特開 2024-148177 アフリベルセプトをコードするＡＡＶ２バリアントを使用する眼内血管新生疾患を処置する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024148177

(43)【公開日】2024-10-17

(54)【発明の名称】アフリベルセプトをコードするＡＡＶ２バリアントを使用する眼内血管新生疾患を処置する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 48/00 20060101AFI20241008BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20241008BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20241008BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20241008BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20241008BHJP

   A61K 31/573 20060101ALI20241008BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241008BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20241008BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20241008BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20241008BHJP

   C12N 15/864 20060101ALN20241008BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20241008BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20241008BHJP

   C12N 15/35 20060101ALN20241008BHJP

【ＦＩ】

A61K48/00

A61P27/02 ZNA

A61K38/16

A61K47/02

A61K47/10

A61K31/573

A61P43/00 121

A61K9/10

A61K35/76

A61P27/02

A61K48/00 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/864 100Z

C12N15/13

C12N15/12

C12N15/35

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024112281

(22)【出願日】2024-07-12

(62)【分割の表示】P 2022515693の分割

【原出願日】2019-11-18

(31)【優先権主張番号】62/899,070

(32)【優先日】2019-09-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/913,648

(32)【優先日】2019-10-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 刊行物等１．平成３１年４月１６日に公開されたＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖのＷＥＢサイト（ＡＤＶＭ－０２２ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｗｅｔ ＡＭＤ（ＯＰＴＩＣ）） 刊行物等２．令和１年８月８日に公開された「Ａｄｖｅｒｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｒｅｐｏｒｔｓ Ｓｅｃｏｎｄ Ｑｕａｒｔｅｒ ２０１９ Ｆｉｎａｎｃｉａｌ Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ Ｐｒｏｖｉｄｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｅ Ｕｐｄａｔｅ」のプレスリリース 刊行物等３．平成３１年１月１７日に公開されたＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖのＷＥＢサイト（ＡＤＶＭ－０２２ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｗｅｔ ＡＭＤ（ＯＰＴＩＣ）） 刊行物等４．令和１年６月４日に公開されたＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖのＷＥＢサイト（ＡＤＶＭ－０２２ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｗｅｔ ＡＭＤ （ＯＰＴＩＣ）） 刊行物等５．平成３１年３月８日に公開されたＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖのＷＥＢサイト （ＡＤＶＭ－０２２ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｗｅｔ ＡＭＤ （ＯＰＴＩＣ）） 刊行物等６．令和１年５月２日に公開された２０１９ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙにおける口頭発表 刊行物等７．令和１年５月１６日に公開された「Ａｄｖｅｒｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｐｒｏｖｉｄｅｓ Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ＯＰＴＩＣ Ｐｈａｓｅ １ Ｔｒｉａｌ ｆｏｒ ＡＤＶＭ－０２２ ｉｎ ＷＥＴ ＡＭＤ」のプレスリリース 刊行物等８．平成３０年１１月２１日に公開されたＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖのＷＥＢサイト（Ａｎ Ｏｐｅｎ Ｌａｂｅｌ Ｐｈａｓｅ １ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＡＤＶＭ－０２２（ＡＡＶ．７ｍ８－ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）ｉｎ Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ（Ｗｅｔ）Ａｇｅ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 刊行物等９．令和１年１０月１１日に公開されたＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖのＷＥＢサイト（ＡＤＶＭ－０２２ Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｗｅｔ ＡＭＤ（ＯＰＴＩＣ）） 刊行物等１０．令和１年９月１１日および１２日に公開された「Ａｄｖｅｒｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｒｅｐｏｒｔｓ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ２４－Ｗｅｅｋ Ｄａｔａ ｆｒｏｍ Ｆｉｒｓｔ Ｃｏｈｏｒｔ ｏｆ ＯＰＴＩＣ Ｐｈａｓｅ １ Ｔｒｉａｌ ｏｆ ＡＤＶＭ－０２２ Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｔｏ Ｔｒｅａｔ Ｗｅｔ ＡＭＤ」のプレスリリース

(71)【出願人】

【識別番号】516279086

【氏名又は名称】アドヴェラム バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】メヒディ ガスミ

(72)【発明者】

【氏名】シラード キス

(72)【発明者】

【氏名】アーロン オズボーン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】有効で、有害効果のリスクを低減し、患者が長期間の高いコンプライアンスを受け入れやすい、個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法を提供する。
【解決手段】組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の単位用量を個体の眼に投与するステップを含み、ｒＡＡＶ粒子が、ａ）特定のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、およびｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

本明細書に記載の発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、２０１９年９月１１日に提出された米国仮特許出願第６２／８９９，０７０号および２０１９年１０月１０日に提出された米国仮特許出願第６２／９１３，６４８号の利益を主張し、その各々の開示のその全体はこれにより参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピューター可読型（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：６２７００２００１２４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年１１月１８日、サイズ：２９ＫＢ）。

【0003】

分野
本開示は、個体における眼内血管新生疾患および障害を処置する方法であって、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の１回単位用量を個体の眼に投与するステップを含む方法に関する。

【背景技術】

【0004】

背景
加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）は、字を読む、および細かいものを見る視力を担う網膜の中心にある光感受性の小さい領域である黄斑に影響を及ぼす眼の変性疾患である。黄斑に影響を及ぼす状態は、中心視野を低減させるが、周辺視野は影響を受けないままである。重度の例では、疾患は、中枢盲をもたらし得る。ＡＭＤは、米国集団の６５歳およびそれより上の人における視覚喪失の顕著な原因であり、年齢４０歳を超える人における任意のＡＭＤの推定有病率は、およそ６．５％である（Klein et al., (2011) Arch Ophthalmol, 129(1):75-80）。血管新生型または滲出型または滲出性ＡＭＤ（ｎＡＭＤ、ｗＡＭＤ、またはｎｗＡＭＤ）は、ＡＭＤの進行型である。ｗＡＭＤの典型的特徴は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）であり、これはその下にある脈絡膜層から網膜への異常な血管の浸潤であり、網膜細胞の損傷および中枢盲をもたらす。この異常な血管形成プロセスは、増殖因子、特に血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）によってモジュレートされる。

【0005】

ｗＡＭＤの標準治療は、ＶＥＧＦに結合してこれを隔離する分子のクラス、例えばラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ）である。例えば、アフリベルセプトは、血管内皮増殖因子サブタイプＡおよびＢ（ＶＥＧＦ－ＡおよびＶＥＧＦ－Ｂ）ならびに胎盤増殖因子（ＰＧＦ）のデコイ受容体として作用する組換え融合タンパク質である。これらのリガンドに結合することによって、アフリベルセプトは、それらのリガンドが血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、ＶＥＧＦＲ－１およびＶＥＧＦＲ－２に結合するのを防止し、血管新生を抑制し、血管透過性を減少させることができる。アフリベルセプトは、ＩｇＧ１のＦｃ断片に融合したＶＥＧＦＲ－１のドメイン２およびＶＥＧＦＲ－２のドメイン３からなる。

【0006】

現在の標準治療の抗ＶＥＧＦ剤は、最適な治療転帰を達成するためおよび視力を維持するためには、硝子体内注射（ＩＶＴ）注射を介して４～８週間毎に再投与する必要がある。そのようなレジメンのコンプライアンスは患者、その介護者および保健システムにとって煩わしく、ほとんどの患者が、時間が経つにつれて最適なレジメンのコンプライアンスから外れ、これは視覚喪失と相関する（Khanani AM, et al.）。加えて、眼内炎、網膜剥離、外傷性白内障、および眼圧（ＩＯＰ）上昇を含む合併症が存在し、これらの合併症のリスクは、繰り返しＩＶＴ注射によって増加する可能性がある（Falavarjani et al., (2013) Eye (Lond), 27(7):787-794）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Klein et al., (2011) Arch Ophthalmol, 129(1):75-80

【非特許文献2】Falavarjani et al., (2013) Eye (Lond), 27(7):787-794

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

したがって、有効で、有害効果のリスクを低減し、患者が長期間の高いコンプライアンスを受け入れやすい、ｗＡＭＤなどの眼内血管新生疾患の治療が当技術分野で必要である。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本開示の要旨
一態様では、本明細書において、個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の約６×１０^１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満の単位用量を個体の１つの眼に投与するステップを含み、個体がヒトであり、ｒＡＡＶ粒子が、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および（ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の眼の網膜液を低減させるステップを含む。

【0010】

別の態様では、本明細書において、眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減させるための方法であって、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼に投与するステップを含み、個体がヒトであり、ｒＡＡＶ粒子が、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および（ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のおよそ最後の１２週間に抗ＶＥＧＦ剤の少なくとも１回の処置を受けている。一部の実施形態では、個体の１つの眼の網膜液の量または存在は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置に対して不応性である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプトである。一部の実施形態では、１つの眼の網膜液は、少なくとも約６０％低減される。一部の実施形態では、１つの眼の網膜液は、ｒＡＡＶを個体に投与する前の個体の１つの眼の網膜液のレベルと比較して約８０％低減される。一部の実施形態では、網膜液は、網膜下液（ＳＲＦ）または網膜内液（ＩＲＦ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約６×１０^１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）またはそれ未満である。

【0011】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約６×１０^１０～約２×１０^１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約２×１０^１１または約６×１０^１０ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である。

【0012】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間後である。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量と同じであるかまたはそれより少ないベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間後である。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より多くのベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）を含む。

【0013】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、アフリベルセプトである。

【0014】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、核酸は、第１のエンハンサー領域、プロモーター領域、５’ＵＴＲ領域、第２のエンハンサー領域、およびポリアデニル化部位をさらに含む。一部の実施形態では、核酸は、５’から３’の順に：（ａ）第１のエンハンサー領域；（ｂ）プロモーター領域；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸；（ｄ）５’ＵＴＲ領域；（ｅ）第２のエンハンサー領域；および（ｆ）ポリアデニル化部位を含む。一部の実施形態では、第１のエンハンサー領域は、配列番号２２の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む。一部の実施形態では、プロモーター領域は、配列番号２３の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドはアフリベルセプトである。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ領域は、５’から３’の順に、配列番号２４の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＴＰＬ配列、および配列番号２５の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むｅＭＬＰ配列を含む。一部の実施形態では、第２のエンハンサー領域は、配列番号２６の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む全長のＥＥＳ配列を含む。一部の実施形態では、ポリアデニル化部位は、配列番号２７の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＨＧＨポリアデニル化部位を含む。一部の実施形態では、核酸は、（ａ）配列番号２２の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む第１のエンハンサー領域；（ｂ）配列番号２３の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含むプロモーター領域；（ｃ）５’から３’の順に、配列番号２４の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＴＰＬ配列、および配列番号２５の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むｅＭＬＰ配列を含む５’ＵＴＲ領域；（ｄ）配列番号２６の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む全長のＥＥＳ配列を含む第２のエンハンサー領域；ならびに（ｅ）配列番号２７の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＨＧＨポリアデニル化部位をさらに含む。一部の実施形態では、核酸はエレメントの両端にあるＡＡＶ ＩＴＲを含む。

【0015】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含む。一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含み、アミノ酸残基ナンバリングは、ＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する。一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含む。

【0016】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内投与による。

【0017】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、医薬製剤中にある。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、および界面活性剤を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１５０～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８、および約６×１０^１３～約６×１０^１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ｍＬ（ｖｇ／ｍＬ）のｒＡＡＶ粒子を含み、医薬製剤は、約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は、約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は、約７．３のｐＨを有する。

【0018】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約２５μＬ～約２５０μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約１００μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約３０μＬの体積を含む。

【0019】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けた。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプトである。

【0020】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、滲出性加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜虚血、虚血性網膜症、糖尿病網膜浮腫、またはそのいずれかの組合せである。

【0021】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ステロイド処置と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置はコルチコステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は全身性のステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置はプレドニゾン処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は局所ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置はジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与される。

【0022】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ステロイド処置は、局所ステロイド処置であり、局所ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から最大約４週間、最大約６週間、または最大約８週間の毎日ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１週目に局所ステロイドの約４回の投与、約２週目に局所ステロイドの約３回の投与、約３週目に局所ステロイドの約２回の投与、および約４週目に局所ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から開始し投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートの約１μｇ～約３μｇ用量を含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートの約２．５μｇ用量を含む。

【0023】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の維持または減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の減少をもたらす。一部の実施形態では、網膜厚の減少は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して少なくとも約１０％である。一部の実施形態では、網膜厚は、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）である。

【0024】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して、黄斑体積の維持または減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、黄斑体積の減少は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して少なくとも約１０％である。

【0025】

先行実施形態のいずれかと組み合わせられ得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の改善をもたらす。一部の実施形態では、視力は、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）である。参照による組み込み

【0026】

本明細書で引用した特許出願および刊行物を含む参考文献は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0027】

本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲において詳細に記載されている。本発明の原理が利用されている例示的な実施形態が記載されている以下の詳細な説明および付属図を参照することにより、本発明の特徴および利点のよりよい理解が得られよう。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の約６×１０^１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満の単位用量を前記個体の１つの眼に投与するステップを含み、前記個体がヒトであり、前記ｒＡＡＶ粒子が、
ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および
ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法。
（項目２）
眼内血管新生疾患を有する前記個体の前記眼の網膜液が低減される、項目１に記載の方法。
（項目３）
眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減させるための方法であって、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を前記個体の１つの眼に投与するステップを含み、前記個体がヒトであり、前記ｒＡＡＶ粒子が、
ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および
ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法。
（項目４）
前記個体が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を投与する約１２週間前に抗ＶＥＧＦ剤の少なくとも１回の処置を受けた、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記個体の前記１つの眼の網膜液の量または存在が、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置に対して不応性である、項目３または項目４に記載の方法。
（項目６）
前記抗ＶＥＧＦ剤がアフリベルセプトである、項目４または項目５に記載の方法。
（項目７）
前記１つの眼の前記網膜液が少なくとも約６０％低減される、項目２～６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記１つの眼の前記網膜液が、前記ｒＡＡＶの前記個体への投与前の前記個体の前記１つの眼の網膜液のレベルと比較して約８０％低減される、項目２～７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記網膜液が、網膜下液（ＳＲＦ）または網膜内液（ＩＲＦ）である、項目２～８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約６×１０^１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）またはそれ未満である、項目２～９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約６×１０^１０～約２×１０^１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である、項目１～１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約２×１０^１１または約６×１０^１０ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である、項目１～１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
ｒＡＡＶ粒子の単位用量を前記個体の反対側の眼に投与するステップをさらに含む、項目１～１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記１つの眼に投与するステップの最大約２週間後である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記個体の前記反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、前記個体の前記１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の前記単位用量と同じであるか、またはより少ないベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）を含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間後である、項目１３に記載の方法。
（項目１７）
前記個体の前記反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、前記個体の前記１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の前記単位用量より多くのベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）を含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ポリペプチドが配列番号３５のアミノ酸配列を含む、項目１～１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記ポリペプチドがアフリベルセプトである、項目１～１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記核酸が、第１のエンハンサー領域、プロモーター領域、５’ＵＴＲ領域、第２のエンハンサー領域、およびポリアデニル化部位をさらに含む、項目１～１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記核酸が５’から３’の順に：
（ａ）第１のエンハンサー領域；
（ｂ）プロモーター領域；
（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸；
（ｄ）５’ＵＴＲ領域；
（ｅ）第２のエンハンサー領域；および
（ｆ）ポリアデニル化部位；
を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する、項目１～２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記第１のエンハンサー領域が、配列番号２２の配列、またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む、項目２０または項目２１に記載の方法。（項目２３）
前記プロモーター領域が、配列番号２３の配列、またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む、項目２０～２２のいずれか一項に記載の方法。（項目２４）
前記ポリペプチドが、配列番号３５のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、項目２０～２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記ポリペプチドがアフリベルセプトである、項目２０～２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記５’ＵＴＲ領域が、５’から３’の順に、配列番号２４の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＴＰＬ配列、および配列番号２５の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むｅＭＬＰ配列を含む、項目２０～２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記第２のエンハンサー領域が、配列番号２６の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む全長のＥＥＳ配列を含む、項目２０～２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記ポリアデニル化部位が、配列番号２７の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＨＧＨポリアデニル化部位を含む、項目２０～２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記核酸が、（ａ）配列番号２２の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む第１のエンハンサー領域；（ｂ）配列番号２３の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含むプロモーター領域；（ｃ）５’から３’の順に、配列番号２４の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＴＰＬ配列、および配列番号２５の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むｅＭＬＰ配列を含む５’ＵＴＲ領域；（ｄ）配列番号２６の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む全長のＥＥＳ配列を含む第２のエンハンサー領域；ならびに（ｅ）配列番号２７の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＨＧＨポリアデニル化部位をさらに含む、項目１～１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質が、前記カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含み、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、項目１～２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質が、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含む、項目１～３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質が、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含む、項目１～３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の前記１つの眼および／または前記反対側の眼への投与が硝子体内投与による、項目１～３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が医薬製剤中にある、項目１～３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記医薬製剤が、前記ｒＡＡＶ粒子、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、および界面活性剤を含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記医薬製剤が、約１５０～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８、および約６×１０^１３～約６×１０^１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ｍＬ（ｖｇ／ｍＬ）の前記ｒＡＡＶ粒子を含み、前記医薬製剤が約７．０～約７．５のｐＨを有する、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記医薬製剤が、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬの前記ｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、前記医薬製剤が約７．３のｐＨを有する、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記医薬製剤が、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬの前記ｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、前記医薬製剤が約７．３のｐＨを有する、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約２５μＬ～約２５０μＬの体積を含む、項目１～３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が約１００μＬの体積を含む、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が約３０μＬの体積を含む、項目３９に記載の方法。
（項目４２）
前記個体が、抗ＶＥＧＦ剤による前記眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けた、項目１～４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記抗ＶＥＧＦ剤がアフリベルセプトである、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記眼内血管新生疾患が、滲出性加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜虚血、虚血性網膜症、糖尿病網膜浮腫、またはそのいずれかの組合せである、項目１～４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量がステロイド処置と組み合わせて投与される、項目１～４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記ステロイド処置がコルチコステロイド処置である、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記ステロイド処置が全身性のステロイド処置である、項目４５または項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記ステロイド処置が経口ステロイド処置である、項目４５～４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記ステロイド処置がプレドニゾン処置である、項目４５～４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記ステロイド処置が局所ステロイド処置である、項目４５または項目４６に記載の方法。
（項目５１）
前記ステロイド処置がジフルプレドネート処置である、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記ステロイドが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与される、項目４５～５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記ステロイド処置が局所ステロイド処置であり、前記局所ステロイド処置が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与から最大約４週間、最大約６週間、または最大約８週間の毎日ステロイド処置である、項目５０～５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記局所ステロイド処置が、約１週目に局所ステロイドの約４回の投与、約２週目に局所ステロイドの約３回の投与、約３週目に局所ステロイドの約２回の投与、および約４週目に局所ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与から開始し投与後である、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記局所ステロイドが、０．０５％ジフルプレドネートの約１μｇ～約３μｇ用量を含む、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記局所ステロイドが、０．０５％ジフルプレドネートの約２．５μｇ用量を含む、項目５４に記載の方法。
（項目５７）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の維持または減少をもたらす、項目１～５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の減少をもたらす、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
網膜厚の前記減少が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の網膜厚と比較して少なくとも約１０％である、項目５７または項目５８に記載の方法。
（項目６０）
網膜厚が、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）である、項目５７～５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の維持または減少をもたらす、項目１～６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の減少をもたらす、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
黄斑体積の前記減少が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の黄斑体積と比較して少なくとも約１０％である、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善をもたらす、項目１～６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の視力と比較して視力の改善をもたらす、項目１～６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
視力が、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）である、項目６４～６５のいずれか一項に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0028】

【図1A】図１Ａ～１Ｂは、調査医薬品ならびに実施例１および２に記載されている第Ｉ相試験の概略図を提示する。図１Ａは、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの概略図である。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは、ＡＡＶ２．７ｍ８タンパク質カプシドと、遍在するキメラプロモーターの制御下にあるアフリベルセプトｃＤＮＡのコドン最適化バージョンの発現カセット（Ｃ１１）を含有するベクターゲノムとを含有する組換え複製欠損アデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターである。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトベクターゲノムは、アフリベルセプトｃＤＮＡ発現カセットの両端にある２つのＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）も含有する。図１Ｂは、実施例１および２に記載されている第Ｉ相試験の試験設計を要約する図である。

【図1B】同上。

【0029】

【図2A】図２Ａ～２Ｌは、実施例１に記載の試験のコホート１の対象から取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。ＯＣＴ画像をＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与（１日目）の前後の示されている時点で取得した。抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ処置間隔が対象全員について示されている。図２Ａは、対象１から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像をアフリベルセプト標準治療による処置の直前に取得した。対象１は５～７週間ごとのアフリベルセプトＩＶＴを必要としており、アフリベルセプト標準治療による処置にもかかわらず不応性網膜下液および色素上皮剥離（ＰＥＤ）を示した。図２Ｂは、対象１からスクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－７日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象１は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象１は第４週に始まる網膜下液の消散を示し、網膜下および網膜内液が存在しないまま（乾燥したまま）であった。図２Ｃは、対象２から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像をアフリベルセプト標準治療による処置の直前に取得した。対象２は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置前の８カ月の間に、網膜の解剖学的構造を維持するために６回のアフリベルセプトＩＶＴ処置を必要とした。図２Ｄは、対象２からスクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－７日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象２は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象２は第２４週まで安定な網膜の解剖学的構造を示し、網膜下液も網膜内液も存在しなかった。図２Ｅは、対象３から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での４回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。－２７週に取得したＯＣＴ画像は示されていない。ＯＣＴ画像をアフリベルセプト標準治療による処置の直前に取得した。対象３は網膜下液を示し、アフリベルセプトＩＶＴ間の間隔が５週間から７週間に増すと網膜下液が増加した。図２Ｆは、対象３から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－７日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象３は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象３は、第８週までに不応性網膜下液の消散を示し、また、第２４週まで安定な網膜の解剖学的構造を示した。図２Ｇは、対象４から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像をラニビズマブ０．５ｍｇ ＩＶＴ標準治療による処置の直前に取得した。対象４はラニビズマブＩＶＴ注射に対して不応性の網膜下液を示した。図２Ｈは、対象４から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－１４日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象４は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象４は、第８週までに不応性網膜下液の消散を示し、また、第２４週まで安定な網膜の解剖学的構造を示した。図２Ｉは、対象５から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像をアフリベルセプト標準治療による処置の直前に取得した。図２Ｊは、対象５から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－１４日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象５は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置時に網膜下液およびＰＥＤが存在し、経時的に消散し、また、第２４週まで網膜の解剖学的構造は安定なままであり、網膜下液も網膜内液も存在しなかった。図２Ｋは、対象６から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像を示されている通りベバシズマブ１．５ｍｇ ＩＶＴ標準治療またはラニビズマブ０．５ｍｇ ＩＶＴ標準治療のいずれかによる処置の直前に取得した。対象６の網膜の外観はポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）と一致した。図２Ｌは、対象６から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－１０日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象６は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象６は第２４週までいかなる網膜下液の増加も示さず、いくらかの解剖学的改善が実現された。対象６の反対側の眼は標準治療であるアフリベルセプト注射を試験の経過にわたって４週間ごとに受け、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトで処置された眼と同様の網膜形態を示した。

【図2B】同上。

【図2C】同上。

【図2D】同上。

【図2E】同上。

【図2F】同上。

【図2G】同上。

【図2H】同上。

【図2I】同上。

【図2J】同上。

【図2K】同上。

【図2L】同上。

【0030】

【図3】図３は、実施例１に記載の試験のコホート１の対象についての示されている時点での平均中心窩網膜厚（ＣＳＴ）の変化を示す。エラーバーは、Ｔ分布を使用して算出された９０％信頼区間を示す。ベースライン（ＢＬ）は、１日目のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の７～１５日前（例えば、７～１４日前）のスクリーニングでのアフリベルセプト注射前に取得された測定値を示す。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後２４週間の時点で、対象が示したＣＲＴの変化は平均で－５２．７μｍ（９０％ＣＩ－８６．５、－１８．８）であった。ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。１日目の来訪はベースライン来訪の７～１４日後に行われた。

【0031】

【図4】図４は、実施例１に記載の試験のコホート１の対象についての示されている時点でのＥａｒｌｙ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｓｔｕｄｙ（ＥＴＤＲＳ）文字評価に基づく平均最高矯正視力（ＢＣＶＡ）測定値を示す。エラーバーは、Ｔ分布を使用して算出された９０％信頼区間を示す。ベースライン（ＢＬ）は、１日目のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の７～１５日前（例えば、７～１４日前）のスクリーニングでのアフリベルセプト注射前に取得された測定値を示す。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後２４週間の時点で、対象が示したＢＣＶＡの変化は平均で－２文字（９０％ＣＩ－９．１、５．１）であった。ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。１日目の来訪はベースライン来訪の７～１４日後に行われた。

【0032】

【図5】図５は、アフリベルセプトの核酸配列（配列番号３６）を提示する。

【0033】

【図6】図６は、実施例１に記載の試験の対象１～６についてのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の前房内細胞および硝子体細胞計数のプロットを示す。各患者に投与されたステロイド処置が各プロットの下に示されている。房水細胞計数カテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準（Jabs, DA et al., J Ophthalmol. 2005; 140: 509-516）に基づくものであった。硝子体細胞計数カテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった。房水細胞に関しては、細胞計数値０．５＋は１～５個の細胞を示し、細胞計数値１＋は６～１５個の細胞を示し、細胞計数値２＋は１６～２５個の細胞を示し、細胞計数値３＋は２６～５０個の細胞を示し、細胞計数値４＋は＞５０個の細胞を示す。硝子体細胞に関しては、細胞計数値０．５＋は１～１０個の細胞を示し、細胞計数値１＋は１１～２０個の細胞を示し、細胞計数値２＋は２１～３０個の細胞を示し、細胞計数値３＋は３１～１００個の細胞を示し、細胞計数値４＋は＞１００個の細胞を示す。この図に示されている分析に関しては希少な細胞は０．５＋として捕捉した。

【0034】

【図7A】図７Ａ～７Ｂは、実施例１に記載の試験のコホート１の対象１～６からフォローアップ時間中央値である第３４週に取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。さらに、ＢＣＶＡのベースラインからの変化、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与前８カ月の間の抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射の回数、および試験中に投与されたレスキュー抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射の回数も対象１～６のそれぞれについて提示する。各対象についてＯＣＴ画像および網膜厚マップを得た実際の週が示されている（対象１＝第４４週；対象２＝第４０週；対象３＝第３６週；対象４＝第３２週；対象５＝第２８週；および対象６＝第２８週）。試験中にレスキュー抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射を必要とした対象はおらず、また、最大４４週間のフォローアップ期間中のいかなる時点においても満たされた再処置基準はなかった。ＯＣＴイメージングで疾患再活動化の徴候を示した対象はいなかった。

【図7B】同上。

【発明を実施するための形態】

【0035】

詳細な説明
いくつかの態様を、例証のための例としての応用を参照して以下に記載する。多数の具体的詳細、関係、および方法は、本明細書に記載される特色の十分な理解を提供するために記載されることを理解すべきである。しかし、関連技術分野の当業者は、本明細書に記載される特色が具体的詳細の１つもしくは複数がなくとも、または他の方法によって実践することができることを容易に認識する。本明細書に記載される特色は、一部の行為が他の行為もしくは事象と異なる順序および／または同時に起こり得ることから、行為または事象の例証される順序に限定されない。さらに、本明細書に記載される特色に従って方法論を実施するために、必ずしも全ての例証される行為または事象は必要ではない。
定義

【0036】

特に定義していない限り、本明細書で使用される全ての技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。

【0037】

本明細書で使用される用語は、単に特定の例を説明する目的のためであり、限定することを意図していない。本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、本文が明らかにそれ以外であることを示していない限り、複数形も同様に含むと意図される。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「と共に（ｗｉｔｈ）」という用語またはその変化形を、詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかで使用する場合、そのような用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と類似の方法で包括的であると意図される。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」と同義であり、包括的であるか、または非限定的である。

【0038】

本明細書において「または」という言及は、それ以外であることを示していない限り「および／または」を包含すると意図される。本明細書で使用される場合、用語「約」の数は、その数のプラスまたはマイナス１０％の数を指す。用語「約」の範囲は、その最低値のマイナス１０％からその最大値のプラス１０％の範囲を指す。

【0039】

「対象」、「患者」、または「個体」という用語は、霊長類、例えばヒトおよび非ヒト霊長類、例えばアフリカミドリザルおよびアカゲザルを指す。一部の実施形態では、対象はヒトである。

【0040】

「処置する」、「処置している」、「処置」、「改善する」または「改善している」という用語および他の文法的等価物は、本明細書で使用される場合、眼内血管新生疾患もしくは障害、または眼内血管新生疾患もしくは障害の症状を軽減する、弱める、または改善すること、眼内血管新生疾患または障害の追加の症状を防止すること、症状の基礎となる代謝的原因を改善または防止すること、眼内血管新生疾患または障害を阻害すること、例えば眼内血管新生疾患または障害の発生を停止させること、眼内血管新生疾患または障害を緩和すること、眼内血管新生疾患または障害の退縮を引き起こすこと、あるいは眼内血管新生疾患または障害の症状を停止させることを指し、予防を含むと意図される。用語は、治療利益および／または予防利益を達成することをさらに含む。「治療利益」という用語は、処置される眼内血管新生疾患または障害の根絶または改善を指す。「治療利益」という用語は、処置される眼内血管新生疾患または障害の根絶または改善を指す。同様に、治療利益は、それによって一部の実施形態では、対象が眼内血管新生疾患または障害になおも罹患しているにもかかわらず、対象において改善が観察されるように、眼内血管新生疾患または障害に関連する１つまたは複数の生理的症状の根絶または改善によっても達成される。予防利益の場合、医薬組成物は、眼内血管新生疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象、またはたとえ疾患もしくは障害の診断が行われていない場合であっても眼内血管新生疾患もしくは障害の１つまたは複数の生理的症状を報告する対象に投与される。

【0041】

「投与する」、「投与している」、「投与」等という用語は、本明細書で使用される場合、生物学的作用の所望の部位への治療薬または医薬組成物の送達を可能にするために使用される方法を指し得る。これらの方法は、眼への硝子体内または網膜下注射を含む。

【0042】

「有効量」、「治療有効量」、または「薬学的有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、処置される眼の疾患または障害の１つまたは複数の症状をある程度軽減する、投与される少なくとも１つの医薬組成物または化合物の十分量を指し得る。医薬組成物の「有効量」、「治療有効量」、または「薬学的有効量」は、それを必要とする対象に単位用量として投与され得る（本明細書において他所でさらに詳しく記載される）。

【0043】

「薬学的に許容される」という用語は、本明細書で使用される場合、本明細書に開示される化合物の生物活性または特性を排除せず、比較的非毒性である（すなわち、材料を個体に投与した場合に、望ましくない生物作用を引き起こさず、それが含有される組成物の構成成分のいずれとも有害に相互作用しない）担体または希釈剤などの材料を指し得る。

【0044】

「医薬組成物」または単に「組成物」という用語は、本明細書で使用される場合、担体、安定化剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、濃化剤、賦形剤等などの、しかしこれらに限定されない少なくとも１つの薬学的に許容される化学構成成分と必要に応じて混合された生物活性化合物を指し得る。

【0045】

「ＡＡＶベクター」または「ｒＡＡＶベクター」は、本明細書で使用される場合、標的細胞中へのまたは標的組織への形質導入のための、ＡＡＶ起源ではないポリヌクレオチド配列（例えば、治療用トランスジーン、例えばアフリベルセプトをコードする核酸配列などの、ＡＡＶに対して異種のポリヌクレオチド）を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターまたは組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターを指す。一般的に、異種ポリヌクレオチドは、少なくとも１つのＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）が隣接し、一般的に２つのＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する。ｒＡＡＶベクターという用語は、ｒＡＡＶベクター粒子およびｒＡＡＶベクタープラスミドの両方を包含する。ｒＡＡＶベクターは、一本鎖（ｓｓＡＡＶ）または自己相補的（ｓｃＡＡＶ）のいずれかであり得る。

【0046】

「ＡＡＶウイルス」または「ＡＡＶウイルス粒子」または「ｒＡＡＶベクター粒子」または「ｒＡＡＶ粒子」は、少なくとも１つのＡＡＶカプシドタンパク質およびポリヌクレオチドｒＡＡＶベクターを含むウイルス粒子を指す。一部の例では、少なくとも１つのＡＡＶカプシドタンパク質は、野生型ＡＡＶに由来するか、またはバリアントＡＡＶカプシドタンパク質（例えば、挿入、例えば以下に記載される７ｍ８アミノ配列の挿入を有するＡＡＶカプシドタンパク質）である。粒子が異種ポリヌクレオチド（例えば、標的細胞または標的組織に送達されるトランスジーンなどの野生型ＡＡＶゲノム以外のポリヌクレオチド）を含む場合、「ｒＡＡＶ粒子」、「ｒＡＡＶベクター粒子」、または「ｒＡＡＶベクター」と呼ばれる。このように、ｒＡＡＶ粒子の産生は、そのようなベクターがｒＡＡＶ粒子内に含有されることから、ｒＡＡＶベクターの産生を必然的に含む。

【0047】

「パッケージング」という用語は、本明細書で使用される場合、ｒＡＡＶ粒子のアセンブリおよびカプシド形成をもたらし得る一連の細胞内事象を指し得る。

【0048】

ＡＡＶ「ｒｅｐ」および「ｃａｐ」遺伝子は、アデノ随伴ウイルスの複製およびカプシド形成タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を指す。ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐは、本明細書においてＡＡＶ「パッケージング遺伝子」と呼ばれる。

【0049】

「ポリペプチド」という用語は、天然に存在するおよび天然に存在しない、両方のタンパク質（例えば、融合タンパク質）、ペプチド、断片、突然変異体、その誘導体およびアナログを包含し得る。ポリペプチドは、単量体、二量体、三量体、またはポリマーであり得る。さらに、ポリペプチドは、その各々が１つまたは複数の明確な活性を有するいくつかの異なるドメインを含み得る。誤解を避けるために、「ポリペプチド」は、２アミノ酸より長い任意の長さであり得る。

【0050】

本明細書で使用される場合、「ポリペプチドバリアント」または単純に「バリアント」は、その配列がアミノ酸改変を含有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、改変は、参照のタンパク質またはポリペプチド、例えばネイティブまたは野生型タンパク質のアミノ酸配列と比較した、１つまたは複数のアミノ酸の挿入、重複、欠失、再配列、または置換である。バリアントは、ある位置での単一のアミノ酸が別のアミノ酸に変化している１つもしくは複数のアミノ酸の点置換、１つもしくは複数のアミノ酸が参照タンパク質の配列においてそれぞれ、挿入されるかもしくは欠失している１つもしくは複数の挿入および／もしくは欠失、ならびに／またはアミノ末端もしくはカルボキシ末端のいずれかもしくは両方でのアミノ酸配列の切断を有し得る。バリアントは、参照タンパク質または非改変タンパク質と比較して同じまたは異なる生物活性を有し得る。

【0051】

一部の実施形態では、バリアントは、その相対物の参照タンパク質と例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な配列相同性を有し得る。一部の実施形態では、バリアントは、野生型タンパク質と少なくとも約９０％の全体的な配列相同性を有し得る。一部の実施形態では、バリアントは、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または少なくとも約９９．９％の全体的な配列同一性を示す。

【0052】

本明細書で使用される場合、「組換え」は、（１）その天然に存在する環境から除去されている、（２）遺伝子が天然に見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは一部に会合していない、（３）天然において連結していないポリヌクレオチドに作動可能に連結している、または（４）天然に存在しない、生物分子、例えば遺伝子またはタンパク質を指し得る。「組換え」という用語は、クローニングされたＤＮＡ単離体、化学合成されたポリヌクレオチドアナログ、または異種系によって生物学的に合成されたポリヌクレオチドアナログ、ならびにそのような核酸によってコードされるタンパク質および／またはｍＲＮＡに関連して使用することができる。このように、例えば、微生物によって合成されたタンパク質は、例えばそれが細胞に存在する組換え遺伝子から合成されたｍＲＮＡから合成される場合、組換えである。

【0053】

「抗ＶＥＧＦ剤」という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏで内因性のＶＥＧＦおよび／もしくは内因性のＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）の活性もしくは機能、またはＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ相互作用もしくは経路を低減する、妨害する、破壊する、遮断する、および／または阻害することができるタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、多量体タンパク質、遺伝子産物、抗体、ヒトモノクローナル抗体、抗体断片、アプタマー、低分子、キナーゼ阻害剤、受容体もしくは受容体断片、または核酸分子を含む任意の治療剤を含む。抗ＶＥＧＦ剤は、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞、組織、または対象に送達した場合に、新規血管の成長もしくは形成および／または浮腫もしくは腫脹を低減させることができる公知の治療剤の任意の１つ、例えばラニビズマブ、ブロルシズマブ、またはベバシズマブであり得る。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、天然に存在する、天然に存在しない、または合成であり得る。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、天然に存在する分子に由来し得て、その後抗ＶＥＧＦ活性を付与するように改変または突然変異させた。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、融合タンパク質またはキメラタンパク質である。そのようなタンパク質では、機能的ドメインまたはポリペプチドを部分またはポリペプチドに人為的に融合して、ｉｎ ｖｉｖｏでＶＥＧＦを隔離するか、またはＶＥＧＦＲデコイとして機能することができる融合タンパク質またはキメラタンパク質を作製する。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、内因性のＶＥＧＦＲをそのリガンドと相互作用しないように遮断する融合タンパク質またはキメラタンパク質である。

【0054】

本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦ」は、それ以外を必要としている場合を除き、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＶＥＧＦ－Ｅ、ＶＥＧＦ－Ｆ、またはその任意の組合せ、またはその任意の機能的断片もしくはバリアントを含むがこれらに限定されない、ＶＥＧＦの任意のアイソフォームを指し得る。それ以外を必要とする場合を除き、「ＶＥＧＦ」は、メンバー：ＶＥＧＦ－Ａ、胎盤増殖因子（ＰＧＦ）、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、およびＶＥＧＦ－Ｄ、またはその任意の組合せ、機能的断片、もしくはバリアントを含むＶＥＧＦファミリーの任意のメンバーを指し得る。本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦ受容体」または「ＶＥＧＦＲ」または「ＶＥＧＦ－Ｒ」は、ＶＥＧＦＲ－１（またはＦｌｔ－１）、ＶＥＧＦＲ－２（またはＦｌｋ－１／ＫＤＲ）、およびＶＥＧＦＲ－３（またはＦｌｔ－４）を含むがこれらに限定されないＶＥＧＦの受容体のいずれか１つを指すために使用され得る。ＶＥＧＦＲは、膜結合型もしくは可溶性型、または受容体の機能的断片もしくは切断型であり得る。抗ＶＥＧＦ剤の例としては、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、またはその任意の組合せ、バリアント、もしくは機能的断片を含むがこれらに限定されない。

【0055】

「作動可能に連結された（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」または「作動可能に連結された（ｏｐｅｒａｂｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」または「カップリングされた」は、エレメントが、それらを予想される様式で作動させることができる関係にある、遺伝子エレメントの並置を指し得る。例えば、プロモーターは、プロモーターがコード配列の転写の開始を助ける場合、コード領域に作動可能に連結され得る。この機能的関係が維持される限り、プロモーターとコード領域の間に介在残基が存在してもよい。

【0056】

「発現ベクター」または「発現構築物」または「カセット」または「プラスミド」または単に「ベクター」という用語は、配列をコードする核酸の一部または全てが転写可能であり、遺伝子治療に適合する遺伝子産物をコードする核酸またはポリヌクレオチドを含有するＡＡＶまたはｒＡＡＶベクターを含む任意のタイプの遺伝子産物を含み得る。転写物はタンパク質に翻訳され得る。一部の実施形態では、転写物は、部分的に翻訳されるか、または翻訳されない。ある特定の態様では、発現は、遺伝子の転写およびｍＲＮＡの遺伝子産物への翻訳の両方を含む。他の態様では、発現のみは、目的の遺伝子をコードする核酸の転写を含む。発現ベクターはまた、標的細胞におけるタンパク質の発現を容易にするために、コード領域に作動可能に連結された制御エレメントも含み得る。制御エレメントと、それらが発現のために作動可能に連結される遺伝子または複数の遺伝子の組合せは、時に「発現カセット」と呼ぶことができ、その多くは当技術分野で公知であり、利用可能であるか、または当技術分野で利用可能な構成成分から容易に構築することができる。

【0057】

「異種」という用語は、それが比較される実体の残りの部分とは遺伝子型が異なる実体を指し得る。例えば、遺伝子操作技法によって異なる種に由来するプラスミドまたはベクターに導入されたポリヌクレオチドは、異種ポリヌクレオチドであり得る。そのネイティブのコード配列から除去され、それとの連結が天然に見出されないコード配列に作動可能に連結されたプロモーターは、異種プロモーターであり得る。

【0058】

本明細書で使用される場合、「７ｍ８」は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を指す。

【0059】

「７ｍ８バリアント」は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）が、カプシドタンパク質の溶媒に露出したＧＨループに挿入されている任意の血清型であり得るｒＡＡＶを指す。

【0060】

７ｍ８がｒＡＡＶ２に挿入される場合（ＡＡＶ２．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質のアミノ酸５７０～６１１内のＧＨループに、例えばＡＡＶ２カプシドタンパク質ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入される。一部の例では、７ｍ８がｒＡＡＶ２に挿入される場合（ＡＡＶ２．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質のＧＨループに、例えば配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ１に挿入される場合（ＡＡＶ１．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ１カプシドタンパク質のＡＡＶ１のアミノ酸５７１～６１２内のＧＨループに、例えばＡＡＶ１カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ５に挿入される場合（ＡＡＶ５．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ５カプシドタンパク質のＡＡＶ５のアミノ酸５６０～６０１内のＧＨループに、例えばＡＡＶ５カプシドタンパク質のアミノ酸５７５と５７６の間に挿入される。７ｍ８が、ｒＡＡＶ６に挿入される場合（ＡＡＶ６．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ６カプシドタンパク質のアミノ酸５７１～６１２内のＧＨループに、例えばＡＡＶ６カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ７に挿入される場合（ＡＡＶ７．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ７カプシドタンパク質のアミノ酸５７２～６１３内のＧＨループに、例えばＡＡＶ７カプシドタンパク質のアミノ酸５８９と５９０の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ８に挿入される場合（ＡＡＶ８．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸５７３～６１４内のＧＨループに、例えばＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ９に挿入される場合（ＡＡＶ９．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質のＧＨループに、例えばＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸５８８と５８９の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ１０に挿入される場合（ＡＡＶ１０．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ１０カプシドタンパク質のアミノ酸５７３～６１４内のＧＨループに、例えばＡＡＶ１０カプシドタンパク質のアミノ酸５８９と５９０の間に挿入される。
概要

【0061】

眼内血管新生疾患、例えばｗＡＭＤに関する現在の治療（例えば、アフリベルセプト）は、およそ４～８週間毎の一生涯続くＩＶＴ投与を必要とする。これは、一部の患者では炎症、感染症、および他の有害効果のリスクを増加させ得る。さらに、現在の治療は、特にｗＡＭＤに最も多く罹患している高齢患者に治療を投与するための診療所への繰り返しおよび／または頻繁な移動により、コンプライアンスの問題を有する。投与回数の低減は、視覚喪失および眼の疾患または状態の悪化に関連する。ＡＡＶベクターが、ＩＶＴ注射後に標的網膜細胞に効率よく形質導入できることは、治療遺伝子を光受容器、網膜色素上皮、および内部網膜へとうまく移入して多様な網膜疾患を処置するために利用されている。このように、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードするｒＡＡＶ粒子の投与は、抗ＶＥＧＦ剤のｉｎ ｖｉｖｏでの長期間のおよび／または持続的な放出を提供することができる。

【0062】

意外にも、アフリベルセプトをコードするｒＡＡＶ粒子の６×１０^１１ベクターゲノム（ｖｇ）／眼の１回単位低用量を、眼内血管新生疾患を有する個体の眼に投与することは、処置した全ての個体において疾患の安定化およびロバストな解剖学的応答をもたらした（実施例１を参照されたい）。加えて、アフリベルセプトをコードするｒＡＡＶ粒子の６×１０^１１ｖｇ／眼の１回単位低用量の投与後、全ての処置した個体において視力が安定化され、いずれの個体もレスキュー抗ＶＥＧＦ処置（例えば、アフリベルセプトのＩＶＴ注射）を必要としなかった。その上、アフリベルセプトをコードするｒＡＡＶ粒子の１回単位用量を、眼内血管新生疾患を有する個体の眼に投与することは、以前の抗ＶＥＧＦ処置（例えば、アフリベルセプト、ラニビズマブ、またはベバシズマブの長期的なＩＶＴ注射）に対して不応性であった網膜内液および網膜下液を含む症状の低減（例えば、消散）を意外にも引き起こした。

【0063】

したがって、本開示は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードするｒＡＡＶ粒子の６×１０^１１ｖｇ／眼またはそれ未満の１回単位用量を投与することによって、個体における眼内血管新生疾患を処置する方法を提供する。加えて、本開示は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードするｒＡＡＶ粒子の１回単位用量を投与することによって、眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減するための方法を提供する。本明細書に開示される方法は、繰り返しＩＶＴ注射の必要性を低減させるかまたはなくし、長期的な有効性を提供しながら、ノンコンプライアンスおよびノンアドヒアランスの問題に対処する。加えて、本明細書に提供される方法は、複数のＩＶＴ注射に関連する有害効果を低減する。
処置の方法

【0064】

本明細書において、個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の単位用量を個体の眼に投与するステップを含む方法が提供される。

【0065】

同様に、本明細書において、眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減させるための方法であって、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の眼に投与するステップを含む方法が提供される。

【0066】

一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、滲出性加齢黄斑変性（ｗＡＭＤ）、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜虚血、虚血性網膜症、糖尿病網膜浮腫、またはそのいずれかの組合せである。

【0067】

一部の実施形態では、個体はヒトである。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による眼内血管新生疾患の少なくとも１回の以前の処置（例えば、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、またはそれより多くの処置）を、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のおよそ最後の８週間、およそ最後の９週間、およそ最後の１０週間、およそ最後の１１週間、およそ最後の１２週間、およそ最後の１３週間、およそ最後の１４週間、およそ最後の１５週間、またはおよそ最後の１６週間の間に受けた。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置に対して意味のある応答を示した。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、個体の眼の網膜液は、網膜内液（ＩＲＦ）および／または網膜下液（ＳＲＦ）である。一部の実施形態では、個体の眼の網膜液の量または存在は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置に対して不応性である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。

【0068】

一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）／眼（ｖｇ／眼）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１１ｖｇ／眼またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約６×１０^１０～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約２×１０^１１または約６×１０^１０ｖｇ／眼である。

【0069】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与される。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼または左眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は左眼である。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼であり、反対側の眼は左眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は左眼であり、反対側の眼は右眼である。

【0070】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間（例えば、約０日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日）後である。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量とほぼ同じである（例えば、１％未満高いもしくは低い、５％未満高いもしくは低い、１０％未満高いもしくは低い、または２０％未満高いもしくは低い）か、またはそれより低い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％低い）。

【0071】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間（例えば、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約１カ月、少なくとも約２カ月、少なくとも約３カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約５カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約７カ月、少なくとも約８カ月、少なくとも約９カ月、少なくとも約１０カ月、少なくとも約１１カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年、またはそれより長い期間）後である。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より高い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％、またはそれより高い％のいずれかより高い）。

【0072】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、およびｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。配列番号３５の配列を以下に提供する：
SDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVLNCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG（配列番号３５）

【0073】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、およびｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。

【0074】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、アフリベルセプトまたはその機能的バリアントまたはその機能的断片である。

【0075】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするコドン最適化配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするコドン最適化配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするコドン最適化配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。

【0076】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトまたはその機能的バリアントまたはその機能的断片のｃＤＮＡ配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトまたはその機能的バリアントまたはその機能的断片のコドン最適化ｃＤＮＡ配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３６の核酸配列を含む核酸を含む。

【0077】

一部の実施形態では、核酸は、（ａ）ＣＭＶ配列を含む第１のエンハンサー領域；（ｂ）ＣＭＶ配列を含むプロモーター領域；（ｃ）５’から３’の順に、ＴＰＬ配列およびｅＭＬＰ配列を含む５’ＵＴＲ領域；（ｄ）全長のＥＥＳ配列を含む第２のエンハンサー領域；ならびに（ｅ）ＨＧＨポリアデニル化部位をさらに含む。一部の実施形態では、ＣＭＶ配列を含むエンハンサー領域は、配列番号２２の配列を含む。一部の実施形態では、ＣＭＶ配列を含むプロモーター領域は、配列番号２３の配列を含む。一部の実施形態では、ＴＰＬ配列は、配列番号２４の配列を含む。一部の実施形態では、ｅＭＬＰ配列は、配列番号２５の配列を含む。一部の実施形態では、全長のＥＥＳ配列を含む第２のエンハンサー領域は、配列番号２６の配列を含む。一部の実施形態では、ＨＧＨポリアデニル化部位は、配列番号２７の配列を含む。

【0078】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。配列番号１３の配列を以下に提供する：
MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLD
KGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQ
AKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDAD
SVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVI
TTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLI
NNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQG
CLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPF
HSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPG
PCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVL
IFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGV
LPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTT
FSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVY
SEPRPIGTRYLTRNL（配列番号１３）

【0079】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。

【0080】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入された以下のアミノ酸配列：ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）；ＬＡＮＥＴＩＴＲＰＡ（配列番号２）、ＬＡＫＡＧＱＡＮＮＡ（配列番号３）、ＬＡＫＤＰＫＴＴＮＡ（配列番号４）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号５）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号６）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号７）、ＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号８）、ＬＡＫＤＴＤＴＴＲＡ（配列番号９）、ＬＡＲＡＧＧＳＶＧＡ（配列番号１０）、ＬＡＡＶＤＴＴＫＦＡ（配列番号１１）、ＬＡＳＴＧＫＶＰＮＡ（配列番号１２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）、ＮＥＴＩＴＲＰ（配列番号１５）、ＫＡＧＱＡＮＮ（配列番号１６）、ＫＤＰＫＴＴＮ（配列番号１７）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号１８）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号１９）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号２０）、およびＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号２１）のいずれかを含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入された以下のアミノ酸配列：ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）；ＬＡＮＥＴＩＴＲＰＡ（配列番号２）、ＬＡＫＡＧＱＡＮＮＡ（配列番号３）、ＬＡＫＤＰＫＴＴＮＡ（配列番号４）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号５）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号６）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号７）、ＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号８）、ＬＡＫＤＴＤＴＴＲＡ（配列番号９）、ＬＡＲＡＧＧＳＶＧＡ（配列番号１０）、ＬＡＡＶＤＴＴＫＦＡ（配列番号１１）、ＬＡＳＴＧＫＶＰＮＡ（配列番号１２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）、ＮＥＴＩＴＲＰ（配列番号１５）、ＫＡＧＱＡＮＮ（配列番号１６）、ＫＤＰＫＴＴＮ（配列番号１７）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号１８）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号１９）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号２０）、およびＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号２１）のいずれかを含むＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。

【0081】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内（ＩＶＴ）注射、眼内投与、または網膜内注射による。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内（ＩＶＴ）注射による。

【0082】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は医薬製剤中にある。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、１つまたは複数の浸透圧またはイオン強度調整剤、１つまたは複数の緩衝剤、１つまたは複数の界面活性剤、および１つまたは複数の溶媒を含む。一部の実施形態では、浸透圧またはイオン強度調整剤は、塩化ナトリウムである。一部の実施形態では、１つまたは複数の緩衝剤は、リン酸二水素ナトリウムおよび／またはリン酸水素ナトリウムである。一部の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。一部の実施形態では、溶媒は水である。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、および界面活性剤を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１×１０^１０ｖｇ／ｍＬ～約１×１０^１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム（例えば、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、または約２００ｍＭのいずれか）を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム（例えば、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭ）を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム（例えば、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭ）を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８（例えば、約０．０００５％（重量／体積）、０．０００６％（重量／体積）、０．０００７％（重量／体積）、０．０００８％（重量／体積）、０．０００９％（重量／体積）、０．００１％（重量／体積）、０．００２％（重量／体積）、０．００３％（重量／体積）、０．００４％（重量／体積）、または約０．００５％（重量／体積）のいずれか）を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約７．０～約７．５（例えば、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５のいずれか）のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。

【0083】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約２５μＬ～約２５０μＬの間（例えば、約２５μＬ、約３０μＬ、約４０μＬ、約５０μＬ、約６０μＬ、約７０μＬ、約８０μＬ、約９０μＬ、約１００μＬ、約１１０μＬ、約１２０μＬ、約１３０μＬ、約１４０μＬ、約１５０μＬ、約１６０μＬ、約１７０μＬ、約１８０μＬ、約１９０μＬ、約２００μＬ、約２１０μＬ、約２２０μＬ、約２３０μＬ、約２４０μＬ、または約２５０μＬのいずれか）の体積を含む。一部の実施形態では、医薬製剤中のｒＡＡＶ粒子の濃度は、個体の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量の体積が約２５μＬ～約２５０μＬの間となるように調整される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約１００μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約３０μＬの体積を含む。

【0084】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ステロイド処置と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置はコルチコステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は全身性のステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置はプレドニゾン処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は眼科用ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、局所ステロイド処置（例えば、点眼液）、眼周囲のステロイド処置（例えば、テノン嚢下、結膜下）、硝子体内ステロイド処置、または脈絡膜上ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置、メドリゾン処置、ロテプレドノール処置、プレドニゾロン処置、フルオシノロン処置、トリアムシノロン処置、リメキソロン処置、デキサメタゾン処置、フルオロメトロン処置、フルオシノロン処置、リメキソロン処置、またはプレドニゾン処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置はジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および投与後に投与される。

【0085】

一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置（例えば、ジフルプレドネート）である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置（例えば、ジフルプレドネート）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から最大約４週間、約６週間、または約８週間の毎日ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、約１週目に眼科用ステロイドの約４回の投与、約２週目に眼科用ステロイドの約３回の投与、約３週目に眼科用ステロイドの約２回の投与、および約４週目に眼科用ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から開始し投与後である。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、約０．００５％～約０．５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、または約０．１％ジフルプレドネートのいずれかである。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、０．０５％ジフルプレドネートの用量は、眼科用溶液１滴である。一部の実施形態では、１滴は約５０μｌ（例えば、約２５μｌ～約５０μｌ、約５０μｌ～約１００μｌ）である。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約１μｇ～約５μｇ、または約２μｇ～約３μｇ、または約２．５μｇジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約２．５μｇジフルプレドネートを含む。

【0086】

一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置（例えば、ジフルプレドネート）である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置（例えば、ジフルプレドネート）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から最大約４週間、約６週間、または約８週間の毎日の局所ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１週目に局所ステロイドの約４回の投与、約２週目に局所ステロイドの約３回の投与、約３週目に局所ステロイドの約２回の投与、および約４週目に局所ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から開始し投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートの約１μｇ～約３μｇ用量を含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートの約２．５μｇ用量を含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、約０．００５％～約０．５％ジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、または約０．１％ジフルプレドネートのいずれかである。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、０．０５％ジフルプレドネートの用量は、眼科用溶液１滴である。一部の実施形態では、１滴は約５０μｌ（例えば、約２５μｌ～約５０μｌ、約５０μｌ～約１００μｌ）である。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約１μｇ～約５μｇ、または約２μｇ～約３μｇ、または約２．５μｇジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は約２．５μｇジフルプレドネートを含む。

【0087】

一部の実施形態では、個体の眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％のいずれかより大きく低減される。一部の実施形態では、個体の眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の個体の眼の網膜液のレベルと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％のいずれかより大きく低減される。一部の実施形態では、個体の眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の個体の眼の網膜液のレベルと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約１００％低減される。

【0088】

一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後の個体の１つの眼および／または反対側の眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）のレベルをモニターするステップをさらに含む。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の、約１日、約３日、約８日、約２週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間、約２８週間、約３２週間、約３６週間、約４０週間、約４４週間、約４８週間、約５２週間、約５６週間、約６０週間、約６４週間、約６８週間、約７２週間、約７６週間、約８０週間、約８４週間、約８８週間、約９２週間、約９６週間、約１００週間、約１０４週間、またはそれより長い期間のいずれかの後に初めて観察される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を投与後、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも１６週間、少なくとも２０週間、少なくとも２４週間、少なくとも２８週間、少なくとも３２週間、少なくとも３６週間、少なくとも４０週間、少なくとも４４週間、少なくとも４８週間、少なくとも５２週間、少なくとも５６週間、少なくとも６０週間、少なくとも６４週間、少なくとも６８週間、少なくとも７２週間、少なくとも７６週間、少なくとも８０週間、少なくとも８４週間、少なくとも８８週間、少なくとも９２週間、少なくとも９６週間、少なくとも１００週間、少なくとも１０４週間、またはそれより長い期間持続するか、または維持される。

【0089】

一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、当技術分野で公知の任意の方法によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、光干渉断層法（ＯＣＴ）、スペクトラルドメインＯＣＴ（ＳＤ－ＯＣＴ）、ＯＣＴ血管造影、フルオレセイン血管造影、または直接網膜観察によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、光干渉断層法（ＯＣＴ）によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、スペクトラルドメインＯＣＴ（ＳＤ－ＯＣＴ）によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、ＯＣＴ血管造影によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、フルオレセイン血管造影によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、直接網膜観察によって決定される。

【0090】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、ＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液（例えば、網膜内液（ＩＲＦ）および／または網膜下液（ＳＲＦ））のレベルと比較した網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）のレベルに基づいて評価される（例えば、上記のように）。一部の実施形態では、網膜液は、網膜下液（ＳＲＦ）または網膜内液（ＩＲＦ）である。一部の実施形態では、網膜液は網膜下液（ＳＲＦ）である。一部の実施形態では、網膜液は網膜内液（ＩＲＦ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液（例えば、ＩＲＦおよび／またはＳＲＦ）のレベルと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に網膜液（例えば、ＩＲＦおよび／またはＳＲＦ）の低減が観察される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される（例えば、上記のように）。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。

【0091】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の維持または減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の減少をもたらす。一部の実施形態では、網膜厚は、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％のいずれかより大きい網膜厚の減少をもたらす。一部の実施形態では、網膜厚（例えば、ＣＳＴまたはＣＲＴ）は、ＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、約１０μｍ～約１００μｍ（例えば、約１０μｍ、約１５μｍ、約２０μｍ、約２５μｍ、約３０μｍ、約３５μｍ、約４０μｍ、約４５μｍ、約５０μｍ、約５５μｍ、約６０μｍ、約６５μｍ、約７０μｍ、約７５μｍ、約８０μｍ、約８５μｍ、約９０μｍ、約９５μｍ、約１００μｍ、またはそれより大きいμｍのいずれかより大きい）の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％のいずれかより大きい中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して少なくとも約１０％の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約１５％またはそれより大きい中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の減少をもたらす。

【0092】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の維持または減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、または約５０％のいずれかより大きい黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して少なくとも約１０％の黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、黄斑体積は、ＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して少なくとも約１０％の黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して約１５％またはそれより大きい黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、黄斑体積はＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。

【0093】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％、またはそれより大きい％のいずれかより大きい視力の改善をもたらす。一部の実施形態では、視力は、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡの改善をもたらす。一部の実施形態では、ＢＣＶＡは、ＥＴＤＲＳスコアとして表記され、これは正確に読んだ文字数に対応する（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）。一部の実施形態では
、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較して、少なくとも１５ＥＴＤＲＳ文字（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）（例えば、
少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、または約７０文字）のＢＣＶＡの改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較して約５ＥＴＤＲＳ文字のＢＣＶＡの改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較して個体が１５ＥＴＤＲＳ文字未満（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）（例えば、１５文字もしくはそれ未満、１４
文字もしくはそれ未満、１３文字もしくはそれ未満、１２文字もしくはそれ未満、１１文字もしくはそれ未満、１０文字もしくはそれ未満、９文字もしくはそれ未満、８文字もしくはそれ未満、７文字もしくはそれ未満、６文字もしくはそれ未満、５文字もしくはそれ未満、４文字もしくはそれ未満、３文字もしくはそれ未満、２文字もしくはそれ未満、１文字、または０文字のいずれか）の減少を有する、ＢＣＶＡの維持をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較して個体が約２文字の減少を有する、ＢＣＶＡの維持をもたらす。

【0094】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、１つの眼および／または反対側の眼における最高矯正視力（ＢＣＶＡ）に基づいて評価される。一部の実施形態では、ＢＣＶＡは、ＥＴＤＲＳスコアとして表記され、これは正確に読んだ文字数に対応する（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）。一部の実施形態
では、個体が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較して、ＥＴＤＲＳスコアの１５文字未満（例えば、１５文字もしくはそれ未満、１４文字もしくはそれ未満、１３文字もしくはそれ未満、１２文字もしくはそれ未満、１１文字もしくはそれ未満、１０文字もしくはそれ未満、９文字もしくはそれ未満、８文字もしくはそれ未満、７文字もしくはそれ未満、６文字もしくはそれ未満、５文字もしくはそれ未満、４文字もしくはそれ未満、３文字もしくはそれ未満、２文字もしくはそれ未満、１文字、または０文字のいずれか）の減少を有する場合、個体は視覚および／または視力の維持を有すると決定される。一部の実施形態では、個体が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較して、少なくとも１５文字（例えば、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、または約７０文字のいずれか）の増加を有する場合、個体は、視覚および／または視力の改善を有すると決定される。

【0095】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、１つの眼および／または反対側の眼における中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）に基づいて評価される。一部の実施形態では、ＣＳＴまたはＣＲＴは、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴまたはＣＲＴが減少する場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴまたはＣＲＴが維持される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。

【0096】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、１つの眼および／または反対側の眼における黄斑体積に基づいて評価される。一部の実施形態では、黄斑体積は、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価した黄斑体積が減少する場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価した黄斑体積が維持される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。

【0097】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、１つの眼および／または反対側の眼における網膜厚（例えば、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ））、および黄斑体積に基づいて評価される。一部の実施形態では、ＣＳＴおよび黄斑体積は、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴおよび黄斑体積が減少する場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴおよび黄斑体積が維持される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。

【0098】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に個体が必要とするレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）の数に基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、個体が４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎またはそれより多くのいずれかの、１回未満のレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。

【0099】

一部の実施形態では、個体が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、少なくとも２０週間、少なくとも３０週間、少なくとも４０週間、少なくとも５０週間、少なくとも６０週間、少なくとも７０週間、少なくとも８０週間、少なくとも９０週間、少なくとも１００週間、少なくとも１１０週間、またはそれより長い期間のいずれかの間、いかなるレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。

【0100】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液のレベルと比較した網膜液のレベルに基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液のレベルと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、網膜液の低減が観察される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。

【0101】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の色素上皮剥離（ＰＥＤ）と比較したＰＥＤの消散に基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前のＰＥＤと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後にＰＥＤの消散が観察される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。

【0102】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、フルオレセイン血管造影によって決定される脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）病変の成長に基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＣＮＶ病変が収縮（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または１００％のいずれかより大きく）する場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後にＣＮＶ病変が成長しない（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１５％、または約２０％のいずれかより小さい成長）場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。

【0103】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、当技術分野で公知のいずれかの方法（例えば、ＳＤ－ＯＣＴ、ＯＣＴ、フルオレセイン血管造影、デジタルカラー眼底撮影等）に基づく１つの眼および／または反対側の眼の解剖学的特色に基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に１つの眼および／または反対側の眼の解剖学的特色に改善が観察される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。

【0104】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、眼科検査、眼内圧（例えば、ゴールドマン圧平眼圧計、またはＴｏｎｏ－ｐｅｎを使用する）、倒像眼底検査、１つの眼および／または反対側の眼ならびに眼付属器の検査、眼瞼および／または瞳孔の応答性、眼瞼下垂、異常な瞳孔形状、瞳孔不同、光に対する反応の異常、求心性瞳孔障害、細隙灯検査（眼瞼、結膜、角膜、水晶体、光彩、および前房の検査を含む）、硝子体、視神経、周辺網膜、および網膜の脈管構造の後側セグメントの異常、ＳＤ－ＯＣＴ、フルオレセイン血管造影、デジタルカラー眼底撮影（網膜、視神経乳頭、および／または黄斑の画像を含む）、房水採取、硝子体液採取、ＯＣＴ－血管造影（ＯＣＴ－Ａ）、屈折および／または視力（ＢＣＶＡ）に基づいて評価される。一部の実施形態では、ＳＤ－ＯＣＴは、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚または中心領域網膜厚）、黄斑体積、および／または液体（例えば、網膜下液または網膜内液）の存在を評価するために実施される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。

【0105】

ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、当技術分野で公知の任意の方法によって個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与され得る。例えばｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼の眼内にまたは硝子体内注射によって投与され得る。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、眼内である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内注射（ＩＶＴ）または網膜下注射による。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、ＩＶＴ注射による。一部の実施形態では、無菌的技法を使用して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を硝子体内注射によって投与する。一部の実施形態では、ポビドン（providone）ヨードを伴う無菌的技法を使用して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を硝子体内注
射によって投与する。

【0106】

一部の実施形態では、個体は、眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への、眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、以前のアフリベルセプト処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への以前のアフリベルセプト処置を受けていない。
ステロイド処置

【0107】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ステロイド処置と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、コルチコステロイド処置である。例示的なコルチコステロイドとしては、アクロメタゾン、アムシノミド（amcinomide）、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチバゾール、デフラザコルト、デオキシコルチコステロン、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドネート、フルクロロロン、フルドロコルチゾン、フルドロキシコルチド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルチカゾン、フプレドニデン（fuprednidene）、フォルモコルタル（formocortal）、ハルシノニド、ハ
ロメタゾン、ヒドロコルチゾンアセポン酸エステル、ヒドロコルチゾンブテプレート、ヒドロコルチゾン酪酸エステル、ロテプレドノール、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンアセポン酸エステル、モメタゾンフランカルボン酸エステル、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾン、プレドニゾロン、プレドニリデン、レメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、およびウロベタゾールを含むが限定されない。一部の実施形態では、ステロイド処置は、全身性のステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、局所ステロイド処置（例えば、点眼液）、眼周囲のステロイド処置（例えば、テノン嚢下、結膜下）、硝子体内ステロイド処置、または脈絡膜上ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置、メドリゾン処置、ロテプレドノール処置、プレドニゾロン処置、フルオシノロン処置、トリアムシノロン処置、リメキソロン処置、デキサメタゾン処置、フルオロメトロン処置、フルオシノロン処置、リメキソロン処置、またはプレドニゾン処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、プレドニゾン処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置である。

【0108】

一部の実施形態では、ステロイド処置は、全身性のステロイド処置および局所ステロイド処置を含む。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置は、経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置は、プレドニゾン処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置および局所ステロイド処置は、同時に（例えば、同じ日に）投与される。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置および局所ステロイド処置は、個別に（例えば、異なる日に）投与される。

【0109】

一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間、および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および／または投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与後に投与される。

【0110】

一部の実施形態では、ステロイド処置は、全身性のステロイド処置である。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置は、経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、経口プレドニゾン処置である。一部の実施形態では、経口プレドニゾン処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に開始される。一部の実施形態では、初回の経口プレドニゾン処置は、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、または約７０ｍｇ／日のプレドニゾンのいずれかの用量で、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約７日、約６日、約５日、約４日、約３日、約２日、約１日、または０日前のいずれかに投与され、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、または約１０日間、またはそれより長い期間のいずれか持続する。一部の実施形態では、初回の経口プレドニゾン処置は、約６０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、ｒＡＡＶの単位用量の投与の約３日前に投与され、約３日間持続する。

【0111】

一部の実施形態では、初回の経口プレドニゾン処置の後、経口プレドニゾン処置の用量を漸減させる。一部の実施形態では、経口プレドニゾン処置の用量の漸減は、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、または約５０ｍｇ／日のプレドニゾンのいずれかの用量で、全体で約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、または約７日間のいずれか、その後約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、または約２５ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、約１日間、約２日間、約３日間、または約４日間のいずれか、その後約５ｍｇ、約１０ｍｇ、または約１５ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、約１日間、約２日間、約３日間、または約４日間投与する。一部の実施形態では、プレドニゾンの用量の漸減は、約４０ｍｇ／日のプレドニゾンのいずれかの用量で、３日間、その後約２０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、２日間、その後約１０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、２日間投与される。

【0112】

一部の実施形態では、初回の経口プレドニゾン処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の３日前に、６０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、全体で６日間から開始され、その後４０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、全体で３日間、その後２０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、２日間、その後１０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、２日間投与される。

【0113】

一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および投与後に投与される。

【0114】

一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後最大４週間、最大６週間、または最大８週間の毎日ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１週目に局所ステロイドの約４回の投与、約２週目に局所ステロイドの約３回の投与、約３週目に局所ステロイドの約２回の投与、および約４週目に局所ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から開始し投与後である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、処置を行う医師の裁量で延長される。

【0115】

一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、約０．００５％～約０．５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、または約０．１％ジフルプレドネートのいずれかである。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、０．０５％ジフルプレドネートの用量は、眼科用溶液１滴である。一部の実施形態では、１滴は約５０μｌ（例えば、約２５μｌ～約５０μｌ、約５０μｌ～約１００μｌ）である。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約１μｇ～約５μｇ、または約２μｇ～約３μｇ、または約２．５μｇジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約２．５μｇジフルプレドネートを含む。
標的細胞にトランスジーンを送達するためのベクター

【0116】

一部の実施形態では、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子は、対象（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）において複製欠損であるように変更されているアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来する組換えウイルスベクターを含む。一部の実施形態では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）である。

【0117】

ＡＡＶまたはｒＡＡＶは、小さいノンエンベロープの一本鎖ＤＮＡウイルスである。ｒＡＡＶは、非病原性ヒトパルボウイルスであり、複製がアデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、およびＣＭＶを含むヘルパーウイルスに依存するように作製することができる。

【0118】

野生型（ｗｔ）ＡＡＶに対する曝露は、いかなるヒト病態にも関連せず、または引き起こさないことが公知であり、一般集団において一般的であることから、ＡＡＶまたはｒＡＡＶは、遺伝子治療のための適した送達系となる。抗ＶＥＧＦ剤、例えばアフリベルセプトを送達するための遺伝子治療のために使用されるＡＡＶおよびｒＡＡＶは、任意の血清型であり得る。一部の実施形態では、本開示の方法は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ｒｈ１０、ＡＡＶ－ＤＪ、およびその任意のハイブリッドまたはキメラＡＡＶを含む、任意の適したＡＡＶ血清型の使用を提供する。一部の実施形態では、使用される血清型は、ウイルスの指向性または目的の標的細胞の感染力に基づく。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤トランスジーン（例えば、アフリベルセプトトランスジーン）と共に使用するために最も最適な血清型の選択を可能にするために、いくつかのＡＡＶベクターが生成され得る。

【0119】

一部の実施形態では、本開示の方法は、シュードタイプＡＡＶの使用を提供する。シュードタイプＡＡＶ粒子は、別のＡＡＶ血清型のＡＡＶカプシドによってカプシド化された１つのＡＡＶ血清型のＡＡＶゲノム末端逆位配列（ＩＴＲ）を含む。典型的には、シュードタイプＡＡＶは、「ＡＡＶ＃／＃」として指定され、第１の「＃」は、ＡＡＶ ＩＴＲ血清型を示し、第２の「＃」は、カプシドの血清型を示す。例えば、ＡＡＶ２ ＩＴＲおよびＡＡＶ１カプシドを含むＡＡＶ粒子は、「ＡＡＶ２／１」と指定される。

【0120】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、核酸、例えば異種核酸を含む。一部の実施形態では、核酸は、トランスジーン、例えば抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする。一部の実施形態では、コードされるトランスジーン、例えば抗ＶＥＧＦ剤は、核酸の転写を開始するプロモーターの転写制御下にある。一部の実施形態では、プロモーターは、「遍在する」プロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、「強力な」または構成的に活性なプロモーター、例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、伸長因子１アルファ（ＥＦｌａ）プロモーター、グリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）プロモーター、またはコネキシン３６（または「Ｃｘ３６」）プロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、非標的化細胞への潜在的毒性または望ましくない効果を低減するために、特定の組織または細胞、例えば網膜細胞において活性化される組織特異的プロモーターである。一部の態様では、抗ＶＥＧＦ剤トランスジーン（例えば、アフリベルセプトトランスジーン）と共に使用するために最も最適な血清型およびプロモーターの選択を可能にするために、いくつかのＡＡＶベクターが生成され得る。一部の実施形態では、核酸は、ＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する。一部の実施形態では、核酸はＡＡＶ２ ＩＴＲを両端に有する。

【0121】

一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、標的細胞（例えば、網膜細胞）におけるトランスジーン（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を増強するためにポリヌクレオチドカセットを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドカセットは、５’から３’の順に：（ａ）ＣＭＶ配列を含む第１のエンハンサー領域（配列番号２２）；（ｂ）ＣＭＶ配列を含むプロモーター領域（配列番号２３）；（ｃ）５’から３’の順にＴＰＬおよびｅＭＬＰ配列（それぞれ、配列番号２４および配列番号２５）を含む５’ＵＴＲ領域；（ｄ）ペプチドまたはポリペプチド（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）をコードするコード配列；（ｅ）全長のＥＥＳ配列（配列番号２６）を含む第２のエンハンサー領域；ならびに（ｆ）ＨＧＨポリアデニル化部位（配列番号２７）を含む。ある特定のこれらの実施形態では、ポリヌクレオチドカセットは、配列番号２８～３２から選択される１つもしくは複数の配列、またはそれらと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。ある特定のこれらの実施形態では、ポリヌクレオチドカセットの５’アームは、配列番号３３またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。ある特定のこれらの実施形態では、ポリヌクレオチドカセットの３’アームは、配列番号３４またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。配列番号２２～３４の核酸配列を以下に提供する：
ACTTACGGTA AATGGCCCGC CTGGCTGACC GCCCAACGAC CCCCGCCCAT TGACGTCAAT
AATGACGTAT GTTCCCATAG TAACGCCAAT AGGGACTTTC CATTGACGTC AATGGGTGGA
GTATTTACGG TAAACTGCCC ACTTGGCAGT ACATCAAGTG TATCATATGC CAAGTCCGCC
CCCTATTGAC GTCAATGACG GTAAATGGCC CGCCTGGCAT TATGCCCAGT ACATGACCTT
ACGGGACTTT CCTACTTGGC AGTACATCTA CGTATTAGTC ATCGCTATTA CCA（配列番号２２）

TGCTGATGCG GTTTTGGCAG TACACCAATG GGCGTGGATA GCGGTTTGAC TCACGGGGAT
TTCCAAGTCT CCACCCCATT GACGTCAATG GGAGTTTGTT TTGGCACCAA AATCAACGGG
ACTTTCCAAA ATGTCGTAAT AACCCCGCCC CGTTGACGCA AATGGGCGGT AGGCGTGTAC
GGTGGGAGGT CTATATAAGC AGAGCTCGTT TAGTGAACCG（配列番号２３）

CTCACTCTCT TCCGCATCGC TGTCTGCGAG GGCCAGCTGT TGGGCTCGCG GTTGAGGACA
AACTCTTCGC GGTCTTTCCA GTACTCTTGG ATCGGAAACC CGTCGGCCTC CGAACGGTAC
TCCGCCACCG AGGGACCTGA GCGAGTCCGC ATCGACCGGA TCGGAAAACC TCTCGAGAAA
GGCGTCTAAC CAGTCACAGT CGCAAGGTAG GCTGAGCACC GTGGCGGGCG GCAGCGGGTG
GCGGTCGGGG TTGTTTCTGG CGGAGGTGCT GCTGATGATG TAATTAAAGT AGGCGGTCTT
GAGACGGCGG ATGGTCGA（配列番号２４）

CCAGCTGTTG GGGTGAGTAC TCCCTCTCAA AAGCGGGCAT TACTTCTGCG CTAAGATTGT
CAGTTTCCAA AAACGAGGAG GATTTGATAT TCACCTGGCC CG（配列番号２５）

CTGTTCTCAT CACATCATAT CAAGGTTATA TACCATCAAT ATTGCCACAG ATGTTACTTA
GCCTTTTAAT ATTTCTCTAA TTTAGTGTAT ATGCAATGAT AGTTCTCTGA TTTCTGAGAT
TGAGTTTCTC ATGTGTAATG ATTATTTAGA GTTTCTCTTT CATCTGTTCA AATTTTTGTC
TAGTTTTATT TTTTACTGAT TTGTAAGACT TCTTTTTATA ATCTGCATAT TACAATTCTC
TTTACTGGGG TGTTGCAAAT ATTTTCTGTC ATTCTATGGC CTGACTTTTC TTAATGGTTT
TTTAATTTTA AAAATAAGTC TTAATATTCA TGCAATCTAA TTAACAATCT TTTCTTTGTG
GTTAGGACTT TGAGTCATAA GAAATTTTTC TCTACACTGA AGTCATGATG GCATGCTTCT
ATATTATTTT CTAAAAGATT TAAAGTTTTG CCTTCTCCAT TTAGACTTAT AATTCACTGG
AATTTTTTTG TGTGTATGGT ATGACATATG GGTTCCCTTT TATTTTTTAC ATATAAATAT
ATTTCCCTGT TTTTCTAAAA AAGAAAAAGA TCATCATTTT CCCATTGTAA AATGCCATAT
TTTTTTCATA GGTCACTTAC ATATATCAAT GGGTCTGTTT CTGAGCTCTA CTCTATTTTA
TCAGCCTCAC TGTCTATCCC CACACATCTC ATGCTTTGCT CTAAATCTTG ATATTTAGTG
GAACATTCTT TCCCATTTTG TTCTACAAGA ATATTTTTGT TATTGTCTTT GGGCTTTCTA
TATACATTTT GAAATGAGGT TGACAAGTTA（配列番号２６）

CTGCCCGGGT GGCATCCCTG TGACCCCTCC CCAGTGCCTC TCCTGGCCCT GGAAGTTGCC
ACTCCAGTGC CCACCAGCCT TGTCCTAATA AAATTAAGTT GCATCATTTT GTCTGACTAG
GTGTCCTTCT ATAATATTAT GGGGTGGAGG GGGGTGGTAT GGAGCAAGGG GCCCAAGTTG
GGAAGAAACC TGTAGGGCCT GC（配列番号２７）

AGGCGGTCTT GAGACGGCGG ATGGTCGAGG TGAGGTGTGG CAGGCTTGAG ATCCAGCTGT
TGGGGTGA（配列番号２８）

CGCTGTTTTG ACCTCCATAG TGGACACCGG GACCGATCCA GCCTCCGCGT CTCAGGGGAG
ATCTCGTTTA GTGAACCGTC AGATCCTCAC TCTCTTCCGC ATCGCTGTCT GCGAGGGCCA
GCTGTTGGG（配列番号２９）

TTGATATTCA CCTGGCCCGA TCTGGCCATA CACTTG（配列番号３０）

CCCAGGTCCA AGTTTAAACG CC（配列番号３１）

TCTTTGGGCT TTCTATATAC ATTTTGAAAT GAGGTTGACA AGTTACCTAG GAAAACTGTC
TTCCTGCCCG GGTGGCA（配列番号３２）

CTCTGGAGAC GACTTACGGT AAATGGCCCG CCTGGCTGAC CGCCCAACGA CCCCCGCCCA
TTGACGTCAA TAATGACGTA TGTTCCCATA GTAACGCCAA TAGGGACTTT CCATTGACGT
CAATGGGTGG AGTATTTACG GTAAACTGCC CACTTGGCAG TACATCAAGT GTATCATATG
CCAAGTCCGC CCCCTATTGA CGTCAATGAC GGTAAATGGC CCGCCTGGCA TTATGCCCAG
TACATGACCT TACGGGACTT TCCTACTTGG CAGTACATCT ACGTATTAGT CATCGCTATT
ACCATGCTGA TGCGGTTTTG GCAGTACACC AATGGGCGTG GATAGCGGTT TGACTCACGG
GGATTTCCAA GTCTCCACCC CATTGACGTC AATGGGAGTT TGTTTTGGCA CCAAAATCAA
CGGGACTTTC CAAAATGTCG TAATAACCCC GCCCCGTTGA CGCAAATGGG CGGTAGGCGT
GTACGGTGGG AGGTCTATAT AAGCAGAGCT CGTTTAGTGA ACCGTCAGAT CGCCTGGAGA
GGCCATCCAC GCTGTTTTGA CCTCCATAGT GGACACCGGG ACCGATCCAG CCTCCGCGTC
TCAGGGGAGA TCTCGTTTAG TGAACCGTCA GATCCTCACT CTCTTCCGCA TCGCTGTCTG
CGAGGGCCAG CTGTTGGGCT CGCGGTTGAG GACAAACTCT TCGCGGTCTT TCCAGTACTC
TTGGATCGGA AACCCGTCGG CCTCCGAACG GTACTCCGCC ACCGAGGGAC CTGAGCGAGT
CCGCATCGAC CGGATCGGAA AACCTCTCGA GAAAGGCGTC TAACCAGTCA CAGTCGCAAG
GTAGGCTGAG CACCGTGGCG GGCGGCAGCG GGTGGCGGTC GGGGTTGTTT CTGGCGGAGG
TGCTGCTGAT GATGTAATTA AAGTAGGCGG TCTTGAGACG GCGGATGGTC GAGGTGAGGT
GTGGCAGGCT TGAGATCCAG CTGTTGGGGT GAGTACTCCC TCTCAAAAGC GGGCATTACT
TCTGCGCTAA GATTGTCAGT TTCCAAAAAC GAGGAGGATT TGATATTCAC CTGGCCCGAT
CTGGCCATAC ACTTGAGTGA CAATGACATC CACTTTGCCT TTCTCTCCAC AGGTGTCCAC
TCCCAGGTCC AAGTTTAAAC GCCGCCACCA TG（配列番号３３）

ACTGTTCTCA TCACATCATA TCAAGGTTAT ATACCATCAA TATTGCCACA GATGTTACTT
AGCCTTTTAA TATTTCTCTA ATTTAGTGTA TATGCAATGA TAGTTCTCTG ATTTCTGAGA
TTGAGTTTCT CATGTGTAAT GATTATTTAG AGTTTCTCTT TCATCTGTTC AAATTTTTGT
CTAGTTTTAT TTTTTACTGA TTTGTAAGAC TTCTTTTTAT AATCTGCATA TTACAATTCT
CTTTACTGGG GTGTTGCAAA TATTTTCTGT CATTCTATGG CCTGACTTTT CTTAATGGTT
TTTTAATTTT AAAAATAAGT CTTAATATTC ATGCAATCTA ATTAACAATC TTTTCTTTGT
GGTTAGGACT TTGAGTCATA AGAAATTTTT CTCTACACTG AAGTCATGAT GGCATGCTTC
TATATTATTT TCTAAAAGAT TTAAAGTTTT GCCTTCTCCA TTTAGACTTA TAATTCACTG
GAATTTTTTT GTGTGTATGG TATGACATAT GGGTTCCCTT TTATTTTTTA CATATAAATA
TATTTCCCTG TTTTTCTAAA AAAGAAAAAG ATCATCATTT TCCCATTGTA AAATGCCATA
TTTTTTTCAT AGGTCACTTA CATATATCAA TGGGTCTGTT TCTGAGCTCT ACTCTATTTT
ATCAGCCTCA CTGTCTATCC CCACACATCT CATGCTTTGC TCTAAATCTT GATATTTAGT
GGAACATTCT TTCCCATTTT GTTCTACAAG AATATTTTTG TTATTGTCTT TGGGCTTTCT
ATATACATTT TGAAATGAGG TTGACAAGTT ACCTAGGAAA ACTGTCTTCC TGCCCGGGTG
GCATCCCTGT GACCCCTCCC CAGTGCCTCT CCTGGCCCTG GAAGTTGCCA CTCCAGTGCC
CACCAGCCTT GTCCTAATAA AATTAAGTTG CATCATTTTG TCTGACTAGG TGTCCTTCTA
TAATATTATG GGGTGGAGGG GGGTGGTATG GAGCAAGGGG CCCAAGTTGG GAAGAAACCT
GTAGGGCCTG CGAAGACAGT CAG（配列番号３４）

【0122】

標的細胞（例えば、網膜細胞）におけるトランスジーン（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤をコードするトランスジーン）の発現を増強するための追加のポリヌクレオチドカセットは、ＷＯ２０１８／１７０４７３に開示されており、標的細胞におけるトランスジーンの発現を増強させるためのポリヌクレオチドカセットに関連するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0123】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、標的細胞、例えば網膜細胞の感染力の増加を有するバリアントカプシドタンパク質を含み、網膜細胞への形質導入を増加させるために、または個体における網膜細胞への遺伝子送達の標的化を増加させるために使用される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶカプシドタンパク質のカプシドタンパク質ＧＨループ／ループＩＶにアミノ酸改変を含む。一部の実施形態では、改変部位は、ＡＡＶカプシドタンパク質のＧＨループ／ループＩＶの溶媒アクセス可能部分である。ＡＡＶカプシドのＧＨループ／ループＩＶの説明に関しては、例えばvan Vliet et al. (2006) Mol. Ther. 14:809；Padron et al. (2005) J. Virol. 79:5047；およびShen
et al. (2007) Mol. Ther. 15:1955を参照されたい。７ｍ８バリアントを含むい
くつかのＡＡＶカプシドバリアントが公知である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、対応する親のＡＡＶカプシドタンパク質と比較してカプシドタンパク質のＧＨループに５アミノ酸～１１アミノ酸、例えば７アミノ酸配列の挿入を含むバリアントＡＡＶカプシドタンパク質を含み、バリアントカプシドタンパク質は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子による網膜細胞の感染力と比較すると、網膜細胞の感染力の増加を付与する。一部の実施形態では、以下のアミノ酸配列：ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）；ＬＡＮＥＴＩＴＲＰＡ（配列番号２）、ＬＡＫＡＧＱＡＮＮＡ（配列番号３）、ＬＡＫＤＰＫＴＴＮＡ（配列番号４）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号５）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号６）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号７）、ＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号８）、ＬＡＫＤＴＤＴＴＲＡ（配列番号９）、ＬＡＲＡＧＧＳＶＧＡ（配列番号１０）、ＬＡＡＶＤＴＴＫＦＡ（配列番号１１）、およびＬＡＳＴＧＫＶＰＮＡ（配列番号１２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）、ＮＥＴＩＴＲＰ（配列番号１５）、ＫＡＧＱＡＮＮ（配列番号１６）、ＫＤＰＫＴＴＮ（配列番号１７）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号１８）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号１９）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号２０）、およびＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号２１）のうちのいずれか１つがカプシドタンパク質のＧＨループに挿入され得る。一部の実施形態では、配列番号１～１２および１４～２１に記載のアミノ酸配列のいずれか１つが、ｒＡＡＶにおけるＶＰ１カプシドタンパク質の溶媒に露出したＧＨループに挿入される。例えばＩＶＴ注射後の網膜細胞への目的の核酸の形質導入を容易にするために、カプシドタンパク質のＧＨループに挿入することができるアミノ酸配列に関する追加の詳細は、ＷＯ２０１２１４５６０１、ＵＳ９５８７２８２、ＵＳ１０２０２６５７、およびＵＳ１０２１４７８５に提供され、カプシドタンパク質のＧＨループに挿入することができるアミノ酸配列に関連するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0124】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、以下の位置：ＡＡＶ２カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間；ＡＡＶ１カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間；ＡＡＶ５カプシドタンパク質のアミノ酸５７５と５７６の間；ＡＡＶ６カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間；ＡＡＶ７カプシドタンパク質のアミノ酸５８９と５９０の間；ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間；ＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸５８８と５８９の間；またはＡＡＶ１０カプシドタンパク質のアミノ酸５８９と５９０の間に挿入された以下のアミノ酸配列：ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）；ＬＡＮＥＴＩＴＲＰＡ（配列番号２）、ＬＡＫＡＧＱＡＮＮＡ（配列番号３）、ＬＡＫＤＰＫＴＴＮＡ（配列番号４）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号５）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号６）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号７）、ＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号８）、ＬＡＫＤＴＤＴＴＲＡ（配列番号９）、ＬＡＲＡＧＧＳＶＧＡ（配列番号１０）、ＬＡＡＶＤＴＴＫＦＡ（配列番号１１）、およびＬＡＳＴＧＫＶＰＮＡ（配列番号１２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）、ＮＥＴＩＴＲＰ（配列番号１５）、ＫＡＧＱＡＮＮ（配列番号１６）、ＫＤＰＫＴＴＮ（配列番号１７）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号１８）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号１９）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号２０）、およびＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号２１）のうちのいずれか１つを含むＡＡＶカプシドタンパク質、例えばＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。

【0125】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２からの７ｍ８バリアントカプシドタンパク質を含む。ＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２からの７ｍ８バリアントカプシドタンパク質の配列を以下に提供する：
IHSLPIVSDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNLALGETTRPARQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL（配列番号３７）

【0126】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むカプシドタンパク質ＶＰ１であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ１を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むカプシドタンパク質ＶＰ２であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ２を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むカプシドタンパク質ＶＰ３であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ３を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３であって、その各々がカプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含み、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含む。

【0127】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むカプシドタンパク質ＶＰ１であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ１を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むカプシドタンパク質ＶＰ２であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ２を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むカプシドタンパク質ＶＰ３であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ３を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３であって、その各々がカプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含み、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含む。

【0128】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶウイルスを生成するために使用される組換えウイルスおよび／またはプラスミドは、他の転写または調節エレメント、例えばポリＡ（ポリアデニル化）配列、非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または終止配列を含む。一部の実施形態では、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、あるいは２つもしくはそれより多くのタンパク質の同時発現を可能にするか、または多重遺伝子もしくは多シストロン性ｍＲＮＡを作製する類似のエレメントを使用して、１つより多くの遺伝子が、ベクターまたはプラスミドから発現される。

【0129】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶおよび／またはｒＡＡＶを生成するために使用されるプラスミドは、以下の核酸エレメント：第１のＩＴＲ配列；プロモーター配列；イントロン配列；第１のＵＴＲ配列；抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする異種核酸；第２のＵＴＲ配列；ポリＡ配列；および第２のＩＴＲ配列のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、リンカー配列（複数可）が核酸エレメントの２つまたはそれより多くの間に挿入される。一部の実施形態では、治療ポリペプチドをコードする異種核酸は、アフリベルセプト（またはその機能的断片もしくは機能的バリアント）をコードする。

【0130】

一部の実施形態では、ベクターは、標的化ベクター、特に特定の細胞、例えば網膜細胞（例えば、光受容器、網膜神経節細胞、ミュラー細胞、双極細胞、アマクリン細胞、水平細胞、または網膜色素上皮細胞）の高い感染力を示す標的化ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）である。本開示において使用するためのウイルスベクターは、個体において低い毒性および／または低い免疫原性を示し、個体、例えばヒトにおいて抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）の治療有効量を発現するベクターを含み得る。当技術分野で公知の任意の適した方法を、例えば本明細書の他所で記載される医薬組成物を調製するための組換えウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）の生化学的精製に使用することができる。組換えＡＡＶウイルスは、細胞から直接または細胞を含む培養培地から採取することができる。ウイルスは、様々な生化学的手段、例えばゲル濾過、濾過、クロマトグラフィー、アフィニティ精製、密度勾配超遠心、またはサイズ排除法を使用して精製することができる。一部の実施形態では、ウイルスは凍結乾燥される。

【0131】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、７ｍ８バリアントカプシドタンパク質、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８、および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト、またはその機能的断片もしく機能的バリアント）をコードする核酸配列を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子（例えば、７ｍ８バリアント）は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％のいずれかの網膜細胞感染力の増加を有する。一部の実施形態では、網膜細胞の感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、５％～１００％の間、５％～９５％の間、５％～９０％の間、５％～８５％の間、５％～８０％の間、５％～７５％の間、５％～７０％の間、５％～６５％の間、５％～６０％の間、５％～５５％の間、５％～５０％の間、５％～４５％の間、５％～４０％の間、５％～３５％の間、５％～３０％の間、５％～２５％の間、５％～２０％の間、５％～１５％の間、５％～１０％の間のいずれかの増加である。

【0132】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８の網膜細胞感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも１倍、少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、または少なくとも２倍のいずれかである。一部の実施形態では、感染力の増加は、対応する親ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍のいずれかである。一部の実施形態では、感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、少なくとも３０倍、少なくとも３５倍、少なくとも４０倍、少なくとも４５倍、少なくとも５０倍、少なくとも５５倍、少なくとも６０倍、少なくとも６５倍、少なくとも７０倍、少なくとも７５倍、少なくとも８０倍、少なくとも８５倍、少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍のいずれかである。

【0133】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８の網膜細胞感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、１０倍～１００倍の間、１０倍～９５倍の間、１０倍～９０倍の間、１０倍～８５倍の間、１０倍～８０倍の間、１０倍～７５倍の間、１０倍～７０倍の間、１０倍～６５倍の間、１０倍～６０倍の間、１０倍～５５倍の間、１０倍～５０倍の間、１０倍～４５倍の間、１０倍～４０倍の間、１０倍～３５倍の間、１０倍～３０倍の間、１０倍～２５倍の間、１０倍～２０倍の間、または１０倍～１５倍の間である。

【0134】

一部の実施形態では、網膜細胞感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、２倍～２０倍の間、２倍～１９倍の間、２倍～１８倍の間、２倍～１７倍の間、２倍～１６倍の間、２倍～１５倍の間、２倍～１４倍の間、２倍～１３倍の間、２倍～１２倍の間、２倍～１１倍の間、２倍～１０倍の間、２倍～９倍の間、２倍～８倍の間、２倍～７倍の間、２倍～６倍の間、２倍～５倍の間、２倍～４倍の間、または２倍～３倍の間である。

【0135】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるカプシドタンパク質のアミノ酸改変は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子が対象の眼の内境界膜（ＩＬＭ）を通過する能力と比較して、個体、例えばヒトの眼のＩＬＭを通過する能力の増加を付与し得る。一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８がＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％のいずれかの増加である。一部の実施形態では、ＩＬＭを通過する能力の増加は、親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質と比較して、５％～１００％の間、５％～９５％の間、５％～９０％の間、５％～８５％の間、５％～８０％の間、５％～７５％の間、５％～７０％の間、５％～６５％の間、５％～６０％の間、５％～５５％の間、５％～５０％の間、５％～４５％の間、５％～４０％の間、５％～３５％の間、５％～３０％の間、５％～２５％の間、５％～２０％の間、５％～１５％の間、または５％～１０％の間の増加である。

【0136】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８がＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親のＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも１倍、少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、または少なくとも２倍のいずれかである。一部の実施形態では、ＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親のＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍のいずれかである。一部の実施形態では、ＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、少なくとも３０倍、少なくとも３５倍、少なくとも４０倍、少なくとも４５倍、少なくとも５０倍、少なくとも５５倍、少なくとも６０倍、少なくとも６５倍、少なくとも７０倍、少なくとも７５倍、少なくとも８０倍、少なくとも８５倍、少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍のいずれかである。

【0137】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８がＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、１０倍～１００倍の間、１０倍～９５倍の間、１０倍～９０倍の間、１０倍～８５倍の間、１０倍～８０倍の間、１０倍～７５倍の間、１０倍～７０倍の間、１０倍～６５倍の間、１０倍～６０倍の間、１０倍～５５倍の間、１０倍～５０倍の間、１０倍～４５倍の間、１０倍～４０倍の間、１０倍～３５倍の間、１０倍～３０倍の間、１０倍～２５倍の間、１０倍～２０倍の間、または１０倍～１５倍の間である。

【0138】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８がＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、２倍～２０倍の間、２倍～１９倍の間、２倍～１８倍の間、２倍～１７倍の間、２倍～１６倍の間、２倍～１５倍の間、２倍～１４倍の間、２倍～１３倍の間、２倍～１２倍の間、２倍～１１倍の間、２倍～１０倍の間、２倍～９倍の間、２倍～８倍の間、２倍～７倍の間、２倍～６倍の間、２倍～５倍の間、２倍～４倍の間、または２倍～３倍の間である。

【0139】

一部の実施形態では、アフリベルセプトをコードする核酸を含むｒＡＡＶ．７ｍ８を、遺伝子治療のために使用する。一部の実施形態では、ＡＡＶ２またはｒＡＡＶ２を使用して、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を、対象の眼または網膜細胞に硝子体内または網膜下注射を介して送達する。一部の実施形態では、ＡＡＶ２またはｒＡＡＶ２を使用して、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を対象の眼または網膜細胞に硝子体内注射を介して送達する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ２．７ｍ８を使用して、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）の核酸配列を、対象の網膜細胞に送達する。一部の実施形態では、異種核酸（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤をコードする核酸）は、標的細胞ゲノム（例えば、網膜細胞ゲノム）に組み込まれ、標的細胞において例えば、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）の長期間の発現をもたらす。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、異種核酸（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤をコードする核酸）を含むプラスミドまたは他の染色体外遺伝子エレメントを、標的細胞（例えば、網膜細胞）に送達する。

【0140】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。配列番号３５の配列を以下に提供する：
SDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVLNCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG（配列番号３５）

【0141】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３６の核酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、または少なくとも約１００％のいずれかの配列相同性を有する核酸であって、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。配列番号３６の配列を図５に提供する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトの核酸配列（例えば、配列番号３６）と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、または少なくとも約１００％のいずれかの配列相同性を有する核酸であって、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、アフリベルセプトの核酸配列は、そのアミノ酸配列に由来する。一部の実施形態では、アフリベルセプトの核酸配列は、対象におけるその発現を改善するためにコドン最適化されている。

【0142】

一部の実施形態では、アフリベルセプトの核酸配列は、霊長類またはヒト対象における発現のためにコドン最適化されている。アフリベルセプトアミノ酸配列に対応する合成遺伝子の構築は、文献、例えばKanda A, Noda K, Saito W, Ishida S. Aflibercept Traps Galectin-1, an Angiogenic Factor Associated with Diabetic Retinopathy. Scientific Reports 5:17946 (2015)（「ＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ_Ｒ１Ｒ２（ア
フリベルセプトに対応する）ｃＤＮＡが、ＩＤＴ（Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ、ＩＡ）によって合成遺伝子として生成された」ことを記載する）に記載されている。アフリベルセプトの利用可能なアミノ酸配列を考慮すると、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、本明細書に記載される遺伝子治療またはｒＡＡＶにおいて使用するためのアフリベルセプトのｃＤＮＡを生成することができる。

【0143】

コドン最適化は、当技術分野で公知の任意の方法によって達成することができる。コドン最適化は、目的の標的または宿主細胞、例えばヒト網膜細胞における遺伝子の発現を増強するために、ネイティブアミノ酸配列を維持しながら、ネイティブ配列の少なくとも１つのコドン（例えば、約１個もしくはそれより多く、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、５０個、１００個、またはそれより多くのコドン）を宿主細胞においてより頻繁に使用されるまたは最も頻繁に使用されるコドンと交換することによって、核酸配列を改変するプロセスを指す。例えば、GenScript Codon Usage Frequency
Table Tool at www(dot)genscript(dot)com/tools/codon-frequency-table；Codon
Usage Database at www(dot)kazusa(dot)or(dot)jp/codon/；およびNakamura, Y.,
et al. "Codon usage tabulated from the international DNA sequence databases: status for the year 2000" Nucl. Acids Res. 28:292 (2000)を含
むコドン使用表が容易に入手可能である。

【0144】

相同性は、機能的断片、挿入、欠失、置換を含む配列、偽断片、偽遺伝子、スプライスバリアント、または人為的に最適化した配列を含むがこれらに限定されない２つの配列間のアライメントの残基のパーセント保存を指す。

【0145】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドはアフリベルセプトである。

【0146】

本明細書で使用される場合、「アフリベルセプト」は、上記で同定されるアフリベルセプトアミノ酸配列（配列番号３５）と少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高く、または１００％のいずれかの相同性を有するポリペプチドまたはタンパク質配列またはその機能的断片もしくはバリアントもしくは突然変異体を指す。相同性は、機能的断片、挿入、欠失、置換を含む配列、偽断片、偽遺伝子、スプライスバリアント、または人為的に最適化した配列を含むがこれらに限定されない２つの配列間のアライメントの残基のパーセント保存を指す。

【0147】

一部の実施形態では、アフリベルセプトのアミノ酸配列は、配列番号３５のアフリベルセプトアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のいずれか、相同である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるアフリベルセプトをコードする核酸配列は、上記で同定されたアフリベルセプトアミノ酸配列の対応するｃＤＮＡ配列と比較した場合、アフリベルセプトの核酸配列（例えば、配列番号３６）との間で少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のいずれかの配列相同性を示す。一部の実施形態では、アフリベルセプトは、アフリベルセプトと少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のいずれか、空間的に（例えば、その二次構造、三次構造、および四次構造または立体配座に関して）相同である。一部の実施形態では、アフリベルセプトは、標準治療で使用されるアフリベルセプトと多くて８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のいずれか、空間的に（例えば、二次構造、三次構造、および四次構造または立体配座）相同である。

【0148】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶに基づく遺伝子治療に含まれるアフリベルセプト遺伝子産物、またはアフリベルセプトトランスジーンは、本明細書に開示されるカプシドバリアント（例えば、７ｍ８バリアント）を含み、配列番号３５の上記のアミノ酸配列と、またはアフリベルセプトの対応するｃＤＮＡ配列（例えば、配列番号３６と比較して遺伝子治療に使用されるアフリベルセプト配列のｃＤＮＡ）との間で、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％のいずれかの相同性を有するタンパク質、融合タンパク質、またはポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法、組成物は、アフリベルセプトの機能的断片、またはそのバリアントもしくは突然変異体を含む。一部の実施形態では、アフリベルセプトの核酸配列は、ｉｎ ｖｉｖｏでのその活性、発現、安定性、および／または溶解度を増強するように改変されるかまたはコドン最適化される。

【0149】

アフリベルセプトは、グリコシル化され得る１１５ｋＤａの融合タンパク質である。アフリベルセプトは、ヒトＶＥＧＦＲ－１およびＶＥＧＦＲ－２の細胞外ＶＥＧＦ受容体配列に融合されたＩｇＧ骨格を含み、その天然のまたは内因性の受容体より高い親和性でＶＥＧＦ－Ａに結合することによって可溶性のデコイ受容体として機能する。例えば、Stewart MW. Aflibercept (VEGF Trap-eye): the newest anti-VEGF drug. Br. J.
Ophthalmol. 2012 Sep;96(9):1157-8を参照されたい。アフリベルセプトのＶＥＧＦ
に対する高い親和性は、ネイティブまたは内因性のＶＥＧＦ受容体のその後の結合および活性化を妨害または破壊する。ＶＥＧＦ活性の低減は、血管形成および血管透過性の減少をもたらし得る。アフリベルセプトによる胎盤増殖因子ＰＩＧＦおよびＶＥＧＦ－Ｂの阻害はまた、異常な（例えば、過剰な）血管形成および／または血管新生によって特徴付けられる眼の疾患または障害の処置にも寄与し得る。ＰＩＧＦは、ＰＩＧＦの上昇レベルに関連し得る、血管形成および滲出性ＡＭＤなどのある特定の眼の疾患または障害に関連している。ＶＥＧＦ－Ｂの過剰発現は、血液－網膜関門の破壊および網膜血管形成に関連し得る。このように、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、およびＰＩＧＦの阻害は全て、アフリベルセプトの有効性に寄与し得る。
標的細胞にトランスジーンを送達するためのベクターの調製方法

【0150】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して製造される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞におけるバキュロウイルス発現ベクター系を使用して製造される。Ｓｆ９細胞は、バキュロウイルスを使用する組換えタンパク質産生のために一般的に使用される昆虫細胞培養細胞系である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞において２つのバキュロウイルスを使用して製造される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞において２つのバキュロウイルスを使用して製造され、第１のバキュロウイルスは、ＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ２．７ｍ８ Ｃａｐタンパク質の遺伝子をコードし、第２のバキュロウイルスは抗ＶＥＧＦ剤をコードする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞において２つのバキュロウイルスを使用して製造され、第１のバキュロウイルスは、ＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ２．７ｍ８ Ｃａｐタンパク質の遺伝子をコードし、第２のバキュロウイルスはアフリベルセプト（例えば、ヒトアフリベルセプト）ｃＤＮＡ発現カセットをコードする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞において２つのバキュロウイルスを使用して製造され、第１のバキュロウイルスは、ＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ２．７ｍ８ Ｃａｐタンパク質の遺伝子をコードし、第２のバキュロウイルスは、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドはアフリベルセプトである。
用量

【0151】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与される。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼または左眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は左眼である。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼であり、反対側の眼は左眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は左眼であり、反対側の眼は右眼である。

【0152】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間（例えば、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約１カ月、少なくとも約２カ月、少なくとも約３カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約５カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約７カ月、少なくとも約８カ月、少なくとも約９カ月、少なくとも約１０カ月、少なくとも約１１カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年、またはそれより長い期間）後である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間後であり、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より高い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％またはそれより高い％のいずれかより高い）。

【0153】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約１週間、最大約２週間、最大約３週間、または最大約４週間後である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間（例えば、約０日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日）後である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間（例えば、約０日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日）後であり、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量とほぼ同じであるか（例えば、１％未満高いもしくは低い、５％未満高いもしくは低い、１０％未満高いもしくは低い、または２０％未満高いもしくは低い）、または低い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％低い）。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間後であり、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量とほぼ同じである（例えば、１％未満高いもしくは低い、５％未満高いもしくは低い、１０％未満高いもしくは低い、または２０％未満高いもしくは低い）。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間後であり、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より低い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％低い）。

【0154】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１×１０^１０～約２×１０^１０ｖｇ、約２×１０^１０～約３×１０^１０ｖｇの間、約３×１０^１０～約４×１０^１０ｖｇの間、約４×１０^１０～約５×１０^１０ｖｇの間、約５×１０^１０～約６×１０^１０ｖｇの間、約６×１０^１０～約７×１０^１０ｖｇの間、約７×１０^１０～約８×１０^１０ｖｇの間、約８×１０^１０～約９×１０^１０ｖｇの間、約９×１０^１０～約１０×１０^１０ｖｇの間、約１×１０^１１～約２×１０^１１ｖｇの間、約２×１０^１１～約３×１０^１１ｖｇの間、約３×１０^１１～約４×１０^１１ｖｇの間、約４×１０^１１～約５×１０^１１ｖｇの間、または約５×１０^１１～約６×１０^１１ｖｇの間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ベクターゲノム（ｖｇ）～約２×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ～約２×１０^１１ｖｇ、約７×１０^１０ｖｇ～約２×１０^１１ｖｇ、約８×１０^１０ｖｇ～約２×１０^１１ｖｇ、約９×１０^１０ｖｇ～約２×１０^１１ｖｇ、約１０×１０^１０ｖｇ～約２×１０^１１ｖｇ、または約１×１０^１１ｖｇ～約２×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ～約２×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ～約７×１０^１０ｖｇ、約７×１０^１０ｖｇ～約８×１０^１０ｖｇ、約８×１０^１０ｖｇ～約９×１０^１０ｖｇ、約９×１０^１０ｖｇ～約１０×１０^１０ｖｇ、約１０×１０^１０ｖｇ～約１×１０^１１ｖｇ、または約１×１０^１１ｖｇ～約２×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ、約７×１０^１０ｖｇ、約８×１０^１０ｖｇ、約９×１０^１０ｖｇ、約１０×１０^１０ｖｇ、約１×１０^１１ｖｇ、または約２×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇまたは約２×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、約６×１０^１０ｖｇ、約２×１０^１１ｖｇ、または約６×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０^１０ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約２×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０^１１ｖｇである。

【0155】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）／眼（ｖｇ／眼）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１１ｖｇ／眼またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１×１０^１０～約２×１０^１０ｖｇ／眼、約２×１０^１０～約３×１０^１０ｖｇ／眼の間、約３×１０^１０～約４×１０^１０ｖｇ／眼の間、約４×１０^１０～約５×１０^１０ｖｇ／眼の間、約５×１０^１０～約６×１０^１０ｖｇ／眼の間、約６×１０^１０～約７×１０^１０ｖｇ／眼の間、約７×１０^１０～約８×１０^１０ｖｇ／眼の間、約８×１０^１０～約９×１０^１０ｖｇ／眼の間、約９×１０^１０～約１０×１０^１０ｖｇ／眼の間、約１×１０^１１～約２×１０^１１ｖｇ／眼の間、約２×１０^１１～約３×１０^１１ｖｇ／眼の間、約３×１０^１１～約４×１０^１１ｖｇ／眼の間、約４×１０^１１～約５×１０^１１ｖｇ／眼の間、または約５×１０^１１～約６×１０^１１ｖｇ／眼の間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、約７×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、約８×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、約９×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、約１０×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、または約１×１０^１１ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼～約７×１０^１０ｖｇ／眼、約７×１０^１０ｖｇ／眼～約８×１０^１０ｖｇ／眼、約８×１０^１０ｖｇ／眼～約９×１０^１０ｖｇ／眼、約９×１０^１０ｖｇ／眼～約１０×１０^１０ｖｇ／眼、約１０×１０^１０ｖｇ／眼～約１×１０^１１ｖｇ／眼、または約１×１０^１１ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼、約７×１０^１０ｖｇ／眼、約８×１０^１０ｖｇ／眼、約９×１０^１０ｖｇ／眼、約１０×１０^１０ｖｇ／眼、約１×１０^１１ｖｇ／眼、または約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼または約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、約６×１０^１０ｖｇ／眼、約２×１０^１１ｖｇ／眼、または約６×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０^１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０^１１ｖｇ／眼である。

【0156】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、Ｅは、底１０の指数の略記であり、ｘＥｙは、ｘに、底１０の累乗／羃指数ｙ乗を掛けたものを指す。一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１Ｅ^１０～約２Ｅ^１０ｖｇ、約２Ｅ^１０～約３Ｅ^１０ｖｇの間、約３Ｅ^１０～約４Ｅ^１０ｖｇの間、約４Ｅ^１０～約５Ｅ^１０ｖｇの間、約５Ｅ^１０～約６Ｅ^１０ｖｇの間、約６Ｅ^１０～約７Ｅ^１０ｖｇの間、約７Ｅ^１０～約８Ｅ^１０ｖｇの間、約８Ｅ^１０～約９Ｅ^１０ｖｇの間、約９Ｅ^１０～約１０Ｅ^１０ｖｇの間、約１Ｅ^１１～約２Ｅ^１１ｖｇの間、約２Ｅ^１１～約３Ｅ^１１ｖｇの間、約３Ｅ^１１～約４Ｅ^１１ｖｇの間、約４Ｅ^１１～約５Ｅ^１１ｖｇの間、または約５Ｅ^１１～約６Ｅ^１１ｖｇの間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ベクターゲノム（ｖｇ）～約２Ｅ^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ～約２Ｅ^１１ｖｇ、約７Ｅ^１０ｖｇ～約２Ｅ^１１ｖｇ、約８Ｅ^１０ｖｇ～約２Ｅ^１１ｖｇ、約９Ｅ^１０ｖｇ～約２Ｅ^１１ｖｇ、約１０Ｅ^１０ｖｇ～約２Ｅ^１１ｖｇ、または約１Ｅ^１１ｖｇ～約２Ｅ^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ～約２Ｅ^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ～約７Ｅ^１０ｖｇ、約７Ｅ^１０ｖｇ～約８Ｅ^１０ｖｇ、約８Ｅ^１０ｖｇ～約９Ｅ^１０ｖｇ、約９Ｅ^１０ｖｇ～約１０Ｅ^１０ｖｇ、約１０Ｅ^１０ｖｇ～約１Ｅ^１１ｖｇ、または約１Ｅ^１１ｖｇ～約２Ｅ^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ、約７Ｅ^１０ｖｇ、約８Ｅ^１０ｖｇ、約９Ｅ^１０ｖｇ、約１０Ｅ^１０ｖｇ、約１Ｅ^１１ｖｇ、または約２Ｅ^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇまたは約２Ｅ^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、約６Ｅ^１０ｖｇ、約２Ｅ^１１ｖｇ、または約６×１０^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約６Ｅ^１０ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約２Ｅ^１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０^１１ｖｇである。

【0157】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）／眼（ｖｇ／眼）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１１ｖｇ／眼またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１Ｅ^１０～約２Ｅ^１０ｖｇ／眼、約２Ｅ^１０～約３Ｅ^１０ｖｇ／眼の間、約３Ｅ^１０～約４Ｅ^１０ｖｇ／眼の間、約４Ｅ^１０～約５Ｅ^１０ｖｇ／眼の間、約５Ｅ^１０～約６Ｅ^１０ｖｇ／眼の間、約６Ｅ^１０～約７Ｅ^１０ｖｇ／眼の間、約７Ｅ^１０～約８Ｅ^１０ｖｇ／眼の間、約８Ｅ^１０～約９Ｅ^１０ｖｇ／眼の間、約９Ｅ^１０～約１０Ｅ^１０ｖｇ／眼の間、約１Ｅ^１１～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼の間、約２Ｅ^１１～約３Ｅ^１１ｖｇ／眼の間、約３Ｅ^１１～約４Ｅ^１１ｖｇ／眼の間、約４Ｅ^１１～約５Ｅ^１１ｖｇ／眼の間、または約５Ｅ^１１～約６Ｅ^１１ｖｇ／眼の間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼、約７Ｅ^１０ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼、約８Ｅ^１０ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼、約９Ｅ^１０ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼、約１０Ｅ^１０ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼、または約１Ｅ^１１ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ／眼～約７Ｅ^１０ｖｇ／眼、約７Ｅ^１０ｖｇ／眼～約８Ｅ^１０ｖｇ／眼、約８Ｅ^１０ｖｇ／眼～約９Ｅ^１０ｖｇ／眼、約９Ｅ^１０ｖｇ／眼～約１０Ｅ^１０ｖｇ／眼、約１０Ｅ^１０ｖｇ／眼～約１Ｅ^１１ｖｇ／眼、または約１Ｅ^１１ｖｇ／眼～約２Ｅ^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ／眼、約７Ｅ^１０ｖｇ／眼、約８Ｅ^１０ｖｇ／眼、約９Ｅ^１０ｖｇ／眼、約１０Ｅ^１０ｖｇ／眼、約１Ｅ^１１ｖｇ／眼、または約２Ｅ^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ／眼または約２Ｅ^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ^１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、約６Ｅ^１０ｖｇ／眼、約２Ｅ^１１ｖｇ／眼、または約６×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約６Ｅ^１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約２Ｅ^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０^１１ｖｇ／眼である。

【0158】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、硝子体液中で治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、硝子体液中で約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｍｌまたはそれより高いμｇ／ｍｌのいずれか１つの、これらの値の間の任意の範囲を含む治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の濃度を達成するために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、硝子体液中でアフリベルセプトの発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、硝子体液中で約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｍｌまたはそれより高いμｇ／ｍｌのいずれか１つの、これらの値の間の任意の範囲を含むアフリベルセプトの濃度を達成するために十分な単位用量である。

【0159】

一部の実施形態では、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、房水中で治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、房水中で、少なくとも約０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１．０μｇ／ｍｌまたはそれより高い、これらの値の間の任意の範囲を含む治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の濃度を達成するために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、房水中でアフリベルセプトの発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、房水中で少なくとも約０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１．０μｇ／ｍｌまたはそれより高い、これらの値の間の任意の範囲を含むアフリベルセプトの濃度を達成するために十分な単位用量である。

【0160】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、網膜中で治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、網膜中で少なくとも約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｇ、またはそれより高い、これらの値の間の任意の範囲を含む治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の濃度を達成するために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、網膜中でアフリベルセプトの発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、網膜中で少なくとも約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｇ、またはそれより高い、これらの値の間の任意の範囲を含むアフリベルセプトの濃度を達成するために十分な単位用量である。

【0161】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、脈絡膜中で治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、脈絡膜中で約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｇまたはそれより高いμｇ／ｇのいずれか１つの、これらの値の間の任意の範囲を含む治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の濃度を達成するために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、脈絡膜中でアフリベルセプトの発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、脈絡膜中で約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｇ、またはそれより高いμｇ／ｇのいずれか１つの、これらの値の間の任意の範囲を含むアフリベルセプトの濃度を達成するために十分な単位用量である。

【0162】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、治療有効用量である。

【0163】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の維持または減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、網膜厚は、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％のいずれかより大きい網膜厚の減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、網膜厚（例えば、ＣＳＴまたはＣＲＴ）は、ＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。

【0164】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の維持または減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、または約６５％のいずれかより大きい黄斑体積の減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、黄斑体積は、ＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。

【0165】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％またはそれより大きい％のいずれかより大きい視力の改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、視力は、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡの改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ＢＣＶＡは、ＥＴＤＲＳスコアとして表記され、これは正確に読んだ文字数に対応する（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位
用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較して、少なくとも１５ＥＴＤＲＳ文字（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）（例えば、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約
４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、または約７０文字）のＢＣＶＡの改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較して個体が１５ＥＴＤＲＳ文字未満（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）（例えば、１５文字もしくはそれ未満、１４文字もしくはそれ未満、１３文字
もしくはそれ未満、１２文字もしくはそれ未満、１１文字もしくはそれ未満、１０文字もしくはそれ未満、９文字もしくはそれ未満、８文字もしくはそれ未満、７文字もしくはそれ未満、６文字もしくはそれ未満、５文字もしくはそれ未満、４文字もしくはそれ未満、３文字もしくはそれ未満、２文字もしくはそれ未満、１文字、または０文字）の減少を有する、ＢＣＶＡの維持を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。

【0166】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が視覚の維持を有すると決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が視覚の改善を有すると決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴまたはＣＲＴが減少する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴまたはＣＲＴが維持される場合、治療有効用量である。

【0167】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に黄斑体積が減少する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に黄斑体積が維持される場合、治療有効用量である。

【0168】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ））および黄斑体積が減少する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ））および黄斑体積が維持される場合、治療有効用量である。

【0169】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体がｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、約４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、またはそれより長い期間毎のいずれかに１回未満のレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に個体が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、少なくとも２０週間、少なくとも３０週間、少なくとも４０週間、少なくとも５０週間、少なくとも６０週間、少なくとも７０週間、少なくとも８０週間、少なくとも９０週間、少なくとも１００週間、少なくとも１１０週間、またはそれより長い期間のうちの、少なくともおよそいずれかの期間、いかなるレスキュー治療処置も（例えば、アフリベルセプト注射）必要としない場合、治療有効用量である。

【0170】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液のレベルと比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が網膜液の低減を有することが決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液のレベルと比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が網膜液の維持を有することが決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前のＩＲＦおよび／またはＳＲＦのレベルと比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が１つの眼および／または反対側の眼においてＩＲＦおよび／またはＳＲＦの低減を有することが決定される場合、治療有効用量である。

【0171】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の色素上皮剥離（ＰＥＤ）と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体がＰＥＤの消散を有することが決定される場合、治療有効用量である。

【0172】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＣＮＶ病変が収縮する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＣＮＶ病変が約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかより大きく収縮する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＣＮＶ病変が成長しない場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＣＮＶ病変が、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、または２０％のいずれかより大きく成長しない場合、治療有効用量である。

【0173】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の解剖学的特色と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が、１つの眼および／または反対側の眼の解剖学的特色の改善を有することが決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の解剖学的特色と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が、１つの眼および／または反対側の眼の解剖学的特色の安定化および／または維持を有することが決定される場合、治療有効用量である。

【0174】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与が、眼内血管新生疾患または障害の少なくとも１つの症状を低減する、停止する、または防止する場合、治療的に有効である。異常な（例えば、過剰な）血管形成によって特徴付けられる眼内血管新生疾患または障害の場合、そのような症状としては、例えば視覚障害（例えば、色覚障害、かすみ目、中心視力の悪化）および視覚喪失を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与が、眼内血管新生疾患の１つまたは複数の臨床特色の維持、部分消散、または完全消散をもたらす場合、治療有効用量である。例えば、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、当技術分野で公知の任意の方法によって測定した場合に、個体の１つの眼および／または反対側の眼への用量の投与が、眼内血管新生疾患の完全消散、部分消散、または維持をもたらす場合、治療的に有効である。一部の実施形態では、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼への用量の投与が、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）（例えば、ＥＴＤＲＳスコアに基づく；Vitale et al.,
(2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される中
心網膜厚、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与への投与後に個体が必要としたレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）の回数、網膜内液（ＩＲＦ）および／または網膜下液（ＳＲＦ）の存在、色素上皮剥離（ＰＥＤ）の消散、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）病変の成長、当技術分野で公知の任意の方法（例えば、ＳＤ－ＯＣＴ、ＯＣＴ、フルオレセイン血管造影、デジタルカラー眼底撮影等）に基づく解剖学的特色によって評価した場合に、眼内血管新生疾患の完全消散、部分消散、または維持をもたらす場合、治療的に有効である。一部の実施形態では、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼への用量の投与が、眼科検査、眼内圧（例えば、ゴールドマン圧平眼圧計、またはＴｏｎｏ－ｐｅｎを使用する）、倒像眼底検査、１つの眼および／または反対側の眼ならびに眼付属器の検査、眼瞼および／または瞳孔の応答性、眼瞼下垂、異常な瞳孔形状、瞳孔不同、光に対する反応の異常、求心性瞳孔障害、細隙灯検査（眼瞼、結膜、角膜、水晶体、光彩、および前房の検査を含む）、硝子体、視神経、周辺網膜、および網膜の脈管構造の後側セグメントの異常、ＳＤ－ＯＣＴ、フルオレセイン血管造影、デジタルカラー眼底撮影（網膜、視神経乳頭、および／または黄斑の画像を含む）、房水採取、硝子体液採取、ＯＣＴ－血管造影（ＯＣＴ－Ａ）、屈折および視力（ＢＣＶＡ）によって評価した場合に、眼内血管新生疾患の完全消散、部分消散、または維持をもたらす場合、治療的に有効である。

【0175】

一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量と同じである。一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量とは異なる。一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より高く、例えば約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％またはそれより高い％のいずれかより高い。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より高く、例えば約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％またはそれより高い％のいずれかより高い。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）／眼（ｖｇ／眼）として表記される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１１ｖｇ／眼またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１×１０^１０～約２×１０^１０ｖｇ／眼、約２×１０^１０～約３×１０^１０ｖｇ／眼の間、約３×１０^１０～約４×１０^１０ｖｇ／眼の間、約４×１０^１０～約５×１０^１０ｖｇ／眼の間、約５×１０^１０～約６×１０^１０ｖｇ／眼の間、約６×１０^１０～約７×１０^１０ｖｇ／眼の間、約７×１０^１０～約８×１０^１０ｖｇ／眼の間、約８×１０^１０～約９×１０^１０ｖｇ／眼の間、約９×１０^１０～約１０×１０^１０ｖｇ／眼の間、約１×１０^１１～約２×１０^１１ｖｇ／眼の間、約２×１０^１１～約３×１０^１１ｖｇ／眼の間、約３×１０^１１～約４×１０^１１ｖｇ／眼の間、約４×１０^１１～約５×１０^１１ｖｇ／眼の間、または約５×１０^１１～約６×１０^１１ｖｇ／眼の間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、約７×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、約８×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、約９×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、約１０×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼、または約１×１０^１１ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼～約７×１０^１０ｖｇ／眼、約７×１０^１０ｖｇ／眼～約８×１０^１０ｖｇ／眼、約８×１０^１０ｖｇ／眼～約９×１０^１０ｖｇ／眼、約９×１０^１０ｖｇ／眼～約１０×１０^１０ｖｇ／眼、約１０×１０^１０ｖｇ／眼～約１×１０^１１ｖｇ／眼、または約１×１０^１１ｖｇ／眼～約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼、約７×１０^１０ｖｇ／眼、約８×１０^１０ｖｇ／眼、約９×１０^１０ｖｇ／眼、約１０×１０^１０ｖｇ／眼、約１×１０^１１ｖｇ／眼、または約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼または約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０^１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約６×１０^１０ｖｇ／眼、約２×１０^１１ｖｇ／眼、または約６×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約６×１０^１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約２×１０^１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約６×１０^１１ｖｇ／眼である。

【0176】

一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量と、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、同じ時間に投与される。一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量と、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、異なる時間に投与される。一部の実施形態では、反対側の眼に投与された単位用量は、単位用量を１つの眼に投与した少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約７日、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、またはそれより長い期間のいずれかの後に投与される。一部の実施形態では、反対側の眼に投与された単位用量は、単位用量を１つの眼に投与した少なくとも約２週間後に投与される。

【0177】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の１回単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の１回単位用量は、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の１つより多くの用量（例えば、約２、３、４、５、またはそれより多くの単位用量のいずれかより多く）が、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の１つより多くの用量は、治療有効用量である。
医薬製剤

【0178】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は医薬製剤中にある。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、１つまたは複数の浸透圧またはイオン強度調整剤、１つまたは複数の緩衝剤、１つまたは複数の界面活性剤、および１つまたは複数の溶媒を含む。一部の実施形態では、浸透圧またはイオン強度調整剤は塩化ナトリウムである。一部の実施形態では、１つまたは複数の緩衝剤はリン酸二水素ナトリウムおよび／またはリン酸水素ナトリウムである。一部の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。一部の実施形態では、溶媒は水である。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、塩化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、および界面活性剤を含む。

【0179】

一部の実施形態では、医薬製剤は、約１×１０^１０ｖｇ／ｍＬ～約１×１０^１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。

【0180】

一部の実施形態では、医薬製剤中のｒＡＡＶ粒子は、約１×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約１×１０^１３ｖｇ／ｍｌの濃度で存在する。一部の実施形態では、医薬製剤中のｒＡＡＶ粒子は、約１×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約６×１０^１４ｖｇ／ｍｌの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、医薬製剤中のｒＡＡＶ粒子は、約１×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約２×１０^０９ｖｇ／ｍｌ、約２×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約３×１０^０９、約３×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約４×１０^０９、約４×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約５×１０^０９、約５×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約６×１０^０９、約６×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約７×１０^０９、約７×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約８×１０^０９、約８×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約９×１０^０９、約９×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０^０９、約１０×１０^０９ｖｇ／ｍｌ～約１×１０^１０、約１×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約２×１０^１０、約２×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約３×１０^１０、約３×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約４×１０^１０、約４×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約５×１０^１０、約５×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約６×１０^１０、約６×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約７×１０^１０、約７×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約８×１０^１０、約８×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約９×１０^１０、約９×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０^１０、約１０×１０^１０ｖｇ／ｍｌ～約１×１０^１１、約１×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約２×１０^１１、約２×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約３×１０^１１、約３×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約４×１０^１１、約４×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約５×１０^１１、約５×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約６×１０^１１、約６×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約７×１０^１１、約７×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約８×１０^１１、約８×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約９×１０^１１、約９×１０^１１ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０^１１、約１×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約２×１０^１２、約２×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約３×１０^１２、約３×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約４×１０^１２、約４×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約５×１０^１２、約５×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約６×１０^１２、約６×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約７×１０^１２、約７×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約８×１０^１２、約８×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約９×１０^１２、約９×１０^１２ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０^１２、約１×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約２×１０^１３、約２×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約３×１０^１３、約３×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約４×１０^１３、約４×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約５×１０^１３、約５×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約６×１０^１３、約６×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約７×１０^１３、約７×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約８×１０^１３、約８×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約９×１０^１３、約９×１０^１３ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０^１３、約１×１０^１４ｖｇ／ｍｌ～約２×１０^１４、約２×１０^１４ｖｇ／ｍｌ～約３×１０^１４、約３×１０^１４ｖｇ／ｍｌ～約４×１０^１４、約４×１０^１４ｖｇ／ｍｌ～約５×１０^１４、または約５×１０^１４ｖｇ／ｍｌ～約６×１０^１４ｖｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。

【0181】

一部の実施形態では、医薬製剤中の塩化ナトリウムは、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、医薬製剤中の塩化ナトリウムは、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、または約２００ｍＭの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、医薬製剤中の塩化ナトリウムは、約１８０ｍＭの濃度で存在する。

【0182】

一部の実施形態では、リン酸二水素ナトリウムは医薬製剤中に約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、リン酸二水素ナトリウムは医薬製剤中に約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭのいずれかの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、リン酸二水素ナトリウムは医薬製剤中に約５ｍＭの濃度で存在する。

【0183】

一部の実施形態では、リン酸水素ナトリウムは医薬製剤中に約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、リン酸水素ナトリウムは医薬製剤中に約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭのいずれかの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、リン酸水素ナトリウムは医薬製剤中に約５ｍＭの濃度で存在する。

【0184】

一部の実施形態では、ポロキサマー１８８は医薬製剤中に約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）の濃度で存在する。一部の実施形態では、ポロキサマー１８８は医薬製剤中に約０．０００５％（重量／体積）、約０．０００６％（重量／体積）、約０．０００７％（重量／体積）、約０．０００８％（重量／体積）、約０．０００９％（重量／体積）、約０．００１％（重量／体積）、約０．００２％（重量／体積）、約０．００３％（重量／体積）、約０．００４％（重量／体積）、または約０．００５％（重量／体積）のいずれかの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、ポロキサマー１８８は医薬製剤中に約０．００１％（重量／体積）の濃度で存在する。

【0185】

一部の実施形態では、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、塩酸および水酸化ナトリウムを使用して医薬製剤のｐＨを調整する。

【0186】

一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０^１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。

【0187】

一部の実施形態では、医薬製剤は、個体、例えばヒト患者の１つの眼および／または反対側の眼に硝子体内（ＩＶＴ）注射によって投与して所望の治療効果または予防効果を実現するために適したものである。一部の実施形態では、医薬製剤を復元された均一な溶液として供給する。一部の実施形態では、溶液は懸濁液である。一部の実施形態では、医薬製剤を凍結懸濁液として供給し、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与する前に解凍する。一部の実施形態では、溶液は等張性である。

【0188】

他の実施形態では、例えば抗ＶＥＧＦ剤（例えば、その機能的断片またはバリアント）をコードする核酸配列を含むＡＡＶ２．７ｍ８ベクターを含む医薬組成物を凍結乾燥形態で供給し、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与する前に復元する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）を含み、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプトまたはその機能的断片もしくはバリアント）をコードする凍結乾燥させた医薬組成物を、対象への投与前に緩衝剤中に復元する、溶解させる、または可溶化させるステップをさらに含む。一部の実施形態では、そのような凍結乾燥させた医薬組成物は、以下の１つまたは複数を含む：凍結保護物質、界面活性剤、塩、安定剤、またはそのいずれかの組合せ。

【0189】

一部の実施形態では、医薬製剤は均一な溶液である。一部の実施形態では、均一な溶液を充填済みシリンジ中に入れて供給する。一部の実施形態では、医薬製剤を懸濁液として供給する。一部の実施形態では、懸濁液は溶液である。一部の実施形態では、懸濁液は冷蔵されている。一部の実施形態では、懸濁液は凍結している。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に（例えば、ＩＶＴ注射による）、冷蔵されている懸濁液を室温まで温め、かつ／または懸濁液を撹拌して、活性成分（複数可）が溶液中に溶解し、かつ／または一様に分布することを確実にするステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に（例えば、ＩＶＴ注射による）、凍結懸濁液を解凍し、室温まで温め、かつ／または懸濁液を撹拌して、活性成分（複数可）が溶液中に溶解し、かつ／または一様に分布することを確実にするステップをさらに含む。一部の実施形態では、懸濁液を対象（例えば、ＩＶＴ注射によって）への投与前に希釈する。一部の実施形態では、懸濁液を充填済みシリンジとして供給する。

【0190】

一部の実施形態では、医薬製剤を凍結懸濁液として提供する。一部の実施形態では、懸濁液は、薬学的に許容される賦形剤、例えば、界面活性剤、グリセロール、非イオン界面活性剤、緩衝剤、グリコール、塩、およびそのいずれかの組合せを含む。

【0191】

一部の実施形態では、懸濁液は溶液である。一部の実施形態では、懸濁液はミセルを含む。

【0192】

一部の実施形態では、貯蔵安定性および取扱いの利便性のために、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプトまたはその機能的断片もしくはバリアント）をコードする核酸配列を含む医薬製剤を、凍結乾燥粉末、フリーズドライ粉末、または真空乾燥粉末として製剤化し、それを、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与する前に生理食塩水、緩衝剤、または水を用いて復元する。かわるがわる、医薬製剤を懸濁液または均一な溶液などの水溶液として製剤化する。医薬製剤は、アフリベルセプトをコードする核酸配列を含むｒＡＡＶ粒子を含有し得る。リン酸、ＰＢＳ、もしくはトリス緩衝剤、グリコール、グリセロール、生理食塩水、界面活性剤（例えば、プルロニック（登録商標）もしくはポリソルベート）、またはそのいずれかの組合せなどの種々の賦形剤を使用して医薬製剤を安定化することができる。さらに、アルコールなどの凍結保護物質を凍結または乾燥条件下での安定剤として使用することができる。一部の実施形態では、遺伝子治療薬を懸濁液、冷蔵懸濁液、または凍結懸濁液として提供する。

【0193】

一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液は、約２０μＬ、３０μＬ、４０μＬ、５０μＬ、６０μＬ、７０μＬ、８０μＬ、９０μＬ、１００μＬ、２００μＬ、３００μＬ、４００μＬ、５００μＬ、６００μＬ、７００μＬ、８００μＬ、９００μＬ、または１０００μＬのいずれかの体積を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液は約２５０μＬの体積を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液は、０．１～０．５ｍＬ、０．１～０．２ｍＬ、０．３～０．５ｍＬ、０．５～１．０ｍＬ、０．５～０．７ｍＬ、０．６～０．８ｍＬ、０．８～１ｍＬ、０．９～１．１ｍＬ、１．０～１．２ｍＬ、または１．０～１．５ｍＬの体積を有する。他の実施形態では、体積は、０．１ｍＬ以下、０．２ｍＬ以下、０．３ｍＬ以下、０．４ｍＬ以下、０．５ｍＬ以下、０．６ｍＬ以下、０．７ｍＬ以下、０．８ｍＬ以下、０．９ｍＬ以下、１．０ｍＬ以下、１．１ｍＬ以下、１．２ｍＬ以下、１．３ｍＬ以下、１．４ｍＬ以下、または１．５ｍＬ以下である。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液は約０．２５ｍＬの体積を有する。

【0194】

一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液を、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液を、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供し、ここで、バイアルは、０．１～０．５ｍＬ、０．１～０．２ｍＬ、０．２～０．３ｍＬ、０．３～０．４ｍＬ、または０．４ｍＬ～０．５ｍＬの体積の医薬製剤の懸濁液を含有する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液を、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供し、ここで、バイアルは、約０．２５ｍＬの体積の医薬製剤の懸濁液を含有する。

【0195】

一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤を、霊長類（例えば、非ヒト霊長類およびヒト対象）に硝子体内注射または網膜下注射によって投与するために設計する、工学的に操作する、または適合させる。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含むｒＡＡＶ粒子を含む医薬製剤を、個体の眼に硝子体内注射するために製剤化する。一部の実施形態では、医薬組成物を、約２５μＬ以下、約３０μＬ以下、約３５μＬ以下、約４０μＬ以下、約４５μＬ以下、約５０μＬ以下、約５５μＬ以下、約６０μＬ以下、約６５μＬ以下、約７０μＬ以下、約７５μＬ以下、約８０μＬ以下、約８５μＬ以下、約９０μＬ以下、約９５μＬ以下、約１００μＬ以下、約１１０μＬ以下、約１２０μＬ以下、約１３０μＬ以下、約１４０μＬ以下、約１５０μＬ以下、約１６０μＬ以下、約１７０μＬ以下、約１８０μＬ以下、約１９０μＬ以下、約２００μＬ以下、約２１０μＬ以下、約２２０μＬ以下、約２３０μＬ以下、約２４０μＬ以下、もしくは約２５０μＬ以下、または２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、もしくは２５０μＬのいずれか以下の体積の硝子体内注射を可能にする濃度に製剤化する、または復元する。一部の実施形態では、医薬製剤の単位用量は、約２５μＬ以下、約３０μＬ以下、約３５μＬ以下、約４０μＬ以下、約４５μＬ以下、約５０μＬ以下、約５５μＬ以下、約６０μＬ以下、約６５μＬ以下、約７０μＬ以下、約７５μＬ以下、約８０μＬ以下、約８５μＬ以下、約９０μＬ以下、約９５μＬ以下、約１００μＬ以下、約１１０μＬ以下、約１２０μＬ以下、約１３０μＬ以下、約１４０μＬ以下、約１５０μＬ以下、約１６０μＬ以下、約１７０μＬ以下、約１８０μＬ以下、約１９０μＬ以下、約２００μＬ以下、約２１０μＬ以下、約２２０μＬ以下、約２３０μＬ以下、約２４０μＬ以下、もしくは約２５０μＬ以下、または２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、もしくは２５０μＬのいずれか以下の体積を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含む医薬製剤の溶液または懸濁液を約２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、または２５０μＬのいずれかの体積で硝子体内注射することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含む医薬製剤の溶液または懸濁液を約３０μＬまたは約１００μＬの体積で硝子体内注射することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含む医薬製剤の溶液または懸濁液を約３０μＬの体積で硝子体内注射することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含む医薬製剤の溶液または懸濁液を約１００μＬの体積で硝子体内注射することを含む。

【0196】

一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）導入遺伝子の核酸配列を含むＡＡＶ２．７ｍ８粒子は、遺伝子治療薬用医薬製剤の構成成分である。一部の実施形態では、本明細書に記載の７ｍ８バリアントカプシドタンパク質を含む任意の血清型のｒＡＡＶ粒子を使用して、凍結懸濁液またはフリーズドライもしくは凍結乾燥させた製剤組成物を作出する。一部の実施形態では、遺伝子治療薬を冷蔵または凍結懸濁液として製剤化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子はｒＡＡＶ２である。一部の実施形態では、医薬製剤の凍結乾燥または懸濁液は、７ｍ８バリアントカプシドタンパク質、および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードするＤＮＡ配列を含むｒＡＡＶ２を含む。一部の実施形態では、懸濁液は冷蔵または凍結されたものである。

【0197】

一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内（ＩＶＴ）注射による。ＩＶＴ注射に関しては、ｒＡＡＶ粒子を医薬製剤の懸濁液の形で送達することができる（例えば、本明細書に記載の通り）。最初に、局所麻酔薬を眼の表面に適用し、その後、点眼用消毒溶液を適用する。器具使用を伴ってまたは伴わずに眼を開いたままに保ち、直接観察下で、ｒＡＡＶ粒子を、個体の１つの眼および／または反対側の眼の硝子体腔に、短く細い針、例えば３０ゲージの針を用いて強膜を通じて注射する。一般には、約２５μＬ～約２５０μＬ（例えば、約２５μＬ、約３０μＬ、約４０μＬ 約５０μＬ、約６０μＬ、約７０μＬ、約８０μＬ、約９０μＬ、約１００μＬ、約１１０μＬ、約１２０μＬ、約１３０μＬ、約１４０μＬ、約１５０μＬ、約１６０μＬ、約１７０μＬ、約１８０μＬ、約１９０μＬ、約２００μＬ、約２１０μＬ、約２２０μＬ、約２３０μＬ、約２４０μＬ、または約２５０μＬのいずれか）の体積のｒＡＡＶ粒子懸濁液をＩＶＴ注射によって眼に送達することができる。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約１００μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約３０μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ＩＶＴ注射を硝子体液の除去と組み合わせて実施する。一部の実施形態では、硝子体切除術を実施することができ、ｒＡＡＶ粒子懸濁液（例えば、約４ｍＬのｒＡＡＶ粒子懸濁液）を注入することによって硝子体ゲルの全体積を置き換える。硝子体切除術は適当な口径サイズ（例えば、２０ゲージ～２７ゲージ）のカニューレを使用して実施し、除去された硝子体ゲルの体積を注入用カニューレからの液、例えば、生理食塩水、等張溶液、ｒＡＡＶ粒子懸濁液の注入によって置き換える。ＩＶＴ投与は一般に忍容性が良好である。時には手順の終わりに注射部位が軽く赤くなる。圧痛が時々生じるが、大多数の患者からはいかなる痛みも報告されない。この手順後、眼帯も眼球保護帯も必要なく、活動も制限されない。時には感染防止を補助するために数日間の抗生物質点眼剤が処方される。

【0198】

一部の実施形態では、医薬製剤は、異常な（例えば、過剰な）血管形成または血管新生を特徴とする眼の疾患または障害を処置するために個体（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）の１つの眼および／または反対側の眼にＩＶＴ注射によって投与される単位用量（例えば、治療有効用量）である。一部の実施形態では、医薬製剤は、本明細書の他の箇所でさらに詳細に記載されている単位用量（例えば、治療有効用量）を含む。一部の実施形態では、対象に投与されるウイルスベクター（例えば、本明細書に開示されるｒＡＡＶベクター）の単位用量（例えば、治療有効用量）の体積は、これらの値の間の任意の範囲を含め、約２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、または２５０μＬのいずれか１つ以下である。対象に投与される単位用量の体積を最小化することにより、ＩＶＴ注射に付随する眼圧の変化および他の有害作用（例えば、眼圧、炎症、刺激、または疼痛の増大）が回避または軽減され得る。

【0199】

眼への使用に適した医薬製剤は、滅菌水溶液または分散および滅菌注射用溶液、懸濁液、または分散を即時調製するための滅菌粉末を含む。硝子体内投与に関しては、適切な担体として、生理的食塩水、静菌水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、および／または等張化剤、例えばグリセロールが挙げられる。ある特定の実施形態では、医薬製剤は、容易な注射可能性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ ｏｒ ｉｎｊｅｃｔａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に滅菌された流体である。ある特定の実施形態では、医薬製剤は、製造および貯蔵の条件下で安定であり、細菌および真菌などの微生物の夾雑作用から保護される。一部の実施形態では、医薬組成物は、塩またはグリセロールなどの等張化剤を含み得る。一部の実施形態では、凝集を防止するために界面活性剤または安定剤を医薬組成物に添加する。

【0200】

一部の実施形態では、医薬製剤は賦形剤または担体を含有する。担体は、例えば、水、生理食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそのいずれかの組合せを含有する溶媒または分散媒である。適当な流動性を、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散の場合では必要な粒子サイズを維持することによって、ならびにポリソルベート（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）、ドデシル硫酸ナトリウム（ラウリル硫酸ナトリウム）、ラウリルジメチルアミン酸化物、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、ポリエトキシル化アルコール、ポリオキシエチレンソルビタン、オクトキシノール（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（商標））、Ｎ，Ｎ－ジメチルドデシルアミン－Ｎ－オキシド、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（ＨＴＡＢ）、ポリオキシル１０ラウリルエーテル、Ｂｒｉｊ ７２１（商標）、胆汁酸塩（デオキシコール酸ナトリウム、コール酸ナトリウム）、プルロニック（登録商標）酸（Ｆ－６８、Ｆ－１２７）、ポリオキシルヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（商標））ノニルフェノールエトキシレート（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標））、シクロデキストリン、および、塩化エチルベンゼトニウム（Ｈｙａｍｉｎｅ（商標））などの界面活性剤を使用することによって維持することができる。微生物の作用の防止を種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、クレゾール、チメロサールなどによって実現することができる。多くの実施形態では、等張化剤は、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、および／または塩化ナトリウムを医薬製剤に含める。内部組成物の持続的な吸収を、吸収を遅延させる作用剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。一部の実施形態では、医薬担体は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート、およびスクロースを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、界面活性剤、例えば、ポリソルベート、ポロキサマー、またはプルロニック（登録商標）などの非イオン界面活性剤を含む。一部の実施形態では、非イオン界面活性剤の添加により、医薬組成物中の凝集が低減する。

【0201】

本明細書に記載の少なくとも１つの医薬製剤を含むキットも本明細書で提供される。一部の実施形態では、キットは、医薬製剤の凍結懸濁液（例えば、バイアル中に１つの単位用量）を含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に開示される凍結乾燥またはフリーズドライさせた医薬製剤（例えば、バイアル中に１つの単位用量）ならびに凍結乾燥させた医薬組成物を溶解させる、希釈する、および／または復元するための溶液を含む。一部の実施形態では、復元または希釈のための溶液を充填済みシリンジとして供給する。一部の実施形態では、キットは、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）を含むフリーズドライまたは凍結乾燥させた医薬組成物、および医薬組成物を所望の濃度または体積に復元するための溶液を含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に開示される医薬組成物を復元する際の凝集を防止するのに役立つ緩衝剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物を充填済みシリンジ中にいれて提供する。一部の実施形態では、キットは、二重チャンバーシリンジまたは容器を含み、その場合、チャンバーの一方は医薬組成物を溶解させるまたは希釈するための緩衝剤を含有する。一部の実施形態では、キットは、注射用のシリンジを含む。一部の実施形態では、復元された溶液を投与前に濾過する。一部の実施形態では、キットは、復元された医薬組成物を患者への投与前にろ過するためのフィルターまたはフィルターシリンジを含む。一部の実施形態では、キットは、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供される、本明細書に開示されるｒＡＡＶ粒子を含む医薬製剤の懸濁液を含む。一部の実施形態では、キットは、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供される、本明細書に開示されるｒＡＡＶ粒子を含む医薬製剤の懸濁液を含み、ここで、バイアルは、０．１～０．５ｍＬ、０．１～０．２ｍＬ、０．２～０．３ｍＬ、０．３～０．４ｍＬ、または０．４ｍＬ～０．５ｍＬの体積の医薬製剤の懸濁液を含有する。一部の実施形態では、キットは、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供される、開示されるｒＡＡＶ粒子を含む医薬製剤の懸濁液を含み、ここで、バイアルは、約０．２５ｍＬの体積の医薬製剤の懸濁液を含有する。一部の実施形態では、キットは、使用説明書；例えば、本明細書に開示されるｒＡＡＶ粒子を用いて眼内血管新生疾患を処置するための説明書をさらに含む。
眼内血管新生疾患

【0202】

一態様では、本開示は、個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法を提供する。別の態様では、本開示は、眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減するための方法を提供する。

【0203】

一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、滲出性ＡＭＤ、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜虚血、虚血性網膜症、糖尿病網膜浮腫、またはそのいずれかの組合せである。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）に続発する活動性脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）である。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、再発性および／または持続性ｗＡＭＤである。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、ＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶである。一部の実施形態では、ＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶは総病変サイズの≧５０％を占める。一部の実施形態では、ＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶは総病変サイズの≧５０％を占め、フルオレセイン血管造影図（ＦＡ）での漏出、スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）での滲出液、および／またはカラー眼底撮影での網膜下出血のエビデンスが伴う。一部の実施形態では、ＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶは総病変サイズの≧５０％を占め、フルオレセイン血管造影図（ＦＡ）での漏出、スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）での滲出液、および／またはカラー眼底撮影での網膜下出血のエビデンスが伴い、かつ、病変の総寸法が１２黄斑光凝固試験ディスク面積を超えない。一部の実施形態では、本開示のｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に個体の１つの眼および／または反対側の眼により示されたＥＴＤＲＳ文字評価に基づく最高矯正視力（ＢＣＶＡ）は、７８～２５（例えば、約７８、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、または約２５のいずれか未満）であった。一部の実施形態では、本開示のｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に個体の１つの眼および／または反対側の眼により示されたＥＴＤＲＳ文字評価に基づく最高矯正視力（ＢＣＶＡ）は約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、または約１００のいずれかよりも大きいものであった。

【0204】

一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に１つの眼および／または反対側の眼にポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）を有していた。

【0205】

一部の実施形態では、ＥＴＤＲＳ文字評価を約０．５メートル、約１メートル、約２メートル、約３メートル、または約４メートルで行う。一部の実施形態では、ＥＴＤＲＳ文字評価を約４メートルで行う。

【0206】

一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の直前約１２週間（例えば、約４カ月）の間に、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による少なくとも１回の以前の処置（例えば、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回またはそれよりも多くの処置）を受けている。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の直前約１２週間（例えば、約４カ月）の間に、１つの眼および／または反対側の眼に抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による２回または３回の以前の処置を受けていた。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼に抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による少なくとも約１回、少なくとも約５回、少なくとも約１０回、少なくとも約２０回、少なくとも約 回、少なくとも約４０回、少なくとも約５０回、少なくとも約６０回、少なくとも約７０回、少なくとも約８０回、少なくとも約９０回、少なくとも約１００回、少なくとも約１１０回、少なくとも約１２０回、またはそれよりも多くの以前の処置を受けていた。一部の実施形態では、個体は、約２週間、約３週間、４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、またはそれよりも長い、１つの眼および／または反対側の眼に対する計算された抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、および／またはアフリベルセプト）注射間隔を有していた。一部の実施形態では、個体は、約５～７週間、約４～１０週間、約４～７週間、または約４～６週間の、１つの眼および／または反対側の眼に対する算出された抗ＶＥＧＦ（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、および／またはアフリベルセプト）注射間隔を有していた。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間のいずれかにわたって１つの眼および／または反対側の眼に抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を受けていた。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の約７日間、約１０日間、または約１４日間にわたって１つの眼および／または反対側の眼に抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を受けていた。一部の実施形態では、以前の処置は、抗ＶＥＧＦ剤の眼内注射、網膜下注射または硝子体内注射を含む。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプトである。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプトである。

【0207】

一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置に対して意味のある応答を示した。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に１つの眼および／または反対側の眼への眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を示した。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦによる処置後少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって、１つの眼および／または反対側の眼に対する最初の診断時の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の≧３０％（例えば、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦによる処置後の約７日間、約１０日間、または約１４日間のいずれかよりも長くにわたって、１つの眼および／または反対側の眼への以前の抗ＶＥＧＦによる処置の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の≧３０％（例えば、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。

【0208】

一部の実施形態では、中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚は１つの眼および／または反対側の眼のＳＤ－ＯＣＴによって決定される。中心領域網膜厚は、中心窩を中心とした直径１ｍｍの円であるＥＴＤＲＳグリッドの中心領域にわたる網膜の平均厚である。

【0209】

一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与前の中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚と比較して、中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与後少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与前の中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚と比較して中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与後約７日間、約１０日間、または約１４日間にわたって、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与前の中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚と比較して中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚は１つの眼および／または反対側の眼のＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への抗ＶＥＧＦによる処置後にＣＳＴの正常化が観察され、観察可能な血管滲出が伴わない場合、眼内血管新生疾患に対する抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。正規化とは、ＣＳＴ値がその患者のクラス（例えば、年齢、性別などに基づく）に関して正常であることを指す。

【0210】

一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼のＳＤ－ＯＣＴによって決定して、抗ＶＥＧＦによる処置後少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって、抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト）の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼のＳＤ－ＯＣＴによって決定して、抗ＶＥＧＦによる処置後約７日間、約１０日間、または約１４日間にわたって、抗ＶＥＧＦによる処置の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。

【0211】

一部の実施形態では、個体は、眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、以前の抗ＶＥＧＦによる処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への以前の抗ＶＥＧＦによる処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、以前のアフリベルセプトによる処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への以前のアフリベルセプトによる処置を受けていない。

【0212】

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置される眼の疾患または障害は、糖尿病黄斑浮腫である。糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）は、糖尿病における黄斑内の血管からの液の漏出に起因する網膜の腫れである。黄斑は網膜の中心部分であり、色を検出し、昼間視覚が依存する特殊化された神経終末である錐体に富む狭い領域である。黄斑浮腫が発生するにつれ、中心視野の中央またはちょうど側面にぼやけが生じる。糖尿病黄斑浮腫からの失明が数カ月の期間にわたって進行する可能性があり、はっきりと焦点を合わせることが不可能になる。ＤＭＥの一般的な症状は、霧視、飛蚊症、複視、および無処置のままでいると最終的に視覚消失である。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法および医薬組成物を使用してＤＭＥを処置する。

【0213】

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置される眼の疾患または障害は、網膜静脈閉塞症である。網膜静脈閉塞症は、網膜から血液を運び出す小静脈の遮断である。網膜は、眼の内部の後方にある組織の層であり、光の像を神経シグナルに変換し、それらを脳に送る。網膜静脈閉塞症は、動脈硬化（アテローム性動脈硬化症）および血餅の形成によって引き起こされることが最も多い。網膜におけるより小さな静脈（分枝静脈またはＢＲＶＯ）の遮断は、多くの場合、アテローム性動脈硬化症によって肥厚または硬化した網膜動脈が交差し、網膜静脈に圧力がかかる場所で生じる。網膜静脈閉塞症の症状は、突発性のぼやけまたは１つの眼の全部もしくは一部の視力喪失を含み得る。

【0214】

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置される眼の疾患または障害は、滲出性加齢黄斑変性（ｗＡＭＤ）としても公知の脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）である。脈絡膜血管新生は、脈絡膜を起源とし、ブルッフ膜の割れ目から網膜下色素上皮（ＲＰＥ下）または網膜下腔への新しい血管の成長を伴い得、これは失明の主要な原因になり得る。ＣＮＶにより、数週間以内に注目すべき中心視覚の突発性の悪化が生じ得る。他の症状は、色覚障害、および変形視症（直線が波状に見える歪み）を含み得る。新しい血管からの出血により、ＣＮＶの症状の発症が加速し得る。ＣＮＶは眼の奥の圧迫感も含み得る。

【0215】

進行した「滲出」形態（新生血管または滲出型）のＡＭＤは、患者における急速かつ多くの場合に実質的である中心視覚の喪失を頻繁に引き起こし得る。滲出形態のＡＭＤでは、脈絡膜血管新生が形成され、網膜色素上皮の下におよびそれを通って成長し得る血管のネットワークに発達する。これには網膜下腔内への血漿の漏出および／または出血が伴うので、これが黄斑において生じた場合には中心視覚の重症の突発性喪失が生じ得る。本開示は、ＡＭＤ、滲出性ＡＭＤの処置または防止を意図している。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法および医薬組成物を使用してＡＭＤを処置する。

【0216】

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、および／またはアフリベルセプトによる以前の処置を受けた対象における眼の疾患または障害を防止または処置する。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、および／またはアフリベルセプトによる処置に対して応答性の眼の疾患または障害を防止または処置する。

【0217】

一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の少なくとも１日前、少なくとも１週間前、少なくとも１カ月前、少なくとも２カ月前、少なくとも４カ月前、少なくとも６カ月前、少なくとも１２カ月前、少なくとも１８カ月前、少なくとも２４カ月前、少なくとも３０カ月前、少なくとも３６カ月前、少なくとも４２カ月前、少なくとも４８カ月前、少なくとも５４カ月前、少なくとも６０カ月前、少なくとも６６カ月前、少なくとも７２カ月前、少なくとも７８カ月前、少なくとも８４カ月前、少なくとも９０カ月前、９６カ月前、少なくとも１０２カ月前、少なくとも１０８カ月前、少なくとも１１４カ月前、少なくとも１２０カ月前、少なくとも１２６カ月前、少なくとも１３２カ月前、またはそれよりも前に眼内血管新生疾患の診断を受けている。

【0218】

以下の説明は、当業者が種々の実施形態を作出し、使用することを可能にするために提示するものである。特定のデバイス、技法、および適用の説明は単に例として提示される。本明細書に記載の実施例に対する種々の改変が当業者には容易に明らかになり、また、本明細書において定義されている一般原則を、種々の実施形態の主旨および範囲から逸脱することなく、他の実施例および適用に適用することができる。したがって、種々の実施形態は、本明細書に記載され示されている実施例に限定されるものではなく、請求項に矛盾しない範囲と一致するものである。

【実施例0219】

（実施例１）
血管新生（滲出性）加齢黄斑変性症に対する６×１０^１１ｖｇ／眼の用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのオープンラベル第１相試験。
本実施例では、脈絡膜血管新生を伴う加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を処置するための、ＶＥＧＦ阻害剤であるアフリベルセプトおよびＡＡＶ２．７ｍ８タンパク質カプシドを含有するｒＡＡＶベクターであるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのオープンラベル第１相試験について記載する。
Ｉ．試験の目的
Ａ．主要目的

【0220】

本試験の主要目的は、ｗＡＭＤを有する対象に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回硝子体内（ＩＶＴ）注射の安全性および忍容性を評価することであった。
主要エンドポイント

【0221】

本試験の主要エンドポイントは、眼および全身性の有害事象（ＡＥ）の型、重症度、および発生率であった。
Ｂ．副次目的

【0222】

本試験の副次目的は以下の通りであった：
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの最高矯正視力（ＢＣＶＡ）に対する効果を評価すること。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの中心窩網膜厚（ＣＲＴ）としても公知の中心領域網膜厚（ＣＳＴ）に対する効果を評価すること。
・第４週から第１０４週までのレスキュー治療の必要性を評価すること。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの網膜内液（ＩＲＦ）および網膜下液（ＳＲＦ）の存在に対する効果を評価すること。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの、ベースラインにおいてＰＥＤを有する患者の間での色素上皮剥離（ＰＥＤ）消散に対する効果を評価すること。
副次的エンドポイント

【0223】

本試験の副次的エンドポイントは以下の通りであった：
・８日目から第１０４週まで経時的にＥＴＤＲＳ文字によって評価される、ベースラインと比較したベースラインからの経時的なＢＣＶＡの平均変化。
・８日目から第１０４週まで評価して、ベースラインと比較して、ベースラインから経時的に≧１５ＥＴＤＲＳ文字のＢＣＶＡ増加を有した対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、ベースラインと比較して、ベースラインから経時的に≦１５ＥＴＤＲＳ文字のＢＣＶＡ減少を有した対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、ベースラインと比較した、ベースラインからの経時的なＣＳＴおよび黄斑体積の平均変化。
・第４週から第１０４週まで評価して、経時的な、アフリベルセプト注射の平均回数。
・第４週から第１０４週まで評価して、経時的な、アフリベルセプト注射を必要とする対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、経時的な、ＩＲＦを有さない対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、経時的な、ＳＲＦを有さない対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、経時的な、ベースラインにおいてＰＥＤを有した対象の中でＰＥＤを有さない対象のパーセンテージ。
ＩＩ．試験の対象

【0224】

本試験の対象は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）に続発する活動性脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の診断を受けており、最近の抗ＶＥＧＦによる処置に応答した履歴があり、かつ頻繁な抗ＶＥＧＦ治療薬の注射を必要とする対象であった。

【0225】

試験の持続時間にわたって、試験を行う眼として１つの眼のみを選択した。両方の眼が組み入れ基準および除外基準の全てを満たす場合には、スクリーニング時に評価されたＢＣＶＡが最悪であった眼を試験を行う眼として選択した。両方の眼が組み入れ基準および除外基準の全てを満たし、かつ両方の眼のＢＣＶＡ値が同一である場合には、利き目でない方の眼を処置に選択するか、またはデフォルトで右眼を試験を行う眼として選択するかを対象が選択した。
Ａ．組み入れ基準

【0226】

以下の組み入れ基準を満たす対象を本試験に登録した：
・男性または女性の対象、年齢≧５０歳であること。
・試験を行う眼に総病変サイズの≧５０％を占有するＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶの以前のまたは現在のエビデンスがあり、以下を伴うこと：
○フルオレセイン血管造影図（ＦＡ）での漏出、スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）での液、またはカラー眼底写真での網膜下出血；および
○病変の寸法全体が１２黄斑光凝固試験ディスク面積を超えていないこと。
・対象がスクリーニング前４カ月の間に最低２回の注射によるｗＡＭＤに対する積極的な抗ＶＥＧＦによる処置を受けていること。
・スクリーニング来訪時（アフリベルセプト注射の前）の試験を行う眼の視覚に関して：
○ＢＣＶＡ ＥＴＤＲＳが７８～２５であること。
・試験を行わない眼の視覚に関して：
○ＢＣＶＡ ＥＴＤＲＳが≧３５であること。
・試験責任医師によって確認され、以下の通り定義される意味のある抗ＶＥＧＦ応答が実証されていること：
○ＳＤ－ＯＣＴを使用して評価して、中心領域網膜厚が最初の診断から≧３０％減少していること；または
○ＳＤ－ＯＣＴを使用して評価して、中心領域網膜厚がスクリーニング時から≧２０％減少していること；または
○ＣＳＴが正常化しており、観察可能な血管滲出が伴わないこと。

【0227】

ＶＥＧＦ応答性は、１日目の来訪時、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前に抗ＶＥＧＦ応答を確認する目的で試験責任医師によって確認された。意味のある抗ＶＥＧＦ応答を有さないと判定された対象はスクリーニング不合格となり、本試験に登録されなかった。
Ｂ．除外基準

【0228】

以下の除外基準を満たす対象は本試験に登録しなかった：
中和抗体
・血清および硝子体液中の中和抗体（ＮＡｂ）のレベルとＡＡＶの間の相関は確立されていないが（Lukason et al., (2011) Mol Ther 19 (2): 260-265）、用心のた
めに対象をＡＡＶ２．７ｍ８ベクターに対するＮＡｂについてスクリーニングした。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前６カ月の間に＞１：１２５の抗ＡＡＶ２．７ｍ８中和抗体力価レベルが実証された対象を本試験から除外した。
ＣＮＶ病変
・以下のＣＮＶ病変の特徴の、分かっている履歴またはエビデンス：
○線維症もしくは萎縮、試験を行う眼の中心窩の中央の網膜上皮断裂、または視力改善を妨げるあらゆる状態。
○総病変面積の＞５０％を構成する瘢痕化または線維症。
○蛍光眼底造影（ＦＡ）によって評価される、血液、瘢痕、および血管新生を含めた＞１２黄斑光凝固試験ディスク面積（３０．５ｍｍ^２）の病変サイズ。
○試験を行う眼における総病変面積の≧５０％である網膜下出血、または≧１ディスク面積のサイズの中心窩の下の血液の存在（血液が中心窩の下にある場合、中心窩は可視ＣＮＶによって２７０度囲まれていた）。
眼の状態（網膜／後眼）
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬時点での試験を行う眼における著しい網膜上膜または硝子体黄斑牽引（ＶＭＴ）症候群または試験を行う眼における全層の黄斑円孔（Ｇａｓｓ Ｓｔａｇｅ ２およびそれよりも高い）の履歴。
・試験を行う眼における、糖尿病網膜症（いずれかの眼におけるもの）、網膜静脈閉塞症、ぶどう膜炎、疑わしい網膜血管腫状増殖、ポリープ状脈絡膜症、または他の原因によるＣＮＶ（例えば、眼ヒストプラスマ症、外傷、もしくは病理的近視）、または眼における任意の他の血管疾患（硝子体もしくは周辺網膜の良性の状態は除外対象としなかった）を含めたｗＡＭＤ以外の網膜疾患の履歴。
・試験を行う眼における網膜剥離（修復を伴うまたは伴わない）の履歴。
他の状態（非網膜）
・試験の過程中に視覚を損なう恐れがあり、外科手術が必要になる恐れがあり、かつ／または網膜の適当な可視化またはイメージングを妨げる恐れがある、試験を行う眼における有意な非網膜疾患または中間透光体混濁の、分かっている履歴またはエビデンス（例えば、中心角膜瘢痕化、著しい白内障、角膜ジストロフィー、強膜軟化症）。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬時点での試験を行う眼における制御されていない高眼圧症または緑内障（抗緑内障薬による処置にもかかわらず眼圧［ＩＯＰ］が＞２２ｍｍＨｇであると定義される）またはスクリーニング時に＞２のＩＯＰ降下薬の使用。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前４週間以内にいずれかの眼における眼または眼周囲の活動性の感染またはその履歴。
眼の外科手術／手順
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬の６カ月以内の試験を行う眼に対するあらゆる以前の眼内もしくは眼周囲の外科手術、または、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬の６カ月以内のあらゆる計画されている大きな外科手技。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬の＞１カ月の瞼の外科手術は除外基準としなかった。
・試験を行う眼に対する硝子体切除術、線維柱帯切除術、または他の濾過手術の履歴。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前３カ月以内のイットリウム・アルミニウム・ガーネット（ＹＡＧ）後嚢切開術。
・ｗＡＭＤを処置するための光線力学的療法または網膜レーザーによるあらゆる以前の処置および試験を行う眼の領域内のあらゆる以前の治療的放射線照射。
全般／全身の状態
・指定がなければ投薬の６カ月以内の以下の心血管疾患のいずれかの履歴またはエビデンス：
○重症心疾患（例えば、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ［ＮＹＨＡ］Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓ ＩＩＩまたはＩＶ）の履歴または不安定狭心症の臨床的なエビデンス。
○急性冠状動脈症候群、心筋梗塞または冠状動脈血管再生。
○継続処置が必要な心室頻脈性不整脈、または制御されていない不整脈。
○投薬前のスクリーニング期間内のＢＰ降下薬の使用にもかかわらず、平均収縮期血圧（ＳＢＰ）≧１６０ｍｍＨｇまたは平均拡張期血圧（ＤＢＰ）≧１００ｍｍＨｇと定義される制御されていない高血圧。
○脳血管発作または一過性脳虚血発作の履歴。
・進行中の出血障害のあらゆる履歴または国際標準化比（ＩＮＲ）＞３．０。アスピリンまたは他の抗凝固薬（例えば、第Ｘａ因子阻害剤）の使用は除外基準としなかった。適格基準が満たされていることを確認するためにＩＮＲをスクリーニング期間中に報告した。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前のスクリーニング期間内にＨｂＡ１ｃ＞７．０％を伴う制御されていない糖尿病のエビデンス。
・十分に処置されている場合には以下を除き、過去５年以内の悪性腫瘍の履歴：
○皮膚の局部的な基底細胞癌または扁平上皮癌。
○子宮頸部または乳房の上皮内癌。
○乳頭状非侵襲膀胱がん。
○観察により６カ月にわたって安定な前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）が臨床的に示される前立腺がんステージ１および２。
○少なくとも２年にわたって完全寛解の状態にあるかまたは外科的に治癒したとみなされる任意の他のがん。
・ＨＩＶ、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎陽性（処置され治癒が実証された場合を除く）。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前３６時間以内に、臨床検査および／または体温＞３８．５℃に基づいて試験責任医師によって臨床的に意味があるとみなされる任意の型の全身性の活動性感染エビデンスまたは疑い。
・以下に対する分かっている重篤なアレルギー：
○血管造影に使用されるフルオレセイン色素またはナトリウムフルオレセイン（処置を適用できる軽症のアレルギーは許容された）；または
○アフリベルセプト。
・妊娠中、授乳中、または試験中に妊娠する予定の女性。
・試験責任医師の見解で対象の安全性を損なう他の著しい検査値異常または医学的状態。
薬物適用
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前、全身性の抗炎症性ステロイドまたは免疫抑制薬の５半減期以内の使用（プロトコール指定のプレドニゾン以外）。吸入または局所ステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は許容された。
・以下のいずれかを受けたこと：
○調査医薬品、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前３０日か５半減期のいずれか長い方の期間内。
○以前の遺伝子治療薬。
ＩＩＩ．調査医薬品

【0229】

調査医薬品（ＩＭＰ）であるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは、ＡＡＶ２カプシドに対するｉｎ ｖｉｖｏ定向進化によって引き出されたＡＡＶ２．７ｍ８タンパク質カプシドを含有する組換え複製欠損アデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターであった（Dalkara et al., (2013) Sci Transl Med 5 (189): 189ra76; US2014/0364338）。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは、遍在するキメラプロモーターの制御下にあるアフリベルセプトｃＤＮＡのコドン最適化バージョンの発現カセットを保有するものであった（図１Ａ）（ＷＯ２０１８１７０４７３Ａ１参照）。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを、Ｓｆ９細胞において一方がＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ２．７ｍ８ Ｃａｐタンパク質の遺伝子をコードし、他方がヒトアフリベルセプトｃＤＮＡ発現カセットをコードする２つの異なるバキュロウイルスを使用するバキュロウイルス発現ベクター系を使用して製造した。

【0230】

ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを、表１に示されている通り製剤化した、ＩＭＰ、０．２５ｍＬを含有する滅菌されたすぐ使用できる０．５ｍＬ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈバイアル中の滅菌濾過された凍結懸濁液として供給した。

【表1】

ＩＶ．試験設計
Ａ．用量および投与方法
コホート１

【0231】

コホート１の対象に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを用量１の６×１０^１１ｖｇ／眼で注射量を１００μＬとして単回ＩＶＴ注射によって投与した。

【0232】

ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのバイアルを≦－６０℃での凍結保存から取り出し、室温で解凍した。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトをＩＶＴ注射によって投与した。ポビドンヨードを用いた無菌技法を局所または結膜下麻酔と一緒に使用した。注射後のケアおよび薬物適用レジメンを施設の標準治療に基づいて行った。
Ｂ．試験来訪
スクリーニング（－１５日目～－７日目）

【0233】

図１Ｂに示されている通り、対象は、－１５日目～－７日目（例えば、－１４日目～－７日目）のスクリーニング中に標準治療と両立してアフリベルセプト２ｍｇの単回ＩＶＴ注射を受けた。対象は常套的な施設の標準の注射後のケアを受けた。
試験１日目

【0234】

試験１日目に（アフリベルセプトのＩＶＴ注射の７日後から１５日後の間、例えば、７日後から１４日後の間）、試験対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前に、抗ＶＥＧＦ治療薬に対して応答性であることを確認するためにＳＤ－ＯＣＴ試験を受けた。抗ＶＥＧＦ応答性は試験責任医師によって確認された。上記の通り意味のある抗ＶＥＧＦ応答を有することが確認された対象のみ（組み入れ基準を参照されたい）を本試験への登録に適格であるとした。

【0235】

抗ＶＥＧＦ治療薬に対して応答性の対象は試験コホートに逐次的に登録され、試験を行う眼への単回のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトＩＶＴ注射を受けた。上記の通り、試験の持続時間にわたって１つの眼のみを試験を行う眼として選択した。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与後

【0236】

対象は、３日目および８日目、第２週、第４週、第６週、および第８週の間、ならびにその後４週間ごと（すなわち、第１２週、第１６週、第２０週、および第２４週）に臨床評価および処置（必要であれば）のために戻った。コホート１に関する安全性および有効性解析を第２４週に実施した。

【0237】

第４週に開始して、再処置基準（以下を参照されたい）に従って疾患活動性の増大のエビデンスが存在する場合には、対象を、アフリベルセプト２ｍｇ ＩＶＴのレスキュー注射を受けることに適格であるとした。以下のいずれか１つが存在することにより、２ｍｇ
ＩＶＴアフリベルセプトを用いた標準の抗ＶＥＧＦによる処置の再開が正当化された：
・ＢＣＶＡのベースラインから≧１０文字の減少（ＥＴＤＲＳプロトコールを使用）およびＳＤ－ＯＣＴによって観察され、試験責任医師によってＢＣＶＡ低下の原因であると判断される網膜内または網膜下液。
・ＳＤ－ＯＣＴによって評価して、中心領域網膜厚のベースラインから＞７５μｍの増加。
・黄斑変性症に起因する視覚を脅かす出血の存在。

【0238】

対象を、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後第５２週に安全性および有効性について再度評価する。フォローアップ期間はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後第１０４週まで続く。
Ｃ．コルチコステロイドレジメン

【0239】

可能性のある注射後の眼の炎症のリスクを低減するために、対象に予防的コルチコステロイドレジメン（例えば、プレドニゾン）を投与し、ベクターの眼および全身性の忍容性について厳密にモニタリングした。

【0240】

コホート１の対象に、予防的な１３日間の経口コルチコステロイドレジメンを投与した。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の３日前（－３日目）から３日後まで、合計６日間にわたる６０ｍｇ／日のプレドニゾンから開始した。これに続いて、７日間のプレドニゾン漸減を行った。経口プレドニゾンレジメンの要約を表２に提示する。

【表2】

【0241】

ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのＩＶＴ注射前の免疫抑制（すなわち、プレドニゾン）の開始を、カプシド抗原に曝露した際の免疫応答が限定されるように設計した。対象はプレドニゾンを１３日間のレジメンにわたって自己投与した。

【0242】

対象は、必要に応じて試験の第２週～第２４週に局所または経口コルチコステロイド（プレドニゾン）を受けた。
Ｄ．禁止薬物および処置

【0243】

試験の間、以下の薬物を禁止した：
・ベバシズマブを含めたあらゆる全身性の抗ＶＥＧＦ剤。
・試験薬または本試験のレスキュー抗ＶＥＧＦ注射基準に従ったアフリベルセプト注射２ｍｇ以外の、試験を行う眼へのあらゆる抗ＶＥＧＦ剤。
・試験を行う眼へのＩＶＴステロイド。
・免疫抑制薬。全身性、吸入または局所ステロイドおよびＮＳＡＩＤは許容された。
・あらゆる他の調査試験薬の使用および試験への参加。
・試験を行う眼の白内障外科手術は、臨床的に必要が示され、ＩＶＴ投与後９０日よりも後かつ／またはアフリベルセプトの最後の注射後７日よりも後に予定されている場合には実施することができる。
・試験を行わない眼にＡＭＤが発生している対象は試験を行わない眼への標準治療を受けることができる。
Ｅ．コホート１に対する試験設計の要約

【0244】

６名の対象をコホート１に登録した。

【0245】

コホート１の対象に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを６×１０^１１ｖｇ／眼の用量１で単回ＩＶＴ注射によって投与した。コホート１に登録された第１の（センチネル）対象にＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトをＩＶＴ注射し、２９日間評価を行った後、コホート内の後の５名の対象（対象２～６）への投薬を行った。

【0246】

コホート１に対する試験設計の要約を表３に提示する。

【表3】

Ｆ．試験持続時間

【0247】

対象が試験に参加する持続時間は、各対象についておよそ１０８週間である。これには４週間のスクリーニング期間および追加的な１０４週間の試験期間が含まれる。

【0248】

試験が完了するかまたは中止されると、必要に応じて、この遺伝子治療薬の安全性をさらに評価するために長期間のフォローアップ試験に登録する機会が対象に提供される。
Ｖ．試験評価
Ａ．全般的な身体検査およびバイタルサイン

【0249】

各対象の関連性のある医学的および眼に関する履歴を収集し、記録した。全般的な身体検査は身長（スクリーニング時のみ）、体重、およびバイタルサインからなった。

【0250】

バイタルサインは血圧、脈拍数測定、体温、および呼吸数からなった。１２誘導心電図（ＥＣＧ）を各対象について取得した。以下の臨床検査および抗体検査を実施した：化学的検査、全血球計算（ＣＢＣ）、凝固試験、尿検査、ＨＩＶまたは肝炎の血清学的エビデンス、ならびに妊娠検査。

【0251】

第１０４週、試験終了時（ＥＯＳ）、および／または早期中止来訪時に、身体検査により、スクリーニング検査時から対象の健康状態に何らかの変化が生じているかどうかを評価する。
Ｂ．免疫応答およびアフリベルセプト発現

【0252】

総抗ＡＡＶ２．７ｍ８抗体を測定した。対象の血清中の中和性抗ＡＡＶ２．７ｍ８抗体を、カットポイントによって評価されるレポーター遺伝子に基づく形質導入干渉アッセイを使用して決定した。

【0253】

抗アフリベルセプト抗体に対する液性免疫応答を血清においてＥＬＩＳＡに基づくカットポイント抗体アッセイを使用して測定した。

【0254】

血清を収集して、アフリベルセプトタンパク質の存在を決定した。

【0255】

ＡＡＶ２．７ｍ８カプシドタンパク質およびアフリベルセプトタンパク質に対する細胞性免疫をＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して測定した。
Ｃ．全眼科検査および他の評価方法

【0256】

試験評価には眼科学的検査、眼圧（ＩＯＰ）、および間接検眼が含まれた。

【0257】

眼科検査は、眼および付属器の外診、眼瞼／瞳孔応答性に関する常套的なスクリーニング（これだけに限定されないが、眼瞼下垂、異常な瞳孔形状、瞳孔不同、光に対する反応の異常、および求心性瞳孔障害を含む）、ならびに細隙灯検査（眼瞼、結膜、角膜、水晶体、虹彩、前房）からなった。細隙灯検査により眼の前側の構造を検査し、あらゆる所見のグレード分類のために使用した。いずれかの来訪時の細隙灯検査の間に何らかの所見が認められた場合、重症度が試験責任医師によってグレード分類され、その所見が臨床的に意味があるものまたは臨床的に意味がないものとして記載された。

【0258】

ＩＯＰ測定をＧｏｌｄｍａｎｎ圧平眼圧計またはＴｏｎｏ－ｐｅｎ（商標）を使用して実施した。あらゆるＩＶＴ注射の前および眼を散大させる前にＩＯＰ測定を実施した。１日目の来訪では注射前および注射後（注射の３０分後）のＩＯＰ測定が必要であった。

【0259】

散大間接検眼試験には、硝子体、視神経、周辺網膜、および網膜の脈管構造の後側セグメントの異常の評価が含まれた。いずれかの来訪時の検眼鏡検査の間に何らかの所見が認められた場合、重症度が試験責任医師によってグレード分類され、その所見が臨床的に意味があるものまたは臨床的に意味がないものとして記載された。１日目の来訪では注射前および注射後の間接検眼評価が必要であった。
スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）

【0260】

ＳＤ－ＯＣＴを使用して、干渉縞パターンのスペクトル分析によって後方散乱光の大きさおよび遅延にコード化された深さ分解された組織構造情報を得た。
蛍光眼底造影

【0261】

ＣＮＶ病変成長の有効性を評価するため、およびベースラインと比較した漏出を評価するため、蛍光眼底造影画像を使用して試験登録に対する患者の適格性を確認した。
デジタルカラー眼底撮影

【0262】

網膜、視神経乳頭、および黄斑のカラー眼底画像を取得した。
光干渉断層血管造影（ＯＣＴ－Ａ）

【0263】

ＯＣＴ－Ａイメージング（波長掃引またはスペクトラルドメイン）を使用して、網膜および脈絡膜の容積３次元マップならびに血流に関する情報を得た。
屈折および視力

【0264】

屈折およびＢＣＶＡを試験場所において訓練を受け認証された視力試験者が測定した。視力を、眼を散大させる前に、出発距離４メートルで測定した。
Ｄ．安全性評価

【0265】

ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのＩＶＴ投与に伴うリスクを軽減するために、ＩＶＴ ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与日および処置後に対象を厳密にモニタリングした。

【0266】

ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性を、ＡＥ、バイタルサイン、身体検査および眼検査、ＥＣＧ、妊娠検査、ならびに実験室評価を収集することによって評価した。

【0267】

試験の最初の８週間に対象のモニタリングを集中して行い、その後、安全性および有効性に関する通常の安全性評価を行った。全ての対象に対して各試験来訪時にＥａｒｌｙ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｓｔｕｄｙ（ＥＴＤＲＳ）文字評価による視力検査を行い、標準治療であるアフリベルセプトのＩＶＴ注射をレスキュー処置として使用した。

【0268】

ＡＥの重症度、または強度を以下の尺度で評価した：
・軽症：ＡＥは注目すべきものではあるが、対象の日常活動を有意に損なうものではなかった。
・中等症：ＡＥにより通常の日常活動が低減するかまたは損なわれるが、無能力になるものではなかった。
・重症：ＡＥにより無能力になり、通常の日常活動を行うことが不可能になった。

【0269】

安全性を試験処置の投与後１０４週間にわたって評価する。試験終了（ＥＯＳ）来訪が完了したら、対象に導入遺伝子発現の安全性および耐久性をさらに評価するために長期間の延長試験への登録を提案する。
Ｅ．有効性評価

【0270】

ｗＡＭＤの処置に関するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの有効性を以下の評価基準によって評価した。重要な評価時点は２４週間であった。ＢＣＶＡおよびＳＤ－ＯＣＴのベースライン値は、－１５日目～－７日目（例えば、－１４日目～－７日目）のスクリーニング来訪中、アフリベルセプト注射の前に取得された値を指す。ベースライン値を分析に関する比較のために使用した。

【0271】

視覚は主にＥＴＤＲＳスコア（正確に読み取られる文字の数）（Vitale et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134 (9): 1041-1047）として表されるＢＣＶＡによって評価
した。対象が、ベースラインと比較して、ＥＴＤＲＳスコアの１５文字未満の減少を有する場合、視覚の維持に分類した。算出されたエンドポイントには、ベースラインからの平均変化、ベースラインと比較して、少なくとも１５文字の増加を有したパーセント、およびベースラインと比較して１５文字またはそれよりも多くの減少を有したパーセントが含まれた。

【0272】

ＦＡを実施して、ベースラインと比較した漏出を評価するための標準の技法を使用してＣＮＶ病変を評価した。

【0273】

認可された設備および標準の技法を使用してＳＤ－ＯＣＴを実施して、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚または中心領域網膜厚）、黄斑体積、および液（例えば、網膜下液および網膜内液）の存在をベースライン値と比較して評価した。

【0274】

第４週から第１０４週までの経時的な対象当たりのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後に行われたアフリベルセプト注射の回数を決定した。さらに、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の最初のアフリベルセプト注射までの時間およびアフリベルセプトによるレスキュー処置を必要としなかった対象の割合を決定した。

【0275】

第４週から第１０４週までの経時的なＩＲＦを有さない対象の割合を決定した。

【0276】

第４週から第１０４週までの経時的なＳＲＦを有さない対象の割合を決定した。

【0277】

ベースラインにおいてＰＥＤを有した対象の中で第４週から第１０４週までの経時的なＰＥＤを有さない対象の割合を決定した。
Ｆ．統計値

【0278】

安全性解析対象集団に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを受け、受けた用量に従って解析された対象全員を含めた。

【0279】

全ての他の安全性パラメータをコホートごとに要約した。ＡＥを医薬品規制用語集（ＭｅｄＤＲＡ、バージョン２１）分類を使用してコード化して、各事象に基本語（ＰＴ）および器官別大分類（ＳＯＣ）を付与した。試験離脱に至ったＳＡＥおよびＡＥを別々に列挙した。

【0280】

有効性解析には対象全員を含めた。有効性解析エンドポイントを評価し、記述統計をコホートごとに算出する。重要な評価時点は２４週間であった。有効性を、受けた用量に応じて、および全体として評価した。
ＶＩ．結果
Ａ．対象の特徴

【0281】

コホート１に登録された対象６名全員がｗＡＭＤと診断された。登録時に、対象は抗ＶＥＧＦによる処置の大きな必要性（例えば、頻繁な抗ＶＥＧＦによる処置を必要としていた）、約２０／５０の機能的視覚、ＯＣＴでのいくつかの過剰な中心領域網膜厚を有しており、抗ＶＥＧＦによる処置の定期的なＩＶＴ注射を受けており、治療に応答していた。対象全員の疾患特徴および処置歴を表４～５に提示する。

【0282】

表４に示されている通り、コホート１の対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与されるおよそ１年前（対象５）からおよそ１０年またはそれよりも前（対象４）の間にｗＡＭＤと診断されていた。対象は、注射前７（対象５）から１０９（対象４）まで、試験を行う眼に広範囲の以前の抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射を受けていた。算出された本試験前の平均抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射間隔は４週間ごとから１０週間ごとにわたった。対象全員が本試験への登録のためのスクリーニング前４カ月の間に抗ＶＥＧＦ注射を２回または３回受けていた。試験開始前のスクリーニング抗ＶＥＧＦ注射の７日後（対象１～３）または１４日後（対象４～６）に対象にＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与した。

【表4】

【表5】

Ｂ．安全性

【0283】

ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後２４週間の間、ＳＡＥも生じず、用量制限毒性（ＤＬＴ）の基準を満たすいかなるＡＥも生じなかった。薬物に関連する眼以外のＡＥは観察されなかった。眼の炎症が対象全員に関して観察され、局所ステロイドで管理可能であった。さらに、血管炎、網膜炎、または脈絡膜炎のいずれも観察されなかった。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに潜在的に関連すると思われる眼のＡＥが１９件観察され、１４件が軽症であり、５件が中等症であった（２件のＡＥは中間部ぶどう膜炎であり、１件のＡＥは硝子体細胞であり、２件のＡＥは前房内細胞であった）。１名の患者が２件の前房内細胞事象を有した（１件は軽症の事象であり、１件は中等症の事象であった）。初期フォローアップ中に局所または経口コルチコステロイドに応答性の軽症から中等症の眼内炎症が頻繁に観察された。ＯＣＴ画像から、大多数の対象における残留液の消散が示され、悪化の徴候は見られなかった。視力は一般に安定していた。２４週間を通じたＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連した全ての安全性事象の要約を表６に提示する。

【表6】

【0284】

対象全員が経口プレドニゾン６０ｍｇを－３日目から開始して６日間受け、その後、７日間のプレドニゾンの漸減過程を受けた。眼の細胞の炎症の臨床評価から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト後初期に臨床的に意味がある炎症は生じなかったことが明らかになった。さらに、図６に示されている通り、対象がステロイド点眼剤を受けた場合、悪化も新しい炎症も観察されなかった。第２４週までに前房内細胞の炎症が消散または改善した。観察された細胞の炎症は概して軽症であった。図６に示されている房水細胞計数カテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準（Jabs, DA et al., J Ophthalmol. 2005; 140: 509-516
）に基づくものであり、一方、硝子体細胞計数カテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった。

【0285】

全体的に、安全性評価により、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは忍容性が良好であり、ＤＬＴもＳＡＥも報告されなかったことが示された。全ての安全性事象が軽症～中等症であり、大多数が炎症に関連するものであった。ＡＥの継続的なフォローアップにより、平均視力が安定なままであり、抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射は必要なかったことが示された。したがって、結果から、以前から頻繁な抗ＶＥＧＦ注射を必要としているｗＡＭＤ患者に対して６×１０^１１ｖｇ／眼の用量で単回ＩＶＴ注射として投与されるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性プロファイルが許容されるものであることが示される。
Ｃ．有効性

【0286】

ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後、ＯＣＴ評価に基づいて６名の対象全員で疾患活動性の安定化が示された。図２Ａ～２Ｌに示されている通り、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置前および処置後に取得したＯＣＴ画像から、コホート１の対象６名全員においてロバストな解剖学的応答が明らかになったことが示された。例えば、対象１（例えば、図２Ａと２Ｂを比較されたい）、対象２（例えば、図２Ｂと２Ｃを比較されたい）、対象３（例えば、図２Ｄと２Ｅを比較されたい）、対象４（例えば、図２Ｆと２Ｇを比較されたい）、および対象５（例えば、図２Ｈと２Ｉを比較されたい）において、網膜下液が標準治療の抗ＶＥＧＦによる処置では残留したが、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後には消散し、消散したままであった。対象６はポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）と一致する網膜形態を示し（図２Ｋ）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後にいくらかの液が残留したが、疾患進行のエビデンスは認められなかった（図２Ｌ）。さらに、図３に示されている通り、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の増加を示した対象はおらず、－５２．７μｍの平均減少が観察された（９０％ＣＩ－８６．５、－１８．８）。ＣＳＴの増加はｗＡＭＤの疾患進行を示す。重要なことに、いずれの対象も、標準治療であるアフリベルセプトによるレスキュー注射（「レスキュー注射」）の投与を一切受けず、必要ともしなかった。

【0287】

対象全員に対して試験全体を通して最高矯正視力（ＢＣＶＡ）をＥＴＤＲＳ文字評価に基づいて測定した。図４に示されている通り、ＢＣＶＡはコホート１の対象にわたって安定であり、平均減少は－２文字（９０％ＣＩ－９．１、５．１）であった。

【0288】

フォローアップ時間中央値であるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の３４週間後に、ＯＣＴイメージングで疾患再活性化の徴候を示した対象はいなかった（図７Ａ～７Ｂ）。さらに、いずれの対象もいかなるレスキュー抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射も必要とせず、また、最大４４週間のフォローアップ期間中のいかなる時点においても再処置基準を満たす対象はいなかった。最後に、２４週間を超える追加的なフォローアップ期間中、ＢＣＶＡは維持され（すなわち、１０ＥＴＤＲＳ文字よりも多くの減少または増加を有した患者はいなかった）、第２４週に観察された解剖学的改善（すなわち、網膜下および網膜内液の消散、ならびにＣＳＴの減少）が維持され、安全性の懸念は生じなかった。

【0289】

フォローアップ時間中央値である第３４週に評価された安全性および有効性に関する結果の要約を表７に提示する。

【表7】

Ｄ．結論

【0290】

ｗＡＭＤに対する現行の標準治療は、一般には長期にわたって約４～８週間ごとに必要な抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射である。このレジメンでのコンプライアンスは患者、介護者、および健康管理システムにとって困難であり得、それにより、最適以下の投薬および処置不十分に起因した視力の喪失が導かれる。

【0291】

この実施例で示された結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトが、網膜の解剖学的構造の改善および視覚の安定化に関して明らかな利益をもたらす一方で、許容される安全性プロファイルを示すことが示される。特に、試験の間、患者の視覚が維持され、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトが安全であり、忍容性が良好であることが示され、観察された炎症は一般に軽症であり、ステロイド点眼剤に応答性のものであった。

【0292】

本試験のコホート１の対象は、疾患の進行を緩徐化するまたは防止するために以前から頻繁な抗ＶＥＧＦ注射を必要としていたが（表４）、本試験の間、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後は抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射を必要としなかったことが認められた。

【0293】

標準治療である抗ＶＥＧＦによる処置を２０週間よりも長く受けている対象のＯＣＴスキャンで網膜下液が存在し、スクリーニングでのアフリベルセプトのＩＶＴ注射の１～２週間後に継続していることが認められた。この液は、対象が処置を繰り返し受けていたにもかかわらず存在し、したがって、標準治療である抗ＶＥＧＦタンパク質のＩＶＴボーラスに対して不応性であった。予想外に、この不応性ＳＲＦはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後に消散し、この結果は、前臨床試験からは予測されていなかった。

【0294】

６×１０^１１ｖｇ／眼の用量で投与されたＡＡＶ２．７Ｍ８－アフリベルセプトの観察された安全性および有効性により、実施例２に記載の通り、低用量で局所コルチコステロイドと共に投与されるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性および有効性を評価するためにこの第１相試験の継続が導かれた。

【0295】

（実施例２）
血管新生（滲出性）加齢黄斑変性症に対する、６×１０^１１ｖｇ／眼よりも低用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトと局所コルチコステロイドのオープンラベル第１相試験。
以下の実施例では、ｗＡＭＤを有する対象に対する、局所コルチコステロイドを伴い、６×１０^１１ｖｇ／眼よりも低用量で投与されるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性および有効性を評価するための、実施例１に記載の第１相試験の継続について記載する。
Ｉ．試験の目的およびエンドポイント

【0296】

主要目的、副次目的、および主要エンドポイントおよび副次的エンドポイントは実施例１の節Ｉに記載されている通りである。
ＩＩ．試験の対象

【0297】

本試験の試験対象は実施例１の節ＩＩに記載されている通りである。
ＩＩＩ．調査医薬品

【0298】

調査医薬品はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトであり、以下の表８に記載されている通り適切な注射量を維持するためにＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの濃度を変動させたことを例外として、実施例１の節ＩＩＩにおいて詳細に記載されており、図１Ａに示されている通りである。

【表8】

ＩＶ．試験設計
Ａ．用量および投与方法

【0299】

下記の用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを実施例１の節ＩＶに記載されている通り投与した。
試験コホート２～４

【0300】

コホート２：ｗＡＭＤの診断を受けている６名の対象をコホート２に登録する。コホート２の対象には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量２の２×１０^１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な経口プレドニゾンレジメンを伴う。

【0301】

コホート３：ｗＡＭＤの診断を受けている９名の対象をコホート３に登録する。コホート３の対象には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量２の２×１０^１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な局所コルチコステロイドレジメンを伴う。

【0302】

コホート４：ｗＡＭＤの診断を受けている９名の対象をコホート４に登録する。レスキュー治療を必要とする脈絡膜血管新生滲出の徴候がコホート２および３の対象の大多数で観察された場合には、コホート４の対象にＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量３の６×１０^１０ｖｇ／眼で投与し、局所コルチコステロイドレジメンを伴う（コホート４ｂ）。レスキュー治療を必要とする脈絡膜血管新生滲出の徴候がコホート２および３の対象の大多数で観察されない場合には、コホート４の対象にＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量１の６×１０^１１ｖｇ／眼で投与し、局所コルチコステロイドレジメンを伴う（コホート４ａ）。
Ｂ．試験来訪

【0303】

試験来訪は実施例１の節ＩＶおよび図１Ｂに記載されている通りである。
Ｃ．コルチコステロイドレジメン

【0304】

実施例１のコホートについて詳細に記載されている通り、コホート２の対象に予防的な１３日間の経口コルチコステロイドレジメンを投与する：

【0305】

コホート２：コホート２の対象には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量２の２×１０^１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な１３日間の経口コルチコステロイドレジメンを、プレドニゾン６０ｍｇから開始してＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置前３日間および処置後３日間、合計６日間にわたって投与する。この後に７日間のプレドニゾン漸減を続ける。コホート２に対する経口プレドニゾンレジメンの要約は実施例１の表２に提示されている。

【0306】

コホート３および４の対象には下記の通り予防的な漸減レジメンの局所コルチコステロイド（０．０５％ジフルプレドネート点眼薬）を投与する：

【0307】

コホート３：コホート３の対象には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量２の２×１０^１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な４週間の漸減局所コルチコステロイドレジメンを伴う。

【0308】

コホート４：コホート４ｂの対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量３の６×１０^１０ｖｇ／眼で投与し、予防的な４週間の漸減局所コルチコステロイドレジメンを伴い、これは、処置にあたる医師の自由裁量で延長することができる。コホート４ａの対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量３の６×１０^１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な４週間の漸減局所ジフルプレドネートレジメンを伴い、これは処置にあたる医師の自由裁量で延長することができる。

【0309】

局所ジフルプレドネートレジメンの要約を以下の表９に提示する。

【表9】

【0310】

カプシド抗原に曝露した際の免疫応答を限定するために、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのＩＶＴ注射への曝露の直後の免疫抑制の開始を設計する。対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの注射日（１日目、注射後）から開始して第１の週にわたって０．０５％ジフルプレドネート溶液（ジフルプレドネート２．５μｇ）を１滴、処置を受ける眼の結膜嚢に１日当たり４回自己投与する。この後、第２の週にわたって１日当たり３回、第３の週にわたって１日当たり２回、および第４の週にわたって１日当たり１回投与する。漸減コルチコステロイドレジメンは処置にあたる医師の自由裁量で延長することができる。
Ｄ．禁止薬物および処置

【0311】

本試験の禁止薬物および処置は実施例１の節ＩＶに記載されている通りである。
Ｅ．コホート２～４に対する試験設計の要約

【0312】

コホート２～４に対する試験設計の要約を表１０に提示する。

【表10】

Ｆ．試験持続時間

【0313】

対象の本試験への参加の持続時間は実施例１の節ＩＶに記載されている通りである。
Ｖ．試験評価

【0314】

本試験において実施する評価は実施例１の節Ｖに記載されている通りである。さらに、房水および硝子体液の試料を取得する。
房水試料採取

【0315】

房水試料を、スクリーニング時（アフリベルセプト注射の前）および１日目（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射の前）、第１２週、第２４週、第３６週、第５２週、第７６週、第８８週、第１０４週、および第１のアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ）レスキュー処置が必要な任意の来訪時、または早期中止時に得る。房水試料をアフリベルセプト、ＶＥＧＦ－Ａ、およびＮＡｂ濃度について分析する。
硝子体液試料採取

【0316】

硝子体液試料を、試験中のいかなる時点でも硝子体切除術が実施される際に得る。硝子体液試料を主にアフリベルセプト濃度について分析する。残りの試料をＶＥＧＦ－Ａ濃度について分析する。
ＶＩ．結果
Ａ．対象の特徴

【0317】

対象全員の疾患特徴および処置歴を記録する。特に、血管新生ＡＭＤ診断の日付または年、試験を行う眼への以前の抗ＶＥＧＦ注射の回数、算出された試験前の抗ＶＥＧＦ注射間隔の平均、スクリーニング前４カ月の間に受けた抗ＶＥＧＦ注射の回数、スクリーニングでのアフリベルセプトＩＶＴ投薬の日付、およびＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射の日付を記録する。
Ｂ．安全性

【0318】

対象をＩＶＴ ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与日および処置後、厳密にモニタリングする。

【0319】

ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性を、バイタルサイン、身体検査および眼検査、ＥＣＧ、妊娠検査、および実験室評価を収集することによって評価する。

【0320】

ＡＥ、ＳＡＥ、およびＤＬＴの発生率、重症度、および処置との関連性を対象全員に関して評価する。

【0321】

眼内炎症の出現率、重症度、および処置との関連性を対象全員に関して評価する。

【0322】

視力を対象全員に関して、ＥＴＤＲＳスコア（正確に読み取られる文字の数）（Vitale
et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134 (9): 1041-1047）として表されるＢＣＶ
Ａによって評価する。

【0323】

抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射の必要性を対象全員に関してモニタリングする。

【0324】

対象の血清中の既存の抗ＡＡＶ ＮＡｂレベルとＡＥ、ＳＡＥ、およびＤＬＴの間の相関の存在を決定する。

【0325】

ステロイド予防法（局所または経口）のＡＥ、ＳＡＥ、ＤＬＴ、および眼内炎症出現率および消散に対する効果を評価する。

【0326】

標準治療であるアフリベルセプトのＩＶＴ注射をレスキュー処置として使用する。
Ｃ．有効性評価

【0327】

疾患安定化を対象全員に関して評価する。網膜厚、中心領域網膜厚、液および他の解剖学的特色を試験処置の投与前および投与後に測定する（例えば、ＯＣＴイメージングによって）。

【0328】

ｗＡＭＤの処置に関するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの有効性を以下の評価基準によって評価する。重要な評価時点は第２４週である。ＢＣＶＡおよびＳＤ－ＯＣＴのベースライン値は、－１５日目～－７日目（例えば、－１４日目～－７日目）のスクリーニング来訪中、アフリベルセプト注射の前に取得された値を指す。ベースライン値を分析のための比較に使用する。

【0329】

視覚を、ＥＴＤＲＳスコア（正確に読み取られる文字の数）（Vitale et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134 (9): 1041-1047）として表されるＢＣＶＡによって主に評
価する。対象が、ベースラインと比較して、ＥＴＤＲＳスコアの１５文字未満の減少を有する場合には視覚の維持に分類する。算出されたエンドポイントには、ベースラインからの平均変化、ベースラインと比較して少なくとも１５文字の増加を有したパーセント、およびベースラインと比較して１５文字またはそれよりも多くの減少を有したパーセントが含まれる。

【0330】

ＦＡを実施して、ベースラインと比較した漏出を評価するための標準の技法を使用してＣＮＶ病変を評価する。

【0331】

ＳＤ－ＯＣＴを認可された設備および標準の技法を使用して実施して、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚または中心領域網膜厚）、黄斑体積、および液（例えば、網膜下液および網膜内液）の存在を評価し、液をベースライン値と比較する。

【0332】

第４週から第１０４週までの経時的な対象当たりのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後に行われたアフリベルセプト注射の回数を決定する。さらに、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の最初のアフリベルセプト注射までの時間およびアフリベルセプトによる再処置を必要としなかった対象の割合を決定する。

【0333】

第４週から第１０４週までの経時的なＩＲＦを有さない対象の割合を決定する。

【0334】

第４週から第１０４週までの経時的なＳＲＦを有さない対象の割合を決定する。

【0335】

ベースラインにおいてＰＥＤを有した対象の中で第４週から第１０４週までの経時的なＰＥＤを有さない対象の割合を決定する。

【0336】

本開示を明確な理解のために実例および実施例として一部の詳細に関して記載しているが、説明および実施例は本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書において引用されている全ての特許および科学文献の開示は明白にその全体が参照により組み入れられる。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図2I】

【図2J】

【図2K】

【図2L】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【配列表】

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【外国語明細書】