特開2024-142368サリチル酸メチルを検出するための試薬、サリチル酸メチルセンサー、それらを用いたサリチル酸メチルのセンシング方法、及び植物の病原菌感染の検出方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024142368
(43)【公開日】2024-10-11
(54)【発明の名称】サリチル酸メチルを検出するための試薬、サリチル酸メチルセンサー、それらを用いたサリチル酸メチルのセンシング方法、及び植物の病原菌感染の検出方法
(51)【国際特許分類】
G01N 21/78 20060101AFI20241003BHJP
G01N 21/64 20060101ALI20241003BHJP
A01G 7/00 20060101ALI20241003BHJP
【ＦＩ】
G01N21/78 C
G01N21/64 F
A01G7/00 603
【審査請求】未請求
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023054485
(22)【出願日】2023-03-30
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）国等の委託研究の成果に係る特許出願（国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構生物系特定産業技術研究支援センター令和４年度「イノベーション創出強化研究推進事業 基礎研究ステージ（基礎研究型）」、産業技術力強化法第１７条の適用を受けるもの）
(71)【出願人】
【識別番号】000004237
【氏名又は名称】日本電気株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100106297
【弁理士】
【氏名又は名称】伊藤 克博
(72)【発明者】
【氏名】前田 勝美
【テーマコード（参考）】
2G043
【Ｆターム（参考）】
2G043AA04
2G043BA17
2G043DA02
2G043EA01
(57)【要約】
【課題】
農作物を含む植物の栽培において、病原菌感染した際に放出される植物ホルモンであるサリチル酸メチルを検出するための試薬、サリチル酸メチルセンサー、それを用いたサリチル酸メチルのセンシング方法を提供し、それによって植物の病原菌感染を検出する方法を提供する。
【解決手段】
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含むサリチル酸メチルを検出するための試薬、前記試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部とを備えるサリチル酸メチルセンサー、前記試薬を用いてサリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルのセンシング方法。
【選択図】なし
農作物を含む植物の栽培において、病原菌感染した際に放出される植物ホルモンであるサリチル酸メチルを検出するための試薬、サリチル酸メチルセンサー、それを用いたサリチル酸メチルのセンシング方法を提供し、それによって植物の病原菌感染を検出する方法を提供する。
【解決手段】
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含むサリチル酸メチルを検出するための試薬、前記試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部とを備えるサリチル酸メチルセンサー、前記試薬を用いてサリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルのセンシング方法。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬。
【請求項2】
前記テルビウム複合塩が、下記一般式（１）：
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
で表される、請求項１に記載の試薬。
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
で表される、請求項１に記載の試薬。
【請求項3】
一般式（１）中のＸがピバル酸イオンである、請求項２に記載の試薬。
【請求項4】
一般式（１）中のＹが酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン及び２－メチル酪酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンである、請求項２に記載の試薬。
【請求項5】
さらに非揮発性のイオン液体を含む、請求項１又は２に記載の試薬。
【請求項6】
前記イオン液体が、イミダゾリウム塩、ホスホニウム塩、ピリジニウム塩、アンモニウム塩、ピペリジニウム塩、及びピロリジニウム塩から成る群から選択される少なくとも１つである、請求項５に記載の試薬。
【請求項7】
サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、
請求項１又は２に記載の試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサー。
請求項１又は２に記載の試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサー。
【請求項8】
前記捕捉部が、前記試薬を含有する媒体を含む、請求項７に記載のサリチル酸メチルセンサー。
【請求項9】
請求項１又は２に記載の試薬を用いてサリチル酸メチルを捕捉する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
【請求項10】
請求項１又は２に記載の試薬を植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、植物が病原菌に感染した際に放出する植物ホルモンであるサリチル酸メチルを検出するための試薬、サリチル酸メチルセンサー、それらを用いたサリチル酸メチルのセンシング方法、及び植物の病原菌感染を早期に検出する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
植物は、病原菌の感染を受けると、シグナル物質である植物ホルモンを合成・放出し、周囲の植物に病原菌の感染を知らせることで、予め防御機構を促すことが知られている。こうした植物が放出するシグナル物質をいち早く認識することで病害虫被害を早期に検出することが可能となる。
【0003】
対象植物の害虫被害を早期発見する方法としては、例えば、特許文献１には、対象植物の近傍に、発光タンパク質遺伝子を有するモニター植物を配置し、対象植物がストレスに応答して放出する揮発性物質をモニター植物が感知して発光する現象を利用する方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】国際公開第２０１９／０８２９４２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明の課題は、農作物を含む植物の栽培において、病原菌感染した際に放出される植物ホルモンであるサリチル酸メチルを検出するための試薬、サリチル酸メチルセンサー、それらを用いたサリチル酸メチルのセンシング方法を提供し、それによって植物の病原菌感染を早期に検出する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者らは、上述の課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、サリチル酸メチルのレセプターとしてテルビウム複合塩を使用することにより、サリチル酸メチルとの反応に伴い生成する錯体からの蛍光発光が増大し、植物の病原菌感染を高感度で早期に検出できることを見出し、本発明を完成した。
【0007】
本実施形態の一態様は、２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬に関する。
【0008】
また、本実施形態の一態様は、サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、
請求項１又は２に記載の試薬を有するサリチル酸メチルの補足部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサーに関する。
請求項１又は２に記載の試薬を有するサリチル酸メチルの補足部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサーに関する。
【0009】
さらに、本実施形態の一態様は、前記試薬を用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法に関する。
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法に関する。
【0010】
またさらに、本実施形態の一態様は、前記試薬を植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法に関する。
【発明の効果】
【0011】
本発明によると、サリチル酸メチルを検出するための試薬において、サリチル酸メチルのレセプターとしてテルビウム複合塩を含有させることにより、植物が病原菌に感染した際に放出される揮発性植物ホルモンのサリチル酸メチルとの反応によって形成された錯体からの蛍光発光強度が増大し、植物の病原菌による感染を高感度で早期に検出することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【発明を実施するための形態】
【0013】
以下に、本発明を実施するための形態について図面等を用いて説明する。ただし、以下に述べる実施形態には、本発明を実施するために技術的に好ましい限定がされているが、発明の範囲を以下に限定するものではない。
【0014】
［１］サリチル酸メチルを検出するための試薬
本発明の一実施形態は、サリチル酸メチルのレセプターとして、２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬である。本発明において、用語「試薬」とは、化学的方法による物質の検出もしくは定量、物質の合成、又は物理的特性の測定のために使用される化学物質と定義される。
本発明の一実施形態は、サリチル酸メチルのレセプターとして、２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬である。本発明において、用語「試薬」とは、化学的方法による物質の検出もしくは定量、物質の合成、又は物理的特性の測定のために使用される化学物質と定義される。
【0015】
＜サリチル酸メチルのレセプター：テルビウム複合塩＞
本発明においてサリチル酸メチルを認識するために利用できるテルビウム複合塩は、構造の異なる２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩である。
本発明においてサリチル酸メチルを認識するために利用できるテルビウム複合塩は、構造の異なる２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩である。
【0016】
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩としては、下記一般式（１）で表されるものが好ましい。
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
【0017】
対アニオンは、２種であっても、３種以上であってもよい。対アニオンが２種である場合は、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して１種の１価アニオンであり、対アニオンが３種以上である場合は、Ｘは１種の１価アニオンであり、Ｙは複数の種類の１価アニオンである。
【0018】
対アニオンは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択されることが好ましい。ここで、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、又は炭素数６～１４のアリール基であり；任意でフッ素原子で置換される炭素数１～６のアルキル基又はフェニル基であることが好ましく；メチル基、エチル基、プロピル基、２－メチルプロピル基、トリフルオロメチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、又はイソブチル基であることがさらに好ましい。ハロゲン化物イオンとしては、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、及びヨウ化物イオン等が挙げられ、塩化物イオンであることが好ましい。
【0019】
一般式（１）中のＸはピバル酸イオン（すなわち、Ｒ＝ｔｅｒｔ－ブチル基）であることが好ましく、一般式（１）中のＹは酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン及び２－メチル酪酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオン（すなわち、Ｒ＝メチル基、エチル基、プロピル基、２－メチルプロピル基、トリフルオロメチル基、イソブチル基）であることが好ましい。またテルビウム複合塩の具体的な例としては、酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩、２－メチル酪酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩、トリフルオロ酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩、酢酸テルビウム－２－メチル酪酸テルビウム複合塩等が挙げられるが、これらだけに限定されるものではない。
【0020】
テルビウム複合塩、例えば、ピバル酸テルビウム－酢酸テルビウム複合塩（Ｔｂ（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）ａ（ＣＨ３ＣＯＯ）３－ａ）は、ピバル酸テルビウムと酢酸テルビウムをメタノールに完全に溶解し、加熱反応させることで合成することができる。また、合成時のテルビウム塩の配合比率を変えることで、複合塩の対イオン（Ｘ、Ｙ）の比率を変えることができる。
【0021】
ｘがピバル酸イオンである場合、一般式（１）中のａは０．３～２．５であることが好ましく、０．４～２．０であることがより好ましく、０．５～１．５であることがさらに好ましく、０．７～１．０であることが特に好ましい。
【0022】
テルビウム複合塩は、サリチル酸メチルと反応してサリチル酸メチル錯体を形成することで、サリチル酸メチルを選択的に認識することができる。そして生成したサリチル酸メチル－テルビウム錯体は、ＵＶで励起するとテルビウム錯体特有の蛍光を発光する。テルビウム複合塩のみでは、ＵＶ光を照射しても蛍光の発光強度は小さいため観察されない。また、テルビウム複合塩は、サリチル酸メチル以外の他の植物ホルモン、例えばジャスモン酸メチルとは反応せず認識しないため、サリチル酸メチルを選択的に認識することができる。テルビウム複合塩は、テルビウム単塩と比較して、サリチル酸メチルとの反応によって形成された錯体からの蛍光発光強度が増大する。
【0023】
＜非揮発性のイオン液体＞
本発明のサリチル酸メチルを検出するための試薬は、サリチル酸メチルを効果的に捕捉させるため、テルビウム複合塩に加えて、非揮発性のイオン液体を含むことができる。イオン液体を含む場合、テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解して存在するが、一部は析出している場合もある。テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解していても、析出していても、同様にサリチル酸メチルのレセプターとして機能することができる。
本発明のサリチル酸メチルを検出するための試薬は、サリチル酸メチルを効果的に捕捉させるため、テルビウム複合塩に加えて、非揮発性のイオン液体を含むことができる。イオン液体を含む場合、テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解して存在するが、一部は析出している場合もある。テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解していても、析出していても、同様にサリチル酸メチルのレセプターとして機能することができる。
【0024】
本発明において利用できる非揮発性のイオン液体としては、イミダゾリウム塩、ホスホニウム塩、ピリジニウム塩、アンモニウム塩、ピペリジニウム塩、ピロリジニウム塩等が挙げられる。具体的には、１－エチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボラート、１－ブチル－１－メチルピロリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムジブチルホスファート、テトラブチルアンモニウムアセタート、１－ブチルピリジニウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、１－メチル－１－プロピルピペリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムジシアナミド等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0025】
テルビウム複合塩に対するイオン液体の比率は、重量比で２～４０倍であることが好ましく、３～３０倍であることがより好ましく、４～２０倍であることが特に好ましい。テルビウム複合塩に対するイオン液体の重量比率が２倍未満であると、サリチル酸メチル検出感度の向上効果が得られないことがあり、テルビウム複合塩に対するイオン液体の重量比率が４０倍を超えると、テルビウム複合塩がサリチル酸メチルと錯体を形成しにくくなることがある。
【0026】
本発明のサリチル酸メチルを検出するための試薬は、本発明の効果を損なわない範囲内において、任意で他の溶媒を含んでもよい。溶媒としては、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、水、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド、テトラヒドフラン、アセトン、アセトニトリル、１，４－ジオキサン等を使用することができるがこれらに限定されない。
【0027】
［２］サリチル酸メチルセンサー
本発明の一実施形態は、サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、前記試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部を備える、サリチル酸メチルセンサーに関する。
本発明の一実施形態は、サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、前記試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部を備える、サリチル酸メチルセンサーに関する。
【0028】
（１）捕捉部
本発明のサリチル酸メチルセンサーの捕捉部は、サリチル酸メチルを選択的に認識するレセプターであるテルビウム複合塩を有するものである。捕捉部は、テルビウム複合塩に加えて、サリチル酸メチルを効果的に捕捉させるために、非揮発性のイオン液体を含むことが好ましい。捕捉部において、試薬は媒体に含有されていることが好ましい。
本発明のサリチル酸メチルセンサーの捕捉部は、サリチル酸メチルを選択的に認識するレセプターであるテルビウム複合塩を有するものである。捕捉部は、テルビウム複合塩に加えて、サリチル酸メチルを効果的に捕捉させるために、非揮発性のイオン液体を含むことが好ましい。捕捉部において、試薬は媒体に含有されていることが好ましい。
【0029】
＜媒体＞
本発明のテルビウム複合塩を含有させる媒体としては、例えば、紙又はガラス繊維、樹脂（例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ナイロン樹脂、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリフェニレンオキサイド）、水溶性ポリマー（セルロース系、アガロース、でんぷん系、アルギン酸ナトリウム、アクリル酸系、アクリルアミド系、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリビニルピロリドン等）でありうるが、これらに限定されるものではない。
本発明のテルビウム複合塩を含有させる媒体としては、例えば、紙又はガラス繊維、樹脂（例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ナイロン樹脂、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリフェニレンオキサイド）、水溶性ポリマー（セルロース系、アガロース、でんぷん系、アルギン酸ナトリウム、アクリル酸系、アクリルアミド系、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリビニルピロリドン等）でありうるが、これらに限定されるものではない。
【0030】
例えば、媒体として紙を使用する場合には、テルビウム複合塩を溶媒に溶解し、さらにそこにイオン液体を加えてもよく、得られた溶液を紙（例えば、ろ紙）に含浸させた後、室温～６０℃で乾燥させて溶媒を除去することで、テルビウム複合塩と非揮発性のイオン液体を含有する媒体が得られる。溶媒を使用せず、テルビウム複合塩と非揮発性のイオン液体の混合物を媒体に含侵させることもできるが、溶媒を使用すると、テルビウム複合塩を媒体に含浸させやすくなり、またテルビウム複合塩の濃度調製が容易になるため好ましい。溶媒を除去した後、テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解して存在するが、一部は析出している場合もある。テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解していても、析出していても、同様にサリチル酸メチルのレセプターとして機能することができる。
【0031】
テルビウム複合塩を溶解する溶媒としては、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、水、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド、テトラヒドフラン、アセトン、アセトニトリル、１，４－ジオキサン等を使用することができるが、これらに限定されない。
【0032】
また、溶媒に対するイオン液体の比率は、含浸させる媒体に対して、適宜設定されうる。溶媒に対するイオン液体の比率が低いと、乾燥後の媒体中のイオン液体の量が少なくなり、検出感度の向上効果が小さくなることがある。一方、溶媒に対するイオン液体の比率が大きくなると、イオン液体が高粘度であるために、媒体に含浸しにくくなるデメリットが生じることがある。そのため、溶媒に対するイオン液体の比率は媒体に対して、適宜設定される。例えば、ろ紙に含浸させる場合は、溶媒に対するイオン液体の比率は、５～５０重量％であることが好ましく、１０～３０重量％であることがより好ましい。
【0033】
（２）検出部
本発明のサリチル酸メチルセンサーの検出部は、捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを光学的に検出できるように構成されている。検出部は、捕捉部と一体の装置ではなく、別装置として構成されてもよい。本発明の一態様においては、光学的な検出部では、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルで生成した錯体（サリチル酸メチル錯体）の蛍光発光を検出するために、励起光源（発光部）と検出素子（蛍光の受光部）とを含み、観測された蛍光強度の変化に基づき、サリチル酸メチルの検出及び／又は濃度測定を行うことができる。
本発明のサリチル酸メチルセンサーの検出部は、捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを光学的に検出できるように構成されている。検出部は、捕捉部と一体の装置ではなく、別装置として構成されてもよい。本発明の一態様においては、光学的な検出部では、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルで生成した錯体（サリチル酸メチル錯体）の蛍光発光を検出するために、励起光源（発光部）と検出素子（蛍光の受光部）とを含み、観測された蛍光強度の変化に基づき、サリチル酸メチルの検出及び／又は濃度測定を行うことができる。
【0034】
本発明の一態様においては、検出部は、サリチル酸メチルの検出及び／又は濃度測定を処理するプログラムを実行するコンピュータを含みうる。そのようなプログラムは、例えば、コンピュータに、（ｉ）光学的な検出素子からの信号を受信する段階、（ｉｉ）受信した信号を分析してサリチル酸メチルの有無及び／又はその濃度を決定する段階、並びに、（ｉｉｉ）分析結果を出力する段階を実行させるプログラムでありうる。
【0035】
本発明の一態様においては、受信した信号の分析は、例えば、受信した信号をあらかじめ決められた参照値と比較することにより、サリチル酸メチルの有無及び／又はその濃度を決定することを含みうる。また、本発明の一態様においては、分析結果は、例えば、センサーに接続されたディスプレイ装置、又はネットワークを介して接続された他の機器等に出力されうる。
【0036】
本発明の一態様においては、本発明のサリチル酸メチルセンサーは、農作物が病原菌に感染した際に放出される植物ホルモンのサリチル酸メチルを感知する。よって、本発明のサリチル酸メチルセンサーは、農作物を含む植物の病原菌感染検出用のセンサーとして用いられうる。
【0037】
［３］サリチル酸メチルのセンシング方法
本発明の一実施形態は、前記試薬又はサリチル酸メチルセンサーを用いて、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとを反応させて得られる錯体からの蛍光発光現象を用いてサリチル酸メチルをセンシングする方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法に関する。
本発明の一実施形態は、前記試薬又はサリチル酸メチルセンサーを用いて、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとを反応させて得られる錯体からの蛍光発光現象を用いてサリチル酸メチルをセンシングする方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法に関する。
【0038】
テルビウム複合塩のみではほとんど蛍光発光を示さないのに対し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルの反応により生成した錯体は、新たに蛍光発光を示す。この現象を利用することで、サリチル酸メチルを検出することが可能となる。
【0039】
本発明の一態様では、励起波長として３００～４００ｎｍの範囲内の適切な波長が選択される。さらに、本発明の一態様では、検出された蛍光の強度をあらかじめ決められた参照値と比較することにより、サリチル酸メチルの濃度を決定する工程も実施されうる。
【0040】
［４］植物の病原菌感染を検出する方法
本発明の一実施形態は、前記試薬又はサリチル酸メチルセンサーを植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法に関する。
本発明の一実施形態は、前記試薬又はサリチル酸メチルセンサーを植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法に関する。
【0041】
監視対象となりうる植物としては、例えば、キュウリ、スイカ、トマト、ナス、ピーマン、パプリカ、シシトウ、メロン、ハクサイ、キャベツ、ダイコン、レタス、ネギ、ブロッコリー、タマネギ、ニンニク、ヤマノイモ、アスパラガス、ニンジン、バレイショ、セルリー、タバコ、イネ、イチゴが挙げられるが、これらに限定されない。
【0042】
検出されうる病害としては、例えば、輪紋病、白星病、褐色輪紋病、葉かび病、萎凋病、根腐萎凋病、半身萎凋病、褐色根腐病、灰色疫病、根腐病、黒点根腐病、白絹病、苗立枯病、褐斑病、ベと病、うどんこ病、灰色かび病、炭疽病、黒星病、菌核病、つる枯病、斑点病、疫病、モザイク病、黄化えそ病、黄化葉巻病、青枯病、軟腐病、かいよう病、茎えそ細菌病、黒班細菌病、斑点細菌病等が挙げられるが、これらに限定されず、また、検出されうる病原菌感染としては、上記の病害の原因菌による感染が挙げられるが、これらに限定されない。
【0043】
本開示の文脈において、「植物の近傍に設置する」と言った場合、用語「近傍」の例としては、例えば、監視対象の植物から２ｍ以内、１ｍ以内、７５ｃｍ以内、５０ｃｍ以内、４０ｃｍ以内、３０ｃｍ以内、２０ｃｍ以内、１０ｃｍ以内、又は５ｃｍ以内の距離が挙げられるが、これらに限定されず、適切な距離が種々の要因を考慮して適宜選択される。当業者であれば、センサーを設置する位置を様々な条件を考慮した上で適宜設定することが可能であろう。
【0044】
さらに、本発明の一実施形態は、植物の病原菌感染の検出における、試薬又はサリチル酸メチルセンサーの使用に関する。また、本発明の一実施形態は、試薬又はサリチル酸メチルセンサーの製造における、テルビウム複合塩の使用に関する。
【実施例0045】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【0046】
（合成例１）酢酸テルビウム（Ｔｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）３：ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（Ｔｂ（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）３：ＴｂＰｖ）の複合塩［Ｔｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）０．７５（Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）２．２５：０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ］
酢酸テルビウム四水和物０．２ｇとピバル酸テルビウム０．６７９７ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール６５ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７４ｇ得た。
酢酸テルビウム四水和物０．２ｇとピバル酸テルビウム０．６７９７ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール６５ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７４ｇ得た。
【0047】
図１に、合成例１で得られた複合塩と、単塩（酢酸テルビウム及びピバル酸テルビウム）のＦＴＩＲスペクトルを示す。実線はテルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＦＴＩＲスペクトル、点線はピバル酸テルビウムのＦＴＩＲスペクトル、一点鎖線は酢酸テルビウムのＦＴＩＲスペクトルを表す。ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、複合塩では１４２２ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0048】
（合成例２）酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩［Ｔｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）１．５（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）１．５：０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ］
酢酸テルビウム四水和物０．３ｇとピバル酸テルビウム０．３３９８ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：１）をメタノール３５ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．４４８ｇ得た。
酢酸テルビウム四水和物０．３ｇとピバル酸テルビウム０．３３９８ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：１）をメタノール３５ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．４４８ｇ得た。
【0049】
合成例２で得られた複合塩のＦＴＩＲを測定した結果、ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、１４２３ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0050】
（合成例３）酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩［Ｔｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）０．６（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）２．４：０．２ＴｂＡ－０．８ＴｂＰｖ］
酢酸テルビウム四水和物０．１５４５ｇとピバル酸テルビウム０．７ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：４）をメタノール７０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７５ｇ得た。
酢酸テルビウム四水和物０．１５４５ｇとピバル酸テルビウム０．７ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：４）をメタノール７０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７５ｇ得た。
【0051】
合成例３で得られた複合塩のＦＴＩＲを測定した結果、ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、１４２２ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0052】
（合成例４）２－メチル酪酸テルビウム［Ｔｂ（２－ＭＢＡ）］とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩［Ｔｂ（Ｃ２Ｈ５（ＣＨ３）ＣＨＣＯＯ）０．７５（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）２．２５：０．２５Ｔｂ（２－ＭＢＡ）－０．７５ＴｂＰｖ］
２－メチル酪酸テルビウム０．２２７ｇとピバル酸テルビウム０．６７８７ｇ（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)とＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール７０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の２－メチル酪酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．８３ｇ得た。
２－メチル酪酸テルビウム０．２２７ｇとピバル酸テルビウム０．６７８７ｇ（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)とＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール７０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の２－メチル酪酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．８３ｇ得た。
【0053】
合成例４で得られた複合塩のＦＴＩＲを測定した結果、ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、１４２４ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0054】
（合成例５）トリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩：［Ｔｂ（ＣＦ３ＣＯＯ）０．７５（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）２．２５：０．２５ＴｂＴｆａ－０．７５ＴｂＰｖ］
トリフルオロ酢酸テルビウム３水和物０．２３９ｇとピバル酸テルビウム０．６ｇ（ＴｂＴｆａとＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール６０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的のトリフルオロ酢酸テルビウムテルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７４９ｇ得た。
トリフルオロ酢酸テルビウム３水和物０．２３９ｇとピバル酸テルビウム０．６ｇ（ＴｂＴｆａとＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール６０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的のトリフルオロ酢酸テルビウムテルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７４９ｇ得た。
【0055】
合成例５で得られた複合塩のＦＴＩＲを測定した結果、ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、１４２７ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0056】
[サリチル酸メチル（ＭＳＡ）との反応に伴う蛍光発光挙動（試薬）]
（実施例１：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
（実施例１：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0057】
（実施例２：（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例２で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例２で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0058】
（実施例３：（０．２ＴｂＡ－０．８ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例３で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２ＴｂＡ－０．８ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例３で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２ＴｂＡ－０．８ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0059】
（比較例１：ＴｂＡ＋ＭＳＡ）
酢酸テルビウム四水和物（ＴｂＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
酢酸テルビウム四水和物（ＴｂＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0060】
（比較例２：ＴｂＰｖ＋ＭＳＡ）
ピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
ピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0061】
（対象１：０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖのみ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとＤＭＳＯ０．１ｍｌを混合し、さらに２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例１で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとＤＭＳＯ０．１ｍｌを混合し、さらに２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0062】
（対象２：ＭＳＡのみ）
サリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌとＤＭＳＯ０．９ｍｌを混合し、さらに２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
サリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌとＤＭＳＯ０．９ｍｌを混合し、さらに２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0063】
図２に、実施例１、対象１及び対象２で得られた蛍光スペクトル曲線を示す。実線はテルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡの蛍光スペクトル、点線はテルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のみの蛍光スペクトル、一点鎖線はＭＳＡのみの蛍光スペクトルを表す。この結果から、テルビウム複合塩やＭＳＡは、４８０～６３０ｎｍの範囲では、それ自身では蛍光発光を示さないが、テルビウム複合塩とＭＳＡとが反応することで蛍光発光（極大波長５４６ｎｍ）を示すことが分かった。
【0064】
実施例１～３、比較例１及び比較例２で得られた蛍光スペクトルにおいて、波長５４６ｎｍの蛍光強度を表１にまとめた。これらの結果から、酢酸テルビウム（比較例１）やピバル酸テルビウム（比較例２）といった単塩に比べ、複合塩（実施例１～３）にすることで蛍光強度が増大することが分かった。
【0065】
【表1】
【0066】
（実施例４：（０．２５Ｔｂ(２－ＭＢＡ)－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例４で得られた２－メチル酪酸テルビウム（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５Ｔｂ(２－ＭＢＡ)－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例４で得られた２－メチル酪酸テルビウム（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５Ｔｂ(２－ＭＢＡ)－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0067】
（比較例３：Ｔｂ(２－ＭＢＡ)＋ＭＳＡ）
２－メチル酪酸テルビウム（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
２－メチル酪酸テルビウム（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0068】
実施例４、比較例２及び比較例３で得られた蛍光スペクトルにおいて、波長５４６ｎｍの蛍光強度を表２にまとめた。これらの結果から、ピバル酸テルビウム（比較例２）や２－メチル酪酸テルビウム（比較例３）といった単塩に比べ、複合塩（実施例４）にすることで蛍光強度が増大することが分かった。
【0069】
【表2】
【0070】
（実施例５：（０．２５ＴｂＴｆａ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例５で得られたトリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＴｆａ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例５で得られたトリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＴｆａ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0071】
（比較例４：ＴｂＴｆａ＋ＭＳＡ）
トリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
トリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0072】
実施例５、比較例２及び比較例４で得られた蛍光スペクトルにおいて、波長５４６ｎｍの蛍光強度を表３にまとめた。これらの結果から、ピバル酸テルビウム（比較例２）やトリフルオロ酢酸テルビウム（比較例４）といった単塩に比べ、複合塩（実施例５）にすることで蛍光強度が増大することが分かった。
【0073】
【表3】
【0074】
[サリチル酸メチル（ＭＳＡ）との反応に伴う蛍光発光挙動（センサー）]
（実施例６：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、蛍光スペクトルを測定した。
（実施例６：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、蛍光スペクトルを測定した。
【0075】
（比較例５：ＴｂＡ＋ＭＳＡ）
酢酸テルビウム四水和物（ＴｂＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、ＴｂＡを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、同様に蛍光スペクトルを測定した。
酢酸テルビウム四水和物（ＴｂＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、ＴｂＡを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、同様に蛍光スペクトルを測定した。
【0076】
（比較例６：ＴｂＰｖ＋ＭＳＡ）
ピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、同様に蛍光スペクトルを測定した。
ピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、同様に蛍光スペクトルを測定した。
【0077】
図３に、実施例６、比較例５及び比較例６で得られた蛍光スペクトル曲線を示す。実線はテルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）の蛍光スペクトル、点線はＴｂＡの蛍光スペクトル、一点鎖線はＴｂＰｖの蛍光スペクトルを表す。図３の１時間曝露後の蛍光スペクトルから、酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）は、酢酸テルビウムやピバル酸テルビウムに比べ、蛍光強度が強いことが確認できた。この結果から、酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）を含有するセンサーは、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを高感度でセンシングできることが分かった。
【0078】
（実施例７：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）（イオン液体を使用）
合成例１で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）０．０４４９ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１．６ｍｌに溶解し、そこにイオン液体として１-エチル－１－メチルイミダゾリウムアセタート（ＥＭＩｍＡｃ）０．４ｍｌを加え（ＤＭＳＯ／ＥＭＩｍＡｃ＝８／２）、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖとＥＭＩｍＡｃを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
合成例１で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）０．０４４９ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１．６ｍｌに溶解し、そこにイオン液体として１-エチル－１－メチルイミダゾリウムアセタート（ＥＭＩｍＡｃ）０．４ｍｌを加え（ＤＭＳＯ／ＥＭＩｍＡｃ＝８／２）、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖとＥＭＩｍＡｃを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
【0079】
表４に記載のように、実施例６で得られた蛍光スペクトルの波長５４６ｎｍでの蛍光強度は５５３５であった。一方、実施例７で得られた蛍光スペクトルの波長５４６ｎｍでの蛍光強度は１８４２２であり、イオン液体を含むことで蛍光発光強度が約３倍に増大することが分かった。この結果から、複合塩とともにイオン液体を含むことでサリチル酸メチルのセンシング感度が向上することが明らかになった。
【0080】
【表4】
【0081】
（実施例８：（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例２で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）０．０４１７ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２ｍｌに溶解し、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
合成例２で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）０．０４１７ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２ｍｌに溶解し、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
【0082】
（実施例９：（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）（イオン液体を使用）
合成例２で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）０．０４１７ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１．６ｍｌに溶解し、そこにイオン液体として１-エチル－１－メチルイミダゾリウムアセタート（ＥＭＩｍＡｃ）０．４ｍｌを加え（ＤＭＳＯ／ＥＭＩｍＡｃ＝８／２）、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖとＥＭＩｍＡｃを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
合成例２で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）０．０４１７ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１．６ｍｌに溶解し、そこにイオン液体として１-エチル－１－メチルイミダゾリウムアセタート（ＥＭＩｍＡｃ）０．４ｍｌを加え（ＤＭＳＯ／ＥＭＩｍＡｃ＝８／２）、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖとＥＭＩｍＡｃを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
【0083】
表５に記載のように、実施例８で得られた蛍光スペクトルの波長５４６ｎｍでの蛍光強度は６８６２であった。一方、実施例９で得られた蛍光スペクトルの波長５４６ｎｍでの蛍光強度は１２８４８であり、イオン液体を含むことで蛍光発光強度が約２倍に増大することが分かった。この結果から、複合塩とともにイオン液体を含むことでサリチル酸メチルのセンシング感度が向上することが明らかになった。
【0084】
【表5】
【産業上の利用可能性】
【0085】
本発明による植物ホルモンであるサリチル酸メチルを検出する試薬及びサリチル酸メチルセンサーは、テルビウム複合塩、又はテルビウム複合塩と非揮発性のイオン液体を含むことにより、サリチル酸メチルを効率的に捕捉して、錯体を形成し、且つ蛍光発光を発現することから、植物が病原菌感染の際に放出する植物ホルモンであるサリチル酸メチルを選択的に検出することを可能とする。そして、前記試薬及びサリチル酸メチルセンサーを用いることで、植物の病原菌感染を早期に検出することができ、具体的には農作物の病原菌感染を早期に検出できるセンサーとしてハウス等の施設園芸での農業ＩＣＴ用の新たなセンサーとして利用することができる。
【0086】
以上、実施形態及び実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は上記実施形態及び実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明の範囲内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。
【0087】
（付記１）
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬。
（付記２）
前記テルビウム複合塩が、下記一般式（１）：
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
で表される、付記１に記載の試薬。
（付記３）
一般式（１）中のＸがピバル酸イオンである、付記２に記載の試薬。
（付記４）
一般式（１）中のＹが酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン及び２－メチル酪酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンである、付記２に記載の試薬。
（付記５）
さらに非揮発性のイオン液体を含む、先行する付記のいずれかに記載の試薬。
（付記６）
前記イオン液体が、イミダゾリウム塩、ホスホニウム塩、ピリジニウム塩、アンモニウム塩、ピペリジニウム塩、及びピロリジニウム塩から成る群から選択される少なくとも１つである、付記５記載の試薬。
（付記７）
前記イオン液体が、１－エチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボラート、１－ブチル－１－メチルピロリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－ブチルピリジニウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、１－メチル－１－プロピルピペリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、及び１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムジシアナミド酸メチルから成る群から選択される少なくとも１つで
ある、付記５又は６に記載の試薬。
（付記８）
前記テルビウム複合塩に対する前記イオン液体の比率が、重量比で２～４０倍である、付記５～７のいずれかに記載の試薬。
（付記９）
サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、
先行する付記のいずれかに記載の試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサー。
（付記１０）
前記捕捉部が、前記試薬を含有する媒体を含む、付記９に記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１１）
前記媒体が、紙、ガラス繊維、樹脂、又は水溶性ポリマーである、付記１０に記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１２）
前記検出部が、光学的な検出素子とコンピュータを含み、前記コンピュータに、
ｉ）光学的な検出素子からの信号を受信する段階、
ｉｉ）受信した信号を分析してサリチル酸メチルの有無及び／又はその濃度を決定する段階、並びに
ｉｉｉ）分析結果を出力する段階
を実行させるプログラムを有する、付記９～１１のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１３）
前記テルビウム複合塩を溶媒に溶解し、イオン液体を加えて得られた溶液を媒体に含有させた後、乾燥させて溶媒を除去することで、前記テルビウム複合塩と前記イオン液体を含有する媒体を有するサリチル酸メチルの捕捉部を得る工程を含む、付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを製造する方法。
（付記１４）
前記溶媒に対する前記イオン液体の比率が５～５０重量％である、付記１３に記載の製造方法。
（付記１５）
付記１～８のいずれかに記載の試薬を用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（付記１６）
付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（付記１７）
励起光の励起波長として３００～４００ｎｍの範囲内の波長を用いる付記１５又は１６に記載のセンシング方法。
（付記１８）
検出された蛍光の強度をあらかじめ決められた参照値と比較することにより、サリチル酸メチルの濃度を決定する工程をさらに含む、付記１５～１７のいずれかに記載のセンシング方法。
（付記１９）
付記１～８のいずれかに記載の試薬を植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
（付記２０）
付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬。
（付記２）
前記テルビウム複合塩が、下記一般式（１）：
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
で表される、付記１に記載の試薬。
（付記３）
一般式（１）中のＸがピバル酸イオンである、付記２に記載の試薬。
（付記４）
一般式（１）中のＹが酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン及び２－メチル酪酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンである、付記２に記載の試薬。
（付記５）
さらに非揮発性のイオン液体を含む、先行する付記のいずれかに記載の試薬。
（付記６）
前記イオン液体が、イミダゾリウム塩、ホスホニウム塩、ピリジニウム塩、アンモニウム塩、ピペリジニウム塩、及びピロリジニウム塩から成る群から選択される少なくとも１つである、付記５記載の試薬。
（付記７）
前記イオン液体が、１－エチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボラート、１－ブチル－１－メチルピロリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－ブチルピリジニウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、１－メチル－１－プロピルピペリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、及び１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムジシアナミド酸メチルから成る群から選択される少なくとも１つで
ある、付記５又は６に記載の試薬。
（付記８）
前記テルビウム複合塩に対する前記イオン液体の比率が、重量比で２～４０倍である、付記５～７のいずれかに記載の試薬。
（付記９）
サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、
先行する付記のいずれかに記載の試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサー。
（付記１０）
前記捕捉部が、前記試薬を含有する媒体を含む、付記９に記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１１）
前記媒体が、紙、ガラス繊維、樹脂、又は水溶性ポリマーである、付記１０に記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１２）
前記検出部が、光学的な検出素子とコンピュータを含み、前記コンピュータに、
ｉ）光学的な検出素子からの信号を受信する段階、
ｉｉ）受信した信号を分析してサリチル酸メチルの有無及び／又はその濃度を決定する段階、並びに
ｉｉｉ）分析結果を出力する段階
を実行させるプログラムを有する、付記９～１１のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１３）
前記テルビウム複合塩を溶媒に溶解し、イオン液体を加えて得られた溶液を媒体に含有させた後、乾燥させて溶媒を除去することで、前記テルビウム複合塩と前記イオン液体を含有する媒体を有するサリチル酸メチルの捕捉部を得る工程を含む、付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを製造する方法。
（付記１４）
前記溶媒に対する前記イオン液体の比率が５～５０重量％である、付記１３に記載の製造方法。
（付記１５）
付記１～８のいずれかに記載の試薬を用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（付記１６）
付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（付記１７）
励起光の励起波長として３００～４００ｎｍの範囲内の波長を用いる付記１５又は１６に記載のセンシング方法。
（付記１８）
検出された蛍光の強度をあらかじめ決められた参照値と比較することにより、サリチル酸メチルの濃度を決定する工程をさらに含む、付記１５～１７のいずれかに記載のセンシング方法。
（付記１９）
付記１～８のいずれかに記載の試薬を植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
（付記２０）
付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
【図1】
【図2】
【図3】
【手続補正書】
【提出日】2024-03-14
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、植物が病原菌に感染した際に放出する植物ホルモンであるサリチル酸メチルを検出するための試薬、サリチル酸メチルセンサー、それらを用いたサリチル酸メチルのセンシング方法、及び植物の病原菌感染を検出する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
植物は、病原菌の感染を受けると、シグナル物質である植物ホルモンを合成・放出し、周囲の植物に病原菌の感染を知らせることで、予め防御機構を促すことが知られている。こうした植物が放出するシグナル物質をいち早く認識することで病害虫被害を検出することが可能となる。
【0003】
対象植物の害虫被害を発見する方法としては、例えば、特許文献１には、対象植物の近傍に、発光タンパク質遺伝子を有するモニター植物を配置し、対象植物がストレスに応答して放出する揮発性物質をモニター植物が感知して発光する現象を利用する方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】国際公開第２０１９／０８２９４２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明の課題は、農作物を含む植物の栽培において、病原菌感染した際に放出される植物ホルモンであるサリチル酸メチルを検出するための試薬、サリチル酸メチルセンサー、それらを用いたサリチル酸メチルのセンシング方法を提供し、それによって植物の病原菌感染を検出する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者らは、上述の課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、サリチル酸メチルのレセプターとしてテルビウム複合塩を使用することにより、サリチル酸メチルとの反応に伴い生成する錯体からの蛍光発光が増大し、植物の病原菌感染を検出できることを見出し、本発明を完成した。
【0007】
本実施形態の一態様は、２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬に関する。
【0008】
また、本実施形態の一態様は、サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、
請求項１又は２に記載の試薬を有するサリチル酸メチルの補足部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサーに関する。
請求項１又は２に記載の試薬を有するサリチル酸メチルの補足部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサーに関する。
【0009】
さらに、本実施形態の一態様は、前記試薬を用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法に関する。
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法に関する。
【0010】
またさらに、本実施形態の一態様は、前記試薬を植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法に関する。
【発明の効果】
【0011】
本発明によると、サリチル酸メチルを検出するための試薬において、サリチル酸メチルのレセプターとしてテルビウム複合塩を含有させることにより、植物が病原菌に感染した際に放出される揮発性植物ホルモンのサリチル酸メチルとの反応によって形成された錯体からの蛍光発光強度が増大し、植物の病原菌による感染を検出することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【発明を実施するための形態】
【0013】
以下に、本発明を実施するための形態について図面等を用いて説明する。ただし、以下に述べる実施形態には、本発明を実施するために技術的に好ましい限定がされているが、発明の範囲を以下に限定するものではない。
【0014】
［１］サリチル酸メチルを検出するための試薬
本発明の一実施形態は、サリチル酸メチルのレセプターとして、２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬である。本発明において、用語「試薬」とは、化学的方法による物質の検出もしくは定量、物質の合成、又は物理的特性の測定のために使用される化学物質と定義される。
本発明の一実施形態は、サリチル酸メチルのレセプターとして、２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬である。本発明において、用語「試薬」とは、化学的方法による物質の検出もしくは定量、物質の合成、又は物理的特性の測定のために使用される化学物質と定義される。
【0015】
＜サリチル酸メチルのレセプター：テルビウム複合塩＞
本発明においてサリチル酸メチルを認識するために利用できるテルビウム複合塩は、構造の異なる２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩である。
本発明においてサリチル酸メチルを認識するために利用できるテルビウム複合塩は、構造の異なる２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩である。
【0016】
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩としては、下記一般式（１）で表されるものが好ましい。
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
【0017】
対アニオンは、２種であっても、３種以上であってもよい。対アニオンが２種である場合は、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して１種の１価アニオンであり、対アニオンが３種以上である場合は、Ｘは１種の１価アニオンであり、Ｙは複数の種類の１価アニオンである。
【0018】
対アニオンは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択されることが好ましい。ここで、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、又は炭素数６～１４のアリール基であり；任意でフッ素原子で置換される炭素数１～６のアルキル基又はフェニル基であることが好ましく；メチル基、エチル基、プロピル基、２－メチルプロピル基、トリフルオロメチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、又はイソブチル基であることがさらに好ましい。ハロゲン化物イオンとしては、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、及びヨウ化物イオン等が挙げられ、塩化物イオンであることが好ましい。
【0019】
一般式（１）中のＸはピバル酸イオン（すなわち、Ｒ＝ｔｅｒｔ－ブチル基）であることが好ましく、一般式（１）中のＹは酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン及び２－メチル酪酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオン（すなわち、Ｒ＝メチル基、エチル基、プロピル基、２－メチルプロピル基、トリフルオロメチル基、イソブチル基）であることが好ましい。またテルビウム複合塩の具体的な例としては、酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩、２－メチル酪酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩、トリフルオロ酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩、酢酸テルビウム－２－メチル酪酸テルビウム複合塩等が挙げられるが、これらだけに限定されるものではない。
【0020】
テルビウム複合塩、例えば、ピバル酸テルビウム－酢酸テルビウム複合塩（Ｔｂ（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）ａ（ＣＨ３ＣＯＯ）３－ａ）は、ピバル酸テルビウムと酢酸テルビウムをメタノールに完全に溶解し、加熱反応させることで合成することができる。また、合成時のテルビウム塩の配合比率を変えることで、複合塩の対イオン（Ｘ、Ｙ）の比率を変えることができる。
【0021】
ｘがピバル酸イオンである場合、一般式（１）中のａは０．３～２．５であることが好ましく、０．４～２．０であることがより好ましく、０．５～１．５であることがさらに好ましく、０．７～１．０であることが特に好ましい。
【0022】
テルビウム複合塩は、サリチル酸メチルと反応してサリチル酸メチル錯体を形成することで、サリチル酸メチルを選択的に認識することができる。そして生成したサリチル酸メチル－テルビウム錯体は、ＵＶで励起するとテルビウム錯体特有の蛍光を発光する。テルビウム複合塩のみでは、ＵＶ光を照射しても蛍光の発光強度は小さいため観察されない。また、テルビウム複合塩は、サリチル酸メチル以外の他の植物ホルモン、例えばジャスモン酸メチルとは反応せず認識しないため、サリチル酸メチルを選択的に認識することができる。テルビウム複合塩は、テルビウム単塩と比較して、サリチル酸メチルとの反応によって形成された錯体からの蛍光発光強度が増大する。
【0023】
＜非揮発性のイオン液体＞
本発明のサリチル酸メチルを検出するための試薬は、サリチル酸メチルを効果的に捕捉させるため、テルビウム複合塩に加えて、非揮発性のイオン液体を含むことができる。イオン液体を含む場合、テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解して存在するが、一部は析出している場合もある。テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解していても、析出していても、同様にサリチル酸メチルのレセプターとして機能することができる。
本発明のサリチル酸メチルを検出するための試薬は、サリチル酸メチルを効果的に捕捉させるため、テルビウム複合塩に加えて、非揮発性のイオン液体を含むことができる。イオン液体を含む場合、テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解して存在するが、一部は析出している場合もある。テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解していても、析出していても、同様にサリチル酸メチルのレセプターとして機能することができる。
【0024】
本発明において利用できる非揮発性のイオン液体としては、イミダゾリウム塩、ホスホニウム塩、ピリジニウム塩、アンモニウム塩、ピペリジニウム塩、ピロリジニウム塩等が挙げられる。具体的には、１－エチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボラート、１－ブチル－１－メチルピロリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムジブチルホスファート、テトラブチルアンモニウムアセタート、１－ブチルピリジニウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、１－メチル－１－プロピルピペリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムジシアナミド等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0025】
テルビウム複合塩に対するイオン液体の比率は、重量比で２～４０倍であることが好ましく、３～３０倍であることがより好ましく、４～２０倍であることが特に好ましい。テルビウム複合塩に対するイオン液体の重量比率が２倍未満であると、サリチル酸メチル検出感度の向上効果が得られないことがあり、テルビウム複合塩に対するイオン液体の重量比率が４０倍を超えると、テルビウム複合塩がサリチル酸メチルと錯体を形成しにくくなることがある。
【0026】
本発明のサリチル酸メチルを検出するための試薬は、本発明の効果を損なわない範囲内において、任意で他の溶媒を含んでもよい。溶媒としては、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、水、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド、テトラヒドフラン、アセトン、アセトニトリル、１，４－ジオキサン等を使用することができるがこれらに限定されない。
【0027】
［２］サリチル酸メチルセンサー
本発明の一実施形態は、サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、前記試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部を備える、サリチル酸メチルセンサーに関する。
本発明の一実施形態は、サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、前記試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部を備える、サリチル酸メチルセンサーに関する。
【0028】
（１）捕捉部
本発明のサリチル酸メチルセンサーの捕捉部は、サリチル酸メチルを選択的に認識するレセプターであるテルビウム複合塩を有するものである。捕捉部は、テルビウム複合塩に加えて、サリチル酸メチルを効果的に捕捉させるために、非揮発性のイオン液体を含むことが好ましい。捕捉部において、試薬は媒体に含有されていることが好ましい。
本発明のサリチル酸メチルセンサーの捕捉部は、サリチル酸メチルを選択的に認識するレセプターであるテルビウム複合塩を有するものである。捕捉部は、テルビウム複合塩に加えて、サリチル酸メチルを効果的に捕捉させるために、非揮発性のイオン液体を含むことが好ましい。捕捉部において、試薬は媒体に含有されていることが好ましい。
【0029】
＜媒体＞
本発明のテルビウム複合塩を含有させる媒体としては、例えば、紙又はガラス繊維、樹脂（例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ナイロン樹脂、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリフェニレンオキサイド）、水溶性ポリマー（セルロース系、アガロース、でんぷん系、アルギン酸ナトリウム、アクリル酸系、アクリルアミド系、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリビニルピロリドン等）でありうるが、これらに限定されるものではない。
本発明のテルビウム複合塩を含有させる媒体としては、例えば、紙又はガラス繊維、樹脂（例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ナイロン樹脂、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリフェニレンオキサイド）、水溶性ポリマー（セルロース系、アガロース、でんぷん系、アルギン酸ナトリウム、アクリル酸系、アクリルアミド系、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリビニルピロリドン等）でありうるが、これらに限定されるものではない。
【0030】
例えば、媒体として紙を使用する場合には、テルビウム複合塩を溶媒に溶解し、さらにそこにイオン液体を加えてもよく、得られた溶液を紙（例えば、ろ紙）に含浸させた後、室温～６０℃で乾燥させて溶媒を除去することで、テルビウム複合塩と非揮発性のイオン液体を含有する媒体が得られる。溶媒を使用せず、テルビウム複合塩と非揮発性のイオン液体の混合物を媒体に含侵させることもできるが、溶媒を使用すると、テルビウム複合塩を媒体に含浸させやすくなり、またテルビウム複合塩の濃度調製が容易になるため好ましい。溶媒を除去した後、テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解して存在するが、一部は析出している場合もある。テルビウム複合塩は、非揮発性のイオン液体に溶解していても、析出していても、同様にサリチル酸メチルのレセプターとして機能することができる。
【0031】
テルビウム複合塩を溶解する溶媒としては、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、水、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド、テトラヒドフラン、アセトン、アセトニトリル、１，４－ジオキサン等を使用することができるが、これらに限定されない。
【0032】
また、溶媒に対するイオン液体の比率は、含浸させる媒体に対して、適宜設定されうる。溶媒に対するイオン液体の比率が低いと、乾燥後の媒体中のイオン液体の量が少なくなり、検出感度の向上効果が小さくなることがある。一方、溶媒に対するイオン液体の比率が大きくなると、イオン液体が高粘度であるために、媒体に含浸しにくくなるデメリットが生じることがある。そのため、溶媒に対するイオン液体の比率は媒体に対して、適宜設定される。例えば、ろ紙に含浸させる場合は、溶媒に対するイオン液体の比率は、５～５０重量％であることが好ましく、１０～３０重量％であることがより好ましい。
【0033】
（２）検出部
本発明のサリチル酸メチルセンサーの検出部は、捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを光学的に検出できるように構成されている。検出部は、捕捉部と一体の装置ではなく、別装置として構成されてもよい。本発明の一態様においては、光学的な検出部では、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルで生成した錯体（サリチル酸メチル錯体）の蛍光発光を検出するために、励起光源（発光部）と検出素子（蛍光の受光部）とを含み、観測された蛍光強度の変化に基づき、サリチル酸メチルの検出及び／又は濃度測定を行うことができる。
本発明のサリチル酸メチルセンサーの検出部は、捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを光学的に検出できるように構成されている。検出部は、捕捉部と一体の装置ではなく、別装置として構成されてもよい。本発明の一態様においては、光学的な検出部では、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルで生成した錯体（サリチル酸メチル錯体）の蛍光発光を検出するために、励起光源（発光部）と検出素子（蛍光の受光部）とを含み、観測された蛍光強度の変化に基づき、サリチル酸メチルの検出及び／又は濃度測定を行うことができる。
【0034】
本発明の一態様においては、検出部は、サリチル酸メチルの検出及び／又は濃度測定を処理するプログラムを実行するコンピュータを含みうる。そのようなプログラムは、例えば、コンピュータに、（ｉ）光学的な検出素子からの信号を受信する段階、（ｉｉ）受信した信号を分析してサリチル酸メチルの有無及び／又はその濃度を決定する段階、並びに、（ｉｉｉ）分析結果を出力する段階を実行させるプログラムでありうる。
【0035】
本発明の一態様においては、受信した信号の分析は、例えば、受信した信号をあらかじめ決められた参照値と比較することにより、サリチル酸メチルの有無及び／又はその濃度を決定することを含みうる。また、本発明の一態様においては、分析結果は、例えば、センサーに接続されたディスプレイ装置、又はネットワークを介して接続された他の機器等に出力されうる。
【0036】
本発明の一態様においては、本発明のサリチル酸メチルセンサーは、農作物が病原菌に感染した際に放出される植物ホルモンのサリチル酸メチルを感知する。よって、本発明のサリチル酸メチルセンサーは、農作物を含む植物の病原菌感染検出用のセンサーとして用いられうる。
【0037】
［３］サリチル酸メチルのセンシング方法
本発明の一実施形態は、前記試薬又はサリチル酸メチルセンサーを用いて、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとを反応させて得られる錯体からの蛍光発光現象を用いてサリチル酸メチルをセンシングする方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法に関する。
本発明の一実施形態は、前記試薬又はサリチル酸メチルセンサーを用いて、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとを反応させて得られる錯体からの蛍光発光現象を用いてサリチル酸メチルをセンシングする方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法に関する。
【0038】
テルビウム複合塩のみではほとんど蛍光発光を示さないのに対し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルの反応により生成した錯体は、新たに蛍光発光を示す。この現象を利用することで、サリチル酸メチルを検出することが可能となる。
【0039】
本発明の一態様では、励起波長として３００～４００ｎｍの範囲内の適切な波長が選択される。さらに、本発明の一態様では、検出された蛍光の強度をあらかじめ決められた参照値と比較することにより、サリチル酸メチルの濃度を決定する工程も実施されうる。
【0040】
［４］植物の病原菌感染を検出する方法
本発明の一実施形態は、前記試薬又はサリチル酸メチルセンサーを植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法に関する。
本発明の一実施形態は、前記試薬又はサリチル酸メチルセンサーを植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法に関する。
【0041】
監視対象となりうる植物としては、例えば、キュウリ、スイカ、トマト、ナス、ピーマン、パプリカ、シシトウ、メロン、ハクサイ、キャベツ、ダイコン、レタス、ネギ、ブロッコリー、タマネギ、ニンニク、ヤマノイモ、アスパラガス、ニンジン、バレイショ、セルリー、タバコ、イネ、イチゴが挙げられるが、これらに限定されない。
【0042】
検出されうる病害としては、例えば、輪紋病、白星病、褐色輪紋病、葉かび病、萎凋病、根腐萎凋病、半身萎凋病、褐色根腐病、灰色疫病、根腐病、黒点根腐病、白絹病、苗立枯病、褐斑病、ベと病、うどんこ病、灰色かび病、炭疽病、黒星病、菌核病、つる枯病、斑点病、疫病、モザイク病、黄化えそ病、黄化葉巻病、青枯病、軟腐病、かいよう病、茎えそ細菌病、黒班細菌病、斑点細菌病等が挙げられるが、これらに限定されず、また、検出されうる病原菌感染としては、上記の病害の原因菌による感染が挙げられるが、これらに限定されない。
【0043】
本開示の文脈において、「植物の近傍に設置する」と言った場合、用語「近傍」の例としては、例えば、監視対象の植物から２ｍ以内、１ｍ以内、７５ｃｍ以内、５０ｃｍ以内、４０ｃｍ以内、３０ｃｍ以内、２０ｃｍ以内、１０ｃｍ以内、又は５ｃｍ以内の距離が挙げられるが、これらに限定されず、適切な距離が種々の要因を考慮して適宜選択される。当業者であれば、センサーを設置する位置を様々な条件を考慮した上で適宜設定することが可能であろう。
【0044】
さらに、本発明の一実施形態は、植物の病原菌感染の検出における、試薬又はサリチル酸メチルセンサーの使用に関する。また、本発明の一実施形態は、試薬又はサリチル酸メチルセンサーの製造における、テルビウム複合塩の使用に関する。
【実施例0045】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【0046】
（合成例１）酢酸テルビウム（Ｔｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）３：ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（Ｔｂ（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）３：ＴｂＰｖ）の複合塩［Ｔｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）０．７５（Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）２．２５：０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ］
酢酸テルビウム四水和物０．２ｇとピバル酸テルビウム０．６７９７ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール６５ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７４ｇ得た。
酢酸テルビウム四水和物０．２ｇとピバル酸テルビウム０．６７９７ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール６５ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７４ｇ得た。
【0047】
図１に、合成例１で得られた複合塩と、単塩（酢酸テルビウム及びピバル酸テルビウム）のＦＴＩＲスペクトルを示す。実線はテルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＦＴＩＲスペクトル、点線はピバル酸テルビウムのＦＴＩＲスペクトル、一点鎖線は酢酸テルビウムのＦＴＩＲスペクトルを表す。ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、複合塩では１４２２ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0048】
（合成例２）酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩［Ｔｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）１．５（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）１．５：０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ］
酢酸テルビウム四水和物０．３ｇとピバル酸テルビウム０．３３９８ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：１）をメタノール３５ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．４４８ｇ得た。
酢酸テルビウム四水和物０．３ｇとピバル酸テルビウム０．３３９８ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：１）をメタノール３５ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．４４８ｇ得た。
【0049】
合成例２で得られた複合塩のＦＴＩＲを測定した結果、ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、１４２３ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0050】
（合成例３）酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩［Ｔｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）０．６（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）２．４：０．２ＴｂＡ－０．８ＴｂＰｖ］
酢酸テルビウム四水和物０．１５４５ｇとピバル酸テルビウム０．７ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：４）をメタノール７０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７５ｇ得た。
酢酸テルビウム四水和物０．１５４５ｇとピバル酸テルビウム０．７ｇ（ＴｂＡとＴｂＰｖのモル比は、１：４）をメタノール７０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７５ｇ得た。
【0051】
合成例３で得られた複合塩のＦＴＩＲを測定した結果、ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、１４２２ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0052】
（合成例４）２－メチル酪酸テルビウム［Ｔｂ（２－ＭＢＡ）］とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩［Ｔｂ（Ｃ２Ｈ５（ＣＨ３）ＣＨＣＯＯ）０．７５（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）２．２５：０．２５Ｔｂ（２－ＭＢＡ）－０．７５ＴｂＰｖ］
２－メチル酪酸テルビウム０．２２７ｇとピバル酸テルビウム０．６７８７ｇ（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)とＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール７０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の２－メチル酪酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．８３ｇ得た。
２－メチル酪酸テルビウム０．２２７ｇとピバル酸テルビウム０．６７８７ｇ（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)とＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール７０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的の２－メチル酪酸テルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．８３ｇ得た。
【0053】
合成例４で得られた複合塩のＦＴＩＲを測定した結果、ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、１４２４ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0054】
（合成例５）トリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩：［Ｔｂ（ＣＦ３ＣＯＯ）０．７５（ｔ－Ｃ４Ｈ９ＣＯＯ）２．２５：０．２５ＴｂＴｆａ－０．７５ＴｂＰｖ］
トリフルオロ酢酸テルビウム３水和物０．２３９ｇとピバル酸テルビウム０．６ｇ（ＴｂＴｆａとＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール６０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的のトリフルオロ酢酸テルビウムテルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７４９ｇ得た。
トリフルオロ酢酸テルビウム３水和物０．２３９ｇとピバル酸テルビウム０．６ｇ（ＴｂＴｆａとＴｂＰｖのモル比は、１：３）をメタノール６０ｍｌ中、５時間加熱還流させた。放冷後、メタノールを留去し、析出した白色結晶を真空乾燥することで、目的のトリフルオロ酢酸テルビウムテルビウムとピバル酸テルビウムの複合塩を０．７４９ｇ得た。
【0055】
合成例５で得られた複合塩のＦＴＩＲを測定した結果、ピバル酸テルビウム単体のピバル酸イオンに由来する１４２９ｃｍ－１の吸収ピークが、１４２７ｃｍ－１にシフトしており、複合塩が酢酸テルビウムとピバル酸テルビウムの混合物ではないことが確認された。
【0056】
[サリチル酸メチル（ＭＳＡ）との反応に伴う蛍光発光挙動（試薬）]
（実施例１：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
（実施例１：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0057】
（実施例２：（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例２で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例２で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0058】
（実施例３：（０．２ＴｂＡ－０．８ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例３で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２ＴｂＡ－０．８ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例３で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２ＴｂＡ－０．８ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0059】
（比較例１：ＴｂＡ＋ＭＳＡ）
酢酸テルビウム四水和物（ＴｂＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
酢酸テルビウム四水和物（ＴｂＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0060】
（比較例２：ＴｂＰｖ＋ＭＳＡ）
ピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
ピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0061】
（対照１：０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖのみ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとＤＭＳＯ０．１ｍｌを混合し、さらに２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例１で得られた酢酸テルビウム（ＴｂＡ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとＤＭＳＯ０．１ｍｌを混合し、さらに２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0062】
（対照２：ＭＳＡのみ）
サリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌとＤＭＳＯ０．９ｍｌを混合し、さらに２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
サリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌとＤＭＳＯ０．９ｍｌを混合し、さらに２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0063】
図２に、実施例１、対照１及び対照２で得られた蛍光スペクトル曲線を示す。実線はテルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡの蛍光スペクトル、点線はテルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のみの蛍光スペクトル、一点鎖線はＭＳＡのみの蛍光スペクトルを表す。この結果から、テルビウム複合塩やＭＳＡは、４８０～６３０ｎｍの範囲では、それ自身では蛍光発光を示さないが、テルビウム複合塩とＭＳＡとが反応することで蛍光発光（極大波長５４６ｎｍ）を示すことが分かった。
【0064】
実施例１～３、比較例１及び比較例２で得られた蛍光スペクトルにおいて、波長５４６ｎｍの蛍光強度を表１にまとめた。これらの結果から、酢酸テルビウム（比較例１）やピバル酸テルビウム（比較例２）といった単塩に比べ、複合塩（実施例１～３）にすることで蛍光強度が増大することが分かった。
【0065】
【表1】
【0066】
（実施例４：（０．２５Ｔｂ(２－ＭＢＡ)－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例４で得られた２－メチル酪酸テルビウム（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５Ｔｂ(２－ＭＢＡ)－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例４で得られた２－メチル酪酸テルビウム（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５Ｔｂ(２－ＭＢＡ)－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0067】
（比較例３：Ｔｂ(２－ＭＢＡ)＋ＭＳＡ）
２－メチル酪酸テルビウム（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
２－メチル酪酸テルビウム（Ｔｂ(２－ＭＢＡ)）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0068】
実施例４、比較例２及び比較例３で得られた蛍光スペクトルにおいて、波長５４６ｎｍの蛍光強度を表２にまとめた。これらの結果から、ピバル酸テルビウム（比較例２）や２－メチル酪酸テルビウム（比較例３）といった単塩に比べ、複合塩（実施例４）にすることで蛍光強度が増大することが分かった。
【0069】
【表2】
【0070】
（実施例５：（０．２５ＴｂＴｆａ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例５で得られたトリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＴｆａ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
合成例５で得られたトリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）とピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）の複合塩（０．２５ＴｂＴｆａ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0071】
（比較例４：ＴｂＴｆａ＋ＭＳＡ）
トリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
トリフルオロ酢酸テルビウム（ＴｂＴｆａ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．７３ｍＭ）０．９ｍｌとサリチル酸メチル（ＭＳＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度１．５ｍＭ）０．１ｍｌを混合し、１０分後に２０倍に希釈してその溶液を石英セルに入れ、励起波長３６５ｎｍで蛍光スペクトルを測定した。
【0072】
実施例５、比較例２及び比較例４で得られた蛍光スペクトルにおいて、波長５４６ｎｍの蛍光強度を表３にまとめた。これらの結果から、ピバル酸テルビウム（比較例２）やトリフルオロ酢酸テルビウム（比較例４）といった単塩に比べ、複合塩（実施例５）にすることで蛍光強度が増大することが分かった。
【0073】
【表3】
【0074】
[サリチル酸メチル（ＭＳＡ）との反応に伴う蛍光発光挙動（センサー）]
（実施例６：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、蛍光スペクトルを測定した。
（実施例６：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例１で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、蛍光スペクトルを測定した。
【0075】
（比較例５：ＴｂＡ＋ＭＳＡ）
酢酸テルビウム四水和物（ＴｂＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、ＴｂＡを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、同様に蛍光スペクトルを測定した。
酢酸テルビウム四水和物（ＴｂＡ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、ＴｂＡを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、同様に蛍光スペクトルを測定した。
【0076】
（比較例６：ＴｂＰｖ＋ＭＳＡ）
ピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、同様に蛍光スペクトルを測定した。
ピバル酸テルビウム（ＴｂＰｖ）のＤＭＳＯ溶液（濃度５０ｍＭ）０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を、容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、同様に蛍光スペクトルを測定した。
【0077】
図３に、実施例６、比較例５及び比較例６で得られた蛍光スペクトル曲線を示す。実線はテルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）の蛍光スペクトル、点線はＴｂＡの蛍光スペクトル、一点鎖線はＴｂＰｖの蛍光スペクトルを表す。図３の１時間曝露後の蛍光スペクトルから、酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）は、酢酸テルビウムやピバル酸テルビウムに比べ、蛍光強度が強いことが確認できた。この結果から、酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）を含有するセンサーは、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを高感度でセンシングできることが分かった。
【0078】
（実施例７：（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）（イオン液体を使用）
合成例１で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）０．０４４９ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１．６ｍｌに溶解し、そこにイオン液体として１-エチル－１－メチルイミダゾリウムアセタート（ＥＭＩｍＡｃ）０．４ｍｌを加え（ＤＭＳＯ／ＥＭＩｍＡｃ＝８／２）、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖとＥＭＩｍＡｃを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
合成例１で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖ）０．０４４９ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１．６ｍｌに溶解し、そこにイオン液体として１-エチル－１－メチルイミダゾリウムアセタート（ＥＭＩｍＡｃ）０．４ｍｌを加え（ＤＭＳＯ／ＥＭＩｍＡｃ＝８／２）、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．２５ＴｂＡ－０．７５ＴｂＰｖとＥＭＩｍＡｃを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
【0079】
表４に記載のように、実施例６で得られた蛍光スペクトルの波長５４６ｎｍでの蛍光強度は５５３５であった。一方、実施例７で得られた蛍光スペクトルの波長５４６ｎｍでの蛍光強度は１８４２２であり、イオン液体を含むことで蛍光発光強度が約３倍に増大することが分かった。この結果から、複合塩とともにイオン液体を含むことでサリチル酸メチルのセンシング感度が向上することが明らかになった。
【0080】
【表4】
【0081】
（実施例８：（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）
合成例２で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）０．０４１７ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２ｍｌに溶解し、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
合成例２で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）０．０４１７ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２ｍｌに溶解し、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
【0082】
（実施例９：（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）＋ＭＳＡ）（イオン液体を使用）
合成例２で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）０．０４１７ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１．６ｍｌに溶解し、そこにイオン液体として１-エチル－１－メチルイミダゾリウムアセタート（ＥＭＩｍＡｃ）０．４ｍｌを加え（ＤＭＳＯ／ＥＭＩｍＡｃ＝８／２）、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖとＥＭＩｍＡｃを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
合成例２で得られた酢酸テルビウム－ピバル酸テルビウム複合塩（０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖ）０．０４１７ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１．６ｍｌに溶解し、そこにイオン液体として１-エチル－１－メチルイミダゾリウムアセタート（ＥＭＩｍＡｃ）０．４ｍｌを加え（ＤＭＳＯ／ＥＭＩｍＡｃ＝８／２）、その溶液０．２ｍｌを円形ろ紙（Φ４０ｍｍ）に滴下し乾燥させて、ＤＭＳＯを揮発させ、０．５ＴｂＡ－０．５ＴｂＰｖとＥＭＩｍＡｃを含むろ紙を得た。得られたろ紙を容量８００ｍｌのデシケータ内に設置し、そこに窒素をキャリアガスにして、濃度７．５ｐｐｂのサリチル酸メチルを導入し、１時間曝露後にろ紙を取り出し、励起波長３６５ｎｍでの蛍光スペクトルを測定した。
【0083】
表５に記載のように、実施例８で得られた蛍光スペクトルの波長５４６ｎｍでの蛍光強度は６８６２であった。一方、実施例９で得られた蛍光スペクトルの波長５４６ｎｍでの蛍光強度は１２８４８であり、イオン液体を含むことで蛍光発光強度が約２倍に増大することが分かった。この結果から、複合塩とともにイオン液体を含むことでサリチル酸メチルのセンシング感度が向上することが明らかになった。
【0084】
【表5】
【産業上の利用可能性】
【0085】
本発明による植物ホルモンであるサリチル酸メチルを検出する試薬及びサリチル酸メチルセンサーは、テルビウム複合塩、又はテルビウム複合塩と非揮発性のイオン液体を含むことにより、サリチル酸メチルを効率的に捕捉して、錯体を形成し、且つ蛍光発光を発現することから、植物が病原菌感染の際に放出する植物ホルモンであるサリチル酸メチルを選択的に検出することを可能とする。そして、前記試薬及びサリチル酸メチルセンサーを用いることで、植物の病原菌感染を検出することができ、具体的には農作物の病原菌感染を検出できるセンサーとしてハウス等の施設園芸での農業ＩＣＴ用の新たなセンサーとして利用することができる。
【0086】
以上、実施形態及び実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は上記実施形態及び実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明の範囲内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。
【0087】
（付記１）
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬。
（付記２）
前記テルビウム複合塩が、下記一般式（１）：
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
で表される、付記１に記載の試薬。
（付記３）
一般式（１）中のＸがピバル酸イオンである、付記２に記載の試薬。
（付記４）
一般式（１）中のＹが酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン及び２－メチル酪酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンである、付記２に記載の試薬。
（付記５）
さらに非揮発性のイオン液体を含む、先行する付記のいずれかに記載の試薬。
（付記６）
前記イオン液体が、イミダゾリウム塩、ホスホニウム塩、ピリジニウム塩、アンモニウム塩、ピペリジニウム塩、及びピロリジニウム塩から成る群から選択される少なくとも１つである、付記５記載の試薬。
（付記７）
前記イオン液体が、１－エチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボラート、１－ブチル－１－メチルピロリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－ブチルピリジニウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、１－メチル－１－プロピルピペリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、及び１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムジシアナミド酸メチルから成る群から選択される少なくとも１つで
ある、付記５又は６に記載の試薬。
（付記８）
前記テルビウム複合塩に対する前記イオン液体の比率が、重量比で２～４０倍である、付記５～７のいずれかに記載の試薬。
（付記９）
サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、
先行する付記のいずれかに記載の試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサー。
（付記１０）
前記捕捉部が、前記試薬を含有する媒体を含む、付記９に記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１１）
前記媒体が、紙、ガラス繊維、樹脂、又は水溶性ポリマーである、付記１０に記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１２）
前記検出部が、光学的な検出素子とコンピュータを含み、前記コンピュータに、
ｉ）光学的な検出素子からの信号を受信する段階、
ｉｉ）受信した信号を分析してサリチル酸メチルの有無及び／又はその濃度を決定する段階、並びに
ｉｉｉ）分析結果を出力する段階
を実行させるプログラムを有する、付記９～１１のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１３）
前記テルビウム複合塩を溶媒に溶解し、イオン液体を加えて得られた溶液を媒体に含有させた後、乾燥させて溶媒を除去することで、前記テルビウム複合塩と前記イオン液体を含有する媒体を有するサリチル酸メチルの捕捉部を得る工程を含む、付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを製造する方法。
（付記１４）
前記溶媒に対する前記イオン液体の比率が５～５０重量％である、付記１３に記載の製造方法。
（付記１５）
付記１～８のいずれかに記載の試薬を用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（付記１６）
付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（付記１７）
励起光の励起波長として３００～４００ｎｍの範囲内の波長を用いる付記１５又は１６に記載のセンシング方法。
（付記１８）
検出された蛍光の強度をあらかじめ決められた参照値と比較することにより、サリチル酸メチルの濃度を決定する工程をさらに含む、付記１５～１７のいずれかに記載のセンシング方法。
（付記１９）
付記１～８のいずれかに記載の試薬を植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
（付記２０）
付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
２種以上の対アニオンを有するテルビウム複合塩を含む、サリチル酸メチルを検出するための試薬。
（付記２）
前記テルビウム複合塩が、下記一般式（１）：
ＴｂＸａＹ３－ａ （１）
（式中、０＜ａ＜３、Ｘは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つの１価アニオンであり、Ｙは、ＲＣＯＯ－、ハロゲン化物イオン及び硝酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンであり、Ｒは、任意でハロゲンで置換される、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数３～６のシクロアルキル基、及び炭素数６～１４のアリール基である）
で表される、付記１に記載の試薬。
（付記３）
一般式（１）中のＸがピバル酸イオンである、付記２に記載の試薬。
（付記４）
一般式（１）中のＹが酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン及び２－メチル酪酸イオンから成る群から選択される１つ又は複数の１価アニオンである、付記２に記載の試薬。
（付記５）
さらに非揮発性のイオン液体を含む、先行する付記のいずれかに記載の試薬。
（付記６）
前記イオン液体が、イミダゾリウム塩、ホスホニウム塩、ピリジニウム塩、アンモニウム塩、ピペリジニウム塩、及びピロリジニウム塩から成る群から選択される少なくとも１つである、付記５記載の試薬。
（付記７）
前記イオン液体が、１－エチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウム酢酸塩、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボラート、１－ブチル－１－メチルピロリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－ブチルピリジニウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、１－メチル－１－プロピルピペリジニウムビス(フルオロスルホニル)イミド、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムビス(トリフルオロメタンスルホニル)イミド、及び１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムジシアナミド酸メチルから成る群から選択される少なくとも１つで
ある、付記５又は６に記載の試薬。
（付記８）
前記テルビウム複合塩に対する前記イオン液体の比率が、重量比で２～４０倍である、付記５～７のいずれかに記載の試薬。
（付記９）
サリチル酸メチルを検出するサリチル酸メチルセンサーであって、
先行する付記のいずれかに記載の試薬を有するサリチル酸メチルの捕捉部と、
前記捕捉部にサリチル酸メチルが捕捉されたことを検出する検出部と、
を備える、サリチル酸メチルセンサー。
（付記１０）
前記捕捉部が、前記試薬を含有する媒体を含む、付記９に記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１１）
前記媒体が、紙、ガラス繊維、樹脂、又は水溶性ポリマーである、付記１０に記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１２）
前記検出部が、光学的な検出素子とコンピュータを含み、前記コンピュータに、
ｉ）光学的な検出素子からの信号を受信する段階、
ｉｉ）受信した信号を分析してサリチル酸メチルの有無及び／又はその濃度を決定する段階、並びに
ｉｉｉ）分析結果を出力する段階
を実行させるプログラムを有する、付記９～１１のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサー。
（付記１３）
前記テルビウム複合塩を溶媒に溶解し、イオン液体を加えて得られた溶液を媒体に含有させた後、乾燥させて溶媒を除去することで、前記テルビウム複合塩と前記イオン液体を含有する媒体を有するサリチル酸メチルの捕捉部を得る工程を含む、付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを製造する方法。
（付記１４）
前記溶媒に対する前記イオン液体の比率が５～５０重量％である、付記１３に記載の製造方法。
（付記１５）
付記１～８のいずれかに記載の試薬を用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（付記１６）
付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを用いてサリチル酸メチルを検出する、サリチル酸メチルのセンシング方法であって、
（ｉ）テルビウム複合塩と、サリチル酸メチルとを反応させて錯体を形成する工程、
（ｉｉ）前記錯体に励起光をあてる工程、
（ｉｉｉ）前記錯体が発する蛍光を検出する工程
を含む、サリチル酸メチルのセンシング方法。
（付記１７）
励起光の励起波長として３００～４００ｎｍの範囲内の波長を用いる付記１５又は１６に記載のセンシング方法。
（付記１８）
検出された蛍光の強度をあらかじめ決められた参照値と比較することにより、サリチル酸メチルの濃度を決定する工程をさらに含む、付記１５～１７のいずれかに記載のセンシング方法。
（付記１９）
付記１～８のいずれかに記載の試薬を植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
（付記２０）
付記９～１２のいずれかに記載のサリチル酸メチルセンサーを植物の近傍に設置し、テルビウム複合塩とサリチル酸メチルとの反応に伴い形成される錯体に由来する蛍光発光を確認することにより、植物の病原菌感染を検出する方法。
【手続補正3】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図2】
