特開 2024-123159 遺伝子治療のためのアデノ随伴ウイルスベクターのくも膜下腔内投与

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024123159

(43)【公開日】2024-09-10

(54)【発明の名称】遺伝子治療のためのアデノ随伴ウイルスベクターのくも膜下腔内投与

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/76 20150101AFI20240903BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 25/06 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240903BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 31/06 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240903BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240903BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20240903BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20240903BHJP

   C07K 16/40 20060101ALI20240903BHJP

   C07K 16/12 20060101ALI20240903BHJP

   C07K 16/08 20060101ALI20240903BHJP

   C07K 16/10 20060101ALI20240903BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240903BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20240903BHJP

【ＦＩ】

A61K35/76

A61P25/16 ZNA

A61P25/00

A61P25/14

A61P17/02

A61P19/00

A61P25/06

A61P31/00

A61K39/395 V

A61K39/395 N

A61K39/395 D

A61K48/00

A61P31/06

A61P31/04

A61P31/18

A61P31/22

A61P31/12

C12N15/13

C12N15/864 100Z

C07K16/18

C07K16/40

C07K16/12

C07K16/08

C07K16/10

A61P9/10

A61P25/16

A61K35/76 ZNA

C12P21/08

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024100272

(22)【出願日】2024-06-21

(62)【分割の表示】P 2022085777の分割

【原出願日】2016-10-27

(31)【優先権主張番号】62/247,498

(32)【優先日】2015-10-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】502409813

【氏名又は名称】ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア

(74)【代理人】

【識別番号】110000741

【氏名又は名称】弁理士法人小田島特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ウイルソン，ジェームス・エム

(72)【発明者】

【氏名】ヒンデラー，クリスチャン

(72)【発明者】

【氏名】ロスウェル，ウイリアム・トーマス

(57)【要約】      （修正有）

【課題】中枢神経系へのくも膜下腔内送達のため配合されるＡＡＶベクターを含む組成物を提供する。
【解決手段】中枢神経系へのくも膜下腔内送達のため配合されている最低１種のＡＡＶベクターを含む組成物が提供される。該組成物は、そのための発現制御配列に連結されている免疫グロブリン構築物をコードする配列を含有する最低１種の発現カセット及び製薬学的に許容できる担体を含む。該免疫グロブリン構築物は新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する低下された親和性を有するか又は測定可能な親和性を有しないように改変されている免疫グロブリンでありうる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、外傷性脳損傷、脊髄損傷、偏頭痛、卒中及び／又は感染症の１種又はそれ以上から選択される神経変性障害の処置のためにくも膜下腔内に送達するため配合される最低１種のＡＡＶベクターを含む組成物であって、該組成物は中枢神経系の細胞を標的とするＡＡＶキャプシドを含むＡＡＶベクターを含み、前記キャプシドは最低１個のＡＡＶ末端逆位配列と、そのための発現制御配列とに操作可能に連結されている免疫グロブリン構築物をコードする配列をその中にパッケージングしており、前記組成物は製薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤をさらに含む、組成物。

【請求項2】

前記免疫グロブリン構築物は、一本鎖可変フラグメント抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ）３、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、イムノアドヘシン、モノクローナル抗体、ラクダ科又はサメの重鎖免疫グロブリンから選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記障害はアルツハイマー病であり、かつ前記組成物は、Ａβ、βセクレターゼ及び／又はτタンパク質に特異的な免疫グロブリンを発現する最低１種のベクターストックを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記免疫グロブリンはｓｃＦｖである、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

前記ｓｃＦｖは、配列番号８、配列番号１０又は配列番号１２から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

最低２種の異なる抗体発現カセットを含むＡＡＶストックを含む、請求項１ないし５のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項7】

単一免疫グロブリン発現カセットを含むＡＡＶストックを含む、請求項１ないし７のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項8】

くも膜下腔内に送達され、中枢神経系及び全身の双方で症状を処置する、請求項１に記載の組成物。

【請求項10】

前記免疫グロブリン構築物が、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性が低下するか又は測定可能な親和性がないように改変されている免疫グロブリンを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項11】

中枢神経系の細胞を標的とするＡＡＶキャプシドを含む最低１種のＡＡＶベクターストックを含む、アルツハイマー病の処置に有用な組成物であって、該キャプシドが最低１個のＡＡＶ末端逆位配列と、そのための発現制御配列とに操作可能に連結されている免疫グロブリン構築物をコードする配列をその中にパッケージングしており、前記最低１種のベクターストックが、Ａβ、βセクレターゼ及び／又はτタンパク質に特異的な免疫グロブリンを発現し、かつ、製薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤をさらに含む、上記組成物。

【請求項12】

前記免疫グロブリンがｓｃＦｖである、請求項１１に記載の組成物。

【請求項13】

前記ｓｃＦｖが、配列番号８、配列番号１０又は配列番号１２から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

アルツハイマー病の処置方法であって、最低１種のベクターストックが、Ａβ、βセクレターゼ及び／又はτタンパク質に特異的な免疫グロブリンを発現する請求項１ないし５のいずれか１つに記載の組成物のくも膜下腔内送達をそれの必要な被験体に投与することを含む、上記方法。

【請求項15】

ＡＬＳの処置方法であって、請求項１又は２に記載の組成物をくも膜下腔内に送達することを含み、最低１種のＡＡＶベクターストックの組成物が、Ｄｅｒｌｉｎ－１結合領域に特異的な免疫グロブリン、神経突起伸長阻害物質及び／又はＡＬＳ酵素スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）に対する抗体構築物並びにそれらのバリアントを発現するが、但し抗ＳＯＤ１抗体はＳｃＦｖフラグメント以外である、方法。

【請求項16】

パーキンソン病又は関連するシヌクレイン病の処置方法であって、請求項１又は２に記載の組成物をくも膜下腔内に送達することを含み、該組成物中で最低１種のベクターストックが、１種又はそれ以上のロイシンリッチリピートキナーゼ２抗体、ｄａｒｄａｒｉｎ（ＬＲＲＫ２）抗体、αシヌクレイン抗体及び／又はＤＪ－１（ＰＡＲＫ７）抗体をコードする、方法。

【請求項17】

多発性硬化症の処置方法であって、請求項１又は２に記載の組成物をくも膜下腔内に送達することを含み、該組成物中で最低１種のベクターストックが、ａ４インテグリン、ＬＩＮＧＯ１、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＩＬ１２、ｐ４０＋ＩＬ２３ｐ４０、ＬＩＮＧＯ－１、ＣＤ４０、及びｒＨＩｇＭ２２、ＣＤ５２、ＩＬ１７、ＣＤ１９、並びに／又はＳＥＭＡ４Ｄの１種又はそれ以上に対し向けられる免疫グロブリンをコードする、方法。

【請求項18】

中枢神経系の感染症の処置方法であって、請求項１又は２に記載の組成物をくも膜下腔内に送達することを含み、該組成物中で最低１種のベクターストックが、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ）、ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｄｏｒｆｅｒｉａ）、ヒト免疫不全ウイルス、ヘルペス科ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス、日本脳炎、ヨーロッパ脳炎及び／又はＪＣウイルスの１種に対し向けられる免疫グロブリンをコードする、方法。

【請求項19】

プリオン関連疾患の処置方法であって、請求項１ないし８のいずれか１つに記載の組成物をくも膜下腔内に送達することを含み該組成物中で最低１種のベクターストックが、主要プリオンタンパク質又はＰｒＰ^Scの１種又はそれ以上に向けられる免疫グロブリンをコードする、方法。

【請求項20】

前記組成物は血液脳関門の化学的又は物理的破壊の非存在下で投与される、請求項１４ないし２０のいずれか１つに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

中枢神経系へのくも膜下腔内送達のため配合されている最低１種のＡＡＶベクターを含む組成物が説明される。

【背景技術】

【0002】

電子形式で提出される資料の引用することによる組み込み
出願人は、ここに、これとともに提出される配列表の資料を引用することにより組み込む。

【0003】

生物医学及び製薬学の研究者は、中枢神経系を冒す疾患を処置するための新たなかつより効果的な治療薬を考案するために働いてきた。しかしながら、脳の保護における血液脳関門の有効性を含む中枢神経系それ自体の生物学は、薬物送達に対する深刻な難題を提示する。これは、卒中、神経変性障害及び脳腫瘍のような多くの中枢神経系疾患のための利用可能な処置の欠如につながる。

【0004】

神経変性はニューロンの死を含むニューロンの構造又は機能の進行性の喪失の包括的用語である。筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病及びハンチントン病を含む多くの神経変性疾患は神経変性過程の結果として起こる。モノクローナル抗体治療を含む多様な治療がこうした神経変性疾患の処置について記載されている。

【0005】

アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は複製欠損パルボウイルスであり、その一本鎖ＤＮＡゲノムはヌクレオチド１４５個の末端逆位配列（ＩＴＲ）を含む長さが約４．７ｋｂである。ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）ゲノムのヌクレオチド配列は、非特許文献１により修正されるとおり非特許文献２に提示されている。ウイルスＤＮＡの複製（ｒｅｐ）、被胞化／パッケージング及び宿主細胞染色体組込みを指図するシスに作用する配列がＩＴＲ内に含まれている。３種のＡＡＶプロモーター（それらの相対的な地図位置についてｐ５、ｐ１９及びｐ４０と命名される）が、ｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子をコードする２個のＡＡＶ内部オープンリーディングフレームの発現を駆動する。単一ＡＡＶイントロンの（ヌクレオチド２１０７及び２２２７での）差次的スプライシングと結合した２個のｒｅｐプロモーター（ｐ５及びｐｉ ９）は、ｒｅｐ遺伝子からの４種のｒｅｐタンパク質（ｒｅｐ ７８、ｒｅｐ ６８、ｒｅｐ ５２及びｒｅｐ ４０）の産生をもたらす。Ｒｅｐタンパク質は、究極的にウイルスゲノムの複製を司る複数の酵素特性を保有する。ｃａｐ遺伝子はｐ４０プロモーターから発現され、そしてそれは３種のキャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３をコードする。選択的スプライシング及び非コンセンサス翻訳開始部位が３種の関連したキャプシドタンパク質の産生を司る。単一のコンセンサスポリアデニル化部位はＡＡＶゲノムの地図位置９５に配置されている。ＡＡＶの生活環及び遺伝学は非特許文献３で総説されている。ＡＡＶゲノムのコーディング配列はトランスで提供され得、内因性ウイルス遺伝子よりはむしろ目的の遺伝子を運搬するＡＡＶベクターを生成することを可能にする。これらＡＡＶベクターはｉｎ ｖｉｖｏで遺伝子移入が可能である。複数の血清型のＡＡＶが存在しかつ多様な組織向性を提供する。既知の血清型は、例えばＡＡＶｌ、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０及びＡＡＶ１を含む。ＡＡＶ９は特許文献１及び非特許文献４に記載されている。

【0006】

ＳＯＤ１を標的とするための一本鎖の分泌可能なＳｃＦｖ抗体を運搬するＡＡＶベクターのくも膜下腔内投与がＡＬＳのための潜在的治療アプローチとして記載されている。例えば非特許文献５を参照されたい。

【0007】

必要とされるのは、完全長抗体を制限なしに含む免疫グロブリン構築物の中枢神経系への他の送達方法である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】米国特許第７，１９８．９５１号明細書

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｒｕｆｆｉｎｇ ＥＴ ａｈ、Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ、７５：３３８５－３３９２（１９９４）

【非特許文献2】Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ、４５：５５５－５６４（１９８３）

【非特許文献3】Ｍｕｚｙｃｚｋａ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５８：９７－１２９（１９９２）

【非特許文献4】Ｇａｏら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ、７８：６３８１－６３８８（２００４）

【非特許文献5】Ｐ Ｐａｔｅｌら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１４）：２２、３、４９８－５１０

【発明の概要】

【0010】

中枢神経系へのくも膜下腔内送達のため配合されるＡＡＶベクターを含む組成物が提供され、該組成物は、そのための発現制御配列に操作可能に連結されているＣＮＳへの送達のための免疫グロブリン生成物をコードする配列を含む最低１種の発現カセット並びに製薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む。一局面において、組成物は血液脳関門の化学的又は物理的破壊の非存在下で投与される。一例において、免疫グロブリン構築物は新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する低下された親和性を有するか又は測定可能な親和性を有しないように改変されている免疫グロブリンを含む。

【0011】

一局面において、中枢神経系の状態の処置のためのくも膜下腔内送達のため配合されるＡＡＶベクターを含む組成物が記載され、前記組成物は、中枢神経系の細胞を標的とするＡＡＶキャプシドを含むＡＡＶベクターを含み、該キャプシドは最低１個のＡＡＶ末端逆位配列及びそのための発現制御配列に操作可能に連結されている免疫グロブリン構築物をコードする配列をその中にパッケージングしており、前記組成物は製薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤をさらに含む。適切に、コードされる免疫グロブリンは、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する低下された親和性を有するか又は測定可能な親和性を有しないように変異又は操作されている。

【0012】

神経障害及び／又は中枢神経系の感染症の処置で有用な免疫グロブリン構築物をコードする最低１種のＡＡＶベクターストックを含む組成物の使用が本明細書に提供される。

【0013】

別の局面において、最低１種のＡＡＶベクターストックがＡβ、βセクレターゼ及び／又はτタンパク質に特異的な免疫グロブリンを発現する本明細書説明のＡＡＶベクター組成物をそれの必要な被験体のくも膜下腔内に送達することを含むアルツハイマー病の処置方法が提供される。

【0014】

なお別の局面において、最低１種のＡＡＶベクターストックがＡＬＳ酵素スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）に特異的な免疫グロブリン及びそのバリアントを発現するが、但し該抗ＳＯＤ１抗体はＳｃＦｖフラグメント、Ｄｅｒｌｉｎ－１結合領域及び／
又は神経突起伸長阻害物質に対する抗体構築物以外である、本明細書説明のＡＡＶベクター組成物をくも膜下腔内に送達することを含むＡＬＳの処置方法が提供される。

【0015】

なお別の態様において、最低１種のＡＡＶベクターストックが１種又はそれ以上のロイシンリッチリピートキナーゼ２抗体、ｄａｒｄａｒｉｎ（ＬＲＲＫ２）抗体、αシヌクレイン抗体及び／又はＤＪ－１（ＰＡＲＫ７）抗体をコードする、本明細書に提供されるＡＡＶベクター組成物をくも膜下腔内に送達することを含むパーキンソン病又は関連するシヌクレイン病の処置方法が提供される。

【0016】

なおさらなる一局面において、本明細書に提供されるところのＡＡＶベクター組成物のくも膜下腔内送達を必要とする多発性硬化症の処置方法が本明細書に提供され、その組成物中で、最低１種のベクターストックがａ４インテグリン、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＩＬ１２、ｐ４０＋ＩＬ２３ｐ４０、ＬＩＮＧＯ－１、ＣＤ４０、及びｒＨＩｇＭ２２、ＣＤ５２、ＩＬ１７、ＣＤ１９、並びに／又はＳＥＭＡ４Ｄの１種又はそれ以上に対し向けられる免疫グロブリンをコードする。

【0017】

別の局面において、本明細書に提供されるＡＡＶベクター組成物をくも膜下腔内に送達することを含む中枢神経系の感染症の処置方法が提供され、その組成物中で、最低１種のベクターストックは前記感染症を引き起こす病原体に対し向けられる免疫グロブリンをコードする。例は、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（結核）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）（髄膜炎）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ）（リステリア症）、ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ
ｂｕｒｄｏｒｆｅｒｉａ）（ライム病）、ヒト欠乏ウイルス（ｈｕｍａｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）（後天性免疫不全症候群）、ヘルペス科ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス及び／又はＪＣウイルスの１種又はそれ以上に対し向けられる１種又はそれ以上の免疫グロブリンを含むが、これらに限られない。免疫グロブリンの標的の他の例が本出願の別の場所に提供され、そして引用することにより本明細書に組み込まれる。

【0018】

一局面において、最低１種のベクターストックが主要プリオンタンパク質又はＰｒＰＳｃの１種又はそれ以上に向けられる免疫グロブリンをコードするＡＡＶベクター組成物のくも膜下腔内送達を含む、プリオン関連疾患の処置方法が提供される。

【0019】

本発明のなお他の局面及び利点は、本発明の以下の詳細な説明から容易に明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1A】ニワトリβアクチン（ＣＢ）プロモーター下にイムノアドヘシンを発現し、後頭下穿刺によりくも膜下腔内に送達される、ＡＡＶ９ベクターを投与された動物２頭についての脳脊髄液（ＣＳＦ）中のアカゲザル由来イムノアドヘシン（２０１ＩＡ）の濃度を示すグラフである。ＣＳＦはベクター投与後定期的に回収し、４００日が本図に示される最後の収集時間点である。ＣＳＦの目盛は８００ｎｇ／ｍＬまでである。

【図1B】ニワトリβアクチン（ＣＢ）プロモーター下にイムノアドヘシンを発現し、後頭下穿刺によりくも膜下腔内に送達される、ＡＡＶ９ベクターを投与された動物２頭についての血清中のアカゲザル由来イムノアドヘシン（２０１ＩＡ）の濃度を示すグラフである。血清はベクター投与後定期的に回収し、４００日が本図に示される最後の収集時間点である。血清の濃度目盛は１２０μｇ／ｍＬまでである。

【0021】

［発明の詳細な説明］
本明細書に説明される組成物及び投与計画は中枢神経系への免疫グロブリン構築物の送達に有用である。本明細書に説明される組成物は中枢神経系（ＣＮＳ）へのくも膜下腔内送達のための免疫グロブリン構築物を有するＡＡＶを含む。

【0022】

本明細書で使用される免疫グロブリン構築物（本明細書で定義される抗体又は抗体フラグメントを含む）は、中枢神経系内に位置する細胞表面抗原又は受容体に結合するポリペプチドに基づく部分をコードする。こうした受容体は、中枢神経系に感染する細菌、ウイルス、真菌又は他の病原体上に配置されている場合があり、及び／又は、中枢神経系の障害及び／又はこうした病原体と関連するタンパク質、例えば分泌タンパク質及び／又はタンパク質凝集物の場合がある。

【0023】

「免疫グロブリン」という用語は抗体、その機能的フラグメント及びイムノアドヘシンを含むように本明細書で使用される。抗体は、例えばポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ラクダ科の動物の単一ドメイン抗体、細胞内抗体（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ａｎｔｉｂｏｄｙ）（「細胞内抗体（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）」）、組換え抗体、多特異性抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）₂、Ｆ（ａｂ）₃、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）₂のような抗体フラグメント、一本鎖可変フラグメント抗体（ｓｃＦｖ）、タンデ
ム／ビスｓｃＦｖ、Ｆｃ、ｐＦｃ’、ｓｃＦｖＦｃ（又はｓｃＦｖ－Ｆｃ）、ジスルフィドＦｖ（ｄｓｆｖ）、ＢｉＴＥ抗体のような二特異性抗体（ｂｃ－ｓｃＦｖ）；ラクダ科の動物の抗体、再表面化抗体（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ヒト化抗体、完全にヒトの抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ＮＡＮＯＢＯＤＹ（登録商標）としてもまた知られる）、キメラ抗体、最低１個のヒト定常領域を含むキメラ抗体などを含む多様な形態で存在しうる。「抗体フラグメント」はその標的例えば細胞表面抗原又は受容体に結合する免疫グロブリンの可変領域の少なくとも一部分を指す。

【0024】

一態様において、本明細書に説明される組成物は、完全長抗体、二特異性抗体、イムノアドヘシン［免疫グロブリン定常ドメイン及び典型的にはまたヒンジ及びＦｃ領域も含む］、モノクローナル抗体、重鎖のラクダ科の動物又はサメの免疫グロブリンに存在するようなものを含むフラグメントの結晶化可能な領域（Ｆｃ部分）を含む免疫グロブリンのＡＡＶに媒介される送達を提供する。完全長抗体及び２種の抗体の組合せを送達するためのＡＡＶの使用は、例えば“Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ＡＡＶ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｄｕａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ”、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／３０５３３号明細書、２０１５年５月１３日出願、“Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ
Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｒａｉｎ”、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／２７４９１号明細書、２０１５年４月２４日出願に説明されており、引用することにより本明細書に組み込まれる。場合によっては、組成物は本明細書に説明される２種又はそれ以上の異なるＡＡＶ－免疫グロブリン構築物を含む場合がある。

【0025】

別の態様において、本明細書に説明される組成物は、Ｆｃ部分、例えばＦａｂ（典型的にＡｂのパパイン消化により形成されるフラグメント抗原結合フラグメント）、Ｆ（ａｂ’）₂フラグメント（典型的にＡｂのペプシン消化により形成される２個の抗原結合フラ
グメントを含有する）、Ｆａｂ’フラグメント（典型的にＦ（ａｂ’）₂の還元により形
成される）、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）₃（三特異性抗体フラグメント）、Ｆｖ（２個
の可変ドメインのみ含有する免疫グロブリン）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ又はＶ_HＨ
ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ））例えばラクダ科の動物又はサメの抗体、又はｓｃＦｖ構築物を除外する免疫グロブリンのＡＡＶに媒介される送達を提供する。こうした組成物は２個又はそれ以上の異なるＡＡＶｓｃＦｖ構築物を含む場合がある。

【0026】

タンパク質又は核酸に言及して使用される場合の「異種」という用語は、該タンパク質又は核酸が、天然では相互に対し同一の関係で見出されない２種又はそれ以上の配列又は下位配列を含むことを示す。例えば、新たな機能的核酸を作成するために配置される無関係の遺伝子からの２種又はそれ以上の配列を有する核酸は組換えで製造されるのが典型的である。例えば、一態様において、核酸は、異なる遺伝子からのコーディング配列の発現を指図するよう配置される１つの遺伝子からのプロモーターを有する。従って、前記コーディング配列に関して該プロモーターは異種である。

【0027】

本明細書で使用されるところの「発現カセット」は、免疫グロブリン遺伝子（１種又は複数）（例えば免疫グロブリン可変領域、免疫グロブリン定常領域、完全長軽鎖、完全長重鎖又は免疫グロブリン構築物の別のフラグメント）、プロモーターを含みかつそのための他の制御配列を包む場合がある核酸分子を指し、そのカセットは、遺伝要素（例えばプラスミド）を介してパッケージング宿主細胞に送達されそしてウイルスベクターのキャプシド（例えばウイルス粒子）中にパッケージングされうる。典型的には、ウイルスベクターを生成するためのこうした発現カセットは、ウイルスゲノムのパッケージングシグナル及び本明細書に説明されるもののような他の発現制御配列により隣接される本明細書に説明される免疫グロブリン配列を含む。

【0028】

本明細書で使用される「ベクターストック」又は「ＡＡＶベクターストック」は、本明細書で定義されるところの免疫グロブリン（１種又は複数）をコードするＡＡＶ以外の配列をその中にパッケージングしているＡＡＶウイルス粒子のゲノムコピーの集団を指す。適切には、ベクターストックは、所望の生理学的効果を達成するのに十分な数の組換えＡＡＶベクターのゲノムコピー（ＧＣ）を含む。所望の生理学的効果が達成される場合、組成物中のベクターストックの量、用量又は投与計画を、ｒＡＡＶベクター又はベクターストックの「有効量」と称することができる。

【0029】

別の方法で明記されない限り、「中枢神経系」は脊髄及び脳を指し、脊髄及び脳を除外する「末梢神経系」と対照をなす。ニューロン細胞及びグリア細胞を含む中枢神経系内の多様な細胞タイプが存在する。成熟系中のグリアは星状細胞、乏突起細胞及びミクログリア細胞を含む。本発明で使用されるベクターのためのＡＡＶキャプシドは、好ましくは、中枢神経系のこれら細胞タイプの最低１種を形質導入し及び／又はそれら中で発現することができるもののなから選択される。

【0030】

本明細書で使用されるところの「くも膜下腔内送達」又は「くも膜下腔内投与」という用語は、脊柱管中への、より具体的にはそれが脳脊髄液（ＣＳＦ）に達するようにくも膜下腔中への注入を介する薬物のための投与経路を指す。くも膜下腔内送達は腰椎穿刺、脳室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）（脳室内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）（ＩＣＶ）を含む）、後頭葉下／大槽内及び／又はＣ１－２穿刺を含む場合がある。例えば、物質を腰椎穿刺によってくも膜下腔全体への拡散のため導入しうる。別の例において、注入は大槽中への場合がある。

【0031】

本明細書で使用されるところの「大槽内送達」又は「大槽内投与」という用語は、直接、脳延髄大槽（ｃｉｓｔｅｒｎａ ｍａｇｎａ ｃｅｒｅｂｅｌｌｏｍｅｄｕｌａｒｉｓ）の脳脊髄液中に、より具体的には後頭葉下穿刺を介する又は大槽中への直接注入による又は永続的に配置されるチューブを介する、薬物のための投与経路を指す。

【0032】

上で説明される、数値を修飾するために使用される場合の「約」という用語は、別の方法で明記されない限り±１０％の変動を意味する。

【0033】

本明細及び請求の範囲全体で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｃ
ｏｎｔａｉｎ）」という用語、並びに変形のなかでも「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（こと）（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」及び「含む（こと）（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」を含むその変形は、他の成分、要素、整数、段階などを含む。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」又は「からなる（こと）（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語は他の成分、要素、整数、段階などを排除する。

【0034】

ＡＡＶベクターからの発現のため、１種又はそれ以上の神経変性障害の処置で有用な免疫グロブリンをコードする核酸構築物が、本発明のＡＡＶ組成物を介する送達のため操作又は選択されうる。こうした障害は、伝達性海綿状脳症（例えばクロイツフェルト・ヤコブ病）、パーキンソン病、筋萎縮性（ａｍｙｏｔｒｏｐｉｃ）側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、カナバン病、外傷性脳損傷、脊髄損傷（ＡＴＩ３３５、Ｎｏｖａｒｔｉｓによる抗ｎｏｇｏ１）、偏頭痛（Ａｌｄｅｒ ＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによるＡＬＤ４０３；ＥｌｉによるＬＹ２９５１７４２；Ｌａｂｒｙｓ ＢｉｏｌｏｇｉｃｓによるＲＮ３０７）、リソソーム蓄積症、卒中、及び中枢神経系を冒す感染症を含むがこれらに限られない。

【0035】

なお他の核酸は、ロイシンリッチリピート、及びＮｏｇｏ受容体の機能的成分でありかつ多発性硬化症、パーキンソン病又は本態性振戦を伴う患者における本態性振戦に関連する免疫グロブリン様ドメイン含有タンパク質１（ＬＩＮＧＯ－１）に向けられる免疫グロブリンをコードしうる。１つのこうした商業的に入手可能な抗体はオクレリズマブ（Ｂｉｏｇｅｎ、ＢＩＩＢ０３３）である。例えば米国特許第８，４２５，９１０号明細書を参照されたい。

【0036】

一態様において、核酸構築物はＡＬＳを伴う患者に有用な免疫グロブリン構築物をコードする。適する抗体の例は、ＡＬＳ酵素スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）に対する抗体及びそのバリアント（例えばＡＬＳバリアントＧ９３Ａ、Ｃ４Ｆ６ ＳＯＤ１抗体）；Ｄｅｒｌｉｎ－１結合領域に向けられるＭＳ７８５）；神経突起伸長阻害物質に対する抗体（ＮＯＧＯ－Ａ又はレティキュロン（Ｒｅｔｉｃｕｌｏｎ）４）、例えばＧＳＫ１２２３２４９、オザネズマブ（ヒト化、ＧＳＫ、多発性硬化症に有用としてもまた説明されている）を含む。

【0037】

アルツハイマー病を有する患者で有用な免疫グロブリンをコードする核酸配列を設計又は選択しうる。こうした抗体構築物は、例えばアデュマヌカブ（ａｄｕｍａｎｕｃａｂ）（Ｂｉｏｇｅｎ）、バピネオズマブ（Ｅｌａｎ；Ａβのアミノ末端に向けられるヒト化ｍＡｂ）；ソラネズマブ Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ、可溶性Ａβの中央部分に対するヒト化ｍＡｂ）；ガンテネルマブ（中外及びＨｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ、Ａβのアミノ末端及び中央部分双方に対し向けられる完全ヒトｍＡｂである）；クレネズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、単量体及び立体構造エピトープに作用するヒト化ｍＡｂ、オリゴマー及び前原線維の（ｐｒｏｔｏｆｉｂｒｉｌｌａｒ）形態のＡβを含む；ＢＡＮ２４０１（エーザイ株式会社、Ａβ前原線維に選択的に結合しかつＡβ前原線維の消失を高め及び／又は脳中のニューロンに対するそれらの毒性効果を中和するのいずれかと考えられているヒト化免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）ｍＡｂ）；ＧＳＫ ９３３７７６（Ａβのアミノ末端に対し向けられるヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体）；ＡＡＢ－００１、ＡＡＢ－００２、ＡＡＢ－００３（Ｆｃが操作されているバピネオズマブ）；ＳＡＲ２２８８１０（前原線維及び低分子量Ａβに対し向けられるヒト化ｍＡｂ）；ＢＩＩＢ０３７／ＢＡＲＴ（不溶性線維性ヒトＡβに対する完全ヒトＩｇＧ１、Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ｍ２６６、ｔｇ２５７６のような抗Ａβ抗体（Ａβオリゴマーに対する相対的特異性）［ＢｒｏｄｙとＨｏｌｔｚｍａｎ、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２００８；３１：１７５－１９３］を含む。他の抗体はβアミロイドタンパク質、Ａβ、βセクレターゼ及び／又はτタンパク質を標的とする場合がある。

【0038】

完全長抗アミロイドβ（Ａβ）のＦｃ領域を除外するよう設計された３種の抗Ａβ ｓｃＦｖ構築物が本明細書の実施例に具体的に説明される。これら構築物は、アミロイド関連の画像化の異常のリスクを低下させ及び／又は高モノクローナル抗体濃度への血管の曝露を制限するよう設計された。一態様において、具体的に説明するｓｃＦＶは線維性βアミロイドを結合する。例えば、重鎖可変領域がアミノ酸２１ないし１４３の配列を有しかつ軽鎖可変領域がアミノ酸１５９ないし２６５の配列を有する配列番号８のアミノ酸配列を有するｓｃＦＶを参照されたい。このｓｃＦＶのバリアントもまた含まれる。例えば、配列番号８に関して、異なるシグナル配列（アミノ酸１－２０）、異なるリンカーをＧｌｙ－Ｓｅｒリンカー（アミノ酸１４４ないし１５８）の代わりに用いることができるか、又はＨｉｓタグ（アミノ酸２６６ないし２７１）を除去しうる。本明細書に説明されるｓｃＦＶアミノ酸配列をコードする核酸配列が本明細書に提供される。例えば配列番号７を参照されたい。

【0039】

別の態様において、具体的に説明するｓｃＦＶはオリゴマー、可溶性及び線維性のβアミロイドに対し向けられる。例えば、ａａ２１ないし１３１の重鎖可変領域及びａａ１４７ないし２５８の軽鎖可変領域を有する配列番号１０のアミノ酸配列を参照されたい。このｓｃＦＶのバリアントもまた含まれる。例えば、配列番号１０に関して、異なるシグナル配列（アミノ酸１－２０）、異なるリンカーをＧｌｙ－Ｓｅｒリンカー（アミノ酸１３２ないし１４６）の代わりに用いることができるか、又はＨｉｓタグ（アミノ酸２５９－２６４）を除去しうる。本明細書に説明されるｓｃＦＶアミノ酸配列をコードする核酸配列が本明細書に提供される。例えば配列番号９を参照されたい。

【0040】

なお別の態様において、具体的に説明するｓｃＦＶは可溶性βアミロイドに対し向けられる。例えば、ａａ２１ないし１３１の重鎖可変領域及びａａ１４７ないし２５８の軽鎖可変領域を有する配列番号１２のアミノ酸配列を参照されたい。このｓｃＦＶのバリアントもまた含まれる。例えば、配列番号１２に関して、異なるシグナル配列（アミノ酸１－２０）、異なるリンカーをＧｌｙ－Ｓｅｒリンカー（アミノ酸１３２ないし１４６）の代わりに用いることができるか、又はＨｉｓタグ（アミノ酸２５９－２６４）を除去しうる。本明細書に説明されるｓｃＦＶアミノ酸配列をコードする核酸配列が本明細書に提供される。例えば配列番号１１を参照されたい。

【0041】

なお他の態様において、抗βアミロイド抗体は、エフェクター機能を最小限にするためにβアミロイドを標的とするためのＩｇＧ４モノクローナル抗体から得られるか、又は、Ｆｃ領域を欠くｓｃＦｖ以外の構築物が、アミロイド関連の画像化の異常（ＡＲＩＡ）及び炎症反応を回避するため選択される。これらの態様のあるものにおいて、ｓｃＦｖ構築物の１種又はそれ以上の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を、本明細書に提供されるところの別の適する免疫グロブリン構築物中で使用する。これらｓｃＦＶ及び他の操作された免疫グロブリンは、Ｆｃ領域を含有する免疫グロブリンに比較して血清中の免疫グロブリンの半減期を低下させうる。抗アミロイド分子の血清濃度を低下させることはＡＲＩＡのリスクをさらに低下させうる。血清中の抗アミロイド抗体の極めて高レベルは、アミロイド斑の高負荷量で脳血管を不安定化して血管透過性を引き起こしうるからである。

【0042】

パーキンソン病を伴う患者の処置のための他の免疫グロブリン構築物をコードする核酸を、例えばロイシンリッチリピートキナーゼ２、ｄａｒｄａｒｉｎ（ＬＲＲＫ２）抗体、；抗シヌクレイン及びαシヌクレイン抗体並びにＤＪ－１（ＰＡＲＫ７）抗体、を含む構築物を発現するように操作又は設計しうる。他の抗体はＰＲＸ００２（Ｐｒｏｔｈｅｎａ及びＲｏｃｈｅ）パーキンソン病及び関連シヌクレイン病を含む場合がある。これら抗体、とりわけ抗シヌクレイン抗体は、１種又はそれ以上のリソソーム蓄積症の処置でもまた有用でありうる。

【0043】

多発性硬化症を処置するための免疫グロブリン構築物をコードする核酸構築物を操作又は選択しうる。こうした免疫グロブリンは、２００６年に承認されたナタリズマブ（ヒト化抗ａ４イングリン（ｉｎｇｒｉｎ）、ｉＮＡＴＡ、Ｔｙｓａｂｒｉ、Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ及びＥｌａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ－１Ｈ、ヒト化抗ＣＤ５２）、リツキシマブ（リツジン（ｒｉｔｕｚｉｎ）、キメラ抗ＣＤ２０）、ダクリズマブ（Ｚｅｎｅｐａｘ、ヒト化抗ＣＤ２５）、オクレリズマブ（ヒト化、抗ＣＤ２０、Ｒｏｃｈｅ）、ウステキヌマブ（ＣＮＴＯ－１２７５、ヒト抗ＩＬ１２ ｐ４０＋ＩＬ２３ｐ４０）；抗ＬＩＮＧＯ－１、並びにｃｈ５Ｄ１２（キメラ抗ＣＤ４０）、並びにｒＨＩｇＭ２２（再ミエリン化モノクローナル抗体；Ａｃｏｒｄａ ａｎｄ ｔｈｅ Ｍａｙｏ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）のような抗体を含むか、それらに由来する場合がある。なお他の抗ａ４インテグリン抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＩＬ－１７、抗ＣＤ１９、抗ＳＥＭＡ４Ｄ及び抗ＣＤ４０抗体を、本明細書に説明されるところのＡＡＶベクターを介して送達しうる。

【0044】

中枢神経系の多様な感染症に対する抗体のＡＡＶに媒介される送達もまた本発明により企図している。こうした感染症は、例えばクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ケカビ目（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）目、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）スピーシーズ及びカンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）スピーシーズにより引き起こされるクリプトコッカス髄膜炎、脳膿瘍、脊髄硬膜感染症のような真菌性疾患；例えばトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｓ）、マンソン裂頭条虫（Ｓｐｉｒｏｍｅｔｒａ ｍａｎｓｏｎｏｉｄｅｓ（孤虫症（ｓｐａｒａｇａｎｏｉｓｉｓ））、エキノコックス属（Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）スピーシーズ（ｎｅｕｒｏ ｈｙｄａｔｏｓｉｓを引き起こす）のような病原体により引き起こされるトキソプラズマ症、マラリア及び原発性アメーバ性髄膜脳炎、並びに脳アメーバ症のような原生動物性；例えば結核、ハンセン病、脳梅毒、細菌性髄膜炎、ライム病（ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ））、ロッキー山紅斑病（リケッチア・リケッチ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ））、ＣＮＳノカルジア症（ノカルジア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）スピーシーズ）、ＣＮＳ結核（結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））、ＣＮＳリステリア症（リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ））、脳膿瘍及び神経ボレリア症のような細菌性；例えば、ヘルペス科ウイルス（ＨＳＶ）、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２（新生児単純ヘルペス脳炎）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ビッカースタッフ脳炎、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＴＣＮ－２０２はＴｈｅｒａｃｌｏｎｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓにより開発中であるのようなＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ－６）、Ｂウイルス（サルヘルペスウイルス）により引き起こされうるウイルス性髄膜炎、東部ウマ脳炎（ＥＥＥ）、セントルイス脳炎、ウエストナイルウイルス及び／又は脳炎、狂犬病、カリフォルニア脳炎ウイルス、ラクロス脳炎、麻疹脳炎、灰白髄炎、フラビウイルス脳炎、日本脳炎、マレー渓谷熱（Ｍｕｒｒａｙ
ｖａｌｌｅｙ ｆｅｖｅｒ）、ＪＣウイルス（進行性多病巣性白質脳症）、ニパウイルス（ＮｉＶ）、麻疹（亜急性硬化性全脳炎）のようなウイルス感染症；並びに、例えば亜急性硬化性全脳炎、進行性多病巣性白質脳症のような他の感染症；ヒト免疫不全ウイルス（後天的免疫不全症候群（ＡＩＤＳ））；化膿性連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）及び他のβ溶血性連鎖球菌（例えば小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害、ＰＡＮＤＡＳ）並びに／又はシデナム舞踏病、及びギラン・バレー症候群、並びにプリオンを含む場合がある。

【0045】

適する抗体構築物の例は、例えば第ＷＯ ２００７／０１２９２４Ａ２号明細書、２０１５年１月２９日（本明細書に引用することにより組み込まれる）に説明されるものを含む場合がある。

【0046】

例えば、他の核酸配列は抗プリオン免疫グロブリン構築物をコードしうる。こうした免疫グロブリンは、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ、プリオンタンパク質（ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）又はプロテアーゼ抵抗性タンパク質（ｐｒｏｔｅａｓｅ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）に対する、ＣＤ２３０（表面抗原分類（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）２３０）としてもまた知られる）に対し向けられうる。ＰｒＰのアミノ酸配列は、例えば、本明細書に引用することにより組み込まれるｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ＮＰ＿０００３０２に提供されている。該タンパク質は複数のアイソフォーム、すなわち正常ＰｒＰ^C
、疾患を引き起こすＰｒＰ^Sc及びミトコンドリア中のアイソフォームで存在し得る。ミスフォールドしたバージョンＰｒＰ^Scは、クロイツフェルト・ヤコブ病、ウシ海綿状脳症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、致死性家族性不眠症及びクールーのような多様な認知障害及び神経変性疾患と関連する。

【0047】

標的及び免疫グロブリンが一旦選択されれば、選択された免疫グロブリン（例えば重鎖及び／又は軽鎖（１種又は複数））のコーディング配列を得及び／又は合成することができる。タンパク質、ペプチド又はポリペプチド（例えば免疫グロブリンのような）の配列決定方法は当業者に既知である。タンパク質の配列が一旦知られれば、ウェブに基づく及び商業的に利用可能なコンピュータプログラム、ならびに前記アミノ酸配列を核酸コーディング配列に戻し翻訳するサービスに基づく企業が存在する。例えば、ＥＭＢＯＳＳによるｂａｃｋｔｒａｎｓｅｑ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｔ／；Ｇｅｎｅ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｉｎｆｉｎｉｔｙ．ｏｒｇ／ｓｍｓ／ｓｍｓ＿ｂａｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ．ｈｔｍｌ）；ＥｘＰａｓｙ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｔｏｏｌｓ／）を参照されたい。一態様において、ＲＮＡ及び／又はｃＤＮＡコーディング配列がヒト細胞中の最適の発現のため設計される。

【0048】

コドン最適化されたコーディング領域は多様な異なる方法により設計し得る。この最適化は、オンラインで利用可能な方法（例えばＧｅｎｅＡｒｔ）、公表された方法、又はコドン最適化サービスを提供する企業例えばＤＮＡ２．０（カリフォルニア州メンローパーク）を使用して実施しうる。１つのコドン最適化アルゴリズムが、例えば米国国際特許公開第ＷＯ ２０１５／０１２９２４号明細書（本明細書に引用することにより組み込まれる）に説明されている。例えば米国特許公開第２０１４／００３２１８６号明細書及び米国特許公開第２００６／０１３６１８４号明細書もまた参照されたい。適切には、産物のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の完全長を改変する。しかしながら、いくつかの態様において、ＯＲＦの１フラグメントのみを変えることができる。これらの方法の１つを使用することにより、いずれかの所定のポリペプチド配列に該頻度を適用しかつポリペプチドをコードするコドン最適化されたコーディング領域の核酸フラグメントを製造し得る。

【0049】

多数の選択肢が、コドンに対する実際の変化を実施するため又は本明細書に説明されるとおりに設計されるコドン最適化されたコーディング領域を合成するために利用可能である。こうした改変又は合成は、当業者に公知の標準的及び通例の分子生物学的操作を使用して実施し得る。あるアプローチにおいて、長さがそれぞれヌクレオチド８０－９０個でかつ所望の配列の長さにわたる一連の相補オリゴヌクレオチド対を、標準的方法により合成する。アニーリングに際してそれらが付着端を含有する塩基対８０－９０個の二本鎖フラグメントを形成するようなこれらオリゴヌクレオチド対を合成し、例えば、該オリゴヌ
クレオチド対中の各オリゴヌクレオチドを、該オリゴヌクレオチド対中の他のオリゴヌクレオチドに相補性である領域を超えて３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれ以上の塩基を伸長するように合成する。オリゴヌクレオチドの各対の一本鎖端はオリゴヌクレオチドの別の対の一本鎖端とアニーリングするよう設計する。前記オリゴヌクレオチド対がアニーリングされ、そして、これらの二本鎖フラグメントのおよそ５ないし６個がその後付着一本鎖端を介して一緒にアニーリングされ、そしてその後それらは一緒に連結され、及び標準的細菌クローニングベクター、例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州カールズバッドから入手可能なＴＯＰＯ（登録商標）ベクター中にクローン化される。前記構築物をその後標準的方法により配列決定する。所望の配列全体が一連のプラスミド構築物中で表されるような、一緒に連結された塩基対８０ないし９０個のフラグメントのフラグメント５ないし６本からなるこれら構築物、すなわち塩基対約５００個のフラグメントのいくつかを製造する。これらプラスミドの挿入断片をその後適切な制限酵素で切断し及び一緒に連結して最終構築物を形成する。最終構築物をその後標準的細菌クローニングベクター中にクローン化し及び配列決定する。付加的な方法は当業者に即座に明らかであろう。加えて、遺伝子合成が商業的に容易に利用可能である。

【0050】

本明細書に説明される免疫グロブリン遺伝子を、「野生型」すなわち公表され若しくは商業的に入手可能な、又は他の既知の定常免疫グロブリンドメインを発現するために使用しうるか、或いは、免疫グロブリン上に存在するＦｃ結合部位に対する親和性を減少若しくはそれへの結合を消失させるよう操作し得る。数種の異なる種類のＦｃ受容体が存在し、それらはそれらが認識する抗体のタイプに基づき分類される。本明細書で使用される「ＦｃＲｎ」はＩｇＧを結合する新生児Ｆｃ受容体を指す。それは構造がＭＨＣクラスＩタンパク質に類似している。ヒトにおいて、それはＦＣＧＲＴ遺伝子によりコードされる。Ｆｃ受容体は例えば血液脳関門の上皮細胞を含む多様な細胞タイプ上に存在している。本明細書で使用される「ＦｃＲｎ結合ドメイン」という用語は、ＦｃＲｎに直接又は間接的に結合するタンパク質ドメインを指す。ＦｃＲｎは哺乳動物ＦｃＲｎでありうる。さらなる態様において、ＦｃＲｎはヒトＦｃＲｎである。ＦｃＲｎに直接結合するＦｃＲｎ結合ドメインは抗体Ｆｃ領域である。一方では、ヒトＦｃＲｎ結合活性を有するアルブミン又はＩｇＧのようなポリペプチドに結合することが可能な領域は、アルブミン、ＩｇＧ又はこうしたものを介してヒトＦｃＲｎに間接的に結合し得る。従って、こうしたヒトＦｃＲｎ結合領域はヒトＦｃＲｎ結合活性を有するポリペプチドに結合する領域でありうる。本明細書で使用されるところの「Ｆｃ領域」という用語は、ＦｃＲｎ、哺乳動物ＦｃＲｎ又はヒトＦｃＲｎに直接結合するＦｃＲｎ結合ドメインを指す。具体的には、Ｆｃ領域は抗体のＦｃ領域である。Ｆｃ領域は哺乳動物Ｆｃ領域又はより具体的にはヒトＦｃ領域でありうる。とりわけ、Ｆｃ領域はヒト免疫グロブリンの第二及び第三定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）内に位置しうる。さらに、Ｆｃ領域はＣＨ２及びＣＨ３のヒンジでありうる。一態様において、免疫グロブリン構築物はＩｇＧである。さらなる一態様において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。他のＩｇアイソタイプを同様に使用し得る。

【0051】

こうしたアライメント作成用方法及びコンピュータプログラムが利用可能でありかつ当業者に公知である。置換は（１文字コードにより特定されるアミノ酸）－位置番号－（１文字コードにより特定されるアミノ酸）としてもまた書かれることができ、それにより第一のアミノ酸は置換されるアミノ酸でありかつ第二のアミノ酸は指定される位置の置換するアミノ酸である。本明細書で使用されるところの「置換」及び「アミノ酸の置換」及び「アミノ酸置換」という用語は、アミノ酸配列中のアミノ酸１個を別のアミノ酸で置換することを指し、ここで後者は置換されるアミノ酸と異なる。アミノ酸の置換方法は当業者に公知であり、そして、該アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の突然変異を挙げることができるがこれに限られない。ＩｇＧ中のアミノ酸置換の作成方法は、例えば第ＷＯ ２０１３／０４６７０４号明細書（アミノ酸改変技術のその論考について引用するこ
とにより本明細書に組み込まれる）に説明されているとはいえ、この文書は本明細書に説明される結合親和性を減少又は消失させすることよりむしろＦｃＲｎの親和性を増大させることを説明する。

【0052】

「アミノ酸置換」という用語と、上述のその同義語は、あるアミノ酸の別のアミノ酸での置換によるアミノ酸配列の改変を含むことを意図している。置換は保存的置換でありうる。アミノ酸２個に言及しての保存的という用語は、該アミノ酸が当業者により認識される共通の特性を共有することを意味することを意図している。アミノ酸２個に言及しての非保存的という用語は、当業者により認識される最低１種類の特性の差異があるアミノ酸を意味することを意図している。例えば、こうした特性は、疎水性の非酸性側鎖を有するアミノ酸、疎水性側鎖（酸性又は非酸性としてさらに差別化されうる）を有するアミノ酸、脂肪族疎水性側鎖を有するアミノ酸、芳香族疎水性側鎖を有するアミノ酸、極性中性側鎖を伴うアミノ酸、電気的に荷電した側鎖を伴うアミノ酸、電気的に荷電した酸性側鎖を伴うアミノ酸、及び電気的に荷電した塩基性側鎖を伴うアミノ酸を包む場合がある。天然及び非天然の双方のアミノ酸が当該技術分野で既知であり、そして実施態様において置換アミノ酸として使用されうる。従って、保存的アミノ酸置換は、疎水性側鎖を有する第一のアミノ酸を疎水性側鎖を有する異なるアミノ酸で変えることを含む場合があり；一方、非保存的アミノ酸置換は、酸性疎水性側鎖を伴う第一のアミノ酸を異なる側鎖例えば塩基性疎水性側鎖又は親水性側鎖を有する異なるアミノ酸で変えることを含む場合がある。なお他の保存的又は非保存的変化が当業者により決定され得る。

【0053】

なお他の態様において、所定の１位置での置換は、本明細書で同定される目的を成し遂げるため当業者に明らかなアミノ酸１個又はアミノ酸の群の１種に対してであろう。

【0054】

一態様において、本明細書に定義されるところの免疫グロブリン構築物は、免疫グロブリンＦｃ領域の保存された領域に位置する天然の配列が、ＦｃＲｎへの結合を排除するため、及び（ＣＮＳ領域から）血液脳関門を通過して全身循環中への前記タンパク質性免疫グロブリン構築物の輸送を最小化又は排除するために除去されるように操作されている。一例において、これは例えば選択されたアミノ酸（１個又は複数）のためのコドンの改変によりＦｃＲｎ結合ドメインの１個又はそれ以上のアミノ酸を変えることにより成し遂げることができる。例えば第ＵＳ ８６１８２５２ Ｂ２号明細書を参照されたい、
加えて、又は、あるいは、エフェクター機能を増強するよう工作された免疫グロブリン構築物（例えばＦｃバリアント）が選択される。例えばＴ．Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ、Ｋｏｒｅａｎ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ、２０１１ Ｓｅｐ；４６（３）：１４８－１５０；米国特許第６，９４６，２９２号明細書を参照されたい。

【0055】

変異体の場所を同定するのに本明細書で使用される重鎖アミノ酸番号付けは、ＥＵ番号付け体系［ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ、６３、７８－８５（１９６９）；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／－ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／－Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＨＧｎｂｅｒ．ｈｔｍｌ］］に基づき、そしてＦｃＲｎ結合ドメイン、具体的にはＦｃ領域中の位置を指す。類似の一様式において、置換は例えば「ＥＵ３８７Ｒ」又は「ＥＵ４４０Ｅ」として示され、ここで「ＥＵ」後に示される数字はＥＵ番号付けに従った置換の位置を示し、そして該番号の後の文字は１文字コードで示される置換されるアミノ酸である。他の番号付け体系は、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｔ．Ｔ．Ｗｕ，Ｈ．Ｍ．Ｐｅｒｒｙ，Ｋ．Ｓ．Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，Ｃ．Ｆｏｅｌｅｒ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．Ｎｏ．９１－３２４２ アメリカ公衆衛生局（Ｕ．Ｓ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、米国国立保健研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）、ベセスダ）を含む。

【0056】

プロモーター（１個又は複数）は、多様な供給源、例えばヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期エンハンサー／プロモーター、ＳＶ４０初期エンハンサー／プロモーター、ＪＣポリモウイルス（ｐｏｌｙｍｏｖｉｒｕｓ）プロモーター、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）又はグリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－１）潜伏関連プロモーター（ＬＡＰ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ニューロン特異的プロモーター（ＮＳＥ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）プロモーター、ｈＳＹＮ、メラニン濃縮ホルモン（ＭＣＨ）プロモーター、ＣＢＡ、マトリックス金属タンパク質プロモーター（ＭＴＰ）及びニワトリβアクチンプロモーターから選択し得る。

【0057】

ある態様において、本明細書に説明される発現カセットは、重及び軽鎖のコーディング領域の間に配置される最低１個の内部リボソーム結合部位すなわちＩＲＥＳを含む。あるいは、重及び軽鎖はフューリン２ａ自己切断型ペプチドリンカーにより分離される場合がある［例えばＲａｄｃｌｉｆｆｅとＭｉｔｒｏｐｈａｎｏｕｓ、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２００４）、１１、１６７３－１６７４を参照されたい。前記発現カセットは最低１個のエンハンサーすなわちＣＭＶエンハンサーを含む場合がある。なお他のエンハンサーエレメントは、例えば、アポリポタンパク質エンハンサー、ゼブラフィッシュエンハンサー、ＧＦＡＰエンハンサーエレメント、及び第ＷＯ ２０１３／１５５５２２２号明細書に説明されるような脳特異的エンハンサー、ウッドチャック肝炎後転写後調節エレメントを包む場合がある。加えて、又は、あるいは、他の、例えばハイブリッドヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）前初期（ＩＥ）－ＰＤＧＲプロモーターその他のプロモーター－エンハンサーエレメントを選択しうる。発現を高めるため、他のエレメントは（Ｐｒｏｍｅｇａ^TMイントロン又はキメラニワトリグロビン－ヒト免疫グロブリンイントロンのような）イントロンであり得る。

【0058】

２種又はそれ以上の核酸又はポリペプチド配列の状況での「同一の」又は「同一性」パーセントという用語は、下に記述されるデフォルトのパラメータを用いるＢＬＡＳＴ又はＢＬＡＳＴ ２．０配列比較アルゴリズムを使用して、又は手動アライメント及び視覚的検査（例えばＮＣＢＩウェブサイトなどを参照されたい）により測定されるところの、指定される１領域（例えば、ある比較窓又は指定される領域にわたり最大の対応のため比較及び整列される場合に本明細書に提供される改変されたＯＲＦのいずれか１つ）にわたり同一であるか、又は同一であるアミノ酸残基又はヌクレオチドの指定されたパーセンテージ（すなわち約７０％の同一性、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はより高い同一性を有する、２種又はそれ以上の配列又は下位配列を指す。別の例として、ポリヌクレオチド配列はＧＣＧ バージョン６．１中のプログラムＦａｓｔａを使用して比較する場合がある。Ｆａｓｔａはクエリ及び検索配列の間の最良の重複領域のアライメント及び配列同一性パーセントを提供する。例えば、核酸配列間の配列同一性パーセントは、ＧＣＧバージョン６．１（引用することにより本明細書に組み込まれる）中に提供されるところのデフォルトのパラメータ（ワードサイズ６及びスコアリング マトリックス（ｓｃｏｒｅｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ）のためのＮＯＰＡＭファクター）を用いてＦａｓｔａを使用して決定する場合がある。一般に、これらプログラムはデフォルトの設定で使用されるとはいえ、当業者はこれらの設定を必要とされるとおり変えることができる。あるいは、当業者は、少なくとも、参照されるアルゴリズム及びプログラムにより提供されるもののような同一性又はアライメントのレベルを提供する別のアルゴリズム又はコンピュータプログラムを利用する場合がある。この定義は、１配列の相補物もまた指すか又はそれにも適用し得る。該定義は欠失及び／又は付加を有する配列ならびに置換を有するものもまた含む。下に説明されるとおり、好ましいアルゴリズムはギャップなどを説明し得る。好ましくは、同一性は長さ最低約２５、５０、７５、１００、１５０、２００アミノ酸又はヌクレオチ
ドである１領域にわたり、及びしばしば長さ２２５、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００個のアミノ酸又はヌクレオチドである１領域にわたるか、又は１個のアミノ酸又は核酸配列の完全長にわたり存在する。

【0059】

典型的に、アライメントをアミノ酸配列に基づき製造する場合、該アライメントは、参照ＡＡＶ配列に関してそのように同定される挿入及び欠失を含み、アミノ酸残基の番号付けは前期アライメントについて提供される参照尺度に基づく。しかしながら、いかなる所定のＡＡＶ配列も前記参照尺度より少ないアミノ酸残基を有する場合がある。本発明において、親配列を論考する場合、「同一位置」又は「対応する位置」という用語は、整列された配列の参照尺度に関して該配列のそれぞれ中の同一残基番号に位置するアミノ酸を指す。しかしながら、アライメントから取り出される場合、タンパク質のそれぞれは異なる残基番号に位置するこれらアミノ酸を有する場合がある。アライメントは、多様な公的に又は商業的に利用可能な複数配列アライメントプログラム（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ）のいずれかを使用して実行する。配列アライメントプログラム、例えば「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ」、「ＭＡＰ」、「ＰＩＭＡ」、「ＭＳＡ」、「ＢＬＯＣＫＭＡＫＥＲ」、「ＭＥＭＥ」及び「Ｍａｔｃｈ－Ｂｏｘ」プログラムがアミノ酸配列について利用可能である。一般に、これらプログラムのいずれもデフォルトの設定で使用されるとは言え、当業者はこれら設定を必要とされるとおりに変えることができる。あるいは、当業者は、少なくとも、参照されるアルゴリズム及びプログラムにより提供されるもののような同一性又はアライメントのレベルを提供する別のアルゴリズム又はコンピュータプログラムを利用し得る。例えばＪ．Ｄ．Ｔｈｏｍｓｏｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．、“Ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ”、２７（１３）：２６８２－２６９０（１９９９）を参照されたい。

【0060】

別の態様において、ＦｃＲｎに対するその親和性を消失し、かつ生理学的に有効な活性を保持する改変免疫グロブリンが提供される。１個又はそれ以上のアミノ酸改変を、ＦｃＲｎへの機能的結合を消失させるため選択しうる。一態様において、前記突然変異はＦｃＲｎに対する免疫グロブリンの結合親和性を天然のタンパク質の１０％未満に低下させる。これら突然変異を伴う免疫グロブリンは実質的に通常全部の他のＦｃ受容体に結合するのが適切である。アミノ酸配列が一旦選択されれば、核酸配列を設計し得、及び／又は以前に説明された配列を上記説明のとおり操作しうる。これらの改変は、部位特異的突然変異誘発か、当業者に既知の他の遺伝子操作技術かを使用して核酸コーディング領域を操作することにより作成する。

【0061】

一態様において、本明細書に説明される免疫グロブリン遺伝子は、運搬される免疫グロブリン構築物の配列を導入するＡＡＶベクターを生成するのに有用な遺伝要素（例えばプラスミド）中に入るように操作される。本明細書の実施例並びに配列番号１３、１４及び１５は、それぞれＡβ標的に向けられる３種の異なるｓｃＦＶ構築物を含むＡＡＶベクターゲノムを具体的に説明する。選択されるベクターは、トランスフェクション、電気穿孔法、リポソーム送達、膜融合技術、高速ＤＮＡ被覆ペレット、ウイルス感染及びプロトプラスト融合を含むいずれかの適する方法によりＡＡＶパッケージング細胞に送達しうる。安定なパッケージング細胞もまた作成し得る。こうした構築物を作成するのに使用される方法は核酸操作の当業者に既知であり、遺伝子操作、組換え操作及び合成技術を含む。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＧｒｅｅｎとＳａｍｂｒｏｏｋ編、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（２０１２）を参照されたい。

【0062】

ＡＡＶベクター
本明細書に説明されるＡＡＶベクターは１個又はそれ以上の核酸配列を含む場合があり
、それらのそれぞれは免疫グロブリン構築物の重鎖及び／又は軽鎖ポリペプチドの１種若しくはそれ以上又は他のポリペプチドをコードする。組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏで免疫グロブリン構築物を形成するポリペプチドの全部をコードする核酸配列を含有する１種又はそれ以上のＡＡＶベクターを含むのが適切である。例えば、完全長抗体は４種のポリペプチド：２コピーの重（Ｈ）鎖ポリペプチド及び２コピーの軽（Ｌ）鎖ポリペプチドからなる。重鎖のそれぞれは１個のＮ末端可変（ＶＨ）領域並びに３個のＣ末端定常（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）領域を含み、各軽鎖は１個のＮ末端可変（ＶＬ）領域及び１個のＣ末端定常（ＣＬ）領域を含む。軽鎖及び重鎖の各対の可変領域は抗体の抗原結合部位を形成する。この点に関して、本明細書に説明されるＡＡＶベクターは、免疫グロブリン構築物の重鎖ポリペプチド（例えば定常 可変）及び軽鎖ポリペプチドをコードする単一核酸配列を含む場合がある。あるいは、ＡＡＶベクターは、最低１個の重鎖定常ポリペプチド及び最低１個の重鎖可変ポリペプチドをコードする第１の発現カセット、並びに免疫グロブリン構築物の定常及び可変軽鎖ポリペプチドをコードする第２の発現カセットを含む場合がある。なお別の態様において、ＡＡＶベクターは、第１の重鎖ポリペプチドをコードする第１の発現カセット、第２の重鎖ポリペプチドをコードする第２の発現カセットを含み得、及び軽鎖ポリペプチドをコードする第３の発現カセットは２個の重鎖により共有される。別の態様において、ＡＡＶベクターは１、２、３又は４個のｓｃＦｖオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を発現することができ、それらのそれぞれは同一又は異なってよい。

【0063】

典型的に、ＡＡＶベクターのための発現カセットは、ＡＡＶ ５’末端逆位配列（ＩＴＲ）、免疫グロブリン構築物のコーディング配列及びいずれかの制御配列、並びにＡＡＶ
３’ＩＴＲを含む。しかしながらこれらエレメントの他の構成が適する場合がある。Ｄ配列及び末端解離部位（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｓｉｔｅ）（ｔｒｓ）が欠失されている、ΔＩＴＲと命名される５’ＩＴＲの短縮されたバージョンが説明されている。他の態様において、完全長ＡＡＶ５’及び３’ＩＴＲを使用する。

【0064】

シュードタイピングされたＡＡＶが産生されるべきである場合、発現におけるＩＴＲはキャプシドのＡＡＶ供給源と異なる供給源から選択される。例えば、ＡＡＶ２のＩＴＲを、ＣＮＳ又はＣＮＳ内の組織又は細胞を標的とするための特定の効率を有するＡＡＶキャプシドとの使用のため選択する場合がある。一態様において、ＡＡＶ２からのＩＴＲ配列又はその欠失されたバージョン（ΔＩＴＲ）を、便宜性のため及び規制上の承認を加速するために使用する。しかしながら他のＡＡＶ供給源からのＩＴＲを選択しうる。ＩＴＲの供給源がＡＡＶ２からでありかつＡＡＶキャプシドが別のＡＡＶ供給源からである場合、生じるベクターはシュードタイピングされたと呼ばれることができる。しかしながらＡＡＶ ＩＴＲの他の供給源を利用しうる。

【0065】

「ｓｃＡＡＶ」という略語は自己相補性を指す。「自己相補性ＡＡＶ」は、組換えＡＡＶ核酸配列により運搬されるコーディング領域が分子内二本鎖ＤＮＡ鋳型を形成するよう設計されている構築物を指す。感染に際して、第２鎖の細胞媒介性の合成を待たずにｓｃＡＡＶの２個の相補性の半分が会合して、即座の複製及び転写の準備ができている１個の二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）単位を形成するであろう。例えば、Ｄ Ｍ ＭｃＣａｒｔｙら、“Ｓｅｌｆ－ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ（ｓｃＡＡＶ） ｖｅｃｔｏｒｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ ＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、（Ａｕｇｕｓｔ ２００１）、Ｖｏｌ ８、Ｎｕｍｂｅｒ １６、１２４８－１２５４ページを参照されたい。自己相補性ＡＡＶは例えば米国特許第６，５９６，５３５号明細書；同第７，１２５，７１７号明細書；及び同第７，４５６，６８３号明細書（それらのそれぞれは引用することにより全体が本明細書に組み込まれる）に説明されている。

【0066】

発現カセットは、典型的に、例えば選択された５’ＩＴＲ配列と免疫グロブリン構築物のコーディング配列の間に配置される発現制御配列の一部としてプロモーター配列を含む。組織特異的プロモーター、構成的プロモーター、調節可能なプロモーター［例えば第ＷＯ ２０１１／１２６８０８号明細書及び第ＷＯ ２０１３／０４９４３号明細書を参照されたい］、又は生理学的合図に応答性のプロモーターを使用しうるを本明細書に説明されるベクターで利用しうる。プロモーターに加え、発現カセット及び／又はベクターは、他の適切な転写開始、終止、エンハンサー配列と、スプライシング及びポリアデニル化（ポリＡ）シグナルのような効率的ＲＮＡプロセシングシグナルと、細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列と、翻訳効率を高める配列（すなわちコザックコンセンサス配列）と、タンパク質の安定性を高める配列と、所望の場合はコードされる産物の分泌を高める配列とを含む場合がある。

【0067】

これら制御配列は免疫グロブリン構築物の遺伝子配列に「操作可能に連結」される。本明細書で使用されるところの「操作可能に連結される」という用語は、目的の遺伝子と隣接する発現制御配列と、目的の遺伝子を制御するためトランスで又は遠隔で作用する発現制御配列との双方を指す。

【0068】

一態様において、自己相補性ＡＡＶが提供される。このウイルスベクターはΔ５’ＩＴＲ及びＡＡＶ ３’ＩＴＲを含む場合がある。別の態様において、一本鎖ＡＡＶウイルスベクターが提供される。被験者への送達に適するＡＡＶウイルスベクターの生成及び単離方法が当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第７７９０４４９号明細書；米国特許第７２８２１９９号明細書；第ＷＯ ２００３／０４２３９７号明細書；第ＷＯ ２００５／０３３３２１号明細書、第ＷＯ ２００６／１１０６８９号明細書；及び第ＵＳ ７５８８７７２ Ｂ２号明細書を参照されたい］。１つの系において、産生体細胞株を、ＩＴＲ並びにｒｅｐ及びｃａｐをコードする構築物（１個又は複数）により隣接されている導入遺伝子をコードする構築物で一過性にトランスフェクトする。第２の系において、ｒｅｐ及びｃａｐを安定に供給するパッケージング細胞株を、ＩＴＲにより隣接されている導入遺伝子をコードする構築物で一過性にトランスフェクトする。これらの系のそれぞれにおいて、ＡＡＶビリオンが、ヘルパーアデノウイルス又はヘルペスウイルスへの感染に応答して産生され、混在するウイルスからのｒＡＡＶの分離を必要とする。より最近、ＡＡＶを回収するためにヘルパーウイルスへの感染を必要としない系が開発された―必要とされるヘルパー機能（すなわちアデノウイルスＥ１、Ｅ２ａ、ＶＡ及びＥ４、又はヘルペスウイルスＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ５２及びＵＬ２９並びにヘルペスウイルスポリメラーゼ）もまた前記の系によりトランスに供給される。これらのより新しい系において、ヘルパー機能は、必要とされるヘルパー機能をコードする構築物での細胞の一過性トランスフェクションにより供給され得るか、又は、細胞を、ヘルパー機能をコードする遺伝子を安定に含有するよう操作し得、それらの発現は転写又は転写後レベルで制御され得る。なお別の系において、ＩＴＲ及びｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子により隣接される導入遺伝子が、バキュロウイルスに基づくベクターへの感染により昆虫細胞中に導入される。これら産生系に関する総説については、全般として、例えばＺｈａｎｇら、２００９、“Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ－ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｈｙｂｒｉｄ ｆｏｒ ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ、”Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０：９２２－９２９（そのそれぞれの内容は引用することにより全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。これら及び他のＡＡＶ産生系の作成及び使用方法は、以下の米国特許（それらのそれぞれの内容は引用することにより全体が本明細書に組み込まれる）：第５，１３９，９４１号明細書；同第５，７４１，６８３号明細書；同第６，０５７，１５２号明細書；同第６，２０４，０５９号明細書；同第６，２６８，２１３号明細書；同第６，４９１，９０７号明細書；同第６，６６０，５１４号明細書；同第６，９５１，７５３
号明細書；同第７，０９４，６０４号明細書；同第７，１７２，８９３号明細書；同第７，２０１，８９８号明細書；同第７，２２９，８２３号明細書；及び同第７，４３９，０６５号明細書にもまた説明されている。

【0069】

パッケージングのための利用可能な空間は１個以上の転写ユニットを単一発現カセット中に組合せることにより保存することができ、従って必要とされる制御配列の量を減らせる。例えば、単一プロモーターが２個又は３個又はそれ以上の遺伝子をコードする単一ＲＮＡの発現を指図することができ、そして下流の遺伝子の翻訳がＩＲＥＳ配列により駆動される。別の例において、単一プロモーターが、自己切断ペプチド（例えば２Ａ）及び／又はプロテアーゼ認識部位（例えばフューリン）をコードする配列により相互から分離されている２個又は３個又はそれ以上の遺伝子を単一オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）中に含むＲＮＡの発現を指図しうる。該ＯＲＦは従って単一のポリタンパク質をコードし、これは、翻訳中又は後のいずれかに個別のタンパク質（例えば重鎖及び軽鎖のような）に切断される。しかしながら、これらＩＲＥＳ及びポリタンパク質系をＡＡＶパッケージング空間を節約するために使用し得るとはいえ、それらは同一プロモーターにより駆動され得る成分の発現にのみ使用し得ることに注目されるべきである。別の代替において、ＡＡＶの導入遺伝子容量は、アニーリングしてヘッドトゥテールのコンカタマー（ｃｏｎｃａｔａｍｅｒ）を形成し得る２種のゲノムのＡＡＶ ＩＴＲを提供することにより増大させ得る。さらなる代替案において、双方向性プロモーターを選択しうる。

【0070】

以下の実施例において、ＡＡＶ９キャプシドを有するＡＡＶベクターが説明される。本明細書で使用されるところの「ＡＡＶ９キャプシド」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託：ＡＡＳ９９２６４（本明細書に引用することにより組み込まれる）のアミノ酸配列を有するＡＡＶ９を指す。このコードされる配列からの若干の変動が本発明に含まれ、それはＧｅｎＢａｎｋ受託：ＡＡＳ９９２６４及び第ＵＳ７９０６１１１号明細書（また第ＷＯ ２００５／０３３３２１号明細書も）中の参照されるアミノ酸配列に対する最低約９５％、最低約９７％又は最低約９９％の同一性を有する配列を包む場合がある。キャプシドの生成方法、そのためのコーディング配列、及びｒＡＡＶウイルスベクターの製造方法が説明されている。例えば、Ｇａｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００（１０）、６０８１－６０８６（２００３）及び第ＵＳ ２０１３／００４５１８６Ａ１号明細書を参照されたい。ＡＡＶ９ベクターの生成は、例えば米国特許第７，９０６，１１１号明細書（引用することにより本明細書に組み込まれる）に説明されている。しかしながら、ＡＡＶキャプシド及び他のウイルスエレメントの他の供給源を、他の免疫グロブリン構築物及び他のベクターエレメントと同様に、選択する場合がある。ＡＡＶベクターの生成方法は、例えば第ＷＯ ２００３／０４２３９７号明細書；第ＷＯ ２００５／０３３３２１号明細書、第ＷＯ ２００６／１１０６８９号明細書；第ＵＳ ７５８８７７２ Ｂ２号明細書を含む文献及び特許文書に広範囲に説明されている。ＡＡＶキャプシドの供給源は、ＣＮＳ、ＣＮＳ内の特定の細胞及び／又は特定の抗原若しくは受容体を標的とするＡＡＶから選択しうる。適するＡＡＶは、例えば、ＡＡＶ９［第ＵＳ ７，９０６，１１１号明細書；第ＵＳ ２０１１－０２３６３５３－Ａ１号明細書］、ｒｈ１０［第ＷＯ ２００３／０４２３９７号明細書］及び／又はｈｕ３７［例えば第ＵＳ ７，９０６，１１１号明細書；第ＵＳ ２０１１－０２３６３５３－Ａ１号明細書を参照されたい］を包む場合がある。しかしながら、例えばＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８［米国特許第７７９０４４９号明細書；米国特許第７２８２１９９号明細書］その他を含む他のＡＡＶを、本明細書に説明されるＡＡＶベクターを製造するために選択しうる。

【0071】

使用及び投与計画
本発明の組成物は、ＡＡＶベクターが、免疫グロブリン構築物及び選択された細胞中でその免疫グロブリンの発現を指図する制御配列をコードする核酸発現カセットを運搬する
ように設計されることが適切である。ＣＮＳ中への前記ベクターの投与後に、該ベクターは発現カセットをＣＮＳに送達し、ｉｎ ｖｉｖｏでタンパク質性免疫グロブリン構築物を発現する。治療目的上の本明細書に説明される組成物の使用が、１種又はそれ以上の他の有効成分の送達を場合によっては必要としうる多様な投与計画におけるこれら組成物の使用と同様に、説明される。

【0072】

上記のとおり、組成物は、免疫グロブリン構築物をｉｎ ｖｉｖｏで送達するための発現カセットを含む本明細書に説明される単一の型のＡＡＶベクターを含む場合がある。あるいは、組成物は、それらのそれぞれが多様な発現カセットをその中にパッケージングしている２種又はそれ以上の異なるＡＡＶベクターを含む場合がある。例えば、該２種又はそれ以上の異なるＡＡＶは、ｉｎ ｖｉｖｏで集合して単一の機能的免疫グロブリン構築物を形成する免疫グロブリンポリペプチドを発現する多様な発現カセットを有する場合がある。別の例において、前記２種又はそれ以上のＡＡＶは、多様な標的のための免疫グロブリンポリペプチドを発現する多様な発現カセットを有する場合があり、例えば、２種が２種の機能的免疫グロブリン構築物（例えば第１の免疫グロブリン構築物及び第２の免疫グロブリン構築物）を提供する。なお別の代替策において、前記２種又はそれ以上の異なるＡＡＶは、同一標的に向けられる免疫グロブリン構築物（該免疫グロブリン構築物の１種がＦｃＲｎ結合を消失するよう改変されている）、及び、ＦｃＲｎに結合するその能力を保持する又は高められた能力を有する第２の免疫グロブリン構築物を発現しうる。こうした組成物は、ＣＮＳ中の増大された保持を伴う抗体及び免疫グロブリン構築物の全身送達のための抗体を同時に提供するのに有用な場合がある。

【0073】

本明細書に説明される投与計画は、本明細書に説明される組合せの１種又はそれ以上に加え、生物学的薬物、小分子薬物又は他の療法の１種又はそれ以上とのさらなる組合せを含む場合がある。本明細書に説明される生物学的薬物は、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、酵素、核酸分子、ベクター（ウイルスベクターを含む）などに基づく。

【0074】

本明細書に説明される組成物は、注入、浸透圧ポンプ、くも膜下腔内カテーテルを介する被験体への送達のため、又は別の装置若しくは経路による送達のため設計された製薬学的に適する担体に懸濁され及び／又は適する賦形剤と混合されている１種又はそれ以上のＡＡＶの有効量を含むことが適切である。一例において、組成物はくも膜下腔内送達のため配合される。一態様において、くも膜下腔内送達は脊柱管、例えば、くも膜下腔中への注入を含む。しかしながら、適切な直接又は全身経路のなかでも、例えば頭蓋内、鼻内、大槽内、脳脊髄内液送達を含むＡＡＶ組成物のための他の送達経路すなわちオンマヤリザーバーと、製薬学的に許容できる担体とを選択される場合がある。

【0075】

前記組成物は、約１×１０⁹ゲノムコピー（ＧＣ）ないし約５×１０¹⁴ＧＣの範囲にあ
るＡＡＶの量を含むよう配合される場合がある。一例において、ベクターは約３×１０¹³ＧＣ、しかし約１×１０⁹ＧＣ、約５×１０⁹ＧＣ、約１×１０¹⁰ＧＣ、約５×１０¹⁰ＧＣ、約１×１０¹¹ＧＣ、約５×１０¹¹ＧＣ、約１×１０¹²ＧＣ、約５×１０¹²ＧＣ又は約５×１０¹³ＧＣのような他の量である。こうした組成物は、選択された標的に向けられる免疫グロブリンを発現する単一ＡＡＶストックを含む場合がある。別の態様において、こうした組成物は、標的とされた宿主細胞中で集合して、選択された標的に対する所望の免疫グロブリン（例えば完全長抗体）を形成する、免疫グロブリンを同時発現する２種のＡＡＶストックを含む場合がある。別の態様において、組成物は２種又はそれ以上のＡＡＶストックを含む場合があり、それらのそれぞれが異なる免疫グロブリン構築物を発現する。こうした組成物中で、発現されるタンパク質は、結合して単一免疫グロブリンを形成しうるか、又は異なる標的を有する２種若しくはそれ以上の免疫グロブリンを発現しうる。これら異なる標的は、同一細胞タイプ又は同一ウイルス（又は他の標的）上の異なるリガンドか、２種の完全に異なる病原体かに対する場合がある。組成物はくも膜下腔内送達のた
め設計される。一態様において、脊椎穿刺を実施し、そこで約１５ｍＬ（又はより少ない）から約２５ｍＬまでのＣＳＦを取り出し、ベクターを適合性の担体に懸濁しそして被験体に送達する。

【0076】

前記ｒＡＡＶは、好ましくは生理学的に適合性の担体に懸濁され、及び場合によっては１種又はそれ以上の賦形剤と混合され、ヒト又はヒト以外の哺乳動物患者に投与される場合がある。適切な担体は、前記導入ウイルスが指定される適応症を考慮して、当業者により容易に選択される場合がある。例えば、ある適切な担体は、多様な緩衝溶液と配合されうる生理的食塩水（例えばリン酸緩衝生理的食塩水）を含む。他の例示的担体は、Ｅｌｌｉｏｔ’ｓ Ｂ、滅菌生理的食塩水、乳糖、ショ糖、麦芽糖及び水を含む。担体の選択は本発明を限定するものではない。場合によっては、本発明の組成物は、ｒＡＡＶ及び担体（１種又は複数）に加え、保存剤又は化学的安定化剤のような他の従来の製薬学的成分を含む場合がある。

【0077】

一態様において、本明細書に説明される組成物は中枢神経系の障害及び疾患を処置するための医薬品の製造において使用される。

【0078】

別の局面において、最低１種のＡＡＶベクターストックがＡβ、βセクレターゼ及び／又はτタンパク質に特異的な免疫グロブリンを発現する、本明細書に説明されるＡＡＶベクター組成物をそれの必要な被験体のくも膜下腔内に送達することを含む、アルツハイマー病の処置方法が提供される。

【0079】

なお別の態様において、最低１種のＡＡＶベクターストックが、１種又はそれ以上のロイシンリッチリピートキナーゼ２抗体、ｄａｒｄａｒｉｎ（ＬＲＲＫ２）抗体、αシヌクレイン抗体及び／又はＤＪ－１（ＰＡＲＫ７）抗体をコードする本明細書に提供されるＡＡＶベクター組成物をくも膜下腔内に送達することを含む、パーキンソン病又は関連するシヌクレイン病の処置方法が提供される。

【0080】

なおさらなる一局面において、その組成物中の最低１種のベクターストックが、ａ４インテグリン、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＩＬ１２、ｐ４０＋ＩＬ２３ｐ４０、ＬＩＮＧＯ－１、ＣＤ４０、及びｒＨＩｇＭ２２、ＣＤ５２、ＩＬ１７、ＣＤ１９、並びに／又はＳＥＭＡ４Ｄの１種又はそれ以上に対し向けられる免疫グロブリンをコードする、本明細書に提供されるＡＡＶベクター組成物をくも膜下腔内に送達することを含む、多発性硬化症の処置方法が本明細書に提供される。

【0081】

なお別の局面において、最低１種のＡＡＶベクターストックが、ＡＬＳ酵素スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）及びそのバリアント、Ｄｅｒｌｉｎ－１結合領域に特異的な免疫グロブリン、及び／又は、神経突起伸長阻害物質に対する抗体構築物を発現する本明細書に説明されるＡＡＶベクター組成物をくも膜下腔内に送達することを含むＡＬＳの処置方法が提供される。一態様において、ベクター及び／又は組成物は抗ＳＯＤ１免疫グロブリンＦｃフラグメントを含む。

【0082】

一局面において、最低１種のベクターストックが主要プリオンタンパク質又はＰｒＰＳｃの１種又はそれ以上に向けられる免疫グロブリンをコードするＡＡＶベクター組成物をくも膜下腔内に送達することを含む、プリオン関連疾患の処置方法が提供される。

【0083】

本明細書に説明される多様な障害及び疾患に対する処置の有効性を評価するための動物モデルが利用可能である。例えば、例えばＤ Ｖａｎ ＤａｍとＰ．Ｐ．Ｄｅ Ｄｅｙｎ、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２０１１ Ｏｃｔ；１６４（４）：１２８５－１３００に記述されるアルツハイマー病を評価するための動物モデルを参照されたい。パーキン
ソン病薬を評価するためのモデルもまた、例えばＨＴ Ｔｒａｎら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、Ｖｏｌ．７、Ｉｓｓｕｅ ６、ｐ２０５４－２０６５、Ｊｕｎｅ ２６，２０１４．、ＲＭ Ｒａｎｓａｊｏｆｆ、Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ａｕｇ ２０１２、Ｖｏｌ １５、１０７４－１０７７（多発性硬化症）；Ｍ．Ａ Ｐｏｕｌａｄｉら、Ｎａｔｕｅｒ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、１４、７０８－７２１（２０１３）（ハンチントン病）；Ｎ Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｂｏｒｇｅｓら、Ｃｕｒ
ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２０１３；１３（１９）：２５０４－２１（抗プリオン薬）；ＰＭｃＧｏｌｄｒｉｃｋら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ（ＢＢＡ）－Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｖｏｌ．１８３２、Ｉｓｓｕｅ ９、Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１３、ｐｐ．１４２１－１４３６及びＪＭ Ｍｏｓｅｒら、Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、２０１３ Ｊｕｎ；２８８（５－６）：２０７－２９（ＡＬＳ）に説明されている。なお他のモデルが当業者に既知である。

【0084】

別の局面において、その組成物中で最低１種のベクターストックが中枢神経系の感染症を引き起こす病原体に対し向けられる免疫グロブリンをコードする本明細書に提供されるＡＡＶベクター組成物をくも膜下腔内に送達することを含む、前記感染症の処置方法が提供される。例は、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（結核）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）（髄膜炎）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ）（リステリア症）、ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ
ｂｕｒｄｏｒｆｅｒｉａ）（ライム病）、ヒト欠乏ウイルス（後天的免疫不全症候群）、ヘルペス科ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス及び／又はＪＣウイルスの１種又はそれ以上に対し向けられる１種又はそれ以上の免疫グロブリンを含むが、これらに限定されない。

【0085】

場合によっては、本明細書に説明されるＡＡＶ組成物は、付加的な外因性薬理学的又は化学的剤か、血液脳関門の他の物理的破壊かの非存在下で投与される。

【0086】

併用療法において、本明細書に説明されるＡＡＶで送達される免疫グロブリン構築物は、別の剤での治療を開始する前、治療中又は治療後、並びにそれらのいずれかの組合せ、すなわち治療を開始する前及び治療中か、治療前及び治療後か、治療中及び治療後か治療前、治療中及び治療後かに投与される。

【0087】

本明細書に説明される組成物は他の有効成分の同時投与を必要とする投与計画で使用される場合がある。いずれかの適する方法又は経路をこうした他の剤を投与するために使用する場合がある。投与経路は、例えば、全身、経口、静脈内、腹腔内、皮下又は筋肉内投与を含む。場合によっては、本明細書に説明されるＡＡＶ組成物はこれら経路の１つによってもまた投与される場合がある。

【0088】

以下の実施例は具体的説明のみでありかつ本明細書に説明される本発明を限定するものではない。

【0089】

実施例

【実施例0090】

抗ＳＩＶイムノアドヘシンのＡＡＶ９に媒介される送達のＣＮＳ発現
ＩＴ ＡＡＶ送達後のＣＮＳ中の長期抗体産生の可能性を評価するため、イムノアドヘシンをコードするベクターを２匹のヒト以外の霊長類に投与して、ＣＳＦ中の導入遺伝子産物の濃度をＥＬＩＳＡにより評価した。アカゲザル由来イムノアドヘシン（２０１ＩＡ
）を発現するＡＡＶ９ベクターを、ＣＢプロモーター（サイトメガロウイルスエンハンサーを伴うニワトリβアクチン）をサイトメガロウイルスプロモーターの代わりに使用し［Ｇｒｅｉｇ ＪＡら（２０１４）Ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＡＡＶ８ ｉｎ Ｍｉｃｅ ａｎｄ Ｍａｃａｑｕｅｓ Ｉｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ Ｈｅｐａｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｄ
Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９（１１）：ｅ１１２２６８］、ＡＡＶ９キャプシドをＡＡＶ８の代わりに使用したことを除いて、ＡＡＶ８について以前に説明されたとおり構築した。

【0091】

簡潔には、アカゲザル抗ＳＩＶ ｍａｃ２５１ ｇｐ１２０ ＩｇＧ－２０１（Ｇｌａｍａｎｎら Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９９８；７４（１５）：７１５８－７１６３．ｄｏｉ：１０．１１２８／ＪＶＩ．７４．１５．７１５８－７１６３．２０００．Ｕｐｄａｔｅｄ．）イムノアドヘシン（２０１ＩＡ）のコドン最適化されたヌクレオチド配列をＡＡＶ発現構築物中にクローン化した。該構築物はＡＡＶ２末端逆位配列により挟まれ、ＣＢ７プロモーター、キメライントロン及びウサギグロビンポリアデニル化配列を含んだ（ｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．２０１ＩＡ．ｒＢＧ）。このプラスミドの配列を確認した［配列番号１（配列番号２はコードされる２０１ＩＡ配列に対応する）］。

【0092】

ｒＡＡＶ９．ＣＢ７．ＣＩ．２０１ＩＡ．ｒＢＧベクター（３×１０¹²ＧＣ／ｋｇ）をカニクイザル２頭（ＩＤ０４１１及び９８６０）の脳脊髄液（ＣＳＦ）中に後頭葉下穿刺により送達した。血清及びＣＳＦをベクター投与後定期的に収集した。ＣＳＦ及び血清中の２０１ＩＡの濃度を後に続くとおりＥＬＩＳＡにより測定した。

【0093】

全部の処置は、別の方法で示されない限り室温で実施した。プレートを、ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を使用してＢｉｏＴｅｋ ４０５ＴＳマイクロプレート洗浄機を用い洗浄した。ＰＢＳで２μｇ／ｍＬに希釈されたｍａｃ２５１ ｇｐ１２０（Ｉｍｍｕｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ．）をＣｏｓｔａｒ（登録商標）９６ウェルＥａｓｙＷａｓｈ^TMＥＬＩＳＡアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）上４℃で一夜インキュベートした。プレートをその後、２０１ＩＡ ＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋５％熱不活性化ウシ胎児血清＋１ｍＭ ＥＤＴＡ＋０．０７％Ｔｗｅｅｎ－２０）でブロッキングした。希釈されたサンプルをプレートに添加し、そしてプレートを最低４回２倍希釈した。プレートを３７℃で１ｈインキュベートし、及び２０１ＩＡ ＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液で再度ブロッキングした。プレートをその後、ＰＢＳで希釈されたＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧ－ビオチン（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ）、その後ＰＢＳで希釈されたストレプトアビジン－ワサビペルオキシダーゼ（Ａｂｃａｍ）とともにインキュベートした。３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質を使用してプレートを発色させた。発色反応をＨ₂ＳＯ₄で停止した後にプレートをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）プレートリーダーを使用して４５０ｎｍで読み取った。

【0094】

動物２頭のそれぞれの結果を図１Ａ及び１Ｂに具体的に説明し、それらは投与から投与後第４００日までのそれぞれ脳脊髄液及び血清中の２０１ＩＡの濃度を示す。ＣＳＦの濃度尺度はｎｇ／ｍＬで提示される一方、血清中の発現レベルはマイクログラム（μｇ）／ｍＬで測定された。

【実施例0095】

ＦｃＲｎ結合を抑止するための２０１ＩＡのＩ２５３Ａ突然変異
２０１ＩＡ遺伝子に相補的だが重鎖アミノ酸配列のＩ２５３Ａ又はＨ４５３Ａ（Ｋａｂａｔの番号付け）に対応する１突然変異を含む長さ７６８ｂｐのヌクレオチド配列をＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から得た。前記配列は、ｐＡＡＶ．
ＣＢ７．ＣＩ．２０１ＩＡ．ｒＢＧ中のものに一致するＰｓｔ１およびＢｓｔＺ１７Ｉ制限部位に挟まれた。前記変異された配列を、製造元により説明されたとおり示される酵素（ＮＥＢ）を使用する制限消化及びライゲーション（ＴａＫａＲａ Ｉｎｃ．）によりｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．２０１ＩＡ．ｒＢＧ中に別々にクローン化した。サンガーシークエンシング（ＧｅｎｅＷｉｚ）を使用して、ｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．２０１ＩＡ．ｒＢＧ［配列番号１（配列番号２はコードされる２０１ＩＡ配列に対応する）］、ｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．２０１ＩＡ（Ｉ２５３Ａ）．ｒＢＧ［配列番号３（配列番号４をコードする）］及びｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．２０１ＩＡ（Ｈ４３５Ａ）．ｒＢＧ［配列番号５（配列番号６をコードする］の相補性を、所望の突然変異のいずれの側でも確認した。

【0096】

ＡＡＶ９ベクターを、これらプラスミドを使用して実施例１に説明される方法を使用して作成する。