特開 2024-170456 ＩｇＡ抗体構築物を含む組成物および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024170456

(43)【公開日】2024-12-10

(54)【発明の名称】ＩｇＡ抗体構築物を含む組成物および方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241203BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20241203BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241203BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241203BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/63 Z

C07K16/28

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024144789

(22)【出願日】2024-08-26

(62)【分割の表示】P 2021524345の分割

【原出願日】2019-10-29

(31)【優先権主張番号】18203183.1

(32)【優先日】2018-10-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】62/752,641

(32)【優先日】2018-10-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521190576

【氏名又は名称】ティガティーエックス，インコーポレーテッド

(71)【出願人】

【識別番号】514116305

【氏名又は名称】ユーエムセー・ユトレヒト・ホールディング・ベー・フェー

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100122644

【弁理士】

【氏名又は名称】寺地 拓己

(72)【発明者】

【氏名】デ・ブール，マーク

(72)【発明者】

【氏名】ロイゼン，ジャネット・ヘンリカ・ウィルヘルミナ

(72)【発明者】

【氏名】ファン・テザリング，ゲールツ・ヤン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】ＩｇＡ定常領域を含む治療薬、医薬組成物、および方法を提供する。
【解決手段】（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む抗体構築物であって、該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）との結合を阻害し、該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、前記抗体構築物を提供する。
【選択図】図９

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む抗体構築物であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記抗体構築物。

【請求項2】

ＣＤ４７結合ドメインが、第１の軽鎖可変ドメインおよび第１の重鎖可変ドメインのうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の抗体構築物。

【請求項3】

抗原結合ドメインが、第２の軽鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインのうちの少なくとも１つを含む、請求項１または請求項２に記載の抗体構築物。

【請求項4】

前記構築物が、前記第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の軽鎖可変ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２
）、および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み；
前記ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１３のアミノ酸配列または配列番号１３中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号１４のアミノ酸配列または配列番号１４中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１５のアミノ酸配列または配列番号１５中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む、
請求項２または請求項３に記載の抗体構築物。

【請求項5】

前記構築物が前記第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の軽鎖可変ドメインが、配列番号２６に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２～４のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項6】

前記構築物が、前記第１の重鎖可変ドメインを含み、前記第１の重鎖可変ドメインが、可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
前記ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む、
請求項２～５のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項7】

前記構築物が前記第１の重鎖可変ドメインを含み、該第１の重鎖可変ドメインが、配列番号２３に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２～６のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項8】

前記構築物が、前記第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の軽鎖可変ドメインが、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
前記ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１０のアミノ酸配列または配列番号１０中に最大２つのア
ミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号１１のアミノ酸配列または配列番号１１中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１２中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む、
請求項３～７のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項9】

前記構築物が前記第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の軽鎖可変ドメインが配列番号２５のアミノ酸配列を含む、請求項３～８のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項10】

前記構築物が、前記第２の重鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインが、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
前記ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む、請求項３～９のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項11】

前記構築物が前記第２の重鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインが、配列番号２２に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３～１０のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項12】

前記第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインのＣ末端が第１の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている、第１のポリペプチド；および
前記第１の軽鎖可変ドメインおよび第２の軽鎖可変ドメインを含み、第２の軽鎖可変ドメインのＣ末端が第１の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている、第２のポリペプチド；
のうちの少なくとも１つを含む、請求項３～１１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項13】

前記第１または前記第２のポリペプチドが、前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドをさらに含む、請求項１２に記載の抗体構築物。

【請求項14】

リンカーペプチドが配列番号４４の配列を含む、請求項１３に記載の抗体構築物。

【請求項15】

第１のポリぺプチドが配列番号２９の配列を含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項16】

第１のポリペプチドのＣ末端が（ＩｇＡ）重鎖領域に連結されている、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項17】

連結がＩｇＡ ＣＨ１定常ドメインを介している、請求項１６に記載の抗体構築物。

【請求項18】

第２のポリぺプチドが配列番号３１の配列を含む、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項19】

抗体構築物が第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む、請求項１２～１８のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項20】

第１の重鎖可変ドメインのＣ末端が第２の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている第１のポリペプチド；または
第１の軽鎖可変ドメインのＣ末端が第２の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている第２のポリペプチド；
のうちの少なくとも１つを含む、請求項３に記載の抗体構築物。

【請求項21】

連結がリンカーペプチドによる、請求項２０に記載の抗体構築物。

【請求項22】

リンカーペプチドが配列番号４４の配列を含む、請求項２１に記載の抗体構築物。

【請求項23】

第１のポリぺプチドが配列番号３０の配列を含む、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項24】

第１のポリペプチドのＣ末端が（ＩｇＡ）重鎖領域に連結されている、請求項２０～２３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項25】

連結がＩｇＡ ＣＨ１定常ドメインを介する、請求項２３に記載の抗体構築物。

【請求項26】

第２のポリぺプチドが配列番号３２の配列を含む、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項27】

抗体構築物が第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む、請求項２０～２６のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項28】

抗体構築物が、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む第１のポリペプチドを含み、該ｓｃＦＶが、前記第２の軽鎖可変ドメインに連結された前記第２の重鎖可変ドメインを含む、請求項３～１１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項29】

前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドを含む、請求項２８に記載の構築物。

【請求項30】

リンカーペプチドが配列番号４５の配列を含む、請求項２９に記載の抗体構築物。

【請求項31】

第１のポリペプチドが、第１の軽鎖可変ドメイン；または第１の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦｖを含む、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項32】

連結がリンカーペプチドによる、請求項３１に記載の抗体構築物。

【請求項33】

リンカーペプチドが配列番号４４の配列を含む、請求項３２に記載の抗体構築物。

【請求項34】

第１の軽鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項35】

第１の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３３に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項36】

抗体構築物が、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む第１のポリペプチドを含み、該ｓｃＦＶが、第１の軽鎖可変ドメインに連結された第１の重鎖可変ドメインを含む、請求項３に記載の抗体構築物。

【請求項37】

前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドを含む、請求項３６に記載の抗体構築物
。

【請求項38】

リンカーペプチドが配列番号４５の配列を含む、請求項３７に記載の抗体構築物。

【請求項39】

第１のポリペプチドが、第２の軽鎖可変ドメイン；または第２の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦｖを含む、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項40】

連結がリンカーペプチドによる、請求項３９に記載の抗体構築物。

【請求項41】

リンカーペプチドが配列番号４４の配列を含む、請求項４０に記載の抗体構築物。

【請求項42】

第２の軽鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３６に対して９０％の同一性を有する配列を含む、請求項３９～４１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項43】

第２の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３４に対して９０％の同一性を有する配列を含む、請求項３９～４１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項44】

ＩｇＡ重鎖ドメインがＩｇＡ重鎖定常ドメインを含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項45】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、ＩｇＡ１定常ドメインまたはそのバリアントである、請求項４４に記載の抗体構築物。

【請求項46】

ＩｇＡ１定常ドメインが、ＩｇＡ１ ＣＨ２領域およびＩｇＡ１ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む、請求項４５に記載の抗体構築物。

【請求項47】

ＩｇＡ１定常領域が、ＩｇＡ１ ＣＨ１領域またはそのバリアントをさらに含む、請求
項４６に記載の抗体構築物。

【請求項48】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、ＩｇＡ２定常ドメインまたはそのバリアントである、請求項４４に記載の抗体構築物。

【請求項49】

ＩｇＡ２定常ドメインが、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む、請求項４８に記載の抗体構築物。

【請求項50】

ＩｇＡ２定常領域がＩｇＡ２ ＣＨ１領域をさらに含む、請求項４９に記載の抗体構築
物。

【請求項51】

抗原が、ＣＤ２０、ＧＤ２、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ２５である、請求項１～５０のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項52】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つまたは２つの天然に存在するグリコシル化部位を欠く、請求項４４～５１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項53】

前記構築物が、少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位を欠き、該少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位が、少なくとも１つのＩｇＡ ＣＨ２領域また
はＩｇＡ ＣＨ３領域にある、請求項５２に記載の抗体構築物。

【請求項54】

少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位が、２つの天然に存在するＮ連結グリコシル化部位である、請求項５３に記載の抗体構築物。

【請求項55】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を欠く、請求項４４～５４のいずれか一項に記載の構築物。

【請求項56】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基のアミノ酸置換、または両方の残基の置換を含む、請求項４４～５４のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項57】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基を欠く、請求項４４～５６のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項58】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項５７に記載の抗体構築物。

【請求項59】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換を含む、請求項５８に記載の抗体構築物。

【請求項60】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸欠失を含む、請求項５７に記載の抗体構築物。

【請求項61】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基を欠く、請求項４４～６０のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項62】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項６１に記載の抗体構築物。

【請求項63】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基の欠失を含む、請求項６１に記載の抗体構築物。

【請求項64】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基を欠く、請求項４４～６３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項65】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項６４に記載の抗体構築物。

【請求項66】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の欠失を含む、請求項６５に記載の抗体構築物。

【請求項67】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基を欠く、請求項４４～６６のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項68】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項６７に記載の抗体構築物。

【請求項69】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の欠失を含む、請求項６８に記載の抗体構築物。

【請求項70】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基を欠く、請求項４４～６９のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項71】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項７０に記載の抗体構築物。

【請求項72】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の欠失を含む、請求項７１に記載の抗体構築物。

【請求項73】

前記構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い循環半減期を示す、請求項５２～７２のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項74】

抗体構築物が、対応する野生型ＣＤ４７結合ドメインと比較して、ＣＤ４７に対してより低い親和性を有する弱毒化ＣＤ４７結合ドメインを含む、請求項１～７３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項75】

抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、減少した凝集を示す、請求項５２～７４のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項76】

抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、血清タンパク質との減少した凝集を示す、請求項５２～７５のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項77】

前記ＩｇＡ重鎖定常領域が１以上のアルブミン結合ドメインを含む、請求項４４～７６のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項78】

抗体構築物が、１以上のアルブミン結合ドメインを含まない対応する抗体構築物よりも長い半減期を有する、請求項７７に記載の抗体構築物。

【請求項79】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、配列番号３７～４１のいずれか１つから選択される配列に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４４～７８のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項80】

構築物がヒンジ領域をさらに含む、請求項１～７９のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項81】

ヒンジ領域が、ＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、請求項８０に記載の抗体構築物。

【請求項82】

ヒンジ領域が、ヒトＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、請求項８０または請求項８１に記載の抗体構築物。

【請求項83】

ヒンジが、ＩｇＡ１ヒンジもしくはＩｇＡ２ヒンジ、またはそのバリアントもしくはフ
ラグメントである、請求項８０～８２のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項84】

抗体構築物が軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１～８３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項85】

軽鎖定常領域がカッパ定常領域である、請求項８４に記載の抗体構築物。

【請求項86】

軽鎖定常領域がラムダ定常領域である、請求項８４に記載の抗体構築物。

【請求項87】

軽鎖定常領域が、第１の軽鎖可変ドメインまたは第１の重鎖可変ドメインに連結される、請求項８４～８６のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項88】

（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖定常ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む抗体構築物であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記抗体構築物。

【請求項89】

ＣＤ４７結合ドメインが、第１の軽鎖可変ドメインおよび第１の重鎖可変ドメインを含む、請求項８８に記載の抗体構築物。

【請求項90】

抗原結合ドメインが、第２の軽鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインを含む、請求項８９に記載の抗体構築物。

【請求項91】

第１の軽鎖可変ドメインがカッパ型のものである、請求項９０に記載の抗体構築物。

【請求項92】

第２の軽鎖可変ドメインがラムダ型のものである、請求項９１に記載の抗体構築物。

【請求項93】

第１の軽鎖可変ドメインがラムダ型のものである、請求項９０に記載の抗体構築物。

【請求項94】

第２の軽鎖可変ドメインがカッパ型のものである、請求項９３に記載の抗体構築物。

【請求項95】

第１の軽鎖可変ドメインが、カッパ型のものであり、配列番号１６の可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）アミノ酸配列、配列番号１７の可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）アミノ酸配列、配列番号１８の可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）アミノ酸配列を含む、請求項９１または請求項９２に記載の抗体構築物。

【請求項96】

第１の軽鎖可変ドメインが、配列番号２７に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９５に記載の抗体構築物。

【請求項97】

第２の軽鎖可変ドメインが、配列番号１９の可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）アミノ酸配列、配列番号２０の可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）アミノ酸配列、配列番号２１の可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）アミノ酸配列を含むラムダ型のものである、請求項９２に記載の抗体構築物。

【請求項98】

第２の軽鎖可変ドメインが、配列番号２８に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９７に記載の抗体構築物。

【請求項99】

第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインが同じである、請求項９０～９８のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項100】

第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインが、配列番号７の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）アミノ酸配列、配列番号８の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）アミノ酸配列、配列番号９の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）アミノ酸配列を含む、請求項９９に記載の抗体構築物。

【請求項101】

第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインが、配列番号２４に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１００に記載の抗体構築物。

【請求項102】

第１の軽鎖可変ドメインがカッパ定常領域をさらに含む、請求項８９～１０１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項103】

第２の軽鎖可変ドメインがラムダ定常領域をさらに含む、請求項９０～１０２のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項104】

第１の軽鎖可変ドメインがラムダ定常領域をさらに含む、請求項８９～１０１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項105】

第２の軽鎖可変ドメインがカッパ定常領域をさらに含む、請求項９０～１０１または請求項１０４のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項106】

カッパ定常領域が、配列番号４２に対して９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０２～１０５のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項107】

ラムダ定常領域が、配列番号４３に対して９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０３～１０５のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項108】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、ＩｇＡ ＣＨ２領域およびＩｇＡ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む、請求項８８～１０７のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項109】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインがＩｇＡ ＣＨ１領域またはそのバリアントをさらに含む、請求項１０８に記載の抗体構築物。

【請求項110】

ＣＤ４７結合ドメインが、ＩｇＡ ＣＨ１ドメインによってＩｇＡ定常ドメインに連結される、請求項１０９に記載の抗体構築物。

【請求項111】

抗原結合ドメインが、ＩｇＡ ＣＨ１ドメインによってＩｇＡ定常ドメインに連結される、請求項１０９～１１０に記載の抗体構築物。

【請求項112】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインがＩｇＡ１定常領域またはそのバリアントである、請求項８８～１１１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項113】

ＩｇＡ１定常領域がＩｇＡ１ ＣＨ２領域およびＩｇＡ１ ＣＨ３領域を含む、請求項１１２に記載の抗体構築物。

【請求項114】

ＩｇＡ１定常領域がＩｇＡ１ ＣＨ１領域をさらに含む、請求項１１３に記載の抗体構
築物。

【請求項115】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインがＩｇＡ２定常領域またはそのバリアントである、請求項８８～１１１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項116】

ＩｇＡ２定常領域が、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含む、請求項１１５に記載の抗体構築物。

【請求項117】

ＩｇＡ２定常領域がＩｇＡ２ ＣＨ１領域をさらに含む、請求項１１６に記載の抗体構
築物。

【請求項118】

抗原が、ＣＤ２０、ＧＤ２、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ２５である、請求項８８～１１７のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項119】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、１、２または３つの天然に存在するグリコシル化部位を欠く、請求項１０８～１１８のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項120】

前記部位が、ＩｇＡ ＣＨ２領域またはＩｇＡ ＣＨ３領域の少なくとも１つにある、請求項１１９に記載の抗体構築物。

【請求項121】

前記構築物が、２つの天然に存在するＮ連結グリコシル化部位を欠く、請求項１１９または請求項１２０に記載の抗体構築物。

【請求項122】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を欠く、請求項１０８～１２１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項123】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基のアミノ酸置換、または少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基の置換を含む、請求項１２２に記載の抗体構築物。

【請求項124】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基を欠く、請求項１０８～１２３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項125】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項１２４に記載の抗体構築物。

【請求項126】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換を含む、請求項１２５に記載の抗体構築物。

【請求項127】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸欠失を含む、請求項１２６に記載の抗体構築物。

【請求項128】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基を欠く、請求項１０８～１２７のいずれか一項に
記載の抗体構築物。

【請求項129】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項１２８に記載の抗体構築物。

【請求項130】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基の欠失を含む、請求項１２９に記載の抗体構築物。

【請求項131】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基を欠く、請求項１０８～１３０のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項132】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項１３１に記載の抗体構築物。

【請求項133】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の欠失を含む、請求項１３２に記載の抗体構築物。

【請求項134】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基を欠く、請求項１０８～１３３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項135】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項１３４に記載の抗体構築物。

【請求項136】

ＩｇＡ重鎖定常領域が、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の欠失を含む、請求項１３５に記載の抗体構築物。

【請求項137】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基を欠く、請求項１０８～１３６のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項138】

ＩｇＡ重鎖定常領域が、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、請求項１３７に記載の抗体構築物。

【請求項139】

ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の欠失を含む、請求項１３８に記載の抗体構築物。

【請求項140】

抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い循環半減期を示す、請求項１１９～１３９のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項141】

抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い半減期を示す、請求項１１９～１４０のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項142】

抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、減少した凝集を示す、請求項１１９～１４１のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項143】

抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、血清タンパク質との減少した凝集を示す、請求項１１９～１４２のいずれか一項に記
載の抗体構築物。

【請求項144】

前記ＩｇＡ重鎖定常領域が１以上のアルブミン結合ドメインを含む、請求項１～１４３のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項145】

抗体構築物が、１以上のアルブミン結合ドメインを含まない対応する抗体構築物よりも長い半減期を有する、請求項１４４に記載の抗体構築物。

【請求項146】

ＩｇＡ重鎖定常領域がヒンジ領域をさらに含む、請求項８８～１４５のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項147】

ヒンジ領域が、ＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、請求項１４６に記載の抗体構築物。

【請求項148】

ヒンジ領域が、ヒトＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、請求項１４７に記載の抗体構築物。

【請求項149】

ヒンジが、ＩｇＡ１ヒンジもしくはＩｇＡ２ヒンジ、またはそのバリアントもしくはフラグメントである、請求項１４７または１４８に記載の抗体構築物。

【請求項150】

抗体構築物が、免疫接着分子、造影剤、治療薬、または細胞毒性薬をさらに含む、請求項１～１４９のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項151】

造影剤が、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、またはビオチンである、請求項１５０に記載の抗体構築物。

【請求項152】

前記治療薬または細胞毒性薬が、代謝拮抗薬、アルキル化薬、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生薬、抗有糸分裂薬、アントラサイクリン、毒素、またはアポトーシス薬である、請求項１５０に記載の抗体構築物。

【請求項153】

免疫エフェクター細胞が好中球である、請求項１または請求項８８に記載の抗体構築物。

【請求項154】

抗体構築物が、ＣＤ４７を発現する標的細胞に抗原結合ドメインも結合している場合にのみ、免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）機能を阻害する、請求項１または請求項８８に記載の抗体構築物。

【請求項155】

抗体構築物は二重特異性である、請求項１または請求項８８に記載の抗体構築物。

【請求項156】

ＣＤ４７結合ドメインが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはラクダ科ＶＨＨドメインである、請求項１または請求項８８に記載の抗体構築物。

【請求項157】

抗原結合ドメインが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはラクダ科ＶＨＨドメインである、請求項１または請求項８８に記載の抗体構築物。

【請求項158】

ＩｇＡ重鎖ドメインが、２つのＩｇＡ重鎖定常ドメインのヘテロ二量体である、請求項１５３～１５７のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項159】

ヘテロ二量体化が、ノブ－イントゥ－ホールカップリング、塩橋／静電相補性カップリング、ＣｒｏｓｓＭａｂカップリング、鎖交換操作ドメイン技術、またはそれらの組み合わせによる、請求項１５８に記載の抗体構築物。

【請求項160】

抗原結合ドメインが、癌細胞または病原体の抗原に結合する、請求項１５３～１５９のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項161】

病原体が、病原菌、微生物、またはウイルスである、請求項１６０に記載の抗体構築物。

【請求項162】

（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む抗体構築物であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、
該抗原が、ＣＤ２０、ＧＤ２、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１またはＣＤ２５であり、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記抗体構築物。

【請求項163】

（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む多重特異性免疫エフェクター細胞エンゲージャー分子であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲと特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原と結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記多重特異性免疫エフェクター細胞エンゲージャー分子。

【請求項164】

請求項１～１６１のいずれか一項に記載の抗体構築物、および
医薬的に許容しうるキャリヤー、アジュバントまたは希釈剤、
を含む医薬組成物。

【請求項165】

さらに、少なくとも１つの追加の治療薬を含む、請求項１６４に記載の医薬組成物。

【請求項166】

前記追加的治療薬が、造影剤、細胞毒性薬、血管形成阻害薬、キナーゼ阻害薬、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、抗サイトカイン抗体もしくはその機能性フラグメント、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦ拮抗薬、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬、ベータ作動薬、吸入ステロイド、エピネフリンもしくはその類似体、サイトカイン、またはサイトカイン拮抗薬である、請求項１６５に記載の医薬組成物。

【請求項167】

請求項１～１６１のいずれか一項に記載の抗体構築物をコードする、単離核酸。

【請求項168】

請求項１６７に記載の単離核酸を含むベクター。

【請求項169】

請求項１６７に記載の単離核酸を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞。

【請求項170】

請求項１～１６１のいずれか一項に記載の抗体構築物を発現するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞。

【請求項171】

抗体構築物を含む有効量の組成物を被験体に投与することを含む、それを必要とする被験体の処置方法であって、該抗体構築物が、
（a）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含み、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記処置方法。

【請求項172】

ＳＩＲＰ αとのＣＤ４７結合の阻害が、標的細胞の食作用およびクリアランスを増加
させる、請求項１７１に記載の方法。

【請求項173】

組成物が、経口、病巣内、静脈内治療によって、または皮下、筋肉内、動脈内、静脈内、腔内、頭蓋内、もしくは腹腔内注射によって投与される、請求項１７１～１７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項174】

組成物が、毎日、毎週、隔週、毎月、２カ月毎、３カ月に１回、６カ月に１回、または１２カ月に１回投与される、請求項１７１～１７３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項175】

被験体が癌を有する、請求項１７１～１７４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項176】

癌が、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、胆道癌、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、胆道癌、骨癌、脳癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、子宮頸癌、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、胃癌、消化管癌、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頚部癌、ホジキンリンパ腫、肝癌、肺癌、甲状腺髄様癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、肺路癌、腎癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、尿路上皮癌、および膀胱癌からなる群より選択される、請求項１７５に記載の方法。

【請求項177】

被験体がヒトである、請求項１７１～１７６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項178】

有効量の少なくとも１つの追加的治療薬を投与することを含む、請求項１７１～１７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項179】

追加的治療薬が、造影剤、化学療法薬、キナーゼ阻害薬、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、第２の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、薬物、毒素、酵素、細胞毒性薬
、抗血管形成薬、プロアポトーシス薬、抗生物質、ホルモン、免疫モジュレーター、サイトカイン、ケモカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦ拮抗薬、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、または抗精神病薬である、請求項１７８に記載の方法。

【請求項180】

標的細胞を有効量の抗体構築物と接触させることを含む、標的細胞に対する好中球媒介免疫応答を誘導する方法であって、
該抗体構築物が、
（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン
を含み；
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、好中球上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と好中球上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有し、それによって、好中球媒介免疫応答を誘導する、
前記方法。

【請求項181】

好中球媒介免疫応答が、標的細胞の食作用または標的細胞の溶解を含む、請求尾１８０に記載の方法。

【請求項182】

抗原提示細胞が癌細胞またはウイルス細胞である、請求項１８０～１８１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項183】

癌細胞がリンパ球である、請求項１８２に記載の方法。

【請求項184】

ＣＤ４７結合ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む第１の軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３が、表Ａから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１６２のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項185】

ＣＤ４７結合ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｈ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む第１の重鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３が、表Ａから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１６２または請求項１８４のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項186】

抗原結合ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む第２の軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３が、表Ｂから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１６２または請求項１８４～１８５のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【請求項187】

抗原結合ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｈ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む第２の重鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３が、表Ｂから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１６２または請求項１８４～１８６のいずれか一項に記載の抗体構築物。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

相互参照
[001]本出願は２０１８年１０月２９日に出願された欧州特許出願ＥＰ１８２０３１８
３．１および２０１８年１０月３０日に出願された米国仮出願Ｎｏ．６２／７５２６４１の利益を主張するものである；これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

[002]腫瘍抗原を標的としたＩｇＧアイソタイプのモノクローナル抗体は、さまざまな
悪性腫瘍の有効な治療法であることが証明されている。長年にわたって、異なる腫瘍抗原を標的とする、ますます多くのモノクローナル抗体で、癌治療における使用が承認されている。しかしながら、特に単独療法におけるそれらの臨床的有効性はまだ十分ではない。臨床的有効性が向上した新規代替的抗体療法の開発に、関心が寄せられている。

【発明の概要】

【0003】

[003]一観点において、本明細書中に、（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイ
ン、（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン、および（ｃ）抗原結合ドメインを含む抗体構築物であって、該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、前記抗体構築物を提供する。

【0004】

[004]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合ドメインは、第１の軽鎖可変ドメインお
よび第１の重鎖可変ドメインのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、第２の軽鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの態様において、前記構築物は、前記第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の軽鎖可変ドメインは、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）、および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み、前記ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１３のアミノ酸配列または配列番号１３中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１４のアミノ酸配列または配列番号１４中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１５のアミノ酸配列または配列番号１５中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む。いくつかの態様において、構築物は前記第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の軽鎖可変ドメインは、配列番号２６に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0005】

[005]いくつかの態様において、前記構築物は、前記第１の重鎖可変ドメインを含み、
前記第１の重鎖可変ドメインは、可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、前記ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む。

【0006】

[006]いくつかの態様において、前記構築物は前記第１の重鎖可変ドメインを含み、該
第１の重鎖可変ドメインは、配列番号２３に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸
配列を含む。

【0007】

[007]いくつかの態様において、前記構築物は、前記第２の軽鎖可変ドメインを含み、
前記第２の軽鎖可変ドメインは、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１０のアミノ酸配列または配列番号１０中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１１のアミノ酸配列または配列番号１１中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１２中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む。いくつかの態様において、前記構築物は前記第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の軽鎖可変ドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。

【0008】

[008]いくつかの態様において、前記構築物は、前記第２の重鎖可変ドメインを含み、
前記第２の重鎖可変ドメインは、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む。

【0009】

[009]いくつかの態様において、前記構築物は前記第２の重鎖可変ドメインを含み、前
記第２の重鎖可変ドメインは、配列番号２２に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0010】

[0010]いくつかの態様において、前記第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインのＣ末端が第１の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている、第１のポリペプチド；および、前記第１の軽鎖可変ドメインおよび第２の軽鎖可変ドメインを含み、第２の軽鎖可変ドメインのＣ末端が第１の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている、第２のポリペプチド；のうちの少なくとも１つを含む、抗体構築物。

【0011】

[0011]いくつかの態様において、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドをさらに含む。いくつかの態様において、リンカーペプチドは配列番号４４の配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリぺプチドは配列番号２９の配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドのＣ末端は、（ＩｇＡ）重鎖領域に連結されている。いくつかの態様において、連結は、ＩｇＡ ＣＨ１定常ドメインを介する。

【0012】

[0012]いくつかの態様において、第２のポリぺプチドは配列番号３１の配列を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１の重鎖可変ドメインのＣ末端が第２の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている第１のポリペプチド；または、第１の軽鎖可変ドメインのＣ末端が第２の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている第２のポリペプチド；のうちの少なくとも１つを含む、抗体構築物。

【0013】

[0013]いくつかの態様において、連結はリンカーペプチドによる。いくつかの態様において、リンカーペプチドは配列番号４４の配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリぺプチドは配列番号３０の配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドのＣ末端は、（ＩｇＡ）重鎖領域に連結されている。

【0014】

[0014]いくつかの態様において、連結はＩｇＡ ＣＨ１定常ドメインを介する。いくつかの態様において、第２のポリぺプチドは配列番号３２の配列を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む第１のポリペプチドを含み、該ｓｃＦＶは、前記第２の軽鎖可変ドメインに連結された前記第２の重鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、構築物は、前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドを含む。いくつかの態様において、リンカーペプチドは、配列番号４５の配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１の軽鎖可変ドメイン；または第１の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦｖを含む。いくつかの態様において、連結はリンカーペプチドによる。いくつかの態様において、リンカーペプチドは配列番号４４の配列を含む。いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、抗体構築物。

【0015】

[0015]いくつかの態様において、抗体構築物は、第１の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドは、配列番号３３に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む第１のポリペプチドを含み、該ｓｃＦＶは、第１の軽鎖可変ドメインに連結された第１の重鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドを含む。いくつかの態様において、リンカーペプチドは配列番号４５の配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第２の軽鎖可変ドメイン；または第２の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦｖを含む。

【0016】

[0016]いくつかの態様において、連結はリンカーペプチドによる。いくつかの態様において、リンカーペプチドは配列番号４４の配列を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、第２の軽鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドは、配列番号３６に対して９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、第２の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドは、配列番号３４に対して９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖ドメインはＩｇＡ重鎖定常ドメインを含む。

【0017】

[0017]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、ＩｇＡ１定常ドメインまたはそのバリアントである。いくつかの態様において、ＩｇＡ１定常ドメインは、ＩｇＡ１ ＣＨ２領域およびＩｇＡ１ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ１定常領域は、ＩｇＡ１ ＣＨ１領域またはそ
のバリアントをさらに含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、ＩｇＡ２定常ドメインまたはそのバリアントである。いくつかの態様において、ＩｇＡ２定常ドメインは、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ２定常領域は、ＩｇＡ２
ＣＨ１領域をさらに含む。

【0018】

[0018]いくつかの態様において、抗原は、ＣＤ２０、ＧＤ２、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ２５である。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つまたは２つの天然に存在するグリコシル化部位を欠く。いくつかの態様において、前記構築物は、少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位を欠き、該少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位は、少なくとも１つのＩｇＡ ＣＨ２領域またはＩｇＡ
ＣＨ３領域にある。いくつかの態様において、少なくとも２つの天然に存在するグリコ
シル化部位は、２つの天然に存在するＮ連結グリコシル化部位である。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を欠く。

【0019】

[0019]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基のアミノ酸置換、または両方の残基の置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換を含む。 いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸欠失を含む。

【0020】

[0020]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基の欠失を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基を欠く。

【0021】

[0021]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の欠失を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の欠失を含む。

【0022】

[0022]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の欠失を含む。

【0023】

[0023]いくつかの態様において、前記構築物は、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い循環半減期を示す。
[0024]いくつかの態様において、抗体構築物は、対応する野生型ＣＤ４７結合ドメインと比較して、ＣＤ４７に対してより低い親和性を有する弱毒化ＣＤ４７結合ドメインを含む。

【0024】

[0025]いくつかの態様において、抗体構築物は、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、減少した凝集を示す。いくつかの態様において、抗体構築物は、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、血清タンパク質との減少した凝集を示す。

【0025】

[0026]いくつかの態様において、前記ＩｇＡ重鎖定常領域は１以上のアルブミン結合ドメインを含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、１以上のアルブミン結合ドメインを含まない対応する抗体構築物よりも長い半減期を有する。

【0026】

[0027]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、配列番号３７～４１のいずれか１つから選択される配列に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0027】

[0028]いくつかの態様において、構築物はヒンジ領域をさらに含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域は、ＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0028】

[0029]いくつかの態様において、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。いくつかの態様において、ヒンジは、ＩｇＡ１ヒンジもしくはＩｇＡ２ヒンジ、またはそのバリアントもしくはフラグメントである。いくつかの態様において、抗体構築物は軽鎖定常領域をさらに含む。いくつかの態様において、軽鎖定常領域はカッパ定常領域である。いくつかの態様において、軽鎖定常領域はラムダ定常領域である。いくつかの態様において、軽鎖定常領域は、第１の軽鎖可変ドメインまたは第１の重鎖可変ドメインに連結される。

【0029】

[0030]一観点において、本明細書中に、（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖定常ドメイン、（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および（ｃ）抗原結合ドメイン、を含む抗体構築物であって、該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、前記抗体構築物を提供する。

【0030】

[0031]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合ドメインは、第１の軽鎖可変ドメインおよび第１の重鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、第２の軽鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインはカッパ型のものである。いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインはラムダ型のものである。

【0031】

[0032]いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインはラムダ型のものである。いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインはカッパ型のものである。いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインは、カッパ型のものであり、配列番号１６の可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）アミノ酸配列、配列番号１７の可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）アミノ酸配列、配列番号１８の可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインは、配列番号２７に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0032】

[0033]いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインは、配列番号１９の可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）アミノ酸配列、配列番号２０の可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）アミノ酸配列、配列番号２１の可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）アミノ酸配列を含むラムダ型のものである。いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインは、配列番号２８に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインは同じである。

【0033】

[0034]いくつかの態様において、第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインは、配列番号７の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）アミノ酸配列、配列番号８の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）アミノ酸配列、配列番号９の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）アミノ酸配列を含む。

【0034】

[0035]いくつかの態様において、第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインは、配列番号２４に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインはカッパ定常領域をさらに含む。いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインはラムダ定常領域をさらに含む。いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインはラムダ定常領域をさらに含む。いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインはカッパ定常領域をさらに含む。いくつかの態様において、カッパ定常領域は、配列番号４２に対して９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ラムダ定常領域は、配列番号４３に対して９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、ＩｇＡ ＣＨ２領域およびＩｇＡ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む。

【0035】

[0036]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、ＩｇＡ ＣＨ１領域またはそのバリアントをさらに含む。いくつかの態様において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＩｇＡ ＣＨ１ドメインによってＩｇＡ定常ドメインに連結される。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、ＩｇＡ ＣＨ１ドメインによってＩｇＡ定常ドメインに連結される。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインはＩｇＡ１定常領域またはそのバリアントである。いくつかの態様において、ＩｇＡ１定常領域はＩｇＡ１ ＣＨ２領域およびＩｇＡ１ ＣＨ３領域を含む。

【0036】

[0037]いくつかの態様において、ＩｇＡ１定常領域はＩｇＡ１ ＣＨ１領域をさらに含
む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインはＩｇＡ２定常領域またはそのバリアントである。いくつかの態様において、ＩｇＡ２定常領域は、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域
およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ２定常領域はＩｇ
Ａ２ ＣＨ１領域をさらに含む。いくつかの態様において、抗原は、ＣＤ２０、ＧＤ２、
メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ２５である。

【0037】

[0038]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、１、２または３つの天然に存在するグリコシル化部位を欠く。いくつかの態様において、前記部位は、ＩｇＡ ＣＨ２領域またはＩｇＡ ＣＨ３領域の少なくとも１つにある。いくつかの態様において、前記構築物は、２つの天然に存在するＮ連結グリコシル化部位を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を欠く。

【0038】

[0039]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基のアミノ酸置換、または少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基の置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換を含む。

【0039】

[0040]
[0041]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸欠失を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基の欠失を含む。

【0040】

[0042]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の欠失を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基を欠く。

【0041】

[0043]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常領域は、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の欠失を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基を欠く。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常領域は、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む。

【0042】

[0044]いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の欠失を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い循環半減期を示す。いくつかの態様において、抗体構築物は、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い半減期を示す。いくつかの態様において、抗体構築物は、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、減少した凝集を示す。いくつかの態様において、抗体構築物は、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、血清タンパク質との減少した凝集を示す。

【0043】

[0045]いくつかの態様において、前記ＩｇＡ重鎖定常領域は１以上のアルブミン結合ドメインを含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、１以上のアルブミン結合ドメインを含まない対応する抗体構築物よりも長い半減期を有する。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常領域はヒンジ領域をさらに含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域は、ＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0044】

[0046]いくつかの態様において、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。いくつかの態様において、ヒンジは、ＩｇＡ１ヒンジもしくはＩｇＡ２ヒンジ、またはそのバリアントもしくはフラグメントである。いくつかの態様において、抗体構築物は、免疫接着分子(immunoadhesion molecule)、
造影剤、治療薬、または細胞毒性薬をさらに含む。いくつかの態様において、造影剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、またはビオチンである。いくつかの態様において、前記治療薬または細胞毒性薬は、代謝拮抗薬、アルキル化薬、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生薬、抗有糸分裂薬、アントラサイクリン、毒素、またはアポトーシス薬である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は好中球である。

【0045】

[0047]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＣＤ４７を発現する標的細胞に抗原結合ドメインも結合している場合にのみ、免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）機能を阻害する。いくつかの態様において、抗体構築物は二重特異性である。いくつかの態様において、ＣＤ４７結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ(diabody)、線状抗体、単
一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはラクダ科ＶＨＨドメインである。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはラクダ科ＶＨＨドメインである。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖ドメインは、２つのＩｇＡ重鎖定常ドメインのヘテロ二量体である。いくつかの態様において、ヘテロ二量体化は、ノブ－イントゥ－ホールカップリング(knobs-into-holes coupling)、塩橋／静電相補
性カップリング、ＣｒｏｓｓＭａｂカップリング、鎖交換操作ドメイン(strand-exchange
engineered domain)技術、またはそれらの組み合わせによる。いくつかの態様において
、抗原結合ドメインは、癌細胞または病原体の抗原に結合する。いくつかの態様において、病原体は、病原菌、微生物、またはウイルスである。

【0046】

[0048]一観点において、本明細書中に、（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン、（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および（ｃ）抗原結合ドメイン、を含む抗体構築物であって、該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、該抗原が、ＣＤ２０、ＧＤ２、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１またはＣＤ２５であり、そして該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、前記抗体構築物を提供する。

【0047】

[0049]一観点において、本明細書に、（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および（ｃ）抗原結合ドメイン、を含む多重特異性免疫エフェクター細胞エンゲージャー(engager)分子であって、該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免
疫エフェクター細胞上のＦｃαＲと特異的に結合し、該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、前記多重特異性免疫エフェクター細胞エンゲージャー分子を提供する。

【0048】

[0050]一観点において、本明細書中に、上記抗体構築物のいずれか１つ、および医薬的に許容しうるキャリヤー、アジュバントまたは希釈剤を含む、医薬組成物を提供する。いくつかの態様において、医薬組成物は、少なくとも１つの追加の治療薬をさらに含む。いくつかの態様において、前記追加的治療薬は、造影剤、細胞毒性薬、血管形成阻害薬、キナーゼ阻害薬、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、抗サイトカイン抗体もしくはその機能性フラグメント、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦ拮抗薬、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド(corticosteriod)、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬、ベータ作動薬、吸入ステロイド、エピネフリンもしくはその類似体、サイトカイン、またはサイトカイン拮抗薬である。

【0049】

[0051]一観点において、本明細書中に、上記観点のいずれか１つの抗体構築物をコードする単離核酸を提供する。
[0052]一観点において、本明細書中に、上記単離核酸を含むベクターを提供する。

【0050】

[0053]一観点において、本明細書中に、先に開示した単離核酸を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞を提供する。
[0054]一観点において、本明細書中に、上記観点のいずれか１つの抗体構築物を発現するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞を提供する。

【0051】

[0055]一観点において、本明細書中に、抗体構築物を含む有効量の組成物を被験体に投与することを含む、それを必要とする被験体の処置方法であって、該抗体構築物が、（a
）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン、（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および（ｃ）抗原結合ドメインを含み、該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、前記処置方法を提供する。

【0052】

[0056]いくつかの態様において、ＳＩＲＰ αとのＣＤ４７結合の阻害は、標的細胞の
食作用およびクリアランスを増加させる。いくつかの態様において、組成物は、経口、病巣内、静脈内治療によって、または皮下、筋肉内、動脈内、静脈内、腔内、頭蓋内、もしくは腹腔内注射によって投与される。いくつかの態様において、組成物は、毎日、毎週、隔週、毎月、２カ月毎、３カ月に１回、６カ月に１回、または１２カ月に１回投与される。いくつかの態様において、被験体は癌を有する。いくつかの態様において、癌は、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、胆道癌、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、胆道癌、骨癌、脳癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、子宮頸癌、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、胃癌、消化管癌、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頚部癌、ホジキンリンパ腫、肝癌、肺癌、甲状腺髄様癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、肺路癌(pulmonary tract cancer)、腎癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、尿路上皮癌、および膀胱癌からなる群より選択される。

【0053】

[0057]いくつかの態様において、被験体はヒトである。いくつかの態様において、本方法は、有効量の少なくとも１つの追加的治療薬を投与することを含む。いくつかの態様において、追加的治療薬は、造影剤、化学療法薬、キナーゼ阻害薬、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、第２の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、薬物、毒素、酵素、細胞毒性薬、抗血管形成薬、プロアポトーシス薬、抗生物質、ホルモン、免疫モジュレーター、サイトカイン、ケモカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦ拮抗薬、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、または抗精神病薬である。

【0054】

[0058]一観点において、本明細書中に、標的細胞を有効量の抗体構築物と接触させることを含む、標的細胞に対する好中球媒介免疫応答を誘導する方法であって、該抗体構築物が、（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および（ｃ）抗原結合ドメインを含み；該ＩｇＡ重鎖ドメインが、好中球上のＦｃαＲに特異的に結合し、該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と好中球上
のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有し、それによって、好中球媒介免疫応答を誘導する、前記方法を提供する。

【0055】

[0059]いくつかの態様において、好中球媒介免疫応答は、標的細胞の食作用または標的細胞の溶解を含む。いくつかの態様において、抗原提示細胞は、癌細胞またはウイルス細胞である。いくつかの態様において、癌細胞はリンパ球である。

【0056】

[0060]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合ドメインは、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む第１の軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３は、表Ａから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0057】

[0061]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合ドメインは、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｈ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む第１の重鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３は、表Ａから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0058】

[0062]いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｌ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む第２の軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３は、表Ｂから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0059】

[0063]いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ Ｈ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む第２の重鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３は、表Ｂから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0060】

[0064]本開示の特徴を、添付の特許請求の範囲に詳細に記載する。本開示の特徴および利点のより良い理解は、本開示の原理が利用される例示的な態様を記載する以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することによって得られるであろう：
[0065]図１Ａ～１Ｅは、本明細書中に記載される例示的な抗体構築物を示す。例示的な構築物の調製法は、実施例において説明する。

【図面の簡単な説明】

【0061】

【図1A】図１Ａは、例示的なＩｇＡ定常ドメイン足場に基づく二価二量体構築物を示し（本明細書に記載の例示的な構築物において、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、または減少したグリコシル化および／もしくはより良好な発現プロフィールを有する改変ＩｇＡ２（ＩｇＡ２．０またはＩｇＡ３．０ともよばれる）のＩｇＡ重鎖足場を例示する）、特異性は、ＩｇＡ足場に接続されたＶＨおよびカッパＶＬ領域によって決定される。前記構築物は、ＣＤ４７および抗原提示細胞上の例示的な抗原（例示的な場合、ＣＤ２０）に結合することができる。

【図1B】図１Ｂは、共通の重鎖と、カッパおよびラムダ軽鎖の両方とからなる二価ヘテロ二量体を示す。特異性は、カッパ領域およびラムダ領域の両方のＶＬ領域によってのみ決定され、このような領域の一方はＣＤ４７に特異的に結合し、他方は抗原提示細胞上の例示的な抗原（例示的な場合、ＣＤ２０）に特異的に結合する。

【図1C】図１Ｃは、四価ホモ二量体であるＤＶＤ－ＩｇＡ２に基づく構築物を示す。特異性は２つのＶＨ／ＶＬ対の組み合わせによって決定される。追加的なＶＨが元のＶＨに連結され、追加的なＶＬが元のＶＬに連結されており、これらはペプチドリンカーによって既存のＶＨおよびＶＬに連結されている。

【図1D】図１Ｄは、四価ホモ二量体であるＤＶＤ－ＩｇＡ３．０－ｓｃＦｖ＿ＬＣを示し、ここで、ＩｇＡ３．０は、グリコシル化および製造可能性のために最適化されたＩｇＡである。特異性は、元のＶＬに連結されたｓｃＦｖの組合せによって決定される。

【図1E】図１Ｅは、四価ホモ二量体であるＤＶＤ－ＩｇＡ３．０－ｓｃＦｖ＿ＨＣを示す。特異性は、元のＶＨに連結されたｓｃＦｖの組み合わせによって決定される。本明細書中に記載される態様において、構築物は、ＣＤ４７および抗原提示細胞上の抗原（例示的な場合、ＣＤ２０、ＨＥＲ２、ＧＤ２、メソテリン、ＥＧＦＲなど）に特異的に結合する。本明細書中で図１Ａ～１Ｅのいずれかに記載される抗体構築物設計において、抗原結合領域およびＣＤ４７結合領域は、商業的に入手可能な抗体または他の公知の抗体から誘導することができる。特定の態様において、抗体構築物は、構築物中の抗原結合ドメインまたは領域よりもＣＤ４７に対して低い結合親和性を有するＣＤ４７結合ドメインまたは領域を有するように設計される。

【図2A】[0066]図２Ａ～２Ｋは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞における本明細書に記載されるＩｇＡ抗体構築物の発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。Ｘ軸は、容積２ｍＬ中の総濃度１ｕｇ／ｍＬにおける、ｐＡｄｖａｎｔａｇｅ－ｐＡｄｖ（Ｐｒｏｍｅｇａ）と組み合わせた、重鎖をコードするＤＮＡ（ＨＣ）と軽鎖をコードするＤＮＡ（ＫＬＣ）の比を示す。ｐＡｄｖ ＤＮＡの量は常にＨＣ ＤＮＡと等しい。Ｙ軸は、個々の抗体構築物について測定されたタンパク質濃度を示す。タンパク質濃度は、表１および表２の二重特異性抗体のそれぞれについて決定した。ＤＶＤ－ＩｇＡ二重特異性抗体＃１（図２Ａ）およびＤＶＤ－ＩｇＡ二重特異性抗体＃２（図２Ｂ）、ＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖ＿ＬＣ二重特異性抗体＃５（図２Ｃ）、ＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖ＿ＬＣ二重特異性抗体＃６（図２Ｄ）、ＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖ＿ＨＣ二重特異性抗体＃３（図２Ｅ）、ＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖ＿ＨＣ二重特異性抗体＃４（図２Ｆ）については、カッパ－ＩｇＡ ＥＬＩＳＡによってタンパク質濃度を決定する。カッパ－カッパＩｇＡ（図２Ｇ－２Ｈ）およびラムダ－ラムダＩｇＡ（図２Ｉ－２Ｊ）については、カッパ／ラムダ－ＩｇＡ ＥＬＩＳＡによりタンパク質濃度を測定する。標準の欠如により濃度を測定することができなかったため、カッパ－ラムダＩｇＡについてのＯＤ４１５値（図２Ｋ）。方法を、実施例の３節に記載する。図２Ａは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるＤＶＤ－ＩｇＡ二重特異性抗体＃１の発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2B】図２Ｂは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるＤＶＤ－ＩｇＡ二重特異性抗体＃２の発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2C】図２Ｃは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖ＿ＬＣ二重特異性抗体＃５の発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2D】図２Ｄは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖ＿ＬＣ二重特異性抗体＃６の発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2E】図２Ｅは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖ＿ＨＣ二重特異性抗体＃３の発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2F】図２Ｆは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖ＿ＨＣ二重特異性抗体＃４の発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2G】図２Ｇは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるカッパ－カッパＩｇＡの発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2H】図２Ｈは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるカッパ－カッパＩｇＡの発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2I】図２Ｉは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるラムダ－ラムダＩｇＡの発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2J】図２Ｊは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるラムダ－ラムダＩｇＡの発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比を示す。

【図2K】図２Ｋは、ＨＥＫ２９３－Ｆｒｅｅｓｔｌｙｅ（ＨＥＫ２９３Ｆ）細胞におけるカッパ－ラムダＩｇＡの発現に必要な最適な重鎖：軽鎖比をＯＤ４１５値について示す。

【図3A】[0067]図３Ａ～３Ｂは、本明細書に記載の例示的な組換えＩｇＡ抗体構築物の精製を示す。図３Ａは、例示的な二重特異性ＤＶＤ－ＩｇＡ分子のアフィニティー精製溶出プロフィールを例示する。

【図3B】図３Ｂは、予想される分子量での非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上の二重特異性抗体＃１および＃５の純度を示す。ゲルは、低レベルの非会合カッパ軽鎖（＃１について３５ｋＤａ；＃５について５０ｋＤａ）を示す。方法を、実施例の３節に記載する。

【図4】[0068]図４は、本明細書中に記載される（例えば、表１に列挙される）６つの代表的な抗体構築物（ＤＶＤ－ＩｇＡ）の測定された濃度を示す。６つの二重特異性ＩｇＡ分子はすべてＨＥＫ２９３Ｆ細胞中で産生され、濃度は上清においてＥＬＩＳＡによって測定された。

【図5A】[0069]図５Ａ～５Ｄは、ＩｇＡ抗体構築物を発現する細胞のフローサイトメトリー分析および同定におけるゲーティング戦略を示す。図５Ａは、細胞サイズおよび形状に基づく生細胞集団の選択を示す。

【図5B】図５Ｂは、生細胞集団からの単一細胞のさらなる選択を示す。

【図5C】図５Ｃは、抗ＩｇＡ ＰＥ標識抗体で染色した後の対照ＩｇＡ陰性細胞のゲーティング戦略を示す。

【図5D】図５Ｄは、抗ＩｇＡ ＰＥ標識抗体で染色することによるＩｇＡ陽性細胞の分析および選択を示す。

【図6A】[0070]図６Ａ～６Ｂは、フローサイトメトリーによる本明細書に記載の抗体構築物（例えば、表１および表２）の結合分析を示す。図６Ａは、使用したＳＫＢＲ３細胞株の特徴付けを示す。ＳＫＢＲ３ ＷＴ細胞およびＳＫＢＲ３－ＣＤ２０細胞はいずれも、ＣＤ２０（Ｏｂｉ＝オビヌツズマブ(Obinituzumab)の相補性領域）またはＣＤ４７（クローン２．３Ｄ１１）に対するＩｇＡ抗体で染色されている。無染色細胞および二次抗体のみは対照である。

【図6B】図６Ｂは、ＳＫＢＲ３ ＷＴおよびＳＫＢＲ３－ＣＤ２０細胞に対する二重特異性抗体の結合を示す。図６Ｂの左パネルのＸ軸は、抗体、例えば、抗ＣＤ４７抗体２．３Ｄ１１単独、抗体＃１、抗体＃２、抗体＃３、抗体＃４、抗体＃５、および抗体＃６を識別する。図６Ｂの右パネルのＸ軸は、抗体、例えば、抗ＣＤ２０ Ｏｂｉ抗体単独、抗体＃１、抗体＃２、抗体＃３、抗体＃４、抗体＃５、および抗体＃６を識別する。個々の二重特異性抗体＃１～６を含有する上清を、ＣＤ４７遮断抗体の非存在下（黒色）または存在下（灰色）で、ＳＫＢＲ３ ＷＴ（左パネル）およびＳＫＢＲ３－ＣＤ２０（右パネル）細胞の両方で試験した。二重特異性抗体＃２、＃３、および＃５は、ＣＤ４７遮断の効果を示し、追加的なＣＤ４７結合によってＣＤ２０結合が増強されることを示している。

【図7A】[0071]図７Ａ～７Ｂは、二重特異性抗体の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）分析を示す。ＳＫＢＲ３－ＣＤ２０細胞を、ＰＭＮ ＡＤＣＣアッセイにおいて標的細胞として使用した。抗体ＩｇＡ３．０－ＯｂｉおよびＩｇＡ３．０－２．３Ｄ１１を単独または組み合わせのいずれかで使用し、二重特異性ＩｇＡ抗体＃２を並行して試験した。組み合わせ（Ｏｂｉ＋２．３Ｄ１１）および二重特異性抗体は、ｍＩｇＧ１ ＣＤ４７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗体を用いて事前遮断(pre-block)した。ＣＤ４７の事前遮断により、組み合わせおよび二重特異性について観察される死滅が減少する。ＣＤ４７の二重特異性遮断による機能的効果は、ＣＤ２０依存性ＡＤＣＣを増強する。図７Ａは、標的細胞としてＳＫＢＲ３（ＣＤ２０－／－）ＷＴ（上部パネル）またはＳＫＢＲ３ ＣＤ２０（＋）（下部パネル）のいずれかを用いたＰＭＮでのＯｂｉ－ＩｇＡおよび２．３Ｄ１１－ＩｇＡ依存性ＡＤＣＣ活性を示す。ＳＫＢＲ３ ＷＴおよびＣＤ２０細胞は、ＩｇＧ１でＡＤＣＣを示さない。ＳＫＢＲ３ ＷＴはＯｂｉ－ＩｇＡのみでは特異的溶解を示さないが、２．３Ｄ１１はＡＤＣＣを誘発する。ＳＫＢＲ３－ＣＤ２０（＋）細胞において、Ｏｂｉ－ＩｇＡは２．３Ｄ１１－ＩｇＡとの組み合わせでさらなるＡＤＣＣを誘発し、これはｍＩｇＧ１－抗ＣＤ４７ ＰｅｒＣＰ‐Ｃｙ５．５を用いたＣＤ４７の事前遮断により部分的に元に戻った。ｘ軸に、抗体濃度をｕｇ／ｍＬで示す。

【図7B】図７Ｂは、二重特異性抗体＃２、ＤＶＤ－ＩｇＡ Ｏｂｉ－２．３Ｄ１１のＡＤＣＣ活性を試験するためのＰＭＮ ＡＤＣＣアッセイにおけるＳＫＢＲ３－ＣＤ２０（＋）細胞を示す。対照として、ＩｇＡ３．０－ＯｂｉおよびＩｇＡ３．０－２．３Ｄ１１を単独または組み合わせのいずれかで使用した。組み合わせ（Ｏｂｉ＋２．３Ｄ１１）は最高のＡＤＣＣを示し、これは、ＳＫＢＲ３－ＣＤ２０（＋）細胞をｍＩｇＧ１ ＣＤ４７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗体とプレインキュベートすることによって効率的に遮断することができた。二重特異性抗体＃２は、組み合わせと比較して同様の死滅効率を示した。この効果は、ｍＩｇＧ１抗ＣＤ４７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５による事前遮断によって部分的にのみ低下することができた。このように、同じ分子、二重特異性ＩｇＡにおけるＣＤ４７の遮断による機能的効果は、ＣＤ２０依存性ＡＤＣＣを大きく増強する。

【図8A】[0072]図８Ａ～８Ｄは、抗体構築物によるＣＤ４７結合の分析を示す。[0073]図８Ａは、赤血球のゲーティング戦略を示す。ＣＤ２３５ａ＋細胞を選択し、単なる陰性ゲートとして二次ＩｇＡ抗体に関しゲートした。ＣＤ４７は赤血球上で高度に陽性である。

【図8B】図８Ｂは、血小板のゲーティング戦略を示す。ＣＤ６１＋細胞を選択し、単なる陰性ゲートとして二次ＩｇＡ抗体に関しゲートした。ＣＤ４７は血小板上で高度に陽性である。

【図8C】図８Ｃは、本明細書中に記載される抗体構築物の赤血球への結合のフローサイトメトリー分析を示す。

【図8D】図８Ｄは、本明細書中に記載される抗体構築物の血小板への結合のフローサイトメトリー分析を示す。図８Ｃは、赤血球へのＣＤ４７結合の分析が、二重特異性抗体＃４（Ｏｂｉ－ｓｃＦｖ：２．３Ｄ１１＿ＨＣ）による赤血球に対する低レベルのＣＤ４７結合を示すことを、示している。他のすべての二重特異性では、赤血球への結合は観察されなかった。図８Ｄは、二重特異性抗体の血小板結合が観察されないことを示す。

【図9】[0074]図９は、本明細書中に記載される抗体構築物の作用機構を記載する例示を示す。本開示の抗体構築物は、抗原結合ドメイン、ＣＤ４７結合ドメインおよびＩｇＡ重鎖定常ドメインを含む。抗体構築物は、抗原結合ドメインを介して標的細胞の抗原と結合し、ＣＤ４７結合ドメインにより同じ標的細胞上のＣＤ４７と結合し、そしてＩｇＡ重鎖定常ドメインにより免疫エフェクター細胞（例えば、好中球）上のＦｃ受容体と結合する。ＣＤ４７に結合することで、免疫エフェクター細胞上のＳＩＲＰαと標的細胞上のＣＤ４７との相互作用が阻害され、それによって「私を食べないでシグナル」が阻害され、標的細胞に対する免疫エフェクター細胞応答が誘導される。

【発明を実施するための形態】

【0062】

[0075]以下の説明および実施例は、本開示の態様を詳細に例示するものである。本開示は、本明細書に記載された特定の態様に限定されず、したがって変更可能であることを理解されたい。当業者は、本開示の多数の変形および修正が存在し、それらが本開示の範囲内に包含されることを、認識するであろう。

【0063】

[0076]すべての用語は、当業者によって理解されるように理解されることが意図される。他に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術的および科学的用語は、本開示に関連する、当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有している。

【0064】

[0077]本明細書で使用される項目見出しは、構成的な目的のためでしかなく、説明され
る主題を限定すると解釈すべきではない。
[0078]本開示のさまざまな特徴は、単一の態様の文脈で説明することができるが、特徴を別個に、または任意の適切な組み合わせで提供することもできる。反対に、本開示は、明確にするために、本明細書において別個の態様の文脈で説明することができるが、本開示は単一の態様で実施することもできる。

【0065】

定義
[0079]以下の定義は当業者を補完するものであり、本出願を被験体としており、任意の関連事例または無関係の事例、例えば、任意の共同所有された特許または出願に帰属されるべきではない。本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法および材料を本開示の試験の実施において使用することができるが、好ましい材料および方法は本明細書に記載するものである。したがって、本明細書で使用される専門用語は特定の態様を説明することのみを目的としており、限定することを意図していない。

【0066】

[0080]本出願において、単数形の使用は、特記しない限り、複数形を包含する。本明細書で使用されるように、単数形「１つの(a)」、「１つの(an)」、および「その(the)」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示被験体を包含することに留意されたい。本出願において、「または」の使用は、特記しない限り、「および／または」を意味する。さらに、「包含している」という用語ならびに「包含する」、「包含する（単数形）」、および「包含される」など他の形態の使用は、限定的ではない。

【0067】

[0081]本明細書における「いくつかの態様」、「態様」、「一態様」、または「他の態様」への言及は、態様に関連して記載される特定の特徴、構造、または特性が、本開示の少なくともいくつかの態様に包含されるが、必ずしもすべての態様に包含されるわけではないことを意味する。

【0068】

[0082]本明細書および請求項（１以上）で使用される場合、用語「含んでいる」（ならびに、「含む」および「含む（単数形）」など、含んでいるの任意の形態）、「有している」（ならびに、「有する」および「有する（単数形）」など、有しているの任意の形態）、「包含している」（ならびに、「包含する（単数形）」および「包含する」など、包含しているの任意の形態）、または「含有している」（ならびに、「含有する（単数形）」および「含有する」など、含有しているの任意の形態）は、包含的または無制限であり、列挙されていない追加的な要素または方法段階を除外しない。本明細書で論じられる任意の態様は本開示の任意の方法または組成物に関して実施することができ、逆もまた同様であることが企図される。さらに、本開示の組成物は、本開示の方法を達成するために使用することができる。

【0069】

[0083]用語「約」または「およそ」は、当業者によって決定される特定の値についての許容可能な誤差範囲内を意味し、これは、値がどのように測定または決定されるか、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存する。例えば、「約」は、当技術分野での実施により、１以上の標準偏差内を意味することができる。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％、または最大１％の範囲を意味することができる。他の例において、「約１０」という量は、１０および９～１１の任意の量を包含する。さらに他の例において、参照数値に関する用語「約」は、その値からプラスまたはマイナス１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％の範囲を包含することもできる。あるいは、とりわけ生物学的システムまたはプロセスに関して、用語「約」は、値の大きさの程度以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味することができる。特定の値が出願および特許請求の範囲に記載されている場合、特記しない限り、特定の値の許容誤差範囲内を意味する「約」という用語を想定すべきである。

【0070】

[0084]本明細書中で使用される場合、「抗原提示細胞上の抗原」は、抗原提示に関連し、そして宿主において免疫応答を誘発する可能性がある抗原性物質をさす。例えば、抗原は、病原性細胞、例えば癌細胞において産生または過剰発現される任意の抗原性物質である。抗原は、タンパク質、ペプチドまたは多糖類である。本明細書に記載される抗原提示細胞は、例えば組織適合性分子上のペプチドの形態で、抗原を提示する細胞である。癌細胞、例えば、腫瘍抗原を提示する腫瘍細胞は、代表的な抗原提示細胞である。腫瘍抗原は、本明細書中に記載される構築物における代表的な抗原であり、ここで、前記腫瘍抗原は、腫瘍細胞において産生される。それは、例えば、宿主において免疫応答を誘発する可能性がある。あるいは、本開示の目的のために、腫瘍抗原は、健常細胞および腫瘍細胞の両方によって発現されるタンパク質であることができるが、それらは特定の腫瘍タイプを識別するか、または特定の腫瘍タイプにおいて過剰発現されるため、適切な治療標的である。態様において、腫瘍抗原は、ＣＤ２０、ＧＤ２、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３またはＶＥＧＦ－Ｒ２である。一態様において、腫瘍抗原はＥＧＦＲｖＩＩＩであり、これは、骨髄性悪性腫瘍、例えば神経膠芽腫または多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ）を処置する治療薬の標的である。他の態様において、腫瘍抗原はＣＤ２０である。さらに他の態様において、腫瘍抗原はＧＤ２である。さらに他の態様において、腫瘍抗原はメソテリンである。

【0071】

[0085]本明細書中で使用される場合、「抗体」という用語は、特定の抗原に特異的に結合するか、または特定の抗原に対して免疫学的に反応性を示す免疫グロブリン分子をさす。抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、遺伝子操作抗体、およびそれらの抗原結合フラグメントを包含することができる。抗体は、例えば、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ(triabody)、またはテトラボディ(tetrabody)であることができる。抗原結
合フラグメントとしては、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒｌｇＧ、ｓｃＦｖ、ｈｃＡｂ（重鎖抗体）、単一ドメイン抗体、Ｖ_ＨＨ、Ｖ_ＮＡＲ、ｓｄＡｂ、またはナノボディを挙げることができる。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、Ｂ細胞の単一クローンによって産生され、同じエピトープに結合する抗体をさす。対照的に、「ポリクローナル抗体」は、異なるＢ細胞によって産生され、同じ抗原の異なるエピトープに結合する抗体の集団をさす。全抗体は、典型的には４つのポリペプチド、すなわち、：重（Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピーおよび軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピーからなる。各重鎖は１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域および３つのＣ末端定常（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）領域を含有し、各軽鎖は１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域および１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域を含有する。軽鎖および重鎖の各対の可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。ＶＨおよびＶＬ領域は同様の一般構造を有し、各領域は４つのフレームワーク領域を含み、その配列は比較的保存されている。フレームワーク領域は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続される。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３として知られる３つのＣＤＲは、抗原結合に関与する抗体の「超可変領域」を形成する。本明細書中に記載される構築物において、抗体は、ＣＤ４７結合ドメインおよび／または抗原結合ドメインの付着のための足場を形成するＩｇＡ重鎖ドメインまたは領域を含む。ＩｇＡ定常領域ドメインはＩｇＡ１またはＩｇＡ２定常領域ドメインに基づいており、これらは、場合によっては、改善されたグリコシル化プロフィール、改善された製造性、ヘテロ二量体形成の容易さ、または適合させた／選択的なＦｃ受容体結合のために、さらに改変されている。

【0072】

[0086]本明細書中で使用される場合、「組換え抗体」は、２つの異なる種または２つの
異なる供給源に由来するアミノ酸配列を含み、合成分子を包含する抗体である。非限定的な例として、非ヒトＣＤＲおよびヒト可変領域フレームワークまたは定常もしくはＦｃ領域を含む抗体、２つの異なるモノクローナル抗体由来の結合ドメインを有する抗体、あるいは、抗体の一部の生物学的活性または結合を増加または減少させるための１以上のアミノ酸残基の変異を含む抗体。特定の態様において、組換え抗体は、組換えＤＮＡ分子から産生されるか、または合成される。特定の態様において、本明細書中に記載される抗体は、１以上のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド（１以上）である。

【0073】

[0087]本明細書中で使用される場合、「認識する」または「結合する」または「に選択的」は、抗原結合ドメインと抗原との間の会合または結合をさす。本明細書で使用される場合、「抗原」は、宿主において免疫応答を誘発することができる抗原性物質をさす。抗原性物質は、宿主において免疫応答を誘発することができる共刺激分子のような分子であることができる。

【0074】

[0088]本明細書中で使用される場合、「抗体構築物」は、抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含有する構築物をさす。
[0089]本明細書中で使用される場合、「結合ドメイン」は、抗体または非抗体ドメインをさす。

【0075】

[0090]本明細書中で使用される場合、「抗原結合ドメイン」は、抗体由来の、または抗原に結合することができる非抗体由来の結合ドメインをさす。抗原結合ドメインは、腫瘍抗原結合ドメイン、または抗原提示細胞上の抗原（例えば、分子）に結合することができる結合ドメインであることができる。所与のコンジュゲートまたは抗体構築物中に１より多くの抗原結合ドメインが存在する場合、抗原結合ドメインに番号を付けることができる（例えば、第１の抗原結合ドメイン、第２の抗原結合ドメイン、第３の抗原結合ドメインなど）。同じコンジュゲートまたは構築物中の異なる抗原結合ドメインは、同じ抗原または異なる抗原（例えば、腫瘍抗原に結合することができる第１の抗原結合ドメイン、抗原提示細胞上の分子（ＡＰＣ抗原）に結合することができる第２の抗原結合ドメイン、およびＡＰＣ抗原に結合することができる第３の抗原結合ドメイン）を標的化することができる。

【0076】

[0091]本明細書中で使用される場合、「抗体抗原結合ドメイン」は、抗原に結合することができる抗体由来の結合ドメインをさす。
[0092]本明細書中で使用される場合、「Ｆｃドメイン」は、抗体由来のＦｃドメイン、またはＦｃ受容体に結合することができる非抗体由来のＦｃドメインをさす。本明細書中で使用される場合、「Ｆｃドメイン」および「Ｆｃを含むドメイン」は、互換的に使用することができる。

【0077】

[0093]本明細書中で使用される場合、「標的結合ドメイン」は、抗体由来の、または抗原に結合することができる非抗体由来の抗原結合ドメインを含有する構築物をさす。
[0094]本明細書中で使用される場合、天然の１エナンチオマーアミノ酸の略語は慣用的であり、以下の通りであることができる：アラニン（Ａ、Ａｌａ）；アルギニン（Ｒ、Ａｒｇ）；アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）；アスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）；システイン（Ｃ、Ｃｙｓ）；グルタミン酸（Ｅ、Ｇｌｕ）；グルタミン（Ｑ、Ｇｉｎ）；グリシン（Ｇ、Ｇｌｙ）；ヒスチジン（Ｈ、Ｈｉｓ）；イソロイシン（Ｉ、Ｈｅ）；ロイシン（Ｌ、Ｌｅｕ）；リジン（Ｋ、Ｌｙｓ）；メチオニン（Ｍ、Ｍｅｔ）；フェニルアラニン（Ｆ、Ｐｈｅ）；プロリン（Ｐ、Ｐｒｏ）；セリン（Ｓ、Ｓｅｒ）；トレオニン（Ｔ、Ｔｈｒ）；トリプトファン（Ｗ、Ｔｒｐ）；チロシン（Ｙ、Ｔｙｒ）；バリン（Ｖ、Ｖａｌ）。特記しない限り、Ｘは任意のアミノ酸を示すことができる。いくつかの観点において、Ｘは、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、またはアルギ
ニン（Ｒ）であることができる。

【0078】

[0095]「医薬的に許容しうる」という語句は、本明細書において、妥当な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、合理的な利益／リスク比に相応して、被験体、例えば、ヒトおよび動物の組織との接触で使用するのに適した、化合物、材料、組成物および／または剤形をさすために採用される。

【0079】

[0096]本明細書中で使用される場合、「医薬的に許容しうる賦形剤」または「医薬的に許容しうるキャリヤー」という語句は、医薬的に許容しうる材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料を意味する。各キャリヤーは、製剤の他の成分と適合し、患者に有害でないという意味で、「許容可能」でなければならない。医薬的に許容しうるキャリヤーとして働くことができる材料のいくつかの例としては、以下が挙げられる：（１）糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンのような；（３）セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）粉末トラガント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えば、ココアバターおよび座薬ワックス；（９）油、例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；および（２１）医薬製剤に採用される他の非毒性適合性物質。

【0080】

[0097]抗原は免疫応答を誘発することができる。抗原はタンパク質、多糖、脂質、または糖脂質であることができ、これらは、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＢ細胞によって認識されることができる。これらの抗原の１以上に免疫細胞が暴露されると、迅速な細胞分裂および分化応答が誘発されて、暴露されたＴ細胞およびＢ細胞のクローン形成がもたらされ得る。Ｂ細胞は形質細胞に分化することができ、形質細胞は、抗原に選択的に結合する抗体を産生することができる。

【0081】

[0098]「癌」、「腫瘍」および「増殖性疾患」という用語は、脱調節された細胞成長によって特徴付けられる、哺乳類における生理学的状態に関連する。癌は、細胞群が制御されない成長または望ましくない成長を示す疾患のクラスである。癌細胞は他の部位にも拡散する可能性があり、転移の形成をもたらす可能性がある。体内での癌細胞の拡散は、例えば、リンパ液または血液を介して起こる可能性がある。制御されない成長、侵入および転移形成はまた、癌の悪性特性ともよばれる。これらの悪性特性により、癌は、典型的には浸潤も転移もしない良性腫瘍と区別される。

【0082】

[0099]「抗原認識部分」または「抗体認識ドメイン」は、抗原に特異的に結合する分子または分子の一部をさす。一態様において、抗原認識部分は、抗体、抗体様分子またはそのフラグメントであり、抗原は、腫瘍抗原または感染性疾患抗原である。

【0083】

[00100]用語「抗体のフラグメント」、「抗体フラグメント」、「抗体の機能的フラグ
メント」、「抗原結合ドメイン」またはそれらの文法的等価物は、本明細書において、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１以上のフラグメントまたは部分を意味するために互換的に使用される（一般的に、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ
．，２３（９）：１１２６－１１２９（２００５）参照）。抗体フラグメントは、望ましくは、例えば、１以上のＣＤＲ、可変領域（もしくはその部分）、定常領域（もしくはその部分）、またはそれらの組み合わせを含む。抗体フラグメントの例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：（ｉ）Ｆａｂフラグメント、これは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントである；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、これは、ストーク領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントである；（ｉｉｉ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｉｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、これは、２つのドメインが単一のポリペプチド鎖として合成されることを可能にする合成リンカーによって接合されたＦｖフラグメント（すなわち、ＶＬおよびＶＨ）の２つのドメインからなる一価の分子である（例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３－４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．米国、８５：５８７９－５８８３（１９８８）；および、Ｏｓｂｏｕｒｎら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６：７７８（１９９８）参照）；ならびに、（ｖ）ポリペプチド鎖の二量体であるダイアボディ、これに関し、各ポリペプチド鎖は、同一ポリペプチド鎖上のＶＨとＶＬとの間の対合を可能にするには短すぎるペプチドリンカーによってＶＬに接続されたＶＨを含み、それによって、異なるＶＨ－ＶＬポリペプチド鎖上の相補的ドメイン間の対合を促進して、２つの機能的抗原結合部位を有する二量体分子をもたらす。抗体フラグメントは当該分野で公知であり、例えば、米国特許第８６０３９５０号により詳細に記載されている。他の抗体フラグメントとしては、重鎖抗体の可変フラグメント（ＶＨＨ）を挙げることができる。

【0084】

[00101]「保存的アミノ酸置換」または「保存的変異」という用語は、共通の特性を有
する別のアミノ酸による１つのアミノ酸の置換をさす。個々のアミノ酸間の共通の特性を定義するための機能的方法は、相同生物の対応するタンパク質間のアミノ酸変化の正規化頻度を分析することである（Ｓｃｈｕｌｚ，Ｇ．Ｅ．およびＳｃｈｉｒｍｅｒ，Ｒ．Ｈ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７９））。このような分析によれば、アミノ酸のグループは、グループ内のアミノ酸が互いに優先的に交換し、したがって、全体的なタンパク質構造に対するそれらの影響において互いに最も類似していると定義することができる（Ｓｃｈｕｌｚ，Ｇ．Ｅ．およびＳｃｈｉｒｍｅｒ，Ｒ．Ｈ．，上記）。保存的変異の例としては、上記サブグループ内のアミノ酸のアミノ酸置換、例えば、正電荷が維持され得るように、アルギニンに対するリジンおよびその逆；負電荷が維持され得るように、アスパラギン酸に対するグルタミン酸およびその逆；遊離－ＯＨが維持され得るように、トレオニンに対するセリン；および、遊離－ＮＨ_２が維持され得るように、アスパラギンに対するグルタミン；が挙げられる。あるいは、またはさらに、治療薬は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する参照タンパク質のアミノ酸配列を含むことができる。

【0085】

[00102]「非保存的変異」または「非保存的アミノ酸置換」という用語は、異なるグル
ープ間のアミノ酸置換、例えば、トリプトファンに対するリジン、セリンに対するフェニルアラニンなどを包含する。この場合、非保存的アミノ酸置換は、治療薬の生物学的活性を妨害または阻害しないことが好ましい。非保存的アミノ酸置換は治療薬の生物学的活性を向上させることができ、その結果、治療薬の生物学的活性は、野生型の治療薬と比較して向上する。
ＩｇＡ抗体
[00103]免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）は、その抗微生物的役割が知られており、その二
量体形態で粘膜部位に豊富に存在する。モノマーとして、それは、血清中に存在する２番目に最も一般的な抗体である。ＩｇＡは２つのサブクラス、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含み、これらは同様の親和性で骨髄ＩｇＡ受容体（ＦｃαＲＩ、ＣＤ８９）に結合する。い
くつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のために好中球を補充する優れた能力を有する。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、より低いエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比を必要とする。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、他のタイプの抗体（例えば、ＩｇＧ）と比較して、腫瘍オプソニン化抗体濃度を低下させる。一般に、癌治療抗体は、直接的ならびに間接的な免疫媒介作用の両方の組合せによって働く。これらの作用としては、補体活性化により誘導される細胞傷害、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、および抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が挙げられる。ＡＤＣＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージおよび好中球を含む異なるＦｃ受容体発現細胞の活性化により媒介されることができる。これらのＦｃ受容体発現エフェクター細胞のうち、マクロファージおよび好中球はＩｇＡ抗体と結合するのに必要なＦｃαＲＩを発現し、したがって、ＡＤＣＰまたはＡＤＣＣによって腫瘍細胞を死滅させることができる。

【0086】

[00104]いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＡ抗体－免疫細胞の係合(engagement)に続いて、腫瘍細胞のような病原性細胞の免疫細胞媒介性（例えば、好中球媒介性
）食作用またはトロゴサイトーシスを誘発する。この腫瘍細胞を死滅させる機構は、おもにＩｇＡに対するＦｃ受容体（ＦｃαＲＩ；ＣＤ８９）との相互作用によって媒介され、このＦｃ受容体は、最もよく特徴付けられているＩｇＡ受容体である。ＦｃαＲＩは、単球、マクロファージ、顆粒球、樹状細胞のサブセット、およびクッパー細胞に発現し、単量体および二量体のＩｇＡアイソフォームの両方に中間的親和性で結合する。ＩｇＡのＦｃαＲＩへの結合は、食作用、酸化的バースト、サイトカイン放出、抗原提示、およびＡＤＣＣなどのエフェクター機能を媒介する。ヒトでは、２つのＩｇＡアイソタイプ、すなわちＩｇＡ１およびＩｇＡ２、ならびに３つのアロタイプ、すなわちＩｇＡ２ｍ（１）、ＩｇＡ２ｍ（２）およびＩｇＡ２ｎが識別されている。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＧ抗体よりも効率的に多形核細胞（ＰＭＮ）媒介ＡＤＣＣを誘発する。

【0087】

[00105]ＩｇＡは２つのサブクラス（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を有し、単量体および
二量体形態ならびに分泌形態として産生されことができる。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は単量体であることができる。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、１以上のＩｇＡ１アミノ酸配列を含むことができる。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、１以上のＩｇＡ２アミノ酸配列を含むことができる。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、１以上のＩｇＡ１アミノ酸配列および１以上のＩｇＡ２アミノ酸配列を含むことができる。

【0088】

[00106]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩｇＡ１またはＩｇ！抗体であるＩ
ｇＡ抗体由来の定常領域ドメインを含む。いくつかの場合において、ＩｇＡ２抗体は、アロタイプのＩｇＡ２抗体、すなわち、ＩｇＡ２ｍ（１）、ＩｇＡ２（ｍ）２、またはＩｇＡ２ｎである。いくつかの態様において、ＩｇＡ２ｍ（１）抗体はコーカサス系ＩｇＡ２ｍ（１）抗体である。いくつかの態様において、ＩｇＡ２ｍ（２）抗体はアフリカ系ＩｇＡ２ｍ（２）抗体またはアジア系ＩｇＡ２ｍ（２）抗体である。いくつかの態様において、改善された製造性、好ましいグリコシル化、改善された溶解性、または改善された活性、例えば選択的Ｆｃ受容体結合のために改変されたＩｇＡ２抗体である。ＩｇＡ２．０およびＩｇＡ３．０など、そのような改善を伴う、本明細書に記載の抗体構築物における例示的なＩｇＡ２ベースの定常領域または使用を、本明細書中に提供する。当業者の知識に基づくさらなるこのような改変は、本明細書中に記載される構築物の範囲内である。

【0089】

[00107]いくつかの態様において、本明細書に記載される抗体構築物は、少なくとも６
０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のＩｇＡアミノ酸を含む重鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、少なくとも５０、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のＩｇＡア
ミノ酸を含む軽鎖定常領域を含む。

【0090】

[00108]いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、１以上のＩ
ｇＡ ＣＨ３領域、ＩｇＡ ＣＨ２、またはＩｇＡ ＣＨ１領域、またはそれらの任意の組み合わせを含む重鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＩｇＡ ＣＨ１領域を含む軽鎖領域ドメインを含む。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＩｇＧ ＣＨ３領域、ＩｇＧ ＣＨ２、またはＩｇＧ ＣＨ１領域、またはそれらの任意の組み合わせの１以上のアミノ酸を含む重鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＩｇＡ ＣＨ３領域、ＩｇＡ ＣＨ２、およびＩｇＡ ＣＨ１領域、またはそれらの任意の組み合わせを含む重鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＩｇＡ ＣＨ３領域、ＩｇＡ ＣＨ２、およびＩｇＡもしくはＩｇＧ
ＣＨ１領域、またはそれらの任意の組み合わせを含む重鎖定常領域を含む。

【0091】

[00109]いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＩｇＧ可変
領域、例えば、所望によりリンカーの使用によってＩｇＡ定常領域に融合または接続される軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＩｇＧ重鎖可変領域を含む。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＩｇＧ軽鎖可変領域およびＩｇＧ重鎖可変領域を含む。

【0092】

[00110]いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ヒト化抗体
由来の１以上のドメインを含むことができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、キメラ抗体、マウス抗体、ラクダ科抗体またはサメ抗体由来の１以上のドメインを含むことができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ヒト抗体のみに由来するドメインを含むことができる。

【0093】

[00111]いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、二重特異性
抗体、または多重特異性抗体構築物であることができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、三重特異性抗体であることができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、多重特異性抗体であることができる。

【0094】

[00112]いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、二重特異性
抗体であることができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、細胞表面でＣＤ４７および１以上の抗原と共時係合する。いくつかの例において、２つの異なる抗原への本明細書中に記載される抗体構築物の結合は、逐次的である。例えば、第１の抗原への構築物の結合が最初に起こり、それによって、第２の抗体のアームによって探索される空間が制限される。結果として、第２の抗原の局所濃度の有意な上昇が生じる可能性があり、これは、第２の抗体のアームの結合を容易にすることができる。いくつかの場合において、そのような第一の抗原は、抗原提示細胞上に選択的に発現または過剰発現される抗原であり、第二の抗原は、同様に抗原提示細胞上に発現されるＣＤ４７である。いくつかの場合において、構築物は、第１の抗原よりも低い結合強度で第２の抗原に結合し、それによって、第１の抗原への結合が細胞特異性を指示することが可能になる。

【0095】

[00113]いくつかの態様において、構築物は、ＩｇＡまたはそのバリアントのＦｃドメ
インの少なくとも一部を含むことができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＣＨ３、ＣＨ２、およびＣＨ１ドメインを含む重鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＣＨ１を含む軽鎖定常領域を含む。

【0096】

[00114]いくつかの態様において、構築物は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導す
る。いくつかの態様において、構築物は、多形核好中球（ＰＭＮ）媒介腫瘍細胞溶解を誘導する。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、カスパーゼ非依存性経路を介してプログラム細胞死（ＰＣＤ）を誘導する。いくつかの態様において、抗体構築物は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、好中球によって媒介される抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。

【0097】

[00115]いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、対応するＩ
ｇＧ抗体と比較して、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のために好中球を補充する優れた能力を有することができる。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、より低いエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比を必要とし得る。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、他のタイプの抗体（例えば、ＩｇＧ）と比較して、より低い腫瘍オプソニン化抗体濃度を必要とし得る。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、ＩｇＡ抗体－好中球の係合に続いて、腫瘍細胞の好中球媒介食作用またはトロゴサイトーシスを誘発することができる。この腫瘍細胞を死滅させる機構は、おもにＩｇＡに対するＦｃ受容体（ＦｃαＲＩ；ＣＤ８９）との相互作用によって媒介され、このＦｃ受容体は、最もよく特徴づけられているＩｇＡ受容体である。ＦｃαＲＩは、単球、マクロファージ、顆粒球、樹状細胞のサブセット、およびクッパー細胞に発現し、単量体および二量体のＩｇＡアイソフォームの両方に中間的親和性で結合する。ＩｇＡのＦｃαＲＩへの結合は、食作用、酸化的バースト、サイトカイン放出、抗原提示、およびＡＤＣＣなどのエフェクター機能を媒介する。ヒトでは、２つのＩｇＡアイソタイプ、すなわちＩｇＡ１およびＩｇＡ２、ならびに３つのアロタイプ、すなわちＩｇＡ２ｍ（１）、ＩｇＡ２ｍ（２）およびＩｇＡ２ｎが識別されている。いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＧ抗体よりも効率的に多形核細胞（ＰＭＮ）媒介ＡＤＣＣを誘発する。

【0098】

[00116]いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、Ｂ細胞、Ｔ
細胞、血小板、および／または赤血球に結合しない。例えば、いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、低い免疫原性を有することができる。

【0099】

[00117]いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、治療用抗体
である。いくつかの態様において、本明細書に記載される抗体構築物は、組換え抗体であることができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載される抗体構築物は、細胞株において作製される。いくつかの態様において、細胞株はＣＨＯである。いくつかの態様において、細胞株はＳＰ２０である。いくつかの態様において、細胞株はＨＥＫ２３９細胞株である。いくつかの態様において、ＨＥＫ２９３細胞株は、ＨＥＫ２９３Ｆである。

【0100】

ＩｇＡ抗体修飾
[00118]１以上のＩｇＡ定常領域ドメインに１以上のアミノ酸置換および／または１以
上のアミノ酸欠失を含む、本明細書に記載される抗体構築物を、本明細書に記載する。

【0101】

[00119]いくつかの態様において、本明細書中に記載されるＩｇＡ抗体に基づく構築物
のアミノ酸番号付けは、Ｃ－ＤＯＭＡＩＮおよびＣ－ＬＩＫＥ－ＤＯＭＡＩＮについてのＩＭＧＴ独自の番号付けに従って示される（“ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｃ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ．”Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；２９（３）：１８５－２０３に開示されているとおりであり、その内容全体を本明細書中で参考として援用する）。

【0102】

[00120]いくつかの態様において、構築物は、定常領域内に少なくとも４つのグリコシ
ル化部位の欠失を含む。いくつかの態様において、構築物は、抗体の定常領域に少なくとも３つのＮ－連結グリコシル化部位の欠失を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、抗体の定常領域に少なくとも３つのＮ－連結グリコシル化部位の欠失、および抗体の定常領域に少なくとも１つのＯ－連結グリコシル化部位を含む。

【0103】

[00121]
いくつかの態様において、欠失したテールピースを含むＩｇＡ定常領域を含む、抗体構築物である。いくつかの態様において、構築物は、３－２０、３－１９、３－１８、３－１７、３－１６、３－１５、３－１４、３－１３、３－１２、３－１１、３－１０、３－９、３－８、３－７、３－６、３－５、３－４Ｃ末端アミノ酸の欠失を含む。いくつかの態様において、構築物は、３－２０、３－１９、３－１８、３－１７、３－１６、３－１５、３－１４、３－１３、３－１２、３－１１、３－１０、３－９、３－８、３－７、３－６、３－５、３－４Ｃ末端アミノ酸の欠失を含む。いくつかの態様において、Ｃ末端アミノ酸は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、ＩｇＡ２抗体のアミノ酸１３１～１４８に由来する。

【0104】

[00122]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、アミノ酸１３１～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１４７～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１４６～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１４５～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１４４～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１４３～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１４２～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１４１～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１４０～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３９～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３８～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３７～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３６～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３５～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３４～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３３～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３２～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸１３１～１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構
築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。

【0105】

[00123]いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、Ｃ末端アスパラギン（Ｎ）アミノ酸
の変異を含む。いくつかの態様において、変異は非保存的アミノ酸置換である。いくつかの態様において、変異は、ＩｇＡのＣ末端アスパラギン（Ｎ）アミノ酸のグリコシル化部位を欠失させる。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｎ１３５の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｎ１３５の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｎ１３５Ｑ変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。

【0106】

[00124]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、Ｎ４５．２の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｎ４５．２の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｎ４５．２Ｇを含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ２ベースの定常領域を含む抗体構築物は、Ｎ４５．２アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２ベースの定常領域を含む抗体構築物と比較して、延長された循環半減期を有する。

【0107】

[00125]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、Ｐ１２４の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｐ１２４の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｐ１２４Ｒを含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ２ベースの定常領域を含む抗体構築物は、Ｐ１２４アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２ベースの定常領域を含む抗体構築物と比較して、延長された循環半減期を有する。いくつかの態様において、ＩｇＡ２ベースの定常領域を含む抗体構築物は、Ｐ１２４アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２ベースの定常領域を含む抗体構築物と比較して、増大した安定性を有する。

【0108】

[00126]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、Ｃ９２の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｃ９２の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｃ９２Ｓを含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ２ベースの定常領域を含む抗体構築物は、Ｃ９２アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して、減少した凝集を有する。いくつかの態様において、ＩｇＡ２ベースの定常領域を含む抗体構築物は、Ｃ９２アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して、血清タンパク質との凝集が減少した。いくつかの態様において、抗体構築物は、Ｃ９２アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで凝集が減少した。

【0109】

[00127]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、Ｎ１２０の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｎ１２０の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｎ１２０Ｔを含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつか
の態様において、ＩｇＡ２抗体は、Ｎ１２０アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して、延長された循環半減期を有する。

【0110】

[00128]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、Ｉ１２１の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｉ１２１の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｉ１２１Ｌを含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ２抗体は、Ｎ３３８アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して、延長された循環半減期を有する。

【0111】

[00129]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、Ｔ１２２の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｔ１２２の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｔ１２２Ｓを含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ２抗体は、Ｎ３３９アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して、延長された循環半減期を有する。

【0112】

[00130]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、Ｃ１４７の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｃ１４７の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸Ｃ１４７の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ２抗体は、Ｃ１４７アミノ酸に変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して、減少した凝集を有する。

【0113】

[00131]いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付け
で、Ｙ１４８の変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、Ｙ１４８の非保存的変異を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、ＩＭＧＴスキームに従った番号付けで、アミノ酸Ｙ１４８の欠失を含むＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。

【0114】

[00132]いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、１以上のアルブミン結合ドメインを
含む。いくつかの態様において、１以上のアルブミン結合ドメインは、ＩｇＡ定常領域の軽鎖または重鎖に融合される。いくつかの態様において、１以上のアルブミン結合ドメインは、ＩｇＡ定常領域の重鎖に融合される。いくつかの態様において、１以上のアルブミン結合ドメインは、ＩｇＡ定常領域の重鎖のＣＨ３領域のＣ末端領域に融合される。いくつかの態様において、ＩｇＡ２抗体は、１以上のアルブミン結合ドメインを含まないＩｇＡ２抗体と比較して、延長された循環半減期を有する。いくつかの態様において、抗体構築物は、１以上のアルブミン結合ドメインを含み、対応するＩｇＧ抗体の循環半減期の１％、５％、または１０％内の循環半減期を有する、ＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体構築物は、１以上のアルブミン結合ドメインを含み、対応するＩｇＧ抗体の半減期よりも長い循環半減期を有する、ＩｇＡ２ベースの定常領域を含む。

【0115】

[00133]いくつかの態様において、ＩｇＡ抗体は、Ｌｏｈｓｅ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１５；７６（２）：４０３－１７；Ｍｅｙｅｒ Ｓ．ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ．２０１６；８（１）：８７－９８；またはＬｅｕｓｅｎ Ｊ．ｅｔ ａｌ．
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１５；６８：３５－３９に記載されている１以上の変異を含む。

【0116】

[00134]いくつかの態様において、参照ＩｇＡ配列と比較して１以上の変異または欠失
は、抗体構築物の循環半減期の延長または短縮をもたらす。いくつかの態様において、１以上の変異または欠失は、抗体構築物の循環半減期の延長をもたらす。例えば、１以上の変異は、ヒトにおいて、抗体構築物の血清半減期を最大２１日またはそれ以上延長することができる。さらに、１以上の変異は、マウスにおいて、抗体構築物の血清半減期を最大９日またはそれ以上延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、抗体構築物の血清半減期を、免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)分子の血清半減期に匹敵するレベルまで延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異または欠失は、抗体構築物の循環半減期の短縮をもたらす。

【0117】

[00135]いくつかの態様において、１以上の変異は、抗体構築物の血清半減期を、少な
くとも約７日～約３０日またはそれ以上延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、抗体構築物の血清半減期を少なくとも約７日延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、抗体構築物の血清半減期を最大約３０日延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、抗体構築物の血清半減期を、約７日～約８日、約７日～約９日、約７日～約１０日、約７日～約１５日、約７日～約２０日、約７日～約２５日、約７日～約３０日、約８日～約９日、約８日～約１０日、約８日～約１５日、約８日～約２０日、約８日～約２５日、約８日～約３０日、約９日～約１０日、約９日～約１５日、約９日～約２０日、約９日～約２５日、約９日～約３０日、約１０日～約１５日、約１０日～約２０日、約１０日～約２５日、約１０日～約３０日、約１５日～約２０日、約１５日～約２５日、約１５日～約３０日、約２０日～約２５日、約２０日～約３０日、または約２５日～約３０日、延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、抗体構築物の血清半減期を、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１５日、約２０日、約２５日、または約３０日、延長することができる。

【0118】

[00136]いくつかの態様において、抗体構築物は、増大した安定性を示す。いくつかの
態様において、１以上の変異および／または１以上の欠失は、１以上の変異および／または１以上の欠失を含まない対応するＩｇＡ抗体と比較して、抗体構築物の増大した安定性をもたらす。

【0119】

[00137]いくつかの態様において、抗体構築物は、減少した凝集を示す。抗体凝集は、
物理的不安定性のより一般的な発現である。タンパク質凝集体は一般に、エピトープの多様性および／または構造変化に起因して、低下した活性と、より重要なことには、より大きな免疫原性の可能性を有する。免疫グロブリン凝集体は、重篤な腎不全およびアナフィラキシー様反応、例えば、頭痛、発熱、および悪寒を引き起こすことが知られている。したがって、抗体治療において、凝集を減少させることは有利である。これに加えて、市販の静注用免疫グロブリン製品中の凝集体レベルは、世界保健機構（ＷＨＯ）基準に基づき５％未満に制限されている。いくつかの態様において、１以上の変異は凝集の減少をもたらす。いくつかの態様において、１以上の変異および／または１以上の欠失は、１以上の変異および／または１以上の欠失を含まない対応するＩｇＡ抗体と比較して、抗体構築物の凝集の減少をもたらす。

【0120】

[00138]いくつかの態様において、本明細書で提供される抗体構築物は、少なくとも約
０．１％～最大約５％の範囲の凝集体レベルを有する。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗体構築物は、少なくとも約０．１％の範囲の凝集体レベルを有する。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗体構築物は、最大約５％の範囲の凝集体レベルを有する。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗体構築物は、約０．
１％～約０．５％、約０．１％～約１％、約０．１％～約２％、約０．１％～約３％、約０．１％～約４％、約０．１％～約５％、約０．５％～約１％、約０．５％～約２％、約０．５％～約３％、約０．５％～約４％、約０．５％～約５％、約１％～約２％、約１％～約３％、約１％～約４％、約１％～約５％、約２％～約３％、約２％～約４％、約２％～約５％、約３％～約４％、約３％～約５％、または約４％～約５％の範囲の凝集体レベルを有する。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗体構築物は、約０．１％、約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、または約５％の範囲の凝集体レベルを有する。

【0121】

[00139]本明細書中に開示される治療用抗体は、１以上の天然に存在するアミノ酸の代
わりに合成アミノ酸を含んでいてもよい。このような合成アミノ酸は当分野で公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－およびトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリン β－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－
[00140]ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロ
ペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、およびα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンを包含する。

【0122】

ＣＤ４７およびＳＩＲＰα
[00141]シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ－α）は、骨髄細胞の膜に広く発現する
タンパク質である。ＳＩＲＰ－αは、体内の多くの細胞型に広く発現するタンパク質であるＣＤ４７（分化抗原群４７）と相互作用する。ＳＩＲＰ－αとＣＤ４７との相互作用は、通常なら免疫系によって認識されることができる「自己」細胞の抱き込みを妨げる。急性骨髄性白血病およびいくつかの固形腫瘍癌において、腫瘍細胞上の高いＣＤ４７発現が、生存に対する負の予後因子として作用し得ることが観察されている。ＣＤ４７とＳＩＲＰ－αとの相互作用を中断させることに焦点を当てた戦略、例えば、ＣＤ４７またはＳＩＲＰ－αのいずれかをマスキングする薬剤の投与は、潜在的な抗癌療法となる可能性がある。

【0123】

[00142]さらに、抑制性受容体シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）または
そのリガンドＣＤ４７のチェックポイント阻害は、ＩｇＧ_１抗癌療法と組み合わせた前臨床モデルにおいて非常に効果的であることが証明されており、これらのＣＤ４７－ＳＩＲＰａ相互作用遮断薬のいくつかは、血液癌および固形癌に対する臨床試験ですでに試験中である（ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ 識別番号：ＮＣＴ０２２１６４０９；ＮＣＴ０２６７８３３８，ＮＣＴ０２６４１００２；ＮＣＴ０２３６７１９６，ＮＣＴ０２８９０３６８；ＮＣＴ０２６６３５１８，ＮＣＴ０２９５３５０９）。ＳＩＲＰαは多かれ少なかれ選択的に骨髄細胞上に存在し、それぞれマクロファージおよび好中球によるＡＤＣＰ／ＡＤＣＣを制限する。その遍在的に発現されたリガンドＣＤ４７は「私を食べないで」シグナルとして作用し、しばしば癌細胞上で過剰発現して、マクロファージによる食作用およびクリアランスを阻害することが見いだされている。実際、臨床の場において、癌細胞上でのＣＤ４７の発現レベルは、抗癌抗体療法に対する臨床反応と逆相関することが見いだされている。いくつかの前臨床モデルにおいて、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα遮断薬は、さまざまな腫瘍抗原を標的化するＩｇＧ ｍＡｂ、例えばセツキシマブお
よびトラスツズマブと併用した場合、癌免疫療法を増強するための有望な標的であることが証明されている。しかしながら、特異的腫瘍抗原に対するＩｇＡ抗体については、この追加的なＣＤ４７－ＳＩＲＰαチェックポイント阻害の増強効果はまだ検討されていない。ＣＤ４７はヒト細胞に遍在的に発現されるので、ＣＤ４７の広範な阻害は有害作用のリスクを提示する可能性がある。したがって、癌細胞に対するＣＤ４７の効果的な局所的標的化が望ましい。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬は、ＣＤ４７への低い親和性結合を有し；したがって、癌細胞以外の細胞への不要な結合を防止する。本明細書中に記載される構築物の特定の態様において、ＣＤ４７のこのような低い親和性結合を、抗原結合細胞上に発現される抗原への高い親和性結合と組み合わせると、抗原結合が構築物の細胞特異性を指示することが可能になる。

【0124】

[00143]本明細書中に、ＩｇＡ定常領域ドメインを含む治療薬であって、図１に示すよ
うに、治療薬がＣＤ４７および追加的な腫瘍関連抗原に結合するものを提供する。さらに、本明細書に開示される治療用量の治療薬を被験体に投与することを含む、それを必要とする被験体の処置方法を、本明細書中に提供する。さらに、本明細書中に開示される治療薬および医薬的に許容しうるキャリヤーを含む医薬組成物を、本明細書中に提供する。

【0125】

治療薬
[00144]本明細書に記載の抗体構築物を含む治療薬を提供する。
[00145]本明細書に記載の態様において、免疫エフェクター細胞エンゲージャー分子と
して作用する抗体構築物を、本明細書中に記載する。このような免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、本明細書中に記載されるようなＩｇＡ構築物に基づく免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン、本明細書中に記載されるようなＣＤ４７結合ドメイン；および抗原提示細胞上で発現される抗原結合ドメインを含み；これに関し、該ＩｇＡ重鎖ドメインは、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、それによって前記免疫エフェクター細胞と係合し、該抗原結合ドメインは、標的抗原提示細胞上の抗原に結合し、該ＣＤ４７結合ドメインは、標的抗原提示細胞上に発現されるＣＤ４７と、免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、それによって、免疫エフェクター細胞が抗原提示細胞を破壊することを可能にし、そして、該抗体構築物は、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有し、それによって抗原提示細胞に選択的に結合する。

【0126】

[00146]特定の態様において、標的細胞を有効量の抗体構築物と接触させることを含む
、標的抗原提示細胞に対する好中球媒介免疫応答を誘導する方法であり、これに関し、該抗体構築物は、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；ＣＤ４７結合ドメイン；および抗原結合ドメインを含み；
該抗原結合ドメインは、標的細胞上の抗原と結合し、該ＩｇＡ重鎖ドメインは、好中球上のＦｃαＲと特異的に結合し、それによって前記好中球を標的細胞に補充し、該ＣＤ４７結合ドメインは、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と好中球上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、それによって好中球による標的細胞の死滅を促進し、そして該抗体構築物は、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有し、それによって好中球媒介免疫応答を誘導し、それによって抗原提示標的細胞と選択的に結合する。

【0127】

[00147]いくつかの場合において、標的細胞は、腫瘍抗原を提示する癌細胞である。癌
には、以下の４つの一般的な腫瘍抗原群がある：(ｉ)このタイプの任意のウイルス性腫瘍に対して同一であることができるウイルス性腫瘍抗原、（ｉｉ）患者および腫瘍に対して特異的であることができる発癌性腫瘍抗原、（ｉｉｉ）すべての個々のタイプの腫瘍において異なる可能性があるが、同一ウイルスによって引き起こされる異なる腫瘍において同一である可能性がある、移植タイプの同種抗原または腫瘍特異的移植抗原；および（ｉｖ
）胚性抗原。腫瘍抗原が発見された結果、癌を特異的に標的化することができる新規癌治療法の開発において、腫瘍抗原が重要になってきた。これにより、これらの腫瘍抗原に対する抗体が開発された。癌治療のための腫瘍抗原に対する抗体の開発に加え、免疫細胞を標的化して免疫応答を促進する抗体も開発されている。

【0128】

[00148]本明細書中で、特定の態様において、ＩｇＡ定常領域を含む治療薬を開示する
。いくつかの場合において、治療薬はＩｇＡ抗体である。ＩｇＡ定常領域は、ＩｇＡ１定常領域であることができる。ＩｇＡ定常領域は、ＩｇＡ２定常領域であることができる。例えば、治療薬は、ＩｇＡ１抗体またはＩｇＡ２抗体であることができる。いくつかの態様において、治療薬は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、血小板、および／または赤血球に結合しない。例えば、治療薬は、低い免疫原性を有する。

【0129】

[00149]治療薬は、二重特異性または多重特異性抗体であることができる。いくつかの
場合において、治療薬は、細胞表面で２つの抗原と共係合する。治療薬は、２つの異なる抗原と共係合することができる。いくつかの例において、２つの異なる抗原への治療薬の結合は、逐次的である。例えば、第１の抗原への治療薬の結合が最初に起こり、それによって、第２の抗体のアームによって探索される空間が制限される。結果として、第２の抗原の局所濃度の有意な上昇が生じる可能性があり、これは、第２の抗体のアームの結合を容易にすることができる。

【0130】

[00150]いくつかの態様において、治療薬は、抗原への結合と比較して低い親和性でＣ
Ｄ４７に結合する。いくつかの場合において、治療薬は癌細胞のＣＤ４７結合を減少させる。例えば、治療薬は、ヒトＣＤ４７とシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）との相互作用を阻害することができる。さらに、ヒトＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の阻害は、治療薬の治療可能性を上昇させることができる。ヒトＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の阻害は、腫瘍部位における癌細胞の食作用およびクリアランスを増加させることができる。例えば、癌細胞は、ＩｇＡオプソニン化癌細胞であることができる。治療薬は、低親和性ＣＤ４７アームを含むＩｇＡ二重特異性抗体であることができる。いくつかの態様において、本明細書に記載の治療薬はＣＤ４７への低親和性結合を有し、これにより、癌細胞以外の細胞上のＣＤ４７への治療薬の結合が妨げられる。いくつかの場合において、本明細書中に記載される治療薬の低親和性ＣＤ４７アームは、ＣＤ４７を発現する腫瘍細胞に結合する。いくつかの例において、本明細書に記載の治療薬の低親和性ＣＤ４７アームは、腫瘍細胞ではないＣＤ４７を発現する細胞には結合しない。治療薬は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰαシグナルを中断させるＩｇＡ二重特異性抗体であることができる。いくつかの例において、治療薬は、対応する野生型ＣＤ４７結合抗体と比較して、より低い結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する弱毒化ＣＤ４７結合ドメインを含む。

【0131】

[00151]いくつかの態様において、治療薬は、少なくとも約０．０１マイクロモル（μ
Ｍ）～約９９９μＭ以上の結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。いくつかの態様において、治療薬は、少なくとも約０．０１μＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。いくつかの態様において、治療薬は、最大約９９９μＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施態様において、治療薬は、約０．０１μＭ～約０．１ μＭ、約０．０１μＭ～約０．５μＭ、約０．０１μＭ～約１μＭ、約０．０１μＭ～約５μＭ、約０．０１μＭ～約１０μＭ、約０．０１μＭ～約５０μＭ、約０．０１μＭ～約１００μＭ、約０．０１μＭ～約２００μＭ、約０．０１μＭ～約３００μＭ、約０．０１μＭ～約５００μＭ、約０．０１μＭ～約９９９μＭ、約０．１μＭ～約０．５μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約０．１μＭ～約５μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．１μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約１００μＭ、約０．１μＭ～約２００μＭ、約０．１μＭ～約３００μＭ、約０．１μＭ～約５００μＭ、約０．１μＭ～約９９９μＭ、約０．５μＭ～約１μＭ、約０．５μＭ～約５μＭ、約０．５μＭ～約１０μＭ、約０
．５μＭ～約５０μＭ、約０．５μＭ～約１００μＭ、約０．５μＭ～約２００μＭ、約０．５μＭ～約３００μＭ、約０．５μＭ～約５００μＭ、約０．５μＭ～約９９９μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１μＭ～約５０μＭ、約１μＭ～約１００μＭ、約１μＭ～約２００μＭ、約１μＭ～約３００μＭ、約１μＭ～約５００μＭ、約１μＭ～約９９９μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約５μＭ～約５０μＭ、約５μＭ～約１００μＭ、約５μＭ～約２００μＭ、約５μＭ～約３００μＭ、約５μＭ～約５００μＭ、約５μＭ～約９９９μＭ、約１０μＭ～約５０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１０μＭ～約２００μＭ、約１０μＭ～約３００μＭ、約１０μＭ～約５００μＭ、約１０μＭ～約９９９μＭ、約５０μＭ～約１００μＭ、約５０μＭ～約２００μＭ、約５０μＭ～約３００μＭ、約５０μＭ～約５００μＭ、約５０μＭ～約９９９μＭ、約１００μＭ～約２００μＭ、約１００μＭ～約３００μＭ、約１００μＭ～約５００μＭ、約１００μＭ～約９９９μＭ、約２００μＭ～約３００μＭ、約２００μＭ～約５００μＭ、約２００μＭ～約９９９μＭ、約３００μＭ～約５００μＭ、約３００μＭ～約９９９μＭ、または約５００μＭ～約９９９μＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。いくつかの態様において、治療薬は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約０．５μＭ、約１μＭ、約５μＭ、約１０μＭ、約５０μＭ、約１００μＭ、約２００μＭ、約３００μＭ、約５００μＭ、または約９９９μＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。

【0132】

[00152]本明細書中に記載される構築物は、公知のまたはｄｅ ｎｏｖｏで生成された
ＣＤ４７標的化抗体または分子に由来する任意のＣＤ４７結合ドメインを含むことができる。これらのＣＤ４７結合領域は、本明細書中に記載される構築物中にそのまま組み込まれることができ、またはこれらは、本明細書中に記載される構築物中に組み込まれる前に、さらに弱毒化してＣＤ４７結合強度を低下させることができる。ＣＤ４７標的化に使用することができる抗体の代表的なＣＤＲ領域を、以下の表Ａに提供する。

【0133】

[00153]

【0134】

【表1】

【0135】

[00154]いくつかの態様において、治療薬は、約１ｍＭ～約１０００ミリモル（ｍＭ）
の結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。いくつかの態様において、治療薬は、少なくとも約１ｍＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。いくつかの態様において、治療薬は、最大約１０００ｍＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。いくつかの態様において、治療薬は、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約５０ｍＭ、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、約１ｍＭ～約２００ｍＭ、約１ｍＭ～約３００ｍＭ、約１ｍＭ～約４００ｍＭ、約１ｍＭ～約５００ｍＭ、約１ｍＭ～約６００ｍＭ、約１ｍＭ～約８００ｍＭ、約１ｍＭ～約１０００ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭ、約５ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５ｍＭ～約２００ｍＭ、約５ｍＭ～約３００ｍＭ、約５ｍＭ～約４００ｍＭ、約５ｍＭ～約５００ｍＭ、約５ｍＭ～約６００ｍＭ、約５ｍＭ～約８００ｍＭ、約５ｍＭ～約１０００ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１０ｍＭ～約３００ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０
０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５００ｍＭ、約１０ｍＭ～約６００ｍＭ、約１０ｍＭ～約８００ｍＭ、約１０ｍＭ～約１０００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、約５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約５０ｍＭ～約５００ｍＭ、約５０ｍＭ～約６００ｍＭ、約５０ｍＭ～約８００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１０００ｍＭ、約１００ｍＭ～約２００ｍＭ、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１００ｍＭ～約４００ｍＭ、約１００ｍＭ～約５００ｍＭ、約１００ｍＭ～約６００ｍＭ、約１００ｍＭ～約８００ｍＭ、約１００ｍＭ～約１０００ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、約２００ｍＭ～約４００ｍＭ、約２００ｍＭ～約５００ｍＭ、約２００ｍＭ～約６００ｍＭ、約２００ｍＭ～約８００ｍＭ、約２００ｍＭ～約１０００ｍＭ、約３００ｍＭ～約４００ｍＭ、約３００ｍＭ～約５００ｍＭ、約３００ｍＭ～約６００ｍＭ、約３００ｍＭ～約８００ｍＭ、約３００ｍＭ～約１０００ｍＭ、約４００ｍＭ～約５００ｍＭ、約４００ｍＭ～約６００ｍＭ、約４００ｍＭ～約８００ｍＭ、約４００ｍＭ～約１０００ｍＭ、約５００ｍＭ～約６００ｍＭ、約５００ｍＭ～約８００ｍＭ、約５００ｍＭ～約１０００ｍＭ、約６００ｍＭ～約８００ｍＭ、約６００ｍＭ～約１０００ｍＭ、または約８００ｍＭ～約１０００ｍＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。いくつかの態様において、治療薬は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約２００ｍＭ、約３００ｍＭ、約４００ｍＭ、約５００ｍＭ、約６００ｍＭ、約８００ｍＭ、または約１０００ｍＭの結合親和性（Ｋ_ｄ）でＣＤ４７に結合する。

【0136】

[00155]いくつかの場合において、治療薬は、腫瘍関連抗原と結合する。治療薬は、高
親和性腫瘍関連抗原アームを含むＩｇＡ二重特異性抗体であることができる。腫瘍関連抗原は、ＣＤ２０であることができる。腫瘍関連抗原は、ＧＤ２であることができる。腫瘍関連抗原は、メソテリンであることができる。腫瘍関連抗原は、ＧＤ２、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、およびＣＤ２５からなる群より選択することができる。腫瘍関連抗原は、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３、ＶＥＧＦ－Ｒ２、またはそれらの任意の組み合わせであることができる。

【0137】

[00156]本明細書中に記載される構築物は、公知のまたはｄｅ ｎｏｖｏで生成された
抗原標的化抗体または分子に由来する任意の抗原結合ドメインを含むことができる。抗原標的化に使用することができる抗体の代表的なＣＤＲ領域を、以下の表Ｂに提供する。当業者なら、公知の供給源からの適切な抗原結合ドメインを利用して、抗原提示細胞を適切に標的化することを知っているはずである。

【0138】

[00157]

【0139】

【表2】

【0140】

[00158]いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬は、ＣＤ２０に結合
する。ＣＤ２０は、ほぼすべての正常および悪性Ｂ細胞の表面上に発現される３３～３７ｋＤの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０ノックアウトマウスはほぼ正常な表現型を示し、高レベルの冗長度が示唆される。最近、ヒトにおけるＣＤ２０欠損は、Ｔ細胞非依存性抗体応答の障害をもたらすことが報告された。ＣＤ２０は、カルシウムチャネルとして機能するほか、脂質ラフト、すなわち、細胞膜中のコレステロール富むミクロドメインに存在すると仮定されている。ＣＤ２０は膜を４回貫通(span)し、細胞内Ｃ末端およびＮ末端を持つ。ＣＤ２０の２つの領域は細胞外にあり、小ループと大ループを形成している。

【0141】

[00159]いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬は、ＨＥＲ２に結合
する。ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子受容体２／受容体チロシン－プロテインキナーゼｅｒｂＢ－２）は、ヒト上皮成長因子ファミリーの一部である。このタンパク質の過剰発現は、例えば乳癌のような癌の進行において重要な役割を果たすことが示され得る。ＨＥＲ２／ｎｅｕタンパク質は、受容体チロシンキナーゼとして機能することができ、結合パートナーとの二量体化時に自己リン酸化する。ＨＥＲ２／ｎｅｕは、いくつかのシグナル伝達経路、例えば、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、ホスホイノシチド３－キナーゼ、ホスホリパーゼＣ、プロテインキナーゼＣ、ならびにシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）などを、活性化することができる。ＨＥＲ２／ｎｅｕを標的化および阻害することができる抗体の例としては、トラスツズマブおよびペルツズマブを挙げることができる。

【0142】

[00160]いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬は、ＥＧＦＲに結合
する。ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）は、ヒト上皮成長因子ファミリーのメンバーをコードする。ＥＧＦＲの過剰発現または過剰活性につながりうる変異は、扁平上皮癌および膠芽腫を含むいくつかの癌と関連する可能性がある。ＥＧＦＲは受容体チロシンキナーゼとして機能することができ、リガンド結合は結合パートナーとの二量体化および自己リン酸化を誘発することができる。次に、リン酸化されたＥＧＦＲは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、ホスホイノシチド３－キナーゼ、ホスホリパーゼＣｙ、プロテインキナーゼＣ、およびシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）を含むいくつかの下流シグナル伝達経路を活性化することができる。ＥＧＦＲを標的化および阻害することができる抗体の例としては、セツキシマブ、パニツムマブ(panutumumab)、ニモツズマブ、および
ザルツムマブを挙げることができる。ＥＧＦＲの１つの変異バリアントはＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ）である。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、細胞外ドメインのエクソン２～７が欠失したＥＧＦＲ遺伝子再配列の結果である可能性がある。この変異は、任意の公知のリガンドに結合できない変異受容体をもたらす可能性がある。得られた受容体は、構成的な低レベルのシグナル伝達に係合することができ、腫瘍の進行に関与することができる。ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的化することができる抗体の例としては、ＡＭＧ５９５およびＡＢＴ８０６を挙げることができる。

【0143】

[00161]いくつかの態様において、本明細書に記載の治療薬は、メソテリンに結合する
。メソテリンは、最初は、ＯＶＣＡＲ－３ヒト卵巣癌細胞株でマウスを免疫化した後に生成されるＫ１モノクローナル抗体によって認識される抗原として記載された。その後、１９９６年にメソテリン遺伝子がクローニングされた。メソテリンｃＤＮＡは１８８４ｂｐのオープンリーディングフレームを含有し、６９ｋＤａ前駆体タンパク質（６２８アミノ酸）をコードする。グリコシル化後、前駆体はアミノ酸２８８～２９３でフリンによって切断され、４０ｋＤａのタンパク質および細胞から放出されるより小さな３２ｋＤａのフラグメントを生じる。この３２ｋＤａの脱落フラグメントは巨核球増強因子（ＭＰＦ）とよばれる。４０ｋＤａのタンパク質は細胞表面に見いだされ、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼＣでの処理によって放出されることができる。この４０ｋＤａのＧＰＩ連結膜結合タンパク質は、正常な中皮細胞によって産生されるため、メソテリンと命名された。悪性中皮腫と卵巣腺癌は正常な中皮細胞に由来するので、メソテリンがこれらの悪性疾患と関連していることは驚くにあたらない。

【0144】

[00162]メソテリンの最も一般的な形態は膜結合型であるが、２つのバリアントが見い
だされている：８アミノ酸の挿入を有するバリアント－１もまた、膜結合型である。バリアント－２は、ＧＰＩアンカーシグナル配列の欠如により脱落し、可溶性である。可溶性メソテリンタンパク質は卵巣癌患者の血清中で検出可能であり、卵巣癌の診断および／またはＣＡ１２５（癌抗原１２５）と共に治療に対するその応答をモニタリングするための、有用な新規マーカーを提供する可能性がある。さらに、可溶性メソテリンは、中皮腫患者の血液および滲出液中で上昇し、これらの流体中のメソテリンレベルの決定は、おもに患者の応答および進行をモニタリングするためのツールとして、米国ＦＤＡにより承認されている。

【0145】

[00163]メソテリンは、卵巣癌の診断に使用される腫瘍抗原であるＣＡ１２５との相互
作用を介して、細胞接着および腫瘍転移に役割を果たすことが疑われている。ＣＡ１２５はＭＵＣ１６ともよばれる。ＣＡ１２５／ＭＵＣ１６は多くの上皮の細胞表面に発現されるＩ型膜貫通タンパク質であり、その可溶形態は細胞外空間に放出されることができる。さらに、ＣＡ１２５／ＭＵＣ１６にメソテリンが結合すると、ＭＭＰ－７活性化を介して膵臓癌細胞の運動性および浸潤が促進される。

【0146】

[00164]メソテリンは正常組織での発現が中皮に限定されるため、分化抗原と考えられ
ているが、メソテリンは、中皮腫、卵巣癌、膵臓癌および肺癌を含むさまざまな腫瘍で多量に発現される。メソテリンは胸膜、心膜、および腹膜表面を覆う正常な中皮細胞上で免疫組織学的方法により検出することができるが、重要な器官では検出できない。多くの上皮性癌で高度に発現されることが多い。腫瘍におけるメソテリンの差次的過剰発現ならびに細胞接着および腫瘍転移におけるその役割により、メソテリンは癌治療のための適切な標的となる。

【0147】

[00165]いくつかの態様において、本明細書に記載される治療薬の抗原結合部分は、Ｇ
Ｄ２、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－
２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３およびＶＥＧＦ－Ｒ２に特異的であるか、またはこれらに結合する。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、グリシン－セリンリンカーまたはＷｈｉｔｌｏｗリンカーなどのフレキシブルリンカーによって接合された標的抗原特異的モノクローナル抗体の可変ドメイン軽鎖（ＶＬ）および可変ドメイン重鎖（ＶＨ）を含む単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。複数態様において、ｓｃＦｖはヒト化されている。いくつかの態様において、治療薬は、可変ドメインおよび抗体を含む。いくつかの態様において、治療薬は、ヒト、ヒト化、または任意の他の非ヒト起源のＩｇＧ抗体由来の可変ドメインを含む。いくつかの態様において、抗原結合部分は、例えば、ＮからＣ末端、ＶＨ－リンカー－ＶＬまたはＶＬ－リンカー－ＶＨに方向的に連結されたＶＨおよびＶＬを含むことができる。いくつかの例において、抗原結合ドメインは、標的のエピトープを認識する。

【0148】

[00166]一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ２０
に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ１９に特異的である。一態様において、本明細書に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ３８に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＰＤ－Ｌ１に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ２５に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ３３に特異的である。他の態様において、本明細書に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＢＣＭＡに特異的である。さらに他の態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ４４に特異的である。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、α－葉酸受容体に特異的である。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＡＩＸに特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ３０に特異的である。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＲＯＲ１に特異的である。一態様において、本明細書に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＥＡに特異的である。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＥＧＰ－２に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＥＧＰ－４０に特異的である。他の態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＨＥＲ２に特異的である。さらに他の態様において、本明細書に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＨＥＲ３に特異的である。さらに他の態様において、本明細書に記載される治療薬の抗原結合部分は、葉酸結合タンパク質に特異的である。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＧＤ２に特異的である。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＧＤ３に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２に特異的である。一態様において、本明細書に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＫＤＲに特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＥＤＢ－Ｆに特異的である。他の態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、メソテリンに特異的である。さらに他の態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ２２に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＥＧＦＲに特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＭＵＣ－１に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＭＵＣ－１６に特異的である。一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＭＡＧＥ－Ａ１に特異的である。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ｈ５Ｔ４に特異的である。いくつかの態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＰＳＭＡに特異的
である。他の態様において、本明細書に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＴＡＧ－７２に特異的である。さらに一態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的である。他の態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＣＤ１２３に特異的である。さらに態様において、本明細書中に記載される治療薬の抗原結合部分は、ＶＥＧＦ－Ｒ２に特異的である。

【0149】

[00167]治療用モノクローナル抗体としての未改変ＩｇＡは、比較的短い半減期を有す
る。これは、ｉｎ ｖｉｖｏで新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合がないことと、組換え産生系におけるシアリル化レベルが低いこととの組み合わせによる可能性がある。ＦｃＲｎ受容体は抗体半減期の維持において確立された役割を有し、ＦｃＲｎへの抗体分子の結合の減少は、血清中でのより短い半減期につながる。さらに、ＩｇＡはＩｇＧよりも高度にグリコシル化されているので、シアル酸を新生オリゴ糖に移動させる酵素（シアリルトランスフェラーゼ）は限られている。Ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）は、シアリル化のレベルが低いため、ＩｇＧよりも速やかにＩｇＡを除去する。血清中での延長された半減期を有する抗体治療薬の開発は、さまざまな理由、例えば、限定されるものではないが、血流中での持続的循環による改善された治療効力および改善された投与のために望ましい。

【0150】

[00168]本明細書中に、改善された薬物動態をもたらす１以上の変異を含む治療薬を提
供する（Ｌｏｈｓｅ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１６；７６（２）：４０３－１７；Ｍｅｙｅｒ Ｓ．ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ．２０１６；８（１）：８７－９８）。本明細書中に、改善された薬物動態をもたらす１以上のアルブミン結合ドメインを含む治療薬を提供する。いくつかの態様において、治療薬は１以上の変異を含む。変異は保存的変異であることができる。変異は、非保存的変異であってもよい。いくつかの態様において、治療薬は、１以上の欠失を含む。いくつかの態様において、治療薬は、１以上のアルブミン結合ドメインを含む。変異または欠失は、ＩｇＡ定常領域に見いだすことができる。あるいは、１以上の変異および／または１以上の欠失は、ＩｇＡ可変領域に見いだすことができる。１以上の変異は、治療薬の血清半減期を、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子の半減期に匹敵するレベルまで延長させることができる。例えば、１以上の変異は、ヒトにおいて治療薬の血清半減期を最大２１日またはそれ以上まで延長することができる。さらに、１以上の変異は、マウスにおいて、治療薬の血清半減期を最大９日またはそれ以上まで延長することができる。

【0151】

[00169]いくつかの態様において、１以上の変異は、治療薬の血清半減期を、少なくと
も約７日～約３０日またはそれ以上延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、治療薬の血清半減期を少なくとも約７日延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、治療薬の血清半減期を最大約３０日延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、治療薬の血清半減期を、約７日～約８日、約７日～約９日、約７日～約１０日、約７日～約１５日、約７日～約２０日、約７日～約２５日、約７日～約３０日、約８日～約９日、約８日～約１０日、約８日～約１５日、約８日～約２０日、約８日～約２５日、約８日～約３０日、約９日～約１０日、約９日～約１５日、約９日～約２０日、約９日～約２５日、約９日～約３０日、約１０日～約１５日、約１０日～約２０日、約１０日～約２５日、約１０日～約３０日、約１５日～約２０日、約１５日～約２５日、約１５日～約３０日、約２０日～約２５日、約２０日～約３０日、または約２５日～約３０日、延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１５日間、約２０日間、約２５日間、または約３０日間、延長することができる。いくつかの態様において、１以上の変異は、治療薬の血清半減期を、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１５日、約２０日、約２５日、または約３０日、延長することができる。

【0152】

[00170]いくつかの態様において、ＩｇＡ定常領域は、１６６位に変異を含有する。変
異は、非保存的変異であることができる。例えば、変異は、１６６位のアスパラギンをグリシンまたはグリシン相同体で置換することを含むことができる。いくつかの場合において、１６６位のアミノ酸置換は、治療薬の血清半減期を、グリシンでの置換と同等またはそれよりも長く延長する。治療薬は、１６６位にアスパラギンを含む対応する治療薬よりも長い半減期を有することができる。

【0153】

[00171]いくつかの場合において、ＩｇＡ定常領域は、３３７位に変異を含有する。変
異は、非保存的変異であることができる。例えば、変異は、３３７位のアスパラギンをトレオニンまたはトレオニン相同体で置換することを含むことができる。特定の態様において、３３７位のアミノ酸置換は、治療薬の血清半減期を、アスパラギンでの置換と同等またはそれよりも長く延長する。いくつかの態様において、治療薬は、３３７位にアスパラギンを含む対応する治療薬よりも長い半減期を有する。

【0154】

[00172]いくつかの態様において、ＩｇＡ定常領域は、３３８位に変異を含有する。変
異は、非保存的変異であることができる。例えば、変異は、３３８位のイソロイシンをロイシンまたはロイシン相同体で置換することを含むことができる。特定の場合において、３３８位のアミノ酸置換は、前記治療薬の血清半減期を、イソロイシンでの置換と同等またはそれよりも長く延長する。いくつかの例において、治療薬は、３３８位にイソロイシンを含む対応する治療薬よりも長い半減期を有する。

【0155】

[00173]いくつかの態様において、ＩｇＡ定常領域は、３３９位に変異を含有する。変
異は、非保存的変異であることができる。例えば、変異は、３３９位のトレオニンをセリンまたはセリン相同体で置換することを含むことができる。いくつかの場合において、治療薬は、３３９位にトレオニンを含む対応する治療薬よりも長い半減期を有する。

【0156】

[00174]特定の態様において、ＩｇＡ定常領域は、１以上のグリコシル化部位を欠く。
いくつかの場合において、ＩｇＡ定常領域は、１以上のアルブミン結合ドメインを含む。特定の場合において、１以上のアルブミン結合ドメインは、前記ＩｇＡ定常領域の軽鎖または重鎖に融合される。いくつかの態様において、１以上のアルブミン結合ドメインは、治療薬の血清半減期を延長する。いくつかの場合において、治療薬は、１以上のアルブミン結合ドメインを含まない対応する治療薬よりも長い半減期を有する。

【0157】

[00175]安定性を増大させた抗体治療薬の開発は、治療薬の活性をそのままで維持しつ
つ、治療薬の保存寿命を延長することができるので望ましい。いくつかの態様において、本明細書で提供される治療薬は、ＩｇＧ分子と同じか、それよりも良好な安定性を有する。いくつかの場合において、治療薬の安定性は、変異を導入することによって改善される。いくつかの態様において、ＩｇＡ定常領域は、２２１位に変異を含有する。変異は、非保存的変異であることができる。例えば、変異は、２２１位のプロリンをアルギニンまたはアルギニン相同体で置換することを含むことができる。いくつかの例において、アミノ酸置換によって、前記治療薬の安定性は、２２１位にプロリンを含む対応する治療薬よりも高くなる。

【0158】

[00176]ヒト抗体のさらなる固有の生物物理学的特性は、凝集する傾向である。抗体凝
集は、物理的不安定性のより一般的な発現である。タンパク質凝集体は一般に、エピトープの多様性および／または構造変化に起因して、低下した活性と、より重要なことには、より大きな免疫原性の可能性を有する。免疫グロブリン凝集体は、重篤な腎不全およびアナフィラキシー様反応、例えば、頭痛、発熱、および悪寒を引き起こすことが知られている。したがって、抗体治療薬において、凝集を減少させることが有利である。これに加えて、市販の静注用免疫グロブリン製品中の凝集体レベルは、世界保健機構（ＷＨＯ）基準
に基づき５％未満に制限されている。

【0159】

[00177]本明細書中に、減少した凝集を含む治療薬を提供する。いくつかの態様におい
て、本明細書で提供される治療薬は、ＩｇＧ分子の凝集と比較して減少した凝集を有する。いくつかの態様において、本明細書で提供される治療薬は、ＩｇＧ分子と同じ、またはそれよりも良好な凝集傾向を有する。いくつかの場合において、治療薬の凝集傾向は、変異を導入することによって改善される。いくつかの態様において、ＩｇＡ定常領域は、３１１位に変異を含有する。変異は、非保存的突然変異であることができる。例えば、変異は、３１１位のシステインをセリンまたはセリン相同体で置換することを含むことができる。いくつかの例において、治療薬は、３１１位にシステインを含む対応する治療薬と比較して、減少した凝集を有する。

【0160】

[00178]いくつかの場合において、治療薬の凝集傾向は、欠失を導入することによって
改善される。いくつかの場合において、ＩｇＡ定常領域は、４１７位に欠失を含有する。いくつかの場合において、４７１位のシステインの欠失は、治療薬の凝集傾向を低下させることができる。特定の例において、治療薬は、４７１位の欠失を含まない対応する治療薬と比較して、低下した凝集を有する。

【0161】

[00179]いくつかの態様において、本明細書で提供される治療薬は、少なくとも約０．
１％～最大約５％の範囲の凝集体レベルを有する。いくつかの態様において、本明細書で提供される治療薬は、少なくとも約０．１％の範囲の凝集体レベルを有する。いくつかの態様において、本明細書で提供される治療薬は、最大約５％の範囲の凝集体レベルを有する。いくつかの態様において、本明細書に提供される治療薬は、約０．１％～約０．５ ％、約０．１％～約１％、約０．１％～約２％、約０．１％～約３％、約０．１％～約４％、約０．１％～約５％、約０．５％～約１％、約０．５％～約２％、約０．５％～約３％、約０．５％～約４％、約０．５％～約５％、約１％～約２％、約１％～約３％、約１％～約４％、約１％～約５％、約２％～約３％、約２％～約４％、約２％～約５％、約３％～約４％、約３％～約５％、または約４％～約５％の範囲の凝集体レベルを有する。いくつかの態様において、本明細書で提供される治療薬は、約０．１％、約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、または約５％の範囲の凝集体レベルを有する。

【0162】

[00180]本明細書中に開示される治療薬は、１以上の天然に存在するアミノ酸の代わり
に合成アミノ酸を含んでいてもよい。このような合成アミノ酸は当分野で公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－およびトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリン β－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、およびα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンを包含する。

【0163】

[00181]「多重特異性抗体」は、異なる構造の少なくとも２つの標的、例えば、２つの
異なる抗原、同じ抗原上の２つの異なるエピトープ、またはハプテンおよび／または抗原もしくはエピトープに、同時に結合することができる抗体である。「多価抗体」は、同じまたは異なる構造の少なくとも２つの標的に同時に結合することができる抗体である。価
数は、抗体が単一の抗原またはエピトープに対してどれだけの結合アームまたは部位を有するか、すなわち、一価、二価、三価または多価を示す。抗体の多価性とは、抗体が抗原に結合する際に複数の相互作用を利用することができ、したがって、抗原への結合の結合活性が増大することを意味する。特異性は、抗体が結合することができる抗原またはエピトープの数、すなわち、単一特異性、二重特異性、三重特異性、多重特異性を示す。これらの定義を用いると、自然抗体、例えばＩｇＡは、２つの結合アームを有するので二価であるが、１つのエピトープに結合するので単一特異性である。多重特異性、多価抗体は、異なる特異性の１より多くの結合領域を有する構築物である。例えば、本明細書中に開示される二重特異性抗体構築物は、ＣＤ４７結合領域および抗原結合領域を有する。

【0164】

[00182]「二重特異性抗体」は、異なる構造の２つの標的に同時に結合することができ
る抗体である。二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）および二重特異性抗体フラグメント（ｂｓＦａｂ）は、例えばＣＤ４７に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、疾患細胞、組織、器官または病原体、例えば腫瘍関連抗原によって産生されるかまたはそれに関連する抗原に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有することができる。さまざまな二重特異性抗体を、分子工学を用いて生産することができる。

【0165】

[00183]二重特異性抗体構築物、または本明細書中に記載される組成物は、投与される
量が生理学的に有意である場合、「治療有効量」で投与されると言われる。薬剤は、その存在がレシピエント被験体の生理機能に検出可能な変化をもたらす場合、生理学的に有意である。特定の態様において、本明細書に開示される二重特異性抗体構築物は、その存在が抗腫瘍応答を引き起こすか、または感染性疾患状態の徴候および症状を軽減する場合、生理学的に有意である。生理学的に有意な効果は、標的細胞の成長阻害または死をもたらすレシピエント被験体における体液性および／または細胞性免疫応答の惹起であることもできる。

【0166】

[00184]用語「リンカー」は、ペプチド結合によって接合された２以上のアミノ酸残基
を含み、１以上の抗原結合部分または可変ドメインを連結するために使用されるポリペプチドを示すために用いられる。このようなリンカーポリペプチドは、当分野で周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅ
ｔ ａｌ．（１９９４） Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３参照）。いくつかの態様において、リンカーペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、リンカーペプチドは、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0167】

[00185]「Ｆｖ」または「Ｆｖフラグメント」は、免疫グロブリンの「シングルアーム
」の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）および重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のみからなる。したがって、「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。「二本鎖」Ｆｖフラグメントは、密接で非共有結合的に会合している１つの重鎖可変領域と１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ種（ｓｃＦｖ）は免疫グロブリンのＶＨおよびＶＬドメインを包含し、これらのドメインは、リンカーペプチドによって互いに共有結合して、一本鎖ポリペプチド中に存在する。典型的には、ｓｃＦｖフラグメントにおいて、軽鎖および重鎖の可変ドメインは二本鎖Ｆｖ種と類似の二量体構造で会合する。一本鎖Ｆｖフラグメントにおいては、一本鎖ポリペプチドのＮ末端に配置された軽鎖の可変ドメイン、続いてリンカー、そして、ポリペプチド鎖のＣ末端に配置された重鎖の可変ドメインを有するか、あるいはその逆で、重鎖の可変ドメインがＮ末端に配置
され、軽鎖の可変ドメインがＣ末端に配置され、リンカーペプチドがその間に配置されているかのいずれかであることが可能である。リンカーペプチドは、当分野で公知の任意のフレキシブルリンカー、例えば、グリシンおよびセリン残基から作製されるものであることができる。保存されたフレームワーク領域にジスルフィド結合を導入することによって、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のドメイン会合をさらに安定化することも可能である（Ｒｅｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｖ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｉｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ ｂｙ
ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄｓ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９４，３３，６５５１－５４５９参照）。このようなｓｃＦｖフラグメントは、ジスルフィド安定化ｓｃＦｖフラグメント（ｄｓ－ｓｃＦｖ）としても知られている
ＣＤ４７への結合
[00186]ＣＤ４７およびそのフラグメントに結合する二重特異性抗体構築物は、ＣＤ４
７の機能的活性を調節、遮断、阻害、低減、拮抗、中和またはその他の方法で妨害するように働く。ＣＤ４７の機能的活性は、非限定的な例として、ＳＩＲＰαとの相互作用を包含する。抗体の存在下でのＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用のレベルが、本明細書に記載の二重特異性抗体との結合の非存在下でのＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用のレベルと比較して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％低下した場合、抗体は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用を完全に調節し、遮断し、阻害し、低減し、拮抗し、中和し、またはその他の方法で妨害すると考えられる。二重特異性抗体は、抗体の存在下でのＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用のレベルが、本明細書に記載される二重特異性抗体との結合の非存在下でのＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用のレベルと比較して、９５％未満、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％または９０％低下した場合に、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用を部分的に調節、遮断、阻害、低減、拮抗、中和またはその他の方法で妨害すると考えられる。

【0168】

[00187]本開示は、１つの結合領域がＣＤ４７に特異的であり、他の結合領域が抗原（
例えば、ＣＤ２０のような腫瘍抗原）に特異的である、抗体構築物を提供する。いくつかの態様において、構築物は、好中球上のＦｃ受容体に結合することができる機能性ＩｇＡ
Ｆｃ部分を包含する。二重特異性抗体の抗原結合領域は、ＣＤ４７結合領域を抗原提示細胞に標的化する。ＩｇＡ Ｆｃ部分は好中球と結合する。ＣＤ４７アームは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断、阻害、またはその他の方法で低減し、それにより、抗原に対する好中球媒介免疫応答を誘導する。いくつかの態様において、二重特異性抗体の抗原結合領域は、抗ＣＤ２０抗体配列またはその抗原結合フラグメントを包含する。本明細書中の構築物に使用するための抗原結合領域は、本開示の他の箇所に記載されるように、任意の抗原を標的化することができる。このような抗原結合領域は、例えば表Ｂに示すような公知の抗体からも得ることができる。

【0169】

[00188]いくつかの態様において、抗原結合領域の親和性は、二重特異性構築物におい
て増大する。いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域の親和性は、二重特異性構築物において低下する。例えば、二重特異性抗体では、抗原結合領域の親和性が増大し、ＣＤ４７結合領域の親和性が低下する。抗原結合領域およびＣＤ４７結合領域の結合親和性におけるこれらの差異により、例えば、標的細胞または標的細胞群に対する選択性を改善することが可能になる。本明細書中の構築物で使用するためのＣＤ４７結合領域は、ｄｅ ｎｏｖｏで設計されることができ、または、例えば、表Ａに示すような公知の抗体からも得ることができる。

【0170】

[00189]いくつかの態様において、抗原結合領域の親和性は、少なくとも約２、４、５
、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１０
０倍増大する。いくつかの態様において、増大は、単一特異性抗原結合抗体に関連する。いくつかの態様において、増大は、二重特異性抗体におけるＣＤ４７に対するＣＤ４７結合領域の結合親和性に関連する。いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域の親和性は、少なくとも約２、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００倍低下する。いくつかの態様において、低下は、単一特異性ＣＤ４７結合抗体に関連する。いくつかの態様において、低下は、二重特異性抗体における抗原に対する抗原結合領域の結合親和性に関連する。

【0171】

抗体の作製方法
一般的抗体技術
[00190]実質的に任意の標的抗原に対するモノクローナル抗体を調製するための技術は
、当分野で周知である。例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５），およびＣｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（編集）， ＣＵＲ
ＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．１，２．５．１～２．６．７頁（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ １９９１）参照。簡潔には、モノクローナル抗体は、抗原を含む組成物をマウスに注射し、脾臓を除去してＢリンパ球を得、Ｂリンパ球を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを産生し、ハイブリドーマをクローニングし、抗原に対する抗体を産生する陽性クローンを選択し、抗原に対する抗体を産生するクローンを培養し、ハイブリドーマ培養物から抗体を単離することによって、得ることができる。

【0172】

[00191]ＭＡｂは、さまざまな十分に確立された技術によって、ハイブリドーマ培養物
から単離および精製することができる。このような単離技術としては、プロテインＡセファロースでのアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。例えば、２．７．１～２．７．１２頁および２．９．１～２．９．３頁のＣｏｌｉｇａｎ参照。同様に、Ｂａｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ（ＩｇＧ），”， ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．１０
，７９～１０４頁（Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９２）参照。

【0173】

[00192]最初に体を免疫原に対して抗惹起した後、抗体を配列決定し、続いて組換え技
術によって調製することができる。マウス抗体および抗体フラグメントのヒト化およびキメラ化は、当業者に周知である。ヒト化抗体、キメラ抗体またはヒト抗体に由来する抗体成分の使用は、マウス定常領域の免疫原性に関連する潜在的な問題を取り除く。

【0174】

キメラ抗体
[00193]キメラ抗体は、ヒト抗体の可変領域が、例えば、マウス抗体の相補性決定領域
（ＣＤＲ）などのマウス抗体の可変領域によって置換されている、組換えタンパク質である。キメラ抗体は、被験体に投与された場合、低減した免疫原性および増大した安定性を示す。マウス免疫グロブリン可変ドメインをクローニングするための一般的な技術は、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：３８３３（１９８９）に開示されている。キメラ抗体を構築するための技術は
、当業者に周知である。一例として、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
１３：４６９（１９９４）は、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体であるマウスＬＬ２のＶκおよびＶＨドメインをコードするＤＮＡ配列を、それぞれのヒトκおよびＩｇＧ１定常領域ドメインと組み合わせることによって、ＬＬ２キメラを産生した。

【0175】

ヒト化抗体
[00194]ヒト化ＭＡｂを産生するための技術は当分野で周知である（例えば、Ｊｏｎｅ
ｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６），Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８），Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８），Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ
．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５（１９９２），Ｓａｎｄｈｕ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１２：４３７（１９９２），およびＳｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１５０：２８４４（１９９３）参照）。キメラまたはマウスモノクローナル抗体は、マウス免疫グロブリンの可変重鎖および軽鎖由来のマウスＣＤＲを、ヒト抗体の対応する可変ドメインに移入することによって、ヒト化することができる。キメラモノクローナル抗体中のマウスフレームワーク領域（ＦＲ）もまた、ヒトＦＲ配列で置換される。マウスＣＤＲをヒトＦＲに単に移入することは、しばしば、抗体親和性の低減またはさらには損失をもたらすので、マウス抗体の元の親和性を回復するために、さらなる改変が必要とされ得る。これは、ＦＲ領域中の１以上のヒト残基をマウス対応物で置換して、そのエピトープに対して良好な結合親和性を有する抗体を得ることによって、達成することができる。例えば、Ｔｅｍｐｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６（１９９１）およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８）参照。一般に、マウス対応物
とは異なり、そして１以上のＣＤＲアミノ酸残基に近接または接触して位置するヒトＦＲアミノ酸残基は、置換の候補である。

【0176】

ヒト抗体
[00195]コンビナトリアルアプローチまたはヒト免疫グロブリン遺伝子座で形質転換さ
れたトランスジェニック動物のいずれかを使用して完全ヒト抗体を産生するための方法は、当分野で公知である（例えば、Ｍａｎｃｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｎｅｗ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ２７：３１５－２８；ＣｏｎｒａｄおよびＳｃｈｅｌｌｅｒ，２０
０５，Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ．８：１１７－２６；ＢｒｅｋｋｅおよびＬｏｓｅｔ，２００３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｍａｃｏｌ．３：５４４－５０）。完全ヒト抗体はまた、遺伝的または染色体トランスフェクション法、ならびにファージディスプレイ技術によって構築することができ、これらのすべては、当分野で公知である。例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３（１９９０）参照。このような完全ヒト抗体は、キメラまたはヒト化抗体よりもさらに少ない副作用を示し、ｉｎ ｖｉｖｏで実質的に内因性のヒト抗体として機能することが予想される。特定の態様において、特許請求される方法および手順は、このような技術によって産生されるヒト抗体を利用することができる。

【0177】

[00196]１つの代替法において、ファージディスプレイ技術を、ヒト抗体を生じさせる
ために使用してもよい（例えば、Ｄａｎｔａｓ－Ｂａｒｂｏｓａ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｇｅｎｅｔ．Ｍｏｌ．Ｒｅｓ．４：１２６－４０）。ヒト抗体は正常ヒトから、または癌のような特定の疾患状態を示すヒトから、生じさせることができる（Ｄａｎｔａｓ－Ｂａｒｂｏｓａ ｅｔ ａｌ．，２００５）。疾患個体からヒト抗体を構築する利点は、循環抗体レパートリーが疾患関連抗原に対する抗体に偏り得ることである。

【0178】

[00197]この方法論の非限定的な一例において、Ｄａｎｔａｓ－Ｂａｒｂｏｓａ ｅｔ
ａｌ．（２００５年）は、骨肉腫患者由来のヒトＦａｂ抗体フラグメントのファージディスプレイライブラリーを構築した。一般に、全ＲＮＡは、循環血液リンパ球から得た（同上）。組換えＦａｂをμ、γおよびκ鎖抗体レパートリーからクローニングし、ファージディスプレイライブラリーに挿入した（同上）。ＲＮＡをｃＤＮＡに変換し、重鎖および軽鎖免疫グロブリン配列に対する特異的プライマーを使用してＦａｂ ｃＤＮＡライブラリーの作製に使用した（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７）。ライブラリー構築は、Ａｎｄｒｉｓ－Ｗｉｄｈｏｐｆ ｅｔ
ａｌ．（２０００，ＰＨＡＧＥ ＤＩＳＰＬＡＹ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．（編集），第１版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ． ｐｐ．９．１～９．２２）に従って行った。 最終的なＦａｂフラグメントを制限エンドヌクレアーゼで消化し、バクテリオファージゲノムに挿入してファージディスプレイライブラリーを作製した。このようなライブラリーは、当分野で公知のように、標準的なファージディスプレイ法によってスクリーニングすることができる（例えば、ＰａｓｑｕａｌｉｎｉおよびＲｕｏｓｌａｈｔｉ，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ ３８０：３６４－３６６；Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ，１９９９，Ｔｈｅ Ｑｕａｒｔ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４３：１５９－１６２参照）。

【0179】

[00198]ファージディスプレイは、さまざまなフォーマットで実施することができる。
それらの概説に関しては、例えば、ＪｏｈｎｓｏｎおよびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５５６４－５７１（１９９３）を参照されたい。ヒト抗体はまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化したＢ細胞により生成することもできる。米国特許第５５６７６１０号および第５２２９２７５号参照。これらの特許の全体を参照により本明細書中で援用する。当業者なら、これらの技術は例示的であり、ヒト抗体または抗体フラグメントを作製およびスクリーニングするための任意の公知の方法を利用してもよいことを理解するであろう。

【0180】

[00199]他の代替法では、ヒト抗体を産生するために遺伝子操作されたトランスジェニ
ック動物を、標準的な免疫化プロトコルを使用して実質的に任意の免疫原性標的に対する抗体を産生するために、使用することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１
３（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６（１９
９４）、およびＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．６：５７９（１９９４）によって開示されている。このようなシステムの非限定的な例は、Ａｂｇｅｎｉｘ（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）からのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）（例えば、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１１－２３）である。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）および同様の動物では、マウス抗体遺伝子が不活性化され、機能的なヒト抗体遺伝子に置き換わっているが、残りのマウス免疫系はそのまま残っている。

【0181】

[00200]ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）を、アクセサリー遺伝子および調節配列に沿
って可変領域配列の大部分を包含するヒトＩｇＨおよびＩｇカッパ遺伝子座の一部を含有する生殖細胞系構成ＹＡＣ（酵母人工染色体）で形質転換した。ヒト可変領域レパートリーを用いて抗体産生Ｂ細胞を生成することができ、これを、公知の技術によってハイブリドーマに処理することができる。標的抗原で免疫化されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）は正常な免疫応答によってヒト抗体を産生し、これは、上記標準的技術によって採取および／または産生することができる。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）のさまざまな株が利用可能であり、その各々は、異なるクラスの抗体を産生することができる。トランスジェニック的に産生されたヒト抗体は、正常なヒト抗体の薬物動態学的特性を保持しながら、治療可能性を有することが示されている（Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９）。当業者なら、特許請求される組成物および方法がＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系の使用に限定されず、ヒト抗体を産生するために遺伝子操作された任意のトランスジェニック動物を利用してもよいことを、理解するであろう。

【0182】

抗体のクローニングおよび産生
[00201]キメラ抗体またはヒト化抗体の産生などのさまざまな技術は、抗体のクローニ
ングおよび構築の手順を包含することができる。目的の抗体に対する抗原結合Ｖκ（可変軽鎖）およびＶＨ（可変重鎖）配列は、さまざまな分子クローニング手順、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ、５’－ＲＡＣＥ、およびｃＤＮＡライブラリースクリーニングによって得るこ
とができる。マウス抗体を発現する細胞由来の抗体のＶ遺伝子は、ＰＣＲ増幅によってクローニングされ、配列決定され得る。その真正性を確認するために、クローニングしたＶＬおよびＶＨ遺伝子を、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：３８３３（１９８９））によって記載されているように、細胞培養においてキメラ抗体として発現させることができる。次いで、Ｖ遺伝子配列に基づき、ヒト化抗体を、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２：１４１３（１９９５））によって記載されるように設計および構築することができる。

【0183】

[00202]ｃＤＮＡは、一般的な分子クローニング技術によって、マウス抗体を産生する
任意の公知のハイブリドーマ株またはトランスフェクト細胞株から調製することができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，第２版（１９８９））。抗体のＶκ配列は、プライマーＶＫ１ＢＡＣＫおよびＶＫ１ＦＯＲ（Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９）またはＬｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１５：２８６（１９９３））によって記載されている伸長プライマーセットを使用して、増幅することができる。ＶＨ配列は、プライマー対ＶＨ１ＢＡＣＫ／ＶＨ１ＦＯＲ（Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９）、またはＬｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１３：４６９（１９９４））によって記載されるマウスＩｇＧの定常領域にアニーリングするプライマーを用いて、増幅することができる。ヒト化Ｖ遺伝子は、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２：１４１３（１９９５））によって記載されるように、長いオリゴヌクレオチド鋳型合成およびＰＣＲ増幅の組み合わせによって構築することができる。

【0184】

[00203]ＶκのためのＰＣＲ産物は、ステージングベクター(staging vector)にサブク
ローニングすることができる。ステージングベクターは、ｐＢＲ３２７に基づくステージングベクターであるＶＫｐＢＲなどであり、Ｉｇプロモーター、シグナルペプチド配列および好都合な制限部位を含有する。ＶＨのＰＣＲ産物は、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔに基づくＶＨｐＢＳなど同様のステージングベクターにサブクローニングすることができる。プロモーターおよびシグナルペプチド配列と共にＶκおよびＶＨ配列を含有する発現カセットを、ＶＫｐＢＲおよびＶＨｐＢＳから切り出し、適切な発現ベクター、例えば、それぞれ、ｐＫｈおよびｐＧ１ｇに連結することができる（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１３：４６９（１９９４））。発現ベクターを適切な細胞に同時トランスフェクトし、上清液を、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体の産生についてモニタリングすることができる。あるいは、ＶκおよびＶＨ発現カセットを切り出し、Ｇｉｌｌｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１（１９８９）によって記載され、また、Ｌｏｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，８０：２６６０（１９９７）に示されているように、単一の発現ベクター、例えばｐｄＨＬ２中にサブクローニングすることができる。

【0185】

[00204]他の態様において、発現ベクターは、無血清培地中でのトランスフェクション
、成長および発現に予め適合させた宿主細胞にトランスフェクトすることができる。使用することができる代表的な細胞株としては、Ｓｐ／ＥＥＥ、Ｓｐ／ＥＳＦおよびＳｐ／ＥＳＦ－Ｘ細胞株が挙げられる（例えば、米国特許第７５３１３２７号；第７５３７９３０号および第７６０８４２５号参照；それぞれの実施例の節を、本明細書中で参考として援用する）。これらの代表的な細胞株は、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞株に基づいており、変異Ｂｃｌ－ＥＥＥ遺伝子がトランスフェクトされ、メトトレキサートに暴露してトランスフェクトされた遺伝子配列を増幅し、タンパク質発現のために無血清細胞株に予め適合させる。

【0186】

抗体フラグメント
[00205]特異的エピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術によって生成す
ることができる。抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどのような抗体の抗原結合部分である。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは抗体分子のペプシン消化によって生成することができ、Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって生成することができる。あるいは、Ｆａｂ’発現ライブラリーを構築して（Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７４－１２８１）、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ’フラグメントの迅速かつ容易な同定を可能にすることができる。Ｆ（ａｂ）２フラグメントは、抗体のパパイン消化によって生成することができる。

【0187】

[00206]単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）は、ＶＬドメインおよびＶＨドメインを含む。ＶＬ
およびＶＨドメインは会合して標的結合部位を形成する。これらの２つのドメインは、ペプチドリンカー（Ｌ）によってさらに共有結合される。ｓｃＦｖ分子を作製し、適切なペプチドリンカーを設計するための方法は、米国特許第４７０４６９２号；米国特許第４９４６７７８号；ＲａａｇおよびＷｈｉｔｌｏｗ，ＦＡＳＥＢ ９：７３－８０（１９９５）ならびにＢｉｒｄおよびＷａｌｋｅｒ，ＴＩＢＴＥＣＨ，９：１３２－１３７（１９９１）に記載されている。

【0188】

[00207]単一ドメイン抗体（ＤＡＢまたはＶＨＨ）を産生するための技術はまた、例え
ば、本明細書中で参考として援用するＣｏｓｓｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００６，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｐｕｒｉｆ ５１：２５３－２５９）に開示されるように、当該分野で公知である。単一ドメイン抗体は、例えば、標準的な免疫化技術によってラクダ、アルパカまたはラマから得ることができる。（例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＢＳ ２６：２３０－２３５，２００１；Ｙａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８１：１６１－７５，２００３；Ｍａａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３２４：１３－２５，２００７参照）。ＶＨＨは、強力な抗原結合能力を有することができ、従来のＶＨ－ＶＬ対にはアクセスできない(inacessible)新規エピトープと相互作用することができる。（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎ
ｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）。アルパカ血清ＩｇＧは、約５０％のラクダ科重鎖のみのＩｇＧ抗体（ＨＣＡｂ）を含有する（Ｍａａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００７）。アルパカはＴＮＦ－αのような公知の抗原で免疫化することができ、標的抗原に結合して中和するＶＨＨを単離することができる（Ｍａａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００７）。実質的にすべてのアルパカＶＨＨコード配列を増幅するＰＣＲプライマーが同定されており、アルパカＶＨＨファージディスプレイライブラリーを構築するために使用することができ、このライブラリーは、当分野で周知の標準的バイオパニング技術による抗体フラグメント単離に用いることができる（Ｍａａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００７）。特定の態様において、抗膵臓癌ＶＨＨ抗体フラグメントは、特許請求される組成物および方法において利用することができる。

【0189】

[00208]抗体フラグメントは、全長抗体のタンパク質分解性加水分解によって、または
Ｅ．Ｃｏｌｉもしくは該フラグメントをコードするＤＮＡの他の宿主における発現によって、調製することができる。抗体フラグメントは、従来法による全長抗体のペプシンまたはパパイン消化によって得ることができる。これらの方法は、例えば、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇの米国特許第４０３６９４５号および第４３３１６４７号、ならびにそれらに含まれる参考文献に記載されている。Ｎｉｓｏｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．８９：２３０（１９６０）；Ｐｏｒｔｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．７３：１１９（１９５９）、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ ＶＯＬ．１、４２２頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９６７）、ならびにＣｏｌｉｇａｎ、２．８．１～２．８．１０および２．１０．～２．１０．４頁も参照されたい。

【0190】

二重特異性抗体
[00209]二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する
抗体である。この場合、結合特異性の１つは、標的、例えば、ＣＤ４７またはその任意のフラグメントに対するものである。第２の結合標的は任意の他の抗原であり、有利には、細胞表面タンパク質または受容体または受容体サブユニットである。

【0191】

[00210]二重特異性抗体の作製方法は当分野で公知である。従来、二重特異性抗体の組
換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づいており、これに関し、２つの重鎖は、異なる特異性を有する（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７－５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の分類はランダムなため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生し、そのうちの１つのみが正しい二重特異性構造を有する。正確な分子の精製は、通常、アフィニティークロマトグラフィー工程によって行われる。同様の手順がＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ
Ｊ．，１０：３６５５－３６５９（１９９１）に開示されている。

【0192】

[00211]カッパラムダ抗体などの二重特異性抗体は、ＷＯ２０１２／０２３０５３に開
示されているものを含む、さまざまな当技術分野で認識されている技術のいずれかを使用して作製することができる、上記特許の内容を、全体として本明細書中で参考として援用する。

【0193】

[00212]二重特異性抗体を産生する他の態様において、望ましい結合特異性を有する抗
体可変ドメイン（抗体－抗原結合部位）を、免疫グロブリン定常ドメイン配列に連結することができる。この融合は、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合であることが好ましい。融合体の少なくとも１つに存在する軽鎖の結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体および所望により免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生物に同時トランスフェクトする。二重特異性抗体を生成するさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。

【0194】

[00213]いくつかの態様において、本明細書中の構築物中の一対の抗体分子間の界面は
、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体のパーセンテージを最大にするように操作することができる。好ましい界面は、ＩｇＡ抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を包含する。この方法では、第１の抗体分子の界面からの１以上の小さなアミノ酸側鎖を、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換する。大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置換することによって、大きな側鎖（１以上）と同一または同様のサイズの補償的「キャビティー」が、第２の抗体分子の界面上に作り出される。これは、ホモ二量体のような望ましくない他の最終産物よりもヘテロ二量体の収率を増加させる機構を提供する。

【0195】

[00214]抗体フラグメントから二重特異性抗体を生成するための技術は、文献に記載さ
れている。例えば、二重特異性抗体は化学的連結を用いて調製することができる。生じた二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として用いることができる。

【0196】

[00215]組換え細胞培養物から直接的に二重特異性抗体フラグメントを作成し、それを
単離するさまざまな技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを用いて産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結した。抗体ホモ二量体をヒンジ領域で還元してモノマーを形成した後、再酸化して抗体ヘテロ二量体を形成する。この方法は、抗体ホモ二量体の産生にも利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
９０：６４４４－６４４８（１９９３）によって記載された「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製するための代替的機構を提供した。フラグメントは、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続されている重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは、もう１つのフラグメントの相補的ＶＬおよびＶＨドメインと強制的に対合し、それにより、２つの抗原－結合部位を形成する。単一鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用によって二重特異性抗体フラグメントを作成するための他の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。

【0197】

[00216]２を超える価数を持つ抗体が考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製する
ことができる。Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。代表的な二重特異性抗体は２つの異なるエピトープに結合することができ、その少なくとも１つは本発明のタンパク質抗原に由来する。あるいは、免疫グロブリン分子の抗抗原アームを、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、またはＢ７）のような白血球上のトリガー分子、またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）のようなＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃ受容体に結合するアームと組み合わせて、特定の抗原を発現する細胞に細胞防御機構を集中させることができる。二重特異性抗体を用いて、特定の抗原を発現する細胞に細胞毒性薬を誘導することもできる。これらの抗体は、抗原結合アームと、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ、またはＴＥＴＡなどの細胞毒性薬または放射性核種キレート剤に結合するアームとを有する。対象となる他の二重特異性抗体は、本明細書中に記載されるタンパク質抗原に結合し、そしてさらに組織因子（ＴＦ）に結合する。

【0198】

[00217]抗体フラグメントの化学的架橋、強制的ヘテロ二量体化、クアドローマ技術、
ポリペプチドリンカーを介した抗体フラグメントの融合、および単一ドメイン抗体の使用などのいくつかの戦略が、このような二重特異性分子を生成するために使用されてきた。組換えＤＮＡ技術の利用可能性は、多数の二重特異性抗体フォーマットの生成をもたらした（例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ＪＢ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ９：６１７－６２１参照）。リンカーおよび変異は、しばしば抗体の異なる領域に導入されて、ヘテロ二量体を強制的に形成するか、または異なる結合部分を単一分子に接続している。

【0199】

化学的架橋
[00218]２つの抗体を共有結合させるための化学的架橋試薬の使用は、概念的に簡単な
アプローチである。酵素消化によってそれぞれの親抗体から生成された抗体フラグメント、または組換え技術によって生成された抗体フラグメントを、二官能性試薬を使用して接合させる（Ｇｌｅｎｎｉｅ ＭＪ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９２；１７５：２１７－２２５）。二重特異性種はホモ二量体から精製されなければならず、修飾工程はタンパク質の完全性および安定性を変化させる可能性があるので、生成物の均一性はこのアプローチの主な限界である。

【0200】

クアドローマ
[00219]クアドローマおよびトリオーマは、それぞれ、２つのハイブリドーマまたは１
つのハイブリドーマのいずれかをＢリンパ球と融合させることによって生成することがで
きる（Ｓｕｒｅｓｈ ＭＲ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９８６；１２１：２１０－２２８）。この場合、２つの重鎖および２つの軽鎖の同時発現は、１０の抗体の組合せのランダムアセンブリーをもたらし、所望の二重特異性抗体は、分泌された抗体のごく一部を示すに過ぎない。二重特異性抗体は、クロマトグラフィー技術の組み合わせを用いて精製しなければならず、産生収率が劇的に低下する。主要な制限は、クアドローマはげっ歯類起源の二重特異性抗体をもたらし、免疫原性の問題により治療可能性が制限される点である。

【0201】

組換え二重特異性抗体
[00220]二重特異性抗体フォーマットの大部分は、ポリペプチドリンカーを介して接続
されるビルディングブロックとしてｓｃＦｖまたはＦａｂフラグメントのような抗体フラグメントを使用する遺伝子工学技術によって、生成することができる。連結された抗体フラグメントに基づくフォーマットとしては、タンデムｓｃＦｖ（ＢｉＴＥ）、ダイアボディおよびタンデム－ダイアボディが挙げられる（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ＳＭ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２００３；２０７：３２３－３３３；Ｋｏｒｎ Ｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００２；１００：６９０－６９７）。これらの構築ブロックは、「ＩｇＡ様」分子を生じる免疫グロブリンＦｃ領域にさらに連結することができる。これらのフォーマットとしては、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムダイアボディ－Ｆｃ、タンデムダイアボディ－ＣＨ３、（ｓｃＦｖ）４－ＦｃおよびＤＶＤ－Ｉｇが挙げられる（Ｌｕ Ｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００３；２７９：２１９－２３２；Ｌｕ Ｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００５；２８０：１９６６５－１９６７２；Ｌｕ Ｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ
２００４；２７９：２８５６－２８６５；Ｗｕ Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００７ ２５：１２９０－７）。

【0202】

[00221]２つの重鎖のヘテロ二量体化の強制に基づく戦略が探求されてきた。第１のア
プローチは、「ノブ－イントゥ－ホール」という造語で表され、接触界面を改変するためにＣＨ３ドメインに変異を導入することによって、２つの異なるＩｇＧ重鎖の対合を強制することを目標とする（Ｒｉｄｇｗａｙ ＪＢ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ
１９９６；９：６１７－６２１）。大きな側鎖を有するのアミノ酸を１つの鎖上に導入して、「ノブ」を作り出した。反対に、バルキーなアミノ酸を短い側鎖を有するアミノ酸で置き換えて、他のＣＨ３ドメイン中に「ホール」を作り出した。これら２つの重鎖を同時発現させることによって、ホモ二量体形成（「ホール－ホール」または「ノブ－ノブ」）に対して９０％を超えるヘテロ二量体形成（「ノブ－ホール」）が観察された。同様の概念が、ヒトＩｇＧおよびヒトＩｇＡ配列に基づく鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ヒトＣＨ３ドメインを使用して開発された（Ｄａｖｉｓ ＪＨ ｅｔ ａｌ．，２０１０，ＰＥＤＳ ２３：１９５－２０２）。これらの操作ドメインは、２つの異なる特異性を持つことができるヘテロ二量体分子の形成をもたらす。

【0203】

[00222]最近、「ノブ・イントゥ・ホール」アプローチの改良である「ＣｒｏｓｓＭａ
ｂ」が、ＷＯ２００９／０８０２５３ Ａｌに記載されている。この方法は、「ノブ・イ
ントゥ・ホール」変異に加えて、軽鎖および重鎖ドメインのいくつかの交換を包含する。

【0204】

[00223]単一ドメインベースの抗体。ラクダ科（ラマおよびラクダ）および軟骨魚類（
テンジクザメ）の免疫系は、Ｆｃに融合した単一のＶドメインを使用し、単一のドメインが抗原に高い親和性結合を与えることができることを示している。ラクダ科、サメ、さらにはヒトのＶドメインは、抗体の代替物に相当するが、ｂｓＡｂの生成にも使用されている。これらは正統的なＩｇＧに再フォーマットすることができ、各アームは、そのＶＨまたはＶＬドメインのいずれかを介して２つの標的に結合する可能性を有する。

【0205】

[00224]本開示の二重特異性抗体は、本出願において開示されるか、またはそわなけれ
ば当分野において公知の任意のプロセスによって、作製することができる。
二重可変ドメイン免疫グロブリン
[00225]二重特異性抗体は個々にコードされたペプチドまたは「セグメント」を含むこ
とができ、これは、単一の連続鎖において、コンパクトな三次構造を含む。成分ペプチドは、自己会合してホモ多量体を形成するのではなく、むしろ相補的に会合して、親三次構造に似た安定な複合体を採用するように、それらの想定される構造において非対称であるように選択する。遺伝的レベルでは、これらのセグメントは、適した制限部位をもつ互換可能なカセットによってコードされている。これらの標準化されたカセットは、適切な発現ベクター系においてリンカーまたはヒンジを介して異なる組換えタンパク質にＣ末端またはＮ末端で融合される。ホモ二量体としてアセンブルする能力を有さないポリペプチドセグメントは、コンパクトな三次構造を有する親ポリペプチドを切断することによって誘導される。次いで、これらのポリペプチドセグメントは、遺伝子レベルで１以上の異なる機能性ドメインに融合されることができる。この時点で１以上の機能性ドメインに融合されているこれらの異なるポリペプチドセグメントは、例えば、同時発現されて、機能性ドメインに付着した天然様親構造の形成をもたらすことができる。この親構造は、元の親ポリペプチドに由来するポリペプチドセグメントの二量体化によって形成される。得られる多機能構築物は、１以上の機能性ドメインに付着したコンパクトな三次構造として現れる。いったん構造サブドメインが同定されると、タンパク質は、これらのサブドメインがそのまま維持されるような方法で解体される。本開示の一部として、ＤＮＡ配列、ベクター、好ましくはバイシストロニックベクター、ベクターカセットを作製することができ、これらは、アミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列、および所望により、本発明の多機能性ポリペプチドに含まれる少なくとも１つのさらなる（ポリ）ペプチド、および追加的に、少なくとも１つのさらなる機能性ドメインをコードするＤＮＡを挿入するための少なくとも１つの好ましくは単一のクローニング部位を含むか、あるいは、アミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列、および所望により、本発明の多機能性ポリペプチドに含まれるさらなる（ポリ）ペプチド（１以上）、および機能性ドメインをコードするＤＮＡ配列をクローニングするための適切な制限部位を含み、その結果、適切な宿主において、機能性ドメインをコードするＤＮＡ配列を前記制限部位に挿入した後にＤＮＡ配列を発現させると、本発明の多機能性ポリペプチドを形成することができることを、特徴とすることができる。前記ベクターカセットは、前記機能性ドメイン（１以上）をコードする挿入ＤＮＡ配列（１以上）と、前記二重特異性または多機能性ポリペプチドの調製に使用することができる本発明の少なくとも１つのベクターまたはベクターカセットで形質転換された宿主細胞とを含むことを特徴とする。宿主細胞は、哺乳類、好ましくはヒト、酵母、昆虫、植物または細菌、好ましくはＥ．ｃｏｌｉ細胞であることができる。二重特異性抗体は、適切な培地中で本発明の少なくとも２つの宿主細胞を培養し、これに関し、前記宿主細胞はそれぞれ、少なくとも１つのさらなる機能性ドメインに付着している前記第１および前記第２のアミノ酸配列のうちの１つのみを産生する；該アミノ酸配列を回収し；穏やかな変性条件下でそれを混合し；そして、前記アミノ酸配列からの本発明の多機能性ポリペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏでの折り畳みを可能にする；ことを含む方法によって調製され得る。本方法は、少なくとも１つのさらなる機能性ドメインに付着しているさらなるアミノ酸配列が、前記第１または第２のアミノ酸配列を産生しない少なくとも１つのさらなる宿主細胞によって産生されることを、特徴とすることができる。さらに、本方法は、少なくとも１つのさらなる機能性ドメインに付着した少なくとも１つのさらなるアミノ酸配列が、前記第１または第２のアミノ酸配列を産生する本発明の宿主細胞によって産生されることを、特徴とすることができる。

【0206】

[00226]本明細書中に記載される抗体構築物の第２または第１の部分のいずれかが２つ
の抗体可変ドメインを含む場合、これらの２つの抗体可変ドメインは、互いに会合するＶＨドメインおよびＶＬドメインであることができる。しかしながら、第２または第１の部
分のいずれかに含まれる２つの抗体可変ドメインは、互いに会合する２つのＶＨドメインまたは２つのＶＬ領域であってもよいことも企図される。第１または第２の部分の２つの抗体可変ドメインが互いに共有結合的に会合している場合、２つの抗体可変ドメインはｓｃＦｖフラグメントとして設計することができ、これは、２つのドメインが、これら２つのドメイン間の分子間会合を可能にするのに十分な長さのペプチドリンカーによって互いに分離されていることを意味する。この目的に適したリンカーの設計は、従来技術、例えば、取得特許ＥＰ６２３６７９Ｂ１、米国特許第５２５８４９８号、ＥＰ５７３５５１Ｂ１および米国特許第５５２５４９１号の従来技術に記載されている。言い換えれば、二重特異性抗体は、合計３つの抗体可変ドメインを有する構築物であることができる。抗体可変ドメインの１つは、単独で、すなわち、他の抗体可変ドメインと対合することなく、（ａ）ヒト免疫エフェクター細胞上のエフェクター抗原に特異的に結合することによってヒト免疫エフェクター細胞に、または標的細胞に、特異的に結合する。一方、残りの２つの抗体可変ドメインは、一緒に、それぞれ（ｂ）標的細胞上の標的抗原に、またはヒト免疫エフェクター細胞上のエフェクター抗原に特異的に結合することによってヒト免疫エフェクター細胞に、特異的に結合する。この場合、二重特異性抗体における３つの抗体可変ドメインの存在は、独特の利点を伴う。しばしば、標的抗原に望ましい結合特異性を示すｓｃＦｖは既に公知で最適化されており、その２つの抗体可変ドメインのうちの１つを削除することは、その結合特性を消失させるか、または少なくとも弱めるであろう。このようなｓｃＦｖは、本明細書中に記載される抗体構築物の一部を構成し得る。具体的には、このような３ドメイン抗体は、そのエフェクター抗原付与部分または標的抗原付与部分のいずれかとして、ｓｃＦｖ全体を有利に含むことができる。次いで、効果的に、これは、１つの追加的抗体可変ドメインのみをｓｃＦｖと同じポリペプチド鎖へ単純に組み込むことによって、望ましいｓｃＦｖから出発して二重特異性抗体が形成されることを可能にし、これに関し、組み込まれる１つの追加的抗体可変ドメインは、ｓｃＦｖのそれとは異なる抗原結合特異性を有する。二重特異性抗体の第１および第２の部分は、合成ポリペプチドスペーサー部分によって互いに分離されていてもよく、このスペーサー部分は、第１の部分のＣ末端を第２の部分のＮ末端と、または第２の部分のＣ末端を第１の部分のＮ末端と、共有結合的（すなわち、ペプチド結合的）に連結する。このように、これらの二重特異性抗体の部分は、Ｎ－（第１の部分）－（第２の部分）－ＣまたはＮ－（第２の部分）－（第１の部分）－Ｃのいずれかとして配置されることができる。いくつかの態様において、第２の特異性の結合部位は、重鎖または軽鎖のＮ末端またはＣ末端に、例えば、ｓｃＦｖフラグメントまたは可変単一ドメインの形態で融合されて、二重特異性四価分子を生じる。ｓｃＦｖフラグメントのｍＡｂへの融合によって生成される二重特異性分子は、高い柔軟性を示す。ＳｃＦｖ分子は、一般に産生性または抗原結合活性を損なうことなく、ｍＡｂの重鎖または軽鎖可変ドメインのＮ末端のみならずＣ末端にも連結することができる。この群の二重特異性分子はＤＶＤ－Ｉｇも包含し、これに関し、第２のＶＨおよびＶＬドメインは、ｍＡｂ、第２の特異性がＩｇＧ分子の天然結合部位に導入されるツー・イン・ワン(two-in-one)抗体、および、第２の特異性がＦｃ領域のＣＨ３ドメインに構築されるｍＡｂ２分子の重鎖および軽鎖にそれぞれ融合される。これらすべての分子の特徴は、これらの鎖の固有特性である２つの同一重鎖の二量体アセンブリーに起因する対称性である。

【0207】

[00227]重鎖ヘテロ二量体化は、荷電ＣＨ３界面を操作して静電ステアリング効果(electrostatic steering effect)を導入することによって、またはヒトＩｇＡおよびＩｇＧからの交互セグメントで構成されるＣＨ３配列での鎖交換操作ドメイン技術（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）を使用することによって、達成することができる。二重特異性ＩｇＧ様分子とは対照的に、これらの二重特異性抗体は、ＩｇＧと基本的に同一のサイズを有する二価である。Ｆｃヘテロ二量体化は近年、操作された重鎖（ＨＡ－ＴＦ Ｆｃバリアント）のＣ末端にＶＨおよびＶＬドメインを融合させる三価の二重特異性分子を生成するために施用された。５０～１００ｋＤａの範囲の分子質量を有する二重特異性抗体は、２つの抗体の可変
ドメインを組み合わせることによって生成することができる。例えば、２つのｓｃＦｖは、程度の差はあるがフレキシブルなペプチドリンカーによってタンデム配向（タンデムｓｃＦｖ、ｔａＦｖ、ｔａｓｃＦｖ）で接続されており、これは、追加的なｓｃＦｖによってさらに伸長されて、例えば、二重特異性または三重特異性のトリプルボディ(triple body)（ｓｃｔｂ）を生成することができる。ダイアボディは、ＶＨＡ－ＶＬＢおよびＶＨ
Ｂ－ＶＬＡの順序（ＶＨ－ＶＬ配向）またはＶＬＡ－ＶＨＢおよびＶＬＢ－ＶＨＡの順序（ＶＬ－ＶＨ配向）のいずれかで配置された２つの抗体の可変ドメインで構成されるヘテロ二量体分子である。１つの鎖内の２つのドメインを接続するリンカーは、約５残基であり、１つの細胞内での２つの鎖の同時発現後に、ヘッド・トゥ・テール・アセンブリー (head-to-tail assembly)、したがって、２つの機能性結合部位を有するコンパクトな分子の形成をもたらす。ダイアボディ（Ｄｂ）フォーマットは、鎖間ジスルフィド結合（ｄｓＤｂ、ＤＡＲＴ分子）を導入することによって、または単鎖誘導体（ｓｃＤｂ）を生成することによって、さらに安定化された。ＳｃＤｂを、中間リンカーを還元することによって四価分子に変換して、２つの鎖のホモ二量体化をもたらすことができる。小二重特異性分子はまた、ｓｃＦｖをＦａｂフラグメントの重鎖または軽鎖に融合させることによっても産生されている。さらに、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディおよびｓｃＤｂをＦｃまたはＣＨ３ドメインに融合させて、四価誘導体を生成している。また、ｓｃＦｖをＦｃまたはＣＨ３ドメインと組み合わせて、例えば、ｓｃＦｖをＦｃフラグメントのＮ末端およびＣ末端に融合させるか、あるいはノブ・イントゥ・ホールアプローチを用いて二価ｓｃＦｖ－ＦｃまたはｓｃＦｖ－ＣＨ３分子を生成して、四価分子を生成することができる。本発明の二重特異性抗体を生成するための異なるアプローチは、ドック・アンド・ロック(dock-and-lock)法（ＤＮＬ）である。ここで、抗体フラグメントは、ヒトｃＡＭＰ依存性
プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）由来のホモ二量体化ドッキングドメイン（ＤＤＤ）およびＡキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）由来のアンカー化ドメイン（ＡＤ）に融合されて、二重特異性の三価分子の形成をもたらす。確立された二重特異性抗体フォーマットの多くはまた、さらなるタンパク質および成分、例えば、薬物、毒素、酵素およびサイトカインと組み合わせて、融合パートナーの二重標的化および送達を可能にすることができる。さらに、血清アルブミンまたはアルブミン結合部分などの血漿タンパク質への融合を施用して、二重特異性抗体の血漿半減期を延長することができる。二重特異性抗体の構造
[00228]一例において、二重特異性抗体は、第１のポリペプチド鎖を含む結合タンパク
質であることができ、これに関し、ポリペプチド鎖は、ＶＤ－Ｈ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ－Ｈ２－Ｃ－（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ－Ｈ１は第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ－Ｈ２は第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はポリペプチドリンカーを表し、Ｘ２はＩｇＡ Ｆｃ領域を表し、ｎは０または１である］を含む。いくつかの態様において、結合タンパク質中のＶＤ－Ｈ１およびＶＤ－Ｈ２は、マウス重鎖可変ドメイン、ヒト重鎖可変ドメイン、ＣＤＲ移植重鎖可変ドメイン、およびヒト化重鎖可変ドメインからなる群より選択される重鎖可変ドメインであることができる。ＶＤ－Ｈ１およびＶＤ－Ｈ２は、異なる抗原と結合できる可能性がある。Ｃは重鎖定常ドメインであることができる。例えば、Ｘ１はリンカーペプチドである。例えば、Ｘ１は、本明細書中に挙げるリンカーである。一態様において、Ｘ２はＩｇＡ Ｆｃ領域である。他の態様において、Ｘ２はバリアントＩｇＡ Ｆｃ領域である。いくつかの態様において、ＶＤ－Ｈ１はＣＤ４７に結合することができ、ＶＤ－Ｈ２は抗原に結合することができる。いくつかの態様において、ＶＤ－Ｈ１は抗原に結合することができ、ＶＤ－Ｈ２はＣＤ４７に結合することができる。

【0208】

[00229]一例において、二重特異性抗体は、第２のポリペプチド鎖を含む結合タンパク
質であることができ、これに関し、ポリペプチド鎖は、ＶＤ－Ｌ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ－Ｌ２－Ｃ－（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ－Ｌ１は第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ－Ｌ２は第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はポリペプチドリンカ
ーを表し、Ｘ２はＩｇＡ Ｆｃ領域を表し、ｎは０または１である］を含む。いくつかの態様において、結合タンパク質中のＶＤ－Ｌ１およびＶＤ－Ｌ２は、マウス軽鎖可変ドメイン、ヒト軽鎖可変ドメイン、ＣＤＲ移植軽鎖可変ドメイン、およびヒト化軽鎖可変ドメインからなる群より選択される軽鎖可変ドメインであることができる。ＶＤ－Ｌ１およびＶＤ－Ｌ２は、異なる抗原に結合できる可能性がある。Ｃは重鎖定常ドメインであることができる。例えば、Ｘ１はリンカーペプチドである。例えば、Ｘ１は、本明細書中に挙げるリンカーである。一態様において、Ｘ２はＩｇＡ Ｆｃ領域である。他の態様において、Ｘ２はバリアントＩｇＡ Ｆｃ領域である。いくつかの態様において、ＶＤ－Ｌ１はＣＤ４７に結合することができ、ＶＤ－Ｌ２は抗原に結合することができる。いくつかの態様において、ＶＤ－Ｌ１は抗原に結合することができ、ＶＤ－Ｌ２はＣＤ４７に結合することができる。いくつかの態様において、二重特異性抗体構築物は、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖の両方を含む。本開示の二重特異性抗体は、Ｊａｋｏｂ ２０１３に記載されているような二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ^ＴＭ）であることができ、これは、フレキシブルな天然に存在するリンカーを介して２つのモノクローナル抗体の標的結合ドメインを組み合わせ、四価のＩｇＧ様分子をもたらす。

【0209】

[00230]本発明はさらに、ＣＤ４７の親抗体および望ましい抗原（例えば、ＣＤ２０）
を予め選択することによって、ＤＶＤ－Ｉｇ結合タンパク質を作製する方法を提供する。２つの抗原を結合する二重可変ドメイン免疫グロブリンの作製方法は、ａ）第１の抗原に結合する第１の親抗体またはその抗原結合部分を得る段階；ｂ）第２の抗原に結合する第２の親抗体またはその抗原結合部分を得る段階；ｃ）第１のポリペプチド鎖の２つのコピーを構築する段階、これに関し、該コピーはそれぞれ、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－Ｃ－（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、前記第１の親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１の重鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は、前記第２の親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２の重鎖可変ドメインであり、第２の親抗体は、第１の親抗体と同じまたは異なっていることができる；Ｃは重鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、前記（Ｘ１）ｎは、存在するか存在しないかのいずれかであり；そして（Ｘ２）ｎはＩｇＡ Ｆｃ領域である］を含む；ｄ）第２のポリペプチド鎖の２つのコピーを構築する段階、これに関し、該コピーはそれぞれ、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－Ｃ－（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、前記第１の親抗体またはその抗原結合部分から得られる第１の軽鎖可変ドメインであり；ＶＤ２は、前記第２の親抗体またはその抗原結合部分から得られる第２の軽鎖可変ドメインであり、第２の親抗体は、第１の親抗体と同じまたは異なっていることができる；Ｃは軽鎖定常ドメインであり；（Ｘ１）ｎはリンカーであり、前記（Ｘ１）ｎは、存在するか存在しないかのいずれかであり；そして（Ｘ２）ｎはＩｇＡ Ｆｃ領域を含まず、前記（Ｘ２）ｎは、存在するか存在しないかのいずれかである］を含む；そしてｅ）前記第１および第２のポリペプチド鎖の２つのコピーを発現させる段階；を含み、その結果、前記第１の抗原（例えばＣＤ４７）および前記第２の抗原（例えばＣＤ２０）に結合するＤＶＤ－Ｉｇが生じる。

【0210】

抗原結合ドメインおよび／またはＣＤ４７結合ドメインの生成：
[00231]ＤＶＤ結合タンパク質の可変ドメインは、目的の抗原に結合するポリクローナ
ルおよびモノクローナル抗体などの親抗体から得ることができる。これらの抗体は、天然に存在していてもよく、または組換え技術によって生成してもよく、またはｄｅ ｎｏｖｏで設計してもよい。ＭＡｂは、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当分野で公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。モノクローナル抗体は、本明細書中に開示される方法によって調製することができる。

【0211】

[00232]二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ）分子は、２つの異なる親モ
ノクローナル抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、直接的にタンデムに
、または組換えＤＮＡ技術により短いリンカーを介して連結され、続いて軽鎖定常ドメイン、および所望によりＦｃ領域が連結されるように設計される。同様に、重鎖は、タンデムに連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、続いて定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む。可変ドメインは、本明細書に記載の方法のいずれか１つによって生成された親抗体から組換えＤＮＡ技術を用いて得ることができる。可変ドメインは、マウス重鎖または軽鎖可変ドメイン、ＣＤＲ、ヒト重鎖または軽鎖可変ドメインであることができる。第１および第２の可変ドメインは、組換えＤＮＡ技術を用いて互いに直接的に連結することができ、リンカー配列を介して連結することができく、または、２つの可変ドメインは連結される。可変ドメインは、同じ抗原に結合することができ、または異なる抗原に結合することができる。定常ドメインは、組換えＤＮＡ技術を使用して、２つの連結された可変ドメインに連結することができる。連結された重鎖可変ドメインを含む配列は、重鎖定常ドメインに連結することができ、連結された軽鎖可変ドメインを含む配列は、軽鎖定常ドメインに連結される。定常ドメインはまた、それぞれヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインであることができる。ＤＶＤ重鎖は、ＩｇＡ Ｆｃ領域にさらに連結することができる。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域、またはバリアントＦｃ領域、またはヒトＦｃ領域、またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２由来のＦｃ領域であることができる。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを組み合わせて、ＤＶＤ－Ｉｇ分子を形成することができる。

【0212】

[00233]本発明の「二重特異的(dual-specific)多価全長結合タンパク質」の設計は、主に望ましい「二重特異的多価全長結合タンパク質」にアセンブルする二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖をもたらす。

【0213】

ＤＶＤ分子の構築
[00234]二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ）分子は、同じであっても異
なっていてもよい２つの親モノクローナル抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、直接的にタンデムに、または組換えＤＮＡ技術により短いリンカーを介して連結され、続いて軽鎖定常ドメイン、および所望によりＩｇＡ Ｆｃ領域が連結されるように設計される。同様に、重鎖は、タンデムに連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、続いて定常ドメインＣＨ１およびＩｇＡ Ｆｃ領域を含む。

【0214】

[00235]可変ドメインは、本明細書に記載の方法のいずれか１つによって生成された親
抗体から組換えＤＮＡ技術を用いて得ることができる。一態様において、可変ドメインはマウス重鎖または軽鎖可変ドメインである。他の態様において、可変ドメインは、ＣＤＲ移植またはヒト化可変重鎖もしくは軽鎖ドメインである。一態様において、可変ドメインはヒト重鎖または軽鎖可変ドメインである。

【0215】

[00236]一態様において、第１および第２の可変ドメインは、組換えＤＮＡ技術を用い
て互いに直接的に連結される。他の態様において、可変ドメインは、リンカー配列を介して連結される。一態様では、２つの可変ドメインが連結される。３つ以上の可変ドメインも、直接またはリンカー配列を介して連結することができる。可変ドメインは、同じ抗原に結合することができ、または異なる抗原に結合することができる。本発明のＤＶＤ－Ｉｇ分子は、１つの免疫グロブリン可変ドメインおよび１つの非免疫グロブリン可変ドメイン、例えば、受容体のリガンド結合ドメイン、または酵素の活性ドメインを包含することができる。ＤＶＤ－Ｉｇ分子はまた、２以上の非Ｉｇドメインを含むことができる。

【0216】

[00237]１つの態様において、定常ドメインは、組換えＤＮＡ技術を使用して、２つの
連結された可変ドメインに連結される。一態様において、連結された重鎖可変ドメインを含む配列は重鎖定常ドメインに連結され、連結された軽鎖可変ドメインを含む配列は軽鎖定常ドメインに連結される。一態様において、定常ドメインは、それぞれヒト重鎖定常ド
メインおよびヒト軽鎖定常ドメインである。一態様において、ＤＶＤ重鎖はさらに、Ｆｃ領域に連結される。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域、またはバリアントＦｃ領域であることができる。他の態様において、Ｆｃ領域はヒトＦｃ領域である。他の態様において、Ｆｃ領域としては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ由来のＦｃ領域が挙げられる。

【0217】

[00238]他の態様では、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペ
プチドを組み合わせて、ＤＶＤ－Ｉｇ分子を形成する。
[00239]本発明の結合タンパク質は、当分野で公知のいくつかの技術のいずれかによっ
て産生させることができる。例えば、宿主細胞からの発現、これに関し、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖をコードする発現ベクター（１以上）は、標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」という用語のさまざまな形態は、原核生物または真核生物宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入に一般的に使用される広範な技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図される。本発明のＤＶＤタンパク質を原核生物または真核生物宿主細胞のいずれかで発現させることは可能であるが、ＤＶＤタンパク質は真核細胞、例えば哺乳類宿主細胞において発現される。これは、そのような真核細胞（および特に哺乳類細胞）は、原核細胞よりも、適切に折りたたまれた免疫学的に活性なＤＶＤタンパク質をアセンブルし、分泌する可能性が高いからである。

【0218】

[00240]本発明の組換え抗体を発現するための代表的な哺乳類宿主細胞としては、チャ
イニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載されているｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ａ．（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－６２１に記載されるようなＤＨＦＲ選択可能マーカーと一緒に使用する）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、ＳＰ２およびＰＥＲ．Ｃ６細胞が挙げられる。ＤＶＤタンパク質をコードする組換え発現ベクターを哺乳類宿主細胞に導入する場合、宿主細胞内でのＤＶＤタンパク質の発現、または宿主細胞が成長する培地中へのＤＶＤタンパク質の分泌を可能にするのに十分な時間にわたり、宿主細胞を培養することによって、ＤＶＤタンパク質を産生する。ＤＶＤタンパク質は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培養培地から回収することができる。

【0219】

[00241]本明細書中に記載される構築物におけるＤＶＤタンパク質の組換え発現のため
の代表的なシステムでは、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で、ＤＶＤ重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素にオペレート可能(operatively)に連結さ
れ、遺伝子の高レベルの転写を促進する。組換え発現ベクターはＤＨＦＲ遺伝子も有し、これにより、メトトレキサート選択／増幅を用いてベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択が可能になる。選択された形質転換宿主細胞を培養して、ＤＶＤ重鎖および軽鎖の発現を可能にし、完全なままのＤＶＤタンパク質を培養培地から回収する。標準的な分子生物学的技術を用いて、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、そして培養培地からＤＶＤタンパク質を回収する。さらに、本発明は、本発明のＤＶＤタンパク質が合成されるまで、適切な培養培地中で本発明の宿主細胞を培養することによって、本発明のＤＶＤタンパク質を合成する方法を提供する。この方法はさらに、培養培地からのＤＶＤタンパク質の単離を含むことができる。

【0220】

[00242]ＤＶＤ－Ｉｇの重要な特徴は、従来の抗体と同様の方法で産生および精製する
ことができる点である。ＤＶＤ－Ｉｇの産生は、定常領域の配列改変またはあらゆる種類
の化学修飾なしに、望ましい二重特異的活性を有する均質な単一の主要産物を生じる。先に記載した、「二重特異性」、「多重特異性」および「多重特異性多価」全長結合タンパク質を生成するための他の方法は、単一の一次産物をもたらさず、代わりに、異なる結合部位の組み合わせを有する、アセンブルされた不活性タンパク質、単一特異性タンパク質、多重特異性タンパク質、多価タンパク質、全長結合タンパク質、および多価全長結合タンパク質の混合物の細胞内産生または分泌産生をもたらす。一例として、ＭｉｌｌｅｒおよびＰｒｅｓｔａ（ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００１／０７７３４２（Ａ１））によって記載された設計に基づき、重鎖および軽鎖には１６の可能な組み合わせが存在する。その結果、他の１５の可能な組み合わせと比較して、ほんの６．２５％のタンパク質だけが、単一の主要産物または単一の一次産物としてではなく、望ましい活性形態にある可能性がある。大規模製造で典型的に使用される標準的なクロマトグラフィー技術を使用して、不活性および部分的に活性な形態のタンパク質から、望ましい完全に活性な形態のタンパク質を分離することは、まだ実証されていない。

【0221】

[00243]本明細書に記載の構築物で使用するための「二重特異的多価全長結合タンパク
質」の設計は、主に望ましい「二重特異的多価全長結合タンパク質」にアセンブルする二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖をもたらす。

【0222】

[00244]アセンブルされ、発現された二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の少なくと
も５０％、少なくとも７５％、および少なくとも９０％が、望ましい二重特異的四価タンパク質である。本発明のこの観点は、とりわけ本発明の商業的有用性を高める。したがって、本発明は、単一細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させて、「二重特異的四価全長結合タンパク質」の単一の一次産物をもたらす方法を包含する。

【0223】

[00245]本明細書中に、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を単一細胞
中で発現させて、「二重特異的四価全長結合タンパク質」の「一次産物」をもたらす方法であって、「一次産物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含む、すべてのアセンブルされたタンパク質の５０％を超える方法を提供する。

【0224】

[00246]本明細書中に、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を単一細胞
中で発現させて、「二重特異的四価全長結合タンパク質」の「一次産物」をもたらす方法であって、「一次産物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含む、すべてのアセンブルされたタンパク質の７５％を超える方法を提供する。

【0225】

[00247]本明細書中に、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を単一細胞
中で発現させて、「二重特異的四価全長結合タンパク質」の「一次産物」をもたらす方法であって、「一次産物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含む、すべてのアセンブルされたタンパク質の９０％を超える方法を提供する。

【0226】

カッパラムダ体
[00248]いくつかの態様において、カッパ－ラムダ抗体フォーマットの二重特異性抗体
を、本明細書に提供する。本明細書中に提供される二重特異性抗体は、共通の重鎖、２つの軽鎖－１つのカッパ（Ｋ）、１つのラムダ（λ）－を有し、後者はそれぞれ、異なる特異性（すなわち、２つの軽鎖、２つの特異性）を有する。本明細書中に提供される方法は、多様性がＶＬ領域に制限される特異的結合を有する分子を産生する。これらの方法は、３つの鎖（１つのＶＨ鎖、２つのＶＬ鎖）の制御された同時発現、および二重特異性抗体の精製を介して、二重特異性抗体を産生する。

【0227】

[00249]このタイプの分子は、特有の重鎖ポリペプチドの２つのコピー、定常カッパド
メインに融合された第１の軽鎖可変領域、および定常ラムダドメインに融合された第２の軽鎖可変領域で構成される。各結合部位は、重鎖および軽鎖の両方が寄与する異なる抗原特異性を示す。軽鎖可変領域はラムダまたはカッパファミリーであることができ、好ましくは、それぞれ、ラムダおよびカッパ定常ドメインに融合される。これは、非天然ポリペプチド接合の生成を回避するために好ましい。しかしながら、第１の特異性のためにカッパ軽鎖可変ドメインを定常ラムダドメインに融合させ、第２の特異性のためにラムダ軽鎖可変ドメインを定常カッパドメインに融合させることによって、本発明の二重特異性抗体を得ることも可能である。

【0228】

[00250]本方法に必須の工程は、同じ重鎖可変ドメインを共有し異なる抗原特異性を有
する２つの抗体Ｆｖ領域（それぞれ可変軽鎖および可変重鎖ドメインによって構成される）の同定である。モノクローナル抗体およびそのフラグメントの生成に関し、多くの方法が記載されている。（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ Ｅ，およびＬａｎｅ Ｄ，１９８８，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ参照。これを、本明細書中に参考として援用する）。完全ヒト抗体は、ＣＤＲ１および２を含む軽鎖および重鎖の両方の配列がヒト遺伝子に由来する抗体分子である。ＣＤＲ３領域は、ヒト由来であることができ、または合成的手段によって設計することができる。このような抗体を、本明細書では「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」とよぶ。ヒトモノクローナル抗体は、トリオーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ４：７２参照）；およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ ｅｔ
ａｌ．，１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７－９６頁参照）を使用することによって調製することができる。ヒトモノクローナル抗体を利用することができ、これは、ヒトハイブリドーマを使用することによるか（Ｃｏｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９８３．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８０：２０２６－２０３０参照）、またはｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＢ細胞をエプスタイン・バー・ウイルスで形質転換することによって（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７－９６頁参照）産生することができる。

【0229】

[00251]モノクローナル抗体は、例えば、標的抗原またはその免疫原性フラグメント、
誘導体もしくはバリアントで動物を免疫化することによって生成される。あるいは、標的抗原をコードする核酸分子を含有するベクターでトランスフェクトされた細胞を用いて、トランスフェクト細胞の表面で標的抗原が発現され、会合するように、動物を免疫する。異種非ヒト動物を産生するためのさまざまな技術が、当分野で周知である。例えば、米国特許第６０７５１８１号および第６１５０５８４号参照。これらの全体を、本明細書中で参考として援用する。

【0230】

[00252]あるいは、抗体は、標的抗原に結合するための抗体または抗原結合ドメイン配
列を含有するライブラリーをスクリーニングすることによって得られる。このライブラリーは、例えば、バクテリオファージ中で、アセンブルされたファージ粒子の表面に発現されるバクテリオファージコートタンパク質とのタンパク質またはペプチド融合物として調製され、コードＤＮＡ配列は、ファージ粒子内に含有されている（すなわち、「ファージディスプレイライブラリー」）。

【0231】

[00253]次いで、骨髄腫／Ｂ細胞融合から得たハイブリドーマを、標的抗原に対する反
応性についてスクリーニングする。モノクローナル抗体は、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって記載されている
ようなハイブリドーマ法を用いて調製する。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物を、典型的には免疫化剤で免疫化して、免疫化剤に特異的に結合する抗体を産生するか、産生することができるリンパ球を惹起する。あるいは、リンパ球をｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫化することができる。

【0232】

[00254]同じ重鎖可変ドメインを有するカッパ－ラムダ抗体は、重鎖可変ドメインがす
べてのライブラリーメンバーについて同じであり、したがって多様性が軽鎖可変ドメインに制限される抗体ライブラリーを使用することによって、生成することができる。このようなライブラリーは、例えば、ＷＯ２０１０／１３５５５８に記載されている。しかしながら、軽鎖可変ドメインは重鎖可変ドメインと関連して発現されるので、両方のドメインが抗原結合に寄与し得る。このプロセスをさらに容易にするために、同じ重鎖可変ドメインおよび多様なラムダ可変軽鎖またはカッパ可変軽鎖のいずれかを含有する抗体ライブラリーを、異なる抗原に対する抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ選択のために並行して使用することができる。このアプローチにより、共通の重鎖を有するが、一方はラムダ軽鎖可変ドメインを有し、他方は、本発明の完全免疫グロブリンフォーマットにおける二重特異性抗体の生成のための構築ブロックとして用いることができるカッパ軽鎖可変ドメインを有する、２つの抗体の同定が可能になる。本発明の二重特異性抗体は、ＩｇＡアイソタイプであることができ、それらのＦｃ部分は、異なるＦｃ受容体への結合特性を変更するために改変することができ、このようにして、抗体のエフェクター機能ならびにその薬物動態特性を改変することができる。Ｆｃ部分の改変のための多数の方法が記載されており、本発明の抗体に施用可能である（例えば、Ｓｔｒｏｈｌ，ＷＲ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００９（６）：６８５－９１参照）。

【0233】

[00255]本発明の他の重要な工程は、共通の重鎖および２つの異なる軽鎖の単一細胞へ
の同時発現を最適化して、本発明の二重特異性抗体のアセンブリーを可能にすることである。すべてのポリペプチドが同じレベルで発現され、同等に良好にアセンブルされて免疫グロブリン分子を形成する場合、単一特異性（同じ軽鎖）および二重特異性（２つの異なる軽鎖）の比率は５０％であるべきである。

【0234】

[00256]重鎖および２つの軽鎖の同時発現は、細胞培養物の上清中に３つの異なる抗体
、すなわち、２つの単一特異性二価抗体と１つの二重特異性二価抗体の混合物を生成する。後者は、目的の分子を得るために混合物から精製しなければならない。本明細書に記載の方法は、この精製手順を、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ Ｆａｂ ＫａｐｐａおよびＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ Ｆａｂ Ｌａｍｂｄａ親和性マトリックス（ＢＡＣ ＢＶ，オランダ）のようなカッパまたはラムダ軽鎖定常ドメインと特異的に相互作用するアフィニティークロマトグラフィー媒体の使用により、著しく促進する。この多段階アフィニティークロマトグラフィー精製アプローチは効率的であり、一般に本発明の抗体に施用可能である。これは、抗体混合物を発現するクアドローマまたは他の細胞株に由来する二重特異性抗体それぞれについて開発および最適化しなければならない特異的精製方法とは、明らかに対照的である。実際、混合物中の異なる抗体の生化学的特性が同様である場合、イオン交換クロマトグラフィーのような標準的なクロマトグラフィー技術を使用する分離は、困難であるか、または全く不可能であり得る。

【0235】

[00257]３つの鎖の同時発現は、３つの異なる抗体、すなわち、２つの単一特異性抗体
および１つの二重特異性抗体のアセンブリーをもたらした。それらの理論的相対比は、発現レベルおよびアセンブリー速度が両方の軽鎖について同様であるという条件で、１：１：２であるべきである。二重特異性抗体を、３段階アフィニティークロマトグラフィー手順を用いて精製した：（１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ：ＩｇＡ（モノ－およびビ－）を補足、（２）Ｋａｐｐａ ｓｅｌｅｃｔ：カッパ軽鎖（１以上）を含有するＩｇＡを補足、および（３）Ｌａｍｂｄａ ｓｅｌｅｃｔ：ラムダ軽鎖を含有するＩｇＧを捕捉。Ｋａｐｐａ
ｓｅｌｅｃｔおよびＬａｍｂｄａｓｅｌｅｃｔは、ＢＡＣ、ＢＶおよびＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅによって開発されたアフィニティークロマトグラフィー用媒体である。

【0236】

[00258]精製された二重特異性抗体は、以下のように特徴付けられた。各アフィニティ
ー精製工程からのフロースルーおよび溶離を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。κλ－ボディの特異性および親和性を、ＥＬＩＳＡおよび表面プラズモン共鳴によって決定した。本発明の方法は、最適化なしで、サブナノモルからナノモル範囲の親和性を有する抗体の同定を可能にする。本明細書中に記載される抗体ライブラリーにおける多様性は、標準的な抗体における結合エネルギーにあまり寄与しない軽鎖に制限されるので、これは明白ではない。

【0237】

[00259]カッパ型およびラムダ型の軽鎖可変ドメインを有する２つの抗体へのアクセス
の必要性が、本発明に対する制限として認識されることを回避するために、本明細書に記載される方法は、ラムダ可変ドメインをカッパ定常ドメインに融合させることができ、反対にカッパ可変ドメインがラムダ定常ドメインに融合させることができる、ハイブリッド軽鎖の生成を可能にする。いくつかの態様において、二重特異性および／または多重特異性抗体の生成方法は、完全に無血清で化学的に規定されたプロセスを使用する。これらの方法は、製薬産業において最も広く使用されている哺乳類細胞株、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株を組み込む。そこに記載されている方法は、半安定性および安定性細胞株の両方を生成するために使用される。本方法は、本発明の二重特異性および／または多重特異性抗体を、小規模（例えば、三角フラスコ中）および中規模（例えば、２５Ｌ Ｗａｖｅバッグ中）で製造するために使用することができる。本方法はまた、本発明の抗体混合物と同様に、二重特異性および／または多重特異性抗体のより大規模な生産にも容易に施用可能である。

【0238】

代表的な抗体構築物
[00260]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、（ａ）配列番号４のアミノ酸
配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、第１の重鎖可変ドメインを含む。

【0239】

[00261]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、（ａ）配列番号７のアミノ酸
配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、第１の重鎖可変ドメインを含む。

【0240】

[00262]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、（ａ）配列番号１３のアミノ
酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、第１の軽鎖可変ドメインを含む。

【0241】

[00263]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、（ａ）配列番号１６のアミノ
酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、第１の軽鎖可変ドメインを含む。

【0242】

[00264]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、（ａ）配列番号４のアミノ酸
配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列
を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む第１の軽鎖可変ドメインとを含む。

【0243】

[00265]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、（ａ）配列番号７のアミノ酸
配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む第１の重鎖可変ドメインと、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む第１の軽鎖可変ドメインとを含む。

【0244】

[00266]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、配列番号２３のアミノ酸配列
に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する第１の重鎖可変配列を含む。

【0245】

[00267]いくつかの態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する第１の重鎖可変配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、該配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗原に結合する能力を保持する。いくつかの態様では、全部で１～１０個のアミノ酸が、配列番号２３のアミノ酸配列において置換、挿入および／または欠失されている。いくつかの態様において、置換、挿入、または欠失はＣＤＲの外側の領域（例えば、ＦＲ中）で起こる。所望により、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２３のアミノ酸配列のＶＨ配列を含む。

【0246】

[00268]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、配列番号２６のアミノ酸配列
に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、該配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗原に結合する能力を保持する。いくつかの態様では、全部で１～１０個のアミノ酸が、配列番号２６のアミノ酸配列のいずれか１つにおいて置換、挿入および／または欠失されている。いくつかの態様において、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（例えば、ＦＲ中）で起こる。所望により、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２６のＶＬ配列を含む。

【0247】

[00269]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、配列番号２３の第１の重鎖可
変ドメインアミノ酸配列と、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２６での第１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む。

【0248】

[00270]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、配列番号２４のアミノ酸配列
に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する第１の重鎖可変配列を含む。

【0249】

[00271]いくつかの態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する第１の重鎖可変配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが
、該配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗原に結合する能力を保持する。いくつかの態様では、全部で１～１０個のアミノ酸が、配列番号２４のアミノ酸配列において置換、挿入および／または欠失されている。いくつかの態様において、置換、挿入、または欠失はＣＤＲの外側の領域（例えば、ＦＲ中）で起こる。所望により、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２７のアミノ酸配列のＶＨ配列を含む。

【0250】

[00272]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、配列番号２７のアミノ酸配列
に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、該配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗原に結合する能力を保持する。いくつかの態様では、全部で１～１０個のアミノ酸が、配列番号２７のアミノ酸配列のいずれか１つにおいて置換、挿入および／または欠失されている。いくつかの態様において、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（例えば、ＦＲ中）で起こる。所望により、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２７のＶＬ配列を含む。

【0251】

[00273]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、配列番号２４の第１の重鎖可
変ドメインアミノ酸配列と、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２７での第１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む。

【0252】

[00274]いくつかの態様において、抗原結合領域は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列
を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、第２の重鎖可変ドメインを含む。

【0253】

[00275]いくつかの態様において、抗原結合領域は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配
列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、第２の重鎖可変ドメインを含む。

【0254】

[00276]いくつかの態様において、抗原結合領域は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列
を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む第２の重鎖可変ドメインと、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む第２の第１の軽鎖可変ドメインとを含む。

【0255】

[00277]いくつかの態様において、抗原結合領域は第２の重鎖可変ドメインを含む。
[00278]いくつかの態様において、抗原結合領域は、配列番号２２のアミノ酸配列に対
して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する第２の重鎖可変配列を含む。

【0256】

[00279]いくつかの態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する第２の重鎖可変配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが
、該配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗原に結合する能力を保持する。いくつかの態様では、全部で１～１０個のアミノ酸が、配列番号２２のアミノ酸配列において置換、挿入および／または欠失されている。いくつかの態様において、置換、挿入、または欠失はＣＤＲの外側の領域（例えば、ＦＲ中）で起こる。所望により、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２２のアミノ酸配列のＶＨ配列を含む。

【0257】

[00280]いくつかの態様において、抗原結合領域は、配列番号２５のアミノ酸配列に対
して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する第２の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、該配列を含む抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗原に結合する能力を保持する。いくつかの態様では、全部で１～１０個のアミノ酸が、配列番号２５のアミノ酸配列のいずれか１つにおいて置換、挿入および／または欠失されている。いくつかの態様において、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（例えば、ＦＲ中）で起こる。所望により、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２５のＶＬ配列を含む。

【0258】

[00281]いくつかの態様において、抗原結合領域は、配列番号２２の第２の重鎖可変ド
メインアミノ酸配列と、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２５での第２の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む。

【0259】

[00282]いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域が表ＡからのＣＤＲを含み、抗原
結合領域が表ＢからのＣＤＲを含む構築物を、本明細書中に記載する。これらのＣＤＲおよび結合領域は、標的抗原提示細胞に免疫エフェクター細胞を補充するのに望ましい結合プロフィールを達成するために、文献において公知の他のものと置換することができる。

【0260】

代表的なＤＶＤ Ｉｇ抗体
[00283]いくつかの態様において、抗体構築物は、第２の重鎖可変ドメインのＣ末端が
第１の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結しているポリペプチドを含む。いくつかの態様において、連結はリンカーペプチドを介する。いくつかの態様において、リンカーペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２の重鎖可変ドメインのＣ末端が第１の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結しているポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ポリペプチドのＣ末端は、ＩｇＡ定常重鎖をコードするアミノ酸配列に連結している。

【0261】

[00284]いくつかの態様において、抗体構築物は、第２の軽鎖可変ドメインのＣ末端が
第１の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結しているポリペプチドを含む。いくつかの態様において、連結はリンカーペプチドを介する。いくつかの態様において、リンカーペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインのＣ末端が第１の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結しているポリペプチドは、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ポリペプチド
のＣ末端は、ＩｇＡ定常重鎖をコードするアミノ酸配列に連結している。

【0262】

[00285]いくつかの態様において、二重特異性抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列と
少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドとを含む。

【0263】

[00286]いくつかの態様において、二重特異性抗体は、第１の重鎖可変ドメインのＣ末
端が第２の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結していることを含む第１のポリペプチドを含む。いくつかの態様において、連結はリンカーペプチドを介する。いくつかの態様において、リンカーペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１の重鎖可変ドメインのＣ末端が第２の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結していることを含むポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ポリペプチドのＣ末端は、ＩｇＡ定常重鎖をコードするアミノ酸配列に連結している。

【0264】

[00287]いくつかの態様において、二重特異性抗体は、第１の軽鎖可変ドメインのＣ末
端が第２の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結していることを含む第１のポリペプチドを含む。いくつかの態様において、連結はリンカーペプチドを介する。いくつかの態様において、リンカーペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインのＣ末端が第２の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結していることを含むポリペプチドは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ポリペプチドのＣ末端は、ＩｇＡ定常重鎖をコードするアミノ酸配列に連結している。

【0265】

[00288]いくつかの態様において、二重特異性抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列と
少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドとを含む。

【0266】

[00289]いくつかの態様において、抗体構築物は、軽鎖または重鎖可変ドメインに連結
されたｓｃＦｖを含む第１のポリペプチドを含む。いくつかの態様において、連結はリンカーペプチドを介する。いくつかの態様において、リンカーペプチドは、配列番号４４または配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0267】

[00290]いくつかの態様において、ｓｃＦｖは、第２の重鎖可変ドメインおよび第２の
軽鎖可変ドメインを含み、第１の軽鎖可変ドメインに連結している。いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインに連結しているｓｃＦｖ(例えば、第２の重鎖可変ドメイ
ンおよび第２の軽鎖可変ドメインを含む）を含む第１のポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。

【0268】

[00291]いくつかの態様において、ｓｃＦｖは、第２の重鎖可変ドメインおよび第２の
軽鎖可変ドメインを含み、第１の重鎖可変ドメインに連結している。いくつかの態様において、第１の重鎖可変ドメインに連結しているｓｃＦｖ(例えば、第２の重鎖可変ドメイ
ンおよび第２の軽鎖可変ドメインを含む）を含む第１のポリペプチドは、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。

【0269】

[00292]いくつかの態様において、ｓｃＦｖは、第１の重鎖可変ドメインおよび第１の
軽鎖可変ドメインを含み、第２の軽鎖可変ドメインに連結している。いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインに連結しているｓｃＦｖ(例えば、第１の重鎖可変ドメイ
ンおよび第１の軽鎖可変ドメインを含む）を含む第１のポリペプチドは、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。

【0270】

[00293]いくつかの態様において、ｓｃＦｖは、第１の重鎖可変ドメインおよび第１の
軽鎖可変ドメインを含み、第２の重鎖可変ドメインに連結している。いくつかの態様において、第２の重鎖可変ドメインに連結しているｓｃＦｖ（例えば、第１の重鎖可変ドメインおよび第１の軽鎖可変ドメインを含む）を含む第１のポリペプチドは、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。

【0271】

代表的なカッパラムダ体
[00294]いくつかの態様において、抗体構築物（例えば、カッパ－ラムダ体）は、カッ
パ型またはラムダ型の第１の軽鎖可変ドメイン、およびカッパ型またはラムダ型の第２の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、抗体構築物（例えば、カッパ－ラムダ体）は、カッパ型の第１の軽鎖可変ドメインおよびラムダ型の第２の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、抗体構築物（例えば、カッパ－ラムダ体）は、ラムダ型の第１の軽鎖可変ドメインおよびラムダ型の第２の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、第１の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＤ４７結合領域は、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。

【0272】

[00295]いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、（ａ）配列番号１９のアミノ
酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む、第２の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。

【0273】

[00296]いくつかの態様において、第１の軽鎖可変ドメインはさらに、軽鎖定常ドメイ
ンを含む。いくつかの態様において、第２の軽鎖可変ドメインはさらに、軽鎖定常ドメイ
ンを含む。いくつかの態様において、軽鎖定常ドメインはカッパ型のものである。いくつかの態様において、軽鎖定常ドメインはラムダ型のものである。いくつかの態様において、軽鎖定常ドメインは、配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカッパ型のものである。いくつかの態様において、軽鎖定常ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むラムダ型のものである。

【0274】

[00297]いくつかの態様において、抗体構築物は、第１の重鎖可変ドメインおよび第２
の重鎖可変ドメインを含み、第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。いくつかの態様において、第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインは、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0275】

[00298]いくつかの態様において、本明細書中の抗体構築物は、ＩｇＡ重鎖定常領域を
含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0276】

ＩｇＡ定常領域
[00299]一態様において、本開示の二重特異性ＩｇＡ抗体は、完全なＩｇＡ重鎖定常ド
メインを含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインは、２つの重鎖間に非対称界面を作り出すための１以上の改変を含む。

【0277】

[00300]用語「非対称界面」は、第１および第２のＩｇＡ重鎖定常領域のような２つの
抗体鎖の間、および／またはＩｇＡ重鎖定常領域とその適合軽鎖との間に形成される界面（上記で定義されている）をさすために使用され、これに関し、第１および第２の鎖中の接触残基は設計によって異なり、相補的な接触残基を含む。非対称界面は、ノブ／ホール相互作用および／または塩橋カップリング（電荷スワップ）および／または当技術分野で公知の他の技術、例えば重鎖をその適合する軽鎖に結合するためのＣｒｏｓｓＭａｂアプローチによって作り出すことができる。「キャビティー」または「ホール」は、第２のポリペプチドの界面から窪んでいるため、第１のポリペプチドの隣接する界面上の対応する突起（「ノブ」）を収容する、少なくとも１つのアミノ酸側鎖をさす。キャビティー（ホ
ール）は元の界面に存在することができ、または合成的に導入することができる（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）。通常、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸は、キャビティをコードするように改変される。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面における少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸は、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖体積を有する少なくとも１つの「インポート(import)」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置換される。元の残基および対応するインポート残基が１より多く存在することは、理解されるであろう。置換されてい元の残基の数の上限は、第２のポリペプチドの界面における残基の総数である。キャビティーの形成に好ましいインポート残基は、通常、天然に存在するアミノ酸残基であり、好ましくは、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）およびグリシン（Ｇ）から選択される。最も好ましいアミノ酸残基はセリン、アラニンまたはトレオニンであり、最も好ましくはアラニンである。好ましい態様において、突起の形成のための元の残基は、チロシン（Ｙ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）またはトリプトファン（Ｗ）など、大きな側鎖容積を有する。

【0278】

[00301]「元の」アミノ酸残基は、元の残基よりも小さいまたは大きい側鎖体積を有す
ることができる「インポート^＊」残基によって置換されるものである。インポートアミノ酸残基は天然に存在するか、または天然に存在しないアミノ酸残基であり得るが、好ましくは前者である。

【0279】

[00302]「天然に存在しない」アミノ酸残基とは、遺伝暗号によってコードされていな
いが、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基（１以上）に共有結合することができる残基を意味する。天然に存在しないアミノ酸残基の例はノルロイシン、オルニチン、ノルバリン、ホモセリン、および、例えば、Ｅｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ Ｅｎｚｙｍ．２０２：３０１－３３６（１９９１）に記載されているような他のアミノ酸残基類似体である。このような天然に存在しないアミノ酸残基を生成するために、Ｎｏｒｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１８２（１９８９）および上記Ｅｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．の手順を使用することができる。手短に述べると、これは、天然に存在しないアミノ酸残基でサプレッサーｔＲＮＡを化学的に活性化した後、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＲＮＡを転写および翻訳することを含む。本発明の方法は、特定の態様において、ＩｇＭ重鎖中の少なくとも１つの元のアミノ酸残基を置換することを含むが、１より多くの元の残基を置換することができる。通常、第１または第２のポリペプチドの界面における全部以下の残基が、置換されている元のアミノ酸残基を含む。置換に好ましい元の残基は「埋め込まれ(buried)」ており、「埋め込まれる」は、残基が実質的に溶媒に接近できないことを意味する。好ましいインポート残基は、ジスルフィド結合の考えうる酸化または誤対合を防止するために、システインではない。突起はキャビティー内に「位置決め可能」であり、これは、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドそれぞれの界面上の突起およびキャビティーの空間的位置、ならびに突起およびキャビティーのサイズが、界面での第１および第２のポリペプチドの正常な会合を著しく混乱させることなく、突起をキャビティー内に位置決めすることができるようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、およびＴｒｐなどの突起は、典型的には界面の軸から垂直に延在せず、好ましい立体配座を有するので、対応するキャビティーとの突起のアラインメントは、Ｘ線結晶学または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるような三次元構造に基づいて突起／キャビティー対をモデル化することに依存する。これは、分子モデリングの技術を含む、当技術分野で広く受け入れられている技術を使用して達成することができる。

【0280】

[00303]「元の核酸」とは、突起またはキャビティーをコードするように「改変」（す
なわち、遺伝子操作または変異）することができる目的のポリペプチドをコードする核酸を意味する。元の、または出発時の核酸は、天然に存在する核酸であることができ、または予め改変を受けた核酸を含むことができる（例えば、ヒト化抗体フラグメント）。核酸
を「改変する」とは、元の核酸が、目的のアミノ酸残基をコードする少なくとも１つのコドンを挿入、欠失または置換することによって変異されることを意味する。通常、元の残基をコードするコドンは、インポート残基をコードするコドンによって置換される。このようにＤＮＡを遺伝的に修飾するための技術は、Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ：ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｍ，Ｊ．ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，編集．（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ．英国（１９９１）に概説されており、例えば、部位特異的変異誘発、カセット変異誘発およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＧＲ）変異誘発を包含する。

【0281】

[00304]突起またはキャビティーは、合成的手段、例えば、組換え技術、ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏペプチド合成、前述の天然に存在しないアミノ酸残基の導入技術、ペプチドの酵素的または化学的カップリング、またはこれらの技術のいくつかの組合せによって、第１または第２のポリペプチドの界面に「導入」することができる。したがって、「導入される」突起またはキャビティーは、「天然に存在しない」または「非天然」であり、このことは、それが天然に、たは元のポリペプチド（例えば、ヒト化モノクローナル抗体）中に、存在しないことを手段する。

【0282】

[00305]好ましくは、突起を形成するためのインポートアミノ酸残基は、比較的少数の
「回転異性体」（例えば、約３～６）を有する。「回転異性体」は、アミノ酸側鎖のエネルギー的に好ましい立体配座である。さまざまなアミノ酸残基の回転異性体の数。

【0283】

[00306]さらなる態様において、本発明の多重特異性ＩｇＡ抗体は、完全な天然Ｊ鎖を
含む。Ｊ鎖はＩｇＡの重合を促進し、これらのポリマー中でのその存在がＳＣ／ｐｌｇＲに対するそれらの親和性に必要であると考えられるので、ＳｌｇＡの生成において重要なタンパク質である。本明細書中の多重特異性ＩｇＡ抗体は、Ｉ鎖フラグメント、または他の方法で修飾されたＪ鎖を、フラグメントまたは修飾されたＪ鎖が、特にＩｇＡの効率的な重合および分泌成分（ＳＣ）／ポリマー（ｐ）ＩｇＲへのそのようなポリマーの結合を可能にする天然のＪ鎖の機能を保持する限り、含むことができる。Ｊ鎖の構造－機能関係のさらなる詳細については、例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００１ ； ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６７（９）：５１８５－５１９２参照。

【0284】

[00307]２つの異なる重鎖を有するＩｇＡ分子を生成するために（すなわち、結合ｎｎ
ｌｔの少なくとも１つが二重特異性である場合）、２つの異なる結合特異性を有する２つの適合する重鎖を互いにカップリングするための溶液を見出さなければならない。さらに、結合領域を形成するために軽鎖が必要とされる場合、溶液は、所望の結合特異性を提供するために、各重鎖をその適合する軽鎖とカップリングさせることが見出されなければならない。

【0285】

[00308]カップリングは、特定の残基間の塩橋対電荷スイッチング（電荷スワップまた
は電荷反転ともよばれる）によって、および／または２つの鎖間にノブ－ホール相互作用を作り出すことによって、達成することができる。重鎖はまた、ＣｒｏｓｓＭａｂ技術を使用することによって、それらの適合する軽鎖と対合させることもできる。最適な結果を達成するために、異なるアプローチを組み合わせることもできる。

【0286】

ノブ－イントゥ－ホール技術
[00309]本発明の五量体または六量体二重特異性結合分子の収率を改善するために、Ｉ
ｇＡ重鎖定常領域、例えばＣＨ３ドメインを、「ノブ－イントゥ－ホール」技術によって改変することができる。この技術は、ＷＯ９６／０２７０１ １、Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ９（１９９６）６１７－６２１；および、Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ａ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ）．１６（１９９８）６７７－６８１において、いくつかの例と共に詳細に記載されている。この方法
において、２つのＩｇＡ重鎖定常ドメインの相互作用表面は、異なる結合特異性を有する２つの重鎖のヘテロ二量体化、および／または重鎖とその適合する軽鎖との間のヘテロ二量体化が増加するように改変される。２つの重鎖ドメインの各々は「ノブ」であることができ、他方は「ホール」である。ジスルフィド架橋の導入は、ヘテロ二量体を安定化させ（Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ａ．Ｍ．ｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １６（１９９８）６７７－６８１；Ａｔｗｅｌｌ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｉ．Ｂｉｏｌ．２７０（１９９７）２６－３５）、収率を上昇させる。同様に、適合する重鎖および軽鎖は、この技術によって互いにカップリングすることができる（Ｚｈｕ，Ｚ．；Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．；Ｚａｐａｔａ，Ｇ．；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｐｒｏｆ Ｓｃｉ．６：７８１－７８８（１９９７））。

【0287】

[00310]このアプローチに続いて、二重特異性ＩｇＡ抗体内の他の重鎖の対応するドメ
インの元の界面に合う１つの重鎖のＣｏ．（例えば、Ｃａ３）ドメインの元の界面内で、アミノ酸残基は、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換されて、それにより界面内に突起を作り出す可能性がある。この突起は、他のＩｇＡ重鎖定常領域における対応するドメインの界面内のキャビティーに位置決めされる。同様に、第２のＩｇＡ重鎖は、第１のＩｇＡ重鎖の定常領域中に対応するドメインを有する界面内のアミノ酸残基を、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基と置換することによって、改変することができ、それによって、２つの重鎖領域間の界面内にホール（キャビティー）が作り出される。
塩橋対電荷スイッチング（電荷スワッピング）
[00311]反対の電荷は互いに引きつけ、同様の電荷は互いに反発する。アミノ酸分子の
電荷はｐＨ依存性であり、アルファアミノ基（Ｎ）、アルファカルボキシ基（Ｃ）および遊離アミノ酸の側鎖について決定されるｐＫ値によって特徴付けることができる。アミノ酸がタンパク質またはペプチドの一部である場合、局所的環境が側鎖のｐＨを変化させる可能性がある。

【0288】

[00312]アミノ酸分子の電荷特性は等電点（ｐｉ）によって特徴付けることもでき、等
電点は、分子の全体的電荷が中性であるときのｐＨである。アミノ酸は側鎖において互いに異なるので、ｐｉは側鎖のｐＫの違いを反映する。

【0289】

[00313]ほとんどのアミノ酸（２０のうち１５）は、６に近いｐｉを有するので、それ
らは中性の全体的電荷を有するとみなされる。ＡｓｐおよびＧｌｕは負に帯電し、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇは正に帯電している。

【0290】

[00314]これらの変異の１以上、または変異のセットは、２つの異なるＩｇＡ重鎖間お
よび／またはＩｇＡ重鎖とその適合する軽鎖との間に所望の非対称界面を提供するために、ノブ－ホール変異の１以上のセットと組み合わせることができる。

【0291】

[00315]好ましくは、２つの異なるＩｇＡ重鎖定常領域間の非対称界面は、１つのＩｇ
Ａ重鎖における最大８、例えば、１～８、または１～７、または１～６、または１～５、または１～４、または１～３、または１～２個の変異か、２つのＩｇＡ重鎖における２～１０、または２～９、または２～８、または２～７、または２～６、または２～５、または２～４、または２～３の組み合わされた変異によって、作り出される。
ＣｒｏｓｓＭａｂ技術
[00316]上記のように、ノブ－イントゥ－ホール技術たは電荷スワッピングは、抗体重
鎖のヘテロ二量体化を可能にする。軽鎖およびそれらの同族重鎖の的確な会合は、二重特異性抗体結合単位の半分の抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）内の重鎖および軽鎖ドメインの交換によって、達成することができる。完全なＶＨ－ＣＨおよびＶＬ－ＣＬドメインの交差、ＶＨおよびＶＬドメインのみの交差、またはｉｇＡ抗体の二重特異性結合単位の半
分内のＣＡおよびＣＬドメインの交差として起こり得る。この「交差」は、抗原結合親和性を保持するが、軽鎖の誤対合がもはや起こらないように２つのアームを相違させる。詳細については、ＩｇＧ抗体の文脈において、例えば、Ｓｅｈａｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．， （２０１１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ ＡｃａｄＳｃｉ ＵＳＡ １０８（２７）：１１１８７－１１１９２参照。

【0292】

免疫コンジュゲート
[00317]特定の態様において、抗体またはそのフラグメントは、１以上の治療薬または
診断薬にコンジュゲートすることができる。治療薬は同じである必要はなく、異なるもの、例えば、薬物および放射性同位体であってもよい。例えば、１３１Ｉは、抗体または融合タンパク質のチロシンおよびリジン残基のイプシロンアミノ基に付着している薬物に、組み込まれることができる。治療薬および診断薬はまた、例えば、還元ＳＨ基および／または炭水化物側鎖に付着させることができる。治療薬または診断薬と抗体または融合タンパク質との共有結合または非共有結合コンジュゲートを作製するための多くの方法は、当該分野で公知であり、任意のこのような公知の方法を利用することができる。

【0293】

[00318]治療薬または診断薬は、ジスルフィド結合形成を介して還元抗体成分のヒンジ
領域に付着させることができる。あるいは、このような薬剤は、ヘテロ二官能性架橋剤、例えば、Ｎ－スクシニル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）を使用して付着させることができる。Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５６：
２４４（１９９４）。このようなコンジュゲーションのための一般的な技術は、当分野で周知である。例えば、Ｗｏｎｇ，ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮ ＣＯＮＪＵＧＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＣＲＯＳＳ－ＬＩＮＫＩＮＧ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９９１）；Ｕｐｅｓｌａｃｉｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ”，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，Ｂｉｒｃｈ ｅｔ ａｌ．（編集），１８７～２３０頁（Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９９５）；Ｐｒｉｃｅ，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ，ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ ＡＮＤ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ，Ｒｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（編集），６０～８４頁（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ １９９５）参照。あるいは、治療薬または診断薬は、抗体のＦｃ領域において炭水化物部分を介してコンジュゲートされることができる。炭水化物基は、チオール基に結合される同じ薬剤の負荷を増加させるために使用することができ、または炭水化物部分は、異なる治療薬または診断薬に結合するために使用することができる。

【0294】

[00319]抗体炭水化物部分を介してペプチドを抗体成分にコンジュゲートさせるための
方法は、当業者に周知である。例えば、Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４１：８３２（１９８８）；Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ
４６：１１０１（１９９０）；およびＳｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５０５７３１３号参照。これらを、全体として本明細書中で参考として援用する。一般的な方法は、酸化炭水化物部分を有する抗体成分を、少なくとも１つの遊離アミン官能基を有するキャリヤーポリマーと反応させることを包含する。この反応は最初のシッフ塩基（イミン）連結をもたらし、これは、第二級アミンへの還元によって安定化されて、最終コンジュゲートを形成することができる。

【0295】

[00320]免疫コンジュゲートの抗体成分として使用される抗体が抗体フラグメントであ
る場合、Ｆｃ領域は存在しなくてもよい。しかし、全長抗体または抗体フラグメントの軽鎖可変領域に炭水化物部分を導入することが可能である。例えば、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５９１９（１９９５）；Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５４４３９５３号（１９９５），Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，米国特許第第６２５４８６８参照。これらを、全体として本明細書中で参考として援用する。操作された炭水化物部分は、治療薬または診断薬に付着させるために使用される。

【0296】

[00321]いくつかの態様において、キレート化剤は、抗体、抗体フラグメントまたは融
合タンパク質に付着させることができ、そして放射性核種のような治療薬または診断薬とキレートを形成するために使用することができる。代表的なキレート化剤としては、限定されるものではないが、ＤＴＰＡ（Ｍｘ－ＤＴＰＡなど）、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＮＥＴＡまたはＮＯＴＡが挙げられる。金属または他のリガンドをタンパク質に付着させるためのコンジュゲーション法およびキレート剤の使用方法は、当分野で周知である（例えば、米国特許第７５６３４３３号参照。その実施例の節を、本明細書中で参考として援用する）。

【0297】

[00322]特定の態様において、放射性金属または常磁性イオンは、ロングテールを有す
る試薬との反応によってタンパク質またはペプチドに付着させることができ、ロングテールには、イオンを結合するための多数のキレート化基が付着することができる。このようなテールは、ポリマー、例えば、ポリリジン、多糖、あるいは、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビス－チオセミカルバゾン、ポリオキシム、およびこの目的に有用であることが知られている同様の基などのキレート化基が結合することができるペンダント基を有する他の誘導体化または誘導体化可能な鎖であることができる。

【0298】

[00323]キレートは、例えば、米国特許第４８２４６５９号に開示されているように、
抗体またはペプチドに直接連結することができる。この特許を、全体として本明細書中で参考として援用する。とりわけ有用な金属キレートの組み合わせとしては、２－ベンジル－ＤＴＰＡならびにそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似体が挙げられ、これらは、放射線画像化のために、６０～４０００ｋｅＶの一般的エネルギー範囲の診断用同位体、例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、１８Ｆ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９９ｍＴｃ、９４ｍＴｃ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、７６Ｂｒと一緒に使用される。同じキレートは、マンガン、鉄およびガドリニウムなどの非放射性金属と錯体を形成する場合、ＭＭに有用である。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、およびＴＥＴＡなどの大環状キレートは、さまざまな金属および放射性金属と共に、最も詳細には、それぞれガリウム、イットリウム、および銅の放射性核種と共に使用される。このような金属－キレート錯体は、環の大きさを目的の金属に合わせることによって非常に安定にすることができる。ＲＡＩＴのための２２３Ｒａのような、安定に結合する核種にとって興味深い、大環状ポリエーテルのような他の環型キレートが包含される。

【0299】

[00324]より最近になって、ＰＥＴ走査技術で用いられる１８Ｆ標識化法、例えば、Ｆ
－１８と金属または他の原子、例えばアルミニウムとの反応による方法が、開示されている。１８Ｆ－Ａｌコンジュゲートは、抗体に直接付着されるか、またはプレターゲッティング法において標識化可能な構築物を標識化するために使用される、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、またはＮＥＴＡなどのキレート化基と錯体化することができる。このようなＦ－１８標識化技術は、米国特許第７５６３４３３号に開示されており、その実施例の節を、本明細書中で参考として援用する。

【0300】

[00325]他の代表的な免疫コンジュゲートは、Ｊｏｈａｎｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２
００６，ＡＩＤＳ ２０：１９１１－１５）に開示されており、ここでは、ドキソルビシンがコンジュゲートしたＰ４／Ｄ１０（抗ｇｐ１２０）抗体が、ＨＩＶに感染した細胞を処置する際に非常に有効であることが見出された。

【0301】

追加の治療薬
[00326]他の態様において、細胞毒性薬、抗血管新生薬、プロアポトーシス薬、抗生物
質、ホルモン、ホルモン拮抗薬、ケモカイン、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、または他の薬剤などの治療薬を、対象ｂｓＡｂ、ＡＤＣおよび／もしくは抗体にコンジュゲートさせて、またはｂｓＡｂ、ＡＤＣおよび／もしくは抗体の前に、同時に、または後に別個に投与するかのいずれかで、使用することができる。使用薬物は、抗有糸分裂薬、抗キナーゼ薬、アルキル化薬、代謝拮抗薬、抗生物質、アルカロイド薬、抗血管新生薬、アポトーシス促進薬およびそれらの組合せからなる群より選択される医薬的特性を有することができる。

【0302】

[00327]有用な代表的薬物としては、限定されるものではないが、５－フルオロウラシ
ル、アファチニブ、アプリジン(aplidin)、アザリビン、アナストロゾール、アントラサ
イクリン、アキシチニブ、ＡＶＬ－１０１、ＡＶＬ－２９１、ベンダムスチン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブリオスタチン－１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、Ｃｏｘ－２阻害剤、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、ＳＮ－３８、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテカン、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ディナシクリブ、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシン（２Ｐ－ＤＯＸ）、シアノ－モルホリノドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エルロチニブ、エストラムスチン、エピドフィロトキシン、エルロチニブ、エンチノスタット、エストロゲン受容体結合剤、エトポシド（ＶＰ１６）、エトポシドグルクロニド、エトポシドリン酸塩、エキセメスタン、フィンゴリモド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’－Ｏ－ジオレオイル－ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ－ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、フラボピリドール、フォスタマチニブ、ガネテスピブ、ＧＤＣ－０８３４、ＧＳ－１１０１、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イブルチニブ、イダルビシン、イデラリシブ、イフォスファミド、イマチニブ、Ｌ－アスパラギナーゼ、ラパチニブ、レノリダミド(lenolidamide)、ロイコボリン、ＬＦＭ－Ａ１３、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、ナベルビン、ネラチニブ、ニロチニブ、ニトロソ尿素、オラパリブ、プリコマイシン、プロカルバジン、パクリタキセル、ＰＣＩ－３２７６５、ペントスタチン、ＰＳＩ－３４１、ラロキシフェン、セムスチン、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、タモキシフェン、テマゾロミド（ＤＴＩＣの水性形態）、トランスプラチナム、サリドマイド チオグアニン、チオペタ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、バタラニブ、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンカアルカロイドおよびＺＤ１８３９が挙げられる。

【0303】

[00328]有用な毒素としては、リシン、アブリン、アルファ毒素、サポリン、リボヌク
レアーゼ（ＲＮａｓｅ）、例えば、オンコナーゼ、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン－Ａ、ポークウィード(pokeweed)抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素が挙げられる。

【0304】

[00329]有用なケモカインとしては、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＡＦ、ＭＩＰ１－アルファ、
ＭＩＰ１－ベータおよびＩＰ－１０を挙げることができる。特定の態様において、抗血管新生薬例えば、アンギオスタチン、バキュロスタチン、カンスタチン、マスピン、抗ＶＥＧＦ抗体、抗Ｐ１ＧＦペプチドおよび抗体、抗血管成長因子抗体、抗Ｆｌｋ－１抗体、抗Ｆｌｔ－１抗体およびペプチド、抗Ｋｒａｓ抗体、抗ｃＭＥＴ抗体、抗ＭＩＦ(マクロフ
ァージ遊走阻止因子）抗体、ラミニンペプチド、フィブロネクチンペプチド、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、組織メタロプロテイナーゼ阻害剤、インターフェロン、インターロイキン－１２、ＩＰ－１０、Ｇｒｏ－β、トロンボスポンジン、２－メトキシオエストラジオール(methoxyoestradiol)、プロリフェリン関連タンパク質、カルボキシアミド
トリアゾール、ＣＭ１０１、マリマスタット、ペントサンポリ硫酸塩、アンジオポエチン－２、インターフェロン－アルファ、ハービマイシンＡ、ＰＮＵ１４５１５６Ｅ、１６Ｋプロラクチンフラグメント、リノミド（ロキニメックス）、サリドマイド、ペントキシフィリン、ゲニステイン、ＴＮＰ－４７０、エンドスタチン、パクリタキセル、アキュチン、アンギオスタチン、シドフォビル、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＡＧＭ－１４７０、血小板第４因子またはミノサイクリンが有用であることができる。

【0305】

[00330]有用な免疫調節薬は、サイトカイン、幹細胞成長因子、リンホトキシン、造血
因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリスロポエチン、トロンボポエチンおよびこれらの組合せから選択することができる。とりわけ有用なのは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのリンホトキシン、インターロイキン（ＩＬ）などの造血因子、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子、インターフェロン－α、－βまたは－λなどのインターフェロン、および「Ｓ１因子」と指名されるものなどの幹細胞成長因子である。サイトカインに包含されるものは、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝臓成長因子；プロスタグランジン、線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン、ＯＢタンパク質；腫瘍壊死因子－αおよび－β；ミュラー管抑制物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えば、ＮＧＦ－β；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ－αおよびＴＧＦ－β；インスリン様成長因子－Ｉおよび－ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子：インターフェロン、例えば、インターフェロン－α、－βおよび－γ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ））、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２；ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２５、ＬＩＦ、キット－リガンドまたはＦＬＴ－３、アンギオスタチン、トロンボスポンジン、エンドスタチン、腫瘍壊死因子、およびＬＴである。

【0306】

[00331]有用な放射性核種としては、限定されるものではないが、１１１Ｉｎ、１７７
Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、１１１Ａｇ、６７Ｇａ、１４２Ｐｒ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、２１２Ｐｂ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９９Ｍｏ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１６９Ｅｒ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ｐｂ、および２２７Ｔｈが挙げられる。治療用放射性核種は、好ましくは、２０～６０００ｋｅＶの範囲の崩壊エネルギーを有し、好ましくは、オージェ放射体の場合は６０～２００ｋｅＶ、ベータ放射体の場合は１００～２５００ｋｅＶ、アルファ放射体の場合は４０００～６０００ｋｅＶの範囲の崩壊エネルギーを有する。有用なベータ粒子放出核種の最大崩壊エネルギーは、好ましくは２０～５０００ｋｅＶ、より好ましくは１００～４０００ｋｅＶ、最も好ましくは５００～２５００ｋｅＶである。また、オージェ放出粒子と共に実質的に崩壊する放射性核種も好ましい。例えば、Ｃｏ－５８、Ｇａ－６７、Ｂｒ－８０ｍ、Ｔｃ－９９ｍ、Ｒｈ－１０３ｍ、Ｐｔ－１０９、Ｉｎ－
１１１、Ｓｂ－１１９、１－１２５、Ｈｏ－１６１、Ｏｓ－１８９ｍ、およびＩｒ－１９２である。有用なベータ粒子放出核種の崩壊エネルギーは、好ましくは＜１０００ｋｅＶ、より好ましくは＜１００ｋｅＶ、最も好ましくは＜７０ｋｅＶである。アルファ粒子の生成と共に実質的に崩壊する放射性核種も好ましい。このような放射性核種としては、限定されるものではないが、Ｄｙ－１５２、Ａｔ－２１１、Ｂｉ－２１２、Ｒａ－２２３、Ｒｎ－２１９、Ｐｏ－２１５、Ｂｉ－２１１、Ａｃ－２２５、Ｆｒ－２２１、Ａｔ－２１７、Ｂｉ－２１３、Ｔｈ－２２７およびＦｍ－２５５が挙げられる。有用なアルファ粒子放出放射性核種の崩壊エネルギーは、好ましくは２０００～１００００ｋｅＶ、より好ましくは３０００～８０００ｋｅＶ、最も好ましくは４０００～７０００ｋｅＶである。さらに考えうる有用な放射性同位体としては、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、７５Ｂｒ、１９８Ａｕ、２２４Ａｃ、１２６Ｉ、１３３Ｉ、７７Ｂｒ、１１３ｍＩｎ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｕ、１０７Ｈｇ、２０３Ｈｇ、１２１ｍＴｅ、１２２ｍＴｅ、１２５ｍＴｅ、１６５ｍＴｅ、１６５７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１９７Ｐｔ、１０９Ｐｄ、１０５Ｒｂ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１６１Ｔｂ、１６６Ｈｏ、１９９Ａｕ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５１Ｃｒ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、２０１Ｔｌ、２２５Ａｃ、７６Ｂｒ、１６９Ｙ
ｂなどが挙げられる。いくつかの有用な診断用核種としては、１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、または１１１Ｉｎを挙げることができる。

【0307】

[00332]治療薬は、光活性剤または染料を包含することができる。蛍光色素などの蛍光
組成物、および他の色原体、または可視光に感受性を示すポルフィリンなどの染料が、病変に適切な光を向けることによって病変を検出および処置するために使用されてきた。治療において、これは光線照射、光線療法、または光線力学的療法とよばれている。Ｊｏｎｉ ｅｔ ａｌ．（編集），ＰＨＯＴＯＤＹＮＡＭＩＣ ＴＨＥＲＡＰＹ ＯＦ ＴＵＭＯＲＳ ＡＮＤ ＯＴＨＥＲ ＤＩＳＥＡＳＥＳ（Ｌｉｂｒｅｒｉａ Ｐｒｏｇｅｔｔｏ
１９８５）；ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇｈ，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔａｉｎ（１９８６），２２：４３０参照。さらに、光線療法を達成するために、モノクローナル抗体が光活性化染料とカップリングされている。Ｍｅｗ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８３），１３０：１４７３；同上，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９８５），４５：４３８０；Ｏｓｅｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８６），８３：８７４４；同上，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．（１９８７），４６：８３；Ｈａｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．（１９８９），２８８：４７１；Ｔａｔｓｕｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｓｅｒｓ Ｓｕｒｇ．Ｍｅｄ．（１９８９），９：４２２；Ｐｅｌｅｇｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ（１９９１），６７：２５２９参照。

【0308】

[00333]他の有用な治療薬は、オリゴヌクレオチド、特に、好ましくは癌遺伝子および
癌遺伝子産物、例えば、ｂｃｌ－２またはｐ５３に対して指向されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでいてもよい。治療用オリゴヌクレオチドの好ましい形態は、ｓｉＲＮＡである。当業者なら、任意のｓｉＲＮＡまたは干渉ＲＮＡ種が、標的組織への送達のために抗体またはそのフラグメントに付着することができることを理解するであろう。多種多様な標的に対する多くのｓｉＲＮＡ種が当技術分野で公知であり、任意のこのような公知のｓｉＲＮＡを、特許請求される方法および組成物において利用することができる。

【0309】

[00334]有用になり得る公知のｓｉＲＮＡ種としては、ＩＫＫ－ガンマ（米国特許第７
０２２８２８号）；ＶＥＧＦ、Ｆｌｔ－１およびＦｌｋ－１／ＫＤＲ（米国特許第７１４８３４２号）；Ｂｃｌ２およびＥＧＦＲ（米国特許第７５４１４５３号）；ＣＤＣ２０（米国特許第７５５０５７２号）；トランスデューシン（ベータ）－様３（米国特許第７５７６１９６号）；ＫＲＡＳ（米国特許第７５７６１９７号）；炭酸脱水酵素ＩＩ（米国特許第７５７９４５７号）；補体成分３（米国特許第７５８２７４６号）；インターロイキ
ン－１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）（米国特許第７５９２４４３号）；サバイビン（米国特許第７６０８７０７０号）；スーパーオキシドジスムターゼ１（米国特許第７６３２９３８号）；ＭＥＴ癌原遺伝子（米国特許第７６３２９３９号）；アミロイドベータ前駆体タンパク質（ＡＰＰ）（米国特許第７６３５７７１号）；ＩＧＦ－１Ｒ（米国特許第７６３８６２１号）；ＩＣＡＭ１（米国特許第７６４２３４９号）；補体因子Ｂ（米国特許第７６９６３４４号）；ｐ５３（７７８１５７５号）、およびアポリポタンパク質Ｂ（７７９５４２１号）に特異的なものが挙げられる。それぞれの参照した特許の実施例の節を、本明細書中に参考として援用する。

【0310】

[00335]さらなるｓｉＲＮＡ種は、公知の商業的供給源、例えば、多くの供給源のなか
でもとりわけ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘ．）、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，Ｃｏｌｏ．）、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、Ｍｉｎｉｓ Ｂｉｏ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）およびＱｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）から入手可能である。ｓｉＲＮＡ種の他の公的に利用可能な供給源としては、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ＣｅｎｔｒｅのｓｉＲＮＡｄｂデータベース、ＭＩＴ／ＩＣＢＰ
ｓｉＲＮＡデータベース、Ｂｒｏａｄ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＲＮＡｉ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ ｓｈＲＮＡライブラリー、およびＮＣＢＩのＰｒｏｂｅデータベースが挙げられる。例えば、ＮＣＢＩ Ｐｒｏｂｅデータベースには３０８５２のｓｉＲＮＡ種が存在する。当業者なら、目的の任意の遺伝子について、ｓｉＲＮＡ種が既に設計されているか、または公的に利用可能なソフトウェアツールを使用して容易に設計され得ることを理解するであろう。任意のこのようなｓｉＲＮＡ種は、本ＤＮＬ（登録商標）複合体を使用して送達することができる。

【0311】

処置方法
[00336]特定の態様において、本明細書に開示されるのは、被験体に、治療用量の本明
細書に開示される治療薬または医薬組成物を投与することを含む、それを必要とする被験体の処置方法である。いくつかの例において、被験体は癌または感染性疾患を有する。場合によっては、癌は、ＣＤ２０、ＧＤ２、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３またはＶＥＧＦ－Ｒ２の発現に関連する癌である。

【0312】

[00337]いくつかの態様において、医薬組成物または治療薬は、静脈内、皮膚、皮下に
投与されるか、または苦痛部位に注射される。特定の場合において、医薬組成物または治療薬は、単回用量として、または分割用量で互いに約４８時間以内に投与される。いくつかの例において、医薬組成物または治療薬は、癌細胞数または体積の減少によって測定して、非癌性組織と比較して癌に対してより大きな免疫活性化を誘導する。

【0313】

[00338]いくつかの態様において、本明細書中に開示されるのは、ＣＤ２０の過剰発現
に関連する癌を有する被験体に、本明細書中に記載される治療薬または医薬組成物を投与する方法である。いくつかの態様において、本明細書に開示されるのは、ＧＤ２の過剰発現に関連する癌を有する被験体に、本明細書に記載の治療薬または医薬組成物を投与する方法である。いくつかの態様において、本明細書に開示されるのは、メソテリンの過剰発現に関連する癌を有する被験体に、本明細書に記載の治療薬または医薬組成物を投与する方法である。いくつかの態様において、本明細書中に開示されるのは、ＣＤ３８、ＣＤ１
９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３またはＶＥＧＦ－Ｒ２の過剰発現に関連する癌を有する被験に、改変したエフェクター細胞を投与する方法である。いくつかの場合において、癌は転移癌である。他の場合において、癌は再発性または難治性癌である。

【0314】

[00339]いくつかの場合において、癌は固形腫瘍または血液悪性腫瘍である。いくつか
の場合において、癌は固形腫瘍である。他の場合において、癌は血液悪性腫瘍である。いくつかの場合、癌は転移癌である。いくつかの場合は、癌は再発性または難治性癌である。

【0315】

[00340]いくつかの場合において、癌は固形腫瘍である。例示的な固形腫瘍としては、
限定されるものではないが、肛門癌；虫垂癌；胆管癌(bile duct cancer)（すなわち、胆管癌(cholangiocarcinoma)）；膀胱癌；脳腫瘍；乳癌；子宮頚癌；結腸癌；原発不明癌（ＣＵＰ）；食道癌；眼癌；卵管癌；消化器癌；腎臓癌；肝臓癌；肺癌；髄芽腫；黒色腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；上皮小体疾患；陰茎癌；下垂体腫瘍；前立腺癌；直腸癌；皮膚癌；胃癌；精巣癌；咽頭癌；甲状腺癌；子宮癌；膣癌；外陰癌；または膠芽腫が挙げられる。

【0316】

[00341]「膠芽腫」または「多形性膠芽腫」（ＧＢＭ）は、侵攻性の神経上皮性脳癌で
ある。ＧＢＭは、グリア型細胞、星状細胞、乏突起膠細胞前駆細胞、または神経幹細胞に由来し得る。膠芽腫の４つのサブタイプが同定されている。ＧＢＭの大部分である古典的サブタイプは上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）遺伝子の余分なコピーを保有しており、大部分は上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の発現が正常よりも多い。症例のサブセットでは、ＥＧＦＲ増幅は遺伝子再構成を伴い、そのうち最も一般的なものはＥＧＦＲバリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）である。膠芽腫でしばしば変異している遺伝子ＴＰ５３（ｐ５３）は、古典的サブタイプではほとんど変異していない。前神経(proneural)サブタイ
プは、ＴＰ５３（ｐ５３）、および血小板由来成長因子受容体Ａをコードする遺伝子であるＰＤＧＦＲＡ、およびイソクエン酸デヒドロゲナーゼ－１をコードする遺伝子であるＩＤＨ１において、高い変化率を有することが多い。間葉系サブタイプは、ニューロフィブロミン１をコードする遺伝子であるＮＦ１において変異またはその他の変化の割合が高く、ＥＧＦＲ遺伝子の変化が少なく、ＥＧＦＲの発現が他のタイプより少ないことを特徴とする。神経系サブタイプは、ＮＥＦＬ、ＧＡＢＲＡ１、ＳＹＴ１およびＳＬＣ１２Ａ５などのニューロンマーカーの発現という特徴を示す。他の遺伝子変化は膠芽腫で記載されており、それらの大部分はＲＢとＰＩ３Ｋ／ＡＫＴの２つの経路でクラスター化されている。膠芽腫では、これらの経路のそれぞれ６８～７８％および８８％に変化がみられる。

【0317】

[00342]いくつかの例では、癌は血液悪性腫瘍である。場合によっては、血液悪性腫瘍
は、リンパ腫、白血病、骨髄腫、またはＢ細胞悪性腫瘍を含む。場合によっては、血液悪性腫瘍は、がリンパ腫、白血病または骨髄腫を含む。いくつかの例において、例示的な血液悪性腫瘍としては、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、高リスクＣＬＬ、非ＣＬＬ／ＳＬＬリンパ腫、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞
性リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症が挙げられる。いくつかの態様では、血液悪性腫瘍は骨髄性白血病を含む。いくつかの態様において、血液悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む。

【0318】

[00343]いくつかの例において、本明細書中に開示されるのは、慢性リンパ性白血病（
ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、高リスクＣＬＬ、非ＣＬＬ／ＳＬＬリンパ腫、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症から選択される血液悪性腫瘍を有する被験体に、本明細書中に記載される改変されたエフェクター細胞を投与する方法である。いくつかの場合、本明細書中に開示されるのは、ＡＭＬまたはＣＭＬから選択される血液悪性腫瘍を有する被験体に、改変されたエフェクター細胞を投与する方法である。

【0319】

[00344]他の場合において、本明細書中に開示されるのは、感染性疾患による感染を有
する被験体に投与する方法である。感染性疾患は、細菌、ウイルスまたは真菌の感染に起因する疾患であることができる。他の例において、例示的なウイルス病原体としては、Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）、Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ（ＣＭＶ）、Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ Ｖｉｒｕｓ（ＲＳＶ）、ＪＣウイルス、ＢＫウイルス、ＨＳＶ、ＨＨＶファミリーのウイルス、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｕｓ、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ、およびＴｏｇａｖｉｒｉｄａｅが挙げられる。代表的な病原性ウイルスは、天然痘、インフルエンザ、ムンプス、麻疹、水痘、エボラ、および風疹を引き起こす。代表的な病原性真菌としては、Ｃａｎｄｉｄａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ、およびＳｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓが挙げられる。代表的な病原性細菌としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｓｐｉｒｏｃｈｅｔｅｓ、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａが挙げられる。

【0320】

二重特異性抗体の使用
[00345]本発明による治療実体の投与は、改善された移動、送達、忍容度などを提供す
るために製剤に組み込まれる適切なキャリヤー、賦形剤、および他の薬剤と共に投与されることは、理解されるであろう。多数の適切な製剤は、すべての医薬化学者に知られている処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ（１９７５））、特にＢｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章に、見出すことができる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルション、エ
マルションカルボワックス（さまざまな分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカルボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。製剤中の活性成分が製剤によって不活性化されず、製剤が投与経路と生理学的に適合性であり、忍容性であるという条件で、上記混合物のいずれも、本発明に従った処置および治療において適切であることができる。製薬化学者に周知の製剤、賦形剤およびキャリヤーに関するさらなる情報については、以下の文献およびその中の引用も参照されたい。Ｂａｌｄｒｉｃｋ Ｐ．“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ ｎｅｅｄ ｆｏｒ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｇｕｉｄａｎｃｅ．”Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０－８（２０００），Ｗａｎｇ Ｗ．
“Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１－２）：１－６０（２０００），Ｃｈａｒｍａｎ Ｗ Ｎ“Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ ｏｒａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ－ｓｏｍｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｃｏｎｃｅｐｔｓ．”Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．８９（８）：９６７－７８（２０００），Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ
ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８－３１１（１９９８）。

【0321】

[00346]本発明の抗体を包含する本発明の治療用製剤は、癌、例えば、非限定的な例と
して、白血病、リンパ腫、乳癌、結腸癌、卵巣癌、膀胱癌(bladder cancer)、前立腺癌、神経膠腫、肺および気管支癌、結腸直腸癌、膵臓癌、食道癌、肝臓癌、膀胱癌(urinary bladder cancer)、腎臓および腎盂癌、口腔および咽頭癌、子宮体癌、および／または黒色腫に関連する症状を処置または緩和するために用いられる。本発明はまた、癌に関連する症状の処置または緩和方法を提供する。治療レジメンは、標準的な方法を使用して、被験体、例えば、癌を罹患している（または癌を発症するリスクがある）ヒト患者を同定することによって実施される。

【0322】

[00347]処置の有効性は、特定の免疫関連疾患を診断または処置するための任意の公知
の方法と関連して決定される。免疫関連疾患の１以上の症状の緩和は、抗体が臨床的利益を与えることを示す。

【0323】

[00348]所望の特異性を有する抗体をスクリーニングするための方法としては、限定さ
れるものではないが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および当分野で公知の他の免疫学的に媒介される技術が挙げられる。

【0324】

[00349]ＣＤ４７、腫瘍関連抗原または他の抗原（またはそのフラグメント）などの標
的に対する抗体は、例えば、適切な生理学的試料内のこれらの標的のレベルの測定に使用するため、診断方法で使用するため、タンパク質の画像化に使用するために、これらの標的の局在性および／または定量に関連する当分野で公知の方法において使用することができる。所与の態様では、抗体由来抗原結合ドメインを含有するこれらの標的、またはその誘導体、フラグメント、類似体もしくは同族体のいずれかに特異的な抗体が、薬理学的に活性な化合物（以下、「治療薬」とよぶ）として利用される。

【0325】

[00350]本発明の抗体は、イムノアフィニティー、クロマトグラフィーまたは免疫沈降
などの標準的な技術を用いて、特定の標的を単離するために使用することができる。本発明の抗体（またはそのフラグメント）は、臨床試験手順の一部として、例えば、所定の処置レジメンの効力を決定するために、組織中のタンパク質レベルをモニタリングするために診断的に使用され得る。検出は、抗体を検出可能な物質にカップリングさせる（すなわち、物理的に連結させる）ことによって促進することができる。検出可能な物質の例とし
ては、さまざまな酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例としてはルミノールが挙げられ；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが挙げられ；適切な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈが挙げられる。

【0326】

[00351]ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化および完全ヒト抗体を含む本発明の
抗体を、治療薬として使用することができる。このような薬剤は一般に、被験体における所与の標的の異常な発現または活性化に関連する疾患または病理を処置または予防するために使用される。抗体調製物、好ましくは、標的抗原に対して高い特異性および高い親和性を有するものが、被験体に投与され、一般に、その標的との結合に起因する効果を有する。抗体の投与は、標的のシグナル伝達機能を無効化するか、阻害するか、または妨害することができる。抗体の投与は、標的と、それが天然に結合する内因性リガンドとの結合を無効化するか、阻害するか、または妨害することができる。例えば、抗体は標的に結合し、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を中和または他の方法で阻害する。

【0327】

[00352]本発明の抗体の治療有効量は一般に、治療目的を達成するのに必要な量に関連
する。上記のように、これは、特定の場合において、標的の機能を妨害する、抗体とその標的抗原との間の結合相互作用であり得る。投与するのに必要な量はさらに、その特異的抗原に対する抗体の結合親和性に依存し、また、投与される抗体が、それが投与される他の被験体の自由体積から激減する速度に依存する。本発明の抗体または抗体フラグメントの治療的に有効な投与のための一般的な範囲は、非限定的な例として、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重であることができる。一般的な投薬頻度は、例えば、１日２回～週１回の範囲であり得る。

【0328】

[00353]本発明の抗体またはそのフラグメントは、さまざまな疾患および障害の処置の
ために、医薬組成物の形態で投与することができる。このような組成物の調製に関与する原理および考察、ならびに成分の選択の指針は、例えば、以下に提供される：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ 第１９版（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｔ ａｌ．，編集者）Ｍａｃｋ
Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：１９９５；Ｄｒｕｇ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ
Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，Ａｎｄ Ｔｒｅｎｄｓ，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ，Ｐａ．，１９９４；およびＰｅｐｔｉｄｅ Ａｎｄ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．４），１９９１，Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。

【0329】

[00354]抗体フラグメントが使用される場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的
に結合する最小の阻害フラグメントが好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合成することができ、および／または組換えＤＮＡ技術によって生産することができる。（例えば、Ｍａｒａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３（１９９３）参照）。製剤はまた、処置される特定の適応症に必要な１より多くの活性化合物、好ましくは、
互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物を含有することができる。あるいは、またはさらに、組成物は、その機能を増強する薬剤、例えば、細胞毒性薬、サイトカイン、化学療法薬、または成長阻害薬を含むことができる。このような分子は、意図される目的に有効な量で、組み合わせ中に適切に存在する。

【0330】

[00355]活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合
によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、およびナノカプセル）またはマクロエマルションにおける、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、捕捉されることができる。

【0331】

[00356]ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、滅
菌濾過膜による濾過によって容易に達成される。
[00357]徐放性製剤を調製することができる。徐放性製剤の適切な例としては、抗体を
含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは造形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態にある。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ－グルタミン酸とγ－エチル－Ｌ－グルタミン酸とのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーおよびロイプロリドアセテートから構成される注射用ミクロスフェア）などの分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、およびポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。ポリマー、例えば、エチレン－酢酸ビニルおよび乳酸－グリコール酸は、１００日間を超えて分子を放出できるが、特定のヒドロゲルはより短い時間の間しかタンパク質を放出しない。

【0332】

[00358]本発明による抗体は、試料中の所与の標的（またはそのタンパク質フラグメン
ト）の存在を検出するための薬剤として使用することができる。いくつかの態様において、抗体は、検出可能な標識を含有する。抗体はポリクローナルであるか、より好ましくはモノクローナルである。完全な抗体、またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ）２）を使用する。プローブまたは抗体に関する「標識化された」という用語は、検出可能な物質をプローブまたは抗体にカップリング（すなわち、物理的に連結）することによる、プローブまたは抗体の直接的な標識化と、直接標識化される別の試薬との反応性による、プローブまたは抗体の間接的な標識化とを包含することを意図する。間接的標識化の例としては、蛍光標識された二次抗体を使用する一次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンで検出され得るようなビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識化が挙げられる。用語「生物学的試料」は、被験体から単離された組織、細胞および生物学的流体、ならびに被験体内に存在する組織、細胞および流体を包含することが意図される。したがって、「生物学的試料」という用語の使用に包含されるのは、血液、および血清、血漿、またはリンパを含む血液の画分または成分である。すなわち、本発明の検出方法は、生物学的試料中の分析物ｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡをｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで検出するために使用することができる。例えば、分析物ｍＲＮＡの検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを包含する。分析物タンパク質の検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降、および免疫蛍光が包含される。分析物ゲノムＤＮＡの検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術には、サザンハイブリダイゼーションが含まれる。免疫アッセイを実施するための手順は、例えば、“ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｖ
ｏｌ．４２，Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（編集）Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，１９９５；“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”，Ｅ．ＤｉａｍａｎｄｉｓおよびＴ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，１９９６；および“Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ
ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。さらに、分析物タンパク質の検出のためのｉｎ ｖｉｖｏ技術は、標識化された抗分析物タンパク質抗体を被験体に導入することを包含する。例えば、抗体を放射性マーカーで標識することができ、被験体におけるその存在および位置を、標準的な画像化技術によって検出することができる。

【0333】

医薬組成物および用量
[00359]本明細書に開示されるのは、特定の態様において、被験体に投与するための、
本明細書に開示される治療薬を含む医薬組成物である。

【0334】

[00360]いくつかの例において、本明細書に記載される治療薬を含む医薬組成物は、医
薬的に使用可能な調製物への活性化合物の加工を容易にする、賦形剤および補助剤を含む１以上の生理学的に許容しうるキャリヤーを使用して、従来法で製剤化される。適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。本明細書に記載される医薬組成物の要約は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）； Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９７５；Ｌｉｂｅｒｍａｎ， Ｈ．Ａ．およびＬａｃｈｍａｎ，Ｌ．，編集，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８０；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，第７版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ１９９９）に見いだされる。

【0335】

[00361]医薬組成物は、所望により、従来法、例えば、例示に過ぎないが、従来の混合
、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、水簸、乳化、カプセル化、捕捉または圧縮プロセスの手段により製造される。

【0336】

[00362]特定の態様において、組成物はまた、１以上のｐＨ調整剤または緩衝剤、例え
ば、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸などの酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウムおよびトリス－ヒドロキシメチルアミノメタンなどの塩基；ならびにクエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの緩衝剤を包含することができる。このような酸、塩基および緩衝剤は、組成物のｐＨを許容範囲に維持するのに必要な量で包含される。

【0337】

[00363]他の態様において、組成物はまた、組成物の重量モル浸透圧濃度を許容範囲に
するのに必要な量の１以上の塩を包含することができる。このような塩としては、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムカチオンおよび塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩または重亜硫酸塩アニオンを有するものが挙げられ；適切な塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウムおよび硫酸アンモニウムが挙げられる。

【0338】

[00364]本明細書に記載の医薬組成物は、任意の適した投与経路、例えば、限定される
ものではないが、経口、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、脳内、脳室内、関節内、腹腔内、または頭蓋内）、鼻腔内、バッカル、舌下、または直腸内の投与経路によって投与される。場合によっては、医薬組成物は、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、脳内、脳室内、関節内、腹腔内、または頭蓋内）投与のために製剤化される。

【0339】

[00365]本明細書に記載される医薬組成物は、任意の適した剤形、例えば、限定される
ものではないが、処置される個体による経口摂取のための、水性経口分散液、液体、ゲル、シロップ、エリキシル、スラリー、懸濁液など、固体経口剤形、エアロゾル、放出制御製剤、速溶融性製剤(fast melt formulation)、発泡性製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、粉末
、丸剤、糖衣錠、カプセル、遅延放出性製剤、徐放性製剤、パルス放出製剤、多粒子製剤、ならびに混合された即時放出性および放出制御性製剤に製剤化される。いくつかの態様において、医薬組成物はカプセルに製剤化される。いくつかの態様において、医薬組成物は、（例えば、ＩＶ投与のために）溶液に製剤化される。場合によっては、医薬組成物は、注入剤として製剤化される。場合によっては、医薬組成物は注射剤として製剤化される。

【0340】

[00366]本明細書中に記載される医薬固体剤形は、所望により、本明細書に記載される
化合物と、１以上の医薬的に許容しうる添加剤、例えば、適合性キャリヤー、結合剤、充填剤、懸濁化剤、香味剤、甘味剤、崩壊剤、分散剤、界面活性剤、潤滑剤、着色剤、希釈剤、可溶化剤、加湿剤、可塑剤、安定剤、浸透増強剤、湿潤剤、消泡剤、抗酸化剤、防腐剤、またはそれらの１以上の組み合わせとを包含する。

【0341】

[00367]さらに他の観点では、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第２０版（２０００）に記載されているような標準的なコーティング手順を用いて、組成物の周囲にフィルムコーティングを提供する。いくつかの態様では、組成物を粒子（例えば、カプセルによる投与のための）に製剤化し、粒子のいくつかまたはすべてをコーティングする。いくつかの態様では、組成物を粒子（例えば、カプセルによる投与のための）に製剤化し、粒子のいくつかまたはすべてをマイクロカプセル化する。いくつかの態様では、組成物を粒子（例えば、カプセルによる投与のための）に製剤化し、粒子のいくつかまたはすべてをマイクロカプセル化せず、コーティングしない。

【0342】

[00368]特定の態様において、本明細書で提供される組成物はまた、微生物活性を阻害
するために１以上の防腐剤を含むことができる。適切な防腐剤としては、メルフェン(merfen)およびチオメルサールなどの水銀含有物質；安定化二酸化塩素；ならびに、塩化ベンザルコニウム、セチルトリメチルアンモニウムブロミドおよびセチルピリジニウムクロリドなどの第四級アンモニウム化合物が挙げられる。

【0343】

[00369]本明細書中で言及される「増殖性疾患」は、細胞の過剰な増殖および細胞基質
のターンオーバーが、癌を含むいくつかの疾患の病因に顕著に寄与するという統一概念を意味する。

【0344】

[00370]本明細書で使用される「患者」または「被験体」は、生理学的状態、例えば、
癌または自己免疫状態または感染症を有するか、または発症すると、診断されるか、または疑われる哺乳類被験体をさす。いくつかの態様において、「患者」という用語は、平均よりも癌を発症する可能性が高い哺乳類被験体をさす。代表的な患者は、ヒト、類人猿、イヌ、ブタ、ウシ、ネコ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、齧歯類、および本明細書に開示される治療法から利益を得ることができる他の哺乳類であることができる。代表的なヒト患者は、男性および／または女性であることができる。

【0345】

[00371]「それを必要とする患者」または「それを必要とする被験体」は、本明細書中
では、疾患または傷害、例えば、制限されるものではないが、癌などの増殖性障害を有すると診断されるか、または疑われる患者をさす。いくつかの場合において、癌は固形腫瘍または血液悪性腫瘍である。場合によっては、癌は固形腫瘍である。他の場合において、癌は血液悪性腫瘍である。いくつかの場合、癌は転移癌である。いくつかの場合、癌は再発性または難治性癌である。いくつかの場合において、癌は固形腫瘍である。例示的な固形腫瘍としては、限定されるものではないが、肛門癌；虫垂癌；胆管癌(bile duct cancer)（すなわち、胆管癌(cholangiocarcinoma)）；膀胱癌；脳腫瘍；乳癌；子宮頚癌；結腸癌；原発不明癌（ＣＵＰ）；食道癌；眼癌；卵管癌；消化器癌；腎臓癌；肝臓癌；肺癌；髄芽腫；黒色腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；上皮小体疾患；陰茎癌；下垂体腫瘍；前立腺癌；直腸癌；皮膚癌；胃癌；精巣癌；咽頭癌；甲状腺癌；子宮癌；膣癌；外陰癌；または膠芽腫が挙げられる。いくつかの態様において、白血病は、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）であることができる。

【0346】

[00372]本明細書において、「投与すること」とは、本開示の組成物を患者に提供する
ことをいう。限定ではなく例として、組成物投与、例えば、注射は、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、皮下（ｓ．ｃ．）注射、皮内（ｉ．ｄ．）注射、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射、または筋肉内（ｉ．ｍ．）注射によって行うことができる。１以上のこのような経路を使用してもよい。非経口投与は、例えば、ボーラス注射によるか、または経時的な段階的潅流によることができる。あるいは、または同時に、投与は経口経路によるものであり得る。さらに、投与はまた、細胞のボーラスもしくはペレットの外科的堆積(surgical deposition)
、または医療デバイスの位置決めによるものであり得る。一態様において、本開示の組成物は、本明細書に記載される核酸配列を発現する操作された細胞もしくは宿主細胞、または本明細書に記載される少なくとも１つの核酸配列を含むベクターを、増殖性障害を処置または予防するのに有効な量で含むことができる。医薬組成物は、本明細書に記載の標的細胞集団を、１以上の医薬的または生理学的に許容しうるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と組み合わせて含むことができる。このような組成物は、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチドまたはアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート化剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含むことができる。

【0347】

[00373]本明細書中で使用される場合、用語「処置」、「処置すること」およびその文
法的等価物は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることをいう。態様において、効果は治療的であり、すなわち、効果は、疾患および／または疾患に起因する有害症状を部分的または完全に治癒する。この目的のために、本明細書中に記載される方法は、本明細書中に記載される核酸配列を発現する宿主細胞を含む組成物、または本明細書中に記載される核酸配列を含むベクターの「治療的有効量」を投与することを含む。

【0348】

[00374]用語「治療的有効量」、「治療量」、「免疫学的有効量」、「抗腫瘍有効量」
、「腫瘍阻害有効量」またはそれらの文法的等価物は、所望の治療結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量をさす。治療的有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する本明細書に記載の組成物の能力などの因子に従って変動することができる。投与されるべき本開示の組成物の正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および患者（被験体）の状態における個体差を考慮して、医師によって決定され得る。

【0349】

[00375]あるいは、本明細書中に記載される１以上の組成物の患者または被験体への投
与の薬理学的および／または生理学的効果は、「予防的」であることができ、すなわち、この効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に予防する。

【0350】

[00376]「予防的有効量」は、所望の予防的結果（例えば、疾患発症の予防）を達成す
るために必要な投与量および期間で有効な量をさす。
[00377]「消泡剤」は、水性分散液の凝固、完成フィルム中の気泡をもたらし、または
一般的に加工を損なうことがある、加工中の発泡を減少させる。例示的な消泡剤としては、ケイ素エマルジョンまたはソルビタンセスキオレイン酸エステル(sorbitan sesquoleate)が挙げられる。

【0351】

[00378]「抗酸化剤」としては、例えば、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ア
スコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびトコフェロールが挙げられる。特定の態様において、抗酸化剤は、必要な場合、化学的安定性を増強する。

【0352】

[00379]本明細書に記載される製剤は、抗酸化剤、金属キレート化剤、チオール含有化
合物および他の一般的な安定剤から利益を得ることができる。このような安定剤の例としては、例えば、限定されるものではないが、（ａ）約０．５％～約２％ｗ／ｖ グリセロール、（ｂ）約０．１％～約１％ｗ／ｖ メチオニン、（ｃ）約０．１％～約２％ｗ／ｖモノチオグリセロール、（ｄ）約１ｍＭ～約１０ｍＭ ＥＤＴＡ、（ｅ）約０．０１％～約２％ｗ／ｖ アスコルビン酸、（ｆ）０．００３％～約０．０２％ｗ／ｖ ポリソルベート８０、（ｇ）０．００１％～約０．０５％ｗ／ｖ ポリソルベート２０、（ｈ）アルギニン、（ｉ）ヘパリン、（ｊ）デキストラン硫酸(dextran sulfate)、（ｋ）シクロデ
キストリン、（ｌ）ペントサンポリスルフェートおよび他のヘパリノイド、（ｍ）マグネシウムおよび亜鉛などの二価カチオン；または（ｎ）それらの組み合わせが挙げられる。

【0353】

[00380]「結合剤」は凝集性を付与し、例えば、アルギン酸およびその塩；カルボキシ
メチルセルロース、メチルセルロース（例えば、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標））、エチルセルロース（例えば、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））、および微晶質セルロース（例えば、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標））などのセルロース誘導体；微晶質デキストロース；アミロース；マグネシウムアルミニウムシリケート；多糖類酸；ベントナイト；ゼラチン；ポリビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー；クロスポビドン；ポビドン；デンプン；プレゼラチン化デンプン；トラガカント、デキストリン、スクロース（例えば、Ｄｉｐａｃ（登録商標））、グルコース、デキストロース、糖蜜、マンニトール、ソルビトール、キシリトール（例えば、Ｘｙｌｉｔａｂ（登録商標））、およびラクトースなどの糖；アカシア、トラガカントゴム、ガティガム(ghatti gum)、イサポール皮(isapol husk)の粘液、ポリビニルピロリドン（例えば
、Ｐｏｌｙｖｉｄｏｎｅ（登録商標） ＣＬ、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標） ＣＬ、Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標） ＸＬ－１０)、カラマツアラボガラクタン、Ｖｅ
ｅｇｕｍ（登録商標）、ポリエチレングリコール、ワックス、アルギン酸ナトリウムなどを包含する。

【0354】

[00381]「キャリヤー」または「キャリヤー材料」は、薬剤学で一般に使用されている
任意の賦形剤を包含し、イブルチニブおよび抗癌剤の化合物などの本明細書に開示される化合物との適合性、および所望の剤形の放出プロフィール特性に基づいて選択されるべきである。例示的なキャリヤー材料としては、例えば、結合剤、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、潤滑剤、湿潤剤、希釈剤などが挙げられる。「医薬的に適合しうるキャリヤー材料」は、限定されるものではないが、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、コレステロール、コレステロールエステル、カゼイン酸ナトリウム、大豆レシチン、タウロコール酸、
ホスホチジルコリン、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウム、リン酸二カリウム、セルロースおよびセルロースコンジュゲート、糖ステアロイル乳酸ナトリウム(sugars sodium stearoyl lactylate)、カラゲナン、モノグリセリド、ジグリセリド、プレゼラチン化デンプンなどが挙げられる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ
Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）；Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９７５；Ｌｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．およびＬａｃｈｍａｎ，Ｌ．，編集，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８０；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ
Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，第７版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ１９９９）参照。

【0355】

[00382]「分散剤」および／または「粘度調節剤」は、液体媒体または顆粒化方法また
はブレンド方法を通して薬物の拡散および均質性を制御する材料を包含する。いくつかの態様において、これらの薬剤はまた、コーティングまたは浸食マトリックスの有効性を促進する。例示的な拡散促進剤／分散剤としては、例えば、親水性ポリマー、電解質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０または８０、ＰＥＧ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ；Ｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）として商業的に知られている）、および炭水化物ベースの分散剤、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、ＨＰＣ、ＨＰＣ－ＳＬ、およびＨＰＣ－Ｌ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例えば、ＨＰＭＣ Ｋ１００、ＨＰＭＣ
Ｋ４Ｍ、ＨＰＭＣ Ｋ１５Ｍ、およびＨＰＭＣ Ｋ１００Ｍ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート（ＨＰＭＣＡＳ）、非結晶性セルロース、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー（Ｓ６３０）、４－（１，３，３－テトラメチルブチル）－フェノールポリマーとエチレンオキシドおよびホルムアルデヒド（チロキサポールとしても知られる）、ポロキサマー（例えば、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのブロックコポリマーであるＰｌｕｒｏｎｉｃｓ Ｆ６８（登録商標）、Ｆ８８（登録商標）およびＦ１０８（登録商標））；およびポロキサミン（例えば、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ ９０８（登録商標）、これは、Ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅ（登録商標）としても知られ、エチレンジアミンへのプロピレンオキシドおよびエチレンオキシドの逐次付加から誘導される四官能性ブロックコポリマーである（ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ， ＮＪ））、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、またはポリビニルピロリドンＫ３０、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー（Ｓ－６３０）、ポリエチレングリコール、例えば、ポリエチレングリコールは約３００～約６０００、または約３３５０～約４０００、または約７０００～約５４００の分子量を有することができる、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、ゴム、例えば、トラガカントゴムおよびアラビアゴム、グアーガム、キサンタンゴムを含むキサンタン、糖類、セルロース系誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなど、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポビドン、カルボマー、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、アルギン酸塩、キトサンおよびそれらの組み合わせが挙げられる。セルロースまたはトリエチルセルロースなどの可塑剤も分散剤として使用することができる。リポソーム分散液および自己乳化分散液に特に有用な分散剤は、ジミリストイルホスファチジルコリン、卵由来の天然ホスファチジルコリン、卵由来の天然ホスファチジルグリセロール、コレステロー
ルおよびミリスチン酸イソプロピルである。

【0356】

[00383]１以上の浸食促進剤と１以上の拡散促進剤との組み合わせもまた、本組成物に
おいて使用することができる。
[00384]「希釈剤」という用語は、送達前に目的の化合物を希釈するために使用される
化合物をさす。希釈剤は、より安定な環境を提供することができるので、化合物を安定化するために使用することもできる。緩衝溶液（これはまた、ｐＨ制御または維持を提供することもできる）に溶解した塩、例えば、限定されるものではないが、リン酸緩衝食塩水は、当分野で希釈剤として用いられている。特定の態様において、希釈剤は組成物の嵩を増大させて、圧縮を容易にし、またはカプセル充填のための均質なブレンドのために十分な嵩を作り出す。このような化合物としては、例えば、ラクトース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標)などの微結晶セルロー
ス；二塩基性リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物；リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム；無水ラクトース、噴霧乾燥ラクトース；プレゼラチン化デンプン、圧縮性糖(compressible sugar)、例えばＤｉ－Ｐａｃ（登録商標）（Ａｍｓｔａｒ）；マンニトール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、スクロースに基づく希釈剤、粉砂糖；一塩基性硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム二水和物；乳酸カルシウム三水和物、デキストレート(dextrate)；加水分解された穀物固体、アミロース；粉末セルロース、炭酸カルシウム；グリシン、カオリン；マンニトール、塩化ナトリウム；イノシトール、ベントナイトなどが挙げられる。

【0357】

[00385]「充填剤」としては、ラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、二塩
基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶セルロース、セルロース粉末、デキストロース、デキストレート、デキストラン、デンプン、プレゼラチン化デンプン、スクロース、キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコールなどの化合物が挙げられる。

【0358】

[00386]「潤滑剤」および「流動促進剤」は、材料の付着または摩擦を防止、低減また
は抑制する化合物である。例示的な潤滑剤としては、例えば、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、フマル酸ステアリルナトリウム(sodium stearyl fumerate)、鉱油など
の炭化水素、または水素化大豆油（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ（登録商標））などの水素化植物油、高級脂肪酸およびそのアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩、例えば、アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール、タルク、ワックス、Ｓｔｅａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ－４０００）、またはＣａｒｂｏｗａｘ^ＴＭなどのメトキシポリエチレングリコール、オレイン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ポリエチレングリコール、マグネシウムもしくはラウリル硫酸ナトリウム、コロイドシリカ、例えば、Ｓｙｌｏｉｄ^ＴＭ、Ｃａｂ－Ｏ－Ｓｉｌ（登録商標）、トウモロコシデンプンなどのデンプン、シリコーン油、界面活性剤などが挙げられる。

【0359】

[00387]「可塑剤」は、マイクロカプセル化材料またはフィルムコーティングを軟化さ
せて、それらをより脆性を低下させるために使用される化合物である。適切な可塑剤としては、例えば、ＰＥＧ ３００、ＰＥＧ ４００、ＰＥＧ ６００、ＰＥＧ １４５０、ＰＥＧ ３３５０、およびＰＥＧ ８００などのポリエチレングリコール、ステアリン酸、プロピレングリコール、オレイン酸、トリエチルセルロース、およびトリアセチンが挙げられる。いくつかの態様では、可塑剤が分散剤または湿潤剤としても機能することができる。

【0360】

[00388]「可溶化剤」には、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、
カプリル酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクサートナトリウム(sodium doccusate)、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ｎ－ブタノール、イソプロピルアルコール、コレステロール、胆汁塩、ポリエチレングリコール２００－６００、グリコールフルオール、トランスクトール、プロピレングリコール、およびジメチルイソソルビドなどの化合物が包含される。

【0361】

[00389] 「安定剤」には、任意の抗酸化剤、緩衝剤、酸、防腐剤などの化合物が包含される。
[00390]「懸濁化剤」には、ポリビニルピロリドン、例えば、ポリビニルピロリドンＫ
１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、またはポリビニルピロリドンＫ３０、ビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー（Ｓ－６３０）、ポリエチレングリコール、例えば、ポリエチレングリコールは約３００～約６０００、または約３３５０～約４０００、または約７０００～約５４００の分子量を有することができる、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースアセテートステアレート、ポリソルベート－８０、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゴム、例えば、トラガカントゴムおよびアラビアゴム、グアーガム、キサンタンゴムを含むキサンタン、糖類、セルロース系誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポビドンなどが包含される。

【0362】

[00391]「界面活性剤」には、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクサートナトリウム、Ｔｗ
ｅｅｎ ６０または８０、トリアセチン、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポロキソマー(polaxomer)、胆汁塩、グリセリルモノステアレート、エチレンオキシドとプロピレンオキ
シドとのコポリマー、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）（ＢＡＳＦ）などの化合物が包含される。他のいくつかの界面活性剤としては、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドおよび植物油、例えば、ポリオキシエチレン（６０）水素化ひまし油；およびポリオキシエチレンアルキルエーテルおよびアルキルフェニルエーテル、例えば、オクトキシノール１０、オクトキシノール４０が挙げられる。いくつかの態様において、界面活性剤は、物理的安定性を増強するために、または他の目的のために包含させることができる。

【0363】

[00392]「粘度増強剤」には、例えば、メチルセルロース、キサンタンガム、カルボキ
シメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートカルボマー、ポリビニルアルコール、アルギン酸塩、アカシア、キトサンおよびそれらの組合せが包含される。

【0364】

[00393]「湿潤剤」としては、オレイン酸、グリセリルモノステアレート、ソルビタン
モノオレエート、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ドクサートナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクサートナトリウム、トリアセチン、Ｔｗｅｅｎ ８０、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、アンモニウム塩
などの化合物が挙げられる。

【0365】

抗体をコードする核酸分子
[00394]本開示の別の観点は、本明細書中に記載される抗体ポリペプチドまたはその抗
原結合フラグメントをコードする単離された核酸配列に関する。「ポリヌクレオチド」または「核酸分子」は本明細書中で互換的に使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをさし、ＤＮＡおよびＲＮＡを包含する。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および／またはそれらの類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマー中に組み込むことができる任意の基質であることができる。核酸分子は、修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチドおよびそれらの類似体を含むことができる。核酸分子は、標準的技術、例えば、限定されるものではないが、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当分野で周知の他の技術によって、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質から精製された場合、「単離」されており、「実質的に純粋になっている」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，編集（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照。本開示の少なくともいくつかの態様に従った核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、イントロン配列を含んでも含まなくてもよい。好ましい態様では、核酸はｃＤＮＡ分子である。

【0366】

[00395]いくつかの態様において、単離された核酸分子は、抗体の重鎖可変ドメインを
コードする核酸配列を含む。いくつかの態様において、第２の可変軽鎖ドメインをコードする核酸配列は、配列番号４９のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、第２の可変軽鎖ドメインをコードする核酸配列は、配列番号５２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、第１の可変軽鎖ドメインをコードする核酸配列は、配列番号５０のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、第１の可変軽鎖ドメインをコードする核酸配列は、配列番号５１のヌクレオチド配列を含む。

【0367】

[00396]いくつかの態様において、単離された核酸分子は、抗体の重鎖ポリペプチドを
コードする核酸配列を含む。いくつかの態様にて、第２の可変重鎖ドメインをコードする核酸配列は、配列番号４６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、第１の可変重鎖ドメインをコードする核酸配列は、配列番号４７のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、第１の可変重鎖ドメインをコードする核酸配列は、配列番号４８のヌクレオチド配列を含む。

【0368】

[00397]いくつかの態様において、二重可変ドメインＩｇにおいて第１のポリペプチド
をコードする単離された核酸分子は、配列番号５３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、二重可変ドメインＩｇにおいて第２のポリペプチドをコードする単離された核酸分子は、配列番号５５のヌクレオチド配列を含む。

【0369】

[00398]いくつかの態様において、二重可変ドメインＩｇにおいて第１のポリペプチド
をコードする単離された核酸分子は、配列番号５４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、二重可変ドメインＩｇにおいて第２のポリペプチドをコードする単離された核酸分子は、配列番号５６のヌクレオチド配列を含む。

【0370】

[00399]いくつかの態様において、抗体構築物のポリペプチドをコードする単離された
核酸は、表１５および表１６から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ＩｇＡ重鎖定常ドメインをコードする単離された核酸は、配列番号６１～６６から選択される。いくつかの態様において、カッパ型の軽鎖定常ドメインをコードする単離された核酸は、配列番号６７または配列番号６８のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ラムダ型の軽鎖定常ドメインをコードする単離された核酸は、配列番号６９のヌクレオチド配列を含む。

【0371】

[00400]本開示の少なくともいくつかの態様に従った核酸分子は、標準的な分子生物学
技術を用いて得ることができる。ハイブリドーマによって発現される抗体（例えば、以下にさらに記載されるようなヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスから調製されるハイブリドーマ）の場合、ハイブリドーマによって作製される抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技術によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから（例えば、ファージディスプレイ技術を使用して）得られる抗体に関し、抗体をコードする核酸は、ライブラリーから回収することができる。

【0372】

[00401]いったんＤＮＡ断片が得られると、これらのＤＮＡフラグメントを標準的な組
換えＤＮＡ技術によってさらに操作して、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝子またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作において、ＶＬまたはＶＨをコードするＤＮＡフラグメントは、他のタンパク質、例えば、抗体定常領域またはフレキシブルリンカーをコードする他のＤＮＡフラグメントにオペレート可能に連結される。この文脈において使用される用語「オペレート可能に連結された」は、２つのＤＮＡフラグメントによってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように、２つのＤＮＡフラグメントが接合されることを意味することを意図する。ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする他のＤＮＡ分子にオペレート可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は当分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２定常領域であることができる。ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする他のＤＮＡ分子にオペレート可能に連結することができる。

【0373】

[00402]ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖
定常領域ＣＬをコードする他のＤＮＡ分子にオペレート可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ． Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であることができる。

【0374】

[00403]ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡフラグ
メントは、ペプチドリンカーをコードする他のフラグメントにオペレート可能に連結され、その結果、ＶＨおよびＶＬ配列は連続する一本鎖タンパク質として発現され得、ＶＬおよびＶＨ領域はフレキシブルリンカーによって接合される（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４）参照）。

【0375】

[00404]本開示から単離された核酸分子は、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）
を含む核酸分子を包含することができ、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、所望により、１以上のイントロン、例えば、限定されるものではないが、少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも１つの特異的部分を、少なくとも１つの軽鎖または少なくとも１つの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３として含み；本明細書に開示される抗体構築物のコード配列または可変領域、例えば、軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む核酸分子；ならびに、上記のものとは実質的に異なるが、遺伝コードの縮重のために、少なくとも抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載されている、および／または当技術分野で知られている抗体のドメインもしくはポリペプチドを依然としてコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。言うまでもなく、遺伝子コードは当技術分野で周知である。したがって、本開示の特異的抗体をコードするそのような縮重核酸バリアントを生成することは、当業者にとって日常的であろう。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，同上参照。このような核酸バリアントは、本発明に包含される。

【0376】

[00405]抗体の１以上のドメインをコードする核酸配列を含む核酸分子を、本明細書中
に提供する。いくつかの態様において、核酸分子は、抗体の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインをコードする核酸配列を含む。いくつかの態様において、核酸分子は、抗体の重鎖可変ドメインをコードする核酸配列と、軽鎖可変ドメインをコードする核酸配列の両方を含む。いくつかの態様では、第１の核酸分子が、重鎖可変ドメインをコードする第１の核酸配列を含み、第２の核酸分子が、軽鎖可変ドメインをコードする第２の核酸配列を含む。

【0377】

[00406]いくつかの態様において、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインは、２つ
の別個のポリペプチドとして、１つの核酸分子から、または２つの別個の核酸分子から発現される。いくつかの態様において、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一の核酸配列は、一緒に連結された重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの両方を含む単一のポリペプチドをコードする。

【0378】

[00407]いくつかの態様において、核酸分子は、本明細書の表１～２の抗体のアミノ酸
配列のいずれかをコードするものである。いくつかの態様において、核酸配列は、本明細書の表１２～１７中のアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも８０％同一であり、例えば、少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％同一であるものである。いくつかの態様において、核酸は、本明細書中に提供される核酸配列の任意の１以上にハイブリダイズする核酸である。いくつかの態様において、ハイブリダイゼーションは、中程度の条件下である。いくつかの態様において、ハイブリダイゼーションは非常に厳しい条件下であり、例えば、６５oＣで少
なくとも約６×ＳＳＣおよび１％ ＳＤＳ、最初の洗浄は、約４２oＣにおいて０．１×
ＳＳＣ中の約２０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドで１０分間、次の洗浄は、６５oＣにおいて
０．２×ＳＳＣおよび０．１％ ＳＤＳで行われる。

【0379】

[00408]核酸分子は、当該分野で慣用的な組換えＤＮＡ技術を使用して構築することが
できる。いくつかの態様において、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に適した発現ベクター中に配置される。

【0380】

[00409]本明細書中の抗体または抗原結合フラグメントをコードする核酸分子を含むベ
クターを提供する。重鎖および／または軽鎖をコードする核酸分子を含むベクターも提供する。このようなベクターとしては、限定されるものではないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウィルスベクターなどが挙げられる。一態様において、軽可変ドメインをコードする核酸および重鎖可変ドメインをコードする核酸は、
上記に概説される手順によって別個に単離される。一態様において、軽鎖可変ドメインをコードする単離された核酸および重鎖可変ドメインをコードする単離された核酸は、それぞれが適切なプロモーターおよび翻訳制御下にある限り、別々の発現プラスミド中に、または同じプラスミド中に一緒に、挿入されることができる。いくつかの態様において、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインは、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリペプチドの一部として発現される。

【0381】

[00410]いくつかの態様において、第１のベクターは、重鎖可変ドメインをコードする
核酸分子を含み、第２のベクターは、軽鎖可変ドメインをコードする核酸分子を含む。いくつかの態様では、第１のベクターおよび第２のベクターは、同様の量（同様のモル量または同様の質量量など）で宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの態様では、５：１～１：５のモル比または質量比の第１のベクターおよび第２のベクターが、宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの態様では、重鎖をコードするベクターおよび軽鎖をコードするベクターについて、１：１～１：５の質量比が使用される。いくつかの態様では、重鎖をコードするベクターおよび軽鎖をコードするベクターについて１：２の質量比が使用される。いくつかの態様では、ＣＨＯまたはＣＨＯ由来細胞、またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されたベクターが選択される。このようなベクターの例は、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記載されている。

【0382】

[00411]一観点において、本開示は、核酸分子を投与することを含む、癌の処置または
予防方法を提供し、ここで、該核酸分子は、ＶＨのＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ３領域またはＶＬもしくはその抗原結合フラグメントのＣＤＲ３領域をコードし、該核酸分子は、遺伝子治療として本明細書中に開示される配列（例えば、表１２～１７）を含む。遺伝子治療法は、発現された、または発現されうる核酸の被験体への投与により実施する治療法をさす。本発明のこの態様において、核酸は、予防的または治療的効果を媒介するそれらのコードされたタンパク質を産生する。当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法を、本明細書中の態様に従って使用することができる。

【0383】

[00412]遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８－５０５；ＷｕおよびＷｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３－５９６； Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；およびＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１－２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢＴＥＣＨ １１（５）：１５５－２１５参照。使用することができる組換えＤＮＡ技術の技術分野で一般に公知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（編集）、１９９３、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， ＮＹ；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹに記載されている。適切な細胞への治療抗体の送達は、物理的ＤＮＡ転移法（例えば、リポソームまたは化学的処理）の使用によるか、またはウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、またはレトロウイルス）の使用を含む、当該分野で公知の任意の適切なアプローチの使用によって、ｅｘ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｓｉｔｕ、またはｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子治療を介して達成され得る。

【0384】

[00413]本明細書で使用される「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェク
トされた特定の被験体細胞、およびそのような細胞の子孫または潜在的子孫をさす。このような細胞の子孫は、核酸分子をトランスフェクトされた親細胞と同一ではないことがあ
るが、これは、核酸分子の宿主細胞ゲノムへの連続した発生または統合において起こりうる変異または環境の影響による。

【0385】

[00414]他のｉｎ ｖｉｖｏ核酸導入技術は、ウイルスベクター（例えば、アデノウイ
ルス、単純ヘルペスＩウイルス、またはアデノ随伴ウイルス）および脂質ベースのシステムでのトランスフェクションを含む。核酸およびトランスフェクション剤は、所望により、微粒子と会合される。例示的なトランスフェクション剤としては、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、四級アンモニウム両親媒性ＤＯＴＭＡ（（ジオレオイルオキシプロピル）トリメチルアンモニウムブロミド、ＧＩＢＣＯ－ＢＲＬによってＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎとして市販されている）（Ｆｅｌｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８７) Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８４，７４１３－７４１７；Ｍａｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６ ６０７７－６０８１）；ペンダントトリメチルアンモニウムヘッドを有する親油性グルタミン酸ジエステル（Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０２３， １２４－１３２）；カチオン性脂質ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ，Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ，Ｐｒｏｍｅｇａ）およびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミルスペルミン（ＤＰＰＥＳ）（Ｊ．Ｐ．Ｂｅｈｒ（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ
Ｌｅｔｔ ２７，５８６１－５８６４；Ｊ．Ｐ．Ｂｅｈｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６，６９８２－６９８６））のような代謝可能な親脂質；代謝可能な第四級アンモニウム塩（ＤＯＴＢ、Ｎ－（１－［２，３－ジオレオイルオキシ］プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムメチルスルフェート（ＤＯＴＡＰ）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ジオレオイルエステル、ＣｈｏＴＢ、ＣｈｏＳＣ、ＤＯＳＣ）（Ｌｅｖｅｎｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｉｎｔｅｒ．２２，２３５－２４１）；３ベータ［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ）、１対１の混合物でのジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）／３ベータ［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロールＤＣ－Ｃｈｏｌ（Ｇａｏ ｃｔ ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏｃｈｉｍ）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０６５，８－１４）、スペルミン、スペルミジン、リポポリアミン（Ｂｅｈｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ，１９９４，５：３８２－３８９）、親油性ポリリジン（ＬＰＬＬ）（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ９３９， ８－１８）、［［（１，１，３，３テトラメチルブチル）クレソキシ］エトキシ］エチル］ジメチルベンジルアンモニウムヒドロキシド（ＤＥＢＤＡヒドロキシド）と過剰のホスファチジルコリン／コレステロール（Ｂａｌｌａｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ９３９，８－１８）、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）／ＤＯＰＥ混合物（Ｐｉｎｎａｄｕｗａｇｅ ｅｔ ａｌ，（１９８９）Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ９８５，３３－３７）、ホスファチジルエタノールアミンとの混合物中のＤＯＰＥ、ＣＴＡＢ、ＤＥＢＤＡ、ジドデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、およびステアリルアミンを含むグルタミン酸（ＴＭＡＧ）の親油性ジエステル（Ｒｏｓｅ ｅｔ ａｌ，（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅ １０，５２０－５２５）、ＤＤＡＢ／ ＤＯＰＥ（ＴｒａｎｓｆｅｃｔＡＣＥ，ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ）、およびオリゴガラクトース含有脂質が挙げられる。移入の効率を増加させる例示的なトランスフェクション増強剤には、例えば、ＤＥＡＥ－デキストラン、ポリブレン、リソソーム破壊ペプチド（Ｏｈｍｏｒｉ ＮＩ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ Ｊｕｎ １９９７；２３５（３）：７２６－９）、コンドロイタンに基づくプロテオグリカン、硫酸化プロテオグリカン、ポリエチレンイミン、ポリリジン（Ｐｏｌｌａｒｄ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、１９９８、２７３（１３）：７５０７－１１）、インテグリン結合ペプチドＣＹＧＧＲＧＤＴＰ、
線状デキストラン非糖類、グリセロール、オリゴヌクレオチドの３’末端インターヌクレオシド連結で繋がれたコレステリル基（Ｌｅｔｓｎｇｅｒ Ｒ．Ｌ．１９８９ Ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：（１７）：６５５３－６）、リゾホスファチド、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、および１－オレオイルリゾホスファチジルコリンが含まれる。

【0386】

[00415]いくつかの状況において、核酸含有ベクターを標的細胞に向ける薬剤と共に核
酸を送達することが望ましい場合がある。このような「標的化」分子には、標的細胞上の細胞表面膜蛋白質に特異的な抗体、または標的細胞上の受容体に対するリガンドが含まれる。リポソームが使用される場合、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質を、標的化のために、および／または取り込みを容易にするために使用することができる。このようなタンパク質の例としては、特定の細胞型に対して向性のキャプシドタンパク質およびそのフラグメント、サイクリングにおいてインターナリゼーションを受けるタンパク質に対する抗体、ならびに細胞内局在化を標的とし、細胞内半減期を増強するタンパク質が挙げられる。他の態様では、受容体媒介エンドサイトーシスを使用することができる。このような方法は、例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９８７またはＷａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０に記載されている。現在知られている遺伝子マーキングおよび遺伝子治療プロトコルのレビューについては、Ａｎｄｅｒｓｏｎ １９
９２を参照のこと。ＷＯ９３／２５６７３およびそこに引用されている参考文献も参照されたい。

【実施例0387】

[00416]これらの実施例は、例示の目的のために提供するに過ぎず、本明細書に提供さ
れる特許請求の範囲を限定するものではない。
実施例１．ＩｇＡに基づく抗体構築物は腫瘍細胞の食作用を誘発する
[00417]ＣＤ２０－ＣＤ４７ ＩｇＡ二重特異性抗体構築物は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα
相互作用を遮断し、マクロファージ上でＦｃＲを係合させる結果、腫瘍細胞の食作用を可能にする。ＣＤ２０＋ＣＤ４７＋ＣＦＳＥ標識細胞株を、異なる抗体の存在下で非標識ヒトマクロファージと共インキュベートし、標的細胞の食作用をフローサイトメトリーにより評価する。ＣＤ４７またはＣＤ２０に対する抗体は、アイソタイプ対照抗体で観察されるベースラインレベルと比較して有意な食作用を誘発する。ＩｇＡ二重特異性抗体は抗ＣＤ４７とリツキシマブの併用治療の相乗作用を反復し、試験される細胞株において抗ＣＤ４７単独による治療と比較して食作用を増加させる。

【0388】

実施例２ 二重特異性抗体構築物
二重可変ドメインＩｇＡ免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ二重特異性ＩｇＡ）
[00418]二重可変ドメインＩｇＡ免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ二重特異性ＩｇＡ）で
ある、ＣＤ２０およびＣＤ４７に結合可能な二重特異性抗体構築物を作製した。これらの二重特異性抗体構築物において、追加の可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）および可変重鎖ドメイン（ＶＨ）ドメインを、短いリンカー（配列番号４４；ＳＧＧＧＧＳ）の手段によって、存在するＩｇＡ ＶＨ－ＶＬドメインの上部に連結した。追加のＶＨドメインを既存のＶＨに連結し、同様に、追加のＶＬを既存のＶＬに連結する。これらの二重特異性構築物に加えて、ｓｃＦｖフォーマットを用いる２つの単一連結二重可変ドメイン抗体も調製した（ＤＶＤ－ＩｇＡ ｓｃＦｖ）。ｓｃＦｖ要素は単独で、ＶＬを長いリンカー（配列番号４５；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）でＶＨに連結するが、全ｓｃＦｖ分子は、短いリンカー（配列番号４４；ＳＧＧＧＧＳ）によってＶＬまたはＶＨのいずれかに連結される。

【0389】

[00419]抗原ＣＤ２０結合可変ドメインは、オビヌツズマブ（ＣＤ２０結合抗体）から
誘導した。ＣＤ４７結合可変ドメインは、５Ａ３Ｍ５または２．３Ｄ１１クローン（いず
れもＣＤ４７結合抗体）から誘導した。すべての組み合わせの概要は、以下の表１に見ることができる。

【0390】

[00420]追加のＣＤ２０およびＣＤ４７可変ドメインの位置決めを、以下の組み合わせ
を用いて、両方の配向で使用した：
二重連結二重特異性ＩｇＡ
[00421]１つの二重特異性抗体構築物（二重特異性抗体＃２）において、外側ドメイン
に位置決めされた追加のＶＨ／ＶＬドメインは、ＣＤ２０結合部分（すなわち、ＣＤ２０結合可変ドメイン）を含有し、既存のＶＨ／ＶＬドメインはａＣＤ４７ ２．３Ｄ１１結合部分（すなわち、ＣＤ４７結合可変ドメイン）を含有していた。

【0391】

[00422]他の二重特異性抗体構築物（二重特異性抗体＃１）において、外側ドメインに
位置決めされたＶＨ／ＶＬドメインはａＣＤ４７ ５Ａ３Ｍ５結合部分（すなわち、ＣＤ４７結合可変ドメイン）を含有し、既存のＶＨ／ＶＬドメインはａＣＤ２０結合部分を含有する。

【0392】

ｓｃＦｖ－ＬＣ単一連結二重特異性ＩｇＡ
[00423]二重特異性抗体＃６は、外側ドメインに位置決めされたｓｃＦｖを有していた
。ｓｃＦＶはＣＤ２０結合部分を含有し、二重特異性抗体構築物中の既存のＶＨ／ＶＬドメインはａＣＤ４７ ２．３Ｄ１１結合部分を含有していた。ｓｃＦｖを、可変軽鎖、特に、ａＣＤ４７ ２．３Ｄ１１結合部分の可変軽鎖ドメインに連結した。

【0393】

[00424]二重特異性抗体＃５は、外側ドメインに位置決めされたｓｃＦｖを有していた
。ｓｃＦＶはａＣＤ４７ ５Ａ３Ｍ５結合部分を含有し、既存のＶＨ／ＶＬドメインはＣＤ２０結合部分を含有していた。ｓｃＦｖを、可変軽鎖、特に、ＣＤ２０結合部分の可変軽鎖ドメインに連結した。

【0394】

ｓｃＦｖ－ＨＣ単一連結二重特異性ＩｇＡ
[00425]二重特異性抗体＃４は、外側ドメインに位置決めされたｓｃＦｖを有していた
。ｓｃＦＶはＣＤ２０結合部分を含有し、既存のＶＨ／ＶＬドメインはａＣＤ４７ ２．３Ｄ１１結合部分を含有していた。ｓｃＦｖを、可変重鎖、特に、ＣＤ４７結合部分（ａＣＤ４７ ２．３Ｄ１１結合部分）の可変重鎖ドメインに連結した。

【0395】

[00426]二重特異性抗体＃３は、外側ドメインに位置決めされたｓｃＦｖを有していた
。ｓｃＦｖはＣＤ４７結合部分（ａＣＤ４７ ５Ａ３Ｍ５結合部分）を含有し、既存のＶＨ／ＶＬドメインはＣＤ２０結合部分を含有していた。ｓｃＦｖを、可変重鎖、特に、ＣＤ２０結合部分の可変重鎖ドメインに連結した。

【0396】

【表3】

【0397】

カッパ－ラムダ二重特異性抗体
[00427]カッパ－ラムダ二重特異性抗体も生成した。これらの抗体において、何に対し
ても親和性を有さない重鎖を、カッパおよびラムダ軽鎖の両方と組み合わせて使用した。これらの軽鎖はそれぞれ、それらのＶＬドメインに別個の親和性を含有する。したがって、二重の特異性は軽鎖のみによって指示され、この場合、Ｃ２クローンによるＣＤ１９と５Ａ３Ｍ５クローンによるＣＤ４７である。共通の重鎖のＶＨ領域をＩｇＡ分子に適応させた。カッパおよびラムダ軽鎖は改変されていなかった。親和性も特異性も含有しない対照軽鎖のセットを用いて、シングルアーム親和性、いわゆるダミー軽鎖を決定した。以下の表２は、カッパ－ラムダ抗体の代表的な組み合わせを示す。

【0398】

【表4】

【0399】

実施例３．二重特異性抗体構築物の生成
ＩｇＡ二重特異性抗体構築物のクローニング
ＤＶＤ－ＩｇＡ３．０
[00428]２つのＶＨを互いに接合するＳＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４４）を含有す
る５Ａ３Ｍ３ ＶＨおよびオビヌツズマブＶＨからなるフラグメント（二重特異性抗体＃１）を、クリセツルス・グリセウス細胞(cricetulus griseus cell)で使用するためにコ
ドン最適化し、ＩＤＴにおいて合成ＤＮＡ（ｇＢｌｏｃｋ）として順序付けし、そして製造者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いて、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩで前消化されたＩｇＡ３．０の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングした。

【0400】

[00429]２つのＶＨを互いに接合するＳＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４４）を含有す
るオビヌツズマブＶＨおよび２．３Ｄ１１ ＶＨからなるフラグメント（二重特異性抗体＃２）を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するためにコドン最適化し、ＩＤＴにおいて合成ＤＮＡ（ｇＢｌｏｃｋ）として順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いて、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩで前消化されたＩｇＡ３．０の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングした。

【0401】

[00430]２つのＶＬを互いに接合するＳＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４４）を含有す
る５Ａ３Ｍ３ ＶＬおよびオビヌツズマブＶＬからなるフラグメント（二重特異性抗体＃１）を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するためにコドン最適化し、ＩＤＴにおいて合成ＤＮＡ（ｇＢｌｏｃｋ）として順序付けし、そして製造者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いて、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩで前消化されたＩｇＡ３．０の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングした。

【0402】

[00431]２つのＶＬを互いに接合するＳＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４４）を含有す
るオビヌツズマブＶＬおよび２．３Ｄ１１ ＶＬからなるフラグメント（二重特異性抗体＃２）を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するためにコドン最適化し、ＩＤＴにおいて合成ＤＮＡ（ｇＢｌｏｃｋ）として順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いて、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩで前消化されたＩｇＡ３．０の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングした。

【0403】

ＤＶＤ－ＩｇＡ ｓｃＦｖ＿ＨＣ
[00432]ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４５）を介して５Ａ３Ｍ５ ＶＬ
に連結された後、ｓｃＦｖをＶＨに接合するＳＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４４）によってオビヌツズマブＶＨに連結されている５Ａ３Ｍ５ ＶＨからなるｓｃＦｖフラグメント（二重特異性抗体＃３）を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するためにコドン最適化し、ＩＤＴにおいて合成ＤＮＡ（ｇＢｌｏｃｋ）として順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いて、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩで前消化されたＩｇＡ３．０の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングした。

【0404】

[00433]ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４５）を介してオビヌツズマブＶ
Ｌに連結された後、ｓｃＦｖをＶＨに接合するＳＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４４）によって２．３Ｄ１１ ＶＨに連結されているオビヌツズマブＶＨからなるｓｃＦｖフラグメント（二重特異性抗体＃４）を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するためにコドン最適化し、ＩＤＴにおいて合成ＤＮＡ（ｇＢｌｏｃｋ）として順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いて、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩで前消化されたＩｇＡ３．０の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングした。

【0405】

[00434]オビヌツズマブＶＬまたはＶＨをｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩベクター中に
クローニングし、そこから、ＶＨまたはＶＬを、ＨｉｎｄＩＩＩ－ＮｏｔＩを介して、ＩｇＡ３．０またはカッパ軽鎖の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクター中にサブクロ
ーニングした。

【0406】

[00435]２．３Ｄ１１ ＶＬまたはＶＨをｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩベクター中に
クローニングし、そこから、ＶＨまたはＶＬを、ＨｉｎｄＩＩＩ－ＮｏｔＩを介して、ＩｇＡ３．０またはカッパ軽鎖の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクター中にサブクローニングした。

【0407】

ＤＶＤ－ＩｇＡ ｓｃＦｖ＿ＬＣ
[00436]ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４５）を介して５Ａ３Ｍ５ ＶＬ
に連結された後、ｓｃＦｖをＶＨに接合するＳＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４４）によってオビヌツズマブＶＬに連結されている５Ａ３Ｍ５ ＶＨからなるｓｃＦｖフラグメント（二重特異性抗体＃５）を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するためにコドン最適化し、ＩＤＴにおいて合成ＤＮＡ（ｇＢｌｏｃｋ）として順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いて、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩで前消化されたＩｇＡ３．０の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングした。

【0408】

[00437]ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４５）を介してオビヌツズマブＶ
Ｌに連結された後、ｓｃＦｖをＶＨに接合するＳＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４４）によって２．３Ｄ１１ ＶＬに連結されているオビヌツズマブＶＨからなるｓｃＦｖフラグメント（二重特異性抗体＃６）を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するためにコドン最適化し、ＩＤＴにおいて合成ＤＮＡ（ｇＢｌｏｃｋ）として順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いて、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩで前消化されたＩｇＡ３．０の定常領域を含有するｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングした。

【0409】

カッパ－ラムダ抗体
[00438]完全なＩｇＡ３．０共通重鎖を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するた
めにコドン最適化し、合成ＤＮＡとして順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いてｐｃＤＮＡ３．４ベクターにアセンブルした。

【0410】

[00439]完全な５Ａ３Ｍ５カッパ軽鎖を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するた
めにコドン最適化し、合成ＤＮＡとして順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いてｐｃＤＮＡ３．４ベクターにアセンブルした。

【0411】

[00440]完全なＣ２ラムダ軽鎖を、クリセツルス・グリセウス細胞で使用するためにコ
ドン最適化し、合成ＤＮＡとして順序付けし、そして製造業者のプロトコルに従ってＨｉＦｉアセンブリー（ＮＥＢ）を用いてｐｃＤＮＡ３．４ベクターにアセンブルした。

【0412】

ＨＥＫ２９３Ｆ細胞のトランスフェクション
[00441]ＨＥＫ２９３ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ細胞を、以下の改変を伴いトランスフェク
トした：ＤＮＡ：２９３フェクチンの比は１：１．３３を用いた。いくつかのＨＣ：ＬＣ
ＤＮＡ、すなわち、重鎖をコードするＤＮＡおよび軽鎖をコードするＤＮＡの抗体鎖の比を、ｐＡｄｖａｎｔａｇｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ）と組み合わせて、全濃度１ｕｇ／ｍＬ、容積２ｍＬで試験した。ｐＡｄｖａｎｔａｇｅ ＤＮＡの量は常に重鎖ＤＮＡと等しかった。

【0413】

[00442]ＦＡＣＳ、ＡＤＣＣ、ＲＢＣおよび血小板プロファイリング実験で使用した上
清の生産を、以下の比率で４ｍＬ中でもたらした：＃１（１：１：１）、＃２（１：２：１）、＃３（１：０．５：１）、＃４（１：０．５：１）、＃５（１：２：１）、＃６（１：２：１）。

【0414】

[00443]細胞産生抗体を採取し、３５０ｇで５分間遠心分離し、得られた上清を収集し
た。０．２２ｕｍフィルターを通過させることにより、上清から細胞デブリを除去した。
ＥＬＩＳＡ
[00444]次いで、二重特異性抗体の濃度を、以下のようなＥＬＩＳＡによって、上記で
得た清澄化された上清中で測定した；
１日目：プレートコーティング
[00445]プレートを、１００μＬ／ウェルを使用して、４℃で一晩、ＰＢＳ中の抗体で
コーティングした。

【0415】

２日目：ＥＬＩＳＡ
[00446]プレートを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、各洗浄後にプレー
トを穏やかにフリックした。プレートを遮断するために、１５０μＬ／ウェルの遮断緩衝液を各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを穏やかにフリックし、標準物質を加えた。試料を以下の条件に従った遮断緩衝液で希釈し、室温で２時間インキュベートした；標準希釈；１００μＬ／ウェルおよび希釈試料；１００μＬ／ウェル。

【0416】

[00447]プレートをフリックした後、１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄した
。検出抗体を遮断緩衝液（１００μＬ／ウェル）に添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートをフリックし、１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、各洗浄後にプレートをフリックした。ＡＢＴＳ基質を添加した（５０ｍＬのＡＢＴＳ緩衝液中に５０ｍｇを１錠、暗所保存）；１００μＬ／ウェル、±１５分間。プレートの光学濃度を４１５ｎｍでＢｉｏ－Ｒａｄ分光光度計で測定した。

【0417】

[00448]使用した緩衝液は、洗浄緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０）お
よび遮断緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０、１％ ＢＳＡ）であった。使用したＰＢＳ；Ｓｉｇｍａ；Ｄ８８５３７。コーティング抗体はヤギ抗ヒトカッパであった；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ；２０６０－０１、１：２０００で使用。使用したコーティング抗体はヤギ抗ヒトラムダであった；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ；
２０７０－０１、１：２０００で使用。標準曲線ヒトＩｇＡ；ＢＥＴＨＹＬ；ｐ８０－１０２。使用した検出抗体はヤギ抗ヒトＩｇＡ ＨＲＰであった；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ；２０５０－０５、１：２０００使用。使用した検出抗体は、ヤギ抗ヒトラムダＨＲＰであった；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ；２０７０－０５、１：５０００使用。アッセイのためにＭａｘｉＳＯＲＰプレートを使用した；ＮＵＮＣ；４３９４５４およびＢＳＡ；Ｒｏｃｈｅ；１０７３５０９４００１。

【0418】

[00449]ＤＶＤ－ＩｇＡ、ＤＶＤ－ＩｇＡ－ｓｃＦｖおよびカッパ－カッパ抗体分子に
ついて、ヤギ抗ヒトカッパコーティング抗体をヤギ抗ヒトＩｇＡ－ＨＲＰ検出抗体と組み合わせて使用した。ラムダ－ラムダ抗体については、ヤギ抗ヒトラムダコーティング抗体をヤギ抗ヒトＩｇＡ－ＨＲＰ検出抗体と組み合わせて使用した。カッパ－ラムダ抗体については、ヤギ抗ヒトカッパコーティング抗体をヤギ抗ヒトカッパ－ＨＲＰ検出抗体と組み合わせて使用した。

【0419】

ＨｉＴｒａｐ ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔによる二重特異性抗体の精製
[00450]５ｍＬのＨｉＴｒａｐ Ｋａｐｐａ Ｓｅｌｅｃｔカラム（１７－５４５８－
１２；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にロードする前に、上清をＰＢＳで１：１に希釈し
た。試料全体をロードした後、カラムを５カラム容量（ＣＶ）のＰＢＳ、続いて溶出緩衝液（０．１Ｍグリシン ｐＨ２．５）ですすいだ。１ｍＬの画分を、中和緩衝液（７５ｕＬ １Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ ８．８）を予め充填したチューブに収集した。

【0420】

ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
[00451]合計１５ｕＬ／ＨｉＴｒａｐ Ｋａｐｐａ Ｓｅｌｅｃｔ溶出液を、還元剤を
含まない５ｕＬ ４ｘローディング緩衝液（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に添加し、４～２０％ Ｐｒｅｃａｓｔ勾配ゲルＭｉｎｉＰｒｏｔｅａｎ ＴＧＸ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）上で±１時間運転した。ゲルを、バンドが可視化されるまでロッカー上でＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅ（１ＳＢ１Ｌ；Ｅｘｐｅｄｅｏｎ）で染色し、ロッカー上で５分間水で３回洗浄し、走査した。

【0421】

フローサイトメトリー二特異性抗体結合アッセイ
[00452]ＳＫＢＲ３ ＷＴおよびＳＫＢＲ３－ＣＤ２０細胞を、標準培養条件を用いて
ＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。１００．０００細胞の量を、Ｏｂｉ－ＩｇＡ３．０（１ｕｇ／ｍＬ）、または２．３Ｄ１１－ＩｇＡ２（１ｕｇ／ｍＬ）、５０ｕＬ二重特異性抗体上清と一緒に４℃で４５分間染色した後、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中の１％ ＢＳＡ）中で洗浄した。二次抗体を使用し、ヤギ抗ｈＩｇＡ ＲＰＥ Ｆ（ａｂ’）２（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２０５２－０９；１：１５０使用）を４℃で４５分間使用して、ＩｇＡ分子を検出した後、ＦＡＣＳ緩衝液中で洗浄した。細胞の一部を、４℃で４５分間、ｍＩｇＧ１抗ＣＤ４７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；クローンＣＣ２６Ｃ；１：２０使用）で事前遮断し、続いて洗浄した。事前遮断後、ＩｇＡ抗体を上記のように施用した。試料をＢＤ Ｃａｎｔｏ ＩＩで分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（ＢＤ）を用いて分析した。

【0422】

抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
[00453]合計１００万の標的細胞を５１Ｃｒで少なくとも３時間標識化し、続いて培養
培地で洗浄した。標的細胞のサブセット（５００．０００）を、ｍＩｇＧ１抗ＣＤ４７
ＰｅｒＣｐ－Ｃｙ５．５抗体によって、２００ ｕＬの２０倍希釈液中、４℃で１時間イ
ンキュベートし、続いて培地洗浄することによって、事前遮断した。

【0423】

[00454]エフェクター細胞を、標準的なＦｉｃｏｌｌ－ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔ
ｈｃａｒｅ）およびＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１１１９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して、健康なドナーから単離した。ＨｉｓｔｏｐａｑｕｅをＦｉｃｏｌｌ層の上に施用してから、ＰＢＳ中で１：１に希釈した血液混合物を施用した。チューブを、室温においで４５０ｇで２５分間スピンダウンした。Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ層からＰＭＮを単離し、培養培地で洗浄した。

【0424】

[00455]合計２００．０００のＰＭＮを用いて、さまざまな濃度の抗体（Ｏｂｉ－Ｉｇ
Ａ３．０；２．３Ｄ１１－ＩｇＡ３．０）または二重特異性抗体の生の上清の存在下で、５０００の標的細胞（１：４０比率）と一緒に４時間にわたり共培養した。最小放出として標的およびエフェクター細胞のみを採取したが、最大放出の場合は標的およびエフェクター細胞を５％Ｔｒｉｔｏｎ中で共培養した。

【0425】

実施例４．二重特異性抗体の作製と特性解析
[00456]二重特異性抗体のすべての１０形態を、標準条件を使用してＨＥＫ２９３Ｆ細
胞中で産生し、そして清澄化した上清を採取し、０．２２ｕｍフィルターを通過させ、そして使用まで４℃で保存した。上清をＥＬＩＳＡによって評価して、成功した産生および抗体濃度を決定した。すべての二重特異性分子の産生は成功し、下流アッセイで使用するのに十分な濃度をもたらした。

【0426】

[00457]ＤＶＤ－Ｉｇ様二重特異性抗体（＃１～６）の生上清を、以下の細胞に直接施
用した：１）ＣＤ４７を自然に発現するがＣＤ２０を発現しないＳＫＢＲ３細胞（ＣＤ２０－／ＣＤ４７＋）；２）ＣＤ２０を形質導入され、二重陽性（ＣＤ２０＋／ＣＤ４７＋）細胞株として作用する、ＳＫＢＲ３細胞株。

【0427】

[00458]フローサイトメトリー分析を行って、細胞表面上のＩｇＡ二重特異性抗体を検
出した。
[00459]二重特異性抗体によるＣＤ４７オプソニン化に関してどのような効率があるか
、およびＣＤ４７への付加的結合能が二重特異性抗体のＣＤ２０結合を増強し得るかを決定するために、ＣＤ４７に対するｍＩｇＧ１遮断抗体（ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５で標識化）を用いて、ＣＤ４７分子をそれぞれ事後遮断(post-block)または事前遮断した。これは、ＩｇＡバリアントにおいて使用されるクローンとは異なるクローンであった。また、二重特異性によってＣＤ２０のオプソニン化を決定する対照も平行して利用し、これに関してはＩｇＧ１ オビヌツズマブを用いた。

【0428】

[00460]事前遮断（二重特異性抗体による増強されたＣＤ２０結合を決定する）に関し
ては、以下の方法を使用した：１）ＣＤ４７遮断抗体を細胞に施用し、非結合抗体画分を洗い流し；２）細胞を二重特異性抗体（上清）と共にインキュベートし、非結合二重特異性抗体画分を洗い流し；そして３）細胞を抗ＩｇＡ－ＰＥと共にインキュベートし、非結合抗体画分を洗い流した。細胞を固定し、ＦＡＣＳによって測定した。

【0429】

[00461]事後遮断（二重特異性抗体によるＣＤ４７オプソニン化を決定する）に関して
は、以下の方法を使用した：１）細胞を二重特異性抗体（上清）と共にインキュベートし、非結合二重特異性抗体画分を洗い流し；そして２）細胞を抗ＩｇＡ－ＰＥと共にインキュベートし、同時にＣＤ４７遮断抗体を細胞に施用し、非結合抗体画分を洗い流した。細胞を固定し、ＦＡＣＳによって測定した。平行して利用された対照は、未染色細胞、二次抗体のみ、および二価単一特異性抗体である。

【0430】

[00462]ＳＫＢＲ３細胞では、予想通り、二価単一特異性抗体２．３Ｄ１１のＣＤ４７
の強力な結合が観察された。ｍＩｇＧ１ ａＣＤ４７抗体を用いたクロスブロッキング実験は、ＣＤ４７は良好に遮断されることができ、二重特異性抗体による結合は観察することができないことを示した。二重特異性＃４および＃６の結合は見られたが、それらは、事後遮断実験で観察されたように、細胞上のＣＤ４７を完全にオプソニン化しない。

【0431】

[00463]ＳＫＢＲ３－ＣＤ２０では、すべての二重特異性抗体が高い親和性でＣＤ２０
と結合するが、細胞を完全にオプソニン化するわけではない。ＣＤ４７分子もまた、抗ＣＤ４７ ｍＩｇＧ１による事後遮断によって決定されるように、完全にオプソニン化されていない。しかしながら、ＣＤ４７分子を事前遮断し、次いで二重特異性抗体で染色した場合、結合の減少が、抗体＃２、＃３、および＃５について観察される。これらの抗体は、ＣＤ２０陰性細胞（ＳＫＢＲ３－ＷＴ）で観察されるようなＣＤ４７の結合を示さない。これは、ＣＤ４７分子を結合することによって、二重特異性抗体はＣＤ２０により良好に結合することができ、結合の増強を示すことを、示している。上記の観察は、ＩｇＡ抗体が、２つの標的に同時に結合する二重特異性抗体に適応され得ることを示し、これらの例において、ＣＤ４７結合はＣＤ２０結合を増強する。

【0432】

赤血球染色
[00464]ＰＭＮ／ＰＢＭＣから赤血球を分離するために、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ／ｆｉ
ｃｏｌｌ単離を行った。血漿、ＰＢＭＣ、ｆｉｃｏｌｌ、ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅおよびＰＭＮは廃棄した。赤血球の残りのペレットをＰＢＳで洗浄し、２４００ｒｐｍで５分間回
転させ、ペレットを５ｍＬのＰＢＳに再懸濁した。マウスＩｇＧ１抗ヒトＣＤ４７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；クローンＣＣ２Ｃ６；１：２０希釈）と組み合わせたマウスＩｇＧ２ｂ抗ヒトＣＤ２３５ａ－ＰＥ（ＢＤ；クローンＧＡ－Ｒ２；１：４０希釈）、または二重特異性ＩｇＡ抗体１～６の４０ｕＬの上清で染色するために、試料当たり１０ｕＬの量を使用した。希釈は、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中１％ ＢＳＡ）中で行う。遮光下の室温で３０分間インキュベートし、過剰の未結合抗体をＦＡＣＳ緩衝液で洗い流した。４０ｕＬをＦＡＣＳ緩衝液に加え、検出抗体（ヤギＦ（ａｂ）’２抗ヒトＩｇＡ－ＦＩＴＣ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ；１：１００希釈）を希釈し、遮光下の室温で３０分間インキュベートし、過剰の未結合抗体をＦＡＣＳ緩衝液で洗い流した。１％ ＰＦＡをペレット化細胞に添加することにより、試料を固定した。Ｃａｎｔｏ
ＩＩ （ＢＤ）を測定し、ＣＤ２３５陽性事象をにゲーティングする。

【0433】

血小板染色
[00465]マウスＩｇＧ１抗ヒトＣＤ４７ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎ
ｄ；クローンＣＣ２Ｃ６；１：２０希釈）と組み合わせたマウスＩｇＧ１抗ヒトＣＤ６１－ＦＩＴＣ（Ｄａｋｏ；クローンＹ２－５１；１：２０希釈）、または二重特異性ＩｇＡ抗体１～６の４０ｕＬの上清で染色するために、試料当たりヘパリン／ＥＤＴＡチューブから１０ｕＬの全血を使用した。希釈は、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中１％ ＢＳＡ）中で行った。遮光下の室温で３０分間インキュベートした後、０．５ｕＬの検出抗体（ヤギＦ（ａｂ）’２抗ヒトＩｇＡ－ＲＰＥ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ；１：５０希釈）を添加し、遮光下の室温で３０分間インキュベートした。１％ ＰＦＡをペレット化細胞に添加することにより、試料を固定した。測定はＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ）で行い、ＣＤ６１陽性事象をゲーティングした。

【0434】

【表5】

【0435】

【表6】

【0436】

【表7】

【0437】

【表8】

【0438】

【表9】

【0439】

【表10】

【0440】

【表11】

【0441】

【表12】

【0442】

【表13】

【0443】

【表14】

【0444】

【表15】

【0445】

【表16】

【0446】

【表17】

【0447】

【表18】

【0448】

【表19】

【0449】

【表20】

【0450】

【表21】

【0451】

【表22】

【0452】

【表23】

【0453】

【表24】

【0454】

【表25】

【0455】

【表26】

【0456】

【表27】

【0457】

【表28】

【0458】

【表29】

【0459】

[00466]本開示の好ましい態様を本明細書に示し、記載してきたが、そのような態様が単に例として提供されていることは当業者には明らかであろう。ここで、本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更、および置換が当業者に想起されるであろう。本明細書に記載された態様、またはこれらの態様もしくはそこに記載された観点のうちの１以上の組み合わせに対するさまざまな代替物が、本開示を実施する際に採用されてもよいことを、理解すべきである。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲およびその等価物の範囲内の方法および構造は、それによって包含されることが意図される。
本願は以下の発明を包含する。
［項目１］ （ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む抗体構築物であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記抗体構築物。
［項目２］ ＣＤ４７結合ドメインが、第１の軽鎖可変ドメインおよび第１の重鎖可変ドメインのうちの少なくとも１つを含む、項目１に記載の抗体構築物。
［項目３］ 抗原結合ドメインが、第２の軽鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインのうちの少なくとも１つを含む、項目１または２に記載の抗体構築物。
［項目４］ 前記構築物が、前記第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の軽鎖可変ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み；
前記ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１３のアミノ酸配列または配列番号１３中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号１４のアミノ酸配列または配列番号１４中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１５のアミノ酸配列または配列番号１５中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む、
項目２または３に記載の抗体構築物。
［項目５］ 前記構築物が前記第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の軽鎖可変ドメインが、配列番号２６に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目２～４のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目６］ 前記構築物が、前記第１の重鎖可変ドメインを含み、前記第１の重鎖可変ドメインが、可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
前記ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む、
項目２～５のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目７］ 前記構築物が前記第１の重鎖可変ドメインを含み、該第１の重鎖可変ドメインが、配列番号２３に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目２～６のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目８］ 前記構築物が、前記第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の軽鎖可変ドメインが、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含み；
前記ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１０のアミノ酸配列または配列番号１０中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号１１のアミノ酸配列または配列番号１１中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１２中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む、
項目３～７のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目９］ 前記構築物が前記第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の軽鎖可変ドメインが配列番号２５のアミノ酸配列を含む、項目３～８のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１０］ 前記構築物が、前記第２の重鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインが、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含み；
前記ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、前記ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含み、そして前記ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３中に最大２つのアミノ修飾を有するそのバリアントを含む、項目３～９のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１１］ 前記構築物が前記第２の重鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインが、配列番号２２に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目３～１０のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１２］ 前記第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインのＣ末端が第１の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている、第１のポリペプチド；および
前記第１の軽鎖可変ドメインおよび第２の軽鎖可変ドメインを含み、第２の軽鎖可変ドメインのＣ末端が第１の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている、第２のポリペプチド；
のうちの少なくとも１つを含む、項目３～１１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１３］ 前記第１または前記第２のポリペプチドが、前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドをさらに含む、項目１２に記載の抗体構築物。
［項目１４］ リンカーペプチドが配列番号４４の配列を含む、項目１３に記載の抗体構築物。
［項目１５］ 第１のポリペプチドが配列番号２９の配列を含む、項目１２～１４のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１６］ 第１のポリペプチドのＣ末端が（ＩｇＡ）重鎖領域に連結されている、項目１２～１５のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１７］ 連結がＩｇＡ ＣＨ１定常ドメインを介している、項目１６に記載の抗体構築物。
［項目１８］ 第２のポリぺプチドが配列番号３１の配列を含む、項目１２～１７のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１９］ 抗体構築物が第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む、項目１２～１８のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目２０］ 第１の重鎖可変ドメインのＣ末端が第２の重鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている第１のポリペプチド；または
第１の軽鎖可変ドメインのＣ末端が第２の軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結されている第２のポリペプチド；
のうちの少なくとも１つを含む、項目３に記載の抗体構築物。
［項目２１］ 連結がリンカーペプチドによる、項目２０に記載の抗体構築物。
［項目２２］ リンカーペプチドが配列番号４４の配列を含む、項目２１に記載の抗体構築物。
［項目２３］ 第１のポリぺプチドが配列番号３０の配列を含む、項目２０～２２のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目２４］ 第１のポリペプチドのＣ末端が（ＩｇＡ）重鎖領域に連結されている、項目２０～２３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目２５］ 連結がＩｇＡ ＣＨ１定常ドメインを介する、項目２３に記載の抗体構築物。
［項目２６］ 第２のポリぺプチドが配列番号３２の配列を含む、項目２２～２５のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目２７］ 抗体構築物が第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む、項目２０～２６のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目２８］ 抗体構築物が、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む第１のポリペプチドを含み、該ｓｃＦＶが、前記第２の軽鎖可変ドメインに連結された前記第２の重鎖可変ドメインを含む、項目３～１１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目２９］ 前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドを含む、項目２８に記載の構築物。
［項目３０］ リンカーペプチドが配列番号４５の配列を含む、項目２９に記載の抗体構築物。
［項目３１］ 第１のポリペプチドが、第１の軽鎖可変ドメイン；または第１の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦｖを含む、項目２８～３０のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目３２］ 連結がリンカーペプチドによる、項目３１に記載の抗体構築物。
［項目３３］ リンカーペプチドが配列番号４４の配列を含む、項目３２に記載の抗体構築物。
［項目３４］ 第１の軽鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、項目３１～３３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目３５］ 第１の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３３に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、項目３１～３３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目３６］ 抗体構築物が、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む第１のポリペプチドを含み、該ｓｃＦＶが、第１の軽鎖可変ドメインに連結された第１の重鎖可変ドメインを含む、項目３に記載の抗体構築物。
［項目３７］ 前記可変ドメインを連結するリンカーペプチドを含む、項目３６に記載の抗体構築物。
［項目３８］ リンカーペプチドが配列番号４５の配列を含む、項目３７に記載の抗体構築物。
［項目３９］ 第１のポリペプチドが、第２の軽鎖可変ドメイン；または第２の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦｖを含む、項目３６～３８のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目４０］ 連結がリンカーペプチドによる、項目３９に記載の抗体構築物。
［項目４１］ リンカーペプチドが配列番号４４の配列を含む、項目４０に記載の抗体構築物。
［項目４２］ 第２の軽鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３６に対して９０％の同一性を有する配列を含む、項目３９～４１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目４３］ 第２の重鎖可変ドメインに連結されたｓｃＦＶを含む第１のポリペプチドを含み、該第１のポリペプチドが、配列番号３４に対して９０％の同一性を有する配列を含む、項目３９～４１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目４４］ ＩｇＡ重鎖ドメインがＩｇＡ重鎖定常ドメインを含む、項目１～４３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目４５］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、ＩｇＡ１定常ドメインまたはそのバリアントである、項目４４に記載の抗体構築物。
［項目４６］ ＩｇＡ１定常ドメインが、ＩｇＡ１ ＣＨ２領域およびＩｇＡ１ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む、項目４５に記載の抗体構築物。
［項目４７］ ＩｇＡ１定常領域が、ＩｇＡ１ ＣＨ１領域またはそのバリアントをさらに含む、項目４６に記載の抗体構築物。
［項目４８］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、ＩｇＡ２定常ドメインまたはそのバリアントである、項目４４に記載の抗体構築物。
［項目４９］ ＩｇＡ２定常ドメインが、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む、項目４８に記載の抗体構築物。
［項目５０］ ＩｇＡ２定常領域がＩｇＡ２ ＣＨ１領域をさらに含む、項目４９に記載の抗体構築物。
［項目５１］ 抗原が、ＣＤ２０、ＧＤ２、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ２５である、項目１～５０のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目５２］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つまたは２つの天然に存在するグリコシル化部位を欠く、項目４４～５１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目５３］ 前記構築物が、少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位を欠き、該少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位が、少なくとも１つのＩｇＡ ＣＨ２領域またはＩｇＡ ＣＨ３領域にある、項目５２に記載の抗体構築物。
［項目５４］ 少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位が、２つの天然に存在するＮ連結グリコシル化部位である、項目５３に記載の抗体構築物。
［項目５５］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を欠く、項目４４～５４のいずれか１項に記載の構築物。
［項目５６］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基のアミノ酸置換、または両方の残基の置換を含む、項目４４～５４のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目５７］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基を欠く、項目４４～５６のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目５８］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目５７に記載の抗体構築物。
［項目５９］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換を含む、項目５８に記載の抗体構築物。
［項目６０］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸欠失を含む、項目５７に記載の抗体構築物。
［項目６１］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基を欠く、項目４４～６０のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目６２］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目６１に記載の抗体構築物。
［項目６３］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基の欠失を含む、項目６１に記載の抗体構築物。
［項目６４］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基を欠く、項目４４～６３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目６５］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目６４に記載の抗体構築物。
［項目６６］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の欠失を含む、項目６５に記載の抗体構築物。
［項目６７］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基を欠く、項目４４～６６のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目６８］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目６７に記載の抗体構築物。
［項目６９］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の欠失を含む、項目６８に記載の抗体構築物。
［項目７０］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基を欠く、項目４４～６９のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目７１］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目７０に記載の抗体構築物。
［項目７２］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の欠失を含む、項目７１に記載の抗体構築物。
［項目７３］ 前記構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い循環半減期を示す、項目５２～７２のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目７４］ 抗体構築物が、対応する野生型ＣＤ４７結合ドメインと比較して、ＣＤ４７に対してより低い親和性を有する弱毒化ＣＤ４７結合ドメインを含む、項目１～７３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目７５］ 抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、減少した凝集を示す、項目５２～７４のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目７６］ 抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、血清タンパク質との減少した凝集を示す、項目５２～７５のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目７７］ 前記ＩｇＡ重鎖定常領域が１以上のアルブミン結合ドメインを含む、項目４４～７６のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目７８］ 抗体構築物が、１以上のアルブミン結合ドメインを含まない対応する抗体構築物よりも長い半減期を有する、項目７７に記載の抗体構築物。
［項目７９］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、配列番号３７～４１のいずれか１つから選択される配列に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目４４～７８のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目８０］ 構築物がヒンジ領域をさらに含む、項目１～７９のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目８１］ ヒンジ領域が、ＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、項目８０に記載の抗体構築物。
［項目８２］ ヒンジ領域が、ヒトＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、項目８０または８１に記載の抗体構築物。
［項目８３］ ヒンジが、ＩｇＡ１ヒンジもしくはＩｇＡ２ヒンジ、またはそのバリアントもしくはフラグメントである、項目８０～８２のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目８４］ 抗体構築物が軽鎖定常領域をさらに含む、項目１～８３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目８５］ 軽鎖定常領域がカッパ定常領域である、項目８４に記載の抗体構築物。
［項目８６］ 軽鎖定常領域がラムダ定常領域である、項目８４に記載の抗体構築物。
［項目８７］ 軽鎖定常領域が、第１の軽鎖可変ドメインまたは第１の重鎖可変ドメインに連結される、項目８４～８６のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目８８］ （ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖定常ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む抗体構築物であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記抗体構築物。
［項目８９］ ＣＤ４７結合ドメインが、第１の軽鎖可変ドメインおよび第１の重鎖可変ドメインを含む、項目８８に記載の抗体構築物。
［項目９０］ 抗原結合ドメインが、第２の軽鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインを含む、項目８９に記載の抗体構築物。
［項目９１］ 第１の軽鎖可変ドメインがカッパ型のものである、項目９０に記載の抗体構築物。
［項目９２］ 第２の軽鎖可変ドメインがラムダ型のものである、項目９１に記載の抗体構築物。
［項目９３］ 第１の軽鎖可変ドメインがラムダ型のものである、項目９０に記載の抗体構築物。
［項目９４］ 第２の軽鎖可変ドメインがカッパ型のものである、項目９３に記載の抗体構築物。
［項目９５］ 第１の軽鎖可変ドメインが、カッパ型のものであり、配列番号１６の可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）アミノ酸配列、配列番号１７の可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）アミノ酸配列、配列番号１８の可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）アミノ酸配列を含む、項目９１または９２に記載の抗体構築物。
［項目９６］ 第１の軽鎖可変ドメインが、配列番号２７に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目９５に記載の抗体構築物。
［項目９７］ 第２の軽鎖可変ドメインが、配列番号１９の可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）アミノ酸配列、配列番号２０の可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）アミノ酸配列、配列番号２１の可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）アミノ酸配列を含むラムダ型のものである、項目９２に記載の抗体構築物。
［項目９８］ 第２の軽鎖可変ドメインが、配列番号２８に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目９７に記載の抗体構築物。
［項目９９］ 第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインが同じである、項目９０～９８のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１００］ 第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインが、配列番号７の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）アミノ酸配列、配列番号８の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）アミノ酸配列、配列番号９の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）アミノ酸配列を含む、項目９９に記載の抗体構築物。
［項目１０１］ 第１の重鎖可変ドメインおよび第２の重鎖可変ドメインが、配列番号２４に対して９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目１００に記載の抗体構築物。
［項目１０２］ 第１の軽鎖可変ドメインがカッパ定常領域をさらに含む、項目８９～１０１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１０３］ 第２の軽鎖可変ドメインがラムダ定常領域をさらに含む、項目９０～１０２のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１０４］ 第１の軽鎖可変ドメインがラムダ定常領域をさらに含む、項目８９～１０１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１０５］ 第２の軽鎖可変ドメインがカッパ定常領域をさらに含む、項目９０～１０１または１０４のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１０６］ カッパ定常領域が、配列番号４２に対して９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目１０２～１０５のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１０７］ ラムダ定常領域が、配列番号４３に対して９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目１０３～１０５のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１０８］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、ＩｇＡ ＣＨ２領域およびＩｇＡ ＣＨ３領域またはそのバリアントのうちの少なくとも１つを含む、項目８８～１０７のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１０９］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインがＩｇＡ ＣＨ１領域またはそのバリアントをさらに含む、項目１０８に記載の抗体構築物。
［項目１１０］ ＣＤ４７結合ドメインが、ＩｇＡ ＣＨ１ドメインによってＩｇＡ定常ドメインに連結される、項目１０９に記載の抗体構築物。
［項目１１１］ 抗原結合ドメインが、ＩｇＡ ＣＨ１ドメインによってＩｇＡ定常ドメインに連結される、項目１０９～１１０に記載の抗体構築物。
［項目１１２］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインがＩｇＡ１定常領域またはそのバリアントである、項目８８～１１１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１１３］ ＩｇＡ１定常領域がＩｇＡ１ ＣＨ２領域およびＩｇＡ１ ＣＨ３領域を含む、項目１１２に記載の抗体構築物。
［項目１１４］ ＩｇＡ１定常領域がＩｇＡ１ ＣＨ１領域をさらに含む、項目１１３に記載の抗体構築物。
［項目１１５］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインがＩｇＡ２定常領域またはそのバリアントである、項目８８～１１１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１１６］ ＩｇＡ２定常領域が、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含む、項目１１５に記載の抗体構築物。
［項目１１７］ ＩｇＡ２定常領域がＩｇＡ２ ＣＨ１領域をさらに含む、項目１１６に記載の抗体構築物。
［項目１１８］ 抗原が、ＣＤ２０、ＧＤ２、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ２５である、項目８８～１１７のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１１９］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、１、２または３つの天然に存在するグリコシル化部位を欠く、項目１０８～１１８のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１２０］ 前記部位が、ＩｇＡ ＣＨ２領域またはＩｇＡ ＣＨ３領域の少なくとも１つにある、項目１１９に記載の抗体構築物。
［項目１２１］ 前記構築物が、２つの天然に存在するＮ連結グリコシル化部位を欠く、項目１１９または１２０に記載の抗体構築物。
［項目１２２］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を欠く、項目１０８～１２１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１２３］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基のアミノ酸置換、または少なくとも２つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基の置換を含む、項目１２２に記載の抗体構築物。
［項目１２４］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基を欠く、項目１０８～１２３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１２５］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目１２４に記載の抗体構築物。
［項目１２６］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換を含む、項目１２５に記載の抗体構築物。
［項目１２７］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸欠失を含む、項目１２６に記載の抗体構築物。
［項目１２８］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基を欠く、項目１０８～１２７のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１２９］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目１２８に記載の抗体構築物。
［項目１３０］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｙ）アミノ酸残基の欠失を含む、項目１２９に記載の抗体構築物。
［項目１３１］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基を欠く、項目１０８～１３０のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１３２］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目１３１に記載の抗体構築物。
［項目１３３］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の欠失を含む、項目１３２に記載の抗体構築物。
［項目１３４］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基を欠く、項目１０８～１３３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１３５］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目１３４に記載の抗体構築物。
［項目１３６］ ＩｇＡ重鎖定常領域が、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の欠失を含む、項目１３５に記載の抗体構築物。
［項目１３７］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基を欠く、項目１０８～１３６のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１３８］ ＩｇＡ重鎖定常領域が、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基のアミノ酸置換を含む、項目１３７に記載の抗体構築物。
［項目１３９］ ＩｇＡ重鎖定常ドメインが、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の欠失を含む、項目１３８に記載の抗体構築物。
［項目１４０］ 抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い循環半減期を示す、項目１１９～１３９のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１４１］ 抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、より長い半減期を示す、項目１１９～１４０のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１４２］ 抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、減少した凝集を示す、項目１１９～１４１のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１４３］ 抗体構築物が、対応する野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体構築物と比較して、血清タンパク質との減少した凝集を示す、項目１１９～１４２のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１４４］ 前記ＩｇＡ重鎖定常領域が１以上のアルブミン結合ドメインを含む、項目１～１４３のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１４５］ 抗体構築物が、１以上のアルブミン結合ドメインを含まない対応する抗体構築物よりも長い半減期を有する、項目１４４に記載の抗体構築物。
［項目１４６］ ＩｇＡ重鎖定常領域がヒンジ領域をさらに含む、項目８８～１４５のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１４７］ ヒンジ領域が、ＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、項目１４６に記載の抗体構築物。
［項目１４８］ ヒンジ領域が、ヒトＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、項目１４７に記載の抗体構築物。
［項目１４９］ ヒンジが、ＩｇＡ１ヒンジもしくはＩｇＡ２ヒンジ、またはそのバリアントもしくはフラグメントである、項目１４７または１４８に記載の抗体構築物。
［項目１５０］ 抗体構築物が、免疫接着分子、造影剤、治療薬、または細胞毒性薬をさらに含む、項目１～１４９のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１５１］ 造影剤が、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、またはビオチンである、項目１５０に記載の抗体構築物。
［項目１５２］ 前記治療薬または細胞毒性薬が、代謝拮抗薬、アルキル化薬、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生薬、抗有糸分裂薬、アントラサイクリン、毒素、またはアポトーシス薬である、項目１５０に記載の抗体構築物。
［項目１５３］ 免疫エフェクター細胞が好中球である、項目１または８８に記載の抗体構築物。
［項目１５４］ 抗体構築物が、ＣＤ４７を発現する標的細胞に抗原結合ドメインも結合している場合にのみ、免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）機能を阻害する、項目１または８８に記載の抗体構築物。
［項目１５５］ 抗体構築物は二重特異性である、項目１または８８に記載の抗体構築物。
［項目１５６］ ＣＤ４７結合ドメインが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはラクダ科ＶＨＨドメインである、項目１または８８に記載の抗体構築物。
［項目１５７］ 抗原結合ドメインが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはラクダ科ＶＨＨドメインである、項目１または８８に記載の抗体構築物。
［項目１５８］ ＩｇＡ重鎖ドメインが、２つのＩｇＡ重鎖定常ドメインのヘテロ二量体である、項目１５３～１５７のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１５９］ ヘテロ二量体化が、ノブ－イントゥ－ホールカップリング、塩橋／静電相補性カップリング、ＣｒｏｓｓＭａｂカップリング、鎖交換操作ドメイン技術、またはそれらの組み合わせによる、項目１５８に記載の抗体構築物。
［項目１６０］ 抗原結合ドメインが、癌細胞または病原体の抗原に結合する、項目１５３～１５９のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１６１］ 病原体が、病原菌、微生物、またはウイルスである、項目１６０に記載の抗体構築物。
［項目１６２］ （ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む抗体構築物であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、
該抗原が、ＣＤ２０、ＧＤ２、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１またはＣＤ２５であり、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記抗体構築物。
［項目１６３］ （ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む多重特異性免疫エフェクター細胞エンゲージャー分子であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲと特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原と結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記多重特異性免疫エフェクター細胞エンゲージャー分子。
［項目１６４］ 項目１～１６１のいずれか１項に記載の抗体構築物、および
医薬的に許容しうるキャリヤー、アジュバントまたは希釈剤、
を含む医薬組成物。
［項目１６５］ さらに、少なくとも１つの追加の治療薬を含む、項目１６４に記載の医薬組成物。
［項目１６６］ 前記追加的治療薬が、造影剤、細胞毒性薬、血管形成阻害薬、キナーゼ阻害薬、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、抗サイトカイン抗体もしくはその機能性フラグメント、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦ拮抗薬、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬、ベータ作動薬、吸入ステロイド、エピネフリンもしくはその類似体、サイトカイン、またはサイトカイン拮抗薬である、項目１６５に記載の医薬組成物。
［項目１６７］ 項目１～１６１のいずれか１項に記載の抗体構築物をコードする、単離核酸。
［項目１６８］ 項目１６７に記載の単離核酸を含むベクター。
［項目１６９］ 項目１６７に記載の単離核酸を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞。
［項目１７０］ 項目１～１６１のいずれか１項に記載の抗体構築物を発現するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞。
［項目１７１］ 抗体構築物を含む有効量の組成物を被験体に投与することを含む、それを必要とする被験体の処置方法であって、該抗体構築物が、
（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含み、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記処置方法。
［項目１７２］ ＳＩＲＰ αとのＣＤ４７結合の阻害が、標的細胞の食作用およびクリアランスを増加させる、項目１７１に記載の方法。
［項目１７３］ 組成物が、経口、病巣内、静脈内治療によって、または皮下、筋肉内、動脈内、静脈内、腔内、頭蓋内、もしくは腹腔内注射によって投与される、項目１７１～１７２のいずれか１項に記載の方法。
［項目１７４］ 組成物が、毎日、毎週、隔週、毎月、２カ月毎、３カ月に１回、６カ月に１回、または１２カ月に１回投与される、項目１７１～１７３のいずれか１項に記載の方法。
［項目１７５］ 被験体が癌を有する、項目１７１～１７４のいずれか１項に記載の方法。
［項目１７６］ 癌が、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、胆道癌、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、胆道癌、骨癌、脳癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、子宮頸癌、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、胃癌、消化管癌、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頚部癌、ホジキンリンパ腫、肝癌、肺癌、甲状腺髄様癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、肺路癌、腎癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、尿路上皮癌、および膀胱癌からなる群より選択される、項目１７５に記載の方法。
［項目１７７］ 被験体がヒトである、項目１７１～１７６のいずれか１項に記載の方法。
［項目１７８］ 有効量の少なくとも１つの追加的治療薬を投与することを含む、項目１７１～１７７のいずれか１項に記載の方法。
［項目１７９］ 追加的治療薬が、造影剤、化学療法薬、キナーゼ阻害薬、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、第２の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、薬物、毒素、酵素、細胞毒性薬、抗血管形成薬、プロアポトーシス薬、抗生物質、ホルモン、免疫モジュレーター、サイトカイン、ケモカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦ拮抗薬、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、または抗精神病薬である、項目１７８に記載の方法。
［項目１８０］ 標的細胞を有効量の抗体構築物と接触させることを含む、標的細胞に対する好中球媒介免疫応答を誘導する方法であって、
該抗体構築物が、
（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン
を含み；
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、好中球上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と好中球上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有し、それによって、好中球媒介免疫応答を誘導する、
前記方法。
［項目１８１］ 好中球媒介免疫応答が、標的細胞の食作用または標的細胞の溶解を含む、請求尾１８０に記載の方法。
［項目１８２］ 抗原提示細胞が癌細胞またはウイルス細胞である、項目１８０～１８１のいずれか１項に記載の方法。
［項目１８３］ 癌細胞がリンパ球である、項目１８２に記載の方法。
［項目１８４］ ＣＤ４７結合ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む第１の軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３が、表Ａから選択されるアミノ酸配列を含む、項目１～１６２のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１８５］ ＣＤ４７結合ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む第１の重鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３が、表Ａから選択されるアミノ酸配列を含む、項目１～１６２または１８４のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１８６］ 抗原結合ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む第２の軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３が、表Ｂから選択されるアミノ酸配列を含む、項目１～１６２または１８４～１８５のいずれか１項に記載の抗体構築物。
［項目１８７］ 抗原結合ドメインが、可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）および可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む第２の重鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３が、表Ｂから選択されるアミノ酸配列を含む、項目１～１６２または１８４～１８６のいずれか１項に記載の抗体構築物。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図2I】

【図2J】

【図2K】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-08-30

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

（ａ）免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖ドメイン；
（ｂ）ＣＤ４７結合ドメイン；および
（ｃ）抗原結合ドメイン；
を含む抗体構築物であって、
該ＩｇＡ重鎖ドメインが、免疫エフェクター細胞上のＦｃαＲに特異的に結合し、
該ＣＤ４７結合ドメインが、標的細胞上に発現されたＣＤ４７と免疫エフェクター細胞上のシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ α）との結合を阻害し、
該抗原結合ドメインが、標的細胞上の抗原に結合し、そして
該抗体構築物が、ＣＤ４７と比較して、抗原に対してより高い結合親和性を有する、
前記抗体構築物。

【外国語明細書】