特開 2024-133607 ペプチド精製のためのトレースレスな還元的切断可能なリンカー分子

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024133607

(43)【公開日】2024-10-02

(54)【発明の名称】ペプチド精製のためのトレースレスな還元的切断可能なリンカー分子

(51)【国際特許分類】

   C07C 271/66 20060101AFI20240925BHJP

   C07D 295/185 20060101ALI20240925BHJP

   C07D 213/75 20060101ALI20240925BHJP

   C07K 1/14 20060101ALI20240925BHJP

【ＦＩ】

C07C271/66 CSP

C07D295/185 ZNA

C07D213/75

C07K1/14

C07D295/185

C07C271/66 ZNA

【審査請求】有

【請求項の数】15

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2024108076

(22)【出願日】2024-07-04

(62)【分割の表示】P 2021510463の分割

【原出願日】2019-08-27

(31)【優先権主張番号】18191038.1

(32)【優先日】2018-08-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】18212487.5

(32)【優先日】2018-12-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(71)【出願人】

【識別番号】523430870

【氏名又は名称】ギロス プロテイン テクノロジーズ エービー

(74)【代理人】

【識別番号】100149032

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 敏明

(72)【発明者】

【氏名】ツィッターバルト，ロバート

(72)【発明者】

【氏名】レイマン，オリバー

(57)【要約】      （修正有）

【課題】固相ペプチド合成によって生成されるペプチド又はペプチド核酸を精製する、安価で不良傾向の少ない方法、及び前記精製に使用するリンカー分子を提供する。
【解決手段】本発明は、式（１）、Ｘ－Ｔ_ｂ－Ｖ_ａ－Ｕ－Ｙ－Ｚ（１）のリンカー分子、及び前記リンカー分子を使用してペプチドを精製する方法に関する。リンカー分子は、部分Ｘを介して精製樹脂にカップリングし、脱離基Ｚの放出下で部分Ｙを介してペプチドにカップリングすることができる。Ｔは任意のスペーサー部分であり、Ｖは任意の電子吸引性部分である。Ｕは、少なくとも１つの電子求引性部分Ｖ、Ｗ、又はＥに結合されるアリール又は５員若しくは６員のヘテロアリールの部分である。リンカーは酸性条件下で安定しており、還元剤の添加時にペプチドを放出する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式１、Ｘ－Ｔ_ｂ－Ｖ_ａ－Ｕ－Ｙ－Ｚ（１）の化合物であって、式中、
－ Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に式２、２ａ、３又は３ａの、より特に式２又は２ａの部分から選択され、

【化1】

式中、
－ 各Ｒ^１及びＲ^２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ^１又はＲ^２は、Ｂであり、
－ Ｒ^３は、Ｈ又はＢから選択され、
－ Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基によって保護され得、
－ Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
－ Ｔは、部分、－Ｃ_１～１２アルキル－、（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＪＲ^９－、－ＪＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＪＲ^９－、フェニル、５員若しくは６員ヘテロアリールのうちの少なくとも１つ、特に１～５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、
Ｊは、ＣＨ又はＮであり、特にＮであり、
特にＴは：
－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－、－フェニル－Ｒ^６－、－フェニル－、－Ｒ^５－ピロイル、－Ｒ^５－ピラゾイル、－Ｒ^５－イミダゾイル、Ｒ^５－ピペラジニル－、－Ｒ^５－ピリジニル、－Ｒ^５－ピリミジニル、－Ｒ^５－ピラジニル、－Ｒ^５－ピリダジニル、－Ｒ^５－ピロイル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピラゾイル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－イミダゾイル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピペラジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリミジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピラジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリダジニル－Ｒ^６－、ピロイル－Ｒ^６－、ピラゾイル－Ｒ^６－、イミダゾイル－Ｒ^６－ピパラジニル－Ｒ^６－、ピリジニル－Ｒ^６－、ピリミジニル－Ｒ^６－、ピラジニル－Ｒ^６－、ピリダジニル－Ｒ^６－、ピロイル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル及びピリダジニル、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ^５、Ｒ^５’及びＲ^６は、互いに独立して、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル又は（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２から、特にＣ_１～Ｃ_６アルキルから、特にＣ_１～Ｃ_３アルキルから選択され、かつ、式中、
Ｒ^９及びＲ^９’は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ_２、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨＢ、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＢ_２、－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ－Ｒ^１５から、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^９はＨであり、式中、
Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ^１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ^１５は、システイニル、スレオニニル、２－メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、Ｎ－メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ－メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、ここで、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得、
－ ｂは、０又は１であり、特に１であり、
－ Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、

【化2】

、
－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から、特に－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル－、ピリミジニルから、より特に－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される電子求引性部分であり、式中、
Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１はＨであり、
Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルであり、
ｐは、０、１又は２であり、特に０又は１であり、
－ ａは、０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
－ Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員ヘテロアリール部分であり、より特にフェニルであり、これは部分Ｖ、Ｗ_ｑ及びＥ_ｎの少なくとも１つに結合し、かつＣ_１～６アルキルによって、特にＣ_１～３アルキルによって任意に置換され得、式中、
Ｖは、上記のとおり定義され、
Ｗは、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、

【化3】

から、特に－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８から選択され、式中、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、酸性条件下で電子吸引基であり、
ｎは、０～４の間の整数であり、特に０～２の間、より特に０又は１の整数であり、ｑは、０～４の間の整数であり、特に０～２の間、より特に０及び１の間の整数であり、ｎとｑとの合計は、４以下であり、式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である場合に、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計は、０．４５より大きく、かつ式中、
Ｗは、Ｙに対してオルト位又はパラ位にあり、
－ Ｙは、－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－又は－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは、１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
－ Ｚは、電子吸引性脱離基である、
前記化合物。

【請求項2】

Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｎ（Ｃ_２Ｈ_４）_２ＮＨ_２、－Ｎ（Ｃ_２Ｈ_４）_２Ｎ－Ｂ、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｍｅ、－ＳＯＭｅ、－ＳＯ_２Ｅｔ、－ＳＯＥｔから、特に、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈから、より特に、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル又は－Ｂｒから選択され、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、かつ
Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、かつ
ｒは、０、１、２、３又は４であり、特に０、１又は２である、
請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

－ Ｂは、Ｂｏｃ（－Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ）、Ｅｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ，１－エトキシエチリデン）トリチル（－Ｃ（Ｐｈ）_３）、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＰｈ_３、Ｍｍｔ（－Ｃ（Ｐｈ）_２Ｃ_６Ｈ_４ＯＭｅ）、ＤＭＴ（－Ｃ（Ｐｈ）（Ｃ_６Ｈ_４ＯＭｅ）_２）、Ｃｂｚ（－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ_２Ｐｈ）、ベンジリデンアミン（＝ＣＰｈ）、フタリミド（＝（ＣＯ）_２Ｃ_６Ｈ_４）、ｐ－トルエンスルホンアミド（－ＳＯ_２Ｃ_６Ｈ_４Ｍｅ）、ベンジルアミン（－ＣＨ_２Ｐｈ）、アセトアミド（－ＣＯＭｅ）、トリフルオロアセトアミド（－ＣＯＣＦ_３）、Ｄｄｅ（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－エチル）及び１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）から選択され、特にＢは、Ｂｏｃ又はＥｅｉであり、より特にＢは、Ｂｏｃであり、及び／又は
－ アセタール又はケタールの保護基は、

【化4】

から選択され、
式中、ｒは、０～１２であり、特に０～６であり、より特に０、１又は２であり、かつ
Ｒ^１０は、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－であり、特にＣ_１～６アルキルであり、より特にＣ_１～３アルキルである、
請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｔは、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－から、特に、Ｃ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－から、より特に、Ｃ_１～３アルキル又は－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－から選択され、
Ｒ^５、Ｒ^５’、Ｒ^６、Ｒ^９’及びＲ^９は、上記で定義されたとおりである、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

部分Ｕの５員若しくは６員のヘテロアリール部分は、１又は２個のヘテロ原子を含み、特に、部分Ｕの５員ヘテロアリール部分は、ピラゾール、イミダゾールから選択され、かつ部分Ｕの６員ヘテロアリール部分は、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンから、特にピリジンから選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

Ｕは、式５、６、７又は８の、特に式５又は６の部分から選択され、

【化5】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、及びＥは、上記のとおり定義され、
式５及び６の場合、Ｕは、部分Ｔ又はＶ（Ｔ ｏｒ Ｖ）に結合され、
式７及び８の場合、Ｕは、部分Ｖに結合され、
Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３、Ａ^４及びＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４は、互いに独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから、特にＣ及びＮから選択され、Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４、又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４の２～４個の部分は、Ｃであり、特にＡ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４、又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４の３又は４個の部分は、Ｃであり、より特にＡ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４、又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４のすべての部分は、Ｃであり、
ｎは、
式５及び６の場合、０～３の間の、特に０～２の間の整数であり、
式７及び８の場合、０～４の間の、特に０～２の間の、より特に０～１の間の整数であり、
ｑは、０～４の間の、特に０～２の間の、より特に０～１の間の整数であり、ｎとｑとの合計は、４以下である、
請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

Ｕは、式９、１０、１１又は１２の、特に式９又は１０の部分から選択され、

【化6】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式９及び１０の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶ（Ｔ ｏｒ Ｖ）に結合され、
式１１及び１２の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
すべての部分Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４は、Ｃである、又はＡ^２、Ａ^３及びＡ^４のうちの２つはＣであり、かつＡ^２、Ａ^３及びＡ^４のうちの他の２つはＮであり、特にＡ^２及びＡ^３はともにＣであり、かつ
Ｄ^２は、Ｃ又はＮであり、特にＣである、
請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

Ｕは、式１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１の、特に式１３～１９の、より特に式１５又は１９の部分から選択され、

【化7】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式１３、１４及び１５の場合、Ｕは、部分Ｔ又はＶ（Ｔ ｏｒ Ｖ）に結合され、
式１６、１７及び１８の場合、Ｕは、部分Ｖに結合され、
Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４は、Ｃ又はＮであり、特にＣであり、
Ｄ^２は、Ｃ又はＮである、
請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

Ｚは、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－Ｎ_３、－ＯＨ、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ、－ＳＲ^１４、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＨ_２ＣＦ_３、－ＯＳＯ_２ＣＦ_３、－ＳＯ_２Ｃ_６Ｈ_４ＣＨ_３、－ＳＯ_２ＣＦ_３、－ＳＯ_２ＣＨ_３、

【化8】

から、特に、－ＯＨ、－Ｃｌ、

【化9】

から、特に、－ＯＨ、

【化10】

から選択され、
式中、Ｒ^１４は、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、アリール（ａｒｙｌｉｃ）又はベンジルの置換基である、
請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物。

【請求項10】

ペプチドを精製する方法であって、以下のステップ：
－ 粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであり、粗ペプチドは、請求項１に記載のリンカー分子に共有結合される、前記ステップ、
－ カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
－ 放出ステップにおいて、ペプチドを、特に酸性条件下で還元剤を加えることによって、放出する、前記ステップ、
を含む、前記方法。

【請求項11】

放出ステップにおいて、固定化リンカー修飾ペプチドの還元されたリンカー部分によって特徴付けられる還元中間体が達成され、引き金によって、特に、温度及び／又はｐＨの変化によって、より特に、アミンスイッチの場合にｐＨを還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに増加させることによって、又はカルバメートスイッチの場合にｐＨをカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａに減少させることによって、ペプチドは前記還元中間体から放出される、
請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

リンカー修飾ペプチドは、合成樹脂にさらに結合され、かつ合成樹脂は、カップリングステップが実行される前に切断される、請求項１０又は１１に記載の方法。

【請求項13】

請求項１に記載のリンカー分子は、アジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

固体支持体の非反応アルデヒド部分は、ステップ（ｂ）を実行した後にブロッキング剤を使用して、特に、システイン、スレオニン、２－メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、Ｎ－メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから選択されるブロッキング剤を使用することによって、より特に、システイン及びＮ－メチルヒドロキシルアミンから選択されるブロッキング剤を使用することによってブロッキングされる、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、トリブチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、トリメチルホスファイト、トリエチルホスファイト、トリブチルホスファイト、ジエチルホスファイト、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４）、エタンジチオール、プロパンジチオール、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、Ｎａ_２Ｓ、ＮａＳＨ、グルタチオン、２，２’－ジチオジピリジン、ＢＨ_３、４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン、カテコールボラン、ボランテトラヒドロフラン、ボランジメチルスルフィド、ボランジメチルアミン錯体、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ボランｔｅｒｔ－ブチルアミン、ＬｉＡｌＨ_４、ＬｉＢＨ_４、ＮａＢＨ_４、ＮａＢＨ_３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＯＭｅ）_３、ＮａＢＨ（ＯＣＣＨ_３）_３、ＬｉＡｌＨ（ＯＣＭｅ_３）_３、ヒドロキノン、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ＫＩを含むアスコルビン酸、ヒドラジン、ＮＨ＝ＮＨ、ホルムアルデヒドから、特に、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、トリフェニルホスフィン、ＫＩを含むアスコルビン酸、トリブチルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ_４、アスコルビン酸から、より特にトリフェニルホスフィン及びトリメチルホスフィンから選択される、
請求項１０～１４のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって生成されるペプチド又はペプチド核酸を精製する方法、及び前記精製に使用するリンカー分子に関する。

【背景技術】

【0002】

固相ペプチド合成は、ペプチドの合成の方法として確立されている。標準的な手順は、第１のＮ末端で保護されたアミノ酸を合成樹脂にカップリングした後、Ｎ末端の脱保護のサイクルを繰り返し、次のＮ末端で保護されたアミノ酸をカップリングし、未反応のペプチド配列をキャッピングすることである。最後に、合成されたペプチドは合成樹脂から切断され、精製される。

【0003】

ペプチドの精製に広く使用されている方法は、分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である。この方法の欠点は、所望の生産量に関するスケーラビリティが低いことであり、そのため、１つの同じシステムで様々な量を生産することはできない。これにより、対応する複合デバイスの取得費用が比較的高くなる。さらなる欠点は、個々の断片を正しく分析評価するためには、比較的広範な知識を必要とするということである。さらに、ＨＰＬＣ精製では、実行中に溶媒、及び時にはカラム材（固相）を大量に消費することがある。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】欧州特許第０５５２３６８（Ａ１）号

【特許文献2】欧州特許第２５０１７１１（Ｂ１）号

【特許文献3】ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

それ故、安価で不良傾向の少ない方法は、ペプチド製造の費用削減に有利である。

【0006】

代替的な方法では、ペプチドに結合できるリンカー分子を使用し、その後、精製時に使用される官能化固相にカップリングする。

【0007】

欧州特許第０５５２３６８（Ａ１）号には、精製支持体に共有結合できるチオールを有するリンカー分子が記載されている。ただし、この方法は、アミノ酸のシステイン又はペニシラミンを含むようなチオール含有ペプチドには適していない。

【0008】

欧州特許第２５０１７１１（Ｂ１）号では、銅の存在を必要とするアジド（－Ｎ_３）とアルキンとの間の１，３－双極性環化付加反応によってリンカーを固相に結合させる類似の方法が提案されている。しかし、メチオニン、システイン、アルギニン、リジンを含むペプチドは、銅と複合化して除去が困難になる場合がある。銅の毒性のため、このようなペプチドは、医薬品用途のようなすべての適用に適していない。

【0009】

ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）は、ＳＰＰＳ後に合成樹脂になお結合したままのペプチドに結合し得るリンカー分子を開示している。一般的に使用されているＴＦＡ条件を適用して、ペプチドはその後に合成から切断される。しかし、ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）に開示されるとおり、ペプチドとベンジルカルバメートを形成するリンカー分子の欠点は、酸性処理に対する不安定性である（ＴＦＡ＞５０％、水の存在下でｐＨ＜０）。リンカー分子の早期分解は、精製ペプチドの収量の大幅な低下を引き起こす。

【0010】

Ｎ末端にＴｈｒ、Ｓｅｒ、又はＣｙｓを含有するペプチドとの望ましくない副反応もまた発生し、これは、ペプチドの放出に使用される塩基性条件（ｐＨ＞９）の下で、リンカーのスルホ・エチレン・カルバメート部分に対するβ－ヒドロキシル基又はβ－チオール基の求核攻撃に起因する。ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）に開示されているリンカー分子のさらなる副反応は、アスパルチミド形成及びＡｒｇ－Ｇｌｕ配列でのアルギニンのシトルリンへの変換、並びに塩基性条件下での内部Ｃｙｓ残基によるジスルフィド形成及び求核性副反応である。

【0011】

さらに、ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）に記載されているスルホンリンカーは、固体レポートに残り、かつ追加の消光ステップを必要とする反応性ビニルスルホン部分に悩まされている。

【課題を解決するための手段】

【0012】

塩基性条件下での副反応及び酸性条件下でのリンカーの早期分解の欠点を克服するために、本発明は、ＴＦＡ条件下で安定であり、かつ穏やかな酸性条件下、特にｐＨ≦７でペプチド放出を可能にするリンカー分子を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】図１は、Ｘ－Ｔ_ｂ－Ｖ_ａ－Ｕ（Ｗ）－Ｙ－Ｚ型（式中、ＷはＮ_３である）のリンカーの使用による本発明のペプチド精製の模式図であり、この方法は請求項１０に記載されている。ＳＲ＝合成樹脂、ＰＢ＝精製ビーズ；１．）４当量のＸ－Ｔｂ－Ｖａ－Ｕ（Ｗ）－Ｙ－Ｚ、６当量のオキシマ、６当量のＤＩＥＡ、２時間、３．）ＤＭＳＯによる粗ペプチドの溶解及び１０体積％のクエン酸Ｎａ ｐＨ ４．５の添加、９０分、４．）洗浄、５．）ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ ９：１中のＰＰｈ３、１５分、６．）ＭｅＣＮで洗浄、７．）Ｈ２Ｏ／ＴＦＡによる加水分解、８．）１，６－又は１，４－脱離、９．）最終的なエーテル沈殿。

【図2-1】図２は、本発明のリンカー分子Ｘ１及びＸ２の使用による、ペプチドＰ１（Ｈ－ＡＲＴＫＱＴＡＲＫＳＴＧＧＫＡ－ＯＨ）の本発明のペプチド精製の例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）Ｐ１へのリンカーカップリング前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ１のクロマトグラム、３．）リンカーＸ２の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ１のクロマトグラム。

【図2-2】図２は、本発明のリンカー分子Ｘ１及びＸ２の使用による、ペプチドＰ１（Ｈ－ＡＲＴＫＱＴＡＲＫＳＴＧＧＫＡ－ＯＨ）の本発明のペプチド精製の例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）Ｐ１へのリンカーカップリング前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ１のクロマトグラム、３．）リンカーＸ２の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ１のクロマトグラム。

【図3-1】図３は、本発明のリンカー分子Ｘ２の使用による、ペプチドＰ２（Ｈ－ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２）の本発明のペプチド精製の例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）Ｐ２にリンカーカップリングする前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ２の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ２のクロマトグラム。約３－アミノ安息香酸は、ペプチドの定量化のための内部標準として使用した。

【図3-2】図３は、本発明のリンカー分子Ｘ２の使用による、ペプチドＰ２（Ｈ－ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２）の本発明のペプチド精製の例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）Ｐ２にリンカーカップリングする前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ２の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ２のクロマトグラム。約３－アミノ安息香酸は、ペプチドの定量化のための内部標準として使用した。

【図4-1】図４は、本発明のリンカー分子Ｘ１の使用による、ペプチドＰ３（Ｈ－ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ－ＮＨ_２）、ペプチドＰ４（Ｈ－ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ－ＮＨ_２）、ペプチドＰ５（Ｈ－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ－ＮＨ_２）及びペプチドＰ６（Ｈ－ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２）の本発明のペプチド精製の４つの例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）ペプチドへのリンカーカップリングの前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のペプチドのクロマトグラム。

【図4-2】図４は、本発明のリンカー分子Ｘ１の使用による、ペプチドＰ３（Ｈ－ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ－ＮＨ_２）、ペプチドＰ４（Ｈ－ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ－ＮＨ_２）、ペプチドＰ５（Ｈ－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ－ＮＨ_２）及びペプチドＰ６（Ｈ－ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２）の本発明のペプチド精製の４つの例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）ペプチドへのリンカーカップリングの前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のペプチドのクロマトグラム。

【図4-3】図４は、本発明のリンカー分子Ｘ１の使用による、ペプチドＰ３（Ｈ－ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ－ＮＨ_２）、ペプチドＰ４（Ｈ－ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ－ＮＨ_２）、ペプチドＰ５（Ｈ－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ－ＮＨ_２）及びペプチドＰ６（Ｈ－ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２）の本発明のペプチド精製の４つの例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）ペプチドへのリンカーカップリングの前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のペプチドのクロマトグラム。

【図4-4】図４は、本発明のリンカー分子Ｘ１の使用による、ペプチドＰ３（Ｈ－ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ－ＮＨ_２）、ペプチドＰ４（Ｈ－ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ－ＮＨ_２）、ペプチドＰ５（Ｈ－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ－ＮＨ_２）及びペプチドＰ６（Ｈ－ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２）の本発明のペプチド精製の４つの例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）ペプチドへのリンカーカップリングの前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のペプチドのクロマトグラム。

【図5】図５～図８の総論：図５～図８では、以下のような略語が使用される：Ｐ＝ペプチド、Ｅ＝矢印は電子吸引又は電子供与の方向を示す、ａ）リンカー修飾ペプチドを得るための合成樹脂（ＳＲ）のＴＦＡ切断、ｂ）リンカー修飾ペプチドを精製ビーズ（ＰＢ）に固定化するためのアルデヒド官能化固体支持体とのインキュベーション、ｃ）合成不純物を除去するためのビーズの洗浄、ｄ）還元剤を添加することによる還元、ｅ）還元剤の洗浄、ｆ）放出の電子構造をもたらすためのｐＨの調整、ｇ）１，６－、１，４－脱離又は求核攻撃のいずれかによるリンカー分子の自然な分解。図５は、アジド還元型セーフティロックを有するアミンスイッチ（タイプ１）である。切断可能な芳香族のコアと共役している塩基性窒素原子は、プロトン化される場合に電子を引き抜く（Ｅ：矢印）。構造１の正電荷は、溶解性を高め、合成樹脂（ＳＲ）のリンカー－ペプチド構造の酸性切断時にＴＦＡの安定性を提供する。ペプチドの放出は２つのステップで行われる。最初に、アジド（部分Ｗ）が－ＮＨ_２に還元されることで、放出の安全ロックが除去される。リンカーの安定性は、ｐＨが最も塩基性の高い窒素のｐＫａより低い場合、プロトン化されたアミン基の電子吸引性により、構造２の還元後もなお保持される。これにより、還元剤の除去及び酸性条件下での洗浄を可能にする。第２のステップでは、ｐＨを、最も塩基性の高い窒素のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに上昇させることによって、精製されたペプチドが放出される。ｐＨの増加は、１，６－脱離反応を誘導する。リンカーはＣＯ_２の放出下で分解する。このペプチドは、遊離Ｎ末端を有して得られる。

【図6】図５～図８の総論：図５～図８では、以下のような略語が使用される：Ｐ＝ペプチド、Ｅ＝矢印は電子吸引又は電子供与の方向を示す、ａ）リンカー修飾ペプチドを得るための合成樹脂（ＳＲ）のＴＦＡ切断、ｂ）リンカー修飾ペプチドを精製ビーズ（ＰＢ）に固定化するためのアルデヒド官能化固体支持体とのインキュベーション、ｃ）合成不純物を除去するためのビーズの洗浄、ｄ）還元剤を添加することによる還元、ｅ）還元剤の洗浄、ｆ）放出の電子構造をもたらすためのｐＨの調整、ｇ）１，６－、１，４－脱離又は求核攻撃のいずれかによるリンカー分子の自然な分解。図６は、アジドではなく、ニトロ基、ジスルフィド基、又はアゾ基などの他の還元性部分を持つ還元的安全ロックを有するアミンスイッチ（タイプ２）を示す。切断可能な芳香族のコアと共役している塩基性窒素原子は、プロトン化される場合に電子を引き抜く（Ｅ：矢印）。構造１の正電荷は、溶解性を高め、合成樹脂（ＳＲ）のリンカー－ペプチド構造の酸性切断時にＴＦＡの安定性を提供する。ペプチドの放出は２つのステップで行われる。最初に、ニトロ（部分Ｗ）が－ＮＨ_２に還元されることで、放出の安全ロックが除去される。リンカーの安定性は、ｐＨが最も塩基性の高い窒素のｐＫａより低い場合、プロトン化されたアミン基の電子吸引性により、構造２の還元後もなお保持される。これにより、還元剤の除去及び酸性条件下での洗浄を可能にする。第２のステップでは、ｐＨを、最も塩基性の高い窒素のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに上昇させることによって、精製されたペプチドが放出される。ｐＨの増加は、１，６－脱離反応を誘導する。リンカーはＣＯ_２の放出下で分解する。このペプチドは、遊離Ｎ末端を有して得られる。

【図7】図５～図８の総論：図５～図８では、以下のような略語が使用される：Ｐ＝ペプチド、Ｅ＝矢印は電子吸引又は電子供与の方向を示す、ａ）リンカー修飾ペプチドを得るための合成樹脂（ＳＲ）のＴＦＡ切断、ｂ）リンカー修飾ペプチドを精製ビーズ（ＰＢ）に固定化するためのアルデヒド官能化固体支持体とのインキュベーション、ｃ）合成不純物を除去するためのビーズの洗浄、ｄ）還元剤を添加することによる還元、ｅ）還元剤の洗浄、ｆ）放出の電子構造をもたらすためのｐＨの調整、ｇ）１，６－、１，４－脱離又は求核攻撃のいずれかによるリンカー分子の自然な分解。図７は、求核的放出を有するアミンスイッチ（タイプ３）を示す。求核的放出を介してペプチドを放出することが可能なリンカーは、カーボネート部分（Ｙ＝－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｚ＝Ｏ－Ｒ）の代わりに、カルボキシレート（Ｙ＝Ｃ（＝Ｏ）、Ｚ＝ＯＨ）を含む。炭酸塩なしに、リンカーは溶液中及び保存中に高い安定性を示す。ペプチドへのカップリングは、カルバメート結合の代わりにアミド結合を生じる一般的なアミノ酸カップリングとして行うことができる。カルバメート結合の欠如により、リンカーはＴＦＡなどの酸性条件下で安定している。また、ここではペプチドの放出は２つのステップで行われる。最初に、還元性部分（－Ｎ_３）がアミンに還元されるため、放出の安全ロックが除去される。ｐＨが最も塩基性の高い窒素のｐＫａよりも高い場合、還元後もなおリンカーの安定性が保たれる。これにより、還元剤の除去及び酸性条件下での洗浄を可能にする。第２のステップでは、ｐＨを、最も塩基性の高い窒素のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに上昇させることによって、精製されたペプチドが放出される。ｐＨの増加により求核的放出が誘導され、遊離Ｎ末端を有するペプチドが得られる。ｐＨがカルバメートのｐＫａよりも高い場合、還元後もなおリンカーの安定性が保たれる。

【図8】図５～図８の総論：図５～図８では、以下のような略語が使用される：Ｐ＝ペプチド、Ｅ＝矢印は電子吸引又は電子供与の方向を示す、ａ）リンカー修飾ペプチドを得るための合成樹脂（ＳＲ）のＴＦＡ切断、ｂ）リンカー修飾ペプチドを精製ビーズ（ＰＢ）に固定化するためのアルデヒド官能化固体支持体とのインキュベーション、ｃ）合成不純物を除去するためのビーズの洗浄、ｄ）還元剤を添加することによる還元、ｅ）還元剤の洗浄、ｆ）放出の電子構造をもたらすためのｐＨの調整、ｇ）１，６－、１，４－脱離又は求核攻撃のいずれかによるリンカー分子の自然な分解。図８は、カルバメートスイッチ（タイプ４）を示す。カルバメートスイッチを介してペプチドを放出することができるリンカーは、部分Ｙ＝－Ｏ－（＝Ｏ）－を含む。さらに、リンカーは、電子吸引性部分Ｅ、例えば－Ｂｒ、及び還元性部分Ｗ、例えば－Ｎ_３を含む。ＴＦＡの安定性は、ＴＦＡ切断中の電子求引性部分－Ｂｒによって、固体支持体、例えば精製樹脂へのリンカー－ペプチド構造の固定化によって、及びその後の酸性条件下での洗浄ステップによって媒介される。還元性部分－Ｎ_３を－ＮＨ_２に還元すると、放出のための安全ロックが除去される。ｐＨがこのカルバメートのｐＫａよりも高い場合リンカー分子は安定している。これにより、還元剤の除去と洗浄が可能となる。最後に、１，６－又は１，４－脱離及びＣＯ_２の放出によって、カルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａまでｐＨを減少させることによって、精製されたペプチドが放出される。このペプチドは、遊離Ｎ末端を有して得られる。

【図9】図９は、３つの本発明リンカー分子の使用によるペプチドＰ２（Ｈ－ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２）の本発明ペプチド精製のそれぞれの例を示す。２．）アジドの還元的安全ロックを有するタイプ１のアミンスイッチのＸ９、３．）他の還元的安全ロックを有するタイプ２のアミンスイッチのＸ１３、４．）求核的放出を有するタイプ３のアミンスイッチのＸ２２。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；単離されたペプチドの同一性は常にＵＰＬＣ－ＥＳＩ／ＭＳ分析によって確認した。同定されたＰ２生成物には^＊でマークされている。１．）Ｐ２（^＊）にリンカーカップリングする前の粗製ペプチド試料のクロマトグラム。２．）以下の実施例のセクションに記載されるとおり、タイプ１のリンカーＸ９の使用、及び対応する方法による精製の後のＰ２（^＊）のクロマトグラム。３．）以下の実施例のセクションに記載されるとおり、タイプ２のリンカーＸ１３の使用、及び対応する方法による精製の後のＰ２（^＊）のクロマトグラム。４．）以下の実施例のセクションに記載されるとおり、タイプ３のリンカーＸ２２の使用、及び対応する方法による精製の後のＰ２（^＊）のクロマトグラム。

【発明を実施するための形態】

【0014】

説明
本発明の第１の態様によれば、式１、Ｘ－Ｔ_ｂ－Ｖ_ａ－Ｕ－Ｙ－Ｚ（１）の化合物が提供され、
式中、
－ Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に式２、２ａ、３又は３ａの、より特に式２又は２ａの部分から選択され、

【化1】

式中、
－ 各Ｒ^１及びＲ^２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ^１又はＲ^２は、Ｂであり、
－ Ｒ^３は、Ｈ又はＢから選択され、
－ Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基で保護され得、
－ Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
－ Ｔは、部分、－Ｃ_１～１２アルキル－、（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＪＲ^９－、－ＪＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＪＲ^９－、フェニル、５又は６員ヘテロアリールの、特に－Ｃ_１－１２アルキル－、（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＪＲ^９－、－ＪＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＪＲ^９－のうちの少なくとも１つ、特に１～５、より特に１～３を含む直鎖状又は分岐状スペーサーであり、式中、
Ｊは、ＣＨ又はＮであり、特にＮであり、
特にＴは：
－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特に－Ｃ_１～６アルキル－から、より特に－Ｃ_１～３アルキル－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－、－フェニル－Ｒ^６－、－フェニル－、－Ｒ^５－ピロリル、－Ｒ^５－ピラゾイル、－Ｒ^５－イミダゾイル、Ｒ^５－ピペラジニル－、－Ｒ^５－ピリジニル、－Ｒ^５－ピリミジニル、－Ｒ^５－ピラジニル、－Ｒ^５－ピリダジニル、－Ｒ^５－ピロリル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピラゾイル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－イミダゾイル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピペラジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリミジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピラジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリダジニル－Ｒ^６－、ピロリル－Ｒ^６－、ピラゾイル－Ｒ^６－、イミダゾイル－Ｒ^６－ピパラジニル－Ｒ^６－、ピリジニル－Ｒ^６－、ピリミジニル－Ｒ^６－、ピラジニル－Ｒ^６－、ピリダジニル－Ｒ^６－、ピロイル（ｐｙｒｒｏｙｌ）、ピラゾイル、イミダゾイル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニル、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ^５、Ｒ^５’及びＲ^６は、互いに独立して、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル又は（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２から、特にＣ_１～Ｃ_６アルキルから、特にＣ_１～Ｃ_３アルキルから選択され、かつ、式中、
Ｒ^９及びＲ^９’は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ_２、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨＢ、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＢ_２、－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ－Ｒ^１５から、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^９は、Ｈであり、式中、
Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ^１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ^１５は、システイニル、スレオニニル、２－メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、Ｎ－メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ－メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、式中、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得、
－ ｂは、０又は１であり、特に１であり、
－ Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、

【化2】

、
－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から、特に－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル－、ピリミジニルから、より特に－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される電子求引性部分であり、式中、
Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１はＨであり、
Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルであり、
ｐは、０、１又は２であり、特に０又は１であり、
－ ａは０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
－ Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員のヘテロアリール部分であり、より特にフェニルであり、これは部分Ｖ、Ｗ_ｑ及びＥ_ｎの少なくとも１つに結合され、かつＣ_１～６アルキルによって、特にＣ_１～３アルキルによって任意に置換され得、式中、
Ｖは上記のとおり定義され、
Ｗは、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、

【化3】

から、特に－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８から選択され、式中、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、酸性条件下で電子吸引基であり、
ｎは０～４の間の整数であり、特に０～２の間、より特に０又は１の整数であり、かつｑは０～４の間の整数であり、特に０～２の間、より特に０及び１の整数であり、ｎとｑとの合計は、４以下であり、式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である場合、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計が０．４５より大きく、かつ
式中、
Ｗは、Ｙに対してオルト位又はパラ位にあり、
－ Ｙは、－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－又は－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
－ Ｚは、電子吸引性脱離基である。

【0015】

特定の実施形態では、
－ Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に式２、２ａ、３又は３ａの、より特に式２又は２ａの部分から選択され、

【化4】

式中、
－ 各Ｒ^１及びＲ^２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ^１又はＲ^２は、Ｂであり、
－ Ｒ^３は、Ｈ又はＢから選択され、
－ Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基で保護され得、
－ Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
－ Ｔは、部分、－Ｃ_１～１２アルキル－、（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＪＲ^９－、－ＪＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＪＲ^９－のうちの少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、
Ｊは、Ｃ又はＮであり、特にＮであり、
特にＴは：
－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－、－フェニル－Ｒ^６－、－フェニル－、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ^５、Ｒ^５’及びＲ^６は、互いに独立して、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル又は（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２から、特にＣ_１～Ｃ_６アルキルから、特にＣ_１～Ｃ_３アルキルから選択され、かつ、
Ｒ^９及びＲ^９’は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ_２、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨＢ、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＢ_２、－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ－Ｒ^１５から、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^９は、Ｈであり、式中、
Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ^１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ^１５は、システイニル、スレオニニル、２－メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、Ｎ－メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ－メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、式中、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得、
－ ｂは、０又は１であり、特に１であり、
－ Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピペラジニル－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、

【化5】

、
－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から、特に、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピペラジニル－、－ピリジニル－、ピリミジニルから、より特に－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピペラジニル－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、
Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１はＨであり、
Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルであり、
－ ａは０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
－ Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員のヘテロアリール部分であり、より特にフェニルであり、これは部分Ｖ、Ｗ_ｑ及びＥ_ｎの少なくとも１つに結合し、かつＣ_１～６アルキルによって、特にＣ_１～３アルキルによって任意に置換され得、式中、
Ｖは上記のとおり定義され、
Ｗは、－Ｎ_３、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、

【化6】

から、特に－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８から選択され、式中、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特に、ピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、酸性条件下で電子吸引基であり、
ｎは、０～４の間、特に０～２の間の整数であり、より特に０又は１の整数であり、かつｑは、０～４の間の、特に０～２の間の整数であり、より特に０及び１の整数であり、ｎとｑとの合計は、４以下であり、式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である場合、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計が０．４５より大きく、
－ Ｙは、－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－又は－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは、１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
－ Ｚは、電子吸引性脱離基である。

【0016】

特定の実施形態では、
－ Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に式２、２ａ、３又は３ａの、より特に式２又は２ａの部分から選択され、

【化7】

式中、
－ 各Ｒ^１及びＲ^２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ^１又はＲ^２は、Ｂであり、
－ Ｒ^３は、Ｈ又はＢから選択され、
－ Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基によって保護され得、
－ Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
－ Ｔは：
－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－、－フェニル－Ｒ^６－、－フェニル－、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ^５、Ｒ^５’及びＲ^６は、互いに独立して、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルから、特にＣ_１～Ｃ_６アルキルから、特にＣ_１～Ｃ_３アルキルから選択され、Ｒ^９及びＲ^９’は、互いに独立して、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^９は、Ｈであり、
－ ｂは、０又は１であり、特に１であり、
－ Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピペラジニル－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、

【化8】

、
－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から、特に、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピペラジニル－、－ピリジニル－、ピリミジニルから、より特に－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピペラジニル－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、
Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１は、Ｈであり、
Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２は、メチルであり、
－ ａは、０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
－ Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員のヘテロアリール部分であり、より特にフェニルであり、これは部分Ｖ、Ｗ_ｑ及びＥ_ｎの少なくとも１つに結合し、かつＣ_１～６アルキルによって、特にＣ_１～３アルキルによって任意に置換され得、式中、
Ｖは、上記のとおり定義され、
Ｗは、－Ｎ_３、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、

【化9】

から、特に、－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８から選択され、式中、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特に、ピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、酸性条件下で電子吸引基であり、
ｎは０～４の間の、特に０～２の間の整数であり、より特に０又は１の整数であり、かつｑは０～４の間の、特に０～２の間の整数である、より特に０及び１の整数であり、ｎとｑとの合計は４以下であり、かつ式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である場合、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計が０．４５より大きく、かつ式中、
特に、ＷはＹに対してオルト位又はパラ位にあり、
－ Ｙは、－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－又は－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは、１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
－ Ｚは、電子吸引性脱離基である。

【0017】

特定の実施形態では、
－ Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に、式２、２ａ、３又は３ａの、より特に、式２又は２ａの、最も特に式２の部分から選択され、

【化10】

式中、
－ 各Ｒ^１及びＲ^２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ^１又はＲ^２は、Ｂであり、
－ Ｒ^３は、Ｈ又はＢから選択され、
－ Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基で保護され得、
－ Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
－ Ｔは：
－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５－ＮＲ^９Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－、－フェニル－Ｒ^６－、－フェニル－、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ^５及びＲ^６は、互いに独立して、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルから、特にＣ_１～Ｃ_６アルキルから、特にＣ_１～Ｃ_３アルキルから選択され、Ｒ_９は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^９は、Ｈであり、
－ ｂは、０又は１であり、特に１であり、
－ Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から、特に－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、
Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１は、Ｈであり、
Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２は、メチルであり、
－ ａは０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
－ Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員のヘテロアリール部分であり、これは、部分Ｖ、Ｗ及びＥのうちの少なくとも１つに結合しており、式中、
Ｖは、上記のとおり定義され、
Ｗは、－Ｎ_３、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－ＳＳＲ^８、－ＯＣＨ_２Ｎ_３、－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－ピリジン、

【化11】

から選択され、式中、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｍｅ、－ＳＯＭｅ、－ＳＯ_２Ｅｔ、－ＳＯＥｔから、特に、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈから選択され、
Ｒ^１３は、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＰＦ_６から選択され、かつ式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である場合、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計が０．４５より大きく、かつ式中、
特に、Ｗは、Ｙに対してオルト位又はパラ位にあり、
－ Ｙは、－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－又は－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは、１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
－ Ｚは、電子吸引性脱離基である。

【0018】

式１のリンカー分子は、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）後のペプチドの精製に適している。

【0019】

リンカー分子を使用してＳＰＰＳ後にペプチドを精製する一般的なアプローチは、最後のカップリングのステップでリンカー分子をペプチドのＮ末端にカップリングさせるアプローチである。このカップリングのステップでは、ペプチドのＮ末端がリンカー分子を求核攻撃して、このリンカーの部分Ｙと共有結合性カルバメート結合又はアミド結合を形成する一方で、電子吸引性の脱離基Ｚが放出される。その後、ＴＦＡを加えることによってペプチドリンカー構築物が合成樹脂から切断される。

【0020】

本発明によるリンカーは、例えばＴＦＡを使用することによってペプチドリンカー構築物が切断される場合に酸性条件下で安定している。

【0021】

リンカーの部分Ｘは、精製時に使用される樹脂などの官能化固相にカップリングされ得る。部分Ｘは、アルデヒド、ケトン、アミノオキシ、ヒドラジンなどの官能化固相の適切な部分と反応することで、ヒドラゾン結合又はオキシム結合を形成し得る。

【0022】

部分Ｔは、一般的に適用される精製条件で非反応性のスペーサーを表す。

【0023】

部分Ｔは、部分Ｕに直接結合している、又は部分Ｖを介して結合している。

【0024】

部分Ｕは、酸性条件下、特にＴＦＡ＞５０％、水の存在下、ｐＨ＜０でのリンカー分子の安定性に寄与する。これは、電子吸引性部分Ｅ、Ｗ、Ｖの少なくとも１つに結合している複素環部分又はフェニル部分を使用することのいずれかによって達成される。

【0025】

電子吸引部分（Ｅ、Ｗ、Ｖ）がフェニル部分に結合される場合、ペプチドに結合したリンカー分子のベンジル位は電子密度が低くなるため、酸触媒による分解の影響を受けにくくなる。酸性条件下での本発明のリンカー分子の十分な安定性のために、電子吸引の特定の閾値が満たされる必要がある。この閾値は、０．４５より大きい酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数（σ_ｍ及びσ_ｐ）の合計として表される。Ｈａｍｍｅｔｔ定数はＨａｎｓｃｈ ａｎｄ Ｔａｆｔ（１９９１）、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９１：１６５－１９５に従って計算される。正のハメット定数は、置換基がフェニル部分に電子吸引効果を発揮する能力を反映し、負の値は、置換基が電子供与効果を発揮することを示している。

【0026】

ハメット定数は、メタ位（σ_ｍ）及びパラ位（σ_ｐ）の安息香酸誘導体のフェニルのコアの置換基について経験的に決定された定数であり、異なる酸性度（ｐＫａ）をもたらす。本発明の文脈において、この位置は、部分Ｙの結合に関連して決定される。オルト位の置換基については、パラ位のハメット値は良好な近似であり、したがって、本発明の文脈において置換基Ｖ、Ｗ、及びＥのハメット値の合計を計算するために使用される。

【0027】

留意すべきことに、ハメット定数は、酸性条件下で置換基Ｖ、Ｗ、及びＥについて計算される。例えば、中性ｐＨのアミン部分は、ハメット定数がσ_ｍ＝－０．１６及びσ_ｐ＝－０．６６であり、したがって電子を押し出す置換基により特徴付けられる。酸性条件下では、アミン部分がプロトン化される。プロトン化アミンについては、ハメット定数はσ_ｍ＝＋０．８６及びσ_ｐ＝＋０．６０であり、プロトン化アミンが電子吸引性置換基であることを示し、これはまた、Ｕ上の置換基として直接であれ、又はＵのπ共役であれ、プロトン化形態におけるＵから共役π系を介して電子を吸引することができる芳香族アミンも含む。

【0028】

０．４５より大きいハメット定数の合計の閾値は、Ｕがフェニル部分であり、かつＹが－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍ＝１である場合に適用され、これは、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－がベンジル位に良好な脱離を含み、酸触媒による分解を促進するためである。したがって、芳香環の電子密度は、Ｙのベンジル位のカチオンの安定化を防ぐのに十分に低い必要がある。

【0029】

【表1】

【0030】

部分Ｙが－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－の場合、－Ｃ（＝Ｏ）－はベンジル位における良好な脱離基ではないため、この閾値は必要ではない。

【0031】

複素環式部分Ｕを含む酸性条件下でのリンカー分子の安定性のために、特定の部分Ｖ、Ｗ及びＥを選択するためのそのような余剰の閾値は必要ではない。複素環式部分自体はフェニル部分と比較して電子不足であるため、酸性条件下でのリンカー分子の安定性には、Ｖ、Ｗ、及びＥの任意の組み合わせで十分であるようである。特に、Ｕが窒素含有複素環である場合、ペプチドの酸性放出中に窒素がプロトン化され、Ｕの芳香族系の電子密度が特に低くなる。したがって、ベンジルカチオンを安定化することができない。

【0032】

酸性条件下でのリンカー分子の安定性を媒介することは別として、部分Ｖ、Ｗ及びＥは、ペプチドの放出メカニズムに関して重要である。さらに、それらは酸性条件下でのリンカー分子の溶解性に寄与することができる。

【0033】

部分Ｗは、リンカーの崩壊、したがってペプチドの放出を引き起こす還元可能な置換基である。還元部分Ｗを含むリンカーは、還元中間体とも呼ばれる。安定したリンカー分子とは対照的に、還元中間体は不安定である。還元中間体の不安定性は、ｐＨに依存する。部分Ｗがプロトン化可能である場合（例えば、ピリジル）、それはまた、酸性条件下でのリンカー分子の溶解性にも寄与する。

【0034】

部分Ｅは電子求引性置換基であり、これは酸性条件下で電子求引性効果を示す。例えば、酸性条件下で正のハメット定数を有する部分は、特にｐＨ３～６、より特にｐＨ４．５にて、電子吸引性である。部分Ｅがプロトン化可能である場合、それは酸性条件下でのリンカー分子の溶解性にも寄与する。

【0035】

部分Ｅに加えて、又は代替的に、部分Ｖは、酸性条件下で電子吸引効果を示し得る。また、部分Ｖは、酸性条件下でのリンカーの安定性及び溶解性に寄与し得る。

【0036】

本発明によるリンカー分子は、アミンスイッチメカニズム（図５、６及び７を参照）又はカルバメートスイッチメカニズム（図８を参照）を介してペプチドを放出し得る。

【0037】

部分Ｙは、－Ｃ（＝Ｏ）－部分又は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－部分のいずれかである。リンカー分子がカップリングすると、アミド（－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－）部分又はカルバメート（－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－）部分がリンカー分子とペプチドのＮ末端との間に形成される。精製後、このペプチドは１．４又は１．６の脱離又は求核攻撃のいずれかによる還元条件下でのリンカー分子から、よって精製媒体から放出される。この還元刺激はＷを還元型に変換し、電子供与基及び求核試薬として機能するようになり、よってペプチドの放出が可能になる。

【0038】

特定の実施形態では、Ｘは、式２又は３の部分から選択される。

【0039】

特定の実施形態では、Ｘは、式２の部分から選択される。

【0040】

ヒドラゾン又はオキシム結合の形成による部分Ｘの官能化固相へのカップリングに必要な反応時間は、式４の部分を有するリンカーを使用する場合は長く、式２又は３の部分を有するリンカーを使用する場合は短くなる。固体支持体のアルデヒド又はケトン部分と、式３の部分Ｘとの間のヒドラゾン結合の形成は可逆的である。この可逆性により、発明者は、精製中の各洗浄ステップ後にペプチド材料の最大約１０％の損失を観察した。これとは対照的に、式２の部分を有するリンカーを使用した場合、ペプチド材料の損失はほとんど観察されなかった。

【0041】

特定の実施形態では、ＵはＣ_１～６アルキルで置換されている。

【0042】

特定の実施形態では、ＵはＣ_１～３アルキルで置換されている。

【0043】

特定の実施形態では、Ｕはメチルで置換されている。

【0044】

Ｕが１つ以上のアルキル部分でさらに置換されている場合は、アルキル部分のハメット値が考慮される。Ｕがさらにフェニル部分又はヘテロ原子で置換されている場合には、Ｖ、Ｗ、Ｅ及び任意にアルキル置換基のハメット値の合計が０．４５より大きい。特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｎ（Ｃ_２Ｈ_４）_２ＮＨ_２、－Ｎ（Ｃ_２Ｈ_４）_２Ｎ－Ｂ、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｍｅ、－ＳＯＭｅ、－ＳＯ_２Ｅｔ、－ＳＯＥｔから選択され、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４であり、かつ
Ｂは、本明細書で定義されるとおり酸に不安定なアミン保護基であり、特に－Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ（Ｂｏｃ）又はＣ（＝Ｏ）ＣＰｈ_３であり、かつ
ｒは、０、１、２、３又は４であり、特に０、１又は２である。

【0045】

特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈから選択され、ｒは、０、１、２、３又は４であり、特に０、１又は２である。

【0046】

特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、－Ｎ＝Ｎ－ピリジニル又は－Ｂｒから選択される。

【0047】

特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、又は－Ｂｒから選択される。

【0048】

特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、又は－Ｂｒから選択される。

【0049】

特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｍｅ、－ＳＯＭｅ、－ＳＯ_２Ｅｔ、－ＳＯＥｔから選択され、Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。

【0050】

特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈから選択され、Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。

【0051】

特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６－アルキル）_２－から選択され、特に－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～３－アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～３アルキル）_２－、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｍｅ、－ＳＯＭｅ、－ＳＯ_２Ｅｔ、－ＳＯＥｔから選択され、ｒは０、１又は２であり、特に０である。

【0052】

特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｍｅ、－ＳＯＭｅ、－ＳＯ_２Ｅｔ、－ＳＯＥｔから選択される。

【0053】

特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－から選択され、特に－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～３アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～３アルキル）_２－、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈから選択される。

【0054】

特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈから選択され、ｒは、０、１又は２であり、特に０である。

【0055】

特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｎ_３、－ＣＦ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈから選択される。

【0056】

特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、特に－ＮＨ－Ｃ_１－３アルキル、－Ｎ（Ｃ_１－３アルキル）_２－、又は－Ｂｒから選択される。

【0057】

特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル又は－Ｂｒから選択される。

【0058】

特定の実施形態では、ｎは、０、１又は２である。

【0059】

特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニルから選択され、かつｎは１である、又はＥは－Ｂｒであり、かつｎは１又は２である。

【0060】

アミンスイッチを介するペプチド放出（図５、図６、図７）には、プロトン化することができる塩基性窒素を必要とする。そのような塩基性窒素は、部分Ｅによって提供され得る。

【0061】

特定の実施形態では、Ｅは、－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－から選択され、特に－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～３アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～３アルキル）_２－、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル及びピリダジニルから選択され、ｒは０、１又は２であり、特に０であり、ここで特にｎは、１である。

【0062】

特定の実施形態では、Ｅは、－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－から選択され、特に－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～３アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～３アルキル）_２－、ピリジル、ピリミジニル及びピリダジニルから選択され、ｒは０、１又は２であり、特に０であり、かつｎは１である。

【0063】

特に、カルバメートスイッチ（図８）によってペプチドを放出するリンカー分子は、部分Ｗの還元に用いられる還元剤によって還元されない電子吸引部分を含む。カルバメートスイッチに適した置換基Ｅは、ハロゲン又はニトロ置換基などの非プロトン性であり得る。また、０未満である対応する酸のｐＫａによって特徴付けられる置換基もまた、カルバメートスイッチに適した置換基Ｅである。

【0064】

特定の実施形態では、Ｅは、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＮＯ_２、－ＣＦ_３、－ＣＮ、－ＮＣ、ＢＦ_２、－ＰＦ_４、－ＯＣＦ_３、－ＳＯＣＦ_３、－ＳＯＲ_８、－ＳＯ_２Ｒ_８である。

【0065】

特定の実施形態では、Ｅは、－Ｂｒである。

【0066】

特定の実施形態では、Ｅは－Ｂｒであり、ｎは１又は２である。

【0067】

例えば疎水性ペプチドの精製のために、酸性条件下でのリンカーの溶解性を高める必要がある場合、Ｅはプロトン化可能な部分から選択され得る。特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｎ（Ｃ_２Ｈ_４）_２ＮＨ_２、－Ｎ（Ｃ_２Ｈ_４）_２Ｎ－Ｂ、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－（ＣＨ_２）ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｍｅ、－ＳＯＭｅ、－ＳＯ_２Ｅｔ、－ＳＯＥｔから選択され、Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２から選択され、ここでｐは１、２、３又は４であり、特に１又は２である。

【0068】

特定の実施形態では、Ｂは、
－ Ｂｏｃ（－Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ）、Ｅｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ、１－エトキシエチリデン）、トリチル（－Ｃ（Ｐｈ）_３）、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＰｈ_３、Ｍｍｔ（－Ｃ（Ｐｈ）_２Ｃ_６Ｈ_４ＯＭｅ）、ＤＭＴ（－Ｃ（Ｐｈ）（Ｃ_６Ｈ_４ＯＭｅ）_２）、Ｃｂｚ（－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ_２Ｐｈ）、ベンジリデンアミン（＝ＣＰｈ）、フタリミド（＝（ＣＯ）_２Ｃ_６Ｈ_４）、ｐ－トルエンスルホンアミド（－ＳＯ_２Ｃ_６Ｈ_４Ｍｅ）、ベンジルアミン（－ＣＨ_２Ｐｈ）、アセトアミド（－ＣＯＭｅ）、トリフルオロアセトアミド（－ＣＯＣＦ_３）、Ｄｄｅ（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシ－１－イリデン）－３－エチル）、及び１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシ－１－イリデン）－３－メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）から選択され、特にＢは、Ｂｏｃ又はＥｅｉであり、ここでより特にＢは、Ｂｏｃである、又は
－ 以下から選択されるアセタール又はケタールの保護基から選択され、

【化12】

式中、ｒは０～１２であり、特に０～６、より特に０、１又は２であり、かつＲ^１０は、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－であり、特にＣ_１～６アルキル、より特にＣ_１～３アルキルである。

【0069】

特定の実施形態では、Ｂは
－ Ｂｏｃ（－Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ）、Ｅｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ，１－エトキシエチリデン）、トリチル（－Ｃ（Ｐｈ）_３）、Ｍｍｔ（－Ｃ（Ｐｈ）_２Ｃ_６Ｈ_４ＯＭｅ）、ＤＭＴ（－Ｃ（Ｐｈ）（Ｃ_６Ｈ_４ＯＭｅ）_２）、Ｃｂｚ（－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ_２Ｐｈ）、ベンジリデンアミン（＝ＣＰｈ）、フタリミド（＝（ＣＯ）_２Ｃ_６Ｈ_４）、ｐ－トルエンスルホンアミド（－ＳＯ_２Ｃ_６Ｈ_４Ｍｅ）、ベンジルアミン（－ＣＨ_２Ｐｈ）、アセトアミド（－ＣＯＭｅ）、トリフルオロアセトアミド（－ＣＯＣＦ_３）、Ｄｄｅ（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－エチル）及び１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）特にＢはＢｏｃ又はＥｅｉであり、より特にＢはＢｏｃである、又は
－ 以下から選択されるアセタール又はケタールの保護基から選択され、

【化13】

式中、ｒは０～１２であり、特に０～６であり、より特に０、１又は２であり、かつ
Ｒ^１０は、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－であり、特にＣ_１～６アルキルであり、より特にＣ_１～３アルキルである。

【0070】

特定の実施形態では、Ｂは、Ｂｏｃ（－Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ）、Ｅｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ，１－エトキシエチリデン）、トリチル（－Ｃ（Ｐｈ）_３）、Ｍｍｔ（－Ｃ（Ｐｈ）_２Ｃ_６Ｈ_４ＯＭｅ）、ＤＭＴ（－Ｃ（Ｐｈ）（Ｃ_６Ｈ_４ＯＭｅ）_２）、Ｃｂｚ（－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ_２Ｐｈ）、ベンジリデンアミン（＝ＣＰｈ）、フタリミド（＝（ＣＯ）_２Ｃ_６Ｈ_４）、ｐ－トルエンスルホンアミド（－ＳＯ_２Ｃ_６Ｈ_４Ｍｅ）、ベンジルアミン（－ＣＨ_２Ｐｈ）、アセトアミド（－ＣＯＭｅ）、トリフルオロアセトアミド（－ＣＯＣＦ_３）、Ｄｄｅ（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－エチル）及び１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）から選択される。

【0071】

特定の実施形態では、Ｂは、Ｂｏｃ又はＥｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ，１－エトキシエチリデン）である。

【0072】

特定の実施形態では、Ｂは、Ｂｏｃである。

【0073】

特定の実施形態では、Ｂは、以下から選択されるアセタール又はケタールの保護基から選択され、

【化14】

式中、ｒは０～１２であり、特に０～６であり、より特に０、１又は２であり、Ｒ^１０は、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－であり、特にＣ_１～６アルキルである。

【0074】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＪＲ^９－、－ＪＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＪＲ^９－、フェニル、５員若しくは６員のヘテロアリールのうちの少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、ＪはＣＨ又はＮであり、特にＮであり、式中、Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ_２、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨＢ、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＢ_２から、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから独立して選択され、より特にＲ^９は、Ｈであり、式中、Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基である。

【0075】

特定の実施形態では、Ｔは、－Ｃ_１～１２アルキル－、（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＪＲ^９－、－ＪＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＪＲ^９－、フェニル、５員若しくは６員のヘテロアリールから独立して選択される１～５個の部分を含む直鎖状又は分岐状のスペーサー、特に直鎖状のスペーサーである。

【0076】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^９－、フェニル、ピペラジニル、ピロイル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニルの少なくとも１つ、特に１～５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーである。

【0077】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^９－、フェニル、イミダゾイル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニルの少なくとも１つ、特に１～５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーである。

【0078】

特定の実施形態では、Ｔは直鎖状のスペーサーである。

【0079】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、（－Ｃ_２Ｈ_４Ｏ－）_１～１２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＪＲ^９－、－ＪＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＪＲ^９－の少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、ＪはＣ又はＮであり、特にＮであり、式中、Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ_２、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨＢ、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＢ_２から、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから独立して選択され、より特にＲ^９は、Ｈであり、式中、Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基である。

【0080】

特定の実施形態では、スペーサーＴの全長は、０．５～１００ｎｍの間である。

【0081】

特定の実施形態では、Ｔは、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－Ｒ^６、－Ｒ^５－フェニル、－フェニル－Ｒ^６－、－フェニル－、－Ｒ^５－ピロイル、－Ｒ^５－ピラゾイル、－Ｒ^５－イミダゾイル、Ｒ^５－ピペラジニル－、－Ｒ^５－ピリジニル、－Ｒ^５－ピリミジニル、－Ｒ^５－ピラジニル、－Ｒ^５－ピリダジニル、－Ｒ^５－ピロイル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピラゾイル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－イミダゾイル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピペラジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリミジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピラジニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ピリダジニル－Ｒ^６－、ピロイル－Ｒ^６－、ピラゾイル－Ｒ^６－、イミダゾイル－Ｒ^６－ピパラジニル－Ｒ^６－、ピリジニル－Ｒ^６－、ピリミジニル－Ｒ^６－、ピラジニル－Ｒ^６－、ピリダジニル－Ｒ^６－、ピロイル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニルから選択される。

【0082】

特定の実施形態では、Ｔは、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－Ｒ^６－、－Ｒ^５－フェニル－、－フェニル－Ｒ^６－、－フェニル－、－Ｒ^５－イミダゾイル、－Ｒ^５－イミダゾイル－Ｒ^６－、イミダゾイル－Ｒ^６－、イミダゾイルから選択される。

【0083】

特定の実施形態では、Ｔは、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－イミダゾイル、－Ｒ^５－イミダゾイル－Ｒ^６－、－イミダゾイル－Ｒ^６－、イミダゾイルから選択される。

【0084】

特定の実施形態では、Ｔは、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－から選択される。

【0085】

特定の実施形態では、Ｔは、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^５’－ＮＲ^９’Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－から選択され、特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－から、より特にＣ_１～３アルキル又は－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－から選択され、Ｒ^５、Ｒ^５’、Ｒ^６、Ｒ^９’及びＲ^９は上記で定義されるとおりである。

【0086】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^９－、フェニル、５～６員ヘテロアリールの少なくとも１つ、特に１～５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ_２、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨＢ、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＢ_２、－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ－Ｒ^１５から、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから独立して選択され、特にＲ^９はＨであり、式中、Ｂは独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、式中、
Ｒ^１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ^１５は、システイニル、スレオニニル、２－メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、Ｎ－メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ－メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、式中、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得る。

【0087】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^９－、フェニル、ピロイル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニルの少なくとも１つ、特に１～５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーである。

【0088】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^９－、フェニル、イミダゾイル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニルの少なくとも１つ、特に１～５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーである。

【0089】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^９－の少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ_２、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨＢ、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＢ_２、－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ－Ｒ^１５から、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから独立して選択され、より特にＲ^９はＨであり、式中、Ｂは独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ^１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ^１５は、システイニル、スレオニニル、２－メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、Ｎ－メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ－メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、ここで、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得る。

【0090】

上記のとおり、スペーサーＴは、酸性条件下での保護基の除去を除いて、一般的に適用される精製条件では全般的に非反応性である。スペーサーＴは、リンカー分子の溶解性を増強し得る。特に、Ｒ^９にて保護又は非保護のアミン部分を含む分岐状スペーサーは、溶解性の増強に寄与する。酸性条件下では、アミン保護基Ｂが除去され、アミンがプロトン化される。

【0091】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^９－の少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ_２、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨＢ、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＢ_２から、特に、Ｈ及びＣ_１～２アルキルから独立して選択され、より特にＲ^９はＨであり、式中、Ｂは独立して選択される酸に不安定なアミン保護基である。

【0092】

スペーサーＴはまた、ブロッキング機能を含み得る。特に、分岐状スペーサーは、アルデヒド部分に結合するのに適したブロッキング剤を含み得る。ペプチド精製に使用される固相がアルデヒド部分を含む場合（例えばアガロースビーズ）、リンカー化合物の部分Ｘは、例えばオキシム結合の形成によって固相に共有結合することができる。未反応のアルデヒド部分は、その後の精製時に不要な副反応を引き起こし得る。このような副反応を防ぐために、固相の非反応アルデヒド部分をスペーサーのブロッキング機能、例えばシステイニル部分によってブロックすることができる。

【0093】

特定の実施形態では、Ｔは、部分－Ｃ_１～１２アルキル－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－、－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^９－の少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－Ｒ^１５、－Ｃ_１～６アルキル－ＮＨ－Ｒ^１５から、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから独立して選択され、より特にＲ^９はＨであり、式中、Ｂは独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ^１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ^１５は、システイニル、スレオニニル、２－メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、Ｎ－メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ－メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、ここで、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基、特にトリチルによって保護され得る。

【0094】

特定の実施形態では、Ｔは、－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５－ＮＲ^９Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－から、特に－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル－から、特にＣ_１～６アルキルから、より特にＣ_１～３アルキル、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、－Ｒ^５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^９－Ｒ^６－、－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｒ^５－ＮＲ^９Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－、最も特に－Ｒ^５－ＮＲ^９－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^６－から選択され、Ｒ^５、Ｒ^６及びＲ^９は上記で定義したとおりである。

【0095】

上記のとおり、部分Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｅは、酸性条件下でリンカーの安定性に寄与する。例えば、アミン又はピリジンなどの複素環を含む部分Ｕ又はＶを含むリンカーは、アミン又は複素環がプロトン化されるため、酸性条件下、特にＴＦＡ＞５０％、水の存在下ｐＨ＜０で安定である。さらに、プロトン化リンカーは、リンカー－ペプチド複合体の溶解性を向上させる。ｐＨがリンカーのｐＫａより高い場合、最後のステップのとおり、所望のペプチドの放出の際にリンカーが急速に分解するであろう。

【0096】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、

【化15】

、
－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から選択される電子吸引性部分であり、式中、
Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１はＨであり、
Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルであり、
ｐは０、１又は２であり、特に０又は１である。

【0097】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、

【化16】

、
－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から選択される電子吸引性部分であり、式中、ピリジニル部分は、３位にてＵに接続される。

【0098】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－から選択される。

【0099】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－から選択される。

【0100】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ＮＨ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－から選択される。

【0101】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－から選択される。

【0102】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－から選択され、ｐは、０又は１である。

【0103】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－及び－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－から選択され、ｐは、０又は１であり、特にｐは０である。

【0104】

特に、カルバメートスイッチを介してペプチドを放出するリンカー分子（図８）は、塩基性窒素原子を含んでおらず、そのような原子は対応する酸のｐＫａが２未満である。特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－及び－Ｓ（＝Ｏ）－から、特に－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－及び－Ｃ（Ｏ＝）－ＮＨ－から選択され、より特にＶは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－である。

【0105】

Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピペラジニル－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、

【化17】

、
－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から選択される電子吸引性部分であり、式中、Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１はＨであり、Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルである。

【0106】

Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピペラジニル－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から選択される電子吸引性部分であり、式中、Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１はＨであり、Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルである。

【0107】

Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピペラジニル－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１はＨであり、Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルである。

【0108】

Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－ＮＲ^１２－、－ピペラジニル－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１は、Ｈであり、Ｒ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルである。

【0109】

Ｖは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＨＮ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピペラジニル－、－ピリジニル－、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニルから選択される電子吸引性部分である。

【0110】

Ｖは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＨＮ－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピペラジニル－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分である。

【0111】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－から選択される電子吸引性部分である。

【0112】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１１－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－及び－ピリジニル－、ピリミジニルから選択され、式中、Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１１はＨであり、かつＲ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから、特にＨ及びＣ_１～２アルキルから選択され、より特にＲ^１２はメチルである。

【0113】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択され、式中、Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから選択され、かつＲ^１２は、Ｈ及びＣ_１～４アルキルから選択される。

【0114】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＲ^１１－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｓ（＝Ｏ）－、－ＮＲ^１２－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択され、式中、Ｒ^１１は、Ｈ及びＣ_１～２アルキルから選択され、かつＲ^１２は、Ｈ及びＣ_１～２アルキルから選択される。

【0115】

特定の実施形態では、Ｖは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｎ－（ＣＨ_３）－、－ピリジニル－、ピリミジニルから選択される。

【0116】

特に、アミンスイッチを介してペプチドを放出するリンカー分子は、塩基性窒素原子を必要とする。塩基性窒素原子は、部分Ｖ、Ｅ又はＵ（Ｕ＝ヘテロアリール）を介して提供され得る。Ｕがフェニルである場合、塩基性窒素原子は、部分Ｖ又はＥを介して提供され得る。

【0117】

特定の実施形態では、Ｅ及びＶは上記のとおり選択され、Ｕがフェニルである場合には、少なくとも１つの部分Ｅ又はＶは以下から選択される：
－ Ｅ：ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｎ（Ｃ_２Ｈ_４）_２ＮＨ_２、－Ｎ（Ｃ_２Ｈ_４）_２Ｎ－Ｂ、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－Ｃ_１～６アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｎ（Ｃ_１～６アルキル）_２－、－Ｎ_３、－ＳＯ_３Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＳＯ_２Ｍｅ、－ＳＯＭｅ、－ＳＯ_２Ｅｔ、－ＳＯＥｔであって、Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２から選択され、ｐ及びＢは、本明細書に記載されるとおり定義されている、及び
－ Ｖ：－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、

【化18】

であって、特に－ＮＲ^１２－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピペラジニル－（ＣＨ_２）_ｐ－、－ピリジニル、ピリミジニルであり、Ｒ^１２及びｐは本明細書に記載されてとおり定義される。

【0118】

上記のとおり、Ｗは、還元可能な部分である。Ｗの還元時に、還元中間体はｐＨ依存的様式においてさらに分解し、遊離Ｎ末端を有するペプチドを放出する。

【0119】

特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、

【化19】

から選択され、式中、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。Ｃ_１～６アルキルは直鎖状又は分岐状であり得、例えばブチル又はｔｅｒｔ－ブチルであり得る。

【0120】

特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－フェニル、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、

【化20】

から選択される。

【0121】

特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ_３、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８から、特に－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８から選択され、式中、Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。

【0122】

特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ_３、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８から、特に－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８から選択され、式中、Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。

【0123】

Ｒ^８がＣ_１～６アルキルである場合、アルキル部分は直鎖状又は分岐状であり得、例えばｔｅｒｔ－ブチルであり得る。特にＷが－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８である場合、Ｒ^８は、ピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_４アルキルであり得、特にピリジル又はｔｅｒｔ－ブチルであり得る。

【0124】

部分Ｗ＝－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８を含むリンカーは、チオールを用いて切断され得る。したがって、酸性条件下（例えば、ＴＦＡ＞５０％、水の存在下ｐＨ＜０）でＳＰＰＳの際に使用される合成樹脂からのペプチド－リンカー複合体の切断は、このようなリンカーがペプチドの精製に使用される場合、チオールなしで行うことができる。

【0125】

特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ_３、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８から、特に－Ｎ_３、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８から選択され、式中、Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル若しくは－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、又は特にピリミジニル、ピリジル若しくは－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり、より特にピリジル又は－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルである。

【0126】

特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８（Ｒ^８は、－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルである）、及びＮＯ_２から選択される。

【0127】

アジド還元的安全ロックを有するアミンスイッチ（図５）又はカルバメートスイッチ（図８）を介してペプチドを放出するリンカー分子は、還元可能な部分Ｎ_３を含む。特定の実施形態では、Ｗは、－Ｎ_３である。

【0128】

アジドを含まない還元的安全ロックを有するアミンスイッチを介してペプチドを放出するリンカー分子（図６）は、－ＮＯ_２又は－Ｓ－ｔｅｒｔ－ブチルなどの還元可能な部分を含む。特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８（Ｒ８が－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルである）、－ＮＯ_２、

【化21】

－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８（Ｒ^８がピリジル、ピリミジニル、ピラジニル又はピリダジルである）から選択される。

【0129】

特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８（Ｒ^８が－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルである）、－ＮＯ_２、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８（Ｒ^８がピリジル、ピリミジニル、ピラジニル又はピリダジルである）から選択され、特に－ＮＯ_２又は－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８（Ｒ^８が－Ｃ_１～Ｃ_６アルキルである）から選択される。

【0130】

アミンスイッチを介してペプチドを求核的放出により放出するリンカー分子（図７）は、－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８（Ｒ^８はＣ_１～６アルキル、特にｔｅｒｔブチルである、又はＲ^８はピリジニルである）などの還元可能な部分を含む。

【0131】

上記のとおり、リンカー分子は、酸性条件下、特に疎水性ペプチド精製時に、リンカー－ペプチド構築物の溶解性に寄与することができる。溶解性はまた、部分Ｗによっても媒介され得、すなわち、Ｗは、０～７のｐＨ範囲で精製されるペプチドに対して溶解性の増強をもたらす基から選択される。

【0132】

特定の実施形態では、Ｗは、－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ^８、－Ｓ－Ｓ－Ｒ^８、－Ｎ＝Ｎ－Ｒ^８、

【化22】

から選択され、式中、
Ｒ^８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＨＢｏｃ又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＭｅ_２であり、特にピリジル又は－（ＣＨ_２）_ｐ－ＮＨＢｏｃ－であり、ｐは１、２、３又は４である。

【0133】

特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員の複素環から選択され、５員若しくは６員の複素環は、１又は２個のヘテロ原子を含む。

【0134】

特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員の複素環から選択され、５員若しくは６員の複素環は１個のヘテロ原子を含む。

【0135】

特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は６員の複素環から選択される。

【0136】

特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は６員の複素環から選択され、６員の複素環は、１又は２個のヘテロ原子を含む。

【0137】

特定の実施形態では、Ｕの５員若しくは６員のヘテロアリール部分は、１又は２個のヘテロ原子を含み、特に、部分Ｕの５員ヘテロアリール部分は、ピラゾール、イミダゾールから選択され、部分Ｕの６員ヘテロアリール部分は、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンから、特にピリジンから選択される。

【0138】

特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は６員の複素環から選択され、６員の複素環は、１個のヘテロ原子を含む。特定の実施形態では、部分Ｕの５員の複素環はピラゾール、イミダゾールから選択され、部分Ｕの６員の複素環はピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンから選択される。

【0139】

特定の実施形態では、Ｕは、フェニル、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンから、特にフェニル又はピリジンから、より特にフェニルから選択される。

【0140】

本発明によるリンカーは、アミンスイッチ（図５～７）又はカルバメートスイッチ（図８）によってペプチドを放出することができる。これらの放出メカニズムは、部分Ｙに対してオルト位又はパラ位にある還元可能な置換基Ｗを必要とする。

【0141】

特定の実施形態では、Ｕは、式５又は６の部分から選択され、

【化23】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、及びＥは、上記のとおり定義され、
Ｕは、部分Ｔ又はＶ（Ｔ ｏｒ Ｖ）に結合され、
Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３、Ａ^４及びＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４は、互いに独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから、特にＣ及びＮから選択され、かつ
ｎは、０～３の間の、特に０、１又は２の整数である。

【0142】

特定の実施形態では、Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４、又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４の２～４個の部分は、Ｃであり、特にＡ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４、又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４の３又は４個の部分は、Ｃである。

【0143】

特定の実施形態では、すべての部分Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４の部分は、Ｃである。

【0144】

特定の実施形態では、Ｕは、式５、６、７又は８の部分から選択され、

【化24】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、及びＥは、上記のとおり定義され、
式５及び６の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式７及び８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３、Ａ^４及びＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４は、互いに独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから、特にＣ及びＮから選択され、Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４、又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４の２～４個の部分は、Ｃであり、特にＡ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４、又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４の３又は４個の部分は、Ｃであり、より特にＡ^１、Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４、又はＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３及びＤ^４のすべての部分は、Ｃであり、
ｎは、
式５及び６の場合、０～３の間の整数であり、
式７及び８の場合、０～４の間の整数であり、
ｑは、０～４の間の整数であり、ｎとｑとの合計は４以下である。

【0145】

特定の実施形態では、Ｕは、式５又は６の部分から選択される。

【0146】

特定の実施形態では、Ｕは、式５、６、７又は８の部分から選択され、式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、及びＥは、上記のとおり定義され、
式５及び６の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式７及び８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３、Ａ^４及びＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４は、互いに独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから、特にＣ及びＮから選択され、
ｎは、
式５及び６の場合、０～２の間の整数であり、
式７及び８の場合、０～２の間の、特に０～１の間の整数であり、
ｑは０～２の間の、特に０～１の間の整数である。

【0147】

特定の実施形態では、Ｕは、式９、１０、１１又は１２の、特に式９又は１０の部分から選択され、

【化25】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式９及び１０の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１１及び１２の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
すべての部分Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４はＣである、又はＡ^２、Ａ^３及びＡ^４のうちの２つはＣであり、かつＡ^２、Ａ^３及びＡ^４のうちの他の２つがＮであり、特にＡ^２及びＡ^３がともにＣであり、かつ
Ｄ^２は、Ｃ又はＮであり、特にＣである。

【0148】

特定の実施形態では、Ｕは、式９、１０、１１又は１２の、特に式９又は１０の部分から選択され、

【化26】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式９及び１０の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１１及び１２の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ^２及びＡ^３がともにＣである、又はＡ^２及びＡ^３の一方がＣであり、かつＡ^２及びＡ^３の他方がＮであり、
Ｄ^２は、Ｃ又はＮである。

【0149】

部分ＵがＮ含有ヘテロアリールを含む場合、Ｎ原子は酸性条件下でプロトン化され、したがってリンカー分子の溶解性が増加する。

【0150】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１の、特に式１３～１９の、より特に式１５又は１９の部分から選択され、

【化27】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式１３、１４及び１５の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１６、１７及び１８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４は、Ｃ、Ｎ又はＮ^＋Ｍｅであり、特にＣであり、
Ｄ^２は、Ｃ又はＮである。

【0151】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１又は２２の部分から選択され、

【化28】

式中、Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式１３、１４、１５、１９、２０、２１及び２２の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１６、１７及び１８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ^２、Ａ^３及びＡ^４は、Ｃ又はＮであり、特にＣであり、
Ｄ^２はＣ又はＮである。

【0152】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、１６、１７又は１８の部分から選択され、

【化29】

式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式１３、１４及び１５の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１６、１７及び１８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ^３は、Ｃ又はＮであり、
Ｄ^２は、Ｃ又はＮである。

【0153】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、２１又は２２の部分から選択され、式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ及びｎは、上記のとおり定義され、
Ｕは、部分Ｔ又はＶに結合され、
Ａ^３及びＡ^４は、Ｃ又はＮであり、特にＣであり、
Ｄ^２は、Ｃ又はＮである、

【0154】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３、２１又は２２の部分から選択される。

【0155】

特に、カルバメートスイッチを介してペプチドを放出するリンカー分子について、Ｕはフェニルである。特定の実施形態では、Ｕは上記のとおり選択され、かつすべてのＡ及びすべてのＤはＣである。

【0156】

還元的安全ロックを有するアミンスイッチ（図５、６）及びカルバメートスイッチ（図８）について、部分Ｙは、特に、ｐＨの変化によってリンカーの崩壊が引き起こされ、遊離Ｎ末端を有するペプチドが放出される場合に、ＣＯ_２を放出することができる－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である。

【0157】

特定の実施形態では、Ｕは式１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１又は２２の部分であり、かつＹは－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である。

【0158】

特定の実施形態では、Ｕは式１３、１４、１５、２１又は２２の部分であり、かつＹは－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である。

【0159】

特定の実施形態では、Ｕは式１３又は２１の部分であり、かつＹは－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－である。

【0160】

求核的放出を伴うアミンスイッチについて（図７）、リンカーは、部分Ｙがペプチドとアミド結合を形成する場合、酸性条件下でのみ安定である。特定の実施形態では、Ｙは－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－である。

【0161】

リンカー分子の末端が－ＣＯＯＨを有する場合、ペプチドは、一般的なアミノ酸カップリングを介してペプチドとカップリングされ得る。特定の実施形態では、Ｙは－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、かつＺは－ＯＨである。

【0162】

求核性放出を伴うアミンスイッチについては、Ｕは特に式２２の部分であり、Ｙは－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、Ｚは－ＯＨである。

【0163】

特定の実施形態では、Ｚは以下：－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－Ｎ_３、－ＯＨ、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ、－ＳＲ^１４、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＨ_２ＣＦ_３、－ＯＳＯ_２ＣＦ_３、－ＳＯ_２Ｃ_６Ｈ_４ＣＨ_３、－ＳＯ_２ＣＦ_３、－ＳＯ_２ＣＨ_３、

【化30】

から選択され、特に、－ＯＨ、－Ｃｌ、

【化31】

から選択され、特に－ＯＨ、

【化32】

から選択され、式中、Ｒ^１４は、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル－、アリール（ａｒｙｌｉｃ）－又はベンジル－置換基である。

【0164】

アジド還元的安全ロックを有するアミンスイッチによるペプチドの放出に適したタイプ１のリンカー分子（図５）は、以下の部分から構成され得る：
Ｕは、フェニル又はピリミジルであり、特にＵは、式１３、１４、１５、２１又は２２であり、
Ｗは、－Ｎ_３であり、
Ｅのｎは、１であり、かつＥはピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｎ＝Ｎ－ピリジルから選択され、又はｎは０であり、特にｎは０であり、
Ｖのａは、１であり、かつＶは、－ピペラジニル－、－ピペラジニル－ＣＨ_２－、－Ｎ（ＣＨ_３）－、ピリミジニル、ピリジルから、特に－ピペラジニル－、－ピペラジニル－ＣＨ_２－、－Ｎ（ＣＨ_３）－から選択され、かつ
Ｙは、－（ＣＨ_２）ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１である。

【0165】

ピリジル部分は、３位又は５位でＵに接続される。

【0166】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、２１又は２２の部分から選択される。

【0167】

アジドなしのアミンスイッチによるペプチドの放出に適したタイプ２のリンカー分子（図６）は、以下の部分から構成され得る：
Ｕは、ピリジニル又はフェニルであり、特にＵは式１３、１４又は２１であり、
Ｗは、－Ｓ－Ｓ－ｔｅｒｔブチル、－ＮＯ_２、－Ｎ＝Ｎ－ピリジル、

【化33】

から選択され、特に－Ｓ－Ｓ－ｔｅｒｔブチル，－ＮＯ_２から選択され、
Ｅのｎは、０であり、
Ｖのａは、１であり、かつＶは－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－及びピペラジニルから選択され、かつ
Ｙは、－（ＣＨ_２）ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１である。

【0168】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４又は２１の部分から選択される。

【0169】

求核的放出を伴うアミンスイッチによるペプチドの放出に適したタイプ３のリンカー分子（図７）は、以下の部分から構成され得る：
Ｕは、フェニル又はピリジニルであり、特にフェニルであり、より特にＵは、式１３又は１４の部分であり、
Ｗは－Ｎ_３、－Ｓ－Ｓ－ｔｅｒｔブチル、－Ｓ－Ｓ－ピリジルであり、特に－Ｎ_３であり、
Ｅのｎは、０であり、
Ｖのａは、１であり、かつＶはピペラジニル、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－であり、特にピペラジニルであり、かつ
Ｙは、－（ＣＨ_２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１である。

【0170】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３又は１４の部分から選択され、特にすべての部分Ｄ及びＡは、Ｃである。

【0171】

カルバメートスイッチによるペプチドの放出に適したタイプ４のリンカー分子（図８）は、以下の部分から構成され得る：
Ｕはフェニルであり、特にＵは、式１３又は１５であり、特に部分ＡはＣであり、
Ｗは、－Ｎ_３であり、
Ｅのｎは、１又は２であり、Ｅは－Ｂｒであり、
Ｖのａは、１であり、かつＶは、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、かつ
Ｙは、－（ＣＨ_２）ｍ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１である。

【0172】

特定の実施形態では、Ｕは、式１３又は１５の部分から選択され、特に部分Ａは、Ｃである。

【0173】

特定の実施形態では、Ｚは以下：－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－Ｎ_３、－ＯＨ、－ＳＲ^１４、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＨ_２ＣＦ_３、－ＯＳＯ_２ＣＦ_３、－ＳＯ_２Ｃ_６Ｈ_４ＣＨ_３、－ＳＯ_２ＣＦ_３、－ＳＯ_２ＣＨ_３、

【化34】

から選択され、特に、－ＯＨ、－Ｃｌ、

【化35】

から選択され、特に－ＯＨ、

【化36】

から選択され、式中、Ｒ^１４は、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、アリール又はベンジルの置換基である。

【0174】

Ｚが－ＯＨである場合、－ＯＨ部分は、固相ペプチド合成などで一般的に使用されるとおりのカップリング試薬によって活性化され、脱離基として機能する。

【0175】

特定の実施形態では、式１の化合物は、式：Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ１９、Ｘ２０、Ｘ２１、Ｘ２２、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２７、ｘ２８、Ｘ２９、Ｘ３０、Ｘ３１、Ｘ３２、Ｘ３３、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２、Ｘ４３、Ｘ４４、Ｘ４５、Ｘ４６又はＸ４７の化合物から選択される。

【化37】

【化38】

【化39】

【化40】

【化41】

【化42】

【化43】

【化44】

【0176】

本発明の第２の態様は、ペプチドを精製する方法を目的とする。

【0177】

本発明の第２の態様によれば、ペプチドを精製する方法が提供される。この方法は、以下のステップを含む：
－ 粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであって、粗ペプチドは、本発明の第１の態様によるリンカー分子に共有結合される、前記ステップ、
－ カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
－ 放出ステップにおいて、酸性条件下で還元剤を加えてペプチドを放出する、前記ステップ。

【0178】

本発明の第１の態様に従うリンカー分子は、ペプチドを精製する方法に使用することができる。第１のステップでは、粗ペプチド混合物は、本発明の第１の態様に従うリンカー分子と接触し、かつ粗ペプチドは、リンカー分子にカップリングされて、粗リンカー修飾ペプチドが得られる。この粗ペプチドは、化学、生化学、薬学の分野の一般的な専門家に一般的に知られている標準的な方法でリンカー分子にカップリングされる。精製時には、ｐＨを調整することでリンカー分子の安定性を図ることができる。酸性条件下（特に、リンカー分子の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａより低いｐＨ）では、このヘテロ原子がプロトン化されて電子を吸引することに起因して、リンカー分子は安定する（図５、６、７）。リンカーがペプチドに結合して固体支持体に固定化されると、例えば、酸性条件下でトリフェニルホスフィンなどの還元剤を添加するなど、還元条件下で還元中間体を介してペプチドが放出される。還元中間体は、還元リンカー部分、例えばアザイリド（ａｚａｙｌｉｄｅ）によって特徴付けられる。還元中間体のリンカー部分は、時間の経過とともに、又はｐＨの上昇など、特に還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａとなる引き金によって分解する。したがって、ペプチドを放出する前のすべてのステップ（カップリング、任意の洗浄、及びリンカーの還元）は、酸性条件下で行われる。還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａを超えるｐＨにｐＨが上昇すると、還元中間体のリンカー部分は、１．４／１．６の脱離反応又は求核攻撃によって分解し、ペプチドが放出される。

【0179】

還元中間体のリンカー分子／リンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子は、以下に関連する：例えば、部分Ｕは、－Ｎ_３で置換されたピリジンからなる。ピリジンのヘテロ原子Ｎは、－Ｎ_３部分又は還元された－Ｎ_３部分のｐＫａよりも高いｐＫａであるｐＫａ約５を有する（－ＮＨ_３のｐＫａは約４．６）。したがって、最も塩基性のヘテロ原子は、ピリジン部分のＮである。ｐＨをｐＨ＞５にシフトすることで、還元中間体のリンカー部分が脱離反応を起こし、ペプチドが放出される。このメカニズムはアミンスイッチと呼ばれている。

【0180】

あるいは、リンカー分子は、カルバメートスイッチによって分解することができる（図８）。適切なリンカー分子は、－Ｂｒなどの電子吸引性部分及び－Ｎ_３などの還元性部分を含む。このリンカー分子は、この電子求引性に起因して、ＴＦＡ条件下で安定している。還元されると、ｐＨがこのカルバメートのｐＫａよりも高い場合リンカー分子は安定している。最後に、このカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａになるようにｐＨを減少することによって、１．６－脱離を介してペプチドが放出される。

【0181】

特定の実施形態では、還元剤を添加する前のすべてのステップにおけるｐＨでは、リンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａである。

【0182】

ある実施形態では、ペプチドは中間体を介して放出される。

【0183】

特定の実施形態では、酸性条件下で還元剤を添加することによる、固定化されたリンカー修飾ペプチドの還元されたリンカー部分を特徴とする還元中間体を介してペプチドが放出される。

【0184】

特定の実施形態では、放出ステップにおいて、固定化されたリンカー修飾ペプチドの還元されたリンカー部分を特徴とする還元中間体が達成され、ペプチドが引き金によって、特に温度及び／又はｐＨの変化によって、より特に、ｐＨをアミンスイッチの場合は還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａへ増加させることによって、又はカルバメートスイッチの場合はカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａへｐＨを減少させることによって、ペプチドが前記還元中間体から放出される。

【0185】

特定の実施形態では、固定化リンカー修飾ペプチドの還元されたリンカー部分を特徴とする還元中間体は、放出ステップで達成され、ペプチドは、引き金によって、特に、温度及び／又はｐＨの変化によって、より特に、ｐＨを還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに増加させることによって前記還元中間体から放出される。

【0186】

ペプチドは自発的に、あるいは引き金によって中間体から放出される。

【0187】

特定の実施形態では、温度及び／又はｐＨの変化が引き金となる。

【0188】

特定の実施形態では、温度の変化は、周囲温度（２０℃～３０℃）からより高い温度への上昇であり、より高い温度は１００℃を超えず、特に７０℃、より特に５０℃を超えない。

【0189】

上記のとおり、アミンスイッチに適したリンカーは、－還元される場合－最も塩基性の高いヘテロ原子のｐＫａを超えるｐＨまでｐＨが上昇される場合、分解する。

【0190】

特定の実施形態では、引き金はｐＨのシフト、特にｐＨの上昇である。

【0191】

特定の実施形態では、ｐＨを、還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに上昇させることにより、ペプチドが還元された中間体から放出される。

【0192】

カルバメートスイッチに適したリンカーは、カルバメートのｐＫａ未満のｐＨにｐＨが減少する場合－還元される場合－分解する。

【0193】

特定の実施形態では、引き金はｐＨのシフトであり、特にｐＨの減少である。

【0194】

特定の実施形態では、リンカー部分のカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａまでｐＨを減少させることにより、ペプチドが還元中間体から放出される。

【0195】

還元中間体が酸性条件下で安定している場合（アミンスイッチ）、又はカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａで安定している場合（カルバメートスイッチ）、過剰な還元剤を除去するために追加の洗浄ステップを行うことができる。還元剤はリンカー部分だけでなく、ペプチドとも反応する可能性があるため、洗浄ステップを追加することで、還元剤とペプチドとの間の不要な副反応が低減される。さらに、不揮発性還元剤又はそれらの使用の生成物もまた不純物であり、追加の精製ステップによって除去する必要があるであろう。

【0196】

特定の実施形態では、還元中間体が形成された後、並びにペプチドが還元中間体から放出される前に、洗浄によって還元剤が除去される。

【0197】

特定の実施形態では、ＭｅＣＮを用いて還元剤が除去される。

【0198】

特定の実施形態では、本発明の第１の態様によるリンカー分子は、アジド（－Ｎ_３）部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む。

【0199】

特定の実施形態では、リンカー修飾ペプチドは合成樹脂に付加的に結合され、カップリングステップを実行する前に、特にリンカー分子の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａにて、合成樹脂が切断される。

【0200】

合成支持体からのペプチドの切断は、ＴＦＡを使用して達成され、最後にＴＦＡ混合物からペプチドを沈殿させて（例えば、２－８時間後）、粗ペプチド混合物を得る。沈殿には、冷エーテル（Ｅｔ２Ｏ、ｉＰｒ２Ｏ、ＭｅＯｔＢｕ、ＴＨＦ／ヘキサン（１：１））が使用され得る。

【0201】

粗ペプチド混合物を適切な有機溶媒、特にＤＭＳＯに溶解し、緩衝系、特に１０体積％のクエン酸ナトリウム緩衝液０．１Ｍ、ｐＨ４．５が添加される。

【0202】

カップリングステップのための固体支持体は、アルデヒド修飾固体支持体、特にアガロースビーズ、ポリリジン、ポリエチレングリコール、ポリアミド、ポリスチレン及びそれらのコポリマーであり、そこに溶解した粗ペプチド混合物が添加される。

【0203】

特定の実施形態では、固体支持体はアルデヒド部分を含む。

【0204】

特定の実施形態では、カップリングステップを実行した後、固体支持体の非反応アルデヒド部分がブロッキング剤を用いてブロックされる。

【0205】

特定の実施形態では、ブロッキング剤は、固体支持体のアルデヒド部分と反応し、チオール及び／又はアミン部分を含む。

【0206】

特定の実施形態では、ブロッキング剤は、システイン、スレオニン、２－メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ－メチルヒドロキシルアミン、Ｎ－メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから選択される。

【0207】

特定の実施形態では、ブロッキング剤は、システイン及びＮ－メチルヒドロキシルアミンから選択される。

【0208】

カップリングした生成物は、特にＤＭＳＯ、６Ｍの塩酸グアニジウム、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）、水、ＭｅＣＮで洗浄される。

【0209】

特定の実施形態では、放出ステップは、リンカー分子の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａで行われる。

【0210】

特定の実施形態では、放出ステップは、リンカー分子のカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａで行われる。

【0211】

特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、トリブチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、トリメチルホスファイト、トリエチルホスファイト、トリブチルホスフィン、ジエチルホスファイト、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４）、エタンジチオール、プロパンジチオール、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、Ｎａ_２Ｓ、ＮａＳＨ、グルタチオン、２，２’－ジチオジピリジン、ＢＨ_３、４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン、カテコールボラン、ボランテトラヒドロフラン、ボランジメチルスルフィド、ボランジメチルアミン錯体、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ボランｔｅｒｔ－ブチルアミン、ＬｉＡｌＨ_４、ＬｉＢＨ_４、ＮａＢＨ_４、ＮａＢＨ_３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＯＭｅ）_３、ＮａＢＨ（ＯＣＣＨ_３）_３、ＬｉＡｌＨ（ＯＣＭｅ_３）_３、ヒドロキノン、アスコルビン酸ナトリウム塩、アスコルビン酸、ＫＩ含有アスコルビン酸、ヒドラジン、ＮＨ＝ＮＨ、ホルムアルデヒドから選択される。

【0212】

特定の実施形態では、還元剤は、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、トリフェニルホスフィン、ＫＩ含有アスコルビン酸、トリブチルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ_４、アスコルビン酸から選択される。

【0213】

特定の実施形態では、還元剤は、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、ＫＩ含有アスコルビン酸、トリフェニルホスフィン及びトリメチルホスフィンから選択される。

【0214】

特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、トリブチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、トリメチルホスファイト、トリエチルホスファイト、トリブチルホスフィン、ジエチルホスファイト、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４）、エタンジチオール、プロパンジチオール、ジチオスレイトール、Ｎａ_２Ｓ、ＮａＳＨ、グルタチオン、２，２’－ジチオジピリジン、ＢＨ_３、４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン、カテコールボラン、ボランテトラヒドロフラン、ボランジメチルスルフィド、ボランジメチルアミン錯体、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ボランｔｅｒｔ－ブチルアミン、ＬｉＡｌＨ_４、ＬｉＢＨ_４、ＮａＢＨ_４、ＮａＢＨ_３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＯＭｅ）_３、ＮａＢＨ（ＯＣＣＨ_３）_３、ＬｉＡｌＨ（ＯＣＭｅ_３）_３、ヒドロキノン、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ヒドラジン、ＮＨ＝ＮＨ、ホルムアルデヒドから選択される。

【0215】

特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリブチルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ_４、アスコルビン酸から選択される。

【0216】

特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ_４、アスコルビン酸から選択される。

【0217】

特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ_４、アスコルビン酸から選択される。

【0218】

特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン及びトリメチルホスフィンから選択される。

【0219】

特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィンである。

【0220】

特定の実施形態では、方法は以下のステップを含む：
－ 粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであって、粗ペプチドは、本発明の第１の態様に従うリンカー分子に共有結合され、リンカー分子は、アジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、前記ステップ、
－ カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
－ 放出ステップにおいて、酸性条件下で還元剤を加えることによってペプチドを放出させる、前記ステップ。

【0221】

特定の実施形態では、方法は以下のステップを含む：
－ 粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであって、粗ペプチドは、本発明の第１の態様に従うリンカー分子に共有結合され、リンカー分子は、アジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、前記ステップ、
－ カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
－ 放出ステップにおいて、酸性条件下で還元剤を添加し、還元中間体を得た後に、還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａになるようにｐＨを上昇させることによりペプチドを放出させる、前記ステップ。
－

【0222】

特定の実施形態では、方法は以下のステップを含む：
－ 粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであって、粗ペプチドは、本発明の第１の態様に従うリンカー分子に共有結合され、リンカー分子は、アジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、前記ステップ、
－ カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
－ 放出ステップにおいて、酸性条件下でトリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンを、特にトリフェニルホスフィンを添加し、還元中間体を生成した後に、最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａとなるようにｐＨを増加させることによってペプチドを放出させる、前記ステップ。

【0223】

本発明の第２の態様の副態様によれば、固相ペプチド合成によって調製される粗ペプチドを精製する方法が提供される。

【0224】

特定の実施形態では、ペプチドを精製する方法は、以下のステップを含む：
ａ） 合成樹脂に結合されたペプチドを提供するステップであって、該ペプチドが請求項１に記載のリンカー分子にさらに共有結合され、該リンカー分子がアジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、前記ステップ、
ｂ） 合成樹脂からペプチドを切断するステップ、
ｃ） 切断されたペプチド混合物を固体支持体とカップリングするステップ、
ｄ） ペプチドをトリフェニルホスフィン、又はトリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンを、特にトリフェニルホスフィンを用いて放出するステップ。

【0225】

合成支持体からのペプチドの切断は、ＴＦＡを使用して達成され、最後にＴＦＡ混合物からペプチドを沈殿させて（例えば、２－８時間後）、粗ペプチド混合物を得る。沈殿には、冷エーテル（Ｅｔ_２Ｏ、ｉＰｒ_２Ｏ、ＭｅＯｔＢｕ、ＴＨＦ／ヘキサン（１：１））が使用され得る。

【0226】

粗ペプチド混合物を適切な有機溶媒、特にＤＭＳＯに溶解し、緩衝系、特に１０体積％のクエン酸ナトリウム緩衝液０．１Ｍ、ｐＨ４．５が添加される。

【0227】

カップリングステップのための固体支持体は、アルデヒド修飾固体支持体であり、特にアガロースビーズ、ポリリジン、ポリエチレングリコール、ポリアミド、ポリスチレン及びそれらのコポリマーであり、そこに溶解した粗ペプチド混合物が添加される。

【0228】

カップリングした生成物は、特にＤＭＳＯ、６Ｍの塩酸グアニジウム、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）、水、ＭｅＣＮで洗浄される。

【0229】

特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンが、特にトリフェニルホスフィンが、ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ（９：１）に添加される。特定の実施形態では、添加は１５分間行われる。

【0230】

特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンを、ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ（９０：５：５）に添加し、及び／又はトリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンを、特にトリフェニルホスフィンを添加した後、形成されるアザイリドが、特にＭｅＣＮ又はＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（９：１）を用いて洗浄される。

【0231】

特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンは、特にトリフェニルホスフィンは、ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ（９０：５：５）に添加される。特定の実施形態では、添加は１５分間行われる。

【0232】

特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの添加後、形成されるアザイリドは、特にＭｅＣＮ又はＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（９：１）を用いて洗浄される。

【0233】

特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの添加後、形成されるアザイリドは、特にＭｅＣＮを用いて洗浄される。

【0234】

特定の実施形態では、形成されるアザイリドは、特にＨ_２Ｏ／ＴＦＡを用いて加水分解される。その比率は、水が９９．９５％～５０％であり得る。

【0235】

リンカー、特にＵ、Ｅ、Ｗ又はＶが窒素含有複素環である場合、ｐＨは複素環部分のｐＫａを超える必要があり、これはＴＦＡと水の加水分解混合物の場合にすでにそうなっている、又は所望のｐＨの緩衝液を加えることで可能となる。

【0236】

特定の実施形態では、加水分解の後に、特にＴＦＡ／Ｈ_２Ｏを用いて、特に９：１の比率で溶出ステップが行われる。

【0237】

特定の実施形態では、加水分解の後に、特にＴＦＡ／Ｈ_２Ｏを用いて、特に９５：５の比率で溶出ステップが行われる。

【0238】

特定の実施形態では、加水分解生成物は、特に冷エーテル、より特にはＥｔ_２Ｏ、ｉＰｒ_２Ｏ、ＭｅＯｔＢｕ、ＴＨＦ／ヘキサン（１：１）を添加することによって沈殿する。

【0239】

用語及び定義
本発明の文脈において、「電子吸引基」又は「ＥＷＧ」は、誘導効果又はメソメリー効果を介して、その接続された原子又はアリール系から電子を引き離すことができる任意の化学基である。

【0240】

本発明の文脈において、ハメット定数は、Ｈａｎｓｃｈ及びＴａｆｔ（１９９１）、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９１：１６５－１９５で計算及び記載されるとおりの定数である。正のハメット定数は、置換基がフェニル部分に電子吸引効果を発揮する能力を反映し、負の値は、置換基が電子供与効果を発揮することを示している。電子吸引効果は、ハメット定数が大きいほど強くなる。ハメット定数とは、メタ位（σ_ｍ）及びパラ位（σ_ｐ）のフェニル部分の置換基について経験的に決定された定数である。本発明の文脈において、この位置は、部分Ｙの結合に関連して決定される。オルト位の置換基については、パラ位のハメット値は良好な近似であり、したがって、本発明の文脈において置換基Ｖ、Ｗ、及びＥのハメット値の合計を計算するために使用される。

【0241】

本発明の文脈において、「酸性条件下で」という用語は、ｐＨ７未満のｐＨ、特にリンカーのｐＫａ未満のｐＨ、より特にＴＦＡ＞５０％、水の存在下でｐＨ＜０に関する。

【0242】

本発明の文脈では、アルキルという用語は、直鎖状又は分岐状の飽和炭化水素を意味する。例えば、Ｃ_１～１２アルキルという用語は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２個の炭素原子を有する飽和の直鎖状又は分枝状の炭化水素を指す。Ｃ_１～Ｃ_４アルキルの非限定的な例としては、メチル、エチル、プロピル、ｎ－ブチル、２－メチルプロピル、 ｔｅｒｔ－ブチルが挙げられる。

【実施例0243】

リンカータイプ４の実施例１：天然由来及び研究用ペプチド、Ｐ１及びＰ２の精製
本発明のペプチドの精製方法を、極性の異なる２つのペプチドに適用した。これらはヒストンＨ３タンパク質のＨ－ＡＲＴＫＱＴＡＲＫＳＴＧＧＫＡ－ＯＨ（配列番号：１）（Ｐ１）断片２～１６であり、かつＨ－ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ－ＮＨ２（配列番号：２）（Ｐ２）は研究用のペプチド配列であった。

【0244】

ペプチド配列は、標準的な固相ペプチド合成条件下で合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。リンカーＸ１は、ＤＭＦ中で４当量のリンカー、６当量のオキシマ、６当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）を２時間使用することにより、樹脂上のＰ１へカップリングした。本発明の方法を図１に示す。リンカーＸ２は、４当量のリンカー、６当量のオキシマ、６当量のＤＩＥＡを使用することによって樹脂上のＰ１及びＰ２に２時間カップリングした。その後、ペプチドをＴＦＡ／ＰｈＯＨ／ＰｈＳＨ／Ｈ_２Ｏ／エタンジチオール（ＥＤＴ，８２．５：５：５：２．５）の混合物によって合成樹脂から切断した。粗ペプチド混合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズを水及びクエン酸Ｎａ緩衝液０．１Ｍ（ｐＨ４．５にて）で各３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に１０体積％のクエンＮａ酸緩衝液を加え、次いで、この溶液をアガロースビーズに９０分かけて適用して、目的のペプチドがアガロースビーズに定量的に固定化された。その後、アセチル化した末端配列及びその他の不純物を除去するために、８Ｍの尿素、ＤＭＳＯ、ＥｔＯＨ／水（７：３）、０．１ＭのＮａＣｌ、水、ＭｅＣＮで各３回の洗浄を行った。固定化されたリンカーの切断は、アガロース樹脂を１ｍＬのＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ（９：１）あたり５０ｍｇのＰＰｈ_３で処理することで行った。その後、支持体をＭｅＣＮで４回リンスし、Ｈ_２Ｏ／ＭｅＣＮ／ＴＦＡ（７０：２９：１）の溶液を１８０分間で加えた。その後、上清を遠心チューブに濾過し、支持体をＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ（９：１）で３回、同じチューブにリンスした。Ｅｔ_２Ｏを１０倍添加して沈殿を起こし、チューブを遠心分離して有機の上清を処理することによってペプチドを得た。

【0245】

ＵＰＬＣ－ＭＳを用いて各フェーズの純度を確認した。非精製（リンカー分子なし）及び精製のペプチドのＵＰＬＣクロマトグラムを図２及び図３に示し、さらに結果を表２にまとめた。ペプチドの同一性はＥＳＩ－ＭＳで確認した。１００μｍｏｌのＰ１の精製において、純度９３％のＸ１を使用することで、２６ｍｇの量（回収率６２％）のペプチドＰ１を得た（元は４１％）。Ｘ２リンカーの使用により、２１ｍｇ（回収率５０％）が９３％の純度で得られた。Ｐ２はＸ２リンカーの試料によって５μｍｏｌスケールで精製し、それにより、４ｍｇ（回収率７３％）が、純度９５％で得られた（元は５５％）。

【0246】

【表2】

【0247】

リンカータイプ４の実施例２：天然由来及び研究用ペプチド、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５及びＰ６の精製
第２のセットでは、５つのペプチドを合成した。これらは、以下である：Ｈ－ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ－ＮＨ_２（配列番号：３）（Ｐ３）ヒトサイトメガロウイルス低マトリックスリン酸化タンパク質（ｌｏｗｅｒ ｍａｔｒｉｘ ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ）（ＣＭＶ）の断片８１～９５、Ｈ－ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ－ＮＨ_２（配列番号：４）（Ｐ４）ヒトＬｅｍｕｒチロシンキナーゼ３（ＬＭＴＫ３）の断片５１０～５２０、Ｈ－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ－ＮＨ_２（配列番号：５）（Ｐ５）ヒトアミロイドベータの断片１～２０、Ｈ－ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２（配列番号：６）（Ｐ６）研究用に意図されるペプチド配列。

【0248】

ペプチド配列Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５及びＰ６は、標準的な固相ペプチド合成条件下で１００μｍｏｌスケールで合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。１．３ｍＬのＤＭＦ中で、２時間、４当量のリンカーＸ１（３０１ｍｇ）、６当量のオキシマ（８６ｍｇ）、及び６当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ、１０５μＬ）を使用して、リンカーＸ１を樹脂上のＰ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６にカップリングした。その後、ＴＦＡ／ＰｈＯＨ／ＰｈＳＨ／Ｈ_２Ｏ／エタンジチオール（ＥＤＴ，８２．５：５：５：２．５）の混合物で合成樹脂からペプチドを切断し、冷ジエチルエーテルにおいて沈殿した。粗ペプチド混合物を４．５ｍＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズ（１．５ｍＬの沈降ビーズ）を、水及びｐＨ ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液でそれぞれ３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に、８Ｍの塩酸グアニジウムを有する１０ｖｏｌ．％（５００μＬ）のクエン酸ナトリウム緩衝液を加えた。次いで、この溶液をアガロースビーズに９０分間適用して目的のペプチドがアガロースビーズに定量的に固定化した。その後、未反応のアルデヒド基をブロックするために、ｐＨ ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液中のＬ－システインの１ｗ％溶液を固定化混合物に直接１５分間添加した。その後、精製媒体をＤＭＳＯ、６Ｍの塩酸グアニジウム、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）、水、ＭｅＣＮでそれぞれ３回洗浄し、いずれのアセチル化末端配列及びその他の不純物を除去した。固定化されたリンカーの切断は、アガロース樹脂を１０ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬ ＰＰｈ_３のＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ（９０：５：５）で処理することで行った。その後、支持体をＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（９：１）で３回リンスし、２ｍＬのＨ_２Ｏ／ＴＦＡ（６０：４０）の溶液を６０分間で添加した。その後、上清に２ｍＬのＴＦＡを加え、得られた混合物を遠心チューブに濾過し、支持体をＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ（９５：５）で２回、同じチューブにリンスした。Ｅｔ_２ＯをＴＦＡ－水の量に対して５倍加えて沈殿を開始し、チューブの遠心分離と有機上清の処理によってペプチドを取得した。

【0249】

ＵＰＬＣ－ＭＳを使用して各フェーズの純度を検証した。非精製ペプチド（リンカー分子なし）及び精製ペプチドのＵＰＬＣ－クロマトグラムを図４に示す。ペプチドの同一性はＥＳＩ－ＭＳで確認した。凍結乾燥後に得られたペプチド量、計算された回収率、及び精製前後のＵＶ純度を表３に示す。

【0250】

【表3】

【0251】

タイプ１のリンカーの実施１：研究用ペプチドＰ２の精製
タイプ１のリンカーを有するペプチドを精製する本発明の方法を、ペプチドＨ－ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２（配列番号：２）（Ｐ２）（これは研究を意図したペプチド配列である）に適用した。

【0252】

ペプチドは、標準的な固相ペプチド合成条件下で合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。タイプ１のリンカーＸ９を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で４当量のリンカー、６当量のオキシマ、６当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて樹脂上のＰ２に２時間カップリングさせた。その後、ＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ／Ｈ_２Ｏ（８４：２：６：８）の混合物で合成樹脂からペプチドを切断し、ジエチルエーテルにおいて沈殿させた。３０ｍｇのリンカー修飾ペプチドを得た。このリンカータイプ１の本発明方法を図５に示す。粗ペプチド混合物のうち１．９ｍｇを１００μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズを、Ｈ_２Ｏ／ＥｔＯＨ（４：１）スラリーの各７５μＬの５０％ビーズ懸濁液を有するカートリッジに加え、その後、ビーズを水及びｐＨ ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液で３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に、８Ｍの塩酸グアニジウムを有する１０ｖｏｌ．％（１０μＬ）のクエン酸ナトリウム緩衝液を加えた。次いで、１１０μＬのこの溶液をアガロースビーズに９０分かけて適用し、これにより、所望のペプチドがアガロースビーズに定量的に固定化された（固定化上清のＵＰＬＣ分析）。その後、固定化混合物を１５分で間濾別して未反応のアルデヒド基をブロックし、イミンの形成をリバースした後に、ｐＨ ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液中のＬ－システインの２ｗ％溶液１００μＬをビーズに加えた。その後、精製媒体を０．９Ｍの塩酸グアニジウムを有するＤＭＳＯ、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）で５００μＬずつ３回洗浄して、アセチル化末端配列及びその他の不純物を除去した。固定化されたリンカーペプチドの切断は、アガロース樹脂をリアクターごとに２００μＬのＴＣＥＰ（２５ｍｇ／ｍＬ）で３０分間処理することで行った。その後、支持体を０．１％ ＴＦＡを含有するＨ_２Ｏで３回リンスした。アミンスイッチを使用してペプチドをアガロースから放出させるため、ｐＨ９の０．２ＭのＮＨ_４ＨＣＯ_３溶液２００μＬをビーズに１５分間かけて添加した。これにより、ピペラジニル部分が脱プロトン化され、ペプチドが放出された。ＥＳＩ／ＭＳで所望のペプチドの同一性を確認した（図９、表４）。

【0253】

【表4】

【0254】

タイプ２のリンカーの実施１：研究用ペプチドＰ２の精製
タイプ２のリンカーを有するペプチドを精製する本発明の方法を、ペプチドＨ－ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２（配列番号：２）（Ｐ２）（これは研究を意図したペプチド配列である）に適用した。

【0255】

ペプチドは、標準的な固相ペプチド合成条件下で合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。リンカーＸ１３を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で４当量のリンカー、６当量のオキシマ、６当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、樹脂上のＰ２に３時間かけてカップリングした。このリンカータイプ２の本発明方法を図６に示す。その後、ＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ／Ｈ_２Ｏ（８４：２：６：８）の混合物でペプチドを合成樹脂から切断した。粗ペプチド混合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズを、水及びｐＨ ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液でそれぞれ３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に、クエン酸ナトリウム緩衝液中の６ＭのＧｄｍＣｌ１０体積％を加えた。得られた溶液をアガロースビーズに加え、混合物を９０分間振とうすることで、所望のペプチドをアガロースビーズ上に定量的に固定化した。上清を除去し、残渣をクエン酸Ｎａ緩衝液中の１重量％のＬ－Ｃｙｓで１５分間処理した。その後、ビーズをＤＭＳＯ、６Ｍの水性ＧｄｍＣｌ、ＥｔＯＨ／０．１Ｍ ＮａＣｌ（７：３）、水、ＭｅＣＮ、ＥｔＯＨ中０．１体積％のＴＦＡでそれぞれ３回洗浄し、アセチル化末端配列及びその他の不純物を除去した。固定化されたリンカーの切断は、アガロース樹脂をＥｔＯＨ（０．５Ｍ）中の１０当量のＳｎＣｌ２で３時間処理することによって行った。その後、支持体を、ＥｔＯＨ中０．１体積％のＴＦＡ、Ｈ_２Ｏ中０．１体積％のＴＦＡ、ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（９：１）で各３回洗浄した。０．２Ｍ水性ＮＨ_４ＨＣＯ_２（ｐＨ ８．８５）／ＭｅＣＮ（１：１）の溶液を１５分間かけて添加した。上清を遠心チューブに濾過し、支持体をＨ_２Ｏで２回、同じチューブにリンスした。残渣を凍結乾燥することにより精製ペプチドを得た。

【0256】

ＵＰＬＣ－ＭＳを用いて各ステップの純度を検証した。非精製ペプチド（リンカー分子なし）及び精製ペプチドのＵＰＬＣ－クロマトグラムを図９に示す。ペプチドの同一性はＥＳＩ－ＭＳで確認した（表５）。精製実験にてＸ１３及び５０μｍｏｌの粗Ｐ２を使用することで、最終純度９７％（元は７７％）の３６ｍｇ（回収率７３％）のペプチドＰ２が得られた。

【0257】

【表5】

【0258】

タイプ３のリンカーの実施１：研究用ペプチドＰ２の精製
タイプ３のリンカーを有するペプチドを精製する本発明の方法を、ペプチドＨ－ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ－ＮＨ_２（配列番号：２）（Ｐ２）（これは研究を意図したペプチド配列である）に適用した。

【0259】

ペプチドは、標準的な固相ペプチド合成条件下で合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。タイプ３のリンカーＸ２２を、樹脂上のＰ２に、４当量のリンカー、３．６当量の２－（６－クロロ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウム－ヘキサフルオロホスファト（ＨＣＴＵ）、４当量のオキシマ及びジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の８当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて２時間かけてカップリンクした。その後、ＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ／Ｈ_２Ｏ（８４：２：６：８）の混合物でペプチドを合成樹脂から切断し、ジエチルエーテルにおいて沈殿させた。２７ｍｇのリンカー修飾ペプチドを得た。このリンカータイプ３の本発明方法を図７に示す。粗ペプチド混合物のうち２．１ ｍｇを１００μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズを、Ｈ_２Ｏ／ＥｔＯＨ（４：１）スラリーの各７５μＬの５０％ビーズ懸濁液を有するカートリッジに加え、その後、ビーズを水及びｐＨ ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液で３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に、８Ｍの塩酸グアニジウムを有する１０ｖｏｌ．％（１０μＬ）のクエン酸ナトリウム緩衝液を加えた。その後、１１０μＬのこの溶液をアガロースビーズに９０分かけて適用し、これにより、所望のペプチドがアガロースビーズに定量的に固定化された（固定化上清のＵＰＬＣ分析）。その後、固定化混合物を１５分で間濾別して未反応のアルデヒド基をブロックし、イミンの形成をリバースした後に、ｐＨ ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液中のＬ－システインの２ｗ％溶液１００μＬをビーズに加えた。その後、精製媒体を０．９Ｍの塩酸グアニジウムを有するＤＭＳＯ、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）で５００μＬずつ３回洗浄して、アセチル化末端配列及びその他の不純物を除去した。固定化されたリンカーペプチドの切断は、アガロース樹脂をリアクターごとに２００μＬのＴＣＥＰ（２５ｍｇ／ｍＬ）で３０分間処理することで行った。その後、支持体を０．１％ ＴＦＡを含有するＨ_２Ｏで３回リンスした。求核性放出を伴うアミンスイッチを使用することにより、ペプチドをアガロースから放出し、したがって、ｐＨ７の水溶液中の０．２ＭのＮＥｔ_３の２００μＬをビーズに１００時間加えた。これにより、ピペラジニル及びアニリン－ＮＨ_３ ^＋部分が脱プロトン化され、次いでアニリン－ＮＨ_２の求核攻撃によってペプチドが放出された。ＥＳＩ／ＭＳで所望のペプチドの同一性を確認した（図９、表６）。

【0260】

【表6】

【0261】

カルバメートスイッチ（タイプ４）リンカー分子Ｘ１とＸ２の化学合成
２－（（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）カルバモイル）－４－アジド－３－ブロモベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１）を合成するための合成ステップ

【0262】

６－アミノ－７－ブロモフタリド
ＴＨＦ（８０ｍＬ）中の６－アミノフタリド（５．１３ｇ、３４．０５ｍｍｏｌ）の冷却溶液（０℃）に、Ｎ－ブロモスクシンイミド（６．１２ｇ、３４．０５ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。冷却浴を取り外し、溶液を１時間撹拌し、次いで減圧下で溶媒を除去した。黄色の残渣を酢酸エチル（４００ｍｌ）に取り混み、水（各２００ｍＬ）で３回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、６－アミノ－７－ブロモフタリドを褐色の固体として得た（６．５３ｇ、２８．６３ｍｍｏｌ、８４％）。Ｒ_ｆ＝０．２（シクロヘキサン／酢酸エチル２：１）；ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．４５分（５分で勾配１０～９０％のＢ）；ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝８３．１％；ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２２７．９７、２２９．９６，検出：２２８．０１、２３０．０１）

【0263】

６－アジド－７－ブロモフタリド
６－アミノ－５－ブロモフタリド（５．５４ｇ、２４．１７ｍｍｏｌ）を０°Ｃの冷塩酸（１Ｍ、１００ｍＬ）に加えた。冷却した懸濁液に濃硫酸を、固体が完全に溶解するまで（２５ｍＬ）撹拌しながら滴下し、溶液が再び０℃に達するまでさらに冷却した。水（１７ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（３．３４ｇ、４８．３４ｍｍｏｌ、２当量）の溶液をゆっくりと加えた（溶液が温かすぎると亜硝酸ガスが形成される）。１０分間撹拌した後、水中（２０ｍＬ）のアジ化ナトリウムの溶液（３．１４ｇ、４８．３４ｍｍｏｌ、２当量）をゆっくりと滴下して添加した（注意：アジ化水素酸の形成）。３０分後、懸濁液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。水相を濾過し、濾過ケーク（ｆｉｌｔｅｒ ｃａｋｅ）を水（各１００ｍＬ）で３回及びシクロヘキサン（１５０ｍＬ）で１回洗浄した。６－アジド－７－ブロモフタリド（６．５８ｇ（９４％）、２４．１７ｍｍｏｌ、定量的）が黄色の固体として得られた。Ｒ_ｆ＝０．３（シクロヘキサン／酢酸エチル２：１）；ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．２４分（５分で勾配１０～９０％のＢ）；ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝５０．３％

【0264】

Ｎ－（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）－３－アジド－２－ブロモ－６－（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
６－アジド－７－ブロモフタリド（５．５４ｇ（９４％）、２４．１７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５０ｍＬ）に取り込み、この懸濁液を撹拌しながら５０℃に加熱した。エチレンジアミン（２３．４ｍＬ、３５０．４７ｍｍｏｌ、１４．５当量）を加え、従って、１０分後に固体が完全に溶解した。５０℃で１時間撹拌した後、溶媒及び過剰のエチレンジアミンを減圧下で除去して、残渣として赤色の油（８．４９ｇ）を得た。飽和塩水（８０ｍＬ）を加え、得られた懸濁液を３０分間超音波処理し、４０°Ｃで３０分間撹拌し、濾過した。濾過ケークを飽和塩水（５０ｍＬ）で１回、シクロヘキサン（１００ｍＬ）で１回洗浄した。濾過ケークを乾燥させた後、表題の化合物を黄色の固体として得た（３．８４ｇ、１２．２ｍｍｏｌ、５０．６％）。生成物３はまた、酢酸エチルで抽出することにより（毎回１５０ｍｌで６回）濾液からも得られた（４．７９ｇ、１５．２２ｍｍｏｌ、６３．１％）。Ｒ_ｆ＝０．１（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８：２）；ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．０３分（５分で勾配１０～９０％のＢ）；ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝８３．５％；ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＮａ^＋：３３６．０１、３３８．０１ｇ／ｍｏｌ、検出：３３５．９５、３３７．９６ｍ／ｚ）

【0265】

Ｎ－（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）－３－アジド－２－ブロモ－６－（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃ－ＯＨ、４．７１ｇ、１５．８６ｍｍｏｌ、１．３当量）及びＮＨＳ（１．８４ｇ、１５．８６ｍｍｏｌ、１．３当量）のアセトニトリル（４０ｍＬ）中の攪拌溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、３．３０ｇ、１５．８６ｍｍｏｌ、１．３当量）を加える。１時間撹拌した後、溶液を濾過により得られた白色沈殿物から分離し、濾過ケークをアセトニトリル（４０ｍＬ）で洗浄する。濾液をアセトニトリルで１２０ｍＬに希釈する。Ｎ－（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）－３－アジド－２－ブロモ－６－（ヒドロキシメチル）ベンズアミド（３．７９ｇ、１２．０６ｍｍｏｌ、１当量）をアセトニトリル（３０ｍＬ）に取り込み、懸濁液を５０分間超音波処理する。次に、（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃ－ＮＨＳを有する濾液をこの懸濁液に加え、反応混合物を２．５時間撹拌する。減圧下で溶媒を除去した後、得られたオレンジ色の油（１０．４７ｇ）に酢酸エチル（１５０ｍｌ）を加え、懸濁液を１０分間超音波処理し、５０℃で１０分間撹拌する。懸濁液を洗浄した後（８０ｍＬの５重量％のＮａＨＣＯ_３溶液（ｐＨ ８）で３回、８０ｍＬの２％のクエン酸溶液（ｐＨ ４．５）で１回、８０ｍＬの塩水で２回）、有機相を分離して、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去し、黄色の泡を粗生成物（６．８４ｇ）として得た。粗生成物を高真空下で乾燥した後、生成物を黄色の固体として得た（６．４３ｇ、７５．８９％純度（ＵＶ／可視で測定）、８．３１ｍｍｏｌ、６８．９１％収率）。ｃ＝０．１５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５）；ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．６０分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２１ｎｍ）＝７９．１％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＮａ^＋：６０９．１３、６１１．１３ｇ／ｍｏｌ、検出：６０９．０３、６１１．０６ｍ／ｚ）

【0266】

２－（（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）カルバモイル）－４－アジド－３－ブロモベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート
Ｎ－（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）－３－アジド－２－ブロモ－６－（ヒドロキシメチル）ベンズアミド（６．３９ｇ（７９％）、８．２６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、０°Ｃに冷却した。この溶液に、最初に無水ピリジン（１．００ｍＬ、１２．４８ｍｍｏｌ、１．５当量）を攪拌しながら加え、次にＤＣＭ（２０ｍＬ）中のクロロギ酸ｐ－ニトロフェニルの溶液（２．５２ｇ、１２．４８ｍｍｏｌ、１．５当量）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、得られたオレンジ色の油（９．９９ｇ）を１５０ｍＬの酢酸エチルに溶解する。懸濁液を濾過し、溶媒を濾液から減圧下で除去して、黄色の泡状固体を粗生成物（８．８５ｇ）として得た。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、シクロヘキサン：酢酸エチル ２：１～１：１）で精製した後、生成物（３．８２ｇ）を１００ｍＬのジエチルエーテルに取り込み、超音波で１０分間処理し、４０℃で３０分間撹拌し、次に－２０°Ｃで一晩保存した。生成物を濾過し、１００ｍＬの－２０℃の冷ジエチルエーテルで洗浄し、高真空後に乾燥して、淡黄色の固体（２．４７ｇ、３．２９ｍｍｏｌ、３９．５％）とした。

【0267】

Ｒ_ｆ＝０．２５（酢酸エチル／シクロヘキサン ２：１）、ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝３．１８分（５分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８８．４％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＮａ^＋：７７４．１３、７７６．１３ｇ／ｍｏｌ、検出：７７３．９１、７７５．８８ｍ／ｚ）

【0268】

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ） δ ８．７１（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝９．２ Ｈｚ，２Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），５．２５（ｓ，２Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ），３．３３（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ）

【0269】

２－（（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）カルバモイル）－４－アジド－３，５－ジブロモベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ２）
５，７－ジブロモ－６－アミノフタリド
６－アミノフタリド（２０．００ｇ、１３２．７５ｍｍｏｌ）を、撹拌子付きの１Ｌの丸底フラスコに入れ、５５０ｍＬのＴＨＦ及び３０ｍＬのＭｅＣＮを０℃にて加えた。溶液が褐色に変わった後、溶液にＮ－ブロモスクシンイミドを粉末漏斗を通して固体としてゆっくりと加えた。氷浴を取り除き、しばらくすると溶液が黄色に変わった。室温で２時間撹拌した後、ＵＰＬＣ－ＭＳ及びＴＬＣは二臭化物への完全な変換を示した。回転式エバポレーターにて減圧下で溶媒を除去した。残りの固体を６００ｍｌの酢酸エチルに溶解し、水で３回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、蒸発後、３９．８６ｇ（１２９．８６ｍｍｏｌ、９８％）の所望の生成物を淡黄色の固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．６（シクロヘキサン／酢酸エチル ２：１）、ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．３６分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２５４ｎｍ）＝８７．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：３０７．９５ｇ／ｍｏｌ、検出：３０７．７６ｍ／ｚ）

【0270】

５５，７－ジブロモ－６－アジドフタリド
５，７－ジブロモ－６－アミノフタリド（３８．５０ｇ、１２４．１８ｍｍｏｌ）を２Ｌフラスコ内の２００ｍＬの濃Ｈ_２ＳＯ_４に溶解し、この茶色の溶液を大きな氷のバケツで冷却し、次いで、２３５ｍＬの１ＭのＨＣｌをゆっくりと加え、ＨＣｌ添加中に沈殿物が形成された。ＮａＮＯ_２（１７．３１ｇ、２４８．３５ｍｍｏｌ、２当量）を３２ｍＬの水に溶解し、それが５°Ｃに達した後、懸濁液にゆっくりと加えた。その後、沈殿物は溶解した。溶液をさらに０℃で１５分間撹拌し、その後に７５ｍＬの水中のＮａＮ_３（１６．３１ｇ、２４８．３５ｍｍｏｌ、２当量）をパスツールピペットによって滴下して加えた。ガス（Ｎ_２、ＨＮ_３）の強い形成を観察した。泡状の溶液を１時間撹拌し、その後、氷での冷却下で５００ｍｌの水を加えた。泡の発生が止まり、溶液が室温に達した後、懸濁液をブフナー漏斗を使用して濾過し、一方で２Ｌの水を使用して固体を漏斗に移し、それによって固体を洗浄した。湿った生成物を結晶皿中で減圧下で乾燥させた後、生成物はわずかに茶色がかった固体として得られた（３６．０１ｇ、１０８．１６ｍｍｏｌ、８７．１％）。Ｒ_ｆ＝０．４５（シクロヘキサン／酢酸エチル ２：１）、ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．８９分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２５４ｎｍ）＝９５．３％、

【0271】

Ｎ－（２－アミノエチル）－３－アジド－２，４－ジブロモ－６－（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
５，７－ジブロモ－６－アジドフタリド（１８．００ｇ、５３．５２ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（４９０ｍＬ）に溶解し、不溶性不純物を濾別し、エチレンジアミン（５２．７３ｍＬ、７４９．３２ｍｍｏｌ、１４当量）を０℃にて加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、その後、ＵＰＬＣ－ＭＳは定量的変換を示した。反応混合物を、１００ｍＬの塩水が添加された分液漏斗に移した。水相を分離した後、有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、回転式エバポレーターで有機溶媒をオレンジ色の固体として蒸発させた後、所望の生成物を得た。（２０．５０ｇ、５２．１６ｍｍｏｌ、９７．４％）。Ｒ_ｆ＝０．２５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８：２）、ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．８０分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２５４ｎｍ）＝８４．２％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：３９３．９３ｇ／ｍｏｌ、検出：３９３．８７ｍ／ｚ）

【0272】

Ｎ－（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）－３－アジド－２，４－ジブロモ－６－（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃＯＨ、１７．３０ｇ、５８．１８ｍｍｏｌ、１．１当量）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、６．７６ｇ、５８．１８ｍｍｏｌ、１．１当量）を３５０ｍＬのアセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１２．１３ｇ、５８．１８ｍｍｏｌ、１．１当量）を固体として加え、ＤＣＣの溶解後に白色の沈殿物が形成された。反応混合物を室温で１時間撹拌し、そこで（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃ－ＮＨＳエステルがＵＰＬＣ－ＭＳに従って定量的に形成された。その後、混合物を１Ｌフラスコに濾過して、ＤＣＣ－尿素を除去した。Ｎ－（２－アミノエチル）－３－アジド－２，４－ジブロモ－６－（ヒドロキシメチル）ベンズアミド（２０．５ｇ、５２．９０ｍｍｏｌ）を５３０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、続いて（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃ－ＮＨＳの溶液に加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、その後、反応の完了をＴＬＣ及びＵＰＬＣ－ＭＳによって確認した。追加の形成された沈殿物を濾別し、有機相を５％のＮａＨＣＯ_３（各２００ｍＬ）で２回、ブライン１回及び２％クエン酸溶液（ｐＨ ４．５）／塩水１：１（各１５０ｍＬ）で２回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、従って、有機溶媒を真空で除去し、表題の化合物を淡黄色の油として得た（３７．７０ｇ、５６．５８ｍｍｏｌ、定量的）。Ｒ_ｆ＝０．４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５）、ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．９７分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２５４ｎｍ）＝５４．２％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：６６７．０５、ＭＮａ^＋：６８９．０４ｇ／ｍｏｌ、検出：６８８．９５ｍ／ｚ）

【0273】

２－（（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）カルバモイル）－４－アジド－３，５－ジブロモベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート
Ｎ－（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）－３－アジド－２，４－ジブロモ－６－（ヒドロキシメチル）ベンズアミド（３７．７０ｇ（９４％）、５２．９０ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１７０ｍＬ）に入れ、（乾燥、分子ふるい上に入れた）ピリジン（４．７２ｍＬ、５８．５０ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。その後、４－ニトロフェニルクロロホルミエート（１２．０３ｇ、５８．５０ｍｍｏｌ、１．１当量）を、水浴の使用により温度を一定に保ちながら、室温にて固体としてゆっくりと加えた。反応により、ＤＣＭのフラスコの中央での蒸発が引き起こされる可能性がある。ＬＣＭＳ及びＴＬＣで示されるように、１時間後に完全な反応が示された。ジクロロメタンを真空で除去して５２ｇの粗褐色油を得て、残渣を５００ｍＬの酢酸エチルに溶解し、２％のクエン酸溶液（ｐＨ ４．５）／塩水１：１（各２５０ｍＬ）で２回及び塩水１５０ｍＬで１回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させた。その後、この懸濁液をグラスフリットにおいて５０ｇのシリカプラグで濾過したが、オレンジと赤みがかった不純物はシリカに残留した。有機溶媒を、高粘度のわずかに琥珀色の油が残るまで、減圧下で濾液から除去した。この油に７０ｍｌのＥｔ_２Ｏを加え、２相エマルジョンを４５°Ｃで１０分間、１つの均一な相が形成されるまで回転式エバポレーターで回転させた。結晶化開始剤として小さなサンドコーン（ｓａｎｄ ｃｏｒｎ）をフラスコに加え、フラスコを冷蔵庫に一晩（１６時間）置いた。フラスコの中にはドロドロした沈殿物が形成されていた。さらに２００ｍＬの冷（－２５°Ｃ）エーテルをフラスコに加え、フラスコを穏やかに振とうし、氷浴中で撹拌した。白い星のような結晶を、フィルターを満たしたブフナー漏斗に移し、さらに２００ｍＬの冷Ｅｔ２Ｏで洗浄した。したがって、表題の化合物を白色の固体として得た（２９．９５ｇ、３６．０２ｍｍｏｌ、６８．１％）。Ｒ_ｆ＝０．６（酢酸エチル／シクロヘキサン ２：１）、ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．８６分（３分で３０～９５％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９３．５％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：８３２．０６、ＭＮａ^＋：８５４．０４ｇ／ｍｏｌ、検出：８５３．８７ｍ／ｚ）

【0274】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ ８．７３（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），５．２４（ｓ，２Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ），３．４０－３．３２（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ）

【0275】

アジド還元安全ロック（タイプ１）リンカー分子Ｘ６及びＸ９を有するアミンスイッチの化学合成
３－（（４－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）メチル）－４－アジドベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ６）の合成のための合成ステップ

【0276】

４－ニトロ－３－（ピペラジン－１－イルメチル）安息香酸
４－ニトロ－３－メチル安息香酸メチルエステル（５．０３ｇ、２５．５０ｍｍｏｌ）を、撹拌子を備えた５００ｍＬの丸底フラスコ中の１７０ｍＬの乾燥ベンゼンに溶解した。Ｎ－ブロモスクシンイミド（５．２７ｇ、２９．３３ｍｍｏｌ）及び過酸化ベンゾイル（０．６２ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を加熱還流した。１２時間後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は、臭素化出発材料への変換が１０％しかないことを示した。再び、Ｎ－ブロモスクシンイミド（３．６６ｇ、２０．５６ｍｍｏｌ）及び過酸化ベンゾイル（０．６２ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を加えた。３６時間後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は８０％の変換を示した。混合物を真空で濃縮し、８５ｍＬのクロロホルムを加えた。それを、撹拌子を備えた５００ｍＬの丸底フラスコ中の８５ｍＬのクロロホルム中のピペラジン（８．８７ｇ、１０２．００ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（４．６３ｇ、３３．１５ｍｍｏｌ）の混合物にゆっくりと濾過した。２時間後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は、所望の生成物への完全な変換を示した。回転式エバポレーターで溶媒を除去した。残渣に２５０ｍＬの酢酸エチルを加え、混合物を分液漏斗へ濾過した。有機相を１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３で３回、１００ｍＬの塩水で３回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた後、７．３ｇ（完全に乾燥していない）の所望の生成物が黄色の油として得られた。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．６０２分（３分で１０～９０％ＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝６８．３％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２８０．１２ｇ／ｍｏｌ、検出：２８０．１１ｍ／ｚ）

【0277】

（４－ニトロ－３－（ピペラジン－１－イルメチル）フェニル）メタノール
４－ニトロ－３－（ピペラジン－１－イルメチル）安息香酸（１．１０ｇ，推定３．００ｍｍｏｌ）を２５０ｍＬの丸底フラスコにおいて８ｍＬのＴＨＦに溶解し、磁気攪拌子を用いて室温で撹拌した。ＬｉＣｌ（０．７７ｇ、１８．００ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ_４（０．６９ｇ、１８．００ｍｍｏｌ）、及び１６ｍＬのエタノールを順次加えた。１２時間後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は、出発材料の完全な変換を示した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣を６０ｍＬの酢酸エチルに懸濁した。混合物を急速に撹拌しながら、２５ｍＬの１ＭのＮＨ_４Ｃｌを滴下して加えた。２時間後、２５ｍＬの１ＭのＮａＯＨをゆっくりと加え、混合物を分離漏斗に移した。この層を分離し、水相を５０ｍＬの酢酸エチルで２回、５０ｍＬのクロロホルムで２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、有機溶媒を蒸発させた後に、所望の生成物が黄色の固体として得られた（０．５９ｇ、２．３５ｍｍｏｌ、８８％）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．２７分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝５０．４％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２５２．２９ｇ／ｍｏｌ、検出：２５２．１７ｍ／ｚ）

【0278】

２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（５－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロベンジル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン
１００ｍＬの丸底フラスコで、Ｂｉｓ－Ｂｏｃ保護されたアミノオキシ酢酸（０．７８ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（０．３１ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を２５ｍＬのアセトニトリルに溶解し、マグネチック攪拌子で攪拌した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（０．５５ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。滴下漏斗へ濾過した後、それを、２５０ｍＬの丸底フラスコにおいて２５ｍＬのクロロホルム中の４－ニトロ－３－（ピペラジン－１－イルメチル）ベンジルアルコール（０．５９ｇ、２．３５ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加えた。１時間後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は、出発材料の完全な変換を示した。溶媒を回転式エバポレーターで除去し、残渣を１００ｍＬの酢酸エチルに懸濁し、分液漏斗へ移した。有機相を５０ｍＬの水で３回、５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で３回、５０ｍＬの塩水で３回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。有機溶媒を蒸発させた後、黄色の固体として所望の生成物が得られた（１．８ｇ、完全に乾燥していない）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．２４分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝１９．８％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：５２５．１４ｇ／ｍｏｌ、検出：５２５．２５ｍ／ｚ）

【0279】

１－（４－（２－アミノ－５－（ヒドロキシメチル）ベンジル）ピペラジン－１－イル）－２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）エタン－１－オン
丸底フラスコで、２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（５－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロベンジル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オンを１６ｍＬの水／エタノール（１：４）に溶解した。この後、鉄粉（０．２３ｇ、４ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（０．２５ｇ、４ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＵＰＬＣ－ＭＳを介して出発材料の完全な消費を確認した後、反応混合物をセライトで濾過して過剰の鉄を除去した。溶媒を可能な限り真空で濃縮した。５０ｍＬのＣＨＣｌ_３を加えた後、有機相を３５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液で３回、５０ｍＬの塩水で３回洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させた後、回転式エバポレーターにて減圧下で有機溶媒を除去した。最終生成物（０．１９ｇ、０．４ｍｍｏｌ）が茶色の油として得られた。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．０５分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝２４．７％，ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：４９５．２８、ＭＮａ^＋：５１７．２６ｇ／ｍｏｌ、検出：５１７．２９ｍ／ｚ）

【0280】

２－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（２－アジド－５－（ヒドロキシメチル）ベンジル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン
丸底フラスコに、１－（４－（２－アミノ－５－（ヒドロキシメチル）ベンジル）ピペラジン－１－イル）－２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）エタン－１－オン（０．１９ｇ、０．４ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリルに溶解した。攪拌しながら、氷浴でこの溶液を冷却し、ｔｅｒｔ－ブチルニトリル（２３６μＬ、２ｍｍｏｌ）、次いでトリメチルシリルアジド（３５１μＬ、１．６ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。この溶液を、密閉フラスコ内で２時間、氷冷しながらさらに撹拌した。ＵＰＬＣ－ＭＳが不完全な変換を示した後、ｔｅｒｔ－ブチルニトリル（５７２μＬ、４ｍｍｏｌ）、次にトリメチルシリルアジド（７０２μＬ、３．２ｍｍｏｌ）を再びゆっくりと加えた。この反応混合物をさらに２時間攪拌した。次に、溶媒を回転式エバポレーターで減圧下で除去した。粗生成物を５０ｍＬの酢酸エチルに溶解した後、有機相を５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３で３回、５０ｍＬの塩水溶液で３回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。有機溶媒を蒸発させた後、所望の生成物（０．１４ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）が得られた。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．３４分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝２０．４％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：５２１．２７、検出：５２１．３０ｍ／ｚ）

【0281】

３－（（４－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）メチル）－４－アジドベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ６）
２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（２－アジド－５－（ヒドロキシメチル）ベンジル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン（１４９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を０．２ｍＬの乾燥ＤＣＭを使用して丸底フラスコに溶解した。ピリジン（１９．２μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を用いて溶液を冷却した。この混合物に、０．２ｍＬの乾燥ＤＣＭにおけるｐ－ニトロフェニルクロロホルミエート（３２．９ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。有機溶媒を真空で除去し、所望の生成物を暗褐色の油として得た（０．２１ｇ、完全に乾燥していない）ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１０．７２分（１１分で０～６０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８．３９％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：６８６．２８、ＭＮａ^＋：７０８．２６ｇ／ｍｏｌ、検出：６８６．３８ｍ／ｚ）

【0282】

３－（４－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）－４－アジドベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ９）の合成のための合成ステップ
１－（４－（２－アミノ－５－（ヒドロキシメチル）フェニル）ピペラジン－１－イル）－２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）エタン－１－オン
２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（５－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロフェニル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン（１．００ｇ、１．９６ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコにおいて７８ｍＬのメタノールに溶解した。この溶液にマグネシウム粉末（１．２８ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を加えた。攪拌下で、ギ酸アンモニウム（１．２３ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を固体として加えた。この溶液を室温で２０分間さらに撹拌すると同時に、ガスの形成が観察された。この溶液を直ちにマグネシウムを除去するために濾別し、回転式エバポレーターにて減圧下で溶媒を除去した。粗生成物を１：１の水／アセトニトリルの溶媒混合物を用いて凍結乾燥した。この粗生成物（２．２０ｇ）は、任意のさらなる精製を行わずに使用した。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．２１分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝５３．２％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：４８１．２７ｇ／ｍｏｌ、ＭＮａ^＋：５０３．２５ｇ／ｍｏｌ、検出：４７７．３０ｍ／ｚ）

【0283】

２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（２－アジド－５－（ヒドロキシメチル）フェニル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン
丸底フラスコに、１－（４－（２－アミノ－５－（ヒドロキシメチル）フェニル）ピペラジン－１－イル）－２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－アミノオキシ）エタン－１－オン（１．００ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリルに溶解した。撹拌下で、氷浴でこの溶液を冷却し、ｔｅｒｔ－ブチルニトリル（１．３７ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）、次にトリメチルシリルアジド（１．１６ｍＬ、８．３２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。この溶液を、密閉フラスコ内で２時間、氷冷しながらさらに撹拌した。ＵＰＬＣ－ＭＳが不完全な変換を示した後、ｔｅｒｔ－ブチルニトリル（１．３７ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）、次にトリメチルシリルアジド（１．１６ｍＬ、８．３２ｍｍｏｌ）を再びゆっくりと加えた。この反応混合物をさらに一晩攪拌した。次に、溶媒を回転式エバポレーターで減圧下で除去した。粗生成物を５０ｍＬの酢酸エチルに溶解した後、有機相を５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３で３回、５０ｍＬの塩水溶液で３回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。有機溶媒を蒸発させ、フラッシュカラム（３：２ ＥｔＯＡＣ／シクロヘキサン）で精製した後、所望の生成物（０．２ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を得た。Ｒ_ｆ＝０．５（ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン ４：１）、ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．９２分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８４．２％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：５０７．２６ｇ／ｍｏｌ、ＭＮａ^＋：５２９．２４ｇ／ｍｏｌ、検出：５２９．３０ｍ／ｚ）

【0284】

３－（４－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）－４－アジドベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ９）
２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（２－アジド－５－（ヒドロキシメチル）フェニル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン（７６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を１ｍＬの乾燥ＤＣＭを使用して丸底フラスコに溶解した。ピリジン（１２．２μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を用いて溶液を冷却した。この溶液に、ｐ－ニトロフェニルクロロホルミエート（２０．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を固体としてゆっくりと加えた。１０分後、氷浴を除去し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。有機溶媒を真空で除去し、粗生成物を３０ｍＬのＥｔＯＡｃに再溶解した。次に、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で３回、塩水で３回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、有機溶媒を再び真空で除去した。粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン（１：１）溶媒混合物を使用するフラッシュカラムによって最終的に精製した。所望の化合物を淡黄色の油（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）として得た。Ｒ_ｆ＝０．５４（ＥｔＯＡＣ／シクロヘキサン １：１）、ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝３．５３分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９３．６％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：６７１．６６、ＭＮａ^＋：６９４．２４ｇ／ｍｏｌ、検出：６９４．４０ｍ／ｚ）

【0285】

^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，２５ °Ｃ）：δ［ｐｐｍ］＝８．２８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２２－７．０６（ｍ，３Ｈ），５．２２（ｓ，２Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），３．９４（ｔ，Ｊ＝３．９３，２Ｈ），３．８１（ｔ，Ｊ＝３．８１，２Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝３．１２，２Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝３．０７，２Ｈ），１．５４（ｓ，１８Ｈ）

【0286】

他の還元的安全ロック（タイプ２）リンカー分子Ｘ１２、Ｘ１３、及びＸ４３を有するアミンスイッチの化学合成
（５－（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（アミノオキシ）アセトアミド）－６－（ｔｅｒｔ－ブチルジスルファニル）ピリジン－３－イル）メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１２）の合成
メチル６－メラカプト－５－ニトロピリジン－３－カルボキシレートの合成
メタノール（２５ｍｌ）中のメチル６－クロロ－５－ニトロピリジン－３－カルボキシレート（１．６ｇｍ、７．０３７ｍｍｏｌ）の冷却溶液に、７０％硫化水素ナトリウム水和物（１．１１５、１４．１２７ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。この混合物を撹拌しながら３０分～１時間静置する。続いて、この固体材料を濾過した。回転式エバポレーターを使用して、残りの溶液を５ｍｌに減縮した。残りの溶液を、０°Ｃにて１ＭのＨＣｌをゆっくりと加えることにより、ｐＨ ２に酸性化した。得られた黄色の固体材料を濾過により回収し、その材料は精製せずにさらなるステップに使用する。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．８０分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９５．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２１５．０１ｇ／ｍｏｌ、検出：２１５．２０ｍ／ｚ）

【0287】

メチル６－メラカプト－５－アミノピリジン－３－カルボキシレートの合成
メチル６－メラカプト－５－ニトロピリジン－３－カルボキシレート（１．００ｇｍ、４．５３７ｍｍｏｌ）及び鉄粉１．８５ｇｍ（３２．４８ｍｍｏｌ）を、７５％メタノール及び２５％水５０ｍＬを含有する反応フラスコに入れた。次いで、塩化カルシウム（０．４１ｇｍ、３．６３ｍｍｏｌ）を加え、出発材料が生成物に完全に変換するまで、混合物を油浴上で還流した。還流の終了後、混合物をセライトで濾過して過剰の鉄を除去した。濾液をほぼ乾固するまで濃縮し、続いて水（２５ｍｌ）を加え、酢酸エチルを使用して化合物を抽出した（３回×２５ｍｌ）。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗残渣は、更なる進行に十分な純度であった（３．４９ｍｍｏｌ、７７％）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．２６分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９３％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：１８５．０４ｇ／ｍｏｌ、検出：１８５．１４ｍ／ｚ）

【0288】

（５－アミノ－６－メラカプトピリジン－３－イル）メタノールの合成
メチル６－メラカプト－５－アミノピリジン－３－カルボキシレート（０．７ｇｍ、３．６８ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解し、この溶液を０°Ｃに冷却した。水素化リチウムアルミニウム（１．４２ｇｍ、３６．８９ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下で１０分間反応混合物に少しずつ加えた。得られた溶液を室温で２４時間撹拌した。ＵＰＬＣで示されるように反応が完了した後、１．４ｍｌの水、１．４ｍｌの１０％ＮａＯＨ、０°Ｃの４．２ｍｌの水を同時に加えることにより、過剰のＬｉＡｌＨ_４をクエンチした。Ａｌ塩を濾別し、固形材料を水及びＭｅＯＨ（１：１、１００ｍｌ）で洗浄した。溶媒を蒸発させ、イソプロパノール（３回×５０ｍｌ）を使用して固体ケークから化合物を抽出した。イソプロパノールを減圧下で除去して、純粋な形で所望の生成物（１．９２ｍｍｏｌ、５２％）を得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．０１分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９６％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：１５７．０４ｇ／ｍｏｌ、検出：１５７．１１ｍ／ｚ）

【0289】

（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（アミノオキシ））－Ｎ－（２－（ｔｅｒｔ－ブチルジスルファニル）－５－（ヒドロキシメチル）ピリジン－３－イル）アセトアミド）の合成
６－メルカプト－５－アミノピリジン－３－カルボン酸（１．３ｇｍ、８．０３ｍｍｏｌ）を入れたシュレンクフラスコに、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）、２－メチル－２－プロパンチオール（０．９１ｍｌ、８．０３ｍｍｏｌ）及びＴＢＨＰ（１．１３ｇｍ、８．８３ｍｍｏｌ、水の７０％溶液）をＮ_２雰囲気下で加えた。３０秒後、ＮＩＳ（０．１９ｇｍ、０．１８ｍｍｏｌ）を１つのバッチで加えた。次に、シュレンクフラスコを２５°Ｃで１時間反応させた。反応終了後、水（２０．０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチルで抽出した（３回×３０ｍＬ）。有機層を組み合わせて、真空下で蒸発させ、化合物をさらに精製することなく次のステップで使用した。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．６８分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９３％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２４５．０８ｇ／ｍｏｌ、検出：２４５．１８ｍ／ｚ）

【0290】

（５－（２－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（アミノオキシ）アセトアミド）－６－（ｔｅｒｔ－ブチルジスルファニル）ピリジン－３－イル）メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１２）の合成
（５－アミノ－６－（ｔｅｒｔ－ブチルジスルファニル）ピリジン－３－イル）メタノール（８３．５ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）に入れ、乾燥ピリジン（０．１６１ｍＬ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。その後、４－ニトロフェニルクロロホルミエート（３１．９ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）を加えた。ＬＣＭＳ及びＴＬＣによって反応が１２時間後に完了したことが示される。ジクロロメタンを真空で除去して、淡黄色／オレンジ色の粗油を得て、残渣を１０ｍＬの酢酸エチルに再溶解し、水と塩水を１：１（各５ｍＬ）で洗浄した。最後に、ＥｔｏＡｃを減圧下で除去して、所望の生成物（０．０８ｍｍｏｌ、７５％）を得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１２．５９分（１１．５０分で１０～６０％のＭｅＣＮ、１１．５１～１３分で６０～９０％）、ＵＰＬＣ純度（＝ｎｍ）＝７０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＮａ^＋：７０５．１９ｇ／ｍｏｌ、検出：７０５．４１ｍ／ｚ）

【0291】

３－（４－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）－４－ニトロベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１３）の合成のための合成ステップ
メチル３－フルオロ－４－ニトロベンゾエート
３－フルオロ－４－ニトロ安息香酸（５．００ｇ、２７．０１ｍｍｏｌ）を、攪拌子で２５０ｍＬ丸底フラスコ内で、１００ｍＬのメタノールに溶解し、３ｍＬの（５４，０２ｍｍｏｌ）Ｈ_２ＳＯ_４を添加した。５０°Ｃで４２時間撹拌した後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視はメチルエステルへの完全な変換を示した。回転式エバポレーターで反応混合物を１０ｍＬに濃縮した。１００ｍＬの酢酸エチル及び１００ｍＬのＨ_２Ｏを加えた後、混合物を攪拌し、続いてＫ_２ＣＯ_３（７．００ｇ）を少しずつ加えた。混合物を分液漏斗に移し、層を分離し、水相を１００ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発後、４．８１ｇ（２４．１５ｍｍｏｌ、８９％）の所望の生成物をオレンジ色の固体として得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．５３分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝９９．４％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２００．１４ｇ／ｍｏｌ、検出：－）。

【0292】

メチル４－ニトロ－３－（ピペラジン－１－イル）ベンゾエート
ピペラジン（４．０７ｇ、４７．２０ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（４．２４ｇ、３０．６８ｍｍｏｌ）を、攪拌子で２５０ｍＬ丸底フラスコ内の５０ｍＬのクロロホルムに懸濁した。５０ｍＬのクロロホルムに溶解したメチル３－フルオロ－４－ニトロベンゾエート（４．７ｇ、２３．６０ｍｍｏｌ）を、室温で１時間かけて滴下漏斗からゆっくりと加え、混合物を急速に攪拌した。６６時間後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は、出発材料の１０％のみが変換したことを示した。ピペラジン（４．０７ｇ、４７．２０ｍｍｏｌ）を加え、２時間後にＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は完全な変換を示した。１５分後、１００ｍＬのクロロホルム及び１５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加え、混合物を分液漏斗に移した。層を分離し、有機相を１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で２回、１００ｍＬの塩水で１回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、回転式エバポレーターで有機溶媒を蒸発させた後、所望の生成物を赤色の固体（７．８７ｇ、完全に乾燥していない）として得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．７２分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝８７．２％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２６６．２７ｇ／ｍｏｌ、検出：２６６．２３ｍ／ｚ）

【0293】

（４－ニトロ－３－（ピペラジン－１－イル）フェニル）メタノール
メチル４－ニトロ－３－（ピペラジン－１－イル）ベンゾエート（５．８５ｇ、完全に乾燥していない、推定２０．００ｍｍｏｌ）を５００ｍＬの丸底フラスコで４０ｍＬのＴＨＦに溶解し、磁気撹拌子で攪拌した。ＬｉＣｌ（５．０９ｇ、１２０．００ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ_４（４．５４ｇ、１２０．００ｍｍｏｌ）、及び８０ｍＬのエタノールを連続して添加した。１５時間後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は完全な変換を示した。反応混合物を真空で濃縮し、２０ｍＬのクロロホルムを加え、３０ｍＬの２ＭのＮＨ_４Ｃｌ溶液を滴下して加えながら混合物を急速に撹拌した。１時間後、１２０ｍＬの１ＭのＮａＯＨ及び８０ｍＬのクロロホルムをゆっくりと加え、混合物を分液漏斗に移した。層を分離し、水相を１００ｍＬのクロロホルムで３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、有機溶媒を蒸発させた後に、所望の生成物がオレンジ色の固体として得られた（３．９７ｇ、１６．７３ｍｍｏｌ、８４％）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．２７分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝７０．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２３８．２６ｇ／ｍｏｌ、検出：２３８．２４ｍ／ｚ）

【0294】

２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（５－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロフェニル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン
ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃＯＨ、２．９６ｇ、９．９６ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、１．１５ｇ、９．９６ｍｍｏｌ、１．２当量）を１０ｍＬのアセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、２．０７ｇ、９．９６ｍｍｏｌ、１．２当量）を固体として加え、ＤＣＣの溶解後に白色の沈殿物が形成された。反応混合物を室温で１時間撹拌し、そこで（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃ－ＮＨＳエステルがＵＰＬＣ－ＭＳに従って定量的に形成された。その後、混合物を（４－ニトロ－３－（ピペラジン－１－イル）フェニル）メタノール（１．９８ｇ、８．３０ｍｍｏｌ）を８３ｍＬのクロロホルムに入れた丸底フラスコに濾過した。混合物を室温で１時間撹拌し、その後、反応の完了をＴＬＣ及びＵＰＬＣ－ＭＳによって確認した。更なる形成された沈殿物を濾別し、有機相を水で３回、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で３回、および塩水溶液で３回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、従って、有機溶媒を真空で除去し、表題の化合物を黄色の油として得た（４．３５ｇ、８．５２ｍｍｏｌ、定量的、完全に乾燥していない）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝３．００分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝４８．２％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：５１１．２４、ＭＮａ^＋：５３４．２３ｇ／ｍｏｌ、検出：－）。

【0295】

３－（４－（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）－４－ニトロベンジル（４ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１３）
２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－アミノオキシ）－１－（４－（５－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロフェニル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン（２．０６ｇ、４ｍｍｏｌ）を撹拌子を有する８ｍＬ丸底フラスコ内に入れた。この溶液に、乾燥ピリジンを加えた。その後、４－ニトロフェニルクロロホルミエート（０．８６ｇ、４．２ｍｍｏｌ）を固体として室温でゆっくり加えた。反応は発熱性であり、ＤＣＭの泡立ちを引き起こし得る。室温で２時間撹拌した後、ＵＰＬＣ－ＭＳ及びＴＬＣは炭酸塩への完全な変換を示した。回転式エバポレーターにて減圧下で溶媒を除去した。生成物をカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル １：１）で精製し、黄色の固体（４１０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝３．４４分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９２．４％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：６７６．２５ｇ／ｍｏｌ、ＭＮａ^＋：６９８．２３ｇ／ｍｏｌ、検出：６９８．５１ｍ／ｚ）

【0296】

^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，２５ °Ｃ）：δ［ｐｐｍ］＝８．２９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２９（ｓ，２Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝３．９０，２Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝３．７８，２Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝３．１５，２Ｈ），３．１０（ｔ，Ｊ＝３．１０，２Ｈ），１．５４（ｓ，１８Ｈ）

【0297】

３－（（４－（２－（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）メチル）－４－ニトロベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ４３）を合成するための合成ステップ
２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）－１－（４－（５－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロベンジル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン（１．２７ｇ、完全に乾燥していない、推定１．８６ｍｍｏｌ）を磁気撹拌子を用いて５０ｍＬ丸底フラスコ内の５ｍＬクロロホルムに溶解し、氷浴で０°Ｃに冷却した。乾燥ピリジン（０．２３ｍＬ、０．２３ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）及びｐ－ニトロフェニルクロロホルメート（０．５９ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を連続して加えた。ｘ時間後、ＵＰＬＣ－ＵＶ／可視は、出発材料の完全な変換を示した。回転式エバポレーターで溶媒を除去し、残渣を５ｍＬの酢酸エチル／シクロヘキサン（１：１）に溶解した。酢酸エチル／シクロキサン（１：１）を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製した後、所望の生成物（０．０２ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．９６分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝５５．６％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＮａ^＋：７１２．２４ｇ／ｍｏｌ、検出：７１２．４１ｍ／ｚ）

【0298】

求核性放出（タイプ３）リンカー分子Ｘ２２及びＸ４２を有するアミンスイッチの化学合成
２－（２－アジド－５－（４－（２－（（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）フェニル）酢酸（Ｘ２２）の合成

【0299】

メチル２－（５－フルオロ－２－ニトロフェニル）アセテートの合成
５－フルオロ－２－ニトロフェニル酢酸（３．００ｇｍ、１４．９２ｍｍｏｌ）を、撹拌子と共に１００ｍｌの丸底フラスコに入れた。化合物を４０ｍｌのＭｅＯＨに溶解し、そして１．６２ｍｌ（２９．８４ｍｍｏｌ）のＨ_２ＳＯ_４を室温でゆっくりと加えた。得られた反応混合物を６時間還流した。反応の進行は、ＵＰＬＣ－ＭＳ及びＴＬＣによってモニターした。反応終了後、回転式エバポレーターにて減圧下でメタノールを除去した。得られた粗製物に、２０ｍｌの水を加え、飽和Ｋ_２ＣＯ_３溶液（５０ｍｌ）を用いて溶液を中和した。沈殿した固体を濾過し、水で洗浄し、減圧下で乾燥して、所望の生成物を白色の固体として得た（１２９．８６ｍｍｏｌ、９８％）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．４１分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９７％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２１４．０５ｇ／ｍｏｌ、検出：…）

【0300】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（２－メトキシ－２－オキソエチル）－４－ニトロフェニル）ピペラジン－１－カルボキシレートの合成
メチル２－（５－フルオロ－２－ニトロフェニル）アセテート（０．７０ｇｍ、３．２５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦに溶解した。この溶液に、１－Ｂｏｃ－ピペラジン（０．８３ｇｍ、４．３９ｍｍｏｌ）及びＮａ_２ＣＯ_３（０．７１ｇｍ、６．５ｍｍｏｌ）を室温で加え、得られた反応混合物を一晩、最大８０℃で加熱した。反応の進行を、ＵＰＬＣ－ＭＳ及びＴＬＣによってモニターした。反応の完了後、溶液を濾過して固体副生成物を除去し、回転式エバポレーターを使用して減圧下でＤＭＦを除去した。粗材料に氷冷水（２５ｍｌ）を加え、得られた固体を濾過し、水（５０ｍｌ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、黄色の固体ＵＰＬＣの目的の生成物（１．０１ｇｍ、２．６６ｍｍｏｌ、８２％）を得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝３．０１分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９６．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：３８０．１８ｇ／ｍｏｌ、検出：３２４．１０（Ｍ２Ｈ^＋－ｔブチル（ｔｂｕ））。

【0301】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（４－アミノ－３－（２－メトキシ－２－オキソエチル）フェニル）ピペラジン－１－カルボキシレートの合成
ジオキサン／Ｈ_２Ｏ（２５ｍＬ、３：１）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（２－メトキシ－２－オキソエチル）－４－ニトロフェニル）ピペラジン－１－カルボキシレート（１．００ｇｍ、２．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でＮＨ_４Ｃｌ（１．２３ｇｍ、１．０１ｇｍ、１８．５０ｍｍｏｌ）及び亜鉛末（１．２３ｇｍ、１８．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を同じ温度で３時間撹拌し、その後、それをセライトベッドに濾過した。得られた溶液を蒸発させ、粗材料をＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）の間で区画化した。有機層を分離し、乾燥濃縮して（ＭｇＳＯ_４）、黄色の固体（１．７５ｍｍｏｌ、６８％）で所望の生成物を得た。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．１２分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９４．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：３５０．２１ｇ／ｍｏｌ、検出：３５０．１９ｍ／ｚ）

【0302】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（４－アジド－３－（２－メトキシ－２－オキソエチル）フェニル）ピペラジン－１－カルボキシレートの合成
ｔｅｒｔ－ブチル４－（４－アミノ－３－（２－メトキシ－２－オキソエチル）フェニル）ピペラジン－１－カルボキシレート（０．３５ｇｍ、０．９９ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（２５ｍＬ）に溶解し、０°Ｃに冷却した。９０％の亜硝酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．８３７ｇ、７．９４ｍｍｏｌ）を反応混合物に滴下して加え、次にＴＭＳＮ_３（０．７２２ｇ、５．９５ｍｍｏｌ）を１０分かけて加えた。得られた赤色の混合物を３時間撹拌した。反応の進行はＵＰＬＣ－ＭＳでモニターした。反応終了後、過剰のＴＭＳＮ_３、ｔ－ＢｕＯＮＯ及び溶媒を減圧下で除去し、得られた赤色残渣を５０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、水で洗浄した（２回×５０ｍＬ）。酢酸エチル層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で除去してオレンジ色の固体を得た（これをさらに精製することなく進めた）（０．３３ｇｍ、０．８８ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝３．０１分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９５．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：３７６．２０ｇ／ｍｏｌ、検出：３７６．２８ｍ／ｚ）

【0303】

２－（２－アジド－５－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペラジン－１－イル）フェニル）酢酸の合成
ｔｅｒｔ－ブチル４－（４－アジド－３－（２－メトキシ－２－オキソエチル）フェニル）ピペラジン－１－カルボキシレート（０．３１４ｇｍ、０．８３ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ（０．１０２ｇｍ、４．１４ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）、及びＨ_２Ｏ（０．２ｍＬ）の溶液を、室温で３時間撹拌した。出発材料を生成物に完全に変換した後（ＵＰＬＣ－ＭＳでモニター）、反応混合物を蒸発させ、得られた粗材料に、溶液のＰＨが６に達するまで飽和ＮＨ_４Ｃｌを加えた。得られた溶液をＥｔＯＡｃで抽出し（２回×２５ｍＬ）、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮して、生成物を黄色の固体（０．６５ｍｍｏｌ、７８％）としてもたらした。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．５５分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９５．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：３６２．１８ｇ／ｍｏｌ、検出：３０６．０４ｍ／ｚ）

【0304】

４－（４－アジド－３－（カルボキシメチル）フェニル）ピペラジン－１－イウム２，２，２－トリフルオロアセテートの合成
純粋なトリフルオロ酢酸（０．６ｍｌ、６．１４ｍｍｏｌ）を、２－（２－アジド－５－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペラジン－１－イル）フェニル）酢酸（０．２２ｇｍ、０．６１ｍｍｏｌ）を含有する丸底フラスコに滴下して加え、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。反応の完了後（ＵＰＬＣ－ＭＳでモニター）、冷エーテル（２５ｍＬ）を加え、得られた固体を濾過し、冷エーテルで洗浄した。得られた薄茶色の固体（０．３０ｇｍ、８５％）を乾燥させ、精製せずにさらなるステップに進めた。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．８０分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８７．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２６２．１３ｇ／ｍｏｌ、検出：２６２．１１ｍ／ｚ）間違った質量。

【0305】

２－（２－アジド－５－（４－（２－（（（（２－ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）フェニル）酢酸（Ｘ２２）の合成
ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃＯＨ、８８．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、３４．６ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、６２．０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を固体として加え、ＤＣＣの溶解後に白色の沈殿物が形成された。反応混合物を室温で１時間撹拌し、そこで（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃ－ＮＨＳエステルがＵＰＬＣ－ＭＳに従って定量的に形成された。その後、混合物を、ＤＣＣ－尿素を除去するために、４－（４－アジド－３－（カルボキシメチル）フェニル）ピペラジン－１－イウム２，２，２－トリフルオロアセテート（１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２ｍｌ）及びＤＩＥＰＡ（１５５μＬ、０．８９ｍｍｏｌ）に含有する反応フラスコへ直接濾紙で濾過した。混合物をさらに室温で１～２時間撹拌した。反応終了後、減圧下で溶媒を蒸発させ、ＮＨ_４Ｃｌ（２５ｍｌ）を加えて反応混合物を中和した。化合物をＥｔＯＡｃで抽出し（２回×２５ｍＬ）、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮して、生成物を暗褐色の固体（０．１９ｍｍｏｌ、９７％）としてもたらした。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．８０分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８７．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＮａ^＋：５５７．２３ｇ／ｍｏｌ、検出：５５７．２８ｍ／ｚ）
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，）δ ７．０６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｓ，２Ｈ），３．９０－３．８４（ｍ，２Ｈ），３．７７－３．７２（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），３．２４－３．１１（ｍ，４Ｈ），１．５４（ｓ，１８Ｈ）

【0306】

２－（５－（４－（２－（（２－ビス－）ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）－２－ニトロフェニル）酢酸（Ｘ４２）の合成
２－（５－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペラジン－１－イル）－２－ニトロフェニル）酢酸の合成
ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ（２１．２ｍＬ、１６：１）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（３－（２－メトキシ－２－オキソエチル）－４－ニトロフェニル）ピペラジン－１－カルボキシレート（０．５０ｇｍ、１．３０ｍｍｏｌ）の溶液にＬｉＯＨを加え、室温で一晩撹拌した。出発材料を生成物に完全に変換した後に（ＵＰＬＣ－ＭＳでモニター）、反応混合物を蒸発させ、得られた粗材料に飽和ＮＨ_４Ｃｌ（２５ｍＬ）を溶液のＰＨが６に達するまで加えた。化合物をＥｔＯＡｃで抽出し（４回×２５ｍＬ）、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮して、所望の生成物を黄色の固体としてもたらした（０．７８ｍｍｏｌ、５９％）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．３６分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９７．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：３８０．１８ｇ／ｍｏｌ、検出：３１０．０４ｍ／ｚ（２Ｈ^＋－ｔｂｕ ｍ／ｚ））

【0307】

４－（３－（カルボキシメチル）－４－ニトロフェニル）ピペラジン－１－イウム２，２，２－トリフルオロアセテートの合成
純粋なトリフルオロ酢酸（０．７３ｍｌ、７．５９ｍｍｏｌ）を、２－（５－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペラジン－１－イル）－２－ニトロフェニル）酢酸（０．２８ｇｍ、０．７６ｍｍｏｌ）を含有する丸底フラスコに室温で滴下して加え、得られた溶液を１時間撹拌した。反応の完了後（ＵＰＬＣ－ＭＳでモニター）、冷エーテル（２５ｍＬ）を加え、得られた固体を濾過し、冷エーテルで洗浄した。得られた黄色の固体（８８％）を乾燥し、精製せずにさらなるステップに進めた。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝１．３５分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８８．９％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＨ^＋：２６６．１１ｇ／ｍｏｌ、検出：２６６．１１ｍ／ｚ）

【0308】

２－（５－（４－（２－（（２－ビス－）ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）アセチル）ピペラジン－１－イル）－２－ニトロフェニル）酢酸（Ｘ４２）の合成
ビス－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃＯＨ、８８．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、３４．６ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、６２．０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を固体として加え、ＤＣＣの溶解後に白色の沈殿物が形成された。反応混合物を室温で１時間撹拌し、そこで（Ｂｏｃ）_２ＡＯＡｃ－ＮＨＳエステルがＵＰＬＣ－ＭＳに従って定量的に形成された。その後、混合物を、ＤＣＣ－尿素を除去するために、４－（３－（カルボキシメチル）－４－ニトロフェニル）ピペラジン－１－イウム２，２，２－トリフルオロアセテート（１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２ｍｌ）及びＤＩＥＰＡ（１５５μＬ、０．８９ｍｍｏｌ）に含有する反応フラスコへ直接濾紙で濾過した。混合物を室温で１～２時間撹拌し、その後、反応の完了をＵＰＬＣ－ＭＳによって確認した。反応終了後、減圧下で溶媒を留去し、ＮＨ_４Ｃｌ（２５ｍｌ）を加えて反応混合物を中和した。得られた溶液を ＥｔＯＡｃで抽出し（２回×２５ｍＬ）、濃縮して、生成物を暗褐色の固体としてもたらした（０．１９ｍｍｏｌ、９７％）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：ｔ_Ｒ＝２．７４分（３分で１０～９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８７．０％、ＥＳＩ－ＭＳ：（計算上のＭＮａ^＋：５６１．２２ｇ／ｍｏｌ、検出：５６１．２８ｍ／ｚ）。

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4-1】

【図4-2】

【図4-3】

【図4-4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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