特開 2024-156665 タンパク質をコードするＲＮＡ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024156665

(43)【公開日】2024-11-06

(54)【発明の名称】タンパク質をコードするＲＮＡ

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20241029BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/53 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/19 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/16 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/24 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/57 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/56 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/61 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/54 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 38/18 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 38/22 20060101ALI20241029BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20241029BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 38/30 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20241029BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/11 Z

C12N15/12

C12N15/53

C12N15/19

C12N15/16

C12N15/24

C12N15/57

C12N15/56

C12N15/61

C12N15/54

C12N15/85 Z

A61K38/19

A61K38/18

A61K38/22

A61P21/00

A61P43/00 105

A61K48/00

A61K31/7105

A61K38/30

A61K35/76

C12N15/62 Z

【審査請求】有

【請求項の数】42

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024106599

(22)【出願日】2024-07-02

(62)【分割の表示】P 2021535281の分割

【原出願日】2019-12-18

(31)【優先権主張番号】18214221.6

(32)【優先日】2018-12-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】19208066.1

(32)【優先日】2019-11-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(71)【出願人】

【識別番号】521265726

【氏名又は名称】ヴェルサメブ アーゲー

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】セルバライ， ジュスタン アントニー

(72)【発明者】

【氏名】シャフハウザー， エルベ

(72)【発明者】

【氏名】メッツガー， フリードリヒ

(57)【要約】      （修正有）

【課題】タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡ、ならびにタンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターを提供する。
【解決手段】５’から３’方向に以下の順番で、ｉ）シグナルペプチドおよびｉｉ）タンパク質をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２.２に等しいかまたはそれを超える平均疎水性スコアを有し、疎水性スコアは、カイト－デューリトルのスケールにより計算され、かつ、シグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、シグナルペプチドは、長さ１６から４０アミノ酸のアミノ酸配列からなり、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、ｍＲＮＡが提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、
シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、ｍＲＮＡ。

【請求項2】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９が、６．１またはそれ未満の平均極性を有する、請求項１に記載のｍＲＮＡ。

【請求項3】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸の平均疎水性スコアが、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の平均疎水性スコアより少なくとも１．０単位低い、請求項１または２に記載のｍＲＮＡ。

【請求項4】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９、アミノ酸２～１０、アミノ酸３～１１、アミノ酸４～１２およびアミノ酸５～１３が、それぞれ１．５を超える平均疎水性スコアを有する、請求項１から３のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項5】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸８～１６の平均疎水性スコアが、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアに等しいかまたはそれより低い、請求項１から４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項6】

シグナルペプチドが、長さ１８～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１０～１８の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアより少なくとも０．５単位低い、請求項１から４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項7】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸の平均疎水性スコアが、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアより少なくとも１．５単位低い、請求項１から６のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項8】

シグナルペプチドのアミノ酸配列の任意の９つの連続するアミノ酸の平均疎水性スコアが、４．１を超えない、請求項１から７のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項9】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸が、負の疎水性スコアを有する少なくとも１つのアミノ酸を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項10】

負の疎水性スコアを有する少なくとも１つのアミノ酸が、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、ＹおよびＷからなる群から選択される、請求項９に記載のｍＲＮＡ。

【請求項11】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の２番目のアミノ酸が、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｌ、ＶおよびＩからなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項12】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の２番目のアミノ酸が、Ａ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、ＶおよびＷからなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項13】

シグナルペプチドが、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の平均疎水性スコアは、修飾を含まないシグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の平均疎水性スコアより少なくとも１．０単位高い、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである、請求項１から１２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項14】

疎水性スコアが、カイト－デューリトルのスケールに従って計算され、極性が、ジマーマンの極性インデックスに従って計算される、請求項１から１３または２から１３のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項15】

シグナルペプチドが、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、および補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである、請求項１から１４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項16】

シグナルペプチドが、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである、請求項１から１４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項17】

シグナルペプチドが、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドおよび前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、インスリンのシグナルペプチドおよびＩＮＳ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）のシグナルペプチドおよびＥＰＯ、インターロイキン４（ＩＬ－４）のシグナルペプチドおよびＩＬ－４、ならびにインターロイキン１０（ＩＬ－１０）のシグナルペプチドおよびＩＬ－１０からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである、請求項１から１４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項18】

シグナルペプチドが、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、天然に存在するアミノ酸配列は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチド、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列および腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドからなる群から選択される、天然に存在するアミノ酸配列である、請求項１から１４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項19】

シグナルペプチドが、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドを使用した場合の分泌タンパク質の量は、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドを使用した場合の前記分泌タンパク質の量より多い、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである、請求項１から１８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項20】

シグナルペプチドが、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドを使用した場合の分泌タンパク質の量は、修飾を含まない前記タンパク質に相同なシグナルペプチドを使用した場合の前記分泌タンパク質の量より多い、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである、請求項１から１８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項21】

シグナルペプチドが、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列を使用した場合の分泌タンパク質の量は、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドを使用した場合の前記分泌タンパク質の量より多い、天然に存在するアミノ酸配列である、請求項１から１８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項22】

シグナルペプチドが、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、必要に応じて、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸の数の５０％未満の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである、請求項１から２１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項23】

シグナルペプチドが、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸の数の５０％未満の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである、請求項１から２１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項24】

シグナルペプチドが、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて、天然に存在するアミノ酸配列のアミノ酸配列のアミノ酸の数の５０％未満の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列である、請求項１から２１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項25】

タンパク質が、サイトカイン、増殖因子およびホルモンからなる群から選択される、請求項１から２４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項26】

シグナルペプチドが、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、インスリン（ＩＮＳ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）およびインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される、請求項１から２５のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項27】

シグナルペプチドが、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質は、ＩＧＦ１である、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである、請求項１から２５のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項28】

シグナルペプチドが、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質は、ＩＧＦ１である、天然に存在するアミノ酸配列である、請求項１から２７のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項29】

シグナルペプチドが、長さ１６～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含む、請求項１から５および請求項７から２８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項30】

タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクター。

【請求項31】

請求項１から２９のいずれか一項に記載のｍＲＮＡおよび／または請求項３０に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクターを含む治療用組成物。

【請求項32】

請求項１から２９のいずれか一項に記載のｍＲＮＡおよび／もしくは請求項３０に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクター、ならびに／または請求項３１に記載の治療用組成物および使用説明書、必要に応じてベクターマップ、必要に応じて宿主細胞、必要に応じて宿主細胞の培養のための培地、および／もしくは必要に応じてトランスフェクトされた宿主細胞を選択および培養するための選択培地を含むキット。

【請求項33】

ｉ）タンパク質；および
ｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、
前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、ｍＲＮＡ。

【請求項34】

ｉ）タンパク質；および
ｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、
前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、ｍＲＮＡ。

【請求項35】

タンパク質が、サイトカイン；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；神経刺激性タンパク質；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、請求項３３または３４に記載のｍＲＮＡ。

【請求項36】

タンパク質が、増殖因子である、請求項３３または３４に記載のｍＲＮＡ。

【請求項37】

増殖因子が、ＡＭＨ、ＡＲＴＮ、ＢＴＣ、ＣＤＮＦ、ＣＦＣ１、ＣＦＣ１Ｂ、ＣＨＲＤＬ１、ＣＨＲＤＬ２、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＣＮＭＤ、ＥＦＥＭＰ１、ＥＧＦＬ６、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＬ８、ＥＰＧＮ、ＥＲＥＧ、ＥＹＳ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＲＺＢ、ＧＤＮＦ、ＧＦＥＲ、ＧＫＮ１、ＨＢＥＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＨＢＢ、ＩＮＨＢＣ、ＩＮＨＢＥ、ＫＩＴＬＧ、ＭＡＮＦ、ＭＤＫ、ＭＩＡ、ＮＧＦ、ＮＯＶ、ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、ＮＲＧ４、ＮＲＴＮ、ＮＴＦ３、ＮＴＦ４、ＯＧＮ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＣ、ＰＤＧＦＤ、ＰＧＦ、ＰＲＯＫ１、ＰＳＰＮ、ＰＴＮ、ＳＤＦ１、ＳＤＦ２、ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ３、ＳＦＲＰ４、ＳＦＲＰ５、ＴＤＧＦ１、ＴＦＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＨＢＳ４、ＴＩＭＰ１、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、およびＷＩＳＰ３からなる群から選択される、請求項３６に記載のｍＲＮＡ。

【請求項38】

タンパク質が、ＩＧＦ１である、請求項３３または３４に記載のｍＲＮＡ。

【請求項39】

脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドが、配列番号３１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項３３から３８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項40】

タンパク質をコードする核酸配列、および前記タンパク質にとって異種の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列が、作動可能に連結されている、請求項３３から３９のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項41】

５’から３’に以下の順番で、
ｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド；
ｉｉ）必要に応じて、タンパク質のプロドメイン；および
ｉｉｉ）成熟タンパク質
をコードする核酸配列を含み、
脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列、必要に応じた
タンパク質のプロドメインをコードする核酸配列、および成熟タンパク質をコードする核酸配列は、作動可能に連結されている、請求項３３から４０のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項42】

ＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核酸配列、成熟ＩＧＦ１をコードする核酸配列、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、ＩＧＦ１のＥペプチドをコードする核酸配列を含まない、請求項３３から４１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項43】

脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドが、タンパク質の天然シグナルペプチドを置き換えている、請求項３３から４２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項44】

タンパク質および前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクター。

【請求項45】

タンパク質および前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクター。

【請求項46】

請求項３３から４３のいずれか一項に記載のｍＲＮＡおよび／または請求項４４または４５に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクターを含む治療用組成物。

【請求項47】

請求項３３から４３のいずれか一項に記載のｍＲＮＡもしくは請求項４４または４５に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクター、および／または請求項４６に記載の治療用組成物および使用説明書、必要に応じてベクターマップ、必要に応じて宿主細胞、必要に応じて宿主細胞の培養のための培地、および／もしくは必要に応じてトランスフェクトされた宿主細胞を選択および培養するための選択培地を含むキット。

【請求項48】

医薬として使用するための、請求項１から２８または３３から４３のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ、請求項３０または４４から４５のいずれか一項に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクター、請求項３１または４６に記載の治療用組成物、または請求項３２または４７に記載のキット。

【請求項49】

骨格筋損傷を処置するための方法での使用のための、請求項１から２９または請求項３８もしくは４２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項50】

骨格筋損傷を処置する方法での使用のためのｍＲＮＡ。

【請求項51】

骨格筋損傷を処置する方法での使用のためのｍＲＮＡを含む治療用組成物。

【請求項52】

ｍＲＮＡが、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）をコードするｍＲＮＡである、請求項５０または５１に記載の使用のためのｍＲＮＡまたは組成物。

【請求項53】

ヒトＩＧＦ１をコードするｍＲＮＡが、シグナルペプチドをコードする核酸配列、必要に応じてヒトＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核酸配列、および成熟ヒトＩＧＦ１をコードする核酸配列を含む、請求項５２に記載の使用のためのｍＲＮＡまたは組成物。

【請求項54】

シグナルペプチドをコードする核酸配列が、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする、請求項５３に記載の使用のためのｍＲＮＡまたは組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、ｍＲＮＡに関する。

【0002】

本発明はさらに、ｉ）タンパク質；およびｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、ｍＲＮＡに関する。また本発明は、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位または発現ベクターであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、転写単位または発現ベクターにも関する。また本発明は、前記タンパク質にとって異種のタンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位または発現ベクターであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドである、転写単位または発現ベクターにも関する。また本発明は、ｍＲＮＡ、および／または転写単位もしくは発現ベクターを含む、治療用組成物およびキットにも関する。また本発明は、医薬として使用するための、ｍＲＮＡ、転写単位または発現ベクター、治療用組成物および／またはキットにも関し、特に、医薬として使用するための、ｉ）ＩＧＦ１；およびｉｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡにも関する。また本発明は、骨格筋損傷を処置する方法での使用のためのｍＲＮＡおよびその治療用組成物にも関する。

【背景技術】

【0003】

これまでに、コードされたタンパク質の発現および分泌の収量を増加させるために、様々な試みが、特にインビトロおよび／またはインビボの両方での改善された発現系の使用によって、なされてきた。一般的に先行技術に記載された発現および分泌を増加させるための方法は、慣習的に、特異的なプロモーターおよび対応する調節エレメントを含有する発現ベクターまたはカセットの使用に基づく。これらの発現ベクターまたはカセットは、典型的には特定の細胞系に限定されるため、これらの発現系は、異なる細胞系で使用する場合、適合させる必要がある。次いでこのような適合させた発現ベクターまたはカセットは通常、細胞にトランスフェクトされ、典型的には特定の細胞株に応じて処置される。それ故に、主として、特定の細胞型に特異的なプロモーターおよび調節エレメントから独立した細胞に固有の系によって、標的細胞においてコードされたタンパク質を発現することができる、ｍＲＮＡのような核酸分子が選ばれる。この状況において、ｍＲＮＡを安定化するエレメントと、ｍＲＮＡの翻訳効率を増加させるエレメントを区別することができる。例えば、ＷＯ０２／０９８４４３は、一般的な形態で安定化され、そのコード化領域において翻訳に最適化されたｍＲＮＡを記載している。ＷＯ０２／０９８４４３はさらに、配列修飾を決定するための方法を開示している。ＷＯ０２／０９８４４３は、加えて、配列のグアニン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量を増加させるためにｍＲＮＡ配列中のアデニンおよびウラシルヌクレオチドを置換する可能性を記載している。この状況において、ＷＯ０２／０９８４４３は、概して、このような修飾に関する塩基配列としての配列に言及しており、修飾されたｍＲＮＡは、処置しようとする患者で翻訳される少なくとも１つの生物学的に活性なペプチドまたはポリペプチドを、例えば、間違いがまったくないか、または不十分に、または多少の間違いを含んでのいずれかでコードする。コードされたタンパク質の発現を増加させるためのさらなるアプローチにおいて、ＷＯ２００７／０３６３６６号出願は、長いポリ（Ａ）配列（特に１２０ｂｐより長い）ならびにｍＲＮＡ安定性および翻訳活性へのベータグロビン遺伝子の少なくとも２つの３’非翻訳領域の組合せのプラスの作用を記載している。当業界における全ての進歩にもかかわらず、無細胞の系、細胞または生物体（組換え発現）におけるコードされたタンパク質の効率的な発現、特に効率的な分泌は、それでもなお挑戦しがいのある課題である。

【発明の概要】

【0004】

本発明は、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、ｍＲＮＡを提供する。

【0005】

本発明はさらに、
ｉ）タンパク質；および
ｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、
前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、ｍＲＮＡを提供し、特に、本発明は、
ｉ）タンパク質；および
ｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、
前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、ｍＲＮＡを提供する。

【0006】

本発明はさらに、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位または発現ベクターであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、転写単位または発現ベクターを提供する。

【0007】

本発明はさらに、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のタンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位または発現ベクターを提供する。本発明はさらに、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、タンパク質は、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のタンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位または発現ベクターを提供する。本発明はさらに、上述のｍＲＮＡおよび／または転写単位もしくは発現ベクターを含む治療用組成物を提供する。本発明はさらに、上述のｍＲＮＡ、転写単位または発現ベクターおよび／または治療用組成物、ならびに使用説明書、必要に応じてベクターマップ、必要に応じて宿主細胞、必要に応じて宿主細胞の培養のための培地、および／もしくは必要に応じてトランスフェクトされた宿主細胞を選択および培養するための選択培地を含むキットを提供する。本発明はさらに、医薬として使用するための、上述のｍＲＮＡ、転写単位または発現ベクター、治療用組成物またはキットを提供する。本発明はさらに、医薬として使用するための、ｉ）ＩＧＦ１；およびｉｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡを提供する。本発明はさらに、骨格筋損傷を処置する方法での使用のための、ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡを含有する治療用組成物を提供する。

【0008】

本発明者らは、驚くべきことに、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、ｍＲＮＡは、タンパク質およびその天然の相同なシグナルペプチドをコードするｍＲＮＡでトランスフェクトされた細胞によるタンパク質の分泌と比較して、このｍＲＮＡでトランスフェクトされた細胞によるタンパク質のより効率的な分泌を提供することを見出した。特に、本発明者らは、驚くべきことに、ｉ）タンパク質；およびｉｉ）前記タンパク質にとって異種のＢＤＮＦシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡは、タンパク質の天然の相同なシグナルペプチドと比べて、このｍＲＮＡでトランスフェクトされた細胞によるタンパク質のより効率的な分泌を提供することを見出した。分泌タンパク質の量は、同じタンパク質およびタンパク質の天然の相同なシグナルペプチドを含むｍＲＮＡと比較して、最大で６倍多い。この予想外の発見は、所望のタンパク質をコードするｍＲＮＡを効果的に送達し、細胞中で発現させ、タンパク質の天然の相同なシグナルペプチドを有するものより多くの量の分泌タンパク質を得るのに非常に有用である。本発明によって提供される同じ量のｍＲＮＡを用いて得られた、より多くの量の分泌タンパク質は、治療用量を、組織に局所適用するのに必要な用量より少なくし、それによって起こり得るｍＲＮＡ関連の副作用に対するその安全性の枠を増加させるために極めて有用である。さらにこれは、本出願を、制御放出のための製剤やデバイスのコーティングにより適したものにしている。さらにこれは、ｍＲＮＡ関連の免疫原性のリスクを低減し、本出願を、限られた体積しか注射できない組織に対して、またはこれまで処理しにくい組織により適したものにしている。本発明者らはまた、ｍＲＮＡ、特にヒトＩＧＦ－１をコードするｍＲＮＡを骨格筋に効果的に送達し、発現させることを可能にし、それによって骨格筋における所望のポリペプチドの発現を可能にし、意味のある機能的な利益が筋肉に提供されることも見出した。ｍＲＮＡは、好ましくは液体組成物で、好ましくは裸の形態で存在する。この液体組成物は、例えば注射によって骨格筋に直接送達することができ、ｍＲＮＡのための遺伝子移入ベクターまたは担体、またはエレクトロトランスファーまたは超音波のような組織への移入を強化するための方法をまったく必要としない。さらに、損傷を受けた骨格筋へのｍＲＮＡの注射は、回復プロセスを促進し、骨格筋の機能の増加をもたらすことが示された。驚くべきことに、ＩＧＦ－１をコードするｍＲＮＡで処置した動物は、１６日間の間に（ｂｙ １６ ｄａｙｓ）健康な範囲の機能的なレベルに到達した。対照的に、ビヒクルで処置した対照動物は、２８日目でさえも十分な機能的な回復を達成しなかった。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】Ｃｐｄ．１のＤＮＡおよびＲＮＡ配列を示す図である。（Ａ）は、そのプレドメイン、プロドメインおよびコードドメインを含有するヒトコドン最適化ＩＧＦ１のＤＮＡ配列（配列番号１）を示す。プレドメイン（シグナル伝達ペプチド）の配列はイタリック体で示され、プロドメインの配列は下線が引かれ、ＩＧＦ－Ｉコードドメインは太字で示され、ストップコドンは太字で示されている。（Ｂ）は、ウリジンがＮ１－メチルシュードウリジンである、ヒトＩＧＦ１のプレドメイン、プロドメインおよびコードドメインのＲＮＡ配列を図示する（配列番号２）。プレドメインおよびプロドメインは分泌時に切断される。

【図2】Ｃｐｄ．２のＤＮＡおよびＲＮＡ配列を示す図である。（Ａ）は、ＩＧＦ２プレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインを含有するヒトコドン最適化ＩＧＦ１のＤＮＡ配列（配列番号３）を示す。プレドメイン（シグナル伝達ペプチド）の配列はイタリック体で示され、プロドメインの配列は下線が引かれ、ＩＧＦ１コードドメインは太字で示され、ストップコドンは太字で示されている。（Ｂ）は、ウリジンがＮ１－メチルシュードウリジンである、ＩＧＦ２プレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインのＲＮＡ配列を図示する（配列番号４）。プレドメインおよびプロドメインは分泌時に切断される。

【図3】Ｃｐｄ．３のＤＮＡおよびＲＮＡ配列を示す図である。（Ａ）は、ＡＬＢプレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインを含有するヒトコドン最適化ＩＧＦ１のＤＮＡ配列（配列番号５）を示す。プレドメイン（シグナル伝達ペプチド）の配列はイタリック体で示され、プロドメインの配列は下線が引かれ、ＩＧＦ１コードドメインは太字で示され、ストップコドンは太字で示されている。（Ｂ）は、ウリジンがＮ１－メチルシュードウリジンである、ＡＬＢプレドメインおよびＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインのＲＮＡ配列を図示する（配列番号６）。プレドメインおよびプロドメインは分泌時に切断される。

【図4】Ｃｐｄ．４のＤＮＡおよびＲＮＡ配列を示す図である。（Ａ）は、ＢＤＮＦプレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインを含有するヒトコドン最適化ＩＧＦ１のＤＮＡ配列（配列番号７）を示す。プレドメイン（シグナル伝達ペプチド）の配列はイタリック体で示され、プロドメインの配列は下線が引かれ、ＩＧＦ１コードドメインは太字で示され、ストップコドンは太字で示されている。（Ｂ）は、ウリジンがＮ１－メチルシュードウリジンである、ＢＤＮＦプレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインのＲＮＡ配列を図示する（配列番号８）。プレドメインおよびプロドメインは分泌時に切断される。

【図5】Ｃｐｄ．５のＤＮＡおよびＲＮＡ配列を示す図である。（Ａ）は、ＣＸＣＬ１２プレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインを含有するヒトコドン最適化ＩＧＦ１のＤＮＡ配列（配列番号９）を示す。プレドメイン（シグナル伝達ペプチド）の配列はイタリック体で示され、プロドメインの配列は下線が引かれ、ＩＧＦ１コードドメインは太字で示され、ストップコドンは太字で示されている。（Ｂ）は、ウリジンがＮ１－メチルシュードウリジンである、ＣＸＣＬ１２プレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインのＲＮＡ配列を図示する（配列番号１０）。プレドメインおよびプロドメインは分泌時に切断される。

【図6】Ｃｐｄ．６のＤＮＡおよびＲＮＡ配列を示す図である。（Ａ）は、合成シグナル伝達ペプチド１プレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインを含有するヒトコドン最適化ＩＧＦ１のＤＮＡ配列（配列番号１１）を示す。プレドメイン（シグナル伝達ペプチド）の配列はイタリック体で示され、プロドメインの配列は下線が引かれ、ＩＧＦ１コードドメインは太字で示され、ストップコドンは太字で示されている。（Ｂ）は、ウリジンがＮ１－メチルシュードウリジンである、合成シグナル伝達ペプチド１プレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインのＲＮＡ配列を図示する（配列番号１２）。プレドメインおよびプロドメインは分泌時に切断される。

【図7】Ｃｐｄ．７のＤＮＡおよびＲＮＡ配列を示す図である。（Ａ）は、合成シグナル伝達ペプチド２プレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインを含有するヒトコドン最適化ＩＧＦ１のＤＮＡ配列（配列番号１３）を示す。プレドメイン（シグナル伝達ペプチド）の配列はイタリック体で示され、プロドメインの配列は下線が引かれ、ＩＧＦ１コードドメインは太字で示され、ストップコドンは太字で示されている。（Ｂ）は、ウリジンがＮ１－メチルシュードウリジンである、合成シグナル伝達ペプチド２プレドメインならびにＩＧＦ１プロドメインおよびコードドメインのＲＮＡ配列を図示する（配列番号１４）。プレドメインおよびプロドメインは分泌時に切断される。

【図8】 太字でマークされたＣｐｄ．１インサートを含むベクターｐＶＡＸ．Ａ１２０のＤＮＡ配列を示す図である（配列番号１５）。Ｃｐｄ．１のＯＲＦは、その元のプラスミドから消化され、ベクターにサブクローニングされた。

【図9】 太字でマークされたＣｐｄ．２インサートを含むベクターｐＭＡ－ＴのＤＮＡ配列を示す図である（配列番号１６）。Ｃｐｄ．２のＯＲＦは、その元のプラスミドから消化され、ベクターにサブクローニングされた。

【図10】 太字でマークされたＣｐｄ．３インサートを含むベクターｐＭＡ－ＴのＤＮＡ配列を示す図である（配列番号１７）。Ｃｐｄ．３のＯＲＦは、その元のプラスミドから消化され、ベクターにサブクローニングされた。

【図11】 太字でマークされたＣｐｄ．４インサートを含むベクターｐＭＡ－ＴのＤＮＡ配列を示す図である（配列番号１８）。Ｃｐｄ．４のＯＲＦは、その元のプラスミドから消化され、ベクターにサブクローニングされた。

【図12】 太字でマークされたＣｐｄ．５インサートを含むベクターｐＭＡ－ＴのＤＮＡ配列を示す図である（配列番号１９）。Ｃｐｄ．５のＯＲＦは、その元のプラスミドから消化され、ベクターにサブクローニングされた。

【図13】 太字でマークされたＣｐｄ．６を含むベクターｐＭＡ－ＲＱのＤＮＡ配列を示す図である（配列番号２０）。Ｃｐｄ．６のＯＲＦは、その元のプラスミドから消化され、ベクターにサブクローニングされた。

【図14】 太字でマークされたＣｐｄ．７を含むベクターｐＭＡ－ＲＱのＤＮＡ配列を示す図である（配列番号２１）。Ｃｐｄ．７のＯＲＦは、その元のプラスミドから消化され、ベクターにサブクローニングされた。

【図15】ｍＲＮＡのＩＶＴ用ｐＭＡ－ＴおよびｐＭＡ－ＲＱプラスミドを増幅するのに使用されるフォワード（配列番号２２）およびリバースプライマー（配列番号２３）配列を示す図である。

【図16】Ｃｐｄ．１～Ｃｐｄ．７のシグナルペプチドの遺伝子名、ＵｎｉＰｒｏｔ数、コドン最適化ＤＮＡ配列およびアミノ酸配列ならびにベクター（配列番号２４～３７）を示す図である。Ｃｐｄ．６およびＣｐｄ．７のシグナルペプチドは合成ペプチドであり、公開データベース中の一致する既知のタンパク質配列ではないことに注意。

【図17】Ｃｐｄ．１～Ｃｐｄ．７のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト胎児性腎細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）からのＩＧＦ１分泌の誘導を示す図である。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は各２μｇ Ｃｐ．１～Ｃｐｄ．７をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。Ｃｐｄ．４は、Ｃｐｄ．１より有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導した（３．３倍）。データは、４つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊＊＊、＜０．００１）は、一方向ＡＮＯＶＡとその後のダネットの多重比較検定によって評価された。

【図18】Ｃｐｄ．１またはＣｐｄ．４のｍＲＮＡトランスフェクション後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞でのＩＧＦ１分泌の誘導の濃度依存性を示す図である。細胞は、種々の濃度（０、０．０２、０．０６、０．２、０．６または２μｇ）でＣｐｄ．１またはＣｐｄ．４をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。Ｃｐｄ．４誘導ＩＧＦ１分泌は、Ｃｐｄ．１（ＥＣ_５０ ０．８８９μｇ）より有意に強力であった（ＥＣ_５０ ０．１３４μｇ）。データは、２つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊＊＊、＜０．００１）は、２つの曲線の二方向ＡＮＯＶＡによって評価された。

【図19】Ｃｐｄ．１～Ｃｐｄ．７のｍＲＮＡトランスフェクションによる、マウス骨格筋細胞（Ｃ２Ｃ１２）からのＩＧＦ１分泌の誘導を示す図である。Ｃ２Ｃ１２細胞は各２μｇ Ｃｐ．１～Ｃｐｄ．７をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。Ｃｐｄ．４は、Ｃｐｄ．１より有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導した（６．１倍）。データは、４つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊＊＊、＜０．００１）は、一方向ＡＮＯＶＡとその後のダネットの多重比較検定によって評価された。

【図20】Ｃｐｄ．１およびＣｐｄ．４のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト初代骨格筋細胞（ＨＳｋＭＣ）からのＩＧＦ１分泌の誘導を示す図である。ＨＳｋＭＣ細胞は各２μｇ Ｃｐ．１またはＣｐｄ．４をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。Ｃｐｄ．４は、Ｃｐｄ．１より有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導した（３．１倍）。データは、３つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊＊、ｐ＜０．０１）は、一方向ＡＮＯＶＡとその後のダネットの多重比較検定によって評価された。

【図21】ノテキシン損傷後の前脛骨筋（ＴＡ）の機能回復を示す図である。筋肉内注射（０日目）によるノテキシン損傷後、２つのＩＧＦ－Ｉ ｍＲＮＡ処置（Ｃｐｄ．４（１μｇ））が１日目および４日目の筋肉内注射によって適用された（矢印の頭を参照）。対照群はビヒクル溶液を受け取った。筋機能は、損傷後１、４、７、１０、１４、２１および２８日目に評価された。データは、１群および１時点あたり５マウスの平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。アスタリスクは、スチューデントのｔ検定によって評価された場合のＣｐｄ．４処置群と対照群との有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図22】対照としてのＣｐｄ．１およびＣｐｄ．８～Ｃｐｄ．２６のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト胎児性腎細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）からのＩＧＦ１分泌の誘導を示す図である。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は各０．３μｇ Ｃｐｄ．１およびＣｐｄ．８～Ｃｐｄ．２６をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＧＦ１分泌はＣｐｄ．１ ＩＧＦ１分泌に対して正規化された。Ｃｐｄ．８、９、１０、１１、１２および１３はＩＧＦ１分泌の低下を示したのに対し、Ｃｐｄ．１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２３、２４、２５および２６はＣｐｄ．１より高いＩＧＦ１分泌を誘導した（最大２．６倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき２～１１の複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊、ｐ＜０．００１；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．１と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【図23】対照としてのＣｐｄ．１およびＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２６のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）からのＩＧＦ１分泌の誘導を示す図である。ＨｅｐＧ２細胞は各０．３μｇ Ｃｐ．１およびＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２６をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＧＦ１分泌はＣｐｄ．１に対して正規化された。Ｃｐｄ．８、９および１２はＩＧＦ１分泌の低下を示したのに対し、Ｃｐｄ．４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５および２６はＣｐｄ．１より高いＩＧＦ１分泌を誘導した（最大８．３倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき２～４つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊＊、ｐ＜０．０１；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．１と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【図24】対照としてのＣｐｄ．１およびＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２４のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト神経細胞（ＩＭＲ３２）からのＩＧＦ１分泌の誘導を示す図である。ＩＭＲ３２細胞は各０．３μｇ Ｃｐ．１およびＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２４をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＧＦ１分泌はＣｐｄ．１に対して正規化された。Ｃｐｄ．４、１４、１５、１６、１７、２０、２２、２３および２４はＣｐｄ．１より高いＩＧＦ１分泌を誘導した（最大２．６倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき２～６つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．１と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【図25】対照としてのＣｐｄ．１およびＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２５のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト初代軟骨細胞からのＩＧＦ１分泌の誘導を示す図である。軟骨細胞は各０．６μｇ Ｃｐ．１およびＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２５をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＧＦ１分泌はＣｐｄ．１に対して正規化された。Ｃｐｄ．４、１４、１５、１６、２０、２１、２２、２４および２５はＣｐｄ．１より高いＩＧＦ１分泌を誘導した（最大１．９倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき１～２つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．１と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【図26】対照としてのＣｐｄ．１およびＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．１７のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ラット野生型（Ａ）またはＳＯＤ１Ｇ^Ｓ９３Ａ（Ｂ）初代運動ニューロンからのＩＧＦ１分泌の誘導を示す図である。ラット野生型初代運動ニューロンは、各０．３μｇ Ｃｐ．１、Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４およびＣｐｄ．１７をトランスフェクトされ、ラットＳＯＤ１Ｇ^Ｓ９３Ａ初代運動ニューロンは、各０．３μｇ Ｃｐ．１、Ｃｐｄ．１４およびＣｐｄ．１７をトランスフェクトされ、分泌されたＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して４８時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＧＦ１分泌はＣｐｄ．１に対して正規化された。Ｃｐｄ．４、１４および１７はＣｐｄ．１より高いＩＧＦ１分泌を誘導した（野生型で最大４．３倍またはＳＯＤ１^Ｓ９３Ａで９．３倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき２つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性は、Ｃｐｄ．１と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価され、統計的差異がないことを明らかにした。

【図27】Ｃｐｄ．２７、Ｃｐｄ．２８またはＣｐｄ．２９のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト胎児性腎細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ、Ａ）、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２、Ｂ）およびヒト肺癌細胞（Ａ５４９、Ｃ）からのＥＰＯ分泌の誘導を示す図である。細胞は各０．３～０．９μｇ Ｃｐ．２７、Ｃｐｄ．２８またはＣｐｄ．２９をトランスフェクトされ、分泌されたＥＰＯは、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＥＰＯ分泌はＣｐｄ．２７に対して正規化された。Ｃｐｄ．２８および２９は、分析された３つの細胞型全てにおいてＣｐｄ．２７より高いＥＰＯ分泌を誘導した（最大１．８倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき３～８つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．２７と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【図28】Ｃｐｄ．３０、Ｃｐｄ．３１またはＣｐｄ．３２のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト胎児性腎細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）からのＩＮＳ分泌の誘導を示す図である。細胞は各０．６μｇ Ｃｐ．３０、Ｃｐｄ．３１またはＣｐｄ．３２をトランスフェクトされ、分泌されたＩＮＳは、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＮＳ分泌はＣｐｄ．３０に対して正規化された。Ｃｐｄ．３１および３２はＣｐｄ．３０より高いＩＮＳ分泌を誘導した（最大３．９倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき３～５つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．３０と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【図29】Ｃｐｄ．３３、Ｃｐｄ．３４またはＣｐｄ．３５のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト胎児性腎細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ、Ａ）、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２、Ｂ）、ヒト単球（ＴＨＰ－１、Ｃ）およびヒト肺癌細胞（Ａ５４９、Ｄ）からのＩＬ４分泌の誘導を示す図である。細胞は各０．５～０．６μｇ Ｃｐ．３３、Ｃｐｄ．３４またはＣｐｄ．３５をトランスフェクトされ、分泌されたＩＬ４は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＬ４分泌はＣｐｄ．３３に対して正規化された。Ｃｐｄ．３４および３５は、分析された３つの細胞型全てにおいてＣｐｄ．３３より高いＩＬ４分泌を誘導した。ｉｎ（最大２．２倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき３～８つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．３３と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【図30】Ｃｐｄ．３６、Ｃｐｄ．３７またはＣｐｄ．３８のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト胎児性腎細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ、Ａ）、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２、Ｂ）またはヒト単球（ＴＨＰ－１、Ｃ）からのＩＬ１０分泌の誘導を示す図である。細胞は各０．３～０．６μｇ Ｃｐ．３６、Ｃｐｄ．３７またはＣｐｄ．３８をトランスフェクトされ、分泌されたＩＬ１０は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＬ１０分泌はＣｐｄ．３６に対して正規化された。Ｃｐｄ．３７および３８は、分析された３つの細胞型全てにおいてＣｐｄ．３６より高いＩＬ１０分泌を誘導した（最大２．２倍）。データは、１Ｃｐｄ．につき４～８つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊＊、ｐ＜０．０１；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．３６と比較した個々のＣｐｄ．のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【図31】Ｃｐｄ．３９のｍＲＮＡトランスフェクションによる、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２、Ａ）およびヒト初代軟骨細胞（Ｂ）からのＩＧＦ－１分泌の誘導を示す図である。細胞は各０．３～０．６μｇ Ｃｐ．３９をトランスフェクトされ、分泌ＩＧＦ１は、特異的ＥＬＩＳＡを使用して２４時間後に細胞培養上清で測定された。ＩＧＦ１分泌はＣｐｄ．１に対して正規化された。Ｃｐｄ．３９は、分析された２つの細胞型全てにおいてＣｐｄ．１より高いＩＧＦ１分泌を誘導した（最大１．４倍）。データは、４～７つの複製物の平均±平均の標準誤差を表す。有意性（^＊＊、ｐ＜０．０１；^＊＊＊、＜０．００１）は、Ｃｐｄ．３９と比較した個々のＣｐｄ．１のスチューデントのｔ検定によって評価された。

【発明を実施するための形態】

【0010】

用語「ＲＮＡ」は、本明細書で使用される場合、アミノ酸配列をコードするＲＮＡ、加えて、アミノ酸配列をコードしないＲＮＡを含む。通常、本明細書で使用されるようなＲＮＡは、コードＲＮＡであり、すなわちアミノ酸配列をコードするＲＮＡである。このようなＲＮＡ分子はまた、ｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）とも称され、一本鎖ＲＮＡ分子である。したがって、用語「ＲＮＡ」は、本明細書で使用される場合、好ましくはｍＲＮＡを指す。ＲＮＡは、当業者公知の化学的および酵素的な合成手法によって、または組換え技術の使用によって作製してもよいし、または天然源から単離してもよいし、またはそれらの組合せであってもよい。ＲＮＡは、必要に応じて、天然にはない、および天然に存在するヌクレオシド修飾、例えば、本明細書ではメチルプソイドウリジンとも称されるＮ^１－メチルプソイドウリジンなどを含んでいてもよい。

【0011】

用語「ｍＲＮＡ」（すなわちメッセンジャーＲＮＡ）は、本明細書で使用される場合、主としてヌクレオシドとしてアデノシン、シチジン、ウリジンおよびグアノシンを含むヌクレオシドリン酸ビルディングブロックから構築され、タンパク質をコードするコード化領域を含有するポリマーを指す。本発明の文脈において、ｍＲＮＡは、細胞に入ると、タンパク質またはその断片の発現に好適であるか、またはタンパク質またはその断片に翻訳可能な、あらゆるポリリボヌクレオチド分子を意味することが理解されるものとする。タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む本発明のｍＲＮＡは、細胞に入ると、前記タンパク質またはその断片の発現および分泌を誘導するのに好適なポリリボヌクレオチド分子を意味することが理解されるものとする。本発明のｍＲＮＡは、人工核酸分子、すなわち人工ｍＲＮＡである。人工核酸分子、例えば人工ｍＲＮＡは、典型的には、組換えｍＲＮＡのように天然に存在しない核酸分子であると理解される場合がある。組換えｍＲＮＡは、本発明の好ましいｍＲＮＡである。ｍＲＮＡは、特に骨格筋損傷の治癒の状況で、細胞中または細胞の近くでのその機能が一般的に必要であるかまたは有益であるタンパク質またはその断片をコードするリボヌクレオチド配列を含有する。ｍＲＮＡは、完全なタンパク質またはその機能的な変異体の配列を含有していてもよい。したがって、完全なタンパク質のｍＲＮＡの核酸配列は通常、シグナルペプチドをコードする核酸配列およびタンパク質をコードする核酸配列を含む。本発明のｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む。タンパク質をコードする核酸配列は、必要に応じて、タンパク質のプロドメインを含んでいてもよく、プロドメインは通常、タンパク質のＮ末端に配置される。タンパク質およびシグナルペプチドは、通常、本発明のｍＲＮＡの核酸配列によって、５’から３’にｉ）シグナルペプチドおよびｉｉ）タンパク質の順番でコードされ、すなわちシグナルペプチドのコード化領域の最後のヌクレオシドに続いて、タンパク質のコード化領域の第１のヌクレオシドが存在するか、またはプロドメインを含むタンパク質のケースでは、タンパク質の前駆タンパク質の形態のコード化領域の第１のヌクレオシドが存在する。リボヌクレオチド配列は、因子、誘導物質、調節因子、刺激因子または酵素として作用するタンパク質、またはそれらの機能的な断片をコードすることができ、その場合、このタンパク質は、通常、その機能が障害、特に骨格筋損傷を改善するために必要であるものである。ここで、機能的な変異体は、細胞中で、細胞におけるその機能が必要とされるタンパク質の機能を担う可能性がある断片を意味すると理解される。加えて、ｍＲＮＡはまた、さらなる機能的な領域および／または３’または５’非コード化領域を有していてもよい。３’および／または５’非コード化領域は、例えば５’末端におけるｃａｐおよび／または３’末端におけるポリＡテールのような、タンパク質コード化配列または人工配列に天然に隣接する、ＲＮＡの安定化に寄与する領域であってもよい。当業者は、それぞれのケースにおいて慣例的な実験によって、これに好適な配列を決定することができる。ｍＲＮＡを転写するのに使用されるｍＲＮＡまたはＤＮＡは、コドン最適化されていてもよい。好ましくは、本発明のｍＲＮＡを転写するための本発明で使用されるＤＮＡおよび本発明のｍＲＮＡは、コドン最適化されている。一般的に、コドン最適化は、ネイティブのアミノ酸配列を維持しながら、ネイティブの配列の少なくとも１つのコドン（例えば１つより多く、２つより多く、３つより多く、４つより多く、５つより多く、１０個より多く、１５個より多く、２０個より多く、２５個より多く、５０個より多く、またはそれより多くのコドン）を、その宿主細胞の遺伝子においてより頻繁に、または最も高い頻度で使用されるコドンで置き換えることによって、目的の宿主細胞における発現のために核酸配列を修飾するプロセスを指す。コドン出現頻度表は、例えば、「コドン出現頻度データベース」で容易に入手可能であり、これらの表は、様々な方法で適合させることができる。特定の宿主細胞での発現のために特定の配列をコドン最適化するためのコンピューターアルゴリズム、例えばＧｅｎｅ Ｆｏｒｇｅ（登録商標）（Ａｐｔａｇｅｎ、ＰＡ）およびＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、ＭＡ）も利用可能であり、これらは好ましい。

【0012】

用語「裸のＲＮＡ」は、本明細書で使用される場合、いずれの種類の他の化合物、特にタンパク質、ペプチド、カチオン性ポリマーのようなポリマー、脂質、リポソーム、ウイルスベクターなどに複合体化されていないＲＮＡを指す。したがって、「裸のＲＮＡ」は、ＲＮＡが、例えば液体組成物中に、溶液中に分子として分散された遊離の複合体化されていない形態で存在することを意味する。例えば、「裸のＲＮＡ」が、脂質および／またはポリマー担体系（例えば、脂質ナノ粒子およびミセル）／トランスフェクション試薬、例えば、ＤｒｅａｍＦｅｃｔ（商標）Ｇｏｌｄまたは（分岐）ＰＥＩなどと複合体化されていることは想定されない。したがって、本発明の治療用組成物のようなｍＲＮＡを含む組成物は、例えば、例えば、ＤｒｅａｍＦｅｃｔ（商標）Ｇｏｌｄまたは（分岐）ＰＥＩなどの脂質および／またはポリマー担体系トランスフェクション試薬を含有しない。

【0013】

用語「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」および「ヌクレオチド酸（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｃｉｄ）配列」は、本明細書において同義的に使用され、本明細書において同一な意味を有し、好ましくはＤＮＡまたはＲＮＡを指す。用語「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」および「ヌクレオチド酸配列」は、好ましくは、用語「ポリヌクレオチド配列」と同義として使用される。好ましくは、核酸配列は、糖／リン酸－骨格のリン酸のジエステル結合によって互いに共有結合で連結されたヌクレオチド単量体を含むかまたはそれからなるポリマーである。用語「核酸配列」はまた、修飾された核酸配列、例えば塩基が修飾された、糖が修飾された、または骨格が修飾された等のＤＮＡまたはＲＮＡも包含する。

【0014】

用語「オープンリーディングフレーム」は、本明細書で使用される場合、ペプチドまたはタンパク質に翻訳が可能な、数個のヌクレオチドの三つ組みの配列を指す。オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、好ましくは、その５’末端に、開始コドン、すなわち通常アミノ酸のメチオニン（ＡＴＧ）をコードする３つの連続するヌクレオチドの組合せと、それに続く、通常、複数の３つのヌクレオチドにあたる長さを示す領域を含有する。ＯＲＦは、好ましくは停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、ＴＧＡ）で終わる。これは、典型的には、オープンリーディングフレームの唯一の停止コドンである。したがって、オープンリーディングフレームは、本発明の文脈において、好ましくは、３で割ることができる数のヌクレオチドからなり、開始コドン（例えばＡＴＧ）から始まり、好ましくは停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＧＡ、またはＴＡＧ）で終わる核酸配列である。オープンリーディングフレームは、単離されていてもよいし、またはより長い核酸配列に、例えばベクターまたはｍＲＮＡに取り込まれていてもよい。オープンリーディングフレームはまた、「（タンパク質）コード化領域」、または好ましくは「コード配列」と呼ばれることもある。

【0015】

用語「シグナルペプチド」はまた、本明細書において、シグナル伝達ペプチド、プレドメイン、シグナル配列、標的化シグナル、局在化シグナル、局在化配列、トランジットペプチド（ｔｒａｎｓｉｔ ｐｅｐｔｉｄｅ）、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称され、これらは、分泌経路に向かうことが定められている新たに合成されたタンパク質のＮ末端に存在する短いペプチド（通常、長さ１６～４０アミノ酸）である。本発明のシグナルペプチドは、長さが、好ましくは１０～５０、より好ましくは１１～４５、さらにより好ましくは１２～４５、最も好ましくは１３～４５、特に１４～４５、より特に１５～４５、さらにより特に１６～４０アミノ酸である。本発明によるシグナルペプチドは、目的のタンパク質のＮ末端に、または目的のタンパク質の前駆タンパク質の形態のＮ末端に位置する。本発明によるシグナルペプチドを使用して、目的のタンパク質は、少なくとも、その天然の（相同な）シグナルペプチドを使用して分泌された前記タンパク質の量に等しい量で、好ましくはそれより多くの量で分泌され得る。本発明によるシグナルペプチドは、通常、真核生物起源であり、例えば真核生物タンパク質のシグナルペプチドであり、好ましくは哺乳類起源であり、例えば哺乳類タンパク質のシグナルペプチドであり、より好ましくはヒト起源であり、例えば哺乳類タンパク質のシグナルペプチドである。一部の実施形態において、修飾しようとする異種シグナルペプチドおよび／または相同なシグナルペプチドは、真核生物タンパク質の天然に存在するシグナルペプチド、好ましくは哺乳類タンパク質の天然に存在するシグナルペプチド、より好ましくはヒトタンパク質の天然に存在するシグナルペプチドである。

【0016】

用語「タンパク質」は、本明細書で使用される場合、典型的には１つまたは複数のペプチドまたはポリペプチドを含む分子を指す。ペプチドまたはポリペプチドは、典型的には、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸残基の鎖である。ペプチドは、通常、２～５０アミノ酸残基を含む。ポリペプチドは、通常、５０個より多くのアミノ酸残基を含む。タンパク質は、典型的には、３次元の形態に折り畳まれており、これは、タンパク質の生物学的機能を働かせるのに必要な場合がある。用語「タンパク質」は、本明細書で使用される場合、タンパク質および融合タンパク質の断片を含む。好ましくは、タンパク質は、哺乳類由来であり、より好ましくはヒト起源であり、すなわちヒトタンパク質である。好ましくは、タンパク質は、通常、細胞から分泌されるタンパク質であり、すなわち自然状態で細胞から分泌されるタンパク質である。本明細書で言及されるタンパク質は、通常、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される。

【0017】

カルボキシペプチダーゼは、タンパク質のカルボキシ末端（Ｃ末端）でペプチド結合を加水分解する（切断する）プロテアーゼ酵素であるタンパク質である；サイトカインは、しばしば免疫学的な反応に関与するその表面上の受容体を介した標的細胞のシグナル伝達のモジュレーターとして、分泌され、局所的または全身的のいずれかで作用するタンパク質である；細胞外のリガンドおよび輸送体は、分泌され、他のタンパク質への結合を介して作用するか、または特定の生物学的機能を働かせるために他のタンパク質または他の分子を有するタンパク質である；細胞外マトリックスタンパク質は、周囲の細胞に構造的および生化学的な支持体を提供する支持細胞によって分泌されるタンパク質の一群である；グルコシダーゼは、デンプンやグリコーゲンなどの複合炭水化物をそれらの単量体に分解することに関与する酵素である；グリコシルトランスフェラーゼは、天然のグリコシド結合を生じさせる酵素である；増殖因子は、しばしば栄養性反応および生存または細胞ホメオスタシスのシグナル伝達に関与する、その表面上の受容体を介した標的細胞のシグナル伝達のモジュレーターとして局所的または全身的のいずれかで作用する、細胞成長、増殖、治癒、および細胞分化を刺激することが可能な分泌タンパク質である；増殖因子結合タンパク質は、増殖因子に結合し、それによってその生物学的活性をモジュレートする分泌タンパク質である；ヘパリン結合タンパク質は、ヘパリンと相互作用して、しばしば増殖因子またはホルモンへの別の結合と連携してその生物学的機能をモジュレートする分泌タンパク質である；ホルモンは、多細胞生物における腺によって生産されるシグナル伝達分子のクラスのメンバーであって、分泌され、循環系によって標的の遠隔臓器に輸送されて、その標的細胞上の特異的な受容体への結合を介して生理機能と挙動を制御するものである；ヒドロラーゼは、化学結合を破断するのに水を利用することによって分子切断を生化学的に触媒し、結果としてより大きい分子のより小さい分子への分裂を引き起こす酵素のクラスである；免疫グロブリンは、主として形質細胞によって生産された大きいＹ型の分泌タンパク質であり、病原菌やウイルスなどの病原体を中和するために免疫系によって使用される；イソメラーゼは、ある異性体から別のものに分子を変換する酵素の一般的なクラスであり、それによって結合が破壊および形成される分子内の再配列が容易になる；キナーゼは、高エネルギーのリン酸供与分子から特異的な基質へのリン酸基の移動を触媒する酵素である；リアーゼは、加水分解および酸化以外の手段によって様々な化学結合の破壊を触媒し、しばしば新しい二重結合または新しい環構造を形成する酵素である；金属酵素阻害剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の細胞阻害剤である；メタロプロテアーゼは、その触媒メカニズムが金属イオンを含むプロテアーゼ酵素である；乳タンパク質は、乳汁に分泌されるタンパク質である；神経刺激性タンパク質は、ニューロンの機能、生存および生理機能を維持するために、局所的かまたは距離を介するかのいずれかで作用する分泌タンパク質である；プロテアーゼ（ペプチダーゼまたはプロテイナーゼとも呼ばれる）は、ペプチド結合の加水分解によってタンパク質分解を実行する酵素である；プロテアーゼ阻害剤は、プロテアーゼの機能を阻害するタンパク質である；タンパク質ホスファターゼは、その基質タンパク質のリン酸化されたアミノ酸残基からリン酸基を除去する酵素である；エステラーゼは、アミノ酸残基での水との化学反応においてエステルを酸とアルコールに分ける酵素である；トランスフェラーゼは、一方の分子（ドナーと呼ばれる）から他方（アクセプターと呼ばれる）への特異的な官能基（例えばメチルまたはグリコシル基）の移動を触媒する酵素のクラスである；血管作動性タンパク質は、血管の機能に生物学的に影響を与える分泌タンパク質である。本明細書で言及される、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースに見出すことができる。

【0018】

用語「断片」または「配列の断片」は、本明細書において同一な意味を有し、例えばＤＮＡまたはＲＮＡのような核酸分子またはタンパク質の全長配列のより短い部分である。したがって、断片は、典型的には、全長配列内の対応するストレッチに同一な配列を含むかまたはそれからなる。本発明の文脈における好ましい配列の断片は、断片の由来となる分子中の実体の連続的なストレッチに対応するヌクレオチドまたはアミノ酸などの実体の連続的なストレッチを含むかまたはそれからなり、断片の由来となる総（すなわち全長）分子の、少なくとも５％、通常少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、最も好ましくは少なくとも８０％を表す。

【0019】

用語「前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、タンパク質の天然に存在するシグナルペプチドと異なる天然に存在するシグナルペプチドを指し、すなわちシグナルペプチドは、タンパク質の同じ遺伝子由来ではない。通常、所与のタンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、別のタンパク質由来のシグナルペプチドであり、所与のタンパク質に関連しない別のタンパク質由来のシグナルペプチド、すなわち、所与のタンパク質のシグナルペプチドとは異なるアミノ酸配列を有する、例えば、所与のタンパク質のシグナルペプチドとは、５０％より多く、好ましくは６０％より多く、より好ましくは７０％より多く、さらにより好ましくは８０％より多く、最も好ましくは９０％より多く、特に９５％より多くが異なるアミノ酸配列を有する、別のタンパク質由来のシグナルペプチドである。好ましくは、所与のタンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、９５％未満、好ましくは９０％未満、より好ましくは８０％未満、さらにより好ましくは７０％未満、最も好ましくは６０％未満、特に５０％未満の、所与のタンパク質の天然に存在する（相同な）シグナルペプチドのアミノ酸配列との配列同一性を有する。異種配列は、同じ生物体から得られる可能性があるが、これらは、天然に（自然状態で）、同じ核酸分子で、例えば同じｍＲＮＡで発生しない。タンパク質にとって異種のシグナルペプチドおよびタンパク質にとってシグナルペプチドが異種であるタンパク質は、同一または異なる起源由来であってもよく、通常、同じ起源由来であり、好ましくは真核生物起源、より好ましくは同じ真核生物の真核生物起源、さらにより好ましくは哺乳類起源、特に同じ哺乳類生物体の哺乳類起源、より一層特にヒト起源由来である。実施例１において、ヒトＢＤＮＦシグナルペプチドおよびヒトＩＧＦ１、すなわちタンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、シグナルペプチドおよびタンパク質が同じ起源由来である、すなわちヒト起源由来であるものが、開示されている。

【0020】

用語「前記タンパク質に相同なシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、タンパク質の天然に存在するシグナルペプチドを指す。タンパク質に相同なシグナルペプチドは、それが自然状態で存在する状態のままのタンパク質の遺伝子によってコードされるシグナルペプチドである。タンパク質に相同なシグナルペプチドは、通常、真核生物起源であり、例えば真核生物タンパク質の天然に存在するシグナルペプチドであり、好ましくは哺乳類起源であり、例えば哺乳類タンパク質の天然に存在するシグナルペプチドであり、より好ましくはヒト起源であり、例えばヒトタンパク質の天然に存在するシグナルペプチドである。

【0021】

用語「自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない、天然に存在するアミノ酸配列」は、本明細書で使用される場合、自然状態で存在し、自然状態で存在するいずれのシグナルペプチドのアミノ酸配列にも同一ではないアミノ酸配列を指す。本発明で言及される自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列は、長さが、好ましくは１０～５０、より好ましくは１１～４５、さらにより好ましくは１２～４５、最も好ましくは１３～４５、特に１４～４５、より特に１５～４５、さらにより特に１６～４０アミノ酸である。好ましくは、本発明の自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列は、真核生物起源由来であり、真核生物起源のいずれのシグナルペプチドにも同一ではなく、より好ましくは、哺乳類起源由来であり、哺乳類起源のいずれのシグナルペプチドにも同一ではなく、より好ましくは、ヒト起源由来であり、自然状態で存在するヒト起源のいずれのシグナルペプチドにも同一ではない。自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列は、通常、タンパク質のコード配列のアミノ酸配列である。本発明による自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列は、通常、真核生物起源由来であり、好ましくは哺乳類起源由来、より好ましくはヒト起源由来である。

【0022】

用語「天然に存在する」、「天然」および「自然状態で」は、本明細書で使用される場合、同等の意味を有する。

【0023】

用語「シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９」は、本明細書で使用される場合、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端の、最初の９つのアミノ酸を指す。同じように、用語「シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７」は、本明細書で使用される場合、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端の最初の７つのアミノ酸を指し、用語「シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５」は、本明細書で使用される場合、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端の最初の５つのアミノ酸を指す。

【0024】

用語「少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されたアミノ酸配列」は、本明細書で使用される場合、アミノ酸配列内に少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を含むアミノ酸配列を指す。用語「前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている」は、本明細書で使用される場合、その天然に存在するアミノ酸配列内に少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を含むタンパク質にとって異種の天然に存在するシグナルペプチドのアミノ酸配列を指す。用語「前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている」は、本明細書で使用される場合、その天然に存在するアミノ酸配列内に少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を含むタンパク質に相同な天然に存在するシグナルペプチドを指す。用語「天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている」は、その天然に存在するアミノ酸配列内に少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を含む天然に存在するアミノ酸配列を指す。「アミノ酸置換」または「置換」は、本明細書において、親タンパク質配列の特定の位置におけるアミノ酸の別のアミノ酸での置き換えを意味する。例えば、置換Ｒ３４Ｋは、３４位のアルギニンがリシンで置き換えられているポリペプチドを指す。前述の例について、３４Ｋは、３４位のリシンでの置換を示す。本明細書に記載の目的のために、複数の置換は、典型的にはスラッシュで区切られる。例えば、Ｒ３４Ｋ／Ｌ７８Ｖは、置換Ｒ３４ＫおよびＬ３８Ｖを含む二重変異体を指す。「アミノ酸挿入」または「挿入」は、本明細書で使用される場合、親タンパク質配列中の特定の位置におけるアミノ酸の付加を意味する。例えば、挿入－３４は、３４位における挿入を表す。「アミノ酸欠失」または「欠失」は、本明細書で使用される場合、親タンパク質配列中の特定の位置におけるアミノ酸の除去を意味する。例えば、Ｒ３４－は、３４位のアルギニンの欠失を表す。

【0025】

好ましくは、欠失したアミノ酸は、－０．８未満、好ましくは１．９未満の疎水性スコアを有するアミノ酸である。好ましくは、置換アミノ酸は、置換されたアミノ酸の疎水性スコアより高い疎水性スコアを有するアミノ酸であり、より好ましくは、置換アミノ酸は、２．８以上の疎水性スコアを有し、より好ましくは３．８以上の疎水性スコアを有するアミノ酸である。好ましくは、挿入されたアミノ酸は、２．８以上の疎水性スコアを有する、より好ましくは３．８以上の疎水性スコアを有するアミノ酸である。

【0026】

所与のアミノ酸配列の、通常１～１５、好ましくは１～１１アミノ酸、より好ましくは１～１０アミノ酸、さらにより好ましくは１～９アミノ酸、特に１～８アミノ酸、より特に１～７アミノ酸、さらにより特に１～６アミノ酸、特に好ましくは１～５アミノ酸、さらに特に好ましくは１～４アミノ酸、さらにさらに特に好ましくは１～２アミノ酸が、挿入、欠失および／または置換されている。所与のアミノ酸配列の、通常１～１５、好ましくは１～１１アミノ酸、より好ましくは１～１０アミノ酸、さらにより好ましくは１～９アミノ酸、特に１～８アミノ酸、より特に１～７アミノ酸、さらにより特に１～６アミノ酸、特に好ましくは１～５アミノ酸、さらに特に好ましくは１～４アミノ酸、より一層特に好ましくは１～２アミノ酸が、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端の、通常アミノ酸１～１１の範囲内で、好ましくはアミノ酸１～１０の範囲内で、より好ましくはアミノ酸１～９の範囲内で、さらにより好ましくはアミノ酸１～８の範囲内で、特にアミノ酸１～７の範囲内で、より特にアミノ酸１～６の範囲内で、さらにより特にアミノ酸１～５の範囲内で、特に好ましくはアミノ酸１～４の範囲内で、さらに特に好ましくはアミノ酸１～３の範囲内で、より一層特に好ましくはアミノ酸１～２の範囲内で、挿入、欠失しおよび／または置換されている。

【0027】

好ましくは、アミノ酸配列は、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の欠失および／または置換によって修飾されている。

【0028】

好ましくは、修飾されたシグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端の最初の９つのアミノ酸の平均疎水性スコアは、修飾を含まないシグナルペプチドと比較して１．０単位またはそれより多く増加している。

【0029】

用語「インスリン様成長因子１」、「インスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）」または「ＩＧＦ１」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さず、プロペプチドおよび／またはＥペプチドを含んでいてもよいＩＧＦ１タンパク質の天然配列を指し、好ましくは、シグナル伝達ペプチドを有さず、Ｅペプチドを有さないＩＧＦ１タンパク質の天然配列を指す。用語「ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０５０１９およびＧｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００６１８．４、ＮＭ＿００１１１１２８５．２およびＮＭ＿００１１１１２８３．２と称されるヒトＩＧＦ１の天然配列（プロＩＧＦ１）、またはそれらの断片を指す。ヒトインスリン様成長因子１をコードする天然ＤＮＡ配列は、コドン最適化されていてもよい。ヒトＩＧＦ１の天然配列は、２１アミノ酸（ヌクレオチド１～６３）を有するヒトシグナル伝達ペプチド、２７アミノ酸（ヌクレオチド６４～１４４）を有するヒトプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）、７０アミノ酸（ヌクレオチド１４５～３５４）を有する成熟ヒトＩＧＦ１およびいわゆるＥペプチド（またはＥドメイン）であるヒトＩＧＦ１のＣ末端ドメインを含むかまたはそれからなる。ヒトＩＧＦ１のＣ末端ドメイン（いわゆるＥペプチドまたはＥドメイン）は、オルタナティブスプライシング事象によって生成されるＥａ、ＥｂまたはＥｃドメインを含む。Ｅａドメインは、３５アミノ酸（１０５ヌクレオチド）を含むかまたはそれからなり、Ｅｂドメインは、７７アミノ酸（２３１ヌクレオチド）を含むかまたはそれからなる、Ｅｃドメインは、４０アミノ酸（１２０ヌクレオチド）を含むかまたはそれからなる（例えばＷａｌｌｉｓ Ｍ（２００９）Ｎｅｗ インスリン－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＩＧＦ）－ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｇｅｎｏｍｅｓ：ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ＩＧＦｓ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｔｅｓ．Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍ ＩＧＦ Ｒｅｓ １９（１）：１２－２３．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｇｈｉｒ．２００８．０５．００１を参照）。用語「ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ）」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さず、プロペプチドおよび／またはＥペプチドを含んでいてもよいヒトＩＧＦ１タンパク質の天然配列を指し、好ましくは、シグナル伝達ペプチドを有さず、Ｅペプチドを有さないヒトＩＧＦ１タンパク質の天然配列を指す。用語「ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ）」は、本明細書で使用される場合、通常、成熟ヒトＩＧＦ１を含む。用語「成熟タンパク質」は、タンパク質を発現および分泌する細胞において、小胞体で合成され、ゴルジ体を介して分泌されるタンパク質を指す。用語「成熟ＩＧＦ１」は、ＩＧＦ１を発現および分泌する細胞において、小胞体で合成され、ゴルジ体を介して分泌されるタンパク質を指す。用語「成熟ヒトＩＧＦＩ」は、ヒトＩＧＦ１を発現および分泌するヒト細胞において、小胞体で合成され、ゴルジ体を介して分泌されるタンパク質を指し、通常、配列番号３９で示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸を含有する。

【0030】

用語「インスリン」または「ＩＮＳ」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さないインスリンの天然配列を指す。用語「ヒトインスリン」または「ヒトＩＮＳ」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０１３０８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００２０７．２、ＮＭ＿００１１８５０９７．１、ＮＭ＿００１１８５０９８．１およびＮＭ＿００１２９１８９７．１と称されるヒトインスリンの天然配列、またはそれらの断片を指す。ヒトインスリンをコードする天然ＤＮＡ配列は、コドン最適化されていてもよい。ヒトインスリンの天然配列は、２４アミノ酸（ヌクレオチド１～７２）を有するヒトシグナル伝達ペプチド、３０アミノ酸（ヌクレオチド７３～１６３）を有するヒトインスリンＢ鎖、３１アミノ酸（ヌクレオチド６４～１４４）を有するヒトインスリンプロペプチド（結合ペプチド、すなわちＣペプチドとも呼ばれる）、および２１アミノ酸（ヌクレオチド６４～１４４）を含むかまたはそれからなるヒトインスリンＡ鎖のＣ末端ドメインを含むかまたはそれからなる。用語「ヒトインスリン」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さないヒトインスリンを含む。

【0031】

用語「エリスロポエチン」、「ＥＰＯ」または「Ｅｐｏ」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さないＥＰＯの天然配列を指す。用語「ヒトエリスロポエチン」、「ヒトＥＰＯ」または「ヒトＥｐｏ」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０１５８８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００７９９．２と称されるヒトエリスロポエチンの天然配列、またはそれらの断片を指す。ヒトエリスロポエチンをコードする天然ＤＮＡ配列は、コドン最適化されていてもよい。ヒトエリスロポエチンの天然配列は、２７アミノ酸（ヌクレオチド１～８１）を有するヒトシグナル伝達ペプチド、１６６アミノ酸（ヌクレオチド８２～５７９）を有するヒトＥｐｏをコードする鎖を含むかまたはそれからなる。用語「ヒトエリスロポエチン」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さないヒトＥＰＯを含む。

【0032】

用語「インターロイキン－４」または「ＩＬ４」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さないＩＬ４の天然配列を指す。用語「ヒトインターロイキン－４」または「ヒトＩＬ４」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０５１１２と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００５８９．３およびＮＭ＿１７２３４８．２と称されるヒトＩＬ４の天然配列、またはそれらの断片を指す。ヒトＩＬ４をコードする天然ＤＮＡ配列は、コドン最適化されていてもよい。ヒトＩＬ４の天然配列は、２４アミノ酸（ヌクレオチド１～７２）を有するヒトシグナル伝達ペプチド、１２９アミノ酸（ヌクレオチド７３～３８７）を有するヒトＩＬ４をコードする鎖を含むかまたはそれからなる。用語「ヒトＩＬ４」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さないヒトＩＬ４を含む。

【0033】

用語「インターロイキン－１０」または「ＩＬ１０」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さないＩＬ１０の天然配列を指す。用語「ヒトインターロイキン－１０」または「ヒトＩＬ１０」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２２３０１と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００５７２．２と称されるヒトＩＬ１０の天然配列またはそれらの断片を指す。ヒトＩＬ１０をコードする天然ＤＮＡ配列は、コドン最適化されていてもよい。ヒトＩＬ１０の天然配列は、１８アミノ酸（ヌクレオチド１～５４）を有するヒトシグナル伝達ペプチド、１６０アミノ酸（ヌクレオチド５５～５３４）を有するヒトＩＬ１０をコードする鎖を含むかまたはそれからなる。用語「ヒトＩＬ１０」は、本明細書で使用される場合、通常、シグナル伝達ペプチドを有さないヒトＩＬ１０を含む。

【0034】

用語「インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のシグナルペプチド」または「ＩＧＦ１のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０５０１９と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００６１８．４、ＮＭ＿００１１１１２８４．１およびＮＭ＿００１１１１２８５．２と称され、好ましくは配列番号２４で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号２５で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＩＧＦ１の天然シグナルペプチドを指す。

【0035】

用語「インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド」または「ＩＧＦ２のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０１３４４と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００６１２．５、ＮＭ＿００１００７１３９．５、ＮＭ＿００１１２７５９８．２、ＮＭ＿００１２９１８６１．２およびＮＭ＿００１２９１８６２．２と称され、好ましくは配列番号２６で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号２７で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＩＧＦ２の天然シグナルペプチドを指す。

【0036】

用語「血清アルブミン（ＡＬＢ）のシグナルペプチド」または「ＡＬＢのシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０２７６８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００４７７．６と称され、好ましくは配列番号２８で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号２９で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＡＬＢの天然シグナルペプチドを指す。

【0037】

用語「脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）」または「ＢＤＮＦのシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ２３５６０と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００１１４３８０５．１、ＮＭ＿１７０７３１．４、ＮＭ＿１７０７３４．３、ＮＭ＿００１１４３８１０．１およびＮＭ＿００１１４３８０９．１と称され、好ましくは配列番号３０で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号３１で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＢＤＮＦの天然シグナルペプチドを指す。

【0038】

用語「間質細胞由来因子－１（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド」または「ＣＸＣＬ１２のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ４８０６１と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００６０９．６、ＮＭ＿００１０３３８８６．２、ＮＭ＿００１１７８１３４．１、ＮＭ＿００１２７７９９０．１およびＮＭ＿１９９１６８．３と称され、好ましくは配列番号３２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号３３で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＣＸＣＬ１２の天然シグナルペプチドを指す。

【0039】

用語「合成シグナル伝達ペプチド１（合成ｓｅｑ１）のシグナルペプチド」または「合成ｓｅｑ１のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、合成シグナルペプチド１であって、配列番号３４で示されるアミノ酸配列を有するか、および／または配列番号３５で示されるＤＮＡ配列によってコードされるものを指す。

【0040】

用語「合成シグナル伝達ペプチド２（合成ｓｅｑ２）のシグナルペプチド」または「合成ｓｅｑ１のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、合成シグナルペプチド１であって、配列番号３６で示されるアミノ酸配列を有するか、および／または配列番号３７で示されるＤＮＡ配列によってコードされるものを指す。

【0041】

用語「潜在型トランスフォーミング増殖因子ベータ結合タンパク質２（ＬＴＢＰ２）のシグナルペプチド」または「ＬＴＢＰ２のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｑ１４７６７と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００４２８．２と称され、好ましくは配列番号４１で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号４２で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＬＴＢＰ２の天然シグナルペプチドを指す。

【0042】

用語「インスリン様成長因子結合タンパク質複合体の酸不安定性サブユニット（ＩＧＦＡＬＳ）のシグナルペプチド」または「ＩＧＦＡＬＳのシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ３５８５８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００１１４６００６．１およびＮＭ＿００４９７０．２と称され、好ましくは配列番号４６で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号４７で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＩＧＦＡＬＳの天然シグナルペプチドを指す。

【0043】

用語「インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド」または「ＩＮＳのシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ１３０８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００１１８５０９７．１、ＮＭ＿０００２０７．２、ＮＭ＿００１１８５０９８．１およびＮＭ＿００１２９１８９７．１と称され、好ましくは配列番号５１で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号５２で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＩＮＳの天然シグナルペプチドを指す。

【0044】

用語「エリスロポエチン（Ｅｐｏ）のシグナルペプチド」または「Ｅｐｏのシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０１５８８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００７９９．２と称され、好ましくは配列番号５６で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号５７で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＥｐｏの天然シグナルペプチドを指す。

【0045】

用語「顆粒球コロニー刺激因子（ＣＳＦ３）のシグナルペプチド」または「ＣＳＦ３のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０９９１９と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００７５９．３、ＮＭ＿００１１７８１４７．１、ＮＭ＿１７２２１９．２およびＮＭ＿１７２２２０．２と称され、好ましくは配列番号６１で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号６２で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＣＳＦ３の天然シグナルペプチドを指す。

【0046】

用語「ベータ－神経成長因子（ＮＧＦ）のシグナルペプチド」または「ＮＧＦのシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０１１３８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００２５０６．２およびＸＭ＿００６７１０６６３．３と称され、好ましくは配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号６７で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＮＧＦの天然シグナルペプチドを指す。

【0047】

用語「インターロイキン－４（ＩＬ４）のシグナルペプチド」または「ＩＬ４のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０５１１２と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００５８９．３およびＮＭ＿１７２３４８．２と称され、好ましくは配列番号７７で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号７８で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＩＬ４の天然シグナルペプチドを指す。

【0048】

用語「インターロイキン－１０（ＩＬ１０）のシグナルペプチド」または「ＩＬ１０のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ２２３０１と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００５７２．２と称され、好ましくは配列番号８２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号８３で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＩＬ１０の天然シグナルペプチドを指す。

【0049】

用語「線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド」または「ＦＧＦ５のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ１２０３４と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００４４６４．３およびＮＭ＿０３３１４３．２と称され、好ましくは配列番号８７で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号８８または配列番号１８３で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＦＧＦ５の天然シグナルペプチドを指す。

【0050】

用語「補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチド」または「ＦＨＲ２のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ３６９８０と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００１３１２６７２．１およびＮＭ＿００５６６６．３と称され、好ましくは配列番号９２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号９３で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＦＨＲ２の天然シグナルペプチドを指す。

【0051】

用語「インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド」または「ＩＢＰ５のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ２４５９３と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００１３１２６７２．１およびＮＭ＿０００５９９．３と称され、好ましくは配列番号９７で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号９８で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＩＢＰ５の天然シグナルペプチドを指す。

【0052】

用語「ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ３）のシグナルペプチド」または「ＮＴＦ３のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ２０７８３と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００２５２７．４、ＸＭ＿０１１５２０９６３．２およびＮＭ＿００１１０２６５４．１と称され、好ましくは配列番号１０２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１０３で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＮＴＦ３の天然シグナルペプチドを指す。

【0053】

用語「前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド」または「ＰＡＴＥ２のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｑ６ＵＹ２７と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿２１２５５５．２と称され、好ましくは配列番号１０７で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１０８で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＰＡＴＥ２の天然シグナルペプチドを指す。

【0054】

用語「細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド」または「ＳＯＤ３のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０８２９４と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００３１０２．２と称され、好ましくは配列番号１１２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１１３で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＳＯＤ３の天然シグナルペプチドを指す。

【0055】

用語「グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列」または「ＧＬ－Ｒのコード配列」は、本明細書で使用される場合、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ４７８７１と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００１６０．４およびＸＭ＿００６７２２２７７．１と称され、好ましくは配列番号１１７で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１１８で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＧＬ－Ｒのコード鎖を指す。

【0056】

用語「インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のシグナルペプチドの修飾型」、「ＩＧＦ１のシグナルペプチドの修飾型」または「修飾されたＩＧＦ１のシグナルペプチド」は、本明細書で使用される場合、ＩＧＦ１の修飾されたシグナルペプチドであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０５０１９と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００６１８．４、ＮＭ＿００１１１１２８４．１およびＮＭ＿００１１１１２８５．２と称され、置換Ｇ２Ｌ／Ｓ５Ｌ／Ｔ９Ｌ／Ｑ１０Ｌおよび欠失Ｋ３－およびＣ１５－によって修飾されており、好ましくは配列番号１２２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１２３で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＩＧＦ１の天然シグナルペプチドを指す。

【0057】

用語「インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチドの修飾型」、「ＩＧＦ２の修飾されたシグナルペプチド」または「ＩＧＦ２のシグナルペプチドの修飾型」は、本明細書で使用される場合、ＩＧＦ２の修飾されたシグナルペプチドであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０１３４４と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００６１２．５、ＮＭ＿００１００７１３９．５、ＮＭ＿００１１２７５９８．２、ＮＭ＿００１２９１８６１．２およびＮＭ＿００１２９１８６２．２と称され、置換Ｇ２Ｌ／Ｇ６Ｌ／Ｋ７Ｌ／Ｓ８Ｌおよび欠失Ｐ４－、Ｍ５－、Ｉ２３－およびＡ２４－によって修飾されており、好ましくは配列番号１２７で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１２８で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＩＧＦ２の天然シグナルペプチドは、を指す。

【0058】

用語「間質細胞由来因子－１（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチドの修飾型」、「ＣＸＣＬ１２の修飾されたシグナルペプチド」または「ＣＸＣＬ１２のシグナルペプチドの修飾型」は、本明細書で使用される場合、ＣＸＣＬ１２の修飾されたシグナルペプチドであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ４８０６１と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００６０９．６、ＮＭ＿００１０３３８８６．２、ＮＭ＿００１１７８１３４．１、ＮＭ＿００１２７７９９０．１およびＮＭ＿１９９１６８．３と称され、欠失Ｎ３－およびＫ５－によって修飾されており、好ましくは配列番号１３２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１３３で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＸＣＬ１２の天然シグナルペプチドを指す。

【0059】

用語「インターロイキン－４（ＩＬ４）のシグナルペプチドの修飾型」、「ＩＬ４の修飾されたシグナルペプチド」または「ＩＬ４のシグナルペプチドの修飾型」は、本明細書で使用される場合、ＩＬ４の修飾されたシグナルペプチドであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０５１１２と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００５８９．３およびＮＭ＿１７２３４８．２と称され、欠失Ｇ２－、Ｔ４－、Ｓ５－およびＱ６－によって修飾されており、好ましくは配列番号１６６で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１６７で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＩＬ４の天然シグナルペプチドを指す。

【0060】

用語「インターロイキン－１０（ＩＬ１０）のシグナルペプチドの修飾型」、「ＩＬ１０の修飾されたシグナルペプチド」または「ＩＬ１０のシグナルペプチドの修飾型」は、本明細書で使用される場合、ＩＬ１０の修飾されたシグナルペプチドであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ２２３０１と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００５７２．２と称され、置換Ｈ２Ｖ／Ｓ３Ｌ／Ｓ４ＬおよびＳ８Ｌによって修飾されており、好ましくは配列番号１７４で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１７５で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＩＬ１０の天然シグナルペプチドを指す。

【0061】

用語「インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチドの修飾型」、「ＩＮＳの修飾されたシグナルペプチド」または「ＩＮＳのシグナルペプチドの修飾型」は、本明細書で使用される場合、ＩＮＳの修飾されたシグナルペプチドであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ１３０８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００１１８５０９７．１、ＮＭ＿０００２０７．２、ＮＭ＿００１１８５０９８．１およびＮＭ＿００１２９１８９７．１と称され、欠失Ｍ５－およびＲ６－によって修飾されており、好ましくは配列番号１４７で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１４８または配列番号１８２で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＩＮＳの天然シグナルペプチドを指す。

【0062】

用語「脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドの修飾型」、「ＢＤＮＦの修飾されたシグナルペプチド」または「ＢＤＮＦのシグナルペプチドの修飾型」は、本明細書で使用される場合、ＢＤＮＦの修飾されたシグナルペプチドであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ２３５６０と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００１１４３８０５．１、ＮＭ＿１７０７３１．４、ＮＭ＿１７０７３４．３、ＮＭ＿００１１４３８１０．１およびＮＭ＿００１１４３８０９．１と称され、置換Ｔ２Ｌ／Ｔ７ＬおよびＳ１１Ｌによって修飾されており、好ましくは配列番号１３７で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１３８で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＢＤＮＦの天然シグナルペプチドを指す。

【0063】

用語「エリスロポエチン（Ｅｐｏ）のシグナルペプチドの修飾型」、「Ｅｐｏの修飾されたシグナルペプチド」または「Ｅｐｏのシグナルペプチドの修飾型」は、本明細書で使用される場合、Ｅｐｏの修飾されたシグナルペプチドであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０１５８８と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００７９９．２と称され、置換Ｇ２Ｌ／Ｐ７Ｌ／Ｗ９Ｌおよび欠失Ｈ４－、Ｅ５－、およびＷ１１－によって修飾されており、好ましくは配列番号１５２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１５３で示されるＤＮＡ配列によってコードされる、Ｅｐｏの天然シグナルペプチドを指す。

【0064】

用語「インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）プロドメインの修飾型」、「修飾されたＩＧＦ１プロドメイン」または「ＩＧＦ１－Ｐｒｏ－修飾型」は、本明細書で使用される場合、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０５０１９と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿０００６１８．４、ＮＭ＿００１１１１２８４．１およびＮＭ＿００１１１１２８５．２と称され、プロペプチドのＮ末端における隣接する２２～３１の１０個のアミノ酸残基（ＶＫＭＨＴＭＳＳＳＨ）の欠失によって修飾されており、好ましくは配列番号１４２で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１４３で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＩＧＦ１のプロペプチドを指す。

【0065】

用語「腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）プロドメインの修飾型」、「修飾されたＡＬＰＩプロドメイン」、「ＡＬＰＩ－修飾型」または「ＡＬＰＩ－Ｐｒｏ－修飾型」は、本明細書で使用される場合、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースでは、Ｐ０９９２３と称され、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースでは、ＮＭ＿００１６３１．４と称され、置換Ａ５０４Ｌ／Ａ５０５Ｌ／Ｓ５１１Ｌ／Ｇ５１７Ｌ／Ｔ５１８Ｌおよび欠失Ｈ５０６－、Ｐ５０７－、Ａ５０９－、Ａ５１０－およびＰ５１３－によって修飾されており、好ましくは配列番号１８９で示されるアミノ酸配列を有し、および／または好ましくは配列番号１９０で示されるＤＮＡ配列によってコードされるＡＬＰＩのプロペプチドを指す。

【0066】

用語「ｍＲＮＡは、ＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核酸配列、および成熟ＩＧＦ１をコードする核酸配列を含み、ＩＧＦ１のＥペプチドをコードする核酸配列を含まない」は、本明細書で使用される場合、通常、２７アミノ酸を有するヒトＩＧＦ１のプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列、および７０アミノ酸を有する成熟ヒトＩＧＦ１をコードするヌクレオチド配列を含み、ヒトＩＧＦ１のＥペプチド（Ｅドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列を含まない、すなわちＥａ、ＥｂまたはＥｃドメインをコードするヌクレオチド配列を含まないｍＲＮＡを指す。２７アミノ酸を有するヒトＩＧＦ１のプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列、および７０アミノ酸を有する成熟ヒトＩＧＦ１をコードするヌクレオチド配列は、コドン最適化されていてもよい。

【0067】

用語「ベクター」または「発現ベクター」は、本明細書で使用される場合、細胞における核酸の取り込み、増殖、発現または伝達のための、天然に存在する、または合成的に生成したコンストラクト、例えばプラスミド、ミニサークル、ファージミド、コスミド、人工染色体／ミニ染色体、バクテリオファージ、ウイルス、例えばバキュロウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、単純疱疹ウイルス、バクテリオファージを指す。ベクターは、宿主細胞のゲノムに組み込まれるか、または自律複製型コンストラクトとして宿主細胞内に残るかのいずれであってもよい。ベクターを構築するのに使用される方法は、当業者に周知であり、様々な刊行物に記載されている。特に、好適なベクターを構築するための技術は、機能的および調節要素、例えばプロモーター、エンハンサー、終結およびポリアデニル化シグナル、選択マーカー、複製開始点、およびスプライシングシグナルの説明を含めて、当業者公知である。真核生物発現ベクターは、典型的には、真核細胞のトランスフェクションの前に除去可能な細菌における選択のための複製開始点や抗生物質耐性遺伝子などの、細菌におけるベクターの伝播を容易にする原核生物配列も含有すると予想される。ポリヌクレオチドを動作可能に連結することができるクローニング部位を含有する様々な真核生物の発現ベクターが当業界において周知であり、一部は、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、Ｃａｌｉｆ．；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．；Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．またはＩｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．などの会社から商業的に入手可能である。

【0068】

用語「遺伝子治療用ベクター」は、本明細書で使用される場合、細胞に、核酸配列、例えば遺伝子をコードする核酸配列を送達するのに使用されているあらゆるベクターを指す。遺伝子治療用ベクターおよび遺伝子送達方法は当業界において周知である。これらの方法の非限定的な例としては、細胞への送達後にエピソームであるか、または組み込まれるかのいずれかであるゲノムを有するＤＮＡおよびＲＮＡウイルスを含むウイルスベクター送達系、ＤＮＡプラスミド、裸の核酸、および送達媒体と複合体化した核酸、トランスポゾン系を含む非ウイルスベクター送達系（宿主ゲノムへの送達および組込みのため；Ｍｏｒｉａｒｉｔｙら（２０１３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ４１（８）、ｅ９２、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈら（２０１１）Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０（Ｒ１）、Ｒ１４～Ｒ２０）、レトロウイルス媒介ＤＮＡ移入（例えば、モロニーマウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、アデノウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳がんウイルスなどのレトロウイルス；例えば、Ｋａｙら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６２、１１７～１１９、Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６、８０８～８１３を参照）、ならびにアデノウイルス、ヘルペスウイルス、パルボウイルスおよびアデノ随伴ウイルスを含むＤＮＡウイルス媒介ＤＮＡ移入（例えば、Ａｌｉら（１９９４）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １、３６７～３８４）が挙げられる。ウイルスベクターとしてはまた、これらに限定されないが、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルスウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、および単純疱疹ウイルスベクターも挙げられる。宿主ゲノムへの組込みが可能なベクターとしては、これらに限定されないが、レトロウイルスまたはレンチウイルスが挙げられる。

【0069】

用語「転写単位」、「発現単位」または「発現カセット」は、本明細書で使用される場合、転写しようとする１つまたは複数の遺伝子を含有するベクター、コンストラクトまたはポリヌクレオチド配列内の領域を指し、この場合、セグメント内に含有される遺伝子は互いに動作可能に連結されている。これらは、単一のプロモーターから転写され、転写は、少なくとも１つのポリアデニル化シグナルによって終結する。結果として、異なる遺伝子が、少なくとも転写により連結される。各転写単位（多シストロン性転写単位）から、１種より多くのタンパク質または生成物を転写および発現させることができる。各転写単位は、その単位内に含有される選択された配列のいずれかの転写および翻訳に必要な調節エレメントを含むと予想され、各転写単位は、同一または異なる調節エレメントを含有していてもよい。例えば、各転写単位は、同じターミネーターを含有していてもよい。ＩＲＥＳエレメントまたはイントロンは、転写単位内の遺伝子の機能的な連結のために使用することができる。ベクターまたはポリヌクレオチド配列は、１つより多くの転写単位を含有していてもよい。

【0070】

用語「骨格筋損傷」は、本明細書で使用される場合、骨格筋のあらゆる損傷および断裂、好ましくは、伸張性筋収縮、伸長および筋肉の過負荷により誘発された骨格筋の断裂を指す。原則的にあらゆる骨格筋が、このような損傷または断裂によって影響を受ける可能性がある。好ましくは、骨格筋損傷は、骨格筋の損傷および断裂であり、この場合、骨格筋は、頭、頸部、胸部、背中、腹部、骨盤、腕、脚および臀部の筋肉群から選択される。

【0071】

より好ましくは、骨格筋損傷は、骨格筋が、足底筋、側頭部、乳頭、大胸筋、後脛骨筋、前脛骨筋、腓腹筋、烏口腕筋、横隔膜、長掌筋、腹直筋、外肛門括約筋、内肛門括約筋、肩甲下筋、二頭筋、三頭筋、四頭筋、ふくらはぎ、鼠径部、膝窩腱、三角筋、大円筋、回旋腱板の棘上筋、回旋腱板の棘下筋、回旋腱板の小円筋、回旋腱板の肩甲下筋、大腿直筋（ｒｅｃｔｕｓ ｆｅｍｏｒａｌｉｓ）、腹直筋、腹部の外腹斜筋、咬筋、僧帽筋、広背筋、胸筋、脊柱起立筋、腸肋筋、最長筋、棘筋、広背筋、横突棘筋、背半棘筋、頚半棘筋、頭半棘筋、多裂筋、回旋筋、棘間筋（ｉｎｔｅｒｓｐｉｎａｌｅｓ）、横突間筋、頭板状筋、頚板状筋（ｓｐｌｅｎｉｕｓ ｃｅｒｖｉｃｅｓ）、肋間筋、肋下筋（ｓｕｂｃｏｓｔａｌｅｓ）、胸横筋、肋骨挙筋、下後鋸筋、上後鋸筋、腹横筋、腹直筋、錐体筋、精巣挙筋、腰方形筋、外腹斜筋、内腹斜筋からなる群から選択される損傷および断裂である。

【0072】

さらにより好ましくは、骨格筋損傷は、骨格筋が、足底筋、側頭部、乳頭、大胸筋、後脛骨筋、前脛骨筋、腓腹筋、烏口腕筋、横隔膜、長掌筋、腹直筋、外肛門括約筋、内肛門括約筋、肩甲下筋、二頭筋、三頭筋、四頭筋、ふくらはぎ、鼠径部、膝窩腱、三角筋、大円筋、回旋腱板の棘上筋、回旋腱板の棘下筋、回旋腱板の小円筋、回旋腱板の肩甲下筋、大腿直筋、腹直筋、腹部の外腹斜筋、咬筋、僧帽筋、広背筋、胸筋からなる群から選択される損傷および断裂である。

【0073】

好ましくは、あらゆる骨格筋の損傷および断裂、好ましくは、伸張性筋収縮、伸長または筋肉の過負荷により誘発された骨格筋の断裂が、本発明の方法によって処置される。

【0074】

第１の態様において、本発明は、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、ｍＲＮＡを提供する。

【0075】

一実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド、または前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0076】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0077】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0078】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0079】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；および
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド
からなる群から選択される。

【0080】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0081】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0082】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない。

【0083】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであり、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている。

【0084】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であり、天然に存在するアミノ酸配列は、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている。

【0085】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0086】

一実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド、または前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0087】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0088】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0089】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0090】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；および
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド
からなる群から選択される。

【0091】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0092】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0093】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない。

【0094】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであり、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている。

【0095】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．５を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であり、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている。

【0096】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0097】

一実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド、または前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0098】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0099】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0100】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0101】

一実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；および
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド
からなる群から選択される。

【0102】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0103】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0104】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない。

【0105】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであり、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている。

【0106】

さらなる実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であり、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている。

【0107】

好ましい実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドは、
長さ１６～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0108】

さらに好ましい実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドは、長さ１６～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；および
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド
からなる群から選択される。

【0109】

さらに好ましい実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドは、長さ１６～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0110】

さらに好ましい実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドは、長さ１６～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0111】

さらに好ましい実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドは、長さ１６～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない。

【0112】

さらに好ましい実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドは、長さ１６～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであり、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている。

【0113】

さらに好ましい実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドは、長さ１６～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であり、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている。

【0114】

一実施形態において、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択され、
少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換による修飾は、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端の、アミノ酸１～１１の範囲内で、好ましくはアミノ酸１～１０の範囲内で、より好ましくはアミノ酸１～９の範囲内で、さらにより好ましくはアミノ酸１～８の範囲内で、特にアミノ酸１～７の範囲内で、より特にアミノ酸１～６の範囲内で、さらにより特にアミノ酸１～５の範囲内で、特に好ましくはアミノ酸１～４の範囲内で、さらに特に好ましくはアミノ酸１～３の範囲内で、より一層特に好ましくはアミノ酸１～２の範囲内でなされる。

【0115】

用語「疎水性スコア（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｓｃｏｒｅ）」または「疎水性スコア（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ ｓｃｏｒｅ）」は、本明細書において用語「ハイドロパシースコア」と同意語として使用され、カイト－デューリトルのスケール（Ｋｙｔｅ Ｊ．、Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ Ｒ．Ｆ．；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５～１３２（１９８２））に従って計算されるアミノ酸の疎水性の程度を指す。カイト－デューリトルのスケールによるアミノ酸疎水性スコアは、以下の通りである。

【0116】

アミノ酸配列の「平均疎水性スコア」、例えばシグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の平均疎水性スコアは、アミノ酸配列のアミノ酸のそれぞれのカイト－デューリトルのスケールによる疎水性スコア、例えば、Ｎ末端のアミノ酸１～９の９つのアミノ酸のそれぞれの疎水性スコアを足して、アミノ酸の数で割る、例えば９で割ることによって計算される。

【0117】

本発明の一実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２．０５に等しいかまたはそれを超える、好ましくは２．１に等しいかまたはそれを超える、より好ましくは２．１５に等しいかまたはそれを超える、さらにより好ましくは２．２に等しいかまたはそれを超える、特に２．２５に等しいかまたはそれを超える、より特に２．３に等しいかまたはそれを超える、さらにより特に２．３５に等しいかまたはそれを超える平均疎水性スコアを有する。さらなる実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２．０５～４．５、好ましくは２．１～４．５、より好ましくは２．１５～４．５、さらにより好ましくは２．２～４．５、特に２．２５～４．５、より特に２．３～４．５、さらにより特に２．３５～４．５の平均疎水性スコアを有する。さらなる実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２．０５～４．０、好ましくは２．１～４．０、より好ましくは２．１５～４．０、さらにより好ましくは２．２～４．０、特に２．２５～４．０、より特に２．３～４．０、さらにより特に２．３５～４．０の平均疎水性スコアを有する。

【0118】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の平均疎水性スコアより、少なくとも１．０単位低い、好ましくは少なくとも１．１単位低い、より好ましくは少なくとも１．２単位低い、さらにより好ましくは少なくとも１．３単位低い、特に１．０～４単位低い、より特に１．１～４単位低い、さらにより特に１．２～４単位低い、最も特に１．３～４単位低い。

【0119】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端の、アミノ酸１～９、アミノ酸２～１０、アミノ酸３～１１、アミノ酸４～１２およびアミノ酸５～１３は、それぞれ１．５を超える平均疎水性スコア、好ましくは１．６を超える平均疎水性スコア、より好ましくは１．７を超える平均疎水性スコア、さらにより好ましくは１．８を超える平均疎水性スコア、より一層好ましくは１．９を超える平均疎水性スコア、特に１．５～４．５の平均疎水性スコア、より特に１．６～４．５の平均疎水性スコア、さらにより特に１．７～４．５の平均疎水性スコア、より一層特に１．８～４．５の平均疎水性スコア、最も特に１．９～４．５の平均疎水性スコアを有する。

【0120】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸８～１６の平均疎水性スコアは、少なくとも、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアに等しいかまたはそれより低い、好ましくはそれより少なくとも０．４単位低い、より好ましくはそれより０．４～２．０単位低い。

【0121】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、長さ１８～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１０～１８の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアより、少なくとも０．５単位、好ましくは０．５～３．０単位低い。

【0122】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアより、少なくとも１．５単位、好ましくは１．５～３．５単位低い。

【0123】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列の任意の９つの連続するアミノ酸の平均疎水性スコアが、４．１を超えない。

【0124】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸は、負の疎水性スコアを有する少なくとも１つのアミノ酸を含み、好ましくはシグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸は、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、ＹおよびＷからなる群から選択されるアミノ酸を含む。

【0125】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の２番目のアミノ酸は、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｌ、ＶおよびＩからなる群から選択される。

【0126】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の２番目のアミノ酸は、Ａ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、ＶおよびＷからなる群から選択される。

【0127】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、６．１またはそれ未満の平均極性、好ましくは６．１未満の平均極性、より好ましくは４未満の平均極性、さらにより好ましくは２未満の平均極性、特に６．１～０の平均極性、より特に４～０の平均極性、さらにより特に２～０の平均極性、最も特に１～０．２の平均極性を有する。

【0128】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、６．１またはそれ未満の平均極性、好ましくは６．１未満の平均極性、より好ましくは４未満の平均極性、さらにより好ましくは２未満の平均極性、特に６．１～０の平均極性、より特に４～０の平均極性、さらにより特に２～０の平均極性、最も特に１～０．２の平均極性を有する。

【0129】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、６．１またはそれ未満の平均極性、好ましくは６．１未満の平均極性、より好ましくは４未満の平均極性、さらにより好ましくは２未満の平均極性、特に６．１～０の平均極性、より特に４～０の平均極性、さらにより特に２～０の平均極性、最も特に１．１～０．２の平均極性を有する。

【0130】

極性は、ジマーマン（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ）の極性インデックス（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ Ｊ．Ｍ．、Ｅｌｉｅｚｅｒ Ｎ．、Ｓｉｍｈａ Ｒ．；Ｊ．Ｔｈｅｏｒ．Ｂｉｏｌ．２１：１７０～２０１（１９６８））に従って計算される。アミノ酸配列の「平均極性」、例えば、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の平均極性は、アミノ酸配列のアミノ酸のそれぞれのジマーマンの極性インデックスによる計算された極性値、例えば、Ｎ末端のアミノ酸１～９の９つのアミノ酸のそれぞれの平均極性を足して、アミノ酸の数で割ること、例えば９で割ることによって計算される。ジマーマンの極性インデックスによるアミノ酸の極性は、以下の通りである。

【0131】

上述した本発明のシグナルペプチドのアミノ酸配列の平均疎水性スコアまたは平均極性は、Ｇａｓｔｅｉｇｅｒ Ｅ．ら（Ｇａｓｔｅｉｇｅｒ Ｅ．、Ｈｏｏｇｌａｎｄ Ｃ．、Ｇａｔｔｉｋｅｒ Ａ．、Ｄｕｖａｕｄ Ｓ．、Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｍ．Ｒ．、Ａｐｐｅｌ Ｒ．Ｄ．、Ｂａｉｒｏｃｈ Ａ．；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｔｏｏｌｓ ｏｎ ｔｈｅ ＥｘＰＡＳｙ Ｓｅｒｖｅｒ；（Ｉｎ）Ｊｏｈｎ Ｍ． Ｗａｌｋｅｒ（編）：Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（２００５）．５７１～６０７頁）で言及されている公共的に利用可能なオンラインデータベースのＰｒｏｔＳｃａｌｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｔｏｏｌｓ／ｐｒｏｔｓｃａｌｅ．ｈｔｍｌ）を使用して、カイトおよびデューリトルのスケール（「疎水性／カイトおよびデューリトル」）またはジマーマンのスケールの極性（「極性／ジマーマン」）の疎水性の選択、およびシグナルペプチドの具体的なウィンドウサイズ（例えば９アミノ酸のウィンドウサイズ）に対応する設定を用いて、ウィンドウの端の相対的な重量値を１００％に設定し、スケールの正規化をせずに、計算することができる。それぞれの数値データは、結果のページにおける「数値フォーマット（Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ ｆｏｒｍａｔ）（冗長）」上のオープンリンクによって検索することができる。

【0132】

本発明の一実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．７を超える平均疎水性スコアを有する。一実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．７を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、１４～４０アミノ酸の長さのアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0133】

本発明の一実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．６に等しいかまたはそれを超える、好ましくは１．７に等しいかまたはそれを超える、より好ましくは１．７５に等しいかまたはそれを超える、さらにより好ましくは１．８に等しいかまたはそれを超える、特に２．０に等しいかまたはそれを超える、より特に２．１に等しいかまたはそれを超える、さらにより特に２．２に等しいかまたはそれを超える平均疎水性スコアを有する。さらなる実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．６～４．５、好ましくは１．７～４．５、より好ましくは１．７５～４．５、さらにより好ましくは１．８～４．５、特に２．０～４．５、より特に２．１～４．５、さらにより特に２．２～４．５の平均疎水性スコアを有する。さらなる実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７は、１．６～４．０、好ましくは１．７～４．０、より好ましくは１．７５～４．０、さらにより好ましくは１．８～４．０、特に２．０～４．０、より特に２．１～４．０、さらにより特に２．２～４．０の平均疎水性スコアを有する。

【0134】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の７つのアミノ酸の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７の平均疎水性スコアに等しいかまたはそれ未満であり、好ましくは少なくとも０．０６単位低い、より好ましくは少なくとも１．０単位低い、さらにより好ましくは少なくとも１．１単位低い、特に少なくとも１．２単位低い、より特に１．０～４単位低い、さらにより特に１．０～４単位低い、最も特に１．２～４単位低い。

【0135】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７、アミノ酸２～８、アミノ酸３～９、アミノ酸４～１０およびアミノ酸５～１１は、それぞれ、１．４を超える平均疎水性スコア、好ましくは１．５を超える平均疎水性スコア、より好ましくは１．６を超える平均疎水性スコア、さらにより好ましくは１．７を超える平均疎水性スコア、より一層好ましくは１．７５を超える平均疎水性スコア、特に１．４～４．５の平均疎水性スコア、より特に１．５～４．５の平均疎水性スコア、さらにより特に１．６～４．５の平均疎水性スコア、より一層特に１．７～４．５の平均疎水性スコア、最も特に１．７５～４．５の平均疎水性スコアを有する。

【0136】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の７つのアミノ酸の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～９の平均疎水性スコアより、少なくとも１．０単位、好ましくは１．０～３．６単位低い。

【0137】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列の任意の７つの連続するアミノ酸の平均疎水性スコアが、４．１を超えない。

【0138】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の７つのアミノ酸は、負の疎水性スコアを有する少なくとも１つのアミノ酸を含み、好ましくは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の７つのアミノ酸は、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、ＹおよびＷからなる群から選択されるアミノ酸を含む。

【0139】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７の２番目のアミノ酸は、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｌ、ＶおよびＩからなる群から選択される。

【0140】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～７の２番目のアミノ酸は、Ａ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、ＶおよびＷからなる群から選択される。

【0141】

本発明の一実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３単位を超える平均疎水性スコアを有する。一実施形態において、ｍＲＮＡは、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．３を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、１２～４０アミノ酸の長さのアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0142】

本発明の一実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．０に等しいかまたはそれを超える、好ましくは１．１に等しいかまたはそれを超える、より好ましくは１．２に等しいかまたはそれを超える、さらにより好ましくは１．２５に等しいかまたはそれを超える、特に１．３に等しいかまたはそれを超える、より特に１．３５に等しいかまたはそれを超える、さらにより特に１．３８に等しいかまたはそれを超える平均疎水性スコアを有する。さらなる実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１～４．５、好ましくは１．１～４．５、より好ましくは１．２～４．５、さらにより好ましくは１．２５～４．５、特に１．３～４．５、より特に１．３５～４．５、さらにより特に１．３８～４．５の平均疎水性スコアを有する。さらなる実施形態において、アミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５は、１．０～４．０、好ましくは１．１～４．０、より好ましくは１．２～４．０、さらにより好ましくは１．２５～４．０、特に１．３～４．０、より特に１．３５～４．０、さらにより特に１．３８～４．０の平均疎水性スコアを有する。

【0143】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の５つのアミノ酸の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５の平均疎水性スコアより、少なくとも０．２単位低い、好ましくは少なくとも０．２４単位低い、より好ましくは少なくとも１．０単位低い、さらにより好ましくは少なくとも１．２単位低い、特に０．２～４単位低い、より特に０．２４～４単位低い、さらにより特に１．０～４単位低い、最も特に１．２～４単位低い。

【0144】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～５、アミノ酸２～６、アミノ酸３～７、アミノ酸４～８およびアミノ酸５～９は、それぞれ１．０を超える平均疎水性スコア、好ましくは１．１５を超える平均疎水性スコア、より好ましくは１．２を超える平均疎水性スコア、さらにより好ましくは１．２１を超える平均疎水性スコア、より一層好ましくは１．２３を超える平均疎水性スコア、特に１．０～４．５の平均疎水性スコア、より特に１．１５～４．５の平均疎水性スコア、さらにより特に１．２～４．５の平均疎水性スコア、より一層特に１．２１～４．５の平均疎水性スコア、最も特に１．２３～４．５の平均疎水性スコアを有する。

【0145】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の５つのアミノ酸の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～７の平均疎水性スコアより、少なくとも１．２単位、好ましくは１．２～３．０単位、より好ましくは１．２～４．３単位低い。

【0146】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列の任意の５つの連続するアミノ酸の平均疎水性スコアが、４．２を超えず、好ましくは４．３を超えない。

【0147】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の９つのアミノ酸のうち５つは、負の疎水性スコアを有する少なくとも１つのアミノ酸を含み、好ましくは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の５つのアミノ酸は、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、ＹおよびＷからなる群から選択されるアミノ酸を含む。

【0148】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の２番目のアミノ酸は、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｌ、ＶおよびＩからなる群から選択される。

【0149】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の２番目のアミノ酸は、Ａ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、ＶおよびＷからなる群から選択される。

【0150】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸の数の５０％未満の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。

【0151】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、修飾されたシグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種の修飾を含まないシグナルペプチドのアミノ酸配列とは、１つ、好ましくは２つ、より好ましくは３つ、さらにより好ましくは４つ、最も好ましくは５つ、特に６つ、より特に７つ、さらにより特に８つ、最も特に９または１０個のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。

【0152】

一実施形態において、修飾されたシグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種の修飾を含まないシグナルペプチドのアミノ酸配列とは、１～２アミノ酸、好ましくは１～３アミノ酸、より好ましくは１～４アミノ酸、さらにより好ましくは１～５アミノ酸、最も好ましくは１～６アミノ酸、特に１～７アミノ酸、より特に１～１０アミノ酸、さらにより特に１～１２アミノ酸、最も特に１～１５アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する。

【0153】

一実施形態において、修飾されたシグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種の修飾を含まないシグナルペプチドのアミノ酸配列との、９５％～５０％、好ましくは９５％～６０％、より好ましくは９５％～７０％、さらにより好ましくは９５％～８０％、最も好ましくは９５％～９０％の配列同一性を有する。

【0154】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし修飾されたシグナルペプチドは、前記タンパク質の天然に存在する（相同な）シグナルペプチドのアミノ酸配列とは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは少なくとも４つ、最も好ましくは少なくとも５つ、特に少なくとも６つ、より特に少なくとも７つ、さらにより特に少なくとも８つ、最も特に少なくとも９または１０個のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。一実施形態において、前記タンパク質にとって異種の修飾されたシグナルペプチドは、９５％未満、好ましくは９０％未満、より好ましくは８０％未満、さらにより好ましくは７０％未満、最も好ましくは６０％未満、特に５０％未満の、前記タンパク質の天然に存在する（相同な）シグナルペプチドのアミノ酸配列との配列同一性を有する。

【0155】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質に相同な修飾を含まないシグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２およびそれ未満、好ましくは２未満の平均疎水性スコアを有する、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである。

【0156】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸の数の５０％未満の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである。

【0157】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドは、前記タンパク質に相同な修飾を含まないシグナルペプチドのアミノ酸配列とは、１、好ましくは２、より好ましくは３、さらにより好ましくは４、最も好ましくは５、特に６、より特に７、さらにより特に８～１２、最も特に９～１５アミノ酸が異なる、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである。一実施形態において、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドは、前記タンパク質に相同な修飾を含まないシグナルペプチドのアミノ酸配列とは、１～２アミノ酸、好ましくは１～３アミノ酸、より好ましくは１～４アミノ酸、さらにより好ましくは１～５アミノ酸、最も好ましくは１～６アミノ酸、特に１～７アミノ酸、より特に１～１０アミノ酸、さらにより特に１～１２アミノ酸、最も特に１～１５アミノ酸が異なる。

【0158】

一実施形態において、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドは、前記タンパク質に相同な修飾を含まないシグナルペプチドのアミノ酸配列との、９５％未満、好ましくは９０％未満、より好ましくは８０％未満、さらにより好ましくは７０％未満、最も好ましくは６０％未満、特に５０％未満の配列同一性を有する。

【0159】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、必要に応じて、天然に存在するアミノ酸配列のアミノ酸配列のアミノ酸の数の５０％未満の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0160】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、修飾を含まない天然に存在するアミノ酸配列のアミノ酸配列とは、１つ、好ましくは２つ、より好ましくは３つ、さらにより好ましくは４つ、最も好ましくは５つ、特に６つ、より特に７つ、さらにより特に８～１２、最も特に９～１５アミノ酸が異なる、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0161】

一実施形態において、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、修飾を含まない天然に存在するアミノ酸配列のアミノ酸配列とは、１～２アミノ酸、好ましくは１～３アミノ酸、より好ましくは１～４アミノ酸、さらにより好ましくは１～５アミノ酸、最も好ましくは１～６アミノ酸、特に１～７アミノ酸、より特に１～１０アミノ酸、さらにより特に１～１２アミノ酸、最も特に１～１５アミノ酸が異なる。

【0162】

一実施形態において、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、修飾を含まない天然に存在するアミノ酸配列のアミノ酸配列との、９５％未満、好ましくは９０％未満、より好ましくは８０％未満、さらにより好ましくは７０％未満、最も好ましくは６０％未満、特に５０％未満の配列同一性を有する。

【0163】

本発明の一実施形態において、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、天然に存在するシグナルペプチドのアミノ酸配列とは、５０％より多く、好ましくは６０％より多く、より好ましくは７０％より多く、さらにより好ましくは８０％より多く、最も好ましくは９０％より多く、特に９５％より多く異なるアミノ酸配列を有する。一実施形態において、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、１００％未満、好ましくは９５％未満、より好ましくは９０％未満、さらにより好ましくは８０％未満、最も好ましくは７０％未満、特に６０％未満、より特に５０％未満の、天然に存在するシグナルのアミノ酸配列との配列同一性を有する。

【0164】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、および補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであるか、またはｉ）少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾された、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。

【0165】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、配列番号３０で示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、配列番号１０２で示されるニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、配列番号８７で示される線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、配列番号９７で示されるインスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、配列番号１０７で示される前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、配列番号１１２で示される細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、および配列番号９２で示される補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであるか、またはｉ）少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾された、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種の修飾されたシグナルペプチドは、配列番号１３２で示される修飾されたＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、配列番号１２７で示される修飾されたインスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、配列番号１４７で示される修飾されたインスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および配列番号１３７で示される修飾された脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。

【0166】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、および補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。好ましくは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、配列番号３０で示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、配列番号１０２で示されるニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、配列番号８７で示される線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、配列番号９７で示されるインスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、配列番号１０７で示される前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、配列番号１１２で示される細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、および配列番号９２で示される補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択される。

【0167】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾された、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。

【0168】

本発明の好ましい実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾された前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、配列番号１３２で示される修飾されたＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、配列番号１２７で示される修飾されたインスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、配列番号１４７で示される修飾されたインスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および配列番号１３７で示される修飾された脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択される。

【0169】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドおよび前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、インスリンのシグナルペプチドおよびＩＮＳ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）のシグナルペプチドおよびＥＰＯ、インターロイキン４（ＩＬ－４）のシグナルペプチドおよびＩＬ－４、ならびにインターロイキン１０（ＩＬ－１０）のシグナルペプチドおよびＩＬ－１０からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである。本発明の好ましい実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾された、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、配列番号１２２で示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１４７で示されるインスリンの修飾されたシグナルペプチド、配列番号１５２で示されるエリスロポエチン（ＥＰＯ）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１６６で示されるインターロイキン４（ＩＬ－４）の修飾されたシグナルペプチド、および配列番号１７４で示されるインターロイキン１０（ＩＬ－１０）の修飾されたシグナルペプチドからなる群から選択される。

【0170】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、天然に存在するアミノ酸配列は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチド、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列および腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドからなる群から選択される、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0171】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列である、天然に存在するアミノ酸配列、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列、またはｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0172】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列である、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0173】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、天然に存在するアミノ酸配列は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0174】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、天然に存在するアミノ酸配列は、腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0175】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、配列番号１１７で示されるグルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列である、天然に存在するアミノ酸配列、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１４２で示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列、またはｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１８９で示される腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）の修飾されたプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0176】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、配列番号１１７で示されるグルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列である、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0177】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１４２で示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0178】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１８９で示される腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）の修飾されたプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0179】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドを使用した分泌タンパク質の量は、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドを使用した前記分泌タンパク質の量より多い、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。好ましくは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドを使用した分泌タンパク質の量は、好ましくは、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドを使用した前記分泌タンパク質の量より、少なくとも１．４倍多い。

【0180】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドを使用した分泌タンパク質の量は、前記タンパク質に相同な修飾を含まないシグナルペプチドを使用した前記分泌タンパク質の量より多い、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである。好ましくは、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドを使用した分泌タンパク質の量は、好ましくは、前記タンパク質に相同な修飾されていないシグナルペプチドを使用した前記分泌タンパク質の量より少なくとも１．４倍多い。

【0181】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、必要に応じて少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列を使用した分泌タンパク質の量は、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドを使用した前記分泌タンパク質の量より多い、天然に存在するアミノ酸配列である。好ましくは、必要に応じて修飾された天然に存在するアミノ酸配列を使用した分泌タンパク質の量は、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドを使用した前記分泌タンパク質の量より、好ましくは少なくとも１．４倍多い。

【0182】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、必要に応じて、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、ただし前記タンパク質は、チオレドキシンではなく、より特に、タンパク質は、桿体由来錐体生存因子（ｒｏｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｏｎｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｆａｃｔｏｒ）ではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。

【0183】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、インスリン（ＩＮＳ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）およびインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質は、ＩＧＦ１である、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド、
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、インスリン（ＩＮＳ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）およびインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列であり、タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列；および
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチドであり、タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列
から選択される。

【0184】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、インスリン（ＩＮＳ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）およびインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される。

【0185】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、配列番号１８８で示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、配列番号１８５で示されるインスリン（ＩＮＳ）、配列番号１８４で示されるエリスロポエチン（ＥＰＯ）、配列番号１８６で示されるインターロイキン－４（ＩＬ－４）および配列番号１８７で示されるインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される。

【0186】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質は、ＩＧＦ１である、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。

【0187】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドは、ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、前記タンパク質は、配列番号１８８で示されるＩＧＦ１である、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドである。

【0188】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、インスリン（ＩＮＳ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）およびインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである。

【0189】

本発明の好ましい実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、タンパク質は、配列番号１８８で示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、配列番号１８５で示されるインスリン（ＩＮＳ）、配列番号１８４で示されるエリスロポエチン（ＥＰＯ）、配列番号１８６で示されるインターロイキン－４（ＩＬ－４）および配列番号１８７で示されるインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドである。

【0190】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列であり、タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0191】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチドであり、タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0192】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドであり、タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0193】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列であり、タンパク質は、配列番号１８８で示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0194】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたプロペプチドであり、タンパク質は、配列番号１８８で示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0195】

本発明の一実施形態において、シグナルペプチドは、ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）の修飾されたプロペプチドであり、タンパク質は、配列番号１８８で示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列である。

【0196】

本発明の好ましい実施形態では、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、ならびに補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択され、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択され、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のシグナルペプチド、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）のシグナルペプチド、インターロイキン４（ＩＬ－４）のシグナルペプチド、およびインターロイキン１０（ＩＬ－１０）のシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列である、天然に存在するアミノ酸配列；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、天然に存在するアミノ酸配列は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列；ならびに
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、天然に存在するアミノ酸配列は、腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0197】

本発明の好ましい実施形態では、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、ならびに補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択され、前記タンパク質は、サイトカイン、増殖因子およびホルモンからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択され、前記タンパク質は、サイトカイン、増殖因子およびホルモンからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドおよび前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、インスリンのシグナルペプチドおよびＩＮＳ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）のシグナルペプチドおよびＥＰＯ、インターロイキン４（ＩＬ－４）のシグナルペプチドおよびＩＬ－４、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）のシグナルペプチドおよびＩＬ－１０からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；
ｉｉｉ）シグナルペプチドが、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列であり、前記タンパク質が、サイトカイン；増殖因子；およびホルモンからなる群から選択され、好ましくは増殖因子である、自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、天然に存在するアミノ酸配列は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチドであり、前記タンパク質は、サイトカイン、増殖因子およびホルモンからなる群から選択され、好ましくは増殖因子である、天然に存在するアミノ酸配列；ならびに
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、天然に存在するアミノ酸配列は、腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドであり、前記タンパク質は、サイトカイン、増殖因子およびホルモンからなる群から選択され、好ましくは増殖因子である、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0198】

本発明の好ましい実施形態では、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、ならびに補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択され、前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、インスリン（ＩＮＳ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン４（ＩＬ－４）、およびインターロイキン１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択され、前記タンパク質はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドおよび前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、インスリンのシグナルペプチドおよびＩＮＳ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）のシグナルペプチドおよびＥＰＯ、インターロイキン４（ＩＬ－４）のシグナルペプチドおよびＩＬ－４、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）のシグナルペプチドおよびＩＬ－１０からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列であり、前記タンパク質はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、天然に存在するアミノ酸配列はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチドであり、前記タンパク質はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列；ならびに
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、天然に存在するアミノ酸配列は腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドであり、前記タンパク質はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0199】

本発明の好ましい実施形態では、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドおよび前記タンパク質が、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、インスリン、ＥＰＯ、またはＩＬ－１０、ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１またはＩＬ４、インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、ならびに補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１からなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドおよび前記タンパク質は、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、ならびに脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１からなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドおよび前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のシグナルペプチドおよびＩＧＦ１、インスリンのシグナルペプチドおよびＩＮＳ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）のシグナルペプチドおよびＥＰＯ、インターロイキン４（ＩＬ－４）のシグナルペプチドおよびＩＬ－４、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）のシグナルペプチドおよびＩＬ－１０からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、グルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列であり、前記タンパク質はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、天然に存在するアミノ酸配列はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）のプロペプチドであり、前記タンパク質はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列；ならびに
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、天然に存在するアミノ酸配列は腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）のプロペプチドであり、前記タンパク質はインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0200】

本発明の好ましい実施形態では、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、配列番号３０に示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、配列番号１０２に示されるニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、配列番号８７に示される線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、配列番号９７に示されるインスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、配列番号１０７に示される前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、配列番号１１２に示される細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、ならびに配列番号９２に示される補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択され、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、配列番号１３２に示されるＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、配列番号１２７に示されるインスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、配列番号１４７に示されるインスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および配列番号１３７に示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択され、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、配列番号１２２に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１４７に示されるインスリン（ＩＮＳ）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１５２に示されるエリスロポエチン（ＥＰＯ）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１６６に示されるインターロイキン４（ＩＬ－４）の修飾されたシグナルペプチド、および配列番号１７４に示されるインターロイキン１０（ＩＬ－１０）の修飾されたシグナルペプチドからなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、配列番号１１７に示されるグルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列である、天然に存在するアミノ酸配列；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１４２に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列；ならびに
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１８９に示される腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）の修飾されたプロペプチドである、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0201】

本発明の好ましい実施形態では、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、配列番号３０に示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、配列番号１０２に示されるニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、配列番号８７に示される線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、配列番号９７に示されるインスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、配列番号１０７に示される前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、配列番号１１２に示される細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、ならびに配列番号９２に示される補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択され、前記タンパク質は、サイトカイン、増殖因子およびホルモンからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質にとって異種の修飾されたシグナルペプチドは、配列番号１３２に示されるＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１２７に示されるインスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１４７に示されるインスリン（ＩＮＳ）の修飾されたシグナルペプチド、および配列番号１３７に示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の修飾されたシグナルペプチドからなる群から選択され、前記タンパク質は、サイトカイン増殖因子およびホルモンからなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドおよび前記タンパク質は、配列番号１２２に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８８に示されるＩＧＦ１、配列番号１４７に示されるインスリンの修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８５に示されるインスリン（ＩＮＳ）、配列番号１５２に示されるエリスロポエチン（ＥＰＯ）の修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８４に示されるＥＰＯ、配列番号１６６に示されるインターロイキン４（ＩＬ－４）の修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８６に示されるＩＬ－４、配列番号１７４に示されるインターロイキン１０（ＩＬ－１０）の修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８７に示されるＩＬ－１０からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１１７に示されるグルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列であり、前記タンパク質は、サイトカイン；増殖因子；およびホルモンからなる群から選択され、好ましくは増殖因子である、天然に存在するアミノ酸配列；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１４２に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたプロペプチドであり、前記タンパク質は、サイトカイン；増殖因子；およびホルモンからなる群から選択され、好ましくは増殖因子である、天然に存在するアミノ酸配列；ならびに
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１８９に示される腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）の修飾されたプロペプチドであり、前記タンパク質は、サイトカイン；増殖因子；およびホルモンからなる群から選択され、好ましくは増殖因子である、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0202】

本発明の好ましい実施形態では、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、配列番号３０に示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、配列番号１０２に示されるニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、配列番号８７に示される線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、配列番号９７に示されるインスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、配列番号１０７に示される前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、配列番号１１２に示される細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、ならびに配列番号９２に示される補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択され、前記タンパク質は、配列番号１８８に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、配列番号１８５に示されるインスリン、配列番号１８４に示されるエリスロポエチン（ＥＰＯ）、配列番号１８６に示されるインターロイキン４（ＩＬ－４）、および配列番号１８７に示されるインターロイキン１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質にとって異種の修飾されたシグナルペプチドは、配列番号１３２に示されるＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１２７に示されるインスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）の修飾されたシグナルペプチド、配列番号１４７に示されるインスリン（ＩＮＳ）の修飾されたシグナルペプチド、および配列番号１３７に示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の修飾されたシグナルペプチドからなる群から選択され、前記タンパク質は、配列番号１８８に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、前記タンパク質に相同な修飾されたシグナルペプチドおよび前記タンパク質は、配列番号１２２に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８８に示されるＩＧＦ１、配列番号１４７に示されるインスリンの修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８５に示されるインスリン（ＩＮＳ）、配列番号１５２に示されるエリスロポエチン（ＥＰＯ）の修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８４に示されるＥＰＯ、配列番号１６６に示されるインターロイキン４（ＩＬ－４）の修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８６に示されるＩＬ－４、配列番号１７４に示されるインターロイキン１０（ＩＬ－１０）の修飾されたシグナルペプチドおよび配列番号１８７に示されるＩＬ－１０からなる群から選択される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１１７に示されるグルカゴン受容体（ＧＬ－Ｒ）のコード配列であり、前記タンパク質は、配列番号１８８に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列；
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１４２に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）の修飾されたプロペプチドであり、前記タンパク質は、配列番号１８８に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列、ならびに
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、天然に存在するアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾され、修飾された天然に存在するアミノ酸配列は、配列番号１８９に示される腸型アルカリホスファターゼ（ＡＬＰＩ）の修飾されたプロペプチドであり、前記タンパク質は、配列番号１８８に示されるインスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）である、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される。

【0203】

本発明の特定の好ましい実施形態では、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡは、配列番号８に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１０５に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号９０に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１００に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１１０に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１１５に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号９５に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１３５に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１３０に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１５０に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１４０に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１２５に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１６１に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１５５に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１６９に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１７７に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１２０に示されるｍＲＮＡ配列、配列番号１４５に示されるｍＲＮＡ配列、および配列番号１９２に示されるｍＲＮＡ配列からなる群から選択される。

【0204】

さらなる態様では本発明は、
ｉ）タンパク質；および
ｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、タンパク質がオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡ、
特に、
ｉ）タンパク質；ならびに
ｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、タンパク質は、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡを提供する。

【0205】

本発明の１つの実施形態では、タンパク質は治療用タンパク質である。本発明の好ましい実施形態では、タンパク質はヒト由来であり、すなわち、ヒトタンパク質である。本発明のさらに好ましい実施形態では、タンパク質は、全てヒト由来のカルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；ならびに血管作動性タンパク質からなる群から選択される。本発明のより好ましい実施形態では、本発明のタンパク質は、ヒトカルボキシペプチダーゼ；ヒトサイトカイン；ヒト細胞外のリガンドおよび輸送体；ヒト細胞外マトリックスタンパク質；ヒトグルコシダーゼ；ヒトグリコシルトランスフェラーゼ；ヒト増殖因子；ヒト増殖因子結合タンパク質；ヒトヘパリン結合タンパク質；ヒトホルモン；ヒトヒドロラーゼ；ヒト免疫グロブリン；ヒトイソメラーゼ；ヒトキナーゼ；ヒトリアーゼ；ヒト金属酵素阻害剤；ヒトメタロプロテアーゼ；ヒト乳タンパク質；ヒト神経刺激性タンパク質；ヒトプロテアーゼ；ヒトプロテアーゼ阻害剤；ヒトタンパク質ホスファターゼ；ヒトエステラーゼ；ヒトトランスフェラーゼ；ならびにヒト血管作動性タンパク質からなる群から選択される。

【0206】

１つの実施形態では、タンパク質は、カルボキシペプチダーゼが、ＡＣＥ、ＡＣＥ２、ＣＮＤＰ１、ＣＰＡ１、ＣＰＡ２、ＣＰＡ４、ＣＰＡ５、ＣＰＡ６、ＣＰＢ１、ＣＰＢ２、ＣＰＥ、ＣＰＮ１、ＣＰＱ、ＣＰＸＭ１、ＣＰＺ、およびＳＣＰＥＰ１からなる群から選択されるカルボキシペプチダーゼ；サイトカインが、ＢＭＰ１、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１５、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８Ａ、ＢＭＰ８Ｂ、Ｃ１ＱＴＮＦ４、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ４Ｌ、ＣＣＬ４Ｌ２、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＤ４０ＬＧ、ＣＥＲ１、ＣＫＬＦ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＣＳＦ２、ＣＳＦ３、ＣＴＦ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＤＫＫ１、ＤＫＫ２、ＤＫＫ３、ＤＫＫ４、ＥＤＡ、ＥＢＩ３、ＦＡＭ３Ｂ、ＦＡＭ３Ｃ、ＦＡＳＬＧ、ＦＬＴ３ＬＧ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１０、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ１５、ＧＤＦ２、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＧＤＦ９、ＧＰＩ、ＧＲＥＭ１、ＧＲＥＭ２、ＧＲＮ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬ４、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｄ、ＩＬ１７Ｆ、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ３、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３４、ＩＬ３６Ａ、ＩＬ３６Ｂ、ＩＬ３６Ｇ、ＩＬ３６ＲＮ、ＩＬ３７、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＬＥＦＴＹ１、ＬＥＦＴＹ２、ＬＩＦ、ＬＴＡ、ＭＩＦ、ＭＳＴＮ、ＮＡＭＰＴ、ＮＯＤＡＬ、ＯＳＭ、ＰＦ４、ＰＦ４Ｖ１、ＳＣＧＢ３Ａ１、ＳＥＣＴＭ１、ＳＬＵＲＰ１、ＳＰＰ１、ＴＨＮＳＬ２、ＴＨＰＯ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１２、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、ＴＳＬＰ、ＶＳＴＭ１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＸＣＬ１、およびＸＣＬ２からなる群から選択されるサイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体が、ＡＰＣＳ、ＣＨＩ３Ｌ１、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＬＥＣ３Ｂ、ＤＭＢＴ１、ＤＭＫＮ、ＥＤＤＭ３Ａ、ＥＤＤＭ３Ｂ、ＥＦＮＡ４、ＥＭＣ１０、ＥＮＡＭ、ＥＰＹＣ、ＥＲＶＨ４８－１、Ｆ１３Ｂ、ＦＣＮ１、ＦＣＮ２、ＧＬＤＮ、ＧＰＬＤ１、ＨＥＧ１、ＩＴＦＧ１、ＫＡＺＡＬＤ１、ＫＣＰ、ＬＡＣＲＴ、ＬＥＧ１、ＭＥＴＲＮ、ＮＯＴＣＨ２ＮＬ、ＮＰＮＴ、ＯＬＦＭ１、ＯＬＦＭＬ３、ＰＲＢ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＡＰＬ１、ＰＳＧ１、ＰＳＧ６、ＰＳＧ９、ＰＴＸ３、ＰＴＸ４、ＲＢＰ４、ＲＮＡＳＥ１０、ＲＮＡＳＥ１２、ＲＮＡＳＥ１３、ＲＮＡＳＥ９、ＲＳＰＲＹ１、ＲＴＢＤＮ、Ｓ１００Ａ１２、Ｓ１００Ａ１３、Ｓ１００Ａ７、Ｓ１００Ａ８、ＳＡＡ２、ＳＡＡ４、ＳＣＧ１、ＳＣＧ２、ＳＣＧ３、ＳＣＧＢ１Ｃ１、ＳＣＧＢ１Ｃ２、ＳＣＧＢ１Ｄ１、ＳＣＧＢ１Ｄ２、ＳＣＧＢ１Ｄ４、ＳＣＧＢ２Ｂ２、ＳＣＧＢ３Ａ２、ＳＣＧＮ、ＳＣＲＧ１、ＳＣＵＢＥ１、ＳＣＵＢＥ２、ＳＣＵＢＥ３、ＳＤＣＢＰ、ＳＥＬＥＮＯＰ、ＳＦＴＡ２、ＳＦＴＡ３、ＳＦＴＰＡ１、ＳＦＴＰＡ２、ＳＦＴＰＣ、ＳＦＴＰＤ、ＳＨＢＧ、ＳＬＵＲＰ２、ＳＭＯＣ１、ＳＭＯＣ２、ＳＭＲ３Ａ、ＳＭＲ３Ｂ、ＳＮＣＡ、ＳＰＡＴＡ２０、ＳＰＡＴＡ６、ＳＯＧＡ１、ＳＰＡＲＣ、ＳＰＡＲＣＬ１、ＳＰＡＴＡ２０、ＳＰＡＴＡ６、ＳＲＰＸ２、ＳＳＣ４Ｄ、ＳＴＸ１Ａ、ＳＵＳＤ４、ＳＶＢＰ、ＴＣＮ１、ＴＣＮ２、ＴＣＴＮ１、ＴＦ、ＴＵＬＰ３、ＴＦＦ２、ＴＦＦ３、ＴＨＳＤ７Ａ、ＴＩＮＡＧ、ＴＩＮＡＧＬ１、ＴＭＥＦＦ２、ＴＭＥＭ２５、およびＶＷＣ２Ｌからなる群から選択される細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質が、ＡＢＩ３ＢＰ、ＡＧＲＮ、ＣＣＢＥ１、ＣＨＬ１、ＣＯＬ１５Ａ１、ＣＯＬ１９Ａ１、ＣＯＬＥＣ１１、ＤＭＢＴ１、ＤＲＡＸＩＮ、ＥＤＩＬ３、ＥＬＮ、ＥＭＩＤ１、ＥＭＩＬＩＮ１、ＥＭＩＬＩＮ２、ＥＭＩＬＩＮ３、ＥＰＤＲ１、ＦＢＬＮ１、ＦＢＬＮ２、ＦＢＬＮ５、ＦＬＲＴ１、ＦＬＲＴ２、ＦＬＲＴ３、ＦＲＥＭ１、ＧＬＤＮ、ＩＢＳＰ、ＫＥＲＡ、ＫＩＡＡ０１００、ＫＩＲＲＥＬ３、ＫＲＴ１０、ＬＡＭＢ２、ＭＧＰ、ＲＰＴＮ、ＳＢＳＰＯＮ、ＳＤＣ１、ＳＤＣ４、ＳＥＭＡ３Ａ、ＳＥＭＡ３Ｂ、ＳＥＭＡ３Ｃ、ＳＥＭＡ３Ｄ、ＳＥＭＡ３Ｅ、ＳＥＭＡ３Ｆ、ＳＥＭＡ３Ｇ、ＳＩＧＬＥＣ１、ＳＩＧＬＥＣ１０、ＳＩＧＬＥＣ６、ＳＬＩＴ１、ＳＬＩＴ２、ＳＬＩＴ３、ＳＬＩＴＲＫ１、ＳＮＥＤ１、ＳＮＯＲＣ、ＳＰＡＣＡ３、ＳＰＡＣＡ７、ＳＰＯＮ１、ＳＰＯＮ２、ＳＴＡＴＨ、ＳＶＥＰ１、ＴＥＣＴＡ、ＴＥＣＴＢ、ＴＮＣ、ＴＮＮ、ＴＮＲ、およびＴＮＸＢからなる群から選択される細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼが、ＡＭＹ１Ａ、ＡＭＹ１Ｂ、ＡＭＹ１Ｃ、ＡＭＹ２Ａ、ＡＭＹ２Ｂ、ＣＥＭＩＰ、ＣＨＩＡ、ＣＨＩＴ１、ＦＵＣＡ２、ＧＬＢ１Ｌ、ＧＬＢ１Ｌ２、ＨＰＳＥ、ＨＹＡＬ１、ＨＹＡＬ３、ＫＬ、ＬＹＧ１、ＬＹＧ２、ＬＹＺＬ１、ＬＹＺＬ２、ＭＡＮ２Ｂ２、ＳＭＰＤ１、ＳＭＰＤＬ３Ｂ、ＳＰＡＣＡ５、およびＳＰＡＣＡ５Ｂからなる群から選択されるグルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼが、ＡＲＴ５、Ｂ４ＧＡＬＴ１、ＥＸＴＬ２、ＧＡＬＮＴ１、ＧＡＬＮＴ２、ＧＬＴ１Ｄ１、ＭＧＡＴ４Ａ、ＳＴ３ＧＡＬ１、ＳＴ３ＧＡＬ２、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ４、ＳＴ６ＧＡＬ１、およびＸＹＬＴ１からなる群から選択されるグリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子が、ＡＭＨ、ＡＲＴＮ、ＢＴＣ、ＣＤＮＦ、ＣＦＣ１、ＣＦＣ１Ｂ、ＣＨＲＤＬ１、ＣＨＲＤＬ２、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＣＮＭＤ、ＥＦＥＭＰ１、ＥＧＦ、ＥＧＦＬ６、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＬ８、ＥＰＧＮ、ＥＲＥＧ、ＥＹＳ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＲＺＢ、ＧＤＮＦ、ＧＦＥＲ、ＧＫＮ１、ＨＢＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＨＢＢ、ＩＮＨＢＣ、ＩＮＨＢＥ、ＩＮＳ、ＫＩＴＬＧ、ＭＡＮＦ、ＭＤＫ、ＭＩＡ、ＮＧＦ、ＮＯＶ、ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、ＮＲＧ４、ＮＲＴＮ、ＮＴＦ３、ＮＴＦ４、ＯＧＮ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＣ、ＰＤＧＦＤ、ＰＧＦ、ＰＲＯＫ１、ＰＳＰＮ、ＰＴＮ、ＳＤＦ１、ＳＤＦ２、ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ３、ＳＦＲＰ４、ＳＦＲＰ５、ＴＤＧＦ１、ＴＦＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＨＢＳ４、ＴＩＭＰ１、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、およびＷＩＳＰ３からなる群から選択される増殖因子；増殖因子結合タンパク質が、ＣＨＲＤ、ＣＹＲ６１、ＥＳＭ１、ＦＧＦＢＰ１、ＦＧＦＢＰ２、ＦＧＦＢＰ３、ＨＴＲＡ１、ＧＨＢＰ、ＩＧＦＡＬＳ、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、ＩＧＦＢＰ７、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、ＳＯＳＴＤＣ１、ＮＯＧ、ＴＷＳＧ１、およびＷＩＦ１からなる群から選択される増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質が、ＡＤＡ２、ＡＤＡＭＴＳＬ５、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＰＯＢ、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＨ、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＭＰ、ＣＴＧＦ、ＦＢＬＮ７、ＦＮ１、ＦＳＴＬ１、ＨＲＧ、ＬＡＭＣ２、ＬＩＰＣ、ＬＩＰＧ、ＬＩＰＨ、ＬＩＰＩ、ＬＰＬ、ＰＣＯＬＣＥ２、ＰＯＳＴＮ、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、ＲＳＰＯ４、ＳＡＡ１、ＳＬＩＴ２、ＳＯＳＴ、ＴＨＢＳ１、およびＶＴＮからなる群から選択されるヘパリン結合タンパク質；ホルモンが、ＡＤＣＹＡＰ１、ＡＤＩＰＯＱ、ＡＤＭ、ＡＤＭ２、ＡＮＧＰＴＬ８、ＡＰＥＬＡ、ＡＰＬＮ、ＡＶＰ、Ｃ１ＱＴＮＦ１２、Ｃ１ＱＴＮＦ９、ＣＡＬＣＡ、ＣＡＬＣＢ、ＣＣＫ、ＣＧＡ、ＣＧＢ１、ＣＧＢ２、ＣＧＢ３、ＣＧＢ５、ＣＧＢ８、ＣＯＰＡ、ＣＯＲＴ、ＣＲＨ、ＣＳＨ１、ＣＳＨ２、ＣＳＨＬ１、ＥＮＨＯ、ＥＰＯ、ＥＲＦＥ、ＦＢＮ１、ＦＮＤＣ５、ＦＳＨＢ、ＧＡＬ、ＧＡＳＴ、ＧＣＧ、ＧＨ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲＨ、ＧＨＲＬ、ＧＩＰ、ＧＮＲＨ１、ＧＮＲＨ２、ＧＰＨＡ２、ＧＰＨＢ５、ＩＡＰＰ、ＩＮＳ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＮＳＬ５、ＩＮＳＬ６、ＬＨＢ、ＭＥＴＲＮＬ、ＭＬＮ、ＮＰＰＡ、ＮＰＰＢ、ＮＰＰＣ、ＯＳＴＮ、ＯＸＴ、ＰＭＣＨ、ＰＰＹ、ＰＲＬ、ＰＲＬＨ、ＰＴＨ、ＰＴＨＬＨ、ＰＹＹ、ＲＥＴＮ、ＲＥＴＮＬＢ、ＲＬＮ１、ＲＬＮ２、ＲＬＮ３、ＳＣＴ、ＳＰＸ、ＳＳＴ、ＳＴＣ１、ＳＴＣ２、ＴＧ、ＴＯＲ２Ａ、ＴＲＨ、ＴＳＨＢ、ＴＴＲ、ＵＣＮ、ＵＣＮ２、ＵＣＮ３、ＵＴＳ２、ＵＴＳ２Ｂ、およびＶＩＰからなる群から選択されるホルモン；ヒドロラーゼが、ＡＡＤＡＣＬ２、ＡＢＨＤ１５、ＡＣＰ７、ＡＣＰＰ、ＡＤＡ２、ＡＤＡＭＴＳＬ１、ＡＯＡＨ、ＡＲＳＦ、ＡＲＳＩ、ＡＲＳＪ、ＡＲＳＫ、ＢＴＤ、ＣＨＩ３Ｌ２、ＥＮＰＰ１、ＥＮＰＰ２、ＥＮＰＰ３、ＥＮＰＰ５、ＥＮＴＰＤ５、ＥＮＴＰＤ６、ＧＢＰ１、ＧＧＨ、ＧＰＬＤ１、ＨＰＳＥ、ＬＩＰＣ、ＬＩＰＦ、ＬＩＰＧ、ＬＩＰＨ、ＬＩＰＩ、ＬＩＰＫ、ＬＩＰＭ、ＬＩＰＮ、ＬＰＬ、ＰＧＬＹＲＰ２、ＰＬＡ１Ａ、ＰＬＡ２Ｇ１０、ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ、ＰＬＡ２Ｇ１Ｂ、ＰＬＡ２Ｇ２Ａ、ＰＬＡ２Ｇ２Ｄ、ＰＬＡ２Ｇ２Ｅ、ＰＬＡ２Ｇ２Ｆ、ＰＬＡ２Ｇ３、ＰＬＡ２Ｇ５、
ＰＬＡ２Ｇ７、ＰＮＬＩＰ、ＰＮＬＩＰＲＰ２、ＰＮＬＩＰＲＰ３、ＰＯＮ１、ＰＯＮ３、ＰＰＴ１、ＳＭＰＤＬ３Ａ、ＴＨＥＭ６、ＴＨＳＤ１、およびＴＨＳＤ４からなる群から選択されるヒドロラーゼ；免疫グロブリンが、ＩＧＳＦ１０、ＩＧＫＶ１－１２、ＩＧＫＶ１－１６、ＩＧＫＶ１－３３、ＩＧＫＶ１－６、ＩＧＫＶ１Ｄ－１２、ＩＧＫＶ１Ｄ－３９、ＩＧＫＶ１Ｄ－８、ＩＧＫＶ２－３０、ＩＧＫＶ２Ｄ－３０、ＩＧＫＶ３－１１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０、ＩＧＫＶ５－２、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、およびＩＧＬＣ３からなる群から選択される免疫グロブリン；イソメラーゼが、ＮＡＸＥ、ＰＰＩＡ、およびＰＴＧＤＳからなる群から選択されるイソメラーゼ；キナーゼが、ＡＤＣＫ１、ＡＤＰＧＫ、ＦＡＭ２０Ｃ、ＩＣＯＳ、およびＰＫＤＣＣからなる群から選択されるキナーゼ；リアーゼが、ＰＭ２０Ｄ１、ＰＡＭ、およびＣＡ６からなる群から選択されるリアーゼ；金属酵素阻害剤が、ＦＥＴＵＢ、ＳＰＯＣＫ３、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３、ＴＩＭＰ４、ＷＦＩＫＫＮ１、およびＷＦＩＫＫＮ２からなる群から選択される金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼが、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ２８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＤＥＣ１、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ１０、ＡＤＡＭＴＳ１２、ＡＤＡＭＴＳ１３、ＡＤＡＭＴＳ１４、ＡＤＡＭＴＳ１５、ＡＤＡＭＴＳ１６、ＡＤＡＭＴＳ１７、ＡＤＡＭＴＳ１８、ＡＤＡＭＴＳ１９、ＡＤＡＭＴＳ２、ＡＤＡＭＴＳ２０、ＡＤＡＭＴＳ３、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＡＤＡＭＴＳ６、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＤＡＭＴＳ８、ＡＤＡＭＴＳ９、ＣＬＣＡ１、ＣＬＣＡ２、ＣＬＣＡ４、ＩＤＥ、ＭＥＰ１Ｂ、ＭＭＥＬ１、ＭＭＰ１、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２５、ＭＭＰ２６、ＭＭＰ２８、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＰＡＰＰＡ、ＰＡＰＰＡ２、ＴＬＬ１、およびＴＬＬ２からなる群から選択されるメタロプロテアーゼ；乳タンパク質が、ＣＳＮ１Ｓ１、ＣＳＮ２、ＣＳＮ３、およびＬＡＬＢＡからなる群から選択される乳タンパク質；神経刺激性タンパク質が、ＣＡＲＴＰＴ、ＮＭＳ、ＮＭＵ、ＮＰＢ、ＮＰＦＦ、ＮＰＳ、ＮＰＶＦ、ＮＰＷ、ＮＰＹ、ＰＣＳＫ１Ｎ、ＰＤＹＮ、ＰＥＮＫ、ＰＮＯＣ、ＰＯＭＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＴＨ２、ＰＹＹ２、ＰＹＹ３、ＱＲＦＰ、ＴＡＣ１、およびＴＡＣ３からなる群から選択される神経刺激性タンパク質；プロテアーゼが、ＡＤＡＭＴＳ６、Ｃ１Ｒ、Ｃ１ＲＬ、Ｃ２、ＣＡＳＰ４、ＣＥＬＡ１、ＣＥＬＡ２Ａ、ＣＥＬＡ２Ｂ、ＣＦＢ、ＣＦＤ、ＣＦＩ、ＣＭＡ１、ＣＯＲＩＮ、ＣＴＲＢ１、ＣＴＲＢ２、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＤＨＨ、Ｆ１０、Ｆ１１、Ｆ１２、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ９、ＦＡＰ、ＦＵＲＩＮ、ＧＺＭＡ、ＧＺＭＫ、ＧＺＭＭ、ＨＡＢＰ２、ＨＧＦＡＣ、ＨＴＲＡ３、ＨＴＲＡ４、ＩＨＨ、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ９、ＫＬＫＢ１、ＭＡＳＰ１、ＭＡＳＰ２、ＭＳＴ１Ｌ、ＮＡＰＳＡ、ＯＶＣＨ１、ＯＶＣＨ２、ＰＣＳＫ２、ＰＣＳＫ５、ＰＣＳＫ６、ＰＣＳＫ９、ＰＧＡ３、ＰＧＡ４、ＰＧＡ５、ＰＧＣ、ＰＬＡＴ、ＰＬＡＵ、ＰＬＧ、ＰＲＯＣ、ＰＲＳＳ１、ＰＲＳＳ１２、ＰＲＳＳ２、ＰＲＳＳ２２、ＰＲＳＳ２３、ＰＲＳＳ２７、ＰＲＳＳ２９Ｐ、ＰＲＳＳ３、ＰＲＳＳ３３、ＰＲＳＳ３６、ＰＲＳＳ３８、ＰＲＳＳ３Ｐ２、ＰＲＳＳ４２、ＰＲＳＳ４４、ＰＲＳＳ４７、ＰＲＳＳ４８、ＰＲＳＳ５３、ＰＲＳＳ５７、ＰＲＳＳ５８、ＰＲＳＳ８、ＰＲＴＮ３、ＲＥＬＮ、ＲＥＮ、ＴＭＰＲＳＳ１１Ｄ、ＴＭＰＲＳＳ１１Ｅ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＰＳＡＢ１、ＴＰＳＢ２、およびＴＰＳＤ１からなる群から選択されるプロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤が、Ａ２Ｍ、Ａ２ＭＬ１、ＡＭＢＰ、ＡＮＯＳ１、ＣＯＬ２８Ａ１、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＯＬ７Ａ１、ＣＰＡＭＤ８、ＣＳＴ１、ＣＳＴ２、ＣＳＴ３、ＣＳＴ４、ＣＳＴ５、ＣＳＴ６、ＣＳＴ７、ＣＳＴ８、ＣＳＴ９、ＣＳＴ９Ｌ、ＣＳＴ９ＬＰ１、ＣＳＴＬ１、ＥＰＰＩＮ、ＧＰＣ３、ＨＭＳＤ、ＩＴＩＨ１、ＩＴＩＨ２、ＩＴＩＨ３、ＩＴＩＨ４、ＩＴＩＨ５、ＩＴＩＨ６、ＫＮＧ１、ＯＰＲＰＮ、ＯＶＯＳ１、ＯＶＯＳ２、ＰＡＰＬＮ、ＰＩ１５、ＰＩ１６、ＰＩ３、ＰＺＰ、Ｒ３ＨＤＭＬ、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ１０、ＳＥＲＰＩＮＡ１１、ＳＥＲＰＩＮＡ１２、ＳＥＲＰＩＮＡ１３Ｐ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＡ４、ＳＥＲＰＩＮＡ５、ＳＥＲＰＩＮＡ７、ＳＥＲＰＩＮＡ９、ＳＥＲＰＩＮＢ２、ＳＥＲＰＩＮＢ５、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＳＥＲＰＩＮＥ２、ＳＥＲＰＩＮＥ３、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＥＲＰＩＮＧ１、ＳＥＲＰＩＮＩ１、ＳＥＲＰＩＮＩ２、ＳＰＩＮＫ１、ＳＰＩＮＫ１３、ＳＰＩＮＫ１４、ＳＰＩＮＫ２、ＳＰＩＮＫ４、ＳＰＩＮＫ５、ＳＰＩＮＫ６、ＳＰＩＮＫ７、ＳＰＩＮＫ８、ＳＰＩＮＫ９、ＳＰＩＮＴ１、ＳＰＩＮＴ３、ＳＰＩＮＴ４、ＳＰＯＣＫ１、ＳＰＯＣＫ２、ＳＰＰ２、ＳＳＰＯ、ＴＦＰＩ、ＴＦＰＩ２、ＷＦＤＣ１、ＷＦＤＣ１０Ａ、ＷＦＤＣ１３、ＷＦＤＣ２、ＷＦＤＣ３、ＷＦＤＣ５、ＷＦＤＣ６、およびＷＦＤＣ８からなる群から選択されるプロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼが、ＡＣＰ７、ＡＣＰＰ、ＰＴＥＮ、およびＰＴＰＲＺ１からなる群から選択されるタンパク質ホスファターゼ；エステラーゼが、ＢＣＨＥ、ＣＥＬ、ＣＥＳ４Ａ、ＣＥＳ５Ａ、ＮＯＴＵＭ、およびＳＩＡＥからなる群から選択されるエステラーゼ；トランスフェラーゼが、ＭＥＴＴＬ２４、ＦＫＲＰ、ＣＨＳＹ１、ＣＨＳＴ９、およびＢ３ＧＡＴ１からなる群から選択されるトランスフェラーゼ；ならびに血管作動性タンパク質が、ＡＧＧＦ１、ＡＧＴ、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ６、ＥＤＮ１、ＥＤＮ２、ＥＤＮ３、およびＮＴＳからなる群から選択される血管作動性タンパク質からなる群から選択される。

【0207】

好ましい実施形態では、タンパク質は、サイトカイン；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；神経刺激性タンパク質；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される。

【0208】

より好ましい実施形態では、タンパク質は、サイトカインが、ＢＭＰ１、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１５、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８Ａ、ＢＭＰ８Ｂ、Ｃ１ＱＴＮＦ４、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ４Ｌ、ＣＣＬ４Ｌ２、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＤ４０ＬＧ、ＣＥＲ１、ＣＫＬＦ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＣＳＦ２、ＣＳＦ３、ＣＴＦ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＤＫＫ１、ＤＫＫ２、ＤＫＫ３、ＤＫＫ４、ＥＤＡ、ＥＢＩ３、ＦＡＭ３Ｂ、ＦＡＭ３Ｃ、ＦＡＳＬＧ、ＦＬＴ３ＬＧ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１０、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ１５、ＧＤＦ２、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＧＤＦ９、ＧＰＩ、ＧＲＥＭ１、ＧＲＥＭ２、ＧＲＮ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬ４、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｄ、ＩＬ１７Ｆ、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ３、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３４、ＩＬ３６Ａ、ＩＬ３６Ｂ、ＩＬ３６Ｇ、ＩＬ３６ＲＮ、ＩＬ３７、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＬＥＦＴＹ１、ＬＥＦＴＹ２、ＬＩＦ、ＬＴＡ、ＭＩＦ、ＭＳＴＮ、ＮＡＭＰＴ、ＮＯＤＡＬ、ＯＳＭ、ＰＦ４、ＰＦ４Ｖ１、ＳＣＧＢ３Ａ１、ＳＥＣＴＭ１、ＳＬＵＲＰ１、ＳＰＰ１、ＴＨＮＳＬ２、ＴＨＰＯ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１２、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、ＴＳＬＰ、ＶＳＴＭ１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＸＣＬ１、およびＸＣＬ２からなる群から選択されるサイトカイン；増殖因子が、ＡＭＨ、ＡＲＴＮ、ＢＴＣ、ＣＤＮＦ、ＣＦＣ１、ＣＦＣ１Ｂ、ＣＨＲＤＬ１、ＣＨＲＤＬ２、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＣＮＭＤ、ＥＦＥＭＰ１、ＥＧＦ、ＥＧＦＬ６、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＬ８、ＥＰＧＮ、ＥＲＥＧ、ＥＹＳ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＲＺＢ、ＧＤＮＦ、ＧＦＥＲ、ＧＫＮ１、ＨＢＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＨＢＢ、ＩＮＨＢＣ、ＩＮＨＢＥ、ＩＮＳ、ＫＩＴＬＧ、ＭＡＮＦ、ＭＤＫ、ＭＩＡ、ＮＧＦ、ＮＯＶ、ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、ＮＲＧ４、ＮＲＴＮ、ＮＴＦ３、ＮＴＦ４、ＯＧＮ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＣ、ＰＤＧＦＤ、ＰＧＦ、ＰＲＯＫ１、ＰＳＰＮ、ＰＴＮ、ＳＤＦ１、ＳＤＦ２、ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ３、ＳＦＲＰ４、ＳＦＲＰ５、ＴＤＧＦ１、ＴＦＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＨＢＳ４、ＴＩＭＰ１、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、およびＷＩＳＰ３からなる群から選択される増殖因子；増殖因子結合タンパク質が、ＣＨＲＤ、ＣＹＲ６１、ＥＳＭ１、ＦＧＦＢＰ１、ＦＧＦＢＰ２、ＦＧＦＢＰ３、ＨＴＲＡ１、ＧＨＢＰ、ＩＧＦＡＬＳ、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、ＩＧＦＢＰ７、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、ＳＯＳＴＤＣ１、ＮＯＧ、ＴＷＳＧ１、およびＷＩＦ１からなる群から選択される増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質が、ＡＤＡ２、ＡＤＡＭＴＳＬ５、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＰＯＢ、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＨ、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＭＰ、ＣＴＧＦ、ＦＢＬＮ７、ＦＮ１、ＦＳＴＬ１、ＨＲＧ、ＬＡＭＣ２、ＬＩＰＣ、ＬＩＰＧ、ＬＩＰＨ、ＬＩＰＩ、ＬＰＬ、ＰＣＯＬＣＥ２、ＰＯＳＴＮ、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、ＲＳＰＯ４、ＳＡＡ１、ＳＬＩＴ２、ＳＯＳＴ、ＴＨＢＳ１、およびＶＴＮからなる群から選択されるヘパリン結合タンパク質；ホルモンが、ＡＤＣＹＡＰ１、ＡＤＩＰＯＱ、ＡＤＭ、ＡＤＭ２、ＡＮＧＰＴＬ８、ＡＰＥＬＡ、ＡＰＬＮ、ＡＶＰ、Ｃ１ＱＴＮＦ１２、Ｃ１ＱＴＮＦ９、ＣＡＬＣＡ、ＣＡＬＣＢ、ＣＣＫ、ＣＧＡ、ＣＧＢ１、ＣＧＢ２、ＣＧＢ３、ＣＧＢ５、ＣＧＢ８、ＣＯＰＡ、ＣＯＲＴ、ＣＲＨ、ＣＳＨ１、ＣＳＨ２、ＣＳＨＬ１、ＥＮＨＯ、ＥＰＯ、ＥＲＦＥ、ＦＢＮ１、ＦＮＤＣ５、ＦＳＨＢ、ＧＡＬ、ＧＡＳＴ、ＧＣＧ、ＧＨ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲＨ、ＧＨＲＬ、ＧＩＰ、ＧＮＲＨ１、ＧＮＲＨ２、ＧＰＨＡ２、ＧＰＨＢ５、ＩＡＰＰ、ＩＮＳ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＮＳＬ５、ＩＮＳＬ６、ＬＨＢ、ＭＥＴＲＮＬ、ＭＬＮ、ＮＰＰＡ、ＮＰＰＢ、ＮＰＰＣ、ＯＳＴＮ、ＯＸＴ、ＰＭＣＨ、ＰＰＹ、ＰＲＬ、ＰＲＬＨ、ＰＴＨ、ＰＴＨＬＨ、ＰＹＹ、ＲＥＴＮ、ＲＥＴＮＬＢ、ＲＬＮ１、ＲＬＮ２、ＲＬＮ３、ＳＣＴ、ＳＰＸ、ＳＳＴ、ＳＴＣ１、ＳＴＣ２、ＴＧ、ＴＯＲ２Ａ、ＴＲＨ、ＴＳＨＢ、ＴＴＲ、ＵＣＮ、ＵＣＮ２、ＵＣＮ３、ＵＴＳ２、ＵＴＳ２Ｂ、およびＶＩＰからなる群から選択されるホルモン；神経刺激性タンパク質が、ＣＡＲＴＰＴ、ＮＭＳ、ＮＭＵ、ＮＰＢ、ＮＰＦＦ、ＮＰＳ、ＮＰＶＦ、ＮＰＷ、ＮＰＹ、ＰＣＳＫ１Ｎ、ＰＤＹＮ、ＰＥＮＫ、ＰＮＯＣ、ＰＯＭＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＴＨ２、ＰＹＹ２、ＰＹＹ３、ＱＲＦＰ、ＴＡＣ１、およびＴＡＣ３からなる群から選択される神経刺激性タンパク質；ならびに血管作動性タンパク質が、ＡＧＧＦ１、ＡＧＴ、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ６、ＥＤＮ１、ＥＤＮ２、ＥＤＮ３、およびＮＴＳからなる群から選択される血管作動性タンパク質からなる群から選択される。

【0209】

さらにより好ましい実施形態では、タンパク質は、サイトカイン；増殖因子；ホルモン；および神経刺激性タンパク質からなる群から選択される。

【0210】

本発明の特定の実施形態では、タンパク質は、サイトカインが、ＢＭＰ１、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１５、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８Ａ、ＢＭＰ８Ｂ、Ｃ１ＱＴＮＦ４、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ４Ｌ、ＣＣＬ４Ｌ２、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＤ４０ＬＧ、ＣＥＲ１、ＣＫＬＦ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＳＦ１、ＣＳＦ２、ＣＳＦ３、ＣＴＦ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＤＫＫ１、ＤＫＫ２、ＤＫＫ３、ＤＫＫ４、ＥＤＡ、ＥＢＩ３、ＦＡＭ３Ｂ、ＦＡＭ３Ｃ、ＦＡＳＬＧ、ＦＬＴ３ＬＧ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１０、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ１５、ＧＤＦ２、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＧＤＦ９、ＧＰＩ、ＧＲＥＭ１、ＧＲＥＭ２、ＧＲＮ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬ４、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｄ、ＩＬ１７Ｆ、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ３、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３４、ＩＬ３６Ａ、ＩＬ３６Ｂ、ＩＬ３６Ｇ、ＩＬ３６ＲＮ、ＩＬ３７、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＬＥＦＴＹ１、ＬＥＦＴＹ２、ＬＩＦ、ＬＴＡ、ＭＩＦ、ＭＳＴＮ、ＮＡＭＰＴ、ＮＯＤＡＬ、ＯＳＭ、ＰＦ４、ＰＦ４Ｖ１、ＳＣＧＢ３Ａ１、ＳＥＣＴＭ１、ＳＬＵＲＰ１、ＳＰＰ１、ＴＨＮＳＬ２、ＴＨＰＯ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１２、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、ＴＳＬＰ、ＶＳＴＭ１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＸＣＬ１、およびＸＣＬ２からなる群から選択されるサイトカイン；増殖因子が、ＡＭＨ、ＡＲＴＮ、ＢＴＣ、ＣＤＮＦ、ＣＦＣ１、ＣＦＣ１Ｂ、ＣＨＲＤＬ１、ＣＨＲＤＬ２、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＣＮＭＤ、ＥＦＥＭＰ１、ＥＧＦ、ＥＧＦＬ６、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＬ８、ＥＰＧＮ、ＥＲＥＧ、ＥＹＳ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＲＺＢ、ＧＤＮＦ、ＧＦＥＲ、ＧＫＮ１、ＨＢＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＨＢＢ、ＩＮＨＢＣ、ＩＮＨＢＥ、ＩＮＳ、ＫＩＴＬＧ、ＭＡＮＦ、ＭＤＫ、ＭＩＡ、ＮＧＦ、ＮＯＶ、ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、ＮＲＧ４、ＮＲＴＮ、ＮＴＦ３、ＮＴＦ４、ＯＧＮ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＣ、ＰＤＧＦＤ、ＰＧＦ、ＰＲＯＫ１、ＰＳＰＮ、ＰＴＮ、ＳＤＦ１、ＳＤＦ２、ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ３、ＳＦＲＰ４、ＳＦＲＰ５、ＴＤＧＦ１、ＴＦＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＨＢＳ４、ＴＩＭＰ１、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、およびＷＩＳＰ３からなる群から選択される増殖因子；ホルモンが、ＡＤＣＹＡＰ１、ＡＤＩＰＯＱ、ＡＤＭ、ＡＤＭ２、ＡＮＧＰＴＬ８、ＡＰＥＬＡ、ＡＰＬＮ、ＡＶＰ、Ｃ１ＱＴＮＦ１２、Ｃ１ＱＴＮＦ９、ＣＡＬＣＡ、ＣＡＬＣＢ、ＣＣＫ、ＣＧＡ、ＣＧＢ１、ＣＧＢ２、ＣＧＢ３、ＣＧＢ５、ＣＧＢ８、ＣＯＰＡ、ＣＯＲＴ、ＣＲＨ、ＣＳＨ１、ＣＳＨ２、ＣＳＨＬ１、ＥＮＨＯ、ＥＰＯ、ＥＲＦＥ、ＦＢＮ１、ＦＮＤＣ５、ＦＳＨＢ、ＧＡＬ、ＧＡＳＴ、ＧＣＧ、ＧＨ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲＨ、ＧＨＲＬ、ＧＩＰ、ＧＮＲＨ１、ＧＮＲＨ２、ＧＰＨＡ２、ＧＰＨＢ５、ＩＡＰＰ、ＩＮＳ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＮＳＬ５、ＩＮＳＬ６、ＬＨＢ、ＭＥＴＲＮＬ、ＭＬＮ、ＮＰＰＡ、ＮＰＰＢ、ＮＰＰＣ、ＯＳＴＮ、ＯＸＴ、ＰＭＣＨ、ＰＰＹ、ＰＲＬ、ＰＲＬＨ、ＰＴＨ、ＰＴＨＬＨ、ＰＹＹ、ＲＥＴＮ、ＲＥＴＮＬＢ、ＲＬＮ１、ＲＬＮ２、ＲＬＮ３、ＳＣＴ、ＳＰＸ、ＳＳＴ、ＳＴＣ１、ＳＴＣ２、ＴＧ、ＴＯＲ２Ａ、ＴＲＨ、ＴＳＨＢ、ＴＴＲ、ＵＣＮ、ＵＣＮ２、ＵＣＮ３、ＵＴＳ２、ＵＴＳ２Ｂ、およびＶＩＰ；からなる群から選択されるホルモン；ならびに神経刺激性タンパク質が、ＣＡＲＴＰＴ、ＮＭＳ、ＮＭＵ、ＮＰＢ、ＮＰＦＦ、ＮＰＳ、ＮＰＶＦ、ＮＰＷ、ＮＰＹ、ＰＣＳＫ１Ｎ、ＰＤＹＮ、ＰＥＮＫ、ＰＮＯＣ、ＰＯＭＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＴＨ２、ＰＹＹ２、ＰＹＹ３、ＱＲＦＰ、ＴＡＣ１、およびＴＡＣ３からなる群から選択される神経刺激性タンパク質からなる群から選択される。

【0211】

本発明の別の特定の実施形態では、タンパク質は、サイトカインが、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－４、ＣＮＴＦ、ＭＳＴＮ、ＩＦＮＧ、ＩＬ６、ＳＰＰ１からなる群から選択されるサイトカイン；増殖因子が、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＧＤＮＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１からなる群から選択される増殖因子；ホルモンが、ＥＰＯ、ＦＢＮ１、ＧＨ、ＧＨＲＨ、ＯＳＴＮ、ＵＣＮからなる群から選択されるホルモン；および神経刺激性タンパク質が、ＮＰＦＦ、ＮＰＹ、ＰＮＯＣ、ＰＯＭＣからなる群から選択される神経刺激性タンパク質からなる群から選択される。

【0212】

本発明の別の特定の実施形態では、タンパク質は、サイトカインが、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－４、ＣＮＴＦ、ＭＳＴＮ、ＩＦＮＧ、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＳＰＰ１からなる群から選択されるサイトカイン；増殖因子が、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＧＤＮＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１からなる群から選択される増殖因子；ホルモンが、ＥＰＯ、ＦＢＮ１、ＧＨ、ＧＨＲＨ、ＯＳＴＮ、ＵＣＮ、ＩＮＳからなる群から選択されるホルモン；および神経刺激性タンパク質が、ＮＰＦＦ、ＮＰＹ、ＰＮＯＣ、ＰＯＭＣからなる群から選択される神経刺激性タンパク質からなる群から選択される。

【0213】

本発明のより特定の実施形態では、タンパク質は、増殖因子からなる群から選択される。本発明のさらにより特定の実施形態では、タンパク質は増殖因子からなる群から選択され、増殖因子は、ＡＭＨ、ＡＲＴＮ、ＢＤＮＦ、ＢＴＣ、ＣＤＮＦ、ＣＦＣ１、ＣＦＣ１Ｂ、ＣＨＲＤＬ１、ＣＨＲＤＬ２、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＣＮＭＤ、ＥＦＥＭＰ１、ＥＧＦ、ＥＧＦＬ６、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＬ８、ＥＰＧＮ、ＥＲＥＧ、ＥＹＳ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＲＺＢ、ＧＤＮＦ、ＧＦＥＲ、ＧＫＮ１、ＨＢＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＨＢＢ、ＩＮＨＢＣ、ＩＮＨＢＥ、ＩＮＳ、ＫＩＴＬＧ、ＭＡＮＦ、ＭＤＫ、ＭＩＡ、ＮＧＦ、ＮＯＶ、ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、ＮＲＧ４、ＮＲＴＮ、ＮＴＦ３、ＮＴＦ４、ＯＧＮ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＣ、ＰＤＧＦＤ、ＰＧＦ、ＰＲＯＫ１、ＰＳＰＮ、ＰＴＮ、ＳＤＦ１、ＳＤＦ２、ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ３、ＳＦＲＰ４、ＳＦＲＰ５、ＴＤＧＦ１、ＴＦＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＨＢＳ４、ＴＩＭＰ１、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、およびＷＩＳＰ３からなる群から選択される。

【0214】

本発明の別のさらにより特定の実施形態では、タンパク質は増殖因子からなる群から選択され、増殖因子は、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＧＤＮＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１からなる群から選択される。最も具体的には、タンパク質はＩＧＦ１、好ましくはヒトＩＧＦ１である。

【0215】

本発明のさらにより特定の実施形態では、タンパク質は、サイトカイン；増殖因子；およびホルモンからなる群から選択され、好ましくはサイトカインは、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－４、ＣＮＴＦ、ＭＳＴＮ、ＩＦＮＧ、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＳＰＰ１からなる群から選択され；増殖因子は、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＧＤＮＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１からなる群から選択され；およびホルモンは、ＥＰＯ、ＦＢＮ１、ＧＨ、ＧＨＲＨ、ＯＳＴＮ、ＵＣＮ、ＩＮＳからなる群から選択される。最も具体的には、タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、インスリン（ＩＮＳ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）およびインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される。

【0216】

本発明の１つの実施形態では、ｍＲＮＡは裸のｍＲＮＡである。好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、特に翻訳を改善するためにｍ７Ｇ（５’）Ｇ、ｍ７ＧｐｐｐＧキャップなどのアンチリバースＣＡＰアナログ、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）および／または３’末端のポリＡテールを含む。ｍＲＮＡは、当業者に公知の翻訳を促進するさらなる領域を有することができる。

【0217】

本発明の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、修飾および非修飾ヌクレオチドの組合せを含有する。より好ましい実施形態では、そのような修飾されたｍＲＮＡではウリジンヌクレオチドの１～１００％、好ましくは１０～１００％、より好ましくは５０～１００％、さらにより好ましくは９０～１００％、最も好ましくは１００％は修飾される。アデノシン、グアノシン、およびシチジン含有ヌクレオチドは、非修飾であってもまたは部分的に修飾されてもよく、それらは好ましくは非修飾型で存在する。好ましくは、ｍＲＮＡ中の修飾ウリジンヌクレオチドの含有量は５～２５％の範囲にある。本発明の特に好ましい実施形態では、修飾ウリジンヌクレオチドはＮ^１－メチルシュードウリジンである。本発明のより特に好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは修飾および非修飾ヌクレオチドの組合せを含有し、そのような修飾されたｍＲＮＡではウリジンヌクレオチドの１～１００％、好ましくは１０～１００％、より好ましくは５０～１００％、さらにより好ましくは９０～１００％、最も好ましくは１００％はＮ^１－メチルシュードウリジンである。

【0218】

本発明のより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、コドン最適化され、修飾および非修飾ヌクレオチドの組合せを含有するｍＲＮＡである。より好ましい実施形態では、そのような修飾されたｍＲＮＡではウリジンヌクレオチドの１～１００％、好ましくは１０～１００％、より好ましくは５０～１００％、さらにより好ましくは９０～１００％、最も好ましくは１００％は修飾される。アデノシン、グアノシン、およびシチジン含有ヌクレオチドは、非修飾であってもまたは部分的に修飾されてもよく、それらは好ましくは非修飾型で存在する。好ましくは、ｍＲＮＡ中の修飾ウリジンヌクレオチドの含有量は５～２５％の範囲にある。本発明の特に好ましい実施形態では、修飾ウリジンヌクレオチドはＮ^１－メチルシュードウリジンである。本発明のより特に好ましい実施形態では、ＲＮＡは修飾および非修飾ヌクレオチドの組合せを含有するｍＲＮＡであり、そのような修飾されたｍＲＮＡではウリジンヌクレオチドの１～１００％、好ましくは１０～１００％、より好ましくは５０～１００％、さらにより好ましくは９０～１００％、最も好ましくは１００％はＮ^１－メチルシュードウリジンである。

【0219】

本発明の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、タンパク質としてヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）をコードする核酸配列を含み、より好ましくはｍＲＮＡは、タンパク質としてヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）をコードする核酸配列を含む裸のｍＲＮＡである。本発明のこの好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、成熟ヒトＩＧＦ－１をコードする核酸配列を含む。
本発明のより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＧＦ１のプロペプチド、好ましくはヒトＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核酸配列、およびＩＧＦ１の成熟タンパク質、好ましくはヒトＩＧＦ１の成熟タンパク質をコードする核酸配列を含み、ＩＧＦ１のＥペプチドをコードする核酸配列を含まず、好ましくはＩＧＦ１のヒトＥペプチドをコードする核酸配列を含まない。
本発明のさらにより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＧＦ１のプロペプチド、好ましくはヒトＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核酸配列、ＩＧＦ１の成熟タンパク質、好ましくはヒトＩＧＦ１の成熟タンパク質をコードする核酸配列を含む。好ましくはｍＲＮＡは、ＩＧＦ１のＥペプチドをコードする核酸配列を含まず、より好ましくはＩＧＦ１のヒトＥペプチドをコードする核酸配列を含まない。本発明のさらにより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＧＦ１のプロペプチド、好ましくはヒトＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核酸配列、ＩＧＦ１の成熟タンパク質、好ましくはヒトＩＧＦ１の成熟タンパク質をコードする核酸配列、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む。好ましくはｍＲＮＡは、ＩＧＦ１のＥペプチドをコードする核酸配列を含まず、より好ましくはＩＧＦ１のヒトＥペプチドをコードする核酸配列を含まない。

【0220】

本発明のさらにより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＧＦ１の、好ましくは２７個のアミノ酸を有するヒトＩＧＦ１のプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド酸配列、および成熟ＩＧＦ１、好ましくは７０個のアミノ酸を有する成熟ヒトＩＧＦ１をコードするヌクレオチド配列を含み、好ましくはＩＧＦ１のＥペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まず、好ましくはＩＧＦ１のヒトＥペプチドをコードする核酸配列を含まない。
本発明のさらにより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＧＦ１の、好ましくは２７個のアミノ酸を有するヒトＩＧＦ１のプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド酸配列、成熟ＩＧＦ１、好ましくは７０個のアミノ酸を有する成熟ヒトＩＧＦ１をコードするヌクレオチド配列、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む。好ましくはｍＲＮＡは、ＩＧＦ１のＥペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まず、より好ましくはＩＧＦ１のヒトＥペプチドをコードする核酸配列を含まない。

【0221】

本発明の特定の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、２７個のアミノ酸を有するヒトＩＧＦ１のプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）をコードする核酸配列、および７０個のアミノ酸を有する成熟ヒトＩＧＦ１をコードするヌクレオチド酸配列を含み、好ましくはヒトＩＧＦ１のＥペプチド（Ｅドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列を含まず、２７個のアミノ酸を有するヒトＩＧＦ１のプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列、および７０個のアミノ酸を有する成熟ヒトＩＧＦ１をコードするヌクレオチド配列、およびＥペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ＵｎｉｐｒｏｔデータベースではＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０５０１９と呼ばれ、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースではそれぞれ、ＮＭ＿０００６１８．４、ＮＭ＿００１１１１２８５．２およびＮＭ＿００１１１１２８３．２と呼ばれる。

【0222】

本発明のさらにより特定の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号３８に示される２７個のアミノ酸を有するヒトＩＧＦ１のプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）をコードする核酸配列、および配列番号３９に示される７０個のアミノ酸を有する成熟ヒトＩＧＦ１をコードするヌクレオチド酸配列を含み、好ましくはヒトＩＧＦ１のＥペプチド（Ｅドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列を含まない。

【0223】

本発明のさらにより特定の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号３８に示される２７個のアミノ酸を有するヒトＩＧＦ１のプロペプチド（プロドメインとも呼ばれる）をコードする核酸配列、配列番号３９に示される７０個のアミノ酸を有する成熟ヒトＩＧＦ１をコードするヌクレオチド酸配列、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列、好ましくは、配列番号３０に示される脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードするヌクレオチド酸配列を含む。好ましくはｍＲＮＡは、ヒトＩＧＦ１のＥペプチド（Ｅドメインとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列を含まない。

【0224】

本発明の特定の好ましい実施形態では、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡは、配列番号８に示される核酸配列を含む。

【0225】

本発明のさらに特定の好ましい実施形態では、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡは、配列番号７に示されるＤＮＡ配列から転写された核酸配列を含む。好ましくは核酸配列は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで配列番号７に示されるＤＮＡ配列から転写される。

【0226】

本発明のより特定の好ましい実施形態では、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡは、ウリジンヌクレオチドの好ましくは１～１００％、より好ましくは５０～１００％、さらにより好ましくは９０～１００％、最も好ましくは１００％がＮ^１－メチルシュードウリジンである、配列番号８に示される核酸配列を含む。

【0227】

本発明のさらにより特定の好ましい実施形態では、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡは、ウリジンヌクレオチドの好ましくは１～１００％、より好ましくは５０～１００％、さらにより好ましくは９０～１００％、最も好ましくは１００％がＮ^１－メチルシュードウリジンである、配列番号７に示されるＤＮＡ配列から転写された核酸配列を含む。この実施形態では、ヌクレオチド配列は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで配列番号７に示されるＤＮＡ配列から好ましくは転写されるのに対し、ウリジンヌクレオチドとしてはＮ^１－メチルシュードウリジン－５’－トリホスフェート（Ｎ^１－メチルシュード－ＵＴＰ）、すなわち１００％ Ｎ^１－メチルシュード－ＵＴＰのみが、配列番号７に示されるＤＮＡ配列からの転写に使用される。

【0228】

本発明の好ましい実施形態では 脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドは、ヒトＢＤＮＦのシグナルペプチド、より好ましくは配列番号３１に示されるシグナルペプチド、特に配列番号３０に示される核酸配列によってコードされるヒトＢＤＮＦのシグナルペプチドである。

【0229】

本発明のより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、５’から３’に以下の順で：
ｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド；
ｉｉ）必要に応じて、タンパク質のプロドメイン；および
ｉｉｉ）成熟タンパク質
をコードする核酸配列含む。

【0230】

本発明のさらにより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、５’から３’に以下の順で：
ｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド；
ｉｉ）必要に応じて、ヒトＩＧＦのプロドメイン；および
ｉｉｉ）成熟ヒトＩＧＦ
をコードする核酸配列を含む。

【0231】

本発明の好ましい実施形態では、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドは、タンパク質の天然のシグナルペプチドに置き換わる。

【0232】

さらなる態様では本発明は、タンパク質およびシグナルペプチドをコードする核酸を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２を超える平均疎水性スコアを有し、シグナルペプチドは、
ｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって必要に応じて修飾されており、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド；
ｉｉ）前記タンパク質に相同なシグナルペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾される、前記タンパク質に相同なシグナルペプチド；ならびに
ｉｉｉ）自然状態でシグナルペプチドの機能を有さない天然に存在するアミノ酸配列であって、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって必要に応じて修飾されている、天然に存在するアミノ酸配列
からなる群から選択される、転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターを提供する。

【0233】

さらなる態様では本発明は、タンパク質および前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、タンパク質はオキシドレダクターゼではない、好ましくはチオレドキシンではない、より好ましくは桿体由来錐体生存因子ではない、タンパク質および前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターを提供する。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドおよびタンパク質に関して、本明細書の他の部分に記載されているのと同じことが当てはまる。

【0234】

さらなる態様では本発明は、タンパク質および前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、タンパク質は、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、タンパク質および前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターを提供する。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドおよびタンパク質に関して、本明細書の他の部分に記載されているのと同じことが当てはまる。

【0235】

さらなる態様では本発明は、上記に記載のｍＲＮＡおよび／または転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクターを含む治療用組成物を提供する。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドおよびタンパク質に関して、本明細書の他の部分に記載されているのと同じことが当てはまる。通常、本発明のｍＲＮＡは、好ましくは液体組成物である治療用組成物として提供される。液体組成物は、ｍＲＮＡが液体の溶液中に存在する任意の組成物である。本発明の１つの実施形態では、ｍＲＮＡは、水、または緩衝もしくは非緩衝水溶液に溶解される。溶液は、好ましくは水溶液である。故に、液体は、水、好ましくは滅菌水、より好ましくは「注射用水」（ＷＦＩ）または任意の他の緩衝もしくは非緩衝水溶液であってもよい。本発明の１つの実施形態では、液体組成物は、非緩衝溶液、好ましくは塩類溶液、より好ましくは薬学的に許容される塩の塩類溶液、さらにより好ましくはＮａＣｌ溶液、すなわち、食塩水である。好ましくは、塩類溶液は等張性であり、さらにより好ましくは、塩類溶液は生理的ｐＨ値を示す。本発明の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡが含有される溶液は緩衝溶液である。好ましくは、そのような溶液は血液と等張である。原則として、生理的範囲、特にｐＨ３．０～１０．５、より好ましくはｐＨ４．０～９．０の範囲で効果的に緩衝する任意のバッファーが使用され得る。好ましいバッファーは、酢酸塩バッファー、リン酸塩バッファー、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、炭酸塩バッファー、乳酸塩バッファーおよびクエン酸塩バッファーまたはリンゲル液、好ましくはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。故に、本発明のより好ましい実施形態では、ｍＲＮＡが含有される溶液はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。

【0236】

治療用組成物中のｍＲＮＡの濃度は特に重要ではなく、必要に応じて調整することができる。好ましくは、濃度は、０．０５～２０．０μｇ／μｌの範囲、より好ましくは０．１～１０．０μｇ／μｌの範囲、さらにより好ましくは０．２～５μｇ／ｌの範囲、特に０．４～２．０μｇ／μｌの範囲、より特に０．６～１．５μｇ／μｌの範囲、さらにより特に０．８０～１．２０μｇ／μｌの範囲にある。特に好ましいのは、０．０１μｇ～０．１ｇ、好ましくは０．１μｇ～０．０１ｇ、より好ましくは０．５μｇ～１ｍｇ、さらにより好ましくは０．５μｇ～１０μｇの範囲である。

【0237】

さらなる態様では本発明は、上記に記載のｍＲＮＡおよび／もしくは転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクターまたは治療用組成物、ならびに使用説明書、必要に応じてベクターマップ、必要に応じて宿主細胞、必要に応じて、宿主細胞の培養のための培養培地、および／または必要に応じて、トランスフェクトされた宿主細胞を選択および培養するための選択培地を含むキットを提供する。本発明のキットは、キットオブコンテンツとして（または該キットの形態で）提供されてもよい。キットは、例えば１つまたは複数の別々の容器に、本発明の治療用組成物の成分の１つまたは複数をさらに含んでもよい。例えば、キットは、ｍＲＮＡ（例えば乾燥形態の）、可溶化剤および（緩衝または非緩衝）水溶液を、例えばそれぞれ１つ、２つまたは３つ（またはそれ以上）の別々の容器で含んでもよい。キットはまた、取扱説明書または指示リーフレットも含んでもよい。

【0238】

さらなる態様では本発明は、医薬として使用するための上記に記載のｍＲＮＡ、転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクター、治療用組成物またはキットを提供する。シグナルペプチド、例えば脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドおよびタンパク質に関して、本明細書の他の部分に記載されているのと同じことが当てはまる。

【0239】

さらなる態様では本発明は、骨格筋損傷を処置する方法での使用のための、ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡを含むもしくは含有する治療用組成物を提供する。本発明はまた、対象における骨格筋損傷を処置するための医薬の製造のための、ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡを含むもしくは含有する治療用組成物の使用も提供する。
本発明はまた、ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡを含むもしくは含有する治療用組成物を対象に投与することを含む、対象における骨格筋損傷を処置する方法も提供する。

【0240】

筋断裂などの骨格筋損傷は、スポーツで生じる最も一般的な損傷の１つであり、その頻度は全ての持続的損傷の１０～５５％まで様々である。筋損傷は、伸張性筋収縮、伸長および筋肉の過負荷によって引き起こされ得る。全てのスポーツ関連損傷の９０％以上が、伸張性筋収縮、伸長または筋肉の過負荷のいずれかによって引き起こされる。骨格筋損傷は、筋肉が直接的な衝撃などの突然の大きな圧縮力を受けるときに生じる。
筋断裂では、筋肉が過剰で伸張性の張力を受け、筋線維の過度の緊張につながり、その結果、筋腱接合部（ＭＴＪ）付近の筋線維の断裂に至る。筋断裂は、医師によって処置される最も一般的な愁訴の１つであり、全てのスポーツ関連損傷の大部分を占める。ハムストリング筋複合体（ＨＭＣ）の損傷は、走っている間の急速な加速および減速を余儀なくさせ、伸張性筋収縮を必要とするスポーツに関与するアスリートにしばしば影響を与える。軽度の損傷は保存的処置によって容易に対処することができ、よりひどい損傷はハムストリング筋の完全断裂である。ハムストリング筋断裂は、分類のされ方に応じて保存的または外科的に処置される。軽度、中程度、または重度の断裂がある。軽度から中程度の断裂は保存的に処置され得るが、重度の断裂は外科的処置の明らかな適応となる。保存的処置は臨床症状によって決定され、凍結療法、圧迫包帯、固定、および弾性包帯の前の非ステロイド薬、抗炎症薬により直ちに開始し、患者が安定したら理学療法を開始する。超音波治療は治療選択肢として広く論じられているが、再生の最終転帰に対する有意な効果は見出されなかった。２週間以内に、疼痛の明らかな減少があるはずであるため、理学療法を増やして上述したような積極的な運動を含めることができる。しかし、外科的処置はリスクがないわけではなく、候補は慎重に選択されなければならないことが現場では認識されている（Ｊａｒｖｉｎｅｎ ＴＡ、Ｊａｒｖｉｎｅｎ ＴＬ、Ｋａａｒｉａｉｎｅｎ Ｍ、Ａａｒｉｍａａ Ｖ、Ｖａｉｔｔｉｎｅｎ Ｓ、Ｋａｌｉｍｏ Ｈ、Ｊａｒｖｉｎｅｎ Ｍ（２００７）Ｍｕｓｃｌｅ ｉｎｊｕｒｉｅｓ：ｏｐｔｉｍｉｓｉｎｇ ｒｅｃｏｖｅｒｙ． Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２１（２）：３１７～３３１頁． ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｂｅｒｈ．２００６．１２．００４；Ｈｏｒｓｔ Ｋ、Ｄｉｅｎｓｔｋｎｅｃｈｔ Ｔ、Ｓｅｌｌｅｉ ＲＭ、Ｐａｐｅ ＨＣ（２０１４） Ｐａｒｔｉａｌ ｒｕｐｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈａｍｓｔｒｉｎｇ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｍｐｌｅｘ：ａ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｐｔｉｏｎｓ． Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ Ｓｕｒｇ Ｔｒａｕｍａｔｏｌ ２４（３）：２８５－９． ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ００５９０－０１３－１３１５－ｘ）。現在の治療選択肢は、身体自体の治癒過程以上のものはほとんど提供しておらず、実際に、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が治癒過程を損なうことはあり得る。今日、利用可能な有効な薬学的治療がないため、満たされていない医療ニーズは高い。特に、回復過程を加速させ、損傷した筋肉の機能の増加をもたらす骨格筋損傷を処置するための有効な方法を提供する必要がある。

【0241】

本発明の好ましい実施形態では、骨格筋損傷を処置する方法での使用のためのｍＲＮＡは、増殖因子をコードするｍＲＮＡ、好ましくはヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）をコードするｍＲＮＡである。増殖因子をコードするｍＲＮＡは、通常、シグナル伝達ペプチドをコードする核配列、必要に応じて、増殖因子のプロペプチドをコードする核配列、および成熟増殖因子をコードする核配列を含む。ヒトＩＧＦ１をコードするｍＲＮＡは、好ましくはシグナル伝達ペプチドをコードする核配列、必要に応じて、ヒトＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核配列、および成熟ヒトＩＧＦ１をコードする核配列、さらにより好ましくはシグナル伝達ペプチドをコードする核配列、ヒトＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核配列、および成熟ヒトＩＧＦ１をコードする核配列を含み、ヒトＩＧＦ１のＥペプチドをコードする核配列を含まない。増殖因子をコードするｍＲＮＡによって含まれるシグナル伝達ペプチドは、増殖因子に相同なシグナル伝達ペプチド、すなわち、増殖因子のシグナル伝達ペプチドであってもよく、または増殖因子にとって異種のシグナル伝達ペプチドであってもよく、好ましくは増殖因子にとって異種のシグナル伝達ペプチド、より好ましくは脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、特にヒトＢＤＮＦのシグナルペプチドである。ヒトＩＧＦ１をコードするｍＲＮＡによって含まれるシグナル伝達ペプチドは、ヒトＩＧＦ１に相同なシグナル伝達ペプチド、すなわち、ヒトＩＧＦ１のシグナル伝達ペプチドであってもよく、またはヒトＩＧＦ１にとって異種のシグナル伝達ペプチドであってもよく、好ましくはヒトＩＧＦ１にとって異種のシグナル伝達ペプチド、より好ましくは脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、特にヒトＢＤＮＦのシグナルペプチドである。

【0242】

故に本発明のより好ましい実施形態では、骨格筋損傷を処置する方法での使用のためのｍＲＮＡは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、特にヒトＢＤＮＦのシグナルペプチドをコードする核配列、必要に応じて、ヒトＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核配列および成熟ヒトＩＧＦ－１をコードする核配列を含む、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）をコードするｍＲＮＡである。本発明のさらにより好ましい実施形態では、骨格筋損傷を処置する方法での使用のためのｍＲＮＡは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、特にヒトＢＤＮＦのシグナルペプチドをコードする核配列、必要に応じて、ヒトＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核配列および成熟ヒトＩＧＦ－１をコードする配列を含み、ヒトＩＧＦ１のＥペプチドをコードする核配列を含まない、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）をコードするｍＲＮＡである。

【0243】

故にさらなる態様では本発明は、骨格筋損傷を処置するための方法での使用のための、
ｉ）ＩＧＦ１、好ましくはヒトＩＧＦ１；および
ｉｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、好ましくはヒトＢＤＮＦのシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡを提供する。
本発明はまた、対象における骨格筋損傷を処置するための医薬の製造のための、
ｉ）ＩＧＦ１、好ましくはヒトＩＧＦ１；および
ｉｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、好ましくはヒトＢＤＮＦのシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡの使用も提供する。

【0244】

本発明はまた、
ｉ）ＩＧＦ１、好ましくはヒトＩＧＦ１；および
ｉｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、好ましくはヒトＢＤＮＦのシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡを対象に投与することを含む、対象における骨格筋損傷を処置する方法も提供する。
好ましくは本発明は、骨格筋損傷を処置するための方法での使用のための、
ｉ）成熟ＩＧＦ１、好ましくは成熟ヒトＩＧＦ１；
ｉｉ）必要に応じてＩＧＦ１の、好ましくはヒトＩＧＦ１のプロドメイン；
ｉｉｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、好ましくはヒトＢＤＮＦのシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡを提供する。
本発明はまた、対象における骨格筋損傷を処置するための医薬の製造のための、
ｉ）成熟ＩＧＦ１、好ましくは成熟ヒトＩＧＦ１；
ｉｉ）必要に応じてＩＧＦ１の、好ましくはヒトＩＧＦ１のプロドメイン；
ｉｉｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、好ましくはヒトＢＤＮＦのシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡの使用も提供する。

【0245】

本発明はまた、
ｉ）成熟ＩＧＦ１、好ましくは成熟ヒトＩＧＦ１；
ｉｉ）必要に応じてＩＧＦ１の、好ましくはヒトＩＧＦ１のプロドメイン；
ｉｉｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、好ましくはヒトＢＤＮＦのシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡを対象に投与することを含む、対象における骨格筋損傷を処置する方法も提供する。

【0246】

骨格筋損傷を処置するための方法での使用のための、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡに関して、本明細書の他の部分に記載されているのと同じことが当てはまる。本発明の特定の好ましい実施形態では、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡは、配列番号８に示される核酸配列を含む。本発明のさらに特定の好ましい実施形態では、ヒトインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡは、配列番号７に示されるＤＮＡ配列から転写された核酸配列を含む。好ましくは核酸配列は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで配列番号７に示されるＤＮＡ配列から転写される。

【0247】

ｍＲＮＡおよび／または治療用組成物は、当業者に公知の手段、好ましくは注射、より好ましくは筋肉内注射によって、典型的には針を備えたシリンジを使用して細胞および組織、例えば骨格筋に適用することができる。原則として、針と組み合わせた任意の市販のシリンジがこの目的のために使用され得る。好ましいのは皮下注射針である。針の直径は針ゲージによって示される（Ｇ；スタブの針ゲージによる）。典型的には、７Ｇ（最大）～３３Ｇ（最小）の医療用範囲の針が使用され得る。

【0248】

いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡおよび／または治療用組成物は、直接ＤＮＡ移入（Ｗｏｌｆｆら（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７、１４６５～１４６８頁）により細胞に送達されてもよい。ｍＲＮＡおよび／または治療用組成物は、細胞膜を穏やかに機械的に破壊し、細胞を一時的に透過処理した後で細胞に送達されてもよい。膜のそのような穏やかな機械的破壊は、細胞に小さな開口部を穏やかに通過させて達成することができる（Ｓｈａｒｅｉら ＰＬＯＳ ＯＮＥ（２０１５）１０（４）、ｅ０１１８８０３）。別の実施形態では、ｍＲＮＡおよび／または治療用組成物は、リポソーム媒介ＤＮＡ移入により細胞に送達されてもよい（例えば、ＧａｏおよびＨｕａｎｇ（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｃｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ． １７９、２８０～２８５頁、Ｃｒｙｓｔａｌ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ． １、１５～１７頁、Ｃａｐｌｅｎら（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ． ３、３９～４６頁）。用語「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によって形成される様々な単層および多層小胞脂質ビヒクルを包含し得る。ｍＲＮＡは、リポソームの水性内部にカプセル化され、リポソームの脂質二重層内に分散され、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と会合される連結分子を介してリポソームに結合され、リポソームに封入され、またはリポソームと複合体化され得る。

【0249】

本発明の１つの実施形態では、ＲＮＡまたは治療用組成物は、ＲＮＡが裸のＲＮＡとして含有される治療用組成物、すなわち、液体組成物の形態で骨格筋に直接投与される（好ましくは注射によって）。組成物およびその中に含有されるＲＮＡの投与方法および特性に関して、本明細書の他の部分に記載されているのと同じことが当てはまる。好ましい実施形態では、本発明の液体組成物およびｍＲＮＡはそれぞれ、骨格筋に直接投与される。これに関連して、最も好ましい投与方法は、注射、すなわち、筋肉内注射である。

【0250】

原則として、できる限り早期に、すなわち、骨格筋損傷のできるだけ早い段階で、ｍＲＮＡおよび治療用組成物をそれぞれ投与することが本発明の文脈において想定される。例えば、この段階は、初発症状（複数可）が観察された時点である（例えば疼痛）。しかし、診断後のあらゆる時点が可能性があり、有意義であり、それ故に、本発明により想定される。例えば、外科的処置（例えば筋断裂後の）がある場合、ｍＲＮＡおよび治療用組成物は、それぞれ、外科的処置中、ただし、外科的処置の少なくとも直後に既に投与されてもよい。

【0251】

１つの実施形態では、ｍＲＮＡおよび治療用組成物は、それぞれ、骨格筋再生の炎症期および早期増殖期それぞれの期間中またはその前でさえ投与される。例えば、投与は、損傷後０日目～１０日目の間、好ましくは０日目～７日目の間であってもよい。より具体的には、投与は、損傷後０、１、２、３、４、５、６または７日目であってもよい。好ましくは投与は、損傷後１日目であり、さらにより好ましくは０日目である。好ましい実施形態では、治療用組成物は、前記骨格筋損傷の後の炎症期の前に投与される。特に好ましいのは、損傷後１日目に投与され、損傷後４日目に反復される投与である。

【0252】

本発明によるｍＲＮＡおよび治療用組成物それぞれの投与は、例えば治療される損傷の経過に応じて、少なくとも１回、ただし好ましくは数回（例えば３～５回）反復することができる。反復投与は、１、２、３、４、５、６、７、８、または９日後、好ましくは２、３、４、５、６、７日目後、より好ましくは３、４または５日目後であってもよい。反復投与は、数週間おき（例えば１、２、３、または４週間おき）、最大数日おき（例えば１、２、３、４、５または６日おき）、好ましくは２または３日おきであってもよい。

【0253】

本発明のｍＲＮＡまたは治療用組成物は、適切な用量で患者に投与することができる。投与レジメンは、主治医によって、例えば臨床的要因に基づき決定され得る。医学分野で周知の通り、任意の１人の患者に対する投与量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与のタイミングおよび経路、一般的健康、および同時に投与される他の薬物を含む多くの要因に依存する。しかし、当業者／主治医は、例えばｉｎ ｖｉｖｏまたはエクスビボで、投与される活性物質の（治療）有効濃度および／または投与量を容易に推定する立場にある。対応する試料は、例えば、骨格筋から（例えば適切なプローブによって）採取することができ、活性化合物（裸のＲＮＡ）は前記試料で検出することができ、その対応する濃度は、前記試料で例えばＨＰＬＣによって決定することができる。

【0254】

活性物質（例えばｍＲＮＡ）の典型的な用量は、例えば、１ｎｇ～数グラムの範囲、好ましくは０．１μｇ～１ｇの範囲、好ましくは１μｇ～０．１ｇの範囲、より好ましくは１０μｇ～１ｍｇの範囲、さらにより好ましくは１５μｇ～０．５ｍｇの範囲、および最も好ましくは２０μｇ～１００μｇの範囲であってもよい。特に好ましいのは、０．０１μｇ～０．１ｇ、好ましくは０．１μｇ～０．０１ｇ、より好ましくは０．５μｇ～１ｍｇ、さらにより好ましくは０．５μｇ～１０μｇの範囲である。これはヒト患者に特に当てはまる。（ｍ）ＲＮＡ治療に適用されるとき、発現のための（ｍ）ＲＮＡの投与量は、この範囲に相当するべきである；しかし、この例示的範囲より下または上の用量もまた、原則として、特に上述の要因を考慮しながら想定される、一般に、治療用組成物の定期的投与としてのレジメンは、１日につき体重１キログラムあたり０．１μｇ～１０ｍｇ単位の範囲、好ましくは１μｇ～１ｍｇ単位の範囲、より好ましくは１０μｇ～０．１ｍｇ単位の範囲であるべきである。この場合も、これは特にヒト患者に当てはまる。進展は定期的な評価によって監視することができる。投与量は異なり得るが、本発明の液体組成物の構成素としての（ｍ）ＲＮＡの注射による投与のための好ましい投与量は、１回の注射あたり（ｍ）ＲＮＡ分子約１０^５～１０^１５コピーである。この場合も、これは特にヒト患者に当てはまる。

【0255】

特に、本発明の治療用組成物は、患者、好ましくはヒト患者／ヒトに投与されることが想定される。しかし、本明細書に記載された骨格筋損傷は、例えば、ペット（例えばイヌ、ネコ、ウサギ、ネズミおよびマウス）、家畜（例えばウシ、ブタ、ヒツジ）、ウマ（例えば競走馬）もしくはポニー、ラクダ（例えばレース用ラクダ）、またはトリ（例えばニワトリ、シチメンチョウ、オウム）のようなヒト以外の動物対象／患者においても処置（または予防）され得る。

【0256】

特に、ｍＲＮＡを含む治療用組成物は、例えば骨格筋損傷などの損傷、障害および／または疾患の治癒過程で治療的に活性である。

【0257】

本発明のより特定の好ましい実施形態では、医薬として使用するためのインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）をコードするｍＲＮＡは、配列番号７のＤＮＡ配列から転写された核酸配列を含む。本発明のさらにより特定の好ましい実施形態では、医薬として使用するためのインスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）をコードするｍＲＮＡは、配列番号８の核酸配列を含む。

【0258】

本発明の治療用組成物のいずれも、取扱説明書または指示リーフレットと一緒に提供され得る。取扱説明書／リーフレットは、本明細書に記載の疾患または障害（骨格筋損傷）を本発明により処置（または予防）する方法の当業者／主治医向けの手引きを含んでもよい。特に、取扱説明書／リーフレットは、本明細書に記載された送達／投与の方法および送達／投与レジメン（例えば、送達／投与の経路、投与レジメン、送達／投与のタイミング、送達／投与の頻度）それぞれに関する手引きを含んでもよい。特に、取扱説明書／リーフレットは、ｍＲＮＡが、それぞれ、骨格筋に注射されるおよび／または骨格筋への注射用に調製されるという使用説明書を含んでもよい。取扱説明書／リーフレットは、ｍＲＮＡが、それぞれ、骨格筋損傷の後の炎症期中の投与用に調整されるという使用説明書をさらに含んでもよい。原則として、送達／投与の方法および送達／投与レジメンに関して本明細書の他の部分に述べられていることは、それぞれ、取扱説明書／リーフレットにそれぞれの使用説明書として含まれ得る。

【実施例0259】

実施例１
方法および材料
ＩＧＦ１のクローニングおよびシグナル伝達ペプチドの交換
ＩＧＦ１は、小胞体で合成され、ゴルジ装置を介して分泌されて細胞外増殖因子として自己分泌および傍分泌的に作用する７０個のアミノ酸ポリペプチドである。トランスフェクトされた細胞からのｍＲＮＡ誘導ＩＧＦ１の適切な発現および分泌を確保するために、ｍＲＮＡ配列はヒトＩＧＦ１の天然のＮ末端プレ－プロ配列（プレ－プロ－ＩＧＦ１）を含んだ。この配列は、２１個のアミノ酸（ヌクレオチド１～６３）を有するヒトＩＧＦ１のプレドメイン（シグナル伝達ペプチド）をコードする配列、および２７個のアミノ酸（ヌクレオチド６４～１４４）を有するヒトプロドメインをコードする配列からなった。さらに、コンストラクトは、７０個のアミノ酸（ヌクレオチド１４５～３５４）を有する成熟ヒトＩＧＦ１の完全コード配列をコードする配列を含有した。Ｃｐｄ．２～７では、プレドメイン（シグナル伝達ペプチド、ヌクレオチド１～６３）を、ＩＧＦ２、ＡＬＢ、ＢＤＮＦ、ＣＸＣＬ１２のそれぞれのプレドメイン、または合成シグナル伝達ペプチド１もしくは２に交換した。Ｃ末端Ｅドメインは、コンストラクトに加えなかった。要約すると、クローニングベクターは、ヒトプレ－プロ－ＩＧＦ１ ＤＮＡのコピーをＥペプチド情報なしで含有し、Ｃｐｄ．１として定義されたのに対し、Ｃｐｄ．２～７は代替プレドメイン（シグナル伝達ペプチド）を含有した。図１は、そのプレドメイン、プロドメインおよびコードドメインによってコードされるＩＧＦ１のＤＮＡおよびＲＮＡ配列を図示する。図２は、ＩＧＦ２プレドメインによってコードされるＩＧＦ１ならびにそのプロドメインおよびコードドメインのＤＮＡおよびＲＮＡ配列を図示する。図３は、ＡＬＢプレドメインによってコードされるＩＧＦ１ならびにそのプロドメインおよびコードドメインのＤＮＡおよびＲＮＡ配列を図示する。図４は、ＢＤＮＦプレドメインによってコードされるＩＧＦ１ならびにそのプロドメインおよびコードドメインのＤＮＡおよびＲＮＡ配列を図示する。図５ は、ＣＸＣＬ１２プレドメインによってコードされるＩＧＦ１ならびにそのプロドメインおよびコードドメインのＤＮＡおよびＲＮＡ配列を図示する。図６は、合成シグナル伝達ペプチド１プレドメインによってコードされるＩＧＦ１ならびにそのプロドメインおよびコードドメインのＤＮＡおよびＲＮＡ配列を図示する。図７は、合成シグナル伝達ペプチド２プレドメインによってコードされるＩＧＦ１ならびにそのプロドメインおよびコードドメインのＤＮＡおよびＲＮＡ配列を図示する。図８は、Ｃｐｄ．１インサートを含むｐＶＡＸ．Ａ１２０ベクター（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）を図示する。図９は、Ｃｐｄ．２インサートを含むｐＭＡ－Ｔベクター（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）を図示する。図１０は、Ｃｐｄ．３インサートを含むｐＭＡ－Ｔベクターを図示する。図１１は、Ｃｐｄ．４インサートを含むｐＭＡ－Ｔベクターを図示する。図１２は、Ｃｐｄ．５インサートを含むｐＭＡ－Ｔベクターを図示する。図１３は、Ｃｐｄ．６インサートを含むｐＭＡ－ＲＱベクター（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）を図示する。図１４は、Ｃｐｄ．６インサートを含むｐＭＡ－ＲＱベクター（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）を図示する。図１５は、Ｃｐｄ．２～７を増幅するのに利用されたプライマーを示す。図１６は、遺伝子名、ＵｎｉＰｒｏｔ数、プレドメインのＤＮＡおよびアミノ酸配列ならびにベクターを示して種々のプレドメインの識別をまとめている。Ｃｐｄ．６およびＣｐｄ．７に関して、これらが人工プレドメインであったため遺伝子名は存在しない。Ｃｐｄ．１～７のＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列のコドン最適化は、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、ＭＡ）を使用して行った。

【0260】

プレ－プロ－ＩＧＦ１ ＤＮＡ配列のオープンリーディングフレームは、ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ制限酵素認識部位を含むＧｅｎｅＡｒｔ（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、ＭＡ）から合成し、同じ制限酵素を使用してｐＶＡＸ１．Ａ１２０ベクターにサブクローニングした。ベクター全体のＤＮＡ配列を図８に示す。クローニングしたインサートの配向および塩基配列を、いくつかのクローンのサンガー配列決定によって確認した。成功したクローンを、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）ｍＲＮＡ生産の鋳型として選択した。代替プレドメイン変異体Ｃｐｄ．２～Ｃｐｄ．７については、ｐＭＡ－Ｔ（図９～１２）およびｐＭＡ－ＲＱ（図１３～１４）ベクターをＩＶＴの鋳型として使用した。全てのＩＶＴ反応が、同一のポリＡ１２０テールを含むｍＲＮＡをもたらした。

【0261】

Ｃｐｄ．８～Ｃｐｄ．３９ ｍＲＮＡにおけるシグナル伝達ペプチドの交換
Ｃｐｄ．８～２６およびＣｐｄ．３９では、ＩＧＦ１のプレドメイン（シグナル伝達ペプチド、ヌクレオチド １～６３）（すなわち、Ｃｐｄ．１）を、ＬＴＢＰ２（Ｃｐｄ．８；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｑ１４７６７）、ＩＧＦＡＬＳ（Ｃｐｄ．９；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ３５８５８）、ＩＮＳ（Ｃｐｄ．１０；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１３０８）、）、Ｅｐｏ（Ｃｐｄ．１１；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１５８８）、ＣＳＦ３（Ｃｐｄ．１２；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０９９１９）、ＮＧＦ（Ｃｐｄ．１３；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１１３８）、ＦＧＦ５（Ｃｐｄ．１４；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ１２０３４）、ＦＨＲ２（Ｃｐｄ．１５；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ３６９８０）、ＩＢＰ５（Ｃｐｄ．１６；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２４５９３）、ＮＴＦ３（Ｃｐｄ．１７；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２０７８３）、ＰＡＴＥ２（Ｃｐｄ．１８；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｑ６ＵＹ２７）、ＳＯＤ３（Ｃｐｄ．１９；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０８２９４）、ＧＬＲのコード配列の一部（Ｃｐｄ．２０；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ４７８７１）、ＩＧＦ１の修飾プレドメイン配列（Ｃｐｄ．２１；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０５０１９）、ＩＧＦ２の修飾プレドメイン配列（Ｃｐｄ．２２；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１３４４）、ＣＸＣＬ１２の修飾プレドメイン配列（Ｃｐｄ．２３；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ４８０６１）、ＢＤＮＦの修飾プレドメイン配列（Ｃｐｄ．２４；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２３５６０）、ＩＧＦ１の修飾プロドメイン配列（Ｃｐｄ．２５；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０５０１９）、ＡＬＰＩの修飾プロドメイン配列（Ｃｐｄ．３９；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０９９２３）およびＩＮＳの修飾プレドメイン配列（Ｃｐｄ．２６；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１３０８）のそれぞれのプレドメインに交換した。Ｃｐｄ．１と同様に、全ての上記に指定した化合物はＥペプチドがなかった。Ｃｐｄ．８～２６およびＣｐｄ．３９のＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列のコドン最適化は、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、ＭＡ）を使用して行った。

【0262】

Ｃｐｄ．２７は、２７個のアミノ酸（ヌクレオチド１～８１）を有するヒトエリスロポエチンのプレドメイン（シグナル伝達ペプチド）をコードする配列（Ｅｐｏ；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１５８８）、および１６６個のアミノ酸（ヌクレオチド８２～４９８）を有するヒトエリスロポエチンのコード鎖をコードする配列からなった。Ｃｐｄ．２８およびＣｐｄ．２９では、Ｅｐｏのプレドメイン（シグナル伝達ペプチド、ヌクレオチド１～８１）を、Ｅｐｏの修飾プレドメイン配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１５８８）およびＢＤＮＦのプレドメイン配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２３５６０）に交換した。Ｃｐｄ．２７～２９のＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列のコドン最適化は、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、ＭＡ）を使用して行った。

【0263】

Ｃｐｄ．３０は、２４個のアミノ酸（ヌクレオチド１～７２）を有するヒトインスリンのプレドメイン（シグナル伝達ペプチド）をコードする配列（ＩＮＳ；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１３０８）、および３０個のアミノ酸（ヌクレオチド７３～１６２を有する）Ｂ鎖ドメインをコードする配列、および３１個のアミノ酸（ヌクレオチド１６３～２５５）を有する結合ペプチド（Ｃペプチド）ドメインをコードする配列、および２１個のアミノ酸（ヌクレオチド２５６～３３０）を有するＡ鎖ドメインをコードする配列からなった。Ｃｐｄ．３１およびＣｐｄ．３２では、ＩＮＳのプレドメイン（シグナル伝達ペプチド、ヌクレオチド１～７２）を、ＩＮＳの修飾プレドメイン配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１３０８）およびＢＤＮＦのプレドメイン配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２３５６０）に交換した。Ｃｐｄ．３０～３２のＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列のコドン最適化は、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、ＭＡ）を使用して行った。

【0264】

Ｃｐｄ．３３は、２４個のアミノ酸（ヌクレオチド１～７２）を有するヒトインターロイキン４のプレドメイン（シグナル伝達ペプチド）をコードする配列（ＩＬ－４；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０５１１２）、および１２９個のアミノ酸（ヌクレオチド７３～３８７）を有するコード鎖ドメインをコードする配列からなった。Ｃｐｄ．３４およびＣｐｄ．３５では、ＩＬ－４のプレドメイン（シグナル伝達ペプチド、ヌクレオチド１～７２）を、ＩＬ－４の修飾プレドメイン配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０５１１２）およびＦＧＦ５のプレドメイン配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１３０８）に交換した。Ｃｐｄ．３３～３５のＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列のコドン最適化は、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、ＭＡ）を使用して行った。

【0265】

Ｃｐｄ．３６は、２４個のアミノ酸（ヌクレオチド１～５４）を有するヒトインターロイキン１０のプレドメイン（シグナル伝達ペプチド）をコードする配列（ＩＬ－１０；Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２２３０１）、および１６０個のアミノ酸（ヌクレオチド５５～５３４）を有するコード鎖ドメインをコードする配列からなった。Ｃｐｄ．３７およびＣｐｄ．３８では、ＩＬ－１０のプレドメイン（シグナル伝達ペプチド、ヌクレオチド１～５４）を、ＩＬ－１０の修飾プレドメイン配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２２３０１）およびＢＤＮＦのプレドメイン配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２３５６０）に交換した。Ｃｐｄ．３６～３８のＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列のコドン最適化は、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、ＭＡ）を使用して行った。

【0266】

Ｃｐｄ．１～３９のシグナルペプチドのアミノ酸配列およびＤＮＡ配列ならびにＣｐｄ．１～３９それぞれのＲＮＡ配列およびＤＮＡ配列およびベクターを、以下の表１に示す。

【0267】

Ｃｐｄ．１～Ｃｐｄ．７ ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）
Ｃｐｄ．１を含有するｐＶＡＸ．Ａ１２０ベクター（配列番号１５）は、Ｔ７プロモーターおよび１２０ｂｐ長のポリＡテールも有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）を使用したｍＲＮＡ生産の前にポリＡテールの下流でＸｈｏＩ酵素を用いて該ベクターを直線状にした。ｐＭＡ－ＴおよびｐＭＡ－ＲＱベクターについては、相同なプライマー対（配列番号２２および２３）をＰＣＲベースのＩＶＴ－ｍＲＮＡ生産に使用した（図１５）。リバースプライマーは、ポリＡテールを成熟ｍＲＮＡに含めるために１２０ｂｐポリＡを含有した。直線状プラスミドおよびＰＣＲアンプリコンの両方を、ＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔ Ｔ７キットのＴ７ ＲＮＡポリメラーゼ（ｗｗｗ．ａｍｂｉｏｎ．ｃｏｍ）によって行われるＩＶＴの鋳型として使用した。全てのｍＲＮＡは、５’末端のアンチリバースＣＡＰアナログ（ＡＲＣＡ；［ｍ７Ｇ（５’）Ｇ］）を用いて生産し、１００％ Ｎ１－メチルシュード－ＵＴＰ（ｗｗｗ．ｔｒｉｌｉｎｋ．ｃｏｍ）を用いて化学的に修飾した。ＭＥＧＡｃｌｅａｒキット（ｗｗｗ．ａｍｂｉｏｎ．ｃｏｍ）を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡを精製し、Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ ＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒのＲＮＡ ６０００ Ｎａｎｏキット（ｗｗｗ．ａｇｉｌｅｎｔ．ｃｏｍ）を使用して品質および濃度について分析した。

【0268】

Ｃｐｄ．１およびＣｐｄ．８～Ｃｐｄ．３９ ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）
Ｃｐｄ．１（配列番号４０； ｐＶＡＸ．Ａ１２０ベクターへのサブクローニング前）およびＣｐｄ．８～Ｃｐｄ．３９をコードするｐＭＡ－ＴおよびｐＭＡ－ＲＱベクターについては、相同なプライマー対（配列番号２２および２３）をＰＣＲベースのＩＶＴ－ｍＲＮＡ生産に使用した（図１５）。リバースプライマーは、ポリＡテールを成熟ｍＲＮＡに含めるために１２０ｂｐポリＡを含有した。ＰＣＲアンプリコンを、ＭＥＧＡｓｃｒｉｐｔ Ｔ７キットのＴ７ ＲＮＡポリメラーゼ（ｗｗｗ．ａｍｂｉｏｎ．ｃｏｍ）によって行われるＩＶＴの鋳型として使用した。全てのｍＲＮＡは、５’末端のアンチリバースＣＡＰアナログ（ＡＲＣＡ；［ｍ７Ｇ（５’）Ｇ］）を用いて生産し、１００％ Ｎ１－メチルシュード－ＵＴＰ（ｗｗｗ．ｔｒｉｌｉｎｋ．ｃｏｍ）を用いて化学的に修飾した。ＭＥＧＡｃｌｅａｒキット（ｗｗｗ．ａｍｂｉｏｎ．ｃｏｍ）を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡを精製し、ＲＮＡアガロースゲル電気泳動を使用して品質および濃度について分析した。

【0269】

ＨＥＫ２９３Ｔ、Ｃ２Ｃ１２およびＨｅｐＧ２細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ヒト胎児性腎細胞２９３（ＨＥＫ２９３Ｔ；ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－１５７３、ロックビル、ＭＤ、ＵＳＡ）は、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、およびペニシリン－ストレプトマイシン－アンホテリシンＢ混合物（８８２０８７、Ｂｉｏｚｙｍ、オルデンドルフ、ドイツ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｒｏｍ．ｃｏｍ）で維持した。細胞を９６ウェル培養プレートに７，０００～２０，０００細胞／ウェルで播種し、トランスフェクションの前に５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で２４時間インキュベートした。トランスフェクションの前に培養密度＜６０％に達するように、抗生物質なしで１０％のＦＢＳを含有するＤＭＥＭ増殖培地で細胞を増殖させた。

【0270】

ヒト肝がん細胞株ＨｅｐＧ２（カタログ番号８５０１１４３０、ＥＣＡＣＣ ＵＫ）は、１０％ウシ胎児血清およびペニシリン－ストレプトマイシン－アンホテリシンＢ混合物（８８２０８７、Ｂｉｏｚｙｍ、オルデンドルフ、ドイツ）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で増殖させた。ＨｅｐＧ２細胞を、２日おきおよび５日おきにそれぞれ１：２および１：４の分割比で継代培養した。細胞を、トランスフェクションの２４時間前に２０，０００～４０，０００細胞／ウェルの密度で９６ウェルマイクロタイタープレートに播種した。トランスフェクションの前に３０～４０％培養密度に達するように、抗生物質なしで１０％のＦＢＳを含有するＤＭＥＭ増殖培地で細胞を増殖させた。

【0271】

マウス筋芽細胞株Ｃ２Ｃ１２（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－１７７２、ロックビル、ＭＤ、ＵＳＡ）は、１０％ウシ胎児血清およびペニシリン－ストレプトマイシン－アンホテリシンＢ混合物（８８２０８７、Ｂｉｏｚｙｍ、オルデンドルフ、ドイツ）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で増殖させた。Ｃ２Ｃ１２細胞を、２日おきおよび５日おきにそれぞれ１：２および１：４の分割比で継代培養した。細胞を、トランスフェクションの２４時間前に２０，０００細胞／ウェルの密度で９６ウェルマイクロタイタープレートにプレーティングした。トランスフェクションの前に８０～９０％培養密度に達するように、抗生物質なしで２％のＦＢＳを含有するＤＭＥＭ増殖培地で細胞を増殖させた。

【0272】

その後、リポフェクタミン２０００（ｗｗｗ．ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．ｃｏｍ）を使用して製造者の使用説明書に従って、種々のｍＲＮＡ変異体を０．３μｇで細胞にトランスフェクトした。ＤＭＥＭ １００μｌを除去し、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ ５０μｌならびにＯｐｔｉ－ＭＥＭ中５０μｌ ｍＲＮＡおよびリポフェクタミン２０００複合体（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）に置き換えた。５時間後、培地を新鮮な培地に置き換え、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で２４時間、プレートをインキュベートした。

【0273】

ＨＳｋＭＣ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨＳｋＭＣ細胞を、マイクロタイタープレートの９６ウェルあたり４０．０００細胞の密度でＳｋＭ増殖培地（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ、ハイデルベルク、ドイツ）にプレーティングした。細胞を、加湿雰囲気中、３７℃インキュベーターおよび５％ ＣＯ_２で＞９０％のコンフルエンスまで１日増殖させた。トランスフェクション当日、リポフェクタミン２０００（ｗｗｗ．ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．ｃｏｍ）を使用して、細胞を２μｇの種々のｍＲＮＡ変異体（Ｃｐｄ．１または４）で処理した。したがって、１００μｌ培地を除去し、１μｌリポフェクタミン／ウェルを２μｇ ｍＲＮＡ／ウェルと一緒にＯＰＴＩＭＥＭ培地（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）に添加した。細胞を次いで加湿雰囲気中、３７℃および５％ ＣＯ_２で２４時間インキュベートした。

【0274】

ＩＭＲ３２細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
トランスフェクションの２４時間前に、ヒト白色人種神経芽細胞腫ＩＭＲ３２細胞（カタログ番号８６０４１８０９、ＥＣＡＣＣ、ＵＫ）を、１０％（ｖ／ｖ）加熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、Ｌ－グルタミン（２ｍＭ）および非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ、１×）を補充したイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ、Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ カタログ番号１－３１Ｓ０１－Ｉ、ｗｗｗ．ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ．ｃｈ）に、９６プレコートＢＲＡＮＤマイクロタイタープレート（カタログ番号７８２０８２）の１ウェルあたり密度６０，０００細胞でプレーティングした。細胞を、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で一晩増殖させた。ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ（ｗｗｗ．ｐｏｌｙｐｌｕｓ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．ｃｏｍ）を使用して製造者の使用説明書に従って、０．３μｇのｍＲＮＡコンストラクトを細胞にトランスフェクトした。簡単には、０．１μｇ ｍＲＮＡコンストラクトあたり０．２５μｌ ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ試薬を混合して、ｍＲＮＡ／ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ複合体を形成した。室温で１５分間インキュベート後、ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ複合体を１０μｌとして添加し、トランスフェクション５時間後、培地／ｍＲＮＡ／ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒをウェルから除去し、新鮮な１００μｌ増殖培地と置き換え、プレートを５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で２４時間インキュベートした。

【0275】

Ａ５４９細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ヒト肺癌細胞株（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス スイス カタログ番号６０１２８０４）を、１０％ ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｃｈｅｒ、バーゼル、スイス カタログ番号１０５００－０６４）を補充したダルベッコ改変イーグル培地－高グルコース（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス スイス カタログ番号Ｄ０８２２）で維持した。トランスフェクションの２４時間前に、Ａ５４９細胞を通常の増殖培地に１０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングした。その後、リポフェクタミン２０００（ｗｗｗ．ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．ｃｏｍ）を使用して製造者の使用説明書に従って、種々のｍＲＮＡ（０．３～０．６μｇ）を細胞にトランスフェクトした。ＤＭＥＭ １００μｌを除去した。Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）５０μｌを各ウェルに添加し、その後、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ中５０μｌ ｍＲＮＡおよびリポフェクタミン２０００複合体を添加した。インキュベーションの５時間後、培地を新鮮な増殖培地に置き換え、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で２４時間、プレートをインキュベートした。

【0276】

ＴＨＰ－１細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ヒト単球白血病細胞株ＴＨＰ－１（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス スイス、カタログ番号８８０８１２０１）を、増殖培地（１０％ ＦＢＳおよび２ｍＭグルタミンを補充したＲＰＭＩ １６４０で維持した。トランスフェクションの７２時間前に、細胞を９６ウェル細胞培養物プレートに３０，０００ ＴＨＰ－１細胞で播種し、増殖培地に希釈したホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス スイス、カタログ番号Ｐ８１３９）５０ｎＭで活性化した。リポフェクタミン２０００（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）を使用して、ｍＲＮＡ（３００～６００ｎｇ／ウェル）を細胞にトランスフェクトし、ＤＭＥＭ １００μｌを除去した。Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ）５０μｌを各ウェルに添加し、その後、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ中５０μｌ ｍＲＮＡおよびリポフェクタミン２０００複合体を添加した。５時間後、培地を５０ｎＭ ＰＭＡを補充した新鮮な増殖培地に置き換え、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で２４時間、プレートをインキュベートした。

【0277】

ラット初代脊髄ニューロン
妊娠したメスの野生型ウィスターラット（Ｊａｎｖｉｅｒ ｌａｂｓ、フランス）または妊娠１４日のＳＯＤ１Ｇ９３Ａ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、ＣＯ_２による深麻酔および頸椎脱臼を使用して屠殺した。胎児を子宮から取り出し、２％ペニシリン（１０，０００Ｕ／ｍＬ）およびストレプトマイシン（１０ｍｇ／ｍＬ）溶液（ＰＳ）および１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補充した氷冷Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ培地に直ちに入れた。脊髄を切断し、０．０５％トリプシン－０．０２％ ＥＤＴＡで３７℃、２０分間処理した。グルコース４．５ｇ／ｌ、０．５ｍｇ／ｍＬ ＤＮＡａｓｅ ＩおよびＩＩ、ならびに１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）の添加によって解離を停止した。１０ｍＬピペットの先端を強制的に３回通過させて細胞を機械的に解離した。さらに、細胞を４℃、５１５ｇで１０分間遠心分離した。得られたペレットを、Ｂ２７サプリメントの２％溶液、グルタミン２ｍｍｏｌ／ｌ、２％のＰＳ溶液、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）１０ｎｇ／ｍｌを含有するｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地からなる既知組成培地に再懸濁した。細胞を、９６ウェルポリ－Ｄ－リジンプレコートプレートに１ウェルあたり２０，０００細胞で播種し、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で培養した。培地を２日おきに置き換えた。培養下１１～１２日後、製造者の説明書に従ってＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ（ｗｗｗ．ｐｏｌｙｐｌｕｓ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．ｃｏｍ）を使用してｍＲＮＡコンストラクト（０．３μｇ）をトランスフェクトした。

【0278】

ヒト分化軟骨細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ヒト関節軟骨細胞（Ｓｉｇｍａ／Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ブフス、スイス カタログ番号４０２～０５Ａ）を、Ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ増殖培地（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス、スイス カタログ番号４１１～５００）で維持した。細胞を、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃でインキュベートした。細胞を分化培地のアルギネートビーズ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス、スイス カタログ番号Ａ４１１Ｄ－２５０）で最低３週間増殖させて、細胞を分化させた。アルギネートビーズの調製については、４×１０^６軟骨細胞あたり、１．２％滅菌アルギネート溶液（０．９％ ＮａＣｌ中１．２％アルギネート Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス スイス カタログ番号 Ａ－２０３３）１ｍｌを使用した。細胞を相応の容量の１．２％アルギネート溶液に再懸濁し、２２ゲージ針を通じて６ウェル未処理細胞培養物プレート中１００ｍＭ ＣａＣｌ_２溶液に液滴分注した。１５分後、重合ビーズを０．９％ ＮａＣｌで５回、および分化培地で２回洗浄した。軟骨細胞／アルギネートビーズを分化のため、５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で最低３週間インキュベートし、培地は２日おきに交換した。トランスフェクションの２４時間前に、分化軟骨細胞を０．９％ ＮａＣｌで２×洗浄し、アルギネート溶解バッファー（５５ｍＭクエン酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３０ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ６．８）で約５分間インキュベートして、分化軟骨細胞をアルギネートビーズから放出した。細胞を０．９％ ＮａＣｌで２×洗浄した。１ウェルあたり３０，０００細胞を、９６ウェルＴＰＰプレート（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス、スイス カタログ番号 ９２０９６）の１００μｌ増殖培地に播種し、一晩増殖させた。製造者の使用説明書に従ってＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ（ｗｗｗ．ｐｏｌｙｐｌｕｓ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．ｃｏｍ）を使用して、細胞にｍＲＮＡコンストラクト０．６μｇをトランスフェクトした。ｍＲＮＡ／ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ複合体を１０μｌとして４通りに添加した。ｍＲＮＡ／ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ複合体は、０．１μｇ ｍＲＮＡコンストラクトあたり０．２５μｌ ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ試薬を混合し、室温で１５分間インキュベートして形成した。トランスフェクション後の５時間後、トランスフェクション複合体（培地／ｍＲＮＡ／ＪｅｔＭｅｓｓｅｎｇｅｒ）をウェルから除去し、１００μｌ増殖培地と置き換えた。プレートを５％ ＣＯ_２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で２４時間インキュベートした。

【0279】

細胞培養上清中のタンパク質レベルの分析
トランスフェクション後２４時間時点で、トランスフェクトされた細胞からの上清を回収し、凍結し、ＩＧＦ１（カタログ番号Ｅ２０、Ｍｅｄｉａｇｎｏｓｔ、ロイトリンゲン、ドイツ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ；カタログ番号ＢＭＳ２０３５、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、バーゼル、スイス）、インスリン（ＩＮＳ、カタログ番号ＲＡＢ０３２７、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ブフス、スイス）、インターロイキン４（ＩＬ－４、カタログ番号８８－７０４６－２２、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、バーゼル、スイス）およびインターロイキン１０（ＩＬ－１０、カタログ番号キット１０９４７ Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、中国）の、製造者の使用説明書に従ってＥＬＩＳＡによる定量分析まで２０℃で保管した。それぞれのＥＬＩＳＡバッファーで希釈した後、細胞上清を分析した。

【0280】

データ分析
標準または試料中のタンパク質（ＩＧＦ１、ＥＰＯ、ＩＮＳ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０）レベルの推定のために、ブランクの平均吸光度値を、標準または試料の平均吸光度から減算した。検量線を生成し、製造者のプロトコールに従って４つのパラメータ非線形回帰を使用してプロットした。各試料中のタンパク質（ＩＧＦ１、ＥＰＯ、ＩＮＳ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０）の濃度を決定するために、種々のタンパク質の濃度を検量線から補間した。試料の最終タンパク質濃度を、希釈係数を乗算して算出した。全ての算出は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８（サンディエゴ、ＵＳＡ）を使用して行った。内因性シグナル伝達ペプチドコンストラクトと比べた増加倍数の表示のために、個々のコンストラクトによって産生されるタンパク質のレベルを、同じ濃度で内因性シグナル伝達ペプチドコンストラクトによって生成されるタンパク質のレベルで除算した。

【0281】

結果
ＩＧＦ１のクローニング
ｐＶＡＸ．Ａ１２０への全てのインサートのクローニングの成功を、サンガー配列決定によって確認した。全てのテストしたクローンは、ＩＧＦ１インサートの正しい配向を１００％の配列精度でもたらした。ＩＶＴ ｍＲＮＡ生産のために陽性クローンを選択した。

【0282】

Ｃｐｄ．１～３９の平均疎水性および極性
シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９、アミノ酸１～７およびアミノ酸１～５ならびにＣ末端の最後の９個のアミノ酸に対するＣｐｄ．１～３９の平均疎水性、ならびにＮ末端のアミノ酸１～９に対するＣｐｄ．１～３９の平均極性は、以下の表２～５に示されている通りである。

【0283】

ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写
ＩＧＦ１＿ｐＶＡＸ．Ａ１２０プラスミドをＸｈｏＩで直線状にし、ＩＶＴ系を使用してＩＧＦ１ ｍＲＮＡ（Ｃｐｄ．１）を生産した。同様に、変化したプレドメイン（シグナル伝達ペプチドを有するＩＧＦ１ ｍＲＮＡである、ベクターｐＭＡ－ＴおよびｐＭＡ－ＲＱにコードされたＣｐｄ．２～Ｃｐｄ．７（図１６）を、ＰＣＲベースのＩＶＴを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション実験用に５０～２００μｇ範囲で生産した。同様に、Ｃｐｄ．１（配列番号４０）ならびにｐＭＡ－ＴおよびｐＭＡ－ＲＱベクターにコードされたＣｐｄ．８～２６についても、変化したシグナル伝達ペプチドを有するＩＧＦ１ ｍＲＮＡを、ＰＣＲベースのＩＶＴを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション実験用に５０～２００μｇ範囲で生産した。ＩＧＦ１ ｍＲＮＡに加えて、内因性のまたは変化したシグナル伝達ペプチドを有する、エリスロポエチン（ＥＰＯ、Ｃｐｄ．２７～２９）、インスリン（ＩＮＳ、Ｃｐｄ．３０～３２）、インターロイキン４（ＩＬ４、Ｃｐｄ．３３～３５）およびインターロイキン１０（ＩＬ１０、Ｃｐｄ．３６～３８）のためのｍＲＮＡを、ｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション実験用に５０～２００μｇ範囲で生産した。

【0284】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するＨＥＫ２９３Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をＣｐｄ．１～Ｃｐｄ．７ ｍＲＮＡと２４時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図１７）。Ｃｐｄ．１は、ＩＧＦ１分泌を最大５０ｎｇ／ｍｌ誘導することができた。Ｃｐｄ．４は、Ｃｐｄ．１より有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導した（３．３倍、０．００１）。Ｃｐｄ．１およびＣｐｄ．４の濃度依存性を評価するために、Ｃｐｄ．１およびＣｐｄ．４両方の種々の濃度（０．０２～２μｇ／ウェル）を、上清中へのＩＧＦ１分泌の誘導に関してテストした（図１８）。Ｃｐｄ．１は０．８９μｇのＥＣ_５０を、Ｃｐｄ．４については０．１３μｇのＥＣ_５０を示し、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞からのＩＧＦ１分泌の誘導においてＣｐｄ．４は６．８倍効力があることを示した。まとめると、図１７および１８のデータは、Ｃｐｄ．４がＣｐｄ．１より強くて効力があるＨＥＫ２９３Ｔ細胞でのＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、このシグナル伝達ペプチドが、この細胞型における産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0285】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するＣ２Ｃ１２細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
Ｃ２Ｃ１２細胞をＣｐｄ．１～Ｃｐｄ．７ ｍＲＮＡと２４時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図１９）。Ｃｐｄ．１は、ＩＧＦ１分泌を最大６０ｎｇ／ｍｌ誘導することができた。Ｃｐｄ．４は、Ｃｐｄ．１より有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導した（６．１倍、０．００１）。データは、Ｃｐｄ．４がＣｐｄ．１より強いＣ２Ｃ１２細胞でのＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、このシグナル伝達ペプチドが、この細胞型においても産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0286】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するＨＳｋＭＣ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨＳｋＭＣ細胞をＣｐｄ．１またはＣｐｄ．４ ｍＲＮＡと２４時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２０）。Ｃｐｄ．１は、ＩＧＦ１分泌を最大３０ｎｇ／ｍｌ誘導することができた。Ｃｐｄ．４は、Ｃｐｄ．１より有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導した（３．１倍、ｐ＜０．０５）。データは、Ｃｐｄ．４がＣｐｄ．１より強い初代ＨＳｋＭＣ細胞でのＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、このシグナル伝達ペプチドが、この細胞型においても産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0287】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するＨＥＫ２９３Ｔ細胞への追加のｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
別のセットのテストでは、Ｃｐｄ．８～Ｃｐｄ．２６を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞からのＩＧＦ１分泌の調節に対するその可能性について分析した。対照としてのＣｐｄ．１およびテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．８～Ｃｐｄ．２６と２４時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２２）。Ｃｐｄ．１応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．１の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．８、Ｃｐｄ．９、Ｃｐｄ．１０、Ｃｐｄ．１１、Ｃｐｄ．１２およびＣｐｄ１３がＩＧＦ１分泌の低下を示したのに対し、Ｃｐｄ．１４、Ｃｐｄ．１５、Ｃｐｄ．１６、Ｃｐｄ．１７、Ｃｐｄ．１８、Ｃｐｄ．１９、Ｃｐｄ．２０、Ｃｐｄ．２１、Ｃｐｄ．２３、Ｃｐｄ．２４、Ｃｐｄ．２５およびＣｐｄ．２６は、Ｃｐｄ．１と比べて最大２．６倍有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導することができた。それに関して、Ｃｐｄ．１５およびＣｐｄ．２１は、Ｃｐｄ．４と同じような誘導を示した（図１７参照）。まとめると、データは、Ｃｐｄ．１４、Ｃｐｄ．１５、Ｃｐｄ．１６、Ｃｐｄ．１７、Ｃｐｄ．１８、Ｃｐｄ．１９、Ｃｐｄ．２０、Ｃｐｄ．２１、Ｃｐｄ．２３、Ｃｐｄ．２４、Ｃｐｄ．２５およびＣｐｄ．２６が、Ｃｐｄ．１より強くて効力があるＨＥＫ２９３Ｔ細胞でのＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、この細胞型における産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0288】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するＨｅｐＧ２細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨｅｐＧ２細胞を、対照としてのＣｐｄ．１およびテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２６と２４時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２３）。Ｃｐｄ．１応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．１の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．８、Ｃｐｄ．９、およびＣｐｄ．１２がＩＧＦ１分泌の低下を示したのに対し、Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４、Ｃｐｄ．１５、Ｃｐｄ．１６、Ｃｐｄ．１７、Ｃｐｄ．１８、Ｃｐｄ．１９、Ｃｐｄ．２０、Ｃｐｄ．２１、Ｃｐｄ．２２、Ｃｐｄ．２３、Ｃｐｄ．２４、Ｃｐｄ．２５およびＣｐｄ．２６は、Ｃｐｄ．１と比べて最大８．３倍有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導することができた。まとめると、データは、Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４、Ｃｐｄ．１５、Ｃｐｄ．１６、Ｃｐｄ．１７、Ｃｐｄ．１８、Ｃｐｄ．１９、Ｃｐｄ．２０、Ｃｐｄ．２１、Ｃｐｄ．２２、Ｃｐｄ．２３、Ｃｐｄ．２４、Ｃｐｄ．２５およびＣｐｄ．２６が、Ｃｐｄ．１より強いＨｅｐＧ２細胞でのＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、この細胞型における産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0289】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するＩＭＲ３２神経細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＩＭＲ３２４神経細胞を、対照としてのＣｐｄ．１およびテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２４と２４時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２４）。Ｃｐｄ．１応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．１の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４、Ｃｐｄ．１５、Ｃｐｄ．１６、Ｃｐｄ．１７、Ｃｐｄ．２０、Ｃｐｄ．２２、Ｃｐｄ．２３およびＣｐｄ．２４は、Ｃｐｄ．１と比べて最大２．６倍有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導することができた。まとめると、データは、Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４、Ｃｐｄ．１５、Ｃｐｄ．１６、Ｃｐｄ．１７、Ｃｐｄ．２０、Ｃｐｄ．２２、Ｃｐｄ．２３およびＣｐｄ．２４が、Ｃｐｄ．１より強いＩＭＲ３２神経細胞でのＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、この細胞型における産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0290】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するヒト軟骨細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
軟骨細胞を、対照としてのＣｐｄ．１およびテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．４～Ｃｐｄ．２５と２４時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２５）。Ｃｐｄ．１応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．１の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４、Ｃｐｄ．１５、Ｃｐｄ．１６、Ｃｐｄ．２０、Ｃｐｄ．２１、Ｃｐｄ．２２、Ｃｐｄ．２４およびＣｐｄ．２５は、Ｃｐｄ．１と比べて最大１．９倍有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導することができた。まとめると、データは、Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４、Ｃｐｄ．１５、Ｃｐｄ．１６、Ｃｐｄ．２０、Ｃｐｄ．２１、Ｃｐｄ．２２、Ｃｐｄ．２４およびＣｐｄ．２５が、Ｃｐｄ．１より強い軟骨細胞でのＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、この細胞型における産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0291】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するラット運動ニューロンのｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ラット運動ニューロンまたはラットトランスジェニック／遺伝子組換えＳＯＤ１^Ｇ９３Ａ（図２６Ｂ）を、対照としてのＣｐｄ．１ならびに、テストｍＲＮＡとしての、野生型に対するＣｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４およびＣｐｄ．１７（図２６Ａ）またはトランスジェニック／遺伝子組換えＳＯＤ１^Ｇ９３Ａ（図２６Ｂ）に対するＣｐｄ．１４およびＣｐｄ．１７と４８時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２６ＡおよびＢ）。Ｃｐｄ．１応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．１の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４およびＣｐｄ．１７は、Ｃｐｄ．１と比べてＩＧＦ１分泌を野生型で最大４．３倍、またはトランスジェニック／遺伝子組換えＳＯＤ１Ｇ^Ｓ９３Ａで最大９．３倍誘導することができた。まとめると、データは、Ｃｐｄ．４、Ｃｐｄ．１４およびＣｐｄ．１７が、Ｃｐｄ．１より強い運動ニューロンでのＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、この細胞型における産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0292】

ＥＰＯ分泌のテストに関するＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２およびＡ５４９細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２またはＡ５４９細胞を、対照としてのＣｐｄ．２７およびテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．２８およびＣｐｄ．２９と２４時間インキュベーションした後、分泌されたエリスロポエチン（ＥＰＯ）レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２７）。Ｃｐｄ．２７応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．２７の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．２８は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（図２７Ａ）、ＨｅｐＧ２細胞（図２７Ｂ）およびＡ５４９細胞（図２７Ｃ）においてＣｐｄ．２７と比べてＥＰＯ分泌を最大１．８倍誘導することができ、Ｃｐｄ．２９は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（図２７Ａ）およびＨｅｐＧ２細胞（図２７Ｂ）においてＣｐｄ．２７と比べてＥＰＯ分泌を最大１．４倍誘導した。まとめると、データは、Ｃｐｄ．２８およびＣｐｄ．２９が、Ｃｐｄ．２７より強いＥＰＯ分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、これらの細胞型における産生されたＥＰＯの細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0293】

ＩＮＳ分泌のテストに関するＨＥＫ２９３Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、対照としてのＣｐｄ．３０ならびにテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．３１およびＣｐｄ．３２と２４時間インキュベーションした後、分泌されたインスリン（ＩＮＳ）レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２８）。Ｃｐｄ．３０応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．３０の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．３１およびＣｐｄ．３２は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞においてＣｐｄ．３０と比べてＩＮＳ分泌を最大３．９倍誘導することができた。まとめると、データは、Ｃｐｄ．３１およびＣｐｄ．３２が、Ｃｐｄ．３０より強いＩＮＳ分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、この細胞型における産生されたＩＮＳの細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0294】

ＩＬ４分泌のテストに関するＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＴＨＰ－１およびＡ５４９細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＴＨＰ－１またはＡ５４９細胞を、対照としてのＣｐｄ．３３ならびにテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．３４およびＣｐｄ．３５と２４時間インキュベーションした後、分泌されたインターロイキン４（ＩＬ４）レベルを細胞培養物の上清で評価した（図２９）。Ｃｐｄ．３３応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．３３の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．３４は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（図２９Ａ）、ＨｅｐＧ２細胞（図２９Ｂ）、ＴＨＰ－１細胞（図２９Ｃ）およびＡ５４９細胞（図２９Ｄ）において、Ｃｐｄ．３３と比べてＩＬ４分泌を最大２．２倍誘導することができ、Ｃｐｄ．３５は、ＨｅｐＧ２細胞（図２９Ｂ）およびＴＨＰ－１細胞（図２９Ｃ）において、それぞれ、Ｃｐｄ．３３と比べてＩＬ４分泌を最大１．３倍誘導した。まとめると、データは、Ｃｐｄ．３４およびＣｐｄ．３５が、Ｃｐｄ．３３より強いＩＬ４分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、これらの細胞型における産生されたＩＬ４の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0295】

ＩＬ１０分泌のテストに関するＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２およびＴＨＰ－１細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２またはＴＨＰ－１細胞を、対照としてのＣｐｄ．３６ならびにテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．３７およびＣｐｄ．３８と２４時間インキュベーションした後、分泌されたインターロイキン１０（ＩＬ１０）レベルを細胞培養物の上清で評価した（図３０）。Ｃｐｄ．３６応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．３６の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．３７は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（図３０Ａ）、ＨｅｐＧ２細胞（図３０Ｂ）およびＴＨＰ－１細胞（図３０Ｃ）において、Ｃｐｄ．３６と比べてＩＬ１０分泌を最大２．２倍誘導することができ、Ｃｐｄ．３８は、ＴＨＰ－１細胞（図３０Ｃ）においてＣｐｄ．３６と比べてＩＬ１０分泌を１．４倍誘導した。まとめると、データは、Ｃｐｄ．３７およびＣｐｄ．３８が、Ｃｐｄ．３６より強いＩＬ１０分泌を誘導したことを立証しており、これらのシグナル伝達ペプチドが、これらの細胞型における産生されたＩＬ１０の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0296】

ＩＧＦ１分泌のテストに関するＨｅｐＧ２およびヒト初代軟骨細胞へのＣｐｄ．３９のｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクション
ＨｅｐＧ２または軟骨細胞を、対照としてのＣｐｄ．１およびテストｍＲＮＡとしてのＣｐｄ．３９と２４時間インキュベーションした後、分泌されたＩＧＦ１レベルを細胞培養物の上清で評価した（図３１）。Ｃｐｄ．１応答を１に正規化し、データをＣｐｄ．１の倍数変化として表した。Ｃｐｄ．３９は、ＨｅｐＧ２（図３１Ａ）およびヒト初代軟骨細胞（図３１Ｂ）において、Ｃｐｄ．１と比べて最大１．４倍有意に高いＩＧＦ１分泌を誘導することができた。まとめると、データは、Ｃｐｄ．３９がＣｐｄ．１より強いＩＧＦ１分泌を誘導したことを立証しており、このシグナル伝達ペプチドが、これらの細胞型における産生されたＩＧＦ１の細胞排出を容易にすることを示唆している。

【0297】

実施例２
骨格筋損傷のマウスモデルにおける局所適用ＩＧＦ－Ｉ ｍＲＮＡの有効性をテストするために、８～１０週齢のオスのＣ５７ＢＬ６／Ｊマウスに、０日目に前脛骨筋（ＴＡ）のノテキシン誘導筋毒性損傷を受けさせた。損傷後１日目に、ビヒクルまたは１μｇ ｍＲＮＡ（Ｃｐｄ．４）を、損傷した筋肉への筋肉内注射により適用し、損傷後４日目に反復した。ＴＡの筋機能を、損傷後１、４、７、１０、１４、２１および２８日目で測定した。対側ＴＡ筋のサブセットも試験全体を通して評価して、ＴＡ筋機能の健康な対照レベルを評価した。

【0298】

方法および材料
ＩＧＦ－１のクローニングおよびＩＧＦ－１ ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写
ＩＧＦ－１のクローニングおよびＩＧＦ－１ ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写は、実施例１に記載したように行った。ｐＭＡ－ＴベクターにクローニングされるようにＣｐｄ．４のコドン最適化ＤＮＡ（図４）を使用して、図１１に示されているコンストラクトを得た。このコンストラクトを使用して、ｍＲＮＡ処置に使用されるｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡを生産した。

【0299】

ノテキシン損傷
ノテキシン（Ｌａｔｏｘａｎ、バランス、フランス）は、マウスごとに４０μｌ食塩水中０．４μｇの濃度で調製した。マウスの麻酔はチャンバーで誘発し（約４～５％イソフルラン、効果を与えるまで）、ノーズコーン（約２～３％イソフルラン、効果を与えるまで）により維持した。マウスを次いで、加熱した（３７℃）手術台で維持した。ＴＡ筋の中腹の皮膚を脱毛クリームで準備し（Ｎａｉｒ Ｈａｉｒ Ｒｅｍｏｖｅｒ４５秒間、その後、水による３回のすすぎ）、ベータダインおよび７０％アルコールで３回交互に洗ってさらに準備し、皮膚細菌の軟組織への播種を予防した。ツベルクリンシリンジを使用して、調製したノテキシン０．０４ｍｌを右ＴＡの腹部へ筋肉内注射した。手順の間、動物は観察可能な疼痛に苦しまず、その後適切な抗疼痛処置を施された（注射後４８時間、１２時間おきにブプレノルフィン０．０５～０．１ｍｇ／ｋｇ）。鎮痛剤の初回投与は麻酔薬誘発時点で行って、回復時の鎮痛剤の存在を確保した。最初の４８時間後、動物を少なくとも週２回調べて正常歩行の適切な治癒および回復を確実にした。

【0300】

ｍＲＮＡ処置
マウスをｍＲＮＡまたはビヒクル処置に無作為に割り付けた。マウスを上記に記載のイソフルランを使用して麻酔し、損傷したＴＡ筋に、筋肉の真ん中へｍＲＮＡまたはビヒクル処置の筋肉内注射１回を投与した。

【0301】

ｉｎ ｖｉｖｏ ＴＡ機能の評価
筋肉の性能を、損傷後１、４、７、１０、１４、２１および２８日目に３０５Ｃ筋肉レバーシステム（Ａｕｒｏｒａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、オーロラ、カナダ）によりｉｎ ｖｉｖｏで測定した。マウスの麻酔は上記に記載したように達成し、マウスをサーモスタット制御台に置いた。脛骨頭に押し付けたピンを使用して膝を絶縁し、足をモーター軸のフットプレートにしっかり固定した。背屈筋群には、腓骨神経の経皮的電気刺激によって収縮を誘発した。最適な等尺性単収縮トルクを、疲労を避けるために収縮と収縮の間を最小３０秒にし、電流を増加して決定した。次いで、一連の刺激を増加する刺激頻度で行った（０．２ｍｓパルス、５００ｍｓ列持続時間）：１、１０、２０、４０、６０、８０、１００、１５０Ｈｚ、その後、１Ｈｚの最終刺激。最大ピーク等尺性筋力をプロットした。

【0302】

データ分析
データをグループ化し、平均および標準誤差を算出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８（サンディエゴ、ＵＳＡ）を使用して統計解析を行った。スチューデントのｔ検定を使用して比較を行った。

【0303】

結果
実施例２は、毒素（ノテキシン）によって誘発されたTA筋損傷のマウスモデルでは、筋損傷後早期の1日目および4日目のＩＧＦ－Ｉ ｍＲＮＡ筋肉内処置が、筋機能の回復の加速および完全な回復をもたらしたことを示している（図２１）。１μｇ Ｃｐｄ．４で処置した動物は、１６日間の間に健康な範囲の機能レベルに達した。対照的に、ビヒクルで処置した対照動物および低用量処置マウスは、２８日目まででも完全な機能回復を達成しなかった。データはそれ故に、ＩＧＦ－Ｉ ｍＲＮＡ処置は筋損傷後の治癒を加速することができ、筋機能を完全に回復することによって慢性障害を予防できる可能性があることを示している。驚くべきことに、それには損傷後早期の２回の投与のみが必要である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-07-30

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

５’から３’方向に以下の順番で、ｉ）シグナルペプチドおよびｉｉ）タンパク質をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、
シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２.２に等しいかまたはそれを超える平均疎水性スコアを有し、
疎水性スコアは、カイト－デューリトルのスケールにより計算され、かつ、
シグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、シグナルペプチドは、長さ１６から４０アミノ酸のアミノ酸配列からなり、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、ｍＲＮＡ。

【請求項2】

前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、通常、シグナルペプチドのアミノ酸１から１１内で、１から１１アミノ酸が、挿入、欠失および／または置換されている、請求項１に記載のｍＲＮＡ。

【請求項3】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９が、６．１またはそれ未満の平均極性を有する、請求項１または２に記載のｍＲＮＡ。

【請求項4】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸の平均疎水性スコアが、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の平均疎水性スコアより少なくとも１．０単位低い、請求項１または２に記載のｍＲＮＡ。

【請求項5】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９、アミノ酸２～１０、アミノ酸３～１１、アミノ酸４～１２およびアミノ酸５～１３が、それぞれ１．５を超える平均疎水性スコアを有する、請求項１から４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項6】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸８～１６の平均疎水性スコアが、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアに等しいかまたはそれより低い、請求項１から５のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項7】

シグナルペプチドが、長さ１８～４０アミノ酸のアミノ酸配列を含み、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１０～１８の平均疎水性スコアは、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアより少なくとも０．５単位低い、請求項１から５のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項8】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸の平均疎水性スコアが、シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸３～１１の平均疎水性スコアより少なくとも１．５単位低い、請求項１から７のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項9】

シグナルペプチドのアミノ酸配列の任意の９つの連続するアミノ酸の平均疎水性スコアが、４．１を超えない、請求項１から８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項10】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＣ末端の最後の９つのアミノ酸が、負の疎水性スコアを有する少なくとも１つのアミノ酸を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項11】

負の疎水性スコアを有する少なくとも１つのアミノ酸が、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、ＹおよびＷからなる群から選択される、請求項１０に記載のｍＲＮＡ。

【請求項12】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の２番目のアミノ酸が、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｌ、ＶおよびＩからなる群から選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項13】

シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９の２番目のアミノ酸が、Ａ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、ＶおよびＷからなる群から選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項14】

極性が、ジマーマンの極性インデックスに従って計算される、請求項３から１３のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項15】

前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド、ニューロトロフィン－３（ＮＴＦ－３）のシグナルペプチド、線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ５）のシグナルペプチド、インスリン様成長因子結合タンパク質５（ＩＢＰ５）のシグナルペプチド、前立腺および精巣発現タンパク質２（ＰＡＴＥ２）のシグナルペプチド、細胞外スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ３）のシグナルペプチド、および補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＦＨＲ２）のシグナルペプチドからなる群から選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項16】

前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）のシグナルペプチド、インスリン増殖因子２（ＩＧＦ２）のシグナルペプチド、インスリン（ＩＮＳ）のシグナルペプチド、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドからなる群から選択される、請求項２から１４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項17】

前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドを使用した場合の分泌タンパク質の量は、前記タンパク質に相同なシグナルペプチドを使用した場合の前記分泌タンパク質の量より多い、請求項１から１６のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項18】

前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸の数の５０％未満の挿入、欠失および／または置換によって修飾されている、請求項２から１７のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項19】

タンパク質が、サイトカイン、増殖因子およびホルモンからなる群から選択される、請求項１から１８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項20】

前記タンパク質は、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ１）、インスリン（ＩＮＳ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）およびインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）からなる群から選択される、請求項１から１８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項21】

前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、かつ前記タンパク質は、ＩＧＦ１である、請求項１から１８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項22】

５’から３’方向に以下の順番で、ｉ）シグナルペプチドおよびｉｉ）タンパク質をコードする核酸を含む、転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、
シグナルペプチドのアミノ酸配列のＮ末端のアミノ酸１～９は、２.２に等しいかまたはそれを超える平均疎水性スコアを有し、
疎水性スコアは、カイト－デューリトルのスケールにより計算され、かつ、
シグナルペプチドは、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドであり、ただし前記タンパク質はオキシドレダクターゼではない、転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクター。

【請求項23】

前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、欠失および／または置換によって修飾されており、
シグナルペプチドは、長さ１６から４０アミノ酸のアミノ酸配列からなり、かつ、通常、シグナルペプチドのアミノ酸１から１１以内で、１から１１アミノ酸が、挿入、欠失および／または置換されている、
請求項２２に記載の転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクター。

【請求項24】

請求項１から２１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡおよび／または請求項２２もしくは２３に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクターを含む治療用組成物。

【請求項25】

請求項１から２１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ、および／または請求項２２もしくは２３に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクター、および／または請求項２４に記載の治療用組成物、ならびに使用説明書、必要に応じてベクターマップ、必要に応じて宿主細胞、必要に応じて宿主細胞の培養のための培地、および／または必要に応じてトランスフェクトされた宿主細胞を選択および培養するための選択培地を含むキット。

【請求項26】

ｉ）タンパク質；および
ｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、
前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、ｍＲＮＡ。

【請求項27】

ｉ）タンパク質；および
ｉｉ）前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチド
をコードする核酸配列を含むｍＲＮＡであって、
前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、かつ前記タンパク質は、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、ｍＲＮＡ。

【請求項28】

タンパク質が、サイトカイン；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；神経刺激性タンパク質；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、請求項２６または２７に記載のｍＲＮＡ。

【請求項29】

タンパク質が、増殖因子である、請求項２６または２７に記載のｍＲＮＡ。

【請求項30】

増殖因子が、ＡＭＨ、ＡＲＴＮ、ＢＴＣ、ＣＤＮＦ、ＣＦＣ１、ＣＦＣ１Ｂ、ＣＨＲＤＬ１、ＣＨＲＤＬ２、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＣＮＭＤ、ＥＦＥＭＰ１、ＥＧＦＬ６、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＬ８、ＥＰＧＮ、ＥＲＥＧ、ＥＹＳ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＲＺＢ、ＧＤＮＦ、ＧＦＥＲ、ＧＫＮ１、ＨＢＥＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＨＢＢ、ＩＮＨＢＣ、ＩＮＨＢＥ、ＫＩＴＬＧ、ＭＡＮＦ、ＭＤＫ、ＭＩＡ、ＮＧＦ、ＮＯＶ、ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、ＮＲＧ４、ＮＲＴＮ、ＮＴＦ３、ＮＴＦ４、ＯＧＮ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＣ、ＰＤＧＦＤ、ＰＧＦ、ＰＲＯＫ１、ＰＳＰＮ、ＰＴＮ、ＳＤＦ１、ＳＤＦ２、ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ３、ＳＦＲＰ４、ＳＦＲＰ５、ＴＤＧＦ１、ＴＦＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＨＢＳ４、ＴＩＭＰ１、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、およびＷＩＳＰ３からなる群から選択される、請求項２９に記載のｍＲＮＡ。

【請求項31】

タンパク質が、ＩＧＦ１である、請求項２６または２７に記載のｍＲＮＡ。

【請求項32】

脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドが、配列番号３１で示されるアミノ酸配列を含む、請求項２６から３１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項33】

タンパク質をコードする核酸配列、および前記タンパク質にとって異種の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列が、作動可能に連結されている、請求項２６から３２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項34】

５’から３’に以下の順番で、
ｉ）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチド；
ｉｉ）必要に応じて、タンパク質のプロドメイン；および
ｉｉｉ）成熟タンパク質
をコードする核酸配列を含み、
脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列、必要に応じた
タンパク質のプロドメインをコードする核酸配列、および成熟タンパク質をコードする核酸配列は、作動可能に連結されている、請求項２６から３３のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項35】

ＩＧＦ１のプロペプチドをコードする核酸配列、成熟ＩＧＦ１をコードする核酸配列、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含み、ＩＧＦ１のＥペプチドをコードする核酸配列を含まない、請求項２６から３４のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項36】

脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドが、タンパク質の天然シグナルペプチドを置き換えている、請求項２６から３５のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【請求項37】

タンパク質および前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、オキシドレダクターゼではない、転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクター。

【請求項38】

タンパク質および前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドをコードする核酸配列を含む転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクターであって、前記タンパク質にとって異種のシグナルペプチドは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のシグナルペプチドであり、前記タンパク質は、カルボキシペプチダーゼ；サイトカイン；細胞外のリガンドおよび輸送体；細胞外マトリックスタンパク質；グルコシダーゼ；グリコシルトランスフェラーゼ；増殖因子；増殖因子結合タンパク質；ヘパリン結合タンパク質；ホルモン；ヒドロラーゼ；免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）；イソメラーゼ；キナーゼ；リアーゼ；金属酵素阻害剤；メタロプロテアーゼ；乳タンパク質；神経刺激性タンパク質；プロテアーゼ；プロテアーゼ阻害剤；タンパク質ホスファターゼ；エステラーゼ；トランスフェラーゼ；および血管作動性タンパク質からなる群から選択される、転写単位、発現ベクターまたは遺伝子治療用ベクター。

【請求項39】

請求項２６から３６のいずれか一項に記載のｍＲＮＡおよび／または請求項３７もしくは３８に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクターを含む治療用組成物。

【請求項40】

請求項２６から３６のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ、または請求項３７もしくは３８に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクター、および／または請求項３９に記載の治療用組成物、ならびに使用説明書、必要に応じてベクターマップ、必要に応じて宿主細胞、必要に応じて宿主細胞の培養のための培地、および／または必要に応じてトランスフェクトされた宿主細胞を選択および培養するための選択培地を含むキット。

【請求項41】

医薬として使用するための、請求項１から２１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ、請求項２２または２３に記載の転写単位、発現ベクターもしくは遺伝子治療用ベクター、請求項２４に記載の治療用組成物、または請求項２５に記載のキット。

【請求項42】

骨格筋損傷を処置するための方法での使用のための、請求項１から２１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ。

【外国語明細書】