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▶ モレキュラー テクノロジーズ ラボラトリーズ エルエルシーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024016080
(43)【公開日】2024-02-06
(54)【発明の名称】ＰＥＧ化された成長ホルモンアンタゴニストの治療薬
(51)【国際特許分類】
C07K 14/61 20060101AFI20240130BHJP
A61K 38/27 20060101ALI20240130BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240130BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240130BHJP
A61K 47/60 20170101ALI20240130BHJP
C12N 15/18 20060101ALN20240130BHJP
【ＦＩ】
C07K14/61 ZNA
A61K38/27
A61P35/00
A61P43/00
A61P43/00 111
A61K47/60
C12N15/18
【審査請求】有
【請求項の数】9
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023182884
(22)【出願日】2023-10-25
(62)【分割の表示】P 2021574754の分割
【原出願日】2020-06-17
(31)【優先権主張番号】62/862,222
(32)【優先日】2019-06-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】521251143
【氏名又は名称】モレキュラー テクノロジーズ ラボラトリーズ エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】100104411
【弁理士】
【氏名又は名称】矢口 太郎
(72)【発明者】
【氏名】ブロディ、リチャード、エス．
(72)【発明者】
【氏名】ズパンシック、トーマス、ジェイ．
(72)【発明者】
【氏名】コプチック、ジョン、ジェイ．
(72)【発明者】
【氏名】バース、リートブラタ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する癌や先端肥大症などの疾患または病態の治療に有用なヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。
【解決手段】ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、または前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、およびシステインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子と、を含む、成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。
【選択図】図１Ａ
【解決手段】ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、または前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、およびシステインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子と、を含む、成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。
【選択図】図１Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
成長ホルモン受容体アンタゴニストであって、
（ａ）ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、または前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、およびシステインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および
（ｂ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子と、
を含む、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
（ａ）ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、または前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、およびシステインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および
（ｂ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子と、
を含む、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項2】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ポリエチレングリコール分子が、遊離のスルフヒドリル基に結合するためのマレミド基を含む、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項3】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、システインに変異した前記１つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子である、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項4】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、システインに変異した前記２つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子である、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項5】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子と少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化される、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項6】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項7】
ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療する方法であって、請求項１記載の前記組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項8】
請求項７記載の方法において、前記疾患または状態が、高レベルの前記成長ホルモン受容体、高レベルの前記プロラクチン受容体、または高レベルの前記成長ホルモン受容体と前記プロラクチン受容体の両方を発現する癌を含む、方法。
【請求項9】
請求項８記載の方法において、前記癌が、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌を含む、方法。
【請求項10】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記アミノ酸Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔがシステインに変異しており、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を妨げるように作用する、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項11】
先端巨大症を治療する方法であって、請求項１０記載の前記組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項12】
ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストであって、
（ａ）ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、および、システインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および
（ｂ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、
（ｉ）システインに変異した前記１つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールであり、および
（ｉｉ）システインに変異した前記２つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールである、前記ポリエチレングリコール分子と、
を含む、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
（ａ）ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、および、システインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および
（ｂ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、
（ｉ）システインに変異した前記１つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールであり、および
（ｉｉ）システインに変異した前記２つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールである、前記ポリエチレングリコール分子と、
を含む、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項13】
請求項１２記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ポリエチレングリコール分子が、遊離のスルフヒドリル基に結合するマレミド基を含む、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項14】
請求項１２記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１５および２３からなる群からなる群から選択されるＤＮＡ分子と少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化される、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項15】
請求項１２記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項16】
ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療する方法であって、請求項１２記載の前記組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項17】
請求項１６記載の方法において、前記疾患または状態が、高レベルの前記成長ホルモン受容体、高レベルの前記プロラクチン受容体、または高レベルの前記成長ホルモン受容体と前記プロラクチン受容体の両方を発現する癌を含む、方法。
【請求項18】
請求項１７記載の方法において、前記癌が、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌を含む、方法。
【請求項19】
請求項１２記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記アミノ酸Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔがシステインに変異しており、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を妨げるように作用する、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項20】
先端巨大症を治療する方法であって、請求項１９記載の前記組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項21】
ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストであって、
（ａ）ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、および、システインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および
（ｂ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、
（ｉ）システインに変異した前記１つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールであり、および
（ｉｉ）システインに変異した前記２つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール、または３つのカルボキシレートアニオンを含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールである、前記ポリエチレングリコール分子と、および
（ｃ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子に対して少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化され、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、
を含む、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
（ａ）ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、および、システインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および
（ｂ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、
（ｉ）システインに変異した前記１つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールであり、および
（ｉｉ）システインに変異した前記２つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール、または３つのカルボキシレートアニオンを含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールである、前記ポリエチレングリコール分子と、および
（ｃ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子に対して少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化され、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、
を含む、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項22】
請求項２１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ポリエチレングリコール分子が、遊離のスルフヒドリル基に結合するマレミド基を含む、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項23】
ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療する方法であって、請求項２１記載の前記組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項24】
請求項２３記載の方法において、前記疾患または状態が、高レベルの前記成長ホルモン受容体、高レベルの前記プロラクチン受容体、または高レベルの前記成長ホルモン受容体と前記プロラクチン受容体の両方を発現する癌を含む、方法。
【請求項25】
請求項２４記載の方法において、前記癌が、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌を含む、方法。
【請求項26】
請求項２１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記アミノ酸Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔがシステインに変異しており、およびこれらの変異がプロラクチン受容体への結合を妨げるように作用する、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項27】
先端巨大症を治療する方法であって、請求項２６記載の前記組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）のシーケンスリストがファイルされている。シーケンスリストは、２０２０年６月１１日に作成されたＳＥＱＩＤＮＯＳ＿１＿２４＿ＳＴ２５．ｔｘｔというタイトルのＡＳＣＩＩテキスト（．ｔｘｔ）ファイルであり、サイズは３３ＫＢである。シーケンスリストは、本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
記載されている本発明は、一般的には、受容体アンタゴニストとして使用するための組成物に関し、より具体的には、非常に効果的な治療薬となる可能性のある新規のヒト成長ホルモンアンタゴニストに関するものである。
【0003】
ヒト成長ホルモンは、ソマトトロピンまたはソマトロピンとしても知られており、ヒトや他の動物の成長、細胞の再生産、再生を刺激するペプチドホルモンである。成長ホルモンは、ある種の細胞にのみ特異的に作用するマイトジェンの一種であり、１９１アミノ酸の一本鎖ポリペプチドであり、下垂体前葉の側翼にある体細胞によって合成、貯蔵、および分泌される。先端巨大症は、思春期に骨端板が閉じた後、下垂体前葉が成長ホルモン（ｈＧＨ）を過剰に分泌することで生じる症候群である。骨端板閉鎖前にｈＧＨが過剰に産生されると、結果として巨人症（ｇｉｇａｎｔｉｓｍ）（または巨人症（ｇｉａｎｔｉｓｍ））となる。多くの疾患が下垂体のｈＧＨ産生量を増加させる可能性があるが、最も一般的なのは、異なるタイプの細胞（体細胞栄養因子）に由来する下垂体腺腫と呼ばれる腫瘍である。先端巨大症は、最も一般的には中年期の成人に発症し、未治療の場合、重度の外見障害、合併症、早死にを引き起こす可能性がある。この病気は、その病態と進行の遅さから、初期段階では診断が難しく、外見上の変化、特に顔面の変化が顕著になるまで何年も見過ごされることが多い。
【0004】
受容体とは，通常，細胞の細胞膜表面に存在し、細胞外からの化学的シグナルを受け取るタンパク質分子である。化学信号が受容体に結合すると、例えば細胞の電気的活動の変化など、何らかの細胞／組織の反応を引き起こす。この意味で、受容体とは、内因性の化学信号を認識し、それに応答するタンパク質分子である。ヒト成長ホルモンのようなアゴニストは、受容体に結合し、受容体を活性化して生物学的反応を引き起こす化学組成物である。アゴニストが作用を引き起こすのに対し、アンタゴニストはアゴニストの作用を阻害し、インバースアゴニストはアゴニストの作用とは逆の作用を引き起こす。
【0005】
受容体アンタゴニストとは、受容体に結合するとそれ自体が生物学的反応を引き起こすのではなく、アゴニストが介在する反応をブロックまたは減衰させるタイプの受容体リガンドまたは薬剤のことである。これらの組成物はブロッカーと呼ばれることもあり、例としてはαブロッカー、βブロッカー、およびカルシウムチャネルブロッカーなどがある。薬理学的には、アンタゴニストは同種の受容体に対して親和性はあるが有効性はなく、結合することで相互作用が阻害され、受容体におけるアゴニストまたはインバースアゴニストの機能が阻害される。アンタゴニストは、受容体の活性部位（オルトステリック）や他の部位（アロステリック）に結合することでその効果を媒介する。また、受容体の活性の生物学的調節に通常は関与していない特異な結合部位で相互作用することもある。アンタゴニストの活性は、アンタゴニスト－受容体複合体の寿命に応じて可逆的にも不可逆的にも変化し、それはアンタゴニスト－受容体結合の性質にも依存する。アンタゴニストの大部分は、受容体上の構造的に定義された結合部位において、内因性リガンドまたは基質と競合することでその効力を発揮する。定義上、アンタゴニストは、結合した受容体を活性化する効力を示さず、アンタゴニストは受容体を活性化する能力を維持しない。しかし、いったん結合すると、アンタゴニストは、アゴニスト、インバースアゴニスト、およびパーシャルアゴニストの機能を阻害する。
【0006】
ペグビソマント（ＳＯＭＡＶＥＲＴ（登録商標）という商標で販売されている）のような成長ホルモン受容体アンタゴニストは、先端巨大症の治療に使用される。このような組成物は、先端巨大症の原因となっている下垂体の腫瘍を手術や放射線で制御できず、ソマトスタチンアナログの使用がうまくいかない場合に使用される。ペグビソマントは、通常、水と混合して皮下に注射する粉末として投与される。
【0007】
ペギレーション（Ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）とは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー鎖を薬物、ペプチド、抗体フラグメント、または治療用タンパク質などの分子やマクロ構造に共有結合および非共有結合で結合させるプロセスである。ＰＥＧ化は、通常、ＰＥＧの反応性誘導体を標的分子とインキュベートすることで達成され、分子サイズや分子電荷の変化など、物理化学的特性の変化をもたらす。これらの物理的・化学的な変化は、治療薬の全身的な保持力を高め、細胞受容体に対する治療部分の結合親和性に影響を与え、吸収・分布パターンを変化させることができる。ＰＥＧを薬剤や治療用タンパク質に共有結合させることで、薬剤を宿主の免疫系から「マスクする（覆う）」ことができ（すなわち、免疫原性や抗原性を低下させる）、薬剤の流体力学的サイズ（すなわち、溶液中でのサイズ）を大きくして、腎クリアランスを低下させることで循環時間を長くすることができる。また、ＰＥＧ化することで、疎水性の薬物やタンパク質に水溶性を与えることができる。
【0008】
ペギレーションは、分子量を増加させることにより、未修飾の分子と比較して、以下のようないくつかの重要な薬理学的利点を与えることができる。例えば、（ｉ）薬物の溶解性の向上、（ｉｉ）有効性を低下させることなく投与回数を減らし、潜在的に毒性を低減し得る、（ｉｉｉ）循環寿命の延長、（ｉｖ）薬物の安定性の向上、（ｖ）タンパク質分解からの保護の強化などである。また、ＰＥＧ化された薬剤には、以下のような商業的な利点もある。ＰＥＧ化された薬剤には、以下：（ｉ）新しいデリバリーフォーマットや投与レジメンの機会、（ｉｉ）既に承認された薬剤の特許期間の延長である。ＰＥＧは結合にとって特に魅力的なポリマーであり、医薬用途に関連するＰＥＧ部位の特定の特性には以下：（ｉ）水溶性、（ｉｉ）溶液中での高い移動性、（ｉｉｉ）毒性がなく、免疫原性が低い、（ｉｖ）体内での分布が変化する、というような商業的な利点もある。
【0009】
高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をタンパク質に添加すると，腎臓による排泄がサイズに依存して減少することにより、これらのタンパク質の生体内半減期が長くなることがこれまでに示される。また，ＰＥＧの添加は，タンパク質の免疫原性を低下させ、凝集やプロテアーゼによる切断を減少させる［１］－［２］。ホルモン、サイトカイン、抗体フラグメント、酵素など、複数の既知のＰＥＧ化タンパク質が治療用としてＵＳＦＤＡに承認される［１］および［３］－［４］。このように、ＰＥＧ化された治療薬、特にヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）受容体アンタゴニストまたは他の受容体アンタゴニストの使用に反応する疾患の治療に使用する治療薬のさらなる開発が継続的に必要とされる。
【0010】
ヒトおよび動物実験から得られた証拠は、発癌における成長ホルモン（ＧＨ）の役割を支持する。乳がん、中枢神経系がん、大腸がん、白血病、メラノーマ、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、腎臓がんの９種類のがん細胞６０株における成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）の発現レベルが測定された［５］。大腸と白血病を除くすべての癌種の細胞株で，高いＧＨＲ発現レベルが得られた。メラノーマ細胞株のＧＨＲ発現レベルは例外的に高く、パネル全体に比べて５０倍近く高かった。３種類のメラノーマ細胞をｈＧＨで処理したところ、３種類のうち２種類では、ｈＧＨは増殖を促進し、ＳＴＡＴ５とｍＴＯＲの活性化を誘導した。ＧＨとｓｉＲＮＡでＧＨＲをノックダウンした細胞株が、ヒトメラノーマ細胞の腫瘍進行と上皮間葉転換に及ぼす影響が調査された［６］。この研究では、ｈＧＨが腫瘍の増殖を促進し、ＧＨＲのノックダウンが腫瘍の増殖、移動、浸潤を弱めることが示された。ヒトのメラノーマ細胞の化学療法に対する感受性に対するＧＨＲノックダウンの効果が調査された［７］。この研究では、ｈＧＨが複数のＡＢＣトランスポーターをアップレギュレートし、メラノーマ治療薬であるベムラフェニブのＥＣ５０を増加させることが示された。一方、ＧＨＲのノックダウンは、メラノーマ細胞による薬物の保持を著しく増加させ、細胞増殖を低下させ、薬効を増加させる。したがって、ある種のｈＧＨアンタゴニストをがん治療薬として使用することは有益であると考えられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0011】
以下は、開示された発明的主題の特定の実施例の概要を提供するものである。この要約は、広範な概要ではなく、開示された発明主題の重要なまたは重要な側面または要素を特定することや、その範囲を明確にすることを意図したものではない。しかし、開示された発明対象を説明および請求するために使用される言語で不定冠詞を使用することは、記載された発明対象を制限することを何ら意図していないことを理解されたい。むしろ、「ａ」または「ａｎ」の使用は、「少なくとも１つ」または「１またはそれ以上」を意味するように解釈されるべきである。
【0012】
一つの実施態様は、第一の成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。この成長ホルモン受容体アンタゴニストは、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した１つのアミノ酸がＴ１４２であり、システインに変異した２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子と、を含む。ポリエチレングリコール分子は、遊離のスルフヒドリル基に結合するためのマレミド基を含んでいても良い。システインに変異した１つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子は、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子であっても良い。システインに変異した２つのアミノ酸に結合されたポリエチレングリコール分子は、２つの４０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａ直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンをそれぞれ含む２つの４．５ｋＤａ分岐ポリエチレングリコールであっても良い。ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストは、識別ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子と少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化されていても良い。ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストは、識別ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。本実施態様はまた、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療する方法であって、記載された組成物の有効量を患者に投与する工程を含む方法を含んでも良い。疾患または状態には、高レベルの成長ホルモン受容体、高レベルのプロラクチン受容体、または高レベルの成長ホルモン受容体とプロラクチン受容体の両方を発現する癌が含まれ得る。癌には、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌が含まれ得る。この実施態様は、アミノ酸Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔがさらにシステインに変異しており、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を阻止するように作用している変異体も含むことができる。この変異体は、有効量の開示された組成物を患者に投与する工程を含む、先端巨大症を治療するための方法に使用することができる。
【0013】
別の実施態様では、第２の成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。この成長ホルモン受容体アンタゴニストは、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した１つのアミノ酸がＴ１４２であり、システインに変異した２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、ここで、システインに変異した１つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子はシステインに変異したポリエチレングリコール分子は、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子であり、システインに変異した２つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子は、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールである。ポリエチレングリコール分子は、遊離のスルフヒドリル基に結合するためのマレミド基を含んでいても良い。ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストは、識別ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子に対して少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化されていても良い。ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストは、識別ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。本実施態様はまた、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療する方法であって、記載された組成物の有効量を患者に投与する工程を含む方法を含んでも良い。疾患または状態には、高レベルの成長ホルモン受容体、高レベルのプロラクチン受容体、または高レベルの成長ホルモン受容体とプロラクチン受容体の両方を発現する癌が含まれ得る。癌には、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌が含まれ得る。この実施態様は、アミノ酸Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔがさらにシステインに変異しており、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を阻止するように作用する変異体も含むことができる。この変異体は、有効量の開示された組成物を患者に投与する工程を含む、先端巨大症を治療するための方法に使用することができる。
【0014】
さらに別の実施態様では、第３の成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。この成長ホルモン受容体アンタゴニストは、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した１つのアミノ酸がＴ１４２であり、システインに変異した２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、システインに変異した１つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子である、ポリエチレングリコール分子と、を含む。そして、システインに変異した２つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａ直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールを含み、そしてヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが識別ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子に対して少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化され、およびヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが識別ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。ポリエチレングリコール分子は、遊離のスルフヒドリル基に結合するためのマレミド基を含んでも良い。本実施態様はまた、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療するための方法であって、記載された組成物の有効量を患者に投与する工程を含む方法を含んでも良い。疾患または状態には、高レベルの成長ホルモン受容体、高レベルのプロラクチン受容体、または高レベルの成長ホルモン受容体とプロラクチン受容体の両方を発現する癌が含まれても良い。癌には、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌が含まれ得る。この実施態様は、アミノ酸Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔがさらにシステインに変異しており、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を阻止するように作用する変異体も含むことができる。この変異体は、有効量の開示された組成物を患者に投与する工程を含む、先端巨大症を治療するための方法に使用することができる。
【0015】
前述の概念および以下で詳細に説明する追加の概念のすべての組み合わせ（これらの概念が相互に矛盾しないことを条件とする）は、本明細書に開示された発明的主題の一部であると考えられ、本明細書に記載された利益を達成するために実施することができることを理解すべきである。開示されたシステム、デバイス、および方法の追加の特徴および側面は、以下の実施例の詳細な説明を読んで理解すると、当業者には明らかになるだろう。当業者であれば理解できるように、本明細書に開示されているものの範囲および精神から逸脱することなく、さらなる実施例が可能である。したがって、図面および関連する説明は、例示的なものであり、本質的に制限的なものではないとみなされるべきである。
【図面の簡単な説明】
【0016】
本明細書に組み込まれ、本明細書の一部を構成する添付の図面は、開示された発明的主題の１つ以上の例示的な実装を模式的に示しており、上に与えられた一般的な説明および下に与えられた詳細な説明とともに、開示された主題の原理を説明するのに役立つものであり、以下のとおりである。
【0017】
【図1C】図１Ｃは、非ＰＥＧ化ｈＧＨアンタゴニストＧ１２０Ｋ（Ａ）によるＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激の阻害を示すウエスタンブロット分析であり、ｈＧＨアンタゴニストのｎＭ濃度の増加（２．５ｎＭ ｈＧＨ）
【図2C】図２Ｃは、ＰＥＧ化されたｈＧＨアンタゴニストＧ１２０Ｋ（Ｄ）によるＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激の阻害を示すウエスタンブロット分析であり、ｈＧＨアンタゴニストのｎＭ濃度の増加（２．５ｎＭ ｈＧＨ）
【図3A】図３Ａは、ＰＥＧ化ｈＧＨアンタゴニストＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）によるＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激の阻害を描いた棒グラフであり、アンタゴニストの濃度をｘ軸に、阻害率をｙ軸に表す。
【図3B】図３Ｂは、ＰＥＧ化ｈＧＨアンタゴニストＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）によるＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激の阻害を示すグラフであり、アンタゴニストの濃度がｘ軸で表され、阻害率がｙ軸で表す。
【図3C】図３Ｃは、ＰＥＧ化ｈＧＨアンタゴニストＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）によるＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激の阻害を示すウエスタンブロット分析であり、ｈＧＨアンタゴニストのｎＭ濃度の増加（２．５ｎＭ ｈＧＨ）
【図4A】図４Ａは、ｈＧＨアンタゴニストなし、ｈＧＨアンタゴニストＧ１２０Ｋ（Ａ）、ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、およびｈＧＨアンタゴニストＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）の存在下での２４時間後の細胞生存率を示すグラフであり、サンプルの種類がｘ軸（対照、対照＋ｈＧＨ、対照＋ドキソルビシン、対照＋ドキソルビシン＋ｈＧＨ）で表され、成長率がｙ軸で表す。
【図4B】図４Ｂは、ｈＧＨアンタゴニストなし、ｈＧＨアンタゴニストＧ１２０Ｋ（Ａ）、ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、およびｈＧＨアンタゴニストＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）の存在下での４８時間後の細胞生存率を示すグラフであり、サンプルの種類がｘ軸（対照、対照＋ｈＧＨ、対照＋ドキソルビシン、対照＋ドキソルビシン＋ｈＧＨ）で表され、成長率がｙ軸で表す。
【図4C】図４Ｃは、ｈＧＨアンタゴニストなし、ｈＧＨアンタゴニストＧ１２０Ｋ（Ａ）、ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、アンタゴニストＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）の存在下での７２時間後の細胞生存率を示すグラフであり、サンプルの種類をｘ軸（対照、対照＋ｈＧＨ、対照＋ドキソルビシン、対照＋ドキソルビシン＋ｈＧＨ）で表し、成長率をｙ軸で表す。
【図4D】図４Ｄは、ｈＧＨアンタゴニストなし、ｈＧＨアンタゴニストＧ１２０Ｋ（Ａ）、ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、ｈＧＨアンタゴニストＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）の存在下での９６時間後の細胞生存率を示すグラフであり、ｘ軸にサンプルタイプを表し（対照、対照＋ｈＧＨ、対照＋ドキソルビシン、対照＋ドキソルビシン＋ｈＧＨ）、ｙ軸に成長率を表す。
【図6A】図６Ａは、ｈＧＨアンタゴニストなしおよびｈＧＨアンタゴニストＧ１２０Ｋ（Ａ）を用いた基底膜阻害（侵襲）アッセイの結果を示す棒グラフであり、サンプルの種類をｘ軸に表し（対照、対照＋ｈＧＨ、対照＋ドキソルビシン、対照＋ドキソルビシン＋ｈＧＨ）、阻害率をｙ軸に表す。
【図6B】図６Ｂは、ｈＧＨアンタゴニストなしおよびｈＧＨアンタゴニストＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）を用いた基底膜阻害（侵襲）アッセイの結果を示す棒グラフであり、サンプルの種類がｘ軸（対照、対照＋ｈＧＨ、対照＋ドキソルビシン、対照＋ドキソルビシン＋ｈＧＨ）で表され、阻害率がｙ軸で表す。
【図6C】図６Ｃは、ｈＧＨアンタゴニストを使用せず、アンタゴニストＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）を使用した基底膜阻害（侵襲）アッセイの結果を示す棒グラフであり、サンプルの種類をＸ軸に表し（対照、対照＋ｈＧＨ、対照＋ドキソルビシン、対照＋ドキソルビシン＋ｈＧＨ）、阻害率をＹ軸に表す。
【発明を実施するための形態】
【0018】
以下、実施例に関し、図を参照して説明する。詳細な説明では、様々な要素や構造を参照するために、参照数字が使用される。以下の詳細な説明には、説明のために多くの具体的な内容が含まれるが、当業者であれば、以下の詳細に対する多くの変形および変更が、開示された発明の主題の範囲内にあることを理解するだろう。したがって、以下の実施例は、特許請求の範囲の主題に対する一般性を損なうことなく、また制限を課すことなく記載される。
【0019】
本発明は、主に治療薬、特に癌治療薬として使用するための新規なヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）アンタゴニストを提供する。米国特許出願第１６／２１６，２３０号（ＵＳ２０１９／００９９４９７として公開）は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれており、所定の位置でペジル化されたｈＧＨアンタゴニスト分子の調製を開示する。本発明のｈＧＨアンタゴニストは、典型的には、既知のｈＧＨアンタゴニストであるｈＧＨ Ｇ１２０Ｋの１つ以上の選択されたアミノ酸をシステインに変異させ、次いで、システインを化学的に活性化されたポリエチレングリコール分子に結合させることによって作られる。置換されたシステインの位置は、ポリエチレングリコールとの結合後にｈＧＨ受容体結合活性の損失が最小限になるように選択された。また、ＰＥＧの大きさや数は、腎臓での分子のろ過を防ぎ、インビボでの半減期を長くするために選択した。
【0020】
開示されたｈＧＨアンタゴニストの調製における２つの重要な変数：（ｉ）ＰＥＧの結合に使用するアミノ酸の位置、（ｉｉ）結合したＰＥＧのサイズとタイプが含まれる。初期の研究では、タンパク質の表面にある複数のリジンに、比較的小さなＰＥＧ（例えば約５ｋＤａ）をランダムに結合させることで、同様の組成物を作成した。この方法では、タンパク質のインビボでの半減期を長くすることに成功したが、タンパク質の受容体に対する親和性が大きく低下した。最近の実験では、タンパク質の特定のアミノ酸部位にＰＥＧ分子を付加する方法が用いられる。部位特異的なＰＥＧ化に使用される２つの一般的な方法：（ｉ）低ｐＨ還元的アミノ化によりタンパク質のＮ－末端アミンにＰＥＧを付加する方法、（ｉｉ）タンパク質にもともと存在する、あるいは特定の位置に設計されたシステインのチオール基にＰＥＧを付加する方法、がある。その他の方法としては、非天然アミノ酸へのＰＥＧ付加、インテイン融合タンパク質を用いたタンパク質Ｃ末端へのＰＥＧ付加、トランスアミナーゼ触媒を用いたアクセス可能なグルタミンへのＰＥＧ付加などがある。
【0021】
本発明では、２つの異なるタイプまたはクラスのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子が利用される。第１のクラスのＰＥＧは、重合によって調製され、インビボでの半減期を長くするためにタンパク質を修飾するのに有用である。この種のＰＥＧは、もともと多分散であり、平均分子量の周りに分子量製品の分布があることを意味する。ＰＥＧには、２０ｋＤａの直鎖状ＰＥＧ（Ｌａｙｓｏｎ Ｂｉｏ，ＭＰＥＧ－ＭＡＬ－２０，０００）、４０ｋＤａの分岐状ＰＥＧ（ＮＯＦ，Ｓｕｎｂｒｉｇｈｔ ＧＬ２－４００ＭＡ）、および直鎖状４０ｋＤａＰＥＧ（ＮＯＦ，Ｓｕｎｂｒｉｇｈｔ ＭＥ－４００ＭＡ）がある。これらのＰＥＧはそれぞれ、変異タンパク質の遊離のスルフヒドリル基に結合するためのマレイミド基を含む。ポリエチレングリコールの第２のクラスは、「離散型」ＰＥＧ（ｄＰＥＧ（登録商標）、Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ）である。これらのｄＰＥＧ（登録商標）は純粋な単一ＰＥＧ分子であり、各ｄＰＥＧ（登録商標）種が特定の構造と分子量を持つ純粋な単一化合物となるように、段階的に有機化学的に調製される。典型的には、遊離チオールにカップリングするためのマレイミド基を含む、本発明で使用されるｄＰＥＧには、以下：分子量４４７３ダルトンの３分岐分子で、各分岐の末端にカルボキシレートアニオンを有するもの（Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ ＃１０４５１，ＭＡＬ－ｄＰＥＧＡ）；分子量４２９９ダルトンの中性３分岐分子（Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ ＃４２２９，ＭＡＬ－ｄＰＥＧＢ）、分子量８３２４の中性９分岐分子（Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ ＃１０４８４、ＭＡＬ－ｄＰＥＧＥ）、および分子量１５５９２の中性９分岐分子（Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ ＃１１４８７、ＭＡＬ－ｄＰＥＧＦ）が含まれ得る。
【0022】
これらのＰＥＧ化アンタゴニストのうちの特定のものをメラノーマ細胞を用いて試験し、これらの分子がｈＧＨによるｈＧＨ受容体の活性化を阻害する能力、これらの細胞を化学療法処理に感作する能力、ｈＧＨによって刺激される基底膜浸潤を阻害する能力、およびｈＧＨによって刺激される非付着性メラノーマ細胞のコロニー形成を阻害する能力を決定した。以下の表Ｉは、本明細書に開示された特定のヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）アンタゴニストの名称および略語を含む。
【表1】
【0023】
ｈＧＨのＧ１２０Ｋ変異は、ホルモンをアンタゴニストに変化させるものである。Ｔ１４２ＣまたはＨ１５１Ｃ変異体を含むシングル変異体は、付加されたシステインを介して４０ｋＤａの２分岐ポリエチレングリコール（ＧＬ２－４００ＭＡ）に結合した。Ｎ９９ＣとＴ１４２Ｃ、Ｈ１５１ＣとＴ１４２Ｃのいずれかを含むダブル変異体は、両方のシステインの位置が、それぞれの枝の端にカルボキシル基を持つ４．５ｋＤａの３分岐ポリエチレングリコールに結合した。
【0024】
競合ＥＬＩＳＡ法によるｈＧＨ受容体への相対的な親和性の決定
システインに変異させ、その後ＰＥＧ化したＧ１２０Ｋのアミノ酸位置は、アミノ酸アクセス性と構造エネルギーの基準に基づいて選択した（米国特許出願番号１６／２１６，２３０参照）。ＰＥＧ化された変異体はすべて同じ方法で選択されたにもかかわらず、ｈＧＨ受容体に対するＰＥＧ化された変異体の親和性には違いがある（米国特許出願番号１６／２１６，２３０、表２を参照、この表は本明細書で表２としても再現される）。ｄＰＥＧＡで置換された単一変異体の相対的な結合親和性は、ｈＧＨの親和性の２０％から１００％の間で変化した。
システインに変異させ、その後ＰＥＧ化したＧ１２０Ｋのアミノ酸位置は、アミノ酸アクセス性と構造エネルギーの基準に基づいて選択した（米国特許出願番号１６／２１６，２３０参照）。ＰＥＧ化された変異体はすべて同じ方法で選択されたにもかかわらず、ｈＧＨ受容体に対するＰＥＧ化された変異体の親和性には違いがある（米国特許出願番号１６／２１６，２３０、表２を参照、この表は本明細書で表２としても再現される）。ｄＰＥＧＡで置換された単一変異体の相対的な結合親和性は、ｈＧＨの親和性の２０％から１００％の間で変化した。
【0025】
一連の類似したｄＰＥＧの中では、ＰＥＧ置換基の大きさが受容体結合親和性に違いをもたらし（下記表２参照）、大きいｄＰＥＧＥ（８．３ｋＤａ）、およびｄＰＥＧＦ（１５．６ｋＤａ）は、小さいｄＰＥＧＡ（４．５ｋＤａ）またはｄＰＥＧＢ（４．３ｋＤａ）よりも結合力が低いことがわかった。しかし、ｈＧＨ受容体の結合親和性を予測するには、ＰＥＧのサイズだけではなく、ＰＥＧの構造も重要である。１５．６ｋＤａのｄＰＥＧＦのＮ９９Ｃ、Ｔ１４２Ｃ、Ｈ１５１Ｃを９つの枝で置換した変異体は、ｈＧＨ受容体にそれぞれ４％、２０％、および４％の相対親和性で結合する。一方、同じ３つの変異体に４０ｋＤａのＰＥＧ（ＧＬ２－ＭＡ、２分岐）を結合させたものは、いずれもｈＧＨの５０％の親和性で受容体に結合した。
１受容体結合活性は、組換え受容体をプレートに結合させ、コーティングされたプレートへのビオチン－ｈＧＨの結合を５０％阻害するのに必要な各サンプルの濃度（Ｉ５０）を決定する競合ＥＬＩＳＡを用いて測定した。表の項目は、１００％と定義されたｈＧＨのそれに対するＩ５０ｓを示しており、有効数字１桁に丸めてある。ほとんどの変異体では単一の競合ＥＬＩＳＡのみが実施され、推定相対標準偏差は２５％であった。ＮＴと書かれた項目は、このアッセイではテストされていない。
２ｄＰＥＧＡは分子量４４７３ダルトンの３分岐分子で、各分岐の末端にカルボキシレートアニオンを持ち、ｄＰＥＧＢは分子量４２９９ダルトンの中性３分岐分子、ｄＰＥＧＥは分子量８３２４の中性９分岐分子、およびｄＰＥＧＦは分子量１５，５９２の中性９分岐分子である。
３これらの反応は、ダブルＰＥＧ化された製品には進行しなかった。
【表2】
２ｄＰＥＧＡは分子量４４７３ダルトンの３分岐分子で、各分岐の末端にカルボキシレートアニオンを持ち、ｄＰＥＧＢは分子量４２９９ダルトンの中性３分岐分子、ｄＰＥＧＥは分子量８３２４の中性９分岐分子、およびｄＰＥＧＦは分子量１５，５９２の中性９分岐分子である。
３これらの反応は、ダブルＰＥＧ化された製品には進行しなかった。
【0026】
ＰＥＧ化ｈＧＨアンタゴニストのｈＧＨによるＳｔａｔ５リン酸化の刺激を抑制する能力の決定
４つのペジル化変異体アンタゴニストを選択し、３つのヒト癌細胞株におけるＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激を単一のアンタゴニスト濃度で阻害する能力を試験した。下記の表３に示されるように、これらの変異体は、ＩＭ９細胞株を用いたＨ１５１Ｃ－ＧＬ２を除いて、５０ｎＭですべて有効なアンタゴニストであった。
１Ｓｔａｔ５のリン酸化は、細胞を２．５ｎＭのｈＧＨ＋５０ｎＭのアンタゴニストサンプルとインキュベートした後、ＥＬＩＳＡで測定した。
２使用した細胞株は以下の通りである：
－ＩＭ９；ヒトリンパ芽球、形質転換
－ＰＡＮＣ１；ヒト膵臓腺癌
－ＭＡＬＭＥ３Ｍ；メラノーマ
４つのペジル化変異体アンタゴニストを選択し、３つのヒト癌細胞株におけるＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激を単一のアンタゴニスト濃度で阻害する能力を試験した。下記の表３に示されるように、これらの変異体は、ＩＭ９細胞株を用いたＨ１５１Ｃ－ＧＬ２を除いて、５０ｎＭですべて有効なアンタゴニストであった。
【表3】
２使用した細胞株は以下の通りである：
－ＩＭ９；ヒトリンパ芽球、形質転換
－ＰＡＮＣ１；ヒト膵臓腺癌
－ＭＡＬＭＥ３Ｍ；メラノーマ
【0027】
ペギル化変異体ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２－ＧＬ２（Ｄ）およびＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）を、非ペギル化変異体Ｇ１２０Ｋ（Ａ）を対照として、メラノーマ細胞でのさらなる試験のために選択した。図１Ａ－１Ｃ、２Ａ－２Ｃ、および３Ａ－３Ｃは、選択した化合物によるＳｔａｔ５リン酸化刺激の効果的な阻害を異なる濃度で示す。図１Ａ－１Ｂ、２Ａ－２Ｂ、および３Ａ－３Ｂは、５０％の阻害には、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）の必要な濃度よりも２．７倍高いＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）の濃度が必要であることを示すＥＬＩＳＡによって生成されたデータを提供する。したがって、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）は、Ｇ１２０Ｋの約４０％の阻害力を持つ。図１Ｃ、２Ｃ、および３Ｃには、図に示したＥＬＩＳＡの結果と一致するウエスタンブロットのデータを示す。試験した最高濃度（２００ｎＭ）で、Ｔ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）は、ＥＬＩＳＡで測定したＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激を５０％阻害した（図２Ａ～２Ｂ）。一方、１００ｎｍのＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）はｈＧＨ刺激を完全に阻害した（図３Ａ－３Ｂ）。これらの結果は、可溶性ｈＧＨ受容体に結合するＰＥＧ化変異体ｈＧＨアンタゴニストの相対的な能力は、異なる癌細胞株におけるＳｔａｔ５リン酸化のｈＧＨ刺激を阻害するこれらのアンタゴニストの能力を予測するものではないことを示す。
【0028】
ＰＥＧ化ｈＧＨアンタゴニストの抗がん作用と相関するインビトロアッセイでの挙動
細胞の生存率
メラノマ細胞を、ＰＥＧ化された変異型ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２－ＧＬ２（Ｄ）およびＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）と、対照として非ＰＥＧ化Ｇ１２０Ｋ変異体（Ａ）とを、ｈＧＨおよび化学療法薬ドキソルビシンの存在下および非存在下でインキュベートした。図４Ａ～４Ｄに示すように、２４時間後、４８時間後、７２時間後、および９６時間後の細胞生存率を測定した。成長ホルモンは、細胞が化学療法剤を輸出する能力を高めることが分かっており、ｈＧＨアンタゴニストはこの増強を阻止すると予測される［７］。したがって、ここで開示されたＰＥＧ化変異体ｈＧＨアンタゴニストは、成長ホルモンで処理された細胞の生存率を低下させると予想された。成長ホルモンで処理した細胞において、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）は、９６時間後の細胞の生存率を有意に低下させた（図４Ｄ）。アンタゴニストのＧ１２０Ｋ（Ａ）とＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）では、生存率に差は見られなかった。ドキソルビシンで処理した細胞では、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）が７２時間後の細胞生存率を有意に低下させた（図４Ｃ）。この場合も、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）およびＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）は有意な効果を示さなかった。ｈＧＨとドキソルビシンを併用した細胞では、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）、Ｔ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）のいずれも、わずか２４時間後に細胞生存率が有意に低下した（ＦＩＧ．４Ａ）。
細胞の生存率
メラノマ細胞を、ＰＥＧ化された変異型ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２－ＧＬ２（Ｄ）およびＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）と、対照として非ＰＥＧ化Ｇ１２０Ｋ変異体（Ａ）とを、ｈＧＨおよび化学療法薬ドキソルビシンの存在下および非存在下でインキュベートした。図４Ａ～４Ｄに示すように、２４時間後、４８時間後、７２時間後、および９６時間後の細胞生存率を測定した。成長ホルモンは、細胞が化学療法剤を輸出する能力を高めることが分かっており、ｈＧＨアンタゴニストはこの増強を阻止すると予測される［７］。したがって、ここで開示されたＰＥＧ化変異体ｈＧＨアンタゴニストは、成長ホルモンで処理された細胞の生存率を低下させると予想された。成長ホルモンで処理した細胞において、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）は、９６時間後の細胞の生存率を有意に低下させた（図４Ｄ）。アンタゴニストのＧ１２０Ｋ（Ａ）とＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）では、生存率に差は見られなかった。ドキソルビシンで処理した細胞では、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）が７２時間後の細胞生存率を有意に低下させた（図４Ｃ）。この場合も、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）およびＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）は有意な効果を示さなかった。ｈＧＨとドキソルビシンを併用した細胞では、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）、Ｔ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）のいずれも、わずか２４時間後に細胞生存率が有意に低下した（ＦＩＧ．４Ａ）。
【0029】
基底膜の移動
癌細胞の特徴として、基底膜を通過して移動する能力が知られる。この移動は、ドキソルビシンのような化学療法剤によって阻害されることがある。癌細胞などの細胞の基底膜移動を測定する一般的な方法を図５に示す。図５に示す方法の第１工程では、無血清培地中の細胞懸濁液を上部チャンバに入れ、その底部には基底膜層が含まれる。上部チャンバーは、化学誘引剤を含む媒体を含む下部チャンバーに置かれる。図５に示す方法の第２工程では、１２～１４時間の期間後に、侵襲性細胞が基底膜層を通過して膜の下部に付着し、非侵襲性細胞が上部チャンバに残る。図５に示す方法の第３工程では、細胞剥離バッファーを下部チャンバーに加えることにより、侵襲性細胞を膜から分離する。最後に、図５に示した方法の第４の工程では、侵襲性細胞が溶解され、ＣｙＱｕａｎｔ（登録商標）ＧＲ蛍光色素を用いて定量される。
癌細胞の特徴として、基底膜を通過して移動する能力が知られる。この移動は、ドキソルビシンのような化学療法剤によって阻害されることがある。癌細胞などの細胞の基底膜移動を測定する一般的な方法を図５に示す。図５に示す方法の第１工程では、無血清培地中の細胞懸濁液を上部チャンバに入れ、その底部には基底膜層が含まれる。上部チャンバーは、化学誘引剤を含む媒体を含む下部チャンバーに置かれる。図５に示す方法の第２工程では、１２～１４時間の期間後に、侵襲性細胞が基底膜層を通過して膜の下部に付着し、非侵襲性細胞が上部チャンバに残る。図５に示す方法の第３工程では、細胞剥離バッファーを下部チャンバーに加えることにより、侵襲性細胞を膜から分離する。最後に、図５に示した方法の第４の工程では、侵襲性細胞が溶解され、ＣｙＱｕａｎｔ（登録商標）ＧＲ蛍光色素を用いて定量される。
【0030】
メラノーマ細胞とｈＧＨアンタゴニストＧ１２０Ｋ（Ａ）、Ｔ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）を用いた基底膜阻害アッセイの結果を図６Ａ～６Ｃに示す。Ｇ１２０Ｋ（Ａ）と、ＰＥＧ化された阻害剤であるＴ１４２Ｃ－ＧＬ（Ｄ）およびＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）の結果は同様である。メラノーマ細胞にドキソルビシンを添加すると、ｈＧＨアンタゴニストを添加した場合としない場合で、基底膜の移動が阻害されることがわかった。アンタゴニストを加えずにドキソルビシンで処理した細胞にｈＧＨを加えると、この阻害が著しく減少する。基本的に、ｈＧＨはドキソルビシンの効果を打ち消し、おそらく細胞を刺激してドキソルビシンを送り出すことで、メラノーマ細胞が移動の増加を示すことを可能にする。アンタゴニスト＋ドキソルビシン＋ｈＧＨで細胞を処理すると、アンタゴニストがｈＧＨの効果を逆転させ、基底膜の移動阻害はｈＧＨがない場合に見られた高い値に戻ってしまう。
【0031】
非接着性メラノーマ細胞のコロニー形成
上皮細胞から間葉系細胞への移行は、がんのメタセシスと関連する。非接着は上皮－間葉転換の重要なマーカーである。接着したメラノーマ細胞をｈＧＨまたはｈＧＨ＋ｈＧＨアンタゴニストのいずれかで処理し、非接着細胞をコロニー形成能力についてアッセイした（図７Ａ～７Ｈ）。ｈＧＨの非存在下（図７Ａ～７Ｄに示すプレート１～４）では、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）、Ｔ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）の有無にかかわらず、コロニーの数はほぼ同じであった。対照（図７Ｅに示すプレート５）にｈＧＨを加えたところ、コロニー形成が明らかに増加した。また、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）にｈＧＨを加えたものでは、コロニー形成が増加した（図７Ｆに示すプレート６）。しかし、ｈＧＨのアンタゴニストであるＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）またはＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）のいずれかをｈＧＨに加えても、コロニー形成は明らかに減少した。このように、２つのペグ型アンタゴニストは、非付着細胞の生存率を高める成長ホルモンの能力を逆転させる。
上皮細胞から間葉系細胞への移行は、がんのメタセシスと関連する。非接着は上皮－間葉転換の重要なマーカーである。接着したメラノーマ細胞をｈＧＨまたはｈＧＨ＋ｈＧＨアンタゴニストのいずれかで処理し、非接着細胞をコロニー形成能力についてアッセイした（図７Ａ～７Ｈ）。ｈＧＨの非存在下（図７Ａ～７Ｄに示すプレート１～４）では、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）、Ｔ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）、Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）の有無にかかわらず、コロニーの数はほぼ同じであった。対照（図７Ｅに示すプレート５）にｈＧＨを加えたところ、コロニー形成が明らかに増加した。また、Ｇ１２０Ｋ（Ａ）にｈＧＨを加えたものでは、コロニー形成が増加した（図７Ｆに示すプレート６）。しかし、ｈＧＨのアンタゴニストであるＴ１４２Ｃ－ＧＬ２（Ｄ）またはＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２（Ｇ）のいずれかをｈＧＨに加えても、コロニー形成は明らかに減少した。このように、２つのペグ型アンタゴニストは、非付着細胞の生存率を高める成長ホルモンの能力を逆転させる。
【0032】
プロラクチン受容体への結合
ヒトプロラクチンとｈＧＨはともにプロラクチン受容体に結合して活性化する。この受容体の活性化は、乳癌の病因や挙動に関与しているとされる［８］。ＰＥＧ化ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２Ｃ－ＧＬ２、Ｈ１５１Ｃ－ＧＬ２、Ｎ９９Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２、およびＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２の競合ＥＬＩＳＡアッセイにおける可溶性プロラクチン受容体への結合により、ｈＧＨおよび表２に記載のＰＥＧ化アンタゴニスト（米国特許出願番号１６／２１６，２３０、表２も参照）は、下記の表４に示す相対的な結合親和性でプロラクチン受容体に結合することが決定された。
ヒトプロラクチンとｈＧＨはともにプロラクチン受容体に結合して活性化する。この受容体の活性化は、乳癌の病因や挙動に関与しているとされる［８］。ＰＥＧ化ｈＧＨアンタゴニストＴ１４２Ｃ－ＧＬ２、Ｈ１５１Ｃ－ＧＬ２、Ｎ９９Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２、およびＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２の競合ＥＬＩＳＡアッセイにおける可溶性プロラクチン受容体への結合により、ｈＧＨおよび表２に記載のＰＥＧ化アンタゴニスト（米国特許出願番号１６／２１６，２３０、表２も参照）は、下記の表４に示す相対的な結合親和性でプロラクチン受容体に結合することが決定された。
【表4】
【0033】
したがって、これらのアンタゴニストは、ｈＧＨまたはプロラクチンのいずれかによってプロラクチン受容体が活性化されることによって媒介される癌細胞の成長促進を阻害することが期待される。これは、プロラクチン受容体に結合しない現在の治療用成長ホルモンアンタゴニストＰｅｇｖｉｓｏｍａｎｔ（ＳＯＭＡＶＥＲＴ（登録商標））とは対照的である［８］－［９］。
【0034】
成長ホルモンアンタゴニストの先端巨大症治療薬としての可能性
ＰＥＧ化された成長ホルモンアンタゴニストＰｅｇｖｉｓｏｍａｎｔ（ＳＯＭＡＶＥＲＴ（登録商標））が先端巨大症の治療に承認された。この分子は、ｈＧＨ－Ｇ１２０Ｋと８つの追加変異からなり、ランダムなリジン残基に４～６個の５ｋＤａの直鎖状ＰＥＧ分子が結合する。８つの追加変異は、可溶性成長ホルモン受容体に対する薬剤の親和性を高め、プロラクチン受容体に対する親和性を取り除く。ペグビソマントは、そのランダムに結合したＰＥＧ分子がｈＧＨＲに対する親和性を約２０倍低下させるにもかかわらず、先端巨大症の有効な治療法である〔１０〕。ここに開示されるｈＧＨアンタゴニストは、１つまたは２つの特異的に置換されたＰＥＧＳを有することで、受容体親和性を約２倍にしか低下させず、これらの化合物は先端巨大症治療薬としてより効果的である可能性がある。しかしながら、先端巨大症治療薬を準備するためには、開示されたペジル化アンタゴニストは、オフターゲットのプロラクチン受容体結合を防ぐために修飾され、以下の変異：Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔが必要となる［１１］。
ＰＥＧ化された成長ホルモンアンタゴニストＰｅｇｖｉｓｏｍａｎｔ（ＳＯＭＡＶＥＲＴ（登録商標））が先端巨大症の治療に承認された。この分子は、ｈＧＨ－Ｇ１２０Ｋと８つの追加変異からなり、ランダムなリジン残基に４～６個の５ｋＤａの直鎖状ＰＥＧ分子が結合する。８つの追加変異は、可溶性成長ホルモン受容体に対する薬剤の親和性を高め、プロラクチン受容体に対する親和性を取り除く。ペグビソマントは、そのランダムに結合したＰＥＧ分子がｈＧＨＲに対する親和性を約２０倍低下させるにもかかわらず、先端巨大症の有効な治療法である〔１０〕。ここに開示されるｈＧＨアンタゴニストは、１つまたは２つの特異的に置換されたＰＥＧＳを有することで、受容体親和性を約２倍にしか低下させず、これらの化合物は先端巨大症治療薬としてより効果的である可能性がある。しかしながら、先端巨大症治療薬を準備するためには、開示されたペジル化アンタゴニストは、オフターゲットのプロラクチン受容体結合を防ぐために修飾され、以下の変異：Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔが必要となる［１１］。
【0035】
上記の開示によって示されるように、本発明の組成物は、治療用途に有用な新規のヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供するものである。参考のために、識別ＩＤ番号：１は、ヒト成長ホルモンＷＴｈＧＨのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：２で、本明細書でｈＧＨと呼ばれるヒト成長ホルモンＷＴｈＧＨ（成熟型）のアミノ酸配列を提供する。本明細書でＧ１２０Ｋと呼ばれるヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストｈＧＨ－Ｇ１２０Ｋは、本発明の組成物のための親受容体アンタゴニストであり、参照目的で、識別ＩＤ番号：３は、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０ＫのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：４は、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ（成熟型）のアミノ酸配列を提供する。先に述べたように、本明細書で使用される一文字のアミノ酸略語は、ＩＵＰＡＣ形式に従う。
【0036】
本明細書に開示される第１の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含み、アミノ酸Ｔ３がシステインに変異されており、ポリエチレングリコール分子がシステイン変異に結合されているものである。識別ＩＤ番号：５は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｔ３ＣのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：６は、配列ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｔ３Ｃのアミノ酸を提供する。
【0037】
本明細書で開示される第２の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｅ３９がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子がシステイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：７は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｅ３９ＣのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：８は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｅ３９Ｃのアミノ酸配列を提供する。
【0038】
本明細書で開示される第３の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｐ４８がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子がシステイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：９は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｐ４８ＣのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：１０は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｐ４８Ｃのアミノ酸配列を提供する。
【0039】
本明細書で開示される第４の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｑ６９がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子がシステイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：１１は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｑ６９ＣのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：１２は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｑ６９Ｃのアミノ酸配列を提供する。
【0040】
本明細書で開示される第５の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｎ９９がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子がシステイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：１３は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｎ９９ＣのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：１４は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｎ９９Ｃのアミノ酸配列を提供する。
【0041】
本明細書で開示される第６の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｔ１４２がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子がシステイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：１５は、本明細書でＴ１４２Ｃ－ＧＬ２と呼ばれるヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｔ１４２Ｃ－ＧＬ２－４００ＭＡのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：１６は、本明細書でＴ１４２Ｃ－ＧＬ２と呼ばれるヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｔ１４２Ｃ－ＧＬ２－４００ＭＡのアミノ酸配列を提供する。
【0042】
本明細書で開示される第７の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｈ１５１がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子がシステイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：１７は、本明細書でＨ１５１Ｃ－ＧＬ２と呼ばれるヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｈ１５１Ｃ－ＧＬ２－４００ＭＡのＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：１８は、本明細書でＨ１５１Ｃ－ＧＬ２と呼ばれるヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｈ１５１Ｃ－ＧＬ２－４００ＭＡのアミノ酸配列を提供する。
【0043】
本明細書で開示される第８の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｎ９９およびＨ１５１がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子が各システイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：１９は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｎ９９Ｃ－Ｈ１５１Ｃ－ｄＰＥＧＡ２のＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：２０は、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｎ９９Ｃ－Ｈ１５１Ｃ－ｄＰＥＧＡ２のアミノ酸配列を提供する。
【0044】
本明細書で開示される第９の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｔ１４２およびＮ９９がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子が各システイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：２１は、本明細書でＮ９９Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２と呼ばれるヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｎ９９Ｃ－Ｔ１４２－ｄＰＥＧＡ２のＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：２２は、本明細書でＮ９９Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２と呼ばれるヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｎ９９Ｃ－Ｔ１４２－ｄＰＥＧＡ２のアミノ酸配列を提供する。
【0045】
本明細書で開示される第１０の実施例のヒト成長ホルモンアンタゴニストは、アミノ酸Ｔ１４２およびＨ１５１がシステインに変異しており、ポリエチレングリコール分子が各システイン変異に結合しているヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋを含む。識別ＩＤ番号：２３は、本明細書でＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２と呼ばれる、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２のＤＮＡ配列を提供し、識別ＩＤ番号：２４は、本明細書でＨ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２と呼ばれる、ヒト成長ホルモンアンタゴニストＧ１２０Ｋ－Ｈ１５１Ｃ－Ｔ１４２Ｃ－ｄＰＥＧＡ２のアミノ酸配列を提供する。
【0046】
本出願で引用されているすべての文献および類似資料（特許、特許出願、論文、書籍、論説、ウェブページを含むがこれらに限定されない）は、そのような文献および類似資料の形式にかかわらず、その全体が参照により明示的に組み込まれる。組み込まれた文献および類似資料のうち１つ以上が、定義された用語、用語の使い方、記載された技術などを含めて、本願と異なる、または矛盾する場合には、本願が優先される。
【0047】
先に述べたように、また本明細書で使用されているように、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうでないことを示していない限り、単数形だけでなく複数形の両方を指す。本明細書で使用される用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、または「によって特徴付けられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と同義であり、包括的またはオープンエンドであり、追加の未記録の要素または方法工程を除外するものではない。本明細書に記載されているものと同様または同等の多くの方法および材料を使用することができるが、特定の好適な方法および材料が本明細書に記載される。文脈が他を示さない限り、エンドポイントによる数値範囲の再記述は、その範囲内に包含されるすべての数値を含む。さらに、「ある実施態様」という表現は、記載された特徴を組み込んだ追加の実施態様の存在を排除すると解釈されることを意図したものではない。さらに、反対に明示されていない限り、特定の特性を有する要素または複数の要素を「含む」または「有する」実装は、その特性を有するか否かにかかわらず、追加の要素を含むことができる。
【0048】
本明細書中で使用される「実質的に」および「約」という用語は、処理のばらつきなどによる小さな変動を説明し、考慮するために使用される。例えば、これらの用語は、±５％より少ないかそれと同等、例えば±２％より少ないかそれと同等、例えば±１％より少ないかそれと同等、例えば±０．５％より少ないかそれと同等、例えば±０．２％より少ないかそれと同等、例えば±０．１％より少ないかそれと同等、例えば±０．０５％より少ないかそれと同等、および／または０％を指すことができる。
【0049】
下線および／またはイタリックの見出しおよび小見出しは、便宜上のみ使用され、開示された主題を限定するものではなく、開示された主題の説明の解釈に関連して参照されるものではない。本開示全体を通して記載された様々な実装の要素に対する、当業者に知られている、または後に知られるようになるすべての構造的および機能的等価物は、参照により本明細書に明示的に組み込まれており、開示された主題に包含されることを意図している。さらに、本明細書に開示されているものは、そのような開示が上記の説明に明示的に記載されているかどうかにかかわらず、公に捧げられることを意図していない。
【0050】
開示された本発明の主題を実施するための多くの代替方法があり得る。本明細書に記載された様々な機能および要素は、開示された発明主題の範囲から逸脱することなく、示されたものとは異なって分割されても良い。ここで定義された一般的な原理は、他の実装にも適用することができる。所与のモジュールまたはユニットの異なる数を採用しても良く、所与のモジュールまたはユニットの異なるタイプまたは種類を採用しても良く、所与のモジュールまたはユニットを追加しても良く、所与のモジュールまたはユニットを省略しても良い。
【0051】
前述の概念および本明細書でより詳細に論じられている追加の概念のすべての組み合わせ（そのような概念が相互に矛盾しないことを条件とする）が、開示された発明的主題の一部であることが企図されることを理解すべきである。特に、本開示の末尾に記載されている請求対象物のすべての組み合わせは、本明細書に開示される発明対象物の一部であることが企図される。開示された発明主題が例示され、例示された実施例がある詳細に説明されたが、添付の請求項の範囲をそのような詳細に制限したり、いかなる方法でも制限したりする意図はない。追加の利点や変更点は、当業者には容易に現れるだろう。したがって、開示された本発明の主題は、そのより広い側面において、示され、説明された特定の詳細、代表的な装置および方法、および／または例示的な実施例のいずれにも限定されない。したがって、一般的な発明概念の精神または範囲から逸脱することなく、そのような詳細から逸脱することができる。
【0052】
以下の参考文献は、本願明細書の一部を構成しており、各参考文献は、すべての目的のために、その全体が本明細書に参照として組み込まれる。
１．Ｐａｓｕｔ，Ｇ．ａｎｄ Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｍ．（２０１２）Ｓｔａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｒｔ ｉｎ Ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ： Ｔｈｅ Ｇｒｅａｔ Ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ Ａｃｈｉｅｖｅｄ Ａｆｔｅｒ Ｆｏｒｔｙ Ｙｅａｒｓ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １６１，４６１－４７２．
２．Ｐａｒｖｅｅｎ，Ｓ．ａｎｄ Ｓａｈｏｏ，Ｓ．Ｋ．Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇｓ Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．４５，９６５－９８８．
３．Ａｌｃｏｎｃｅｌ， Ｓ．Ｎ．Ｓ．，Ｂａａｓ，Ａ．Ｓ．ａｎｄ Ｍａｙｎａｒｄ，Ｈ．Ｄ．（２０１１） ＦＤＡ－Ａｐｐｒｏｖｅｄ
Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）－Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｄｒｕｇｓ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２，１４４２－１４４８．
４．Ｋｌｉｎｇ，Ｊ．（２０１３）Ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ：Ａ Ｍｕｌｔｉｐｕｒｐｏｓｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ １１，３５－４３．
５．Ｓｕｓｔａｒｓｉｃ，Ｅ．Ｇ．，Ｊｕｎｎｉｌａ，Ｒ．Ｋ．，ａｎｄ Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．（２０１３）"Ｈｕｍａｎ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｒｅｓｐｏｎｄ ｔｏ ＧＨ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ"Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．４４１：１４４－１５０．
６．Ｂａｓｕ，Ｒ．，Ｗｕ，Ｓ．，ａｎｄ Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．（２０１７－１）"Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ Ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ Ｖｉａ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ Ｐａｔｈｗａｙｓ"Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ８，２１５７９－２１５９８．
７．Ｂａｓｕ，Ｒ．，Ｂａｕｍｇａｅｒｔｅｌ，Ｎ．，Ｗｕ，Ｓ．，ａｎｄ Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．（２０１７－２）"Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ Ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ Ｈｕｍａｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｂｙ Ａｔｔｅｎｕａｔｉｎｇ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＢＣ Ｄｒｕｇ Ｅｆｆｌｕｘ Ｐｕｍｐｓ"Ｈｏｒｍ．Ｃａｎｃ．８，１４３－１５６．
８．Ｘｕ，Ｊ．，Ｓｕｎ，Ｄ．，Ｊｉａｎｇ，Ｊ．，Ｄｅｎｇ．，Ｌ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｙｕ，Ｈ．，Ｂａｈｌ，Ｄ．，Ｌａｎｇｅｎｈｅｉｍ，Ｊ．Ｆ．， Ｃｈｅｎ，Ｗ．Ｙ．，Ｆｕｃｈｓ，Ｓ．Ｙ．，ａｎｄ Ｆｒａｎｋ，Ｓ．Ｊ．（２０１３）"Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ＧＨ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ"Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２７，２６６－２７９．
９．Ｇｏｆｆｉｎ，Ｖ．，Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ，Ｓ．，Ｃａｒｒｉｅｒｅ，Ｏ．，Ｂｅｎｎｅｔ，Ｗ．Ｆ．，Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．，ａｎｄ Ｋｅｌｌｙ，Ｐ．Ａ．（１９９９）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４０，３８５３－３８５６．
１０．Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．，Ｌｉｓｔ，Ｅ．Ｏ．，Ｋｅｌｄｅｒ，Ｂ．，Ｇｏｓｎｅｙ，Ｅ．Ｓ．，ａｎｄ Ｂｅｒｒｙｍａｎ，Ｄ．Ｅ．（２０１４）"Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ（ＧＨ）ａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｈＧＨ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ３８６，３４－４５．
１１．Ｐｒａｄｈａｎａｎｇａ，Ｓ．，Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ，Ｉ．，ａｎｄ Ｒｏｓｓ，Ｒ．Ｊ．Ｍ．（２００２）"Ｐｅｇｖｉｓｏｍａｎｔ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ"Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ２９，１１－１４．
１．Ｐａｓｕｔ，Ｇ．ａｎｄ Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｍ．（２０１２）Ｓｔａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｒｔ ｉｎ Ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ： Ｔｈｅ Ｇｒｅａｔ Ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ Ａｃｈｉｅｖｅｄ Ａｆｔｅｒ Ｆｏｒｔｙ Ｙｅａｒｓ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １６１，４６１－４７２．
２．Ｐａｒｖｅｅｎ，Ｓ．ａｎｄ Ｓａｈｏｏ，Ｓ．Ｋ．Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇｓ Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．４５，９６５－９８８．
３．Ａｌｃｏｎｃｅｌ， Ｓ．Ｎ．Ｓ．，Ｂａａｓ，Ａ．Ｓ．ａｎｄ Ｍａｙｎａｒｄ，Ｈ．Ｄ．（２０１１） ＦＤＡ－Ａｐｐｒｏｖｅｄ
Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）－Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｄｒｕｇｓ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２，１４４２－１４４８．
４．Ｋｌｉｎｇ，Ｊ．（２０１３）Ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ：Ａ Ｍｕｌｔｉｐｕｒｐｏｓｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ １１，３５－４３．
５．Ｓｕｓｔａｒｓｉｃ，Ｅ．Ｇ．，Ｊｕｎｎｉｌａ，Ｒ．Ｋ．，ａｎｄ Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．（２０１３）"Ｈｕｍａｎ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｒｅｓｐｏｎｄ ｔｏ ＧＨ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ"Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．４４１：１４４－１５０．
６．Ｂａｓｕ，Ｒ．，Ｗｕ，Ｓ．，ａｎｄ Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．（２０１７－１）"Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ Ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ Ｖｉａ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ Ｐａｔｈｗａｙｓ"Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ８，２１５７９－２１５９８．
７．Ｂａｓｕ，Ｒ．，Ｂａｕｍｇａｅｒｔｅｌ，Ｎ．，Ｗｕ，Ｓ．，ａｎｄ Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．（２０１７－２）"Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ Ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ Ｈｕｍａｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｂｙ Ａｔｔｅｎｕａｔｉｎｇ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＢＣ Ｄｒｕｇ Ｅｆｆｌｕｘ Ｐｕｍｐｓ"Ｈｏｒｍ．Ｃａｎｃ．８，１４３－１５６．
８．Ｘｕ，Ｊ．，Ｓｕｎ，Ｄ．，Ｊｉａｎｇ，Ｊ．，Ｄｅｎｇ．，Ｌ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｙｕ，Ｈ．，Ｂａｈｌ，Ｄ．，Ｌａｎｇｅｎｈｅｉｍ，Ｊ．Ｆ．， Ｃｈｅｎ，Ｗ．Ｙ．，Ｆｕｃｈｓ，Ｓ．Ｙ．，ａｎｄ Ｆｒａｎｋ，Ｓ．Ｊ．（２０１３）"Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ＧＨ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ"Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２７，２６６－２７９．
９．Ｇｏｆｆｉｎ，Ｖ．，Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ，Ｓ．，Ｃａｒｒｉｅｒｅ，Ｏ．，Ｂｅｎｎｅｔ，Ｗ．Ｆ．，Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．，ａｎｄ Ｋｅｌｌｙ，Ｐ．Ａ．（１９９９）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４０，３８５３－３８５６．
１０．Ｋｏｐｃｈｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．，Ｌｉｓｔ，Ｅ．Ｏ．，Ｋｅｌｄｅｒ，Ｂ．，Ｇｏｓｎｅｙ，Ｅ．Ｓ．，ａｎｄ Ｂｅｒｒｙｍａｎ，Ｄ．Ｅ．（２０１４）"Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ（ＧＨ）ａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｈＧＨ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ３８６，３４－４５．
１１．Ｐｒａｄｈａｎａｎｇａ，Ｓ．，Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ，Ｉ．，ａｎｄ Ｒｏｓｓ，Ｒ．Ｊ．Ｍ．（２００２）"Ｐｅｇｖｉｓｏｍａｎｔ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ"Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ２９，１１－１４．
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図7E】
【図7F】
【図7G】
【図7H】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-11-08
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストであって、
（ａ）ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、および、システインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および
（ｂ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、
（ｉ）システインに変異した前記１つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールであり、および
（ｉｉ）システインに変異した前記２つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールである、前記ポリエチレングリコール分子と、
を含む、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
（ａ）ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した前記１つのアミノ酸がＴ１４２であり、および、システインに変異した前記２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および
（ｂ）前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、
（ｉ）システインに変異した前記１つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールであり、および
（ｉｉ）システインに変異した前記２つのアミノ酸に結合した前記ポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールである、前記ポリエチレングリコール分子と、
を含む、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項2】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ポリエチレングリコール分子が、遊離のスルフヒドリル基に結合するマレミド基を含む、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項3】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１５および２３からなる群からなる群から選択されるＤＮＡ分子と少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化される、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項4】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが、配列ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項5】
ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療する方法であって、請求項１記載の前記組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項6】
請求項５記載の方法において、前記疾患または状態が、高レベルの前記成長ホルモン受容体、高レベルの前記プロラクチン受容体、または高レベルの前記成長ホルモン受容体と前記プロラクチン受容体の両方を発現する癌を含む、方法。
【請求項7】
請求項６記載の方法において、前記癌が、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌を含む、方法。
【請求項8】
請求項１記載の成長ホルモン受容体アンタゴニストにおいて、前記アミノ酸Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔがシステインに変異しており、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を妨げるように作用する、成長ホルモン受容体アンタゴニスト。
【請求項9】
先端巨大症を治療する方法であって、請求項８記載の前記組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、方法。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0010】
ヒトおよび動物実験から得られた証拠は、発癌における成長ホルモン（ＧＨ）の役割を支持する。乳がん、中枢神経系がん、大腸がん、白血病、メラノーマ、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、腎臓がんの９種類のがん細胞６０株における成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）の発現レベルが測定された［５］。大腸と白血病を除くすべての癌種の細胞株で，高いＧＨＲ発現レベルが得られた。メラノーマ細胞株のＧＨＲ発現レベルは例外的に高く、パネル全体に比べて５０倍近く高かった。３種類のメラノーマ細胞をｈＧＨで処理したところ、３種類のうち２種類では、ｈＧＨは増殖を促進し、ＳＴＡＴ５とｍＴＯＲの活性化を誘導した。ＧＨとｓｉＲＮＡでＧＨＲをノックダウンした細胞株が、ヒトメラノーマ細胞の腫瘍進行と上皮間葉転換に及ぼす影響が調査された［６］。この研究では、ｈＧＨが腫瘍の増殖を促進し、ＧＨＲのノックダウンが腫瘍の増殖、移動、浸潤を弱めることが示された。ヒトのメラノーマ細胞の化学療法に対する感受性に対するＧＨＲノックダウンの効果が調査された［７］。この研究では、ｈＧＨが複数のＡＢＣトランスポーターをアップレギュレートし、メラノーマ治療薬であるベムラフェニブのＥＣ５０を増加させることが示された。一方、ＧＨＲのノックダウンは、メラノーマ細胞による薬物の保持を著しく増加させ、細胞増殖を低下させ、薬効を増加させる。したがって、ある種のｈＧＨアンタゴニストをがん治療薬として使用することは有益であると考えられる。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１） 米国特許出願公開第２０１９／００９９４９７号明細書
（特許文献２） 米国特許第７，９４７，４７３号明細書
（特許文献３） 国際公開第１９９７／０１１１７８号
（特許文献４） 米国特許出願公開第２００９／０２０３５８９号明細書
（非特許文献）
（非特許文献１） ＷＡＮＧ ｅｔ ａｌ．"Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｒｅｔａｒｄｓ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｒｏｂａｓｉｎ／ＴＡｇ Ｒａｔ，"Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，０１ Ｍａｒｃｈ ２００８（０１．０３．２００８），Ｖｏｌ．１４９，Ｉｓｓ．３，Ｐｇｓ．１３６６－１３７６．ｅｎｔｉｒｅ ｄｏｃｕｍｅｎｔ
（非特許文献２） ＥＩＪＮＤＥＮ ｅｔ ａｌ．"Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｌｄｉｎｇ， ｄｉｍｅｒｉｓａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ，"Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，０４ Ｊｕｌｙ ２００６（０４．０７．２００６），Ｖｏｌ．１１９，Ｉｓｓ．１５，Ｐｇｓ．３０７８－３０８６．ｅｎｔｉｒｅ ｄｏｃｕｍｅｎｔ
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１） 米国特許出願公開第２０１９／００９９４９７号明細書
（特許文献２） 米国特許第７，９４７，４７３号明細書
（特許文献３） 国際公開第１９９７／０１１１７８号
（特許文献４） 米国特許出願公開第２００９／０２０３５８９号明細書
（非特許文献）
（非特許文献１） ＷＡＮＧ ｅｔ ａｌ．"Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｒｅｔａｒｄｓ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｒｏｂａｓｉｎ／ＴＡｇ Ｒａｔ，"Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，０１ Ｍａｒｃｈ ２００８（０１．０３．２００８），Ｖｏｌ．１４９，Ｉｓｓ．３，Ｐｇｓ．１３６６－１３７６．ｅｎｔｉｒｅ ｄｏｃｕｍｅｎｔ
（非特許文献２） ＥＩＪＮＤＥＮ ｅｔ ａｌ．"Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｌｄｉｎｇ， ｄｉｍｅｒｉｓａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ，"Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，０４ Ｊｕｌｙ ２００６（０４．０７．２００６），Ｖｏｌ．１１９，Ｉｓｓ．１５，Ｐｇｓ．３０７８－３０８６．ｅｎｔｉｒｅ ｄｏｃｕｍｅｎｔ
【手続補正3】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0012】
一つの実施態様は、第一の成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。この成長ホルモン受容体アンタゴニストは、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した１つのアミノ酸がＴ１４２であり、システインに変異した２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子と、を含む。ポリエチレングリコール分子は、遊離のスルフヒドリル基に結合するためのマレミド基を含んでいても良い。システインに変異した１つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子は、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子であっても良い。システインに変異した２つのアミノ酸に結合されたポリエチレングリコール分子は、２つの４０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａ直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンをそれぞれ含む２つの４．５ｋＤａ分岐ポリエチレングリコールであっても良い。ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストは、識別ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子と少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化されていても良い。ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストは、識別ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。本実施態様はまた、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療する方法であって、記載された組成物の有効量を患者に投与する工程を含む方法を含んでも良い。疾患または状態には、高レベルの成長ホルモン受容体、高レベルのプロラクチン受容体、または高レベルの成長ホルモン受容体とプロラクチン受容体の両方を発現する癌が含まれ得る。癌には、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌が含まれ得る。この実施態様は、次のアミノ酸変異：Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔが作成され、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を阻止するように作用している変異体も含むことができる。この変異体は、有効量の開示された組成物を患者に投与する工程を含む、先端巨大症を治療するための方法に使用することができる。
【手続補正4】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0013】
別の実施態様では、第２の成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。この成長ホルモン受容体アンタゴニストは、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した１つのアミノ酸がＴ１４２であり、システインに変異した２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、ここで、システインに変異した１つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子はシステインに変異したポリエチレングリコール分子は、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子であり、システインに変異した２つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子は、２つの４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａの直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールである。ポリエチレングリコール分子は、遊離のスルフヒドリル基に結合するためのマレミド基を含んでいても良い。ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストは、識別ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子に対して少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化されていても良い。ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストは、識別ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。本実施態様はまた、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療する方法であって、記載された組成物の有効量を患者に投与する工程を含む方法を含んでも良い。疾患または状態には、高レベルの成長ホルモン受容体、高レベルのプロラクチン受容体、または高レベルの成長ホルモン受容体とプロラクチン受容体の両方を発現する癌が含まれ得る。癌には、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌が含まれ得る。この実施態様は、次のアミノ酸変異：Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔが作成され、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を阻止するように作用する変異体も含むことができる。この変異体は、有効量の開示された組成物を患者に投与する工程を含む、先端巨大症を治療するための方法に使用することができる。
【手続補正5】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0014】
さらに別の実施態様では、第３の成長ホルモン受容体アンタゴニストを提供する。この成長ホルモン受容体アンタゴニストは、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋであって、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの１つのアミノ酸がシステインに変異しているか、またはヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋの２つのアミノ酸がシステインに変異しており、システインに変異した１つのアミノ酸がＴ１４２であり、システインに変異した２つのアミノ酸がＴ１４２およびＨ１５１である、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋと、および、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストＧ１２０Ｋ変異体の各置換されたシステインに結合したポリエチレングリコール分子であって、システインに変異した１つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子が、多分散した４０ｋＤａの分岐ポリエチレングリコール分子である、ポリエチレングリコール分子と、を含む。そして、システインに変異した２つのアミノ酸に結合したポリエチレングリコール分子が、２つの４０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａ分岐ポリエチレングリコール分子、２つの２０ｋＤａ直鎖ポリエチレングリコール分子、または３つのカルボキシレートアニオンを夫々含む２つの４．５ｋＤａの分岐ポリエチレングリコールを含み、そしてヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが識別ＩＤ番号：１５および２３からなる群から選択されるＤＮＡ分子に対して少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ配列によってコード化され、およびヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストが識別ＩＤ番号：１６および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。ポリエチレングリコール分子は、遊離のスルフヒドリル基に結合するためのマレミド基を含んでも良い。本実施態様はまた、ヒト成長ホルモン受容体アンタゴニストに反応する疾患または状態を治療するための方法であって、記載された組成物の有効量を患者に投与する工程を含む方法を含んでも良い。疾患または状態には、高レベルの成長ホルモン受容体、高レベルのプロラクチン受容体、または高レベルの成長ホルモン受容体とプロラクチン受容体の両方を発現する癌が含まれても良い。癌には、乳癌、中枢神経系癌、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および腎癌が含まれ得る。この実施態様は、次のアミノ酸変異：Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、およびＩ１７９Ｔが作成され、これらの変異がプロラクチン受容体への結合を阻止するように作用する変異体も含むことができる。この変異体は、有効量の開示された組成物を患者に投与する工程を含む、先端巨大症を治療するための方法に使用することができる。
【外国語明細書】