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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024169416
(43)【公開日】2024-12-05
(54)【発明の名称】ＸＣＬ１を標的とする抗体及びそれを使用する方法
(51)【国際特許分類】
C07K 16/24 20060101AFI20241128BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241128BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241128BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241128BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241128BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241128BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241128BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20241128BHJP
C07K 14/52 20060101ALI20241128BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20241128BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20241128BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20241128BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20241128BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20241128BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20241128BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20241128BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241128BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20241128BHJP
【ＦＩ】
C07K16/24 ZNA
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
C07K14/52
A61P17/14
A61P17/00
A61P11/06
A61P25/00
A61P19/02
A61P17/06
A61P1/00
A61K39/395 N
A61K47/64
C07K16/24
【審査請求】未請求
【請求項の数】64
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024084764
(22)【出願日】2024-05-24
(31)【優先権主張番号】63/504,051
(32)【優先日】2023-05-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100103182
【弁理士】
【氏名又は名称】日野 真美
(74)【代理人】
【識別番号】100131990
【弁理士】
【氏名又は名称】大野 玲恵
(72)【発明者】
【氏名】ステファニー リン ビースリー
(72)【発明者】
【氏名】パトリック フランシス グリーリッシュ
(72)【発明者】
【氏名】ジンシン リー
(72)【発明者】
【氏名】チャド ディー． パーヴォラ
(72)【発明者】
【氏名】ジョシュア デード プーアボウ
(72)【発明者】
【氏名】マシュー アラン レンシュラー
(72)【発明者】
【氏名】マーク アンドリュー ウォーティンガー
(72)【発明者】
【氏名】イン タン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA87X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C076CC01
4C076CC09
4C076CC15
4C076CC16
4C076CC18
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C085AA14
4C085BB11
4C085DD34
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045DA76
4H045EA22
4H045FA72
4H045FA74
4H045GA23
(57)【要約】 （修正有）
【課題】潰瘍性大腸炎、白斑、多発性硬化症、円形脱毛症、乾癬、１型糖尿病、及び喘息を含む免疫媒介性疾患の分野において有用な、療法用抗体、医薬組成物、及びそれらを使用する方法を含む、ヒトリンホタクチンを標的とする化合物及び方法を提供する。
【解決手段】本発明は、リンホタクチン、特にヒトケモカインＸＣＬ１及びＸＣＬ２に対する抗体、そのような抗体を含む医薬組成物、並びにそのような抗体を使用する方法を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明は、リンホタクチン、特にヒトケモカインＸＣＬ１及びＸＣＬ２に対する抗体、そのような抗体を含む医薬組成物、並びにそのような抗体を使用する方法を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むヒトＸＣＬ１に結合する抗体であって、前記ＨＣＶＲが、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１２を含み、式中、Ｚが、Ｑ及びＥから選択され、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号５を含み、式中、Ｘが、Ｓ及びＤから選択され、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号８を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号９を含む、抗体。
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１２を含み、式中、Ｚが、Ｑ及びＥから選択され、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号５を含み、式中、Ｘが、Ｓ及びＤから選択され、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号８を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号９を含む、抗体。
【請求項2】
Ｚが、Ｅである、請求項１に記載の抗体。
【請求項3】
Ｘが、Ｄである、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項4】
Ｚが、Ｑである、請求項１に記載の抗体。
【請求項5】
Ｘが、Ｓである、請求項１又は４に記載の抗体。
【請求項6】
ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１が、配列番号６を含み、ＬＣＤＲ２が、配列番号８を含み、ＬＣＤＲ３が、配列番号９を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項7】
前記ＬＣＶＲが、配列番号１７を含み、前記ＨＣＶＲが、配列番号１５を含み、式中、Ｘａが、Ｑ及びピログルタミン酸から選択される、請求項１～３又は６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項8】
Ｘａが、Ｑである、請求項７に記載の抗体。
【請求項9】
前記抗体が、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、前記ＨＣが、配列番号１９を含み、式中、Ｘ１が、Ｑ及びピログルタミン酸から選択され、Ｘ２が、Ｇであるか又は存在せず、Ｘ３が、Ｋであるか又は存在せず、前記ＬＣが、配列番号２１を含む、請求項１～３、６、又は７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項10】
Ｘ１が、Ｑであり、Ｘ２が、Ｇであり、Ｘ３が、Ｋである、請求項９に記載の抗体。
【請求項11】
ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３が、配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ１が、配列番号７を含み、ＬＣＤＲ２が、配列番号８を含み、ＬＣＤＲ３が、配列番号９を含む、請求項１、４、及び５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項12】
前記ＬＣＶＲが、配列番号１８を含み、前記ＨＣＶＲが、配列番号１６を含み、式中、Ｘａが、Ｑ及びピログルタミン酸から選択される、請求項１、４、５、及び１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項13】
Ｘａが、Ｑである、請求項１２に記載の抗体。
【請求項14】
前記抗体が、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、前記ＨＣが、配列番号２０を含み、式中、Ｘ１が、Ｑ及びピログルタミン酸から選択され、Ｘ２が、Ｇであるか又は存在せず、Ｘ３が、Ｋであるか又は存在せず、前記ＬＣが、配列番号２２を含む、請求項１、４、５、１１、及び１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項15】
Ｘ１が、Ｑであり、Ｘ２が、Ｇであり、Ｘ３が、Ｋである、請求項１４に記載の抗体。
【請求項16】
ＸＣＬ１アンタゴニストである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項17】
前記抗体が、ヒトＸＣＬ２に結合する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項18】
ＸＣＬ２アンタゴニストである、請求項１７に記載の抗体。
【請求項19】
二量体ＸＣＬ１に結合する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項20】
前記二量体ＸＣＬ１が、ホモ二量体ＸＣＬ１である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項21】
前記抗体が、β－シート立体配置にあるＸＣＬ１に結合する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項22】
前記ホモ二量体ＸＣＬ１が、細胞の表面上のグリコサミノグリカンに結合している、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項23】
二量体ＸＣＬ２に結合する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項24】
前記二量体ＸＣＬ２が、ホモ二量体ＸＣＬ２である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項25】
前記抗体が、二量体ＸＣＬ２の各単量体単位上の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項26】
前記ホモ二量体ＸＣＬ２が、細胞の表面上のグリコサミノグリカンに結合している、請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項27】
ＸＣＬ１の１つの単量体及びＸＣＬ２の１つの単量体を含むヘテロ二量体複合体に結合する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項28】
前記抗体が、前記ヘテロ二量体複合体の前記ＸＣＬ１単量体の少なくとも１つのアミノ酸又は前記ＸＣＬ２単量体の少なくとも１つのアミノ酸に結合する、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項29】
前記ヘテロ二量体複合体が、細胞の表面上のグリコサミノグリカンに結合している、請求項１～２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項30】
ＸＣＬ１及びＸＣＬ２以外のケモカインに結合しない、請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項31】
配列番号１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、ヒトＸＣＬ１に結合する、抗体。
【請求項32】
配列番号１９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）及び配列番号２１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む、請求項３１に記載する抗体。
【請求項33】
配列番号１６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、ヒトＸＣＬ１に結合する、抗体。
【請求項34】
配列番号２０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）及び配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む、請求項３３に記載する抗体。
【請求項35】
配列番号２７の１つ以上のアミノ酸を含むＸＣＬ１のエピトープに結合する、抗体。
【請求項36】
配列番号２７の２つ以上のアミノ酸に結合する、請求項３５に記載の抗体。
【請求項37】
配列番号２７の３つ以上のアミノ酸に結合する、請求項３６に記載の抗体。
【請求項38】
配列番号２９の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項３７に記載の抗体。
【請求項39】
配列番号２８の１つ以上のアミノ酸を含むＸＣＬ１のエピトープに結合する、抗体。
【請求項40】
配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合する、請求項３９に記載の抗体。
【請求項41】
配列番号２７の１つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の１つ以上のアミノ酸を含むＸＣＬ１のエピトープに結合する、抗体。
【請求項42】
配列番号２７の２つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合する、請求項４１に記載の抗体。
【請求項43】
配列番号２９の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項４１に記載の抗体。
【請求項44】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する、請求項１～４３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項45】
請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項46】
円形脱毛症、白斑、喘息、乾癬、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、又は潰瘍性大腸炎の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、有効量の請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項47】
療法に使用するための、請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項48】
円形脱毛症、白斑、喘息、乾癬、多発性硬化症、関節リウマチ、又は潰瘍性大腸炎の治療に使用するための、請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項49】
円形脱毛症、白斑、喘息、乾癬、多発性硬化症、関節リウマチ、又は潰瘍性大腸炎の治療のための医薬剤の製造における、請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４５に記載の医薬組成物の使用。
【請求項50】
配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６をコードする配列を含む、核酸。
【請求項51】
配列番号２３又は配列番号２５をコードする第１の核酸配列及び配列番号２４又は配列番号２６をコードする第２の核酸配列を含む、ベクター。
【請求項52】
請求項５１に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項53】
抗体を産生する方法であって、前記抗体が発現されるような条件下で請求項５２に記載の細胞を培養することと、前記発現された抗体を培養培地から回収することと、を含む、方法。
【請求項54】
抗体が発現されるような条件下で請求項５２に記載の細胞を培養し、前記発現された抗体を培養培地から回収することによって産生される、抗体。
【請求項55】
二量体ＸＣＬ１及び二量体ＸＣＬ１に結合した抗体を含む、タンパク質複合体。
【請求項56】
前記二量体ＸＣＬ１が、ホモ二量体ＸＣＬ１である、請求項５５に記載のタンパク質複合体。
【請求項57】
前記抗体が、β－シート立体配置にあるＸＣＬ１に結合する、請求項５５又は５６に記載のタンパク質複合体。
【請求項58】
二量体ＸＣＬ２及び二量体ＸＣＬ２に結合した抗体を含む、タンパク質複合体。
【請求項59】
前記二量体ＸＣＬ２が、ホモ二量体ＸＣＬ２である、請求項５８に記載のタンパク質複合体。
【請求項60】
前記抗体が、β－シート立体配置にあるＸＣＬ２に結合する、請求項５８又は５９に記載のタンパク質複合体。
【請求項61】
タンパク質複合体であって、
ＸＣＬ１の単量体単位及びＸＣＬ２の単量体単位を含むヘテロ二量体と、
前記ヘテロ二量体に結合した抗体と、を含む、タンパク質複合体。
ＸＣＬ１の単量体単位及びＸＣＬ２の単量体単位を含むヘテロ二量体と、
前記ヘテロ二量体に結合した抗体と、を含む、タンパク質複合体。
【請求項62】
前記抗体が、ＸＣＬ１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、請求項６１に記載のタンパク質複合体。
【請求項63】
前記抗体が、ＸＣＬ２の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、請求項６１又は６２に記載のタンパク質複合体。
【請求項64】
前記抗体が、β－シート立体配置にあるＸＣＬ１又はＸＣＬ２の少なくとも１つの残基に結合する、請求項６１～６３のいずれか一項に記載のタンパク質複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（配列表ファイル）
本出願は、ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表とともに提出されている。配列表は、２０２４年５月６日に作成された「３０５７４＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ」と題されたファイルとして提供され、４３キロバイトのサイズである。ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表とともに提出されている。配列表は、２０２４年５月６日に作成された「３０５７４＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ」と題されたファイルとして提供され、４３キロバイトのサイズである。ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
（発明の分野）
本発明は、医薬品の分野に属する。より具体的には、本発明は、リンホタクチン、特にヒトケモカインＸＣＬ１及びＸＣＬ２に対する抗体、そのような抗体を含む医薬組成物、並びにそのような抗体を使用する方法に関する。本明細書に開示される抗体は、ＸＣＬ１及びＸＣＬ２に結合し、それらを中和する。本発明の抗体及び方法は、自己免疫及び慢性炎症性疾患（本明細書ではまとめて免疫媒介性疾患と称される）、特に円形脱毛症、白斑、潰瘍性大腸炎（ulcerative colitis、ＵＣ）、関節リウマチ（rheumatoid arthritis、ＲＡ）、多発性硬化症（multiple sclerosis、ＭＳ）、１型糖尿病、乾癬、喘息などの疾患の分野において、それらの治療を含めて有用であると予想される。
本発明は、医薬品の分野に属する。より具体的には、本発明は、リンホタクチン、特にヒトケモカインＸＣＬ１及びＸＣＬ２に対する抗体、そのような抗体を含む医薬組成物、並びにそのような抗体を使用する方法に関する。本明細書に開示される抗体は、ＸＣＬ１及びＸＣＬ２に結合し、それらを中和する。本発明の抗体及び方法は、自己免疫及び慢性炎症性疾患（本明細書ではまとめて免疫媒介性疾患と称される）、特に円形脱毛症、白斑、潰瘍性大腸炎（ulcerative colitis、ＵＣ）、関節リウマチ（rheumatoid arthritis、ＲＡ）、多発性硬化症（multiple sclerosis、ＭＳ）、１型糖尿病、乾癬、喘息などの疾患の分野において、それらの治療を含めて有用であると予想される。
【背景技術】
【0003】
ＸＣＬ１及びＸＣＬ２は、それぞれリンホタクチン－α及び－βとしても既知であり、Ｃケモカイン／γケモカインファミリーの唯一のメンバーである。ＸＣＬ１は、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（natural killer、ＮＫ）細胞、胸腺髄質上皮細胞などを含む様々な免疫細胞によって発現され、分泌される。ＸＣＬ２は、ＸＣＬ１のパラログであり、遺伝子重複から生じたと考えられており、ＸＣＬ１とほぼ同一のアミノ酸配列（Ｎ末端領域の２つのアミノ酸のみがＸＣＬ１と異なる）を有する。ＸＣＬ１及びＸＣＬ２は、この構造的類似性の結果として類似した機能を有すると考えられる。
【0004】
２つのジスルフィド結合を形成することができるそれらのアミノ末端付近に４つのシステイン残基を有するほとんどの他のケモカインとは異なり、ＸＣＬ１及びＸＣＬ２は、単一のジスルフィド結合を形成するそのようなシステインを２つだけ有する。これによって、ケモカインは、標準的な単量体のα－ヘリックス含有ケモカインフォールドを有する第１の立体配置と、第２の主にβ－シート形態との間で相互変換して、変性することができる。形態間のこの変換は、典型的には、毎秒数回起こる。単量体α－ヘリックス形態は、受容体ＸＣＲ１に結合して活性化し、細胞移動を誘導することができる。α－ヘリックス形態は、β－シート形態への立体構造変化を受け、これは、単量体形態で存在し得るが、二量体化に有利である。二量体又はβ－シート立体配置にある場合、ＸＣＬ１は、ＸＣＲ１結合に対して不活性であり、二量体は、細胞表面上のグリコサミノグリカン（glycosaminoglycan、ＧＡＧ）に付着することができる。単量体α－ヘリックス形態は、ＧＡＧに結合しない。Ｌｅｉ ａｎｄ Ｔａｋａｈａｍａ，Ｍｉｃｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ １４（２０１２）２６２－２６７、Ｆｏｘ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０（１１）（２０１５）２５８０－２５８８を参照されたい。これらの形態間の頻繁な変換は、特に二量体及びβ－シート形態の不活性、並びにＧＡＧ上の細胞表面で凝集するその傾向を考慮すると、ケモカインの二量体形態に結合することができる抗体がケモカインの不活性形態に主に結合することができ、薬物動態、免疫原性、及び有効性に関して未知の特性をもたらすため、特に療法剤としての抗ＸＣＬ１及び抗ＸＣＬ２抗体の設計を複雑にする。
【0005】
自己免疫疾患は、身体が自身の組織に対する免疫応答を産生することから生じる免疫媒介性疾患の一形態である。これらの状態は、多くの場合慢性であり、かつ衰弱性であり得、致命的でさえあり得る。免疫媒介性疾患に対する現在のＦＤＡ承認の治療としては、急性炎症の治療に使用されることが多いコルチコステロイド、並びにＴＮＦα、インターロイキン－１２、－１７、及び－２３を標的とするバイオ製品が挙げられる。これらの治療は一部の患者の症状を低減する際に有効であることが実証されているが、あるパーセンテージの患者は、非応答のままであるか、又は現在利用可能な治療に対して応答を失う。したがって、免疫媒介性疾患の治療のための異なるヒト標的及び経路を標的とする追加の療法が依然として必要とされている。
【0006】
自己免疫疾患の一部は、円形脱毛症、白斑、ＵＣ、１型糖尿病、乾癬、ＲＡ、ＭＳ、及び喘息を含む、これらの細胞が体内のある特定の部位に移動した場合のＣＤ８＋Ｔ細胞の過剰活性及びＣＤ８＋Ｔ細胞による組織損傷と関連付けられているが、これらの状態の根底にあるＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の機構に関する詳細の多くは解明されていない。例えば、樹状細胞（dendritic cell、ＤＣ）によるＣＤ８＋Ｔ細胞活性化に特異的な役割は、チェックポイントアンタゴニストの研究など、免疫学ではなく腫瘍学の分野において一般に解明されている。これは、従来の樹状細胞１（conventional dendritic cell 1、ｃＤＣ１）として既知のＤＣの一部に当てはまり、例えば、Ｂｏｗｍａｎ－Ｋｉｒｉｇｉｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｔｈｅ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌ １ Ｓｕｂｓｅｔ Ｐｒｉｍｅｓ ＣＤ８＋Ｔ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｔｒａｆｆｉｃｓ Ｔｕｍｏｒ Ａｎｔｉｇｅｎ ｔｏ Ｄｒｉｖｅ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｒａｉｎ，」Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ，１１（１）（２０２３）ｐ．２０－３７を参照されたい。
【0007】
ＸＣＬ１抗体は、ＸＣＬ１の検出及び可視化のための研究ツールとして存在するが、現在まで、ＸＣＬ１特異的アンタゴニスト抗体療法のための承認された又は既知の臨床候補はない。したがって、ＲＡ、ＭＳ、喘息、乾癬、ＵＣ、１型糖尿病、円形脱毛症、白斑などの免疫媒介性疾患の治療に有用な、ヒトＸＣＬ１を標的とする抗体、医薬組成物、及び方法に対する満たされていない必要性が残っている。ヒトＸＣＬ１の強力な中和剤（すなわち、アンタゴニスト）であることを含む、良好な療法的特徴を保有するＸＣＬ１抗体が必要とされている。そのような抗体の有利な特性としては、ヒトＸＣＬ１に対する高い結合親和性、並びに特にＸＣＬ１と類似の配列及び／又は構造を有し得る他のケモカインに対する低い非特異的結合が挙げられ得る。そのようなＸＣＬ１抗体はまた、治療的に許容される薬物動態（pharmacokinetics、Ｐｋ）プロファイルを保有し、低い免疫原性を実証すべきである。そのようなＸＣＬ１抗体はまた、高レベルの溶解性及び低レベルの凝集を含めて、商業的製造に適しているはずである。本開示は、免疫媒介性疾患の治療に使用するための、これらの必要性のうちの１つ以上に対処するＸＣＬ１抗体を提供する。
【0008】
したがって、ある特定の実施形態では、本発明は、ヒトＸＣＬ１に対する抗体を提供する。本明細書に開示される抗体はまた、ヒトＸＣＬ２に結合し、それを中和する。
【発明の概要】
【0009】
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体は、ヒトＸＣＬ１に対して拮抗的であり、いくつかの実施形態では、ヒトＸＣＬ２に対して拮抗的である。一態様では、重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（light chain variable region、ＬＣＶＲ）を含むヒトＸＣＬ１に結合する抗体が本明細書に記載される。ＨＣＶＲは、相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。ＬＣＶＲは、ＣＤＲ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。ＨＣＤＲ１は、配列番号１０であるか又はそれを含む。ＨＣＤＲ２は、配列番号１１であるか又はそれを含む。ＨＣＤＲ３は、配列番号１２であるか又はそれを含み、式中、Ｚは、Ｑ及びＥから選択される。ＬＣＤＲ１は、配列番号５であるか又はそれを含み、式中、Ｘは、Ｓ及びＤから選択される。ＬＣＤＲ２は、配列番号８であるか又はそれを含む。ＬＣＤＲ３は、配列番号９であるか又はそれを含む。
【0010】
一実施形態では、Ｚは、Ｅである。別の実施形態では、Ｚは、Ｑである。
【0011】
一実施形態では、Ｘは、Ｄである。別の実施形態では、Ｘは、Ｓである。
【0012】
一実施形態では、ＨＣＤＲ１は、配列番号１０であるか又はそれを含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１であるか又はそれを含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３であるか又はそれを含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号６であるか又はそれを含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号８であるか又はそれを含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号９であるか又はそれを含む。
【0013】
一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号１７であるか又はそれを含み、ＨＣＶＲは、配列番号１５であるか又はそれを含み、式中、Ｘａは、Ｑ及びピログルタミン酸から選択される。一実施形態では、Ｘａは、Ｑである。
【0014】
一実施形態では、抗体は、重鎖（heavy chain、ＨＣ）及び軽鎖（light chain、ＬＣ）を有し、ＨＣのアミノ酸配列は、配列番号１９であるか又はそれを含み、式中、Ｘ１は、Ｑ及びピログルタミン酸から選択され、Ｘ２は、Ｇであるか又は存在せず、Ｘ３は、Ｋであるか又は存在せず、ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号２１であるか又はそれを含む。一実施形態では、Ｘ１は、Ｑであり、Ｘ２は、Ｇであり、Ｘ３は、Ｋである。
【0015】
一実施形態では、ＨＣＤＲ１は、配列番号１０であるか又はそれを含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１であるか又はそれを含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１４であるか又はそれを含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号７であるか又はそれを含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号８であるか又はそれを含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号９であるか又はそれを含む。
【0016】
一実施形態では、ＬＣＶＲのアミノ酸配列は、配列番号１８であるか又はそれを含み、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は、配列番号１６であるか又はそれを含み、式中、Ｘａは、Ｑ及びピログルタミン酸から選択される。一実施形態では、Ｘａは、Ｑである。
【0017】
一実施形態では、抗体は、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を有する。ＨＣは、配列番号２０であるか又はそれを含み、式中、Ｘ１は、Ｑ及びピログルタミン酸から選択され、Ｘ２は、Ｇであるか又は存在せず、Ｘ３は、Ｋであるか又は存在せず、ＬＣは、配列番号２２であるか又はそれを含む。一実施形態では、Ｘ１は、Ｑであり、Ｘ２は、Ｇであり、Ｘ３は、Ｋである。
【0018】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ＸＣＬ１アンタゴニストであり得る。
【0019】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ヒトＸＣＬ２に結合し得る。
【0020】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ＸＣＬ２アンタゴニストであり得る。
【0021】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、二量体ＸＣＬ１に結合し得る。二量体ＸＣＬ１は、ホモ二量体ＸＣＬ１であり得る。抗体は、β－シート立体配置にあるＸＣＬ１に結合し得る。ホモ二量体ＸＣＬ１は、細胞の表面上のグリコサミノグリカンに結合し得る。
【0022】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、二量体ＸＣＬ２に結合し得る。二量体ＸＣＬ２は、ホモ二量体ＸＣＬ２であり得る。抗体は、β－シート立体配置にあるＸＣＬ２に結合し得る。ホモ二量体ＸＣＬ２は、細胞の表面上のグリコサミノグリカンに結合し得る。
【0023】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ＸＣＬ１の１つの単量体及びＸＣＬ２の１つの単量体を含むヘテロ二量体複合体に結合し得る。そのような実施形態では、抗体は、ヘテロ二量体複合体のＸＣＬ１単量体の少なくとも１つのアミノ酸又はＸＣＬ２単量体の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。ヘテロ二量体複合体は、細胞の表面上のグリコサミノグリカンに結合し得る。
【0024】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ＸＣＬ１及びＸＣＬ２以外のケモカインに結合しない。
【0025】
一実施形態では、抗体は、配列番号１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
【0026】
一実施形態では、抗体は、配列番号１９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）及び配列番号２１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。
【0027】
一実施形態では、抗体は、配列番号１６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
【0028】
一実施形態では、抗体は、配列番号２０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）及び配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。
【0029】
一実施形態では、抗体は、配列番号２７の１つ以上のアミノ酸を含むＸＣＬ１のエピトープに結合する。一実施形態では、抗体は、配列番号２７の２つ以上のアミノ酸に結合する。実施形態では、抗体は、配列番号２７の３つ以上のアミノ酸に結合する。
【0030】
一実施形態では、抗体は、配列番号２９の１つ以上のアミノ酸に結合する。
【0031】
一実施形態では、抗体は、配列番号２８の１つ以上のアミノ酸を含むＸＣＬ１のエピトープに結合する。一実施形態では、抗体は、配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合する。
【0032】
実施形態では、配列番号２７の１つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の１つ以上のアミノ酸を含むＸＣＬ１のエピトープに結合する抗体。一実施形態では、抗体は、配列番号２７の２つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合する。一実施形態では、抗体は、配列番号２９の１つ以上のアミノ酸に結合する。
【0033】
一実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。
【0034】
本開示はまた、上記の実施形態のいくつかに記載されるような抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。
【0035】
本開示は、円形脱毛症、白斑、喘息、乾癬、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、又は潰瘍性大腸炎の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、有効量の本明細書に記載の抗体又は医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【0036】
本開示は、療法に使用するための、例えば、円形脱毛症、白斑、喘息、乾癬、多発性硬化症、関節リウマチ、又は潰瘍性大腸炎の治療に使用するための抗体又は医薬組成物を提供する。
【0037】
本開示は、円形脱毛症、白斑、喘息、乾癬、多発性硬化症、関節リウマチ、又は潰瘍性大腸炎の治療のための医薬剤の製造における抗体又は医薬組成物の使用を提供する。
【0038】
一態様では、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６をコードする配列を含む核酸が提供される。一態様では、配列番号２３又は配列番号２５をコードする第１の核酸配列及び配列番号２４又は配列番号２６をコードする第２の核酸配列を含むベクターが記載され、そのようなベクターを含む細胞も記載される。一実施形態では、抗体を産生する方法であって、抗体が発現されるような条件下で当該細胞を培養することと、発現された抗体を培養培地から回収することと、を含む、方法が開示される。一実施形態では、抗体が発現されるような条件下で当該細胞を培養し、発現された抗体を培養培地から回収することによって産生された抗体が開示される。
【0039】
一態様では、二量体ＸＣＬ１及び二量体ＸＣＬ１に結合した抗体を含む、タンパク質複合体が提供される。二量体ＸＣＬ１は、ホモ二量体ＸＣＬ１であり得る。抗体は、二量体ＸＣＬ１の各単量体単位上の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合し得る。
【0040】
一態様では、二量体ＸＣＬ２及び二量体ＸＣＬ２に結合した抗体を含む、タンパク質複合体が提供される。二量体ＸＣＬ２は、ホモ二量体ＸＣＬ２であり得る。抗体は、二量体ＸＣＬ２の各単量体単位上の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合し得る。
【0041】
一態様では、ＸＣＬ１の単量体単位及びＸＣＬ２の単量体単位から構成されるヘテロ二量体と、ヘテロ二量体に結合した抗体と、を含む、タンパク質複合体が提供される。この実施形態では、抗体は、ＸＣＬ１の少なくとも１つのアミノ酸残基、又はＸＣＬ２の少なくとも１つのアミノ酸残基、又はＸＣＬ１の少なくとも１つの残基及びＸＣＬ２の少なくとも１つの残基に結合し得る。
【発明を実施するための形態】
【0042】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体の実施形態には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性若しくは多重特異性抗体、又はコンジュゲート抗体が含まれる。抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ）、及び任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）であってもよい。
【0043】
本開示の例示的な抗体は、４つのポリペプチド鎖：鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）から構成された、免疫グロブリンＧ（immunoglobulin G、ＩｇＧ）型抗体である。４つのポリペプチド鎖の各々のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００～１２５個以上のアミノ酸の可変領域を含む。４つのポリペプチド鎖の各々のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を含有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域から構成される。ＩｇＧアイソタイプは、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）に更に分割され得る。
【0044】
ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変領域に更に細分され得る。ＣＤＲはタンパク質の表面上に露出しており、抗原結合特異性のための抗体の重要な領域である。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成されており、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の３つのＣＤＲを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。アミノ酸残基のＣＤＲへの割り当ては、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，」Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、Ｎｏｒｔｈ（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，「Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））、又はＩＭＧＴ（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能なｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９９；２７：２０９－２１２を参照されたい）に記載されるものを含む、周知のスキームに従って行うことができる。
【0045】
本開示の実施形態はまた、本明細書で使用される場合、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ｓｃＦａｂ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄ断片などの、抗原又は抗原のエピトープと特異的に相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部を含む、抗体断片又は抗原結合断片を含む。
【0046】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、例えば、任意の真核生物、原核生物、若しくはファージクローンを含む単一のコピー又はクローンに由来する抗体であり、それが産生される方法ではない。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージ提示技術、合成技術、例えば、ＣＤＲ移植、又はそのような技術若しくは当該技術分野で既知の他の技術の組み合わせにより産生することができる。
【0047】
抗体を産生及び精製する方法は、当該技術分野で周知されており、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ｃｈａｐｔｅｒｓ ５－８ ａｎｄ １５，ＩＳＢＮ ０－８７９６９－３１４－２に見ることができる。例えば、当該技術分野で既知の遺伝子形質転換マウス又はウサギを含む、マウス又はウサギは、ヒトＸＣＬ１又はその部分で免疫化してもよく、得られた抗体を回収、スクリーン、精製することができ、アミノ酸配列を、当該技術分野で周知の従来の方法を使用して決定することができる。
【0048】
本発明の特定の実施形態では、抗体、又は抗体をコードする核酸は、単離された形態で提供される。本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、細胞環境内に見出される他の高分子種を含まないか、又はそれを実質的に含まない、タンパク質、ポリペプチド、又は核酸を指す。
【0049】
本発明の抗体は、既知の方法を使用して調製及び精製され得る。例えば、ＨＣ（例えば、配列番号１９又は配列番号２０によって示されるアミノ酸配列）及びＬＣ（例えば、配列番号２１又は配列番号２２によって示されるアミノ酸配列）をコードするｃＤＮＡ配列は、クローン化して、ＧＳ（グルタミンシンセターゼ）発現ベクター中に操作され得る。一例では、抗体は、配列番号１９によって示されるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２１によって示されるアミノ酸配列を有する軽鎖を有し、そのような例において、鎖を発現するために使用され得るｃＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号２３及び配列番号２４によって提供される。別の例では、抗体は、配列番号２０によって示されるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２２によって示されるアミノ酸配列を有する軽鎖を有し、この例において、鎖を発現するために使用され得るｃＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号２５及び配列番号２６によって提供される。
【0050】
次いで、操作した免疫グロブリン発現ベクターを、ＣＨＯ細胞に安定的にトランスフェクトし得る。当業者が理解するように、抗体の哺乳動物発現は、典型的にはＦｃ領域の高度に保存されたＮ－グリコシル化部位でグリコシル化をもたらすであろう。安定したクローンは、ヒトＸＣＬ１（例えば、配列番号１を含む組換え的に産生されたペプチドによって表される）に特異的に結合する抗体の発現について検証され得る。陽性クローンを、バイオリアクターでの抗体産生のために無血清培養培地中に拡大し得る。抗体が分泌された培地を、従来の技術によって精製し得る。例えば、培地を、リン酸緩衝生理食塩水などの適合性のある緩衝液で平衡化されたプロテインＡ又はＧ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦカラムに都合よく適用し得る。カラムを洗浄して、非特異的結合構成成分を除去する。結合した抗体は、例えば、ｐＨ勾配によって溶出され、抗体画分は、例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって検出され、次いでプールされる。抗体を、一般的な技術を使用して濃縮及び／又は滅菌濾過し得る。可溶性凝集体及び多量体を、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去し得る。生成物は、例えば、－７０℃で直ちに凍結され得るか、又は凍結乾燥され得る。
【0051】
本発明の抗体は、患者の治療に使用することができる。より具体的には、本発明の抗体は、円形脱毛症、白斑、喘息、ＲＡ、ＭＳ、ＵＣ、乾癬、及び１型糖尿病を含む免疫媒介性疾患又は障害の治療に有用であると期待される。本明細書で互換的に使用される場合、「治療」及び／又は「治療すること」及び／又は「治療する」は、本明細書に記載の障害の進行を遅らせること、妨害すること、抑止すること、制御すること、停止させること、又は逆行させることであってもよい全てのプロセスを指すことが意図されるが、全ての障害の症状の完全な排除を必ずしも示すものではない。治療は、ＸＣＬ１及び／又はＸＣＬ２活性の低減から利益を得るであろうヒトにおける疾患又は状態の治療のための本発明の抗体、又はその医薬組成物の投与を含み、（ａ）疾患の更なる進行を阻害すること、すなわち、その発症を抑止すること、あるいは（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患若しくは障害の退行を引き起こすこと、又はその症状若しくは合併症を緩和することを含む。
【0052】
本明細書で互換的に使用される場合、「患者」、「対象」、及び「個体」という用語は、ヒトを指す。ある特定の実施形態では、患者は、ＸＣＬ１及び／又はＸＣＬ２活性の低減から利益を得るであろう疾患、障害、又は状態（例えば、免疫媒介性疾患）を更に特徴とする。他の実施形態では、患者は、ＸＣＬ１及び／又はＸＣＬ２活性の低減から利益を得るであろう免疫媒介性疾患、障害、又は状態を発症するリスクがあることを更に特徴とする。
【0053】
本明細書で言及される場合、「エピトープ」という用語は、抗体によって結合される抗原のアミノ酸残基を指す。エピトープは、直鎖状エピトープ、立体構造エピトープ、又はハイブリッドエピトープであり得る。
【0054】
「エピトープ」という用語は、構造的エピトープに関して使用され得る。構造的エピトープは、いくつかの実施形態によれば、抗体によってカバーされる抗原の領域（例えば、抗原に結合したときの抗体のフットプリント）を説明するために使用され得る。いくつかの実施形態では、構造的エピトープは、抗体のアミノ酸残基の特定の近接内（例えば、特定のオングストローム数内）にある抗原のアミノ酸残基を説明し得る。
【0055】
「エピトープ」という用語はまた、機能的エピトープに関して使用され得る。機能的エピトープは、いくつかの実施形態によれば、抗原と抗体との間の結合エネルギーに寄与する様式で抗体のアミノ酸残基と相互作用する抗原のアミノ酸残基を説明するために使用され得る。
【0056】
エピトープは、「エピトープマッピング技術」とも呼ばれる異なる実験技術に従って決定することができる。エピトープの決定は、使用される異なるエピトープマッピング技術に基づいて変動し得、例えば、特定の実験条件によって誘導される抗原の立体構造変化又は切断に起因して、使用される異なる実験条件によっても変動し得ることが理解される。Ｘ線結晶学、核磁気共鳴（nuclear magnetic resonance、ＮＭＲ）分光法、部位特異的突然変異誘発、種スワップ突然変異誘発、アラニン走査突然変異誘発、水素－重水素交換（hydrogen-deuterium exchange、ＨＤＸ）、及びクロスブロッキングアッセイが挙げられるが、これらに限定されないエピトープマッピング技術は、当該技術分野において既知である（例えば、Ｒｏｃｋｂｅｒｇ ａｎｄ Ｎｉｌｖｅｂｒａｎｔ，Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，３ｒｄ ｅｄ．２０１８）。
【0057】
本明細書で使用される場合、「結合する（bind）」、「結合する（binds）」、及び「結合すること（binding）」という用語は、別段示されない限り、化学結合又は別のタンパク質若しくは分子との引力相互作用を形成するタンパク質又は分子の能力を意味し、当該技術分野で既知の一般的な方法によって決定されるように、２つのタンパク質又は分子の密接な近接をもたらす。特に抗体の抗原への結合に関して、「結合する（bind）」、「結合する（binds）」、及び「結合すること（binding）」という用語は、抗体の超可変領域のＣＤＲの１つ以上と抗原との相互作用を指し、つまり、特異的結合は、ＣＤＲの１つ以上によって抗体に付与され得る。
【0058】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」及び「特異的結合」という用語は、特異的結合対の一方のメンバーが、その特異的結合パートナー以外の分子に有意に結合しない状況を指す。例えば、ある特定の抗体は、ＸＣＬ１及びＸＣＬ２に特異的に結合するが、他の類似のタンパク質（例えば、ケモカインなど）には結合しないと言うことができる。抗体は、当該技術分野で利用可能な技術、例えば、競合ＥＬＩＳＡ又はＢＩＡＣＯＲＥ若しくはＫＩＮＥＸＡアッセイを用いたＫＤ測定によって測定されるように、それが異なる抗原又は非抗原標的に結合するよりも少なくとも約５０％大きく、又は２倍大きく、又は２０倍大きく、又は５０倍大きく、又は１００倍大きく結合する場合、抗原に特異的に結合すると言うことができる。
【0059】
本発明の抗体は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ、本発明の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体及び／又は希釈剤と、を含む、医薬組成物に組み込むことができる（例えば、一般に開業医に既知の製剤化技術の概要を提供する、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｏｙｄ Ｖ．，Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２）。医薬組成物に好適な担体には、本発明の抗体と組み合わせたときに分子の活性を保持し、かつ患者の免疫系と非反応性である、任意の材料が含まれる。
【0060】
本発明の抗体を含む医薬組成物は、親的経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、又は経皮）によって、本明細書に記載の疾患若しくは障害のリスクがあるか、又はそれを呈する患者に投与され得る。本発明の医薬組成物は、「有効」量又は「治療有効」量（本明細書で互換的に使用される）の本発明の抗体を含有する。有効量は、所望の治療結果を達成するのに必要な量（投与量及び期間及び投与手段で）を指す。抗体の有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、並びに抗体が個体において所望の応答を誘発する能力などの要因に応じて変動し得る。有効量はまた、本発明の抗体の任意の毒性効果又は有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。
【0061】
２つ以上のアミノ酸配列に関連して、本開示において使用される場合、相同性パーセントは、配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＮ、又は当業者が利用可能な他のアルゴリズム）を使用して、又は目視検査によって測定されて、最大一致について比較及び整列されたときに、特定されるパーセンテージの同じアミノ酸残基を有する２つ以上の配列を指す。用途に応じて、相同性パーセントは、比較される配列の領域にわたって、例えば、機能的ドメインにわたって存在するか、あるいは比較される２つの配列の全長にわたって存在することができる。例として、配列の相同性パーセントを参照配列と比較することができる。例えば、配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列と参照配列をコンピュータに入力することができる（必要に応じて、配列アルゴリズムプログラムのパラメータとともにサブシーケンス座標を更に指定することができる）。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムのパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性又は相同性パーセントを計算する。例示的な配列アラインメント及び／又は相同性アルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）、ＧＡＰ，ＢＥＳＴＦＩＴ，ＦＡＳＴＡ，ａｎｄ ＴＦＡＳＴＡ（ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を通じて利用可能であるか、又は目視検査（一般に、Ａｕｓｕｂｅｌら、以下を参照されたい）による。配列同一性及び配列類似性パーセントを決定するために好適であるアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通じて公に利用可能である。
【0062】
いくつかの場合において、抗体の組換え産生が抗体の改変をもたらし得ることが知られている。そのような改変の例としては、ＨＣのＣ末端におけるリジン若しくはグリシンの喪失、重鎖のＮ末端におけるグルタミン若しくはグルタミン酸のピログルタミン酸への変換、又はラムダ軽鎖のＮ末端におけるグルタミン若しくはグルタミン酸のピログルタミン酸への変換が挙げられる。これは、改変のないもの、単一の改変、又は複数の改変を有するものを含む、抗体の不均一な混合物の産生をもたらし得る。本開示の抗体は、そのような改変を受けてもよく、それに由来する特許請求の範囲によって包含される。
【0063】
一実施形態では、本発明の抗体は、ＸＣＬ１に結合し、ＸＣＬ１を中和する。一実施形態では、本発明の抗体は、ＸＣＬ２に結合し、ＸＣＬ２を中和する。
【0064】
一実施形態では、本発明の抗体は、ＸＣＲ１を発現する細胞の移動を妨害又は防止する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、樹状細胞移動を中和する。一実施形態では、樹状細胞は、ｃＤＣ１である。
【0065】
一実施形態では、本発明の抗体は、５．０×１０－１１Ｍ未満のＸＣＬ１に対するＫＤを有する。一実施形態では、本発明の抗体は、１．０×１０－１１Ｍ未満のＸＣＬ２に対するＫＤを有する。
【0066】
一実施形態では、本発明の抗体は、β－シート単量体立体配置にあるＸＣＬ１に結合する。一実施形態では、本発明の抗体は、二量体立体配置にあるＸＣＬ１に結合する。
【0067】
一実施形態では、本発明の抗体は、β－シート単量体立体配置にあるＸＣＬ２に結合する。一実施形態では、本発明の抗体は、二量体立体配置にあるＸＣＬ２に結合する。
【0068】
一実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ホモ二量体ＸＣＬ１に結合する。実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ホモ二量体ＸＣＬ２に結合する。一実施形態では、本明細書の抗体は、ＸＣＬ１の１つの単量体及びＸＣＬ２の１つの単量体を含むヘテロ二量体複合体に結合する。一実施形態では、本明細書に開示される抗体は、遊離単量体ＸＣＬ１及び／若しくはＸＣＬ２、並びに／又は遊離ホモ二量体ＸＣＬ１、並びに／又は遊離ホモ二量体ＸＣＬ２、並びに／又はＸＣＬ１及びＸＣＬ２の遊離ヘテロ二量体に結合する。一実施形態では、本開示の抗体は、ＧＡＧに結合したホモ二量体ＸＣＬ１、並びに／又はＧＡＧに結合したホモ二量体ＸＣＬ２、並びに／又はＧＡＧに結合したＸＣＬ１及びＸＣＬ２のヘテロ二量体に結合する。
【0069】
一実施形態では、抗体は、配列番号２９によって示される配列（つまり、スレオニン１６、グルタミン１７、アルギニン１８、ロイシン１９、及びプロリン２０）に結合する。実施形態では、抗体は、リジン４２及びアルギニン４３とともに配列番号２９によって示される配列に結合する。一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２７の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の２つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の３つ以上のアミノ酸に結合する。一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２８の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合する。実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２９の１つ以上のアミノ酸に結合する。一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２７の１つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の２つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合する。
【0070】
一実施形態では、本発明の抗体は、抗炎症活性を有し、療法剤として使用され得る。
【0071】
一態様では、本発明の抗体は、ＸＣＬ１及び／又はＸＣＬ２に結合するが、別のケモカインに特異的に結合しない。
【実施例0072】
実施例１：組換えＸＣＬ１及びその変異体、並びにＸＣＬ２の発現
各タンパク質（ヒトＸＣＬ１、配列番号１；ヒトＸＣＬ２、配列番号２；ＣＣ３、配列番号３；及びＣＣ５、配列番号４）をＮ末端の８ｘＨｉｓタグ、周知のＢＲＩＬ融合タンパク質、エンテロキナーゼ（enterokinase、ＥＫ）切断部位、次いでＣ末端の特異的タンパク質（ＸＣＬ１など）で構成された融合タンパク質として発現させた。融合タンパク質発現プラスミドを使用して、当該技術分野で既知の方法によって、各タンパク質について安定したＣＨＯ－Ｋ１細胞株を作成した。融合タンパク質を発現させ、化学的に定義された培地中で分泌させた。培地を回収し、融合タンパク質をＮｉ－ＩＭＡＣカラム（例えば、Ｐｉｅｒｃｅから入手可能なもの）上で捕捉し、ｐＨ７．５の３７５ｍＭのイミダゾールで溶出した。Ｎｉ－ＩＭＡＣプールをＥＫ消化緩衝液（２０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ８）中に透析し、融合タンパク質をＥＫで一晩インキュベートした。遊離タンパク質をＣａｐｔｏ－Ｓ樹脂（Ｃｙｔｉｖａカタログ番号１７５４４１０１）で捕捉した後、サイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５－Ｃｙｔｉｖａカタログ番号２８９８９３３３）で研磨した。タンパク質の同一性を質量分析によって確認した。
各タンパク質（ヒトＸＣＬ１、配列番号１；ヒトＸＣＬ２、配列番号２；ＣＣ３、配列番号３；及びＣＣ５、配列番号４）をＮ末端の８ｘＨｉｓタグ、周知のＢＲＩＬ融合タンパク質、エンテロキナーゼ（enterokinase、ＥＫ）切断部位、次いでＣ末端の特異的タンパク質（ＸＣＬ１など）で構成された融合タンパク質として発現させた。融合タンパク質発現プラスミドを使用して、当該技術分野で既知の方法によって、各タンパク質について安定したＣＨＯ－Ｋ１細胞株を作成した。融合タンパク質を発現させ、化学的に定義された培地中で分泌させた。培地を回収し、融合タンパク質をＮｉ－ＩＭＡＣカラム（例えば、Ｐｉｅｒｃｅから入手可能なもの）上で捕捉し、ｐＨ７．５の３７５ｍＭのイミダゾールで溶出した。Ｎｉ－ＩＭＡＣプールをＥＫ消化緩衝液（２０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ８）中に透析し、融合タンパク質をＥＫで一晩インキュベートした。遊離タンパク質をＣａｐｔｏ－Ｓ樹脂（Ｃｙｔｉｖａカタログ番号１７５４４１０１）で捕捉した後、サイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５－Ｃｙｔｉｖａカタログ番号２８９８９３３３）で研磨した。タンパク質の同一性を質量分析によって確認した。
【0073】
実施例２：抗ＸＣＬ１抗体の発現
本発明の例示される抗ＸＣＬ１抗体を、下の表１に提示する。抗体を化学的に定義された培地中の安定したＣＨＯ－Ｋ１細胞株中で産生した。それらをＰＲＩＳＭＡ樹脂（Ｃｙｔｉｖａ－カタログ番号１７５４９８１）上で捕捉し、ｐＨ３の緩衝液で溶出した。ＰＲＩＳＭＡプールをｐＨ５にして、宿主細胞タンパク質（host cell protein、ＨＣＰ）を沈殿させた。タンパク質を、ＰＯＲＯＳ ５０ＨＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号１３３５９０６）を使用して陰イオン交換クロマトグラフィー（anion exchange chromatography、ＡＥＸ）によって研磨し、次いで１０ｍＭのヒスチジン、２７５ｍＭのスクロース、ｐＨ６中に透析した。材料を分析的サイズ排除クロマトグラフィー（size exclusion chromatography、ＳＥＣ）によって分析し、質量分析を使用して確認した。
本発明の例示される抗ＸＣＬ１抗体を、下の表１に提示する。抗体を化学的に定義された培地中の安定したＣＨＯ－Ｋ１細胞株中で産生した。それらをＰＲＩＳＭＡ樹脂（Ｃｙｔｉｖａ－カタログ番号１７５４９８１）上で捕捉し、ｐＨ３の緩衝液で溶出した。ＰＲＩＳＭＡプールをｐＨ５にして、宿主細胞タンパク質（host cell protein、ＨＣＰ）を沈殿させた。タンパク質を、ＰＯＲＯＳ ５０ＨＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号１３３５９０６）を使用して陰イオン交換クロマトグラフィー（anion exchange chromatography、ＡＥＸ）によって研磨し、次いで１０ｍＭのヒスチジン、２７５ｍＭのスクロース、ｐＨ６中に透析した。材料を分析的サイズ排除クロマトグラフィー（size exclusion chromatography、ＳＥＣ）によって分析し、質量分析を使用して確認した。
【0074】
【表1】
【0075】
配列番号２７によって示されるＨＣアミノ酸配列及び配列番号２８によって示されるＬＣアミノ酸配列を有する、単量体ＸＣＬ１に特異的に結合する（つまり、高い親和性でＣＣ３に結合し、ＣＣ５に結合しない；下の実施例を参照されたい）対照抗体。ＨＣ及びＬＣを発現するために使用され得るｃＤＮＡ配列は、それぞれ、配列番号２９及び配列番号３０によって示される。この抗体は、本明細書において単量体結合対照（monomer-binding control、ＭＢＣ）と称される。
【0076】
例示される抗ＸＣＬ１抗体の様々な領域の関係は、以下の通りである（アミノ酸の番号付けは、線形番号付けを適用し、可変ドメインへのアミノ酸の割り当ては、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能なＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）に基づく）。例示される各抗体のＣＤＲドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｃ末端が周知のＫａｂａｔ番号付け規則に基づくＨＣＤＲ２を除いて、周知のＮｏｒｔｈ番号付け規則に基づく。
【0077】
本開示の例示される抗体は、高い結合親和性を保有し、療法用親的投与と一致する凝集及び溶解性を含めて化学的及び物理的に安定していると特定される。本開示の例示される抗体はまた、低い免疫原性（低い非特異的結合及び／又は血清結合を含む）を保有し、免疫媒介性疾患の治療のための療法用親的投与と一致する薬物動態特性を保有するものとして特定される。一態様では、本明細書に開示される抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのヒト抗体である。本明細書に開示される抗体は、モノクローナル抗体である。他のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ４など）の抗体もまた、本開示によって企図される。
【0078】
実施例３：ＸＣＬ１変異体ＣＣ３及びＣＣ５の特性
ＸＣＬ１は、塩及び温度条件に依存して主要な立体構造再編成を容易に受ける変成タンパク質である。高い塩及び低い温度（１０℃）は、同族受容体、ＸＣＲ１を介してシグナル伝達することができる標準的なケモカインフォールドに典型的なα－ヘリックスモチーフを有する活性単量体立体構造に有利に働くが、低い塩及びより高い温度（４０℃）は、二量体化して内因性グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合し得る不活性β－シート立体配置に有利に働く。
ＸＣＬ１は、塩及び温度条件に依存して主要な立体構造再編成を容易に受ける変成タンパク質である。高い塩及び低い温度（１０℃）は、同族受容体、ＸＣＲ１を介してシグナル伝達することができる標準的なケモカインフォールドに典型的なα－ヘリックスモチーフを有する活性単量体立体構造に有利に働くが、低い塩及びより高い温度（４０℃）は、二量体化して内因性グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合し得る不活性β－シート立体配置に有利に働く。
【0079】
各立体配置の特性を別々に研究するために、操作した変異体タンパク質を発現させ、精製した。ＣＣ３（配列番号３）は、残基２１及び５９がシステインに突然変異した場合（Ｖ２１Ｃ／Ｖ５９Ｃ）のジスルフィド結合の作成を通して、活性なα－ヘリックス含有単量体立体構造で安定化されたＸＣＬ１の操作された変異体である。同様に、残基３６及び４９におけるシステインへの突然変異（Ａ３６Ｃ／Ａ４９Ｃ）は、ＣＣ５（配列番号４）と呼ばれる、二量体状態に向かう傾向がある不活性β－シート立体配置を安定化する代替ジスルフィド構造を作成する。これらの変異体は、当該技術分野で既知であり、文献に明記されているように調製された（Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２０２１ Ｏｃｔ、１１２（１０）：ｅ２３４０２ ｄｏｉ：１０．１００２／ｂｉｐ．２３４０２．Ｅｐｕｂ ２０２０ Ｓｅｐ ２８を参照されたい）。
【0080】
ＸＣＲ１は、いくつかのタイプの樹状細胞（ＤＣ）、主に１型従来型樹状細胞（ｃＤＣ１）上で発現される。ｃＤＣ１は、主要組織適合性複合体Ｉとの関連でＣＤ８＋Ｔ細胞への抗原提示に適した抗原提示細胞（antigen presenting cell、ＡＰＣ）である。ＣＤ８＋Ｔ細胞がＸＣＬ１を分泌するため、ケモイン性勾配が生じ、ＸＣＲ１保有細胞をＣＤ８＋Ｔ細胞の部位（例えば、腫瘍又は自己免疫部位内）に誘引し、免疫応答を増強する。Ｄｏｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３１（２００９）８２３－８３３、Ａｕｄｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌｓ ９（２０２０）５６５ １－２２を参照されたい。
【0081】
組換えヒトＸＣＬ１、ＣＣ３、及びＣＣ５を調製し、ヒトＸＣＲ１を安定して過剰発現させるマウスＢａ／Ｆ３細胞株を利用する移動アッセイにおいて評価した。この細胞株は、５μＭのボイデンチャンバーアッセイプレートにおいて、ＸＣＬ１ケモカイン勾配インビトロに向かって移動する。下部チャンバーには様々な濃度のＸＣＬ１を添加して、上部チャンバーには１５０，０００細胞／ウェルでアッセイを設定する。細胞を３７℃で約４時間にわたって移動させ、発光細胞生存率読み出しを使用して移送した細胞を定量する。結果を下の表２に示す。
【0082】
【表2】
【0083】
ＣＣ３については、野生型ＸＣＬ１（８５８．４ｎＭ）と比較して、約１１４．７ｎＭのＥＣ５０で強い移動が起こる。ＣＣ５については、移動は観察されなかった。これらのデータは、組換えＣＣ３及びＣＣ５がＸＣＬ１の２つの異なる立体構造を表すことを示す文献における観察を確認する。
【0084】
実施例４：結合動態及び親和性
Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する表面プラズモン共鳴によって、ヒトＸＣＬ１、ヒトＸＣＬ２、マウスＸＣＬ１、カニクイザル（cynomolgus、ｃｙｎｏ）ＸＣＬ１、及びラットＸＣＬ１に対する本発明の抗体及びＭＢＣの親和性及び結合動態を決定した。手順は、一般に、「Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」に従う。抗体を最初にＢｉａｃｏｒｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップ上で捕捉し、続いて、ＰＢＳ－Ｐ２０－ＢＳＡ（０．１％の界面活性剤Ｐ２０、０．１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ）中の２倍連続希釈で４００ｎＭから０．０３９ｎＭまでの連続濃度の抗原を流した。全ての測定を２５℃で実施する。
Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する表面プラズモン共鳴によって、ヒトＸＣＬ１、ヒトＸＣＬ２、マウスＸＣＬ１、カニクイザル（cynomolgus、ｃｙｎｏ）ＸＣＬ１、及びラットＸＣＬ１に対する本発明の抗体及びＭＢＣの親和性及び結合動態を決定した。手順は、一般に、「Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」に従う。抗体を最初にＢｉａｃｏｒｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップ上で捕捉し、続いて、ＰＢＳ－Ｐ２０－ＢＳＡ（０．１％の界面活性剤Ｐ２０、０．１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ）中の２倍連続希釈で４００ｎＭから０．０３９ｎＭまでの連続濃度の抗原を流した。全ての測定を２５℃で実施する。
【0085】
各試料注入後に表面を再生する別々のサイクルにおいて各分析物濃度を実行するマルチサイクル動態設定を使用する。再生を、サイクル毎に一貫した表面特性を維持するように最適化する。各サイクルは、１０μｌ／分の流速での抗体（約１５０応答単位（response unit、ＲＵ）捕捉レベル）の３分間の注入で開始し、５０μｌ／分の流速での抗原の３分間の注入及びＰＢＳ－Ｐ２０－ＢＳＡ中で１５分間の解離相が続く。次いで、ｐＨ１．５、１０ｍＭのグリシン緩衝液を５０μｌ／分の流速で３回３０秒間注入することによって、チップ表面を再生した。データを１：１の結合モデルに適合させて、ｋａ及びｋｄを導き出し、Ｋｄを計算した。
【0086】
本質的に上記の手順に従って、本発明における抗体について以下のパラメータが得られる。
【0087】
【表3】
【0088】
注目すべきことに、抗体１及び２は、良好な親和性でＣＣ５に結合するが、ＣＣ３には結合せず、一方、ＭＢＣの単量体特異的結合ではその逆が観察される。これは、ＣＣ３におけるシステインの導入が、抗体１及び２が結合するエピトープに干渉し得るためであり得る。結晶学実験は、抗体１及び抗体２がβ－シート単量体形態のＸＣＬ１に結合するということを支持する。一態様では、抗体１及び２は、主に及び優先的に二量体形態に結合すると称され得、これらの結果は、抗体１及び２がホモ二量体ＸＣＬ１に結合し得ることを実証する。
【0089】
実施例５：ＸＣＬ１及びＸＣＬ２の中和：ヒトＸＣＲ１移動アッセイ
ＸＣＬ１及びＸＣＬ２は、ＸＣＲ１受容体を通して媒介されるケモイン性活性を有する高度に保存されたケモカインである。マウス細胞株Ｂａ／Ｆ３をヒトＸＣＲ１受容体で安定してトランスフェクトして、ＸＣＬ１／２がインビトロ系において移動を誘導する能力を評価した。
ＸＣＬ１及びＸＣＬ２は、ＸＣＲ１受容体を通して媒介されるケモイン性活性を有する高度に保存されたケモカインである。マウス細胞株Ｂａ／Ｆ３をヒトＸＣＲ１受容体で安定してトランスフェクトして、ＸＣＬ１／２がインビトロ系において移動を誘導する能力を評価した。
【0090】
このアッセイのために、１５０，０００個の組換えｈＸＣＲ１／Ｂａ／Ｆ３細胞を、５μＭのボイデンチャンバーアッセイプレートの上部チャンバーに播種し、ＸＣＬ１濃度を、下部チャンバーに添加された各々の種について経験的に決定した。細胞をＸＣＬ１／２勾配に向かって約４時間移動させ、下部チャンバー中の細胞を発光細胞生存率読み出しによってアッセイした。このアッセイでは、ヒトＸＣＬ１、ヒトＸＣＬ２、マウス、ラット、及びカニクイザルＸＣＬ１は全て、移動を誘導する。リガンドの用量応答を行った後、単一濃度のＸＣＬ１／２を選択し、試験した各ｍＡＢの用量応答とともにボイデンチャンバープレートの下部チャンバーに使用した。各抗体の中和ＩＣ５０値を決定した。下の表４に見られるように、全ての抗体は、ヒトＸＣＬ１及びＸＣＬ２、並びにラット、マウス、及びカニクイザルＸＣＬ１を中和することができた。
【0091】
【表4】
【0092】
表３及び４に提供される結果は、両方の例示される抗体が、高い親和性でＸＣＬ１及びＸＣＬ２の両方に結合し、インビトロアッセイにおいて両方のケモカインを中和することを実証する。したがって、本開示の抗体は、療法的にＸＣＬ１、ＸＣＬ２、又はそれらの両方の結合及び中和に有用であることが理解されるであろう。本明細書に開示される抗体はホモ二量体ＸＣＬ１に結合し、ＸＣＬ１とＸＣＬ２との間の配列類似性のために、抗体はホモ二量体ＸＣＬ２に結合することが理解されるであろう。抗体はまた、ＸＣＬ１及びＸＣＬ２のうちの１つの単量体を形成し得、かつ含むヘテロ二量体複合体に結合する。本開示の抗体は、遊離単量体ＸＣＬ１若しくはＸＣＬ２、又は遊離ホモ二量体ＸＣＬ１、又は遊離ホモ二量体ＸＣＬ２、又はＸＣＬ１及びＸＣＬ２の遊離ヘテロ二量体に結合し得る。本開示の抗体はまた、ＧＡＧに結合したホモ二量体ＸＣＬ１、又はＧＡＧに結合したホモ二量体ＸＣＬ２、又はＧＡＧに結合したＸＣＬ１及びＸＣＬ２のヘテロ二量体に結合し得る。
【0093】
実施例６：抗体によるＸＣＬ１活性の中和：樹状細胞移動
ＸＣＬ１及びＸＣＬ２は、従来の１型樹状細胞（ｃＤＣ１）を発現するＸＣＲ１の移動を刺激する。ＸＣＬ１／２抗体中和活性を実証するために、ヒトｃＤＣ１細胞をＣＤ３４＋幹細胞から分化させ、ボイデンチャンバーを通るＸＣＬ１へのそれらの移動をフローサイトメトリーによって測定した。簡潔には、ヒト臍帯血由来のＣＤ３４＋細胞を、ＤＬＬ１を発現するフィーダー層上のサイトカインカクテル中で３週間にわたって分化させた（Ｂａｌａｎ ｅｔ ａｌ．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１８．０７．０３３から改作）。細胞を、骨髄樹状細胞キットを使用して濃縮した（ＳｔｅｍＣｅｌｌ；系統陰性、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１１ｃ＋）。１０ｎｇ／ｍＬのＸＣＬ１＋抗体用量滴定を三連で１時間プレインキュベートし、ボイデンチャンバーの下部チャンバーに添加した。用いた抗体は、抗体１、抗体２、及びｈＩｇＧ１－ＡＡＳアイソタイプ対照抗体であった。１５０，０００個の濃縮分化細胞をボイデンチャンバーの上部チャンバーに添加し、２時間インキュベートした。下部チャンバー中の移動したヒトｃＤＣ１細胞を染色し（生／死、ＣＬＥＣ９Ａ＋、ＸＣＲ１＋）、計数した。本発明のＸＣＬ１／２抗体は、３回の反復実験にわたってＸＣＬ１へのｃＤＣ１移動を完全に阻害し、ＩＣ５０値の幾何平均（ｎＭ）及び関連する誤差（デルタ法）を表５に示す。
ＸＣＬ１及びＸＣＬ２は、従来の１型樹状細胞（ｃＤＣ１）を発現するＸＣＲ１の移動を刺激する。ＸＣＬ１／２抗体中和活性を実証するために、ヒトｃＤＣ１細胞をＣＤ３４＋幹細胞から分化させ、ボイデンチャンバーを通るＸＣＬ１へのそれらの移動をフローサイトメトリーによって測定した。簡潔には、ヒト臍帯血由来のＣＤ３４＋細胞を、ＤＬＬ１を発現するフィーダー層上のサイトカインカクテル中で３週間にわたって分化させた（Ｂａｌａｎ ｅｔ ａｌ．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１８．０７．０３３から改作）。細胞を、骨髄樹状細胞キットを使用して濃縮した（ＳｔｅｍＣｅｌｌ；系統陰性、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１１ｃ＋）。１０ｎｇ／ｍＬのＸＣＬ１＋抗体用量滴定を三連で１時間プレインキュベートし、ボイデンチャンバーの下部チャンバーに添加した。用いた抗体は、抗体１、抗体２、及びｈＩｇＧ１－ＡＡＳアイソタイプ対照抗体であった。１５０，０００個の濃縮分化細胞をボイデンチャンバーの上部チャンバーに添加し、２時間インキュベートした。下部チャンバー中の移動したヒトｃＤＣ１細胞を染色し（生／死、ＣＬＥＣ９Ａ＋、ＸＣＲ１＋）、計数した。本発明のＸＣＬ１／２抗体は、３回の反復実験にわたってＸＣＬ１へのｃＤＣ１移動を完全に阻害し、ＩＣ５０値の幾何平均（ｎＭ）及び関連する誤差（デルタ法）を表５に示す。
【0094】
【表5】
【0095】
実施例７：マウスにおける抗体の抗炎症効果
抗体１及び２の免疫抑制活性を、マウス耳に対するオキサゾロン誘導性遅延型過敏のマウスモデルにおいて評価し、抗ＣＤ８枯渇抗体（Ｂｉｏ Ｘ細胞＃ＢＥ０１１７）と比較した。０日目にマウスを抗ＸＣＬ１／２抗体で処置し、その約１時間後に、剃毛した腹側表面をアセトン中３％オキサゾロンで感作した。６日目に、マウスの耳に２％オキサゾロン投与を行い、７日目に耳の腫脹の変化を測定した。結果を、対応するアイソタイプと比較した抗ＸＣＬ１／２抗体を用いたデルタ耳厚として表６に示す。
抗体１及び２の免疫抑制活性を、マウス耳に対するオキサゾロン誘導性遅延型過敏のマウスモデルにおいて評価し、抗ＣＤ８枯渇抗体（Ｂｉｏ Ｘ細胞＃ＢＥ０１１７）と比較した。０日目にマウスを抗ＸＣＬ１／２抗体で処置し、その約１時間後に、剃毛した腹側表面をアセトン中３％オキサゾロンで感作した。６日目に、マウスの耳に２％オキサゾロン投与を行い、７日目に耳の腫脹の変化を測定した。結果を、対応するアイソタイプと比較した抗ＸＣＬ１／２抗体を用いたデルタ耳厚として表６に示す。
【0096】
【表6】
【0097】
実施例８：エピトープマッピング及び決定
ＸＣＬ１の表面上の例示される抗体についての結合部位を、当該技術分野で周知の技術であるＨＤＸ及びＸ線結晶学によって決定した。ＨＤＸによって、抗体１及び２は、残基１２～２０（配列番号２７）内及び残基３５～４６、配列番号２８内の残基から形成される非直鎖状エピトープに結合することが見出された。ヒトＸＣＬ１と複合体化されたフラグメント抗原結合領域（fragment antigen-binding、Ｆａｂ）のＸ線結晶構造（２．７７オングストロームの分解能まで）は、結合に関与する特定の残基が、その配列が配列番号２９によって示されるもの（つまり、スレオニン１６、グルタミン１７、アルギニン１８、ロイシン１９、及びプロリン２０）、並びにリジン４２及びアルギニン４３であることを更に示唆する。したがって、本発明の抗体は、配列番号２７の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の２つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の３つ以上のアミノ酸に結合し得る。本発明の抗体は、配列番号２８の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合し得る。本発明の抗体は、配列番号２９の１つ以上のアミノ酸に結合し得る。本発明の抗体は、配列番号２７の１つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の２つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合し得る。
ＸＣＬ１の表面上の例示される抗体についての結合部位を、当該技術分野で周知の技術であるＨＤＸ及びＸ線結晶学によって決定した。ＨＤＸによって、抗体１及び２は、残基１２～２０（配列番号２７）内及び残基３５～４６、配列番号２８内の残基から形成される非直鎖状エピトープに結合することが見出された。ヒトＸＣＬ１と複合体化されたフラグメント抗原結合領域（fragment antigen-binding、Ｆａｂ）のＸ線結晶構造（２．７７オングストロームの分解能まで）は、結合に関与する特定の残基が、その配列が配列番号２９によって示されるもの（つまり、スレオニン１６、グルタミン１７、アルギニン１８、ロイシン１９、及びプロリン２０）、並びにリジン４２及びアルギニン４３であることを更に示唆する。したがって、本発明の抗体は、配列番号２７の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の２つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の３つ以上のアミノ酸に結合し得る。本発明の抗体は、配列番号２８の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合し得る。本発明の抗体は、配列番号２９の１つ以上のアミノ酸に結合し得る。本発明の抗体は、配列番号２７の１つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の１つ以上のアミノ酸、又は配列番号２７の２つ以上のアミノ酸及び配列番号２８の２つ以上のアミノ酸に結合し得る。
【0098】
本明細書に例示される抗体は、ＸＣＬ１／ＸＣＬ２の非直鎖状エピトープに結合する。一例では、抗体は、ＸＣＬ１又はＸＣＬ２の単量体β－シート立体配置に結合する。別の例では、抗体は、ＸＣＬ１又はＸＣＬ２の二量体形態に結合する。そのような場合、抗体は、一緒になって二量体を定義するケモカインの２つの単量体サブユニットのうちの単一の１つに結合し得る。例えば、抗体は、配列番号２９によって定義されるアミノ酸残基、並びにＸＣＬ１の第１の単量体単位のリジン４２及び／又はアルギニン４３に結合し得る。本開示は、同様に、二量体の両方の単量体の残基を含む非直鎖状エピトープに結合することによって二量体ＸＣＬ１又はＸＣＬ２に結合する抗体を企図する。本明細書で企図される別の結合様式は、二量体化が防止されるような方法で単量体β－シートＸＣＬ１又はＸＣＬ２に結合する様式である。
【0099】
実施例９：ＧＡＧ－結合アッセイ
言及したように、ＸＣＬ１／２のβ－シート立体配置は、二量体化することができ、ＸＣＲ１受容体に結合することができない。代わりに、この形態では、ＸＣＬ１／２は細胞表面ＧＡＧに結合し、これは化学誘引性勾配の確立を助けると考えられている。抗体１及び２は、β－シート立体配置に、優先的に二量体形態に結合し、フローサイトメトリーを使用して、細胞表面ＧＡＧに結合したＸＣＬ１／２二量体に結合するそれらの能力を研究した。
言及したように、ＸＣＬ１／２のβ－シート立体配置は、二量体化することができ、ＸＣＲ１受容体に結合することができない。代わりに、この形態では、ＸＣＬ１／２は細胞表面ＧＡＧに結合し、これは化学誘引性勾配の確立を助けると考えられている。抗体１及び２は、β－シート立体配置に、優先的に二量体形態に結合し、フローサイトメトリーを使用して、細胞表面ＧＡＧに結合したＸＣＬ１／２二量体に結合するそれらの能力を研究した。
【0100】
２９３Ｔ細胞を、１μｇ／ｍＬのＸＣＬ１又はＸＣＬ２の様々な調製物、及び１００ｎＭの抗体１、抗体２、又はｈＩｇＧ１－ＡＡＳアイソタイプ対照抗体（「対照」）のいずれかとともに１時間インキュベートした。これに続いて、抗ヒト－Ｆｃ／ＰＥ二次抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２－４９９８－８２）で染色して、細胞表面ＧＡＧに結合した抗体－ＸＣＬ１／２複合体を検出した。別の条件において、抗体－ＸＣＬ１／２複合体の結合を１００ｕｇ／ｍＬのヘパリンの存在下で行って、ＧＡＧ結合の特異性を実証する。平均蛍光強度（mean fluorescence intensity、ＭＦＩ）を、各条件についてフローサイトメトリーによって測定した。実験を３回繰り返し、実験全体にわたる平均ＭＦＩ＋／－標準偏差を下の表７に示す。
【0101】
【表7】
【0102】
上記の結果は、抗体１及び２が細胞表面で不活性又は二量体ＸＣＬ１に結合することを実証し、実施例６の結果と合わせると、抗体１及び２が不活性ＸＣＬ１に結合して、ＸＣＲ１を活性化しないようにそれを隔離し得ることを実証する。
【0103】
実施例１０：例示される抗体のＸＣＬ１特異性
ヒト血清結合アッセイを使用して、抗体１及び２、並びにＭＢＣの非特異的標的を特定した。各抗体をマイクロウェルにコーティングし、続いて血清で処理した。一晩インキュベートした後、抗体結合タンパク質を溶出する前に、未結合の血清タンパク質を洗い流した。これらの試料をトリプシンで消化し、ペプチドを質量分析によって特定した。
ヒト血清結合アッセイを使用して、抗体１及び２、並びにＭＢＣの非特異的標的を特定した。各抗体をマイクロウェルにコーティングし、続いて血清で処理した。一晩インキュベートした後、抗体結合タンパク質を溶出する前に、未結合の血清タンパク質を洗い流した。これらの試料をトリプシンで消化し、ペプチドを質量分析によって特定した。
【0104】
抗体１及び２は他のケモカインに結合しなかったが、ＭＢＣは相当量の第２のオフターゲットケモカインに結合することが見出された。その後の実験は、ＭＢＣがこのケモカインの高濃度（つまり、生理学的状況において予想されるものに類似）の存在下で生物学的活性を失う一方で、他の抗体１及び２は影響を受けないことを実証した。
【0105】
配列表
配列番号１ ヒトＸＣＬ１
ＶＧＳＥＶＳＤＫＲＴＣＶＳＬＴＴＱＲＬＰＶＳＲＩＫＴＹＴＩＴＥＧＳＬＲＡＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫＶＣＡＤＰＱＡＴＷＶＲＤＶＶＲＳＭＤＲＫＳＮＴＲＮＮＭＩＱＴＫＰＴＧＴＱＱＳＴＮＴＡＶＴＬＴＧ
配列番号１ ヒトＸＣＬ１
ＶＧＳＥＶＳＤＫＲＴＣＶＳＬＴＴＱＲＬＰＶＳＲＩＫＴＹＴＩＴＥＧＳＬＲＡＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫＶＣＡＤＰＱＡＴＷＶＲＤＶＶＲＳＭＤＲＫＳＮＴＲＮＮＭＩＱＴＫＰＴＧＴＱＱＳＴＮＴＡＶＴＬＴＧ
【0106】
配列番号２ ヒトＸＣＬ２
ＶＧＳＥＶＳＨＲＲＴＣＶＳＬＴＴＱＲＬＰＶＳＲＩＫＴＹＴＩＴＥＧＳＬＲＡＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫＶＣＡＤＰＱＡＴＷＶＲＤＶＶＲＳＭＤＲＫＳＮＴＲＮＮＭＩＱＴＫＰＴＧＴＱＱＳＴＮＴＡＶＴＬＴＧ
ＶＧＳＥＶＳＨＲＲＴＣＶＳＬＴＴＱＲＬＰＶＳＲＩＫＴＹＴＩＴＥＧＳＬＲＡＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫＶＣＡＤＰＱＡＴＷＶＲＤＶＶＲＳＭＤＲＫＳＮＴＲＮＮＭＩＱＴＫＰＴＧＴＱＱＳＴＮＴＡＶＴＬＴＧ
【0107】
配列番号３ ＣＣ３
ＶＧＳＥＶＳＤＫＲＴＣＶＳＬＴＴＱＲＬＰＣＳＲＩＫＴＹＴＩＴＥＧＳＬＲＡＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫＶＣＡＤＰＱＡＴＷＶＲＤＣＶＲＳＭＤＲＫＳＮＴＲＮＮＭＩＱＴＫＰＴＧＴＱＱＳＴＮＴＡＶＴＬＴＧ
ＶＧＳＥＶＳＤＫＲＴＣＶＳＬＴＴＱＲＬＰＣＳＲＩＫＴＹＴＩＴＥＧＳＬＲＡＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫＶＣＡＤＰＱＡＴＷＶＲＤＣＶＲＳＭＤＲＫＳＮＴＲＮＮＭＩＱＴＫＰＴＧＴＱＱＳＴＮＴＡＶＴＬＴＧ
【0108】
配列番号４ ＣＣ５
ＶＧＳＥＶＳＤＫＲＴＣＶＳＬＴＴＱＲＬＰＶＳＲＩＫＴＹＴＩＴＥＧＳＬＲＣＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫＶＣＣＤＰＱＡＴＷＶＲＤＶＶＲＳＭＤＲＫＳＮＴＲＮＮＭＩＱＴＫＰＴＧＴＱＱＳＴＮＴＡＶＴＬＴＧ
ＶＧＳＥＶＳＤＫＲＴＣＶＳＬＴＴＱＲＬＰＶＳＲＩＫＴＹＴＩＴＥＧＳＬＲＣＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫＶＣＣＤＰＱＡＴＷＶＲＤＶＶＲＳＭＤＲＫＳＮＴＲＮＮＭＩＱＴＫＰＴＧＴＱＱＳＴＮＴＡＶＴＬＴＧ
【0109】
配列番号５ 抗体１及び２のＬＣＤＲ１一般式
ＱＡＳＱＸＩＳＤＹＬＮ（式中、Ｘは、Ｓ及びＤから選択される）
ＱＡＳＱＸＩＳＤＹＬＮ（式中、Ｘは、Ｓ及びＤから選択される）
【0110】
配列番号６ 抗体１軽鎖ＣＤＲ１
ＱＡＳＱＤＩＳＤＹＬＮ
ＱＡＳＱＤＩＳＤＹＬＮ
【0111】
配列番号７ 抗体２ 軽鎖ＣＤＲ１
ＱＡＳＱＳＩＳＤＹＬＮ
ＱＡＳＱＳＩＳＤＹＬＮ
【0112】
配列番号８ 抗体１及び２の軽鎖ＣＤＲ２
ＹＤＡＳＡＫＱＴ
ＹＤＡＳＡＫＱＴ
【0113】
配列番号９ 抗体１及び２の軽鎖ＣＤＲ３
ＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴ
ＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴ
【0114】
配列番号１０ 抗体１及び２の重鎖ＣＤＲ１
ＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶ
ＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶ
【0115】
配列番号１１ 抗体１及び２の重鎖ＣＤＲ２
ＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧ
ＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧ
【0116】
配列番号１２ 抗体１及び２のＨＣＤＲ３ ＣＤＲ２
ＡＲＥＧＬＺＬＬＡＦＤＩ（式中、Ｚは、Ｑ及びＥから選択される）
ＡＲＥＧＬＺＬＬＡＦＤＩ（式中、Ｚは、Ｑ及びＥから選択される）
【0117】
配列番号１３ 抗体１ 重鎖ＣＤＲ３
ＡＲＥＧＬＥＬＬＡＦＤＩ
ＡＲＥＧＬＥＬＬＡＦＤＩ
【0118】
配列番号１４ 抗体２ 重鎖ＣＤＲ３
ＡＲＥＧＬＱＬＬＡＦＤＩ
ＡＲＥＧＬＱＬＬＡＦＤＩ
【0119】
配列番号１５ 抗体１ ＨＣＶＲ
ＸａＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＥＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（式中、Ｘは、Ｑ又はピログルタミン酸である）
ＸａＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＥＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（式中、Ｘは、Ｑ又はピログルタミン酸である）
【0120】
配列番号１６ 抗体２ ＨＣＶＲ
ＸａＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＱＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（式中、Ｘは、Ｑ又はピログルタミン酸である）
ＸａＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＱＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（式中、Ｘは、Ｑ又はピログルタミン酸である）
【0121】
配列番号１７ 抗体１ ＬＣＶＲ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＡＫＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＡＫＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【0122】
配列番号１８ 抗体２ ＬＣＶＲ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＳＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＡＫＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＳＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＡＫＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【0123】
配列番号１９ 抗体１ ＨＣ
Ｘ１ＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＥＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＸ２Ｘ３（式中、Ｘ１は、Ｑ又はピログルタミン酸であり、Ｘ２は、Ｇであるか又は存在せず、Ｘ３は、Ｋであるか又は存在しない）
Ｘ１ＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＥＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＸ２Ｘ３（式中、Ｘ１は、Ｑ又はピログルタミン酸であり、Ｘ２は、Ｇであるか又は存在せず、Ｘ３は、Ｋであるか又は存在しない）
【0124】
配列番号２０ 抗体２ ＨＣ
Ｘ１ＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＱＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＸ２Ｘ３（式中、Ｘ１は、Ｑ又はピログルタミン酸であり、Ｘ２は、Ｇであるか又は存在せず、Ｘ３は、Ｋであるか又は存在しない）
Ｘ１ＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＱＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＸ２Ｘ３（式中、Ｘ１は、Ｑ又はピログルタミン酸であり、Ｘ２は、Ｇであるか又は存在せず、Ｘ３は、Ｋであるか又は存在しない）
【0125】
配列番号２１ 抗体１ ＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＡＫＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＡＫＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【0126】
配列番号２２ 抗体２ ＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＳＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＡＫＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＳＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＡＫＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＨＹＤＮＬＧＹＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【0127】
配列番号２３ 抗体１ 重鎖ＤＮＡ配列
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【0128】
配列番号２４ 抗体１ 軽鎖ＤＮＡ配列
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配列番号２５ 抗体２ 重鎖ＤＮＡ配列
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【0130】
配列番号２６ 抗体２ 軽鎖ＤＮＡ配列
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【0131】
配列番号２７ ＸＣＬ１エピトープ１（抗体１及び２）
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【0132】
配列番号２８ ＸＣＬ１エピトープ２（抗体１及び２）
ＲＡＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫ
ＲＡＶＩＦＩＴＫＲＧＬＫ
【0133】
配列番号２９ ＸＣＬ１エピトープ１サブシーケンス（抗体１及び２）
ＴＱＲＬＰ
ＴＱＲＬＰ
【0134】
配列番号３０ 可変数なしの抗体１ ＨＣＶＲ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＥＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
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【0135】
配列番号３１ 可変数なしの抗体２ ＨＣＶＲ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＱＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
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【0136】
配列番号３２ 可変数なしの抗体１ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＶＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＤＰＳＫＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＬＥＬＬＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
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【0137】
配列番号３３ 可変数なしの抗体２ ＨＣ
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