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特開2024-170521水を溶媒とする結晶化を用いて水溶液からメバロン酸又はその塩若しくはラクトンを回収するための方法及びその組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024170521
(43)【公開日】2024-12-10
(54)【発明の名称】水を溶媒とする結晶化を用いて水溶液からメバロン酸又はその塩若しくはラクトンを回収するための方法及びその組成物
(51)【国際特許分類】
C12P 7/62 20220101AFI20241203BHJP
C07D 309/30 20060101ALI20241203BHJP
A61K 31/366 20060101ALI20241203BHJP
A61K 8/49 20060101ALI20241203BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20241203BHJP
A61Q 1/00 20060101ALI20241203BHJP
C12P 7/22 20060101ALI20241203BHJP
A23L 33/10 20160101ALI20241203BHJP
【ＦＩ】
C12P7/62
C07D309/30 D
A61K31/366
A61K8/49
A61Q19/00
A61Q1/00
C12P7/22
A23L33/10
【審査請求】有
【請求項の数】11
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024152013
(22)【出願日】2024-09-04
(62)【分割の表示】P 2022513846の分割
【原出願日】2020-08-25
(31)【優先権主張番号】62/892,760
(32)【優先日】2019-08-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/012,492
(32)【優先日】2020-04-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】509240479
【氏名又は名称】ダニスコ・ユーエス・インク
(74)【代理人】
【識別番号】110003579
【氏名又は名称】弁理士法人山崎国際特許事務所
(74)【代理人】
【識別番号】100173978
【弁理士】
【氏名又は名称】朴 志恩
(74)【代理人】
【識別番号】100118647
【弁理士】
【氏名又は名称】赤松 利昭
(74)【代理人】
【識別番号】100123892
【弁理士】
【氏名又は名称】内藤 忠雄
(74)【代理人】
【識別番号】100169993
【弁理士】
【氏名又は名称】今井 千裕
(72)【発明者】
【氏名】ヤルヴィネン、ユホ
(72)【発明者】
【氏名】コイヴィッコ、ハンヌ
(72)【発明者】
【氏名】クーシスト、イルキ
(72)【発明者】
【氏名】メントゥネン、テロ トゥオマス
(72)【発明者】
【氏名】ヌルミ、ユハ
(72)【発明者】
【氏名】サレラ、ペルッティ マティアス
(72)【発明者】
【氏名】シートネン、ヤニ
(72)【発明者】
【氏名】ホワイテッド、グレゴリー エム
(57)【要約】 （修正有）
【課題】メバロン酸の塩を含む水溶液から結晶形態のメバロノラクトンを生成するための方法及び生成したメバロノラクトンを含む組成物を提供する。
【解決手段】メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液からメバロノラクトンを生成するための方法であって、前記Ｘ－ＭＶＡを含む水溶液を陽イオン交換に付すことにより、Ｘ－ＭＶＡを含む前記水溶液をメバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液に変換することを含む、方法である。また、メバロノラクトン一水和物結晶を生成するための方法も提供する。
【選択図】図１Ｂ
【解決手段】メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液からメバロノラクトンを生成するための方法であって、前記Ｘ－ＭＶＡを含む水溶液を陽イオン交換に付すことにより、Ｘ－ＭＶＡを含む前記水溶液をメバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液に変換することを含む、方法である。また、メバロノラクトン一水和物結晶を生成するための方法も提供する。
【選択図】図１Ｂ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
メバロン酸の塩の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液からメバロノラクトンを生成するための方法であって、前記メバロネートの塩を含む前記水溶液を陽イオン交換に付し、それによりメバロネートの塩を含む前記水溶液をメバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液に変換することを含む、方法。
【請求項2】
メバロン酸の塩の前記塩は、Ｎａ－メバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）、Ｋ－メバロネート（Ｋ－ＭＶＡ）、アンモニウムメバロネート（ＮＨ４－ＭＶＡ）、リチウムメバロネート（Ｌｉ－ＭＶＡ）、他の任意の１価のメバロン酸の塩、又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
メバロノラクトンを含む前記水溶液を濃縮することにより、ＤＳを少なくとも６５％～９０％含む液体にすることを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶を得るために前記水溶液又は液体を０～２５℃に冷却することを更に含む、請求項１又は請求項３に記載の方法。
【請求項5】
メバロノラクトンの純度が最小９０％であるメバロノラクトンを含む希薄な液体を得るために、前記ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ結晶を水に溶解することを更に含む、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記水溶液は、発酵ブロスである、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
前記発酵ブロスは、プレコート濾過、精密濾過、又は限外濾過の少なくとも１種により、前記発酵ブロスからバイオマス及び任意の固体を除去することにより清澄化される、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記発酵ブロスは、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の発酵により得られるブロスである、請求項６に記載の方法。
【請求項9】
請求項１～６のいずれか一項により生成したＭＶＬ又はその可溶化した形態を含む、医薬用又は在宅医療用又は栄養又はパーソナルケア又は化粧用組成物。
【請求項10】
請求項１５に記載の方法により得られる結晶性メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）。
【請求項11】
メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、２０１９年８月２８日に出願された米国仮出願第６２／８９２７６０号明細書、２０２０年４月２０日に出願された米国仮出願第６３／０１２４９２号の利益を主張するものであり、それぞれの全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
【0002】
本開示は、有機酸分離技法の分野に関し、より詳細には、水を溶媒とする結晶化（ｗａｔｅｒ ｓｏｌｖｅｎｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）を用いて有機酸及びその塩又はラクトンを水溶液から回収するための方法に関する。
【背景技術】
【0003】
発酵ブロス等の溶液から有機酸を単離及び精製するための公知のプロセスは非常に複雑であり、一般には、溶媒抽出ステップ又は固相吸収が含まれる。
【0004】
炭水化物を含有する基質を様々な微生物を使用して発酵させることにより生成するカルボン酸等の有機酸を工業的に使用するために重要な面は、有機酸又は有機酸塩又はラクトンのみならず、他の有機酸、他の発酵副産物、微生物、及びその構成要素に加えて、基質の残滓、例えば、糖、タンパク質、脂質、及び他の微量の有機及び無機化合物も含む、こうした水性発酵液から、有機酸又はその塩若しくはラクトンを除去及び精製する費用対効果及び効率である。
【0005】
微生物により生成した有機酸を発酵ブロスから精製する古典的な方法は、ブロスのｐＨを低下させることにより目的の酸をプロトン化し、部分混和性を有する有機溶媒を用いて液／液抽出を行うものである（Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｐｇ．４９－６７．Ｒａｌｐｈ Ｆｅｓｓｅｎｄｅｎ，Ｊｏａｎ Ｆｅｓｓｅｎｄｅｎ，Ｐａｔｔｙ Ｆｅｉｓｔ ２００１，Ｂｒｏｏｋｓ／Ｃｏｌｅ）。
【0006】
米国特許出願公開第２０１４／０３７１４８６号明細書には、固相吸着を用いて発酵ブロスからカルボン酸を精製するための方法が記載されている。この方法は、発酵ブロス中に存在するバイオマス及び任意の固体を除去することと、バイオマスも固体も含まない発酵ブロスをナノ濾過により精密に清浄化することと、精密に清浄化されたバイオマスも固体も含まない発酵ブロスから、３級アミノ基を有する１又は複数の固相に吸着させることによりカルボン酸を除去することと、を含む。ＫＲ２０１８００７０１１７号明細書には、生合成されたメバロン酸からリン酸を用いてメバロノラクトンを製造する方法が記載されている。
【0007】
米国特許第５０３４１０５号明細書には、コハク酸塩の不飽和溶液からコハク酸を結晶化させる方法であって、前記塩溶液を電気透析に付すことにより過飽和溶液を生成させ、次いで、前記溶液にコハク酸の結晶化を促すのに有効な量の酢酸を添加することにより、コハク酸の過飽和溶液を結晶化させることによる、方法が記載されている。
【0008】
これらの方法の欠点は、プロセスに追加の物質が供給されることであり、目的の生成物中にはこの物質はもはや存在してはならず、もしこの物質が目的の生成物中に微量に存在すると、製品の品質及び適用可能性を制限しかねない。この方法の実際の実施にはまた、かなりの技術的な複雑さ及び相当なエネルギー消費が伴う場合もある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
したがって、有機酸並びにその塩及びラクトンを精製及び回収するため、並びに有機酸及びその塩又はラクトンを結晶形態で製造するための、より効果が高く、信頼性が高く、環境に優しく、及び／又は経済的に実現可能なプロセスを開発することが依然として望まれている。
【課題を解決するための手段】
【0010】
水溶液から有機酸又はその塩若しくはラクトンの結晶形態を生成するための組成物及び方法が提供される。一態様において、結晶性メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）及びメバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）を結晶化させる方法を開示する。
【0011】
より具体的には、一態様において、本明細書は、メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡとも称する）の結晶形態を水溶液から生成するための方法であって、前記Ｘ－ＭＶＡを含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することと、前記透過液から前記Ｘ－ＭＶＡを、水を溶媒とする結晶化（ｗａｔｅｒ ｓｏｌｖｅｎｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）により結晶化させることと、を含む、方法を提供する（図１Ａ）。
【0012】
他の態様において、本明細書は、水に可溶化したメバロノラクトンを水溶液から生成するための方法であって：ａ）メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成し、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることによって、前記メバロン酸の塩の結晶を生成することにより、水溶液から結晶形態の前記メバロン酸の塩を生成することと；ｂ）（ａ）の結晶を水に溶解することによって水に可溶化したメバロン酸の塩を生成し、前記液体を陽イオン交換に付すことにより、前記水に可溶化したメバロン酸の塩を水に可溶化したメバロノラクトンに変換することと、を含む、方法を提供する（図１Ｂ）。
【0013】
更なる他の態様において、本明細書は、メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液からメバロノラクトンを生成するための方法であって、前記メバロネートの塩を含む水溶液を、陽イオン交換に付すことにより、メバロネートの塩を含む前記水溶液をメバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液に変換することと、任意選択的に、前記溶液を濃縮することにより前記水溶液から高純度（純度＞９０％）のＭＶＬを生成することと、前記濃縮された溶液からメバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）を生成することと、メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）の結晶を水に溶解することにより高純度のＭＶＬ溶液を得ることと、を含む、方法を提供する（図２）。
【0014】
メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）の結晶形態を生成するための組成物及び方法も提供する。
【0015】
本開示の方法及び組成物の更なる実施形態を本明細書に示す。
【0016】
本開示は、以下の詳細な説明及び本出願の一部を構成する添付の図面からより充分に理解することができるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1A】水溶液から結晶形態のメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）（これらに限定されるものではないが、Ｎａ－ＭＶＡ等）を生成するための方法の模式図を示すものであり、前記メバロン酸の塩（Ｎａ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することと、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む。水を溶媒とする結晶化は、透過液を蒸発させることにより、濃縮されたＸ－ＭＶＡを含むシロップ（ｓｙｒｕｐ）を得ることと、次いで、前記シロップを冷却することによりメバロン酸の塩の結晶（Ｎａ－ＭＶＡ結晶等）を生成することと、を含む。
【図1B】水溶液から水に可溶化したメバロノラクトン（ＭＶＬ）を生成するための方法の模式図を示すものであり、この方法は、図１Ａに記載した方法により得られたメバロン酸の塩の結晶（Ｎａ－ＭＶＡ結晶等）を水に溶解することにより、水に可溶化したメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を生成することと、前記液体を陽イオン交換に付すことにより、前記水に可溶化したメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を水に可溶化したメバロノラクトン（ＭＶＬ）に変換することと、任意選択的に、水に可溶化したメバロノラクトンを蒸発により濃縮することと、を含む。
【図2】メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液からメバロノラクトンを生成するための方法の模式図を示すものであり、この方法は、前記メバロネートの塩を含む水溶液を陽イオン交換に付すことにより、メバロネートの塩を含む前記水溶液をメバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液に変換することと、任意選択的に、前記溶液を濃縮することにより、約２３℃未満の低温で保存するとメバロノラクトン＊一水和物結晶を生成し得るシロップとすることと、を含む。このメバロノラクトン＊一水和物結晶を、任意選択的に、更に水に溶解して濃縮することにより、高度に濃縮された高純度のＭＶＬ液体（純度＞９０％）を生成することができる。
【図3】この写真は、メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶の典型的な形状を示すものである。
【発明を実施するための形態】
【0018】
有機酸並びにその塩及びラクトンを、水を溶媒とする結晶化を用いて水溶液から回収するための組成物及び方法を提供する。一態様において、結晶性メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）及びメバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）を結晶化させる方法を開示する。
【0019】
より詳細には、一態様において、本発明の目的は、それを含む溶液からメバロネートの塩（Ｘ－ＭＶＡ）を回収するための方法を提供することにある。他の態様において、本発明の目的は、メバロネートの塩（Ｘ－ＭＶＡ）、メバロノラクトン（ＭＶＬ）、メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）、又はこれらの組合せを含む溶液からメバロノラクトン（ＭＶＬ）を回収するための方法を提供することにある。メバロネートの塩を回収するため及び／又はメバロノラクトンを回収するための全プロセスは、好ましくは、有機溶媒を使用することなく水溶液中で実施することができる。
【0020】
本明細書に記載する方法により、着色物質が殆ど又は全く形成されない水のような外観を有する高純度（純度＞９０％）のＭＶＬ生成物を得ることができる。したがって、本明細書に記載する方法により生成するＭＶＬは、大規模製造のために規模を拡大することができ、また、高度に精製されたＭＶＬ生成物に有色の汚染物質が殆ど又は全く存在せず無色透明であれば非常に価値の高いものになる、パーソナルケア産業から特に関心が寄せられている。
【0021】
この詳細な説明は、本出願人の発明が属する技術分野の他の当業者にその原理及び実際の用途を知らせることによって、他の当業者が、特定の使用の要件に最も適したものになり得るように本発明をその数々の形態に適応及び適用することができるようにすることを意図している。この詳細な説明及びその具体例は、特定の実施形態を示してはいるが、例示のみを目的とするものである。したがって本明細書は、記載された実施形態に限定されず、様々な修正を行うことが可能である。
【0022】
本文書は、読みやすいように複数の項から構成されているが、読者は、ある項における記載が他の項に適用できることを理解するであろう。このように、本開示の異なる項に使用されている見出しは限定するためのものと解釈すべきではない。
【0023】
本明細書において示す見出しは本組成物及び方法の様々な態様又は実施形態を制限するものではなく、本組成物及び方法は、本明細書全体を参照することにより理解することができる。したがって、この直後に定義する用語は、本明細書全体を参照することによってより十分に定義される。
【0024】
他に定義されていない限り、本明細書において用いられる全ての技術及び科学用語は、本組成物及び方法が属する技術分野の当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。
本明細書に記載する任意の方法及び材料と類似又は均等な方法及び材料も、本組成物及び方法の実施又は試験に用いることができるが、代表的な例示的方法及び材料をここに記載する。
本明細書に記載する任意の方法及び材料と類似又は均等な方法及び材料も、本組成物及び方法の実施又は試験に用いることができるが、代表的な例示的方法及び材料をここに記載する。
【0025】
本明細書に引用する全ての刊行物及び特許を、個々の刊行物及び特許がそれぞれ具体的且つ個別に参照により組み込まれることが示されているかの如く、参照により本明細書に組み込み、また、引用されている刊行物に関連する方法及び／又は材料を開示及び説明するために、参照により本明細書に組み込む。
【0026】
定義
本明細書において、並びに実施例及び特許請求の範囲全体を通して、以下に示す定義を使用する。
本明細書において、並びに実施例及び特許請求の範囲全体を通して、以下に示す定義を使用する。
【0027】
「メバロン酸（ＭＶＡ）」又は「（Ｒ）－メバロン酸」という用語は本明細書において互換的に使用され、化学式Ｃ６Ｈ１２Ｏ４を有し、モル質量が１４８．１６ｇ／ｍｏｌである（３Ｒ）－３，５－ジヒドロキシ－３－メチルペンタン酸を指す。メバロン酸のカルボキシレート陰イオンは、メバロネートとして知られている。本明細書に記載するメバロン酸は、生物学的に活性なＲエナンチオマーである。
【0028】
「メバロネートの塩」又は「メバロネート塩」又は「Ｘ－ＭＶＡ」という用語は、本明細書において互換的に使用され、Ｘが陽イオンであり、ＭＶＡがメバロン酸のカルボキシレート陰イオンであるメバロン酸の塩（したがって、Ｘ－ＭＶＡ）を指す。メバロネートの塩は、Ｎａ－メバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）、Ｋ－メバロネート（Ｋ－ＭＶＡ）、アンモニウムメバロネート（ＮＨ４－ＭＶＡ）、リチウムメバロネート（Ｌｉ－ＭＶＡ）、他の任意の１価のメバロン酸の塩、又はこれらの任意の組合せからなる群から選択することができる。
【0029】
「メバロノラクトン」又は「（Ｒ）－メバロノラクトン」又は「ＭＶＬ」という用語は、本明細書において互換的に使用され、（Ｒ）－３－ヒドロキシ－３－メチル－δ－バレロラクトンを指す。
【0030】
本明細書に記載する水溶液は、平衡濃度に向かって互いに変換し合う有機酸及びそのラクトンの両方を含む溶液を含む。例えば、メバロン酸及びメバロノラクトンは互いに平衡化する傾向にある。本記載において、有機酸を含む溶液は、特に断りのない限り、確実にそのラクトン形態も含む。
【0031】
メバロノラクトン一水和物は、ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏとも称される。
【0032】
ＳＡＣは、強酸性陽イオン交換樹脂を指す。
【0033】
ＷＡＣは、弱酸性陽イオン交換樹脂を指す。
【0034】
ＤＳは、重量％で表される乾燥物含有量を指す。乾燥物はカールフィッシャー水分滴定法により測定することができる。
【0035】
ＲＤＳは、屈折率による乾燥物含有量（ｒｅｆｒａｃｔｏｍｅｔｒｉｃ ｄｒｙ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｃｏｎｔｅｎｔ）を指し、糖の水溶液の屈折率とＤＳとの間の相関関係に従い重量％で表される。
【0036】
ＩＸ又はＩＥＸはイオン交換プロセスを指す。
【0037】
ＢＶ／ｈは、カラム又は運転装置（ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｕｎｉｔ）に含まれるイオン交換材料を通過する体積流量を指す。ＢＶは、カラム又は運転装置に含まれる指定されたイオン形態にあるイオン交換材料の体積である、ベッド体積を指す。
【0038】
純度は、構成成分（Ｎａ－ＭＶＡ、ＭＶＬ、ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ等）のＤＳ又はＲＤＳに基づく含有量を指す。面積％の算出手順では、クロマトグラム（ＨＰＬＣクロマトグラム等）の各ピークの面積を、全てのピークの総面積の百分率として報告する。例えば、メバロノラクトンの純度が少なくとも９０％であるとは、クロマトグラフィー分析を用いた、ＭＶＬに対応するピーク面積（この場合は９０）のピークの総面積（１００）に対する百分率を指す。純度は、ＨＰＬＣ（Ｒｅｚｅｘ ＲＯＡ－Ｏｒｇａｎｉｃ Ａｃｉｄ Ｈ＋（８％）カラム）を用いて測定することができる。
【0039】
ＨＰＬＣは、高速液体クロマトグラフィーを指す。
【0040】
ナトリウムメバロネート純度とは、メバロン酸、メバロネート、及びメバロノラクトンが全てナトリウムメバロネート形態にあると仮定した場合のナトリウムメバロネートの量を、乾燥物の総量で除した値を指す。
【0041】
メバロノラクトン純度とは、メバロン酸、メバロネート、及びメバロノラクトンが全てメバロノラクトン形態にあると仮定した場合のメバロノラクトンの総量を、乾燥物の総量で除した値を指す。
【0042】
メバロネート収率とは、メバロン酸、メバロネート、及びメバロノラクトンが全てメバロネート形態にあると仮定した場合の、目的の画分（ナノ濾過による透過液又は遠心ケーク等）中のメバロネートの量を、供給液画分（ナノ濾過供給液又は遠心分離供給液）中のメバロネートの量で除した値を指す。
【0043】
メバロノラクトン収率とは、メバロン酸、メバロネート、及びメバロノラクトンが全てメバロノラクトン形態にあると仮定した場合の、目的の画分（陽イオン交換生成物又は遠心ケーク）中のメバロノラクトンの量を、供給液画分（陽イオン交換供給液又は遠心分離供給液等）中のメバロノラクトンの量で除した値を指す。
【0044】
色とは、国際砂糖分析統一委員会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｆｏｒ Ｕｎｉｆｏｒｍ Ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｓｕｇａｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ）（「ＩＣＵＭＳＡ」）糖色価等級格付け体系（ｓｕｇａｒ ｃｏｌｏｒ ｇｒａｄｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ）に基づく色価を指す。
【0045】
ＤＳＣサーモグラムは、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＳＣ８２２ｅ示差走査熱量計を用いて測定した。この測定は、４０μＬアルミニウム製標準るつぼ内で流速８０ｍＬ／ｍｉｎの窒素気流下にて実施した。温度範囲は０～５０℃とし、昇温速度を２℃／ｍｉｎとした。
【0046】
旋光度は、メバロノラクトン濃度が２ｇ／１００ｍＬである水溶液中で、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＭＣＰ ３００ Ｓｕｃｒｏｍｅｔを２０℃の温度で使用し、１００ｍｍのキュベット及び５８９ｎｍのＮａ光源を用いて測定した。
【0047】
略語の意味を次に示す：「ｓｅｃ」は秒を意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「ｈ」又は「ｈｒ」は時を意味し、「ｄ」は日を意味し、「μＬ」はマイクロリットルを意味し、「ｍＬ」はミリリットルを意味し、「Ｌ」はリットルを意味し、「μＭ」はマイクロモル濃度を意味し、μｍはマイクロメートルを意味し、「ｍＭ」はミリモル濃度を意味し、「Ｍ」はモル濃度を意味し、「ｍｍｏｌ」はミリモルを意味し、「μｍｏｌｅ」はマイクロモルを意味し、「ｋｇ」はキログラムを意味し、「ｇ」はグラムを意味し、「μｇ」はマイクログラムを意味し、「ｎｇ」はナノグラムを意味し、「Ｕ」はユニットを意味し、「ｂｐ」は塩基対を意味し、「ｋｂ」はキロベースを意味する。
【0048】
出発物質
記載する方法に使用する溶液は、有機酸又はその塩若しくはラクトンを含む水溶液を含む。より具体的には、一態様において、出発物質は、少なくともＭＶＡ及び／又はメバロネートの１種の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液である。一態様において、出発物質は、メバロノラクトン（ＭＶＬ）又はメバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）を含む水溶液である。出発物質は、例えば、ＭＶＡ、メバロネートの塩、メバロノラクトン、メバロノラクトン一水和物、又はこれらの任意の組合せを含む発酵由来の発酵液及び／又は水溶液から選択することができる。
記載する方法に使用する溶液は、有機酸又はその塩若しくはラクトンを含む水溶液を含む。より具体的には、一態様において、出発物質は、少なくともＭＶＡ及び／又はメバロネートの１種の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液である。一態様において、出発物質は、メバロノラクトン（ＭＶＬ）又はメバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）を含む水溶液である。出発物質は、例えば、ＭＶＡ、メバロネートの塩、メバロノラクトン、メバロノラクトン一水和物、又はこれらの任意の組合せを含む発酵由来の発酵液及び／又は水溶液から選択することができる。
【0049】
幾つかの実施形態において、水溶液は、発酵生成物を含む（又は全体若しくは一部がそれに由来する）。幾つかのこの種の実施形態において、水溶液は、精製すべきＭＶＡ、Ｘ－ＭＶＡ、及び／又はＭＶＬを製造するために使用される発酵生成物である（又は全体若しくは一部がそれに由来する）。幾つかの実施形態において、発酵は、炭水化物を含む水性培養液中で、ＭＶＡ、Ｘ－ＭＶＡ、及び／又はＭＶＬを産生することができる１種の酵素（又は複数種の酵素）をコードする少なくとも１つの組換えポリヌクレオチド配列を含む組換え微生物を培養することを含む。発酵プロセスの生成物は、発酵「生成物」又は「ブロス」と称することができる。生成物は、通常、精製すべきＸ－ＭＶＡ及び／又はＭＶＬに加えて、例えば、１価及び２価の塩、糖類、オリゴ糖類、単糖類、アミノ酸、ポリペプチド、タンパク質、有機酸、核酸等の多くの成分を含む。水溶液は発酵に由来する、ある種のアルコール又は他の溶媒を含み得る。
【0050】
ＭＶＡの製造に多くの場合有用となる酵素の例として、ＭｖａＥ（アセチル－ＣｏＡアセチルトランスフェラーゼ／ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ）及びＭｖａＳ（ヒドロキシメチルグルタリル－ＣｏＡシンターゼ）が挙げられる。ｍｖａＥ遺伝子は、チオラーゼ及びＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼの両方の活性を有するポリペプチド（ＭｖａＥ）をコードする。ｍｖａＳ遺伝子は、ＨＭＧ－ＣｏＡシンターゼ活性を有するポリペプチド（ＭｖａＳ）をコードする。ＭＶＡ（及び対応するヌクレオチド配列）を産生することができる酵素は、これらに限定されるものではないが、リステリア・グレイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｇｒａｙｉ）、エンテロコッカス・フェカーリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、（ストレプトコッカス・フェカーリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ））、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカス・ガリナラム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、及びエンテロコッカス・カセリフラブス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ）に由来するものとすることができる。
【0051】
発酵ブロスは、ＭＶＡ又はＭＶＬを産生することができる任意の生物を発酵させることにより得られたブロスとすることができる。幾つかの実施形態において、発酵ブロスは、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の発酵により得られるブロスである。幾つかの態様において、出発水溶液は、これらに限定されるものではないが、メバロン酸を塩として含む、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の発酵により得られる発酵ブロス等の、ｐＨが中性の発酵ブロスとすることができる。出発水溶液はまた、低ｐＨ（ｐＨ３～５）の発酵ブロスとすることもでき、前記発酵ブロスは、一部が酸形態にあり、一部がメバロネートの塩であるメバロン酸を含む。発酵ブロスは清澄化された発酵ブロスとすることができ、この清澄化は、発酵ブロスを供給液として限外濾過することにより得られる。
【0052】
幾つかの実施形態において、精製すべき有機酸はＭＶＡであり、ＭＶＡ出発溶液は、発酵プロセスの生成物を含み（又は全体若しくは一部がそれに由来する）、この発酵プロセスは、ＭｖａＥ及びＭｖａＳをコードする組換えポリヌクレオチド配列を含む組換え微生物を水性培養液中で培養することを含む。
【0053】
発酵ブロスは、プレコート濾過、精密濾過、遠心分離、又は限外濾過の少なくとも１種により、前記発酵ブロスからバイオマス及び任意の不溶性固体を除去することにより清澄化することができる。限外濾過は、例えば、内毒素、タンパク質、核酸、リポ多糖等の大きな生体分子を除去するのに有利となり得る。
【0054】
細胞バイオマスは、例えば、濾過、遠心分離、沈降、及び／又は細胞バイオマスの除去に適した他のプロセスを用いて発酵生成物から分離することができる。
【0055】
ナノ濾過
本明細書に記載するように、一態様において、本発明の目的は、メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ又はＸ－メバロネートとも称する）の結晶形態を水溶液から生成するための精製方法であって、前記メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することと、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む方法にある（図１Ａ及び実施例１～４も参照されたい）。
本明細書に記載するように、一態様において、本発明の目的は、メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ又はＸ－メバロネートとも称する）の結晶形態を水溶液から生成するための精製方法であって、前記メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することと、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む方法にある（図１Ａ及び実施例１～４も参照されたい）。
【0056】
ナノ濾過（ＮＦ）は、圧力を駆動力とする膜濾過を基礎とするプロセスである。ナノ濾過により、２種の画分：保持液及び透過液が得られる。
【0057】
本発明の一態様において、ＮＦプロセスは、メバロン酸の塩（これらに限定されるものではないが、Ｎａ－メバロネート、Ｋ－メバロネート、Ｌｉ－メバロネート、アンモニウムメバロネート、又は他の１価のメバロン酸の塩等）を精製して透過液（濾過液とも称する）を得ることを目的とする。このプロセスからの保持液（濃縮液とも称する）は、消泡剤、内毒素、有色成分、２価の塩、及びより大きな分子を含む廃棄物である。本発明の一実施形態において、水溶液は、高含有量のメバロネート塩（透過液中に少なくとも６０％のナトリウムメバロネート、実施例１～４）及びごく少量の廃棄物質を含む透過液を得るためのナノ濾過の供給液として使用される。
【0058】
出発水溶液は、これらに限定されるものではないが、メバロン酸を塩として含む、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の発酵により得られる発酵ブロス等の、ｐＨが中性の発酵ブロスとすることができる。出発水溶液はまた、低ｐＨ（ｐＨ３～５）の発酵ブロスとすることもでき、前記発酵ブロスは、一部が酸形態にあり、一部がメバロネートの塩であるメバロン酸を含む。
【0059】
本発明によるナノ濾過は、回分式プロセス又は連続式プロセスとして実施することができる。
【0060】
ナノ濾過は、通常、５～８０℃の範囲、好ましくは、３０～７５℃の範囲、最も好ましくは５０～７０℃の範囲の温度で実施される。ナノ濾過の圧力は、通常、５～６０ｂａｒの範囲、好ましくは１０～５０ｂａｒの範囲、最も好ましくは２０～４５ｂａｒの範囲にある。ｐＨは、１～１０の範囲、好ましくは３～９の範囲、最も好ましくは６～９の範囲とすることができる。ｐＨは、出発溶液の組成及びナノ濾過に使用される膜及び回収すべき構成成分の安定性に依存する。出発溶液のｐＨは、必要に応じて、ナノ濾過を行う前に所望の値に調整することができる。
【0061】
ナノ濾過は、通常、ナノ濾過供給液の濃度及び粘度に応じて、流束１～１００ｌ／ｍ２ｈ、好ましくは流束２～５０ｌ／ｍ２ｈ、最も好ましくは流束３～１２ｌ／ｍ２ｈで実施される。
【0062】
本発明に使用されるナノ濾過膜は、ＭｇＳＯ４阻止率が５０～９９％（２５℃、濃度２ｇ／ｌ、８ｂａｒ、ｐＨ６）、好ましくは７０～９９％（２５℃、濃度２ｇ／ｌ、８ｂａｒ、ｐＨ６）、より好ましくは８０～９８％（２５℃、濃度２ｇ／ｌ、８ｂａｒ、ｐＨ６）、最も好ましくは９０～９８％（２５℃、濃度２ｇ／ｌ、８ｂａｒ、ｐＨ６）である高分子膜及び無機膜から選択することができる。一態様において、ナノ濾過膜は、ＭｇＳＯ４阻止率が約９２～９８％であるナノ濾過膜ＸＮ４５である。
【0063】
ナノ濾過膜のＭｇＳＯ４阻止率が９９％又はそれを超えるＭｇＳＯ４阻止率の場合は、１価塩の阻止率が過度に高く、ＭＷＣＯが低く、したがってＸ－ＭＶＡ塩の阻止率が高くなる。ＭｇＳＯ４阻止率が＜９０％ＭｇＳＯ４阻止率の膜は、小さい２価の塩も通過させてしまうため、さほど高度に精製されない。
【0064】
幾つかの実施形態において、膜の分画分子量（ＭＷＣＯ）は約１００～約７００ダルトンＭＷＣＯ膜の範囲にあり、これらに限定されるものではないが、ＴｒｉＳｅｐ ＸＮ４５膜等である。ＴｒｉＳｅｐ ＸＮ４５膜は、ＭＷＣＯが３００～５００ダルトンの膜であることを特徴とする。幾つかの実施形態において、膜の分画分子量（ＭＷＣＯ）は、約１５０～約４００ダルトンの範囲にある。幾つかの実施形態において、膜の分画分子量（ＭＷＣＯ）は、約１５０～約３００ダルトンの範囲にあり、これらに限定されるものではないが、Ｓｕｅｚ ｄｕｒａｔｈｅｒｍ ＥＸＬＤＬ及びＤＫ膜等がある。Ｓｕｅｚ ｄｕｒａｔｈｅｒｍ ＥＸＬ ＤＬ及びＤＫ膜は、ＭＷＣＯが１５０～３００ダルトンの膜であることを特徴とする。ＭＷＣＯ及びＭｇＳｏ４阻止率は、どちらもナノ濾過膜の選択に重要なパラメータである。一態様において、ここに記載したプロセス用の膜は、ＭＷＣＯが１５０Ｄａを超えるが、２価の塩の排除率も高い（＞９０％ＭｇＳＯ４）ものであり、これらに限定されるものではないが、ＴｒｉＳｅｐ ＸＮ４５タイプの膜等のナノ濾過膜である。
【0065】
幾つかの実施形態において、膜の分画分子量（ＭＷＣＯ）は約１００～約９００ダルトンの範囲にあり、ＭｇＳＯ４阻止率は２５℃で約５０～９９％である。幾つかの実施形態において、膜の分画分子量（ＭＷＣＯ）は約１５０～約５００ダルトンの範囲にあり、ＭｇＳＯ４阻止率は２５℃で約８０～９９％である。幾つかの実施形態において、膜の分画分子量（ＭＷＣＯ）は約１５０～約３００ダルトンの範囲にあり、ＭｇＳＯ４阻止率は２５℃で約９８～９９％である。
【0066】
本発明に有用なナノ濾過膜は、負電荷又は正電荷を有することができる。膜はイオン性膜とすることができる、即ち、これらはカチオン性又はアニオン性基を含むことができるが、例え中性膜であってさえも有用である。ナノ濾過膜は、疎水性膜及び親水性膜から選択することができる。
【0067】
ナノ濾過膜の典型的な形態は、スパイラル型膜を含む。膜の構成は、例えば、平板、チューブ、及び中空繊維から選択することもできる。振動膜及び回転膜等の「高剪断」膜も使用することができる。膜は、チューブ型、スパイラル型、又は平板型とすることができる。
【0068】
本発明に有用なナノ濾過設備は、出発物質（供給液）を保持液部分及び透過液部分に分割する少なくとも１種のナノ濾過膜エレメントを含む。ナノ濾過設備は、通常、ポンプ及び弁並びに圧力計及び制御装置等の圧力及び流れを制御するための手段も含む。この設備はまた、１つの圧力容器内に異なる組合せで並列又は直列に配置された幾つかのナノ濾過膜エレメントを含むこともできる。
【0069】
ナノ濾過におけるＸ－ＭＶＡ（メバロネートの塩、例えば、Ｎａ－メバロネート等）の収率は、通常、出発物質中に存在していたＮａ－メバロネートの７０％を超え、好ましくは８０％を超え、最も好ましくは９０％を超える。
【0070】
透過液中のＮａ－メバロネート含有量は、ＤＳで５０％を超え、好ましくはＤＳで６０％を超え、より好ましくはＤＳで７０％を超え、最も好ましくはＤＳで８０％を超える。
【0071】
ナノ濾過の透過液は、蒸発又は当該技術分野において知られている、メバロネートの塩を更に濃縮するための任意の手段、例えば、これらに限定されるものではないが、減圧下における蒸発（真空蒸発）によって更に濃縮することにより、濃縮された水性シロップ（ａｑｕｅｏｕｓ ｓｙｒｕｐ）を生成することができる。濃縮された水性シロップのＮａ－メバロネート含有量は、ＤＳで６０％超、好ましくはＤＳで６５％～９５％の間とすることができる。
【0072】
ナノ濾過の透過液は、イオン交換、蒸発、電気透析、及び濾過から選択される更なる精製ステップに付すことができる。これらの更なる精製ステップは、前記膜濾過の前又は後に実施することができる。
【0073】
更に、回収されたメバロネートの塩画分は、１又は複数の更なるステップ、例えば、蒸発、濃縮、濾過、イオン交換、活性炭処理、無菌濾過、結晶化、中間結晶化（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）、ナノ濾過、及びクロマトグラフィーによる分画等に付すことができる。回収されたメバロネートの塩画分は、画分の純度に応じた異なる方法で処理することができる。
【0074】
幾つかの実施形態において、ナノ濾過から回収された透過液及び／又は濃縮された水性シロップは、続いて結晶化ステップに付される。
【0075】
一態様において、本明細書に記載するように、本方法は、水溶液から結晶形態のメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を生成するための方法であり、この方法は、前記メバロン酸の塩を含む水溶液を精製ステップに付すことであって、前記精製ステップにより、純度が少なくとも６０％であるＸ－ＭＶＡを含む精製された溶液を生成する、ことと、水を溶媒とする結晶化により、前記精製された溶液から前記メバロン酸の塩を結晶化させることと、を含み、前記精製ステップは、前記メバロン酸の塩を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することを含み、前記透過液は、純度が少なくとも６０％であるＸ－ＭＶＡを含む。
【0076】
別法として、一態様において、本方法は、水溶液からメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）の結晶形態を生成するための方法であって、前記メバロン酸の塩を含む水溶液を精製ステップに付すことであって、前記精製ステップは、純度が少なくとも６０％のＸ－ＭＶＡを含む精製された溶液を生成する、ことと、水を溶媒とする結晶化により、前記精製された溶液から前記メバロン酸の塩を結晶化させることと、を含み、前記精製ステップは、前記メバロン酸の塩を含む水溶液を、精密濾過、電気透析、イオン交換、濾過、活性炭処理、蒸発、濃縮、無菌濾過、クロマトグラフィーによる分画、又はこれらの任意の組合せに付すことを含む。
【0077】
陽イオン交換
一態様において、本明細書は、水に溶解したメバロノラクトンを水溶液から生成するための方法であって：この方法は：ａ）メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成し、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることによって、前記メバロン酸の塩の結晶を生成することにより、水溶液から結晶形態の前記メバロン酸の塩を生成することと；ｂ）（ａ）の結晶を水に溶解することによって水に可溶化したメバロン酸の塩を生成し、前記液体を陽イオン交換に付すことにより、前記水に溶解したメバロン酸の塩を水に溶解したメバロノラクトンに変換することと、を含む、方法を提供する（図１Ｂ及び実施例９～１２）。
一態様において、本明細書は、水に溶解したメバロノラクトンを水溶液から生成するための方法であって：この方法は：ａ）メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成し、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることによって、前記メバロン酸の塩の結晶を生成することにより、水溶液から結晶形態の前記メバロン酸の塩を生成することと；ｂ）（ａ）の結晶を水に溶解することによって水に可溶化したメバロン酸の塩を生成し、前記液体を陽イオン交換に付すことにより、前記水に溶解したメバロン酸の塩を水に溶解したメバロノラクトンに変換することと、を含む、方法を提供する（図１Ｂ及び実施例９～１２）。
【0078】
他の態様において、本明細書は、メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液からメバロノラクトンを生成するための方法であって、前記メバロネートの塩を含む水溶液を陽イオン交換に付し、それによりメバロネートの塩を含む前記水溶液をメバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液に変換することを含む、方法を提供する（図２）。
【0079】
強酸性陽イオン交換樹脂（ＳＡＣ樹脂）
ＳＡＣ樹脂は、スチレン又はアクリル系骨格を有することができる。本発明の一実施形態において、樹脂は、スルホン化ポリスチレン－ｃｏ－ジビニルベンゼン樹脂である。アルキル置換スチレン等のモノマー又はその混合物を基体とするものなどの他のアルケニル芳香族ポリマー樹脂も適用することができる。この樹脂は、ジビニルトルエン、ジビニルキシレン、ジビニルナフタレン、ジビニルベンゼン等の他の好適な芳香族架橋モノマーで、又はイソプレン、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、Ｎ，Ｎ’－メチレンビスアクリルアミド、若しくはこれらの混合物等の脂肪族架橋モノマーで架橋されていてもよい。樹脂の架橋度は、通常、ジビニルベンゼン（ＤＶＢ）等の架橋剤の約１～約２０％、好ましくは約３～約８％である。
ＳＡＣ樹脂は、スチレン又はアクリル系骨格を有することができる。本発明の一実施形態において、樹脂は、スルホン化ポリスチレン－ｃｏ－ジビニルベンゼン樹脂である。アルキル置換スチレン等のモノマー又はその混合物を基体とするものなどの他のアルケニル芳香族ポリマー樹脂も適用することができる。この樹脂は、ジビニルトルエン、ジビニルキシレン、ジビニルナフタレン、ジビニルベンゼン等の他の好適な芳香族架橋モノマーで、又はイソプレン、エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、Ｎ，Ｎ’－メチレンビスアクリルアミド、若しくはこれらの混合物等の脂肪族架橋モノマーで架橋されていてもよい。樹脂の架橋度は、通常、ジビニルベンゼン（ＤＶＢ）等の架橋剤の約１～約２０％、好ましくは約３～約８％である。
【0080】
本発明のイオン交換に使用するためのＳＡＣ樹脂は、多価、２価、又は１価の陽イオン形とすることができる。１価の陽イオン形は、例えば、Ｈ＋、Ｎａ＋、及びＫ＋から選択することができる。２価の陽イオン形の例は、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、Ｓｒ２＋、及びＢａ２＋である。３価の陽イオン形の例は、Ａｌ３＋である。本発明の好ましい実施形態において、本発明のイオン交換に使用するためのＳＡＣ樹脂は１価のＨ＋型である。樹脂の典型的な平均粒子径（ｍｅａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ）は、１０～２０００μｍ、好ましくは３００～１２００μｍである。
【0081】
一実施形態において、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を生成するためのメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）のイオン交換には１価のＳＡＣ樹脂が使用され、１価の陽イオンはＨ＋型である。
【0082】
弱酸性陽イオン交換樹脂（ＳＡＣ樹脂）
ＷＡＣ樹脂は、カルボキシル官能基を有するアクリル系陽イオン交換樹脂である。アクリル系ＷＡＣ樹脂は、通常、アクリル酸エステル、アクリロニトリル、アクリル酸、及びこれらの混合物からなる群から誘導される。アクリル酸エステルは、メタクリル酸メチル、アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、及びアクリル酸ブチルからなる群から選択される。ＷＡＣ樹脂のマトリックスは、アクリル系のもの以外であってもよい。ＷＡＣ樹脂の活性官能基は、カルボキシル基以外であってもよい。これらは例えば、他の弱酸から選択することもできる。ＷＡＣ樹脂は、Ｈ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋、又はＭｇ２＋形とすることができ、好ましくは、Ｈ＋又はＮａ＋形である。他のイオン形も使用することができる。
ＷＡＣ樹脂は、カルボキシル官能基を有するアクリル系陽イオン交換樹脂である。アクリル系ＷＡＣ樹脂は、通常、アクリル酸エステル、アクリロニトリル、アクリル酸、及びこれらの混合物からなる群から誘導される。アクリル酸エステルは、メタクリル酸メチル、アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、及びアクリル酸ブチルからなる群から選択される。ＷＡＣ樹脂のマトリックスは、アクリル系のもの以外であってもよい。ＷＡＣ樹脂の活性官能基は、カルボキシル基以外であってもよい。これらは例えば、他の弱酸から選択することもできる。ＷＡＣ樹脂は、Ｈ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋、又はＭｇ２＋形とすることができ、好ましくは、Ｈ＋又はＮａ＋形である。他のイオン形も使用することができる。
【0083】
ＷＡＣ樹脂は、芳香族系架橋剤、好ましくはジビニルベンゼン（ＤＶＢ）で架橋されている。これは、イソプレン、１，７－オクタジエン、トリビニルシクロヘキサン、ジエチレングリコールジビニルエーテル等の脂肪族架橋剤で架橋することもできる。架橋度は、１～２０％、好ましくは、３～約８％ＤＶＢである。
【0084】
平均粒子径は、１０～２０００μｍ、好ましくは３００～１２００μｍである。
【0085】
イオン交換は、好ましくは、陽イオン交換樹脂、特に強酸性陽イオン樹脂、特にＨ＋イオン形を用いて実施される。
【0086】
一実施形態において、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を生成するためのメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）のイオン交換には、１価のＷＡＣ樹脂が使用され、１価の陽イオンはＨ＋型である。
【0087】
水を溶媒とする結晶化
本明細書に記載するように、一態様において、本発明の目的は、結晶形態のメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ又はＸ－メバロネートとも称する）を水溶液から生成するための方法であって、前記メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液を、これらに限定されるものではないが、ナノ濾過等の精製ステップに付すことにより、前記Ｘ－ＭＶＡを結晶化させることが可能な高純度の溶液（透過液）を生成することと、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む方法にある（図１Ａ及び実施例５～８）。
本明細書に記載するように、一態様において、本発明の目的は、結晶形態のメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ又はＸ－メバロネートとも称する）を水溶液から生成するための方法であって、前記メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液を、これらに限定されるものではないが、ナノ濾過等の精製ステップに付すことにより、前記Ｘ－ＭＶＡを結晶化させることが可能な高純度の溶液（透過液）を生成することと、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む方法にある（図１Ａ及び実施例５～８）。
【0088】
本発明の他の態様において、本明細書は、メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液からメバロノラクトンを生成するための方法であって、前記メバロネートの塩を含む水溶液を陽イオン交換に付し、それによりメバロネートの塩を含む前記水溶液をメバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液に変換することと、次いで、任意選択的に、前記ＭＶＬ溶液を濃縮し、前記溶液を結晶化させることにより、ＭＶＬ＊一水和物の結晶を得ることと、を含む、方法を提供する（図２及び実施例１３～２０）。
【0089】
「水を溶媒とする結晶化」という用語は、水等の水性溶媒を使用し、有機溶媒を一切使用することなく実施される結晶化を指す。
【0090】
Ｘ－ＭＶＡの水を溶媒とする結晶化
Ｘ－ＭＶＡの結晶化は、１０～８０℃の範囲の温度下における冷却結晶化（ｃｏｏｌｉｎｇ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）又は析出結晶化（ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）等の従来の方法で実施することができる。Ｘ－ＭＶＡの結晶化はまた、有利には、煮沸結晶化（ｂｏｉｌｉｎｇ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）方法又は煮沸及び冷却による結晶化（ｂｏｉｌｉｎｇ ａｎｄ ｃｏｏｌｉｎｇ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）方法により実施することができる。
Ｘ－ＭＶＡの結晶化は、１０～８０℃の範囲の温度下における冷却結晶化（ｃｏｏｌｉｎｇ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）又は析出結晶化（ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）等の従来の方法で実施することができる。Ｘ－ＭＶＡの結晶化はまた、有利には、煮沸結晶化（ｂｏｉｌｉｎｇ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）方法又は煮沸及び冷却による結晶化（ｂｏｉｌｉｎｇ ａｎｄ ｃｏｏｌｉｎｇ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）方法により実施することができる。
【0091】
本開示の一実施形態において、Ｘ－ＭＶＡの結晶化は、ＤＳに基づくＸ－ＭＶＡ純度が６０％を超え、好ましくは７０％を超え、より好ましくは８０％を超え、最も好ましくは９０％を超え、特に９５％を超える溶液（供給液）から実施される。この結晶化により、通常、ＤＳに基づく純度が６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％を超え、好ましくは９５％を超え、最も好ましくは９９％を超える、結晶性Ｘ－ＭＶＡ生成物が得られる。
【0092】
Ｘ－ＭＶＡを含む溶液はまず、溶液のＸ－ＭＶＡ含有量に応じて適切な乾燥物含有量（例えば、ＤＳが約６０～９０％）になるように蒸発させることができる。シロップのＤＳ濃度は、結晶化の可能性を有するのに十分に高い（過飽和）ことが必要である。最小ＤＳ含有量は、シロップの温度及び純度に依存する。シロップの純度が高くなるほど、シロップのＤＳを低くすることが必要である。ＤＳが高過ぎると、結晶化が遅延するか又は結晶の懸濁液が高濃度になり過ぎて結晶を効率的に分離できなくなる。本発明の一実施形態において、Ｎａ－ＭＶＡを含むシロップの純度は６５～９９％である。
【0093】
過飽和溶液には、Ｘ－ＭＶＡの種結晶を添加することができる。種晶を使用する場合、種晶は、乾燥形態の結晶であるか又はこれらを溶媒、好ましくは水中に懸濁させ、結晶の大きさは、好ましくは、例えば、粉末化（ｐｕｌｖｅｒｉｚｉｎｇ）又は粉砕（ｍｉｌｌｉｎｇ）により小さくする。Ｘ－ＭＶＡを含む溶液の蒸発温度は３０℃～８０℃の範囲とすることができる。種晶添加した後、結晶化原料（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｍａｓｓ）を、結晶化収率及び粘度が結晶の分離に最適なものとなるまで、冷却しながら同時に混合した。冷却時間は、好ましくは１０～６０時間である。冷却時の温度降下は、好ましくは５～４０℃である。種晶添加したＮａ－ＭＶＡを含むシロップは、約２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃、４０℃、４１℃、４２℃、４３℃、４４℃、４５℃、４６℃、４７℃、４８℃、４９℃、５０℃、５１℃、５２℃、５３℃、５４℃、５５℃、５６℃、５７℃、５８℃、５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃から約７５℃又はそれを超える温度まで冷却することができる。冷却は、約２ｈｒ、３ｈｒ、４ｈｒ、５ｈｒ、６ｈｒ、７ｈｒ、８ｈｒ、９ｈｒ、１０ｈｒ、１１ｈｒ、１２ｈｒ、１３ｈｒ、１４ｈｒ、１５ｈｒ、１６ｈｒ、１７ｈｒ、１８ｈｒ、又はそれを超える時間で起こり得る。冷却は連続的に撹拌又は混合しながら行うことができる。混合は結晶化の制御に有利となり得る。混合することにより、結晶の沈降が防止され、結晶成長が維持され、自然発生による結晶形成が低減される。混合は、有利な熱及び物質移動も促進する。次いで、結晶化原料を、最終温度で、ある期間、好ましくは０．５～２４時間、最大結晶収率に到達するように混合することができる。結晶は母液から、例えば、濾過又は遠心分離によって分離される。
【0094】
本発明の一実施形態において、Ｘ－ＭＶＡ含有量がＤＳで６５％を超える溶液から、溶解及び再結晶化ステップを経ることなく、１回の結晶化ステップ（＝一段階結晶化）で、Ｘ－ＭＶＡ結晶含有量がＤＳで９７％を超え、好ましくはＤＳで９８％を超え、より好ましくはＤＳで９９％を超える高純度のＸ－ＭＶＡ結晶が得られる。一段階結晶化は、煮沸及び冷却ステップを含むことができるが、再結晶ステップを含まない。
【0095】
本発明の他の実施形態において、Ｘ－ＭＶＡの結晶化は、更なるステップとして洗浄を含む。洗浄は、通常、母液からの結晶の分離と関連させて行われる。追加の洗浄は、水性洗浄溶媒を結晶ケークと混合し、その後、結晶を分離することにより行うことができる。
洗浄溶媒は水とすることができる。本発明のこの実施形態により、通常、純度が９８％を超えるＸ－ＭＶＡが得られる。
洗浄溶媒は水とすることができる。本発明のこの実施形態により、通常、純度が９８％を超えるＸ－ＭＶＡが得られる。
【0096】
種結晶は様々なプロセスにより生成することができる。幾つかの実施形態においては、乾燥した種晶を粉砕することによって粒子径をより小さくする。種結晶の所望の量は、例えば、種結晶の大きさに依存し得る。幾つかの実施形態において、結晶化は、過飽和溶液に種結晶を添加することなく開始する。この種の幾つかの実施形態において、例えば、種晶添加は、種晶の自然発生を用いてなされる。
【0097】
幾つかの実施形態において、結晶化の開始（例えば、種結晶の添加）は、シロップの乾燥固体含有量が少なくとも約６０％（重量による）になった時点で実施される。幾つかの実施形態において、結晶化の開始（例えば、種結晶の添加）は、シロップの乾燥固体含有量が少なくとも約７０％（重量による）になった時点で実施される。幾つかの実施形態において、結晶化の開始（例えば、種結晶の添加）は、シロップの乾燥固体含有量が少なくとも約８０％（重量による）になった時点で実施される。幾つかの実施形態において、結晶化の開始（例えば、種結晶の添加）はシロップの乾燥固体含有量が約６０～約９０％（重量による）になった時点で実施される。幾つかの実施形態において、結晶化の開始（例えば、種結晶の添加）はシロップの乾燥固体含有量が約７０～約９０％（重量による）になった時点で実施される。幾つかの実施形態において、結晶化の開始（例えば、種結晶の添加）は、シロップの乾燥固体含有量が約８０～約９０％（重量による）になった時点で実施される。幾つかの実施形態において、結晶化の開始（例えば、種結晶の添加）は、シロップの乾燥固体含有量が約８０～約８８％（重量による）になった時点で実施される。
【0098】
蒸発は、結晶成長能力及び粘度が許容すれば、種晶添加後に継続することができる。蒸発後、結晶化原料は、結晶含有量及び粘度が結晶の分離に最適なものとなるまで、冷却と同時に混合される。結晶化原料は、通常、１０～７５℃の温度に冷却される。次いで結晶化原料は、最終温度で、最大結晶化収率に達するまで、ある期間、好ましくは０．５時間～２４時間混合することができ、その後、結晶は、例えば、濾過又は遠心分離により分離される。本発明のプロセスは、通常、更なるステップとして結晶の洗浄を含む。洗浄は、通常、母液からの結晶の分離と関連させて行われる。追加の洗浄は、洗浄溶媒を結晶ケークと混合し、その後結晶を分離することにより行うことができる。洗浄溶媒は水とすることができる。
【0099】
幾つかの実施形態において、再結晶は、Ｘ－ＭＶＡ純度を高めるために１回又は複数回実施される。再結晶は、例えば、Ｘ－ＭＶＡ結晶を水（通常、脱イオン水）に溶解し、得られた溶液をＸ－ＭＶＡに対し過飽和状態にし（例えば、蒸発による）、種晶添加し、上に記載した冷却による結晶化方法を用いて結晶化させることにより実施することができる。
【0100】
幾つかの実施形態において、収率は、初回の結晶化で生成した母液の結晶化を実施することにより高められる。この種の結晶化は、例えば、母液をＸ－ＭＶＡに対し過飽和状態にし（例えば、蒸発による）、種晶添加し、上に記載した冷却による結晶化方法を用いて結晶化させることにより実施することができる。
【0101】
本明細書に記載する結晶化は、溶液中に有機溶媒を存在させることを必要としない。有機溶媒を含まない結晶性Ｘ－ＭＶＡが得られる。結晶化ステップにおいて有機溶媒を添加することなく生成した結晶性Ｘ－ＭＶＡは、基本的に有機溶媒を含まない。
【0102】
結晶化及び結晶分離性能を改良するために水溶液に有機溶媒を添加することができるが、そのような有機溶媒の添加を行うと、これらに限定されるものではないが、得られる結晶又は精製物が少量のこうした有機溶媒を含むなどの不利益が生じ、これはパーソナルケア組成物等の市販の組成物には望ましくない。
【0103】
ＭＶＬ＊一水和物の水を溶媒とする結晶化
本明細書に記載するように、驚くべきことに、且つ予期せぬことに、ＭＶＬの高純度シロップを本明細書に記載する方法により調製し、２３℃未満の温度で数週間冷却すると、メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶が自然発生することが見出された。このメバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶は、本明細書に記載するように、ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの結晶化を更に促進するための種晶材料として使用することができる。ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの結晶化は、２３℃、２２℃未満、２１℃未満、２０℃未満、１９℃未満、１８℃未満、１７℃未満、１６℃未満、１５℃未満、１４℃未満、１３℃未満、１２℃未満、１１℃未満、１０℃未満、９℃未満、８℃未満、７℃未満、６℃未満、５℃未満、４℃未満、３℃未満、２℃未満、１℃未満、及び０℃までの温度等の、融点未満の温度で達成される。ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの結晶化は、０℃未満で、溶液の凝固点の低さまで実施可能である。本発明の一実施形態において、ＭＶＬ＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）の結晶化は、ＭＶＬ純度がＤＳで５５％超、好ましくは７０％超、より好ましくは８０％超、最も好ましくは９０％超、特に９５％超の水溶液から行われる。この結晶化により、通常、純度がＤＳで６５％超、６６％超、６７％超、６８％超、６９％超、７０％超、７１％超、７２％超、７３％超、７４％超、７５％超、７６％超、７７％超、７８％超、７９％超、８０％超、８１％超、８２％超、８３％超、８４％超、８５％超、８６％超、８７％超、８９％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、好ましくは、９５％超、最も好ましくは９９％超の結晶性ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ生成物が得られる。
本明細書に記載するように、驚くべきことに、且つ予期せぬことに、ＭＶＬの高純度シロップを本明細書に記載する方法により調製し、２３℃未満の温度で数週間冷却すると、メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶が自然発生することが見出された。このメバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶は、本明細書に記載するように、ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの結晶化を更に促進するための種晶材料として使用することができる。ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの結晶化は、２３℃、２２℃未満、２１℃未満、２０℃未満、１９℃未満、１８℃未満、１７℃未満、１６℃未満、１５℃未満、１４℃未満、１３℃未満、１２℃未満、１１℃未満、１０℃未満、９℃未満、８℃未満、７℃未満、６℃未満、５℃未満、４℃未満、３℃未満、２℃未満、１℃未満、及び０℃までの温度等の、融点未満の温度で達成される。ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの結晶化は、０℃未満で、溶液の凝固点の低さまで実施可能である。本発明の一実施形態において、ＭＶＬ＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）の結晶化は、ＭＶＬ純度がＤＳで５５％超、好ましくは７０％超、より好ましくは８０％超、最も好ましくは９０％超、特に９５％超の水溶液から行われる。この結晶化により、通常、純度がＤＳで６５％超、６６％超、６７％超、６８％超、６９％超、７０％超、７１％超、７２％超、７３％超、７４％超、７５％超、７６％超、７７％超、７８％超、７９％超、８０％超、８１％超、８２％超、８３％超、８４％超、８５％超、８６％超、８７％超、８９％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、好ましくは、９５％超、最も好ましくは９９％超の結晶性ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ生成物が得られる。
【0104】
一態様において、実用上の理由から、ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの冷却結晶化が、一定温度での結晶化よりも好ましい。一定温度での結晶化は、種晶添加時に非常に高い過飽和度が必要であり、それにより、冷却を用いるよりもプロセスが制御しにくくなる。ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏは結晶化中に多くの熱を放出するため、所望の結晶化収率に到達させるために系から熱を取り除かなければならない。種晶添加時の過飽和度が非常に高いなどの幾つかの例において、結晶化が実際に速くなり、結晶化懸濁液の温度が著しく上昇する可能性がある。このことは、効果的な冷却手段を使用するか又は種晶添加時の過飽和度をより低くし、及び制御された冷却を利用することによって克服することができる。
【0105】
ＭＶＬを含む溶液はまず、溶液のＭＶＬ含有量に応じて適切な乾燥物含有量（例えば、ＤＳ約６５～９０％）になるように蒸発させることができる。シロップのＤＳ濃度は、結晶化の可能性を有するのに十分に高い（過飽和）ことが必要である。最小ＤＳ含有量は、シロップの温度及び純度に依存する。シロップの純度が高くなるほど、シロップのＤＳを低くすることが必要である。ＤＳが高過ぎると、結晶化が遅延するか又は結晶の懸濁液が高濃度になり過ぎて結晶を効率的に分離できなくなる。過飽和溶液には、ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの種結晶を添加することができる。種晶を使用する場合、種晶は、乾燥形態の結晶であるか又はこれらを溶媒、好ましくは水中に懸濁させ、好ましくは、結晶の大きさを、例えば、粉末化又は粉砕により小さくする。種晶添加後、結晶化原料を、結晶化収率及び粘度が結晶の分離に最適なものとなるまで、冷却と同時に混合を行う。
【0106】
ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏを結晶化するための条件を実施例１３～２０に更に記載する。
【0107】
一態様において、メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶は、結晶が液体に変化するように、水を追加することなく、ある温度（これらに限定されるものではないが、室温である約２３℃～３０℃等）まで加温することができる。この種の液体は、ＭＶＬを約８７％及び水を１３％含む。
【0108】
メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶は、水に溶解させると、水のような外観及び粘度を呈し、殆ど又は全く着色していない高度に精製された（純度＞９０％）ＭＶＬを生成することができる。この高度に精製されたＭＶＬ溶液は、水のような外観を保ったまま、蒸発により更に濃縮することができる。
【0109】
ＭＶＡ、Ｘ－ＭＶＡ、ＭＶＬ、及び／又はＭＶＬ＊Ｈ２Ｏを含む組成物
結晶性Ｘ－ＭＶＡ又は結晶性Ｘ－ＭＶＡを含む組成物は、例えば、栄養補助食品、乳幼児及び成人用栄養、医薬品、並びに化粧品の成分として使用することができる。
結晶性Ｘ－ＭＶＡ又は結晶性Ｘ－ＭＶＡを含む組成物は、例えば、栄養補助食品、乳幼児及び成人用栄養、医薬品、並びに化粧品の成分として使用することができる。
【0110】
本明細書のプロセスにより精製されたＭＶＡ、Ｘ－ＭＶＡ、ＭＶＬ、及び／若しくはＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ又は本明細書に記載するＭＶＡ、Ｘ－ＭＶＡ、ＭＶＬ、及び／若しくはＭＶＬ＊Ｈ２Ｏを含む組成物は、例えば、栄養補助食品、パーソナルケア組成物（これらに限定されるものではないが、スキンケア、口腔ケア、ヘアケア組成物等）、医薬品、及び化粧品の成分として使用することができる。
【0111】
パーソナルケア産業においてＭＶＡ又はＭＶＬを使用することを目的とする場合、それが無色透明であり、有色の混入物が殆ど又は全く存在しない精製された生成物は高価値である。本明細書に記載するように、本明細書に記載する方法により得られた高度に精製されたＭＶＬ生成物は、殆ど又は全く色が残っておらず、無色透明である。
【0112】
本明細書に開示する組成物及び方法の非限定的な例を次に示す：
１．水溶液から結晶形態の有機酸又はその塩を生成するための方法であって、前記有機酸又はその塩を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することと、前記透過液から有機酸又はその塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む、方法。
１．水溶液から結晶形態の有機酸又はその塩を生成するための方法であって、前記有機酸又はその塩を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することと、前記透過液から有機酸又はその塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む、方法。
【0113】
２．水を溶媒とする結晶化は、透過液を蒸発させることにより、ＤＳを少なくとも６０％含むシロップを得ることと、次いで、前記シロップを冷却することにより、前記有機酸又はその塩の結晶を生成することと、を含む、実施形態１の方法。
【0114】
３．水溶液は、発酵ブロスである、実施形態１の方法。
【0115】
４．発酵ブロスは、プレコート濾過、精密濾過、又は限外濾過の少なくとも１種により、前記発酵ブロスからバイオマス及び任意の固体を除去することにより清澄化される、実施形態３の方法。
【0116】
５．発酵ブロスは、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）の発酵により得られるブロスである、実施形態３の方法。
【0117】
６．前記シロップから濾過及び遠心分離により前記有機酸又はその塩の前記結晶を除去することを更に含む、実施形態２の方法。
【0118】
７．有機酸はカルボン酸である、実施形態１の方法。
【0119】
８．カルボン酸は、ヒドロキシカルボン酸及びジカルボン酸からなる群から選択される、実施形態７の方法。
【0120】
９．ヒドロキシカルボン酸は、リンゴ酸、グリコール酸、イソクエン酸、マンデル酸、乳酸、タルトロン酸、酒石酸、クエン酸、β－ヒドロキシ酪酸、メバロン酸、及びサリチル酸からなる群から選択される、実施形態８の方法。
【0121】
１０．水溶液から結晶形態のメバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を生成するための方法であって、前記メバロン酸の塩を含む水溶液を精製ステップに付すことであって、前記精製ステップは、純度が少なくとも６０％、好ましくは６０～９９％の間にあるＸ－ＭＶＡを含む精製された溶液を生成する、ことと、前記精製された溶液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む、方法。
【0122】
１１．前記精製ステップは、前記メバロン酸の塩を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することを含み、前記透過液は、純度が少なくとも６０％であるＸ－ＭＶＡを含む、実施形態１０に記載の方法。
【0123】
１１ｂ．水溶液から結晶形態のメバロン酸の塩を生成するための方法であって、前記メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成することと、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることと、を含む、方法。
【0124】
１２．水を溶媒とする結晶化は、精製された溶液又は透過液を蒸発させることにより、ＤＳを少なくとも６０％含むシロップを得ることと、次いで、前記シロップを冷却することによりＸ－ＭＶＡ結晶を生成することと、を含む、実施形態１０、１１、及び１１ｂの方法。
【0125】
１２ｂ．透過液のＸ－ＭＶＡ純度は、少なくとも６０％であり、任意選択的に、６５～９５％の間にある、実施形態１１ｂの方法。
【0126】
１２ｃ．シロップのＸ－ＭＶＡ純度は、少なくとも６０％であり、任意選択的に、６５～９５％の間にある、実施形態１２の方法。
【0127】
１３．水溶液は、発酵ブロスである、実施形態１０の方法。
【0128】
１４．発酵ブロスは、プレコート濾過、精密濾過、又は限外濾過の少なくとも１種により、前記発酵ブロスからバイオマス及び任意の固体を除去することにより清澄化される、実施形態１３の方法。
【0129】
１５．発酵ブロスは、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）の発酵により得られるブロスである、実施形態１３の方法。
【0130】
１６．前記シロップから濾過及び遠心分離により前記結晶を除去することを更に含む、実施形態１２の方法。
【0131】
１６ｂ．ナノ濾過は、約１５０Ｄａ～約７００Ｄａで分離分画（ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｃｕｔ－ｏｆｆ）するナノ濾過膜を利用する、実施形態１１の方法。
【0132】
１７．ナノ濾過は、２価の塩を少なくとも６０～９８重量％保持（ｒｅｔａｉｎ）すると同時に、１価の塩を３０重量％未満阻止（ｒｅｊｅｃｔ）することができるナノ濾過膜を利用する、実施形態１０の方法。
【0133】
１８．水溶液から水に可溶化したメバロノラクトンを生成するための方法であって：
ａ）メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成し、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることによって、前記メバロン酸の塩の結晶を生成することにより、水溶液から結晶形態の前記メバロン酸の塩を生成することと；
ｂ）（ａ）の結晶を水に溶解することによって水に可溶化したメバロン酸の塩を生成し、前記液体を陽イオン交換に付すことにより、前記水に可溶化したメバロン酸の塩を水に可溶化したメバロノラクトンに変換することと；を含む、方法。
ａ）メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液をナノ濾過に付すことにより透過液を生成し、前記透過液から前記メバロン酸の塩を、水を溶媒とする結晶化により結晶化させることによって、前記メバロン酸の塩の結晶を生成することにより、水溶液から結晶形態の前記メバロン酸の塩を生成することと；
ｂ）（ａ）の結晶を水に溶解することによって水に可溶化したメバロン酸の塩を生成し、前記液体を陽イオン交換に付すことにより、前記水に可溶化したメバロン酸の塩を水に可溶化したメバロノラクトンに変換することと；を含む、方法。
【0134】
１８ｂ．透過液のＸ－ＭＶＡ純度は、少なくとも６０％であり、任意選択的に、６５～９５％の間にある、実施形態１８の方法。
【0135】
１８ｃ．透過液は、前記メバロン酸の塩の結晶を生成するためにシロップから水を溶媒とする結晶化により前記メバロン酸の塩を結晶化する前に、前記シロップを生成するために濃縮される、実施形態１８の方法。
【0136】
１８ｄ．シロップのＸ－ＭＶＡ純度は、少なくとも６０％であり、任意選択的に、６５～９５％の間にある、実施形態１８ｃの方法。
【0137】
１８ｅ．水に可溶化したメバロノラクトンの純度は、少なくとも６０％であり、任意選択的に、６５～９５％の間にある、実施形態１８の方法。
【0138】
１８ｆ．ｂ）の水に可溶化したメバロノラクトンは、少なくとも９０％ＤＳである高度に濃縮されたＭＶＬ液体を生成するために更に濃縮される、実施形態１８の方法。
【0139】
１９．前記メバロン酸の塩は、Ｎａ－メバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）、Ｋ－メバロネート（Ｋ－ＭＶＡ）、アンモニウムメバロネート（ＮＨ４－ＭＶＡ）、リチウムメバロネート（Ｌｉ－ＭＶＡ）、他の任意の１価のメバロン酸の塩、又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される、実施形態１０又は実施形態１８の方法。
【0140】
２０．前記水に可溶化したメバロノラクトンの純度は、少なくとも９０％（この百分率は、ＨＰＬＣ分析を用いたピークの総面積に対する、ＭＶＬに対応するピークの面積である）である、実施形態１８、１８ｂ、１８ｃ、１８ｄ、１８ｅ、１８ｆ、又は１９の方法。
【0141】
２１．メバロン酸の塩（Ｘ－ＭＶＡ）を含む水溶液からメバロノラクトンを生成するための方法であって、前記メバロネートの塩を含む水溶液を陽イオン交換に付し、それによりメバロネートの塩を含む前記水溶液をメバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液に変換することを含む、方法。
【0142】
２２．前記メバロン酸の塩は、Ｎａ－メバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）、Ｋ－メバロネート（Ｋ－ＭＶＡ）、アンモニウムメバロネート（ＮＨ４－ＭＶＡ）、リチウムメバロネート（Ｌｉ－ＭＶＡ）、他の任意の１価のメバロン酸の塩、又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される、実施形態２１の方法。
【0143】
２３．メバロノラクトンを含む前記水溶液を濃縮することにより、ＤＳを少なくとも６５％～９０％含む液体にすることを更に含む、実施形態２１の方法。
【0144】
２４．メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶を得るために前記液体を０～２５℃に冷却することを更に含む、実施形態２３の方法。
【0145】
２５．前記ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ結晶を水に溶解／可溶化することにより、高度に精製されたメバロノラクトンの希薄な液体を得ることを更に含み、希薄な液体のメバロノラクトン純度は少なくとも９０％（この百分率は、ＨＰＬＣ分析を用いたピークの総面積に対する、ＭＶＬに対応するピークの面積である）である、実施形態２４の方法。
【0146】
２５ｂ．前記高度に精製されたメバロノラクトンを含む希薄な液体は、少なくとも９０％ＤＳである高度に濃縮されたＭＶＬ液体を生成するために更に濃縮される、実施形態２５の方法。
【0147】
２６．水溶液は、発酵ブロスである、実施形態２１の方法。
【0148】
２７．発酵ブロスは、プレコート濾過、精密濾過、又は限外濾過の少なくとも１種により、前記発酵ブロスからバイオマス及び任意の固体を除去することにより清澄化される、実施形態２６の方法。
【0149】
２８．発酵ブロスは、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の発酵により得られるブロスである、実施形態２６の方法。
【0150】
２９．実施形態２０～２６のいずれか一つにより生成する、ＭＶＬ又はその可溶化した形態を含む医薬用又は在宅医療用又は栄養又はパーソナルケア又は化粧用組成物。
【0151】
３０．実施形態１～１７のいずれか一つの方法により得られる結晶性Ｘ－ＭＶＡ。
【0152】
３１．実施形態２４の方法により得られる結晶性メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）。
【0153】
３２．分子式Ｃ６Ｈ１０Ｏ３
＊Ｈ２Ｏを有する結晶性メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）。
【0154】
３３．融点は２５℃未満である、結晶性メバロノラクトン＊一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）。
【0155】
３４．メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶を含む組成物。
【0156】
３５．可溶化したメバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶を含む組成物。
【実施例0157】
以下に示す実施例においては、別段の指定がない限り、部及び百分率は重量により、度は摂氏である。これらの実施例は、本開示の実施形態を示すが、例示のみを目的として与えられていることを理解すべきである。上の検討及びこれらの実施例から、当業者は、本開示をその用法及び状況に適合させるために様々な変更及び修正を施すことができる。この種の修正もまた、添付の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【0158】
実施例１
高緻密性（ｔｉｇｈｔ）ナノ濾過膜を用いたナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）液のナノ濾過（ＮＦ）
本実施例においては、有機酸又はその塩を含む水溶液のナノ濾過、例えば、高緻密性ナノ濾過膜を使用するナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）液のナノ濾過について記載する。
高緻密性（ｔｉｇｈｔ）ナノ濾過膜を用いたナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）液のナノ濾過（ＮＦ）
本実施例においては、有機酸又はその塩を含む水溶液のナノ濾過、例えば、高緻密性ナノ濾過膜を使用するナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）液のナノ濾過について記載する。
【0159】
この処理設備は、プレート・フレーム式濾過ユニット（Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ Ｌａｂｓｔａｋ Ｍ２０）、供給及び透析濾過ポンプ、熱交換器、冷却装置、７０リットル容の供給液槽に加えて、入口及び出口圧力計並びに圧力制御弁を含むものとした。総膜面積は０．６５ｍ２とした。装着した膜は、Ｄｅｓａｌ－５ ＤＬ（Ｓｕｅｚ、分画分子量約１５０～３００ダルトン、２５℃におけるＭｇＳＯ４阻止率＞９８％）及びＸＮ４５（ＴｒｉＳｅｐ（商標登録）／Ｍｉｃｒｏｄｙｎ Ｎａｄｉｒ、分画分子量約３００～５００ダルトン、２５℃におけるＭｇＳＯ４阻止率９０～９６％）とした。ＭｇＳＯ４の阻止率は、濃度１～２ｇ／ｌ、７～８ｂａｒ、２５℃、ｐＨ６～８、１０～２５％回収率で規定したものである。
【0160】
エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ）を原材料とするナトリウムメバロネートの発酵に由来する限外濾過の透過液を供給液として使用した。その目的は、不純物（他の塩、着色物質、消泡剤、タンパク質）を保持しながら、ナトリウムメバロネートを通過させることにあった。
【0161】
供給液６３．４ｋｇを７０リットル容の供給液槽に供給した。供給液の乾燥物濃度はショ糖のＲＤＳに基づき６．８ｇ／１００ｇであり、電気伝導率は１７．７ｍＳ／ｃｍであり、ｐＨは７．８であった。透過液をＤＬ膜から回収し、ＸＮ４５膜からの透過液を供給液槽に再循環させた。供給液は表１に示す構成を有していた。ＨＰＬＣ及びＩＣ分析値を％／ショ糖ＲＤＳ基準で示す。
【0162】
【表1】
【0163】
供給液は５０～６８℃に維持し、水を透析濾過に使用した。濾過圧力を２０～３３Ｂａｒとし、濃縮液のＤＳ（乾燥物）濃度を制御して、流束が７ｋｇ／ｍ２／ｈ（観測される最小流束値（ｍｉｎｉｍｕｍ ｆｌｕｘ ｐｏｉｎｔ））を超えるように維持した。
【0164】
回分式濾過を行った後、３つの透過液画分及び最終濃縮液画分を回収した。透過液画分及び最終濃縮液画分に関するＨＰＬＣ及びＩＣ分析値（％／ショ糖ＲＤＳ基準）を含む結果を表２に示す。
【0165】
【表2】
【0166】
メバロネートの全収率は４９．９％と求められた。透過液のナトリウムメバロネート純度の平均値は７５．６％であった。
【0167】
供給液及び濃縮液のサンプルから求めたサルフェート除去効率は７８．１％であり、ホスフェート除去効率は７１．０％であった。ＤＬ膜に関し５点で測定したナトリウムメバロネート阻止率の平均値は７６．７％であった。ＤＬ及びＸＮ４５のメバロネート阻止率を、４１ｋｇの透過液を回収した後に、４番目の試料採取点で平行して測定したところ、阻止率はＤＬ及びＸＮ４５でそれぞれ７１．０％及び４１．８％であった。
【0168】
実施例２
低緻密性（ｏｐｅｎ）ナノ濾過（ＮＦ）膜を用いたナトリウムメバロネート液のナノ濾過 本実施例においては、有機酸又はその塩を含む水溶液のナノ濾過、例えば、低緻密性ナノ濾過膜を使用するナトリウムメバロネート液のナノ濾過について記載する。
低緻密性（ｏｐｅｎ）ナノ濾過（ＮＦ）膜を用いたナトリウムメバロネート液のナノ濾過 本実施例においては、有機酸又はその塩を含む水溶液のナノ濾過、例えば、低緻密性ナノ濾過膜を使用するナトリウムメバロネート液のナノ濾過について記載する。
【0169】
この処理設備は、プレート・フレーム式濾過ユニット（Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ Ｌａｂｓｔａｋ Ｍ２０）、供給及び透析濾過ポンプ、熱交換器、冷却装置、１００リットル容の供給液槽に加えて、入口及び出口圧力計並びに圧力制御弁を含むものとした。総膜面積は０．７２ｍ２とした。装着した膜は、ＸＮ４５（ＴｒｉＳｅｐ（商標登録）／Ｍｉｃｒｏｄｙｎ Ｎａｄｉｒ、分画分子量約３００～５００ダルトン、２５℃におけるＭｇＳＯ４阻止率９０～９６％）とした。ＭｇＳＯ４の阻止率は、濃度１～２ｇ／ｌ、７～８ｂａｒ、２５℃、ｐＨ６～８、１０～２５％回収率で規定したものである。
【0170】
エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ）を原材料とするナトリウムメバロネートの発酵に由来する限外濾過の透過液を供給液として使用した。その目的は、不純物（他の塩、着色物質、消泡剤、タンパク質）を保持しながら、ナトリウムメバロネートを通過させることにあった。
【0171】
供給液８０．０ｋｇを１００リットル容の供給液槽に供給した。供給液の濃度はショ糖のＲＤＳに基づき６．６ｇ／１００ｇであった。ｐＨをＮａＯＨで８．８に調整した。消泡剤Ｆｏａｍｂｌａｓｔ ８８２の濃度を測定したところ、１３３７ｍｇ／Ｌであった。
供給液は表３に示す構成を有していた。ＨＰＬＣ及びＩＣ分析値を％／ショ糖ＲＤＳ基準で示す。
供給液は表３に示す構成を有していた。ＨＰＬＣ及びＩＣ分析値を％／ショ糖ＲＤＳ基準で示す。
【0172】
【表3】
【0173】
供給液を４６～５１℃に維持した。濾過圧力を１０～２５Ｂａｒとし、流束が７ｋｇ／ｍ２／ｈ（観測される最小流束値）を超えるようにした。
【0174】
回分式濾過を行った後、２つの透過液画分及び最終濃縮液画分を回収した。透過液画分及び最終濃縮液画分に関するＨＰＬＣ及びＩＣ分析値（％／ショ糖ＲＤＳ基準）を含む結果を表４に示す。
【0175】
【表4】
【0176】
メバロネートの全収率は８２．１％と求められた。濃度２９．５％の透過液サンプルを蒸発させて測定した消泡剤濃度は８４．４ｍｇ／ｌであり、これは、生成物の透過液画分から消泡剤が９９％除去されたことを意味する。最終濃縮液の消泡剤濃度を測定したところ１３２３０．０ｍｇ／ｌであった。３点で測定したナトリウムメバロネート阻止率の平均値は２３．６％であった。
【0177】
実施例３
低緻密性ナノ濾過（ＮＦ）膜を用いたナトリウムメバロネート液のナノ濾過
本実施例においては、有機酸又はその塩を含む水溶液のナノ濾過、例えば、低緻密性ナノ濾過膜を使用するナトリウムメバロネート液のナノ濾過について記載する。
低緻密性ナノ濾過（ＮＦ）膜を用いたナトリウムメバロネート液のナノ濾過
本実施例においては、有機酸又はその塩を含む水溶液のナノ濾過、例えば、低緻密性ナノ濾過膜を使用するナトリウムメバロネート液のナノ濾過について記載する。
【0178】
この処理設備は、プレート・フレーム式濾過ユニット（Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ Ｌａｂｓｔａｋ Ｍ２０）、供給及び透析濾過ポンプ、熱交換器、冷却装置、１００リットル容の供給液槽に加えて、入口及び出口圧力計並びに圧力制御弁を含むものとした。総膜面積は０．７２ｍ２とした。装着した膜は、ＸＮ４５（ＴｒｉＳｅｐ（商標登録）／Ｍｉｃｒｏｄｙｎ Ｎａｄｉｒ、分画分子量約３００～５００ダルトン、２５℃におけるＭｇＳＯ４阻止率９０～９６％）とした。ＭｇＳＯ４の阻止率は、濃度１～２ｇ／ｌ、７～８ｂａｒ、２５℃、ｐＨ６～８、１０～２５％回収率で規定したものである。
【0179】
エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ）を原材料とするナトリウムメバロネートの発酵に由来する限外濾過の透過液を供給液として使用した。その目的は、不純物（他の塩、着色物質、消泡剤、タンパク質）を保持しながら、ナトリウムメバロネートを通過させることにあった。
【0180】
供給液７９．７ｋｇを１００リットル容の供給槽に供給した。供給液の濃度を７．０ｇ／１００ｇとした。ｐＨを５０グラムの３０％ＮａＯＨで８．２５に調整した。供給液は表５に示す構成を有していた。ＨＰＬＣ分析値を％／ショ糖ＲＤＳ基準で示す（表６）。
【0181】
【表5】
【0182】
供給液を４６～５１℃に維持した。濾過圧力を１０～２５Ｂａｒとし、流束が７ｋｇ／ｍ２／ｈ（観測される流束最小値）を超えるようにした。
【0183】
回分式濾過を行った後、透過液画分及び最終保持液画分を回収した。全透過液の一部を蒸発させ、乾燥固体を２８．７％とした。透過液画分及び最終濃縮液画分に関するＨＰＬＣ分析値（％／ショ糖ＲＤＳ基準）を含む結果を表６に示す。
【0184】
【表6】
【0185】
全メバロネート収率は８６．８％と求められた。
【0186】
実施例４
低緻密性スパイラル型ナノ濾過（ＮＦ）膜を用いたナトリウムメバロネート液のナノ濾過 本実施例においては、有機酸又はその塩を含む水溶液のナノ濾過、例えば、低緻密性スパイラル型ナノ濾過膜を使用するナトリウムメバロネート液のナノ濾過について記載する。
低緻密性スパイラル型ナノ濾過（ＮＦ）膜を用いたナトリウムメバロネート液のナノ濾過 本実施例においては、有機酸又はその塩を含む水溶液のナノ濾過、例えば、低緻密性スパイラル型ナノ濾過膜を使用するナトリウムメバロネート液のナノ濾過について記載する。
【0187】
この処理設備は、プレート・フレーム式濾過ユニット（Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ Ｌａｂｓｔａｋ Ｍ２０）、供給及び透析濾過ポンプ、熱交換器、冷却装置、１０００リットル容の供給液槽に加えて、入口及び出口圧力計並びに圧力制御弁を含むものとした。総膜面積は１４．８ｍ２とした。装着した膜は、３１ｍｉｌのスペーサを備える４０４０ ＸＮ４５（ＴｒｉＳｅｐ（商標登録）／Ｍｉｃｒｏｄｙｎ Ｎａｄｉｒ、分画分子量約３００～５００ダルトン、２５℃におけるＭｇＳＯ４阻止率９０～９６％）とした。ＭｇＳＯ４の阻止率は、濃度１～２ｇ／ｌ、７～８ｂａｒ、２５℃、ｐＨ６～８、１０～２５％回収率で規定したものである。
【0188】
エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ）を原材料とするナトリウムメバロネートの発酵に由来する限外濾過の透過液を供給液として使用した。その目的は、不純物（他の塩、着色物質、消泡剤、タンパク質）を保持しながら、ナトリウムメバロネートを通過させることにあった。
【0189】
供給液６００ｋｇを１０００リットル容の供給槽に供給した。供給液の濃度を６．７ｇ／１００ｇとした。ｐＨを３０％ＮａＯＨで８．５に調整した。供給液は表７に示す構成を有していた。ＨＰＬＣ分析値を％／ショ糖ＲＤＳ基準で示す。
【0190】
【表7】
【0191】
供給液を４５～５２℃に維持した。濾過圧力を１０～２５Ｂａｒとし、流束が５ｋｇ／ｍ２／ｈ（観測される最小流束値）を超えるようにした。
【0192】
回分式濾過を行った後、透過液画分及び最終濃縮液画分を回収した。全透過液を蒸発させることにより乾燥固体を３９．１％とした。透過液画分及び最終濃縮液画分に関するＨＰＬＣ分析値（％／ショ糖ＲＤＳ基準）を含む結果を表８に示す。
【0193】
【表8】
【0194】
メバロネートの全収率は８７．５％と求められた。
【0195】
実施例５
ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、有機酸又はその塩の、水を溶媒とする結晶化、例えば、ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化及びナトリウムメバロネート種結晶の調製について記載する。
ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、有機酸又はその塩の、水を溶媒とする結晶化、例えば、ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化及びナトリウムメバロネート種結晶の調製について記載する。
【0196】
結晶化原料は、ナトリウムメバロネートを含む水性シロップとした。シロップのナトリウムメバロネート純度はＤＳで９６％であった。ＤＳで≧９５％のナトリウムメバロネートを含む水性シロップは、公知の市販のナトリウムメバロネート塩を脱イオン水中に溶解するか、又は公知の市販のナトリウムメバロネート塩を、実施例１～４に従い調製したナトリウムメバロネートを含むナノ濾過透過液と混合することにより生成することができる。
【0197】
原料シロップを７０℃の温度で蒸発させた（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５１）。ＤＳ（乾燥物）が約５４％となった時点で、自然発生核により結晶が生成した。核発生後も、結晶化原料のＤＳが８１．８％となるまで７０℃で２時間蒸発を継続した。
【0198】
蒸発させた結晶化原料を２リットル容の冷却晶析装置に移し替えた。結晶化原料を７０℃で１時間維持した後、連続的に撹拌しながら２０時間以内に４０℃の温度まで冷却した。
【0199】
結果として得られた結晶化原料９３０ｇを洗浄水２０ｍＬと一緒に遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径２２．５ｃｍ、３５００ｒｐｍ、５ｍｉｎ）。遠心分離によるメバロネートの収率は４５％であり、遠心分離ケークのナトリウムメバロネート純度はＤＳで≧９８％であり、遠心分離母液のナトリウムメバロネート純度はＤＳで９４％であった。
【0200】
結晶ケークを６０℃の加熱室で１９時間乾燥させた。乾燥ケークの水分含有量は≦０．２重量％であった。
【0201】
このプロセスに従い調製したナトリウムメバロネート結晶を実施例６、７、及び８の種結晶として使用した。使用前にこの結晶を磁器製粉砕器で粉砕した。
【0202】
実施例６
ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、有機酸又はその塩の、水を溶媒とする結晶化、例えば、ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化について記載する。
ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、有機酸又はその塩の、水を溶媒とする結晶化、例えば、ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化について記載する。
【0203】
結晶化原料には、実施例４に従い調製した、ナノ濾過透過液を蒸発させたものを用いた。結晶化を行う前に、シロップを活性炭で処理することにより着色物質を除去した。炭素処理は、蒸発させたシロップ７６ｋｇにＮｏｒｉｔ ＤＸ １炭素粉６００ｇを投入することにより行った（ＤＳ１ｋｇ当たり炭素粉約２０ｇ）。シロップを５０℃の温度に加熱し、一定温度で４５分間、撹拌を継続したままにした。次いで、濾過助剤を用いて炭素粉を濾過することによりシロップから分離した（Ｓｅｉｔｚデプスフィルタ、Ｋｅｎｉｔｅ ３００濾過助剤１．１ｋｇ）。得られたシロップのナトリウムメバロネート純度はＤＳで７３％であり、色価は６３００ ＩＣＵＭＳＡであり、ＤＳは２４．１％であった。
【0204】
炭素処理した原料シロップ４１ｋｇを蒸発させることにより、ＤＳを８６．０％とした（Ｌｕｗａ薄膜蒸発器ＮＬ３－２１０／１６００／１０及びＲｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３蒸発器）。起泡を防ぐため、蒸発時に１０％ Ｓｔｒｕｋｔｏｌ Ｊ ６５０消泡剤４ｇを添加した。得られたシロップ１１．６ｋｇを１０リットル容の冷却晶析装置に移し替え、７０℃の温度で２回種晶添加した：１回目はナトリウムメバロネート乾燥種晶（実施例５に従い調製）を０．３ｇ、次いで１回目の種晶添加から０．６時間後にナトリウムメバロネート乾燥種晶２．０ｇを添加した。１回目の種晶添加により非常に細かい結晶が生成した。
【0205】
種晶添加したシロップを連続的に撹拌しながら１６時間以内に４８℃の温度まで冷却した。４８℃に冷却した後、結晶化原料を４８℃で２時間維持した。
【0206】
結果として得られた結晶化原料１０．７ｋｇを洗浄水１７０ｍＬと一緒に遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径４０．５ｃｍ、２０５０ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）。遠心分離によるメバロネートの収率は３３％であった。遠心分離ケークのナトリウムメバロネート純度はＤＳで９４％であり、未乾燥ケークの水分含有量は５．３重量％であり、色価は５２００ ＩＣＵＭＳＡであった。遠心分離母液のナトリウムメバロネート純度はＤＳで６８％であり、色価は８２０００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0207】
実施例７
ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、有機酸又はその塩の、水を溶媒とする結晶化、例えば、ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化について記載する。
ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、有機酸又はその塩の、水を溶媒とする結晶化、例えば、ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化について記載する。
【0208】
結晶化原料には、実施例４に従い調製した、ナノ濾過透過液を蒸発させたものを用いた。これを、実施例６に記載した手順に従い活性炭で処理した（ＤＳ１ｋｇ当たりＮｏｒｉｔ ＤＸ １炭素粉２０ｇ、接触時間４５ｍｉｎ、接触温度５０℃、炭素粉は、Ｓｅｉｔｚデプスフィルタを使用し、Ｋｅｎｉｔｅ ３００濾過助剤と一緒に分離）。この原料のナトリウムメバロネート純度はＤＳで７３％であり、色価は６３００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0209】
この原料シロップをＤＳが８６．２％となるまで蒸発させた（Ｌｕｗａ薄膜蒸発器ＮＬ３－２１０／１６００／１０蒸発器及びＲｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３蒸発器）。結果として得られたシロップ１１．７ｋｇを１０リットル容の冷却晶析装置に移し替えて、２．０ｇのナトリウムメバロネート乾燥種晶（実施例５に従い調製）を６９℃の温度で添加した。種晶添加したシロップを連続的に撹拌しながら１６時間以内に４４℃の温度まで冷却した。次いで、結晶化原料に脱イオン水を加えて希釈することにより、ＤＳ８５．４％とした。希釈した結晶化原料を３時間以内に４０℃の温度まで冷却し、４０℃で２時間維持した。
【0210】
結果として得られた結晶化原料１０．９ｋｇを洗浄水１７０ｍＬと一緒に遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径４０．５ｃｍ、２０５０ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）。遠心分離によるメバロネートの収率は３７％であった。遠心分離ケークのナトリウムメバロネート純度はＤＳで９５％であり、未乾燥ケークの水分含有量は７．０重量％であり、色価は１１００ ＩＣＵＭＳＡであった。遠心分離母液のナトリウムメバロネート純度はＤＳで６７％であり、色価は１４０００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0211】
実施例８
ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、有機酸又はその塩の、水を溶媒とする結晶化、例えば、脱イオン水中に結晶ケークを溶解することにより調製したシロップからの、ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化について記載する。
ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、有機酸又はその塩の、水を溶媒とする結晶化、例えば、脱イオン水中に結晶ケークを溶解することにより調製したシロップからの、ナトリウムメバロネート（Ｎａ－ＭＶＡ）の水を溶媒とする結晶化について記載する。
【0212】
実施例６及び実施例７からのナトリウムメバロネート結晶を合わせて脱イオン水に溶解した。結果として得られた溶液を実施例６に記載した手順に従い活性炭で処理し（ＤＳ１ｋｇ当たりＮｏｒｉｔ ＤＸ １炭素粉２０ｇ、接触時間４５ｍｉｎ、接触温度５０℃、炭素粉をＫｅｎｉｔｅ ３００濾過助剤と一緒にブフナー濾過により分離）、０．２μｍの無菌フィルタで濾過し、ＤＳが８３．５％になるまで蒸発させた（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５１蒸発器）。シロップのナトリウムメバロネート純度はＤＳで９６％であり、色価は１３００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0213】
結果として得られたシロップ５．６ｋｇを６リットル容の冷却晶析装置に移し替えて、１．６ｇのナトリウムメバロネート乾燥種晶（実施例５に従い調製）を６８℃の温度で添加した。種晶添加したシロップを連続的に撹拌しながら１８時間以内に４０℃の温度まで冷却した。４０℃に冷却した後、結晶化原料を４０℃で４時間維持した。
【0214】
結果として得られた結晶化原料５．１ｋｇを洗浄水１５０ｍＬと一緒に遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径４０．５ｃｍ、２０５０ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）。遠心分離によるメバロネートの収率は４２％であった。遠心分離ケークのナトリウムメバロネート純度はＤＳで≧９８％であり、未乾燥ケークの水分含有量は１．５重量％であり、色価は１００ ＩＣＵＭＳＡであった。遠心分離母液のナトリウムメバロネート純度はＤＳで９４％であり、色価は３４００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0215】
実施例９
結晶化したＮａ－ＭＶＡからメバロノラクトン（ＭＶＬ）への陽イオン交換
本実施例においては、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む希薄な液体（これは、任意選択的に蒸発させることにより濃縮することができる）を生成するための、Ｎａ－ＭＶＡ結晶が溶解している溶液の陽イオン交換について記載する（図１Ｂも参照）。
結晶化したＮａ－ＭＶＡからメバロノラクトン（ＭＶＬ）への陽イオン交換
本実施例においては、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む希薄な液体（これは、任意選択的に蒸発させることにより濃縮することができる）を生成するための、Ｎａ－ＭＶＡ結晶が溶解している溶液の陽イオン交換について記載する（図１Ｂも参照）。
【0216】
処理設備は、内径４５ｍｍ、全長１０００ｍｍのジャケット付きガラスカラムと、カラム上方に配置された供給液容器と、カラム出口の蠕動ポンプと、実験室用ロータリーエバポレータであるＢｕｅｃｈｉ ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ２００とを含むものとした。Ｄｏｗｅｘ ８８強酸性陽イオン交換樹脂１リットルをカラムに充填し、ベッド長を約７００ｍｍとした。樹脂を逆洗し、４リットル（４ベッド体積）の５％Ｈ２ＳＯ４を用いて流速２ＢＶ／ｈとし、２５℃の温度でＨ＋型に再生した。
【0217】
水を用いた結晶化プロセスにより得られたＤＳ純度約９８％のナトリウムメバロネート結晶を水に溶解することにより２４．２％の溶液を生成した。この目的は、ナトリウム陽イオンを交換して純粋なメバロン酸又はメバロノラクトンシロップを生成することにあった。
【0218】
供給液９５７グラムを、流速を１ＢＶ／ｈとして室温（約２５℃）でカラムを通過させ、水を用いて溶出を継続した。供給液のｐＨは９．７８であり、電気伝導率は３９．４ｍＳ／ｃｍであった。カラム溶出液のｂｒｉｘが０．４％になったら生成物の回収を開始し、溶出液のｂｒｉｘが１．２％になったら終了した。１３２２グラムの僅かに着色した生成物を回収した。カラムを再びＨ＋型に再生し、原料を、速度を１ＢＶ／ｈとして室温（約２５℃）で通過させた。カラム流出液のｂｒｉｘが３．０％になったら生成物の回収を開始し、流出液のｂｒｉｘが１．４％になったら終了した。１６４１グラムの着色していない生成物を回収した。この物質をロータリーエバポレータで蒸発させることによりＫＦ－ＤＳ ９９．１％とした。ＭＶＬのＤＳ純度は９５．５％であった。
【0219】
供給液及びイオン交換（ＩＥＸ）生成物のＨＰＬＣ分析値（乾燥物基準の％）を含む結果を表９に示す。
【0220】
【表9】
【0221】
ＩＥＸプロセスによるメバロノラクトンの全収率を求めたところ９５．６％であった。
【0222】
このプロセスに従い生成したメバロノラクトンを含むシロップの比旋光度は－３４．７°（水、ｃ＝１、２０℃）であった。
【0223】
実施例１０
Ｎａ－ＭＶＡ溶液からメバロノラクトン（ＭＶＬ）への陽イオン交換
本実施例においては、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液（これは、任意選択的に蒸発させることにより濃縮することができる）を生成するための、Ｎａ－ＭＶＡを含む水溶液の陽イオン交換について記載する（図２も参照）。
Ｎａ－ＭＶＡ溶液からメバロノラクトン（ＭＶＬ）への陽イオン交換
本実施例においては、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液（これは、任意選択的に蒸発させることにより濃縮することができる）を生成するための、Ｎａ－ＭＶＡを含む水溶液の陽イオン交換について記載する（図２も参照）。
【0224】
処理設備は、１００リットル容の槽と、Ｓｅｉｔｚデプスフィルタと、内径１３０ｍｍ、全長１５００ｍｍのジャケット付きガラスカラム３本と、カラム上方に配置された供給液容器と、カラム出口の蠕動ポンプと、ＬＵＷＡ薄膜蒸発器とを含むものとした。Ｄｏｗｅｘ ８８強酸性陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗ）１３リットルを各カラムに充填し、ベッド長を約１０００ｍｍとした。樹脂を逆洗し、１３０リットル（約３．３ベッド体積）の５％Ｈ２ＳＯ４を用いて流速を２ＢＶ／ｈとし、２５℃の温度でＨ＋型に再生した。
【0225】
この目的は、ナトリウム陽イオンを交換して、更に精製に付すためのメバロン酸又はメバロノラクトンシロップを生成することにあった。ＩＥＸ供給液から析出する可能性のある着色物質を粉末活性炭を使用して除去した。
【0226】
Ｎａ－ＭＶＡ純度が７５．５％／ＤＳであり、色価が１０９８６ ＩＣＵＭＳＡ単位であるナノ濾過透過液を３９．１％ｂｒｉｘになるまで蒸発させた。この溶液７６．２ｋｇを５０～６０℃の温度に加熱し、２％／ＤＳであるＮｏｒｉｔ ＤＸ １粉末活性炭を添加して４５分間混合した。懸濁液を、Ｓｅｉｔｚデプスフィルタである濾過面積０．５６ｍ２のＴ２６００フィルタシート（Ｐａｌｌ）及びプリコートとしてのＫｅｎｉｔｅ ３００（ＩＭＥＲＹＳ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）珪藻土濾過助剤１ｋｇ／ｍ２を用いて濾過した。ｂｒｉｘ２４．１％の濾過液１１０リットルを蒸発させることにより、ｂｒｉｘ５３％、色価６４９６ ＩＣＵＭＳＡ単位の溶液を得た。この材料１４．８ｋｇを希釈して、ＩＥＸ供給液用にｂｒｉｘ３９．８％とし、５０℃に加熱した。
【0227】
供給液２０．０５ｋｇを速度２ＢＶ／ｈとして５０℃でカラムを通過させ、水を用いて溶出を継続した。最後のカラム溶出液のｂｒｉｘが０．５％になったら生成物の回収を開始し、溶出液のｂｒｉｘが４．０％となり、ｐＨが２．５になったら終了した。生成物を２つの画分として回収した。画分を合わせて蒸発させた。合わせて蒸発させたＩＥＸ生成物の色価は２３６２ ＩＣＵＭＳＡ単位であり、ＭＶＬ純度は約７６％／ＤＳであった。
【0228】
供給液及びＩＥＸ生成物に関する結果を表１０に記載する。
【0229】
【表10】
【0230】
実施例１１
Ｎａ－ＭＶＡ溶液からメバロノラクトン（ＭＶＬ）への陽イオン交換
本実施例においては、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液（これは、任意選択的に蒸発させることにより濃縮することができる）を生成するための、Ｎａ－ＭＶＡを含む水溶液の陽イオン交換について記載する（図２も参照）。
Ｎａ－ＭＶＡ溶液からメバロノラクトン（ＭＶＬ）への陽イオン交換
本実施例においては、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液（これは、任意選択的に蒸発させることにより濃縮することができる）を生成するための、Ｎａ－ＭＶＡを含む水溶液の陽イオン交換について記載する（図２も参照）。
【0231】
処理設備は、１００リットル容のタンクと、Ｓｅｉｔｚデプスフィルタと、内径１３０ｍｍ、全長１５００ｍｍのジャケット付きガラスカラム３本と、カラム上方に配置された供給液容器と、カラム出口の蠕動ポンプと、ＬＵＷＡ薄膜蒸発器とを含むものとした。Ｄｏｗｅｘ ８８強酸性陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗ）１３リットルを各カラムに充填し、ベッド長を約１０００ｍｍとした。樹脂を逆洗し、１３０リットル（約３．３ベッド体積）の５％Ｈ２ＳＯ４を用いて流速を２ＢＶ／ｈとし、２５℃の温度でＨ＋型に再生した。
【0232】
この目的は、ナトリウム陽イオンを交換して、更に精製に付すためのメバロン酸又はメバロノラクトンシロップを生成することにあった。ＩＥＸ供給液から析出する可能性のある着色物質を、粉末活性炭を使用して除去した。
【0233】
Ｎａ－ＭＶＡ純度が７８．８％／ＤＳであり、色価が８８８７ ＩＣＵＭＳＡ単位であるナノ濾過透過液を４２．０％ｂｒｉｘになるまで蒸発させた。この溶液４１．４ｋｇを５５～５８℃の温度に加熱し、２．２％／ＤＳであるＮｏｒｉｔ ＤＸ １粉末活性炭を添加して７０分間混合した。懸濁液を、Ｓｅｉｔｚデプスフィルタである濾過面積０．２８ｍ２のＴ２６００フィルタシート（Ｐａｌｌ）及びプリコートとしてのＫｅｎｉｔｅ ３００（ＩＭＥＲＹＳ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）珪藻土濾過助剤１ｋｇ／ｍ２を用いて濾過した。ｂｒｉｘ２３．８％及び色価２１２４ ＩＣＵＭＳＡ単位を有する濾過液５６リットルが得られた。ＩＥＸ供給液とするために、材料を蒸発させてｂｒｉｘ３１．１％とした。
【0234】
供給液３５．７ｋｇを速度２ＢＶ／ｈとして２５℃でカラムを通過させ、水を用いて溶出を継続した。最後のカラム溶出液のｂｒｉｘが０．５％になったら生成物の回収を開始し、溶出液のｂｒｉｘが２．０％となり、ｐＨが２．５に達したら終了した。生成物及び残存画分を回収した。蒸発させたＩＥＸ生成物のＭＶＬ純度は約７８～８３％／ＤＳであった。供給液及びＩＥＸ生成物に関する結果を表１１に記載する。
【0235】
【表11】
【0236】
実施例１２
Ｎａ－ＭＶＡ溶液からメバロノラクトン（ＭＶＬ）への陽イオン交換
本実施例においては、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液（これは、任意選択的に蒸発させることにより濃縮することができる）を生成するための、Ｎａ－ＭＶＡを含む水溶液の陽イオン交換について記載する（図２も参照されたい）。
Ｎａ－ＭＶＡ溶液からメバロノラクトン（ＭＶＬ）への陽イオン交換
本実施例においては、メバロノラクトン（ＭＶＬ）を含む水溶液（これは、任意選択的に蒸発させることにより濃縮することができる）を生成するための、Ｎａ－ＭＶＡを含む水溶液の陽イオン交換について記載する（図２も参照されたい）。
【0237】
処理設備は、内径１３０ｍｍ、全長１５００ｍｍのジャケット付きガラスカラム３本と、カラム上方に配置された供給液容器と、カラム出口の蠕動ポンプとを含むものとした。
Ｄｏｗｅｘ ８８強酸性陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗ）１３リットルを各カラムに充填し、ベッド長を約１０００ｍｍとした。樹脂を逆洗し、１３０リットル（約３．３ベッド体積）の５％Ｈ２ＳＯ４を用いて流速を２ＢＶ／ｈとし、２５℃の温度でＨ＋型に再生した。
Ｄｏｗｅｘ ８８強酸性陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗ）１３リットルを各カラムに充填し、ベッド長を約１０００ｍｍとした。樹脂を逆洗し、１３０リットル（約３．３ベッド体積）の５％Ｈ２ＳＯ４を用いて流速を２ＢＶ／ｈとし、２５℃の温度でＨ＋型に再生した。
【0238】
この目的は、ナトリウム陽イオンを交換して、更に精製に付すためのメバロン酸又はメバロノラクトンシロップを生成することにあった。
【0239】
Ｎａ－ＭＶＡ純度が６８．２％／ＤＳであり、色価が８２９５２ ＩＣＵＭＳＡ単位であるＮａ－ＭＶＡ結晶化後に得られた母液を３９．４％ｂｒｉｘに希釈した。
【0240】
供給液１７．０ｋｇを速度２ＢＶ／ｈとして２５℃でカラムを通過させ、水を用いて溶出を継続した。最後のカラム溶出液のｂｒｉｘが０．８％になったら生成物の回収を開始し、溶出液のｂｒｉｘが２．０％になったら終了した。生成物を３つの画分で回収した。
画分を合わせて蒸発させた。合わせて蒸発させたＩＥＸ生成物のＭＶＬ純度は約７０～７３％／ＤＳであった。
画分を合わせて蒸発させた。合わせて蒸発させたＩＥＸ生成物のＭＶＬ純度は約７０～７３％／ＤＳであった。
【0241】
供給液及びＩＥＸ生成物に関する結果を表１２に記載する。
【0242】
【表12】
【0243】
実施例１３
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化及びＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ種結晶の調製
本実施例においては、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化及びメバロノラクトン一水和物種結晶の調製について記載する。
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化及びＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ種結晶の調製
本実施例においては、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化及びメバロノラクトン一水和物種結晶の調製について記載する。
【0244】
高純度のＭＶＬのシロップを本明細書に記載した方法により調製した（図１Ａ及び１Ｂ、実施例１～９）。予期せぬことに、且つ驚くべきことに、この高純度ＭＶＬシロップを低温（約６℃）で数週間保存すると、メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶が自然発生することが認められた。
【0245】
このシロップのＭＶＬ純度はＤＳで９８％（ＨＰＬＣ、Ｈ＋型樹脂、面積％）であり、水分含有量は約６％ｗ／ｗであり、これはＭＶＬ＊Ｈ２Ｏを結晶化させるのに充分に高かった。
【0246】
結晶を濾過し、濾過チューブ内で遠心分離（５７０ｇ、約１５℃で２分間）することにより、結晶表面から母液を除去した。次いでこれらの結晶及び母液を分析した。結晶の水分含有量は１０．８％（カールフィッシャー法による）であり、これは、結晶化条件に起因して、理論値である１２．１％よりも少し低かった。母液の水分含有量は３．２％であり、これは、一水和物の結晶が生成する際に母液が濃縮されたことを意味している。結晶のＭＶＬ純度はＤＳで９８．８％であり、母液は９７．７％／ＤＳであった。これらのＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ結晶を実施例１４の種結晶として使用した。使用前にこの結晶を磁器製粉砕器で粉砕した。
【0247】
実施例１４
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例は、ナトリウムメバロネート結晶化母液を陽イオン交換に付すことにより生成したメバロノラクトンシロップからの、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化について記載するものである。
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例は、ナトリウムメバロネート結晶化母液を陽イオン交換に付すことにより生成したメバロノラクトンシロップからの、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化について記載するものである。
【0248】
実施例６で得られたナトリウムメバロネートを含む遠心分離母液を実施例１２に従い陽イオン交換で処理することにより、メバロノラクトンを含む液体を得た。得られたシロップのメバロノラクトン純度はＤＳで７１％であり、色価は３４０００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0249】
原料シロップを蒸発させることにより、ＤＳを９３．７％とした（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３蒸発器）。結果として得られたシロップ２．１ｋｇを２リットル容の冷却晶析装置に移し替えて、０．４ｇのメバロノラクトン一水和物乾燥種晶（実施例１３に従い調製）を１１℃の温度で添加した。種晶添加したシロップを連続的に撹拌しながら１６時間以内に７℃の温度まで冷却した。７℃に冷却した後、撹拌を７℃で５０時間継続した。
温度が一定の間に、結晶化原料に脱イオン水を次に示すように３回に分けて加えて希釈した：（１）種晶添加から２３時間後に４０ｇ添加、（２）種晶添加から４３時間後に５０ｇ添加、及び（３）種晶添加から４７時間後に１０ｇ添加。得られた結晶化原料のＤＳは８９．１％であった。
温度が一定の間に、結晶化原料に脱イオン水を次に示すように３回に分けて加えて希釈した：（１）種晶添加から２３時間後に４０ｇ添加、（２）種晶添加から４３時間後に５０ｇ添加、及び（３）種晶添加から４７時間後に１０ｇ添加。得られた結晶化原料のＤＳは８９．１％であった。
【0250】
結晶化原料１．７ｋｇを、回分式遠心分離により、洗浄水を使用せずに遠心分離した（バスケット径２２．５ｃｍ、４０００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）。遠心分離によるメバロノラクトンの収率は５２％であった。遠心分離ケークのメバロノラクトン純度はＤＳで９４％であり、未乾燥ケークの水分含有量は１０．８重量％であり、色価は５２００ ＩＣＵＭＳＡであった。遠心分離母液のメバロノラクトン純度はＤＳで５６％であり、色価は５２０００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0251】
このプロセスに従い調製したメバロノラクトン一水和物結晶を実施例１５の種結晶として使用した。使用前にこの結晶を磁器製粉砕器で粉砕した。
【0252】
実施例１５
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、ナノ濾過に続いて陽イオン交換ステップを用いることにより生成したメバロノラクトンを含むシロップからの、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化について記載する（図２）。
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、ナノ濾過に続いて陽イオン交換ステップを用いることにより生成したメバロノラクトンを含むシロップからの、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化について記載する（図２）。
【0253】
実施例４に従い調製されたナトリウムメバロネートを含むナノ濾過透過液を、実施例１０に従い陽イオン交換処理することにより、メバロノラクトンを含む液体を得た。得られたシロップのメバロノラクトン純度はＤＳで７６％であり、色価は２４００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0254】
この原料シロップを蒸発させることにより、ＤＳを９０．７％とした（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３蒸発器）。結果として得られたシロップ６．３ｋｇを６リットル容の冷却晶析装置に移し替えて、０．５ｇのメバロノラクトン一水和物乾燥種晶（実施例１４に従い調製）を１２℃の温度で添加した。種晶添加したシロップを連続的に撹拌しながら１７時間以内に６℃の温度まで冷却した。６℃に冷却した後、撹拌を６℃で５時間継続した。温度が６℃で一定している間に、結晶化原料に脱イオン水を次に示すように３回に分けて加えて希釈した：（１）種晶添加から１８時間後に５０ｇ添加、（２）種晶添加から１９時間後に４０ｇ添加、及び（３）種晶添加から２０時間後に７０ｇ添加。得られた結晶化原料のＤＳは８８．１％であった。
【0255】
得られた結晶化原料５．２ｋｇを、２７～３３ｍＬ／ｋｇＤＳ質量の量の洗浄水を使用して、４回の回分で遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径２２．５ｃｍ、３５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）。１回目の遠心分離から結晶ケークのサンプル及び母液のサンプルを回収した。１回目の遠心分離によるメバロノラクトンの収率は７１％であった。１回目の遠心分離ケークのメバロノラクトン純度はＤＳで９３％であり、未乾燥ケークの水分含有量は１２．７重量％であり、色価は５６０ ＩＣＵＭＳＡであった。１回目の遠心分離母液のメバロノラクトン純度はＤＳで５５％であり、色価は５７００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0256】
このプロセスに従い調製したメバロノラクトン一水和物結晶を実施例１６及び１７の種結晶として使用した。使用前にこの結晶を磁器製粉砕器で粉砕した。
【0257】
実施例１６
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、ナノ濾過に続いて陽イオン交換ステップを用いることにより生成したメバロノラクトンを含むシロップからの、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化について記載する（図２）。
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、ナノ濾過に続いて陽イオン交換ステップを用いることにより生成したメバロノラクトンを含むシロップからの、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化について記載する（図２）。
【0258】
実施例３に従い調製されたＮａ－ＭＶＡを含むナノ濾過透過液を、実施例１１に従い陽イオン交換処理することにより、ＭＶＬを含む液体を生成した。得られたシロップのメバロノラクトン純度はＤＳで８１％であり、色価は１２００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0259】
この原料シロップを蒸発させることにより、ＤＳを８４．１％とした（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３蒸発器）。得られたシロップ６．２ｋｇを６リットル容の冷却晶析装置に移し替えて、１．０ｇのメバロノラクトン一水和物乾燥種晶（実施例１５に従い調製）を１６℃の温度で添加した。種晶添加したシロップを１６℃で３時間維持した後、連続的に撹拌しながら１１時間以内に６℃の温度まで冷却した。６℃に冷却した後、撹拌を６℃で７時間継続した。
【0260】
得られた結晶化原料５．５ｋｇを、７２～７９ｍＬ／ｋｇＤＳ質量の量の洗浄水を使用して、５回の回分で遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径２２．５ｃｍ、３５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）。１回目の遠心分離から結晶ケークのサンプル及び母液のサンプルを回収した。１回目の遠心分離によるメバロノラクトンの収率は６２％であった。１回目の遠心分離ケークのメバロノラクトン純度はＤＳで≧９７％であり、未乾燥ケークの水分含有量は１１．６重量％であり、色価は６１ ＩＣＵＭＳＡであった。１回目の遠心分離母液のメバロノラクトン純度はＤＳで６４％であり、色価は２７００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0261】
実施例１７
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、遠心分離母液と希釈された結晶化原料との混合物からの、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化について記載する。
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、遠心分離母液と希釈された結晶化原料との混合物からの、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化について記載する。
【0262】
結晶化原料は、メバロノラクトンを含む水性シロップとした。これは、実施例１６の遠心分離母液と、設備を脱イオン水で洗浄することにより回収した希釈された結晶化原料とを合一することにより得られたものである。得られたシロップのメバロノラクトン純度はＤＳで７０％であり、色価は２４００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0263】
この原料を蒸発させることによりＤＳを８５．３％とし（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３）、得られたシロップ２．８ｋｇを２リットル容の冷却晶析装置に移し替えた。このシロップに種晶を２回：１回目はメバロノラクトン一水和物乾燥種晶１．０ｇ（実施例１５に従い調製）を１３℃の温度で添加し、次いでメバロノラクトン一水和物乾燥種晶１．０ｇを１０℃の温度で添加した。１回目の種晶添加により非常に細かい結晶が生成した。
【0264】
種晶添加したシロップを１０℃で３５分間維持した後、連続的に撹拌しながら１６時間以内に４℃の温度に冷却した。４℃に冷却した後、撹拌を４℃で２時間継続した。
【0265】
結果として得られた結晶化原料２．５ｋｇを２回の回分で遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径２２．５ｃｍ、３５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）。１回目の遠心分離の洗浄水の量は９０ｍＬ／ｋｇＤＳとした。遠心分離により得られたメバロノラクトンの収率は４２％であった。遠心分離ケークのメバロノラクトン純度はＤＳで≧９７％であり、未乾燥ケークの水分含有量は１４．７重量％であり、色価は３３ ＩＣＵＭＳＡであった。遠心分離母液のメバロノラクトン純度はＤＳで５８％であり、色価は４２００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0266】
２回目の遠心分離は洗浄水を使用せずに実施した。遠心分離により得られたメバロノラクトンの収率は５４％であった。遠心分離ケークのメバロノラクトン純度はＤＳで≧９７％であり、未乾燥ケークの水分含有量は１１．７重量％であり、色価は１２０ ＩＣＵＭＳＡであった。遠心分離母液のメバロノラクトン純度はＤＳで５３％であり、色価は４６００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0267】
このプロセスに従い調製したメバロノラクトン一水和物結晶を実施例１８及び１９の種結晶として使用した。使用前にこの結晶を磁器製粉砕器で粉砕した。
【0268】
実施例１８
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、脱イオン水中に溶解されたメバロノラクトン一水和物結晶の、水を溶媒とする再結晶について記載する。
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、脱イオン水中に溶解されたメバロノラクトン一水和物結晶の、水を溶媒とする再結晶について記載する。
【0269】
結晶化原料は、メバロノラクトンを含む水性シロップとした。これは、実施例１５からの遠心分離ケーク２．２ｋｇに脱イオン水を添加して溶解及び希釈することにより得られたものである。得られたシロップのメバロノラクトン純度はＤＳで９２％であり、色価は５６０ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0270】
原料シロップを蒸発させることによりＤＳを８０．８％とし（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３）、得られたシロップ２．３ｋｇを２リットル容の冷却晶析装置に移し替えた。
このシロップを、次に示す２段階で、種晶添加することなく、連続的に撹拌しながら冷却した：（１）２時間以内で２０℃から１５℃に冷却、及び（２）１０時間以内で１５℃から１０℃に冷却。１０℃に冷却した後、撹拌を１０℃で６時間継続した。こうすることにより、自然発生による結晶形成が起こらなかった。
このシロップを、次に示す２段階で、種晶添加することなく、連続的に撹拌しながら冷却した：（１）２時間以内で２０℃から１５℃に冷却、及び（２）１０時間以内で１５℃から１０℃に冷却。１０℃に冷却した後、撹拌を１０℃で６時間継続した。こうすることにより、自然発生による結晶形成が起こらなかった。
【0271】
このシロップにメバロノラクトン一水和物乾燥種晶（実施例１７に従い調製）０．５ｇを１０℃の温度で添加した。晶析装置のジャケットの冷却水温度を７℃で一定に維持した。種晶添加直後に結晶形成が開始した。結晶化原料の温度はまず結晶化熱に起因して種晶添加から５０分以内に１０℃から１６℃まで上昇し、その後、３時間以内に１６℃から１２℃まで低下した。１２℃まで降温した後、冷却水温度を７℃から１２℃に昇温し、撹拌を１２℃で１時間継続した。
【0272】
結果として得られた結晶化原料２．２ｋｇを、６５～６６ｍＬ／ｋｇＤＳ質量の量の洗浄水を使用して、２回の回分で遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径２２．５ｃｍ、３５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）。１回目の遠心分離から結晶ケークのサンプル及び母液のサンプルを回収した。１回目の遠心分離によるメバロノラクトンの収率は５２％であった。１回目の遠心分離ケークのメバロノラクトン純度はＤＳで≧９８％であり、未乾燥ケークの水分含有量は１３．６重量％であり、色価は３５ ＩＣＵＭＳＡであった。１回目の遠心分離母液のメバロノラクトン純度はＤＳで８７％であり、色価は１１００ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0273】
実施例１９
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、脱イオン水中に溶解されたメバロノラクトン一水和物結晶の、水を溶媒とする再結晶について記載するものである。
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、脱イオン水中に溶解されたメバロノラクトン一水和物結晶の、水を溶媒とする再結晶について記載するものである。
【0274】
結晶化原料は、メバロノラクトンを含む水性シロップとした。これは、実施例１６からの遠心分離ケーク２．０ｋｇと実施例１７からの遠心分離ケーク３２０ｇとを合わせることにより得られたものである。混合する前に、実施例１６からのメバロノラクトン生成物を脱イオン水で希釈することによりＤＳを８０．９％とし、得られたシロップを実施例６に記載した手順に従い活性炭で処理した（ＤＳ１ｋｇ当たりＮｏｒｉｔ ＤＸ １炭素粉２０ｇ、接触時間１時間、接触温度５０℃、炭素粉は、Ｋｅｎｉｔｅ ３００濾過助剤と一緒にブフナー濾過により分離）。結晶化原料シロップのメバロノラクトン純度はＤＳで≧９７％であり、色価は３４ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0275】
この原料シロップを蒸発させることによりＤＳを７８．３％とした（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５１蒸発器）。結果として得られたシロップ２．６ｋｇを５リットル容の冷却晶析装置に移し替えて、０．４ｇのメバロノラクトン一水和物乾燥種晶（実施例１７に従い調製）を１７℃の温度で添加した。種晶添加したシロップを１７℃で１．５時間維持した後、連続的に撹拌しながら１５時間以内に１３℃の温度まで冷却した。１３℃に冷却した後、撹拌を１３℃で５時間継続した。
【0276】
結果として得られた結晶化原料２．４ｋｇを、６５～７１ｍＬ／ｋｇＤＳ質量の量の洗浄水を使用して、２回の回分で遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径２２．５ｃｍ、３５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）。１回目の遠心分離から結晶ケークのサンプル及び母液のサンプルを回収した。１回目の遠心分離によるメバロノラクトンの収率は５０％であった。１回目の遠心分離ケークのメバロノラクトン純度はＤＳで≧９８％であり、未乾燥のケークの水分含有量は１２．１重量％であり、色価は３ ＩＣＵＭＳＡであった。１回目の遠心分離母液のメバロノラクトン純度はＤＳで９６％であり、色価は７０ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0277】
このプロセスに従い調製したメバロノラクトン一水和物結晶を実施例２０の種結晶として使用した。使用前にこの結晶を磁器製粉砕器で粉砕した。
【0278】
実施例２０
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化及び高純度のメバロノラクトン水性シロップの調製について記載する。
メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化
本実施例においては、メバロノラクトン一水和物の水を溶媒とする結晶化及び高純度のメバロノラクトン水性シロップの調製について記載する。
【0279】
結晶化原料は、メバロノラクトンを含む水性シロップとした。これは、実施例１７からの２回目の遠心分離ケークと、実施例１８及び１９からの遠心分離母液とを合一することにより得られたものである。このシロップを、脱イオン水を添加することによりＤＳが５１．２％になるまで希釈し、得られた溶液を実施例６に記載した手順に従い活性炭で処理した（ＤＳ１ｋｇ当たりＮｏｒｉｔ ＤＸ １炭素粉２０ｇ、接触時間１時間、接触温度５０℃、炭素粉はＫｅｎｉｔｅ ３００濾過助剤と一緒にブフナー濾過により分離）。得られたシロップのメバロノラクトン純度はＤＳで９３％であり、色価は１７０ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0280】
炭素処理した原料シロップを蒸発させることによりＤＳを８０．３％とした（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３蒸発器）。結果として得られたシロップ２．６ｋｇを２リットル容の冷却晶析装置に移し替えて、０．６ｇのメバロノラクトン一水和物乾燥種晶（実施例１９に従い調製）を１８℃の温度で添加した。種晶添加したシロップを１８℃で１時間維持した後、連続的に撹拌しながら１５時間以内に１３℃の温度まで冷却した。１３℃に冷却した後、撹拌を１３℃で４時間継続した。
【0281】
得られた結晶化原料２．３ｋｇを、６７～６８ｍＬ／ｋｇＤＳ質量の量の洗浄水を使用して、２回の回分で遠心分離した（回分式遠心分離、バスケット径２２．５ｃｍ、３５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）。１回目の遠心分離から結晶ケークのサンプル及び母液のサンプルを回収した。１回目の遠心分離によるメバロノラクトンの収率は５１％であった。１回目の遠心分離ケークのメバロノラクトン純度はＤＳで≧９８％であり、未乾燥ケークの水分含有量は１２．３重量％であり、色価は３ ＩＣＵＭＳＡであった。１回目の遠心分離母液のメバロノラクトン純度はＤＳで８７％であり、色価は３７０ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0282】
このプロセスに従い調製したメバロノラクトン一水和物結晶のＤＳＣ分析を行ったところ、２２．６℃にピーク極大がある吸熱ピークが見られた。
【0283】
遠心分離ケークを合わせ、脱イオン水を加えてＤＳを５７．４％にすることにより、液体メバロノラクトン生成物を得た。得られたシロップを蒸発させることにより、ＤＳを≧９７％とした（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－１５３蒸発器）。蒸発後のシロップのメバロノラクトン純度はＤＳで≧９８％であり、色価は２ ＩＣＵＭＳＡであった。
【0284】
ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏを結晶化させるための典型的な条件を表１３Ａ～１３Ｅに示す。
【0285】
【表13A】
【0286】
【表13B】
【0287】
【表13C】
【0288】
【表13D】
【0289】
【表13E】
【0290】
更に、ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏは、冷却設備に能力があり、結晶化原料の粘度が許容できるのであれば、０℃未満から母液の凝固点までの温度で結晶化させることができる。
【0291】
実施例２１
メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）の特性評価
式Ｃ６Ｈ１０Ｏ３ ＊Ｈ２Ｏを有する結晶性メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）について、以下に示すように更に特性評価した。
メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）の特性評価
式Ｃ６Ｈ１０Ｏ３ ＊Ｈ２Ｏを有する結晶性メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）について、以下に示すように更に特性評価した。
【0292】
Ａ．Ｘ線による結晶構造
ＭＶＬ＊Ｈ２ＯのＸ線回折測定を行った。
ＭＶＬ＊Ｈ２ＯのＸ線回折測定を行った。
【0293】
Ｂ．融点
ＭＶＬ－一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）の融点（ｍ．ｐ．）は、結晶の純度に応じて２０～２５℃、好ましくは２１～２４℃である。結晶化はｍ．ｐ．を下回った場合にのみ可能である。融点は、示差走査熱量計（ＤＳＣ）のピーク温度を用いて決定した。ＤＳＣサーモグラムは、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＳＣ８２２ｅ示差走査熱量計を用いて測定した。この測定は、４０μＬアルミニウム製標準るつぼ内で流速８０ｍＬ／ｍｉｎの窒素気流下にて実施した。温度範囲は０～５０℃とし、昇温速度を２℃／ｍｉｎとした。
ＭＶＬ－一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）の融点（ｍ．ｐ．）は、結晶の純度に応じて２０～２５℃、好ましくは２１～２４℃である。結晶化はｍ．ｐ．を下回った場合にのみ可能である。融点は、示差走査熱量計（ＤＳＣ）のピーク温度を用いて決定した。ＤＳＣサーモグラムは、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＳＣ８２２ｅ示差走査熱量計を用いて測定した。この測定は、４０μＬアルミニウム製標準るつぼ内で流速８０ｍＬ／ｍｉｎの窒素気流下にて実施した。温度範囲は０～５０℃とし、昇温速度を２℃／ｍｉｎとした。
【0294】
Ｃ．結晶の水分含有量
分子量から算出されるＭＶＬ一水和物の水分含有量の理論値は１２．１５％（ＤＳ含有量８７．８５％）である（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの分子量は１４８．１６ｇ／ｍｏｌ）。これは過剰な水を有する条件下で結晶化した結晶に相当する。結晶化用シロップに存在する水が結晶水含有量よりも少ない場合、母液は結晶化時に濃縮され、形成された結晶の結晶水含有量は理論値よりも低くなる。形成途中の（ｆｏｒｍｉｎｇ）ＭＶＬ一水和物結晶の結晶水含有量が１０．８％（カールフィッシャー法による）であることを、実施例１３に記載したように観測した。高ＤＳ（９６及び８９）シロップにおいて形成されたＭＶＬ一水和物結晶でも、１０～１１％という結晶水含有量が観測された。
分子量から算出されるＭＶＬ一水和物の水分含有量の理論値は１２．１５％（ＤＳ含有量８７．８５％）である（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの分子量は１４８．１６ｇ／ｍｏｌ）。これは過剰な水を有する条件下で結晶化した結晶に相当する。結晶化用シロップに存在する水が結晶水含有量よりも少ない場合、母液は結晶化時に濃縮され、形成された結晶の結晶水含有量は理論値よりも低くなる。形成途中の（ｆｏｒｍｉｎｇ）ＭＶＬ一水和物結晶の結晶水含有量が１０．８％（カールフィッシャー法による）であることを、実施例１３に記載したように観測した。高ＤＳ（９６及び８９）シロップにおいて形成されたＭＶＬ一水和物結晶でも、１０～１１％という結晶水含有量が観測された。
【0295】
Ｄ．水溶性
溶解度は結晶性化合物を特徴付ける特性の一つである。結晶化は、過飽和シロップの濃度が溶解度を上回った場合にのみ可能である。溶解度は、所与の温度で結晶化する最小のＤＳ濃度を定めるものである。溶解度は、結晶懸濁液から平衡濃度を分析するなどの標準的な方法で求められる。
溶解度は結晶性化合物を特徴付ける特性の一つである。結晶化は、過飽和シロップの濃度が溶解度を上回った場合にのみ可能である。溶解度は、所与の温度で結晶化する最小のＤＳ濃度を定めるものである。溶解度は、結晶懸濁液から平衡濃度を分析するなどの標準的な方法で求められる。
【0296】
ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏの水溶性は、純度９３％の結晶を使用し、純度１００に換算することにより求めた。平衡時のＤＳ含有量を測定し、０～２０℃の範囲で算出した（表１４）。
【0297】
【表14】
【0298】
Ｅ．結晶形状
図３に、メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶の典型的な形状を示す。結晶は容易に大きく且つ速やかに成長し、多量の結晶化熱を放出する。
図３に、メバロノラクトン一水和物（ＭＶＬ＊Ｈ２Ｏ）結晶の典型的な形状を示す。結晶は容易に大きく且つ速やかに成長し、多量の結晶化熱を放出する。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
