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特開2024-133600抗ＣＤ１９抗体及びナチュラルキラー細胞を含む、腫瘍を治療する薬学的組み合わせ
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024133600
(43)【公開日】2024-10-02
(54)【発明の名称】抗ＣＤ１９抗体及びナチュラルキラー細胞を含む、腫瘍を治療する薬学的組み合わせ
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240925BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240925BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20240925BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240925BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240925BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20240925BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20240925BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61K39/395 D ZNA
A61P35/00
A61K35/17
A61P43/00 121
A61P35/02
C07K16/28
C12N5/0783
A61K39/395 D
【審査請求】有
【請求項の数】30
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024107975
(22)【出願日】2024-07-04
(62)【分割の表示】P 2021513780の分割
【原出願日】2019-09-05
(31)【優先権主張番号】10-2018-0109093
(32)【優先日】2018-09-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(71)【出願人】
【識別番号】518272614
【氏名又は名称】ジーシー・セル・コーポレイション
【氏名又は名称原語表記】ＧＣ ＣＥＬＬ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】316005432
【氏名又は名称】モルフォシス・アーゲー
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(72)【発明者】
【氏名】ホ・ジョンヒョン
(72)【発明者】
【氏名】チョン・ミヨン
(72)【発明者】
【氏名】クォン・スヒョン
(72)【発明者】
【氏名】イム・ホヨン
(72)【発明者】
【氏名】チョ・ソンユ
(72)【発明者】
【氏名】ウォン・ソンヨン
(72)【発明者】
【氏名】ファン・ユギョン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン・エンデル
(72)【発明者】
【氏名】ライナー・ボクスハンマー
(57)【要約】 （修正有）
【課題】非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病及び／または急性リンパ芽球性白血病などのＢ細胞由来の悪性腫瘍に対して相乗的な治療効果を示す薬学的組み合わせを提供する。
【解決手段】ＣＤ１９に特異的な抗体及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を含む、組み合わせを提供する。好ましくは、抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含む、前記組み合わせである。
【選択図】図５
【解決手段】ＣＤ１９に特異的な抗体及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を含む、組み合わせを提供する。好ましくは、抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含む、前記組み合わせである。
【選択図】図５
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＣＤ１９に特異的な抗体及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を含む、がんを治療するための薬学的組み合わせ。
【請求項2】
請求項１に記載の薬学的組み合わせであって、
前記抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含む、前記薬学的組み合わせ。
前記抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含む、前記薬学的組み合わせ。
【請求項3】
請求項１に記載の薬学的組み合わせであって、
前記抗体が、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、前記薬学的組み合わせ。
前記抗体が、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、前記薬学的組み合わせ。
【請求項4】
請求項１～３のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせであって、
前記抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＳＳＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）の重鎖可変領域と、ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９）の軽鎖可変領域とを含む、前記薬学的組み合わせ。
前記抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＳＳＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）の重鎖可変領域と、ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９）の軽鎖可変領域とを含む、前記薬学的組み合わせ。
【請求項5】
請求項１～４のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせであって、
前記抗体が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の重鎖定常領域を含む、前記薬学的組み合わせ。
前記抗体が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の重鎖定常領域を含む、前記薬学的組み合わせ。
【請求項6】
請求項１～５のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせであって、
前記抗体が、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）の軽鎖定常領域を含む、前記薬学的組み合わせ。
前記抗体が、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）の軽鎖定常領域を含む、前記薬学的組み合わせ。
【請求項7】
請求項１～６のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせであって、
前記ＮＫ細胞が、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）、
抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する、工程（ｉ）と、
サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する、工程（ｉｉ）と、
前記細胞にサイトカインを含む培地を添加し、前記細胞の濃度及び前記サイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する、工程（ｉｉｉ）と
を含む方法によって調製される、前記薬学的組み合わせ。
前記ＮＫ細胞が、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）、
抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する、工程（ｉ）と、
サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する、工程（ｉｉ）と、
前記細胞にサイトカインを含む培地を添加し、前記細胞の濃度及び前記サイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する、工程（ｉｉｉ）と
を含む方法によって調製される、前記薬学的組み合わせ。
【請求項8】
請求項１～６のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせであって、
前記ＮＫ細胞が、フィーダー細胞としてｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞、またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製される、前記薬学的組み合わせ。
前記ＮＫ細胞が、フィーダー細胞としてｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞、またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製される、前記薬学的組み合わせ。
【請求項9】
請求項８に記載の薬学的組み合わせであって、
前記ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株である、前記薬学的組み合わせ。
前記ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株である、前記薬学的組み合わせ。
【請求項10】
請求項９に記載の薬学的組み合わせであって、
前記ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株が、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株である、前記薬学的組み合わせ。
前記ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株が、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株である、前記薬学的組み合わせ。
【請求項11】
請求項８に記載の薬学的組み合わせであって、
前記種細胞が、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種である、前記薬学的組み合わせ。
前記種細胞が、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種である、前記薬学的組み合わせ。
【請求項12】
請求項１～１１のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせであって、
前記がんが、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌、リンパ腫及びＢ細胞由来の悪性腫瘍からなる群から選択される少なくとも１種である、前記薬学的組み合わせ。
前記がんが、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌、リンパ腫及びＢ細胞由来の悪性腫瘍からなる群から選択される少なくとも１種である、前記薬学的組み合わせ。
【請求項13】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせであって、
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が別々に投与される、前記薬学的組み合わせ。
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が別々に投与される、前記薬学的組み合わせ。
【請求項14】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせであって、
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が同時に投与される、前記薬学的組み合わせ。
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が同時に投与される、前記薬学的組み合わせ。
【請求項15】
請求項１～１４のいずれか１項に記載の組み合わせを含む、がんを治療するためのキット。
【請求項16】
がんを治療する薬物を調製するための、請求項１～１４のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせの使用。
【請求項17】
がんを治療するための、請求項１～１４のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせの使用。
【請求項18】
ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞を組み合わせて対象に投与する工程を含む、がんの治療方法。
【請求項19】
請求項１８に記載の方法であって、
前記抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含む、前記方法。
前記抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含む、前記方法。
【請求項20】
請求項１８に記載の方法であって、
前記抗体が、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、前記方法。
前記抗体が、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含む、前記方法。
【請求項21】
請求項１８～２０のいずれか１項に記載の方法であって、
前記ＮＫ細胞が、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）、
抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する、工程（ｉ）と、
サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する、工程（ｉｉ）と、
前記細胞にサイトカインを含む培地を添加し、前記細胞の濃度及び前記サイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する、工程（ｉｉｉ）によって調製される、前記方法。
前記ＮＫ細胞が、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）、
抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する、工程（ｉ）と、
サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する、工程（ｉｉ）と、
前記細胞にサイトカインを含む培地を添加し、前記細胞の濃度及び前記サイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する、工程（ｉｉｉ）によって調製される、前記方法。
【請求項22】
請求項１８～２０のいずれか１項に記載の方法であって、
前記ＮＫ細胞が、フィーダー細胞としてｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞、またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製される、前記方法。
前記ＮＫ細胞が、フィーダー細胞としてｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞、またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製される、前記方法。
【請求項23】
請求項２２に記載の方法であって、
前記ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株である、前記方法。
前記ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株である、前記方法。
【請求項24】
請求項２３に記載の方法であって、
前記ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株が、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株である、前記方法。
前記ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株が、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株である、前記方法。
【請求項25】
請求項２２に記載の方法であって、
前記種細胞が、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種である、前記方法。
前記種細胞が、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種である、前記方法。
【請求項26】
請求項１８～２５のいずれか１項に記載の方法であって、
前記がんが、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌、リンパ腫及びＢ細胞由来の悪性腫瘍からなる群から選択される少なくとも１種である、前記方法。
前記がんが、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌、リンパ腫及びＢ細胞由来の悪性腫瘍からなる群から選択される少なくとも１種である、前記方法。
【請求項27】
請求項１８～２６のいずれか１項に記載の方法であって、
前記投与の工程が、前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞を組み合わせて、同時に、順番に、または逆順番に投与することによって実施される、前記方法。
前記投与の工程が、前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞を組み合わせて、同時に、順番に、または逆順番に投与することによって実施される、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明の実施形態は、抗ＣＤ１９抗体及びナチュラルキラー細胞を含み、さらに非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及び／または急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）などのＢ細胞由来の悪性腫瘍に対して相乗的な治療効果を有する薬学的組み合わせに関する。
【背景技術】
【0002】
ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）は、Ｔ細胞と異なる、ＭＨＣに制限されない方法で標的を認識し、また自然免疫応答において重要な役割を担うリンパ球系細胞であることが知られている。ナチュラルキラー細胞は、抗ウイルス効果及び抗がん効果を発揮し得る。具体的には、ナチュラルキラー細胞は、悪性腫瘍を直接殺傷する役割、または樹状細胞の活性もしくは腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を誘発することで、腫瘍を発症した、もしくは腫瘍を発症している異常細胞を排除する役割を担う。さらに、ナチュラルキラー細胞の抗がん効果に関して、がん患者の治療におけるキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）－リガンドペアとのミスマッチを有する同種異系ナチュラルキラー細胞の使用は、自己ナチュラルキラー細胞を用いる場合よりもはるかに効果的かつ安全であることが証明されている。
【0003】
一方、ヒトＣＤ１９分子は、例えば、プレＢ細胞、発生初期の未成熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞及び悪性Ｂ細胞などのヒトＢ細胞の表面に発現する細胞表面受容体である。実際には、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）などのほとんどのＢ細胞系統の悪性腫瘍はＣＤ１９を発現する。そのため、抗ＣＤ１９抗体は、標的としてＣＤ１９抗原に結合することが可能であり、つまり、上述のＢ細胞由来の悪性腫瘍の治療免疫療法に用いることが可能である。
【0004】
近年いくつかの抗がん剤が発見及び開発されているにもかかわらず、ＣＤ１９発現腫瘍を含む多くの種類のがんの予後不良のために、このような種類のがんを治療するための改善された方法または治療薬が依然として必要である。したがって、本発明者らは、ナチュラルキラー細胞及びＣＤ１９に特異的な抗体の併用投与が、Ｂ細胞由来の悪性リンパ腫の治療に対して相乗効果を有することを確認し、本発明を完成するに至った。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
Ｎａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４－２５０（１９８３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
発明の開示
本発明の目的は、ＣＤ１９に特異的な抗体及びナチュラルキラー細胞、またはそれらの組み合わせを用いる併用療法を提供することである。
本発明の目的は、ＣＤ１９に特異的な抗体及びナチュラルキラー細胞、またはそれらの組み合わせを用いる併用療法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0007】
上述の目的を達成するための本発明の実施形態は、ＣＤ１９に特異的な抗体及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を含む、がんを治療するための薬学的組み合わせを提供することが可能である。
【0008】
抗体は、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を有し得る。
【0009】
抗体は、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を有し得る。
【0010】
抗体は、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域と、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域とを含み得る。
【0011】
抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＳＳＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）の重鎖可変領域と、ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９）の軽鎖可変領域とを含み得る。
【0012】
抗体は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の重鎖定常領域を含み得る。
【0013】
抗体は、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）の軽鎖定常領域を含み得る。
【0014】
ＮＫ細胞は、抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中でＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する工程（ｉ）、再刺激のためにそこにサイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を添加し、再び静置培養を実施することで細胞内接触を誘導する工程（ｉｉ）、この細胞にサイトカインを含む培地を添加し、細胞の濃度及びサイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する工程（ｉｉｉ）を含む方法で調製され得る。
【0015】
ＮＫ細胞は、フィーダー細胞としてｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞、またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製され得る。
【0016】
ＣＤ４（＋）Ｔ細胞は、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株であってもよい。
【0017】
ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株は、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株であってもよい。
【0018】
種細胞は、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種であり得る。
【0019】
なお、薬学的組み合わせは、さらにアルブミンを含み得る。
【0020】
がんは、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ芽球性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌及びリンパ腫からなる群から選択される少なくとも１種であり得る。
【0021】
リンパ腫はＢ細胞由来の悪性腫瘍であり得る。
【0022】
Ｂ細胞由来の悪性腫瘍は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病及び急性リンパ芽球性白血病からなる群から選択される少なくとも１種であり得る。
【0023】
ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞は、別々に投与され得る。
【0024】
ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞は、同時に投与され得る。
【0025】
本発明の別の実施形態は、上述の組み合わせを含む、がんを治療するためのキットを提供することが可能である。
【0026】
本発明のさらに別の実施形態は、がんを治療する薬物を調製するための上述の薬学的組み合わせの使用を提供することが可能である。
【0027】
なお、本発明のさらに別の実施形態は、対象に、ＣＤ１９に特異的な上述の抗体及び上述のＮＫ細胞を組み合わせて投与する工程を含む、がんを治療する方法を提供することが可能である。
【発明の効果】
【0028】
本発明の実施形態による、ＣＤ１９に特異的な抗体及びナチュラルキラー細胞を含む薬学的組み合わせは、がん、特に非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病及び／または急性リンパ性白血病などのＢ細胞悪性腫瘍の治療に有用である。特に、ナチュラルキラー細胞は、従来の方法と比較して臨床的に扱いやすい方法で製造され、高い細胞殺傷効果、細胞生存率及び長期保存性を有し、さらにＣＤ１９に特異的な特定の抗体と組み合わせて投与された場合に腫瘍の治療に対して相乗効果を示す能力がある。
【図面の簡単な説明】
【0029】
【図1a】ＮＫ細胞の存在下で様々な濃度のモノクローナル抗体と共にバーキットＢ細胞リンパ腫であるＲａｊｉを培養することで得られた結果を示す。
【図1b】ＮＫ細胞の存在下で様々な濃度のモノクローナル抗体と共にバーキットＢ細胞リンパ腫であるＲａｊｉを培養することで得られた別の結果を示す。
【図1c】ＮＫ細胞の存在下で様々な濃度のモノクローナル抗体と共にバーキットＢ細胞リンパ腫であるＲａｍｏｓを培養することで得られた結果を示す。
【図1d】ＮＫ細胞の存在下で様々な濃度のモノクローナル抗体と共にバーキットＢ細胞リンパ腫であるＲａｍｏｓを培養することで得られた別の結果を示す。
【図2】ＳＣＩＤマウスモデルにおけるＲａｍｏｓ細胞株の適合性を評価することで得られた結果を示す。
【図3】Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内投与したＳＣＩＤマウスモデル群に、様々な濃度のＭＯＲ２０８を投与することで得られた結果を示す。
【図4】Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内投与したＳＣＩＤマウスモデル群に、様々な濃度のＭＧ４１０１を投与することで得られた結果を示す。
【図5】Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内注射したＳＣＩＤマウスモデル群に、対照、ＭＯＲ２０８、ＭＧ４１０１及び「ＭＯＲ２０８／ＭＧ４１０１」を投与することで得られた結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0030】
ナチュラルキラー細胞は、様々な疾患の治療薬として適用され得るが、末梢血中のナチュラルキラー細胞の数が少し制限されていることと、適正製造基準（ＧＭＰ）に準拠した、細胞溶解性のナチュラルキラー細胞の大規模な製造に係る困難と、さらにナチュラルキラー細胞が、ナチュラルキラー細胞が介在する殺傷を誘発するために活性化する必要があることなどのいくつかの制限のために利用は容易ではなかった。
【0031】
近年、本発明者らは、ＧＭＰの条件下で健康なドナー由来のナチュラルキラー細胞を大規模な増殖及び活性化させる簡便かつ効率的な方法を確立した（ＫＲ１０－１６４４９８４Ｂ１）。また、臍帯血単核細胞からのＮＫ細胞の大規模培養法によりｅｘ ｖｉｖｏで増殖し、高度に活性化させたナチュラルキラー細胞は、ＧＭＰの条件下で製造し、前臨床試験ではｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで強い抗がん活性を示した。
【0032】
一方、がん細胞中で発現するエピトープ分子に特異的なモノクローナル抗体を用いる治療法は、これまでで最も成功したがん免疫療法として知られている。その作用機序の１つは、ナチュラルキラー細胞を介した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。本発明の実施形態により増殖したナチュラルキラー細胞が、ＡＤＣＣを介するＦｃ受容体である高レベルのＣＤ１６を発現したので、本発明者らは、Ｂ細胞リンパ腫に対するその抗がん活性について、抗ＣＤ１９抗体の存在下での増強が可能であると確認しようと試みた。
【0033】
驚くべきことに、本発明者らは、ＣＤ１９に特異的な特定の抗体及びナチュラルキラー細胞を組み合わせて投与した場合、抗体またはナチュラルキラー細胞を単独で投与する場合と比較して、ＡＤＣＣを介したヒトＢ細胞悪性腫瘍の直接的な死に対し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで相乗効果を示すことを見いだした。
【0034】
本発明の一態様は、ＣＤ１９に特異的な抗体及びナチュラルキラー細胞を含む、がんを治療するための薬学的組み合わせを提供する。
【0035】
本明細書で用いる用語「ＣＤ１９」は、以下の同義語、Ｂ４、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、ＣＶＩＤ３、分化抗原ＣＤ１９、ＭＧＣ１２８０２及びＴ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２を有するＣＤ１９として既知のタンパク質を示す。ＣＤ１９は、ヒト由来のＣＤ１９であってもよく、ヒトＣＤ１９は配列番号７のアミノ酸配列を含み得る。ＣＤ１９は、ほとんどのＢ細胞悪性腫瘍及び正常なＢ細胞上の様々な疾患及び病変を有する細胞及び組織によって発現される。
【0036】
さらに、本明細書で用いる用語「抗体」は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥなどの任意のアイソタイプを含むモノクローナル抗体を示す。ＩｇＧ抗体は、２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖からなり、ジスルフィド結合で結合している。重鎖及び軽鎖はそれぞれ、定常領域及び可変領域を含む。可変領域は、それぞれ「相補性決定領域（ＣＤＲ）」または「超可変領域」と呼ばれる３つのセグメントを含み、主に抗原のエピトープへの結合に関与する。これらは、Ｎ末端から順番に番号が付けられ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ぶ。可変領域中のＣＤＲの外側により高度に保存された部分を、「フレームワーク領域」と呼ぶ。
【0037】
すなわち、抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９抗原に特異的に結合する抗体であり、完全な抗体形態だけでなく、その抗原結合フラグメントも含み得る。
【0038】
本発明の実施形態によるＣＤ１９に特異的な抗体の例は、ＵＳ１２／３７７，２５１（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＷＯ２００５／０１２４９３、ＷＯ２０１０／０５３７１６（ｌｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、ＷＯ２００７／００２２２３（Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＷＯ２００８／０２２１５２（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＷＯ２００８／０３１０５６（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＷＯ２００７／０７６９５０（Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨ）、ＷＯ２００９／０５２４３１（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）及びＷＯ２０１０／０９５０３１（Ｇｌｅｎｍａｒｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載されている例を含み得る。
【0039】
さらに、本発明の実施形態によるＣＤ１９に特異的な抗体は、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含み得る。さらに、本発明のＣＤ１９に特異的な抗体は、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含み得る。
【0040】
本発明の別の実施形態によるＣＤ１９に特異的な抗体は、上述の通り本発明の抗体と交差競合する抗体を含み得る。
【0041】
本明細書で用いる用語「交差競合」は、通常の競合的結合アッセイにおいて、ＣＤ１９への別の抗体または結合剤の結合を妨害する抗体または他の結合剤の能力を意味する。抗体または他の結合剤が、ＣＤ１９への別の抗体または結合剤の結合を妨害することが可能である能力または程度、つまり、それが本発明による交差競合と呼ぶことが可能であるかどうかは、通常の競合的結合アッセイを用いて確定することが可能である。
【0042】
さらに、本発明の別の実施形態によるＣＤ１９に特異的な抗体は、上述の本発明の抗体と同じエピトープに結合する抗体を含み得る。
【0043】
さらに抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＳＳＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）の重鎖可変領域と、ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９）の軽鎖可変領域とを含み得る。加えて、抗体は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の重鎖定常領域を含み得る。加えて、抗体は、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）の軽鎖定常領域を含み得る。上述の抗ＣＤ１９抗体は「ＭＯＲ２０８」であり得る。ＭＯＲ２０８抗体は、米国特許出願第１２／３７７，２５１号に開示されているものであってもよい。
【0044】
本明細書で用いる用語「ナチュラルキラー細胞（以下、ＮＫ細胞と呼ぶ）」は、体の免疫系において重要な役割を担う細胞傷害性リンパ球を指す。本発明の目的のために、ＮＫ細胞は、対象の内在性ＮＫ細胞及び／または体外からのＮＫ細胞、具体的には、対象の外部から投与されるがそれに限定されない単離されたＮＫ細胞であり得る。加えて、ＮＫ細胞は、市販の製品を購入することによって、または対象もしくは培養物からの単離などの従来の方法に従って得ることが可能である。
【0045】
一方で、本発明の実施形態による薬学的組み合わせに含まれるＮＫ細胞は、Ｔ細胞を除去した単核細胞をサイトカインを含む培地中で、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞と共に刺激し、数日間細胞内接触を実施して細胞内接触を刺激し、さらに細胞の濃度とサイトカインの濃度を一定に維持したまま、ＮＫ細胞の静置培養または浮遊培養を実施することで調製されたものであり得る。
【0046】
ＮＫ細胞の量を増加させるために、刺激及び静置培養を、その後の静置培養または浮遊培養の前に繰り返すことが可能である。本発明の方法により調製したＮＫ細胞は、高い細胞生存率及び細胞殺傷効果を示しながら、高効率及び高濃度でｅｘ ｖｉｖｏで培養することができるため、Ｂ細胞由来の悪性腫瘍を治療するために抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて投与され得る。
【0047】
一例として、ＮＫ細胞は、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）を含む方法によって調製されたものであり得る。
【0048】
工程（ｉ）では、抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する。
【0049】
工程（ｉｉ）では、サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する。
【0050】
工程（ｉｉｉ）では、この細胞にサイトカインを含む培地を添加し、細胞の濃度及びサイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する。
【0051】
なお、単離したＮＫ細胞は、ヒト末梢血または臍帯血から白血球細胞及びＮＫ細胞を単離することによって得てもいい。
【0052】
なお、初期刺激後の静置培養は、約２～１５日間、具体的には５～１０日間、再刺激後の静置培養は、約２～７日間、具体的には３～５日間実施してもよい。加えて、静置培養の完了後、サイトカインの濃度を一定に維持しながら、静置培養または浮遊培養をインキュベーター内で実施され得る。加えて、ＮＫ細胞を調製する場合、ＮＫ細胞を含む組成物にアルブミンを添加すると、ＮＫ細胞の細胞殺傷効果及び細胞生存率を大幅に高めることが可能である。具体的には、上述の方法で調製したＮＫ細胞を「ＭＧ４１０１」と示すことが可能である。本発明の実施形態によるＮＫ細胞を調製する方法及びＮＫ細胞は、韓国特許第１０－１６４４９８４号に記載されているものであり得る。
【0053】
本明細書で用いる用語「フィーダー細胞（培養の支持細胞とも呼ばれる）」は、分裂によって増殖する能力を有さないが代謝活性を有し、それによって標的のＮＫ細胞の増殖を助ける様々な代謝物質を生成する細胞を指す。用いられ得るフィーダー細胞として、遺伝子が導入された動物細胞株、様々なサイトカインまたは化合物で処置した末梢血白血球（ＰＢＬ）、自己または非自己末梢血白血球（ＰＢＬ）、Ｔ細胞、Ｂ細胞、または単球などを用いることができ、具体的には、自己末梢血単核細胞が用いられるが、それらに限定されない。
【0054】
さらに、フィーダー細胞として用いられる自己末梢血単核細胞は、安全性を確保するために不活化され得る。不活化法としては、当技術分野で周知である従来の方法が用いることが可能であるが、例えば、ガンマ線照射法を用いることが可能である。このように不活化したフィーダー細胞には、単離されたＴ細胞が含まれる。上述の通りにフィーダー細胞を用いる増殖法は、それらを純粋に単離した後にＮＫ細胞を増殖させる方法であり、純粋なＮＫ細胞のみがその後連続的に増殖するという利点を有している。
【0055】
本明細書で用いる用語「抗ＣＤ３抗体」は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に結合して抗原認識複合体を形成する分子群であるＣＤ３抗原に特異的に結合する抗体を指す。ＣＤ３分子はＴＣＲと結合し、抗原認識シグナルを細胞に伝達する働きをする。本発明で用いられ得る抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３に結合する特性を有する抗体である限り限定されない。例えば、抗ＣＤ３抗体は、ＯＫＴ３、ＵＣＨＴ１及びＨＩＴ３ａからなる群から選択され得るが、これらに限定されない。
【0056】
本発明において、培地に含まれ得るサイトカインは、インターロイキンから選択される１種または複数種であり得る。例えば、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）及びインターロイキン－２１（ＩＬ－２１）からなる群から選択される１種または複数種が用いられ得るが、これらに限定されない。
【0057】
さらに、静置培養及び浮遊培養に用いられ得る培地中の抗ＣＤ３抗体の濃度は、０．１～１，０００ｎｇ／ｍｌ、１～１００ｎｇ／ｍｌまたは５～２０ｎｇ／ｍｌであってもよく、培地中のサイトカインの濃度は、１０～２，０００ＩＵ、１００～１，０００ＩＵまたは約２００～７００ＩＵであり得る。
【0058】
本明細書で用いる用語「刺激」は、フィーダー細胞などをそれに添加することによってＮＫ細胞の増殖を誘導することを意味し、そこにおいて抗ＣＤ３抗体を共に用いることが可能である。さらに、本明細書で用いる用語「再刺激」は、一定の培養時間が経過した後に、フィーダー細胞及び／または抗ＣＤ３抗体を培地に再び添加することによってＮＫ細胞の増殖を再誘導することを意味する。
【0059】
本発明の実施形態によるＮＫ細胞を調製するための培地として、ＣｅｌｌＧｒｏ培地（Ｃｅｌｌｇｅｎｉｘ）、ＡＩＭ－Ｖ培地、ＲＰＭＩ１６４０培地及びＸ－ＶＩＶＯ２０などの動物細胞培養のための一般的な培地が用いられ得る。
【0060】
特に、ＮＫ細胞の調製法では、浮遊培養中に細胞及びサイトカインの濃度を一定に維持するために、培地中のサイトカイン及び細胞の濃度を一定の時間間隔で測定され得るが、その測定値によって、サイトカイン含有培地は、細胞及びサイトカインの濃度に適応するように提供され得る。
【0061】
さらに、培養は、培地に、血清または血漿と、リンパ球の増殖を支持する追加の増殖因子とを添加することによって実施され得る。培地に添加される血清または血漿の種類は特に限定されない。市販の動物由来のものはいずれも用いることができ、同一人物由来のヒト由来のものを用いることが可能である。例えば、末梢血単核細胞からリンパ球を増殖させるサイトカイン、リンパ球の増殖を刺激するレクチンなどの組み合わせを加えることが可能である。
【0062】
特に、本発明の方法により調製されたＮＫ細胞を含む組成物にアルブミンを添加すると、ＮＫ細胞の長期保存性の観点から、その細胞殺傷効果及び細胞生存率を大幅に高めることが可能である。添加するアルブミンの量は特に限定されない。アルブミンは、組成物全体の中に、具体的には、０．１重量％～５重量％の範囲で、より具体的には、０．５重量％～２重量％の範囲で含まれ得る。
【0063】
さらに、ＮＫ細胞を調製するために細胞の濃度を一定に維持する培養法を適用することにより、細胞の異常増殖を防ぎ、それによって細胞を最適な状態に維持することが可能である。特に、凍結後に解凍した場合でも、細胞の機能が損なわれず、高い細胞生存率と細胞殺傷効果を維持することが可能である。したがって、保存及び供給が、追加の処置なしに液体のまたは凍結した貯蔵形態で容易に行われるという利点がある。
【0064】
一方、本発明で用いるＮＫ細胞は、例として、フィーダー細胞としてｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞、またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製されたものであってもよい。
【0065】
具体的には、本発明で用いるＣＤ４（＋）Ｔ細胞は、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株、より具体的には、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株であってもよい。
【0066】
本明細書で用いる用語「種細胞」は、標的細胞を得るための出発物質である細胞を意味する。本発明で用いる種細胞は、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種であり得るが、これらに限定されない。
【0067】
本発明の実施形態によるＮＫ細胞の調製方法及びＮＫ細胞に関して、これらは、韓国特許第１０－１６９７４７３号または第１０－１７９９９８６号に記載されているものであり得る。
【0068】
このようなＮＫ細胞の調製方法によって、少量の種細胞からＮＫ細胞のみを大規模に選択的に増殖させるだけでなく、その高い殺傷効果を維持することも可能である。したがって、そのような方法によって生成されたＮＫ細胞を含むことにより、高い細胞生存率及び細胞殺傷効果、ならびに特定の抗ＣＤ１９抗体を有し、本発明の実施形態による薬学的組み合わせは、極めて優れたがん治療効果を示す。
【0069】
さらに、本明細書で用いる用語「組み合わせ」は、１種以上の有効成分、例えば、抗体及びナチュラルキラー細胞などの有効成分が組み合わされている組成物を意味する。本発明の組み合わせに含まれる各有効成分は、対象に、同時に、または別々に異なる時間に投与され得る。したがって、各有効成分は、投与時に単一の組成物の形態として組み合わされて必ずしも存在する必要はない。本発明による組み合わせは、組み合わせ、薬物及び医薬組成物に関する。実施形態において、組み合わせの構成成分は、いずれの構成成分（薬物）も同時に活性であるときに患者において投与される。「相乗作用」により、いずれの薬物も同時に患者に有効であることが暗示される。実施形態において、組み合わせの構成成分は、物理的または時間的いずれかについて、一緒に、同時に、別々に、またはその後に投与される。実施形態において、組み合わせの構成成分は同時に投与される。
【0070】
薬学的組み合わせは、固形がん及び血液がんを含む全種類の腫瘍に適用可能である。血液がんとは異なり、固形がんとは、臓器中に塊として形成されるがんを指す。ほとんどの臓器で発生したがんは、固形がんに相当する。本発明による薬学的組み合わせを用いて治療され得る腫瘍に特別な制限はない。本発明による薬学的組み合わせは、例えば、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性骨髄性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌及びリンパ腫からなる群から選択される少なくとも１種の疾患に対して相乗的な治療効果を有し得る。
【0071】
本明細書で用いる用語「相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｙ）」、「相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）」及び「相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｏｎ）」は、組み合わせることにより期待される組み合わせの相加効果を超えることを意味する。
【0072】
さらに、リンパ腫は、具体的には、Ｂ細胞由来の悪性腫瘍であり得るが、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病及び急性リンパ芽球性白血病からなる群から選択される少なくとも１種であり得る。
【0073】
非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット及びマントル細胞からなる群から選択されるリンパ腫であり得る。
【0074】
本発明の相乗的組み合わせの２つの構成成分、例えば、ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞は、物理的または時間的観点から、共に、同時に、別に、または連続的に投与され得る。本明細書で用いる用語「投与される」または「投与する」は、静脈内、筋肉内、皮内もしくは皮下経路などの注射可能な形態で、または例えば吸入用の点鼻薬もしくはエアロゾルで、または摂取可能な溶液、カプセル、もしくは錠剤での送達を包含することが意図されるが、これらに限定されない。加えて、薬学的組み合わせは、治療される疾患に対する治療効果が既知である別の薬物もしくは生理活性物質と組み合わせて投与され得る、または別の薬物との組み合わせ製剤の形態で処方され得る。
【0075】
例えば、ＮＫ細胞は、ＣＤ１９に特異的な抗体を投与する前及び／または別々に投与され得るが、その抗体の例はＭＯＲ２０８である。２つの構成成分を一緒に投与される場合、これらの構成成分は、薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含み得る１種の医薬組成物と一緒に処方され得る。また、２つの構成成分は、様々な医薬組成物でも処方され得る。この場合、２つの構成成分は、同時にまたは別々に投与され得る。具体的には、ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞が投与される場合、これらの構成成分は、投与を受けた患者の体内で同時に活性化し得る。例えば、ＭＯＲ２０８を毎週投与し、さらにＮＫ細胞を毎日投与する場合、いずれの薬物の有効成分も同時に患者に存在する。
【0076】
さらに、本発明の別の態様は、上述の組み合わせを含む、がんを治療するためのキットを提供することが可能である。キットの種類は特に限定されず、当技術分野で一般的に用いられている種類のキットを用いることが可能である。
【0077】
キットは、上述のＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞が、それぞれ個別の容器に含有されるような形態、または上述のＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞が、１つもしくはそれ以上のコンパートメントに振り分けられた単一の容器に含有されるような形態で包装され得る。ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞はそれぞれ、単回投与の単位用量で包装され得るが、これに限定されない。キットにあるＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞は、投与を受ける対象の健康状態などによって、適切な時間に別々に、組み合わせて投与され得る。
【0078】
本発明の別の態様は、がんを治療する薬物を調製するための上述の薬学的組み合わせの使用を提供する。加えて、がん性疾患及び同様の病変を治療するための上述の薬学的組み合わせの使用が提供される。
【0079】
さらに、本発明のさらに別の態様は、ＮＫ細胞を調製する工程（ａ）、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ１９に特異的な抗体を調製する工程（ｂ）、ならび治療上有効な量のＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞を組み合わせて対象に投与する工程（ｃ）を含む、がんを治療する方法を提供する。
【0080】
本明細書で用いる用語「対象」は、本発明の実施形態による、ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞を投与することによって軽減、抑制、もしくは治療することが可能である状態のがん性疾患を有するまたはそのような疾患に罹っているヒトを含む哺乳動物を意味する。さらに、対象は非ヒト動物であってもよく、用語「非ヒト動物」には、例えば、ヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類及び爬虫類などの哺乳動物及び非哺乳動物などの脊椎動物が含まれる。
【0081】
ＮＫ細胞を調製する工程（ａ）、ＣＤ１９に特異的な抗体を調製する工程（ｂ）及び対象に治療上有効な量のＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞を組み合わせて投与する工程（ｃ）を含む、がんを治療する方法を提供することが可能である。
【0082】
ＮＫ細胞を調製する工程（ａ）と、工程（ｂ）におけるＣＤ１９に特異的な抗体とはすでに上述しているので、それらの説明については、過度の冗長を回避するために省略する。
【0083】
投与をする工程（ｃ）は、ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞を、同時に、連続して、または逆順で組み合わせて投与することによって実施され得る。
【0084】
本開示の一態様は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及び配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域ならびに、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病及び／または急性リンパ芽球性白血病を治療するためのＮＫ細胞を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体の相乗的な組み合わせを含む。実施形態において、非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット及びマントル細胞からなる群から選択される。一実施形態において、ＮＫ細胞はＭＧ４１０１である。
【0085】
本開示の一態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病及び／または急性リンパ芽球性白血病を治療するために、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及び配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ１９に特異的な抗体を含み、そこにおいて、このＣＤ１９に特異的な抗体は、ＮＫ細胞と組み合わせて用いられる。実施形態において、非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット及びマントル細胞からなる群から選択される。一実施形態において、ＮＫ細胞はＭＧ４１０１である。実施形態において、非ホジキンリンパ腫は濾胞性リンパ腫である。実施形態において、非ホジキンリンパ腫は小リンパ球性リンパ腫である。実施形態において、非ホジキンリンパ腫は粘膜関連リンパ組織である。実施形態において、非ホジキンリンパ腫は辺縁帯リンパ腫である。実施形態において、非ホジキンリンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。実施形態において、非ホジキンリンパ腫はバーキットリンパ腫である。実施形態において、非ホジキンリンパ腫はマントル細胞リンパ腫である。
【0086】
別の態様は、それを必要とする個人の非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病及び／または急性リンパ芽球性白血病を治療する方法を含み、この方法は、ＮＫ細胞と組み合わせたＣＤ１９に特異的な抗体の投与を含む。この方法の実施形態において、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及び配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む。この方法の実施形態において、抗体は、例示のＣＤ１９に特異的な抗体を含む。この方法の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＭＧ４１０１である。
【0087】
別の態様は、ＣＤ１９に特異的な抗体の使用を含み、そこにおいてこの抗体は、ＮＫ細胞と相乗的に組み合わせて、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病及び／または急性リンパ芽球性白血病を治療する薬物を製造する際に、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及び配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む。一実施形態において、ＮＫ細胞はＭＧ４１０１である。
【0088】
また、ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞の投与経路、投与量及び投与頻度は、患者の症状及び副作用の有無により異なり得るため、様々な方法及び様々な量で対象に投与され得る。投与の最適な方法、投与量及び頻度は、好適な範囲内で当業者によって選択されることが可能である。
【0089】
ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞は、非経口的に投与され得るが、この投与は、腫瘍内、腹腔内、皮下、皮内、節内及び静脈内経路などの好適な任意の方法によって実施することが可能である。具体的には、ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞は、腫瘍内、腹腔内または静脈内に投与され得る。一方、ＣＤ１９に特異的な抗体及びＮＫ細胞の投与量は、投与スケジュール、投与量及び患者の健康状態によって決定することが可能である。
【0090】
さらに、ＮＫ細胞は、２～５回投与され得るが、１～３０日、２～１５日、または３～１０日の間隔で対象に投与され得る。
【0091】
ＣＤ１９に特異的な抗体は、ＮＫ細胞を投与して２～４８時間以内に投与され得る。具体的には、ＣＤ１９に特異的な抗体は、ＮＫ細胞投与前に３～５日間、ＮＫ細胞投与２時間後から開始して、９～１１日間、１日１回連続投与され得る。上述の併用投与により相乗的な治療効果を示す標的疾患であるがんに関する詳細は、薬学的組み合わせに記載されている通りである。
【0092】
本発明の別の態様は、がんを治療する薬物を調製するためのナチュラルキラー細胞との薬学的組み合わせで用いられるＣＤ１９に特異的な抗体の使用を提供する。
【0093】
本発明で用いられる、ＣＤ１９に特異的な抗体、ナチュラルキラー細胞及びそれらの併用投与については、すでに上述しているので、その説明については、過度の冗長を回避するために省略する。
【0094】
以下、本発明は以下の実施例によってより詳細に説明する。ここでは、本発明者らは、抗ＣＤ１９抗体及びナチュラルキラー細胞の併用投与の相乗効果を説明することを意図している。しかしながら、以下の実施例は、本発明を単に例示するためのものであり、本発明の範囲は、それのみに限定されない。
【0095】
【表1-1】
【表1-2】
【0096】
発明の形態
調製例１ 細胞株、初代細胞及び培養条件
Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓ細胞株（ヒトバーキットリンパ腫細胞株）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）で得た。Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓ細胞株は、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び２ｍｍｏｌ／Ｌのグルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地に保存した。ＮＫ細胞に関して、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を健康なドナーからランダムに単離し、ＮＫ細胞を上述の方法で適正製造基準（ＧＭＰ）条件下で拡大培養した（ＭＧ４１０１、Ｇｒｅｅｎ Ｃｒｏｓｓ Ｌａｂｃｅｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）。簡潔に述べると、ＣＤ３＋Ｔ細胞がほぼ完全に除去されたＰＢＭＣを、１％自己血漿、放射線（２，０００ｒａｄ）を照射した５×１０６細胞／ｍＬの自家ＰＢＭＣ、ＣＤ３の１０ｎｇ／ｍＬのモノクローナル抗体（ＯＫＴ３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）及び５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）を含むＣｅｌｌＧｒｏ ＳＣＧＭ無血清培地（Ｃｅｌｌｇｅｎｉｘ）に拡大培養した。ＮＫ細胞の培養中に、２～３日ごとに５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ２を培地に加えた。
調製例１ 細胞株、初代細胞及び培養条件
Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓ細胞株（ヒトバーキットリンパ腫細胞株）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）で得た。Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓ細胞株は、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び２ｍｍｏｌ／Ｌのグルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地に保存した。ＮＫ細胞に関して、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を健康なドナーからランダムに単離し、ＮＫ細胞を上述の方法で適正製造基準（ＧＭＰ）条件下で拡大培養した（ＭＧ４１０１、Ｇｒｅｅｎ Ｃｒｏｓｓ Ｌａｂｃｅｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）。簡潔に述べると、ＣＤ３＋Ｔ細胞がほぼ完全に除去されたＰＢＭＣを、１％自己血漿、放射線（２，０００ｒａｄ）を照射した５×１０６細胞／ｍＬの自家ＰＢＭＣ、ＣＤ３の１０ｎｇ／ｍＬのモノクローナル抗体（ＯＫＴ３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）及び５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）を含むＣｅｌｌＧｒｏ ＳＣＧＭ無血清培地（Ｃｅｌｌｇｅｎｉｘ）に拡大培養した。ＮＫ細胞の培養中に、２～３日ごとに５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ２を培地に加えた。
【0097】
調製例２ モノクローナル抗体
ＣＤ１９に特異的な抗体であるＭＯＲ２０８は、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）は、Ｒｏｃｈｅで購入した。細胞ごとに結合したＭＯＲ２０８またはリツキシマブ抗体として決定した抗原発現量は、メーカーの指示に従ってフローサイトメトリー（Ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ ｋｉｔ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓの細胞あたりのＭＯＲ２０８結合部位の数は、それぞれ５６，７０２及び２７，７７２である。Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓの細胞あたりのリツキシマブ結合部位の数は、それぞれ５９，９７４及び１６８，２５３である。
ＣＤ１９に特異的な抗体であるＭＯＲ２０８は、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）は、Ｒｏｃｈｅで購入した。細胞ごとに結合したＭＯＲ２０８またはリツキシマブ抗体として決定した抗原発現量は、メーカーの指示に従ってフローサイトメトリー（Ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ ｋｉｔ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓの細胞あたりのＭＯＲ２０８結合部位の数は、それぞれ５６，７０２及び２７，７７２である。Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓの細胞あたりのリツキシマブ結合部位の数は、それぞれ５９，９７４及び１６８，２５３である。
【0098】
調製例３ カルセイン放出による細胞傷害性アッセイ
標的細胞を３０ｕＭカルセイン－アセトキシメチルエステル（カルセイン－ＡＭ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅ）で３７℃で１時間標識した。洗浄後、標識した標的細胞を、ウェル当たり１×１０４細胞で９６ウェルプレートに分注した。モノクローナル抗体（ＭＯＲ２０８、リツキシマブ、または対照である無関係の抗体）を（０．００１ｎｇ／ｍＬと１０ｕｇ／ｍＬの間の濃度で）標的細胞に添加した。ＭＧ４１０１を回収し、洗浄し、３：１（Ｅ／Ｔ）の比率で標的細胞に添加した。２時間後、プレートを２，０００ｒｐｍで３分間回転させ、１００ｕＬの上清を収集した。次に、蛍光マイクロプレートリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ３、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて蛍光値（ＯＤ４８０／５３５ｎｍ）を測定し、放出されたカルセインの量を測定した。放出されたカルセインの具体的な量は、次の式を用いて算出した。
標的細胞を３０ｕＭカルセイン－アセトキシメチルエステル（カルセイン－ＡＭ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅ）で３７℃で１時間標識した。洗浄後、標識した標的細胞を、ウェル当たり１×１０４細胞で９６ウェルプレートに分注した。モノクローナル抗体（ＭＯＲ２０８、リツキシマブ、または対照である無関係の抗体）を（０．００１ｎｇ／ｍＬと１０ｕｇ／ｍＬの間の濃度で）標的細胞に添加した。ＭＧ４１０１を回収し、洗浄し、３：１（Ｅ／Ｔ）の比率で標的細胞に添加した。２時間後、プレートを２，０００ｒｐｍで３分間回転させ、１００ｕＬの上清を収集した。次に、蛍光マイクロプレートリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ３、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて蛍光値（ＯＤ４８０／５３５ｎｍ）を測定し、放出されたカルセインの量を測定した。放出されたカルセインの具体的な量は、次の式を用いて算出した。
【0099】
具体的な溶解％＝（試験放出値－自然放出値）×１００／（最大放出値－自発放出値）
最大の溶解値は、１％トリトンＸ－１００で達成した。
最大の溶解値は、１％トリトンＸ－１００で達成した。
【0100】
調製例４ マウス腫瘍モデル
調製例４．１ ＳＣＩＤマウスにおけるＲａｍｏｓ異種移植モデルの確立
Ｒａｍｏｓ細胞（マウス当たり１ｘ１０５、５ｘ１０５または１０ｘ１０５）をＰＢＳに懸濁させ、ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した。動物は、疾患、後肢麻痺または死亡の兆候について毎日モニターした。
調製例４．１ ＳＣＩＤマウスにおけるＲａｍｏｓ異種移植モデルの確立
Ｒａｍｏｓ細胞（マウス当たり１ｘ１０５、５ｘ１０５または１０ｘ１０５）をＰＢＳに懸濁させ、ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した。動物は、疾患、後肢麻痺または死亡の兆候について毎日モニターした。
【0101】
調製例４．２ Ｒａｍｏｓ異種移植モデルに対するＭＯＲ２０８用量試験
Ｒａｍｏｓ細胞（マウス当たり１×１０６）をＰＢＳに懸濁させ、ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した（０日目）。ＭＯＲ２０８は、３、６、１０、１３、１７及び２０日目に、様々な濃度（２０、６０、または２００ｕｇ／１００ｕＬ／ヘッド）で静脈内注射で投与した。動物は、疾患、後肢麻痺または死亡の兆候について毎日モニターした。
Ｒａｍｏｓ細胞（マウス当たり１×１０６）をＰＢＳに懸濁させ、ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した（０日目）。ＭＯＲ２０８は、３、６、１０、１３、１７及び２０日目に、様々な濃度（２０、６０、または２００ｕｇ／１００ｕＬ／ヘッド）で静脈内注射で投与した。動物は、疾患、後肢麻痺または死亡の兆候について毎日モニターした。
【0102】
調製例４．３ Ｒａｍｏｓ異種移植モデルに対するＭＧ４１０１用量試験
Ｒａｍｏｓ細胞（マウス当たり１×１０６）をＰＢＳに懸濁させ、ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した（０日目）。ＭＧ４１０１は、４、７、１１、１４、１８及び２１日目に、種々な濃度（１、２、または５×１０７／４００μＬ／ヘッド）で静脈内注射で投与した。動物は、疾患、後肢麻痺または死亡の兆候について毎日モニターした。
Ｒａｍｏｓ細胞（マウス当たり１×１０６）をＰＢＳに懸濁させ、ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した（０日目）。ＭＧ４１０１は、４、７、１１、１４、１８及び２１日目に、種々な濃度（１、２、または５×１０７／４００μＬ／ヘッド）で静脈内注射で投与した。動物は、疾患、後肢麻痺または死亡の兆候について毎日モニターした。
【0103】
調製例４．４ Ｒａｍｏｓ異種移植モデルに対するＭＧ４１０１＋ＭＯＲ２０８有効性試験
Ｒａｍｏｓ細胞（マウス当たり１×１０６）をＰＢＳに懸濁させ、ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した（０日目）。マウスを６群に分け、以下の通りに適合させた。
Ｒａｍｏｓ細胞（マウス当たり１×１０６）をＰＢＳに懸濁させ、ＳＣＩＤマウスに静脈内注射した（０日目）。マウスを６群に分け、以下の通りに適合させた。
【0104】
ｉ）培地を凍結し、ｈＩｇＧ（２００ｕｇ）を静脈内注射
ｉｉ）ＭＧ４１０１の静脈内注射（２ｘ１０７／４００ｕＬ／ヘッド）
ｉｉｉ）ＭＯＲ２０８の静脈内注射（６０ｕｇ／ヘッド）
ｉｖ）ＭＯＲ２０８の静脈内注射（２００ｕｇ／ヘッド）
ｖ）ＭＧ４１０１の静脈内注射（２ｘ１０７／４００ｕＬ／ヘッド）及びＭＯＲ２０８の静脈内注射（６０ｕｇ／ヘッド）
ｖｉ）ＭＧ４１０１の静脈内注射（２ｘ１０７／４００ｕＬ／ヘッド）及びＭＯＲ２０８の静脈内注射（２００ｕｇ／ヘッド）
ｉｉ）ＭＧ４１０１の静脈内注射（２ｘ１０７／４００ｕＬ／ヘッド）
ｉｉｉ）ＭＯＲ２０８の静脈内注射（６０ｕｇ／ヘッド）
ｉｖ）ＭＯＲ２０８の静脈内注射（２００ｕｇ／ヘッド）
ｖ）ＭＧ４１０１の静脈内注射（２ｘ１０７／４００ｕＬ／ヘッド）及びＭＯＲ２０８の静脈内注射（６０ｕｇ／ヘッド）
ｖｉ）ＭＧ４１０１の静脈内注射（２ｘ１０７／４００ｕＬ／ヘッド）及びＭＯＲ２０８の静脈内注射（２００ｕｇ／ヘッド）
【0105】
これらの投与は、３、６、１０、１３、１７及び２０日目に、様々な濃度（６０または２００ｕｇ／１００ｕＬ／ヘッド）のｈＩｇＧまたはＭＯＲ２０８を３週間週２回静脈内注射で実施した。
【0106】
４、７、１１、１４、１８及び２１日目に、ＭＧ４１０１の静脈内注射（２×１０７／４００μＬ／ヘッドの濃度）で実施した。動物は、疾患、後肢麻痺または死亡の兆候について毎日モニターした。
【0107】
実験例１． 悪性Ｂ細胞に対するＭＯＲ２０８のｉｎ ｖｉｔｒｏでの強いＡＤＣＣ活性の確認
ＮＫ細胞を介したＡＤＣＣは、モノクローナル抗体の活性のために非常に重要であるため、本発明者らははじめに、リンパ腫治療用の標準的なモノクローナル抗体であるリツキシマブと比較して、バーキットリンパ腫細胞株であるＲａｊｉ及びＲａｍｏｓにおけるＭＯＲ２０８（抗ＣＤ１９抗体）及びＭＧ４１０１（ＮＫ細胞）のＡＤＣＣ活性を測定したが、ここで、リツキシマブは、本発明における陽性対照及び基準値として用いる。
ＮＫ細胞を介したＡＤＣＣは、モノクローナル抗体の活性のために非常に重要であるため、本発明者らははじめに、リンパ腫治療用の標準的なモノクローナル抗体であるリツキシマブと比較して、バーキットリンパ腫細胞株であるＲａｊｉ及びＲａｍｏｓにおけるＭＯＲ２０８（抗ＣＤ１９抗体）及びＭＧ４１０１（ＮＫ細胞）のＡＤＣＣ活性を測定したが、ここで、リツキシマブは、本発明における陽性対照及び基準値として用いる。
【0108】
はじめに、Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓ細胞株（バーキットリンパ腫、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋）を、３名の健康なドナーから得て、活性化かつ拡大させたＭＧ４１０１の液体タイプ及び凍結タイプの存在下で、ＭＯＲ２０８またはリツキシマブの濃度を増加させ、２時間培養した（Ｅ／Ｔ比 ３：１）。
【0109】
【0110】
（サンプルの放出値－自然放出値）／（最大放出値－自然放出値）ｘ１００。
【0111】
図１ａ～１ｄに示す通り、ＭＯＲ２０８はＲａｊｉ及びＲａｍｏｓ細胞株に対して顕著なｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＤＣＣ活性を示した。ｈＩｇＧで同時処置した対照と比較すると、ＭＯＲ２０８とリツキシマブの両方が、両方の腫瘍細胞株に対して用量依存的有効性を示し、低い抗体濃度ですでに活性があり、さらに最大腫瘍細胞溶解の最大値が増大した。ＭＯＲ２０８及びリツキシマブが、ＣＤ１９と比較して（材料及び方法）、ＣＤ２０の実質的なレベルの高さと同様に、比較可能な最大殺傷効果を示したことを考慮すると、ＭＯＲ２０８は、Ｒａｊｉ及びＲａｍｏｓ細胞を含む様々な悪性Ｂ細胞上のリツキシマブと比較して、全体的により低いＥＣ５０を有することが実証された。これは、リツキシマブの効果が低い条件下で、ＭＯＲ２０８が興味深い代替治療薬になり得ることを示している。
【0112】
実験例２． 異種移植ＳＣＩＤマウスのリンパ腫細胞死に対するＭＯＲ２０８の効果
実験例２．１． ＳＣＩＤマウスモデルにおけるＲａｍｏｓ異種移植モデルの確立
ＭＯＲ２０８のｉｎ ｖｉｖｏ実験に関して、異種移植ＳＣＩＤマウスモデルは、Ｒａｍｏｓ細胞株の適合性を評価するためにＲａｍｏｓ細胞を用いて確立した。６のＳＣＩＤマウスの群には、１Ｘ１０５、５Ｘ１０５、１０Ｘ１０５のＲａｍｏｓ細胞またはＰＢＳを静脈内注射し、疾患の兆候について毎日モニターした。Ｒａｍｏｓを注射して２６日目から３７日目までの間に、全てのマウスが死亡した。
実験例２．１． ＳＣＩＤマウスモデルにおけるＲａｍｏｓ異種移植モデルの確立
ＭＯＲ２０８のｉｎ ｖｉｖｏ実験に関して、異種移植ＳＣＩＤマウスモデルは、Ｒａｍｏｓ細胞株の適合性を評価するためにＲａｍｏｓ細胞を用いて確立した。６のＳＣＩＤマウスの群には、１Ｘ１０５、５Ｘ１０５、１０Ｘ１０５のＲａｍｏｓ細胞またはＰＢＳを静脈内注射し、疾患の兆候について毎日モニターした。Ｒａｍｏｓを注射して２６日目から３７日目までの間に、全てのマウスが死亡した。
【0113】
図２に関して、様々な濃度のＲａｍｏｓ細胞の静脈内注射は、進行性の体重減少及び後肢麻痺を含む症状を特徴とするマウスにおいて、腫瘍形成活性を示し、注射後２６日目から３７日目までの間にほぼ１００％のマウスが死亡した。追跡実験のため、Ｒａｍｏｓ細胞株の至適用量は、１×１０６細胞で選択した。
【0114】
実験例２．２． Ｒａｍｏｓ異種移植モデルに対するＭＯＲ２０８用量試験
Ｂリンパ腫細胞死に対するＭＯＲ２０８の有効性は、患者の原発悪性Ｂ細胞を枯渇させる可能性にとって臨床的に重要である。本発明者らは、Ｒａｍｏｓ細胞をＳＣＩＤマウスに静脈内注射し、上述の「調製例」に記載されている通り、ＭＯＲ２０８が投与された増殖させたリンパ腫モデルにおいて、ＭＯＲ２０８の抗腫瘍活性を評価した。このモデルでは、播種性のＲａｍｏｓ細胞が、中枢神経系を含む全てのマウスの臓器に浸潤するため、増殖したバーキットリンパ腫及び急性リンパ芽球性白血病などの疾患を反映している。この点に関して、１０のＳＣＩＤマウスの群には、１×１０６Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内注射した（０日目）。３、６、１０、１３、１７及び２０日目に、陰性対照として、モノクローナル抗体（２０、６０もしくは２００ｍｇ／１００ｍＬ／ヘッド）またはｈＩｇＧ（ｈＩｇＧ２００ｍｇ／１００ｍＬ／ヘッド）でマウスを処置し、疾患の兆候について毎日観察した。
Ｂリンパ腫細胞死に対するＭＯＲ２０８の有効性は、患者の原発悪性Ｂ細胞を枯渇させる可能性にとって臨床的に重要である。本発明者らは、Ｒａｍｏｓ細胞をＳＣＩＤマウスに静脈内注射し、上述の「調製例」に記載されている通り、ＭＯＲ２０８が投与された増殖させたリンパ腫モデルにおいて、ＭＯＲ２０８の抗腫瘍活性を評価した。このモデルでは、播種性のＲａｍｏｓ細胞が、中枢神経系を含む全てのマウスの臓器に浸潤するため、増殖したバーキットリンパ腫及び急性リンパ芽球性白血病などの疾患を反映している。この点に関して、１０のＳＣＩＤマウスの群には、１×１０６Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内注射した（０日目）。３、６、１０、１３、１７及び２０日目に、陰性対照として、モノクローナル抗体（２０、６０もしくは２００ｍｇ／１００ｍＬ／ヘッド）またはｈＩｇＧ（ｈＩｇＧ２００ｍｇ／１００ｍＬ／ヘッド）でマウスを処置し、疾患の兆候について毎日観察した。
【0115】
図３に示す通り、対照であるモノクローナル抗体で処置した動物と比較して、２００ｍｇのＭＯＲ２０８で処置することにより、マウスの生存期間が有意に延びた（Ｐ＜．００１）。２００ｍｇのＭＯＲ２０８で処置したマウスの生存期間の中央値は３６日であり、対照の抗体で処置したマウスの生存期間の中央値２８．５日よりも長いことがわかった。
【0116】
実験例２．３． Ｒａｍｏｓ異種移植モデルに対するＭＧ４１０１用量試験
Ｒａｍｏｓ細胞を注射したＳＣＩＤマウスに、「調製例」に記載されている通り、健康なドナーのｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化かつ拡大させたＭＧ４１０１細胞を静脈内注射した。このＭＧ４１０１細胞の添加は、患者の臓器に存在し得る組織ＮＫ細胞の存在を模倣することを目的とするものである。具体的には、１０のＳＣＩＤマウスの群には、１×１０６Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内注射した（０日目）。４、７、１１、１４、１８及び２１日目に、ＭＧ４１０１（１、２もしくは５×１０７／４００ｍＬ／ヘッド）、または対照としてＮＫ細胞凍結培地のみを、マウスに投与し、疾患の兆候について毎日観察した。
Ｒａｍｏｓ細胞を注射したＳＣＩＤマウスに、「調製例」に記載されている通り、健康なドナーのｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化かつ拡大させたＭＧ４１０１細胞を静脈内注射した。このＭＧ４１０１細胞の添加は、患者の臓器に存在し得る組織ＮＫ細胞の存在を模倣することを目的とするものである。具体的には、１０のＳＣＩＤマウスの群には、１×１０６Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内注射した（０日目）。４、７、１１、１４、１８及び２１日目に、ＭＧ４１０１（１、２もしくは５×１０７／４００ｍＬ／ヘッド）、または対照としてＮＫ細胞凍結培地のみを、マウスに投与し、疾患の兆候について毎日観察した。
【0117】
図４に示す通り、ＭＧ４１０１をマウスあたり５ｘ１０７細胞の用量で投与したマウスの生存率は、対照で処置したマウス（凍結培地）と比較して有意に高くなった（Ｐ＜．０５）。ＭＧ４１０１の５×１０７細胞で処置したマウスの生存期間の中央値は、３３日であり、凍結培地である対照で処置したマウスの生存期間の中央値は２８日であった。
【0118】
実験例２．４． Ｒａｍｏｓ異種移植モデルにおけるＭＧ４１０１＋ＭＯＲ２０８の併用投与による効果の確認
「調製例」で記述した通りにＲａｍｏｓ細胞を播種した３日後に、Ｒａｍｏｓ細胞を注射したマウスを無作為に複数の群に分け、ＭＯＲ２０８もしくはＭＧ４１０１単独の２回投与、ＭＯＲ２０８及びＭＧ４１０１の組み合わせの２回投与、または対照としてｈＩｇＧを含むＮＫ細胞凍結培地での処置を実施した。具体的には、１０のＳＣＩＤマウスの群には、１×１０６Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内注射した（０日目）。３、６、１０、１３、１７及び２０日目に、マウスをモノクローナル抗体（６０または２００ｍｇ／１００ｍＬ／ヘッド）で処置した。マウスには、ＭＧ４１０１を（２×１０７／４００ｍＬ／ヘッドの濃度で）、４、７、１１、１４、１８及び２１日目に静脈内注射し、毎日モニターした。
「調製例」で記述した通りにＲａｍｏｓ細胞を播種した３日後に、Ｒａｍｏｓ細胞を注射したマウスを無作為に複数の群に分け、ＭＯＲ２０８もしくはＭＧ４１０１単独の２回投与、ＭＯＲ２０８及びＭＧ４１０１の組み合わせの２回投与、または対照としてｈＩｇＧを含むＮＫ細胞凍結培地での処置を実施した。具体的には、１０のＳＣＩＤマウスの群には、１×１０６Ｒａｍｏｓ細胞を静脈内注射した（０日目）。３、６、１０、１３、１７及び２０日目に、マウスをモノクローナル抗体（６０または２００ｍｇ／１００ｍＬ／ヘッド）で処置した。マウスには、ＭＧ４１０１を（２×１０７／４００ｍＬ／ヘッドの濃度で）、４、７、１１、１４、１８及び２１日目に静脈内注射し、毎日モニターした。
【0119】
図５に示す通り、ＭＯＲ２０８で処置したマウスは、凍結培地のｈＩｇＧを注射した対照と比較して、保護効果が顕著に増大したことが確認された。ＭＧ４１０１を注射した群は、対照と比較して顕著に改善した。生存期間の中央値は、対照の凍結培地で処置したものの３０．５日目と比較して、２００ｍｇのＭＯＲ２０８処置マウス（Ｐ＜．０００１）及び２Ｘ１０７細胞のＭＧ４１０１処置マウス（Ｐ＜．００１）で、それぞれ４５．５日及び３８日に増大した。
【0120】
一方、ＭＯＲ２０８及びＭＧ４１０１の組み合わせで処置した動物は、実験期間中に相乗的な生存率の増加を示した。具体的には、生存期間の中央値が、同時注射した２Ｘ１０７細胞のＭＧ４１０１のバックグラウンドで、６０ｍｇ及び２００ｍｇのＭＯＲ２０８処置マウスがそれぞれ５２日及び６２日に増大した（Ｐ＜．０００１）。ＭＯＲ２０８及びＭＧ４１０１の併用投与におけるかなり大きな相乗効果も、生存率の増加の分析で示された。特に、ＭＯＲ２０８またはＭＧ４１０１の各治療による生存率の平均値の増加は、それぞれ１１．５％（６０ｍｇのＭＯＲ２０８）、４９．２％（２００ｍｇのＭＯＲ２０８）及び２４．６％（２×１０７細胞のＭＧ４１０１）であった。対照的に、ＭＯＲ２０８及びＭＧ４１０１の同時処置は、ＭＧ４１０１を同時注射した場合、それぞれ７０．５％（６０ｍｇのＭＯＲ２０８）及び１０３．３％（２００ｍｇのＭＯＲ２０８）というように生存率が増加する効果を示した。これらの結果から、ＭＯＲ２０８またはＭＧ４１０１を別々に注射した動物と比較して、ＭＧ４１０１及びＭＯＲ２０８の同時処置（組み合わせ）が、特に６０ｍｇのＭＯＲ２０８を同時注射した場合に、マウスの生存期間を２倍顕著に伸ばしたことを確認した。
【0121】
言い換えれば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ両方のデータによって、本発明が抗ＣＤ１９抗体及びナチュラルキラー細胞の組み合わせ、すなわち、２つの構成成分の併用療法が、ヒトのＢリンパ腫、白血病などの治療薬になり得て、さらに様々なＢ細胞悪性腫瘍に対しても顕著な治療効果を示す可能性を示唆していることが明らかになった。
【図1a】
【図1b】
【図1c】
【図1d】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-08-01
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒト対象におけるがんの処置において使用するためのＣＤ１９に特異的な抗体を含む医薬組成物であって、
前記抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含み、
前記抗体が、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含み、そして
前記抗体が、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）と組み合わせて投与される、
医薬組成物。
前記抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含み、
前記抗体が、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含み、そして
前記抗体が、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）と組み合わせて投与される、
医薬組成物。
【請求項2】
請求項１に記載の医薬組成物であって、
前記抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＳＳＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）の重鎖可変領域と、ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９）の軽鎖可変領域とを含む、前記医薬組成物。
前記抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＳＳＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）の重鎖可変領域と、ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９）の軽鎖可変領域とを含む、前記医薬組成物。
【請求項3】
請求項１または２に記載の医薬組成物であって、
前記抗体が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の重鎖定常領域を含む、前記医薬組成物。
前記抗体が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の重鎖定常領域を含む、前記医薬組成物。
【請求項4】
請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記抗体が、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）の軽鎖定常領域を含む、前記医薬組成物。
前記抗体が、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）の軽鎖定常領域を含む、前記医薬組成物。
【請求項5】
請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記ＮＫ細胞が、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）、
抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する、工程（ｉ）と、
サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する、工程（ｉｉ）と、
前記細胞にサイトカインを含む培地を添加し、前記細胞の濃度及び前記サイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する、工程（ｉｉｉ）と
を含む方法によって調製される、前記医薬組成物。
前記ＮＫ細胞が、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）、
抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する、工程（ｉ）と、
サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する、工程（ｉｉ）と、
前記細胞にサイトカインを含む培地を添加し、前記細胞の濃度及び前記サイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する、工程（ｉｉｉ）と
を含む方法によって調製される、前記医薬組成物。
【請求項6】
請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記ＮＫ細胞が、フィーダー細胞として、ｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製される、前記医薬組成物。
前記ＮＫ細胞が、フィーダー細胞として、ｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製される、前記医薬組成物。
【請求項7】
請求項６に記載の医薬組成物であって、
前記ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株である、前記医薬組成物。
前記ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株である、前記医薬組成物。
【請求項8】
請求項７に記載の医薬組成物であって、
前記ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株が、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株である、前記医薬組成物。
前記ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株が、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株である、前記医薬組成物。
【請求項9】
請求項６に記載の医薬組成物であって、
前記種細胞が、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種である、前記医薬組成物。
前記種細胞が、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種である、前記医薬組成物。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記がんが、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌、リンパ腫及びＢ細胞由来の悪性腫瘍からなる群から選択される少なくとも１種である、前記医薬組成物。
前記がんが、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌、リンパ腫及びＢ細胞由来の悪性腫瘍からなる群から選択される少なくとも１種である、前記医薬組成物。
【請求項11】
請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記がんが、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、または急性リンパ芽球性白血病である、前記医薬組成物。
前記がんが、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、または急性リンパ芽球性白血病である、前記医薬組成物。
【請求項12】
請求項１１に記載の医薬組成物であって、
前記がんが、非ホジキンリンパ腫である、前記医薬組成物。
前記がんが、非ホジキンリンパ腫である、前記医薬組成物。
【請求項13】
請求項１２に記載の医薬組成物であって、
非ホジキンリンパ腫が、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である、前記医薬組成物。
非ホジキンリンパ腫が、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である、前記医薬組成物。
【請求項14】
請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が別々に投与される、前記医薬組成物。
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が別々に投与される、前記医薬組成物。
【請求項15】
請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が同時に投与される、前記医薬組成物。
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が同時に投与される、前記医薬組成物。
【請求項16】
ヒト対象におけるがんの処置のための医薬の製造における、ＣＤ１９に特異的な抗体の使用であって、
前記抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含み、
前記抗体が、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含み、そして
前記ＣＤ１９に特異的な抗体が、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）と組み合わせて投与される、
使用。
前記抗体が、ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域及びＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含み、
前記抗体が、ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域及びＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含み、そして
前記ＣＤ１９に特異的な抗体が、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）と組み合わせて投与される、
使用。
【請求項17】
請求項１６に記載の使用であって、
前記抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＳＳＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）の重鎖可変領域と、ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９）の軽鎖可変領域とを含む、前記使用。
前記抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＳＳＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）の重鎖可変領域と、ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９）の軽鎖可変領域とを含む、前記使用。
【請求項18】
請求項１６または１７に記載の使用であって、
前記抗体が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の重鎖定常領域を含む、前記使用。
前記抗体が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の重鎖定常領域を含む、前記使用。
【請求項19】
請求項１６～１８のいずれか１項に記載の使用であって、
前記抗体が、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）の軽鎖定常領域を含む、前記使用。
前記抗体が、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）の軽鎖定常領域を含む、前記使用。
【請求項20】
請求項１６～１９のいずれか１項に記載の使用であって、
前記ＮＫ細胞が、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）、
抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する、工程（ｉ）と、
サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する、工程（ｉｉ）と、
前記細胞にサイトカインを含む培地を添加し、前記細胞の濃度及び前記サイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する、工程（ｉｉｉ）と
を含む方法によって調製される、前記使用。
前記ＮＫ細胞が、以下の工程（ｉ）～（ｉｉｉ）、
抗ＣＤ３抗体、サイトカイン及びフィーダー細胞を含む培養液中で単離したＮＫ細胞の静置培養を実施して細胞間接触を刺激する、工程（ｉ）と、
サイトカイン、抗ＣＤ３抗体及びフィーダー細胞を再刺激のためにそれに添加し、細胞内接触を誘導するために静置培養を再び実施する、工程（ｉｉ）と、
前記細胞にサイトカインを含む培地を添加し、前記細胞の濃度及び前記サイトカインの濃度を一定に維持したまま静置培養または浮遊培養を実施する、工程（ｉｉｉ）と
を含む方法によって調製される、前記使用。
【請求項21】
請求項１６～１９のいずれか１項に記載の使用であって、
前記ＮＫ細胞が、フィーダー細胞として、ｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製される、前記使用。
前記ＮＫ細胞が、フィーダー細胞として、ｅｘ ｖｉｖｏで単離したＣＤ４（＋）Ｔ細胞またはｅｘ ｖｉｖｏで拡大培養したＣＤ４（＋）Ｔ細胞と、種細胞とを共培養する工程を含む方法で調製される、前記使用。
【請求項22】
請求項２１に記載の使用であって、
前記ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株である、前記使用。
前記ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株である、前記使用。
【請求項23】
請求項２２に記載の使用であって、
前記ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株が、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株である、前記使用。
前記ＣＤ４（＋）／ＣＤ１（－）Ｔ細胞株が、Ｈ９細胞株またはＨｕＴ７８細胞株である、前記使用。
【請求項24】
請求項２１に記載の使用であって、
前記種細胞が、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種である、前記使用。
前記種細胞が、末梢血由来細胞、末梢血白血球細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、臍帯血白血球細胞、臍帯血単核細胞、幹細胞由来のナチュラルキラー細胞、濃縮したナチュラルキラー細胞及び単離したナチュラルキラー細胞からなる群から選択された１種または複数種である、前記使用。
【請求項25】
請求項１６～２４のいずれか１項に記載の使用であって、
前記がんが、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌、リンパ腫及びＢ細胞由来の悪性腫瘍からなる群から選択される少なくとも１種である、前記使用。
前記がんが、胃癌、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮頸癌、甲状腺癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、唾液腺癌、リンパ腫及びＢ細胞由来の悪性腫瘍からなる群から選択される少なくとも１種である、前記使用。
【請求項26】
請求項１６～２４のいずれか１項に記載の使用であって、
前記がんが、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、または急性リンパ芽球性白血病である、前記使用。
前記がんが、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、または急性リンパ芽球性白血病である、前記使用。
【請求項27】
請求項２６に記載の使用であって、
前記がんが、非ホジキンリンパ腫である、前記使用。
前記がんが、非ホジキンリンパ腫である、前記使用。
【請求項28】
請求項２７に記載の使用であって、
非ホジキンリンパ腫が、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である、前記使用。
非ホジキンリンパ腫が、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である、前記使用。
【請求項29】
請求項１６～２８のいずれか１項に記載の使用であって、
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が別々に投与される、前記使用。
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が別々に投与される、前記使用。
【請求項30】
請求項１６～２８のいずれか１項に記載の使用であって、
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が同時に投与される、前記使用。
前記ＣＤ１９に特異的な抗体及び前記ＮＫ細胞が同時に投与される、前記使用。