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▶ ファイヴ プライム セラピューティクス インクの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024138284
(43)【公開日】2024-10-08
(54)【発明の名称】抗ＦＧＦＲ２抗体製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 9/08 20060101AFI20241001BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241001BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20241001BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20241001BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20241001BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20241001BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20241001BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20241001BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241001BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241001BHJP
【ＦＩ】
A61K9/08
A61K39/395 N
A61K39/395 D
A61K47/22
A61K47/12
A61K47/02
A61K47/18
A61K47/26
A61K47/34
A61P35/00
A61P43/00 111
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024098544
(22)【出願日】2024-06-19
(62)【分割の表示】P 2021517575の分割
【原出願日】2019-10-04
(31)【優先権主張番号】62/741,772
(32)【優先日】2018-10-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】515302853
【氏名又は名称】ファイヴ プライム セラピューティクス インク
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】プラド， イサイアス
(72)【発明者】
【氏名】ホアン， チン－イー
(57)【要約】 （修正有）
【課題】液体として、すぐに使用できる形態で貯蔵することができ、静脈内（ＩＶ）注入によって静脈内投与され得る抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体の製剤を提供する。
【解決手段】ｉ）１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体と、ｉｉ）ヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩のうちの１つ以上から選択される５～４０ｍＭの緩衝液と、ｉｉｉ）１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロースと、ｉｖ）０．００２％～０．１％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０とを含み、製剤が、５．０～６．５のｐＨを有する、薬学的製剤とする。
【選択図】なし
【解決手段】ｉ）１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体と、ｉｉ）ヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩のうちの１つ以上から選択される５～４０ｍＭの緩衝液と、ｉｉｉ）１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロースと、ｉｖ）０．００２％～０．１％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０とを含み、製剤が、５．０～６．５のｐＨを有する、薬学的製剤とする。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
薬学的製剤であって、
ｉ）１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体と、
ｉｉ）ヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩のうちの１つ以上から選択される５～４０ｍＭの緩衝液と、
ｉｉｉ）１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．００２％～０．１％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含み、
前記製剤が、５．０～６．５のｐＨを有し、前記抗ＦＧＦＲ２抗体が、
ａ）配列番号２の配列を含む重鎖、及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、
ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびに
ｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体、から選択される、前記薬学的製剤。
ｉ）１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体と、
ｉｉ）ヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩のうちの１つ以上から選択される５～４０ｍＭの緩衝液と、
ｉｉｉ）１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．００２％～０．１％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含み、
前記製剤が、５．０～６．５のｐＨを有し、前記抗ＦＧＦＲ２抗体が、
ａ）配列番号２の配列を含む重鎖、及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、
ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびに
ｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体、から選択される、前記薬学的製剤。
【請求項2】
前記製剤が、以下の特性：
（ａ）すぐに使用できる液体製剤である、
（ｂ）患者への投与前に凍結乾燥されない、
（ｃ）単回使用バイアル内に収容される、
（ｄ）前記製剤中のタンパク質凝集が、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に２．０％を超えて増加しない、
（ｅ）前記製剤中のタンパク質凝集が、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２．０％または２．５％を超えて増加しない、
（ｆ）前記製剤中のタンパク質凝集が、４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に７．０％を超えて増加しない、
（ｇ）前記製剤中の荷電タンパク質多様体が、５℃で６ヶ月の貯蔵後に５％を超えて変化しない、
（ｈ）前記製剤中のタンパク質凝集が、－７０℃で５回の凍結融解サイクル後に２．０％を超えて増加しない、
（ｉ）前記製剤中のタンパク質凝集が、５００ｒｐｍで７２時間の機械的ストレス後に２．０％を超えて増加しない、
（ｊ）静脈内投与の前に生理食塩水中で希釈される、
（ｋ）静脈内（例えば、静脈内注入によって）投与される、
（ｌ）ヒト血漿と等張である、のうちの１つ以上を有する、請求項１に記載の薬学的製剤。
（ａ）すぐに使用できる液体製剤である、
（ｂ）患者への投与前に凍結乾燥されない、
（ｃ）単回使用バイアル内に収容される、
（ｄ）前記製剤中のタンパク質凝集が、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に２．０％を超えて増加しない、
（ｅ）前記製剤中のタンパク質凝集が、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２．０％または２．５％を超えて増加しない、
（ｆ）前記製剤中のタンパク質凝集が、４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に７．０％を超えて増加しない、
（ｇ）前記製剤中の荷電タンパク質多様体が、５℃で６ヶ月の貯蔵後に５％を超えて変化しない、
（ｈ）前記製剤中のタンパク質凝集が、－７０℃で５回の凍結融解サイクル後に２．０％を超えて増加しない、
（ｉ）前記製剤中のタンパク質凝集が、５００ｒｐｍで７２時間の機械的ストレス後に２．０％を超えて増加しない、
（ｊ）静脈内投与の前に生理食塩水中で希釈される、
（ｋ）静脈内（例えば、静脈内注入によって）投与される、
（ｌ）ヒト血漿と等張である、のうちの１つ以上を有する、請求項１に記載の薬学的製剤。
【請求項3】
前記製剤が、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、２０～２５ｍｇ／ｍＬ、１８～２２ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体を含む、請求項１または２に記載の薬学的製剤。
【請求項4】
前記製剤が、１０～４０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、１５～２５ｍＭ、１０～２０ｍＭ、２０～３０ｍＭ、１８～２２ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２１ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、２５ｍＭ、２６ｍＭ、２７ｍＭ、２８ｍＭ、２９ｍＭ、または３０ｍＭの前記緩衝液を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項5】
前記緩衝液が、ヒスチジン緩衝液である、請求項４に記載の薬学的製剤。
【請求項6】
前記製剤が、１３０～１５０ｍＭ、１５０～１７０ｍＭ、１４０～１６０ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、または１７０ｍＭのアルギニンを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項7】
前記製剤が、スクロースを含まない、請求項６に記載の薬学的製剤。
【請求項8】
前記製剤の前記ｐＨが、５．０～７．０、５．０～６．０、５．５～６．０、５．５～６．５、５．５～５．９、５．６～５．８、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である、請求項６または７に記載の薬学的製剤。
【請求項9】
前記製剤の前記ｐＨが、５．５～５．９、５．６～５．８、５．６、５．７、５．８、５．９、または６．０である、請求項８に記載の薬学的製剤。
【請求項10】
前記製剤が、２６０～２８０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、または２９０ｍＭのスクロースを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項11】
前記製剤が、アルギニンを含まない、請求項８に記載の薬学的製剤。
【請求項12】
前記製剤の前記ｐＨが、５．０～７．０、５．０～６．０、５．５～６．０、５．５～５．９、５．６～５．８、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である、請求項１０または１１に記載の薬学的製剤。
【請求項13】
前記製剤の前記ｐＨが、５．８～６．２、５．９～６．１、５．９、６．０、または６．１である、請求項１２に記載の薬学的製剤。
【請求項14】
前記製剤が、０．０１～０．１％、０．００５～０．０５％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート２０または８０を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項15】
前記製剤が、０．０１～０．１％、０．００５～０．０５％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート２０を含む、請求項１４に記載の薬学的製剤。
【請求項16】
前記製剤が、抗ＦＧＦＲ２抗体；クエン酸塩、リン酸塩、またはヒスチジン緩衝液；アルギニンまたはスクロース；及びポリソルベート２０または８０から本質的になる、請求項１～１５のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項17】
前記製剤が、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、アルギニンまたはスクロース、及びポリソルベート２０から本質的になる、請求項１６に記載の薬学的製剤。
【請求項18】
抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体の薬学的製剤であって、前記製剤が、
ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）１４０～１６０ｍＭのアルギニンと、
ｉｖ）０．００５％～０．０５％のポリソルベート２０と、を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、
前記製剤が、５．６～５．８のｐＨを有する、前記薬学的製剤。
ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）１４０～１６０ｍＭのアルギニンと、
ｉｖ）０．００５％～０．０５％のポリソルベート２０と、を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、
前記製剤が、５．６～５．８のｐＨを有する、前記薬学的製剤。
【請求項19】
抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体の薬学的製剤であって、前記製剤が、
ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）１５０ｍＭのアルギニンと、
ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０と、を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、
前記製剤が、５．７のｐＨを有する、前記薬学的製剤。
ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）１５０ｍＭのアルギニンと、
ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０と、を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、
前記製剤が、５．７のｐＨを有する、前記薬学的製剤。
【請求項20】
抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体の薬学的製剤であって、
ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）２０ｍＭのＬ－ヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）１５０ｍＭのＬ－アルギニンと、
ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０と、を含み、
前記製剤が、５．７のｐＨを有し、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である、前記薬学的製剤。
ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）２０ｍＭのＬ－ヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）１５０ｍＭのＬ－アルギニンと、
ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０と、を含み、
前記製剤が、５．７のｐＨを有し、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である、前記薬学的製剤。
【請求項21】
前記製剤が、前記抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、アルギニン、及びポリソルベート２０から本質的になる、請求項１８、１９、または２０に記載の薬学的製剤。
【請求項22】
抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体の薬学的製剤であって、前記製剤が、
ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）２６０～２８０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．００５％～０．０５％のポリソルベート２０と、を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、
前記製剤が、５．８～６．２のｐＨを有する、前記薬学的製剤。
ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）２６０～２８０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．００５％～０．０５％のポリソルベート２０と、を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、
前記製剤が、５．８～６．２のｐＨを有する、前記薬学的製剤。
【請求項23】
抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体の薬学的製剤であって、前記製剤が、
ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）２７０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０と、を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、
前記製剤が、６．０のｐＨを有する、前記薬学的製剤。
ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）２７０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０と、を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、
前記製剤が、６．０のｐＨを有する、前記薬学的製剤。
【請求項24】
抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体の薬学的製剤であって、
ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）２０ｍＭのＬ－ヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）２７０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０と、を含み、
前記製剤が、６．０のｐＨを有し、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である、前記薬学的製剤。
ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体と、
ｉｉ）２０ｍＭのＬ－ヒスチジン緩衝液と、
ｉｉｉ）２７０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０と、を含み、
前記製剤が、６．０のｐＨを有し、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である、前記薬学的製剤。
【請求項25】
前記製剤が、前記抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、スクロース、及びポリソルベート２０から本質的になる、請求項２２、２３、または２４に記載の薬学的製剤。
【請求項26】
前記抗ＦＧＦＲ２抗体が、
ａ）配列番号２の配列を含む重鎖、及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、
ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびに
ｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体、から選択される、請求項１８～２５のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
ａ）配列番号２の配列を含む重鎖、及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、
ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびに
ｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体、から選択される、請求項１８～２５のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項27】
前記製剤が、以下の特性：
（ａ）単回使用バイアル内に収容される、
（ｂ）前記製剤中のタンパク質凝集が、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に２．０％を超えて増加しない、
（ｃ）前記製剤中のタンパク質凝集が、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２．０％または２．５％を超えて増加しない、
（ｄ）前記製剤中のタンパク質凝集が、４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に７．０％を超えて増加しない、
（ｅ）前記製剤中の荷電タンパク質多様体が、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に５％を超えて変化しない、
（ｆ）前記製剤中のタンパク質凝集が、－７０℃で５回の凍結融解サイクル後に２．０％を超えて増加しない、
（ｇ）前記製剤中のタンパク質凝集が、５００ｒｐｍで７２時間の機械的ストレス後に２．０％を超えて増加しない、
（ｈ）静脈内投与の前に生理食塩水中で希釈する、
（ｉ）（例えば、ＩＶ注入によって）静脈内投与される、及び
（ｊ）ヒト血漿と等張である、のうちの１つ以上を有する、請求項１８～２６のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
（ａ）単回使用バイアル内に収容される、
（ｂ）前記製剤中のタンパク質凝集が、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に２．０％を超えて増加しない、
（ｃ）前記製剤中のタンパク質凝集が、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２．０％または２．５％を超えて増加しない、
（ｄ）前記製剤中のタンパク質凝集が、４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に７．０％を超えて増加しない、
（ｅ）前記製剤中の荷電タンパク質多様体が、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に５％を超えて変化しない、
（ｆ）前記製剤中のタンパク質凝集が、－７０℃で５回の凍結融解サイクル後に２．０％を超えて増加しない、
（ｇ）前記製剤中のタンパク質凝集が、５００ｒｐｍで７２時間の機械的ストレス後に２．０％を超えて増加しない、
（ｈ）静脈内投与の前に生理食塩水中で希釈する、
（ｉ）（例えば、ＩＶ注入によって）静脈内投与される、及び
（ｊ）ヒト血漿と等張である、のうちの１つ以上を有する、請求項１８～２６のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項28】
前記製剤が、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、２０～２５ｍｇ／ｍＬ、１８～２２ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／ｍＬの前記抗ＦＧＦＲ２抗体を含む、請求項１８～１９、２１～２３、または２５～２７のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項29】
前記製剤が、スクロース以外の糖、糖アルコール、抗ＦＧＦＲ２抗体以外のタンパク質種、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０以外の界面活性剤、アルギニン及びヒスチジン以外のアミノ酸、Ｃｕ２＋、Ｍｇ２＋、及びＭｎ２＋のうちの１つ以上を含まない、請求項１～２８のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項30】
前記製剤が、単回使用バイアル内に収容される、請求項１～２９のいずれか１項に記載の薬学的製剤。
【請求項31】
固形腫瘍の治療を必要とする患者において固形腫瘍を治療する方法であって、有効量の請求項１～３０のいずれか１項に記載の製剤を前記患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項32】
前記製剤が、前記患者に（例えば、静脈内注入によって）静脈内投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記抗ＦＧＦＲ２抗体が、アフコシル化される、請求項１～３２のいずれか１項に記載の薬学的製剤または方法。
【請求項34】
前記抗ＦＧＦＲ２抗体が、抗原結合断片、例えば、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、または（Ｆａｂ′）２である、請求項１～３２のいずれか１項に記載の薬学的製剤または方法。
【請求項35】
前記抗体が、キメラ、ヒト化、またはヒトである、請求項１～３４のいずれか１項に記載の薬学的製剤または方法。
【請求項36】
前記抗体が、二重特異性、多重特異性、またはコンジュゲートである、請求項１～３５のいずれか１項に記載の薬学的製剤または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、２０１８年１０月５日に出願された米国仮特許出願第６２／７４１，７７２号の優先権の利益を主張し、参照によりその全体が組み込まれる。
【0002】
本開示は、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体などの抗ＦＧＦＲ２（線維芽細胞増殖因子受容体２）抗体のための製剤に関し、いくつかの実施形態では、液体として長期間、例えばすぐに使用できる形態で貯蔵することができ、いくつかの実施形態では、例えば静脈内（ＩＶ）注入によって静脈内投与され得る。
【背景技術】
【0003】
本開示は、ＦＧＦＲ２に結合する抗体の特定の製剤、例えば、スプライス形態のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ（線維芽細胞増殖因子受容体２ ＩＩＩｂ）に関する。ＦＧＦＲ２は、４つのＦＧＦＲタンパク質（ＦＧＦＲ１、２、３、及び４）のうちの１つである。ＦＧＦＲは、それらのｍＲＮＡの複数の代替スプライシングによって特徴付けられ、様々なアイソフォームをもたらす（Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１５２９２，１９９６、ＦＧＦＲ２及びそのアイソフォームの配列については、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｐ２１８０２及びアイソフォームＰ２１８０２－１～－２０も参照）。ＦＧＦＲ２に関して、代替スプライシングは、例えば、アイソフォームＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ（または単なるＦＧＦＲ２ｂ及びＦＧＦＲ２ｃ）をもたらす。ＦＧＦＲ２のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ形態（Ｋ－ｓａｍ－ＩＩとも称される）は、ＦＧＦ１及びＫＧＦファミリーメンバー（ＦＧＦ７、ＦＧＦ１０、及びＦＧＦ２２）の両方に対する高親和性受容体である一方で、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ（Ｋ－ｓａｍ－Ｉとも称される）は、ＦＧＦ１及びＦＧＦ２の両方に十分に結合するが、ＫＧＦファミリーメンバーには結合しない（Ｍｉｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：２４６，１９９２）。ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂは、ＫＧＦファミリーメンバーの唯一の受容体であり（Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９６，同前）、したがってＫＧＦＲとも称される。
【0004】
ＦＧＦＲ２の阻害剤は、抗体を含み得る。例えば、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号は、例えば、ヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合するが、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃにはそれほど十分に結合しない、または結合しない、及びその逆のモノクローナル抗体を記載している。米国特許公開第２０１５－００５０２７３Ａ１号は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合するある特定のアフコシル化抗体を記載している。本開示は、例えば、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号及び米国特許公開第２０１５－００５０２７３Ａ１号に記載される抗体に使用され得る製剤を記載している。
【0005】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２抗体が液体製剤の形態で調製され、数ヶ月の貯蔵後に安定したままであり、例えばＩＶ注入によって静脈内投与されることを可能にする製剤条件が、本明細書で特定されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】米国特許第８，１０１，７２３号明細書
【特許文献2】米国特許出願公開第２０１５／００５０２７３号明細書
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１５２９２，１９９６
【非特許文献2】Ｍｉｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：２４６，１９９２
【発明の概要】
【0008】
本開示は、例えば、ｉ）１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗体、ｉｉ）５～４０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩のうちの１つ以上から選択される緩衝液、ｉｉｉ）１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、及びｉｖ）０．００２％～０．１％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む、抗ＦＧＦＲ２抗体の薬学的製剤を包含し、製剤は、５．０～６．５のｐＨを有し、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ａ）配列番号２の配列を含む重鎖及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびにｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体から選択される。いくつかの実施形態では、製剤は、以下の特性のうちの１つ以上を有する：（ａ）すぐに使用できる液体製剤である、（ｂ）患者への投与前に凍結乾燥されない、（ｃ）単回使用バイアル内に収容される、（ｄ）製剤中のタンパク質凝集は、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に２．０％を超えて増加しない、（ｅ）製剤中のタンパク質凝集は、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２．０％または２．５％を超えて増加しない、（ｆ）製剤中のタンパク質凝集は、４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に７．０％を超えて増加しない、（ｇ）製剤中の荷電タンパク質多様体は、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に５％を超えて変化しない、（ｈ）製剤中のタンパク質凝集は、－７０℃で５回の凍結融解サイクル後に２．０％を超えて増加しない、（ｉ）製剤中のタンパク質凝集は、５００ｒｐｍで７２時間の機械的ストレス後に２．０％を超えて増加しない、（ｊ）静脈内投与前に生理食塩水溶液中で希釈される、（ｋ）（例えば、静脈内注入によって）静脈内投与される、及び（ｌ）ヒト血漿と等張性である。
【0009】
場合によっては、上記製剤は、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、２０～２５ｍｇ／ｍＬ、１８～２２ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体を含む。場合によっては、製剤は、１０～４０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、１５～２５ｍＭ、１０～２０ｍＭ、２０～３０ｍＭ、１８～２２ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２１ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、２５ｍＭ、２６ｍＭ、２７ｍＭ、２８ｍＭ、２９ｍＭ、または３０ｍＭの緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、緩衝液は、ヒスチジン緩衝液である。いくつかの実施形態では、製剤は、１３０～１５０ｍＭ、１５０～１７０ｍＭ、１４０～１６０ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、または１７０ｍＭのアルギニンを含む。場合によっては、アルギニンを含む製剤は、スクロースを含まない。いくつかの実施形態では、アルギニンを含む製剤のｐＨは、５．０～７．０、５．０～６．０、５．５～６．０、５．５～６．５、５．５～５．９、５．６～５．８、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である。場合によっては、製剤のｐＨは、５．５～５．９、５．６～５．８、５．６、５．７、５．８、５．９、または６．０である。いくつかの実施形態では、製剤は、２６０～２８０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、２９０ｍＭのスクロースを含む。いくつかのそのような場合には、スクロースを含む製剤は、アルギニンを含まない。いくつかの実施形態では、スクロースを含む製剤のｐＨは、５．０～７．０、５．０～６．０、５．５～６．０、５．５～５．９、５．６～５．８、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨは、５．８～６．２、５．９～６．１、５．９、６．０、または６．１である。
【0010】
上記製剤のうちのいずれかはまた、０．０１～０．１％、０．００５～０．０５％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート２０または８０を含み得る。場合によっては、製剤は、０．０１～０．１％、０．００５～０．０５％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート２０を含む。
【0011】
いくつかの実施形態では、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体；クエン酸塩、リン酸塩、またはヒスチジン緩衝液；アルギニンまたはスクロース；及びポリソルベート２０または８０から本質的になる。いくつかのそのような場合には、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、アルギニンまたはスクロース、及びポリソルベート２０から本質的になる。
【0012】
本開示はまた、例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体の薬学的製剤を含み、製剤は、ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、ｉｉ）１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｉｉｉ）１４０～１６０ｍＭのアルギニン、及びｉｖ）０．００５％～０．０５％のポリソルベート２０を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、製剤は、５．６～５．８のｐＨを有する。本開示はまた、例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体の薬学的製剤を含み、製剤は、ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、ｉｉ）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｉｉｉ）１５０ｍＭのアルギニン、及びｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、製剤は、５．７のｐＨを有する。本明細書の実施形態は、ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、ｉｉ）２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、ｉｉｉ）１５０ｍＭのＬ－アルギニン、ｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０を含む、抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体の薬学的製剤をさらに含み、薬学的製剤は、５．７のｐＨを有し、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である。これらの場合のいずれにおいても、いくつかの実施形態では、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、アルギニン、及びポリソルベート２０から本質的になる。いくつかのそのような実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ａ）配列番号２の配列を含む重鎖及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびにｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体から選択され得る。上記の薬学的製剤は、以下の特性のうちの１つ以上を有し得る：（ａ）単回使用バイアル内に収容される、（ｂ）製剤中のタンパク質凝集は、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に２．０％を超えて増加しない、（ｃ）製剤中のタンパク質凝集は、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２．０％または２．５％を超えて増加しない、（ｄ）製剤中のタンパク質凝集は、４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に７．０％を超えて増加しない、（ｅ）製剤中の荷電タンパク質多様体は、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に５％を超えて変化しない、（ｆ）製剤中のタンパク質凝集は、－７０℃で５回の凍結融解サイクル後に２．０％を超えて増加しない、（ｇ）製剤中のタンパク質凝集は、５００ｒｐｍで７２時間の機械的ストレス後に２．０％を超えて増加しない、（ｈ）静脈内投与前に生理食塩水溶液中で希釈される、（ｉ）（例えば、静脈内注入によって）静脈内投与される、及び（ｊ）ヒト血漿と等張性である。１０～２５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む上記の薬学的製剤は、より具体的には、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、２０～２５ｍｇ／ｍＬ、１８～２２ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体を含み得る。
【0013】
本開示はまた、例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体の薬学的製剤を含み、製剤は、ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、ｉｉ）１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｉｉｉ）２６０～２８０ｍＭのスクロース、及びｉｖ）０．００５％～０．０５％のポリソルベート２０を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、製剤は、５．８～６．２のｐＨを有する。本開示はまた、例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体の薬学的製剤を含み、製剤は、ｉ）１０～２５ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、ｉｉ）２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｉｉｉ）２７０ｍＭのスクロース、及びｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０を含む、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤であり、製剤は、６．０のｐＨを有する。さらなる実施形態では、薬学的製剤は、ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、ｉｉ）２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、ｉｉｉ）２７０ｍＭのスクロース、及びｉｖ）０．０１％のポリソルベート２０を含んでよく、製剤は、６．０のｐＨを有し、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である。いくつかのそのような実施形態では、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、スクロース、及びポリソルベート２０から本質的になる。いくつかのそのような実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ａ）配列番号２の配列を含む重鎖及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびにｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体から選択され得る。上記の薬学的製剤は、以下の特性のうちの１つ以上を有し得る：（ａ）単回使用バイアル内に収容される、（ｂ）製剤中のタンパク質凝集は、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に２．０％を超えて増加しない、（ｃ）製剤中のタンパク質凝集は、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２．０％または２．５％を超えて増加しない、（ｄ）製剤中のタンパク質凝集は、４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に７．０％を超えて増加しない、（ｅ）製剤中の荷電タンパク質多様体は、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に５％を超えて変化しない、（ｆ）製剤中のタンパク質凝集は、－７０℃で５回の凍結融解サイクル後に２．０％を超えて増加しない、（ｇ）製剤中のタンパク質凝集は、５００ｒｐｍで７２時間の機械的ストレス後に２．０％を超えて増加しない、（ｈ）静脈内投与前に生理食塩水溶液中で希釈される、（ｉ）（例えば、静脈内注入によって）静脈内投与される、及び（ｊ）ヒト血漿と等張性である。１０～２５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む上記の薬学的製剤は、より具体的には、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、２０～２５ｍｇ／ｍＬ、１８～２２ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体を含み得る。
【0014】
本開示のいくつかの実施形態では、薬学的製剤は、スクロース以外の糖、糖アルコール、抗ＦＧＦＲ２抗体以外のタンパク質種、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０以外の界面活性剤、アルギニン及びヒスチジン以外のアミノ酸、Ｃｕ２＋、Ｍｇ２＋、及びＭｎ２＋のうちの１つ以上を含まない場合がある。本開示の任意の実施形態では、製剤は、単回使用バイアル内に収容され得る。
【0015】
本開示はまた、有効量の本明細書の薬学的製剤を患者に投与することを含む、固形腫瘍の治療を必要とする患者においてそれを行う方法を包含する。いくつかの実施形態では、製剤は、患者に（例えば、静脈内注入によって）静脈内投与される。
【0016】
本明細書の製剤のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、任意にアフコシル化され得る。本明細書の製剤のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、全長抗体であり得るか、またはＦｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、または（Ｆａｂ′）２などの抗原結合断片であり得る。本明細書の製剤のいずれにおいても、抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒトであり得る。本明細書の製剤のいずれにおいても、抗体は、二重特異性、多重特異性、またはコンジュゲートであり得る。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】異なる濃度パーセントの過酸化水素（０．０１％、０．１％、及び１．０％ならびに０％（対照））で抗体をインキュベートした後の、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイにおける、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体のＦＧＦＲ２ＩＩＩｂまたはタンパク質Ａへの平均結合を示す。抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の過酸化水素でのインキュベーションは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂへの結合に干渉しなかったが、タンパク質Ａの結合にある程度干渉した。
【図2】ｐＨ４．０、５．０、及び６．０の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体のクエン酸塩／ＮａＣｌ製剤の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。データは、この範囲での製剤の展開温度が、ｐＨとともに増加することを示す。
【図3】以下の実施例５で考察されるように、ｐＨ４、５、６、７、及び８における抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体スクリーニング試料のサイズ排除高性能液体クロマトグラフィーＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図4】ｐＨ４～８の範囲のＳＥ－ＨＰＬＣによって決定された、及び４０℃で０～２ヶ月の貯蔵期間にわたる凝集体形成に対する（クエン酸塩またはリン酸塩ＮａＣｌ緩衝液中の）緩衝液ｐＨの影響を示す。図は、他のｐＨと比較して、ｐＨ４における凝集体の大きな％増加を示す。
【図5】ｐＨ４～８の範囲のＳＥ－ＨＰＬＣによって決定された、及び４０℃で０～２ヶ月の貯蔵期間にわたるクリップ（断片）形成に対する（クエン酸塩またはリン酸塩ＮａＣｌ緩衝液中の）緩衝液ｐＨの影響を示す。図は、他のｐＨと比較して、ｐＨ４におけるクリップ形成の大きな％増加を示す。
【図6】ｐＨ４～８の範囲のＳＥ－ＨＰＬＣによって決定された、及び２５℃で０～２ヶ月の貯蔵期間にわたる凝集体形成に対する（クエン酸塩またはリン酸塩ＮａＣｌ緩衝液中の）緩衝液ｐＨの影響を示す。図は、ｐＨ８製剤を除いて、この期間にわたって全ての製剤が一般に３．０％未満の凝集体を含んでおり、その凝集体は、２ヶ月間の貯蔵にわたって約２．５％～約４％に増加したことを示す。
【図7】ｐＨ４～８の範囲のＳＥ－ＨＰＬＣによって決定された、及び２５℃で０～２ヶ月の貯蔵期間にわたるクリップ（断片）形成に対する（クエン酸塩またはリン酸塩ＮａＣｌ緩衝液中の）緩衝液ｐＨの影響を示す。図は、０．５％未満のクリップのままである他のｐＨと比較してｐＨ４でのクリップの１．５％近くまで増加したことを示している。
【図8】荷電多様体プロファイルを評価するための抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ製剤の代表的な弱カチオン交換（ＷＣＸ）－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図9】ｐＨ４～８の範囲のＷＣＸ－ＨＰＬＣによって決定された、及び２５℃で０～２ヶ月の貯蔵期間にわたる酸性多様体形成に対する（クエン酸塩またはリン酸塩ＮａＣｌ緩衝液中の）緩衝液ｐＨの影響を示す。ｐＨ８製剤において酸性多様体の比較的大きな％増加があり、ｐＨ７製剤は、次に最大の％増加を示した。
【図10】ｐＨ４～８の範囲のＷＣＸ－ＨＰＬＣによって決定された、及び２５℃で０～２ヶ月の貯蔵期間にわたる塩基性多様体形成に対する（クエン酸塩またはリン酸塩ＮａＣｌ緩衝液中の）緩衝液ｐＨの影響を示す。ｐＨ８製剤において塩基性多様体の比較的大きな％減少があり、ｐＨ７製剤は、次に最大の％減少を示した。最も小さい％変化は、ｐＨ４で観察された。
【図11】ｐＨ４～８の範囲のＷＣＸ－ＨＰＬＣクロマトグラムにおける、及び２５℃で０～２ヶ月の貯蔵期間にわたるメインピークのサイズに対する（クエン酸塩またはリン酸塩ＮａＣｌ緩衝液中の）緩衝液ｐＨの影響を示す。メインピークの最大％変化が、ｐＨ４及びｐＨ８製剤において観察され、ｐＨ５及びｐＨ６及びｐＨ７製剤において最小％変化が観察された。
【図12】５００ｒｐｍで７２時間振盪した後の、以下の表８に示される７つの抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ製剤の溶液の外観を示す。
【図13】７０℃～周囲温度で５回の凍結融解サイクルに対する抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ安定性に対する賦形剤の影響を示す。製剤は、表８に提供されるとおりである。ヒスチジン／ＮａＣｌ製剤（表８の４番）のみが、複数の凍結融解サイクルで凝集体の増加を示すように見えた。
【図14】ＳＥ－ＨＰＬＣによって決定されるように、４０℃で１ヶ月間にわたる抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ凝集体形成に対する緩衝液及びバルキング剤の影響を示す。
【図15】ＳＥ－ＨＰＬＣによって決定されるように、４０℃で３ヶ月間にわたる抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ凝集体形成に対する緩衝液及びバルキング剤の影響を示す。
【図16】ＷＣＸ－ＨＰＬＣによって決定される、２５℃での３ヶ月間にわたる抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ酸性多様体形成に対する緩衝液及びバルキング剤の影響を示す。
【図17】２５℃で３ヶ月間にわたるメインＷＣＸ－ＨＰＬＣピークのサイズに対する緩衝液及びバルキング剤の影響を示す。
【図18】２５℃で３ヶ月間にわたるメインＷＣＸ－ＨＰＬＣピークのサイズに対する緩衝液及びバルキング剤の影響を示す。
【図19】ＳＥ－ＨＰＬＣによる凝集体の分析によって決定される、ｐＨ５．５～６．５のヒスチジン／アルギニンまたはヒスチジン／スクロース抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体製剤に対する７２時間にわたる機械的ストレスの影響を示す。
【図20】ＳＥ－ＨＰＬＣによるクリップ（断片）の分析によって決定される、ｐＨ５．５～６．５のヒスチジン／アルギニンまたはヒスチジン／スクロース抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体製剤に対する７２時間にわたる機械的ストレスの影響を示す。
【図21】ＳＥ－ＨＰＬＣによる凝集体の分析によって決定される、ｐＨ５．５～６．５でのヒスチジン／アルギニンまたはヒスチジン／スクロース抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体製剤に対する－７０℃～周囲温度での５サイクルの凍結融解の影響を示す。
【図22】ＳＥ－ＨＰＬＣによるクリップ（断片）の分析によって決定される、ｐＨ５．５～６．５でのヒスチジン／アルギニンまたはヒスチジン／スクロース抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体製剤に対する－７０℃～周囲温度での５サイクルの凍結融解の影響を示す。
【図23】２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのアルギニン、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／アルギニン製剤中の凝集体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、凝集体％が概して３％未満のままであったことを示す、凝集体形成を示す。Ｂは、ｐＨ５．５～６．０において、２５℃で３ヶ月後、凝集体％が概して２．５％未満のままであったことを示す、凝集体形成を示す。Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、凝集体％が概して約１．５％及び２％未満のままであったことを示す、凝集体形成を示す。
【図24】２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのアルギニン、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／アルギニン製剤中のクリップ（断片）に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。Ａは、全てのｐＨにおいて、４０℃で１ヶ月後、％クリップがｐＨ６で概して約１％または１％未満のままであったことを示す、クリップ（断片）形成を示す。Ｂは、全てのｐＨにおいて、２５℃で３ヶ月後、％クリップが概して１．５％未満のままであったことを示す、クリップ形成を示す。Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％クリップが概して１％未満のままであり、ｐＨ５．７または６．０での製剤中の％クリップが概して０．５％未満のままであったことを示す、クリップ形成を示す。
【図25】２０ｍＭのヒスチジン、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／スクロース製剤中の凝集体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。図２５Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、％凝集体が概して４％未満のままであり、ｐＨ６．０及び６．３では３％未満であり、ｐＨ５．５及び５．７では約２．５％であることを示す、凝集体形成を示す。Ｂは、ｐＨ５．５～５．７において、２５℃で３ヶ月後、％凝集体が概して２．０％未満のままであり、ｐＨ６．０において、％凝集体が２．５％未満のままであることを示す、凝集体形成を示す。Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％凝集体が概して約１．５％及び２％未満のままであったことを示す、凝集体形成を示す。
【図26】２０ｍＭのヒスチジン、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／スクロース製剤中のクリップ（断片）に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。Ａは、全てのｐＨにおいて、４０℃で１ヶ月後、％クリップが概して２％未満またはｐＨ５．５～６．３において１．５％未満のままであったことを示す、クリップ（断片）形成を示す。Ｂは、全てのｐＨにおいて、２５℃で３ヶ月後、％クリップが概して３．５％未満のままであったが、そのクリップ形成が、ｐＨ５．５製剤に関して１、２、及び３ヶ月で最も低いパーセンテージ、ならびにｐＨ６．３製剤に関しては毎月最も高いパーセンテージでｐＨ依存性であることを示す、クリップ形成を示す。Ｃは、６．０以下のｐＨで、５℃で６ヶ月後、％クリップが概して１％未満のままであることを示す、クリップ形成を示す。
【図27】２０ｍＭのヒスチジン、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／スクロース製剤中の酸性多様体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、酸性多様体％が概して４０％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。Ｂは、ｐＨ５．５～６．０において、２５℃で３ヶ月後、酸性多様体％が概して３０．０％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％酸性多様体が概して２５％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。
【図28】２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのアルギニン、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／アルギニン製剤中の酸性多様体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、酸性多様体％が概して４０％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。Ｂは、ｐＨ５．５～６．０において、２５℃で３ヶ月後、酸性多様体％が概して３０．０％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％酸性多様体が概して２５％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。
【図29】２０ｍＭのヒスチジン、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／スクロース製剤中の塩基性多様体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、％塩基性多様体がほとんど１０％～２０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。Ｂは、ｐＨ５．５～６．０において、２５℃で３ヶ月後、％塩基性多様体が概して２０％～３０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％塩基性多様体が概して２５％～３０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。
【図30】２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのアルギニン、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／アルギニン製剤中の塩基性多様体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、％塩基性多様体がほとんど１０％～２０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。Ｂは、ｐＨ５．５～６．０において、２５℃で３ヶ月後、％塩基性多様体が概して１５％～２５％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。図３０Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％塩基性多様体が概して２５％～３０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。
【0018】
上記の図のさらなる詳細については、本明細書の実施例セクションを参照されたい。
【発明を実施するための形態】
【0019】
本明細書で使用されるセクション見出しは、単なる組織的目的のためであり、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。特許出願及び刊行物を含む本明細書に引用される全ての参照文献は、任意の目的のために参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
【0020】
定義
別様に定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって別段の必要がない限り、単数形の用語は複数を含み、複数形の用語は単数を含むものとする。
別様に定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって別段の必要がない限り、単数形の用語は複数を含み、複数形の用語は単数を含むものとする。
【0021】
本出願において、「または」の使用は、特に明記しない限り、「及び／または」を意味する。複数の従属請求項の文脈において、「または」の使用は、代替案においてのみ、２つ以上の先行する独立または従属請求項を指す。また、「要素」または「構成要素」などの用語は、特に明記しない限り、１つのユニットを含む要素及び構成要素、ならびに２つ以上のサブユニットを含む要素及び構成要素の両方を包含する。
【0022】
本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲または整数範囲は、別段の指示がない限り、列挙される範囲内の任意の整数の値、及び適切な場合、その端数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）を含むと理解されるべきである。
【0023】
単位、接頭辞、及び記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）により受け入れられる形式で表される。数値範囲には、範囲を定義する数値が含まれる。測定値は、有意な桁と測定に関連する誤差を考慮して、おおよその値であると理解される。
【0024】
本明細書に提供される見出しは、本明細書全体を参照することによって有することができ、本開示の様々な態様の制限ではない。したがって、直下に定義される用語は、本明細書全体を参照することによってより完全に定義される。
【0025】
本開示に従って利用される場合、以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【0026】
「投与すること」は、当業者に既知の様々な方法及び送達系のうちのいずれかを使用して、治療剤を含む組成物を対象に物理的に導入することを指す。抗体の一般的な投与経路としては、例えば、注射または注入による静脈内（ＩＶ）、筋肉内、皮下（ＳＣ）、腹腔内、脊髄、または他の非経口投与経路が挙げられる。本明細書で使用される場合、「非経口投与」という語句は、腸内及び局所投与以外、通常、注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、リンパ内、病変内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、胸骨内注射及び注入、ならびにインビボ電気穿孔を含むが、これらに限定されない。非－非経口経路としては、例えば、経口、鼻腔内、膣、直腸、舌下、または局所等の局所、表皮、または粘膜投与経路が挙げられる。投与はまた、例えば、１回、複数回、及び／または１つ以上の延長期間にわたって行うこともできる。
【0027】
本明細書で使用される「薬学的製剤」または「治療製剤」は、薬学的使用、例えば、直接あるいは少なくとも１つのさらなる組成物で再構成、希釈、混合、もしくは溶解された後、または凍結状態から融解された後のいずれかによる患者への投与など、好適な抗体などの治療剤を含む組成物を指す。本明細書で使用される場合、「すぐに使用できる」製剤は、患者に直接投与することができるため、投与前に希釈する、再構成する、凍結状態から融解する、溶液中に溶解する、または他の成分と混合する必要がない製剤を意味する。
【0028】
本明細書で使用される場合、「皮下投与」は、皮膚の下に治療薬を投与することを指す。場合によっては、皮下投与（略してＳＣまたはＳｕｂＱ）は、シリンジもしくはポンプに接続された針を使用して、または特殊なタイプのインジェクタデバイス（例えば、ＥｐｉＰｅｎ（登録商標）等）を使用して行うことができる。場合によっては、ＳＣ投与は、皮膚層と筋肉層との間の組織内に、場合によっては筋肉層内に治療薬を放出し得る。
【0029】
本明細書で使用される場合、「注射可能」製剤は、ＳＣ注射による投与に好適な製剤である。
【0030】
本明細書で使用される場合、「静脈内投与」は、対象の静脈に治療薬を直接投与することを指す。静脈内投与は、「静脈内注入」によるものであり得る。注入とは、患者に治療薬を提供するために重力によって供給される圧力の使用を指す。
【0031】
本明細書の製剤は、「バイアル」に収容され得る。本明細書における「バイアル」は、液体薬学的製剤を保持するのに好適な任意の小さな容器を指す。場合によっては、「バイアル」は、シリンジまたはポンプに接続されてもよく、または「バイアル」は、例えば、バイアルの内容物を患者に注射するための投与デバイスの一部であってもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、「単回使用バイアル」に含まれ得る。「単回使用バイアル」は、内容物が投与された後、バイアル全体またはバイアルの残りの内容物が廃棄される「バイアル」を指す。
【0032】
「凍結乾燥された」という用語は、製剤、材料、または組成物に適用される場合、凍結乾燥された製剤、材料、または組成物を指す。
【0033】
本明細書で使用される場合、「液体製剤」という用語は、例えば、溶液または液体エマルジョンを含む、液体状態にある製剤を意味する。
【0034】
本明細書で使用される場合、「緩衝液」は、溶液または製剤に添加されるとき、希釈時または酸性もしくは塩基性成分の添加時のｐＨの著しい変化に抵抗する物質である。本明細書における例示的な緩衝液は、ヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸緩衝液を含む。
【0035】
本明細書で言及される「等張性」製剤は、製剤が導入されるヒト体液、またはヒト血漿もしくはヒトリンパ液などの投与領域に存在するヒト体液とほぼ同等の浸透圧を有する製剤である。
【0036】
本明細書で使用される製剤中の「凝集」または「タンパク質凝集」は、製剤中のポリペプチド分子の凝集を指す。二量体または多量体などの凝集状態にある製剤中のポリペプチドの量は、例えば、製剤の総ポリペプチド含有量のパーセンテージとして表され得る。凝集は、例えば、サイズまたは分子量に基づいて溶液中のタンパク質を分離するサイズ排除クロマトグラフィーまたは他の技法によって検出され得る。そのような技法では、「凝集体」の量は、製剤の主要ポリペプチド種（例えば、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体）の少なくとも２倍の分子量を有する製剤中のポリペプチドの量に等しくてもよい。製剤の主要ポリペプチド種の２倍の分子量を有する種は、本明細書において「二量体」と見なされ得る一方で、二量体の分子量よりも大きい分子量を有する検出可能な種は、「より高い分子量の凝集体」または「多量体」または同様の用語と称され得る。
【0037】
本明細書における製剤の貯蔵を指す場合、「暗所中で」という語句は、製剤が周囲光及び紫外線への曝露から保護されるように貯蔵されることを意味する。例えば、製剤は、暗い部屋もしくは空間に、またはそのような光から製剤を保護するパッケージ内に、またはそのような光から内容物を保護する材料で作製される壁を有するか、もしくは該材料で覆われるバイアル内に貯蔵され得る。
【0038】
本明細書のいくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１つ以上のタイプの賦形剤または成分を「含まない」。この文脈において「含まない」という表現は、除外された成分が、例えば、他の意図的に添加された成分に見られる汚染または不純物のために、微量レベルを超えて存在しないことを意味する。
【0039】
本明細書における製剤の成分の混合物を指す場合、「から本質的になる」という用語は、明示的に列挙されるもの以外の成分が存在し得るが、そのような成分は、タンパク質濃度、粘度、熱安定性、浸透圧濃度、及びｐＨを含む配合物の基本的な特徴が変化しないように、微量またはそうでなければ十分に低い量でのみ見出されることを示す。
【0040】
「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すように互換的に使用され、最小長さに限定されない。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然アミノ酸残基を含有し得、限定されないが、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体、及び多量体を含む。全長タンパク質及びその断片の両方が、定義に包含される。これらの用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化等も含む。さらに、本発明の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加、及び置換（概して保存的性質）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発を介して意図的であってもよく、または例えばＰＣＲ増幅に起因するタンパク質またはエラーを産生する宿主の突然変異を介して偶発的であってもよい。
【0041】
「ＦＧＦＲ２」は、非ヒトＦＧＦＲ２が明示的に示されない限り（例えば、「マウスＦＧＦＲ２」）、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ及びＩＩＩｃスプライス形態などのその代替スプライス形態のうちのいずれかを含むヒト線維芽細胞増殖因子受容体２を指す。ＦＧＦＲ２という用語は、野生型ＦＧＦＲ２、及びいくつかのがん細胞に見られる、ＦＧＦＲ２活性化突然変異体形態、例えばＦＧＦＲ２－Ｓ２５２Ｗなどの天然に存在する突然変異体形態を包含する。「ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ」または「ＦＧＦＲ２ｂ」は、線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｂスプライス形態を指すように互換的に使用される。例示的なヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂは、２０１３年７月７日付けのＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０７５２５９．４に示される。非限定的な例示的成熟ヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂアミノ酸配列を、配列番号１に示す。「ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ」または「ＦＧＦＲ２ｃ」は、線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｃスプライス形態を指すように互換的に使用される。例示的なヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃは、２０１３年７月７日付けのＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３２．３に示される。非限定的な例示的成熟ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃアミノ酸配列を、配列番号１３に示す。
【0042】
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体に関して、リガンドの「結合をブロックする」または「結合を阻害する」という用語は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂとＦＧＦＲ２リガンド、例えばＦＧＦ１またはＦＧＦ２との間の相互作用を阻害する能力を指す。そのような阻害は、例えば、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ上の重複結合部位、及び／またはリガンド親和性を変化させる抗体によって誘導されるＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂの立体構造変化のために、リガンド結合への直接干渉を含む任意の機構を通じて生じ得る。
【0043】
「親和性」または「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。いくつかの実施形態では、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表され得る。
【0044】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、重鎖の少なくとも超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３、ならびに軽鎖のＬ１、Ｌ２、及びＬ３を含む分子を指し、この分子は、抗原に結合することができる。抗体という用語としては、全長の重鎖及び軽鎖、ならびにＦｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、及び（Ｆａｂ′）２などの抗原に結合することができる断片（本明細書では「抗原結合断片」とも称される）を含む抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体という用語には、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザル等の様々な種の抗体も含まれる。それにはまた、小分子薬物、二重特異性抗体、及び多重特異性抗体などの他の分子にコンジュゲートされる抗体も含まれる。
【0045】
「重鎖可変領域」という用語は、重鎖ＨＶＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＶＲ２、ＦＲ３、及びＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域はまた、ＦＲ１の少なくとも一部、及び／またはＦＲ４の少なくとも一部を含む。
【0046】
「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的重鎖定常領域としては、γ、δ、及びαが挙げられる。非限定的な例示的重鎖定常領域には、ε及びμも含まれる。各重定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体は、ＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体は、ＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体は、ＩｇＡ抗体である。さらに、μ定常領域を含む抗体は、ＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体は、ＩｇＥ抗体である。ある特定のアイソタイプは、サブクラスにさらに細分化することができる。例えば、ＩｇＧ抗体としては、限定されないが、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体が挙げられ、ＩｇＡ抗体としては、限定されないが、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が挙げられ、ＩｇＭ抗体としては、限定されないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２が挙げられる。
【0047】
「重鎖」という用語は、リーダー配列の有無にかかわらず、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「全長重鎖」という用語は、リーダー配列の有無にかかわらず、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【0048】
「軽鎖可変領域」という用語は、軽鎖ＨＶＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＶＲ２、ＦＲ３、及びＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、ＦＲ１及び／またはＦＲ４も含む。
【0049】
「軽鎖定常領域」という用語は、軽鎖定常ドメインＣＬを含む領域を指す。非限定的な例示的軽鎖定常領域としては、λ及びκが挙げられる。
【0050】
「軽鎖」という用語は、リーダー配列の有無にかかわらず、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「全長軽鎖」という用語は、リーダー配列の有無にかかわらず、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【0051】
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列において超可変であり、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、天然４鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ由来及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最も高い配列可変性を有し、及び／または抗原認識に関与する。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）で生じる（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）．）。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４～３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０～５６、Ｌ３のアミノ酸残基８９～９７、Ｈ１のアミノ酸残基３１～３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０～６５、及びＨ３のアミノ酸残基９５～１０２において生じる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。超可変領域（ＨＶＲ）及び相補性決定領域（ＣＤＲ）という用語はいずれも、抗原結合領域を形成する可変領域の部分を指す。
【0052】
本明細書で使用される「キメラ抗体」は、第１の種（マウス、ラット、カニクイザル等）に由来する少なくとも１つの可変領域及び第２の種（ヒト、カニクイザル等）に由来する少なくとも１つの定常領域を含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのラット可変領域及び少なくとも１つのマウス定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体の可変領域の全ては、第１の種に由来し、キメラ抗体の定常領域の全ては、第２の種に由来する。
【0053】
本明細書で使用される「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域由来の対応するアミノ酸に置き換えられた抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ′）２等である。
【0054】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ移植抗体」または「ＨＶＲ移植抗体」は、第１の（非ヒト）種の相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域（ＨＶＲ）が、第２の（ヒト）種のフレームワーク領域（ＦＲ）上に移植されたヒト化抗体を指す。
【0055】
本明細書で使用される「ヒト抗体」は、ヒトにおいて産生される抗体、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）などのヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物で産生される抗体、及びファージディスプレイなどのインビトロ方法を使用して選択される抗体を指し、抗体レパートリーは、ヒト免疫グロブリン配列に基づく。
【0056】
「アフコシル化」抗体または「フコースを欠く」抗体は、その定常領域グリコシル化においてフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ抗体を指す。ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３のグリコシル化は、Ａｓｎ２９７（Ｎ２９７）において、最大２Ｇａｌ残基で終結したコアフコシル化二分岐複合体オリゴ糖グリコシル化として生じる。いくつかの実施形態では、アフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７においてフコースを欠く。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じてＧ０、Ｇ１（α１，６もしくはα１，３）またはＧ２グリカン残基として指定される。例えば、Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．１：４４－５３（２００３）を参照されたい。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．Ｈ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．１４：２０１－２０７（１９９７）を参照されたい。抗体の集団内で、集団の抗体の５％未満がＡｓｎ２９７でフコースを含む場合、抗体はアフコシル化されると見なされる。
【0057】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃｌｑ結合及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられる。
【0058】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原を有する標的細胞に特異的に結合し、その後、細胞毒で標的細胞を死滅させることを可能にする細胞傷害性の一形態を指す。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７－９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号もしくは同第５，８２１，３３７号または米国特許第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載されるものなどのインビトロＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が挙げられる。代替的に、または追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価されてもよい。Ｆｃ領域アミノ酸配列が変更され、ＡＤＣＣ活性が増加または減少した追加の抗体は、例えば、米国特許第７，９２３，５３８号、及び米国特許第７，９９４，２９０号に記載されている。
【0059】
「向上したＡＤＣＣ活性」を有する抗体は、親抗体と比較して（抗体と親抗体は、少なくとも１つの構造的態様において異なる）、アッセイで使用されるそのような抗体と親抗体の量が本質的に同じであるときに、インビトロまたはインビボでのＡＤＣＣの媒介に、より効果的な抗体を指す。いくつかの実施形態では、抗体と親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、親抗体がフコシル化される一方、抗体はアフコシル化される。いくつかの実施形態では、ＡＤＣＣ活性は、米国公開第２０１５／００５０２７３Ａ１号に開示されているインビトロＡＤＣＣアッセイを使用して決定することができるが、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法、例えば、動物モデルが企図される。他の実施形態では、ＡＤＣＣ活性が向上した抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性も向上している。いくつかの実施形態では、ＡＤＣＣ活性が向上した抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する親和性が向上している。ある特定の実施形態では、ＡＤＣＣ活性が向上した抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性が向上している。
【0060】
「ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性の向上」は、親抗体よりもＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性が高い（場合によっては、ＣＤ１６ａとも称される）抗体を指し、抗体と親抗体は、少なくとも１つの構造的態様において異なる。いくつかの実施形態では、抗体と親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、親抗体がフコシル化される一方、抗体はアフコシル化される。ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性を決定するための任意の好適な方法が使用され得る。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性は、米国公開第２０１５／００５０２７３－Ａ１号に記載される方法によって判定される。他の実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性が向上した抗体はまた、ＡＤＣＣ活性が向上している。ある特定の実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性が向上した抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する親和性が向上している。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性が向上した抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性が向上している。
【0061】
「リーダー配列」という用語は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を促進するポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。リーダー配列は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの輸出時に切断され、成熟タンパク質を形成してもよい。リーダー配列は、天然であっても合成であってもよく、それらは、それらが結合するタンパク質に対して異種であっても相同であってもよい。非限定的な例示的リーダー配列としては、異種タンパク質由来のリーダー配列が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体は、リーダー配列を欠く。他の実施形態では、抗体は、天然抗体リーダー配列及び異種リーダー配列から選択され得る、少なくとも１つのリーダー配列を含む。
【0062】
本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、それが典型的に自然界に見出される構成要素のうちの少なくともいくつかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドが、それが産生された細胞の構成要素のうちの少なくともいくつかから分離されるとき、ポリペプチドは、「単離された」と称される。発現後に細胞によってポリペプチドが分泌される場合、ポリペプチドを含有する上清を産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」と見なされる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが典型的に天然に見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合はゲノムＤＮＡもしくはミトコンドリアＤＮＡ）の一部ではない場合、または例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合は、それが産生された細胞の構成要素のうちの少なくともいくつかから分離される場合、「単離された」と称される。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドがそのベクターに天然に見出されない限り、「単離された」と称され得る。
【0063】
「対象」及び「患者」という用語は、ヒトを指すように本明細書において互換的に使用される。いくつかの実施形態では、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳動物実験動物、哺乳動物農場動物、哺乳動物スポーツ動物、及び哺乳動物ペットを含むがそれらに限定されない、他の哺乳動物を治療する方法も提供される。
【0064】
「がん」という用語は、本明細書において、異常に高いレベルの増殖及び成長を示す細胞群を指すように使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも称される）、前悪性、または悪性であり得る。がん細胞は、固形がん細胞または白血病がん細胞であり得る。「がん成長」という用語は、本明細書において、がんのサイズまたは程度の対応する増加をもたらすがんを含む１つまたは複数の細胞による増殖または成長を指すように使用される。
【0065】
がんの例としては、限定されないが、がん、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられる。そのようながんのより具体的な非限定的例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟組織肉腫、非小細胞肺癌（扁平上皮非小細胞肺癌を含む）、肺の腺癌、肺の肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎細胞癌、肝癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び様々なタイプの頭頸部癌（頭頸部癌の扁平上皮癌を含む）が挙げられる。
【0066】
本明細書で使用される場合、「治療」とは、例えば、病態もしくは障害を治癒させるための、病態もしくは障害の重症度を低下させるかもしくは進行を遅くするための、または病態もしくは障害の再発を阻害するための治療的処置を指す。ある特定の実施形態では、「治療」という用語は、患者における疾患のための治療薬の任意の投与または適用を包含し、疾患もしくは疾患の進行を阻害もしくは減速させること、例えば、縮退を引き起こすことによって、または喪失、欠損、もしくは欠損した機能を回復もしくは修復することによって疾患を部分的もしくは完全に軽減すること、非効率的なプロセスを刺激すること、または安定期の疾患の重症度を低減させることを含む。「治療」という用語はまた、任意の表現型特徴の重症度を低減すること、及び／またはその特徴の発生率、程度、または可能性を低減することも含む。治療を必要とするものには、既に障害を有するもの、ならびに障害の再発の危険性があるもの、または障害の再発を予防または減速させる必要があるものが含まれる。
【0067】
「有効量」または「治療有効量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。ある特定の実施形態では、有効量は、所望の治療結果を達成するために必要な投薬量及び期間において有効な量を指す。本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を引き起こす１つ以上の抗体の能力などの要因によって異なり得る。治療有効量は、１つ以上の抗体のいかなる毒性または有害な作用をも治療的に有益な作用が上回る量を包含する。いくつかの実施形態では、「有効量」という表現は、がんを治療するために有効な抗体の量を指す。
【0068】
以下のセクションに追加の定義が提供される。
【0069】
抗ＦＧＦＲ２抗体
抗ＦＧＦＲ２抗体を含む本明細書に記載される製剤のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、モノクローナル抗体、遺伝子操作抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体であり得る。本明細書に記載される組成物または方法のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ′、及び（Ｆａｂ′）２から選択され得る。本明細書に記載される組成物または製剤のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択され得る。本明細書に記載される組成物または製剤のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＧであり得る。本明細書に記載される方法のいずれにおいても、抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３であり得る。
抗ＦＧＦＲ２抗体を含む本明細書に記載される製剤のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、モノクローナル抗体、遺伝子操作抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体であり得る。本明細書に記載される組成物または方法のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ′、及び（Ｆａｂ′）２から選択され得る。本明細書に記載される組成物または製剤のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択され得る。本明細書に記載される組成物または製剤のいずれにおいても、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＧであり得る。本明細書に記載される方法のいずれにおいても、抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３であり得る。
【0070】
例示的な抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合するよりも低い親和性でＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合する。他の実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合しない。
【0071】
本明細書の実施形態で使用するための例示的な抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる、２０１２年１月２４日に発行された米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載されるＨｕＧＡＬ－ＦＲ２１抗体である。米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号の図１３及び図１４は、ＨｕＧＡＬ－ＦＲ２１の可変領域及び全長成熟抗体鎖のアミノ酸配列を示し、参照により本明細書に組み込まれる。抗体ＨｕＧＡＬ－ＦＲ２１の重鎖可変領域配列は、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号の図１３において下線が引かれ、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。本明細書の実施形態で使用され得るさらなる抗体は、ある特定のアフコシル化ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を記載し、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１５－００５０２７３－Ａ１に記載されるものを含む。
【0072】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つの超可変領域（ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0073】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの重鎖、ならびに軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、２つの重鎖（各重鎖は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む）、ならびに２つの軽鎖（各軽鎖は、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0074】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、６つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、上記の６つのＨＶＲを含み、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0075】
一態様では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、６つのＨＶＲを含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体と競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0076】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0077】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0078】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0079】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのようなＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合することなくＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、配列番号４において置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。任意選択で、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号５のＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0080】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずにＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、配列番号５において置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。任意選択で、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0081】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列、ならびに配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含み、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのような抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずにＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、配列番号４において置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、配列番号５において置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。任意選択で、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のＶＨ配列、及び配列番号５のＶＬ配列を含み、これには、一方または両方の配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含み、ＶＬは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0082】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、上に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号４及び配列番号５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0083】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する重鎖配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのような抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合せずにＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、配列番号２において置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。任意選択で、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、重鎖は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0084】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する軽鎖配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのような抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合せずにＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、配列番号３において置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。任意選択で、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号３のＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、軽鎖は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0085】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖配列、及び配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する重鎖配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのような抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合せずにＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する軽鎖配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのような抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合せずにＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、配列番号２において置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、配列番号３において置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。任意選択で、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体重鎖は、配列番号２のＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含み、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体軽鎖は、配列番号３のＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、重鎖は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含み、軽鎖は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、アフコシル化される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0086】
さらなる例示的な抗ＦＧＦＲ２抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載されるＧＡＬ－ＦＲ２２及びＧＡＬ－ＦＲ２３抗体である。例えば、ＧＡＬ－ＦＲ２２の軽鎖及び重鎖可変領域は、特許第８，１０１，７２３Ｂ２号において配列番号７及び８として提供され、一方、Ｋａｂａｔ ＣＤＲならびに軽鎖及び重鎖可変領域は、参照により本明細書に組み込まれる、その特許の図１６にも提供される。ＧＡＬ－ＦＲ２１、ＧＡＬ－ＦＲ２２及びＧＡＬ－ＦＲ２３産生ハイブリドーマは、それぞれ、２００８年１１月６日、１１月６日、及び８月１２日に、ＡＴＣＣ番号９５８６、９５８７及び９４０８として、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＰＯ Ｂｏｘ １５４９，Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ，ＵＳＡ，２０１０８）に寄託されている。したがって、いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体は、これら３つのハイブリドーマ株のうちの１つから得られる抗体のアミノ酸配列を含む抗体である。
【0087】
ＧＡＬ－ＦＲ２２の重鎖及び軽鎖可変領域はまた、本明細書において、配列番号１５及び１９として提示され、一方、Ｋａｂａｔ ＣＤＲは、本明細書において、配列番号１６～１９及び２０～２２として提示される。したがって、いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ３を含み、軽鎖可変領域は、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ２、及び（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ３を含む。
【0088】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体は、重鎖可変ドメインが配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％、例えば少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号１５のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体は、軽鎖可変ドメインが配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、例えば少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号１９のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％、例えば少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号３９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、例えば少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体重鎖可変領域はまた、（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ３を含み、及び／または軽鎖可変領域はまた、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ２、及び（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0089】
アフコシル化抗ＦＧＦＲ２抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有し、すなわち、抗体はアフコシル化される。いくつかの実施形態では、アフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有し、すなわち、抗体はアフコシル化される。いくつかの実施形態では、アフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７にフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
【0090】
本明細書において、複数のそのような抗体が少なくとも９５％のアフコシル化抗体を含む場合、抗体は、「アフコシル化された」と見なされる。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計と比較して、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定され得る。抗体中のフコースの検出の非限定的な例示的方法としては、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析（例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６を参照）、放出された蛍光標識オリゴ糖のＨＰＬＣ測定（例えば、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，″Ｎ－Ｇｌｙｃａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｕｓｉｎｇ ＵＨＰＬＣ ｗｉｔｈ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，″Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（２０１２）、Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌｙｓｉｓ，１４：６０１－６０８（１９９６）、Ｔａｋａｈａｓｉ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍ．，７２０：２１７－２２５（１９９６）を参照）、放出された蛍光標識オリゴ糖のキャピラリー電気泳動測定（例えば、Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，７１：５１８５－５１９２（１９９９）を参照）、及び単糖類組成を測定するためのパルスアンペロメトリック検出を有するＨＰＬＣ（例えば、Ｈａｒｄｙ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７０：５４－６２（１９８８）を参照）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書のアフコシル化抗体の組成物において、フコースは、これらの方法のうちの１つ以上によって検出不可能である。
【0091】
Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、所与の抗体配列において、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列変異のために、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位と３００位との間に位置してもよい。本明細書に記載されるＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体において、Ａｓｎ２９７は、配列
中に見出され、以下に示される配列表の配列番号２において太字及び下線で示される。
【0092】
フコシル化多様体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「アフコシル化」または「フコース欠損」抗体に関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。アフコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠くＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号、及びＡｄａｍｓらのＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１号、特に実施例１１）、ならびに機能性α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、例えばノックアウトＣＨＯ細胞を欠く細胞株などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照）が挙げられる。
【0093】
本明細書における抗ＦＧＦＲ２抗体はまた、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分岐される二分岐オリゴ糖を有し得る。そのような抗体は、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する。そのような抗体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【0094】
本発明のある特定の実施形態では、アフコシル化ＦＧＦＲ２抗体は、ヒトエフェクター細胞の存在下で、フコースを含む同じアミノ酸配列を有する抗体よりも効果的にＡＤＣＣを媒介する。概して、ＡＤＣＣ活性は、米国公開第２０１５－００５０２７３Ａ１号に開示されているインビトロＡＤＣＣアッセイを使用して決定することができるが、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法、例えば、動物モデル等が企図される。
【0095】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、配列番号２及び３の重鎖及び軽鎖配列を含む。他の実施形態では、配列番号２及び３の重鎖及び軽鎖配列を含む抗体は、アフコシル化される。
【0096】
抗ＦＧＦＲ２抗体の薬学的製剤
本開示は、ヒトへの投与に好適な抗ＦＧＦＲ２抗体の薬学的製剤を提供する。抗ＦＧＦＲ２抗体は、本明細書に開示される任意のそのような抗体であり得る。薬学的製剤中の組成物の量及び種類は、抗体、したがって、最大貯蔵寿命に最大の安定性を提供するように選択される。
本開示は、ヒトへの投与に好適な抗ＦＧＦＲ２抗体の薬学的製剤を提供する。抗ＦＧＦＲ２抗体は、本明細書に開示される任意のそのような抗体であり得る。薬学的製剤中の組成物の量及び種類は、抗体、したがって、最大貯蔵寿命に最大の安定性を提供するように選択される。
【0097】
薬学的製剤は、例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される緩衝液、スクロース、ならびに界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される緩衝液、スクロース、ならびに界面活性剤から本質的になる。薬学的製剤は、代替的に、例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される緩衝液、アルギニン、ならびに界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される緩衝液、アルギニン、ならびに界面活性剤から本質的になる。薬学的製剤は、例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、スクロース、及び界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、スクロース、及び界面活性剤から本質的になる。薬学的製剤は、代替として、例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、アルギニン、及び界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、アルギニン、及び界面活性剤から本質的になる。いくつかの実施形態では、製剤は、例えば、注入または注射による患者への静脈内投与に好適である。他の実施形態では、製剤は、例えば、注射による患者への皮下投与に好適である。ある特定の実施形態では、製剤は、ヒト血漿またはリンパ液などの投与領域における体液と等張性である。
【0098】
いくつかの実施形態では、本明細書における抗ＦＧＦＲ２抗体は、水性製剤中に最大１８０ｍｇ／ｍＬの可溶性であることが見出されている。いくつかの実施形態では、製剤は、１０～１８０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、または１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、または例えば、１０～２５ｍｇ／ｍＬ、２０～３０ｍｇ／ｍＬ、１５～２５ｍｇ／ｍＬ、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、２０～２５ｍｇ／ｍＬ、１８～２２ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、２６ｍｇ／ｍＬ、２７ｍｇ／ｍＬ、２８ｍｇ／ｍＬ、２９ｍｇ／ｍＬ、または３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、２０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。
【0099】
いくつかの実施形態では、製剤は、緩衝液としてヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩を含む。いくつかのそのような場合には、製剤緩衝液は、ヒスチジンから本質的になる。いくつかの実施形態では、製剤は、５～４０ｍＭ、例えば、１０～４０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、１５～２５ｍＭ、１０～２０ｍＭ、２０～３０ｍＭ、１５～２０ｍＭ、２０～２５ｍＭ、２５～３０ｍＭ、または１８～２２ｍＭのヒスチジン、クエン酸、またはリン酸塩を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１０ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２１ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、２５ｍＭ、２６ｍＭ、２７ｍＭ、２８ｍＭ、２９ｍＭ、もしくは３０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、もしくはリン酸塩、またはそれらの濃度のうちの２つによって境界される範囲を含む。ある特定の実施形態では、製剤は、２０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩を含む。
【0100】
いくつかの実施形態では、製剤は、緩衝液としてヒスチジンを含む。いくつかのそのような実施形態では、製剤は、クエン酸塩またはリン酸塩を含まない。いくつかのそのような場合には、製剤緩衝液は、ヒスチジンから本質的になる。いくつかの実施形態では、製剤は、緩衝液としてクエン酸塩を含む。いくつかのそのような実施形態では、製剤は、ヒスチジンまたはリン酸塩を含まない。いくつかのそのような場合には、製剤緩衝液は、本質的にクエン酸塩からなる。いくつかの実施形態では、製剤は、緩衝液としてリン酸塩を含む。いくつかのそのような実施形態では、製剤は、クエン酸塩またはヒスチジンを含まない。いくつかのそのような場合には、製剤緩衝液は、本質的にリン酸塩からなる。
【0101】
緩衝液としてヒスチジンを含むか、または本質的にそれからなるいくつかの実施形態では、製剤は、５～４０ｍＭのヒスチジン、例えば１０～４０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、１５～２５ｍＭ、１０～２０ｍＭ、２０～２５ｍＭ、２５～３０ｍＭ、または１８～２２ｍＭのヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１０ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２１ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、２５ｍＭ、２６ｍＭ、２７ｍＭ、２８ｍＭ、２９ｍＭ、もしくは３０ｍＭのヒスチジン、またはそれらの濃度のうちの２つによって境界される範囲を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、２０ｍＭのヒスチジンを含む。
【0102】
いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート、例えばポリソルベート２０またはポリソルベート８０である。いくつかのそのような場合において、製剤は、０．００１～０．１％、０．００２～０．１％、０．０１～０．１％、０．００５％～０．０５％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート２０または８０を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．００５％～０．０５％のポリソルベート２０、例えば０．００８％～０．０１２％のポリソルベート２０を含む。他の実施形態では、製剤は、０．００２～０．１％のポリソルベート２０を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．０１％のポリソルベート２０を含む。
【0103】
スクロースを含む製剤
いくつかの実施形態では、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）、及びスクロースの混合物を含むか、または本質的にそれらからなる。抗体、ヒスチジン、及びポリソルベートの濃度は、例えば、上に提供されるとおりであり得る。いくつかの実施形態では、スクロースは、体液と等張した配合物を提供する量で見出され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、２００～３００ｍＭ、例えば２００～２５０ｍＭ、２５０～３００ｍＭ、２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、２９０ｍＭ、または３００ｍＭのスクロースを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、２５０～３００ｍＭのスクロースを含む。他の実施形態では、製剤は、２６０～２８０ｍＭのスクロースを含む。ある特定の実施形態では、製剤は、２５０～２７０ｍＭのスクロースを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、２７０～３００ｍＭのスクロースを含む。他の実施形態では、製剤は、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、または２８０ｍＭのスクロースを含む。ある特定の実施形態では、製剤は、２７０ｍＭのスクロースを含む。いくつかの実施形態では、スクロースを含む製剤は、アルギニンを含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体、ヒスチジン、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）、及びスクロースの混合物を含むか、または本質的にそれらからなる。抗体、ヒスチジン、及びポリソルベートの濃度は、例えば、上に提供されるとおりであり得る。いくつかの実施形態では、スクロースは、体液と等張した配合物を提供する量で見出され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、２００～３００ｍＭ、例えば２００～２５０ｍＭ、２５０～３００ｍＭ、２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、２９０ｍＭ、または３００ｍＭのスクロースを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、２５０～３００ｍＭのスクロースを含む。他の実施形態では、製剤は、２６０～２８０ｍＭのスクロースを含む。ある特定の実施形態では、製剤は、２５０～２７０ｍＭのスクロースを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、２７０～３００ｍＭのスクロースを含む。他の実施形態では、製剤は、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、または２８０ｍＭのスクロースを含む。ある特定の実施形態では、製剤は、２７０ｍＭのスクロースを含む。いくつかの実施形態では、スクロースを含む製剤は、アルギニンを含まない。
【0104】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤のｐＨ範囲は、５．０～７．０である。いくつかの実施形態では、スクロース系薬学的製剤は、５．０～６．５、例えば５．０～６．０、５．５～６．０、５．５～６．５、５．８～６．２、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、ｐＨは、５．８～６．２である。いくつかの実施形態では、ｐＨは、６．０である。
【0105】
アルギニンを含む製剤
いくつかの実施形態では、製剤は、ヒスチジン、アルギニン、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）、及び抗体を含むか、または本質的にそれらからなる。いくつかのそのような実施形態では、製剤は、スクロースを含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は、ヒスチジン、アルギニン、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）、及び抗体を含むか、または本質的にそれらからなる。いくつかのそのような実施形態では、製剤は、スクロースを含まない。
【0106】
いくつかの実施形態では、アルギニンは、１００～２００ｍＭ、例えば１００～１５０ｍＭ、１５０～２００ｍＭ、１３０～１７０ｍＭ、または１４０～１６０ｍＭで見出される。ある特定の実施形態では、アルギニンは、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、または２００ｍｍの濃度で存在する。他の実施形態では、アルギニンは、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、または１６０ｍＭで見出される。いくつかの実施形態では、アルギニンは、１５０ｍＭで存在する。
【0107】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤のｐＨ範囲は、５．０～７．０である。いくつかの実施形態では、アルギニン系薬学的製剤は、５．０～６．５、例えば５．０～６．０、５．５～６．５、５．５～６．０、５．５～５．９、５．６～５．８、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、ｐＨは、５．５～５．９である。いくつかの実施形態では、ｐＨは、５．６～５．８である。いくつかの実施形態では、ｐＨは、５．７である。
【0108】
特定の製剤の実施形態
他の実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、０．００２～０．１％のポリソルベート２０、ならびに１０～３０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．０～７．０のｐＨを有する。いくつかのそのような場合では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、０．００２～０．１％のポリソルベート２０、ならびに１０～３０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．０～７．０のｐＨを有する。
他の実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、０．００２～０．１％のポリソルベート２０、ならびに１０～３０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．０～７．０のｐＨを有する。いくつかのそのような場合では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、０．００２～０．１％のポリソルベート２０、ならびに１０～３０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．０～７．０のｐＨを有する。
【0109】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１０～３０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．０～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１０～３０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液から本質的になり、製剤は、５．０～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１０～２０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．０～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１０～３０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．０～６．５のｐＨを有する。
【0110】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１４０～１６０ｍＭのアルギニンまたは２６０～２８０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１５～２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１４０～１６０ｍＭのアルギニンまたは２６０～２８０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１５～２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液から本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１４０～１６０ｍＭのアルギニンまたは２６０～２８０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１５～２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１４０～１６０ｍＭのアルギニンまたは２６０～２８０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１５～２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。
【0111】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１５～２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１５～２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液から本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１５～２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、ならびに１５～２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩、及びリン酸塩から選択される１つ以上の緩衝液を含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。
【0112】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、及び１５～２５ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、及び１５～２５ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、及び１５～２５ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００５～０．０５％のポリソルベート２０、及び１５～２５ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。
【0113】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００８～０．０１２％のポリソルベート２０、及び１０～３０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００８～０．０１２％のポリソルベート２０、及び１０～３０ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００８～０．０１２％のポリソルベート２０、及び１０～３０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００８～０．０１２％のポリソルベート２０、及び１０～３０ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。
【0114】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００８～０．０１２％のポリソルベート２０、及び１５～２５ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００８～０．０１２％のポリソルベート２０、及び１５～２５ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００８～０．０１２％のポリソルベート２０、及び１５～２５ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．００８～０．０１２％のポリソルベート２０、及び１５～２５ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。
【0115】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニンまたは２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．５のｐＨを有する。
【0116】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニン、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．６～５．８または５．７のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニン、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．６～５．８または５．７のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニン、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．６～５．８または５．７のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、１５０ｍＭのアルギニン、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．６～５．８または５．７のｐＨを有する。
【0117】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．９～６．１または６．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．９～６．１または６．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．９～６．１または６．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンを含み、製剤は、５．９～６．１または６．０のｐＨを有する。
【0118】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．０～６．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２抗体、２７０ｍＭのスクロース、０．０１％のポリソルベート２０、及び２０ｍＭのヒスチジンから本質的になり、製剤は、５．５～６．０のｐＨを有する。
【0119】
いくつかの実施形態では、製剤は、ある特定の種類の賦形剤を含まない。例えば、いくつかの実施形態では、製剤は、糖アルコール、抗ＦＧＦＲ２抗体以外のタンパク質、ポリソルベート以外の界面活性剤、ならびにアルギニン及び／またはヒスチジン以外のアミノ酸のうちの１つ以上を含まない。アルギニンを含むある特定の実施形態では、製剤は、糖、糖アルコール、抗ＦＧＦＲ２抗体以外のタンパク質、ポリソルベート以外の界面活性剤、ならびにアルギニン及びヒスチジン以外のアミノ酸のうちの１つ以上を含まない。スクロースを含むいくつかの実施形態では、製剤は、スクロース以外の糖、糖アルコール、抗ＦＧＦＲ２抗体以外のタンパク質、ポリソルベート以外の界面活性剤、及びヒスチジン以外のアミノ酸のうちの１つ以上を含まない。アルギニンを含むいくつかの実施形態では、製剤は、糖、糖アルコール、抗ＦＧＦＲ２抗体以外のタンパク質、ポリソルベート以外の界面活性剤、ならびにアルギニン及びヒスチジン以外のアミノ酸のうちのいずれも含まない。スクロースを含むいくつかの実施形態では、製剤は、スクロース以外の糖、糖アルコール、抗ＦＧＦＲ２抗体以外のタンパク質、ポリソルベート以外の界面活性剤、及びヒスチジン以外のアミノ酸のうちのいずれも含まない。ある特定の実施形態では、製剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、及び／またはリン酸塩以外の他の緩衝液成分を含まない。ヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩を緩衝液として含むある特定の実施形態では、製剤は、他の緩衝液成分を含まない。本出願で先に述べたように、この文脈において「含まない」という表現は、除外された成分が、例えば、他の意図的に添加された成分に見られる汚染または不純物のために、微量レベルを超えて存在しないことを意味する。
【0120】
製剤の例示的な特性
いくつかの実施形態では、製剤は、液体として貯蔵され、患者に投与する前に凍結乾燥されない。いくつかの実施形態では、製剤は、すぐに使用できる液体製剤であり、したがって、患者に直接投与され得る。液体製剤は、すぐに使用可能であり、凍結乾燥製剤よりも患者に投与されやすいという利点を提供する。他の実施形態では、製剤は、生理食塩水、水中で希釈されるか、または投与前にタンパク質を希釈するために他の物質と混合される。例えば、ＩＶ注入のために設計された製剤は、投与前に、生理食塩水またはＩＶバッグ中の別の適切な緩衝液中で希釈され得る。いくつかの実施形態では、すぐに使用できる液体製剤などの液体製剤は、希釈せずに静脈内に直接投与される。
いくつかの実施形態では、製剤は、液体として貯蔵され、患者に投与する前に凍結乾燥されない。いくつかの実施形態では、製剤は、すぐに使用できる液体製剤であり、したがって、患者に直接投与され得る。液体製剤は、すぐに使用可能であり、凍結乾燥製剤よりも患者に投与されやすいという利点を提供する。他の実施形態では、製剤は、生理食塩水、水中で希釈されるか、または投与前にタンパク質を希釈するために他の物質と混合される。例えば、ＩＶ注入のために設計された製剤は、投与前に、生理食塩水またはＩＶバッグ中の別の適切な緩衝液中で希釈され得る。いくつかの実施形態では、すぐに使用できる液体製剤などの液体製剤は、希釈せずに静脈内に直接投与される。
【0121】
いくつかの実施形態では、製剤は、例えば静脈内（ＩＶ）注入によって、静脈内投与される。投与は、病院、診療所、外来、または他の医療オフィス環境で行うことができる。ＩＶ投与は、比較的大量の液体中のタンパク質治療薬を投与することを可能にする。
【0122】
他の実施形態では、より高いタンパク質（抗体）濃度（例えば、３００ｍｇ／ｍＬを超える）に関して、本明細書の薬学的製剤は、注射可能であるか、または例えば、注射によって、例えば皮下投与デバイスを使用して、皮下投与される。いくつかの実施形態では、製剤は、バイアルに収容される。他の実施形態では、バイアルは、シリンジ及び針などの皮下投与デバイスの一部であるか、またはそれに取り付けられている。いくつかの実施形態では、バイアルは、単回使用バイアルである。本明細書のバイアルは、例えば、製剤の０．５ｍＬ、１ｍＬ、１．５ｍＬ、２ｍＬ、または３ｍＬを保持し得る。いくつかの実施形態では、完全な単回投与量の抗ＦＧＦＲ２抗体は、１回、２回、または３回の皮下投与から投与され得る。したがって、いくつかのそのような実施形態では、完全な単回用量の抗体は、１つ、２つ、または３つの単回使用バイアル内に収容され得る。ある特定の実施形態では、バイアルは、１～２ｍＬの製剤を含む。したがって、いくつかの実施形態では、患者のための完全な単回用量は、単一の１ｍＬ、１．５ｍＬ、２ｍＬ、２．５ｍＬ、もしくは３ｍＬバイアル内に、または２つもしくは３つの０．５ｍＬ、１ｍＬ、０．５ｍＬ、もしくは２ｍＬバイアル内に収容され得る。いくつかの実施形態では、液体製剤は、暗所に貯蔵される、例えば暗所のバイアル中に貯蔵される。
【0123】
いくつかの実施形態では、本明細書における薬学的製剤は、溶液中で安定したままであり、例えば、４０℃で３ヶ月または６ヶ月後の薬学的使用に好適である。他の実施形態では、本明細書の薬学的製剤は、溶液中で安定したままであり、例えば、５℃及び／または２５℃で６ヶ月後の薬学的使用に好適である。ある特定の実施形態では、製剤中のタンパク質凝集は、４０℃で１ヶ月、２ヶ月、または３ヶ月間の貯蔵後に３％、４％、５％、６％、または７％を超えて増加し得ない。さらに他の実施形態では、製剤中のタンパク質凝集は、４０℃で１ヶ月間の貯蔵後、３％もしくは４％を超えて増加し得ず、及び／または４０℃で３ヶ月間の貯蔵後に７％を超えて増加し得ない。いくつかの実施形態では、製剤中のタンパク質凝集は、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２％または２．５％を超えて増加し得ない。いくつかの実施形態では、製剤中のタンパク質凝集は、５℃で６ヶ月間の貯蔵後に２％を超えて増加し得ない。
【0124】
凝集体に加えて、タンパク質の荷電多様体は、脱アミド化及び酸化などの化学変化の結果として、貯蔵中に形成され得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体の酸性多様体は、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に２０％を超えて増加または減少しない。いくつかの実施形態では、５℃で６ヶ月間の貯蔵後の荷電多様体のパーセンテージに変化はない。荷電多様体の外観は、例えば、カチオン交換クロマトグラフィーまたはアニオン交換クロマトグラフィーを使用して検出され得る。
【0125】
ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、４０℃で１ヶ月間の貯蔵後に、４０％以下の抗ＦＧＦＲ２抗体の酸性多様体、及び２０％以下の抗ＦＧＦＲ２抗体の塩基性多様体を含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、４０℃で１ヶ月間の貯蔵後に、１％～４０％、１５％～４０％、もしくは２０％～４０％、２０％～３０％、もしくは３０％～４０％の抗体の酸性多様体、及び／または５％～３０％、５％～２０％、１０％～２０％、２０％～３０％、もしくは１５％～２０％の抗体の塩基性多様体を含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、抗ＦＧＦＲ２抗体を含み、組成物は、２５℃で３ヶ月後に、１５％～３５％、２０％～３０％、もしくは２５％～３０％の抗体の酸性多様体、及び／または１５％～４０％、１５％～３０％、１５％～２５％、１５％～２０％、もしくは２０％～２５％の抗体もしくはその抗原結合断片の塩基性多様体を含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、抗ＦＧＦＲ２抗体を含み、組成物は、５℃で６ヶ月後に、１５％～３０％、１５％～２５％、２０％～３０％、もしくは２０％～２５％の抗体の酸性多様体、及び／または２０％～３５％、２０％～３０％、もしくは２５％～３０％の抗体もしくはその抗原結合断片の塩基性多様体を含む。
【0126】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書のｐＨ５．５～６．５のヒスチジン、スクロース、ポリソルベート２０を含む製剤は、最初に、抗ＦＧＦＲ２抗体の２０～２５％の酸性多様体を含有するが、４０℃で１ヶ月間の貯蔵後、２０％～４０％の酸性多様体を含有し、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後、２５％～３０％の酸性多様体を含有し、５℃で６ヶ月間の貯蔵後、２０％～２５％の酸性多様体を含有する（図２７Ａ～Ｃを参照）。いくつかの実施形態では、本明細書のｐＨ５．５～６．５のヒスチジン、スクロース、ポリソルベート２０を含む製剤は、最初に、抗ＦＧＦＲ２抗体の２０～２５％の酸性多様体を含有するが、４０℃で１ヶ月間の貯蔵後、２０％～４０％（例えば、３０％～４０％）の酸性多様体を含有し、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後、２５％～３０％の酸性多様体を含有し、５℃で６ヶ月間の貯蔵後、２０％～２５％の酸性多様体を含有する（図２８Ａ～Ｃを参照）。いくつかの実施形態では、本明細書のｐＨ５．５～６．５のヒスチジン、スクロース、ポリソルベート２０を含む製剤は、最初に、抗ＦＧＦＲ２抗体の３０％の塩基性多様体を含有するが、４０℃で１ヶ月間の貯蔵後、１０％～２５％の塩基性多様体を含有し、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後、１５％～３０％（例えば、１５％～２５％）の塩基性多様体を含有し、５℃で６ヶ月間の貯蔵後、２５％～３０％の塩基性多様体を含有する（図２９Ａ～Ｃを参照）。いくつかの実施形態では、本明細書のｐＨ５．５～６．５のヒスチジン、アルギニン、ポリソルベート２０を含む製剤は、最初に、抗ＦＧＦＲ２抗体の３０～３５％の塩基性多様体を含有するが、４０℃で１ヶ月間の貯蔵後、１０％～２０％の塩基性多様体を含有し、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後、１５％～３０％（例えば、１５％～２５％）の塩基性多様体を含有し、５℃で６ヶ月間の貯蔵後、２５％～３０％の塩基性多様体を含有する（図３０Ａ～Ｃを参照）。
【0127】
いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、例えば、－７０℃での１回以上の凍結融解サイクル、例えば、２、３、４、または５回の凍結融解サイクル後、薬学的使用に対して安定したままである。例えば、いくつかの実施形態では、製剤中のタンパク質凝集は、５回の凍結融解サイクル後、２．０％、１．５％、１．０％、または０．５％を超えて増加し得ない。ある特定の実施形態では、光散乱によって測定される高分子量タンパク質種のパーセンテージは、変化しないままであるか、または５回の凍結融解サイクル後に０．５％を超えて増加しない。いくつかの実施形態では、製剤はまた、製剤を含有するバイアルを長期間撹拌に曝露することによって決定され得る、機械的ストレスに対して安定したままである。他の実施形態では、凝集は、５００ｒｐｍで７２時間の機械的ストレス後に２．０％、１．５％、１．０％、または０．５％を超えて増加し得ない。
【0128】
抗ＦＧＦＲ２抗体薬学的製剤を使用する治療方法
本明細書に開示される薬学的製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体治療を必要とする患者を治療する方法において使用することができる。抗ＦＧＦＲ２抗体の使用は、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる国際特許公開第ＷＯ２０１５／０１７６００号及び第ＷＯ２０１７／０９１５７７号に開示されている。
本明細書に開示される薬学的製剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体治療を必要とする患者を治療する方法において使用することができる。抗ＦＧＦＲ２抗体の使用は、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる国際特許公開第ＷＯ２０１５／０１７６００号及び第ＷＯ２０１７／０９１５７７号に開示されている。
【0129】
いくつかの実施形態では、本明細書における薬学的製剤は、がん患者を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。そのようながんのより具体的な非限定的例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟組織肉腫、非小細胞肺癌（扁平上皮非小細胞肺癌を含む）、肺の腺癌、肺の肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎細胞癌、肝癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び様々なタイプの頭頸部癌（頭頸部癌の扁平上皮癌を含む）が挙げられる。いくつかの実施形態では、がんは、胃癌または膀胱癌である。
【0130】
いくつかの実施形態では、がんは、手術、化学療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせから選択される療法の後に再発または進行性である。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する不十分な応答者である。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する不十分な応答者である対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に以前に応答したことがあるが、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する応答性が低くなった可能性がある対象、またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に応答したことがない可能性がある対象である。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤療法を以前に受けたことがある。
【0131】
いくつかの実施形態では、がんは、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含むがんはまた、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含むがんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂをＦＧＦＲ２ＩＩＩｃよりも大きな程度で過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含むがんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現の正規化レベルよりも２倍、３倍、５倍、または１０倍超大きい正規化レベルでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＧＵＳＢに正規化される。いくつかの実施形態では、がんは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。
【0132】
いくつかの実施形態では、がんは、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む胃癌である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む胃癌は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む胃癌は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂをＦＧＦＲ２ＩＩＩｃよりも大きな程度で過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む胃癌は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ発現の正規化レベルよりも２倍、３倍、５倍、または１０倍超大きい正規化レベルでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＧＵＳＢに正規化される。いくつかの実施形態では、胃癌は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。いくつかの実施形態では、過剰発現は、ｍＲＮＡ過剰発現である。いくつかの実施形態では、過剰発現は、タンパク質過剰発現である。
【0133】
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子増幅は、限定されないが、原位置ハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）を含む、当該技術分野における任意の好適な方法によって決定され得る。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅は、３より大きいＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セントロマー）比を含む。
【0134】
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ ｍＲＮＡ過剰発現は、限定されないが、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を含む方法を含む、当該技術分野における任意の好適な方法によって決定され得る。「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ ｍＲＮＡ過剰発現」という用語は、そのような上昇レベルの原因にかかわらず（すなわち、上昇レベルが、ｍＲＮＡ、他の機構、または機構の組み合わせの増加した転写及び／または減少した分解の結果であるかどうか）、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ ｍＲＮＡの上昇レベルを意味する。
【0135】
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂタンパク質過剰発現は、限定されないが、免疫組織化学（ＩＨＣ）などの抗体ベースの方法を含む、当該技術分野における任意の好適な方法によって決定され得る。いくつかの実施形態では、ＩＨＣ染色は、当該技術分野における方法に従ってスコア化される。「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂタンパク質過剰発現」という用語は、そのようなレベルの上昇の原因にかかわらず（すなわち、レベルの上昇が、タンパク質、他の機構、または機構の組み合わせの増加した翻訳及び／または減少した分解の結果であるかどうか）、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂタンパク質のレベルの上昇を意味する。いくつかの実施形態では、ＩＨＣによる腫瘍細胞の１＋、２＋、または３＋染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現を示す。例えば、過剰発現は、腫瘍細胞の少なくとも１０％、例えば、腫瘍細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％における１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定され得る。いくつかの実施形態では、ＩＨＣによる腫瘍細胞の２＋または３＋染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現を示す。例えば、過剰発現は、腫瘍細胞の少なくとも１０％、例えば、腫瘍細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％における２＋または３＋のＩＨＣシグナルによって決定され得る。
【0136】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２過剰発現は「Ｈスコア」として報告され得る。例えば、いくつかのそのような実施形態では、腫瘍は、膀胱癌腫瘍である。Ｈスコアを決定するために、第１の膜染色強度は、０、１＋、２＋、または３＋のスコアを得るために、例えばＩＨＣを介して固定フィールド内の細胞について決定され得、Ｈスコアは、以下の式を使用して計算され得る。１×（１＋のＩＨＣ強度で可視化された細胞の％）＋２×（２＋のＩＨＣ強度で可視化された細胞の％）＋３×（３＋のＩＨＣ強度で可視化された細胞の％）。理論的にはＨスコアは０～３００の範囲であり得、視野内の全ての細胞が３＋のＩＨＣ染色を有する場合、３００に等しい。いくつかの実施形態では、治療される患者は、＞２０のＦＧＦＲ２ｂ（例えば、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ）などのＦＧＦＲ２の出発Ｈスコア、例えば＞３０、＞４０、＞５０、もしくは＞１００、または２０～３００、２０～１００、２０～５０、２０～４０、もしくは２０～３０の範囲を有する。いくつかの実施形態では、患者は、＞１０のＨスコアを有するか、または１０～２０もしくは１５～２０の範囲内にある。他の実施形態では、患者は、ＦＧＦＲ２過剰発現の欠如を示し得る０～１０のＨスコアを有する。いくつかのそのような実施形態では、患者は膀胱癌患者である。
【0137】
患者が胃癌または膀胱癌に罹患しているいくつかの実施形態では、対象は、以下のプロファイルのうちの１つを有することが以前に決定されていてもよく、あるいは、治療方法は、患者がＦＧＦＲ２発現／遺伝子増幅に関して以下のプロファイルのうちの１つに適合するかどうかを決定することを含み、これは、治療に対する予想される応答性のレベルを示し得る：ａ）胃癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも１０％における３＋のＩＨＣシグナル、ｂ）胃癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも１０％における３＋のＩＨＣシグナル、及びＦＧＦＲ２遺伝子の増幅、ｃ）胃癌対象の場合、ＦＧＦＲ２遺伝子の増幅なしで腫瘍細胞の少なくとも１０％における３＋のＩＨＣシグナル、ｄ）胃癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも１０％における１＋または２＋のＩＨＣシグナル、ｅ）膀胱癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも１０％における１＋のＩＨＣシグナル、ｆ）膀胱癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも１０％における２＋のＩＨＣシグナル、ｇ）膀胱癌対象の場合、２０超のＨスコア、ｈ）膀胱癌対象の場合、１０～１９のＨスコア、ｉ）膀胱癌対象の場合、１０未満のＨスコア。患者が胃癌または膀胱癌に罹患しているいくつかの実施形態では、対象は、以下のプロファイルのうちの１つを有することが以前に決定されていてもよく、あるいは、治療方法は、患者がＦＧＦＲ２発現／遺伝子増幅に関して以下のプロファイルのうちの１つに適合するかどうかを決定することを含み、これは、治療に対する予想される応答性のレベルを示し得る：ａ）胃癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも５％における３＋のＩＨＣシグナル、ｂ）胃癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも５％における３＋のＩＨＣシグナル、及びＦＧＦＲ２遺伝子の増幅、ｃ）胃癌対象の場合、ＦＧＦＲ２遺伝子の増幅なしで腫瘍細胞の少なくとも５％における３＋のＩＨＣシグナル、ｄ）胃癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも５％における１＋または２＋のＩＨＣシグナル、ｅ）膀胱癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも５％における１＋のＩＨＣシグナル、ｆ）膀胱癌対象の場合、腫瘍細胞の少なくとも５％における２＋のＩＨＣシグナル、ｇ）膀胱癌対象の場合、２０超のＨスコア、ｈ）膀胱癌対象の場合、１０～１９のＨスコア、ｉ）膀胱癌対象の場合、１０未満のＨスコア。患者が胃癌または膀胱癌に罹患しているいくつかの実施形態では、対象は、以下のプロファイルのうちの１つを有することが以前に決定されている場合があるか、あるいは、治療方法は、患者がＦＧＦＲ２発現／遺伝子増幅に関して以下のプロファイルのうちの１つに適合するかどうかを決定することを含み、これは、治療に対する予想される応答性のレベルを示し得る：ａ）がんは、がんの試料中で２＋もしくは３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ免疫組織化学（ＩＨＣ）シグナルを有する胃癌である、ｂ）がんは、がんの試料中で２＋もしくは３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ ＩＨＣシグナルを有する胃癌であり、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されている、ｃ）がんは、がんの試料中で２＋もしくは３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ ＩＨＣシグナルを有する胃癌であり、ＦＧＦＲ２遺伝子は増幅されていない、またはｄ）がんは、がんの試料中で２＋もしくは３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ ＩＨＣシグナルを有する膀胱癌である。
【0138】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体は、少なくとも０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、もしくは３０ｍｇ／ｋｇの用量で、またはそれらの用量のうちのいずれか２つによって境界される範囲内で、がん患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、１、２、３、４、または５週間に１回投与される。
【0139】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体を含む薬学的製剤は、免疫チェックポイント阻害剤（免疫刺激剤）及び化学療法剤などの薬剤の組み合わせの一部として提供される。例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体またはそれらを含む製剤は、他の治療様式、例えば、手術、化学療法、または放射線療法の前に、実質的に同時に、または後に提供され得る。いくつかの実施形態では、有効量の、抗ＦＧＦＲ２抗体を含む本明細書の製剤は、別の抗がん剤と併せて投与される。抗ＦＧＦＲ２抗体と共に投与され得る非限定的な例示的抗がん剤としては、白金剤（シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチンなど）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、エピルビシン（ＥＬＬＥＮＣＥ（登録商標）、ＰＨＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮ（登録商標））、ＦＯＬＦＯＸ（５－ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、５－ＦＵ及びイリノテカンの組み合わせ）、ロイコボリン、フルオロウラシル（５－ＦＵ、ＥＦＵＤＥＸ（登録商標））、マイトマイシンＣ（ＭＩＴＯＺＹＴＲＥＸ（商標）、ＭＵＴＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、及びドキソルビシン塩酸塩（アドリアマイシンＰＦＳ、アドリアマイシンＲＤＦ、ＲＵＢＥＸ（登録商標））が挙げられる。いくつかの実施形態では、有効量の抗ＦＧＦＲ２抗体を含む製剤は、パクリタキセルと併せて投与される。いくつかの実施形態では、有効量の抗ＦＧＦＲ２抗体製剤が、シスプラチン及び／または５－ＦＵと併せて投与される。いくつかの実施形態では、有効量の抗ＦＧＦＲ２抗体製剤は、ＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン、５－ＦＵ、及びロイコボリン）と併せて投与される。
【0140】
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体及び少なくとも１つの免疫刺激剤を含む、有効量の薬学的製剤を投与することを含む、がんを治療するための方法が提供される。いくつかの他の実施形態では、有効量の抗ＦＧＦＲ２抗体を含む製剤及び有効量の少なくとも１つの免疫刺激剤を含む製剤を投与することを含む、がんを治療するための方法が提供される。例示的な実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２を含む製剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤を同時に投与する。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体を含む製剤、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤を順次投与する。いくつかの実施形態では、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３用量、少なくとも５用量、または少なくとも１０用量の抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤の投与前に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３用量、少なくとも５用量、または少なくとも１０用量の、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体を含む製剤の投与前に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤の最終用量は、抗ＦＧＦＲ２抗体の第１の用量の少なくとも１日、２日、３日、５日、もしくは１０日、または１週間、２週間、３週間、５週間、１２週間、もしくは２４週間前に投与される。いくつかの他の実施形態では、抗ＦＧＦＲ２抗体の最終用量は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤の第１用量の少なくとも１日、２日、３日、５日、もしくは１０日、または１週間、２週間、３週間、５週間、１２週間、もしくは２４週間前に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤療法を受けたか、または受けており、抗ＦＧＦＲ２抗体が治療レジメンに加えられる。
【実施例0141】
以下に考察される実施例は、純粋に本発明を例示することを意図しており、いかなる方法でも本発明を限定すると見なされるべきではない。使用される数値（例えば、量、温度等）に関して精度を保証するように努力がなされてはいるが、いくらかの実験誤差及び偏差が考慮されるべきである。
【0142】
実施例１：製剤研究で使用される材料及び方法
Ｉ．抗体産生
以下の実施例で使用される抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＵＴ８遺伝子（α１，６－フコシルトランスフェラーゼ）を欠くチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株で産生され、発酵及び精製プロセスで変化を受けた様々なロットを抗体の開発に使用した。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、アフコシル化されたヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ナレッジベースの製剤開発アプローチを使用して、タンパク質に最大の安定性を提供する適切な組成物を特定した。そのためには、タンパク質の安定性に影響を与える可能性のある分子の固有特性及び外因性製剤成分の両方が考慮される。試験を実施して、ＩＶ注入のために希釈することができる１０～２０ｍｇ／ｍＬの液体製剤を産生するための適切な成分を特定した。
Ｉ．抗体産生
以下の実施例で使用される抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＵＴ８遺伝子（α１，６－フコシルトランスフェラーゼ）を欠くチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株で産生され、発酵及び精製プロセスで変化を受けた様々なロットを抗体の開発に使用した。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、アフコシル化されたヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ナレッジベースの製剤開発アプローチを使用して、タンパク質に最大の安定性を提供する適切な組成物を特定した。そのためには、タンパク質の安定性に影響を与える可能性のある分子の固有特性及び外因性製剤成分の両方が考慮される。試験を実施して、ＩＶ注入のために希釈することができる１０～２０ｍｇ／ｍＬの液体製剤を産生するための適切な成分を特定した。
【0143】
原材料：Ｌ－ヒスチジン（ＰＮ Ｈ３９１１）、Ｌ－ヒスチジン．ＨＣｌ（ＰＮ Ｈ５６５９）及び塩化ナトリウム（ＰＮ Ｓ９８８８）をＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。Ｌ－アルギニン．ＨＣｌ（ＰＮ ２０６７－０６）、クエン酸（ＰＮ ０１１９）、クエン酸ナトリウム（ＰＮ ３６２７）、及びポリソルベート２０（ＰＮ４１１６）をＪＴ Ｂａｋｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）から入手した。
【0144】
容器／密封：Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．（ＰＡ）製の３ｃｃ Ｉ型Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌガラスバイアル（ＰＮ ６８０００３６８）及び１３ｍｍストッパー（ＰＮ １９７００１１６）、ポリプロピレン管及びガラスＨＰＬＣバイアルを使用して、製剤を充填した。
【0145】
ＩＩ．一般的な製剤手順
製剤を、ＭＷＣＯ ２０ｋＤ透析膜を使用して、薬物物質を標的製剤緩衝液に透析することによって調製した。製剤を、０．２μｍのフィルターユニットを使用して積層フローフード内で濾過し、安定性評価のために適切な容器／密封システムに充填した。分析のために所定の時点で、個々のバイアルを指定された貯蔵条件から取り出した。
製剤を、ＭＷＣＯ ２０ｋＤ透析膜を使用して、薬物物質を標的製剤緩衝液に透析することによって調製した。製剤を、０．２μｍのフィルターユニットを使用して積層フローフード内で濾過し、安定性評価のために適切な容器／密封システムに充填した。分析のために所定の時点で、個々のバイアルを指定された貯蔵条件から取り出した。
【0146】
ＩＩＩ．分析方法
安定性試料を、以下に記載される早期開発アッセイを使用して分析した。
安定性試料を、以下に記載される早期開発アッセイを使用して分析した。
【0147】
目視検査：蛍光照明下で黒／白背景に対して視覚的評価を行った。
【0148】
タンパク質濃度：タンパク質濃度を、１．４３ｃｍ－１［ｇ／Ｌ］－１の理論吸収係数を使用し、２８０ｎｍの紫外線吸収率によって決定した。試料を適切な製剤緩衝液で直線吸光度範囲内に希釈し、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）水に対して測定した。ＯＤ測定を、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＤＵ８００ ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）で行った。
【0149】
ｐＨ：緩衝液ｐＨを、較正されたＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ｐＨｉ５６０ ｐＨメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）を使用して決定した。
【0150】
浸透圧：緩衝液浸透圧を、Ｗｅｓｃｏｒ ＶＡＰＲＯ（登録商標）システム（Ｗｅｓｃｏｒ，Ｉｎｃ．，ＵＴ）を使用して蒸気圧によって測定した。
【0151】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析：高感度示差走査熱量測定（ＨＳＤＳＣ）分析をＶＰ－ＤＳＣ（ＭｉｃｒｏＣａｌ，Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）を用いて行った。およそ０．５ｍｇの各試料を、試料細胞に負荷し、同量の一致する透析緩衝液を参照細胞に負荷した。試料を２０から９０℃または１００℃まで１℃／分の速度で走査した。データは、Ｏｒｉｇｉｎ ７．０データ分析ソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ，ＭＡ）で分析した。
【0152】
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）：カチオン交換クロマトグラフィーは、タンパク質多様体の正味表面電荷に基づいて分離する方法である。タンパク質の等電点（タンパク質が正味電荷を有しないｐＨである、ｐＩ）は、その一次アミノ酸配列によって決定されるが、タンパク質多様体の正味電荷は、タンパク質の等電電荷及び走行緩衝液ｐＨに基づく。例えば、８．４の抗体のｐＩよりも約１単位低い走行緩衝液ｐＨ７において、タンパク質は、正味の正電荷を担持し、エチルビニルベンゼン－ジビニルベンゼンの基材を備えたＰｒｏｐａｃ ＷＣＸ－１０カラム樹脂上に位置する、反対に弱く帯電した酸性カルボキシレート官能基に静電気的に、及び架橋結合する。２８０ｎｍでのＵＶ検出を備えた高性能液体クロマトグラフィーシステムを用いて、タンパク質多様体を分離し、漸増する塩勾配を適用するときにカラムから溶出し、最も弱いイオン相互作用を有する多様体が最初に溶出し始め、より強いイオン相互作用を有する多様体がより高い塩濃度で後に溶出した。アイソフォームを、酸性、メイン、及び塩基性として３つの領域に順次溶出し、最も高いピークがメインアイソフォームピークである。ピーク面積に基づいて、各領域は、計算された相対ピークパーセンテージを有した。弱カチオン交換ＨＰＬＣ法は、Ｄｉｏｎｅｘ ＷＣＸ－１０ ＰｒｏＰａｃ（商標）４Ｘ２５０ｍｍカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して行った。試料を、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズＨＰＬＣ上で実行し、クロマトグラムをＣｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＣＡ）を使用して統合した。移動相Ａは、ｐＨ７．０で１０ｍＭのＨＥＰＥＳであり、移動相Ｂは、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０の１００ｍＭの塩化ナトリウムであった。２８分間で４０～９０％Ｂからの勾配法を使用し、ＵＶを２８０ｎｍで検出した。酸性、塩基性、及びメインピークのパーセンテージは、各ピーク関連吸光度の総面積パーセントから報告された。
【0153】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）：サイズ排除クロマトグラフィーは、タンパク質をそれらのサイズに基づいて分離する方法である。本方法は、異なるサイズの分子を分離するために多孔質樹脂に依存する。これらの分子が樹脂の孔にアクセスできず、支障なくカラムを通過することができないため、大きな分子は早期に溶出する。より小さい分子は、樹脂細孔にアクセスすることができ、樹脂粒子内の歪みに起因して、カラムを通る経路長が増加する。したがって、より小さい分子は、より大きな分子の後に溶出する。サイズ排除クロマトグラフィーのために２つの方法を使用した。第１の方法は、０．５ｍＬ／分で３０分間移動相として、１００ｍＭのリン酸ナトリウム、７００ｍＭのアルギニン（ｐＨ６．８）を用いてＴｏｓｏｈ Ｇ３０００ＳＷＸＬ ７．８×３００ｍｍカラムを利用した（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．，ＭＯ）。第２の方法は、１ｍＬ／分で１２分間移動相として、１００ｍＭのリン酸ナトリウム、４００ｍＭの塩化ナトリウム（ｐＨ６．８）を用いてＳｅｐａｘ Ｚｅｎｉｘ ＳＥＣ－３００ ７．８×２００ｍｍカラムを、利用した（Ｓｅｐａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｄｅｌａｗａｒｅ）。試料を、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００＆１２００シリーズＨＰＬＣで実行し、２８０ｎｍに設定された検出を伴うＣｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用してクロマトグラムを統合した。各ピーク関連吸光度の総面積パーセントから、凝集体、低分子量（ＬＭＷ）、及びメインピークのパーセンテージが報告された。
【0154】
光の散乱：分光光度計を使用して、２８０ｎｍ（ＵＶ Ａ２８０）での紫外線吸光度を測定した。抗体試料の濃度は、ビールの法則、Ａ＝εｌｃ（ε＝消滅係数、ｌ＝光が通過する溶液の長さ（キュベットの経路長）（ｃｍ）、及びｃ＝溶液の濃度）を使用して計算した。抗体濃度決定には、理論的消滅係数を使用した（例えば、抗ＦＧＦＲ２抗体の理論的消滅係数は、１．４３（ＯＤ・ｍＬ）／（ｍｇ・ｃｍ）である）。各試料調製物の濃度（ｍｇ／ｍＬ）を以下のように計算した。濃度＝（Ａ２８０での吸光度－Ａ３５０での吸光度）×（希釈因子）／（消滅係数×経路長）。各試料の平均及び標準偏差を計算した。
【0155】
実施例２：水溶性
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を、およそ１００ｍｇ／ｍＬに濃縮し、水に透析した。次いで、試料をさらに１８０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、１８０ｍｇ／ｍＬで水溶性であった。最大溶解度に達しなかった。
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を、およそ１００ｍｇ／ｍＬに濃縮し、水に透析した。次いで、試料をさらに１８０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、１８０ｍｇ／ｍＬで水溶性であった。最大溶解度に達しなかった。
【0156】
実施例３：抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の初期凍結／融解安定性
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体に対して凍結／融解研究を行った。抗体を１１．６ｍｇ／ｍＬに濃縮し、０．０１％ポリソルベート２０の有り無しで、ｐＨ７．４で１×ＰＢＳに配合した。配合した溶液をバイアルに充填し、－７０℃から周囲温度まで最大３サイクルの凍結／融解に供した。試料バイアルを目視検査及びＳＥ－ＨＰＬＣによって分析した。凍結／融解結果を表１に示す。３回の凍結／融解サイクルにわたって凝集体のわずかな増加が観察された。結果は、製剤に対して１×ＰＢＳが許容されることを示唆している。
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体に対して凍結／融解研究を行った。抗体を１１．６ｍｇ／ｍＬに濃縮し、０．０１％ポリソルベート２０の有り無しで、ｐＨ７．４で１×ＰＢＳに配合した。配合した溶液をバイアルに充填し、－７０℃から周囲温度まで最大３サイクルの凍結／融解に供した。試料バイアルを目視検査及びＳＥ－ＨＰＬＣによって分析した。凍結／融解結果を表１に示す。３回の凍結／融解サイクルにわたって凝集体のわずかな増加が観察された。結果は、製剤に対して１×ＰＢＳが許容されることを示唆している。
【0157】
実施例４：抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の酸化試験
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、合計１０個のメチオニン残基を有し、その中で、４個のメチオニンが重鎖の各々にあり、いずれもＣＤＲ１に位置しない。加えて、軽鎖には１つのメチオニンが存在する。
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、合計１０個のメチオニン残基を有し、その中で、４個のメチオニンが重鎖の各々にあり、いずれもＣＤＲ１に位置しない。加えて、軽鎖には１つのメチオニンが存在する。
【0158】
実験を行って、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を０．０１％、０．１％、または１．０％の過酸化水素により室温で一晩インキュベートすることによって、メチオニンの酸化に対する感受性を評価した。その後、各メチオニン残基の酸化レベルを定性的に決定するために、酸化された試料をトリプシンマッピングＬＣ／ＭＳによって特徴付けた。酸化試料の活性は、効力についての細胞ベースのアッセイによって決定され、結合親和性はＢｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって分析された。表２に示されるペプチドマップＬＣ／ＭＳ特徴付けは、軽鎖メチオニン５及び重鎖メチオニン８１が酸化されにくいことを明らかにした。重鎖メチオニン２４９、３５５、及び４２５は、より酸化されやすかった。酸化された試料の全ては、ＥＬＩＳＡアッセイによって対照と同等の効力を示した。
【0159】
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体のＦＧＦＲ２ｂ及びタンパク質Ａへの結合は、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定された。重鎖メチオニンの酸化は、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体のＦＧＦＲ２ｂへの結合を妨げなかった（図１及び表３）。酸化の増加は、タンパク質Ａへの結合を妨げた。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の酸化分解は、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の活性が高度に酸化された試料において著しく影響されなかったことを考慮して重要ではなかった。
【0160】
実施例５：タンパク質安定性に対する緩衝液ｐＨの効果
製剤ｐＨは、タンパク質安定性に影響を及ぼす。製剤のｐＨは、脱アミド化、異性化、及び酸化などの生化学分解経路、ならびにタンパク質とそれらの環境との相互作用による凝集及び断片化などの生体物理分解に影響を及ぼし得る。緩衝液ｐＨを、生成物安定性に影響を及ぼし得る製剤変数として研究した。貯蔵時の抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体立体構造安定性及び化学安定性に対するｐＨの影響を評価した。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を２段階精製し、ｐＨ値が４．０～８．０の範囲の９つの異なる等張製剤（表４の製剤１～９）に製剤化した。緩衝液交換溶液のタンパク質濃度を１ｍｇ／ｍＬに調整し、溶液をＤＳＣ分析のためにバイアルに充填し、４０℃及び２５℃で等温安定性評価した。評価された製剤を表４に列挙する。
製剤ｐＨは、タンパク質安定性に影響を及ぼす。製剤のｐＨは、脱アミド化、異性化、及び酸化などの生化学分解経路、ならびにタンパク質とそれらの環境との相互作用による凝集及び断片化などの生体物理分解に影響を及ぼし得る。緩衝液ｐＨを、生成物安定性に影響を及ぼし得る製剤変数として研究した。貯蔵時の抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体立体構造安定性及び化学安定性に対するｐＨの影響を評価した。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を２段階精製し、ｐＨ値が４．０～８．０の範囲の９つの異なる等張製剤（表４の製剤１～９）に製剤化した。緩衝液交換溶液のタンパク質濃度を１ｍｇ／ｍＬに調整し、溶液をＤＳＣ分析のためにバイアルに充填し、４０℃及び２５℃で等温安定性評価した。評価された製剤を表４に列挙する。
【0161】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析による立体構造安定性
表４からの製剤１～９のＤＳＣサーモグラムを生成し、分析した。製剤１～３を表５に＊でマークし、その結果を図２に示す。試料を加熱すると、３つの遷移が観察された。展開遷移後、ＩｇＧ分子は不溶性凝集体を形成し、溶液から沈殿した。表５は、展開温度（ＴＭ１）がｐＨの増加とともに増加し、ｐＨ６及びｐＨ７で約６９℃で最大ＴＭ１に達したことを示す。緩衝液種は展開温度に対して著しい影響を示さなかった。
表４からの製剤１～９のＤＳＣサーモグラムを生成し、分析した。製剤１～３を表５に＊でマークし、その結果を図２に示す。試料を加熱すると、３つの遷移が観察された。展開遷移後、ＩｇＧ分子は不溶性凝集体を形成し、溶液から沈殿した。表５は、展開温度（ＴＭ１）がｐＨの増加とともに増加し、ｐＨ６及びｐＨ７で約６９℃で最大ＴＭ１に達したことを示す。緩衝液種は展開温度に対して著しい影響を示さなかった。
【0162】
等温安定性
凝集体、クリップ（断片）、及び荷電多様体の形成に対する緩衝液ｐＨの影響を、４０℃及び２５℃での加速貯蔵条件下で試料安定性を監視することによって評価した。
凝集体、クリップ（断片）、及び荷電多様体の形成に対する緩衝液ｐＨの影響を、４０℃及び２５℃での加速貯蔵条件下で試料安定性を監視することによって評価した。
【0163】
凝集体及びクリップの変化は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって決定した。選択した抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体のｐＨスクリーニング試料の代表的なＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラムを図３に示す。メインピークはモノマーを表し、モノマーよりも早く溶出したピークは凝集体であり、後で溶出したピークはクリップである。可溶性凝集体は、４０℃でｐＨ４製剤中で急速に増加し、ｐＨ５．０及びｐＨ８．０緩衝液中で可溶性凝集体の中程度の増加が見られた。クリップの形成に対するｐＨの同様の効果が観察された。
【0164】
４０℃の凝集体（図４）及びクリップ（図５）に対する緩衝液ｐＨの影響を、ＳＥ－ＨＰＬＣによって分析した。表５に列挙される製剤１、２、３、７、８、及び９を試験した。試験したｐＨ範囲内で、クリップ形成は、ｐＨ４において最も有意であった。中性ｐＨでは、図５に示すように、４０℃で１ヶ月間の貯蔵後でもクリップの形成はごくわずかであった。２５℃で少なくとも２ヶ月間の貯蔵後、ｐＨ５～ｐＨ８の製剤において凝集体の明らかな増加は観察されなかった（図６）。２５℃で少なくとも２ヶ月間の貯蔵後、ｐＨ５～ｐＨ８の製剤においてクリップの明らかな増加は観察されなかった（図７）。
【0165】
荷電多様体分布の変化は、抗体の別の一般的な分解経路であり、典型的には、製剤緩衝液ｐＨに関連する。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の荷電多様体を、弱いカチオン交換ＨＰＬＣ（ＷＣＸ－ＨＰＬＣ）法で分析した。代表的なクロマトグラムを図８に示す。メインピークの前に出現するピークは酸性種であり、メインピークの後に出現するピークは塩基性種である。酸性種の増加は、ＩｇＧ分子中のアスパラギンの脱アミド化に起因する。荷電多様体プロファイルの変化は、４０℃で劇的に生じた。したがって、荷電プロファイルの変化を２５℃などのより低い温度で監視した。図９～１１は、弱いカチオン交換高性能液体クロマトグラフィー（ＷＣＸ－ＨＰＬＣ）によって決定される、２５℃での荷電多様体に対する緩衝液ｐＨの影響を示す。図９に示されるように、塩基性ｐＨ条件において、特にｐＨ８．０において酸性種が急速に増加した。ｐＨ５～ｐＨ６の間で製剤化された試料は、２５℃で２ヶ月間の貯蔵後でも安定したままであった。図１０は、２５℃で０～２．５ヶ月間の貯蔵の塩基性多様体のパーセンテージに対するｐＨの影響を示す。図１１は、２５℃で０～２．５ヶ月間の貯蔵のメインピークに対するｐＨの影響を示す。
【0166】
ｐＨスクリーニング研究の結果は、ストレス貯蔵条件下で、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の安定性が製剤ｐＨに強く依存していたことを示す。塩基性ｐＨでは、酸性多様体の凝集及び形成が主な分解経路であった。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、５．０～６．０のｐＨ範囲において最も安定であることが決定された。
【0167】
実施例６：タンパク質安定性に対する賦形剤の効果
緩衝液種及びバルキング剤などの製剤賦形剤を、生成物安定性に対するそれらの効果について分析した。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の安定性に対する賦形剤の効果を評価するために、様々なクエン酸塩、リン酸塩、及びヒスチジン緩衝液を試験した。試験した、ｐＨ６．０で緩衝した７つの異なる等張溶液が、表６に列挙される。
緩衝液種及びバルキング剤などの製剤賦形剤を、生成物安定性に対するそれらの効果について分析した。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の安定性に対する賦形剤の効果を評価するために、様々なクエン酸塩、リン酸塩、及びヒスチジン緩衝液を試験した。試験した、ｐＨ６．０で緩衝した７つの異なる等張溶液が、表６に列挙される。
【0168】
タンパク質濃度を２０ｍｇ／ｍＬに調整し、溶液をバイアルに充填した。表６中の製剤１～４をＤＳＣによって分析した。全ての製剤について物理的安定性を評価し、４０℃、２５℃、５℃での等温安定性評価を製剤１～５について決定した。
【0169】
ＤＳＣ分析による立体構造安定性
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の様々な製剤の展開温度が、ＤＳＣ分析によって決定され、表７に要約される。９０℃に加熱した後、全ての製剤において沈殿が観察された。製剤中の界面活性剤は、変性後の沈殿から抗体を保護しなかった。表７に示されるように、製剤は、同等の溶融温度を有した。
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の様々な製剤の展開温度が、ＤＳＣ分析によって決定され、表７に要約される。９０℃に加熱した後、全ての製剤において沈殿が観察された。製剤中の界面活性剤は、変性後の沈殿から抗体を保護しなかった。表７に示されるように、製剤は、同等の溶融温度を有した。
【0170】
抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の様々な製剤を加熱すると、３つの温度遷移が検出された。抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ｐＨ４製剤中で５２．７℃で展開し始め、展開温度（Ｔｍ）は、ｐＨの増加と共に増加し、ｐＨ６及びｐＨ７で約７０℃で最大Ｔｍ１に達し、Ｔｍは、ｐＨ８でわずかに低下した。
【0171】
物理的安定性
タンパク質医薬品は剪断応力に曝されると凝集しやすいため、物理的安定性研究を実施して、複数の凍結／融解サイクル及び激しい撹拌に対する抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の安定性に対する賦形剤の効果を評価した。不溶性及び可溶性凝集体について、視覚的観察、Ａ３５０光散乱、及びＳＥ－ＨＰＬＣによって安定性を評価した。試料中の抗体濃度は、２０ｍｇ／ｍＬであった。
タンパク質医薬品は剪断応力に曝されると凝集しやすいため、物理的安定性研究を実施して、複数の凍結／融解サイクル及び激しい撹拌に対する抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の安定性に対する賦形剤の効果を評価した。不溶性及び可溶性凝集体について、視覚的観察、Ａ３５０光散乱、及びＳＥ－ＨＰＬＣによって安定性を評価した。試料中の抗体濃度は、２０ｍｇ／ｍＬであった。
【0172】
試料バイアルを軌道シェーカー上に水平に配置し、試料を５００ＲＰＭで７７時間、室温で振盪させることによって、試料に撹拌応力を加えた。凝集形成の防止に対するポリソルベート２０の効果を評価するために、０％、０．０１％、０．０５％、及び０．１０％のポリソルベート２０を有するアルギニン製剤の直接比較を行った。表８及び図１２に示されるように、全ての製剤において、ＳＥ－ＨＰＬＣによって可溶性凝集体の明らかな増加は検出されなかった。
【0173】
凍結／融解試験も、５サイクルにわたって試料を－７０℃で凍結し、周囲温度で融解することによって実施した。図１３に示されるように、ヒスチジン／ＮａＣｌ製剤における可溶性凝集体において観察された唯一の明らかな変化は、凍結／融解サイクルの増加に伴って増加した。０．０１％のポリソルベート２０を製剤に添加することにより、振盪応力に対する抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の安定性が向上した。
【0174】
等温安定性
凝集体、クリップ、及び荷電多様体の形成に対する緩衝液種及びバルキング剤の影響を、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の安定性を４０℃、２５℃、及び５℃の加速貯蔵条件下で監視することによって評価した。凝集体及びクリップの変化をＳＥ－ＨＰＬＣで監視した。以下の製剤を試験した：２０ｍＭクエン酸塩、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、及び０．０１％ポリソルベート２０；２０ｍＭリン酸塩、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、及び０．０１％ポリソルベート２０；２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、及び０．０１％ポリソルベート２０；２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．０１％ポリソルベート２０；ならびに２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、ポリソルベート２０なし。
凝集体、クリップ、及び荷電多様体の形成に対する緩衝液種及びバルキング剤の影響を、抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の安定性を４０℃、２５℃、及び５℃の加速貯蔵条件下で監視することによって評価した。凝集体及びクリップの変化をＳＥ－ＨＰＬＣで監視した。以下の製剤を試験した：２０ｍＭクエン酸塩、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、及び０．０１％ポリソルベート２０；２０ｍＭリン酸塩、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、及び０．０１％ポリソルベート２０；２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、及び０．０１％ポリソルベート２０；２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．０１％ポリソルベート２０；ならびに２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、ポリソルベート２０なし。
【0175】
図１４に示されるように、凝集体は、４０℃でクエン酸塩及びリン酸塩製剤中でより高い速度で形成された。４０℃で１ヶ月間の貯蔵後に、全ての製剤において不顕著な断片化が観察された。全ての製剤は、２５℃で３ヶ月間の貯蔵後に、同じ凝集増加を示した（図１５）。
【0176】
製剤賦形剤は、貯蔵時に抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体の荷電プロファイルに影響を与えなかった。図１６に示されるように、全ての製剤において酸性多様体の増加があった。図１７は、経時的に全ての製剤における塩基性多様体の減少があったことを示し、図１８は、メインピークに対する賦形剤の経時的な影響を示す。
【0177】
抗体安定性試験に基づいて、Ｌ－ヒスチジンは、評価された緩衝液種間で抗体安定性に有意な影響を与えなかった。クエン酸ナトリウム及びリン酸ナトリウムは、４０℃で１ヶ月後に凝集体の増加を有した。したがって、Ｌ－ヒスチジンは、クエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウムよりも安定しており、凝集体は、クエン酸塩及びリン酸塩製剤においてより速い速度で増加した。
【0178】
評価されたバルキング剤の中で、ＮａＣｌは、激しい振盪及び凍結／融解プロセスに曝すことによって誘導される凝集体形成をもたらした。最も安定した抗体プロファイルは、Ｌ－アルギニン製剤で得られた。
【0179】
実施例７：ｐＨ評価研究
製剤の化学的及び物理的安定性に対するｐＨの効果を試験した。以下の製剤を、ｐＨ５．５、６．０、及び６．５で試験した：（ａ）２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭアルギニン、０．０１％ポリソルベート２０、及び（ｂ）２０ｍＭヒスチジン、２７０ｍＭスクロース、０．０１％ポリソルベート２０（表９）。製剤を２０ｍｇ／ｍＬに調整し、ガラスバイアルに充填した。
製剤の化学的及び物理的安定性に対するｐＨの効果を試験した。以下の製剤を、ｐＨ５．５、６．０、及び６．５で試験した：（ａ）２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭアルギニン、０．０１％ポリソルベート２０、及び（ｂ）２０ｍＭヒスチジン、２７０ｍＭスクロース、０．０１％ポリソルベート２０（表９）。製剤を２０ｍｇ／ｍＬに調整し、ガラスバイアルに充填した。
【0180】
物理的安定性に対するｐＨの効果
複数の凍結／融解サイクル及び激しい撹拌に対する安定性を評価した。不溶性及び可溶性凝集体について、視覚的観察、Ａ３５０光散乱、及びＳＥ－ＨＰＬＣによって、安定性を評価した。
複数の凍結／融解サイクル及び激しい撹拌に対する安定性を評価した。不溶性及び可溶性凝集体について、視覚的観察、Ａ３５０光散乱、及びＳＥ－ＨＰＬＣによって、安定性を評価した。
【0181】
Ｉ．機械的撹拌
試料バイアルを軌道シェーカー上に水平に配置し、試料を５００ＲＰＭで７２時間、室温で振盪させることによって、試料に撹拌応力を加えた。全ての製剤において、ＳＥ－ＨＰＬＣによって可溶性凝集体の明らかな増加は検出されなかった。図１９は、時間の経過とともに、ｐＨ５．５～６．５の間（ｐＨ５．５、６．０及び６．５）のヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤の凝集に対する機械的ストレスの影響を示す。図１９は、ｐＨ５．５～６．５のヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤のクリップに対する機械的ストレスの影響を示す。７２時間の機械的撹拌後、濃度またはＡ３５０ｎｍにおける光散乱に有意な変化はなかった（表１０に示す）。
試料バイアルを軌道シェーカー上に水平に配置し、試料を５００ＲＰＭで７２時間、室温で振盪させることによって、試料に撹拌応力を加えた。全ての製剤において、ＳＥ－ＨＰＬＣによって可溶性凝集体の明らかな増加は検出されなかった。図１９は、時間の経過とともに、ｐＨ５．５～６．５の間（ｐＨ５．５、６．０及び６．５）のヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤の凝集に対する機械的ストレスの影響を示す。図１９は、ｐＨ５．５～６．５のヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤のクリップに対する機械的ストレスの影響を示す。７２時間の機械的撹拌後、濃度またはＡ３５０ｎｍにおける光散乱に有意な変化はなかった（表１０に示す）。
【0182】
ＩＩ．凍結融解の安定性
５サイクルにわたって試料を－７０℃で凍結し、周囲温度で融解することによって、凍結／融解研究を行った。図２１及び２２は、ｐＨ５．５～６．５の間のヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤の凝集及びクリップに対する凍結融解の影響を示す。図２１において、ｐＨ５．５～６．５の間のヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤のいずれにおいても、ＳＥ－ＨＰＬＣによって可溶性凝集体の明らかな増加は検出されなかった。図２２では、いずれの製剤においても、ＳＥ－ＨＰＬＣによってクリップの明らかな増加は検出されなかった。
５サイクルにわたって試料を－７０℃で凍結し、周囲温度で融解することによって、凍結／融解研究を行った。図２１及び２２は、ｐＨ５．５～６．５の間のヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤の凝集及びクリップに対する凍結融解の影響を示す。図２１において、ｐＨ５．５～６．５の間のヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤のいずれにおいても、ＳＥ－ＨＰＬＣによって可溶性凝集体の明らかな増加は検出されなかった。図２２では、いずれの製剤においても、ＳＥ－ＨＰＬＣによってクリップの明らかな増加は検出されなかった。
【0183】
【0184】
濃度及び光散乱は、凍結融解後も変化しないままであった。
【0185】
Ｉ．等温安定性に対するｐＨの効果
凝集体、クリップ、及び荷電多様体の形成に対する緩衝液ｐＨの影響は、４０℃、２５℃での加速貯蔵条件下での試料安定性、及び５℃でのリアルタイム安定性を監視することによって評価された。以下の製剤を試験した：（Ａ）２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭアルギニン、０．０１％ポリソルベート２０（「ヒスチジン／アルギニン製剤」）、及び（Ｂ）２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭスクロース、０．０１％ポリソルベート２０（「ヒスチジン／スクロース製剤」）。
凝集体、クリップ、及び荷電多様体の形成に対する緩衝液ｐＨの影響は、４０℃、２５℃での加速貯蔵条件下での試料安定性、及び５℃でのリアルタイム安定性を監視することによって評価された。以下の製剤を試験した：（Ａ）２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭアルギニン、０．０１％ポリソルベート２０（「ヒスチジン／アルギニン製剤」）、及び（Ｂ）２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭスクロース、０．０１％ポリソルベート２０（「ヒスチジン／スクロース製剤」）。
【0186】
ヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤において、４０℃で１ヶ月後、及び２５℃で３ヶ月後に凝集及びクリップ形成がｐＨと共に増加した。ヒスチジン／スクロース製剤は、わずかに低い凝集速度を示す。５℃で６ヶ月後も凝集は変わらないままであり、ヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤の両方において、クリップ形成は約１％増加した。
【0187】
例えば、図２３Ａ～Ｃは、（Ａ）４０℃で１ヶ月間、（Ｂ）２５℃で３ヶ月間、及び（Ｃ）５℃で６ヶ月間にわたって測定された様々なｐＨ条件についてのヒスチジン／アルギニン製剤中の凝集体の形成を示す。図２４Ａ～Ｃは、（Ａ）４０℃で１ヶ月間、（Ｂ）２５℃で３ヶ月間、及び（Ｃ）５℃で６ヶ月間にわたって測定した様々なｐＨ条件（ｐＨ５．５～６．５）のヒスチジン／アルギニン製剤におけるクリップ形成を示す。
【0188】
図２５Ａ～Ｃは、（Ａ）４０℃で１ヶ月間、（Ｂ）２５℃で３ヶ月間、及び（Ｃ）５℃で６ヶ月間にわたって測定された様々なｐＨ条件のヒスチジン／スクロース製剤中の凝集体形成を示す。図２６Ａ～Ｃは、（Ａ）４０℃で１ヶ月間、（Ｂ）２５℃で３ヶ月間、及び（Ｃ）５℃で６ヶ月間にわたって測定した様々なｐＨ条件（ｐＨ５．５～６．５）についてのヒスチジン／スクロース製剤中の抗体のクリップ形成を示す。
【0189】
荷電アイソフォームも、５℃で６カ月後に変化しないままであった。例えば、図２７Ａ～Ｃは、（Ａ）４０℃で１ヶ月後、（Ｂ）２５℃で３ヶ月後、及び（Ｃ）５℃で６ヶ月後に、ヒスチジン／スクロース製剤中の酸性多様体が増加したことを示す。
【0190】
加えて、図２８Ａ～Ｃは、２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのアルギニン、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／アルギニン製剤中の酸性多様体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。図２８Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、酸性多様体％が概して４０％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。図２８Ｂは、ｐＨ５．５～６．０において、２５℃で３ヶ月後、酸性多様体％が概して３０．０％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。図２８Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％酸性多様体が概して２５％未満のままであったことを示す、酸性多様体形成を示す。図２９Ａ～Ｃは、２０ｍＭのヒスチジン、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／スクロース製剤中の塩基性多様体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。図２９Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、％塩基性多様体がほとんど１０％～２０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。図２９Ｂは、ｐＨ５．５～６．０において、２５℃で３ヶ月後、％塩基性多様体が概して２０％～３０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。図２９Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％塩基性多様体が概して２５％～３０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。
【0191】
図３０Ａ～Ｃは、２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのアルギニン、及び０．０１％のポリソルベート２０を含むヒスチジン／アルギニン製剤中の塩基性多様体形成に対するｐＨ５．５～６．５の間のｐＨの効果を示す。図３０Ａは、ｐＨ５．５～６．０において、４０℃で１ヶ月後、％塩基性多様体がほとんど１０％～２０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。図３０Ｂは、ｐＨ５．５～６．０において、２５℃で３ヶ月後、％塩基性多様体が概して１５％～２５％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。図３０Ｃは、全てのｐＨにおいて、５℃で６ヶ月後、％塩基性多様体が概して２５％～３０％の間のままであったことを示す、塩基性多様体形成を示す。
【0192】
ヒスチジン／アルギニン及びヒスチジン／スクロース製剤の両方は、ｐＨ５．５～ｐＨ６．５の間で許容可能な安定性を維持した。全体的に、ヒスチジン／スクロース製剤は、ｐＨ５．５～６．０の間のヒスチジン／アルギニンよりも安定していた。
【0193】
２５℃で３ヶ月での製剤安定性及び５℃で６ヶ月での安定性に関するデータ、ならびに上記実施例における他の製剤研究からのデータに基づいて、２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０１％のポリソルベート２０を６．０のｐＨで含有する液体製剤を開発した。２０ｍｇ／ｍＬの抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、１５０ｍＭのＬ－アルギニン、０．０１％のポリソルベート２０をｐＨ５．７で含有する第２の製剤も開発した。
【0194】
本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際に、記載されるものに加えて、本明細書に提供される様々な修正は、前述の説明及び添付の図面から当業者には明白になるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図される。
【0195】
本明細書に引用される全ての参照文献（例えば、公開文献または特許または特許出願）は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれ、各個々の参照文献（例えば、公開文献または特許または特許出願）が全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれることが具体的かつ個々に示されているかのように同じ程度で、全ての目的のために本明細書に組み込まれる。
【0196】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【0197】
配列の表
以下の配列表は、本明細書で考察されるある特定の配列を提供する。別段の指示がない限り、全てのポリペプチド及び抗体配列は、リーダー配列なしで示される。
以下の配列表は、本明細書で考察されるある特定の配列を提供する。別段の指示がない限り、全てのポリペプチド及び抗体配列は、リーダー配列なしで示される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-07-16
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
薬学的製剤であって、
ｉ）１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体と、
ｉｉ）ヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩のうちの１つ以上から選択される５～４０ｍＭの緩衝液と、
ｉｉｉ）１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．００２％～０．１％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含み、
前記製剤が、５．０～６．５のｐＨを有し、前記抗ＦＧＦＲ２抗体が、
ａ）配列番号２の配列を含む重鎖、及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、
ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびに
ｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体、から選択される、前記薬学的製剤。
ｉ）１０～３０ｍｇ／ｍＬの抗線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）抗体と、
ｉｉ）ヒスチジン、クエン酸塩、またはリン酸塩のうちの１つ以上から選択される５～４０ｍＭの緩衝液と、
ｉｉｉ）１３０～１７０ｍＭのアルギニンまたは２５０～２９０ｍＭのスクロースと、
ｉｖ）０．００２％～０．１％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含み、
前記製剤が、５．０～６．５のｐＨを有し、前記抗ＦＧＦＲ２抗体が、
ａ）配列番号２の配列を含む重鎖、及び配列番号３の配列を含む軽鎖を含む抗体、
ｂ）配列番号６の配列を含む重鎖（ＨＣ）超可変領域１（ＨＶＲ１）、配列番号７の配列を含むＨＣ ＨＶＲ２、及び配列番号８の配列を含むＨＣ ＨＶＲ３を含む重鎖と、配列番号９の配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＨＶＲ１、配列番号１０の配列を含むＬＣ ＨＶＲ２、及び配列番号１１の配列を含むＬＣ ＨＶＲ３を含む軽鎖とを含む抗体、ならびに
ｃ）配列番号４の配列を含む可変領域配列を含む重鎖、及び配列番号５の配列を含む軽鎖可変領域配列を含む軽鎖を含む抗体、から選択される、前記薬学的製剤。
【外国語明細書】