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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024149756
(43)【公開日】2024-10-18
(54)【発明の名称】角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/047 20060101AFI20241010BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20241010BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20241010BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20241010BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20241010BHJP
【ＦＩ】
A61K31/047
A61P27/02
A61K47/10
A61K47/02
A61K9/08
【審査請求】有
【請求項の数】7
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024134577
(22)【出願日】2024-08-09
(62)【分割の表示】P 2019199484の分割
【原出願日】2019-11-01
(31)【優先権主張番号】P 2018207064
(32)【優先日】2018-11-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000199175
【氏名又は名称】千寿製薬株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100124431
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 順也
(74)【代理人】
【識別番号】100174160
【弁理士】
【氏名又は名称】水谷 馨也
(74)【代理人】
【識別番号】100175651
【弁理士】
【氏名又は名称】迫田 恭子
(72)【発明者】
【氏名】根本 夫規子
(72)【発明者】
【氏名】小林 真也
(72)【発明者】
【氏名】中瀬 駿佐
(57)【要約】
【課題】本発明の目的は、角膜上皮創傷の治癒促進のために使用される眼科用組成物を提供することである。
【解決手段】浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒を促進する作用があり、角膜上皮創傷が生じている眼に当該眼科用組成物を適用することにより、角膜上皮創傷の治癒を促進できる。
【選択図】なし
【解決手段】浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒を促進する作用があり、角膜上皮創傷が生じている眼に当該眼科用組成物を適用することにより、角膜上皮創傷の治癒を促進できる。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである、角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
【請求項2】
浸透圧が２２０～２６０ｍＯｓｍである、請求項１に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
【請求項3】
アルカリ金属塩、及び／又は多価アルコールを含む、請求項１又は２に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
【請求項4】
前記アルカリ金属塩が塩化ナトリウムである、請求項３に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
【請求項5】
前記多価アルコールがプロピレングリコール及び／又はグリセリンである、請求項３に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
【請求項6】
点眼液である、請求項１～５のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
【請求項7】
眼科用組成物の浸透圧を２００～２６０ｍＯｓｍに調整する工程を含む、眼科用組成物に角膜上皮創傷の治癒促進作用を付与する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、角膜上皮創傷の治癒促進のために使用される眼科用組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
角膜は、角膜上皮、ボーマン膜、角膜実質、デスメ膜、及び角膜内皮から構成されている。この内、最表層に位置する角膜上皮は、内的要因や外的要因によって創傷が生じ易い組織である。通常、角膜上皮に創傷が生じても、上皮幹細胞が健常であれば自己修復機能によって自然治癒される。角膜上皮の創傷治癒は、上皮細胞の伸展・移動（第１相）、上皮細胞の増殖（第２相）、及び上皮細胞の分化（第３相）という３つの相を経て進行する。
【0003】
このように角膜上皮創傷は、自己修復機能によって自然治癒されるが、その自然治癒には長期間を要したり、創傷閉鎖が不十分になったりすることがある。角膜上皮創傷の治癒期間中や創傷閉鎖が不十分な状態では、角膜上皮によるバリア機能が十分に発揮できず、角膜の恒常性維持が不十分になったり、細菌感染等のリスクが高まったりする。そのため、角膜上皮創傷の治癒を促進させることは、眼疾患を防ぎ、眼を健全な状態に維持する上で重要になっている。
【0004】
従来、角膜上皮創傷の治療に有効な治療薬が種々検討されている（例えば、特許文献１～３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】特表２００５－５２９９０６号公報
【特許文献2】特表２０１３－５２３８２９号公報
【特許文献3】特開平２－２１２４３３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明の目的は、角膜上皮創傷の治癒促進のために使用される眼科用組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明者等は、浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒を促進する作用があり、角膜上皮創傷が生じている眼に当該眼科用組成物を適用することにより、角膜上皮創傷の治癒を促進できることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて、更に検討を重ねることにより完成したものである。
【0008】
本発明の一態様として、下記に掲げる眼科用組成物を提供する。
項1-1．浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである、角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-2．浸透圧が２２０～２６０ｍＯｓｍである、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-3．アルカリ金属塩、及び／又は多価アルコールを含む、項1-1又は1-2に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-4．前記アルカリ金属塩が塩化ナトリウムである、項1-3に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-5．前記多価アルコールがプロピレングリコール及び／又はグリセリンである、項1-3に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-6．浸透圧が２１０～２５５ｍＯｓｍであり、塩化ナトリウムを含む、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-7．浸透圧が２２０～２５８ｍＯｓｍであり、グリセリンを含む、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-8．浸透圧が２２０～２５５ｍＯｓｍであり、プロピレングリコールを含む、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-9．浸透圧が２１９～２５５ｍＯｓｍであり、グリセリン、ホウ酸及びホウ砂を含む、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-10．塩化ナトリウム及びトロメタモ―ルを含む、項1-1～1-4のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-11．エデト酸及びその塩、並びにｌ－メントールよりなる群から選択される少なくとも１種を含む、項1-1～1-4のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-12．ピリドキシン、クロルフェニラミン、シアノコバラミン、アスパラギン酸、タウリン、ネオスチグミン、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種を含む、項1-1～1-4のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-13．点眼液である、項1-1～1-12のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-1．浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである、角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-2．浸透圧が２２０～２６０ｍＯｓｍである、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-3．アルカリ金属塩、及び／又は多価アルコールを含む、項1-1又は1-2に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-4．前記アルカリ金属塩が塩化ナトリウムである、項1-3に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-5．前記多価アルコールがプロピレングリコール及び／又はグリセリンである、項1-3に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-6．浸透圧が２１０～２５５ｍＯｓｍであり、塩化ナトリウムを含む、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-7．浸透圧が２２０～２５８ｍＯｓｍであり、グリセリンを含む、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-8．浸透圧が２２０～２５５ｍＯｓｍであり、プロピレングリコールを含む、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-9．浸透圧が２１９～２５５ｍＯｓｍであり、グリセリン、ホウ酸及びホウ砂を含む、項1-1に記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-10．塩化ナトリウム及びトロメタモ―ルを含む、項1-1～1-4のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-11．エデト酸及びその塩、並びにｌ－メントールよりなる群から選択される少なくとも１種を含む、項1-1～1-4のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-12．ピリドキシン、クロルフェニラミン、シアノコバラミン、アスパラギン酸、タウリン、ネオスチグミン、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種を含む、項1-1～1-4のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
項1-13．点眼液である、項1-1～1-12のいずれかに記載の角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物。
【0009】
また、本発明の他の一態様として、下記に掲げる方法を提供する。
項2-1．眼科用組成物の浸透圧を２００～２６０ｍＯｓｍに調整する工程を含む、眼科用組成物に角膜上皮創傷の治癒促進作用を付与する方法。
項2-2．浸透圧が２２０～２６０ｍＯｓｍである、項2-1に記載の方法。
項2-3．前記眼科用組成物にアルカリ金属の塩化物及び／又は多価アルコールが配合される、項2-1又は2-2に記載の方法。
項2-4．前記アルカリ金属の塩化物が塩化ナトリウムである、項2-3に記載の方法。
項2-5．前記多価アルコールがプロピレングリコール及び／又はグリセリンである、項2-3に記載の方法。
項2-6．浸透圧が２１０～２５５ｍＯｓｍであり、塩化ナトリウムが配合される、項2-1に記載の方法。
項2-7．浸透圧が２２０～２５８ｍＯｓｍであり、グリセリンが配合される、項2-1に記載の方法。
項2-8．浸透圧が２２０～２５５ｍＯｓｍであり、プロピレングリコールが配合される、項2-1に記載の方法。
項2-9．浸透圧が２１９～２５５ｍＯｓｍであり、グリセリン、ホウ酸及びホウ砂が配合される、項2-1に記載の方法。
項2-10．前記眼科用組成物に、塩化ナトリウム及びトロメタモ―ルが配合される、項2-1～2-4のいずれかに記載の方法。
項2-11．前記眼科用組成物に、エデト酸及びその塩、並びにｌ－メントールよりなる群から選択される少なくとも１種が配合される、項2-1～2-4のいずれかに記載の方法。
項2-12．前記眼科用組成物に、ピリドキシン、クロルフェニラミン、シアノコバラミン、アスパラギン酸、タウリン、ネオスチグミン、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種が配合される、項2-1～2-4のいずれかに記載の方法。
項2-13．前記眼科用組成物が点眼液である、項2-1～2-12のいずれかに記載の方法。
項2-1．眼科用組成物の浸透圧を２００～２６０ｍＯｓｍに調整する工程を含む、眼科用組成物に角膜上皮創傷の治癒促進作用を付与する方法。
項2-2．浸透圧が２２０～２６０ｍＯｓｍである、項2-1に記載の方法。
項2-3．前記眼科用組成物にアルカリ金属の塩化物及び／又は多価アルコールが配合される、項2-1又は2-2に記載の方法。
項2-4．前記アルカリ金属の塩化物が塩化ナトリウムである、項2-3に記載の方法。
項2-5．前記多価アルコールがプロピレングリコール及び／又はグリセリンである、項2-3に記載の方法。
項2-6．浸透圧が２１０～２５５ｍＯｓｍであり、塩化ナトリウムが配合される、項2-1に記載の方法。
項2-7．浸透圧が２２０～２５８ｍＯｓｍであり、グリセリンが配合される、項2-1に記載の方法。
項2-8．浸透圧が２２０～２５５ｍＯｓｍであり、プロピレングリコールが配合される、項2-1に記載の方法。
項2-9．浸透圧が２１９～２５５ｍＯｓｍであり、グリセリン、ホウ酸及びホウ砂が配合される、項2-1に記載の方法。
項2-10．前記眼科用組成物に、塩化ナトリウム及びトロメタモ―ルが配合される、項2-1～2-4のいずれかに記載の方法。
項2-11．前記眼科用組成物に、エデト酸及びその塩、並びにｌ－メントールよりなる群から選択される少なくとも１種が配合される、項2-1～2-4のいずれかに記載の方法。
項2-12．前記眼科用組成物に、ピリドキシン、クロルフェニラミン、シアノコバラミン、アスパラギン酸、タウリン、ネオスチグミン、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種が配合される、項2-1～2-4のいずれかに記載の方法。
項2-13．前記眼科用組成物が点眼液である、項2-1～2-12のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【0010】
本発明の眼科用組成物によれば、２００～２６０ｍＯｓｍという低浸透圧であることにより、角膜上皮創傷の治癒を効果的に促進することができる。また、本発明の眼科用組成物は、薬理成分を使用せずとも角膜上皮創傷の治癒促進が可能であることから、ヒアルロン酸点眼剤等に取って代わる、安全性の高い点眼剤となり得る。更に、本発明の眼科用組成物は、例えば、緑内障治療剤で懸念される中毒性角膜症等の角膜上皮障害を軽減することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】試験例１において、不死化ヒト角膜上皮細胞を用いて、各種浸透圧の条件でスクラッチアッセイを行った結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
１．定義
本明細書において、「角膜上皮創傷」とは、機械的、化学的又は生物学的刺激により、角膜上皮組織や角膜上皮細胞が欠損した状態を指す。「角膜上皮創傷」には、例えば、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、角膜潰瘍、マイボーム腺炎、アレルギー性結膜炎、ドライアイ等の内因性疾患に伴う角膜上皮の欠損；術後、薬剤性、外傷、化学外傷、熱傷、コンタクトレンズ装用等における外因性疾患に伴う角膜上皮の欠損；春季カタルやアトピー性角結膜炎等の角膜病変を伴う眼アレルギー性疾患に伴う角膜上
皮の欠損等が含まれる。
本明細書において、「角膜上皮創傷」とは、機械的、化学的又は生物学的刺激により、角膜上皮組織や角膜上皮細胞が欠損した状態を指す。「角膜上皮創傷」には、例えば、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、角膜潰瘍、マイボーム腺炎、アレルギー性結膜炎、ドライアイ等の内因性疾患に伴う角膜上皮の欠損；術後、薬剤性、外傷、化学外傷、熱傷、コンタクトレンズ装用等における外因性疾患に伴う角膜上皮の欠損；春季カタルやアトピー性角結膜炎等の角膜病変を伴う眼アレルギー性疾患に伴う角膜上
皮の欠損等が含まれる。
【0013】
本明細書において、「角膜上皮創傷の治癒」とは、角膜上皮が欠損した部位において、角膜上皮組織又は角膜上皮細胞が伸展・移動（遊走）、増殖又は分化して、欠損した部位が塞がった状態へ向かう生体反応をいう。
【0014】
本明細書において、「治癒促進用」とは、角膜上皮が欠損した部位が塞がった状態に向かう生体反応が促進されるものをいう。角膜上皮が欠損した部位が少しでも塞がれば、治癒促進用に該当する。
【0015】
本明細書において、「治癒促進作用を付与する」とは、角膜上皮が欠損した部位が塞がった状態に向かう生体反応を促進させる働きを持つようにすることをいう。
【0016】
本明細書において、「眼科用組成物」とは、眼科用途の医薬組成物である。
【0017】
本明細書において、「浸透圧」は、第十七改正日本薬局方の「一般試験法」の「３０．浸透圧測定法（オスモル濃度測定法）」に規定されている方法に従って測定される値である。
【0018】
２．好ましい実施形態の説明
以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本発明の例示であり、本発明の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。
当業者はまた、後述する好ましい実施例を参考にして、本発明の範囲内にある改変、変更等を容易に行うことができることが理解されるべきである。これらの実施形態について、当業者は適宜、任意の実施形態を組み合わせ得る。
以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本発明の例示であり、本発明の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。
当業者はまた、後述する好ましい実施例を参考にして、本発明の範囲内にある改変、変更等を容易に行うことができることが理解されるべきである。これらの実施形態について、当業者は適宜、任意の実施形態を組み合わせ得る。
【0019】
３．眼科用組成物
従来、角膜上皮創傷の治癒を促進させる眼科用組成物として、ヒアルロン酸ナトリウムを有効成分とする点眼液、キサンタンガムを有効成分とする組成物、ケトロラクとカルボキシメチルセルロースを含む組成物、ビトロネクチンを有効成分とする点眼剤等が知られているが、角膜上皮創傷の治癒と眼科用組成物の浸透圧との関連性については知られていない。このような状況の下、本発明者等は、低浸透圧の眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒を促進できることを見出した。具体的には、浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである
眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒を効果的に促進し得ることを見出した。
従来、角膜上皮創傷の治癒を促進させる眼科用組成物として、ヒアルロン酸ナトリウムを有効成分とする点眼液、キサンタンガムを有効成分とする組成物、ケトロラクとカルボキシメチルセルロースを含む組成物、ビトロネクチンを有効成分とする点眼剤等が知られているが、角膜上皮創傷の治癒と眼科用組成物の浸透圧との関連性については知られていない。このような状況の下、本発明者等は、低浸透圧の眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒を促進できることを見出した。具体的には、浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである
眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒を効果的に促進し得ることを見出した。
【0020】
即ち、一つの態様として、本発明は、浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍである、角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物を提供する。
【0021】
［浸透圧］
本発明の眼科用組成物における浸透圧は、２００～２６０ｍＯｓｍである。このような浸透圧に調整されていることによって、角膜上皮創傷の治癒を効果的に促進することが可能になる。但し、浸透圧が低すぎると点眼時に違和感が現れやすい。このような低浸透圧に起因する点眼時の違和感を抑制しつつ、角膜上皮創傷の治癒促進効果を有効に奏させるという観点から、本発明の眼科用組成物の浸透圧として、好ましくは２１８～２６０ｍＯｓｍ、より好ましくは２２０～２６０ｍＯｓｍ、更に好ましくは２４０～２６０ｍＯｓｍが挙げられる。
本発明の眼科用組成物における浸透圧は、２００～２６０ｍＯｓｍである。このような浸透圧に調整されていることによって、角膜上皮創傷の治癒を効果的に促進することが可能になる。但し、浸透圧が低すぎると点眼時に違和感が現れやすい。このような低浸透圧に起因する点眼時の違和感を抑制しつつ、角膜上皮創傷の治癒促進効果を有効に奏させるという観点から、本発明の眼科用組成物の浸透圧として、好ましくは２１８～２６０ｍＯｓｍ、より好ましくは２２０～２６０ｍＯｓｍ、更に好ましくは２４０～２６０ｍＯｓｍが挙げられる。
【0022】
浸透圧を前述する範囲に調整するには、本発明の眼科用組成物に配合する成分の種類や濃度を調整すればよく、眼科用組成物の浸透圧は、当業者であれば適宜設定可能な事項である。
【0023】
［配合成分］
本発明の眼科用組成物は、水を基剤として含み、且つ前述する浸透圧を充足させるために各種成分が含まれ得る。
本発明の眼科用組成物は、水を基剤として含み、且つ前述する浸透圧を充足させるために各種成分が含まれ得る。
【0024】
本発明の眼科用組成物は、前述する浸透圧を充足させるために、浸透圧調整剤及び／又は緩衝剤が含まれていていることが望ましい。
【0025】
浸透圧調整剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、多価アルコール、糖類等が挙げられる。アルカリ金属塩としては、具体的には、塩化ナトリウム、塩化カリウム等のアルカリ金属の塩化物；酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等の有機酸アルカリ金属塩；ホウ砂、亜硫酸水素ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等の無機酸アルカリ金属塩等が挙げられる。アルカリ土類金属塩としては、具体的には、塩化カルシウム、塩化マグネシウム等のアルカリ土類金属の塩化物等が挙げられる。多価アルコールとしては、具体的には、グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ポリエチレングリコール等が挙げられる。糖類としては、具体的には、ソルビトール、グルコース、マンニトール等が挙げられる。これらの浸透圧調整剤は、水和物等の溶媒和物の形態であってもよい。例えば、リン酸水素二ナトリウムの場合であれば、リン酸水素二ナトリウム１２水和物であってもよい。
【0026】
これらの浸透圧調整剤の中でも、好ましくはアルカリ金属塩、及び多価アルコール、更に好ましくは、アルカリ金属の塩化物、無機酸アルカリ金属塩、及び多価アルコール、特に好ましくは塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、グリセリン、及びプロピレングリコールが挙げられる。
【0027】
これらの浸透圧調整剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0028】
本発明の眼科用組成物に浸透圧調整剤を含有させる場合、その濃度については、使用する浸透圧調整剤の種類、他に配合する成分の種類や濃度等に応じて前述する浸透圧を充足するように適宜設定すればよいが、例えば、０．００１～５ｗ/ｖ％、好ましくは０．００５～３ｗ/ｖ％が挙げられる。
【0029】
緩衝剤は、浸透圧を調整すると共に、緩衝作用を付与する役割を果たす。本発明で使用される緩衝剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、トリス緩衝剤、酒石酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、アミノ酸緩衝剤等が挙げられる。
【0030】
リン酸緩衝剤としては、具体的には、リン酸及び／又はその塩が挙げられる。リン酸の塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム等のリン酸水素二アルカリ金属塩；リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム等のリン酸二水素アルカリ金属塩；リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム等のリン酸三アルカリ金属塩等が挙げられる。また、リン酸の塩は、水和物等の溶媒和物の形態であってもよく、例えば、リン酸水素二ナトリウムの場合であれば十二水和物の形態、リン酸二水素ナトリウムの場合であれば二水和物の形態等であってもよい。リン酸緩衝剤として、リン酸及びその塩の中から１種を選択して単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。リン酸及びその塩の中でも、好ましくはリン酸塩、更に好ましくはリン酸水素二アルカリ金属塩及びリン酸二水素アルカリ金属塩の少なくとも１種、特に好ましくはリン酸水素二ナトリウム及びリン酸二水素ナトリウムの少なくとも１種が挙げられる。
【0031】
クエン酸緩衝剤としては、具体的には、クエン酸及び／又はその塩が挙げられる。クエン酸の塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩等が挙げられる。また、クエン酸の塩は、水和物等の溶媒和物の形態であってもよい。クエン酸緩衝剤として、クエン酸及びその塩の中から１種を選択して単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0032】
ホウ酸緩衝剤としては、具体的には、ホウ酸及び／又はその塩が挙げられる。ホウ酸としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、オルトホウ酸、メタホウ酸、テトラホウ酸等が挙げられる。これらのホウ酸の中でも、好ましくはオルトホウ酸及びテトラホウ酸が挙げられる。これらのホウ酸は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。ホウ酸の塩としては、薬学的に許容されることを限度として、特に制限されないが、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；トリエ
チルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン等の有機アミン塩等が挙げられる。また、ホウ酸／又はその塩は、ホウ砂等のように、水和物の形態であってもよい。ホウ酸緩衝剤として、ホウ酸及びその塩の中から、１種を選択して単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
チルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン等の有機アミン塩等が挙げられる。また、ホウ酸／又はその塩は、ホウ砂等のように、水和物の形態であってもよい。ホウ酸緩衝剤として、ホウ酸及びその塩の中から、１種を選択して単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0033】
トリス緩衝剤としては、具体的には、トロメタモール及び／又はその塩が挙げられる。
トロメタモールの塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、酢酸塩等の有機酸塩；塩酸塩、スルホン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。トリス酸緩衝剤として、トロメタモール及びその塩の中から１種を選択して単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
トロメタモールの塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、酢酸塩等の有機酸塩；塩酸塩、スルホン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。トリス酸緩衝剤として、トロメタモール及びその塩の中から１種を選択して単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0034】
酒石酸緩衝剤としては、具体的には、酒石酸及び／又はその塩が挙げられる。酒石酸の塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩等が挙げられる。また、酒石酸の塩は、水和物等の溶媒和物の形態であってもよい。酒石酸緩衝剤として、酒石酸及びその塩の中から１種を選択して単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0035】
酢酸緩衝剤としては、具体的には、酢酸及び／又はその塩が挙げられる。酢酸の塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩等が挙げられる。また、酢酸の塩は、水和物等の溶媒和物の形態であってもよい。酢酸緩衝剤として、酢酸及びその塩の中から１種を選択して単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0036】
アミノ酸緩衝剤としては、具体的には、酸性アミノ酸、中性アミノ酸、及びそれらの塩が挙げられる。酸性アミノ酸としては、具体的には、アスパラギン酸、グルタミン酸が挙げられる。酸性アミノ酸の塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩等が挙げられる。中性アミノ酸としては、具体的には、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、タウリンが挙げられる。中性アミノ酸
の塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩等が挙げられる。アミノ酸緩衝剤として、酸性アミノ酸及びその塩の中から１種を選択して単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
の塩としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩等が挙げられる。アミノ酸緩衝剤として、酸性アミノ酸及びその塩の中から１種を選択して単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0037】
これらの緩衝剤は、１種単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0038】
これらの緩衝剤の中でも、好ましくはリン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、及びトリス緩衝剤が挙げられる。
【0039】
本発明の眼科用組成物に緩衝剤を含有させる場合、その濃度については、使用する緩衝剤の種類、他に配合する成分の種類や濃度等に応じて前述する浸透圧を充足するように適宜設定すればよいが、例えば、０．００１～５ｗ/ｖ％、好ましくは０．００５～３．５ｗ/ｖ％、更に好ましくは０．０１～２ｗ/ｖ％が挙げられる。
【0040】
前記浸透圧調整剤及び／又は緩衝剤を含み、浸透圧が前記範囲を満たす眼科用組成物の具体的な例として、塩化ナトリウムを含み、且つ浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍ、好ましくは２１０～２５５ｍＯｓｍである眼科用組成物；グリセリンを含み、且つ浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍ、好ましくは２２０～２５８ｍＯｓｍである眼科用組成物；プロピレングリコールを含み、且つ浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍ、好ましくは２２０～２５５ｍＯｓｍである眼科用組成物；グリセリン、ホウ酸及びホウ砂を含み、且つ浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍ、好ましくは２１９～２５５ｍＯｓｍである眼科用組成物；塩化ナトリウム及びトロメタモ―ルを含み、且つ浸透圧が２００～２６０ｍＯｓｍ、好ましくは２２１ｍＯｓｍである眼科用組成物等が挙げられる。
【0041】
本発明の眼科用組成物には、前述する浸透圧を充足することを限度として、前記成分の他に、必要に応じて、界面活性剤、粘稠剤、溶解補助剤、キレート剤、清涼化剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、保存剤等の添加剤を含有してもよい。
【0042】
界面活性剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、チロキサポール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、オクトキシノール等の非イオン性界面活性剤；アルキルジアミノエチルグリシン、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン等の両性界面活性剤；アルキル硫酸塩、Ｎ－アシルタウリン塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩等の陰イオン界面活性剤；アルキルピリジニウム塩、アルキルアミン塩等の陽イオン
界面活性剤等が挙げられる。これらの界面活性剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
界面活性剤等が挙げられる。これらの界面活性剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0043】
粘稠剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、キサンタンガム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、ジェランガム、アルギン酸、ポリカルボフィル等の水溶性高分子；ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース類等が挙げられる。これらの粘稠剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用し
てもよい。
てもよい。
【0044】
溶解補助剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ポリオキシエチレンヒマシ油、エタノール、モノステアリン酸ポリエチレングリコール、ステアリン酸ポリオキシル、ヒマシ油、カルボマーコポリマータイプＡ等が挙げられる。これらの溶解補助剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0045】
キレート剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、エデト酸、クエン酸、コハク酸、アスコルビン酸、トリヒドロキシメチルアミノメタン、ニトリロトリ酢酸、１－ヒドロキシエタン－１，１－ジホスホン酸、ポリリン酸、メタリン酸、ヘキサメタリン酸、これら塩等が挙げられる。塩の形態としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩等が挙げられる。また、これらのキレート剤は水和物の形態であってもよい。これらのキレート剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使
用してもよい。
用してもよい。
【0046】
清涼化剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、l－メントール、ボルネオール、カンフル、ユーカリ油、ゲラニオール、ベルガモット油等が挙げられる。これらの清涼化剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0047】
安定化剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ポリビニルピロリドン、亜硫酸塩、モノエタノールアミン、シクロデキストリン、デキストラン、アスコルビン酸、タウリン、トコフェロール、ジブチルヒドロキシトルエン、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム等が挙げられる。これらの安定化剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0048】
ｐＨ調整剤としては、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、塩酸、酢酸、ホウ酸、アミノエチルスルホン酸、イプシロンアミノカプロン酸等の酸；水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ホウ砂、トリエタノールアミン、モノエタノールアミン、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム等のアルカリが挙げられる。これらのｐＨ調整剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0049】
これらの添加剤の濃度は、前述する浸透圧を充足する範囲で、使用する添加剤の種類や水性液剤に付与すべき特性等に応じて適宜設定すればよい。
【0050】
これらの添加剤の中でも、好適な一例として、エデト酸及びその塩、並びにｌ－メントールよりなる群から選択される少なくとも１種が挙げられる。
【0051】
本発明の眼科用組成物にエデト酸及び／又はその塩を含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．００１～０．１２７ｗ/ｖ％、好ましくは０．００５～０．１ｗ/ｖ％、更に好ましくは０．０１～０．０５ｗ/ｖ％が挙げられる。
【0052】
また、本発明の眼科用組成物にｌ－メントールを含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．０００１～０．５ｗ/ｖ％、好ましくは０．０００５～０．１ｗ/ｖ％、更に好ましくは０．００１～０．０３ｗ/ｖ％が挙げられる。
【0053】
更に、本発明の眼科用組成物には、必要に応じて、薬理成分が含まれていてもよい。配合可能な薬理成分としては、例えば、ヒアルロン酸ナトリウム、ジクアホソルナトリウム、レバミピド、シクロスポリン、Ｌｉｆｉｔｅｇｒａｓｔ等のドライアイ治療剤・角結膜上皮障害治療剤；プラノプロフェン、グリチルリチン酸二カリウム、アラントイン、イプシロンアミノカプロン酸、ブロムフェナクナトリウム、ケトロラクトロメタミン、ネパフェナク、ベルベリン塩化物、硫酸ベルベリン、アズレンスルホン酸ナトリウム、硫酸亜鉛、乳酸亜鉛、リゾチーム塩酸塩等の消炎剤；クロルフェニラミン、クロルフェニラミンの
塩（クロルフェニラミンマレイン酸塩等）、ジフェンヒドラミン塩酸塩等の抗ヒスタミン剤；クロモグリク酸ナトリウム、ケトチフェンフマル酸塩、アシタザノラスト、アンレキサノクス、ペミロラストカリウム、トラニラスト、イブジラスト、オロパタジン塩酸塩等の抗アレルギー剤；ノルフロキサシン、オフロキサシン、ロメフロキサシン、レボフロキサシン、ゲンタマイシン、ガチフロキサシン、アジスロマイシン等の抗菌剤；アスコルビン酸、フラビンアデニンジヌクレオチドナトリウム、シアノコバラミン、ピリドキシン、ピリドキシンの塩（ピリドキシン塩酸塩等）、トコフェロール酢酸エステル、レチノール
酢酸エステル、レチノールパルミチン酸エステル、パンテノール、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウム等のビタミン類；アスパラギン酸、アスパラギン酸の塩（アスパラギン酸ナトリウム、アスパラギン酸カリウム、アスパラギン酸マグネシウム等）、タウリン、コンドロイチン硫酸ナトリウム等のアミノ酸類；グルコース（ブドウ糖）、ガラクトース、マンノース、フルクトース等の単糖類；ネオスチグミン、ネオスチグミンの塩（ネオスチグミンメチル硫酸塩等）等の抗コリンエステラーゼ剤；ナファゾリン、テトラヒドロゾリン、エピネフリン、エフェドリン、フェニレフリン、ｄｌ－メチルエフェド
リン等の血管収縮剤；スルファジアジン、スルフイソキサゾール、スルフイソミジン、スルファジメトキシン、スルファメトキシピリダジン、スルファメトキサゾール、スルファエチドール、スルファメトミジン、スルファフェナゾール、スルファグアニジン、フタリルスルファチアゾール、スクシニルスルファチアゾール等のサルファ剤；ラタノプロスト、ブリンゾラミド、チモロールマレイン酸塩、ビマトプロスト、ブリモニジン酒石酸塩等の緑内障治療剤；イドクスウリジン等の抗ウィルス剤等が挙げられる。ここで例示する化合物は、薬学的に許容されることを限度として、塩の形態であってもよく、また他の塩の
形態であってもよい。これらの薬理成分は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
塩（クロルフェニラミンマレイン酸塩等）、ジフェンヒドラミン塩酸塩等の抗ヒスタミン剤；クロモグリク酸ナトリウム、ケトチフェンフマル酸塩、アシタザノラスト、アンレキサノクス、ペミロラストカリウム、トラニラスト、イブジラスト、オロパタジン塩酸塩等の抗アレルギー剤；ノルフロキサシン、オフロキサシン、ロメフロキサシン、レボフロキサシン、ゲンタマイシン、ガチフロキサシン、アジスロマイシン等の抗菌剤；アスコルビン酸、フラビンアデニンジヌクレオチドナトリウム、シアノコバラミン、ピリドキシン、ピリドキシンの塩（ピリドキシン塩酸塩等）、トコフェロール酢酸エステル、レチノール
酢酸エステル、レチノールパルミチン酸エステル、パンテノール、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウム等のビタミン類；アスパラギン酸、アスパラギン酸の塩（アスパラギン酸ナトリウム、アスパラギン酸カリウム、アスパラギン酸マグネシウム等）、タウリン、コンドロイチン硫酸ナトリウム等のアミノ酸類；グルコース（ブドウ糖）、ガラクトース、マンノース、フルクトース等の単糖類；ネオスチグミン、ネオスチグミンの塩（ネオスチグミンメチル硫酸塩等）等の抗コリンエステラーゼ剤；ナファゾリン、テトラヒドロゾリン、エピネフリン、エフェドリン、フェニレフリン、ｄｌ－メチルエフェド
リン等の血管収縮剤；スルファジアジン、スルフイソキサゾール、スルフイソミジン、スルファジメトキシン、スルファメトキシピリダジン、スルファメトキサゾール、スルファエチドール、スルファメトミジン、スルファフェナゾール、スルファグアニジン、フタリルスルファチアゾール、スクシニルスルファチアゾール等のサルファ剤；ラタノプロスト、ブリンゾラミド、チモロールマレイン酸塩、ビマトプロスト、ブリモニジン酒石酸塩等の緑内障治療剤；イドクスウリジン等の抗ウィルス剤等が挙げられる。ここで例示する化合物は、薬学的に許容されることを限度として、塩の形態であってもよく、また他の塩の
形態であってもよい。これらの薬理成分は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【0054】
これらの薬理成分の濃度については、使用する薬理成分の種類、他に配合する成分の種類や濃度等に応じて、前述する浸透圧を充足する範囲内で適宜設定すればよい。
【0055】
これらの薬理成分の中でも、好適な一例として、ピリドキシン、クロルフェニラミン、シアノコバラミン、アスパラギン酸、タウリン、ネオスチグミン、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種が挙げられる。
【0056】
本発明の眼科用組成物にピリドキシン及び／又はその塩を含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．００１～０．３ｗ/ｖ％、好ましくは０．００１～０．２ｗ/ｖ％、更に好ましくは０．０１～０．１ｗ/ｖ％が挙げられる。
【0057】
本発明の眼科用組成物にクロルフェニラミン及び／又はその塩を含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．０００６～０．１ｗ／ｖ％、好ましくは、０．０００６～０．０５ｗ／ｖ％、更に好ましくは、０．００６～０．０３ｗ／ｖ％が挙げられる。
【0058】
本発明の眼科用組成物にシアノコバラミンを含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．０００２～０．０６ｗ／ｖ％、好ましくは、０．０００２～０．０４ｗ／ｖ％、更に好ましくは、０．００４～０．０２ｗ／ｖ％が挙げられる。
【0059】
本発明の眼科用組成物にアスパラギン酸及び／又はその塩を含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．０１～３ｗ／ｖ％、好ましくは、０．０１～２ｗ／ｖ％、更に好ましくは、０．１～１ｗ／ｖ％が挙げられる。
【0060】
本発明の眼科用組成物にタウリンを含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．０１～３ｗ／ｖ％、好ましくは、０．０１～２ｗ／ｖ％、更に好ましくは、０．１～１ｗ／ｖ％が挙げられる。
【0061】
本発明の眼科用組成物にネオスチグミン及び／又はその塩を含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．００１～０．０２ｗ／ｖ％、好ましくは、０．００１～０．０１ｗ／ｖ％、更に好ましくは、０．００１～０．００５ｗ／ｖ％が挙げられる。
【0062】
本発明の眼科用組成物にブドウ糖を含有させる場合、その濃度については、特に制限されないが、例えば、０．０００１～０．５ｗ／ｖ％、好ましくは、０．０００５～０．２ｗ／ｖ％、更に好ましくは、０．００１～０．１ｗ／ｖ％が挙げられる。
【0063】
本発明の眼科用組成物は、所定の浸透圧を充足することにより、薬理成分としてヒアルロン酸及びそのアルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩等）等の角結膜上皮障害治療剤を含まなくても、角膜上皮創傷の治癒を促進することができる。従って、本発明の眼科用組成物の一実施形態として、ヒアルロン酸、及びそのアルカリ金属塩を含まないことが挙げられる。
【0064】
［ｐＨ］
本発明の眼科用組成物のｐＨについては、眼粘膜に適用可能であることを限度として特に制限されないが、例えば、ｐＨ３～１０、好ましくはｐＨ４～９、更に好ましくはｐＨ５～８が挙げられる。
本発明の眼科用組成物のｐＨについては、眼粘膜に適用可能であることを限度として特に制限されないが、例えば、ｐＨ３～１０、好ましくはｐＨ４～９、更に好ましくはｐＨ５～８が挙げられる。
【0065】
［製剤形態］
本発明の眼科用組成物の製剤形態については、水を基剤として含むものであればよく、例えば水溶液状、懸濁液状、乳液状等のいずれであってもよいが、好ましくは水溶液状が挙げられる。
本発明の眼科用組成物の製剤形態については、水を基剤として含むものであればよく、例えば水溶液状、懸濁液状、乳液状等のいずれであってもよいが、好ましくは水溶液状が挙げられる。
【0066】
また、本発明の眼科用組成物は、点眼液又は洗眼液の形態であればよいが、点眼液であることが好ましい。
【0067】
［用途・用量・用法］
本発明の眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒促進の用途に使用される。本発明の眼科用組成物において、治癒促進対象となる角膜上皮創傷は、内的要因又は外的要因のいずれによって生じたものであってもよい。本発明の眼科用組成物において、治癒促進対象となる角膜上皮創傷の具体例については、前記「１．定義」の欄で例示した通りである。治癒促進対象となる角膜上皮創傷の中でも、好ましくは、アレルギー性結膜炎、ドライアイ等の内因性疾患に伴う角膜上皮の欠損；薬剤性、コンタクトレンズ装用等における外因性疾患に伴う角膜上皮の欠損が挙げられる。
本発明の眼科用組成物は、角膜上皮創傷の治癒促進の用途に使用される。本発明の眼科用組成物において、治癒促進対象となる角膜上皮創傷は、内的要因又は外的要因のいずれによって生じたものであってもよい。本発明の眼科用組成物において、治癒促進対象となる角膜上皮創傷の具体例については、前記「１．定義」の欄で例示した通りである。治癒促進対象となる角膜上皮創傷の中でも、好ましくは、アレルギー性結膜炎、ドライアイ等の内因性疾患に伴う角膜上皮の欠損；薬剤性、コンタクトレンズ装用等における外因性疾患に伴う角膜上皮の欠損が挙げられる。
【0068】
本発明の眼科用組成物は、角膜上皮創傷が生じている眼に適用することによって使用される。例えば、本発明の眼科用組成物が点眼液の場合であれば、角膜上皮創傷が生じている眼に１回当たり１～３滴で１日当たり１～６回点眼すればよい。また、本発明の眼科用組成物が洗眼液の場合であれば、角膜上皮創傷が生じている眼に１回当たり１～３０ｍＬ程度を使用して１日当たり１～６回洗眼すればよい。
【0069】
［製造方法］
本発明の眼科用組成物は、自体公知の調製法に従って製造すればよく、例えば、第十七改正日本薬局方の「製剤総則」の欄に記載された方法を用いて製造することができる。
本発明の眼科用組成物は、自体公知の調製法に従って製造すればよく、例えば、第十七改正日本薬局方の「製剤総則」の欄に記載された方法を用いて製造することができる。
【0070】
４．角膜上皮創傷の治癒促進作用の付与方法
前述の通り、眼科用組成物の浸透圧を２００～２６０ｍＯｓｍに調整することによって、眼科用組成物に角膜上皮創傷の治癒促進作用を具備させることができる。従って、一つの態様として、眼科用組成物の浸透圧を２００～２６０ｍＯｓｍに調整する工程を含む、眼科用組成物に角膜上皮創傷の治癒促進作用を付与する方法を提供する。
前述の通り、眼科用組成物の浸透圧を２００～２６０ｍＯｓｍに調整することによって、眼科用組成物に角膜上皮創傷の治癒促進作用を具備させることができる。従って、一つの態様として、眼科用組成物の浸透圧を２００～２６０ｍＯｓｍに調整する工程を含む、眼科用組成物に角膜上皮創傷の治癒促進作用を付与する方法を提供する。
【0071】
本方法において、浸透圧の好ましい範囲、眼科用組成物に配合される成分の種類や濃度、眼科用組成物の製剤形態、用途、用量、用法等については、前記「３．眼科用組成物」の欄に記載の通りである。
【実施例0072】
以下に、実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【0073】
試験例１：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（１）
１．試験材料及び試験方法
１－１．細胞
V40-adeno virus組換えベクターにより不死化させたヒト角膜上皮細胞（理研細胞バンク、リソース名RCB2280、日本）を使用した。
１．試験材料及び試験方法
１－１．細胞
V40-adeno virus組換えベクターにより不死化させたヒト角膜上皮細胞（理研細胞バンク、リソース名RCB2280、日本）を使用した。
【0074】
１－２．試験培地
増殖培地として、ヒトインスリン（ヒト、組換え体、富士フィルム和光純薬株式会社）5μg/ｍＬ、ペニシリン／ストレプトマイシン１ｗ/ｖ％、ウシ胎児血清（Heat inactivated FBS）（Thermo Fisher Scientific）５ｗ/ｖ％、及び上皮成長因子（EGF）（Pepro Tech）10ng/ｍＬを含むDMEM/F12培地を準備した。また、別途、浸透圧調整液として、塩化ナトリウムを０．３５９ｗ/ｖ％、０．４２２ｗ/ｖ％、０．４８５ｗ/ｖ％、０．５４８ｗ/ｖ％、０．６４２ｗ/ｖ％、及び０．８３７ｗ/ｖ％含む水溶液を準備した。
増殖培地として、ヒトインスリン（ヒト、組換え体、富士フィルム和光純薬株式会社）5μg/ｍＬ、ペニシリン／ストレプトマイシン１ｗ/ｖ％、ウシ胎児血清（Heat inactivated FBS）（Thermo Fisher Scientific）５ｗ/ｖ％、及び上皮成長因子（EGF）（Pepro Tech）10ng/ｍＬを含むDMEM/F12培地を準備した。また、別途、浸透圧調整液として、塩化ナトリウムを０．３５９ｗ/ｖ％、０．４２２ｗ/ｖ％、０．４８５ｗ/ｖ％、０．５４８ｗ/ｖ％、０．６４２ｗ/ｖ％、及び０．８３７ｗ/ｖ％含む水溶液を準備した。
【0075】
前記増殖培地と前記浸透圧調整液を容量比１：１で混和し、浸透圧が２１０ｍＯｓｍ、２１９ｍＯｓｍ、２２８ｍＯｓｍ、２４０ｍＯｓｍ、２５５ｍＯｓｍ、及び２８５ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0076】
１－３．試験方法
培養した不死化ヒト角膜上皮細胞を、増殖用培地で１．５×１０5ｃｅｌｌｓ/ｍＬに希釈し、２４ウェルプレート（Corning）に、１ウェル当たり１ｍＬずつ播種した。３７℃、５％ＣＯ2の条件下で約２４時間インキュベートすることにより、ウェルの底部に不死化ヒト角膜上皮細胞をサブコンフルエントな状態で付着させた。インキュベート後、ウェル内の培地をアスピレータで除去し、ウェルにリン酸緩衝液（DPBS）（Thermo Fisher Scientific）１ｍＬを添加した。次いで、ウェル内のリン酸緩衝液をアスピレータで除去し、Cell Scratcher (ACGテクノグラス)を用いてスクラッチを行い、細胞欠損領域（幅約１．８ｍｍ、長さ約１３ｍｍ）を作製した。細胞欠損領域の作製後、リン酸緩衝液（DPBS）（Thermo Fisher Scientific）１ｍＬを添加した。その後、リン酸緩衝液をアスピレータで除去し、各浸透圧の試験培地１ｍＬを添加した。細胞欠損領域の作製が完了した時点を試験開始時間（０時間）とし、その５時間後に細胞欠損領域の幅を定量することにより、細胞欠損領域の修復の程度を評価した。具体的には、オールインワン蛍光顕微鏡 BZ-X700（KEYENCE）を用いて、０時間と５時間後の細胞欠損領域を撮影し、撮影した写真をコンピュータにデジタル画像として保存し、画像解析ソフト（Image-ProR Plus ver. 7.0J）を用いて細胞欠損領域の幅（ピクセル）を測定した。０時間の時点の細胞欠損領域の幅（ピクセル）から５時間後の細胞欠損領域の幅（ピクセル）を差し引くことにより、創傷治癒幅（ピクセル）を算出した。また、等張条件（２８５ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する各浸透圧条件での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）についても算出した。なお、本試験は、1回の測定（１枚の２４ウェルプレート）において、同じ試験培地での測定を４ウェルで行った。また、本試験は、異なるウェルプレートで合計３回行った（ｎ＝１１～１２）。
培養した不死化ヒト角膜上皮細胞を、増殖用培地で１．５×１０5ｃｅｌｌｓ/ｍＬに希釈し、２４ウェルプレート（Corning）に、１ウェル当たり１ｍＬずつ播種した。３７℃、５％ＣＯ2の条件下で約２４時間インキュベートすることにより、ウェルの底部に不死化ヒト角膜上皮細胞をサブコンフルエントな状態で付着させた。インキュベート後、ウェル内の培地をアスピレータで除去し、ウェルにリン酸緩衝液（DPBS）（Thermo Fisher Scientific）１ｍＬを添加した。次いで、ウェル内のリン酸緩衝液をアスピレータで除去し、Cell Scratcher (ACGテクノグラス)を用いてスクラッチを行い、細胞欠損領域（幅約１．８ｍｍ、長さ約１３ｍｍ）を作製した。細胞欠損領域の作製後、リン酸緩衝液（DPBS）（Thermo Fisher Scientific）１ｍＬを添加した。その後、リン酸緩衝液をアスピレータで除去し、各浸透圧の試験培地１ｍＬを添加した。細胞欠損領域の作製が完了した時点を試験開始時間（０時間）とし、その５時間後に細胞欠損領域の幅を定量することにより、細胞欠損領域の修復の程度を評価した。具体的には、オールインワン蛍光顕微鏡 BZ-X700（KEYENCE）を用いて、０時間と５時間後の細胞欠損領域を撮影し、撮影した写真をコンピュータにデジタル画像として保存し、画像解析ソフト（Image-ProR Plus ver. 7.0J）を用いて細胞欠損領域の幅（ピクセル）を測定した。０時間の時点の細胞欠損領域の幅（ピクセル）から５時間後の細胞欠損領域の幅（ピクセル）を差し引くことにより、創傷治癒幅（ピクセル）を算出した。また、等張条件（２８５ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する各浸透圧条件での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）についても算出した。なお、本試験は、1回の測定（１枚の２４ウェルプレート）において、同じ試験培地での測定を４ウェルで行った。また、本試験は、異なるウェルプレートで合計３回行った（ｎ＝１１～１２）。
【0077】
２．試験結果
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表１に示し、浸透圧と創傷治癒幅の近似曲線を図１に示す。この結果、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲では、等張である２８５ｍＯｓｍの場合に比べて、創傷治癒幅が大きい値を示していることが確認された。即ち、本結果から、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが明らかとなった。
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表１に示し、浸透圧と創傷治癒幅の近似曲線を図１に示す。この結果、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲では、等張である２８５ｍＯｓｍの場合に比べて、創傷治癒幅が大きい値を示していることが確認された。即ち、本結果から、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが明らかとなった。
【0078】
【表1】
【0079】
試験例２：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（２）
浸透圧調整液として、グリセリンを１．１７３ｗ/ｖ％、１．７８６ｗ/ｖ％、及び２．
３２９ｗ/ｖ％含む水溶液を準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と当該浸透圧調整液を容量比１：１で混和し、浸透圧が２２０ｍＯｓｍ、２５８ｍＯｓｍ、及び２８８ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、グリセリンを１．１７３ｗ/ｖ％、１．７８６ｗ/ｖ％、及び２．
３２９ｗ/ｖ％含む水溶液を準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と当該浸透圧調整液を容量比１：１で混和し、浸透圧が２２０ｍＯｓｍ、２５８ｍＯｓｍ、及び２８８ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0080】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝６～７）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８８ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する各浸透圧条件での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0081】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表２に示す。この結果、前記試験例１の場合と同様に、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲では、等張である２８８ｍＯｓｍの場合に比べて、創傷治癒幅が大きい値を示しており、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0082】
即ち、浸透圧調整剤としてグリセリンを使用しても、塩化ナトリウムを使用した場合と同様に、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが明らかとなった。
【0083】
【表2】
【0084】
試験例３：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（３）
浸透圧調整液として、プロピレングリコールを０．９８９ｗ/ｖ％、１．５０６ｗ/ｖ％、及び１．９６３ｗ/ｖ％含む水溶液を準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と当該浸透圧調整液を容量比１：１で混和し、浸透圧が２２０ｍＯｓｍ、２５５ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、プロピレングリコールを０．９８９ｗ/ｖ％、１．５０６ｗ/ｖ％、及び１．９６３ｗ/ｖ％含む水溶液を準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と当該浸透圧調整液を容量比１：１で混和し、浸透圧が２２０ｍＯｓｍ、２５５ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0085】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝６～８）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８６ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する各浸透圧条件での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0086】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表３に示す。この結果、前記試験例１及び２の場合と同様に、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲では、等張である２８６ｍＯｓｍの場合に比べて、創傷治癒幅が大きい値を示しており、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0087】
即ち、浸透圧調整剤としてプロピレングリコールを使用しても、塩化ナトリウムやグリセリンを使用した場合と同様に、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが明らかとなった。
【0088】
【表3】
【0089】
試験例４：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（４）
浸透圧調整液として、表４に示す組成の水溶液Ａ～Ｆを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ａ～Ｆを容量比１：１で混和し、浸透圧が２１９ｍＯｓｍ、２５５ｍＯｓｍ、２８５ｍＯｓｍ、２２０ｍＯｓｍ、２５４ｍＯｓｍ、及び２８５ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表４に示す組成の水溶液Ａ～Ｆを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ａ～Ｆを容量比１：１で混和し、浸透圧が２１９ｍＯｓｍ、２５５ｍＯｓｍ、２８５ｍＯｓｍ、２２０ｍＯｓｍ、２５４ｍＯｓｍ、及び２８５ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0090】
【表4】
【0091】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１４～１６）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８５ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する各浸透圧条件での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。なお、水溶液Ａ及びＢを使用した条件での前記比率は水溶液Ｃを使用して調整した等張条件との対比で算出し、水溶液Ｄ及びＥを使用した条件での前記比率は水溶液Ｆを使用して調整した等張条件との対比で算出した。
【0092】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表５に示す。この結果、グリセリン、ホウ酸、及びホウ砂を使用して浸透圧を調整しても、前記試験例１～３の場合と同様に、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲では、等張である２８５ｍＯｓｍの場合に比べて、創傷治癒幅が大きい値を示しており、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0093】
【表5】
【0094】
試験例５：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（５）
浸透圧調整液として、表６に示す組成の水溶液Ｇ～Ｉを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｇ～Ｉを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２２ｍＯｓｍ、２５４ｍＯｓｍ、及び２８３ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表６に示す組成の水溶液Ｇ～Ｉを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｇ～Ｉを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２２ｍＯｓｍ、２５４ｍＯｓｍ、及び２８３ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0095】
【表6】
【0096】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１６）、創傷治癒幅
を求め、等張条件（２８３ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する各浸透圧条件での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
を求め、等張条件（２８３ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する各浸透圧条件での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0097】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表７に示す。この結果、エデト酸ナトリウム水和物を含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0098】
【表7】
【0099】
試験例６：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（６）
浸透圧調整液として、表８に示す組成の水溶液Ｊ及びＫを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｊ及びＫを容量比１：１で混和し、浸透圧が２１８ｍＯｓｍ、及び２８４ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表８に示す組成の水溶液Ｊ及びＫを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｊ及びＫを容量比１：１で混和し、浸透圧が２１８ｍＯｓｍ、及び２８４ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0100】
【表8】
【0101】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８４ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２１８ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0102】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表９に示す。この結果、ｌ－メントールを含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0103】
【表9】
【0104】
試験例７：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（７）
浸透圧調整液として、表１０に示す組成の水溶液Ｌ及びＭを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｌ及びＭを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２１ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表１０に示す組成の水溶液Ｌ及びＭを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｌ及びＭを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２１ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0105】
【表10】
【0106】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８６ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２１ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0107】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表１１に示す。この結果、ピリドキシン塩酸塩を含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0108】
【表11】
【0109】
試験例８：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（８）
浸透圧調整液として、表１２に示す組成の水溶液Ｎ及びＯを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｎ及びＯを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２８７ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表１２に示す組成の水溶液Ｎ及びＯを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｎ及びＯを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２８７ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0110】
【表12】
【0111】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８７ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２４ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0112】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表１３に示す。この結果、トロメタモールを含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0113】
【表13】
【0114】
試験例９：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（９）
浸透圧調整液として、表１４に示す組成の水溶液Ｐ及びＱを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｐ及びＱを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２１ｍＯｓｍ、及び２８７ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表１４に示す組成の水溶液Ｐ及びＱを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｐ及びＱを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２１ｍＯｓｍ、及び２８７ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0115】
【表14】
【0116】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８７ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２１ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0117】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表１５に示す。この結果、クエン酸ナトリウム水和物を含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0118】
【表15】
【0119】
試験例１０：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（１０）
浸透圧調整液として、表１６に示す組成の水溶液Ｒ及びＳを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｒ及びＳを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表１６に示す組成の水溶液Ｒ及びＳを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｒ及びＳを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0120】
【表16】
【0121】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８６ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２４ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0122】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表１７に示す。この結果、リン酸水素二ナトリウム・十二水和物を含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0123】
【表17】
【0124】
試験例１１：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（１１）
浸透圧調整液として、表１８に示す組成の水溶液Ｔ及びＵを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｔ及びＵを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２５ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表１８に示す組成の水溶液Ｔ及びＵを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｔ及びＵを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２５ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0125】
【表18】
【0126】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８６ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２５ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0127】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表１９に示す。この結果、ブドウ糖を含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0128】
【表19】
【0129】
試験例１２：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（１２）
浸透圧調整液として、表２０に示す組成の水溶液Ｖ及びＷを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｖ及びＷを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２８７ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表２０に示す組成の水溶液Ｖ及びＷを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｖ及びＷを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２８７ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0130】
【表20】
【0131】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅
を求め、等張条件（２８７ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２４ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
を求め、等張条件（２８７ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２４ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0132】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表２１に示す。この結果、クロルフェニラミンマレイン酸塩を含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0133】
【表21】
【0134】
試験例１３：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（１３）
浸透圧調整液として、表２２に示す組成の水溶液Ｘ及びＹを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｘ及びＹを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２５ｍＯｓｍ、及び２８９ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表２２に示す組成の水溶液Ｘ及びＹを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液Ｘ及びＹを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２５ｍＯｓｍ、及び２８９ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0135】
【表22】
【0136】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８９ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２５ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0137】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表２３に示す。この結果、ネオスチグミンメチル硫酸塩を含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0138】
【表23】
【0139】
試験例１４：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（１４）
浸透圧調整液として、表２４に示す組成の水溶液ＡＡ及びＢＢを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液ＡＡ及びＢＢを容量比１：１で混和し、浸透圧が２１９ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表２４に示す組成の水溶液ＡＡ及びＢＢを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液ＡＡ及びＢＢを容量比１：１で混和し、浸透圧が２１９ｍＯｓｍ、及び２８６ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0140】
【表24】
【0141】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅
を求め、等張条件（２８６ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２１９ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
を求め、等張条件（２８６ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２１９ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0142】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表２５に示す。この結果、タウリンを含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0143】
【表25】
【0144】
試験例１５：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（１５）
浸透圧調整液として、表２６に示す組成の水溶液ＣＣ及びＤＤを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液ＣＣ及びＤＤを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２８７ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表２６に示す組成の水溶液ＣＣ及びＤＤを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液ＣＣ及びＤＤを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２８７ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0145】
【表26】
【0146】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２８７ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２４ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0147】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表２７に示す。この結果、Ｌ－アスパラギン酸カリウムを含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0148】
【表27】
【0149】
試験例１６：スクラッチアッセイによる角膜上皮創傷治癒促進作用の検討（１６）
浸透圧調整液として、表２８に示す組成の水溶液ＥＥ及びＦＦを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液ＥＥ及びＦＦを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２９０ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
浸透圧調整液として、表２８に示す組成の水溶液ＥＥ及びＦＦを準備した。前記試験例１で使用した前記増殖培地と浸透圧調整液ＥＥ及びＦＦを容量比１：１で混和し、浸透圧が２２４ｍＯｓｍ、及び２９０ｍＯｓｍに調整された試験培地を調製した。
【0150】
【表28】
【0151】
前記試験培地を使用し、前記試験例１と同条件で試験を行い（ｎ＝１２）、創傷治癒幅を求め、等張条件（２９０ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅に対する低浸透圧条件（２２４ｍＯｓｍ）での創傷治癒幅の比率（％v.s.等張条件）について算出した。
【0152】
各浸透圧条件での創傷治癒幅を表２９に示す。この結果、シアノコバラミンを含んでいても、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧の範囲に設定することにより、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが確認された。
【0153】
【表29】
【0154】
総合考察
前記試験例１～１６の結果から、浸透圧の調整に使用する成分の種類、配合する添加剤や薬理成分の種類等に拘わりなく、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが明らかとなった。
前記試験例１～１６の結果から、浸透圧の調整に使用する成分の種類、配合する添加剤や薬理成分の種類等に拘わりなく、２００～２６０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下で、角膜上皮の創傷治癒が促進されることが明らかとなった。
【0155】
なお、前記試験例１～１６では、それぞれ試験実施日が異なっていることに起因して、各試験時に使用した不死化ヒト角膜上皮細胞の状態の違いにより、同じ浸透圧であっても創傷治癒幅が異なる値を示している場合がある。但し、いずれの試験例でも、等張の場合に比べて、低浸透圧（２００～２６０ｍＯｓｍ）条件下で、創傷治癒幅が増大することが示されており、低浸透圧条件によって角膜上皮の創傷治癒が促進されることが実証されているといえる。
【0156】
試験例１７：in vivoにおける角膜上皮創傷治癒促進作用の検討
以下の試験によって、本発明の眼科用組成物がin vivoにおいて角膜上皮創傷治癒促進作用を示すことを確認できる。
以下の試験によって、本発明の眼科用組成物がin vivoにおいて角膜上皮創傷治癒促進作用を示すことを確認できる。
【0157】
１．試験材料及び試験方法
１－１．使用動物
雄性日本白色種家兎を用いる。実験動物の使用にあたっては、動物の愛護及び管理に関する法律（昭和４８年１０月１日法律第１０５号、最終改正平成２５年６月１２日法律第３８号）等に基づく動物実験倫理委員会の承認を受けて実施する。
１－１．使用動物
雄性日本白色種家兎を用いる。実験動物の使用にあたっては、動物の愛護及び管理に関する法律（昭和４８年１０月１日法律第１０５号、最終改正平成２５年６月１２日法律第３８号）等に基づく動物実験倫理委員会の承認を受けて実施する。
【0158】
１－２．被験点眼液
表３０に示す組成の等張点眼液及び低張点眼液を被験点眼液として準備する。
表３０に示す組成の等張点眼液及び低張点眼液を被験点眼液として準備する。
【表30】
【0159】
１－３．試験方法
１）角膜上皮掻爬
５０ｍｇ/ｍＬケタミン注射液（ケタラールR筋注用５００ｍｇ；第一三共プロファーマ）及び２０ｍｇ/ｍＬセラクタール注射液（セラクタールR２％注射液；バイエル薬品）の３:１混合液を筋肉内注射（１ｍＬ/ｋｇ）することにより動物に全身麻酔を施した後、０．４ｗ/ｖ％オキシブプロカイン塩酸塩点眼液（ベノキシールR点眼液０．４％；参天製薬）を用いて局所麻酔を施す。次いで、眼球を脱臼させた後、直径１０ｍｍのトレパンを用いて角膜中央部の角膜上皮上に直径１０ｍｍの刻印を施し、実体顕微鏡下で、ハンディルーターを用いて刻印した円周内の角膜上皮全層を掻爬する。掻爬後、生理食塩液（大塚生食注；大塚製薬工場）を用いて角膜表面を洗浄し、眼球を眼窩内に復位させて角膜上皮掻爬処置を完了させる。
１）角膜上皮掻爬
５０ｍｇ/ｍＬケタミン注射液（ケタラールR筋注用５００ｍｇ；第一三共プロファーマ）及び２０ｍｇ/ｍＬセラクタール注射液（セラクタールR２％注射液；バイエル薬品）の３:１混合液を筋肉内注射（１ｍＬ/ｋｇ）することにより動物に全身麻酔を施した後、０．４ｗ/ｖ％オキシブプロカイン塩酸塩点眼液（ベノキシールR点眼液０．４％；参天製薬）を用いて局所麻酔を施す。次いで、眼球を脱臼させた後、直径１０ｍｍのトレパンを用いて角膜中央部の角膜上皮上に直径１０ｍｍの刻印を施し、実体顕微鏡下で、ハンディルーターを用いて刻印した円周内の角膜上皮全層を掻爬する。掻爬後、生理食塩液（大塚生食注；大塚製薬工場）を用いて角膜表面を洗浄し、眼球を眼窩内に復位させて角膜上皮掻爬処置を完了させる。
【0160】
２）被験点眼液の投与
被験点眼液を、角膜上皮掻爬当日は１日２回、掻爬１及び２日後には１日４回、掻爬３日後には1日１回、それぞれ２時間以上の間隔をあけて、処置眼に対して１回５０μＬの用量でマイクロピペットを用いて点眼する。
被験点眼液を、角膜上皮掻爬当日は１日２回、掻爬１及び２日後には１日４回、掻爬３日後には1日１回、それぞれ２時間以上の間隔をあけて、処置眼に対して１回５０μＬの用量でマイクロピペットを用いて点眼する。
【0161】
３）角膜上皮欠損部の面積測定
角膜上皮掻爬が完了した時点を試験開始時間（０時間）とし、その４８時間後に角膜上皮欠損面積を定量することにより、角膜上皮の修復の程度を評価する。具体的には、４８時間後の時点で処置眼に０．１ｗ/ｖ％フルオレセインナトリウム（富士フィルム和光純薬株式会社）溶液を１０μＬ点眼し、直ちにスリットランプを用いて動物の前眼部写真を撮影することにより、フルオレセイン染色された角膜上皮欠損領域を記録する。現像された写真をコンピュータにデジタル画像として保存し、画像解析ソフト（Image-ProR Plus ver. 7.0J）を用いてフルオレセイン染色された角膜上皮欠損部の面積を測定し、４８時
間後の残存創傷面積率を算出する。
角膜上皮掻爬が完了した時点を試験開始時間（０時間）とし、その４８時間後に角膜上皮欠損面積を定量することにより、角膜上皮の修復の程度を評価する。具体的には、４８時間後の時点で処置眼に０．１ｗ/ｖ％フルオレセインナトリウム（富士フィルム和光純薬株式会社）溶液を１０μＬ点眼し、直ちにスリットランプを用いて動物の前眼部写真を撮影することにより、フルオレセイン染色された角膜上皮欠損領域を記録する。現像された写真をコンピュータにデジタル画像として保存し、画像解析ソフト（Image-ProR Plus ver. 7.0J）を用いてフルオレセイン染色された角膜上皮欠損部の面積を測定し、４８時
間後の残存創傷面積率を算出する。
【図1】
