特開 2024-176941 天然型クロロフィルを含む抽出液の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024176941

(43)【公開日】2024-12-19

(54)【発明の名称】天然型クロロフィルを含む抽出液の製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/22 20060101AFI20241212BHJP

   C07C 229/12 20060101ALI20241212BHJP

   C07C 309/14 20060101ALI20241212BHJP

   C09B 61/00 20060101ALI20241212BHJP

   B01D 11/02 20060101ALI20241212BHJP

【ＦＩ】

C07D487/22

C07C229/12

C07C309/14

C09B61/00 B

B01D11/02 Z

【審査請求】未請求

【請求項の数】7

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023095837

(22)【出願日】2023-06-09

(71)【出願人】

【識別番号】397022911

【氏名又は名称】学校法人甲南学園

(71)【出願人】

【識別番号】000206473

【氏名又は名称】大倉工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100124431

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 順也

(74)【代理人】

【識別番号】100174160

【弁理士】

【氏名又は名称】水谷 馨也

(74)【代理人】

【識別番号】100175651

【弁理士】

【氏名又は名称】迫田 恭子

(72)【発明者】

【氏名】甲元 一也

(72)【発明者】

【氏名】▲高▼石 佳樹

【テーマコード（参考）】

4C050

4D056

4H006

【Ｆターム（参考）】

4C050PA07

4D056AB14

4D056AB20

4D056AC11

4D056BA03

4D056CA01

4D056CA39

4H006AA03

4H006AB80

4H006BS70

4H006BU50

(57)【要約】

【課題】本発明の課題は、天然型クロロフィルを含む抽出液を簡便な操作で製造する方法を提供することである。
【解決手段】一般式（１）で示される化合物を含む水溶液を抽出溶媒として使用し、クロロフィルを含む植物体又は藻類を抽出処理する工程を含む、クロロフィルを含む抽出液の製造方法。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

一般式（１）で示される化合物を含む水溶液を抽出溶媒として使用し、クロロフィルを含む植物体又は藻類を抽出処理する工程を含む、クロロフィルを含む抽出液の製造方法。

【化1】

［一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃は、それぞれ同一又は異なるアルキル基を示し、且つＲ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数が３～１５であり、Ｒ₄は、炭素数１～５のアルキレン基であり、Ｑ^-は、基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である。］

【請求項2】

前記一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が、炭素数４又は５のアルキル基であり、且つＲ₄が炭素数１～３のアルキレン基である、請求項１に記載の製造方法。

【請求項3】

前記水溶液中の一般式（１）で示される化合物の濃度が０.３～１０.０Ｍである、請求項１又は２に記載の製造方法。

【請求項4】

一般式（１）で示される化合物を含む水溶液を抽出溶媒として使用し、クロロフィルを含む植物部位又は藻類を抽出処理することにより得られる、クロロフィルを含む抽出液。

【化1】

［一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃は、それぞれ同一又は異なるアルキル基を示し、且つＲ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数が３～１５であり、Ｒ₄は、炭素数１～５のアルキレン基であり、Ｑ^-は、基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である。］

【請求項5】

一般式（１）で示される化合物を含む水溶液からなる、植物部位又は藻類からクロロフィルを抽出するための抽出溶媒。

【化1】

［一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃は、それぞれ同一又は異なるアルキル基を示し、且つＲ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数が３～１５であり、Ｒ₄は、炭素数１～５のアルキレン基であり、Ｑ^-は、基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である。］

【請求項6】

固形状のクロロフィルの製造方法であって、
請求項１に記載のクロロフィルを含む抽出液を水で希釈することによりクロロフィルの沈殿を生じさせる工程、及び
前記沈殿を回収する工程を含む、前記製造方法。

【請求項7】

抽出液を水で希釈することにより、前記抽出液に含まれる一般式（１）で示される化合物の濃度を１.３Ｍ以下にする、請求項６に記載の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、天然型クロロフィルを含む抽出液を簡便な操作で製造する方法、及び固形状の天然型クロロフィルを簡便な操作で製造する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

クロロフィルは、植物の葉や藻類等に含まれる緑色の色素であり、葉緑素とも称されている。クロロフィルには、アンチエイジング、コレステロール値の低下、抗アレルギー作用、新陳代謝促進、ダイエット効果、肌荒れ改善、脱臭作用、腸内環境改善、体内の有害ミネラル排出、造血促進、がん予防等の効果が知られており、食品、化粧品、医薬品等の素材として注目されている。

【0003】

クロロフィルは、人工型と天然型に大別される。人工型クロロフィルは、中心金属を銅や鉄に置き換えてアルカリや酸等を用いて抽出及び精製するため、製造は容易であるが、抽出及び精製の過程で本来あるべき側鎖の切断等が生じており、クロロフィルが本来有する機能が減弱又は喪失している。一方、天然型クロロフィルは、自然界に存在する構造を維持しているため、人工型クロロフィルに比べて機能性の点で優れているが、抽出及び精製に高度な技術を要するため、工業的な生産が困難であり、流通量が少ない。

【0004】

そこで、従来、天然型クロロフィルを効率的に抽出する技術について、種々検討されている。例えば、特許文献１では、クロレラに８０～１００％エタノールを処理し、クロロフィルａを抽出した後に、得られた抽出液にジオキサンを添加し、クロロフィルａの沈殿を誘導することにより、クロロフィルａを効率的に製造できることが記載されている。しかしながら、特許文献１の手法では、高濃度のエタノールを用い、しかもクロロフィルの回収にはジオキサンの使用が必要であり、環境に配慮した技術とはいえない点で欠点がある。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特表２０１０―５０９２０７号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、天然型クロロフィルを含む抽出液を簡便な操作で製造する方法を提供することを課題とする。また、本発明は、固形状の天然型クロロフィルを簡便な操作で製造する方法を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討を行ったところ、特定の構造の化合物を含む水溶液を抽出溶媒として使用し、クロロフィルを含む植物体又は藻類を抽出処理することにより、天然型クロロフィルを効率的に抽出できることを見出した。更に、本発明者は、前記手法で得られた抽出液を水で希釈することにより天然型クロロフィルが沈殿し、固形状の天然型クロロフィルとして簡便に回収できることを見出した。本発明は、これらの知見に基づいて、更に検討を重ねることにより完成したものである。

【0008】

即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１． 一般式（１）で示される化合物を含む水溶液を抽出溶媒として使用し、クロロフィルを含む植物体又は藻類を抽出処理する工程を含む、クロロフィルを含む抽出液の製造方法。

【化1】

［一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃は、それぞれ同一又は異なるアルキル基を示し、且つＲ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数が３～１５であり、Ｒ₄は、炭素数１～５のアルキレン基であり、Ｑ^-は、基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である。］
項２． 前記一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が、炭素数４又は５のアルキル基であり、且つＲ₄が炭素数１～３のアルキレン基である、項１に記載の製造方法。
項３． 前記水溶液中の一般式（１）で示される化合物の濃度が０.３～１０.０Ｍである、項１又は２に記載の製造方法。
項４． 一般式（１）で示される化合物を含む水溶液を抽出溶媒として使用し、クロロフィルを含む植物部位又は藻類を抽出処理することにより得られる、クロロフィルを含む抽出液。

【化1】

［一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃は、それぞれ同一又は異なるアルキル基を示し、且つＲ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数が３～１５であり、Ｒ₄は、炭素数１～５のアルキレン基であり、Ｑ^-は、基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である。］
項５． 一般式（１）で示されるカルボキシベタインを含む水溶液からなる、植物部位又は藻類からクロロフィルを抽出するための抽出溶媒。

【化1】

［一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃は、それぞれ同一又は異なるアルキル基を示し、且つＲ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数が３～１５であり、Ｒ₄は、炭素数１～５のアルキレン基であり、Ｑ^-は、基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である。］
項６． 固形状のクロロフィルの製造方法であって、
項１に記載のクロロフィルを含む抽出液を水で希釈することによりクロロフィルの沈殿を生じさせる工程、及び
前記沈殿を回収する工程を含む、前記製造方法。
項７． 抽出液を水で希釈することにより、前記抽出液に含まれる一般式（１）で示される化合物の濃度を１.３Ｍ以下にする、項６に記載の製造方法。

【発明の効果】

【0009】

本発明によれば、一般式（１）で示される化合物を含む水溶液を抽出溶媒として使用し、クロロフィルを含む植物体又は藻類を抽出処理することにより、クロロフィルを効率的に抽出することができる。更に、前記抽出溶媒を使用して得られた抽出液を水で希釈することによりクロロフィルの沈殿を生じさせることができるので、固形状のクロロフィルを簡便な操作で回収することができる。本発明のクロロフィルを含む抽出液の製造方法は、エタノール等を使用せずとも難水溶性のクロロフィルを抽出及び回収できることから環境負荷の小さいクロロフィルの抽出技術と言える。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】２．０Ｍのカルボキシベタイン５（一般式（１）においてＲ₁～Ｒ₃が直鎖状ペンチル基、Ｒ₄がメチレン基、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-である化合物である化合物）水溶液を用いて、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルを抽出した抽出液のＵＶスペクトルである。図１において、縦軸の吸光度は、実測された吸光度の値に、測定に供した抽出液の希釈倍率をかけた値である。

【図2】０～２．４Ｍのカルボキシベタイン５水溶液を用いて、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルの抽出処理を行い、抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果である。

【図3】０～２．０Ｍのカルボキシベタイン４水溶液を用いて、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルの抽出処理を行い、抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果である。

【図4】カルボキシベタイン５水溶液を用いて、４～８０℃でモリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルの抽出処理を行い、抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果である。

【図5】カルボキシベタイン５水溶液を用いて、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルの抽出処理を１０分～３時間行い、抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果である。

【図6】カルボキシベタイン５水溶液３００μＬを用いて、モリンガの葉の乾燥粉末１～４０ｍｇからクロロフィルの抽出処理を行い、抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果である。

【図7】エタノール、アセトン、酢酸エチル、又はカルボキシベタイン５を用いて、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルの抽出処理を行い、抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果である。

【図8】２．０Ｍのカルボキシベタイン５水溶液を用いてモリンガの葉の乾燥粉末から抽出された抽出液を蒸留水で１．５～５０倍に希釈し、生成した沈殿物量を測定した結果である。

【図9】２．０Ｍのカルボキシベタイン４（一般式（１）においてＲ₁～Ｒ₃がｎ－ブチル基、Ｒ₄がメチレン基、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-である化合物）水溶液を用いてモリンガの葉の乾燥粉末から抽出された抽出液を蒸留水で１．５～１２．５倍に希釈し、生成した沈殿物量を測定した結果である。

【図10】２．０Ｍのカルボキシベタイン５水溶液を用いてモリンガの葉の乾燥粉末から抽出された抽出液を蒸留水で４倍に希釈して１～２６時間静置した後に、生成した沈殿物量を測定した結果である。

【図11】２．０Ｍのカルボキシベタイン５水溶液を用いてクロレラの乾燥粉末から抽出された抽出液を蒸留水で１．５～１２．５倍に希釈し、生成した沈殿物量を測定した結果である。

【図12】０～２．０Ｍのスルホベタイン４（一般式（１）において、Ｒ₁～Ｒ₃がｎ－ブチル基、Ｒ₄がプロピレン基、且つＱ^-が基－ＳＯ₃ ^-である化合物）水溶液を用いて、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルの抽出処理を行い、抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果である。

【図13】０～２．０Ｍのスルホベタイン５（一般式（１）において、Ｒ₁～Ｒ₃が直鎖状ペンチル基、Ｒ₄がプロピレン基、且つＱ^-が基－ＳＯ₃ ^-である化合物）水溶液を用いて、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルの抽出処理を行い、抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果である。

【発明を実施するための形態】

【0011】

１．クロロフィルを含む抽出液の製造方法
本発明の製造方法では、一般式（１）で示される化合物を含む水溶液を抽出溶媒として使用し、クロロフィルを含む植物体又は藻類を抽出処理することにより、クロロフィルを含む抽出液を得ることができる。以下、本発明の製造方法について詳述する。

【0012】

［抽出溶媒］
本発明の製造方法では、抽出溶媒として、一般式（１）で示される化合物を含む水溶液を使用する。即ち、本発明の製造方法では、溶質として一般式（１）で示される化合物、溶媒として水を含む抽出溶媒を使用する。

【0013】

一般式（１）で示される化合物の構造は以下の通りである。

【化1】

【0014】

一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃は、それぞれ同一又は異なるアルキル基を示し、且つＲ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数が３～１５である。本発明において、「Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数」とは、Ｒ₁のアルキル基の炭素数とＲ₂のアルキル基の炭素数とＲ₃のアルキル基の炭素数の合計値である。Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数が前記範囲を満たす化合物を使用することにより、クロロフィルを効率的に抽出することが可能になる。クロロフィルをより一層効率的に抽出するという観点から、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の合計炭素数として、好ましくは１０～１５、より好ましくは１１～１５、更に好ましくは１２～１５、より一層好ましくは１２又は１５、特に好ましくは１５が挙げられる。

【0015】

Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基のそれぞれの炭素数としては、合計炭素数が前記範囲を満たすことを限度として特に制限されないが、例えば、１～８、好ましくは２～７、より好ましくは３～６、更に好ましくは３～５、より一層好ましくは４又は５、特に好ましくは５が挙げられる。

【0016】

Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃のアルキル基の炭素数が３以上である場合、当該アルキル基は直鎖状又は分岐状のいずれであってもよいが、好ましくは直鎖状が挙げられる。

【0017】

一般式（１）において、Ｒ₄は、炭素数１～５のアルキレン基である。Ｒ₄として、好ましくは炭素数１～４のアルキレン基、より好ましくはメチレン基（－ＣＨ₂－）、エチレン基（－ＣＨ₂－ＣＨ₂－）、又はプロピレン基（－ＣＨ₂－ＣＨ₂－ＣＨ₂－）、が挙げられる。

【0018】

一般式（１）において、Ｑ^-は、基－ＣＯＯ^-（カルボキシ基からプロトンが脱離した基）、又は基－ＳＯ₃ ^-（スルホ基からプロトンが脱離した基）である。

【0019】

一般式（１）で示される化合物の好適な例として、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が、それぞれ同一又は異なって、炭素数３～５のアルキル基であり、Ｒ₄が炭素数１～３のアルキレン基であり、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-である化合物；より好ましくは、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が、それぞれ同一又は異なって、炭素数４又は５（好ましくはｎ－ブチル基又は直鎖状ペンチル基）のアルキル基であり、Ｒ₄がメチレン基であり、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-である化合物；更に好ましくは、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が直鎖状ペンチル基であり、Ｒ₄がメチレン基であり、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-である化合物が挙げられる。

【0020】

一般式（１）で示される化合物の他の好適な例として、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が、それぞれ同一又は異なって、炭素数３～５のアルキル基であり、Ｒ₄が炭素数１～３のアルキレン基であり、且つＱ^-が基－ＳＯ₃ ^-である化合物：；より好ましくは、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が、それぞれ同一又は異なって、炭素数４又は５（好ましくはｎ－ブチル基又は直鎖状ペンチル基）のアルキル基であり、Ｒ₄がプロピレン基であり、且つＱ^-が基－ＳＯ₃ ^-である化合物；更に好ましくは、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が直鎖状ペンチル基であり、Ｒ₄がプロピレン基であり、且つＱ^-が基－ＳＯ₃ ^-である化合物が挙げられる。

【0021】

抽出溶媒において、一般式（１）で示される化合物は、１種の構造のものを単独で含有させてもよく、また２種以上の構造のものを組み合わせて含有させてもよい。

【0022】

一般式（１）で示される化合物の製造方法については、例えば、特開２００９－９６７６６号公報等で公知であり、公知の有機合成法から導き出すことができる。

【0023】

抽出溶媒として使用される水溶液中の一般式（１）で示される化合物の濃度については、当該化合物の構造、抽出処理に供される植物体や藻類の種類等に応じて適宜設定すればよいが、例えば、０.３Ｍ以上、好ましくは０.３～１０Ｍが挙げられる。より具体的には、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が直鎖状ペンチル基であり、Ｒ₄が炭素数１～３のアルキレン基であり、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である化合物を使用する場合であれば、抽出溶媒として使用される水溶液中の当該化合物の濃度として、０.３Ｍ以上、好ましくは０.３～３Ｍ、より好ましくは０.５～２.４Ｍ又は０．５～３．０Ｍが挙げられる。また、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃がｎ－ブチル基であり、Ｒ₄が炭素数１～３のアルキレン基であり、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である化合物を使用する場合であれば、抽出溶媒として使用される水溶液中の当該化合物の濃度として、０.５Ｍ以上、好ましくは０.７～１０Ｍ、より好ましくは１．０～２．０Ｍが挙げられる。

【0024】

抽出溶媒は、水溶媒を含む各種水溶液であればよく、本発明の効果を喪失させない範囲であれば、必要に応じて、メタノール、エタノール等の水溶性の有機溶媒等、他の溶媒を含んでいてもよい。また、抽出溶媒には、本発明の効果を喪失させない範囲であれば、必要に応じて、界面活性剤等の添加剤が含まれていてもよい。

【0025】

［抽出原料］
本発明の製造方法では、抽出原料として、クロロフィルを含む植物体及び／又は藻類を使用する。

【0026】

抽出原料として使用される植物体の種類については、クロロフィルを含むことを限度として特に制限されないが、例えば、モリンガの葉、大葉の葉、オリーブの葉、茶葉、ホウレン草、コンフリー、アルファルファー、ケール、大麦若葉、小麦若葉、明日葉、クワ若葉、小松菜、アスパラガス、ピーマン、インゲン、春菊、チンゲン菜、行者菜、ブロッコリー、大根の葉、桑葉、ビート葉、大豆の葉、コーンの葉、イチョウ葉、万能葱、おかひじき、ししとう、クレソン、えんどう豆、青菜、ケール、高菜、せり、なずな、よもぎ、ニラ、野沢菜、ニンニクの芽、パセリ、わけぎ、モロヘイヤ、みつば、芽キャベツ、バジル等が挙げられる。これらの植物体は、１種単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。また、抽出原料として使用される植物体は、クロロフィルの抽出効率を高めるために、細切又は粉末化されていることが好ましい。

【0027】

抽出原料として使用される藻類の種類については、クロロフィルを含むことを限度として特に制限されないが、例えば、緑藻類、紅藻類、褐藻類、クリプト藻、ラフィド藻、渦鞭毛藻、ユーグレナ植物、クロララクニオン植物、灰色植物、珪藻類、藍藻類等が挙げられる。これらの藻類は、１種単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。また、抽出原料として使用される藻類は、クロロフィルの抽出効率を高めるために、細切又は粉末化されていることが好ましい。

【0028】

抽出原料として使用される植物体及び／又は藻類は、乾燥処理に供されたものであってもよいが、未乾燥のものであってもよい。

【0029】

［抽出処理］
本発明の製造方法において、抽出処理は、前記抽出溶媒に前記抽出原料を浸漬させればよい。抽出処理時には、必要に応じて攪拌を行ってもよい。

【0030】

抽出処理において、前記抽出溶媒に対する前記抽出原料の添加量については、特に制限されないが、前記抽出溶媒における植物体及び／又は藻類が乾燥重量換算で０.００１～２００ｍｇ/ｍＬ、好ましくは０.１～２００ｍｇ/ｍＬ、より好ましくは１～１５０ｍｇ/ｍＬが挙げられる。

【0031】

抽出処理時の温度については、特に制限されないが、例えば、０～１００℃、好ましくは４～８０℃が挙げられる。

【0032】

抽出処理の時間については、特に制限されないが、例えば、１分間～７２時間、好ましくは１～２４時間、より好ましくは３～１７時間が挙げられる。

【0033】

抽出処理後の懸濁液から固形分を除去することにより抽出液が得られる。固形分の除去は、フィルター処理、遠心分離等、公知の固液分離手法にて行うことができる。得られた抽出液には、植物体及び／又は藻類から溶出されたクロロフィルと、一般式（１）で示される化合物が含まれる。

【0034】

得られた抽出液は、そのまま又は濃縮して、クロロフィル含有液として食品、化粧料、医薬品等の各種製品に使用してもよいが、得られた抽出液を後述する「固形状のクロロフィルの製造方法」に供して、固形状のクロロフィルを回収することもできる。

【0035】

２．固形状のクロロフィルの製造方法
本発明の製造方法では、前記抽出処理で得られた抽出液を水で希釈することによりクロロフィルの沈殿を生じさせる工程、及び当該沈殿を回収する工程を行うことにより、固形状のクロロフィルを得ることができる。前記抽出液に水を添加しても、一般式（１）で示される化合物は溶解した状態を維持し、当該化合物の沈殿は生じないため、回収された沈殿（固形状のクロロフィル）からは、当該化合物が分離されている。

【0036】

前記抽出液を希釈する水は、蒸留水、精製水、水道水等の水であってもよいが、緩衝液等であってもよい。

【0037】

前記抽出液からクロロフィルを沈殿させるために必要となる水の添加量は、前記抽出液に含まれる一般式（１）で示される化合物の構造や濃度、抽出原料として使用した植物体及び／又は藻類の種類等に応じて異なるため一律に規定することはできないが、例えば、水の添加により、前記抽出液に含まれる一般式（１）で示される化合物が、１.３Ｍ以下、好ましくは１.０Ｍ以下に希釈されるように設定すればよい。より具体的には、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が直鎖状ペンチル基であり、且つＲ₄が炭素数１～３のアルキレン基であり、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である化合物を使用する場合であれば、水の添加により、前記抽出液に含まれる当該化合物が、１.３Ｍ以下、好ましくは１.０Ｍ以下、より好ましくは０.７Ｍ以下に希釈されるように設定すればよい。また、例えば、一般式（１）において、Ｒ₁、Ｒ₂、及びＲ₃がｎ－ブチル基であり、且つＲ₄が炭素数１～３のアルキレン基であり、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-又は基－ＳＯ₃ ^-である化合物を使用する場合であれば、前記抽出液に含まれる当該化合物が、０.５Ｍ以下、好ましくは０.４５Ｍ以下、より好ましくは０.４Ｍ以下に希釈されるように設定すればよい。

【0038】

抽出液に水を添加する際の温度条件については、特に制限されず、例えば、４～８０℃、好ましくは１０～４０℃であればよい。また、抽出液に水を添加することによりクロロフィルの沈殿が生じるが、クロロフィルの沈殿量を高めるために、抽出液に水を添加してから、１分間～７２時間、好ましくは１～４８時間、より好ましくは６～２５時間保持した後に、沈殿を回収することが望ましい。

【0039】

抽出液を水で希釈することにより生じたクロロフィルの沈殿を回収することにより、固形状のクロロフィルが得られる。沈殿の回収は、フィルター処理、遠心分離等、公知の固液分離手法にて行うことができる。回収された沈殿（固形状のクロロフィル）は、必要に応じて、洗浄処理に供してもよい。また、回収された沈殿（固形状のクロロフィル）は、必要に応じて乾燥処理に供し、クロロフィルの乾燥物にしてもよい。得られた固形状のクロロフィルは、食品、化粧料、医薬品等の各種製品に使用できる。

【実施例0040】

以下、実施例を挙げて、本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

【0041】

１．試験材料
１－１．一般式（１）で示される化合物の合成
以下に示すカルボキシベタイン４及び５を特開２００９－９６７６６号公報に記載の方法を参考にして合成した。また、以下に示すスルホベタイン４及び５を公知の手法で合成した。カルボキシベタイン４は、一般式（１）において、Ｒ₁～Ｒ₃がｎ－ブチル基、Ｒ₄がメチレン基、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-である化合物である。カルボキシベタイン５は、一般式（１）において、Ｒ₁～Ｒ₃が直鎖状ペンチル基、Ｒ₄がメチレン基、且つＱ^-が基－ＣＯＯ^-であるである化合物である。スルホベタイン４は、一般式（１）において、Ｒ₁～Ｒ₃がｎ－ブチル基、Ｒ₄がプロピレン基、且つＱ^-が基－ＳＯ₃ ^-である化合物である。スルホベタイン５は、一般式（１）において、Ｒ₁～Ｒ₃が直鎖状ペンチル基、Ｒ₄がプロピレン基、且つＱ^-が基－ＳＯ₃ ^-である化合物である。

【化2】

【0042】

１－２．抽出原料の準備
（１）モリンガの葉の乾燥粉末
商品名「モリンガ葉乾燥パウダー」（三豊スーパーフード生産組合）を取得し、これをモリンガの葉の乾燥粉末として使用した。

【0043】

（２）クロレラの乾燥粉末及び未乾燥物
クロレラの培養液から湿潤状態のクロレラ（クロレラの未乾燥物）を回収した。クロレラの未乾燥物をシャーレに入れて、８０℃で１時間加熱し、乾燥させた。次いで、ワンダーブレンダーで破砕した後３５０μｍのふるいをかけて、通り抜けたものを集め、これをクロレラの乾燥粉末として使用した。

【0044】

（３）大葉の葉の乾燥粉末及び未乾燥物
大葉の葉（生）を８０℃で１時間加熱し、乾燥させた。次いで、ワンダーブレンダーで破砕した後３５０μｍのふるいをかけて、通り抜けたものを集め、これを大葉の乾燥粉末として使用した。また、大葉の葉（生）を乾燥させることなく、ハサミで２ｍｍ角に切断したものを大葉の葉の未乾燥物として使用した。

【0045】

（４）オリーブの葉の乾燥粉末及び未乾燥物
オリーブの葉（生）を８０℃で２時間加熱し、乾燥させた。次いで、ワンダーブレンダーで破砕した後３５０μｍのふるいをかけて、通り抜けたものを集め、オリーブの乾燥粉末とした。また、オリーブの葉（生）を乾燥させることなく、前記と同条件にてハサミで２ｍｍ角に切断したものをオリーブの葉の未乾燥物として使用した。

【0046】

（５）抽出原料の水分含量の測定
前記抽出原料の含水率を以下の方法で測定した。先ず、アルミニウム製のシャーレに試料を一定量入れ、試料を含むシャーレの初期重量を測定した。次いで、試料を含むシャーレを真空加熱乾燥器(ＥＹＥＬＡ、ＶＯＳ－２０１ ＳＤ)に入れ、７０℃に加熱した状態で、ダイヤフラム式真空ポンプで真空状態としながら恒温静置した。一定時間ごとにシャーレを取り出し、重量を測定し、重量変化がなくなるまで繰り返した。最終重量と初期重量から含水率を算出した。含水率の測定結果を表１に示す。

【0047】

【表1】

【0048】

２．カルボキシベタイン（一般式（１）においてＱ ^- が基－ＣＯＯ ^- である化合物）によるクロロフィル抽出及び回収
２－１．試験例１（カルボキシベタイン５を用いたクロロフィルの抽出）
カルボキシベタイン５を２．０Ｍとなるように精製水に溶解した抽出溶媒（カルボキシベタイン５水溶液）を用いて植物体からのクロロフィルの抽出を行なった。クロロフィルを含む植物体としてはモリンガの葉の乾燥粉末を用いた。

【0049】

１．５ｍＬのプラスチックチューブにモリンガの葉の乾燥粉末３０ｍｇを入れ、更にベタイン５水溶液３００μＬを加えた。ボルテックスミキサーを用いて粉末が溶液に均一に分散するようによく混合、撹拌し、卓上小型遠心機で遠心分離することでチューブの壁面に付着した抽出液を底部に集めた。その後、３時間、室温（２０～２５℃）で恒温静置した。次いで、モリンガの植物体を含む抽出懸濁液を遠心分離（１６，０００ｇ、５分、室温、Ｍｉｃｒｏ－１２（グライナー社製））し、固形物を全て底部に集め、上清（抽出液）を取り出してＵＶスペクトルを測定した。ＵＶスペクトルの測定は、抽出液をカルボキシベタイン５水溶液で希釈して行った。

【0050】

得られたＵＶスペクトルを図１に示す。この結果、抽出液にはクロロフィルに特有の６６５ｎｍの吸収ピークが確認された。即ち、カルボキシベタイン５水溶液にモリンガの葉を浸漬させることによりクロロフィルが抽出されることが明らかとなった。

【0051】

２－２．試験例２（カルボキシベタイン５の濃度を変化させた場合のクロロフィルの抽出量）
試験例１で確認されたクロロフィルの抽出が水溶液にカルボキシベタイン５を添加したことに起因しているかを確認するために、カルボキシベタイン５の濃度を０～２．４Ｍの範囲で変えて、モリンガの乾燥粉末からのクロロフィルの抽出処理を行なった。具体的な実験条件は、カルボキシベタイン５の濃度を変えたこと以外は、試験例１と同じである。

【0052】

結果を図２に示す。図２には、カルボキシベタイン５の濃度に対して抽出処理後の抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度をプロットしている。カルボキシベタイン５を添加していない場合（０Ｍ）にはクロロフィル由来の６６５ｎｍのピークは全く確認されなかったが、カルボキシベタイン５を添加している場合には６６５ｎｍのピークが検出された。即ち、この結果から、カルボキシベタイン５が、植物体からのクロロフィルに抽出に関与していることが確認された。

【0053】

また、カルボキシベタイン５の濃度が０．５～１．７Ｍの範囲ではカルボキシベタイン５の濃度依存的に６６５ｎｍの吸光度は増加していき、１.７Ｍを超えると６６５ｎｍの吸光度がやや低下する挙動を示すことも確認された。

【0054】

２－３．試験例３（カルボキシベタインの構造の違いによるクロロフィルの抽出量の違い）
試験例１及び２においてカルボキシベタイン５を溶解させた水溶液を用いるとクロロフィルを抽出できることが確認された。そこで、本実施例では、カルボキシベタイン５とは構造が異なるカルボキシベタインを用いて抽出実験を行なった。具体的な実験条件は、カルボキシベタイン４（２．０Ｍ）を使用したこと以外は、試験例１と同じである。

【0055】

得られたＵＶスペクトルにおけるクロロフィルに由来する６６５ｎｍの吸光度を表２に示す。なお、表２には、前記実施例１におけるカルボキシベタイン５（２．０Ｍ）の結果も併せて示している。この結果、カルボキシベタイン４を使用しても、モリンガの乾燥粉末からクロロフィルを抽出できることが確認された。但し、カルボキシベタイン４を使用した場合には、はカルボキシベタイン５と比較して４分の１程度の吸光度であった。即ち、クロロフィルを抽出するためにはカルボキシベタイン４及び５のような構造が必要であり、その中でも適したカルボキシベタインの構造はカルボキシベタイン５であることが示された。

【0056】

なお、水溶液中のカルボキシベタインの溶解量は、カルボキシベタインの分子量、化学構造に依存する為、カルボキシベタイン５よりもＲ₁～Ｒ₃のアルキル基の炭素数が少ないカルボキシベタイン等であっても、カルボキシベタインの溶解量を増やし、濃度を高めることでクロロフィルの抽出を向上させることが可能である。

【0057】

【表2】

【0058】

２－４．試験例４（カルボキシベタイン４の濃度を変化させた場合のクロロフィルの抽出量）
試験例３においてカルボキシベタイン４を使用してもクロロフィルを抽出できることが確認されたので、本試験例ではカルボキシベタイン４を０～２．０Ｍに変えてモリンガの乾燥粉末からのクロロフィルの抽出処理を行なった。具体的な実験条件は、カルボキシベタイン４の濃度を変えたこと以外は、試験例３と同じである。

【0059】

結果を図３に示す。図３には、カルボキシベタイン４の濃度に対して抽出処理後の抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度をプロットしている。この結果、カルボキシベタイン４は、０．５～２．０Ｍの濃度において濃度依存的にクロロフィルの抽出量を増大させることが確認された。

【0060】

２－５．試験例５（抽出温度がカルボキシベタイン５のクロロフィルの抽出量に与える影響）
試験例１では室温（２０～２５℃）でクロロフィルの抽出を行なった。本試験例では、抽出温度を４～８０℃に変え、抽出温度がクロロフィルの抽出量に与える影響を検討した。具体的な実験条件は、抽出温度を変更したこと以外は、試験例１と同じである。

【0061】

結果を図４に示す。図４には、抽出温度に対して抽出後の抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度をプロットしている。４℃から８０℃にかけてクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度に大きな差が確認されなかった。即ち、抽出温度による影響は少なく、幅広い抽出温度でカルボキシベタイン５水溶液によるクロロフィルの抽出が可能であることが示された。

【0062】

２－６．試験例６（抽出時間がカルボキシベタイン５のクロロフィルの抽出量に与える影響）
試験例１では抽出処理を３時間行なった。本実施例では、抽出時間を１０分～２４時間に変え、抽出時間がクロロフィルの抽出量に与える影響を検討した。具体的な実験条件は、抽出時間を変更したこと以外は、試験例１と同じである。

【0063】

結果を図５に示す。図５には、抽出時間に対して抽出後の抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度をプロットしている。抽出時間が１０分～３時間の間に６６５ｎｍの吸光度が増大し、３時間は一定であった。即ち、この結果から、３時間以上行えば十分にクロロフィルを抽出できることが確認された。

【0064】

２－７．試験例７（モリンガの葉の乾燥粉末の量とベタイン５のクロロフィルの抽出量との関係）
試験例１ではモリンガの葉の乾燥粉末の量を３０ｍｇに固定して抽出実験を行なった。本実施例では、モリンガの葉の乾燥粉末の量を１～４０ｍｇに変え、モリンガの葉の乾燥粉末の量がクロロフィルの抽出量に与える影響を検討した。具体的な実験条件は、モリンガの葉の乾燥粉末の量を変更したこと以外は、試験例１と同じである。

【0065】

結果を図６に示す。図６には、モリンガの葉の乾燥粉末の量に対して抽出後の抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度をプロットしている。１～４０ｍｇまでは粉末量に対して抽出されたクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度が比例的に増加しており、粉末量が増えるほどクロロフィルの抽出量は増大することが確認された。

【0066】

２－８．参考試験例１（有機溶媒によるクロロフィルの抽出）
カルボキシベタイン５を使用したクロロフィルの抽出処理が、既存の有機溶媒による抽出処理と比較するために、ベタイン５水溶液（２Ｍ）の代わりに、エタノール、アセトン、又は酢酸エチルを用いて、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルの抽出処理を行なった。具体的な実験条件は、抽出溶媒を変更したこと、及びモリンガの葉の乾燥粉末の量２５ｍｇに変更したこと以外は、試験例１と同じである。

【0067】

結果を図７に示す。図７には、得られた各抽出液の６６５ｎｍの吸光度を示している。この結果、カルボキシベタイン５水溶液（２Ｍ）は、アセトン又は酢酸エチルに比べてクロロフィルの抽出量が多く、エタノールと同等のクロロフィルの抽出量であった。カルボキシベタイン５水溶液は、水溶媒であることから、エタノール等の有機溶媒に比べて、取り扱い易く環境への負荷も少ないことから、クロロフィルの抽出処理に使用される抽出溶媒として既存の有機溶媒よりも利点がある。

【0068】

２－９．試験例８（抽出液からのクロロフィルの回収）
試験例１～３及び５～７で示したようにカルボキシベタイン５水溶液はクロロフィルの抽出において優れた抽出溶媒となることが確認された。本試験例では抽出液からの回収操作について検討を行った。試験例２においてクロロフィルの抽出はカルボキシベタイン５の濃度によって変化することが示されている。そこで、カルボキシベタイン５水溶液を用いた抽出処理により得られたクロロフィルの抽出液を水で希釈し、カルボキシベタイン５濃度をクロロフィルの溶解に適さない濃度まで下げ、沈殿として回収する方法を検討した。この手法では減圧留去のような減圧装置を必要としないため、産業利用をする上で既存設備を活用できるという点で有益な方法であると言える。

【0069】

まず、試験例１と同条件で、クロロフィルを含む抽出液を得た。得られた抽出液２０μＬと蒸留水６０μＬを混合し（希釈倍率４倍、カルボキシベタイン５の最終濃度が０．５Ｍ）、室温（２０～２５℃）で１時間恒温静置した。次いで、混合液を遠心分離（１６，０００ｇ、５分、室温、グライナー、Ｍｉｃｒｏ－１２）し、生成した沈殿を底部に集めた。デカンテーションによって上清を取り除き、蒸留水を２００μＬ加え、ボルテックスミキサーで撹拌し、沈殿に付着しているカルボキシベタイン５を洗浄した。この洗浄操作を３回繰り返した後、沈殿を凍結乾燥した。

【0070】

得られた沈殿（凍結乾燥物）の収量を測定すると０．１３ｍｇ（抽出に供したモリンガの葉の乾燥粉末に対する重量比は０．４％）であった。抽出液の６６５ｎｍの吸光度の値と、抽出液を４倍希釈した混合液の上清の吸光度の値から、抽出されたたクロロフィルの８５％が、蒸留水による希釈操作によって沈殿として回収されていると見積もられた。以上の結果から、カルボキシベタイン５を使用して得られたクロロフィルの抽出液を水で希釈するという簡易な操作で、固形状のクロロフィルを効率的に回収できることが明らかとなった。

【0071】

２－１０．試験例９（クロロフィルの抽出液からのクロロフィルの回収における希釈倍率の影響）
試験例８において、クロロフィルを含む抽出液を水で希釈すると固形状のクロロフィルを回収できることが示された。そこで、本試験例では、クロロフィルを含む抽出液を希釈する際の希釈倍率がクロロフィルの回収率に及ぼす影響を検証した。具体的な実験条件は、蒸留水の添加量を１０～９８０μＬ（希釈倍率１．５～５０倍、カルボキシベタイン５の最終濃度０．０４～１．３Ｍ）となるように変更したこと以外は、試験例７と同じである。

【0072】

結果を図８に示す。図８には、希釈倍率と得られた沈殿（凍結乾燥物）の重さとの相関関係を示している。クロロフィルを含む抽出液を蒸留水で１０倍希釈（カルボキシベタイン５の最終濃度０．２Ｍ）した場合に最大の沈殿量が得られることがわかった。希釈倍率が大きくなるほど、クロロフィルの溶解度が低下するために沈殿量が増大すると考えられたが、１０倍超の希釈倍率では沈殿量が低下する傾向が認められた。これは、希釈倍率が高くなりすぎると、溶液中でのクロロフィルの凝集（沈殿形成）が不利になるためであると類推される。

【0073】

２－１１．試験例１０（ベタイン４水溶液（抽出液）からのクロロフィルの回収における希釈倍率の影響）
試験例３で示したように、カルボキシベタイン４を含む水溶液を使用してもクロロフィルを抽出できることが確認されている。本試験例では、カルボキシベタイン４を含む水溶液を使用して得られた抽出液でも、蒸留水で希釈することによりクロロフィルの沈殿の回収できるかを検証した。具体的な実験条件は、カルボキシベタイン５をカルボキシベタイン４に代えたこと以外は、試験例９と同じである。

【0074】

結果を図９に示す。図９には、希釈倍率と得られた沈殿（凍結乾燥物）の重さとの相関関係を示している。カルボキシベタイン４を使用して得られた抽出液を蒸留水で希釈した場合も、カルボキシベタイン５の場合（図８）と同様にベル型のプロットとなり、最適の希釈倍率があることがわかった。但し、カルボキシベタイン４の場合には、カルボキシベタイン５とは異なり、抽出液の希釈倍率は７.５倍が最適であった。これの結果から、カルボキシベタインを使用して得られた抽出液を希釈してクロロフィルの沈殿を回収する場合には、カルボキシベタインの構造に応じた最適希釈倍率が存在することが分かった。

【0075】

２－１２．試験例１１（抽出液の希釈後に最大量のクロロフィル沈殿を得るための最適な静置時間）
試験例８においてクロロフィルを含む抽出液を水で希釈すると固形状のクロロフィルを回収できることが示された。抽出液の希釈液中でクロロフィル分子が凝集することによって沈殿が生じるが、どの程度の時間静置すれば最大の沈殿量が得られるか本試験例では検討した。具体的には、希釈後の静置時間を１～２６時間に変えたこと以外は試験例８と同様の操作で抽出を行なった。

【0076】

結果を図１０に示す。静置時間が６時間までは経時的に沈殿量が増加し、静置時間が６時間以降は沈殿量の変化はほとんど認められなかった。即ち、抽出液の希釈後に６時間以上静置すれば、最大量の沈殿量が得られることが明らかとなった。

【0077】

２－１３．参考試験例２（有機溶媒を使用した抽出液の希釈によるクロロフィルの回収）
試験例８～１１において、カルボキシベタイン４又は５を使用して得られた抽出液を蒸留水で希釈することにより、固形状のクロロフィルを簡便に回収できることが確認された。そこで、エタノール又はアセトンを抽出溶媒として使用した場合に、得られた抽出液を蒸留水で希釈することにより固形状のクロロフィルを回収できるかについて検証した。具体的な実験条件は、抽出溶媒としてエタノール又はアセトンを使用して得られた抽出液を使用したこと以外は、試験例８と同じである。

【0078】

この結果、エタノールを使用して得られた抽出液を蒸留水で希釈した場合、濁りが生じたものの、重量測定が行える量の沈殿は得られなかった。また、アセトンを使用して得られた抽出液を蒸留水で希釈すると、濁りも確認できなかった。即ち、クロロフィルを含む抽出液を水で希釈することによりクロロフィルの沈殿が生じる現象は、抽出溶媒としてカルボキシベタイン４及び５を含む水溶液を使用した場合に認められる特有のものであることが分かった。

【0079】

２－１４．試験例１２（他の植物体又は藻類からのクロロフィルの抽出）
上述のように、カルボキシベタイン５水溶液を抽出溶媒として使用することにより、モリンガの葉の乾燥粉末からクロロフィルを抽出及び回収できることが確認された。この抽出及び回収技術が、モリンガの葉に限らず、他のクロロフィルを含む植物体又は藻類にも適用できるかについて検証した。

【0080】

先ず、モリンガの葉の乾燥粉末の代わりに、クロレラの乾燥粉末、オリーブの葉の乾燥粉末、又は大葉の葉の乾燥粉末を使用したこと以外は、試験例１と同様の条件で、抽出処理を行なった。得られた抽出液の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果を表３に示す。この結果、カルボキシベタイン５水溶液を使用することにより、クロレラの乾燥粉末、オリーブの葉の乾燥粉末、及び大葉の葉の乾燥粉末からクロロフィルを抽出できることが確認された。特に、クロレラの乾燥粉末及び大葉の葉の乾燥粉末を使用した場合には、モリンガの葉の乾燥粉末に比べて、２～４倍多いクロロフィルを抽出できていた。一方、オリーブの葉の乾燥粉末を使用した場合では、モリンガの葉の乾燥粉末に比べて、抽出されたクロロフィル量は３分の１程度であった。これは植物体又は藻類に含まれるクロロフィル量の違いに起因していると考えられる。以上の結果から、カルボキシベタイン５水溶液を用いると、モリンガの葉に限らず、他のクロロフィルを含む植物体又は藻類からクロロフィルを抽出できることが確認された。

【0081】

【表3】

【0082】

次に、前記で得られた各抽出液を用いて、試験例８と同条件でクロロフィルの沈殿の回収を行った。その結果、回収できた沈殿（凍結乾燥物）の量は、０．０４０ｍｇ（クロレラの乾燥粉末）、０．０７０ｍｇ（オリーブの葉の乾燥粉末）、０．１２２ｍｇ（大葉の葉の乾燥粉末）であった。

【0083】

クロレラの乾燥粉末を使用して得られた抽出液には、クロロフィルが多く抽出されていたにも関わらず、クロロフィルの沈殿の回収量は比較的少なかった。これは、沈殿を生じさせる際の抽出液の希釈倍率が最適ではなかったことに起因していると考えられる。そこで、クロレラの乾燥粉末を使用して得られた抽出液を使用して、試験例９と同様の方法で、沈殿を生じさせる最適の希釈倍率を検討した。結果を図１１に示す。図１１には希釈倍率と得られた沈殿の重さとの相関関係を示している。試験例８及び９の結果とはと異なり、抽出液の希釈倍率が４～５倍の場合にクロロフィルの沈殿が最も多く生成していた。即ち、カルボキシベタインを使用して得られた抽出液を希釈してクロロフィルの沈殿を回収する場合には、カルボキシベタインの構造だけでなく、使用した植物体の種類に応じた最適希釈倍率が存在することが明らかとなった。

【0084】

２－１５．試験例１３（植物体の乾燥状態がクロロフィルの抽出に与える影響）
試験例１２では、植物体として乾燥粉末を用いていたが、未乾燥状態の原料でも、クロロフィルの抽出が行えるかを検証した。具体的な実験条件は、植物体又は藻類としては、クロレラの未乾燥物、オリーブの未乾燥物、又は大葉の葉の未乾燥物を用いたこと以外は、試験例１と同様である。

【0085】

得られた各抽出液に含まれるクロロフィル由来の６６５ｎｍの吸光度を測定した結果を表４に示す。この結果、いずれの未乾燥物を使用しても、カルボキシベタイン５水溶液によってクロロフィルが抽出できていた。即ち、カルボキシベタイン５水溶液によるクロロフィルの抽出は、組織の性状（水分量）による影響はなく、どのような性状の植物体又は藻類にも適用できることが確認された。

【0086】

【表4】

【0087】

３．スルホベタイン（一般式（１）においてＱ ^- が基－ＳＯ ₃ ^- である化合物）によるクロロフィル抽出
試験例１２（スルホベタイン４及び５を用いたクロロフィルの抽出）
前記試験例１～３では、カルボキシベタイン４又は５を溶解させた水溶液を用いてクロロフィルを抽出することに成功した。一般式（１）に示される化合物において、Ｑ^-が基－ＣＯＯ^-から基－ＳＯ₃ ^-に変更しても、クロロフィルを抽出できるかを確認するために、スルホベタイン４及び５を用いて抽出実験を行なった。水溶液に溶解させたカルボキシベタイン４又は５の代わりにスルホベタイン４又は５を使用したこと以外は、前記試験例２と同様の操作で抽出を行なった。

【0088】

スルホベタイン４を使用してクロロフィル抽出を行った結果を図１２に示し、スルホベタイン５を使用してクロロフィル抽出を行った結果を図１３に示す。この結果、スルホベタイン４及び５を使用してもクロロフィルを効率的に抽出できることが確認された。また、カルボキシベタイン４及び５の場合と同様に、一般式（１）におけるＲ₁、Ｒ₂、及びＲ₃が直鎖状ペンチル基であるスルホベタイン５の方が、スルホベタイン４よりもクロロフィルの抽出効率が高くなっていた。また、スルホベタイン４又は５を使用する場合でも０．５Ｍ以上の濃度でクロロフィルを抽出でき、一般式（１）において、Ｑ^-は基－ＣＯＯ^-に限定されず、基－ＳＯ₃ ^-である化合物でも、クロロフィルの効率的な抽出が可能になることが分かった。

【0089】

さらにスルホベタイン４又は５を使用して得られた抽出液を試験例８と同じ実験条件で希釈し、生成した沈殿を回収したところ、スルホベタイン４で０.１５７ｍｇ、スルホベタイン５で０.５８４ｍｇの沈殿が回収され、スルホベタインを用いても抽出後の回収操作も同様に行えることが分かった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】