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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024122883
(43)【公開日】2024-09-09
(54)【発明の名称】分離装置、分離方法及びフィルタ
(51)【国際特許分類】
C12M 1/00 20060101AFI20240902BHJP
C12M 1/28 20060101ALI20240902BHJP
C12N 15/115 20100101ALN20240902BHJP
C07K 16/00 20060101ALN20240902BHJP
【ＦＩ】
C12M1/00 A
C12M1/28
C12N15/115 Z
C07K16/00
【審査請求】未請求
【請求項の数】16
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024012555
(22)【出願日】2024-01-31
(31)【優先権主張番号】P 2023029012
(32)【優先日】2023-02-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000109543
【氏名又は名称】テルモ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000671
【氏名又は名称】ＩＢＣ一番町弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】五十嵐 政嗣
【テーマコード（参考）】
4B029
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B029AA09
4B029BB11
4B029BB15
4B029CC01
4B029DF01
4B029DG08
4B029HA06
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
(57)【要約】 （修正有）
【課題】フィルタを用いて細胞懸濁液から細胞を分離する場合、剥離液による細胞の損傷を避けるために、剥離液を用いることなく、フィルタから細胞を回収する分離装置、分離方法およびフィルタを提供する。
【解決手段】分離装置４０は、分離対象物を着脱し得る着脱部材が備えられる分離室１２と、着脱部材の温度を制御し得る温度制御部１１０と、を備え、着脱部材は、分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で結合物質から抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層が基材に備えられることによって構成され、温度制御部は、着脱部材の温度を応答温度に制御することによって、着脱部材に付着した分離対象物を着脱部材から脱離させる。
【選択図】図４
【解決手段】分離装置４０は、分離対象物を着脱し得る着脱部材が備えられる分離室１２と、着脱部材の温度を制御し得る温度制御部１１０と、を備え、着脱部材は、分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で結合物質から抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層が基材に備えられることによって構成され、温度制御部は、着脱部材の温度を応答温度に制御することによって、着脱部材に付着した分離対象物を着脱部材から脱離させる。
【選択図】図４
【特許請求の範囲】
【請求項1】
細胞又はタンパク質から成る分離対象物を含む懸濁液から前記分離対象物を分離する分離装置であって、
前記分離対象物を着脱し得る着脱部材が備えられる分離室と、
前記着脱部材の温度を制御し得る温度制御部と、
を備え、
前記着脱部材は、前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層が基材に備えられることによって構成され、
前記温度制御部は、前記着脱部材の温度を前記応答温度に制御することによって、前記着脱部材に付着した前記分離対象物を前記着脱部材から脱離させる、分離装置。
前記分離対象物を着脱し得る着脱部材が備えられる分離室と、
前記着脱部材の温度を制御し得る温度制御部と、
を備え、
前記着脱部材は、前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層が基材に備えられることによって構成され、
前記温度制御部は、前記着脱部材の温度を前記応答温度に制御することによって、前記着脱部材に付着した前記分離対象物を前記着脱部材から脱離させる、分離装置。
【請求項2】
請求項１に記載の分離装置において、
前記結合物質は、前記分離対象物に備えられた前記抗原と特異的に結合し得る抗体又はアプタマーである、分離装置。
前記結合物質は、前記分離対象物に備えられた前記抗原と特異的に結合し得る抗体又はアプタマーである、分離装置。
【請求項3】
請求項１に記載の分離装置において、
前記分離対象物を回収するための回収液を前記分離室に供給し得る供給部と、
前記着脱部材から脱離した前記分離対象物を回収し得る回収部と、
を備え、
前記供給部は、前記分離対象物が前記着脱部材から脱離した後に前記分離室に前記回収液を供給し、
前記回収部は、前記分離室から前記分離対象物を含む前記回収液を回収する、分離装置。
前記分離対象物を回収するための回収液を前記分離室に供給し得る供給部と、
前記着脱部材から脱離した前記分離対象物を回収し得る回収部と、
を備え、
前記供給部は、前記分離対象物が前記着脱部材から脱離した後に前記分離室に前記回収液を供給し、
前記回収部は、前記分離室から前記分離対象物を含む前記回収液を回収する、分離装置。
【請求項4】
請求項３に記載の分離装置において、
前記供給部は、前記結合物質を含む結合物質溶液と、前記温度応答性高分子を含む高分子溶液とを前記分離室に供給することが可能であり、前記分離室に前記懸濁液を供給する前に、前記分離室に前記結合物質溶液を供給することによって前記基材に前記結合物質を予め定着させ、前記分離室に前記高分子溶液を供給することによって前記基材に前記温度応答性高分子を予め定着させる、分離装置。
前記供給部は、前記結合物質を含む結合物質溶液と、前記温度応答性高分子を含む高分子溶液とを前記分離室に供給することが可能であり、前記分離室に前記懸濁液を供給する前に、前記分離室に前記結合物質溶液を供給することによって前記基材に前記結合物質を予め定着させ、前記分離室に前記高分子溶液を供給することによって前記基材に前記温度応答性高分子を予め定着させる、分離装置。
【請求項5】
請求項３に記載の分離装置において、
前記供給部は、前記結合物質と前記温度応答性高分子とを含む混合溶液を前記分離室に供給することが可能であり、前記分離室に前記懸濁液を供給する前に、前記分離室に前記混合溶液を供給することによって前記基材に前記結合物質と前記温度応答性高分子とを予め定着させる、分離装置。
前記供給部は、前記結合物質と前記温度応答性高分子とを含む混合溶液を前記分離室に供給することが可能であり、前記分離室に前記懸濁液を供給する前に、前記分離室に前記混合溶液を供給することによって前記基材に前記結合物質と前記温度応答性高分子とを予め定着させる、分離装置。
【請求項6】
細胞又はタンパク質から成る分離対象物を含む懸濁液から前記分離対象物を分離する分離方法であって、
前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層を着脱部材の基材に定着させる工程と、
前記懸濁液と前記着脱部材とを接触させることによって、前記懸濁液に含まれる前記分離対象物に備えられた前記抗原と前記着脱部材に定着している前記結合物質とを結合させる工程と、
前記着脱部材の温度を前記応答温度に制御することによって、前記着脱部材に付着した前記分離対象物を前記着脱部材から脱離させる工程と、
前記着脱部材から脱離した前記分離対象物を回収する工程と、
を備える、分離方法。
前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層を着脱部材の基材に定着させる工程と、
前記懸濁液と前記着脱部材とを接触させることによって、前記懸濁液に含まれる前記分離対象物に備えられた前記抗原と前記着脱部材に定着している前記結合物質とを結合させる工程と、
前記着脱部材の温度を前記応答温度に制御することによって、前記着脱部材に付着した前記分離対象物を前記着脱部材から脱離させる工程と、
前記着脱部材から脱離した前記分離対象物を回収する工程と、
を備える、分離方法。
【請求項7】
細胞又はタンパク質から成る分離対象物を含む懸濁液から前記分離対象物を分離するフィルタであって、
前記分離対象物を着脱し得る着脱部材が備えられる分離室を備え、
前記着脱部材は、前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層が基材に備えられることによって構成される、フィルタ。
前記分離対象物を着脱し得る着脱部材が備えられる分離室を備え、
前記着脱部材は、前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層が基材に備えられることによって構成される、フィルタ。
【請求項8】
前記温度応答性高分子は、下限臨界溶液温度を有する高分子を含む、請求項１に記載の分離装置。
【請求項9】
前記温度応答性高分子は、ポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルメタクリルアミド、ポリ－Ｎ－エトキシエチルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルメタクリルアミドおよびポリ－Ｎ，Ｎ－ジエチルアクリルアミドから選択される少なくとも１種を含む、請求項８に記載の分離装置。
【請求項10】
前記温度応答性高分子は、上限臨界溶液温度を有する高分子を含む、請求項１に記載の分離装置。
【請求項11】
前記温度応答性高分子は、下限臨界溶液温度を有する高分子を含む、請求項６に記載の分離方法。
【請求項12】
前記温度応答性高分子は、ポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルメタクリルアミド、ポリ－Ｎ－エトキシエチルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルメタクリルアミドおよびポリ－Ｎ，Ｎ－ジエチルアクリルアミドから選択される少なくとも１種を含む、請求項１１に記載の分離方法。
【請求項13】
前記温度応答性高分子は、上限臨界溶液温度を有する高分子を含む、請求項６に記載の分離方法。
【請求項14】
前記温度応答性高分子は、下限臨界溶液温度を有する高分子を含む、請求項７に記載のフィルタ。
【請求項15】
前記温度応答性高分子は、ポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルメタクリルアミド、ポリ－Ｎ－エトキシエチルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルメタクリルアミドおよびポリ－Ｎ，Ｎ－ジエチルアクリルアミドから選択される少なくとも１種を含む、請求項１４に記載のフィルタ。
【請求項16】
前記温度応答性高分子は、上限臨界溶液温度を有する高分子を含む、請求項７に記載のフィルタ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細胞又はタンパク質から成る分離対象物を含む懸濁液から分離対象物を分離する分離装置、分離方法及びフィルタに関する。
【背景技術】
【0002】
細胞懸濁液から細胞を分離する手法として、フィルタを用いる方法、遠心分離法等が挙げられる。例えば、特許文献１には、遠心分離法が示される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】特開２０１１－２４５７５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
フィルタを用いる方法の場合、フィルタに細胞懸濁液中の細胞を付着させた後に、フィルタに付着した細胞を回収する。細胞の回収時には、剥離液が用いられる。しかし、剥離液は細胞を損傷させる虞がある。このため、剥離液を用いることなく、フィルタから細胞を剥離する技術が望まれる。
【0005】
本発明は上述した課題を解決することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
（１）第１発明は、細胞又はタンパク質から成る分離対象物を含む懸濁液から前記分離対象物を分離する分離装置であって、前記分離対象物を着脱し得る着脱部材が備えられる分離室と、前記着脱部材の温度を制御し得る温度制御部と、を備え、前記着脱部材は、前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層が基材に備えられることによって構成され、前記温度制御部は、前記着脱部材の温度を前記応答温度に制御することによって、前記着脱部材に付着した前記分離対象物を前記着脱部材から脱離させる。
【0007】
第１発明において、着脱部材に備えられる結合物質は、分離対象物の抗原と結合し得る。また、着脱部材に備えられる温度応答性高分子は、温度応答性高分子の温度が応答温度になると、結合物質から分離対象物の抗原を脱離させ得る。このため、第１発明によれば、温度制御を行うことによって、着脱部材から細胞を剥離することができる。つまり、第１発明によれば、剥離剤を用いることなく着脱部材から細胞を剥離することができる。従って、第１発明によれば、着脱部材に付着した分離対象物の回収時に、分離対象物の損傷を抑制することができる。
【0008】
（２）上記項目（１）に記載の分離装置において、前記結合物質は、前記分離対象物に備えられた前記抗原と特異的に結合し得る抗体又はアプタマーであってもよい。
【0009】
（３）上記項目（１）又は項目（２）に記載の分離装置は、前記分離対象物を回収するための回収液を前記分離室に供給し得る供給部と、前記着脱部材から脱離した前記分離対象物を回収し得る回収部と、を備え、前記供給部は、前記分離対象物が前記着脱部材から脱離した後に前記分離室に前記回収液を供給し、前記回収部は、前記分離室から前記分離対象物を含む前記回収液を回収してもよい。
【0010】
（４）上記項目（３）に記載の分離装置において、前記供給部は、前記結合物質を含む結合物質溶液と、前記温度応答性高分子を含む高分子溶液とを前記分離室に供給することが可能であり、前記分離室に前記懸濁液を供給する前に、前記分離室に前記結合物質溶液を供給することによって前記基材に前記結合物質を予め定着させ、前記分離室に前記高分子溶液を供給することによって前記基材に前記温度応答性高分子を予め定着させてもよい。
【0011】
上記構成によれば、１つの分離装置を用いて、分離対象物を分離する工程及び分離対象物を回収する工程だけでなく、着脱部材を作製する工程の一部を行うことができる。
【0012】
（５）上記項目（３）に記載の分離装置において、前記供給部は、前記結合物質と前記温度応答性高分子とを含む混合溶液を前記分離室に供給することが可能であり、前記分離室に前記懸濁液を供給する前に、前記分離室に前記混合溶液を供給することによって前記基材に前記結合物質と前記温度応答性高分子とを予め定着させてもよい。
【0013】
（８）上記項目（１）～（５）のいずれかに記載の分離装置において、前記温度応答性高分子は、下限臨界溶液温度を有する高分子を含んでもよい。
【0014】
（９）上記項目（１）～（５）および（８）のいずれかに記載の分離装置において、前記温度応答性高分子は、ポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルメタクリルアミド、ポリ－Ｎ－エトキシエチルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルメタクリルアミドおよびポリ－Ｎ，Ｎ－ジエチルアクリルアミドから選択される少なくとも１種を含んでもよい。
【0015】
（１０）上記項目（１）～（５）のいずれかに記載の分離装置において、前記温度応答性高分子は、上限臨界溶液温度を有する高分子を含んでもよい。
【0016】
上記構成によれば、１つの分離装置を用いて、分離対象物を分離する工程及び分離対象物を回収する工程だけでなく、着脱部材を作製する工程の一部を行うことができる。
【0017】
（６）第２発明は、細胞又はタンパク質から成る分離対象物を含む懸濁液から前記分離対象物を分離する分離方法であって、前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層を着脱部材の基材に定着させる工程と、前記懸濁液と前記着脱部材とを接触させることによって、前記懸濁液に含まれる前記分離対象物に備えられた前記抗原と前記着脱部材に定着している前記結合物質とを結合させる工程と、前記着脱部材の温度を前記応答温度に制御することによって、前記着脱部材に付着した前記分離対象物を前記着脱部材から脱離させる工程と、前記着脱部材から脱離した前記分離対象物を回収する工程と、を備える。
【0018】
（１１）上記項目（６）に記載の分離方法において、前記温度応答性高分子は、下限臨界溶液温度を有する高分子を含んでもよい。
【0019】
（１２）上記項目（６）または（１１）に記載の分離方法において、前記温度応答性高分子は、ポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルメタクリルアミド、ポリ－Ｎ－エトキシエチルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルメタクリルアミドおよびポリ－Ｎ，Ｎ－ジエチルアクリルアミドから選択される少なくとも１種を含んでもよい。
【0020】
（１３）上記項目（６）に記載の分離方法において、前記温度応答性高分子は、上限臨界溶液温度を有する高分子を含んでもよい。
【0021】
第２発明において、着脱部材に備えられる結合物質は、分離対象物の抗原と結合し得る。また、着脱部材に備えられる温度応答性高分子は、温度応答性高分子の温度が応答温度になると、結合物質から分離対象物の抗原を脱離させ得る。このため、第２発明によれば、温度制御を行うことによって、着脱部材から細胞を剥離することができる。つまり、第２発明によれば、剥離剤を用いることなく着脱部材から細胞を剥離することができる。従って、第２発明によれば、着脱部材に付着した分離対象物の回収時に、分離対象物の損傷を抑制することができる。
【0022】
（７）第３発明は、細胞又はタンパク質から成る分離対象物を含む懸濁液から前記分離対象物を分離するフィルタであって、前記分離対象物を着脱し得る着脱部材が備えられる分離室を備え、前記着脱部材は、前記分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る結合物質と、所定の応答温度で前記結合物質から前記抗原を脱離させ得る温度応答性高分子とを含む着脱層が基材に備えられることによって構成される。
【0023】
（１４）上記項目（７）に記載のフィルタにおいて、前記温度応答性高分子は、下限臨界溶液温度を有する高分子を含んでもよい。
【0024】
（１５）上記項目（７）または（１４）に記載のフィルタにおいて、前記温度応答性高分子は、ポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルメタクリルアミド、ポリ－Ｎ－エトキシエチルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルアクリルアミド、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルメタクリルアミドおよびポリ－Ｎ，Ｎ－ジエチルアクリルアミドから選択される少なくとも１種を含んでもよい。
【0025】
（１６）上記項目（７）に記載のフィルタにおいて、前記温度応答性高分子は、上限臨界溶液温度を有する高分子を含んでもよい。
【0026】
第３発明において、着脱部材に備えられる結合物質は、分離対象物の抗原と結合し得る。また、着脱部材に備えられる温度応答性高分子は、温度応答性高分子の温度が応答温度になると、結合物質から分離対象物の抗原を脱離させ得る。このため、第３発明によれば、温度制御を行うことによって、着脱部材から細胞を剥離することができる。つまり、第３発明によれば、剥離剤を用いることなく着脱部材から細胞を剥離することができる。従って、第３発明によれば、着脱部材に付着した分離対象物の回収時に、分離対象物の損傷を抑制することができる。
【発明の効果】
【0027】
本発明によれば、剥離液を用いることなく着脱部材から細胞を剥離することができる。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【発明を実施するための形態】
【0029】
［１ フィルタ１０の構成］
図１は、フィルタ１０の構成を示す図である。フィルタ１０は、液体を入口から導入し、液体を出口から排出する。液体が分離対象物を含む懸濁液である場合、フィルタ１０は、懸濁液に含まれる１種類以上の分離対象物を捕捉し得る。分離対象物は、細胞又はタンパク質である。フィルタ１０は、１つ以上の分離室１２を備える。図１で示されるフィルタ１０は、２つの分離室１２（第１分離室１２ａと第２分離室１２ｂ）を備える。
図１は、フィルタ１０の構成を示す図である。フィルタ１０は、液体を入口から導入し、液体を出口から排出する。液体が分離対象物を含む懸濁液である場合、フィルタ１０は、懸濁液に含まれる１種類以上の分離対象物を捕捉し得る。分離対象物は、細胞又はタンパク質である。フィルタ１０は、１つ以上の分離室１２を備える。図１で示されるフィルタ１０は、２つの分離室１２（第１分離室１２ａと第２分離室１２ｂ）を備える。
【0030】
２つの分離室１２は、フィルタ１０に導入される液体が各々の分離室１２を順番に通過するように、液体の流れの上流から下流に向かって一列に並べられる。図１においては、液体は下から上に向かって流れる。第１分離室１２ａが捕捉する分離対象物と、第２分離室１２ｂが捕捉する分離対象物とは相違する。各々の分離室１２は、容器１８と、複数の着脱部材１６とを備える。
【0031】
容器１８は、複数の着脱部材１６を収容する。容器１８は、入口ポート２２と出口ポート２４とを有する。入口ポート２２は、容器１８の外部から内部に液体を導入し得る。第１分離室１２ａの入口ポート２２は、フィルタ１０の入口に相当する。出口ポート２４は、容器１８の内部から外部に液体を排出し得る。第２分離室１２ｂの出口ポート２４は、フィルタ１０の出口に相当する。第１分離室１２ａの出口ポート２４と第２分離室１２ｂの入口ポート２２とは接続流路１４によって相互に連通される。
【0032】
なお、図４で示されるように、接続流路１４に他の流路（第１バイパス流路８８）が合流することにより、第２分離室１２ｂの入口ポート２２は、フィルタ１０の入口になり得る。また、図４で示されるように、接続流路１４から他の流路（第２バイパス流路９０）が分岐することにより、第１分離室１２ａの出口ポート２４は、フィルタ１０の出口になり得る。
【0033】
複数の着脱部材１６は、容器１８の内部に充填される。複数の着脱部材１６は、着脱部材１６の厚さ方向に積層される。更に、複数の着脱部材１６の積層方向（着脱部材１６の厚さ方向）は、入口ポート２２から出口ポート２４に向かう方向と同一である。つまり、複数の着脱部材１６は、液体の流れの上流から下流に向かって一列に並べられる。
【0034】
図２Ａ～図２Ｃ、図３Ａ、図３Ｂは、着脱部材１６の部分拡大図である。各々の図は、着脱部材１６を模式的に示す。着脱部材１６は、基材２０を備える。基材２０は、複数の微細孔が形成された多孔質ポリウレタンからなる。多孔質ポリウレタンによれば、基材２０の表面積を大きくすることができる。なお、基材２０は、ポリウレタン以外の部材によって構成されてもよい。例えば、基材２０は、ポリエステル、ポリエーテルスルホン等で構成されてもよい。
【0035】
基材２０の表面には、着脱層２６が設けられる。着脱層２６は、活性基２８を備える。活性基２８は、結合物質３０と温度応答性高分子３１との少なくとも一方を備える。活性基２８は、結合物質３０と温度応答性高分子３１との両方を備えることが好ましい。結合物質３０は、分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し得る。結合物質３０は、抗体又はアプタマーである。温度応答性高分子３１は、所定の応答温度で結合物質３０から分離対象物に備えられた抗原を脱離させ得る。温度応答性高分子３１は、所定温度を境にして親水性又は分子鎖の長さが変化する。
【0036】
温度応答性高分子３１は、応答温度より低い温度において、特定の分子鎖が伸長（膨潤）して親水性を示し、応答温度以上の温度において、特定の分子鎖が収縮して疎水性を示するもの、すなわち、下限臨界溶液温度（ｌｏｗｅｒ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ； ＬＣＳＴ）を有する高分子（以下、温度応答性高分子３１ａとも称する）であり得る。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ａである場合においては、応答温度（下限臨界溶液温度）以上の温度（つまり、特定の分子鎖が収縮して疎水性を示す状態）において、結合物質３０は、分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し、応答温度（下限臨界溶液温度）より低い温度（つまり、特定の分子鎖が伸長（膨潤）して親水性を示す状態）において、結合物質３０から分離対象物に備えられた抗原を脱離させ得る。このような性質を有する温度応答性高分子３１ａは、ＬＣＳＴを有する高分子として公知のものを、制限なく採用することができる。温度応答性高分子３１ａとしては、例えばポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミド（ＰＮＩＰＡＡｍ、ＬＣＳＴ＝３２℃）、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルアクリルアミド（ＬＣＳＴ＝２１℃）、ポリ－Ｎ－ｎ－プロピルメタクリルアミド（ＬＣＳＴ＝３２℃）、ポリ－Ｎ－エトキシエチルアクリルアミド（ＬＣＳＴ＝約３５℃）、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルアクリルアミド（ＬＣＳＴ＝約２８℃）、ポリ－Ｎ－テトラヒドロフルフリルメタクリルアミド（ＬＣＳＴ＝約３５℃）、ポリ－Ｎ，Ｎ－ジエチルアクリルアミド（ＬＣＳＴ＝３２℃）等が用いられる。また、上記の各高分子を構成する単量体を２以上組み合わせた共重合体を温度応答性高分子３１ａとして用いてもよい。
【0037】
また、温度応答性高分子３１は、応答温度より高い温度において、特定の分子鎖が伸長して親水性を示し、応答温度以下の温度において、特定の分子鎖が収縮して疎水性を示すもの、すなわち、上限臨界溶液温度（ｕｐｐｅｒ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ； ＵＣＳＴ）を有する高分子（以下、温度応答性高分子３１ｂとも称する）であってもよい。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ｂである場合においては、応答温度（上限臨界溶液温度）以下の温度（つまり、特定の分子鎖が収縮して疎水性を示す状態）において、結合物質３０は、分離対象物に備えられた抗原と特異的に結合し、応答温度（上限臨界溶液温度）より高い温度（つまり、特定の分子鎖が伸長（膨潤）して親水性を示す状態）において、結合物質３０から分離対象物に備えられた抗原を脱離させ得る。このような性質を有する温度応答性高分子３１ｂは、ＵＣＳＴを有する高分子として公知のものを、制限なく採用することができる。温度応答性高分子３１ｂとしては、例えばポリアクリル酸、ポリメタクリルアミド、ポリアクリル酸ウラシル、ポリ（メタ）アクリル酸Ｎ－アスパラギンアミド、ポリアクリル酸Ｎ－グルタミンアミド、ポリ（アリルアミン－ｃｏ－アリルウレア）、及びポリ（メタ）アクリルアミド－ｃｏ－Ｎ－アセチルアクリルアミド）等の水素結合型ポリマー、並びにポリ（Ｎ－（３－ｄｉｍｅｔｈｙｌ（ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙｅｔｈｙｌ）ａｍｍｏｎｉｕｍ ｐｒｏｐａｎｅスルホン酸塩若しくは炭酸塩、ポリ（３－［Ｎ－（３－ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）－Ｎ，Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ］ａｍｍｏｎｉｏｐｒｏｐａｎｅスルホン酸塩若しくは炭酸塩等の両イオン性型ポリマーが知られている。また、特開２０２３－００６５９４号公報に記載の特定のウレイド基含有構造の繰り返しであるウレイド基含有繰り返し配列と電荷含有繰り返し配列とを有し、上限臨界溶液温度（ＵＣＳＴ）が４～５０℃の範囲である共重合体等を温度応答性高分子３１ｂとして用いてもよい。
【0038】
例えば、図２Ａで示される着脱部材１６のように、結合物質３０及び温度応答性高分子３１は、基材２０の表面に直接定着してもよい。又は、図２Ｂで示される着脱部材１６のように、結合物質３０とビオチン３４とが結合したビオチン化物質３６が、アビジン３２を介して基材２０の表面に定着してもよい。更に、ビオチン３４´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１が、アビジン３２´を介して基材２０の表面に定着してもよい。図２Ｂで示される着脱部材１６では、アビジン３２及びアビジン３２´が基材２０の表面に直接定着している。また、アビジン３２とビオチン化物質３６とが互いに結合している。また、アビジン３２´とビオチン化された温度応答性高分子３１とが互いに結合している。
【0039】
図２Ｂで示される着脱部材１６において、アビジン３２及びアビジン３２´の代わりに、他のビオチン結合タンパク質、例えばストレプトアビジン３３が使用されてもよい。例えば、図２Ｃで示される着脱部材１６のように、ビオチン化物質３６とビオチン化された温度応答性高分子３１とが、ストレプトアビジン３３を介して基材２０の表面に定着してもよい。図２Ｃで示される着脱部材１６では、ストレプトアビジン３３が基材２０の表面に直接定着している。また、ストレプトアビジン３３とビオチン化物質３６とが互いに結合している。また、ストレプトアビジン３３とビオチン化された温度応答性高分子３１とが互いに結合している。
【0040】
図３Ａで示される着脱部材１６のように、結合物質３０と第２のビオチン３４ｂとが結合したビオチン化物質３６が、アビジン３２と第１のビオチン３４ａとを介して基材２０の表面に定着してもよい。更に、第２のビオチン３４ｂ´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１が、アビジン３２´と第１のビオチン３４ａ´とを介して基材２０の表面に定着してもよい。図３Ａで示される着脱部材１６では、第１のビオチン３４ａ及び第１のビオチン３４ａ´が基材２０の表面に直接定着している。また、第１のビオチン３４ａとアビジン３２とが互いに結合している。また、アビジン３２とビオチン化物質３６とが互いに結合している。また、第１のビオチン３４ａ´とアビジン３２´とが互いに結合している。また、アビジン３２´とビオチン化された温度応答性高分子３１とが互いに結合している。
【0041】
図３Ａで示される着脱部材１６において、アビジン３２及びアビジン３２´の代わりに、他のビオチン結合タンパク質、例えばストレプトアビジン３３が使用されてもよい。例えば、図３Ｂで示される着脱部材１６のように、ビオチン化物質３６とビオチン化された温度応答性高分子３１とが、ストレプトアビジン３３を介して基材２０の表面に定着してもよい。図３Ｂで示される着脱部材１６では、第１のビオチン３４ａが基材２０の表面に直接定着している。また、第１のビオチン３４ａとストレプトアビジン３３とが互いに結合している。また、ストレプトアビジン３３とビオチン化物質３６とが互いに結合している。また、ストレプトアビジン３３とビオチン化された温度応答性高分子３１とが互いに結合している。
【0042】
図２Ａ～図２Ｃ、図３Ａ、図３Ｂで示される着脱部材１６によれば、懸濁液が分離室１２の入口ポート２２から出口ポート２４に向かって流れると、活性基２８の結合物質３０が、懸濁液中の分離対象物に備えられた抗原と結合する。図１７は、細胞Ｃが着脱部材１６（図３Ｂに示される結合物質３０）に付着した様子を示す図である。結合物質３０の種類は、分離対象物の種類に応じて予め選択される。これにより、懸濁液中の分離対象物が着脱部材１６で捕捉される一方で、分離対象物以外の物質を含む懸濁液は出口ポート２４から分離室１２の外部に排出される。
【0043】
更に、図２Ａ～図２Ｃ、図３Ａ、図３Ｂで示される着脱部材１６によれば、温度応答性高分子３１の温度が所定の応答温度になると、温度応答性高分子３１の親水性又は分子鎖の長さが変化する（好ましくは、分子鎖が親水化し、伸長する）。これにより、温度応答性高分子３１は、結合物質３０から分離対象物を脱離させる。つまり、温度応答性高分子３１は、結合物質３０に付着した分離対象物を、着脱部材１６から脱離させる。図１８は、細胞Ｃが着脱部材１６（図３Ｂに示される結合物質３０）から離脱した様子を示す図である。これにより、着脱部材１６に付着する分離対象物を着脱部材１６から剥離することが可能となる。
【0044】
［２ 分離室１２の作製方法］
上述したように、フィルタ１０の基材２０としては多孔質ポリウレタンが使用される。一般に、多孔質ポリウレタンは、白血球除去フィルタとして使用される。基材２０として使用される多孔質ポリウレタンの微細孔は、白血球除去フィルタの微細孔よりも大きい。多孔質ポリウレタンの微細孔の大きさは、細胞液に含まれる分離対象物よりも大きくなるように調整される。多孔質ポリウレタンは、容器１８に収容可能な大きさにカットされて基材２０となる。カット後の基材２０の表面には、以下の作製方法により、活性基２８が定着する。
上述したように、フィルタ１０の基材２０としては多孔質ポリウレタンが使用される。一般に、多孔質ポリウレタンは、白血球除去フィルタとして使用される。基材２０として使用される多孔質ポリウレタンの微細孔は、白血球除去フィルタの微細孔よりも大きい。多孔質ポリウレタンの微細孔の大きさは、細胞液に含まれる分離対象物よりも大きくなるように調整される。多孔質ポリウレタンは、容器１８に収容可能な大きさにカットされて基材２０となる。カット後の基材２０の表面には、以下の作製方法により、活性基２８が定着する。
【0045】
［２．１ 作製方法１］
図２Ａで示される着脱部材１６は、例えば以下のようにして作製可能である。カット後の基材２０とアクリル酸とをプラズマ処理する。これにより、基材２０の表面にアクリル基（カルボキシル基）が導入される。次に、カップリング剤（ヘキサメチレンジアミン）及び結合物質３０を、基材２０の表面のアクリル基（カルボキシル基）と反応させる。同様に、カップリング剤及び温度応答性高分子３１を、基材２０の表面のアクリル基（カルボキシル基）と反応させる。これにより、図２Ａで示されるように、基材２０の表面に活性基２８（結合物質３０及び温度応答性高分子３１）が定着する。活性基２８が定着した基材２０を積層して容器１８の内部に充填する。以上の処理によって、図２Ａで示される着脱部材１６が作製される。
図２Ａで示される着脱部材１６は、例えば以下のようにして作製可能である。カット後の基材２０とアクリル酸とをプラズマ処理する。これにより、基材２０の表面にアクリル基（カルボキシル基）が導入される。次に、カップリング剤（ヘキサメチレンジアミン）及び結合物質３０を、基材２０の表面のアクリル基（カルボキシル基）と反応させる。同様に、カップリング剤及び温度応答性高分子３１を、基材２０の表面のアクリル基（カルボキシル基）と反応させる。これにより、図２Ａで示されるように、基材２０の表面に活性基２８（結合物質３０及び温度応答性高分子３１）が定着する。活性基２８が定着した基材２０を積層して容器１８の内部に充填する。以上の処理によって、図２Ａで示される着脱部材１６が作製される。
【0046】
［２．２ 作製方法２］
図２Ｂ（又は図２Ｃ）で示される着脱部材１６は、例えば以下のようにして作製可能である。カット後の基材２０とアクリル酸とをプラズマ処理する。これにより、基材２０の表面にアクリル基（カルボキシル基）が導入される。次に、カップリング剤（ヘキサメチレンジアミン）及びアビジン３２（又はストレプトアビジン３３、以下同様）を基材２０の表面のアクリル基（カルボキシル基）と反応させる。これにより、基材２０の表面にアビジン３２が定着する。
図２Ｂ（又は図２Ｃ）で示される着脱部材１６は、例えば以下のようにして作製可能である。カット後の基材２０とアクリル酸とをプラズマ処理する。これにより、基材２０の表面にアクリル基（カルボキシル基）が導入される。次に、カップリング剤（ヘキサメチレンジアミン）及びアビジン３２（又はストレプトアビジン３３、以下同様）を基材２０の表面のアクリル基（カルボキシル基）と反応させる。これにより、基材２０の表面にアビジン３２が定着する。
【0047】
アビジン３２が定着した基材２０を積層して容器１８の内部に充填する。次に、第１溶液と第２溶液とを容器１８の内部に導入する。第１溶液は、例えばビオチン化物質３６を含む。第２溶液は、温度応答性高分子３１（好ましくは、ビオチン３４ｂ´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１）を含む。基材２０に定着したアビジン３２と、第１溶液中のビオチン化物質３６とは互いに結合する。また、基材２０に定着したアビジン３２と、第２溶液中の温度応答性高分子３１（好ましくは、ビオチン３４ｂ´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１）とは互いに結合する。これにより、図２Ｂで示されるように、基材２０の表面に活性基２８（アビジン３２、ビオチン化物質３６、温度応答性高分子３１（好ましくは、ビオチン３４ｂ´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１））が定着する。以上の処理によって、図２Ｂで示される着脱部材１６が作製される。
【0048】
［２．３ 作製方法３］
図２Ｂ（又は図２Ｃ）で示される着脱部材１６は、例えば以下のようにしても作製可能である。カット後の基材２０をプラズマ処理する。これにより、基材２０の表面が活性状態になる（プラズマ処理により、基材２０の表面に水酸基および／またはカルボキシル基が形成されうる）。次に、基材２０をＧＭＡ（メタクリル酸グリシジル）溶液に浸漬する。これにより、ＧＭＡが基材２０の表面に結合される（基材２０の表面に形成された水酸基および／またはカルボキシル基と、ＧＭＡの二重結合とが反応しうる）。次に、カップリング剤（ヘキサメチレンジアミン）及びアビジン３２を基材２０の表面のアクリル基と反応させる（カップリング剤（ヘキサメチレンジアミン）が、ＧＭＡ由来のエポキシ基およびアビジン３２と反応しうる）。これにより、基材２０の表面にアビジン３２が定着する。アビジン３２が定着した後の一連の処理は、作製方法２にけるアビジン３２が定着した後の一連の処理と同じである。
図２Ｂ（又は図２Ｃ）で示される着脱部材１６は、例えば以下のようにしても作製可能である。カット後の基材２０をプラズマ処理する。これにより、基材２０の表面が活性状態になる（プラズマ処理により、基材２０の表面に水酸基および／またはカルボキシル基が形成されうる）。次に、基材２０をＧＭＡ（メタクリル酸グリシジル）溶液に浸漬する。これにより、ＧＭＡが基材２０の表面に結合される（基材２０の表面に形成された水酸基および／またはカルボキシル基と、ＧＭＡの二重結合とが反応しうる）。次に、カップリング剤（ヘキサメチレンジアミン）及びアビジン３２を基材２０の表面のアクリル基と反応させる（カップリング剤（ヘキサメチレンジアミン）が、ＧＭＡ由来のエポキシ基およびアビジン３２と反応しうる）。これにより、基材２０の表面にアビジン３２が定着する。アビジン３２が定着した後の一連の処理は、作製方法２にけるアビジン３２が定着した後の一連の処理と同じである。
【0049】
［２．４ 作製方法４］
図３Ａ（又は図３Ｂ）で示される着脱部材１６は、例えば以下のようにして作製可能である。カット後の基材２０の表面に第１のビオチン３４ａが結合された高分子をコーティングする。これにより、基材２０の表面に第１のビオチン３４ａが定着する。第１のビオチン３４ａが定着した基材２０を積層して容器１８の内部に充填する。次に、アビジン液を容器１８の内部に導入する。アビジン液は、アビジン３２を含む。基材２０に定着した第１のビオチン３４ａと、アビジン液中のアビジン３２とは互いに結合する。これにより、基材２０の表面にアビジン３２が定着する。アビジン３２が定着した後の一連の処理は、作製方法２にけるアビジン３２が定着した後の一連の処理と同じである。
図３Ａ（又は図３Ｂ）で示される着脱部材１６は、例えば以下のようにして作製可能である。カット後の基材２０の表面に第１のビオチン３４ａが結合された高分子をコーティングする。これにより、基材２０の表面に第１のビオチン３４ａが定着する。第１のビオチン３４ａが定着した基材２０を積層して容器１８の内部に充填する。次に、アビジン液を容器１８の内部に導入する。アビジン液は、アビジン３２を含む。基材２０に定着した第１のビオチン３４ａと、アビジン液中のアビジン３２とは互いに結合する。これにより、基材２０の表面にアビジン３２が定着する。アビジン３２が定着した後の一連の処理は、作製方法２にけるアビジン３２が定着した後の一連の処理と同じである。
【0050】
［３ 分離装置４０の構成］
図１で示されるフィルタ１０に分離対象物を含む懸濁液を流すことによって、懸濁液から分離対象物を分離することができる。更に、フィルタ１０を所定温度に調整しつつ、フィルタ１０に回収用の液体を流すことによって、フィルタ１０から分離対象物を回収することができる。このような処理を行う装置を分離装置４０という。
図１で示されるフィルタ１０に分離対象物を含む懸濁液を流すことによって、懸濁液から分離対象物を分離することができる。更に、フィルタ１０を所定温度に調整しつつ、フィルタ１０に回収用の液体を流すことによって、フィルタ１０から分離対象物を回収することができる。このような処理を行う装置を分離装置４０という。
【0051】
図４は、分離装置４０の構成を示す図である。分離装置４０は、懸濁液から分離対象物を分離して回収することができる。更に、分離装置４０は、図３Ａ又は図３Ｂで示される着脱部材１６の作製方法の一部処理を行うことが可能である。分離装置４０は、分離回路４２とコントローラ４４とを備える。
【0052】
分離回路４２は、供給部４６と、分離部４８と、回収部５０と、を備える。供給部４６は、懸濁液容器５２と、アビジン液容器５４と、第１溶液容器５６と、第２溶液容器５８と、第３溶液容器６０と、回収液容器６２と、第１供給流路６４～第６供給流路７４と、バルブ７６ａ～７６ｆと、ポンプ７８とを備える。各々の容器（５２～６２）は、例えば軟質樹脂材料を袋状に成形した医療用バッグである。各々の容器は、硬質な材料で構成されたタンク等であってもよい。各々の容器は、分離装置４０に対して着脱可能である。
【0053】
懸濁液容器５２には、懸濁液が充填される。懸濁液は、２種類の分離対象物を含む。本実施形態においては、２種類の分離対象物を、第１細胞及び第２細胞とする。アビジン液容器５４には、アビジン液が充填される。アビジン液は、アビジン３２を含む。第１溶液容器５６には、第１溶液（結合物質溶液）が充填される。第１溶液は、第１結合物質３０ａと第２のビオチン３４ｂとが結合した第１のビオチン化物質３６ａ（図３Ａ、図３Ｂ）を含む。第１結合物質３０ａは、第１細胞が有する抗原と特異的に結合し得る。第２溶液容器５８には、第２溶液（結合物質溶液）が充填される。第２溶液は、第１結合物質３０ａとは異なる第２結合物質３０ｂと第２のビオチン３４ｂとが結合した第２のビオチン化物質３６ｂ（図３Ａ、図３Ｂ）を含む。第２結合物質３０ｂは、第２細胞が有する抗原と特異的に結合し得る。第３溶液容器６０には、第３溶液が充填される。第３溶液（高分子溶液）は、温度応答性高分子３１（温度応答性高分子３１ａまたは温度応答性高分子３１ｂ）を含む。回収液容器６２には、回収液が充填される。回収液は、分離対象物（第１細胞、第２細胞）にダメージを与えない液体である。例えば、回収液は、水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等である。なお、回収液は、分離回路４２内を洗浄するための洗浄液としても使用される。
【0054】
懸濁液容器５２は、第１供給流路６４を介して、ポンプ７８の吸込ポート８０に接続される。第１供給流路６４には、バルブ７６ａが設けられる。アビジン液容器５４は、第２供給流路６６を介して、ポンプ７８の吸込ポート８０に接続される。第２供給流路６６には、バルブ７６ｂが設けられる。第１溶液容器５６は、第３供給流路６８を介して、ポンプ７８の吸込ポート８０に接続される。第３供給流路６８には、バルブ７６ｃが設けられる。第２溶液容器５８は、第４供給流路７０を介して、ポンプ７８の吸込ポート８０に接続される。第４供給流路７０には、バルブ７６ｄが設けられる。第３溶液容器６０は、第５供給流路７２を介して、ポンプ７８の吸込ポート８０に接続される。第５供給流路７２には、バルブ７６ｅが設けられる。回収液容器６２は、第６供給流路７４を介して、ポンプ７８の吸込ポート８０に接続される。第６供給流路７４には、バルブ７６ｆが設けられる。
【0055】
分離部４８は、フィルタ１０と、上流流路８４と、下流流路８６と、第１バイパス流路８８と、第２バイパス流路９０と、バルブ９２ａ～９２ｄと、温度調整部９３とを備える。図４で示されるフィルタ１０は、２つの分離室１２（第１分離室１２ａ、第２分離室１２ｂ）を有する。各々の分離室１２は、分離装置４０に対して着脱可能である。つまり、分離室１２は、分離対象物の種類に応じて交換可能である。分離部４８が、分離装置４０に対して着脱可能であってもよい。又は、フィルタ１０が、分離装置４０に対して着脱可能であってもよい。
【0056】
上述したように、フィルタ１０は、第１分離室１２ａと、第２分離室１２ｂと、接続流路１４とを備える。第１分離室１２ａの入口ポート２２は、上流流路８４を介して、ポンプ７８の吐出ポート８２に接続される。上流流路８４には、バルブ９２ａが設けられる。バルブ９２ａの上流に位置する上流流路８４と接続流路１４とは、第１バイパス流路８８によって連通する。第１バイパス流路８８には、バルブ９２ｂが設けられる。第２分離室１２ｂの出口ポート２４は、下流流路８６に接続される。下流流路８６には、バルブ９２ｃが設けられる。バルブ９２ｃの下流に位置する下流流路８６と接続流路１４とは、第２バイパス流路９０によって連通する。第２バイパス流路９０には、バルブ９２ｄが設けられる。
【0057】
温度調整部９３は、各々の分離室１２の温度を個別に調整することが可能である。例えば、温度調整部９３は、分離室１２の温度を上昇させることが可能な加熱装置を備える。また、温度調整部９３は、分離室１２の温度を低下させることが可能な冷却装置を備える。温度調整部９３は、コントローラ４４の制御に従って各々の分離室１２の温度を調整する。
【0058】
回収部５０は、回収液容器９４と、廃液容器９６と、回収流路９８と、廃液流路１００と、バルブ１０２ａ、１０２ｂとを備える。回収流路９８と廃液流路１００の各々は、分離部４８の下流流路８６に接続される。回収流路９８には、バルブ１０２ａが設けられる。廃液流路１００には、バルブ１０２ｂが設けられる。
【0059】
回収液容器９４は、回収流路９８と下流流路８６とを介して、第２分離室１２ｂの出口ポート２４に接続される。また、回収液容器９４は、回収流路９８と下流流路８６と第２バイパス流路９０とを介して、第１分離室１２ａの出口ポート２４に接続される。
【0060】
廃液容器９６は、廃液流路１００と下流流路８６とを介して、第２分離室１２ｂの出口ポート２４に接続される。また、廃液容器９６は、廃液流路１００と下流流路８６と第２バイパス流路９０とを介して、第１分離室１２ａの出口ポート２４に接続される。
【0061】
コントローラ４４は、例えば、演算部１０４と、記憶部１０６とを備える。演算部１０４は、例えば、ＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）、ＧＰＵ（Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）等のプロセッサ（ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ）によって構成され得る。すなわち、演算部１０４は、処理回路（ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｃｉｒｃｕｉｔｒｙ）によって構成され得る。
【0062】
演算部１０４には、流体制御部１０８と、温度制御部１１０とが備えられる。流体制御部１０８と、温度制御部１１０とは、記憶部１０６に記憶されているプログラムが演算部１０４によって実行されることによって実現され得る。なお、流体制御部１０８と、温度制御部１１０との少なくとも一部が、ＡＳＩＣ（Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｃｉｒｃｕｉｔ）、ＦＰＧＡ（Ｆｉｅｌｄ－Ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ Ｇａｔｅ Ａｒｒａｙ）等の集積回路によって実現されるようにしてもよい。また、流体制御部１０８と、温度制御部１１０との少なくとも一部が、ディスクリートデバイスを含む電子回路によって構成されるようにしてもよい。
【0063】
流体制御部１０８は、各々のバルブの開閉とポンプ７８の動作とを制御することによって、供給部４６の各種液体を分離部４８及び回収部５０に供給させる。温度制御部１１０は、着脱部材１６の温度を所定の応答温度に制御することによって、着脱部材１６に付着した分離対象物を着脱部材１６から脱離させる。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ａである場合においては、温度制御部１１０は、着脱部材１６の温度を所定の応答温度より低い温度に制御することによって、特定の分子鎖を伸長（膨潤）させて、着脱部材１６に付着した分離対象物を着脱部材１６から脱離させる。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ｂである場合においては、温度制御部１１０は、着脱部材１６の温度を所定の応答温度より高い温度に制御することによって、特定の分子鎖を伸長（膨潤）させて、着脱部材１６に付着した分離対象物を着脱部材１６から脱離させる。
【0064】
記憶部１０６は、不図示の揮発性メモリと、不図示の不揮発性メモリとによって構成され得る。揮発性メモリとしては、例えばＲＡＭ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍｅｍｏｒｙ）等が挙げられ得る。この揮発性メモリは、プロセッサのワーキングメモリとして使用され、処理又は演算に必要なデータ等を一時的に記憶する。不揮発性メモリとしては、例えばＲＯＭ（Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）、フラッシュメモリ等が挙げられ得る。この不揮発性メモリは、保存用のメモリとして使用され、プログラム、テーブル、マップ等を記憶する。記憶部１０６の少なくとも一部が、上述したようなプロセッサ、集積回路等に備えられていてもよい。
【0065】
［４ 分離装置４０の動作］
図５は、分離装置４０が行う処理のフローチャートである。図６～図１６は、各処理時の分離装置４０のバルブの開閉及び液体の流れを示す図である。図６～図１６において、黒塗りのバルブは閉じた状態を示し、白塗りのバルブは開いた状態を示す。
図５は、分離装置４０が行う処理のフローチャートである。図６～図１６は、各処理時の分離装置４０のバルブの開閉及び液体の流れを示す図である。図６～図１６において、黒塗りのバルブは閉じた状態を示し、白塗りのバルブは開いた状態を示す。
【0066】
ユーザは、図５で示される一連の処理の前に、予め次の準備作業を行う。ユーザは、各々の分離室１２の容器１８に、基材２０と第１のビオチン３４ａとを備える着脱部材１６を充填する。ユーザは、第１のビオチン化物質３６ａを含む第１溶液を作製し、第１溶液容器５６に充填する。ユーザは、第２のビオチン化物質３６ｂを含む第２溶液を作製し、第２溶液容器５８に充填する。第１のビオチン化物質３６ａは、懸濁液中の分離対象物（第１細胞）と結合し得る物質である。また、第２のビオチン化物質３６ｂは、懸濁液中の分離対象物（第２細胞）と結合し得る物質である。ユーザは、各々の容器（５２～６２）を分離装置４０に取り付ける。ユーザがコントローラ４４の入力装置（不図示）を操作すると、図５で示される一連の処理が開始される。
【0067】
ステップＳ１において、コントローラ４４は、プライミング（洗浄）を行う。コントローラ４４の流体制御部１０８は、分離回路４２を図６で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｆ、バルブ９２ａ、バルブ９２ｃ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、回収液容器６２の回収液（洗浄液）が、図６の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。
【0068】
続いて、流体制御部１０８は、分離回路４２を図７で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｆ、バルブ９２ｂ、バルブ９２ｄ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、回収液容器６２の回収液（洗浄液）が、図７の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。ステップＳ１の処理により、分離部４８は洗浄される。
【0069】
ステップＳ２において、コントローラ４４は、アビジン３２のプレコート（第１プレコート）を行う。コントローラ４４の流体制御部１０８は、分離回路４２を図８で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｂ、バルブ９２ａ、バルブ９２ｃ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、アビジン液容器５４のアビジン液が、図８の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。流体制御部１０８は、ポンプ７８を所定の第１動作時間以上動作させた後に、ポンプ７８を所定の第１停止時間以上停止させる。ステップＳ２の処理により、各々の分離室１２にアビジン液が供給される。これにより、分離室１２内の着脱部材１６がアビジン液に浸漬される。基材２０に定着している第１のビオチン３４ａは、アビジン液中のアビジン３２と結合する。これにより、基材２０にアビジン３２が定着する。
【0070】
続いて、流体制御部１０８は、分離回路４２を図６で示される状態にする。これにより、アビジン液が流れた部分は洗浄される。
【0071】
ステップＳ３において、コントローラ４４は、第１のビオチン化物質３６ａのプレコート（第２プレコート）を行う。コントローラ４４の流体制御部１０８は、分離回路４２を図９で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｃ、バルブ９２ａ、バルブ９２ｄ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、第１溶液容器５６の第１溶液が、図９の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。流体制御部１０８は、ポンプ７８を所定の第２動作時間以上動作させた後に、ポンプ７８を所定の第２停止時間以上停止させる。ステップＳ３の処理により、第１分離室１２ａに第１溶液が供給される。これにより、第１分離室１２ａ内の着脱部材１６が第１溶液に浸漬される。基材２０に定着しているアビジン３２は、第１溶液中の第１のビオチン化物質３６ａと結合する。
【0072】
続いて、流体制御部１０８は、分離回路４２を図１０で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｆ、バルブ９２ａ、バルブ９２ｄ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、回収液容器６２の回収液（洗浄液）が、図１０の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。この処理により、第１溶液が流れた部分は洗浄される。
【0073】
ステップＳ４において、コントローラ４４は、第２のビオチン化物質３６ｂのプレコート（第３プレコート）を行う。コントローラ４４の流体制御部１０８は、分離回路４２を図１１で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｄ、バルブ９２ｂ、バルブ９２ｃ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、第２溶液容器５８の第２溶液が、図１１の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。流体制御部１０８は、ポンプ７８を所定の第３動作時間以上動作させた後に、ポンプ７８を所定の第３停止時間以上停止させる。ステップＳ４の処理により、第２分離室１２ｂに第２溶液が供給される。これにより、第２分離室１２ｂ内の着脱部材１６が第２溶液に浸漬される。基材２０に定着しているアビジン３２は、第２溶液中の第２のビオチン化物質３６ｂと結合する。
【0074】
続いて、流体制御部１０８は、分離回路４２を図１２で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｆ、バルブ９２ｂ、バルブ９２ｃ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、回収液容器６２の回収液（洗浄液）が、図１２の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。この処理により、第２溶液が流れた部分は洗浄される。
【0075】
ステップＳ５において、コントローラ４４は、温度応答性高分子３１（好ましくは、第２のビオチン３４ｂ´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１）のプレコート（第４プレコート）を行う。コントローラ４４の流体制御部１０８は、分離回路４２を図１３で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｅ、バルブ９２ａ、バルブ９２ｃ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、第３溶液容器６０の第３溶液が、図１３の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。流体制御部１０８は、ポンプ７８を所定の第４動作時間以上動作させた後に、ポンプ７８を所定の第４停止時間以上停止させる。ステップＳ５の処理により、第１分離室１２ａ及び第２分離室１２ｂに第３溶液が供給される。これにより、第１分離室１２ａ内の着脱部材１６及び第２分離室１２ｂ内の着脱部材１６が第３溶液に浸漬される。基材２０に定着しているアビジン３２は、第３溶液中の温度応答性高分子３１（好ましくは、第２のビオチン３４ｂ´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１）と結合する。
【0076】
第１、第２、第４プレコートによって、第１分離室１２ａ内の基材２０の表面に活性基２８（第１のビオチン３４ａ、アビジン３２、第１のビオチン化物質３６ａ、温度応答性高分子３１（好ましくは、第２のビオチン３４ｂ´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１））が定着する（図３Ａ、図３Ｂ）。第１、第３、第４プレコートによって、第２分離室１２ｂ内の基材２０の表面に活性基２８（第１のビオチン３４ａ、アビジン３２、第２のビオチン化物質３６ｂ、温度応答性高分子３１（好ましくは、第２のビオチン３４ｂ´と結合してビオチン化された温度応答性高分子３１））が定着する（図３Ａ、図３Ｂ）。
【0077】
続いて、流体制御部１０８は、分離回路４２を図６で示される状態にする。これにより、第３溶液が流れた部分は洗浄される。
【0078】
ステップＳ６において、コントローラ４４は、懸濁液から分離対象物を分離する。コントローラ４４の流体制御部１０８は、分離回路４２を図１４で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ａ、バルブ９２ａ、バルブ９２ｃ、バルブ１０２ｂを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、懸濁液容器５２の懸濁液が、図１４の矢印で示される経路を流れ、廃液容器９６で回収される。懸濁液がフィルタ１０を流れている間、コントローラ４４の温度制御部１１０は、温度調整部９３を制御して、着脱部材１６の温度を温度応答性高分子３１の応答温度以外の温度にする。例えば、温度制御部１１０は、着脱部材１６の温度を温度応答性高分子３１の応答温度よりも低くする。なお、温度制御部１１０は、着脱部材１６の温度を温度応答性高分子３１の応答温度よりも高くしてもよい。着脱部材１６の温度が所定温度以外である場合、温度応答性高分子３１の親水性は低い（疎水性である）。又は、着脱部材１６の温度が所定温度以外である場合、温度応答性高分子３１の分子鎖は収縮する。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ａである場合においては、温度制御部１１０は、着脱部材１６の温度を所定の応答温度以上の温度に制御することによって、特定の分子鎖を収縮（疎水化）させる。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ｂである場合においては、温度制御部１１０は、着脱部材１６の温度を所定の応答温度以下の温度に制御することによって、特定の分子鎖を収縮（疎水化）させる。
【0079】
流体制御部１０８は、懸濁液容器５２の懸濁液がなくなるまでポンプ７８を動作させた後に、ポンプ７８を停止させる。ステップＳ６の処理により、各々の分離室１２に懸濁液が供給される。これにより、各々の分離室１２内の着脱部材１６が懸濁液に浸漬される。第１分離室１２ａの基材２０に定着している第１のビオチン化物質３６ａは、懸濁液中の分離対象物（第１細胞）の抗原と結合する。第２分離室１２ｂの基材２０に定着している第２のビオチン化物質３６ｂは、懸濁液中の分離対象物（第２細胞）の抗原と結合する。このように、フィルタ１０によって、懸濁液中の分離対象物（第１細胞、第２細胞）が捕捉され、懸濁液から分離対象物が分離される。
【0080】
続いて、流体制御部１０８は、分離回路４２を図６で示される状態にする。これにより、懸濁液が流れた部分は洗浄される。
【0081】
ステップＳ７において、コントローラ４４は、着脱部材１６から分離対象物を脱離させる。コントローラ４４の流体制御部１０８は、分離回路４２を図１５で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、全てのバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を停止させる。これにより、分離回路４２は、回収液で満たされる。流体制御部１０８は、ポンプ７８を所定の第５停止時間以上停止させる。この間に、コントローラ４４の温度制御部１１０は、温度調整部９３を制御して、第１分離室１２ａ及び第２分離室１２ｂの各々の着脱部材１６の温度を温度応答性高分子３１の応答温度にする。応答温度が温度幅を有する場合、温度調整部９３は、着脱部材１６の温度が温度幅内に収まるように温度調整部９３を制御する。温度調整部９３は、第１分離室１２ａ及び第２分離室１２ｂの各々に取り付けられた温度センサ（不図示）の検出値に基づいてフィードバック制御を行ってもよい。
【0082】
着脱部材１６の温度が所定温度になると、温度応答性高分子３１の親水性は向上する。又は、着脱部材１６の温度が所定温度になると、温度応答性高分子３１の分子鎖は伸張する。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ａである場合においては、着脱部材１６の温度が所定の応答温度より低い温度になると、特定の分子鎖が伸長（膨潤）して親水性が向上する。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ｂである場合においては、着脱部材１６の温度が所定の応答温度より高い温度になると、特定の分子鎖が伸長（膨潤）して親水性が向上する。結果として、第１分離室１２ａの着脱部材１６に備えられた温度応答性高分子３１は、結合物質３０と結合した分離対象物（第１細胞）の抗原を着脱部材１６から脱離させる。これにより、分離対象物（第１細胞）は、着脱部材１６から脱離して第１分離室１２ａ内の回収液に含まれる。これと同様に、第２分離室１２ｂの着脱部材１６に備えられた温度応答性高分子３１は、結合物質３０と結合した分離対象物（第２細胞）の抗原を着脱部材１６から脱離させる。これにより、分離対象物（第２細胞）は、着脱部材１６から脱離して第２分離室１２ｂ内の回収液に含まれる。なお、流体制御部１０８がポンプ７８を停止させる第５停止時間は、分離対象物が着脱部材１６から脱離するために要する時間である。
【0083】
ステップＳ８において、コントローラ４４は、フィルタ１０から分離対象物を回収する。コントローラ４４の流体制御部１０８は、分離回路４２を図１６で示される状態にする。すなわち、流体制御部１０８は、バルブ７６ｆ、バルブ９２ａ、バルブ９２ｃ、バルブ１０２ａを開け、他のバルブを閉じる。更に、流体制御部１０８は、ポンプ７８を動作させる。すると、回収液容器６２の回収液が、図１６の矢印で示される経路を流れ、回収液容器９４で回収される。回収液容器９４で回収された回収液には、分離対象物（第１細胞、第２細胞）が含まれる。回収液がフィルタ１０を流れている間、コントローラ４４の温度制御部１１０は、温度調整部９３を制御して、第１分離室１２ａ及び第２分離室１２ｂの各々の着脱部材１６の温度を温度応答性高分子３１の応答温度にする。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ａである場合においては、制御部１１０は、温度調整部９３を制御して、第１分離室１２ａ及び第２分離室１２ｂの各々の着脱部材１６の温度を温度応答性高分子３１ａの応答温度より低い温度にする。温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ｂである場合においては、制御部１１０は、温度調整部９３を制御して、第１分離室１２ａ及び第２分離室１２ｂの各々の着脱部材１６の温度を温度応答性高分子３１ａの応答温度より高い温度にする。
【0084】
上記実施形態において、着脱部材１６に備えられる結合物質３０は、分離対象物の抗原と結合し得る（温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ａである場合においては、応答温度以上の温度において、着脱部材１６に備えられる結合物質３０は、分離対象物の抗原と結合し得る；温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ｂである場合においては、応答温度以下の温度において、着脱部材１６に備えられる結合物質３０は、分離対象物の抗原と結合し得る）。また、着脱部材１６に備えられる温度応答性高分子３１は、温度応答性高分子３１の温度が応答温度（温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ａである場合においては、応答温度より低い温度；温度応答性高分子３１が温度応答性高分子３１ｂである場合においては、応答温度より高い温度）になると、結合物質３０から分離対象物の抗原を脱離させ得る。このため、上記実施形態によれば、温度制御を行うことによって、着脱部材１６から細胞を剥離することができる。つまり、上記実施形態によれば、剥離剤を用いることなく着脱部材１６から細胞を剥離することができる。従って、上記実施形態によれば、着脱部材１６に付着した分離対象物の回収時に、分離対象物の損傷を抑制することができる。
【0085】
上記実施形態によれば、１つの分離装置４０を用いて、分離対象物を分離する工程及び分離対象物を回収する工程だけでなく、着脱部材１６を作製する工程の一部を行うことができる。
【0086】
［５ その他］
上述した分離装置４０は、基材２０に対する結合物質３０のプレコート（第２プレコート、第３プレコート）と、基材２０に対する温度応答性高分子３１のプレコート（第４プレコート）とを別々に行う。これに代わり、分離装置４０は、基材２０に対する結合物質３０のプレコートと、基材２０に対する温度応答性高分子３１のプレコートとを同時に行うこともできる。この場合、結合物質３０と温度応答性高分子３１とを含む混合溶液が用いられてもよい。
上述した分離装置４０は、基材２０に対する結合物質３０のプレコート（第２プレコート、第３プレコート）と、基材２０に対する温度応答性高分子３１のプレコート（第４プレコート）とを別々に行う。これに代わり、分離装置４０は、基材２０に対する結合物質３０のプレコートと、基材２０に対する温度応答性高分子３１のプレコートとを同時に行うこともできる。この場合、結合物質３０と温度応答性高分子３１とを含む混合溶液が用いられてもよい。
【0087】
なお、ユーザは、分離装置４０を用いてプレコートを行わなくてもよい。すなわち、ユーザは、各々の容器１８に、図２Ａ～図２Ｃのいずれかで示される着脱部材１６を直接充填してもよい。この場合、分離装置４０には、図４で示されるアビジン液容器５４と、第１溶液容器５６と、第２溶液容器５８と、第３溶液容器６０の各々は不要である。また、図５で示される一連の処理には、フィルタ作製処理（ステップＳ２～ステップＳ５）は不要である。
【0088】
なお、本発明は、上述した開示に限らず、本発明の要旨を逸脱することなく、種々の構成を採り得る。
【実施例0089】
［実施例１］
カラム（φ３０ｍｍ）の内側にビオチン固定化多孔質ポリウレタン（φ３０ｍｍ、厚さ１．２ｍｍ、テルモ社製）を５枚積層させて配置した。
カラム（φ３０ｍｍ）の内側にビオチン固定化多孔質ポリウレタン（φ３０ｍｍ、厚さ１．２ｍｍ、テルモ社製）を５枚積層させて配置した。
【0090】
ストレプトアビジン（富士フイルム社製、製品コード１９４－１７８６３）を５００μｇ／ｍＬの濃度となるようにダルベッコ リン酸緩衝生理食塩水（Ｄ－ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に添加して、ＳｔＡ／Ｄ－ＰＢＳ溶液を調製した。ＳｔＡ／Ｄ－ＰＢＳ溶液 ５ｍＬをカラムに注入し、３７℃で１５分間静置して、第１プレコートを行った。
【0091】
ビオチンが結合したブタＣＤ８抗体（Thermo Fisher社製、製品名：Invitrogen, CD8 alpha Monoclonal Antibody (76-2-11), Biotin）を５０μｇ／ｍＬの濃度となるようにＤ－ＰＢＳに添加して、ＣＤ８抗体／Ｄ－ＰＢＳ溶液を調製した。ＣＤ８抗体／Ｄ－ＰＢＳ溶液 ５ｍＬをカラムに注入し、３７℃で１５分間静置して、第２プレコートを行った。
【0092】
ポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミド（メルク製、製品番号５３５３１１）の末端のアミノ基と、ビオチンのカルボキシル基と、を、アミド結合させることにより、ポリ－Ｎ－イソプロピルアクリルアミドにビオチンを固定した（ビオチン化ＰＮＩＰＡＡｍ）。
【0093】
上記にて得られたビオチン化ＰＮＩＰＡＡｍを８００μｇ／ｍＬの濃度となるようにＤ－ＰＢＳに添加して、ビオチン化ＰＮＩＰＡＡｍ／Ｄ－ＰＢＳ溶液を調製した。このビオチン化ＰＮＩＰＡＡｍ／Ｄ－ＰＢＳ溶液 ５ｍＬをカラムに注入し、４℃で１５分間静置して、第４プレコートを行った。
【0094】
ブタ血液１０００ｍＬをＣＰＤ液（組成：クエン酸ナトリウム水和物 ２６．３０ｇ、クエン酸水和物 ３．２７ｇ、ブドウ糖 ２３．２０ｇ、リン酸二水素ナトリウム ２．５１ｇ／１，０００ｍＬ 注射用水）１４０ｍＬに採血して、ブタ全血（ＣＰＤ採血）を準備した。ブタ全血（ＣＰＤ採血）５ｍＬをカラムに注入し、３７℃で１５分間インキュベートした。
【0095】
カラムを開放し、ブタ全血（ＣＰＤ採血）を回収した。
【0096】
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）１３５ｍＬをカラムに注入し、カラム内を洗浄した。
【0097】
カラムにＰＢＳ １５ｍＬを４℃にて流速１ｍＬ／ｍｉｎで流し、ＣＤ８陽性細胞を回収した。
【符号の説明】
【0098】
１０…フィルタ １２…分離室
１６…着脱部材 ２０…基材
２６…着脱層 ３０…結合物質
３１…温度応答性高分子 ４０…分離装置
４６…供給部 ５０…回収部
１１０…温度制御部
１６…着脱部材 ２０…基材
２６…着脱層 ３０…結合物質
３１…温度応答性高分子 ４０…分離装置
４６…供給部 ５０…回収部
１１０…温度制御部
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
