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特開2024-153823機能および抑制性環境に対する抵抗性を増強するための免疫細胞のマルチプレックスゲノム編集
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024153823
(43)【公開日】2024-10-29
(54)【発明の名称】機能および抑制性環境に対する抵抗性を増強するための免疫細胞のマルチプレックスゲノム編集
(51)【国際特許分類】
C12N 15/113 20100101AFI20241022BHJP
C12N 15/09 20060101ALI20241022BHJP
【ＦＩ】
C12N15/113 140Z
C12N15/113 ZNA
C12N15/09 110
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024124210
(22)【出願日】2024-07-31
(62)【分割の表示】P 2021530101の分割
【原出願日】2019-11-27
(31)【優先権主張番号】62/772,406
(32)【優先日】2018-11-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】500039463
【氏名又は名称】ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ，ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ
【住所又は居所原語表記】２１０ Ｗｅｓｔ ７ｔｈ Ｓｔｒｅｅｔ Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ ７８７０１ Ｕ．Ｓ．Ａ．
(74)【代理人】
【識別番号】110000729
【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】バサール、ラフェット
(72)【発明者】
【氏名】シュポール、エリザベス
(72)【発明者】
【氏名】レズヴァニ、ケイティ
(57)【要約】
【課題】操作された免疫細胞を特に含む癌免疫療法に関する組成物および方法を提供する
。
【解決手段】複数の遺伝子が破壊されている免疫細胞を作製するための方法が本明細書中
に提供される。免疫細胞の遺伝子の遺伝子座にキメラ抗原レセプターを挿入するための方
法がさらに提供される。
【選択図】図１
。
【解決手段】複数の遺伝子が破壊されている免疫細胞を作製するための方法が本明細書中
に提供される。免疫細胞の遺伝子の遺伝子座にキメラ抗原レセプターを挿入するための方
法がさらに提供される。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
免疫細胞の少なくとも２つの遺伝子を破壊するためのインビトロ方法であって、前記少なくとも２つの遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５およびＣＤ７からなる群より選択される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１８年１１月２８日出願の米国仮特許出願第６２／７７２，４０６号に対
する優先権を主張する。この仮出願は、その全体が参照により本明細書中に援用される。
本願は、２０１８年１１月２８日出願の米国仮特許出願第６２／７７２，４０６号に対
する優先権を主張する。この仮出願は、その全体が参照により本明細書中に援用される。
【0002】
本開示は、概して、免疫学、細胞生物学、分子生物学および医学の分野に関する。より
詳細には、本発明は、免疫細胞のマルチプレックス編集およびその使用方法に関する。
詳細には、本発明は、免疫細胞のマルチプレックス編集およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【0003】
細胞免疫療法は、癌を処置できる大きな可能性を秘めている。しかしながら、ほとんど
の免疫療法のアプローチが、単独で適用されたとき、悪性腫瘍、特に固形腫瘍の大部分に
対する価値は限定的である。この成功が限定的である理由としては、腫瘍細胞の表面上で
の腫瘍抗原の発現が低く、免疫系による腫瘍細胞の検出が低下していること、免疫細胞の
不活性化を誘導する阻害性レセプター（例えば、ＰＤ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴまたは
ＣＩＳＨ）に対するリガンドが発現していること；および免疫応答を抑制し、腫瘍細胞の
増殖および生存を促進する物質（例えば、トランスフォーミング成長因子－β（ＴＧＦβ
）およびアデノシン）を放出する細胞（例えば、制御性Ｔ細胞または骨髄系由来サプレッ
サー細胞）が微小環境において誘導されることが挙げられる。このように、細胞免疫療法
の方法の改善に対するニーズが未だ対処されていない。
の免疫療法のアプローチが、単独で適用されたとき、悪性腫瘍、特に固形腫瘍の大部分に
対する価値は限定的である。この成功が限定的である理由としては、腫瘍細胞の表面上で
の腫瘍抗原の発現が低く、免疫系による腫瘍細胞の検出が低下していること、免疫細胞の
不活性化を誘導する阻害性レセプター（例えば、ＰＤ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴまたは
ＣＩＳＨ）に対するリガンドが発現していること；および免疫応答を抑制し、腫瘍細胞の
増殖および生存を促進する物質（例えば、トランスフォーミング成長因子－β（ＴＧＦβ
）およびアデノシン）を放出する細胞（例えば、制御性Ｔ細胞または骨髄系由来サプレッ
サー細胞）が微小環境において誘導されることが挙げられる。このように、細胞免疫療法
の方法の改善に対するニーズが未だ対処されていない。
【発明の概要】
【0004】
本開示は、操作された免疫細胞を特に含む癌免疫療法に関する組成物および方法を提供
する。具体的な実施形態は、１つ、２つまたはそれ以上の遺伝子の発現を欠くようにまた
はその発現を低下させるように人間の手によって改変されたある特定の免疫細胞に関し、
具体的な場合において、そのような改変を有する細胞は、抗原レセプターのような非天然
のタンパク質を含む１つ以上の異種タンパク質も発現する。非天然の免疫細胞を作製する
方法も含まれる。ある特定の場合において、異種抗原レセプターの導入は、発現が低減ま
たは排除される遺伝子のゲノム遺伝子座において行われる。
する。具体的な実施形態は、１つ、２つまたはそれ以上の遺伝子の発現を欠くようにまた
はその発現を低下させるように人間の手によって改変されたある特定の免疫細胞に関し、
具体的な場合において、そのような改変を有する細胞は、抗原レセプターのような非天然
のタンパク質を含む１つ以上の異種タンパク質も発現する。非天然の免疫細胞を作製する
方法も含まれる。ある特定の場合において、異種抗原レセプターの導入は、発現が低減ま
たは排除される遺伝子のゲノム遺伝子座において行われる。
【0005】
１つの実施形態において、本開示は、免疫細胞の少なくとも２つの遺伝子を破壊するた
めのインビトロ方法を提供し、その少なくとも２つの遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥ
Ｃ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ
９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲ
ＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２
１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７および
それらの組み合わせからなる群より選択される。特定の態様において、３つ、４つ、５つ
もしくは６つまたはそれ以上の遺伝子が破壊される。具体的な態様において、２つ以上の
遺伝子の破壊は、同じ方法工程における破壊など、同時である。その方法は、各遺伝子に
対するガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を免疫細胞に導入する工程を含み得る。
めのインビトロ方法を提供し、その少なくとも２つの遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥ
Ｃ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ
９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲ
ＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２
１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７および
それらの組み合わせからなる群より選択される。特定の態様において、３つ、４つ、５つ
もしくは６つまたはそれ以上の遺伝子が破壊される。具体的な態様において、２つ以上の
遺伝子の破壊は、同じ方法工程における破壊など、同時である。その方法は、各遺伝子に
対するガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を免疫細胞に導入する工程を含み得る。
【0006】
上記方法は、例えば以下のような特定の遺伝子の組み合わせ：（ａ）ＮＫＧ２Ａおよび
ＣＩＳＨ、（ｂ）ＮＫＧ２ＡおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｃ）ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩ
Ｉ、（ｄ）ＴＩＧＩＴおよびＦＯＸＯ１、（ｅ）ＴＩＧＩＴおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｆ
）ＣＤ９６およびＦＯＸＯ１、（ｇ）ＣＤ９６およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｈ）ＦＯＸＯ１
およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｉ）ＣＤ９６およびＴＩＧＩＴ、（ｊ）ＣＩＳＨおよびＴＩＧ
ＩＴ、（ｋ）ＴＩＭ３およびＣＩＳＨ、（ｌ）ＴＩＭ３およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｍ）Ｆ
ＯＸＯ１およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｎ）ＴＩＭ３およびＴＩＧＩＴ、（ｏ）ＳＩＧＬＥＣ
７およびＣＩＳＨ、（ｐ）ＳＩＧＬＥＣ７およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｑ）ＣＤ４７および
ＣＩＳＨ、（ｒ）ＣＤ４７およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｓ）ＳＩＲＰＡおよびＣＩＳＨ、（
ｔ）ＳＩＲＰＡおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｕ）ＣＤ４７およびＴＩＧＩＴ、（ｖ）ＣＤ４
７およびＳＩＲＰＡ、（ｗ）Ａ２ＡＲおよびＣＩＳＨ、（ｘ）Ａ２ＡＲおよびＴＧＦＢＲ
ＩＩ、（ｙ）ＡＤＡＭ１７およびＣＩＳＨ、（ｚ）ＴＧＦＢＲＩＩおよびＡＤＡＭ１７、
（ａ）Ａ２ＡＲおよびＴＩＧＩＴ、（ｂ）ＳＨＰ１およびＣＩＳＨ、（ｃ）ＣＩＳＨおよ
びＴＧＦＢＲＩＩ、（ｄ）ＳＨＰ１およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｅ）ＳＨＰ１およびＴＩＧ
ＩＴ、または（ｆ）ＳＨＰ１およびＴＩＭ３のノックダウンを含み得る。上記方法は、（
１）ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（２）ＴＩＧＩＴ、ＦＯＸＯ１および
ＴＧＦＢＲＩＩ、（３）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＣＤ９６およびＴＩＧＩＴ、（４）ＴＧＦＢＲ
２、ＣＩＳＨおよびＴＩＧＩＴ、（５）ＴＩＭ３、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（６
）ＣＤ９６、ＦＯＸＯ１およびＴＧＦＢＲＩＩ、（７）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＩＭ３および
ＴＩＧＩＴ、（８）ＳＩＧＬＥＣ７、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（９）ＣＤ４７、
ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（１０）ＳＩＲＰＡ、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、
（１１）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＣＤ４７およびＴＩＧＩＴ、（１２）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＣＤ４
７およびＳＩＲＰＡ、（１３）Ａ２ＡＲ、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（１４）ＴＧ
ＦＢＲＩＩ、ＣＩＳＨおよびＡＤＡＭ１７、（１５）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＩＭ３およびＴ
ＩＧＩＴ、（１６）ＴＧＦＢＲＩＩ、Ａ２ＡＲおよびＴＩＧＩＴ、（１７）ＳＨＰ１、Ｃ
ＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（１８）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＣＩＳＨおよびＳＨＰ１、（１
９）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＳＨＰ１およびＴＩＧＩＴ、または（２０）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＳＨ
Ｐ１およびＴＩＭ３のノックダウンを含み得る。任意の上記サブグループを、上に開示さ
れたような第２のサブグループと組み合わせてもよい。例えば、サブグループａ～ｊ１の
いずれか１つが、他のサブグループａ～ｊ１のうちのいずれか１つ以上と組み合わされ得
るか、サブグループａ～ｊ１のいずれか１つ以上が、他のサブグループ１～２３のいずれ
か１つ以上と組み合わされ得るか、またはサブグループ１～２３のいずれか１つ以上が、
他のサブグループ１～２３のいずれか１つ以上と組み合わされ得る。
ＣＩＳＨ、（ｂ）ＮＫＧ２ＡおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｃ）ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩ
Ｉ、（ｄ）ＴＩＧＩＴおよびＦＯＸＯ１、（ｅ）ＴＩＧＩＴおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｆ
）ＣＤ９６およびＦＯＸＯ１、（ｇ）ＣＤ９６およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｈ）ＦＯＸＯ１
およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｉ）ＣＤ９６およびＴＩＧＩＴ、（ｊ）ＣＩＳＨおよびＴＩＧ
ＩＴ、（ｋ）ＴＩＭ３およびＣＩＳＨ、（ｌ）ＴＩＭ３およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｍ）Ｆ
ＯＸＯ１およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｎ）ＴＩＭ３およびＴＩＧＩＴ、（ｏ）ＳＩＧＬＥＣ
７およびＣＩＳＨ、（ｐ）ＳＩＧＬＥＣ７およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｑ）ＣＤ４７および
ＣＩＳＨ、（ｒ）ＣＤ４７およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｓ）ＳＩＲＰＡおよびＣＩＳＨ、（
ｔ）ＳＩＲＰＡおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｕ）ＣＤ４７およびＴＩＧＩＴ、（ｖ）ＣＤ４
７およびＳＩＲＰＡ、（ｗ）Ａ２ＡＲおよびＣＩＳＨ、（ｘ）Ａ２ＡＲおよびＴＧＦＢＲ
ＩＩ、（ｙ）ＡＤＡＭ１７およびＣＩＳＨ、（ｚ）ＴＧＦＢＲＩＩおよびＡＤＡＭ１７、
（ａ）Ａ２ＡＲおよびＴＩＧＩＴ、（ｂ）ＳＨＰ１およびＣＩＳＨ、（ｃ）ＣＩＳＨおよ
びＴＧＦＢＲＩＩ、（ｄ）ＳＨＰ１およびＴＧＦＢＲＩＩ、（ｅ）ＳＨＰ１およびＴＩＧ
ＩＴ、または（ｆ）ＳＨＰ１およびＴＩＭ３のノックダウンを含み得る。上記方法は、（
１）ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（２）ＴＩＧＩＴ、ＦＯＸＯ１および
ＴＧＦＢＲＩＩ、（３）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＣＤ９６およびＴＩＧＩＴ、（４）ＴＧＦＢＲ
２、ＣＩＳＨおよびＴＩＧＩＴ、（５）ＴＩＭ３、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（６
）ＣＤ９６、ＦＯＸＯ１およびＴＧＦＢＲＩＩ、（７）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＩＭ３および
ＴＩＧＩＴ、（８）ＳＩＧＬＥＣ７、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（９）ＣＤ４７、
ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（１０）ＳＩＲＰＡ、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、
（１１）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＣＤ４７およびＴＩＧＩＴ、（１２）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＣＤ４
７およびＳＩＲＰＡ、（１３）Ａ２ＡＲ、ＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（１４）ＴＧ
ＦＢＲＩＩ、ＣＩＳＨおよびＡＤＡＭ１７、（１５）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＩＭ３およびＴ
ＩＧＩＴ、（１６）ＴＧＦＢＲＩＩ、Ａ２ＡＲおよびＴＩＧＩＴ、（１７）ＳＨＰ１、Ｃ
ＩＳＨおよびＴＧＦＢＲＩＩ、（１８）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＣＩＳＨおよびＳＨＰ１、（１
９）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＳＨＰ１およびＴＩＧＩＴ、または（２０）ＴＧＦＢＲＩＩ、ＳＨ
Ｐ１およびＴＩＭ３のノックダウンを含み得る。任意の上記サブグループを、上に開示さ
れたような第２のサブグループと組み合わせてもよい。例えば、サブグループａ～ｊ１の
いずれか１つが、他のサブグループａ～ｊ１のうちのいずれか１つ以上と組み合わされ得
るか、サブグループａ～ｊ１のいずれか１つ以上が、他のサブグループ１～２３のいずれ
か１つ以上と組み合わされ得るか、またはサブグループ１～２３のいずれか１つ以上が、
他のサブグループ１～２３のいずれか１つ以上と組み合わされ得る。
【0007】
いくつかの態様において、上記方法は、Ｃａｓ９などのＲＮＡガイドエンドヌクレアー
ゼを上記細胞に導入する工程をさらに含む。ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼの導入は、
ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を上記免疫細胞
に導入することを含み得る。
ゼを上記細胞に導入する工程をさらに含む。ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼの導入は、
ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を上記免疫細胞
に導入することを含み得る。
【0008】
ある特定の態様において、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、
ＮＫＴ細胞または幹細胞である。代替の場合において、免疫細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞では
ないなど、Ｔ細胞ではない。いくつかの態様において、免疫細胞は、１つ以上のキメラ抗
原レセプター（ＣＡＲ）および／または１つ以上のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現す
るように操作されている。免疫細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞など、ウイルス特異的であ
り得る。Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞であり得る。Ｂ細胞は、制御性Ｂ細胞であり得る。いく
つかの態様において、幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳ）
細胞である。特定の態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはガ
ンマ－デルタＴ細胞である。免疫細胞は、末梢血、臍帯血、骨髄またはそれらの混合物か
ら単離され得る。いくつかの態様において、臍帯血は、２単位以上の個々の臍帯血単位か
らプールされている。
ＮＫＴ細胞または幹細胞である。代替の場合において、免疫細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞では
ないなど、Ｔ細胞ではない。いくつかの態様において、免疫細胞は、１つ以上のキメラ抗
原レセプター（ＣＡＲ）および／または１つ以上のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現す
るように操作されている。免疫細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞など、ウイルス特異的であ
り得る。Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞であり得る。Ｂ細胞は、制御性Ｂ細胞であり得る。いく
つかの態様において、幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳ）
細胞である。特定の態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはガ
ンマ－デルタＴ細胞である。免疫細胞は、末梢血、臍帯血、骨髄またはそれらの混合物か
ら単離され得る。いくつかの態様において、臍帯血は、２単位以上の個々の臍帯血単位か
らプールされている。
【0009】
いくつかの態様において、導入工程は、トランスフェクトまたは形質導入を含む。例え
ば、導入は、２回以上行われ得るエレクトロポレーション、例えば、２回または３回のエ
レクトロポレーションを含む。いくつかの態様において、第１の群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲ
ＮＡが、第１のエレクトロポレーションにおいて導入され、第２の群のＣＲＩＳＰＲ ｇ
ＲＮＡが、２回目のエレクトロポレーションにおいて導入される。具体的な場合において
、第１の群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡは、第２の群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡと異なる。
特定の態様において、第１の群および／または第２の群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡは、１
つ、２つ、３つまたは４つ以上のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡを含む。いくつかの態様におい
て、２つのＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡが、第１のエレクトロポレーションにおいて導入され
、異なる２つのＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡが、２回目のエレクトロポレーションにおいて導
入される。具体的な実施形態では、ある群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡが、ある群のｇＲＮ
Ａを含み、そのうちの少なくとも２つは、異なる遺伝子を標的化し、特定の実施形態では
、その群のｇＲＮＡはそれぞれ、異なる遺伝子を標的化する。
ば、導入は、２回以上行われ得るエレクトロポレーション、例えば、２回または３回のエ
レクトロポレーションを含む。いくつかの態様において、第１の群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲ
ＮＡが、第１のエレクトロポレーションにおいて導入され、第２の群のＣＲＩＳＰＲ ｇ
ＲＮＡが、２回目のエレクトロポレーションにおいて導入される。具体的な場合において
、第１の群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡは、第２の群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡと異なる。
特定の態様において、第１の群および／または第２の群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡは、１
つ、２つ、３つまたは４つ以上のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡを含む。いくつかの態様におい
て、２つのＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡが、第１のエレクトロポレーションにおいて導入され
、異なる２つのＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡが、２回目のエレクトロポレーションにおいて導
入される。具体的な実施形態では、ある群のＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡが、ある群のｇＲＮ
Ａを含み、そのうちの少なくとも２つは、異なる遺伝子を標的化し、特定の実施形態では
、その群のｇＲＮＡはそれぞれ、異なる遺伝子を標的化する。
【0010】
特定の態様において、上記方法は、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、ＴＧＦβＲ２およびＣＩＳ
Ｈ；ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２およびＡＤＯＲＡ２；ＮＫＧ２Ａ、ＴＧＦβＲ
２およびＣＩＳＨ；ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＩＳＨおよびＡＤＯＲＡ２；またはＡＤＡ
Ｍ１７、ＴＧＦβＲ２、ＮＫＧ２ＡおよびＳＨＰ１を破壊する工程を含む。
Ｈ；ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２およびＡＤＯＲＡ２；ＮＫＧ２Ａ、ＴＧＦβＲ
２およびＣＩＳＨ；ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＩＳＨおよびＡＤＯＲＡ２；またはＡＤＡ
Ｍ１７、ＴＧＦβＲ２、ＮＫＧ２ＡおよびＳＨＰ１を破壊する工程を含む。
【0011】
いくつかの態様では、破壊によって、免疫細胞の抗腫瘍細胞傷害性の増強、インビボ増
殖、インビボ持続性および／または機能の改善がもたらされる。特定の態様において、そ
の免疫細胞は、改変が無い場合と比べて、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１０７および／またはＴＮＦ
αの分泌を増加させている。いくつかの態様において、その免疫細胞は、改変が無い場合
と比べて、パーフォリンおよび／またはグランザイムＢの産生を増加させている。
殖、インビボ持続性および／または機能の改善がもたらされる。特定の態様において、そ
の免疫細胞は、改変が無い場合と比べて、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１０７および／またはＴＮＦ
αの分泌を増加させている。いくつかの態様において、その免疫細胞は、改変が無い場合
と比べて、パーフォリンおよび／またはグランザイムＢの産生を増加させている。
【0012】
追加の態様において、上記方法は、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲを免疫細胞に導入する
工程（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲをコードする核酸を免疫細胞に導入する工程
）をさらに含む。いくつかの態様において、その核酸は、レトロウイルスベクターなどの
発現ベクター内に存在する。ある特定の態様において、そのベクターは、ＡＡＶ６などの
アデノウイルス関連ベクターである。いくつかの態様において、そのベクターは、ＮＫＧ
２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、
ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、
ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、
ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ
５、ＣＤ７およびそれらの組み合わせからなる群より選択される阻害性遺伝子配列などの
阻害性遺伝子配列をさらに含む。特定の態様において、そのベクターは、阻害性遺伝子に
対するガイドＲＮＡをさらに含む。ＣＡＲは、阻害性遺伝子に対する相同性アームに隣接
していることがある。いくつかの態様において、ＣＡＲ配列を含むベクターを導入するこ
とにより、免疫細胞の阻害性遺伝子の遺伝子座（例えば、阻害性遺伝子のエキソン）にＣ
ＡＲが挿入され、そのＣＡＲは、阻害性遺伝子の内在性プロモーターの支配下になる。特
定の態様において、ベクターの導入は、阻害性遺伝子の発現をさらに妨害する。
工程（例えば、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲをコードする核酸を免疫細胞に導入する工程
）をさらに含む。いくつかの態様において、その核酸は、レトロウイルスベクターなどの
発現ベクター内に存在する。ある特定の態様において、そのベクターは、ＡＡＶ６などの
アデノウイルス関連ベクターである。いくつかの態様において、そのベクターは、ＮＫＧ
２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、
ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、
ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、
ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ
５、ＣＤ７およびそれらの組み合わせからなる群より選択される阻害性遺伝子配列などの
阻害性遺伝子配列をさらに含む。特定の態様において、そのベクターは、阻害性遺伝子に
対するガイドＲＮＡをさらに含む。ＣＡＲは、阻害性遺伝子に対する相同性アームに隣接
していることがある。いくつかの態様において、ＣＡＲ配列を含むベクターを導入するこ
とにより、免疫細胞の阻害性遺伝子の遺伝子座（例えば、阻害性遺伝子のエキソン）にＣ
ＡＲが挿入され、そのＣＡＲは、阻害性遺伝子の内在性プロモーターの支配下になる。特
定の態様において、ベクターの導入は、阻害性遺伝子の発現をさらに妨害する。
【0013】
別の実施形態では、免疫細胞の少なくとも２つの遺伝子の発現が妨害された免疫細胞（
例えば、開示される実施形態の免疫細胞）が提供され、その免疫細胞は、各遺伝子に対す
るＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を前記免疫細胞に導入することを含む工程によ
って少なくとも作製され、少なくとも２つの遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、
ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、Ａ
ＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、Ｓ
ＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、Ｉ
ＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７およびそれらの
組み合わせからなる群より選択される。いくつかの態様において、３つ、４つ、５つもし
くは６つまたはそれ以上の遺伝子が、破壊される。
例えば、開示される実施形態の免疫細胞）が提供され、その免疫細胞は、各遺伝子に対す
るＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を前記免疫細胞に導入することを含む工程によ
って少なくとも作製され、少なくとも２つの遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、
ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、Ａ
ＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、Ｓ
ＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、Ｉ
ＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７およびそれらの
組み合わせからなる群より選択される。いくつかの態様において、３つ、４つ、５つもし
くは６つまたはそれ以上の遺伝子が、破壊される。
【0014】
ある特定の態様において、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞または幹細胞である
。いくつかの態様において、免疫細胞は、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）および／また
はＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現するように操作されている。免疫細胞は、ウイルス
特異的Ｔ細胞など、ウイルス特異的であり得る。Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞であり得る。Ｂ
細胞は、制御性Ｂ細胞であり得る。いくつかの態様において、幹細胞は、間葉系幹細胞（
ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞である。特定の態様において、Ｔ細胞は、Ｃ
Ｄ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはガンマ－デルタＴ細胞である。免疫細胞は、末梢血
、臍帯血または骨髄から単離され得る。いくつかの態様において、臍帯血は、２単位以上
の個々の臍帯血単位からプールされている。
。いくつかの態様において、免疫細胞は、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）および／また
はＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現するように操作されている。免疫細胞は、ウイルス
特異的Ｔ細胞など、ウイルス特異的であり得る。Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞であり得る。Ｂ
細胞は、制御性Ｂ細胞であり得る。いくつかの態様において、幹細胞は、間葉系幹細胞（
ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞である。特定の態様において、Ｔ細胞は、Ｃ
Ｄ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはガンマ－デルタＴ細胞である。免疫細胞は、末梢血
、臍帯血または骨髄から単離され得る。いくつかの態様において、臍帯血は、２単位以上
の個々の臍帯血単位からプールされている。
【0015】
特定の態様において、上記方法は、特定の遺伝子群（例えば、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、
ＴＧＦβＲ２およびＣＩＳＨ；ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２およびＡＤＯＲＡ２
；ＮＫＧ２Ａ、ＴＧＦβＲ２およびＣＩＳＨ；ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＩＳＨおよびＡ
ＤＯＲＡ２；またはＡＤＡＭ１７、ＴＧＦβＲ２ ＮＫＧ２ＡおよびＳＨＰ１）を破壊す
る工程を含む。
ＴＧＦβＲ２およびＣＩＳＨ；ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２およびＡＤＯＲＡ２
；ＮＫＧ２Ａ、ＴＧＦβＲ２およびＣＩＳＨ；ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＩＳＨおよびＡ
ＤＯＲＡ２；またはＡＤＡＭ１７、ＴＧＦβＲ２ ＮＫＧ２ＡおよびＳＨＰ１）を破壊す
る工程を含む。
【0016】
いくつかの態様では、破壊によって、免疫細胞の抗腫瘍細胞傷害性の増強、インビボ増
殖、インビボ持続性および／または機能の改善がもたらされる。特定の態様において、そ
の免疫細胞は、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１０７および／またはＴＮＦαの分泌を増加させている
。いくつかの態様において、その免疫細胞は、パーフォリンおよび／またはグランザイム
Ｂの産生を増加させている。
殖、インビボ持続性および／または機能の改善がもたらされる。特定の態様において、そ
の免疫細胞は、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１０７および／またはＴＮＦαの分泌を増加させている
。いくつかの態様において、その免疫細胞は、パーフォリンおよび／またはグランザイム
Ｂの産生を増加させている。
【0017】
いくつかの態様において、上記細胞は、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲを発現するように
操作されている。ＣＡＲは、例えば、その細胞の内在性の阻害性遺伝子の遺伝子座に挿入
され得、阻害性遺伝子の遺伝子座は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ
３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ
３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡ
Ｍ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９
５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７およびそれらの組み合わせからな
る群より選択される。いくつかの態様において、ＣＡＲは、阻害性遺伝子の内在性プロモ
ーターの支配下にある。ある特定の態様において、ＣＡＲは、ＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝
子編集によって、阻害性遺伝子の遺伝子座に挿入される。
操作されている。ＣＡＲは、例えば、その細胞の内在性の阻害性遺伝子の遺伝子座に挿入
され得、阻害性遺伝子の遺伝子座は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ
３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ
３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡ
Ｍ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９
５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７およびそれらの組み合わせからな
る群より選択される。いくつかの態様において、ＣＡＲは、阻害性遺伝子の内在性プロモ
ーターの支配下にある。ある特定の態様において、ＣＡＲは、ＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝
子編集によって、阻害性遺伝子の遺伝子座に挿入される。
【0018】
いくつかの態様において、ＣＡＲは、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖおよび
ｓｃＦｖからなる群より選択される抗原結合ドメインを含む。ある特定の態様において、
ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ３１９（ＣＳ１）、ＲＯＲ１、ＣＤ２０、癌胎児抗原、アルフ
ァフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、上皮性腫瘍抗原、黒色腫関連抗原、変
異型ｐ５３、変異型ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２、葉酸結合タンパク質、ＨＩ
Ｖ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ
４１、ＧＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１２３、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソ
テリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－１１Ｒアルファ、カッパー鎖、ラムダ鎖、ＣＳＰ
Ｇ４、ＥＲＢＢ２、ＷＴ－１、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ４７
、ＣＬＬ－１、Ｕ５ｓｎＲＮＰ２００、ＣＤ２００、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＢＣＭＡ、ＣＤ９９
およびそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上の腫瘍関連抗原を標的化す
る。特定の態様において、ＣＡＲは、ＣＤ３ξ、ＣＤ２８、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－
１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＦｃεＲＩγ、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＩＬＲＢ／ＣＤ１２２、Ｉ
Ｌ－２ＲＧ／ＣＤ１３２、ＤＡＰ１２、ＣＤ７０、ＣＤ４０およびそれらの組み合わせか
らなる群より選択される少なくとも１つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様
において、免疫細胞は、１つ以上の異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－２、Ｉ
Ｌ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８およびＩＬ－２１の１つ以上）を含む。ある特定の態
様において、ＣＡＲは、膜結合型非分泌性ＴＮＦ－アルファ変異体または誘導性カスパー
ゼ９などの自殺遺伝子をさらに含む。
ｓｃＦｖからなる群より選択される抗原結合ドメインを含む。ある特定の態様において、
ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ３１９（ＣＳ１）、ＲＯＲ１、ＣＤ２０、癌胎児抗原、アルフ
ァフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、上皮性腫瘍抗原、黒色腫関連抗原、変
異型ｐ５３、変異型ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２、葉酸結合タンパク質、ＨＩ
Ｖ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ
４１、ＧＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１２３、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソ
テリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－１１Ｒアルファ、カッパー鎖、ラムダ鎖、ＣＳＰ
Ｇ４、ＥＲＢＢ２、ＷＴ－１、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ４７
、ＣＬＬ－１、Ｕ５ｓｎＲＮＰ２００、ＣＤ２００、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＢＣＭＡ、ＣＤ９９
およびそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上の腫瘍関連抗原を標的化す
る。特定の態様において、ＣＡＲは、ＣＤ３ξ、ＣＤ２８、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－
１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＦｃεＲＩγ、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＩＬＲＢ／ＣＤ１２２、Ｉ
Ｌ－２ＲＧ／ＣＤ１３２、ＤＡＰ１２、ＣＤ７０、ＣＤ４０およびそれらの組み合わせか
らなる群より選択される少なくとも１つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様
において、免疫細胞は、１つ以上の異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－２、Ｉ
Ｌ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８およびＩＬ－２１の１つ以上）を含む。ある特定の態
様において、ＣＡＲは、膜結合型非分泌性ＴＮＦ－アルファ変異体または誘導性カスパー
ゼ９などの自殺遺伝子をさらに含む。
【0019】
少なくとも１つのＣＡＲおよび／またはＴＣＲ、少なくとも１つの阻害性遺伝子配列な
らびに少なくとも１つのｇＲＮＡをコードする発現ベクターがさらに本明細書中に提供さ
れる。いくつかの態様において、その阻害性遺伝子配列は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－
７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６
、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ
、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ
、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５およびＣＤ７からな
る群より選択される阻害性遺伝子由来である。特定の態様において、ｇＲＮＡは、阻害性
遺伝子に特異的である。いくつかの態様において、ベクターは、ＡＡＶベクターなどのウ
イルスベクターである。ＣＡＲは、阻害性遺伝子に対する相同性アームに隣接しているこ
とがある。上記実施形態のベクターを発現するように操作された宿主細胞（例えば、実施
形態の細胞）も本明細書中に提供される。態様において、その細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞
、Ｂ細胞または幹細胞である。
らびに少なくとも１つのｇＲＮＡをコードする発現ベクターがさらに本明細書中に提供さ
れる。いくつかの態様において、その阻害性遺伝子配列は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－
７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６
、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ
、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ
、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５およびＣＤ７からな
る群より選択される阻害性遺伝子由来である。特定の態様において、ｇＲＮＡは、阻害性
遺伝子に特異的である。いくつかの態様において、ベクターは、ＡＡＶベクターなどのウ
イルスベクターである。ＣＡＲは、阻害性遺伝子に対する相同性アームに隣接しているこ
とがある。上記実施形態のベクターを発現するように操作された宿主細胞（例えば、実施
形態の細胞）も本明細書中に提供される。態様において、その細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞
、Ｂ細胞または幹細胞である。
【0020】
開示される実施形態の免疫細胞の集団を含む薬学的組成物も本明細書中に提供される。
別の実施形態は、免疫関連障害、感染症および／または癌を処置するための、開示される
実施形態の細胞の集団を含む組成物を提供する。
別の実施形態は、免疫関連障害、感染症および／または癌を処置するための、開示される
実施形態の細胞の集団を含む組成物を提供する。
【0021】
さらなる実施形態では、被験体の疾患または障害を処置する方法が提供され、その方法
は、有効量の開示される実施形態の免疫細胞をその被験体に投与する工程を含む。いくつ
かの態様において、その疾患または障害は、感染症、癌（例えば、固形癌または血液悪性
腫瘍）または免疫関連障害である。免疫関連障害は、例えば、自己免疫障害、移植片対宿
主病、同種移植片拒絶または炎症状態であり得る。いくつかの態様において、免疫関連障
害は、炎症状態であり、免疫細胞は、糖質コルチコイドレセプターの発現を本質的に有し
ない。ある特定の態様において、免疫細胞は、レシピエント個体に対して自己または同種
異系である。
は、有効量の開示される実施形態の免疫細胞をその被験体に投与する工程を含む。いくつ
かの態様において、その疾患または障害は、感染症、癌（例えば、固形癌または血液悪性
腫瘍）または免疫関連障害である。免疫関連障害は、例えば、自己免疫障害、移植片対宿
主病、同種移植片拒絶または炎症状態であり得る。いくつかの態様において、免疫関連障
害は、炎症状態であり、免疫細胞は、糖質コルチコイドレセプターの発現を本質的に有し
ない。ある特定の態様において、免疫細胞は、レシピエント個体に対して自己または同種
異系である。
【0022】
追加の態様において、上記方法は、免疫細胞を投与される個体に少なくとも第２の治療
薬を投与する工程をさらに含む。いくつかの態様において、その少なくとも第２の治療薬
には、化学療法、免疫療法、手術、放射線療法、ホルモン療法または生物療法が含まれる
。ある特定の態様において、免疫細胞および／または少なくとも第２の治療薬は、静脈内
に、腹腔内に、気管内に、腫瘍内に、筋肉内に、内視鏡的に、病巣内に、経皮的に、皮下
に、領域性に、または直接注射もしくは灌流によって、投与される。
薬を投与する工程をさらに含む。いくつかの態様において、その少なくとも第２の治療薬
には、化学療法、免疫療法、手術、放射線療法、ホルモン療法または生物療法が含まれる
。ある特定の態様において、免疫細胞および／または少なくとも第２の治療薬は、静脈内
に、腹腔内に、気管内に、腫瘍内に、筋肉内に、内視鏡的に、病巣内に、経皮的に、皮下
に、領域性に、または直接注射もしくは灌流によって、投与される。
【0023】
別の実施形態は、ＣＡＲを発現するように免疫細胞を操作するための方法を提供し、そ
の方法は、ＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡを使用して、そのＣＡＲをその免疫細胞の阻害性遺伝
子の遺伝子座に挿入する工程を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、発現ベクター
（例えば、レトロウイルスベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイ
ルスベクター、アデノウイルス関連ウイルスベクターなど）によってコードされる。ある
特定の態様において、ウイルスベクターは、ＡＡＶ６などのアデノウイルス関連ベクター
である。
の方法は、ＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡを使用して、そのＣＡＲをその免疫細胞の阻害性遺伝
子の遺伝子座に挿入する工程を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、発現ベクター
（例えば、レトロウイルスベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイ
ルスベクター、アデノウイルス関連ウイルスベクターなど）によってコードされる。ある
特定の態様において、ウイルスベクターは、ＡＡＶ６などのアデノウイルス関連ベクター
である。
【0024】
いくつかの態様において、上記ベクターは、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３
、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ
２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１
、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１
、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７およびそれらの組み合わ
せからなる群より選択される阻害性遺伝子配列などの阻害性遺伝子配列をさらに含む。い
くつかの態様において、ＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡは、阻害性遺伝子に対するものである。
ある特定の態様において、ＣＡＲは、阻害性遺伝子に対する相同性アームに隣接している
。特定の態様において、ＣＡＲは、阻害性遺伝子の任意の部分（例えば、阻害性遺伝子の
エキソン）において、その阻害性遺伝子の遺伝子座に挿入される。ＣＡＲは、阻害性遺伝
子の内在性プロモーターの支配下であり得る。具体的な態様において、ＣＡＲは、阻害性
遺伝子の発現を妨害する。
、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ
２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１
、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１
、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７およびそれらの組み合わ
せからなる群より選択される阻害性遺伝子配列などの阻害性遺伝子配列をさらに含む。い
くつかの態様において、ＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡは、阻害性遺伝子に対するものである。
ある特定の態様において、ＣＡＲは、阻害性遺伝子に対する相同性アームに隣接している
。特定の態様において、ＣＡＲは、阻害性遺伝子の任意の部分（例えば、阻害性遺伝子の
エキソン）において、その阻害性遺伝子の遺伝子座に挿入される。ＣＡＲは、阻害性遺伝
子の内在性プロモーターの支配下であり得る。具体的な態様において、ＣＡＲは、阻害性
遺伝子の発現を妨害する。
【0025】
いくつかの態様において、ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ３１９（ＣＳ１）、ＲＯＲ１、Ｃ
Ｄ２０、癌胎児抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、上皮性腫
瘍抗原、黒色腫関連抗原、変異型ｐ５３、変異型ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２
、葉酸結合タンパク質、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＨＩＶ－１エ
ンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＧＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１２３、ＣＤ２３、ＣＤ３０、
ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－１１Ｒアルファ、カ
ッパー鎖、ラムダ鎖、ＣＳＰＧ４、ＥＲＢＢ２、ＷＴ－１、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、ＶＥＧ
ＦＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＬＬ－１、Ｕ５ｓｎＲＮＰ２００、ＣＤ２００、ＢＡＦ
Ｆ－Ｒ、ＢＣＭＡ、ＣＤ９９およびそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以
上の腫瘍関連抗原を標的化する。特定の態様において、ＣＡＲは、ＣＤ３ξ、ＣＤ２８、
ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＦｃεＲＩγ、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８
、ＩＬＲＢ／ＣＤ１２２、ＩＬ－２ＲＧ／ＣＤ１３２、ＤＡＰ１２、ＣＤ７０およびＣＤ
４０からなる群より選択される少なくとも１つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつか
の態様において、ＣＡＲをコードするベクターは、サイトカイン（例えば、ＩＬ－７、Ｉ
Ｌ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１またはそれらの組み合わせ）
もコードする。代替の場合において、そのサイトカインは、ＣＡＲをコードするベクター
とは別個のベクター上に存在する。ある特定の態様において、ＣＡＲをコードする発現構
築物は、自殺遺伝子（例えば、誘導性カスパーゼ９または膜結合型非分泌性ＴＮＦ－アル
ファ変異体）をさらに含む。
Ｄ２０、癌胎児抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、上皮性腫
瘍抗原、黒色腫関連抗原、変異型ｐ５３、変異型ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２
、葉酸結合タンパク質、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＨＩＶ－１エ
ンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＧＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１２３、ＣＤ２３、ＣＤ３０、
ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－１１Ｒアルファ、カ
ッパー鎖、ラムダ鎖、ＣＳＰＧ４、ＥＲＢＢ２、ＷＴ－１、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、ＶＥＧ
ＦＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＬＬ－１、Ｕ５ｓｎＲＮＰ２００、ＣＤ２００、ＢＡＦ
Ｆ－Ｒ、ＢＣＭＡ、ＣＤ９９およびそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以
上の腫瘍関連抗原を標的化する。特定の態様において、ＣＡＲは、ＣＤ３ξ、ＣＤ２８、
ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＦｃεＲＩγ、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８
、ＩＬＲＢ／ＣＤ１２２、ＩＬ－２ＲＧ／ＣＤ１３２、ＤＡＰ１２、ＣＤ７０およびＣＤ
４０からなる群より選択される少なくとも１つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつか
の態様において、ＣＡＲをコードするベクターは、サイトカイン（例えば、ＩＬ－７、Ｉ
Ｌ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１またはそれらの組み合わせ）
もコードする。代替の場合において、そのサイトカインは、ＣＡＲをコードするベクター
とは別個のベクター上に存在する。ある特定の態様において、ＣＡＲをコードする発現構
築物は、自殺遺伝子（例えば、誘導性カスパーゼ９または膜結合型非分泌性ＴＮＦ－アル
ファ変異体）をさらに含む。
【0026】
本方法によって作製される免疫細胞などの免疫細胞の阻害性遺伝子に少なくとも１つの
ＣＡＲが挿入されている免疫細胞が、さらに本明細書中に提供される。本開示の実施形態
の免疫細胞の集団（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、
幹細胞の集団、それらの混合物などの集団）を含む組成物も本明細書中に提供される。
ＣＡＲが挿入されている免疫細胞が、さらに本明細書中に提供される。本開示の実施形態
の免疫細胞の集団（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、
幹細胞の集団、それらの混合物などの集団）を含む組成物も本明細書中に提供される。
【0027】
別の実施形態は、上記実施形態の細胞の集団を含む組成物を提供し、ある特定の実施形
態において、その集団は、任意の種類の病状の処置のために（少なくとも、免疫関連障害
、感染症および／または癌の処置などのために）利用される。
態において、その集団は、任意の種類の病状の処置のために（少なくとも、免疫関連障害
、感染症および／または癌の処置などのために）利用される。
【0028】
さらなる実施形態は、被験体の疾患または障害を処置する方法を提供し、その方法は、
有効量の上記実施形態の免疫細胞をその被験体に投与する工程を含む。いくつかの態様に
おいて、その疾患または障害は、感染症；癌（例えば、固形癌または血液悪性腫瘍）；お
よび／または免疫関連障害である。免疫関連障害は、いくつかの場合において、自己免疫
障害、移植片対宿主病、同種移植片拒絶および／または炎症状態であり得る。いくつかの
態様において、免疫関連障害は、炎症状態であり、免疫細胞は、糖質コルチコイドレセプ
ターの発現を本質的に有しない。ある特定の態様において、免疫細胞は、レシピエント個
体に対して自己または同種異系である。
有効量の上記実施形態の免疫細胞をその被験体に投与する工程を含む。いくつかの態様に
おいて、その疾患または障害は、感染症；癌（例えば、固形癌または血液悪性腫瘍）；お
よび／または免疫関連障害である。免疫関連障害は、いくつかの場合において、自己免疫
障害、移植片対宿主病、同種移植片拒絶および／または炎症状態であり得る。いくつかの
態様において、免疫関連障害は、炎症状態であり、免疫細胞は、糖質コルチコイドレセプ
ターの発現を本質的に有しない。ある特定の態様において、免疫細胞は、レシピエント個
体に対して自己または同種異系である。
【0029】
追加の態様において、上記方法は、少なくとも第２の治療薬を個体に投与する工程をさ
らに含む。いくつかの態様において、その少なくとも第２の治療薬には、化学療法、免疫
療法、手術、放射線療法、ホルモン療法または生物療法が含まれる。ある特定の態様にお
いて、免疫細胞および／または少なくとも第２の治療薬は、静脈内に、腹腔内に、気管内
に、腫瘍内に、筋肉内に、内視鏡的に、病巣内に、経皮的に、皮下に、領域性に、または
直接注射もしくは灌流によって、投与される。免疫細胞および少なくとも第２の治療薬は
、同時に投与されてもよいし、異なる時点において投与されてもよく、それらは、異なる
時点において投与されるとき、または同時であるが同じ製剤としてではなく投与されると
き、同じ経路によって投与されてもよいし、そうでなくてもよい。
らに含む。いくつかの態様において、その少なくとも第２の治療薬には、化学療法、免疫
療法、手術、放射線療法、ホルモン療法または生物療法が含まれる。ある特定の態様にお
いて、免疫細胞および／または少なくとも第２の治療薬は、静脈内に、腹腔内に、気管内
に、腫瘍内に、筋肉内に、内視鏡的に、病巣内に、経皮的に、皮下に、領域性に、または
直接注射もしくは灌流によって、投与される。免疫細胞および少なくとも第２の治療薬は
、同時に投与されてもよいし、異なる時点において投与されてもよく、それらは、異なる
時点において投与されるとき、または同時であるが同じ製剤としてではなく投与されると
き、同じ経路によって投与されてもよいし、そうでなくてもよい。
【0030】
本開示の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるだろう。し
かしながら、この詳細な説明から当業者には本開示の趣旨および範囲内での様々な変更お
よび改変が明らかになるので、その詳細な説明および具体例は、本開示の特定の実施形態
を示すが、単に例証として与えられることを理解するべきである。
かしながら、この詳細な説明から当業者には本開示の趣旨および範囲内での様々な変更お
よび改変が明らかになるので、その詳細な説明および具体例は、本開示の特定の実施形態
を示すが、単に例証として与えられることを理解するべきである。
【0031】
以下の図面は、本明細書の一部を成し、本発明のある特定の態様をさらに実証するため
に含められる。本発明は、本明細書中に提示される具体的な実施形態の詳細な説明と併せ
てこれらの図面の１つ以上を参照することによって、より理解される可能性がある。
に含められる。本発明は、本明細書中に提示される具体的な実施形態の詳細な説明と併せ
てこれらの図面の１つ以上を参照することによって、より理解される可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【0032】
【図1】ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、ＮＫ細胞において複数の遺伝子（ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩＳＨ）の効率的な破壊を媒介する。この遺伝子セットでは、１回目のエレクトロポレーションにおいてＮＫＧ２ＡおよびＣＤ４７をノックアウトし、２回目のエレクトロポレーションにおいてＣＩＳＨおよびＴＧＦＢＲ２を標的化した。両方の回のエレクトロポレーションについて、ＰＣＲおよびフローサイトメトリーを使用してノックアウト効率を検証することに成功した。フローパネル内の赤色（右側のピーク）および青色（左側のピーク）のヒストグラムは、それぞれ、ＣＲＩＳＰＲ ＫＯの前および後のタンパク質の発現を表している。
【0033】
【図2】別の遺伝子セット（ＴＩＧＩＴ（Ｔ）、ＣＤ９６（Ｃ）、ＣＩＳＨ（ＣＨ）、アデノシン（Ａ））を用いた、ＮＫ細胞におけるマルチプレックス遺伝子編集の検証。この遺伝子セットでは、１回目のエレクトロポレーションにおいてＴＩＧＩＴおよびＣＤ９６をノックアウトし、２回目のエレクトロポレーションにおいてＣＩＳＨおよびアデノシンを標的化した。両方の回のエレクトロポレーションについて、ＰＣＲおよびフローサイトメトリーを使用してノックアウト効率を検証することに成功した。フローパネル内の赤色（右側のピーク）および青色（左側のピーク）のヒストグラムは、それぞれ、ＣＲＩＳＰＲ ＫＯの前および後のタンパク質の発現を表している。
【0034】
【図3】ＮＫ細胞において複数の遺伝子（ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩＳＨ）を破壊することにより、標的腫瘍細胞に対する機能が高まる。標的細胞株による刺激後に、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７の分泌が増大した。ブレフェルジンＡの存在下において標的細胞株で５時間、共刺激された様々なＮＫ細胞（編集済み 対 Ｃａｓ９のみ）を用いて、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７産生のフローサイトメトリー解析を行った。
【0035】
【図4A】ＮＫ細胞において複数の遺伝子（ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩＳＨ）を破壊することにより、抗腫瘍細胞傷害性が高まる。遺伝子編集されたＮＫ細胞の細胞傷害活性 対 Ｃａｓ９のみのＮＫ細胞の細胞傷害活性を、Ｋ５６２に対する５１Ｃｒ放出アッセイによって測定した。
【図4B】ＮＫ細胞において複数の遺伝子（ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩＳＨ）を破壊することにより、抗腫瘍細胞傷害性が高まる。組換えＴＧＦ－Ｂ処置（５０ｎｇ／ｍｌ）の３０分後に、ｐＳＭＡＤ活性をフローサイトメトリーによって測定した。外来性ＴＧＦ－βを添加しても、ＫＯ ＣＡＲ－ＮＫ細胞においてｐＳＭＡＤの活性化は誘導されなかった。
【0036】
【図5】ＣｙＴＯＦ解析によって示されるように、ＮＫ細胞は、サイトカインの刺激を受けるかまたは標的を認識すると、ＣＤ１６およびＣＤ６２Ｌの発現を失う。
【0037】
【図6】ＮＫ細胞においてＡＤＡＭ１７をノックアウトすると、ＣＤ１６およびＣＤ６２Ｌのシェディングが阻止される。
【0038】
【図7】ＮＫ細胞においてＡＤＡＭ１７をノックアウトすると、Ｋ５６２標的に対するＡＤＣＣおよび細胞傷害性が改善される。
【0039】
【図8】７２時間後のＮＫ細胞におけるＳＨＰ１ノックアウト効率のＦＡＣＳベースのスクリーニング。
【0040】
【図9】ＮＫ細胞においてＳＨＰ１を破壊すると、抗腫瘍効果が高まる。ＮＫ細胞をＫ５６２細胞またはＲａｊｉ細胞と１：１の比で４時間共培養した。インキュベーションの後、それらの細胞をアネキシンＶで染色し、生細胞および死細胞を解析した。Ｋ５６２細胞は、ＮＫ細胞の殺滅に対して感受性であり、Ｒａｊｉ細胞は、ＮＫ細胞の殺滅に対して抵抗性である。
【0041】
【図10A】ＮＫ細胞においてＳＨＰ１を破壊すると、抗腫瘍効果が高まる。ＮＫ細胞をＫ５６２細胞またはＲａｊｉ細胞と２：１の比で５時間共培養した。
【図10B】ＮＫ細胞においてＳＨＰ１を破壊すると、抗腫瘍効果が高まる。様々なエフェクター：標的比での溶解パーセント、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７ａのパーセンテージ、ならびに生細胞または死細胞のパーセンテージを示している。
【0042】
【図11】ＮＫ－ＣＡＲ細胞においてＳＨＰ１を破壊すると、アポトーシスアッセイによって評価される抗腫瘍効果が高まる。
【0043】
【図12A】７日目のＦＡＣＳベースのＮＫＧ２Ａノックアウト効率。
【図12B】拡大されたＮＫ細胞においてＮＫＧ２Ａを破壊すると、抗腫瘍効果が高まる。
【図12C】ＮＫ－ＣＡＲ細胞においてＮＫＧ２Ａを破壊すると、Ｒａｊｉ標的に対する抗腫瘍効果が高まる。
【0044】
【図13】別の遺伝子セット、つまり、ＴＩＧＩＴ（Ｔ）、ＣＤ９６（Ｃ）、ＣＩＳＨ（ＣＨ）およびアデノシン（ＡＤＯＲＡ２Ａ）（Ａ）を用いて、アプローチを検証した。この遺伝子セットの場合、１回目のエレクトロポレーションの間にＴＩＧＩＴおよびＣＤ９６を１セットのＮＫ細胞においてノックアウトした。ＴＩＧＩＴおよびＣＤ９６ ＫＯ細胞における２回目のノックアウトでは、ＣＩＳＨおよびアデノシン（ＡＤＯＲＡ２Ａ）を標的化した。両方の回のエレクトロポレーションについて、ＰＣＲおよびフローサイトメトリーを使用してノックアウト効率を検証することに成功した。フローパネル内の赤色（右側のピーク）および青色（左側のピーク）のヒストグラムは、それぞれ、ＣＲＩＳＰＲ ＫＯの前および後のタンパク質の発現を表している。
【0045】
【図14】ＮＫ細胞において複数の遺伝子を破壊すると、抗腫瘍効果が高まる。これを評価するために、複数の遺伝子（ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦＢＲＩＩおよびアデノシン（ＡＤＯＲＡ２Ａ））のノックアウト細胞およびｃａｓ９だけをエレクトロポレーションした細胞を、コントロールとして、Ｋ５６２（ＮＫ感受性）細胞およびＲａｊｉ（ＮＫ抵抗性）細胞とともに、５時間使用した。ＮＫ細胞の機能をフローサイトメトリー測定によって評価したところ、標的細胞株による刺激を受けたとき、ＫＯ細胞ではＴＮＦα、ＩＦＮγおよびＣＤ１０７ａの増加が観察された。
【0046】
【図15】ＮＫ細胞において複数の遺伝子を破壊すると、抗腫瘍効果が高まる。これを評価するために、複数の遺伝子（ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦＢＲＩＩ）のノックアウト細胞およびｃａｓ９だけをエレクトロポレーションした細胞を、コントロールとして使用した。ＮＫＧ２Ａの発現をフローサイトメトリーによって確認した。外来性ＴＧＦ－βを添加しても、ＫＯ ＣＡＲ－ＮＫ細胞においてｐＳＭＡＤの活性化は誘導されなかった。
【0047】
【図16】ＮＫ－ＣＡＲ細胞において複数の遺伝子（ＮＫＧ２Ａ、ＴＧＦβＲ２およびＣＩＳＨ）を破壊すると、抗腫瘍効果が高まる。
【0048】
【図17】ＴＧＦβＲ２のＫＯは、ＴＧＦβの抑制作用からＮＫ－ＣＡＲ細胞を守る。
【0049】
【図18】マルチプレックス遺伝子編集は、種々のＮＫ－ＣＡＲ構築物で、種々の標的に対して再現性がある。
【0050】
【図19】複数の阻害性遺伝子のマルチプレックス遺伝子編集は、ＮＫの構造を維持し、ＴＦＧβによって誘導される疲弊からＮＫ細胞を守る。
【発明を実施するための形態】
【0051】
ある特定の実施形態において、本開示は、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９技術を用いて、ヒト
免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＣＡＲを形質導入されたＴ細胞またはＣＡＲを形
質導入されたＮＫ細胞）において２つ以上の遺伝子（例えば、遺伝子（例えば、アデノシ
ン２ａレセプター、ＴＧＦβＲ２、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴおよび／またはＣＩＳＨをは
じめとした表１に列挙される遺伝子））を同時にノックダウン（またはノックアウト）す
る新規アプローチを提供する。それらの免疫細胞は、末梢血または臍帯血またはそれらの
組み合わせに由来し得る。
免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＣＡＲを形質導入されたＴ細胞またはＣＡＲを形
質導入されたＮＫ細胞）において２つ以上の遺伝子（例えば、遺伝子（例えば、アデノシ
ン２ａレセプター、ＴＧＦβＲ２、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴおよび／またはＣＩＳＨをは
じめとした表１に列挙される遺伝子））を同時にノックダウン（またはノックアウト）す
る新規アプローチを提供する。それらの免疫細胞は、末梢血または臍帯血またはそれらの
組み合わせに由来し得る。
【0052】
本研究は、これらのタンパク質の低発現が、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の機能の改善、イン
ビボにおける増殖および持続性ならびに細胞傷害性と相関することを実証した。このスト
ラテジーはまた、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞およびｉＮＫＴ細胞を、ＴＧＦβおよび
アデノシンによって主に駆動される免疫抑制性の腫瘍微小環境から守る。したがって、本
方法を用いることにより、様々な養子細胞療法用の生成物（例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞（
例えば、ウイルス特異的Ｔ細胞および制御性Ｔ細胞）、Ｂ細胞（例えば、制御性Ｂ細胞）
、ＣＡＲを形質導入されたＮＫ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ならびにＴＣＲによって操作され
たＴおよびＮＫ細胞、ｉＮＫＴ細胞、ＮＫＴ細胞）の有効性を改善することができる。そ
の養子細胞療法用の生成物は、例えば癌（例えば、血液悪性腫瘍または固形悪性腫瘍）か
ら感染症および免疫障害にまで及ぶ様々な疾患を処置するために使用され得る。
ビボにおける増殖および持続性ならびに細胞傷害性と相関することを実証した。このスト
ラテジーはまた、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞およびｉＮＫＴ細胞を、ＴＧＦβおよび
アデノシンによって主に駆動される免疫抑制性の腫瘍微小環境から守る。したがって、本
方法を用いることにより、様々な養子細胞療法用の生成物（例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞（
例えば、ウイルス特異的Ｔ細胞および制御性Ｔ細胞）、Ｂ細胞（例えば、制御性Ｂ細胞）
、ＣＡＲを形質導入されたＮＫ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ならびにＴＣＲによって操作され
たＴおよびＮＫ細胞、ｉＮＫＴ細胞、ＮＫＴ細胞）の有効性を改善することができる。そ
の養子細胞療法用の生成物は、例えば癌（例えば、血液悪性腫瘍または固形悪性腫瘍）か
ら感染症および免疫障害にまで及ぶ様々な疾患を処置するために使用され得る。
【0053】
特定の実施形態において、上記免疫細胞は、少なくとも１つのＣＡＲを発現する。ＣＡ
Ｒ技術は、過去数年間でいくつもの進歩が見られた。実際に、ＣＡＲ－ＣＤ１９が、Ｂ細
胞白血病およびリンパ腫を有する患者において目覚ましい臨床結果を示し、昨年、２つの
ＣＡＲ Ｔ製品がＦＤＡに承認された。ＣＡＲを形質導入されたＴ細胞が、過去数年間で
先頭に立ったが、たくさんの前臨床研究、ならびに本出願人らが主導する第Ｉ／ＩＩ相Ｃ
ＡＲ ＮＫ試験も、癌に対してＣＡＲ－ＮＫ細胞の有効性を示した。ＣＡＲ技術が前進し
ているにもかかわらず、未だにＣＡＲは、大部分がウイルスベクターを用いてＴ細胞また
はＮＫ細胞に形質導入されており、ウイルスベクターは、ランダムにしか細胞のＤＮＡに
インテグレートせず、クローン増殖、癌化、導入遺伝子の発現の変化または転写のサイレ
ンシングをもたらす恐れがある。したがって、特定のＤＮＡ遺伝子座へのＣＡＲの挿入を
標的化する方法を見つけることが有益であろう。
Ｒ技術は、過去数年間でいくつもの進歩が見られた。実際に、ＣＡＲ－ＣＤ１９が、Ｂ細
胞白血病およびリンパ腫を有する患者において目覚ましい臨床結果を示し、昨年、２つの
ＣＡＲ Ｔ製品がＦＤＡに承認された。ＣＡＲを形質導入されたＴ細胞が、過去数年間で
先頭に立ったが、たくさんの前臨床研究、ならびに本出願人らが主導する第Ｉ／ＩＩ相Ｃ
ＡＲ ＮＫ試験も、癌に対してＣＡＲ－ＮＫ細胞の有効性を示した。ＣＡＲ技術が前進し
ているにもかかわらず、未だにＣＡＲは、大部分がウイルスベクターを用いてＴ細胞また
はＮＫ細胞に形質導入されており、ウイルスベクターは、ランダムにしか細胞のＤＮＡに
インテグレートせず、クローン増殖、癌化、導入遺伝子の発現の変化または転写のサイレ
ンシングをもたらす恐れがある。したがって、特定のＤＮＡ遺伝子座へのＣＡＲの挿入を
標的化する方法を見つけることが有益であろう。
【0054】
したがって、１つの実施形態において、本開示は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を用いて、
特定の遺伝子の遺伝子座（例えば、阻害性遺伝子またはチェックポイントタンパク質の遺
伝子座）にＣＡＲを挿入するための方法を提供する。遺伝子の遺伝子座におけるＣＡＲの
挿入は、所望であれば必要に応じてそのＣＡＲをその遺伝子のプロモーターの支配下に置
きつつ、同時に遺伝子の発現を妨害するためにも使用することができる。具体的には、本
方法は、ＡＡＶ６ベクターおよびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術を用いて、阻害性遺伝子（
例えば、ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＳＨＰ１またはＴＧ
ＦβＲ２を含むがこれらに限定されない表１に列挙される遺伝子など）の遺伝子座におけ
るＣＡＲの挿入を導き得る。阻害性遺伝子の遺伝子座におけるＣＡＲの挿入により、ＣＡ
Ｒの発現がチェックポイントのプロモーターの制御下になって、腫瘍微小環境においてア
ップレギュレートされることも可能にしつつ、チェックポイント分子（例えば）の阻害効
果を妨害することができる。これは、固形腫瘍にＣＡＲ治療を適用する場合に有用であり
、ここで、チェックポイント分子のアップレギュレーションは、ＣＡＲ治療の成功に悪影
響を及ぼし得る。したがって、高い安全性プロファイルを有し得るＣＡＲ挿入方法を用い
て養子細胞療法（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ、ＮＫＴまたはｉＮＫＴ細胞）を作製す
るためのさらなる方法が提供される。
Ｉ．定義
特定の遺伝子の遺伝子座（例えば、阻害性遺伝子またはチェックポイントタンパク質の遺
伝子座）にＣＡＲを挿入するための方法を提供する。遺伝子の遺伝子座におけるＣＡＲの
挿入は、所望であれば必要に応じてそのＣＡＲをその遺伝子のプロモーターの支配下に置
きつつ、同時に遺伝子の発現を妨害するためにも使用することができる。具体的には、本
方法は、ＡＡＶ６ベクターおよびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術を用いて、阻害性遺伝子（
例えば、ＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＳＨＰ１またはＴＧ
ＦβＲ２を含むがこれらに限定されない表１に列挙される遺伝子など）の遺伝子座におけ
るＣＡＲの挿入を導き得る。阻害性遺伝子の遺伝子座におけるＣＡＲの挿入により、ＣＡ
Ｒの発現がチェックポイントのプロモーターの制御下になって、腫瘍微小環境においてア
ップレギュレートされることも可能にしつつ、チェックポイント分子（例えば）の阻害効
果を妨害することができる。これは、固形腫瘍にＣＡＲ治療を適用する場合に有用であり
、ここで、チェックポイント分子のアップレギュレーションは、ＣＡＲ治療の成功に悪影
響を及ぼし得る。したがって、高い安全性プロファイルを有し得るＣＡＲ挿入方法を用い
て養子細胞療法（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ、ＮＫＴまたはｉＮＫＴ細胞）を作製す
るためのさらなる方法が提供される。
Ｉ．定義
【0055】
本明細書中で使用されるとき、特定の構成要素に関する「本質的に含まない」は、その
特定の構成要素が、意図的に組成物に製剤化されていないことおよび／または夾雑物とし
てでさえもしくは微量でさえ存在しないことを意味するために本明細書中で使用される。
ゆえに、ある組成物の任意の意図されない混入に起因する、その特定の構成要素の総量は
、０．０５％未満、好ましくは、０．０１％未満である。標準的な分析方法ではその特定
の構成要素の量を検出できない組成物が最も好ましい。
特定の構成要素が、意図的に組成物に製剤化されていないことおよび／または夾雑物とし
てでさえもしくは微量でさえ存在しないことを意味するために本明細書中で使用される。
ゆえに、ある組成物の任意の意図されない混入に起因する、その特定の構成要素の総量は
、０．０５％未満、好ましくは、０．０１％未満である。標準的な分析方法ではその特定
の構成要素の量を検出できない組成物が最も好ましい。
【0056】
本明細書中で使用されるとき、「ａ」または「ａｎ」は、１つ以上を意味し得る。請求
項で使用されるとき、語「ａ」または「ａｎ」は、語「～を含む」とともに使用されると
き、１つまたは１つより多いことを意味し得る。本明細書中で使用されるとき、「別の」
は、少なくとも第２のものまたはそれ以上のものを意味し得る。なおもさらには、用語「
～を有する」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「～を含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎ
ｇ）」および「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、相互交換可能であり、当業者は
、これらの用語がオープンエンドの用語であることを承知している。具体的な実施形態に
おいて、本開示の態様は、例えば、本開示の１つ以上の配列「から本質的になり」得るか
、またはそれら「からなり」得る。本発明のいくつかの実施形態は、本開示の１つ以上の
エレメント、方法工程および／または方法からなり得るか、またはそれらから本質的にな
り得る。本明細書中に記載される任意の方法または組成物は、本明細書中に記載される他
の任意の方法または組成物に対して実行され得ることが企図される。本願の範囲は、本明
細書に記載されるプロセス、機械、製造、組成物、手段、方法および工程の特定の実施形
態に限定されると意図されていない。本明細書中で使用されるとき、用語「または」およ
び「および／または」は、複数の構成要素を組み合わせてまたは互いから排除して記載す
るために使用される。例えば、「ｘ、ｙおよび／またはｚ」とは、「ｘ」のみ、「ｙ」の
み、「ｚ」のみ、「ｘ、ｙおよびｚ」、「（ｘおよびｙ）またはｚ」、「ｘまたは（ｙお
よびｚ）」または「ｘまたはｙまたはｚ」のことを指し得る。ｘ、ｙまたはｚが、ある実
施形態から明確に排除され得ることが明確に企図される。
項で使用されるとき、語「ａ」または「ａｎ」は、語「～を含む」とともに使用されると
き、１つまたは１つより多いことを意味し得る。本明細書中で使用されるとき、「別の」
は、少なくとも第２のものまたはそれ以上のものを意味し得る。なおもさらには、用語「
～を有する」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「～を含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎ
ｇ）」および「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、相互交換可能であり、当業者は
、これらの用語がオープンエンドの用語であることを承知している。具体的な実施形態に
おいて、本開示の態様は、例えば、本開示の１つ以上の配列「から本質的になり」得るか
、またはそれら「からなり」得る。本発明のいくつかの実施形態は、本開示の１つ以上の
エレメント、方法工程および／または方法からなり得るか、またはそれらから本質的にな
り得る。本明細書中に記載される任意の方法または組成物は、本明細書中に記載される他
の任意の方法または組成物に対して実行され得ることが企図される。本願の範囲は、本明
細書に記載されるプロセス、機械、製造、組成物、手段、方法および工程の特定の実施形
態に限定されると意図されていない。本明細書中で使用されるとき、用語「または」およ
び「および／または」は、複数の構成要素を組み合わせてまたは互いから排除して記載す
るために使用される。例えば、「ｘ、ｙおよび／またはｚ」とは、「ｘ」のみ、「ｙ」の
み、「ｚ」のみ、「ｘ、ｙおよびｚ」、「（ｘおよびｙ）またはｚ」、「ｘまたは（ｙお
よびｚ）」または「ｘまたはｙまたはｚ」のことを指し得る。ｘ、ｙまたはｚが、ある実
施形態から明確に排除され得ることが明確に企図される。
【0057】
請求項での用語「または」の使用は、選択肢だけを指すと明示的に示されない限り、ま
たはそれらの選択肢が相互排他的でない限り、「および／または」を意味するために使用
されるが、本開示は、選択肢だけおよび「および／または」を指すという定義を支持する
。本明細書中で使用されるとき、「別の」は、少なくとも第２のものまたはそれ以上のも
のを意味し得る。用語「約」、「実質的に」および「およそ」は、一般に、述べられてい
る値プラスまたはマイナス５％を意味する。
たはそれらの選択肢が相互排他的でない限り、「および／または」を意味するために使用
されるが、本開示は、選択肢だけおよび「および／または」を指すという定義を支持する
。本明細書中で使用されるとき、「別の」は、少なくとも第２のものまたはそれ以上のも
のを意味し得る。用語「約」、「実質的に」および「およそ」は、一般に、述べられてい
る値プラスまたはマイナス５％を意味する。
【0058】
本明細書全体にわたる「１つの実施形態」、「ある実施形態」、「特定の実施形態」、
「関連する実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加の実施形態」または「さらなる
実施形態」またはそれらの組み合わせに対する言及は、その実施形態に関連して記載され
る特定の特徴、構造または特性が、本開示の少なくとも１つの実施形態に含められること
を意味する。したがって、本明細書全体にわたる様々な箇所における前述の句の出現は、
必ずしもすべてが同じ実施形態について言及しているわけではない。さらに、特定の特徴
、構造または特性が、１つ以上の実施形態において任意の好適な様式で組み合わされ得る
。
「関連する実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加の実施形態」または「さらなる
実施形態」またはそれらの組み合わせに対する言及は、その実施形態に関連して記載され
る特定の特徴、構造または特性が、本開示の少なくとも１つの実施形態に含められること
を意味する。したがって、本明細書全体にわたる様々な箇所における前述の句の出現は、
必ずしもすべてが同じ実施形態について言及しているわけではない。さらに、特定の特徴
、構造または特性が、１つ以上の実施形態において任意の好適な様式で組み合わされ得る
。
【0059】
「免疫障害」、「免疫関連障害」または「免疫媒介性障害」とは、免疫応答が、その疾
患の発症または進行において重要な役割を果たす障害のことを指す。免疫媒介性障害とし
ては、自己免疫障害、同種移植片拒絶、移植片対宿主病ならびに炎症状態およびアレルギ
ー状態が挙げられる。
患の発症または進行において重要な役割を果たす障害のことを指す。免疫媒介性障害とし
ては、自己免疫障害、同種移植片拒絶、移植片対宿主病ならびに炎症状態およびアレルギ
ー状態が挙げられる。
【0060】
「免疫応答」は、刺激に対する、Ｂ細胞またはＴ細胞または自然免疫細胞などの免疫系
細胞の応答である。１つの実施形態において、応答は、特定の抗原に特異的である（「抗
原特異的応答」）。
細胞の応答である。１つの実施形態において、応答は、特定の抗原に特異的である（「抗
原特異的応答」）。
【0061】
本明細書中で使用される用語「阻害性遺伝子」とは、その遺伝子産物が、１つ以上のタ
イプの免疫細胞の活性、増殖および／または持続性にとって直接または間接的に有害であ
る遺伝子のことを指す。
イプの免疫細胞の活性、増殖および／または持続性にとって直接または間接的に有害であ
る遺伝子のことを指す。
【0062】
「自己免疫疾患」とは、免疫系が、正常な宿主の一部である抗原（すなわち、自己抗原
）に対して免疫応答（例えば、Ｂ細胞応答またはＴ細胞応答）を起こし、その結果、組織
が傷害される疾患のことを指す。自己抗原は、宿主細胞に由来し得るか、または共生生物
（例えば、通常、粘膜表面にコロニー形成する微生物（共生生物として知られる））に由
来し得る。
）に対して免疫応答（例えば、Ｂ細胞応答またはＴ細胞応答）を起こし、その結果、組織
が傷害される疾患のことを指す。自己抗原は、宿主細胞に由来し得るか、または共生生物
（例えば、通常、粘膜表面にコロニー形成する微生物（共生生物として知られる））に由
来し得る。
【0063】
本明細書中で使用される用語「操作された」とは、細胞、核酸、ポリペプチド、ベクタ
ーなどをはじめとした、人間の手によって作製された実体のことを指す。少なくともいく
つかの場合において、操作された実体は、合成物であり、天然に存在しないエレメントま
たは本開示において使用されるように構成されたエレメントを含む。
ーなどをはじめとした、人間の手によって作製された実体のことを指す。少なくともいく
つかの場合において、操作された実体は、合成物であり、天然に存在しないエレメントま
たは本開示において使用されるように構成されたエレメントを含む。
【0064】
疾患または状態を「処置する」またはそれらの処置とは、その疾患の徴候または症状を
軽減する目的で、１つ以上の薬物を患者に投与することを含み得るプロトコルを実行する
ことを指す。処置の望ましい効果としては、疾患の進行速度の低下、疾患状態の回復また
は緩和、および予後の緩解または改善が挙げられる。軽減は、現れる疾患または状態の徴
候または症状が現れる前ならびに現れた後において生じ得る。したがって、「処置する」
または「処置」は、疾患または望ましくない状態を「予防する」またはそれらの「予防」
を含み得る。さらに、「処置する」または「処置」は、徴候または症状の完全な軽減を必
要とせず、治癒を必要とせず、詳細には、患者に対して周辺効果しか及ぼさないプロトコ
ルを含む。
軽減する目的で、１つ以上の薬物を患者に投与することを含み得るプロトコルを実行する
ことを指す。処置の望ましい効果としては、疾患の進行速度の低下、疾患状態の回復また
は緩和、および予後の緩解または改善が挙げられる。軽減は、現れる疾患または状態の徴
候または症状が現れる前ならびに現れた後において生じ得る。したがって、「処置する」
または「処置」は、疾患または望ましくない状態を「予防する」またはそれらの「予防」
を含み得る。さらに、「処置する」または「処置」は、徴候または症状の完全な軽減を必
要とせず、治癒を必要とせず、詳細には、患者に対して周辺効果しか及ぼさないプロトコ
ルを含む。
【0065】
本願全体にわたって使用される用語「治療効果」または「治療的に有効な」とは、この
状態の医学的処置に関して被験体の福祉を増進または向上させる何らかのことを指す。こ
れには、ある疾患の徴候または症状の頻度または重症度の低下が含まれるが、これらに限
定されない。例えば、癌の処置は、例えば、腫瘍サイズの減少、腫瘍の侵襲性の低下、癌
の成長速度の低下、または転移の予防を含み得る。癌の処置とは、癌を有する被験体の生
存時間の延長のことも指し得る。
状態の医学的処置に関して被験体の福祉を増進または向上させる何らかのことを指す。こ
れには、ある疾患の徴候または症状の頻度または重症度の低下が含まれるが、これらに限
定されない。例えば、癌の処置は、例えば、腫瘍サイズの減少、腫瘍の侵襲性の低下、癌
の成長速度の低下、または転移の予防を含み得る。癌の処置とは、癌を有する被験体の生
存時間の延長のことも指し得る。
【0066】
「被験体」および「患者」とは、ヒトまたは非ヒト、例えば、霊長類、哺乳動物および
脊椎動物のことを指す。特定の実施形態において、被験体は、ヒトである。
脊椎動物のことを指す。特定の実施形態において、被験体は、ヒトである。
【0067】
本明細書中で使用されるとき、「哺乳動物」は、本発明の方法にとって適切な被験体で
ある。哺乳動物は、ヒトを含む、高等脊椎動物の哺乳綱の任意のメンバーであり得、生児
出生、体毛、および子を養うための乳を分泌する女性（雌）の乳腺を特徴とし得る。さら
に、哺乳動物は、気候条件の変動にもかかわらず体温を一定に維持する能力を特徴とする
。哺乳動物の例は、ヒト、ネコ、イヌ、ウシ、マウス、ラット、ウマ、ヤギ、ヒツジおよ
びチンパンジーである。哺乳動物は、「患者」または「被験体」または「個体」と称され
ることがある。
ある。哺乳動物は、ヒトを含む、高等脊椎動物の哺乳綱の任意のメンバーであり得、生児
出生、体毛、および子を養うための乳を分泌する女性（雌）の乳腺を特徴とし得る。さら
に、哺乳動物は、気候条件の変動にもかかわらず体温を一定に維持する能力を特徴とする
。哺乳動物の例は、ヒト、ネコ、イヌ、ウシ、マウス、ラット、ウマ、ヤギ、ヒツジおよ
びチンパンジーである。哺乳動物は、「患者」または「被験体」または「個体」と称され
ることがある。
【0068】
句「薬学的にまたは薬理学的に許容され得る」とは、ヒトなどの動物に適宜投与された
とき、有害反応、アレルギー反応または他の不都合な反応をもたらさない分子実体および
組成物のことを指す。抗体またはさらなる活性成分を含む薬学的組成物の調製は、本開示
に照らせば当業者に公知である。さらに、動物（例えば、ヒト）への投与の場合、調製物
は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓが要求す
る無菌性、発熱性、一般的な安全性および純度の規格を満たすべきであることが理解され
る。
とき、有害反応、アレルギー反応または他の不都合な反応をもたらさない分子実体および
組成物のことを指す。抗体またはさらなる活性成分を含む薬学的組成物の調製は、本開示
に照らせば当業者に公知である。さらに、動物（例えば、ヒト）への投与の場合、調製物
は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓが要求す
る無菌性、発熱性、一般的な安全性および純度の規格を満たすべきであることが理解され
る。
【0069】
本明細書中で使用されるとき、「薬学的に許容され得るキャリア」は、当業者に公知で
あるように、任意のおよびすべての水性溶媒（例えば、水、アルコール溶液／水溶液、食
塩水、非経口ビヒクル、例えば、塩化ナトリウム、リンゲルデキストロースなど）、非水
溶媒（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油および注射可能
な有機エステル、例えば、オレイン酸エチル）、分散媒、コーティング、界面活性剤、酸
化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤または抗真菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性
ガス）、等張剤、吸収遅延剤、塩、薬物、薬物安定剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、
潤滑剤、甘味剤、香味剤、色素、流動性および栄養補給剤、そのような同様の材料ならび
にそれらの組み合わせを含む。薬学的組成物中の様々な構成要素のｐＨおよび正確な濃度
は、周知のパラメータに従って調整される。
あるように、任意のおよびすべての水性溶媒（例えば、水、アルコール溶液／水溶液、食
塩水、非経口ビヒクル、例えば、塩化ナトリウム、リンゲルデキストロースなど）、非水
溶媒（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油および注射可能
な有機エステル、例えば、オレイン酸エチル）、分散媒、コーティング、界面活性剤、酸
化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤または抗真菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性
ガス）、等張剤、吸収遅延剤、塩、薬物、薬物安定剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、
潤滑剤、甘味剤、香味剤、色素、流動性および栄養補給剤、そのような同様の材料ならび
にそれらの組み合わせを含む。薬学的組成物中の様々な構成要素のｐＨおよび正確な濃度
は、周知のパラメータに従って調整される。
【0070】
本明細書中で使用されるとき、遺伝子の「破壊」とは、破壊が無い場合の遺伝子産物の
発現レベルと比べて、ある細胞における対象遺伝子によってコードされる１つ以上の遺伝
子産物の発現が無くなることまたは低下することを指す。例示的な遺伝子産物としては、
遺伝子によってコードされるｍＲＮＡおよびタンパク質産物が挙げられる。破壊は、いく
つかの場合では、一過性または可逆的であり、他の場合では、永続的である。切断型また
は非機能性の産物が生成され得るという事実があるにもかかわらず、破壊は、いくつかの
場合において、機能的なまたは完全長のタンパク質またはｍＲＮＡの破壊である。本明細
書中のいくつかの実施形態において、遺伝子の活性または機能は、発現とは全く異なって
妨害される。遺伝子破壊は、一般に、人工的な方法、すなわち、化合物、分子、複合体も
しくは組成物の添加もしくは導入、および／または当該遺伝子の核酸もしくは当該遺伝子
に関連する核酸の、ＤＮＡレベルなどでの破壊によって誘導される。遺伝子破壊のための
例示的な方法としては、遺伝子のサイレンシング、ノックダウン、ノックアウト、および
／または遺伝子編集などの遺伝子破壊の手法が挙げられる。例としては、一般に発現の一
過性の低下をもたらすアンチセンス技術（例えば、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡお
よび／またはリボザイム）、ならびに例えば切断および／または相同組換えの誘導によっ
て、標的化された遺伝子の不活性化または破壊をもたらす遺伝子編集の手法が挙げられる
。例としては、挿入、変異および欠失が挙げられる。破壊は、通常、遺伝子によってコー
ドされる正常な産物または「野生型」産物の発現を阻止し、かつ／またはその発現を完全
に無くす。そのような遺伝子破壊の例示は、遺伝子または遺伝子の一部の挿入、フレーム
シフト変異およびミスセンス変異、欠失、ノックインならびにノックアウト（遺伝子全体
の欠失を含む）である。そのような破壊は、コード領域、例えば、１つ以上のエキソンに
おいて生じ得るため、停止コドンの挿入などによって完全長の産物、機能的な産物または
任意の産物を生成することができなくなる。そのような破壊は、遺伝子の転写を防ぐよう
に、プロモーターもしくはエンハンサーまたは転写の活性化に影響する他の領域における
破壊によっても生じ得る。遺伝子破壊には、相同組換えによる標的化された遺伝子不活性
化を含む遺伝子ターゲティングが含まれる。
ＩＩ．マルチプレックス遺伝子編集
発現レベルと比べて、ある細胞における対象遺伝子によってコードされる１つ以上の遺伝
子産物の発現が無くなることまたは低下することを指す。例示的な遺伝子産物としては、
遺伝子によってコードされるｍＲＮＡおよびタンパク質産物が挙げられる。破壊は、いく
つかの場合では、一過性または可逆的であり、他の場合では、永続的である。切断型また
は非機能性の産物が生成され得るという事実があるにもかかわらず、破壊は、いくつかの
場合において、機能的なまたは完全長のタンパク質またはｍＲＮＡの破壊である。本明細
書中のいくつかの実施形態において、遺伝子の活性または機能は、発現とは全く異なって
妨害される。遺伝子破壊は、一般に、人工的な方法、すなわち、化合物、分子、複合体も
しくは組成物の添加もしくは導入、および／または当該遺伝子の核酸もしくは当該遺伝子
に関連する核酸の、ＤＮＡレベルなどでの破壊によって誘導される。遺伝子破壊のための
例示的な方法としては、遺伝子のサイレンシング、ノックダウン、ノックアウト、および
／または遺伝子編集などの遺伝子破壊の手法が挙げられる。例としては、一般に発現の一
過性の低下をもたらすアンチセンス技術（例えば、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡお
よび／またはリボザイム）、ならびに例えば切断および／または相同組換えの誘導によっ
て、標的化された遺伝子の不活性化または破壊をもたらす遺伝子編集の手法が挙げられる
。例としては、挿入、変異および欠失が挙げられる。破壊は、通常、遺伝子によってコー
ドされる正常な産物または「野生型」産物の発現を阻止し、かつ／またはその発現を完全
に無くす。そのような遺伝子破壊の例示は、遺伝子または遺伝子の一部の挿入、フレーム
シフト変異およびミスセンス変異、欠失、ノックインならびにノックアウト（遺伝子全体
の欠失を含む）である。そのような破壊は、コード領域、例えば、１つ以上のエキソンに
おいて生じ得るため、停止コドンの挿入などによって完全長の産物、機能的な産物または
任意の産物を生成することができなくなる。そのような破壊は、遺伝子の転写を防ぐよう
に、プロモーターもしくはエンハンサーまたは転写の活性化に影響する他の領域における
破壊によっても生じ得る。遺伝子破壊には、相同組換えによる標的化された遺伝子不活性
化を含む遺伝子ターゲティングが含まれる。
ＩＩ．マルチプレックス遺伝子編集
【0071】
ある特定の実施形態において、本開示は、任意のタイプの免疫細胞のマルチプレックス
遺伝子編集に関する。ＣＲＩＳＰＲは、免疫細胞において２つ以上の遺伝子（例えば、３
、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の遺伝子）の発現を妨害するために使
用することができる一例である。それらの遺伝子は、表１に列挙される遺伝子、例えば、
ＮＫ細胞レセプターＡ（ＮＫＧ２Ａ）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン７（ＳＩＧＬＥＣ－
７、ＣＤ３２８）、リンパ球活性化３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチンファミ
リーメンバー３（ＴＩＭ３、ＣＤ３６６、ＨＡＶＣＲ２）、サイトカイン誘導性ＳＨ２含
有タンパク質（ＣＩＳＨ、ＣＩＳ－１、ＳＯＣＳ）、フォークヘッドボックスＯ１（ＦＯ
ＸＯ１）、トランスフォーミング成長因子ベータレセプター２（ＴＧＦβＲ２）、Ｉｇお
よびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、ＣＤ９６、アデノシン
レセプター２Ａ（ＡＤＯＲＡ２）、核レセプターサブファミリー３グループＣメンバー１
（ＮＲ３Ｃ１）、プログラム細胞死１（ＰＤ１）、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ
Ｌ－１）、プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤＬ－２）、ＣＤ４７、シグナル調節タン
パク質アルファ（ＳＩＲＰＡ）、ＳＨ２ドメイン含有イノシトール５－ホスファターゼ１
（ＳＨＩＰ１）、ＡＤＡＭメタロペプチダーゼドメイン１７（ＡＤＡＭ１７）、リボソー
ムタンパク質Ｓ６（ＲＰＳ６）、真核生物翻訳開始因子４Ｅ結合タンパク質１（４ＥＢＰ
１）、ＣＤ２５、ＣＤ４０、インターロイキン２１レセプター（ＩＬ２１Ｒ）、細胞間接
着分子１（ＩＣＡＭ１）、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、インターロイキン２１レセプ
ター（ＩＬ１０Ｒ）、ＣＤ５、ＣＤ７から選択され得るか、または他の阻害性遺伝子も存
在し得る。遺伝子編集によって、複数の遺伝子の発現を同時に妨害することが可能になる
。
遺伝子編集に関する。ＣＲＩＳＰＲは、免疫細胞において２つ以上の遺伝子（例えば、３
、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の遺伝子）の発現を妨害するために使
用することができる一例である。それらの遺伝子は、表１に列挙される遺伝子、例えば、
ＮＫ細胞レセプターＡ（ＮＫＧ２Ａ）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン７（ＳＩＧＬＥＣ－
７、ＣＤ３２８）、リンパ球活性化３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチンファミ
リーメンバー３（ＴＩＭ３、ＣＤ３６６、ＨＡＶＣＲ２）、サイトカイン誘導性ＳＨ２含
有タンパク質（ＣＩＳＨ、ＣＩＳ－１、ＳＯＣＳ）、フォークヘッドボックスＯ１（ＦＯ
ＸＯ１）、トランスフォーミング成長因子ベータレセプター２（ＴＧＦβＲ２）、Ｉｇお
よびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、ＣＤ９６、アデノシン
レセプター２Ａ（ＡＤＯＲＡ２）、核レセプターサブファミリー３グループＣメンバー１
（ＮＲ３Ｃ１）、プログラム細胞死１（ＰＤ１）、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ
Ｌ－１）、プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤＬ－２）、ＣＤ４７、シグナル調節タン
パク質アルファ（ＳＩＲＰＡ）、ＳＨ２ドメイン含有イノシトール５－ホスファターゼ１
（ＳＨＩＰ１）、ＡＤＡＭメタロペプチダーゼドメイン１７（ＡＤＡＭ１７）、リボソー
ムタンパク質Ｓ６（ＲＰＳ６）、真核生物翻訳開始因子４Ｅ結合タンパク質１（４ＥＢＰ
１）、ＣＤ２５、ＣＤ４０、インターロイキン２１レセプター（ＩＬ２１Ｒ）、細胞間接
着分子１（ＩＣＡＭ１）、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、インターロイキン２１レセプ
ター（ＩＬ１０Ｒ）、ＣＤ５、ＣＤ７から選択され得るか、または他の阻害性遺伝子も存
在し得る。遺伝子編集によって、複数の遺伝子の発現を同時に妨害することが可能になる
。
【0072】
いくつかの実施形態において、遺伝子破壊は、その遺伝子において破壊をもたらすこと
（例えば、ノックアウト、挿入、ミスセンス変異またはフレームシフト変異、例えば、両
アレルフレームシフト変異、遺伝子の全部または一部の欠失、例えば、１つ以上のエキソ
ンもしくはゆえに一部分の欠失、および／またはノックイン）によって行われる。例えば
、破壊は、遺伝子またはその一部分の配列に標的化されるように特異的にデザインされた
、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）および転写活性化因子様エフェクターヌクレ
アーゼ（ＴＡＬＥＮ）などのＤＮＡ結合標的化ヌクレアーゼ、ならびにＣＲＩＳＰＲ会合
ヌクレアーゼ（Ｃａｓ）などのＲＮＡガイドヌクレアーゼをはじめとした、配列特異的ヌ
クレアーゼまたは標的化ヌクレアーゼによってもたらされ得る。
（例えば、ノックアウト、挿入、ミスセンス変異またはフレームシフト変異、例えば、両
アレルフレームシフト変異、遺伝子の全部または一部の欠失、例えば、１つ以上のエキソ
ンもしくはゆえに一部分の欠失、および／またはノックイン）によって行われる。例えば
、破壊は、遺伝子またはその一部分の配列に標的化されるように特異的にデザインされた
、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）および転写活性化因子様エフェクターヌクレ
アーゼ（ＴＡＬＥＮ）などのＤＮＡ結合標的化ヌクレアーゼ、ならびにＣＲＩＳＰＲ会合
ヌクレアーゼ（Ｃａｓ）などのＲＮＡガイドヌクレアーゼをはじめとした、配列特異的ヌ
クレアーゼまたは標的化ヌクレアーゼによってもたらされ得る。
【0073】
いくつかの実施形態において、破壊は、一過性または可逆的であり、その遺伝子の発現
は、後になって回復する。他の実施形態において、破壊は、可逆的または一過性でなく、
例えば、永続的である。
は、後になって回復する。他の実施形態において、破壊は、可逆的または一過性でなく、
例えば、永続的である。
【0074】
いくつかの実施形態において、遺伝子破壊は、その遺伝子における、通常は標的化様式
での、１つ以上の二本鎖切断および／または１つ以上の一本鎖切断の誘導によって行われ
る。いくつかの実施形態において、二本鎖または一本鎖の切断は、ヌクレアーゼ、例えば
、遺伝子標的化ヌクレアーゼなどのエンドヌクレアーゼによって行われる。いくつかの態
様において、その切断は、遺伝子のコード領域、例えば、エキソンにおいて誘導される。
例えば、いくつかの実施形態において、その誘導は、コード領域、例えば、第１のエキソ
ン、第２のエキソンまたはそれ以降のエキソンのＮ末端部分の近くにおいて生じる。
での、１つ以上の二本鎖切断および／または１つ以上の一本鎖切断の誘導によって行われ
る。いくつかの実施形態において、二本鎖または一本鎖の切断は、ヌクレアーゼ、例えば
、遺伝子標的化ヌクレアーゼなどのエンドヌクレアーゼによって行われる。いくつかの態
様において、その切断は、遺伝子のコード領域、例えば、エキソンにおいて誘導される。
例えば、いくつかの実施形態において、その誘導は、コード領域、例えば、第１のエキソ
ン、第２のエキソンまたはそれ以降のエキソンのＮ末端部分の近くにおいて生じる。
【0075】
上記免疫細胞には、ガイドＲＮＡおよびＣＲＩＳＰＲ酵素、またはＣＲＩＳＰＲ酵素を
コードするｍＲＮＡが導入され得る。いくつかの態様において、その細胞には、１つ、２
つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上のガイドＲＮＡが同時に導入される。例えば、その
細胞には、第１のエレクトロポレーションの間に１つ、２つまたは３つのガイドＲＮＡが
導入され得、次いで、第２のエレクトロポレーションなどの間に１つ、２つまたは３つの
さらなるガイドＲＮＡがさらに導入され得る。
コードするｍＲＮＡが導入され得る。いくつかの態様において、その細胞には、１つ、２
つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上のガイドＲＮＡが同時に導入される。例えば、その
細胞には、第１のエレクトロポレーションの間に１つ、２つまたは３つのガイドＲＮＡが
導入され得、次いで、第２のエレクトロポレーションなどの間に１つ、２つまたは３つの
さらなるガイドＲＮＡがさらに導入され得る。
【0076】
いくつかの実施形態において、遺伝子破壊は、アンチセンス法（例えば、ＲＮＡ干渉（
ＲＮＡｉ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短ヘアピン（ｓｈＲＮＡ）および／また
はリボザイム）を用いて達成され、それらを用いることにより、遺伝子の発現が選択的に
抑制または阻止される。ｓｉＲＮＡ技術は、遺伝子から転写されるｍＲＮＡのヌクレオチ
ド配列と相同な配列およびそのヌクレオチド配列と相補的な配列を有する二本鎖ＲＮＡ分
子を使用するＲＮＡｉである。ｓｉＲＮＡは、一般に、遺伝子から転写されるｍＲＮＡの
１つの領域と相同／相補的であるか、または種々の領域と相同／相補的である複数のＲＮ
Ａ分子を含むｓｉＲＮＡであり得る。いくつかの態様において、ｓｉＲＮＡは、ポリシス
トロニック構築物に含められる。
ＲＮＡｉ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短ヘアピン（ｓｈＲＮＡ）および／また
はリボザイム）を用いて達成され、それらを用いることにより、遺伝子の発現が選択的に
抑制または阻止される。ｓｉＲＮＡ技術は、遺伝子から転写されるｍＲＮＡのヌクレオチ
ド配列と相同な配列およびそのヌクレオチド配列と相補的な配列を有する二本鎖ＲＮＡ分
子を使用するＲＮＡｉである。ｓｉＲＮＡは、一般に、遺伝子から転写されるｍＲＮＡの
１つの領域と相同／相補的であるか、または種々の領域と相同／相補的である複数のＲＮ
Ａ分子を含むｓｉＲＮＡであり得る。いくつかの態様において、ｓｉＲＮＡは、ポリシス
トロニック構築物に含められる。
【0077】
いくつかの実施形態において、破壊は、遺伝子に特異的に結合するかまたはハイブリダ
イズする、ＤＮＡ標的化分子（例えば、ＤＮＡ結合タンパク質またはＤＮＡ結合核酸）ま
たはそれを含む複合体、化合物もしくは組成物を用いて達成される。いくつかの実施形態
において、ＤＮＡ標的化分子は、ＤＮＡ結合ドメイン、例えば、ジンクフィンガータンパ
ク質（ＺＦＰ）のＤＮＡ結合ドメイン、転写活性化因子様タンパク質（ＴＡＬ）のＤＮＡ
結合ドメインもしくはＴＡＬエフェクター（ＴＡＬＥ）のＤＮＡ結合ドメイン、クラスタ
ー化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）のＤＮＡ結合ドメイン、
またはメガヌクレアーゼのＤＮＡ結合ドメインを含む。ジンクフィンガー、ＴＡＬＥおよ
びＣＲＩＳＰＲシステムの結合ドメインは、例えば、天然に存在するジンクフィンガーま
たはＴＡＬＥタンパク質の認識ヘリックス領域の操作（１つ以上のアミノ酸の変更）を介
して、所定のヌクレオチド配列に結合するように操作され得る。操作されたＤＮＡ結合タ
ンパク質（ジンクフィンガーまたはＴＡＬＥ）は、天然に存在しないタンパク質である。
デザインに対する合理的基準としては、置換ルールの適用、ならびに既存のＺＦＰおよび
／またはＴＡＬＥのデザインおよび結合データの情報を保存しているデータベースにおけ
る情報を処理するためのコンピュータアルゴリズムが挙げられる。
イズする、ＤＮＡ標的化分子（例えば、ＤＮＡ結合タンパク質またはＤＮＡ結合核酸）ま
たはそれを含む複合体、化合物もしくは組成物を用いて達成される。いくつかの実施形態
において、ＤＮＡ標的化分子は、ＤＮＡ結合ドメイン、例えば、ジンクフィンガータンパ
ク質（ＺＦＰ）のＤＮＡ結合ドメイン、転写活性化因子様タンパク質（ＴＡＬ）のＤＮＡ
結合ドメインもしくはＴＡＬエフェクター（ＴＡＬＥ）のＤＮＡ結合ドメイン、クラスタ
ー化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）のＤＮＡ結合ドメイン、
またはメガヌクレアーゼのＤＮＡ結合ドメインを含む。ジンクフィンガー、ＴＡＬＥおよ
びＣＲＩＳＰＲシステムの結合ドメインは、例えば、天然に存在するジンクフィンガーま
たはＴＡＬＥタンパク質の認識ヘリックス領域の操作（１つ以上のアミノ酸の変更）を介
して、所定のヌクレオチド配列に結合するように操作され得る。操作されたＤＮＡ結合タ
ンパク質（ジンクフィンガーまたはＴＡＬＥ）は、天然に存在しないタンパク質である。
デザインに対する合理的基準としては、置換ルールの適用、ならびに既存のＺＦＰおよび
／またはＴＡＬＥのデザインおよび結合データの情報を保存しているデータベースにおけ
る情報を処理するためのコンピュータアルゴリズムが挙げられる。
【0078】
ＣＲＩＳＰＲ媒介性の破壊の場合、ガイドＲＮＡおよびエンドヌクレアーゼは、細胞ま
たは細胞内コンパートメントの内側への送達を可能にする当該分野で公知の任意の手段に
よって免疫細胞に導入され得、使用され得る作用物質／化学物質および／または分子（タ
ンパク質および核酸）としては、非限定的な例として、リポソーム送達手段、高分子キャ
リア、化学的キャリア、リポプレックス、ポリプレックス、デンドリマー、ナノ粒子、エ
マルジョン、天然のエンドサイトーシスまたは貪食経路、ならびにエレクトロポレーショ
ンなどの物理的な方法が挙げられる。具体的な態様では、エレクトロポレーションを用い
て、ガイドＲＮＡおよびエンドヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼをコードする核酸
を導入する。
たは細胞内コンパートメントの内側への送達を可能にする当該分野で公知の任意の手段に
よって免疫細胞に導入され得、使用され得る作用物質／化学物質および／または分子（タ
ンパク質および核酸）としては、非限定的な例として、リポソーム送達手段、高分子キャ
リア、化学的キャリア、リポプレックス、ポリプレックス、デンドリマー、ナノ粒子、エ
マルジョン、天然のエンドサイトーシスまたは貪食経路、ならびにエレクトロポレーショ
ンなどの物理的な方法が挙げられる。具体的な態様では、エレクトロポレーションを用い
て、ガイドＲＮＡおよびエンドヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼをコードする核酸
を導入する。
【0079】
例示的な１つの具体的な方法では、複数の遺伝子のＣＲＩＳＰＲノックアウトのための
方法は、臍帯血または末梢血からの、ＮＫ細胞などの免疫細胞の単離を含み得る。ＮＫ細
胞を単離し、照射済みのフィーダー細胞と、一例として１：２の比などで培養プレート上
に播種し得る。次いで、それらの細胞に、２００ＩＵ／ｍＬの濃度などのＩＬ－２の存在
下において、ｇＲＮＡおよびＣａｓ９をエレクトロポレーションし得る。培地は、一例と
して、１日おきに交換し得る。１～３日後に、ＮＫ細胞を単離してフィーダー細胞を除去
し、次いで、そのＮＫ細胞にＣＡＲ構築物を形質導入し得る。次いで、そのＮＫ細胞を、
さらなる遺伝子に対する第２のＣＲＩＳＰＲ Ｃａｓ９ノックアウトに供し得る。エレク
トロポレーションの後、ＮＫ細胞をフィーダー細胞とともに、例えば５～９日間、播種し
得る。
方法は、臍帯血または末梢血からの、ＮＫ細胞などの免疫細胞の単離を含み得る。ＮＫ細
胞を単離し、照射済みのフィーダー細胞と、一例として１：２の比などで培養プレート上
に播種し得る。次いで、それらの細胞に、２００ＩＵ／ｍＬの濃度などのＩＬ－２の存在
下において、ｇＲＮＡおよびＣａｓ９をエレクトロポレーションし得る。培地は、一例と
して、１日おきに交換し得る。１～３日後に、ＮＫ細胞を単離してフィーダー細胞を除去
し、次いで、そのＮＫ細胞にＣＡＲ構築物を形質導入し得る。次いで、そのＮＫ細胞を、
さらなる遺伝子に対する第２のＣＲＩＳＰＲ Ｃａｓ９ノックアウトに供し得る。エレク
トロポレーションの後、ＮＫ細胞をフィーダー細胞とともに、例えば５～９日間、播種し
得る。
【0080】
【表1】
【0081】
【表2】
【0082】
いくつかの実施形態において、本開示の免疫細胞は、２つ以上の遺伝子の発現が変更さ
れるように改変される。いくつかの実施形態において、遺伝子発現の変更は、その遺伝子
において破壊をもたらすこと（例えば、ノックアウト、挿入、ミスセンス変異またはフレ
ームシフト変異、例えば、両アレルフレームシフト変異、その遺伝子の全部または一部の
欠失、例えば、１つ以上のエキソンもしくはゆえに一部分の欠失、および／またはノック
イン）によって行われる。具体的な実施形態において、遺伝子発現の変更は、遺伝子また
はその一部分の配列に標的化されるように特異的にデザインされたＤＮＡ結合標的化ヌク
レアーゼ、例えば、ＣＲＩＳＰＲ会合ヌクレアーゼ（Ｃａｓ）などのＲＮＡガイドヌクレ
アーゼをはじめとした、配列特異的ヌクレアーゼまたは標的化ヌクレアーゼによってもた
らされ得る。
れるように改変される。いくつかの実施形態において、遺伝子発現の変更は、その遺伝子
において破壊をもたらすこと（例えば、ノックアウト、挿入、ミスセンス変異またはフレ
ームシフト変異、例えば、両アレルフレームシフト変異、その遺伝子の全部または一部の
欠失、例えば、１つ以上のエキソンもしくはゆえに一部分の欠失、および／またはノック
イン）によって行われる。具体的な実施形態において、遺伝子発現の変更は、遺伝子また
はその一部分の配列に標的化されるように特異的にデザインされたＤＮＡ結合標的化ヌク
レアーゼ、例えば、ＣＲＩＳＰＲ会合ヌクレアーゼ（Ｃａｓ）などのＲＮＡガイドヌクレ
アーゼをはじめとした、配列特異的ヌクレアーゼまたは標的化ヌクレアーゼによってもた
らされ得る。
【0083】
いくつかの実施形態において、遺伝子の発現、活性および／または機能の変更は、その
遺伝子を破壊することによって行われる。いくつかの態様において、遺伝子は、その発現
が、遺伝子改変が無い場合の発現または改変をもたらす構成要素の導入が無い場合の発現
と比べて、少なくとも１０、２０、３０もしくは４０％または約１０、２０、３０もしく
は４０％低下するように、通常、少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、９１、９２
、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％または約５０、６０、７
０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１０
０％低下するように、改変される。
遺伝子を破壊することによって行われる。いくつかの態様において、遺伝子は、その発現
が、遺伝子改変が無い場合の発現または改変をもたらす構成要素の導入が無い場合の発現
と比べて、少なくとも１０、２０、３０もしくは４０％または約１０、２０、３０もしく
は４０％低下するように、通常、少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、９１、９２
、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％または約５０、６０、７
０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１０
０％低下するように、改変される。
【0084】
いくつかの実施形態において、変更は、一過性または可逆的であり、所望であれば、遺
伝子の発現は、後になって回復する。他の実施形態において、変更は、可逆的または一過
性でなく、例えば、永続的である。
伝子の発現は、後になって回復する。他の実施形態において、変更は、可逆的または一過
性でなく、例えば、永続的である。
【0085】
いくつかの実施形態において、遺伝子の変更は、その遺伝子における、通常は標的化様
式での、１つ以上の二本鎖切断および／または１つ以上の一本鎖切断の誘導によって行わ
れる。いくつかの実施形態において、二本鎖または一本鎖の切断は、ヌクレアーゼ、例え
ば、遺伝子標的化ヌクレアーゼなどのエンドヌクレアーゼによって行われる。いくつかの
態様において、その切断は、遺伝子のコード領域、例えば、エキソンにおいて誘導される
。例えば、いくつかの実施形態において、その誘導は、コード領域、例えば、第１のエキ
ソン、第２のエキソンまたはそれ以降のエキソンのＮ末端部分の近くにおいて生じる。
式での、１つ以上の二本鎖切断および／または１つ以上の一本鎖切断の誘導によって行わ
れる。いくつかの実施形態において、二本鎖または一本鎖の切断は、ヌクレアーゼ、例え
ば、遺伝子標的化ヌクレアーゼなどのエンドヌクレアーゼによって行われる。いくつかの
態様において、その切断は、遺伝子のコード領域、例えば、エキソンにおいて誘導される
。例えば、いくつかの実施形態において、その誘導は、コード領域、例えば、第１のエキ
ソン、第２のエキソンまたはそれ以降のエキソンのＮ末端部分の近くにおいて生じる。
【0086】
いくつかの態様において、二本鎖または一本鎖の切断は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）
または相同組換え修復（ＨＤＲ）などによる細胞の修復プロセスを介した修復を受ける。
いくつかの態様において、この修復プロセスは、エラーが発生しやすく、遺伝子の完全な
ノックアウトをもたらし得る遺伝子の破壊、例えば、フレームシフト変異、例えば、両ア
レルのフレームシフト変異をもたらす。例えば、いくつかの態様において、破壊は、欠失
、変異および／または挿入を誘導することを含む。いくつかの実施形態では、破壊によっ
て、停止コドンが早期に存在するようになる。いくつかの態様において、挿入、欠失、転
座、フレームシフト変異および／または中途での停止コドンが存在することにより、遺伝
子の発現、活性および／または機能が妨害される。
または相同組換え修復（ＨＤＲ）などによる細胞の修復プロセスを介した修復を受ける。
いくつかの態様において、この修復プロセスは、エラーが発生しやすく、遺伝子の完全な
ノックアウトをもたらし得る遺伝子の破壊、例えば、フレームシフト変異、例えば、両ア
レルのフレームシフト変異をもたらす。例えば、いくつかの態様において、破壊は、欠失
、変異および／または挿入を誘導することを含む。いくつかの実施形態では、破壊によっ
て、停止コドンが早期に存在するようになる。いくつかの態様において、挿入、欠失、転
座、フレームシフト変異および／または中途での停止コドンが存在することにより、遺伝
子の発現、活性および／または機能が妨害される。
【0087】
いくつかの実施形態において、上記変更は、ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼ（ＲＧＥ
Ｎ）を介した変更など、１つ以上のＤＮＡ結合核酸を用いて行われる。例えば、上記変更
は、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）およびＣＲ
ＩＳＰＲ会合（Ｃａｓ）タンパク質を用いて行われ得る。一般に、「ＣＲＩＳＰＲシステ
ム」とは、ＣＲＩＳＰＲ会合（「Ｃａｓ」）遺伝子（Ｃａｓ遺伝子をコードする配列を含
む）、ｔｒａｃｒ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ）配列（例えば、ｔｒａｃｒＲＮＡまた
は活性な部分的ｔｒａｃｒＲＮＡ）、ｔｒａｃｒメイト配列（内在性のＣＲＩＳＰＲシス
テムの文脈では「直列反復配列」、およびｔｒａｃｒＲＮＡによってプロセシングされた
部分的な直列反復配列を包含する）、ガイド配列（内在性のＣＲＩＳＰＲシステムの文脈
では「スペーサー」とも称される）、ならびに／またはＣＲＩＳＰＲ遺伝子座由来の他の
配列および転写物の発現に関与するかまたはその活性を指示する転写物および他のエレメ
ントのことを総称する。
Ｎ）を介した変更など、１つ以上のＤＮＡ結合核酸を用いて行われる。例えば、上記変更
は、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）およびＣＲ
ＩＳＰＲ会合（Ｃａｓ）タンパク質を用いて行われ得る。一般に、「ＣＲＩＳＰＲシステ
ム」とは、ＣＲＩＳＰＲ会合（「Ｃａｓ」）遺伝子（Ｃａｓ遺伝子をコードする配列を含
む）、ｔｒａｃｒ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ）配列（例えば、ｔｒａｃｒＲＮＡまた
は活性な部分的ｔｒａｃｒＲＮＡ）、ｔｒａｃｒメイト配列（内在性のＣＲＩＳＰＲシス
テムの文脈では「直列反復配列」、およびｔｒａｃｒＲＮＡによってプロセシングされた
部分的な直列反復配列を包含する）、ガイド配列（内在性のＣＲＩＳＰＲシステムの文脈
では「スペーサー」とも称される）、ならびに／またはＣＲＩＳＰＲ遺伝子座由来の他の
配列および転写物の発現に関与するかまたはその活性を指示する転写物および他のエレメ
ントのことを総称する。
【0088】
ＣＲＩＳＰＲ／ＣａｓヌクレアーゼまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステム
は、ＤＮＡに配列特異的に結合する非コードＲＮＡ分子（ガイド）ＲＮＡ、およびヌクレ
アーゼ機能（例えば、２つのヌクレアーゼドメイン）を有するＣａｓタンパク質（例えば
、Ｃａｓ９）を含み得る。ＣＲＩＳＰＲシステムの１つ以上のエレメントが、Ｉ型、ＩＩ
型またはＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲシステムに由来し得、例えば、内在性のＣＲＩＳＰＲシス
テムを含む特定の生物（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に由
来し得る。
は、ＤＮＡに配列特異的に結合する非コードＲＮＡ分子（ガイド）ＲＮＡ、およびヌクレ
アーゼ機能（例えば、２つのヌクレアーゼドメイン）を有するＣａｓタンパク質（例えば
、Ｃａｓ９）を含み得る。ＣＲＩＳＰＲシステムの１つ以上のエレメントが、Ｉ型、ＩＩ
型またはＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲシステムに由来し得、例えば、内在性のＣＲＩＳＰＲシス
テムを含む特定の生物（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に由
来し得る。
【0089】
いくつかの態様において、ＣａｓヌクレアーゼおよびｇＲＮＡ（標的配列に特異的なｃ
ｒＲＮＡと既定のｔｒａｃｒＲＮＡとの融合物を含む）が、細胞に導入される。一般に、
ｇＲＮＡの５’末端における標的部位が、相補的な塩基対形成によって、Ｃａｓヌクレア
ーゼをその標的部位、例えば、遺伝子に標的化する。標的部位は、プロトスペーサー隣接
モチーフ（ＰＡＭ）配列（例えば、通常、ＮＧＧまたはＮＡＧ）のすぐ５’の位置に基づ
いて選択され得る。この点において、ｇＲＮＡは、標的ＤＮＡ配列に対応するようにガイ
ドＲＮＡの最初の２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１４、１２、１１または
１０ヌクレオチドを改変することによって、所望の配列に標的化される。一般に、ＣＲＩ
ＳＰＲシステムは、標的配列の部位においてＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進するエレメ
ントを特徴とする。通常、「標的配列」とは、一般に、ガイド配列が相補性を有するよう
にデザインされる配列のことを指し、標的配列とガイド配列とのハイブリダイゼーション
が、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進する。ハイブリダイゼーションを引き起こし、ＣＲ
ＩＳＰＲ複合体の形成を促進するのに十分な相補性があれば、完全な相補性は必ずしも必
要ない。
ｒＲＮＡと既定のｔｒａｃｒＲＮＡとの融合物を含む）が、細胞に導入される。一般に、
ｇＲＮＡの５’末端における標的部位が、相補的な塩基対形成によって、Ｃａｓヌクレア
ーゼをその標的部位、例えば、遺伝子に標的化する。標的部位は、プロトスペーサー隣接
モチーフ（ＰＡＭ）配列（例えば、通常、ＮＧＧまたはＮＡＧ）のすぐ５’の位置に基づ
いて選択され得る。この点において、ｇＲＮＡは、標的ＤＮＡ配列に対応するようにガイ
ドＲＮＡの最初の２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１４、１２、１１または
１０ヌクレオチドを改変することによって、所望の配列に標的化される。一般に、ＣＲＩ
ＳＰＲシステムは、標的配列の部位においてＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進するエレメ
ントを特徴とする。通常、「標的配列」とは、一般に、ガイド配列が相補性を有するよう
にデザインされる配列のことを指し、標的配列とガイド配列とのハイブリダイゼーション
が、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進する。ハイブリダイゼーションを引き起こし、ＣＲ
ＩＳＰＲ複合体の形成を促進するのに十分な相補性があれば、完全な相補性は必ずしも必
要ない。
【0090】
ＣＲＩＳＰＲシステムは、標的部位における二本鎖切断（ＤＳＢ）に続いて、本明細書
中で論じられるような破壊または変更を誘導し得る。他の実施形態では、「ニッカーゼ」
とみなされるＣａｓ９バリアントが、標的部位において一本鎖にニックを入れるために使
用される。例えば特異性を改善するために、対のニッカーゼを使用することができ、その
ニッカーゼの各々は、配列を標的化する異なるｇＲＮＡの対によって導かれ、ニックが同
時に導入されると、５’オーバーハングが導入される。他の実施形態では、遺伝子発現に
影響するように、触媒的に不活性なＣａｓ９が、転写抑制因子または転写活性化因子など
の異種エフェクタードメインに融合される。
中で論じられるような破壊または変更を誘導し得る。他の実施形態では、「ニッカーゼ」
とみなされるＣａｓ９バリアントが、標的部位において一本鎖にニックを入れるために使
用される。例えば特異性を改善するために、対のニッカーゼを使用することができ、その
ニッカーゼの各々は、配列を標的化する異なるｇＲＮＡの対によって導かれ、ニックが同
時に導入されると、５’オーバーハングが導入される。他の実施形態では、遺伝子発現に
影響するように、触媒的に不活性なＣａｓ９が、転写抑制因子または転写活性化因子など
の異種エフェクタードメインに融合される。
【0091】
標的配列は、ＤＮＡポリヌクレオチドまたはＲＮＡポリヌクレオチドなどの任意のポリ
ヌクレオチドを含み得る。標的配列は、細胞のオルガネラ内など、細胞の核または細胞質
に位置し得る。一般に、標的配列を含む標的化される遺伝子座への組換えのために使用さ
れ得る配列または鋳型は、「編集鋳型」または「編集ポリヌクレオチド」または「編集配
列」と称される。いくつかの態様では、外来性の鋳型ポリヌクレオチドが、編集鋳型と称
されることがある。いくつかの態様において、組換えは、相同組換えである。
ヌクレオチドを含み得る。標的配列は、細胞のオルガネラ内など、細胞の核または細胞質
に位置し得る。一般に、標的配列を含む標的化される遺伝子座への組換えのために使用さ
れ得る配列または鋳型は、「編集鋳型」または「編集ポリヌクレオチド」または「編集配
列」と称される。いくつかの態様では、外来性の鋳型ポリヌクレオチドが、編集鋳型と称
されることがある。いくつかの態様において、組換えは、相同組換えである。
【0092】
通常、内在性のＣＲＩＳＰＲシステムの文脈では、ＣＲＩＳＰＲ複合体（標的配列にハ
イブリダイズし、１つ以上のＣａｓタンパク質と複合体化するガイド配列を含む）の形成
によって、標的配列においてまたは標的配列の近くで（例えば、標的配列から１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０塩基対以内またはそれ以上以内において）
一方または両方の鎖の切断が生じる。野生型ｔｒａｃｒ配列の全部もしくは一部分（例え
ば、野生型ｔｒａｃｒ配列の約２０ヌクレオチド、約２６ヌクレオチド、約３２ヌクレオ
チド、約４５ヌクレオチド、約４８ヌクレオチド、約５４ヌクレオチド、約６３ヌクレオ
チド、約６７ヌクレオチド、約８５ヌクレオチドもしくはそれ以上または約２０ヌクレオ
チド超、約２６ヌクレオチド超、約３２ヌクレオチド超、約４５ヌクレオチド超、約４８
ヌクレオチド超、約５４ヌクレオチド超、約６３ヌクレオチド超、約６７ヌクレオチド超
、約８５ヌクレオチド超もしくはそれ以上）を含み得るかまたはそれからなり得るｔｒａ
ｃｒ配列も、ガイド配列に作動可能に連結されたｔｒａｃｒメイト配列の全部または一部
分へのｔｒａｃｒ配列の少なくとも一部分に沿ったハイブリダイゼーションなどによって
、ＣＲＩＳＰＲ複合体の一部を形成し得る。ｔｒａｃｒ配列は、ハイブリダイズし、ＣＲ
ＩＳＰＲ複合体の形成に参加する、ｔｒａｃｒメイト配列に対して十分な相補性（例えば
、最適にアラインメントされたとき、ｔｒａｃｒメイト配列の長さに沿って少なくとも５
０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％の配列相補性）を有する。
イブリダイズし、１つ以上のＣａｓタンパク質と複合体化するガイド配列を含む）の形成
によって、標的配列においてまたは標的配列の近くで（例えば、標的配列から１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０塩基対以内またはそれ以上以内において）
一方または両方の鎖の切断が生じる。野生型ｔｒａｃｒ配列の全部もしくは一部分（例え
ば、野生型ｔｒａｃｒ配列の約２０ヌクレオチド、約２６ヌクレオチド、約３２ヌクレオ
チド、約４５ヌクレオチド、約４８ヌクレオチド、約５４ヌクレオチド、約６３ヌクレオ
チド、約６７ヌクレオチド、約８５ヌクレオチドもしくはそれ以上または約２０ヌクレオ
チド超、約２６ヌクレオチド超、約３２ヌクレオチド超、約４５ヌクレオチド超、約４８
ヌクレオチド超、約５４ヌクレオチド超、約６３ヌクレオチド超、約６７ヌクレオチド超
、約８５ヌクレオチド超もしくはそれ以上）を含み得るかまたはそれからなり得るｔｒａ
ｃｒ配列も、ガイド配列に作動可能に連結されたｔｒａｃｒメイト配列の全部または一部
分へのｔｒａｃｒ配列の少なくとも一部分に沿ったハイブリダイゼーションなどによって
、ＣＲＩＳＰＲ複合体の一部を形成し得る。ｔｒａｃｒ配列は、ハイブリダイズし、ＣＲ
ＩＳＰＲ複合体の形成に参加する、ｔｒａｃｒメイト配列に対して十分な相補性（例えば
、最適にアラインメントされたとき、ｔｒａｃｒメイト配列の長さに沿って少なくとも５
０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％の配列相補性）を有する。
【0093】
ＣＲＩＳＰＲシステムの１つ以上のエレメントの発現によって、１つ以上の標的部位に
おいてＣＲＩＳＰＲ複合体の形成が指示されるように、そのＣＲＩＳＰＲシステムのそれ
らのエレメントの発現を駆動する１つ以上のベクターが細胞に導入され得る。また、構成
要素がタンパク質および／またはＲＮＡとして細胞に送達され得る。例えば、Ｃａｓ酵素
、ｔｒａｃｒメイト配列に連結されたガイド配列、およびｔｒａｃｒ配列がそれぞれ、別
個のベクター上の別個の調節エレメントに作動可能に連結され得る。あるいは、同じまた
は異なる調節エレメントから発現されるエレメントの２つ以上が、単一ベクターにおいて
組み合わされ得、ここで、１つ以上のさらなるベクターが、第１のベクターに含まれてい
ないＣＲＩＳＰＲシステムの任意の構成要素を提供する。そのベクターは、制限エンドヌ
クレアーゼ認識配列などの１つ以上の挿入部位（「クローニング部位」とも称される）を
含み得る。いくつかの実施形態において、１つ以上の挿入部位が、１つ以上のベクターの
１つ以上の配列エレメントの上流および／または下流に配置される。複数の異なるガイド
配列が使用されるとき、単一の発現構築物が、細胞内の異なる複数の対応する標的配列に
対してＣＲＩＳＰＲ活性を標的化するために使用され得る。
おいてＣＲＩＳＰＲ複合体の形成が指示されるように、そのＣＲＩＳＰＲシステムのそれ
らのエレメントの発現を駆動する１つ以上のベクターが細胞に導入され得る。また、構成
要素がタンパク質および／またはＲＮＡとして細胞に送達され得る。例えば、Ｃａｓ酵素
、ｔｒａｃｒメイト配列に連結されたガイド配列、およびｔｒａｃｒ配列がそれぞれ、別
個のベクター上の別個の調節エレメントに作動可能に連結され得る。あるいは、同じまた
は異なる調節エレメントから発現されるエレメントの２つ以上が、単一ベクターにおいて
組み合わされ得、ここで、１つ以上のさらなるベクターが、第１のベクターに含まれてい
ないＣＲＩＳＰＲシステムの任意の構成要素を提供する。そのベクターは、制限エンドヌ
クレアーゼ認識配列などの１つ以上の挿入部位（「クローニング部位」とも称される）を
含み得る。いくつかの実施形態において、１つ以上の挿入部位が、１つ以上のベクターの
１つ以上の配列エレメントの上流および／または下流に配置される。複数の異なるガイド
配列が使用されるとき、単一の発現構築物が、細胞内の異なる複数の対応する標的配列に
対してＣＲＩＳＰＲ活性を標的化するために使用され得る。
【0094】
ベクターは、Ｃａｓタンパク質などのＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に
作動可能に連結された調節エレメントを含み得る。Ｃａｓタンパク質の非限定的な例とし
ては、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃ
ａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１およびＣｓｘ１２としても知られる）、Ｃａｓ１
０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ
５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ
３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓ
ｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ
ｌ、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、それらのホモログまたはそれらの改変バージョンが
挙げられる。これらの酵素は、公知であり；例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣａｓ９タ
ンパク質のアミノ酸配列は、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースにアクセッション番号Ｑ９
９ＺＷ２として見られ得る。
作動可能に連結された調節エレメントを含み得る。Ｃａｓタンパク質の非限定的な例とし
ては、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃ
ａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１およびＣｓｘ１２としても知られる）、Ｃａｓ１
０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ
５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ
３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓ
ｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ
ｌ、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、それらのホモログまたはそれらの改変バージョンが
挙げられる。これらの酵素は、公知であり；例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣａｓ９タ
ンパク質のアミノ酸配列は、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースにアクセッション番号Ｑ９
９ＺＷ２として見られ得る。
【0095】
ＣＲＩＳＰＲ酵素は、Ｃａｓ９（例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓまたはＳ．ｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａ由来のもの）であり得る。ＣＲＩＳＰＲ酵素は、標的配列の位置（例えば、標的
配列内および／または標的配列の相補鎖内）において、一方または両方の鎖の切断を指示
し得る。ベクターは、対応する野生型酵素に対して変異したＣＲＩＳＰＲ酵素をコードし
得、その変異したＣＲＩＳＰＲ酵素は、標的配列を含む標的ポリヌクレオチドの一方また
は両方の鎖を切断する能力を欠く。例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のＣａｓ９のＲｕ
ｖＣ Ｉ触媒ドメインにおけるアスパラギン酸からアラニンへの置換（Ｄ１０Ａ）は、両
方の鎖を切断するヌクレアーゼ由来のＣａｓ９をニッカーゼ（一本鎖を切断する）に変換
する。いくつかの実施形態において、Ｃａｓ９ニッカーゼは、ガイド配列、例えば、ＤＮ
Ａ標的のセンス鎖およびアンチセンス鎖をそれぞれ標的化する２つのガイド配列と組み合
わせて使用され得る。この組み合わせは、両方の鎖にニックを入れることができ、ＮＨＥ
ＪまたはＨＤＲを誘導するために使用される。
ｏｎｉａ由来のもの）であり得る。ＣＲＩＳＰＲ酵素は、標的配列の位置（例えば、標的
配列内および／または標的配列の相補鎖内）において、一方または両方の鎖の切断を指示
し得る。ベクターは、対応する野生型酵素に対して変異したＣＲＩＳＰＲ酵素をコードし
得、その変異したＣＲＩＳＰＲ酵素は、標的配列を含む標的ポリヌクレオチドの一方また
は両方の鎖を切断する能力を欠く。例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のＣａｓ９のＲｕ
ｖＣ Ｉ触媒ドメインにおけるアスパラギン酸からアラニンへの置換（Ｄ１０Ａ）は、両
方の鎖を切断するヌクレアーゼ由来のＣａｓ９をニッカーゼ（一本鎖を切断する）に変換
する。いくつかの実施形態において、Ｃａｓ９ニッカーゼは、ガイド配列、例えば、ＤＮ
Ａ標的のセンス鎖およびアンチセンス鎖をそれぞれ標的化する２つのガイド配列と組み合
わせて使用され得る。この組み合わせは、両方の鎖にニックを入れることができ、ＮＨＥ
ＪまたはＨＤＲを誘導するために使用される。
【0096】
いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列は、真核
細胞などの特定の細胞における発現に向けてコドンが最適化される。真核細胞は、特定の
生物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌまたは非ヒト霊長類を含むがこれら
に限定されない哺乳動物）の細胞またはそれらの生物に由来する細胞であり得る。一般に
、コドンの最適化とは、天然のアミノ酸配列を維持しつつ、天然の配列の少なくとも１つ
のコドンをその宿主細胞の遺伝子においてより高頻度にまたは最も高頻度に使用されるコ
ドンで置き換えることによって、目的の宿主細胞において発現が高まるように核酸配列を
改変するプロセスのことを指す。様々な種が、特定のアミノ酸のある特定のコドンについ
て特定の偏りを示す。コドンの偏り（生物間でのコドン使用頻度の差異）は、メッセンジ
ャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳効率と相関することが多く、その翻訳効率は、とりわけ、
翻訳されるコドンの特性および特定の転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）分子の利用可能性に依存す
ると考えられている。細胞において優勢に選択されるｔＲＮＡは、通常、ペプチド合成に
おいて最も高頻度に使用されるコドンを反映する。したがって、コドンの最適化に基づい
て、遺伝子を所与の生物における最適な遺伝子発現に適応させることができる。
細胞などの特定の細胞における発現に向けてコドンが最適化される。真核細胞は、特定の
生物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌまたは非ヒト霊長類を含むがこれら
に限定されない哺乳動物）の細胞またはそれらの生物に由来する細胞であり得る。一般に
、コドンの最適化とは、天然のアミノ酸配列を維持しつつ、天然の配列の少なくとも１つ
のコドンをその宿主細胞の遺伝子においてより高頻度にまたは最も高頻度に使用されるコ
ドンで置き換えることによって、目的の宿主細胞において発現が高まるように核酸配列を
改変するプロセスのことを指す。様々な種が、特定のアミノ酸のある特定のコドンについ
て特定の偏りを示す。コドンの偏り（生物間でのコドン使用頻度の差異）は、メッセンジ
ャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳効率と相関することが多く、その翻訳効率は、とりわけ、
翻訳されるコドンの特性および特定の転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）分子の利用可能性に依存す
ると考えられている。細胞において優勢に選択されるｔＲＮＡは、通常、ペプチド合成に
おいて最も高頻度に使用されるコドンを反映する。したがって、コドンの最適化に基づい
て、遺伝子を所与の生物における最適な遺伝子発現に適応させることができる。
【0097】
一般に、ガイド配列は、標的配列とハイブリダイズする標的ポリヌクレオチド配列であ
って標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指示する標的ポリヌクレオチド
配列に対して十分な相補性を有する任意のポリヌクレオチド配列である。いくつかの実施
形態において、ガイド配列と対応する標的配列との相補性の程度は、好適なアラインメン
トアルゴリズムを用いて最適にアラインメントしたとき、約５０％、６０％、７５％、８
０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％またはそれ以上であるか、またはそれら
を超える。
って標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指示する標的ポリヌクレオチド
配列に対して十分な相補性を有する任意のポリヌクレオチド配列である。いくつかの実施
形態において、ガイド配列と対応する標的配列との相補性の程度は、好適なアラインメン
トアルゴリズムを用いて最適にアラインメントしたとき、約５０％、６０％、７５％、８
０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％またはそれ以上であるか、またはそれら
を超える。
【0098】
最適なアラインメントは、配列をアラインメントするための任意の好適なアルゴリズム
を使用して決定され得、そのアルゴリズムの非限定的な例としては、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔ
ｅｒｍａｎアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム、Ｂｕｒｒｏ
ｗｓ－Ｗｈｅｅｌｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍに基づくアルゴリズム（例えば、Ｂｕｒｒｏ
ｗｓ Ｗｈｅｅｌｅｒ Ａｌｉｇｎｅｒ）、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、
ＢＬＡＴ、Ｎｏｖｏａｌｉｇｎ（Ｎｏｖｏｃｒａｆｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＥＬ
ＡＮＤ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、ＳＯＡＰ（ｓｏａｐ
．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｏｒｇ．ｃｎにおいて利用可能）およびＭａｑ（ｍａｑ．ｓｏｕｒ
ｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔにおいて利用可能）が挙げられる。
を使用して決定され得、そのアルゴリズムの非限定的な例としては、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔ
ｅｒｍａｎアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム、Ｂｕｒｒｏ
ｗｓ－Ｗｈｅｅｌｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍに基づくアルゴリズム（例えば、Ｂｕｒｒｏ
ｗｓ Ｗｈｅｅｌｅｒ Ａｌｉｇｎｅｒ）、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、
ＢＬＡＴ、Ｎｏｖｏａｌｉｇｎ（Ｎｏｖｏｃｒａｆｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＥＬ
ＡＮＤ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、ＳＯＡＰ（ｓｏａｐ
．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｏｒｇ．ｃｎにおいて利用可能）およびＭａｑ（ｍａｑ．ｓｏｕｒ
ｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔにおいて利用可能）が挙げられる。
【0099】
ＣＲＩＳＰＲ酵素は、１つ以上の異種タンパク質ドメインを含む融合タンパク質の一部
であり得る。ＣＲＩＳＰＲ酵素融合タンパク質は、任意のさらなるタンパク質配列、およ
び必要に応じて、任意の２つのドメインの間にリンカー配列を含み得る。ＣＲＩＳＰＲ酵
素に融合され得るタンパク質ドメインの例としては、エピトープタグ、レポーター遺伝子
配列、ならびに以下の活性：メチラーゼ活性、デメチラーゼ活性、転写活性化活性、転写
阻止活性、転写終結因子活性、ヒストン修飾活性、ＲＮＡ切断活性および核酸結合活性の
うちの１つ以上を有するタンパク質ドメインが挙げられるがこれらに限定されない。エピ
トープタグの非限定的な例としては、ヒスチジン（Ｈｉｓ）タグ、Ｖ５タグ、ＦＬＡＧタ
グ、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）タグ、Ｍｙｃタグ、ＶＳＶ－Ｇタグおよびチオ
レドキシン（Ｔｒｘ）タグが挙げられる。レポーター遺伝子の例としては、グルタチオン
－５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、クロラ
ムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ） ベータガラクトシダーゼ、ベー
タ－グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＨｃＲｅｄ、
ＤｓＲｅｄ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、および
青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）を含む自己蛍光タンパク質が挙げられるが、これらに限定
されない。ＣＲＩＳＰＲ酵素は、ＤＮＡ分子に結合するかまたは他の細胞分子に結合する
タンパク質またはタンパク質のフラグメントをコードする遺伝子配列に融合され得、それ
らのタンパク質としては、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、Ｓ－タグ、Ｌｅｘ Ａ
ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）融合物、ＧＡＬ４Ａ ＤＮＡ結合ドメイン融合物および
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＢＰ１６タンパク質融合物が挙げられるが、これらに限
定されない。ＣＲＩＳＰＲ酵素を含む融合タンパク質の一部を形成し得るさらなるドメイ
ンは、参照により本明細書中に援用されるＵＳ２０１１００５９５０２に記載されている
。
ＩＩＩ．阻害性遺伝子の遺伝子座におけるＣＡＲおよび／またはＴＣＲの挿入
であり得る。ＣＲＩＳＰＲ酵素融合タンパク質は、任意のさらなるタンパク質配列、およ
び必要に応じて、任意の２つのドメインの間にリンカー配列を含み得る。ＣＲＩＳＰＲ酵
素に融合され得るタンパク質ドメインの例としては、エピトープタグ、レポーター遺伝子
配列、ならびに以下の活性：メチラーゼ活性、デメチラーゼ活性、転写活性化活性、転写
阻止活性、転写終結因子活性、ヒストン修飾活性、ＲＮＡ切断活性および核酸結合活性の
うちの１つ以上を有するタンパク質ドメインが挙げられるがこれらに限定されない。エピ
トープタグの非限定的な例としては、ヒスチジン（Ｈｉｓ）タグ、Ｖ５タグ、ＦＬＡＧタ
グ、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）タグ、Ｍｙｃタグ、ＶＳＶ－Ｇタグおよびチオ
レドキシン（Ｔｒｘ）タグが挙げられる。レポーター遺伝子の例としては、グルタチオン
－５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、クロラ
ムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ） ベータガラクトシダーゼ、ベー
タ－グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＨｃＲｅｄ、
ＤｓＲｅｄ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、および
青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）を含む自己蛍光タンパク質が挙げられるが、これらに限定
されない。ＣＲＩＳＰＲ酵素は、ＤＮＡ分子に結合するかまたは他の細胞分子に結合する
タンパク質またはタンパク質のフラグメントをコードする遺伝子配列に融合され得、それ
らのタンパク質としては、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、Ｓ－タグ、Ｌｅｘ Ａ
ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）融合物、ＧＡＬ４Ａ ＤＮＡ結合ドメイン融合物および
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＢＰ１６タンパク質融合物が挙げられるが、これらに限
定されない。ＣＲＩＳＰＲ酵素を含む融合タンパク質の一部を形成し得るさらなるドメイ
ンは、参照により本明細書中に援用されるＵＳ２０１１００５９５０２に記載されている
。
ＩＩＩ．阻害性遺伝子の遺伝子座におけるＣＡＲおよび／またはＴＣＲの挿入
【0100】
いくつかの実施形態において、本開示は、免疫細胞の特定の遺伝子の遺伝子座における
ＣＡＲおよび／またはＴＣＲの挿入に関する。ＣＡＲおよび／またはＴＣＲは、阻害性遺
伝子の遺伝子座（例えば、ＮＫＧ２Ａ、Ｓｉｇｌｅｃ７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ
、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、アデノシンレセプター２Ａ、ＮＲ
３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰａ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡ
Ｍ１７、ｐＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５
、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７およびそれらの組み合わせからなる
群より選択される遺伝子）に挿入され得る。
ＣＡＲおよび／またはＴＣＲの挿入に関する。ＣＡＲおよび／またはＴＣＲは、阻害性遺
伝子の遺伝子座（例えば、ＮＫＧ２Ａ、Ｓｉｇｌｅｃ７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ
、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、アデノシンレセプター２Ａ、ＮＲ
３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰａ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡ
Ｍ１７、ｐＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５
、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７およびそれらの組み合わせからなる
群より選択される遺伝子）に挿入され得る。
【0101】
本明細書中に開示される方法のいずれかにおける１つ以上のＣＡＲおよび／またはＴＣ
Ｒの挿入は、部位特異的であり得る。例えば、１つ以上のＣＡＲおよび／またはＴＣＲは
、プロモーターに隣接して、またはプロモーターの近くに、挿入され得る。別の例では、
１つ以上の導入遺伝子が、遺伝子（例えば、阻害性遺伝子）のエキソンに隣接して、遺伝
子のエキソンの近くに、または遺伝子のエキソン内に、挿入され得る。そのような挿入は
、遺伝子の発現を妨害しながら、同時にＣＡＲおよび／またはＴＣＲをノックインするた
めに使用され得る。別の例では、１つ以上のＣＡＲおよび／またはＴＣＲが、遺伝子のイ
ントロンに隣接して、遺伝子のイントロンの近くに、または遺伝子のイントロン内に、挿
入され得る。ＣＡＲおよび／またはＴＣＲは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のウイルス
ベクターによって導入され得、標的化されたゲノム位置にインテグレートされ得る。いく
つかの場合において、ｒＡＡＶベクターを使用して、ある特定の位置への導入遺伝子の挿
入を指示することができる。例えば、いくつかの場合において、ＣＡＲおよび／またはＴ
ＣＲが、ｒＡＡＶまたはＡＡＶベクターによって、ＮＫＧ２Ａ、Ｓｉｇｌｅｃ７、ＬＡＧ
３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、アデノシ
ンレセプター２Ａ、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰ
ａ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ｐＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ
、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５またはＣＤ７遺伝子
の少なくとも一部分にインテグレートされ得る。
Ｒの挿入は、部位特異的であり得る。例えば、１つ以上のＣＡＲおよび／またはＴＣＲは
、プロモーターに隣接して、またはプロモーターの近くに、挿入され得る。別の例では、
１つ以上の導入遺伝子が、遺伝子（例えば、阻害性遺伝子）のエキソンに隣接して、遺伝
子のエキソンの近くに、または遺伝子のエキソン内に、挿入され得る。そのような挿入は
、遺伝子の発現を妨害しながら、同時にＣＡＲおよび／またはＴＣＲをノックインするた
めに使用され得る。別の例では、１つ以上のＣＡＲおよび／またはＴＣＲが、遺伝子のイ
ントロンに隣接して、遺伝子のイントロンの近くに、または遺伝子のイントロン内に、挿
入され得る。ＣＡＲおよび／またはＴＣＲは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のウイルス
ベクターによって導入され得、標的化されたゲノム位置にインテグレートされ得る。いく
つかの場合において、ｒＡＡＶベクターを使用して、ある特定の位置への導入遺伝子の挿
入を指示することができる。例えば、いくつかの場合において、ＣＡＲおよび／またはＴ
ＣＲが、ｒＡＡＶまたはＡＡＶベクターによって、ＮＫＧ２Ａ、Ｓｉｇｌｅｃ７、ＬＡＧ
３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、アデノシ
ンレセプター２Ａ、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰ
ａ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ｐＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ
、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５またはＣＤ７遺伝子
の少なくとも一部分にインテグレートされ得る。
【0102】
細胞の標的化される遺伝子座の改変は、細胞にＤＮＡを導入することによって行うこと
ができ、ここで、そのＤＮＡは、標的遺伝子座に対して相同性を有する。ＤＮＡは、マー
カー遺伝子を含むことができ、それにより、インテグレートされた構築物を含む細胞の選
択が可能になる。標的ベクター内の相補ＤＮＡは、標的遺伝子座において染色体ＤＮＡと
組み換わり得る。マーカー遺伝子は、相補ＤＮＡ配列、３’組換えアームおよび５’組換
えアームに隣接し得る。細胞内の複数の遺伝子座が標的化され得る。例えば、複数のゲノ
ム改変が一工程で行われるように、１つ以上の標的遺伝子座に特異的な組換えアームを有
する導入遺伝子が同時に導入され得る。相同性アームは、約０．２ｋｂ～約５ｋｂ長（例
えば、約０．２ｋｂ、０．４ｋｂ ０．６ｋｂ、０．８ｋｂ、１．０ｋｂ、１．２ｋｂ、
１．４ｋｂ、１．６ｋｂ、１．８ｋｂ、２．０ｋｂ、２．２ｋｂ、２．４ｋｂ、２．６ｋ
ｂ、２．８ｋｂ、３．０ｋｂ、３．２ｋｂ、３．４ｋｂ、３．６ｋｂ、３．８ｋｂ、４．
０ｋｂ、４．２ｋｂ、４．４ｋｂ、４．６ｋｂ、４．８ｋｂから約５．０ｋｂ長など）で
あり得る。
ができ、ここで、そのＤＮＡは、標的遺伝子座に対して相同性を有する。ＤＮＡは、マー
カー遺伝子を含むことができ、それにより、インテグレートされた構築物を含む細胞の選
択が可能になる。標的ベクター内の相補ＤＮＡは、標的遺伝子座において染色体ＤＮＡと
組み換わり得る。マーカー遺伝子は、相補ＤＮＡ配列、３’組換えアームおよび５’組換
えアームに隣接し得る。細胞内の複数の遺伝子座が標的化され得る。例えば、複数のゲノ
ム改変が一工程で行われるように、１つ以上の標的遺伝子座に特異的な組換えアームを有
する導入遺伝子が同時に導入され得る。相同性アームは、約０．２ｋｂ～約５ｋｂ長（例
えば、約０．２ｋｂ、０．４ｋｂ ０．６ｋｂ、０．８ｋｂ、１．０ｋｂ、１．２ｋｂ、
１．４ｋｂ、１．６ｋｂ、１．８ｋｂ、２．０ｋｂ、２．２ｋｂ、２．４ｋｂ、２．６ｋ
ｂ、２．８ｋｂ、３．０ｋｂ、３．２ｋｂ、３．４ｋｂ、３．６ｋｂ、３．８ｋｂ、４．
０ｋｂ、４．２ｋｂ、４．４ｋｂ、４．６ｋｂ、４．８ｋｂから約５．０ｋｂ長など）で
あり得る。
【0103】
１つの方法において、ガイドＲＮＡは、阻害性遺伝子の遺伝子座の領域（例えば、その
遺伝子のプロモーター、エキソンまたはイントロンに隣接した領域）を標的化するように
デザインされ得る。ガイドＲＮＡは、阻害性遺伝子のエキソン（例えば、第１、第２また
は第３のエキソン）の５’末端を標的化し得る。ガイドＲＮＡは、ＡＡＶベクター修復マ
トリックスに含められ得る。ＡＡＶベクターは、Ｐ２Ａペプチドなどの自己切断２Ａペプ
チドに続いてＣＡＲｃＤＮＡをコードし得る。ＣＡＲカセットおよびガイドＲＮＡ配列は
、阻害性遺伝子に対する相同性アームに隣接していることがある。次いで、免疫細胞に、
ＡＡＶベクターおよびＣａｓ９（例えば、Ｃａｓ９ ｍＲＮＡ）が導入（例えば、エレク
トロポレーション）され得る。
ＩＶ．免疫細胞
遺伝子のプロモーター、エキソンまたはイントロンに隣接した領域）を標的化するように
デザインされ得る。ガイドＲＮＡは、阻害性遺伝子のエキソン（例えば、第１、第２また
は第３のエキソン）の５’末端を標的化し得る。ガイドＲＮＡは、ＡＡＶベクター修復マ
トリックスに含められ得る。ＡＡＶベクターは、Ｐ２Ａペプチドなどの自己切断２Ａペプ
チドに続いてＣＡＲｃＤＮＡをコードし得る。ＣＡＲカセットおよびガイドＲＮＡ配列は
、阻害性遺伝子に対する相同性アームに隣接していることがある。次いで、免疫細胞に、
ＡＡＶベクターおよびＣａｓ９（例えば、Ｃａｓ９ ｍＲＮＡ）が導入（例えば、エレク
トロポレーション）され得る。
ＩＶ．免疫細胞
【0104】
本開示のある特定の実施形態は、複数の遺伝子のノックアウトを有するようにおよび／
または阻害性遺伝子の遺伝子座にＣＡＲのノックインを有するように操作された免疫細胞
に関する。それらの免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ
８＋Ｔ細胞またはガンマ－デルタＴ細胞）、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫＴ
細胞、Ｂ細胞、幹細胞（例えば、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳＣ
）細胞）であり得る。それらの免疫細胞は、ウイルス特異的であり得、ＣＡＲを発現し得
、かつ／またはＴＣＲを発現し得る。いくつかの実施形態において、それらの細胞は、単
球または顆粒球、例えば、骨髄性細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細胞
、好酸球および／または好塩基球である。免疫細胞を作製および操作する方法、ならびに
養子細胞療法のためにそれらの細胞を使用および投与する方法も本明細書中に提供され、
その場合、それらの細胞は、自己または同種異系であり得る。したがって、それらの免疫
細胞は、癌細胞を標的化するためなどの免疫療法として使用され得る。
または阻害性遺伝子の遺伝子座にＣＡＲのノックインを有するように操作された免疫細胞
に関する。それらの免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ
８＋Ｔ細胞またはガンマ－デルタＴ細胞）、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫＴ
細胞、Ｂ細胞、幹細胞（例えば、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳＣ
）細胞）であり得る。それらの免疫細胞は、ウイルス特異的であり得、ＣＡＲを発現し得
、かつ／またはＴＣＲを発現し得る。いくつかの実施形態において、それらの細胞は、単
球または顆粒球、例えば、骨髄性細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細胞
、好酸球および／または好塩基球である。免疫細胞を作製および操作する方法、ならびに
養子細胞療法のためにそれらの細胞を使用および投与する方法も本明細書中に提供され、
その場合、それらの細胞は、自己または同種異系であり得る。したがって、それらの免疫
細胞は、癌細胞を標的化するためなどの免疫療法として使用され得る。
【0105】
上記免疫細胞は、被験体、特にヒト被験体から単離され得る。それらの免疫細胞は、目
的の被験体（例えば、特定の疾患もしくは状態を有すると疑われる被験体、特定の疾患も
しくは状態の素因を有すると疑われる被験体、または特定の疾患もしくは状態に対する治
療を受けている被験体）から得ることができる。免疫細胞は、それらが被験体内に存在す
る任意の位置から回収することができ、それらの位置としては、血液、臍帯血、脾臓、胸
腺、リンパ節および骨髄が挙げられるが、これらに限定されない。単離された免疫細胞は
、直接使用され得るか、または凍結などによって、ある時間にわたって保存され得る。
的の被験体（例えば、特定の疾患もしくは状態を有すると疑われる被験体、特定の疾患も
しくは状態の素因を有すると疑われる被験体、または特定の疾患もしくは状態に対する治
療を受けている被験体）から得ることができる。免疫細胞は、それらが被験体内に存在す
る任意の位置から回収することができ、それらの位置としては、血液、臍帯血、脾臓、胸
腺、リンパ節および骨髄が挙げられるが、これらに限定されない。単離された免疫細胞は
、直接使用され得るか、または凍結などによって、ある時間にわたって保存され得る。
【0106】
上記免疫細胞は、それらが存在する任意の組織から濃縮／精製されてもよく、それらの
組織としては、血液（血液バンクまたは臍帯血バンクによって回収された血液を含む）、
脾臓、骨髄、外科手技中に除去および／または露出された組織、ならびに生検手技を介し
て得られた組織が挙げられるが、これらに限定されない。免疫細胞が濃縮、単離および／
または精製される組織／器官は、生存している被験体と生存していない被験体の両方から
単離され得る。ここで、生存していない被験体は、臓器ドナーである。特定の実施形態に
おいて、免疫細胞は、末梢血もしくは臍帯血またはそれらの混合物などの血液から単離さ
れる。いくつかの態様において、臍帯血から単離された免疫細胞は、ＣＤ４陽性またはＣ
Ｄ８陽性Ｔ細胞の抑制によって測定されるような、高い免疫調節能を有する。具体的な態
様において、免疫細胞は、高い免疫調節能を求めて、プールされた血液、特に、プールさ
れた臍帯血から単離される。プールされた血液は、２つ以上の起源（例えば、３、４、５
、６、７、８、９、１０個以上の起源（例えば、ドナー被験体））からの血液であり得る
。
組織としては、血液（血液バンクまたは臍帯血バンクによって回収された血液を含む）、
脾臓、骨髄、外科手技中に除去および／または露出された組織、ならびに生検手技を介し
て得られた組織が挙げられるが、これらに限定されない。免疫細胞が濃縮、単離および／
または精製される組織／器官は、生存している被験体と生存していない被験体の両方から
単離され得る。ここで、生存していない被験体は、臓器ドナーである。特定の実施形態に
おいて、免疫細胞は、末梢血もしくは臍帯血またはそれらの混合物などの血液から単離さ
れる。いくつかの態様において、臍帯血から単離された免疫細胞は、ＣＤ４陽性またはＣ
Ｄ８陽性Ｔ細胞の抑制によって測定されるような、高い免疫調節能を有する。具体的な態
様において、免疫細胞は、高い免疫調節能を求めて、プールされた血液、特に、プールさ
れた臍帯血から単離される。プールされた血液は、２つ以上の起源（例えば、３、４、５
、６、７、８、９、１０個以上の起源（例えば、ドナー被験体））からの血液であり得る
。
【0107】
免疫細胞の集団は、治療を必要とする被験体または低い免疫細胞活性に関連する疾患に
罹患している被験体から得ることができる。したがって、それらの細胞は、治療を必要と
する被験体にとって自己であり得る。あるいは、免疫細胞の集団は、ドナー、好ましくは
、組織適合性がマッチしたドナーから得ることができる。その免疫細胞集団は、末梢血、
臍帯血、骨髄、脾臓、または免疫細胞が被験体もしくはドナーに存在する他の任意の器官
／組織から収集され得る。それらの免疫細胞は、被験体および／またはドナーのプール、
例えば、プールされた臍帯血から単離され得る。
罹患している被験体から得ることができる。したがって、それらの細胞は、治療を必要と
する被験体にとって自己であり得る。あるいは、免疫細胞の集団は、ドナー、好ましくは
、組織適合性がマッチしたドナーから得ることができる。その免疫細胞集団は、末梢血、
臍帯血、骨髄、脾臓、または免疫細胞が被験体もしくはドナーに存在する他の任意の器官
／組織から収集され得る。それらの免疫細胞は、被験体および／またはドナーのプール、
例えば、プールされた臍帯血から単離され得る。
【0108】
免疫細胞集団が、被験体とは異なるドナーから得られるとき、そのドナーは、好ましく
は同種異系であるが、但し、得られる細胞は、それらの細胞が被験体に導入可能であると
いう点で、被験体と適合している。同種異系ドナー細胞は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）が
適合していてもよいし、そうでなくてもよい。
Ａ．Ｔ細胞
は同種異系であるが、但し、得られる細胞は、それらの細胞が被験体に導入可能であると
いう点で、被験体と適合している。同種異系ドナー細胞は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）が
適合していてもよいし、そうでなくてもよい。
Ａ．Ｔ細胞
【0109】
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞である。機能的な抗腫瘍エフェクタ
ー細胞の誘導、活性化および拡大のためのいくつかの基本的なアプローチが、過去２０年
で報告されてきた。これらとしては、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）などの自己細胞；自己
ＤＣ、リンパ球、人工抗原提示細胞（ＡＰＣ）、またはＴ細胞リガンドおよび活性化抗体
でコーティングされたビーズ、または標的細胞膜の捕捉によって単離された細胞を用いて
エキソビボで活性化されたＴ細胞；抗宿主腫瘍Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を天然に発現
している同種異系細胞；および「Ｔ－ボディ」として知られる抗体様腫瘍認識能を示す腫
瘍反応性ＴＣＲ分子またはキメラＴＣＲ分子を発現するように遺伝的に再プログラムされ
たまたは「再指示された」非腫瘍特異的な自己細胞または同種異系細胞が挙げられる。こ
れらのアプローチは、本明細書中に記載される方法において使用され得る、Ｔ細胞を調製
および免疫化するための数多くのプロトコルの元となった。
ー細胞の誘導、活性化および拡大のためのいくつかの基本的なアプローチが、過去２０年
で報告されてきた。これらとしては、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）などの自己細胞；自己
ＤＣ、リンパ球、人工抗原提示細胞（ＡＰＣ）、またはＴ細胞リガンドおよび活性化抗体
でコーティングされたビーズ、または標的細胞膜の捕捉によって単離された細胞を用いて
エキソビボで活性化されたＴ細胞；抗宿主腫瘍Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を天然に発現
している同種異系細胞；および「Ｔ－ボディ」として知られる抗体様腫瘍認識能を示す腫
瘍反応性ＴＣＲ分子またはキメラＴＣＲ分子を発現するように遺伝的に再プログラムされ
たまたは「再指示された」非腫瘍特異的な自己細胞または同種異系細胞が挙げられる。こ
れらのアプローチは、本明細書中に記載される方法において使用され得る、Ｔ細胞を調製
および免疫化するための数多くのプロトコルの元となった。
【0110】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ液、臍帯またはリンパ系
器官に由来する。いくつかの態様において、それらの細胞は、ヒト細胞である。それらの
細胞は、通常、初代細胞であり、例えば、被験体から直接単離された細胞、および／また
は被験体から単離され、凍結された細胞である。いくつかの実施形態において、それらの
細胞には、Ｔ細胞または他の細胞型の１つ以上のサブセット（例えば、Ｔ細胞集団全体、
ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、およびそれらの部分集団、例えば、機能、活性化状態、成
熟度、分化の可能性、拡大、再循環、局在化および／または残存能、抗原特異性、抗原レ
セプターのタイプ、特定の器官もしくはコンパートメントに存在すること、マーカーもし
くはサイトカイン分泌のプロファイル、および／または分化の程度によって定義される部
分集団）が含まれる。処置される被験体に関して、細胞は、同種異系細胞および／または
自己細胞であり得る。いくつかの態様において、既存技術などの場合、細胞は、多能性お
よび／または複能性である（例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞）。い
くつかの実施形態において、上記方法は、被験体から細胞を単離する工程、それらを本明
細書中に記載されるように調製、処理、培養および／または操作する工程、ならびに凍結
保存の前または後にそれらを同じ患者に再導入する工程を含む。
器官に由来する。いくつかの態様において、それらの細胞は、ヒト細胞である。それらの
細胞は、通常、初代細胞であり、例えば、被験体から直接単離された細胞、および／また
は被験体から単離され、凍結された細胞である。いくつかの実施形態において、それらの
細胞には、Ｔ細胞または他の細胞型の１つ以上のサブセット（例えば、Ｔ細胞集団全体、
ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、およびそれらの部分集団、例えば、機能、活性化状態、成
熟度、分化の可能性、拡大、再循環、局在化および／または残存能、抗原特異性、抗原レ
セプターのタイプ、特定の器官もしくはコンパートメントに存在すること、マーカーもし
くはサイトカイン分泌のプロファイル、および／または分化の程度によって定義される部
分集団）が含まれる。処置される被験体に関して、細胞は、同種異系細胞および／または
自己細胞であり得る。いくつかの態様において、既存技術などの場合、細胞は、多能性お
よび／または複能性である（例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞）。い
くつかの実施形態において、上記方法は、被験体から細胞を単離する工程、それらを本明
細書中に記載されるように調製、処理、培養および／または操作する工程、ならびに凍結
保存の前または後にそれらを同じ患者に再導入する工程を含む。
【0111】
Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）のサブタイプおよび部分集
団に含まれるのは、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリ
ーＴ細胞およびそのサブタイプ（例えば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）、セントラルメ
モリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）または最終分化型エフェクター
メモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細
胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、内在性および獲得
型（ａｄａｐｔｉｖｅ）の制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＴＨ１
細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘル
パーＴ細胞）、アルファ／ベータＴ細胞およびデルタ／ガンマＴ細胞である。
団に含まれるのは、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリ
ーＴ細胞およびそのサブタイプ（例えば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）、セントラルメ
モリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）または最終分化型エフェクター
メモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細
胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、内在性および獲得
型（ａｄａｐｔｉｖｅ）の制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＴＨ１
細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘル
パーＴ細胞）、アルファ／ベータＴ細胞およびデルタ／ガンマＴ細胞である。
【0112】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞集団の１つ以上は、表面マーカーなどの特異的マ
ーカーが陽性であるかまたは特異的マーカーが陰性である細胞が濃縮されているか、また
は枯渇している。いくつかの場合において、そのようなマーカーは、ある特定のＴ細胞集
団（例えば、非メモリー細胞）上に存在しないかまたは比較的低レベルでしか発現されな
いが、ある特定の他のＴ細胞集団（例えば、メモリー細胞）上には存在するかまたは比較
的高レベルで発現されるマーカーである。
ーカーが陽性であるかまたは特異的マーカーが陰性である細胞が濃縮されているか、また
は枯渇している。いくつかの場合において、そのようなマーカーは、ある特定のＴ細胞集
団（例えば、非メモリー細胞）上に存在しないかまたは比較的低レベルでしか発現されな
いが、ある特定の他のＴ細胞集団（例えば、メモリー細胞）上には存在するかまたは比較
的高レベルで発現されるマーカーである。
【0113】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、非Ｔ細胞（例えば、Ｂ細胞、単球または他の
白血球）上に発現されているマーカー（例えば、ＣＤ１４）のネガティブ選択によってＰ
ＢＭＣサンプルから分離される。いくつかの態様では、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋選択工程
を用いることにより、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞が分離さ
れる。そのようなＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団は、１つ以上のナイーブ、メモリーおよび
／またはエフェクターＴ細胞の部分集団上に発現されているまたは比較的高い程度に発現
されているマーカーのポジティブまたはネガティブ選択によって、さらに部分集団にソー
ティングされ得る。
白血球）上に発現されているマーカー（例えば、ＣＤ１４）のネガティブ選択によってＰ
ＢＭＣサンプルから分離される。いくつかの態様では、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋選択工程
を用いることにより、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞が分離さ
れる。そのようなＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団は、１つ以上のナイーブ、メモリーおよび
／またはエフェクターＴ細胞の部分集団上に発現されているまたは比較的高い程度に発現
されているマーカーのポジティブまたはネガティブ選択によって、さらに部分集団にソー
ティングされ得る。
【0114】
いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、それぞれの部分集団に関連する表面
抗原に基づくポジティブ選択またはネガティブ選択などによって、ナイーブ、セントラル
メモリー、エフェクターメモリーおよび／またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮
されるかまたは枯渇される。いくつかの実施形態において、セントラルメモリーＴ（ＴＣ
Ｍ）細胞の濃縮は、投与後の長期生存率、拡大および／または生着を改善するなどの有効
性を高めるために行われ、これは、いくつかの態様において、そのような部分集団におい
て特に頑健である。
抗原に基づくポジティブ選択またはネガティブ選択などによって、ナイーブ、セントラル
メモリー、エフェクターメモリーおよび／またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮
されるかまたは枯渇される。いくつかの実施形態において、セントラルメモリーＴ（ＴＣ
Ｍ）細胞の濃縮は、投与後の長期生存率、拡大および／または生着を改善するなどの有効
性を高めるために行われ、これは、いくつかの態様において、そのような部分集団におい
て特に頑健である。
【0115】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞である。この方法では、腫瘍サン
プルを患者から入手し、単一細胞の懸濁液を得る。その単一細胞の懸濁液は、任意の好適
な様式で、例えば、機械的に（例えば、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳＴＭＤｉｓｓｏｃｉａｔｏ
ｒ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，Ｃａｌｉｆ．を用いて腫瘍を脱凝
集させて）または酵素的に（例えば、コラゲナーゼまたはＤＮａｓｅ）得ることができる
。腫瘍の酵素消化物の単一細胞の懸濁液を、インターロイキン－２（ＩＬ－２）中で培養
する。
プルを患者から入手し、単一細胞の懸濁液を得る。その単一細胞の懸濁液は、任意の好適
な様式で、例えば、機械的に（例えば、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳＴＭＤｉｓｓｏｃｉａｔｏ
ｒ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，Ｃａｌｉｆ．を用いて腫瘍を脱凝
集させて）または酵素的に（例えば、コラゲナーゼまたはＤＮａｓｅ）得ることができる
。腫瘍の酵素消化物の単一細胞の懸濁液を、インターロイキン－２（ＩＬ－２）中で培養
する。
【0116】
培養されたＴ細胞は、プールされ、急速に拡大され得る。約１０～約１４日間にわたる
急速な拡大によって、抗原特異的Ｔ細胞の数が少なくとも約５０倍（例えば、５０、６０
、７０、８０、９０もしくは１００倍またはそれ以上）増加する。より好ましくは、約１
０～約１４日間にわたる急速な拡大によって、少なくとも約２００倍（例えば、２００、
３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００またはそれ以上）増加する。
急速な拡大によって、抗原特異的Ｔ細胞の数が少なくとも約５０倍（例えば、５０、６０
、７０、８０、９０もしくは１００倍またはそれ以上）増加する。より好ましくは、約１
０～約１４日間にわたる急速な拡大によって、少なくとも約２００倍（例えば、２００、
３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００またはそれ以上）増加する。
【0117】
当該分野で公知であるようないくつかの方法のうちのいずれかによって、拡大が達成さ
れ得る。例えば、Ｔ細胞は、フィーダーリンパ球と、インターロイキン－２（ＩＬ－２）
またはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）のいずれか（ＩＬ－２が好ましい）との存
在下において非特異的Ｔ細胞レセプター刺激を用いて容易に拡大され得る。その非特異的
Ｔ細胞レセプター刺激は、およそ３０ｎｇ／ｍｌの、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体
であるＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ（登録商標），Ｒａｒｉｔａｎ，Ｎ．Ｊ．か
ら入手可能）を含み得る。あるいは、Ｔ細胞は、Ｔ細胞成長因子（例えば、３００ＩＵ／
ｍｌのＩＬ－２またはＩＬ－１５（ＩＬ－２が好ましい））の存在下において１つ以上の
癌抗原（エピトープなどのその抗原性部分、または細胞を含む）で末梢血単核球（ＰＢＭ
Ｃ）をインビトロにおいて刺激することによって容易に拡大され得、その癌抗原は、必要
に応じてベクターから発現され得、例えば、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペ
プチドである。そのインビトロで誘導されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２を発現している抗原
提示細胞に対してパルスされた同じ癌抗原による再刺激によって急速に拡大される。ある
いは、それらのＴ細胞は、例えば、照射された自己リンパ球または照射されたＨＬＡ－Ａ
２＋同種異系リンパ球およびＩＬ－２で再刺激され得る。
れ得る。例えば、Ｔ細胞は、フィーダーリンパ球と、インターロイキン－２（ＩＬ－２）
またはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）のいずれか（ＩＬ－２が好ましい）との存
在下において非特異的Ｔ細胞レセプター刺激を用いて容易に拡大され得る。その非特異的
Ｔ細胞レセプター刺激は、およそ３０ｎｇ／ｍｌの、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体
であるＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ（登録商標），Ｒａｒｉｔａｎ，Ｎ．Ｊ．か
ら入手可能）を含み得る。あるいは、Ｔ細胞は、Ｔ細胞成長因子（例えば、３００ＩＵ／
ｍｌのＩＬ－２またはＩＬ－１５（ＩＬ－２が好ましい））の存在下において１つ以上の
癌抗原（エピトープなどのその抗原性部分、または細胞を含む）で末梢血単核球（ＰＢＭ
Ｃ）をインビトロにおいて刺激することによって容易に拡大され得、その癌抗原は、必要
に応じてベクターから発現され得、例えば、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペ
プチドである。そのインビトロで誘導されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２を発現している抗原
提示細胞に対してパルスされた同じ癌抗原による再刺激によって急速に拡大される。ある
いは、それらのＴ細胞は、例えば、照射された自己リンパ球または照射されたＨＬＡ－Ａ
２＋同種異系リンパ球およびＩＬ－２で再刺激され得る。
【0118】
上記自己Ｔ細胞は、それらの自己Ｔ細胞の増殖および活性化を促進するＴ細胞成長因子
を発現するように改変され得る。好適なＴ細胞成長因子としては、例えば、インターロイ
キン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－１２が挙げられる。好適な改変方
法は、当該分野で公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１；およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ
，ＮＹ，１９９４を参照のこと。特定の態様において、改変された自己Ｔ細胞は、Ｔ細胞
成長因子を高レベルで発現する。Ｔ細胞成長因子コード配列（例えば、ＩＬ－１２のコー
ド配列）は、Ｔ細胞成長因子コード配列への作動可能な連結が高レベル発現を促進するプ
ロモーターと同様に、当該分野において容易に入手可能である。
Ｂ．ＮＫ細胞
を発現するように改変され得る。好適なＴ細胞成長因子としては、例えば、インターロイ
キン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－１２が挙げられる。好適な改変方
法は、当該分野で公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１；およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ
，ＮＹ，１９９４を参照のこと。特定の態様において、改変された自己Ｔ細胞は、Ｔ細胞
成長因子を高レベルで発現する。Ｔ細胞成長因子コード配列（例えば、ＩＬ－１２のコー
ド配列）は、Ｔ細胞成長因子コード配列への作動可能な連結が高レベル発現を促進するプ
ロモーターと同様に、当該分野において容易に入手可能である。
Ｂ．ＮＫ細胞
【0119】
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。Ｎ
Ｋ細胞は、種々の腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、ならびに骨髄および胸腺における
一部の正常細胞に対して自発的な細胞傷害性を有するリンパ球の部分集団である。ＮＫ細
胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃および胸腺において分化し、成熟する。ＮＫ細胞は、
ヒトにおいては、ＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ８などの特定の表面マーカーによって検
出され得る。ＮＫ細胞は、Ｔ細胞抗原レセプター、汎ＴマーカーＣＤ３、または表面免疫
グロブリンＢ細胞レセプターを発現しない。
Ｋ細胞は、種々の腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、ならびに骨髄および胸腺における
一部の正常細胞に対して自発的な細胞傷害性を有するリンパ球の部分集団である。ＮＫ細
胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃および胸腺において分化し、成熟する。ＮＫ細胞は、
ヒトにおいては、ＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ８などの特定の表面マーカーによって検
出され得る。ＮＫ細胞は、Ｔ細胞抗原レセプター、汎ＴマーカーＣＤ３、または表面免疫
グロブリンＢ細胞レセプターを発現しない。
【0120】
ある特定の実施形態において、ＮＫ細胞は、当該分野で周知の方法によってヒト末梢血
単核球（ＰＢＭＣ）、未刺激の白血球搬出法生成物（ＰＢＳＣ）、ヒト胚性幹細胞（ｈＥ
ＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、骨髄または臍帯血から得られる。特に、臍帯血
が、ＮＫ細胞を得るために使用される。ある特定の態様において、ＮＫ細胞は、以前に報
告された、ＮＫ細胞をエキソビボで拡大する方法（Ｓｐａｎｈｏｌｔｚ ｅｔ ａｌ．，
２０１１；Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３）によって単離され、拡大される。この方
法では、ＣＢ単核細胞をフィコール密度勾配遠心分離によって単離し、ＩＬ－２および人
工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともにバイオリアクター内で培養する。７日後に、細胞培
養物から、ＣＤ３を発現する任意の細胞を枯渇させ、さらに７日間、再培養する。再度、
細胞のＣＤ３枯渇を行い、ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞またはＮＫ細胞のパーセンテージを
測定するために特徴付ける。他の方法では、臍帯血を使用し、ＣＤ３４＋細胞の単離、な
らびにＳＣＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－２を含む培地中で培養することによる
ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞への分化によって、ＮＫ細胞を得る。
単核球（ＰＢＭＣ）、未刺激の白血球搬出法生成物（ＰＢＳＣ）、ヒト胚性幹細胞（ｈＥ
ＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、骨髄または臍帯血から得られる。特に、臍帯血
が、ＮＫ細胞を得るために使用される。ある特定の態様において、ＮＫ細胞は、以前に報
告された、ＮＫ細胞をエキソビボで拡大する方法（Ｓｐａｎｈｏｌｔｚ ｅｔ ａｌ．，
２０１１；Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３）によって単離され、拡大される。この方
法では、ＣＢ単核細胞をフィコール密度勾配遠心分離によって単離し、ＩＬ－２および人
工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともにバイオリアクター内で培養する。７日後に、細胞培
養物から、ＣＤ３を発現する任意の細胞を枯渇させ、さらに７日間、再培養する。再度、
細胞のＣＤ３枯渇を行い、ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞またはＮＫ細胞のパーセンテージを
測定するために特徴付ける。他の方法では、臍帯血を使用し、ＣＤ３４＋細胞の単離、な
らびにＳＣＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－２を含む培地中で培養することによる
ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞への分化によって、ＮＫ細胞を得る。
【0121】
具体的な実施形態において、ＮＫ細胞は、調製中のある時点において拡大される。具体
的な場合において、ＮＫ細胞の拡大は、臍帯血由来の単核細胞（ＭＮＣ）を抗原提示細胞
（ＡＰＣ）およびＩＬ－２の存在下において刺激すること；およびそれらの細胞をＡＰＣ
で再刺激して、拡大されたＮＫ細胞を生成することを含み、少なくともいくつかの場合に
おいて、この方法は、バイオリアクター内で行われる。刺激工程は、ＭＮＣをＮＫ細胞に
向かわせることができる。再刺激工程は、ＩＬ－２の存在を含んでもよいし、含まなくて
もよい。特定の態様において、その方法は、刺激工程中に任意の培地構成要素の除去また
は添加を含まない。特定の態様において、その方法は、ある特定の時間枠内（例えば、１
５日未満、例えば、１４日）で行われる。
的な場合において、ＮＫ細胞の拡大は、臍帯血由来の単核細胞（ＭＮＣ）を抗原提示細胞
（ＡＰＣ）およびＩＬ－２の存在下において刺激すること；およびそれらの細胞をＡＰＣ
で再刺激して、拡大されたＮＫ細胞を生成することを含み、少なくともいくつかの場合に
おいて、この方法は、バイオリアクター内で行われる。刺激工程は、ＭＮＣをＮＫ細胞に
向かわせることができる。再刺激工程は、ＩＬ－２の存在を含んでもよいし、含まなくて
もよい。特定の態様において、その方法は、刺激工程中に任意の培地構成要素の除去また
は添加を含まない。特定の態様において、その方法は、ある特定の時間枠内（例えば、１
５日未満、例えば、１４日）で行われる。
【0122】
ある特定の実施形態において、ＮＫ細胞は、拡大するためのエキソビボでの方法によっ
て拡大され、その方法は、（ａ）臍帯血から単核細胞（ＭＮＣ）の出発集団を得る工程；
（ｂ）そのＭＮＣを抗原提示細胞（ＡＰＣ）およびＩＬ－２の存在下において刺激する工
程；および（ｃ）その細胞をＡＰＣで再刺激して、拡大されたＮＫ細胞を生成する工程を
含み、その方法は、バイオリアクター内で行われ、優良製造規範（ｇｏｏｄ ｍａｎｕｆ
ａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｒａｃｔｉｃｅ）（ＧＭＰ）に準拠している。工程（ｂ）の刺激に
よって、ＭＮＣをＮＫ細胞に向かわせることができる。工程（ｃ）は、ＩＬ－２の存在を
含んでもよいし、含まなくてもよい。特定の態様において、その方法は、工程（ｂ）の間
に任意の培地構成要素の除去または添加を含まない。特定の態様において、その方法は、
１５日未満（例えば、１４日）で行われる。
て拡大され、その方法は、（ａ）臍帯血から単核細胞（ＭＮＣ）の出発集団を得る工程；
（ｂ）そのＭＮＣを抗原提示細胞（ＡＰＣ）およびＩＬ－２の存在下において刺激する工
程；および（ｃ）その細胞をＡＰＣで再刺激して、拡大されたＮＫ細胞を生成する工程を
含み、その方法は、バイオリアクター内で行われ、優良製造規範（ｇｏｏｄ ｍａｎｕｆ
ａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｒａｃｔｉｃｅ）（ＧＭＰ）に準拠している。工程（ｂ）の刺激に
よって、ＭＮＣをＮＫ細胞に向かわせることができる。工程（ｃ）は、ＩＬ－２の存在を
含んでもよいし、含まなくてもよい。特定の態様において、その方法は、工程（ｂ）の間
に任意の培地構成要素の除去または添加を含まない。特定の態様において、その方法は、
１５日未満（例えば、１４日）で行われる。
【0123】
いくつかの態様において、上記方法は、例えばＣＤ３などの１つ以上の特定のマーカー
が陽性の細胞を枯渇させる工程をさらに含む。ある特定の態様において、枯渇工程は、工
程（ｂ）と工程（ｃ）の間に行われる。いくつかの態様において、それらの細胞は、ＣＤ
３枯渇のためにバイオリアクターから取り出され、工程（ｃ）のためのバイオリアクター
に入れられる。
が陽性の細胞を枯渇させる工程をさらに含む。ある特定の態様において、枯渇工程は、工
程（ｂ）と工程（ｃ）の間に行われる。いくつかの態様において、それらの細胞は、ＣＤ
３枯渇のためにバイオリアクターから取り出され、工程（ｃ）のためのバイオリアクター
に入れられる。
【0124】
ある特定の態様において、臍帯血からＭＮＣの出発集団を得る工程は、デキストラン、
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＤＮＡｓｅおよび／または塩化マグネシウムの存在下に
おいて臍帯血を解凍する工程を含む。特定の態様において、臍帯血からＭＮＣの出発集団
を得る工程は、デキストランおよび／またはＤＮａｓｅの存在下において臍帯血を解凍す
る工程を含む。具体的な態様において、臍帯血は、５～２０％（例えば、１０％）のデキ
ストランの存在下において洗浄される。ある特定の態様において、臍帯血は、１００～３
００ｍＭの濃度、特に２００ｍＭなどの塩化マグネシウムの存在下において懸濁される。
いくつかの態様において、得る工程は、フィコール密度勾配遠心分離を行って単核細胞（
ＭＮＣ）を得る工程を含む。
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＤＮＡｓｅおよび／または塩化マグネシウムの存在下に
おいて臍帯血を解凍する工程を含む。特定の態様において、臍帯血からＭＮＣの出発集団
を得る工程は、デキストランおよび／またはＤＮａｓｅの存在下において臍帯血を解凍す
る工程を含む。具体的な態様において、臍帯血は、５～２０％（例えば、１０％）のデキ
ストランの存在下において洗浄される。ある特定の態様において、臍帯血は、１００～３
００ｍＭの濃度、特に２００ｍＭなどの塩化マグネシウムの存在下において懸濁される。
いくつかの態様において、得る工程は、フィコール密度勾配遠心分離を行って単核細胞（
ＭＮＣ）を得る工程を含む。
【0125】
ある特定の態様において、バイオリアクターは、気体透過性のバイオリアクターである
。特定の態様において、気体透過性のバイオリアクターは、Ｇ－Ｒｅｘ１００ＭまたはＧ
－Ｒｅｘ１００である。いくつかの態様において、工程（ｂ）の刺激は、３～５Ｌの培地
（例えば、３、３．５、４、４．５または５Ｌ）において行われる。
。特定の態様において、気体透過性のバイオリアクターは、Ｇ－Ｒｅｘ１００ＭまたはＧ
－Ｒｅｘ１００である。いくつかの態様において、工程（ｂ）の刺激は、３～５Ｌの培地
（例えば、３、３．５、４、４．５または５Ｌ）において行われる。
【0126】
いくつかの態様において、ＡＰＣは、ガンマ線を照射される。ある特定の態様において
、ＡＰＣは、膜結合型ＩＬ－２１（ｍｂＩＬ－２１）を発現するように操作される。特定
の態様において、ＡＰＣは、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－２を発現する
ように操作される。いくつかの態様において、ＭＮＣとＡＰＣとは、１：２の比で培養さ
れる。いくつかの態様において、ＩＬ－２は、５０～２００ＩＵ／ｍＬの濃度（例えば、
１００ＩＵ／ｍＬ）で存在する。特定の態様において、ＩＬ－２は、２～３日ごとに補充
される。
、ＡＰＣは、膜結合型ＩＬ－２１（ｍｂＩＬ－２１）を発現するように操作される。特定
の態様において、ＡＰＣは、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－２を発現する
ように操作される。いくつかの態様において、ＭＮＣとＡＰＣとは、１：２の比で培養さ
れる。いくつかの態様において、ＩＬ－２は、５０～２００ＩＵ／ｍＬの濃度（例えば、
１００ＩＵ／ｍＬ）で存在する。特定の態様において、ＩＬ－２は、２～３日ごとに補充
される。
【0127】
特定の態様において、工程（ｂ）は、６～８日間（例えば、７日間）行われる。いくつ
かの態様において、工程（ｃ）は、６～８日間（例えば、７日間）行われる。いくつかの
態様において、工程（ｃ）は、細胞の分割を含まない。特定の態様において、上記細胞に
は、工程（ｃ）の間にＩＬ－２が２回供給され、具体的な場合では、工程（ｃ）の間に他
の培地構成要素が添加されないか、または除去されない。
かの態様において、工程（ｃ）は、６～８日間（例えば、７日間）行われる。いくつかの
態様において、工程（ｃ）は、細胞の分割を含まない。特定の態様において、上記細胞に
は、工程（ｃ）の間にＩＬ－２が２回供給され、具体的な場合では、工程（ｃ）の間に他
の培地構成要素が添加されないか、または除去されない。
【0128】
いくつかの態様において、上記方法は、３つ、４つ、５つまたは６つのバイオリアクタ
ーの使用を含む。特定の態様において、上記方法は、１０個未満のバイオリアクターの使
用を含む。
ーの使用を含む。特定の態様において、上記方法は、１０個未満のバイオリアクターの使
用を含む。
【0129】
具体的な態様において、ＮＫ細胞は、少なくとも５００倍、８００倍、１０００倍、１
２００倍、１５００倍、２０００倍、２５００倍、３０００倍または５０００倍拡大され
る。特定の態様において、バイオリアクター内でＮＫ細胞を培養することにより、静置液
体培養と比べて１０００倍超のＮＫ細胞が生成される。
２００倍、１５００倍、２０００倍、２５００倍、３０００倍または５０００倍拡大され
る。特定の態様において、バイオリアクター内でＮＫ細胞を培養することにより、静置液
体培養と比べて１０００倍超のＮＫ細胞が生成される。
【0130】
ある特定の態様において、上記方法は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）の適合を含まない。
いくつかの態様において、ＮＫ細胞の出発集団は、ハプロタイプ一致ドナーから得られな
い。
いくつかの態様において、ＮＫ細胞の出発集団は、ハプロタイプ一致ドナーから得られな
い。
【0131】
いくつかの態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、末梢血から拡大されたＮＫ細
胞と比べて高い抗腫瘍活性を有する。ある特定の態様において、上記の拡大されたＮＫ細
胞は、末梢血から拡大されたＮＫ細胞と比べて、１つ以上の細胞周期遺伝子、１つ以上の
細胞分裂遺伝子および／または１つ以上のＤＮＡ複製遺伝子を高発現している。いくつか
の態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、末梢血から拡大されたＮＫ細胞と比べて
、より高い増殖能を有する。いくつかの態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、疲
弊を示さない。ある特定の態様において、疲弊は、パーフォリン、グランザイム、ＣＤ５
７、ＫＬＲＧ１および／またはＰＤ１の発現を測定することによって検出される。いくつ
かの態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、パーフォリンおよび／またはグランザ
イムを高発現している。ある特定の態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、ＣＤ５
７、ＫＬＲＧ１および／またはＰＤ１を低発現しているか、または発現していない。
胞と比べて高い抗腫瘍活性を有する。ある特定の態様において、上記の拡大されたＮＫ細
胞は、末梢血から拡大されたＮＫ細胞と比べて、１つ以上の細胞周期遺伝子、１つ以上の
細胞分裂遺伝子および／または１つ以上のＤＮＡ複製遺伝子を高発現している。いくつか
の態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、末梢血から拡大されたＮＫ細胞と比べて
、より高い増殖能を有する。いくつかの態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、疲
弊を示さない。ある特定の態様において、疲弊は、パーフォリン、グランザイム、ＣＤ５
７、ＫＬＲＧ１および／またはＰＤ１の発現を測定することによって検出される。いくつ
かの態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、パーフォリンおよび／またはグランザ
イムを高発現している。ある特定の態様において、上記の拡大されたＮＫ細胞は、ＣＤ５
７、ＫＬＲＧ１および／またはＰＤ１を低発現しているか、または発現していない。
【0132】
いくつかの態様において、拡大されたＮＫ細胞は、臨床的に妥当な用量を含む。ある特
定の態様において、臍帯血は、凍結臍帯血である。特定の態様において、凍結臍帯血は、
１つ以上の感染症（例えば、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ
ｃｒｕｚｉ、ＨＩＶ、ヒトＴリンパ向性ウイルス、梅毒、ジカウイルスなど）について試
験済みである。いくつかの態様において、臍帯血は、３、４、５、６、７または８単位の
個々の臍帯血単位などからプールされた臍帯血である。
定の態様において、臍帯血は、凍結臍帯血である。特定の態様において、凍結臍帯血は、
１つ以上の感染症（例えば、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ
ｃｒｕｚｉ、ＨＩＶ、ヒトＴリンパ向性ウイルス、梅毒、ジカウイルスなど）について試
験済みである。いくつかの態様において、臍帯血は、３、４、５、６、７または８単位の
個々の臍帯血単位などからプールされた臍帯血である。
【0133】
いくつかの態様において、ＮＫ細胞は、例えばレシピエント自体に対して、自己のＮＫ
細胞ではない。ある特定の態様において、ＮＫ細胞は、例えばレシピエント自体に対して
、同種異系のＮＫ細胞ではない。
細胞ではない。ある特定の態様において、ＮＫ細胞は、例えばレシピエント自体に対して
、同種異系のＮＫ細胞ではない。
【0134】
いくつかの態様において、ＡＰＣは、ユニバーサル抗原提示細胞（ｕＡＰＣ）である。
ある特定の態様において、ｕＡＰＣは、（１）ＣＤ４８および／またはＣＳ１（ＣＤ３１
９）、（２）膜結合型インターロイキン－２１（ｍｂＩＬ－２１）、ならびに（３）４１
ＢＢリガンド（４１ＢＢＬ）を発現するように操作される。いくつかの態様において、ｕ
ＡＰＣは、ＣＤ４８を発現する。ある特定の態様において、ｕＡＰＣは、ＣＳ１を発現す
る。特定の態様において、ｕＡＰＣは、ＣＤ４８およびＣＳ１を発現する。いくつかの態
様において、ｕＡＰＣは、内在性のＨＬＡクラスＩ、ＩＩおよび／またはＣＤ１ｄ分子の
発現を本質的に有しない。ある特定の態様において、ｕＡＰＣは、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５
４）および／またはＬＦＡ－３（ＣＤ５８）を発現する。特定の態様において、ｕＡＰＣ
はさらに、Ｋ５６２細胞などの白血病細胞由来のａＡＰＣと定義される。
Ｃ．幹細胞
ある特定の態様において、ｕＡＰＣは、（１）ＣＤ４８および／またはＣＳ１（ＣＤ３１
９）、（２）膜結合型インターロイキン－２１（ｍｂＩＬ－２１）、ならびに（３）４１
ＢＢリガンド（４１ＢＢＬ）を発現するように操作される。いくつかの態様において、ｕ
ＡＰＣは、ＣＤ４８を発現する。ある特定の態様において、ｕＡＰＣは、ＣＳ１を発現す
る。特定の態様において、ｕＡＰＣは、ＣＤ４８およびＣＳ１を発現する。いくつかの態
様において、ｕＡＰＣは、内在性のＨＬＡクラスＩ、ＩＩおよび／またはＣＤ１ｄ分子の
発現を本質的に有しない。ある特定の態様において、ｕＡＰＣは、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５
４）および／またはＬＦＡ－３（ＣＤ５８）を発現する。特定の態様において、ｕＡＰＣ
はさらに、Ｋ５６２細胞などの白血病細胞由来のａＡＰＣと定義される。
Ｃ．幹細胞
【0135】
いくつかの実施形態において、本開示の免疫細胞は、人工多能性幹細胞（ＰＳＣ）、間
葉系幹細胞（ＭＳＣ）または造血幹細胞（ＨＳＣ）などの幹細胞であり得る。
葉系幹細胞（ＭＳＣ）または造血幹細胞（ＨＳＣ）などの幹細胞であり得る。
【0136】
本明細書中で使用される多能性幹細胞は、通常、ｉＰＳ細胞またはｉＰＳＣと省略され
る、人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞であり得る。生殖細胞を除く任意の細胞をｉＰＳＣの出
発点として使用することができる。例えば、細胞型は、ケラチノサイト、線維芽細胞、造
血細胞、間葉系細胞、肝臓細胞または胃細胞であり得る。細胞分化の程度または細胞が回
収される動物の年齢に制限はない。未分化な前駆細胞（体性幹細胞を含む）および最終分
化した成熟細胞でさえも、本明細書中に開示される方法において体細胞の起源として使用
することができる。
る、人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞であり得る。生殖細胞を除く任意の細胞をｉＰＳＣの出
発点として使用することができる。例えば、細胞型は、ケラチノサイト、線維芽細胞、造
血細胞、間葉系細胞、肝臓細胞または胃細胞であり得る。細胞分化の程度または細胞が回
収される動物の年齢に制限はない。未分化な前駆細胞（体性幹細胞を含む）および最終分
化した成熟細胞でさえも、本明細書中に開示される方法において体細胞の起源として使用
することができる。
【0137】
体細胞は、当業者に公知の方法を用いて初期化されて、ｉＰＳ細胞を生成し得る。一般
に、体細胞から多能性幹細胞を生成するために、核の初期化因子が使用される。いくつか
の実施形態において、Ｋｌｆ４、ｃ－Ｍｙｃ、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｎａｎｏｇおよ
びＬｉｎ２８のうちの少なくとも３つまたは少なくとも４つが使用される。他の実施形態
では、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ｃ－ＭｙｃおよびＫｌｆ４が使用されるか、またはＯｃ
ｔ３／４、Ｓｏｘ２、ＮａｎｏｇおよびＬｉｎ２８が使用される。
に、体細胞から多能性幹細胞を生成するために、核の初期化因子が使用される。いくつか
の実施形態において、Ｋｌｆ４、ｃ－Ｍｙｃ、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｎａｎｏｇおよ
びＬｉｎ２８のうちの少なくとも３つまたは少なくとも４つが使用される。他の実施形態
では、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ｃ－ＭｙｃおよびＫｌｆ４が使用されるか、またはＯｃ
ｔ３／４、Ｓｏｘ２、ＮａｎｏｇおよびＬｉｎ２８が使用される。
【0138】
ｉＰＳＣは、いったん誘導されると、多能性を維持するのに十分な培地中で培養するこ
とができる。ある特定の実施形態では、不確定条件が使用され得る。例えば、多能性細胞
は、その幹細胞を未分化な状態で維持するために、線維芽細胞フィーダー細胞上で、また
は線維芽細胞フィーダー細胞に曝露された培地上で培養され得る。いくつかの実施形態に
おいて、その細胞は、細胞分裂を終結させるために照射または抗生物質で処置されたマウ
ス胎仔線維芽細胞をフィーダー細胞として共存させて培養される。あるいは、多能性細胞
は、ＴＥＳＲＴＭ培地またはＥ８ＴＭ／Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ８ＴＭ培地などのフィーダ
ー非依存性の明確な培養系を用いて、本質的に未分化な状態で培養および維持され得る。
Ｖ．遺伝的に操作された抗原レセプター
とができる。ある特定の実施形態では、不確定条件が使用され得る。例えば、多能性細胞
は、その幹細胞を未分化な状態で維持するために、線維芽細胞フィーダー細胞上で、また
は線維芽細胞フィーダー細胞に曝露された培地上で培養され得る。いくつかの実施形態に
おいて、その細胞は、細胞分裂を終結させるために照射または抗生物質で処置されたマウ
ス胎仔線維芽細胞をフィーダー細胞として共存させて培養される。あるいは、多能性細胞
は、ＴＥＳＲＴＭ培地またはＥ８ＴＭ／Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ８ＴＭ培地などのフィーダ
ー非依存性の明確な培養系を用いて、本質的に未分化な状態で培養および維持され得る。
Ｖ．遺伝的に操作された抗原レセプター
【0139】
本開示の免疫細胞は、抗原レセプター（例えば、操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、キメラサ
イトカインレセプター、ケモカインレセプター、それらの組み合わせなど）を発現するよ
うに遺伝的に操作され得る。例えば、免疫細胞は、癌抗原に対する抗原特異性を有するＣ
ＡＲおよび／またはＴＣＲを発現するように改変される。複数のＣＡＲおよび／またはＴ
ＣＲ（例えば、種々の抗原に対するもの）が、免疫細胞に加えられ得る。いくつかの態様
において、免疫細胞は、ＣＲＩＳＰＲを用いた阻害性遺伝子の遺伝子座におけるＣＡＲま
たはＴＣＲのノックインによって、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現するように操作される。
イトカインレセプター、ケモカインレセプター、それらの組み合わせなど）を発現するよ
うに遺伝的に操作され得る。例えば、免疫細胞は、癌抗原に対する抗原特異性を有するＣ
ＡＲおよび／またはＴＣＲを発現するように改変される。複数のＣＡＲおよび／またはＴ
ＣＲ（例えば、種々の抗原に対するもの）が、免疫細胞に加えられ得る。いくつかの態様
において、免疫細胞は、ＣＲＩＳＰＲを用いた阻害性遺伝子の遺伝子座におけるＣＡＲま
たはＴＣＲのノックインによって、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現するように操作される。
【0140】
好適な改変方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ａｕ
ｓｕｂｅｌ，前出を参照のこと。例えば、上記細胞は、Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ ｅｔ ａｌ
．，２００８およびＪｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００９に記載されている形質導入
法を用いて、癌抗原に対する抗原特異性を有するＴＣＲを発現するように形質導入され得
る。
ｓｕｂｅｌ，前出を参照のこと。例えば、上記細胞は、Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ ｅｔ ａｌ
．，２００８およびＪｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００９に記載されている形質導入
法を用いて、癌抗原に対する抗原特異性を有するＴＣＲを発現するように形質導入され得
る。
【0141】
レトロウイルスによって形質導入されたＴＣＲ鎖と内在性のＴＣＲ鎖との対形成によっ
て引き起こされる自己反応性に関する長期的な問題を克服する選択肢として、完全長ＴＣ
Ｒαおよびβ（またはγおよびδ）鎖をコードするＲＮＡのエレクトロポレーションを使
用することができる。そのような代替の対形成が、一過性のトランスフェクションストラ
テジーにおいて起きたとしても、導入されたＴＣＲαおよびβ鎖は、一過性に発現される
だけなので、生成される可能性がある自己反応性Ｔ細胞は、しばらくするとこの自己反応
性を失う。導入されたＴＣＲαおよびβ鎖の発現が減少すると、正常な自己のＴ細胞だけ
が残る。これは、完全長ＴＣＲ鎖が、安定したレトロウイルス形質導入によって導入され
たときは当てはまらず、導入されたＴＣＲ鎖は失われることはなく、患者に絶えず自己反
応性が存在するようになる。
て引き起こされる自己反応性に関する長期的な問題を克服する選択肢として、完全長ＴＣ
Ｒαおよびβ（またはγおよびδ）鎖をコードするＲＮＡのエレクトロポレーションを使
用することができる。そのような代替の対形成が、一過性のトランスフェクションストラ
テジーにおいて起きたとしても、導入されたＴＣＲαおよびβ鎖は、一過性に発現される
だけなので、生成される可能性がある自己反応性Ｔ細胞は、しばらくするとこの自己反応
性を失う。導入されたＴＣＲαおよびβ鎖の発現が減少すると、正常な自己のＴ細胞だけ
が残る。これは、完全長ＴＣＲ鎖が、安定したレトロウイルス形質導入によって導入され
たときは当てはまらず、導入されたＴＣＲ鎖は失われることはなく、患者に絶えず自己反
応性が存在するようになる。
【0142】
いくつかの実施形態において、上記細胞は、１つ以上の抗原レセプターをコードする、
遺伝子操作を介して導入された１つ以上の核酸、およびそのような核酸の遺伝的に操作さ
れた産物を含む。いくつかの実施形態において、それらの核酸は、異種であり、すなわち
、正常には、細胞または細胞から得られるサンプルに存在しない（例えば、別の生物また
は細胞から得られ、それは、例えば、操作されている細胞および／またはそのような細胞
が由来する生物において通常見られない）。いくつかの実施形態において、それらの核酸
は、自然界に見られない核酸（例えばキメラ）など、天然に存在しない。
遺伝子操作を介して導入された１つ以上の核酸、およびそのような核酸の遺伝的に操作さ
れた産物を含む。いくつかの実施形態において、それらの核酸は、異種であり、すなわち
、正常には、細胞または細胞から得られるサンプルに存在しない（例えば、別の生物また
は細胞から得られ、それは、例えば、操作されている細胞および／またはそのような細胞
が由来する生物において通常見られない）。いくつかの実施形態において、それらの核酸
は、自然界に見られない核酸（例えばキメラ）など、天然に存在しない。
【0143】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、抗原に特異的に結合する細胞外の抗原認
識ドメインを含む。いくつかの実施形態において、その抗原は、細胞表面上に発現される
タンパク質である。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＴＣＲ様ＣＡＲであり
、抗原は、ＴＣＲと同様に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の状況において細胞
表面上で認識される、プロセシングを受けたペプチド抗原（例えば、細胞内タンパク質の
ペプチド抗原）である。
識ドメインを含む。いくつかの実施形態において、その抗原は、細胞表面上に発現される
タンパク質である。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＴＣＲ様ＣＡＲであり
、抗原は、ＴＣＲと同様に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の状況において細胞
表面上で認識される、プロセシングを受けたペプチド抗原（例えば、細胞内タンパク質の
ペプチド抗原）である。
【0144】
ＣＡＲおよび組換えＴＣＲをはじめとした例示的な抗原レセプター、ならびにそれらの
レセプターを操作するための方法およびそれらのレセプターを細胞に導入するための方法
としては、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０００１４２５７、ＷＯ２０１３１２６
７２６、ＷＯ２０１２／１２９５１４、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＷＯ２０１３／１６
６３２１、ＷＯ２０１３／０７１１５４、ＷＯ２０１３／１２３０６１、米国特許出願公
開番号ＵＳ２００２１３１９６０、ＵＳ２０１３２８７７４８、ＵＳ２０１３０１４９３
３７、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，
５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１
７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０
９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３
号および同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許出願番号ＥＰ２５３７４１６に記
載されているもの、および／またはＳａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｄａｖ
ｉｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｗｕ ｅｔ
ａｌ．，２０１２によって記載されたものが挙げられる。いくつかの態様において、遺
伝的に操作された抗原レセプターには、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されてい
るようなＣＡＲ、および国際特許出願公開番号ＷＯ／２０１４０５５６６８Ａｌに記載さ
れているものが含まれる。
Ａ．キメラ抗原レセプター
レセプターを操作するための方法およびそれらのレセプターを細胞に導入するための方法
としては、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０００１４２５７、ＷＯ２０１３１２６
７２６、ＷＯ２０１２／１２９５１４、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＷＯ２０１３／１６
６３２１、ＷＯ２０１３／０７１１５４、ＷＯ２０１３／１２３０６１、米国特許出願公
開番号ＵＳ２００２１３１９６０、ＵＳ２０１３２８７７４８、ＵＳ２０１３０１４９３
３７、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，
５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１
７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０
９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３
号および同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許出願番号ＥＰ２５３７４１６に記
載されているもの、および／またはＳａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｄａｖ
ｉｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｗｕ ｅｔ
ａｌ．，２０１２によって記載されたものが挙げられる。いくつかの態様において、遺
伝的に操作された抗原レセプターには、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されてい
るようなＣＡＲ、および国際特許出願公開番号ＷＯ／２０１４０５５６６８Ａｌに記載さ
れているものが含まれる。
Ａ．キメラ抗原レセプター
【0145】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ａ）１つ以上の細胞内のシグナル伝達ド
メイン、ｂ）膜貫通ドメイン、およびｃ）抗原結合領域を含む細胞外のドメインを含む。
メイン、ｂ）膜貫通ドメイン、およびｃ）抗原結合領域を含む細胞外のドメインを含む。
【0146】
いくつかの実施形態において、操作された抗原レセプターには、活性化型または刺激型
のＣＡＲ、共刺激型のＣＡＲ（ＷＯ２０１４／０５５６６８を参照のこと）および／また
は阻害型のＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０１３を参照のこと）
をはじめとしたＣＡＲが含まれる。それらのＣＡＲは、一般に、１つ以上の細胞内のシグ
ナル伝達構成要素に、いくつかの態様ではリンカーおよび／または膜貫通ドメインを介し
て連結された、細胞外の抗原（またはリガンド）結合ドメインを含む。そのような分子は
、通常、天然の抗原レセプターを介するシグナル、共刺激レセプターとともにそのような
レセプターを介するシグナル、および／または共刺激レセプターのみを介するシグナルを
模倣するかまたはまねる。
のＣＡＲ、共刺激型のＣＡＲ（ＷＯ２０１４／０５５６６８を参照のこと）および／また
は阻害型のＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０１３を参照のこと）
をはじめとしたＣＡＲが含まれる。それらのＣＡＲは、一般に、１つ以上の細胞内のシグ
ナル伝達構成要素に、いくつかの態様ではリンカーおよび／または膜貫通ドメインを介し
て連結された、細胞外の抗原（またはリガンド）結合ドメインを含む。そのような分子は
、通常、天然の抗原レセプターを介するシグナル、共刺激レセプターとともにそのような
レセプターを介するシグナル、および／または共刺激レセプターのみを介するシグナルを
模倣するかまたはまねる。
【0147】
本開示のある特定の実施形態は、細胞内のシグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、お
よび１つ以上のシグナル伝達モチーフを含む細胞外のドメインを含む、抗原特異的ＣＡＲ
ポリペプチド（免疫原性を低減するためにヒト化されたＣＡＲ（ｈＣＡＲ）を含む）をコ
ードする核酸を含む核酸の使用に関する。ある特定の実施形態において、そのＣＡＲは、
１つ以上の抗原の間で共有される空間を含むエピトープを認識し得る。ある特定の実施形
態において、結合領域は、モノクローナル抗体の相補性決定領域、モノクローナル抗体の
可変領域、および／またはそれらの抗原結合フラグメントを含み得る。別の実施形態にお
いて、その特異性は、レセプターに結合するペプチド（例えば、サイトカイン）に由来す
る。
よび１つ以上のシグナル伝達モチーフを含む細胞外のドメインを含む、抗原特異的ＣＡＲ
ポリペプチド（免疫原性を低減するためにヒト化されたＣＡＲ（ｈＣＡＲ）を含む）をコ
ードする核酸を含む核酸の使用に関する。ある特定の実施形態において、そのＣＡＲは、
１つ以上の抗原の間で共有される空間を含むエピトープを認識し得る。ある特定の実施形
態において、結合領域は、モノクローナル抗体の相補性決定領域、モノクローナル抗体の
可変領域、および／またはそれらの抗原結合フラグメントを含み得る。別の実施形態にお
いて、その特異性は、レセプターに結合するペプチド（例えば、サイトカイン）に由来す
る。
【0148】
ヒトＣＡＲ核酸は、ヒト患者に対する細胞免疫療法を増強するために使用されるヒト遺
伝子であり得ると企図される。具体的な実施形態において、本発明は、ＣＡＲの完全長ｃ
ＤＮＡまたはコード領域を含む。その抗原結合領域またはドメインは、特定のヒトモノク
ローナル抗体に由来する一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＶＨ鎖およびＶＬ鎖のフ
ラグメント（例えば、参照により本明細書中に援用される米国特許第７，１０９，３０４
号に記載されているもの）を含み得る。そのフラグメントは、ヒト抗原特異的抗体の任意
の数の異なる抗原結合ドメインでもあり得る。より具体的な実施形態において、そのフラ
グメントは、ヒト細胞における発現のためにヒトのコドン使用頻度に最適化された配列に
よってコードされる抗原特異的ｓｃＦｖである。
伝子であり得ると企図される。具体的な実施形態において、本発明は、ＣＡＲの完全長ｃ
ＤＮＡまたはコード領域を含む。その抗原結合領域またはドメインは、特定のヒトモノク
ローナル抗体に由来する一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＶＨ鎖およびＶＬ鎖のフ
ラグメント（例えば、参照により本明細書中に援用される米国特許第７，１０９，３０４
号に記載されているもの）を含み得る。そのフラグメントは、ヒト抗原特異的抗体の任意
の数の異なる抗原結合ドメインでもあり得る。より具体的な実施形態において、そのフラ
グメントは、ヒト細胞における発現のためにヒトのコドン使用頻度に最適化された配列に
よってコードされる抗原特異的ｓｃＦｖである。
【0149】
配置は、多量体であり得る（例えば、ダイアボディまたは多量体）。その多量体は、軽
鎖および重鎖の可変部分がダイアボディに交差対形成することによって形成される可能性
が最も高い。その構築物のヒンジ部分には、完全欠失から、１つ目のシステインが維持さ
れること、セリン置換ではなくプロリン置換であること、１つ目のシステインまで切断さ
れることにまで及ぶ複数の選択肢があり得る。Ｆｃ部分を欠失させることができる。安定
したかつ／または二量体化する任意のタンパク質が、この目的にかない得る。Ｆｃドメイ
ンのうちの１つだけ、例えば、ヒト免疫グロブリンのＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメイ
ンを使用することができる。二量体化を改善するように改変されたヒト免疫グロブリンの
ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域を使用することもできる。免疫グロブリンのヒンジ部分
だけを使用することもできる。ＣＤ８アルファの部分を使用することもできる。
鎖および重鎖の可変部分がダイアボディに交差対形成することによって形成される可能性
が最も高い。その構築物のヒンジ部分には、完全欠失から、１つ目のシステインが維持さ
れること、セリン置換ではなくプロリン置換であること、１つ目のシステインまで切断さ
れることにまで及ぶ複数の選択肢があり得る。Ｆｃ部分を欠失させることができる。安定
したかつ／または二量体化する任意のタンパク質が、この目的にかない得る。Ｆｃドメイ
ンのうちの１つだけ、例えば、ヒト免疫グロブリンのＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメイ
ンを使用することができる。二量体化を改善するように改変されたヒト免疫グロブリンの
ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域を使用することもできる。免疫グロブリンのヒンジ部分
だけを使用することもできる。ＣＤ８アルファの部分を使用することもできる。
【0150】
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲ核酸は、膜貫通ドメインおよび改変されたＣ
Ｄ２８細胞内シグナル伝達ドメインなどの、他の共刺激レセプターをコードする配列を含
む。他の共刺激レセプターとしては、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、
ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）のうちの１つ以上が挙げられる
が、これらに限定されない。ＣＤ３ζによって惹起される１次シグナルに加えて、ヒトＣ
ＡＲに挿入されたヒト共刺激レセプターによって提供されるさらなるシグナルが、ＮＫ細
胞の完全な活性化にとって重要であり、インビボでの持続性および養子免疫療法の治療の
成功の改善を助け得る。
Ｄ２８細胞内シグナル伝達ドメインなどの、他の共刺激レセプターをコードする配列を含
む。他の共刺激レセプターとしては、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、
ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）のうちの１つ以上が挙げられる
が、これらに限定されない。ＣＤ３ζによって惹起される１次シグナルに加えて、ヒトＣ
ＡＲに挿入されたヒト共刺激レセプターによって提供されるさらなるシグナルが、ＮＫ細
胞の完全な活性化にとって重要であり、インビボでの持続性および養子免疫療法の治療の
成功の改善を助け得る。
【0151】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、養子療法によって標的化される特定の細胞型
において発現される抗原などの特定の抗原（またはマーカーまたはリガンド）、例えば、
癌マーカーおよび／または減衰応答を誘導することを目的とした抗原（例えば、正常細胞
型上または非罹患細胞型上に発現される抗原）に対する特異性を有するように構築される
。したがって、上記ＣＡＲは通常、その細胞外の部分に、１つ以上の抗原結合分子（例え
ば、１つ以上の抗原結合フラグメント、抗原結合ドメインもしくは抗原結合部分）または
１つ以上の抗体可変ドメイン、および／または抗体分子を含む。いくつかの実施形態にお
いて、上記ＣＡＲは、抗体分子の抗原結合部分（例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）
の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）に由来する一本鎖抗体フラグメント（ｓｃＦ
ｖ））を含む。
において発現される抗原などの特定の抗原（またはマーカーまたはリガンド）、例えば、
癌マーカーおよび／または減衰応答を誘導することを目的とした抗原（例えば、正常細胞
型上または非罹患細胞型上に発現される抗原）に対する特異性を有するように構築される
。したがって、上記ＣＡＲは通常、その細胞外の部分に、１つ以上の抗原結合分子（例え
ば、１つ以上の抗原結合フラグメント、抗原結合ドメインもしくは抗原結合部分）または
１つ以上の抗体可変ドメイン、および／または抗体分子を含む。いくつかの実施形態にお
いて、上記ＣＡＲは、抗体分子の抗原結合部分（例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）
の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）に由来する一本鎖抗体フラグメント（ｓｃＦ
ｖ））を含む。
【0152】
キメラ抗原レセプターのある特定の実施形態において、そのレセプターの抗原特異的部
分（抗原結合領域を含む細胞外ドメインと称され得る）は、腫瘍関連抗原または病原体特
異的抗原結合ドメインを含む。抗原には、デクチン－１などのパターン認識レセプターに
よって認識される糖鎖抗原が含まれる。腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞の細胞表面上に発現さ
れる限り、任意の種類であってよい。腫瘍関連抗原の例示的な実施形態としては、ＣＤ１
９、ＣＤ２０、癌胎児抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、Ｃ
Ｄ５６、ＥＧＦＲ、ｃ－Ｍｅｔ、ＡＫＴ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、上皮性腫瘍抗原、黒色腫
関連抗原、変異型ｐ５３、変異型ｒａｓなどが挙げられる。ある特定の実施形態において
、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原の量が少ないとき、持続性を改善するためにサイトカインと同
時発現され得る。例えば、ＣＡＲは、ＩＬ－７、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、Ｉ
Ｌ－１８、ＩＬ－２１またはそれらの組み合わせなどの１つ以上のサイトカインと同時発
現され得る。
分（抗原結合領域を含む細胞外ドメインと称され得る）は、腫瘍関連抗原または病原体特
異的抗原結合ドメインを含む。抗原には、デクチン－１などのパターン認識レセプターに
よって認識される糖鎖抗原が含まれる。腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞の細胞表面上に発現さ
れる限り、任意の種類であってよい。腫瘍関連抗原の例示的な実施形態としては、ＣＤ１
９、ＣＤ２０、癌胎児抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、Ｃ
Ｄ５６、ＥＧＦＲ、ｃ－Ｍｅｔ、ＡＫＴ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、上皮性腫瘍抗原、黒色腫
関連抗原、変異型ｐ５３、変異型ｒａｓなどが挙げられる。ある特定の実施形態において
、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原の量が少ないとき、持続性を改善するためにサイトカインと同
時発現され得る。例えば、ＣＡＲは、ＩＬ－７、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、Ｉ
Ｌ－１８、ＩＬ－２１またはそれらの組み合わせなどの１つ以上のサイトカインと同時発
現され得る。
【0153】
キメラレセプターをコードするオープンリーディングフレームの配列は、ゲノムＤＮＡ
起源、ｃＤＮＡ起源から得ることができるか、または合成することができるか（例えば、
ＰＣＲを介して）、またはそれらの組み合わせであり得る。イントロンはｍＲＮＡを安定
化すると見出されているので、ゲノムＤＮＡのサイズおよびイントロンの数に応じて、ｃ
ＤＮＡまたはそれらの組み合わせを使用することが望ましい場合がある。また、ｍＲＮＡ
を安定化するために内在性または外来性の非コード領域を使用することもさらに有益であ
り得る。
起源、ｃＤＮＡ起源から得ることができるか、または合成することができるか（例えば、
ＰＣＲを介して）、またはそれらの組み合わせであり得る。イントロンはｍＲＮＡを安定
化すると見出されているので、ゲノムＤＮＡのサイズおよびイントロンの数に応じて、ｃ
ＤＮＡまたはそれらの組み合わせを使用することが望ましい場合がある。また、ｍＲＮＡ
を安定化するために内在性または外来性の非コード領域を使用することもさらに有益であ
り得る。
【0154】
上記キメラ構築物は、裸のＤＮＡとしてまたは好適なベクターに入った状態で免疫細胞
に導入され得ることが企図される。裸のＤＮＡを用いたエレクトロポレーションによって
細胞を安定的にトランスフェクトする方法は、当該分野で公知である。例えば、米国特許
第６，４１０，３１９号を参照のこと。裸のＤＮＡとは、一般に、発現にとって適切な向
きでプラスミド発現ベクターに含められたキメラレセプターをコードするＤＮＡのことを
指す。
に導入され得ることが企図される。裸のＤＮＡを用いたエレクトロポレーションによって
細胞を安定的にトランスフェクトする方法は、当該分野で公知である。例えば、米国特許
第６，４１０，３１９号を参照のこと。裸のＤＮＡとは、一般に、発現にとって適切な向
きでプラスミド発現ベクターに含められたキメラレセプターをコードするＤＮＡのことを
指す。
【0155】
あるいは、キメラ構築物を免疫細胞に導入するために、ウイルスベクター（例えば、レ
トロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターまたはレ
ンチウイルスベクター）を用いることができる。本開示の方法に従って使用するのに適し
たベクターは、免疫細胞において非複製性のベクターである。ウイルスに基づくベクター
が多数知られており（例えば、ＨＩＶ、ＳＶ４０、ＥＢＶ、ＨＳＶまたはＢＰＶに基づく
ベクター）、細胞内に維持されるそのウイルスのコピー数は、その細胞の生存能を維持す
るほど十分低い。
トロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターまたはレ
ンチウイルスベクター）を用いることができる。本開示の方法に従って使用するのに適し
たベクターは、免疫細胞において非複製性のベクターである。ウイルスに基づくベクター
が多数知られており（例えば、ＨＩＶ、ＳＶ４０、ＥＢＶ、ＨＳＶまたはＢＰＶに基づく
ベクター）、細胞内に維持されるそのウイルスのコピー数は、その細胞の生存能を維持す
るほど十分低い。
【0156】
いくつかの態様において、抗原に特異的に結合する構成要素または抗原特異的認識構成
要素は、１つ以上の膜貫通ドメインおよび細胞内のシグナル伝達ドメインに連結される。
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合された膜貫
通ドメインを含む。１つの実施形態において、そのＣＡＲにおけるドメインの１つと天然
に会合する膜貫通ドメインが使用される。いくつかの場合において、その膜貫通ドメイン
は、レセプター複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるためにそのようなド
メインが同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合するのを回避するよ
うに、選択されるかまたはアミノ酸置換によって改変される。
要素は、１つ以上の膜貫通ドメインおよび細胞内のシグナル伝達ドメインに連結される。
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合された膜貫
通ドメインを含む。１つの実施形態において、そのＣＡＲにおけるドメインの１つと天然
に会合する膜貫通ドメインが使用される。いくつかの場合において、その膜貫通ドメイン
は、レセプター複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるためにそのようなド
メインが同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合するのを回避するよ
うに、選択されるかまたはアミノ酸置換によって改変される。
【0157】
膜貫通ドメインは、いくつかの実施形態において、天然起源または合成起源に由来する
。起源が天然である場合、そのドメインは、いくつかの態様において、任意の膜結合型タ
ンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域は、Ｔ細胞レセプターのアルフ
ァ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガ
ンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２
、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ
１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２ＤおよびＤＡＰ分子に
由来する（すなわち、それらの分子の膜貫通領域を少なくとも含む）膜貫通領域を含む。
あるいは、膜貫通ドメインは、いくつかの実施形態において、合成の膜貫通ドメインであ
る。いくつかの態様において、合成の膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの疎
水性残基を主に含む。いくつかの態様では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバ
リンのトリプレットが、合成の膜貫通ドメインの各末端に見られることがある。
。起源が天然である場合、そのドメインは、いくつかの態様において、任意の膜結合型タ
ンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域は、Ｔ細胞レセプターのアルフ
ァ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガ
ンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２
、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ
１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２ＤおよびＤＡＰ分子に
由来する（すなわち、それらの分子の膜貫通領域を少なくとも含む）膜貫通領域を含む。
あるいは、膜貫通ドメインは、いくつかの実施形態において、合成の膜貫通ドメインであ
る。いくつかの態様において、合成の膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの疎
水性残基を主に含む。いくつかの態様では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバ
リンのトリプレットが、合成の膜貫通ドメインの各末端に見られることがある。
【0158】
ある特定の実施形態において、ＮＫ細胞などの免疫細胞を遺伝的に改変するための本明
細書中に開示されるプラットフォーム技術としては、（ｉ）エレクトロポレーションデバ
イス（例えば、ヌクレオフェクター）を用いた非ウイルス遺伝子導入、（ｉｉ）エンドド
メイン（例えば、ＣＤ２８／ＣＤ３－ζ、ＣＤ１３７／ＣＤ３－ζまたは他の組み合わせ
）を介してシグナル伝達するＣＡＲ、（ｉｉｉ）長さが不定の細胞外ドメインであって抗
原認識ドメインを細胞表面に接続する細胞外ドメインを有するＣＡＲ、およびいくつかの
場合では、（ｉｖ）ＣＡＲ＋免疫細胞を頑強かつ数値的に拡大することができる、Ｋ５６
２に由来する人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｓ
ｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１）が挙げられる。
Ｂ．Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）
細書中に開示されるプラットフォーム技術としては、（ｉ）エレクトロポレーションデバ
イス（例えば、ヌクレオフェクター）を用いた非ウイルス遺伝子導入、（ｉｉ）エンドド
メイン（例えば、ＣＤ２８／ＣＤ３－ζ、ＣＤ１３７／ＣＤ３－ζまたは他の組み合わせ
）を介してシグナル伝達するＣＡＲ、（ｉｉｉ）長さが不定の細胞外ドメインであって抗
原認識ドメインを細胞表面に接続する細胞外ドメインを有するＣＡＲ、およびいくつかの
場合では、（ｉｖ）ＣＡＲ＋免疫細胞を頑強かつ数値的に拡大することができる、Ｋ５６
２に由来する人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｓ
ｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１）が挙げられる。
Ｂ．Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）
【0159】
いくつかの実施形態において、遺伝的に操作された抗原レセプターには、組換えＴＣＲ
、および／または天然に存在するＴ細胞からクローニングされたＴＣＲが含まれる。「Ｔ
細胞レセプター」または「ＴＣＲ」とは、可変ａ鎖および可変β鎖（それぞれＴＣＲαお
よびＴＣＲβとしても知られる）または可変γ鎖および可変δ鎖（それぞれＴＣＲγおよ
びＴＣＲδとしても知られる）を含む分子であって、ＭＨＣレセプターに結合した抗原ペ
プチドに特異的に結合することができる分子のことを指す。いくつかの実施形態において
、ＴＣＲは、αβ型である。
、および／または天然に存在するＴ細胞からクローニングされたＴＣＲが含まれる。「Ｔ
細胞レセプター」または「ＴＣＲ」とは、可変ａ鎖および可変β鎖（それぞれＴＣＲαお
よびＴＣＲβとしても知られる）または可変γ鎖および可変δ鎖（それぞれＴＣＲγおよ
びＴＣＲδとしても知られる）を含む分子であって、ＭＨＣレセプターに結合した抗原ペ
プチドに特異的に結合することができる分子のことを指す。いくつかの実施形態において
、ＴＣＲは、αβ型である。
【0160】
通常、αβ型およびγδ型として存在するＴＣＲは、一般に構造が似ているが、それら
を発現しているＴ細胞は、解剖学的位置または機能が異なり得る。ＴＣＲは、細胞表面上
にまたは可溶型として見られ得る。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表
面上に見られ、通常、その表面上で、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合し
た抗原の認識に関与する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、定常ドメイン、膜貫
通ドメイン、および／または短い細胞質テイルも含み得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅ
ｔ ａｌ，１９９７を参照のこと）。例えば、いくつかの態様において、ＴＣＲの各鎖は
、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫
通領域、およびＣ末端に短い細胞質テイルを有し得る。いくつかの実施形態において、Ｔ
ＣＲは、シグナル伝達の媒介に関わるＣＤ３複合体のインバリアントタンパク質と会合さ
れる。別段述べられない限り、用語「ＴＣＲ」は、その機能的ＴＣＲフラグメントを包含
すると理解されるべきである。この用語は、αβ型またはγδ型のＴＣＲをはじめとした
インタクトなまたは完全長のＴＣＲも包含する。
を発現しているＴ細胞は、解剖学的位置または機能が異なり得る。ＴＣＲは、細胞表面上
にまたは可溶型として見られ得る。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表
面上に見られ、通常、その表面上で、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合し
た抗原の認識に関与する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、定常ドメイン、膜貫
通ドメイン、および／または短い細胞質テイルも含み得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅ
ｔ ａｌ，１９９７を参照のこと）。例えば、いくつかの態様において、ＴＣＲの各鎖は
、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫
通領域、およびＣ末端に短い細胞質テイルを有し得る。いくつかの実施形態において、Ｔ
ＣＲは、シグナル伝達の媒介に関わるＣＤ３複合体のインバリアントタンパク質と会合さ
れる。別段述べられない限り、用語「ＴＣＲ」は、その機能的ＴＣＲフラグメントを包含
すると理解されるべきである。この用語は、αβ型またはγδ型のＴＣＲをはじめとした
インタクトなまたは完全長のＴＣＲも包含する。
【0161】
したがって、本明細書中の目的では、ＴＣＲへの言及には、任意のＴＣＲまたは機能的
フラグメント（例えば、ＭＨＣ分子において結合した特異的な抗原ペプチド、すなわち、
ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するＴＣＲの抗原結合部分）が含まれる。交換可能に使用
され得る、ＴＣＲの「抗原結合部分」または抗原結合フラグメントとは、ＴＣＲの構造ド
メインの一部分しか含まないが、完全なＴＣＲが結合する抗原（例えば、ＭＨＣ－ペプチ
ド複合体）に結合する分子のことを指す。いくつかの場合において、抗原結合部分は、特
異的なＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分なＴＣＲの
可変ドメイン（例えば、ＴＣＲの可変ａ鎖および可変β鎖）を含み、例えば一般に、各鎖
が３つの相補性決定領域を含む。
フラグメント（例えば、ＭＨＣ分子において結合した特異的な抗原ペプチド、すなわち、
ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するＴＣＲの抗原結合部分）が含まれる。交換可能に使用
され得る、ＴＣＲの「抗原結合部分」または抗原結合フラグメントとは、ＴＣＲの構造ド
メインの一部分しか含まないが、完全なＴＣＲが結合する抗原（例えば、ＭＨＣ－ペプチ
ド複合体）に結合する分子のことを指す。いくつかの場合において、抗原結合部分は、特
異的なＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分なＴＣＲの
可変ドメイン（例えば、ＴＣＲの可変ａ鎖および可変β鎖）を含み、例えば一般に、各鎖
が３つの相補性決定領域を含む。
【0162】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖の可変ドメインは、会合してループ、または免
疫グロブリンに類似の相補性決定領域（ＣＤＲ）を形成し、それにより、抗原認識がもた
らされ、ＴＣＲ分子の結合部位を形成することによってペプチド特異性が決定され、ペプ
チド特異性が決定される。通常、免疫グロブリンと同様に、ＣＤＲは、フレームワーク領
域（ＦＲ）によって隔てられる（例えば、Ｊｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｃｈｏ
ｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８８；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３を参照の
こと）。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ３は、プロセシングされた抗原の認識に関
与する主要なＣＤＲであるが、アルファ鎖のＣＤＲ１は、抗原ペプチドのＮ末端部と相互
作用するとも示されているのに対して、ベータ鎖のＣＤＲ１は、そのペプチドのＣ末端部
と相互作用する。ＣＤＲ２は、ＭＨＣ分子を認識すると考えられている。いくつかの実施
形態において、β鎖の可変領域は、さらなる超可変性（ＨＶ４）領域を含み得る。
疫グロブリンに類似の相補性決定領域（ＣＤＲ）を形成し、それにより、抗原認識がもた
らされ、ＴＣＲ分子の結合部位を形成することによってペプチド特異性が決定され、ペプ
チド特異性が決定される。通常、免疫グロブリンと同様に、ＣＤＲは、フレームワーク領
域（ＦＲ）によって隔てられる（例えば、Ｊｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｃｈｏ
ｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８８；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３を参照の
こと）。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ３は、プロセシングされた抗原の認識に関
与する主要なＣＤＲであるが、アルファ鎖のＣＤＲ１は、抗原ペプチドのＮ末端部と相互
作用するとも示されているのに対して、ベータ鎖のＣＤＲ１は、そのペプチドのＣ末端部
と相互作用する。ＣＤＲ２は、ＭＨＣ分子を認識すると考えられている。いくつかの実施
形態において、β鎖の可変領域は、さらなる超可変性（ＨＶ４）領域を含み得る。
【0163】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖は、定常ドメインを含む。例えば、免疫グロブ
リンと同様に、ＴＣＲ鎖の細胞外の部分（例えば、ａ鎖、β鎖）は、２つの免疫グロブリ
ンドメインである、Ｎ末端における可変ドメイン（例えば、ＶａまたはＶｐ；通常、Ｋａ
ｂａｔナンバリングであるＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ Ｄｅｐ
ｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔ
ｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，
１９９１，５ｔｈ ｅｄ．に基づくアミノ酸１～１１６）、および細胞膜に隣接した１つ
の定常ドメイン（例えば、ａ鎖定常ドメインまたはＣａ、通常、Ｋａｂａｔに基づくアミ
ノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメインまたはＣｐ、通常、Ｋａｂａｔに基づくアミノ酸
１１７～２９５）を含み得る。例えば、いくつかの場合、それらの２本の鎖によって形成
されるＴＣＲの細胞外の部分は、２つの膜近位定常ドメイン、およびＣＤＲを含む２つの
膜遠位可変ドメインを含む。ＴＣＲドメインの定常ドメインは、システイン残基がジスル
フィド結合を形成する短い接続配列を含み、それにより、それらの２本の鎖の間に連結が
形成される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲが、定常ドメインに２つのジスルフィド結
合を含むように、そのＴＣＲは、α鎖およびβ鎖の各々に追加のシステイン残基を有して
もよい。
リンと同様に、ＴＣＲ鎖の細胞外の部分（例えば、ａ鎖、β鎖）は、２つの免疫グロブリ
ンドメインである、Ｎ末端における可変ドメイン（例えば、ＶａまたはＶｐ；通常、Ｋａ
ｂａｔナンバリングであるＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ Ｄｅｐ
ｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔ
ｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，
１９９１，５ｔｈ ｅｄ．に基づくアミノ酸１～１１６）、および細胞膜に隣接した１つ
の定常ドメイン（例えば、ａ鎖定常ドメインまたはＣａ、通常、Ｋａｂａｔに基づくアミ
ノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメインまたはＣｐ、通常、Ｋａｂａｔに基づくアミノ酸
１１７～２９５）を含み得る。例えば、いくつかの場合、それらの２本の鎖によって形成
されるＴＣＲの細胞外の部分は、２つの膜近位定常ドメイン、およびＣＤＲを含む２つの
膜遠位可変ドメインを含む。ＴＣＲドメインの定常ドメインは、システイン残基がジスル
フィド結合を形成する短い接続配列を含み、それにより、それらの２本の鎖の間に連結が
形成される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲが、定常ドメインに２つのジスルフィド結
合を含むように、そのＴＣＲは、α鎖およびβ鎖の各々に追加のシステイン残基を有して
もよい。
【0164】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖は、膜貫通ドメインを含み得る。いくつかの実
施形態において、膜貫通ドメインは、正に帯電している。いくつかの場合において、ＴＣ
Ｒ鎖は、細胞質テイルを含む。いくつかの場合において、その構造のおかげで、ＴＣＲは
ＣＤ３のような他の分子と会合することができる。例えば、膜貫通領域とともに定常ドメ
インを含むＴＣＲは、そのタンパク質を細胞膜に固定し得、ＣＤ３シグナル伝達装置また
は複合体のインバリアントサブユニットと会合し得る。
施形態において、膜貫通ドメインは、正に帯電している。いくつかの場合において、ＴＣ
Ｒ鎖は、細胞質テイルを含む。いくつかの場合において、その構造のおかげで、ＴＣＲは
ＣＤ３のような他の分子と会合することができる。例えば、膜貫通領域とともに定常ドメ
インを含むＴＣＲは、そのタンパク質を細胞膜に固定し得、ＣＤ３シグナル伝達装置また
は複合体のインバリアントサブユニットと会合し得る。
【0165】
一般に、ＣＤ３は、哺乳動物においては３つの異なる鎖（γ、δおよびε）およびζ鎖
を有し得る多タンパク質複合体である。例えば、哺乳動物では、この複合体は、ＣＤ３γ
鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、およびホモ二量体のＣＤ３ζ鎖を含み得る。ＣＤ３
γ鎖、ＣＤ３δ鎖およびＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブ
リンスーパーファミリーの高度に関連した細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ
３δ鎖およびＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に帯電しており、これは、これらの鎖が、正
に帯電したＴ細胞レセプター鎖と会合できるようにする特性である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３
δ鎖およびＣＤ３ε鎖の各細胞内テイルは、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴ
ＡＭとして知られる保存された単一のモチーフを含むのに対して、各ＣＤ３ζ鎖は、３つ
含む。一般に、ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能に関わる。これらのアクセサ
リー分子は、負に帯電した膜貫通領域を有し、ＴＣＲから細胞へのシグナルの伝播におい
て役割を果たす。ＣＤ３鎖およびζ鎖は、ＴＣＲと一体となって、Ｔ細胞レセプター複合
体として知られる複合体を形成する。
を有し得る多タンパク質複合体である。例えば、哺乳動物では、この複合体は、ＣＤ３γ
鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、およびホモ二量体のＣＤ３ζ鎖を含み得る。ＣＤ３
γ鎖、ＣＤ３δ鎖およびＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブ
リンスーパーファミリーの高度に関連した細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ
３δ鎖およびＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に帯電しており、これは、これらの鎖が、正
に帯電したＴ細胞レセプター鎖と会合できるようにする特性である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３
δ鎖およびＣＤ３ε鎖の各細胞内テイルは、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴ
ＡＭとして知られる保存された単一のモチーフを含むのに対して、各ＣＤ３ζ鎖は、３つ
含む。一般に、ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能に関わる。これらのアクセサ
リー分子は、負に帯電した膜貫通領域を有し、ＴＣＲから細胞へのシグナルの伝播におい
て役割を果たす。ＣＤ３鎖およびζ鎖は、ＴＣＲと一体となって、Ｔ細胞レセプター複合
体として知られる複合体を形成する。
【0166】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、２本の鎖αおよびβ（または必要に応じてγ
およびδ）のヘテロ二量体であり得るか、または一本鎖ＴＣＲ構築物であり得る。いくつ
かの実施形態において、ＴＣＲは、ジスルフィド結合などによって連結された２本の別個
の鎖（α鎖とβ鎖またはγ鎖とδ鎖）を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施形態に
おいて、標的抗原（例えば、癌抗原）に対するＴＣＲが特定され、細胞に導入される。い
くつかの実施形態において、ＴＣＲをコードする核酸は、公的に入手可能なＴＣＲ ＤＮ
Ａ配列のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅などによって、種々の起源から得ることが
できる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、生物学的起源、例えば、細胞、例えば
、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマまたは他の公的に入手可
能な起源から得られる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、インビボで単離された
細胞から得ることができる。いくつかの実施形態において、高親和性Ｔ細胞クローンが、
患者から単離され得、ＴＣＲが単離され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、
培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであり得る。いくつかの実施形態におい
て、標的抗原に対するＴＣＲクローンは、ヒト免疫系遺伝子（例えば、ヒト白血球抗原系
またはＨＬＡ）で操作されたトランスジェニックマウスにおいて産生されたクローンであ
る。例えば、腫瘍抗原（例えば、Ｐａｒｋｈｕｒｓｔ ｅｔ ａｌ．，２００９およびＣ
ｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００５）を参照のこと。いくつかの実施形態では、ファージ
ディスプレイを用いて、標的抗原に対するＴＣＲが単離される（例えば、Ｖａｒｅｌａ－
Ｒｏｈｅｎａ ｅｔ ａｌ．，２００８およびＬｉ，２００５を参照のこと）。いくつか
の実施形態において、ＴＣＲまたはその抗原結合部分は、ＴＣＲの配列の知識によって合
成的に作製され得る。
Ｃ．抗原提示細胞
およびδ）のヘテロ二量体であり得るか、または一本鎖ＴＣＲ構築物であり得る。いくつ
かの実施形態において、ＴＣＲは、ジスルフィド結合などによって連結された２本の別個
の鎖（α鎖とβ鎖またはγ鎖とδ鎖）を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施形態に
おいて、標的抗原（例えば、癌抗原）に対するＴＣＲが特定され、細胞に導入される。い
くつかの実施形態において、ＴＣＲをコードする核酸は、公的に入手可能なＴＣＲ ＤＮ
Ａ配列のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅などによって、種々の起源から得ることが
できる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、生物学的起源、例えば、細胞、例えば
、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマまたは他の公的に入手可
能な起源から得られる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、インビボで単離された
細胞から得ることができる。いくつかの実施形態において、高親和性Ｔ細胞クローンが、
患者から単離され得、ＴＣＲが単離され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、
培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであり得る。いくつかの実施形態におい
て、標的抗原に対するＴＣＲクローンは、ヒト免疫系遺伝子（例えば、ヒト白血球抗原系
またはＨＬＡ）で操作されたトランスジェニックマウスにおいて産生されたクローンであ
る。例えば、腫瘍抗原（例えば、Ｐａｒｋｈｕｒｓｔ ｅｔ ａｌ．，２００９およびＣ
ｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００５）を参照のこと。いくつかの実施形態では、ファージ
ディスプレイを用いて、標的抗原に対するＴＣＲが単離される（例えば、Ｖａｒｅｌａ－
Ｒｏｈｅｎａ ｅｔ ａｌ．，２００８およびＬｉ，２００５を参照のこと）。いくつか
の実施形態において、ＴＣＲまたはその抗原結合部分は、ＴＣＲの配列の知識によって合
成的に作製され得る。
Ｃ．抗原提示細胞
【0167】
マクロファージ、Ｂリンパ球および樹状細胞を含む抗原提示細胞は、特定のＭＨＣ分子
の発現によって識別される。ＡＰＣは、抗原を内部移行し、その抗原の一部をＭＨＣ分子
とともにその細胞膜の外膜上に再発現する。ＭＨＣは、複数の遺伝子座を含む大きな遺伝
子複合体である。ＭＨＣ遺伝子座は、クラスＩおよびクラスＩＩ ＭＨＣと称されるＭＨ
Ｃ膜分子の主要な２クラスをコードする。Ｔヘルパーリンパ球は、一般に、ＭＨＣクラス
ＩＩ分子と会合した抗原を認識し、Ｔ細胞傷害性リンパ球は、ＭＨＣクラスＩ分子と会合
した抗原を認識する。ＭＨＣは、ヒトではＨＬＡ複合体と称され、マウスではＨ－２複合
体と称される。
の発現によって識別される。ＡＰＣは、抗原を内部移行し、その抗原の一部をＭＨＣ分子
とともにその細胞膜の外膜上に再発現する。ＭＨＣは、複数の遺伝子座を含む大きな遺伝
子複合体である。ＭＨＣ遺伝子座は、クラスＩおよびクラスＩＩ ＭＨＣと称されるＭＨ
Ｃ膜分子の主要な２クラスをコードする。Ｔヘルパーリンパ球は、一般に、ＭＨＣクラス
ＩＩ分子と会合した抗原を認識し、Ｔ細胞傷害性リンパ球は、ＭＨＣクラスＩ分子と会合
した抗原を認識する。ＭＨＣは、ヒトではＨＬＡ複合体と称され、マウスではＨ－２複合
体と称される。
【0168】
いくつかの場合において、上記実施形態の治療的組成物および細胞療法用の生成物を調
製する際には、ａＡＰＣが有用である。抗原提示システムの調製および使用に関する一般
的ガイダンスについては、例えば、米国特許第６，２２５，０４２号、同第６，３５５，
４７９号、同第６，３６２，００１号および同第６，７９０，６６２号；米国特許出願公
開第２００９／００１７０００号および同第２００９／０００４１４２号；ならびに国際
公開番号ＷＯ２００７／１０３００９を参照のこと。
製する際には、ａＡＰＣが有用である。抗原提示システムの調製および使用に関する一般
的ガイダンスについては、例えば、米国特許第６，２２５，０４２号、同第６，３５５，
４７９号、同第６，３６２，００１号および同第６，７９０，６６２号；米国特許出願公
開第２００９／００１７０００号および同第２００９／０００４１４２号；ならびに国際
公開番号ＷＯ２００７／１０３００９を参照のこと。
【0169】
ａＡＰＣシステムは、少なくとも１つの外来性の補助分子を含み得る。任意の好適な数
および組み合わせの補助分子が使用され得る。補助分子は、共刺激分子および接着分子な
どの補助分子から選択され得る。例示的な共刺激分子としては、ＣＤ８６、ＣＤ６４（Ｆ
ｃγＲＩ）、４１ＢＢリガンドおよびＩＬ－２１が挙げられる。接着分子としては、例え
ば細胞間の接触または細胞とマトリックスとの接触を促進する、セレクチンなどの糖結合
糖タンパク質、インテグリンなどの膜貫通結合糖タンパク質、カドヘリンなどのカルシウ
ム依存性タンパク質、および細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）などの１回膜貫通型免疫グロブ
リン（Ｉｇ）スーパーファミリータンパク質が挙げられ得る。例示的な接着分子としては
、ＬＦＡ－３、およびＩＣＡＭ－１などのＩＣＡＭが挙げられる。共刺激分子および接着
分子をはじめとした例示的な補助分子の選択、クローニング、調製および発現に有用な手
法、方法および試薬は、例えば、米国特許第６，２２５，０４２号、同第６，３５５，４
７９号および同第６，３６２，００１号に例証されている。
Ｄ．抗原
および組み合わせの補助分子が使用され得る。補助分子は、共刺激分子および接着分子な
どの補助分子から選択され得る。例示的な共刺激分子としては、ＣＤ８６、ＣＤ６４（Ｆ
ｃγＲＩ）、４１ＢＢリガンドおよびＩＬ－２１が挙げられる。接着分子としては、例え
ば細胞間の接触または細胞とマトリックスとの接触を促進する、セレクチンなどの糖結合
糖タンパク質、インテグリンなどの膜貫通結合糖タンパク質、カドヘリンなどのカルシウ
ム依存性タンパク質、および細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）などの１回膜貫通型免疫グロブ
リン（Ｉｇ）スーパーファミリータンパク質が挙げられ得る。例示的な接着分子としては
、ＬＦＡ－３、およびＩＣＡＭ－１などのＩＣＡＭが挙げられる。共刺激分子および接着
分子をはじめとした例示的な補助分子の選択、クローニング、調製および発現に有用な手
法、方法および試薬は、例えば、米国特許第６，２２５，０４２号、同第６，３５５，４
７９号および同第６，３６２，００１号に例証されている。
Ｄ．抗原
【0170】
遺伝的に操作された抗原レセプターによって標的化される抗原には、養子細胞療法を介
して標的化される疾患、状態または細胞型の状況において発現される抗原が含まれる。そ
れらの疾患および状態には、血液癌、免疫系の癌（例えば、リンパ腫、白血病および／ま
たはミエローマ、例えば、Ｂ、Ｔおよび骨髄性白血病、リンパ腫ならびに多発性骨髄腫）
をはじめとした癌および腫瘍を含む、増殖性、腫瘍性および悪性の疾患および障害が含ま
れる。いくつかの実施形態において、抗原は、正常細胞もしくは正常組織または非標的化
細胞もしくは非標的化組織と比べて、その疾患または状態の細胞上、例えば、腫瘍細胞上
または病原性細胞上に、選択的に発現されるかまたは過剰発現される。他の実施形態にお
いて、抗原は、正常細胞上に発現され、かつ／または操作された細胞上に発現される。
して標的化される疾患、状態または細胞型の状況において発現される抗原が含まれる。そ
れらの疾患および状態には、血液癌、免疫系の癌（例えば、リンパ腫、白血病および／ま
たはミエローマ、例えば、Ｂ、Ｔおよび骨髄性白血病、リンパ腫ならびに多発性骨髄腫）
をはじめとした癌および腫瘍を含む、増殖性、腫瘍性および悪性の疾患および障害が含ま
れる。いくつかの実施形態において、抗原は、正常細胞もしくは正常組織または非標的化
細胞もしくは非標的化組織と比べて、その疾患または状態の細胞上、例えば、腫瘍細胞上
または病原性細胞上に、選択的に発現されるかまたは過剰発現される。他の実施形態にお
いて、抗原は、正常細胞上に発現され、かつ／または操作された細胞上に発現される。
【0171】
任意の好適な抗原が、本方法において標的化され得る。その抗原は、ある特定の癌細胞
に関連することもあるが、いくつかの場合では、非癌性細胞と関連しないこともある。例
示的な抗原としては、感染性物質、自己（ａｕｔｏ）抗原／自己（ｓｅｌｆ）抗原、腫瘍
関連抗原／癌関連抗原、および腫瘍新抗原に由来する抗原性分子（Ｌｉｎｎｅｍａｎｎ
ｅｔ ａｌ．，２０１５）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様において
、それらの抗原には、ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｍｕｃ－１、Ｈｅｒ２、ＣＡ－
１２５、ＷＴ－１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／
ＤＲ４およびＣＥＡが含まれる。特定の態様において、２つ以上の抗原レセプターに対す
る抗原としては、ＣＤ１９、ＥＢＮＡ、ＷＴ１、ＣＤ１２３、ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖ
ＩＩＩ、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＣＡ－１２５、ＷＴ１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４
、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４および／またはＣＥＡが挙げられるが、これら
に限定されない。これらの抗原に対する配列は、当該分野で公知であり、例えば、Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ（登録商標）データベースにおける以下のものである：ＣＤ１９（アクセッショ
ン番号ＮＧ＿００７２７５．１）、ＥＢＮＡ（アクセッション番号ＮＧ＿００２３９２．
２）、ＷＴ１（アクセッション番号ＮＧ＿００９２７２．１）、ＣＤ１２３（アクセッシ
ョン番号ＮＣ＿００００２３．１１）、ＮＹ－ＥＳＯ（アクセッション番号ＮＣ＿０００
０２３．１１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（アクセッション番号ＮＧ＿００７７２６．３）、Ｍ
ＵＣ１（アクセッション番号ＮＧ＿０２９３８３．１）、ＨＥＲ２（アクセッション番号
ＮＧ＿００７５０３．１）、ＣＡ－１２５（アクセッション番号ＮＧ＿０５５２５７．１
）、ＷＴ１（アクセッション番号ＮＧ＿００９２７２．１）、Ｍａｇｅ－Ａ３（アクセッ
ション番号ＮＧ＿０１３２４４．１）、Ｍａｇｅ－Ａ４（アクセッション番号ＮＧ＿０１
３２４５．１）、Ｍａｇｅ－Ａ１０（アクセッション番号ＮＣ＿００００２３．１１）、
ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４（アクセッション番号ＮＣ＿０００００３．１２）、および／または
ＣＥＡ（アクセッション番号ＮＣ＿００００１９．１０）。
に関連することもあるが、いくつかの場合では、非癌性細胞と関連しないこともある。例
示的な抗原としては、感染性物質、自己（ａｕｔｏ）抗原／自己（ｓｅｌｆ）抗原、腫瘍
関連抗原／癌関連抗原、および腫瘍新抗原に由来する抗原性分子（Ｌｉｎｎｅｍａｎｎ
ｅｔ ａｌ．，２０１５）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様において
、それらの抗原には、ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｍｕｃ－１、Ｈｅｒ２、ＣＡ－
１２５、ＷＴ－１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／
ＤＲ４およびＣＥＡが含まれる。特定の態様において、２つ以上の抗原レセプターに対す
る抗原としては、ＣＤ１９、ＥＢＮＡ、ＷＴ１、ＣＤ１２３、ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖ
ＩＩＩ、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＣＡ－１２５、ＷＴ１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４
、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４および／またはＣＥＡが挙げられるが、これら
に限定されない。これらの抗原に対する配列は、当該分野で公知であり、例えば、Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ（登録商標）データベースにおける以下のものである：ＣＤ１９（アクセッショ
ン番号ＮＧ＿００７２７５．１）、ＥＢＮＡ（アクセッション番号ＮＧ＿００２３９２．
２）、ＷＴ１（アクセッション番号ＮＧ＿００９２７２．１）、ＣＤ１２３（アクセッシ
ョン番号ＮＣ＿００００２３．１１）、ＮＹ－ＥＳＯ（アクセッション番号ＮＣ＿０００
０２３．１１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（アクセッション番号ＮＧ＿００７７２６．３）、Ｍ
ＵＣ１（アクセッション番号ＮＧ＿０２９３８３．１）、ＨＥＲ２（アクセッション番号
ＮＧ＿００７５０３．１）、ＣＡ－１２５（アクセッション番号ＮＧ＿０５５２５７．１
）、ＷＴ１（アクセッション番号ＮＧ＿００９２７２．１）、Ｍａｇｅ－Ａ３（アクセッ
ション番号ＮＧ＿０１３２４４．１）、Ｍａｇｅ－Ａ４（アクセッション番号ＮＧ＿０１
３２４５．１）、Ｍａｇｅ－Ａ１０（アクセッション番号ＮＣ＿００００２３．１１）、
ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４（アクセッション番号ＮＣ＿０００００３．１２）、および／または
ＣＥＡ（アクセッション番号ＮＣ＿００００１９．１０）。
【0172】
腫瘍関連抗原は、例として、前立腺癌、乳癌、直腸結腸癌、肺癌、膵臓癌、腎癌、中皮
腫、卵巣癌、肝臓癌、脳癌、骨癌、胃癌、脾臓癌、精巣癌、子宮頸癌、肛門癌、胆嚢癌、
甲状腺癌または黒色腫に由来し得る。例示的な腫瘍関連抗原または腫瘍細胞由来抗原とし
ては、ＭＡＧＥ１、３およびＭＡＧＥ４（または他のＭＡＧＥ抗原、例えば、国際特許公
開番号ＷＯ９９／４０１８８に開示されているもの）；ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ
、Ｌａｇｅ（ＮＹ ＥＳＯ１としても知られる）；ＳＡＧＥ；およびＨＡＧＥまたはＧＡ
ＧＥが挙げられる。腫瘍抗原のこれらの非限定的な例は、黒色腫、肺癌、肉腫および膀胱
癌などの広範囲の腫瘍タイプにおいて発現される。例えば、米国特許第６，５４４，５１
８号を参照のこと。前立腺癌の腫瘍関連抗原としては、例えば、前立腺特異的膜抗原（Ｐ
ＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性リン酸塩、ＮＫＸ３．１および前立
腺の６回膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）が挙げられる。
腫、卵巣癌、肝臓癌、脳癌、骨癌、胃癌、脾臓癌、精巣癌、子宮頸癌、肛門癌、胆嚢癌、
甲状腺癌または黒色腫に由来し得る。例示的な腫瘍関連抗原または腫瘍細胞由来抗原とし
ては、ＭＡＧＥ１、３およびＭＡＧＥ４（または他のＭＡＧＥ抗原、例えば、国際特許公
開番号ＷＯ９９／４０１８８に開示されているもの）；ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ
、Ｌａｇｅ（ＮＹ ＥＳＯ１としても知られる）；ＳＡＧＥ；およびＨＡＧＥまたはＧＡ
ＧＥが挙げられる。腫瘍抗原のこれらの非限定的な例は、黒色腫、肺癌、肉腫および膀胱
癌などの広範囲の腫瘍タイプにおいて発現される。例えば、米国特許第６，５４４，５１
８号を参照のこと。前立腺癌の腫瘍関連抗原としては、例えば、前立腺特異的膜抗原（Ｐ
ＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性リン酸塩、ＮＫＸ３．１および前立
腺の６回膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）が挙げられる。
【0173】
他の腫瘍関連抗原としては、Ｐｌｕ－１、ＨＡＳＨ－１、ＨａｓＨ－２、Ｃｒｉｐｔｏ
およびＣｒｉｐｔｉｎが挙げられる。さらに、腫瘍抗原は、多くの癌の処置において有用
な自己ペプチドホルモン、例えば、完全長の性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）
、短い１０アミノ酸長のペプチドであり得る。
およびＣｒｉｐｔｉｎが挙げられる。さらに、腫瘍抗原は、多くの癌の処置において有用
な自己ペプチドホルモン、例えば、完全長の性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）
、短い１０アミノ酸長のペプチドであり得る。
【0174】
腫瘍抗原には、ＨＥＲ－２／ｎｅｕの発現などの腫瘍関連抗原の発現を特徴とする癌に
由来する腫瘍抗原が含まれる。目的の腫瘍関連抗原には、系列特異的腫瘍抗原、例えば、
メラノサイト－黒色腫系列抗原ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、
ｍｄａ－７、チロシナーゼおよびチロシナーゼ関連タンパク質が含まれる。例証的な腫瘍
関連抗原としては、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ－Ｍｙｃ、細胞質セリン／トレオニンキナーゼ（
例えば、Ａ－Ｒａｆ、Ｂ－ＲａｆおよびＣ－Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ）、ＭＡ
ＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡ
ＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＲＴ－１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ－６、－１０、ＧＡ
ＧＥ－１、－２、－８、ＧＡＧＥ－３、－４、－５、－６、－７Ｂ、ＮＡ８８－Ａ、ＭＡ
ＲＴ－１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ
－２、ＡＲＴ－４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ－Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、
ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫレセプター、
ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ウィルムス腫瘍抗
原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、－カテニン／ｍ、カスパーゼ－８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ－４／ｍ
、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ＫＩＡＡ０２０
５、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ－２、Ｔ
ＲＰ－２／ＩＮＴ２、７０７－ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃ
ｒ－ａｂｌ、ＢＣＲ－ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／Ａ
ＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲ、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（Ｔ
ＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、レセプターチロシンキナーゼ（例えば、上皮成長因子レ
セプター（ＥＧＦＲ）（特に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、血小板由来成長因子レセプター（Ｐ
ＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子レセプター（ＶＥＧＦＲ））、細胞質チロシンキナーゼ（
例えば、ｓｒｃファミリー、ｓｙｋ－ＺＡＰ７０ファミリー）、インテグリン結合キナー
ゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達性転写因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴＳおよびＳＴＡＴＥ、低酸
素誘導因子（例えば、ＨＩＦ－１およびＨＩＦ－２）、核因子－カッパーＢ（ＮＦ－Ｂ）
、Ｎｏｔｃｈレセプター（例えば、Ｎｏｔｃｈ１～４）、ｃ－Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺
乳動物標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）およびそれら
の調節サブユニット、ＰＭＳＡ、ＰＲ－３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌－５Ｔ４、
ＳＭ２２－アルファ、炭酸脱水酵素Ｉ（ＣＡＩ）およびＩＸ（ＣＡＩＸ）（Ｇ２５０とし
ても知られる）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲ
Ｔ、肉腫転座切断点（ｓａｒｃｏｍａ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｂｒｅａｋｐｏｉ
ｎｔｓ）、ＥｐｈＡ２、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融
合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲンレセプター、サイクリンＢ１、
ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリアン（ｍｅｓｏ
ｔｈｅｌｉａｎ）、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏ
ｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧｓＳ、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、
精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１、Ｂ
７Ｈ３、レグマイン（ｌｅｇｕｍａｉｎ）、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ－ＣＴ－１、
ＦＡＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ｆｏｓ関連抗原１、ＣＢＸ２、ＣＬＤＮ６、ＳＰＡＮＸ、Ｔ
ＰＴＥ、ＡＣＴＬ８、ＡＮＫＲＤ３０Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＭＡＤ２Ｌ１、ＣＴＡＧ１Ｂ、
ＳＵＮＣ１、ＬＲＲＮ１ならびにイディオタイプのうちのいずれか１つ以上に由来するか
またはいずれか１つ以上を含む腫瘍抗原が挙げられるが、これらに限定されない。
由来する腫瘍抗原が含まれる。目的の腫瘍関連抗原には、系列特異的腫瘍抗原、例えば、
メラノサイト－黒色腫系列抗原ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、
ｍｄａ－７、チロシナーゼおよびチロシナーゼ関連タンパク質が含まれる。例証的な腫瘍
関連抗原としては、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ－Ｍｙｃ、細胞質セリン／トレオニンキナーゼ（
例えば、Ａ－Ｒａｆ、Ｂ－ＲａｆおよびＣ－Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ）、ＭＡ
ＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡ
ＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＲＴ－１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ－６、－１０、ＧＡ
ＧＥ－１、－２、－８、ＧＡＧＥ－３、－４、－５、－６、－７Ｂ、ＮＡ８８－Ａ、ＭＡ
ＲＴ－１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ
－２、ＡＲＴ－４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ－Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、
ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫレセプター、
ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ウィルムス腫瘍抗
原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、－カテニン／ｍ、カスパーゼ－８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ－４／ｍ
、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ＫＩＡＡ０２０
５、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ－２、Ｔ
ＲＰ－２／ＩＮＴ２、７０７－ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃ
ｒ－ａｂｌ、ＢＣＲ－ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／Ａ
ＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲ、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（Ｔ
ＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、レセプターチロシンキナーゼ（例えば、上皮成長因子レ
セプター（ＥＧＦＲ）（特に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、血小板由来成長因子レセプター（Ｐ
ＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子レセプター（ＶＥＧＦＲ））、細胞質チロシンキナーゼ（
例えば、ｓｒｃファミリー、ｓｙｋ－ＺＡＰ７０ファミリー）、インテグリン結合キナー
ゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達性転写因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴＳおよびＳＴＡＴＥ、低酸
素誘導因子（例えば、ＨＩＦ－１およびＨＩＦ－２）、核因子－カッパーＢ（ＮＦ－Ｂ）
、Ｎｏｔｃｈレセプター（例えば、Ｎｏｔｃｈ１～４）、ｃ－Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺
乳動物標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）およびそれら
の調節サブユニット、ＰＭＳＡ、ＰＲ－３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌－５Ｔ４、
ＳＭ２２－アルファ、炭酸脱水酵素Ｉ（ＣＡＩ）およびＩＸ（ＣＡＩＸ）（Ｇ２５０とし
ても知られる）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲ
Ｔ、肉腫転座切断点（ｓａｒｃｏｍａ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｂｒｅａｋｐｏｉ
ｎｔｓ）、ＥｐｈＡ２、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融
合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲンレセプター、サイクリンＢ１、
ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリアン（ｍｅｓｏ
ｔｈｅｌｉａｎ）、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏ
ｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧｓＳ、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、
精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１、Ｂ
７Ｈ３、レグマイン（ｌｅｇｕｍａｉｎ）、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ－ＣＴ－１、
ＦＡＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ｆｏｓ関連抗原１、ＣＢＸ２、ＣＬＤＮ６、ＳＰＡＮＸ、Ｔ
ＰＴＥ、ＡＣＴＬ８、ＡＮＫＲＤ３０Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＭＡＤ２Ｌ１、ＣＴＡＧ１Ｂ、
ＳＵＮＣ１、ＬＲＲＮ１ならびにイディオタイプのうちのいずれか１つ以上に由来するか
またはいずれか１つ以上を含む腫瘍抗原が挙げられるが、これらに限定されない。
【0175】
抗原は、腫瘍細胞において変異した遺伝子由来の、または正常細胞と比べて腫瘍細胞に
おいて異なるレベルで転写される遺伝子由来の、エピトープ領域またはエピトープペプチ
ド（例えば、テロメラーゼ酵素、サバイビン、メソテリン、変異型ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂ
ｌ再配列、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異型または野生型ｐ５３、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１
、およびＮ－アセチルグルコサミン転移酵素－Ｖなどの異常に発現されるイントロン配列
）；ミエローマおよびＢ細胞リンパ腫においてユニークなイディオタイプを生成する免疫
グロブリン遺伝子のクローン性再配列；オンコウイルスのプロセスに由来するエピトープ
領域またはエピトープペプチドを含む腫瘍抗原（例えば、ヒトパピローマウイルスタンパ
ク質Ｅ６およびＥ７）；エプスタイン・バーウイルスタンパク質ＬＭＰ２；腫瘍選択的に
発現する変異していない腫瘍胎児性タンパク質（例えば、癌胎児抗原およびアルファ－フ
ェトプロテイン）を含み得る。
おいて異なるレベルで転写される遺伝子由来の、エピトープ領域またはエピトープペプチ
ド（例えば、テロメラーゼ酵素、サバイビン、メソテリン、変異型ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂ
ｌ再配列、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異型または野生型ｐ５３、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１
、およびＮ－アセチルグルコサミン転移酵素－Ｖなどの異常に発現されるイントロン配列
）；ミエローマおよびＢ細胞リンパ腫においてユニークなイディオタイプを生成する免疫
グロブリン遺伝子のクローン性再配列；オンコウイルスのプロセスに由来するエピトープ
領域またはエピトープペプチドを含む腫瘍抗原（例えば、ヒトパピローマウイルスタンパ
ク質Ｅ６およびＥ７）；エプスタイン・バーウイルスタンパク質ＬＭＰ２；腫瘍選択的に
発現する変異していない腫瘍胎児性タンパク質（例えば、癌胎児抗原およびアルファ－フ
ェトプロテイン）を含み得る。
【0176】
他の実施形態において、抗原は、病原性微生物または日和見病原性微生物（本明細書中
で感染症微生物とも呼ばれる）（例えば、ウイルス、真菌、寄生生物および細菌）から得
られるかまたはそれらに由来する。ある特定の実施形態において、そのような微生物に由
来する抗原には、完全長タンパク質が含まれる。
で感染症微生物とも呼ばれる）（例えば、ウイルス、真菌、寄生生物および細菌）から得
られるかまたはそれらに由来する。ある特定の実施形態において、そのような微生物に由
来する抗原には、完全長タンパク質が含まれる。
【0177】
本明細書中に記載される方法において使用が企図される抗原を有する例証的な病原性生
物としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸
器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウ
イルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、ＢおよびＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、
水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルスおよびＪ
Ｃウイルス）、アデノウイルス、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒ
ｅｕｓ（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌属の種、ならびにＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐ
ｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む連鎖球菌属の種が挙げられる。当業者が理解するように、本明
細書中に記載されるような抗原として使用するためのこれらおよび他の病原性微生物に由
来するタンパク質、ならびにそれらのタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、刊行
物ならびにＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲ
ＥＭＢＬ（登録商標）などの公的データベースにおいて特定され得る。
物としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸
器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウ
イルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、ＢおよびＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、
水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルスおよびＪ
Ｃウイルス）、アデノウイルス、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒ
ｅｕｓ（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌属の種、ならびにＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐ
ｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む連鎖球菌属の種が挙げられる。当業者が理解するように、本明
細書中に記載されるような抗原として使用するためのこれらおよび他の病原性微生物に由
来するタンパク質、ならびにそれらのタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、刊行
物ならびにＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲ
ＥＭＢＬ（登録商標）などの公的データベースにおいて特定され得る。
【0178】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に由来する抗原には、ＨＩＶビリオン構造タンパク質
（例えば、ｇｐ１２０、ｇｐ４１、ｐ１７、ｐ２４）、プロテアーゼ、逆転写酵素、また
はｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｒおよびｖｐｕによってコードされるＨＩＶタ
ンパク質のうちのいずれかが含まれる。
（例えば、ｇｐ１２０、ｇｐ４１、ｐ１７、ｐ２４）、プロテアーゼ、逆転写酵素、また
はｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｒおよびｖｐｕによってコードされるＨＩＶタ
ンパク質のうちのいずれかが含まれる。
【0179】
単純ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２）に由来する抗原としては、
ＨＳＶ後期遺伝子から発現されるタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。後
期群の遺伝子は、ビリオン粒子を形成するタンパク質を主にコードする。そのようなタン
パク質としては、ウイルスキャプシドを形成する（ＵＬ）の５つのタンパク質：ＵＬ６、
ＵＬ１８、ＵＬ３５、ＵＬ３８ならびに主要キャプシドタンパク質ＵＬ１９、ＵＬ４５お
よびＵＬ２７（これらの各々が、本明細書中に記載されるような抗原として使用され得る
）が挙げられる。本明細書中で抗原としての使用が企図される他の例証的なＨＳＶタンパ
ク質としては、ＩＣＰ２７（Ｈ１、Ｈ２）、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）および糖タンパク質
Ｄ（ｇＤ）タンパク質が挙げられる。ＨＳＶゲノムは、少なくとも７４個の遺伝子を含み
、その各々が、抗原として使用され得る可能性があるタンパク質をコードする。
ＨＳＶ後期遺伝子から発現されるタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。後
期群の遺伝子は、ビリオン粒子を形成するタンパク質を主にコードする。そのようなタン
パク質としては、ウイルスキャプシドを形成する（ＵＬ）の５つのタンパク質：ＵＬ６、
ＵＬ１８、ＵＬ３５、ＵＬ３８ならびに主要キャプシドタンパク質ＵＬ１９、ＵＬ４５お
よびＵＬ２７（これらの各々が、本明細書中に記載されるような抗原として使用され得る
）が挙げられる。本明細書中で抗原としての使用が企図される他の例証的なＨＳＶタンパ
ク質としては、ＩＣＰ２７（Ｈ１、Ｈ２）、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）および糖タンパク質
Ｄ（ｇＤ）タンパク質が挙げられる。ＨＳＶゲノムは、少なくとも７４個の遺伝子を含み
、その各々が、抗原として使用され得る可能性があるタンパク質をコードする。
【0180】
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に由来する抗原としては、ＣＭＶ構造タンパク質、ウ
イルス複製の前初期および初期に発現されるウイルス抗原、糖タンパク質ＩおよびＩＩＩ
、キャプシドタンパク質、コートタンパク質、低分子マトリックスタンパク質（ｌｏｗｅ
ｒ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｅｉｎ）ｐｐ６５（ｐｐＵＬ８３）、ｐ５２（ｐｐＵＬ４４
）、ＩＥ１および１Ｅ２（ＵＬ１２３およびＵＬ１２２）、ＵＬ１２８～ＵＬ１５０の遺
伝子クラスターのタンパク質産物（Ｒｙｋｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，２００６）、エンベロ
ープ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、ｇＨ、ｇＮ、ならびにｐｐ１５０が挙げられる。当業者が
理解するように、本明細書中に記載される抗原として使用するためのＣＭＶタンパク質は
、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ
（登録商標）などの公的データベースにおいて特定され得る（例えば、Ｂｅｎｎｅｋｏｖ
ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｌｏｅｗｅｎｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｍａｒｓ
ｃｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００９を参照のこと）。
イルス複製の前初期および初期に発現されるウイルス抗原、糖タンパク質ＩおよびＩＩＩ
、キャプシドタンパク質、コートタンパク質、低分子マトリックスタンパク質（ｌｏｗｅ
ｒ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｅｉｎ）ｐｐ６５（ｐｐＵＬ８３）、ｐ５２（ｐｐＵＬ４４
）、ＩＥ１および１Ｅ２（ＵＬ１２３およびＵＬ１２２）、ＵＬ１２８～ＵＬ１５０の遺
伝子クラスターのタンパク質産物（Ｒｙｋｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，２００６）、エンベロ
ープ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、ｇＨ、ｇＮ、ならびにｐｐ１５０が挙げられる。当業者が
理解するように、本明細書中に記載される抗原として使用するためのＣＭＶタンパク質は
、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ
（登録商標）などの公的データベースにおいて特定され得る（例えば、Ｂｅｎｎｅｋｏｖ
ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｌｏｅｗｅｎｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｍａｒｓ
ｃｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００９を参照のこと）。
【0181】
ある特定の実施形態において使用が企図されるエプスタイン・バンウイルス（ＥＢＶ）
に由来する抗原としては、ＥＢＶ溶解性タンパク質ｇｐ３５０およびｇｐ１１０、エプス
タイン・バン核抗原（ＥＢＮＡ）－１、ＥＢＮＡ－２、ＥＢＮＡ－３Ａ、ＥＢＮＡ－３Ｂ
、ＥＢＮＡ－３Ｃ、ＥＢＮＡ－リーダータンパク質（ＥＢＮＡ－ＬＰ）、ならびに潜伏感
染膜タンパク質（ＬＭＰ）－１、ＬＭＰ－２ＡおよびＬＭＰ－２Ｂを含む、潜伏感染サイ
クル中に生成されるＥＢＶタンパク質が挙げられる（例えば、Ｌｏｃｋｅｙ ｅｔ ａｌ
．，２００８を参照のこと）。
に由来する抗原としては、ＥＢＶ溶解性タンパク質ｇｐ３５０およびｇｐ１１０、エプス
タイン・バン核抗原（ＥＢＮＡ）－１、ＥＢＮＡ－２、ＥＢＮＡ－３Ａ、ＥＢＮＡ－３Ｂ
、ＥＢＮＡ－３Ｃ、ＥＢＮＡ－リーダータンパク質（ＥＢＮＡ－ＬＰ）、ならびに潜伏感
染膜タンパク質（ＬＭＰ）－１、ＬＭＰ－２ＡおよびＬＭＰ－２Ｂを含む、潜伏感染サイ
クル中に生成されるＥＢＶタンパク質が挙げられる（例えば、Ｌｏｃｋｅｙ ｅｔ ａｌ
．，２００８を参照のこと）。
【0182】
本明細書中で使用が企図される呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に由来する抗原には、
ＲＳＶゲノムによってコードされる１１個のタンパク質またはそれらの抗原性フラグメン
ト：ＮＳ１、ＮＳ２、Ｎ（ヌクレオキャプシドタンパク質）、Ｍ（マトリックスタンパク
質）ＳＨ、ＧおよびＦ（ウイルスコートタンパク質）、Ｍ２（第２のマトリックスタンパ
ク質）、Ｍ２－１（伸長因子）、Ｍ２－２（転写制御）、ＲＮＡポリメラーゼ、ならびに
リンタンパク質Ｐのうちのいずれかが含まれる。
ＲＳＶゲノムによってコードされる１１個のタンパク質またはそれらの抗原性フラグメン
ト：ＮＳ１、ＮＳ２、Ｎ（ヌクレオキャプシドタンパク質）、Ｍ（マトリックスタンパク
質）ＳＨ、ＧおよびＦ（ウイルスコートタンパク質）、Ｍ２（第２のマトリックスタンパ
ク質）、Ｍ２－１（伸長因子）、Ｍ２－２（転写制御）、ＲＮＡポリメラーゼ、ならびに
リンタンパク質Ｐのうちのいずれかが含まれる。
【0183】
使用が企図される水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に由来する抗原には、ＶＳＶゲノム
によってコードされる主要な５つのタンパク質およびそれらの抗原性フラグメント：巨大
タンパク質（Ｌ）、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、リンタンパク質（Ｐ）お
よびマトリックスタンパク質（Ｍ）のうちのいずれか１つが含まれる（例えば、Ｒｉｅｄ
ｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９を参照のこと）。
によってコードされる主要な５つのタンパク質およびそれらの抗原性フラグメント：巨大
タンパク質（Ｌ）、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、リンタンパク質（Ｐ）お
よびマトリックスタンパク質（Ｍ）のうちのいずれか１つが含まれる（例えば、Ｒｉｅｄ
ｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９を参照のこと）。
【0184】
ある特定の実施形態において使用が企図されるインフルエンザウイルスに由来する抗原
としては、赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、
マトリックスタンパク質Ｍ１およびＭ２、ＮＳ１、ＮＳ２（ＮＥＰ）、ＰＡ、ＰＢ１、Ｐ
Ｂ１－Ｆ２、ならびにＰＢ２が挙げられる。
としては、赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、
マトリックスタンパク質Ｍ１およびＭ２、ＮＳ１、ＮＳ２（ＮＥＰ）、ＰＡ、ＰＢ１、Ｐ
Ｂ１－Ｆ２、ならびにＰＢ２が挙げられる。
【0185】
例示的なウイルス抗原としては、アデノウイルスのポリペプチド、アルファウイルスの
ポリペプチド、カリシウイルスのポリペプチド（例えば、カリシウイルスのキャプシド抗
原）、コロナウイルスのポリペプチド、ジステンパーウイルスのポリペプチド、エボラウ
イルスのポリペプチド、エンテロウイルスのポリペプチド、フラビウイルスのポリペプチ
ド、肝炎ウイルス（ＡＥ）のポリペプチド（Ｂ型肝炎コアまたは表面抗原、Ｃ型肝炎ウイ
ルスのＥ１もしくはＥ２糖タンパク質、コアまたは非構造タンパク質）、ヘルペスウイル
スのポリペプチド（単純ヘルペスウイルスまたは水痘帯状疱疹ウイルスの糖タンパク質を
含む）、感染性腹膜炎ウイルスのポリペプチド、白血病ウイルスのポリペプチド、マール
ブルグウイルスのポリペプチド、オルトミクソウイルスのポリペプチド、パピローマウイ
ルスのポリペプチド、パラインフルエンザウイルスのポリペプチド（例えば、赤血球凝集
素ポリペプチドおよびノイラミニダーゼポリペプチド）、パラミクソウイルスのポリペプ
チド、パルボウイルスのポリペプチド、ペスチウイルスのポリペプチド、ピコルナウイル
スのポリペプチド（例えば、ポリオウイルスのキャプシドポリペプチド）、ポックスウイ
ルスのポリペプチド（例えば、ワクシニアウイルスのポリペプチド）、狂犬病ウイルスの
ポリペプチド（例えば、狂犬病ウイルスの糖タンパク質Ｇ）、レオウイルスのポリペプチ
ド、レトロウイルスのポリペプチド、およびロタウイルスのポリペプチドも挙げられるが
、これらに限定されない。
ポリペプチド、カリシウイルスのポリペプチド（例えば、カリシウイルスのキャプシド抗
原）、コロナウイルスのポリペプチド、ジステンパーウイルスのポリペプチド、エボラウ
イルスのポリペプチド、エンテロウイルスのポリペプチド、フラビウイルスのポリペプチ
ド、肝炎ウイルス（ＡＥ）のポリペプチド（Ｂ型肝炎コアまたは表面抗原、Ｃ型肝炎ウイ
ルスのＥ１もしくはＥ２糖タンパク質、コアまたは非構造タンパク質）、ヘルペスウイル
スのポリペプチド（単純ヘルペスウイルスまたは水痘帯状疱疹ウイルスの糖タンパク質を
含む）、感染性腹膜炎ウイルスのポリペプチド、白血病ウイルスのポリペプチド、マール
ブルグウイルスのポリペプチド、オルトミクソウイルスのポリペプチド、パピローマウイ
ルスのポリペプチド、パラインフルエンザウイルスのポリペプチド（例えば、赤血球凝集
素ポリペプチドおよびノイラミニダーゼポリペプチド）、パラミクソウイルスのポリペプ
チド、パルボウイルスのポリペプチド、ペスチウイルスのポリペプチド、ピコルナウイル
スのポリペプチド（例えば、ポリオウイルスのキャプシドポリペプチド）、ポックスウイ
ルスのポリペプチド（例えば、ワクシニアウイルスのポリペプチド）、狂犬病ウイルスの
ポリペプチド（例えば、狂犬病ウイルスの糖タンパク質Ｇ）、レオウイルスのポリペプチ
ド、レトロウイルスのポリペプチド、およびロタウイルスのポリペプチドも挙げられるが
、これらに限定されない。
【0186】
ある特定の実施形態において、抗原は、細菌抗原であり得る。ある特定の実施形態にお
いて、目的の細菌抗原は、分泌型ポリペプチドであり得る。他のある特定の実施形態にお
いて、細菌抗原には、細菌の細胞外面上に露出したポリペプチドの一部分を有する抗原が
含まれる。
いて、目的の細菌抗原は、分泌型ポリペプチドであり得る。他のある特定の実施形態にお
いて、細菌抗原には、細菌の細胞外面上に露出したポリペプチドの一部分を有する抗原が
含まれる。
【0187】
使用が企図される、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（Ｍ
ＲＳＡ）を含むブドウ球菌属の種に由来する抗原としては、ビルレンス制御因子、例えば
、Ａｇｒシステム、ＳａｒおよびＳａｅ、Ａｒｌシステム、Ｓａｒホモログ（Ｒｏｔ、Ｍ
ｇｒＡ、ＳａｒＳ、ＳａｒＲ、ＳａｒＴ、ＳａｒＵ、ＳａｒＶ、ＳａｒＸ、ＳａｒＺおよ
びＴｃａＲ）、ＳｒｒシステムならびにＴＲＡＰが挙げられる。抗原として役立ち得る他
のブドウ球菌属のタンパク質としては、Ｃｌｐタンパク質、ＨｔｒＡ、ＭｓｒＲ、アコニ
ターゼ、ＣｃｐＡ、ＳｖｒＡ、Ｍｓａ、ＣｆｖＡおよびＣｆｖＢが挙げられる（例えば、
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００８ Ｃ
ａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｅｄ．Ｊｏｄｉ Ｌｉｎｄｓａｙを参照
のこと）。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの２種（Ｎ３１５およびＭｕ５
０）のゲノムが、配列決定済みであり、例えば、ＰＡＴＲＩＣ（ＰＡＴＲＩＣ：Ｔｈｅ
ＶＢＩ ＰａｔｈｏＳｙｓｔｅｍｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ Ｃｅ
ｎｔｅｒ，Ｓｎｙｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７）において公的に入手可能である。当
業者が理解するように、抗原として使用するためのブドウ球菌属のタンパク質は、Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ（登録商標）、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ（登録商標）およびＴｒＥＭＢＬ（登録商
標）などの他の公的データベースにおいても特定され得る。
ＲＳＡ）を含むブドウ球菌属の種に由来する抗原としては、ビルレンス制御因子、例えば
、Ａｇｒシステム、ＳａｒおよびＳａｅ、Ａｒｌシステム、Ｓａｒホモログ（Ｒｏｔ、Ｍ
ｇｒＡ、ＳａｒＳ、ＳａｒＲ、ＳａｒＴ、ＳａｒＵ、ＳａｒＶ、ＳａｒＸ、ＳａｒＺおよ
びＴｃａＲ）、ＳｒｒシステムならびにＴＲＡＰが挙げられる。抗原として役立ち得る他
のブドウ球菌属のタンパク質としては、Ｃｌｐタンパク質、ＨｔｒＡ、ＭｓｒＲ、アコニ
ターゼ、ＣｃｐＡ、ＳｖｒＡ、Ｍｓａ、ＣｆｖＡおよびＣｆｖＢが挙げられる（例えば、
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００８ Ｃ
ａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｅｄ．Ｊｏｄｉ Ｌｉｎｄｓａｙを参照
のこと）。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの２種（Ｎ３１５およびＭｕ５
０）のゲノムが、配列決定済みであり、例えば、ＰＡＴＲＩＣ（ＰＡＴＲＩＣ：Ｔｈｅ
ＶＢＩ ＰａｔｈｏＳｙｓｔｅｍｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ Ｃｅ
ｎｔｅｒ，Ｓｎｙｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７）において公的に入手可能である。当
業者が理解するように、抗原として使用するためのブドウ球菌属のタンパク質は、Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ（登録商標）、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ（登録商標）およびＴｒＥＭＢＬ（登録商
標）などの他の公的データベースにおいても特定され得る。
【0188】
本明細書中に記載されるある特定の実施形態において使用が企図されるＳｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに由来する抗原としては、ニューモリシン、Ｐｓｐ
Ａ、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｂｐＡ）、ＮａｎＡ、ＮａｎＢ、ＳｐｎＨＬ、ＰａｖＡ
、ＬｙｔＡ、Ｐｈｔおよびピリンタンパク質（ＲｒｇＡ；ＲｒｇＢ；ＲｒｇＣ）が挙げら
れる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの抗原性タンパク質も、当該
分野で公知であり、いくつかの実施形態において抗原として使用され得る（例えば、Ｚｙ
ｓｋ ｅｔ ａｌ．，２０００を参照のこと）。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅの毒性株の全ゲノム配列は、配列決定済みであり、当業者が理解するように
、本明細書中で使用するためのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅタンパク質は、ＧＥＮＢＡＮＫ
（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ（登録商標）など
の他の公的データベースにおいても特定され得る。本開示に係る抗原として特に興味深い
タンパク質としては、肺炎球菌の表面に露出すると予測される病原性因子およびタンパク
質が挙げられる（例えば、Ｆｒｏｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，２０１０を参照のこと）。
ｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに由来する抗原としては、ニューモリシン、Ｐｓｐ
Ａ、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｂｐＡ）、ＮａｎＡ、ＮａｎＢ、ＳｐｎＨＬ、ＰａｖＡ
、ＬｙｔＡ、Ｐｈｔおよびピリンタンパク質（ＲｒｇＡ；ＲｒｇＢ；ＲｒｇＣ）が挙げら
れる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの抗原性タンパク質も、当該
分野で公知であり、いくつかの実施形態において抗原として使用され得る（例えば、Ｚｙ
ｓｋ ｅｔ ａｌ．，２０００を参照のこと）。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅの毒性株の全ゲノム配列は、配列決定済みであり、当業者が理解するように
、本明細書中で使用するためのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅタンパク質は、ＧＥＮＢＡＮＫ
（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ（登録商標）など
の他の公的データベースにおいても特定され得る。本開示に係る抗原として特に興味深い
タンパク質としては、肺炎球菌の表面に露出すると予測される病原性因子およびタンパク
質が挙げられる（例えば、Ｆｒｏｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，２０１０を参照のこと）。
【0189】
抗原として使用され得る細菌抗原の例としては、アクチノマイセス属のポリペプチド、
バチルス属のポリペプチド、バクテロイデス属のポリペプチド、ボルデテラ属のポリペプ
チド、バルトネラ属のポリペプチド、ボレリア属のポリペプチド（例えば、Ｂ．ｂｕｒｇ
ｄｏｒｆｅｒｉ ＯｓｐＡ）、ブルセラ属のポリペプチド、カンピロバクター属のポリペ
プチド、キャプノサイトファーガ属のポリペプチド、クラミジア属のポリペプチド、コリ
ネバクテリウム属のポリペプチド、コクシエラ属のポリペプチド、デルマトフィルス属の
ポリペプチド、エンテロコッカス属のポリペプチド、エーリキア属のポリペプチド、エシ
ェリキア属のポリペプチド、フランシセラ属のポリペプチド、フソバクテリウム属のポリ
ペプチド、ヘモバルトネラ属のポリペプチド、ヘモフィルス属のポリペプチド（例えば、
Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型外膜タンパク質）、ヘリコバクター属のポリペプチド、
クレブシエラ属のポリペプチド、Ｌ型細菌のポリペプチド、レプトスピラ属のポリペプチ
ド、リステリア属のポリペプチド、マイコバクテリウム属のポリペプチド、マイコプラズ
マ属のポリペプチド、ナイセリア属のポリペプチド、ネオリケッチア属のポリペプチド、
ノカルジア属のポリペプチド、パスツレラ属のポリペプチド、ペプトコッカス属のポリペ
プチド、ペプトストレプトコッカス属のポリペプチド、肺炎球菌のポリペプチド（すなわ
ち、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのポリペプチド）（本明細書中の説明を参照のこと）、プ
ロテウス属のポリペプチド、シュードモナス属のポリペプチド、リケッチア属のポリペプ
チド、ロシャリメア属のポリペプチド、サルモネラ属のポリペプチド、シゲラ属のポリペ
プチド、ブドウ球菌属のポリペプチド、Ａ群連鎖球菌のポリペプチド（例えば、Ｓ．ｐｙ
ｏｇｅｎｅｓのＭタンパク質）、Ｂ群連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）のポリペプ
チド、トレポネーマ属のポリペプチド、およびエルシニア属のポリペプチド（例えば、Ｙ
ｐｅｓｔｉｓのＦ１およびＶ抗原）が挙げられるが、これらに限定されない。
バチルス属のポリペプチド、バクテロイデス属のポリペプチド、ボルデテラ属のポリペプ
チド、バルトネラ属のポリペプチド、ボレリア属のポリペプチド（例えば、Ｂ．ｂｕｒｇ
ｄｏｒｆｅｒｉ ＯｓｐＡ）、ブルセラ属のポリペプチド、カンピロバクター属のポリペ
プチド、キャプノサイトファーガ属のポリペプチド、クラミジア属のポリペプチド、コリ
ネバクテリウム属のポリペプチド、コクシエラ属のポリペプチド、デルマトフィルス属の
ポリペプチド、エンテロコッカス属のポリペプチド、エーリキア属のポリペプチド、エシ
ェリキア属のポリペプチド、フランシセラ属のポリペプチド、フソバクテリウム属のポリ
ペプチド、ヘモバルトネラ属のポリペプチド、ヘモフィルス属のポリペプチド（例えば、
Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型外膜タンパク質）、ヘリコバクター属のポリペプチド、
クレブシエラ属のポリペプチド、Ｌ型細菌のポリペプチド、レプトスピラ属のポリペプチ
ド、リステリア属のポリペプチド、マイコバクテリウム属のポリペプチド、マイコプラズ
マ属のポリペプチド、ナイセリア属のポリペプチド、ネオリケッチア属のポリペプチド、
ノカルジア属のポリペプチド、パスツレラ属のポリペプチド、ペプトコッカス属のポリペ
プチド、ペプトストレプトコッカス属のポリペプチド、肺炎球菌のポリペプチド（すなわ
ち、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのポリペプチド）（本明細書中の説明を参照のこと）、プ
ロテウス属のポリペプチド、シュードモナス属のポリペプチド、リケッチア属のポリペプ
チド、ロシャリメア属のポリペプチド、サルモネラ属のポリペプチド、シゲラ属のポリペ
プチド、ブドウ球菌属のポリペプチド、Ａ群連鎖球菌のポリペプチド（例えば、Ｓ．ｐｙ
ｏｇｅｎｅｓのＭタンパク質）、Ｂ群連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）のポリペプ
チド、トレポネーマ属のポリペプチド、およびエルシニア属のポリペプチド（例えば、Ｙ
ｐｅｓｔｉｓのＦ１およびＶ抗原）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0190】
真菌抗原の例としては、アブシディア属のポリペプチド、アクレモニウム属のポリペプ
チド、アルテルナリア属のポリペプチド、アスペルギルス属のポリペプチド、バシジオボ
ラス属のポリペプチド、ビポラーリス属のポリペプチド、ブラストミセス属のポリペプチ
ド、カンジダ属のポリペプチド、コクシジオイデス属のポリペプチド、コニディオボラス
属のポリペプチド、クリプトコッカス属のポリペプチド、カーバラリア属のポリペプチド
、エピデルモフィトン属のポリペプチド、エクソフィアラ属のポリペプチド、ゲオトリク
ム属のポリペプチド、ヒストプラズマ属のポリペプチド、マヅレラ属のポリペプチド、マ
ラセチア属のポリペプチド、ミクロスポルム属のポリペプチド、モニリエラ属のポリペプ
チド、モルチエレラ属のポリペプチド、ケカビ属のポリペプチド、ペシロマイセス属のポ
リペプチド、ペニシリウム属のポリペプチド、フィアレモニウム属（Ｐｈｉａｌｅｍｏｎ
ｉｕｍ）のポリペプチド、フィアロフォラ属のポリペプチド、プロトテカ属のポリペプチ
ド、シュードアレシェリア属のポリペプチド、シュードミクロドキウム属（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ）のポリペプチド、フィチウム属のポリペプチド、リノスポリ
ジウム属のポリペプチド、クモノスカビ属のポリペプチド、スコレコバシジウム属（Ｓｃ
ｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ）のポリペプチド、スポロトリクス属のポリペプチド、ステ
ンフィリウム属（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ）のポリペプチド、白癬菌属のポリペプチド、
トリコスポロン属のポリペプチドおよびキシロヒファ属（Ｘｙｌｏｈｙｐｈａ）のポリペ
プチドが挙げられるが、これらに限定されない。
チド、アルテルナリア属のポリペプチド、アスペルギルス属のポリペプチド、バシジオボ
ラス属のポリペプチド、ビポラーリス属のポリペプチド、ブラストミセス属のポリペプチ
ド、カンジダ属のポリペプチド、コクシジオイデス属のポリペプチド、コニディオボラス
属のポリペプチド、クリプトコッカス属のポリペプチド、カーバラリア属のポリペプチド
、エピデルモフィトン属のポリペプチド、エクソフィアラ属のポリペプチド、ゲオトリク
ム属のポリペプチド、ヒストプラズマ属のポリペプチド、マヅレラ属のポリペプチド、マ
ラセチア属のポリペプチド、ミクロスポルム属のポリペプチド、モニリエラ属のポリペプ
チド、モルチエレラ属のポリペプチド、ケカビ属のポリペプチド、ペシロマイセス属のポ
リペプチド、ペニシリウム属のポリペプチド、フィアレモニウム属（Ｐｈｉａｌｅｍｏｎ
ｉｕｍ）のポリペプチド、フィアロフォラ属のポリペプチド、プロトテカ属のポリペプチ
ド、シュードアレシェリア属のポリペプチド、シュードミクロドキウム属（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ）のポリペプチド、フィチウム属のポリペプチド、リノスポリ
ジウム属のポリペプチド、クモノスカビ属のポリペプチド、スコレコバシジウム属（Ｓｃ
ｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ）のポリペプチド、スポロトリクス属のポリペプチド、ステ
ンフィリウム属（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ）のポリペプチド、白癬菌属のポリペプチド、
トリコスポロン属のポリペプチドおよびキシロヒファ属（Ｘｙｌｏｈｙｐｈａ）のポリペ
プチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【0191】
原生動物の寄生生物抗原の例としては、バベシア属のポリペプチド、バランチジウム属
のポリペプチド、ベスノイチア属（Ｂｅｓｎｏｉｔｉａ）のポリペプチド、クリプトスポ
リジウム属のポリペプチド、エイメリア属のポリペプチド、エンセファリトゾーン属のポ
リペプチド、エントアメーバ属のポリペプチド、ジアルジア属のポリペプチド、ハモンデ
ィア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）のポリペプチド、ヘパトゾーン属のポリペプチド、イソス
ポラ属のポリペプチド、リーシュマニア属のポリペプチド、微胞子虫門のポリペプチド、
ネオスポラ属のポリペプチド、ノゼマ属のポリペプチド、ペンタトリコモナス属のポリペ
プチド、プラスモディウム属のポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。蠕
虫寄生生物抗原の例としては、アカントケイロネマ属のポリペプチド、アエルロストロン
ギルウス属（Ａｅｌｕｒｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）のポリペプチド、鉤虫属のポリペプチ
ド、住血線虫属のポリペプチド、回虫属のポリペプチド、ブルギア属のポリペプチド、ブ
ノストムム属のポリペプチド、キャピラリア属のポリペプチド、カベルチア属（Ｃｈａｂ
ｅｒｔｉａ）のポリペプチド、クーペリア属のポリペプチド、クレノソマ属（Ｃｒｅｎｏ
ｓｏｍａ）のポリペプチド、ディクチオカウルス属のポリペプチド、ジオクトフィーメ属
のポリペプチド、ディペタロネマ属のポリペプチド、裂頭条虫属のポリペプチド、ジプリ
ジウム属のポリペプチド、イヌ糸状虫属のポリペプチド、ドラクンクルス属のポリペプチ
ド、エンテロビウス属のポリペプチド、フィラロイデス属（Ｆｉｌａｒｏｉｄｅｓ）のポ
リペプチド、ヘモンクス属のポリペプチド、ラゴキラスカリス属（Ｌａｇｏｃｈｉｌａｓ
ｃａｒｉｓ）のポリペプチド、ロア糸状虫属（Ｌｏａ）のポリペプチド、マンソネラ属の
ポリペプチド、ムエレリウス属（Ｍｕｅｌｌｅｒｉｕｓ）のポリペプチド、ナノフィエツ
ス属（Ｎａｎｏｐｈｙｅｔｕｓ）のポリペプチド、アメリカ鉤虫属のポリペプチド、ネマ
トジルス属のポリペプチド、腸結節虫属のポリペプチド、オンコセルカ属のポリペプチド
、オピストルキス属のポリペプチド、オステルタギア属のポリペプチド、パラフィラリア
属（Ｐａｒａｆｉｌａｒｉａ）のポリペプチド、肺吸虫属のポリペプチド、パラスカリス
属（Ｐａｒａｓｃａｒｉｓ）のポリペプチド、フィサロプテラ属のポリペプチド、プロト
ストロンギルス属（Ｐｒｏｔｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）のポリペプチド、セタリア属のポ
リペプチド、スピロセルカ属（Ｓｐｉｒｏｃｅｒｃａ）のポリペプチド スピロメトラ属
のポリペプチド、ステファノフィラリア属のポリペプチド、ストロンギロイデス属のポリ
ペプチド、ストロンギルス属のポリペプチド、テラジア属のポリペプチド、トキサスカリ
ス属のポリペプチド、トキソカラ属のポリペプチド、旋毛虫属のポリペプチド、毛様線虫
属のポリペプチド、鞭虫属のポリペプチド、ウンシナリア属のポリペプチドおよびウケレ
リア属のポリペプチド（例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのスポロゾイト周囲ポリペプ
チド（ＰｆＣＳＰ））、スポロゾイト表面タンパク質２（ＰｆＳＳＰ２）、肝臓状態抗原
（ｌｉｖｅｒ ｓｔａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ）１のカルボキシル末端（ＰｆＬＳＡ１ ｃ
末端）、ならびに搬出タンパク質１（ＰｆＥｘｐ－１）、ニューモシスチス属のポリペプ
チド、サルコシスティス属のポリペプチド、住血吸虫属のポリペプチド、タイレリア属の
ポリペプチド、トキソプラズマ属のポリペプチド、ならびにトリパノソーマ属のポリペプ
チドが挙げられるが、これらに限定されない。
のポリペプチド、ベスノイチア属（Ｂｅｓｎｏｉｔｉａ）のポリペプチド、クリプトスポ
リジウム属のポリペプチド、エイメリア属のポリペプチド、エンセファリトゾーン属のポ
リペプチド、エントアメーバ属のポリペプチド、ジアルジア属のポリペプチド、ハモンデ
ィア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）のポリペプチド、ヘパトゾーン属のポリペプチド、イソス
ポラ属のポリペプチド、リーシュマニア属のポリペプチド、微胞子虫門のポリペプチド、
ネオスポラ属のポリペプチド、ノゼマ属のポリペプチド、ペンタトリコモナス属のポリペ
プチド、プラスモディウム属のポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。蠕
虫寄生生物抗原の例としては、アカントケイロネマ属のポリペプチド、アエルロストロン
ギルウス属（Ａｅｌｕｒｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）のポリペプチド、鉤虫属のポリペプチ
ド、住血線虫属のポリペプチド、回虫属のポリペプチド、ブルギア属のポリペプチド、ブ
ノストムム属のポリペプチド、キャピラリア属のポリペプチド、カベルチア属（Ｃｈａｂ
ｅｒｔｉａ）のポリペプチド、クーペリア属のポリペプチド、クレノソマ属（Ｃｒｅｎｏ
ｓｏｍａ）のポリペプチド、ディクチオカウルス属のポリペプチド、ジオクトフィーメ属
のポリペプチド、ディペタロネマ属のポリペプチド、裂頭条虫属のポリペプチド、ジプリ
ジウム属のポリペプチド、イヌ糸状虫属のポリペプチド、ドラクンクルス属のポリペプチ
ド、エンテロビウス属のポリペプチド、フィラロイデス属（Ｆｉｌａｒｏｉｄｅｓ）のポ
リペプチド、ヘモンクス属のポリペプチド、ラゴキラスカリス属（Ｌａｇｏｃｈｉｌａｓ
ｃａｒｉｓ）のポリペプチド、ロア糸状虫属（Ｌｏａ）のポリペプチド、マンソネラ属の
ポリペプチド、ムエレリウス属（Ｍｕｅｌｌｅｒｉｕｓ）のポリペプチド、ナノフィエツ
ス属（Ｎａｎｏｐｈｙｅｔｕｓ）のポリペプチド、アメリカ鉤虫属のポリペプチド、ネマ
トジルス属のポリペプチド、腸結節虫属のポリペプチド、オンコセルカ属のポリペプチド
、オピストルキス属のポリペプチド、オステルタギア属のポリペプチド、パラフィラリア
属（Ｐａｒａｆｉｌａｒｉａ）のポリペプチド、肺吸虫属のポリペプチド、パラスカリス
属（Ｐａｒａｓｃａｒｉｓ）のポリペプチド、フィサロプテラ属のポリペプチド、プロト
ストロンギルス属（Ｐｒｏｔｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）のポリペプチド、セタリア属のポ
リペプチド、スピロセルカ属（Ｓｐｉｒｏｃｅｒｃａ）のポリペプチド スピロメトラ属
のポリペプチド、ステファノフィラリア属のポリペプチド、ストロンギロイデス属のポリ
ペプチド、ストロンギルス属のポリペプチド、テラジア属のポリペプチド、トキサスカリ
ス属のポリペプチド、トキソカラ属のポリペプチド、旋毛虫属のポリペプチド、毛様線虫
属のポリペプチド、鞭虫属のポリペプチド、ウンシナリア属のポリペプチドおよびウケレ
リア属のポリペプチド（例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのスポロゾイト周囲ポリペプ
チド（ＰｆＣＳＰ））、スポロゾイト表面タンパク質２（ＰｆＳＳＰ２）、肝臓状態抗原
（ｌｉｖｅｒ ｓｔａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ）１のカルボキシル末端（ＰｆＬＳＡ１ ｃ
末端）、ならびに搬出タンパク質１（ＰｆＥｘｐ－１）、ニューモシスチス属のポリペプ
チド、サルコシスティス属のポリペプチド、住血吸虫属のポリペプチド、タイレリア属の
ポリペプチド、トキソプラズマ属のポリペプチド、ならびにトリパノソーマ属のポリペプ
チドが挙げられるが、これらに限定されない。
【0192】
外寄生生物抗原の例としては、ノミ；カタダニおよびヒメダニを含むマダニ；ハエ、例
えば、小虫、蚊、スナバエ、ブユ、ウマバエ、ノサシバエ、メクラアブ、ツェツェバエ、
サシバエ、ハエ幼虫症の原因となるハエおよび刺して血を吸う小さな羽虫（ｂｉｔｉｎｇ
ｇｎａｔｓ）；アリ；クモ、シラミ；ダニ；ならびに半翅類の昆虫、例えば、トコジラ
ミおよびサシガメのポリペプチド（抗原ならびにアレルゲンを含む）が挙げられるが、こ
れらに限定されない。
Ｅ．自殺遺伝子
えば、小虫、蚊、スナバエ、ブユ、ウマバエ、ノサシバエ、メクラアブ、ツェツェバエ、
サシバエ、ハエ幼虫症の原因となるハエおよび刺して血を吸う小さな羽虫（ｂｉｔｉｎｇ
ｇｎａｔｓ）；アリ；クモ、シラミ；ダニ；ならびに半翅類の昆虫、例えば、トコジラ
ミおよびサシガメのポリペプチド（抗原ならびにアレルゲンを含む）が挙げられるが、こ
れらに限定されない。
Ｅ．自殺遺伝子
【0193】
いくつかの場合において、本開示の任意の細胞が、異種サイトカイン、操作されたレセ
プターなど以外の１つ以上の作用物質を産生するように改変される。具体的な実施形態に
おいて、ＮＫ細胞などの細胞は、１つ以上の自殺遺伝子を有するように操作され、本明細
書中で使用される用語「自殺遺伝子」は、プロドラッグが投与された際に、遺伝子産物が
、宿主細胞を殺滅する化合物に変化する遺伝子と定義される。いくつかの場合において、
ＮＫ細胞療法は、ＮＫ細胞療法を受けている個体および／またはＮＫ細胞療法を受けた個
体が、１つ以上の有害事象の１つ以上の症状（例えば、サイトカイン放出症候群、神経毒
性、アナフィラキシー／アレルギーおよび／またはオンターゲット／オフ腫瘍毒性（例と
して））を示したとき、または１つ以上の症状を有するリスクがあると考えられるとき（
切迫した場合を含む）、任意の種類の１つ以上の自殺遺伝子の利用の対象となり得る。自
殺遺伝子の使用は、治療のために計画されたプロトコルの一部であり得るか、またはそれ
を使用する必要性が認められたときにだけ使用され得る。いくつかの場合において、細胞
療法は、もはや必要なくなったという理由で、自殺遺伝子またはその遺伝子産物を標的化
する作用物質を使用することによって終結される。
プターなど以外の１つ以上の作用物質を産生するように改変される。具体的な実施形態に
おいて、ＮＫ細胞などの細胞は、１つ以上の自殺遺伝子を有するように操作され、本明細
書中で使用される用語「自殺遺伝子」は、プロドラッグが投与された際に、遺伝子産物が
、宿主細胞を殺滅する化合物に変化する遺伝子と定義される。いくつかの場合において、
ＮＫ細胞療法は、ＮＫ細胞療法を受けている個体および／またはＮＫ細胞療法を受けた個
体が、１つ以上の有害事象の１つ以上の症状（例えば、サイトカイン放出症候群、神経毒
性、アナフィラキシー／アレルギーおよび／またはオンターゲット／オフ腫瘍毒性（例と
して））を示したとき、または１つ以上の症状を有するリスクがあると考えられるとき（
切迫した場合を含む）、任意の種類の１つ以上の自殺遺伝子の利用の対象となり得る。自
殺遺伝子の使用は、治療のために計画されたプロトコルの一部であり得るか、またはそれ
を使用する必要性が認められたときにだけ使用され得る。いくつかの場合において、細胞
療法は、もはや必要なくなったという理由で、自殺遺伝子またはその遺伝子産物を標的化
する作用物質を使用することによって終結される。
【0194】
自殺遺伝子の例としては、操作された非分泌性（膜結合型を含む）の腫瘍壊死因子（Ｔ
ＮＦ）－アルファ変異ポリペプチド（その全体が参照により本明細書中に援用されるＰＣ
Ｔ／ＵＳ１９／６２００９を参照のこと）が挙げられ、それらのポリペプチドは、ＴＮＦ
－アルファ変異体に結合する抗体の送達によって標的化され得る。使用され得る自殺遺伝
子／プロドラッグの組み合わせの例は、単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳ
Ｖ－ｔｋ）と、ガンシクロビル、アシクロビルまたはＦＩＡＵ；オキシドレダクターゼと
シクロヘキシミド；シトシンデアミナーゼと５－フルオロシトシン；チミジンキナーゼチ
ミジル酸キナーゼ（Ｔｄｋ：：Ｔｍｋ）とＡＺＴ；およびデオキシシチジンキナーゼとシ
トシンアラビノシドである。プロドラッグである６－メチルプリンデオキシリボシドを毒
性のプリンである６－メチルプリンに変換するいわゆる自殺遺伝子であるＥ．ｃｏｌｉの
プリンヌクレオシドホスホリラーゼが使用され得る。他の自殺遺伝子としては、ＣＤ２０
、ＣＤ５２、誘導性カスパーゼ９、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）、シト
クロムｐ４５０酵素（ＣＹＰ）、カルボキシペプチダーゼ（ＣＰ）、カルボキシルエステ
ラーゼ（ＣＥ）、ニトロ還元酵素（ＮＴＲ）、グアニンリボシルトランスフェラーゼ（Ｘ
ＧＲＴＰ）、グリコシダーゼ酵素、メチオニン－α，γ－リアーゼ（ＭＥＴ）およびチミ
ジンホスホリラーゼ（ＴＰ）が例として挙げられる。
Ｆ．送達方法
ＮＦ）－アルファ変異ポリペプチド（その全体が参照により本明細書中に援用されるＰＣ
Ｔ／ＵＳ１９／６２００９を参照のこと）が挙げられ、それらのポリペプチドは、ＴＮＦ
－アルファ変異体に結合する抗体の送達によって標的化され得る。使用され得る自殺遺伝
子／プロドラッグの組み合わせの例は、単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳ
Ｖ－ｔｋ）と、ガンシクロビル、アシクロビルまたはＦＩＡＵ；オキシドレダクターゼと
シクロヘキシミド；シトシンデアミナーゼと５－フルオロシトシン；チミジンキナーゼチ
ミジル酸キナーゼ（Ｔｄｋ：：Ｔｍｋ）とＡＺＴ；およびデオキシシチジンキナーゼとシ
トシンアラビノシドである。プロドラッグである６－メチルプリンデオキシリボシドを毒
性のプリンである６－メチルプリンに変換するいわゆる自殺遺伝子であるＥ．ｃｏｌｉの
プリンヌクレオシドホスホリラーゼが使用され得る。他の自殺遺伝子としては、ＣＤ２０
、ＣＤ５２、誘導性カスパーゼ９、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）、シト
クロムｐ４５０酵素（ＣＹＰ）、カルボキシペプチダーゼ（ＣＰ）、カルボキシルエステ
ラーゼ（ＣＥ）、ニトロ還元酵素（ＮＴＲ）、グアニンリボシルトランスフェラーゼ（Ｘ
ＧＲＴＰ）、グリコシダーゼ酵素、メチオニン－α，γ－リアーゼ（ＭＥＴ）およびチミ
ジンホスホリラーゼ（ＴＰ）が例として挙げられる。
Ｆ．送達方法
【0195】
当業者であれば、本開示の抗原レセプターを発現させるために標準的な組換え手法（例
えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．
，１９９６（両方が参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）によってベクタ
ーを構築する能力を十分に備えているだろう。ベクターとしては、プラスミド、コスミド
、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルスおよび植物ウイルス）および人工染色体
（例えば、ＹＡＣ）、例えば、レトロウイルスベクター（例えば、モロニーマウス白血病
ウイルスベクター（ＭｏＭＬＶ）、ＭＳＣＶ、ＳＦＦＶ、ＭＰＳＶ、ＳＮＶなどに由来す
るもの）、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＳＩＶ、ＢＩＶ
、ＦＩＶなどに由来するもの）、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター（その複製可能型、複
製欠損型およびガットレス型（ｇｕｔｌｅｓｓ ｆｏｒｍｓ）を含む）、アデノ随伴ウイ
ルス（ＡＡＶ）ベクター、サルウイルス４０（ＳＶ－４０）ベクター、ウシパピローマウ
イルスベクター、エプスタイン・バーウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワ
クシニアウイルスベクター、ハーベイマウス肉腫ウイルスベクター、マウス乳癌ウイルス
ベクター、ラウス肉腫ウイルスベクター、パルボウイルスベクター、ポリオウイルスベク
ター、水疱性口内炎ウイルスベクター、マラバウイルス（ｍａｒａｂａ ｖｉｒｕｓ）ベ
クターおよびＢ群アデノウイルスｅｎａｄｅｎｏｔｕｃｉｒｅｖベクターが挙げられるが
これらに限定されない。
えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．
，１９９６（両方が参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）によってベクタ
ーを構築する能力を十分に備えているだろう。ベクターとしては、プラスミド、コスミド
、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルスおよび植物ウイルス）および人工染色体
（例えば、ＹＡＣ）、例えば、レトロウイルスベクター（例えば、モロニーマウス白血病
ウイルスベクター（ＭｏＭＬＶ）、ＭＳＣＶ、ＳＦＦＶ、ＭＰＳＶ、ＳＮＶなどに由来す
るもの）、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＳＩＶ、ＢＩＶ
、ＦＩＶなどに由来するもの）、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター（その複製可能型、複
製欠損型およびガットレス型（ｇｕｔｌｅｓｓ ｆｏｒｍｓ）を含む）、アデノ随伴ウイ
ルス（ＡＡＶ）ベクター、サルウイルス４０（ＳＶ－４０）ベクター、ウシパピローマウ
イルスベクター、エプスタイン・バーウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワ
クシニアウイルスベクター、ハーベイマウス肉腫ウイルスベクター、マウス乳癌ウイルス
ベクター、ラウス肉腫ウイルスベクター、パルボウイルスベクター、ポリオウイルスベク
ター、水疱性口内炎ウイルスベクター、マラバウイルス（ｍａｒａｂａ ｖｉｒｕｓ）ベ
クターおよびＢ群アデノウイルスｅｎａｄｅｎｏｔｕｃｉｒｅｖベクターが挙げられるが
これらに限定されない。
【0196】
具体的な実施形態において、ベクターは、ＰＣＴ／ＵＳ１９／６２０１４（その全体が
参照により本明細書中に援用される）に記載されているようなマルチシストロニックベク
ターである。そのような場合、単一のベクターが、ＣＡＲまたはＴＣＲ（その発現構築物
は、ＣＡＲまたはＴＣＲの部分の相互交換を可能にするためにモジュール形式で構成され
得る）、自殺遺伝子および１つ以上のサイトカインをコードし得る。
ａ．ウイルスベクター
参照により本明細書中に援用される）に記載されているようなマルチシストロニックベク
ターである。そのような場合、単一のベクターが、ＣＡＲまたはＴＣＲ（その発現構築物
は、ＣＡＲまたはＴＣＲの部分の相互交換を可能にするためにモジュール形式で構成され
得る）、自殺遺伝子および１つ以上のサイトカインをコードし得る。
ａ．ウイルスベクター
【0197】
抗原レセプターをコードするウイルスベクターが、本開示のある特定の態様において提
供され得る。組換えウイルスベクターを作製する際、必須ではない遺伝子は、通常、異種
（または非天然）タンパク質の遺伝子またはコード配列で置き換えられる。ウイルスベク
ターは、ウイルス配列を利用して、核酸および場合によってはタンパク質を細胞に導入す
る一種の発現構築物である。ある特定のウイルスが細胞に感染する能力またはレセプター
媒介性のエンドサイトーシスを介して細胞に侵入する能力、および宿主細胞のゲノムにイ
ンテグレートし、ウイルス遺伝子を安定かつ効率的に発現する能力によって、それらのウ
イルスが、外来核酸を細胞（例えば、哺乳動物細胞）に移行させるための魅力的な候補に
なった。本発明のある特定の態様の核酸を送達するために使用され得るウイルスベクター
の非限定的な例を下記に記載する。
供され得る。組換えウイルスベクターを作製する際、必須ではない遺伝子は、通常、異種
（または非天然）タンパク質の遺伝子またはコード配列で置き換えられる。ウイルスベク
ターは、ウイルス配列を利用して、核酸および場合によってはタンパク質を細胞に導入す
る一種の発現構築物である。ある特定のウイルスが細胞に感染する能力またはレセプター
媒介性のエンドサイトーシスを介して細胞に侵入する能力、および宿主細胞のゲノムにイ
ンテグレートし、ウイルス遺伝子を安定かつ効率的に発現する能力によって、それらのウ
イルスが、外来核酸を細胞（例えば、哺乳動物細胞）に移行させるための魅力的な候補に
なった。本発明のある特定の態様の核酸を送達するために使用され得るウイルスベクター
の非限定的な例を下記に記載する。
【0198】
レンチウイルスは、複雑なレトロウイルスであり、一般的なレトロウイルス遺伝子であ
るｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖに加えて、調節機能または構造機能を有する他の遺伝子も
含む。レンチウイルスベクターは、当該分野で周知である（例えば、米国特許第６，０１
３，５１６号および同第５，９９４，１３６号を参照のこと）。
るｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖに加えて、調節機能または構造機能を有する他の遺伝子も
含む。レンチウイルスベクターは、当該分野で周知である（例えば、米国特許第６，０１
３，５１６号および同第５，９９４，１３６号を参照のこと）。
【0199】
組換えレンチウイルスベクターは、非分裂細胞に感染することができ、インビボとエキ
ソビボの両方において遺伝子導入および核酸配列発現のために使用され得る。例えば、非
分裂細胞に感染することができる組換えレンチウイルス（ここで、好適な宿主細胞が、パ
ッケージング機能を有する２つ以上のベクター、すなわちｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ、
ならびにｒｅｖおよびｔａｔでトランスフェクトされる）は、参照により本明細書中に援
用される米国特許第５，９９４，１３６号に記載されている。
ｂ．調節エレメント
ソビボの両方において遺伝子導入および核酸配列発現のために使用され得る。例えば、非
分裂細胞に感染することができる組換えレンチウイルス（ここで、好適な宿主細胞が、パ
ッケージング機能を有する２つ以上のベクター、すなわちｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ、
ならびにｒｅｖおよびｔａｔでトランスフェクトされる）は、参照により本明細書中に援
用される米国特許第５，９９４，１３６号に記載されている。
ｂ．調節エレメント
【0200】
本開示において有用なベクターに含められる発現カセットは、特に、タンパク質コード
配列に作動可能に連結された真核生物転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグ
ナル、および転写終結／ポリアデニル化配列を（５’から３’の方向で）含む。タンパク
質をコードする遺伝子の転写を真核細胞において制御するプロモーターおよびエンハンサ
ーは、複数の遺伝的エレメントから構成される。細胞機構は、各エレメントによって運ば
れる調節情報を集め、統合することができ、それにより、異なる遺伝子が、多くの場合は
複雑なパターンである異なるパターンの転写制御を展開することが可能になる。本開示の
状況において使用されるプロモーターとしては、構成的プロモーター、誘導性プロモータ
ーおよび組織特異的プロモーターが挙げられる。
（ｉ）プロモーター／エンハンサー
配列に作動可能に連結された真核生物転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグ
ナル、および転写終結／ポリアデニル化配列を（５’から３’の方向で）含む。タンパク
質をコードする遺伝子の転写を真核細胞において制御するプロモーターおよびエンハンサ
ーは、複数の遺伝的エレメントから構成される。細胞機構は、各エレメントによって運ば
れる調節情報を集め、統合することができ、それにより、異なる遺伝子が、多くの場合は
複雑なパターンである異なるパターンの転写制御を展開することが可能になる。本開示の
状況において使用されるプロモーターとしては、構成的プロモーター、誘導性プロモータ
ーおよび組織特異的プロモーターが挙げられる。
（ｉ）プロモーター／エンハンサー
【0201】
本明細書中に提供される発現構築物は、抗原レセプターの発現を駆動するプロモーター
を含む。プロモーターは、一般に、ＲＮＡ合成のための開始部位の位置を特定するように
機能する配列を含む。これの最もよく知られている例は、ＴＡＴＡボックスであるが、哺
乳動物のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーターお
よびＳＶ４０後期遺伝子のプロモーターなど、一部のプロモーターでは、ＴＡＴＡボック
スを欠き、開始部位自体と重なっている不連続なエレメントが、開始の場所を固定するの
を助ける。さらなるプロモーターエレメントが、転写開始の頻度を制御する。通常、これ
らは、開始部位の３０１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、いくつかのプロモーターは、
開始部位の下流にも機能的エレメントを含むと示されている。コード配列をプロモーター
「の支配下に」するためには、転写読み枠の転写開始部位の５’末端を、選択されたプロ
モーターの「下流」（すなわち、３’）に置く。「上流」のプロモーターは、ＤＮＡの転
写を刺激し、コードされるＲＮＡの発現を促進する。
を含む。プロモーターは、一般に、ＲＮＡ合成のための開始部位の位置を特定するように
機能する配列を含む。これの最もよく知られている例は、ＴＡＴＡボックスであるが、哺
乳動物のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーターお
よびＳＶ４０後期遺伝子のプロモーターなど、一部のプロモーターでは、ＴＡＴＡボック
スを欠き、開始部位自体と重なっている不連続なエレメントが、開始の場所を固定するの
を助ける。さらなるプロモーターエレメントが、転写開始の頻度を制御する。通常、これ
らは、開始部位の３０１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、いくつかのプロモーターは、
開始部位の下流にも機能的エレメントを含むと示されている。コード配列をプロモーター
「の支配下に」するためには、転写読み枠の転写開始部位の５’末端を、選択されたプロ
モーターの「下流」（すなわち、３’）に置く。「上流」のプロモーターは、ＤＮＡの転
写を刺激し、コードされるＲＮＡの発現を促進する。
【0202】
プロモーターエレメント間の間隔は、変更がきくことが多く、エレメントが、反転され
るかまたは互いに対して移動された場合でも、プロモーターの機能は保存される。ｔｋプ
ロモーターでは、プロモーターエレメント間の間隔は、活性が低下し始めるまで最大５０
ｂｐ広げられ得る。プロモーターに応じて、個々のエレメントは、協同的にまたは独自に
機能して転写を活性化し得るとみられる。プロモーターは、核酸配列の転写性の活性化に
関わるシス作用性制御配列のことを指す「エンハンサー」と併せて使用されてもよいし、
使用されなくてもよい。
るかまたは互いに対して移動された場合でも、プロモーターの機能は保存される。ｔｋプ
ロモーターでは、プロモーターエレメント間の間隔は、活性が低下し始めるまで最大５０
ｂｐ広げられ得る。プロモーターに応じて、個々のエレメントは、協同的にまたは独自に
機能して転写を活性化し得るとみられる。プロモーターは、核酸配列の転写性の活性化に
関わるシス作用性制御配列のことを指す「エンハンサー」と併せて使用されてもよいし、
使用されなくてもよい。
【0203】
プロモーターは、コードセグメントおよび／またはエキソンの上流に位置する５’非コ
ード配列を単離することによって得られることがあるような、ある核酸配列と天然に会合
したプロモーターであり得る。そのようなプロモーターは、「内在性」プロモーターと呼
ぶことができる。同様に、エンハンサーは、ある核酸配列の下流または上流に位置する、
その配列と天然に会合したエンハンサーであり得る。あるいは、ある核酸配列とその天然
の環境では天然には会合していないプロモーターのことを指す、組換えプロモーターまた
は異種プロモーターの支配下にコード核酸セグメントを置くことによって、一定の利点が
得られる。また、組換えエンハンサーまたは異種エンハンサーは、その天然の環境では核
酸配列と天然には会合していないエンハンサーのことを指す。そのようなプロモーターま
たはエンハンサーには、他の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、ならびに他の任
意のウイルスまたは原核細胞もしくは真核細胞から単離されたプロモーターまたはエンハ
ンサー、ならびに「天然に存在」しない、すなわち、種々の転写制御領域の種々のエレメ
ントおよび／または発現を変化させる変異を含む、プロモーターまたはエンハンサーが含
まれ得る。例えば、組換えＤＮＡの構築において最もよく使用されるプロモーターとして
は、βラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトースおよびトリプトファン（ｔｒｐ－）
プロモーターシステムが挙げられる。プロモーターおよびエンハンサーの核酸配列を合成
的に作製することに加えて、組換えクローニング、および／またはＰＣＲＴＭをはじめと
した核酸増幅技術を用いて、ある配列が、本明細書中に開示される組成物に関連して作製
され得る。さらに、核以外のオルガネラ（例えば、ミトコンドリア、葉緑体など）内での
配列の転写および／または発現を指示する調節配列も同様に使用できることが企図される
。
ード配列を単離することによって得られることがあるような、ある核酸配列と天然に会合
したプロモーターであり得る。そのようなプロモーターは、「内在性」プロモーターと呼
ぶことができる。同様に、エンハンサーは、ある核酸配列の下流または上流に位置する、
その配列と天然に会合したエンハンサーであり得る。あるいは、ある核酸配列とその天然
の環境では天然には会合していないプロモーターのことを指す、組換えプロモーターまた
は異種プロモーターの支配下にコード核酸セグメントを置くことによって、一定の利点が
得られる。また、組換えエンハンサーまたは異種エンハンサーは、その天然の環境では核
酸配列と天然には会合していないエンハンサーのことを指す。そのようなプロモーターま
たはエンハンサーには、他の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、ならびに他の任
意のウイルスまたは原核細胞もしくは真核細胞から単離されたプロモーターまたはエンハ
ンサー、ならびに「天然に存在」しない、すなわち、種々の転写制御領域の種々のエレメ
ントおよび／または発現を変化させる変異を含む、プロモーターまたはエンハンサーが含
まれ得る。例えば、組換えＤＮＡの構築において最もよく使用されるプロモーターとして
は、βラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトースおよびトリプトファン（ｔｒｐ－）
プロモーターシステムが挙げられる。プロモーターおよびエンハンサーの核酸配列を合成
的に作製することに加えて、組換えクローニング、および／またはＰＣＲＴＭをはじめと
した核酸増幅技術を用いて、ある配列が、本明細書中に開示される組成物に関連して作製
され得る。さらに、核以外のオルガネラ（例えば、ミトコンドリア、葉緑体など）内での
配列の転写および／または発現を指示する調節配列も同様に使用できることが企図される
。
【0204】
当然、発現のために選択されたオルガネラ、細胞型、組織、器官または生物におけるＤ
ＮＡセグメントの発現を効果的に指示するプロモーターおよび／またはエンハンサーを使
用することが重要になる。分子生物学の当業者は、一般に、タンパク質発現のために、プ
ロモーター、エンハンサーおよび細胞型の組み合わせを使用することを承知している（例
えば、参照により本明細書中に援用されるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．１９８９を参
照のこと）。使用されるプロモーターは、構成的プロモーター、組織特異的プロモーター
、誘導性プロモーター、および／または導入されたＤＮＡセグメントの高レベル発現を指
示する、適切な条件下において有用なプロモーター（例えば、組換えタンパク質および／
または組換えペプチドの大規模生成において有益なプロモーター）であり得る。そのプロ
モーターは、異種であっても、内在性であってもよい。
ＮＡセグメントの発現を効果的に指示するプロモーターおよび／またはエンハンサーを使
用することが重要になる。分子生物学の当業者は、一般に、タンパク質発現のために、プ
ロモーター、エンハンサーおよび細胞型の組み合わせを使用することを承知している（例
えば、参照により本明細書中に援用されるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．１９８９を参
照のこと）。使用されるプロモーターは、構成的プロモーター、組織特異的プロモーター
、誘導性プロモーター、および／または導入されたＤＮＡセグメントの高レベル発現を指
示する、適切な条件下において有用なプロモーター（例えば、組換えタンパク質および／
または組換えペプチドの大規模生成において有益なプロモーター）であり得る。そのプロ
モーターは、異種であっても、内在性であってもよい。
【0205】
さらに、任意のプロモーター／エンハンサーの組み合わせ（例えば、ｅｐｄ．ｉｓｂ－
ｓｉｂ．ｃｈ／のワールドワイドウェブを介したＥｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｐｒｏｍｏｔｅ
ｒ Ｄａｔａ Ｂａｓｅ ＥＰＤＢに従って）も、発現を駆動するために使用され得る。
Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６細胞質発現系の使用が、別の実行可能な実施形態である。適切な
細菌ポリメラーゼが、送達複合体の一部としてまたはさらなる遺伝的発現構築物として提
供される場合、真核細胞は、ある特定の細菌プロモーターからの細胞質での転写を支持し
得る。
ｓｉｂ．ｃｈ／のワールドワイドウェブを介したＥｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｐｒｏｍｏｔｅ
ｒ Ｄａｔａ Ｂａｓｅ ＥＰＤＢに従って）も、発現を駆動するために使用され得る。
Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６細胞質発現系の使用が、別の実行可能な実施形態である。適切な
細菌ポリメラーゼが、送達複合体の一部としてまたはさらなる遺伝的発現構築物として提
供される場合、真核細胞は、ある特定の細菌プロモーターからの細胞質での転写を支持し
得る。
【0206】
プロモーターの非限定的な例としては、初期ウイルスプロモーターまたは後期ウイルス
プロモーター（例えば、ＳＶ４０初期または後期プロモーター、サイトメガロウイルス（
ＣＭＶ）最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター）；真核
細胞プロモーター（例えば、ベータアクチンプロモーター、ＧＡＤＰＨプロモーター、メ
タロチオネインプロモーター）；および連鎖状応答エレメントプロモーター（例えば、サ
イクリックＡＭＰ応答エレメントプロモーター（ｃｒｅ）、血清応答エレメントプロモー
ター（ｓｒｅ）、ホルボールエステルプロモーター（ＴＰＡ）およびミニマルＴＡＴＡボ
ックス近傍の応答エレメントプロモーター（ｔｒｅ））が挙げられる。ヒト成長ホルモン
プロモーター配列（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）に記載されているヒト成長ホル
モンミニマルプロモーター、アクセッション番号Ｘ０５２４４、ヌクレオチド２８３～３
４１）またはマウス乳腺腫瘍プロモーター（ＡＴＣＣから入手可能，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＴ
ＣＣ４５００７）を使用することも可能である。ある特定の実施形態において、プロモー
ターは、ＣＭＶ ＩＥ、デクチン－１、デクチン－２、ヒトＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０、Ｓ
Ｍ２２、ＲＳＶ、ＳＶ４０、Ａｄ ＭＬＰ、ベータ－アクチン、ＭＨＣクラスＩまたはＭ
ＨＣクラスＩＩプロモーターであるが、しかしながら、治療用の遺伝子の発現を駆動する
ために有用な他の任意のプロモーターも本開示の実施に適用できる。
プロモーター（例えば、ＳＶ４０初期または後期プロモーター、サイトメガロウイルス（
ＣＭＶ）最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター）；真核
細胞プロモーター（例えば、ベータアクチンプロモーター、ＧＡＤＰＨプロモーター、メ
タロチオネインプロモーター）；および連鎖状応答エレメントプロモーター（例えば、サ
イクリックＡＭＰ応答エレメントプロモーター（ｃｒｅ）、血清応答エレメントプロモー
ター（ｓｒｅ）、ホルボールエステルプロモーター（ＴＰＡ）およびミニマルＴＡＴＡボ
ックス近傍の応答エレメントプロモーター（ｔｒｅ））が挙げられる。ヒト成長ホルモン
プロモーター配列（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）に記載されているヒト成長ホル
モンミニマルプロモーター、アクセッション番号Ｘ０５２４４、ヌクレオチド２８３～３
４１）またはマウス乳腺腫瘍プロモーター（ＡＴＣＣから入手可能，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＴ
ＣＣ４５００７）を使用することも可能である。ある特定の実施形態において、プロモー
ターは、ＣＭＶ ＩＥ、デクチン－１、デクチン－２、ヒトＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０、Ｓ
Ｍ２２、ＲＳＶ、ＳＶ４０、Ａｄ ＭＬＰ、ベータ－アクチン、ＭＨＣクラスＩまたはＭ
ＨＣクラスＩＩプロモーターであるが、しかしながら、治療用の遺伝子の発現を駆動する
ために有用な他の任意のプロモーターも本開示の実施に適用できる。
【0207】
ある特定の態様において、本開示の方法は、エンハンサー配列、すなわち、プロモータ
ーの活性を増加させる核酸配列であって、シスで、かつその向きを問わず、比較的長い距
離（標的プロモーターから最大数キロベース離れた距離）にわたって作用する能力を有す
る核酸配列にも関する。しかしながら、エンハンサーは、所与のプロモーターに対して近
位でも機能し得るので、エンハンサーの機能は必ずしもそのような長い距離に限定されな
い。
（ｉｉ）開始シグナルおよび連結発現
ーの活性を増加させる核酸配列であって、シスで、かつその向きを問わず、比較的長い距
離（標的プロモーターから最大数キロベース離れた距離）にわたって作用する能力を有す
る核酸配列にも関する。しかしながら、エンハンサーは、所与のプロモーターに対して近
位でも機能し得るので、エンハンサーの機能は必ずしもそのような長い距離に限定されな
い。
（ｉｉ）開始シグナルおよび連結発現
【0208】
コード配列の効率的な翻訳のために、本開示に提供される発現構築物において、特異的
な開始シグナルも使用され得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接配列
を含む。外来性の翻訳制御シグナル（ＡＴＧ開始コドンを含む）が提供される必要がある
場合がある。当業者であれば、これを判断することおよび必要なシグナルを提供すること
が容易にできるだろう。インサート全体の翻訳を確保するためには、開始コドンが、所望
のコード配列の読み枠と「インフレーム」でなければならないことは周知である。その外
来性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然のものまたは合成のものであり得る。
適切な転写エンハンサーエレメントを含めることによって、発現効率が高められ得る。
な開始シグナルも使用され得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接配列
を含む。外来性の翻訳制御シグナル（ＡＴＧ開始コドンを含む）が提供される必要がある
場合がある。当業者であれば、これを判断することおよび必要なシグナルを提供すること
が容易にできるだろう。インサート全体の翻訳を確保するためには、開始コドンが、所望
のコード配列の読み枠と「インフレーム」でなければならないことは周知である。その外
来性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然のものまたは合成のものであり得る。
適切な転写エンハンサーエレメントを含めることによって、発現効率が高められ得る。
【0209】
ある特定の実施形態において、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントの使
用は、多重遺伝子のメッセージ、すなわちポリシストロニックなメッセージを生成するた
めに使用される。ＩＲＥＳエレメントは、５’メチル化キャップ依存的翻訳のリボソーム
スキャニングモデルを迂回し、内部の部位において翻訳を開始することができる。ピコル
ナウイルス科の２つのメンバー（ポリオおよび脳心筋炎）由来のＩＲＥＳエレメント、な
らびに哺乳動物のメッセージ由来のＩＲＥＳが、報告されている。ＩＲＥＳエレメントは
、異種のオープンリーディングフレームに連結できる。各々がＩＲＥＳによって隔てられ
た複数のオープンリーディングフレームを一緒に転写することができ、ポリシストロニッ
クなメッセージを生成できる。ＩＲＥＳエレメントのおかげで、各オープンリーディング
フレームが、効率的な翻訳のためにリボソームに接近できるようになる。単一のプロモー
ター／エンハンサーを用いて複数の遺伝子を効率的に発現して、単一のメッセージを転写
することもできる。
用は、多重遺伝子のメッセージ、すなわちポリシストロニックなメッセージを生成するた
めに使用される。ＩＲＥＳエレメントは、５’メチル化キャップ依存的翻訳のリボソーム
スキャニングモデルを迂回し、内部の部位において翻訳を開始することができる。ピコル
ナウイルス科の２つのメンバー（ポリオおよび脳心筋炎）由来のＩＲＥＳエレメント、な
らびに哺乳動物のメッセージ由来のＩＲＥＳが、報告されている。ＩＲＥＳエレメントは
、異種のオープンリーディングフレームに連結できる。各々がＩＲＥＳによって隔てられ
た複数のオープンリーディングフレームを一緒に転写することができ、ポリシストロニッ
クなメッセージを生成できる。ＩＲＥＳエレメントのおかげで、各オープンリーディング
フレームが、効率的な翻訳のためにリボソームに接近できるようになる。単一のプロモー
ター／エンハンサーを用いて複数の遺伝子を効率的に発現して、単一のメッセージを転写
することもできる。
【0210】
さらに、本開示に提供される構築物内の遺伝子の連結発現または同時発現をもたらすた
めに、ある特定の２Ａ配列エレメントが使用され得る。例えば、オープンリーディングフ
レームを連結して単一のシストロンを形成することによって遺伝子を同時発現するために
、切断配列が使用され得る。例示的な切断配列は、Ｆ２Ａ（口蹄疫ウイルス２Ａ）または
「２Ａ様」配列（例えば、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ；Ｔ２Ａ）である。
（ｉｉｉ）複製開始点
宿主細胞においてベクターを増殖させるために、そのベクターは、１つ以上の複製開始
部位（「ｏｒｉ」と呼ばれることが多い）、例えば、複製が開始される特異的な核酸配列
である、上に記載されたようなＥＢＶのｏｒｉＰまたはプログラミングにおける機能が似
ているかもしくは高められた遺伝的に操作されたｏｒｉＰに対応する核酸配列を含み得る
。あるいは、上に記載されたような染色体外で複製する他のウイルスの複製起点、または
自律複製配列（ＡＲＳ）を使用することができる。
ｃ．選択マーカーおよびスクリーニング可能なマーカー
めに、ある特定の２Ａ配列エレメントが使用され得る。例えば、オープンリーディングフ
レームを連結して単一のシストロンを形成することによって遺伝子を同時発現するために
、切断配列が使用され得る。例示的な切断配列は、Ｆ２Ａ（口蹄疫ウイルス２Ａ）または
「２Ａ様」配列（例えば、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ；Ｔ２Ａ）である。
（ｉｉｉ）複製開始点
宿主細胞においてベクターを増殖させるために、そのベクターは、１つ以上の複製開始
部位（「ｏｒｉ」と呼ばれることが多い）、例えば、複製が開始される特異的な核酸配列
である、上に記載されたようなＥＢＶのｏｒｉＰまたはプログラミングにおける機能が似
ているかもしくは高められた遺伝的に操作されたｏｒｉＰに対応する核酸配列を含み得る
。あるいは、上に記載されたような染色体外で複製する他のウイルスの複製起点、または
自律複製配列（ＡＲＳ）を使用することができる。
ｃ．選択マーカーおよびスクリーニング可能なマーカー
【0211】
いくつかの実施形態において、本開示の構築物を含む細胞は、マーカーを発現ベクター
に含めることによって、インビトロまたはインビボにおいて特定され得る。そのようなマ
ーカーは、発現ベクターを含む細胞を容易に特定できるようにする特定可能な変化を細胞
にもたらす。一般に、選択マーカーは、選択を可能にする特性を付与するマーカーである
。ポジティブ選択マーカーは、そのマーカーが存在することによってその選択が可能にな
るマーカーであり、ネガティブ選択マーカーは、その存在が選択を妨げるマーカーである
。ポジティブ選択マーカーの例は、薬物耐性マーカーである。
に含めることによって、インビトロまたはインビボにおいて特定され得る。そのようなマ
ーカーは、発現ベクターを含む細胞を容易に特定できるようにする特定可能な変化を細胞
にもたらす。一般に、選択マーカーは、選択を可能にする特性を付与するマーカーである
。ポジティブ選択マーカーは、そのマーカーが存在することによってその選択が可能にな
るマーカーであり、ネガティブ選択マーカーは、その存在が選択を妨げるマーカーである
。ポジティブ選択マーカーの例は、薬物耐性マーカーである。
【0212】
通常、薬物選択マーカーを含めることにより、形質転換体のクローニングおよび特定が
助けられ、例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ＤＨＦＲ、Ｇ
ＰＴ、ゼオシンおよびヒスチジノールに対して耐性にする遺伝子が、有用な選択マーカー
である。条件の実行に基づいて形質転換体の判別を可能にする表現型を付与するマーカー
に加えて、比色解析を基礎とする、ＧＦＰなどのスクリーニング可能なマーカーをはじめ
とした他のタイプのマーカーも企図される。あるいは、単純ヘルペスウイルスチミジンキ
ナーゼ（ｔｋ）またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）など
の、ネガティブ選択マーカーとしてスクリーニング可能な酵素が利用され得る。当業者で
あれば、免疫学的マーカーをおそらくはＦＡＣＳ解析と併せて使用する方法も承知してい
るだろう。使用されるマーカーは、遺伝子産物をコードする核酸と同時に発現されること
が可能である限り、重要ではないと考えられている。選択マーカーおよびスクリーニング
可能なマーカーのさらなる例は、当業者に周知である。
ｄ．他の核酸送達方法
助けられ、例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ＤＨＦＲ、Ｇ
ＰＴ、ゼオシンおよびヒスチジノールに対して耐性にする遺伝子が、有用な選択マーカー
である。条件の実行に基づいて形質転換体の判別を可能にする表現型を付与するマーカー
に加えて、比色解析を基礎とする、ＧＦＰなどのスクリーニング可能なマーカーをはじめ
とした他のタイプのマーカーも企図される。あるいは、単純ヘルペスウイルスチミジンキ
ナーゼ（ｔｋ）またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）など
の、ネガティブ選択マーカーとしてスクリーニング可能な酵素が利用され得る。当業者で
あれば、免疫学的マーカーをおそらくはＦＡＣＳ解析と併せて使用する方法も承知してい
るだろう。使用されるマーカーは、遺伝子産物をコードする核酸と同時に発現されること
が可能である限り、重要ではないと考えられている。選択マーカーおよびスクリーニング
可能なマーカーのさらなる例は、当業者に周知である。
ｄ．他の核酸送達方法
【0213】
抗原レセプターをコードする核酸のウイルス送達に加えて、以下の方法が、所与の宿主
細胞への組換え遺伝子送達のさらなる方法であるので、本開示において考慮される。
細胞への組換え遺伝子送達のさらなる方法であるので、本開示において考慮される。
【0214】
本開示の免疫細胞へのＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸の導入は、本明細書中に記載され
るようにまたは当業者に公知であるように、細胞を形質転換するための核酸送達に適した
任意の方法を使用し得る。そのような方法としては、ＤＮＡの直接送達（例えば、エキソ
ビボトランスフェクション、注射（マイクロインジェクションを含む））；エレクトロポ
レーション；リン酸カルシウム沈殿；ＤＥＡＥ－デキストランに続くポリエチレングリコ
ールの使用；直接的な音波負荷；リポソーム媒介性のトランスフェクションおよびレセプ
ター媒介性のトランスフェクション；微粒子銃（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏ
ｍｂａｒｄｍｅｎｔ）；炭化ケイ素繊維を伴った撹拌；アグロバクテリウム媒介性の形質
転換；乾燥／阻害媒介性のＤＮＡ取り込み、およびそのような方法の任意の組み合わせが
挙げられるが、これらに限定されない。これらの手法などの手法の適用により、オルガネ
ラ、細胞、組織または生物が安定にまたは一過性に形質転換され得る。
ＶＩ．処置方法
るようにまたは当業者に公知であるように、細胞を形質転換するための核酸送達に適した
任意の方法を使用し得る。そのような方法としては、ＤＮＡの直接送達（例えば、エキソ
ビボトランスフェクション、注射（マイクロインジェクションを含む））；エレクトロポ
レーション；リン酸カルシウム沈殿；ＤＥＡＥ－デキストランに続くポリエチレングリコ
ールの使用；直接的な音波負荷；リポソーム媒介性のトランスフェクションおよびレセプ
ター媒介性のトランスフェクション；微粒子銃（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏ
ｍｂａｒｄｍｅｎｔ）；炭化ケイ素繊維を伴った撹拌；アグロバクテリウム媒介性の形質
転換；乾燥／阻害媒介性のＤＮＡ取り込み、およびそのような方法の任意の組み合わせが
挙げられるが、これらに限定されない。これらの手法などの手法の適用により、オルガネ
ラ、細胞、組織または生物が安定にまたは一過性に形質転換され得る。
ＶＩ．処置方法
【0215】
本開示の実施形態は、癌、任意の種類の感染症および任意の免疫障害について個体を処
置する方法を含む。その個体は、最初の処置として、または別の処置の後にもしくは別の
処置の最中に、本開示の処置方法を使用し得る。免疫療法の方法は、癌のタイプまたはス
テージに基づいて、癌を有する個体のニーズに合わせることができ、少なくともいくつか
の場合では、免疫療法は、処置の期間中にその個体に対して改変され得る。
置する方法を含む。その個体は、最初の処置として、または別の処置の後にもしくは別の
処置の最中に、本開示の処置方法を使用し得る。免疫療法の方法は、癌のタイプまたはス
テージに基づいて、癌を有する個体のニーズに合わせることができ、少なくともいくつか
の場合では、免疫療法は、処置の期間中にその個体に対して改変され得る。
【0216】
具体的な場合において、処置方法は、以下のとおりである：１）任意のタイプの血液悪
性腫瘍を有する癌患者を処置するために、ＴまたはＮＫ細胞（エキソビボで拡大されたＴ
もしくはＮＫ細胞、またはＣＡＲもしくはＴＣＲを発現するＴもしくはＮＫ細胞）を用い
る養子細胞療法、（２）任意のタイプの固形癌を有する癌患者を処置するために、Ｔまた
はＮＫ細胞（エキソビボで拡大されたＴもしくはＮＫ細胞、またはＣＡＲもしくはＴＣＲ
を発現するＴもしくはＮＫ細胞）を用いる養子細胞療法、（３）免疫障害を有する患者を
処置するために、Ｔｒｅｇおよび制御性Ｂ細胞を用いる養子細胞療法（エキソビボ拡大さ
れた、またはＣＡＲまたはＴＣＲを発現する）、（４）感染症を有する患者を処置するた
めに、ＴまたはＮＫ細胞（エキソビボで拡大されたＴもしくはＮＫ細胞、またはＣＡＲも
しくはＴＣＲを発現するＴもしくはＮＫ細胞）を用いる養子細胞療法。本開示は、ヒトＮ
Ｋ細胞における複数の遺伝子をノックダウン／ノックアウトすることが、細胞の機能の改
善および腫瘍微小環境に対する抵抗性に寄与することを初めて示した。具体的な実施形態
において、これには、患者自身の免疫細胞または養子移入された免疫細胞の機能を高める
新規の免疫療法アプローチを用いた患者のケアに対して直接の意味がある。実施形態は、
免疫療法に向けて高度に機能的なＴ、ＮＫおよびＢ細胞（エキソビボで拡大され、かつＣ
ＡＲまたはＴＣＲが操作された細胞）を作製する新規アプローチを提供する。これらには
、癌（血液腫瘍と固形腫瘍の両方）（ＮＫ細胞およびＴ細胞、また、ＣＡＲ Ｔ細胞およ
びＣＡＲ ＮＫ細胞）、自己免疫障害および同種免疫障害（Ｂ細胞、制御性Ｂ細胞および
制御性Ｔ細胞）の標的化、および感染症の処置（病原体特異的Ｔ細胞）が含まれる。
性腫瘍を有する癌患者を処置するために、ＴまたはＮＫ細胞（エキソビボで拡大されたＴ
もしくはＮＫ細胞、またはＣＡＲもしくはＴＣＲを発現するＴもしくはＮＫ細胞）を用い
る養子細胞療法、（２）任意のタイプの固形癌を有する癌患者を処置するために、Ｔまた
はＮＫ細胞（エキソビボで拡大されたＴもしくはＮＫ細胞、またはＣＡＲもしくはＴＣＲ
を発現するＴもしくはＮＫ細胞）を用いる養子細胞療法、（３）免疫障害を有する患者を
処置するために、Ｔｒｅｇおよび制御性Ｂ細胞を用いる養子細胞療法（エキソビボ拡大さ
れた、またはＣＡＲまたはＴＣＲを発現する）、（４）感染症を有する患者を処置するた
めに、ＴまたはＮＫ細胞（エキソビボで拡大されたＴもしくはＮＫ細胞、またはＣＡＲも
しくはＴＣＲを発現するＴもしくはＮＫ細胞）を用いる養子細胞療法。本開示は、ヒトＮ
Ｋ細胞における複数の遺伝子をノックダウン／ノックアウトすることが、細胞の機能の改
善および腫瘍微小環境に対する抵抗性に寄与することを初めて示した。具体的な実施形態
において、これには、患者自身の免疫細胞または養子移入された免疫細胞の機能を高める
新規の免疫療法アプローチを用いた患者のケアに対して直接の意味がある。実施形態は、
免疫療法に向けて高度に機能的なＴ、ＮＫおよびＢ細胞（エキソビボで拡大され、かつＣ
ＡＲまたはＴＣＲが操作された細胞）を作製する新規アプローチを提供する。これらには
、癌（血液腫瘍と固形腫瘍の両方）（ＮＫ細胞およびＴ細胞、また、ＣＡＲ Ｔ細胞およ
びＣＡＲ ＮＫ細胞）、自己免疫障害および同種免疫障害（Ｂ細胞、制御性Ｂ細胞および
制御性Ｔ細胞）の標的化、および感染症の処置（病原体特異的Ｔ細胞）が含まれる。
【0217】
いくつかの実施形態において、本開示は、有効量の本開示の免疫細胞を投与する工程を
含む、免疫療法のための方法を提供する。１つの実施形態において、免疫応答を誘発する
免疫ＮＫ細胞集団の移入によって、内科疾患または内科障害が処置される。本開示のある
特定の実施形態において、免疫応答を誘発する免疫細胞集団の移入によって、癌または感
染症が処置される。個体の癌を処置するためまたは癌の進行を遅延させるための方法が本
明細書中に提供され、その方法は、有効量の抗原特異的細胞療法を個体に投与する工程を
含む。本方法は、免疫障害、固形癌、血液癌およびウイルス感染症の処置に適用され得る
。
含む、免疫療法のための方法を提供する。１つの実施形態において、免疫応答を誘発する
免疫ＮＫ細胞集団の移入によって、内科疾患または内科障害が処置される。本開示のある
特定の実施形態において、免疫応答を誘発する免疫細胞集団の移入によって、癌または感
染症が処置される。個体の癌を処置するためまたは癌の進行を遅延させるための方法が本
明細書中に提供され、その方法は、有効量の抗原特異的細胞療法を個体に投与する工程を
含む。本方法は、免疫障害、固形癌、血液癌およびウイルス感染症の処置に適用され得る
。
【0218】
本処置方法が有用な腫瘍には、任意の悪性細胞タイプ、例えば、固形腫瘍または血液腫
瘍に見られる細胞タイプが含まれる。例示的な固形腫瘍としては、膵臓、結腸、盲腸、胃
、脳、頭部、頸部、卵巣、腎臓、喉頭、肉腫、肺、膀胱、黒色腫、前立腺および乳房から
なる群より選択される器官の腫瘍が挙げられ得るが、これらに限定されない。例示的な血
液腫瘍としては、骨髄の腫瘍、ＴまたはＢ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、芽腫、ミエ
ローマなどが挙げられる。本明細書中に提供される方法を用いて処置され得る癌のさらな
る例としては、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌を含む）、
腹膜癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）癌または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）癌（消化器癌および消化管
間質癌を含む）、膵癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、直腸結腸癌
、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌
、様々なタイプの頭頸部癌、および黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。
瘍に見られる細胞タイプが含まれる。例示的な固形腫瘍としては、膵臓、結腸、盲腸、胃
、脳、頭部、頸部、卵巣、腎臓、喉頭、肉腫、肺、膀胱、黒色腫、前立腺および乳房から
なる群より選択される器官の腫瘍が挙げられ得るが、これらに限定されない。例示的な血
液腫瘍としては、骨髄の腫瘍、ＴまたはＢ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、芽腫、ミエ
ローマなどが挙げられる。本明細書中に提供される方法を用いて処置され得る癌のさらな
る例としては、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌を含む）、
腹膜癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）癌または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）癌（消化器癌および消化管
間質癌を含む）、膵癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、直腸結腸癌
、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌
、様々なタイプの頭頸部癌、および黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【0219】
癌は、具体的には以下の組織タイプの癌であり得るが、これらに限定されない：新生物
、悪性；癌腫；癌腫、未分化；巨細胞および紡錘形細胞癌；小細胞癌；乳頭状癌；扁平上
皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；毛母癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；ガス
トリノーマ、悪性；胆管癌；肝細胞癌；肝細胞癌・胆管癌の混合型；索状腺癌；腺様嚢胞
癌；腺腫性ポリープ内腺癌；腺癌、家族性大腸ポリポーシス；固形癌；カルチノイド腫瘍
、悪性；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌；嫌色素性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；好塩基性
癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞腺癌；乳頭状・濾胞腺癌；非被包性硬化癌；副腎皮質
癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘表皮癌；嚢胞腺
癌；乳頭状嚢腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；
浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；パジェット病、乳房；腺房細胞癌；腺扁平上
皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；胸腺腫、悪性；卵巣間質腫瘍、悪性；莢膜細胞腫、悪性
；顆粒膜細胞腫、悪性；アンドロブラストーマ、悪性；セルトリ細胞癌；ライディッヒ細
胞腫瘍、悪性；脂質細胞腫瘍、悪性；傍神経節腫、悪性；乳房外傍神経節腫、悪性；褐色
細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性黒色腫；無色素性黒色腫；表在拡大型黒色腫；悪性黒子
黒色腫；末端黒子型黒色腫；結節性黒色腫；巨大色素性母斑内悪性黒色腫；類上皮細胞黒
色腫；青色母斑、悪性；肉腫；線維肉腫；線維性組織球腫、悪性；粘液肉腫；脂肪肉腫；
平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；混合腫瘍、
悪性；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；間葉腫、悪性；ブレンナー腫瘍、
悪性；葉状腫瘍、悪性；滑膜肉腫；中皮腫、悪性；未分化胚腫；胎児性癌；奇形腫、悪性
；卵巣甲状腺腫、悪性；絨毛癌；中腎腫、悪性；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉
腫；血管外皮腫、悪性；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍皮質骨肉腫；軟骨肉腫；軟骨芽細胞腫
、悪性；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫瘍；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍、悪性；エナメル
上皮歯牙肉腫；エナメル上皮腫、悪性；エナメル上皮線維肉腫；松果体腫、悪性；脊索腫
；グリオーマ、悪性；上衣腫；アストロサイトーマ；原形質性アストロサイトーマ；細線
維性アストロサイトーマ；星芽腫；膠芽腫；乏突起膠腫；希突起芽腫；原始神経外胚葉性
；小脳肉腫；神経節神経芽腫；神経芽腫；網膜芽腫；嗅神経原腫瘍；髄膜腫、悪性；神経
線維肉腫；神経鞘腫、悪性；顆粒細胞腫、悪性；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン；
側肉芽腫；悪性リンパ腫、小リンパ球性；悪性リンパ腫、大細胞型、びまん性；悪性リン
パ腫、濾胞性；菌状息肉腫；他の特定の非ホジキンリンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫；低悪性度
／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞
性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性
ＮＨＬ；高悪性度小非切れ込み型細胞ＮＨＬ；巨大病変（ｂｕｌｋｙ ｄｉｓｅａｓｅ）
ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ワルデンシュトレームマクログ
ロブリン血症；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；
白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性
白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞白血病；巨核芽球
性白血病；骨髄性肉腫；ヘアリー細胞白血病；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リン
パ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；および慢性骨髄芽球性白血病
。
、悪性；癌腫；癌腫、未分化；巨細胞および紡錘形細胞癌；小細胞癌；乳頭状癌；扁平上
皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；毛母癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；ガス
トリノーマ、悪性；胆管癌；肝細胞癌；肝細胞癌・胆管癌の混合型；索状腺癌；腺様嚢胞
癌；腺腫性ポリープ内腺癌；腺癌、家族性大腸ポリポーシス；固形癌；カルチノイド腫瘍
、悪性；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌；嫌色素性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；好塩基性
癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞腺癌；乳頭状・濾胞腺癌；非被包性硬化癌；副腎皮質
癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘表皮癌；嚢胞腺
癌；乳頭状嚢腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；
浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；パジェット病、乳房；腺房細胞癌；腺扁平上
皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；胸腺腫、悪性；卵巣間質腫瘍、悪性；莢膜細胞腫、悪性
；顆粒膜細胞腫、悪性；アンドロブラストーマ、悪性；セルトリ細胞癌；ライディッヒ細
胞腫瘍、悪性；脂質細胞腫瘍、悪性；傍神経節腫、悪性；乳房外傍神経節腫、悪性；褐色
細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性黒色腫；無色素性黒色腫；表在拡大型黒色腫；悪性黒子
黒色腫；末端黒子型黒色腫；結節性黒色腫；巨大色素性母斑内悪性黒色腫；類上皮細胞黒
色腫；青色母斑、悪性；肉腫；線維肉腫；線維性組織球腫、悪性；粘液肉腫；脂肪肉腫；
平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；混合腫瘍、
悪性；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；間葉腫、悪性；ブレンナー腫瘍、
悪性；葉状腫瘍、悪性；滑膜肉腫；中皮腫、悪性；未分化胚腫；胎児性癌；奇形腫、悪性
；卵巣甲状腺腫、悪性；絨毛癌；中腎腫、悪性；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉
腫；血管外皮腫、悪性；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍皮質骨肉腫；軟骨肉腫；軟骨芽細胞腫
、悪性；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫瘍；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍、悪性；エナメル
上皮歯牙肉腫；エナメル上皮腫、悪性；エナメル上皮線維肉腫；松果体腫、悪性；脊索腫
；グリオーマ、悪性；上衣腫；アストロサイトーマ；原形質性アストロサイトーマ；細線
維性アストロサイトーマ；星芽腫；膠芽腫；乏突起膠腫；希突起芽腫；原始神経外胚葉性
；小脳肉腫；神経節神経芽腫；神経芽腫；網膜芽腫；嗅神経原腫瘍；髄膜腫、悪性；神経
線維肉腫；神経鞘腫、悪性；顆粒細胞腫、悪性；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン；
側肉芽腫；悪性リンパ腫、小リンパ球性；悪性リンパ腫、大細胞型、びまん性；悪性リン
パ腫、濾胞性；菌状息肉腫；他の特定の非ホジキンリンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫；低悪性度
／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞
性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性
ＮＨＬ；高悪性度小非切れ込み型細胞ＮＨＬ；巨大病変（ｂｕｌｋｙ ｄｉｓｅａｓｅ）
ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ワルデンシュトレームマクログ
ロブリン血症；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；
白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性
白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞白血病；巨核芽球
性白血病；骨髄性肉腫；ヘアリー細胞白血病；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リン
パ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；および慢性骨髄芽球性白血病
。
【0220】
特定の実施形態は、白血病の処置方法に関する。白血病は、血液または骨髄の癌であり
、血液細胞、通常は白血球細胞（白血球）の異常な増殖（分裂増殖による生成）を特徴と
する。白血病は、血液腫瘍と呼ばれる広範な疾患群の一部である。白血病は、多種多様な
疾患を網羅する広義語である。白血病は、急性および慢性の形態に臨床的におよび病理学
的に分けられる。
、血液細胞、通常は白血球細胞（白血球）の異常な増殖（分裂増殖による生成）を特徴と
する。白血病は、血液腫瘍と呼ばれる広範な疾患群の一部である。白血病は、多種多様な
疾患を網羅する広義語である。白血病は、急性および慢性の形態に臨床的におよび病理学
的に分けられる。
【0221】
本開示のある特定の実施形態において、免疫細胞は、それを必要とする個体（例えば、
癌または感染症を有する個体）に送達される。次いで、それらの細胞は、その個体の免疫
系を増強して、それぞれの癌細胞または病原性細胞を攻撃する。いくつかの場合では、そ
の個体に免疫細胞が１回以上提供される。個体に免疫細胞が２回以上提供される場合、投
与間の時間は、その個体において伝播するのに十分な時間であるべきであり、具体的な実
施形態では、投与間の時間は、ｌ、２、３、４、５、６、７日間またはそれ以上である。
癌または感染症を有する個体）に送達される。次いで、それらの細胞は、その個体の免疫
系を増強して、それぞれの癌細胞または病原性細胞を攻撃する。いくつかの場合では、そ
の個体に免疫細胞が１回以上提供される。個体に免疫細胞が２回以上提供される場合、投
与間の時間は、その個体において伝播するのに十分な時間であるべきであり、具体的な実
施形態では、投与間の時間は、ｌ、２、３、４、５、６、７日間またはそれ以上である。
【0222】
本開示のある特定の実施形態は、免疫媒介性障害を処置または予防するための方法を提
供する。１つの実施形態において、被験体は、自己免疫疾患を有する。自己免疫疾患の非
限定的な例としては、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性ア
ジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵
巣炎および自己免疫性睾丸炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱
瘡、心筋症、セリアック多発性皮膚炎（ｃｅｌｉａｃ ｓｐａｔｅ－ｄｅｒｍａｔｉｔｉ
ｓ）、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、
チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素病、クロ
ーン病、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、糸球
体腎炎、グレーヴズ病、ギランバレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減
少紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパシー、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデ
ス、メニエール病、混合結合組織病、多発性硬化症、１型糖尿病または免疫媒介性糖尿病
、重症筋無力症、ネフローゼ症候群（例えば、微小変化群、巣状糸球体硬化症または膜性
腎症）、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺症候群、リ
ウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発
性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、
サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、全身性エリテ
マトーデス、エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎（例えば、結節性多
発性動脈炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎または疱疹状皮膚炎脈管炎）、白
斑ならびにウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。したがって、本明細書中に開示される方法
を用いて処置され得る自己免疫疾患のいくつかの例としては、多発性硬化症、関節リウマ
チ、全身性エリテマトーデス、Ｉ型糖尿病、クローン病；潰瘍性大腸炎、重症筋無力症、
糸球体腎炎、強直性脊椎炎、脈管炎または乾癬が挙げられるが、これらに限定されない。
被験体は、喘息などのアレルギー性障害も有し得る。
供する。１つの実施形態において、被験体は、自己免疫疾患を有する。自己免疫疾患の非
限定的な例としては、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性ア
ジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵
巣炎および自己免疫性睾丸炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱
瘡、心筋症、セリアック多発性皮膚炎（ｃｅｌｉａｃ ｓｐａｔｅ－ｄｅｒｍａｔｉｔｉ
ｓ）、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、
チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素病、クロ
ーン病、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、糸球
体腎炎、グレーヴズ病、ギランバレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減
少紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパシー、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデ
ス、メニエール病、混合結合組織病、多発性硬化症、１型糖尿病または免疫媒介性糖尿病
、重症筋無力症、ネフローゼ症候群（例えば、微小変化群、巣状糸球体硬化症または膜性
腎症）、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺症候群、リ
ウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発
性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、
サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、全身性エリテ
マトーデス、エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎（例えば、結節性多
発性動脈炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎または疱疹状皮膚炎脈管炎）、白
斑ならびにウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。したがって、本明細書中に開示される方法
を用いて処置され得る自己免疫疾患のいくつかの例としては、多発性硬化症、関節リウマ
チ、全身性エリテマトーデス、Ｉ型糖尿病、クローン病；潰瘍性大腸炎、重症筋無力症、
糸球体腎炎、強直性脊椎炎、脈管炎または乾癬が挙げられるが、これらに限定されない。
被験体は、喘息などのアレルギー性障害も有し得る。
【0223】
さらに別の実施形態では、被験体は、移植される器官または幹細胞のレシピエントであ
り、拒絶反応を予防および／または処置するために免疫細胞が使用される。特定の実施形
態において、被験体は、移植片対宿主病を有するか、または移植片対宿主病を発症するリ
スクがある。ＧＶＨＤは、血縁ドナーまたは非血縁ドナーからの幹細胞を使用するまたは
含む任意の移植に関して起こり得る合併症である。ＧＶＨＤには、急性と慢性の２種類が
ある。急性ＧＶＨＤは、移植後の最初の３ヶ月以内に現れる。急性ＧＶＨＤの徴候として
は、手および足における赤みがかった発疹が挙げられ、それは、剥皮または皮膚の水疱形
成を伴って広がることがあり、より重篤になることがある。急性ＧＶＨＤは、胃および腸
にも影響することがあり、その場合、筋痙攣、悪心および下痢が認められる。皮膚および
目の黄変（黄疸）は、急性ＧＶＨＤが肝臓に影響していることを示す。慢性ＧＶＨＤは、
その重症度に基づいて等級付けされる：ステージ／グレード１が軽度であり；ステージ／
グレード４が重度である。慢性ＧＶＨＤは、移植の３ヶ月後またはそれ以降に発症する。
慢性ＧＶＨＤの症状は、急性ＧＶＨＤの症状と似ているが、さらに、慢性ＧＶＨＤは、眼
の粘液腺、口の唾液腺ならびに胃壁および腸を滑らかにする腺にも影響し得る。本明細書
中に開示される任意の免疫細胞集団を使用することができる。移植される器官の例として
は、臓器移植片、例えば、腎臓、肝臓、皮膚、膵臓、肺および／または心臓、あるいは細
胞移植片、例えば、小島、肝細胞、筋芽細胞、骨髄または造血性幹細胞もしくは他の幹細
胞が挙げられる。移植片は、複合性の移植片、例えば、顔面の組織であり得る。免疫細胞
は、移植の前、移植と同時、または移植の後に、投与され得る。いくつかの実施形態にお
いて、免疫細胞は、移植の前に、例えば、移植の少なくとも１時間前、少なくとも１２時
間前、少なくとも１日前、少なくとも２日前、少なくとも３日前、少なくとも４日前、少
なくとも５日前、少なくとも６日前、少なくとも１週間前、少なくとも２週間前、少なく
とも３週間前、少なくとも４週間前または少なくとも１ヶ月前に投与される。１つの非限
定的な具体例では、治療有効量の免疫細胞の投与は、移植の３～５日前に行われる。
り、拒絶反応を予防および／または処置するために免疫細胞が使用される。特定の実施形
態において、被験体は、移植片対宿主病を有するか、または移植片対宿主病を発症するリ
スクがある。ＧＶＨＤは、血縁ドナーまたは非血縁ドナーからの幹細胞を使用するまたは
含む任意の移植に関して起こり得る合併症である。ＧＶＨＤには、急性と慢性の２種類が
ある。急性ＧＶＨＤは、移植後の最初の３ヶ月以内に現れる。急性ＧＶＨＤの徴候として
は、手および足における赤みがかった発疹が挙げられ、それは、剥皮または皮膚の水疱形
成を伴って広がることがあり、より重篤になることがある。急性ＧＶＨＤは、胃および腸
にも影響することがあり、その場合、筋痙攣、悪心および下痢が認められる。皮膚および
目の黄変（黄疸）は、急性ＧＶＨＤが肝臓に影響していることを示す。慢性ＧＶＨＤは、
その重症度に基づいて等級付けされる：ステージ／グレード１が軽度であり；ステージ／
グレード４が重度である。慢性ＧＶＨＤは、移植の３ヶ月後またはそれ以降に発症する。
慢性ＧＶＨＤの症状は、急性ＧＶＨＤの症状と似ているが、さらに、慢性ＧＶＨＤは、眼
の粘液腺、口の唾液腺ならびに胃壁および腸を滑らかにする腺にも影響し得る。本明細書
中に開示される任意の免疫細胞集団を使用することができる。移植される器官の例として
は、臓器移植片、例えば、腎臓、肝臓、皮膚、膵臓、肺および／または心臓、あるいは細
胞移植片、例えば、小島、肝細胞、筋芽細胞、骨髄または造血性幹細胞もしくは他の幹細
胞が挙げられる。移植片は、複合性の移植片、例えば、顔面の組織であり得る。免疫細胞
は、移植の前、移植と同時、または移植の後に、投与され得る。いくつかの実施形態にお
いて、免疫細胞は、移植の前に、例えば、移植の少なくとも１時間前、少なくとも１２時
間前、少なくとも１日前、少なくとも２日前、少なくとも３日前、少なくとも４日前、少
なくとも５日前、少なくとも６日前、少なくとも１週間前、少なくとも２週間前、少なく
とも３週間前、少なくとも４週間前または少なくとも１ヶ月前に投与される。１つの非限
定的な具体例では、治療有効量の免疫細胞の投与は、移植の３～５日前に行われる。
【0224】
いくつかの実施形態において、被験体には、免疫細胞療法の前に骨髄非破壊的なリンパ
球除去化学療法が施され得る。その骨髄非破壊的なリンパ球除去化学療法は、任意の好適
な経路によって投与され得る任意の好適なそのような治療であり得る。その骨髄非破壊的
なリンパ球除去化学療法は、特に、癌が転移性であり得る黒色腫である場合、例えば、シ
クロホスファミドおよびフルダラビンの投与を含み得る。シクロホスファミドおよびフル
ダラビンの例示的な投与経路は、静脈内である。同様に、任意の好適な用量のシクロホス
ファミドおよびフルダラビンが投与され得る。特定の態様では、およそ６０ｍｇ／ｋｇの
シクロホスファミドが２日間投与され、その後、およそ２５ｍｇ／ｍ２のフルダラビンが
５日間投与される。
球除去化学療法が施され得る。その骨髄非破壊的なリンパ球除去化学療法は、任意の好適
な経路によって投与され得る任意の好適なそのような治療であり得る。その骨髄非破壊的
なリンパ球除去化学療法は、特に、癌が転移性であり得る黒色腫である場合、例えば、シ
クロホスファミドおよびフルダラビンの投与を含み得る。シクロホスファミドおよびフル
ダラビンの例示的な投与経路は、静脈内である。同様に、任意の好適な用量のシクロホス
ファミドおよびフルダラビンが投与され得る。特定の態様では、およそ６０ｍｇ／ｋｇの
シクロホスファミドが２日間投与され、その後、およそ２５ｍｇ／ｍ２のフルダラビンが
５日間投与される。
【0225】
ある特定の実施形態では、免疫細胞の増殖および活性化を促進する成長因子が、免疫細
胞と同時にまたは免疫細胞に続いて被験体に投与される。免疫細胞成長因子は、免疫細胞
の増殖および活性化を促進する任意の好適な成長因子であり得る。好適な免疫細胞成長因
子の例としては、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、
ＩＬ－１８およびＩＬ－２１が挙げられ、これらは、単独でまたは様々な組み合わせで（
例えば、ＩＬ－２とＩＬ－７、ＩＬ－２とＩＬ－１５、ＩＬ－７とＩＬ－１５、ＩＬ－２
とＩＬ－７とＩＬ－１５、ＩＬ－１２とＩＬ－７、ＩＬ－１２とＩＬ－１５またはＩＬ－
１２とＩＬ２）使用され得る。
胞と同時にまたは免疫細胞に続いて被験体に投与される。免疫細胞成長因子は、免疫細胞
の増殖および活性化を促進する任意の好適な成長因子であり得る。好適な免疫細胞成長因
子の例としては、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、
ＩＬ－１８およびＩＬ－２１が挙げられ、これらは、単独でまたは様々な組み合わせで（
例えば、ＩＬ－２とＩＬ－７、ＩＬ－２とＩＬ－１５、ＩＬ－７とＩＬ－１５、ＩＬ－２
とＩＬ－７とＩＬ－１５、ＩＬ－１２とＩＬ－７、ＩＬ－１２とＩＬ－１５またはＩＬ－
１２とＩＬ２）使用され得る。
【0226】
治療有効量の免疫細胞が、非経口投与をはじめとしたいくつかの経路、例えば、静脈内
、腹腔内、筋肉内、胸骨内もしくは関節内の注射または注入によって投与され得る。
、腹腔内、筋肉内、胸骨内もしくは関節内の注射または注入によって投与され得る。
【0227】
養子細胞療法において使用するための免疫細胞の治療有効量は、処置される被験体にお
いて所望の効果を達成する量である。例えば、これは、進行を阻害するために必要な免疫
細胞の量、または自己免疫疾患もしくは同種免疫疾患を後退させるために必要な免疫細胞
の量、または自己免疫疾患によって引き起こされる症状、例えば、疼痛および炎症を和ら
げることができる量であり得る。これは、炎症に伴う症状、例えば、疼痛、浮腫および体
温上昇を和らげるために必要な量であり得る。これは、移植された器官の拒絶反応を減少
させるまたは予防するために必要な量でもあり得る。
いて所望の効果を達成する量である。例えば、これは、進行を阻害するために必要な免疫
細胞の量、または自己免疫疾患もしくは同種免疫疾患を後退させるために必要な免疫細胞
の量、または自己免疫疾患によって引き起こされる症状、例えば、疼痛および炎症を和ら
げることができる量であり得る。これは、炎症に伴う症状、例えば、疼痛、浮腫および体
温上昇を和らげるために必要な量であり得る。これは、移植された器官の拒絶反応を減少
させるまたは予防するために必要な量でもあり得る。
【0228】
上記免疫細胞集団は、疾患状態を回復させるために、上記疾患と一致した処置レジメン
で、例えば、１日から数日間にわたって１回または数回で、投与され得るか、または疾患
の進行を阻害するためおよび疾患の再発を予防するために、長期間にわたる定期的な投与
で投与され得る。製剤において用いられる正確な用量は、投与経路および疾患または障害
の重篤度にも依存し、医師の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。免
疫細胞の治療有効量は、処置される被験体、苦痛の重症度およびタイプならびに投与様式
に依存する。いくつかの実施形態において、ヒト被験体の処置において使用され得る用量
は、少なくとも３．８×１０４、少なくとも３．８×１０５、少なくとも３．８×１０６
、少なくとも３．８×１０７、少なくとも３．８×１０８、少なくとも３．８×１０９ま
たは少なくとも３．８×１０１０免疫細胞／ｍ２で変動する。ある特定の実施形態におい
て、ヒト被験体の処置において使用される用量は、約３．８×１０９～約３．８×１０１
０免疫細胞／ｍ２で変動する。さらなる実施形態において、免疫細胞の治療有効量は、約
５×１０６細胞／ｋｇ体重～約７．５×１０８細胞／ｋｇ体重、例えば、約２×１０７細
胞～約５×１０８細胞／ｋｇ体重または約５×１０７細胞～約２×１０８細胞／ｋｇ体重
で変動し得る。免疫細胞の正確な量は、被験体の年齢、体重、性別および生理学的状態に
基づいて当業者によってすぐに決定される。有効量は、インビトロモデルまたは動物モデ
ルの試験系から導かれた用量反応曲線から外挿され得る。
で、例えば、１日から数日間にわたって１回または数回で、投与され得るか、または疾患
の進行を阻害するためおよび疾患の再発を予防するために、長期間にわたる定期的な投与
で投与され得る。製剤において用いられる正確な用量は、投与経路および疾患または障害
の重篤度にも依存し、医師の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。免
疫細胞の治療有効量は、処置される被験体、苦痛の重症度およびタイプならびに投与様式
に依存する。いくつかの実施形態において、ヒト被験体の処置において使用され得る用量
は、少なくとも３．８×１０４、少なくとも３．８×１０５、少なくとも３．８×１０６
、少なくとも３．８×１０７、少なくとも３．８×１０８、少なくとも３．８×１０９ま
たは少なくとも３．８×１０１０免疫細胞／ｍ２で変動する。ある特定の実施形態におい
て、ヒト被験体の処置において使用される用量は、約３．８×１０９～約３．８×１０１
０免疫細胞／ｍ２で変動する。さらなる実施形態において、免疫細胞の治療有効量は、約
５×１０６細胞／ｋｇ体重～約７．５×１０８細胞／ｋｇ体重、例えば、約２×１０７細
胞～約５×１０８細胞／ｋｇ体重または約５×１０７細胞～約２×１０８細胞／ｋｇ体重
で変動し得る。免疫細胞の正確な量は、被験体の年齢、体重、性別および生理学的状態に
基づいて当業者によってすぐに決定される。有効量は、インビトロモデルまたは動物モデ
ルの試験系から導かれた用量反応曲線から外挿され得る。
【0229】
上記免疫細胞は、免疫媒介性障害を処置するための１つ以上の他の治療薬と併用して投
与され得る。併用療法としては、１つ以上の抗菌剤（例えば、抗生物質、抗ウイルス剤お
よび抗真菌剤）、抗腫瘍剤（例えば、フルオロウラシル、メトトレキサート、パクリタキ
セル、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはビンクリスチン）、免疫枯渇剤
（例えば、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはビンクリスチン）、免疫抑
制剤（例えば、アザチオプリンまたは糖質コルチコイド、例えば、デキサメタゾンまたは
プレドニゾン）、抗炎症剤（例えば、糖質コルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン、デ
キサメタゾンまたはプレドニゾン）または非ステロイド性抗炎症剤（例えば、アセチルサ
リチル酸、イブプロフェンまたはナプロキセンナトリウム））、サイトカイン（例えば、
インターロイキン－１０またはトランスフォーミング成長因子－ベータ）、ホルモン（例
えば、エストロゲン）またはワクチンが挙げられ得るが、これらに限定されない。さらに
、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリンおよびタクロリムス）；ｍＴＯＲ阻
害剤（例えば、ラパマイシン）；ミコフェノール酸モフェチル、抗体（例えば、ＣＤ３、
ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ１５４、ＣＤ４５、ＩＶＩＧまたはＢ細胞を認識する抗体）；化
学療法剤（例えば、メトトレキサート、トレオスルファン、ブスルファン）；照射；また
はケモカイン、インターロイキンもしくはそれらの阻害剤（例えば、ＢＡＦＦ、ＩＬ－２
、抗ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＪＡＫキナーゼ阻害剤）を含むがこれらに限定されない免疫
抑制剤または免疫寛容誘発剤が投与され得る。そのようなさらなる医薬品は、所望の効果
に応じて免疫細胞の投与前、投与中または投与後に投与され得る。上記細胞および作用物
質のこの投与は、同じ経路または異なる経路による投与、および同じ部位または異なる部
位における投与であり得る。
Ａ．薬学的組成物
与され得る。併用療法としては、１つ以上の抗菌剤（例えば、抗生物質、抗ウイルス剤お
よび抗真菌剤）、抗腫瘍剤（例えば、フルオロウラシル、メトトレキサート、パクリタキ
セル、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはビンクリスチン）、免疫枯渇剤
（例えば、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはビンクリスチン）、免疫抑
制剤（例えば、アザチオプリンまたは糖質コルチコイド、例えば、デキサメタゾンまたは
プレドニゾン）、抗炎症剤（例えば、糖質コルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン、デ
キサメタゾンまたはプレドニゾン）または非ステロイド性抗炎症剤（例えば、アセチルサ
リチル酸、イブプロフェンまたはナプロキセンナトリウム））、サイトカイン（例えば、
インターロイキン－１０またはトランスフォーミング成長因子－ベータ）、ホルモン（例
えば、エストロゲン）またはワクチンが挙げられ得るが、これらに限定されない。さらに
、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリンおよびタクロリムス）；ｍＴＯＲ阻
害剤（例えば、ラパマイシン）；ミコフェノール酸モフェチル、抗体（例えば、ＣＤ３、
ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ１５４、ＣＤ４５、ＩＶＩＧまたはＢ細胞を認識する抗体）；化
学療法剤（例えば、メトトレキサート、トレオスルファン、ブスルファン）；照射；また
はケモカイン、インターロイキンもしくはそれらの阻害剤（例えば、ＢＡＦＦ、ＩＬ－２
、抗ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＪＡＫキナーゼ阻害剤）を含むがこれらに限定されない免疫
抑制剤または免疫寛容誘発剤が投与され得る。そのようなさらなる医薬品は、所望の効果
に応じて免疫細胞の投与前、投与中または投与後に投与され得る。上記細胞および作用物
質のこの投与は、同じ経路または異なる経路による投与、および同じ部位または異なる部
位における投与であり得る。
Ａ．薬学的組成物
【0230】
免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＮＫ細胞）および薬学的に許容され得るキャ
リアを含む薬学的組成物および製剤も本明細書中に提供される。
リアを含む薬学的組成物および製剤も本明細書中に提供される。
【0231】
本明細書中に記載されるような薬学的組成物および製剤は、所望の程度の純度を有する
活性成分（例えば、抗体またはポリペプチド）を１つ以上の自由選択の薬学的に許容され
得るキャリア（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ ２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２）と混合することによって、凍結乾燥された
製剤または水溶液の形態で調製され得る。薬学的に許容され得るキャリアは、一般に、使
用される投与量および濃度においてレシピエントにとって無毒性であり、それらのキャリ
アとしては、緩衝剤（例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸）；酸化防止剤（アス
コルビン酸およびメチオニンを含む）；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベン
ジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム
；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベ
ン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；
シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残
基未満）のポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グ
ロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グ
リシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、
二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む）；キレ
ート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖類（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース
またはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚ
ｎ－タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ））が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な本明細書中の
薬学的に許容され得るキャリアとしては、間質薬物分散剤、例えば、中性で活性な可溶性
ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒア
ルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標），Ｂ
ａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）がさらに挙げられる。ｒＨｕＰＨ
２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許公開第２００
５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。１つの
態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼ、例え
ば、コンドロイチナーゼと併用される。
Ｂ．併用療法
活性成分（例えば、抗体またはポリペプチド）を１つ以上の自由選択の薬学的に許容され
得るキャリア（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ ２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２）と混合することによって、凍結乾燥された
製剤または水溶液の形態で調製され得る。薬学的に許容され得るキャリアは、一般に、使
用される投与量および濃度においてレシピエントにとって無毒性であり、それらのキャリ
アとしては、緩衝剤（例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸）；酸化防止剤（アス
コルビン酸およびメチオニンを含む）；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベン
ジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム
；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベ
ン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；
シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残
基未満）のポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グ
ロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グ
リシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、
二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む）；キレ
ート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖類（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース
またはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚ
ｎ－タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ））が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な本明細書中の
薬学的に許容され得るキャリアとしては、間質薬物分散剤、例えば、中性で活性な可溶性
ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒア
ルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標），Ｂ
ａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）がさらに挙げられる。ｒＨｕＰＨ
２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許公開第２００
５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。１つの
態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼ、例え
ば、コンドロイチナーゼと併用される。
Ｂ．併用療法
【0232】
ある特定の実施形態において、本実施形態の組成物および方法は、少なくとも１つのさ
らなる治療と併用される免疫細胞集団を含む。そのさらなる治療は、放射線療法、手術（
例えば、ランペクトミーおよび乳房切除術）、化学療法、遺伝子治療、ＤＮＡ治療、ウイ
ルス治療、ＲＮＡ治療、免疫療法、骨髄移植、ナノ治療、モノクローナル抗体治療または
前述の組み合わせであり得る。そのさらなる治療は、アジュバント療法またはネオアジュ
バント療法の形態であり得る。
らなる治療と併用される免疫細胞集団を含む。そのさらなる治療は、放射線療法、手術（
例えば、ランペクトミーおよび乳房切除術）、化学療法、遺伝子治療、ＤＮＡ治療、ウイ
ルス治療、ＲＮＡ治療、免疫療法、骨髄移植、ナノ治療、モノクローナル抗体治療または
前述の組み合わせであり得る。そのさらなる治療は、アジュバント療法またはネオアジュ
バント療法の形態であり得る。
【0233】
いくつかの実施形態において、さらなる治療は、小分子酵素阻害剤または抗転移剤の投
与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、副作用制限剤（例えば、処置
の副作用の発生率および／または重症度を下げることを目的とする作用物質、例えば、抗
悪心剤など）の投与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、放射線療法
である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、手術である。いくつかの実施形
態において、さらなる治療は、放射線療法と手術の併用である。いくつかの実施形態にお
いて、さらなる治療は、ガンマ線照射である。いくつかの実施形態において、さらなる治
療は、ＰＢＫ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的化する治療、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリ
ン阻害剤、アポトーシス阻害剤および／または化学予防剤である。さらなる治療は、当該
分野で公知の化学療法剤の１つ以上であり得る。
与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、副作用制限剤（例えば、処置
の副作用の発生率および／または重症度を下げることを目的とする作用物質、例えば、抗
悪心剤など）の投与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、放射線療法
である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、手術である。いくつかの実施形
態において、さらなる治療は、放射線療法と手術の併用である。いくつかの実施形態にお
いて、さらなる治療は、ガンマ線照射である。いくつかの実施形態において、さらなる治
療は、ＰＢＫ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的化する治療、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリ
ン阻害剤、アポトーシス阻害剤および／または化学予防剤である。さらなる治療は、当該
分野で公知の化学療法剤の１つ以上であり得る。
【0234】
免疫細胞療法は、免疫チェックポイント療法などのさらなる癌治療の前、最中、後また
は様々な組み合わせで投与され得る。それらの投与は、同時から数分、数日、数週間まで
の範囲の間隔で行われ得る。免疫細胞療法がさらなる治療薬とは別に患者に提供される実
施形態では、それら２つの化合物が、なおも患者に対して有益な併用効果を発揮できるよ
うに、各送達時点の間にかなりの期間が経過しないことを保証するのが一般的である。そ
のような場合、抗体療法と抗癌療法とが、互いの約１２～２４または７２時間以内に、よ
り詳細には、互いの約６～１２時間以内に患者に提供され得ることが企図される。いくつ
かの状況において、それぞれの投与間に数日（２、３、４、５、６または７）から数週間
（１、２、３、４、５、６、７または８）が経過した場合、処置期間をかなり延長するこ
とが望ましいことがある。
は様々な組み合わせで投与され得る。それらの投与は、同時から数分、数日、数週間まで
の範囲の間隔で行われ得る。免疫細胞療法がさらなる治療薬とは別に患者に提供される実
施形態では、それら２つの化合物が、なおも患者に対して有益な併用効果を発揮できるよ
うに、各送達時点の間にかなりの期間が経過しないことを保証するのが一般的である。そ
のような場合、抗体療法と抗癌療法とが、互いの約１２～２４または７２時間以内に、よ
り詳細には、互いの約６～１２時間以内に患者に提供され得ることが企図される。いくつ
かの状況において、それぞれの投与間に数日（２、３、４、５、６または７）から数週間
（１、２、３、４、５、６、７または８）が経過した場合、処置期間をかなり延長するこ
とが望ましいことがある。
【0235】
様々な組み合わせが使用され得る。下記の例の場合、免疫細胞療法が、「Ａ」であり、
抗癌療法が、「Ｂ」である：
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／
Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ
Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ
抗癌療法が、「Ｂ」である：
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／
Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ
Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ
【0236】
本実施形態の任意の化合物または治療の患者への投与は、それらの作用物質に毒性があ
る場合はそれを考慮して、そのような化合物を投与するための一般的なプロトコルに従う
。ゆえに、いくつかの実施形態では、併用療法に起因し得る毒性をモニタリングする工程
が存在する。
１．化学療法
る場合はそれを考慮して、そのような化合物を投与するための一般的なプロトコルに従う
。ゆえに、いくつかの実施形態では、併用療法に起因し得る毒性をモニタリングする工程
が存在する。
１．化学療法
【0237】
多種多様の化学療法剤が、本実施形態に従って使用され得る。用語「化学療法」とは、
薬物を使用して癌を処置することを指す。「化学療法剤」は、癌の処置において投与され
る化合物または組成物を意味するために使用される。これらの作用物質または薬物は、細
胞内でのそれらの活性様式によって、例えば、それらが細胞周期に影響するか否かおよび
どのステージにおいて細胞周期に影響するかによって、分類される。あるいは、作用物質
は、ＤＮＡを直接架橋する能力、ＤＮＡにインターカレートする能力、または核酸合成に
影響することによって染色体異常および有糸分裂異常を誘導する能力に基づいて特徴付け
られ得る。
薬物を使用して癌を処置することを指す。「化学療法剤」は、癌の処置において投与され
る化合物または組成物を意味するために使用される。これらの作用物質または薬物は、細
胞内でのそれらの活性様式によって、例えば、それらが細胞周期に影響するか否かおよび
どのステージにおいて細胞周期に影響するかによって、分類される。あるいは、作用物質
は、ＤＮＡを直接架橋する能力、ＤＮＡにインターカレートする能力、または核酸合成に
影響することによって染色体異常および有糸分裂異常を誘導する能力に基づいて特徴付け
られ得る。
【0238】
化学療法剤の例としては、アルキル化剤（例えば、チオテパおよびシクロスホスファミ
ド）；スルホン酸アルキル（例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスル
ファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツ
レドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ））；エチレンイミン
およびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）（アルトレタミン、トリ
エチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよ
びトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；ア
セトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログで
あるトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼ
レシン、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）およびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ
）合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプト
フィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログであるＫＷ－２１８９
およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウセロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンク
ラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃ
ｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスター
ド（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コ
ロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファ
ミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビキン（ｎ
ｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムス
チン、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）およびウラシルマスタード）；
ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、
ニムスチンおよびラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ））；抗生物質（例えば、
エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマｌＩお
よびカリケアマイシンオメガＩ１））；ジネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）（ジネマイ
シンＡを含む）；ビスホスホネート（例えば、クロドロネート）；エスペラミシン；なら
びにネオカルチノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質であるエンジイン抗生
物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラルニシン、アザセ
リン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミ
ノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌ
ｉｎ）、クロモミシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏ
ｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モル
ホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソル
ビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒ
ｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マ
イトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラルニシン、オリ
ボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピュ
ーロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕ
ｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、
ジノスタチンおよびゾルビシン；抗代謝産物（例えば、メトトレキサートおよび５－フル
オロウラシル（５－ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒ
ｉｎ）、プテロプテリンおよびトリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダ
ラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）およびチオグ
アニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジ
ン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン
およびフロクスウリジン）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモ
スタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタンおよびテストラクトン）；抗副腎（ａ
ｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）（例えば、ミトタンおよびトリロスタン）；葉酸補給剤（例
えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ））；アセグラトン；アルドホスファミ
ドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリ
ン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビ
サントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デ
ホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルミチン（
ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ ａｃｅｔ
ａｔｅ）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロ
ニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ
ｓ）（例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ））；ミ
トグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリ
ン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサント
ロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａ
ｃｉｄ）；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リ
ゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクォン（ｔｒｉ
ａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特
に、Ｔ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン
（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミ
トブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）
；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリ
タキセルおよびドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；白金
配位錯体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラ
スチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンク
リスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシ
ン；アミノプテリン；キセロダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート；イリノテカン（例
えば、ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオル
ニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えば、レチノイン酸）；カペシタビン；カルボプラ
チン、プロカルバジン、プリコマイシン、ゲムシタビエン、ナベルビン、ファルネシル－
タンパク質タンスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナ（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）
、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸または誘導体が挙げられる。
２．放射線療法
ド）；スルホン酸アルキル（例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスル
ファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツ
レドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ））；エチレンイミン
およびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）（アルトレタミン、トリ
エチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよ
びトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；ア
セトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログで
あるトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼ
レシン、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）およびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ
）合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプト
フィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログであるＫＷ－２１８９
およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウセロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンク
ラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃ
ｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスター
ド（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コ
ロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファ
ミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビキン（ｎ
ｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムス
チン、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）およびウラシルマスタード）；
ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、
ニムスチンおよびラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ））；抗生物質（例えば、
エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマｌＩお
よびカリケアマイシンオメガＩ１））；ジネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）（ジネマイ
シンＡを含む）；ビスホスホネート（例えば、クロドロネート）；エスペラミシン；なら
びにネオカルチノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質であるエンジイン抗生
物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラルニシン、アザセ
リン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミ
ノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌ
ｉｎ）、クロモミシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏ
ｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モル
ホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソル
ビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒ
ｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マ
イトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラルニシン、オリ
ボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピュ
ーロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕ
ｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、
ジノスタチンおよびゾルビシン；抗代謝産物（例えば、メトトレキサートおよび５－フル
オロウラシル（５－ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒ
ｉｎ）、プテロプテリンおよびトリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダ
ラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）およびチオグ
アニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジ
ン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン
およびフロクスウリジン）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモ
スタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタンおよびテストラクトン）；抗副腎（ａ
ｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）（例えば、ミトタンおよびトリロスタン）；葉酸補給剤（例
えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ））；アセグラトン；アルドホスファミ
ドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリ
ン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビ
サントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デ
ホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルミチン（
ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ ａｃｅｔ
ａｔｅ）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロ
ニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ
ｓ）（例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ））；ミ
トグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリ
ン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサント
ロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａ
ｃｉｄ）；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リ
ゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクォン（ｔｒｉ
ａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特
に、Ｔ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン
（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミ
トブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）
；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリ
タキセルおよびドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；白金
配位錯体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラ
スチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンク
リスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシ
ン；アミノプテリン；キセロダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート；イリノテカン（例
えば、ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオル
ニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えば、レチノイン酸）；カペシタビン；カルボプラ
チン、プロカルバジン、プリコマイシン、ゲムシタビエン、ナベルビン、ファルネシル－
タンパク質タンスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナ（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）
、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸または誘導体が挙げられる。
２．放射線療法
【0239】
ＤＮＡ損傷を引き起こす、広く使用されてきた他の因子としては、γ線、Ｘ線および／
または腫瘍細胞への放射性同位体の定方向送達として一般的に知られているものが挙げら
れる。マイクロ波、陽子ビーム照射およびＵＶ照射などの他の形態のＤＮＡ損傷因子も企
図される。これらの因子のすべてが、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製および修復
ならびに染色体のアセンブリおよび維持に対して広範囲のダメージをもたらす可能性が最
も高い。Ｘ線の線量の範囲は、長期間（３～４週間）にわたる５０～２００レントゲンと
いう１日線量から、２０００～６０００レントゲンという単回線量までの範囲である。放
射性同位体の線量の範囲は、大きく異なり、同位体の半減期、放射される放射線の強度お
よびタイプ、ならびに腫瘍性細胞による取り込みに依存する。
３．免疫療法
または腫瘍細胞への放射性同位体の定方向送達として一般的に知られているものが挙げら
れる。マイクロ波、陽子ビーム照射およびＵＶ照射などの他の形態のＤＮＡ損傷因子も企
図される。これらの因子のすべてが、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製および修復
ならびに染色体のアセンブリおよび維持に対して広範囲のダメージをもたらす可能性が最
も高い。Ｘ線の線量の範囲は、長期間（３～４週間）にわたる５０～２００レントゲンと
いう１日線量から、２０００～６０００レントゲンという単回線量までの範囲である。放
射性同位体の線量の範囲は、大きく異なり、同位体の半減期、放射される放射線の強度お
よびタイプ、ならびに腫瘍性細胞による取り込みに依存する。
３．免疫療法
【0240】
当業者は、さらなる免疫療法が上記実施形態の方法と併用してまたは併せて使用され得
ることを理解する。癌の処置の状況において、免疫治療薬は、通常、癌細胞を標的化し、
破壊するために免疫エフェクター細胞および免疫エフェクター分子を使用することに頼る
。リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））が、そのような例である。免疫エフェク
ターは、例えば、腫瘍細胞の表面上の何らかのマーカーに特異的な抗体であり得る。その
抗体は、単独で治療のエフェクターとして機能し得るか、または他の細胞をリクルートし
て、実際に細胞殺滅に影響し得る。その抗体はまた、薬物またはトキシン（化学療法剤、
放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）に結合体化され得、標的化剤と
して役立ち得る。あるいは、そのエフェクターは、腫瘍細胞標的と直接または間接的に相
互作用する表面分子を有するリンパ球であり得る。様々なエフェクター細胞には、細胞傷
害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞が含まれる。
ることを理解する。癌の処置の状況において、免疫治療薬は、通常、癌細胞を標的化し、
破壊するために免疫エフェクター細胞および免疫エフェクター分子を使用することに頼る
。リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））が、そのような例である。免疫エフェク
ターは、例えば、腫瘍細胞の表面上の何らかのマーカーに特異的な抗体であり得る。その
抗体は、単独で治療のエフェクターとして機能し得るか、または他の細胞をリクルートし
て、実際に細胞殺滅に影響し得る。その抗体はまた、薬物またはトキシン（化学療法剤、
放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）に結合体化され得、標的化剤と
して役立ち得る。あるいは、そのエフェクターは、腫瘍細胞標的と直接または間接的に相
互作用する表面分子を有するリンパ球であり得る。様々なエフェクター細胞には、細胞傷
害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞が含まれる。
【0241】
抗体－薬物結合体（ＡＤＣ）は、殺細胞薬に共有結合的に連結されたモノクローナル抗
体（ＭＡｂ）を含み、併用療法において使用され得る。このアプローチは、抗原標的に対
するＭＡｂの高い特異性を非常に強力な細胞傷害性薬物と組み合わせることから、豊富な
レベルの抗原を有する腫瘍細胞にペイロード（薬物）を送達する「武装した」ＭＡｂをも
たらす。また、薬物の標的化送達は、正常組織への曝露を最小限に抑えることから、毒性
の低減および治療指数の改善をもたらす。例示的なＡＤＣ薬物としては、ＡＤＣＥＴＲＩ
Ｓ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）およびＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラ
スツズマブエムタンシンまたはＴ－ＤＭ１）が挙げられる。
体（ＭＡｂ）を含み、併用療法において使用され得る。このアプローチは、抗原標的に対
するＭＡｂの高い特異性を非常に強力な細胞傷害性薬物と組み合わせることから、豊富な
レベルの抗原を有する腫瘍細胞にペイロード（薬物）を送達する「武装した」ＭＡｂをも
たらす。また、薬物の標的化送達は、正常組織への曝露を最小限に抑えることから、毒性
の低減および治療指数の改善をもたらす。例示的なＡＤＣ薬物としては、ＡＤＣＥＴＲＩ
Ｓ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）およびＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラ
スツズマブエムタンシンまたはＴ－ＤＭ１）が挙げられる。
【0242】
免疫療法の１つの態様において、腫瘍細胞は、標的化の影響を受けやすい何らかのマー
カー、すなわち、他の大部分の細胞上に存在しない何らかのマーカーを有さなければなら
ない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらのいずれかが、本実施形態の状況において標
的化に好適であり得る。一般的な腫瘍マーカーとしては、ＣＤ２０、癌胎児抗原、チロシ
ナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ－７２、ＨＭＦＧ、Ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ抗原
、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、ラミニンレセプター、ｅｒｂ Ｂおよびｐ１５５が挙
げられる。免疫療法の代替の態様は、抗癌効果と免疫刺激効果とを組み合わせることであ
る。ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、ガンマ－ＩＦＮなどのサイトカイ
ン、ＭＩＰ－１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－８などのケモカイン、およびＦＬＴ３リガンドなど
の成長因子をはじめとした免疫刺激分子も存在する。
カー、すなわち、他の大部分の細胞上に存在しない何らかのマーカーを有さなければなら
ない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらのいずれかが、本実施形態の状況において標
的化に好適であり得る。一般的な腫瘍マーカーとしては、ＣＤ２０、癌胎児抗原、チロシ
ナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ－７２、ＨＭＦＧ、Ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ抗原
、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、ラミニンレセプター、ｅｒｂ Ｂおよびｐ１５５が挙
げられる。免疫療法の代替の態様は、抗癌効果と免疫刺激効果とを組み合わせることであ
る。ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、ガンマ－ＩＦＮなどのサイトカイ
ン、ＭＩＰ－１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－８などのケモカイン、およびＦＬＴ３リガンドなど
の成長因子をはじめとした免疫刺激分子も存在する。
【0243】
免疫療法の例としては、免疫アジュバント、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂ
ｏｖｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、ジニトロクロロベンゼンおよ
び芳香族化合物）；サイトカイン療法、例えば、インターフェロンα、βおよびγ、ＩＬ
－１、ＧＭ－ＣＳＦならびにＴＮＦ；遺伝子治療、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２
およびｐ５３；ならびにモノクローナル抗体、例えば、抗ＣＤ２０、抗ガングリオシドＧ
Ｍ２および抗ｐ１８５が挙げられる。１つ以上の抗癌療法が、本明細書中に記載される抗
体療法とともに使用され得ることが企図される。
ｏｖｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、ジニトロクロロベンゼンおよ
び芳香族化合物）；サイトカイン療法、例えば、インターフェロンα、βおよびγ、ＩＬ
－１、ＧＭ－ＣＳＦならびにＴＮＦ；遺伝子治療、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２
およびｐ５３；ならびにモノクローナル抗体、例えば、抗ＣＤ２０、抗ガングリオシドＧ
Ｍ２および抗ｐ１８５が挙げられる。１つ以上の抗癌療法が、本明細書中に記載される抗
体療法とともに使用され得ることが企図される。
【0244】
いくつかの実施形態において、免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤であり得る。
免疫チェックポイントは、シグナル（例えば、共刺激分子）を強めるかまたはシグナルを
弱めるかのいずれかである。免疫チェックポイントの遮断によって標的化され得る阻害性
免疫チェックポイントとしては、アデノシンＡ２Ａレセプター（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３
（ＣＤ２７６としても知られる）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、
細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＤ１５２としても知られるＣＴＬＡ－４）、
インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（Ｋ
ＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞
免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、ならびにＴ細胞活性化
のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）が挙げられる。特に、免疫チェックポイ
ント阻害剤は、ＰＤ－１軸および／またはＣＴＬＡ－４を標的化する。
免疫チェックポイントは、シグナル（例えば、共刺激分子）を強めるかまたはシグナルを
弱めるかのいずれかである。免疫チェックポイントの遮断によって標的化され得る阻害性
免疫チェックポイントとしては、アデノシンＡ２Ａレセプター（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３
（ＣＤ２７６としても知られる）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、
細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＤ１５２としても知られるＣＴＬＡ－４）、
インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（Ｋ
ＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞
免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、ならびにＴ細胞活性化
のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）が挙げられる。特に、免疫チェックポイ
ント阻害剤は、ＰＤ－１軸および／またはＣＴＬＡ－４を標的化する。
【0245】
免疫チェックポイント阻害剤は、小分子、組換え型のリガンドまたはレセプターなどの
薬物であり得るか、または特に、ヒト抗体などの抗体である。免疫チェックポイントタン
パク質またはそのアナログの公知の阻害剤が、使用され得、特に、キメラ化型、ヒト化型
またはヒト型の抗体が使用され得る。当業者が承知しているように、代替のおよび／また
は等価な名称が、本開示において述べられるある特定の抗体に対して使用され得る。その
ような代替のおよび／または等価な名称は、本開示の文脈において相互交換可能である。
例えば、ランブロリズマブが、代替のおよび等価な名称であるＭＫ－３４７５およびペン
ブロリズマブとしても知られていることは公知である。
薬物であり得るか、または特に、ヒト抗体などの抗体である。免疫チェックポイントタン
パク質またはそのアナログの公知の阻害剤が、使用され得、特に、キメラ化型、ヒト化型
またはヒト型の抗体が使用され得る。当業者が承知しているように、代替のおよび／また
は等価な名称が、本開示において述べられるある特定の抗体に対して使用され得る。その
ような代替のおよび／または等価な名称は、本開示の文脈において相互交換可能である。
例えば、ランブロリズマブが、代替のおよび等価な名称であるＭＫ－３４７５およびペン
ブロリズマブとしても知られていることは公知である。
【0246】
いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１がそのリガン
ド結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ－１
リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２である。別の実施形態にお
いて、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１がその結合パートナーに結合するのを阻
害する分子である。具体的な態様において、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ－１および
／またはＢ７－１である。別の実施形態において、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤ
Ｌ２がその結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、
ＰＤＬ２結合パートナーは、ＰＤ－１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合フ
ラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドであり得る。
ド結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ－１
リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２である。別の実施形態にお
いて、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１がその結合パートナーに結合するのを阻
害する分子である。具体的な態様において、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ－１および
／またはＢ７－１である。別の実施形態において、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤ
Ｌ２がその結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、
ＰＤＬ２結合パートナーは、ＰＤ－１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合フ
ラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドであり得る。
【0247】
いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体（例え
ば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体）である。いくつかの実施形態において、抗
ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＣＴ－０１１からなる群より選択
される。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシ
ン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤＬ１
またはＰＤＬ２の細胞外の部分またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン）である
。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ－２２４である
。ＭＤＸ－１１０６－０４、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５
８およびＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られるニボルマブは、使用され得る抗ＰＤ
－１抗体である。ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ３４７５、ランブロリズマブ、ＫＥＹＴＲ
ＵＤＡ（登録商標）およびＳＣＨ－９００４７５としても知られるペンブロリズマブは、
例示的な抗ＰＤ－１抗体である。ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１としても知られるＣＴ－０
１１も、抗ＰＤ－１抗体である。Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られるＡＭＰ－２２４は、Ｐ
ＤＬ２－Ｆｃ融合可溶性レセプターである。
ば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体）である。いくつかの実施形態において、抗
ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＣＴ－０１１からなる群より選択
される。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシ
ン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤＬ１
またはＰＤＬ２の細胞外の部分またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン）である
。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ－２２４である
。ＭＤＸ－１１０６－０４、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５
８およびＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られるニボルマブは、使用され得る抗ＰＤ
－１抗体である。ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ３４７５、ランブロリズマブ、ＫＥＹＴＲ
ＵＤＡ（登録商標）およびＳＣＨ－９００４７５としても知られるペンブロリズマブは、
例示的な抗ＰＤ－１抗体である。ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１としても知られるＣＴ－０
１１も、抗ＰＤ－１抗体である。Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られるＡＭＰ－２２４は、Ｐ
ＤＬ２－Ｆｃ融合可溶性レセプターである。
【0248】
本明細書中に提供される方法において標的化され得る別の免疫チェックポイントは、Ｃ
Ｄ１５２としても知られる細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）であ
る。ヒトＣＴＬＡ－４の完全ｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ１５
００６を有する。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞の表面上に見られ、抗原提示細胞の表面上のＣ
Ｄ８０またはＣＤ８６に結合したとき「切」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘ
ルパーＴ細胞の表面上に発現される免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり
、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝達する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質であるＣＤ
２８に似ており、両分子は、抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６（それぞれＢ７－
１およびＢ７－２とも呼ばれる）に結合する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝
達するのに対して、ＣＤ２８は、刺激シグナルを伝達する。細胞内ＣＴＬＡ４は、制御性
Ｔ細胞にも見られ、それらの細胞の機能にとって重要であり得る。Ｔ細胞レセプターおよ
びＣＤ２８を介したＴ細胞の活性化により、Ｂ７分子に対する阻害性レセプターであるＣ
ＴＬＡ－４が高発現される。
Ｄ１５２としても知られる細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）であ
る。ヒトＣＴＬＡ－４の完全ｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ１５
００６を有する。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞の表面上に見られ、抗原提示細胞の表面上のＣ
Ｄ８０またはＣＤ８６に結合したとき「切」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘ
ルパーＴ細胞の表面上に発現される免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり
、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝達する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質であるＣＤ
２８に似ており、両分子は、抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６（それぞれＢ７－
１およびＢ７－２とも呼ばれる）に結合する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝
達するのに対して、ＣＤ２８は、刺激シグナルを伝達する。細胞内ＣＴＬＡ４は、制御性
Ｔ細胞にも見られ、それらの細胞の機能にとって重要であり得る。Ｔ細胞レセプターおよ
びＣＤ２８を介したＴ細胞の活性化により、Ｂ７分子に対する阻害性レセプターであるＣ
ＴＬＡ－４が高発現される。
【0249】
いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体（
例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体）、それらの抗原結合フラグメント、イ
ムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドである。
例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体）、それらの抗原結合フラグメント、イ
ムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドである。
【0250】
本方法における使用に適した抗ヒトＣＴＬＡ－４抗体（またはそれ由来のＶＨおよび／
もしくはＶＬドメイン）は、当該分野で周知の方法を用いて作製され得る。あるいは、当
該分野で認められている抗ＣＴＬＡ－４抗体を使用することができる。例示的な抗ＣＴＬ
Ａ－４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１およびＹｅｒ
ｖｏｙ（登録商標）としても知られる）またはその抗原結合フラグメントおよびバリアン
トである。他の実施形態において、その抗体は、イピリムマブの重鎖ＣＤＲおよび軽鎖Ｃ
ＤＲまたは重鎖ＶＲおよび軽鎖ＶＲを含む。したがって、１つの実施形態において、その
抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインならびに
イピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施
形態において、その抗体は、ＣＴＬＡ－４上の、上述の抗体と同じエピトープへの結合に
ついて競合し、かつ／またはＣＴＬＡ－４上の、上述の抗体と同じエピトープに結合する
。別の実施形態において、その抗体は、上述の抗体に対して少なくとも約９０％の可変領
域アミノ酸配列同一性（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％または９９
％の可変領域同一性）を有する。
４．手術
もしくはＶＬドメイン）は、当該分野で周知の方法を用いて作製され得る。あるいは、当
該分野で認められている抗ＣＴＬＡ－４抗体を使用することができる。例示的な抗ＣＴＬ
Ａ－４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１およびＹｅｒ
ｖｏｙ（登録商標）としても知られる）またはその抗原結合フラグメントおよびバリアン
トである。他の実施形態において、その抗体は、イピリムマブの重鎖ＣＤＲおよび軽鎖Ｃ
ＤＲまたは重鎖ＶＲおよび軽鎖ＶＲを含む。したがって、１つの実施形態において、その
抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインならびに
イピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施
形態において、その抗体は、ＣＴＬＡ－４上の、上述の抗体と同じエピトープへの結合に
ついて競合し、かつ／またはＣＴＬＡ－４上の、上述の抗体と同じエピトープに結合する
。別の実施形態において、その抗体は、上述の抗体に対して少なくとも約９０％の可変領
域アミノ酸配列同一性（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％または９９
％の可変領域同一性）を有する。
４．手術
【0251】
癌を有する人のおよそ６０％が、予防的手術、診断的手術または進行度診断手術、根治
的手術および緩和手術をはじめとした何らかのタイプの手術を受ける。根治的手術には、
癌性組織の全部または一部を物理的に除去、切除および／または破壊する摘出術が含まれ
、他の治療（例えば、本実施形態の処置、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子
治療、免疫療法および／または代替療法）と併せて使用され得る。腫瘍摘出術とは、腫瘍
の少なくとも一部を物理的に除去することを指す。手術による処置には、腫瘍摘出術に加
えて、レーザー手術、凍結手術、電気手術および顕微鏡下手術（モース術）が含まれる。
的手術および緩和手術をはじめとした何らかのタイプの手術を受ける。根治的手術には、
癌性組織の全部または一部を物理的に除去、切除および／または破壊する摘出術が含まれ
、他の治療（例えば、本実施形態の処置、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子
治療、免疫療法および／または代替療法）と併せて使用され得る。腫瘍摘出術とは、腫瘍
の少なくとも一部を物理的に除去することを指す。手術による処置には、腫瘍摘出術に加
えて、レーザー手術、凍結手術、電気手術および顕微鏡下手術（モース術）が含まれる。
【0252】
癌性細胞、組織または腫瘍の一部または全部を切除する際、身体に空洞が形成され得る
。処置は、さらなる抗癌療法によるその領域の灌流、直接注射または局所適用によって達
成され得る。そのような処置は、例えば、１、２、３、４、５、６もしくは７日ごとに、
または１、２、３、４および５週間ごとに、または１、２、３、４、５、６、７、８、９
、１０、１１もしくは１２ヶ月ごとに、反復され得る。これらの処置は、様々な投与量の
処置でもあり得る。
５．他の作用物質
。処置は、さらなる抗癌療法によるその領域の灌流、直接注射または局所適用によって達
成され得る。そのような処置は、例えば、１、２、３、４、５、６もしくは７日ごとに、
または１、２、３、４および５週間ごとに、または１、２、３、４、５、６、７、８、９
、１０、１１もしくは１２ヶ月ごとに、反復され得る。これらの処置は、様々な投与量の
処置でもあり得る。
５．他の作用物質
【0253】
処置の治療効果を改善するために、本実施形態のある特定の態様と組み合わせて他の作
用物質が使用され得ることが企図される。これらのさらなる作用物質としては、細胞表面
レセプターおよびギャップ結合のアップレギュレーションに影響する作用物質、細胞分裂
抑制剤および分化剤、細胞接着の阻害剤、アポトーシス誘導物質に対する過剰増殖細胞の
感度を高める作用物質、または他の生物学的作用物質が挙げられる。ギャップ結合数を増
加させることによる細胞間のシグナル伝達の増加は、隣接する過剰増殖細胞集団に対する
抗過剰増殖効果を高め得る。他の実施形態では、処置の抗過剰増殖の有効性を改善するた
めに、本実施形態のある特定の態様と組み合わせて細胞分裂抑制剤または分化剤が使用さ
れ得る。本実施形態の有効性を改善するために、細胞接着の阻害剤が企図される。細胞接
着阻害剤の例は、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤およびロバスタチンである。アポトー
シスに対する過剰増殖細胞の感度を高める他の作用物質（例えば、抗体ｃ２２５）が、処
置の有効性を改善するために本実施形態のある特定の態様と組み合わせて使用され得るこ
とがさらに企図される。
ＶＩＩ．製品またはキット
用物質が使用され得ることが企図される。これらのさらなる作用物質としては、細胞表面
レセプターおよびギャップ結合のアップレギュレーションに影響する作用物質、細胞分裂
抑制剤および分化剤、細胞接着の阻害剤、アポトーシス誘導物質に対する過剰増殖細胞の
感度を高める作用物質、または他の生物学的作用物質が挙げられる。ギャップ結合数を増
加させることによる細胞間のシグナル伝達の増加は、隣接する過剰増殖細胞集団に対する
抗過剰増殖効果を高め得る。他の実施形態では、処置の抗過剰増殖の有効性を改善するた
めに、本実施形態のある特定の態様と組み合わせて細胞分裂抑制剤または分化剤が使用さ
れ得る。本実施形態の有効性を改善するために、細胞接着の阻害剤が企図される。細胞接
着阻害剤の例は、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤およびロバスタチンである。アポトー
シスに対する過剰増殖細胞の感度を高める他の作用物質（例えば、抗体ｃ２２５）が、処
置の有効性を改善するために本実施形態のある特定の態様と組み合わせて使用され得るこ
とがさらに企図される。
ＶＩＩ．製品またはキット
【0254】
免疫細胞を含む製品またはキットも本明細書中に提供される。その製品またはキットは
、個体の癌を処置するためもしくは癌の進行を遅延させるためにまたは癌を有する個体の
免疫機能を高めるために免疫細胞を使用するための指示を含む添付文書をさらに含み得る
。本明細書中に記載される抗原特異的免疫細胞のいずれかが、その製品またはキットに含
められ得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが
挙げられる。その容器は、ガラス、プラスチック（例えば、ポリ塩化ビニルまたはポリオ
レフィン）または金属合金（例えば、ステンレス鋼またはハステロイ）などの種々の材料
から形成され得る。いくつかの実施形態において、その容器は、製剤およびラベルを保持
し、そのラベルは、容器に付着しているかまたは関連付けられており、その容器には、使
用法が示されている場合がある。その製品またはキットは、商業的な観点およびユーザー
の観点から望ましい他の材料をさらに含むことがあり、それらの材料としては、他の緩衝
液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用するための指示を含む添付文書が挙
げられる。いくつかの実施形態において、その製品は、１つ以上の別の作用物質（例えば
、化学療法剤および抗悪性腫瘍剤）をさらに含む。その１つ以上の作用物質に適した容器
としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが挙げられる。
、個体の癌を処置するためもしくは癌の進行を遅延させるためにまたは癌を有する個体の
免疫機能を高めるために免疫細胞を使用するための指示を含む添付文書をさらに含み得る
。本明細書中に記載される抗原特異的免疫細胞のいずれかが、その製品またはキットに含
められ得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが
挙げられる。その容器は、ガラス、プラスチック（例えば、ポリ塩化ビニルまたはポリオ
レフィン）または金属合金（例えば、ステンレス鋼またはハステロイ）などの種々の材料
から形成され得る。いくつかの実施形態において、その容器は、製剤およびラベルを保持
し、そのラベルは、容器に付着しているかまたは関連付けられており、その容器には、使
用法が示されている場合がある。その製品またはキットは、商業的な観点およびユーザー
の観点から望ましい他の材料をさらに含むことがあり、それらの材料としては、他の緩衝
液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用するための指示を含む添付文書が挙
げられる。いくつかの実施形態において、その製品は、１つ以上の別の作用物質（例えば
、化学療法剤および抗悪性腫瘍剤）をさらに含む。その１つ以上の作用物質に適した容器
としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが挙げられる。
【実施例0255】
ＶＩＩＩ．実施例
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含められる。以下の実施
例に開示される手法は、本発明の実施において十分に機能すると本発明者が発見した手法
であり、ゆえにその実施に対する好ましい形式であると考えることができることが当業者
によって認識されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に鑑みて、開示される
具体的な実施形態において多くの変更を行うことができ、それらの変更は、本発明の趣旨
および範囲から逸脱することなく、なおも同様または類似の結果をもたらすと認識するは
ずである。
実施例１－マルチプレックス遺伝子編集
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含められる。以下の実施
例に開示される手法は、本発明の実施において十分に機能すると本発明者が発見した手法
であり、ゆえにその実施に対する好ましい形式であると考えることができることが当業者
によって認識されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に鑑みて、開示される
具体的な実施形態において多くの変更を行うことができ、それらの変更は、本発明の趣旨
および範囲から逸脱することなく、なおも同様または類似の結果をもたらすと認識するは
ずである。
実施例１－マルチプレックス遺伝子編集
【0256】
Ｔ細胞およびＮＫ細胞などの免疫細胞において複数の遺伝子の発現を同時に妨害するこ
との有効性を試験するために、いくつかの研究を行って、ＣＲＩＳＰＲを用いて異なる遺
伝子の組み合わせの破壊を試験した。第１の研究では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用し
て、ＮＫ細胞においてＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩＳＨの発現を妨害
した。この遺伝子セットでは、ＮＫＧ２ＡおよびＣＤ４７を１回目のエレクトロポレーシ
ョンにおいてノックアウトし、２回目のエレクトロポレーションにおいてＣＩＳＨおよび
ＴＧＦＢＲ２を標的化した。両方の回のエレクトロポレーションに対してＰＣＲおよびフ
ローサイトメトリーを用いたノックアウト効率の検証が成功した（図１）。
との有効性を試験するために、いくつかの研究を行って、ＣＲＩＳＰＲを用いて異なる遺
伝子の組み合わせの破壊を試験した。第１の研究では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を使用し
て、ＮＫ細胞においてＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩＳＨの発現を妨害
した。この遺伝子セットでは、ＮＫＧ２ＡおよびＣＤ４７を１回目のエレクトロポレーシ
ョンにおいてノックアウトし、２回目のエレクトロポレーションにおいてＣＩＳＨおよび
ＴＧＦＢＲ２を標的化した。両方の回のエレクトロポレーションに対してＰＣＲおよびフ
ローサイトメトリーを用いたノックアウト効率の検証が成功した（図１）。
【0257】
ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＩＳＨ、アデノシン（図２）、ならびにＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４
７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩＳＨ（図３）を含むさらなる遺伝子セットにおいて、複数の
遺伝子を破壊する方法を検証した。複数の遺伝子を破壊することにより、標的腫瘍細胞に
対する機能が高まることが見出された。ブレフェルジンＡの存在下において５時間、標的
細胞株で共刺激された様々なＮＫ細胞（編集済み 対 Ｃａｓ９のみ）を用いて、ＩＦＮ
－γ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７の産生のフローサイトメトリー解析を行った。標的細胞
株による刺激の後、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７の分泌が増大した（図３）。
７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩＳＨ（図３）を含むさらなる遺伝子セットにおいて、複数の
遺伝子を破壊する方法を検証した。複数の遺伝子を破壊することにより、標的腫瘍細胞に
対する機能が高まることが見出された。ブレフェルジンＡの存在下において５時間、標的
細胞株で共刺激された様々なＮＫ細胞（編集済み 対 Ｃａｓ９のみ）を用いて、ＩＦＮ
－γ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７の産生のフローサイトメトリー解析を行った。標的細胞
株による刺激の後、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７の分泌が増大した（図３）。
【0258】
この機能の増強を、ＮＫ細胞におけるＮＫＧ２Ａ、ＣＤ４７、ＴＧＦＢＲ２およびＣＩ
ＳＨの破壊によって確かめた。そのＮＫ細胞は、５１Ｃｒ放出アッセイによって測定した
とき、Ｋ５６２細胞に対して抗腫瘍細胞傷害性の増大を示した（図４Ａ）。さらに、組換
えＴＧＦ－Ｂのよる処置（５０ｎｇ／ｍｌ）の３０分後に、ｐＳＭＡＤ活性をフローサイ
トメトリーによって測定した（図４Ｂ）。ＮＫ細胞は、サイトカインで刺激されるかまた
は標的を認識すると、ＣＤ１６およびＣＤ６２Ｌの発現を失うこと（図５）、およびＮＫ
細胞においてＡＤＡＭ１７をノックアウトすると、ＣＤ１６およびＣＤ６２Ｌのシェディ
ングが阻止され（図６）、Ｋ５６２標的に対するＡＤＣＣおよび細胞傷害性が改善される
こと（図７）も観察された。
ＳＨの破壊によって確かめた。そのＮＫ細胞は、５１Ｃｒ放出アッセイによって測定した
とき、Ｋ５６２細胞に対して抗腫瘍細胞傷害性の増大を示した（図４Ａ）。さらに、組換
えＴＧＦ－Ｂのよる処置（５０ｎｇ／ｍｌ）の３０分後に、ｐＳＭＡＤ活性をフローサイ
トメトリーによって測定した（図４Ｂ）。ＮＫ細胞は、サイトカインで刺激されるかまた
は標的を認識すると、ＣＤ１６およびＣＤ６２Ｌの発現を失うこと（図５）、およびＮＫ
細胞においてＡＤＡＭ１７をノックアウトすると、ＣＤ１６およびＣＤ６２Ｌのシェディ
ングが阻止され（図６）、Ｋ５６２標的に対するＡＤＣＣおよび細胞傷害性が改善される
こと（図７）も観察された。
【0259】
さらなる研究は、ＮＫ細胞においてＳＨＰ１を破壊すると、抗腫瘍効果が高まることを
示した（図９および１０）。ＮＫ細胞を、Ｋ５６２／Ｒａｊｉ細胞と１：１の比で４時間
共培養した。インキュベーションの後、それらの細胞をアネキシンＶで染色し、生細胞お
よび死細胞を解析した。Ｋ５６２細胞は、ＮＫ細胞の殺滅に対して感受性であり、Ｒａｊ
ｉ細胞は、ＮＫ細胞の殺滅に対して抵抗性である。さらに、ＮＫ－ＣＡＲ細胞においてＮ
ＫＧ２Ａを破壊すると、Ｒａｊｉ標的に対する抗腫瘍効果が高まった（図１２）。
示した（図９および１０）。ＮＫ細胞を、Ｋ５６２／Ｒａｊｉ細胞と１：１の比で４時間
共培養した。インキュベーションの後、それらの細胞をアネキシンＶで染色し、生細胞お
よび死細胞を解析した。Ｋ５６２細胞は、ＮＫ細胞の殺滅に対して感受性であり、Ｒａｊ
ｉ細胞は、ＮＫ細胞の殺滅に対して抵抗性である。さらに、ＮＫ－ＣＡＲ細胞においてＮ
ＫＧ２Ａを破壊すると、Ｒａｊｉ標的に対する抗腫瘍効果が高まった（図１２）。
【0260】
本アプローチを、さらなる遺伝子セット、つまり、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＩＳＨお
よびアデノシン、ならびにＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦＢＲＩＩおよびアデノシンを用
いてさらに検証した。ＮＫ細胞の機能をフローサイトメトリー測定によって評価したとこ
ろ、標的細胞株で刺激すると、それらの細胞においてＴＮＦα、ＩＦＮγおよびＣＤ１０
７ａの増加が観察された（図１３～１４）。
よびアデノシン、ならびにＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦＢＲＩＩおよびアデノシンを用
いてさらに検証した。ＮＫ細胞の機能をフローサイトメトリー測定によって評価したとこ
ろ、標的細胞株で刺激すると、それらの細胞においてＴＮＦα、ＩＦＮγおよびＣＤ１０
７ａの増加が観察された（図１３～１４）。
【0261】
したがって、本方法は、免疫細胞において複数の遺伝子の発現を同時に妨害して、その
免疫細胞の機能を高めるために用いることができる。
実施例２－方法
免疫細胞の機能を高めるために用いることができる。
実施例２－方法
【0262】
ｓｇＲＮＡ－Ｃａｓ９のプレ複合体化およびエレクトロポレーション：近接領域にまた
がる１つまたは２つのｓｇＲＮＡを各遺伝子に対してデザインし、使用した。１ｕｇのｃ
ａｓ９（ＰＮＡ Ｂｉｏ）および５００ｎｇのｓｇＲＮＡ（全ｓｇＲＮＡの合計）の反応
物を各遺伝子に対して作製し、氷上で２０分間インキュベートした。２０分後、２５０，
０００個のＮＫ細胞を、Ｔ－緩衝液＊（Ｎｅｏｎ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ Ｋ
ｉｔ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎに添付されているもの、ＲＮＰ複合体および細胞を含む総体
積は１４ｕｌであるべきである）に再懸濁し、Ｎｅｏｎ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｓ
ｙｓｔｅｍを用いて１０ｕｌのエレクトロポレーションチップでエレクトロポレーション
した。ＮＫ細胞に対するエレクトロポレーション条件は、１６００Ｖ、１０ｍｓおよび３
パルス＊である。次いで、それらの細胞を、ＡＰＣ（１ＮＫ：２ＡＰＣ）、ＳＣＧＭ培地
（優先的には抗生物質不含）、２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ２を含む培養プレートに加え、３
７℃恒温器において回復させた。
がる１つまたは２つのｓｇＲＮＡを各遺伝子に対してデザインし、使用した。１ｕｇのｃ
ａｓ９（ＰＮＡ Ｂｉｏ）および５００ｎｇのｓｇＲＮＡ（全ｓｇＲＮＡの合計）の反応
物を各遺伝子に対して作製し、氷上で２０分間インキュベートした。２０分後、２５０，
０００個のＮＫ細胞を、Ｔ－緩衝液＊（Ｎｅｏｎ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ Ｋ
ｉｔ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎに添付されているもの、ＲＮＰ複合体および細胞を含む総体
積は１４ｕｌであるべきである）に再懸濁し、Ｎｅｏｎ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｓ
ｙｓｔｅｍを用いて１０ｕｌのエレクトロポレーションチップでエレクトロポレーション
した。ＮＫ細胞に対するエレクトロポレーション条件は、１６００Ｖ、１０ｍｓおよび３
パルス＊である。次いで、それらの細胞を、ＡＰＣ（１ＮＫ：２ＡＰＣ）、ＳＣＧＭ培地
（優先的には抗生物質不含）、２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ２を含む培養プレートに加え、３
７℃恒温器において回復させた。
【0263】
ｃｒＲＮＡのプレ複合体化およびエレクトロポレーション：ｃｒＲＮＡとｔｒａｃｒＲ
ＮＡとの二重鎖をピペットおよび遠心機を用いて混合した。その混合物をサーモサイクラ
ーにおいて９５℃で５分間インキュベートし、次いで、卓上で室温に冷却した。
ＮＡとの二重鎖をピペットおよび遠心機を用いて混合した。その混合物をサーモサイクラ
ーにおいて９５℃で５分間インキュベートし、次いで、卓上で室温に冷却した。
【0264】
【表3】
【0265】
【表4】
【0266】
【表5】
【0267】
ｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ二重鎖を、ピペットを用いてＣａｓ９ヌクレアーゼミッ
クスと合わせ、室温で１５分間インキュベートした。次いで、その混合物をｃｒＲＮＡと
合わせた。
クスと合わせ、室温で１５分間インキュベートした。次いで、その混合物をｃｒＲＮＡと
合わせた。
【0268】
【表6】
【0269】
まず、ＡＰＣ（１ＮＫ：２ＡＰＣ）、ＳＣＧＭ培地（好ましくは抗生物質不含）および
２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む培養プレートを調製することによって、エレクトロポ
レーションを行った。１ウェルあたり２５０，０００個の細胞の調製物を、使用の直前に
、７．５ｕｌのＴ緩衝液に再懸濁した。エレクトロポレーション条件は、１６００Ｖ、１
０ｍｓおよび３パルス＊であった。次いで、それらの細胞を培養プレートに加え、３７℃
恒温器において回復させた。
２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む培養プレートを調製することによって、エレクトロポ
レーションを行った。１ウェルあたり２５０，０００個の細胞の調製物を、使用の直前に
、７．５ｕｌのＴ緩衝液に再懸濁した。エレクトロポレーション条件は、１６００Ｖ、１
０ｍｓおよび３パルス＊であった。次いで、それらの細胞を培養プレートに加え、３７℃
恒温器において回復させた。
【0270】
ＮＫ細胞の拡大：ＭｉｌｔｅｎｙｉのＮＫ細胞単離キット（１３０－０９２－６５７）
を用いて臍帯血または末梢血からＮＫ細胞を単離する。ＮＫ細胞をフィーダー細胞と１：
２の比（１ＮＫ細胞２フィーダー細胞）でＩＬ２（２００ＩＵ／ｍｌ）の存在下において
ＳＣＧＭ培地に入れる。培地を１日おきにＩＬ２とともに交換する。４日目に、ＮＫ細胞
単離キットを用いてＮＫ細胞を再度選択して、フィーダー細胞を除去するか、またはすべ
てのフィーダー細胞が死ぬまで７日目まで待つ。キメラ抗原レセプターを形質導入するか
、またはＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９に対するエレクトロポレーションを行う。
を用いて臍帯血または末梢血からＮＫ細胞を単離する。ＮＫ細胞をフィーダー細胞と１：
２の比（１ＮＫ細胞２フィーダー細胞）でＩＬ２（２００ＩＵ／ｍｌ）の存在下において
ＳＣＧＭ培地に入れる。培地を１日おきにＩＬ２とともに交換する。４日目に、ＮＫ細胞
単離キットを用いてＮＫ細胞を再度選択して、フィーダー細胞を除去するか、またはすべ
てのフィーダー細胞が死ぬまで７日目まで待つ。キメラ抗原レセプターを形質導入するか
、またはＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９に対するエレクトロポレーションを行う。
【0271】
本明細書中に開示および特許請求される方法のすべてが、本開示に鑑みて、過度の実験
を行うことなく実施および実行され得る。本発明の組成物および方法を好ましい実施形態
の点から説明してきたが、本発明の概念、趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細
書中に記載された方法および方法の工程または工程の順序に変更が適用されてもよいこと
が当業者には明らかだろう。より詳細には、同じまたは類似の結果が達成される限り、化
学的かつ生理的に関係するある特定の作用物質を本明細書中に記載される作用物質の代わ
りに用いてもよいことが明らかだろう。当業者に明らかなそのような類似の代替物および
改変のすべてが、添付の請求項によって定義される本発明の趣旨、範囲および概念の範囲
内であるとみなされる。
文献
以下の参考文献は、それらが本明細書に記載されたものを補足する例示的な手順または
他の詳細を提供する範囲で、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
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を行うことなく実施および実行され得る。本発明の組成物および方法を好ましい実施形態
の点から説明してきたが、本発明の概念、趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細
書中に記載された方法および方法の工程または工程の順序に変更が適用されてもよいこと
が当業者には明らかだろう。より詳細には、同じまたは類似の結果が達成される限り、化
学的かつ生理的に関係するある特定の作用物質を本明細書中に記載される作用物質の代わ
りに用いてもよいことが明らかだろう。当業者に明らかなそのような類似の代替物および
改変のすべてが、添付の請求項によって定義される本発明の趣旨、範囲および概念の範囲
内であるとみなされる。
文献
以下の参考文献は、それらが本明細書に記載されたものを補足する例示的な手順または
他の詳細を提供する範囲で、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
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【図1】
【図2】
【図3-1】
【図3-2】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6-1】
【図6-2】
【図7-1】
【図7-2】
【図8】
【図9】
【図10A-1】
【図10A-2】
【図10B】
【図11】
【図12A】
【図12B-1】
【図12B-2】
【図12C-1】
【図12C-2】
【図12C-3】
【図12C-4】
【図13】
【図14-1】
【図14-2】
【図14-3】
【図15】
【図16-1】
【図16-2】
【図16-3】
【図17-1】
【図17-2】
【図18-1】
【図18-2】
【図18-3】
【図19-1】
【図19-2】
【配列表】