特開 2024-167313 腫瘍治療薬及びその応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024167313

(43)【公開日】2024-12-03

(54)【発明の名称】腫瘍治療薬及びその応用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/00 20060101AFI20241126BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 5/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20241126BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241126BHJP

【ＦＩ】

C07K16/00 ZNA

C12N15/13

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/00

A61K39/395 N

A61K48/00

A61K35/12

A61P35/00

A61P1/00

A61K47/68

A61K39/395 L

C07K16/00

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2024146208

(22)【出願日】2024-08-28

(62)【分割の表示】P 2023129054の分割

【原出願日】2020-04-15

(31)【優先権主張番号】201910315634.9

(32)【優先日】2019-04-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】520488148

【氏名又は名称】康諾亜生物医薬科技（成都）有限公司

【氏名又は名称原語表記】Ｋｅｙｍｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏ．， Ｌｔｄ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】徐 ▲剛▼

(72)【発明者】

【氏名】▲陳▼ 博

(72)【発明者】

【氏名】王 ▲瑩▼

(57)【要約】      （修正有）

【課題】ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分、および該抗体又はその抗原結合部分を含む医薬組成物を提供する。
【解決手段】ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分であって、一態様において、特定の配列の重鎖ＣＤＲ１；特定の配列の重鎖ＣＤＲ２；特定の配列の重鎖ＣＤＲ３；特定の配列の軽鎖ＣＤＲ１；特定の配列の軽鎖ＣＤＲ２；および、特定の配列の軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその抗原結合部分、および、該抗体又はその抗原結合部分を含む医薬組成物を提供する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アミノ酸配列の配列番号２－４、１２－１４、２２－２４、３２－３４、４２－４４、５２－５４、６２－６４、７２－７４、８２－８４、９２－９４、１０２－１０４、１１２－１１４、１２２－１２４、１３２－１３４、１４２－１４４、１５２－１５４、１５７－１５９、１６２－１６４、１６７－１６９、１７２－１７４、１７７－１７９、１８２－１８４、１８７－１８９、１９２－１９４、１９７－１９９、２０２－２０４、２０７－２０９、２１２－２１４、２１７－２１９、２２２－２２４、２２７－２２９、２３２－２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号７－９、１７－１９、２７－２９、３７－３９、４７－４９、５７－５９、６７－６９、７７－７９、８７－８９、９７－９９、１０７－１０９、１１７－１１９、１２７－１２９、１３７－１３９、１４７－１４９、２３７－２３９、２４２－２４４、２４７－２４９、２５２－２５４、２５７－２５９、２６２－２６４、２６７－２６９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲを含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分。

【請求項2】

アミノ酸配列の配列番号２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１５７、１６２、１６７、１７２、１７７、１８２、１８７、１９２、１９７、２０２、２０７、２１２、２１７、２２２、２２７、２３２又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列の配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１５８、１６３、１６８、１７３、１７８、１８３、１８８、１９３、１９８、２０３、２０８、２１３、２１８、２２３、２２８、２３３又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列の配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１５９、１６４、１６９、１７４、１７９、１８４、１８９、１９４、１９９、２０４、２０９、２１４、２１９、２２４、２２９、２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、２３７、２４２、２４７、２５２、２５７、２６２、２６７又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列の配列番号８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、１４８、２３８、２４３、２４８、２５３、２５８、２６３、２６８又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列の配列番号９、１９、２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、２３９、２４４、２４９、２５４、２５９、２６４、２６９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。

【請求項3】

アミノ酸配列の配列番号１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１５６、１６１、１６６、１７１、１７６、１８１、１８６、１９１、１９６、２０１、２０６、２１１、２１６、２２１、２２６、２３１又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、２３６、２４１、２４６、２５１、２５６、２６１、２６６又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合部分。

【請求項4】

（１）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（４）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（５）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（６）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（７）それぞれ配列番号１６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（８）それぞれ配列番号１６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（９）それぞれ配列番号１６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１０）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１１）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１２）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１３）それぞれ配列番号１７２－１７４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１４）それぞれ配列番号１７２－１７４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１５）それぞれ配列番号１７７－１７９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１６）それぞれ配列番号１７７－１７９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１７）それぞれ配列番号１８２－１８４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１８）それぞれ配列番号１８２－１８４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１９）それぞれ配列番号１８７－１８９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２０）それぞれ配列番号１８７－１８９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２１）それぞれ配列番号１９２－１９４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２２）それぞれ配列番号１９２－１９４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２３）それぞれ配列番号１９７－１９９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２４）それぞれ配列番号１９７－１９９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２５）それぞれ配列番号２０２－２０４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２６）それぞれ配列番号２０２－２０４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２７）それぞれ配列番号２０７－２０９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２８）それぞれ配列番号２０７－２０９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２９）それぞれ配列番号２１２－２１４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３０）それぞれ配列番号２１２－２１４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３１）それぞれ配列番号２１７－２１９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３２）それぞれ配列番号２１７－２１９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３３）それぞれ配列番号２２２－２２４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３４）それぞれ配列番号２２２－２２４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３５）それぞれ配列番号２２７－２２９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３６）それぞれ配列番号２２７－２２９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３７）それぞれ配列番号２３２－２３４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３８）それぞれ配列番号２３２－２３４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列という重鎖及び軽鎖のＣＤＲ組み合わせを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分。

【請求項5】

前記抗体又はその抗原結合部分はヒト化される、前記請求項のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分。

【請求項6】

前記請求項のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子、又はそれに対して少なくとも６０％より高く、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％より高い配列同一性を有する核酸分子。

【請求項7】

請求項６に記載の核酸を含む、担体。

【請求項8】

請求項７に記載の担体を含む、細胞又はキット。

【請求項9】

前記請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分、又は請求項６に記載の核酸、請求項７に記載の担体、又は請求項８に記載の細胞又はキットを含む、医薬組成物。

【請求項10】

前記請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分、又は請求項６に記載の核酸、請求項７に記載の担体、又は請求項８に記載の細胞又はキット、又は請求項９に記載の医薬組成物の、哺乳動物の癌を治療するための薬物又はキットの調製における用途であって、任意選択で、前記癌は胃癌であり、任意選択で、前記抗体は、ＡＤＣＣ又はＣＤＣ作用によって癌細胞を死滅させ、任意選択で、前記抗体は、その他の細胞毒性薬物と結合する、用途。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、クローディンを認識する抗体、その製造方法及び応用に関する。

【背景技術】

【0002】

クローディン１８（Ｃｌａｕｄｉｎ１８）は、高度な組織特異的分布を有するクローディンファミリーメンバーであり、正常組織において、主に胃又は肺部の上皮及び内皮細胞に分布している。細胞間の密着結合の形成に関与し、溶液及び分子の細胞間隙への浸透を制限し、内皮細胞の外膜及び基底膜の完全性を維持するために重要な役割を果たしており、シグナル伝達に関与する可能性がある。

【0003】

クローディン１８は、複数回膜貫通タンパク質であり、分子内に４つの膜貫通領域を有し、そのうち２つの断片が細胞外に細胞外領域（ｌｏｏｐ１及びｌｏｏｐ２）を形成し、２つの膜貫通断片が細胞内に細胞内領域を形成する。ＲＮＡの選択的スプライシングのために、クローディン１８．１（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｕ５６８５６）及びクローディン１８．２（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｕ５６８５６－２）という２種類の異なる膜タンパク質サブタイプが組織に存在しており、この２種類の膜タンパク質サブタイプの相違点は、Ｎ末端にある膜貫通領域（アミノ酸残基１～２７）と第１の細胞外領域（ｌｏｏｐ１、アミノ酸残基２８～８０）であり、ｌｏｏｐ１領域の配列類似性は約８５％であるため、クローディン１８．２を特異的に標的とする抗体を生成する可能性がある。クローディン１８の膜タンパク質サブタイプは、正常組織において分布が異なり、クローディン１８．１は正常な肺組織に選択的に発現するが、クローディン１８．２は高分化型胃粘膜細胞の表面のみに高度に特異的に発現し、胃組織の粘膜下に近い幹細胞領域では検出されない。研究によると、腫瘍組織において、クローディン１８．２は、７０％の原発性胃癌及びその転移に発現するだけでなく、異所性活性化が存在し、膵臓癌（５０％）、食道癌（３０％）、非小細胞肺癌（２５％）、乳癌及び耳鼻咽喉腫瘍などの多くの他の癌に発現することが明らかになっている。消化管腫瘍において広く発現するため、クローディン１８は、新たな腫瘍マーカー及び潜在的な治療標的となる可能性がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

広範囲の詳細な研究及びマススクリーニングを通して、本発明者らは、予想外に、極めて優れた親和性及び特異性を有する抗クローディン１８．２抗体、及び該抗体に基づいて得られるヒト化抗体を得た。本発明の抗体は、クローディン１８．２に高度に特異的に結合することが可能であり、親和性が高く、細胞殺傷作用を媒介することにより、胃癌、膵臓癌などのいくつかの悪性腫瘍の診断及び治療に使用することができる。これに基づいて、本発明を完成した。

【課題を解決するための手段】

【0005】

一態様において、本開示は、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分を提供する。

【0006】

一態様において、本開示は、上記態様に係る抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。

【0007】

一態様において、本開示は、上記態様に係る核酸を含む担体を提供する。

【0008】

一態様において、本開示は、上記態様に係る担体を含む細胞を提供する。

【0009】

上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分において、前記抗体又はその抗原結合部分はヒト化される。

【0010】

一態様において、本開示は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分又はそのコード核酸及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物又はキットを提供する。

【0011】

一態様に係る癌を治療する方法は、治療有効量の上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合断片又は核酸分子又は担体又は細胞又は医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む。

【0012】

一態様に係る用途は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合断片又は核酸分子又は担体又は細胞又は医薬組成物の、哺乳動物の癌を治療するための薬物又はキットの調製における用途である。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】ＲＴ－ＰＣＲは、ＨＥＫ２９３安定形質転換細胞株がそれぞれクローディン１８．１及びクローディン１８．２を発現することを示す。ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株及び対照ＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞は、いずれもクローディン１８．２の特異的な７８０ｂｐの特徴的なバンドを増幅することができ、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．１は、５０４ｂｐの共通断片のみを増幅することができる。

【図2】ＦＡＣＳ実験で高発現のＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株をスクリーニングした結果を示す。図中、黒色点は、陰性対照であり、灰色点は、高発現のＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株である。

【図3】ＦＡＣＳ実験で高発現のＮＩＨ３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株をスクリーニングした結果を示す。図中、黒色の線は、陰性対照であり、灰色の陰影は、３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株である。ＮＯ．３２－Ｈは、高発現の３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＮＯ．１８－Ｍは、中発現の３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＮＯ．６－Ｌは、低発現の３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株である。

【図4】モノクローナル抗体によるクローディン１８．２の特異的認識を示す。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によると、得られたキメラクローディン１８．２ ＩｇＧ１抗体は、クローディン１８．２をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－クローディン１８．２細胞のみを認識し（図４Ｂ）、ＨＥＫ２９３（図４Ａ）及びＨＥＫ２９３－クローディン１８．１（図４Ｃ）といずれも結合しないことを示す。

【図5】クローディン１８．２抗体と細胞を３７℃で異なる時間インキュベートした後、細胞内取り込み作用に伴う細胞表面の抗体数の変化を示す。

【図6】クローディン１８．２ヒト化抗体によるＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞のＡＤＣＣ細胞殺傷活性を示す。

【図7】クローディン１８．２ヒト化抗体による腫瘍細胞のＣＤＣ細胞殺傷活性を示す。

【図8】クローディン１８．２抗体の細胞内取り込みを示す。レーザー共焦点によると、ヒト化クローディン１８．２抗体（赤色）が細胞膜に結合し、その一部が細胞内に取り込まれた後にリソソーム（緑色）と重なり、矢印で示される黄色のスポット領域を形成する（青色が細胞核である）ことを示す。

【発明を実施するための形態】

【0014】

Ｉ．定義
本発明において、特に断りのない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は、当業者が一般的に理解する意味を有する。また、本明細書において使用されるタンパク質及び核酸化学、分子生物学、細胞及び組織培養、微生物学、免疫学の関連用語及び実験室の操作ステップは、いずれも対応する分野で広く使用されている用語及び一般的なステップである。また、本発明をよりよく理解するために、以下、関連する用語の定義及び解釈を提供する。

【0015】

一態様において、本明細書は、クローディン１８．２に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を提供する。具体的な態様において、本明細書は、ヒトクローディン１８．２に特異的に結合する抗クローディン１８．２モノクローナル抗体を提供し、上記抗クローディン１８．２抗体は、親抗体の変異体を含む。具体的な態様において、本明細書は、クローディン１８．２（例えば、ヒトクローディン１８．２）に特異的に結合する抗体を提供する。特定の態様において、本明細書は、１つ以上のアミノ酸残基の修飾を含み、上記修飾のない親抗体と比べて、抗原との親和性を維持する抗クローディン１８．２抗体（例えば、重鎖可変領域のフレームワーク領域における５～１３個のアミノ酸置換）を提供する。

【0016】

本明細書において使用されるとき、用語「約」又は「およそ」は、特に断りのない限り、所定の値又は範囲のプラス又はマイナス１０％以内を意味する。整数にする場合、これらの用語は、所定の値又は範囲のプラス又はマイナス１０％以内において、最も近い整数に切り上げる又は切り下げることを意味する。

【0017】

抗体鎖のポリペプチド配列に関して、語句「実質的に同一」は、参照ポリペプチド配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を示す抗体鎖として解釈され得る。核酸配列に関して、該用語は、参照核酸配列に対して、少なくとも６０％より高く、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％より高い配列同一性を示すヌクレオチド配列として解釈され得る。

【0018】

配列「相同性」又は「同一性」は、本分野で一致して認められている意味であり、開示された技術を用いて、２つの核酸又はポリペプチド分子又は領域間の配列同一性のパーセンテージを算出することができる。配列相同性は、ポリヌクレオチド又はポリペプチドの全長に沿って、又は該分子の領域に沿って測定することができる。２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド間の相同性を測定するための方法は多数あるが、用語「相同性」は、当業者に周知である（Ｃａｒｒｉｌｌｏ， Ｈ． ＆ Ｌｉｐｍａｎ， Ｄ．，ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３（１９８８））。

【0019】

「置換」変異体は、天然配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、同じ位置に異なるアミノ酸が挿入された変異体である。上記置換は、単一とすることができ、ここでは分子における１つのアミノ酸のみが置換されており、或いは、上記置換は、複数とすることができ、ここでは同じ分子における２つ以上のアミノ酸が置換されている。複数の置換は、連続した部位に存在することができる。同様に、１つのアミノ酸は、複数の残基で置換されてよく、その場合、このような変異体は、置換と挿入の両方を含む。「挿入」変異体は、１つ以上のアミノ酸が天然配列中の特定の位置におけるあるアミノ酸に直接隣接して挿入された変異体である。あるアミノ酸に直接隣接するとは、該アミノ酸のα－カルボキシル官能基又はα－アミノ官能基に連結することを意味する。「欠失」変異体は、天然アミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸が除去された変異体である。通常、欠失変異体では、分子の特定の領域中の１つ又は２つのアミノ酸が欠失している。

【0020】

抗体の可変ドメインの文脈における用語「可変」は、抗体間で配列が大きく異なり、その特定の標的に対する特定の抗体の特異的認識及び結合において使用される、関連する分子のいくつかの部分を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインにわたって均等に分布していない。可変性は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方における、相補性決定領域（ＣＤＲｓ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）又は超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域又はフレームワーク配列と呼ばれる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つのＣＤＲｓによって連結し、β－シート配置を主に取る４つのＦＲ領域を含み、ＣＤＲｓは、β－シート構造に連結するループを形成し、ある場合にはβ－シート構造の一部を形成する。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域によって接近して連結することが多く、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位（エピトープ又は決定基）の形成に寄与する。本明細書において使用されるとき、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、特に断りのない限り、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けシステムに従って行われる。１つのＣＤＲは、同族エピトープに特異的に結合する能力を有することができる。

【0021】

本明細書において使用されるとき、抗体の「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、全長未満であるが、抗原に結合する抗体の可変領域の一部（例えば、１つ以上のＣＤＲ及び／又は１つ以上の抗体結合部位）を少なくとも含有し、したがって、結合特異性及び全長抗体の特異的結合能の少なくとも一部を保持する全長抗体の任意の部分を指す。したがって、抗原結合断片は、抗体断片が由来する抗体と同一の抗原に結合する抗原結合部分を含有する抗体断片を指す。抗体断片は、全長抗体の酵素的処理によって産生された抗体誘導体と、合成的に、例えば、組換えによって産生された誘導体とを含む。抗体は、抗体断片を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、Ｆｄ、及びＦｄ’断片、並びに修飾断片を含めたその他の断片を含むが、これらに限定されない。上記断片は、例えば、ジスルフィド結合によって、及び／又はペプチドリンカーによって互いに連結している複数の鎖を含むことができる。抗体断片は、一般的に、少なくとも又は約５０個のアミノ酸、通常、少なくとも又は約２００個のアミノ酸を含有する。抗原結合断片は、抗体フレームワーク中に挿入された場合に（対応する領域を置換することなどによって）、抗原に免疫特異的に結合する（すなわち、少なくとも又は少なくとも約１０^７～１０^８Ｍ^－１のＫａを示す）抗体をもたらす任意の抗体断片を含む。「機能的断片」又は「抗クローディン１８．２抗体の類似体」は、リガンドに結合するか又はシグナル伝達を開始する上記受容体の能力を抑止するか又は実質的に低下させることができる断片又は類似体である。本明細書において使用されるとき、機能的断片は、一般的に「抗体断片」と同義であり、そして抗体に関しては、リガンドに結合するか又はシグナル伝達を開始する上記受容体の能力を抑止するか又は実質的に低下させることができる、Ｆ_ｖ、Ｆ_ａｂ、Ｆ_{（ａｂ’）２}などの断片を指すことができる。「Ｆ_ｖ」断片は、非共有結合において、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ二量体）からなる。該立体配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲｓが相互作用して、インタクト抗体中のようにＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ二量体の表面上で標的結合部位を決定する。全体として、上記６つのＣＤＲｓは、インタクト抗体に標的結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は標的に特異的な３つのＣＤＲｓのみを含むＦ_ｖの半分）でさえ、標的を認識し、結合する能力を有することができる。

【0022】

本明細書において使用されるとき、「モノクローナル抗体」は、同一抗体の集団を指し、これは、モノクローナル抗体の集団中の個々の抗体分子各々が、他の抗体分子に対して同一であることを意味する。このような特性は、複数の異なる配列を有する抗体を含有する抗体のポリクローナル集団の特性とは対照的である。モノクローナル抗体は、いくつかの周知の方法によって調製できる（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ． Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ． ５７， ９１２－９１７；及びＮｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ （２０００）， ５３， １１１－１１７）。例えば、モノクローナル抗体は、例えば、骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞株を産生することによるＢ細胞の不死化によって、又はＥＢＶなどのウイルスによるＢ細胞の感染によって調製できる。組換え技術は、インビトロで、抗体をコードするヌクレオチドの人工配列を保有するプラスミドを用いて、宿主細胞を形質転換することによって、宿主細胞のクローン集団から抗体を調製することもできる。

【0023】

本明細書において使用されるとき、用語「ハイブリドーマ」又は「ハイブリドーマ細胞」は、抗体を産生するリンパ球と抗体を産生しない癌細胞を融合することにより産生される細胞又は細胞株（通常、骨髄腫又はリンパ腫細胞）を指す。当業者に知られているように、ハイブリドーマは、特定のモノクローナル抗体を産生し、持続的に供給することができる。ハイブリドーマを産生するための方法は、本分野において周知である。用語「ハイブリドーマ」又は「ハイブリドーマ細胞」に言及する場合、それは、ハイブリドーマのサブクローン及び子孫細胞をさらに含む。

【0024】

本明細書において使用されるとき、全長抗体は、２つの全長重鎖（例えば、ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３又はＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４）と、２つの全長軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）と、ヒンジ領域とを有する抗体、例えば、抗体を分泌するＢ細胞によって天然に産生される抗体と合成的に産生される同一ドメインを有する抗体である。

【0025】

用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指す。

【0026】

「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合サブ配列）である、非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基によって置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。

【0027】

また、ヒト化において、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３内のアミノ酸残基を突然変異させることにより、抗体の１つ以上の結合特性（例えば親和性）を改善することも可能である。突然変異は、例えば、ＰＣＲによって媒介される突然変異を行うことにより導入することができ、抗体の結合又は他の機能特性への影響は、本明細書に記載のインビトロ又はインビボ試験により評価することができる。一般的には、保存的突然変異が導入される。このような突然変異は、アミノ酸置換、添加又は欠失であってよい。また、ＣＤＲ内の突然変異は、通常、１つ又は２つを超えない。したがって、本発明に係るヒト化抗体は、ＣＤＲ内に１又は２個のアミノ酸変異を含有する抗体をさらにカバーする。

【0028】

本明細書において使用されるとき、用語「エピトープ」は、抗体のパラトープが結合する、抗原上の任意の抗原決定基を指す。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群を含有し、通常、特定の三次元構造的特徴及び特定の荷電特徴を有する。

【0029】

本明細書において使用されるとき、抗体又はその抗原結合断片に関して、用語「特異的に結合する」又は用語「免疫特異的に結合する」は、本明細書において交換可能に使用され、抗体又は抗原結合断片の、抗体と抗原の抗体結合部位との間の非共有結合相互作用によって、同族抗原と１つ以上の非共有結合を形成する能力を指す。上記抗原は、単離された抗原であってもよく、腫瘍細胞中に存在してもよい。通常、抗原に免疫特異的に結合する（又は特異的に結合する）抗体は、約１×１０^７Ｍ^－１若しくは１×１０^８Ｍ^－１若しくはそれ以上の親和性定数Ｋａ（又は１×１０^－７Ｍ若しくは１×１０^－８Ｍ若しくはそれ以下の解離定数（Ｋｄ））で上記抗原に結合する。親和性定数は、抗体反応の標準的動力学的方法、例えば、免疫測定、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｒｉｃｈ ａｎｄ Ｍｙｓｚｋａ （２０００） Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１：５４；Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ （１９９８）Ａｎａｌｙｓｔ．１２３：１５９９）、等温滴定熱量測定法（ＩＴＣ）又は本分野で周知のその他の動力学的相互作用測定によって測定することができる（さらに、抗体の結合親和性を算出するための例示的ＳＰＲ及びＩＴＣ法の説明については、米国特許第７，２２９，６１９号を参照）。結合速度のリアルタイム検出及びモニタリングのための装置及び方法は周知であり、市販されている。

【0030】

本明細書において使用されるとき、抗体に関する用語「競合」は、第１の抗体又はその抗原結合断片が、第２の抗体又はその抗原結合断片の結合と十分に類似した方式でエピトープに結合し、それによって、第１の抗体とその同族エピトープの結合の結果が、第２の抗体の非存在下よりも、第２の抗体の存在下で、検出可能に低下することを意味する。或いは、第２の抗体とそのエピトープの結合も第１の抗体の存在下で検出可能に低下する場合もありうるが、そうである必要はない。すなわち、第１の抗体によって第２の抗体とそのエピトープとの結合を抑制することができ、第２の抗体によって第１の抗体とその各自のエピトープとの結合を抑制する必要はない。しかしながら、それぞれの抗体が、同レベルか、より高いレベルか、より低いレベルかにかかわらず、他の抗体とその同族エピトープ又はリガンドとの結合を検出可能に抑制する場合、上記抗体は、その各自のエピトープの結合について互いに「交差競合する」と言われる。競合及び交差競合抗体はどちらも本発明に含まれる。このような競合又は交差競合がどのようなメカニズムで発生するかにかかわらず（例えば、立体障害、立体配位変化、又は共通エピトープ若しくはその断片との結合）、当業者であれば、本発明の教示に基づいて、このような競合及び／又は交差競合抗体が本発明に含まれ、本発明に開示された方法に適用可能であることを認識することができる。

【0031】

本明細書において使用されるとき、用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸分子」は、少なくとも２つの連結しているヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体を含有するオリゴマー又はポリマーであり、通常、リン酸ジエステル結合を介して連結するデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸を含む（ＲＮＡ）。本明細書において使用されるとき、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことを意図する。核酸分子は、一本鎖又は二本鎖であってもよく、かつｃＤＮＡであってもよい。

【0032】

本明細書において使用されるとき、単離された核酸分子は、核酸分子の天然供給源中に存在するその他の核酸分子から分離される核酸分子である。ｃＤＮＡ分子などの「単離された」核酸分子は、組換え技術によって調製される場合に、その他の細胞性物質若しくは培地を実質的に含まないもの、又は化学的に合成される場合に、化学前駆体若しくはその他の化学物質を実質的に含まないものであってよい。本明細書に係る例示的な単離された核酸分子は、提供される抗体又は抗原結合断片をコードする単離された核酸分子を含む。

【0033】

本明細書において使用されるとき、核酸配列、領域、エレメント又はドメインに関して、用語「作動可能に連結する」は、核酸領域が互いに機能的に関連していることを示す。例えば、プロモーターは、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結することができ、それによって、上記プロモーターは、上記核酸の転写を調節又は媒介する。

【0034】

本明細書に記載の配列表における上記配列の「保存的配列修飾」、すなわち、ヌクレオチド配列によりコードされるか又はアミノ酸配列を含む抗体と抗原との結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸配列修飾も提供される。これらの保存的配列修飾は、保存的ヌクレオチド、アミノ酸置換、及び、ヌクレオチド及びアミノ酸の付加及び欠失を含む。例えば、本分野で周知の標準技術（例えば、部位特異的変異及びＰＣＲ媒介性変異誘発）により修飾を本明細書に記載の配列表に導入することができる。保存的配列修飾は、保存的アミノ酸置換を含み、アミノ酸残基は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される。類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、本分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン及びヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非帯電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。したがって、抗クローディン１８．２抗体における予測される非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換される。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、本分野において周知である（例えば、Ｂｌｏｍｍｅｌｌら，Ｂｉｏｃｈｅｍ． ３２：１１８０－１１８７（１９９３）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４（１９９９）；及びＢｕｒｋｓら，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９４：４１２－４１７（１９９７）を参照）。

【0035】

他の選択肢として、別の実施形態において、例えば飽和変異誘発により、抗クローディン１８．２抗体をコードする配列の全部又は一部に沿ってランダムに変異を導入することができ、得られた修飾された抗クローディン１８．２抗体を、改善された結合活性についてスクリーニングすることができる。

【0036】

本明細書において使用されるとき、「発現」は、ポリヌクレオチドの転写及び翻訳によってポリペプチドを産生するプロセスを指す。ポリペプチドの発現レベルは、例えば、宿主細胞から産生されたポリペプチドの量を測定する方法を含む、本分野で周知の任意の方法を使用して評価することができる。このような方法は、ＥＬＩＳＡによる細胞溶解物中のポリペプチドの定量、ゲル電気泳動法後のクーマシーブルー染色、Ｌｏｗｒｙタンパク質アッセイ及びＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを含むことができるが、これらに限定されない。

【0037】

本明細書において使用されるとき、「宿主細胞」は、担体を受け取り、維持し、複製し、増幅するための細胞である。宿主細胞は、さらに、担体によってコードされるポリペプチドを発現するために使用することができる。宿主細胞が分裂するとき、担体に含有される核酸が複製されて、核酸を増幅する。宿主細胞は、真核細胞であってもよく、原核細胞であってもよい。好適な宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、様々なＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞を含むが、これらに限定されない。

【0038】

本明細書において使用されるとき、「担体」は、複製可能な核酸であり、担体を適切な宿主細胞に形質転換するとき、該担体から１つ以上の異種のタンパク質を発現させることができる。担体についての言及は、一般的に制限消化及び連結によって、ポリペプチド又はその断片をコードする核酸を導入できる担体を含む。担体についての言及は、ポリペプチドをコードする核酸を含有する担体をさらに含む。担体は、核酸の増幅のために、又は核酸によってコードされるポリペプチドの発現／提示のために、ポリペプチドをコードする核酸を宿主細胞に導入するために使用される。担体は、一般的にエピソームのままであるが、遺伝子又はその部分をゲノム染色体に組み込むことを引き起こすように設計されてもよい。また、酵母人工染色体及び哺乳動物人工染色体などの人工染色体である担体も考慮される。このような媒体の選択及び用途は、当業者に周知である。

【0039】

本明細書において使用されるとき、担体は、「ウイルス担体」又は「ウイルスの担体」をさらに含む。ウイルスの担体は、外因性遺伝子を（媒体又はシャトル（ｓｈｕｔｔｌｅ）として）細胞に移行するように、外因性遺伝子に作動可能に連結した、操作されたウイルスである。

【0040】

本明細書において使用されるとき、「発現担体」は、ＤＮＡを発現することができる担体を含み、上記ＤＮＡは、例えば、プロモーター領域の、ＤＮＡ断片の発現に影響を与える調節配列に作動可能に連結する。このような追加の断片は、プロモーター及びターミネーター配列を含むことがあり、任意選択で、１つ以上の複製起点、１つ以上の選択可能マーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル等を含むことができる。発現担体は、一般的に、プラスミド又はウイルスＤＮＡに由来するか、又は両方のエレメントを含有することができる。したがって、発現担体は、組換えＤＮＡ又はＲＮＡ構築物、例えば、プラスミド、ファージ、組換えウイルス、又は適切な宿主細胞への導入に際してクローニングされたＤＮＡの発現をもたらす他の担体を指す。適切な発現担体は、当業者に周知であり、真核細胞及び／又は原核細胞において複製可能な発現担体、及びエピソームのままである発現担体又は宿主細胞ゲノムに組み込まれる発現担体を含む。

【0041】

本明細書において使用されるとき、疾患を有する又は疾患状態にある個体を「治療する」とは、上記個体の症状が、部分的又は全体的に寛解するか、又は治療後そのまま変化しないことを意味する。したがって、治療は、予防、治療及び／又は治癒を含む。予防は、潜在的な疾患の防止及び／又は症状の悪化若しくは疾患の進行の防止を指す。治療は、提供される任意の抗体若しくはその抗原結合断片、及び本明細書において提供される組成物の任意の薬学的用途をさらに含む。

【0042】

本明細書において使用されるとき、「治療効果」は、個体の治療によって得られる効果を意味し、疾患若しくは疾患状態の症状の変化、通常は改良若しくは改善、又は疾患若しくは疾患状態の治癒である。

【0043】

本明細書において使用されるとき、「治療有効量」又は「治療有効用量」は、対象への投与後に治療効果を達成するのに少なくとも十分な、薬剤、化合物、物質又は化合物を含有する組成物の量を指す。したがって、それは、疾患又は病症の症状を防止、治癒、改善、抑制又は部分的に抑制するために必要な量である。

【0044】

本明細書において使用されるとき、「予防有効量」又は「予防有効用量」は、対象への投与時に、例えば疾患又は症状の発生又は再発の防止又は遅延、疾患又は症状の発生又は再発の可能性の低減など、意図される予防効果を有する薬剤、化合物、物質又は化合物を含有する組成物の量を指す。完全な予防有効用量は、１用量の投与で達成する必要はなく、一連の用量が投与されたときのみ達成されてもよい。したがって、予防有効量は、１回又は複数回の投与において投与し得る。

【0045】

本明細書において使用されるとき、用語「患者」は、哺乳動物、例えばヒトを指す。

【0046】

ＩＩ．発明を実施するための形態
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２－４、１２－１４、２２－２４、３２－３４、４２－４４、５２－５４、６２－６４、７２－７４、８２－８４、９２－９４、１０２－１０４、１１２－１１４、１２２－１２４、１３２－１３４、１４２－１４４、１５２－１５４、１５７－１５９、１６２－１６４、１６７－１６９、１７２－１７４、１７７－１７９、１８２－１８４、１８７－１８９、１９２－１９４、１９７－１９９、２０２－２０４、２０７－２０９、２１２－２１４、２１７－２１９、２２２－２２４、２２７－２２９、２３２－２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号７－９、１７－１９、２７－２９、３７－３９、４７－４９、５７－５９、６７－６９、７７－７９、８７－８９、９７－９９、１０７－１０９、１１７－１１９、１２７－１２９、１３７－１３９、１４７－１４９、２３７－２３９、２４２－２４４、２４７－２４９、２５２－２５４、２５７－２５９、２６２－２６４、２６７－２６９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲを含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分を提供する。

【0047】

前の態様に係る抗体又はその抗原結合部分は、アミノ酸配列の配列番号２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１５７、１６２、１６７、１７２、１７７、１８２、１８７、１９２、１９７、２０２、２０７、２１２、２１７、２２２、２２７、２３２又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列の配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１５８、１６３、１６８、１７３、１７８、１８３、１８８、１９３、１９８、２０３、２０８、２１３、２１８、２２３、２２８、２３３又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列の配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１５９、１６４、１６９、１７４、１７９、１８４、１８９、１９４、１９９、２０４、２０９、２１４、２１９、２２４、２２９、２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、２３７、２４２、２４７、２５２、２５７、２６２、２６７又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列の配列番号８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、１４８、２３８、２４３、２４８、２５３、２５８、２６３、２６８又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列の配列番号９、１９、２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、２３９、２４４、２４９、２５４、２５９、２６４、２６９又はそれらの任意の変形体から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0048】

上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分は、アミノ酸配列の配列番号１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１５６、１６１、１６６、１７１、１７６、１８１、１８６、１９１、１９６、２０１、２０６、２１１、２１６、２２１、２２６、２３１又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、２３６、２４１、２４６、２５１、２５６、２６１、２６６又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む。

【0049】

上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子は、配列番号５、１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５又はそれらの任意の変異体から選択された抗体重鎖核酸配列、及び／又は、配列番号１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０又はそれらの任意の変異体から選択された抗体軽鎖核酸配列を含む。

【0050】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５１、１５６、１６１、１６６、１７１、１７６、１８１、１８６、１９１、１９６、２０１、２０６、２１１、２１６、２２１、２２６、２３１又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６、２４１、２４６、２５１、２５６、２６１、２６６又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0051】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0052】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２４１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0053】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0054】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0055】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２４１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0056】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0057】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0058】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２４１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0059】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0060】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0061】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２４１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0062】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0063】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１７１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0064】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１７１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0065】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１７６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0066】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１７６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0067】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１８１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0068】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１８１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0069】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１８６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0070】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１８６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0071】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１９１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0072】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１９１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0073】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１９６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0074】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１９６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0075】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0076】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0077】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0078】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0079】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0080】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0081】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0082】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0083】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0084】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0085】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0086】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0087】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２３１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0088】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２３１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。

【0089】

１つの具体的な実施形態において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５２－１５４、１５７－１５９、１６２－１６４、１６７－１６９、１７２－１７４、１７７－１７９、１８２－１８４、１８７－１８９、１９２－１９４、１９７－１９９、２０２－２０４、２０７－２０９、２１２－２１４、２１７－２１９、２２２－２２４、２２７－２２９、２３２－２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３７－２３９、２４２－２４４、２４７－２４９、２５２－２５４、２５７－２５９、２６２－２６４、２６７－２６９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲを含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分を提供する。

【0090】

一態様に係るヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分は、（１）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（４）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（５）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（６）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（７）それぞれ配列番号１６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（８）それぞれ配列番号１６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（９）それぞれ配列番号１６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１０）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１１）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１２）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１３）それぞれ配列番号１７２－１７４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１４）それぞれ配列番号１７２－１７４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１５）それぞれ配列番号１７７－１７９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１６）それぞれ配列番号１７７－１７９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１７）それぞれ配列番号１８２－１８４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１８）それぞれ配列番号１８２－１８４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１９）それぞれ配列番号１８７－１８９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２０）それぞれ配列番号１８７－１８９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２１）それぞれ配列番号１９２－１９４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２２）それぞれ配列番号１９２－１９４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２３）それぞれ配列番号１９７－１９９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２４）それぞれ配列番号１９７－１９９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２５）それぞれ配列番号２０２－２０４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２６）それぞれ配列番号２０２－２０４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２７）それぞれ配列番号２０７－２０９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２８）それぞれ配列番号２０７－２０９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２９）それぞれ配列番号２１２－２１４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３０）それぞれ配列番号２１２－２１４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３１）それぞれ配列番号２１７－２１９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３２）それぞれ配列番号２１７－２１９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３３）それぞれ配列番号２２２－２２４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３４）それぞれ配列番号２２２－２２４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３５）それぞれ配列番号２２７－２２９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３６）それぞれ配列番号２２７－２２９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３７）それぞれ配列番号２３２－２３４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３８）それぞれ配列番号２３２－２３４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列という重鎖及び軽鎖のＣＤＲ組み合わせを含む。

【0091】

一態様に係るヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分に対して、少なくとも６０％より高く、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％より高い配列同一性を有する。

【0092】

一態様に係る核酸分子は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子、又はそれに対して少なくとも６０％より高く、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％より高い配列同一性を有する。

【0093】

一態様に係る担体は、上記いずれかの態様に係る核酸を含む。

【0094】

一態様に係る細胞は、上記いずれかの態様に係る担体を含む。

【0095】

一態様に係る医薬組成物は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分又はそのコード核酸及び薬学的に許容される担体を含む。

【0096】

一態様に係る癌を治療する方法は、治療有効量の上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合断片又は核酸分子又は担体又は細胞又は医薬組成物を上記哺乳動物に投与するステップを含む。

【0097】

一態様に係る用途は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合断片又は核酸分子又は担体又は細胞又は医薬組成物の、哺乳動物の癌を治療するための薬物の調製における用途である。

【0098】

上記いずれかの態様において、任意選択で、上記癌は胃癌であり、任意選択で、上記抗体は、ＡＤＣＣ又はＣＤＣ効果によって癌細胞を死滅させ、任意選択で、上記抗体は、その他の薬物、例えば、標識化接合体又は細胞毒性接合体と結合する。

【0099】

一態様において、本開示は、抗体、その断片、相同体、その誘導体等、例えば、標識化接合体又は細胞毒性接合体、並びに抗体、特定の細胞型を死滅させる接合体などの使用についての使用説明書を含むキットをさらに含む。該説明書は、インビトロ、インビボ又はエキソビボでの抗体、接合体などを使用するための指示を含むことができる。抗体は、液体形態であってもよく、一般的に凍結乾燥された固体であってもよい。該キットは、適切な他の試薬、例えば、緩衝液、再構成溶液及び所定の用途に必要な他の成分を含むことができる。その用途のための、例えば、治療上の用途又は診断アッセイの実施のための説明書と共に、所定量の包装された試薬の組み合わせが検討される。抗体が標識され、例えば酵素で標識される場合、該キットは、基質と酵素に必要な補因子（例えば、検出可能な発色団又は発蛍光団を提供する基質前駆体）とを含むことができる。また、他の添加剤、例えば、安定剤、緩衝液（例えば、ブロッキング用緩衝液又は溶解用緩衝液）などを含むこともできる。様々な試薬の相対量を変更して、試薬溶液の濃縮物を提供してもよく、それによって使用者に柔軟性、空間の節約、試薬の節約等がもたらされる。これらの試薬は、一般的に凍結乾燥された乾燥粉末として提供され、溶解時に適切な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む。

【0100】

一態様に係る用途は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又は核酸分子又は担体又は細胞又は医薬組成物又はキットの、細胞表面のクローディン１８．２の細胞内取り込みを媒介する試薬の調製における用途である。

【0101】

本発明は、二重特異的抗クローディン１８．２抗体を含む多価抗体をさらに含み、この抗体は、該抗体に連結し、診断又は治療の機能を有するエフェクター分子、原子又は他の物質を有する。例えば、抗体は、該抗体に連結し、癌をインビボで診断又は治療するために使用される放射性診断標識、又は放射性細胞毒性原子若しくは金属、又は細胞毒性物質（例えば、リシン鎖）を有することができる。

【0102】

また、本発明に係る抗体は、免疫測定法、精製方法、及び免疫グロブリン又はその断片を使用する他の方法において使用されてもよい。このような用途は、本分野において周知である。

【0103】

したがって、本発明は、本発明に係る抗クローディン１８．２抗体又はその断片を含む組成物をさらに提供し、上記抗体は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と組み合わせやすく、これは本分野において一般的な手法である。

【0104】

本発明において使用される用語「医薬組成物」は、様々な調製物の製剤を指す。治療有効量の多価抗体を含む製剤は、滅菌液体溶液、液体懸濁液又は凍結乾燥形態であり、任意選択で安定剤又は賦形剤を含有する。

【0105】

本発明において使用される用語「癌」は、哺乳動物、特にヒトの生理的状態を指すか又は説明しており、その典型的な特徴は、細胞が無秩序に増殖することである。癌の例は、癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病を含むが、これらに限定されない。

【0106】

本発明に係る抗体は、単独で投与される組成物として使用されてもよく、他の活性剤と併用されてもよい。

【0107】

なお、上記実施形態に係る治療薬は、適切な薬学的に許容される担体、賦形剤、及び製剤中に組み込まれて移行、送達、耐性などを改善する他の試薬とともに投与されることを理解されたい。多数の適切な製剤は、すべての医薬品化学者にとって周知の薬局方、特にＢｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章に見出すことができる。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー剤、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性又はアニオン性）含有担体（例えば、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ^ＴＭ）、ＤＮＡ接合体、無水吸収性ペースト、水中油型及び油中水型エマルション、エマルションカーボワックス（異なる分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックスを含む半固体混合物を含む。製剤中の有効成分が製剤によって不活性化されず、製剤が投与経路において生理学的に適合性及び忍容性を示すものである限り、上記いずれかの混合物は、いずれも本発明に係る治療及び治療方法に適用可能である。

【0108】

１つの実施形態において、上記抗体を治療薬として使用することができる。このような試薬は、一般的に、被験体の、異常なクローディン１８．２の発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は病態を治療、緩和及び／又は予防するために使用される。治療レジメンは、標準的な方法を用いて、例えば異常なクローディン１８．２の発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は障害、例えば癌又は他の腫瘍性障害に罹患した（又はそれらを発症するリスクを有するか又はそれらが進行している）ヒト患者などの被験体を特定することによって、実施することができる。抗体製剤、好ましくはその標的抗原に対して高い特異性及び高い親和性を有する抗体製剤は、被験体に投与されると、標的との結合による作用を一般的に示す。抗体の投与によって、標的（例えばクローディン１８．２）の発現、活性及び／又はシグナル伝達機能を除去又は抑制又は阻止することができる。抗体の投与によって、標的（例えばクローディン１８．２）とそれが天然に結合する内因性リガンドとの結合を除去又は抑制又は阻止することができる。例えば、抗体は標的に結合して、クローディン１８．２の発現、活性及び／又はシグナル伝達を調節、遮断、抑制、減少、阻害、中和するか、又は他の形で妨げる。いくつかの実施形態において、異常なクローディン１８．２の発現に関連する疾患又は障害を治療するために、重鎖及び軽鎖のＣＤＲを有する抗体を被験体に投与することができる。１つの実施形態において、異常なクローディン１８．２の発現に関連する疾患又は障害は、癌であってもよい。

【0109】

非限定的な例として、異常なクローディン１８．２の発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連した疾患又は障害は、血液癌及び／又は固形腫瘍を含む。血液癌は、例えば、白血病、リンパ腫及び骨髄腫を含む。非限定的な例として、いくつかの形態の白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、及び骨髄異形成症候群を含む。非限定的な例として、いくつかの形態のリンパ腫は、ホジキンリンパ腫、低悪性度及び侵襲性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫（小細胞型及び大細胞型）を含む。非限定的な例として、いくつかの形態の骨髄腫は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖又はＢｅｎｃｅ－Ｊｏｎｅｓ骨髄腫を含む。固形腫瘍は、例えば、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝臓腫瘍、及び腎臓腫瘍を含む。

【0110】

癌及び他の腫瘍性障害に関連する症状は、例えば、炎症、熱、全身倦怠感、熱、疼痛、しばしば局所炎症、食欲減退、体重減少、浮腫、頭痛、疲労、発疹、貧血、筋力低下、筋疲労、及び腹痛、下痢又は便秘などの腹部症状を含む。

【0111】

別の実施形態において、クローディン１８．２を標的とする抗体は、クローディン１８．２の局在化及び／又は定量に関連した、本分野で周知の方法により使用することができる（例えば、適切な生理学的試料中のクローディン１８．２及び／又はクローディン１８．２のレベルを測定するための使用、診断方法における使用、タンパク質のイメージングにおける使用など）。１つの特定の実施形態において、クローディン１８．２又はその誘導体、断片、類似体若しくは相同体に対して特異的であり、抗体由来の抗原結合ドメインを含む抗体は、薬理学的に活性な化合物（以下、「治療薬」と呼ばれる）として使用される。

【0112】

別の実施形態において、免疫アフィニティー、クロマトグラフィー又は免疫沈降法などの標準的な方法によって、クローディン１８．２に対して特異的な抗体を使用してクローディン１８．２ポリペプチドを単離することができる。クローディン１８．２タンパク質を標的とする抗体（又はその断片）を使用して、生物学的試料中のタンパク質を検出することができる。いくつかの実施形態において、例えば所定の治療レジメンの効果を判定するという目的で、臨床試験手順の一環として生物学的試料中のクローディン１８．２を検出することができる。抗体を検出可能な物質と結合する（すなわち物理的に連結する）ことによって、検出を促進することができる。検出可能な物質の例は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質及び放射性物質を含む。適切な酵素の例は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼを含み、適切な補欠分子族複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンを含み、適切な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル又はフィコエリトリンを含み、発光物質の１つの例は、ルミノールを含み、生物発光物質の例は、ルシフェラーゼ、フルオレセイン及びイクオリンを含み、適切な放射性物質の例は、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ又は^３Ｈを含む。

【0113】

別の実施形態において、本開示に係る抗体は、試料中のクローディン１８．２又はそのタンパク質断片の両方を検出するための試薬として使用することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、検出可能な標識を含む。抗体は、ポリクローナル抗体であるか、又はより好ましくはモノクローナル抗体である。完全な抗体又はその断片（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はＦ（ａｂ’）_２）が使用される。抗体に関して用語「標識」は、検出可能な物質を該抗体と結合する（すなわち物理的に連結する）ことによる該抗体の直接的標識と、直接標識された別の試薬との反応による該抗体の間接的標識とを含むことを意図している。間接的標識の例は、蛍光標識された第２の抗体を用いて第１の抗体を検出することと、蛍光標識されたストレプトアビジンによって検出されるようにビオチンで抗体を末端標識することとを含む。用語「生物学的試料」は、被験体から単離された組織、細胞及び生物学的液体、並びに被験体の体内に存在する組織、細胞及び液体を含むことを意図している。したがって、使用される用語「生物学的試料」は、血液、及び血清、血漿又はリンパ液を含む血液の画分又は成分を含む。換言すれば、上記実施形態の検出方法を用いて、生物学的試料中の分析物ｍＲＮＡ、タンパク質又はゲノムＤＮＡをインビトロ及びインビボで検出することができる。例えば、分析物ｍＲＮＡをインビトロで検出する技術は、Ｎｏｒｈｔｅｒｎハイブリダイゼーション及びインサイチュハイブリダイゼーションを含む。分析物タンパク質をインビトロで検出する技術は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｗｅｓｔｅｒｎブロット、免疫沈降法及び免疫蛍光法を含む。分析物ゲノムＤＮＡをインビトロで検出する技術は、Ｓｏｕｔｈｅｒｎハイブリダイゼーションを含む。また、分析物タンパク質をインビボで検出する技術は、標識した抗分析物タンパク質抗体を被験体の体内に導入することを含む。例えば、放射性マーカーで抗体を標識し、次に標準的なイメージング法によって被験体の体内における該放射性マーカーの存在又は位置を検出することができる。

【0114】

本明細書に記載の抗体及びその誘導体、断片、類似体及び相同体を、投与に適した医薬組成物中に添加することができる。このような組成物の調製に関連する原理及び考慮事項、並びに成分の選択のガイダンスは、本分野において周知である。

【0115】

このような組成物は、一般的に、抗体及び薬学的に許容される担体を含む。抗体断片を使用するとき、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最も小さい阻害性断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を維持したペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合成されるか、及び／又は組換えＤＮＡ技術によって産生される（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３（１９９３）を参照）。

【0116】

本明細書において使用されるとき、用語「薬学的に許容される担体」は、薬物投与に適合する任意及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含むことを意図している。適切な薬学的に許容される担体について、本分野では標準的な参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に述べられており、該書籍は、参照によって本明細書に組み込まれる。このような担体又は希釈剤の好ましい例は、水、生理食塩水、リンゲル液、グルコース溶液及び５％ヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されない。リポソーム、及び固定油などの非水性担体を使用することもできる。このような媒体及び試薬を薬学的活性物質において使用することは、本分野で周知である。任意の従来の媒体又は試薬が抗体と不適合でない限り、組成物におけるその用途が考えられる。

【0117】

上記実施形態の医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように配合される。投与経路の例は、非経口投与、例えば静脈内投与、皮内投与、皮下投与、経口投与（例えば吸入）、経皮投与（例えば局所投与）、経粘膜投与及び直腸内投与を含む。非経口投与、皮内投与又は皮下投与に使用される溶液又は懸濁液は、水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール系、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒などの注射用滅菌希釈剤と、ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗細菌剤と、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤と、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤と、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤と、塩化ナトリウム又はデキストロースなどの浸透圧調節用試薬とを含むことができる。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調整することができる。非経口製剤は、アンプル、使い捨て注射器、又はガラスやプラスチックで作られた多数回投与バイアルに封入することができる。

【0118】

注射用途に適した医薬組成物は、滅菌水溶液（本明細書において水溶性である）又は分散液と、滅菌注射溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末とを含む。静脈内投与について、適切な薬学的に許容される担体は、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ^ＴＭ（ＢＡＳＦ社、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合に、組成物は滅菌でなければならず、かつ容易に注射可能である程度に流動性を有さなければならない。組成物は、製造及び保存条件下で安定でなければならず、かつ細菌及び真菌などの微生物の汚染作用を防止しなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）を含有する溶媒又は分散媒、及びそれらの適切な混合物であってよい。例えば、レシチンなどのコーティングを使用することにより、分散液の場合に必要な粒径を維持することにより、また、界面活性剤を使用することにより、適正な流動性を保つことができる。微生物の作用に対する防止は、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールによって実現することができる。多くの場合に、組成物中に等張剤、例えば糖類、多価アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、塩化ナトリウムを含むことが好ましい。上記組成物中に、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含有することによって、注射用組成物の持続的吸収を実現することができる。

【0119】

必要に応じて、必要量の抗体を、上記に列挙した成分の１つ又は組み合わせ（必要に応じて）を有する適切な溶媒に添加した後、濾過滅菌を行うことにより、滅菌注射溶液を調製することができる。一般的に、塩基性分散媒と上記に列挙したものから選ばれた他の必要な成分とを含む滅菌担体に抗体を添加することにより、分散液を調製する。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合、調製方法は、有効成分及び任意の更なる所望の成分を含む粉末が得られる真空乾燥及び凍結乾燥であり、それらの成分は上記成分の滅菌濾過溶液由来である。

【0120】

吸入投与について、二酸化炭素などの気体などの適切な推進剤を含む加圧容器、ディスペンサー又は噴霧器からエアロゾルスプレーの形で化合物を投与する。

【0121】

経粘膜的又は経皮的手段によって全身投与を行うこともできる。経粘膜投与又は経皮投与については、製剤中に、浸透すべきバリアに適した浸透剤を使用する。このような浸透剤は、本分野において周知であり、例えば、経粘膜投与のための洗浄剤、胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻スプレー又は坐剤を使用することによって行うことができる。経皮投与については、１つ以上の上記抗体を本分野で周知の膏薬、軟膏、ゲル又はクリームに配合することができる。

【0122】

さらに、直腸投与のために、化合物を坐剤（例えばココアバター又は他のグリセリドなど、従来の坐剤基剤を有するもの）又は停留性浣腸剤の形で調製することができる。

【0123】

１つの実施形態において、上記抗体は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む持続／制御放出製剤などの、身体からの速やかな排出を防ぐ担体を用いて調製することができる。エチレン－酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤を調製する方法は、当業者にとって自明である。

【0124】

投与を容易にし、用量を均一にするために、非経口組成物を単位剤形として調製することが特に有利である。本明細書において使用されるとき、単位剤形は、治療される被験体に用いられ、単位用量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体とともに所望の治療効果を達成するように計算された所定量の１つ以上の上記抗体を含むものである。上記実施形態の単位剤形の仕様は、抗体の固有の特性及び達成されるべき具体的な治療効果と、個体を治療するためのこのような抗体を配合する技術分野に固有の制限とによって決定され、且つこれらに直接依存する。

【0125】

上記医薬組成物は、投与のための説明書とともに容器、パック又はディスペンサーに入れることができる。

【0126】

本明細書に記載の製剤は、治療される具体的な疾患に応じて複数の上記抗体、好ましくは相補的活性を有するが互いに悪影響を及ぼさないものを含んでもよい。代替的に又はそれに加えて、組成物は、細胞毒性剤、サイトカイン、化学治療薬又は増殖阻害剤などの、その機能を高める試薬を含むことができる。このような分子は、意図する目的に対して有効な量で適切に組み合わせて存在する。例えば、キット内で共存することも、使用中に共存することもできる。

【0127】

１つの実施形態において、１つ以上の上記抗体を併用療法において投与することができる。すなわち、治療薬（様々な形態の癌、自己免疫疾患及び炎症性疾患などの病理学的症状又は障害を治療するために使用される）などの他の試薬と併用して投与することができる。用語「併用」は、本明細書において、試薬をほぼ同じ時点で、同時に又は順次投与することを意味する。順次投与する場合、第２の化合物の投与を開始するとき、２つの化合物のうち第１の化合物が治療部位において依然として有効濃度で検出可能であることが好ましい。１つの場合において、「併用」はまた、本発明の抗体及び他の治療薬がキットに含まれることを意味する。

【0128】

例えば、併用療法は、本明細書に記載の１つ以上の抗体と、１つ以上の追加の治療薬（例えば、下記に詳細に述べるような、１つ以上のサイトカイン及び増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、及び／又は細胞毒性剤若しくは細胞増殖抑制剤）との同時配合及び／又は同時投与を含むことができる。このような併用療法は、投与される治療薬を低用量で有利に使用することができ、それにより単独療法に関連する様々な潜在的な毒性又は合併症が回避される。

【0129】

明確かつ簡潔な説明の目的のために、本明細書では、同じ又は別個の実施形態の一部として特徴を説明しているが、本発明の範囲は、説明される特徴の全部又は一部を組み合わせたいくつかの実施形態を含み得ることが理解されるであろう。（実施例）

【実施例0130】

＜抗クローディン１８．２モノクローナル抗体の調製＞
Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫するとともにスクリーニングして、クローディン１８．２にのみ特異的に結合し、クローディン１８の異なるスプライセオソームであるクローディン１８．１に結合しないモノクローナル抗体を取得するために複数のポリシーが同時に適用される。具体的には以下のとおりである。

【0131】

１）クローディン１８．２安定形質転換細胞株の構築
ヒトクローディン１８．１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ５６８５６）の全長配列を含むプラスミド遺伝子クローディン１８．１－ｐｕｃ５７－Ａｍｐ（蘇州鴻迅生物、ＳｙｎｂｉｏＴｅｃｈ）を合成した。該プラスミドをテンプレートとし、上流プライマー５’－ｔｔｇｇｃａａａｇａａｔｔｇｃｔａｇａｔｇｔｃｃａｃｃａｃｃａｃａｔｇｃｃ－３’及び下流プライマー５’－ｔｇｔｔｃｇｇｇｃｃｃｔｃｃｔｃｇａｔｔａｃａｃａｔａｇｔｃｇｔｇｃｔｔｇｇ－３’を使用して、ヒトクローディン１８．１の全長断片（Ｍｅｔ１－Ｖａｌ２６１）をＰＣＲで増幅した。増幅産物を、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＮＥＢ、Ｃａｔ：Ｍ０５３０Ｌ）により酵素に連結した後、真核発現プラスミドシステムにクローニングした。同様に、ヒトクローディン１８．２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ５６８５６－２）の全長配列を含むプラスミド遺伝子クローディン１８．２－ｐｕｃ５７－Ａｍｐ（蘇州鴻迅生物、ＳｙｎｂｉｏＴｅｃｈ）を合成した。該プラスミドをテンプレートとし、上流プライマー５’－ｔｔｇｇｃａａａｇａａｔｔｇｃｔａｇａｔｇｇｃｃｇｔｇａｃｔｇｃｃｔｇｔｃ－３’及び下流プライマー５’－ｔｇｔｔｃｇｇｇｃｃｃｔｃｃｔｃｇａｔｔａｃａｃａｔａｇｔｃｇｔｇｃｔｔｇｇ－３’を使用して、ヒトクローディン１８．２の全長断片（Ｍｅｔ１－Ｖａｌ２６１）をＰＣＲで増幅した。増幅産物を、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＮＥＢ、Ｃａｔ：Ｍ０５３０Ｌ）により酵素に連結した後、真核発現プラスミドシステムにクローニングした。このプラスミドをそれぞれＮＩＨ３Ｔ３細胞とＨＥＫ２９３細胞に電気的に形質転換し、１～１０μｇ／ｍＬのＰｕｒｏｍｙｃｉｎ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ：Ａ１１１３８０３）を使用して安定発現細胞株を段階的に加圧してスクリーニングした。

【0132】

得られたＨＥＫ２９３－クローディン１８．１及びＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株について、まずＲＴ－ＰＣＲ方法で検証した。Ｔｒｉｚｏｌ ＲＮＡ抽出キットを使用して陽性クローン細胞から全ＲＮＡを抽出し、逆転写キット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＴＭ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｃａｔ：１８０８００５１）を使用して、Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）プライマーを使用して逆転写を行い、ｃＤＮＡライブラリを得た。クローディンの２つのスプライス断片であるクローディン１８．１とクローディン１８．２は、Ｎ末端から１番目の細胞外領域（Ｌｏｏｐ １）までが異なるため、プライマーＫＮＢ１４（５’－ｔｇｔｇｃｇｃｃａｃｃａｔｇｇｃｃｇｔｇ－３’）、ＫＮＢ１５（５’－ｔｇｇａａｇｇａｔａａｇａｔｔｇｔａｃｃ－３’）を設計することにより、クローディン１８．１とクローディン１８．２のＬｏｏｐ １からＣ末端までの領域（５０４ｂｐ）を増幅することができる。プライマーＫＮＢ１６（５’－ｔｇｇｇｔｇｃｃａｔｔｇｇｃｃｔｃｃｔｇ－３’）を設計することにより、クローディン１８．２のＮ末端に特異的に相補的に結合し、クローディン１８．１のＮ末端領域に結合せず、クローディン１８．２のＮ末端からＣ末端までの全長断片（７８０ｂｐ）のみを増幅して、クローディン１８．２を発現するＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－１０３）を陽性対照とした。結果を図１に示す。ＲＴ－ＰＣＲにより、ＨＥＫ２９３安定形質転換細胞株がそれぞれクローディン１８．１及びクローディン１８．２を発現することが示されている。ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株及び対照ＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞は、いずれもクローディン１８．２の特異的な７８０ｂｐの特徴的なバンドを増幅することができ、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．１は、５０４ｂｐの共通断片のみを増幅することができる。

【0133】

構築された安定形質転換細胞株ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２細胞及びＮＩＨ３Ｔ３－クローディン１８．２細胞を消化して収集し、ＰＢＳで２回洗浄し、管あたり１：２００で希釈された第１の抗体ウサギ抗クローディン１８．２（Ａｂｃａｍ、ＥＰＲ１９２０２、品番：ａｂ２２２５１２）を１００μＬ加え、４℃で６０分間培養し、０．５％ ＢＳＡ／ＰＢＳで余分な第１の抗体溶液を洗浄し、さらに５０μＬの第２の抗体ヤギ抗ウサギＩｇＧＦｃ－ＡＦ６４７（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、品番：１１１－６０６－０４６）を加え、４℃で４５分間インキュベートし、その後に０．５％ ＢＳＡ／ＰＢＳで余分な第２の抗体を洗浄し、最後に１００μＬのＰＢＳ溶液で細胞を再懸濁させ、直ちにフローサイトメーターで検出した。結果を図２、図３に示す。

【0134】

図２は、ＦＡＣＳ実験により、クローディン１８．２の全長遺伝子をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株を検出した結果を示している。図中、黒色点は、トランスフェクトされていないＨＥＫ２９３細胞であり、灰色点は、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＨＥＫ２９３細胞は、クローディン１８．２を発現させず、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株は、細胞膜表面にクローディン１８．２を高度に発現させている。

【0135】

図３は、ＦＡＣＳ実験により、クローディン１８．２がＮＩＨ３Ｔ３－クローディン１８．２において高度に発現した安定形質転換細胞株を検出した結果を示している。図中、黒色の線は、陰性対照であり、灰色の陰影は、３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株である。ＮＯ．３２－Ｈは、クローディン１８．２が高度に発現した３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＮＯ．１８－Ｍは、クローディン１８．２が中度に発現した３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＮＯ．６－Ｌは、クローディン１８．２が低度に発現した３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株である。

【0136】

増殖された陽性の安定形質転換細胞株を収集して凍結保存し、ＮＩＨ３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株が動物の免疫に用いられる。

【0137】

２）ハイブリドーマからの抗クローディン１８．２モノクローナル抗体の調製
６～８週間の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスに対して、３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞又はクローディン１８．２をコードするプラスミドでそれぞれ免疫を行い、又は交互に免疫を行った。細胞で免疫を行う場合、毎回１×１０^６ ３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞を完全フロイントアジュバント又は不完全フロイントアジュバントと混合した後、大腿部と足蹠に注射し、２週間後に異なる部位で再び免疫した。ＤＮＡで免疫を行う場合、２０μｇのプラスミドを１μｇのＣｐＧと混合した後、遺伝子銃（Ｂｉｏｒａｄ）を用いて４０ｐｓｉでマウスの腹部に直接投与し、毎週１回免疫した。融合準備の３日前に、高発現のＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株を１×１０^６細胞／５０μＬ／匹とし、ショック免疫のために尾静脈注射した。３日後、マウスを殺し、膝窩リンパ節、鼠径リンパ節及び腸骨リンパ節を収集し、ＤＭＥＭで研磨してＢ細胞に富む懸濁液を得、マウスの脾臓を取り出し、ＤＭＥＭで研磨した後に遠心分離し、脾臓細胞懸濁液を得た。適量のリンパ節及び脾細胞の懸濁液とＳＰ２／０を混合して、エレクトロフュージョン装置を用いて細胞融合を行った。

【0138】

３）抗クローディン１８．２ファージ抗体ライブラリの構築
収集された一部のマウス脾臓と末梢リンパ節の細胞懸濁液に対して、Ｔｒｉｚｏｌ ＲＮＡ抽出キットで全ＲＮＡを抽出し、逆転写キット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ、品番１８０８００５１）を用いて、軽鎖、重鎖の特異的プライマーを使用して逆転写を行い、それぞれ抗体の軽鎖、重鎖ｃＤＮＡライブラリを得た。当該ｃＤＮＡをテンプレートとし、軽鎖、重鎖可変領域プライマーＰＣＲで抗体の軽鎖、重鎖可変領域断片を増幅し、ヒト抗体軽鎖定常領域Ｃｋａｐｐａ又はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域ＣＨ１を含むファージプラスミド担体に制限酵素クローニングし、それぞれキメラ軽鎖ライブラリと重鎖ライブラリを形成した。軽鎖ライブラリにおける抗体断片をＢｓｐＱＩとＳｆｉＩで二重酵素切断した後、重鎖ライブラリに連結し、糸状ファージＭ１３に基づくマウスキメラＦａｂファージ表示ライブラリを形成し、ライブラリサイズは１．２×１０^１０個であった。０．８ｍＬのファージ（力価が約１ｘ１０^１３／ｍＬである）と２００μＬの５％ＢＳＡ／ＰＢＳを混合した後、１ｘ１０^７個のＨＥＫ２９３－クローディン１８．１細胞を加え、１時間氷浴し、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を収集し、上清と１ｘ１０^６個のＨＥＫ２９３－クローディン１８．２細胞を混合し、１時間氷浴し、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を捨て、１％ＢＳＡ／ＰＢＳを１ｍＬ加え、５～１０回繰り返して洗浄し、１００ｍＭのＴＥＡ（トリエチルアミン）溶解細胞を１ｍＬ加え、室温で１０分間静置し、１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）を０．５ｍＬ加えて中和した後、対数増殖期にあるＴＧ１ Ｅ．ｃｏｌｉ．細胞を１０ｍＬ感染し、３７℃で３０分間静置した。分子生物学の従来のプロセスに従って、ファージを回収し、力価を検出し、次のスクリーニングを行った。

【実施例0139】

＜抗クローディン１８．２特異的抗体のスクリーニング及び配列取得＞
ＨＥＫ２９３－クローディン１８．１、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２及びＨＥＫ２９３に対して、それぞれ５μＭ、０．５μＭ及び０μＭのＣｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＣＭＦＤＡ Ｄｙｅ（Ｔｈｅｒｍｏ、品番Ｃ２９２５）で指定されたように生細胞予備染色を行い、染料を洗浄した後、１：１：１で混合し、９６ウェルプレート（２ｘ１０^５細胞／ウェル）に加え、ハイブリドーマ上清又は細菌誘導上清と結合し、氷浴で１時間インキュベートした後、ＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ６４７で標識された第２の抗体抗ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｆｃ又は抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ）’２（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を加え、氷上で４５分間インキュベートした。洗浄した後、ＰＢＳ再懸濁細胞をウェルあたり１００μＬ加え、フローサイトメーター（ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ）を準備し、ＦＬ２チャンネルの蛍光強度によって、それぞれ３種類の異なる細胞群を特定した後、ＦＬ４チャンネルの被験抗体と各細胞群の結合状況を検出した。スクリーニングした抗体は、高い親和性でＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞に特異的に結合し、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．１安定形質転換細胞及びＨＥＫ２９３細胞には結合しなかった。ＦＡＣＳ検出により、クローディン１８．２に結合できるがクローディン１８．１に結合しないクローンをハイブリドーマ細胞から合計３２０個スクリーニングし、３回のｐａｎｎｉｎｇを経て、クローディン１８．２に高い親和性で結合するがクローディン１８．１に結合しないクローンをファージＦａｂライブラリから６２個スクリーニングした。

【0140】

ファージライブラリからスクリーニングした陽性クローンに対して、プラスミドを抽出して配列を決定し、全長ＩｇＧ発現のために重鎖及び軽鎖定常領域担体に可変領域配列をクローニングした。ハイブリドーマから得られた陽性細胞において、ＴＲＮｚｏｌを１ｍＬ加えて分裂分解し、グアニジンイソチオシアネート法で全ＲＮＡを抽出した。これをテンプレートとし、第一鎖ｃＤＮＡを合成した後、第一鎖ｃＤＮＡを後続のテンプレートとしてハイブリドーマ細胞に対応する可変領域ＤＮＡ配列を増幅した。増幅産物の配列決定した後、候補ハイブリドーマの重鎖及び軽鎖可変領域配列を得た（以下のとおりである）。

【0141】

クローン８Ｃ１１：配列番号１－１０
重鎖ＶＨ ＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＧＩＮＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＦＰＧＤＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＡＹＭＱＩＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＦＹＹＧＮＳＦＶＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＣＴＴＴＴＧＧＴＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＡＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＴＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＣＣＴＴＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＴＡＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＲＰＧＱＰＰＫＬＬＬＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＡＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＤＹＴＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧＡＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＴＴＴＧＣＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＧＡＴＴＡＴＡＣＴＴＡＴＣＣＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
クローン９Ａ８：配列番号１１－２０
重鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－ ＱＶＱＬＱＱＳＧＲＥＶＶＲＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＰＳＧＹＡＦＴＮＹＬＩＤＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＮＰＧＳＧＤＴＶＹＮＥＫＦＫＡＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＭ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＡＮＭＱＬＳＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＡＲＲＶＲＧＮＳＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＧＴＧＧＴＡＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＧＣＣＴＴＣＡＣＴＡＡＴＴＡＣＴＴＧＡＴＡＧＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＧＧＡＴＴＡＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＧＡＣＡＣＴＧＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＴＧＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＣＧＣＡＡＧＡＡＧＧＧＴＣＣＧＴＧＧＴＡＡＴＴＣＧＴＴＴＧＡＴＴＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＲＮＹＬＴＷＹＱＱＫＴＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＮＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＮＹＹＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＴＴＡＴＴＡＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
クローン９Ｃ９：配列番号２１－３０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＥＶＱＬＫＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＮＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＡＩＷＡＧＧＮＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＬＳＩＲＫＤＮＳＫＳＱ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＭＹＹＣＡＲＶＧＹＧＮＳＦＡＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
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軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＬＳＣＫＳＳＱＴＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＮＹＦＹＰＬＴＦＧＡＧＴＲＬＥＩＫ
核酸配列
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クローン９Ｄ１２：配列番号３１－４０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＥＶＱＬＱＱＳＧＲＥＶＶＲＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＰＳＧＹＡＦＴＮＹＬＩＤＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＮＰＧＳＧＤＴＶＹＮＥＲＦＫＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＳＡＮＭＱＬＳＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＡＲＲＶＲＧＮＳＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
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軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＫＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＦＹＣＱＮＮＹＦＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
核酸配列
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クローン１３Ａ８：配列番号４１－５０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＲＰＧＧＳＬＫＶＳＣＡＡＳＧＩＴＦＳＲＹＡＩＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＳＧＤＳＹＴＹＹＬＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＧＲＬＧＹＧＮＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
核酸配列
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軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＮＩＭＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
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クローン１４Ｈ１１：配列番号５１－６０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＶＳＧＦＴＩＮＮＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＩＧＧＧＳＳＴＹＹＰＤＳＬＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＮＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＶＲＬＹＦＧＮＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
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軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＶＳＣＫＳＳＱＳＬＳＮＳＧＮＱＲＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＮＹＦＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
核酸配列
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クローン１５Ａ７：配列番号６１－７０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＹＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＦＧＩＮＷＶＲＱＲＰＥＫＧＬＥＷＩＧＷＩＦＰＧＤＧＴＴＫＹＮＥＮＦＫＧＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＡＹＭＱＬＳＲＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＦＹＹＧＮＳＦＶＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
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軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＬＳＣＫＳＳＱＴＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＨＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＮＹＦＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
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クローン１５Ｄ１１：配列番号７１－８０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＮＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＡＩＷＡＧＧＮＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＬＳＩＲＫＤＮＳＫＳＱ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＭＹＹＣＡＲＶＧＹＧＮＳＦＡＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
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軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＬＲＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＲＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＮＹＦＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
核酸配列
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クローン１５Ｆ９：配列番号８１－９０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＥＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＩＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＫＷＭＧＷＩＮＰＮＴＧＥＴＴＹＡＥＥＦＫＧＲＦＡＬＳＷＫＴＳＡＳ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＬＹＹＧＮＲＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
核酸配列
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軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＲＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＡＹＹＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
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クローン１８Ａ９：配列番号９１－１００
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＱＶＱＬＱＱＳＧＲＥＶＶＲＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＰＳＧＹＡＦＴＮＹＬＩＤＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＮＰＧＳＧＤＴＶＹＮＥＫＦＫＡＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＭ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＡＮＭＱＬＳＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＡＲＲＶＲＧＮＳＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＧＴＧＧＴＡＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＧＣＣＴＴＣＡＣＴＡＡＴＴＡＣＴＴＧＡＴＡＧＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＧＧＡＴＴＡＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＧＡＣＡＣＴＧＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＴＧＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＣＧＣＡＡＧＡＡＧＧＧＴＣＣＧＴＧＧＴＡＡＴＴＣＧＴＴＴＧＡＴＴＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＫＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＬＹＹＣＱＮＮＹＦＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＴＴＧＴＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＡＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン１８Ｇ５：配列番号１０１－１１０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＥＶＱＬＱＱＳＧＲＥＶＶＲＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＰＳＧＹＡＦＴＮＹＬＩＤＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＮＰＧＳＧＤＴＶＹＮＥＫＦＫＡＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＭ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＴＮＭＱＬＳＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＡＲＲＶＲＧＮＳＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
ＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＧＴＧＧＴＡＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＧＣＣＴＴＣＡＣＴＡＡＴＴＡＣＴＴＧＡＴＡＧＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＧＧＡＴＴＡＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＧＡＣＡＣＴＧＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＴＧＡＣＴＡＣＣＡＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＣＧＣＡＡＧＡＡＧＧＧＴＣＣＧＴＧＧＴＡＡＴＴＣＧＴＴＴＧＡＴＴＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＲＡＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＦＮＳＧＮＱＲＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＬＹＷＡＴＡＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＳＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＶＹＦＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＧＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＴＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＴＴＴＧＣＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
クローン１８Ｄ１０：配列番号１１１－１２０
重鎖ＶＨ ＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＤＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＴＶＴＧＹＳＩＴＳＮＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＮＹＳＧＮＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＱＦＦＬＱＬＮＳＶＴＡＥＤＴＡＴＹＹＣＡＴＳＹＹＧＮＳＦＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
ＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＴＴＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＴＣＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＡＡＴＴＡＴＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＡＣＡＧＴＴＴＣＣＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＡＡＡＣＴＡＣＡＧＴＧＧＧＡＡＣＡＣＴＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＡＡＡＡＧＴＣＧＡＡＴＣＴＣＴＡＴＣＡＣＴＣＧＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＴＣＣＴＧＣＡＧＴＴＧＡＡＴＴＣＴＧＴＧＡＣＴＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＡＡＣＣＴＣＣＴＡＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＴＣＣＴＴＴＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＡＹＳＦＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＧＣＴＴＡＴＡＧＴＴＴＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
クローン１９Ｂ２：配列番号１２１－１３０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＴＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＴＹＧＬＮＷＶＲＱＲＰＫＱＧＬＥＷＩＧＷＩＦＰＧＤＧＮＶＮＹＮＥＫＦＱＧＱＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＡＹＭＱＬＳＲＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＦＹＹＧＮＳＬＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＡＡＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＴＣＣＴＴＣＡＣＡＡＣＣＴＡＴＧＧＴＣＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＡＡＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＴＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＧＴＡＡＴＧＴＴＡＡＣＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＡＴＴＴＣＡＧＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＣＧＧＴＡＡＣＴＣＣＴＴＡＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＬＲＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＲＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＮＹＦＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＴＡＡＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
クローン２５Ａ５：配列番号１３１－１４０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＥＶＱＬＫＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＮＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＡＩＷＡＧＧＮＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＬＳＩＲＫＤＮＳＫＳＱ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＭＹＹＣＡＲＶＧＹＧＮＳＦＡＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
ＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＧＣＧＣＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＴＴＣＡＴＴＧＡＣＣＡＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＣＡＡＴＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＴＴＡＴＡＡＴＴＣＧＧＣＴＣＴＣＡＴＧＴＣＣＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＧＧＡＡＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣＴＴＡＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＴＡＧＧＧＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＣＧＴＴＴＧＣＴＡＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＲＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＩＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＹＣＱＮＮＹＩＦＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＴＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＧＴＧＴＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＴＴＡＴＡＴＴＴＴＴＣＣＴＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
クローン２５Ｆ５：配列番号１４１－１５０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－ ＱＶＱＬＫＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＬＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＧＩＮＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＦＰＧＤＡＴＴＭＹＮＥＫＦＫＧＴＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳ －－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－－＞ ＴＡＹＭＱＬＳＧＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＦＹＹＧＮＳＦＶＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
核酸配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＣＴＣＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＡＡＣＴＴＡＴＧＧＴＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＡＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＴＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＧＣＡＡＣＣＡＣＴＡＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＣＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＧＧＧＴＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＴＴＣＴＡＣＴＡＣＧＧＴＡＡＣＴＣＣＴＴＴＧＴＴＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－ ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞ ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＡＹＹＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＧＣＴＴＡＴＴＡＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ

【0142】

上記重鎖及び軽鎖可変領域配列断片をＰＣＲで増幅し、ヒト重鎖定常領域を含む担体に重鎖可変領域をクローニングすることにより、哺乳動物細胞に完全なＩｇＧ１重鎖を発現させた。同様に、ヒト軽鎖定常領域を含む担体に軽鎖可変領域をクローニングすることにより、哺乳動物細胞に完全なｋａｐｐａ軽鎖を発現させた。配列を正しく決定した後にＨＥＫ２９３－６Ｅ哺乳動物細胞にトランスフェクトし、ＩｇＧ１を発現させ、培地中に分泌させ、合わせて上清を収集し、濾過して精製した。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａクロマトグラフィーを用いてＩｇＧを精製し、培養上清を適切な大きさのＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラムにローディングし、５０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）と２５０ｍＭのＮａＣｌで洗浄し、結合したＩｇＧを０．１ＭのＧｌｙｃｉｎｅ－ＨＣｌ（ｐＨ３．０）で溶出した。濃縮管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いてタンパク質を限外濾過により濃縮し、ＯＤ２８０を検出し、分光光度法によりＩｇＧの濃度を測定した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いてＩｇＧの純度を分析した。

【0143】

対数増殖期にあるＨＥＫ２９３－クローディン１８．１細胞、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２細胞及びＨＥＫ２９３細胞を消化した後に、５×１０^４細胞／１００μＬで９６ウェルＵ底プレートに加え、１１００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を捨て、細胞を軽く振動させて分散させ、段階希釈された抗体（抗体濃度を１００ｎＭから８段階に５倍希釈した）をウェルあたり５０μＬ加え、４℃で１時間インキュベートした。インキュベートが終了した後、０．５％ＢＳＡをウェルあたり１４０μＬ加えて３回洗浄し、３０μＬ／ウェルの第２の抗体ＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ６４７抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、品番：１０９－６０６－１７０）を加え、４℃で４０分間インキュベートした。インキュベートが終了した後、０．５％ＢＳＡをウェルあたり１４０μＬ加えて３回洗浄し、最後にウェルあたり５０μＬのＰＢＳに再懸濁させ、フローサイトメーター（ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ）で検出した。結果を図４及び表１に示す。図４においては、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によると、得られたキメラクローディン１８．２ ＩｇＧ１抗体は、クローディン１８．２をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－クローディン１８．２細胞のみを認識し（図４Ｂ）、ＨＥＫ２９３（図４Ａ）及びＨＥＫ２９３－クローディン１８．１（図４Ｃ）といずれも結合しないことを示している。

【0144】

【表1】