ホーム > 特許ランキング > 国立大学法人東北大学
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ 国立大学法人東北大学の特許一覧 ▶ ポッカサッポロフード＆ビバレッジ株式会社の特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024158950
(43)【公開日】2024-11-08
(54)【発明の名称】発酵飲食品
(51)【国際特許分類】
A23L 5/00 20160101AFI20241031BHJP
A23L 33/125 20160101ALI20241031BHJP
A23L 11/65 20210101ALI20241031BHJP
C12P 19/04 20060101ALI20241031BHJP
【ＦＩ】
A23L5/00 J
A23L33/125
A23L11/65
C12P19/04 C
【審査請求】未請求
【請求項の数】8
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023074607
(22)【出願日】2023-04-28
(71)【出願人】
【識別番号】504157024
【氏名又は名称】国立大学法人東北大学
(71)【出願人】
【識別番号】312017444
【氏名又は名称】ポッカサッポロフード＆ビバレッジ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100162396
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 泰之
(74)【代理人】
【識別番号】100194803
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 理弘
(72)【発明者】
【氏名】北澤 春樹
(72)【発明者】
【氏名】仲田 創
【テーマコード（参考）】
4B018
4B020
4B035
4B064
【Ｆターム（参考）】
4B018MD28
4B018MD29
4B018MD30
4B018MD31
4B018MD33
4B018MD58
4B018MD86
4B018ME14
4B018MF01
4B018MF13
4B020LB18
4B020LC05
4B020LK05
4B020LK18
4B020LP18
4B035LC06
4B035LG17
4B035LG19
4B035LG20
4B035LG33
4B035LG50
4B035LP42
4B064AF11
4B064CA02
4B064CE03
4B064CE06
4B064CE17
4B064DA10
(57)【要約】
【課題】菌体外多糖（ＥＰＳ）を産生させ、菌体外多糖を含有することで免疫賦活効果を有する発酵飲料品を提供する。
【解決手段】（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖と、（Ｂ）スクロースとを重量比（Ａ）：（Ｂ）＝１：５～１：１の割合で含む基材を乳酸菌ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を含有する、発酵飲食品。
【選択図】図１－１
【解決手段】（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖と、（Ｂ）スクロースとを重量比（Ａ）：（Ｂ）＝１：５～１：１の割合で含む基材を乳酸菌ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を含有する、発酵飲食品。
【選択図】図１－１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖と、（Ｂ）スクロースとを重量比（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１の割合で含む基材を、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を含有する、発酵飲食品。
【請求項2】
前記基材が豆乳であることを特徴とする、請求項１に記載の発酵飲食品。
【請求項3】
基材中の（Ａ)のいずれか１以上の糖含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が、（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１であることを特徴とする、請求項１または２に記載の発酵飲食品。
【請求項4】
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株用発酵基材であって、培地中の（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１となるよう調整されたものである、菌体外多糖（ＥＰＳ）産生乳酸菌用発酵基材。
【請求項5】
（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１である基材を、
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させることによる、免疫賦活に優れた菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生方法。
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させることによる、免疫賦活に優れた菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生方法。
【請求項6】
免疫賦活がＮＫ活性向上および／又はＩＬ－１２産生促進によるものである、請求項５に記載の菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生方法。
【請求項7】
（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロースの含量の重量比が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１である基材を
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を投与することによる、免疫賦活方法。
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を投与することによる、免疫賦活方法。
【請求項8】
免疫賦活がＮＫ活性向上活性および／又はＩＬ－１２産生促進によるものであることを特徴とする、請求項７に記載の免疫賦活方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、発酵飲食品に関する。
【背景技術】
【0002】
従来より、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ；ブルガリア菌とも呼ばれる）やストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）等の乳酸菌を用いて牛乳を発酵することで製造されるヨーグルトをはじめとする発酵乳中には、菌体外多糖（ＥＰＳ）が含まれていることが知られている。
そして近年の世界的な感染症の流行等を受けて、免疫力向上に対する消費者の関心が大きくなってきているが、これまでにこの乳酸菌が産生する菌体外多糖（ＥＰＳ）が免疫賦活活性を有することが報告されている（特許文献１）。
また、ブルガリア菌の一種であるＯＬＬ１０７３Ｒ－１株により産生される菌体外多糖（ＥＰＳ）には、自己免疫疾患を予防する効果があることが知られている。そしてＯＬＬ１０７３Ｒ－１株を用いて製造された発酵乳には、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞の活性化（以下、「ＮＫ活性」という）、感冒罹患の減少等の効果があることも知られている。
また特許文献２には、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス ＦＣ（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｂｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ ＦＣ）が生産する菌体外多糖（ＥＰＳ）が、免疫系の向上活性を保つのに重要な役割を果たすインターロイキン－１２（以下、「ＩＬ－１２」という）の産生を誘導することが記載されている。
なお、ヒトの免疫指標が様々ある中で、ＮＫ活性を評価するものが最もポピュラーである。そして、そのＮＫ活性のｉｎ ｖｉｔｒｏでの評価方法として、マクロファージ様細胞の産生するＩＬ－１２をマーカーとして評価するものがよく使われている。
そして近年の世界的な感染症の流行等を受けて、免疫力向上に対する消費者の関心が大きくなってきているが、これまでにこの乳酸菌が産生する菌体外多糖（ＥＰＳ）が免疫賦活活性を有することが報告されている（特許文献１）。
また、ブルガリア菌の一種であるＯＬＬ１０７３Ｒ－１株により産生される菌体外多糖（ＥＰＳ）には、自己免疫疾患を予防する効果があることが知られている。そしてＯＬＬ１０７３Ｒ－１株を用いて製造された発酵乳には、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞の活性化（以下、「ＮＫ活性」という）、感冒罹患の減少等の効果があることも知られている。
また特許文献２には、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス ＦＣ（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｂｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ ＦＣ）が生産する菌体外多糖（ＥＰＳ）が、免疫系の向上活性を保つのに重要な役割を果たすインターロイキン－１２（以下、「ＩＬ－１２」という）の産生を誘導することが記載されている。
なお、ヒトの免疫指標が様々ある中で、ＮＫ活性を評価するものが最もポピュラーである。そして、そのＮＫ活性のｉｎ ｖｉｔｒｏでの評価方法として、マクロファージ様細胞の産生するＩＬ－１２をマーカーとして評価するものがよく使われている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】特許第５１７７７２８号公報
【特許文献2】特開２００９－２５６３１２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
免疫賦活を目的として、菌体外多糖（ＥＰＳ）を含む牛乳ヨーグルトは既に商品として販売されている。近年需要が伸びている豆乳ヨーグルトにおいても同様に、免疫賦活効果を有する商品が求められているが、未だ実現していない。
豆乳を発酵させて得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）が、牛乳を発酵させて得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）よりも、ＮＫ細胞を活性化させる結果を得て、この成果を効率良く応用することを検討した。
そして、豆乳と牛乳の組成を比較して、豆乳が多く含有するスタキオースに着目することで、免疫賦活効果を有する豆乳ヨーグルトを得る可能性を検討した。
豆乳を発酵させて得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）が、牛乳を発酵させて得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）よりも、ＮＫ細胞を活性化させる結果を得て、この成果を効率良く応用することを検討した。
そして、豆乳と牛乳の組成を比較して、豆乳が多く含有するスタキオースに着目することで、免疫賦活効果を有する豆乳ヨーグルトを得る可能性を検討した。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、下記の手段を採用することにより上記の課題を解決できることを見出した。
１．（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖と、（Ｂ）スクロースとを重量比（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１の割合で含む基材を、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を含有する、発酵飲食品。
２．前記基材が豆乳であることを特徴とする、１．に記載の発酵飲食品。
３．基材中の（Ａ)のいずれか１以上の糖含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が、（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１であることを特徴とする、１．または２．に記載の発酵飲食品。
４．ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株用発酵基材であって、培地中の（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１となるよう調整されたものである、菌体外多糖（ＥＰＳ）産生乳酸菌用発酵基材。
５．（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１である基材を、
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させることによる、免疫賦活に優れた菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生方法。
６．免疫賦活がＮＫ活性向上および／又はＩＬ－１２産生促進によるものである、５．に記載の菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生方法。
７．（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロースの含量の重量が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１である基材を
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を投与することによる、免疫賦活方法。
８．免疫賦活がＮＫ活性向上活性および／又はＩＬ－１２産生促進によるものであることを特徴とする、７．に記載の免疫賦活方法。
１．（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖と、（Ｂ）スクロースとを重量比（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１の割合で含む基材を、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を含有する、発酵飲食品。
２．前記基材が豆乳であることを特徴とする、１．に記載の発酵飲食品。
３．基材中の（Ａ)のいずれか１以上の糖含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が、（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１であることを特徴とする、１．または２．に記載の発酵飲食品。
４．ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株用発酵基材であって、培地中の（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１となるよう調整されたものである、菌体外多糖（ＥＰＳ）産生乳酸菌用発酵基材。
５．（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロース含量の重量比が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１である基材を、
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させることによる、免疫賦活に優れた菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生方法。
６．免疫賦活がＮＫ活性向上および／又はＩＬ－１２産生促進によるものである、５．に記載の菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生方法。
７．（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖の含量と（Ｂ）スクロースの含量の重量が（Ａ):（Ｂ）＝１：５～１：１である基材を
ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株によって発酵させて得られる菌体外多糖（ＥＰＳ）を投与することによる、免疫賦活方法。
８．免疫賦活がＮＫ活性向上活性および／又はＩＬ－１２産生促進によるものであることを特徴とする、７．に記載の免疫賦活方法。
【発明の効果】
【0006】
本発明によれば、豆乳を発酵させて得られる飲食品によって、免疫賦活を達成することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【0007】
【図1-1】実施例１におけるＩＬ－１２の産生量を示すグラフである。
【図1-2】実施例１におけるＮＫ活性の向上率を示すグラフである。
【図2-1】実施例２におけるＩＬ－１２の産生量を示すグラフである。
【図2-2】実施例２におけるＮＫ活性の向上率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0008】
以下の本発明を実施するための説明は、本発明を限定するものではない。本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、当業者の通常の知識に基づいて、以下の実施の形態に対し適宜変更、改良等が加えられたものも本発明の範囲に属する。
【0009】
[（Ａ)グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノース、スタキオースからなる群のいずれか１以上の糖]（以下場合により「Ａ成分」という）
Ａ成分として使用できる糖は、各種異性体のうち任意のものを使用できる。
基材中のＡ成分の含有量は、３～１０ｇ／Ｌが好ましい。
[（Ｂ）スクロース] （以下場合により「Ｂ成分」という）
基材中のＢ成分の含有量は、５～１５ｇ／Ｌが好ましい。
Ａ成分として使用できる糖は、各種異性体のうち任意のものを使用できる。
基材中のＡ成分の含有量は、３～１０ｇ／Ｌが好ましい。
[（Ｂ）スクロース] （以下場合により「Ｂ成分」という）
基材中のＢ成分の含有量は、５～１５ｇ／Ｌが好ましい。
【0010】
[乳酸菌]
本発明において発酵を行う乳酸菌としては、糖から乳酸を生成するホモ発酵乳酸菌である、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）が好ましい。
そして、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチラス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｒｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ロイコノストック・ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチラス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチラス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）等の２種以上と併用してもよい。
本発明において発酵を行う乳酸菌としては、糖から乳酸を生成するホモ発酵乳酸菌である、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）が好ましい。
そして、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチラス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｒｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ロイコノストック・ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチラス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチラス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）等の２種以上と併用してもよい。
【0011】
[基材]
本発明における、上記Ａ成分及びＢ成分を含有させる基材としては、豆乳類が好ましい。このような豆乳としては、公知のものを採用できる。また豆乳以外にも、牛乳、生乳、山羊乳、めん羊乳、加工乳、成分調整牛乳、低脂肪化等の加工をした乳等を単独で、または複数種混合して使用できる。なお、豆乳単独で使用することが好ましいが、豆乳に別の乳を混合しても良い。
また豆乳類としては、豆乳、調製豆乳、又は、豆乳飲料がある。
そして、豆乳類に属する「豆乳」とは、豆乳類の日本農林規格（平成２４年７月１７日農林水産省告示第１６７９号）の第２条に規定されているとおり、「大豆（粉末状のもの及び脱脂したものを除く）から熱水等によりたん白質その他の成分を溶出させ、繊維質を除去して得られた乳状の飲料であって、大豆固形分が８％以上のもの」であり、第３条の規格に沿うものである。なお、豆乳類に属する調製豆乳、豆乳飲料も、前記の日本農林規格の第２条に規定されているとおりであって、第４条、第５条の其々の規格に沿うものである。
大豆原料は、大豆及び大豆加工物から選択される少なくとも１種であってよい。大豆加工物としては、例えば、豆乳、大豆の磨砕物及び粉砕物、脱皮処理した大豆並びにその磨砕物及び粉砕物、脱脂大豆等が挙げられる。大豆原料としては、豆乳を使用することが好ましい。但し、大豆原料としてオカラ分を含有する豆粉を使用しても良く、使用しなくても良い。
また、豆乳として、乳酸菌発酵に要する時間の低減の観点から、豆乳を予めペプチド結合加水分解酵素により加水分解させて得た酵素処理豆乳を使用できる。酵素処理豆乳を使用することで、プロテアーゼ分泌の弱い乳酸菌（例えば、ラクトバチラス・ブレビスの一部等）を用いた場合であっても、発酵を促進し、発酵時間を短くすることができ、生産性を向上することもできる。
本発明における、上記Ａ成分及びＢ成分を含有させる基材としては、豆乳類が好ましい。このような豆乳としては、公知のものを採用できる。また豆乳以外にも、牛乳、生乳、山羊乳、めん羊乳、加工乳、成分調整牛乳、低脂肪化等の加工をした乳等を単独で、または複数種混合して使用できる。なお、豆乳単独で使用することが好ましいが、豆乳に別の乳を混合しても良い。
また豆乳類としては、豆乳、調製豆乳、又は、豆乳飲料がある。
そして、豆乳類に属する「豆乳」とは、豆乳類の日本農林規格（平成２４年７月１７日農林水産省告示第１６７９号）の第２条に規定されているとおり、「大豆（粉末状のもの及び脱脂したものを除く）から熱水等によりたん白質その他の成分を溶出させ、繊維質を除去して得られた乳状の飲料であって、大豆固形分が８％以上のもの」であり、第３条の規格に沿うものである。なお、豆乳類に属する調製豆乳、豆乳飲料も、前記の日本農林規格の第２条に規定されているとおりであって、第４条、第５条の其々の規格に沿うものである。
大豆原料は、大豆及び大豆加工物から選択される少なくとも１種であってよい。大豆加工物としては、例えば、豆乳、大豆の磨砕物及び粉砕物、脱皮処理した大豆並びにその磨砕物及び粉砕物、脱脂大豆等が挙げられる。大豆原料としては、豆乳を使用することが好ましい。但し、大豆原料としてオカラ分を含有する豆粉を使用しても良く、使用しなくても良い。
また、豆乳として、乳酸菌発酵に要する時間の低減の観点から、豆乳を予めペプチド結合加水分解酵素により加水分解させて得た酵素処理豆乳を使用できる。酵素処理豆乳を使用することで、プロテアーゼ分泌の弱い乳酸菌（例えば、ラクトバチラス・ブレビスの一部等）を用いた場合であっても、発酵を促進し、発酵時間を短くすることができ、生産性を向上することもできる。
【0012】
豆乳類における大豆固形分（厳密には、豆乳類に由来する大豆固形分）の含有量については特に限定されないが、例えば、１．００ｗ／ｗ％以上、２．００ｗ／ｗ％以上、３．００ｗ／ｗ％以上、４．００ｗ／ｗ％以上、４．６５ｗ／ｗ％以上であり、１５．００ｗ／ｗ％以下、１０．００ｗ／ｗ％以下、８．００ｗ／ｗ％以下、５．００ｗ／ｗ％以下である。
【0013】
［菌体外多糖（ＥＰＳ）］
菌体外多糖（ＥＰＳ）は、微生物が菌体表面に分泌・産生する多糖の総称で、環境ストレスなどから自身を保護する役割を有する。菌体外多糖（ＥＰＳ）は構成される糖の種類や数、結合様式によって多種多様な構造を有しており、増粘剤や安定化剤などの食品素材としての利用も為されている。乳酸菌もこれを産生することが知られており、ヨーグルトに粘性をもたせる役割の他、免疫賦活機能などの様々な生理活性機能を有している。
菌体外多糖（ＥＰＳ）は、微生物が菌体表面に分泌・産生する多糖の総称で、環境ストレスなどから自身を保護する役割を有する。菌体外多糖（ＥＰＳ）は構成される糖の種類や数、結合様式によって多種多様な構造を有しており、増粘剤や安定化剤などの食品素材としての利用も為されている。乳酸菌もこれを産生することが知られており、ヨーグルトに粘性をもたせる役割の他、免疫賦活機能などの様々な生理活性機能を有している。
【0014】
［菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株］
本発明では、菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株とは、菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生量が４ｍｇ／Ｌ（培養スケール）である菌株のことをいう。
測定は、例えば下記の実施例１の（１）～（８）の方法（培地中のスクロースは５ｇ／Ｌ、スタキオースは０ｇ／Ｌ）によって行うものとする。
本発明では、菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株とは、菌体外多糖（ＥＰＳ）の産生量が４ｍｇ／Ｌ（培養スケール）である菌株のことをいう。
測定は、例えば下記の実施例１の（１）～（８）の方法（培地中のスクロースは５ｇ／Ｌ、スタキオースは０ｇ／Ｌ）によって行うものとする。
【0015】
［発酵飲食品］
本発明における発酵飲食品は、例えば、豆乳ヨーグルト、豆乳チーズなどが挙げられる。
それらの飲食品には、本発明による効果を毀損しない範囲において、飲料素材や食品素材として通常配合される甘味料、高甘味度甘味料、酸化防止剤、香料（フレーバー）、酸味料、塩類、食物繊維、タンパク質、食用油脂、増粘剤、澱粉、ゲル化剤、ｐＨ調整剤など（以下、適宜「添加剤」という）を含有していてもよいし、当然、含有していなくてもよい。甘味料としては、例えば、果糖ぶどう糖液糖、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マルトースなどを用いることができる。高甘味度甘味料としては、例えば、ネオテーム、アセスルファムカリウム、スクラロース、サッカリン、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二ナトリウム、チクロ、ズルチン、ステビア、グリチルリチン、ソーマチン、モネリン、アスパルテーム、アリテームなどを用いることができる。酸化防止剤としては、例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ポリフェノールなどを用いることができる。酸味料としては、例えば、アジピン酸、クエン酸三ナトリウム、グルコノデルタラクトン、グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸ナトリウム、コハク酸、コハク酸一ナトリウム、コハク酸二ナトリウム、酢酸ナトリウム、ＤＬ－酒石酸、Ｌ－酒石酸、ＤＬ－酒石酸ナトリウム、Ｌ－酒石酸ナトリウム、二酸化炭素、乳酸、乳酸ナトリウム、酢酸、フマル酸、フマル酸一ナトリウム、ＤＬ－リンゴ酸、ＤＬ－リンゴ酸ナトリウム、リン酸、フィチン酸などを用いることができる。塩類としては、例えば、食塩、酸性りん酸カリウム、酸性りん酸カルシウム、りん酸アンモニウム、硫酸カルシウム、メタ重亜硫酸カリウム、塩化カルシウム、硝酸カリウム、硫酸アンモニウムなどを用いることができる。食物繊維としては、例えば、難消化性デキストリン、ペクチン、ポリデキストロース、グアーガム分解物などを用いることができる。タンパク質としては、例えば、大豆タンパク質、小麦タンパク質、トウモロコシタンパク質、エンドウタンパク質、カゼイン、卵白アルブミン、ゼラチンなどを用いることができる。食用油脂としては、食用の油脂であれば、特に限定されない。増粘剤としては、例えば、ローカストビーンガム、グアーガムなどを用いることができる。澱粉としては、例えば、加工澱粉などを用いることができる。ゲル化剤については、ペクチン、カラギーナンなどを用いることができる。ｐＨ調整剤としては、例えば、リン酸塩などを用いることができる。
さらに上記の飲食品を、グラタン、ケーキ等任意に使用することができる。
本発明における発酵飲食品は、例えば、豆乳ヨーグルト、豆乳チーズなどが挙げられる。
それらの飲食品には、本発明による効果を毀損しない範囲において、飲料素材や食品素材として通常配合される甘味料、高甘味度甘味料、酸化防止剤、香料（フレーバー）、酸味料、塩類、食物繊維、タンパク質、食用油脂、増粘剤、澱粉、ゲル化剤、ｐＨ調整剤など（以下、適宜「添加剤」という）を含有していてもよいし、当然、含有していなくてもよい。甘味料としては、例えば、果糖ぶどう糖液糖、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マルトースなどを用いることができる。高甘味度甘味料としては、例えば、ネオテーム、アセスルファムカリウム、スクラロース、サッカリン、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二ナトリウム、チクロ、ズルチン、ステビア、グリチルリチン、ソーマチン、モネリン、アスパルテーム、アリテームなどを用いることができる。酸化防止剤としては、例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ポリフェノールなどを用いることができる。酸味料としては、例えば、アジピン酸、クエン酸三ナトリウム、グルコノデルタラクトン、グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸ナトリウム、コハク酸、コハク酸一ナトリウム、コハク酸二ナトリウム、酢酸ナトリウム、ＤＬ－酒石酸、Ｌ－酒石酸、ＤＬ－酒石酸ナトリウム、Ｌ－酒石酸ナトリウム、二酸化炭素、乳酸、乳酸ナトリウム、酢酸、フマル酸、フマル酸一ナトリウム、ＤＬ－リンゴ酸、ＤＬ－リンゴ酸ナトリウム、リン酸、フィチン酸などを用いることができる。塩類としては、例えば、食塩、酸性りん酸カリウム、酸性りん酸カルシウム、りん酸アンモニウム、硫酸カルシウム、メタ重亜硫酸カリウム、塩化カルシウム、硝酸カリウム、硫酸アンモニウムなどを用いることができる。食物繊維としては、例えば、難消化性デキストリン、ペクチン、ポリデキストロース、グアーガム分解物などを用いることができる。タンパク質としては、例えば、大豆タンパク質、小麦タンパク質、トウモロコシタンパク質、エンドウタンパク質、カゼイン、卵白アルブミン、ゼラチンなどを用いることができる。食用油脂としては、食用の油脂であれば、特に限定されない。増粘剤としては、例えば、ローカストビーンガム、グアーガムなどを用いることができる。澱粉としては、例えば、加工澱粉などを用いることができる。ゲル化剤については、ペクチン、カラギーナンなどを用いることができる。ｐＨ調整剤としては、例えば、リン酸塩などを用いることができる。
さらに上記の飲食品を、グラタン、ケーキ等任意に使用することができる。
【0016】
［免疫賦活、ＮＫ活性向上、ＩＬ－１２産生促進］
本発明では、免疫賦活の有無を、一般的に用いられているＩＬ－１２産生の促進、ＮＫ活性の向上を指標として表す。ある乳酸菌株を用いて基材を発酵させて菌体外多糖（ＥＰＳ）を産生させた後、その菌体外多糖（ＥＰＳ）をマクロファージ様細胞に添加してＩＬ－１２産生量を測定した際に、「基材にスタキオース（あるいは他の糖）を添加して発酵させて得られたＩＬ－１２産生量」が、「培地にスタキオース（あるいは他の糖）を添加せずに発酵させて得られたＩＬ－１２産生量」よりも「１．５倍以上高い」状態である場合、「ＩＬ－１２の産生が促進された」、「ＮＫ活性が向上した」と規定する。
また、本発明で得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）を、被検体に投与することによって、免疫賦活を図ることができる。
本発明では、免疫賦活の有無を、一般的に用いられているＩＬ－１２産生の促進、ＮＫ活性の向上を指標として表す。ある乳酸菌株を用いて基材を発酵させて菌体外多糖（ＥＰＳ）を産生させた後、その菌体外多糖（ＥＰＳ）をマクロファージ様細胞に添加してＩＬ－１２産生量を測定した際に、「基材にスタキオース（あるいは他の糖）を添加して発酵させて得られたＩＬ－１２産生量」が、「培地にスタキオース（あるいは他の糖）を添加せずに発酵させて得られたＩＬ－１２産生量」よりも「１．５倍以上高い」状態である場合、「ＩＬ－１２の産生が促進された」、「ＮＫ活性が向上した」と規定する。
また、本発明で得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）を、被検体に投与することによって、免疫賦活を図ることができる。
【実施例0017】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明の技術範囲はこれらにより限定されるものではない。
＜実施例１＞
基材中のスタキオースの含有濃度の検討
以下に述べる方法で大豆オリゴ糖であるスタキオースと、豆乳の主要成分であるスクロースの比率を変化させた基材を、乳酸菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株であるＤＳＭ２０６１７Ｔ株で発酵させ、菌体外多糖（ＥＰＳ）を単離した。その後、得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）を細胞に作用させ、細胞中のＩＬ－１２量を測定することによって、ＮＫ活性を評価した。
（１）培地作成
下記の通り培地を混ぜ、純水に溶解し、ｐＨ７．３に調整した。
・トリプトン １０ｇ／Ｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）
・酵母エキス ５ｇ／Ｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）
・リン酸水素２カリウム ２ｇ／Ｌ（富士フイルム和光純薬株式会社）
・スクロース ５又は１０ｇ／Ｌ（富士フイルム和光純薬株式会社）
・スタキオース ０～１０ｇ／Ｌ（東京化成工業株式会社）
その後、１２１℃１５分オートクレーブし、低温室で冷まし、４℃で保存した。
（２）菌の前培養
各培地を５ｍＬ分注して乳酸菌のＧＳ（グリセロールストック）を１０μＬずつ添加し、３７℃で２４時間前培養した。
（３）菌の本培養
前培養した菌液を保存しておいた培地に全量添加し、良く攪拌して３７℃で２４時間培養した。
（４）培養液の回収とエタノール沈殿
培養液を５００ｍＬの遠沈管に入れ、１２０００ｇで２０分遠心した（ＭＸ－３０７、ＴＯＭＹ社製）。上清を回収し、４℃で冷やした。上清と等量の冷やしたエタノールを入れ、良く攪拌し、４℃で静置した。
（５）再エタノール沈殿
静置してあった培養液を１２０００ｇで１０分遠心し、上清を廃棄し、沈殿は７０％エタノールで２回洗浄した。その後、沈殿を３０ｍＬの純水に溶解し、さらに３０ｍＬのエタノールを加え、４℃で静置した。
（６）酵素処理
サンプルを１２０００ｇで１０分遠心し、上清を廃棄し、沈殿は７０％エタノールで２回洗浄した。その後、沈殿を３０ｍＬの純水に溶解し、ＤＮａｓｅ（Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｉ ｆｒｏｍ ｂｏｖｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓｅ、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）とＲＮａｓｅ（Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ａ ｆｒｏｍ ｂｏｖｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓ、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）を７μｇ／ｍＬになるように加え、３７℃で６時間培養した。次にＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ（ＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ ｆｒｏｍ Ｔｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ ａｌｂｕｍ、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）を２００μｇ／ｍＬとなるように添加し、良く攪拌し、３７℃で一晩培養した。
（７）透析
サンプルを１００℃１０分加熱し、酵素を失活させた後、４℃で冷却した。その後、ＭＷ８０００の透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ（登録商標）、ＲＥＰＬＩＧＥＮ社製）で２日間透析を行った（１日後に外液の水換を行った）。
（８）凍結乾燥
内液を回収し、凍結乾燥（ＦＤＵ－２０００、ＥＹＥＬＡ社製）させたのち、得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）の収量を測定した（ＸＳＥ１０５、ＭＥＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯ社製）。
（９）プレート作成、菌体外多糖（ＥＰＳ）添加
Ｊ７７４．１細胞（マウス由来マクロファージ様細胞、ＪＣＲＢ細胞バンクより入手）を２４ｗｅｌｌプレート（ＴＲＰ社製）に、細胞数３×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播いた。培地はＤＭＥＭ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、１０％ＦＢＳ（ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ社製）、１％Ｐｅｎｉｃｉｌｉｎ／Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ社製）を使用した。（８）の各サンプルを２ｍｇ／ｍＬとなるように調整し、ボルテックス（ＶＯＬＴＥＸ ＭＩＸＥＲ ＶＴＸ－３０００Ｌ、ＬＭＳ社製）した後、７０℃で１０分加熱し、殺菌および完全に溶解した。その後、各ｗｅｌｌに終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように添加し、３７℃で４８時間培養した。
（１０）培地上清・細胞回収
培養液上清（約１ｍＬ）を１．５ｍＬチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に回収し、４℃に保存した。
（１１）ＥＬＩＳＡ解析
ＬＢＩＳ Ｍｏｕｓｅ ＩＬ－１２ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（富士フイルムワコーシバヤギ株式会社）のプロトコルに則り、サンプル中のＩＬ－１２量を測定した。
＜実施例１＞
基材中のスタキオースの含有濃度の検討
以下に述べる方法で大豆オリゴ糖であるスタキオースと、豆乳の主要成分であるスクロースの比率を変化させた基材を、乳酸菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株であるＤＳＭ２０６１７Ｔ株で発酵させ、菌体外多糖（ＥＰＳ）を単離した。その後、得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）を細胞に作用させ、細胞中のＩＬ－１２量を測定することによって、ＮＫ活性を評価した。
（１）培地作成
下記の通り培地を混ぜ、純水に溶解し、ｐＨ７．３に調整した。
・トリプトン １０ｇ／Ｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）
・酵母エキス ５ｇ／Ｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）
・リン酸水素２カリウム ２ｇ／Ｌ（富士フイルム和光純薬株式会社）
・スクロース ５又は１０ｇ／Ｌ（富士フイルム和光純薬株式会社）
・スタキオース ０～１０ｇ／Ｌ（東京化成工業株式会社）
その後、１２１℃１５分オートクレーブし、低温室で冷まし、４℃で保存した。
（２）菌の前培養
各培地を５ｍＬ分注して乳酸菌のＧＳ（グリセロールストック）を１０μＬずつ添加し、３７℃で２４時間前培養した。
（３）菌の本培養
前培養した菌液を保存しておいた培地に全量添加し、良く攪拌して３７℃で２４時間培養した。
（４）培養液の回収とエタノール沈殿
培養液を５００ｍＬの遠沈管に入れ、１２０００ｇで２０分遠心した（ＭＸ－３０７、ＴＯＭＹ社製）。上清を回収し、４℃で冷やした。上清と等量の冷やしたエタノールを入れ、良く攪拌し、４℃で静置した。
（５）再エタノール沈殿
静置してあった培養液を１２０００ｇで１０分遠心し、上清を廃棄し、沈殿は７０％エタノールで２回洗浄した。その後、沈殿を３０ｍＬの純水に溶解し、さらに３０ｍＬのエタノールを加え、４℃で静置した。
（６）酵素処理
サンプルを１２０００ｇで１０分遠心し、上清を廃棄し、沈殿は７０％エタノールで２回洗浄した。その後、沈殿を３０ｍＬの純水に溶解し、ＤＮａｓｅ（Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｉ ｆｒｏｍ ｂｏｖｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓｅ、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）とＲＮａｓｅ（Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ａ ｆｒｏｍ ｂｏｖｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓ、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）を７μｇ／ｍＬになるように加え、３７℃で６時間培養した。次にＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ（ＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ ｆｒｏｍ Ｔｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ ａｌｂｕｍ、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）を２００μｇ／ｍＬとなるように添加し、良く攪拌し、３７℃で一晩培養した。
（７）透析
サンプルを１００℃１０分加熱し、酵素を失活させた後、４℃で冷却した。その後、ＭＷ８０００の透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ（登録商標）、ＲＥＰＬＩＧＥＮ社製）で２日間透析を行った（１日後に外液の水換を行った）。
（８）凍結乾燥
内液を回収し、凍結乾燥（ＦＤＵ－２０００、ＥＹＥＬＡ社製）させたのち、得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）の収量を測定した（ＸＳＥ１０５、ＭＥＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯ社製）。
（９）プレート作成、菌体外多糖（ＥＰＳ）添加
Ｊ７７４．１細胞（マウス由来マクロファージ様細胞、ＪＣＲＢ細胞バンクより入手）を２４ｗｅｌｌプレート（ＴＲＰ社製）に、細胞数３×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播いた。培地はＤＭＥＭ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、１０％ＦＢＳ（ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ社製）、１％Ｐｅｎｉｃｉｌｉｎ／Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ社製）を使用した。（８）の各サンプルを２ｍｇ／ｍＬとなるように調整し、ボルテックス（ＶＯＬＴＥＸ ＭＩＸＥＲ ＶＴＸ－３０００Ｌ、ＬＭＳ社製）した後、７０℃で１０分加熱し、殺菌および完全に溶解した。その後、各ｗｅｌｌに終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように添加し、３７℃で４８時間培養した。
（１０）培地上清・細胞回収
培養液上清（約１ｍＬ）を１．５ｍＬチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に回収し、４℃に保存した。
（１１）ＥＬＩＳＡ解析
ＬＢＩＳ Ｍｏｕｓｅ ＩＬ－１２ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（富士フイルムワコーシバヤギ株式会社）のプロトコルに則り、サンプル中のＩＬ－１２量を測定した。
【0018】
結果を図１－１、図１－２に示す。図１－１は、ＩＬ－１２の産生量を示したグラフである。図１－２は、ＩＬ－１２の産生量を、スタキオースを含まない場合（０％）との比率で表したものであり、これをＮＫ活性の向上率とする。
図１－１、図１－２に示すとおり、スタキオースとスクロースを重量比１：５～１：１の割合で基材に含む場合に、ＩＬ－１２の産生が促進され、ＮＫ活性が向上することがわかった。
図１－１、図１－２に示すとおり、スタキオースとスクロースを重量比１：５～１：１の割合で基材に含む場合に、ＩＬ－１２の産生が促進され、ＮＫ活性が向上することがわかった。
【0019】
＜実施例２＞
豆乳中のスタキオースの含有量の検討
次に、以下に述べる方法で、基材として豆乳を用いてスタキオースとスクラロースの含有比率を変化させ、乳酸菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株であるＤＳＭ２０６１７Ｔ株で発酵させ、菌体外多糖（ＥＰＳ）を単離した。その後、得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）を細胞に作用させ、細胞中のＩＬ－１２量を測定することによって、ＮＫ活性を評価した。
（１）豆乳の透析
豆乳（不二製油社製）をＭＷ８０００の透析膜に入れ、１０倍量の外液で透析を行った。透析開始１日後に外液を交換し、透析を継続した。透析開始２日後の豆乳を回収してエバポレーターで水分を飛ばし、固形分を元の豆乳と同じになるように調整した。
（２）糖の添加
スクロースを５又は１０ｇ／Ｌになるように添加し、９０℃１０分で殺菌し、各豆乳を３０ｍＬずつ分注した。
（３）発酵試験
乳酸菌を終濃度５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように添加し、３７℃７時間発酵させた。
（４）菌体外多糖（ＥＰＳ）の抽出・エタノール沈殿
完成したヨーグルトを均一化し、２０ｇずつ量り取り、６０％トリクロロ酢酸を１０ｍＬずつ加えてよく攪拌し、４℃で一晩静置した。その後、６０００ｇで１５分遠心分離した。得られた上清２０ｍＬに２０％トリクロロ酢酸を１２．５ｍＬ加えてよく攪拌し、氷水中で１時間静置した後、６０００ｇで１５分遠心分離した。上清１２ｍＬにエタノールを２８ｍＬ加え、よく攪拌し－３０℃で一晩静置した。
（５）洗浄・酵素処理
８０００ｇで１５分遠心分離した後、上清を取り除き、沈殿を７０％エタノールで２回洗浄した。その沈殿を５ｍＬの純水で溶解し、ＤＮａｓｅとＲＮａｓｅを７μｇ／ｍＬになるように加え、３７℃で６時間培養した。次にＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫを２００μｇ／ｍＬとなるように添加し、良く攪拌し、３７℃で一晩培養した。
（６）
以下、実施例１の（７）以降と同様にして、サンプル中のＩＬ－１２量を測定した。
豆乳中のスタキオースの含有量の検討
次に、以下に述べる方法で、基材として豆乳を用いてスタキオースとスクラロースの含有比率を変化させ、乳酸菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの菌体外多糖（ＥＰＳ）高生産株であるＤＳＭ２０６１７Ｔ株で発酵させ、菌体外多糖（ＥＰＳ）を単離した。その後、得られた菌体外多糖（ＥＰＳ）を細胞に作用させ、細胞中のＩＬ－１２量を測定することによって、ＮＫ活性を評価した。
（１）豆乳の透析
豆乳（不二製油社製）をＭＷ８０００の透析膜に入れ、１０倍量の外液で透析を行った。透析開始１日後に外液を交換し、透析を継続した。透析開始２日後の豆乳を回収してエバポレーターで水分を飛ばし、固形分を元の豆乳と同じになるように調整した。
（２）糖の添加
スクロースを５又は１０ｇ／Ｌになるように添加し、９０℃１０分で殺菌し、各豆乳を３０ｍＬずつ分注した。
（３）発酵試験
乳酸菌を終濃度５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように添加し、３７℃７時間発酵させた。
（４）菌体外多糖（ＥＰＳ）の抽出・エタノール沈殿
完成したヨーグルトを均一化し、２０ｇずつ量り取り、６０％トリクロロ酢酸を１０ｍＬずつ加えてよく攪拌し、４℃で一晩静置した。その後、６０００ｇで１５分遠心分離した。得られた上清２０ｍＬに２０％トリクロロ酢酸を１２．５ｍＬ加えてよく攪拌し、氷水中で１時間静置した後、６０００ｇで１５分遠心分離した。上清１２ｍＬにエタノールを２８ｍＬ加え、よく攪拌し－３０℃で一晩静置した。
（５）洗浄・酵素処理
８０００ｇで１５分遠心分離した後、上清を取り除き、沈殿を７０％エタノールで２回洗浄した。その沈殿を５ｍＬの純水で溶解し、ＤＮａｓｅとＲＮａｓｅを７μｇ／ｍＬになるように加え、３７℃で６時間培養した。次にＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫを２００μｇ／ｍＬとなるように添加し、良く攪拌し、３７℃で一晩培養した。
（６）
以下、実施例１の（７）以降と同様にして、サンプル中のＩＬ－１２量を測定した。
【0020】
結果を図２－１、図２－２に示す。図２－１は、ＩＬ－１２の産生量を示したグラフである。図２－２は、ＩＬ－１２の産生量を、スタキオースを含まない場合（０％）との比率で表したものであり、これをＮＫ活性の向上率とする。
図２－１、図２－２に示すとおり、スタキオースとスクロースを重量比１：５～１：１の割合で豆乳に含む場合に、ＩＬ－１２の産生が促進され、ＮＫ活性が向上することがわかった。
図２－１、図２－２に示すとおり、スタキオースとスクロースを重量比１：５～１：１の割合で豆乳に含む場合に、ＩＬ－１２の産生が促進され、ＮＫ活性が向上することがわかった。
【0021】
＜実施例３＞
活用可能な乳酸菌の検討
次に、発酵基材中のスタキオースとスクロースの比率を１：２で固定し、様々な乳酸菌で発酵させて菌体外多糖（ＥＰＳ）を精製し、ＮＫ活性の向上率を調べた。
乳酸菌は、以下のものを使用した。
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＪＣＭ２００２６株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ２０６１７Ｔ株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ８７１３株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＩＳＯ１３９５７株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ２０２５９株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ２０４７９株
・Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｓｅｎｔｒｏｉｄｅｓ ＪＣＭ６１２４株
・Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ＩＦＯ１２００７株
・Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｌａｃｔｉｓ ＪＣＭ５８０５株
活用可能な乳酸菌の検討
次に、発酵基材中のスタキオースとスクロースの比率を１：２で固定し、様々な乳酸菌で発酵させて菌体外多糖（ＥＰＳ）を精製し、ＮＫ活性の向上率を調べた。
乳酸菌は、以下のものを使用した。
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＪＣＭ２００２６株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ２０６１７Ｔ株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ８７１３株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＩＳＯ１３９５７株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ２０２５９株
・Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ２０４７９株
・Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｓｅｎｔｒｏｉｄｅｓ ＪＣＭ６１２４株
・Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ＩＦＯ１２００７株
・Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｌａｃｔｉｓ ＪＣＭ５８０５株
【0022】
（１）培地作成
下記の通り培地を混ぜ、純水に溶解し、ｐＨ７．３に調整した。（スタキオースを加えない場合と、５ｇ／Ｌとなるように加えた場合の２通り作成した。）
・トリプトン １０ｇ／Ｌ
・酵母エキス ５ｇ／Ｌ
・リン酸水素２カリウム ２ｇ／Ｌ
・スクロース １０ｇ／Ｌ
・スタキオース ０又は５ｇ／Ｌ
その後、１２１℃１５分オートクレーブし、低温室で冷まし、４℃で保存した。
（２）
以下、実施例１の（２）以降と同様にして、サンプル中のＩＬ－１２量を測定した。その結果を表１に示す。なお、表中の培地量は、（１）で調製した培地の量を指す。
下記の通り培地を混ぜ、純水に溶解し、ｐＨ７．３に調整した。（スタキオースを加えない場合と、５ｇ／Ｌとなるように加えた場合の２通り作成した。）
・トリプトン １０ｇ／Ｌ
・酵母エキス ５ｇ／Ｌ
・リン酸水素２カリウム ２ｇ／Ｌ
・スクロース １０ｇ／Ｌ
・スタキオース ０又は５ｇ／Ｌ
その後、１２１℃１５分オートクレーブし、低温室で冷まし、４℃で保存した。
（２）
以下、実施例１の（２）以降と同様にして、サンプル中のＩＬ－１２量を測定した。その結果を表１に示す。なお、表中の培地量は、（１）で調製した培地の量を指す。
【0023】
【表1】
【0024】
＜実施例４＞
活用可能な糖の検討
次に、発酵基材中にスタキオース以外の各種の糖とスクロースを比率１：２に固定して添加し、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ２０６１７Ｔ株を用いて発酵させ、菌体外多糖（ＥＰＳ）を精製し、ＮＫ活性の向上率を調べて、本発明に活用可能な糖の種類を確認した。
活用可能な糖の検討
次に、発酵基材中にスタキオース以外の各種の糖とスクロースを比率１：２に固定して添加し、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＤＳＭ２０６１７Ｔ株を用いて発酵させ、菌体外多糖（ＥＰＳ）を精製し、ＮＫ活性の向上率を調べて、本発明に活用可能な糖の種類を確認した。
【0025】
（１）培地作成
下記の通り培地を混ぜ、純水に溶解し、ｐＨ７．３に調整した。
・トリプトン １０ｇ／Ｌ
・酵母エキス ５ｇ／Ｌ
・リン酸水素２カリウム ２ｇ／Ｌ
・スクロース １０ｇ／Ｌ
・各糖 ５ｇ／Ｌ
その後、１２１℃１５分オートクレーブし、低温室で冷まし、４℃で保存した。
下記の通り培地を混ぜ、純水に溶解し、ｐＨ７．３に調整した。
・トリプトン １０ｇ／Ｌ
・酵母エキス ５ｇ／Ｌ
・リン酸水素２カリウム ２ｇ／Ｌ
・スクロース １０ｇ／Ｌ
・各糖 ５ｇ／Ｌ
その後、１２１℃１５分オートクレーブし、低温室で冷まし、４℃で保存した。
【0026】
（２）
以下、実施例１の（２）以降と同様にして、サンプル中のＩＬ－１２量を測定した。
結果を表２に示す。
ＮＫ活性の向上率は、糖源をスクロースのみにした場合のＮＫ活性を１とした場合の値である。
なお、使用した糖は以下のとおりである。
グルコール：Ｄ（+）－グルコース（富士フイルム和光純薬株式会社製）
ラクトース：ラクトース一水和物（富士フイルム和光純薬株式会社製）
マンノース：Ｄ（+）－マンノース（富士フイルム和光純薬株式会社製）
フルクトース：Ｄ（-）－フルクトース（富士フイルム和光純薬株式会社製）
ガラクトース：Ｄ（+）－ガラクトース（富士フイルム和光純薬株式会社製）
ラフィノース：Ｄ－（+）－ラフィノース五水和物（富士フイルム和光純薬株式会社製）アロース：Ｄ－（+）－アロース（東京化成工業株式会社製）
フルクトオリゴ糖：フルクトオリゴ糖（富士フイルム和光純薬株式会社製）
イヌリン：イヌリン（東京化成工業株式会社製）
イノシトール：ｍｙｏ－イノシトール（東京化成工業株式会社製）
イソマルトオリゴ糖：イソマルトオリゴ糖（富士フイルム和光純薬株式会社製）
マルチトール：マルチトール（東京化成工業株式会社製）
パラチノース：パラチノース水和物（東京化成工業株式会社製）
トレハロース：トレハロース二水和物（富士フイルム和光純薬株式会社製）
キシリトール：キシリトール（富士フイルム和光純薬株式会社製）
キシロビオース：キシロビオース（東京化成工業株式会社製）
以下、実施例１の（２）以降と同様にして、サンプル中のＩＬ－１２量を測定した。
結果を表２に示す。
ＮＫ活性の向上率は、糖源をスクロースのみにした場合のＮＫ活性を１とした場合の値である。
なお、使用した糖は以下のとおりである。
グルコール：Ｄ（+）－グルコース（富士フイルム和光純薬株式会社製）
ラクトース：ラクトース一水和物（富士フイルム和光純薬株式会社製）
マンノース：Ｄ（+）－マンノース（富士フイルム和光純薬株式会社製）
フルクトース：Ｄ（-）－フルクトース（富士フイルム和光純薬株式会社製）
ガラクトース：Ｄ（+）－ガラクトース（富士フイルム和光純薬株式会社製）
ラフィノース：Ｄ－（+）－ラフィノース五水和物（富士フイルム和光純薬株式会社製）アロース：Ｄ－（+）－アロース（東京化成工業株式会社製）
フルクトオリゴ糖：フルクトオリゴ糖（富士フイルム和光純薬株式会社製）
イヌリン：イヌリン（東京化成工業株式会社製）
イノシトール：ｍｙｏ－イノシトール（東京化成工業株式会社製）
イソマルトオリゴ糖：イソマルトオリゴ糖（富士フイルム和光純薬株式会社製）
マルチトール：マルチトール（東京化成工業株式会社製）
パラチノース：パラチノース水和物（東京化成工業株式会社製）
トレハロース：トレハロース二水和物（富士フイルム和光純薬株式会社製）
キシリトール：キシリトール（富士フイルム和光純薬株式会社製）
キシロビオース：キシロビオース（東京化成工業株式会社製）
【0027】
【表2】
【0028】
ＮＫ活性の向上率が大きいものが本発明に活用可能であるので、スタキオースに加えて、グルコース、ラクトース、ラフィノース、パラチノースも使用できることが確認できた。
【図1-1】
【図1-2】
【図2-1】
【図2-2】
