特開 2024-167866 肝線維症の治療及び／又は予防におけるイオンチャネル遮断薬の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024167866

(43)【公開日】2024-12-04

(54)【発明の名称】肝線維症の治療及び／又は予防におけるイオンチャネル遮断薬の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20241127BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20241127BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20241127BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241127BHJP

   A61K 31/403 20060101ALI20241127BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P1/16

A61P37/06

A61P43/00 111

A61K31/403

【審査請求】有

【請求項の数】10

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023195477

(22)【出願日】2023-11-16

(31)【優先権主張番号】202310579552.1

(32)【優先日】2023-05-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(71)【出願人】

【識別番号】520422566

【氏名又は名称】遵義医科大学附属医院

(74)【代理人】

【識別番号】110002262

【氏名又は名称】ＴＲＹ国際弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】徐 靖宇

(72)【発明者】

【氏名】謝 睿

(72)【発明者】

【氏名】杜 倩

(72)【発明者】

【氏名】胡 艶霞

(72)【発明者】

【氏名】丁 建紅

(72)【発明者】

【氏名】呉 先麗

(72)【発明者】

【氏名】楊 暁旭

(72)【発明者】

【氏名】婁 俊

(72)【発明者】

【氏名】劉 奇

(72)【発明者】

【氏名】李 卓

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA17

4C084NA14

4C084ZA751

4C084ZA752

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZC411

4C084ZC412

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC10

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA75

4C086ZB08

4C086ZC41

(57)【要約】      （修正有）

【課題】より効果的な肝線維症の治療及び／又は予防のための医薬品を提供する。
【解決手段】肝線維症を治療及び／又は予防するための医薬品の製造におけるイオンチャネル遮断薬の使用を提供する。前記イオンチャネル遮断薬は、カリウムイオンチャネル遮断薬であり、具体的にはグリクラジドの使用である。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

肝線維症を治療及び／又は予防するための医薬品の製造におけるイオンチャネル遮断薬の使用。

【請求項2】

前記イオンチャネル遮断薬は、カリウムイオンチャネル遮断薬であることを特徴とする、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記カリウムイオンチャネル遮断薬は、グリクラジドを含むことを特徴とする、請求項２に記載の使用。

【請求項4】

請求項１に記載の使用であって、その特徴は、前記肝線維症がＣＣｌ_４により誘導された肝線維症を含むことである。

【請求項5】

肝臓組織のオートファージーを抑制するための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用。

【請求項6】

肝星細胞の増殖を抑制するための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用。

【請求項7】

前記肝星細胞は、ＨＳＣ－Ｔ６細胞を含むことを特徴とする、請求項６に記載の使用。

【請求項8】

肝細胞α－ＳＭＡをダウンレギュレートするための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用。

【請求項9】

肝細胞ＬＣ３をダウンレギュレートするための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用。

【請求項10】

肝細胞Ｐ６２をアップレギュレートするための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、イオンチャネルと肝線維症の技術分野に関し、特に、肝線維症の治療及び／又は予防におけるイオンチャネル遮断薬の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

世界中で慢性肝疾患患者は８億人以上に達し、そのうち、毎年様々な肝疾患による死亡者数は２００万に達している。肝線維症（Ｈｅｐａｔｉｃ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ、ＨＦ）段階は、全ての慢性肝疾患の共通の病理学的基礎であるだけでなく、さらに肝硬変及び肝がんへの進行の重要な部分である。研究では、肝線維症、さらには初期の肝硬変さえも、回復可能であることが示されている。しかし、現在の抗線維化対策は、主に抗ウイルス治療、禁酒及び食事管理などによる肝線維症病因の除去であり、これらの対策には、一般的に治療期間が長く、治療効果が低く、副作用が多く、患者のコンプライアンスが低いなどの欠点が存在する。そのため、肝線維症を顕著に回復できる方法を探してきた。

【0003】

現在、肝線維症の病理生理的変化において、肝星細胞（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ、ＨＳＣ）の活性化及び肝細胞外マトリックス（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ、ＥＣＭ）の過剰な沈着は、重要な部分であると考えられている。肝星細胞（ＨＳＣ）は、最初にｖｏｎ Ｋｕｐｆｆｅｒにより１８７６年に発見され、Ｄｉｓｓｅの内皮下空間に存在し、肝類洞内皮細胞（ＬＳＥＣｓ）と肝細胞との間に位置し、それらは全ての常在肝細胞の約１０％を占める。正常な肝臓では、肝星細胞は、非増殖、静止表現型を維持する。肝損傷又はインビトロ培養後、肝星細胞は、活性化されてビタミンＡ貯蔵細胞から筋線維母細胞へ転換し、増殖、収縮、炎症及び走化し、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）産生の増加を特徴とする。ＨＳＣの活性化は、様々な制御メカニズムに関し、オートファージー、小胞体ストレス、酸化ストレス、レチノール及びコレステロール代謝、エピジェネティクス及び受容体媒介のシグナルを含み、ＨＳＣ活性化の複雑さを示している。現在、形質転換成長因子β（ＴＧＦ－β）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）など、ＨＳＣ活性化につながるいくつかの重要な分子チャネル障害の標的化メカニズムが見出されており、ＨＳＣ活性化に関与するメカニズムの一部も、既に明らかになっている。しかし、残念なことに、今までのところ、臨床的にＨＳＣを標的とする抗線維化の治療方法は依然として不足している。したがって、ＨＳＣ活性化を引き起こす他の経路を探索することにより、より効果的な抗線維化の治療標的を見出す可能性がある。

【0004】

イオンチャネルは、近年注目されている研究分野であり、いくつかのイオンチャネルは、胃がん、肝がんなどの消化管がんの発生、移動、湿潤及び転移において重要な役割を果たすと考えられている。

【発明の概要】

【0005】

本発明の目的は、肝線維症の治療及び／又は予防におけるイオンチャネル遮断薬の使用を提供することにより、従来技術に存在する上記の問題を解決することである。

【0006】

上記の目的を達成するために、本発明は、以下の手段を提供する。
本発明は、肝線維症を治療及び／又は予防するための医薬品の製造におけるイオンチャネル遮断薬の使用を提供する。

【0007】

好ましくは、前記イオンチャネル遮断薬は、カリウムイオンチャネル遮断薬である。

【0008】

好ましくは、前記カリウムイオンチャネル遮断薬は、グリクラジドを含む。

【0009】

好ましくは、前記肝線維症は、ＣＣｌ_４により誘発された肝線維症を含む。

【0010】

本発明は、肝臓組織のオートファージーを抑制するための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用をさらに提供する。

【0011】

本発明は、肝星細胞の増殖を抑制するための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用をさらに提供する。

【0012】

好ましくは、前記肝星細胞は、ＨＳＣ－Ｔ６細胞を含む。

【0013】

本発明は、肝細胞α－ＳＭＡをダウンレギュレートするための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用をさらに提供する。

【0014】

本発明は、肝細胞ＬＣ３をダウンレギュレートするための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用をさらに提供する。

【0015】

本発明は、肝細胞Ｐ６２をアップレギュレートするための医薬品の製造におけるグリクラジドの使用を提供する。

【0016】

本発明は、以下の技術的効果を開示する。
本発明は、肝星細胞の活性化が抗肝線維症の重要な部分であることに基づいており、インビボ及びインビトロの実験により、グリクラジドが肝星細胞の活性化を抑制する作用を有することが判明した。さらに、グリクラジドが、主にオートファージー経路を抑制することにより肝星細胞の活性化を抑制することにより、グリクラジドが肝線維症を治療及び／又は予防するための医薬品の製造に使用できることが判明した。

【図面の簡単な説明】

【0017】

本発明の実施例又は従来技術における技術的解決策をより明確に説明するために、以下、実施例に必要な図面を簡単に紹介する。明らかに、以下に説明する図面は本発明のいくつかの実施例に過ぎず、当業者であれば、創造的な努力なしでこれらの図面に基づいて他の図面を取得することができる。

【図1】実施例１におけるＨＥ染色及びピクロシリウスレッド染色法により観察された肝臓組織の線維化の程度を示す図である。

【図2】実施例１において検出された血清中のＡＳＴ（Ａ）、ＡＬＴ（Ｂ）のレベル変化及び統計図である、

【図3】実施例２において免疫組織化学により検出された肝臓組織中のα－ＳＭＡの発現変化（Ａ）及び統計図（Ｂ）である。

【図4】実施例３においてＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔにより検出された肝臓組織中のα－ＳＭＡの発現変化（Ａ）及び統計図（Ｂ）である。

【図5】実施例３においてＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔにより検出されたマウス肝臓組織中のＬＣ３の発現変化（Ａ）及び統計図（Ｂ）である。

【図6】実施例３においてＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔにより検出された肝臓組織中のＰ６２の発現変化（Ａ）及び統計図（Ｂ）である。

【図7】実施例４においてＣＣＫ８により検出されたグリクラジドとＴＧＦ－β１の共培養のＨＳＣｓ細胞増殖への影響及び統計図である、

【図8】実施例５においてＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔにより検出されたＨＳＣｓ細胞中のα－ＳＭＡのタンパク質の発現レベルの変化（Ａ）及び統計図（Ｂ）である。

【図9】実施例５においてＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔにより検出されたＨＳＣｓ細胞中のＬＣ３の発現変化（Ａ）及び統計図（Ｂ）である。

【図10】実施例５においてＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔにより検出されたＨＳＣｓ細胞中のＰ６２の発現変化（Ａ）及び統計図（Ｂ）である。

【図11】実施例６においてＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔにより検出されたＲａｐａｍｙｃｉｎ添加後のＨＳＣｓ細胞中のα－ＳＭＡの発現変化（Ａ）及び統計図（Ｂ）である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

本発明の様々な例示的な実施形態を詳細に説明するが、以下の詳細な説明は、本発明を限定するものではなく、本発明のいくつかの態様、特性及び実施形態をより詳細に説明するものと理解すべきである。

【0019】

本発明の前記技術的解決策は、特に説明しない限り、いずれも当該技術分野の一般的な解決手段であり、使用される試薬又は原料は、特に説明しない限り、いずれも市販品又は既存のものである。

【0020】

実施例１：四塩化炭素（ＣＣｌ_４）により誘発されたマウス肝線維症
実験材料
６０匹の健康な雄Ｃ５７マウス（２０－２５ｇ／匹、重慶騰シン生物技術有限会社から購入）、強制経口投与針、１ｍＬ注射器、ＣＣｌ_４溶液、オリーブ油、グリクラジド容液。

【0021】

実験方法
ＣＣｌ_４溶液：ＣＣｌ_４をオリーブ油溶液（ＣＣｌ_４：オリーブ油＝１：４）に溶解し、使用時に調製した。グリクラジド容液：グリクラジド容液を生理食塩水に溶解し、使用時に調製した。濃度は５００μｍである。

【0022】

マウスを以下の４群にランダムに分けた。
ａ．正常対照群、
ｂ．モデル群：マウスにＣＣｌ_４溶液を０．１ｍＬ／２０ｇで強制経口投与した（週に２回、合計８週間）。
ｃ．ＣＣｌ_４＋グリブシスト群：マウスにＣＣｌ_４溶液単独を０．１ｍＬ／２０ｇで強制経口投与し（週に２回、合計２週間）、次に、グリブシスト溶液及びＣＣｌ_４溶液を６週間共投与した。グリブシスト溶液の投与方法は、０．２ｍＬ／２０ｇ、１日１回の腹腔内注射である。
ｄ．グリクラジド群：グリクラジドを８週間腹腔内注射した。投与方法は、０．２ｍＬ／２０ｇで、1日１回の腹腔内注射である。

【0023】

マウスはモデル確立後の２、４、６、８週目にそれぞれ順に安楽死させ、各群について毎回１匹安楽死させた。肝臓サンプルを取り出して－８０℃の液体窒素に入れて急速冷凍して保存し、他の肝臓を４％のパラホルムアルデヒドに入れて２４時間固定した後、パラフィンに包埋した。外観、ピクロシリウスレッド染色、ＨＥ染色により肝臓線維症の重症度を観察し、染色結果が肝臓線維症を示す場合、モデル確立に成功したものとみなし、次に、全てのマウスを安楽死させ、眼球血を採取して肝臓機能指標（ＡＬＴ、ＡＳＴ）を測定し、肝臓組織をホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋して使用に備えた。

【0024】

実験結果
図１－２に示すように、８週目にモデル群から眼球血を採取して検出した結果、ＡＬＴ、ＡＳＴはいずれも顕著に上昇した。ＨＥ染色の結果として、正常群では、肝臓組織の構造は明らかで、肝小葉の構造は正常で、肝細胞は完全で、模様は明確であった。モデル群では、肝臓組織が損傷し、線維組織が顕著に増殖した。四塩化炭素＋グリクラジド群では、肝臓組織の損傷及び線維組織の増殖の程度はいずれも顕著に軽減した。ピクロシリウスレッド染色結果から分かるように、モデル群では、赤色のコラーゲン線維は、太く長くなり、一部は偽小葉を形成し、マウス肝線維症モデルの確立に成功したことを示している。グリクラジド群では、明らかなコラーゲン線維は見られず、５００μｍの濃度では、グリクラジドはマウスの肝線維症を引き起こすことができないことを示している。

【0025】

実施例２：異なる群間の肝線維症指標であるα－ＳＭＡのタンパク質発現レベルの免疫組織化学検出
実験材料：Ｃ５７マウス、α－ＳＭＡ一次抗体、免疫組織化学キット、ＰＢＳ溶液、クエン酸ナトリウム溶液など

【0026】

実験方法：実施例１のパラフィンブロックを取り、切片を作成した後に手順に従って免疫組織化学操作を行い、順に１００％、９５％、８０％、７５％のエタノールに５ｍｉｎ浸漬し、さらにＰＢＳで洗浄し、過酸化水素水でカタラーゼを除去し、クエン酸ナトリウム修復液で抗原を修復し、冷却した後にＰＢＳで洗浄し、室温で３０ｍｉｎブロッキングした後に一次抗体を添加し、４℃で一晩インキュベートし、翌日、二次抗体で室温で１ｈインキュベートし、さらにＤＢＡで染色し、ヘマトキシリンで再染色し、塩酸アルコールで分化し、脱水し、密封し、最後に顕微鏡で観察し、撮影した。

【0027】

実験結果：図３に示すように、グリクラジドは四塩化炭素誘発肝線維化マウス中のα－ＳＭＡの発現をダウンレギュレートすることができる。

【0028】

実施例３：Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技術による異なる実験群の肝線維化指標α－ＳＭＡ及びオートファージー関連指標（ＬＣ３、Ｐ６２）などの発現状況の検出
実験材料：マウス肝臓組織、ピンセット、ハサミ、２ｍｍ鋼球、磁石、細胞溶解液、ＰＢＳ液、ＢＣＡタンパク質定量キット、脱脂粉乳、αＳＭＡ、ＬＣ３及びＰ６２一次抗体及び対応する二次抗体など

【0029】

実験方法：実施例１の肝臓組織を取り、ピンセット及びハサミで米粒程度の大きさを切り出し、マークを付けた１．５ｍＬのＥＰチューブ内に添加し、各ＥＰチューブ内に２つの２ｍｍ鋼球を入れ、２００－２５０μＬの細胞溶解液を添加し、パラメータを設定した後に粉砕機に入れて十分に粉砕し、その後、磁石で鋼球を吸引して取り出し、氷上で３０ｍｉｎ作用させた後に１２０００ｒｐｍ、３０分間、４℃で遠心分離した。標準曲線を作成し、９６ウェルプレートの各ウェルにタンパク質サンプル１μＬ、ＰＢＳ液１９μＬ、ＢＣＡ作動液２００μＬ（５０：１）を添加し、各ウェルにさらに２つの付加ウェルを追加した。３７℃の乾燥オーブンに３０ｍｉｎ入れた。ＥＬＩＳＡを使用して５６０ｎｍでのＯＤ値を測定し、タンパク質濃度を計算し、沸騰水でタンパク質を５分間煮沸した後にサンプルをローディングし、さらにゲル電気泳動、転写、密封を順に行い、一次抗体及び二次抗体をインキュベートした後に露光した。

【0030】

実験結果：図４－６に示すように、グリクラジドは、肝臓組織中のαＳＭＡ、ＬＣ３の発現を顕著に減少させ、肝臓組織中のオートファージー基質Ｐ６２の発現レベルを顕著に増加させることができる。

【0031】

実施例４：ＣＣＫ８によるグリクラジドとＴＧＦ－β１の共培養のＨＳＣｓ細胞増殖に対する影響の検出
実験材料：ＨＳＣ－Ｔ６細胞、ＤＭＥＭ完全培地、９６ウェルプレート、カウントプレート、ＣＣＫ－８作動液など

【0032】

実験方法：まず、ＨＳＣ－Ｔ６肝星細胞の培養を行い、１０％ウシ胎児血清、１％二重抗体（ペニシリン-ストレプトマイシン溶液）及び１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）を含有するＤＭＥＭ培養液において、培養条件３７℃、５％ＣＯ_２で、細胞コンフルエンスが８０％～９０％に達した後にトリプシンで消化して継代した。次に、プレートに播種し、密度が７×１０^６個／Ｌの細胞懸濁液を取り、１００μＬ／ウェルで９６ウェル培養プレートに添加した。各群６個のウェルである。実験は、対照群、ＴＧＦ－β１群、ＴＧＦ－β１＋異なる濃度（５０μＭ、１００μＭ、１５０μＭ、２００μＭ）のグリクラジドの医薬品群に分けた。細胞が壁に付着した後、対照群及びＴＧＦ－β１群以外に、残りの各群に対応する濃度のグリクラジドを添加し、３ｈ後に対応する群にＴＧＦβ１（１０ｎｇ／ｍＬ）を添加してマウスの肝星細胞を刺激した。４８ｈインキュベートした後、各ウェルに「１０％のＣＣＫ８＋９０％培地」混合溶液１００μＬを添加し、３７℃で１－４ｈインキュベートし、波長を４５０ｎｍに設定し、全自動マイクロプレートリーダーにより、対応する波長で吸光度値を読み取って記録した。ＣＣＫ８実験によりグリクラジドの細胞増殖への影響を検出し、最適な作用時点及び医薬品濃度をスクリーニングした。

【0033】

実験結果：図７に示すように、正常値と比較して、ＴＧＦ－β１で刺激した後にＨＳＣ－Ｔ６細胞の増殖を顕著に誘導することができ、１００μＭ、１５０μＭ、２００μＭ濃度のグリクラジド及びＴＧＦ－β１を用いた共培養により、ＴＧＦ－β１誘導での増殖傾向が抑制され、結果の差は、統計学的に有意であった（Ｐ＜０．０５）。

【0034】

実施例５：Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技術によるＨＳＣｓ細胞中のα－ＳＭＡ及びオートファージー関連指標（ＬＣ３、Ｐ６２）などの発現状況の検出
実験材料：ＨＳＣ－Ｔ６細胞、ＤＭＥＭ完全培地、細胞培養皿、細胞溶解液、ＰＢＳ液、ＢＣＡタンパク質定量キット、脱脂粉乳、αＳＭＡ、ＬＣ３及びＰ６２一次抗体及び対応する二次抗体など

【0035】

実験方法：まず、正常群、ＴＧＦ－β１群、グリクラジド＋ＴＧＦ－β１群、及びグリクラジドグループ群に分けた。ここで、ＴＧＦ－β１刺激濃度は１０ｎｇ／ｍＬであり、グリクラジド濃度は１００μｍであった。細胞培養皿を用いてＨＳＣ－Ｔ６細胞を培養し、実施例４に記載の条件で培養し、医薬品を添加し、ＴＧＦ－β１を添加した。４８ｈ後にインキュベートされた細胞を予冷したＰＢＳで３－４回洗浄した後、濾紙で残りのＰＢＳ液体を吸引して乾燥し、５０ｍＬ培養フラスコに５０μＬのＲＩＰＡ及び１００ｍｏｌ／ＬのＰＭＳＦ０．５μＬ（１００：１）を添加し、氷上で３０分間作用させた後、セルスクレーパーでタンパク質を掻き取り、タンパク質をＥＰチューブに吸引し、１２０００ｒｐｍ、３０分間、４℃で遠心分離した。標準曲線を作成し、９６ウェルプレートの各ウェルにタンパク質サンプル１μＬ、ＰＢＳ液１９μＬ、ＢＣＡ作動液２００μＬ（５０：１）を添加し、各ウェルにさらに２つの付加ウェルを追加した。３７℃の乾燥オーブンに３０ｍｉｎ入れた。ＥＬＩＳＡを使用して５６０ｎｍでのＯＤ値を測定し、タンパク質濃度を計算し、沸騰水でタンパク質を５分間煮沸した後にサンプルをローディングし、さらにゲル電気泳動、転写、密封を順に行い、一次抗体及び二次抗体をインキュベートした後に露光した。

【0036】

実験結果：図８－１０に示すように、グリクラジドは、ＨＳＣｓ細胞中のαＳＭＡ、ＬＣ３の発現を顕著に減少させ、ＨＳＣｓ細胞中のオートファージー基質Ｐ６２の発現レベルを顕著に増加させることができる。

【0037】

実施例６：Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技術によるオートファージーアゴニスト（Ｒａｐａｍｙｃｉｎ）添加後のＨＳＣｓ細胞中のα－ＳＭＡの発現レベルの検出
実験材料：ＨＳＣ－Ｔ６細胞、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ、ＤＭＥＭ完全培地、細胞培養皿、細胞溶解液、ＰＢＳ液、ＢＣＡタンパク質定量キット、脱脂粉乳、αＳＭＡ、ＬＣ３及びＰ６２一次抗体及び対応する二次抗体など

【0038】

実験方法：こちらも同様に、まず、正常群、ＴＧＦ－β１群、グリクラジド＋ＴＧＦ－β１群、グリクラジド＋ＴＧＦ－β１＋Ｒａｐａｍｙｃｉｎ群に分けた。ここで、ＴＧＦ－β１刺激濃度は１０ｎｇ／ｍＬであり、グリクラジド濃度は１００μｍであり、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ濃度は１００ｎｍであった。ＴＧＦ－β１の添加時間は実施例５に記載のとおりであり、Ｒａｐａｍｙｃｉｎとグリクラジドを同時に添加した。４８ｈインキュベートした後にタンパク質定量、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技術により検出した。

【0039】

実験結果：図１１に示すように、共培養群（ＴＧＦβ１＋グリクラジド）では、ＴＧＦβ１単独群と比較して、α－ＳＭＡタンパク質の発現レベルは顕著に減少し、別の共培養群（ＴＧＦβ１＋グリクラジド＋Ｒａｐａｍｙｃｉｎ）と比較して、α－ＳＭＡタンパク質の発現レベルは顕著に上昇し、その差は統計学的に有意であった（Ｐ＜０．０５）。

【0040】

上述の実施例は、本発明の好ましい形態を説明するものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の設計思想から逸脱しない前提で、当業者が本発明の技術的解決策に対してなされる各種の変形及び改善は、いずれも本発明の特許請求の範囲によって確定される保護範囲内に含まれるべきである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】