特開 2024-174853 サイトカインを含む口内崩壊錠を製造する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024174853

(43)【公開日】2024-12-17

(54)【発明の名称】サイトカインを含む口内崩壊錠を製造する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/21 20060101AFI20241210BHJP

   A61K 9/16 20060101ALI20241210BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20241210BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20241210BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241210BHJP

【ＦＩ】

A61K38/21

A61K9/16

A61K9/20

A61K47/12

A61K47/26

A61P37/04

A61P43/00 117

【審査請求】有

【請求項の数】10

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024090860

(22)【出願日】2024-06-04

(31)【優先権主張番号】63/506342

(32)【優先日】2023-06-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】523161424

【氏名又は名称】美商艾諾斯生技股▲ふん▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＡＩＮＯＳ ＩＮＣ． ＴＡＩＷＡＮ ＢＲＡＮＣＨ （ＵＳＡ）

【住所又は居所原語表記】１４Ｆ．，Ｎｏ．６１，Ｓｅｃ． ４，Ｎｅｗ Ｔａｉｐｅｉ Ｂｌｖｄ．，Ｘｉｎｚｈｕａｎｇ Ｄｉｓｔ．，Ｎｅｗ Ｔａｉｐｅｉ Ｃｉｔｙ ２４２０３２，Ｔａｉｗａｎ，

(74)【代理人】

【識別番号】100107766

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠重

(74)【代理人】

【識別番号】100229448

【弁理士】

【氏名又は名称】中槇 利明

(72)【発明者】

【氏名】尤 宗富

(72)【発明者】

【氏名】田 宜育

(72)【発明者】

【氏名】蔡 群賢

(72)【発明者】

【氏名】李 庭鵑

(72)【発明者】

【氏名】蔡 群榮

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

【Ｆターム（参考）】

4C076AA31

4C076AA36

4C076BB01

4C076CC50

4C076DD22Z

4C076DD23Z

4C076DD41C

4C076DD41Z

4C076DD43Q

4C076DD49

4C076DD67

4C076EE41

4C076FF04

4C076FF09

4C076FF36

4C076FF61

4C076FF63

4C076FF68

4C076GG13

4C084AA03

4C084BA44

4C084DA01

4C084DA12

4C084DA21

4C084DA22

4C084DA25

4C084MA05

4C084MA35

4C084MA52

4C084NA03

4C084NA10

4C084ZB021

4C084ZB022

4C084ZB091

4C084ZB092

(57)【要約】

【課題】 有効活性成分としてサイトカインを含む口内崩壊錠（ＯＤＴ）の製造方法を提供すること。
【解決手段】 本願は、有効活性成分としてサイトカインを含む口内崩壊錠（ＯＤＴ）を製造する方法を提供し、当該方法は：賦形剤を酸性化することと、酸性化した賦形剤の第１の造粒ステップを行って酸性粉末を得ることと、酸性粉末とサイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、サイトカインを含有する顆粒を得ることと、を含む。本願はまた、この方法によって製造されたＯＤＴを提供する。
【選択図】 図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

有効活性成分としてサイトカインを含む口内崩壊錠を製造する方法であって、
賦形剤を酸性化することと、
前記酸性化した賦形剤の第１の造粒ステップを行って酸性粉末を得ることと、
前記酸性粉末と前記サイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、前記サイトカインを含有する顆粒を得ることと、
を含む方法。

【請求項2】

前記サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子を含む群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記賦形剤は、糖類、糖アルコール、セルロース、多糖類、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、無水リン酸二カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、及びシリコン酸化物を含む群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記賦形剤は、
酸及び水を含む酸性溶液を調製するステップ、並びに
前記賦形剤と前記酸性溶液とを混合するステップ、
によって酸性化され、
前記賦形剤、前記酸及び水を含む得られた溶液は、３から１０のｐＨを有する、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記サイトカインは、溶媒及び添加剤を含む溶液に含有され、前記サイトカイン、前記溶媒及び添加剤を含む前記溶液は、３から１０のｐＨを有する、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

有効活性成分としてサイトカインを含む口内崩壊錠を製造する方法であって、
第１の賦形剤を酸性化することと、
前記酸性化した第１の賦形剤の第１の造粒ステップを行って第１の酸性粉末を得ることと、
前記第１の酸性粉末をふるい分け及び造粒して第２の酸性粉末を得ることと、
前記第２の酸性粉末と前記サイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、第１の顆粒を得ることと、
を含む方法。

【請求項7】

前記第１の顆粒を圧縮して錠剤を形成すること、又は
前記第１の顆粒と前記第１の賦形剤及び／又は添加剤とを混合し、圧縮して錠剤を形成すること、
をさらに含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記第１の賦形剤は、
酸及び水を含む酸性溶液を調製するステップ、並びに
前記賦形剤と前記酸性溶液とを混合するステップ、
によって酸性化され、
前記賦形剤、前記酸及び水を含む得られた溶液は、３から１０のｐＨを有する、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子を含む群から選択され、第１、第２、又は第３の賦形剤が、糖類、糖アルコール、セルロース、多糖類、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、無水リン酸二カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、及びシリコン酸化物を含む群から選択される、請求項６に記載の方法。

【請求項10】

有効活性成分としてサイトカインを含む口内崩壊錠（ＯＤＴ）であって、請求項１又は請求項６に記載の方法により製造されることによって特徴づけられる、口内崩壊錠（ＯＤＴ）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は、口内崩壊錠（ＯＤＴ）を製造する方法に関し、特に、サイトカインを含むＯＤＴを製造する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

サイトカインは、細胞シグナル伝達において重要な低分子量タンパク質（約６から７０ｋＤａ）である。そのサイズのため、サイトカインは細胞の脂質二重層を通過して細胞質に入ることができず、従って、典型的には、標的細胞表面上の特異的なサイトカイン受容体と相互作用することによってその機能を発揮する。サイトカインは、免疫調節剤として自己分泌、パラ分泌、及び内分泌シグナル伝達に関与することが示されている。

【0003】

サイトカインには、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子が含まれる。サイトカインは、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、及び肥満細胞のような免疫細胞だけでなく、内皮細胞、線維芽細胞、及び様々なストロマ細胞を含む広範囲の細胞によって産生される。所与のサイトカインが２つ以上のタイプの細胞によって産生されることもある。それらは、細胞表面受容体を介して作用し、免疫系において特に重要であり；サイトカインは、液性免疫応答と細胞性免疫応答とのバランスを調節し、さらに、特定の細胞集団の成熟、増殖、及び応答性を制御する。一部のサイトカインは、他のサイトカインの作用を複雑な方法で増強又は阻害する。サイトカインは、健康及び疾患において重要であり、特に、感染、炎症、外傷、敗血症、がん、及び生殖に対する宿主免疫応答において重要である。

【0004】

インターフェロン（ＩＦＮ）は、ウイルス、細菌、寄生虫、又は腫瘍細胞等の病原体の存在に応答して宿主細胞によって作られるタンパク質である。ＩＦＮは、細胞間の情報交換を可能にして、病原体又は腫瘍を根絶する免疫系の保護防御をトリガーする。同定されている９つの異なるヒトインターフェロンファミリーのうち、インターフェロン－アルファ（ＩＦＮ－α）が最も広く研究されている。ＵＳ ＦＤＡは、いくつかのがんだけでなく、Ｂ型及びＣ型肝炎を治療するための、注射により与えられる大量投与のＩＦＮαの使用を承認している。例えば、１００万ＩＵを超える高用量のインターフェロンは、症状を全身的に治療するために、従来は筋肉内注射によって投与される。

【0005】

近年、インターフェロンの経口投与が、高用量注射に伴う副作用を有することなく、末梢血内の数十の免疫系遺伝子を活性化し、さらに、ウイルス性疾患及び自己免疫性疾患に対して効果的であると、公表された研究において示されている。しかし、経口投与されたインターフェロンのタンパク質安定性は、依然として課題である。

【0006】

経口投与は、唾液又は少量の水で急速に崩壊することができるＯＤＴ等を介するものであり得る。ＯＤＴは、患者にとって便利で容易な投与であるため、服薬遵守をＯＤＴの適用によって高めることができる。しかし、ＯＤＴは、新しく開発された剤形であり、錠剤の性質等のいくつかの技術的問題が依然として存在する。

【0007】

そのようなものとして、良好なタンパク質安定性を有するインターフェロン等のサイトカインを含有するＯＤＴが、依然として必要である。

【発明の概要】

【0008】

本願は、有効活性成分としてサイトカインを含むＯＤＴを製造する方法を提供し、当該方法は：賦形剤を酸性化することと、酸性化した賦形剤の第１の造粒ステップを行って酸性粉末を得ることと、酸性粉末とサイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、サイトカインを含有する顆粒を得ることと、を含む。

【0009】

本願はまた、有効活性成分としてサイトカインを含むＯＤＴを製造する方法を提供し、当該方法は：第１の賦形剤を酸性化することと、酸性化した第１の賦形剤の第１の造粒ステップを行って第１の酸性粉末を得ることと、第１の酸性粉末をふるい分け及び造粒して第２の酸性粉末を得ることと、第２の酸性粉末とサイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、第１の顆粒を得ることと、を含む。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】本願の一実施形態による、有効活性成分としてサイトカインを含むＯＤＴを製造する方法を示した図である。

【図2】ＩＦＮ－αに対する様々な因子の保護作用を示した図である。

【図3】本願の方法の賦形剤酸性化ステップの効果に関する試験結果を示した図であり、ＩＦＮ－α含有量を、ＯＤ４５０でＥＬＩＳＡを使用して測定し、各グループにおいて５つのサンプルを、酸性化（Ｓ１～Ｓ５）及び酸性化なし（Ｓ１～Ｓ５）と標識した。

【図4】第１の酸性粉末に対する処理ステップの効果に関する試験結果を示した図である。

【図5】第２の造粒ステップにおいて使用した装置の効果に関する試験結果を示した図である。

【図6】ＩＦＮ－α効力に対する錠剤の厚さの効果に関する試験結果を示した図である。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本願は、有効活性成分としてサイトカインを含むＯＤＴを製造する方法を提供する。

【0012】

サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子を含む群から選択される。サイトカインは、天然サイトカイン、組換えサイトカイン、又はそれらの混合物であり得る。ＯＤＴに含有されるサイトカインの投与量は特に限定されず、状況に応じて決めることができる。

【0013】

一部の実施形態において、サイトカインは、インターフェロン、例えば、Ｉ型ＩＮＦ、ＩＩ型ＩＮＦ、及びＩＩＩ型ＩＮＦ等から選択される。一実施形態において、サイトカインは、インターフェロン－アルファ（ＩＮＦ－α）、より好ましくは、組換えＩＮＦ－αである。

【0014】

一実施形態において、ＯＤＴは、１～１００，０００国際単位（ＩＵ）のＩＮＦ－αの投与量を含有し得る。一実施形態において、ＯＤＴは、１，０００マイクログラム以下のＩＮＦ－αの投与量を含有し得る。投与量は、例えば、７５，０００ＩＵ未満、５０，０００ＩＵ未満、２５，０００ＩＵ未満、１０，０００ＩＵ未満、７，５００ＩＵ未満、５，０００ＩＵ未満、２，５００ＩＵ未満、１，０００ＩＵ未満、１０ＩＵを超える、１００ＩＵを超える、２５０ＩＵを超える、５００ＩＵを超える、７５０ＩＵを超える、９００ＩＵを超える、又は上記の数値のうちいずれか２つの数値間の値等であり得る。

【0015】

本願において、ＯＤＴは、少なくとも１つの賦形剤を含む。賦形剤は薬学的に許容される成分であり、既知の賦形剤を、それがＯＤＴにおいて賦形剤として機能することができ且つサイトカインに悪影響を及ぼさない限り、使用することができる。実施形態において、賦形剤は、例えば、糖類、糖アルコール、セルロース、多糖類、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、無水リン酸二カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、及びシリコン酸化物等を含み得る。糖類の例としては、ラクトース、マルトース、デキストリン、トレハロース、及びスクロース等が挙げられる。糖アルコールの例としては、マンニトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、ソルビトール、及びキシリトール等が挙げられる。セルロースの例としては、結晶セルロース、ケイ化結晶セルロース、及び粉末セルロース等が挙げられる。多糖類の例としては、コーンスターチ、馬鈴薯澱粉、アルファ化澱粉等の澱粉が挙げられる。一部の実施形態において、賦形剤は糖である。好ましい実施形態において、賦形剤はマルトースである。

【0016】

有効活性成分としてサイトカインを含むＯＤＴを製造する方法は：賦形剤を酸性化するステップと、酸性化した賦形剤の第１の造粒ステップを行って酸性粉末を得るステップと、酸性粉末とサイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、サイトカインを含有する顆粒を得るステップと、を含む。

【0017】

本願において、賦形剤は、有効活性成分、すなわちサイトカインと混合する前に酸性化される。酸性化された賦形剤は、ＯＤＴの製造中のサイトカインのタンパク質分解を防ぎ、最終生成物におけるサイトカインの安定性及び含有量を維持することができる。

【0018】

一部の実施形態において、酸性化された賦形剤は：酸と水とを混合して酸性溶液を得るステップ、及び賦形剤と酸性溶液とを混合するステップによって調製される。水は、精製水、滅菌水、及び脱イオン水等であり得る。

【0019】

酸は、賦形剤溶液のｐＨを調整するために添加される。一部の実施形態において、酸性化は、賦形剤の溶液が、３から１０のｐＨ、例えば、３．５から８のｐＨ、４から７のｐＨ、又は５から６のｐＨ等を有するようにする。無機酸及び／又は有機酸を、それがＯＤＴの成分又は特性を破壊又は変化させない限り、使用することができる。酸の例としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、炭酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、フマル酸、及び乳酸等を挙げることができるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、酸はクエン酸である。

【0020】

本願における造粒ステップについては、特定の制限はなく、従来の造粒方法を適用することができる。造粒方法の例としては、高速せん断混合造粒、流動層造粒、遠心造粒、ローラー造粒、及びスプレー造粒等が挙げられる。ＯＤＴに含有される有効活性成分の特性を考慮すると、湿式造粒方法が好ましい。一部の実施形態では、高速せん断混合造粒が適用される。一部の実施形態では、流動層造粒が適用される。

【0021】

賦形剤酸性化ステップ及び第１の造粒ステップの後で、得られた酸性粉末はさらに処理される。以下、第１の造粒ステップから得られた酸性粉末は「第１の酸性粉末」と呼ばれることがある。第１の酸性粉末を、例えば、１００メッシュスクリーンを使用することによってふるい分けすることができ、スクリーンを通過する粉末（以下、「第１の酸性粉末のうちふるい分けされた部分」又は「アンダーサイズ物質」と呼ばれる）、及びスクリーン上に残る粉末（以下、「第１の酸性粉末のうち残った部分」と呼ぶ）が分離される。第１の酸性粉末のうちふるい分けされた部分は、酸性化されていない賦形剤とさらに混合され、次に、造粒されて第２の酸性粉末が得られる。

【0022】

その後、酸性粉末をサイトカインと混合することができる。

【0023】

サイトカインは、溶液に含有させることができる。溶液は、溶媒及び酸をさらに含んでもよい。一実施形態において、サイトカイン、溶媒、及び酸を含む溶液は、３から１０のｐＨ、例えば、３．５から８のｐＨ、４から７のｐＨ、又は５から６のｐＨ等を有する。溶媒は、サイトカインに悪影響を及ぼさない限り、任意の薬学的に許容される溶媒であり得る。一実施形態において、溶媒は、精製水、脱イオン水、及び／又は滅菌水等の水であってもよい。酸は、サイトカインに悪影響を及ぼさない限り、無機酸及び／又は有機酸であり得る。酸の例としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、炭酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、フマル酸、及び乳酸等を挙げることができるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、酸は塩酸（ＨＣｌ）である。一部の実施形態において、溶液は、酸性化を受けた賦形剤と同じであり得るか又は異なり得る賦形剤をさらに含む。一部の実施形態において、溶液は、緩衝剤、崩壊剤、結合剤、着色剤、潤滑剤、流動化剤、界面活性剤、着香剤、酸化防止剤、防腐剤、又はそれらの任意の組み合わせを含む群から選択された添加剤をさらに含み得る。

【0024】

一部の実施形態では、第１の酸性粉末がサイトカインと混合されて、第２の造粒ステップが進められる。一部の実施形態では、第２の酸性粉末がサイトカインと混合されて、第２の造粒ステップが進められる。

【0025】

一部の好ましい実施形態では、第２の酸性粉末がサイトカインと混合され、第２の造粒ステップを行って第１の顆粒が得られ、次に、第１の顆粒は、第１の酸性粉末のうち残った部分とさらに混合され、第３の造粒ステップを行って第２の顆粒が得られるか、又は圧縮ステップを行って錠剤が得られる。

【0026】

一部の実施形態において、１つ以上のさらなる賦形剤を、当該方法の任意の適したステップにおいて添加することができる。一部の実施形態では、緩衝剤、崩壊剤、結合剤、着色剤、潤滑剤、流動化剤、界面活性剤、着香剤、酸化防止剤、防腐剤、充填剤、又はそれらの任意の組み合わせ等の添加剤を、当該方法の任意の適したステップにおいて添加することができる。そのような添加剤は特に限定されず、関連する技術分野の一般知識に基づき適用又は添加することができる。一実施形態において、添加剤はステアリン酸マグネシウムである。

【0027】

上記に従って、本願は、ある実施形態において、サイトカインを含むＯＤＴを製造する方法を提供し、当該方法は：第１の賦形剤を酸性化するステップと、酸性化した第１の賦形剤の第１の造粒ステップを行って第１の酸性粉末を得るステップと、第１の酸性粉末をふるい分け及び造粒して第２の酸性粉末を得るステップと、第２の酸性粉末とサイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、第１の顆粒を得るステップと、を含む。

【0028】

本願はまた、ある実施形態において、サイトカインを含むＯＤＴを製造する方法を提供し、当該方法は：第１の賦形剤を酸性化するステップと、酸性化した第１の賦形剤の第１の造粒ステップを行って第１の酸性粉末を得るステップと、第１の酸性粉末をふるい分け及び造粒して第２の酸性粉末を得るステップと、第２の酸性粉末とサイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、第１の顆粒を得るステップと、第１の顆粒を圧縮して錠剤を形成するステップと、を含む。

【0029】

さらに、ある実施形態において、本願はまた、有効活性成分としてサイトカインを含むＯＤＴを製造する方法を提供し、当該方法は：第１の賦形剤を酸性化することと、酸性化した第１の賦形剤の第１の造粒ステップを行って第１の酸性粉末を得ることと、第１の酸性粉末をふるい分け及び造粒して第２の酸性粉末を得ることと、第２の酸性粉末とサイトカインとを混合することによって第２の造粒ステップを行って、第１の顆粒を得ることと、第１の顆粒と第１の賦形剤及び／又は添加剤とを混合し、圧縮して錠剤を形成することと、を含む。特に、第１の酸性粉末のうち残った部分を第１の顆粒と混合することができる。

【0030】

本願において、当該方法は、乾燥ステップ、ふるい分けステップ、及び圧縮ステップをさらに含んでもよい。乾燥ステップは、第１の造粒ステップ、第２の造粒ステップ、及び／又は第３の造粒ステップの後に行うことができる。乾燥ステップの後、任意的に、ふるい分けステップを行って、得られる顆粒の均一性を改善させてもよい。ふるい分けステップにおいて使用されるスクリーンのメッシュサイズは、必要に応じて決めることができる。全ての造粒ステップが完了した後で、圧縮ステップを行い、サイトカインを含有する顆粒を圧縮して錠剤を形成することができる。

【0031】

別の態様において、本願はまた、本願において記載される方法によって製造されたＯＤＴを提供する。ＯＤＴは、含有されるサイトカインの良好且つ十分な効力及び安定性を維持することができる。

【0032】

本願は、工業規模の製造に適した、最適な処理ステップを有するサイトカイン含有ＯＤＴの製造方法を提供する。本願の方法は、良好なタンパク質安定性及びサイトカイン効力を有するサイトカインを含むＯＤＴの製造に適用することができる。

【実施例0033】

図１を参照すると、ＩＮＦ－αを含むＯＤＴを製造する方法のステップを例示した。本実施例では、酸性化されることになる賦形剤としてマルトースを使用した。

【0034】

調整された活性バルク溶液（ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｕｌｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）の調製：
ｐＨ調整用のＨＣｌ、酢酸ナトリウム三水和物、及び塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を精製水に添加した。目視観察により透明な溶液が得られるまで少なくとも１０分間撹拌を続けた。ヒト血清アルブミンを添加し、１０分間撹拌した。この溶液にＩＮＦ－α溶液をゆっくり添加し、１０分間撹拌を続けた。そのようなものとして、調整された活性バルク溶液を得た。

【0035】

酸性粉末の調製：
マルトースを粉砕し、Ｎｏ．４０メッシュに通した。マルトース粉末をＣｏｍｉｌ（スクリーン開口０．０３２インチ、０３２Ｒ）でふるい分けした。

【0036】

クエン酸を撹拌しながら精製水にゆっくり添加した。１０分間撹拌し続けて、透明な外観の酸性溶液を得た。

【0037】

酸性溶液とマルトース粉末とを混合し、高速混合造粒機に供給して酸性粉末を製造した。流動層造粒乾燥機／コーターを使用することによって酸性粉末を乾燥させた。任意的に、乾燥ステップの後、且つ処理ステップの前に、酸性粉末を３０メッシュスクリーン（バイブロシーブセパレーター）に通した。そのようなものとして、第１の酸性粉末を得た。

【0038】

酸性粉末の処理：
第１の酸性粉末を、１００メッシュスクリーン（バイブロシーブセパレーター）を使用することによってふるい分けして、アンダーサイズ物質（スクリーンを通過する酸性粉末）と、第１の酸性粉末のうち残った部分（スクリーンを通過しない酸性粉末）とを分離した。

【0039】

アンダーサイズ物質を、アンダーサイズ物質９０～５０ｗｔ％に対して１０～５０ｗｔ％の比のマルトース粉末と混合することができる。この実施例１では、アンダーサイズ物質は２０％である。この混合物を高速混合造粒機に供給して、第２の酸性粉末を得た。

【0040】

ＩＮＦ－αを含有する顆粒の調製：
第２の酸性粉末を、調整された活性バルク溶液と混合した。この混合物を高速混合造粒機に供給し、バインダイン（ｂｉｎｄｅｒ－ｉｎ）及び造粒ステップを行って、ＩＮＦ－αを含有する第１の顆粒を得た。その後、第１の顆粒を、流動層造粒乾燥機／コーターを使用することによって３０°Ｃで１５分間乾燥させ、６０メッシュスクリーン（バイブロシーブセパレーター）によってふるい分けした。

【0041】

第１の顆粒を、ドラムミキサーにおいて１０分間、第１の酸性粉末のうち残った部分と混合した。さらなる賦形剤として、ステアリン酸マグネシウムを添加し、ドラムミキサーにおいて５分間混合した。

【0042】

高速混合造粒機を適用して、ＩＮＦ－αを含有する第２の顆粒を製造した。

【0043】

代替の実施形態では、ステアリン酸マグネシウムを添加した後で、混合物に錠剤圧縮を受けさせることができた。

【0044】

以下の実施例では、当該方法に対する最適なステップ／パラメータ／条件を見つけ出すために、当該方法の様々なパラメータを変更し且つ評価した。

【実施例0045】

ＩＮＦ－αに対する保護作用に関する様々な因子の評価：
活性バルク溶液（ａｃｔｉｖｅｌｙ ｂｕｌｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を調整するための最適な溶液を見つけるための実験であり、これは、ＡＰＩの効力にとって非常に重要である。最適な溶液は、製造方法全体を通してＡＰＩの効力を保つことができた。表１は、２つの因子の実験計画を示している。

【0046】

【表1】

図２は、ＩＮＦ－αに対する様々な因子の保護作用について、正の値は保護作用を有し、負の値はＩＮＦ－αに対して破壊作用を有し、２つの因子間には相互作用があり、正の値は相互作用の保護作用を強め、負の値は保護作用を弱めることを示している。

【0047】

結果
全てのサイトカインは、溶解時に界面活性剤／安定剤と共に緩衝系に留まる必要があるが、ストレス剤（ｓｔｒｅｓｓｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）と共に留まる必要はない。ほとんどの生物学的医薬品は、血液製剤、血清製剤、ワクチン、細胞治療製剤、遺伝子治療製剤、バイオテクノロジー製剤、ヒト又は動物抽出製剤、アレルゲン製剤、組織工学製剤である。上記の生物学的医薬品は全て無菌製剤である。しかし、本願の方法によって製造されたサイトカイン含有ＯＤＴは非無菌製剤である。ＯＤＴにおける含有されたＩＮＦ－αの効力及び機能をどのようにして保護し且つ維持するかが第１の目的であった。本発明者等は、より適した製造プロセスを設定しただけでなく、ＡＰＩに対する最適なパラメータも見出した。本発明者等の研究によると、図２を参照すると、ＨＳ（ヒト血清アルブミン）、ＮａＣｌ、ｐＨ調整、ＷＦＩ（注射用水）、及びＥＤＴＡが保護作用を有している。対照的に、ＩＦＮ濃度が高いほど保護作用は低下した。ＩＦＮ濃度が高いほどＨＳ保護作用は低下すると説明することができる。加えて、塩及びＨＳは互いに拮抗しており、両者の濃度が高くなると保護作用は弱くなり、他の実験因子の相互作用は互いに強くなる。この知見と２つの製造方法とを組み合わせれば、生物学的固体剤形は有益な効果を有することになる。