▶ ウニヴェルズィテート・フューア・ボーデンクルトゥーア・ウィーンの特許一覧 ▶ メディツィニシェ ウニベルジテート ウィーンの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024012402
(43)【公開日】2024-01-30
(54)【発明の名称】老化細胞の除去のための組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 45/06 20060101AFI20240123BHJP
A61K 31/196 20060101ALI20240123BHJP
A61K 31/405 20060101ALI20240123BHJP
A61K 31/4152 20060101ALI20240123BHJP
A61K 31/616 20060101ALI20240123BHJP
A61K 31/655 20060101ALI20240123BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240123BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240123BHJP
C12Q 1/02 20060101ALI20240123BHJP
C12Q 1/44 20060101ALI20240123BHJP
G01N 33/92 20060101ALI20240123BHJP
G01N 33/48 20060101ALI20240123BHJP
G01N 33/15 20060101ALI20240123BHJP
G01N 33/50 20060101ALI20240123BHJP
C12N 9/02 20060101ALN20240123BHJP
C12N 9/00 20060101ALN20240123BHJP
C12N 9/16 20060101ALN20240123BHJP
【ＦＩ】
A61K45/06
A61K31/196
A61K31/405
A61K31/4152
A61K31/616
A61K31/655
A61P29/00
A61P43/00 111
C12Q1/02
C12Q1/44
G01N33/92 Z
G01N33/48 M
G01N33/15 Z
G01N33/50 Z
G01N33/50 D
C12N9/02
C12N9/00
C12N9/16 Z
【審査請求】有
【請求項の数】15
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023184576
(22)【出願日】2023-10-27
(62)【分割の表示】P 2021522539の分割
【原出願日】2019-10-25
(31)【優先権主張番号】18202657.5
(32)【優先日】2018-10-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(71)【出願人】
【識別番号】507205623
【氏名又は名称】ウニヴェルズィテート・フューア・ボーデンクルトゥーア・ウィーン
(71)【出願人】
【識別番号】508317424
【氏名又は名称】メディツィニシェ ウニベルジテート ウィーン
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100163784
【弁理士】
【氏名又は名称】武田 健志
(72)【発明者】
【氏名】レンマーマン，インゴ
(72)【発明者】
【氏名】グリラリ，ヨハネス
(72)【発明者】
【氏名】ピルス，ベラ
(72)【発明者】
【氏名】グルーバー，フロリアン
(72)【発明者】
【氏名】ナルツ，マリー－ソフィー
(57)【要約】 （修正有）
【課題】老化細胞を効果的に除去することが可能な組成物を提供する。
【解決手段】本発明は、老化細胞の選択的な除去での使用のための、シクロオキシゲナーゼ１（ＣＯＸ－１）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ－２）、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な１つもしくは複数の阻害剤を含む組成物、またはアラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、もしくはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つもしくは複数の阻害剤を含む組成物、またはそれらの組合せを提供する。本発明は、対象において老化細胞を同定するインビトロ方法、および老化細胞の選択的な除去のための候補化合物を同定する方法にさらに提供する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明は、老化細胞の選択的な除去での使用のための、シクロオキシゲナーゼ１（ＣＯＸ－１）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ－２）、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な１つもしくは複数の阻害剤を含む組成物、またはアラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、もしくはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つもしくは複数の阻害剤を含む組成物、またはそれらの組合せを提供する。本発明は、対象において老化細胞を同定するインビトロ方法、および老化細胞の選択的な除去のための候補化合物を同定する方法にさらに提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
シクロオキシゲナーゼ１（ＣＯＸ－１）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ－２）、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な１つ以上の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
【請求項2】
アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
【請求項3】
アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤、およびＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、またはリポキシゲナーゼのうちの少なくとも１つを含む、請求項２に記載の使用のための組成物。
【請求項4】
老化細胞が、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの高い細胞内レベルで特徴付けられる、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項5】
リゾホスファチジルコリンが、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＳＰＣ）、または１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＰＰＣ）である、請求項４に記載の使用のための組成物。
【請求項6】
１つ以上の阻害剤が、アセチルサリチル酸、ジクロフェナク、セレコキシブ、シクロスポリンＡ、イブプロフェン、アセトアミノフェン、インドメタシン、ナブメトン、ケトロラック、テノキシカム、トルメチン、ピロキシカム、フェノプロフェン、エトドラク、ナプロキセン、ジフルニサル、スプロフェン、ブロムフェナク、ケトプロフェン、ジホモ－γ－リノレン酸、イコサペント、フルルビプロフェン、メフェナム酸、サルサレート、スリンダク、サリチル酸、ルミラコキシブ、Ｏ－アセチル－Ｌ－セリン、フェナセチン、フルルビプロフェンメチルエステル、メタミゾール、ニトロアスピリン、メロキシカム、フルフェナム酸、オキサプロジン、チアプロフェン酸、サリチル酸マグネシウム、ジエチルカルバマジン、ロルノキシカム、カルプロフェン、フェニルブダゾン、ネパフェナク、アンチピリン、アントラフェニン、トリサリチル酸コリンマグネシウム、トリフルサール、ニフルム酸、デキシブプロフェン、アセクロフェナック、アセメタシン、ドロキシカム、ロキソプロフェン、トルフェナム酸、デキスケトプロフェン、トロメタモール、タルニフルメート、プロパセタモール、サリチル酸トロラミン、サリチル酸フェニル、ブフェキサマク、サリチル酸グリコール、サリチル酸メンチル、ＦＫ－５０６、レナリドマイド、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、シミコキシブ、クロルフェネシン、クロドロン酸、セリシクリブ、ドロスピレノン、トリアムシノロン、ポマリドミド、パレコキシブ、フィロコキシブ、アクロフェナク、アダパレン、サリドマイド、エトリコキシブ、ロベナコキシブ、アサルアルデヒド、ザルトプロフェン、デラコキシブ、デキサメタゾン、プラノプロフェン、アンフェナクナトリウム一水和物、アンピロキシカム、ＮＳ－３９８、次サリチル酸ビスマス、ジクロフェナクジエチルアミン、トロメタモール、ルテカルピン、サリシン、フェンブフェン、キサントフモール、フルニキシンメグルミン、およびニメスリドからなる群から選択されるＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２阻害剤である、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項7】
１つ以上の阻害剤が、ＭＫ８８６、ジロイトン、マソプロコール、ジエチルカルバマジン、アゼラスチン、ベノキサプロフェン、ノルジヒドログアイアレチン酸、アビエチン酸、エスクレチン、モンテルカスト、ミノサイクリン、ＭＬＮ－９７７、レイン、ジアセレイン、ナビキシモルス、ホスタマチニブ、ＡＭ１０３、ＤＧ０３１、フィボフラポン、ＡＡ－８６１、およびアトレロイトンからなる群から選択されるリポキシゲナーゼおよび／またはＦＬＡＰ（ＡＬＯＸ５ＡＰ）阻害剤である、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項8】
１つ以上の阻害剤が、好ましくは、リコフェロン、ダルブフェロン、ＣＩ－９８７、Ｓ－２４７４、ＫＭＥ－４、ケブラジン酸、バルサラジド、メサラジン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、メクロフェナム酸、モルニフルマートジアリールピラゾール誘導体、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体、Ｎ－置換５－アミノサリシリシラミド、フラボコキシド、インドリジン誘導体、ＬＱＦＭ－０９１、ヒペルホリン、セラストロール、ＢＷ７５５Ｃ、テポキサリン、ｂ－ボスウェリン酸、Ｄ－００２、２，３－ジアリールキサントン、フェニドン、およびＥＲ－３４１２２からなる群から選択されるデュアルシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ阻害剤である、請求項１～７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項9】
アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤が、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、５－ブロモ－５’－フェニルスピロ［３Ｈ－１，３，４－チアジアゾール－２，３’－インドリン］－２－オン、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６、ＣＢ１６、ＮＣＩ－３、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６、ＣＢ１６の類似体、および２－（６－ヒドロキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）－１，３－チアゾール－４（５Ｈ）－オンからなる群から選択される阻害剤である、請求項２～８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項10】
アラキドン酸の細胞内の転換を阻害することが可能な追加の化合物を含み、前記追加の化合物が、
ａ）好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、ケンフェロールからなる群から選択される天然化合物；
ｂ）好ましくは、スルファフェナゾール、アバシミブ、ベンズブロマロン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、セルビスタチン、ワルファリン、ピオグリタゾン、ラパチニブ、トリメトプリム、ザフィルルカスト、アモジアキン、ニカルジピン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロラタジン、エチニルエストラジオール、イルベサルタン、キニーネ、ソラフェニブ、エルトロンボパグ、ロサルタン、リコフェロン、アミトリプチリン、アトルバスタチン、メフェナム酸、メロキシカム、ピロキシカム、エルロチニブ、パゾパニブ、ジエチルスチルベストロール、エンザルタミド、ポナチニブ、ダブラフェニブ、エナシデニブ、ロバスタチン、モンテルカスト、ケトコナゾール、フェロジピン、カンデサルタンシレキセチル、クロトリマゾール、モメタゾン、サルメテロール、ラロキシフェン、フェノフィブラート、レボチロキシン、タモキシフェン、オキシブチニン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ニフェジピン、リオトリックス、アムロジピン、ベザフィブラート、クロラムフェニコール、シクロスポリン、シメチジン、クロピドグレル、コレカルシフェロール、デラビルジン、デキストロプロポキシフェン、エトポシド、イソニアジド、ケトプロフェン、メトロニダゾール、ニルタミド、ニルバジピン、パロキセチン、フェネルジン、プラバスタチン、プロパフェノン、ピリメタミン、ロフェコキシブ、ルチン、サキナビル、スルファメトキサゾール、スルフィンピラゾン、テガセロド、テルフェナジン、チオリ
ダジン、チクロピジン、チオコナゾール、トリアゾラム、トロレアンドマイシン、バルプロ酸、アビラテロン、ビスモデギブ、レゴラフェニブ、トラメチニブ、イデラリシブ、ロピナビル、セレコキシブ、エファビレンツ、ラベプラゾール、テリフルノミド、クリサボロール、ベリノスタット、トピロキソスタット、カンデサルタン、レテルモビル、ルカパリブ、オピカポン、ナビロン、フルボキサミン、フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ボスチニブ、カボザンチニブ、ゲニステイン、レンバチニブ、アタザナビル、ベキサロテン、デフェラシロクス、キニジン、ミフェプリストン、ベムラフェニブ、シルデナフィル、ジクロフェナク、フルオキセチン、バルデコキシブ、ボリコナゾール、エトドラク、セルトラリン、グリブリド、アセノクマロール、ロスバスタチン、イマチニブ、クロザピン、ジアゼパム、プロゲステロン、オメプラゾール、バルサルタン、ボルテゾミブ、ネビラピン、アゼラスチン、ロルノキシカム、フェニルブダゾン、エトラビリン、レフルノミド、シタキセンタン、アミノフェナゾン、ベラパミル、エトリコキシブ、プロポフォール、スルファモキソール、ジクマロール、ジルチアゼム、ヒスタミン、モクロベミド、セレギリン、パレコキシブ、ドコネキセント、アセチルスルフィソキサゾール、フルコナゾール、パントプラゾール、デスロラタジン、ミコナゾール、アミオダロン、ゲムフィブロジル、プロベネシド、テニポシド、スルファジアジン、カペシタビン、フルオロウラシル、トラニルシプロミン、アナストロゾール、アトバコン、シクリジン、デクスフェンフルラミン、ジスルフィラム、エピネフリン、エプロサルタン、フレカイニド、インジナビル、メタゾラミド、ネルフィナビル、オランザピン、プランルカスト、プロメタジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファピリジン、メチマゾール、トルカポン、ビカルタミド、アルモダフィニル、アゴメラチン、ノスカピン、クレビジピン、スルコナゾール、ゲフィチニブ、チカグレロル、セリチニブ、フロクスウリジン、リフィテグラスト、レイン、ジアセレイン、ズカプサイシン、スチリペントール、ロベグリタゾン、ドスレピン、マニジピン、ブラックコホシュ、クルクミン、フェルバメート、ピペリン、サフィナミド、イプロニアジド、オリタバンシン、マソルポコール、およびペグビソマントからなる群から選択される、シトクロムＰ４５０の阻害剤；
ｃ）好ましくは、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤；
ｄ）好ましくは、Ｎ－フェニルマレイミド誘導体、ＴＳＩ－０１、およびチメロサールからなる群から選択される、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、具体的には、ＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、ＭＢＯＡＴ２、および／もしくはＭＢＯＡＴ７の阻害剤；ならびに／または
ｅ）好ましくは、シクロエート、アデノシン５’－ヘキサデシルホスフェート、エンド－１ｋ、（Ｓ）－イル、および化合物３７、５，５－ジメチル－３－（５－メチル－３－オキソ－２－フェニル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１－フェニル－３－（トリフルオロメチル－３，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インドール－２，４－ジオン）、および（３－エンド）－３－（フェニルスルホニル）－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボキサミドからなる群から選択される、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、具体的にはＥＬＯＶＬ２、ＥＬＯＶＬ４、および／もしくはＥＬＯＶＬ５の阻害剤
からなる群から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
ａ）好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、ケンフェロールからなる群から選択される天然化合物；
ｂ）好ましくは、スルファフェナゾール、アバシミブ、ベンズブロマロン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、セルビスタチン、ワルファリン、ピオグリタゾン、ラパチニブ、トリメトプリム、ザフィルルカスト、アモジアキン、ニカルジピン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロラタジン、エチニルエストラジオール、イルベサルタン、キニーネ、ソラフェニブ、エルトロンボパグ、ロサルタン、リコフェロン、アミトリプチリン、アトルバスタチン、メフェナム酸、メロキシカム、ピロキシカム、エルロチニブ、パゾパニブ、ジエチルスチルベストロール、エンザルタミド、ポナチニブ、ダブラフェニブ、エナシデニブ、ロバスタチン、モンテルカスト、ケトコナゾール、フェロジピン、カンデサルタンシレキセチル、クロトリマゾール、モメタゾン、サルメテロール、ラロキシフェン、フェノフィブラート、レボチロキシン、タモキシフェン、オキシブチニン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ニフェジピン、リオトリックス、アムロジピン、ベザフィブラート、クロラムフェニコール、シクロスポリン、シメチジン、クロピドグレル、コレカルシフェロール、デラビルジン、デキストロプロポキシフェン、エトポシド、イソニアジド、ケトプロフェン、メトロニダゾール、ニルタミド、ニルバジピン、パロキセチン、フェネルジン、プラバスタチン、プロパフェノン、ピリメタミン、ロフェコキシブ、ルチン、サキナビル、スルファメトキサゾール、スルフィンピラゾン、テガセロド、テルフェナジン、チオリ
ダジン、チクロピジン、チオコナゾール、トリアゾラム、トロレアンドマイシン、バルプロ酸、アビラテロン、ビスモデギブ、レゴラフェニブ、トラメチニブ、イデラリシブ、ロピナビル、セレコキシブ、エファビレンツ、ラベプラゾール、テリフルノミド、クリサボロール、ベリノスタット、トピロキソスタット、カンデサルタン、レテルモビル、ルカパリブ、オピカポン、ナビロン、フルボキサミン、フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ボスチニブ、カボザンチニブ、ゲニステイン、レンバチニブ、アタザナビル、ベキサロテン、デフェラシロクス、キニジン、ミフェプリストン、ベムラフェニブ、シルデナフィル、ジクロフェナク、フルオキセチン、バルデコキシブ、ボリコナゾール、エトドラク、セルトラリン、グリブリド、アセノクマロール、ロスバスタチン、イマチニブ、クロザピン、ジアゼパム、プロゲステロン、オメプラゾール、バルサルタン、ボルテゾミブ、ネビラピン、アゼラスチン、ロルノキシカム、フェニルブダゾン、エトラビリン、レフルノミド、シタキセンタン、アミノフェナゾン、ベラパミル、エトリコキシブ、プロポフォール、スルファモキソール、ジクマロール、ジルチアゼム、ヒスタミン、モクロベミド、セレギリン、パレコキシブ、ドコネキセント、アセチルスルフィソキサゾール、フルコナゾール、パントプラゾール、デスロラタジン、ミコナゾール、アミオダロン、ゲムフィブロジル、プロベネシド、テニポシド、スルファジアジン、カペシタビン、フルオロウラシル、トラニルシプロミン、アナストロゾール、アトバコン、シクリジン、デクスフェンフルラミン、ジスルフィラム、エピネフリン、エプロサルタン、フレカイニド、インジナビル、メタゾラミド、ネルフィナビル、オランザピン、プランルカスト、プロメタジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファピリジン、メチマゾール、トルカポン、ビカルタミド、アルモダフィニル、アゴメラチン、ノスカピン、クレビジピン、スルコナゾール、ゲフィチニブ、チカグレロル、セリチニブ、フロクスウリジン、リフィテグラスト、レイン、ジアセレイン、ズカプサイシン、スチリペントール、ロベグリタゾン、ドスレピン、マニジピン、ブラックコホシュ、クルクミン、フェルバメート、ピペリン、サフィナミド、イプロニアジド、オリタバンシン、マソルポコール、およびペグビソマントからなる群から選択される、シトクロムＰ４５０の阻害剤；
ｃ）好ましくは、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤；
ｄ）好ましくは、Ｎ－フェニルマレイミド誘導体、ＴＳＩ－０１、およびチメロサールからなる群から選択される、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、具体的には、ＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、ＭＢＯＡＴ２、および／もしくはＭＢＯＡＴ７の阻害剤；ならびに／または
ｅ）好ましくは、シクロエート、アデノシン５’－ヘキサデシルホスフェート、エンド－１ｋ、（Ｓ）－イル、および化合物３７、５，５－ジメチル－３－（５－メチル－３－オキソ－２－フェニル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１－フェニル－３－（トリフルオロメチル－３，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インドール－２，４－ジオン）、および（３－エンド）－３－（フェニルスルホニル）－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボキサミドからなる群から選択される、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、具体的にはＥＬＯＶＬ２、ＥＬＯＶＬ４、および／もしくはＥＬＯＶＬ５の阻害剤
からなる群から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項11】
細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物を含み、前記追加の化合物が、
ａ）好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピ
セアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン、シトバリシン、ペリオマイシン、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルもしくはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤；
ｂ）好ましくは、クロドロン酸、イビピナバント、アトラクチロシド、カルボキシアトラクチロシド、ボンクレキン酸、イソボンクレキン酸、ＭＴ－２１、クロサンテル、ＣＤ４３７、リーラミン、Ｌ９２３－０６７３、ＩＭＤ０３５４、ＰＩ３２－０３３３、Ｓ８９９５４２、ノナクチン、およびＳ８３８４６２からなる群から選択される、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼの阻害剤；
ｃ）好ましくは、２－デオキシ－Ｄ－グルコース、ロニダミン、ブロモピルビン酸、フロレチン、ＳＴＦ－３１、ＷＺＢ１１７、３ＰＯ、３－ブロモピルベート、ジクロロアセテート、オキサミン酸、ＮＨＩ－１、オキシチアミン、イマチニブ、グルコサミン、６－アミノニコチンアミド、ゲニステイン、５－チオグルコース、マンノヘプツロース、α－クロロヒドリン、オルニダゾール、オキサレート、グルフォスファミド、Ｎ－（ホスホンアセチル）－Ｌ－アスパルテート、６－メチルメルカプトプリンリボシド、ＣＧＰ３４６６Ｂマレエート、モノフルオロリン酸ナトリウム、ＤＡＳＡ－５８、ＤＬ－セリン、ジクロロ酢酸、ジクロロ酢酸ナトリウム、ニトロフラール、６－ＡＮ、ファセンチン、ベンセ
ラジド、アストラガリン、レスベラトロール、クリシン、ＧＥＮ－２７、アピゲニン、ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，３，４－チアジアゾール－２－イル）エチル硫化物、ＣＢ－８３９、アザセリン、アシビシン、６－ジアゾ－５－ｏｘ－Ｌ－ノルロイシン、チアゾリジン－２，４－ジオン誘導体、化合物９６８、Ｒ－リポ酸、１，３，４－チアジアゾール化合物、２－クロロプロピオネート、Ｎｏｖ３ｒ、ＡＺＤ７５４５、Ｐｆｚ３、ラジシコール、ミタプラチン、ｍｉｔｏ－ＤＣＡ、フェニルブチレート、４，５－ジアリールイソオキサゾール、ＶＥＲ－２４６６０８、ベツリン酸、ホスフィネートまたはホスホナート基を含有するピルベート類似体、ＣＰＩ－６１３、Ｍ７７９７６、芳香族ＤＣＡ誘導体、フランおよびチオフェンカルボン酸、リトナビル、ＦＸ１１、オキサメート、Ｄ－フルクトース－６－ホスフェート、６－ホスホグルコン酸、Ｎ－ブロモアセチル－アミノエチルホスフェート、２－カルボキシエチルホスホン酸、Ｎ－ヒドロキシ－４－ホスホノ－ブタンアミド、２－ホスホグリセリン酸、ヨードアセテート、ゴシポール、１，３－ビスホスホグリセリン酸のビスホスホネート類似体、ベンゼンヘキサカルボン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホノアセトヒドロキサム酸、２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸、ＴＬＮ－２３２、ならびにＣＡＰ－２３２からなる群から選択される、グリコリシスの阻害剤
からなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
ａ）好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピ
セアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン、シトバリシン、ペリオマイシン、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルもしくはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤；
ｂ）好ましくは、クロドロン酸、イビピナバント、アトラクチロシド、カルボキシアトラクチロシド、ボンクレキン酸、イソボンクレキン酸、ＭＴ－２１、クロサンテル、ＣＤ４３７、リーラミン、Ｌ９２３－０６７３、ＩＭＤ０３５４、ＰＩ３２－０３３３、Ｓ８９９５４２、ノナクチン、およびＳ８３８４６２からなる群から選択される、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼの阻害剤；
ｃ）好ましくは、２－デオキシ－Ｄ－グルコース、ロニダミン、ブロモピルビン酸、フロレチン、ＳＴＦ－３１、ＷＺＢ１１７、３ＰＯ、３－ブロモピルベート、ジクロロアセテート、オキサミン酸、ＮＨＩ－１、オキシチアミン、イマチニブ、グルコサミン、６－アミノニコチンアミド、ゲニステイン、５－チオグルコース、マンノヘプツロース、α－クロロヒドリン、オルニダゾール、オキサレート、グルフォスファミド、Ｎ－（ホスホンアセチル）－Ｌ－アスパルテート、６－メチルメルカプトプリンリボシド、ＣＧＰ３４６６Ｂマレエート、モノフルオロリン酸ナトリウム、ＤＡＳＡ－５８、ＤＬ－セリン、ジクロロ酢酸、ジクロロ酢酸ナトリウム、ニトロフラール、６－ＡＮ、ファセンチン、ベンセ
ラジド、アストラガリン、レスベラトロール、クリシン、ＧＥＮ－２７、アピゲニン、ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，３，４－チアジアゾール－２－イル）エチル硫化物、ＣＢ－８３９、アザセリン、アシビシン、６－ジアゾ－５－ｏｘ－Ｌ－ノルロイシン、チアゾリジン－２，４－ジオン誘導体、化合物９６８、Ｒ－リポ酸、１，３，４－チアジアゾール化合物、２－クロロプロピオネート、Ｎｏｖ３ｒ、ＡＺＤ７５４５、Ｐｆｚ３、ラジシコール、ミタプラチン、ｍｉｔｏ－ＤＣＡ、フェニルブチレート、４，５－ジアリールイソオキサゾール、ＶＥＲ－２４６６０８、ベツリン酸、ホスフィネートまたはホスホナート基を含有するピルベート類似体、ＣＰＩ－６１３、Ｍ７７９７６、芳香族ＤＣＡ誘導体、フランおよびチオフェンカルボン酸、リトナビル、ＦＸ１１、オキサメート、Ｄ－フルクトース－６－ホスフェート、６－ホスホグルコン酸、Ｎ－ブロモアセチル－アミノエチルホスフェート、２－カルボキシエチルホスホン酸、Ｎ－ヒドロキシ－４－ホスホノ－ブタンアミド、２－ホスホグリセリン酸、ヨードアセテート、ゴシポール、１，３－ビスホスホグリセリン酸のビスホスホネート類似体、ベンゼンヘキサカルボン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホノアセトヒドロキサム酸、２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸、ＴＬＮ－２３２、ならびにＣＡＰ－２３２からなる群から選択される、グリコリシスの阻害剤
からなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項12】
老化関係の疾患もしくは状態の発症を予防もしくは遅延するか、または老化関係の疾患もしくは状態の進行を予防もしくは遅延するか、または老化関係の疾患もしくは状態の退行を促進する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項13】
老化関係の疾患または状態が、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、がん、骨粗鬆症、変形性関節症、神経障害、認知症、白内障、腎疾患、網膜症、糖尿病、肺線維症、脊椎の皮膚変性、加齢性筋萎縮、脱毛、または皮膚老化である、請求項１２に記載の使用のための組成物。
【請求項14】
移植の成績を改善する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項15】
老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項16】
化学療法の副作用を改善し、腫瘍の再発を予防または遅延する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項17】
対象において老化細胞を同定するインビトロ方法であって、
ａ）前記対象のサンプルを準備するステップ、
ｂ）前記対象においてリゾホスファチジル－コリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルを決定するステップ、
ｃ）ｂ）のレベルを基準レベルと比較するステップ
を含み、基準レベルが、非老化細胞におけるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルであり、
リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のレベルでの少なくとも２倍の増加が、前記サンプルにおける老化細胞の存在を示している、
上記方法。
ａ）前記対象のサンプルを準備するステップ、
ｂ）前記対象においてリゾホスファチジル－コリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルを決定するステップ、
ｃ）ｂ）のレベルを基準レベルと比較するステップ
を含み、基準レベルが、非老化細胞におけるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルであり、
リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のレベルでの少なくとも２倍の増加が、前記サンプルにおける老化細胞の存在を示している、
上記方法。
【請求項18】
老化細胞を除去するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、
ａ）少なくとも１つの試験化合物を、老化細胞のサンプルと接触させるステップ、
ｂ）アラキドン酸の細胞内レベルを測定する、および／またはアポトーシスを測定する、および／または細胞生存率を測定するステップ、ならびに
ｃ）未処置の老化細胞と比較して、試験化合物と接触させた老化細胞において、アラキドン酸の細胞内蓄積、高いアポトーシス、および／または低い細胞生存率を起こす試験化合物を選択するステップ
を含む、上記方法。
ａ）少なくとも１つの試験化合物を、老化細胞のサンプルと接触させるステップ、
ｂ）アラキドン酸の細胞内レベルを測定する、および／またはアポトーシスを測定する、および／または細胞生存率を測定するステップ、ならびに
ｃ）未処置の老化細胞と比較して、試験化合物と接触させた老化細胞において、アラキドン酸の細胞内蓄積、高いアポトーシス、および／または低い細胞生存率を起こす試験化合物を選択するステップ
を含む、上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、老化細胞除去剤（ｓｅｎｏｌｙｔｉｃｓ）の分野に関し、老化細胞の選択的な除去に有用な組成物、および老化細胞除去（ｓｅｎｏｌｙｔｉｃ）化合物をスクリーニングする方法を提供する。
【背景技術】
【0002】
老化細胞は、それらが加齢性の疾患および障害の発症および進行に重要な役割を果たす加齢性病変に近接して、加齢の過程の間に組織および臓器に蓄積することが見出された。遺伝的または薬理学的のいずれかの手法を使用するマウスモデルでの老化細胞のクリアランスは、健康寿命を延長し、老化関連の疾患および障害の発生ならびに虚弱の発症を予防または遅延することが示された。それ以来、老化細胞を選択的に除去することができ、一般に「老化細胞除去剤」と称される、いくつかの薬理学的化合物が同定されている。
【0003】
細胞老化が、胚発生（Ｍｕｎｏｚ－Ｅｓｐｉｎら、２０１３年）、および創傷治癒（Ｄｅｍａｒｉａら、２０１４年）に重要な役割を果たす腫瘍抑制機構であるので、加齢の過程の間の臓器および組織での老化細胞の慢性蓄積は、加齢性の疾患および障害の発症および進行に対する主な駆動力であると考えられる。老化細胞は、最終的に、ｐ５３－ｐ２１ＣＩＰ１またはｐ１６ＩＮＫ４ａ－Ｒｂ軸のいずれかを介して成長が停止しており、老化関連のβ－ガラクトシダーゼ活性（ＳＡ－β－ｇａｌ）を蓄積させ、典型的な形態を呈する（Ｃａｍｐｉｓｉおよびｄ’Ａｄｄａ ｄｉ Ｆａｇａｇｎａ、２００７年）。慢性的に存在する場合、これらは、老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）と呼ばれる、サイトカイン、成長因子、およびプロテアーゼの腫瘍化を促進する（ｐｒｏ－ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ）炎症性混合物を分泌することにより、周囲組織に悪影響を及ぼす（Ａｃｏｓｔａら、２０１３年；Ｃｏｐｐｅら、２０１０年；Ｋｒｔｏｌｉｃａら、２００１年）。
【0004】
老化細胞では、アラキドン酸の細胞外培地への放出が増大するので、若い細胞と比較してアラキドン酸の細胞内レベルが低減することは、以前に記載されている（Ｌｏｒｅｎｚｉｎｉら、２０００年）。
【0005】
これらの知見と対照的に、ＷＯ２０１９０７０４０７Ａ１は、例えばエイコサノイドのような老化細胞のインジケーター、またはエイコサノイド前駆体アラキドン酸を決定することにより、哺乳動物において高いレベルの老化細胞を同定する方法を開示する。
【0006】
ｐ１６ＩＮＫ４ａプロモーターを使用して、ｐ１６ＩＮＫ４ａ陽性細胞を視覚化し、選択的に除去する遺伝学的マウスモデルは、老化細胞が、インビボの加齢の過程の間に蓄積し、ｐ１６ＩＮＫ４ａ陽性細胞のクリアランスが、健康寿命を延長させ、老化関連の疾患および障害の発症および進行を障害することを、説得力をもって示した（Ｂａｋｅｒら、２０１６年；Ｂａｋｅｒら、２０１１年）。老化細胞、ならびに、いくつか加齢性の疾患および障害、例えば、アテローム性動脈硬化症（Ｃｈｉｌｄｓら、２０１６年；Ｒｏｏｓら、２０１６年）、特発性肺線維症（Ｌｅｈｍａｎｎら、２０１７年；Ｓｃｈａｆｅｒら、２０１７年）、骨粗鬆症（Ｆａｒｒら、２０１７年；Ｚｈｕら、２０１５年）、外傷後変形性関節症（Ｊｅｏｎら、２０１７年）、腎臓老化（ＳｃｈｍｉｔｔａｎｄＭｅｌｋ、２０１７年；Ｖａｌｅｎｔｉｊｎら、２０１８年）、皮膚老化（Ｂａａｒら、２０１７年；Ｌａｍｍｅｒｍａｎｎら、２０１８年；Ｌｅｗｉｓら、２０１１年；Ｒｅｓｓｌｅｒら、２００６年；Ｙｏｓｅｆら、２０１６年）、神経変性疾患（Ｂｕｓｓｉａｎら、２０１８年）、および脂肪生成の障害（Ｘｕら、２０１５年）の間の因果関係に対する有力な証拠がある。さらに、老化細胞のクリアランスが、照射および化学療法に誘発された老化の悪影響を減弱し、組織機能性を修復することを示していた（Ｂａａｒら、２０１７年；Ｃｈａｎｇら、２０１６年；Ｄｏｒｒら、２０１３年；Ｐａｎら、２０１７年）。加齢性の疾患および障害に加えて、細胞老化はまた、腫瘍の再発と、続く化学療法（Ｍｉｌａｎｏｖｉｃら、２０１７年）、および、老化細胞除去両方の潜在性を強調する移植臓器の成績（Ｂｒａｕｎら、２０１２年）に関連する。
【0007】
老化細胞除去化合物および標的のリストは、Ｂｃｌ－２ファミリーの阻害剤（Ｃｈａｎｇら、２０１６年；Ｐａｎら、２０１７年；Ｙｏｓｅｆら、２０１６年；Ｚｈｕら、２０１７年；Ｚｈｕら、２０１６年）、Ｈｓｐ９０阻害剤（Ｆｕｈｒｍａｎｎ－Ｓｔｒｏｉｓｓｎｉｇｇら、２０１７年）、ダサチニブ（Ｒｏｏｓら、２０１６年；Ｓｃｈａｆｅｒら、２０１７年；Ｚｈｕら、２０１５年）、ＦＯＸＯ４（Ｂａａｒら、２０１７年）、ＯＸＲ１（Ｚｈａｎｇら、２０１８年）、グルコース代謝（Ｄｏｒｒら、２０１３年）、ミトコンドリア標的タモキシフェン（ＭｉｔｏＴａｍ）またはオリゴマイシンＡでのＡＴＰシンターゼ活性の低減（Ｈｕｂａｃｋｏｖａら、２０１８）、およびいくつかの植物由来化合物、例えばケルセチン（Ｒｏｏｓら、２０１６年；Ｓｃｈａｆｅｒら、２０１７年；Ｚｈｕら、２０１５年）、フィセチン（Ｚｈｕら、２０１７年）、ピペルロングミン（Ｗａｎｇら、２０１６ａ年）、ならびにアキノキリンソウ（ｓｏｌｉｄａｇｏｖｉｒｇａｕｒｅａ）のアルコール抽出物（Ｌａｍｍｅｒｍａｎｎら、２０１８年）を含む。
【0008】
老化細胞を標的とする化合物の組合せは、記載されている。ＷＯ２０１５１１６７３５Ａ１は、例えばダサチニブおよびケルセチンを含む老化細胞除去の組合せを投与することによる、老化細胞関連の疾患または障害の処置のための方法を記載する。
【0009】
しかし、ナビトクラックスおよびダサチニブのような報告された老化細胞除去剤の多くは、重篤な副作用を有し、ほとんどの老化細胞除去剤は、全ての細胞種において全般に効果的なわけではない。
【0010】
したがって、重篤な副作用がより少なく、広範囲な適用の改善された老化細胞除去剤が強く望まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0011】
本発明の目的は、老化細胞を効果的に除去することが可能な組成物を提供することである。本発明のさらなる目的は、老化細胞の選択的な除去に有用な化合物をスクリーニングする方法を提供することである。
【0012】
課題は、本発明により解決される。
【課題を解決するための手段】
【0013】
本発明者らは、老化細胞が、変化した脂質代謝を含み、これを、老化細胞を選択的に除去するのに利用することができることを示している。特に、リゾＰＣは、老化細胞において上方制御され、アラキドン酸の形成の増加を示す。アラキドン酸の細胞内蓄積による細胞死を予防するために、アラキドン酸は、代謝される。例えば、アラキドン酸は、リポキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼによりエイコサノイドに代謝されるか、またはＡＣＳＬ４のようなアラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素により、酵素的な再利用および分解の過程に対する前駆体であるアラキドニル－ＣｏＡに代謝される。これにより、高い細胞内レベルのアラキドン酸による細胞死は、予防される。したがって、リポキシゲナーゼまたはシクロオキシゲナーゼの阻害は、老化細胞のアラキドン酸の増加をもたらすので、老化細胞の選択的な除去をもたらす。
【0014】
本発明によると、シクロオキシゲナーゼ１（ＣＯＸ－１）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ－２）、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な１つまたは複数の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物が提供される。
【0015】
具体的には、１つまたは複数の阻害剤は、ＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２の特異的阻害剤である。
具体的には、本明細書で提供される組成物は、１つまたは複数の阻害剤を含み、ＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、およびリポキシゲナーゼからなる群から選択される少なくとも２つの酵素の酵素活性を阻害することが可能である。
具体的には、本明細書で提供される組成物は、１つまたは複数の阻害剤を含み、ＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、およびリポキシゲナーゼからなる群から選択される少なくとも２つの酵素の酵素活性を阻害することが可能である。
【0016】
具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、少なくとも２つの阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、少なくとも１つのＣＯＸ－１またはＣＯＸ－２阻害剤、および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、組成物は、少なくとも１つのＣＯＸ－１阻害剤、および少なくとも１つのＣＯＸ－２阻害剤を含む。具体的には、提供される組成物は、ＣＯＸ－１阻害剤、ＣＯＸ－２阻害剤、およびＣＯＸ－１／ＣＯＸ－２阻害剤、ならびにリポキシゲナーゼ阻害剤からなる群から選択されるシクロオキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、少なくとも１つのＣＯＸ－１阻害剤および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤、または少なくとも１つのＣＯＸ－２阻害剤および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤、または少なくとも１つのＣＯＸ－１／ＣＯＸ－２阻害剤および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤を含む。
【0017】
さらに具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、少なくとも１つのデュアルシクロオキシゲナーゼおよび／またはリポキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、上記組成物は、１つのデュアルシクロオキシゲナーゼおよび／またはリポキシゲナーゼ阻害剤、ならびに任意で少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼまたはリポキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、併用処置として、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼおよび少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤を含むか、またはシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも１つのデュアル阻害剤、もしくはそれらの任意の組合せを含む。
【0018】
さらに具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２を阻害することが可能な、１つまたは複数の阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、少なくとも１つのＣＯＸ－１／ＣＯＸ－２阻害剤、または少なくとも１つのＣＯＸ－１阻害剤、および少なくとも１つのＣＯＸ－２阻害剤を含む。
【0019】
本発明によると、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害することが可能な１つまたは複数の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物がさらに提供される。具体的には、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する上記酵素は、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）、具体的にはＡＣＳＬ１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、またはＳＬＣ２７Ａ２もしくはＡＣＳＢＧ２のいずれか１つまたは複数である。
【0020】
具体的には、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害することが可能な阻害剤は、ＡＣＳＬ阻害剤であり、具体的には、少なくともＡＣＳＬ４を阻害することが可能な阻害剤である。具体的には、本明細書に記載の組成物は、１つまたは複数のＡＣＳＬ阻害剤を含む。具体的には、本明細書に記載の組成物は、ＡＣＳＬ４阻害剤を含む。
【0021】
具体的には、１つまたは複数のＡＣＳＬ阻害剤は、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、
トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、例えば、Ｋｉｍら、２０１２年、またはＰｒｉｏｒら、２０１４年に記載されたもの、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、またはロシグリタゾンである。
トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、例えば、Ｋｉｍら、２０１２年、またはＰｒｉｏｒら、２０１４年に記載されたもの、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、またはロシグリタゾンである。
【0022】
具体的には、本明細書に記載の組成物は、１つまたは複数のＳＬＣ２７Ａ２阻害剤を含み、好ましくは、トリアクシンＣ、５－ブロモ－５’－フェニルスピロ［３Ｈ－１，３，４－チアジアゾール－２，３’－インドリン］－２－オン、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６、ＣＢ１６、ＮＣＩ－３、ならびに、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６およびＣＢ１６の類似体から選択される。具体的には、ＳＬＣ２７Ａ２の阻害剤は、Ｓａｎｄｏｖａｌら、２０１０年に開示される。
【0023】
具体的には、本明細書に記載の組成物は、１つまたは複数のＡＣＳＢＧ２阻害剤を含み、好ましくは、上記阻害剤は、２－（６－ヒドロキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）－１，３－チアゾール－４（５Ｈ）－オンである。
【0024】
本発明の具体的な実施形態によると、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つまたは複数の阻害剤、およびＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、またはリポキシゲナーゼのうちの少なくとも１つを含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物を提供する。
【0025】
具体的には、本明細書で提供される組成物は、１つまたは複数の阻害剤を含み、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的にはＡＣＳＬ１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２および／またはＡＣＳＢＧ２、ならびに、シクロオキシゲナーゼ活性を有する酵素、具体的にはＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２の酵素活性を阻害することが可能である。
【0026】
具体的には、本明細書で提供される組成物は、少なくとも１つのＡＣＳＬ阻害剤、およびシクロオキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、ＡＣＳＬ１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、およびＡＣＳＬ６のうちの少なくとも１つを阻害することが可能な阻害剤、ならびに、ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２のうちの少なくとも１つを阻害することが可能な阻害剤を含む。
【0027】
具体的には、本明細書で提供される組成物は、１つまたは複数の阻害剤を含み、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的にはＡＣＳＬ１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２および／またはＡＣＳＢＧ２、ならびに、リポキシゲナーゼ活性を有する酵素の酵素活性を阻害することが可能である。
【0028】
具体的には、本明細書で提供される組成物は、少なくとも１つのＡＣＳＬ阻害剤、およびリポキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、ＡＣＳＬ１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、およびＡＣＳＬ６のうちの少なくとも１つを阻害することが可能な阻害剤、ならびに、少なくともＡＬＯＸ５を阻害することが可能な阻害剤を含む。
【0029】
具体的には、老化細胞は、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、およびホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの高い細胞内レベルで特徴付けられる。
具体的には、リゾホスファチジルコリンは、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＳＰＣ）、または１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＰＰＣ）からなる群から選択され
る。
具体的には、リゾホスファチジルコリンは、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＳＰＣ）、または１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＰＰＣ）からなる群から選択され
る。
【0030】
具体的には、本明細書で提供される組成物に含まれる１つまたは複数の阻害剤は、アセチルサリチル酸、ジクロフェナク、セレコキシブ、シクロスポリンＡ、イブプロフェン、アセトアミノフェン、インドメタシン、ナブメトン、ケトロラック、テノキシカム、トルメチン、ピロキシカム、フェノプロフェン、エトドラク、ナプロキセン、ジフルニサル、スプロフェン、ブロムフェナク、ケトプロフェン、ジホモ－γ－リノレン酸、イコサペント、フルルビプロフェン、メフェナム酸、サルサレート、スリンダク、サリチル酸、ルミラコキシブ、Ｏ－アセチル－Ｌ－セリン、フェナセチン、フルルビプロフェンメチルエステル、メタミゾール、ニトロアスピリン、メロキシカム、フルフェナム酸、オキサプロジン、チアプロフェン酸、サリチル酸マグネシウム、ジエチルカルバマジン、ロルノキシカム、カルプロフェン、フェニルブダゾン、ネパフェナク、アンチピリン、アントラフェニン、トリサリチル酸コリンマグネシウム、トリフルサール、ニフルム酸、デキシブプロフェン、アセクロフェナック、アセメタシン、ドロキシカム、ロキソプロフェン、トルフェナム酸、デキスケトプロフェン、タルニフルメート、プロパセタモール、サリチル酸トロラミン、サリチル酸フェニル、ブフェキサマク、サリチル酸グリコール、サリチル酸メンチル、ＦＫ－５０６、レナリドマイド、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、シミコキシブ、クロルフェネシン、クロドロン酸、セリシクリブ、ドロスピレノン、トリアムシノロン、ポマリドミド、パレコキシブ、フィロコキシブ、アクロフェナク、アダパレン、サリドマイド、エトリコキシブ、ロベナコキシブ、アサルアルデヒド、ザルトプロフェン、デラコキシブ、デキサメタゾン、プラノプロフェン、アンフェナクナトリウム一水和物、アンピロキシカム、ＮＳ－３９８、次サリチル酸ビスマス、ジクロフェナクジエチルアミン、トロメタモール、ルテカルピン、サリシン、フェンブフェン、キサントフモール、フルニキシンメグルミン、およびニメスリドからなる群から選択されるＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２阻害剤である。
【0031】
好ましくは、本明細書に記載の組成物は、ケルセチンを含まない。具体的には、ケルセチンは、１００μｍ未満のＩＣ５０で、シクロオキシゲナーゼ活性を阻害することが不可能なので、シクロオキシゲナーゼ阻害剤ではない（Ｗａｎｇら、２０００年）。具体的には、ケルセチンは、３μｍ未満のＩＣ５０で、リポキシゲナーゼ活性を阻害することができないので、リポキシゲナーゼ阻害剤ではない。
【0032】
具体的には、本明細書で提供される組成物に含まれる１つまたは複数の阻害剤は、ＭＫ８８６、ジロイトン、マソプロコール、ジエチルカルバマジン、アゼラスチン、ベノキサプロフェン、ノルジヒドログアイアレチン酸、アビエチン酸、エスクレチン、モンテルカスト、ミノサイクリン、ＭＬＮ－９７７、レイン、ジアセレイン、ナビキシモルス、ホスタマチニブ、ＡＭ１０３、ＤＧ０３１、フィボフラポン、ＡＡ－８６１、およびアトレロイトン（ａｔｒｅｌｅｕｔｏｎ）からなる群から選択されるリポキシゲナーゼおよび／またはＦＬＡＰ（ＡＬＯＸ５ＡＰ）阻害剤である。
【0033】
好ましい実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、アセチルサリチル酸、ジクロフェナク、セレコキシブ、シクロスポリンＡ、およびイブプロフェンからなる群から選択される少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤、ならびに、ＭＫ８８６およびジロイトンからなる群から選択される少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、アセチルサリチル酸およびＭＫ８８６を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、ジクロフェナクおよびＭＫ８８６を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、セレコキシブおよびＭＫ８８６を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、アセチルサリチル酸、ジクロフェナクまたはセレコキシブ、ならびにシクロスポリンＡおよびＭＫ８８６を含む。
【0034】
具体的には、本明細書で提供される組成物に含まれる１つまたは複数の阻害剤は、好ましくは、リコフェロン、ダルブフェロン、ＣＩ－９８７、Ｓ－２４７４、ＫＭＥ－４、ケブラジン酸、バルサラジド、メサラジン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、メクロフェナム酸、モルニフルマートジアリールピラゾール誘導体、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体、Ｎ－置換５－アミノサリシリシラミド（ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃｙｌａｍｉｄｅ）、フラボコキシド、インドリジン誘導体、ＬＱＦＭ－０９１、ヒペルホリン、セラストロール、ＢＷ７５５Ｃ、テポキサリン、ｂ－ボスウェリン酸、Ｄ－００２、２，３－ジアリールキサントン、フェニドン、およびＥＲ－３４１２２からなる群から選択されるデュアルシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ阻害剤である。
【0035】
さらに具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、アラキドン酸の細胞内の転換を阻害することが可能な追加の化合物を含む。具体的には、上記の追加の化合物は、アラキドン酸レベルの増加をもたらす。具体的には、上記の追加の化合物は、天然化合物のいずれか１つ、シトクロムＰ４５０の阻害剤、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、もしくは脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、またはそれらの任意の組合せである。
【0036】
具体的には、追加の化合物は、好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、およびケンフェロールからなる群から選択される天然化合物である。
【0037】
具体的には、追加の化合物は、好ましくは、スルファフェナゾール、アバシミブ、ベンズブロマロン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、セルビスタチン、ワルファリン、ピオグリタゾン、ラパチニブ、トリメトプリム、ザフィルルカスト、アモジアキン、ニカルジピン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロラタジン、エチニルエストラジオール、イルベサルタン、キニーネ、ソラフェニブ、エルトロンボパグ、ロサルタン、リコフェロン、アミトリプチリン、アトルバスタチン、メフェナム酸、メロキシカム、ピロキシカム、エルロチニブ、パゾパニブ、ジエチルスチルベストロール、エンザルタミド、ポナチニブ、ダブラフェニブ、エナシデニブ、ロバスタチン、モンテルカスト、ケトコナゾール、フェロジピン、カンデサルタンシレキセチル、クロトリマゾール、モメタゾン、サルメテロール、ラロキシフェン、フェノフィブラート、レボチロキシン、タモキシフェン、オキシブチニン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ニフェジピン、リオトリックス、アムロジピン、ベザフィブラート、クロラムフェニコール、シクロスポリン、シメチジン、クロピドグレル、コレカルシフェロール、デラビルジン、デキストロプロポキシフェン、エトポシド、イソニアジド、ケトプロフェン、メトロニダゾール、ニルタミド、ニルバジピン、パロキセチン、フェネルジン、プラバスタチン、プロパフェノン、ピリメタミン、ロフェコキシブ、ルチン、サキナビル、スルファメトキサゾール、スルフィンピラゾン、テガセロド、テルフェナジン、チオリダジン、チクロピジン、チオコナゾール、トリアゾラム、トロレアンドマイシン、バルプロ酸、アビラテロン、ビスモデギブ、レゴラフェニブ、トラメチニブ、イデラリシブ、ロピナビル、セレコキシブ、エファビレンツ、ラベプラゾール、テリフルノミド、クリサボロール、ベリノスタット、トピロキソスタット、カンデサルタン、レテルモビル、ルカパリブ、オピカポン、ナビロン、フルボキサミン、フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ボスチニブ、カボザンチニブ、ゲニステイン、レンバチニブ、アタザナビル、ベキサロテン、デフェラシロクス、キニジン、ミフェプリストン、ベムラフェニブ、シルデナフィル、ジクロフェナク、フルオキセチン、バルデコキシブ、ボリコナゾール、エトドラク、セルトラリン、グリブリド、アセノクマロール、ロスバスタチン、イマチニブ、クロザピン、ジアゼパム、プロゲステロン、オメプラゾール、バルサルタン、ボルテゾミブ、ネビラピン、アゼラスチン、ロルノキシカム、フェニルブダゾン、エトラビリン、レフルノミド、シタキセンタン、アミノフェナゾン、ベラパミル、エトリコキシブ、プロポフォール、スルファモキソール、ジクマロール、ジルチアゼム、ヒスタミン、モクロベミド、セレギリン、パレコキシブ、ドコネキセント、アセチルスルフィソキサゾール、フルコナゾール、パントプラゾール、デスロラタジン、ミコナゾール、アミオダロン、ゲムフィブロジル、プロベネシド、テニポシド、スルファジアジン、カペシタビン、フルオロウラシル、トラニルシプロミン、アナストロゾール、アトバコン、シクリジン、デクスフェンフルラミン、ジスルフィラム、エピネフリン、エプロサルタン、フレカイニド、インジナビル、メタゾラミド、ネルフィナビル、オランザピン、プランルカスト、プロメタジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファピリジン、メチマゾール、トルカポン、ビカルタミド、アルモダフィニル、アゴメラチン、ノスカピン、クレビジピン、スルコナゾール、ゲフィチニブ、チカグレロル、セリチニブ、フロクスウリジン、リフィテグラスト、レイン、ジアセレイン、ズカプサイシン、スチリペントール、ロベグリタゾン、ドスレピン、マニジピン、ブラックコホシュ、クルクミン、フェルバメート、ピペリン、サフィナミド、イプロニアジド、オリタバンシン、マソルポコール（ｍａｓｏｒｐｏｃｏｌ）、およびペグビソマントからなる群から選択される、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ２Ｊ、ＣＹＰ２Ｃ、ＣＹＰ４Ａ、ＣＹＰ４Ｆ）の阻害剤である。
【0038】
具体的には、追加の化合物は、好ましくは、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤である。
【0039】
具体的には、追加の化合物は、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、具体的にはＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、ＭＢＯＡＴ２、および／またはＭＢＯＡＴ７の阻害剤であり、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤は、好ましくは、Ｎ－フェニルマレイミド誘導体、ＴＳＩ－０１、およびチメロサールからなる群から選択される。
【0040】
具体的には、追加の化合物は、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、具体的にはＥＬＯＶＬ２、ＥＬＯＶＬ４、および／またはＥＬＯＶＬ５の阻害剤であり、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤は、好ましくは、シクロエート、アデノシン５’－ヘキサデシルホスフェート、エンド－１ｋ、（Ｓ）－イル、および化合物３７、５，５－ジメチル－３－（５－メチル－３－オキソ－２－フェニル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１－フェニル－３－（トリフルオロメチル－３，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インドール－２，４－ジオン）、および（３－エンド）－３－（フェニルスルホニル）－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボキサミドからなる群から選択される。
【0041】
さらに具体的な実施形態によると、組成物は、細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物を含む。
具体的には、細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物は、好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピセアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン（ｏｓｓａｍｙｃｉｎ）、シトバリシン、ペリオマイシン（ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルまたはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤である。
具体的には、細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物は、好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピセアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン（ｏｓｓａｍｙｃｉｎ）、シトバリシン、ペリオマイシン（ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルまたはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤である。
【0042】
具体的には、細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物は、好ましくは、クロドロン酸、イビピナバント、アトラクチロシド、カルボキシアトラクチロシド、ボンクレキン酸、イソボンクレキン酸、ＭＴ－２１、クロサンテル、ＣＤ４３７、リーラミン（ｌｅｅｌａｍｉｎｅ）、Ｌ９２３－０６７３、ＩＭＤ０３５４、ＰＩ３２－０３３３、Ｓ８９９５４２、ノナクチン、およびＳ８３８４６２からなる群から選択される、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼの阻害剤である。
【0043】
具体的には、細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物は、好ましくは、２－デオキシ－Ｄ－グルコース、ロニダミン、ブロモピルビン酸、フロレチン、ＳＴＦ－３１、ＷＺＢ１１７、３ＰＯ、３－ブロモピルベート、ジクロロアセテート、オキサミン酸、ＮＨＩ－１、オキシチアミン、イマチニブ、グルコサミン、６－アミノニコチンアミド、ゲニステイン、５－チオグルコース、マンノヘプツロース、α－クロロヒドリン、オルニダゾール、オキサレート、グルフォスファミド、Ｎ－（ホスホンアセチル）－Ｌ－アスパルテート、６－メチルメルカプトプリンリボシド、ＣＧＰ３４６６Ｂマレエート、モノフルオロリン酸ナトリウム、ＤＡＳＡ－５８、ＤＬ－セリン、ジクロロ酢酸、ジクロロ酢酸ナトリウム、ニトロフラール、６－ＡＮ、ファセンチン（ｆａｓｅｎｔｉｎ）、ベンセラジド、アストラガリン、レスベラトロール、クリシン、ＧＥＮ－２７、アピゲニン、ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，３，４－チアジアゾール－２－イル）エチル硫化物、ＣＢ－８３９、アザセリン、アシビシン、６－ジアゾ－５－ｏｘ－Ｌ－ノルロイシン、チアゾリジン－２，４－ジオン誘導体、化合物９６８、Ｒ－リポ酸、１，３，４－チアジアゾール化合物、２－クロロプロピオネート、Ｎｏｖ３ｒ、ＡＺＤ７５４５、Ｐｆｚ３、ラジシコール、ミタプラチン（ｍｉｔａｐｌａｔｉｎ）、ｍｉｔｏ－ＤＣＡ、フェニルブチレート、４，５－ジアリールイソオキサゾール、ＶＥＲ－２４６６０８、ベツリン酸、ホスフィネートまたはホスホナート基を含有するピルベート類似体、ＣＰＩ－６１３、Ｍ７７９７６、芳香族ＤＣＡ誘導体、フランおよびチオフェンカルボン酸、リトナビル、ＦＸ１１、オキサメート、Ｄ－フルクトース－６－ホスフェート、６－ホスホグルコン酸、Ｎ－ブロモアセチル－アミノエチルホスフェート、２－カルボキシエチルホスホン酸、Ｎ－ヒドロキシ－４－ホスホノ－ブタンアミド、２－ホスホグリセリン酸、ヨードアセテート、ゴシポール、１，３－ビスホスホグリセリン酸のビスホスホネート類似体、ベンゼンヘキサカルボン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホノアセトヒドロキサム酸、２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸、ＴＬＮ－２３２、ならびにＣＡＰ－２３２からなる群から選択される、グリコリシスの阻害剤である。
【0044】
具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、老化関係の疾患または状態の発症を予防または遅延する。
具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、老化関係の疾患または状態の進行を予防または遅延する。
具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、老化関係の疾患または状態の進行を予防または遅延する。
【0045】
具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、老化関係の疾患または状態の退行を促進する。
具体的には、老化関係の疾患または状態は、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、がん、骨粗鬆症、変形性関節症、神経障害、認知症、白内障、腎疾患、網膜症、糖尿病、肺線維症、脊椎の皮膚変性、加齢性筋萎縮、脱毛、および皮膚老化から選択される。
具体的には、老化関係の疾患または状態は、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、がん、骨粗鬆症、変形性関節症、神経障害、認知症、白内障、腎疾患、網膜症、糖尿病、肺線維症、脊椎の皮膚変性、加齢性筋萎縮、脱毛、および皮膚老化から選択される。
【0046】
具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、移植の成績を改善する。
具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する。
具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する。
【0047】
具体的な実施形態によると、組成物は、化学療法の副作用を改善し、腫瘍の再発を予防または遅延する。
本明細書でさらに提供されるのは、対象において老化細胞を同定するインビトロ方法であって、
ａ）上記対象のサンプルを準備するステップ、
ｂ）上記対象においてリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルを決定するステップ、
ｃ）ｂ）のレベルを基準レベルと比較するステップ
を含み、基準レベルが、非老化細胞におけるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルであり、
少なくとも２倍の増加が、上記サンプルにおける老化細胞の存在を示している、
方法である。
本明細書でさらに提供されるのは、対象において老化細胞を同定するインビトロ方法であって、
ａ）上記対象のサンプルを準備するステップ、
ｂ）上記対象においてリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルを決定するステップ、
ｃ）ｂ）のレベルを基準レベルと比較するステップ
を含み、基準レベルが、非老化細胞におけるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルであり、
少なくとも２倍の増加が、上記サンプルにおける老化細胞の存在を示している、
方法である。
【0048】
具体的には、基準レベルと比較して少なくとも２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、または５倍のリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、およびホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルでの増加は、上記サンプルにおける老化細胞の存在を示している。
【0049】
さらにより具体的には、それぞれの標準偏差の少なくとも２倍、３倍、４倍、または５倍である、基準レベルと比較した、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、およびホ
スホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルでの増加は、上記サンプルにおける老化細胞の存在を示している。好ましくは、それぞれの標準偏差の少なくとも２倍である、基準レベルと比較した、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、およびホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つのレベルでの増加は、対象のサンプルにおける老化細胞の存在を示している。
スホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルでの増加は、上記サンプルにおける老化細胞の存在を示している。好ましくは、それぞれの標準偏差の少なくとも２倍である、基準レベルと比較した、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、およびホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つのレベルでの増加は、対象のサンプルにおける老化細胞の存在を示している。
【0050】
さらに提供されるのは、老化細胞を除去するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、
ａ）少なくとも１つの試験化合物を、老化細胞のサンプルと接触させるステップ、
ｂ）アラキドン酸の細胞内レベルを測定する、および／またはアポトーシスを測定する、および／または細胞生存率を測定するステップ、ならびに
ｃ）未処置の老化細胞と比較して、試験化合物と接触させた老化細胞において、アラキドン酸の細胞内蓄積、高いアポトーシス、および／または低い細胞生存率を起こす試験化合物を選択するステップ
を含む方法である。
ａ）少なくとも１つの試験化合物を、老化細胞のサンプルと接触させるステップ、
ｂ）アラキドン酸の細胞内レベルを測定する、および／またはアポトーシスを測定する、および／または細胞生存率を測定するステップ、ならびに
ｃ）未処置の老化細胞と比較して、試験化合物と接触させた老化細胞において、アラキドン酸の細胞内蓄積、高いアポトーシス、および／または低い細胞生存率を起こす試験化合物を選択するステップ
を含む方法である。
【0051】
具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物で使用される化合物は、本明細書に記載のスクリーニング方法にしたがって同定される。
具体的な実施形態によると、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物は、ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２活性を阻害または除去する、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤を含み、老化関係の疾患または状態に罹患するか、または発症の危険がある対象は、女性である。
具体的な実施形態によると、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物は、ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２活性を阻害または除去する、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤を含み、老化関係の疾患または状態に罹患するか、または発症の危険がある対象は、女性である。
【0052】
具体的な実施形態によると、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物は、ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２を阻害する、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、本明細書で提供される組成物は、ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２を阻害する、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤を含み、老化関係の疾患または状態に罹患するか、または発症の危険がある対象は、男性である。
【図面の簡単な説明】
【0053】
【図1】リゾホスファチジルコリンは、老化細胞において上昇する。（ａ）リゾＰＰＣ（１６：０ リゾＰＣ）およびリゾＳＰＣ（１８：０ リゾＰＣ）の細胞内レベルは、３つの異なるドナー由来のＨＤＦの複製寿命の間に上昇し、高い集団倍加（ＰＤ）でのＨＤＦ培養における複製老化細胞の高い百分率をミラーリングする。リゾＰＰＣ（１６：０ リゾＰＣ）およびリゾＳＰＣ（１８：０ リゾＰＣ）の細胞内レベルは、（ｂ）過酸化水素および（ｃ）ドキソルビシンでのテロメア非依存性ストレスに誘発された早期老化の誘導後、ＨＤＦにおいて上昇する。エラーバーは、平均値±標準偏差を表す。データは、３つの実験の平均値を示す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図2】ＰＬＡ２活性を伴うホスホリパーゼ、および分泌型ホスホリパーゼＡ２受容体は、ＳＩＰＳのＨＤＦおよびＨＬＦで上昇する。（ａ）ＰＬＡ２活性を有する酵素をエンコードするか、または他の手段により細胞内ＰＬＡ２活性を高めることが可能であるかのいずれかである、いくつかの遺伝子の転写レベルは、ストレスに誘発された早期老化のＨＤＦを上昇させ、酵素加水分解が、老化細胞での高いレベルのリゾＰＣに対して可能性のある供給源であることを示す。ＰＬＡ２Ｇ４Ａ、ＰＬＡ２Ｇ４Ｃ、およびＰＬＡ２Ｒ１は全て、この過程の間、リゾＰＣの他に、生成物としてアラキドン酸を生成することが知られている。（ｂ）ＰＬＡ２活性は、３つの異なるドナー由来のストレスに誘発された早期老化のＨＤＦ、およびＨＬＦで上昇し、ＥｎｚＣｈｅｋ（商標）ホスホリパーゼＡ２アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｅ１０２１７）で測定される。データは、３つの実験の平均値を示す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図3】本明細書に記載の老化細胞除去組成物により利用される経路の概要：老化細胞では、脂質代謝、具体的にはアラキドン酸の代謝が変化する。老化細胞は、高いレベルのアラキドン酸を含み、これは、例えばＣＯＸおよびＡＬＯＸによりエイコサノイドへと代謝されるか、またはアラキドニル－ＣｏＡへと変換されるので、再アシル化および分解の過程で利用可能である（ＭｕｒｐｈｙおよびＦｏｌｃｏ、２０１９年）。ＣＯＸおよびＡＬＯＸまたはＡＣＳＬ４の阻害は、老化細胞でのアラキドン酸の蓄積をもたらし、次にアポトーシスの誘導をもたらす。
【図4】ＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡおよびＡＬＯＸ阻害剤ＭＫ８８６単独、対、先行技術の老化細胞除去剤ケルセチンおよびナビトクラックスの老化細胞除去効果。ＭＫ８８６、ＡＳＡ、ならびに報告された老化細胞除去剤ケルセチンおよびナビトクラックスは、対照の休止細胞（Ｑ）と比較して、Ｈ２Ｏ２に誘発された早期老化ヒト真皮線維芽細胞（ＳＩＰＳ）において試験した。ＭＫ８８６およびＡＳＡが、ＳＩＰＳのＨＤＦにおいて著しい老化細胞除去効果を示した一方、これは、ケルセチンまたはナビトクラックスでは見られなかった。エラーバーは、平均値±標準偏差を表す。データは、６つの実験の平均値を示す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図5】ＣＯＸ－２／ＡＬＯＸデュアル阻害剤リコフェロンおよびＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡ単独、対、先行技術の老化細胞除去剤の老化細胞除去効果。リコフェロン、ＡＳＡ、ならびに報告された老化細胞除去ケルセチンおよびナビトクラックスは、対照の休止細胞（Ｑ）と比較して、ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＵＶＥＣ（ＳＩＰＳ）において試験した。リコフェロン、ＡＳＡ、ならびにナビトクラックスが、ＳＩＰＳのＨＵＶＥＣにおいて著しい老化細胞除去効果を示した一方、これは、ケルセチンでは見られなかった。エラーバーは、平均値±標準偏差を表す。データは、６つの実験の平均値を示す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図6-1】ＨＤＦ１６１におけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果。ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＤＦ１６１（ＳＩＰＳ）および対照の休止細胞（Ｑ）は、ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６、ＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡ、およびジクロフェナク、もしくはＣＯＸ－２特異的阻害剤セレコキシブ単独、または高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、５０μＭのジクロフェナク、もしくは２μＭのセレコキシブのいずれかを使用する組合せのいずれかで処置した。単一のＡＡ代謝酵素の阻害は、セレコキシブ単独で見られる老化細胞での細胞生存率を低下させるのに十分ではなかった。ＭＫ８８６の任意のシクロオキシゲナーゼ阻害剤（ＣＯＸ－１／２またはＣＯＸ－２特異的）との組合せは、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加を実証した、相乗効果を示した。データは、３つの実験の平均値を示す。
【図6-2】同上。
【図7】ＨＤＦ１６４におけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果。ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＤＦ１６４（ＳＩＰＳ）および対照の休止細胞（Ｑ）は、ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６、およびＣＯＸ－１／２阻害剤ジクロフェナク単独、または高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、もしくは５０、１００、もしくは２００μＭのジクロフェナクのいずれかを使用する組合せのいずれかで処置した。ＭＫ８８６のシクロオキシゲナーゼ阻害剤との組合せは、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加により相乗効果を示した。データは、３つの実験の平均値を示す。
【図8】ｆＨＤＦ１６６におけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果。ドキソルビシンに誘発された早期老化ｆＨＤＦ１６６（ＳＩＰＳ）および対照の休止細胞（Ｑ）は、ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６、およびＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡ、およびジクロフェナク単独、または高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、もしくは５０μＭのジクロフェナクのいずれかを使用する組合せのいずれかで処置した。ＭＫ８８６のシクロオキシゲナーゼ阻害剤との組合せは、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加により相乗効果を示した。データは、３つの実験の平均値を示す。
【図9】ＨＤＦにおけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果（３つのドナーの組合せデータ）。（ａ）ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＤＦ７６、ＨＤＦ１６１、ＨＤＦ１６４（ＳＩＰＳ）、および対照の休止細胞（Ｑ）は、ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６、およびＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡ、およびジクロフェナク単独、または（ｂ）高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、もしくは５０μＭのジクロフェナクのいずれかを使用する組合せのいずれかで処置した。ＭＫ８８６のシクロオキシゲナーゼ阻害剤との組合せは、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加により相乗効果を示した。（ｃ）ナビトクラックス、ならびに高濃度のダサチニブと組み合わせた１５μＭのケルセチンは、ＨＤＦにおいて老化細胞除去効果を示さなかった。エラーバーは、平均値±標準偏差を表す。データは、３つの生物学的複製の平均値を示す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図10】ランズ回路の重要な酵素は、老化ＨＤＦで増加する。アシル－ＣｏＡシンテターゼまたはリゾリン脂質アシルトランスフェラーゼのいずれかをコードする、いくつかの遺伝子の転写レベルは、ストレスに誘発された早期老化のＨＤＦで上昇し、遊離ＡＡの細胞内レベルが、ランズ回路の迅速な再利用および分解の過程により老化細胞内で調節されることを示す。（ａ）ＡＣＳＬ１およびＡＣＳＬ４は、ＡＡ－ＣｏＡ、リン脂質への分解または酵素的再組込みに対する前駆体を生成することにより遊離ＡＡの活性化を必要とする。（ｂ）ＭＢＯＡＴ７は、ホスホイノシトールへのＡＡ－ＣｏＡの再組込みにとって重要な酵素である。データは、３つの実験の平均値を示す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図11】長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害は、老化細胞除去であり、ＨＤＦにおけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの阻害と組み合わせる場合（３つのドナーの組合せデータ）、相乗効果を有する。ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＤＦ７６、ＨＤＦ１６１、ＨＤＦ１６４（ＳＩＰＳ）、および対照の休止細胞（Ｑ）は、ＡＣＳＬ４阻害剤トリアクシンＣ（ＴｒＣ）単独、または高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．５μＭのＴｒＣ、もしくは５０μＭのジクロフェナクのいずれかを使用する組合せのいずれかで処置した。ＡＣＳＬ４阻害剤単独は、ＨＤＦにおいて強力な老化細胞除去効果を示した。加えて、リポキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼ阻害剤のＴｒｃとの組合せは、図９と比較して、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加により相乗効果を示した。エラーバーは、平均値±標準偏差を表す。データは、３つの生物学的複製の平均値を示す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図12】長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害は、老化細胞除去であり、ＨＬＦにおけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの阻害と組み合わせる場合、相乗効果を有する。ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＬＦ１０２（ＳＩＰＳ）、および対照の休止細胞（Ｑ）は、ＡＣＳＬ４阻害剤トリアクシンＣ（ＴｒＣ）単独、または高濃度のＴｒＣと組み合わせた１μＭのＭＫ８８６、もしくは５０μＭのジクロフェナクのいずれかを使用する組合せのいずれかで処置した。ＡＣＳＬ４阻害剤単独は、ＨＬＦにおいて強力な老化細胞除去効果を示した。加えて、リポキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼ阻害剤との組合せは、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加により相乗効果を示した。データは、３つの実験の平均値を示す。
【図13】長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害は、老化細胞除去であり、ＲＰＴＥＣにおけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの阻害と組み合わせる場合、相乗効果を有する。ドキソルビシンに誘発された早期老化ＲＰＴＥＣ１（ＳＩＰＳ）および対照の休止細胞（Ｑ）は、ＡＣＳＬ４阻害剤トリアクシンＣ（ＴｒＣ）、ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６、およびＣＯＸ－１／２阻害剤ジクロフェナク単独、または高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．１μＭのＴｒＣ、もしくは２５μＭのジクロフェナクのいずれかを使用する組合せのいずれかで処置した。ＡＣＳＬ４阻害剤単独は、ＲＰＴＥＣにおいて強力な老化細胞除去効果を示した。加えて、リポキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼ阻害剤のＴｒｃとの組合せは、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加により相乗効果を示した。データは、３つの実験の平均値を示す。
【図14】ＨＤＦ１６４におけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果は、ＡＴＰシンターゼ阻害剤オリゴマイシンＡの添加によりさらに増強することができる。ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＤＦ１６４（ＳＩＰＳ）、および対照の休止細胞（Ｑ）は、高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、または５μＭのオリゴマイシンＡとの組合せで処置した。ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６およびＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡのＡＴＰシンターゼ阻害剤オリゴマイシンＡとの組合せは、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加により相乗効果を示した。データは、３つの実験の平均値を示す。
【図15】ｆＨＤＦ１６６におけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果は、カルシニューリン阻害剤シクロスポリンＡの添加によりさらに増強することができる。ドキソルビシンに誘発された早期老化ｆＨＤＦ１６６（ＳＩＰＳ）、および対照の休止細胞（Ｑ）は、高濃度のＭＫ８８６単独と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、または２μＭのシクロスポリンＡとの組合せで処置した。ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６およびＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡのカルシニューリン阻害剤シクロスポリンＡとの組合せは、ＣＯＸ－２発現を阻害すると知られており、老化細胞のＥＣ５０値の低下、および老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化の増加により相乗効果を示した。データは、３つの実験の平均値を示す。
【図16】ＳＩＰＳのＨＤＦのシクロスポリンＡとの併用処置は、ＣＯＸ／ＡＬＯＸ阻害剤の老化細胞除去効果を増強した。顕微鏡画像は、ＭＫ８８６およびＡＳＡを使用する併用処置が、対照細胞（「Ｑ」）ではなく、老化細胞（「ＳＩＰＳ」）の溶解を誘発することを明らかにする。ＳＩＰＳにおけるＭＫ８８６およびＡＳＡの老化細胞除去効果は、シクロスポリンＡを添加すると、さらに増大する。このような効果は、対照細胞において観察されない。１００倍の倍率での顕微鏡写真。スケールバー、１００μｍ。
【図17】ＡＡの細胞内レベルは、対照の休止細胞（Ｑ）と比較して、老化ＨＤＦおよびＨＬＦ（ＳＩＰＳ）で上昇し、エイコサノイド合成を遮断することで、ＡＡの細胞内レベルを上昇させる。（ａ）ドキソルビシンに誘発された老化ＨＤＦおよびＨＬＦのＡＡの細胞内レベルは、それぞれ、４つおよび３つの異なるドナー由来の対照の休止細胞と比較した。（ｂ）ＨＤＦ１６１のＡＡの細胞内レベルは、ＣＯＸ－１／２阻害剤ジクロフェナク（１００μＭ）およびＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６（１０μＭ）、または溶媒のみ（１％のＤＭＳＯ）で６時間処置した。（ａ）に対して、データは、４つおよび３つの生物学的複製の平均値を示す。（ｂ）に対して、データは、１つの実験を示す。エラーバーは、平均値±標準偏差を表す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図18】ＡＣＳＬ４およびＡＬＯＸ５のデュアル阻害の老化細胞除去効果は、老化細胞の高いＰＬＡ２－活性に依存する。ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＤＦ７６、ＨＤＦ８５、ＨＤＦ１６１（ＳＩＰＳ）、および対照の休止細胞（Ｑ）は、１μＭのＡＣＳＬ４阻害剤トリアクシンＣ（ＴｒＣ）および１μＭのＡＬＯＸ５阻害剤ＭＫ８８６単独の組合せ、または２．５μＭのＡ２３１８７（ｃＰＬＡ２活性剤）もしくは１２．５μＭのＡＳＢ１４７８０（ｃＰＬＡ２阻害剤）のいずれかを添加してのいずれかで７２時間処置した。ＡＬＯＸ５単独と組み合わせたＡＣＳＬ４阻害は、図１１に示す通り、ＨＤＦにおいて著しい老化細胞除去効果を示した。ｃＰＬＡ２活性剤Ａ２３１８７は、同様のレベルに、老化細胞ならびに休止細胞の両方の生存率を低減したので、老化細胞除去効果を消失させた。一方、小分子阻害剤ＡＳＢ１４７８０を有するｃＰＬＡ２の阻害が、老化細胞の生存率を上昇させた一方、休止細胞は、わずかな程度でしか影響を及ぼさなかった。エラーバーは、平均値±標準偏差を表す。データは、３つの生物学的複製の平均値を示す。有意水準は、以下で示した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【発明を実施するための形態】
【0054】
別段指示または定義がない限り、本明細書で使用される全ての用語は、当該技術分野における通常の意味を有し、当業者には明白であろう。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（第２版）、１～３巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）；Ｌｅｗｉｎ、「Ｇｅｎｅｓ ＩＶ」、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、（１９９０）、およびＪａｎｅｗａｙら、「Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ」（第５版またはより最新版）、Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１年のような、標準的なハンドブックを参照する。
【0055】
本明細書を通して使用される具体的な用語は、以下の意味を有する。
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」とは、本明細書で使用する場合、同義的に使用することができ、さらなる部材または部分または要素に対するオープン定義として理解されるべきである。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」とは、なっている定義の特徴のさらなる要素を伴わない、最もクローズな定義として考えられる。ゆえに、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、より広く、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」の定義を含有する。
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」とは、本明細書で使用する場合、同義的に使用することができ、さらなる部材または部分または要素に対するオープン定義として理解されるべきである。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」とは、なっている定義の特徴のさらなる要素を伴わない、最もクローズな定義として考えられる。ゆえに、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、より広く、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」の定義を含有する。
【0056】
用語「約」とは、本明細書で使用する場合、同じ値、または与えられた値の±５％の差である値を指す。
単数形および複数形は、別段指示されない場合、本明細書で互換的に使用することができる。
単数形および複数形は、別段指示されない場合、本明細書で互換的に使用することができる。
【0057】
本明細書で使用する場合、用語「対象」または「個体」または「患者」とは、温血哺乳動物、特にヒトを指すべきである。あるいは、これはまた、動物、例えば、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、または非ヒト霊長類であり得る。
【0058】
用語「患者」とは、老化関連の状態もしくは疾患に対する予防的もしくは治療的処置を受けるか、または細胞老化もしくは老化関連の状態もしくは疾患と診断されている、ヒトおよび他の哺乳動物対照を含む。
【0059】
用語「サンプル」とは、一般に、組織または臓器サンプル、血液、無細胞血液、例えば血清および血漿、乏血小板血漿、リンパ液、尿、唾液、ならびに生検プローブを指す。
老化細胞は、内部または外部ストレスに応じて、ならびに加齢の過程の間に、組織および臓器に蓄積することが見出された。これらは、老化関係の疾患または障害の発症および進行に重要な役割を果たす。老化細胞を除去することができるいくつかの薬理学的化合物は、同定されているが、多くの老化細胞除去剤は、重篤な副作用を起こすか、特定の細胞種でのみ老化細胞除去活性を呈するか、または十分な有効性を欠如させる。したがって、改善された老化細胞除去剤に対する、緊急の必要性がある。
老化細胞は、内部または外部ストレスに応じて、ならびに加齢の過程の間に、組織および臓器に蓄積することが見出された。これらは、老化関係の疾患または障害の発症および進行に重要な役割を果たす。老化細胞を除去することができるいくつかの薬理学的化合物は、同定されているが、多くの老化細胞除去剤は、重篤な副作用を起こすか、特定の細胞種でのみ老化細胞除去活性を呈するか、または十分な有効性を欠如させる。したがって、改善された老化細胞除去剤に対する、緊急の必要性がある。
【0060】
老化とは、機能的特質が徐々に劣化することを指す。細胞老化は、細胞外もしくは細胞内ストレスに対する応答として、および／または加齢により、培養およびインビボで起こ
る。老化応答は、損傷細胞の増殖を予防し、潜在的な悪性転換を妨げる細胞周期停止に細胞を固定する。老化とは、経時的に起こる変化の列挙を指す。基準細胞（例えば、非老化であると知られている同じ種類または年齢の細胞またはサンプル）と比較して、老化細胞は、以下の特徴：細胞増殖能の低下；リポフスチンの蓄積（例えば、リポフスチン蓄積における増加）；β－ガラクトシダーゼ活性の増大；老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）のメンバーの分泌での増加；ミトコンドリア由来の反応性酸素種の増加；核ＤＮＡ損傷病巣の増大；テロメアの短縮；ｐ１６もしくはｐ２１もしくはその任意の組合せの高い発現のいずれかの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上、または全てを示す細胞として定義され；または細胞もしくは対象は、上述のものを起こす過程を示す。
る。老化応答は、損傷細胞の増殖を予防し、潜在的な悪性転換を妨げる細胞周期停止に細胞を固定する。老化とは、経時的に起こる変化の列挙を指す。基準細胞（例えば、非老化であると知られている同じ種類または年齢の細胞またはサンプル）と比較して、老化細胞は、以下の特徴：細胞増殖能の低下；リポフスチンの蓄積（例えば、リポフスチン蓄積における増加）；β－ガラクトシダーゼ活性の増大；老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）のメンバーの分泌での増加；ミトコンドリア由来の反応性酸素種の増加；核ＤＮＡ損傷病巣の増大；テロメアの短縮；ｐ１６もしくはｐ２１もしくはその任意の組合せの高い発現のいずれかの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上、または全てを示す細胞として定義され；または細胞もしくは対象は、上述のものを起こす過程を示す。
【0061】
老化細胞は、オートファジー効果の低下、もしくはミトコンドリア膜電位の低下をさらに示すことができるか、または上述のものを起こす過程を示す。公知の老化細胞または対象のような細胞または対象と比較して、非老化細胞または対象は、細胞増殖能の増加、リポフスチン蓄積の低下、β－ガラクトシダーゼ活性の低下、またはその組合せを示すことができる。具体的には、ヒトの場合、約３０歳以上、約４０歳以上、約５０歳以上、約６０歳以上、約７０歳以上、約８０歳以上、約９０歳以上の人から採取した細胞またはサンプルは、老化細胞またはサンプルとして定義することができる。ある特定の場合、約３０歳以下、２０歳以下、１０歳以下、または胚期でのヒトから採取した細胞またはサンプルは、老化細胞またはサンプルとして定義することができる。具体的には、例えば糖尿病、具体的にはＩ型糖尿病のような、老化関係の疾患または状態に罹患するか、または発症の危険があるヒトの子供から採取した細胞またはサンプルは、老化細胞またはサンプルとして定義することができる。
【0062】
ゆえに、用語「細胞老化」および「老化細胞」とは、分裂することができる細胞が、臨界的に短いテロメア、発がん性ストレス、もしくはＤＮＡ損傷に接するか、または強い細胞分裂促進シグナル、例えば、限定されないが、がん遺伝子または高発現した増殖性を促進する遺伝子を経験する場合に起こる重要な不可逆な成長停止、および代謝的に活性であり、タンパク質発現において広範な変化を受けている潜在的に持続する細胞である老化細胞を指す。
【0063】
用語「老化細胞」とは、具体的には、老化の特質である、マーカーまたはマーカーの組合せを発現する細胞を指す。具体的な実施形態によると、このようなマーカーは、リゾホスファチジルコリン、具体的にはリゾＰＰＣおよび／またはリゾＳＰＣ、アラキドン酸、ならびにホスホリパーゼＡ２活性のいずれか１つまたは複数である。具体的には、このようなマーカーは、リゾホスファチジルコリン、好ましくはリゾＰＰＣおよび／またはリゾＳＰＣ、アラキドン酸、ならびにホスホリパーゼＡ２活性のいずれか１つまたは複数のレベル、具体的には細胞内レベルの増加である。いくつかの実施形態では、老化細胞は、ＤＮＡ損傷応答性（ＤＤＲ）マーカーのレベル、テロメアを有する５３ＢＰ１またはγＨ２ＡＸのようなＤＮＡ損傷タンパク質の共局在性、ならびに細胞周期阻害剤ｐ１６ＩＮＫ４Ａ、ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ、ｐ２１ＣＩＰ１、およびｐ５３における、非老化細胞のような基準に対する高い発現を含むがそれらに限定されない他のマーカーを発現する。ＤＥＣ１、ＤＣＲ２、およびＰＡＩ１もまた、老化のバイオマーカーとして使用することができる。一実施形態では、老化細胞は、ＳＡ－β－Ｇａｌ（老化関連のβガラクトシダーゼ）を、ｐＨ＝６でＸ－Ｇａｌでの染色が青色となる程度まで発現する。
【0064】
ストレスは、天然およびインビボの等価物が知られていないが、著しいテロメアの浸食を伴わずに老化停止を起こす。これらのストレスは、不適切な基質、例えば、組織培養プラスチック、血清（インビボでは、多くの細胞が血清ではなく血漿を経験）、血清除去、物質または酸化ストレス、例えば大気Ｏ２での培養を含むＤＮＡ損傷を含み、これは、超生理学的であるか、または過酸化水素、パラコート、もしくはｔｅｒｔ－ブチルヒドロペ
ルオキシドのような反応性酸素種を生成する物質への曝露である。細胞はまた、ＰＴＥＮ腫瘍抑制剤、増殖性／生存性を促進するキナーゼと反作用するホスファターゼを喪失すると、老化に入る。加えて、老化成長停止を通常実現するサイクリン依存性キナーゼ阻害剤（ＣＤＫｉ）、特にｐ２１ＷＡＦ１および／またはｐ１６ＩＮＫ４ａの異所性発現は、老化を起こし得る。
ルオキシドのような反応性酸素種を生成する物質への曝露である。細胞はまた、ＰＴＥＮ腫瘍抑制剤、増殖性／生存性を促進するキナーゼと反作用するホスファターゼを喪失すると、老化に入る。加えて、老化成長停止を通常実現するサイクリン依存性キナーゼ阻害剤（ＣＤＫｉ）、特にｐ２１ＷＡＦ１および／またはｐ１６ＩＮＫ４ａの異所性発現は、老化を起こし得る。
【0065】
加齢は、有機体の発生の期間に続く劣化の過程の組合せである。加齢は、一般に、ストレスに対する適応性の低下、ホメオスタシス不均衡の増大、老化細胞の増加、および疾患の高い危険性で特徴付けられる。これにより、死亡が加齢の最終結果である。環境因子は、加齢に影響を及ぼし得、例えば、紫外線放射への過剰曝露は、皮膚老化を加速する。身体の異なる部分は、異なる速度で老化し得る。同じ種の２つの有機体もまた、異なる速度で老化し得るが、生物学的老化および経時的老化を別個の概念とする。
【0066】
老化の速度の加速は、化学的、身体的、および生物学的ストレスを含むが、限定されないストレス状態により誘発され得る。例えば、加速した老化は、ＵＶおよびＩＲ放射、薬物および他の化学物質、化学療法、中毒物質、例えば、限定されないが、ＤＮＡ挿入剤および／または損傷剤、酸化ストレッサーなど；細胞分裂促進刺激、発がん性刺激、有害化合物、低酸素、酸化剤、環境汚染物質、例えばシリカへの曝露、産業的汚染物質、例えば粉塵、噴煙、石綿、または煙霧への曝露に起因するストレスにより誘発され得る。これら全てのストレッサーは、単独で、または組み合わせて、細胞老化も起こし得る。具体的には、老化は、ストレスの組合せ、例えば、２つ以上の化学的および身体的ストレス；２つ以上の化学的および生物学的ストレス；２つ以上の身体的および生物学的ストレス；組み合わせて化学的、身体的および生物学的ストレスなどにより誘発される。
【0067】
細胞老化はまた、繰り返される細胞分裂（複製老化と称す）に由来するテロメア機能障害（テロメア脱キャップ化）、ミトコンドリア劣化、酸化ストレス、重篤または修復不能なＤＮＡ損傷およびクロマチン破壊（遺伝毒性ストレス）、ならびにある特定のがん遺伝子の発現（がん遺伝子に誘発された老化）に起因し得る。細胞老化を起こすストレスは、寿命の過程の間、治療的介入（例えば、Ｘ線照射もしくは化学療法）で、または酸化呼吸および細胞分裂促進シグナルのような内因性の過程の結果として遭遇する、外部または内部の化学的および身体的結果により誘発され得る。例示的な細胞分裂促進シグナル、例えば、正常細胞に近接する腫瘍細胞による増殖関連癌遺伝子α（ＧＲＯα）分泌、または循環するアンギオテンシンＩＩもまた、細胞老化を誘発することが示されている。分裂する能力を有する全ての体細胞は、老化を経験し得る。老化を誘発するストレスの異なる機構に関わらず、老化プログラムは、細胞が、損傷または機能障害の限界レベルを感知すると、活性化される。今まで、老化成長停止は、ｐ１６ＩＮＫ４ａおよびｐＲＢ（網膜芽腫タンパク質）、ならびにｐ５３により制御される、主要な腫瘍抑制経路の活性に依存することが示されている。老化関連表現型の経路上流および下流に関与する分子のいくつかは、培地およびインビボでの老化細胞を検出するマーカーとして使用されている。
【0068】
本明細書に記載される通り、老化細胞は、変化した脂質代謝を有する。具体的には、ホスホリパーゼＡ２活性は、上方制御される。具体例によると、分泌型ホスホリパーゼＡ２受容体（ＰＬＡ２Ｒ１）は、上方制御され、リゾＰＣの生成を誘発し、アラキドン酸（ＡＡ）の同時細胞内放出をもたら。ゆえに、具体的には、老化細胞は、速いＡＡ形成速度を有する。さらに具体例によると、リゾホスファチジルコリンは、上方制御される。特に、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ リゾＰＣ）および１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０ リゾＰＣ）は、老化誘導因子が、テロメア依存性（複製老化、加齢）であるかまたは非依存性（ストレスに誘発された早期老化）であるかに依存せずに上方制御される。
【0069】
驚くべきことに、ＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な組成物を使用して老化細胞の上記の変化した脂質代謝を標的とすることは、異なる細胞種の老化細胞を効果的かつ選択的に除去する。有利には、十分に研究された薬理学的化合物であり、一般に軽い副作用のみを有する、多くのシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ阻害剤が、存在する。
【0070】
用語「ホスホリパーゼＡ２」または「ＰＬＡ２」とは、本明細書で使用する場合、ＰＬＡ２活性を有するリパーゼのスーパーファミリーを指す。ＰＬＡ２活性とは、例えばホスファチジルコリンのような膜リン脂質のｓｎ－２位置から脂肪酸を加水分解する、ＰＬＡ２酵素の能力を指す。ＰＬＡ２スーパーファミリーは、分泌したＰＬＡ２（ｓＰＬＡ２）、細胞質ゾロのＰＬＡ２（ｃＰＬＡ２）、カルシウム依存性ＰＬＡ２（ｉＰＬＡ２）、および、血小板活性化因子（ＰＡＦ）アセチルヒドロラーゼ／酸化した脂質リポタンパク質関連ＰＬＡ２（（Ｌｐ）ＰＬＡ２）を含む、４つの主要な種類の酵素を含む。具体的には、ＰＬＡ２、特にｓＰＬＡ２およびｃＰＬＡ２は、ホスファチジルコリンを加水分解することで知られており、リゾホスファチジルコリンを生成し、アラキドン酸を同時に放出する。
【0071】
用語「リゾホスファチジルコリン」または「リゾＰＣ」とは、本明細書で使用する場合、ホスファチジルコリンに由来する化学化合物を指し、通常、細胞膜に位置する。リゾＰＣを、酸化の過程を通して非酵素的、またはＰＬＡ２活性を有するホスホリパーゼによる転換を通して酵素的のいずれかで、ホスファチジルコリン（ＰＣ）から生成することができる。具体的には、リゾＰＣは、細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２Ｇ４Ａ）、細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２γ（ＰＬＡ２Ｇ４Ｃ）、および／またはグループＸＶホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２Ｇ１５）により生成することができる。リゾＰＣは、Ｃ－１（ｓｎ－１）位置に結合した、様々な長さおよび飽和の脂肪酸の異なる組合せを有し得る。１６、１８、および２０個の炭素を含有する脂肪酸が、最も一般的である。１８：０ リゾＰＣは、リゾＳＰＣとも呼ばれるが、特に、Ｃ－１位置でステアリン酸の１本鎖からなる。１６：０ リゾＰＣは、リゾＰＰＣとも呼ばれるが、特に、Ｃ－１位置でパルミチン酸の１本鎖からなる。
【0072】
用語「アラキドン酸」または「ＡＡ」とは、本明細書で使用する場合、ポリ不飽和ω－６脂肪酸を指す。具体的には、ＡＡは、身体の細胞の膜のリン脂質、とりわけホスファチジルコリンに存在する。シグナル伝達酵素の調節に関与する脂質セカンドメッセンジャーとして細胞シグナル伝達に関与することに加え、アラキドン酸は、重要な炎症性中間体であり、血管拡張剤として作用することもできる。具体的には、ＡＡは、ＰＬＡ２活性を有するリパーゼによるホスファチジルコリンのリゾホスファチジルコリンへの加水分解時、ホスファチジルコリンから細胞質ゾルへと放出される。
【0073】
ＡＡは、様々な酵素により、広範囲のエイコサノイドおよびエイコサノイドの代謝物に代謝される前駆体である。具体的には、細胞内ＡＡは、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼによりエイコサノイドにさらに代謝される。例えば、酵素シクロオキシゲナーゼ－１および－２（ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２）は、アラキドン酸をプロスタグランジンＧ２およびプロスタグランジンＨ２に代謝し、５－リポキシゲナーゼは、アラキドン酸を５－ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸（５－ＨＰＥＴＥ）に代謝し、次に様々なロイコトリエンに代謝し、１５－リポキシゲナーゼ－１（ＡＬＯＸ１５）および１５－リポキシゲナーゼ－２（ＡＬＯＸ１５Ｂ）は、アラキドン酸を１５－ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸（１５－ＨＰＥＴＥ）に代謝し、１２－リポキシゲナーゼ（ＡＬＯＸ１２）は、アラキドン酸を１２－ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸（１２－ＨＰＥＴＥ）に代謝する。
【0074】
ＡＡのエイコサノイドまたはエイコサノイドの代謝物への転換は、重要であるが、それは、ＡＡの細胞内蓄積が、細胞に毒性作用を有するからである。例えば、ホスホリパーゼＡ２活性により細胞質ゾルへと放出されるＡＡは、ミトコンドリアのアポトーシス経路を通してアポトーシスを誘導することができる。本明細書に記載される通り、老化細胞は、速いＡＡ形成速度を有するが、それは、ＰＬＡ２およびリゾＰＣが、上方制御されるからである。したがって、ＡＡのエイコサノイドへの代謝の阻害は、老化細胞のＡＡレベル、特に細胞内ＡＡレベルを、非老化細胞より高い程度まで高め、老化細胞の選択的除去をもたらす。具体的には、老化細胞は、高い細胞内ＡＡレベルにより誘導される細胞死を通して選択的に除去される。
【0075】
用語「選択的に除去すること」とは、細胞または対象の、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤、および／もしくは少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤、ならびに／またはアラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害することが可能な少なくとも１つの阻害剤を含む老化細胞除去組成物への曝露を指し、老化細胞の溶解を誘発する。本明細書に記載の老化細胞除去組成物は、好ましくは老化細胞を死滅させることにより、例えばアポトーシスを誘発することにより、老化細胞を選択的に除去する組成物である。換言すれば、老化細胞除去組成物は、非老化細胞を破壊または死滅させるその能力と比較して、生物学的、臨床的、および／または統計学的に有意な方法で老化細胞を破壊または死滅させる。具体的には、本明細書に記載の老化細胞除去組成物は、老化細胞の死滅を誘発する（開始する、刺激する、誘導する、活性化する、促進する）および老化細胞の死滅を生じる（すなわち、起こす、もたらす）方法で、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ、ならびにアラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を標的化することにより、老化細胞の脂質代謝を変化させる。加えて、本明細書に記載の老化細胞除去組成物は、例えば、老化細胞の細胞生存および／または炎症性経路内のタンパク質と拮抗することにより、例えば、細胞生存シグナル伝達経路（例としてＡｋｔ経路）、または炎症性経路を変化させることができる。具体的には、本明細書に記載の組成物は、細胞死をもたらすアポトーシス経路を誘発する（活性化する、刺激する、その阻害を除去する）ことにより、老化細胞を選択的に除去することができる。
【0076】
非老化細胞は、増殖する細胞であり得るか、または休止細胞であり得る。ある特定の例では、非老化細胞の本明細書に記載の組成物への曝露は、増殖する非老化細胞の能力を一時的に低下させるが、非老化細胞は、破壊されない。
【0077】
用語「シクロオキシゲナーゼ阻害剤」または「ＣＯＸ阻害剤」とは、本明細書で使用する場合、シクロオキシゲナーゼ活性と結合および阻害、予防もしくは低下することができるか、またはＣＯＸ－１もしくはＣＯＸ－２活性を選択的に除去、予防もしくは低下するできる任意の化合物、またはそれらの組合せを指す。具体的には、ＣＯＸ阻害剤は、少なくとも１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５倍またはそれ以上に、シクロオキシゲナーゼ活性を阻害、予防、もしくは低下することができるか、またはＣＯＸ－１もしくはＣＯＸ－２活性を選択的に阻害、予防、もしくは低下することができる任意の化合物である。さらにより具体的には、ＣＯＸ阻害剤は、５０μＭ未満、好ましくは４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、もしくは１０μＭ未満、または９．５、９、８．５、８、７．５、７、６．５、６、５．５、５、４．５、４、３．５、３、２．５、２、１．５、もしくは１μＭ未満のＩＣ５０で、シクロオキシゲナーゼ活性を著しく低下することができるか、またはＣＯＸ－１もしくはＣＯＸ－２活性を低下させることができる任意の化合物であり、さらにより好ましくは、９５０、９００、８５０、８００、７５０、７００、６５０、６００、５５０、５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００ｎＭ未満、または９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、もしくは１０ｎＭ未満、またはさらにそれ未満のＩＣ５０で、シクロオキシゲナーゼ活性を著しく低下させることができる任意の化合物である。
【0078】
具体的には、阻害剤のＩＣ５０は、組換えヒトＣＯＸ酵素の阻害を、市販の無細胞の試験キット、例えばＣＯＸ－１（ヒト）阻害剤スクリーニングアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｃａｙ７０１０７０－９６）、およびＣＯＸ－２（ヒト）阻害剤スクリーニングアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｃａｙ７０１０８０－９６）で測定し、阻害剤に対して得られたＩＣ５０値を計算することにより決定される。あるいは、ヒト全血アッセイは、（Ｂｒｉｄｅａｕら、１９９６年）に記載される通りに実施して、それぞれ、ＴｘＢ２およびＰＧＥ２の生成を測定することによりＣＯＸ１およびＣＯＸ２活性を決定することができる。
【0079】
具体的には、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）は、プロスタグランジン－エンドペルオキシドシンターゼ（ＰＴＧＳ）として表向きは知られているが、アラキドン酸から、トロンボキサン、およびプロスタサイクリンのようなプロスタグランジンを含む、プロスタノイドの形成に関与する酵素である。別個の遺伝子生成物：構成性ＣＯＸ－１および誘導性ＣＯＸ－２によりコードされるＣＯＸの２つのアイソザイムが存在する。
【0080】
古典的なＣＯＸ阻害剤は、選択的ではなく、全ての種類のＣＯＸを阻害する。最頻の有害作用は、プロスタグランジンが胃腸管において保護的な役割を通常は有するので、胃粘膜の刺激である。より新しいＣＯＸ阻害剤は、ＣＯＸ－２もしくはＣＯＸ－１に対する選択性を呈するか、または優先的には、他のものよりＣＯＸ－２もしくはＣＯＸ－１の１つを阻害する。ＣＯＸ－２が、通常、炎症性組織に特異的であるので、消化性潰瘍の危険性が低い、ＣＯＸ－２阻害剤に関連する胃刺激症状は大幅に少ない。
【0081】
具体的には、非選択性ＣＯＸ阻害剤の例は、アセチルサリチル酸またはその誘導体、例えばＮＯ－アスピリン（アセチルサリチル酸のニトロ誘導体）、およびサリチル酸またはその誘導体、例えばサリチル酸マグネシウム、トリサリチル酸コリンマグネシウム、サリチル酸トロラミン、サリチル酸フェニル、サリチル酸グリコール、サリチル酸メンチル、次サリチル酸ビスマス、およびＯ－アセチル－Ｌ－セリン、ジクロフェナクおよびその誘導体、例えばジクロフェナクジエチルアミン、イブプロフェン、スプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、フルルビプロフェンメチルエステル、フェノプロフェン、カルプロフェン、デキシブプロフェン、ロキソプロフェン、ザルトプロフェン、プラノプロフェン、インドメタシン、ケトロラック、オキシカムクラスの薬物、例えばテノキシカム、ピロキシカム、ロルノキシカム、ドロキシカム、およびトルメチン、ナプロキセン、ジフルニサル、サルサレート、メタミゾール（ジピロン）、オキサプロジン、チアプロフェン酸、ジエチルカルバマジン、フェニルブダゾン、ネパフェナク（アンフェナクのプロドラッグ）、アントラフェニン、アセメタシン、トルフェナム酸、デキスケトプロフェントロメタモール、タルニフルメート、プロパセタモール、ブフェキサマク、クロルフェネシン、クロドロン酸、アンフェナクナトリウム一水和物、アンピロキシカム、サリシン、フェンブフェン、キサントフモール、スリンダク、ジホモ－γ－リノレン酸、およびフルニキシンメグルミンを含む。
【0082】
具体的には、選択性ＣＯＸ－２阻害剤の例は、シクロスポリンＡ、セレコキシブ、シミコキシブ、ルミラコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、フィロコキシブ、エトリコキシブ、ロベナコキシブ、デラコキシブ、アセトアミノフェン（パラセタモール）、ナブメトン、エトドラク、ブロムフェナク、イコサペント、メロキシカム、フルフェナム酸、メフェナム酸、トリフルサール、ニフルム酸、アセクロフェナック、具体的には、ジクロフェナクのプロドラッグとして、タクロリムス（フジマイシンまたはＦＫ－５０６としても公知）、レナリドマイド、ロスコビチン（セリシクリブ）、ドロスピレノン、トリアムシノロン、ポマリドミド、アダパレン、サリドマイド、アサルアルデヒ
ド、デキサメタゾン、ＮＳ－３９８、ルテカルピン、およびニメスリドを含む。
ド、デキサメタゾン、ＮＳ－３９８、ルテカルピン、およびニメスリドを含む。
【0083】
具体的には、ＣＯＸ－１またはそのアイソフォームＣＯＸ－３に選択的な阻害剤の例は、フェナセチン、アンチピリン、アミノピリン、ＳＣ－５６０、およびモフェゾラクを含む。
【0084】
具体的には、多くの天然化合物も、ＣＯＸ阻害効果を呈する。マイタケのような調理用キノコは、ＣＯＸ－１およびＣＯＸ－２を部分的に阻害することができ、様々なフラボノイドは、ＣＯＸ－２を阻害することが見出され、ヒペルホリンは、アスピリンの約３～１８倍、ＣＯＸ－１を阻害することが示され、カルシトリオール（ビタミンＤ）は、ＣＯＸ－２遺伝子の発現を著しく阻害し、魚油は、代替的な脂肪酸をアラキドン酸に供給する。これらの酸は、炎症性プロスタグランジンの代わりのＣＯＸにより、いくつかの抗炎症性プロスタサイクリンにすることができる。
【0085】
用語「リポキシゲナーゼ阻害剤」とは、本明細書で使用する場合、任意のリポキシゲナーゼの活性と結合および阻害、予防または低減する化合物を指す。具体的には、リポキシゲナーゼ阻害剤は、少なくとも１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５倍またはそれ以上に、リポキシゲナーゼ活性を阻害、予防、もしくは低下することができるか、またはＡＬＯＸ５活性を選択的に阻害、予防、もしくは低下することができる任意の化合物である。さらにより具体的には、リポキシゲナーゼ阻害剤は、３μＭ未満、好ましくは２．５、２、１．５、または１μＭ未満のＩＣ５０で、リポキシゲナーゼ活性を著しく低下することができるか、またはリポキシゲナーゼ活性、具体的にはＡＬＯＸ５活性を選択的に阻害、予防、または低下することができる任意の化合物であり、さらにより好ましくは、９５０、９００、８５０、８００、７５０、７００、６５０、６００、５５０、５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００ｎＭ未満、または９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、もしくは１０ｎＭ未満、またはさらにそれ未満のＩＣ５０で、リポキシゲナーゼ活性を著しく低下することができる任意の化合物である。
【0086】
具体的には、阻害剤のＩＣ５０は、組換えヒトＡＬＯＸ５酵素の阻害を、市販の無細胞の試験キット、例えばヒト５－リポキシゲナーゼアッセイキット（ＭＹＢｉｏＳｏｕｒｃｅ、ＭＢＳ８４６９１１）で測定し、阻害剤に対して得られたＩＣ５０値を計算することにより決定する。あるいは、ヒト血液ＬＴＢ４阻害アッセイは、（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、２００９年）に記載の通りに実施することができ、ＡＬＯＸ５ＡＰ阻害剤によりＡＬＯＸ５の間接的阻害を決定することもできる。
【0087】
リポキシゲナーゼは、鉄含有酵素のファミリーであり、その多くは、細胞シグナル伝達剤に、ｃｉｓ，ｃｉｓ－１，４－ペンタジエンを含有する脂質において、ポリ不飽和脂肪酸の二原子酸素添加を触媒する。具体的には、ポリ不飽和脂肪酸アラキドン酸は、リポキシゲナーゼに対する基質として機能する。具体的には、アラキドン酸５－リポキシゲナーゼ（またはＡＬＯＸ－５もしくは５－ＬＯＸ）は、代謝することができるので、アラキドン酸をエイコサノイド、特に５－ヒドロキシエイコサテトラエン酸、および５－オキソエイコサテトラエン酸に転換する。ロイコトリエンは、エイコサノイド炎症性メディエイターのファミリーであるが、ＡＬＯＸ－５によるＡＡおよび必須脂肪酸イコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の酸化により生成される。
【0088】
アラキドン酸５－リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＡＬＯＸ５ＡＰまたはＦＬＡＰ）は、５－リポキシゲナーゼと共に、ロイコトリエン合成に必要なタンパク質である。ロイコトリエンは、アラキドン酸代謝物であり、様々な種類の炎症反応に関与している。このタンパク質は、原形質膜に局在している。この機能の阻害剤は、細胞質から細胞膜への５－リポキシゲナーゼの転座を妨げ、５－リポキシゲナーゼ活性化を阻害する。ＡＬＯＸ５ＡＰ阻害剤の例は、ＭＫ８８６である。ＭＫ－８８６、またはＬ－６６３５３６は、ロイコトリエンアンタゴニストであり、５－リポキシゲナーゼ活性化タンパク質を遮断し、それゆえ５－リポキシゲナーゼを阻害することにより、その作用を発揮する。具体的には、ＦＬＡＰ（またはＡＬＯＸ５ＡＰ）の阻害剤は、リポキシゲナーゼ阻害剤であり、リポキシゲナーゼの酵素活性を間接的に阻害する。
【0089】
具体的には、ロイコトリエン形成は、性別による偏りがある。ロイコトリエン形成は、ホルモン、テストステロンの制御下であり、炎症性エイコサノイドの生合成における重要な酵素であるＡＬＯＸ－５の細胞内局在を調節する。男性のような高いテストステロンレベルを有する個体では、テストステロンは、細胞質から細胞膜へのＡＬＯＸ－５の転座を阻害するので、アラキドン酸代謝活性を阻害する。
【0090】
本発明の具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、１つまたは複数のシクロオキシゲナーゼ阻害剤のみを含むその具体的な使用を除いて、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、およびリポキシゲナーゼ阻害剤を含む。例えば、本明細書で提供される組成物がシクロオキシゲナーゼ阻害剤のみを含む、このような具体的な使用の１つは、性別に偏りがある老化関係の疾患または状態の処置である。具体的には、老化関係の疾患または状態に罹患するか、または発症の危険がある対象は、男性であり、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物は、少なくとも１つのＣＯＸ－１／ＣＯＸ２阻害剤、またはＣＯＸ－１阻害剤およびＣＯＸ２阻害剤を含む。しかし、シクロオキシゲナーゼ阻害剤およびリポキシゲナーゼ阻害剤の両方を含む組成物での男性対象の処置は、排除しない。
【0091】
リポキシゲナーゼおよび／またはＦＬＡＰ阻害剤の例は、限定されないが、ＭＫ８８６、ジロイトン、マソプロコール、ジエチルカルバマジン、アゼラスチン、ベノキサプロフェン、ノルジヒドログアイアレチン酸、アビエチン酸、エスクレチン、モンテルカスト、ミノサイクリン、ＭＬＮ－９７７、レイン、ジアセレイン、ナビキシモルス、ホスタマチニブ、ＡＭ１０３、ＤＧ０３１、フィボフラポン、ＡＡ－８６１、およびアトレロイトンを含む。
【0092】
具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、少なくとも１つのデュアルシクロオキシゲナーゼ／リポキシゲナーゼ阻害剤を含む。具体的には、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物は、老化関係の疾患または状態に罹患するか、または発症の危険がある対象が、女性対象である場合、このようなデュアル阻害剤を含む。
【0093】
例示的なデュアル阻害剤は、限定されないが、リコフェロン、ダルブフェロン、ＣＩ－９８７、Ｓ－２４７４、ＫＭＥ－４、ケブラジン酸、バルサラジド、メサラジン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、メクロフェナム酸、モルニフルマートジアリールピラゾール誘導体、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体、Ｎ－置換５－アミノサリシリシラミド、フラボコキシド、インドリジン誘導体、ＬＱＦＭ－０９１、ヒペルホリン、セラストロール、ＢＷ７５５Ｃ、テポキサリン、ｂ－ボスウェリン酸、Ｄ－００２（６つの高級脂肪族蜜蝋アルコールの混合物）、２，３－ジアリールキサントン、フェニドン、およびＥＲ－３４１２２を含む。
【0094】
本明細書で言及される通り、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素は、アラキドン酸およびＣｏＡのアラキドニル－ＣｏＡへの転換を触媒することが可能な酵素である。このような酵素の具体例は、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）、具体的にはＡＣＳＬ４である。
【0095】
本明細書で使用する場合、用語「長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ阻害剤」または省略して
「ＡＣＳＬ阻害剤」とは、任意の長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼの活性と結合および阻害、予防または低減する化合物を指す。具体的には、ＡＣＳＬ阻害剤は、少なくとも１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５倍またはそれ以上に、ＡＣＳＬ活性を阻害、予防、または低下することができる任意の化合物である。さらにより具体的には、ＡＣＳＬ阻害剤は、約１００μＭ以下、好ましくは５０、４５、４０、３５、３０、２５、または２０μＭ以下のＩＣ５０で、ＡＣＳＬ活性を著しく低下することができる任意の化合物であり、さらにより好ましくは、約１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、または９μＭのＩＣ５０で、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を著しく低下することができる任意の化合物である。
「ＡＣＳＬ阻害剤」とは、任意の長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼの活性と結合および阻害、予防または低減する化合物を指す。具体的には、ＡＣＳＬ阻害剤は、少なくとも１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５倍またはそれ以上に、ＡＣＳＬ活性を阻害、予防、または低下することができる任意の化合物である。さらにより具体的には、ＡＣＳＬ阻害剤は、約１００μＭ以下、好ましくは５０、４５、４０、３５、３０、２５、または２０μＭ以下のＩＣ５０で、ＡＣＳＬ活性を著しく低下することができる任意の化合物であり、さらにより好ましくは、約１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、または９μＭのＩＣ５０で、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を著しく低下することができる任意の化合物である。
【0096】
具体的には、ＡＣＳＬ阻害剤のＩＣ５０は、（Ａｓｋａｒｉら、２００７年；Ｋｉｍら、２００１年）に記載される通り、組換えＡＣＳＬ酵素または細胞溶解物のいずれかを、ＡＴＰ、ＣｏＡ、アラキドン酸のような放射性標識された脂肪酸でインキュベートすることによる、アシル－ＣｏＡの形成の阻害を測定することにより決定される。
【0097】
細胞内の遊離アラキドン酸のリン脂質への組込みは、長鎖アシル－ＣｏＡシンテターゼの群に属する酵素によるＡＡのチオエステル化を必要とする。
長鎖脂肪アシルＣｏＡシンテターゼは、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ、略して「ＡＣＳＬ」とも称すが、複合脂肪酸の酸性化を活性化するリガーゼファミリーの酵素である。これら酵素は、アシル－ＣｏＡを、長さが少なくとも１２個の炭素である脂肪酸から生成する。ＡＣＳＬは、アデニル化中間体を通じて進行する２ステッププロセスにより脂肪アシル－ＣｏＡの形成を触媒し、具体的には、長鎖脂肪酸の脂肪アシル補酵素Ａ（脂肪酸ＣｏＡ）への活性化を触媒する。いくつかの高度に保存された領域、およびこのスーパーファミリーのメンバー間で、２０～３０％のアミノ酸配列類似性が存在する。具体的には、ファミリーにおける酵素は、大型のＮ末端および小型のＣ末端ドメインからなり、２つのドメイン間に位置する触媒部位を有する。
長鎖脂肪アシルＣｏＡシンテターゼは、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ、略して「ＡＣＳＬ」とも称すが、複合脂肪酸の酸性化を活性化するリガーゼファミリーの酵素である。これら酵素は、アシル－ＣｏＡを、長さが少なくとも１２個の炭素である脂肪酸から生成する。ＡＣＳＬは、アデニル化中間体を通じて進行する２ステッププロセスにより脂肪アシル－ＣｏＡの形成を触媒し、具体的には、長鎖脂肪酸の脂肪アシル補酵素Ａ（脂肪酸ＣｏＡ）への活性化を触媒する。いくつかの高度に保存された領域、およびこのスーパーファミリーのメンバー間で、２０～３０％のアミノ酸配列類似性が存在する。具体的には、ファミリーにおける酵素は、大型のＮ末端および小型のＣ末端ドメインからなり、２つのドメイン間に位置する触媒部位を有する。
【0098】
具体的には、用語「ＡＣＳＬ」はまた、本明細書で使用する場合、長鎖脂肪酸補酵素Ａリガーゼファミリーのアイソザイムも指す。ヒトおよび齧歯類で公知の５つのＡＣＳＬアイソフォーム：ＡＣＳＬ１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、およびＡＣＳＬ６が存在する。基質特異性、細胞内局在性、および組織分布が異なるが、このファミリーの全てのアイソザイムは、遊離の長鎖脂肪酸を脂肪アシル－ＣｏＡエステルへと変換されるので、脂質生合成および脂肪酸分解に重要な役割を果たす。
【0099】
具体的には、ＡＣＳＬ４およびＡＣＳＬ１は、アシル－ＣｏＡシンテターゼファミリーの２つのメンバーであり、遊離脂肪酸のＣｏＡでの活性化に必要であり、ランズ回路での再組込みおよび分解の過程に対する前駆体であるアシル－ＣｏＡを生成する（ＭｕｒｐｈｙおよびＦｏｌｃｏ、２０１９年）。ランズ回路は、ＡＡのようなリゾリン脂質および遊離脂肪酸を生成する、リン脂質の酵素加水分解、アシル－ＣｏＡシンテターゼを通した脂肪酸の活性化、および、アシル－ＣｏＡトランスフェラーゼによるアシル－ＣｏＡのリゾリン脂質への再組込みを包含する。あるいは、アラキドン酸－ＣｏＡは、β－酸化を介して分解するか、またはジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼに使用して、ジアシルおよびトリアシルグリセロールを形成し、ステロールＯ－アシルトランスフェラーゼに使用して、コレステロールエステルを形成する。
【0100】
具体的には、ＡＣＳＬ４は、優先的には、基質としてアラキドン酸塩を利用する。ＡＣＳＬ４は、アラキドン酸の細胞内レベルを制御するが、それは、ＡＡが、具体的には老化細胞でアポトーシスを誘発することができるので、ＡＣＳＬ４がアポトーシスを調節する能力を有するからである。ＡＣＳＬ４の過剰発現は、より高速のアラキドノイル－ＣｏＡ合成、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、およびトリアシ
ルグリセロールへの高いＡＡ組込み、ならびに非エステル化ＡＡの低い細胞レベルをもたらすことが示されている。
ルグリセロールへの高いＡＡ組込み、ならびに非エステル化ＡＡの低い細胞レベルをもたらすことが示されている。
【0101】
具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、活性剤としてＡＣＳＬ阻害剤を含む。さらに具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、ＡＣＳＬ阻害剤、およびＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、またはリポキシゲナーゼの１つまたは複数を阻害することが可能な少なくとも１つの阻害剤を含む。具体的には、本明細書に記載の組成物は、ＡＣＳＬ、ＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な阻害剤を含む。
【0102】
具体的な実施形態によると、ＡＣＳＬ阻害剤は、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体（Ｋｉｍら、２０１２年；Ｐｒｉｏｒら、２０１４年）、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される。
【0103】
具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ、および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤、ならびにアラキドン酸の細胞内の転換を阻害することが可能な追加の化合物を含む。具体的には、このような追加の化合物は、天然化合物のいずれか１つもしくは複数もしくは全て、シトクロムＰ４５０の阻害剤、長鎖脂肪酸ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、および／または脂肪酸エロンガーゼの阻害剤である。
【0104】
具体的には、シトクロムＰ４５０の阻害剤は、シトクロムＰ４５０２Ｊ２（ＣＹＰ２Ｊ２）、シトクロムＰ４５０２Ｃ（ＣＹＰ２Ｃ）、シトクロムＰ４５０４Ａ（ＣＹＰ４Ａ）、および／またはシトクロムＰ４５０４Ｆ（ＣＹＰ４Ｆ）のいずれか１つまたは複数または全ての阻害剤であり得る。
【0105】
具体的には、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）の阻害剤は、ＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、リゾリン脂質アシルトランスフェラーゼ２（ＭＢＯＡＴ２）、ならびに膜結合Ｏ－アシルトランスフェラーゼドメイン含有７（リゾリン脂質アシルトランスフェラーゼ７および／またはＭＢＯＡＴ７）のいずれか１つまたは複数または全ての阻害剤であり得る。
【0106】
具体的には、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤は、超長鎖脂肪酸タンパク質２（ＥＬＯＶＬ２）の伸長、超長鎖脂肪酸タンパク質４（ＥＬＯＶＬ４）の伸長、および／または超長鎖脂肪酸タンパク質５（ＥＬＯＶＬ５）の伸長のいずれか１つまたは複数または全ての阻害剤であり得る。
【0107】
具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ、および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤、ならびにＡＴＰレベルを操作すること、具体的には細胞内のＡＴＰレベルを上昇させるおよび／または低減することが可能な追加の化合物を含む。具体的には、このような追加の化合物は、ＡＴＰシンターゼの阻害剤、阻害剤もしくはＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ、および／またはグリコリシスの阻害剤のいずれか１つまたは複数または全てである。
【0108】
本明細書に記載される通り、本明細書で提供される組成物は、老化関係の疾患または状態の処置に使用することができる。具体的には、本明細書で提供される組成物は、老化関係の疾患もしくは状態の発症の予防（すなわち、発生の可能性の低下）もしくは遅延、老
化関係の疾患もしくは状態の進行の予防もしくは遅延、または老化関係の疾患もしくは状態の退行を促進するのに使用される。
化関係の疾患もしくは状態の進行の予防もしくは遅延、または老化関係の疾患もしくは状態の退行を促進するのに使用される。
【0109】
用語「老化関係の疾患または障害」とは、加齢性の疾患および障害を含む、細胞老化に関するか、関連するか、または起因する状態、疾患、または障害を指す。
老化関係の疾患または状態は、心血管疾患または状態であり得、限定されないが、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化症、心筋症、うっ血性心不全、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、頚動脈疾患、心内膜炎、冠状動脈血栓症、頚動脈血栓症、心筋梗塞（ＭＩ）、高血圧症、大動脈瘤、脳動脈瘤、心臓線維症、心臓拡張機能障害、高コレステロール血症／高脂血症、僧帽弁逸脱症、末梢血管疾患、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、心臓ストレス耐性、および卒中を含むことができる。
老化関係の疾患または状態は、心血管疾患または状態であり得、限定されないが、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化症、心筋症、うっ血性心不全、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、頚動脈疾患、心内膜炎、冠状動脈血栓症、頚動脈血栓症、心筋梗塞（ＭＩ）、高血圧症、大動脈瘤、脳動脈瘤、心臓線維症、心臓拡張機能障害、高コレステロール血症／高脂血症、僧帽弁逸脱症、末梢血管疾患、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、心臓ストレス耐性、および卒中を含むことができる。
【0110】
心血管疾患に罹患する対象は、心血管疾患に対して、当該技術分野で公知の標準的な診断法を使用して同定することができる。一般に、アテローム性動脈硬化症および他の心血管疾患の診断は、患者の症状（例えば胸部の疼痛または圧迫感（狭心症）、腕もしくは下肢のしびれもしくは虚弱、発話困難もしくは不明瞭発語、顔面での下垂した筋肉、下肢痛、高血圧症、腎不全、および／もしくは勃起不全）、病歴ならびに／または身体検査に基づく。心血管疾患の発症の危険がある対象は、心血管疾患の家族歴を有するもの、ならびに、高血圧症、高コレステロール、糖尿病、肥満、および／または喫煙のような他の危険因子を有するものを含む。ある特定の実施形態では、老化細胞関連の疾患／障害である心血管疾患は、アテローム性動脈硬化症である。アテローム性動脈硬化症は、中規模および大動脈の内腔に食い込む斑点上の内膜プラーク（アテローム）で特徴付けられ；プラークは、脂質、炎症細胞、平滑筋細胞、および結合組織を含有する。
【0111】
心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）を処置または予防する（すなわち、その発症または発生の可能性を低下または低減する）のに本明細書に記載の組成物の有効性は、医学的および臨床的分野での当業者により容易に決定することができる。診断方法の１つまたは任意の組合せは、身体検査、評価、および臨床症状のモニタリング、ならびに、本明細書に記載し、当該技術分野で実行される分析試験および方法（例えば、血管造影、心電図検査、ストレステスト、ノンストレステスト）の実施を含むが、対象の健康状態をモニタリングするために使用することができる。老化細胞除去の組合せの処置の効果は、当該技術分野で公知の技術を使用して、例えば、心血管疾患に罹患するか、またはその危険がある、処置を受けた患者の症状を、このような処置を受けていない、またはプラセボ処置を受けた患者の症状と比較することで分析することができる。
【0112】
老化関係の疾患または状態は、神経学的状態であり得る。神経学的状態は、限定されないが、パーキンソン病、アルツハイマー病、認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、球麻痺、仮性球麻痺、原発性側索硬化症、運動ニューロン機能障害（ＭＮＤ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、ハンチントン病、眼疾患、黄斑変性症（湿性および乾性）、緑内障、視力喪失、老眼、白内障、進行性筋萎縮症、下位運動ニューロン疾患、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、ウェルドニッヒ－ホフマン病（ＳＭＡ１）、ＳＭＡ２、クーゲルバーグ－ヴェランダー病（ＳＭ３）、ケネディー病、ポリオ後症候群、遺伝性痙性対麻痺、加齢性の記憶低下、ならびに、うつ病および気分障害を含む。神経学的状態の処置または予防における使用のための、本明細書に記載の老化細胞除去組成物の効果は、例えばパーキンソン病またはアルツハイマー病のような神学的疾患または障害に罹患するか、またはその危険がある、処置を受けた患者の症状を、このような処置を受けていない、またはプラセボ処置を受けた患者の症状と比較することにより分析することができる。
【0113】
パーキンソン病は、２番目に一般的な神経変性疾患である。運動の緩慢さ（運動緩徐）、振戦、こわばり、および後期での平衡障害で特徴付けられる、脳の機能障害状態である。これらの症状の多くは、脳のある特定の神経の喪失によるものであり、ドーパミンの欠乏をもたらす。この疾患は、神経変性、例えば、黒質緻密部におけるドーパミン作動性ニューロンの約５０％～７０％の喪失、線条体におけるドーパミンの深刻な喪失、および／または細胞質内封入体（レビー小体）の存在で特徴付けられ、α－シヌクレインおよびユビキチンから主としてなる。パーキンソン病はまた、運動障害、例えば振戦、こわばり、運動緩徐、および／または姿勢不安定で特徴付けられる。これらの動的な発現はまた、嗅覚障害、睡眠障害、および神経精神障害のような、非運動性症状を伴ってもよい。一般に、パーキンソン病の診断は、患者の症状、病歴、ならびに神経学的および／または身体検査に基づく。パーキンソン病の発症の危険がある対象は、パーキンソン病の家族歴を有するもの、および、殺有害生物剤（例えば、ロテノンもしくパラコート）、除草剤（例えば、枯葉剤）、または重金属に曝露したものを含む。パーキンソン病に関連する神経変性の欠乏および／または運動障害を検出、モニタリング、または定量化するための方法は、当該技術分野で知られており、例えば、組織学的研究、生化学的研究、および行動評価である。
【0114】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶力の減退、失見当識、および錯乱を伴う緩徐進行型精神荒廃を示す神経変性疾患であり、深刻な認知症をもたらす。年齢は、ＡＤを発症する単一の最も大きな素質危険因子であり、高齢者の認知症の主因である。初期の臨床的症状は、軽度認知障害と著しい類似性を示し、最近の生活体験または人の名前を記憶することが困難であることで特徴付けられる。疾患が進行すると、判断力障害、錯乱、挙動変化、失見当識、ならびに、歩行および嚥下の困難さが起こる。アルツハイマー病は、組織学的標本における、神経原線維変化、およびアミロイド（老年性）プラークの存在で特徴付けられる。疾患は、大部分が、脳の辺縁領域および皮質領域を含む。いくつかの挙動アッセイおよび組織病理学アッセイは、治療剤を特徴付け、処置を評価するためにアルツハイマー病の表現型を評価する目的で、当該技術分野で知られている。アルツハイマー病に罹患する対象は、アルツハイマー病に対して、当該技術分野で公知の標準的な診断法を使用して同定することができる。一般に、アルツハイマー病の診断は、患者の症状（例えば、記憶機能の進行性の低下、通常の活動からの緩やかな衰退または通常の活動への不満、無感情、動揺またはかんしゃく、攻撃性、不安、睡眠障害、不快気分、異常運動行動、脱抑制、引きこもり、食欲減退、幻覚、認知症）、病歴、神経心理学テスト、神経学的および／または身体検査に基づく。脳脊髄液はまた、タウ、アミロイドβペプチド、およびＡＤ７Ｃ－ＮＴＰを含む、アルツハイマー病変に関連している様々なタンパク質に対して試験することができる。遺伝子検査はまた、常染色体優性遺伝的疾患である、早期発症型家族性アルツハイマー病（ｅＦＡＤ）で利用可能である。臨床的遺伝子検査は、ＡＤ症状を有する個体、または早期発症型疾患の患者の危険性のある家族に利用可能である。米国では、ＰＳ２に対する突然変異、およびＡＰＰは、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ Ａｍｅｎｄｍｅｎｔｓの下で、臨床的または連邦政府により承認された研究室において試験することができる。ＰＳ１突然変異に対する市販のテストも利用可能である（Ｅｌａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）。
【0115】
ＭＣＩは、個々の年齢および教育に基づいて予期されるものを超える、認知障害の発症および進展に関与するが、この個々の毎日の活動を妨げるのに十分なほど著しいものではない脳機能症候群である。ＭＣＩは、通常の加齢と、変換され得る認知症との間の過度状態である考えられる認知的な加齢の側面である。記憶に主に影響を及ぼすＭＣＩは、「健忘性ＭＣＩ」として知られている。健忘性ＭＣＩの人は、最近の事象のような以前は容易に思い出せた重要な情報を忘れることから始まり得る。健忘性ＭＣＩは、アルツハイマー病の前駆期として頻繁に見られる。
【0116】
ＭＮＤは、発話、歩行、呼吸、および嚥下のような重要な随意筋活動を制御する細胞である、運動ニューロンを破壊する進行性神経障害の群である。変性が、上位運動ニューロ
ン、下位運動ニューロン、またはその両方に影響を及ぼすかどうかにしたがって分類される。ＭＮＤの例は、例えば、側索硬化症（ＡＬＳ）、球麻痺、および脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を含む。腕、下肢、または顔面の筋肉に影響を及ぼすことができる。ＭＮＤの患者は、筋肉虚弱および消耗、制御不能な単収縮、痙性、緩慢で不自然な動作、ならびに過活動な腱反射を含む、１つまたは複数の運動障害を示す。原発性側索硬化症は、上位運動ニューロンの疾患である一方、進行性筋萎縮症は、脊髄において下位運動ニューロンのみに影響を及ぼす。進行性球麻痺では、脳幹の最下位運動ニューロンは、最も影響があり、不明瞭発語、ならびに咀嚼および嚥下の困難さを起こす。ほとんどの場合、腕および下肢において軽度な異常徴候がある。ＭＮＤに関連する運動障害および組織病理学的障害を検出、モニタリング、定量化、または評価するための方法は、当該技術分野で知られており、組織病理学研究、生化学的研究、および電気生理学的研究、ならびに運動活性分析を含む。
ン、下位運動ニューロン、またはその両方に影響を及ぼすかどうかにしたがって分類される。ＭＮＤの例は、例えば、側索硬化症（ＡＬＳ）、球麻痺、および脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を含む。腕、下肢、または顔面の筋肉に影響を及ぼすことができる。ＭＮＤの患者は、筋肉虚弱および消耗、制御不能な単収縮、痙性、緩慢で不自然な動作、ならびに過活動な腱反射を含む、１つまたは複数の運動障害を示す。原発性側索硬化症は、上位運動ニューロンの疾患である一方、進行性筋萎縮症は、脊髄において下位運動ニューロンのみに影響を及ぼす。進行性球麻痺では、脳幹の最下位運動ニューロンは、最も影響があり、不明瞭発語、ならびに咀嚼および嚥下の困難さを起こす。ほとんどの場合、腕および下肢において軽度な異常徴候がある。ＭＮＤに関連する運動障害および組織病理学的障害を検出、モニタリング、定量化、または評価するための方法は、当該技術分野で知られており、組織病理学研究、生化学的研究、および電気生理学的研究、ならびに運動活性分析を含む。
【0117】
老化関係の疾患または状態は、炎症状態であり得る。炎症状態は、限定されないが、筋骨格疾患、変形性関節症、骨粗鬆症、サルコペニア、狼瘡、間質性膀胱炎、強皮症、脱毛症、口腔粘膜炎、関節リウマチ、炎症性腸疾患、側弯症、椎間板ヘルニア、潰瘍性大腸炎、クローン病、潰瘍性喘息、移植後腎線維症を含む腎線維症、肝線維症、膵線維症、心臓線維症、糖尿病に関する創傷治癒を含む皮膚の創傷治癒、および口腔内粘膜下線維症を含む。炎症状態の処置または予防における使用のための、本明細書に記載の老化細胞除去組成物の効果は、例えば変形性関節症のような炎症性の疾患または障害に罹患するか、またはその危険がある、処置を受けた患者の症状を、このような処置を受けていない、またはプラセボ処置を受けた患者の症状と比較することにより分析することができる。
【0118】
変形性関節症は、高い機械的ストレスの部位での軟骨の線維化、骨硬化症、ならびに滑膜および関節包の肥厚で特徴付けられる、変性関節疾患である。変形性関節症の症状は、不活動または酷使した後の、特に股関節、膝、および背部下部の関節痛または関節硬直；動作後に消失する安静後の硬直；ならびに、活動後または１日の終わりに向かって悪化する疼痛を含む。骨粗鬆症の処置または予防のための本明細書に記載の組成物の有効性、およびその組成物を投与される対象のモニタリングは、医学および臨床の分野における当業者により容易に決定することができる。診断方法の１つまたは任意の組合せは、身体検査（例えば罹患関節の圧痛、腫脹、または発赤の決定）、臨床症状の評価およびモニタリング（例えば疼痛、硬直、移動性）、ならびに本明細書に記載し、当該技術分野で実行される分析試験および方法の実施（例えば、炎症性サイトカインまたはケモカインのレベルを決定すること；関節内の骨の間隔の狭窄により示される軟骨の喪失を決定する、Ｘ線画像；軟骨を含む骨および軟組織の詳細な画像をもたらす、磁気共鳴撮像（ＭＲＩ））を含むが、対象の健康状態をモニタリングするために使用することができる。
【0119】
骨粗鬆症は、骨折の高い危険性をもたらし得る、骨量および密度の低下で特徴付けられる進行性の骨疾患である。骨密度（ＢＭＤ）は低下し、骨微細構造は劣化し、骨内のタンパク質の量および種類は変化する。骨粗鬆症は、典型的には、骨密度検査により診断し、モニタリングする。閉経後の女性、またはエストロゲンの低下している女性は、最も危険性が高い。７５歳超の男女ともに危険がある一方、女性は、男性より骨粗鬆症を発症する可能性は２倍である。
【0120】
本明細書に記載の組成物で処置することができる、さらなる炎症性／自己免疫障害は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、ならびに、潰瘍性大腸炎およびクローン病のような炎症性腸疾患を含む。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、消化管の全てまたは一部の慢性炎症を含む。ＩＢＤを起こす命に関わる合併症に加えて、疾患は、有痛性で消耗性であり得る。潰瘍性大腸炎は、消化管の一部で持続性の炎症を起こす、炎症性腸疾患である。症状は、通常、突然ではなく、経時的に発症する。潰瘍性大腸炎は、通常、大腸（結腸）および直腸の最内
層のみに影響を及ぼす。クローン病は、消化管の内層に沿った任意の場所で炎症を起こす、炎症性腸疾患であり、多くの場合、罹患組織内深くに広がる。これは、腹痛、重篤な下痢、および栄養不良をもたらし得る。クローン病に起因する炎症は、消化管の異なる領域を含み得る。疾患の診断およびモニタリングは、血液検査、結腸内視鏡、軟性Ｓ状結腸鏡、バリウム注腸、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、内視鏡検査、および小腸撮像を含む、当該技術分野で日常的に実行される方法および診断試験にしたがって実施する。
層のみに影響を及ぼす。クローン病は、消化管の内層に沿った任意の場所で炎症を起こす、炎症性腸疾患であり、多くの場合、罹患組織内深くに広がる。これは、腹痛、重篤な下痢、および栄養不良をもたらし得る。クローン病に起因する炎症は、消化管の異なる領域を含み得る。疾患の診断およびモニタリングは、血液検査、結腸内視鏡、軟性Ｓ状結腸鏡、バリウム注腸、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、内視鏡検査、および小腸撮像を含む、当該技術分野で日常的に実行される方法および診断試験にしたがって実施する。
【0121】
老化関係の疾患または状態は、皮膚科学的状態であり得る。皮膚科学的状態は、限定されないが、乾癬、湿疹、しわ、掻痒症、異常感覚、丘疹鱗状障害、紅皮症、扁平苔癬、苔癬様皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、湿疹性発疹、好酸球性皮膚疾患、発疹、光線過敏症ならびに光老化に関連する疾患および障害、反応性好中球性皮膚疾患、天疱瘡、類天疱瘡、免疫水疱性皮膚疾患、皮膚の線維組織球性増殖、皮膚の母斑、蕁麻疹、色素沈着過剰症、皮膚リンパ腫、乾癬、ならびに皮膚狼瘡を含む。ある特定の実施形態では、老化細胞関連の障害は、皮膚の炎症性障害であり、例えば、非限定的な例として、本明細書に記載の組成物を使用して処置または予防することができる乾癬および湿疹である。乾癬は、皮膚の表皮層の異常な過度で迅速な増殖で特徴付けられる。乾癬の診断は、通常、皮膚の外観に基づく。乾癬に典型的な皮膚の特質は、疼痛や掻痒を伴い得る、鱗状の赤いプラーク、丘疹、または皮膚斑である。
【0122】
本明細書に記載の老化細胞除去組成物で処置することができる、他の免疫不全または状態は、臓器移植（例えば、腎臓、骨髄、肝臓、肺、または心臓移植）に対する宿主免疫反応に由来する状態、例えば、移植した臓器の拒絶を含む。具体的には、老化細胞除去組成物は、移植片対宿主疾患の発生を処置するか、またはその可能性を低減するために使用することができる。
【0123】
老化関係の疾患または状態は、代謝障害であり得る。代謝障害は、限定されないが、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、糖尿病性潰瘍、および肥満を含む。代謝の状態の処置または予防における使用のための、本明細書に記載の老化細胞除去組成物の効果は、例えば糖尿病のような代謝性疾患または障害に罹患するか、またはその危険がある、処置を受けた患者の症状を、このような処置を受けていない、またはプラセボ処置を受けた患者の症状と比較することにより分析することができる。
【0124】
糖尿病は、インスリン産生、インスリン作用、またはその両方の欠陥に起因する、高いレベルの血糖で特徴付けられる。成人で糖尿病と診断された全ての場合の大部分（９０～９０％）は、膵臓によるインスリン産生を徐々に喪失することで特徴付けられる、２型糖尿病である。２型糖尿病に罹患する対象は、２型糖尿病に対して、当該技術分野で公知の標準的な診断法を使用して同定することができる。一般に、２型糖尿病の診断は、患者の症状（例えば、口渇感増強および頻尿、空腹感増強、体重減少、疲労感、霧視、疼痛の治りにくさ、もしくは頻繁な感染、および／もしくは暗色皮膚の領域）、病歴、ならびに／または身体検査に基づく。２型糖尿病の発症の危険がある対象は、２型糖尿病の家族歴を有するもの、ならびに、体重増加、脂肪分布、不活動、人種、年齢、前糖尿病、および／または妊娠糖尿病のような他の危険因子を有するものを含む。
【0125】
肥満および肥満関連とは、身長および骨格に対する理想よりある程度大きい体重を有する対象の状態を指すのに使用される。ボディマス指数（ＢＭＩ）は、過剰な体重を決定するのに使用される測定ツールであり、対象の身長および体重から計算される。ヒトは、ＢＭＩが２５～２９である場合、過体重とみなされ；人は、ＢＭＩが３０～３９である場合、肥満とみなされ；人は、ＢＭＩが４０以上である場合、重度の肥満とみなされる。
【0126】
糖尿病および老化に関連する状態または障害は、糖尿病性潰瘍（すなわち、糖尿病創傷
）である。潰瘍は、皮膚の崩壊であり、皮下組織、または筋肉もしくは骨さえも含むほどに広がる可能性がある。これらの病変は、特に、下肢で起こる。糖尿病性静脈性潰瘍の患者は、慢性創傷の部位で細胞老化の高い存在を示す。
）である。潰瘍は、皮膚の崩壊であり、皮下組織、または筋肉もしくは骨さえも含むほどに広がる可能性がある。これらの病変は、特に、下肢で起こる。糖尿病性静脈性潰瘍の患者は、慢性創傷の部位で細胞老化の高い存在を示す。
【0127】
老化関係の疾患または状態は、黄斑変性症、乾性（非血管新生）または湿性（血管新生）黄斑変性症であり得る。黄斑変性症は、黄斑と呼ばれる、網膜の中心部分において、光受容細胞の喪失を起こす神経変性疾患である。黄斑変性症は、一般に、２つの種類：乾性および湿性に分類される。乾性型は、湿性型より一般的であり、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）患者の約９０％が、乾性型と診断される。湿性型の疾患は、通常、より重症の視力喪失をもたらす。症状は、直線がゆがんで知覚されることを含み、いくつかの場合、視覚の中心が、周りの光景よりひずんで見える；暗くぼやけた領域もしくは「白くらみ」が、視覚の中心に見られる；および／または色の知覚が、変化もしくは低下する。黄斑変性症の対象の診断およびモニタリングは、当該技術分野で認められた周期的な検眼手順および対象による症状の報告にしたがって、眼科分野における当業者により達成することができる。
【0128】
老化細胞関連の状態は、肺の状態であり得る。肺の状態は、限定されないが、特発性肺線維症（ＴＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、嚢胞性線維症、気管支拡張症、肺気腫、加齢性の肺機能の喪失、および加齢関連の睡眠時無呼吸を含む。肺の状態の処置または予防における使用のための、本明細書に記載の老化細胞除去組成物の効果は、例えばＣＯＰＤのような肺の疾患または障害に罹患するか、またはその危険がある、処置を受けた患者の症状を、このような処置を受けていない、またはプラセボ処置を受けた患者の症状と比較することにより分析することができる。
【0129】
ＣＯＰＤは、肺組織の崩壊（肺気腫）、および小気道の機能障害（閉塞性細気管支炎）に由来する、慢性的な気流不良により定義される、肺疾患である。ＣＯＰＤの初期症状は、息切れ、喘鳴、胸部絞扼感、慢性咳嗽、および喀痰の過剰産生を含む。ＣＯＰＤは、タバコの煙（紙巻きタバコの煙、葉巻タバコ、副流煙、パイプの煙を含む）、職業曝露（例えば、粉塵、噴煙、または煙霧）、および汚染に最も一般的に起因し、これらが何十年にもわたって起こるので、ＣＯＰＤを発症する危険因子として加齢に関与する。
【0130】
肺線維症は、肺の硬化および瘢痕化で特徴付けられる慢性および進行性の肺疾患であり、呼吸不全、肺がん、および心不全をもたらす可能性がある。線維症は、上皮の修復に関連する。肺線維症の発症の危険がある対象は、環境または職業の汚染物質に曝露されるもの、例えば石綿肺症および珪肺症；紙巻きタバコを吸うもの；関節リウマチ、ＳＬＥ、および強皮症のような、いくつかの典型的な結合組織疾患を有すること；サルコイドーシスおよびウェゲナー肉芽腫症のような結合組織を含む他の疾患を有すること；感染を有すること；ある特定の医薬（例えば、アミオダロン、ブレオマイシン、ブスルファン、メトトレキサート、およびニトロフラントイン）の摂取；胸部に放射線療法を行ったもの；ならびに、家族が肺線維症を有するものを含む。肺線維症の症状は、当該技術分野で知られており、息切れ、特に運動時；乾いた空咳；速い浅呼吸；穏やかな意図しない体重減少；疲労；関節痛および筋肉痛；ならびに、ばち状指形成（手指または足指の先端が広く丸くなる）を含む。
【0131】
さらに具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、移植の成績を改善するのに使用される。具体的には、ドナー臓器および／またはレシピエントにおける増加した数の老化細胞の存在は、移植の成績に悪影響を及ぼす。具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、ドナー臓器および／またはレシピエントにおいて老化細胞を選択的に除去して、移植の成績を改善するのに使用することができる。
【0132】
さらに具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱するのに使用される。
さらに具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、化学療法の副作用を改善するのに使用される。なおさらに具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、腫瘍の再発、ならびに老化関係の疾患および状態の発生を予防または遅延するのに使用される。療法に誘発された老化（ＴＩＳ）は、がん療法の一般的な副作用であり、療法で生存した患者において早期老化を起こす。加えて、ＴＩＳは、腫瘍、例えば、Ｂｃｌ２リンパ腫において老化関連の幹細胞性（ＳＡＳ）を誘発するので、高い腫瘍発生の能力およびがん再発に対する高い危険性をもたらす。
さらに具体的な実施形態によると、本明細書で提供される組成物は、化学療法の副作用を改善するのに使用される。なおさらに具体的な実施形態によると、本明細書に記載の組成物は、腫瘍の再発、ならびに老化関係の疾患および状態の発生を予防または遅延するのに使用される。療法に誘発された老化（ＴＩＳ）は、がん療法の一般的な副作用であり、療法で生存した患者において早期老化を起こす。加えて、ＴＩＳは、腫瘍、例えば、Ｂｃｌ２リンパ腫において老化関連の幹細胞性（ＳＡＳ）を誘発するので、高い腫瘍発生の能力およびがん再発に対する高い危険性をもたらす。
【0133】
老化細胞の除去または破壊は、化学療法または放射線療法の、エネルギー不均衡を含む急性毒性を含む、急性毒性を改善することができる。急性毒性の副作用は、限定されないが、胃腸毒性（例えば、悪心、嘔吐、便秘、食欲不振、下痢）、末梢神経障害、疲労感、不定愁訴、低い身体活動、血液学的毒性（例えば、貧血）、肝毒性、脱毛症（脱毛）、疼痛、感染、粘膜炎、体液貯留、皮膚科学的毒性（例えば、発疹、皮膚炎、色素沈着過剰症、蕁麻疹、光線過敏症、爪の変化）、口腔、歯肉もしくは咽頭の問題、または化学療法もしくは放射線療法に起因する任意の毒性の副作用を含む。例えば、化学療法もしくは放射線療法に起因する毒性の副作用（例えば、国立がん研究所のウェブサイトを参照）は、本明細書に記載の方法により改善することができる。したがって、ある特定の実施形態では、方法は、療法を受ける対象において、急性毒性を改善する（発生を低減、阻害、もしくは予防する（すなわち、発生の可能性を低減する））、または化学療法もしくは放射線療法の毒性の副作用（すなわち、有害な副作用）の重症度を低減する、またはその両方のために本明細書で提供され、方法は、対象に、老化細胞を選択的に死滅、除去、もしくは破壊するか、または老化細胞の選択的崩壊を促進する、本明細書に記載の組成物を投与することを含む。処置するか、または発生の可能性を低減するか、または化学療法もしくは放射線療法の副作用の重症度を低減するための老化細胞除去組成物の投与は、転移の処置／予防に対して、上述と同じ処置の過程により達成することができる。転移を処置または予防する（すなわち、その発生の可能性を低減する）のに記載される通り、老化細胞除去の組合せは、化学療法もしくは放射線療法を行わない期間の間、または化学療法もしくは放射線療法の処置レジメンが完了した後、投与される。
【0134】
本明細書でさらに提供されるのは、対象において老化細胞を同定する方法である。具体的には、本明細書に記載の老化細胞の変化した脂質代謝のメンバーのレベルの変化は、対象において老化細胞を同定するために検出することができる。具体的には、対象において老化細胞を同定する方法は、バイオマーカーである、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、およびホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つのレベルを決定することを含む。好ましくは、バイオマーカーは、リゾＳＰＣ、またはリゾＰＰＣ、またはアラキドン酸である。
【0135】
対象において老化細胞を同定する方法は、具体的には、老化関連の疾患もしくは状態の診断、対象における老化関連の疾患もしくは状態の危険性の診断、老化関連の疾患もしくは状態のモニタリング、もしくは処置応答のモニタリングもしくは予測、または老化誘発剤（酸化ストレッサーを含む、中毒物質、ＤＮＡ損傷剤など）への曝露のモニタリングにおいて、老化細胞の存在を決定するために使用することができる。
【0136】
「対照」、「対照サンプル」、または「基準値」もしくは「基準レベル」とは、本明細書で互換的に使用することができる用語であり、実験サンプルとの比較に対して使用されるサンプルまたは基準として利用されるべきである。対照は、健康対象、または老化の危険がないか、もしくは罹患していないか、もしくは老化を含むストレス状態に曝露していないか、もしくは老化細胞除去剤での処置に曝露している、対象から得られるサンプルを
含み得る。基準レベルとは、具体的には、健康対象由来、老化の危険がないか、もしくは罹患していないか、もしくは老化を含むストレス状態に曝露していない対象由来のサンプルで定量化された、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／もしくはＰＬＡ２活性のレベルを指すか、または老化細胞除去処置のモニタリングの場合、上記レベルはまた、老化細胞除去処置を開始する前、もしくは老化細胞除去処置の過程の間の対象のサンプルに由来することができる。
含み得る。基準レベルとは、具体的には、健康対象由来、老化の危険がないか、もしくは罹患していないか、もしくは老化を含むストレス状態に曝露していない対象由来のサンプルで定量化された、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／もしくはＰＬＡ２活性のレベルを指すか、または老化細胞除去処置のモニタリングの場合、上記レベルはまた、老化細胞除去処置を開始する前、もしくは老化細胞除去処置の過程の間の対象のサンプルに由来することができる。
【0137】
具体的には、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはＰＬＡ２活性のレベルは、ＥＬＩＳＡ、質量分析、または高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）のような免疫アッセイを使用して測定される。
【0138】
例えば、リゾホスファチジルコリンのレベル、具体的には細胞内レベルは、Ｇｒｕｂｅｒら、２０１５年に記載の陽イオンモードでのタンデム質量分析に連結される高性能液体クロマトグラフィー、またはＪｅｓｃｈｅｋら、２０１６年に記載のＨＰＬＣにより測定することができる。
【0139】
例えば、細胞内アラキドン酸のレベルは、酵素免疫測定法、例えば、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ（ＮＢＰ２－６６３７２）で供給されるユニバーサルアラキドン酸ＥＬＩＳＡキット、または任意の他の等価のＥＬＩＳＡアッセイにより測定することができる。さらに具体例によると、アラキドン酸アッセイのレベルは、Ｎｉｓｈｉｋｉｏｒｉら、２０１５年に記載の高性能液体クロマトグラフィー、または陰イオンモードでのタンデム質量分析に連結される高性能液体クロマトグラフィーでの、Ｇｒｕｂｅｒら、２０１５年に記載のフローインジェクションエレクトロスプレーイオン化質量分析により測定することができる。
【0140】
例えば、ＰＬＡ２活性は、ホスホリパーゼＡ２活性による切断時に、蛍光計、例えばｂｉｓ－ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）－ＦＬ－Ｃ１１－ＰＣ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で、またはＥｎｚＣｈｅｋ（商標）ホスホリパーゼＡ２アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）もしくは任意の他の等価のアッセイで定量化することができる蛍光産物を得る、ＰＬＡ２基質を含むアッセイにより測定することができる。
【0141】
具体的な実施形態によると、バイオマーカーである、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、およびホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つのレベルの２または３超の標準偏差の、基準における上記バイオマーカーのレベルと比較しての増加は、老化細胞または細胞老化の存在を示している。
【0142】
具体的には、健康対象または健康対象の群から得られる上記バイオマーカーのいずれか１つまたは複数の基準レベル間の、対象のサンプルから得られる上記バイオマーカーの１つまたは複数のレベルと比較して、２．０、２．５、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５．０倍超の増加は、上記サンプルにおける老化細胞の存在を示している。
【0143】
具体的には、老化細胞除去処置の間またはその後の対象のサンプルから得られる上記バイオマーカーのいずれか１つまたは複数の基準レベル間の、早い時点からの同じ対象のサンプルと比較して、２．０分の１、２．５分の１、３．０分の１、３．１分の１、３．２分の１、３．３分の１、３．４分の１、３．５分の１、３．６分の１、３．７分の１、３．８分の１、３．９分の１、４．０分の１、４．１分の１、４．２分の１、４．３分の１、４．４分の１、４．５分の１、４．６分の１、４．７分の１、４．８分の１、４．９分の１、または５．０分の１への減少（個人内比較または個人内差異）は、老化細胞除去処置に対する陽性反応を示している。
【0144】
加えて、対照はまた、標準的な基準値、または値の範囲であり得る。基準レベルはまた、健康な対象のサンプル、および／または薬理学的、食事もしくは生活様式の介入前の対象における、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のいずれか１つまたは複数の平均レベルとして決定することができる。別の方法として、また、１つまたは複数の対象由来のサンプルのプールは、使用することができるか、または文献に開示される参照であり得る。
【0145】
本明細書に記載の老化細胞の検出のための方法は、具体的には、本明細書に記載の診断シグネチャーまたは発現パターンを使用する診断ツールおよび予測ツールであって、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２のいずれか１つまたは複数または全てのレベルの上昇からなり、線維芽細胞、内皮細胞、腎上皮細胞、肝細胞、神経細胞、皮膚細胞、肺上皮細胞、または結腸上皮細胞を含むが、限定されない、様々な細胞種の広範囲な老化に適用可能であるツールを提供する。特に、若い対象または老化を誘発するストレス状態に曝露していない対象、および高齢の対象または老化を誘発するストレス状態に曝露した対象の組織、血液、または血清における老化細胞の検出は、初期診断、長期予後、および細胞老化の患者のスクリーニングに対してより高い有意性を有する診断ツールおよび予測ツールを提供する。本明細書に記載の方法はまた、老化細胞除去剤での処置をモニタリングするための診断ツールを提供する。
【0146】
具体的には、本明細書に記載の老化細胞を同定する方法は、単一測定として実施することができるが、反復した決定により実行することもできる。
具体的には、本明細書に記載の老化細胞を検出するための方法の使用はまた、移植臓器の機能を予測すること、または臓器移植不全を予測することを包含する。
具体的には、本明細書に記載の老化細胞を検出するための方法の使用はまた、移植臓器の機能を予測すること、または臓器移植不全を予測することを包含する。
【0147】
具体的な実施形態によると、本明細書に記載の方法はまた、老化細胞の減少、または細胞老化の低減を検出するために使用することができ、バイオマーカーであるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはＰＬＡ２活性のうちの少なくとも１つのレベルは、老化細胞除去剤、抗加齢剤、または任意の抗加齢性介入での処置の前の、相当するリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはＰＬＡ２活性のレベルと比較する。具体的には、上記のバイオマーカーのうちの少なくとも１つのレベルでの低下は、例えば、老化細胞除去剤、抗加齢剤（例えば、ラパマイシン、スペルミジン、メトホルミン）、または食事、運動などのような任意の他の抗加齢性介入を使用する間、老化細胞の除去を示すことができる。このシグネチャーはまた、任意の抗加齢性介入から利益を受ける対象を同定するのに使用することができる。
【0148】
具体的には、方法は、対象をモニタリングする、具体的には老化細胞除去処置に対する対象の応答を測定するのに有用である。したがって、バイオマーカーはまた、効果的な薬物用量の表示（例えば、任意の種類の介入の開発中、またはパーソナル化された処置選択肢もしくは投与の同定に関して、用量設定）のために使用することができる。
【0149】
本明細書でさらに提供されるのは、老化細胞を選択的に除去することが可能な、老化細胞除去化合物をスクリーニングする方法である。具体的な実施形態によると、アラキドン酸のレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡのような、酵素に基づく免疫アッセイを使用して、化合物にもまた曝露した非老化細胞、もしくは化合物に曝露しない老化細胞、またはその両方でのアラキドン酸のレベルと比較して、化合物への曝露時に老化細胞で測定される。具体的には、本スクリーニング法により同定された化合物は、老化細胞を選択的に除去することが可能である。
【0150】
本発明は、以下の項目をさらに含む：
１．シクロオキシゲナーゼ１（ＣＯＸ－１）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ－２）、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な１つまたは複数の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
１．シクロオキシゲナーゼ１（ＣＯＸ－１）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ－２）、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な１つまたは複数の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
【0151】
２．アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つまたは複数の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
【0152】
３．アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つまたは複数の阻害剤、およびＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、またはリポキシゲナーゼのうちの少なくとも１つを含む、項目２に記載の使用のための組成物。
【0153】
４．老化細胞が、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、およびホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの高い細胞内レベルで特徴付けられる、項目１から３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【0154】
５．リゾホスファチジルコリンが、１－ステアロイル（ｓｔｅｒａｒｏｙｌ）－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＳＰＣ）、または１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＰＰＣ）である、項目４に記載の使用のための組成物。
【0155】
６．阻害剤の１つまたは複数が、アセチルサリチル酸、ジクロフェナク、セレコキシブ、シクロスポリンＡ、イブプロフェン、アセトアミノフェン、インドメタシン、ナブメトン、ケトロラック、テノキシカム、トルメチン、ピロキシカム、フェノプロフェン、エトドラク、ナプロキセン、ジフルニサル、スプロフェン、ブロムフェナク、ケトプロフェン、ジホモ－γ－リノレン酸、イコサペント、フルルビプロフェン、メフェナム酸、サルサレート、スリンダク、サリチル酸、ルミラコキシブ、Ｏ－アセチル－Ｌ－セリン、フェナセチン、フルルビプロフェンメチルエステル、メタミゾール、ニトロアスピリン、メロキシカム、フルフェナム酸、オキサプロジン、チアプロフェン酸、サリチル酸マグネシウム、ジエチルカルバマジン、ロルノキシカム、カルプロフェン、フェニルブダゾン、ネパフェナク、アンチピリン、アントラフェニン、トリサリチル酸コリンマグネシウム、トリフルサール、ニフルム酸、デキシブプロフェン、アセクロフェナック、アセメタシン、ドロキシカム、ロキソプロフェン、トルフェナム酸、デキスケトプロフェン、トロメタモール、タルニフルメート、プロパセタモール、サリチル酸トロラミン、サリチル酸フェニル、ブフェキサマク、サリチル酸グリコール、サリチル酸メンチル、ＦＫ－５０６、レナリドマイド、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、シミコキシブ、クロルフェネシン、クロドロン酸、セリシクリブ、ドロスピレノン、トリアムシノロン、ポマリドミド、パレコキシブ、フィロコキシブ、アクロフェナク、アダパレン、サリドマイド、エトリコキシブ、ロベナコキシブ、アサルアルデヒド、ザルトプロフェン、デラコキシブ、デキサメタゾン、プラノプロフェン、アンフェナクナトリウム一水和物、アンピロキシカム、ＮＳ－３９８、次サリチル酸ビスマス、ジクロフェナクジエチルアミン、トロメタモール、ルテカルピン、サリシン、フェンブフェン、キサントフモール、フルニキシンメグルミン、およびニメスリドからなる群から選択されるＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２阻害剤である、項目１から５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【0156】
７．１つまたは複数の阻害剤が、ＭＫ８８６、ジロイトン、マソプロコール、ジエチル
カルバマジン、アゼラスチン、ベノキサプロフェン、ノルジヒドログアイアレチン酸、アビエチン酸、エスクレチン、モンテルカスト、ミノサイクリン、ＭＬＮ－９７７、レイン、ジアセレイン、ナビキシモルス、ホスタマチニブ、ＡＭ１０３、ＤＧ０３１、フィボフラポン、ＡＡ－８６１、およびアトレロイトンからなる群から選択されるリポキシゲナーゼおよび／またはＦＬＡＰ（ＡＬＯＸ５ＡＰ）阻害剤である、項目１から６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
カルバマジン、アゼラスチン、ベノキサプロフェン、ノルジヒドログアイアレチン酸、アビエチン酸、エスクレチン、モンテルカスト、ミノサイクリン、ＭＬＮ－９７７、レイン、ジアセレイン、ナビキシモルス、ホスタマチニブ、ＡＭ１０３、ＤＧ０３１、フィボフラポン、ＡＡ－８６１、およびアトレロイトンからなる群から選択されるリポキシゲナーゼおよび／またはＦＬＡＰ（ＡＬＯＸ５ＡＰ）阻害剤である、項目１から６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【0157】
８．１つまたは複数の阻害剤が、デュアルシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ阻害剤であり、好ましくは、リコフェロン、ダルブフェロン、ＣＩ－９８７、Ｓ－２４７４、ＫＭＥ－４、ケブラジン酸、バルサラジド、メサラジン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、メクロフェナム酸、モルニフルマートジアリールピラゾール誘導体、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体、Ｎ－置換５－アミノサリシリシラミド、フラボコキシド、インドリジン誘導体、ＬＱＦＭ－０９１、ヒペルホリン、セラストロール、ＢＷ７５５Ｃ、テポキサリン、ｂ－ボスウェリン酸、Ｄ－００２、２，３－ジアリールキサントン、フェニドン、およびＥＲ－３４１２２からなる群から選択される、項目１から７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【0158】
９．アラキドン酸の細胞内の転換を阻害することが可能な追加の化合物を含む、項目１から８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
１０．追加の化合物が、好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、およびケンフェロールからなる群から選択される天然化合物である、項目９に記載の使用のための組成物。
１０．追加の化合物が、好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、およびケンフェロールからなる群から選択される天然化合物である、項目９に記載の使用のための組成物。
【0159】
１１．追加の化合物が、シトクロムＰ４５０の阻害剤、好ましくは、スルファフェナゾール、アバシミブ、ベンズブロマロン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、セルビスタチン、ワルファリン、ピオグリタゾン、ラパチニブ、トリメトプリム、ザフィルルカスト、アモジアキン、ニカルジピン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロラタジン、エチニルエストラジオール、イルベサルタン、キニーネ、ソラフェニブ、エルトロンボパグ、ロサルタン、リコフェロン、アミトリプチリン、アトルバスタチン、メフェナム酸、メロキシカム、ピロキシカム、エルロチニブ、パゾパニブ、ジエチルスチルベストロール、エンザルタミド、ポナチニブ、ダブラフェニブ、エナシデニブ、ロバスタチン、モンテルカスト、ケトコナゾール、フェロジピン、カンデサルタンシレキセチル、クロトリマゾール、モメタゾン、サルメテロール、ラロキシフェン、フェノフィブラート、レボチロキシン、タモキシフェン、オキシブチニン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ニフェジピン、リオトリックス、アムロジピン、ベザフィブラート、クロラムフェニコール、シクロスポリン、シメチジン、クロピドグレル、コレカルシフェロール、デラビルジン、デキストロプロポキシフェン、エトポシド、イソニアジド、ケトプロフェン、メトロニダゾール、ニルタミド、ニルバジピン、パロキセチン、フェネルジン、プラバスタチン、プロパフェノン、ピリメタミン、ロフェコキシブ、ルチン、サキナビル、スルファメトキサゾール、スルフィンピラゾン、テガセロド、テルフェナジン、チオリダジン、チクロピジン、チオコナゾール、トリアゾラム、トロレアンドマイシン、バルプロ酸、アビラテロン、ビスモデギブ、レゴラフェニブ、トラメチニブ、イデラリシブ、ロピナビル、セレコキシブ、エファビレンツ、ラベプラゾール、テリフルノミド、クリサボロール、ベリノスタット、トピロキソスタット、カンデサルタン、レテルモビル、ルカパリブ、オピカポン、ナビロン、フルボキサミン、フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ボスチニブ、カボザンチニブ、ゲニステイン、レンバチニブ、アタザナビル、ベキサロテン、デフェラシロクス、キニジン、ミフェプリストン、ベムラフェニブ、シルデナフィル、ジクロフェナク、フルオキセチン、バルデコキシブ、ボリコナゾール、エトドラク、セルトラリン、グリブリド、アセノクマロール、ロスバスタチン、イマチニブ、クロザピン、ジアゼパム、プロゲステロン、オメプラゾール、バルサルタン、ボルテゾミブ、ネビラピン、アゼラスチン、ロルノキシカム、フェニルブダゾン、エトラビリン、レフルノミド、シタキセンタン、アミノフェナゾン、ベラパミル、エトリコキシブ、プロポフォール、スルファモキソール、ジクマロール、ジルチアゼム、ヒスタミン、モクロベミド、セレギリン、パレコキシブ、ドコネキセント、アセチルスルフィソキサゾール、フルコナゾール、パントプラゾール、デスロラタジン、ミコナゾール、アミオダロン、ゲムフィブロジル、プロベネシド、テニポシド、スルファジアジン、カペシタビン、フルオロウラシル、トラニルシプロミン、アナストロゾール、アトバコン、シクリジン、デクスフェンフルラミン、ジスルフィラム、エピネフリン、エプロサルタン、フレカイニド、インジナビル、メタゾラミド、ネルフィナビル、オランザピン、プランルカスト、プロメタジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファピリジン、メチマゾール、トルカポン、ビカルタミド、アルモダフィニル、アゴメラチン、ノスカピン、クレビジピン、スルコナゾール、ゲフィチニブ、チカグレロル、セリチニブ、フロクスウリジン、リフィテグラスト、レイン、ジアセレイン、ズカプサイシン、スチリペントール、ロベグリタゾン、ドスレピン、マニジピン、ブラックコホシュ、クルクミン、フェルバメート、ピペリン、サフィナミド、イプロニアジド、オリタバンシン、マソルポコール、およびペグビソマントからなる群から選択される、ＣＹＰ２Ｊ、ＣＹＰ２Ｃ、ＣＹＰ４Ａ、またはＣＹＰ４Ｆの阻害剤である、項目９に記載の使用のための組成物。
【0160】
１２．追加の化合物が、好ましくは、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤である、項目９に記載の使用のための組成物。
【0161】
１３．追加の化合物が、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、具体的にはＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、ＭＢＯＡＴ２、および／またはＭＢＯＡＴ７の阻害剤であり、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤が、好ましくは、Ｎ－フェニルマレイミド誘導体、ＴＳＩ－０１、およびチメロサールからなる群から選択される、項目９に記載の使用のための組成物。
【0162】
１４．追加の化合物が、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、具体的にはＥＬＯＶＬ２、ＥＬＯＶＬ４、および／またはＥＬＯＶＬ５の阻害剤であり、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤が、好ましくは、シクロエート、アデノシン５’－ヘキサデシルホスフェート、エンド－１ｋ、（Ｓ）－イル、および化合物３７、５，５－ジメチル－３－（５－メチル－３－オキソ－２－フェニル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１－フェニル－３－（トリフルオロメチル－３，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インドール－２，４－ジオン）、および（３－エンド）－３－（フェニルスルホニル）－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボキサミドからなる群から選択される、項目９に記載の使用のための組成物。
【0163】
１５．細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物を含む、項目１から９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
１６．追加の化合物が、好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピセアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲ
ニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン、シトバリシン、ペリオマイシン、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルもしくはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤である、項目１５に記載の使用のための組成物。
１６．追加の化合物が、好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピセアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲ
ニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン、シトバリシン、ペリオマイシン、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルもしくはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤である、項目１５に記載の使用のための組成物。
【0164】
１７．追加の化合物が、好ましくは、クロドロン酸、イビピナバント、アトラクチロシド、カルボキシアトラクチロシド、ボンクレキン酸、イソボンクレキン酸、ＭＴ－２１、クロサンテル、ＣＤ４３７、リーラミン、Ｌ９２３－０６７３、ＩＭＤ０３５４、ＰＩ３２－０３３３、Ｓ８９９５４２、ノナクチン、およびＳ８３８４６２からなる群から選択される、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼの阻害剤である、項目１５に記載の使用のための組成物。
【0165】
１８．追加の化合物が、好ましくは、２－デオキシ－Ｄ－グルコース、ロニダミン、ブロモピルビン酸、フロレチン、ＳＴＦ－３１、ＷＺＢ１１７、３ＰＯ、３－ブロモピルベート、ジクロロアセテート、オキサミン酸、ＮＨＩ－１、オキシチアミン、イマチニブ、グルコサミン、６－アミノニコチンアミド、ゲニステイン、５－チオグルコース、マンノヘプツロース、α－クロロヒドリン、オルニダゾール、オキサレート、グルフォスファミド、Ｎ－（ホスホンアセチル）－Ｌ－アスパルテート、６－メチルメルカプトプリンリボシド、ＣＧＰ３４６６Ｂマレエート、モノフルオロリン酸ナトリウム、ＤＡＳＡ－５８、ＤＬ－セリン、ジクロロ酢酸、ジクロロ酢酸ナトリウム、ニトロフラール、６－ＡＮ、ファセンチン、ベンセラジド、アストラガリン、レスベラトロール、クリシン、ＧＥＮ－２７、アピゲニン、ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，３，４－チアジアゾール－２－イル）エチル硫化物、ＣＢ－８３９、アザセリン、アシビシン、６－ジアゾ－５－ｏｘ－Ｌ－ノルロイシン、チアゾリジン－２，４－ジオン誘導体、化合物９６８、Ｒ－リポ酸、１，３，４－チアジアゾール化合物、２－クロロプロピオネート、Ｎｏｖ３ｒ、ＡＺＤ７５４５、Ｐｆｚ３、ラジシコール、ミタプラチン、ｍｉｔｏ－ＤＣＡ、フェニルブチレート、４，５－ジアリールイソオキサゾール、ＶＥＲ－２４６６０８、ベツリン酸、ホスフィネートまたはホスホナート基を含有するピルベート類似体、ＣＰＩ－６１３、Ｍ７７９７６、芳香族ＤＣＡ誘導体、フランおよびチオフェンカルボン酸、リトナビル、ＦＸ１１、オキサメート、Ｄ－フルクトース－６－ホスフェート、６－ホスホグルコン酸、Ｎ－ブロモアセチル－アミノエチルホスフェート、２－カルボキシエチルホスホン酸、Ｎ－ヒドロキシ－４－ホスホノ－ブタンアミド、２－ホスホグリセリン酸、ヨードアセテート、ゴシポール、１，３－ビスホスホグリセリン酸のビスホスホネート類似体、ベンゼンヘキサカルボン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホノアセトヒドロキサム酸、２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸、ＴＬＮ－２３２、ならびにＣＡＰ－２３２からなる群から選択される、グリコリシスの阻害剤である、項目１５に記載の使用のための組成物。
【0166】
１９．老化関係の疾患または状態の発症を予防または遅延する、項目１から１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
２０．老化関係の疾患または状態の進行を予防または遅延する、項目１から１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
２０．老化関係の疾患または状態の進行を予防または遅延する、項目１から１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【0167】
２１．老化関係の疾患または状態の退行を促進する、項目１から１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
２２．老化関係の疾患または状態が、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、がん、骨粗鬆症、変形性関節症、神経障害、認知症、白内障、腎疾患、網膜症、糖尿病、肺線維症、脊椎の皮膚変性、加齢性筋萎縮、脱毛、または皮膚老化から選択される、項目１９から２１に記載の使用のための組成物。
２２．老化関係の疾患または状態が、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、がん、骨粗鬆症、変形性関節症、神経障害、認知症、白内障、腎疾患、網膜症、糖尿病、肺線維症、脊椎の皮膚変性、加齢性筋萎縮、脱毛、または皮膚老化から選択される、項目１９から２１に記載の使用のための組成物。
【0168】
２３．移植の成績を改善する、項目１から１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
２４．老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する、項目１から１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
２４．老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する、項目１から１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【0169】
２５．化学療法の副作用を改善し、腫瘍の再発を予防または遅延する、項目１から１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
２６．対象において老化細胞を同定する方法であって、
ａ）上記対象のサンプルを準備するステップ、
ｂ）上記対象においてリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルを決定するステップ、
ｃ）ｂ）のレベルを基準レベルと比較するステップ
を含み、基準レベルが、非老化細胞におけるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルであり、
リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のレベルでの少なくとも２倍の増加が、上記サンプルにおける老化細胞の存在を示している、
方法。
２６．対象において老化細胞を同定する方法であって、
ａ）上記対象のサンプルを準備するステップ、
ｂ）上記対象においてリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルを決定するステップ、
ｃ）ｂ）のレベルを基準レベルと比較するステップ
を含み、基準レベルが、非老化細胞におけるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルであり、
リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のレベルでの少なくとも２倍の増加が、上記サンプルにおける老化細胞の存在を示している、
方法。
【0170】
２７．老化細胞を除去するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、
ａ）少なくとも１つの試験化合物を、老化細胞のサンプルと接触させるステップ、
ｂ）アラキドン酸の細胞内レベルを測定する、および／またはアポトーシスを測定する、および／または細胞生存率を測定するステップ、ならびに
ｃ）未処置の老化細胞と比較して、試験化合物と接触させた老化細胞において、アラキドン酸の細胞内蓄積、高いアポトーシス、および／または低い細胞生存率を起こす試験化合物を選択するステップ
を含む方法。
ａ）少なくとも１つの試験化合物を、老化細胞のサンプルと接触させるステップ、
ｂ）アラキドン酸の細胞内レベルを測定する、および／またはアポトーシスを測定する、および／または細胞生存率を測定するステップ、ならびに
ｃ）未処置の老化細胞と比較して、試験化合物と接触させた老化細胞において、アラキドン酸の細胞内蓄積、高いアポトーシス、および／または低い細胞生存率を起こす試験化合物を選択するステップ
を含む方法。
【0171】
２８．対象において老化細胞を除去する化合物の使用であって、上記化合物が、項目２７に記載の方法にしたがって同定される、使用。
２９．少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤、および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
２９．少なくとも１つのシクロオキシゲナーゼ阻害剤、および少なくとも１つのリポキシゲナーゼ阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
【0172】
本明細書に記載の実施例は、本発明の説明であり、その限定を意図するものではない。本発明の異なる実施形態は、本発明にしたがって記載される。本明細書で記載および図示した技術に対して、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、多くの変形および変更がなされ得る。したがって、実施例が、単なる例示に過ぎず、本発明の範囲を限定しないことを理解すべきである。
【実施例0173】
以下の材料および方法は、別段指示がない限り、本明細書で提供される実施例を通して使用される。
細胞単離
ヒト真皮線維芽細胞（ＨＤＦ）を、健康な女性の成人ドナーの皮膚生検から単離し、Ｅｖｅｒｃｙｔｅ（ウィーン、オーストリア）より入手した。包皮ヒト真皮線維芽細胞（ｆＨＤＦ）を、包皮から単離し、Ｅｖｅｒｃｙｔｅ（ウィーン、オーストリア）より入手した。男性ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ヒト臍帯から単離し、Ｅｖｅｒｃｙｔｅ（ウィーン、オーストリア）より入手した。全ての細胞株は、一定間隔でマイコプラズマに対して試験した。ヒト肺線維芽細胞（ＨＬＦ）を、ドナー肺から単離し、Ｌｕｄｗｉｇ Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｌｕｎｇ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（グラーツ、オーストリア）より入手した。ヒト腎近位上皮細胞（ＲＰＴＥＣ）を、Ｂｉｏｐｒｅｄｉｃ（サン・グレゴワール、フランス）より入手した。
細胞単離
ヒト真皮線維芽細胞（ＨＤＦ）を、健康な女性の成人ドナーの皮膚生検から単離し、Ｅｖｅｒｃｙｔｅ（ウィーン、オーストリア）より入手した。包皮ヒト真皮線維芽細胞（ｆＨＤＦ）を、包皮から単離し、Ｅｖｅｒｃｙｔｅ（ウィーン、オーストリア）より入手した。男性ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ヒト臍帯から単離し、Ｅｖｅｒｃｙｔｅ（ウィーン、オーストリア）より入手した。全ての細胞株は、一定間隔でマイコプラズマに対して試験した。ヒト肺線維芽細胞（ＨＬＦ）を、ドナー肺から単離し、Ｌｕｄｗｉｇ Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｌｕｎｇ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（グラーツ、オーストリア）より入手した。ヒト腎近位上皮細胞（ＲＰＴＥＣ）を、Ｂｉｏｐｒｅｄｉｃ（サン・グレゴワール、フランス）より入手した。
【0174】
細胞培養
ＨＤＦ、ｆＨＤＦ、およびＨＬＦを、周囲の酸素下、７％のＣＯ２、３７℃で、１０％のＦＣＳ（Ｆ７５２４、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）および４ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇ７５１３、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ Ｆ－１２（１：１混合物）（Ｆ４８１５、Ｂｉｏｃｈｒｏｍｅ）で培養した。ＨＵＶＥＣを、周囲の酸素下、７％のＣＯ２、３７℃で、１０％のＦＣＳ（Ｆ７５２４、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したＥｎｄｏｐａｎ３Ｋｉｔ（ゲンタマイシンおよびＦＢＳを除く；Ｐ０４－００１０Ｋ、Ｐａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で培養した。細胞を、３７℃で３～５分間、０．１％のトリプシンおよび０．０２％のＥＤＴＡでインキュベートすることにより剥離し、細胞の種類および成長速度によって１：２と１：８との間の比で分割した。ＲＰＴＥＣを、周囲の酸素下、７％のＣＯ２、３７℃で、Ｇ４１８を伴わないＰｒｏｘＵｐ（ＭＨＴ－００３、Ｅｖｅｒｃｙｔｅ）で培養した。細胞を、３７℃で３～５分間、０．０５％のトリプシン－ＥＤＴＡ溶液（２５３０００５４、Ｇｉｂｃｏ）でインキュベートすることにより剥離し、成長速度によって１：２と１：４との間の比で分割した。細胞を、Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＸＲ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）自動細胞計数器を使用して計数した。
ＨＤＦ、ｆＨＤＦ、およびＨＬＦを、周囲の酸素下、７％のＣＯ２、３７℃で、１０％のＦＣＳ（Ｆ７５２４、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）および４ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇ７５１３、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ Ｆ－１２（１：１混合物）（Ｆ４８１５、Ｂｉｏｃｈｒｏｍｅ）で培養した。ＨＵＶＥＣを、周囲の酸素下、７％のＣＯ２、３７℃で、１０％のＦＣＳ（Ｆ７５２４、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したＥｎｄｏｐａｎ３Ｋｉｔ（ゲンタマイシンおよびＦＢＳを除く；Ｐ０４－００１０Ｋ、Ｐａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で培養した。細胞を、３７℃で３～５分間、０．１％のトリプシンおよび０．０２％のＥＤＴＡでインキュベートすることにより剥離し、細胞の種類および成長速度によって１：２と１：８との間の比で分割した。ＲＰＴＥＣを、周囲の酸素下、７％のＣＯ２、３７℃で、Ｇ４１８を伴わないＰｒｏｘＵｐ（ＭＨＴ－００３、Ｅｖｅｒｃｙｔｅ）で培養した。細胞を、３７℃で３～５分間、０．０５％のトリプシン－ＥＤＴＡ溶液（２５３０００５４、Ｇｉｂｃｏ）でインキュベートすることにより剥離し、成長速度によって１：２と１：４との間の比で分割した。細胞を、Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＸＲ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）自動細胞計数器を使用して計数した。
【0175】
ＳＩＰＳ
細胞を、処置の１日前に、２，８００細胞／ｃｍ２の細胞密度で播種した。細胞を、培地交換の前の１時間に、培地に補充した６０～８０μＭのＨ２Ｏ２で、１１日間にわたって９回処置した。あるいは、細胞の種類によって、細胞を、処置の１日前に、３，５００～７，０００細胞／ｃｍ２の細胞密度で播種し、ＳＩＰＳを、６日間、培地に補充した１００～２００ｎＭのドキソルビシン（Ｄ１５１５、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で誘発された。老化の誘導を、ＳＡ－β－ｇａｌ染色、ｐ２１発現、およびＢｒｄＵ組込みがないことにより確認した。アネキシンＶ／ＰＩ染色を実施して、処置が非致死性であったことを保証し、ＳＩＰＳのＨＤＦを５０日にわたって培養およびモニタリングして、誘発された成長停止が恒久的であったことを保証した（Ｔｅｒｌｅｃｋｉ－Ｚａｎｉｅｗｉｃｚら、２０１８年）。
細胞を、処置の１日前に、２，８００細胞／ｃｍ２の細胞密度で播種した。細胞を、培地交換の前の１時間に、培地に補充した６０～８０μＭのＨ２Ｏ２で、１１日間にわたって９回処置した。あるいは、細胞の種類によって、細胞を、処置の１日前に、３，５００～７，０００細胞／ｃｍ２の細胞密度で播種し、ＳＩＰＳを、６日間、培地に補充した１００～２００ｎＭのドキソルビシン（Ｄ１５１５、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で誘発された。老化の誘導を、ＳＡ－β－ｇａｌ染色、ｐ２１発現、およびＢｒｄＵ組込みがないことにより確認した。アネキシンＶ／ＰＩ染色を実施して、処置が非致死性であったことを保証し、ＳＩＰＳのＨＤＦを５０日にわたって培養およびモニタリングして、誘発された成長停止が恒久的であったことを保証した（Ｔｅｒｌｅｃｋｉ－Ｚａｎｉｅｗｉｃｚら、２０１８年）。
【0176】
脂質分析
細胞を、０．５ｍＭのジエチレントリアミン五酢酸を含有するＰＢＳで１回洗浄し、３％の酢酸および０．０１％のブチル化ヒドロキシトルエンを含有する２．２ｍｌのメタノールを添加した後、細胞を、セルスクレーパーで剥離した。脂質サンプルをガラスバイアルに移し、空気を不活性ガスで排出し、サンプルを、バイアルをパラフィンで封止した後、－２０℃で保管した。最終的に、サンプルを、Ａｎａｌｙｓｔソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）のバージョン１．６を使用して、（Ｇｒｕｂｅｒら、２０１５年）に記載のフローインジェクションエレクトロスプレーイオン化質量分析で分析した。リゾＰＰＣおよびリゾＳＰＣのレベルを、ＤＰＰＣレベルに正規化した。
細胞を、０．５ｍＭのジエチレントリアミン五酢酸を含有するＰＢＳで１回洗浄し、３％の酢酸および０．０１％のブチル化ヒドロキシトルエンを含有する２．２ｍｌのメタノールを添加した後、細胞を、セルスクレーパーで剥離した。脂質サンプルをガラスバイアルに移し、空気を不活性ガスで排出し、サンプルを、バイアルをパラフィンで封止した後、－２０℃で保管した。最終的に、サンプルを、Ａｎａｌｙｓｔソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）のバージョン１．６を使用して、（Ｇｒｕｂｅｒら、２０１５年）に記載のフローインジェクションエレクトロスプレーイオン化質量分析で分析した。リゾＰＰＣおよびリゾＳＰＣのレベルを、ＤＰＰＣレベルに正規化した。
【0177】
次世代シーケンシングおよびデータ分析
ライブラリ作成およびシーケンシングを、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉｇｈＳｅｑ ２０００ Ｐｌａｔｆｏｒｍ（ＧＡＴＣ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＧ、コンスタンツ、ドイツ）で実施した。全ての分析ステップを、Ｔｕｘｅｄｏ Ｓｕｉｔｅ Ｐｉｐｅｌｉｎｅにしたがって行った（Ｔｒａｐｎｅｌｌら、２０１２年）。簡潔には、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｃａｓａｖａ １．８．２ソフトウェアを、ベースコールに使用した。ＲＮＡ－ｓｅｑ読出しを、初期パラメータを伴うＴＯＰＨＡＴバージョン２．０．１３を使用して、ｈｇ１９ゲノムアセンブリに整合した。転写産物を、Ｃｕｆｆｌｉｎｋｓバージョン２．１．１にアセンブルし、示唆発現した遺伝子を、Ｃｕｆｆｄｉｆｆにより予測した。
ライブラリ作成およびシーケンシングを、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉｇｈＳｅｑ ２０００ Ｐｌａｔｆｏｒｍ（ＧＡＴＣ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＧ、コンスタンツ、ドイツ）で実施した。全ての分析ステップを、Ｔｕｘｅｄｏ Ｓｕｉｔｅ Ｐｉｐｅｌｉｎｅにしたがって行った（Ｔｒａｐｎｅｌｌら、２０１２年）。簡潔には、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｃａｓａｖａ １．８．２ソフトウェアを、ベースコールに使用した。ＲＮＡ－ｓｅｑ読出しを、初期パラメータを伴うＴＯＰＨＡＴバージョン２．０．１３を使用して、ｈｇ１９ゲノムアセンブリに整合した。転写産物を、Ｃｕｆｆｌｉｎｋｓバージョン２．１．１にアセンブルし、示唆発現した遺伝子を、Ｃｕｆｆｄｉｆｆにより予測した。
【0178】
生存率アッセイ
ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ（ＤＡＬ１１００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）アッセイを、製造会社の説明書にしたがって実施した。細胞を、第０日、第３日、および第６日の培地を交換しながら、９日間それぞれの物質で処置した。対照を、それぞれの濃度の溶媒（ＤＭＳＯ）で処置した。
ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅ（ＤＡＬ１１００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）アッセイを、製造会社の説明書にしたがって実施した。細胞を、第０日、第３日、および第６日の培地を交換しながら、９日間それぞれの物質で処置した。対照を、それぞれの濃度の溶媒（ＤＭＳＯ）で処置した。
【0179】
アラキドン酸の定量化
細胞を、トリプシン処理により採取し、４℃で５分間、１０００ｇで遠心分離し、冷ＰＢＳで３回洗浄した。細胞を、Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＸＲ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）自動細胞計数器を使用して計数し、細胞ペレットを、冷ＰＢＳで再懸濁して、２０００～５０００細胞／μｌで細胞懸濁液を得た。その後、細胞を、Ｂｉｏｒｕｐｔｏｒ（Ｄｉａｇｅｎｏｄｅ）において、３０周期の超音波処理（３０秒のオン、３０秒のオフ）により溶解した。細胞デブリを、４℃で、１５００ｇで１０分間の遠心分離により除去し、上清を、製造会社の説明書にしたがってＥＬＩＳＡアッセイ（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ；ＮＢＰ２－６６３７２）で分析した。
細胞を、トリプシン処理により採取し、４℃で５分間、１０００ｇで遠心分離し、冷ＰＢＳで３回洗浄した。細胞を、Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＸＲ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）自動細胞計数器を使用して計数し、細胞ペレットを、冷ＰＢＳで再懸濁して、２０００～５０００細胞／μｌで細胞懸濁液を得た。その後、細胞を、Ｂｉｏｒｕｐｔｏｒ（Ｄｉａｇｅｎｏｄｅ）において、３０周期の超音波処理（３０秒のオン、３０秒のオフ）により溶解した。細胞デブリを、４℃で、１５００ｇで１０分間の遠心分離により除去し、上清を、製造会社の説明書にしたがってＥＬＩＳＡアッセイ（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ；ＮＢＰ２－６６３７２）で分析した。
【0180】
ＰＬＡ２活性アッセイ
細胞を、トリプシン処理により採取し、４℃で５分間、１０００ｇで遠心分離し、冷ＰＢＳで３回洗浄した。細胞を、Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＸＲ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ
）自動細胞計数器を使用して計数し、細胞ペレットを、冷ＰＢＳで再懸濁して、２０００～５０００細胞／μｌで細胞懸濁液を得た。その後、細胞を、Ｂｉｏｒｕｐｔｏｒ（Ｄｉａｇｅｎｏｄｅ）において、３０周期の超音波処理（３０秒のオン、３０秒のオフ）により溶解した。細胞デブリを、４℃で、１５００ｇで１０分間の遠心分離により除去し、上清を、製造会社の説明書にしたがってＥｎｚＣｈｅｋ（商標）ホスホリパーゼＡ２アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｅ１０２１７）で分析した。
細胞を、トリプシン処理により採取し、４℃で５分間、１０００ｇで遠心分離し、冷ＰＢＳで３回洗浄した。細胞を、Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＸＲ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ
）自動細胞計数器を使用して計数し、細胞ペレットを、冷ＰＢＳで再懸濁して、２０００～５０００細胞／μｌで細胞懸濁液を得た。その後、細胞を、Ｂｉｏｒｕｐｔｏｒ（Ｄｉａｇｅｎｏｄｅ）において、３０周期の超音波処理（３０秒のオン、３０秒のオフ）により溶解した。細胞デブリを、４℃で、１５００ｇで１０分間の遠心分離により除去し、上清を、製造会社の説明書にしたがってＥｎｚＣｈｅｋ（商標）ホスホリパーゼＡ２アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｅ１０２１７）で分析した。
【0181】
実施例１：老化細胞において変化した脂質代謝
実施例１Ａ：老化細胞におけるリゾＰＣの高いレベルの同定
本明細書に記載される通り、老化細胞において変化した脂質代謝を発見し、老化に対する新規のバイオマーカーとして２種類のリゾＰＣを、質量分析を使用して同定した。１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ リゾＰＣ）および１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０ リゾＰＣ）は、誘導因子が、テロメア依存性（複製老化）であるか、または非依存性（ストレスに誘発された早期老化；図１）であるかにかかわらず、いくつかの一次ヒト細胞株において老化の間、上方制御された。
実施例１Ａ：老化細胞におけるリゾＰＣの高いレベルの同定
本明細書に記載される通り、老化細胞において変化した脂質代謝を発見し、老化に対する新規のバイオマーカーとして２種類のリゾＰＣを、質量分析を使用して同定した。１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ リゾＰＣ）および１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１６：０ リゾＰＣ）は、誘導因子が、テロメア依存性（複製老化）であるか、または非依存性（ストレスに誘発された早期老化；図１）であるかにかかわらず、いくつかの一次ヒト細胞株において老化の間、上方制御された。
【0182】
図１は、リゾホスファチジルコリンが、老化細胞で上昇することを示す。図１ａは、初期、中期、および後期の集団倍加（ＰＤ）で、３つの異なるドナーのヒト真皮線維芽細胞（ＨＤＦ）の脂質分析を示す一方、リゾＰＣのレベルを、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）レベルに正規化した。図１ｂは、ＳＩＰＳ処置の４日後、ストレスに誘発された早期老化（ＳＩＰＳ）のＨＤＦの脂質分析を示す。ＳＩＰＳを、慢性酸化ストレス処置（１１日間にわたって９用量のＨ２Ｏ２処置）で誘発した。図１ｃは、ＳＩＰＳ処置の７日後、ストレスに誘発された早期老化（ＳＩＰＳ）のＨＤＦの脂質分析を示す。ＳＩＰＳを、ドキソルビシン（１００ｎＭで７２時間、２つの後処置）で誘発した。ＳＩＰＳ処置に対する対照として、細胞は、通常の成長培地で培養し、処置の間に集密になるまで成長させ、休止状態（Ｑ）に入れた。図１ａでは、有意性を、１方向ＡＮＯＶＡと、続くｐｏｓｔ ｈｏｃ Ｔｕｋｅｙ検定で計算した。図１ｂ、ｃでは、有意性を、両側スチューデントｔ検定で計算した。
【0183】
リゾＰＣは、酸化の過程を通して非酵素的に（Ｃｈｏｉら、２０１１年）、またはＰＬＡ２活性を有するホスホリパーゼによる転換を通して酵素的に（ＳｉｘおよびＤｅｎｎｉｓ、２０００年）のいずれかで、ホスファチジルコリン（ＰＣ）から生成され得る。ＳＩＰＳのＨＤＦ由来のＲＮＡ－ｓｅｑ発現データを対照の休止細胞（ＧＥＯ受託番号：ＧＳＥ９３５３５で得られる生データ）と比較すると、観察された効果に対して可能性のある候補として、細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２Ｇ４Ａ）、細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２γ（ＰＬＡ２Ｇ４Ｃ）、およびグループＸＶホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２Ｇ１５）を同定した（図２）。
【0184】
図２は、ＰＬＡ２活性、およびＰＬＡ２活性に関連するタンパク質のｍＲＮＡ発現レベルが、老化細胞において上昇することを示す。図２ａは、ＰＬＡ２活性を伴うホスホリパーゼ、および分泌型ホスホリパーゼＡ２受容体が、ＳＩＰＳのＨＤＦで上昇することを示す。早期老化を、慢性酸化ストレス処置（１１日間にわたって９用量のＨ２Ｏ２処置）で、ＨＤＦにおいて誘発した。ＳＩＰＳ処置に対する対照として、細胞は、通常の成長培地で培養し、処置の間に集密になるまで成長させ、休止状態（Ｑ）に入れた。ＳＩＰＳ処置の４日後、ＲＮＡサンプルを調製し、ＲＮＡ－ｓｅｑを実施した。発現レベルを、Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ｐｅｒ Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ（ＦＰＫＭ）として表す。ｐ値を、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法を使用して多重比較の偽発見率で補正し、エラーバーは、信頼区間（９５％）を示す。図２ｂは、ＳＩＰＳのＨＤＦおよびＨＬＦにおける高いレベルのＰＬＡ２活性を示す。早期老化を、ＨＤＦおよびＨＬＦにおいて、ドキソルビシン（１００ｎＭで７２時間、２つの後処置）で誘発した。ＳＩＰＳ処置に対する対照として、細胞は、通常の成長培地で培養し、処置の間に集密になるまで成長させ、休止状態（Ｑ）に入れた。
【0185】
実施例１Ｂ：老化細胞におけるアラキドン酸（ＡＡ）の増産
分泌型ホスホリパーゼＡ２受容体（ＰＬＡ２Ｒ１）は、細胞老化を誘発し（Ａｕｇｅｒｔら、２００９年）、本発明者らのデータセットで上方制御されているが（図２）、ＭＡＰＫによるリン酸化を通したＰＬＡ２Ｇ４Ａの活性化により、リゾＰＣの生成およびアラキドン酸（ＡＡ）の同時放出を誘発することが報告されている（Ｆｏｎｔｅｈら、２０００年；Ｐａｎら、２０１５年；Ｓｃｏｔｔら、２００６年）。
分泌型ホスホリパーゼＡ２受容体（ＰＬＡ２Ｒ１）は、細胞老化を誘発し（Ａｕｇｅｒｔら、２００９年）、本発明者らのデータセットで上方制御されているが（図２）、ＭＡＰＫによるリン酸化を通したＰＬＡ２Ｇ４Ａの活性化により、リゾＰＣの生成およびアラキドン酸（ＡＡ）の同時放出を誘発することが報告されている（Ｆｏｎｔｅｈら、２０００年；Ｐａｎら、２０１５年；Ｓｃｏｔｔら、２００６年）。
【0186】
老化におけるリゾＰＣの増加が、老化誘導因子に非依存的に、全ての被検細胞株に頑強であったという事実は、変化した脂質代謝が、老化細胞に特異的な細胞障害性処置の開発の、したがって老化関連の疾患および障害の予防または療法の標的として使用することができることを示す。
【0187】
エイコサノイドの形成の増加は、細胞老化および加齢に関連することが報告されている（Ｃｕｒｒａｉｓら、２０１６年；Ｋａｂｉｒら、２０１６年；Ｌｉら、２０１５年；Ｗａｎｇら、２０１６ｂ年）。本明細書で示す通り、リゾＰＣの生成は、上昇し、リゾＰＣの高い生成は、副産物としてＡＡの高い生成をもたらす（図１および図１６）。次にＡＡは、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼのような酵素により、エイコサノイドへとさらに代謝され得る。細胞内ＡＡの蓄積が、高濃度のＡＡでアポトーシスを誘発することができたことが報告されている（Ｐｅｎｚｏら、２００４年）。
【0188】
最初に本明細書で記載される通り、細胞内レベルのＡＡの蓄積に起因する細胞死は、これらの細胞が、より速いＡＡ形成速度を伴う変化した脂質代謝を有するので、老化細胞において大部分が観察される（図３）。実際に、以下の実施例で驚くべきことに示す通り、新規の老化細胞除去剤は、アラキドン酸代謝における老化細胞特異的変化に基づいて同定され、変化したアラキドン酸代謝は、老化細胞を選択的に除去するのに利用することができた。
【0189】
実施例２：新規の老化細胞除去剤の同定
実施例１Ｂで確立した仮説にしたがって、シクロオキシゲナーゼまたはリポキシゲナーゼの阻害は、細胞障害作用をもたらしたが、これは、一般に、老化細胞においてより重篤であり（図４～１５）、良好な治療ウインドウを得ることかできることを示した。４つの被検細胞種（ＨＤＦ、ＨＬＦ、ＲＰＴＥＣ、およびＨＵＶＥＣ）間にいくつかの差が存在したが、シクロオキシゲナーゼおよび／またはリポキシゲナーゼの阻害は、全ての細胞株における老化細胞の除去をもたらす。老化の異なる誘導因子間および異なるドナー間の差は、ほとんど目立たなかった。これは、先の報告に沿って、他の老化細胞除去戦略による細胞種依存性老化細胞除去効果を示している（Ｆｕｈｒｍａｎｎ－Ｓｔｒｏｉｓｓｎｉｇｇら、２０１７年；Ｓｃｈａｆｅｒら、２０１７年；Ｚｈｕら、２０１７年；Ｚｈｕら、２０１６年；Ｚｈｕら、２０１５年）。
実施例１Ｂで確立した仮説にしたがって、シクロオキシゲナーゼまたはリポキシゲナーゼの阻害は、細胞障害作用をもたらしたが、これは、一般に、老化細胞においてより重篤であり（図４～１５）、良好な治療ウインドウを得ることかできることを示した。４つの被検細胞種（ＨＤＦ、ＨＬＦ、ＲＰＴＥＣ、およびＨＵＶＥＣ）間にいくつかの差が存在したが、シクロオキシゲナーゼおよび／またはリポキシゲナーゼの阻害は、全ての細胞株における老化細胞の除去をもたらす。老化の異なる誘導因子間および異なるドナー間の差は、ほとんど目立たなかった。これは、先の報告に沿って、他の老化細胞除去戦略による細胞種依存性老化細胞除去効果を示している（Ｆｕｈｒｍａｎｎ－Ｓｔｒｏｉｓｓｎｉｇｇら、２０１７年；Ｓｃｈａｆｅｒら、２０１７年；Ｚｈｕら、２０１７年；Ｚｈｕら、２０１６年；Ｚｈｕら、２０１５年）。
【0190】
３つの報告された先行技術の老化細胞除去剤ナビトクラックス（ＡＢＴ２６３；Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、ケルセチン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、およびケルセチンのダサチニブとの組合せ（ＤＱ；Ｃａｙｍａｎ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）は、ＨＤＦにおいて老化細胞除去効果を示さなかった（図４および９）。ＨＵＶＥＣのみで、ナビトクラックスは、老化細胞を選択的に除去することができたが、ケルセチンはできなか
った（図５）。
った（図５）。
【0191】
実施例２Ａ：ヒト真皮線維芽細胞における新規の老化細胞除去剤の同定
最初に、ＣＯＸまたはＡＬＯＸ阻害剤のいずれか単独での老化細胞除去効果を評価した。図４は、ヒト線維芽細胞のみで、ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、およびＣＯＸ阻害剤アセチルサリチル酸（ＡＳＡ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の著しい老化細胞除去効果を示す。これら２つの薬物はまた、先行技術の老化細胞除去剤ケルセチンおよびナビトクラックスと比較した。
最初に、ＣＯＸまたはＡＬＯＸ阻害剤のいずれか単独での老化細胞除去効果を評価した。図４は、ヒト線維芽細胞のみで、ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、およびＣＯＸ阻害剤アセチルサリチル酸（ＡＳＡ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の著しい老化細胞除去効果を示す。これら２つの薬物はまた、先行技術の老化細胞除去剤ケルセチンおよびナビトクラックスと比較した。
【0192】
早期老化を、慢性酸化ストレス処置（１１日間にわたって９用量のＨ２Ｏ２処置）で、ＨＤＦにおいて誘発した。休止細胞を、対照として使用した。老化細胞除去物質での処置は、ＳＩＰＳ処置の完了の１１日後に開始して、完全に確立した老化表現型の確立を可能にした。成長培地を、３日毎に培地を交換しながら、９日間老化細胞除去物質で補充した。対照を含む、全てのサンプルは、同濃度の溶媒（ＤＭＳＯ）を含有した。その後、生存率を、ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して評価した。
【0193】
実際に、ＭＫ８８６およびＣＯＸ阻害剤ＡＳＡは、休止細胞と比較して、先行技術の老化細胞除去剤ケルセチンおよびナビトクラックスより大きな程度まで、老化細胞の生存率を低減した。
【0194】
実施例２Ｂ：ＨＵＶＥＣにおける新規の老化細胞除去剤の同定
ＣＯＸまたはＡＬＯＸ阻害剤のいずれか、ならびにデュアル阻害剤の老化細胞除去効果を、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）で評価した。図５は、先行技術の老化細胞除去剤ケルセチンおよびナビトクラックスと比較して、ＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡおよびデュアルＣＯＸ／ＬＯＸ阻害剤リコフェロンの効果を示す。
ＣＯＸまたはＡＬＯＸ阻害剤のいずれか、ならびにデュアル阻害剤の老化細胞除去効果を、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）で評価した。図５は、先行技術の老化細胞除去剤ケルセチンおよびナビトクラックスと比較して、ＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡおよびデュアルＣＯＸ／ＬＯＸ阻害剤リコフェロンの効果を示す。
【0195】
早期老化を、６日間成長培地に補充したドキソルビシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）によりＨＵＶＥＣにおいて誘発した。老化細胞除去物質での処置は、ＳＩＰＳ処置の完了の８日後に開始して、細胞が老化に入ることを可能にした。休止細胞を、対照として使用した。成長培地を、３日毎に培地を交換しながら、９日間老化細胞除去物質で補充した。対照を含む、全てのサンプルは、同濃度の溶媒（ＤＭＳＯ）を含有した。その後、生存率を、ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して評価した（図５）。
【0196】
ＨＵＶＥＣは、ＨＤＦより、シクロオキシゲナーゼ単独の阻害に対して感受性があった。予期される通り、先の報告（Ｚｈｕら、２０１６年）に沿って、ナビトクラックスは、ＨＵＶＥＣに対してかなりの老化細胞除去活性を示さなかった。加えて、デュアルＣＯＸ／ＬＯＸ阻害剤リコフェロンはまた、ＨＵＶＥＣにおいて著しい老化細胞除去効果を示した。
【0197】
これは、異なる細胞種が、老化細胞除去化合物と別々に反応するという最近の知見を確認し、胚性および新生児の起源由来の細胞が、一般に老化細胞除去剤に対してより感受性がある可能性があったことを示す（Ｈｗａｎｇら、２０１８年；Ｓｃｈａｆｅｒら、２０１７年）。驚くべきことに、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ阻害剤を使用した、ＡＡを代謝する酵素の阻害は、両方の細胞種、ＨＤＦおよびＨＵＶＥＣにおいて老化細胞除去的であったし、重要なことに、これらは、今まで成人ヒト真皮線維芽細胞に対して報告された、唯一の効果的な老化細胞除去化合物である。
【0198】
実施例３：ＨＤＦにおけるシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害
観察された老化細胞除去効果を高めるために、併用処置を使用するシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの両方の阻害を試験し、実際にそれらは相乗効果を示した。ＭＫ８８６と共にアセチルサリチル酸（ＡＳＡ）またはジクロフェナク（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の組合せを有するシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの共阻害は、成人ＨＤＦならびに包皮ＨＤＦで強力な老化細胞除去効果を生じた（図６～９）。これらの結果は、初めて、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの共阻害が、効果的に、老化細胞を除去／破壊することを示す。
観察された老化細胞除去効果を高めるために、併用処置を使用するシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの両方の阻害を試験し、実際にそれらは相乗効果を示した。ＭＫ８８６と共にアセチルサリチル酸（ＡＳＡ）またはジクロフェナク（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の組合せを有するシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの共阻害は、成人ＨＤＦならびに包皮ＨＤＦで強力な老化細胞除去効果を生じた（図６～９）。これらの結果は、初めて、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの共阻害が、効果的に、老化細胞を除去／破壊することを示す。
【0199】
これは、ＣＯＸ２およびＡＬＯＸ５の阻害剤での併用処置が老化細胞の細胞数の上昇をもたらしたＷＯ２０１９０７０４０７Ａ１の知見と矛盾する。この上昇は、本明細書で示すように、老化細胞の標的化された除去の研究で実施された実験で観察されたことはなかったし、実際、ＷＯ２０１９０７０４０７Ａ１で使用される細胞の増殖によって説明される。これは、ＷＯ２０１９０７０４０７Ａ１に記載の実験で使用された細胞が、いまだに細胞老化に関連する不可逆な成長停止を確立する過程にあったことを強く示し、ＷＯ２０１９０７０４０７Ａ１で示される他の結果に沿っている。ゆえに、老化前の細胞を、ＣＯＸ２およびＡＬＯＸ５の阻害剤で処置することにより、細胞は、成長停止を回避し、増殖を開始した。結果として、ＳＡＳＰ因子の分泌は、低減された。
【0200】
早期老化を、ドキソルビシンを有する成人および包皮ＨＤＦにおいて誘発し、６日間成長培地に補充した。老化細胞除去物質での処置は、ＳＩＰＳ処置の完了の８日後に開始して、細胞が老化に入ることを可能にした。休止細胞を、対照として使用した。成長培地を、３日毎に培地を交換しながら、９日間老化細胞除去物質で補充した。対照を含む、全てのサンプルは、同濃度の溶媒（ＤＭＳＯ）を含有した。その後、生存率を、ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して評価した。
【0201】
図６は、高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、５０μＭのジクロフェナク、または２μＭのセレコキシブのいずれかを使用するデュアル阻害と比較して、ＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６、およびＣＯＸ－１／２阻害剤ＡＳＡ、およびジクロフェナク、またはＣＯＸ－２特異的阻害剤セレコキシブ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用する、細胞株ＨＤＦ１６１の成人ヒト真皮線維芽細胞での単一処置の効果を示す。セレコキシブによるＣＯＸ－２単独の阻害は、いかなる老化細胞除去効果を示さず、単一のＡＡ代謝酵素の阻害が、老化細胞での細胞生存率を低下させるのに十分ではないことを示した。単一処置としてのＭＫ８８６のＥＣ５０は、老化細胞に対して２６．４μＭだった一方、ＡＳＡ、ジクロフェナク、またはセレコキシブと組み合わせて、ＥＣ５０は、それぞれ１８．８μＭ、９μＭ、および１７μＭに低下した。より重要なことに、老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化は、それぞれ１．５８から１．９５、２．５３、および２．５５に増加した。これは、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ単独の阻害と比較して、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果を示す。
【0202】
図７は、高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、または５０、１００、もしくは２００μＭのジクロフェナクを使用するデュアル阻害と比較して、ＣＯＸ阻害剤ジクロフェナクおよびＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６特異的阻害剤を使用する、細胞株ＨＤＦ１６４の成人ヒト真皮線維芽細胞での単一処置の効果を示す。単一処置としてのＭＫ８８６のＥＣ５０は、老化細胞に対して３４．７μＭであり、それぞれ３０．４μＭ、１７．３μＭ、１１．２μＭ、および８．３９μＭに低下した。加えて、老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化は、それぞれ１．３１から１．４６、１．６１、１．８８、および１．６４に増加し、異なるドナー由来の細胞株において、図７の結果を確認した。
【0203】
図８は、高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、または５０μＭのジ
クロフェナクを使用するデュアル阻害と比較して、ＣＯＸ阻害剤ＡＳＡ、およびジクロフェナク、ならびにＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６を使用する、細胞株ｆＨＤＦ１６６の包皮ヒト真皮線維芽細胞での単一処置の効果を示す。単一処置としてのＭＫ８８６のＥＣ５０は、老化細胞に対して３４μＭであり、それぞれ２９．６μＭ、および１２．４μＭに低下した。上で概説する通り、成人ヒト真皮線維芽細胞で得られる結果に沿って、老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化は、それぞれ１．４９から１．５１および２．５２に増加した。再び、これは、包皮由来ＨＤＦにおいても、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ単独の阻害と比較して、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果を示す。
クロフェナクを使用するデュアル阻害と比較して、ＣＯＸ阻害剤ＡＳＡ、およびジクロフェナク、ならびにＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６を使用する、細胞株ｆＨＤＦ１６６の包皮ヒト真皮線維芽細胞での単一処置の効果を示す。単一処置としてのＭＫ８８６のＥＣ５０は、老化細胞に対して３４μＭであり、それぞれ２９．６μＭ、および１２．４μＭに低下した。上で概説する通り、成人ヒト真皮線維芽細胞で得られる結果に沿って、老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化は、それぞれ１．４９から１．５１および２．５２に増加した。再び、これは、包皮由来ＨＤＦにおいても、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ単独の阻害と比較して、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼの併用阻害の相乗効果を示す。
【0204】
図９は、高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．４ｍＭのＡＳＡ、または５０μＭのジクロフェナクを使用するデュアル阻害と比較して、ＣＯＸ阻害剤ＡＳＡ、およびジクロフェナク、およびＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６を使用する、成人ヒト真皮線維芽細胞（ＨＤＦ７６、ＨＤＦ１６１、ＨＤＦ１６４）の３つの細胞株での単一処置の効果を示す。加えて、２つの先行技術の老化細胞除去剤ナビトクラックス、および１５μＭのケルセチンの高濃度のダサチニブとの組合せを試験した。３つの異なるＨＤＦドナーのデータを組み合わせた場合、老化細胞のＥＣ５０値は、ＭＫ８８６、ＡＳＡ、およびジクロフェナク、ならびにナビトクラックスおよびＤＱでの単一処置により、著しく低下した。しかし、ＭＫ８８６をシクロオキシゲナーゼ阻害剤と組み合わせた場合、ＥＣ５０値は、対照の休止細胞と比較した場合に老化細胞で著しく低下し、図６および７の結果を確認した。
【0205】
実施例４：トリアクシンＣ（ＴｒＣ）、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤により再利用されるＡＡの阻害
エイコサノイド合成の他に、細胞のアポトーシスを促進する遊離ＡＡのレベルを調節する最も効果的な方法は、ランズ回路を介するリン脂質への再組込みである（ＭｕｒｐｈｙおよびＦｏｌｃｏ、２０１９年）。
エイコサノイド合成の他に、細胞のアポトーシスを促進する遊離ＡＡのレベルを調節する最も効果的な方法は、ランズ回路を介するリン脂質への再組込みである（ＭｕｒｐｈｙおよびＦｏｌｃｏ、２０１９年）。
【0206】
実際に、ランズ回路の重要な酵素は、老化細胞において著しく上昇した（図１０）。長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）および長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ１（ＡＣＳＬ１）は、ＡＣＳＬ４およびＡＣＳＬ１は、アシル－ＣｏＡシンテターゼファミリーの２つのメンバーであり、遊離脂肪酸のＣｏＡでの活性化に必要であり、ランズ回路での再組込みおよび分解の過程に対する前駆体であるアシル－ＣｏＡを生成する。加えて、リゾリン脂質アシルトランスフェラーゼ７（ＭＢＯＡＴ７）は、ＡＡ－ＣｏＡのホスファチジルイノシトールへの再組込みに関与する酵素であり、老化細胞内で上昇したことが見出された。これは、老化細胞が、ランズ回路の迅速な再利用の過程を通して、遊離ＡＡのレベルを調節することを強く示唆する。
【0207】
ゆえに、ランズ回路の重要な酵素の阻害は、老化細胞の、それ自身を、アポトーシスを促進する細胞内ＡＡの形成の増加から保護する能力を低下させるはずであり、それにより、このような阻害剤の老化細胞除去効果をもたらす。
【0208】
図１１は、高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．５μＭのＴｒＣ、または５０μＭのジクロフェナクを使用するデュアル阻害と比較して、ＡＣＳＬ４阻害剤トリアクシンＣ（ＴｒＣ）を使用する、成人ヒト真皮線維芽細胞（ＨＤＦ７６、ＨＤＦ１６１、ＨＤＦ１６４）の３つの細胞株での単一処置の効果を示す。ＡＣＳＬ４の単独阻害、ならびにＡＣＳＬ４およびＡＬＯＸ５のデュアル阻害は、著しい老化細胞除去効果を誘発するのに既に十分だった一方、ＭＫ８８６単独の効果は、著しくなかった（図９）。ＡＣＳＬ４、ＡＬＯＸ５、およびＣＯＸ１／２の併用阻害は、ＥＣ５０値をさらにより低減した。
【0209】
図１２は、高濃度のＴｒＣと組み合わせた１μＭのＭＫ８８６、または５０μＭのジク
ロフェナクを使用するデュアル阻害と比較して、ＡＣＳＬ４阻害剤ＴｒＣを使用する、細胞株ＨＬＦ１０２のヒト肺線維芽細胞（ＨＬＦ）での単一処置の効果を示す。再び、ＡＣＳＬ４の単独阻害は、老化細胞および休止細胞間でＥＣ５０倍数変化が９．１９である、強力な老化細胞除去効果を誘発するのに十分だった。ＡＬＯＸ５およびＣＯＸ１／２の阻害を組み合わせた場合、ＥＣ５０倍数変化は、１３．７５にさらに上昇し、真皮線維芽細胞での実験からの結果を確認することができた。
ロフェナクを使用するデュアル阻害と比較して、ＡＣＳＬ４阻害剤ＴｒＣを使用する、細胞株ＨＬＦ１０２のヒト肺線維芽細胞（ＨＬＦ）での単一処置の効果を示す。再び、ＡＣＳＬ４の単独阻害は、老化細胞および休止細胞間でＥＣ５０倍数変化が９．１９である、強力な老化細胞除去効果を誘発するのに十分だった。ＡＬＯＸ５およびＣＯＸ１／２の阻害を組み合わせた場合、ＥＣ５０倍数変化は、１３．７５にさらに上昇し、真皮線維芽細胞での実験からの結果を確認することができた。
【0210】
図１３は、高濃度のＭＫ８８６と組み合わせた０．１μＭのＴｒＣ、または２５μＭのジクロフェナクを使用するデュアル阻害と比較して、ＡＣＳＬ４阻害剤ＴｒＣ、ＣＯＸ阻害剤ジクロフェナク、ならびにＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６を使用する、細胞株ＲＰＴＥＣ１のヒト腎近位上皮細胞（ＲＰＴＥＣ）での単一処置の効果を示す。再び、ＡＣＳＬ４の単独阻害は、老化細胞および休止細胞間でＥＣ５０倍数変化が約３５０である、強力な老化細胞除去効果を誘発するのに十分だった。ＣＯＸ１／２およびＡＬＯＸ５の単独阻害は、それぞれ３．０２および２．６６のＥＣ５０倍数変化をもたらし、これはＡＬＯＸ５およびＣＯＸ１／２の併用阻害により５．１１にさらに上昇させることができた。ＡＣＳＬ４、ＡＬＯＸ５、およびＣＯＸ１／２の阻害は、約７００のＥＣ５０倍数変化をもたらした。これらの結果は、遊離細胞内ＡＡ転換の阻害により、老化細胞を選択的に除去する本手法の実効性および効力を明白に示す。
【0211】
実施例５：シクロオキシゲナーゼ／リポキシゲナーゼ阻害のＡＴＰ減少との組合せ
ＡＴＰシンターゼ、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ、またはグリコリシスの阻害によるＡＴＰレベルの低下は、心臓ミトコンドリアでのＡＡに誘発されたミトコンドリア膜透過性を高め、ＡＡに誘発されたアポトーシスが、ＡＴＰレベルを低減することによりさらに増強され得ることを示す。
ＡＴＰシンターゼ、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ、またはグリコリシスの阻害によるＡＴＰレベルの低下は、心臓ミトコンドリアでのＡＡに誘発されたミトコンドリア膜透過性を高め、ＡＡに誘発されたアポトーシスが、ＡＴＰレベルを低減することによりさらに増強され得ることを示す。
【0212】
早期老化を、ドキソルビシンを有する成人ＨＤＦにおいて誘発し、６日間成長培地に補充した。老化細胞除去物質での処置は、ＳＩＰＳ処置の完了の８日後に開始して、細胞が老化に入ることを可能にした。休止細胞を、対照として使用した。成長培地を、３日毎に培地を交換しながら、９日間老化細胞除去物質で補充した。対照を含む、全てのサンプルは、同濃度の溶媒（ＤＭＳＯ）を含有した。その後、生存率を、ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して評価した。
【0213】
実際に、ＡＴＰシンターゼの阻害剤である、５μＭのオリゴマイシンＡ（ＯｍＡ；Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）の０．４ｍＭのＡＳＡおよびＭＫ８８６の併用処置への添加は、老化細胞に対するＥＣ５０を３０．４μＭから９．９μＭへと低減することにより老化細胞除去効果をさらに高め、老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化を１．４６から４．５１へと高めた（図１４）。これは、老化細胞でのＡＡに誘発されたアポトーシスが、ＡＴＰ感受性であり、ＡＴＰ減少によりさらに増強され得ることを示す。
【0214】
実施例６：シクロオキシゲナーゼ／リポキシゲナーゼ阻害のカルシニューリン－ＮＦＡＴ経路の阻害との組合せ
ＡＡを代謝している酵素の発現レベルを低減することも、老化細胞除去効果を有することが予期され、ＣＯＸ／ＡＬＯＸ酵素活性の阻害と共に老化細胞除去の併用処置として使用し、老化細胞においてさらにアポトーシス圧を高めることができる。本発明者らのＲＮＡ－ｓｅｑデータセットの経路解析（Ｌａｍｍｅｒｍａｎｎら、２０１８年）は、カルシニューリン－ＮＦＡＴ経路が、休止細胞と比較して、ＳＩＰＳのＨＤＦでより上方制御されることを示す。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は、カルシニューリン－ＮＦＡＴ経路の強力な阻害剤であり、ＣＯＸ－２発現も下方制御することが以前に示された（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚら、２００１年；Ｌｏｔｚｅｒら、２００７年；ＹｉｕおよびＴｏｋｅｒ、２００６年）。
ＡＡを代謝している酵素の発現レベルを低減することも、老化細胞除去効果を有することが予期され、ＣＯＸ／ＡＬＯＸ酵素活性の阻害と共に老化細胞除去の併用処置として使用し、老化細胞においてさらにアポトーシス圧を高めることができる。本発明者らのＲＮＡ－ｓｅｑデータセットの経路解析（Ｌａｍｍｅｒｍａｎｎら、２０１８年）は、カルシニューリン－ＮＦＡＴ経路が、休止細胞と比較して、ＳＩＰＳのＨＤＦでより上方制御されることを示す。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は、カルシニューリン－ＮＦＡＴ経路の強力な阻害剤であり、ＣＯＸ－２発現も下方制御することが以前に示された（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚら、２００１年；Ｌｏｔｚｅｒら、２００７年；ＹｉｕおよびＴｏｋｅｒ、２００６年）。
【0215】
これを試験するために、早期老化を、ドキソルビシンを有する包皮ＨＤＦにおいて誘発し、６日間成長培地に補充した。老化細胞除去物質での処置は、ＳＩＰＳ処置の完了の８日後に開始して、細胞が老化に入ることを可能にした。休止細胞を、対照として使用した。成長培地を、３日毎に培地を交換しながら、９日間老化細胞除去物質で補充した。対照を含む、全てのサンプルは、同濃度の溶媒（ＤＭＳＯ）を含有した。その後、生存率を、ａｌａｍａｒ ｂｌｕｅアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して評価した。
【0216】
興味深いことに、２μＭのＣｓＡ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の０．４ｍＭのＡＳＡおよびＭＫ８８６の併用処置への添加は、老化細胞に対するＥＣ５０を２９．６μＭから１４．９μＭへと低減し、老化細胞対休止細胞のＥＣ５０間の倍数変化を１．５１から２．８１へと高めた（図１５および１６）。
【0217】
したがって、それらをまとめると、脂質代謝を標的とする方法および組成物は、老化細胞を除去し、老化関連の疾患および障害を処置する有望な方式を示す。本結果は、ＡＡを利用する酵素の阻害が、成人ＨＤＦおよび包皮ＨＤＦ、ならびに新生児ＨＵＶＥＣにおける老化細胞除去効果をもたらすことを示す。２つの報告された老化細胞除去剤ケルセチンおよびナビトクラックスは、ドキソルビシンに誘発された老化ＨＵＶＥＣにおけるナビトクラックスを除いて、かなりの老化細胞除去活性を示さなかった。ナビトクラックスと対照的に、シクロオキシゲナーゼおよび／またはリポキシゲナーゼの阻害に対して報告された重篤な副作用はない。加えて、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼのデュアル阻害は、老化関連の疾患および障害を処置および予防する能力を独自にもたらす、成人起源の老化ＨＤＦでの相乗効果を示した。
【0218】
本明細書で示す通り、シクロオキシゲナーゼおよび／またはリポキシゲナーゼの阻害の老化細胞除去効果は、加えて、ＡＴＰシンターゼおよびカルシニューリンの同時阻害により増強することができた。ＡＡを利用するか、またはＡＡレベルを操作する酵素および経路、例えば、シトクロムＰ４５０、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ、または脂肪酸エロンガーゼをさらに阻害することは、シクロオキシゲナーゼおよび／またはリポキシゲナーゼ阻害剤の老化細胞除去効果をさらに高める。
【0219】
実施例７：ＡＡの定量分析
本明細書に記載される通り、老化細胞除去効果は、ＡＡの細胞内レベルをある特定の閾値超に上昇させることによって、細胞死を誘発することに起因する。これは、代謝経路を利用するＡＡを阻害する前後に、休止細胞および老化細胞の細胞内ＡＡレベルを測定することにより確認することができる。これは、同じ条件下で休止細胞では達しない、老化細胞の細胞内ＡＡレベルを限界閾値超に上昇させることが予期される。細胞内ＡＡレベルは、ＥＬＩＳＡ、質量分析、またはＨＰＬＣのような定量分析法を使用して定量化することができる。
本明細書に記載される通り、老化細胞除去効果は、ＡＡの細胞内レベルをある特定の閾値超に上昇させることによって、細胞死を誘発することに起因する。これは、代謝経路を利用するＡＡを阻害する前後に、休止細胞および老化細胞の細胞内ＡＡレベルを測定することにより確認することができる。これは、同じ条件下で休止細胞では達しない、老化細胞の細胞内ＡＡレベルを限界閾値超に上昇させることが予期される。細胞内ＡＡレベルは、ＥＬＩＳＡ、質量分析、またはＨＰＬＣのような定量分析法を使用して定量化することができる。
【0220】
新規の老化細胞除去剤を、ＡＡの細胞内レベルを測定する効果的なスクリーニングで同定することができるかどうかを確認するために、ＥＬＩＳＡ試験（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ；ＮＢＰ２－６６３７２）を、製造会社の説明書にしたがって使用して、最初に、上記の実施例で同定された新規の老化細胞除去剤が、実際に、細胞内ＡＡの蓄積をもたらし、次に、化合物をスクリーニングし、老化ＨＤＦにおいてＡＡの細胞内レベルの増加を起こすことを確認した。
【0221】
予期される通り、ＡＡの細胞内濃度は、対照の休止細胞と比較して、老化細胞でより高
く、ＣＯＸ－１／２阻害剤ジクロフェナクおよびＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６で６時間エイコサノイドの生成を遮断することにより、細胞内ＡＡレベルを上昇させることができた（図１７）。
く、ＣＯＸ－１／２阻害剤ジクロフェナクおよびＡＬＯＸ－５阻害剤ＭＫ８８６で６時間エイコサノイドの生成を遮断することにより、細胞内ＡＡレベルを上昇させることができた（図１７）。
【0222】
次いで、ＥＬＩＳＡスクリーニングで同定される化合物の老化細胞除去効果を、ＣＯＸおよびＡＬＯＸ阻害剤に対して上述される成人および包皮ＨＤＦにおける用量応答アッセイを使用して試験する。このような化合物はまた、ＡＡ代謝を標的とする老化細胞除去薬として使用される。
【0223】
実施例８：ｃＰＬＡ２－活性を操作することによる老化細胞除去効果の救済
ＡＡ変換酵素に対する阻害剤の老化細胞除去効果が、老化細胞の上昇したＰＬＡ２－活性に基づくので、休止細胞におけるＰＬＡ２－活性の上昇、または老化細胞におけるＰＬＡ２－活性の低下のいずれかは、ＡＡ変換酵素の阻害により誘発された細胞死に対する感受性の差をなくすはずである。
ＡＡ変換酵素に対する阻害剤の老化細胞除去効果が、老化細胞の上昇したＰＬＡ２－活性に基づくので、休止細胞におけるＰＬＡ２－活性の上昇、または老化細胞におけるＰＬＡ２－活性の低下のいずれかは、ＡＡ変換酵素の阻害により誘発された細胞死に対する感受性の差をなくすはずである。
【0224】
ドキソルビシンに誘発された早期老化ＨＤＦ７６、ＨＤＦ８５、ＨＤＦ１６１（ＳＩＰＳ）、および対照の休止細胞（Ｑ）は、１μＭのＡＣＳＬ４阻害剤トリアクシンＣ（ＴｒＣ）および１μＭのＡＬＯＸ５阻害剤ＭＫ８８６単独の組合せ、または２．５μＭのＡ２３１８７（ｃＰＬＡ２活性剤）もしくは１２．５μＭのＡＳＢ１４７８０（ｃＰＬＡ２阻害剤）のいずれかを添加してのいずれかで７２時間処置した。ＡＬＯＸ５単独と組み合わせたＡＣＳＬ４阻害は、図１１に示す通り、ＨＤＦにおいて著しい老化細胞除去効果を示した。
【0225】
本明細書で表すモデルに沿って、図１８は、既に図１１で観察された通り、１μＭのＴｒｃ（ＡＣＳＬ４阻害剤）および１μＭのＭＫ８８６（ＡＬＯＸ５阻害剤）での併用処置の後、ＨＤＦにおける老化細胞除去効果を示す。老化細胞除去処置を、細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２の公知の活性剤である２．５μＭのＡ２３１８７（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｃａｙ１１０１６－１）と組み合わせた場合、老化細胞ならびに休止細胞の両方の生存率は低下し、同様のレベルに達し、したがって処置の老化細胞除去効果が消失した。これはまた、細胞質ゾルのホスホリパーゼＡ２の酵素活性を、小分子阻害剤ＡＳＢ１４７８０（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＳＭＬ１９１３）により低下させた場合もそうなった。１２．５μＭのＡＳＢ１４７８０での処置は、老化細胞でのＴｒＣおよびＭＫ８８６の細胞障害作用を低下させた一方、休止細胞の生存率は、わずかな程度でしか影響を及ぼさなかった。これは、老化細胞の高いＰＬＡ２－活性が、ＡＡ変換酵素に対する阻害剤の観察された老化細胞除去効果に関与することを示す。
【0226】
参照文献
【0227】
【表1-1】
【0228】
【表1-2】
【0229】
【表1-3】
【0230】
【表1-4】
【0231】
【表1-5】
【0232】
【表1-6】
【0233】
【表1-7】
【0234】
【表1-8】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6-1】
【図6-2】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【手続補正書】
【提出日】2023-11-17
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、およびＡＣＳＢＧ２からなる群より選択される、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害する１つ以上の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
【請求項2】
長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、およびＡＣＳＢＧ２からなる群より選択される、アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害する１つ以上の阻害剤；およびＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、またはリポキシゲナーゼのうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
老化細胞が、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの高い細胞内レベルで特徴付けられる、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項4】
リゾホスファチジルコリンが、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＳＰＣ）、または１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＰＰＣ）である、請求項３に記載の組成物。
【請求項5】
１つ以上の阻害剤が、アセチルサリチル酸、ジクロフェナク、セレコキシブ、シクロスポリンＡ、イブプロフェン、アセトアミノフェン、インドメタシン、ナブメトン、ケトロラック、テノキシカム、トルメチン、ピロキシカム、フェノプロフェン、エトドラク、ナプロキセン、ジフルニサル、スプロフェン、ブロムフェナク、ケトプロフェン、ジホモ－γ－リノレン酸、イコサペント、フルルビプロフェン、メフェナム酸、サルサレート、スリンダク、サリチル酸、ルミラコキシブ、Ｏ－アセチル－Ｌ－セリン、フェナセチン、フルルビプロフェンメチルエステル、メタミゾール、ニトロアスピリン、メロキシカム、フルフェナム酸、オキサプロジン、チアプロフェン酸、サリチル酸マグネシウム、ジエチルカルバマジン、ロルノキシカム、カルプロフェン、フェニルブダゾン、ネパフェナク、アンチピリン、アントラフェニン、トリサリチル酸コリンマグネシウム、トリフルサール、ニフルム酸、デキシブプロフェン、アセクロフェナック、アセメタシン、ドロキシカム、ロキソプロフェン、トルフェナム酸、デキスケトプロフェン、トロメタモール、タルニフルメート、プロパセタモール、サリチル酸トロラミン、サリチル酸フェニル、ブフェキサマク、サリチル酸グリコール、サリチル酸メンチル、レナリドマイド、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、シミコキシブ、クロルフェネシン、クロドロン酸、セリシクリブ、ドロスピレノン、トリアムシノロン、ポマリドミド、パレコキシブ、フィロコキシブ、アクロフェナク、アダパレン、サリドマイド、エトリコキシブ、ロベナコキシブ、アサルアルデヒド、ザルトプロフェン、デラコキシブ、プラノプロフェン、アンフェナクナトリウム一水和物、アンピロキシカム、ＮＳ－３９８、次サリチル酸ビスマス、ジクロフェナクジエチルアミン、トロメタモール、ルテカルピン、サリシン、フェンブフェン、キサントフモール、フルニキシンメグルミン、およびニメスリドからなる群から選択されるＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２阻害剤である、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項6】
１つ以上の阻害剤が、ＭＫ８８６、ジロイトン、マソプロコール、ジエチルカルバマジン、アゼラスチン、ベノキサプロフェン、ノルジヒドログアイアレチン酸、アビエチン酸、エスクレチン、モンテルカスト、ミノサイクリン、ＭＬＮ－９７７、レイン、ジアセレイン、ナビキシモルス、ホスタマチニブ、ＡＭ１０３、ＤＧ０３１、フィボフラポン、ＡＡ－８６１、およびアトレロイトンからなる群から選択されるリポキシゲナーゼおよび／またはＦＬＡＰ（ＡＬＯＸ５ＡＰ）阻害剤である、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項7】
１つ以上の阻害剤が、好ましくは、リコフェロン、ダルブフェロン、ＣＩ－９８７、Ｓ－２４７４、ＫＭＥ－４、ケブラジン酸、バルサラジド、メサラジン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、メクロフェナム酸、モルニフルマートジアリールピラゾール誘導体、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体、Ｎ－置換５－アミノサリシリシラミド、フラボコキシド、インドリジン誘導体、ＬＱＦＭ－０９１、ヒペルホリン、セラストロール、ＢＷ７５５Ｃ、テポキサリン、ｂ－ボスウェリン酸、Ｄ－００２、２，３－ジアリールキサントン、フェニドン、およびＥＲ－３４１２２からなる群から選択されるデュアルシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ阻害剤である、請求項１～６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項8】
アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤が、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、５－ブロモ－５’－フェニルスピロ［３Ｈ－１，３，４－チアジアゾール－２，３’－インドリン］－２－オン、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６、ＣＢ１６、ＮＣＩ－３、および２－（６－ヒドロキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）－１，３－チアゾール－４（５Ｈ）－オンからなる群から選択される阻害剤である、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項9】
アラキドン酸の細胞内の転換を阻害することが可能な追加の化合物を含み、前記追加の化合物が、
ａ）好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、ケンフェロールからなる群から選択される天然化合物；
ｂ）好ましくは、スルファフェナゾール、アバシミブ、ベンズブロマロン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、セルビスタチン、ワルファリン、ピオグリタゾン、ラパチニブ、トリメトプリム、ザフィルルカスト、アモジアキン、ニカルジピン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロラタジン、エチニルエストラジオール、イルベサルタン、キニーネ、ソラフェニブ、エルトロンボパグ、ロサルタン、リコフェロン、アミトリプチリン、アトルバスタチン、メフェナム酸、メロキシカム、ピロキシカム、エルロチニブ、パゾパニブ、ジエチルスチルベストロール、エンザルタミド、ポナチニブ、ダブラフェニブ、エナシデニブ、ロバスタチン、モンテルカスト、ケトコナゾール、フェロジピン、カンデサルタンシレキセチル、クロトリマゾール、モメタゾン、サルメテロール、ラロキシフェン、フェノフィブラート、レボチロキシン、タモキシフェン、オキシブチニン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ニフェジピン、リオトリックス、アムロジピン、ベザフィブラート、クロラムフェニコール、シクロスポリン、シメチジン、クロピドグレル、コレカルシフェロール、デラビルジン、デキストロプロポキシフェン、エトポシド、イソニアジド、ケトプロフェン、メトロニダゾール、ニルタミド、ニルバジピン、パロキセチン、フェネルジン、プラバスタチン、プロパフェノン、ピリメタミン、ロフェコキシブ、ルチン、サキナビル、スルファメトキサゾール、スルフィンピラゾン、テガセロド、テルフェナジン、チオリ
ダジン、チクロピジン、チオコナゾール、トリアゾラム、トロレアンドマイシン、バルプロ酸、アビラテロン、ビスモデギブ、レゴラフェニブ、トラメチニブ、イデラリシブ、ロピナビル、セレコキシブ、エファビレンツ、ラベプラゾール、テリフルノミド、クリサボロール、ベリノスタット、トピロキソスタット、カンデサルタン、レテルモビル、ルカパリブ、オピカポン、ナビロン、フルボキサミン、フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ボスチニブ、カボザンチニブ、ゲニステイン、レンバチニブ、アタザナビル、ベキサロテン、デフェラシロクス、キニジン、ミフェプリストン、ベムラフェニブ、シルデナフィル、ジクロフェナク、フルオキセチン、バルデコキシブ、ボリコナゾール、エトドラク、セルトラリン、グリブリド、アセノクマロール、ロスバスタチン、イマチニブ、クロザピン、ジアゼパム、プロゲステロン、オメプラゾール、バルサルタン、ボルテゾミブ、ネビラピン、アゼラスチン、ロルノキシカム、フェニルブダゾン、エトラビリン、レフルノミド、シタキセンタン、アミノフェナゾン、ベラパミル、エトリコキシブ、プロポフォール、スルファモキソール、ジクマロール、ジルチアゼム、ヒスタミン、モクロベミド、セレギリン、パレコキシブ、ドコネキセント、アセチルスルフィソキサゾール、フルコナゾール、パントプラゾール、デスロラタジン、ミコナゾール、アミオダロン、ゲムフィブロジル、プロベネシド、テニポシド、スルファジアジン、カペシタビン、フルオロウラシル、トラニルシプロミン、アナストロゾール、アトバコン、シクリジン、デクスフェンフルラミン、ジスルフィラム、エピネフリン、エプロサルタン、フレカイニド、インジナビル、メタゾラミド、ネルフィナビル、オランザピン、プランルカスト、プロメタジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファピリジン、メチマゾール、トルカポン、ビカルタミド、アルモダフィニル、アゴメラチン、ノスカピン、クレビジピン、スルコナゾール、ゲフィチニブ、チカグレロル、セリチニブ、フロクスウリジン、リフィテグラスト、レイン、ジアセレイン、ズカプサイシン、スチリペントール、ロベグリタゾン、ドスレピン、マニジピン、ブラックコホシュ、クルクミン、フェルバメート、ピペリン、サフィナミド、イプロニアジド、オリタバンシン、マソルポコール、およびペグビソマントからなる群から選択される、シトクロムＰ４５０の阻害剤；
ｃ）好ましくは、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤；
ｄ）好ましくは、Ｎ－フェニルマレイミド誘導体、ＴＳＩ－０１、およびチメロサールからなる群から選択される、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、具体的には、ＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、ＭＢＯＡＴ２、および／もしくはＭＢＯＡＴ７の阻害剤；ならびに／または
ｅ）好ましくは、シクロエート、アデノシン５’－ヘキサデシルホスフェート、エンド－１ｋ、（Ｓ）－イル、および化合物３７、５，５－ジメチル－３－（５－メチル－３－オキソ－２－フェニル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１－フェニル－３－（トリフルオロメチル－３，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インドール－２，４－ジオン）、および（３－エンド）－３－（フェニルスルホニル）－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボキサミドからなる群から選択される、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、具体的にはＥＬＯＶＬ２、ＥＬＯＶＬ４、および／もしくはＥＬＯＶＬ５の阻害剤
からなる群から選択される、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。
ａ）好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、ケンフェロールからなる群から選択される天然化合物；
ｂ）好ましくは、スルファフェナゾール、アバシミブ、ベンズブロマロン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、セルビスタチン、ワルファリン、ピオグリタゾン、ラパチニブ、トリメトプリム、ザフィルルカスト、アモジアキン、ニカルジピン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロラタジン、エチニルエストラジオール、イルベサルタン、キニーネ、ソラフェニブ、エルトロンボパグ、ロサルタン、リコフェロン、アミトリプチリン、アトルバスタチン、メフェナム酸、メロキシカム、ピロキシカム、エルロチニブ、パゾパニブ、ジエチルスチルベストロール、エンザルタミド、ポナチニブ、ダブラフェニブ、エナシデニブ、ロバスタチン、モンテルカスト、ケトコナゾール、フェロジピン、カンデサルタンシレキセチル、クロトリマゾール、モメタゾン、サルメテロール、ラロキシフェン、フェノフィブラート、レボチロキシン、タモキシフェン、オキシブチニン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ニフェジピン、リオトリックス、アムロジピン、ベザフィブラート、クロラムフェニコール、シクロスポリン、シメチジン、クロピドグレル、コレカルシフェロール、デラビルジン、デキストロプロポキシフェン、エトポシド、イソニアジド、ケトプロフェン、メトロニダゾール、ニルタミド、ニルバジピン、パロキセチン、フェネルジン、プラバスタチン、プロパフェノン、ピリメタミン、ロフェコキシブ、ルチン、サキナビル、スルファメトキサゾール、スルフィンピラゾン、テガセロド、テルフェナジン、チオリ
ダジン、チクロピジン、チオコナゾール、トリアゾラム、トロレアンドマイシン、バルプロ酸、アビラテロン、ビスモデギブ、レゴラフェニブ、トラメチニブ、イデラリシブ、ロピナビル、セレコキシブ、エファビレンツ、ラベプラゾール、テリフルノミド、クリサボロール、ベリノスタット、トピロキソスタット、カンデサルタン、レテルモビル、ルカパリブ、オピカポン、ナビロン、フルボキサミン、フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ボスチニブ、カボザンチニブ、ゲニステイン、レンバチニブ、アタザナビル、ベキサロテン、デフェラシロクス、キニジン、ミフェプリストン、ベムラフェニブ、シルデナフィル、ジクロフェナク、フルオキセチン、バルデコキシブ、ボリコナゾール、エトドラク、セルトラリン、グリブリド、アセノクマロール、ロスバスタチン、イマチニブ、クロザピン、ジアゼパム、プロゲステロン、オメプラゾール、バルサルタン、ボルテゾミブ、ネビラピン、アゼラスチン、ロルノキシカム、フェニルブダゾン、エトラビリン、レフルノミド、シタキセンタン、アミノフェナゾン、ベラパミル、エトリコキシブ、プロポフォール、スルファモキソール、ジクマロール、ジルチアゼム、ヒスタミン、モクロベミド、セレギリン、パレコキシブ、ドコネキセント、アセチルスルフィソキサゾール、フルコナゾール、パントプラゾール、デスロラタジン、ミコナゾール、アミオダロン、ゲムフィブロジル、プロベネシド、テニポシド、スルファジアジン、カペシタビン、フルオロウラシル、トラニルシプロミン、アナストロゾール、アトバコン、シクリジン、デクスフェンフルラミン、ジスルフィラム、エピネフリン、エプロサルタン、フレカイニド、インジナビル、メタゾラミド、ネルフィナビル、オランザピン、プランルカスト、プロメタジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファピリジン、メチマゾール、トルカポン、ビカルタミド、アルモダフィニル、アゴメラチン、ノスカピン、クレビジピン、スルコナゾール、ゲフィチニブ、チカグレロル、セリチニブ、フロクスウリジン、リフィテグラスト、レイン、ジアセレイン、ズカプサイシン、スチリペントール、ロベグリタゾン、ドスレピン、マニジピン、ブラックコホシュ、クルクミン、フェルバメート、ピペリン、サフィナミド、イプロニアジド、オリタバンシン、マソルポコール、およびペグビソマントからなる群から選択される、シトクロムＰ４５０の阻害剤；
ｃ）好ましくは、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤；
ｄ）好ましくは、Ｎ－フェニルマレイミド誘導体、ＴＳＩ－０１、およびチメロサールからなる群から選択される、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、具体的には、ＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、ＭＢＯＡＴ２、および／もしくはＭＢＯＡＴ７の阻害剤；ならびに／または
ｅ）好ましくは、シクロエート、アデノシン５’－ヘキサデシルホスフェート、エンド－１ｋ、（Ｓ）－イル、および化合物３７、５，５－ジメチル－３－（５－メチル－３－オキソ－２－フェニル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１－フェニル－３－（トリフルオロメチル－３，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インドール－２，４－ジオン）、および（３－エンド）－３－（フェニルスルホニル）－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボキサミドからなる群から選択される、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、具体的にはＥＬＯＶＬ２、ＥＬＯＶＬ４、および／もしくはＥＬＯＶＬ５の阻害剤
からなる群から選択される、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項10】
細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物を含み、前記追加の化合物が、
ａ）好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピ
セアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン、シトバリシン、ペリオマイシン、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルもしくはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤；
ｂ）好ましくは、クロドロン酸、イビピナバント、アトラクチロシド、カルボキシアトラクチロシド、ボンクレキン酸、イソボンクレキン酸、ＭＴ－２１、クロサンテル、ＣＤ４３７、リーラミン、Ｌ９２３－０６７３、ＩＭＤ０３５４、ＰＩ３２－０３３３、Ｓ８９９５４２、ノナクチン、およびＳ８３８４６２からなる群から選択される、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼの阻害剤；
ｃ）好ましくは、２－デオキシ－Ｄ－グルコース、ロニダミン、ブロモピルビン酸、フロレチン、ＳＴＦ－３１、ＷＺＢ１１７、３ＰＯ、３－ブロモピルベート、ジクロロアセテート、オキサミン酸、ＮＨＩ－１、オキシチアミン、イマチニブ、グルコサミン、６－アミノニコチンアミド、ゲニステイン、５－チオグルコース、マンノヘプツロース、α－クロロヒドリン、オルニダゾール、オキサレート、グルフォスファミド、Ｎ－（ホスホンアセチル）－Ｌ－アスパルテート、６－メチルメルカプトプリンリボシド、ＣＧＰ３４６６Ｂマレエート、モノフルオロリン酸ナトリウム、ＤＡＳＡ－５８、ＤＬ－セリン、ジクロロ酢酸、ジクロロ酢酸ナトリウム、ニトロフラール、６－ＡＮ、ファセンチン、ベンセ
ラジド、アストラガリン、レスベラトロール、クリシン、ＧＥＮ－２７、アピゲニン、ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，３，４－チアジアゾール－２－イル）エチル硫化物、ＣＢ－８３９、アザセリン、アシビシン、６－ジアゾ－５－ｏｘ－Ｌ－ノルロイシン、チアゾリジン－２，４－ジオン誘導体、化合物９６８、Ｒ－リポ酸、１，３，４－チアジアゾール化合物、２－クロロプロピオネート、Ｎｏｖ３ｒ、ＡＺＤ７５４５、Ｐｆｚ３、ラジシコール、ミタプラチン、ｍｉｔｏ－ＤＣＡ、フェニルブチレート、４，５－ジアリールイソオキサゾール、ＶＥＲ－２４６６０８、ベツリン酸、ホスフィネートまたはホスホナート基を含有するピルベート類似体、ＣＰＩ－６１３、Ｍ７７９７６、芳香族ＤＣＡ誘導体、フランおよびチオフェンカルボン酸、リトナビル、ＦＸ１１、オキサメート、Ｄ－フルクトース－６－ホスフェート、６－ホスホグルコン酸、Ｎ－ブロモアセチル－アミノエチルホスフェート、２－カルボキシエチルホスホン酸、Ｎ－ヒドロキシ－４－ホスホノ－ブタンアミド、２－ホスホグリセリン酸、ヨードアセテート、ゴシポール、ベンゼンヘキサカルボン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホノアセトヒドロキサム酸、２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸、ＴＬＮ－２３２、ならびにＣＡＰ－２３２からなる群から選択される、グリコリシスの阻害剤
からなる群から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
ａ）好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピ
セアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン、シトバリシン、ペリオマイシン、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルもしくはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤；
ｂ）好ましくは、クロドロン酸、イビピナバント、アトラクチロシド、カルボキシアトラクチロシド、ボンクレキン酸、イソボンクレキン酸、ＭＴ－２１、クロサンテル、ＣＤ４３７、リーラミン、Ｌ９２３－０６７３、ＩＭＤ０３５４、ＰＩ３２－０３３３、Ｓ８９９５４２、ノナクチン、およびＳ８３８４６２からなる群から選択される、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼの阻害剤；
ｃ）好ましくは、２－デオキシ－Ｄ－グルコース、ロニダミン、ブロモピルビン酸、フロレチン、ＳＴＦ－３１、ＷＺＢ１１７、３ＰＯ、３－ブロモピルベート、ジクロロアセテート、オキサミン酸、ＮＨＩ－１、オキシチアミン、イマチニブ、グルコサミン、６－アミノニコチンアミド、ゲニステイン、５－チオグルコース、マンノヘプツロース、α－クロロヒドリン、オルニダゾール、オキサレート、グルフォスファミド、Ｎ－（ホスホンアセチル）－Ｌ－アスパルテート、６－メチルメルカプトプリンリボシド、ＣＧＰ３４６６Ｂマレエート、モノフルオロリン酸ナトリウム、ＤＡＳＡ－５８、ＤＬ－セリン、ジクロロ酢酸、ジクロロ酢酸ナトリウム、ニトロフラール、６－ＡＮ、ファセンチン、ベンセ
ラジド、アストラガリン、レスベラトロール、クリシン、ＧＥＮ－２７、アピゲニン、ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，３，４－チアジアゾール－２－イル）エチル硫化物、ＣＢ－８３９、アザセリン、アシビシン、６－ジアゾ－５－ｏｘ－Ｌ－ノルロイシン、チアゾリジン－２，４－ジオン誘導体、化合物９６８、Ｒ－リポ酸、１，３，４－チアジアゾール化合物、２－クロロプロピオネート、Ｎｏｖ３ｒ、ＡＺＤ７５４５、Ｐｆｚ３、ラジシコール、ミタプラチン、ｍｉｔｏ－ＤＣＡ、フェニルブチレート、４，５－ジアリールイソオキサゾール、ＶＥＲ－２４６６０８、ベツリン酸、ホスフィネートまたはホスホナート基を含有するピルベート類似体、ＣＰＩ－６１３、Ｍ７７９７６、芳香族ＤＣＡ誘導体、フランおよびチオフェンカルボン酸、リトナビル、ＦＸ１１、オキサメート、Ｄ－フルクトース－６－ホスフェート、６－ホスホグルコン酸、Ｎ－ブロモアセチル－アミノエチルホスフェート、２－カルボキシエチルホスホン酸、Ｎ－ヒドロキシ－４－ホスホノ－ブタンアミド、２－ホスホグリセリン酸、ヨードアセテート、ゴシポール、ベンゼンヘキサカルボン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホノアセトヒドロキサム酸、２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸、ＴＬＮ－２３２、ならびにＣＡＰ－２３２からなる群から選択される、グリコリシスの阻害剤
からなる群から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項11】
老化関係の疾患もしくは状態の発症を予防もしくは遅延するか、または老化関係の疾患もしくは状態の進行を予防もしくは遅延するか、または老化関係の疾患もしくは状態の退行を促進する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項12】
老化関係の疾患または状態が、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、がん、骨粗鬆症、変形性関節症、神経障害、認知症、白内障、腎疾患、網膜症、糖尿病、肺線維症、肝線維症、椎間板ヘルニア、加齢性筋萎縮、脱毛、または皮膚老化である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
移植の成績を改善する、および／または、老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項14】
老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項15】
化学療法の副作用を改善し、腫瘍の再発を予防または遅延する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0172】
本明細書に記載の実施例は、本発明の説明であり、その限定を意図するものではない。本発明の異なる実施形態は、本発明にしたがって記載される。本明細書で記載および図示した技術に対して、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、多くの変形および変更がなされ得る。したがって、実施例が、単なる例示に過ぎず、本発明の範囲を限定しないことを理解すべきである。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］シクロオキシゲナーゼ１（ＣＯＸ－１）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ－２）、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な１つ以上の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
［態様２］アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
［態様３］アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤、およびＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、またはリポキシゲナーゼのうちの少なくとも１つを含む、態様２に記載の使用のための組成物。
［態様４］老化細胞が、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの高い細胞内レベルで特徴付けられる、態様１～３のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様５］リゾホスファチジルコリンが、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＳＰＣ）、または１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＰＰＣ）である、態様４に記載の使用のための組成物。
［態様６］１つ以上の阻害剤が、アセチルサリチル酸、ジクロフェナク、セレコキシブ、シクロスポリンＡ、イブプロフェン、アセトアミノフェン、インドメタシン、ナブメトン、ケトロラック、テノキシカム、トルメチン、ピロキシカム、フェノプロフェン、エトドラク、ナプロキセン、ジフルニサル、スプロフェン、ブロムフェナク、ケトプロフェン、ジホモ－γ－リノレン酸、イコサペント、フルルビプロフェン、メフェナム酸、サルサレート、スリンダク、サリチル酸、ルミラコキシブ、Ｏ－アセチル－Ｌ－セリン、フェナセチン、フルルビプロフェンメチルエステル、メタミゾール、ニトロアスピリン、メロキシカム、フルフェナム酸、オキサプロジン、チアプロフェン酸、サリチル酸マグネシウム、ジエチルカルバマジン、ロルノキシカム、カルプロフェン、フェニルブダゾン、ネパフェナク、アンチピリン、アントラフェニン、トリサリチル酸コリンマグネシウム、トリフルサール、ニフルム酸、デキシブプロフェン、アセクロフェナック、アセメタシン、ドロキシカム、ロキソプロフェン、トルフェナム酸、デキスケトプロフェン、トロメタモール、タルニフルメート、プロパセタモール、サリチル酸トロラミン、サリチル酸フェニル、ブフェキサマク、サリチル酸グリコール、サリチル酸メンチル、ＦＫ－５０６、レナリドマイド、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、シミコキシブ、クロルフェネシン、クロドロン酸、セリシクリブ、ドロスピレノン、トリアムシノロン、ポマリドミド、パレコキシブ、フィロコキシブ、アクロフェナク、アダパレン、サリドマイド、エトリコキシブ、ロベナコキシブ、アサルアルデヒド、ザルトプロフェン、デラコキシブ、デキサメタゾン、プラノプロフェン、アンフェナクナトリウム一水和物、アンピロキシカム、ＮＳ－３９８、次サリチル酸ビスマス、ジクロフェナクジエチルアミン、トロメタモール、ルテカルピン、サリシン、フェンブフェン、キサントフモール、フルニキシンメグルミン、およびニメスリドからなる群から選択されるＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２阻害剤である、態様１～５のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様７］１つ以上の阻害剤が、ＭＫ８８６、ジロイトン、マソプロコール、ジエチルカルバマジン、アゼラスチン、ベノキサプロフェン、ノルジヒドログアイアレチン酸、アビエチン酸、エスクレチン、モンテルカスト、ミノサイクリン、ＭＬＮ－９７７、レイン、ジアセレイン、ナビキシモルス、ホスタマチニブ、ＡＭ１０３、ＤＧ０３１、フィボフラポン、ＡＡ－８６１、およびアトレロイトンからなる群から選択されるリポキシゲナーゼおよび／またはＦＬＡＰ（ＡＬＯＸ５ＡＰ）阻害剤である、態様１～６のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様８］１つ以上の阻害剤が、好ましくは、リコフェロン、ダルブフェロン、ＣＩ－９８７、Ｓ－２４７４、ＫＭＥ－４、ケブラジン酸、バルサラジド、メサラジン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、メクロフェナム酸、モルニフルマートジアリールピラゾール誘導体、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体、Ｎ－置換５－アミノサリシリシラミド、フラボコキシド、インドリジン誘導体、ＬＱＦＭ－０９１、ヒペルホリン、セラストロール、ＢＷ７５５Ｃ、テポキサリン、ｂ－ボスウェリン酸、Ｄ－００２、２，３－ジアリールキサントン、フェニドン、およびＥＲ－３４１２２からなる群から選択されるデュアルシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ阻害剤である、態様１～７のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様９］アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤が、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、５－ブロモ－５’－フェニルスピロ［３Ｈ－１，３，４－チアジアゾール－２，３’－インドリン］－２－オン、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６、ＣＢ１６、ＮＣＩ－３、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６、ＣＢ１６の類似体、および２－（６－ヒドロキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）－１，３－チアゾール－４（５Ｈ）－オンからなる群から選択される阻害剤である、態様２～８のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１０］アラキドン酸の細胞内の転換を阻害することが可能な追加の化合物を含み、前記追加の化合物が、
ａ）好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、ケンフェロールからなる群から選択される天然化合物；
ｂ）好ましくは、スルファフェナゾール、アバシミブ、ベンズブロマロン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、セルビスタチン、ワルファリン、ピオグリタゾン、ラパチニブ、トリメトプリム、ザフィルルカスト、アモジアキン、ニカルジピン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロラタジン、エチニルエストラジオール、イルベサルタン、キニーネ、ソラフェニブ、エルトロンボパグ、ロサルタン、リコフェロン、アミトリプチリン、アトルバスタチン、メフェナム酸、メロキシカム、ピロキシカム、エルロチニブ、パゾパニブ、ジエチルスチルベストロール、エンザルタミド、ポナチニブ、ダブラフェニブ、エナシデニブ、ロバスタチン、モンテルカスト、ケトコナゾール、フェロジピン、カンデサルタンシレキセチル、クロトリマゾール、モメタゾン、サルメテロール、ラロキシフェン、フェノフィブラート、レボチロキシン、タモキシフェン、オキシブチニン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ニフェジピン、リオトリックス、アムロジピン、ベザフィブラート、クロラムフェニコール、シクロスポリン、シメチジン、クロピドグレル、コレカルシフェロール、デラビルジン、デキストロプロポキシフェン、エトポシド、イソニアジド、ケトプロフェン、メトロニダゾール、ニルタミド、ニルバジピン、パロキセチン、フェネルジン、プラバスタチン、プロパフェノン、ピリメタミン、ロフェコキシブ、ルチン、サキナビル、スルファメトキサゾール、スルフィンピラゾン、テガセロド、テルフェナジン、チオリダジン、チクロピジン、チオコナゾール、トリアゾラム、トロレアンドマイシン、バルプロ酸、アビラテロン、ビスモデギブ、レゴラフェニブ、トラメチニブ、イデラリシブ、ロピナビル、セレコキシブ、エファビレンツ、ラベプラゾール、テリフルノミド、クリサボロール、ベリノスタット、トピロキソスタット、カンデサルタン、レテルモビル、ルカパリブ、オピカポン、ナビロン、フルボキサミン、フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ボスチニブ、カボザンチニブ、ゲニステイン、レンバチニブ、アタザナビル、ベキサロテン、デフェラシロクス、キニジン、ミフェプリストン、ベムラフェニブ、シルデナフィル、ジクロフェナク、フルオキセチン、バルデコキシブ、ボリコナゾール、エトドラク、セルトラリン、グリブリド、アセノクマロール、ロスバスタチン、イマチニブ、クロザピン、ジアゼパム、プロゲステロン、オメプラゾール、バルサルタン、ボルテゾミブ、ネビラピン、アゼラスチン、ロルノキシカム、フェニルブダゾン、エトラビリン、レフルノミド、シタキセンタン、アミノフェナゾン、ベラパミル、エトリコキシブ、プロポフォール、スルファモキソール、ジクマロール、ジルチアゼム、ヒスタミン、モクロベミド、セレギリン、パレコキシブ、ドコネキセント、アセチルスルフィソキサゾール、フルコナゾール、パントプラゾール、デスロラタジン、ミコナゾール、アミオダロン、ゲムフィブロジル、プロベネシド、テニポシド、スルファジアジン、カペシタビン、フルオロウラシル、トラニルシプロミン、アナストロゾール、アトバコン、シクリジン、デクスフェンフルラミン、ジスルフィラム、エピネフリン、エプロサルタン、フレカイニド、インジナビル、メタゾラミド、ネルフィナビル、オランザピン、プランルカスト、プロメタジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファピリジン、メチマゾール、トルカポン、ビカルタミド、アルモダフィニル、アゴメラチン、ノスカピン、クレビジピン、スルコナゾール、ゲフィチニブ、チカグレロル、セリチニブ、フロクスウリジン、リフィテグラスト、レイン、ジアセレイン、ズカプサイシン、スチリペントール、ロベグリタゾン、ドスレピン、マニジピン、ブラックコホシュ、クルクミン、フェルバメート、ピペリン、サフィナミド、イプロニアジド、オリタバンシン、マソルポコール、およびペグビソマントからなる群から選択される、シトクロムＰ４５０の阻害剤；
ｃ）好ましくは、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤；
ｄ）好ましくは、Ｎ－フェニルマレイミド誘導体、ＴＳＩ－０１、およびチメロサールからなる群から選択される、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、具体的には、ＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、ＭＢＯＡＴ２、および／もしくはＭＢＯＡＴ７の阻害剤；ならびに／または
ｅ）好ましくは、シクロエート、アデノシン５’－ヘキサデシルホスフェート、エンド－１ｋ、（Ｓ）－イル、および化合物３７、５，５－ジメチル－３－（５－メチル－３－オキソ－２－フェニル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１－フェニル－３－（トリフルオロメチル－３，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インドール－２，４－ジオン）、および（３－エンド）－３－（フェニルスルホニル）－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボキサミドからなる群から選択される、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、具体的にはＥＬＯＶＬ２、ＥＬＯＶＬ４、および／もしくはＥＬＯＶＬ５の阻害剤
からなる群から選択される、態様１～９のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１１］細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物を含み、前記追加の化合物が、
ａ）好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピセアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン、シトバリシン、ペリオマイシン、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルもしくはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤；
ｂ）好ましくは、クロドロン酸、イビピナバント、アトラクチロシド、カルボキシアトラクチロシド、ボンクレキン酸、イソボンクレキン酸、ＭＴ－２１、クロサンテル、ＣＤ４３７、リーラミン、Ｌ９２３－０６７３、ＩＭＤ０３５４、ＰＩ３２－０３３３、Ｓ８９９５４２、ノナクチン、およびＳ８３８４６２からなる群から選択される、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼの阻害剤；
ｃ）好ましくは、２－デオキシ－Ｄ－グルコース、ロニダミン、ブロモピルビン酸、フロレチン、ＳＴＦ－３１、ＷＺＢ１１７、３ＰＯ、３－ブロモピルベート、ジクロロアセテート、オキサミン酸、ＮＨＩ－１、オキシチアミン、イマチニブ、グルコサミン、６－アミノニコチンアミド、ゲニステイン、５－チオグルコース、マンノヘプツロース、α－クロロヒドリン、オルニダゾール、オキサレート、グルフォスファミド、Ｎ－（ホスホンアセチル）－Ｌ－アスパルテート、６－メチルメルカプトプリンリボシド、ＣＧＰ３４６６Ｂマレエート、モノフルオロリン酸ナトリウム、ＤＡＳＡ－５８、ＤＬ－セリン、ジクロロ酢酸、ジクロロ酢酸ナトリウム、ニトロフラール、６－ＡＮ、ファセンチン、ベンセラジド、アストラガリン、レスベラトロール、クリシン、ＧＥＮ－２７、アピゲニン、ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，３，４－チアジアゾール－２－イル）エチル硫化物、ＣＢ－８３９、アザセリン、アシビシン、６－ジアゾ－５－ｏｘ－Ｌ－ノルロイシン、チアゾリジン－２，４－ジオン誘導体、化合物９６８、Ｒ－リポ酸、１，３，４－チアジアゾール化合物、２－クロロプロピオネート、Ｎｏｖ３ｒ、ＡＺＤ７５４５、Ｐｆｚ３、ラジシコール、ミタプラチン、ｍｉｔｏ－ＤＣＡ、フェニルブチレート、４，５－ジアリールイソオキサゾール、ＶＥＲ－２４６６０８、ベツリン酸、ホスフィネートまたはホスホナート基を含有するピルベート類似体、ＣＰＩ－６１３、Ｍ７７９７６、芳香族ＤＣＡ誘導体、フランおよびチオフェンカルボン酸、リトナビル、ＦＸ１１、オキサメート、Ｄ－フルクトース－６－ホスフェート、６－ホスホグルコン酸、Ｎ－ブロモアセチル－アミノエチルホスフェート、２－カルボキシエチルホスホン酸、Ｎ－ヒドロキシ－４－ホスホノ－ブタンアミド、２－ホスホグリセリン酸、ヨードアセテート、ゴシポール、１，３－ビスホスホグリセリン酸のビスホスホネート類似体、ベンゼンヘキサカルボン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホノアセトヒドロキサム酸、２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸、ＴＬＮ－２３２、ならびにＣＡＰ－２３２からなる群から選択される、グリコリシスの阻害剤
からなる群から選択される、態様１～１０のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１２］老化関係の疾患もしくは状態の発症を予防もしくは遅延するか、または老化関係の疾患もしくは状態の進行を予防もしくは遅延するか、または老化関係の疾患もしくは状態の退行を促進する、態様１～１１のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１３］老化関係の疾患または状態が、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、がん、骨粗鬆症、変形性関節症、神経障害、認知症、白内障、腎疾患、網膜症、糖尿病、肺線維症、脊椎の皮膚変性、加齢性筋萎縮、脱毛、または皮膚老化である、態様１２に記載の使用のための組成物。
［態様１４］移植の成績を改善する、態様１～１１のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１５］老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する、態様１～１１のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１６］化学療法の副作用を改善し、腫瘍の再発を予防または遅延する、態様１～１１のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１７］対象において老化細胞を同定するインビトロ方法であって、
ａ）前記対象のサンプルを準備するステップ、
ｂ）前記対象においてリゾホスファチジル－コリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルを決定するステップ、
ｃ）ｂ）のレベルを基準レベルと比較するステップ
を含み、基準レベルが、非老化細胞におけるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルであり、
リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のレベルでの少なくとも２倍の増加が、前記サンプルにおける老化細胞の存在を示している、
上記方法。
［態様１８］老化細胞を除去するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、
ａ）少なくとも１つの試験化合物を、老化細胞のサンプルと接触させるステップ、
ｂ）アラキドン酸の細胞内レベルを測定する、および／またはアポトーシスを測定する、および／または細胞生存率を測定するステップ、ならびに
ｃ）未処置の老化細胞と比較して、試験化合物と接触させた老化細胞において、アラキドン酸の細胞内蓄積、高いアポトーシス、および／または低い細胞生存率を起こす試験化合物を選択するステップ
を含む、上記方法。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］シクロオキシゲナーゼ１（ＣＯＸ－１）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ－２）、およびリポキシゲナーゼのうちの少なくとも２つを阻害することが可能な１つ以上の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
［態様２］アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤を含む、老化細胞の選択的な除去での使用のための組成物。
［態様３］アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素、具体的には長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ（ＡＣＳＬ）１、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ４、ＡＣＳＬ５、ＡＣＳＬ６、ＳＬＣ２７Ａ２、またはＡＣＳＢＧ２を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤、およびＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、またはリポキシゲナーゼのうちの少なくとも１つを含む、態様２に記載の使用のための組成物。
［態様４］老化細胞が、リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの高い細胞内レベルで特徴付けられる、態様１～３のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様５］リゾホスファチジルコリンが、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＳＰＣ）、または１－パルミトイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＬｙｓｏＰＰＣ）である、態様４に記載の使用のための組成物。
［態様６］１つ以上の阻害剤が、アセチルサリチル酸、ジクロフェナク、セレコキシブ、シクロスポリンＡ、イブプロフェン、アセトアミノフェン、インドメタシン、ナブメトン、ケトロラック、テノキシカム、トルメチン、ピロキシカム、フェノプロフェン、エトドラク、ナプロキセン、ジフルニサル、スプロフェン、ブロムフェナク、ケトプロフェン、ジホモ－γ－リノレン酸、イコサペント、フルルビプロフェン、メフェナム酸、サルサレート、スリンダク、サリチル酸、ルミラコキシブ、Ｏ－アセチル－Ｌ－セリン、フェナセチン、フルルビプロフェンメチルエステル、メタミゾール、ニトロアスピリン、メロキシカム、フルフェナム酸、オキサプロジン、チアプロフェン酸、サリチル酸マグネシウム、ジエチルカルバマジン、ロルノキシカム、カルプロフェン、フェニルブダゾン、ネパフェナク、アンチピリン、アントラフェニン、トリサリチル酸コリンマグネシウム、トリフルサール、ニフルム酸、デキシブプロフェン、アセクロフェナック、アセメタシン、ドロキシカム、ロキソプロフェン、トルフェナム酸、デキスケトプロフェン、トロメタモール、タルニフルメート、プロパセタモール、サリチル酸トロラミン、サリチル酸フェニル、ブフェキサマク、サリチル酸グリコール、サリチル酸メンチル、ＦＫ－５０６、レナリドマイド、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、シミコキシブ、クロルフェネシン、クロドロン酸、セリシクリブ、ドロスピレノン、トリアムシノロン、ポマリドミド、パレコキシブ、フィロコキシブ、アクロフェナク、アダパレン、サリドマイド、エトリコキシブ、ロベナコキシブ、アサルアルデヒド、ザルトプロフェン、デラコキシブ、デキサメタゾン、プラノプロフェン、アンフェナクナトリウム一水和物、アンピロキシカム、ＮＳ－３９８、次サリチル酸ビスマス、ジクロフェナクジエチルアミン、トロメタモール、ルテカルピン、サリシン、フェンブフェン、キサントフモール、フルニキシンメグルミン、およびニメスリドからなる群から選択されるＣＯＸ－１および／またはＣＯＸ－２阻害剤である、態様１～５のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様７］１つ以上の阻害剤が、ＭＫ８８６、ジロイトン、マソプロコール、ジエチルカルバマジン、アゼラスチン、ベノキサプロフェン、ノルジヒドログアイアレチン酸、アビエチン酸、エスクレチン、モンテルカスト、ミノサイクリン、ＭＬＮ－９７７、レイン、ジアセレイン、ナビキシモルス、ホスタマチニブ、ＡＭ１０３、ＤＧ０３１、フィボフラポン、ＡＡ－８６１、およびアトレロイトンからなる群から選択されるリポキシゲナーゼおよび／またはＦＬＡＰ（ＡＬＯＸ５ＡＰ）阻害剤である、態様１～６のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様８］１つ以上の阻害剤が、好ましくは、リコフェロン、ダルブフェロン、ＣＩ－９８７、Ｓ－２４７４、ＫＭＥ－４、ケブラジン酸、バルサラジド、メサラジン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、メクロフェナム酸、モルニフルマートジアリールピラゾール誘導体、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体、Ｎ－置換５－アミノサリシリシラミド、フラボコキシド、インドリジン誘導体、ＬＱＦＭ－０９１、ヒペルホリン、セラストロール、ＢＷ７５５Ｃ、テポキサリン、ｂ－ボスウェリン酸、Ｄ－００２、２，３－ジアリールキサントン、フェニドン、およびＥＲ－３４１２２からなる群から選択されるデュアルシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ阻害剤である、態様１～７のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様９］アラキドン酸－ＣｏＡリガーゼ活性を有する酵素を阻害することが可能な１つ以上の阻害剤が、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、５－ブロモ－５’－フェニルスピロ［３Ｈ－１，３，４－チアジアゾール－２，３’－インドリン］－２－オン、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６、ＣＢ１６、ＮＣＩ－３、ＣＢ２、ＣＢ５、ＣＢ６、ＣＢ１６の類似体、および２－（６－ヒドロキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）－１，３－チアゾール－４（５Ｈ）－オンからなる群から選択される阻害剤である、態様２～８のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１０］アラキドン酸の細胞内の転換を阻害することが可能な追加の化合物を含み、前記追加の化合物が、
ａ）好ましくは、ウコン、ローズマリー、ショウガ、オレガノ、レスベラトロール、クルクミン、カンナビノイド、チョウセンニンジン、サポニン、テルペノイド、フラボノイド、ポリフェノール、イチョウ、カプサイシン、ゲニステイン、ケンフェロールからなる群から選択される天然化合物；
ｂ）好ましくは、スルファフェナゾール、アバシミブ、ベンズブロマロン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、セルビスタチン、ワルファリン、ピオグリタゾン、ラパチニブ、トリメトプリム、ザフィルルカスト、アモジアキン、ニカルジピン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロラタジン、エチニルエストラジオール、イルベサルタン、キニーネ、ソラフェニブ、エルトロンボパグ、ロサルタン、リコフェロン、アミトリプチリン、アトルバスタチン、メフェナム酸、メロキシカム、ピロキシカム、エルロチニブ、パゾパニブ、ジエチルスチルベストロール、エンザルタミド、ポナチニブ、ダブラフェニブ、エナシデニブ、ロバスタチン、モンテルカスト、ケトコナゾール、フェロジピン、カンデサルタンシレキセチル、クロトリマゾール、モメタゾン、サルメテロール、ラロキシフェン、フェノフィブラート、レボチロキシン、タモキシフェン、オキシブチニン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ニフェジピン、リオトリックス、アムロジピン、ベザフィブラート、クロラムフェニコール、シクロスポリン、シメチジン、クロピドグレル、コレカルシフェロール、デラビルジン、デキストロプロポキシフェン、エトポシド、イソニアジド、ケトプロフェン、メトロニダゾール、ニルタミド、ニルバジピン、パロキセチン、フェネルジン、プラバスタチン、プロパフェノン、ピリメタミン、ロフェコキシブ、ルチン、サキナビル、スルファメトキサゾール、スルフィンピラゾン、テガセロド、テルフェナジン、チオリダジン、チクロピジン、チオコナゾール、トリアゾラム、トロレアンドマイシン、バルプロ酸、アビラテロン、ビスモデギブ、レゴラフェニブ、トラメチニブ、イデラリシブ、ロピナビル、セレコキシブ、エファビレンツ、ラベプラゾール、テリフルノミド、クリサボロール、ベリノスタット、トピロキソスタット、カンデサルタン、レテルモビル、ルカパリブ、オピカポン、ナビロン、フルボキサミン、フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ボスチニブ、カボザンチニブ、ゲニステイン、レンバチニブ、アタザナビル、ベキサロテン、デフェラシロクス、キニジン、ミフェプリストン、ベムラフェニブ、シルデナフィル、ジクロフェナク、フルオキセチン、バルデコキシブ、ボリコナゾール、エトドラク、セルトラリン、グリブリド、アセノクマロール、ロスバスタチン、イマチニブ、クロザピン、ジアゼパム、プロゲステロン、オメプラゾール、バルサルタン、ボルテゾミブ、ネビラピン、アゼラスチン、ロルノキシカム、フェニルブダゾン、エトラビリン、レフルノミド、シタキセンタン、アミノフェナゾン、ベラパミル、エトリコキシブ、プロポフォール、スルファモキソール、ジクマロール、ジルチアゼム、ヒスタミン、モクロベミド、セレギリン、パレコキシブ、ドコネキセント、アセチルスルフィソキサゾール、フルコナゾール、パントプラゾール、デスロラタジン、ミコナゾール、アミオダロン、ゲムフィブロジル、プロベネシド、テニポシド、スルファジアジン、カペシタビン、フルオロウラシル、トラニルシプロミン、アナストロゾール、アトバコン、シクリジン、デクスフェンフルラミン、ジスルフィラム、エピネフリン、エプロサルタン、フレカイニド、インジナビル、メタゾラミド、ネルフィナビル、オランザピン、プランルカスト、プロメタジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファピリジン、メチマゾール、トルカポン、ビカルタミド、アルモダフィニル、アゴメラチン、ノスカピン、クレビジピン、スルコナゾール、ゲフィチニブ、チカグレロル、セリチニブ、フロクスウリジン、リフィテグラスト、レイン、ジアセレイン、ズカプサイシン、スチリペントール、ロベグリタゾン、ドスレピン、マニジピン、ブラックコホシュ、クルクミン、フェルバメート、ピペリン、サフィナミド、イプロニアジド、オリタバンシン、マソルポコール、およびペグビソマントからなる群から選択される、シトクロムＰ４５０の阻害剤；
ｃ）好ましくは、トリアクシンＡ、トリアクシンＢ、トリアクシンＣ、トリアクシンＤ、トリアクシンＣの類似体、Ｎ－エチルマレイミド、２－フルオロパルミチン酸、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾンからなる群から選択される、長鎖脂肪酸－ＣｏＡリガーゼ４（ＡＣＳＬ４）の阻害剤；
ｄ）好ましくは、Ｎ－フェニルマレイミド誘導体、ＴＳＩ－０１、およびチメロサールからなる群から選択される、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼの阻害剤、具体的には、ＬＰＣＡＴ１、ＬＰＣＡＴ２、ＬＰＣＡＴ３、ＬＰＣＡＴ４、ＭＢＯＡＴ２、および／もしくはＭＢＯＡＴ７の阻害剤；ならびに／または
ｅ）好ましくは、シクロエート、アデノシン５’－ヘキサデシルホスフェート、エンド－１ｋ、（Ｓ）－イル、および化合物３７、５，５－ジメチル－３－（５－メチル－３－オキソ－２－フェニル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１－フェニル－３－（トリフルオロメチル－３，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インドール－２，４－ジオン）、および（３－エンド）－３－（フェニルスルホニル）－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボキサミドからなる群から選択される、脂肪酸エロンガーゼの阻害剤、具体的にはＥＬＯＶＬ２、ＥＬＯＶＬ４、および／もしくはＥＬＯＶＬ５の阻害剤
からなる群から選択される、態様１～９のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１１］細胞内のＡＴＰレベルを操作することが可能な追加の化合物を含み、前記追加の化合物が、
ａ）好ましくは、オリゴマイシンＡ、ニコチン酸イノシトール、ベダキリン、エフラペプチン、ロイシノスタチン、テントキシン、テントキシン誘導体、アンジオスタチン、エンテロスタチン、メリチン、ＩＦ１、Ｓｙｎ－Ａ２、Ｓｙｎ－Ｃ、レスベラトロール、ピセアタンノール、ジエチルスチルベストロール、４－アセトアミド－４’－イソチオシアノスチルベン－２，２’－ジスルホネート、４，４’－Ｄ－イソチオシアナトスチルベン－２，２－ジスルホン酸、ケンフェロール、モリン、アピゲニン、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ダイゼイン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン、クルクミン、フロレチン、テアフラビン、タンニン酸、４－ヒドロキシ－エストラジオール、２－ヒドロキシ－エストラジオール、１７α－エストラジオール、１７β－エストラジオール、α－ゼアラレノール、β－ゼアラレノール、オリゴマイシン、ベンツリシジン、アポプトリジン、オサマイシン、シトバリシン、ペリオマイシン、トリブチルスズ塩化物、水酸化トリシクロヘキシルスズ、硫酸トリエチルスズ、トリフェニルスズ塩化物、ジメチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３－ヒドロキシフラボン臭化物、ジオクチルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジフェニルスズ３－ヒドロキシフラボン塩化物、ジエチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、ジブチルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン臭化物、ジフェニルスズ３，５，７，２’，４’－ペンタヒドロキシフラボン塩化物、トリブチルスズ３－ヒドロキシフラボン、トリエチル鉛、オーロベルチン、シトレオビリジン、アステルトキシン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン６Ｇ、ロザニリン、マラカイトグリーン、ブリリアントグリーン、キナクリン、キナクリンマスタード、アクリジンオレンジ、コリホスフィン、ピロニンＹ、デカリニウム、サフラニンＯ、ナイルブルーＡ、臭化エチジウム、テトラカイン、ジブカイン、プロカイン、リドカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、プロカインアミド、プロプラノロール、オクチルグアニジン、１－ダンシルアミド－３－ジメチルプロピルアミン化合物、セチルトリメチルアンモニウム、スペルミン、スペルミジン、バトフェナントロリン－金属キレート、４，４－ジフェニル－２，２－ビピリジン、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン、アトラジン、アトラジンアミノ誘導体、アルセネート、フッ化アルミニウム、フッ化ベリリウム、フッ化スカンジウム、バナデート、フッ化マグネシウム、亜硫酸塩、チオホスフェート、アジド、ＡＮＰＰ、フェニルグリオキサール、ブタンジオン、ダンシル塩化物、１－フルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、ジカルボポリボレート、アルミトリン、５－ヒドロキシ－１，２－ナフタレンジカルボン酸無水物、Ｒ２０７９１０、スペガッジニン、ｎ－ブタノール、テトラクロロサリチルアニリド、ジヒドロストレプトマイシン、スラミン、Ｂｚ－４２３、ＤＭＳＯ、次亜塩素酸、ＤＤＴ、ジアゾキシド、ＨＮＢ、Ｎ－スルホニルもしくはＮ－アルキル置換テトラヒドロベンゾジアゼピン誘導体、４－（Ｎ－アリールイミダゾール）－置換ベンゾピラン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－シアノグアニジン誘導体、Ｎ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－アシルグアニジン誘導体、Ｏ－［１－アリール－２－（１－イミダゾロ）エチル］－チオウレタン誘導体、ｄｉｏ－９複合体、エタノール、および亜鉛からなる群から選択される、ＡＴＰシンターゼの阻害剤；
ｂ）好ましくは、クロドロン酸、イビピナバント、アトラクチロシド、カルボキシアトラクチロシド、ボンクレキン酸、イソボンクレキン酸、ＭＴ－２１、クロサンテル、ＣＤ４３７、リーラミン、Ｌ９２３－０６７３、ＩＭＤ０３５４、ＰＩ３２－０３３３、Ｓ８９９５４２、ノナクチン、およびＳ８３８４６２からなる群から選択される、ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼの阻害剤；
ｃ）好ましくは、２－デオキシ－Ｄ－グルコース、ロニダミン、ブロモピルビン酸、フロレチン、ＳＴＦ－３１、ＷＺＢ１１７、３ＰＯ、３－ブロモピルベート、ジクロロアセテート、オキサミン酸、ＮＨＩ－１、オキシチアミン、イマチニブ、グルコサミン、６－アミノニコチンアミド、ゲニステイン、５－チオグルコース、マンノヘプツロース、α－クロロヒドリン、オルニダゾール、オキサレート、グルフォスファミド、Ｎ－（ホスホンアセチル）－Ｌ－アスパルテート、６－メチルメルカプトプリンリボシド、ＣＧＰ３４６６Ｂマレエート、モノフルオロリン酸ナトリウム、ＤＡＳＡ－５８、ＤＬ－セリン、ジクロロ酢酸、ジクロロ酢酸ナトリウム、ニトロフラール、６－ＡＮ、ファセンチン、ベンセラジド、アストラガリン、レスベラトロール、クリシン、ＧＥＮ－２７、アピゲニン、ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，３，４－チアジアゾール－２－イル）エチル硫化物、ＣＢ－８３９、アザセリン、アシビシン、６－ジアゾ－５－ｏｘ－Ｌ－ノルロイシン、チアゾリジン－２，４－ジオン誘導体、化合物９６８、Ｒ－リポ酸、１，３，４－チアジアゾール化合物、２－クロロプロピオネート、Ｎｏｖ３ｒ、ＡＺＤ７５４５、Ｐｆｚ３、ラジシコール、ミタプラチン、ｍｉｔｏ－ＤＣＡ、フェニルブチレート、４，５－ジアリールイソオキサゾール、ＶＥＲ－２４６６０８、ベツリン酸、ホスフィネートまたはホスホナート基を含有するピルベート類似体、ＣＰＩ－６１３、Ｍ７７９７６、芳香族ＤＣＡ誘導体、フランおよびチオフェンカルボン酸、リトナビル、ＦＸ１１、オキサメート、Ｄ－フルクトース－６－ホスフェート、６－ホスホグルコン酸、Ｎ－ブロモアセチル－アミノエチルホスフェート、２－カルボキシエチルホスホン酸、Ｎ－ヒドロキシ－４－ホスホノ－ブタンアミド、２－ホスホグリセリン酸、ヨードアセテート、ゴシポール、１，３－ビスホスホグリセリン酸のビスホスホネート類似体、ベンゼンヘキサカルボン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホノアセトヒドロキサム酸、２－ホスホ－Ｄ－グリセリン酸、ＴＬＮ－２３２、ならびにＣＡＰ－２３２からなる群から選択される、グリコリシスの阻害剤
からなる群から選択される、態様１～１０のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１２］老化関係の疾患もしくは状態の発症を予防もしくは遅延するか、または老化関係の疾患もしくは状態の進行を予防もしくは遅延するか、または老化関係の疾患もしくは状態の退行を促進する、態様１～１１のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１３］老化関係の疾患または状態が、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、がん、骨粗鬆症、変形性関節症、神経障害、認知症、白内障、腎疾患、網膜症、糖尿病、肺線維症、脊椎の皮膚変性、加齢性筋萎縮、脱毛、または皮膚老化である、態様１２に記載の使用のための組成物。
［態様１４］移植の成績を改善する、態様１～１１のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１５］老化関連の瘢痕形成および線維症を予防または減弱する、態様１～１１のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１６］化学療法の副作用を改善し、腫瘍の再発を予防または遅延する、態様１～１１のいずれか１に記載の使用のための組成物。
［態様１７］対象において老化細胞を同定するインビトロ方法であって、
ａ）前記対象のサンプルを準備するステップ、
ｂ）前記対象においてリゾホスファチジル－コリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルを決定するステップ、
ｃ）ｂ）のレベルを基準レベルと比較するステップ
を含み、基準レベルが、非老化細胞におけるリゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のうちの少なくとも１つの細胞内レベルであり、
リゾホスファチジルコリン、アラキドン酸、および／またはホスホリパーゼＡ２活性のレベルでの少なくとも２倍の増加が、前記サンプルにおける老化細胞の存在を示している、
上記方法。
［態様１８］老化細胞を除去するための候補化合物をスクリーニングする方法であって、
ａ）少なくとも１つの試験化合物を、老化細胞のサンプルと接触させるステップ、
ｂ）アラキドン酸の細胞内レベルを測定する、および／またはアポトーシスを測定する、および／または細胞生存率を測定するステップ、ならびに
ｃ）未処置の老化細胞と比較して、試験化合物と接触させた老化細胞において、アラキドン酸の細胞内蓄積、高いアポトーシス、および／または低い細胞生存率を起こす試験化合物を選択するステップ
を含む、上記方法。
【外国語明細書】