(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024129078
(43)【公開日】2024-09-26
(54)【発明の名称】極性非水溶媒中の架橋エラストマータンパク質及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/435 20060101AFI20240918BHJP
C07K 17/02 20060101ALI20240918BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240918BHJP
【FI】
C07K14/435
C07K17/02
C07K14/435 ZNA
C12N15/12 ZNA
C12N15/12
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】OL
(21)【出願番号】P 2024103646
(22)【出願日】2024-06-27
(62)【分割の表示】P 2021502541の分割
【原出願日】2019-07-18
(31)【優先権主張番号】62/700,197
(32)【優先日】2018-07-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】516079198
【氏名又は名称】ボルト スレッズ インコーポレイテッド
【住所又は居所原語表記】2261 Market Street, STE 5447 San Francisco, CA 94114 USA
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(74)【代理人】
【識別番号】100221741
【弁理士】
【氏名又は名称】酒井 直子
(74)【代理人】
【識別番号】100114926
【弁理士】
【氏名又は名称】枝松 義恵
(72)【発明者】
【氏名】スミス マシュー ジョーダン
(72)【発明者】
【氏名】イ マイケル ウン-スク
(72)【発明者】
【氏名】ハインリッヒ ミッチェル ジョゼフ
(72)【発明者】
【氏名】イェーレン ポール ジェイムズ
(57)【要約】 (修正有)
【課題】分解を生じる不純物を残さず、且つ大規模で効率的に実施することができる組み換えレシリンタンパク質を架橋する新しい方法、架橋組み換えレシリンを含む組成物、該組成物の製造方法を提供する。
【解決手段】精製組み換えレシリンを含む組成物を提供する工程、過硫酸アンモニウムを含む架橋溶液に前記組み換えレシリンを入れる工程、及び前記架橋溶液中の前記組み換えレシリンを、少なくとも60℃の温度でインキュベートし、それにより、架橋組み換えレシリン固体組成物を生成する工程を含む、組み換えレシリンを架橋する方法である。前記架橋溶液は、光触媒や架橋酵素を含まなくてよい。
【選択図】
図12
【特許請求の範囲】
【請求項1】
精製組み換えレシリンを含む組成物を提供する工程、
過硫酸アンモニウムを含む架橋溶液に前記組み換えレシリンを入れる工程、及び
前記架橋溶液中の前記組み換えレシリンを、少なくとも60℃の温度でインキュベートし、それにより、架橋組み換えレシリン固体組成物を生成する工程
を含む、組み換えレシリンを架橋する方法。
【請求項2】
前記インキュベーションが、少なくとも15分、少なくとも30分、少なくとも45分、少なくとも60分、少なくとも90分、または少なくとも2時間実施される、請求項1に記載の方法。
【請求項3】
前記架橋溶液中の前記組み換えレシリンが、60℃~85℃、70℃~85℃、または75℃~85℃の温度でインキュベートされる、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
【請求項4】
前記インキュベーションが、少なくとも2時間実施される、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
【請求項5】
前記架橋溶液が、光触媒や架橋酵素を含まない、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
【請求項6】
前記架橋された組み換えレシリン固体組成物が、室温で5日間超、10日間超、20日間超、または40日間超で安定である、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
【請求項7】
前記精製組み換えレシリンが、培養物中の改変生物において前記組み換えレシリンをコードする遺伝子を組み換え発現すること、及び前記培養物から発現組み換えレシリンを精製することにより調製される、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
【請求項8】
架橋組み換えレシリンを含む組成物であって、前記組み換えレシリンが、前記レシリンを過硫酸アンモニウム及び熱に曝露することにより架橋されている、前記組成物。
【請求項9】
架橋酵素を含まない、架橋組み換えレシリンを含む組成物。
【請求項10】
光触媒を含まない、架橋組み換えレシリンを含む組成物。
【請求項11】
極性非水溶媒中に架橋組み換えレシリンを含む、組み換えレシリン組成物。
【請求項12】
前記極性非水溶媒が、プロトン性溶媒である、請求項11に記載の組成物。
【請求項13】
前記プロトン性溶媒が、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される、請求項12に記載の組成物。
【請求項14】
前記極性非水溶媒が、非プロトン性溶媒である、請求項11に記載の組成物。
【請求項15】
前記非プロトン性溶媒が、DMSOである、請求項14に記載の組成物。
【請求項16】
20~40重量%のレシリンを含む、請求項11~15のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項17】
サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、前記レシリンが、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンである、請求項11~16のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項18】
前記極性非水溶媒が、前記溶媒の少なくとも60体積%、少なくとも70体積%、少なくとも80体積%、少なくとも90体積%、少なくとも95体積%、少なくとも98体積%、または少なくとも99体積%である、請求項11~17のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項19】
前記組み換えレシリン組成物が、水性溶媒中の同様の架橋組み換えレシリンよりも大きい弾性率を有する、請求項11~18のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項20】
ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、少なくとも10の硬度を含む、請求項11~19のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項21】
ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、約10~約50の硬度を含む、請求項11~20のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項22】
ASTM D7121で測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、約40%~約60%の反発弾性を含む、請求項11~21のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項23】
ASTM D575で測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、約6~約8psiの25%での圧縮応力を含む、請求項11~22のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項24】
Zwick圧縮試験で測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、2kN未満の圧縮力で弾性から塑性へ遷移しない、請求項11~23のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項25】
前記組み換えレシリン組成物が、発泡材料である、請求項11~24のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項26】
水性溶媒中で架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、及び
前記水性溶媒を極性非水溶媒と交換する工程
を含む、組み換えレシリン固体を調製する方法。
【請求項27】
前記極性非水溶媒が、プロトン性溶媒である、請求項26に記載の方法。
【請求項28】
前記プロトン性溶媒が、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される、請求項27に記載の方法。
【請求項29】
前記極性非水溶媒が、非プロトン性溶媒である、請求項26に記載の方法。
【請求項30】
前記非プロトン性溶媒が、DMSOである、請求項29に記載の方法。
【請求項31】
前記溶媒交換が、少なくとも8時間、少なくとも16時間、少なくとも24時間、または少なくとも48時間実施される、請求項26~30のいずれか1項に記載の方法。
【請求項32】
前記溶媒交換が、約60℃で実施される、請求項26~31のいずれか1項に記載の方法。
【請求項33】
サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、前記架橋組み換えレシリン固体組成物が、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンを含む、請求項26~32のいずれか1項に記載の方法。
【請求項34】
前記架橋組み換え固体組成物が請求項1~7のいずれか1項に記載の方法で調製される、請求項26~33のいずれか1項に記載の方法。
【請求項35】
水性溶媒を含む架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、及び
前記水性溶媒を極性非水溶媒で置き換えるために溶媒交換を実施する工程
を含む、架橋組み換えレシリン固体を含む固体組成物の材料特性を調整する方法。
【請求項36】
前記溶媒を置き換えると、前記架橋組み換えレシリン固体組成物の弾性率、弾性、硬度、最大弾性圧縮荷重、または材料寿命が変化する、請求項35に記載の方法。
【請求項37】
精製組み換えレシリンを含む組成物を提供する工程、
過硫酸アンモニウムを含む水性溶媒に前記組み換えレシリンを入れる工程、
前記水性溶媒中の前記組み換えレシリンを、少なくとも60℃の温度でインキュベートし、それにより、架橋組み換えレシリン固体組成物を生成する工程、ならびに
グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、及びDMSOからなる群より選択される極性非水溶媒と、前記水性溶媒を交換する工程
を含む、組み換え架橋レシリン固体を調製する方法。
【請求項38】
水性溶媒中で架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、
前記水性溶媒を極性非水溶媒と交換する工程、及び
前記架橋組み換えレシリン固体組成物に1つ以上の気泡を導入する工程
を含む、組み換えレシリン発泡体を調製する方法。
【請求項39】
前記極性非水溶媒が、プロトン性溶媒である、請求項38に記載の方法。
【請求項40】
前記プロトン性溶媒が、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される、請求項39に記載の方法。
【請求項41】
前記極性非水溶媒が、非プロトン性溶媒である、請求項38に記載の方法。
【請求項42】
前記非プロトン性溶媒が、DMSOである、請求項41に記載の方法。
【請求項43】
前記溶媒交換が、少なくとも8時間、少なくとも16時間、少なくとも24時間、または少なくとも48時間実施される、請求項38~42のいずれか1項に記載の方法。
【請求項44】
前記溶媒交換が、約60℃で実施される、請求項38~43のいずれか1項に記載の方法。
【請求項45】
サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、前記架橋組み換えレシリン固体組成物が、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンを含む、請求項38~44のいずれか1項に記載の方法。
【請求項46】
前記架橋組み換え固体組成物が請求項1~7のいずれか1項に記載の方法で調製される、請求項38~45のいずれか1項に記載の方法。
【請求項47】
前記導入が、前記架橋組み換えレシリン固体組成物に発泡剤を添加することを含む、請求項38~46のいずれか1項に記載の方法。
【請求項48】
前記発泡剤が、化学発泡剤を含む、請求項47に記載の方法。
【請求項49】
前記化学発泡剤が、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、アンモニウム、アゾジカルボンアミド、イソシアナート、ヒドラジン、イソプロパノール、5-フェニルテトラゾール、トリアゾール、4,4’オキシビス(ベンゼンスルホニルヒドラジド)(OBSH)、トリヒドラジントリアジン(THT)、リン酸水素、酒石酸、クエン酸、及びトルエンスルホニルセミカルバジド(TSS)を含む、請求項48に記載の方法。
【請求項50】
前記化学発泡剤が、重炭酸ナトリウムを含む、請求項48に記載の方法。
【請求項51】
前記発泡剤が、物理発泡剤を含む、請求項47に記載の方法。
【請求項52】
前記物理発泡剤が、クロロフルオロカーボン(CFC)、溶存窒素、N2、CH4、H2、CO2、Ar、ペンタン、イソペンタン、ヘキサン、二塩化メチレン、及びジクロロテトラフルオロエタンを含む、請求項51に記載の方法。
【請求項53】
前記物理発泡剤が、溶存窒素を含む、請求項51に記載の方法。
【請求項54】
請求項1~7、25~36、及び38~53のいずれか1項に記載の方法で調製された組成物を含む、靴のインソール。
【請求項55】
極性非水溶媒中の架橋レシリン組成物を含む組成物であって、前記架橋レシリンが発泡されている、前記組成物。
【請求項56】
前記発泡架橋レシリンが、少なくとも50%の多孔性を含む、請求項55に記載の組成物。
【請求項57】
前記発泡架橋レシリンが、約0.01mm~約3mmの平均気泡直径を有する、請求項55に記載の組成物。
【請求項58】
請求項8~25及び請求項55~57のいずれか1項に記載の組成物を含む、靴のインソール。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願との相互参照
本出願は、内容の全体が参照により組み込まれる2018年7月18日に出願された米国仮出願第62/700,197号の利益を主張する。
【背景技術】
【0002】
背景
エラストマータンパク質は、粘弾性の機械的特性を示すポリペプチドであり、エラスチン、レシリン、アブダクチン、及びタコの動脈のエラストマーを含む。レシリンは、負荷及び除荷中にエネルギーをほとんど消費しないので、特に興味深いエラストマータンパク質である。レシリンは、多数の昆虫にみられ、低エネルギー消費により、多数の昆虫種が跳ぶまたは羽を非常に効率的に回転させる特別な能力が可能になる。レシリンは、その特有の特性により、多くの産業用途を有し得る興味深いエラストマー材料である。それ故、必要とされるものは、望ましい機械的特性を有し且つ大規模で効率的な製造に適する新しいレシリン組成物及びそれを作製する方法である。
【0003】
天然のレシリン及びレシリン様タンパク質(レシリン配列に基づく)の様々な変形が、E. coli培養物中の多数の群により組み換え産生されており、組み換え発現されたタンパク質を抽出するために細胞を溶解させ、精製するためにアフィニティークロマトグラフィー手法を使用することにより単離されている(Elvin et al.,2005、Charati et al.,2009、McGann et al.,2013)。天然のレシリンにおいても架橋を形成するチロシン残基を標的とする、組み換え産生されたレシリン及びレシリン様タンパク質が架橋されている(例えば、Elvin et al.,2005、Qin et al.,2011を参照のこと)。リジン残基(Li et al.,2011)またはシステイン残基(McGann et al.,2013)を標的とする組み換え産生されたレシリンも架橋されている。架橋方法は、酵素的に触媒された架橋及び光活性化された架橋を含んでいる。架橋の酵素触媒のための酵素は、最終組成物から除去するのが難しい可能性がある一方、光活性化架橋は、不純物も残しながら、表面のみが光に曝露されるために非効率になり得る。酵素不純物は、レシリンを分解し得る一方、最終的な固体架橋組成物に残った酵素または光触媒のいずれかからの不純物は、望ましくない機械的特性をもたらし得る。それ故、必要とされるものは、分解を生じる不純物を残さず、且つ大規模で効率的に実施することができる組み換えレシリンタンパク質を架橋する新しい方法である。
【発明の概要】
【0004】
改善された架橋レシリン組成物及びこれらの改善された組成物を作製する方法が本明細書で開示される。これらは、レシリン組成物を架橋する新しい方法、及び架橋レシリン固体組成物の材料特性を調整するための極性非水溶媒の使用を含む。
【0005】
一部の実施形態では、組み換えレシリンを架橋する方法が本明細書で提供され、方法は、精製組み換えレシリンを含む組成物を提供する工程、過硫酸アンモニウムを含む架橋溶液に該組み換えレシリンを入れる工程、及び少なくとも60℃の温度で、該架橋溶液中で該組み換えレシリンをインキュベートし、それにより、架橋組み換えレシリン固体組成物を生成する工程を含む。
【0006】
一部の実施形態では、インキュベーションは、少なくとも15分、少なくとも30分、少なくとも45分、少なくとも60分、少なくとも90分、または少なくとも2時間実施される。
【0007】
一部の実施形態では、該架橋溶液中の組み換えレシリンは、60℃~85℃、70℃~85℃、または75℃~85℃の温度でインキュベートされる。
【0008】
一部の実施形態では、インキュベーションは、少なくとも2時間実施される。
【0009】
一部の実施形態では、架橋溶液は、光触媒や架橋酵素を含まない。
【0010】
一部の実施形態では、架橋組み換えレシリン固体組成物は、室温で、5日超、10日超、20日超、または40日超にわたって安定である。
【0011】
一部の実施形態では、精製組み換えレシリンは、培養物中の改変生物において該組み換えレシリンをコードする遺伝子を組み換え発現すること、及び該培養物から発現された組み換えレシリンを精製すること、により調製される。
【0012】
一部の実施形態によると、架橋組み換えレシリンを含む組成物も本明細書で提供され、該組み換えレシリンは、該レシリンを過硫酸アンモニウム及び熱に曝露することにより架橋されている。一部の実施形態では、組成物は、架橋酵素を含まない。一部の実施形態では、組成物は、光触媒を含まない。
【0013】
一部の実施形態では、極性非水溶媒中に架橋組み換えレシリンを含む組み換えレシリン組成物が本明細書に提供される。
【0014】
一部の実施形態では、極性非水溶媒は、プロトン性溶媒である。一部の実施形態では、プロトン性溶媒は、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される。一部の実施形態では、極性非水溶媒は、非プロトン性溶媒である。一部の実施形態では、非プロトン性溶媒は、DMSOである。
【0015】
一部の実施形態では、組成物は、20~40重量%のレシリンを含む。
【0016】
一部の実施形態では、サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、レシリンは、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンである。
【0017】
一部の実施形態では、極性非水溶媒は、該溶媒の、少なくとも60体積%、少なくとも70体積%、少なくとも80体積%、少なくとも90体積%、少なくとも95体積%、少なくとも98体積%、または少なくとも99体積%である。
【0018】
一部の実施形態では、組み換えレシリン組成物は、水性溶媒中の類似の架橋組み換えレシリンよりも大きい弾性率を有する。
【0019】
一部の実施形態では、ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、組み換えレシリン組成物は、少なくとも10の硬度を含む。
【0020】
一部の実施形態では、ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、組み換えレシリン組成物は、約10~約50の硬度を含む。
【0021】
一部の実施形態では、ASTM D7121で測定した場合、組み換えレシリン組成物は、約40%~約60%の反発弾性を含む。
【0022】
一部の実施形態では、ASTM D575で測定した場合、組み換えレシリン組成物は、約6~約8psiの25%での圧縮応力を含む。
【0023】
一部の実施形態では、Zwick圧縮試験により測定した場合、組み換えレシリン組成物は、2kN未満の圧縮力で弾性から塑性へ遷移しない。一部の実施形態では、組み換えレシリン組成物は、発泡材料である。
【0024】
一部の実施形態によると、組み換えレシリン固体を調製する方法も本明細書に提供され、方法は、水性溶媒中で架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、及び該水性溶媒を極性非水溶媒と交換する工程を含む。
【0025】
一部の実施形態では、極性非水溶媒は、プロトン性溶媒である。一部の実施形態では、プロトン性溶媒は、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される。一部の実施形態では、極性非水溶媒は、非プロトン性溶媒である。一部の実施形態では、非プロトン性溶媒は、DMSOである。
【0026】
一部の実施形態では、溶媒交換は、少なくとも8時間、少なくとも16時間、少なくとも24時間、または少なくとも48時間実施される。
【0027】
一部の実施形態では、溶媒交換は、約60℃で実施される。
【0028】
一部の実施形態では、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定した場合、架橋組み換えレシリン固体組成物は、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンを含む。
【0029】
一部の実施形態では、架橋組み換え固体組成物は、本明細書に記載の過硫酸アンモニウム及び加熱方法により調製される。
【0030】
一部の実施形態によると、架橋組み換えレシリン固体を含む固体組成物の材料特性を調整する方法も本明細書に提供され、方法は、水性溶媒を含む架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、及び該水性溶媒を極性非水溶媒で置き換える溶媒交換を実施する工程を含む。一部の実施形態では、該溶媒を置き換えると、架橋された組み換えレシリン固体組成物の弾性率、弾性、硬度、最大弾性圧縮荷重、または材料寿命が変化する。
【0031】
一部の実施形態によると、組み換え架橋レシリン固体を調製する方法も本明細書に提供され、方法は、精製組み換えレシリンを含む組成物を提供する工程、過硫酸アンモニウムを含む水性溶媒に該組み換えレシリンを入れる工程、該水性溶媒中の該組み換えレシリンを少なくとも60℃の温度でインキュベートし、それにより、架橋組み換えレシリン固体組成物を生成する工程、ならびに、グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、及びDMSOからなる群より選択される極性非水溶媒と、該水性溶媒を交換する工程を含む。
【0032】
一部の実施形態によると、組み換えレシリン発泡体を調製する方法も本明細書で提供され、方法は、水性溶媒中で架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、該水性溶媒を極性非水溶媒と交換する工程、及び、架橋組み換えレシリン固体組成物に1つ以上の気泡を導入する工程を含む。
【0033】
一部の実施形態では、極性非水溶媒は、プロトン性溶媒である。一部の実施形態では、プロトン性溶媒は、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される。一部の実施形態では、極性非水溶媒は、非プロトン性溶媒である。一部の実施形態では、非プロトン性溶媒は、DMSOである。
【0034】
一部の実施形態では、溶媒交換は、少なくとも8時間、少なくとも16時間、少なくとも24時間、または少なくとも48時間実施される。
【0035】
一部の実施形態では、溶媒交換は、約60℃で実施される。
【0036】
一部の実施形態では、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定した場合、架橋組み換えレシリン固体組成物は、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンを含む。
【0037】
一部の実施形態では、架橋組み換え固体組成物は、本明細書に記載の過硫酸アンモニウム及び加熱方法により調製される。
【0038】
一部の実施形態では、導入は、架橋組み換えレシリン固体組成物に発泡剤を添加することを含む。
【0039】
一部の実施形態では、発泡剤は、化学発泡剤を含む。一部の実施形態では、化学発泡剤は、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、アンモニウム、アゾジカルボンアミド、イソシアナート、ヒドラジン、イソプロパノール、5-フェニルテトラゾール、トリアゾール、4,4’オキシビス(ベンゼンスルホニルヒドラジド)(OBSH)、トリヒドラジントリアジン(THT)、リン酸水素、酒石酸、クエン酸、及びトルエンスルホニルセミカルバジド(TSS)を含む。一部の実施形態では、化学発泡剤は、重炭酸ナトリウムを含む。
【0040】
一部の実施形態では、発泡剤は、物理的な発泡剤を含む。一部の実施形態では、物理発泡剤は、クロロフルオロカーボン(CFC)、溶存窒素、N2、CH4、H2、CO2、Ar、ペンタン、イソペンタン、ヘキサン、二塩化メチレン、及びジクロロテトラフルオロエタンを含む。一部の実施形態では、物理発泡剤は、溶存窒素を含む。
【0041】
一部の実施形態によれば、組み換えレシリンタンパク質を含む組成物を生成するための方法が本明細書で提供され、方法は、発酵物において組み換え宿主細胞の集団を培養すること(該組み換え宿主細胞は、分泌レシリンコード配列を含むベクターを含み、該組み換え宿主細胞は、該分泌レシリンコード配列によりコードされる組み換えレシリンタンパク質を分泌する)、及び該発酵物から該組み換えレシリンタンパク質を精製することを含む。
【0042】
一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、全長または短縮型天然レシリンである。一部の実施形態では、天然レシリンは、セイシェルショウジョウバエ(Drosophila sechellia)、パナマハキリアリ(Acromyrmex echinatior)、ルリボシヤンマ属(Aeshna)、ノサシバエ(Haematobia irritans)、ネコノミ(Ctenocephalides felis)、セイヨウオオマルハナバチ(Bombus terrestris)、コクヌストモドキ(Tribolium castaneum)、ミツバチ(Apis mellifera)、キョウソヤドリコバチ(Nasonia vitripennis)、コロモジラミ(Pediculus humanus corporis)、ガンビアハマダラカ(Anopheles gambiae)、ツェツェバエ(Glossina morsitans)、アタ・セファロテス(Atta cephalotes)、アノフェレス・ダーリンギ(Anopheles darlingi)、エンドウヒゲナガアブラムシ(Acyrthosiphon pisum)、クロショウジョウバエ(Drosophila virilis)、ドロソフィラ・エレクタ(Drosophila erecta)、スナバエ(Lutzomyia longipalpis)、ベネズエラサシガメ(Rhodnius prolixus)、ヒアリ(Solenopsis invicta)、クレクス・クインクエファシアタス(Culex quinquefasciatus)、ウリミバエ(Bactrocera cucurbitae)、及びトリコグラマ・プレチオサム(Trichogramma pretiosum)からなる群より選択される生物由来のものである。一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、SEQ ID NO:1を含む。一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、SEQ ID NO:4を含む。
【0043】
一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、アルファ接合因子分泌シグナルを含む。一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、FLAGタグを含む。一部の実施形態では、ベクターは、複数の分泌レシリンコード配列を含む。
【0044】
一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、酵母細胞である。一部の実施形態では、酵母細胞は、メチロトローフ酵母細胞である。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、ピキア(コマガタエラ)・パストリス(Pichia(Komagataella)pastoris)、ハンゼヌラ・ポリモルファ(Hansenula polymorpha)、アルクスラ・アデニニボランス(Arxula adeninivorans)、ヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)、ピキア(シェフェルソミセス)・スティピティス(Pichia(Scheffersomyces)stipitis)、ピキア・メタノリカ(Pichia methanolica)、出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)、及びクルイベロミセス・ラクチス(Kluyveromyces lactis)からなる群より選択される種である。
【0045】
一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、2mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間を超える速度で組み換えレシリンを産生する。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、組み換え宿主細胞により発現される総組み換えレシリンタンパク質と比較して50%を超える組み換えレシリンの分泌画分を産生する。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、2mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間を超える速度で組み換えレシリンを分泌する。一部の実施形態では、組み換えレシリンの80%超が、該発酵物において組み換え宿主細胞の外側にある。一部の実施形態では、発酵物は、少なくとも2g組み換えレシリン/Lを含む。
【0046】
一部の実施形態では、該組み換えレシリンタンパク質を精製することは、発酵物を遠心分離することにより、第1のペレット画分及び第1の上清画分を生成すること、ならびに、第1のペレット画分から組み換えレシリンタンパク質を単離することを含む。一部の実施形態では、該組み換えレシリンタンパク質を精製することはさらに、第1のペレット画分にカオトロープを添加して、組み換えレシリンタンパク質が可溶性である溶液を生成すること、該カオトロープを含む第1のペレット画分を遠心分離することにより、第2の上清画分及び第2のペレット画分を生成すること、ならびに、第2の上清画分から可溶性の全長レシリンを単離することを含む。
【0047】
一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列を含むベクターが本明細書に提供される。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、全長または短縮型天然レシリンをコードする。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、改変全長または短縮型天然レシリンをコードする。一部の実施形態では、改変レシリンは、別のレシリンに架橋することが可能なアミノ酸残基の位置での付加、削減、置換、または変化を含む。
【0048】
一部の実施形態では、全長または短縮型天然レシリンは、セイシェルショウジョウバエ、パナマハキリアリ、ルリボシヤンマ属、ノサシバエ、ネコノミ、セイヨウオオマルハナバチ、コクヌストモドキ、ミツバチ、キョウソヤドリコバチ、コロモジラミ、ガンビアハマダラカ、ツェツェバエ、アタ・セファロテス、アノフェレス・ダーリンギ、エンドウヒゲナガアブラムシ、クロショウジョウバエ、ドロソフィラ・エレクタ、スナバエ、ベネズエラサシガメ、ヒアリ、クレクス・クインクエファシアタス、ウリミバエ、及びトリコグラマ・プレチオサムからなる群より選択される生物由来のものである。
【0049】
一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、SEQ ID NO:1を含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、SEQ ID NO:4を含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、1つ以上のAリピートまたは準Aリピートを含む組み換えレシリンをコードする。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、1つ以上のBリピートまたは準Bリピートを含む組み換えレシリンをコードする。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、1つ以上のAリピートもしくは準Aリピート、または1つ以上のBリピートもしくは準Bリピートのいずれかを含むが、両方ではない組み換えレシリンをコードする。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、1つ以上のAリピートまたは準Aリピート及び1つ以上のBリピートまたは準Bリピートを含む組み換えレシリンをコードする。
【0050】
一部の実施形態では、組み換えレシリンはさらに、キチン結合ドメインを含む。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、アルファ接合因子分泌シグナルを含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、FLAGタグを含む。
【0051】
一部の実施形態では、ベクターは、複数の分泌レシリンコード配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、3つの分泌レシリンコード配列を含む。一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、構成的または誘導性プロモーターに作動可能に連結される。
【0052】
一部の実施形態によると、分泌レシリンコード配列を含む1つ以上のベクターを含む組み換え宿主細胞も本明細書で提供される。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、酵母細胞である。一部の実施形態では、酵母細胞は、メチロトローフ酵母細胞である。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、ピキア(コマガタエラ)・パストリス、ハンゼヌラ・ポリモルファ、アルクスラ・アデニニボランス、ヤロウイア・リポリティカ、ピキア(シェフェルソミセス)・スティピティス、ピキア・メタノリカ、出芽酵母、及びクルイベロミセス・ラクチスからなる群より選択される種である。
【0053】
一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、分泌レシリンコード配列を含む3つのベクターを含む。
【0054】
一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、2mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間を超える速度で組み換えレシリンを産生する。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、50%を超える組み換えレシリンの分泌画分を有する。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、2mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間を超える速度でレシリンを分泌する。
【0055】
一部の実施形態によると、分泌レシリンコード配列を含む1つ以上のベクターを含む組み換え宿主細胞と組み換え宿主細胞を成長させるのに適する培地を含む発酵物も本明細書で提供される。
【0056】
一部の実施形態では、発酵物は、少なくとも2g組み換えレシリン/Lを含む。
【0057】
発酵物の一部の実施形態では、組み換えレシリンの80%超は、組み換え宿主細胞の外側にある。
【0058】
発酵物の一部の実施形態では、組み換えレシリンは、全長組み換えレシリンである。
【0059】
一部の実施形態によると、分泌レシリンコード配列を含む1つ以上のベクターを含む組み換え宿主細胞と組み換え宿主細胞を成長させるのに適する培地を含む発酵物に由来する組み換えレシリンを含む組成物も本明細書で提供される。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも60重量%の組み換えレシリンを含む。
【0060】
一部の実施形態では、組成物は、類似量の天然レシリンを含む組成物と比較して、類似の特性を有する。一部の実施形態では、組成物は、類似量の天然レシリンを含む組成物と比較して、異なる特性を有する。
【0061】
一部の実施形態では、組成物は、50%を超える弾性を含む。一部の実施形態では、組成物は、10MPa未満の圧縮弾性率を有する。一部の実施形態では、組成物は、10MPa未満の引張弾性率を有する。一部の実施形態では、組成物は、1MPa未満の剪断弾性率を有する。一部の実施形態では、組成物は、1%を超える破壊伸びを有する。一部の実施形態では、組成物は、0.1kPaを超える最大引張強さを有する。一部の実施形態では、組成物は、90未満のShore OO硬度を有する。一部の実施形態では、組成物は、全長レシリンを含む。
【0062】
一部の実施形態によると、組み換えレシリンを含む組成物を生成するための方法も本明細書で提供され、方法は、分泌レシリンコード配列を含む1つ以上のベクターを含む組み換え宿主細胞を培養して、組み換え宿主細胞からの組み換えレシリンの分泌を促進する条件下で発酵物を生成するステップを含む。
【0063】
一部の実施形態では、組み換えレシリンを含む組成物を生成するための方法はさらに、該組み換えレシリンを精製して、全長の天然レシリンを生成するステップを含む。一部の実施形態では、全長の天然レシリンを生成するために該組み換えレシリンを精製することは、発酵物を遠心分離することにより、第1のペレット画分及び第1の上清画分を生成すること、ならびに、第1のペレット画分から組み換えレシリンタンパク質を単離することを含む。一部の実施形態では、第1のペレット画分から組み換えレシリンタンパク質を単離することは、第1のペレット画分にカオトロープを添加して、組み換えレシリンタンパク質が可溶性である溶液を生成すること、該カオトロープを含む第1のペレット画分を遠心分離することにより、第2の上清画分及び第2のペレット画分を生成すること、ならびに、第2の上清画分から組み換えレシリンタンパク質を単離することを含む。
【0064】
一部の実施形態では、組み換えレシリンを含む組成物を生成するための方法はさらに、複数の該組み換えレシリンを架橋するステップを含む。一部の実施形態では、該架橋は、酵素的架橋である。一部の実施形態では、該架橋は、光化学的架橋である。一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、全長レシリンタンパク質を含む。
【0065】
一部の実施形態によると、培地及び組み換え宿主細胞を含む発酵物も本明細書で提供され、組み換え宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、分泌レシリンコード配列を含み、組み換え宿主細胞は、組み換えレシリンを少なくとも2mg/g乾燥細胞重量/時間の速度で分泌する。
[本発明1001]
精製組み換えレシリンを含む組成物を提供する工程、
過硫酸アンモニウムを含む架橋溶液に前記組み換えレシリンを入れる工程、及び
前記架橋溶液中の前記組み換えレシリンを、少なくとも60℃の温度でインキュベートし、それにより、架橋組み換えレシリン固体組成物を生成する工程
を含む、組み換えレシリンを架橋する方法。
[本発明1002]
前記インキュベーションが、少なくとも15分、少なくとも30分、少なくとも45分、少なくとも60分、少なくとも90分、または少なくとも2時間実施される、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記架橋溶液中の前記組み換えレシリンが、60℃~85℃、70℃~85℃、または75℃~85℃の温度でインキュベートされる、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1004]
前記インキュベーションが、少なくとも2時間実施される、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1005]
前記架橋溶液が、光触媒や架橋酵素を含まない、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1006]
前記架橋された組み換えレシリン固体組成物が、室温で5日間超、10日間超、20日間超、または40日間超で安定である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1007]
前記精製組み換えレシリンが、培養物中の改変生物において前記組み換えレシリンをコードする遺伝子を組み換え発現すること、及び前記培養物から発現組み換えレシリンを精製することにより調製される、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1008]
架橋組み換えレシリンを含む組成物であって、前記組み換えレシリンが、前記レシリンを過硫酸アンモニウム及び熱に曝露することにより架橋されている、前記組成物。
[本発明1009]
架橋酵素を含まない、架橋組み換えレシリンを含む組成物。
[本発明1010]
光触媒を含まない、架橋組み換えレシリンを含む組成物。
[本発明1011]
極性非水溶媒中に架橋組み換えレシリンを含む、組み換えレシリン組成物。
[本発明1012]
前記極性非水溶媒が、プロトン性溶媒である、本発明1011の組成物。
[本発明1013]
前記プロトン性溶媒が、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される、本発明1012の組成物。
[本発明1014]
前記極性非水溶媒が、非プロトン性溶媒である、本発明1011の組成物。
[本発明1015]
前記非プロトン性溶媒が、DMSOである、本発明1014の組成物。
[本発明1016]
20~40重量%のレシリンを含む、本発明1011~1015のいずれかの組成物。
[本発明1017]
サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、前記レシリンが、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンである、本発明1011~1016のいずれかの組成物。
[本発明1018]
前記極性非水溶媒が、前記溶媒の少なくとも60体積%、少なくとも70体積%、少なくとも80体積%、少なくとも90体積%、少なくとも95体積%、少なくとも98体積%、または少なくとも99体積%である、本発明1011~1017のいずれかの組成物。
[本発明1019]
前記組み換えレシリン組成物が、水性溶媒中の同様の架橋組み換えレシリンよりも大きい弾性率を有する、本発明1011~1018のいずれかの組成物。
[本発明1020]
ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、少なくとも10の硬度を含む、本発明1011~1019のいずれかの組成物。
[本発明1021]
ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、約10~約50の硬度を含む、本発明1011~1020のいずれかの組成物。
[本発明1022]
ASTM D7121で測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、約40%~約60%の反発弾性を含む、本発明1011~1021のいずれかの組成物。
[本発明1023]
ASTM D575で測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、約6~約8psiの25%での圧縮応力を含む、本発明1011~1022のいずれかの組成物。
[本発明1024]
Zwick圧縮試験で測定した場合、前記組み換えレシリン組成物が、2kN未満の圧縮力で弾性から塑性へ遷移しない、本発明1011~1023のいずれかの組成物。
[本発明1025]
前記組み換えレシリン組成物が、発泡材料である、本発明1011~1024のいずれかの組成物。
[本発明1026]
水性溶媒中で架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、及び
前記水性溶媒を極性非水溶媒と交換する工程
を含む、組み換えレシリン固体を調製する方法。
[本発明1027]
前記極性非水溶媒が、プロトン性溶媒である、本発明1026の方法。
[本発明1028]
前記プロトン性溶媒が、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される、本発明1027の方法。
[本発明1029]
前記極性非水溶媒が、非プロトン性溶媒である、本発明1026の方法。
[本発明1030]
前記非プロトン性溶媒が、DMSOである、本発明1029の方法。
[本発明1031]
前記溶媒交換が、少なくとも8時間、少なくとも16時間、少なくとも24時間、または少なくとも48時間実施される、本発明1026~1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
前記溶媒交換が、約60℃で実施される、本発明1026~1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、前記架橋組み換えレシリン固体組成物が、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンを含む、本発明1026~1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
前記架橋組み換え固体組成物が本発明1001~1007のいずれかの方法で調製される、本発明1026~1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
水性溶媒を含む架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、及び
前記水性溶媒を極性非水溶媒で置き換えるために溶媒交換を実施する工程
を含む、架橋組み換えレシリン固体を含む固体組成物の材料特性を調整する方法。
[本発明1036]
前記溶媒を置き換えると、前記架橋組み換えレシリン固体組成物の弾性率、弾性、硬度、最大弾性圧縮荷重、または材料寿命が変化する、本発明1035の方法。
[本発明1037]
精製組み換えレシリンを含む組成物を提供する工程、
過硫酸アンモニウムを含む水性溶媒に前記組み換えレシリンを入れる工程、
前記水性溶媒中の前記組み換えレシリンを、少なくとも60℃の温度でインキュベートし、それにより、架橋組み換えレシリン固体組成物を生成する工程、ならびに
グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、及びDMSOからなる群より選択される極性非水溶媒と、前記水性溶媒を交換する工程
を含む、組み換え架橋レシリン固体を調製する方法。
[本発明1038]
水性溶媒中で架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、
前記水性溶媒を極性非水溶媒と交換する工程、及び
前記架橋組み換えレシリン固体組成物に1つ以上の気泡を導入する工程
を含む、組み換えレシリン発泡体を調製する方法。
[本発明1039]
前記極性非水溶媒が、プロトン性溶媒である、本発明1038の方法。
[本発明1040]
前記プロトン性溶媒が、グリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールからなる群より選択される、本発明1039の方法。
[本発明1041]
前記極性非水溶媒が、非プロトン性溶媒である、本発明1038の方法。
[本発明1042]
前記非プロトン性溶媒が、DMSOである、本発明1041の方法。
[本発明1043]
前記溶媒交換が、少なくとも8時間、少なくとも16時間、少なくとも24時間、または少なくとも48時間実施される、本発明1038~1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
前記溶媒交換が、約60℃で実施される、本発明1038~1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、前記架橋組み換えレシリン固体組成物が、全レシリンの一部として少なくとも20%、少なくとも50%、少なくとも70%、または少なくとも80%の全長レシリンを含む、本発明1038~1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
前記架橋組み換え固体組成物が本発明1001~1007のいずれかの方法で調製される、本発明1038~1045のいずれかの方法。
[本発明1047]
前記導入が、前記架橋組み換えレシリン固体組成物に発泡剤を添加することを含む、本発明1038~1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
前記発泡剤が、化学発泡剤を含む、本発明1047の方法。
[本発明1049]
前記化学発泡剤が、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、アンモニウム、アゾジカルボンアミド、イソシアナート、ヒドラジン、イソプロパノール、5-フェニルテトラゾール、トリアゾール、4,4’オキシビス(ベンゼンスルホニルヒドラジド)(OBSH)、トリヒドラジントリアジン(THT)、リン酸水素、酒石酸、クエン酸、及びトルエンスルホニルセミカルバジド(TSS)を含む、本発明1048の方法。
[本発明1050]
前記化学発泡剤が、重炭酸ナトリウムを含む、本発明1048の方法。
[本発明1051]
前記発泡剤が、物理発泡剤を含む、本発明1047の方法。
[本発明1052]
前記物理発泡剤が、クロロフルオロカーボン(CFC)、溶存窒素、N2、CH4、H2、CO2、Ar、ペンタン、イソペンタン、ヘキサン、二塩化メチレン、及びジクロロテトラフルオロエタンを含む、本発明1051の方法。
[本発明1053]
前記物理発泡剤が、溶存窒素を含む、本発明1051の方法。
[本発明1054]
本発明1001~1007、1025~1036、及び1038~1053のいずれかの方法で調製された組成物を含む、靴のインソール。
[本発明1055]
極性非水溶媒中の架橋レシリン組成物を含む組成物であって、前記架橋レシリンが発泡されている、前記組成物。
[本発明1056]
前記発泡架橋レシリンが、少なくとも50%の多孔性を含む、本発明1055の組成物。
[本発明1057]
前記発泡架橋レシリンが、約0.01mm~約3mmの平均気泡直径を有する、本発明1055の組成物。
[本発明1058]
本発明1008~1025及び本発明1055~1057のいずれかの組成物を含む、靴のインソール。
【図面の簡単な説明】
【0066】
上述及び他の目的、特徴、及び利点は、添付の図面に示される、本発明の特定の実施形態の以下の説明から明らかとなり、同様の参照文字は、異なる図にわたって同じ部分を指す。図面は、必ずしも縮尺通りでなく、代わりに、本発明の種々の実施形態の原理を説明することに重点を置く。
【0067】
【
図2】組み換えレシリンを含む組成物を生成するための方法の流れ図である。
【
図3】3つの分泌レシリンコード配列を含むベクターの例示的なマップである。
【
図4】種々の形状及び形態の架橋精製組み換えレシリンを含むタンパク質性ブロックコポリマーの写真を示す。
【
図5】架橋組み換えレシリンを含むタンパク質性ブロックコポリマーの圧縮の写真を示す。
【
図6】過硫酸アンモニウム及び熱(AP)により架橋されたレシリン固体組成物、過硫酸アンモニウム及び熱で架橋され且つ過剰な架橋溶液を除去するために3回洗浄されたレシリン固体組成物(AP 3x洗浄)、及び西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)による酵素的架橋されたレシリン固体組成物の、レシリン上のFLAGタグに特異的な抗体を使用してELISAで測定された総分解レシリンを示す。
【
図7】10重量%のヒュームドシリカ(左)及び5重量%のヒュームドシリカ(右)を含むレシリン発泡体の写真を示す。
【
図8】5重量%のヒュームドシリカを含むレシリン発泡体の写真を示す。比較のために、25セント硬貨を含める。
【
図9】架橋後(上)及び密閉せずに1週間保管した7日後(下)のグリセロール系及び水系架橋レシリン組成物の画像を示す。
【
図10A】以下の架橋レシリン組成物についてレオメーターで測定された応力ひずみ曲線を示す:60%のグリセロール溶媒交換、続いて、100%のグリセロール溶媒交換で調製されたグリセロール溶媒中の27重量%のレシリン。
【
図10B】以下の架橋レシリン組成物についてレオメーターで測定された応力ひずみ曲線を示す:プロピレングリコール溶媒中の27重量%の全長レシリン。
【
図10C】以下の架橋レシリン組成物についてレオメーターで測定された応力ひずみ曲線を示す:プロピレングリコール溶媒中の27%の全長レシリン(すなわち、全レシリンの割合として約80%の全長レシリン)。
【
図11】5重量%のヒュームドシリカを含むレシリン発泡体の応力-ひずみ曲線を示す。
【
図12】以下の架橋レシリン固体組成物のそれぞれについてレオメーターにより測定された弾性及び弾性率の相対値のプロットを示す:20重量%のレシリン、プロピレングリコール(「A」);27重量%レシリン、プロピレングリコール(「B」);40重量%レシリン、プロピレングリコール(「C」);レシリンコアセルベート、プロピレングリコール(「D」);27重量%の全長レシリン、プロピレングリコール(「E」);27重量%レシリン、60~100%グリセロール(「F」);27重量%レシリン、100%グリセロール(「H」);及び27重量%のレシリン、エチレングリコール(「I」)。
【
図13】以下の架橋レシリン固体のそれぞれについてZwick引張試験機により測定した場合、加えられた力対ひずみ曲線のプロットを示す:27重量%のレシリンエチレングリコール固体(「A」)、27重量%のレシリンプロピレングリコール固体(「C」)、コアセルベートレシリンプロピレングリコール固体(「D」)、27重量%のレシリン60~100%グリセロール固体(「G」)、及び27重量%のレシリン100%のグリセロール固体(「H」)。
【0068】
図は、例示のためのみに、本開示の種々の実施形態を示す。当業者は、以下の考察から、本明細書で例示される構造及び方法の代替の実施形態が、本明細書に記載の原理から逸脱することなく用いられ得ることを容易に認識するであろう。
【発明を実施するための形態】
【0069】
詳細な説明
本発明の種々の実施形態の詳細が以下の説明に記載される。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【0070】
定義
別途定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示に関わる技術分野における当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。
【0071】
本明細書で使用される「a」及び「an」及び「the」という用語ならびに同様の指示対象は、本明細書で別途指示のない限り、または文脈により明確に矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を指す。
【0072】
「約」、「ほぼ」、または「類似」という用語は、当業者により決定される特定の値の許容誤差範囲内を意味し、これは、部分的に、値が測定もしくは決定される方法、または測定システムの制限に依存し得る。以下に記載される全ての範囲及び量は、概数であり、本発明を限定することを意図するものではないことを理解すべきである。範囲及び数値が使用される場合、これらは、統計的範囲または測定誤差または変動を含むように概数とすることができる。一部の実施形態では、例えば、測定値は、プラスまたはマイナス10%とすることができる。
【0073】
アミノ酸は、1文字コードまたは3文字コードで言及することができる。1文字コード、アミノ酸名、及び3文字コードは、以下の通りである:G-グリシン(Gly)、P-プロリン(Pro)、A-アラニン(Ala)、V-バリン(Val)、L-ロイシン(Leu)、I-イソロイシン(Ile)、M-メチオニン(Met)、C-システイン(Cys)、F-フェニルアラニン(Phe)、Y-チロシン(Tyr)、W-トリプトファン(Trp)、H-ヒスチジン(His)、K-リジン(Lys)、R-アルギニン(Arg)、Q-グルタミン(Gln)、N-アスパラギン(Asn)、E-グルタミン酸(Glu)、D-アスパラギン酸(Asp)、S-セリン(Ser)、T-スレオニン(Thr)。
【0074】
「含むこと(including)」、「含む(includes)」、「有すること(having)」、「有する(has)」、「有する(with)」という用語、またはそれらの変形は、「含むこと(comprising)」という用語と同様の方法で包括的であることが意図される。
【0075】
本明細書で使用される「微生物」という用語は、微生物を指し、単細胞生物を指す。本明細書で使用される場合、この用語は、全ての細菌、全ての古細菌、単細胞原生生物、単細胞動物、単細胞植物、単細胞真菌、単細胞藻類、全ての原生動物、及び全てのクロミスタを含む。
【0076】
本明細書で使用される「天然」という用語は、天然の未改変状態で自然界に見出される組成物を指す。
【0077】
「任意の」または「任意に」という用語は、特徴もしくは構造が存在してもしなくてもよいか、または、事象もしくは状況が起こっても起こらなくてもよいこと、ならびに、記述が、特定の特徴もしくは構造が存在する場合及び特徴もしくは構造が存在しない場合、または事象もしくは状況が起こる場合及び事象もしくは状況が起こらない場合を含むことを意味する。
【0078】
本明細書で使用される「分泌画分」という用語は、細胞により産生される総レシリンと比較した、細胞から分泌される組み換えレシリンの画分を指す。
【0079】
本明細書で使用される「分泌シグナル」という用語は、ポリペプチドに融合されると、細胞からのそのポリペプチドの分泌を媒介する短いペプチドを指す。
【0080】
本明細書で使用される「分泌レシリンコード配列」という用語は、N末端で分泌シグナルに融合され、任意に、タグペプチドまたはC末端でポリペプチドに融合される本明細書に提供されるレシリンをコードするヌクレオチド配列を指す。
【0081】
ポリペプチド(例えば、レシリン)に関して本明細書で使用される「組み換え」という用語は、組み換え宿主細胞内で産生されるポリペプチド、または組み換え核酸から合成されるポリペプチドを指す。
【0082】
本明細書で使用される「組み換え宿主細胞」という用語は、組み換え核酸を含む宿主細胞を指す。
【0083】
本明細書で使用される「組み換え核酸」という用語は、天然に存在する環境から取り出された核酸、または自然界にみられる場合に、その核酸に隣接もしくは近接する核酸の全部もしくは一部が付随しない核酸、または自然界では連結されない核酸に作動可能に連結される核酸、または自然界では生じない核酸、または自然界の核酸にみられない改変を含有する核酸(例えば、人間の介入により、例えば、人工的に導入される挿入、欠失、もしくは点変異)、または異種部位で染色体に組み込まれる核酸を指す。この用語は、化学的に合成されたヌクレオチド類似体を含むクローン化DNA分離株及び核酸を含む。
【0084】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を指す。ベクターの1つのタイプは「プラスミド」であり、一般に、追加のDNAセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖DNAループを指すが、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)による増幅からまたは制限酵素による環状プラスミドの処理から生じるような線状二本鎖分子も含む。他のベクターとしては、バクテリオファージ、コスミド、細菌人工染色体(BAC)、及び酵母人工染色体(YAC)が挙げられる。別のタイプのベクターは、ウイルスベクターであり、追加のDNAセグメントをウイルスゲノムに連結することができる。ある特定のベクターは、それらが導入された細胞内で自律複製することができる(例えば、細胞内で機能する複製起点を有するベクター)。他のベクターは、細胞への導入時に細胞のゲノムに組み込むことができ、それにより、細胞ゲノムと一緒に複製される。
【0085】
アミノ酸または核酸配列に関して本明細書で使用される「リピート」という用語は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド内に複数回存在する部分配列(例えば、連結される配列)を指す。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、いかなる介在配列も有しないリピート配列の直接の繰り返しを有し得るか、または介在配列を有するリピート配列の非連続繰り返しを有し得る。アミノ酸または核酸配列に関して本明細書で使用される「準リピート」という用語は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドにわたって不正確に繰り返される(すなわち、準リピート部分配列の一部が、準リピート間で可変である)部分配列である。リピートポリペプチド及びDNA分子(またはポリペプチドもしくはDNA分子の一部)は、リピート部分配列(すなわち、正確なリピート)または準リピート部分配列(すなわち、不正確なリピート)のいずれかで構成することができる。
【0086】
本明細書で使用される「天然レシリン」という用語は、昆虫により産生されるエラストマーポリペプチドまたはタンパク質を指す。天然レシリンの非限定例のGenBankアクセッション番号としては、以下のNCBI配列番号が挙げられる:NP995860(キイロショウジョウバエ(Drosophila melanogaster))、NP611157(キイロショウジョウバエ)、Q9V7U0(キイロショウジョウバエ)、AAS64829、AAF57953(キイロショウジョウバエ)、XP001817028(コクヌストモドキ)、及びXP001947408(エンドウヒゲナガアブラムシ)。
【0087】
本明細書で使用される「改変された」という用語は、天然タンパク質またはポリペプチド配列とは組成が異なるタンパク質またはポリペプチド配列を指し、機能特性が天然タンパク質またはポリペプチド特性の10%以内に保存される。一部の実施形態では、改変タンパク質またはポリペプチドと天然のタンパク質またはポリペプチドの差異は、1次配列内に存在する(例えば、1つ以上のアミノ酸が、除去、挿入、もしくは置換される)か、または翻訳後修飾(例えば、グリコシル化、リン酸化)であり得る。アミノ酸欠失は、タンパク質から1つ以上のアミノ酸を除去することを指す。アミノ酸挿入は、タンパク質またはポリペプチドに導入される1つ以上のアミノ酸残基を指す。アミノ酸挿入は、N末端及び/またはC末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸の配列内挿入を含んでもよい。アミノ酸置換は、非保存的または保存的置換を含み、保存的アミノ酸置換表が、当該技術分野で周知である(例えば、Creighton(1984)Proteins.W.H.Freeman and Company(Eds)を参照のこと)。一部の実施形態では、改変タンパク質またはポリペプチドと天然のタンパク質またはポリペプチドアミノ酸またはヌクレオチドとの配列同一性は、アミノ酸またはヌクレオチド塩基の少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも98%である。
【0088】
本明細書で使用される「短縮型」という用語は、天然のタンパク質またはポリペプチドよりも長さが短いタンパク質またはポリペプチド配列を指す。一部の実施形態では、短縮型タンパク質またはポリペプチドは、天然タンパク質またはポリペプチドの長さの10%超、または20%超、または30%超、または40%超、または50%超、または60%超、または70%超、または80%超、または90%超であり得る。
【0089】
ポリペプチド、核酸、またはそのフラグメントを指す場合、本明細書で使用される「ホモログ」または「実質的な類似性」という用語は、別のアミノ酸または核酸(またはその相補鎖)と、適切なアミノ酸またはヌクレオチド挿入または欠失とともに最適にアラインされる場合、上述のように、FASTA、BLASTまたはGapなどの周知の任意の配列同一性アルゴリズムで測定した場合、アミノ酸またはヌクレオチド塩基の少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも98%のアミノ酸またはヌクレオチド配列同一性があることを示す。
【0090】
本明細書で使用される「レシリン」という用語は、架橋してエラストマーを形成することができるタンパク質またはポリペプチドを指し、タンパク質またはポリペプチドは、天然レシリン、または改変される天然レシリン、または短縮される天然レシリンである。本発明のレシリンは、好ましくは、組み換えレシリンである。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、異種発現された及び宿主細胞から分泌される(例えば、昆虫から単離された)レシリンまたはレシリンフラグメントをコードする(例えば、短縮または連結される)天然または改変ヌクレオチド配列を含む。好ましい実施形態では、分泌組み換えレシリンタンパク質は、宿主細胞の細胞外の溶液から収集される。一部の実施形態では、レシリンは、発泡材料、例えば、固体発泡体の形態である。
【0091】
本明細書で使用される場合、「エラストマー」という用語は、粘弾性及び通常は(分子間に共有結合架橋が存在する場合は、それを除く)弱い分子間力を有するポリマーを指す。粘弾性は、変形を受ける場合、粘性特性及び弾性特性の両方を示し、従って、時間依存のひずみを示す材料の特性である。弾性は、規則正しい固体の結晶面に沿った結合の伸長に関連し、粘度は、アモルファス材料内の原子または分子の拡散の結果である。従って、粘弾性のエラストマーは一般に、他の材料と比較して、ヤング率が低く、破壊ひずみが高い。材料の粘性構成成分により、粘弾性材料は、荷重が加えられ、次に、除かれる場合にエネルギーが放散する。この現象は、粘弾性材料の応力-ひずみ曲線のヒステリシスとして観察される。荷重が加えられる時、特定の応力-ひずみ曲線があり、荷重が除かれる時、除荷時の応力-ひずみ曲線は、荷重時の曲線とは異なる。消費されるエネルギーは、負荷及び除荷曲線の間の面積である。
【0092】
本明細書で使用される場合、「非水性」という用語は、主に、水ではない1つ以上の化合物を含む溶媒を指す。これは、溶媒として存在する水の割合が全体的に減少する溶媒との溶媒交換プロセスを経ており、すなわち、溶媒としての水が非水分子で置き換えられている組成物を含む。一部の実施形態では、非水溶媒は、50%未満の水を含むものである。架橋レシリン組成物の溶媒に関して本明細書で使用される極性非水溶媒は、レシリンを溶解させることができる任意の非水溶媒を指す。
【0093】
本明細書の値の範囲の列挙は、単に、本明細書に別途指示のない限り、範囲内に包括的に入る別々の各値を個別に指す簡単な方法として使用されることが意図され、別々の各値は、本明細書に個別に記載されるかのように本明細書に組み込まれる。
【0094】
レシリン組成物
組み換えレシリンを含む組成物、及びそれらを生成するための方法が本明細書で提供される。
【0095】
レシリンは、石油系エラストマーと比較して多くの固有の特性を有する。最も注目すべきことに、レシリンは、非常に高い弾性効率(すなわち、弾性)を有し、変形に入力されたエネルギーのほとんどが熱として失われない。レシリンの他の望ましい特性としては、例えば、圧縮弾性率、引張弾性率、剪断弾性率、硬度、反発、及び圧縮永久ひずみが挙げられる。さらに、レシリンは、タンパク質であり、従って、生分解することができ、これにより、石油系ポリマーよりも環境適合性になる。また、レシリンは、生体適合性であり、それ故、ヒトまたは動物との接触を伴う用途で使用することができる。最後に、組み換えレシリンの機械的特性は、特定の用途の分野に設計されたエラストマーを生成するように、タンパク質配列、タンパク質構造、分子間架橋の量、及び処理の可変要素を変化させることにより調整することができる。
【0096】
一部の実施形態では、望ましい機械的特性を有する架橋レシリン組成物及びそれらを生成する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態では、大きなバッチで効率的に実施することができ、架橋反応で残った不純物による分解を受けにくい架橋レシリン固体を形成するレシリン組成物を架橋する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態では、架橋反応は、過硫酸アンモニウムなどの過硫酸塩へのレシリンの曝露を含む。過硫酸塩により触媒される架橋反応を開始するために、熱を加えることができる。このタイプの架橋反応は、組成物中にいかなる光活性または酵素化合物も残さない。さらに、この架橋反応は、光活性化を必要としないので、光が架橋溶液の全ての部分に到達する必要なしに、大きなバッチを効率的に生成することができる。一部の実施形態では、架橋は、得られた組み換えレシリン組成物が特定の形状または形態を有するように、容器または型内で生じる。
【0097】
本明細書で提供される架橋レシリン固体組成物はまた、ある特定の用途に好ましい弾性率、硬度、最大弾性圧縮荷重、弾性、及び材料の寿命/疲労などの所望の機械的特性を提供するために、極性非水溶媒を含む架橋レシリン組成物を含む。一部の実施形態では、組成物は、レシリン組成物との溶媒交換を実施して、水性溶媒を非水溶媒で置き換えることにより作製される。架橋レシリンと溶媒交換を行うことができる溶媒には、非架橋形態でレシリンを溶解させる溶媒を含む。
【0098】
好ましい実施形態では、非水溶媒は、不揮発性で水溶性または極性である。一部の実施形態では、溶媒の分子量は、約100以下である。一部の実施形態では、極性非水溶媒は、グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、またはDMSOを含む。一部の実施形態では、溶媒交換は、極性非水溶媒勾配(例えば、60%から100%へのグリセロール)を使用して行われる。
【0099】
一部の実施形態では、例えば、要望通りに、加えられた力からのエネルギーの吸収を含む物理的特性が改善された組成物を提供するために、本明細書に記載の架橋レシリン組成物を使用することができる。一部の実施形態では、ゴムを含有する既存の生成物を改善するために、本明細書に記載の架橋レシリン組成物を使用することができる。特に、本明細書で提供される架橋レシリン組成物の一部は、非弾性材料に遷移することなく、大量の力を吸収することができる。
【0100】
一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、ミッドソールとして使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、ゴルフボールのコアの一部として使用することができる。他の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、例えば、ゴルフクラブもしくはテニスラケットなどのスポーツ用品用のハンドルもしくはグリップに、自転車グリップもしくはオートバイグリップとして、またはハンマー、ネイルガン、削岩機、及びエネルギーを吸収して戻すことが好ましい他の任意の道具などの道具及び工業用途用のグリップとして、使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、ブッシングまたは制振、例えば、スケートボードトラックまたはハードドライブプラッター振動緩衝装置に使用することができる。一部の実施形態では、架橋レシリン組成物は、スケートボード、ローラーブレード、またはスクーターなどのホイールの優れた材料として使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、ヘルメット、肘もしくは膝パッド、または安全帽などの保護装置のための、あるいは擦傷から皮膚を保護するために保護外層としての、パディングなどの安全及び保護具に使用することができる。
【0101】
一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、自動車部品、例えば、ブッシングもしくは緩衝装置などのサスペンションコンポーネント、またはシートボルスター及びランバーサポートなどの内部クッションに使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、タイヤ及びインナーチューブに使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、スーパーボールに使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、靴のインソール、ミッドソール、及びアウトソールに使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、パッド入りマットに使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、いくつかのタイプのガスケットまたはOリングに使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、耐衝撃性を高めるために、プラスチック製品に添加することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、電話またはタブレットケースなどの保護ケースに使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、ゴム印に使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、ローラーに使用することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、ゴムバンドに使用することができる。
【0102】
一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋されたレシリン組成物は、靴のソール、地下室の床、音楽スタジオのためのノイズ保護、自動車バンパー、クッションパッド、ドアマット、ヨガマット、ドラムパッド、ウィンドウワイパー、自動車タイヤ、消火ホース、電気配線絶縁材、ゴムバンド、ゴム製アヒル、弾性手袋、調理器具、レインブーツ、歯がため、自転車タイヤ、時計、瓶、ガスケット、ヘアタイ、フリップフロップ、電話ケース、メディシンボール、スーパーボール、水または埃からの汚染を防ぐ電子デバイス用のシール、冷蔵庫または冷凍庫のドアシール、チャンバーの中または外への空気の流れを防止するシール、トランポリン、おしゃぶり、窓シール、ハロウィーンマスク、ガーデンホース、卓球ラケット、コンベアベルト、ダクト、スタンプ、バルーン、皮膚及び髪のケア及び保護のための化粧品組成物、ネイル組成物、または装飾化粧品の調製に使用することができる。
【0103】
好適な皮膚化粧品組成物は、例えば、フェイストニック、フェイシャルマスク、例えばシートマスク、デオドラント、及び他の化粧品ローションである。装飾化粧品に使用される組成物は、例えば、コンシーラースティック、ステージメイクアップ、マスカラ及びアイシャドウ、口紅、コールペンシル、アイライナー、ほお紅、パウダー、及び眉ペンシルを含む。
【0104】
使用分野に応じて、本明細書に記載の組成物は、例えば、クリーム、フォーム、ゲル、スティック、ムース、ミルク、スプレー(ポンプスプレーもしくは噴射剤含有スプレー)またはローションなどのスキンケアに適する形態で適用することができる。
【0105】
図1は、天然レシリンの例を示し、これは、コンセンサスアミノ酸配列YGXP(「Aリピート」)(Xは任意のアミノ酸である)を含む複数のリピート単位を含むN末端Aドメイン、キチン結合型RR-2(C)ドメイン(Pfam参照番号PF00379、Rebers JE & Willis,JH.A conserved domain in anthropod cuticular proteins binds chitin.Insect Biochem Mol Biol 31:1083-1093)、及びコンセンサスアミノ酸配列UYZXZ(「Bリピート」)(式中、Uはグリシンまたはセリンであり、Zはセリン、グリシン、アルギニン、またはプロリンであり、Xは任意のアミノ酸である)を含む複数のリピート単位を含むC末端Bドメインを含有する。全ての天然に存在するレシリンが、Aドメイン、Cドメイン、及びBドメインを有するわけではない。種々の昆虫により産生される天然レシリンは通常、不正確なリピート(すなわち、準リピート)を、Aドメイン及び/またはBドメイン内に、準リピート間にいくらかのアミノ酸変動を伴って有する。
【0106】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組み換えレシリンは、1つ以上のAリピートを含む。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、それぞれコンセンサス配列SXXYGXP(SEQ ID NO:50)(式中、Sはセリンであり、Xはアミノ酸であり、Yはチロシンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンである)を有するAリピート及び/または準Aリピートアミノ酸部分配列の複数のブロックを含むN末端Aドメインを含む。
【0107】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組み換えレシリンは、1つ以上のBリピートを含む。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、それぞれコンセンサス配列GYZXZZX及び/またはSYZXZZX(式中、Gはグリシンであり、Yはチロシンであり、Zはセリン、グリシン、プロリン、またはアルギニンであり、Sはセリンであり、Xは任意のアミノ酸である)を有するBリピート及び/または準Bリピートアミノ酸部分配列の複数のブロックを含むC末端Bドメインを含む。
【0108】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組み換えレシリンは、1つ以上のAリピートを含む。そのような一部の実施形態では、組み換えレシリンは、1~100のAリピート、または2~50のAリピート、または5~50のAリピート、または5~20のAリピートを含む。
【0109】
一部の実施形態では、組み換えレシリンは、式
(X1-X2-X3-X4)n(1)(SEQ ID NO:64)
により記載される1つ以上のコンセンサス配列を含み、
式中、括弧はコンセンサス配列のリピートまたは準リピートを示し、
nはAリピートまたは準Aリピートの数を記載し、1~100、または2~50、または5~50、または5~20であり、
X1は4アミノ酸長のモチーフであって、X1の第1のアミノ酸はYであり、X1の残りのアミノ酸はGAP、GLP、GPP、GTP、またはGVPであり、
X2は3~20アミノ酸長のモチーフであり、
X2はGGG、GGGG(SEQ ID NO:51)、N、NG、NN、NGN、NGNG(SEQ ID NO:52)、GQGG(SEQ ID NO:53)、GQGN(SEQ ID NO:54)、GQGQ(SEQ ID NO:55)、GQGQG(SEQ ID NO:56)、もしくは3つ以上のグリシン残基を含むか、または、X2の残基の50%以上が、グリシンもしくはアスパラギンのいずれかであるか、または、X2の残基の60%以上が、グリシンもしくはアスパラギンのいずれかであるか、またはX2の残基の70%以上が、グリシンもしくはアスパラギンのいずれかであるか、またはX2の残基の80%以上が、グリシンもしくはアスパラギンのいずれかであり、
X3は2~4アミノ酸長のモチーフであり、X3はGG、LS、APS、GAG、GGG、KPS、RPS、またはGGGG(SEQ ID NO:51)であり、
X4は1~2アミノ酸長のモチーフであり、X4はS、D、T、N、L、DS、DT、LS、SS、ST、TN、またはTSである。
【0110】
そのような一部の実施形態では、組み換えレシリンは、モチーフX1、X2、X3、及びX4を含むが、他の実施形態では、組み換えレシリンは、モチーフX1、X2、X3、もしくはX4、またはそれらの組み合わせを含む。
【0111】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組み換えレシリンは、1つ以上のBリピートを含む。そのような一部の実施形態では、組み換えレシリンは、1~100のBリピート、または2~50のAリピート、または5~50のAリピート、または5~20のAリピートを含む。
【0112】
一部の実施形態では、組み換えレシリンは、式
(X11-X12-X13)m(2)(SEQ ID NO:65)
により記載される1つ以上のコンセンサス配列を含み、
式中、括弧はコンセンサス配列のリピートまたは準リピートを示し、
mはB-リピートまたは準B-リピートの数を記載し、1~100であり、
X11は1~5アミノ酸長のモチーフであり、第1のアミノ酸はYであり、残りのアミノ酸はGAP、GPP、SSG、またはSGGを含み得、
X12は2~5アミノ酸長のモチーフであり、GQ、GN、RPG、RPGGQ(SEQ ID NO:57)、RPGGN(SEQ ID NO:58)、SSS、SKG、またはSNを含み、
X13は4~30アミノ酸長のモチーフであり、GG、DLG、GFG、GGG、RDG、SGG、SSS、GGSF(SEQ ID NO:59)、GNGG(SEQ ID NO:60)、GGAGG(SEQ ID NO:61)、もしくは3以上のグリシン残基を含むか、または30%以上の残基がグリシンであるか、もしくは40%以上の残基がグリシンであるか、もしくは50%以上の残基がグリシンであるか、もしくは60%以上の残基がグリシンである。
【0113】
そのような一部の実施形態では、組み換えレシリンは、モチーフX11、X12、及びX13を含むが、そのような他の実施形態では、組み換えレシリンは、モチーフX11、X12、もしくはX13、またはそれらの組み合わせを含む。
【0114】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組み換えレシリンは、1つ以上のAリピート、1つ以上のBリピート、及び/または1つ以上のCドメインを含む。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、1つ以上のAリピートまたは1つ以上のBリピートを含むが、両方は含まない。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、1つ以上のAリピートを含むが、BリピートとCドメインのどちらも含まない。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、1つ以上のBリピートを含むが、AリピートとCドメインのどちらも含まない。組み換えレシリンがCドメインを含む実施形態では、Cドメインは、AリピートまたはBリピートのN末端側またはC末端側のいずれかに、またはAリピート及びBリピート間に、配置することができる。
【0115】
一部の実施形態では、組み換えレシリンはさらに、配列XXEPPVSYLPPS(SEQ ID NO:62)(式中、Xは任意のアミノ酸である)を含む。そのような一部の実施形態では、配列は、AリピートまたはBリピートのN末端側に位置する。
【0116】
一部の実施形態では、組み換えレシリンは、非天然環境で発現される全長天然レシリンである。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、天然レシリンの短縮バージョンを含む。一部の実施形態では、短縮型天然レシリンは、少なくとも1つのAリピートを含む。一部の実施形態では、短縮型天然レシリンは、少なくとも1つのBリピートを含む。全長及び短縮型天然レシリンの非限定例は、SEQ ID NO:1~44として提供される。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、全長のセイシェルショウジョウバエレシリン(SEQ ID NO:1)である。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、短縮型パナマハキリアリレシリン(SEQ ID NO:4)である。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、非天然の方法で架橋(例えば、より少ないかより多い架橋、異なるアミノ酸残基を介した架橋)される全長または短縮型天然レシリンである。
【0117】
一部の実施形態では、組み換えレシリンは、改変全長または短縮型天然レシリンである。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、全長または短縮型天然レシリンと少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも98%同一である。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、全長セイシェルショウジョウバエレシリン(SEQ ID NO:1)と少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも98%同一である。一部の実施形態では、組み換えレシリンは、短縮型パナマハキリアリレシリン(SEQ ID NO:4)と少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも98%同一である。
【0118】
ヌクレオチド配列またはタンパク質配列同一性を測定するために使用することができる当該技術分野で既知のいくつかの異なるアルゴリズムが存在する。例えば、ポリヌクレオチド配列は、ウィスコンシンパッケージバージョン10.0、Genetics Computer Group(GCG)、ウィスコンシン州マディソンのプログラムであるFASTA、Gap、またはBestfitを使用して比較することができる。FASTAは、クエリー及び検索配列の間で最も重複する領域のアラインメント及びパーセント配列同一性を提供する。例えば、Pearson,Methods Enzymol.183:63-98,1990(全体が本明細書で参照により組み込まれる)を参照のこと。例えば、核酸配列間のパーセント配列同一性は、デフォルトのパラメーター(ワードサイズ6及びスコアリングマトリックスのNOPAMファクター)で、FASTAを使用して、または参照により本明細書に組み込まれるGCGバージョン6.1で提供されるデフォルトのパラメーターで、Gapを使用して決定することができる。あるいは、配列は、コンピュータープログラムのBLAST(Altschul et al.,J.Mol.Biol.215:403-410,1990、Gish and States,Nature Genet.3:266-272,1993、Madden et al.,Meth.Enzymol.266:131-141,1996;Altschul et al.,Nucleic Acids Res.25:3389-3402,1997、Zhang and Madden,Genome Res.7:649-656,1997)、特に、blastpまたはtblastn(Altschul et al.,Nucleic Acids Res.25:3389-3402,1997)を使用して比較することができる。
【0119】
一部の実施形態では、改変レシリンは、改変レシリンが全長または短縮型天然レシリンと異なる位置及び/または異なる量及び/または異なるタイプの翻訳後修飾を1つ以上有するように、全長または短縮型天然レシリンと、翻訳後修飾される(例えば、グリコシル化、リン酸化)アミノ酸残基が異なる。一部の実施形態では、改変レシリンは、改変レシリンが全長または短縮型の天然レシリンとは異なる、架橋に関与する1つ以上の位置及び/または異なる量及び/または異なるタイプのアミノ酸を有するように、架橋に関与するアミノ酸残基が全長または短縮型天然レシリンとは異なる。そのような一部の実施形態では、改変レシリンは、1つ以上の追加またはより少ないチロシン残基、1つ以上の追加またはより少ないリジン残基、及び/または1つ以上の追加またはより少ないシステイン残基を含む点で、全長または短縮型天然レシリンとは異なる。
【0120】
一部の実施形態では、組み換えレシリンは、連結される天然もしくは短縮型天然レシリンまたは連結される改変レシリンを含む。一部の実施形態では、連結される天然もしくは短縮型天然レシリンまたは連結される改変レシリンは、少なくとも2つのAリピート(例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはそれ以上)を含む。一部の実施形態では、連結される短縮型天然レシリンもしくは連結される改変レシリンは、少なくとも2つのBリピート(例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはそれ以上)を含む。
【0121】
タンパク質の定量及び純度分析
一部の実施形態では、組成物中の全長レシリンの総量は、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)、逆相高速液体クロマトグラフィー、または当該技術分野で既知の他の方法(例えば、定量的ウェスタンブロット)で決定される。種々の実施形態では、同じまたは類似のアッセイが、単量体及び凝集体形態の全長レシリンの相対量を評価するために使用されてもよい。
【0122】
本明細書に記載されるように、特定の実施形態では、レシリン組成物中のレシリンの優勢な種(すなわち、単量体全長レシリン)の相対量を特徴付けるデータは、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)から、以下のように決定される。レシリン粉末を5Mのグアニジンチオシアナートに溶解させ、Yarra SEC-3000 SEC-HPLCカラム上に注入して、分子量に基づいて成分を分離する。屈折率が、検出モダリティとして使用される。BSAが、全てのタンパク質の90%超が互いに約7%以内のdn/dc値(屈折率の応答係数)を示すという仮定の下で、一般的なタンパク質標準として使用される。ポリ(エチレンオキシド)が、保持時間標準として使用され、BSA較正物質が、方法の一貫した性能を保証するためにチェック標準として使用される。単量体全長レシリンに対応する範囲は、60~40kDaから評価され、凝集または重合した全長レシリンに対応し得る観察されたより高いピークは、この定量化には含まれない。このレシリンピークの相対的なパーセンテージは、総レシリンの一部としての組成物中の全長レシリンの量を決定するために、質量%及び面積%として報告される。
【0123】
架橋
一部の実施形態では、本明細書で提供される方法はさらに、組み換えレシリンを架橋して、本明細書で提供される組み換えレシリン組成物を得るステップ(
図2のステップ1005)を含む。架橋剤を含む所望の溶媒中の組み換えレシリンを小さな成形型に充填して、架橋後に得られる固体の形状を制御することができる。得られた組み換えレシリン固体の例が
図4に示される。
【0124】
一部の実施形態では、架橋は、チロシン残基を介して達成される。レシリンは、長さの大部分にわたって15~24アミノ酸毎にチロシン残基を有する。一部の実施形態では、レシリンの架橋は、レシリン中でジチロシン及びトリチロシン架橋を生成して、レシリン固体を形成する。
【0125】
他の実施形態では、架橋は、リジン残基を介して達成される。一部の実施形態では、架橋は、システイン残基を介して達成される。一部の実施形態では、架橋は、トランスグルタミナーゼを用いる(例えば、Kim Y,Gill EE,Liu JC.Enzymatic Cross-Linking of Resilin-Based Proteins for Vascular Tissue Engineering Applications.Biomacromolecules.17(8):2530-9を参照のこと)。一部の実施形態では、架橋は、ポリ(エチレングリコール)(PEG)を用いる(McGann CL,Levenson EA,Kiick KL.Macromol.Chem.Phys.2013,214,203-13;McGann CL,Akins RE,Kiick KL.Resilin-PEG Hybrid Hydrogels Yield Degradable Elastomeric Scaffolds with Heterogeneous Microstructure.Biomacromolecules.2016;17(1):128-40)。
【0126】
一部の実施形態では、組み換えレシリンは、酵素的架橋を介して(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼを使用して)架橋される。この方法はレシリンの大きな溶液を効率的に架橋し得るが、得られる架橋生成物は、架橋されたレシリン固体に共有結合で組み込まれた活性酵素を含む。これにより、レシリンのタンパク質骨格を分解するラジカル連鎖反応が生じる。
【0127】
他の実施形態では、組み換えレシリンは、光化学的架橋を介して架橋される(例えば、Elvin CM,Carr AG,Huson MG,Maxwell JM,Pearson RD,Vuocolo T,Liyou NE,Wong DCC,Merritt DJ,Dixon NE.Nature 2005,437,999-1002、Whittaker JL,Dutta NK,Elvin CM,Choudhury NR.Journal of Materials Chemistry B 2015,3,6576-79、Degtyar E,Mlynarczyk B,Fratzl P,Harrington MJ.Polymer 2015,69,255-63を参照のこと)。
【0128】
この架橋反応はまた、材料から完全に透析することが困難である活性な触媒のレシリン固体への組み込みをもたらし、比較的高い触媒負荷を使用し、型を通して光活性化が困難であり得る反応には効率的ではない。
【0129】
分解を防ぎ、エネルギー吸収の量及び形態が重要である、ある特定の用途のために好ましい一部の機械的特性を有する固体物質を作る新しい組み換えレシリンの架橋化学作用が本明細書で提供される。
【0130】
好ましい実施形態では、組み換えレシリンは、過硫酸アンモニウムを含む溶媒及び熱の適用(例えば、約80℃の温度で約2.5時間のインキュベーション)を介して架橋される。この架橋反応は、効率的であり、レシリン固体中に活性触媒を残さず、タンパク質の分解が少ない組成物が得られる。
【0131】
一部の実施形態では、レシリン架橋反応のための過硫酸アンモニウムの最終濃度は、約30~40mMである。一部の実施形態では、過硫酸アンモニウム及びレシリンを含む架橋溶液は、望ましい機械的特性を備えた固体を形成するのに十分な架橋を促進するために、少なくとも15分、少なくとも30分、少なくとも60分、少なくとも90分、または少なくとも2時間インキュベートされる(すなわち、熱に曝露される)。一部の実施形態では、他の過硫酸塩が使用される。
【0132】
一部の実施形態では、過硫酸アンモニウム及びレシリン組成物溶液に加えられる熱は、少なくとも40℃、少なくとも45℃、少なくとも50℃、少なくとも55℃、少なくとも60℃、少なくとも65℃、少なくとも70℃、少なくとも75℃、または少なくとも80℃である。一部の実施形態では、過硫酸アンモニウム及びレシリンの架橋溶液に加えられる熱は、50℃~90℃または60℃~90℃または70℃~90℃または75℃~85℃または70℃~80℃である。一部の実施形態では、架橋溶液は、酵素触媒を含まない。一部の実施形態では、架橋溶液は、光活性触媒を含まない。
【0133】
一部の実施形態では、架橋溶液は、総架橋溶液の少なくとも1重量%、5重量%、10重量%、20重量%、25重量%、30重量%、35重量%、40重量%、45重量%、もしくは50重量%のレシリン、総架橋溶液の1重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、30重量%、20重量%、もしくは10重量%、10重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、30重量%、もしくは20重量%、20重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、もしくは30重量%、30重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、もしくは40重量%、40重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、もしくは50重量%、50重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、もしくは60重量%、60重量%から100重量%、90重量%、80重量%、もしくは70重量%、70重量%から100重量%、90重量%、もしくは80重量%、80重量%から100重量%もしくは90重量%、または90重量%から100重量%を占める。好ましい実施形態では、レシリンは、20重量%~30重量%のレシリンの濃度まで架橋溶液に溶解される。一部の実施形態では、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)で測定した場合、総レシリンは、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、または少なくとも90%の全長レシリンを含む。
【0134】
溶媒交換レシリン固体
架橋レシリンは水性溶媒中で形成することができ、エネルギー吸収及び剛性が望まれるある特定の用途にはあまり適さない低硬度及び弾性率を有する組成物をもたらす。一部の実施形態では、溶媒交換が、水性溶媒を極性非水溶媒と置き換えて、所望の材料特性を提供するために、架橋レシリン組成物に対して実施される。一部の実施形態では、極性非水溶媒は、グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、またはDMSOを含む。一部の実施形態では、非水溶媒は、水混和性である。一部の実施形態では、非水溶媒は、非揮発性溶媒である。一部の実施形態では、非水溶媒は、複数のアルコール官能基を有する分子を含む。一部の実施形態では、非水溶媒は、分子量が約100g/mol未満の分子(複数可)を少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、または100%含む。本明細書に記載されるように、弾性率、硬度、最大弾性圧縮荷重、弾性、及び材料寿命/疲労を含む架橋レシリン組成物の材料特性を、溶媒交換を使用して調整することができる。架橋レシリンと溶媒交換を行うことができる溶媒には、非架橋形態でレシリンを溶解させる溶媒を含む。
【0135】
一部の実施形態では、レシリンの水性溶媒を極性非水溶媒と置き換える溶媒交換は、熱の存在下で、例えば、約60℃の温度で実施される。一部の実施形態では、溶媒交換プロセスは、レシリン固体に対して少なくとも1倍、少なくとも2倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、または少なくとも20倍の体積の交換溶媒を含有する溶液中で実施される。一部の実施形態では、溶媒交換は、少なくとも1時間、少なくとも2時間、少なくとも4時間、少なくとも8時間、少なくとも16時間、少なくとも24時間、または少なくとも48時間実施される。一部の実施形態では、グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、またはDMSOが、架橋レシリン固体組成物の交換溶媒として使用される。
【0136】
一部の実施形態では、交換溶媒の選択及び使用される濃度は、溶媒設計から、剛性などの所望の調整可能な機械的特性を達成するように選択される。これは、所望の用途(例えば、靴のソール、ゴルフボールなど)に応じて選択することができる。
【0137】
一部の実施形態では、上記の溶媒交換プロセスにより、非水溶媒中で形成された架橋レシリン組成物は、少なくとも10日間、少なくとも20日間、少なくとも30日間、少なくとも40日間、または少なくとも50日室温で安定である。一部の実施形態では、上記の溶媒交換プロセスにより、非水溶媒中で形成された架橋レシリン組成物は、少なくとも10日間、少なくとも20日間、少なくとも30日間、少なくとも40日間、または少なくとも50日間、カビの成長に対して耐性を示す。一部の実施形態では、上記の溶媒交換プロセスにより、非水溶媒中で形成された架橋レシリン組成物は、少なくとも7日間または少なくとも14日間、脱水に対して耐性を示す。対照的に、水系架橋レシリン固体は、周囲条件下で開放環境に保存した場合、2週間以内に完全に脱水し、5~14日以内にカビを成長させることが観察された。さらに、水系レシリン固体の10mm×5mmディスクは、220lbの力が加えられる場合に壊れるが、グリセロール系レシリン固体の10mm×5mmディスクは、220lbの力の下では壊れない。
【0138】
一部の実施形態では、連続的に試験される材料間の相対的な材料特性は、レオメーターを使用して試験することができる。例えば、架橋レシリン組成物は、シリンダー型内で形成されていてもよく、得られたレシリンシリンダーは、レオメーターを使用して圧縮試験にかけられる。組み換えレシリンシリンダーは、破損することなく、開始の高さ7.3mm(平均幅5.4mm)から0.66mm未満に圧縮することができる。
図5に示されるように、圧縮荷重の解放時に、シリンダーは、6.7mmの高さ(平均幅5.6mm)に戻った。
【0139】
一部の実施形態では、極性非水溶媒は、該溶媒の極性非水性組成物の、少なくとも50体積%、少なくとも60体積%、少なくとも70体積%、少なくとも80体積%、少なくとも90体積%、少なくとも95体積%、少なくとも98体積%、または少なくとも99体積%を構成する。一部の実施形態では、溶媒は、該溶媒の、少なくとも50体積%、少なくとも60体積%、少なくとも70体積%、少なくとも80体積%、少なくとも90体積%、少なくとも95体積%、少なくとも98体積%、または少なくとも99体積%のグリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、またはDMSOを含む。
【0140】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組み換えレシリン組成物は、水性溶媒中の架橋組み換えレシリンよりも大きい弾性率を有する。
【0141】
一部の実施形態では、本明細書で提供される架橋レシリン組成物は、50以上、40以上、30以上、20以上、10以上、10から50、40、30、もしくは20、20から50、40、もしくは30、30から50もしくは40、または40から50のShore OO硬度を有する。一部の実施形態では、レシリンの硬度測定は、ASTM D2240に従って実施される。一部の実施形態では、ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、組み換えレシリン組成物は、少なくとも10の硬度を含む。一部の実施形態では、ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、組み換えレシリン組成物は、少なくとも30の硬度を含む。一部の実施形態では、ASTM D2240によりShore OOデュロメーターを使用して測定した場合、組み換えレシリン組成物は、約10~約50の硬度を含む。一部の実施形態では、架橋レシリン組成物の硬度は、整形外科用ソールに匹敵する。
【0142】
一部の実施形態では、ASTM D7121で測定した場合、組み換えレシリン組成物は、約40%~約60%の反発弾性を含む。
【0143】
一部の実施形態では、ASTM D575により測定した場合、組み換えレシリン組成物は、約6psi~約8psiの25%での圧縮応力を含む。
【0144】
一部の実施形態では、Zwick圧縮試験により測定した場合、組み換えレシリン組成物は、2kN未満の圧縮力で弾性から塑性へ遷移しない。
【0145】
一部の実施形態では、弾性、圧縮弾性率、引張弾性率、剪断弾性率、破断伸び、最大引張強さ、硬度、剛性、及び反発などのレシリン固体材料特性は、使用される溶媒及び溶媒交換の実施される方法に基づいて調整することができる。例えば、グリセロールは、勾配を用いるか、または用いずに、レシリン固体へ交換でき、異なる材料特性をもたらす。レシリン固体中のレシリンの濃度及び全レシリンの一部としての全長レシリンの量もまた、架橋レシリン固体組成物の材料特性に影響を与えるように調整することができる。
【0146】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるように、水系レシリン組成物(すなわち、水性溶媒中の架橋レシリン組成物)を極性非水系レシリン組成物(すなわち、極性非水溶媒中の架橋レシリン組成物)と置き換える溶媒交換は、同様の弾性及び同様の伸縮性を有するより堅い材料をもたらす。
【0147】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、少なくとも5重量%、少なくとも10重量%、少なくとも15重量%、少なくとも20重量%、少なくとも25重量%、少なくとも30重量%、少なくとも35重量%、少なくとも40重量%、少なくとも45重量%、少なくとも50重量%、少なくとも55重量%、少なくとも60重量%、少なくとも65重量%、少なくとも70重量%、少なくとも75重量%、少なくとも80重量%、少なくとも85重量%、少なくとも90重量%、少なくとも95重量%、10重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、30重量%、もしくは20重量%の間、20重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、もしくは30重量%の間、30重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、もしくは40重量%の間、40重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、もしくは50重量%の間、50重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、もしくは60重量%の間、60重量%と100重量%、90重量%、80重量%、もしくは70重量%の間、70重量%と100重量%、90重量%、もしくは80重量%の間、80重量%と100重量%もしくは90重量%の間、または90重量%と100重量%の間の組み換えレシリンを含む。組み換えレシリンは、同一の組み換えレシリン、または少なくとも2つの異なるアミノ酸配列を有する組み換えレシリンの混合物であり得る。
【0148】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、各組成物中に総レシリンの一部として、少なくとも5重量%、少なくとも10重量%、少なくとも15重量%、少なくとも20重量%、少なくとも25重量%、少なくとも30重量%、少なくとも35重量%、少なくとも40重量%、少なくとも45重量%、少なくとも50重量%、少なくとも55重量%、少なくとも60重量%、少なくとも65重量%、少なくとも70重量%、少なくとも75重量%、少なくとも80重量%、少なくとも85重量%、少なくとも90重量%、少なくとも95重量%、10重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、30重量%、もしくは20重量%の間、20重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、もしくは30重量%の間、30重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、もしくは40重量%の間、40重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、もしくは50重量%の間、50重量%と100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、もしくは60重量%の間、60重量%と100重量%、90重量%、80重量%、もしくは70重量%の間、70重量%と100重量%、90重量%、もしくは80重量%の間、80重量%と100重量%もしくは90重量%の間、または90重量%と100重量%の間の全長組み換えレシリンを含む。
【0149】
一部の実施形態では、組み換えレシリン組成物は、発泡材料である。一部の実施形態では、架橋レシリン組成物は、発泡材料、例えば、発泡固体である。一部の実施形態では、発泡材料は、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%の多孔度を含む。本明細書に記載されるように、多孔度は、その質量の体積に対する材料の隙間の体積のパーセンテージを指す。一部の実施形態では、本明細書に記載の発泡材料の密度は、非発泡材料の密度の少なくとも1/3、例えば、非発泡架橋レシリン組成物の密度の少なくとも1/2、少なくとも3/4、または少なくとも2倍である。一部の実施形態では、本明細書に記載の発泡材料中の気泡の平均直径は、約0.01mm~約3mm、例えば、約0.02mm~約1mm、約0.05mm~約2mm、約0.1mm~約3mm、約0.2mm~約4mm、約0.5mm~約5mm、約1mm~約1.5mm、または約1.5mm~約2mmである。
【0150】
一部の実施形態では、組み換えレシリン組成物は、発泡材料の1つ以上の層を含む。一部の実施形態では、発泡材料の1つ以上の層は、所望の順序で、例えば、支持層が発泡材料の2層間に配置される、連続的または交互の構成で構成される。発泡材料の1つ以上の層は、当該技術分野で既知の任意の方法、例えば、噴霧乾燥、射出成形、で配置されてもよい。一部の実施形態では、発泡材料の1つ以上の層は、1つ以上の空隙を含む。各層のトポグラフィー及び一緒に重なる発泡材料の1つ以上の層の傾向は、異なってもよい。一部の実施形態では、空隙は、空気の流れを導き、追加の吸収能力を提供するのを助けるように、1つ以上の側に流路を提供してもよい。
【0151】
機械的特性
他の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、架橋レシリンを含む組成物と比較して異なる特性を有する。一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、合成弾性材料と比較して同様の特性を有する。そのような特性の非限定例としては、弾性、圧縮弾性率、引張弾性率、剪断弾性率、硬度、反発、及び圧縮永久ひずみが挙げられる。特定の機械的特性を有する組成物を得るように改変することができるパラメーターは、例えば、組み換えレシリンの長さ及び/または配列、組み換えレシリンの翻訳後修飾の程度及び/またはタイプ、組み換えレシリンの架橋の程度及び/またはタイプ、ならびに架橋レシリン組成物の溶媒の性質を含む。
【0152】
一部の実施形態では、エラストマー試料の応力-ひずみ測定を行う多くの異なるタイプの引張及び圧縮システムを使用して、最大引張強度、圧縮弾性率、引張弾性率、剪断弾性率、破断伸び、及び弾性などの機械的特性を測定することができる。ヒステリシスとの曲線を含む、得られる応力-ひずみ曲線は、引張りまたは圧縮で測定することができる。一部の実施形態では、張力及び圧縮試験システムは、試料にひずみを適用し、ロードセルを使用して得られる力を測定することができる。一部の実施形態では、機械的特性は、巨視的スケール(例えば、巨視的圧縮試験機を使用する)、微視的、またはナノスケール(例えば、原子間力顕微鏡法(AFM)またはナノ圧痕測定を使用する)で測定することができる。一部の実施形態では、エラストマーの圧縮機械的特性は、標準ASTM D575-91(2012)圧縮におけるゴム特性の標準試験法に従って測定することができる。引張りのエラストマーの機械的測定は、ASTM D412-15a加硫ゴム及び熱可塑性エラストマーの標準試験法-引張りを使用して実施することができる。一部の実施形態では、エラストマーの引き裂き強さは、ASTM D624-00従来の加硫ゴム及び熱可塑性エラストマーの引き裂き強さに関する標準試験法を使用して実施することができる。一部の実施形態では、スラブ、結合、及び成形エラストマーの機械的特性は、ASTM D3574-11柔軟な細胞物質-スラブ、結合、及び成形ウレタン発泡体に関する標準試験法を使用して実施することができる。一部の実施形態では、エラストマーの機械的特性は、振動法を使用する加硫ゴム及びゴム様材料の動的試験のためのASTM D5992-96(2011)標準ガイドを使用して測定することができる。
【0153】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、50%超、60%超、70%超、80%超、90%超、または95%超、50%から100%、90%、80%、70%、もしくは60%、60%から100%、90%、80%、もしくは70%、70%から100%、90%、もしくは80%、80%から100%もしくは90%、90%から100%、95%から100%、90%から99%、または95%から99%の弾性を有する。
【0154】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、10MPa未満、7MPa未満、5MPa未満、2MPa未満、1MPa未満、0.5MPa未満、もしくは0.1MPa未満、0.01MPaから10MPa、7MPa、5MPa、2MPa、1MPa、0.5MPa、もしくは0.1MPa、0.1MPaから10MPa、7MPa、5MPa、2MPa、1MPa、もしくは0.5MPa、0.5MPaから10MPa、7MPa、5MPa、2MPa、もしくは1MPa、1MPaから10MPa、7MPa、5MPa、もしくは2MPa、2MPaから10MPa、7MPa、もしくは5MPa、5MPaから10MPaもしくは7MPa、または7MPaから10MPaの圧縮弾性率を有する。一部の実施形態では、組成物の圧縮弾性率は、ASTM D575-91(2012)圧縮におけるゴム特性の標準試験法により定義されるように測定することができる。
【0155】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、10MPa未満、7MPa未満、5MPa未満、2MPa未満、1MPa未満、0.5MPa未満、もしくは0.1MPa未満、0.01MPaから10MPa、7MPa、5MPa、2MPa、1MPa、もしくは0.5MPa、0.5MPaから10MPa、7MPa、5MPa、2MPa、もしくは1MPa、1MPaから10MPa、7MPa、5MPa、もしくは2MPa、2MPaから10MPa、7MPa、もしくは5MPa、5MPaから10MPaもしくは7MPa、または7MPaから10MPaの引張弾性率を有する。
【0156】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、1MPa未満、100kPa未満、50kPa未満、20kPa未満、10kPa未満、もしくは1kPa未満、0.1kPaから1MPa、100kPa、50kPa、20kPa、10kPa、もしくは1kPa、1kPaから1MPa、100kPa、50kPa、20kPa、もしくは10kPa、10kPaから1MPa、100kPa、50kPa、もしくは20kPa、20kPaから1MPa、100kPa、もしくは50kPa、50kPaから1MPaもしくは100kPa、または100kPaから1MPaの剪断弾性率を有する。
【0157】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、1%超、10%超、50%超、100%超、300%超、もしくは500%超、1%から500%、300%、100%、50%、もしくは10%、10%から500%、300%、100%、もしくは50%、50%から500%、300%、もしくは100%、100%から500%もしくは300%、または300%から500%の破断伸びを有する。
【0158】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、0.1kPa超、1kPa超、2kPa超、5kPa超、もしくは10kPa超、0.1kPaから100kPa、10kPa、5kPa、2kPa、もしくは1kPa、1kPaから100kPa、10kPa、5kPa、もしくは2kPa、2kPaから100kPa、10kPa、もしくは5kPa、5kPaから100kPaもしくは10kPa、または10kPaから100kPaの最大引張強度を有する。
【0159】
一部の実施形態では、硬度及び圧縮弾性率などの機械的特性は、圧痕及びナノ圧痕測定システムを使用して測定することができる。一部の実施形態では、所与の量のひずみまで試料に食い込む先端を利用する圧痕測定は、硬度及びレシリンの圧縮弾性率を測定するために使用され、得られる力は、ロードセルを使用して測定される。一部の実施形態では、Vickers及びBerkovich形状の先端を含む、様々な先端形状を使用することができる。一部の実施形態では、圧痕手法により測定された硬度は、硬度=(ピーク力)/(接触面積)の関係により特徴付けられる。
【0160】
一部の実施形態では、ポリマー、エラストマー、及びゴムの硬度は、硬度計を使用して測定することができる。一部の実施形態では、エラストマーの硬度は、標準ASTM D2240を使用して測定することができ、これは、特定のばね力及び圧子構成の組み合わせを使用する12の異なるデュロメータースケールを承認する。最も一般的なスケールは、Shore OO、A、及びD硬度スケールである。硬度スケールは、0~100の範囲であり、0は、より柔らかい材料であり、100は、より硬い材料である。
【0161】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、90未満、80未満、70未満、60未満、50未満、40未満、30未満、もしくは20未満、10から90、80、70、60、50、40、30、もしくは20、20から90、80、70、60、50、40、もしくは30、30から90、80、70、60、50、もしくは40、40から90、80、70、60、もしくは50、50から90、80、70、もしくは60、60から90、80、もしくは70、70から90もしくは80、または80から90のShore OO硬度を有する。一部の実施形態では、レシリンの硬度測定は、ASTM D2240に従って実施される。
【0162】
本明細書で使用される場合、「反発」という用語は、特定の弾性の尺度を指す。一部の実施形態では、反発は、振り子ツール及びドロップボールを含むいくつかの様々なツールを用いて測定することができる。振り子タイプの測定では、一般に反発率と呼ばれるRBは、以下の式から決定される。
【0163】
反発弾性は、以下の通り計算することができる:
(式中、h=反発の頂点の高さ、H=初期の高さ)。反発弾性は、リバウンドの角度を測定することによっても決定することができる。エラストマーの反発を決定するための試験法の一部の例は、ASTM D2632-15及びASTM D7121-05(2012)である。
【0164】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、50%超、60%超、70%超、80%超、90%超、もしくは95%超、50%から100%、90%、80%、70%、または60%、60%から100%、90%、80%、または70%、70%から100%、90%、または80%、80%から100%もしくは90%、90%から100%、95%から100%、90%から99%、または95%から99%の反発を有する。一部の実施形態では、レシリンの反発測定は、ASTM D2632-15、またはASTM D7121-05(2012)に従って実施される。
【0165】
本明細書で使用される場合、「圧縮永久ひずみ」という用語は、加えられた力が除去された後に残存する永久変形の尺度を指す。一部の実施形態では、圧縮永久ひずみは、空気中で一定の力の下での圧縮永久ひずみ(圧縮永久ひずみAと呼ばれる)、空気中で一定のたわみの下での圧縮永久ひずみ(圧縮永久ひずみBと呼ばれる)、及び材料の硬度を考慮する空気中の一定のたわみの下での圧縮永久ひずみ(圧縮永久ひずみCと呼ばれる)を含む、様々な方法で測定することができる。圧縮永久ひずみA(CA)は、以下の数式、CA=[(to-ti)/to]×100により計算される(式中、toは元の標本の厚さであり、tiは試験中の標本の厚さである)。圧縮永久ひずみB(CB)は、CB=[(to-ti)/(to-tn)]×100で与えられる(式中、toは元の標本の厚さであり、tiは試験後の標本の厚さであり、tnは試験中のスペーサーの厚さまたは標本の厚さである)。エラストマーの圧縮永久ひずみを決定するための試験法の一部の例は、ASTM D3574-11及びASTM D395-16である。
【0166】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、50%超、60%超、70%超、80%超、90%超、もしくは95%超、50%から100%、90%、80%、70%、もしくは60%、60%から100%、90%、80%、もしくは70%、70%から100%、90%、もしくは80%、80%から100%もしくは90%、90%から100%、95%から100%、90%から99%、または95%から99%の圧縮永久ひずみAまたは圧縮永久ひずみBを有する。一部の実施形態では、レシリンの圧縮永久ひずみ測定は、ASTM D3574-11及びASTM D395-16に従って実施される。
【0167】
レシリンの生成物への加工及び成形は、様々な用途に応じて多くの形態をとることができる。従って、本明細書で提供される組成物は、限定されないが、ゲル、多孔質スポンジ、フィルム、機械加工可能な固体、鋳造形態、成形形態、及び複合材料を含む任意の形状及び形態を有し得る。
【0168】
本明細書で使用される場合、「密度」という用語は、体積で除した試料の質量を指す。一部の実施形態では、エラストマーの密度は、気泡を除去するために水の代わりにアルコールを使用したピクノメーターを使用して決定することができる。一部の実施形態では、エラストマーの密度は、静水圧法を使用して決定することができる。本明細書で使用される場合、「圧縮体積密度」という用語は、試料質量対試料の圧縮体積の比を指し、「圧縮体積」は、ピストン-シリンダー試験チャンバーエンクロージャーの周囲の形状に完全に一致するまで自由に動かすのに十分な圧縮力にかけられる際に、エラストマー試料で達成される最終平衡体積として定義される。一部の実施形態では、エラストマーの圧縮体積密度は、圧縮体積密度計を使用して決定することができる。
【0169】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、0.5mg/cm3~2.0mg/cm3、または1.0mg/cm3~1.5mg/cm3、または1.1mg/cm3~1.4mg/cm3、または1.2mg/cm3~1.35mg/cm3の密度または圧縮体積密度を有する。一部の実施形態では、エラストマーの密度または圧縮体積密度の決定は、ASTM D297-15ゴム生成物の標準試験法-化学分析を使用して実施することができる。
【0170】
本明細書で提供される組成物は、とりわけ、限定されないが、航空宇宙、自動車、スポーツ用品、防振、履物、及び衣類における用途を含む、いくつかの用途を有する。これらのカテゴリーの一部の用途を、非限定例として列挙する。望ましい弾性効率のために、レシリンは、機械的エネルギーを貯蔵及び回収するためのエネルギー貯蔵装置(例えば、ゴムバンド)として使用することができる。自動車のサスペンションシステムは、レシリンブッシングを適用することにより改善でき、高速で隆起を越え、窪みを通過する時に、路上でのタイヤのより多くの接触を維持する。さらに、ゴルフボールのコア、テニスラケットグリップ、ゴルフクラブグリップ、及び卓球パドルを含む、様々に調整された機械的特性を有するレシリンのいくつかのスポーツ用品用途がある。
【0171】
特に興味深い用途は、本明細書で提供されるレシリン組成物の独特の特性による履物である。インソールまたはミッドソールとして、レシリンは、フットストライクを緩衝すること、及び前方への運動量としてフットストライクするものからの多くのエネルギーを復元することにより、靴の快適さ及び生体効率を向上させ得る。ミッドソールとして、レシリンは、ミッドソール全体とするか、または特性を補完するために別の材料内にカプセル化することができる(例えば、耐摩耗性または耐摩耗性材料、または牽引力に調整された材料)。レシリンミッドソールはまた、強化された性能(例えば、より柔らかいヒールストライク領域及びより強固なアーチサポート)を提供するために合わせて機能する、異なって調整された機械的特性を有する複数のレシリン材料を含有し得る。
【0172】
ベクター、宿主細胞、及び発酵物
さらに、組み換えレシリンをコードするベクター、そのようなベクターを含む組み換え宿主細胞、ならびにそのような組み換え宿主細胞及び組み換えレシリンを含む発酵物が本明細書に提供される。
【0173】
一部の実施形態では、本明細書で提供されるベクターは、分泌レシリンコード配列を含み、これは、N末端で分泌シグナルに、任意に、C末端でタグペプチドまたはポリペプチドに融合されるレシリンポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、ベクターは、特定の宿主細胞における発現のためにコドン最適化される分泌レシリンコード配列を含む。
【0174】
好適な分泌シグナルは、本明細書で提供される組み換え宿主細胞におけるポリペプチドの分泌を媒介する分泌シグナルである。好適な分泌シグナルの非限定例は、出芽酵母のアルファ接合因子(α-MF)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)の酸性ホスファターゼ(PHO1)、及びインゲンマメ(Phaseolus vulgaris)からのフィトヘマグルチニン(PHA-E)の分泌シグナルである。さらなる分泌シグナルは、当該技術分野で知られているか、または宿主細胞により分泌されたタンパク質の同定、続いて、分泌タンパク質のゲノム分析及び非翻訳N末端配列の同定により同定することができる(例えば、Huang et al.A proteomic analysis of the Pichia pastoris secretome in methanol-induced cultures.Appl Microbiol Biotechnol.2011 Apr;90(1):235-47を参照のこと)。
【0175】
分泌レシリンコード配列によりコードされるレシリンは、さらにタグペプチドまたはポリペプチドに融合することができる。タグペプチドまたはポリペプチドの非限定例としては、親和性タグ(すなわち、特定の薬剤もしくはマトリックスに結合するペプチドもしくはポリペプチド)、可溶化タグ(すなわち、タンパク質の好適な折り畳みを助け、沈殿を防ぐペプチドもしくはポリペプチド)、クロマトグラフィータグ(すなわち、特定の分離手法に対し異なる解像度を得るために、タンパク質のクロマトグラフィー特性を変化させるペプチドもしくはポリペプチド)、エピトープタグ(すなわち、抗体により結合されるペプチドもしくはポリペプチド)、蛍光タグ(すなわち、短波長光で励起すると、高波長光を発するペプチドもしくはポリペプチド)、発色タグ(すなわち、可視光スペクトルの特定のセグメントを吸収するペプチドもしくはポリペプチド)、酵素基質タグ(すなわち、特定の酵素反応の基質であるペプチドもしくはポリペプチド)、化学基質タグ(すなわち、特定の化学改変の基質であるペプチドもしくはポリペプチド)、またはその組み合わせが挙げられる。好適な親和性タグの非限定例としては、マルトース結合タンパク質(MBP)、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)、ポリ(His)タグ、SBPタグ、ストレップタグ、及びカルモジュリンタグが挙げられる。好適な溶解度タグの非限定例としては、チオレドキシン(TRX)、ポリ(NANP)、MBP、及びGSTが挙げられる。クロマトグラフィータグの非限定例としては、ポリアニオン性アミノ酸(例えば、FLAGタグ
)及びポリグルタミン酸タグが挙げられる。エピトープタグの非限定例としては、V5タグ、VSVタグ、Mycタグ、HAタグ、Eタグ、NEタグ、及びFLAGタグが挙げられる。蛍光タグの非限定例としては、緑色蛍光タンパク質(GFP)、青色蛍光タンパク質(BFP)、シアン蛍光タンパク質(CFP)、黄色蛍光タンパク質(YFP)、橙色蛍光タンパク質(OFP)、赤色蛍光タンパク質(RFP)、及びその誘導体が挙げられる。発色タグの非限定例としては、タンパク質のGFP様ファミリーの非蛍光メンバー(例えば、BlitzenBlue、DonnerMagenta;DNA2.0、カリフォルニア州ニューアーク)が挙げられる。酵素基質タグの非限定例としては、ビオチン化に適する配列内にリジンを含むペプチドまたはポリペプチド(例えば、AviTag、ビオチンカルボキシキャリアタンパク質[BCCP])が挙げられる。化学基質タグの非限定例としては、FIASH-EDT2との反応に適する基質が挙げられる。レシリンへのC末端ペプチドまたはポリペプチドの融合は、切断可能(例えば、TEVプロテアーゼ、トロンビン、第Xa因子、またはエンテロペプチダーゼにより)、または切断不可能であり得る。
【0176】
一部の実施形態では、ベクターは、単一の分泌レシリンコード配列を含む。他の実施形態では、ベクターは、2つ以上(例えば、3、4、または5)の分泌レシリンコード配列を含む。そのような一部の実施形態では、分泌レシリンコード配列は、同一である。そのような他の実施形態では、分泌レシリンコード配列のうちの少なくとも2つは、同一ではない。分泌レシリンコード配列の少なくとも2つが同一ではない実施形態では、少なくとも2つの分泌レシリンコード配列は、レシリン及び/もしくは分泌シグナルならびに/またはそれらをコードする任意のタグペプチドもしくはポリペプチドにおいて互いに異なり得る。
【0177】
一部の実施形態では、ベクターは、分泌レシリンコード配列の発現を駆動するように、分泌レシリンコード配列に作動可能に連結されるプロモーターを含む。プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターであり得る。一部の実施形態では、誘導性プロモーターの誘導は、グルコース抑制、ガラクトース誘導、スクロース誘導、リン酸抑制、チアミン抑制、またはメタノール誘導を介して起こる。好適なプロモーターとしては、本明細書で提供される組み換え宿主細胞におけるタンパク質の発現を媒介するプロモーターが挙げられる。好適なプロモーターの非限定例としては、AOX1プロモーター、GAPプロモーター、LAC4-PBIプロモーター、T7プロモーター、TACプロモーター、GCW14プロモーター、GAL1プロモーター、λPLプロモーター、λPRプロモーター、ベータラクタマーゼプロモーター、spaプロモーター、CYC1プロモーター、TDH3プロモーター、GPDプロモーター、TEF1プロモーター、ENO2プロモーター、PGL1プロモーター、SUC2プロモーター、ADH1プロモーター、ADH2プロモーター、HXT7プロモーター、PHO5プロモーター、及びCLB1プロモーターが挙げられる。分泌レシリンコード配列の発現を促進するために使用することができる追加のプロモーターは、当該技術分野で知られている。
【0178】
一部の実施形態では、ベクターは、分泌レシリンコード配列の転写の終結をもたらすように、分泌レシリンコード配列に作動可能に連結されるターミネーターを含む。好適なターミネーターとしては、本明細書で提供される組み換え宿主細胞における転写を終結させるターミネーターが挙げられる。好適なターミネーターの非限定例としては、AOX1ターミネーター、PGK1ターミネーター、及びTPS1ターミネーターが挙げられる。分泌レシリンコード配列の転写の終結をもたらす追加のターミネーターは、当該技術分野で知られている。
【0179】
ベクターが2つ以上のレシリンコード配列を含む実施形態では、2つ以上のレシリンコード配列は、同じプロモーター及び/もしくはターミネーター、または2つ以上の異なるプロモーター及び/もしくはターミネーターに作動可能に連結することができる。
【0180】
本明細書で提供されるベクターはさらに、組み換え宿主細胞におけるベクターの増殖に適する要素を含み得る。そのような要素の非限定例としては、細菌の複製起点及び選択マーカー(例えば、抗生物質耐性遺伝子、栄養要求性マーカー)が挙げられる。細菌の複製起点及び選択マーカーは、当該技術分野で知られている。一部の実施形態では、選択マーカーは、薬剤耐性マーカーである。薬剤耐性マーカーは、それが無ければ細胞を別途死滅させるであろう、外因的に加えられた薬剤を、細胞が解毒することを可能にする。薬剤耐性マーカーの実例としては、アンピシリン、テトラサイクリン、カナマイシン、ブレオマイシン、ストレプトマイシン、ハイグロマイシン、ネオマイシン、ゼオシン(商標)などの抗生物質に対して耐性があるものが含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、選択マーカーは、栄養要求性マーカーである。栄養要求性マーカーは、必須成分を欠く培地で成長する間に、細胞が必須成分(通常は、アミノ酸)を合成することを可能にする。選択可能な栄養要求性遺伝子配列としては、例えば、ヒスチジノールの存在下でヒスチジン不含培地での成長を可能にするhisDが挙げられる。本発明のベクターに適する他の選択マーカーとしては、ブレオマイシン耐性遺伝子、メタロチオネイン遺伝子、ハイグロマイシンB-ホスホトランスフェラーゼ遺伝子、AURI遺伝子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子、アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、チミジンキナーゼ遺伝子、及びキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子が挙げられる。
【0181】
本発明のベクターはさらに、宿主細胞のゲノム内の特定の場所への分泌レシリンコード配列の直接取り組みを誘導する標的化配列を含み得る。そのような標的化配列の非限定例としては、宿主細胞のゲノムに存在するヌクレオチド配列と同一であるヌクレオチド配列が挙げられる。一部の実施形態では、標的化配列は、宿主細胞のゲノムにおける繰り返し要素と同一である。一部の実施形態では、標的化配列は、宿主細胞のゲノムにおける転位因子と同一である。
【0182】
一部の実施形態では、本明細書に記載のベクターを含む組み換え宿主細胞が本明細書に提供される。一部の実施形態では、ベクターは、例えば、相同組み換えまたは標的化組み込みにより、組み換え宿主細胞のゲノム(例えば、染色体)内に安定して組み込まれる。ゲノム組み込みに適する部位の非限定例としては、出芽酵母ゲノムのTy1遺伝子座、ピキア・パストリスゲノムのrDNA及びHSP82遺伝子座、ならびに組み換え宿主細胞のゲノム全体にコピーが散在している転位因子が挙げられる。他の実施形態では、ベクターは、組み換え宿主細胞のゲノム内に安定して組み込まれておらず、むしろ染色体外である。
【0183】
組み換え宿主細胞は、哺乳動物、植物、藻類、真菌、または微生物起源のものであり得る。好適な真菌の非限定例としては、以下が挙げられる:メチロトローフ酵母、糸状酵母、アルクスラ・アデニニボランス、クロコウジカビ(Aspergillus niger)、クロコウジカビ変種アワモリ(Aspergillus niger var.awamori)、コウジカビ(Aspergillus oryzae)、カンジダ・エチェルシイ(Candida etchellsii)、カンジダ・ギリエルモンディ(Candida guilliermondii)、カンジダ・フミリス(Candida humilis)、カンジダ・リポリティカ(Candida lipolytica)、カンジダ・プソイドトロピカリス(Candida pseudotropicalis)、トルラ酵母(Candida utilis)、カンジダ・ベルサチリス(Candida versatilis)、デバリオミセス・ハンセニイ(Debaryomyces hansenii)、クリ胴枯病菌(Endothia parasitica)、エレモテシウム・アシュビイ(Eremothecium ashbyii)、フザリウム・モニリフォルメ(Fusarium moniliforme)、ハンゼヌラ・ポリモルファ、クルイベロミセス・ラクチス、クルイベロミセス・マルキシアヌス(Kluyveromyces marxianus)、クルイベロミセス・サーモトレランス(Kluyveromyces thermotolerans)、モルティエレラ・ヴィナセア変種ラフィノースユーティライザ(Morteirella vinaceae var.raffinoseutilizer)、ムコール・ミエヘイ(Mucor miehei)、ムコール・ミエヘイ変種クーニー・エト・エマーソン(Mucor miehei var.Cooney et Emerson)、ムコール・プシルス・リント(Mucor pusillus Lindt)、ペニシリウム・ロックフォルティ(Penicillium roquefortii)、ピキア・メタノリカ、ピキア・パストリス(コマガタエラ・ファフィイ(Komagataella phaffii))、ピキア(シェフェルソミセス)・スティピティス、リゾプス・ニベウス(Rhizopus niveus)、ロドトルラ属種(Rhodotorula sp.)、サッカロミセス・バヤヌス(Saccharomyces bayanus)、サッカロミセス・ベチクス(Saccharomyces beticus)、出芽酵母、サッカロミセス・チェバリエリ(Saccharomyces chevalieri)、サッカロミセス・ジアスタチクス(Saccharomyces diastaticus)、サッカロミセス・エリプソイデウス(Saccharomyces ellipsoideus)、サッカロミセス・エキシグウス(Saccharomyces exiguus)、サッカロミセス・フロレンチヌス(Saccharomyces florentinus)、サッカロミセス・フラギリス(Saccharomyces fragilis)、サッカロミセス・パストリアヌス(Saccharomyces pastorianus)、サッカロミセス・ポンベ(Saccharomyces pombe)、サッカロミセス・サケ(Saccharomyces sake)、サッカロミセス・ウバルム(Saccharomyces uvarum)、スポリディオボルス・ジョンソニイ(Sporidiobolus johnsonii)、スポリディオボルス・サルモニコロル(Sporidiobolus salmonicolor)、スポロボロミセス・ロセウス(Sporobolomyces roseus)、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesi)、キサントフィロミセス・デンドロロウス(Xanthophyllomyces dendrorhous)、ヤロウイア・リポリティカ、ザイゴサッカロミセス・ロウキシイ(Zygosaccharomyces rouxii)、ならびにそれらの派生物及び交配種。
【0184】
好適な微生物の非限定例としては、以下が挙げられる:アセトバクター・スボキシダンス(Acetobacter suboxydans)、アセトバクター・キシリナム(Acetobacter xylinum)、アクチノプラネス・ミズーリエンシス(Actinoplane missouriensis)、アルスロスピラ・プラテンシス(Arthrospira platensis)、アルスロスピラ・マキシマ(Arthrospira maxima)、バチルス・セレウス(Bacillus cereus)、バチルス・コアグランス(Bacillus coagulans)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus_stearothermophilus)、枯草菌(Bacillus subtilis)、大腸菌(Escherichia coli)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス・ブルガリクス(Lactobacillus bulgaricus)、ラクトバチルス・ロイテリ(Lactobacillus reuteri)、ラクトコッカス・ラクチス(Lactococcus lactis)、ラクトコッカス・ラクチス ランスフィールドN群、ロイコノストック・シトロボルム(Leuconostoc citrovorum)、ロイコノストック・デキストラニクム(Leuconostoc dextranicum)、ロイコノストック・メセンテロイデス(Leuconostoc mesenteroides)株NRRL B-512(F)、ミクロコッカス・リゾデイクティカス(Micrococcus lysodeikticus)、スピルリナ属(Spirulina)、ストレプトコッカス・クレモリス(Streptococcus cremoris)、ストレプトコッカス・ラクチス(Streptococcus lactis)、ストレプトコッカス・ラクチス亜種ジアセチラクチス(Streptococcus lactis subspecies diacetylactis)、ストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus)、ストレプトミセス・チャッタノオゲンシス(Streptomyces chattanoogensis)、ストレプトミセス・グリセウス(Streptomyces griseus)、ストレプトミセス・ナタレンシス(Streptomyces natalensis)、ストレプトミセス・オリバセウス(Streptomyces olivaceus)、ストレプトミセス・オリボクロモゲネス(Streptomyces olivochromogenes)、ストレプトミセス・ルビジノサス(Streptomyces rubiginosus)、キサントモナス・カンペストリス(Xanthomonas campestris)、及びそれらの派生物及び交配種。組み換え宿主細胞として使用することができるさらなる株は、当該技術分野で既知である。「組み換え宿主細胞」という用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫を指すことが意図されると理解すべきである。変異または環境の影響のいずれかにより、特定の改変が、後の世代で起こり得るので、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一でないことがあるが、依然として、本明細書で使用される「組み換え宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。
【0185】
一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、本明細書で提供される組み換えレシリンの産生を改善する遺伝子改変を含む。そのような遺伝子改変の非限定例として、プロモーターの変化、キナーゼ活性の変化、タンパク質フォールディング活性の変化、タンパク質分泌活性の変化、遺伝子発現誘導経路の変化、及びプロテアーゼ活性の変化が挙げられる。
【0186】
本明細書で提供される組み換え宿主細胞は、好適な起源の細胞を本明細書で提供されるベクターで形質転換することにより生成される。そのような変換の場合、ベクターは、円形または線形であり得る。ベクターを含む組み換え宿主細胞の形質転換は、例えば、細胞の成長についてのもしくはこれに対する選択を可能にするベクターによりコードされる薬物耐性もしくは栄養要求性マーカーを発現させることにより、または他の手段(例えば、ベクターに含まれる発光ペプチドの検出、個々の組み換え宿主細胞コロニーの分子分析、例えば、制限酵素マッピング、PCR増幅、または単離染色体外ベクターもしくは染色体組み込み部位の配列分析によるもの)により、容易に同定することができる。
【0187】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組み換え宿主細胞は、本明細書で提供される高力価の組み換えレシリンを産生し得る。そのような一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、2mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、4mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、6mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、8mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、10mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、12mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、14mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、16mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、18mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、20mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、25mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、もしくは30mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、2から40、30、20、10、もしくは5mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、5から40、30、20、もしくは10mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、10から40、30、もしくは20mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、20から40もしくは30mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、または30から40mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間の速度で組み換えレシリンを産生する。そのような他の実施形態では、組み換え宿主細胞は、2mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、4mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、6mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、8mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、10mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、12mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、14mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、16mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、18mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、20mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、25mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、もしくは30mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、2から40、30、20、10、もしくは5mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、5から40、30、20、もしくは10mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、10から40、30、もしくは20mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、20から40もしくは30mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、または30から40mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間の速度で組み換えレシリンを分泌する。産生された組み換えレシリンの識別は、HPLC定量、ウェスタンブロット分析、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、及び2次元質量分析(2D-MS/MS)配列同定により確認することができる。
【0188】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組み換え宿主細胞は、本明細書で提供される組み換えレシリンの高分泌画分を有する。そのような一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、50%超、60%超、70%超、80%超、もしくは90%超、50%から100%、90%、80%、70%、もしくは60%、60%から100%、90%、80%、もしくは70%、70%から100%、90%、もしくは80%、90%から100%もしくは90%、または90%から100%の組み換えレシリンの画分を分泌している。
【0189】
組み換えレシリンの産生及び分泌は、組み換え宿主細胞に含まれる分泌レシリンコード配列のコピー数及び/または組み換え宿主細胞に含まれる分泌レシリンコード配列の転写速度により影響を受け得る。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、単一の分泌レシリンコード配列を含む。他の実施形態では、組み換え宿主細胞は、2つ以上(例えば、3、4、5、またはそれ以上)の分泌レシリンコード配列を含む。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、強力なプロモーターに作動可能に連結される分泌レシリンコード配列を含む。強力なプロモーターの非限定例としては、ピキア・パストリスのpGCW14プロモーターを含む。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、中程度のプロモーターに作動可能に連結される分泌レシリンコード配列を含む。そのような中程度のプロモーターの非限定例としては、ピキア・パストリスのpGAPプロモーターが挙げられる。一部の実施形態では、組み換え宿主細胞は、弱いプロモーターの制御下でレシリンをコードするコード配列を含む。
【0190】
本明細書で提供される発酵物は、本明細書に記載の組み換え宿主細胞、及び組み換え宿主細胞を成長させるのに適する培地を含む。
【0191】
発酵物は、細胞生存及び/または成長、ならびに組み換えレシリンの分泌のために組み換え宿主細胞により必要とされる栄養素を提供する培地中で組み換え宿主細胞を培養することにより得られる。そのような培地は通常、過剰な炭素源を含有する。好適な炭素源の非限定例としては、単糖、二糖、多糖、及びそれらの組み合わせが挙げられる。好適な単糖の非限定例としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、リボース、キシロース、アラビノース、リボース、及びそれらの組み合わせが挙げられる。好適な二糖の非限定例としては、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、及びそれらの組み合わせが挙げられる。好適な多糖の非限定例としては、ラフィノース、デンプン、グリコーゲン、グリカン、セルロース、キチン、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【0192】
一部の実施形態では、発酵物は、全発酵物の少なくとも1重量%、少なくとも5重量%、少なくとも10重量%、少なくとも20重量%、もしくは少なくとも30重量%、1重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、30重量%、20重量%、もしくは10重量%、10重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、30重量%、もしくは20重量%、20重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、40重量%、もしくは30重量%、30重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、50重量%、もしくは40重量%、40重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、60重量%、もしくは50重量%、50重量%から100重量%、90重量%、80重量%、70重量%、もしくは60重量%、60重量%から100重量%、90重量%、80重量%、もしくは70重量%、70重量%から100重量%、90重量%、もしくは80重量%、80重量%から100重量%もしくは90重量%、または90重量%から100重量%の量の組み換えレシリンを含む。
【0193】
一部の実施形態では、発酵物は、少なくとも2g/L、少なくとも5g/L、少なくとも10g/L、少なくとも15g/L、少なくとも20g/L、少なくとも25g/L、もしくは少なくとも30g/L、2g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、90g/L、80g/L、70g/L、60g/L、50g/L、40g/L、30g/L、20g/L、もしくは10g/L、10g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、90g/L、80g/L、70g/L、60g/L、50g/L、40g/L、30g/L、もしくは20g/L、20g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、90g/L、80g/L、70g/L、60g/L、50g/L、40g/L、もしくは30g/L、30g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、90g/L、80g/L、70g/L、60g/L、50g/L、もしくは40g/L、40g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、90g/L、80g/L、70g/L、60g/L、もしくは50g/L、50g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、90g/L、80g/L、70g/L、もしくは60g/L、60g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、90g/L、80g/L、もしくは70g/L、70g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、90g/L、もしくは80g/L、80g/Lから300g/L、200g/L、100g/L、もしくは90g/L、90g/Lから300g/L、200g/L、もしくは100g/L、100g/Lから300g/Lもしくは200g/L、または200g/Lから300g/Lの量の組み換えレシリンを含む。
【0194】
組み換えレシリンの生成方法
さらに、本明細書に記載の組み換えレシリンの生成のための方法が本明細書で提供される。
【0195】
方法は一般に、当該技術分野で周知のならびに別途指示のない限り、本明細書を通して引用及び考察される種々の一般的及びより具体的な参考文献に記載される従来の方法に従って実施される。例えば、以下を参照のこと:Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,2d ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1989、Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates,1992,and Supplements to 2002)、Harlow and Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1990、Taylor and Drickamer,Introduction to Glycobiology,Oxford Univ.Press,2003、Worthington Enzyme Manual,Worthington Biochemical Corp.,Freehold,N.J.、Handbook of Biochemistry:Section A Proteins,Vol I,CRC Press,1976、Handbook of Biochemistry:Section A Proteins,Vol II,CRC Press,1976、Essentials of Glycobiology,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999。
【0196】
一部の実施形態では、新規の方法が、宿主細胞から細胞外にレシリンを分泌するために利用される。一部の実施形態では、方法は、分泌レシリンコード配列を含むベクターを構築すること(
図2のステップ1001)、ベクターを宿主細胞に形質転換すること(
図2のステップ1002)、その後に、細胞外にレシリンを分泌する組み換え宿主細胞を培養すること(
図2のステップ1003)を含む。一部の実施形態では、方法は、2mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、4mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、6mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、8mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、10mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、12mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、14mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、16mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、18mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、20mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、25mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、または30mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間超、2から40、30、20、10、もしくは5mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、5から40、30、20、もしくは10mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、10から40、30、もしくは20mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、20から40もしくは30mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間、または30から40mgレシリン/g乾燥細胞重量/時間の速度で細胞外にレシリンを分泌することを含む。一部の実施形態では、分泌レシリンは、次に精製され(
図2のステップ1004)、精製レシリンは、エラストマーを形成するように架橋される(
図2のステップ1005)。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、本明細書で提供される組み換え宿主細胞を得るために、本明細書で提供されるベクターで細胞を形質転換するステップを含む(
図2のステップ1002)。ベクターで細胞を形質転換するための方法は、当該技術分野で周知である。そのような方法の非限定例としては、リン酸カルシウムトランスフェクション、デンドリマートランスフェクション、リポソームトランスフェクション(例えば、カチオン性リポソームトランスフェクション)、カチオン性ポリマートランスフェクション、エレクトロポレーション、細胞圧搾、ソノポレーション、光学的トランスフェクション、原形質融合、インペイルフェクション、流体力学的送達、遺伝子銃、マグネトフェクション、及びウイルストランスフェクションが挙げられる。当業者は、ベクターを導入するためのある特定の手法がある特定のタイプの細胞に対してより良好に機能するという、当該技術分野の知識に基づいて本明細書で提供されるベクターで細胞を形質転換するための1つ以上の好適な方法を選択することができる。
【0197】
一部の実施形態では、方法はさらに、本明細書で提供される発酵物を得るのに適する条件下、培地中で、本明細書で提供される組み換え宿主細胞を培養するステップを含む(
図2のステップ1003)。一部の実施形態では、条件及び培地は、組み換え宿主細胞から培地への組み換えタンパク質の分泌を促進するのに適する。これらの方法で使用される好適な培地は、好適な培養条件と同様に、当該技術分野で既知である。酵母宿主細胞の培養の例示的な詳細は、Idiris et al.,Appl.Microbiol.Biotechnol.86:403-417,2010、Zhang et al.,Biotechnol.Bioprocess.Eng.5:275-287,2000、Zhu,Biotechnol.Adv.30:1158-1170,2012;Li et al.,MAbs 2:466-477,2010に記載される。
【0198】
一部の実施形態では、方法はさらに、本明細書に提供される組み換えレシリンを得るために、本明細書に提供される発酵物から分泌組み換えレシリンを精製するステップを含む(
図2のステップ1004)。精製は、発酵物から分泌タンパク質を精製するための当該技術分野で既知の様々な方法で生じ得る。そのような方法の一般的なステップは、遠心分離(細胞を除去するための)、それに続く、沈殿剤または他の好適なコスモトロープ(例えば、硫酸アンモニウム)を使用するタンパク質の沈殿を含む。次に、沈殿タンパク質は、遠心分離により上清から分離し、溶媒中に再懸濁させることができる(例えば、リン酸緩衝食塩水[PBS])。懸濁タンパク質は、溶解塩を除去するために透析することができる。さらに、透析タンパク質は、他のタンパク質を変性するために加熱することができ、変性タンパク質は、遠心分離により除去することができる。任意に、精製組み換えレシリンをコアセルベート形成させることができる。
【0199】
種々の実施形態では、発酵物から分泌組み換えタンパク質を精製する方法は、尿素またはグアニジンチオシアナートなどの既知のカオトロープを有する全細胞ブロスまたは細胞ペレット中のタンパク質の可溶化と組み合わせた種々の遠心分離ステップを含み得る。
【0200】
一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、全細胞ブロスを遠心分離して、細胞の第1のペレット及び第1の上清を生じさせること、ならびに第1の上清を抽出して、透明な細胞ブロスを生じさせることにより精製することができる。次に、硫酸アンモニウムを使用して、第1の上清を沈殿させ、遠心分離して、第2のペレット及び第2の上清(廃棄した)を生じさせる。次に、第2のペレットを透析のためにPBS中に再懸濁させる。次に、一部の実施形態では、透析された溶液を高温にかけ、標的組み換えタンパク質よりも安定性が低いタンパク質を変性させる。次に、透析及び変性溶液を遠心分離することにより、変性タンパク質を除去して、第3のペレット及び第3の上清を生じさせる。第3の上清を変性溶液から保持し、次に、第3の上清を冷却することによりコアセルベート形成させて、標的組み換えレシリンタンパク質を含有する密な下層と上層への相分離を誘導する。この方法により精製された試料は、「CCB」試料と呼ぶことができる。一部の実施形態では、下層を保持すること、及び低温で下層をインキュベートして、さらなる相分離を誘導することにより、複数のコアセルベート形成を実施する。
【0201】
一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、全細胞ブロスを遠心分離して、細胞の第1のペレット及び細胞に近接する(例えば、細胞に付着している、細胞の表面上の)タンパク質及び/または不溶性タンパク質(例えば、タンパク質凝集体)及び第1の上清を生じさせること、次に、第1の上清を廃棄して、第1のペレットを得ることにより精製することができる。次に、第1のペレットは、組み換えレシリンタンパク質を可溶化するために、グアニジンチオシアナートに再懸濁させることができる。次に、再懸濁液を再度遠心分離して、第2のペレット及び第2の上清を生じさせる。次に、第2の上清をPBSに対して透析し、組み換えレシリン以外のタンパク質を変性させるために高温にかけ、遠心分離して第3のペレット及び第3の上清を生じさせる。次に、一部の実施形態では、次に、第3の上清を冷却によりコアセルベート形成にかけ、組み換えレシリンを含有する密な下層と上層への相分離を生じさせる。本方法により精製された試料は、「ゲル層」試料と呼ぶことができる。一部の実施形態では、下層を保持すること、及び低温で下層をインキュベートして、さらなる相分離を誘導することにより、複数のコアセルベート形成を実施する。
【0202】
一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、全細胞ブロスを遠心分離して、ペレット及び上清を生じさせること、次に、上清を廃棄して、細胞のペレット及び細胞に近接する(例えば、細胞への付着する、細胞の表面上の)タンパク質及び/または不溶性タンパク質(例えば、タンパク質凝集体)を得ることにより精製することができる。次に、細胞のペレットをグアニジンチオシアナートに再懸濁させて、細胞に近接するタンパク質を可溶化する。再懸濁液を再度遠心分離して、細胞の第2のペレット及び第2の上清を生じさせる。次に、第2の上清を硫酸アンモニウムで沈殿させ、遠心分離させて、第3のペレット及び第3の上清を生じさせる。次に、第3のペレットをグアニジンチオシアナート中に懸濁させ、次に、PBSに対して透析し、高温にかけて組み換えレシリン以外のタンパク質を変性させ、遠心分離して第4の上清及び第4のペレットを生じさせる。次に、第4の上清を冷却によるコアセルベート形成にかけて、相分離を生じさる。本方法により精製された試料は、「沈殿したゲル層」試料と呼ぶことができる。
【0203】
一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、全細胞ブロスに尿素を添加して、タンパク質を可溶化すること、次に、全細胞ブロスを遠心分離して、第1のペレット及び第1の上清を生じさせることにより精製することができる。次に、硫酸アンモニウムを使用して、第1の上清を沈殿させ、遠心分離して、第2のペレット及び第2の上清を生じさせる。第2の上清を廃棄し、次に、第2のペレットをグアニジンチオシアナート中に再懸濁させ、PBSに対して透析し、次に、組み換えレシリン以外のタンパク質を変性するために高温にかけ、再度遠心分離して、第3のペレット及び第3の上清を生じさせる。次に、第3の上清を冷却することにより、第3の上清をコアセルベート形成して、組み換えレシリンを含有する密な下層と上層への相分離を誘導する。本方法により精製された試料は、「尿素WCBE」試料と呼ぶことができる。
【0204】
一部の実施形態では、組み換えレシリンタンパク質は、全細胞ブロスを遠心分離して、第1のペレット及び第1の上清を生じさせること、次に、第1の上清を廃棄して、細胞の第1のペレット及び細胞に近接する(例えば、細胞への付着する、細胞の表面上の)タンパク質及び/または不溶性タンパク質(例えば、タンパク質凝集体)を得ることにより精製することができる。次に、細胞の第1のペレットをグアニジンチオシアナートに再懸濁させて、タンパク質を可溶化する。再懸濁液を再度遠心分離して、細胞の第2のペレット及び第2の上清を生じさせる。第2の上清を、PBSに対して透析し、次に、遠心分離して、タンパク質の重い相、上清の軽い相、及び軽い相から重い相を分離する薄膜を生じさせる。次に、軽い相及び薄膜を廃棄することにより、タンパク質の重い相を分離させる。本方法により精製された試料は、「密な層」試料と呼ぶことができる。
【0205】
一部の実施形態では、組み換えレシリン組成物は、発泡材料である。一部の実施形態では、組み換えレシリン発泡体を調製する方法は、水性溶媒中に架橋組み換えレシリン固体組成物を提供する工程、該水性溶媒を極性非水溶媒と交換する工程、及び架橋組み換えレシリン固体組成物に1つ以上の気泡を導入する工程を含む。当該技術分野で既知の気泡を導入する任意の方法が本明細書で使用されてもよい。例えば、気泡を導入する方法は、ボルテックス、混合、酵母の添加、及び化学反応を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、1つ以上の気泡の導入は、架橋組み換えレシリン固体組成物が提供されると同時に生じ得る。一部の実施形態では、1つ以上の気泡を導入することは、架橋組み換えレシリン固体組成物が提供された後に生じ得る。
【0206】
発泡剤が通常、ポリマー発泡体を作製するためにポリマー材料に導入される。一実施形態によれば、化学発泡剤がポリマーと混合される。化学発泡剤は、通常ポリマーが溶融する条件下で、ポリマー材料中で化学反応を受けて、気体の形成を引き起こす。化学発泡剤は一般に、特定の温度で分解し、窒素、二酸化炭素、または一酸化炭素などの気体を放出する低分子量有機化合物である。
【0207】
例示的な化学発泡剤としては、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、アンモニウム、アゾジカルボンアミド、イソシアナート、ヒドラジン、イソプロパノール、5-フェニルテトラゾール、トリアゾール、4,4’オキシビス(ベンゼンスルホニルヒドラジド)(OBSH)、トリヒドラジントリアジン(THT)、リン酸水素、酒石酸、クエン酸、及びトルエンスルホニルセミカルバジド(TSS)が挙げられるが、これらに限定されない。
【0208】
一部の実施形態では、発泡剤、増粘剤、及び/または硬化剤が、組み換えレシリン固体に添加される。例示的な発泡剤としては、キサンタンガム、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸アンモニウム、ウシ血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な増粘剤としては、ヒュームドシリカ及びキサンタンガムが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な硬化剤としては、脂肪族ポリアミン、脂肪ポリアミド、芳香族ポリアミン硬化剤、無水物硬化剤、三フッ化ホウ素硬化剤、及び硬化剤(ジシアンジアミド)が挙げられるが、これらに限定されない。
【0209】
別の実施形態によれば、物理発泡剤、すなわち、周囲条件下で気体である流体が、溶融ポリマー流に注入されて、混合物を形成する。混合物を圧力低下にかけて、発泡剤が膨張してポリマー内に気泡(セル)を形成させる。一部の実施形態では、必要とされる圧力は、約500psi~約2000psi、例えば、約600psi~約1000psi、約700psi~約1500psi、及び約800psi~約2000psiである。一部の実施形態では、必要とされる圧力は、約500psiである。
【0210】
例示的な物理発泡剤としては、クロロフルオロカーボン(CFC)、溶存窒素、N2、CH4、H2、CO2、Ar、ペンタン、イソペンタン、ヘキサン、二塩化メチレン、及びジクロロテトラフルオロエタンが挙げられるが、これらに限定されない。
【0211】
均等物及び範囲
当業者は、本明細書に記載の本発明による特定の実施形態と同等の多くのものを認識する、または、通常の実験のみを使用して、それらを確認することができるであろう。本発明の範囲は、上記説明に限定されることを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲に記載される通りである。
【0212】
特許請求の範囲では、「a」、「an」、及び「the」などの冠詞は、反対の指示がない限り、または別途文脈から明らかでない限り、1つまたは複数を意味し得る。グループの1つ以上のメンバー間に「または」を含む特許請求の範囲または説明は、反対の指示がない限り、または別途文脈から明らかでない限り、グループメンバーの1つ、複数、または全てが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、用いられるか、または別途関連する場合に満たされていると見なされる。本発明は、正確に、グループの1つのメンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、用いられるか、または別途関連する実施形態を含む。本発明は、グループメンバーのうちの複数または全てが、所与の生成物またはプロセスに存在する、用いられるか、または別途関連する実施形態を含む。
【0213】
「含むこと(comprising)」という用語は、オープンであることが意図され、追加の要素またはステップを含むことを許容するが、必要とはしないことにも留意される。「含むこと(comprising)」という用語が本明細書で使用される場合、「からなること(consisting of)」という用語も包含及び開示される。
【0214】
範囲が与えられる場合、端点が含まれる。さらに、別途指示のない限り、または別途文脈及び当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表現される値は、文脈に別途明示のない限り、範囲の下限の単位の10分の1まで、本発明の異なる実施形態の記載範囲の任意の具体的な値または部分範囲を想定し得ると理解すべきである。
【0215】
引用される全ての出典、例えば、本明細書で引用される参考文献、出版物、データベース、データベースエントリー、及び技術は、引用で明示的に記載されていない場合でも、参照により本出願に組み込まれる。引用された出典及び本出願の記述が矛盾する場合、本出願の記述が優先されるものとする。
【0216】
セクション及び表の見出しは、限定することが意図されない。
【実施例0217】
以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の例である。実施例は、例証の目的のためのみに提供され、決して、本発明の範囲を限定することは意図されない。使用される数値(例えば、量、温度など)に関して正確さを確保するための取り組みがなされているが、もちろん、ある程度の実験誤差及び偏差は許容されるべきである。
【0218】
本発明の実施は、別途指示のない限り、当業者の範囲内で、タンパク質化学、生化学、組み換えDNA手法、及び薬理学の従来の方法を用いるであろう。そのような手法は、文献で完全に説明される。例えば、T.E.Creighton,Proteins:Structures and Molecular Properties(W.H.Freeman and Company,1993)、A.L.Lehninger,Biochemistry(Worth Publishers,Inc.,current addition)、Sambrook,et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2nd Edition,1989)、Methods In Enzymology(S.Colowick and N.Kaplan eds.,Academic Press,Inc.)、Remington′s Pharmaceutical Sciences,18th Edition(Easton,Pennsylvania:Mack Publishing Company,1990)、Carey and Sundberg Advanced Organic Chemistry 3rd Ed.(Plenum Press)Vols A and B(1992)を参照のこと。
【0219】
実施例1:組み換えレシリンの産生
GS115(NRRL Y15851)ピキア・パストリス(コマガタエラ・ファフィイ)のHIS+誘導体を、分泌レシリンコード配列を含むベクターで形質転換することにより、組み換えレシリンを分泌するピキア・パストリス組み換え宿主細胞を生成した。
【0220】
ベクターはそれぞれ、N末端分泌シグナル(アルファ接合因子リーダー及びプロ配列)にインフレームで融合される3つのレシリンコード配列、一部の場合では、C末端3xFLAGタグ(SEQ ID NO:45)を含んでいた(
図3を参照のこと)。分泌レシリンコード配列のそれぞれは、プロモーター(pGCW14)及びターミネーター(tAOX1 pAシグナル)が隣接していた。ベクターはさらに、3つの分泌レシリンコード配列のピキア・パストリスゲノムのHSP82遺伝子座への組み込みを誘導し得る標的領域、細菌及び酵母形質転換体の選択のための優勢な耐性マーカー、ならびに細菌の複製起点を含んでいた。
【0221】
レシリンコード配列を、科学文献及び公開配列データベースの検索から取得した。ヌクレオチド配列をアミノ酸配列に翻訳し、次に、コドン最適化した。全長及び短縮レシリン配列の両方を選択した。選択分泌レシリンコード配列が表1に示される。
【0222】
(表1)例示的な全長及び短縮型レシリンアミノ酸配列及び組み換え宿主株
【0223】
エレクトロポレーションを使用して、ベクターをピキア・パストリスに形質転換して、分泌された各レシリンコード配列の3つの組み込まれたコピーを含む宿主株を生成する。形質転換体を抗生物質が補充されたYPDアガープレート上にプレーティングし、そして30℃で48時間インキュベートした。
【0224】
各最終の形質転換からクローンを96ウェルブロックで緩衝化グリセロール複合培地(BMGY)400μLに接種し、1,000rpmで撹拌しながら30℃で24時間インキュベートした。試料を取り出し、組み換え宿主細胞を遠心分離によりペレット状にし、上清を回収し、(3xFLAGタグを含むポリペプチドのための)クマシーゲル及びウェスタンブロット分析を介してレシリン含量の分析のためにSDS-PAGEゲル上で泳動させた。FLAGタグ付きタンパク質の場合、残りの培養物を使用して、ELISA測定用に最小限の培地培養物を2回接種した。1つの複製をペレット状にし、上清を直接測定した。第2の複製をグアニジンチオシアナートで抽出し、細胞内画分及び細胞外画分の両方を測定した。
【0225】
多数の種からの組み換えレシリンは、ピキア・パストリス組み換え宿主細胞でうまく発現された。組み換え宿主細胞は、産生された組み換えレシリンの最大90%を分泌した。
【0226】
配列表のSEQ ID NO:49は、後で切断されるシグナル配列とともに発現される全長セイシェルショウジョウバエレシリン配列(Ds_ACB)を提供する。第1の配列(斜体)は、シグナルペプチダーゼによる転写、続く、Kex2による切断の後に2回切断されるアルファ接合因子前駆体タンパク質シグナル配列(SEQ ID NO:46)である。第2の配列(太字)は、Ste13(SEQ ID NO:47)により切断されるEAEAリピート(SEQ ID NO:47)である。第3の配列(小文字)は、セイシェルショウジョウバエの全長レシリン(SEQ ID NO:1)に対応する。第4の配列(太字及び斜体)は、リンカー配列(SEQ ID NO:46)に対応する。第5の配列(下線付き)は、3X FLAGタグ(SEQ ID NO:45)に対応する。
【0227】
エドマン配列決定により、約110kDaバンドのタンパク質配列のN末端が、全長セイシェルショウジョウバエのレシリン配列に対応していたことが確認された。具体的には、N末端配列決定は、N末端は、「EAEA」(SEQ ID NO:47)または「GRPE」(SEQ ID NO:63)に対応した(それぞれ、EAEAリピート(SEQ ID NO:47)を有するまたは有しない全長セイシェルショウジョウバエレシリン配列)ことを示した。
【0228】
実施例2:組み換えレシリンの精製
非FLAGタグ付きDs_ACB及びAe_A組み換えレシリンポリペプチドを以下の通り精製した。300rpmで撹拌しながら、RMs1221株(Ds_ACBを発現する)及びRMs1224株(Ae_Aを発現する)を、フラスコ内の500mLのBMGY中で、30℃で48時間成長させた。
【0229】
Lyons et al.(2007)の精製のプロトコールを応用した。遠心分離により細胞をペレット状にし、上清を収集した。硫酸アンモニウムの添加により、タンパク質を沈殿させた。沈殿したタンパク質を、少量のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に再懸濁させ、再懸濁試料を、塩を除去するためにPBSに対して透析した。次に、透析された試料を加熱して、天然タンパク質を変性させ、変性タンパク質を遠心分離により除去した。保持された上清は、精製レシリンポリペプチドを含有していた。任意に、保持された上清を冷却させ、これによりコアセルベート形成が生じ、下相の濃縮をもたらし、上相を希釈した。
【0230】
全細胞ブロスを遠心分離して、細胞の第1のペレット及び細胞に近接する(例えば、細胞に付着している、細胞の表面上の)タンパク質及び/または不溶性タンパク質(例えば、タンパク質凝集体)及び第1の上清を生成すること、次に、第1の上清を廃棄して、第1のペレットを得ることにより、試料の第2のセットを調製した。最初のペレットをグアニジンチオシアナートに再懸濁させて、Ds_ACBを可溶化した。再懸濁液を再度遠心分離して、第2のペレット及び第2の上清を生じさせた。次に、第2の上清をPBSに対し透析し、Ds_ACB以外のタンパク質を変性させるために高温にかけ、遠心分離して、第3のペレット及び第3の上清を生じさせた。第3の上清を冷却によるコアセルベート形成にかけて、Ds_ACBを含有する密な下層と上層への相分離を生じさせた。これは、本明細書では、ゲル層分離、またはコアセルベート形成試料とも呼ばれる。一部のゲル層試料では、下層を保持すること、及び低温で下層をインキュベートして、さらに相分離を誘導することにより、複数のコアセルベート形成を実施した。
【0231】
【0232】
実施例3:精製、分泌、組み換えレシリンの架橋
精製レシリンは、光架橋(Elvin et al.2005から応用)、酵素架橋(Qin et al.2009から応用)、または本明細書に記載の方法(すなわち、過硫酸アンモニウム及び熱)という3つの方法のうちの1つを介して架橋された。
【0233】
光架橋
光架橋のために、レシリンタンパク質を過硫酸アンモニウム及びトリス(ビピリジン)ルテニウム(II)([Ru(bpy)3]2+)と混合した。混合物を明るい白色光に曝露した後、混合物がゴム状の固体を形成した。
【0234】
具体的には、10mMのRu(II)光触媒(CAS 50525-27-4)ストック水溶液及び100mMの過硫酸アンモニウムストック水溶液を調製した。精製レシリン粉末をリン酸緩衝生理食塩水に20~30重量%のレシリン濃度で溶解させて、レシリンストック液を調製した。
【0235】
10mMのRu(II)光触媒溶液2μL及び100mMの過硫酸アンモニウム2μLを、10μLのレシリンストック液に添加し、混合して、光架橋溶液を形成した。気泡を遠心分離により光架橋溶液から除去し、光架橋溶液を型に注いだ。
【0236】
次に、光架橋溶液を白色光(白色LEDフラッドライト、Zochlon USPT100W 110V)に30秒~1分間曝露した。
【0237】
酵素的架橋
酵素的架橋のために、レシリンタンパク質を西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)及び過酸化水素と混合した。混合物を37℃でインキュベートした後、混合物がゴム状の固体を形成した。
【0238】
具体的には、水中の西洋ワサビペルオキシダーゼの10mg/mLのストック(1型、P8125 Sigma)(HRPストック)及び水中の100mMのH2O2ストックである。精製レシリン粉末をリン酸緩衝生理食塩水に20~30重量%のレシリン濃度で溶解させて、レシリンストック液を調製した。
【0239】
HRPストック6μLをレシリンストック液21μLに添加し、混合した。次に、H2O2ストック3μLを添加し、ボルテックスにより混合して、酵素的架橋溶液を形成した。気泡を遠心分離により酵素的架橋溶液から除去し、4℃で溶液を維持しながら、酵素的架橋溶液を型に注いだ。架橋を実施するために、酵素的架橋溶液を37℃で15分間インキュベートした。得られる架橋レシリン組成物は、レシリン固体に共有結合している活性酵素を含む。
【0240】
過硫酸塩及び熱架橋
過硫酸アンモニウム及び熱を使用して、精製レシリンを架橋した。
【0241】
具体的には、精製レシリン粉末をリン酸緩衝生理食塩水に20~30重量%のレシリン濃度で溶解させて、レシリンストック液を調製した。水中の200mMの過硫酸アンモニウム4μLを、レシリンストック液18μLと混合して、最終濃度を36mMの過硫酸アンモニウムにした。気泡を遠心分離で過硫酸塩架橋溶液から除去し、過硫酸塩架橋溶液を型に注いだ。
【0242】
架橋を実施するために、過硫酸塩架橋溶液を、密閉された湿った環境中、80℃で2.5時間インキュベートした。得られる架橋レシリン組成物は、レシリン固体中に活性な触媒が残存せず、分解が少ないタンパク質を有する組成物をもたらす。
【0243】
HRP架橋組成物の分解
各架橋試料が毎日の観察を通して固体のままであった期間を決定することにより、架橋試料の安定性を経時的に評価した。表3は、光架橋(Ru+hv)、酵素架橋(HRP)、及び過硫酸アンモニウム及び熱(AP+熱)による架橋により調製された各架橋試料の固体としての時間を示す。表3に示されるように、室温で、光架橋または過硫酸アンモニウムで架橋されたレシリン組成物は、酵素架橋により架橋されるレシリン組成物よりもはるかに長い安定期間を有していた。
【0244】
(表3)様々な架橋手順により架橋されたレシリン組成物の分解
【0245】
ELISAで測定された過硫酸アンモニウム架橋レシリン組成物(AP)及び酵素的に架橋されたレシリン組成物(HRP)の全分解レシリンが
図6に示される。架橋レシリン組成物からのレシリンフラグメントの分解及び分泌の増加が、AP試料と比較してHRP試料で観察される。
【0246】
このデータは、安定したレシリン組成物の調製には、過硫酸アンモニウム架橋が酵素的架橋よりも好ましいことを示す。酵素的に架橋されたレシリン組成物では、架橋酵素は組成物に残り、組成物の分解をもたらす。
【0247】
実施例4:架橋全長レシリンとレシリン混合物の安定性
様々なレベルの分解生成物で生成されたレシリン試料及び全長のレシリンを、上記のように酵素的架橋に供した。各架橋試料が毎日の観察を通して固体のままであった期間を決定することにより、架橋試料の安定性を経時的に評価した。表4は、各架橋試料の固体としての時間を示す。表4に示されるように、全長レシリンを含む試料は、全長レシリンを含まない試料よりも安定期間が長かった。
【0248】
【0249】
実施例5:レシリン発泡体
増粘添加剤、例えば、ヒュームドシリカ、及び重炭酸ナトリウムの存在下でレシリンを架橋すると、比較的均一な気泡分布を有する発泡レシリンがもたらされた。ヒュームドシリカの量を変更すると、平均気泡サイズに影響を与え、発泡レシリン固体を調整する手段が与えられる。結果が表5に示される。
【0250】
【0251】
レシリンの溶液を調製した。0.81gのレシリンをpH7.4の2.19mLのPBSに溶解させた。発泡剤を添加し、気泡を導入するために溶液をボルテックスし、熱または光により架橋した。50mgのキサンタンガムを溶液に添加し、続いて、225mMの過硫酸アンモニウム0.65mLを添加した。キサンタンガムは、溶液中の気泡を取り出すのに役立つ粘度も増加させたので、発泡剤として使用した。次に、溶液をボルテックスし、80℃で3.5時間加熱した。
【0252】
一部の試料では、ルテニウム(II)及び白色光を使用してレシリンを架橋した。そのような実験では、0.405gのレシリンロット3を1.10mLのPBSに溶解させた。次に、100mMの過硫酸アンモニウム0.3mL及び10mMのRu(II)触媒0.3mLを添加した。他の試料では、0.405gのレシリンロット3を1.10mLのPBSに溶解させた。次に、25mgのキサンタンガムを添加し、続いて、100mMの過硫酸アンモニウム0.3mL及び10mMのRu(II)触媒0.3mLを添加した。
【0253】
一部の試料では、重炭酸ナトリウムを化学発泡剤として使用した。重炭酸ナトリウムをレシリン溶液に添加して、架橋させた。一部の試料では、増粘剤であるヒュームドシリカを添加した。重炭酸ナトリウムが多すぎると(33mg/mL以上)、ゲル化が抑制された。6~20mg/mLの重炭酸ナトリウムをレシリン溶液に使用すると、80℃で3.5時間後に大きな気泡のあるレシリン固体が得られた。増粘剤であるヒュームドシリカを4~10重量%添加すると、気泡が均一に分布したレシリン発泡体が得られた(
図7及び8)。ヒュームドシリカが少なすぎると、半発泡レシリン固体が生成され、5重量%よりも多くのヒュームドシリカを添加すると、より小さい気泡を有する発泡レシリンがもたらされた(
図7)。5重量%のヒュームドシリカを含むレシリン発泡体の気泡の直径は、0.2~2mmであった。10重量%のヒュームドシリカを含むレシリン発泡体の気泡の直径は、0.05~0.2mmであった。
【0254】
具体的には、0.27gのレシリンロット3をpH7.4の0.73mLのPBSに溶解させた。次に、37、18、10、または6mgの重炭酸ナトリウムを溶液に添加し、続いて、225mMの過硫酸アンモニウム0.22mL及び0~10重量%のヒュームドシリカを添加した。溶液をボルテックスし、80℃で3.5時間加熱した。実験をキャップ付きの2mLのチューブ中で実施した。
【0255】
一部の試料では、ISCOポンプを使用して、83℃でレシリンを架橋しながら、1600psiまたは500psiのいずれかで溶存窒素を導入した。これらの圧力での架橋は、おそらく溶存酸素の量の増加のために、大気圧での架橋よりも遅い速度で進行した。
【0256】
具体的には、225または550mMの過硫酸アンモニウムの水溶液1.1mLを、27重量%のレシリンのPBS溶液5mLに添加した。次に、この溶液を7197rcfで5分間遠心分離し、ISCOポンプに加えた。次に、ポンプをハウス窒素に接続し、ISCOポンプは、最大容量266mLに設定し、3分間窒素でパージし、次に、密封した。次に、ポンプを500psiまたは1600psiのいずれかに設定し、83℃で2~6時間加熱した。圧力を解放した後、レシリンを83℃でさらに1~2時間加熱した。
【0257】
実施例6:溶媒交換、及び水性溶媒と極性非水溶媒中の架橋レシリンの比較
以下に詳細に記載するように、水性溶媒中の組み換えレシリンの架橋混合物を溶媒交換で処理して、溶媒を極性非水溶媒で置き換えて、特定の用途により適する材料特性を有する組成物を形成した。
【0258】
残りの粉末が部分的に分解されたレシリンを含む、SEC(サイズ排除クロマトグラフィー)で測定した、19質量%の全長レシリンを含むレシリン粉末を調製した。
【0259】
次に、レシリン粉末を1×リン酸緩衝生理食塩水(PBS)に溶解させ、報告されたレシリンの重量パーセントは、重量/重量(w/w)である。0.27gのレシリンを0.73gのPBS溶液に添加することにより、27重量%のレシリンの溶液1gを調製する。次に、レシリン溶液を型内で架橋して、水系レシリン固体組成物を形成した。形成されたレシリン固体は、直径15mm×高さ5mmのディスクであった。
【0260】
グリセロール系レシリン固体を生成するために、水系固体を、密閉容器中、60℃で16時間、20×体積の60%のグリセロール(60:40グリセロール:水(v:v))に交換される。次に、固体を、密封されていない容器内で、60℃で16時間、20×体積のグリセロールに交換する。
【0261】
水系及びグリセロール系レシリン固体の試料を、室温で1週間密封せずに保管した。
図9に示されるように、水系レシリン固体をわずか1週間後に脱水したが、グリセロール系レシリン固体は目に見える分解や脱水なしに元の形状を維持した。
【0262】
実施例7:溶媒交換、及び複数の極性非水性レシリン溶媒の特性の比較
以下のように、極性非水溶媒中のレシリン固体を、1×リン酸緩衝生理食塩水(PBS)中の架橋レシリンから調製した。
【0263】
密封されていない容器内で、60℃で16時間または2日間(すなわち、2日間のインキュベーション)、20×体積のプロピレングリコール中でレシリン固体を交換することにより、プロピレングリコール溶媒中のレシリン固体を調製した。
【0264】
密閉容器内で、60℃で16時間、20×体積の60%のグリセロール(60:40グリセロール:水(v:v))中でレシリン固体を交換することにより、60~100%グリセロール溶媒中のレシリン固体を調製した。次に、固体を、密封されていない容器内で、60℃で16時間、20×体積のグリセロールに交換する。
【0265】
密封されていない容器内で、60℃で16時間または2日間(すなわち、2日間のインキュベーション)、20×体積のグリセロール中でレシリン固体を交換することにより、100%のグリセロール溶媒中のレシリン固体を調製した。
【0266】
密封されていない容器内で、60℃で16時間、20×体積のエチレングリコール中でレシリン固体を交換することにより、エチレングリコール溶媒中のレシリン固体を調製した。
【0267】
密封されていない容器内で、60℃で16時間、20×体積のプロピレングリコール中のレシリン固体を交換することにより、プロピレングリコール溶媒中のレシリン固体を調製した。
【0268】
コアセルベート形成による精製に基づいてレシリン固体を形成するために、27重量%(w/w)のレシリン溶液を-5℃でインキュベートし、液-液相分離が生じた。下部コアセルベート層を分離し、過硫酸アンモニウム(APS)粉末をコアセルベートに混合して、最終濃度を36mMのAPSにした。次に、この溶液を80℃で2.5時間架橋した。次に、代表的な溶媒交換手順に従って、固体を交換した。
【0269】
別途記載のない限り、使用されるレシリン粉末は、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)で測定して19質量%の全長であり、粉末の残りは部分的に分解されたレシリンで構成される。SECで測定して87質量%の全長単量体レシリンであるレシリン粉末から、27重量%の「全長レシリン」試料を調製した。
【0270】
SECを使用してレシリン組成物中にレシリンの優勢種の相対量の特性を示すために、レシリン粉末を、5Mのグアニジンチオシアナートに溶解させ、分子量に基づいて成分に分離するために、Yarra SEC-3000 SEC-HPLCカラムに注入した。検出モダリティとして屈折率を使用した。全てのタンパク質の90%超が互いに約7%以内のdn/dc値(屈折率の応答係数)を示すという仮定の下で、一般的なタンパク質標準としてBSAを使用した。保持時間の標準としてポリ(エチレンオキシド)を使用し、方法の一貫した性能を保証するチェック標準としてBSA較正物質を使用した。60~40kDaのレシリンに対応する範囲を評価し、凝集または重合したレシリンに対応し得る観察されたより高いピークは、この定量化には含めなかった。総レシリンの一部としての組成物中の全長レシリンの量を決定するために、このレシリンピークの相対パーセンテージを質量%及び面積%として報告した。
【0271】
次に、Malvern KinexusレオメーターRNX2110を使用して、上記のように作成された組成物のそれぞれの応力-ひずみ曲線を生成した。以下のプロトコールを22℃の温度で適用した。ステップ1:初期ギャップ-6.5mm、ステップ2:最終ギャップへの降下。ステップ1及び2を5回繰り返した。レオメーターで測定された弾性率の値は、単に相対的なものであり、様々な条件下または様々な機器で試験された材料と比較することはできない。
【0272】
工学応力と工学ひずみをプロットして応力-ひずみ曲線を生成した。以下の式より、工学応力を計算した:工学応力=(レオメータージオメトリと接触するレシリン固体の垂直力(N)/A(mm2))×106。工学ひずみは、圧縮ひずみの絶対値=ABS((レシリン固体の現在の圧縮高さ(mm)-非圧縮固体の高さ(mm))/非圧縮固体の高さ(mm))*100である。
【0273】
図10Aは、60~100%のグリセロール中の27重量%の架橋レシリンの応力-ひずみ曲線を示す。
図10Bは、プロピレングリコール中の27重量%の架橋レシリンの応力-ひずみ曲線を示す。
図10Cは、プロピレングリコール中の27重量%の全長架橋レシリンの応力-ひずみ曲線を示す。比較のために、Dr.Shollのインサートのレオメトリーデータも生成した。
【0274】
図11に示されるように、発泡レシリンの応力-ひずみ曲線は、ホッケースティックのような形状であった。これは、発泡レシリンのエアポケットの結果であり、エアポケットが、まず、圧縮され、続いて、レシリン材料が圧縮される。
【0275】
レオメトリーデータから、弾性率及び弾性の相対値を表5に示されるように決定した。負荷曲線下面積を取得し、工学応力対ひずみプロットでの無負荷曲線下面積で除し、この値に100を乗じることにより、相対弾性(%)を計算した。10~20%の絶対圧縮ひずみから荷重曲線の勾配をとることにより、相対弾性率を計算した。
【0276】
示されるように、水性水系溶媒から極性非水溶媒への架橋レシリン溶媒の交換により、同様の弾性及び同様の伸縮性を有するより堅い材料がもたらされた。全ての架橋レシリン組成物は、試験された条件下で弾性であった(20N力未満)。
【0277】
また、レオメーターを使用して、100%のグリセロール溶媒中の発泡剤としてヒュームドシリカを含む、実施例5に記載されるように生成された5重量%の発泡レシリンの弾性を測定した。結果は、表6にも示される。
【0278】
(表6)様々な溶媒中の架橋レシリンの弾性率及び弾性の相対値
【0279】
表6の弾性及び弾性率の相対値を、
図12に示されるようにプロットした。このプロットは、溶媒交換により架橋レシリン特性を調整した場合の、弾性及び弾性率間の関係を示す。
【0280】
また、レオメーターを使用して、別々に調製されたプロピレングリコール中の架橋レシリン固体の相対弾性及び弾性率を測定した。結果が表7に示される。
【0281】
(表7)同じように調製されたプロピレングリコール固体のレオメーターデータ
【0282】
また、レオメーターを使用して、力を繰り返し加えることにより、様々な溶媒中で架橋レシリン固体の相対弾性及び弾性率を測定して、力を繰り返し加えることがこれらのパラメーターに与える影響を決定した。結果が表8に示される。
【0283】
(表8)レオメーターデータ:複数の圧縮の弾性及び弾性率データ
【0284】
実施例8:レシリン固体の剛性と代表的なミッドソールの剛性
架橋シルク固体組成物を、水、60~100%のグリセロール、100%のグリセロール、プロピレングリコール(16時間のインキュベーション)、及びプロピレングリコール(実施例6に記載の2日間のインキュベーション)で調製した。ASTM:D-2240によりShore OOデュロメーター(AD-100-00)を使用して、これらの材料の剛性を試験した。比較のために、Dr.Schollのインソール及び代表的なミッドソールも試験した。結果が表9に示される。
【0285】
(表9)様々なレシリン組成物の剛性 対 代表的なミッドソールの剛性
【0286】
実施例9:Zwick圧縮曲線により測定された弾性から塑性への遷移
27重量%のレシリンエチレングリコール固体(「A」)、27重量%のレシリンプロピレングリコール固体(「C」)、コアセルベートレシリンプロピレングリコール固体(「D」)、27重量%のレシリン60~100%グリセロール固体(「G」)、及び27重量%のレシリン100%グリセロール固体(「H」)に対し、Zwick圧縮データを得た。これらの試料のそれぞれを実施例5に記載されるように調製した。
【0287】
具体的には、5kNのロードセル及び5kN圧縮プラテン(Zwick/Roell Z5.0)を備えたZwick引張試験機を使用して、上記試料の圧縮データを試験した。各固体の立体寸法は、15mm×5mmのディスクであった。22Cの温度(周囲温度)及び65%の湿度(周囲)で硬質プラスチックの圧縮プログラムのD695圧縮特性を使用して、材料を試験した。
【0288】
各固体のZwick引張試験機で測定された力対ひずみ曲線が
図13に示される。最大2kNの印加圧縮力で、レシリン固体のいずれに対しても、弾性から塑性への遷移はみられない。代わりに、レシリン固体が圧縮応力下で壊れた場合、それは、弾性変形でなく、引張りによるものであった。
【0289】
実施例10:プロピレングリコールレシリン固体の弾性及び圧縮の分析
実施例5のように調製された、プロピレングリコールに交換された27重量%のレシリン固体について、ASTM D7121及びASTM D575試験を使用して、25%のひずみでの反発弾性及び圧縮応力を測定した。試験された固体の寸法は、0.8インチの高さを有する直径1.125インチのディスクであった。これらの寸法の、異なる3つの試料が試験に供された。結果が表10に示される。
【0290】
(表10)プロピレングリコールレシリン固体の弾性及び圧縮のデータ
【0291】
表10に示されるデータは、同じASTM試験で試験された他のゴムまたはエラストマーと比較することができる。ASTM試験番号は、結果を再現するのに十分である。このデータ及びデュロメーターデータは、エラストマーの他のゴムと直接比較することができる唯一のデータである。
【0292】
さらなる考慮
本開示の実施形態の上述の説明は、例示の目的で提示されており、網羅的であること、または特許請求の範囲を開示された正確な形態に限定することは意図されない。当業者は、多くの修正及び変形が上の開示に照らして可能であることを理解することができる。
【0293】
本明細書で使用される言語表現は、主に可読性及び教示のために選択されており、本発明の主題を限定または制限するように選択されていなくてもよい。それ故、本開示の範囲は、この詳述された説明ではなく、むしろ、本明細書に基づく出願で発行される任意の特許請求の範囲により制限されることが意図される。従って、実施形態の開示は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を例示するが、限定しないことが意図される。
【0294】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、全体が参照により組み込まれる。矛盾する場合、定義を含み本明細書が優先される。さらに、セクションの見出し、材料、方法、及び例は、例示にすぎず、限定することは意図されない。
【0295】
【0296】
配列情報
SEQUENCE LISTING
<110> BOLT THREADS, INC.
<120> CROSS-LINKED ELASTOMERIC PROTEINS IN POLAR NONAQUEOUS SOLVENTS
AND USES THEREOF
<150> US 62/700,197
<151> 2018-07-18
<160> 65
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 606
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 1
Arg Pro Glu Pro Pro Val Asn Ser Tyr Leu Pro Pro Ser Asp Ser Tyr
1 5 10 15
Gly Ala Pro Gly Gln Ser Gly Ala Gly Gly Arg Pro Ser Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly
35 40 45
Ala Pro Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gly Tyr Gly
50 55 60
Gly Lys Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Asn
65 70 75 80
Gly Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly
85 90 95
Gly Arg Pro Ser Asp Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly
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275 280 285
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<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
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<213> Aeshna sp.
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<213> Haematobia irritans
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<213> Haematobia irritans
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<213> Ctenocephalides felis
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<213> Ctenocephalides felis
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<212> PRT
<213> Bombus terrestris
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1 5 10 15
Leu Ser Asn Ser Tyr Gly Val Pro Gly Ser Asn Gly Gly Arg Asn Gly
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<213> Tribolium castaneum
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<212> PRT
<213> Tribolium castaneum
<400> 13
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Gly Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Pro Pro Gly Phe Gln Pro Gly Thr Pro
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Gly Pro Pro Gly Gln Gly Gly Asn Gly Phe Gly Gly Gly Gln Asn Gly
195 200 205
Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Pro Pro Gly Gln Gly Gly Asn Gly
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Phe Gly Gly Gly Gln Asn Gly Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Pro
225 230 235 240
Pro Gly Gln Gly Gly Asn Gly Phe Gly Gly Gly Gln Asn Gly Gly Lys
245 250 255
Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Pro Pro Gly Gln Gly Gly Asn Gly Phe Gly
260 265 270
Gly Gly Gln Asn Gly Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Pro Pro Gly
275 280 285
Gln Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Gly His Asn Gly Gln Arg Pro Gly
290 295 300
Gly Ser Tyr Leu Pro Pro Ser Gln Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser
305 310 315 320
Gly Gly Pro Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gly Gly Asn Gly Gly
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Tyr Gly Gly Glu Glu Glu Ser Thr Glu Pro Ala Lys Tyr Glu Phe Glu
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Pro Gln Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gln Gly Gly
435 440 445
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450 455 460
Pro Ser Gly Gly Pro Gln Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly
465 470 475 480
Pro Gln Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gln Gly Gly
485 490 495
Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gln Gly Gly Asn Gly Gly Tyr
500 505 510
Pro Ser Gly Gly Pro Gln Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Thr Ser Gly Gly
515 520 525
Pro Gln Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gln Gly Gly
530 535 540
Asn Gly Gly Ser Gly Pro Tyr
545 550
<210> 14
<211> 444
<212> PRT
<213> Tribolium castaneum
<400> 14
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1 5 10 15
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20 25 30
Gly Asn Tyr Gly Ala Pro Ser Gly Gly Phe Gly Gly Lys Ser Gly Gly
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Gly Phe Gly Gly Ala Pro Ser Gln Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Gly Gly
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Ser Ser Phe Gly Lys Ser Gly Gly Phe Gly Gly Ala Pro Ser Gln Ser
130 135 140
Tyr Gly Ala Pro Ser Gly Gly Phe Gly Gly Ser Ser Ser Phe Gly Lys
145 150 155 160
Ser Gly Gly Phe Gly Gly Ala Pro Ser Gln Ser Tyr Gly Ala Pro Ser
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Gly Gly Phe Gly Gly Lys Ser Ser Ser Phe Ser Ser Ala Pro Ser Gln
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Gly Lys Ser Gly Gly Phe Gly Gly Ala Pro Ser Gln Ser Tyr Gly Ala
225 230 235 240
Pro Ser Gly Gly Phe Gly Gly Ser Ser Ser Phe Gly Lys Ser Gly Gly
245 250 255
Phe Gly Gly Ala Pro Ser Gln Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Gly Gly Phe
260 265 270
Gly Gly Ser Ser Ser Phe Gly Lys Ser Ser Gly Phe Gly His Gly Ser
275 280 285
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Gly Gln Gly Gln Gly Phe Gly Gly Gly Arg Ser Gln Pro Ser Gln Ser
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Gly Gln Gln Tyr Ala Ser Asn Gly Gly Tyr Ser Tyr
435 440
<210> 15
<211> 426
<212> PRT
<213> Apis mellifera
<400> 15
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65 70 75 80
Asn Gly Asn Gly Arg Gly Asn Gly Tyr Gly Gly Gly Gln Pro Ser Asn
85 90 95
Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Asn Gly His Gly Gly Asn Gly Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Phe Ala Gly
115 120 125
Gly Ser Asn Gly Lys Asn Gly Phe Gly Gly Gly Pro Ser Ser Ser Tyr
130 135 140
Gly Pro Pro Glu Asn Gly Asn Gly Phe Asn Gly Gly Asn Gly Gly Pro
145 150 155 160
Ser Gly Leu Tyr Gly Pro Pro Gly Arg Asn Gly Gly Asn Gly Gly Asn
165 170 175
Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Gly Ser Tyr Gly Thr Pro Glu Arg
180 185 190
Asn Gly Gly Arg Leu Gly Gly Leu Tyr Gly Ala Pro Gly Arg Asn Gly
195 200 205
Asn Asn Gly Gly Asn Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Leu Asn Gly Gly Asn
210 215 220
Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gly Asn Gly Gly Ala Asn Gly Gly
225 230 235 240
Tyr Pro Ser Gly Gly Ser Asn Gly Asp Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly
245 250 255
Gly Pro Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Tyr Gly Gln Asp Glu
260 265 270
Asn Asn Glu Pro Ala Lys Tyr Glu Phe Ser Tyr Glu Val Lys Asp Glu
275 280 285
Gln Ser Gly Ala Asp Tyr Gly His Thr Glu Ser Arg Asp Gly Asp Arg
290 295 300
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305 310 315 320
Val Glu Tyr Glu Ala Asp Gln Asp Gly Phe Lys Pro Gln Ile Arg Tyr
325 330 335
Glu Gly Glu Ala Asn Ser Gln Gly Tyr Gly Ser Gly Gly Pro Gly Gly
340 345 350
Asn Gly Gly Asp Asn Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gly Gly Asn Gly
355 360 365
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Asn Gly Gly Ser Asp Phe Ser Asp Gly Gly
370 375 380
Tyr Pro Ser Thr Arg Pro Gly Gly Glu Asn Gly Gly Tyr Arg Asn Gly
385 390 395 400
Asn Asn Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Asn Gly Gly
405 410 415
Asp Ala Ala Ala Asn Gly Gly Tyr Gln Tyr
420 425
<210> 16
<211> 318
<212> PRT
<213> Apis mellifera
<400> 16
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1 5 10 15
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Gly Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Ser Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Ser Gly
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Gly Asn Gly Gly Tyr Ser Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Ser Gly Gly Gly
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<212> PRT
<213> Nasonia vitripennis
<400> 17
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20 25 30
Gly Pro Pro Asp Phe Gln Gly Ala Gly Gly Arg Gly Gly Gln Ala Ala
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Gly Gly Asn Phe Gly Gly Gly Gly Asn Gly Phe Gly Gly Ala Pro Ser
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130 135 140
Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Ala Gly Gly Gly Gly
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Phe Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gly Ser Pro Gly
165 170 175
Gly Gly Phe Gly Gly Gly Asn Gln Gly Ala Pro Gln Ser Ser Tyr Gly
180 185 190
Pro Pro Ala Ser Gly Phe Gly Gly Gln Gly Gly Ala Gly Gln Gly Arg
195 200 205
Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Pro
210 215 220
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225 230 235 240
Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Ala Ala Gly Gly Gly Gly Phe Gly Gly Asn
245 250 255
Ala Gly Gly Asn Gly Gly Gly Asn Gly Phe Gly Gly Gly Arg Pro Ser
260 265 270
Gly Ser Pro Gly Gly Phe Gly Gly Gln Gly Gly Gly Gly Arg Pro Ser
275 280 285
Asp Ser Tyr Leu Pro Pro Ser Gly Gly Ser Gly Phe Gly Gly Gly Asn
290 295 300
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Gln Gln Asn Gly Gly Gly Gly Ala Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly
325 330 335
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370 375 380
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Asn Gly Asn Gly Gly Phe Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Ser
435 440 445
Asn Gly Tyr Pro Gln Gly Gln Gly Asn Gly Asn Gly Gly Phe Gly Gly
450 455 460
Gln Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Gly
465 470 475 480
Gly Asp Ser Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Ser Gly Asn Phe Gly Gly
485 490 495
Ser Asn Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gln Val Gln Asp
500 505 510
Ser Tyr Gly Pro Pro Pro Ser Gly Ala Val Asn Gly Asn Gly Asn Gly
515 520 525
Tyr Ser Ser Gly Gly Pro Gly Gly Asn Gly Leu Asp Glu Gly Asn Asp
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Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Pro Gln Gly Gly Ser Gly Phe
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Gly Gly Gly Ser Gln Gly Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly
675 680 685
Pro Gly Gly Asn Gly Gly Asn Asn Asn Phe Gly Gly Gly Asn Ala Gly
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Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Ser Gly Gly Asn Gly Phe Asn Gln Gly Gly
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Gln Asn Gln Gly Gly Ser Gly Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Ser Gly Gly
725 730 735
Asp Ala Ala Ala Asn Gly Gly Tyr Gln Tyr Ser
740 745
<210> 18
<211> 419
<212> PRT
<213> Nasonia vitripennis
<400> 18
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Tyr Gly Thr Pro Asn Leu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Phe
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Gly Gly Gly Ala Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Ser Gly Gly
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Gly Phe Gly Gly Ser Phe Gly Gly Gly Ala Pro Ser Ser Ser Tyr Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Tyr Gly Ala Pro Ser Ser Gly Gly Ser Phe Gly Gly Ser Phe Gly Gly
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Gly Ala Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Phe Gly Gly Asn Ala
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115 120 125
Gly Ala Pro Ser Asn Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala
130 135 140
Pro Ser Ala Gly Gly Ser Phe Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Phe Gly
145 150 155 160
Gly Ser Phe Gly Gly Gly Ala Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ala
165 170 175
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Asn Tyr Gly Ala Pro Ser Ser Gly Gly Ser Gly Phe Gly Gly Gly Ser
195 200 205
Gly Phe Gly Gly Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Ser
210 215 220
Gly Ser Phe Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gly Ala Pro Ser Ser Ser Tyr
225 230 235 240
Gly Ala Pro Ala Pro Ser Arg Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Ala Pro Ala
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Pro Ser Arg Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Ala Pro Ala Pro Ser Arg Pro
260 265 270
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275 280 285
Pro Ser Arg Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Ala Pro Ser Ser Gly Gly Ser
290 295 300
Gly Phe Gly Gly Gly Ser Gly Phe Gly Gly Gly Arg Pro Ser Ser Ser
305 310 315 320
Tyr Gly Ala Pro Ser Ser Gly Ser Phe Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gly
325 330 335
Ala Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ala Pro Ser Arg Pro Ser Ser
340 345 350
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355 360 365
Ser Gly Gly Phe Gly Gly Gly Ala Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro
370 375 380
Ser Phe Gly Gly Ser Ser Asn Ala Val Ser Arg Pro Ser Ser Ser Tyr
385 390 395 400
Gly Ala Pro Ser Ser Gly Gly Gly Gln Ser Tyr Ala Ser Asn Gly Gly
405 410 415
Tyr Gln Tyr
<210> 19
<211> 396
<212> PRT
<213> Pediculus humanus
<400> 19
Glu Pro Pro Val Lys Thr Ser Tyr Leu Pro Pro Ser Ala Ser Arg Ser
1 5 10 15
Leu Asn Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Phe Thr Asp Ser Asn Glu Leu
20 25 30
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35 40 45
Gln Gln Ser Phe Asp Leu Ser Asn Gly Leu Ser Val Pro Ser Ala Ala
50 55 60
Gly Arg Leu Ser Asn Thr Tyr Gly Val Pro Ser Ala Gln Gly Ala Asn
65 70 75 80
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85 90 95
Arg Ser Gly Asn Ser Phe Ser Ser His Val Pro Ser Ser Thr Tyr Gly
100 105 110
Ala Pro Gly Asn Gly Phe Gly Gly Gly Ser Arg Ser Ser Gln Ser Gly
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Val Tyr Gly Pro Pro Gln Ala Arg Asn Asn Asn Phe
130 135 140
Gly Asn Gly Ala Ala Pro Ser Ser Val Tyr Gly Pro Pro Gln Ala Arg
145 150 155 160
Asn Asn Asn Phe Gly Asn Gly Gly Ala Pro Ser Gln Val Tyr Gly Pro
165 170 175
Pro Lys Ala Arg Asn Asn Asn Phe Gly Asn Gly Ala Ala Pro Ser Ser
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195 200 205
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210 215 220
Ala Asn Ser Ala Ala Pro Ser Gln Val Tyr Gly Pro Pro Gln Ala Arg
225 230 235 240
Asn Asn Asn Phe Gly Asn Gly Ala Ala Pro Ser Ser Val Tyr Gly Pro
245 250 255
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Pro Ser Ala Thr Tyr Gly Ala Pro Phe Glu Arg Asn Gly Phe Gly Ser
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Thr Thr Glu Asp Pro Phe Ala Glu Pro Ala Lys Tyr Glu Tyr Asp Tyr
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325 330 335
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340 345 350
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Ser Arg Ser Asn Asn Gly Phe Asn Gly Tyr Gln Tyr
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<211> 573
<212> PRT
<213> Anopheles gambiae
<400> 20
Lys Arg Glu Ala Pro Leu Pro Pro Ser Gly Ser Tyr Leu Pro Pro Ser
1 5 10 15
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20 25 30
Gly Ala Pro Thr Gly Gly Ala Gly Ser Trp Gly Gly Asn Gly Gly Asn
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65 70 75 80
Gln Ser Ser Gly Gly Phe Gly Gly His Ser Ser Gly Gly Phe Gly Gly
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100 105 110
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Pro Pro Gln Gln Gln
115 120 125
Gln Gln Gln Gln Ser Phe Arg Pro Pro Ser Thr Ser Tyr Gly Val Pro
130 135 140
Ala Ala Pro Ser Gln Ser Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Gln His Ser Asn
145 150 155 160
Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Ser Thr Gln Tyr Gly
165 170 175
Ala Pro Ala Gln Ser Asn Gly Asn Gly Phe Gly Asn Gly Arg Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ala Arg Pro Ser Thr Gln Tyr Gly Ala Pro
195 200 205
Ser Ala Gly Asn Gly Asn Gly Tyr Ala Gly Asn Gly Asn Gly Arg Ser
210 215 220
Tyr Ser Asn Gly Asn Gly Asn Gly His Gly Asn Gly His Ser Asn Gly
225 230 235 240
Asn Gly Asn Asn Gly Tyr Ser Arg Gly Pro Ala Arg Gln Pro Ser Gln
245 250 255
Gln Tyr Gly Pro Pro Ala Gln Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro
260 265 270
Ala Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Thr Pro Ser
275 280 285
Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala
290 295 300
Pro Ala Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Pro Ser Arg
305 310 315 320
Pro Ser Gln Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Pro Ser Arg Pro Ser Gln Gln
325 330 335
Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala
340 345 350
Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Thr Pro Ser Ser
355 360 365
Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro
370 375 380
Ala Gln Gln Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Pro Ser Arg Pro
385 390 395 400
Ser Gln Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Gln Pro Ser Ala Gln Tyr Gly
405 410 415
Ala Pro Ala Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Pro Ser
420 425 430
Arg Pro Ser Gln Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Ala Pro Ser Ser Gln
435 440 445
Tyr Gly Ala Pro Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Gln
450 455 460
Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr
465 470 475 480
Gly Ala Pro Ser Phe Gly Pro Thr Gly Gly Ala Ser Phe Ser Ser Gly
485 490 495
Asn Gly Asn Val Gly Gly Ser Tyr Gln Val Ser Ser Thr Gly Asn Gly
500 505 510
Phe Ser Gln Ala Ser Phe Ser Ala Ser Ser Phe Ser Pro Asn Gly Arg
515 520 525
Thr Ser Leu Ser Ala Gly Gly Phe Ser Ser Gly Ala Pro Ser Ala Gln
530 535 540
Ser Ala Gly Gly Tyr Ser Ser Gly Gly Pro Ser Gln Val Pro Ala Thr
545 550 555 560
Leu Pro Gln Ser Tyr Ser Ser Asn Gly Gly Tyr Asn Tyr
565 570
<210> 21
<211> 513
<212> PRT
<213> Glossina morsitans
<400> 21
Arg Pro Glu Pro Pro Val Asn Thr Tyr Leu Pro Pro Ser Ala Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Leu Ala Pro Ser Asp Thr Tyr Gly Ala
20 25 30
Pro Gly Val Asn Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Ser Ser Thr
35 40 45
Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Phe Gly Lys Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Leu Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Asn Gly Gly Gly Arg Pro Ser Glu Thr Tyr Gly Ala Pro Ser Gly
85 90 95
Gly Gly Gly Asn Gly Phe Gly Lys Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Ala Pro
100 105 110
Asn Gly Gly Gly Gly Asn Gly Gly Pro Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr
115 120 125
Gly Ala Pro Gly Ser Gly Gly Gly Asn Gly Gly Ser Gly Arg Pro Ser
130 135 140
Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Leu Gly Gly Gly Asn Gly Gly Ser Gly
145 150 155 160
Arg Pro Ser Ser Met Tyr Gly Ala Pro Gly Leu Gly Gly Gly Asn Gly
165 170 175
Gly Ser Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Asn Gly Gly Ser Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Gly
195 200 205
Ser Gly Gly Gly Asn Gly Gly Ser Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr Gly
210 215 220
Ala Pro Gly Asn Gly Asn Gly Gly Asn Gly Phe Gly Arg Pro Ser Ser
225 230 235 240
Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Gly Ser Asn Gly Asn Gly Lys Pro
245 250 255
Ser Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Arg Pro
260 265 270
Ser Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Ala Ser Gly Asn Gly Gly Arg Asn Gly
275 280 285
Asn Gly Asn Gly Gln Ser Gln Glu Tyr Leu Pro Pro Gly Gln Ser Gly
290 295 300
Ser Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser
305 310 315 320
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Asp Gln Asp Asn Asn Val
325 330 335
Val Glu Tyr Glu Ala Asp Gln Glu Gly Tyr Arg Pro Gln Ile Arg Tyr
340 345 350
Glu Gly Asp Gly Ser Gln Gly Gly Phe Gly Gly Asp Gly Asp Gly Tyr
355 360 365
Ser Tyr Glu Gln Asn Gly Val Gly Gly Asp Gly Gly Gly Ala Gly Gly
370 375 380
Ala Gly Gly Tyr Ser Asn Gly Gln Asn Leu Gly Ala Asn Gly Tyr Ser
385 390 395 400
Ser Gly Arg Pro Asn Gly Gly Asn Gly Gly Gly Arg Arg Gly Gly Gly
405 410 415
Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gln Asn Leu Gly Ser Asn Gly
420 425 430
Tyr Ser Ser Gly Ala Pro Asn Gly Phe Gly Gly Gly Asn Gly Gln Gly
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Tyr Ser Gly Gly Arg Ser Asn Gly Asn Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg
450 455 460
Asn Gly Gly Arg Tyr Arg Asn Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg Asn
465 470 475 480
Gly Gly Gly Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Asp Gln Pro Gly Ser Asn Gly
485 490 495
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Tyr
<210> 22
<211> 506
<212> PRT
<213> Atta cephalotes
<400> 22
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1 5 10 15
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Pro Asp Phe Asn Asn Arg Gly Asn Gly Asn Ser Gly Ala Thr Ser Phe
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Asn Gly Gly Ile Asn Gly Tyr Ser Ser Gly Ser Pro Asn Gly Asn Ala
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305 310 315 320
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325 330 335
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405 410 415
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420 425 430
Gly Gly Pro Gly Glu Arg Lys Leu Gly Gly Phe Asn Asn Gly Gly Ser
435 440 445
Ser Gly Tyr Gln Ser Gly Arg Ser Ala Gly Gln Ser Phe Gly Arg Asp
450 455 460
Asn Ala Gly Asp Leu Asn Asn Asp Ile Gly Gly Tyr Phe Ser Asn Ser
465 470 475 480
Pro Asn Asn Ile Gly Asp Ser Asp Asn Ala Asn Val Gly Ser Asn Arg
485 490 495
Gln Asn Asp Gly Asn Ser Gly Tyr Gln Tyr
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<210> 23
<211> 550
<212> PRT
<213> Anopheles darlingi
<400> 23
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Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala Gly Gly Trp Gly Gly Asn
35 40 45
Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Arg Gly Gly Tyr Ser Asn
50 55 60
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<212> PRT
<213> Acromyrmex echinatior
<400> 24
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1 5 10 15
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Ser Gly Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Tyr Gly Gly Gly Ser
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Ser Gly Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ser Tyr Gly Gly Gly Ser
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Ser Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ile Gly Ser Ser Tyr Gly Gly Ser Gly
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Ser Gly Gly Leu Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Gly
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Ser Ser Gly Ser Gly Leu Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Ser Gly Ser Ser
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Ser Gly Gly Leu Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asn Gly
660 665 670
Gly Ile Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gln
675 680 685
Gly Ser Ala Tyr Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ser Gln Gly Gly
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Gly Tyr Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Gly Gly Leu Gly Gly Gly Tyr
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Gly Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Gly Leu Gly Gly Ser Tyr Gly Ser
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Asn Arg Asn Gly Leu Gly Ser Gly Ser Ser Tyr Ser
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<210> 26
<211> 616
<212> PRT
<213> Drosophila virilis
<400> 26
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245 250 255
Gly Ala Pro Gly Gln Gly Gln Gly Gly Phe Gly Gly Lys Pro Ser Asp
260 265 270
Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Ala Gly Asn Gly Asn Gly Arg Pro Ser Ser
275 280 285
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290 295 300
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580 585 590
Arg Asn Gly Asn Gly Asn Ser Phe Gly Pro Gly Gly Gln Asn Gly Asp
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Asn Asp Gly Ser Gly Tyr Arg Tyr
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<210> 27
<211> 557
<212> PRT
<213> Drosophila erecta
<400> 27
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245 250 255
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260 265 270
Asn Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser
275 280 285
Gly Pro Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Ala Ser Gly
290 295 300
Ser Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ser Gly Pro Gly Gly Ala Asp Tyr
305 310 315 320
Asp Asn Asp Ile Val Glu Tyr Glu Ala Asp Gln Gln Gly Tyr Arg Pro
325 330 335
Gln Ile Arg Tyr Glu Gly Asp Ala Asn Asp Gly Ser Gly Pro Ser Gly
340 345 350
Pro Gly Gly Gln Asn Leu Gly Ala Asp Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro
355 360 365
Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Tyr Ser Gly Gly Arg Pro
370 375 380
Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr Ser Gly Gly Arg Pro Gly
385 390 395 400
Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser Asn Gly Arg Pro Gly Gly
405 410 415
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Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp
435 440 445
Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser Asn Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Asn
450 455 460
Gly Asn Gly Gly Ala Asp Gly Gly Arg Val Ile Ile Gly Gly Arg Val
465 470 475 480
Ile Gly Gly Gln Asp Gly Gly Asp Gln Gly Tyr Ser Gly Gly Arg Pro
485 490 495
Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly
500 505 510
Gly Arg Pro Gly Ala Asn Gly Gln Asp Asn Gln Asp Gly Gln Gly Tyr
515 520 525
Ser Ser Gly Arg Ser Gly Lys Gly Gly Arg Asn Ser Phe Gly Pro Gly
530 535 540
Gly Gln Asn Gly Asp Asn Asp Gly Ser Gly Tyr Arg Tyr
545 550 555
<210> 28
<211> 796
<212> PRT
<213> Lutzomyia longipalpis
<400> 28
Arg Pro Glu Pro Pro Ala Asn Thr Tyr Leu Pro Pro Ser Ser Ser Tyr
1 5 10 15
Ala Ala Pro Gly Gln Gln Gly Gly Ser Gly Phe Gly Gly Gly Gly Gly
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Ser Gly Gly Ser Gly Gly Phe Gly Gln Pro Gly Ala Phe Gly Arg Pro
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Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Gln Gly Gly Ala Gly Gly Gly Phe
50 55 60
Gly Ser Asp Ser Gln Phe Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gly Ala Gly Gly
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100 105 110
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115 120 125
Gly Ser Pro Gly Gln Ala Gly Ser Pro Gly Phe Gln Arg Pro Ser Ser
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195 200 205
Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Gly Ser Ser Gly Gly Phe Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Phe Gly Ser Gln Ala Pro Ser Thr Ser Tyr Gly Ala Pro Gly
225 230 235 240
Gln Gly Ser Pro Gly Gly Gly Phe Gly Ser Gln Gly Gly Pro Gly Gly
245 250 255
Gln Pro Gly Ser Pro Gly Phe Gly Gly Ser Gln Arg Pro Ser Ser Ser
260 265 270
Tyr Gly Pro Pro Gly Gln Gly Gly Ala Pro Gly Gln Gly Gly Ser Pro
275 280 285
Gly Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ser Gly Gly Ala Gly Gly Phe Gly Ala
290 295 300
Ser Gln Gln Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Gly Gln Gly Ala Gly
305 310 315 320
Ser Gly Phe Gln Gly Thr Gly Gly Gly Phe Gly Gly Pro Gly Gln Arg
325 330 335
Pro Gly Phe Gly Gly Ser Gln Thr Pro Ala Thr Ser Tyr Gly Ala Pro
340 345 350
Gly Gln Ala Gly Gly Ala Ser Gly Gly Phe Gly Gly Ala Gly Ala Gln
355 360 365
Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Gly Gln Ala Ser Gly Phe Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Phe
385 390 395 400
Gly Gly Asn Gln Gly Gly Phe Gly Gly Asn Gln Gly Gly Phe Gly Gly
405 410 415
Ser Gln Thr Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Phe Gly Ser Gly
420 425 430
Gly Ser Pro Gly Ala Ala Gly Gly Ala Gly Gly Phe Gly Gln Gly Gly
435 440 445
Val Gly Gly Ser Gly Gln Pro Gly Gly Phe Gly Gly Gly Asp Gln Gly
450 455 460
Tyr Pro Pro Arg Gly Gly Pro Gly Gly Phe Gly Pro Gly Ser Gly Gly
465 470 475 480
Ser Gly Ala Gly Gly Pro Ile Ala Gly Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Pro
485 490 495
Gly Gly Ser Asp Ser Gly Ser Asn Glu Pro Ala Lys Tyr Asp Phe Ser
500 505 510
Tyr Gln Val Asp Asp Pro Ala Ser Gly Thr Ser Phe Gly His Ser Glu
515 520 525
Gln Arg Asp Gly Asp Tyr Thr Ser Gly Gln Tyr Asn Val Leu Leu Pro
530 535 540
Asp Gly Arg Lys Gln Ile Val Glu Tyr Glu Ala Asp Leu Gly Gly Tyr
545 550 555 560
Arg Pro Gln Ile Lys Tyr Glu Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ala Gly Gly
565 570 575
Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gly Ser Gln Gly Gly Ala Gly Gly Tyr Pro
580 585 590
Ser Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ser Pro Gly Gly Ala Gly Gly Tyr
595 600 605
Gln Ser Gly Ala Ala Gly Gly Ala Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro
610 615 620
Gly Gly Pro Gly Ala Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Gly Gly Pro
625 630 635 640
Gly Ser Gln Ala Gly Gly Phe Ser Gly Gly Phe Gly Gly Gly Ser Asp
645 650 655
Gly Ala Phe Gly Gly Ala Gly Gly Phe Ser Gln Gly Gly Ala Gly Gly
660 665 670
Gly Asp Ala Gly Tyr Pro Arg Gly Gly Pro Gly Gly Phe Gly Gly Ala
675 680 685
Gly Ser Pro Gly Phe Gly Gly Ser Gly Ser Pro Gly Phe Gly Gly Ser
690 695 700
Gly Ser Pro Gly Ala Gln Gly Ser Ser Gly Phe Gly Gly Thr Gly Gly
705 710 715 720
Gly Phe Gly Gly Gly Ala Asp Gly Tyr Pro Arg Gly Gly Pro Gly Ala
725 730 735
Gly Gln Ser Gly Phe Gln Asp Gly Arg Gly Ala Thr Gly Gly Ala Gly
740 745 750
Gln Pro Gly Gly Arg Gly Ser Phe Gly Arg Pro Gly Ser Ala Arg Gly
755 760 765
Gly Ser Ser Ser Asn Gly Tyr Ala Asn Gly Gly Ala Glu Gly Tyr Pro
770 775 780
Arg Asp Asn Pro Gln Asn Arg Gly Ser Gly Tyr Ser
785 790 795
<210> 29
<211> 1051
<212> PRT
<213> Rhodnius prolixus
<400> 29
Lys Arg Asp Asp Pro Leu Arg Arg Phe Leu Ala Pro Leu Val Gly Gly
1 5 10 15
Gly Asn Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Asn Tyr Asn Lys Pro
20 25 30
Ala Asn Gly Leu Ser Leu Pro Gly Gly Gly Gly Ala Leu Pro Pro Ala
35 40 45
Thr Ser Tyr Gly Val Pro Asp Arg Pro Ala Pro Val Pro Ser Ser Pro
50 55 60
Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gln Pro Ser Pro Asn Tyr Gly Ala
65 70 75 80
Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Gln Pro Ser Arg Ser Tyr
85 90 95
Gly Ala Pro Ser Gln Gly Pro Ser Thr Ser Tyr Ser Gln Arg Pro Ser
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Thr Gly Gly Ala Gln Arg Pro Ser Gly Ser
145 150 155 160
Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Gly Gly Pro Ser Gly Asn Tyr Gly Pro Pro
165 170 175
Ser Gln Gln Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Thr Pro Ser
180 185 190
Ser Asn Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Arg Pro Ser Thr Ser Tyr Gly Ala
195 200 205
Pro Ser Gln Pro Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ser Pro Pro Gln Arg Ala
210 215 220
Ser Gly Tyr Pro Ser Ser Ser Ser Gly Pro Ser Asn Gly Tyr Ser Pro
225 230 235 240
Pro Ala Gln Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Gln Gln Pro
245 250 255
Ala Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Thr Pro Ser Ser Asn Tyr Gly
260 265 270
Pro Pro Ala Pro Ile Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Pro
275 280 285
Pro Ser Lys Pro Ser Ala Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Thr Pro Ser Gln
290 295 300
Thr Pro Ser Thr Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Ala Pro Ser Ser Ser
305 310 315 320
Tyr Gly Ala Pro Ser Arg Pro Ser Pro Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala
325 330 335
Pro Ser Gln Gly Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Arg Pro Ser
340 345 350
Gln Pro Ser Ser Pro Ser Ser Gly Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Gly Pro
355 360 365
Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Arg Pro Ser Ser Pro Ser Ser Ser
370 375 380
Tyr Gly Ala Pro Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Arg Pro Ser
385 390 395 400
Pro Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Gly Pro Ser Ser Ser
405 410 415
Tyr Gly Pro Pro Ser Arg Pro Ser Gln Pro Ser Ser Pro Ser Ser Gly
420 425 430
Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Gly Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser
435 440 445
Arg Pro Ser Ser Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Pro Ser Ser Ser
450 455 460
Tyr Gly Ala Pro Ser Arg Pro Ser Pro Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala
465 470 475 480
Pro Ser Gln Gly Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Arg Pro Ser
485 490 495
Gln Pro Ser Ser Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Gly Pro
500 505 510
Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Arg Pro Ser Pro Pro Ser Ser Ser
515 520 525
Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Gly Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Ser
530 535 540
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545 550 555 560
Pro Ser Thr Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Pro Gln Ala Leu Ser
565 570 575
Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Ser Gly Arg Pro Gly Ala Pro Ser Gln Lys
580 585 590
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595 600 605
Gly Pro Lys Ser Ser Pro Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Val
610 615 620
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625 630 635 640
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645 650 655
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660 665 670
Gly Val Pro Ser Gln Pro Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Val Pro Ser Gln
675 680 685
Gly Val Ser Gly Ser Val Gly Ser Ser Ser Pro Ser Ser Ser Tyr Gly
690 695 700
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705 710 715 720
Ser Ile Gly Gly Phe Gly Ser Ser Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala
725 730 735
Pro Pro Gln Ala Pro Ser Ser Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Arg Ala Pro
740 745 750
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755 760 765
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770 775 780
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820 825 830
Thr Thr Asn Tyr Gly Ala Pro Ser Gln Thr Pro Ser Ser Asn Tyr Gly
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Ala Pro Pro Ala Ser Ser Ala Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Arg Pro Ser
850 855 860
Gln Ser Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ser Pro Ser Ser Ser Ser
865 870 875 880
Ser Ser Tyr Glu Ser Pro Ser Gln Pro Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala
885 890 895
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900 905 910
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1010 1015 1020
Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Thr Gly Thr Gly Ser Ser Gln Pro
1025 1030 1035
Gly Gln Ser Tyr Ala Ser Asn Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser
1040 1045 1050
<210> 30
<211> 506
<212> PRT
<213> Rhodnius prolixus
<400> 30
Gln Pro Pro Phe Asn His Tyr Leu Pro Ala Ala Arg Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Asn Ser Ala Gln Tyr Thr Ala Pro Ser Ser Lys Phe Gly Thr Ser Thr
20 25 30
Gly Gln Tyr Gly Gln Pro Pro Ser Glu Val Pro Arg Gly Leu Gln Gln
35 40 45
Gly Ser Tyr Ala Glu Asp Val His Ser Ser Arg Ser Val Asn Pro Ser
50 55 60
Ser Gln Asn Gly Ile Pro Ser Gly His Phe Ser Ser Leu Ser Ser Asn
65 70 75 80
Tyr Gly Ala Pro Ser Ser Asp Tyr Ser Arg Ser Phe Leu Arg Tyr Gly
85 90 95
Thr Leu Ser Asn Lys Tyr Gly Val Pro Asn Ser Ala Leu Gly Ser Leu
100 105 110
Ser Ser Arg Asn Asn Lys Thr Pro Ala Thr Gln Leu Ser Tyr Gln Pro
115 120 125
Ser Ser His Tyr Asp Ser Arg Ser Thr Ser Glu Asp Gln Phe Ile Ser
130 135 140
Ser Arg Val Ser Asp Ser Gln Tyr Gly Ala Ser Ser Val Arg Arg Phe
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Ser Pro Pro Ser Gln Tyr Gly Gly Pro Tyr Ser Met Arg Thr Ser Ala
245 250 255
Pro Asn Ser Gln Tyr Gly Thr Pro Ser Ser Phe Arg Thr Ser Pro Ser
260 265 270
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275 280 285
Arg Ser Val Pro Ser Ser Pro Tyr Gly Thr Leu Ser Ala Ile Arg Ser
290 295 300
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305 310 315 320
Ser Ser Ser His Asn Gly Leu Pro Ser His Tyr Pro Gly Ser Gly Phe
325 330 335
Ser Gly Ser Ser Val Asn Asp Gln Lys Ser Tyr Thr Gly Asn Val Phe
340 345 350
Gly Gln Ser His Ser Arg Val Ala Asn Gly Asp Gln His Ala Arg Ser
355 360 365
Tyr Thr Leu Ala Gly Gly Asn Glu Ile Ser Glu Pro Ala Lys Tyr Asp
370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
Gly Tyr Lys Pro Thr Ile Ser Tyr Glu Asn Thr Gly Thr Leu Thr Thr
435 440 445
Gly Arg Gln Gln Phe Ser Asn Gly Phe Tyr Asn Val Gln Gln Ser Gly
450 455 460
Ser Glu Ser Gln Glu His Leu Gly Arg Ser Thr Gly Gln Asn Ser Tyr
465 470 475 480
Gly Gly Ser Asn Gly Tyr Glu Ser Gly Val Gly Tyr Gln Ser Gly Val
485 490 495
Gly Arg Arg Ser Arg Pro Ala Gly Ser Tyr
500 505
<210> 31
<211> 551
<212> PRT
<213> Solenopsis invicta
<400> 31
Arg Ser Glu Pro Pro Ile Asn Ser Tyr Leu Pro Pro Arg Ala Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Ala Asn Gly Gly Arg Thr Asp Leu Thr Thr Gln Tyr Gly Ala
20 25 30
Pro Asp Phe Asn Asn Gly Gly Gly Ala Thr Ser Phe Ser Gly Asn Gly
35 40 45
Ala Gly Asp Gly Pro Ser Lys Leu Tyr Asp Val Pro Val Arg Gly Asn
50 55 60
Ala Gly Gly Asn Gly Leu Gly Arg Gly Asn Gly Phe Gly Gly Gly Gln
65 70 75 80
Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Asn Gly Gly Ser Asn Glu Asn Arg
85 90 95
Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Thr Ser Tyr Gly Val Pro Gly Ala Asn
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Gly Gly Phe Gly Asn Gly Gly Asp Lys Gly Arg Pro
115 120 125
Ser Thr Ser Tyr Gly Val Pro Asp Ala Ser Gly Ser Ser Gln Gly Ser
130 135 140
Phe Gly Asn Val Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Thr Asn Tyr Gly Val
145 150 155 160
Pro Gly Ala Asn Gly Asn Gly Gly Gly Phe Gly Asn Ala Ala Asn Glu
165 170 175
Gly Lys Pro Ser Thr Ser Tyr Gly Val Pro Gly Ala Asn Gly Asn Ser
180 185 190
Gln Gly Gly Phe Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Thr Gly Tyr Gly Val
195 200 205
Pro Gly Ala Asn Gly Asn Asn Gly Gly Gly Phe Gly Gly Arg Pro Ser
210 215 220
Thr Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ala Asn Gly Asn His Arg Gly Gly Asn
225 230 235 240
Gly Gly Asn Ala Ser Pro Ser Thr Asn Tyr Gly Val Pro Gly Gly Asn
245 250 255
Asn Gly Asn Thr Asn Gly Lys Gly Arg Phe Asn Gly Gly Asn Ser Gly
260 265 270
Gly Gly Pro Ser Asn Asn Tyr Gly Val Pro Asn Glu Asn Ala Phe Gly
275 280 285
Gly Gly Leu Ser Thr Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Arg Gly Gly Asn Gly
290 295 300
Asn Ser Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Ser Asn Gly Gly Ser Phe Val Asn
305 310 315 320
Asn Gly Ala Asn Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Asn Gly Asn Ala Gly
325 330 335
Asn Phe Gly Asp Gly Arg Gly Gly Lys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Glu
340 345 350
Gly Tyr Asn Asp Asn Ala Gln Glu Gly Ser Thr Glu Pro Ala Lys Tyr
355 360 365
Glu Phe Ser Tyr Lys Val Lys Asp Gln Gln Thr Gly Ser Glu Tyr Ser
370 375 380
His Thr Glu Thr Arg Asp Gly Asp Arg Ala Gln Gly Glu Phe Asn Val
385 390 395 400
Leu Leu Pro Asp Gly Arg Lys Gln Ile Val Glu Tyr Glu Ala Asp Gln
405 410 415
Asp Gly Phe Lys Pro Gln Ile Arg Tyr Glu Gly Glu Ala Asn Ala Gly
420 425 430
Gly Gly Tyr Ser Ser Gly Gly Ser Asn Asp Asn Asn Asp Gly Tyr Ser
435 440 445
Ser Gly Arg Pro Gly Ser Glu Ala Gly Gly Phe Ala Asn Asn Ser Gly
450 455 460
Phe Asn Gly Ser Gly Thr Asn Gly Gly Arg Ser Ser Gly Gly Pro Gly
465 470 475 480
Asp Gly Asn Pro Gly Gly Phe Asn Ser Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Gln
485 490 495
Ser Gly Arg Pro Ala Gly Gln Ser Phe Gly Arg Asp Asn Asp Gly Gly
500 505 510
Leu Ser Gly Asp Ile Gly Gly Tyr Phe Ala Asn Ser Pro Ser Asn Asn
515 520 525
Ile Gly Gly Ser Asp Ser Ala Asn Val Gly Ser Asn Arg Gln Asn Gly
530 535 540
Gly Asn Gly Gly Tyr Gln Tyr
545 550
<210> 32
<211> 382
<212> PRT
<213> Culex quinquefasciatus
<400> 32
Lys Arg Glu Ala Pro Leu Pro Gly Gly Ser Tyr Leu Pro Pro Ser Asn
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Gly Gly Tyr Pro Ala Ala Gly Pro Pro Ser Gly Ser
20 25 30
Tyr Gly Pro Pro Ser Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Ala Gly Gly
35 40 45
Tyr Pro Ser Ala Pro Ser Gln Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala
50 55 60
Pro Ser Gln Gln Tyr Gly Ala Pro Ser Asn Gly Asn Gly Gly Ala Gly
65 70 75 80
Gly Tyr Pro Ser Ala Pro Ser Gln Gln Tyr Gly Ala Pro Asn Gly Asn
85 90 95
Gly Asn Gly Gly Phe Gly Gly Arg Pro Gln Ala Pro Ser Gln Gln Tyr
100 105 110
Gly Ala Pro Ser Asn Gly Asn Gly Gly Ala Arg Pro Ser Gln Gln Tyr
115 120 125
Gly Ala Pro Asn Gly Gly Asn Gly Asn Gly Arg Pro Gln Thr Pro Ser
130 135 140
Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ser Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly
145 150 155 160
Ala Pro Ser Gly Gly Ala Pro Ser Gln Gln Tyr Gly Ala Pro Asn Gly
165 170 175
Gly Asn Gly Asn Gly Arg Pro Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala
180 185 190
Pro Ser Gly Gly Ala Pro Ser Gln Gln Tyr Gly Ala Pro Asn Gly Gly
195 200 205
Asn Gly Asn Gly Arg Pro Gln Thr Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro
210 215 220
Ser Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ser Gly Gly Ala
225 230 235 240
Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln
245 250 255
Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro
260 265 270
Ala Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala
275 280 285
Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln
290 295 300
Tyr Gly Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala Pro
305 310 315 320
Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln Tyr
325 330 335
Gly Ala Pro Ser Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ser
340 345 350
Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ala Gly Gly Ala Pro
355 360 365
Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Ser Gly Gly Ala Pro Ser Ser
370 375 380
<210> 33
<211> 491
<212> PRT
<213> Bactrocera cucurbitae
<400> 33
Arg Pro Glu Pro Pro Val Asn Ser Tyr Leu Pro Pro Ser Ala Asn Gly
1 5 10 15
Asn Gly Asn Gly Gly Gly Arg Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Ala Pro Gly
20 25 30
Leu Gly Ser Asn Ser Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Gly Arg
35 40 45
Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Val Pro Gly Leu Gly Gly Asn Gly Asn Gly
50 55 60
Asn Gly Asn Gly Gly Gly Gly Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala
65 70 75 80
Pro Gly Leu Gly Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Gly Arg
85 90 95
Pro Ser Ser Gln Tyr Gly Val Pro Gly Leu Gly Gly Asn Gly Asn Gly
100 105 110
Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Ala
115 120 125
Pro Gly Leu Arg Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Arg
130 135 140
Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Leu Gly Gly Asn Gly Asn Gly
145 150 155 160
Asn Gly Asn Gly Asn Gly Arg Pro Ser Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Gly
165 170 175
Leu Gly Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Arg Pro Ser
180 185 190
Ser Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Leu Asn Gly Asn Gly Leu Gly Gly Gly
195 200 205
Gln Lys Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Ala Ser Gly Asn Gly Asn
210 215 220
Gly Tyr Ser Asn Gly Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Gly Arg Pro
225 230 235 240
Gly Gln Glu Tyr Leu Pro Pro Gly Arg Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn
245 250 255
Gly Gly Arg Gly Asn Gly Asn Gly Gly Gly Ala Asn Gly Tyr Asp Tyr
260 265 270
Ser Gln Gly Gly Ser Asp Ser Gly Glu Ser Gly Ile Val Asp Tyr Glu
275 280 285
Ala Asp Gln Gly Gly Tyr Arg Pro Gln Ile Arg Tyr Glu Gly Glu Ala
290 295 300
Asn Asn Gly Ala Gly Gly Leu Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Asn Gly
305 310 315 320
Tyr Asp Tyr Glu Gln Asn Gly Asn Gly Leu Gly Gly Gly Asn Gly Tyr
325 330 335
Ser Asn Gly Gln Asp Leu Gly Ser Asn Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro
340 345 350
Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Tyr Ser
355 360 365
Gly Arg Asn Gly Lys Gly Arg Asn Gly Asn Gly Gly Gly Gln Gly Leu
370 375 380
Gly Arg Asn Gly Tyr Ser Asp Gly Arg Pro Ser Gly Gln Asp Leu Gly
385 390 395 400
Asp Asn Gly Tyr Ala Ser Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Asn Gly Asn
405 410 415
Gly Gly Asn Gly Asn Gly Tyr Ser Asn Gly Asn Gly Tyr Ser Asn Gly
420 425 430
Asn Gly Asn Gly Thr Gly Asn Gly Gly Gly Gln Tyr Asn Gly Asn Gly
435 440 445
Asn Gly Tyr Ser Asp Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Asn Leu Asp Gly
450 455 460
Gln Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Asn Gly Phe Gly Pro Gly Gly Gln
465 470 475 480
Asn Gly Asp Asn Asp Gly Asn Gly Tyr Arg Tyr
485 490
<210> 34
<211> 770
<212> PRT
<213> Trichogramma pretiosum
<400> 34
Arg Pro Glu Pro Pro Val Asn Ser Tyr Leu Pro Pro Gly Gln Gly Gly
1 5 10 15
Gln Gly Gly Phe Gly Gly Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gly Ser Pro
20 25 30
Ser Asn Gln Tyr Gly Pro Pro Asn Phe Gln Asn Gly Gly Gly Gln Asn
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Phe Gly Gly Asn Gly Asn Gly Asn Ser Phe Gly Pro
50 55 60
Pro Ser Asn Ser Tyr Gly Pro Pro Glu Phe Gly Ser Pro Gly Ala Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gly Gly Gly Arg Pro Gln Asp Thr Tyr Gly Pro Pro Ser Asn
85 90 95
Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Phe Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Gly
100 105 110
Arg Pro Ser Ser Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Ser Gly
115 120 125
Asn Gly Phe Gly Gly Gly Asn Ser Gly Arg Pro Ser Glu Ser Tyr Gly
130 135 140
Pro Pro Gln Asn Gly Gly Gly Ser Gly Asn Gly Asn Gln Gly Gly Gly
145 150 155 160
Asn Gly Phe Gly Asn Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gln Gly Lys Pro Ser
165 170 175
Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Asn Ser Gly Asn Arg Pro Gly Ser Ser Asn
180 185 190
Gly Gly Gly Gln Gln Gln Asn Gly Phe Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Tyr Gly Pro Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly Gly Arg
210 215 220
Pro Gly Gly Ser Ser Gly Gly Phe Gly Gly Gln Asn Gly Gly Arg Pro
225 230 235 240
Ser Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Arg
245 250 255
Pro Ser Asn Asn Tyr Gly Pro Pro Asn Ser Gly Gly Gly Asn Gly Asn
260 265 270
Gly Phe Gly Gly Ser Asn Gly Lys Pro Ser Asn Ser Tyr Gly Pro Pro
275 280 285
Ser Asn Gly Asn Gly Gly Gly Phe Gly Gly Ser Asn Gly Arg Pro Ser
290 295 300
Asn Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Gly Gly Asn Gly Gly Gly Phe Gly Gly
305 310 315 320
Ser Ser Ala Val Gly Arg Pro Gly Asn Ser Gly Ser Pro Ser Ser Ser
325 330 335
Gly Ser Gly Phe Gly Gly Asn Gly Gly Ala Ser Arg Pro Ser Ser Ser
340 345 350
Tyr Gly Pro Pro Ser Asn Gly Gly Gly Phe Gly Asn Gly Gly Gly Ser
355 360 365
Asn Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Asn Ser Gly Ser Asn
370 375 380
Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gln Asn Gly Asn Gly Arg Gln Asn Gly Asn
385 390 395 400
Asn Gly Gln Gly Gly Phe Gly Gly Gln Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro
405 410 415
Pro Ser Asn Gly Asn Gly Phe Gly Gly Gly Gly Gly Ser Asn Gly Tyr
420 425 430
Pro Gln Asn Ser Gln Gly Gly Asn Gly Asn Gly Phe Gly Gln Gly Ser
435 440 445
Gly Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Pro Pro Ser Asn Gly Gly Gly
450 455 460
Gly Gly Asp Asn Gly Tyr Ser Ser Gly Gly Pro Gly Gly Phe Gly Gly
465 470 475 480
Gln Pro Gln Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Pro Ser Gly Ala Val Asp Gly
485 490 495
Asn Asn Gly Phe Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Asp Asn Asn Gly Tyr
500 505 510
Ser Ser Gly Gly Pro Gly Gly Asn Gly Phe Glu Asp Gly Asn Asp Glu
515 520 525
Pro Ala Lys Tyr Glu Phe Ser Tyr Glu Val Lys Asp Glu Gln Ser Gly
530 535 540
Ser Ser Phe Gly His Thr Glu Met Arg Asp Gly Asp Arg Ala Gln Gly
545 550 555 560
Glu Phe Asn Val Leu Leu Pro Asp Gly Arg Lys Gln Ile Val Glu Tyr
565 570 575
Glu Ala Asp Gln Asp Gly Phe Lys Pro Gln Ile Arg Tyr Glu Gly Glu
580 585 590
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595 600 605
Gln Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Ser Asn
610 615 620
Gly Gly Phe Gly Gly Gln Asn Gly Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser
625 630 635 640
Gly Gly Pro Ser Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gln Asn Gly Gly Ser Gly
645 650 655
Gly Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Ser Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gln Gly
660 665 670
Gly Phe Gly Gly Gln Asn Ser Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Ser Ser Gly
675 680 685
Gly Pro Ala Ser Gly Gly Phe Gly Gly Gln Asn Gly Gly Asn Gly Gly
690 695 700
Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Ser Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gln Gly Gly
705 710 715 720
Phe Gly Gly Gln Asn Ser Gly Gly Asn Gly Gly Tyr Pro Ser Gly Gly
725 730 735
Pro Ser Ser Gly Gly Phe Gly Gly Gln Asn Gly Gly Gly Gly Gly Asn
740 745 750
Tyr Pro Ala Gly Ser Gly Gly Asp Ala Glu Ala Asn Gly Gly Tyr Gln
755 760 765
Tyr Ser
770
<210> 35
<211> 280
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 35
Gln Ser Gly Ala Gly Gly Arg Pro Ser Asp Thr Tyr Gly Ala Pro Gly
1 5 10 15
Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln
20 25 30
Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Gly Lys Pro Ser
35 40 45
Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Arg Pro
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser
65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly
130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Lys Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Asn Gly Ser Ala
245 250 255
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Pro Gly Gly
260 265 270
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275 280
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<211> 280
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 36
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1 5 10 15
Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln
20 25 30
Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Gly Lys Pro Ser
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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180 185 190
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195 200 205
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Gly Gln Gly Gly
210 215 220
Phe Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Asn Gln
225 230 235 240
Lys Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Asn Gly Ser Ala
245 250 255
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Pro Gly Gly
260 265 270
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275 280
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<211> 280
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
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1 5 10 15
Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln
20 25 30
Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Gly Lys Pro Ser
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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115 120 125
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Gly Gln Gly Gly
210 215 220
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225 230 235 240
Lys Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Asn Gly Ser Ala
245 250 255
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Pro Gly Gly
260 265 270
Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Pro
275 280
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<211> 280
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 38
Gln Ser Gly Ala Gly Gly Arg Pro Ser Asp Thr Tyr Gly Ala Pro Gly
1 5 10 15
Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln
20 25 30
Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Gly Lys Pro Ser
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly
130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Gly Gln Gly Gly
210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
Gly Arg Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Pro Gly Gly
260 265 270
Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Pro
275 280
<210> 39
<211> 162
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 39
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr
20 25 30
Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser
35 40 45
Asn Val Lys Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Gly Gly Tyr Ser Gly
50 55 60
Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Gly Gly
65 70 75 80
Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Ala Tyr Ser Asn Gly Arg
85 90 95
Pro Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Ser Asp Gly Gly Arg Val Ile Ile
100 105 110
Gly Gly Arg Val Ile Gly Gly Gln Asp Gly Gly Asp Gln Gly Tyr Ser
115 120 125
Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Ser
130 135 140
Gly Arg Pro Gly Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Gln Asp Ser Gln Asp
145 150 155 160
Gly Gln
<210> 40
<211> 162
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 40
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr
20 25 30
Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser
35 40 45
Asn Val Lys Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Gly Gly Tyr Ser Gly
50 55 60
Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Gly Gly
65 70 75 80
Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Ala Tyr Ser Asn Gly Arg
85 90 95
Pro Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Ser Asp Gly Gly Arg Val Ile Ile
100 105 110
Gly Gly Arg Val Ile Gly Gly Gln Asp Gly Gly Asp Gln Gly Tyr Ser
115 120 125
Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Ser
130 135 140
Gly Arg Pro Gly Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Gln Asp Ser Gln Asp
145 150 155 160
Gly Gln
<210> 41
<211> 162
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 41
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr
20 25 30
Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser
35 40 45
Asn Val Lys Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Gly Gly Tyr Ser Gly
50 55 60
Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Gly Gly
65 70 75 80
Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Ala Tyr Ser Asn Gly Arg
85 90 95
Pro Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Ser Asp Gly Gly Arg Val Ile Ile
100 105 110
Gly Gly Arg Val Ile Gly Gly Gln Asp Gly Gly Asp Gln Gly Tyr Ser
115 120 125
Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Ser
130 135 140
Gly Arg Pro Gly Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Gln Asp Ser Gln Asp
145 150 155 160
Gly Gln
<210> 42
<211> 162
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 42
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr
20 25 30
Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser
35 40 45
Asn Val Lys Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Gly Gly Tyr Ser Gly
50 55 60
Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Gly Gly
65 70 75 80
Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Ala Tyr Ser Asn Gly Arg
85 90 95
Pro Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Ser Asp Gly Gly Arg Val Ile Ile
100 105 110
Gly Gly Arg Val Ile Gly Gly Gln Asp Gly Gly Asp Gln Gly Tyr Ser
115 120 125
Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Ser
130 135 140
Gly Arg Pro Gly Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Gln Asp Ser Gln Asp
145 150 155 160
Gly Gln
<210> 43
<211> 162
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 43
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr
20 25 30
Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser
35 40 45
Asn Val Lys Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Gly Gly Tyr Ser Gly
50 55 60
Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Gly Gly
65 70 75 80
Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Ala Tyr Ser Asn Gly Arg
85 90 95
Pro Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Ser Asp Gly Gly Arg Val Ile Ile
100 105 110
Gly Gly Arg Val Ile Gly Gly Gln Asp Gly Gly Asp Gln Gly Tyr Ser
115 120 125
Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Ser
130 135 140
Gly Arg Pro Gly Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Gln Asp Ser Gln Asp
145 150 155 160
Gly Gln
<210> 44
<211> 162
<212> PRT
<213> Drosophila sechellia
<400> 44
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr
20 25 30
Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser
35 40 45
Asn Val Lys Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Pro Gly Gly Tyr Ser Gly
50 55 60
Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Gly Gly
65 70 75 80
Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala Gly Ala Tyr Ser Asn Gly Arg
85 90 95
Pro Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Ser Asp Gly Gly Arg Val Ile Ile
100 105 110
Gly Gly Arg Val Ile Gly Gly Gln Asp Gly Gly Asp Gln Gly Tyr Ser
115 120 125
Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Ser
130 135 140
Gly Arg Pro Gly Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Gln Asp Ser Gln Asp
145 150 155 160
Gly Gln
<210> 45
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 45
Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp
1 5 10 15
Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
20 25
<210> 46
<211> 85
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Description of Unknown:
Alpha mating factor precursor protein sequence
<400> 46
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Glu Lys Arg
85
<210> 47
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 47
Glu Ala Glu Ala
1
<210> 48
<211> 2
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 48
Ser Gly
1
<210> 49
<211> 722
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 49
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Gly Arg Pro Glu Pro Pro Val
85 90 95
Asn Ser Tyr Leu Pro Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Ser
100 105 110
Gly Ala Gly Gly Arg Pro Ser Asp Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly
115 120 125
Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Gly Gln
130 135 140
Gly Gln Gly Gln Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Gly Lys Pro Ser Asp Ser
145 150 155 160
Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Ser
165 170 175
Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp Thr
180 185 190
Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp Thr Tyr
195 200 205
Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Ser
210 215 220
Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Gly Gln Gly Asn Gly Asn Gly Gly Arg
225 230 235 240
Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro
245 250 255
Ser Asp Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser
260 265 270
Asp Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Asn Gly Gly Arg Pro Ser
275 280 285
Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Gly Arg Pro Ser Asp
290 295 300
Thr Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn Gly Asn Gly Ser Gly Gly Arg
305 310 315 320
Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Gly Gln Gly Gly Phe Gly
325 330 335
Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Asn Gln Lys Pro
340 345 350
Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Asn Gly Ser Ala Gly Arg
355 360 365
Pro Ser Ser Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Ser Gly Pro Gly Gly Arg Pro
370 375 380
Ser Asp Ser Tyr Gly Pro Pro Ala Ser Gly Ser Gly Ala Gly Gly Ala
385 390 395 400
Gly Gly Ser Gly Pro Gly Gly Ala Asp Tyr Asp Asn Asp Glu Pro Ala
405 410 415
Lys Tyr Glu Phe Asn Tyr Gln Val Glu Asp Ala Pro Ser Gly Leu Ser
420 425 430
Phe Gly His Ser Glu Met Arg Asp Gly Asp Phe Thr Thr Gly Gln Tyr
435 440 445
Asn Val Leu Leu Pro Asp Gly Arg Lys Gln Ile Val Glu Tyr Glu Ala
450 455 460
Asp Gln Gln Gly Tyr Arg Pro Gln Ile Arg Tyr Glu Gly Asp Ala Asn
465 470 475 480
Asp Gly Ser Gly Pro Ser Gly Pro Ser Gly Pro Gly Gly Pro Gly Gly
485 490 495
Gln Asn Leu Gly Ala Asp Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Asn Gly
500 505 510
Asn Gly Asn Gly Asn Gly Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Gly Gln
515 520 525
Asp Leu Gly Pro Ser Gly Tyr Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp
530 535 540
Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Ser Asn Val Lys Pro Gly Gly Gln Asp Leu
545 550 555 560
Gly Pro Gly Gly Tyr Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly
565 570 575
Arg Asp Gly Tyr Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu Gly Ala
580 585 590
Gly Ala Tyr Ser Asn Gly Arg Pro Gly Gly Asn Gly Asn Gly Gly Ser
595 600 605
Asp Gly Gly Arg Val Ile Ile Gly Gly Arg Val Ile Gly Gly Gln Asp
610 615 620
Gly Gly Asp Gln Gly Tyr Ser Gly Gly Arg Pro Gly Gly Gln Asp Leu
625 630 635 640
Gly Arg Asp Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro Gly Gly Arg Pro Gly Gly
645 650 655
Asn Gly Gln Asp Ser Gln Asp Gly Gln Gly Tyr Ser Ser Gly Arg Pro
660 665 670
Gly Gln Gly Gly Arg Asn Gly Phe Gly Pro Gly Gly Gln Asn Gly Asp
675 680 685
Asn Asp Gly Ser Gly Tyr Arg Tyr Ser Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp
690 695 700
Asp Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp
705 710 715 720
Asp Lys
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(3)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Any amino acid
<400> 50
Ser Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro
1 5
<210> 51
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 51
Gly Gly Gly Gly
1
<210> 52
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 52
Asn Gly Asn Gly
1
<210> 53
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 53
Gly Gln Gly Gly
1
<210> 54
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 54
Gly Gln Gly Asn
1
<210> 55
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 55
Gly Gln Gly Gln
1
<210> 56
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 56
Gly Gln Gly Gln Gly
1 5
<210> 57
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 57
Arg Pro Gly Gly Gln
1 5
<210> 58
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 58
Arg Pro Gly Gly Asn
1 5
<210> 59
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 59
Gly Gly Ser Phe
1
<210> 60
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 60
Gly Asn Gly Gly
1
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 61
Gly Gly Ala Gly Gly
1 5
<210> 62
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(2)
<223> Any amino acid
<400> 62
Xaa Xaa Glu Pro Pro Val Ser Tyr Leu Pro Pro Ser
1 5 10
<210> 63
<211> 4
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Description of Unknown:
"GRPE" sequence
<400> 63
Gly Arg Pro Glu
1
<210> 64
<211> 3000
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(3000)
<223> This sequence may encompass 1-100 "Tyr Gly Xaa Pro Xaa
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa" repeating units
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(24)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(24)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (25)..(28)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(30)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (33)..(33)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(54)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(54)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (55)..(58)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (59)..(60)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (63)..(63)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(84)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (65)..(84)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (85)..(88)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (89)..(90)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (93)..(93)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (95)..(114)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (95)..(114)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (115)..(118)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (119)..(120)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (123)..(123)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (125)..(144)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (125)..(144)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (145)..(148)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (149)..(150)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (153)..(153)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (155)..(174)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (155)..(174)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (175)..(178)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (179)..(180)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (183)..(183)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (185)..(204)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (185)..(204)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (205)..(208)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (209)..(210)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (213)..(213)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (215)..(234)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (215)..(234)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (235)..(238)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (239)..(240)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (243)..(243)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (245)..(264)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (245)..(264)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (265)..(268)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (269)..(270)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (273)..(273)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (275)..(294)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (275)..(294)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (295)..(298)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (299)..(300)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (303)..(303)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (305)..(324)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (305)..(324)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (325)..(328)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (329)..(330)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (333)..(333)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (335)..(354)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (335)..(354)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (355)..(358)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (359)..(360)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (363)..(363)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (365)..(384)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (365)..(384)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (385)..(388)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (389)..(390)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (393)..(393)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (395)..(414)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (395)..(414)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (415)..(418)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (419)..(420)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (423)..(423)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (425)..(444)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (425)..(444)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (445)..(448)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (449)..(450)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (453)..(453)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (455)..(474)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (455)..(474)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (475)..(478)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (479)..(480)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (483)..(483)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (485)..(504)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (485)..(504)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (505)..(508)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (509)..(510)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (513)..(513)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (515)..(534)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (515)..(534)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (535)..(538)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (539)..(540)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (543)..(543)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (545)..(564)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (545)..(564)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (565)..(568)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (569)..(570)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (573)..(573)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (575)..(594)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (575)..(594)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (595)..(598)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (599)..(600)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (603)..(603)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (605)..(624)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (605)..(624)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (625)..(628)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (629)..(630)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (633)..(633)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (635)..(654)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (635)..(654)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (655)..(658)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (659)..(660)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (663)..(663)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (665)..(684)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (665)..(684)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (685)..(688)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (689)..(690)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (693)..(693)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (695)..(714)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (695)..(714)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (715)..(718)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (719)..(720)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (723)..(723)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (725)..(744)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (725)..(744)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (745)..(748)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (749)..(750)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (753)..(753)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (755)..(774)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (755)..(774)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (775)..(778)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (779)..(780)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (783)..(783)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (785)..(804)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (785)..(804)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (805)..(808)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (809)..(810)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (813)..(813)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (815)..(834)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (815)..(834)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (835)..(838)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (839)..(840)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (843)..(843)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (845)..(864)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (845)..(864)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (865)..(868)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (869)..(870)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (873)..(873)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (875)..(894)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (875)..(894)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (895)..(898)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (899)..(900)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (903)..(903)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (905)..(924)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (905)..(924)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (925)..(928)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (929)..(930)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (933)..(933)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (935)..(954)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (935)..(954)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (955)..(958)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (959)..(960)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (963)..(963)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (965)..(984)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (965)..(984)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (985)..(988)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (989)..(990)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (993)..(993)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (995)..(1014)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (995)..(1014)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1015)..(1018)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1019)..(1020)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1023)..(1023)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1025)..(1044)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1025)..(1044)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1045)..(1048)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1049)..(1050)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1053)..(1053)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1055)..(1074)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1055)..(1074)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1075)..(1078)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1079)..(1080)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1083)..(1083)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1085)..(1104)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1085)..(1104)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1105)..(1108)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1109)..(1110)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1113)..(1113)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1115)..(1134)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1115)..(1134)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1135)..(1138)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1139)..(1140)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1143)..(1143)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1145)..(1164)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1145)..(1164)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1165)..(1168)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1169)..(1170)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1173)..(1173)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1175)..(1194)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1175)..(1194)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1195)..(1198)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1199)..(1200)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1203)..(1203)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1205)..(1224)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1205)..(1224)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1225)..(1228)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1229)..(1230)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1233)..(1233)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1235)..(1254)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1235)..(1254)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1255)..(1258)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1259)..(1260)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1263)..(1263)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1265)..(1284)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1265)..(1284)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1285)..(1288)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1289)..(1290)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1293)..(1293)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1295)..(1314)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1295)..(1314)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1315)..(1318)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1319)..(1320)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1323)..(1323)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1325)..(1344)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1325)..(1344)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1345)..(1348)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1349)..(1350)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1353)..(1353)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1355)..(1374)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1355)..(1374)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1375)..(1378)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1379)..(1380)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1383)..(1383)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1385)..(1404)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1385)..(1404)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1405)..(1408)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1409)..(1410)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1413)..(1413)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1415)..(1434)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1415)..(1434)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1435)..(1438)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1439)..(1440)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1443)..(1443)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1445)..(1464)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1445)..(1464)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1465)..(1468)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1469)..(1470)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1473)..(1473)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1475)..(1494)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1475)..(1494)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1495)..(1498)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1499)..(1500)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1503)..(1503)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1505)..(1524)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1505)..(1524)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1525)..(1528)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1529)..(1530)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1533)..(1533)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1535)..(1554)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1535)..(1554)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1555)..(1558)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1559)..(1560)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1563)..(1563)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1565)..(1584)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1565)..(1584)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1585)..(1588)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1589)..(1590)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1593)..(1593)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1595)..(1614)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1595)..(1614)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1615)..(1618)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1619)..(1620)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1623)..(1623)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1625)..(1644)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1625)..(1644)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1645)..(1648)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1649)..(1650)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1653)..(1653)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1655)..(1674)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1655)..(1674)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1675)..(1678)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1679)..(1680)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1683)..(1683)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1685)..(1704)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1685)..(1704)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1705)..(1708)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1709)..(1710)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1713)..(1713)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1715)..(1734)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1715)..(1734)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1735)..(1738)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1739)..(1740)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1743)..(1743)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1745)..(1764)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1745)..(1764)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1765)..(1768)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1769)..(1770)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1773)..(1773)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1775)..(1794)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1775)..(1794)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1795)..(1798)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1799)..(1800)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1803)..(1803)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1805)..(1824)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1805)..(1824)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1825)..(1828)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1829)..(1830)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1833)..(1833)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1835)..(1854)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1835)..(1854)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1855)..(1858)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1859)..(1860)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1863)..(1863)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1865)..(1884)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1865)..(1884)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1885)..(1888)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1889)..(1890)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1893)..(1893)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1895)..(1914)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1895)..(1914)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1915)..(1918)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1919)..(1920)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1923)..(1923)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1925)..(1944)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1925)..(1944)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1945)..(1948)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1949)..(1950)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1953)..(1953)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1955)..(1974)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1955)..(1974)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1975)..(1978)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1979)..(1980)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1983)..(1983)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1985)..(2004)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1985)..(2004)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2005)..(2008)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2009)..(2010)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2013)..(2013)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2015)..(2034)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2015)..(2034)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2035)..(2038)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2039)..(2040)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2043)..(2043)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2045)..(2064)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2045)..(2064)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2065)..(2068)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2069)..(2070)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2073)..(2073)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2075)..(2094)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2075)..(2094)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2095)..(2098)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2099)..(2100)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2103)..(2103)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2105)..(2124)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2105)..(2124)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2125)..(2128)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2129)..(2130)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2133)..(2133)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2135)..(2154)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2135)..(2154)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2155)..(2158)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2159)..(2160)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2163)..(2163)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2165)..(2184)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2165)..(2184)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2185)..(2188)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2189)..(2190)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2193)..(2193)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2195)..(2214)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2195)..(2214)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2215)..(2218)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2219)..(2220)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2223)..(2223)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2225)..(2244)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2225)..(2244)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2245)..(2248)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2249)..(2250)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2253)..(2253)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2255)..(2274)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2255)..(2274)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2275)..(2278)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2279)..(2280)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2283)..(2283)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2285)..(2304)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2285)..(2304)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2305)..(2308)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2309)..(2310)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2313)..(2313)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2315)..(2334)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2315)..(2334)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2335)..(2338)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2339)..(2340)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2343)..(2343)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2345)..(2364)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2345)..(2364)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2365)..(2368)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2369)..(2370)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2373)..(2373)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2375)..(2394)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2375)..(2394)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2395)..(2398)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2399)..(2400)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2403)..(2403)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2405)..(2424)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2405)..(2424)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2425)..(2428)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2429)..(2430)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2433)..(2433)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2435)..(2454)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2435)..(2454)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2455)..(2458)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2459)..(2460)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2463)..(2463)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2465)..(2484)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2465)..(2484)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2485)..(2488)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2489)..(2490)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2493)..(2493)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2495)..(2514)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2495)..(2514)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2515)..(2518)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2519)..(2520)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2523)..(2523)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (2525)..(2544)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2525)..(2544)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2545)..(2548)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2549)..(2550)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2553)..(2553)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (2555)..(2574)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2575)..(2578)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2579)..(2580)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2583)..(2583)
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<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
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<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2605)..(2608)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2609)..(2610)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2613)..(2613)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2615)..(2634)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2635)..(2638)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2639)..(2640)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2643)..(2643)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2665)..(2668)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
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<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2675)..(2694)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2675)..(2694)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2695)..(2698)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2699)..(2700)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2703)..(2703)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2705)..(2724)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2705)..(2724)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2725)..(2728)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2729)..(2730)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2733)..(2733)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (2735)..(2754)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2735)..(2754)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2755)..(2758)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2759)..(2760)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2765)..(2784)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2785)..(2788)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (2789)..(2790)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2795)..(2814)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2815)..(2818)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2819)..(2820)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2845)..(2848)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2849)..(2850)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
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<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2855)..(2874)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2855)..(2874)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2875)..(2878)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2879)..(2880)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2883)..(2883)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2885)..(2904)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2885)..(2904)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2905)..(2908)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2909)..(2910)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2913)..(2913)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2915)..(2934)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2915)..(2934)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2935)..(2938)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2939)..(2940)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (2943)..(2943)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (2945)..(2964)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2945)..(2964)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2965)..(2968)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2969)..(2970)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2973)..(2973)
<223> A, L, P, T or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2975)..(2994)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2975)..(2994)
<223> This region may encompass 3-20 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2995)..(2998)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GG, LS, APS, GAG, GGG, KPS, RPS, or GGGG
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2999)..(3000)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
S, D, T, N, L, DS, DT, LS, SS, ST, TN, or TS
<220>
<223> See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments
<400> 64
Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly
20 25 30
Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
35 40 45
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro
50 55 60
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
65 70 75 80
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa
85 90 95
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
100 105 110
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa
115 120 125
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
130 135 140
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
145 150 155 160
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
165 170 175
Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
180 185 190
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
195 200 205
Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
210 215 220
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
225 230 235 240
Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
245 250 255
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly
260 265 270
Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa
355 360 365
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly
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565 570 575
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
580 585 590
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa
595 600 605
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
610 615 620
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
625 630 635 640
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
645 650 655
Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
660 665 670
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
675 680 685
Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
690 695 700
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
705 710 715 720
Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
725 730 735
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly
740 745 750
Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
755 760 765
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro
770 775 780
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
785 790 795 800
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa
805 810 815
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
820 825 830
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa
835 840 845
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
850 855 860
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
865 870 875 880
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
885 890 895
Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
900 905 910
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1385 1390 1395
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1415 1420 1425
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1430 1435 1440
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1475 1480 1485
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1490 1495 1500
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1505 1510 1515
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1520 1525 1530
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1535 1540 1545
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
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Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1640 1645 1650
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1655 1660 1665
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1670 1675 1680
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1685 1690 1695
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1700 1705 1710
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1715 1720 1725
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1730 1735 1740
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1745 1750 1755
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1760 1765 1770
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1775 1780 1785
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1790 1795 1800
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1805 1810 1815
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1820 1825 1830
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1835 1840 1845
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1850 1855 1860
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1865 1870 1875
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1880 1885 1890
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1895 1900 1905
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1910 1915 1920
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1925 1930 1935
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1940 1945 1950
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1955 1960 1965
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
1970 1975 1980
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1985 1990 1995
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2000 2005 2010
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2015 2020 2025
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2030 2035 2040
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2045 2050 2055
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2060 2065 2070
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2075 2080 2085
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2090 2095 2100
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2105 2110 2115
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2120 2125 2130
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2135 2140 2145
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2150 2155 2160
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2165 2170 2175
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2180 2185 2190
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2195 2200 2205
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2210 2215 2220
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2225 2230 2235
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2240 2245 2250
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2255 2260 2265
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2270 2275 2280
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2285 2290 2295
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2300 2305 2310
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2315 2320 2325
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2330 2335 2340
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2360 2365 2370
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2375 2380 2385
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2390 2395 2400
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2405 2410 2415
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2420 2425 2430
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2435 2440 2445
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2450 2455 2460
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2465 2470 2475
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2480 2485 2490
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2510 2515 2520
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2525 2530 2535
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2540 2545 2550
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2570 2575 2580
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2585 2590 2595
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2600 2605 2610
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2660 2665 2670
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2675 2680 2685
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2690 2695 2700
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2720 2725 2730
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2735 2740 2745
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2750 2755 2760
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2765 2770 2775
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2780 2785 2790
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2795 2800 2805
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2810 2815 2820
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2825 2830 2835
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2840 2845 2850
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2855 2860 2865
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2870 2875 2880
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2885 2890 2895
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2900 2905 2910
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2915 2920 2925
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2930 2935 2940
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2945 2950 2955
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly Xaa
2960 2965 2970
Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2975 2980 2985
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2990 2995 3000
<210> 65
<211> 4000
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(4000)
<223> This sequence may encompass 1-100 "Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
Xaa Xaa Xaa Xaa" repeating units
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(5)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(5)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(10)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(40)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(40)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(45)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (42)..(45)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (46)..(50)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (51)..(80)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (51)..(80)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (82)..(85)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (82)..(85)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (86)..(90)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (91)..(120)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (91)..(120)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (122)..(125)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (122)..(125)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (126)..(130)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (131)..(160)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (131)..(160)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (162)..(165)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (162)..(165)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (166)..(170)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (171)..(200)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (171)..(200)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (202)..(205)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (202)..(205)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (206)..(210)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (211)..(240)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (211)..(240)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (242)..(245)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (242)..(245)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (246)..(250)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (251)..(280)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (251)..(280)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (282)..(285)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (282)..(285)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (286)..(290)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (291)..(320)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (291)..(320)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (322)..(325)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (322)..(325)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (326)..(330)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (331)..(360)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (331)..(360)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (362)..(365)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (362)..(365)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (366)..(370)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (371)..(400)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (371)..(400)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (402)..(405)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (402)..(405)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (406)..(410)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (411)..(440)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (411)..(440)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (442)..(445)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (442)..(445)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (446)..(450)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (451)..(480)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (451)..(480)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (482)..(485)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (482)..(485)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (486)..(490)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (491)..(520)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (491)..(520)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (522)..(525)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (522)..(525)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (526)..(530)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (531)..(560)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (531)..(560)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (562)..(565)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (562)..(565)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (566)..(570)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (571)..(600)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (571)..(600)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (602)..(605)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (602)..(605)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (606)..(610)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (611)..(640)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (611)..(640)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (642)..(645)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (642)..(645)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (646)..(650)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (651)..(680)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (651)..(680)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (682)..(685)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (682)..(685)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (686)..(690)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (691)..(720)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (691)..(720)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (722)..(725)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (722)..(725)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (726)..(730)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (731)..(760)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (731)..(760)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (762)..(765)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (762)..(765)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (766)..(770)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (771)..(800)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (771)..(800)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (802)..(805)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (802)..(805)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (806)..(810)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (811)..(840)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (811)..(840)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (842)..(845)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (842)..(845)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (846)..(850)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (851)..(880)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (851)..(880)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (882)..(885)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (882)..(885)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (886)..(890)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (891)..(920)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (891)..(920)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (922)..(925)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (922)..(925)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (926)..(930)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (931)..(960)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (931)..(960)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (962)..(965)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (962)..(965)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (966)..(970)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (971)..(1000)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (971)..(1000)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1002)..(1005)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1002)..(1005)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1006)..(1010)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1011)..(1040)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1011)..(1040)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1042)..(1045)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1042)..(1045)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1046)..(1050)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1051)..(1080)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1051)..(1080)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1082)..(1085)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1082)..(1085)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1086)..(1090)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1091)..(1120)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1091)..(1120)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1122)..(1125)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1122)..(1125)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1126)..(1130)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1131)..(1160)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1131)..(1160)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1162)..(1165)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1162)..(1165)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1166)..(1170)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1171)..(1200)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1171)..(1200)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1202)..(1205)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1202)..(1205)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1206)..(1210)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1211)..(1240)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1211)..(1240)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1242)..(1245)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1242)..(1245)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1246)..(1250)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<222> (1251)..(1280)
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<220>
<221> MOD_RES
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<220>
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
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<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1322)..(1325)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1326)..(1330)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<220>
<221> MOD_RES
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may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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may be absent in its entirety
<220>
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GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<220>
<221> MOD_RES
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may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
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GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<220>
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may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
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GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<220>
<221> MOD_RES
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may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1606)..(1610)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<220>
<221> MOD_RES
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<221> MISC_FEATURE
<222> (1642)..(1645)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1646)..(1650)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1651)..(1680)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1686)..(1690)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1691)..(1720)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1726)..(1730)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<221> MISC_FEATURE
<222> (1731)..(1760)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1766)..(1770)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1771)..(1800)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1806)..(1810)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1846)..(1850)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1851)..(1880)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1886)..(1890)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1922)..(1925)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1926)..(1930)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1962)..(1965)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1966)..(1970)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1971)..(2000)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2002)..(2005)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2002)..(2005)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2006)..(2010)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2011)..(2040)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2011)..(2040)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2042)..(2045)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2042)..(2045)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2046)..(2050)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2082)..(2085)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2086)..(2090)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2091)..(2120)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2122)..(2125)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2122)..(2125)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2126)..(2130)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2131)..(2160)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2131)..(2160)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2162)..(2165)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2162)..(2165)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2166)..(2170)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2171)..(2200)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2171)..(2200)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2202)..(2205)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2202)..(2205)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2206)..(2210)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2211)..(2240)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2211)..(2240)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2242)..(2245)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2242)..(2245)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2246)..(2250)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2251)..(2280)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2251)..(2280)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2282)..(2285)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2282)..(2285)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2286)..(2290)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2291)..(2320)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2291)..(2320)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2322)..(2325)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2322)..(2325)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2326)..(2330)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2331)..(2360)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2331)..(2360)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2362)..(2365)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2362)..(2365)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2366)..(2370)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2371)..(2400)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2371)..(2400)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
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may be absent in its entirety
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GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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may be absent in its entirety
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may be absent in its entirety
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may be absent in its entirety
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may be absent in its entirety
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may be absent in its entirety
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may be absent in its entirety
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may be absent in its entirety
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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may be absent in its entirety
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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may be absent in its entirety
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
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<220>
<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
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<221> MOD_RES
<222> (2966)..(2970)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<220>
<221> MOD_RES
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may be absent in its entirety
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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may be absent in its entirety
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<220>
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
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<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
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<223> Any amino acid
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
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<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
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<222> (3282)..(3285)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
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<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3291)..(3320)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3326)..(3330)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3362)..(3365)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3366)..(3370)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3371)..(3400)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3402)..(3405)
<223> Any amino acid
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<222> (3402)..(3405)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
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<222> (3406)..(3410)
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<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (3562)..(3565)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3562)..(3565)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3566)..(3570)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3571)..(3600)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3571)..(3600)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3602)..(3605)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3602)..(3605)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3606)..(3610)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3611)..(3640)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3611)..(3640)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3642)..(3645)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3646)..(3650)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3682)..(3685)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3686)..(3690)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3722)..(3725)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3726)..(3730)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3762)..(3765)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3766)..(3770)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
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<220>
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3806)..(3810)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3811)..(3840)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3846)..(3850)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
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<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
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<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3886)..(3890)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
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<223> Any amino acid
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<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3922)..(3925)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
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<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Any amino acid
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<222> (3931)..(3960)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3962)..(3965)
<223> This region may encompass 1-4 residues or this region
may be absent in its entirety
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3966)..(3970)
<223> This region may encompass one of the following sequences:
GQ, GN, RPG, RPGGQ, RPGGN, SSS, SKG, or SN
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3971)..(4000)
<223> Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3971)..(4000)
<223> This region may encompass 4-30 residues
<220>
<223> See specification as filed for detailed description of
substitutions and preferred embodiments
<400> 65
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3995 4000