知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ ウェスタン ユニバーシティ オブ ヘルス サイエンシズの特許一覧
特開2024-150552緑内障の治療のためのカルパイン－２選択的阻害剤化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024150552
(43)【公開日】2024-10-23
(54)【発明の名称】緑内障の治療のためのカルパイン－２選択的阻害剤化合物
(51)【国際特許分類】
C07C 237/22 20060101AFI20241016BHJP
A61K 31/16 20060101ALI20241016BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20241016BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20241016BHJP
【ＦＩ】
C07C237/22 CSP
A61K31/16
A61P27/02
A61P27/06
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024113455
(22)【出願日】2024-07-16
(62)【分割の表示】P 2021507579の分割
【原出願日】2019-08-13
(31)【優先権主張番号】62/718,088
(32)【優先日】2018-08-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】510023078
【氏名又は名称】ウェスタン ユニバーシティ オブ ヘルス サイエンシズ
(74)【代理人】
【識別番号】100189131
【弁理士】
【氏名又は名称】佐伯 拓郎
(74)【代理人】
【識別番号】100182486
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 正展
(74)【代理人】
【識別番号】100147289
【弁理士】
【氏名又は名称】佐伯 裕子
(72)【発明者】
【氏名】ボードリー， ミシェル
(72)【発明者】
【氏名】ルオ， ユン
(72)【発明者】
【氏名】ピート， ノートン ピー．
(57)【要約】 （修正有）
【課題】急性緑内障又は他の急性眼障害を含む緑内障の治療のための化合物、前記化合物を含む医薬組成物及び前記化合物を用いて緑内障を治療する方法を提供する。
【解決手段】下記化合物が提供される。
【選択図】図１
【解決手段】下記化合物が提供される。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の式（Ｉ）の化合物であって
式中、Ａが、炭素環式アリール又はヘテロアリールであり
Ｒ１が、非水素置換基であり、
ｎが、０（環Ａが非置換の場合）からＡの原子価によって許容される値までの整数であり、
Ｌ１及びＬ２がそれぞれ、１～６個の炭素を有する同じ又は異なる任意に置換されたアルキレンであり、
Ｒ２が、非水素置換基であり、
Ｒ４が、水素又はフルオロなどのハロゲンであり、Ｒ５が、メチルなどのＣ１－６アルキルである、化合物；及びその薬学的に許容される塩。
【化1】
Ｒ１が、非水素置換基であり、
ｎが、０（環Ａが非置換の場合）からＡの原子価によって許容される値までの整数であり、
Ｌ１及びＬ２がそれぞれ、１～６個の炭素を有する同じ又は異なる任意に置換されたアルキレンであり、
Ｒ２が、非水素置換基であり、
Ｒ４が、水素又はフルオロなどのハロゲンであり、Ｒ５が、メチルなどのＣ１－６アルキルである、化合物；及びその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ａがフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
Ｌ１及びＬ２がそれぞれ－ＣＨ２－である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項4】
Ｒ４がフルオロであり、Ｒ５がメチルである、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項5】
以下の構造を有する化合物１７である、化合物。
【化2】
【請求項6】
以下の構造の化合物１５である、化合物。
【化3】
【請求項7】
前記化合物がラセミ体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項8】
前記化合物が光学的に濃縮された混合物として存在する、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項9】
請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項10】
患者の緑内障関連神経損傷を治療するための方法であって、それを必要とする患者に、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又は組成物の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項11】
眼障害に罹患している対象を治療する方法であって、
請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又は組成物の有効量を対象に投与することを含む、方法。
請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又は組成物の有効量を対象に投与することを含む、方法。
【請求項12】
前記眼障害が、網膜神経細胞死に関連している、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記対象が、緑内障に罹患している、請求項１１に記載の方法。
【請求項14】
前記化合物又は組成物が、硝子体内注射、眼内注射、眼内灌流、眼周囲注射及びテノン嚢下注射からなる群から選択される方法を介して投与される、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、内容全体が参照により本明細書に組み入れられている、２０１８年８月１３日に出願された米国仮出願第６２／７１８，０８８号の利益を主張する。
本出願は、内容全体が参照により本明細書に組み入れられている、２０１８年８月１３日に出願された米国仮出願第６２／７１８，０８８号の利益を主張する。
【0002】
一態様において、本発明は、急性緑内障又は他の急性眼障害を含む緑内障の治療のための化合物、前記化合物を含む医薬組成物及び前記化合物を用いて緑内障を治療する方法に関する。
【背景技術】
【0003】
緑内障は視神経の疾患であり、眼圧の上昇はこの神経の損傷に関連している。視神経は網膜から脳に画像を運ぶ。緑内障は視神経細胞に損傷を与え、対象の視界内に盲点を生じる。これらの盲点は通常、視神経へ相当の損傷がすでに発生するまで、対象は気づかない。緑内障の最終段階は、対象の全盲である。
【0004】
脳内の２つの主要なカルパインアイソフォームであるカルパイン－１及びカルパイン－２は、シナプス可塑性及び神経変性の両方で反対の機能を奏する。カルパイン－１はシナプス可塑性の誘導に必要である、カルパイン－２は、誘導イベント後の数分間のシナプス可塑性の範囲を制限する（Ｗａｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｒａｋｅ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｏｆ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ５，３０５１，（２０１４）；同様に、カルパイン－１は神経保護性であり、カルパイン－２は神経変性である（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏ．２７ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，３３（４８）１８８８０－１８８９２）。カルパイン－１／２のこれらの二重の反対の機能、及びこれら２つのカルパインアイソフォームに対する選択的阻害剤の欠如のために、翻訳用途、特に神経変性の予防のためのカルパイン阻害剤の開発がこれまで困難であった。カルパイン－１の活性化は、シナプスＮＭＤＡ受容体刺激に関連していて、これにより長期増強（ＬＴＰ）誘導におけるその必要な役割が説明される。カルパイン－１の活性化は、シナプスのＮＭＤＡ受容体刺激によって誘発される神経保護にも関与している。一方、カルパイン－２はシナプス外ＮＭＤＡ受容体刺激に関連し、神経変性に関与している。カルパイン－２はＢＤＮＦ－＞ＥＲＫ介在リン酸化によっても活性化され、シータバースト刺激（ＴＢＳ）後のＬＴＰの範囲を制限する。したがって、選択的カルパイン－２阻害剤は、神経保護及び認知増強剤の両方となることができる。選択的カルパイン－２阻害剤は、脳卒中、脳震盪、脳内出血、急性緑内障、脊髄損傷を含む神経細胞死に関連するいくつかの急性症状に使用できる。
【0005】
国際公開第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０６０１５７号には、アイソフォーム特異的カルパイン阻害剤、同定の方法及びその使用について記載されている。あるカルパインに対して別のカルパインに対するより高い選択性を示す阻害剤の例が開示されている（Ｌｉ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．Ｎｏｖｅｌ ｐｅｐｔｉｄｙｌ α－ｋｅｔｏ ａｍｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃａｌｐａｉｎｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３９，４０８９－４０９８（１９９６）；Ｌｉ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．Ｐｅｐｔｉｄｅ．α－ｋｅｔｏ ｅｓｔｅｒ，α－ｋｅｔｏ ａｍｉｄｅ，ａｎｄ α－ｋｅｔｏ ａｃｉｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃａｌｐａｉｎｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３６，３４７２－３４８０（１９９３））。しかし、これらの研究によって、カルパイン－１又はカルパイン－２選択的阻害剤の有用性が不明であり、これらの化合物が実際に治療的価値があるかを判断するために、さらなる実験が必要であることが確認された。
【0006】
学習を促進し、神経保護性である、選択的カルパイン－２阻害剤のＺ－Ｌｅｕ－Ａｂｕ－ＣＯＮＨ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ３（３，５－（ＯＭｅ）２（「Ｃ２Ｉ」）は、以前に同定されている（Ｗａｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｒａｋｅ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｏｆ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ５，３０５１，（２０１４）；Ｌｉｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ａ ｃａｌｐａｉｎ－２ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｅａｒｎｉｎｇ＆ｍｅｍｏｒｙ ｂｙ ｐｒｏｌｏｎｇｉｎｇ ＥＲＫ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １０５，４７１－４７７，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍ．２０１６．０２．０２２（２０１６）．Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ．２０１６ Ｓｅｐ；９３：１２１－８も参照のこと。
【0007】
カルパイン－２阻害剤を含む追加のカルパイン阻害剤を有することが所望である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0008】
【特許文献1】国際公開第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０６０１５７号
【非特許文献】
【0009】
【非特許文献1】Ｗａｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｒａｋｅ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｏｆ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ５，３０５１，（２０１４）
【非特許文献2】Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏ．２７ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，３３（４８）１８８８０－１８８９２
【非特許文献3】Ｌｉ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．Ｎｏｖｅｌ ｐｅｐｔｉｄｙｌ α－ｋｅｔｏ ａｍｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃａｌｐａｉｎｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３９，４０８９－４０９８（１９９６）
【非特許文献4】Ｌｉ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．Ｐｅｐｔｉｄｅ．α－ｋｅｔｏ ｅｓｔｅｒ，α－ｋｅｔｏ ａｍｉｄｅ，ａｎｄ α－ｋｅｔｏ ａｃｉｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃａｌｐａｉｎｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３６，３４７２－３４８０（１９９３）
【非特許文献5】Ｗａｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｒａｋｅ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｏｆ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ５，３０５１，（２０１４）
【非特許文献6】Ｌｉｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ａ ｃａｌｐａｉｎ－２ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｅａｒｎｉｎｇ＆ｍｅｍｏｒｙ ｂｙ ｐｒｏｌｏｎｇｉｎｇ ＥＲＫ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １０５，４７１－４７７，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍ．２０１６．０２．０２２（２０１６）
【非特許文献7】Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ．２０１６ Ｓｅｐ；９３：１２１－８
【発明の概要】
【0010】
一態様において、カルパイン－２の選択的阻害剤である化合物が提供される。
【0011】
好ましい化合物は、急性緑内障の治療に有用であり得る。好ましい化合物、網膜神経細胞死に関連する様々な眼障害を治療に有用でもあり得る。
【0012】
ある態様において、以下の式（Ｉ）の化合物であって：
式中、Ａが、炭素環式アリール又はヘテロアリールであり、
Ｒ１が、Ｃ１－６アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１－６アルコキシなどの非水素置換基であり、
ｎが、０（環Ａが非置換の場合）から環の原子価によって許容される値、例えばＡがフェニルである場合、５までの整数であり、
Ｌ１及びＬ２がそれぞれ、１～６個の炭素を有する同じ又は異なる任意に置換されたアルキレン（例えば、－（ＣＨ２）ｎ、式中、ｎは１～６であり、各炭素は、０、１又は２個の非水素置換基を有し得る。）であり、
Ｒ２が、任意に置換された置換されたＣ１－６アルキルなどの非水素置換基であり、
Ｒ４が、水素又はフルオロなどのハロゲンであり、Ｒ５が、メチルなどのＣ１－６アルキルである、化合物；及びその薬学的に許容される塩が提供される。
【化1】
Ｒ１が、Ｃ１－６アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１－６アルコキシなどの非水素置換基であり、
ｎが、０（環Ａが非置換の場合）から環の原子価によって許容される値、例えばＡがフェニルである場合、５までの整数であり、
Ｌ１及びＬ２がそれぞれ、１～６個の炭素を有する同じ又は異なる任意に置換されたアルキレン（例えば、－（ＣＨ２）ｎ、式中、ｎは１～６であり、各炭素は、０、１又は２個の非水素置換基を有し得る。）であり、
Ｒ２が、任意に置換された置換されたＣ１－６アルキルなどの非水素置換基であり、
Ｒ４が、水素又はフルオロなどのハロゲンであり、Ｒ５が、メチルなどのＣ１－６アルキルである、化合物；及びその薬学的に許容される塩が提供される。
【0013】
ある好ましい態様において、Ｒ４は水素又はフルオロであり、Ｒ５はメチルである。特定の態様において、Ｒ４はフルオロであり、Ｒ５はメチルである。別の特定の態様において、Ｒ４は水素であり、Ｒ５はメチルである。
【0014】
好ましい態様において、Ｌ１及びＬ２の一方又は両方は、メチレン（－ＣＨ２－）などの非置換アルキレンである。
【0015】
追加の好ましい態様において、基Ａは、フェニルなどの炭素環式アリール、又は任意に置換されたピリジニル若しくは任意に置換されたピラジニルなどの１つ以上の窒素環員を有するヘテロアリールである。
【0016】
ある態様において、ｎは、０、１、２又は３、例えば０若しくは１又は０であり得る。
【0017】
特に好ましい態様において、以下の化合物１７及び化合物１５が提供される：
前記化合物を含む医薬組成物、及び前記化合物を用いて緑内障を治療する方法も提供される。特定の態様において、例えば開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、正常眼圧緑内障、先天性緑内障、色素性緑内障、偽剥離性緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障を含む緑内障、虹彩角膜内皮症候群、眼の虚血及び／又は網膜の虚血を含む、目又は眼の疾患又は障害に罹患している又は罹患しやすい対象を治療するための方法が提供される。
【化2】
【化3】
【0018】
治療方法は、一般に哺乳動物、特にヒトを含む霊長類などの対象に、本明細書に開示する１つ以上の化合物の有効量を投与することを含む。対象は、治療のために好適に特定及び選択され得る。例えば、対象は、目又は眼の障害、例えば緑内障などの特定の疾患又は障害に罹患しているとして特定され得る。次に、本明細書に開示する１つ以上の化合物が、特定された対象に投与され得る。
【0019】
追加の態様において、本化合物は、様々な糖尿病障害の治療に利用され得る。特定の態様において、ウォルフラム症候群１又はウォルフラム症候群２を含むウォルフラム症候群に罹患している対象が治療され得る。
【0020】
以下でさらに論じるように、我々はインビボ緑内障モデルにおける選択的カルパイン－２阻害剤の眼内注射を実証した。このような化合物は、網膜の神経細胞死に関連する様々な眼の障害の治療に使用され得る。
【0021】
本発明の他の態様を以下に開示する。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【図1】ＩＯＰ上昇後の網膜におけるカルパイン－２の活性化を用量依存的に阻害する、Ｃ２Ｉ（別名ＮＡ１０１）の類似体である、化合物１５（別名ＮＡ１１５）を示す。シャム動物（手術のみ）、ＩＯＰを上昇させ、ビヒクルを眼内注射した（ＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、１μｌ；ＩＯＰ）、ＩＯＰを上昇させ、ＮＡ１１５（４０μＭ、１００μＭ及び２００μＭ）を注射した動物の切片における、ＳＢＤＰ（緑）の免疫組織染色。青色の染色は、上層の網膜神経節細胞による細胞核染色を示す。
【図2】図１に示した画像の数量化を示す。各画像について、平均蛍光強度（ＭＦＩ）が内網状層（図１の２つの細胞体層の間の層）において分析されている。各目の視神経乳頭を切断した３つの凍結切片（厚さ２０μｍ）を収集し、ＳＢＤＰ抗体で染色した。各切片で、共焦点顕微鏡（ＬＳＭ－８８０）の６０倍の対物レンズ下で、３つの画像を取り込んだ。各画像について、ＩＰＬ層におけるＭＦＩ（平均蛍光強度）をＩｍａｇｅＪで測定し、平均した。Ｎ＝２匹／群。
【図3】化合物１５が、眼圧によって誘起される細胞死の増加から網膜神経節から保護することを示す。シャム動物、ＩＯＰを上昇させ、ビヒクルを眼内注射した動物（１０ＰＢＳ中の％ＤＭＳＯ、１μｌ；ＩＯＰ））及びＩＯＰを上昇させ、ＮＡ１１５（２００μＭ）を注射した動物における、ＩＯＰ上昇の３日後の、網膜神経節細胞のマーカーである抗ベータＩＩＩチューブリンを用いて、網膜ホールマウントの末梢領域を染色した、免疫組織染色を示す。スケールバー＝１００ミクロン。
【図4】ＩＯＰ上昇又はシャム手術後の野生型マウスの網膜ホールマウントの末梢領域における抗ベータＩＩＩチューブリン（網膜神経節細胞マーカー）陽性細胞の密度の数値化を示す。ＩＯＰ上昇の２時間後に、ビヒクル（ＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、１μｌ）又はＮＡ１１５（２００μＭ、１μｌ）を注射した。網膜ホールマウントは、手術の３日後に調製した。一元配置分散分析と、後続のボンフェローニ検定。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１。シャムの場合はＮ＝８。ＩＯＰ、ＩＯＰ＋ＮＡ１１５の場合はＮ＝７。
【発明を実施するための形態】
【0023】
論じたように、一態様において、以下の式（Ｉ）：
の化合物が提供され、式中、Ａ、Ｒ１、ｎ、Ｌ１、Ｒ２、Ｌ２、Ｒ４及びＲ５は、上記で定義した通りである。ある態様において、好ましくは、Ｒ１は、非存在（ｎは０であり、Ａ環は非水素置換基を含有しない。）、アルキル、アルコキシ又はハロゲンであり、Ａは、フェニル又はヘテロアリールなどの炭素環式アリールであり、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ非置換アルキレン、特にメチレン（－ＣＨ２－）であり、Ｒ４は、フルオロなどのハロゲン又はアルキルであり、Ｒ５は、メチルなどのアルキルであり、及びその薬学的に許容される塩。
【化4】
【0024】
例示的な好ましいＡ－Ｌ１－基には、以下の：
が含まれる。
上記は、他のＬ１リンカーを有する好ましいＡ基でもある。
【化5】
上記は、他のＬ１リンカーを有する好ましいＡ基でもある。
【0025】
ある好ましい態様において、Ｌ１に最近接するキラル炭素は、（Ｓ）配置を有する。ある態様において、Ｌ１に最近接するキラル炭素は、（Ｒ）配置を有する。
【0026】
ある好ましい態様において、Ｌ２に最近接するキラル炭素は、（Ｓ）配置を有する。ある態様において、Ｌ２に最近接するキラル炭素は、（Ｒ）配置を有する。
【0027】
本発明の化合物は、ラセミ混合物又は光学的に濃縮された混合物として利用され得る。
【0028】
本発明の特に好ましい化合物は、以下に示すように、ＮＡ１１５、別名化合物１５、及びＮＡ１１７、別名化合物１７である。
これらの化合物は、カルパイン－２選択的阻害剤であることができる。本明細書で言う「カルパイン－２選択的阻害剤」又は「選択的カルパイン－２阻害剤」は、カルパイン－１に対するその阻害定数（Ｋｉ）よりも低い、カルパイン－２に対するＫｉを有する化合物である。例えば、カルパイン－２選択的阻害剤は、カルパイン－２に対するＫｉが、カルパイン－１に対するＫｉよりも１０分の１～１００分の１である化合物である。カルパイン－１及びカルパイン－２の活性に対するＮＡ１１５のＩＣ５０値を測定した（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。ＩＣ５０カルパイン－１／ＩＣ５０カルパイン－２の比として測定した、カルパイン－２に対するＮＡ１１５の選択性は３１．７であった。ＮＡ１１７の選択性は２４．１であった。
【化6】
【化7】
【0029】
本発明の医薬組成物は、ＮＡ１１５及びＮＡ１１７並びに薬学的に許容される賦形剤を含む。本発明の医薬組成物に使用される賦形剤は、安全であり、ＮＡ１１５及びＮＡ１１７の有効量の所望の投与経路に適切な送達を提供する。
【0030】
本発明の化合物は、不斉炭素原子（光学中心又はキラル中心）を有する。絶対立体化学の観点から、（Ｒ）－又は（Ｓ）－異性体として定義され得るエナンチオマー、ラセミ体、立体異性形態及び個々の異性体は、本発明の範囲内に含まれる。本発明は、上で論じたように、ラセミ形態及び光学的に純粋な形態の化合物を含むものである。光学活性（Ｒ）－及び（Ｓ）－異性体は、キラルシントン又はキラル試薬を使用して調製され得る、又は従来の技術を使用して分割され得る。
【0031】
別途記載しない限り、本明細書に示す構造は、構造のすべての立体化学的形態、即ち各不斉中心のＲ配置及びＳ配置も含むものである。したがって、本化合物の単一の立体化学異性体並びにエナンチオマー混合物及びジアステレオマー混合物は、本発明の範囲内である。
【0032】
「アルキル」は、１～１２個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ１２アルキル）、１～８個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ８アルキル）又は１～６個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ６アルキル）を有し、単結合によって分子の残部に結合している、炭素原子及び水素原子のみからなる飽和、直鎖又は分枝炭化水素鎖ラジカルを示す。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（イソプロピル）、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）、３－メチルヘキシル、２－メチルヘキシルなどが挙げられる。
【0033】
「アルキル」又は「アルキレン鎖」は、分子の残部をラジカル基に結合する、それぞれ炭素及び水素のみからなる直鎖又は分枝二価炭化水素（アルキル）鎖を示す。アルキレンは、１～１２個の炭素原子を有することができ、例えばメチレン、エチレン、プロピレン、ｎ－ブチレンなどである。アルキレン鎖は、単結合又は二重結合によって分子の残部に結合している。分子の残部へのアルキレン鎖の結合点は、鎖内の１個の炭素又は任意の２個の炭素を介することができる。「任意に置換されたアルキレン」は、アルキレン又は置換アルキレンを示す。
【0034】
「アルコキシ」は、式－ＯＲａのラジカルを示し、Ｒａは、上で定義したような示した数の炭素原子を有するアルキルである。アルコキシ基の例としては、－Ｏ－メチル（メトキシ）、－Ｏ－エチル（エトキシ）、－Ｏ－プロピル（プロポキシ）、－Ｏ－イソプロピル（イソプロポキシ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【0035】
「炭素環式アリール」は、水素、６～１８個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含むが、芳香環にヘテロ（Ｎ、Ｏ又はＳ）環員を含まない炭化水素環系ラジカルを示す。
炭素環式アリールの例は、水素及び６～９個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカル、水素及び９～１２個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカル、水素及び１２～１５個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカル又は水素及び１５～１８個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカルである。本発明の目的のために、炭素環式アリールラジカルは、単環式、二環式、三環式又は四環式環系であり得て、この環系は縮合環系又は架橋環系を含み得る。炭素環式アリールラジカルとしては、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ－インダセン、ｓ－インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレン、フェナントレン、プレアデン、ピレン及びトリフェニレンに由来する炭素環式アリールラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。「任意に置換された炭素環式アリール」は、非置換炭素環式アリール基又は置換炭素環式アリール基を示す。
炭素環式アリールの例は、水素及び６～９個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカル、水素及び９～１２個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカル、水素及び１２～１５個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカル又は水素及び１５～１８個の炭素原子及び少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカルである。本発明の目的のために、炭素環式アリールラジカルは、単環式、二環式、三環式又は四環式環系であり得て、この環系は縮合環系又は架橋環系を含み得る。炭素環式アリールラジカルとしては、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ－インダセン、ｓ－インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレン、フェナントレン、プレアデン、ピレン及びトリフェニレンに由来する炭素環式アリールラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。「任意に置換された炭素環式アリール」は、非置換炭素環式アリール基又は置換炭素環式アリール基を示す。
【0036】
「ヘテロアリール」は、水素原子、１～１３個の炭素原子、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１～６個のヘテロ原子並びに少なくとも１個の芳香環を含む５～１４員環系ラジカルを示す。本発明の目的のために、ヘテロアリールラジカルは、少なくとも１個のヘテロ原子、少なくとも２個のヘテロ原子、少なくとも３個のヘテロ原子、少なくとも４個のヘテロ原子、少なくとも５個のヘテロ原子若しくは少なくとも６個のヘテロ原子を含む、安定な５～１２員環、安定な５～１０員環、安定な５～９員環、安定な５～８員環、安定な５～７員環又は安定な６員環であり得る。ヘテロアリールは、単環式、二環式、三環式又は四環式の環系であり得て、環系には、縮合又は架橋環系が含まれ得る。ヘテロアリールラジカル中の窒素、炭素又は硫黄原子は、任意に酸化され得る。窒素原子は、任意に四級化され得る。ヘテロ原子は、ヘテロアリール中の少なくとも１個の環が芳香族であるという条件で、芳香族又は非芳香環の環員であり得る。例としては、アゼピニル、アクリジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾインドリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、１，４－ベンゾジオキサニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾチエニル（ベンゾチオフェニル）、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シノリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、フラニル、フラノニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、イソキノリル、インドリジニル、イソキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２－オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル、１－オキシドピリジニル、１－オキシドピリミジニル、１－オキシドピラジニル、１－オキシドピリダジニル、１－フェニル－１Ｈ－ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、キヌクリジニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニル及びチオフェニル（即ちチエニル）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0037】
「任意に置換された」様々な化合物及び置換基は、１つ以上の利用可能な位置で、例えばハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１－４アルキルなどのアルキル、Ｃ２－８アルケニルなどのアルケニル、Ｃ１－６アルコキシなどのアルコキシ、Ｃ１－８アルキルアミノなどのアルキルアミノ、フェニル、ナフタ、アントラセニルなどの炭素環式アリール、ヘテロアリールなどによって好適に置換され得る。
【0038】
上記のように、本発明の化合物は、医薬剤形として製剤され、治療を必要とする対象、例えばヒト患者などの哺乳動物に、選択された投与経路に適した様々な形態で投与することができる。本発明の組成物は、局所的に及び眼内注射、眼内灌流、眼周囲注射又は球後（テノン嚢下）注射を含む、様々な異なる方法で投与され得る。本発明の化合物は、当業者に既知の製剤技術に従って、様々な種類の眼科用組成物に含有され得る。例えば、化合物は、局所的、硝子体内又は前房内使用に適した液剤、懸濁剤及び他の剤形に含まれ得る。
【0039】
本発明の化合物の溶液は、シクロデキストリンを含む非毒性界面活性剤と任意に混合された、水又は生理学的に許容される緩衝液中で調製することができる。分散剤は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン及びその混合物中、並びに油中で調製することもできる。通常の保管及び使用条件下では、これらの調製物は微生物の増殖を防止する保存料を含有することができる。
【0040】
注射又は輸液に好適な医薬剤形として、無菌の注射可能又は輸液可能な液剤又は分散剤の即時調製に適した本発明の化合物を含む、無菌の水性液剤又は分散剤又は無菌の粉剤を挙げることができる。すべての場合において、最終剤形は、製造及び保管条件下で無菌で流動性があり、安定している必要がある。液体担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、無毒のグリセリルエステル及びその好適な混合物を含む、溶媒又は液体分散媒であることができる。微生物の作用は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって防止することができる。多くの場合、等張剤、例えば糖、緩衝剤又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。
注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物で使用することによってもたらすことができる。
注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物で使用することによってもたらすことができる。
【0041】
無菌の注射可能な液剤は、本発明の化合物を必要な量で適切な溶媒に、必要に応じて上に列挙した他の様々な成分と共に包含させて、続いてフィルタ滅菌することによって調製される。無菌の注射可能な液剤を調製するための無菌粉剤の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥技術であり、これにより有効成分並びに先に滅菌濾過された液剤中に存在する任意の追加の所望の成分の粉剤が得られる。
【0042】
本発明の化合物の有用な投与量は、それらのインビトロ活性、及び動物モデルにおけるインビボ活性を比較することによって決定することができる。マウス及び他の動物における有効な投与量をヒトに外挿する方法は、当分野で既知である。例えば米国特許第４，９３８，９４９号を参照のこと。治療での使用に必要な本発明の化合物の量は、特定の治療薬、存在する場合には、治療薬を含む組成物、投与経路、治療される状態の性質並びに患者の年齢及び状態によって変わり、最終的には主治医又は臨床医の裁量である。
【0043】
治療的に有効な用量は、当業者に既知の従来の手順によって経験的に決定することができる。例えばＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，ｅｄｓ．，Ｍａｃｍｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。例えば有効用量は、細胞培養アッセイ又は好適な動物モデルのどちらかで最初に概算することができる。動物モデルを使用して、適切な濃度範囲及び投与経路も決定され得る。そのような情報を使用して、次にヒトでの投与に有用な用量及び経路を決定することができる。治療用量は、同等の治療薬の投与量からの類推によって選択することもできる。
【0044】
特定の投与様式及び投薬レジメンは、症例の詳細事項（例えば対象、疾患、関与する病状及び治療が予防的であるか否か）を考慮して、主治医によって選択される。治療は、数日から数ヶ月、又は数年の期間にわたる化合物の１日又は複数日用量を含み得る。
【0045】
実施例
実施例１：化合物ＮＡ１１５及びＮＡ１１７の中間体の合成
実施例１：化合物ＮＡ１１５及びＮＡ１１７の中間体の合成
【0046】
ステップ１：ｔｅｒｔ－ブチル（１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメートの調製
２－アミノブタン－１－オール（１ｇ）をクロロホルム（５０ｍＬ）に溶解させ、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２．５ｇ）及び水酸化ナトリウム溶液（２０ｍＬ、２Ｍ）で処理した。室温で一晩撹拌した後、溶媒を除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル０～５０％）で精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメート（１．８３ｇ、収率８６％）を得た。
２－アミノブタン－１－オール（１ｇ）をクロロホルム（５０ｍＬ）に溶解させ、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２．５ｇ）及び水酸化ナトリウム溶液（２０ｍＬ、２Ｍ）で処理した。室温で一晩撹拌した後、溶媒を除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル０～５０％）で精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメート（１．８３ｇ、収率８６％）を得た。
【0047】
ステップ２：ｔｅｒｔ－ブチル（１－オキソブタン－２－イル）カルバメートの調製
ＤＭＳＯ（２．３４ｇ、３当量）を（ＣｌＣＯ）２（１．９ｇ、１．５当量）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に－７８℃にて添加した。１０分間撹拌した後、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメート（１．８３８ｇ）を滴加し、得られた混合物を３０分間撹拌した。次にＥｔ３Ｎ（４．０４ｇ、４当量）を添加して、反応混合物を室温まで加温し、さらに３０分間撹拌した。次に水（２０ｍＬ）を添加し、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥させ、真空で濃縮して残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル０～２０％）で精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（１．５７％ｇ、収率８６％）を得た。
ＤＭＳＯ（２．３４ｇ、３当量）を（ＣｌＣＯ）２（１．９ｇ、１．５当量）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に－７８℃にて添加した。１０分間撹拌した後、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメート（１．８３８ｇ）を滴加し、得られた混合物を３０分間撹拌した。次にＥｔ３Ｎ（４．０４ｇ、４当量）を添加して、反応混合物を室温まで加温し、さらに３０分間撹拌した。次に水（２０ｍＬ）を添加し、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥させ、真空で濃縮して残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル０～２０％）で精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（１．５７％ｇ、収率８６％）を得た。
【0048】
ステップ３：ｔｅｒｔ－ブチル（１－シアノ－１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメートの調製
ｔｅｒｔ－ブチル（１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（１８．９ｇ）をジオキサン（４００ｍＬ）に溶解させ、０℃にて１０分間冷却し、このときに水（２００ｍＬ）中のＮａＨＳ０３（５２．６４ｇ）を添加した。反応混合物を０℃にて１０分間撹拌し、水（２００ｍＬ）中のＫＣＮ（２６．２２ｇ）を添加し、溶液を一晩撹拌した。
ｔｅｒｔ－ブチル（１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（１８．９ｇ）をジオキサン（４００ｍＬ）に溶解させ、０℃にて１０分間冷却し、このときに水（２００ｍＬ）中のＮａＨＳ０３（５２．６４ｇ）を添加した。反応混合物を０℃にて１０分間撹拌し、水（２００ｍＬ）中のＫＣＮ（２６．２２ｇ）を添加し、溶液を一晩撹拌した。
【0049】
反応混合物は、酢酸エチル（２０００ｍＬ）で希釈し、有機層を飽和重炭酸ナトリウムで３回に分けて洗浄することにより後処理を行った。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、ｔｅｒｔ－ブチル（１－シアノ－１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメート（２４．６２ｇ）を得た。
【0050】
ステップ４：メチル３－アミノ－２－ヒドロキシペンタノエートの調製
ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（約５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（１－シアノ－１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメート（２４．６２ｇ）（メタノール４００及びＡｃＣｌ １８０ｍＬから調製）を２５時間、加熱下で還流させた。溶液を蒸発させ、粗メチル３－アミノ－２－ヒドロキシペンタノエートをさらに精製せずに使用した。
ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（約５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（１－シアノ－１－ヒドロキシブタン－２－イル）カルバメート（２４．６２ｇ）（メタノール４００及びＡｃＣｌ １８０ｍＬから調製）を２５時間、加熱下で還流させた。溶液を蒸発させ、粗メチル３－アミノ－２－ヒドロキシペンタノエートをさらに精製せずに使用した。
【0051】
ステップ５：メチル３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタノエートの調製
粗メチル３－アミノ－２－ヒドロキシペンタノエートＨＣｌ塩（理論値約５．２９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（２ｍＬ）、ＨＡＴＵ（２．２ｇ）、続いてＢＯＣ－ロイシン水和物（１．３１８ｇ）で処理して、混合物を室温にて一晩撹拌した。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、０～３０％）によって精製して、４つのジアステレオマーの粗混合物を得た。
粗メチル３－アミノ－２－ヒドロキシペンタノエートＨＣｌ塩（理論値約５．２９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（２ｍＬ）、ＨＡＴＵ（２．２ｇ）、続いてＢＯＣ－ロイシン水和物（１．３１８ｇ）で処理して、混合物を室温にて一晩撹拌した。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、０～３０％）によって精製して、４つのジアステレオマーの粗混合物を得た。
【0052】
ステップ６：３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタン酸（中間体Ａ）の調製
メチル３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタノエート（２．６３２ｇ）を１Ｍ ＮａＯＨ（８ｍｌ）及びＴＨＦ（８ｍｌ）の混合物に一晩溶解させ、このとき、溶液を酢酸エチルと希ＨＣＬとで分配し、酢酸エチル（２×）で抽出して、合わせた抽出物を乾燥させ、濾過して、蒸発乾固させて、粗３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタン酸（２．２５ｇ、収率約８９％）を得た。
メチル３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタノエート（２．６３２ｇ）を１Ｍ ＮａＯＨ（８ｍｌ）及びＴＨＦ（８ｍｌ）の混合物に一晩溶解させ、このとき、溶液を酢酸エチルと希ＨＣＬとで分配し、酢酸エチル（２×）で抽出して、合わせた抽出物を乾燥させ、濾過して、蒸発乾固させて、粗３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタン酸（２．２５ｇ、収率約８９％）を得た。
【化8】
【0053】
（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミドの調製：中間体２．Ｂ
３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタン酸（２．２４ｇ、６．４７ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ（５０ｍＬ）中の３－メトキシベンジルアミン（０．９７６ｇ、７．１２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．９５ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．２５５ｇ、９．７１ｍｍｏｌ）で処理して、室温にて一晩撹拌した。減圧下で溶媒を除去した後、生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン－酢酸エチル、０～１００％により精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｓ）－１－（（１－（（３－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオソペンタン－３－イル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバメートを得て、これをジオキサン（５０ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌに溶解させ、室温にて３０分間撹拌した。溶媒を除去した後、真空乾燥させて、純粋な（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミドを塩酸塩（２．１５ｇ、収率８３％）として得た。
３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタン酸（２．２４ｇ、６．４７ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ（５０ｍＬ）中の３－メトキシベンジルアミン（０．９７６ｇ、７．１２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．９５ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．２５５ｇ、９．７１ｍｍｏｌ）で処理して、室温にて一晩撹拌した。減圧下で溶媒を除去した後、生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン－酢酸エチル、０～１００％により精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｓ）－１－（（１－（（３－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオソペンタン－３－イル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバメートを得て、これをジオキサン（５０ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌに溶解させ、室温にて３０分間撹拌した。溶媒を除去した後、真空乾燥させて、純粋な（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミドを塩酸塩（２．１５ｇ、収率８３％）として得た。
【化9】
【0054】
（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）アミノ）－２－ヒドロキシ－１－オキソペンタン－３－ｌ）－４－メチルペンタンアミドの調製：中間体３．Ｂ
３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタン酸（２．００ｇ、５．７８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（４０ｍＬ）中の３－メトキシ－５－フルオロベンジルアミン（０．９８６ｇ、６．３６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．６４ｇ、６．９４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．１２ｇ、８．６７ｍｍｏｌ）で処理して、室温にて一晩撹拌した。減圧下で溶媒を除去した後、生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン－酢酸エチル、０～１００％により精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｓ）－１－（（１－（（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）アミノ）－２－ヒドロキシ－１－オキソペンタン－３－イル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバメート得て、これをジオキサン（５０ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌに溶解させ、室温にて３０分間撹拌した。溶媒を除去した後、真空乾燥させて、純粋な（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）アミノ）－２－ヒドロキシ－１－オキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミド（２．３４ｇ、９６％）を塩酸塩として得た。
実施例２：ＮＡ１１７の合成
３－（（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－２－ヒドロキシペンタン酸（２．００ｇ、５．７８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（４０ｍＬ）中の３－メトキシ－５－フルオロベンジルアミン（０．９８６ｇ、６．３６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．６４ｇ、６．９４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．１２ｇ、８．６７ｍｍｏｌ）で処理して、室温にて一晩撹拌した。減圧下で溶媒を除去した後、生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン－酢酸エチル、０～１００％により精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（（２Ｓ）－１－（（１－（（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）アミノ）－２－ヒドロキシ－１－オキソペンタン－３－イル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバメート得て、これをジオキサン（５０ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌに溶解させ、室温にて３０分間撹拌した。溶媒を除去した後、真空乾燥させて、純粋な（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）アミノ）－２－ヒドロキシ－１－オキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミド（２．３４ｇ、９６％）を塩酸塩として得た。
【化10】
【0055】
Ｎ－（３－メトキシベンジル）－３－（（Ｓ）－４－メチル－２－（３－フェニルプロパンアミド）ペンタンアミド）－２－オキソペンタンアミド（化合物２．３）（化合物１７）の調製
（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミド塩酸塩（中間体２．Ｂ）（５０ｍｇ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解／懸濁させ、３－フェニルプロパン酸（１．１当量）、ＨＡＴＵ（１．２当量）及びＤＩＰＥＡ（２．５当量）で処理して、ＬＣＭＳ分析が反応の完了を示すまで、室温にて撹拌した。溶媒を蒸発させ、続いて水と酢酸エチルとで分配して残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、対応するアミドを得た。この物質（１当量）をジクロロメタン（２５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解させ、室温にて撹拌しながら、デス・マーチン・ペルヨージナン（ＤＭＰ）（２当量）によって２時間処理し、このとき反応混合物を飽和重炭酸塩溶液と酢酸エチルとで分配した。
水層を酢酸エチルでさらに２回抽出し、合わせた有機層を水で洗浄して、乾燥濾過し、濃縮乾固させた。次に、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、純粋なＮ－（３－メトキシベンジル）－３－（（Ｓ）－４－メチル－２－（３－フェニルプロパンアミド）－ペンタン－アミド）－２－オキソペンタミド（２２．４ｍｇ）を得た。
実施例３：ＮＡ１１５の合成
（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミド塩酸塩（中間体２．Ｂ）（５０ｍｇ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解／懸濁させ、３－フェニルプロパン酸（１．１当量）、ＨＡＴＵ（１．２当量）及びＤＩＰＥＡ（２．５当量）で処理して、ＬＣＭＳ分析が反応の完了を示すまで、室温にて撹拌した。溶媒を蒸発させ、続いて水と酢酸エチルとで分配して残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、対応するアミドを得た。この物質（１当量）をジクロロメタン（２５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解させ、室温にて撹拌しながら、デス・マーチン・ペルヨージナン（ＤＭＰ）（２当量）によって２時間処理し、このとき反応混合物を飽和重炭酸塩溶液と酢酸エチルとで分配した。
水層を酢酸エチルでさらに２回抽出し、合わせた有機層を水で洗浄して、乾燥濾過し、濃縮乾固させた。次に、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、純粋なＮ－（３－メトキシベンジル）－３－（（Ｓ）－４－メチル－２－（３－フェニルプロパンアミド）－ペンタン－アミド）－２－オキソペンタミド（２２．４ｍｇ）を得た。
【化11】
【0056】
Ｎ－（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）－３－（（Ｓ）－４－メチル－２－（３－フェニルプロパンアミド）－ペンタンアミド）－２－オキソペンタンアミド（化合物３．３）（化合物１５）の調製
（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミド塩酸塩（中間体３．Ｂ）（５０ｍｇ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解／懸濁させて、３－フェニルプロパン酸（１．１当量）、ＨＡＴＵ（１．２当量）及びＤＩＰＥＡ（２．５当量）で処理し、ＬＣＭＳ分析で反応の完了が示されるまで室温にて撹拌した。溶媒を蒸発させ、続いて水と酢酸エチルとで分配して残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、対応するアミドを得た。この物質（１当量）をジクロロメタン（２５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解させ、室温にて撹拌しながら、デス・マーチン・ペルヨージナン（ＤＭＰ）（２当量）によって２時間処理し、このとき反応混合物を飽和重炭酸塩溶液と酢酸エチルとで分配した。水層を酢酸エチルでさらに２回抽出し、合わせた有機層を水で洗浄して、乾燥濾過し、濃縮乾固させた。次に、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、純粋なＮ－（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）－３－（（Ｓ）－４－メチル－２－（３－フェニルプロパンアミド）－ペンタンアミド）－２－オキソペンタンアミド（６．５ｍｇ）を得た。
（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）アミノ）－１，２－ジオキソペンタン－３－イル）－４－メチルペンタンアミド塩酸塩（中間体３．Ｂ）（５０ｍｇ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解／懸濁させて、３－フェニルプロパン酸（１．１当量）、ＨＡＴＵ（１．２当量）及びＤＩＰＥＡ（２．５当量）で処理し、ＬＣＭＳ分析で反応の完了が示されるまで室温にて撹拌した。溶媒を蒸発させ、続いて水と酢酸エチルとで分配して残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、対応するアミドを得た。この物質（１当量）をジクロロメタン（２５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解させ、室温にて撹拌しながら、デス・マーチン・ペルヨージナン（ＤＭＰ）（２当量）によって２時間処理し、このとき反応混合物を飽和重炭酸塩溶液と酢酸エチルとで分配した。水層を酢酸エチルでさらに２回抽出し、合わせた有機層を水で洗浄して、乾燥濾過し、濃縮乾固させた。次に、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、純粋なＮ－（３－フルオロ－５－メトキシベンジル）－３－（（Ｓ）－４－メチル－２－（３－フェニルプロパンアミド）－ペンタンアミド）－２－オキソペンタンアミド（６．５ｍｇ）を得た。
【化12】
【0057】
実施例４：マウスにおける化合物ＮＡ１１５及びＮＡ１１７の試験
【0058】
Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１６）で以前に報告された急性緑内障のモデルを使用した。このモデルでは、麻酔下のマウスで眼圧（ＩＯＰ）を１１０ｍｍＨｇまで１時間にわたって上昇させた。２時間後、マウスに各種濃度のカルパイン－２阻害剤の眼内注射を投与し、そのホームケージに戻した。マウスを４時間後に犠死させて、スペクトリンのカルパイン介在切断によって選択的に生成されたスペクトリン分解産物（ＳＢＤＰ）を染色する免疫組織染色を使用して、カルパイン活性を判定した。以前の研究（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．、２０１６）は、この時点で、カルパイン活性がカルパイン－２活性を表すことを示している。他の群のマウスをＩＯＰの上昇の３日後に犠死させて、網膜神経節細胞の数を分析した。この分析は、網膜神経節細胞マーカーであるベータＩＩＩチューブリンを染色する、網膜ホールマウントにおける免疫組織染色によって行った。結果を図１－５に示す。
実施例５：異性体の分離
実施例５：異性体の分離
【0059】
ＮＡ１１５には２個のキラル中心がある。キラル中心１がＳ－Ｓ型（化合物１５（Ｓ）、即ちＮＡ１１５Ａ）であり、キラル中心２がＳ型であるＮＡ１１５Ａを、Ｓ－Ｒ型（化合物１５（Ｒ）、即ちＮＡ１１５Ｂ）から、ジアステレオマーを分離する周知の方法を使用して分離した。
【化13】
【化14】
【化15】
【0060】
例示的な手順及びその結果を含む分離報告を、図６Ａ～６Ｂに示す。
【0061】
ＮＡ１１５Ａ（化合物１５（上記のＳ）は、コハク酸－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－ＡＭＣ及びヒトカルパイン－１又はカルパイン－２（Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ，１９８４）を含むインビトロ混合物に様々な濃度で導入して、各カルパインについて蛍光の損失の動態を測定した。カルパイン－１及びカルパイン－２のＮＡ１１５、ＮＡ１１５Ａ及びＮＡ１１５ＢのＫｉを以下の表１－２に示す。カルパイン－１又はカルパイン－２に対するＮＡ１１５の効力は、ＮＡ１１５Ａのみに存すると思われる。
【0062】
【表1】
【0063】
【表2】
実施例６：ブタ硝子体液におけるＮＡ１１５のエピマー化
【0064】
ＮＡ１１５Ａ又はＮＡ１１５Ｂ（２μＭ）を、ブタ硝子体液と共に３５℃にて様々な時間にわたってインキュベートした。次にアリコートをカルパイン－２アッセイにて試験した。結果は、ＮＡ１１５Ｂの阻害効果の増大を伴う、ＮＡ１１５Ａの阻害効果の急速な減少があることを示す。これらの結果は、ＮＡ１１５Ａ／Ｂの急速なエピマー化があることを示唆している（図７Ａ及び７Ｂ）。これらの結果をマウス血漿で確認した。さらに、２μＭのインキュベーション中のＮＡ１１５Ａ又はＮＡ１１５Ｂの最終濃度での阻害結果を図８Ａ及び８Ｂに示す。これらの結果は、カルパイン－２（２００ ｎＭ）に対して、ＩＣ５０により近い、より低い濃度のＮＡ１１５Ａ及びＮＡ１１５Ｂで再現された。（図９Ａ－９Ｄ）。
【0065】
これらの結果は、Ｓ－Ｓ及びＳ－Ｒジアステレオアイソマーの急速なエピマー化と、阻害活性の損失を生じる、より低速の分子の代謝を示している。このことは、マウス血漿中のラセミ混合物の安定性を測定することによってさらに調査した。
例７：ＮＡ１１５の血漿安定性（添付のＰｏｗｅｒｐｏｉｎｔファイル：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ＮＡ１１５．ｐｐｔｘ）
例７：ＮＡ１１５の血漿安定性（添付のＰｏｗｅｒｐｏｉｎｔファイル：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ＮＡ１１５．ｐｐｔｘ）
【0066】
ＮＡ１１５の安定性を、２－ヒドロキシプロピル）－ベータ－シクロデキストリン又はカプチゾールに可溶化させたＮＡ１１５で評価した。これらの結果によって、分子がマウス血漿中において、溶媒に応じて９～１５時間の半減期で分解されることが確認される。
【0067】
さらに、ベータ－シクロデキストリン中の１ｍＭ ＮＡ１１５を、新たに調製したマウス血漿で５倍（血漿中２００μＭ ＮＡ１１５）に希釈した。混合物を３７度にてインキュベートした。示した時点にて、混合物１μｌを５ｍＭ Ｃａ２＋、２００μＭ Ｓｕｃ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－ＡＭＣ基質及び１００ｎＭカルパイン－２を含有するカルパインアッセイ溶液９９ｕｌに添加した。加水分解速度をプレートリーダーで監視した。対照として、血漿１μｌのみをカルパインアッセイに供し、その加水分解速度をカルパイン活性１００％として設定した。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図9D】
【手続補正書】
【提出日】2024-08-15
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の式（Ｉ）の化合物であって
式中、Ａが、炭素環式アリール又はヘテロアリールであり
Ｒ１が、非水素置換基であり、
ｎが、０（環Ａが非置換の場合）からＡの原子価によって許容される値までの整数であり、
Ｌ１及びＬ２がそれぞれ、１～６個の炭素を有する同じ又は異なる任意に置換されたアルキレンであり、
Ｒ２が、非水素置換基であり、
Ｒ４が、水素又はフルオロなどのハロゲンであり、Ｒ５が、メチルなどのＣ１－６アルキルである、化合物；及びその薬学的に許容される塩。
【化1】
Ｒ１が、非水素置換基であり、
ｎが、０（環Ａが非置換の場合）からＡの原子価によって許容される値までの整数であり、
Ｌ１及びＬ２がそれぞれ、１～６個の炭素を有する同じ又は異なる任意に置換されたアルキレンであり、
Ｒ２が、非水素置換基であり、
Ｒ４が、水素又はフルオロなどのハロゲンであり、Ｒ５が、メチルなどのＣ１－６アルキルである、化合物；及びその薬学的に許容される塩。