特開 2024-125140 アズブジンと化学療法剤とを含む抗腫瘍医薬組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024125140

(43)【公開日】2024-09-13

(54)【発明の名称】アズブジンと化学療法剤とを含む抗腫瘍医薬組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7068 20060101AFI20240906BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240906BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240906BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240906BHJP

   A61K 31/4164 20060101ALI20240906BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240906BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20240906BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20240906BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7068

A61K45/00

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K31/4164

A61K39/395 N

A61K31/337

A61K31/675

【審査請求】未請求

【請求項の数】7

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023083815

(22)【出願日】2023-05-22

(31)【優先権主張番号】202310201602.2

(32)【優先日】2023-03-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(71)【出願人】

【識別番号】523187789

【氏名又は名称】ホーナン・ジェニュイン・バイオテック・カンパニー・リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100122644

【弁理士】

【氏名又は名称】寺地 拓己

(74)【代理人】

【識別番号】100220098

【弁理士】

【氏名又は名称】宮脇 薫

(72)【発明者】

【氏名】パン・リー

(72)【発明者】

【氏名】リミン・ジア

(72)【発明者】

【氏名】ジヨン・シン

(72)【発明者】

【氏名】ザオヤン・ワン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC75

4C085AA14

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA02

4C086BC38

4C086DA38

4C086EA17

4C086MA02

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZC75

(57)【要約】      （修正有）

【課題】腫瘍疾患を予防又は治療するための、アズブジンと化学療法剤とを含む医薬組成物を提供する。
【解決手段】（ｉ）アズブジン或いはその薬学的に許容される塩、立体異性体又はアイソトープ誘導体と、（ｉｉ）カペシタビン、シクロホスファミド、ダカルバジン、パクリタキセルに代表される化学療法剤、又はアバスチンと、を含む医薬組成物とする。本発明の医薬組成物は、抗腫瘍においてより優れた相乗効果を示し、化学療法剤の用量を減らし、有効性と安全性を高めることができ、それによって患者の生存期間を延長することが図れる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）アズブジン或いはその薬学的に許容される塩、立体異性体又はアイソトープ誘導体と、
（ｉｉ）化学療法剤と、を含む医薬組成物。

【請求項2】

前記化学療法剤が、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファジミン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、フォリン酸、ドキソルビシンリポソーム、ダウノルビシンリポソーム、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パリイッタジン（ｐａｌｉｉｔｔａｚｉｎｅ）、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テガフルウラシル、テモゾロミド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

前記化学療法剤が、カペシタビン、シクロホスファミド、ダカルバジン、パクリタキセル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項１又は２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

（ｉ）アズブジン或いはその薬学的に許容される塩、立体異性体又はアイソトープ誘導体と、
（ｉｉ）アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）と、を含む、医薬組成物。

【請求項5】

前記（ｉ）及び（ｉｉ）が同時に、別々に、又は連続的に投与されるか、或いは前記（ｉ）及び（ｉｉ）が同一の剤形に存在する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項6】

腫瘍関連疾患を治療するために使用される、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記腫瘍関連疾患が、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、脳腫瘍、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓がん、結腸直腸癌、肺癌、腎がん、皮膚癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、肉腫、脂肪肉腫、骨軟骨腫、骨腫、骨肉腫、セミノーマ、精巣腫瘍、子宮癌、頭頸部腫瘍、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、真性多血症、白血病、甲状腺腫瘍、尿管腫瘍、膀胱腫瘍、胆嚢がん、非小細胞肺癌、胆管癌、及び絨毛癌からなる群より選択される、請求項６に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医薬品の分野に属し、具体的にはアズブジンを含む抗腫瘍医薬組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

デオキシシチジンキナーゼ（ＤＣＫ）は、幅広い基質の特異性を備えた酵素であり、ピリミジン及びプリンデオキシヌクレオシドをリン酸化することができ、デオキシヌクレオシド生合成のサルベージ経路における肝要な酵素であり、正常なＤＮＡ代謝を維持して様々な抗ウイルス及び抗がんのヌクレオシド類似体薬物（これらの薬物は、リン酸化された後にのみ活性化され、それによって腫瘍の増殖を阻害する。）をリン酸化することができる。過去数十年間、広く研究されているアポトーシスについての放射線治療戦略は、腫瘍治療に重要な手段の１つになっている。

【0003】

アズブジン（ＦＮＣ）は、広域スペクトルＲＮＡウイルス阻害剤であり、人工的に合成されたウイルスＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）のヌクレオシド類似体として、細胞内で抗ウイルス活性を有する５’－三リン酸塩代謝物（アズブジン三リン酸塩）に代謝され、新型コロナウイルスポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）に特異的に作用することができ、ウイルスのＲｄＲｐを標的として宿主細胞においてＲｄＲｐの活性を阻害することにより、ＲＮＡ鎖の合成と複製をブロックすることができる。２０２１年７月に、アズブジン錠は、ウイルス量の高い成人のＨＩＶ－１感染患者を治療するために用いられるのが中国での販売に承認された。また、２０２２年７月に、アズブジンは、新型コロナウイルス感染症の治療薬として承認された。

【0004】

特許文献ＣＮ２０１０１０５０６５９５．Ｘには、結腸がん、肝臓癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳がん、子宮頸癌、白血病、リンパ腫などの腫瘍を治療するためにアズブジンを使用することが開示されている。アズブジンは様々なヒトのがん細胞や動物の移植腫瘍に対して明らかな抑制効果を有することが見られた。

【0005】

従来の腫瘍治療法の中で、化学療法は、その治療効果が強く、薬効が高いという特徴により、最も広く使用されている臨床腫瘍治療法になっている。そして、現在臨床で使用されている化学療法薬は、ほとんど選択性が低く、腫瘍組織を治療する一方で、人体の正常な組織にも大きな損傷を与え、重篤な毒副作用を引き起こす恐れがある。

【0006】

単剤療法には、物理的及び化学的な特性が悪く、生体利用率が低く、有効性が低いなどの欠点がある。そこで、化学療法薬をアズブジンと併用できれば、腫瘍効果を高める可能性がある。抗腫瘍メカニズムにおける２つの薬物間の補完的な相乗効果に基づいて、両薬とも腫瘍細胞を標的とすることにより、化学療法と免疫が協働して抗腫瘍効果を高めることを図る。

【発明の概要】

【0007】

本開示は、アズブジン（ＦＮＣ）と化学療法剤の医薬組成物、及び腫瘍疾患を予防又は治療するための医薬品の調製におけるこの医薬組成物の使用を提供する。

【0008】

本発明の医薬組成物は、各単剤と比較して、以下の利点を有する。
１．併用後、各単剤の腫瘍抑制効果が向上した。
２．薬剤耐性の発生が遅くなり、有効性及び安全性が向上し、それによって患者の生存期間を延長することが図れる。

【0009】

本発明の技術的課題を解決するために、本発明は、
（ｉ）アズブジン或いはその薬学的に許容される塩、立体異性体又はアイソトープ誘導体と、
（ｉｉ）化学療法剤と、を含む医薬組成物を提供する。

【0010】

本発明の好ましい技術的態様において、前記化学療法剤は、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファジミン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、フォリン酸、ドキソルビシンリポソーム、ダウノルビシンリポソーム、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パリイッタジン（ｐａｌｉｉｔｔａｚｉｎｅ）、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テガフ－ルウラシル、テモゾロミド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トリオスファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。

【0011】

本発明の好ましい技術的態様において、前記化学療法剤は、カペシタビン、シクロホスファミド、ダカルバジン、パクリタキセル及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。

【0012】

また、本発明は、
（ｉ）アズブジン或いはその薬学的に許容される塩、立体異性体又はアイソトープ誘導体と、
（ｉｉ）アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）と、を含む別の医薬組成物を提供する。

【0013】

本発明の好ましい技術的態様において、前記（ｉ）及び（ｉｉ）は同時に、別々に、又は連続的に投与されるか、或いは前記（ｉ）及び（ｉｉ）は同一の剤形に存在する。

【0014】

本発明の好ましい技術的態様において、腫瘍関連疾患を治療するために使用される。

【0015】

本発明の好ましい技術的態様において、前記腫瘍関連疾患は、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、脳腫瘍、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓がん、結腸直腸癌、肺癌、腎がん、皮膚癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、肉腫、脂肪肉腫、骨軟骨腫、骨腫、骨肉腫、セミノーマ、精巣腫瘍、子宮癌、頭頸部腫瘍、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、真性多血症、白血病、甲状腺腫瘍、尿管腫瘍、膀胱腫瘍、胆嚢がん、非小細胞肺癌、胆管癌、及び絨毛癌からなる群より選択される。

【0016】

いくつかの実施形態において、前記アズブジンの用量は１～１００ｍｇの範囲であり、前記化学療法剤の用量は１～５００ｍｇの範囲である。

【0017】

いくつかの実施形態において、前記アズブジンの用量は１～１００ｍｇの範囲であり、前記ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）の用量は１～５００ｍｇの範囲である。

【0018】

本開示に記載されるアズブジンの用量は、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇ、５１ｍｇ、５２ｍｇ、５３ｍｇ、５４ｍｇ、５５ｍｇ、５６ｍｇ、５７ｍｇ、５８ｍｇ、５９ｍｇ、６０ｍｇ、６１ｍｇ、６２ｍｇ、６３ｍｇ、６４ｍｇ、６５ｍｇ、６６ｍｇ、６７ｍｇ、６８ｍｇ、６９ｍｇ、７０ｍｇ、７１ｍｇ、７２ｍｇ、７３ｍｇ、７４ｍｇ、７５ｍｇ、７６ｍｇ、７７ｍｇ、７８ｍｇ、７９ｍｇ、８０ｍｇ、８１ｍｇ、８２ｍｇ、８３ｍｇ、８４ｍｇ、８５ｍｇ、８６ｍｇ、８７ｍｇ、８８ｍｇ、８９ｍｇ、９０ｍｇ、９１ｍｇ、９２ｍｇ、９３ｍｇ、９４ｍｇ、９５ｍｇ、９６ｍｇ、９７ｍｇ、９８ｍｇ、９９ｍｇ、１００ｍｇから選択される。

【0019】

本開示に記載される化学療法剤の用量は、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇ、５１ｍｇ、５２ｍｇ、５３ｍｇ、５４ｍｇ、５５ｍｇ、５６ｍｇ、５７ｍｇ、５８ｍｇ、５９ｍｇ、６０ｍｇ、６１ｍｇ、６２ｍｇ、６３ｍｇ、６４ｍｇ、６５ｍｇ、６６ｍｇ、６７ｍｇ、６８ｍｇ、６９ｍｇ、７０ｍｇ、７１ｍｇ、７２ｍｇ、７３ｍｇ、７４ｍｇ、７５ｍｇ、７６ｍｇ、７７ｍｇ、７８ｍｇ、７９ｍｇ、８０ｍｇ、８１ｍｇ、８２ｍｇ、８３ｍｇ、８４ｍｇ、８５ｍｇ、８６ｍｇ、８７ｍｇ、８８ｍｇ、８９ｍｇ、９０ｍｇ、９１ｍｇ、９２ｍｇ、９３ｍｇ、９４ｍｇ、９５ｍｇ、９６ｍｇ、９７ｍｇ、９８ｍｇ、９９ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７０ｍｇ、３８０ｍｇ、３９０ｍｇ、４００ｍｇ、４１０ｍｇ、４２０ｍｇ、４３０ｍｇ、４４０ｍｇ、４５０ｍｇ、４６０ｍｇ、４７０ｍｇ、４８０ｍｇ、４９０ｍｇ、５００ｍｇから選択される。

【0020】

いくつかの実施形態において、前記アズブジンは、用量が１～１００ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回、１日２回又は１日３回でよく、また、前記化学療法剤は、用量が１～５００ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回、１日２回又は１日３回でよい。

【0021】

いくつかの実施形態において、前記アズブジンは、用量が１～５０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回又は１日２回でよく、また、前記化学療法剤は、用量が１～１００ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回である。

【0022】

いくつかの実施形態において、前記アズブジンは、用量が１～２０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回又は１日２回でよく、また、前記化学療法剤は、用量が１～４０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回である。

【0023】

いくつかの実施形態において、前記アズブジンは、用量が１～１０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回又は１日２回でよく、また、前記化学療法剤は、用量が１～１０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回である。

【0024】

いくつかの実施形態において、前記化学療法剤は、用量が、１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇであり、投与頻度が１日１回又は１日２回であり、また、前記化学療法剤は、用量が、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、６０ｍｇであり、投与頻度が１日１回である。

【0025】

いくつかの実施形態において、前記アズブジンは、用量が、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇであり、投与頻度が１日１回又は１日２回であり、また、前記アズブジンは、用量が、１ｍｇ、２ｍｇ、４ｍｇ、６ｍｇであり、投与頻度が１日１回である。

【0026】

いくつかの実施形態において、前記化学療法剤は、用量が、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇであり、投与頻度が１日１回又は１日２回であり、また、前記化学療法剤は、用量が、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、６０ｍｇであり、投与頻度が１日１回である。

【0027】

いくつかの実施形態において、前記化学療法剤は、用量が、１ｍｇ、２ｍｇ、４ｍｇ、６ｍｇ、８ｍｇであり、投与頻度が１日１回又は１日２回であり、また、前記化学療法剤は、用量が、１ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇであり、投与頻度が１日１回である。

【0028】

本発明による併用投与経路としては、経口投与、非経口投与、経皮投与である。前記非経口投与には、静脈内注射、皮下注射、筋肉注射が含まれるが、以下に限定されず、好ましくは経口投与である。

【0029】

また、本発明は、上記アズブジンと、化学療法剤と、一つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤との医薬組成物を提供する。前記医薬組成物は、任意の薬学的に許容される剤形にすることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、滴丸剤、粒剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、注射剤（インフュジョン、注射用無菌粉末及び注射用濃溶液を含む）、坐剤、吸入剤又はスプレー剤として製剤化することができる。前記医薬組成物は、同一の剤形にすることもでき、例えば、アズブジン及び化学療法剤は、複合錠剤、複合カプセル剤、複合滴丸剤、複合粒剤、複合溶液剤、複合懸濁剤、複合シロップ剤、複合注射剤（インフュジョン、注射用無菌粉末及び注射用濃溶液を含む）、複合坐剤、複合吸入剤又は複合スプレー剤として製剤化することができる。

【0030】

また、本発明は、有效量の上記アズブジン及び有効量の上記化学療法剤を患者に投与することを含む腫瘍疾患の治療方法を提供する。

【0031】

また、本発明は、本開示に記載されるアズブジンと化学療法剤の医薬組成物が包装された、腫瘍疾患を治療するための薬物において使用するための医薬キットを提供する。

【0032】

本発明では、アズブジンと化学療法剤を併用投与することにより、腫瘍疾患を治療するための薬物の効果の増強が図れる。

【0033】

本発明に記載される「併用」は、投与方式であり、所定の期間内に少なくとも１つの用量のアズブジンと少なくとも１つの用量の化学療法剤を投与し、両方の薬剤とも薬理学的効果を示すことを指す。前記期間は、一つの投与周期内としてもよく、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、又は２４時間以内であることが好ましく、１２時間以内であることがより好ましい。アズブジン及び化学療法剤は、同時に投与されてもよく、連続して投与されてもよい。この期間には、アズブジン及び化学療法剤が同じ投与経路又は異なる投与経路で投与されるような治療が含まれる。

【図面の簡単な説明】

【0034】

【図1】図１は、ヒト結腸がんＣＯＬＯ ２０５腫瘍モデルにおける皮下異種移植の腫瘍体積に対するアズブジンとカペシタビン（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）の単独又は併用の影響である。

【図2】図２は、ヒト結腸直腸癌ＬｏＶｏ腫瘍モデルにおける皮下異種移植の腫瘍体積に対するアズブジンとカペシタビンの単独又は併用の影響である。

【図3】図３は、ヒトバーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ）細胞Ｄａｕｄｉ腫瘍モデルにおける皮下異種移植の腫瘍体積に対するアズブジンとシクロホスファミド（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）の単独又は併用の影響である。

【図4】図４は、ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞ＭＯＬＴ４腫瘍モデルにおける皮下異種移植の腫瘍体積に対するアズブジンとシクロホスファミドの単独又は併用の影響である。

【図5】図５は、ヒト卵巣がんＯＶＣＡＲ－８腫瘍モデルにおける皮下異種移植の腫瘍体積に対するアズブジンとパクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）の単独又は併用の影響である。

【図6】図６は、ヒト卵巣がんＯＶＣＡＲ－８腫瘍モデルにおける皮下異種移植の腫瘍体積に対するアズブジンとアバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）の単独又は併用の影響である。

【図7】図７は、ヒト黒色腫Ａ２０５８腫瘍モデルにおける皮下異種移植の腫瘍体積に対するアズブジンとダカルバジン（Ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）の単独又は併用の影響である。

【発明を実施するための形態】

【0035】

以下、本開示を実施例に合わせてより詳細に説明する。本開示の実施例は、本開示の技術的態様を説明するためにのみ使用され、本開示の本質及び範囲を限定するものではない。

【0036】

実験材料
実験動物及び飼育環境
実験動物
雌、７～８週齢（腫瘍細胞の接種時のマウスの週齢）、体重１５．７～２０．７ｇ、６８匹（４８匹に２０匹の残りマウスを加え）のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを使用した。マウスは、北京維通利華実験動物技術有限公司から購入され、ＳＰＦグレードの飼育環境に飼育された。実験動物を、恒温恒湿の独立換気ボックスに、２０～２６oＣの飼育室の温度下、４０～７０％湿度下、１０～２０回／時間で換気を行い昼と夜の明暗交替時間を１２ｈ／１２ｈとした条件下で、飼育し、また、コバルト６０放射線滅菌マウス全価ペレット飼料を継続的に供給して制限なく自由に摂取させ、高圧蒸気滅菌された水道水を飲料水ボトルに常に供水して自由に飲ませた。飼育マウスボックスとして、高圧滅菌された規格３２５ｍｍ×２１０ｍｍ×１８０ｍｍのポリサルフォンマウスボックスを使用した。

【0037】

実施例１ Ｃｏｌｏ ２０５ヒト結腸がんモデルにおけるアズブジンとカペシタビンの併用の抗腫瘍効果に関する試験結果と考察
細胞培養
Ｃｏｌｏ ２０５細胞は、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培養液で培養した。指数増殖期のＣｏｌｏ ２０５細胞を適切な濃度になるようにＰＢＳに再懸濁してＭａｔｒｉｇｅｌと１：１で混合した後、マウスの皮下腫瘍接種に供し、雌マウスの右側皮下に５×１０^６Ｃｏｌｏ ２０５細胞を接種し、接種当日を０日目とした。腫瘍の平均体積が１１０．２６ｍｍ^３になったとき、腫瘍の大きさに基づいてランダムにグループ分けした。

【0038】

相対的腫瘍増殖率は、Ｔ／Ｃ％として表し、ある時点での治療群と対照群の相対的腫瘍体積又は腫瘍重量のパーセンテージ値であり、次の式で算出した。
有効性評価基準
Ｔ／Ｃ％＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ただし、ＴＲＴＶは治療群の平均ＲＴＶで、ＣＲＴＶは溶媒対照群の平均ＲＴＶであり、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０、Ｖ０はグループ分けされたときの動物の腫瘍体積で、Ｖｔは治療後の動物の腫瘍体積である。）
又は、Ｔ／Ｃ％＝ＴＴＷ／ＣＴＷ×１００％（但し、ＴＴＷは治療群の実験終了時の平均腫瘍重量であり、ＣＴＷは溶媒対照群の実験終了時の平均腫瘍重量である）。

【0039】

相対的腫瘍抑制率は、ＴＧＩ（％）として表し、次の式：
ＴＧＩ％＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％（但し、ＴとＣは、それぞれ所定の時点での治療群と対照群の相対的腫瘍体積（ＲＴＶ）又は腫瘍重量（ＴＷ）である。）で算出した。

【0040】

腫瘍接種後２５日目（グループ分け後２０日目）に、溶媒群ではマウスの平均腫瘍体積が１４６５．４７ｍｍ^３であった。被験薬単剤群であるアズブジン１ｍｇ／ｋｇ治療群では、平均腫瘍体積が９８５．１４ｍｍ^３であり、対照群と比較して統計学的有意差が見られなく（ｐ＝０．５４０）、相対的腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）が３２．４３％であった。カペシタビン４００ｍｇ／ｋｇ治療群では、平均腫瘍体積がそれぞれ２６４．９６ｍｍ^３であり、対照群と比較して統計学的有意差が見られ（ｐ＜０．００１）、相対的腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）が８１．９３％であった。アズブジン１ｍｇ／ｋｇとカペシタビン４００ｍｇ／ｋｇの併用群では、平均腫瘍体積がそれぞれ１４４．７６ｍｍ^３であり、対照群と比較して統計学的有意差が見られ（＜０．００１）、相対的腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）が９０．１４％であった。

【0041】

【表1】

【0042】

【表2】

【0043】

腫瘍重量抑制の結果

【0044】

【表3】

【0045】

実施例２ ヒト結腸がんＬｏＶｏ細胞におけるアズブジンとカペシタビンの併用の薬力学研究
細胞培養
ヒト結腸がん細胞ＬｏＶｏ（カタログ番号：ＥＣＡＣＣ－８７０６０１０１）をインビトロで単層培養した。培養条件は、Ｆ１２Ｋ培地に１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを加え、３７oＣ、５％ＣＯ_２インキュベーターで培養したことにした。トリプシン－ＥＤＴＡによる通常の消化を、継代のために週に２回行った。細胞の飽和度が８０％～９０％になって必要な数に達したら、細胞を収集し、カウントして接種した。

【0046】

ＬｏＶｏ細胞０．１ｍＬ（１０×１０^６）を各マウスの右背中に皮下接種し、腫瘍の平均体積が約１４７ｍｍ^３に達したときにグループに分けて投薬を開始した。

【0047】

【表4】

【0048】

実験結果
Ｌｏｖｏ細胞皮下異種移植腫瘍ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに被験薬を投与した後の各群の腫瘍体積変化（投与２１日後）を表５に、腫瘍重量変化を表６に示す。

【0049】

【表5】

【0050】

【表6】

【0051】

この実験では、ＬｏＶｏ異種移植腫瘍モデルにおける被験薬のインビボ薬効を評価した。投与２１日後の各群の腫瘍体積、腫瘍重量をそれぞれ表５、表６及び２に示す。投与開始２１日後、ブランク対照群では、担癌マウスの腫瘍体積が１４８１ｍｍ^３に達した。被験薬アズブジン（１ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較してわずかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が９０２ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが６２．００％、ＴＧＩが４３．４０％、ｐ値が０．０８６であった。被験薬カペシタビン（４００ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較してわずかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が９１９ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが６０．９４％、ＴＧＩが４２．１１％、ｐ値が０．６９６であった。

【0052】

被験薬併用群であるアズブジン＋カペシタビン（１＋４００ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して明らかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が６７６ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが４８．１８％、ＴＧＩが６０．２９％、ｐ値が０．２８２であった。アズブジン＋カペシタビンの併用投与により、このＬｏＶｏ結腸直腸腫瘍における単剤カペシタビンの抗腫瘍効果を高めることができ、ＴＧＩが４２．１％から６０．３％に増加した。

【0053】

実施例３ ヒトバーキットリンパ腫細胞Ｄａｕｄｉの皮下異種移植腫瘍モデルに対するアズブジンとシクロホスファミドの併用のインビボ薬力学
ヒトバーキットリンパ腫細胞Ｄａｕｄｉ（カタログ番号：ＤＳＭＺ－ＡＣＣ１２９）をインビトロで浮遊培養した。培養条件は、ＲＰＭＩ １６４０培地に１０％ウシ胎児血清、２ｍＭのグルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを加え、３７oＣ、５％ＣＯ_２インキュベーターで培養したことにした。細胞の飽和度が８０％～９０％になって必要な数に達したら、細胞を収集し、カウントして接種した。

【0054】

腫瘍細胞の接種
Ｄａｕｄｉ細胞（マトリゲル添加、体積比１：１）０．２ｍＬ（１０×１０^６）を各マウスの右背中に皮下接種し、腫瘍の平均体積が約１００ｍｍ^３に達したときグループに分けて投薬を開始した。

【0055】

【表7】

【0056】

実験結果
Ｄａｕｄｉ細胞皮下異種移植腫瘍ＣＢ １７ ＳＣＩＤマウスに被験薬を投与した後の各群の腫瘍体積、腫瘍重量の変化を表８、表９に示す。

【0057】

【表8】

【0058】

【表9-1】

【0059】

この実験では、Ｄａｕｄｉ異種移植腫瘍モデルにおける被験薬のインビボ薬効を評価した。異なる時点での各群の腫瘍体積を表８、表９－１に示す。投与開始２７日後、ブランク対照群では、担癌マウスの腫瘍体積が２，８９５ｍｍ^３に達した。被験薬アズブジン（１ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して明らかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積がそれぞれ９０９ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが３０．６４％、ＴＧＩが７１．０９％、ｐ値が＜０．０００１であった。被験薬シクロホスファミド（５０ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して明らかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積がそれぞれ２６３ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが８．８３％、ＴＧＩが９４．１７％、ｐ値が＜０．０００１であった。被験薬併用群であるアズブジン＋シクロホスファミド（１＋５０ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して明らかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が１３ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが０．４２％、ＴＧＩが１０３．１５％、ｐ値が＜０．０００１であった。

【0060】

この実験では、被験薬アズブジン（１ｍｇ／ｋｇ）とシクロホスファミドの併用により、このヒトバーキットリンパ腫細胞Ｄａｕｄｉにおける単剤ＣＴＸの抗腫瘍効果を高めることができ、ＴＧＩが９４．１７％から１０３．１５％に増加した。

【0061】

実施例４ ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞ＭＯＬＴ４の細胞皮下異種移植腫瘍モデルに対するアズブジンとシクロホスファミドの併用のインビボ薬力学研究
細胞培養
ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞ＭＯＬＴ４（カタログ番号：ＥＣＡＣＣ－８５０１１４１３）をインビトロで浮遊培養した。培養条件は、ＲＰＭＩ１６４０培地に１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを加え、３７oＣ、５％ＣＯ_２インキュベーターで培養したことにした。細胞の飽和度が８０％～９０％になって必要な数に達したら、細胞を収集し、カウントして接種した。

【0062】

腫瘍細胞の接種
ＭＯＬＴ４細胞（マトリゲル添加、体積比１：１）０．２ｍＬ（１０×１０^６個）を各マウスの右背中に皮下接種し、腫瘍の平均体積が約１４８ｍｍ^３に達したときにグループに分けて投薬を開始した。

【表9-2】

【0063】

ＭＯＬＴ４細胞皮下異種移植腫瘍ＳＣＩＤ Ｂｅｉｇｅマウスに被験薬を投与した後の各群の腫瘍体積及び重量の変化を表１０、表１１に示す。

【0064】

【表10】

【0065】

【表11】

【0066】

この実験では、ＭＯＬＴ４異種移植腫瘍モデルにおける被験薬のインビボ薬効を評価した。異なる時点での各群の腫瘍体積を表１０、表１１に示す。投与開始２８日後、ブランク対照群では、担癌マウスの腫瘍体積が２，８９６ｍｍ^３に達した。被験薬アズブジン（１ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が９７９ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが３３．８９、ＴＧＩが６９．７３％、ｐ値＜０．０００１であった。シクロホスファミドＣＴＸ（５０ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して明らかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が７１６ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが２４．５３％、ＴＧＩが７９．３４％、ｐ値が＜０．０００１であった。被験薬併用群であるアズブジン＋シクロホスファミド（１＋５０ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して明らかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が２５３ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが８．７５％、ＴＧＩが９６．１４％、ｐ値が＜０．００１であった。被験薬併用群における腫瘍重量の分析及び統計結果は、腫瘍体積のデータと基本的に合致している。

【0067】

この実験では、被験薬アズブジン（１ｍｇ／ｋｇ）、シクロホスファミド（５０ｍｇ／ｋｇ）及びアズブジン＋シクロホスファミド（１＋５０ｍｇ／ｋｇ）は、試験用量でＭＯＬＴ４異種移植腫瘍の増殖に対して有意な抑制効果を示した。この実験では、被験薬アズブジン（１ｍｇ／ｋｇ）とシクロホスファミドの併用により、ＭＯＬＴ４ヒト急性淋巴母細胞白血病腫瘍における単剤シクロホスファミドの抗腫瘍効果を高めることができ、ＴＧＩが７９．３４％から９６．１４％に増加した。

【0068】

実施例５ ヒト卵巣がんＯＶＣＡＲ－８腫瘍モデルにおけるアズブジンとパクリタキセルの併用の有効性評価
ＯＶＣＡＲ－８細胞を１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培養液で培養した。指数増殖期のＯＶＣＡＲ－８細胞を採取し、適切な濃度になるようにＰＢＳに再懸濁してＭａｔｒｉｇｅｌと１：１で混合した後、マウスの皮下腫瘍接種に供した。

【0069】

雌マウスの右側皮下に１×１０^７ＯＶＣＡＲ－８細胞を接種した。腫瘍の平均体積が１７４．２５ｍｍ^３になったとき、腫瘍の大きさに基づいてランダムにグループ分けした。

【0070】

この実験に用いられた動物実験の実験方案は、ＣｒｏｗｎＢｉｏ ＩＡＣＵＣ委員会によって審査及び承認された。実験中、動物実験はＡＡＡＬＡＣの要件に従って実行された。腫瘍接種後に、腫瘍の増殖及び治療が動物の正常な行動に対して与える影響を含む定期的なモニタリングを行い、具体的には、実験動物の活動性、摂食と飲水状況、体重の増減（週２回体重測定）、目、被毛及び他の異常常態をモニタリングした。実験中に観察された臨床症状を生データとして記録した。腫瘍体積は、腫瘍体積（ｍｍ^３）＝１／２×（ａ×ｂ^２）（ただし、ａは長径、ｂは短径を表す）で算出した。

【0071】

相対的腫瘍増殖率は、Ｔ／Ｃ％として表し、ある時点での治療群と対照群の相対的腫瘍体積又は腫瘍重量のパーセンテージ値であり、次の式で算出した。
Ｔ／Ｃ％＝Ｔ_ＲＴＶ／Ｃ_ＲＴＶ×１００％（ただし、Ｔ_ＲＴＶは治療群の平均ＲＴＶで、Ｃ_ＲＴＶは溶媒対照群の平均ＲＴＶであり、ＲＴＶ＝Ｖ_ｔ／Ｖ_０、Ｖ_０はグループ分けされたときの動物の腫瘍体積で、Ｖ_ｔは治療後の動物の腫瘍体積である。）
又は、Ｔ／Ｃ％＝Ｔ_ＴＷ／Ｃ_ＴＷ×１００％（ただし、Ｔ_ＴＷは治療群の実験終了時の平均腫瘍重量で、Ｃ_ＴＷは溶媒対照群の実験終了時の平均腫瘍重量である。）

【0072】

相対的腫瘍抑制率は、ＴＧＩ（％）として表し、次の式：
ＴＧＩ％＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％（ただし、ＴとＣは、それぞれ治療群と対照群のある特定の時点での相対的腫瘍体積（ＲＴＶ）又は腫瘍重量（ＴＷ）である）で算出した。

【0073】

異なる治療群におけるある日の腫瘍体積を比較するために、まず、バートレット検定（Bartlett's test）にてすべての群間の等分散性の仮定を検証した。バートレット検定のｐ値が０．０５以上である場合、一元配置分散分析は、すべての群の平均値が等しいかどうかを検定するために使用された。一元配置分散分析のｐ値が０．０５未満である場合、テューキーのＨＳＤ検定にてすべての群間のペアワイズ比較を行うか、又はダネットの検定（Dunnett's test）にて各治療群と対照群の間のペアワイズ比較を行った。バートレット検定のｐ値が０．０５未満である場合、クラスカル・ウォリス検定（Kruskal-Wallis test）は、すべての群の中央値が等しいかどうかを検定するために使用された。クラスカル・ウォリス検定のｐ値が０．０５未満である場合、コノバー検定（Conover test）にてすべて群間のペアワイズ比較を行うか、又は各治療群と対照群の間のペアワイズ比較を行い、また複数の検定のグループ数に基づいて対応するｐ値の補正を行った。

【0074】

さらに、探索的データ分析の目的で、任意の時点ですべての群間のペアワイズ比較を行った。この比較では、特定の時点で比較される２つの群の腫瘍体積データのみを使用したため、複数の検定の補正は必要ではなかった。まず、バートレット検定を使用して２つの群間の等分散性の仮定を検証し、バートレット検定のｐ値が０．０５以上である場合、ウェルチのｔ検定（Welch's t test）にて２つの群の平均値が等しいかどうかを比較したが、バートレット検定のｐ値が０．０５未満である場合、マン・ホイットニーのＵ検定（Mann-Whitney U test）にて２つの群の中央値が等しいかどうかを比較した。

【0075】

すべての統計分析及びグラフ化は、Ｒ言語環境（バージョン３．３．１版）で実行された。特に明記しない限り、すべての検定は両側検定であり、ｐ値が０．０５未満の場合は統計的に有意であると見なされた。

【0076】

実験結果
投与後３４日目に、溶媒対照群では、腫瘍体積が５５８．６８ｍｍ^３であった。被験薬アズブジン１ｍｇ／ｋｇ治療群、陽性薬パクリタキセル１５ｍｇ／ｋｇ治療群、性薬アバスチン１０ｍｇ／ｋｇ治療群では、平均腫瘍体積がそれぞれ４６０．６７ｍｍ^３、４０３．４０ｍｍ^３、４５６．０４ｍｍ^３であり、対照群と比較して統計学的有意差が見られなく（ｐ＝０．９５２、０．７６９及び０．９５７）、相対的腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）がそれぞれ１８．０９％、２６．４９％及び１７．７０％であった。被験薬アズブジン１ｍｇ／ｋｇとパクリタキセル１５ｍｇ／ｋｇを併用した治療群では、平均腫瘍体積が１５７．３４ｍｍ^３であり、対照群と比較して統計学的有意差が見られ（ｐ＝０．００７０７）、相対的腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）が７１．５７％であった。被験薬アズブジンとパクリタキセルを併用投与したところ、パクリタキセル単剤の抗腫瘍効果が有意に改善された（ＴＧＩが２６．５％であった）。被験薬アズブジン１ｍｇ／ｋｇとアバスチン１０ｍｇ／ｋｇを併用した治療群では、平均腫瘍体積が２９４．３６ｍｍ^３であり、対照群と比較して統計学的有意差が見られ（ｐ＝０．１４０）、相対的腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）が４８．６１％であった。被験薬アズブジンとアバスチンを併用投与したところ、アバスチン単剤の抗腫瘍効果が有意に改善された（ＴＧＩが１７．７０％であった）。各治療群と対照群の腫瘍増殖状況を表１２に示す。

【0077】

【表12】

【0078】

実施例６ ヒト黒色腫Ａ２０５８細胞の皮下異種移植腫瘍モデルに対するアズブジンとダカルバジンの併用のインビボ薬力学研究
ヒト黒色腫細胞Ａ２０５８（カタログ番号：ＣＲＬ－１１１４７）をインビトロで単層培養した。培養条件は、ＤＭＥＭ培地に１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを加え、３７oＣ、ＣＯ_２インキュベーターで培養したことにした。トリプシン－ＥＤＴＡによる通常の消化を、継代のために週に２回行った。細胞の飽和度が８０％～９０％になって必要な数に達したら、細胞を収集し、カウントして接種した。

【0079】

腫瘍細胞の接種
マトリゲル添加Ａ２０５８細胞０．２ｍＬ（５×１０^６）を各マウスの右背中に皮下接種し、腫瘍の平均体積が約１３６ｍｍ^３に達したときにグループに分けて投薬を開始した。
実験結果の分析

【0080】

【表13】

【0081】

この実施例では、Ａ２０５８異種移植腫瘍モデルにおける被験薬のインビボ薬効を評価した。異なる時点での各群の腫瘍体積を表１３に示す。投与開始１４日後、ブランク対照群では、担癌マウスの腫瘍体積が２７２４ｍｍ^３に達した。被験薬アズブジン（１ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較してわずかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が２２５３ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが７９．６７％、ＴＧＩが１８．２２％、ｐ値が０．５１８であった。ダカルバジン（６０ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が１２５５ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが４４．７７％、ＴＧＩが５６．７４％、ｐ値が０．００２であった。被験薬併用群であるアズブジン＋ダカルバジン（１＋６０ｍｇ／ｋｇ）では、ブランク対照群と比較して明らかな抗腫瘍効果が見られ、腫瘍体積が９１０ｍｍ^３、Ｔ／Ｃが３１．５２％、ＴＧＩが７０．０７％、ｐ値が＜０．００１であった。

【0082】

以上、本発明の具体的な実施形態を説明したが、これらは単なる例であり、本発明の原理及び要旨から逸脱することなく、これらの実施形態に対して様々な変更や修正を加え得ることは、当業者なら理解すべきである。従って、本発明の保護範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義されるものである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】