特開 2024-166134 標本封入方法および標本封入装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024166134

(43)【公開日】2024-11-28

(54)【発明の名称】標本封入方法および標本封入装置

(51)【国際特許分類】

   G01N 1/28 20060101AFI20241121BHJP

   G01N 33/48 20060101ALI20241121BHJP

【ＦＩ】

G01N1/28 U

G01N33/48 P

G01N33/48 M

【審査請求】未請求

【請求項の数】12

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2024078747

(22)【出願日】2024-05-14

(31)【優先権主張番号】P 2023081992

(32)【優先日】2023-05-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(71)【出願人】

【識別番号】000207551

【氏名又は名称】株式会社ＳＣＲＥＥＮホールディングス

(74)【代理人】

【識別番号】100110847

【弁理士】

【氏名又は名称】松阪 正弘

(74)【代理人】

【識別番号】100136526

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 勉

(74)【代理人】

【識別番号】100136755

【弁理士】

【氏名又は名称】井田 正道

(72)【発明者】

【氏名】森脇 三造

(72)【発明者】

【氏名】荻 寛志

【テーマコード（参考）】

2G045

2G052

【Ｆターム（参考）】

2G045AA24

2G045BA14

2G045BB21

2G045BB22

2G045CB01

2G045FA16

2G045HA16

2G045JA07

2G052AA28

2G052AA33

2G052AD32

2G052AD52

2G052FA02

2G052FA03

2G052GA30

2G052GA32

(57)【要約】

【課題】スライドグラスとカバーグラスとの間における気泡を低減する。
【解決手段】標本封入方法は、標本が貼り付けられたスライドグラスとカバーグラスとを準備する工程（ステップＳ１１）と、封入剤を脱気して脱気封入剤を生成する工程（ステップＳ１２）と、スライドグラスまたはカバーグラスに脱気封入剤を付与する工程（ステップＳ１３）と、カバーグラスを脱気封入剤を介してスライドグラス上に重ねて標本を封入する工程（ステップＳ１４）と、を備える。これにより、スライドグラスとカバーグラスとの間における気泡を低減することができる。
【選択図】図４

【特許請求の範囲】

【請求項1】

標本封入方法であって、
ａ）標本が貼り付けられたスライドグラスとカバーグラスとを準備する工程と、
ｂ）封入剤を脱気して脱気封入剤を生成する工程と、
ｃ）前記スライドグラスまたは前記カバーグラスに前記脱気封入剤を付与する工程と、
ｄ）前記カバーグラスを前記脱気封入剤を介して前記スライドグラス上に重ねて前記標本を封入する工程と、
を備える標本封入方法。

【請求項2】

請求項１に記載の標本封入方法であって、
前記ｂ）工程において生成された前記脱気封入剤は、前記ｃ）工程の前まで外気に曝露されていない状態に維持されており、
前記ｃ）工程および前記ｄ）工程は、前記脱気封入剤が外気に曝露された状態で行われ、
前記脱気封入剤が外気に曝露されてから前記ｄ）工程が終了するまでの経過時間は６０秒以内である標本封入方法。

【請求項3】

請求項１に記載の標本封入方法であって、
前記ｂ）工程における前記封入剤の脱気は脱気膜により行われる標本封入方法。

【請求項4】

請求項１ないし３のいずれか１つに記載の標本封入方法であって、
前記標本は、染色、色除去および観察を複数回繰り返す多重免疫染色法にて観察される標本である標本封入方法。

【請求項5】

標本封入装置であって、
標本が貼り付けられたスライドグラスを保持するスライドグラス保持部と、
カバーグラスを保持するカバーグラス保持部と、
封入剤を脱気して生成した脱気封入剤を前記スライドグラスまたは前記カバーグラスに付与する封入剤付与部と、
前記カバーグラス保持部を前記スライドグラス保持部に対して相対的に移動し、前記カバーグラスを前記脱気封入剤を介して前記スライドグラス上に重ねて前記標本を封入するグラス移動部と、
を備える標本封入装置。

【請求項6】

請求項５に記載の標本封入装置であって、
前記脱気封入剤は、生成されてから前記封入剤付与部による付与の前まで、外気に曝露されていない状態に維持されており、
前記封入剤付与部による前記脱気封入剤の付与、および、前記グラス移動部による前記標本の封入は、前記脱気封入剤が外気に曝露された状態で行われ、
前記脱気封入剤が外気に曝露されてから前記グラス移動部による前記標本の封入が終了するまでの経過時間は６０秒以内である標本封入装置。

【請求項7】

標本封入装置であって、
標本が貼り付けられたスライドグラスを保持するスライドグラス保持部と、
前記スライドグラスと間隙を挟んで対向するカバーグラスを保持するカバーグラス保持部と、
封入剤を脱気して生成した脱気封入剤を前記スライドグラスと前記カバーグラスとの間に付与して前記間隙に前記脱気封入剤を充満させる封入剤付与部と、
を備える標本封入装置。

【請求項8】

請求項７に記載の標本封入装置であって、
前記脱気封入剤は、生成されてから前記封入剤付与部による付与の前まで、外気に曝露されていない状態に維持されており、
前記封入剤付与部による前記脱気封入剤の付与は、前記脱気封入剤が外気に曝露された状態で行われ、
前記脱気封入剤が外気に曝露されてから前記間隙に前記脱気封入剤が充満するまでの経過時間は６０秒以内である標本封入装置。

【請求項9】

請求項５ないし８のいずれか１つに記載の標本封入装置であって、
前記封入剤を脱気して前記脱気封入剤を生成する封入剤生成部をさらに備える標本封入装置。

【請求項10】

請求項９に記載の標本封入装置であって、
前記封入剤生成部は、内部空間に設けられた脱気膜を前記封入剤が通過する脱気膜モジュールを備える標本封入装置。

【請求項11】

請求項１０に記載の標本封入装置であって、
前記封入剤生成部は、前記脱気膜モジュールの送出口から送出された液体を、前記脱気膜モジュールの供給口へと供給する循環部をさらに備える標本封入装置。

【請求項12】

請求項５ないし８のいずれか１つに記載の標本封入装置であって、
前記標本は、染色、観察および色除去を複数回繰り返す多重免疫染色法にて観察される標本である標本封入装置。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、標本封入方法および標本封入装置に関する。

【背景技術】

【0002】

近年、医学研究や生物学研究において、疾患メカニズムの解明や生体メカニズムの解明、薬剤作用機序解明等を目的として、組織標本や細胞標本等の生体由来標本のシングルセル単位の解析が実施されている。例えば、免疫染色解析においては、タンパク質等の生体由来物質を染色し、染色状態を計測することで定量的・定性的な解析が行われている。免疫染色解析を行う際には、スライドグラス上に貼り付けられた染色された標本をカバーグラスにて被覆したプレパラートが使用される。

【0003】

特許文献１の自動カバースリッパでは、３つのサクションカップによって吸着したカバースリップをスライド上に載置する際に、３つのサクションカップによる吸着を順次解除することにより、カバースリップの一方の端部が最初にスライド上に載置され、その後、カバースリップの残りの部分がスライド上に載置される。また、当該自動カバースリッパでは、流体ディスペンサからカバースリッピング封入剤をスライド上の所定位置に分注してカバースリップで制御することにより、スライドとカバースリップとの間における気泡の発生抑制が図られている。スライドとカバースリップとの間に気泡が存在すると、標本のうち気泡と重なっている領域の観察や解析が困難になる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２０１９－２１９６６４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

ところで、上述の免疫染色解析では、解析精度の向上のため、スライドグラスとカバーグラスとの間における気泡の更なる低減が求められている。また、同一の標本に対して複数回の免疫染色を順次実施するタイプの多重免疫染色法では、スライドグラス上の標本に対するカバーグラスの設置および剥離を繰り返すため、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）や水等の比較的低粘度の液体が封入剤として用いられる。このような低粘度の封入剤では、正に帯電したカバーグラスを封入剤に近づける際に封入剤が急速に引き寄せられ、上述の気泡が比較的生じやすい。また、上述の多重免疫染色法では、カバーグラスの剥離等に起因して標本の表面が毛羽立つ（すなわち、粗くなる）場合がある。この場合、標本上に封入剤を付与した際等に、標本の表面上に気体が残存しやすく気泡が比較的生じやすい。したがって、スライドグラスとカバーグラスとの間における気泡低減が特に望まれている。

【0006】

本発明は、上記課題に鑑みなされたものであり、スライドグラスとカバーグラスとの間における気泡を低減することを目的としている。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明の態様１は、標本封入方法であって、ａ）標本が貼り付けられたスライドグラスとカバーグラスとを準備する工程と、ｂ）封入剤を脱気して脱気封入剤を生成する工程と、ｃ）前記スライドグラスまたは前記カバーグラスに前記脱気封入剤を付与する工程と、ｄ）前記カバーグラスを前記脱気封入剤を介して前記スライドグラス上に重ねて前記標本を封入する工程と、を備える。

【0008】

本発明の態様２は、態様１の標本封入方法であって、前記ｂ）工程において生成された前記脱気封入剤は、前記ｃ）工程の前まで外気に曝露されていない状態に維持されている。前記ｃ）工程および前記ｄ）工程は、前記脱気封入剤が外気に曝露された状態で行われる。前記脱気封入剤が外気に曝露されてから前記ｄ）工程が終了するまでの経過時間は６０秒以内である。

【0009】

本発明の態様３は、態様１（態様１または２であってもよい。）の標本封入方法であって、前記ｂ）工程における前記封入剤の脱気は脱気膜により行われる。

【0010】

本発明の態様４は、態様１ないし３のいずれか１つの標本封入方法であって、前記標本は、染色、色除去および観察を複数回繰り返す多重免疫染色法にて観察される標本である。

【0011】

本発明の態様５は、標本封入装置であって、標本が貼り付けられたスライドグラスを保持するスライドグラス保持部と、カバーグラスを保持するカバーグラス保持部と、封入剤を脱気して生成した脱気封入剤を前記スライドグラスまたは前記カバーグラスに付与する封入剤付与部と、前記カバーグラス保持部を前記スライドグラス保持部に対して相対的に移動し、前記カバーグラスを前記脱気封入剤を介して前記スライドグラス上に重ねて前記標本を封入するグラス移動部と、を備える。

【0012】

本発明の態様６は、態様５の標本封入装置であって、前記脱気封入剤は、生成されてから前記封入剤付与部による付与の前まで、外気に曝露されていない状態に維持されている。前記封入剤付与部による前記脱気封入剤の付与、および、前記グラス移動部による前記標本の封入は、前記脱気封入剤が外気に曝露された状態で行われる。前記脱気封入剤が外気に曝露されてから前記グラス移動部による前記標本の封入が終了するまでの経過時間は６０秒以内である。

【0013】

本発明の態様７は、標本封入装置であって、標本が貼り付けられたスライドグラスを保持するスライドグラス保持部と、前記スライドグラスと間隙を挟んで対向するカバーグラスを保持するカバーグラス保持部と、封入剤を脱気して生成した脱気封入剤を前記スライドグラスと前記カバーグラスとの間に付与して前記間隙に前記脱気封入剤を充満させる封入剤付与部と、を備える。

【0014】

本発明の態様８は、態様７の標本封入装置であって、前記脱気封入剤は、生成されてから前記封入剤付与部による付与の前まで、外気に曝露されていない状態に維持されている。前記封入剤付与部による前記脱気封入剤の付与は、前記脱気封入剤が外気に曝露された状態で行われる。前記脱気封入剤が外気に曝露されてから前記間隙に前記脱気封入剤が充満するまでの経過時間は６０秒以内である。

【0015】

本発明の態様９は、態様５ないし８のいずれか１つの標本封入装置であって、前記標本封入装置は、前記封入剤を脱気して前記脱気封入剤を生成する封入剤生成部をさらに備える。

【0016】

本発明の態様１０は、態様９の標本封入装置であって、前記封入剤生成部は、内部空間に設けられた脱気膜を前記封入剤が通過する脱気膜モジュールを備える。

【0017】

本発明の態様１１は、態様１０の標本封入装置であって、前記封入剤生成部は、前記脱気膜モジュールの送出口から送出された液体を、前記脱気膜モジュールの供給口へと供給する循環部をさらに備える。

【0018】

本発明の態様１２は、態様５ないし８のいずれか１つ（態様５ないし１１のいずれか１つ、であってもよい。）の標本封入装置であって、前記標本は、染色、観察および色除去を複数回繰り返す多重免疫染色法にて観察される標本である。

【発明の効果】

【0019】

本発明では、スライドグラスとカバーグラスとの間における気泡を低減することができる。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】一の実施の形態にかかる標本封入装置の構成を示す図である。

【図2】プレパラートの平面図である。

【図3】プレパラートの側面図である。

【図4】標本の封入の流れを示す図である。

【図5】脱気封入剤が外気に暴露されてからの経過時間と気泡の数との関係を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0021】

図１は、本発明の一の実施の形態にかかる標本封入装置１の構成を示す図である。標本封入装置１は、プレパラート２を作成する際に利用される。標本封入装置１は、プレパラート２を作成するプレパラート作成部３と、後述する脱気封入剤を生成する封入剤生成部４と、を備える。プレパラート２は、例えば、免疫染色法による生体由来標本の染色画像を取得するために利用される。

【0022】

図２は、標本封入装置１によって作成されるプレパラート２を示す平面図である。図３は、プレパラート２の側面図である。プレパラート２は、スライドグラス２１と、カバーグラス２２と、標本２３と、脱気封入剤２４とを備える。図３では、図の理解を容易にするために、プレパラート２の各構成を実際よりも厚く描いている。また、図２および図３では、脱気封入剤２４に平行斜線を付す。図１についても同様である。

【0023】

スライドグラス２１は、顕微鏡用のスライドであり、上面に貼り付けられた標本２３を下側から支持する。スライドグラス２１は、ガラス製または樹脂製の略平板状部材である。スライドグラス２１の平面視における形状は、例えば略長方形である。カバーグラス２２は、スライドグラス２１上に貼り付けられている標本２３を上側から被覆する。カバーグラス２２は、ガラス製または樹脂製の略平板状部材である。カバーグラス２２の平面視における形状は、例えば、略正方形または略長方形である。スライドグラス２１およびカバーグラス２２の平面視における形状は、様々に変更されてよい。

【0024】

標本２３は、組織切片や細胞等の生体由来標本である。標本２３は、例えば、免疫染色（免疫組織化学または免疫細胞化学ともいう。）により染色された状態で、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間に挟まれる。標本２３は、例えば、シーケンシャル多重免疫染色法により解析される標本である。シーケンシャル多重免疫染色法とは、標本２３に対する免疫染色、観察（例えば、撮像）および色除去を、免疫染色に用いる抗体等を変更しつつ複数回繰り返す多重免疫染色法である。なお、シーケンシャル多重免疫染色法では、色除去（すなわち、色素除去）の際に、抗体の不活性化および除去も行われてもよい。シーケンシャル多重免疫染色法では、カバーグラス２２による標本２３の被覆、および、標本２３上からのカバーグラス２２の剥離が繰り返されるため、標本２３の表面が毛羽立つ可能性がある（すなわち、粗くなる可能性がある）。

【0025】

脱気封入剤２４は、従来のプレパラートの作成に使用される封入剤（例えば、市販の封入剤）を脱気することにより生成される液体である。脱気封入剤２４は、例えば、市販のリン酸緩衝液（以下、「ＰＢＳ」とも呼ぶ。）や純水等の封入剤を、上述の標本封入装置１の封入剤生成部４にて脱気することにより生成される。上述のシーケンシャル多重免疫染色法では、比較的低粘度の封入剤が使用される。プレパラート２では、標本２３上に付与された脱気封入剤２４を介して、カバーグラス２２がスライドグラス２１上に重ねられることにより、標本２３がスライドグラス２１とカバーグラス２２との間に封入される。

【0026】

図１に示す標本封入装置１では、プレパラート作成部３は、スライドグラス保持部３１と、カバーグラス保持部３２と、封入剤付与部３３と、グラス移動部３４とを備える。スライドグラス保持部３１は、標本２３が上面に貼り付けられたスライドグラス２１を保持する部位である。スライドグラス保持部３１は、例えば、上面３１１上に載置されたスライドグラス２１の下面を着脱自在に吸着して保持するステージである。カバーグラス保持部３２は、スライドグラス保持部３１の上方においてカバーグラス２２を保持する部位である。カバーグラス保持部３２は、例えば、カバーグラス保持部３２の上面を着脱自在に吸着して保持する吸着支持部である。

【0027】

図１に示す状態では、カバーグラス保持部３２によって保持されたカバーグラス２２は、スライドグラス保持部３１によって保持されたスライドグラス２１から上方に離間した位置に配置される。換言すれば、カバーグラス２２は、スライドグラス２１と間隙を挟んで上下方向に対向する。スライドグラス２１の上面とカバーグラス２２の下面との間の上下方向の距離（すなわち、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間の間隙の高さ）は、例えば、２ｍｍ以下が好ましく、より好ましくは１ｍｍ以下である。また、当該間隙の高さは、０．５ｍｍ以上であることが好ましい。

【0028】

封入剤付与部３３は、封入剤生成部４によって生成される脱気封入剤２４を、スライドグラス保持部３１によって保持されたスライドグラス２１、および／または、カバーグラス保持部３２によって保持されたカバーグラス２２に付与する部位である。封入剤付与部３３は、例えば、先端に設けられた吐出口からスライドグラス２１とカバーグラス２２との間の間隙に向けて脱気封入剤２４を吐出するノズル３３１を備える。ノズル３３１から吐出された脱気封入剤２４は、当該間隙から気体を押し出して当該間隙に充満する。

【0029】

グラス移動部３４は、カバーグラス保持部３２をスライドグラス保持部３１に対して上下方向に相対的に移動する移動機構である。図１に示す例では、グラス移動部３４は、カバーグラス保持部３２を上下方向に移動する。グラス移動部３４は、例えば、電動リニアモータ、エアシリンダ、または、ボールネジおよび電動回転式モータを備える。プレパラート作成部３では、グラス移動部３４によってカバーグラス保持部３２が図１に示す状態から下方へと移動する。これにより、カバーグラス２２が脱気封入剤２４を介してスライドグラス２１上に重なり、標本２３がスライドグラス２１とカバーグラス２２との間に封入される。

【0030】

なお、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間の上記間隙の高さが比較的小さい場合、グラス移動部３４によるカバーグラス保持部３２の上記相対移動は行われなくてもよい。例えば、封入剤付与部３３によって上記間隙に脱気封入剤２４を充満させることにより、脱気封入剤２４を介してカバーグラス２２をスライドグラス２１上に重ねて標本２３を封入することが実現されてもよい。この場合、標本封入装置１では、グラス移動部３４は省略されてもよい。

【0031】

あるいは、プレパラート作成部３では、スライドグラス保持部３１によって保持されたスライドグラス２１と、カバーグラス保持部３２によって保持されたカバーグラス２２とが、上下方向に比較的大きく離間して配置された状態で、封入剤付与部３３からスライドグラス２１の上面のみに脱気封入剤２４が付与されてもよい。また、上下方向に反転する機構が設けられたカバーグラス保持部３２によってカバーグラス２２が上下反転した状態で保持されており、当該カバーグラス２２の上面のみに封入剤付与部３３から脱気封入剤２４が付与されてもよい。この場合、脱気封入剤２４が付与されたカバーグラス２２は、上下方向にて反転されつつ下降し、スライドグラス２１上に重ねられる。あるいは、カバーグラス２２がスライドグラス２１から下方に離間して配置された状態で、カバーグラス２２の上面のみに脱気封入剤２４が付与されてもよい。この場合、例えば、標本２３が貼り付けられた面を下方に向けた（すなわち、カバーグラス２２と上下方向に対向させた）スライドグラス２１が、カバーグラス２２に向かって下降してカバーグラス２２上に重ねられる。

【0032】

封入剤生成部４は、貯溜部４１と、送液部４２と、脱気部４３と、バルブ４４と、配管４５とを備える。貯溜部４１、送液部４２、脱気部４３およびバルブ４４は、配管４５によって互いに接続されている。封入剤生成部４では、送液部４２によって貯溜部４１から送出された封入剤は、配管４５を介して脱気部４３およびバルブ４４を通過し、貯溜部４１へと戻る。

【0033】

貯溜部４１は、封入剤を貯留する容器である。貯溜部４１の内部空間は、例えば、実質的に外気（例えば、封入剤生成部４の周囲の空気）に暴露されない空間である。貯溜部４１は、例えば、配管４５との接続部を除いて密閉された密閉容器である。封入剤生成部４では、配管によって接続された複数の容器が、貯溜部４１として利用されてもよい。封入剤生成部４では、貯溜部４１は密閉容器には限定されず、様々な構造を有する容器等が貯溜部４１として利用可能である。例えば、貯溜部４１の上部（すなわち、気体が貯留されている部分）に、フィルタおよび流量制御弁等を介して外気を低流量にて流入させる第１の系統の配管と、減圧機構に接続されて貯溜部４１の当該上部に比較的弱い負圧を発生させる第２の系統の配管と、が接続されてもよい。あるいは、貯溜部４１に貯留されている封入剤の液面の略全体を、当該液面に浮かぶ落とし蓋状の被覆部材にて被覆し、貯溜部４１のうち被覆部材よりも上方の空間は外気と接続されてもよい。この場合、被覆部材は封入剤の液面と共に上下方向に移動可能とされる。また、貯溜部４１から封入剤を送出する配管は、例えば、貯溜部４１の下部側面に接続される。送液部４２は、貯溜部４１に貯留されている封入剤を、配管４５を介して脱気部４３に向けて送出する機構である。送液部４２は、例えば、電動式ポンプである。送液部４２は、電動式ポンプには限定されず、他の機構であってもよい。

【0034】

脱気部４３は、封入剤を脱気して脱気封入剤２４を生成する部位である。脱気部４３は、例えば、ハウジング４３２の内部空間に脱気膜４３１が設けられた脱気膜モジュール４３０を備える。脱気膜４３１は、例えば中空糸膜である。ハウジング４３２は、例えば、略円筒状の略密閉容器である。ハウジング４３２の長手方向の一方の端部（図１に示す例では、右端部）には、貯溜部４１から送出された封入剤が供給される供給口４３３が設けられる。ハウジング４３２の長手方向の他方の端部（図１に示す例では、左端部）には、ハウジング４３２の内部を通過した封入剤が送出される送出口４３４が設けられる。

【0035】

ハウジング４３２の内部空間は、供給口４３３および送出口４３４とは異なる接続部を介して、真空ポンプ等の減圧部４６に接続されている。減圧部４６が駆動されると、脱気膜４３１の周囲の空間が減圧され、脱気膜４３１を通過する封入剤に含まれている気体（例えば、空気中から封入剤に溶け込んだ酸素（Ｏ_２）等）が、脱気膜４３１を透過して脱気膜４３１の周囲の空間へと移動する。このため、脱気膜４３１を通過した封入剤は、脱気された封入剤である脱気封入剤２４となる。

【0036】

脱気部４３にて生成された脱気封入剤２４は、送出口４３４および配管４５を介してバルブ４４を通過し、貯溜部４１へと戻される。封入剤生成部４では、配管４５、バルブ４４、貯溜部４１および送液部４２は、脱気膜モジュール４３０の送出口４３４から送出された液体を、脱気膜モジュール４３０の供給口４３３へと供給する循環部４７である。このように、封入剤が、貯溜部４１、送液部４２、脱気部４３およびバルブ４４を配管４５を介して循環することにより、封入剤生成部４内の封入剤が全て脱気封入剤２４となる。

【0037】

バルブ４４は、例えば三方弁である。バルブ４４は、封入剤生成部４の配管４５とプレパラート作成部３の封入剤付与部３３との接続部に配置される。封入剤生成部４内の封入剤が脱気封入剤２４となるまでは、配管４５と封入剤付与部３３とは接続されず、封入剤は上述のように封入剤生成部４内にて循環する。脱気封入剤２４が生成され、封入剤付与部３３からスライドグラス２１およびカバーグラス２２に脱気封入剤２４が供給される際には、バルブ４４によって封入剤生成部４の配管４５とプレパラート作成部３の封入剤付与部３３とが接続され、配管４５を流れる脱気封入剤２４の一部が封入剤付与部３３へと供給される。

【0038】

図１に例示する封入剤生成部４では、実質的に大気開放されない密閉循環方式により脱気封入剤２４が生成されており、生成された脱気封入剤２４は実質的に外気に暴露されることなく封入剤付与部３３から吐出される。したがって、脱気封入剤２４がスライドグラス２１およびカバーグラス２２に供給されるよりも前に、外気（例えば、大気中の酸素等）が脱気封入剤２４に溶け込むことが抑制される。標本封入装置１において、ノズル３３１から吐出される脱気封入剤２４の溶存酸素濃度は、例えば、吐出される脱気封入剤２４の温度における上記封入剤の飽和溶存酸素濃度よりも１ｍｇ／Ｌ以上低いことが好ましい。

【0039】

次に、図４を参照しつつプレパラート２の作成の流れ（すなわち、標本２３の封入の流れ）の一例について説明する。まず、標本２３が貼り付けられたスライドグラス２１が、標本封入装置１のスライドグラス保持部３１によって保持されて準備される。また、カバーグラス２２が、カバーグラス保持部３２によって保持されて準備される（ステップＳ１１）。スライドグラス２１上の標本２３は、例えば、上述のように免疫染色されている。

【0040】

標本封入装置１では、ステップＳ１１と並行して、封入剤生成部４により封入剤が脱気されて脱気封入剤２４が生成される（ステップＳ１２）。なお、ステップＳ１２は、ステップＳ１１よりも前に予め行われていてもよく、ステップＳ１１よりも後に行われてもよい。

【0041】

ステップＳ１１およびステップＳ１２が終了すると、封入剤生成部４にて生成された脱気封入剤２４が、封入剤付与部３３によってスライドグラス２１およびカバーグラス２２に付与される（ステップＳ１３）。具体的には、封入剤付与部３３から吐出された脱気封入剤２４は、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間の間隙に側方から供給され、当該間隙に充満する。なお、上述のように、封入剤付与部３３から吐出される脱気封入剤２４は、スライドグラス２１およびカバーグラス２２のうち少なくとも一方に付与されればよい。

【0042】

ステップＳ１３が終了すると、グラス移動部３４によってカバーグラス２２が下方へと移動される。そして、カバーグラス２２が、スライドグラス２１に貼り付けられた標本２３上に脱気封入剤２４を介して載置されて重ねられることにより、当該標本２３がスライドグラス２１とカバーグラス２２との間に封入され、プレパラート２が作成される（ステップＳ１４）。上述のように、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間の上記間隙の高さが比較的小さい場合、ステップＳ１４において、グラス移動部３４によるカバーグラス２２の移動は省略されてもよい。

【0043】

このように、脱気封入剤２４を用いてプレパラート２を作成することにより、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における脱気封入剤２４の減圧等の影響によって、脱気封入剤２４に溶存している気体（例えば、酸素）が析出して気泡が発生することを抑制することができる。また、脱気封入剤２４に含まれている微小気泡が標本２３とカバーグラス２２とによって押し広げられることを抑制することができる。さらに、仮に、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間に気泡が発生したとしても、当該気泡は、溶存している気体の濃度が低い脱気封入剤２４に溶け込んで消失する。また、スライドグラス２１上へのカバーグラス２２の載置時に、周囲の雰囲気を巻き込むことにより気泡が生じた場合であっても、当該気泡は脱気封入剤２４に溶け込んで消失する。このため、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡を低減することができる。その結果、平面視において標本２３と気泡とが重なることを抑制することができ、プレパラート２を用いた標本２３の解析精度を向上することができる。

【0044】

上述のプレパラート２の作成（すなわち、標本２３の封入）は、必ずしも標本封入装置１により行われる必要はなく、様々な態様にて行われてよい。例えば、ステップＳ１１におけるスライドグラス２１およびカバーグラス２２の準備、ステップＳ１３における脱気封入剤２４の付与、並びに、ステップＳ１４におけるスライドグラス２１上へのカバーグラス２２の載置は、作業者の手作業により行われてよい。

【0045】

また、ステップＳ１２における脱気封入剤２４の生成は、例えば、ビーカー等の開口容器に貯留された市販の封入剤を、真空容器内に配置されたスターラ等を用いて攪拌することにより行われてもよい。あるいは、市販の封入剤に超音波を付与したり、市販の封入剤を加熱した後に冷却することにより、脱気封入剤２４が生成されてもよい。生成された脱気封入剤２４は、好ましくは、外気に暴露されていない状態で保存される。例えば、脱気封入剤２４は、内部に大気等の気体が実質的に存在しない状態の密閉容器に貯留されてもよい。あるいは、大気中に開放された状態の容器に脱気封入剤２４が貯留されている場合、液面からの深さが例えば３０ｍｍ以上の領域に位置する脱気封入剤２４を、実質的に外気に暴露されていない状態の脱気封入剤２４として使用してもよい。

【0046】

上述のように、脱気封入剤２４の付与（ステップＳ１３）が作業者の手作業にて行われる場合、例えば、ステップＳ１２にて予め生成されて外気に暴露されていない状態で保存されている脱気封入剤２４が、ピペットやスポイト等によって吸い取られ、スライドグラス２１上に滴下されて付与される（ステップＳ１３）。そして、作業者がカバーグラス２２をピンセット等にて保持し、スライドグラス２１上に付与されている脱気封入剤２４上に重ねることにより、標本２３の封入が行われる（ステップＳ１４）。このとき、脱気封入剤２４がスライドグラス２１上に滴下されて外気に暴露されてから、カバーグラス２２による標本２３の封入終了までの経過時間が長いと、脱気封入剤２４に外気が溶け込み（例えば、大気中の酸素が溶け込み）、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間に気泡が生じる可能性がある。

【0047】

図５は、脱気封入剤２４が外気に暴露されてからの経過時間（すなわち、大気との接触時間）と、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間において標本２３上に残存した気泡の数との関係を示すグラフである。図５の横軸は当該経過時間を示し、縦軸は当該気泡の数を示す。当該経過時間は、外気に暴露されていない状態の脱気封入剤２４をスライドグラス２１上に滴下してからカバーグラス２２にて被覆するまでの経過時間である。脱気封入剤２４は、純水を脱気することにより生成した。標本２３の平面視における面積は、約４５０ｍｍ^２であった。

【0048】

図５に示すように、上述の気泡の数を３個以下に抑えるという観点からは、脱気封入剤２４が外気に暴露されてからステップＳ１４が終了するまでの経過時間は、６０秒以下であることが好ましい。また、当該気泡の数を１個以下に抑えるという観点からは、当該経過時間は５０秒以下であることが好ましく、４８秒以下であることがさらに好ましい。なお、脱気していない純水を用いてプレパラート２を作成すると、上記経過時間が２５秒程度の場合であっても、上記気泡の数は８個であり、当該気泡の大きさも脱気封入剤２４を用いた場合に比べて大きくなった。

【0049】

以上に説明したように、上述の標本封入方法は、標本２３が貼り付けられたスライドグラス２１とカバーグラス２２とを準備する工程（ステップＳ１１）と、封入剤を脱気して脱気封入剤２４を生成する工程（ステップＳ１２）と、スライドグラス２１またはカバーグラス２２に脱気封入剤２４を付与する工程（ステップＳ１３）と、カバーグラス２２を脱気封入剤２４を介してスライドグラス２１上に重ねて標本２３を封入する工程（ステップＳ１４）と、を備える。これにより、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡を低減することができる。その結果、平面視において標本２３と気泡とが重なることを抑制することができ、プレパラート２を用いた標本２３の解析精度を向上することができる。

【0050】

上述のように、ステップＳ１２において生成された脱気封入剤２４は、ステップＳ１３の前まで外気に曝露されていない状態に維持されていることが好ましい。これにより、使用前の脱気封入剤２４に外気が溶け込むことを抑制することができる。その結果、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡をさらに低減することができる。また、ステップＳ１３およびステップＳ１４は、脱気封入剤２４が外気に曝露された状態で行われ、脱気封入剤２４が外気に曝露されてからステップＳ１４が終了するまでの経過時間は６０秒以内であることが好ましい。これにより、上述のように、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡をより一層低減することができる。

【0051】

上述のように、ステップＳ１２における封入剤の脱気は脱気膜４３１により行われることが好ましい。これにより、封入剤の脱気を簡素な構造で好適に行うことができる。

【0052】

上述のように、標本２３は、染色、色除去および観察を複数回繰り返す多重免疫染色法（いわゆる、シーケンシャル多重免疫染色法）にて観察される標本であることが好ましい。シーケンシャル多重免疫染色法に使用される標本２３は、繰り返されるカバーグラス２２の剥離等に起因して表面が毛羽立つ可能性があり、この場合、当該表面に気体が残存して気泡が生じやすい。このため、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡を低減可能な上述の脱気封入剤２４を用いた標本封入方法は、シーケンシャル多重免疫染色法に使用される標本２３の封入に特に適している。

【0053】

上述の標本封入装置１は、スライドグラス保持部３１と、カバーグラス保持部３２と、封入剤付与部３３と、グラス移動部３４とを備える。スライドグラス保持部３１は、標本２３が貼り付けられたスライドグラス２１を保持する。カバーグラス保持部３２は、カバーグラス２２を保持する。封入剤付与部３３は、封入剤を脱気して生成した脱気封入剤２４をスライドグラス２１またはカバーグラス２２に付与する。グラス移動部３４は、カバーグラス保持部３２をスライドグラス保持部３１に対して相対的に移動し、カバーグラス２２を脱気封入剤２４を介してスライドグラス２１上に重ねて標本２３を封入する。これにより、上述のように、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡を低減することができる。

【0054】

上述のように、脱気封入剤２４は、生成されてから封入剤付与部３３による付与の前まで、外気に曝露されていない状態に維持されていることが好ましい。これにより、上述のように、使用前の脱気封入剤２４に外気が溶け込むことを抑制することができる。また、封入剤付与部３３による脱気封入剤２４の付与、および、グラス移動部３４による標本２３の封入は、脱気封入剤２４が外気に曝露された状態で行われ、脱気封入剤２４が外気に曝露されてからグラス移動部３４による標本２３の封入が終了するまでの経過時間は６０秒以内であることが好ましい。これにより、上述のように、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡をより一層低減することができる。

【0055】

上述のように、標本封入装置１では、グラス移動部３４は省略されてもよい。この場合、標本封入装置１は、スライドグラス保持部３１と、カバーグラス保持部３２と、封入剤付与部３３とを備える。スライドグラス保持部３１は、標本２３が貼り付けられたスライドグラス２１を保持する。カバーグラス保持部３２は、スライドグラス２１と間隙を挟んで対向するカバーグラス２２を保持する。封入剤付与部３３は、封入剤を脱気して生成した脱気封入剤２４をスライドグラス２１とカバーグラス２２との間に付与して上記間隙に脱気封入剤２４を充満させる。これにより、脱気封入剤２４の外気への曝露を抑制しつつ、脱気封入剤２４をスライドグラス２１およびカバーグラス２２に付与することができる。その結果、上述のように、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡を低減することができる。なお、標本封入装置１では、当該間隙が真空に維持されることにより、当該間隙への脱気封入剤２４の付与が容易化されてもよい。

【0056】

上述のように、脱気封入剤２４は、生成されてから封入剤付与部３３による付与の前まで、外気に曝露されていない状態に維持されていることが好ましい。これにより、上述のように、使用前の脱気封入剤２４に外気が溶け込むことを抑制することができる。また、封入剤付与部３３による脱気封入剤２４の付与は、脱気封入剤２４が外気に曝露された状態で行われ、脱気封入剤２４が外気に曝露されてから上記間隙に脱気封入剤２４が充満するまでの経過時間は６０秒以内であることが好ましい。これにより、上述のように、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡をより一層低減することができる。

【0057】

上述のように、標本封入装置１は、封入剤を脱気して脱気封入剤２４を生成する封入剤生成部４をさらに備えることが好ましい。これにより、脱気封入剤２４の生成と、標本２３の封入とを、単一の装置で行うことができる。

【0058】

上述のように、封入剤生成部４は、内部空間に設けられた脱気膜４３１を封入剤が通過する脱気膜モジュール４３０を備えることが好ましい。これにより、脱気封入剤２４の生成を簡素な構造で実現することができる。

【0059】

上述のように、封入剤生成部４は、脱気膜モジュール４３０の送出口４３４から送出された液体を、脱気膜モジュール４３０の供給口４３３へと供給する循環部４７をさらに備えることが好ましい。これにより、封入剤の脱気を好適に行うことができる。

【0060】

上述のように、標本２３は、染色、色除去および観察を複数回繰り返す多重免疫染色法（いわゆる、シーケンシャル多重免疫染色法）にて観察される標本であることが好ましい。標本封入装置１は、上述のように、スライドグラス２１とカバーグラス２２との間における気泡を低減可能であるため、シーケンシャル多重免疫染色法に使用される標本２３の封入に特に適している。

【0061】

上述の標本封入装置１および標本封入方法では、様々な変更が可能である。

【0062】

標本封入装置１では、必ずしも循環部４７が設けられる必要はなく、脱気部４３にて脱気が１回のみ行われた封入剤が脱気封入剤２４として使用されてもよい。

【0063】

標本封入装置１では、必ずしも封入剤生成部４は設けられる必要はなく、省略されてもよい。この場合、標本封入装置１の外部にて生成された脱気封入剤２４が、標本封入装置１においてスライドグラス２１またはカバーグラス２２に付与される。

【0064】

標本封入装置１では、カバーグラス保持部３２が移動不能に固定されており、グラス移動部３４によってスライドグラス保持部３１が上下方向に移動されてもよい。あるいは、グラス移動部３４は、スライドグラス保持部３１およびカバーグラス保持部３２の双方を移動してもよい。

【0065】

脱気封入剤２４が外気に暴露されてから標本２３の封入が終了するまでの経過時間は、必ずしも６０秒以下である必要はなく、６０秒よりも長くてもよい。

【0066】

標本２３は、必ずしもシーケンシャル多重免疫染色法にて観察されるものである必要はなく、生体由来標本である必要もない。標本２３は、様々な目的に使用される各種標本であってよい。

【0067】

上記実施の形態および各変形例における構成は、相互に矛盾しない限り適宜組み合わされてよい。

【符号の説明】

【0068】

１ 標本封入装置
４ 封入剤生成部
２１ スライドグラス
２２ カバーグラス
２３ 標本
２４ 脱気封入剤
３１ スライドグラス保持部
３２ カバーグラス保持部
３３ 封入剤付与部
３４ グラス移動部
４７ 循環部
３３１ ノズル
４３０ 脱気膜モジュール
４３１ 脱気膜
４３３ 供給口
４３４ 送出口
Ｓ１１～Ｓ１４ ステップ

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】