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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024130220
(43)【公開日】2024-09-30
(54)【発明の名称】ケモカイン産生促進剤及びケモカイン産生促進用飲食品
(51)【国際特許分類】
A23L 33/135 20160101AFI20240920BHJP
A61K 35/744 20150101ALI20240920BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240920BHJP
【ＦＩ】
A23L33/135
A61K35/744
A61P37/04
【審査請求】未請求
【請求項の数】17
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023039835
(22)【出願日】2023-03-14
(71)【出願人】
【識別番号】305018395
【氏名又は名称】協同乳業株式会社
(71)【出願人】
【識別番号】521555579
【氏名又は名称】酪王協同乳業株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110002136
【氏名又は名称】弁理士法人たかはし国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】中村篤央
(72)【発明者】
【氏名】角沙樹
(72)【発明者】
【氏名】久米愛子
(72)【発明者】
【氏名】松本光晴
(72)【発明者】
【氏名】渡辺善久
【テーマコード（参考）】
4B018
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B018MD86
4B018ME14
4B018MF01
4B018MF06
4B018MF13
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC61
4C087CA09
4C087MA52
4C087NA14
4C087ZB09
(57)【要約】
【課題】ケモカインの産生を促進する新規な剤や組成物、特に飲食品の形態とすることにより、摂取することが容易なケモカイン産生促進剤やケモカイン産生促進用飲食品組成物を提供する。また、それらを用いたケモカイン産生促進用飲食品を提供する。
【解決手段】ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌、特に、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスに属する乳酸菌をケモカイン産生促進剤やケモカイン産生促進用飲食品組成物の有効成分として使用することにより上記課題を解決した。
【選択図】図６
【解決手段】ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌、特に、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスに属する乳酸菌をケモカイン産生促進剤やケモカイン産生促進用飲食品組成物の有効成分として使用することにより上記課題を解決した。
【選択図】図６
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌を有効成分とすることを特徴とするケモカイン産生促進剤。
【請求項2】
ＣＸＣケモカインの産生を促進する請求項１に記載のケモカイン産生促進剤。
【請求項3】
ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ９及びＣＸＣＬ１０より選ばれる１種以上のＣＸＣケモカインの産生を促進する請求項２に記載のケモカイン産生促進剤。
【請求項4】
ＣＣケモカインの産生を促進する請求項１に記載のケモカイン産生促進剤。
【請求項5】
ＣＣＬ３、ＣＣＬ４及びＣＣＬ５より選ばれる１種以上のＣＣケモカインの産生を促進する請求項４に記載のケモカイン産生促進剤。
【請求項6】
前記乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスに属する乳酸菌である請求項１ないし請求項５の何れかの請求項に記載のケモカイン産生促進剤。
【請求項7】
前記乳酸菌が、独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）における受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４の乳酸菌である請求項１ないし請求項５の何れかの請求項に記載のケモカイン産生促進剤。
【請求項8】
ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌を有効成分とすることを特徴とするケモカイン産生促進用飲食品組成物。
【請求項9】
ＣＸＣケモカインの産生を促進する請求項８に記載のケモカイン産生促進用飲食品組成物。
【請求項10】
ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ９及びＣＸＣＬ１０より選ばれる１種以上のＣＸＣケモカインの産生を促進する請求項９に記載のケモカイン産生促進用飲食品組成物。
【請求項11】
ＣＣケモカインの産生を促進する請求項８に記載のケモカイン産生促進用飲食品組成物。
【請求項12】
ＣＣＬ３、ＣＣＬ４及びＣＣＬ５より選ばれる１種以上のＣＣケモカインの産生を促進する請求項１１に記載のケモカイン産生促進用飲食品組成物。
【請求項13】
前記乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスに属する乳酸菌である請求項８ないし請求項１２の何れかの請求項に記載のケモカイン産生促進用飲食品組成物。
【請求項14】
前記乳酸菌が、独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）における受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４の乳酸菌である請求項８ないし請求項１２の何れかの請求項に記載のケモカイン産生促進用飲食品組成物。
【請求項15】
請求項８ないし請求項１２の何れかの請求項に記載のケモカイン産生促進用飲食品組成物を含有することを特徴とするケモカイン産生促進用飲食品。
【請求項16】
乳製品である請求項１５に記載のケモカイン産生促進用飲食品。
【請求項17】
発酵乳又は乳酸菌飲料である請求項１６に記載のケモカイン産生促進用飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、特定の種の乳酸菌を含有するケモカイン産生促進剤、ケモカイン産生促進用飲食品組成物、かかるケモカイン産生促進用飲食品組成物を含有するケモカイン産生促進用飲食品に関する。
【背景技術】
【0002】
ケモカインは、ケモタクティック（走化性）・サイトカインとして命名された低分子のサイトカインの一種であり、７回膜貫通ヘリックスを分子内に持つＧタンパク質共役レセプターを介してシグナル伝達を行う。ケモカインは、分子内のシステイン残基の存在形式でＣＸＣ（ＣＸＣＬ）、ＣＣ（ＣＣＬ）、ＣＸ３Ｃ（ＣＸ３ＣＬ）、Ｃ（ＸＣＬ）の４つのサブファミリーに分類され、約５０種のケモカインと約２０種のケモカイン受容体が同定され、更に多くの同定が試みられている。感染部位や炎症局所への白血球やリンパ球の遊走（走化）及び活性化の誘導がケモカインの最もよく知られた機能であるが、ケモカインは、遊走（走化）以外にも様々な免疫調整機能を有していることが報告され、免疫調整のターゲットとして注目されている。
【0003】
特許文献１には、インターロイキン２７を有効成分として含む、血管新生阻害剤が記載されており、血管新生の阻害は、インターロイキン２７が血管内皮細胞に作用して当該血管内皮細胞からのケモカインの産生を誘導することにより生じるものであるとされている。該血管新生阻害剤によって産生が誘導されるケモカインの具体例として、特許文献１には、ＩＰ－１０（ＣＸＣＬ１０）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、Ｉ－ＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）が記載されている。
【0004】
特許文献２には、ワクシニアウイルス接種炎症組織抽出物を有効成分として含有するケモカイン産生促進剤が記載されている。該ケモカイン産生促進剤によって産生が誘導されるケモカインの具体例として、特許文献２には、ＭＩＰ－１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ－１β（ＣＣＬ４）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）が記載されており、該ケモカイン産生促進剤はエイズ治療に有効であるとされている。
【0005】
特許文献３には、２－デオキシ－Ｄ－グルコース等の糖誘導体を含むケモカイン産生促進剤が記載されている。該ケモカイン産生促進剤によって産生が誘導されるケモカインの具体例として、特許文献３には、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１が記載されており、該ケモカイン産生促進剤は癌の微小環境における抗腫瘍免疫を増強することができるとされている。
【0006】
ケモカインの持つ免疫調整機能は、疾患の予防・治療等にも関わる可能性があり、ケモカインの産生を誘導することのできる新規な剤や組成物の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】特開２００６－３１５９８８号公報
【特許文献2】特開２０００－３３６０３４号公報
【特許文献3】特開２０２２－０７８３６２号公報
【特許文献4】特許第６５０５０１８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明は上記背景技術に鑑みてなされたものであり、その課題は、ケモカインの産生を促進する新規な剤や組成物、特に飲食品の形態とすることにより、摂取することが容易なケモカイン産生促進剤やケモカイン産生促進用飲食品組成物を提供することにあり、また、それらを用いたケモカイン産生促進用飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者は、上記の課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌には、ケモカインの産生を促進する作用があり、かかる乳酸菌は食経験が豊富であることから、ケモカイン産生促進用飲食品組成物に適していることを見出して、本発明を完成するに至った。
【0010】
すなわち、本発明は、ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌を有効成分とすることを特徴とするケモカイン産生促進剤を提供するものである。
【0011】
また、本発明は、ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌を有効成分とすることを特徴とするケモカイン産生促進用飲食品組成物を提供するものである。
【0012】
また、本発明は、前記のケモカイン産生促進用飲食品組成物を含有することを特徴とするケモカイン産生促進用飲食品を提供するものである。
【発明の効果】
【0013】
本発明によれば、ケモカインの産生を促進する新規な剤や組成物、特に飲食品の形態とすることにより、摂取することが容易なケモカイン産生促進剤やケモカイン産生促進用飲食品組成物や、それらを用いたケモカイン産生促進用飲食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】評価例１におけるＣＸＣＬ１の相対濃度の測定結果を示すグラフである。
【図2】評価例１におけるＣＸＣＬ９の相対濃度の測定結果を示すグラフである。
【図3】評価例１におけるＣＸＣＬ１０の相対濃度の測定結果を示すグラフである。
【図4】評価例１におけるＣＣＬ３とＣＣＬ４の相対濃度の合計値の測定結果を示すグラフである。
【図5】評価例１におけるＣＣＬ５の相対濃度の測定結果を示すグラフである。
【図6】評価例２におけるＣＣＬ３の濃度の測定結果を示すグラフである。
【図7】評価例２におけるＣＣＬ４の濃度の測定結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0015】
以下、本発明について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではなく、任意に変形して実施することができる。
【0016】
＜ケモカイン産生促進剤＞
本発明は、ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌を有効成分とすることを特徴とするケモカイン産生促進剤に関する。
本発明は、ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌を有効成分とすることを特徴とするケモカイン産生促進剤に関する。
【0017】
ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）は、ストレプトコッカス科に属すグラム陽性菌であるラクトコッカス（Lactococcus）属の乳酸菌の１種である。ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌は、従来、バター、チーズ、乳酸菌飲料等の飲食品に使用されており、食経験が豊富である。
【0018】
ラクトコッカス・ラクティスの亜種として、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス（Lactococcus lactis subsp. lactis）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエ（Lactococcus lactis subsp. hordniae）の２種が知られているが、何れも、本発明のケモカイン産生促進剤の有効成分となり得る。
本発明のケモカイン産生促進剤の有効成分である乳酸菌は、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスに属する乳酸菌であることが特に好ましい。
本発明のケモカイン産生促進剤の有効成分である乳酸菌は、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスに属する乳酸菌であることが特に好ましい。
【0019】
本発明のケモカイン産生促進剤の有効成分である、ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌の具体例としては、下記のものが挙げられる。
【0020】
＜（Ａ）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスに属する乳酸菌＞
（Ａ１）独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）における受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４の乳酸菌
（Ａ２）ＪＣＭ５８０５株
（Ａ３）ＪＣＭ１１５８株
（Ａ４）ＪＣＭ７６３８株
（Ａ５）ＪＣＭ１２６５０株
（Ａ６）ＪＣＭ２０１０１株
（Ａ７）ＪＣＭ２０１２８株
（Ａ８）ＪＣＭ２０３１２株
（Ａ９）ＪＣＭ２０３９９株
（Ａ１０）ＡＴＣＣ１９４３５株
（Ａ１１）ＡＴＣＣ１５５７７株
（Ａ１２）ＡＴＣＣ１１４５４株
（Ａ１３）ＡＴＣＣ７９６２株
（Ａ１４）ＡＴＣＣ１５３４６株
（Ａ１５）ＡＴＣＣ２９１４６株
（Ａ１６）ＡＴＣＣ１１００７株
（Ａ１７）ＡＴＣＣｂａａ－１０５５株
（Ａ１８）ＡＴＣＣ１３６７５株
（Ａ１９）ＡＴＣＣ１１９５５株
（Ａ２０）ＡＴＣＣ７９６３株
（Ａ２１）ＡＴＣＣ１２９２９株
（Ａ２２）ＡＴＣＣ２７８６１株
（Ａ２３）ＤＳＭ２０４８１株
（Ａ２４）ＤＳＭ２０１７５株
（Ａ２５）ＤＳＭ４３６６株
（Ａ２６）ＤＳＭ２０２５０株
（Ａ２７）ＤＳＭ２０３８４株
（Ａ２８）ＤＳＭ２０４８１株
（Ａ２９）ＤＳＭ２０６６１株
（Ａ３０）ＤＳＭ２０７２９株
（Ａ３１）ＤＳＭ２７３０３株
（Ａ３２）ＤＳＭ３０８６３株
（Ａ３３）ＤＳＭ１１００８２株
（Ａ３４）ＤＳＭ１１１８３２株
（Ａ３５）ＤＳＭ１１１８６８株
（Ａ３６）ＤＳＭ１１１８６９株
（Ａ３７）ＤＳＭ１１１８７０株
（Ａ３８）ＮＢＲＣ１００９３３株
（Ａ３９）ＮＢＲＣ１２００７株
（Ａ４０）ＮＢＲＣ１１４７１４株
（Ａ４１）ＮＢＲＣ１１４７８４株
（Ａ４２）ＮＲＩＣ１１４９株
（Ａ４３）ＮＲＩＣ１０７４株
（Ａ４４）ＮＲＩＣ１１５０株
（Ａ４５）ＮＲＩＣ０４９７株
（Ａ４６）ＮＲＩＣ１１４７株
（Ａ４７）ＮＲＩＣ１１４８株
（Ａ１）独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）における受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４の乳酸菌
（Ａ２）ＪＣＭ５８０５株
（Ａ３）ＪＣＭ１１５８株
（Ａ４）ＪＣＭ７６３８株
（Ａ５）ＪＣＭ１２６５０株
（Ａ６）ＪＣＭ２０１０１株
（Ａ７）ＪＣＭ２０１２８株
（Ａ８）ＪＣＭ２０３１２株
（Ａ９）ＪＣＭ２０３９９株
（Ａ１０）ＡＴＣＣ１９４３５株
（Ａ１１）ＡＴＣＣ１５５７７株
（Ａ１２）ＡＴＣＣ１１４５４株
（Ａ１３）ＡＴＣＣ７９６２株
（Ａ１４）ＡＴＣＣ１５３４６株
（Ａ１５）ＡＴＣＣ２９１４６株
（Ａ１６）ＡＴＣＣ１１００７株
（Ａ１７）ＡＴＣＣｂａａ－１０５５株
（Ａ１８）ＡＴＣＣ１３６７５株
（Ａ１９）ＡＴＣＣ１１９５５株
（Ａ２０）ＡＴＣＣ７９６３株
（Ａ２１）ＡＴＣＣ１２９２９株
（Ａ２２）ＡＴＣＣ２７８６１株
（Ａ２３）ＤＳＭ２０４８１株
（Ａ２４）ＤＳＭ２０１７５株
（Ａ２５）ＤＳＭ４３６６株
（Ａ２６）ＤＳＭ２０２５０株
（Ａ２７）ＤＳＭ２０３８４株
（Ａ２８）ＤＳＭ２０４８１株
（Ａ２９）ＤＳＭ２０６６１株
（Ａ３０）ＤＳＭ２０７２９株
（Ａ３１）ＤＳＭ２７３０３株
（Ａ３２）ＤＳＭ３０８６３株
（Ａ３３）ＤＳＭ１１００８２株
（Ａ３４）ＤＳＭ１１１８３２株
（Ａ３５）ＤＳＭ１１１８６８株
（Ａ３６）ＤＳＭ１１１８６９株
（Ａ３７）ＤＳＭ１１１８７０株
（Ａ３８）ＮＢＲＣ１００９３３株
（Ａ３９）ＮＢＲＣ１２００７株
（Ａ４０）ＮＢＲＣ１１４７１４株
（Ａ４１）ＮＢＲＣ１１４７８４株
（Ａ４２）ＮＲＩＣ１１４９株
（Ａ４３）ＮＲＩＣ１０７４株
（Ａ４４）ＮＲＩＣ１１５０株
（Ａ４５）ＮＲＩＣ０４９７株
（Ａ４６）ＮＲＩＣ１１４７株
（Ａ４７）ＮＲＩＣ１１４８株
【0021】
＜（Ｂ）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエに属する乳酸菌＞
（Ｂ１）ＪＣＭ１１８０株
（Ｂ２）ＪＣＭ１１０４０株
（Ｂ３）ＡＴＣＣ２９０７１株
（Ｂ４）ＤＳＭ２０４５０株
（Ｂ５）ＮＢＲＣ１００９３１株
（Ｂ１）ＪＣＭ１１８０株
（Ｂ２）ＪＣＭ１１０４０株
（Ｂ３）ＡＴＣＣ２９０７１株
（Ｂ４）ＤＳＭ２０４５０株
（Ｂ５）ＮＢＲＣ１００９３１株
【0022】
上記（Ａ２）～（Ａ９）、（Ｂ１）、（Ｂ２）の乳酸菌は、理化学研究所・バイオリソースセンター・微生物材料開発室より入手可能である。
上記（Ａ１０）～（Ａ２２）、（Ｂ３）の乳酸菌は、ＡＴＣＣ（American Type Culture Collection）（米国）より入手可能である。
上記（Ａ２３）～（Ａ３７）、（Ｂ４）の乳酸菌は、ＤＭＳＺ（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen）（ドイツ）より入手可能である。
上記（Ａ３８）～（Ａ４１）、（Ｂ５）の乳酸菌は、独立行政法人製品評価技術基盤機構・バイオテクノロジーセンターより入手可能である。
上記（Ａ４２）～（Ａ４７）の乳酸菌は、東京農業大学・微生物リソースセンターより入手可能である。
上記（Ａ１０）～（Ａ２２）、（Ｂ３）の乳酸菌は、ＡＴＣＣ（American Type Culture Collection）（米国）より入手可能である。
上記（Ａ２３）～（Ａ３７）、（Ｂ４）の乳酸菌は、ＤＭＳＺ（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen）（ドイツ）より入手可能である。
上記（Ａ３８）～（Ａ４１）、（Ｂ５）の乳酸菌は、独立行政法人製品評価技術基盤機構・バイオテクノロジーセンターより入手可能である。
上記（Ａ４２）～（Ａ４７）の乳酸菌は、東京農業大学・微生物リソースセンターより入手可能である。
【0023】
なお、同一の菌株が、複数の機関から入手可能であり、それぞれの機関において別々の番号が付されている場合がある。
上記のラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌の具体例の中には、同一の菌株が別々の番号を付されて重複して記載されているものがある。
上記のラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌の具体例の中には、同一の菌株が別々の番号を付されて重複して記載されているものがある。
【0024】
独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）における受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４の乳酸菌は、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスに属する乳酸菌であり、その詳細は、特許文献４に記載されている。
以下、「独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）における受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４の乳酸菌」を、「１１／１９－Ｂ１株」又は「１１／１９－Ｂ１」と記述する場合がある。
以下、「独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）における受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４の乳酸菌」を、「１１／１９－Ｂ１株」又は「１１／１９－Ｂ１」と記述する場合がある。
【0025】
１１／１９－Ｂ１株は、千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８、独立行政法人製品評価技術基盤機構（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ、以下、「ＮＩＴＥ」と略記する）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）に国内寄託され、受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０１６９４（寄託日：２０１３年８月２０日）として受託された微生物である。
１１／１９－Ｂ１株は、その後、千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８、独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）に、原寄託申請書を提出して、国内寄託（原寄託日：２０１３年８月２０日）から、ブダペスト条約に基づく寄託への移管申請を行い（移管日（国際寄託日）：２０１４年１０月１５日）、生存が証明され、ブダペスト条約に基づく寄託（国際寄託）への移管申請が受領された結果、受託番号「ＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４」を付与された。
１１／１９－Ｂ１株は、その後、千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８、独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）に、原寄託申請書を提出して、国内寄託（原寄託日：２０１３年８月２０日）から、ブダペスト条約に基づく寄託への移管申請を行い（移管日（国際寄託日）：２０１４年１０月１５日）、生存が証明され、ブダペスト条約に基づく寄託（国際寄託）への移管申請が受領された結果、受託番号「ＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４」を付与された。
【0026】
本発明のケモカイン産生促進剤が産生を促進するケモカインの種類について、特に限定はなく、本発明のケモカイン産生促進剤は、ＣＸＣケモカイン、ＣＣケモカイン、ＣＸ３Ｃケモカイン、Ｃケモカインの産生を促進することができる。
【0027】
更に具体的には、本発明のケモカイン産生促進剤が産生を促進するＣＸＣケモカインとしては、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１が例示できる。
【0028】
ＣＸＣＬ１は、主にマクロファージ、好中球及び上皮細胞から産生され、主に好中球の活性化を誘導する。ＣＸＣＬ１は、炎症反応、創傷治癒に関与している。
【0029】
ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１は主に単球、内皮細胞、線維芽細胞から産生され、単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞の遊走や活性化、分化に関与している。ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１は抗腫瘍免疫にとって重要な免疫応答であり、癌免疫療法への利用が検討されている。更に、ＣＸＣＬ１０については、抗腫瘍免疫だけでなく抗ウイルス感染へも関与している。
【0030】
また、本発明のケモカイン産生促進剤が産生を促進するＣＣケモカインとしては、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５が例示できる。
【0031】
ＣＣＬ３、ＣＣＬ４は、単球、マクロファージ、樹状細胞及び上皮細胞により産生され、単球、好中球、好酸球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、メモリーＴ細胞の遊走や活性化に関与している。また、ＣＣＬ５は主にＴ細胞や単球によって産生され、主に好酸球と好塩基球の遊走やＴ細胞の活性化に関与している。ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５は、抗腫瘍作用や抗感染作用を有することが報告されている。
【0032】
本発明のケモカイン産生促進剤は、有効成分である「ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌」を種々の状態で含むことができる。
【0033】
本発明のケモカイン産生促進剤は、「ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌」を、生菌の状態で含有してもよいし、死菌の状態で含有してもよい。
例えば、本発明のケモカイン産生促進剤の有効成分として、生菌体、湿潤菌、乾燥菌等が適宜使用可能である。また、本発明のケモカイン産生促進剤の有効成分として、加熱殺菌処理、放射線殺菌処理、破砕処理等を施した死菌も適宜使用可能である。
例えば、本発明のケモカイン産生促進剤の有効成分として、生菌体、湿潤菌、乾燥菌等が適宜使用可能である。また、本発明のケモカイン産生促進剤の有効成分として、加熱殺菌処理、放射線殺菌処理、破砕処理等を施した死菌も適宜使用可能である。
【0034】
本発明のケモカイン産生促進剤は、「ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌」の生菌又は死菌に、種々の処理を施した処理物を含有していてもよい。
かかる処理物としては、例えば、培養物；濃縮物；ペースト化物；噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物等の乾燥物；液状化物；希釈物；破砕物；殺菌加工物；該培養物からの抽出物；等が挙げられる。
かかる処理物としては、例えば、培養物；濃縮物；ペースト化物；噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物等の乾燥物；液状化物；希釈物；破砕物；殺菌加工物；該培養物からの抽出物；等が挙げられる。
【0035】
本発明のケモカイン産生促進剤における、「ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌」の含有量（生菌、死菌、処理物を合計した含有量）は、特に制限がなく、目的に応じて適宜選択することができるが、乾燥重量にして０．００００１質量％以上であることが好ましく、０．００００５質量％以上であることがより好ましく、０．０００１質量％以上であることが特に好ましく、０．００１質量％以上であることが更に好ましい。また、１００質量％以下であることが好ましく、９９質量％以下であることがより好ましく、９５質量％以下であることが特に好ましく、９０質量％以下であることが更に好ましい。
【0036】
本発明のケモカイン産生促進剤は、有効成分である「ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌」に加えて、「その他の成分」を含有することができる。
「その他の成分」としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、凍結乾燥等の加工を行う際の添加剤、薬学的に許容され得る担体が「その他の成分」の例として挙げられる。
かかる担体としては、特に制限はなく、例えば、後述する剤型等に応じて適宜選択することができる。
「その他の成分」としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、凍結乾燥等の加工を行う際の添加剤、薬学的に許容され得る担体が「その他の成分」の例として挙げられる。
かかる担体としては、特に制限はなく、例えば、後述する剤型等に応じて適宜選択することができる。
【0037】
本発明のケモカイン産生促進剤が含有する「その他の成分」には、意図的に添加する成分のみならず、「ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌」が産生することによって生じる成分も含まれる。かかる成分として、例えば、デキストランが挙げられる。
【0038】
本発明のケモカイン産生促進剤が含有する「その他の成分」の含有量に、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0039】
本発明のケモカイン産生促進剤の剤型としては、特に制限はなく、例えば、後述するような所望の投与方法に応じて適宜選択することができる。
具体的には、例えば、経口固形剤（錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等）、経口液剤（内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等）、注射剤（溶剤、懸濁剤等）、軟膏剤、貼付剤、ゲル剤、クリーム剤、外用散剤、スプレー剤、吸入散布剤等が挙げられる。
具体的には、例えば、経口固形剤（錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等）、経口液剤（内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等）、注射剤（溶剤、懸濁剤等）、軟膏剤、貼付剤、ゲル剤、クリーム剤、外用散剤、スプレー剤、吸入散布剤等が挙げられる。
【0040】
前記経口固形剤としては、例えば、前記有効成分に、賦形剤、更には必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤等の添加剤を加え、常法により製造することができる。
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。
前記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。
前記崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。
前記滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。
前記着色剤としては、例えば、酸化チタン、酸化鉄等が挙げられる。
前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。
前記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。
前記崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。
前記滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。
前記着色剤としては、例えば、酸化チタン、酸化鉄等が挙げられる。
前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【0041】
前記経口液剤としては、例えば、前記有効成分に、矯味・矯臭剤、緩衝剤、安定化剤等の添加剤を加え、常法により製造することができる。
前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
前記安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
前記安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【0042】
前記注射剤としては、例えば、前記有効成分に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下用、筋肉内用、静脈内用等の注射剤を製造することができる。
前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。
前記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。
前記等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
前記局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。
前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。
前記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。
前記等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
前記局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。
【0043】
前記軟膏剤としては、例えば、前記有効成分に、公知の基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等を配合し、常法により混合し、製造することができる。
前記基剤としては、例えば、流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィン等が挙げられる。
前記保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。
前記基剤としては、例えば、流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィン等が挙げられる。
前記保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。
【0044】
前記貼付剤としては、例えば、公知の支持体に前記軟膏剤としてのクリーム剤、ゲル剤、ペースト剤等を、常法により塗布し、製造することができる。
前記支持体としては、例えば、綿、スフ、化学繊維等からなる織布又は不織布；軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルム又は発泡体シート等が挙げられる。
前記支持体としては、例えば、綿、スフ、化学繊維等からなる織布又は不織布；軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルム又は発泡体シート等が挙げられる。
【0045】
本発明のケモカイン産生促進剤の投与対象としては、特に制限はないが、例えば、ヒト；マウス；ラット；サル；ウマ；ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、ニワトリ等の家畜；ネコ、イヌ、ウサギ、ハムスター等のペット；等が挙げられる。
【0046】
本発明のケモカイン産生促進剤の投与方法としては、特に制限はなく、剤型等に応じ、適宜選択することができる。具体的には、経口投与、腹腔内投与、血液中への注射、腸内への注入等が挙げられる。
【0047】
本発明のケモカイン産生促進剤の投与量としては、特に制限はなく、投与対象である個体の年齢、体重、所望の効果の程度等に応じて適宜選択することができるが、例えば、成人への１日の投与量は、有効成分の乾燥重量として、０．０００１ｍｇ以上であることが好ましく、０．００１ｍｇ以上であることがより好ましく、０．０１ｍｇ以上であることが特に好ましい。また、１０ｇ以下であることが好ましく、２ｇ以下であることがより好ましく、０．５ｇ以下であることが特に好ましい。
【0048】
本発明のケモカイン産生促進剤の投与時期としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、予防的に投与されてもよいし、治療的に投与されてもよい。
【0049】
＜ケモカイン産生促進用飲食品組成物＞
本発明は、ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌を有効成分とすることを特徴とするケモカイン産生促進用飲食品組成物にも関する。
すなわち、前記した本発明のケモカイン産生促進剤は、飲食品に添加する用途に使用することができる。
本発明のケモカイン産生促進用飲食品組成物の詳細については、前記したケモカイン産生促進剤と同様である。
本発明は、ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌を有効成分とすることを特徴とするケモカイン産生促進用飲食品組成物にも関する。
すなわち、前記した本発明のケモカイン産生促進剤は、飲食品に添加する用途に使用することができる。
本発明のケモカイン産生促進用飲食品組成物の詳細については、前記したケモカイン産生促進剤と同様である。
【0050】
＜ケモカイン産生促進用飲食品＞
本発明は、前記のケモカイン産生促進用飲食品組成物を含有することを特徴とするケモカイン産生促進用飲食品にも関する。
本発明は、前記のケモカイン産生促進用飲食品組成物を含有することを特徴とするケモカイン産生促進用飲食品にも関する。
【0051】
本発明のケモカイン産生促進用飲食品は、前記したケモカイン産生促進用飲食品組成物に加えて、更に、「その他の成分」を含有することができる。
【0052】
本発明のケモカイン産生促進用飲食品における、前記「その他の成分」としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で目的に応じて適宜選択することができ、例えば、各種食品原料等が挙げられる。また、「その他の成分」の含有量は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0053】
本発明のケモカイン産生促進用飲食品は、チルド製品（０℃以上１０℃以下の温度で保存される製品）であってもよいし、チルド製品以外（冷凍保存される製品、常温保存される製品等）であってもよい。
【0054】
本発明のケモカイン産生促進用飲食品の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ゼリー、キャンディー、チョコレート、ビスケット、氷菓等の菓子類；緑茶、紅茶、コーヒー、清涼飲料等の嗜好飲料；発酵乳（ハードヨーグルト、ソフトヨーグルト、ドリンクヨーグルト、フローズンヨーグルト等）、乳酸菌飲料、プリン、アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス等の乳製品；野菜飲料、果実飲料、ジャム類等の野菜・果実加工品；スープ等の液体食品；パン類、麺類等の穀物加工品；各種調味料；特定保健用食品；栄養機能食品等が挙げられる。
中でも、発酵乳、乳酸菌飲料等の乳製品が好ましい。
中でも、発酵乳、乳酸菌飲料等の乳製品が好ましい。
【0055】
本発明のケモカイン産生促進用飲食品は、例えば、錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口固形剤や、内服液剤、シロップ剤等の経口液剤として製造されたものであってもよい。前記経口固形剤、前記経口液剤の製造方法は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記した薬剤の経口固形剤、経口液剤の製造方法にならい、製造することができる。
【0056】
本発明のケモカイン産生促進用飲食品における「ラクトコッカス・ラクティスに属する乳酸菌」の含有量（生菌、死菌、処理物を合計した含有量）は、ケモカイン産生促進用飲食品１００ｇあたり０．１μｇ以上であることが好ましく、１μｇ以上であることがより好ましく、５μｇ以上であることが特に好ましく、１０μｇ以上であることが更に好ましい。また、１００ｇ以下であることが好ましく、１０ｇ以下であることがより好ましく、５ｇ以下であることが特に好ましく、１ｇ以下であることが更に好ましい。
【実施例0057】
以下に、実施例及び比較例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限りこれらの実施例に限定されるものではない。
【0058】
［菌体の調製］
表１に示す公知の乳酸菌株を使用し、各菌株の性質に合わせて培養した。Bifidobacterium animalis subsp. lactis（ＬＫＭ１０１１４）は、嫌気条件下で培養するためにアネロパック（三菱ガス化学社製）を使用した。
表１に示す公知の乳酸菌株を使用し、各菌株の性質に合わせて培養した。Bifidobacterium animalis subsp. lactis（ＬＫＭ１０１１４）は、嫌気条件下で培養するためにアネロパック（三菱ガス化学社製）を使用した。
【0059】
【表1】
【0060】
表１における「１１／１９－Ｂ１」は、「独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）における受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４の乳酸菌」である。
【0061】
５００ｍＬ三角フラスコに２００ｍＬの液体培地を作製し、寒天培地で培養しておいた各菌株のコロニーを液体培地に懸濁し２００μＬ添加した後、４８時間静置培養した。菌株毎に２００ｍＬを２本ずつ培養し、培養後２本をまとめて処理した。培養４８時間後に培養液を回収し、４℃、３０００×ｇで２０分間遠心を行い、培地を除去し、菌体ペレットを３０ｍＬの氷冷生理食塩水に懸濁にした。４℃、２９００×ｇで２０分間遠心分離を行い、遠心後に上清を捨てて３０ｍＬのｍｉｌｌｉＱ水（「ｍｉｌｌｉＱ」は登録商標。）に懸濁し、再度同条件で遠心分離を行うことで菌体の洗浄を行った。上清を捨てて１０ｍＬ氷冷ｍｉｌｌｉＱ水に懸濁後、沸騰水中に１０分間浸漬することで加熱殺菌を行い、氷冷した後ディープフリーザーで凍結させ、その後凍結乾燥処理をすることで加熱死菌体粉末を得た。加熱死菌体粉末を秤量し、２ｍｇ（菌体乾燥重量換算）／ｍＬとなるようにDulbecco's phosphate buffered saline（Ｄ－ＰＢＳ）に懸濁し、死菌体調製液とし使用するまで－８０℃で保存した。
【0062】
評価例１（ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を使用した試験）
［ヒトＰＢＭＣの前培養］
正常ヒトＰＢＭＣ（Precision for Medicine社：精製済、ＨＬＡタイプなし）凍結ストックを３７℃のウォーターバスで融解し、１０％ＦＢＳ及び抗生物質－抗真菌剤混合溶液を含むＲＰＭＩ１６４０培地（ナカライテスク社製）に懸濁した。細胞懸濁液を遠心分離後に上清を除き、１０％ＦＢＳ、抗生物質－抗真菌剤混合溶液、及び０．１ｍｇ／ｍＬのＤＮａｓｅＩを含むＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁し、室温で１５分間静置した。１０％ＦＢＳ及び抗生物質－抗真菌剤混合溶液を含むＲＰＭＩ１６４０培地を追加し、遠心分離後に上清を除き、１０％ＦＢＳ及び抗生物質－抗真菌剤混合溶液（ナカライテスク社製）を含むＲＰＭＩ１６４０培地５ｍＬに懸濁した。細胞懸濁液は６０ｍｍ径の細胞培養ディッシュに全量播種し、３７℃のインキュベーター（ＣＯ２濃度５％）で２４時間前培養した。前培養後に遠心分離し、１０％ＦＢＳ及び抗生物質－抗真菌剤混合溶液を含むＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁し、試験に供した。
［ヒトＰＢＭＣの前培養］
正常ヒトＰＢＭＣ（Precision for Medicine社：精製済、ＨＬＡタイプなし）凍結ストックを３７℃のウォーターバスで融解し、１０％ＦＢＳ及び抗生物質－抗真菌剤混合溶液を含むＲＰＭＩ１６４０培地（ナカライテスク社製）に懸濁した。細胞懸濁液を遠心分離後に上清を除き、１０％ＦＢＳ、抗生物質－抗真菌剤混合溶液、及び０．１ｍｇ／ｍＬのＤＮａｓｅＩを含むＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁し、室温で１５分間静置した。１０％ＦＢＳ及び抗生物質－抗真菌剤混合溶液を含むＲＰＭＩ１６４０培地を追加し、遠心分離後に上清を除き、１０％ＦＢＳ及び抗生物質－抗真菌剤混合溶液（ナカライテスク社製）を含むＲＰＭＩ１６４０培地５ｍＬに懸濁した。細胞懸濁液は６０ｍｍ径の細胞培養ディッシュに全量播種し、３７℃のインキュベーター（ＣＯ２濃度５％）で２４時間前培養した。前培養後に遠心分離し、１０％ＦＢＳ及び抗生物質－抗真菌剤混合溶液を含むＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁し、試験に供した。
【0063】
［菌体によるヒトＰＢＭＣの刺激］
２４ウェルプレートに生細胞数が１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるようにヒトＰＢＭＣを播種し（５００μＬ／ｗｅｌｌ）、そこに各死菌体調製液が１０μｇ／ｍＬ（終濃度）となるように添加し３７℃のインキュベーター（ＣＯ２濃度５％）で４８時間培養した。また、対照実験（Ｃｏｎｔｒｏｌ）では、各死菌体調製液に代えて、Ｄ－ＰＢＳのみを添加し、同様に４８時間培養した。
２４ウェルプレートに生細胞数が１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるようにヒトＰＢＭＣを播種し（５００μＬ／ｗｅｌｌ）、そこに各死菌体調製液が１０μｇ／ｍＬ（終濃度）となるように添加し３７℃のインキュベーター（ＣＯ２濃度５％）で４８時間培養した。また、対照実験（Ｃｏｎｔｒｏｌ）では、各死菌体調製液に代えて、Ｄ－ＰＢＳのみを添加し、同様に４８時間培養した。
【0064】
［培養上清中のケモカイン濃度の測定］
３人分の培養上清をプールしproteome profiler human xl cytokine array kit（Ｒ＆Ｄ社製）を使用して、上清中のケモカイン（ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ９、ＣＫＣＬ１０、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５）の相対濃度を測定した。解析にはＨＬＩｍａｇｅ＋＋ Ｑｕｉｃｋ ｓｐｏｔ Ｔｏｏｌソフト（western vision software社製）を用いた。
結果を図１～５に示す。
３人分の培養上清をプールしproteome profiler human xl cytokine array kit（Ｒ＆Ｄ社製）を使用して、上清中のケモカイン（ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ９、ＣＫＣＬ１０、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５）の相対濃度を測定した。解析にはＨＬＩｍａｇｅ＋＋ Ｑｕｉｃｋ ｓｐｏｔ Ｔｏｏｌソフト（western vision software社製）を用いた。
結果を図１～５に示す。
【0065】
評価例２（マウス生体内での試験）
［マウス生体への菌体の投与］
雌性のＢＡＬＢ／ｃマウス（ジャクソンラボラトリージャパン株式会社）を用い、８週齢時よりＤ－ＰＢＳに懸濁した死菌体調製液２００μＬ（２×１０９）を２週間毎日ゾンデにて経口投与した。対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）はＤ－ＰＢＳを同量投与した。投与２週間後に小腸を採取した。ＮＰ４０（終濃度０．０５％）を添加したＤ－ＰＢＳを組織重量の９倍量添加し、バイオマッシャーＩＩ（ニッピ社製）で破砕後、４℃、２０４００×ｇで１０分間遠心分離し、上清を組織抽出液とした。
［マウス生体への菌体の投与］
雌性のＢＡＬＢ／ｃマウス（ジャクソンラボラトリージャパン株式会社）を用い、８週齢時よりＤ－ＰＢＳに懸濁した死菌体調製液２００μＬ（２×１０９）を２週間毎日ゾンデにて経口投与した。対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）はＤ－ＰＢＳを同量投与した。投与２週間後に小腸を採取した。ＮＰ４０（終濃度０．０５％）を添加したＤ－ＰＢＳを組織重量の９倍量添加し、バイオマッシャーＩＩ（ニッピ社製）で破砕後、４℃、２０４００×ｇで１０分間遠心分離し、上清を組織抽出液とした。
【0066】
［組織抽出液のＣＣＬ３濃度の測定］
MIP-1a (CCL3) Mouse ELISA Kit（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて組織抽出液のＣＣＬ３濃度を測定した。
結果を図６に示す。
MIP-1a (CCL3) Mouse ELISA Kit（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて組織抽出液のＣＣＬ３濃度を測定した。
結果を図６に示す。
【0067】
【産業上の利用可能性】
【0068】
本発明のケモカイン産生促進剤（ケモカイン産生促進用飲食品組成物）は、飲食品に添加して使用することができ、発酵乳、プリン、乳酸菌飲料、アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス、氷菓等の飲食品の生産等に広く利用されるものである。
【受託番号】
【0069】
ＮＩＴＥ ＢＰ－０１６９４
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】