特開 2024-133514 高純度ステビオール配糖体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024133514

(43)【公開日】2024-10-02

(54)【発明の名称】高純度ステビオール配糖体

(51)【国際特許分類】

   C07H 15/256 20060101AFI20240925BHJP

【ＦＩ】

C07H15/256 A CSP

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024099724

(22)【出願日】2024-06-20

(62)【分割の表示】P 2020566207の分割

【原出願日】2019-06-07

(31)【優先権主張番号】62/682,461

(32)【優先日】2018-06-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】520108877

【氏名又は名称】ピュアサークル ユーエスエー インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(72)【発明者】

【氏名】マルコシヤン、アヴェティック

(72)【発明者】

【氏名】ラマンダッシュ、サラヴァンナン、エーエル

(72)【発明者】

【氏名】アフザールビンハシム、モハマド

(72)【発明者】

【氏名】チャクハン、クリスティナ

(72)【発明者】

【氏名】ニザームビンナウィ、カイルル

(72)【発明者】

【氏名】チョウ、シュウ、イン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】高度に精製されたステビオール配糖体、およびその調製方法を提供する。
【解決手段】例えば以下の式を有するレバウジオシドＮ２が示される。その調製方法は、様々な出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換するための酵素調製物及び組み換え微生物を利用することを含む。

【選択図】図１ｃ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式を有するレバウジオシドＮ２。

【化1】

【請求項2】

以下の式を有するレバウジオシドＯ４。

【化2】

【請求項3】

請求項１に記載の高度に精製されたレバウジオシドＮ２を産生するための方法であって、
ａ．少なくとも１つの炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ、並びに任意にＵＤＰ－グルコース及びＵＤＰ－ラムノースリサイクル酵素から選択される少なくとも１つの酵素を含有する酵素調製物又は微生物を提供する工程と、
ｃ．前記酵素調製物又は微生物を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、レバウジオシドＮ２を含む培地を産生する工程と、を含む、方法。

【請求項4】

請求項２に記載の高度に精製されたレバウジオシドＯ４を産生するための方法であって、
ａ．少なくとも１つの炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ、並びに任意にＵＤＰ－グルコース及びＵＤＰ－ラムノースリサイクル酵素から選択される少なくとも１つの酵素を含有する酵素調製物又は微生物を提供する工程と、
ｃ．前記酵素調製物又は微生物を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、レバウジオシドＯ４を含む培地を産生する工程と、を含む、方法。

【請求項5】

請求項１に記載の高度に精製されたレバウジオシドＮ２を産生するための方法であって、
ａ．少なくとも１つの炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ、並びに任意にＵＤＰ－グルコース及びＵＤＰ－ラムノースリサイクル酵素から選択される少なくとも１つの酵素を含む生体酵素を提供する工程と、
ｃ．前記生体酵素を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、レバウジオシドＮ２を含む培地を産生する工程と、を含む、方法。

【請求項6】

請求項２に記載の高度に精製されたレバウジオシドＯ４を産生するための方法であって、
ａ．少なくとも１つの炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ、並びに任意にＵＤＰ－グルコース及びＵＤＰ－ラムノースリサイクル酵素から選択される少なくとも１つの酵素を含む生体酵素を提供する工程と、
ｃ．前記生体酵素を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、レバウジオシドＯ４を含む培地を産生する工程と、を含む、方法。

【請求項7】

更に、
ｄ．前記レバウジオシドＮ２を前記培地から分離して、高度に精製されたレバウジオシドＮ２組成物を提供する工程を含む、請求項３又は５に記載の方法。

【請求項8】

更に、
ｄ．前記レバウジオシドＯ４を前記培地から分離して、高度に精製されたレバウジオシドＯ４組成物を提供する工程を含む、請求項４又は６に記載の方法。

【請求項9】

前記出発組成物が、ステビオール、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、他のステビオール配糖体、ポリオール、炭水化物、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３、４、５又は６に記載の方法。

【請求項10】

前記微生物が、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、及びヤロウィア属（Yarrowia sp.）からなる群から選択される、請求項３又は４に記載の方法。

【請求項11】

前記生体触媒が、前記出発組成物をレバウジオシドＮ２に変換することができる酵素、又は１つ以上の酵素を含む細胞である、請求項５に記載の方法。

【請求項12】

前記生体触媒が、前記出発組成物をレバウジオシドＯ４に変換することができる酵素、又は１つ以上の酵素を含む細胞である、請求項６に記載の方法。

【請求項13】

前記酵素が、メバロン酸（ＭＶＡ）経路酵素、２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトール－４－リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３－ヒドロキシラーゼ（ＫＡＨ）、ステビオールシンターゼ、デオキシキシルロース５－リン酸シンターゼ（ＤＸＳ）、Ｄ－１－デオキシキシルロース５－リン酸レダクトイソメラーゼ（ＤＸＲ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトールシンターゼ（ＣＭＳ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトールキナーゼ（ＣＭＫ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトール２，４－シクロ二リン酸シンターゼ（ＭＣＳ）、１－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸シンターゼ（ＨＤＳ）、１－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸レダクターゼ（ＨＤＲ）、アセトアセチル－ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼ、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＥＵＧＴ１１、ＵＧＴＳｌ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又は＞８５％アミノ酸配列同一性、＞８６％アミノ酸配列同一性、＞８７％アミノ酸配列同一性、＞８８％アミノ酸配列同一性、＞８９％アミノ酸配列同一性、＞９０％アミノ酸配列同一性、＞９１％アミノ酸配列同一性、＞９２％アミノ酸配列同一性、＞９３％アミノ酸配列同一性、＞９４％アミノ酸配列同一性、＞９５％アミノ酸配列同一性、＞９６％アミノ酸配列同一性、＞９７％アミノ酸配列同一性、＞９８％アミノ酸配列同一性、＞９９％アミノ酸配列同一性を有するそれらの変異バリアントからなる群から選択される、請求項３又は４に記載の方法。

【請求項14】

高度に精製されたレバウジオシドＮ２組成物中の前記レバウジオシドＮ２の含有量が、乾燥基準で約９５重量％超である、請求項７に記載の方法。

【請求項15】

高度に精製されたレバウジオシドＯ４組成物中の前記レバウジオシドＯ４含有量が、乾燥基準で約９５重量％超である、請求項８に記載の方法。

【請求項16】

請求項１に記載のレバウジオシドＮ２を含む消費製品であって、食物、飲料、医薬組成物、タバコ製品、栄養補助組成物、口腔衛生組成物、及び化粧品組成物からなる群から選択される、消費製品。

【請求項17】

請求項２に記載のレバウジオシドＯ４を含む消費製品であって、食物、飲料、医薬組成物、タバコ製品、栄養補助組成物、口腔衛生組成物、及び化粧品組成物からなる群から選択される、消費製品。

【請求項18】

前記製品が、飲料、天然ジュース、清涼飲料、炭酸ソフトドリンク、ダイエット飲料、ゼロカロリー飲料、低カロリー飲料及び食物、ヨーグルト飲料、インスタントジュース、インスタントコーヒー、粉末型インスタント飲料、製缶品、シロップ、発酵大豆ペースト、醤油、酢、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、カレー、スープ、インスタントブイヨン、粉末醤油、粉末酢、ビスケットの種類、米菓、クラッカー、パン、チョコレート、キャラメル、キャンディ、チューインガム、ゼリー、プリン、保存加工された果物及び野菜、生クリーム、ジャム、マーマレード、フラワーペースト、粉末ミルク、アイスクリーム、シャーベット、瓶詰野菜及び果物、煮豆缶詰甘味を付与したソースで煮た肉及び食物、農産野菜食品、海産物、ハム、ソーセージ、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚肉ペースト、魚の揚げ物製品海産物の干物、冷凍食品、保存加工された海藻、保存加工された肉、タバコ並びに医薬製品からなる群から選択される、請求項１６又は１７に記載の消費製品。

【請求項19】

炭水化物、ポリオール、アミノ酸及びそれらの対応する塩、ポリアミノ酸及びそれらの対応する塩、糖酸及びそれらの対応する塩、ヌクレオチド、有機酸、無機酸、有機酸塩及び有機塩基塩を含む有機塩、無機塩、苦味化合物、カフェイン、風味剤及び風味成分、渋味化合物、タンパク質又はタンパク質加水分解物、界面活性剤、乳化剤、フラボノイド、アルコール、ポリマー、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの添加剤を更に含む、請求項１６又は１７に記載の消費製品。

【請求項20】

サポニン、酸化防止剤、食物繊維源、脂肪酸、ビタミン、グルコサミン、ミネラル、防腐剤、水和剤、プロバイオティクス、プレバイオティクス、体重管理剤、骨粗しょう症管理剤、フィトエストロゲン、長鎖一級脂肪族飽和アルコール、フィトステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの機能性成分を更に含む、請求項１６又は１７に記載の消費製品。

【請求項21】

ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、ステビオールビオシド、ステビオシド、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、ＮＳＦ－０２、モグロシドＶ、羅漢果、アルロース、Ｄ－アロース、Ｄ－タガトース、エリスリトール、ブラゼイン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、グリチルリジン酸及びその塩、ソーマチン、ペリラルチン（perillartine）、ペルナンズルシン（pernandulcin）、ムクロジオシド、バイユノシド、ファルミソシド－Ｉ、ジメチル－ヘキサヒドロフルオレン－ジカルボン酸、アブルソシド、ペリアンドリン、カルノシフロシド、シクロカリオシド、プテロカリオシド、ポリポドシドＡ、ブラジリン、ヘルナンズルシン、フィロズルシン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、ジヒドロフラボノール、ジヒドロケルセチン－３－アセテート、ネオアスチリビン、トランス－シンナムアルデヒド、モナチン及びその塩、セリゲアインＡ、ヘマトキシリン、モネリン、オスラジン、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、マビンリン、ペンタジン、ミラクリン、クルクリン、ネオクリン、クロロゲン酸、シナリン、シアメノシド、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルターム、アリターム、サッカリン、シクラメート、ネオターム、ズルシン、スオサンアドバンテーム、ギムネマ酸、ホズルシン、ジジフィン、ラクチゾール、グルタメート、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、スレオニン、プロリン、セリン、リジン、トリプトファン、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、スレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルト－オリゴ糖、還元キシロ－オリゴ糖、還元ゲンチオ－オリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、加水分解水添デンプン、ポリグリシトール、糖アルコール、Ｌ－糖、Ｌ－ソルボース、Ｌ－アラビノース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、キシロース、リキソース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、タロース、エリトルロース、キシルロース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノ－ラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロ－オリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ末端オリゴ糖、ゲンチオ－オリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ニゲロ－オリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フルクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロ－オリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液糖、カップリング糖、大豆オリゴ糖、Ｄ－プシコース、Ｄ－リボース、Ｌ－グルコース、Ｌ－フコース、Ｄ－ツラノース、Ｄ－ロイクロースからなる群から選択される化合物を更に含む、請求項１６又は１７に記載の消費製品。

【請求項22】

甘味料を含む飲料又は食品の甘味を増強するための方法であって、
ａ．甘味料を含む飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項１に記載のレバウジオシドＮ２を含む甘味増強剤を添加することと、を含み、
レバウジオシドＮ２が、甘味認識閾値以下の濃度で存在する、方法。

【請求項23】

甘味料を含む飲料又は食品の甘味を増強するための方法であって、
ａ．甘味料を含む飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項２に記載のレバウジオシドＯ４を含む甘味増強剤を添加することと、を含み、
レバウジオシドＯ４が、甘味認識閾値以下の濃度で存在する、方法。

【請求項24】

飲料又は食品の風味を改質するための方法であって、
ａ．飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項１に記載のレバウジオシドＮ２を含む組成物を添加することと、を含む、方法。

【請求項25】

飲料又は食品の風味を改質するための方法であって、
ａ．飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項２に記載のレバウジオシドＯ４を含む組成物を添加することと、を含む、方法。

【請求項26】

飲料又は食品の発泡を抑制するための方法であって、
ａ．飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項１に記載のレバウジオシドＮ２を含む発泡抑制剤を添加することと、を含む、方法。

【請求項27】

飲料又は食品の発泡を抑制するための方法であって、
ａ．飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項２に記載のレバウジオシドＯ４を含む発泡抑制剤を添加することと、を含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、高度に精製されたステビオール配糖体組成物を含むステビオール配糖体を含む組成物を調製するためのプロセスに関する。

【0002】

配列表
「ＰＣ＿７８ＰＲＯＶ．ｔｘｔ」と題された、１９キロバイトのデータを有する２０１８年６月８日に作成され、本願と同時に出願されたテキストファイルは、参照によりその全体が本出願に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

高甘味度甘味料は、スクロースの甘味レベルよりも何倍も大きい甘味レベルを有する。これらは本質的にノンカロリーであり、食物及び飲料を含む食事並びに低カロリー製品において一般的に使用されている。高甘味度甘味料は、血糖応答を誘発せず、糖尿病患者及び炭水化物の摂取を制御することに関心のある他の人々を対象とした製品において使用するのに好適である。

【0004】

ステビオール配糖体は、ステビア・レバウディアナ・ベルトニー（Stevia rebaudiana Bertoni）、南米の特定の地域を原産とするキク科（Asteraceae(Compositae)family）の多年生の低木の葉に見出される化合物の部類である。これらは、Ｃ１３位及びＣ１９位での炭水化物残基の存在によって異なる単一の塩基、ステビオールによって構造的に特徴付けられる。これらはステビア葉に蓄積し、総乾燥重量の約１０％～２０％を構成する。
乾燥重量基準では、ステビアの葉に見られる４つの主要配糖体には、典型的には、ステビオシド（９．１％）、レバウジオシドＡ（３．８％）、レバウジオシドＣ（０．６～１．０％）及びズルコシドＡ（０．３％）が含まれる。他の既知のステビオールとしては、レバウジオシドＢ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ及びＭ、ステビオールビオシド、及びルブソシドが挙げられる。

【0005】

ステビア・レバウディアナ（Stevia rebaudiana）からステビオール配糖体を調製するための方法が知られているが、これらの方法の多くは商業的に使用するのに好適ではない。

【0006】

したがって、高度に精製されたステビオール配糖体組成物を含むステビオール配糖体を含む組成物を調製するための、簡単、効率的かつ経済的な方法が依然として必要とされている。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、有機基質を含む出発組成物を微生物細胞及び／又は酵素調製物と接触させることにより、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を産生することによって、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を調製するためのプロセスを提供する。

【0008】

出発組成物は、少なくとも１つの炭素原子を含む任意の有機化合物であり得る。一実施形態では、出発組成物は、ステビオール配糖体、ポリオール又は糖アルコール、様々な炭水化物からなる群から選択される。

【0009】

対象とするステビオール配糖体は、任意のステビオール配糖体であり得る。一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、又は合成ステビオール配糖体である。

【0010】

一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。

【0011】

一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＯ４である。

【0012】

いくつかの好ましい実施形態では、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することが可能な、１つ以上の酵素を含む酵素調製物、又は１つ以上の酵素を含む微生物細胞が使用される。酵素は、細胞の表面上及び／又は内部に配置することができる。酵素調製物は、全細胞懸濁液、粗溶解物、又は精製酵素（複数可）の形態で提供することができる。酵素調製物は、遊離形態であり得るか、又は無機若しくは有機材料から作製された固体支持体に固定化され得る。

【0013】

いくつかの実施形態では、微生物細胞は、出発組成物を対象とするステビオールに変換するために、必要な酵素及びその酵素をコードする遺伝子を含む。したがって、本発明はまた、有機基質を含む出発組成物を、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる少なくとも１つの酵素を含む微生物細胞と接触させることにより、少なくとも１つの対象とするステビオール配糖体を含む培地を産生することによって、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を調整するためのプロセスも提供する。

【0014】

出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換するのに必要な酵素としては、ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（UDP-glucosyltransferase、ＵＧＴ）、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ（以下、ＵＤＰ－ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ＵＧｌｙＴ）及び／又はＵＤＰ－リサイクル酵素が挙げられる。

【0015】

一実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、メバロン酸（mevalonate、ＭＶＡ）経路酵素が挙げられる。

【0016】

別の実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、非メバロン酸２－Ｃ－メチル－エリスリトール－４－リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素が挙げられる。

【0017】

一実施形態では、ステビオール生合成酵素は、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３－ヒドロキシラーゼ（kaurenoic acid 13-hydroxylase、ＫＡＨ）、ステビオールシンセターゼ、デオキシキシルロース５－リン酸シンターゼ（deoxyxylulose 5 -phosphate synthase、ＤＸＳ）、Ｄ－１－デオキシキシルロース５－リン酸レダクトイソメラーゼ（D-1-deoxyxylulose 5-phosphate reductoisomerase、ＤＸＲ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトールシンターゼ（4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol synthase、ＣＭＳ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトールキナーゼ（4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase、ＣＭＫ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトール２，４－シクロ二リン酸シンターゼ（4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol 2,4-cyclodiphosphate synthase、ＭＣＳ）、１－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸シンターゼ（1-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl 4-diphosphate synthase、ＨＤＳ）、１－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸レダクターゼ（1-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl 4-diphosphate reductase、ＨＤＲ）、アセトアセチル－ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼなどを含む群から選択される。

【0018】

ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオール及び／又はステビオール配糖体基質に付加して、対象とするステビオール配糖体を提供することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼであり得る。

【0019】

ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオール及び／又はステビオール配糖体基質に付加して、対象とするステビオール配糖体を提供することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼであり得る。

【0020】

本明細書で使用するとき、用語「ＳｕＳｙ＿ＡＴ」は、特に明記しない限り、実施例１に記載されるようなアミノ酸配列「配列番号１」を有するスクロースシンターゼ、又は、配列番号１のポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、並びにそれらのポリペチドをコードする単離された核酸分子を指す。

【0021】

本明細書で使用するとき、用語「ＵＧＴＳｌ２」は、特に明記しない限り、実施例１に記載されるようなアミノ酸配列「配列番号２」を有するＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、又は、配列番号２のポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、並びにそれらのポリペチドをコードする単離された核酸分子を指す。

【0022】

本明細書で使用するとき、用語「ＵＧＴ７６Ｇ１」は、特に明記しない限り、実施例１に記載されるようなアミノ酸配列「配列番号３」を有するＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、又は、配列番号３のポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、並びにそれらのポリペチドをコードする単離された核酸分子を指す。

【0023】

本明細書で使用するとき、用語「ＵＧＬｙＴ９１Ｃ１」は、特に明記しない限り、実施例１に記載されるようなアミノ酸配列「配列番号４」を有するＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ、又は、配列番号４のポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、並びにそれらのポリペチドをコードする単離された核酸分子を指す。

【0024】

一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、及びＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、微生物細胞において産生される。微生物細胞は、例えば、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などであってもよい。別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは合成される。

【0025】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＵＧＴＳｌ２、ＥＵＧＴ１１及びこれらのポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ並びにこれらのＵＧＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。

【0026】

一実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１及びこれらのポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴ並びにこれらのＵＧｌｙＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。

【0027】

一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＧＴ、ＵＧｌｙＴ、ＵＤＰ－グルコースリサイクル系及びＵＤＰ－ラムノースリサイクル系は、１つの微生物（微生物細胞）中に存在する。微生物細胞は、例えば、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などであってもよい。

【0028】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、Ｃ１３において－ＯＨ官能基を担持するステビオール又は任意の出発ステビオール配糖体に付加して、Ｃ１３において－Ｏ－グルコースβグルコピラノシドグリコシド結合を有する対象とするステビオール配糖体を与えることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0029】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、Ｃ１９において－ＣＯＯＨ官能基を担持するステビオール又は任意の出発ステビオール配糖体に付加して、Ｃ１９において－ＣＯＯ－グルコースβグルコピラノシドグリコシド結合を有する対象とするステビオール配糖体を与えることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0030】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１９において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→２グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0031】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１９において存在するグルコースに付加して、新たに形成された結合であるグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0032】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのα１→２ラムノピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のラムノースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0033】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成された結合であるグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0034】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→６グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0035】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールに付加してステビオールモノシドを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0036】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールに付加してステビオールモノシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0037】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールモノシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0038】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールビオシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0039】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールビオシドＥを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0040】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してルブソシドを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0041】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してルブソシドを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0042】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してステビオールビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0043】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してステビオールビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0044】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0045】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0046】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0047】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールビオシドＤに付加してズルコシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0048】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＤに付加してレバウジオシドＢ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0049】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＤに付加してステビオシドＧを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0050】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールビオシドＥに付加してズルコシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0051】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＥに付加してレバウジオシドＢ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0052】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＥに付加してステビオシドＨを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0053】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をルブソシドに付加してズルコシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0054】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＧを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0055】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＨを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0056】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0057】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0058】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＡに付加してステビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0059】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＡに付加してステビオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0060】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＢに付加してステビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0061】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＢに付加してステビオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0062】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＣに付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0063】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＣに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0064】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＤに付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0065】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＤに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0066】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＢ２に付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0067】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＢ２に付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0068】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0069】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0070】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0071】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0072】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0073】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0074】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＥ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0075】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＥ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0076】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0077】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0078】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＥ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0079】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＥ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0080】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＣ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0081】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0082】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0083】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0084】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＣ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0085】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0086】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0087】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0088】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオサイＣに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0089】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ３に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0090】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0091】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0092】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0093】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0094】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0095】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0096】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0097】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0098】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0099】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0100】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0101】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0102】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0103】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0104】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0105】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0106】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0107】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0108】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0109】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0110】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0111】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0112】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0113】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0114】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0115】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0116】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0117】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0118】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0119】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0120】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ２に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0121】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ２に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0122】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＫに付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0123】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＫに付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0124】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ３に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0125】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ３に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0126】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ５に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0127】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ５に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0128】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ４に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0129】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ４に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0130】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ５に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0131】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ５に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0132】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ６に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0133】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ６に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0134】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ６に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0135】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ６に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0136】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ７に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0137】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ７に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0138】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ８に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0139】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ８に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0140】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ３に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0141】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ４に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0142】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ２に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0143】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ５に付加してレバウジオシドＫ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0144】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＭ３に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0145】

任意に、本発明の方法は、ＵＤＰ－グルコースを提供するためにＵＤＰをリサイクルすることを更に含む。一実施形態では、本方法は、リサイクル触媒及びリサイクル基質を提供することによってＵＤＰをリサイクルすることを含み、これにより、ステビオール及び／又はステビオール配糖体基質の対象とするステビオール配糖体への生体内変換は、触媒量のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ－グルコースを使用して行われる。

【0146】

任意に、本発明の方法は、ＵＤＰ－ラムノースを提供するために、ＵＤＰをリサイクルすることを更に含む。一実施形態では、本方法は、リサイクル触媒及びリサイクル基質を提供することによってＵＤＰをリサイクルすることを含み、これにより、ステビオール及び／又はステビオール配糖体基質の対象とするステビオール配糖体への生体内変換は、触媒量のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ－ラムノースを使用して行われる。

【0147】

一実施形態では、リサイクル触媒は、スクロースシンターゼＳｕＳｙ＿ＡＴ又はＳｕＳｙ＿ＡＴと＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するスクロース合成酵素である。

【0148】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコースリサイクル触媒のリサイクル基質は、スクロースである。

【0149】

一実施形態では、ＵＤＰ－ラムノースリサイクル触媒のリサイクル基質は、ラムノシル残基を含む分子である。

【0150】

任意に、本発明の方法は、レシピエントの対象とするステビオール配糖体分子を改変するために、糖供与体としてオリゴ糖類又は多糖類を使用するトランスグリコシダーゼの使用を更に含む。非限定的な例としては、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ（cyclodextrin glycosyltransferase、ＣＧＴａｓｅ）、フルクトフラノシダーゼ、アミラーゼ、サッカラーゼ、グルコスクラーゼ、β－ｈ－フルクトシダーゼ、β－フルクトシダーゼ、スクラーゼ、フルクトシルインベルターゼ、アルカリ性インベルターゼ、酸インベルターゼ、フルクトフラノシダーゼが挙げられる。いくつかの実施形態では、グルコース及びグルコース以外の糖（複数可）（フルクトース、キシロース、ラムノース、アラビノース、デオキシグルコース、ガラクトースを含むがこれらに限定されない）が、レシピエントの対象とするステビオール配糖体に移される。一実施形態では、レシピエントステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。別の実施形態では、レシピエントステビオール配糖体は、レバウジオシドＯ４である。

【0151】

任意に、本発明の方法は、対象とするステビオール配糖体を培地から分離して、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物を提供することを更に含む。対象とするステビオール配糖体は、例えば、結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出、クロマトグラフィー分離、又はこのような方法の組み合わせなど、少なくとも１つの好適な方法によって分離することができる。

【0152】

一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、微生物内で産生され得る。別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、培地中に分泌され得る。別の一実施形態では、放出されたステビオール配糖体は、培地から連続的に取り出すことができる。更に別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、変換反応の完了後に分離される。

【0153】

一実施形態では、分離は、無水基準で約８０％超の対象とするステビオール配糖体を含む組成物、すなわち、高度に精製されたステビオール配糖体組成物を含む組成物を産生する。別の実施形態では、分離は、約９０重量％超の対象とするステビオール配糖体を含む組成物を産生する。別の実施形態では、組成物は、約９５重量％超の対象とするステビオール配糖体を含む。他の実施形態では、組成物は、約９９重量％超の対象とするステビオール配糖体を含む。

【0154】

対象とするステビオール配糖体は、水和物、溶媒和物、無水物、又はこれらの組み合わせを含む、任意の多形体又は非晶形であり得る。

【0155】

精製された対象とするステビオール配糖体は、甘味料、風味調整剤、改質特性を有する風味料、及び／又は発泡抑制剤として、消費製品に使用することができる。好適な消費者製品としては、食物、飲料、医薬組成物、タバコ製品、栄養補助組成物、口腔衛生組成物、及び化粧品組成物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0156】

以下の発明の詳細な説明がより良く理解され得るように、前述のものは、本発明の特徴及び技術的利点をより広く概説したものである。本発明の請求項の主題を形成する本発明の更なる特徴及び利点は、以下に記載される。開示される概念及び特定の実施形態は、本発明の同じ目的を実施するための他の構造を修正又は設計するための基礎として容易に利用され得ることを理解されたい。また、このような等価な構造は、添付の特許請求の範囲に記載される本発明の趣旨及び範囲から逸脱しないことも理解されたい。本発明に特徴的であると考えられる新規な特徴は、更なる目的及び利点と一緒にその組織及び動作方法の両方について、添付の図面と関連して考慮される場合、以下の説明からよりよく理解されるであろう。しかしながら、図面のそれぞれは、例示及び説明のみを目的として提供され、本発明の限界の定義として意図されていないことを明示的に理解するべきである。

【図面の簡単な説明】

【0157】

【図1a】レバウジオシドＮ２の化学構造を示す。

【図1b】レバウジオシドＮ２の化学構造を示す。

【図1c】レバウジオシドＯ４の化学構造を示す。

【図1d】レバウジオシドＯ４の化学構造を示す。

【図1e】アグリコン構造を有するステビオール配糖体の化学構造を示す。

【図2a】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2b】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2c】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2d】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2e】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2f】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2g】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2h】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2i】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2j】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2k】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図2l】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。

【図3a】酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用したレバウジオシドＣからのレバウジオシドＮ２の生体触媒産生、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿ＡＴを介したＵＤＰのＵＤＰ－グルコースへの同時リサイクルを示す。

【図3b】酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用したレバウジオシドＣからのレバウジオシドＯ４の生体触媒産生、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿ＡＴを介したＵＤＰのＵＤＰ－グルコースへの同時リサイクルを示す。

【図4】レバウジオシドＣのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。２４．５３５分の保持時間のピークは、レバウジオシドＣに相当する。

【図5】レバウジオシドＣからのレバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４の生体触媒産生の産生物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。１１．３１７分及び８．６０３分の保持時間のピークは、それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４に相当する。１２．５６７分のピークは、レバウジオシドＫに相当する。

【図6a】ＨＰＬＣによる精製後のレバウジオシドＮ２のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。１０．７４５分の保持時間のピークは、レバウジオシドＮ２に相当する。

【図6b】ＨＰＬＣによる精製後のレバウジオシドＯ４のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。８．１８５分の保持時間のピークは、レバウジオシドＯ４に相当する。

【図7a】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図7b】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図8a】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＳＱＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図8b】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＳＱＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図9a】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨ，Ｈ ＣＯＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図9b】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨ，Ｈ ＣＯＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図10a】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＭＢＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図10b】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＭＢＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図11a】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図11b】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す。

【図12a】それぞれ、レバウジオシドＮ２のＬＣクロマトグラム及び質量スペクトルを示す。

【図12b】それぞれ、レバウジオシドＮ２のＬＣクロマトグラム及び質量スペクトルを示す。

【図13a】それぞれ、レバウジオシドＯ４のＬＣクロマトグラム及び質量スペクトルを示す。

【図13b】それぞれ、レバウジオシドＯ４のＬＣクロマトグラム及び質量スペクトルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0158】

本発明は、有機基質を含む出発組成物を微生物細胞及び／又は酵素調製物と接触させることにより、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を産生することによって、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を調製するためのプロセスを提供する。

【0159】

本発明の１つの目的は、対象とするステビオール配糖体、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、又は合成ステビオール配糖体を、様々な出発組成物から調製するための効率的な生体触媒方法を提供することである。

【0160】

本明細書で使用するとき、略語「ｒｅｂ」は、「レバウジオシド」を指す。両方の用語は同じ意味を有し、互換的に使用されてもよい。

【0161】

本明細書で使用するとき、「生体触媒作用」又は「生体触媒の」は、酵素などの天然又は遺伝子操作された生体触媒、又は有機化合物上の単一又は複数の工程化学変換が可能な１つ以上の酵素を含む細胞の使用を指す。生体触媒プロセスとしては、発酵、生合成、生物変換、及び生体内変換プロセスが挙げられる。単離酵素及び全細胞生体触媒法の両方が当該技術分野において既知である。生体触媒タンパク質酵素は、天然に存在し得るか、又は組み換えタンパク質であり得る。

【0162】

本明細書で使用するとき、用語「ステビオール配糖体（複数可）」は、限定されないが、天然に存在するステビオール配糖体、例えば、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、合成ステビオール配糖体、例えば酵素的にグリコシル化されたステビオール配糖体、及びこれらの組み合わせを含む、ステビオールの配糖体を指す。

【0163】

出発組成物
本明細書で使用するとき、「出発組成物」は、少なくとも１つの炭素原子を含む１つ以上の有機化合物を含有する任意の組成物（一般に水溶液）を指す。

【0164】

一実施形態では、出発組成物は、ステビオール、ステビオール配糖体、ポリオール、及び様々な炭水化物からなる群から選択される。

【0165】

出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、ステビア・レバウディアナ（Stevia rebaudiana）植物で見出されるステビオールの他の配糖体、合成ステビオール配糖体、例えば酵素的にグリコシル化されたステビオール配糖体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0166】

一実施形態では、出発組成物は、ステビオールである。

【0167】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールモノシドである。

【0168】

更に別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールモノシドＡである。

【0169】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールモノシドＢである。

【0170】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＣである。

【0171】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＤである。

【0172】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＥである。

【0173】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ルブソシドである。

【0174】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ズルコシドＡである。

【0175】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ズルコシドＣである。

【0176】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ズルコシドＤである。

【0177】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＡである。

【0178】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＢである。

【0179】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＣである。

【0180】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＧである。

【0181】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＨである。

【0182】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＢ２である。

【0183】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＢ２である。

【0184】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＡ４である。

【0185】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣである。

【0186】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ３である。

【0187】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ４である。

【0188】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ５である。

【0189】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ６である。

【0190】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ３である。

【0191】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ４である。

【0192】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ５である。

【0193】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ６である。

【0194】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ７である。

【0195】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ５である。

【0196】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ６である。

【0197】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ７である。

【0198】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ８である。

【0199】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ２である。

【0200】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ３である。

【0201】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ４である。

【0202】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ５である。

【0203】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ６である。

【0204】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＫである。

【0205】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。

【0206】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ３である。

【0207】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ４である。

【0208】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ５である。

【0209】

別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＭ３である。

【0210】

用語「ポリオール」は、２つ以上のヒドロキシル基を含有する分子を指す。ポリオールは、それぞれ２、３、及び４つのヒドロキシル基を含有するジオール、トリオール、又はテトラオールであってもよい。ポリオールはまた、それぞれ５、６、又は７つのヒドロキシル基を含有するペンタノール、ヘキサオール、ヘプタノールなどの、４つを超えるヒドロキシル基を含有してもよい。更に、ポリオールはまた、糖アルコール、多価アルコール、又は炭水化物の還元形態であるポリアルコールであってもよく、この中でカルボニル基（アルデヒド又はケトン、還元糖）は、一級又は二級ヒドロキシル基に還元されている。ポリオールの例としては、エリスリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、スレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルト－オリゴ糖、還元キシロ－オリゴ糖、還元ゲンチオ－オリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、加水分解水添デンプン、ポリグリシトール及び糖アルコール、又は還元可能な任意の他の炭水化物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0211】

用語「炭水化物」は、一般式（ＣＨ_２Ｏ）_ｎ（式中、ｎは３～３０である）の複数のヒドロキシル基で置換されたアルデヒド又はケトン、並びにそれらのオリゴマー及びポリマーを指す。加えて、本発明の炭水化物は、１つ以上の位置で置換又は脱酸素化され得る。本明細書で使用するとき、炭水化物は、非修飾炭水化物、炭水化物誘導体、置換炭水化物、及び修飾炭水化物を包含する。本明細書で使用するとき、語句「炭水化物誘導体」、「置換炭水化物」、及び「修飾炭水化物」は同義である。修飾炭水化物は、少なくとも１つの原子が付加、除去、若しくは置換された任意の炭水化物、又はこれらの組み合わせを意味する。したがって、炭水化物誘導体又は置換炭水化物としては、置換及び非置換の単糖、二糖類、オリゴ糖、及び多糖類が挙げられる。炭水化物誘導体又は置換炭水化物は、任意に、任意の対応するＣ位で脱酸素化されてもよく、かつ／又は水素、ハロゲン、ハロアルキル、カルボキシル、アシル、アシルオキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホ、メルカプト、イミノ、スルホニル、スルフェニル、スルフィニル、スルファモイル、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィノ、チオエステル、チオエーテル、オキシミノ、ヒドラジノ、カルバミル、ホスホ、ホスホナト、又は炭水化物誘導体若しくは置換炭水化物官能基に提供される任意の他の実行可能な官能基などの１つ以上の部分で置換されて、甘味料組成物の甘味を向上させることができる。

【0212】

本発明に従って使用され得る炭水化物の例としては、タガトース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、イドース、タロース、エリトルロース、キシルロース、プシコース、ツラノース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、フコース、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノ－ラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルト－オリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロ－オリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ－末端オリゴ糖、ゲンチオ－オリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ソルボース、ニゲロ－オリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フルクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロ－オリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、リボノース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液糖、カップリング糖、及び大豆オリゴ糖が挙げられるが、これらに限定されない。更に、本明細書で使用される炭水化物は、Ｄ－又はＬ－立体配置のいずれかであってもよい。

【0213】

出発組成物は、市販又は調製された合成若しくは精製（部分的又は完全的）であってもよい。

【0214】

一実施形態では、出発組成物はグリセロールである。

【0215】

別の実施形態では、出発組成物はグルコースである。

【0216】

別の実施形態では、出発組成物はラムノースである。

【0217】

更に別の実施形態では、出発組成物はスクロースである。

【0218】

更に別の実施形態では、出発組成物はデンプンである。

【0219】

別の実施形態では、出発組成物はマルトデキストリンである。

【0220】

更に別の実施形態では、出発組成物はセルロースである。

【0221】

更に別の実施形態では、出発組成物はアミロースである。

【0222】

出発組成物の有機化合物（複数可）は、本明細書に記載されるように、対象とするステビオール配糖体（複数可）の産生のための基質（複数可）として機能する。

【0223】

対象とするステビオール配糖体
本方法の対象とするステビオール配糖体は、本明細書に開示されるプロセスによって調製することができる任意のステビオール配糖体であり得る。一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、ステビア・レバウディアナ（Stevia rebaudiana）植物で見出されるステビオールの他の配糖体、合成ステビオール配糖体、例えば酵素的にグリコシル化されたステビオール配糖体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0224】

一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールモノシドである。

【0225】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールモノシドＡである。

【0226】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＡである。

【0227】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＢである。

【0228】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＣである。

【0229】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＤである。

【0230】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＥである。

【0231】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ルブソシドである。

【0232】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ズルコシドＡである。

【0233】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ズルコシドＣである。

【0234】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ズルコシドＤである。

【0235】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオシドＡである。

【0236】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオシドＢである。

【0237】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオシドＣである。

【0238】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオサイドＧである。

【0239】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオシドＨである。

【0240】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＢ２である。

【0241】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＡ４である。

【0242】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣである。

【0243】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ３である。

【0244】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ４である。

【0245】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ５である。

【0246】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ６である。

【0247】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ３である。

【0248】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ４である。

【0249】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ５である。

【0250】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ６である。

【0251】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ７である。

【0252】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ５である。

【0253】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ６である。

【0254】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ７である。

【0255】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ８である。

【0256】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ２である。

【0257】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ３である。

【0258】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ４である。

【0259】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ５である。

【0260】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ６である。

【0261】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＫである。

【0262】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。

【0263】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ３である。

【0264】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ４である。

【0265】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ５である。

【0266】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＭ３である。

【0267】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＯ４である。

【0268】

対象とするステビオール配糖体は、水和物、溶媒和物、無水物、又はこれらの組み合わせを含む、任意の多形体又は非晶形であり得る。

【0269】

一実施形態では、本発明は、ステビオールモノシドの産生のための生体触媒プロセスである。

【0270】

一実施形態では、本発明は、ステビオールモノシドＡの産生のための生体触媒プロセスである。

【0271】

一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＡの産生のための生体触媒プロセスである。

【0272】

一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＢの産生のための生体触媒プロセスである。

【0273】

一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＣの産生のための生体触媒プロセスである。

【0274】

一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＤの産生のための生体触媒プロセスである。

【0275】

一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＥの産生のための生体触媒プロセスである。

【0276】

一実施形態では、本発明は、ルブソシドの産生のための生体触媒プロセスである。

【0277】

一実施形態では、本発明は、ズルコシドＡの産生のための生体触媒プロセスである。

【0278】

一実施形態では、本発明は、Ｃの産生のための生体触媒プロセスである。

【0279】

一実施形態では、本発明は、ズルコシドＤの産生のための生体触媒プロセスである。

【0280】

一実施形態では、本発明は、ステビオシドＡの産生のための生体触媒プロセスである。

【0281】

一実施形態では、本発明は、ステビオシドＢの産生のための生体触媒プロセスである。

【0282】

一実施形態では、本発明は、ステビオシドＣの産生のための生体触媒プロセスである。

【0283】

一実施形態では、本発明は、ステビオシドＧの産生のための生体触媒プロセスである。

【0284】

一実施形態では、本発明は、ステビオシドＨの産生のための生体触媒プロセスである。

【0285】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＢ２の産生のための生体触媒プロセスである。

【0286】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＡ４の産生のための生体触媒プロセスである。

【0287】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣの産生のための生体触媒プロセスである。

【0288】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ３の産生のための生体触媒プロセスである。

【0289】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ４の産生のための生体触媒プロセスである。

【0290】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ５の産生のための生体触媒プロセスである。

【0291】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ６の産生のための生体触媒プロセスである。

【0292】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ３の産生のための生体触媒プロセスである。

【0293】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ４の産生のための生体触媒プロセスである。

【0294】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ５の産生のための生体触媒プロセスである。

【0295】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ６の産生のための生体触媒プロセスである。

【0296】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ７の産生のための生体触媒プロセスである。

【0297】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ５の産生のための生体触媒プロセスである。

【0298】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ６の産生のための生体触媒プロセスである。

【0299】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ７の産生のための生体触媒プロセスである。

【0300】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ８の産生のための生体触媒プロセスである。

【0301】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ２の産生のための生体触媒プロセスである。

【0302】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ３の産生のための生体触媒プロセスである。

【0303】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ４の産生のための生体触媒プロセスである。

【0304】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ５の産生のための生体触媒プロセスである。

【0305】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ６の産生のための生体触媒プロセスである。

【0306】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＫの産生のための生体触媒プロセスである。

【0307】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＮ２の産生のための生体触媒プロセスである。

【0308】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＮ３の産生のための生体触媒プロセスである。

【0309】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＮ４の産生のための生体触媒プロセスである。

【0310】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＮ５の産生のための生体触媒プロセスである。

【0311】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＭ３の産生のための生体触媒プロセスである。

【0312】

一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＯ４の産生のための生体触媒プロセスである。

【0313】

特定の実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からのレバウジオシドＮ２の産生のための生体触媒プロセスを提供する。

【0314】

別の特定の実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からのレバウジオシドＯ４の産生のための生体触媒プロセスを提供する。

【0315】

任意に、本発明の方法は、対象とするステビオール配糖体を培地から分離して、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物を提供することを更に含む。対象とするステビオール配糖体は、例えば、結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出、クロマトグラフィー分離、又はこのような方法の組み合わせなど、任意の好適な方法によって分離することができる。

【0316】

特定の実施形態では、本明細書に記載のプロセスは、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物をもたらす。本明細書で使用するとき、用語「高度に精製された」は、無水（乾燥）基準で、約８０重量％超の対象とするステビオール配糖体を有する組成物を指す。一実施形態では、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物は、例えば、乾燥基準で約９１％超、約９２％超、超約９３％超、約９４％、超約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、又は約９９％超の対象とするステビオール配糖体含有量などの、無水（乾燥）基準で約９０重量％超の対象とするステビオール配糖体を含有する。

【0317】

一実施形態では、対象とするステビオール配糖体がｒｅｂ Ｎ２である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９０重量％超のｒｅｂ Ｎ２含有量を有する組成物を提供する。別の特定の実施形態では、対象とするステビオール配糖体がｒｅｂ Ｎ２である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９５重量％超のｒｅｂ Ｎ２含有量を含む組成物を提供する。

【0318】

別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体がｒｅｂ Ｏ４である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９０重量％超のｒｅｂ Ｏ４含有量を有する組成物を提供する。別の特定の実施形態では、対象とするステビオール配糖体がｒｅｂ Ｏ４である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９５重量％超のｒｅｂ Ｏ４含有量を含む組成物を提供する。

【0319】

微生物及び酵素調製物
本発明の一実施形態では、微生物（微生物細胞）及び／又は酵素調製物を、出発組成物を含有する培地と接触させて、対象とするステビオール配糖体を産生する。

【0320】

酵素は、全細胞懸濁液、粗溶解物、精製酵素、又はこれらの組み合わせの形態で提供することができる。一実施形態では、生体触媒は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる精製酵素である。別の実施形態では、生体触媒は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる少なくとも１つの酵素を含む粗溶解物である。更に別の実施形態では、生体触媒は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる少なくとも１つの酵素を含む全細胞懸濁液である。

【0321】

別の実施形態では、生体触媒は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる酵素（複数可）を含む１つ以上の微生物細胞である。酵素は、細胞の表面上、細胞内、又は細胞の表面上及び細胞内の両方に位置することができる。

【0322】

出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換するのに好適な酵素としては、ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）及びＵＤＰグリコシルトランスフェラーゼ（ＵＧｌｙＴ）が挙げられるが、これらに限定されない。任意に、これには、ＵＤＰリサイクル酵素（複数可）が含まれてもよい。

【0323】

一実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、メバロン酸（ＭＶＡ）経路酵素が挙げられる。

【0324】

別の実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、非メバロン酸２－Ｃ－メチル－エリスリトール－４－リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素が挙げられる。

【0325】

一実施形態では、ステビオール生合成酵素は、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３－ヒドロキシラーゼ（ＫＡＨ）、ステビオールシンセターゼ、デオキシキシルロース５－リン酸シンターゼ（ＤＸＳ）、Ｄ－１－デオキシキシルロース５－リン酸レダクトイソメラーゼ（ＤＸＲ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトールシンターゼ（ＣＭＳ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトールキナーゼ（ＣＭＫ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリスリトール２，４－シクロ二リン酸シンターゼ（ＭＣＳ）、１－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸シンターゼ（ＨＤＳ）、１－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸レダクターゼ（ＨＤＲ）、アセトアセチル－ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼなどを含む群から選択される。

【0326】

ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオール及び／又はステビオール配糖体基質に付加して、対象とするステビオール配糖体を提供することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼであり得る。

【0327】

ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオール及び／又はステビオール配糖体基質に付加して、対象とするステビオール配糖体を提供することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼであり得る。

【0328】

一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、及びＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、微生物細胞において産生される。微生物細胞は、例えば、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などであってもよい。別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは合成される。

【0329】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＵＧＴＳｌ２、ＥＵＧＴ１１及びこれらのポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ並びにこれらのＵＧＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。

【0330】

一実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１及びこれらのポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴ並びにこれらのＵＧｌｙＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。

【0331】

一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＧＴ、ＵＧｌｙＴ、ＵＤＰ－グルコースリサイクル系及びＵＤＰ－ラムノースリサイクル系は、１つの微生物（微生物細胞）中に存在する。微生物細胞は、例えば、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などであってもよい。

【0332】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、Ｃ１３において－ＯＨ官能基を担持するステビオール又は任意の出発ステビオール配糖体に付加して、Ｃ１３において－Ｏ－グルコースβグルコピラノシドグリコシド結合を有する対象とするステビオール配糖体を与えることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0333】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、Ｃ１９において－ＣＯＯＨ官能基を担持するステビオール又は任意の出発ステビオール配糖体に付加して、Ｃ１９において－ＣＯＯ－グルコースβグルコピラノシドグリコシド結合を有する対象とするステビオール配糖体を与えることができるＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0334】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１９において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→２グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0335】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１９において存在するグルコースに付加して、新たに形成された結合であるグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0336】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのα１→２ラムノピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のラムノースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0337】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成された結合であるグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0338】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→６グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0339】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールに付加してステビオールモノシドを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0340】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールに付加してステビオールモノシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0341】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールモノシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0342】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールビオシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0343】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールビオシドＥを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0344】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してルブソシドを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0345】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してルブソシドを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0346】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してステビオールビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0347】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してステビオールビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0348】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0349】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0350】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0351】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールビオシドＤに付加してズルコシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0352】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＤに付加してレバウジオシドＢ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0353】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＤに付加してステビオシドＧを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0354】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールビオシドＥに付加してズルコシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0355】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＥに付加してレバウジオシドＢ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0356】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＥに付加してステビオシドＨを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0357】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をルブソシドに付加してズルコシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0358】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＧを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0359】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＨを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0360】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0361】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0362】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＡに付加してステビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0363】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＡに付加してステビオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0364】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＢに付加してステビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0365】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＢに付加してステビオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0366】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＣに付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0367】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＣに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0368】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＤに付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0369】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＤに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0370】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＢ２に付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0371】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＢ２に付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0372】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0373】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0374】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0375】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0376】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0377】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0378】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＥ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0379】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＥ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0380】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0381】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0382】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＥ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0383】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＥ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0384】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＣ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0385】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0386】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0387】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0388】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＣ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0389】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0390】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0391】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0392】

一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオサイＣに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0393】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ３に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0394】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0395】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0396】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0397】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0398】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0399】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0400】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0401】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0402】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0403】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0404】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0405】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0406】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0407】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0408】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0409】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0410】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0411】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0412】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0413】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0414】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0415】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0416】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0417】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0418】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0419】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0420】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0421】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0422】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0423】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0424】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ２に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0425】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ２に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0426】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＫに付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0427】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＫに付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0428】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ３に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0429】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ３に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0430】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ５に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0431】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ５に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0432】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ４に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0433】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ４に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0434】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ５に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0435】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ５に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0436】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ６に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0437】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ６に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0438】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ６に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0439】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ６に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0440】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ７に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0441】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ７に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0442】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ８に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0443】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ８に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0444】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ３に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0445】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ４に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0446】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ２に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0447】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ５に付加してレバウジオシドＫ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。

【0448】

別の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＭ３に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。

【0449】

任意に、本発明の方法は、ＵＤＰ－グルコースを提供するためにＵＤＰをリサイクルすることを更に含む。一実施形態では、本方法は、リサイクル触媒及びリサイクル基質を提供することによってＵＤＰをリサイクルすることを含み、これにより、ステビオール及び／又はステビオール配糖体基質の対象とするステビオール配糖体への生体内変換は、触媒量のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ－グルコースを使用して行われる。ＵＤＰリサイクル酵素は、スクロースシンターゼＳｕＳｙ＿ＡＴ又はＳｕＳｙ＿ＡＴと＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するスクロースシンターゼであってもよく、リサイクル基質はスクロースであってもよい。

【0450】

任意に、本発明の方法は、ＵＤＰ－ラムノースを提供するために、ＵＤＰをリサイクルすることを更に含む。一実施形態では、本方法は、リサイクル触媒及びリサイクル基質を提供することによってＵＤＰをリサイクルすることを含み、これにより、ステビオール及び／又はステビオール配糖体基質の対象とするステビオール配糖体への生体内変換は、触媒量のＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ－ラムノースを使用して行われる。

【0451】

任意に、本発明の方法は、レシピエントの対象とするステビオール配糖体分子を改変するために、糖供与体としてオリゴ糖類又は多糖類を使用するトランスグリコシダーゼの使用を更に含む。非限定的な例としては、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ）、フルクトフラノシダーゼ、アミラーゼ、サッカラーゼ、グルコスクラーゼ、β－ｈ－フルクトシダーゼ、β－フルクトシダーゼ、スクラーゼ、フルクトシルインベルターゼ、アルカリ性インベルターゼ、酸インベルターゼ、フルクトフラノシダーゼが挙げられる。いくつかの実施形態では、グルコース及びグルコース以外の糖（複数可）（フルクトース、キシロース、ラムノース、アラビノース、デオキシグルコース、ガラクトースを含むがこれらに限定されない）が、レシピエントの対象とするステビオール配糖体に移される。一実施形態では、レシピエントステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。別の実施形態では、レシピエントステビオール配糖体は、レバウジオシドＯ４である。

【0452】

別の実施形態では、少なくとも１つのグルコース単位を出発組成物ステビオール配糖体に付加することができるＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＧｅｎＩｎｆｏ識別子番号の以下のリストから、好ましくは表１、及び表２に提示された群から選択されるＵＧＴと＞８５％のアミノ酸配列同一性を有する。

【0453】

【表1-1】

【0454】

【表1-2】

（上記表の続き）

【0455】

【表1-3】

（上記表の続き）

【0456】

【表2-1】

表１

【0457】

【表2-2】

（表１の続き）

【0458】

【表3】

表２

【0459】

本発明の一実施形態は、酵素、すなわち、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる酵素を含む微生物細胞である。したがって、本方法のいくつかの実施形態は、微生物を、出発組成物を含有する培地と接触させて、少なくとも１つの対象とするステビオール配糖体を含む培地を提供することを含む。

【0460】

微生物は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体（複数可）に変換するために必要な酵素（複数可）を有する任意の微生物であり得る。これらの酵素は、微生物のゲノム内にコードされる。

【0461】

好適な微生物としては、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などが挙げられる。

【0462】

一実施形態では、微生物は、出発組成物と接触させたときに遊離している。

【0463】

別の実施形態では、微生物は、出発組成物と接触させたときに固定化される。例えば、微生物は、無機又は有機材料から作製された固体支持体に固定化されてもよい。微生物を固定化するのに好適な固体支持体の非限定的な例としては、誘導体化セルロース若しくはガラス、セラミックス、金属酸化物、又は膜が挙げられる。微生物は、例えば、共有結合、吸着、架橋、捕捉、又は封入によって固体支持体に固定化され得る。

【0464】

更に別の実施形態では、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる酵素は、微生物から反応培地に分泌される。

【0465】

対象とするステビオール配糖体は、任意に精製される。反応培地からの対象とするステビオール配糖体の精製は、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物を提供するための少なくとも１つの好適な方法によって達成することができる。好適な方法としては、結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出（液相又は固相）、クロマトグラフィー分離、ＨＰＬＣ（分取若しくは分析）、又はこのような方法の組み合わせが挙げられる。

【0466】

利用
本発明により得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４は、「現状のままで（as-is）」、又は他の甘味料、風味料、食物成分、及びこれらの組み合わせと組み合わせて使用することができる。

【0467】

風味料の非限定的な例としては、ライム、レモン、オレンジ、果実、バナナ、ブドウ、梨、パイナップル、マンゴー、ベリー、ビターアーモンド、コーラ、シナモン、砂糖、綿菓子、バニラ、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0468】

他の食物成分の非限定的な例としては、酸味料、有機及びアミノ酸、着色剤、増量剤、加工デンプン、ガム、調質剤、防腐剤、カフェイン、酸化防止剤、乳化剤、安定剤、増粘剤、ゲル化剤、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0469】

本発明により得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４は、水和物、溶媒和物、無水物、非晶形、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない様々な多形体で調製することができる。

【0470】

本発明により得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４は、食料品、飲料、医薬組成物、化粧品、チューインガム、卓上製品、シリアル、乳製品、練り歯磨き、及び他の口腔用組成物などの高甘味度天然甘味料として組み込むことができる。

【0471】

本発明に従って得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、又は合成ステビオール配糖体は、単一の甘味料として甘味料化合物として使用されてもよく、又はこれは、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、ステビオールビオシド、ステビオシド、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、モグロシド、ブラゼイン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、グリチルリジン酸及びその塩、ソーマチン、ペリラルチン（perillartine）、ペルナンズルシン（pernandulcin）、ムクロジオシド、バイユノシド、ファルミソシド－Ｉ、ジメチル－ヘキサヒドロフルオレン－ジカルボン酸、アブルソシド、ペリアンドリン、カルノシフロシド、シクロカリオシド、プテロカリオシド、ポリポドシドＡ、ブラジリンヘルナンズルシン、フィロズルシン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、ジヒドロフラボノール、ジヒドロケルセチン－３－アセテート、ネオアスチリビン、トランス［－シンナムアルデヒド、モナチン及びその塩、セリゲアインＡ、ヘマトキシリン、モネリン、オスラジン、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、マビンリン、ペンタジン、ミラクリン、クルクリン、ネオクリン、クロロゲン酸、シナリン、羅漢果甘味料、モグロシドＶ、シアメノシド及びこれらの組み合わせなどの少なくとも１つの天然に存在する高甘味度甘味料と一緒に使用されてもよい。

【0472】

特定の実施形態では、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、
レバウジオシドＡ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、スｓテビオールビオシド、ステビオシド、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、ＮＳＦ－０２、モグロシドＶ、羅漢果、アルロース、アロース、Ｄ－タガトース、エリスリトール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物を含む甘味料組成物で使用することができる。

【0473】

高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４はまた、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルターム、アリターム、サッカリン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、シクラメート、ネオターム、ズルシン、スオサンアドバンテーム、これらの塩、及びこれらの組み合わせなどの合成高甘味度甘味料と組み合わせて使用されてもよい。

【0474】

更に、高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４は、ギムネマ酸、ホズルシン、ジジフィン、ラクチゾール、及び他のものなどの天然甘味料抑制剤と組み合わせて使用することができる。ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４もまた、様々な旨味増強剤と組み合わせてもよい。ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、グルタメート、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、スレオニン、プロリン、セリン、グルタミン酸、リジン、トリプトファン及びこれらの組み合わせなどの旨味及び甘味アミノ酸と混合することができる。

【0475】

高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、炭水化物、ポリオール、アミノ酸及びこれらに対応する塩、ポリアミノ酸及びそれらの対応する塩、ポリ－アミノ酸及びそれらの対応する塩、糖酸及びそれらの対応する塩、有機酸塩及び有機塩基塩を含む有機塩、無機塩、苦味化合物、風味剤及び風味成分、渋味化合物、タンパク質又はタンパク質加水分解物、界面活性剤、乳化剤、フラボノイド、アルコール、ポリマー、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の添加剤と組み合わせて使用することができる。

【0476】

高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、ポリオール又は糖アルコールと組み合わせてもよい。用語「ポリオール」は、２つ以上のヒドロキシル基を含有する分子を指す。ポリオールは、それぞれ２、３、及び４つのヒドロキシル基を含有するジオール、トリオール、又はテトラオールであってもよい。ポリオールはまた、それぞれ５、６、又は７つのヒドロキシル基を含有するペンタノール、ヘキサオール、ヘプタノールなどの、４つを超えるヒドロキシル基を含有してもよい。更に、ポリオールはまた、糖アルコール、多価アルコール、又は炭水化物の還元形態であるポリアルコールであってもよく、この中でカルボニル基（アルデヒド又はケトン、還元糖）は、一級又は二級ヒドロキシル基に還元されている。ポリオールの例としては、エリスリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、スレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルト－オリゴ糖、還元キシロ－オリゴ糖、還元ゲンチオ－オリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、加水分解水添デンプン、ポリグリシトール及び糖アルコール、又は甘味料組成物の味に悪影響を及ぼさない還元可能な任意の他の炭水化物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0477】

高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、例えば、Ｄ－タガトース、Ｌ－糖、Ｌ－ソルボース、Ｌ－アラビノース及びこれらの組み合わせなどの低カロリー甘味料と組み合わせてもよい。

【0478】

高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、様々な炭水化物と組み合わせてもよい。用語「炭水化物」は、一般には、一般式（ＣＨ_２Ｏ）_ｎ（式中、ｎは３～３０である）の複数のヒドロキシル基で置換されたアルデヒド又はケトン、並びにそれらのオリゴマー及びポリマーを指す。加えて、本発明の炭水化物は、１つ以上の位置で置換又は脱酸素化され得る。本明細書で使用するとき、炭水化物は、非修飾炭水化物、炭水化物誘導体、置換炭水化物、及び修飾炭水化物を包含する。本明細書で使用するとき、語句「炭水化物誘導体」、「置換炭水化物」、及び「修飾炭水化物」は同義である。修飾炭水化物は、少なくとも１つの原子が付加、除去、若しくは置換された任意の炭水化物、又はこれらの組み合わせを意味する。したがって、炭水化物誘導体又は置換炭水化物としては、置換及び非置換の単糖、二糖類、オリゴ糖、及び多糖類が挙げられる。炭水化物誘導体又は置換炭水化物は、任意に、任意の対応するＣ位で脱酸素化されてもよく、かつ／又は水素、ハロゲン、ハロアルキル、カルボキシル、アシル、アシルオキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホ、メルカプト、イミノ、スルホニル、スルフェニル、スルフィニル、スルファモイル、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィノ、チオエステル、チオエーテル、オキシミノ、ヒドラジノ、カルバミル、ホスホ、ホスホナト、又は炭水化物誘導体若しくは置換炭水化物官能基に提供される任意の他の実行可能な官能基などの１つ以上の部分で置換されて、甘味料組成物の甘味を向上させることができる。

【0479】

本発明に従って使用され得る炭水化物の例としては、プシコース、ツラノース、アロース、タガトース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、イドース、タロース、エリトルロース、キシルロース、プシコース、ツラノース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、フコース、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノ－ラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルト－オリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロ－オリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ－末端オリゴ糖、ゲンチオ－オリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ソルボース、ニゲロ－オリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フルクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロ－オリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、リボノース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液糖、カップリング糖、及び大豆オリゴ糖が挙げられるが、これらに限定されない。
更に、本明細書で使用される炭水化物は、Ｄ－又はＬ－立体配置のいずれかであってもよい。

【0480】

本発明により得られた高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、様々な生理活性物質又は機能性成分と組み合わせて使用することができる。機能性成分は、一般に、カロテノイド、食物繊維、脂肪酸、サポニン、酸化防止剤、栄養補助食品、フラボノイド、イソチオシアネート、フェノール、植物ステロール及びスタノール（フィトステロール及びフィトスタノール）；ポリオール；プレバイオティクス、プロバイオティクス；フィトエストロゲン；大豆タンパク質；硫化物／チオール；アミノ酸；タンパク質；ビタミン；及びミネラルなどのカテゴリに分類される。機能性成分はまた、心血管、コレステロール低減、及び抗炎症などの健康効果に基づいて分類され得る。例示的な機能性成分は、国際公開第２０１３／０９６４２０号に提供され、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0481】

本発明により得られた高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、高甘味度の甘味料として適用され、ゼロカロリー、低カロリー又は糖尿病患者用飲料、及び改善した味特性を有する食品を生み出すことができる。また、飲料、食料品、医薬品、及び糖を使用できない他の製品にも使用することができる。加えて、高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、ヒトの消費に特化した飲み物、食料品、及び他の製品のみならず、改善した特性を有する動物用の餌及び飼料にも、高甘味度の甘味料として使用することができる。

【0482】

本発明により得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、発泡抑制剤として適用され、ゼロカロリー、低カロリー又は糖尿病患者用飲料、及び食品を生み出すことができる。

【0483】

高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４が甘味料化合物として使用され得る消費製品の例としては、ウォッカ、ワイン、ビール、リキュール、及び日本酒などのアルコール飲料；天然ジュース；清涼飲料；炭酸ソフトドリンク；ダイエット飲料；ゼロカロリー飲料；低カロリー飲料及び食物；ヨーグルト飲料；インスタントジュース；インスタントコーヒー；粉末型インスタント飲料；製缶品；シロップ；発酵大豆ペースト；醤油；酢；ドレッシング；マヨネーズ；ケチャップ；カレー；スープ；インスタントブイヨン；粉末醤油；粉末酢；ビスケットの種類；米菓；クラッカー；パン；チョコレート；キャラメル；キャンディ；チューインガム；ゼリー；プリン；保存加工された果物及び野菜；生クリーム；ジャム；マーマレード；フラワーペースト；粉末ミルク；アイスクリーム；シャーベット；瓶詰野菜及び果物；煮豆缶詰甘味を付与したソースで煮た肉及び食物；農産野菜食品；海産物；ハム；ソーセージ；魚肉ハム；魚肉ソーセージ；魚肉ペースト；魚の揚げ物製品海産物の干物；冷凍食品；保存加工された海藻；保存加工された肉；タバコ；医療製品、及び多くの他のものが挙げられるが、これらに限定されない。原則として、それは、無制限の用途を有することができる。

【0484】

高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４が風味改質剤又は改質特性を有する風味剤として使用され得る消費可能な製品の例としては、ウォッカ、ワイン、ビール、リキュール、及び日本酒などのアルコール飲料；天然ジュース；清涼飲料；炭酸ソフトドリンク；ダイエット飲料；ゼロカロリー飲料；低カロリー飲料及び食物；ヨーグルト飲料；インスタントジュース；インスタントコーヒー；粉末型インスタント飲料；製缶品；シロップ；発酵大豆ペースト；醤油；酢；ドレッシング；マヨネーズ；ケチャップ；カレー；スープ；インスタントブイヨン；粉末醤油；粉末酢；ビスケットの種類；米菓；クラッカー；パン；チョコレート；キャラメル；キャンディ；チューインガム；ゼリー；プリン；保存加工された果物及び野菜；生クリーム；ジャム；マーマレード；フラワーペースト；粉末ミルク；アイスクリーム；シャーベット；瓶詰野菜及び果物；煮豆缶詰甘味を付与したソースで煮た肉及び食物；農産野菜食品；海産物；ハム；ソーセージ；魚肉ハム；魚肉ソーセージ；魚肉ペースト；魚の揚げ物製品海産物の干物；冷凍食品；保存加工された海藻；保存加工された肉；タバコ；医療製品、及び多くの他のものが挙げられるが、これらに限定されない。原則として、それは、無制限の用途を有することができる。

【0485】

食料品、飲料、医薬品、化粧品、卓上製品、及びチューインガムなどの製品の製造中に、混合、混練、溶解、ピックリング、浸透、パーコレーション、スプリンキング、噴霧、注入、及び他の方法などの従来の方法を使用することができる。

【0486】

更に、本発明で得られた高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）のステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、乾燥又は液体の形態で使用されてもよい。

【0487】

高度に精製された対象とするステビオール配糖体は、食品の熱処理の前後に添加することができる。高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４の量は、使用目的に応じる。上述のように、これは、単独で又は他の化合物と組み合わせて添加することができる。

【0488】

本発明はまた、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４を甘味増強剤として使用する飲料の甘味増強も目的とし、ここでは、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、それぞれの甘味認識閾値以下の濃度で存在する。

【0489】

本明細書で使用するとき、用語「甘味増強剤（sweetness enhancer）」は、飲料などの組成物中の甘味の知覚を増強又は強化することができる化合物を指す。用語「甘味増強剤（sweetness enhancer）」は、「甘味増強剤（sweet taste potentiator）」、「甘味増強剤（sweetness potentiator）」、「甘味増幅剤（sweetness amplifier）」、及び「甘味強化剤（sweetness intensifier）」という用語と同義である。

【0490】

本明細書で一般に使用される用語「甘味認識閾値濃度」は、ヒトの味覚によって知覚可能な甘味化合物の最も低い既知濃度であり、典型的には約１．０％スクロース当量（１．０％ＳＥ）である。一般に、甘味増強剤は、所与の甘味増強剤の甘味認識閾値濃度以下で存在するとき、それら自体で著しい甘味を提供することなく、甘味料の甘味を増強又は強化することができるが、甘味増強剤は、甘味認識閾値濃度を上回る濃度でそれ自体が甘味を提供することができる。甘味認識閾値濃度は、特定の増強剤に特異的であり、飲料マトリックスに基づいて変化し得る。甘味認識閾値濃度は、所与の飲料マトリックス中の１．０％超のスクロース当量が検出されるまで、所与の増強剤の濃度を増加させる味試験によって容易に判定することができる。約１．０％スクロース当量を提供する濃度は、甘味認識閾値と見なされる。

【0491】

いくつかの実施形態では、甘味料は、例えば、約１．０重量％、約１．５重量％、約２．０重量％、約２．５重量％、約３．０重量％、約３．５重量、約４．０％重量％、約４．５重量％、約５．０重量％、約５．５重量％、約６．０重量％、約６．５重量％、約７．０％重量％、約７．５重量％、約８．０重量％、約８．５重量％、約９．０重量％、約９．５重量％、約１０．０重量％、約１０．５重量％、約１１．０重量％、約１１．５重量％又は約１２．０重量％などの約０．５重量％～約１２重量％の量で飲料中に存在する。

【0492】

特定の実施形態では、甘味料は、例えば、約２重量％～約８重量％、約３重量％～約７重量％、又は約４重量％～約６重量％などの、約０．５重量％～約１０重量の量で飲料中に存在する。特定の実施形態では、甘味料は、約０．５重量％～約８重量％の量で飲料中に存在する。別の特定の実施形態では、甘味料は、約２重量％～約８重量％の量で飲料中に存在する。

【0493】

一実施形態では、甘味料は、従来のカロリー甘味料である。好適な甘味料としては、スクロース、フルクトース、グルコース、高フルクトースコーンシロップ、及び高フルクトースコーンシロップが挙げられるが、これらに限定されない。

【0494】

別の実施形態では、甘味料はエリスリトールである。

【0495】

更に別の実施形態では、甘味料は希少糖である。好適な希少糖としては、Ｄ－アロース、Ｄ－プシコース、Ｄ－リボース、Ｄ－タガトース、Ｌ－グルコース、Ｌ－フコース、Ｌ－アラビノース、Ｄ－ツラノース、Ｄ－ロイクロース、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0496】

甘味料は、単独で、又は他の甘味料と組み合わせて使用することができることが想到される。

【0497】

一実施形態では、希少糖はＤ－アロースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－アロースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0498】

別の実施形態では、希少糖はＤ－プシコースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－プシコースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0499】

更に別の実施形態では、希少糖はＤ－リボースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－リボースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0500】

更に別の実施形態では、希少糖はＤ－タガトースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－タガトースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0501】

更なる実施形態では、希少糖は、Ｌ－グルコースである。より具体的な実施形態では、Ｌ－グルコースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0502】

一実施形態では、希少糖はＬ－フコースである。より具体的な実施形態では、Ｌ－フコースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0503】

別の実施形態では、希少糖はＬ－アラビノースである。より具体的な実施形態では、Ｌ－アラビノースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0504】

更に別の実施形態では、希少糖はＤ－ツラノースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－ツラノースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0505】

更に別の実施形態では、希少糖はＤ－ロイクロースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－ロイクロースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。

【0506】

甘味増強剤の甘味認識閾値以下の濃度での添加は、甘味増強剤の非存在下での対応する飲料と比較して、甘味料及び甘味増強剤を含む飲料の検出されたスクロース当量を増加させる。更に、甘味は、任意の甘味料の非存在下で、少なくとも１つの甘味増強剤の同じ濃度を含有する溶液の検出可能な甘味よりも多い量だけ増加させることができる。

【0507】

更に、本発明はまた、甘味料を含む飲料を提供することと、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４若しくはこれらの組み合わせから選択される甘味増強剤を添加することと、を含む、甘味料を含む飲料の甘味を増強させるための方法も提供し、ここでは、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、それらの甘味認識閾値以下の濃度で存在する。

【0508】

ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４の、甘味認識閾値以下の濃度での甘味料を含有する飲料への添加は、検出されるスクロース当量を、例えば、１．０％、約１．５％、約２．０％、約２．５％、約３．０％、約３．５％、約４．０％、約４．５％又は約５．０％などの約１．０％～約５．０％まで増加させ得る。

【0509】

以下の実施例は、高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４の調製のための本発明の好ましい実施形態を例証する。本発明は、単なる例示である実施例に記載される材料、比率、条件、及び手順に限定されないことを理解されたい。

【0510】

実施例
実施例１
生体触媒プロセスで使用される操作された酵素のタンパク質配列
配列番号１：
＞ＳｕＳｙ＿ＡＴ、バリアントＰＭ１－５４－２－Ｅ０５（操作されたスクロースシンターゼ；ＷＴ遺伝子の供給源：シロイヌナズナ（Arabidopsis thaliana））
ＭＡＮＡＥＲＭＩＴＲＶＨＳＱＲＥＲＬＮＥＴＬＶＳＥＲＮＥＶＬＡＬＬＳＲＶＥＡＫＧＫＧＩＬＱＱＮＱＩＩ ＡＥＦＥＡＬＰＥＱＴＲＫＫＬＥＧＧＰＦＦＤＬＬＫＳＴＱＥＡＩＶＬＰＰＷＶＡＬＡＶＲＰＲＰＧＶＷＥＹＬ ＲＶＮＬＨＡＬＶＶＥＥＬＱＰＡＥＦＬＨＦＫＥＥＬＶＤＧＶＫＮＧＮＦＴＬＥＬＤＦＥＰＦＮＡＳＩＰＲＰＴ ＬＨＫＹＩＧＮＧＶＤＦＬＮＲＨＬＳＡＫＬＦＨＤＫＥＳＬＬＰＬＬＤＦＬＲＬＨＳＨＱＧＫＮＬＭＬＳＥＫＩ ＱＮＬＮＴＬＱＨＴＬＲＫＡＥＥＹＬＡＥＬＫＳＥＴＬＹＥＥＦＥＡＫＦＥＥＩＧＬＥＲＧＷＧＤＮＡＥＲＶＬ ＤＭＩＲＬＬＬＤＬＬＥＡＰＤＰＳＴＬＥＴＦＬＧＲＶＰＭＶＦＮＶＶＩＬＳＰＨＧＹＦＡＱＤＮＶＬＧＹＰＤ ＴＧＧＱＶＶＹＩＬＤＱＶＲＡＬＥＩＥＭＬＱＲＩＫＱＱＧＬＮＩＫＰＲＩＬＩＬＴＲＬＬＰＤＡＶＧＴＴＣＧ ＥＲＬＥＲＶＹＤＳＥＹＣＤＩＬＲＶＰＦＲＴＥＫＧＩＶＲＫＷＩＳＲＦＥＶＷＰＹＬＥＴＹＴＥＤＡＡＶＥＬ ＳＫＥＬＮＧＫＰＤＬＩＩＧＮＹＳＤＧＮＬＶＡＳＬＬＡＨＫＬＧＶＴＱＣＴＩＡＨＡＬＥＫＴＫＹＰＤＳＤＩ ＹＷＫＫＬＤＤＫＹＨＦＳＣＱＦＴＡＤＩＦＡＭＮＨＴＤＦＩＩＴＳＴＦＱＥＩＡＧＳＫＥＴＶＧＱＹＥＳＨＴ ＡＦＴＬＰＧＬＹＲＶＶＨＧＩＤＶＦＤＰＫＦＮＩＶＳＰＧＡＤＭＳＩＹＦＰＹＴＥＥＫＲＲＬＴＫＦＨＳＥＩ ＥＥＬＬＹＳＤＶＥＮＤＥＨＬＣＶＬＫＤＫＫＫＰＩＬＦＴＭＡＲＬＤＲＶＫＮＬＳＧＬＶＥＷＹＧＫＮＴＲＬ ＲＥＬＶＮＬＶＶＶＧＧＤＲＲＫＥＳＫＤＮＥＥＫＡＥＭＫＫＭＹＤＬＩＥＥＹＫＬＮＧＱＦＲＷＩＳＳＱＭＤ ＲＶＲＮＧＥＬＹＲＹＩＣＤＴＫＧＡＦＶＱＰＡＬＹＥＡＦＧＬＴＶＶＥＡＭＴＣＧＬＰＴＦＡＴＣＫＧＧＰＡ ＥＩＩＶＨＧＫＳＧＦＨＩＤＰＹＨＧＤＱＡＡＤＬＬＡＤＦＦＴＫＣＫＥＤＰＳＨＷＤＥＩＳＫＧＧＬＱＲＩＥ ＥＫＹＴＷＱＩＹＳＱＲＬＬＴＬＴＧＶＹＧＦＷＫＨＶＳＮＬＤＲＬＥＨＲＲＹＬＥＭＦＹＡＬＫＹＲＰＬＡＱ ＡＶＰＬＡＱＤＤ

【0511】

配列番号２：
＞ＵＧＴＳｌ２バリアント０２３４（操作されたグルコシルトランスフェラーゼ；ＷＴ遺伝子の供給源：トマト（Solanum lycopersicum））
ＭＡＴＮＬＲＶＬＭＦＰＷＬＡＹＧＨＩＳＰＦＬＮＩＡＫＱＬＡＤＲＧＦＬＩＹＬＣＳＴＲＩＮＬＥＳＩＩＫＫ ＩＰＥＫＹＡＤＳＩＨＬＩＥＬＱＬＰＥＬＰＥＬＰＰＨＹＨＴＴＮＧＬＰＰＨＬＮＰＴＬＨＫＡＬＫＭＳＫＰＮ ＦＳＲＩＬＱＮＬＫＰＤＬＬＩＹＤＶＬＱＰＷＡＥＨＶＡＮＥＱＧＩＰＡＧＫＬＬＶＳＣＡＡＶＦＳＹＦＦＳＦ ＲＫＮＰＧＶＥＦＰＦＰＡＩＨＬＰＥＶＥＫＶＫＩＲＥＩＬＡＫＥＰＥＥＧＧＲＬＤＥＧＮＫＱＭＭＬＭＣＴＳ ＲＴＩＥＡＫＹＩＤＹＣＴＥＬＣＮＷＫＶＶＰＶＧＰＰＦＱＤＬＩＴＮＤＡＤＮＫＥＬＩＤＷＬＧＴＫＰＥＮＳ ＴＶＦＶＳＦＧＳＥＹＦＬＳＫＥＤＭＥＥＩＡＦＡＬＥＡＳＮＶＮＦＩＷＶＶＲＦＰＫＧＥＥＲＮＬＥＤＡＬＰ ＥＧＦＬＥＲＩＧＥＲＧＲＶＬＤＫＦＡＰＱＰＲＩＬＮＨＰＳＴＧＧＦＩＳＨＣＧＷＮＳＶＭＥＳＩＤＦＧＶＰ ＩＩＡＭＰＩＨＮＤＱＰＩＮＡＫＬＭＶＥＬＧＶＡＶＥＩＶＲＤＤＤＧＫＩＨＲＧＥＩＡＥＡＬＫＳＶＶＴＧＥ ＴＧＥＩＬＲＡＫＶＲＥＩＳＫＮＬＫＳＩＲＤＥＥＭＤＡＶＡＥＥＬＩＱＬＣＲＮＳＮＫＳＫ

【0512】

配列番号３：
＞ＵＧＴ７６Ｇ１バリアント００４２（操作されたグルコシルトランスフェラーゼ；ＷＴ遺伝子の供給源：ステビア・レバウディアナ（Stevia rebaudiana））
ＭＥＮＫＴＥＴＴＶＲＲＲＲＲＩＩＬＦＰＶＰＦＱＧＨＩＮＰＩＬＱＬＡＮＶＬＹＳＫＧＦＡＩＴＩＬＨＴＮＦＮＫＰＫＴＳＮＹＰＨＦＴＦＲＦＩＬＤＮＤＰＱＤＥＲＩＳＮＬＰＴＨＧＰＬＡＧＭＲＩＰＩＩＮＥＨＧＡＤＥＬＲＲＥＬＥＬＬＭＬＡＳＥＥＤＥＥＶＳＣＬＩＴＤＡＬＷＹＦＡＱＤＶＡＤＳＬＮＬＲＲＬＶＬＭＴＳＳＬＦＮＦＨＡＨＶＳＬＰＱＦＤＥＬＧＹＬＤＰＤＤＫＴＲＬＥＥＱＡＳＧＦＰＭＬＫＶＫＤＩＫＳＡＹＳＮＷＱＩＧＫＥＩＬＧＫＭＩＫＱＴＫＡＳＳＧＶＩＷＮＳＦＫＥＬＥＥＳＥＬＥＴＶＩＲＥＩＰＡＰＳＦＬＩＰＬＰＫＨＬＴＡＳＳＳＳＬＬＤＨＤＲＴＶＦＥＷＬＤＱＱＡＰＳＳＶＬＹＶＳＦＧＳＴＳＥＶＤＥＫＤＦＬＥＩＡＲＧＬＶＤＳＧＱＳＦＬＷＶＶＲＰＧＦＶＫＧＳＴＷＶＥＰＬＰＤＧＦＬＧＥＲＧＫＩＶＫＷＶＰＱＱＥＶＬＡＨＰＡＩＧＡＦＷＴＨＳＧＷＮＳＴＬＥＳＶＣＥＧＶＰＭＩＦＳＳＦＧＧＤＱＰＬＮＡＲＹＭＳＤＶＬＲＶＧＶＹＬＥＮＧＷＥＲＧＥＶＶＮＡＩＲＲＶＭＶＤＥＥＧＥＹＩＲＱＮＡＲＶＬＫＱＫＡＤＶＳＬＭＫＧＧＳＳＹＥＳＬＥＳＬＶＳＹＩＳＳＬ

【0513】

配列番号４：
＞ＵＤＰ－グリコシルトランスフェラーゼ９１Ｃ１（ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１；ＷＴ遺伝子の供給源：イネジャポニカ型（Oryza sativa Japonica）；ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿０１５６２９１４１．１）
ＭＤＳＧＹＳＳＳＹＡＡＡＡＧＭＨＶＶＩＣＰＷＬＡＦＧＨＬＬＰＣＬＤＬＡＱＲＬＡＳＲＧＨＲＶＳＦＶＳＴＰＲＮＩＳＲＬＰＰＶＲＰＡＬＡＰＬＶＡＦＶＡＬＰＬＰＲＶＥＧＬＰＤＧＡＥＳＴＮＤＶＰＨＤＲＰＤＭＶＥＬＨＲＲＡＦＤＧＬＡＡＰＦＳＥＦＬＧＴＡＣＡＤＷＶＩＶＤＶＦＨＨＷＡＡＡＡＡＬＥＨＫＶＰＣＡＭＭＬＬＧＳＡＨＭＩＡＳＩＡＤＲＲＬＥＲＡＥＴＥＳＰＡＡＡＧＱＧＲＰＡＡＡＰＴＦＥＶＡＲＭＫＬＩＲＴＫＧＳＳＧＭＳＬＡＥＲＦＳＬＴＬＳＲＳＳＬＶＶＧＲＳＣＶＥＦＥＰＥＴＶＰＬＬＳＴＬＲＧＫＰＩＴＦＬＧＬＭＰＰＬＨＥＧＲＲＥＤＧＥＤＡＴＶＲＷＬＤＡＱＰＡＫＳＶＶＹＶＡＬＧＳＥＶＰＬＧＶＥＫＶＨＥＬＡＬＧＬＥＬＡＧＴＲＦＬＷＡＬＲＫＰＴＧＶＳＤＡＤＬＬＰＡＧＦＥＥＲＴＲＧＲＧＶＶＡＴＲＷＶＰＱＭＳＩＬＡＨＡＡＶＧＡＦＬＴＨＣＧＷＮＳＴＩＥＧＬＭＦＧＨＰＬＩＭＬＰＩＦＧＤＱＧＰＮＡＲＬＩＥＡＫＮＡＧＬＱＶＡＲＮＤＧＤＧＳＦＤＲＥＧＶＡＡＡＩＲＡＶＡＶＥＥＥＳＳＫＶＦＱＡＫＡＫＫＬＱＥＩＶＡＤＭＡＣＨＥＲＹＩＤＧＦＩＱＱＬＲＳＹＫＤ

【0514】

実施例２
配列番号１のＳｕＳｙ＿ＡＴバリアントの発現及び配合
配列番号１（実施例１）のＳｕＳｙ＿ＡＴバリアントをコードする遺伝子を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ－１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。得られたプラスミドを、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。

【0515】

細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／ｌ）を補充したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ４１（２００５）２０７－２３４）中で培養した。遺伝子の発現を、ＩＰＴＧ（０．２ｍＭ）により対数相で誘導し、３０℃及び２００ｒｐｍで１６～１８時間実施した。

【0516】

細胞を遠心分離（３２２０×ｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．０；２ｍＭのＭｇＣｌ_２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ））で２００の光学密度（６００ｎｍ（ＯＤ_６００）で測定）まで再懸濁した。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００×ｇ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルターを通した濾過によって滅菌し、蒸留水で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。

【0517】

ＳｕＳｙ＿ＡＴの酵素活性調製物については、単位での活性は以下のように定義される：１ｍＵのＳｕＳｙ＿ＡＴは１分間で１ｎｍｏｌのスクロースフルクトースに変化させる。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、ｔ_０で４００ｍＭのスクロース、３ｍＭのＭｇＣｌ_２、及び１５ｍＭのウリジン二リン酸（ＵＤＰ）である。

【0518】

実施例３
配列番号２のＵＧＴＳｌ２バリアントの発現及び配合
配列番号２（実施例１）のＵＧＴＳｌ２バリアントをコードする遺伝子を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ－１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。
得られたプラスミドを、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。

【0519】

細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／ｌ）を補充したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ４１（２００５）２０７－２３４）中で培養した。遺伝子の発現を、ＩＰＴＧ（０．１ｍＭ）により対数相で誘導し、３０℃及び２００ｒｐｍで１６～１８時間実施した。

【0520】

細胞を遠心分離（３２２０×ｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．０；２ｍＭのＭｇＣｌ_２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ））で２００の光学密度（６００ｎｍ（ＯＤ_６００）で測定）まで再懸濁した。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００×ｇ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルターを通した濾過によって滅菌し、１Ｍのスクロース溶液で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。

【0521】

ＵＧＴＳｌ２の酵素活性調製物については、単位での活性は以下のように定義される：１ｍＵのＵＧＴＳｌ２は１分間で１ｎｍｏｌのレバウジオシドＡ（Ｒｅｂ Ａ）をレバウジオシドＤ（Ｒｅｂ Ｄ）に変化させる。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、ｔ_０で１０ｍＭのＲｅｂ Ａ、５００ｍＭのスクロース、３ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．２５ｍＭのウリジン二リン酸（ＵＤＰ）及び３Ｕ／ｍＬのＳｕＳｙ＿ＡＴである。

【0522】

実施例４
配列番号３のＵＧＴ７６Ｇ１バリアントの発現及び配合
配列番号３（実施例１）のＵＧＴ７６Ｇ１バリアントをコードする遺伝子を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ－１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。得られたプラスミドを、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。

【0523】

細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／ｌ）を補充したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ４１（２００５）２０７－２３４）中で培養した。遺伝子の発現を、ＩＰＴＧ（０．１ｍＭ）により対数相で誘導し、３０℃及び２００ｒｐｍで１６～１８時間実施した。

【0524】

細胞を遠心分離（３２２０×ｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．０；２ｍＭのＭｇＣｌ_２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ））で２００の光学密度（６００ｎｍ（ＯＤ_６００）で測定）まで再懸濁した。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００×ｇ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルターを通した濾過によって滅菌し、１Ｍのスクロース溶液で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。

【0525】

ＵＧＴ７６Ｇ１の酵素活性調製物については、単位での活性は以下のように定義される：１ｍＵのＵＧＴ７６Ｇ１は１分間で１ｎｍｏｌのレバウジオシドＤ（Ｒｅｂ Ｄ）をレバウジオシドＭ（Ｒｅｂ Ｍ）に変化させる。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、ｔ_０で１０ｍＭのＲｅｂ Ｄ、５００ｍＭのスクロース、３ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．２５ｍＭのウリジン二リン酸（ＵＤＰ）及び３Ｕ／ｍＬのＳｕＳｙ＿ＡＴである。

【0526】

実施例５
ＵＧＴＳｌ２、ＳｕＳｙ＿ＡＴ及びＵＧＴ７６Ｇ１を同時に添加する、ワンポット反応でのレバウジオシドＣからのレバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４の合成。

【0527】

レバウジオシド Ｎ２（ｒｅｂ Ｎ２）及びレバウジオシド Ｏ４（ｒｅｂ Ｏ４）を、３つの酵素（実施例１、２、３、及び４を参照）：ＵＧＴＳｌ２（配列番号２のバリアント）、ＳｕＳｙ＿ＡＴ（配列番号１のバリアント）及びＵＧＴ７６Ｇ１（配列番号３のバリアント）を利用して、レバウジオシドＣからワンポット反応で直接合成した（図３ａ及び図３ｂを参照）。最終反応溶液は、１０５Ｕ／Ｌ のＵＧＴＳｌ２、４０５Ｕ／Ｌ のＳｕＳｙ＿ＡＴ、３Ｕ／Ｌ のＵＧＴ７６Ｇ１、５ｍＭのレバウジオシドＣ、０．２５ｍＭのウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、１Ｍのスクロース、４ｍＭのＭｇＣｌ_２、及びリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．６）を含有した。まず、２０７ｍＬの蒸留水を、０．２４ｇのＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ、１０３ｇのスクロース、９．９ｍＬの１．５Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．６）及び１５ｇのレバウジオシドＣと混合した。成分を溶解した後、温度を４５℃に調整し、ＵＧＴＳｌ２、ＳｕＳｙ＿ＡＴ、ＵＧＴ７６Ｇ１、及び３９ｍｇのＵＤＰを添加した。反応混合物を４５℃振盪器で２４時間インキュベートした。更に３９ｍｇのＵＤＰを８時間目及び１８時間目に添加した。いくつかの時点でのｒｅｂ Ｏ４、ｒｅｂ Ｎ２、ｒｅｂ Ｋ、及びｒｅｂ Ｃの含有量を、ＨＰＬＣにより分析した。

【0528】

分析のために、１７％のＨ_３ＰＯ_４を用いて反応混合物をｐＨ５．５に調整し、次いで１０分間沸騰させることによって、生体内変換試料を不活性化した。得られた試料を濾過し、濾液を１０倍に希釈し、ＨＰＬＣ分析用の試料として使用した。ＨＰＬＣアッセイは、ポンプ、カラムサーモスタット、オートサンプラー、バックグラウンド補正が可能なＵＶ検出器、及びデータ収集システムからなるＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰ １２００ ＨＰＬＣシステムで実施した。分析物を、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＳＢ－Ｃ１８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、２．７μｍ使用して４０℃で分離した。移動相は、２つのプレミックスから構成された：
－７５％の１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．６）及び２５％のアセトニトリルを含有するプレミックス１、及び
－６８％の１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．６）及び３２％のアセトニトリルを含有するプレミックス２．

【0529】

プレミックス１で溶出勾配を開始し、１２．５分でプレミックス２に代えて５０％にし、１３分でプレミックス２に代えて１００％にした。合計運転時間は４５分であった。
カラム温度を４０℃に維持した。注入量は５μＬであった。レバウジオシド種は、２１０ｎｍでＵＶによって検出された。

【0530】

表３は、Ｒｅｂ Ｃの特定されたレバウジオシド種への変換（面積百分率）を示す。
レバウジオシドＣのクロマトグラム及び９６時間での反応混合物を、それぞれ図４及び図５に示す。当業者であれば、保持時間は、溶媒及び／又は装置の変化によって時折変化し得ることを理解するであろう。

【0531】

【表4】

【0532】

実施例６
レバウジオシドＮ２及びＯ４の精製
４０ｍＬの実施例５の反応混合物（９６時間後）を、ｐＨをｐＨ５．５にＨ_３ＰＯ_４で調整し、次いで１０分間沸騰させ、濾過した。濾液を、水で予め平衡化した３０ｍＬのＹＷＤ０３（Ｃａｎｇｚｈｏｕ Ｙｕａｎｗｅｉ，Ｃｈｉｎａ）樹脂を含有するカラムに充填した。樹脂を１５０ｍＬの温水（３５℃）で洗浄し、この工程からの水流出液を捨てた。

【0533】

２００ｍＬの７０％ｖ／ｖエタノール／水で溶出することにより、ステビオール配糖体をＹＷＤ０３樹脂カラムから溶出させた。この工程からの流出液を回収し、試料の容量が約２５ｍＬになるまでロータリーエバポレーターで蒸発させた。この濃縮した試料を、以下の表４に記載の条件を使用して分取ＨＰＬＣにより更に精製した。

【0534】

複数の実施から個々の化合物に相当する分取ＨＰＬＣ分画を、保持時間に従って組み合わせた。試料を凍結乾燥して、６０ｍｇのレバウジオシドＮ２及び１０ｍｇのレバウジオシドＯ４を得た。

【0535】

【表5】

【0536】

精製したｒｅｂ Ｎ２及びｒｅｂ Ｏ４のクロマトグラムを、それぞれ図６ａ及び６ｂに示す。当業者であれば、保持時間は、溶媒及び／又は装置の変化によって時折変化し得ることを理解するであろう。

【0537】

実施例７
レバウジオシドＮ２の構造解明
ＮＭＲ実験をＢｒｕｋｅｒ ５００ＭＨｚ分光計で実施し、試料をピリジン－ｄ５に溶解した。試料からのシグナルと共に、δ_ｃ１２３．５、１３５．５、１４９．９ｐｐｍ及びδ_Ｈ７．１９、７．５５、８．７１ｐｐｍでのピリジン－ｄ５からのシグナルを観測した。
ピリジン－ｄ_５で記録されたレバウジオシドＮ２の^１Ｈ－ＮＭＲスペクトルは、試料の優れた品質を確認した（図７ａを参照）。ＨＳＱＣ（図８ａを参照）は、Ｈ，Ｈ－ＣＯＳＹ（図９ａ）で観測可能な、Ｃ－１５に長距離結合した糖領域中のエキソ－メチレン基の存在を示している。四級炭素（Ｃ－１３、Ｃ－１６及びＣ－１９）の他の深視野シグナルは、ＨＭＢＣによって検出される（図１０ａ）。ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ及びＨ，Ｈ－ＣＯＳＹ中のシグナルの相関は、以下のアグリコン構造を有するステビオール配糖体の存在を明らかにする（図１ｅを参照）。

【0538】

【化1】

レバウジオシドＮ２のＨＳＱＣスペクトルはまた、糖領域のシグナルとのＨ，Ｈ－ＣＯＳＹ相関を有するメチル－二重項（Ｊ＝６．３Ｈｚ）の存在を示す。ＨＳＱＣはまた、６つのアノマーシグナルの存在を示し、これらのアノマーシグナルのうちの５つは約８Ｈｚのカップリング定数を有し、それらの糖結合のブロードシグナルは、これら６つの糖をβ－Ｄ－配糖体として特定することを可能にする。第６のアノマーシグナルはブロードの一重項であり、メチル二重項とのＨ，Ｈ－ＣＯＳＹ相関は、この糖をα－Ｌ－ラムノースとして特定することを可能にする。

【0539】

ＨＳＱＣとＨＭＢＣとを組み合わせたアノマープロトンの観測は、糖結合及びアグリコンとの相関を明らかにする。ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ（図１１ａ）及びＨＳＱＣの組み合わせを使用することにより、糖配列の割り当てを確認した。

【0540】

これと共に、上記のＮＭＲ実験の結果を使用して、レバウジオシドＮ２の構造のプロトン及び炭素の化学シフトを割り当てた（表５を参照されたい）。

【0541】

【表6】

【0542】

【表7】

【0543】

【表8】

【0544】

全てのＮＭＲ結果の相関は、以下の化学構造で示されるように、ステビオールアグリコンに結合した５つのβ－Ｄ－グルコースと、１つのα－Ｌ－ラムノースとを有するレバウジオシドＮ２を示す（図１ａ及び１ｂを参照）：

【0545】

【化2】

【0546】

レバウジオシドＮ２のＬＣＭＳ（図１２ａ及び図１２ｂ）分析は、ｍ／ｚ１２７３．０での［Ｍ－Ｈ］^－イオンを、Ｃ_５６Ｈ_９０Ｏ_３２の予想される分子式（［Ｃ_５６Ｈ_８９Ｏ_３２］^－イオン１２７３．５について計算、誤差＜０．０５％）と良好に一致して示した。ＭＳデータは、レバウジオシドＮ２がＣ_５６Ｈ_９０Ｏ_３２の分子式を有することを確認している。ＬＣＭＳ分析を、表６に列挙した以下の条件で行った。

【0547】

【表9】

【0548】

実施例８
レバウジオシドＯ４の構造の解明
ＮＭＲ実験をＢｒｕｋｅｒ ５００ＭＨｚ分光計で実施し、試料をピリジン－ｄ５に溶解した。試料からのシグナルと共に、δ_ｃ１２３．５、１３５．５、１４９．９ｐｐｍ及びδ_Ｈ７．１９、７．５５、８．７１ｐｐｍでのピリジン－ｄ５からのシグナルを観測した。

【0549】

ピリジン－ｄ_５で記録されたレバウジオシドＯ４の^１Ｈ－ＮＭＲスペクトルは、試料の優れた品質を確認した（図７ｂを参照）。ＨＳＱＣ（図８ｂを参照）は、Ｈ，Ｈ－ＣＯＳＹ（図９ｂ）で観測可能な、Ｃ－１５に長距離結合した糖領域中のエキソ－メチレン基の存在を示している。四級炭素（Ｃ－１３、Ｃ－１６及びＣ－１９）の他の深視野シグナルは、ＨＭＢＣによって検出される（図１０ｂ）。ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ及びＨ，Ｈ－ＣＯＳＹ中のシグナルの相関は、以下のアグリコン構造を有するステビオール配糖体の存在を明らかにする（図１ｅを参照）。

【0550】

【化3】

【0551】

レバウジオシドＯ４のＨＳＱＣスペクトルはまた、糖領域のシグナルとのＨ，Ｈ－ＣＯＳＹ相関を有するメチル－ダブレット（Ｊ＝６．３Ｈｚ）の存在を示す。ＨＳＱＣはまた、７つのアノマーシグナルの存在を示し、これらのアノマーシグナルのうちの６つは約８Ｈｚのカップリング定数を有し、それらの糖結合のブロードシグナルは、これら６つの糖をβ－Ｄ－配糖体として特定することを可能にする。第７のアノマーシグナルはブロードの一重項であり、メチル二重項とのＨ，Ｈ－ＣＯＳＹ相関は、この糖をα－Ｌ－ラムノースとして特定することを可能にする。

【0552】

ＨＳＱＣとＨＭＢＣとを組み合わせたアノマープロトンの観測は、糖結合及びアグリコンとの相関を明らかにする。ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ（図１１ｂ）及びＨＳＱＣの組み合わせを使用することにより、糖配列の割り当てを確認した。

【0553】

上記のＮＭＲ実験の結果を使用して、レバウジオシドＯ４の構造のプロトン及び炭素の化学シフトを割り当てた（表７を参照されたい）。

【0554】

【表10】

【0555】

【表11】

【0556】

【表12】

【0557】

全てのＮＭＲ結果の相関は、以下の化学構造で示されるように、ステビオールアグリコンに結合した６つのβ－Ｄ－グルコースと、１つのα－Ｌ－ラムノースとを有するレバウジオシドＯ４を示す（図１ｃ及び１ｄを参照）：

【0558】

【化4】

【0559】

レバウジオシドＯ４のＬＣＭＳ（図１３ａ及び図１３ｂ）分析は、ｍ／ｚ１４３５．０での［Ｍ－Ｈ］^－イオンを、Ｃ_６２Ｈ_１００Ｏ_３７の予想される分子式（［Ｃ６２Ｈ_９９Ｏ_３７］^－イオン１４３５．６について計算、誤差＜０．０５％）と良好に一致して示した。ＭＳデータは、レバウジオシドＯ４がＣ_６２Ｈ_１００Ｏ_３７の分子式を有することを確認している。ＬＣＭＳ分析を、表６に列挙した条件を使用して行った。

【0560】

本発明及びその利点について詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更、置換、及び変更を行うことができることを理解されたい。更に、本出願の範囲は、本明細書に記載されるプロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法及び工程の特定の実施形態に限定されることを意図するものではない。当業者であれば、本発明の開示から容易に理解されるように、本明細書に記載される対応する実施形態と実質的に同じ機能を実行するか、又は実質的に同じ結果を達成する現在の既存の又は今後開発されるプロセス、機械、製造、物質の組成物、手段、方法、又は工程が、本発明に従って利用され得る。したがって、添付の特許請求の範囲は、その範囲内に、そのようなプロセス、機械、製造、物質の組成物、手段、方法、又は工程を含むことが意図される。

【図1a】

【図1b】

【図1c】

【図1d】

【図1e】

【図2a】

【図2b】

【図2c】

【図2d】

【図2e】

【図2f】

【図2g】

【図2h】

【図2i】

【図2j】

【図2k】

【図2l】

【図3a】

【図3b】

【図4】

【図5】

【図6a】

【図6b】

【図7a】

【図7b】

【図8a】

【図8b】

【図9a】

【図9b】

【図10a】

【図10b】

【図11a】

【図11b】

【図12a】

【図12b】

【図13a】

【図13b】

【配列表】

2024133514000001.app

【手続補正書】

【提出日】2024-07-04

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式を有するレバウジオシドＮ２。

【化1】

【外国語明細書】