(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024156800
(43)【公開日】2024-11-06
(54)【発明の名称】凝血アッセイ装置およびその方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/86 20060101AFI20241029BHJP
G01N 33/72 20060101ALI20241029BHJP
【ＦＩ】
G01N33/86
G01N33/72 A
【審査請求】有
【請求項の数】27
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024124211
(22)【出願日】2024-07-31
(62)【分割の表示】P 2022522861の分割
【原出願日】2019-10-17
(71)【出願人】
【識別番号】501464761
【氏名又は名称】ノヴァ バイオメディカル コーポレイション
【住所又は居所原語表記】２００ Ｐｒｏｓｐｅｃｔ Ｓｔｒｅｅｔ Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ ０２４５４（ＵＳ）
(74)【代理人】
【識別番号】100098729
【弁理士】
【氏名又は名称】重信 和男
(74)【代理人】
【識別番号】100206911
【弁理士】
【氏名又は名称】大久保 岳彦
(74)【代理人】
【識別番号】100206656
【弁理士】
【氏名又は名称】林 修身
(74)【代理人】
【識別番号】100204467
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 好文
(74)【代理人】
【識別番号】100148161
【弁理士】
【氏名又は名称】秋庭 英樹
(74)【代理人】
【識別番号】100195833
【弁理士】
【氏名又は名称】林 道広
(72)【発明者】
【氏名】ポメロイ，メアリー
(72)【発明者】
【氏名】メドコヴァ，マルティナ
(72)【発明者】
【氏名】チェン，ジェフ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】希釈キャピラリー全血、クエン酸加全血、およびクエン酸加血漿中の凝血因子の活性を決定するための方法および装置に関する。
【解決手段】全ての血液サンプル中のヘモグロビン量の検出が含まれるため、凝固時間の補正を実行することで、凝固時間の値をヘモグロビンおよびヘマトクリット効果と無関係に作成できる。
【選択図】図８
【解決手段】全ての血液サンプル中のヘモグロビン量の検出が含まれるため、凝固時間の補正を実行することで、凝固時間の値をヘモグロビンおよびヘマトクリット効果と無関係に作成できる。
【選択図】図８
【特許請求の範囲】
【請求項1】
使い捨てのカートリッジが：
ある量のマトリックスを保有する第１のウェルと（マトリックスは乾燥マトリックスまたは液体マトリックスどちらかである）；
複数のマイクロ粒子を保有する第２のウェルと（複数のマイクロ粒子は、少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスであり、少なくとも１つの表面タイプは、未反応のプレーン、硫酸、カルボン酸、およびアミジンからなる群から選ばれる）；
ある量の活性化因子を含む第３のウェルと（活性化因子は、トロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、およびセライトからなる群から選ばれる）；
を含む、
抗凝固薬活性をモニタリングするための使い捨てのバイオアッセイ診断カートリッジ。
ある量のマトリックスを保有する第１のウェルと（マトリックスは乾燥マトリックスまたは液体マトリックスどちらかである）；
複数のマイクロ粒子を保有する第２のウェルと（複数のマイクロ粒子は、少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスであり、少なくとも１つの表面タイプは、未反応のプレーン、硫酸、カルボン酸、およびアミジンからなる群から選ばれる）；
ある量の活性化因子を含む第３のウェルと（活性化因子は、トロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、およびセライトからなる群から選ばれる）；
を含む、
抗凝固薬活性をモニタリングするための使い捨てのバイオアッセイ診断カートリッジ。
【請求項2】
マトリックスがさらにＮａＣｌ、ＰＥＧ、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、炭水化物、およびＣａＣｌ２の少なくとも１つを含む、請求項１に記載の使い捨てのカートリッジ。
【請求項3】
使い捨てのカートリッジが、さらに、少なくとも２つの光学検出読み取りを助けることができる一体型キュベットを含む、請求項１に記載の使い捨てのカートリッジ。
【請求項4】
使い捨てのカートリッジが、さらに、５３０ｎｍの第１のＬＥＤによる第１の光学検出読み取りを助けることができる第１の壁部と；６６０ｎｍの第２のＬＥＤによる第２の光学検出読み取りを助けることができる第２の壁部とを有する一体型キュベットを含む、請求項１に記載の使い捨てのカートリッジ。
【請求項5】
使い捨てのカートリッジが、さらに、５３０ｎｍの第１のＬＥＤによる第１の光学検出読み取りおよび６６０ｎｍの第２のＬＥＤによる第２の光学検出読み取りを助けることができる第１および第２の壁部を有する一体型キュベットを含む、請求項１に記載の使い捨てのカートリッジ。
【請求項6】
フィンガースティック、ピペット、カートリッジ、バイオアッセイコンポーネント、および光学キュベットを含み、フィンガースティック、ピペット、バイオアッセイコンポーネント、および光学キュベットは、カートリッジ内に含有およびシールされ、カートリッジは、さらに、外表面上に識別子を有し；
バイオアッセイコンポーネントは、少なくともマトリックスおよび複数のマイクロ粒子を含み；
複数のマイクロ粒子は、少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスであり、少なくとも１つの表面タイプは、未反応のプレーン、硫酸、カルボン酸、およびアミジンからなる群から選ばれる、
バイオアッセイ診断キット。
バイオアッセイコンポーネントは、少なくともマトリックスおよび複数のマイクロ粒子を含み；
複数のマイクロ粒子は、少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスであり、少なくとも１つの表面タイプは、未反応のプレーン、硫酸、カルボン酸、およびアミジンからなる群から選ばれる、
バイオアッセイ診断キット。
【請求項7】
マトリックスと（マトリックスは、グリシン、塩化ナトリウム、および１％シメチコンの少なくとも１つを含む）；
マトリックス中に懸濁された複数のマイクロ粒子と（複数のマイクロ粒子は、少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスである）；
ある量の活性化因子と（活性化因子は、トロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、およびセライトからなる群から選ばれる）；
を含む、凝血バイオアッセイ。
マトリックス中に懸濁された複数のマイクロ粒子と（複数のマイクロ粒子は、少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスである）；
ある量の活性化因子と（活性化因子は、トロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、およびセライトからなる群から選ばれる）；
を含む、凝血バイオアッセイ。
【請求項8】
少なくとも１つの表面タイプが、プレーン、硫酸、アミジン、およびカルボン酸からなる群から選択される、請求項７に記載の凝血バイオアッセイ。
【請求項9】
マトリックスが乾燥マトリックスおよび液体マトリックスの１つである、請求項７に記載の凝血バイオアッセイ。
【請求項10】
複数のマイクロ粒子のそれぞれが約１０ｎｍから１５０ｎｍの直径を有する、請求項７に記載の凝血バイオアッセイ。
【請求項11】
複数のマイクロ粒子のそれぞれが９０ｎｍから１１０ｎｍの範囲の直径を有する、請求項７に記載の凝血バイオアッセイ。
【請求項12】
複数のマイクロ粒子が、０．００６重量体積％溶液；０．０１重量体積％溶液；および０．０８重量体積％溶液からなる群から選択される重量体積パーセント溶液中にある、請求項７に記載の凝血バイオアッセイ。
【請求項13】
方法が：
マトリックスおよびマトリックス中の複数のマイクロ粒子を有するマイクロ粒子マトリックスを選択し、複数のマイクロ粒子が、少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスであり、少なくとも１つの表面タイプが、活性を保持する未反応のプレーン、硫酸、カルボン酸、およびアミジン化学構造からなる群から選ばれるステップと；
希釈された溶解全血または血漿の１つと共に、試薬としてのマイクロ粒子マトリックスを用いるステップと；
希釈された溶解全血または血漿の１つの凝固時間測定を得るステップと；
希釈された溶解全血または血漿の１つのヘモグロビンレベルを決定するステップと；
希釈された溶解全血または血漿の１つのヘモグロビンレベルについて調整することによって凝固時間測定を補正するステップと；
を含む、
希釈された溶解全血または血漿の１つを用いて凝固時間測定を得る方法。
マトリックスおよびマトリックス中の複数のマイクロ粒子を有するマイクロ粒子マトリックスを選択し、複数のマイクロ粒子が、少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスであり、少なくとも１つの表面タイプが、活性を保持する未反応のプレーン、硫酸、カルボン酸、およびアミジン化学構造からなる群から選ばれるステップと；
希釈された溶解全血または血漿の１つと共に、試薬としてのマイクロ粒子マトリックスを用いるステップと；
希釈された溶解全血または血漿の１つの凝固時間測定を得るステップと；
希釈された溶解全血または血漿の１つのヘモグロビンレベルを決定するステップと；
希釈された溶解全血または血漿の１つのヘモグロビンレベルについて調整することによって凝固時間測定を補正するステップと；
を含む、
希釈された溶解全血または血漿の１つを用いて凝固時間測定を得る方法。
【請求項14】
さらに、別個の活性化因子を反応混合物に追加して、希釈された溶解全血または血漿の１つの中の天然の凝固基質をさらに活性化することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
活性化因子が、トロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、およびセライトからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
希釈された溶解全血または血漿の１つの凝固時間測定を得ることが、さらに、ある期間に渡って第１の波長において希釈された溶解全血または血漿の１つの光学密度を繰り返し測定することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項17】
希釈された溶解全血または血漿の１つのヘモグロビンレベルを決定することが、第２の波長において希釈された溶解全血または血漿の１つの光学密度を測定することを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
第１の波長が６２０ｎｍから７００ｎｍの間の範囲にあり、第２の波長が５００ｎｍから５５０ｎｍの間の範囲にある、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
希釈された溶解全血または血漿の１つの凝固時間測定を得るステップが、さらに、少なくとも０．０８の光学密度値の違いを得ることを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項20】
マトリックスが液体マトリックスであり、さらに、注射グレードの精製水によって希釈されたｐＨ１０．０の０．１７Ｍグリシン、１．２９ＭのＮａＣｌ、および１％シメチコンを含む、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
１．本発明の分野
本発明は、全般的には、希釈キャピラリー全血、クエン酸加全血、およびクエン酸加血漿中の凝血因子の活性を決定するための方法および装置に関する。
本発明は、全般的には、希釈キャピラリー全血、クエン酸加全血、およびクエン酸加血漿中の凝血因子の活性を決定するための方法および装置に関する。
【背景技術】
【0002】
２．従来技術の記載
希釈キャピラリー全血、クエン酸加全血、およびクエン酸加血漿中の凝血因子の活性を決定するための方法および装置には、頻繁に、医師がプロトロンビン時間国際標準比（ＩＮＲ）検査の間に患者の国際標準比（ＩＮＲ）レベルを測定することが関わる。このタイプのバイオ分析は、患者の血液が凝固するためにいかに多くの時間がかかるかを測定するために設計されている。この検査は、患者が、血液凝固が深部静脈血栓（ＤＶＴ）、肺塞栓（ＰＥ）、脳卒中、心臓発作、およびそれ以外を形成することおよび引き起こすことを防止する投薬量およびタイプの薬物を受けているということを保証する。かかる薬物は、凝固を引き起こす血液中の物質のビタミンＫ依存性凝固因子の形成をブロックすることによって働く。ＩＮＲスコアが低すぎる場合には、患者は血液凝固のリスクがあり得る。しかしながら、また、ＩＮＲが高すぎる場合には、患者は出血を経験し得る。典型的なＩＮＲスコアは２から３の間の範囲である。「理想的な」ＩＮＲスコアは患者間で変わり得る。
希釈キャピラリー全血、クエン酸加全血、およびクエン酸加血漿中の凝血因子の活性を決定するための方法および装置には、頻繁に、医師がプロトロンビン時間国際標準比（ＩＮＲ）検査の間に患者の国際標準比（ＩＮＲ）レベルを測定することが関わる。このタイプのバイオ分析は、患者の血液が凝固するためにいかに多くの時間がかかるかを測定するために設計されている。この検査は、患者が、血液凝固が深部静脈血栓（ＤＶＴ）、肺塞栓（ＰＥ）、脳卒中、心臓発作、およびそれ以外を形成することおよび引き起こすことを防止する投薬量およびタイプの薬物を受けているということを保証する。かかる薬物は、凝固を引き起こす血液中の物質のビタミンＫ依存性凝固因子の形成をブロックすることによって働く。ＩＮＲスコアが低すぎる場合には、患者は血液凝固のリスクがあり得る。しかしながら、また、ＩＮＲが高すぎる場合には、患者は出血を経験し得る。典型的なＩＮＲスコアは２から３の間の範囲である。「理想的な」ＩＮＲスコアは患者間で変わり得る。
【0003】
いかに頻繁に患者が検査されるべきかは、それらのＩＮＲが経時的にいかに安定であるかに依存して変わり得る。米国心臓協会（ＡＨＡ）に従うと、患者は、少なくとも月１回、いくつかのケースでは週２回ほども多く検査されるべきである。この検査には、頻繁に、血液を抜かれ、インビトロ診断分析装置によって分析されに行くことが関わる。
【0004】
インビトロ診断分析装置は数十年前から利用可能である。これらのタイプの分析装置の市場は典型的には中央検査室における使用向けであった。中央検査室は典型的には患者の血液および／または血液の血漿中の広い種々のバイオメディカル物質種についての検査ができた。最近、かかる検査については、中央検査室検査から病院内のポイント・オブ・ケアサイトへの継続中のシフトがあるように見える。このシフトはより速やかな検査データ結果を可能にし、これはある種の状態の診断および処置に重要であり得る。
【0005】
ポイント・オブ・ケア検査は重症患者の管理に重要な役割を演じ、手術室、救急室、および集中治療ユニットにおいて広く用いられる。これらの検査は、もはや、もっぱら技能を有する医療技術者によってのみならず、看護師、呼吸療法士、救急隊員、医師、および他の医療スタッフを包含する複数技能を有する担当者によってもまた行われる。この需要を叶えるために、製造者は、分析装置を小型化し、検査手続きを行う最小限のトレーニングのみが要求されるように検査手続きを単純化しなければならなかった。
【0006】
全てのポイント・オブ・ケア分析装置に共通の１つの主要な特徴は、それらが携帯型および／または可搬型どちらかでなければならないということである。かかるポイント・オブ・ケア分析装置の例は、ホフマン・ラ・ロシュの一部門のロシュ・ダイアグノスティックスからのＯｐｔｉＣＣＡおよびＯｍｎｉ９クリティカルケア分析装置、ノバ・バイオメディカルコーポレーションからのスタットプロファイルウルトラＣ、ノバ・バイオメディカルコーポレーションからのＣＲＴ、ならびにシーメンスヘルスケア・ダイアグノスティクスの一部門のデイドベーリング社からのディメンションＲｘＬを包含するが、これらに限定されない。
【0007】
より最近では、診察所または診察所に所在する検査室における検査へのさらなるシフトが起こっている。検査が中央検査室から離れるにつれて、この必要を叶えるために、新たな単回使用医療デバイスが開発されている。
【0008】
診察所環境においては、分析のためのフィンガースティックサンプルを収集するためにキャピラリーを利用する数々のデバイスがある。キャピラリーはガラスまたはプラスチックどちらかであり得る。典型的な分析は例えばＨｂＡ１ｃ、脂質などの物質種についてである。ひとたびサンプルが収集されると、これらのキャピラリーに基づく収集デバイスは分析カートリッジにローディングされ、それから、これは分析のための装置にローディングされる。この時点で、診断目的で使用される２つの公知のバイオアッセイがそれらの元々の特許文書の参照によって論じられる。
【0009】
第１に、特許文献１は、カルボン酸基を有するラテックス粒子とラテックス粒子に機能的にカップリングされた安定化剤とを含む安定化ビーズを開示しており、安定化剤は、安定化剤に近接した診断薬の分解または不活性化を完全にまたは実質的に防止することができる。安定化ビーズは、さらに、ラテックス粒子にカップリングされたヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、またはリンカー基の少なくとも１つを含み得る。
【0010】
第２に、特許文献２は、フィブリンブレークダウン産物のＤダイマーについて単純な検出アッセイを行うための方法および検査キットを開示している。これは、生物学的サンプルからのＤダイマーの直接的な化学結合のために、固相に取り付けられたヒトフィブリノゲンの精製された断片Ｅを利用する。断片Ｅはラテックス担体粒子にコンジュゲート化され、凝集アッセイが行われ得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0011】
【特許文献1】米国特許出願公開第２０１１／０１９６０８５号明細書
【特許文献2】欧州特許第０６５５６２７号明細書
【特許文献3】米国特許第１０，１１７，６１５号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0012】
公知の従来技術に対する本発明の利点および違い
従来技術の上記部分は、産業の要件の全てを叶えることにとって充分に満足のいくものとは判明していない。デハイドレーションした細胞では、不正確さが平均の細胞ヘモグロビン濃度の自動測定に付随することが見出されている。凝血においては、追加の混合およびハイドレーション時間などが、コントロールされない向凝固因子活性化を誘発し得る。本発明に従う乾燥した、液体の、または乾燥したかつ液体の試薬アプローチを利用することは、従来技術の方法と比べて粒子および試薬アッセイのための大いなる増大した能力を提供する。
従来技術の上記部分は、産業の要件の全てを叶えることにとって充分に満足のいくものとは判明していない。デハイドレーションした細胞では、不正確さが平均の細胞ヘモグロビン濃度の自動測定に付随することが見出されている。凝血においては、追加の混合およびハイドレーション時間などが、コントロールされない向凝固因子活性化を誘発し得る。本発明に従う乾燥した、液体の、または乾燥したかつ液体の試薬アプローチを利用することは、従来技術の方法と比べて粒子および試薬アッセイのための大いなる増大した能力を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0013】
本発明に先立っては様々な量の成功によって達成された免疫診断術の能力を増大させるために、本発明は、特定のマイクロ粒子の機能性を保つために炭水化物マトリックスを使用する。具体的には、本発明は、蛋白質に反応、暴露、またはカップリングされていないラテックスマイクロ粒子を使用する。これらの未反応の粒子は、炭水化物マトリックス中で乾燥されるかまたは液体試薬システムに用いられるときにそれらの生物活性物質吸着特性を保持する。使用時に、粒子はバイオ分子を吸着することができる。この作用は、特に希釈サンプル／希釈剤環境に用いられるときに、全血および血漿中に含有される向凝固因子に対する粒子表面の反応性を助け、向上させる。このプロセスには、凝血アッセイに用いられる種々の活性化因子に対する反応性の蛋白質および粒子混合物の提示が包含される。ラテックスマイクロ粒子が本発明の濁度測定式バイオアッセイに使用され、これにおいては、サンプル溶液の典型的な光学特性は濁らずに澄明である。
【0014】
本発明は、希釈された溶解全血サンプルまたは血漿マトリックスへの改変された方法論の新たな応用を提供することによって、従来技術の失敗に対処する。ここでは、ラテックス粒子が凝固検出の方法を提供する。かかる方法は、結合吸着応用が臨床検査現場において適用されることを許し、製造時間、コスト、ならびにエンドユーザーステージにおいてはインキュベーション反応時間および装置フットプリントまたはサイズを縮減する。無処置のラテックスマイクロ粒子および硫酸またはアミジンなどの表面基を有する粒子が両方とも本発明にとって有効である。各マイクロ粒子タイプが希釈血液アッセイスキームにおいて働くための適切な緩衝液および温度条件もまた必要である。
【0015】
一緒になって、バイオ分子、マイクロ粒子、特殊な緩衝液、およびアッセイ温度は、迅速な臨床アッセイへの使用のための迅速な蛋白質吸収に適する。この特性を保持することは機能性にとって最重要である。加えて、粒子分散もまた大きな役割を有する。溶液中への均一な分散は、迅速な反応および凝集の一貫した分析定量を可能にする。よって、これらの特性の両方を保持することは、いずれかの信頼できる検査コンポーネントの開発にとって必須である。
【0016】
本発明は、ポリスチレンのプレーン（生地）または表面官能化基を有する未コーティングの未コンジュゲート化の蛋白質フリーのラテックスマイクロ粒子を乾燥するためのプロセス方法論を提供する。分散した粒子が、定量可能な分析蛋白質バイオマーカーの吸着を許し、それから、これらはリガンド取り付けに利用可能である。特に、炭水化物からなるマトリックスがバイオマーカー蛋白質の吸着を助けながら、同時に、粒子の迅速な溶解および均一な分散を許す。
【0017】
ある種のバイオアッセイへの使用の容易さのための液体マイクロ粒子試薬を提供することが、本発明の狙いである。凝血診断製品への乾燥または液体ラテックスマイクロ粒子の使用のための方法論を提供することが、本発明の別の狙いである。同時的なヘモグロビン検出および凝固時間値の定量的補正のための方法論を提供することが、本発明のさらなる狙いである。
【0018】
外因系凝血経路の評価と経口抗凝固薬治療（ＯＡＴ）のモニタリングとのための新たな方法を提供することが、本発明のなお別の狙いである。
【0019】
本発明の方法は、全血サンプルについてのヘモグロビン測定および補正と共に、全血または血漿の凝血時間のアッセイを提供する。種々の実施形態は、希釈レベル、温度、粒子のタイプ、および緩衝液コンポーネントに対する調整を使用して、総体的なバイオアッセイ時間を変える。これらの実施形態は、フレキシブルな乾燥した、液体の、または乾燥したかつ液体のマトリックスを特定のマイクロ粒子と併せて使用する。しかしながら、全てのアッセイコンポーネントは、本発明の方法に従う凝固バイオアッセイのための最も代表的なタイミングのスキームを与えるように調整され得るということは理解されるべきである。全般的には、最終的な全血または血漿サンプル希釈比は、３３Ｃおよび３８Ｃの間で行われる凝固アッセイでは５０から７５に対して１部の範囲にあるべきである。
【0020】
本発明は、抗凝固薬活性をモニタリングするための使い捨てのバイオアッセイ診断カートリッジを提供することによって、これらおよび他の目標を達成する。使い捨てのカートリッジは、ある量のマトリックスを保有する第１のウェルと（マトリックスは乾燥マトリックスまたは液体マトリックスどちらかである）；マイクロ粒子を保有する第２のウェルとを有し得る。マイクロ粒子は、少なくとも１つの表面タイプ：活性を保持する未反応のプレーン（生地）、硫酸基（サルフェート）、カルボン酸基（カルボキシル基またはカルボキシレート）、およびアミジン基の化学構造を有する未コーティングのラテックスであり得る。カートリッジは、さらに、ある量の活性化因子を有する第３のウェルを有し得、活性化因子は、トロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、またはセライトであり得る。
【0021】
マトリックスは、ＮａＣｌ、ＰＥＧ、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、およびＣａＣｌ２の少なくとも１つを有する液体炭水化物マトリックスおよび／または乾燥マトリックスであり得る。使い捨てのカートリッジは、二重光学検出読み取りを助けることができる一体型キュベットを有し得る。一体型キュベットは、５３０ｎｍの第１のＬＥＤによる第１の光学検出読み取りを助けることができる第１の壁部と；６６０ｎｍの第２のＬＥＤによる第２の光学検出読み取りを助けることができる第２の壁部とを有し得る。
【0022】
本発明は、分析装置それ自体を例外として、全ての要求されるコンポーネントを有するオールインクルーシブな凝血バイオアッセイ診断キットを提供することによって、他の目標を達成する。かかるキットはフィンガースティック、ピペット、バイオアッセイコンポーネント、および光学キュベットを包含し得る。ユーザーへの衛生的な送達を保証するために、フィンガースティック、ピペット、バイオアッセイコンポーネント、および光学キュベットは、分析装置によってスキャンされ得るバーコードなどの識別子を有する衛生的なかつシールされた容器に含有され得る。バイオアッセイコンポーネントはマトリックスおよびマイクロ粒子を有し得、ここで、マイクロ粒子は少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスであり得、少なくとも１つの表面タイプは、活性を保持する未反応のプレーン（生地のもの）、硫酸基（サルフェート）、カルボン酸基（カルボキシル基またはカルボキシレート）、およびアミジン基の化学構造からなる群から選ばれる。
【0023】
本発明に従うさらなる凝血バイオアッセイは、炭水化物マトリックスと炭水化物マトリックス中のマイクロ粒子とを有し得る。また、このバイオアッセイは、ある量の活性化因子、例えばトロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、およびセライトを有し得る。このバイオアッセイのマトリックスは、乾燥マトリックスまたは液体マトリックスどちらかであり得、炭水化物マトリックスは、マルトリン２５０（登録商標）、スクロース、またはイソマルトを有し得る。このタイプのバイオアッセイのマイクロ粒子は、約１０ｎｍから１５０ｎｍの直径を有し得、１重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）溶液、２重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）溶液、４重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）溶液、８重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）溶液、または１０重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）溶液中にあり得る。
【0024】
上のバイオアッセイを使用することによって、本発明は、希釈された溶解全血、全血（フィンガースティックからそのまま）、血漿、クエン酸加血液、および／または混合された血液および血漿のいずれかの血液サンプルタイプについて、凝固時間測定を得る方法を提供しようとする。それから、かかる方法は：炭水化物マトリックスと炭水化物マトリックス中の複数のマイクロ粒子とを有するマイクロ粒子マトリックスを選択するステップを包含するであろう。マイクロ粒子は、好ましくは、炭水化物マトリックス中の乾燥したまたは液体のときの少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスであり、少なくとも１つの表面タイプは、好ましくは、活性を保持する未反応のプレーン（生地のもの）、硫酸基（サルフェート）、カルボン酸基（カルボキシル基またはカルボキシレート）、およびアミジン基の化学構造からなる群から選ばれる。それから、このマイクロ粒子マトリックスは、試薬として血液サンプルに用いられ得る；それから、希釈された溶解全血または血漿の１つの凝固時間測定が光学検出ＩＮＲによって得られ得る。代替的には、別個の試薬もまた反応混合物に追加されて、血液サンプル中の天然の凝固基質を活性化し得る。別個の試薬は、好ましくは、活性化因子、例えばトロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、またはセライトであろう。
【0025】
それから、２つの異なる波長における光学密度読み取りを同時に得ることによって、凝固時間測定はサンプルのヘモグロビン濃度について補正され得る。
【図面の簡単な説明】
【0026】
【図18】図１８は、時間に対する６６０ｎｍの光学密度を測定することによって、第１のアミジン粒子希釈および第１のマトリックスを使用する第１の実施形態のプロトロンビン時間アッセイの結果を例解するグラフである。
【図19】図１９は、時間に対する６６０ｎｍの光学密度を測定することによって、第１の硫酸粒子希釈および第１のマトリックスを使用する第２の実施形態のプロトロンビン時間アッセイの結果を例解するグラフである。
【図20】図２０は、時間に対する６６０ｎｍの光学密度を測定することによって、第１の表面フリーのマイクロ粒子希釈および第１のマトリックスを使用する第２の実施形態のプロトロンビン時間アッセイの結果を例解するグラフである。
【図21】図２１は、時間に対する６６０ｎｍの光学密度を測定することによって、第２のアミジン粒子希釈および第２のマトリックスを使用する第４の実施形態のプロトロンビン時間アッセイの結果を例解するグラフである。
【図22】図２２は、時間に対する６６０ｎｍの光学密度を測定することによって、第２の硫酸粒子希釈および第２のマトリックスを使用する第５の実施形態のプロトロンビン時間アッセイの結果を例解するグラフである。
【図23】図２３は、時間に対する６６０ｎｍの光学密度を測定することによって、第２の表面フリーのマイクロ粒子希釈および第２のマトリックスを使用する第６の実施形態のプロトロンビン時間アッセイの結果を例解するグラフである。
【図34】図３４は、時間に対する６６０ｎｍの光学密度を測定することによって、トロンビン時間バイオアッセイの標準的なクエン酸加血液に対するトロンビン時間バイオアッセイの標準的なクエン酸加血漿の結果を例解および比較するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0027】
本発明の好ましい実施形態は図１～３８の参照によって論じられる。上で論じられている通り、本発明は、希釈キャピラリー全血、クエン酸加全血、およびクエン酸加血漿中の凝血因子の活性を決定するための方法および装置に関するプロセス、方法論、システム、および装置を提供する。
【0028】
概説
この時点で、総体的な方法１００、システムカートリッジ２、およびバイオアッセイのマニュアルおよび自動部分の概説が、種々の視点から、図１～１２の示されている参照によって論じられる。
この時点で、総体的な方法１００、システムカートリッジ２、およびバイオアッセイのマニュアルおよび自動部分の概説が、種々の視点から、図１～１２の示されている参照によって論じられる。
【0029】
ユーザーの視点からの方法の概説
この時点で、ユーザーの視点の概説が図１～７の参照によって論じられる。ここで示される通り、当初に、バイオアッセイカートリッジまたはカートリッジキットがユーザーによって選択される１０２。バイオアッセイカートリッジをマニュアル的に選択した後に１０２、カートリッジは、選択されたバイオアッセイを識別するために分析装置によってスキャンされ得る１０３。それから、血液サンプルを得ることには１０４、要求される血液サンプルサイズを提供するための単純なフィンガースティック１０５が関わり得る。血液サンプルがこのステップにおいて得られ得る容易さは、静脈穿刺または他の大きい血液サンプルサイズの収集を要求する他の従来技術システムおよび方法と比べて本発明のシステムの利益の１つを発揮する。
この時点で、ユーザーの視点の概説が図１～７の参照によって論じられる。ここで示される通り、当初に、バイオアッセイカートリッジまたはカートリッジキットがユーザーによって選択される１０２。バイオアッセイカートリッジをマニュアル的に選択した後に１０２、カートリッジは、選択されたバイオアッセイを識別するために分析装置によってスキャンされ得る１０３。それから、血液サンプルを得ることには１０４、要求される血液サンプルサイズを提供するための単純なフィンガースティック１０５が関わり得る。血液サンプルがこのステップにおいて得られ得る容易さは、静脈穿刺または他の大きい血液サンプルサイズの収集を要求する他の従来技術システムおよび方法と比べて本発明のシステムの利益の１つを発揮する。
【0030】
バイオアッセイが当初に識別される場合には、キャピラリーサンプラーは、カートリッジから取り外され１０６、血液サンプルを充填され１０７、全てフィンガースティック１０５を行なって５秒以内に、所定のカートリッジに戻され得る１０８。充填されたサンプラーをカートリッジに戻した後１０８に、識別子が分析装置によってスキャンされ１０３、カートリッジは分析装置に挿入され得る１０９。カートリッジを分析装置にローディングした後に、自動プロセスが始まる１１０。それから、選択されたバイオアッセイに依存して、自動プロセスには、バイオアッセイコンポーネントの所定の順序に従って、追加１１２、混合１１４、測定１１６、インキュベーション１１７、補正１１８、およびユーザーまたは他の指定された者に結果を報告１１９という自動ステップが関わるであろう。
【0031】
関わるシステムおよびバイオアッセイの目的に依存して、自動プロセス１１０は、処方される薬物の量および／またはビルトイン薬物送達システム（示されていない）によって提供される薬物の量を自動調整するさらなるステップ１２０を包含し得る。
【0032】
図１Ａには、ユーザーによって選択された１０２後のカートリッジキットの例解が示されている。このカートリッジキットは、分析装置システム１への単回使用のための予めパッケージ化されたバイオアッセイカートリッジ２およびフィンガースティック４を包含する。カートリッジキットは、好ましくは、滅菌されたピペット５、サンプラー８、およびキュベット７をもまた包含する。これらは図８～９について下でより詳細に論じられる。本明細書に記載されるバイオアッセイを行うことができる例示的な分析装置システム１は、ノバ・バイオメディカルコーポレーションによるＡＬＬＥＧＲＯ（登録商標）分析装置である。本明細書に記載されるカートリッジ２に用いられることができる例示的なサンプラーおよびカートリッジベースは、ノバ・バイオメディカルコーポレーションの特許文献３により詳しく記載されている。
【0033】
次に、図２～７に目を向ける。これらはカートリッジキットの特定のコンポーネントの使用をユーザーの視点からさらに例解する。具体的には、図２は、本発明の選択されたカートリッジ２をスキャンすることによって、分析装置１にバイオアッセイ方法を識別させているユーザーを例解する。それから、図３は、カートリッジキットによって提供されるフィンガースティック４を用いることによって血液サンプル６０へのアクセスを得ているユーザーを例解する。それから、図４は、サンプラー８をカートリッジ２から取り出しているユーザーを示す。次に、図５は、フィンガースティック４によってアクセスされた血液サンプル６０をそのサンプラー８に充填しているユーザーを示す。その後に、図６は、充填されたサンプラー８をフィンガースティック４から得られた血液サンプル６０と共に本発明のカートリッジ２に戻しているユーザーを例解する。最終的に、図７は、充填されたサンプラー８を有するカートリッジ２を分析装置１に装填し、それによって選択および識別されたバイオアッセイを初期化しているユーザーを示す。これらのコンポーネントを１つになったキットとして単一のパッケージ９によって提供することによって、本発明は総体的な手続き時間の縮減およびユーザーエラーの縮減の両方をする。
【0034】
バイオアッセイカートリッジの概説
本発明のシステムおよび方法論に用いられ得る例示的なカートリッジキットは、図８、９のさらなる参照によってこの時点で記載されるような自給式の単回使用の使い捨ての一体型バイオアッセイカートリッジ２を包含し得る。
本発明のシステムおよび方法論に用いられ得る例示的なカートリッジキットは、図８、９のさらなる参照によってこの時点で記載されるような自給式の単回使用の使い捨ての一体型バイオアッセイカートリッジ２を包含し得る。
【0035】
図８に例解されている第１のカートリッジ２実施形態は、本発明の１つの実施形態に従う単一のタイプのバイオアッセイのみのために、バイオアッセイコンポーネントによって調製される。代替的には、図９に例解されている第２のカートリッジ実施形態は、本発明のさらなる実施形態に従う少なくとも２つのタイプのバイオアッセイのための複数のコンポーネントが予めローディングされる多目的カートリッジ２’である。
【0036】
図８および９は両方とも、分析装置１に対して特定のタイプのカートリッジ（およびそれゆえにバイオアッセイ）を識別することができるバーコードなどの識別子３を有するカートリッジ２を例解する。この識別子３は、カートリッジ２の可視外表面上にまたはメインパッケージ９の外表面上において可視であり得る。このパッケージ９はカートリッジ２、フィンガースティック４、滅菌されたピペット５、サンプラー８、およびキュベット７を含有し得る。図８および９は両方とも、キャピラリーサンプラー８がカートリッジ２それ自体の取り外し可能なコンポーネントであるカートリッジ２を例解する。また、図８および９は両方とも、光学測定を助けることができる側壁部を有する一体型キュベット７を有するカートリッジ２を例解する。しかしながら、パッケージ９は、カートリッジに加えて提供される別個の相違するキュベット７を要求するカートリッジを含有し得るということもまた予想される。
【0037】
また、図８、９は両方とも、本発明の方法に従うアッセイのコンポーネントが予めローディングされる一連のウェル６を有するカートリッジ２を例解する。両方のタイプのカートリッジでは、選択ステージ１０２（図１～７の参照によって上で論じられている）には、所望のバイオアッセイカートリッジを選択することが関わる。所望のカートリッジ／アッセイを選択した後に１０２、カートリッジがスキャンされ１０３、充填され１０７、それからシステムに挿入される１０９。
【0038】
ユーザーの視点からは、第１および第２のタイプのカートリッジを用いることの間の唯一の違いはこの時点で始まる。それから、第１のカートリッジでは、ユーザーは、分析装置のアクセスコントロールパネルからのマニュアルユーザー入力によっていくつかのバイオアッセイオプションの１つを選択することによって、自動プロセスオプションをマニュアル的に選択し得る１１０。一方で、第２のカートリッジタイプでは、カートリッジの挿入１０９は単独で自動プロセス１１０をトリガーすることにとって十分である。この第２のカートリッジタイプでは、ユーザーの視点からは、バイオアッセイカートリッジ単独が「選択」される。しかしながら、ユーザーがバイオアッセイオプションを選択し得る前に、バイオアッセイカートリッジが第１に調製されなければならず、調製の前には、バイオアッセイコンポーネントそれら自体が第１に選択されなければならない。さらに図１０～１３について当初の図１を参照して、いくつかのバイオアッセイカートリッジコンポーネントオプションが下でさらに論じられる。
【0039】
ここで、ひとたびサンプラー８が充填され１０７カートリッジ２に戻されると必ずしもユーザーによって観察されないカートリッジ２の要素をより具体的に検討する。図８、９に見られ得る通り（付番されていないが）、サンプラー８はキャピラリー要素を有する。これが、使い捨ての検査カートリッジ２のカバー突出のステップ型の突出部分の突出部分上側表面の対応するキャピラリー受け穴から挿入され、それから、ステップ型の突出部分に固定される。
【0040】
挿入およびセットのプロセスの間に、サンプラー８のキャピラリー管は、キャピラリーワイパーの頂端に所在する下側部分の穴から挿入される。下側部分の穴の断面積はキャピラリー管の断面積よりも小さいので、下側部分の穴はキャピラリー管の外側表面に対するスクイージのように作用し、キャピラリー管の外側表面に不注意に配されたいずれかのサンプルがカートリッジ２のチャンバー６内に入ることおよび堆積することを防止する。
【0041】
また、正確さを助けるために、これらのカートリッジ２のキャピラリーワイパーはいずれかのサンプル６０をキャピラリー管の外側表面から取り除く。それによって、サンプル６０による検査カートリッジ２の適切なウェル６’の「過剰充填」からの誤った結果が防止される。同様に、キャピラリー管はユーザーによって拭われないので、サンプル６０による検査２カートリッジのウェル６’の「過小充填」からの誤った結果に至り得るキャピラリー管内のいずれかのサンプル６０が不注意に取り除される見込みはないか、またはほとんどない。
【0042】
自動プロセスの概説
それから、カートリッジ２は、血液サンプル６０の自動検査部分１１０のためにポイント・オブ・ケア分析装置１に挿入される。この時点で、これは図１０をさらに参照して論じられる。ひとたび分析装置１の内部にあると、分析装置の自動アームが解放可能なタブをロック解除することによってカートリッジ２のカバーを外し、キャピラリーサンプラー８を有するカバーおよびサンプル６０は依然として中に納められている。
それから、カートリッジ２は、血液サンプル６０の自動検査部分１１０のためにポイント・オブ・ケア分析装置１に挿入される。この時点で、これは図１０をさらに参照して論じられる。ひとたび分析装置１の内部にあると、分析装置の自動アームが解放可能なタブをロック解除することによってカートリッジ２のカバーを外し、キャピラリーサンプラー８を有するカバーおよびサンプル６０は依然として中に納められている。
【0043】
それから、分析装置はカートリッジカバー上の小さい（small a small）尖端を用いて、ウェル６、６’、６’’などのそれぞれのシールを刺通する。それらが運送の間のウェルの内容の交差汚染を防止することができる限り、本カートリッジ２のシールはホイルシールまたは他のカバーであり得る。また、これらのシールは無制御的な水蒸気希釈および蒸発を縮減することができるべきである。
【0044】
それから、自動アームは、ピペットチップ５を第１のウェル６から取り出す。それから、本明細書に記載されるバイオアッセイ方法に従う混合のために、ピペットチップ５は分析装置１によって用いられてサンプルおよび他のバイオアッセイコンポーネントを適切なウェルに移す。
【0045】
乾燥マイクロ粒子マトリックス１１が使用される場合には、ピペット５は追加の希釈剤９０を第４のウェル６’’’から吸い取り、それをプロトコールに従って第３のウェル６’’内のマイクロ粒子１１に追加し、ここで混合および攪拌が起こり、希釈された粒子１１を形成する。それから、どのタイプのマトリックスが使用されるかにかかわらず、ピペットチップ５は、選択された量の（この時点で希釈された）マイクロ粒子１１を第３のウェル６’’から第２のウェル６’へと吸い取る。
【0046】
それから、カートリッジ２のカバーがカートリッジ上に戻され、ピペッターがキャピラリーサンプラー８と係合し、それによって、サンプル６０が、希釈された選択されたマイクロ粒子１１が待機する第２のウェル６’に追加される１１２。それから、分析装置１のアームがカートリッジ２のカバーを再び取り外し、それから、第１の所定の時間に渡って上下にピペッティングすることによって、サンプル６０および希釈された選択された粒子１１が混合され１１４、マイクロ粒子１１およびサンプル６０の混合物１２１を形成する。
【0047】
それから、ピペットチップ５は、指定された量の選択された形成されたマトリックス４０を第５のウェル６’’’’から吸い取り、それから、第２の追加ステップ１１２において、マトリックス４０を第２のウェル６’に追加する。これは既にサンプル６０および希釈されたマイクロ粒子１１の混合物１２１を含む。それから、第２の所定の時間に渡って第２のウェル６’において例えば上下にピペッティングすることによって、マトリックス４０および混合物１２１が混合され１１４、溶液１２２を形成する（マトリックス４０、サンプル６０、およびマイクロ粒子１１を有する）。
【0048】
その後に、ピペット５は、所定量の溶液１２２（マトリックス４０、サンプル６０、およびマイクロ粒子１１を含む）を第２のウェル６’から吸い取り、選択された試薬８０を含むカートリッジ２の第７のウェル７にこの溶液１２２を追加する１１２。それから、溶液１２２（マイクロ粒子、マトリックス、サンプル）および試薬８０が第３の所定の時間に渡って混合され、共混合物１２３を形成する（この時点でマトリックス４０、サンプル６０、マイクロ粒子１１、および試薬８０を有する）。
【0049】
また、図８、９に示されている好ましいカートリッジ２によって行われる場合には、この第７のウェル７は、共混合物１２３のさらなる移動なしに光学検出がこの時点で起こり得るということを保証するために十分な透明性、粘性、および厚さの壁部を有する一体型光学検出キュベット７である。それから、さらに下でより詳細に論じられる通り、共混合物１２３の光学密度は、少なくとも２回測定されるであろう１１２、１１２’。
【0050】
第１の測定１１２を開始し、分析装置１の第１の発光デバイス（ＬＥＤ）がオンにされ、６６０ｎｍの波長の第１のＬＥＤからの光が一体型キュベット７の第１の壁部から透過させられる。それから、光は、共混合物１２３および一体型キュベット７の第２の壁部を透過させられる。それから、光は分析装置の光検出器によって検出される。連続的な読み取りが所定量の時間に渡って収集されて、第１の凝固データ１２４を提供する。
【0051】
第２の測定１１２’では、分析装置１の第２の発光デバイス（ＬＥＤ）がオンにされ、５３０ｎｍの第２の波長の第２のＬＥＤからの光が一体型キュベット７の第１の壁部から透過させられる。それから、光は、共混合物１２３および再度一体型キュベット７の第２の壁部を透過させられる。それから、光は分析装置の光検出器によって収集される。ヘモグロビンレベルデータ１２５を提供するためには、単一の読み取りのみが必要である。これらの測定は第１および第２と呼ばれるが、順序は逆転させられ得るということは認識されるべきである。代替的には、測定を順次に提供する代わりに、それらは同時間的にまたはさらには部分的に同時的に提供され得る。
【0052】
下でさらに論じられるであろう通り、それから、光学検出１１６、１１６’からの結果は凝固時間結果１２６を補正するために用いられる１１８。それからユーザーに報告されるのは、これらの補正後の結果１２６である。
【0053】
バイオアッセイコンポーネントの概説
本発明は、いくつかのマイクロ粒子マトリックス１０の少なくとも１つを有するバイオアッセイカートリッジ２を提供し、これはこの時点で論じられる。いくつかの実施形態においては、マイクロ粒子マトリックス１０はカートリッジ形成に先立って形成され、他の実施形態では、マイクロ粒子マトリックス１０はバイオアッセイプロセス１１０の間の血液サンプル６０の追加１１２の後に形成される。
本発明は、いくつかのマイクロ粒子マトリックス１０の少なくとも１つを有するバイオアッセイカートリッジ２を提供し、これはこの時点で論じられる。いくつかの実施形態においては、マイクロ粒子マトリックス１０はカートリッジ形成に先立って形成され、他の実施形態では、マイクロ粒子マトリックス１０はバイオアッセイプロセス１１０の間の血液サンプル６０の追加１１２の後に形成される。
【0054】
マイクロ粒子マトリックス１０はマイクロ粒子１１を有し、これらは、ポリスチレンマイクロ粒子上のプレーンな（生地の状態のもの）または表面官能化基を有する未コーティングの未コンジュゲート化の蛋白質フリーのラテックスであり得る。マトリックス４０は全般的には炭水化物４６からなり、これはバイオマーカー蛋白質の吸着を助けながら、同時に、マイクロ粒子１１の迅速な溶解および均一な分散を許す。マトリックス４０中のマイクロ粒子１１の分散された性質は、定量可能な分析蛋白質バイオマーカーの吸着を許し、それから、これらはリガンド取り付けに利用可能である。
【0055】
本発明に用いられるマイクロ粒子１１は、アミジン２２および硫酸２４などの表面活性基を有するポリスチレンマイクロ粒子１８を包含する。本発明のマイクロ粒子１１は直径サイズ２６が２０ｎｍから８００ｎｍまたはより多くまでの範囲である。粒子直径２６の好ましい範囲は４０ｎｍから１５０ｎｍであり、最も好ましい直径２６は７５から１２５ｎｍの範囲である。
【0056】
アミジンマイクロ粒子
本発明の１つの実施形態は、９５ｎｍの直径２６を有するアミジン粒子２２を０．０８０重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）２８の希釈１１で使用する。希釈１１の光学密度３１は６６０ｎｍで０．１９の光学密度値と測定された。
本発明の１つの実施形態は、９５ｎｍの直径２６を有するアミジン粒子２２を０．０８０重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）２８の希釈１１で使用する。希釈１１の光学密度３１は６６０ｎｍで０．１９の光学密度値と測定された。
【0057】
本発明のアミジンマイクロ粒子２２は直径サイズ２６が２０ｎｍから８００ｎｍまたはより多くまでの範囲である。粒子直径２６の好ましい範囲は４０ｎｍから１５０ｎｍであり、より好ましい直径２６は７５から１２５ｎｍの範囲であり；最も好ましい直径は９０ｎｍから９８ｎｍの範囲である。アミジンマイクロ粒子２２は、０．００６重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）～８重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）の範囲２８の希釈１１、より好ましくは０．０１０重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）～０．２０重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）の範囲を有する希釈１１、最も好ましくは０．０８０重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）を有する希釈１１である。
【0058】
アミジンラテックス粒子２２を用いる本バイオアッセイ方法は、１：１０から１：４００の範囲の；より好ましくは１：２０から１：１５０の範囲のマイクロ粒子２２対一酸化二水素のトータルの希釈比３０を有する希釈１１を要する。
【0059】
本明細書において論じられる本発明の方法に従って調製されるときに、本発明のバイオアッセイ方法の目標を叶え得るアミジンラテックス粒子２２は、インビトロジェン（登録商標）から提供される高活性ラテックスビーズを包含し得る。
【0060】
硫酸マイクロ粒子
本発明の別の実施形態は、１１０ｎｍの直径を有する硫酸マイクロ粒子２４を．０４４重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）希釈で使用する。希釈１１の光学密度は６６０ｎｍで０．２１の値と測定された。
本発明の別の実施形態は、１１０ｎｍの直径を有する硫酸マイクロ粒子２４を．０４４重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）希釈で使用する。希釈１１の光学密度は６６０ｎｍで０．２１の値と測定された。
【0061】
本発明の他の硫酸マイクロ粒子２４は、直径サイズ２６が、２０ｎｍから８００ｎｍまたはより多くまでの範囲である。硫酸粒子２４の直径２６の好ましい範囲は４０ｎｍから１５０ｎｍであり、より好ましい直径２６は７５から１２５ｎｍの範囲であり；最も好ましい直径２６は９０ｎｍから１１０ｎｍの範囲である。
【0062】
いくつかの実施形態に従うと、硫酸マイクロ粒子２４は、０．００１重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）から１２重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）の範囲の希釈１１、より好ましくは０．０１重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）から８重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）の範囲を有する希釈１１、最も好ましくは０．０１６重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）を有する希釈１１である。
【0063】
硫酸マイクロ粒子２４を用いる本バイオアッセイ方法は、１：５０から１：２０００の範囲のマイクロ粒子２４対一酸化二水素の比；より好ましくは１：１００から１：１０００の範囲の比を有する；最も好ましくは１：５００の比の希釈比３０を要する。
【0064】
本明細書において論じられる本発明の方法に従って調製されるときに、本発明の目標を叶え得る硫酸ラテックス粒子２４は、インビトロジェン（登録商標）から提供される高活性ラテックスビーズを包含し得る。
【0065】
表面フリーのマイクロ粒子
本発明の別の実施形態は、９６ｎｍの直径２６を有する表面フリーのマイクロ粒子２０を、０．０６７重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）２８を有する希釈１１で使用する。この希釈は１対１５０という希釈比３０を有する。希釈１１の光学密度３１は６６０ｎｍで０．２１の値と測定された。
本発明の別の実施形態は、９６ｎｍの直径２６を有する表面フリーのマイクロ粒子２０を、０．０６７重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）２８を有する希釈１１で使用する。この希釈は１対１５０という希釈比３０を有する。希釈１１の光学密度３１は６６０ｎｍで０．２１の値と測定された。
【0066】
本発明の他の表面フリーのマイクロ粒子２０は直径サイズ２６が２０ｎｍから８００ｎｍまたはより多くまでの範囲である。表面フリーのマイクロ粒子２０は４０ｎｍから１５０ｎｍという直径２６の好ましい範囲を有し、より好ましい直径２６は７５から１２５ｎｍの範囲であり；最も好ましい直径２６は９０ｎｍから１１０ｎｍの範囲である。いくつかの実施形態に従うと、表面フリーのマイクロ粒子２０は、０．００１重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）から２重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）の範囲の希釈１１、より好ましくは０．０１重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）から０．２重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）の範囲を有する希釈１１、最も好ましくは０．０１６重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）を有する希釈１１である。
【0067】
表面フリーのマイクロ粒子２０を用いる本バイオアッセイ方法は、１：５０から１：２０００の範囲の；より好ましくは１：１００から１：１０００の範囲のマイクロ粒子２０対一酸化二水素３３の希釈比３０を有する希釈１１を要する。
【0068】
本明細書において論じられる本発明の方法に従って調製されるときに、本発明のマイクロ粒子の要件を叶え得る表面フリーの粒子は、バリアン・ラボ（登録商標）から提供されるプレーンなマイクロ粒子を包含し得る。
【0069】
カルボキシルマイクロ粒子
本発明の他の実施形態は、１０３ｎｍの直径を有するカルボキシルラテックスマイクロ粒子を．０１６重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）溶液で使用する。希釈１１の光学密度は６６０ｎｍで０．０８の値と測定された。
本発明の他の実施形態は、１０３ｎｍの直径を有するカルボキシルラテックスマイクロ粒子を．０１６重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）溶液で使用する。希釈１１の光学密度は６６０ｎｍで０．０８の値と測定された。
【0070】
本発明の他のカルボキシルマイクロ粒子２５は、直径サイズ２６が２０ｎｍから８００ｎｍまたはより多くまでの範囲である。カルボキシル粒子２５直径２６の好ましい範囲は４０ｎｍから１５０ｎｍであり、より好ましい直径２６は７５ｎｍから１２５ｎｍの範囲であり；最も好ましい直径は９０ｎｍから１１０ｎｍの範囲である。
【0071】
いくつかの実施形態に従うと、カルボキシルマイクロ粒子２４は、０．００１重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）から２重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）の範囲の溶液２８、より好ましくは０．００５重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）から．１重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）の範囲を有する溶液２８であり、最も好ましくは希釈１１は０．０１６重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）を有する。
【0072】
カルボキシルマイクロ粒子２５を用いる本バイオアッセイ方法は、１：５０から１：２０００の範囲の；より好ましくは１：１００から１：１０００の範囲のマイクロ粒子２５対希釈剤３３の希釈比３０を有する希釈１１を要する。
【0073】
本明細書において論じられる本発明の方法に従って調製されるときに、本発明の目標を叶え得るカルボキシルラテックス粒子２４は、インビトロジェン（登録商標）から提供される高活性ラテックスビーズを包含し得る。
【0074】
乾燥マトリックス
全般的には、本発明のバイオアッセイ方法は、プレーンまたは官能化された表面を有するほとんどのラテックス粒子懸濁物を利用し得る。いくつかの実施形態は、界面活性剤などの試薬アテニュエーターを有するマトリックスを使用する。検査された２つのかかる試薬アテニュエーターはポリソルベートタイプ非イオン性界面活性剤およびオクチルフェノールエトキシレート界面活性剤を包含する。本明細書において論じられる本発明の方法によって調製されるときに、本発明の目標を叶え得るポリソルベートタイプの非イオン性およびオクチルフェノールエトキシレート界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）およびＴｒｉｔｏｎ（登録商標）ファミリーによって提供される界面活性剤を包含し得る。
全般的には、本発明のバイオアッセイ方法は、プレーンまたは官能化された表面を有するほとんどのラテックス粒子懸濁物を利用し得る。いくつかの実施形態は、界面活性剤などの試薬アテニュエーターを有するマトリックスを使用する。検査された２つのかかる試薬アテニュエーターはポリソルベートタイプ非イオン性界面活性剤およびオクチルフェノールエトキシレート界面活性剤を包含する。本明細書において論じられる本発明の方法によって調製されるときに、本発明の目標を叶え得るポリソルベートタイプの非イオン性およびオクチルフェノールエトキシレート界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）およびＴｒｉｔｏｎ（登録商標）ファミリーによって提供される界面活性剤を包含し得る。
【0075】
本発明に従う乾燥マトリックスのいくつかは炭水化物、炭水化物誘導体、および混合物を包含する。これらは、粒子を有害な温度から保護する環境を生じ、緩衝液、希釈されたサンプル、または他の流体試薬などの流体の追加によって迅速な再ハイドレーションおよび均一な分散（dispersal）を可能にする。
【0076】
炭水化物およびそれらの誘導体は、粒子を乾燥するために用いられる好ましい化合物であり、本明細書において論じられるバイオアッセイ方法のための乾燥プロセスの間の安定化を提供する。これらの試薬は水によって調製される。しかしながら、低モル濃度緩衝液もまた他の実施形態においては用いられ、これらの例はグリシンおよびビシンを包含する。安定化剤のパーセント濃度は２から２５％の範囲であり、５から１０％の好ましい範囲を有する。
【0077】
乾燥マトリックスに用いられる化合物は：グリシン、ビシン、塩化ナトリウム、ｎ－オクテニルコハク酸無水物、ポリビニルアルコール－ポリエチレングリコールグラフトコポリマー、マルトデキストリン、α－（１，６）連結マルトトリオース、α－Ｄ－グルコピラノシル－（１→１）－α－Ｄ－グルコピラノシド、水の存在下における酸および／または酵素による澱粉の加水分解から得られる水溶性グルコースポリマー、多糖ポリマー、ポリエチレングリコール、ヒドロキシステアリン酸ポリエチレングリコール（１５）、ポビドン、スクロース、ソルビトール、１２－ヒドロキシステアリン酸のポリオキシエチレンエステル、ならびに１－Ｏ－アルファ－Ｄ－グルコピラノシル－Ｄ－マンニトールを包含する。
【0078】
本発明の目標を叶え得るこれらの化合物の製品の公的に利用可能なバージョンは、ＨｉＣａｐ１００（登録商標）、ＫｏｌｌｉｃｏａｔＩＲ（登録商標）、マルトリン２５０（登録商標）、プルラン、トレハロース、Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）プラス、およびＳｏｌｕｔｏｌ（登録商標）を包含し得る。好ましい実施形態の解決手段はＬａｂ９１０１（登録商標）、マルトリン２５０（登録商標）、トレハロース（登録商標）、およびスクロースであり、最も好ましいマトリックスはマルトリン（登録商標）、スクロース、およびイソマルトである。一方で、乾燥した硫酸マイクロ粒子を用いる実施形態では、好ましい炭水化物はスクロースまたはイソマルトである。
【0079】
液体マトリックス
また、乾燥マトリックスのそれぞれについて上に記載されている同じ粒子懸濁物は、分注および吸い取りの容易さのために、いわゆる「液体」マトリックスを用いて、より希釈された形態で作られ得る。例えば、乾燥マトリックス製剤が１０％スクロースを有する２５ｕＬの１：１８硫酸ラテックスからなるときには、類似の液体マトリックスは、５％スクロースを有する５０ｕＬの１：９硫酸ラテックスの範囲の試薬を有する。他の実施形態では、液体マトリックスは溶解剤（lyse）希釈剤から形成される。
また、乾燥マトリックスのそれぞれについて上に記載されている同じ粒子懸濁物は、分注および吸い取りの容易さのために、いわゆる「液体」マトリックスを用いて、より希釈された形態で作られ得る。例えば、乾燥マトリックス製剤が１０％スクロースを有する２５ｕＬの１：１８硫酸ラテックスからなるときには、類似の液体マトリックスは、５％スクロースを有する５０ｕＬの１：９硫酸ラテックスの範囲の試薬を有する。他の実施形態では、液体マトリックスは溶解剤（lyse）希釈剤から形成される。
【0080】
本実施形態の液体マトリックスに使用される化合物は：グリシン、ビシン、塩化ナトリウム、ｎ－オクテニルコハク酸無水物、ポリビニルアルコール－ポリエチレングリコールグラフトコポリマー、マルトデキストリン、α－（１，６）連結マルトトリオース、α－Ｄ－グルコピラノシル－（１→１）－α－Ｄ－グルコピラノシド、水の存在下における酸および／もしくは酵素による澱粉の加水分解から得られる水溶性グルコースポリマー、多糖ポリマー、ポリエチレングリコール、ヒドロキシステアリン酸ポリエチレングリコール（１５）、ポビドン、スクロース、ソルビトール、１２－ヒドロキシステアリン酸のポリオキシエチレンエステル、１－Ｏ－アルファ－Ｄ－グルコピラノシル－Ｄ－マンニトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ６Ｋ、ＰＥＧ１２Ｋ、およびＰＥＧ２０Ｋ、ポリソルベートタイプの非イオン性界面活性剤、オクチルフェノールエトキシレート界面活性剤、ならびに／またはＵＳＰアッセイにおいて１５秒未満の消泡性能を支持する濃度に注射グレードの精製水の水によって希釈されたシメチコンを包含する。
【0081】
本発明の目標を叶え得るこれらの化合物製品の選ばれた数個の公的に利用可能なバージョンは、ＨｉＣａｐ１００（登録商標）、ＫｏｌｌｉｃｏａｔＩＲ（登録商標）、Ｌａｂ９１０１（登録商標）、マルトリン２５０（登録商標）、プルラン（登録商標）、トレハロース（登録商標）、Ｓｏｌｕｔｏｌプラス（登録商標）、Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）、ＦｏａｍＡＷＡＹ（登録商標）、およびＳｏｒｂｉｔａｌ（登録商標）を包含し得る。
【0082】
試薬
本発明のバイオアッセイ方法は種々の試薬８０または活性化因子を使用する。本実施形態の活性化因子として使用される化合物は：トロンボキナーゼ、トロンボプラスチン、組織トロンボプラスチン因子ＩＩＩ、血小板組織因子、トロンボキナーゼ、トロンボザイム、組織因子、酵素生成性物質、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、トロンビン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、ケイ酸アルミナ粘土、酸化ケイ素、シリカ、セライト、およびポビドンを包含する。
本発明のバイオアッセイ方法は種々の試薬８０または活性化因子を使用する。本実施形態の活性化因子として使用される化合物は：トロンボキナーゼ、トロンボプラスチン、組織トロンボプラスチン因子ＩＩＩ、血小板組織因子、トロンボキナーゼ、トロンボザイム、組織因子、酵素生成性物質、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、トロンビン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、ケイ酸アルミナ粘土、酸化ケイ素、シリカ、セライト、およびポビドンを包含する。
【0083】
適切に調製されるときに本発明の目標を叶え得るこれらの化合物および製品の選ばれた数個の市販バージョンは、カオリン（登録商標）、Ｉｎｎｏｖｉｎ（登録商標）トロンボプラスチン８２、ＡＰＴＴ－ＸＬ８４、およびシーメンス（登録商標）トロンビン８６を包含し得る。
【0084】
実際のバイオアッセイに先立つ運送のために保存される間には、これらの試薬または活性化因子は追加の安定性を保証するために乾燥状態であり得る。それから、アッセイの間に、これらの試薬８０は、例えばＤＨ２Ｏなどの希釈剤９０によって、種々の量９４で、２０ｕＬから４００ｕＬの範囲で、より好ましくは５０ｕＬから３００ｕＬの範囲で、５０ｕＬから１００ｕＬの範囲で、種々の濃度９６で希釈され得る。依然として他の実施形態は、ＣａＣｌ２または他の希釈剤を使用し、これは下の特定の実施形態について論じられる。
【0085】
光学密度＆補正
図１０について当初に論じられた通り、血漿または全血サンプル６０が凝固するために要求される時間の量を測定１１６、１１６’および記録するために、コアグロメーター的（濁度測定式）凝固検出の原理が本発明およびシステムに用いられる。この技術は、経時的に検出される光学密度１３０の変化１３５を測定することによって、凝血開始１３２および凝血エンドポイント１３４を評価する。
図１０について当初に論じられた通り、血漿または全血サンプル６０が凝固するために要求される時間の量を測定１１６、１１６’および記録するために、コアグロメーター的（濁度測定式）凝固検出の原理が本発明およびシステムに用いられる。この技術は、経時的に検出される光学密度１３０の変化１３５を測定することによって、凝血開始１３２および凝血エンドポイント１３４を評価する。
【0086】
フィブリノゲンがフィブリンに変換される媒体中において、この媒体を通るいずれかの光はフィブリン鎖によって吸収されるであろうという原理に基づいて、凝固形成１２４は推測および「検出」される。それゆえに、フィブリン凝固形成が時間の経過によって進行すると、光の吸収が増大し、光学密度１３０の変化１３５をもたらす。
【0087】
それから、本明細書において論じられるバイオアッセイのそれぞれでは、上で論じられている通り、サンプルを収集することおよび混合することの後に、光が発生源から共混合物１２３を透過させられる。それから、透過光が光検出器に導かれる。これは発生源に対して１８０°の入射で位置する。第１の測定１１６’の光検出器からの第１の対応する電気シグナル出力は、光学検出を用いてヘモグロビン１２５のレベルを決定する。
【0088】
共混合物１２３の光透過率が、所定の時間に渡って光検出器によって再び測定される１１６。これは第２の対応する電気シグナル出力を生成する。光検出器からのこの第１および第２の対応する電気シグナル出力は両方とも、検出された光に従って変化する。
【0089】
シグナル出力はソフトウェアによって一連のアルゴリズムによって処理されて、付随する凝固点、凝固開始１３２、および形成１３４を決定する。手短に言うと、ラテックスマイクロ粒子共混合物１２３シグナルの光学密度１３０の変化１３５が、凝固開始１３２および形成１３４を示すために用いられる。
【0090】
減少した操作手続き所要時間
本発明は、凝血検出手続きの検査室エラーのいくつかの発生源に対処しようとする。凝固形成は時間の経過に依存的であるので、凝血検出手続きの検査室エラーの最も大きい発生源の１つは、サンプリング１０４および測定１１６の間の時間の経過を原因とする。
本発明は、凝血検出手続きの検査室エラーのいくつかの発生源に対処しようとする。凝固形成は時間の経過に依存的であるので、凝血検出手続きの検査室エラーの最も大きい発生源の１つは、サンプリング１０４および測定１１６の間の時間の経過を原因とする。
【0091】
本発明の原理の１つは、サンプル取得１０４および検出（測定）１１６の間の時間の経過を原因として起こり得る増大したエラー数に対処するための従来技術の失敗に対処することである。アッセイコンポーネントをオールインクルーシブなカートリッジ２としてパッケージ化し、アッセイ方法論のための予め選択されたコンポーネントを提供することによって、本発明は検出前のステージを早める。
【0092】
本発明がこのゴールを達成する別のやり方は、検査前に血漿から赤血球を分離する必要なしに全血サンプルを用いることによって正確な結果を達成することができるバイオアッセイを提供することによってである。現行で利用可能なポイント・オブ・ケア分析装置はサンプルとしての血液の血漿の使用を要求する。これは、検査結果を得る前に血液サンプルの血漿からの赤血球の分離を要求し、さらにサンプル取得および検査の間の期間を引き延ばす。
【0093】
現行の分析装置が血液血漿を要求する理由の１つは、従来技術の自動システムおよびアッセイが自己補正分析を提供することの不能を原因とすることが発見された。血液サンプル中のヘモグロビンのレベルは、凝固開始の速度に対するインパクトを有するであろう。本発明者は、個人のヘモグロビン量のばらつきを解決するように光学密度のシグナル出力を調整することの失敗が、凝固開始および形成を正しく識別する際のエラーを生じ得るということを見出した。
【0094】
従来技術のエラーに対処するために、エラーのこの潜在的発生源について、本発明はヘモグロビンの自動補正のためのバイオアッセイ方法を提供する。全血を用いる記載される凝固アッセイ実施形態では、共混合物の光学密度が可視波長で測定される。順次に、別の可視波長でサンプル光学密度を測定することによって、ヘモグロビンレベルが決定される。それから、サンプルの調整後の真の血漿値について、ヘモグロビン測定を用いて、凝固時間が補正される。この自動補正によって提供される利点の利益を例解するために、補正ありまたはなしのプロトロンビン時間ＩＮＲ値に対するヘモグロビンの効果が図１４に図解されている。
【0095】
具体的には、図１４のグラフは、標準的なサンプルのＩＮＲに対する種々のレベルのヘモグロビンの効果（ヘマトクリット効果）を表す。ここで示されている通り、ヘモグロビンは０から２３ｇｍ／ｄｌの範囲であった。標準的なＩＮＲは０．８から１．３ＩＮＲ単位の範囲である。適度な経口抗凝血治療は１．８から２．８ＩＮＲ単位のＩＮＲをもたらす。ヘモグロビンが増大すると、全血サンプル中の減少した血漿部分を原因として、ＩＮＲは増大する。可視範囲の追加のＬＥＤによって、ＩＮＲは検出されたヘモグロビンについて補正され得る。また、この図はヘモグロビンについて補正後のＩＮＲを比較として示す。
【0096】
本発明は、多波長の発光ダイオード（ＬＥＤ）などだがこれに限定されないマルチシグナル測定デバイスを包含するように、装置の能力の拡張を助ける。アッセイを読み取るために共混合物の光学密度を測定することは、好ましくは可視波長で、６２０ｎｍから７００ｎｍの範囲で、より好ましくは６５０から６８０ｎｍの間で、さらにより好ましくは６５８ｎｍおよび６６８ｎｍの間で、最も好ましくは６６０ｎｍで行われる。ヘモグロビンレベルを読み取るためにサンプルの光学密度を測定することは、好ましくは可視波長で、５００ｎｍおよび５５０ｎｍの範囲で、より好ましくは５１０ｎｍおよび５４５ｎｍの間で、さらにより好ましくは５２０ｎｍおよび５４０ｎｍの間で、最も好ましくは５３０ｎｍで行われる。
【0097】
【0098】
【0099】
次に、図１５に示されている予め承認されたＰＴ／ＩＮＲ分析装置によって得られた血漿ＩＮＲ値（単数または複数）間の違いが、本方法に従うヘモグロビンの補正ありまたはなしで図解されている。再び、ヘモグロビン値は０から２３ｇ／ｄｌの範囲であった。
【0100】
【0101】
標準プロトロンビン時間／ＩＮＲ
標準化されたＩＮＲが本発明のバイオアッセイの種々の実施形態に使用されるということは理解されるべきである。出力のばらつきを生ずる用いられるトロンボプラスチンの違いに対処するために、標準化されたプロトロンビン時間ＩＮＲが使用される。このＩＮＲ補正測定（または標準化）はプロトロンビン時間、トロンボプラスチンの感度指数、および平均プロトロンビン時間から展開している。
標準化されたＩＮＲが本発明のバイオアッセイの種々の実施形態に使用されるということは理解されるべきである。出力のばらつきを生ずる用いられるトロンボプラスチンの違いに対処するために、標準化されたプロトロンビン時間ＩＮＲが使用される。このＩＮＲ補正測定（または標準化）はプロトロンビン時間、トロンボプラスチンの感度指数、および平均プロトロンビン時間から展開している。
【0102】
具体的には、数学的定式化では、この標準化は次の計算として書かれ得る：
ＩＮＲ＝（ＰＴ／ＭＴ）ＩＳＩ
ここで、上の式中、ＩＮＲは標準化値を意味し；ＰＴはプロトロンビン検査時間を意味し；ＩＳＩはトロンボプラスチンの感度指数を意味し；ＭＴは２０個の標準的なサンプルに由来する平均プロトロンビン時間を意味する。
ＩＮＲ＝（ＰＴ／ＭＴ）ＩＳＩ
ここで、上の式中、ＩＮＲは標準化値を意味し；ＰＴはプロトロンビン検査時間を意味し；ＩＳＩはトロンボプラスチンの感度指数を意味し；ＭＴは２０個の標準的なサンプルに由来する平均プロトロンビン時間を意味する。
【0103】
本発明の特定のバイオアッセイ
この時点で、図１６～２４に目を向ける。これらは、本発明の実施形態に従って行われた特定のバイオアッセイの結果を図解する。具体的に別様に申し立てられない限り、これらのバイオアッセイ結果は、経時的に（秒による）６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる光学密度読み取りを例解する。
この時点で、図１６～２４に目を向ける。これらは、本発明の実施形態に従って行われた特定のバイオアッセイの結果を図解する。具体的に別様に申し立てられない限り、これらのバイオアッセイ結果は、経時的に（秒による）６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる光学密度読み取りを例解する。
【0104】
組織トロンボプラスチンを使用するバイオアッセイ
種々のマイクロ粒子希釈のための様々なマトリックスを使用する本発明の方法に従う異なるバイオアッセイＢ１～Ｂ２０の結果が、図１６～３３に図解され、それぞれの議論は下で提供される。これらのバイオアッセイＢ１～Ｂ２０のそれぞれは組織トロンボプラスチン試薬を使用した。具体的には、これらのバイオアッセイのための選択された試薬８０は、下のプロトコールのそれぞれに挙げられている量の組織トロンボプラスチンおよびＣａＣｌ２であった。
種々のマイクロ粒子希釈のための様々なマトリックスを使用する本発明の方法に従う異なるバイオアッセイＢ１～Ｂ２０の結果が、図１６～３３に図解され、それぞれの議論は下で提供される。これらのバイオアッセイＢ１～Ｂ２０のそれぞれは組織トロンボプラスチン試薬を使用した。具体的には、これらのバイオアッセイのための選択された試薬８０は、下のプロトコールのそれぞれに挙げられている量の組織トロンボプラスチンおよびＣａＣｌ２であった。
【0105】
【0106】
第１のバイオアッセイＢ１は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）表面基を有するマイクロ粒子２７を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。マイクロ粒子は、水中の０．０２％アジ化ナトリウムによって１対５００の比で０．０１６％というトータルのマイクロ粒子濃度に希釈された。希釈１１の光学密度は希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．０８の光学密度値を有した。このバイオアッセイＢ１は、さらに、水によって希釈されたｐＨ１０．０の０．１７Ｍグリシン、１．０ＭのＮａＣｌ、および１％シメチコンを有するマトリックス４０を使用した。このバイオアッセイＢ１は標準的なクエン酸加全血サンプル６０によって行われた。
【0107】
比較して、第２のバイオアッセイＢ２は上のバイオアッセイＢ２０と同一のプロトコールを有し、Ｂ２のみがマイクロ粒子２０（ＢＳＡ表面基なし）を有するマイクロ粒子希釈１１によって行われた。このバイオアッセイの選択された試薬８０は組織トロンボプラスチンおよびＣａＣｌ２であった。
【0108】
図１６に示されている通り、上で論じられている従来技術に従って働くことが公知のＢＳＡマイクロ粒子を用いる試みであるＢ１アッセイでは、経時的な光学密度の一貫した変化は検出されず、それゆえに、凝固開始時間、凝固終了時間、または凝固の変化はＢ１アッセイでは検出されなかった。
【0109】
また、図１６に示されている通り、本明細書において論じられる新規の方法に従って本発明の概念を使用するＢ２アッセイでは、凝固は約４秒で始まる１３２ことが見られ得、０．１３４２のＯＤ値を有し、凝固は約１０秒で完了する１３４ことが見られ得、０．１９０７のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．０５６５というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0110】
この差異を確かめるために、今度は異常な血液サンプルによって、これらのバイオアッセイＢ１およびＢ２が再び繰り返された。明確にするために、それぞれ第３および第４のバイオアッセイＢ３およびＢ４として指定される。
【0111】
図１７に示されている通り、上で論じられている従来技術に従って働くことが公知のＢＳＡマイクロ粒子を用いることを再び試みるＢ３アッセイでは、経時的な光学密度の一貫した変化は検出されず、それゆえに、凝固開始時間、凝固終了時間、または凝固の変化はＢ３アッセイでは検出されなかった。
【0112】
また、図１７に示されている通り、本発明の方法を使用するＢ４アッセイでは、凝固は約３１秒で始まる１３２ことが見られ得、０．１１６４のＯＤ値を有し、凝固は約５９秒で完了する１３４ことが見られ得、０．２１８０のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．１０１６というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0113】
バイオアッセイＢ１～Ｂ４のプロトコールが下の表１６で提供されている：
【0114】
下の表５は、本発明に従う上に記載されているバイオアッセイＢ１～Ｂ４について、ある期間に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる光学密度結果のデータを示す：
【0115】
ポリエチレングリコールマトリックスによるＢ５～Ｂ１０バイオアッセイ
この時点で、本発明の種々の実施形態に従う６つのバイオアッセイＢ５～Ｂ１０の結果を図解する図１８～２３に目を向ける。
この時点で、本発明の種々の実施形態に従う６つのバイオアッセイＢ５～Ｂ１０の結果を図解する図１８～２３に目を向ける。
【0116】
具体的には、図１８は、本発明に従う第１のバイオアッセイＢ５の結果を図解する。これは、９５ｎｍの直径２６を有するアミジン表面基を有するマイクロ粒子２２を有しかつ０．０８０重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）２８を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。このバイオアッセイＢ５は、さらに、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、１．２９ＭのＮａＣｌ、および１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋを有するマトリックス４０を使用した。
【0117】
Ｂ５の希釈の光学密度は６６０ｎｍで測定されて０．１９の光学密度値３１を有した。図１８に示されている通り、Ｂ５アッセイでは、凝固は約５秒で始まる１３２ことが見られ得、１．１５３のＯＤ値を有し、凝固は約５０秒で完了する１３４ことが見られ得、１．１６４のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．０１１というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0118】
図１９は、第２のバイオアッセイ実施形態Ｂ６の結果を図解する。これは、１１０ｎｍの直径２６を有する硫酸表面基２４を有するマイクロ粒子と０．０４４重量対体積２８とを有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。この実施形態Ｂ６は、さらに、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、１．２９ＭのＮａＣｌ、および１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋを有するマトリックス４０を使用した。
【0119】
希釈の光学密度が６６０ｎｍで測定されて０．２１の光学密度値を有した。図１９に示されている通り、Ｂ６アッセイでは、凝固は約５秒で始まる１３２ことが見られ得、０．５６４のＯＤ値を有し、凝固は約７０秒で完了する１３４ことが見られ得、１．０００のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．４３６というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0120】
次に、第３のバイオアッセイ実施形態Ｂ７の結果の図解の図２０に目を向ける。これは、０．０６７重量対体積％で９６ｎｍの直径２６を有する表面基フリー２０のマイクロ粒子を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。この希釈は１対１５０というマイクロ粒子対希釈剤の希釈比を有した。この実施形態Ｂ７は、さらに、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、１．２９ＭのＮａＣｌ、および１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋを有するマトリックスを使用した。
【0121】
希釈された溶液の光学密度が希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．２１の光学密度値を有した。図２０に示されている通り、Ｂ７アッセイでは、凝固は約５秒で始まる１３２ことが見られ得、０．５１４のＯＤ値を有し、凝固は約８５秒で完了する１３４ことが見られ得、１．２１５のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．７０１というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0122】
それから、図２１は、第４のバイオアッセイ実施形態Ｂ８の結果の図解を提供する。これは、９５ｎｍの直径２６を有するアミジン表面基２２を有するマイクロ粒子を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。マイクロ粒子希釈は０．０８０重量対体積％２８を有した。希釈１１の光学密度３１は、６６０ｎｍで０．１９の光学密度値を有すると測定された。
【0123】
この実施形態Ｂ８は、１．２９ＭのＮａＣｌと共にｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン４７を有するマトリックス４０を使用した。マトリックス４０は、さらに、１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０および１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋの形態の炭水化物誘導体を含む。
【0124】
図２１に示されている通り、Ｂ８アッセイでは、凝固は約１５秒で始まる１３２ことが見られ得、０．６３３のＯＤ値を有し、凝固は約６５秒で完了する１３４ことが見られ得、１．０８１のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．４４８というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0125】
次に、図２２は、マイクロ粒子希釈１１を使用した第５のバイオアッセイ実施形態Ｂ９の結果の図解を提供する。この希釈１１は、硫酸表面基２４と１１０ｎｍの直径２６とを有するマイクロ粒子を有する。希釈１１の中のマイクロ粒子２４は、希釈の０．０４４重量対体積％で存在した。具体的には、この希釈１１は１対１８０の粒子対水比で水によって希釈された。希釈された溶液の光学密度は希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．２１の光学密度値を有した。この実施形態Ｂ５は、さらに、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、１．２９ＭのＮａＣｌ、および１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋを有するマトリックス４０を使用した。
【0126】
図２２に示されている通り、Ｂ９アッセイでは、示されている通り、データが分析およびエンハンスメントされる場合にのみ、凝固が検出され得る（全データは下の表７に提供されている）。しかしながら、エンハンスメントされたときには、凝固は約２５秒で始まる１３２ことが見られ得、０．３７８０のＯＤ値を有し、凝固は約８５秒で完了する１３４ことが見られ得、０．３８３０のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．００５というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0127】
それから、図２３は、第６のバイオアッセイ実施形態Ｂ１０の結果の図解を提供する。これは、０．０６７重量（weight）対体積％で９６ｎｍの直径を有する表面基フリー２０のマイクロ粒子を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。最終的な希釈は１対１５０というマイクロ粒子対水の希釈比を有した。
【0128】
希釈１１の光学密度３１は希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．２１の光学密度値３１を有した。この実施形態は、さらに、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、１．２９ＭのＮａＣｌ、および１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋを有するマトリックス４０を使用した。
【0129】
図２３に示されている通り、Ｂ１０アッセイでは、示されている通り、データが分析およびエンハンスメントされる場合にのみ、凝固が検出され得る（全データは下の表７に提供されている）。しかしながら、エンハンスメントされたときには、凝固は直ちに始まる１３２ことが見られ得、０．３７８０のＯＤ値を有し、凝固は約８５秒で完了する１３４ことが見られ得、０．３８６０のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．００８というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0130】
上で挙げられている全ての６つの実施形態Ｂ５～Ｂ１０のプロトコールが下の表４に示されている：
【0131】
これらのバイオアッセイＢ１～Ｂ６のそれぞれの全般的な方法は同一であり、全般的に、図１０を参照して上で論じられている通り調製された。
【0132】
表５は、本発明に従う上の６つの記載されているバイオアッセイ実施形態のそれぞれについて、１分半に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる補正後の光学密度結果のデータを示す：
【0133】
シメチコンマトリックスによるＢ１１～Ｂ１２バイオアッセイ
この時点で、図２４に目を向ける。これは、１００ｎｍの直径を有する硫酸表面基を有するマイクロ粒子２４を有するマイクロ粒子希釈１１を使用する本発明に従う第１のバイオアッセイＢ１１の結果を図解する。マイクロ粒子は、水中の０．０２％アジ化ナトリウムによって１対５００の比で０．０１６％のトータルのマイクロ粒子濃度に希釈されている。
この時点で、図２４に目を向ける。これは、１００ｎｍの直径を有する硫酸表面基を有するマイクロ粒子２４を有するマイクロ粒子希釈１１を使用する本発明に従う第１のバイオアッセイＢ１１の結果を図解する。マイクロ粒子は、水中の０．０２％アジ化ナトリウムによって１対５００の比で０．０１６％のトータルのマイクロ粒子濃度に希釈されている。
【0134】
希釈１１の光学密度は希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．０８の光学密度値を有した。このバイオアッセイＢ１１は、さらに、ｐＨ１０．０の０．１７Ｍグリシン、１．２９ＭのＮａＣｌ、およびＦｏａｍＡＷＡＹ（登録商標）の商業的アイデンティティによってＵＳＰアッセイにおいて１５秒未満の消泡性能を支持する濃度の注射グレードの精製水の水によって希釈された１％シメチコンを有するマトリックス４０を使用した。このバイオアッセイＢ１１は標準的なサンプル６０によって行われた。
【0135】
図２４に示されている通り、Ｂ１１アッセイでは、凝固は約３秒で始まる１３２ことが見られ得、０．１５１６のＯＤ値を有し、凝固は約６５秒で完了する１３４ことが見られ得、０．２３５６のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．０８４というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0136】
比較して、図２５は、上のバイオアッセイＢ１１と同一のプロトコールを有するが、この時点では異常なサンプルのみによって行われたバイオアッセイＢ１２の結果を図解する。図２５に示されている通り、Ｂ１２アッセイでは、凝固はこの時点では約３０秒で始まる１３２ことが見られ得、０．１５２８のＯＤ値を有し、凝固は約６５秒で完了する１３４ことが見られ得、０．３２１５のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．１６８７というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0137】
バイオアッセイＢ１１、Ｂ１２のプロトコールが下の表１６で提供されている：
【0138】
下の表９は、本発明に従う上に記載されているバイオアッセイＢ１１～Ｂ１２について、バイオアッセイＢ１２では１分に渡って、Ｂ１１では２０秒に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる光学密度結果のデータを示す：
【0139】
これらの光学密度値はここでは示されているが、これらの値は標準ではユーザーに提示されないということは理解されるべきである。代わりに、上で論じられている方法に従うと、サンプルの調整後の真の血漿値について、凝固時間はヘモグロビン測定を用いて補正される。それから、上で論じられている通り、この補正後の凝固時間は標準化されたＩＮＲを報告するために用いられる。
【0140】
例えば、上の異常な血液のバイオアッセイＢ１２では、ヘモグロビン量を決定するために、第１の光学密度測定１１６’が取られた。５３０ｎｍにおいて検出された光学密度は１．５１３５であり、この光学密度値１４０は、分析されているサンプル中に存在する特定のヘモグロビンレベル１４２を決定するために、既知のヘモグロビン値に対するＯＤ値の所定の関係性１４１と比較された。再び、このレベルは標準ではクライアントまたはユーザーに報告されないが、この分析は図２６に図解されている。それから、光学密度測定１１６の第２のセットが完了した後まで、バイオアッセイＢ１１のこの特定のＨＧＢレベル１４２はシステムメモリに保存された。
【0141】
図２５の参照によって上で論じられている通り、Ｂ１２アッセイでは、このヘモグロビンレベルにおいて、凝固は第１の時間（３０秒）で開始し１３２、０．１５２８のＯＤ値を有し、凝固は第２の時間（６５秒）で終了し１３４、０．３２１５のＯＤ値を有した。デルタ時間（３５秒）による吸収１３５の変化は、０．１６８７という第１のＯＤ値の違いであった。本発明の方法の種々のバイオアッセイについて、ＯＤ値の違いをもたらす時間のある変化による吸収１３５の変化は、０．００５～１．０の間の範囲である。より好ましくは、ＯＤ値の違いは少なくとも０．２であり、必要なときには、ＯＤ値の違いは少なくとも０．０８である。吸収１３５のこの変化はＰＴ値１３６を計算するために用いられ得る（４７秒。これには０．２３７１５という吸収ＯＤ値が付随した）。
【0142】
それから、図２４の参照によって決定される通り、システムはこの当初のＰＴ値１３６を用い、特定のＨＧＢレベル１４２を取り出す。それから、所定の関係性１３７が、調整後のまたは補正後のＰＴ値１３８を決定するために用いられる。具体的には、図２７は、サンプル６０のヘモグロビンレベル１４２（１２．３）と対応する所定の関係性１３７による未補正のＰＴ値１３６の補正を例解する。それから、この関係性１３７は補正後のＰＴ値１３８を提供するために用いられる。ここで、ヘモグロビンレベル１４２について、関係性１３７は、数学的には：
ＣＰＴ＝ＰＴ＊ＳＱＲＴ（Ｃ／ＨＧＢ）
として表現され、式中、ＣＰＴは補正後のプロトロンビン時間１３８であり；ＰＴは未補正のプロトロンビン時間１３６であり；Ｃはヘモグロビン定数であり；ＨＧＢは特定のサンプル６０に付随する特定のヘモグロビンレベル１４２である。
ＣＰＴ＝ＰＴ＊ＳＱＲＴ（Ｃ／ＨＧＢ）
として表現され、式中、ＣＰＴは補正後のプロトロンビン時間１３８であり；ＰＴは未補正のプロトロンビン時間１３６であり；Ｃはヘモグロビン定数であり；ＨＧＢは特定のサンプル６０に付随する特定のヘモグロビンレベル１４２である。
【0143】
それから、図２８は補正後のＰＴ１３８からのＩＮＲの計算を例解する。具体的には、この計算は：
ＩＮＲ＝（ＰＴ／ＭＴ）ＩＳＩ
であり、式中、Ｂ１２で得られたデータに適用される上の式では、ＰＴはプロトロンビン補正後検査時間１３８（５０．１秒）を意味し；ＩＳＩは、用いられるトロンボプラスチンの感度指数（０．９８。付随する単位なし）を意味し；ＭＴは、２０個の標準的なサンプルに由来する平均プロトロンビン時間（１０．２秒）を意味し；ＩＮＲは標準化値１４４（４．８。付随する単位なし）を意味する。一般慣行では、補正後のＰＴ値（５０．１秒）およびＩＮＲ値（４．８。付随する単位なし）のみがユーザーに報告されるであろう。
ＩＮＲ＝（ＰＴ／ＭＴ）ＩＳＩ
であり、式中、Ｂ１２で得られたデータに適用される上の式では、ＰＴはプロトロンビン補正後検査時間１３８（５０．１秒）を意味し；ＩＳＩは、用いられるトロンボプラスチンの感度指数（０．９８。付随する単位なし）を意味し；ＭＴは、２０個の標準的なサンプルに由来する平均プロトロンビン時間（１０．２秒）を意味し；ＩＮＲは標準化値１４４（４．８。付随する単位なし）を意味する。一般慣行では、補正後のＰＴ値（５０．１秒）およびＩＮＲ値（４．８。付随する単位なし）のみがユーザーに報告されるであろう。
【0144】
カルボキシルマイクロ粒子によるＢ１３～Ｂ１４バイオアッセイ
この時点で、図２９に目を向ける。これは本発明に従うバイオアッセイＢ１３の結果を図解する。これは、１０３ｎｍの直径を有するカルボキシル表面基を有するマイクロ粒子２５を０．０１６重量対体積％希釈で有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。カルボキシルマイクロ粒子２５を用いる本バイオアッセイ方法は、１：５０から１：２０００の範囲の；より好ましくは１：１００から１：１０００の範囲のマイクロ粒子２５対一酸化二水素３３の希釈比３０を有する希釈１１を要する。
この時点で、図２９に目を向ける。これは本発明に従うバイオアッセイＢ１３の結果を図解する。これは、１０３ｎｍの直径を有するカルボキシル表面基を有するマイクロ粒子２５を０．０１６重量対体積％希釈で有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。カルボキシルマイクロ粒子２５を用いる本バイオアッセイ方法は、１：５０から１：２０００の範囲の；より好ましくは１：１００から１：１０００の範囲のマイクロ粒子２５対一酸化二水素３３の希釈比３０を有する希釈１１を要する。
【0145】
希釈された溶液の光学密度は希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．０８の光学密度値を有した。このバイオアッセイＢ１３は、さらに、ｐＨ１０．０の０．１７Ｍグリシン、１ＭのＮａＣｌ、およびＦｏａｍＡＷＡＹ（登録商標）の商業的アイデンティティによってＵＳＰアッセイにおいて１５秒未満の消泡性能を支持する濃度の注射グレードの精製水の水によって希釈された１％シメチコンを有するマトリックスを使用した。このバイオアッセイＢ１３は標準的なサンプル６０によって行われた。
【0146】
図２９に示されている通り、Ｂ１３アッセイでは、凝固は約５秒で始まる１３２ことが見られ得、０．１３０４というＯＤ値を有し、凝固は約２０秒で完了する１３４ことが見られ得、０．１８２６というＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．０５２２というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0147】
比較して、図３０は、上のバイオアッセイＢ１３と同一のプロトコールを有し、この時点では異常なサンプルのみによって行われたバイオアッセイＢ１４の結果を図解する。図３０に示されている通り、Ｂ１４アッセイでは、凝固は約４０秒で始まる１３２ことが見られ得、０．１２１８というＯＤ値を有し、凝固は約６８秒で完了する１３４ことが見られ得、０．２０２７というＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．０８１１というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0148】
バイオアッセイＢ１３、Ｂ１４のプロトコールが下の表１０で提供されている。
【0149】
下の表１１は、本発明に従う上に記載されているバイオアッセイＢ１３～Ｂ１４について、バイオアッセイＢ１３では１分に渡って、Ｂ１４では２０秒に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる光学密度結果のデータを示す：
【0150】
異なる操作温度によるＢ１５～Ｂ１８バイオアッセイ
典型的には、本発明に従う多くのバイオアッセイは生理的温度において行われるが、これはいつも当てはまるわけではない。全般的には、ほとんどの温度は本発明の方法に適用され得るということは理解されるべきである。しかしながら、上で論じられているバイオアッセイでこの変数を調整することは潜在的なばらつきを導入し、その結果、バイオアッセイ結果は全般的に変えられるであろう。それゆえに、これらのばらつきを解決することなしには、特に、正確なタイミングが臨床的なアウトカムにインパクトを及ぼし得る凝固アッセイにおいては、温度のばらつきは導入されるべきではない。
典型的には、本発明に従う多くのバイオアッセイは生理的温度において行われるが、これはいつも当てはまるわけではない。全般的には、ほとんどの温度は本発明の方法に適用され得るということは理解されるべきである。しかしながら、上で論じられているバイオアッセイでこの変数を調整することは潜在的なばらつきを導入し、その結果、バイオアッセイ結果は全般的に変えられるであろう。それゆえに、これらのばらつきを解決することなしには、特に、正確なタイミングが臨床的なアウトカムにインパクトを及ぼし得る凝固アッセイにおいては、温度のばらつきは導入されるべきではない。
【0151】
図３１および３２は、２つの異なる温度において２つの異なるマイクロ粒子マトリックスを使用する本発明の４つのバイオアッセイ実施形態Ｂ１５～Ｂ１８の結果を図解する。全ての４つのバイオアッセイ実施形態のプロトコールが下の表１２に提供されている：
【0152】
具体的には、バイオアッセイＢ１５は、９５ｎｍの直径を有するアミジン表面基２２を有するマイクロ粒子を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。０．０８０重量対体積％では、この希釈１１は、水によって希釈されたマイクロ粒子２２を１対５０の比で有した。希釈された溶液の光学密度は希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．１９の光学密度値を有した。このバイオアッセイＢ１５は、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、０．２９ＭのＮａＣｌ、および１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋを有するマトリックス４０を使用した。このバイオアッセイＢ１５は２２Ｃの温度で行われた。
【0153】
図３１に示されている通り、Ｂ１５アッセイでは、凝固はほとんど直ちに約４秒で始まる１３２ことが見られ得、１．０７９のＯＤ値を有し、凝固は約１００秒で完了する１３４ことが見られ得、１．７４８のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．６６９というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0154】
また、図３１には、類似のバイオアッセイＢ１６の結果の図式が見られる。また、このバイオアッセイＢ１６は、９５ｎｍの直径を有するアミジン表面基を有するマイクロ粒子２２を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。０．０８０重量対体積％で存在するマイクロ粒子２２は１対５０の希釈比３０で水によって希釈された。希釈の光学密度３１は希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．１９の光学密度値３１を有した。また、このバイオアッセイＢ１６は、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、０．２９ＭのＮａＣｌ、および１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋを有するマトリックス４０を使用した。しかしながら、バイオアッセイＢ１５とは違って、このバイオアッセイＢ１６は３７Ｃの操作温度で行われた。
【0155】
また、図３１に示されている通り、Ｂ１６アッセイでは、凝固値は見分けることがより難しいが、凝固は再びほとんど直ちに約４秒で始まる１３２’ことが見られ得、１．０２３というＯＤ値を有する。Ｂ１５アッセイとは違って、Ｂ１６アッセイは凝固を速やかに完了するように見える。なぜなら、凝固は約４０秒で完了１３４’されるように見え、１．１１０というＯＤ値を有するからである。経時的な吸収１３５’の変化は、０．０８７というＯＤ値の違いのみを有する光学密度値の変化である。
【0156】
次に、図３２に目を向けると、本発明に従うバイオアッセイＢ１７およびＢ１８の別のペアの結果の図式がある。第１のバイオアッセイＢ１７では、マイクロ粒子希釈１１は、０．９５ｎｍの直径２６を有するアミジン表面基を有するマイクロ粒子２２を使用した。水によって１対５０の比で希釈されたマイクロ粒子２２は、このバイオアッセイＢ１７では、０．０８０重量対体積％で希釈１１中に存在した。
【0157】
希釈１１の光学密度３１は６６０ｎｍにおいて測定されて０．１９という光学密度値を有した。このバイオアッセイＢ１７は、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、０．２９ＭのＮａＣｌ、１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋ、および１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を有するマトリックス４０を使用した。バイオアッセイＢ１７は２２Ｃの操作温度で行われた。
【0158】
図３２に示されている通り、Ｂ１７アッセイでは、凝固は約１２秒で始まる１３２ことが見られ得、０．９９７というＯＤ値を有し、凝固は約５８秒で完了する１３４ことが見られ得、１．７７２というＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．７７５というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0159】
本発明に従う第２のバイオアッセイＢ１８は、０．０８０重量対体積％で０．９５ｎｍの直径を有するアミジン表面基を有するマイクロ粒子２２を使用するマイクロ粒子希釈を用いた。希釈１１は１対５０の希釈比を有した。希釈された溶液の光学密度は希釈後に６６０ｎｍで測定されて０．１９という光学密度値を有した。また、このバイオアッセイＢ１８は、ｐＨ７．０の０．１７Ｍグリシン、０．２９ＭのＮａＣｌ、１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０Ｋ、および１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を有するマトリックスを使用した。しかしながら、バイオアッセイＢ１７とは違って、バイオアッセイＢ１８は３７Ｃの操作温度で行われた。
【0160】
また、図３２に示されている通り、Ｂ１８アッセイでは、凝固値は見分けることがより難しいが、凝固は再び約２０秒で始まる１３２’ことが見られ得、０．６５３のＯＤ値を有する。Ｂ１８アッセイは凝固１３４’を約６０秒で完了するように見え、１．０５４のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５’の変化は、０．４０１というＯＤ値の違いのみを有する光学密度値の変化である。
【0161】
これらのバイオアッセイＢ１５～Ｂ１８のそれぞれの全般的な方法は同一であり、全般的には、図１０を参照して上で論じられている通り調製された。
【0162】
下の表１３は、本発明に従う上に記載されているバイオアッセイＢ１５～Ｂ１８のそれぞれについて、数分に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる補正後の光学密度結果のデータを示す：
【0163】
抗凝固薬の使用をモニタリングするためのＢ１９～Ｂ２０バイオアッセイ
この時点で、図３３に目を向ける。これはプロトロンビン時間バイオアッセイＢ１９、Ｂ２０の結果を図解する。これらは凝血の外因系経路を測定し、経口抗凝固薬の使用をマルチステップでモニタリングする。これらのバイオアッセイＢ１１、Ｂ１２は、標準的な全血サンプルの本発明の方法の第１のアッセイＢ１９対経口抗凝固薬クマディン（登録商標）を取っている患者からのサンプルの本発明の方法の第２のアッセイＢ２０について、秒による時間に対する光学密度の測定の結果を例解するプロトロンビン時間アッセイである。
この時点で、図３３に目を向ける。これはプロトロンビン時間バイオアッセイＢ１９、Ｂ２０の結果を図解する。これらは凝血の外因系経路を測定し、経口抗凝固薬の使用をマルチステップでモニタリングする。これらのバイオアッセイＢ１１、Ｂ１２は、標準的な全血サンプルの本発明の方法の第１のアッセイＢ１９対経口抗凝固薬クマディン（登録商標）を取っている患者からのサンプルの本発明の方法の第２のアッセイＢ２０について、秒による時間に対する光学密度の測定の結果を例解するプロトロンビン時間アッセイである。
【0164】
クマディン（登録商標）（ワルファリンとしてもまた公知）はビタミンＫ合成を阻害し、よって、第ＶＩＩ因子の半減期を阻害する。第ＶＩＩ因子レベルは、このグラフでは、本明細書に記載される通りプロトロンビン時間検査および二重波長補正を用いてアッセイおよび補正されている。
【0165】
図３３に例解されている通り、標準的な凝固時間１３２は典型的には約１５から２０秒後に始まるのが見られる。ここでは、凝固形成が、上で論じられている通り第ＶＩＩ因子活性化による外因系凝血経路によって開始される。具体的には、図３３において例解されている通り、標準的な血液サンプルのアッセイＢ１９は凝固１３２をおよそ１５秒で始め、クマディンサンプルのアッセイＢ２０は凝固１３２’をおよそ１００秒で始める。
【0166】
これらのアッセイＢ１９およびＢ２０の両方では、マイクロ粒子希釈１１は、０．０８０重量対体積％で９５ｎｍの直径２６を有するアミジン表面基を有するマイクロ粒子２２を使用した。これらのマイクロ粒子希釈１１は１対５０の比で水によって希釈された。希釈の光学密度は希釈後に６６０ｎｍで測定されて、０．１９の光学密度値を有した。
【0167】
図３３に示されている通り、Ｂ１９アッセイでは、凝固は約１５秒で始まる１３２ことが見られ得、０．９８９のＯＤ値を有し、凝固は約９０秒で完了する１３４ことが見られ得、１．７００のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．７１１というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0168】
また、図３３に示されているＢ２０アッセイでは、凝固は約５０秒で始まる１３２’ことが見られ得、０．９１９のＯＤ値を有し、凝固は約１８０秒で完了する１３４’ことが見られ得、１．６２９０のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５’の変化は、０．７１００というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0169】
バイオアッセイＢ１９、Ｂ２０のプロトコールが下の表１４で提供されている：
【0170】
これらのバイオアッセイＢ１９～Ｂ２０のそれぞれの全般的な方法は同一であり、全般的には、図１０の参照によって上で論じられている通り調製された。表１５は、標準的なクエン酸加血液による第１のバイオアッセイＢ１９およびクマディンクエン酸加血液による第２のバイオアッセイＢ２０について、２分に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる光学密度のデータを示す：
【0171】
トロンビンを使用するバイオアッセイ
種々のマイクロ粒子希釈のための様々なマトリックスを使用する本発明の方法に従う異なるバイオアッセイＢ２１～Ｂ２２の結果が図３４に図解され、それぞれの議論は下で提供される。これらのバイオアッセイＢ２１～Ｂ２２のそれぞれはトロンビン試薬を使用した。具体的には、これらのバイオアッセイのための選択された試薬８０は、下のプロトコールのそれぞれに挙げられている量の組織トロンボプラスチンおよびＣａＣｌ２であった。
種々のマイクロ粒子希釈のための様々なマトリックスを使用する本発明の方法に従う異なるバイオアッセイＢ２１～Ｂ２２の結果が図３４に図解され、それぞれの議論は下で提供される。これらのバイオアッセイＢ２１～Ｂ２２のそれぞれはトロンビン試薬を使用した。具体的には、これらのバイオアッセイのための選択された試薬８０は、下のプロトコールのそれぞれに挙げられている量の組織トロンボプラスチンおよびＣａＣｌ２であった。
【0172】
フィブリノゲンレベルを測定するためのＢ２１～Ｂ２２バイオアッセイ
この時点で、図３４に目を向ける。これは、トロンビン時間（ＴＴ）アッセイＢ２１、Ｂ２２の結果を図解する。これはフィブリノゲンレベルおよび機能を直接測定し、トロンビン阻害剤がサンプル中に存在するかどうかをもまた決定するであろう。図３４は、クエン酸加血漿の３０ｕＬトロンビン試薬による本発明の方法の第１のＴＴアッセイＢ２１対本発明の方法に従う２０ｕＬトロンビン試薬およびクエン酸加血液による第２のＴＴアッセイＢ２２について、秒による時間に対する光学密度の測定の結果を例解する。
この時点で、図３４に目を向ける。これは、トロンビン時間（ＴＴ）アッセイＢ２１、Ｂ２２の結果を図解する。これはフィブリノゲンレベルおよび機能を直接測定し、トロンビン阻害剤がサンプル中に存在するかどうかをもまた決定するであろう。図３４は、クエン酸加血漿の３０ｕＬトロンビン試薬による本発明の方法の第１のＴＴアッセイＢ２１対本発明の方法に従う２０ｕＬトロンビン試薬およびクエン酸加血液による第２のＴＴアッセイＢ２２について、秒による時間に対する光学密度の測定の結果を例解する。
【0173】
バイオアッセイＢ１５、Ｂ１６のプロトコールが下の表１６で提供される：
【0174】
具体的には、これらのバイオアッセイＢ２１、Ｂ２２は、０．２重量対体積％で１１０ｎｍの直径２６を有する硫酸表面基を有するマイクロ粒子２４を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。バイオアッセイＢ２１、Ｂ２２は両方とも、ｐＨ１０．０の０．１７Ｍグリシン、１．０ＭのＮａＣｌを有するマトリックス４０を使用した。第１のバイオアッセイＢ２１は３０ｕＬのシーメンス（登録商標）トロンビン時間（ＴＴ）試薬を使用し、第２のバイオアッセイＢ２２は２０ｕＬのシーメンス（登録商標）トロンビン時間（ＴＴ）試薬を使用した。
【0175】
本発明の方法に用いられ得るいくつかのトロンビン阻害剤は、未分画へパリン、低分子量ヘパリン、および直接アンチトロンビン経口抗凝固薬であり、ヒルジン、リバーロキサバン、アピキサバン、ダビガトラン、およびアルガトロバンを包含するが、これらに限定されない。これらのバイオアッセイＢ２１～Ｂ２２のそれぞれの全般的な方法は同一であり、全般的には、図１０を参照して上で論じられている通り調製された。
【0176】
図３４に示されている通り、Ｂ２１アッセイでは、凝固は約５秒で始まる１３２ことが見られ得、０．１８２９のＯＤ値を有し、凝固は約１００秒で完了する１３４ことが見られ得、０．３４８１のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．１６５２というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0177】
また、図３４に示されているＢ２２アッセイでは、凝固は約５秒で始まる１３２’ことが見られ得、０．１３５７のＯＤ値を有し、凝固は約８０秒で完了する１３４’ことが見られ得、０．２４９１のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５’の変化は、０．１１３４というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0178】
表１７は、３０ｕＬトロンビン試薬による第１のバイオアッセイＢ２１および２０ｕＬトロンビン試薬による第２のバイオアッセイＢ２２について、３分に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる光学密度のデータを示す。
【0179】
活性化部分トロンボプラスチンを使用するバイオアッセイ
種々のマイクロ粒子希釈のための様々なマトリックスを使用する本発明の方法に従う異なるバイオアッセイＢ２３～Ｂ２７の結果が図３５～３８に図解され、それぞれの議論は下で提供される。これらのバイオアッセイＢ２３～Ｂ２７のそれぞれは活性化部分トロンボプラスチン試薬を使用した。具体的には、これらのバイオアッセイのための選択された試薬８０は、下のプロトコールのそれぞれに挙げられている量の活性化部分トロンボプラスチンおよびＣａＣｌ２であった。
種々のマイクロ粒子希釈のための様々なマトリックスを使用する本発明の方法に従う異なるバイオアッセイＢ２３～Ｂ２７の結果が図３５～３８に図解され、それぞれの議論は下で提供される。これらのバイオアッセイＢ２３～Ｂ２７のそれぞれは活性化部分トロンボプラスチン試薬を使用した。具体的には、これらのバイオアッセイのための選択された試薬８０は、下のプロトコールのそれぞれに挙げられている量の活性化部分トロンボプラスチンおよびＣａＣｌ２であった。
【0180】
内因系経路のためのＢ２３～Ｂ２４バイオアッセイ
この時点で、図３５および３６に目を向ける。これらは、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＰＴ）バイオアッセイＢ２３、Ｂ２４の結果を図解する。これらは凝血の内因系経路をシングルステップで測定する。具体的には、図３５は、標準的なコントロールの本発明の方法の第１のＡＰＴＴバイオアッセイＢ２３について、秒による時間に対する光学密度の測定の結果を例解する。それから、図３６は、本発明の方法に従う異常なコントロールの第２のＡＰＴＴバイオアッセイＢ２４について、秒による時間に対する光学密度の測定の結果を例解する。
この時点で、図３５および３６に目を向ける。これらは、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＰＴ）バイオアッセイＢ２３、Ｂ２４の結果を図解する。これらは凝血の内因系経路をシングルステップで測定する。具体的には、図３５は、標準的なコントロールの本発明の方法の第１のＡＰＴＴバイオアッセイＢ２３について、秒による時間に対する光学密度の測定の結果を例解する。それから、図３６は、本発明の方法に従う異常なコントロールの第２のＡＰＴＴバイオアッセイＢ２４について、秒による時間に対する光学密度の測定の結果を例解する。
【0181】
バイオアッセイＢ２３、Ｂ２４は両方とも、１１０ｎｍの直径を有する硫酸表面基を有する０．３９２重量対体積％マイクロ粒子２４を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。２０ｕＬの０．００５ＭのＣａＣｌ２を有する上で論じられている乾燥マトリックスが使用された。別のウェルに、１００ｕＬのＡＰＴＴ－ＸＬ試薬が１５０ｕＬの蒸留水によって希釈された。これらのバイオアッセイＢ２３～Ｂ２４のそれぞれの全般的な方法は同一であり、全般的には、図１０を参照して上で論じられている通り調製された。
【0182】
図３５に示されている通り、Ｂ２３アッセイでは、凝固は約１３秒で始まる１３２ことが見られ得、０．５５２４のＯＤ値を有し、凝固は約１５０秒で完了する１３４ことが見られ得、０．９３１５のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．３７９１というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0183】
図３６に示されている通り、Ｂ２４アッセイでは、凝固は約６５秒で始まる１３２ことが見られ得、０．５１１１のＯＤ値を有し、凝固は約２４０秒で完了する１３４ことが見られ得、０．９０９７のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．３９８６というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0184】
バイオアッセイＢ２３、Ｂ２４のプロトコールが下の表１９で提供されている：
【0185】
表１９は、標準的なコントロールによる第１のバイオアッセイＢ２３および異常なコントロールによる第２のバイオアッセイＢ２４について、３分に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる光学密度のデータを示す：
【0186】
一段ＡＰＴＴに基づく因子のＢ２５～Ｂ２７バイオアッセイ
具体的には、図３７および３８は、凝血の内因系経路の活性および活性レベルを測定するための一段ＡＰＴＴに基づく因子について、３つのバイオアッセイＢ２５、Ｂ２６、およびＢ２７の結果を図解する。第１のバイオアッセイＢ２５は標準的な血漿にＡＰＴＴを用い、第２のバイオアッセイＢ２６は異常な９９．９％第ＶＩＩＩ因子を欠乏した血漿にＡＰＴＴを用い、第３のバイオアッセイＢ２７は、血漿の標準的な／異常な混合によるＡＰＴＴ一段因子アッセイである。
具体的には、図３７および３８は、凝血の内因系経路の活性および活性レベルを測定するための一段ＡＰＴＴに基づく因子について、３つのバイオアッセイＢ２５、Ｂ２６、およびＢ２７の結果を図解する。第１のバイオアッセイＢ２５は標準的な血漿にＡＰＴＴを用い、第２のバイオアッセイＢ２６は異常な９９．９％第ＶＩＩＩ因子を欠乏した血漿にＡＰＴＴを用い、第３のバイオアッセイＢ２７は、血漿の標準的な／異常な混合によるＡＰＴＴ一段因子アッセイである。
【0187】
具体的には、図３７および３８は、バイオアッセイＢ２５、Ｂ２６、Ｂ２７の結果を図解する。これらは、１１０ｎｍの直径を有する硫酸表面基を有する０．０４４％粒子濃度のマイクロ粒子２４を有するマイクロ粒子希釈１１を使用した。この希釈１１は、水によって１から１８０の比で希釈されたマイクロ粒子を有した。希釈１１の光学密度が６６０ｎｍで測定されて０．２１の光学密度値を有した。これらのバイオアッセイはそれぞれがさらに、ｐＨ１０．０の０．１７Ｍグリシンおよび１．０ＭのＮａＣｌを有するマトリックス４０を使用した。
【0188】
第ＸＩＩ、ＸＩ、ＩＸ、ＶＩＩＩ因子はこれらのアッセイによって直接測定される。加えて、第Ｘ、Ｖ、ＩＩ因子が測定される。なぜなら、それらは最終的な凝固に至る共通の経路カスケードに関わるからである。カルシウムおよびリン脂質の追加と共に、第ＸＩＩ因子の共通の表面活性化因子の追加によって、部分トロンボプラスチンがサンプルから形成される。活性化因子はカオリン（登録商標）、セライト、エラグ酸であるが、これらに限定されない。本発明の方法に従う一段因子アッセイは、サンプルの個々の因子レベルを、既知因子を欠乏したサンプルおよび標準的なサンプルの希釈に由来する標準曲線とこのレベルを比較することによってタイトレーションする。
【0189】
バイオアッセイＢ２５、Ｂ２６の全般的な方法は、全般的に、図１０の参照によって上で論じられている通り調製された。一段因子バイオアッセイＢ２７は図１０で論じられている同じ全般的な方法を用いるが、加えて、サンプル６０の応答をアテニュエーションするために、既知量の単一の既知因子を欠乏した乾燥した血漿を追加のウェル６’’’に有する。本明細書において開示される方法に従って、ソフトウェアから提供される標準曲線を用いて、サンプル６０の実際の応答のレベルが測定１１６、補正１１８、および報告１１９される。
【0190】
図３７に示されている通り、Ｂ２５アッセイでは、凝固は約３０秒で始まる１３２ことが見られ得、０．０３４０のＯＤ値を有し、凝固は約１００秒で完了する１３４ことが見られ得、０．３５３０のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．３１９０というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0191】
図３８に示されている通り、Ｂ２６アッセイでは、凝固は約１００秒で始まる１３２ことが見られ得、０．３１４０のＯＤ値を有し、凝固は約２００秒で完了する１３４ことが見られ得、０．８４４０のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５の変化は、０．３９８６というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0192】
また、図３８に示されているＢ２７アッセイでは、凝固は約５０秒で始まる１３２’ことが見られ得、０．１８２０のＯＤ値を有し、凝固は約１１０秒で完了する１３４’ことが見られ得、０．５４８０のＯＤ値を有する。経時的な吸収１３５’の変化は、０．３６６０というＯＤ値の違いを有する光学密度値の変化である。
【0193】
全ての３つのバイオアッセイＢ２５～Ｂ２７のプロトコールが下の表２０で提供されている：
【0194】
下の表２１は、本発明に従う上に記載されているバイオアッセイＢ２５～Ｂ２７のそれぞれについて、５分に渡って６６０ｎｍでキネティクスモードを用いる補正後の光学密度結果のデータを示す：
【0195】
参照番号付きの要素のリスト
本願の図面中の参照番号付きの要素を参照するために、次の参照番号が本明細書において遵守される。
本願の図面中の参照番号付きの要素を参照するために、次の参照番号が本明細書において遵守される。
【符号の説明】
【0196】
１ 分析装置
２ カートリッジ
３ バーコード
４ フィンガースティック
５ 滅菌されたピペット
６ ウェル
７ キュベット
８ サンプラー
９ メインパッケージ
１０ マイクロ粒子マトリックス
１１ マイクロ粒子希釈
１８ 官能基のタイプ
２０ プレーン（生地）
２２ アミジン
２４ 硫酸基（サルフェート）
２６ サイズ
２８ 重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）
３０ 希釈比
３１ 光学密度値
３２ 量
３３ 希釈剤
４０ マトリックス
４２ 湿潤マトリックス
４４ 乾燥マトリックス
４６ 炭水化物
４７ グリシン
４８ 量
５０ 酸性度
５２ ＮａＣｌ
５４ ＰＥＧ
５６ ＴＷＥＥＮ（登録商標）
６０ 血液サンプル
６１ クエン酸加血液
６２ 全血
６３ 血漿
６４ 混合
６５ 量
６８ マイクロ粒子混合物
７０ 温度
８０ 試薬／活性化因子
８２ トロンボプラスチン
８４ ＡＰＴＴ
８６ トロンビン
８８ エラグ酸
９０ 希釈剤
９２ ＣａＣｌ２
１００ 方法
１０２ カートリッジ／バイオアッセイを選択
１０３ カートリッジを分析装置によってスキャン
１０４ 血液サンプルを得る
１０５ フィンガースティックを行う
１０６ カートリッジと提供されるキャピラリーサンプラーを取り外す
１０７ サンプラーを血液に触れさせ、サンプラーにサンプルを充填する
１０８ サンプラーをカートリッジに戻す
１０９ カートリッジを分析装置に挿入する
１１０ 自動バイオアッセイプロセスステップ
１１２ コンポーネントを追加
１１４ 混合／撹拌コンポーネント
１１５ インキュベーション
１１６ 測定
１１８ 補正
１１９ 結果を報告
１２０ 調整
１２１ 混合物
１２２ 溶液
１２３ 共混合物
１２４ 光学検出される凝固形成
１２５ 光学検出されるヘモグロビンレベル
１２６ 補正後の凝固時間
１３０ 光学密度
１３２ 凝固が始まる
１３４ 凝固が終了する
１３５ 吸収の変化＝経時的な光学密度の変化
１３６ 未補正のＰＴ
１３７ ＨＧＢ関係性
１３８ 補正後のＰＴ
１４０ ５３０ｎｍで検出されるＯＤ値
１４１ ＨＧＢに対するＯＤ値の所定の関係性
１４２ 特定のＨＧＢレベル
２ カートリッジ
３ バーコード
４ フィンガースティック
５ 滅菌されたピペット
６ ウェル
７ キュベット
８ サンプラー
９ メインパッケージ
１０ マイクロ粒子マトリックス
１１ マイクロ粒子希釈
１８ 官能基のタイプ
２０ プレーン（生地）
２２ アミジン
２４ 硫酸基（サルフェート）
２６ サイズ
２８ 重量対体積％（％Ｗ／Ｖ）
３０ 希釈比
３１ 光学密度値
３２ 量
３３ 希釈剤
４０ マトリックス
４２ 湿潤マトリックス
４４ 乾燥マトリックス
４６ 炭水化物
４７ グリシン
４８ 量
５０ 酸性度
５２ ＮａＣｌ
５４ ＰＥＧ
５６ ＴＷＥＥＮ（登録商標）
６０ 血液サンプル
６１ クエン酸加血液
６２ 全血
６３ 血漿
６４ 混合
６５ 量
６８ マイクロ粒子混合物
７０ 温度
８０ 試薬／活性化因子
８２ トロンボプラスチン
８４ ＡＰＴＴ
８６ トロンビン
８８ エラグ酸
９０ 希釈剤
９２ ＣａＣｌ２
１００ 方法
１０２ カートリッジ／バイオアッセイを選択
１０３ カートリッジを分析装置によってスキャン
１０４ 血液サンプルを得る
１０５ フィンガースティックを行う
１０６ カートリッジと提供されるキャピラリーサンプラーを取り外す
１０７ サンプラーを血液に触れさせ、サンプラーにサンプルを充填する
１０８ サンプラーをカートリッジに戻す
１０９ カートリッジを分析装置に挿入する
１１０ 自動バイオアッセイプロセスステップ
１１２ コンポーネントを追加
１１４ 混合／撹拌コンポーネント
１１５ インキュベーション
１１６ 測定
１１８ 補正
１１９ 結果を報告
１２０ 調整
１２１ 混合物
１２２ 溶液
１２３ 共混合物
１２４ 光学検出される凝固形成
１２５ 光学検出されるヘモグロビンレベル
１２６ 補正後の凝固時間
１３０ 光学密度
１３２ 凝固が始まる
１３４ 凝固が終了する
１３５ 吸収の変化＝経時的な光学密度の変化
１３６ 未補正のＰＴ
１３７ ＨＧＢ関係性
１３８ 補正後のＰＴ
１４０ ５３０ｎｍで検出されるＯＤ値
１４１ ＨＧＢに対するＯＤ値の所定の関係性
１４２ 特定のＨＧＢレベル
【0197】
結論
本発明の好ましい実施形態が本明細書に記載されたが、上の記載は単に例解的である。本明細書において開示された本発明のさらなる改変がそれぞれの分野の業者によって想到されるであろう。全てのかかる改変は、添付の請求項によって定められる本発明の範囲内であると見なされる。
本発明の好ましい実施形態が本明細書に記載されたが、上の記載は単に例解的である。本明細書において開示された本発明のさらなる改変がそれぞれの分野の業者によって想到されるであろう。全てのかかる改変は、添付の請求項によって定められる本発明の範囲内であると見なされる。
【図1】
【図1a】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35】
【図36】
【図37】
【図38】
【手続補正書】
【提出日】2024-07-31
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
血液サンプル中の凝血活性をモニタリングする方法であって、当該方法は、
複数のマイクロ粒子、血液サンプル、およびマトリックスを含有している第１の混合物を形成し、
該第１の混合物及び試薬を含有している第２の混合物を形成し、
該第２の混合物について少なくとも二つの光学測定を行い、
ここで、
該少なくとも二つの光学測定のうちの第１の光学測定は、該第２の混合物を通して第１の光を透過せしめることを含んでおり、
該少なくとも二つの光学測定のうちの第２の光学測定は、該第２の混合物を通して第２の光を透過せしめることを含んでいる、
ということを含んでいることを特徴とする方法。
複数のマイクロ粒子、血液サンプル、およびマトリックスを含有している第１の混合物を形成し、
該第１の混合物及び試薬を含有している第２の混合物を形成し、
該第２の混合物について少なくとも二つの光学測定を行い、
ここで、
該少なくとも二つの光学測定のうちの第１の光学測定は、該第２の混合物を通して第１の光を透過せしめることを含んでおり、
該少なくとも二つの光学測定のうちの第２の光学測定は、該第２の混合物を通して第２の光を透過せしめることを含んでいる、
ということを含んでいることを特徴とする方法。
【請求項2】
該第１の混合物を形成することは、該複数のマイクロ粒子を該血液サンプルと混合し、第３の混合物を形成し、そして該第３の混合物を該マトリックスと混合することを含むものである、請求項１記載の方法。
【請求項3】
該複数のマイクロ粒子は、未反応の生地のもの、硫酸基、カルボン酸基、およびアミジン基からなる群から選ばれた表面タイプの少なくとも１つの表面タイプを有する未コーティングのラテックスを含むものである、請求項１記載の方法。
【請求項4】
該複数のマイクロ粒子は、ポリスチレンを包含している、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
該複数のマイクロ粒子のそれぞれは、１０ｎｍから１５０ｎｍの範囲の直径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
該複数のマイクロ粒子のそれぞれは、９０ｎｍから１１０ｎｍの範囲の直径を有する、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
該血液サンプルは、希釈された溶解全血、希釈キャピラリー全血、全血、血漿、クエン酸加血、クエン酸加全血、クエン酸加血漿、及び、混合された血液および血漿からなる群から選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
該マトリックスは、乾燥マトリックスである、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
該マトリックスは、液体マトリックスである、請求項１に記載の方法。
【請求項10】
該マトリックスは、バイオマーカー蛋白質の吸着を助ける炭水化物または炭水化物誘導体を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項11】
該炭水化物または炭水化物誘導体は、さらに、該複数のマイクロ粒子の溶解および均一な分散を許している、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
該マトリックスは、グリシン、塩化ナトリウム、および１％シメチコンの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項13】
該マトリックスが、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコール、ポリソルベートタイプ非イオン性界面活性剤、オクチルフェノールエトキシレート界面活性剤、炭水化物および塩化カルシウムの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項14】
該試薬は、トロンボプラスチン、トロンビン、エラグ酸、活性化部分トロンボプラスチン、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｉ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、活性化プロテインＣ、ヘビ毒、負荷電リン脂質、カルシウムイオン、組織因子、シリカ、カオリン（登録商標）、およびセライトからなる群から選ばれるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項15】
該第１の光及び該第２の光の少なくとも一つは、発光ダイオード（ＬＥＤ）光を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項16】
該第１の光は、５００ｎｍ～５５０ｎｍの間の範囲にある波長のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項17】
該第１の光は、５１０ｎｍ～５４５ｎｍの間の範囲にある波長のものである、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
該第１の光は、５２０ｎｍ～５４０ｎｍの間の範囲にある波長のものである、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
該第１の光は、５３０ｎｍの波長の光を含んでいる、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
該第２の光は、６２０ｎｍ～７００ｎｍの間の範囲にある波長のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項21】
該第２の光は、６５０ｎｍ～６８０ｎｍの間の範囲にある波長のものである、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
該第２の光は、６５８ｎｍ～６６８ｎｍの間の範囲にある波長のものである、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
該第２の光は、６６０ｎｍの波長の光を含んでいる、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
該第１の混合物を形成する場合に、該複数のマイクロ粒子は、該血液サンプルと混合される前に希釈剤と混合せしめられる、請求項１に記載の方法。
【請求項25】
該第１の混合物を形成することと該第２の混合物を形成することの少なくとも一方は、アッセイカートリッジ内で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項26】
該アッセイカートリッジは、該複数のマイクロ粒子、該マトリックス及び該試薬を有しており、且つ、該血液サンプルを受容するように構成されている、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
請求項１に記載の方法を行うように構成されているシステムであって、該システムは、
該複数のマイクロ粒子、該マトリックス及び該試薬を有しているアッセイカートリッジであって、且つ、該血液サンプルを受容するように構成されているアッセイカートリッジと、
該第２の混合物を通して該第１の光及び該第２の光を送るように構成されている分析装置と
を有していることを特徴とする該システム。
該複数のマイクロ粒子、該マトリックス及び該試薬を有しているアッセイカートリッジであって、且つ、該血液サンプルを受容するように構成されているアッセイカートリッジと、
該第２の混合物を通して該第１の光及び該第２の光を送るように構成されている分析装置と
を有していることを特徴とする該システム。