特開 2024-171544 ＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤、ＩＶ型コラーゲン分解抑制剤、及び皮膚外用組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024171544

(43)【公開日】2024-12-12

(54)【発明の名称】ＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤、ＩＶ型コラーゲン分解抑制剤、及び皮膚外用組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/9789 20170101AFI20241205BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20241205BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20241205BHJP

   A61K 36/232 20060101ALI20241205BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20241205BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241205BHJP

【ＦＩ】

A61K8/9789

A61Q19/00

A61Q19/08

A61K36/232

A61P17/00

A61P43/00 111

【審査請求】未請求

【請求項の数】3

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023088609

(22)【出願日】2023-05-30

(71)【出願人】

【識別番号】000113470

【氏名又は名称】ポーラ化成工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110002860

【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】丸山 玲奈

(72)【発明者】

【氏名】大島 宏

(72)【発明者】

【氏名】原田 靖子

【テーマコード（参考）】

4C083

4C088

【Ｆターム（参考）】

4C083AA111

4C083AA112

4C083CC02

4C083EE12

4C088AB41

4C088BA08

4C088MA63

4C088NA14

4C088ZA89

4C088ZC41

(57)【要約】

【課題】アシタバエキスを用いた、ＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制するための技術を提供することを課題とする。また、アシタバエキスを用いた、ＩＶ型コラーゲンの分解を抑制するための技術を提供することを課題とする。
【解決手段】アシタバエキスを含有する、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤により、ＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制するための技術が提供される。また、アシタバエキスを含有する、ＩＶ型コラーゲン分解抑制剤により、ＩＶ型コラーゲンの分解を抑制するための技術が提供される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アシタバエキスを含有する、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤。

【請求項2】

アシタバエキスを含有する、ＩＶ型コラーゲン分解抑制剤。

【請求項3】

アシタバエキスを含有する、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制用又はＩＶ型コラーゲン分解抑制用の皮膚外用組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明はマトリックスメタロプロテイナーゼ－９（Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９（以降、ＭＭＰ９と記す）遺伝子発現抑制剤に関する。

【背景技術】

【0002】

ＭＭＰは、線維芽細胞や内皮細胞、癌細胞等が産生する細胞外マトリックス分解酵素の総称であり、コラーゲン、ゼラチン、エラスチン等の基質や基底膜の主要構成成分であるラミニン５等の細胞外マトリックスを分解する。例えば、ＭＭＰに属するＭＭＰ９は、基底膜に存在するＩＶ型コラーゲンを分解する酵素である。ＭＭＰ９に対して阻害活性を有する物質は、ガン組織における血管新生やガンの転移を抑制する効果が期待され、ガン疾患の予防、治療に有用であると考えられる。さらにＭＭＰ９の阻害はガン疾患のみならず、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、皮膚のシワ・タルミ等、ＭＭＰ９をコードする遺伝子（ＭＭＰ９遺伝子）の活性化に起因する疾患や状態等の予防、治療及び改善に有用である。したがって、ＭＭＰ９阻害作用に優れた成分が望まれている。

【0003】

一方、本発明で用いられるアシタバエキスの用途としては、例えば、ヒアルロン酸産生促進剤（特許文献１）が報告されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２０２２－１６７１９７

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

しかし、アシタバエキスがＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制することは知られていない。そこで本発明は、ＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制するための技術を提供することを課題とする。また、本発明は、ＩＶ型コラーゲンの分解を抑制するための技術を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明者は上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、アシタバエキスがＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制する作用を有することを見出し、ひいてはＩＶ型コラーゲンの分解を抑制し得ることを見出したことにより、本発明を完成させた。

【0007】

すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］アシタバエキスを含有する、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤。
［２］アシタバエキスを含有する、ＩＶ型コラーゲン分解抑制剤。
［３］アシタバエキスを含有する、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制用又はＩＶ型コラーゲン分解抑制用の皮膚外用組成物。

【発明の効果】

【0008】

本発明により、ＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制する成分が提供される。また、ＩＶ型コラーゲンの分解を抑制する成分が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】アシタバエキスを添加又は非添加してインキュベートしたときの表皮角化細胞におけるＭＭＰ９遺伝子の発現量を表すグラフ。発現量は溶媒コントロールを１００としたときの相対量である。

【発明を実施するための形態】

【0010】

本発明のＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤及びＩＶ型コラーゲン分解抑制剤は、アシタバエキスを有効成分として含有する。
アシタバエキスは、セリ科シシウド属アシタバ（学名：Angelica keiskei）の抽出物である。アシタバは、房総半島、伊豆半島、伊豆半島等に自生しており、これらの地域から容易に入手され得る。アシタバの抽出原料として使用し得るアシタバの構成部位としては、例えば、葉部、茎部、花部、蕾部、果実部、果皮部、果核部、根部、又はこれらの混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部又は茎部である。

【0011】

上記抽出物は、抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物又は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味するものとする。
また、抽出物としては、通常化粧料や医薬品等の皮膚外用剤や経口摂取組成物に用いられるものであればよく、植物体から常法により抽出されたものを用いることができる。

【0012】

抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３－ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される一種又は二種以上が好適に用いられる。

【0013】

具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位又はその乾燥物１質量部に対して、溶媒を１～３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却した後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。

【0014】

アシタバエキスは、ＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制する作用を有する。すなわち、アシタバエキスは、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤の有効成分である。

【0015】

なお、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制作用は、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤を添加した細胞におけるＭＭＰ９遺伝子発現量が、添加しなかった細胞における発現量よりも小さいこと、通常９０％以下、好ましくは８０％以下、より好ましくは７０％以下となることにより確認することができる。ＭＭＰ９遺伝子の発現量は、例えば、ＭＭＰ９遺伝子の配列に特異的に結合する配列を有するＤＮＡ断片をプライマーとして用いてＰＣＲを行い、ｍＲＮＡ量を測定することにより行うことができる。また、例えば、ＭＭＰ９遺伝子によりコードされるタンパク質の存在量を、常法により定量的に測定して、ＭＭＰ９遺伝子の発現量としてもよい。

【0016】

本発明のＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤によりＭＭＰ９遺伝子の発現が抑制される細胞は、本来、ＭＭＰ９遺伝子を発現する細胞であれば特に限定されず、表皮角化細胞、真皮線維芽細胞、癌細胞等が挙げられる。

【0017】

ＭＭＰ９はＩＶ型コラーゲンを分解する酵素であることから、ＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制することによりＩＶ型コラーゲンの分解が抑制され得る。したがって、アシタバエキスは、ＩＶ型コラーゲンの分解を抑制する作用を有する。すなわち、アシタバエキスは、ＩＶ型コラーゲン分解抑制剤の有効成分である。

【0018】

ＩＶ型コラーゲンは、基底膜に存在するコラーゲンであり、皮膚の表皮と真皮をつなぎとめる役割を持つ。したがって、本発明のＩＶ型コラーゲン分解抑制剤は、基底膜におけ
るＩＶ型コラーゲンの分解を抑制するものであることが好ましい。

【0019】

なお、ＩＶ型コラーゲン分解抑制作用は、例えば、ＩＶ型コラーゲン分解抑制剤を添加した細胞におけるＩＶ型コラーゲン量が、添加しなかった細胞におけるＩＶ型コラーゲン量よりも大きいこと、通常１１０％以上、好ましくは１２０％以上、より好ましくは１３０％以上となることにより確認することができる。ＩＶ型コラーゲン量は、例えば、ＩＶ型コラーゲンの存在量を、ELISA法やウェスタンブロット法により測定することができる
。

【0020】

本発明のＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤又はＩＶ型コラーゲン分解抑制剤（以降、「本発明の剤」とも記す）の投与経路は、経皮、経口、経鼻、静脈注射等、特に限定されないが、経皮投与されることが好ましい。なお、ここで「投与」は「摂取」と置換されてもよい。
本発明の剤の投与量としては、特に限定されないが、所望の効果と安全性とを考慮して、アシタバエキスの総量として、固形物換算で０．３～３００μｇ／日を１回又は数回に分けて摂取されることが好ましい。また、単回摂取する他に、連続的に又は断続的に数週間～数か月の間摂取することが好ましい。

【0021】

本明細書は別の態様として、アシタバエキスを含有する、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制用又はＩＶ型コラーゲン分解抑制用の皮膚外用組成物をも提供する。
本発明の皮膚外用組成物の態様としては、皮膚に外用で適用されるものであれば特に限定されないが、化粧料（医薬部外品を含む）、医薬品等が好ましく挙げられ、化粧料がより好ましい。化粧料としては、例えば、洗顔料、クレンジング剤、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ジェル、サンケア品等が挙げられる。
本発明の皮膚外用組成物を塗布する部位は特に限定されないが、通常は顔面、四肢、首、デコルテである。

【0022】

皮膚外用組成物の剤型としては、例えば、ローション剤型、乳液やクリーム等の乳化剤型、オイル剤型、ジェル剤型、パック、洗浄料等が挙げられ、特に限定されない。
また、皮膚外用組成物の態様としては、リーブオンタイプ、リーブオフタイプのいずれでも構わない。

【0023】

本発明の皮膚外用組成物におけるアシタバエキスの含有量は、組成物全体に対して、固形物換算で０．００００１～０．０９質量％が好ましく、０．００００５～０．０３質量％がより好ましく、０．０００１～０．００３質量％がさらに好ましい。
含有量を上記範囲とすることで所望の効果を得やすく、また処方設計の自由度を確保できる。
なお、上記含有量は、上述の投与経路や含有させる組成物の態様に合わせて適宜調整することができる。

【0024】

本発明の皮膚外用組成物の製造に際しては、化粧料、医薬部外品、医薬品などの製剤化で通常使用される成分を任意に配合することができる。
かかる任意成分としては例えば、スクワラン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックスなどの炭化水素類、ホホバ油、カルナウバワックス、オレイン酸オクチルドデシルなどのエステル類、オリーブ油、牛脂、椰子油などのトリグリセライド類、ステアリン酸、オレイン酸、レチノイン酸などの脂肪酸、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノール等の高級アルコール、スルホコハク酸エステルやポリオキシエチレンアルキル硫酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤類、アルキルベタイン塩等の両性界面活性剤類、ジアルキルアンモニウム塩等のカチオン界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、これらのポリオキシエチレン付加物、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤類、ポリ
エチレングリコール、グリセリン、１，３－ブチレングリコール等の多価アルコール類、増粘・ゲル化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、色剤、防腐剤、粉体等を任意に配合することができる。

【実施例0025】

以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。

【0026】

＜参考例１＞
以下の手順で、アシタバエキスを調製した。
乾燥したアシタバ（セリ科シシウド属アシタバ）の葉及び根を粉砕し、１０倍量の３０％１，３－ブチレングリコール水溶液を加えて、還流して抽出した液を、凍結乾燥により粉末化した。その後、粉末を３０％１，３－ブチレングリコール水溶液に溶解させた。

【0027】

＜試験例１＞表皮角化細胞におけるアシタバエキスのＭＭＰ９遺伝子発現量への影響の検討
－１５０℃で保管していた正常ヒト表皮角化細胞（NHEK：Normal Human Epidermal Keratinocytes、新生児、男性、Caucasian）を起眠し、３７℃・５％ＣＯ_２環境下で５日間
培養した。ＮＨＥＫを回収し、８．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるようにＮＨＥＫ用培地HUMedia-KG2（クラボウ社）を用いて希釈した。２４ウェルプレートにＮＨＥＫ用培
地を５００μＬ／ウェルずつ添加し、ＮＨＥＫを５００μＬ／ウェルずつ播種し（４．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２環境下で一晩培養した。培養後、培地を除去し、アシタバエキスの固形分濃度が０．０５質量％になるように１，３－ブチレングリコール水溶液で調整したアシタバエキスを含有するＮＨＥＫ用培地、又はアシタバエキスに代えて１，３－ブチレングリコール水溶液を含有するＮＨＥＫ用培地に交換して、さらに４８時間培養した。培養後に細胞をＰＢＳ（－）で洗浄して回収し、QIAshredder、RNeasy Mini Kit（QIAGEN社製）を用いてQIAcube（QIAGEN社製）にてＲＮＡを抽出し
た。抽出したＲＮＡをSuperScript VILO cDNA Synthesis Kit（Invitrogen社製）を用い
てcDNA化し、SYBR（QIAGEN社製）を用い、QuantStudio 7（Applied Biosystems社製）に
てRT-qPCRを行い、ＭＭＰ９遺伝子の各発現量を解析した。内在性コントロールとしては
、β-Actin遺伝子を用いた。
アシタバエキスは、参考例１の方法で調製したものを用いた。

【0028】

図１に、アシタバエキスを添加した表皮角化細胞におけるＭＭＰ９遺伝子のｍＲＮＡ発現量を、溶媒対照（コントロール）の表皮角化細胞におけるＭＭＰ９遺伝子のｍＲＮＡ発現量を１００とした場合の相対値で示した。
アシタバエキスを添加した表皮角化細胞においては、ＭＭＰ９遺伝子のｍＲＮＡ発現量がコントロールに対して有意に減少することが認められた。この結果から、アシタバエキスは、ＭＭＰ９遺伝子発現抑制作用を有することが示された。また、ＭＭＰ９はＩＶ型コラーゲンを分解する酵素であるから、アシタバエキスは、ＭＭＰ９遺伝子の発現を抑制することによりＩＶ型コラーゲンの分解が抑制されることが推測される。

【産業上の利用可能性】

【0029】

本発明のＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤は、優れたＭＭＰ９遺伝子発現抑制作用を有するため、化粧料等の一成分として、好適に利用し得る。また、本発明のＭＭＰ９遺伝子発現抑制剤は、ＩＶ型コラーゲン分解抑制剤としても利用し得る。

【図1】