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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024177926
(43)【公開日】2024-12-24
(54)【発明の名称】４－ヒドロキシ安息香酸組成物およびポリマー
(51)【国際特許分類】
C12P 7/42 20060101AFI20241217BHJP
C08G 63/60 20060101ALI20241217BHJP
【ＦＩ】
C12P7/42
C08G63/60
【審査請求】未請求
【請求項の数】7
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023096338
(22)【出願日】2023-06-12
(71)【出願人】
【識別番号】510242668
【氏名又は名称】グリーンケミカルズ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100110928
【弁理士】
【氏名又は名称】速水 進治
(72)【発明者】
【氏名】村田 隆一
(72)【発明者】
【氏名】井上 雄介
(72)【発明者】
【氏名】橘 賢也
(72)【発明者】
【氏名】藤原 大輔
(72)【発明者】
【氏名】橋詰 正義
(72)【発明者】
【氏名】乾 将行
(72)【発明者】
【氏名】平賀 和三
(72)【発明者】
【氏名】北出 幸広
(72)【発明者】
【氏名】須田 雅子
(72)【発明者】
【氏名】橋本 龍馬
【テーマコード（参考）】
4B064
4J029
【Ｆターム（参考）】
4B064AD56
4B064AD57
4B064CA02
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA16
4J029AA06
4J029AD09
4J029AE02
4J029AE15
4J029AE18
4J029BB10A
4J029CB06A
4J029EB05A
4J029HA01
4J029HB01
4J029KC06
4J029KD02
4J029KE03
4J029KE08
4J029KE12
4J029KE15
4J029KF04
(57)【要約】
【課題】環境適合性と重合性のバランスが向上した４－ヒドロキシ安息香酸組成物およびポリマーを提供する。
【解決手段】ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて測定される、１９５０年代の循環炭素中の放射性炭素の濃度を基準として求まるバイオマス資源由来の放射性炭素１４Ｃの割合を示す実測バイオ化率が、８０％以上１００％以下である４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）を少なくとも含み、４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、シキミ酸の含有量が０．０１２質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
【選択図】なし
【解決手段】ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて測定される、１９５０年代の循環炭素中の放射性炭素の濃度を基準として求まるバイオマス資源由来の放射性炭素１４Ｃの割合を示す実測バイオ化率が、８０％以上１００％以下である４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）を少なくとも含み、４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、シキミ酸の含有量が０．０１２質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて測定される、１９５０年代の循環炭素中の放射性炭素の濃度を基準として求まるバイオマス資源由来の放射性炭素１４Ｃの割合を示す実測バイオ化率が、８０％以上１００％以下である４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）を少なくとも含み、
シキミ酸の含有量が、４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．０１２質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
シキミ酸の含有量が、４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．０１２質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
【請求項2】
請求項１に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の含有量が、前記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、９５質量％以上１００質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の含有量が、前記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、９５質量％以上１００質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
【請求項3】
請求項１または２に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の前記実測バイオ化率が９５％以上１００％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の前記実測バイオ化率が９５％以上１００％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
【請求項4】
請求項１または２に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
前記シキミ酸の含有量が、前記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．００８質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
前記シキミ酸の含有量が、前記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．００８質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
【請求項5】
請求項１または２に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）は、形質転換体ＨＢＡ－２（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８３８）および形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）から選択される１つまたは２つの形質転換体の生成物を少なくとも含む、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）は、形質転換体ＨＢＡ－２（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８３８）および形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）から選択される１つまたは２つの形質転換体の生成物を少なくとも含む、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
【請求項6】
請求項１または２に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物由来の前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の構造を少なくとも含む、ポリマー。
【請求項7】
液晶ポリマーである、請求項６に記載のポリマー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物およびポリマーに関する。
【背景技術】
【0002】
地球温暖化や化石資源の枯渇問題を背景に、再生可能なバイオマス資源を原料とした化学品の製造は、低炭素社会の実現に向けた新しい産業として注目されている。
【0003】
４－ヒドロキシ安息香酸（４－ＨＢＡ）は、液晶のポリマー原料や、防腐剤であるパラベンの合成原料等に利用されている有用な化学物質である。
現在、４－ヒドロキシ安息香酸は、原油を原料として化学的に生産されている。化学的な４－ヒドロキシ安息香酸の製造方法は、たとえばフェノールと水酸化カリウムと二酸化炭素を用いて高圧条件下で反応させる方法などがある。
現在、４－ヒドロキシ安息香酸は、原油を原料として化学的に生産されている。化学的な４－ヒドロキシ安息香酸の製造方法は、たとえばフェノールと水酸化カリウムと二酸化炭素を用いて高圧条件下で反応させる方法などがある。
【0004】
しかし、こうした方法では、原料とするフェノールが化石原料に依存しているだけでなく、反応プロセス中で強アルカリや二酸化炭素、高温高圧条件を必要としており、製造過程において生じる有害な廃液・排ガスが生じるなど、環境に多大な負荷を与えている。
このような背景を踏まえ、そのため、再生可能資源を原料として、省エネルギー、且つ、有害廃液を削減した、環境調和型のバイオ法による４－ヒドロキシ安息香酸の製造技術の確立が強く望まれている。
このような背景を踏まえ、そのため、再生可能資源を原料として、省エネルギー、且つ、有害廃液を削減した、環境調和型のバイオ法による４－ヒドロキシ安息香酸の製造技術の確立が強く望まれている。
【0005】
たとえば、非特許文献１，２および特許文献１，２には、４－ＨＢＡは、芳香族アミノ酸などの合成に関わるシキミ酸経路の中間体であるコリスミ酸からｕｂｉＣによってコードされるコリスメート－ピルベート リアーゼによって合成されることが大腸菌を用いて明らかにされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．， １７４， ５３０９－５３１６ （１９９２）
【非特許文献2】Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， １４０， ８９７－９０４ （１９９４）
【特許文献1】米国特許６０３０８１９号
【特許文献2】米国特許６１１４１５７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明者らの検討によれば、上記のようなバイオマス由来の４－ヒドロキシ安息香酸を下流製品である樹脂の重合に用いた場合、重合性に改善の余地があることが明らかになった。
【0008】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、環境適合性と重合性のバランスが向上した４－ヒドロキシ安息香酸組成物およびポリマーを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者らは、上記課題を達成するために鋭意検討を重ねた。その結果、４－ヒドロキシ安息香酸組成物中に含まれるシキミ酸を所定の濃度以下にすることにより、環境適合性と重合性のバランスが向上することを見出して、本発明を完成させた。
【0010】
［１］
ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて測定される、１９５０年代の循環炭素中の放射性炭素の濃度を基準として求まるバイオマス資源由来の放射性炭素１４Ｃの割合を示す実測バイオ化率が、８０％以上１００％以下である４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）を少なくとも含み、
シキミ酸の含有量が、４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．０１２質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［２］
上記［１］に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の含有量が、上記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、９５質量％以上１００質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［３］
上記［１］または［２］に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の上記実測バイオ化率が９５％以上１００％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［４］
上記［１］～［３］のいずれかに記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
上記シキミ酸の含有量が、上記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．００８質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［５］
上記［１］～［４］のいずれかに記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）は、形質転換体ＨＢＡ－２（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８３８）および形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）から選択される１つまたは２つの形質転換体の生成物を少なくとも含む、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［６］
上記［１］～［５］のいずれかに記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物由来の上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の構造を少なくとも含む、ポリマー。
［７］
液晶ポリマーである、上記［６］に記載のポリマー。
ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて測定される、１９５０年代の循環炭素中の放射性炭素の濃度を基準として求まるバイオマス資源由来の放射性炭素１４Ｃの割合を示す実測バイオ化率が、８０％以上１００％以下である４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）を少なくとも含み、
シキミ酸の含有量が、４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．０１２質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［２］
上記［１］に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の含有量が、上記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、９５質量％以上１００質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［３］
上記［１］または［２］に記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の上記実測バイオ化率が９５％以上１００％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［４］
上記［１］～［３］のいずれかに記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
上記シキミ酸の含有量が、上記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．００８質量％以下である、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［５］
上記［１］～［４］のいずれかに記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、
前記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）は、形質転換体ＨＢＡ－２（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８３８）および形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）から選択される１つまたは２つの形質転換体の生成物を少なくとも含む、４－ヒドロキシ安息香酸組成物。
［６］
上記［１］～［５］のいずれかに記載の４－ヒドロキシ安息香酸組成物由来の上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の構造を少なくとも含む、ポリマー。
［７］
液晶ポリマーである、上記［６］に記載のポリマー。
【発明の効果】
【0011】
本発明によれば、環境適合性と重合性のバランスが向上した４－ヒドロキシ安息香酸組成物およびポリマーを提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【0012】
以下、本発明の実施形態について、詳細に説明する。
本明細書における「液晶ポリマー」という用語は、一般に、それがその溶融状態において液晶質の挙動（例えばサーモトロピックネマチック状態）を示すことを可能にする棒状の構造を有することができるポリマーを指す。
本明細書における「液晶ポリマー」という用語は、一般に、それがその溶融状態において液晶質の挙動（例えばサーモトロピックネマチック状態）を示すことを可能にする棒状の構造を有することができるポリマーを指す。
【0013】
［４－ヒドロキシ安息香酸組成物］
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物は、ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて測定される、１９５０年代の循環炭素中の放射性炭素の濃度を基準として求まるバイオマス資源由来の放射性炭素１４Ｃの割合を示す実測バイオ化率が、８０％以上１００％以下である４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）を少なくとも含み、シキミ酸の含有量が、上記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．０１２質量％以下である。
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物は、ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて測定される、１９５０年代の循環炭素中の放射性炭素の濃度を基準として求まるバイオマス資源由来の放射性炭素１４Ｃの割合を示す実測バイオ化率が、８０％以上１００％以下である４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）を少なくとも含み、シキミ酸の含有量が、上記４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．０１２質量％以下である。
【0014】
このような４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、実測バイオ化率は、４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）中に含まれる植物由来の炭素の量を示し、この値が大きいほど４－ヒドロキシ安息香酸組成物が自然由来の原料により構成されていることを表す。そのため、実測バイオ化率が大きいほど、カーボンニュートラルの観点から環境適合性が良好である。また、シキミ酸の含有量が０．０１２質量％以下であると、重合性がより好適となった４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得ることができる。
【0015】
このような４－ヒドロキシ安息香酸組成物は、後述する製造方法によって、特に（ｉ）原料化合物として特定の植物由来の原料を用いること、（ｉｉ）反応液に吸着材を添加させることによって不純物を除去すること、および（ｉｉｉ）回収時に純水にて洗浄を行うことによって作製することができる。
【0016】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物中の４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）において、ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて測定される、１９５０年代の循環炭素中の放射性炭素の濃度を基準として求まるバイオマス資源由来の放射性炭素１４Ｃの割合を示す上記実測バイオ化率は、８０％以上１００％以下であり、８５％以上１００％以下が好ましく、９０％以上１００％以下がより好ましく、９５％以上１００％以下がさらに好ましい。上記実測バイオ化率が上記数値範囲内であることにより、カーボンニュートラルの観点から環境適合性がより良好になる。
【0017】
このとき、４－ヒドロキシ安息香酸組成物中の４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の全炭素原子中における放射性炭素１４Ｃの割合を示す実測バイオ化率は、米国試験材料協会（ＡＳＴＭ）が定めるバイオベース濃度試験規格ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づいて試料中の放射性炭素１４Ｃの含有量を測定し、その測定結果と、１９５０年時点の循環炭素中の放射性炭素１４Ｃの濃度と、から算出される。なお、この試験規格には、複数の分析法が示されているが、このうち、分析法Ｂ（ＡＭＳ法）が好ましく用いられる。分析法Ｂには、例えば、ＮＥＣ社製、加速器質量分析装置ペレトロンＡＭＳ等の分析装置が用いられる。
【0018】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、シキミ酸の含有量の上限値は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、０．０１２質量％以下であり、０．００８質量％以下が好ましく、０．００６質量％以下がより好ましく、０．００３質量％以下がさらに好ましく、０．００１質量％以下がさらに好ましい。シキミ酸の含有量が上記上限値以下であることにより、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性がより好適となる。
また、シキミ酸の含有量の下限値は特に限定されないが、例えば０．０００質量％以上である。このとき、０．０００質量％というのは、シキミ酸の含有量が検出下限以下であり、定量によって検出できない場合も含む。
また、シキミ酸の含有量の下限値は特に限定されないが、例えば０．０００質量％以上である。このとき、０．０００質量％というのは、シキミ酸の含有量が検出下限以下であり、定量によって検出できない場合も含む。
【0019】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の含有量は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物全体を１００質量％としたとき、９５質量％以上１００質量％以下が好ましく、９６質量％以上１００質量％以下がより好ましく、９７質量％以上１００質量％以下がさらに好ましく、９８質量％以上１００質量％以下がさらに好ましく、９９質量％以上１００質量％以下がさらに好ましい。上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の含有量が上記数値範囲内であることにより、カーボンニュートラルの観点から環境適合性がより良好になることに加え、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性がより好適となる。
なお、上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の含有量が１００質量％であるときは、上述したシキミ酸の含有量および後述するその他の成分の含有量は０．０００質量％である。このとき、シキミ酸およびその他の成分の含有量が検出下限以下であり、定量によって検出できない場合も含む。
なお、上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の含有量が１００質量％であるときは、上述したシキミ酸の含有量および後述するその他の成分の含有量は０．０００質量％である。このとき、シキミ酸およびその他の成分の含有量が検出下限以下であり、定量によって検出できない場合も含む。
【0020】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）は、形質転換体ＨＢＡ－２（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８３８）および形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）から選択される１つまたは２つの形質転換体の生成物を少なくとも含むことが好ましい。上記４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）が上記生成物を少なくとも含むことにより、カーボンニュートラルの観点から環境適合性がより良好になることに加え、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性がより好適となる。
【0021】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）が形質転換体ＨＢＡ－２および形質転換体ＨＢＡ－４７から選択される１つまたは２つ以上の形質転換体の生成物を少なくとも含むことにより、重合性がより好適となる理由としては、重合性に悪影響を及ぼし得る極微量の成分の存在が比較的低く抑えられているからだと推測される。
ここで、形質転換体由来の極微量の成分は極めて多数にのぼり、かつ、上記極微量の成分の含有量は検出限界未満であり分析することができない。そのため、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）が形質転換体ＨＢＡ－２および形質転換体ＨＢＡ－４７から選択される１つまたは２つ以上の形質転換体の生成物を少なくとも含む態様は、本態様の特徴部分を物の構造又は特性により直接特定することは不可能であり、およそ実際的ではないといえ、いわゆる「不可能・非実際的事情」が存在すると考えられる。
ここで、形質転換体由来の極微量の成分は極めて多数にのぼり、かつ、上記極微量の成分の含有量は検出限界未満であり分析することができない。そのため、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）が形質転換体ＨＢＡ－２および形質転換体ＨＢＡ－４７から選択される１つまたは２つ以上の形質転換体の生成物を少なくとも含む態様は、本態様の特徴部分を物の構造又は特性により直接特定することは不可能であり、およそ実際的ではないといえ、いわゆる「不可能・非実際的事情」が存在すると考えられる。
【0022】
（その他の成分）
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、環境適合性と重合性のバランスを低下させない範囲であれば、上述した成分以外のその他の成分を含んでもよい。
その他の成分としては、以下の化合物からなる群から選択される一種又は二種以上が挙げられる。
フルクトース、マンノース、アラビノース、キシロース、ガラクトースなどの単糖類；セロビオース、ショ糖、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、キシロビオースなどの二糖類；デキストリン又は可溶性澱粉などの多糖類などの糖類等。
マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセリンのような糖アルコール；酢酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、グルコン酸のような有機酸；エタノール、プロパノールのようなアルコール；ノルマルパラフィンのような炭化水素等。
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムのような無機又は有機アンモニウム化合物、尿素、アンモニア水、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、コーンスティープリカー、肉エキス、ペプトン、ＮＺ－アミン、蛋白質加水分解物、アミノ酸等の含窒素有機化合物等。
リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、炭酸カルシウム等。
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、環境適合性と重合性のバランスを低下させない範囲であれば、上述した成分以外のその他の成分を含んでもよい。
その他の成分としては、以下の化合物からなる群から選択される一種又は二種以上が挙げられる。
フルクトース、マンノース、アラビノース、キシロース、ガラクトースなどの単糖類；セロビオース、ショ糖、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、キシロビオースなどの二糖類；デキストリン又は可溶性澱粉などの多糖類などの糖類等。
マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセリンのような糖アルコール；酢酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、グルコン酸のような有機酸；エタノール、プロパノールのようなアルコール；ノルマルパラフィンのような炭化水素等。
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムのような無機又は有機アンモニウム化合物、尿素、アンモニア水、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、コーンスティープリカー、肉エキス、ペプトン、ＮＺ－アミン、蛋白質加水分解物、アミノ酸等の含窒素有機化合物等。
リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、炭酸カルシウム等。
【0023】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、その他の上記成分の含有量は、５質量％以下が好ましく、４質量％以下がより好ましく、３質量％以下がさらに好ましく、２質量％以下がさらに好ましく、１質量％以下がさらに好ましい。その他の上記成分の含有量が上記上限値以下であることにより、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性がより好適となる。
また、その他の上記成分の含有量の下限値は特に限定されないが、例えば０．０００質量％以上である。このとき、０．０００質量％というのは、その他の上記成分の含有量が検出下限以下であり、定量によって検出できない場合も含む。
なお、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、その他の上記成分を複数含む場合は、その他の上記成分を合計した含有量が上記上限値以下および上記下限値以上であればよい。
また、その他の上記成分の含有量の下限値は特に限定されないが、例えば０．０００質量％以上である。このとき、０．０００質量％というのは、その他の上記成分の含有量が検出下限以下であり、定量によって検出できない場合も含む。
なお、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物において、その他の上記成分を複数含む場合は、その他の上記成分を合計した含有量が上記上限値以下および上記下限値以上であればよい。
【0024】
このようなシキミ酸、４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）およびその他の成分の含有量を定量する方法としては、例えば、ＵＶ検出器を備えた高速液体クロマトグラフ（株式会社日立ハイテクサイエンス製、Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ（登録商標））を用いた高速液体クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー質量分析法（ＧＣ／ＭＳ）、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ－ＭＳ）等が挙げられる。
【0025】
［４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造方法］
次に、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造方法を説明する。
次に、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造方法を説明する。
【0026】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造方法としては、以下の工程（Ａ）～（Ｃ）を含むことが好ましい。
（Ａ）形質転換体と、糖類、上記形質転換体が代謝によりコリスミ酸を生成し得る化合物またはコリスミ酸およびそれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の原料化合物と、を含有する反応液中で反応させる工程。
（Ｂ）反応液の不純物を除去する工程。
（Ｃ）反応液中の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収する工程。
（Ａ）形質転換体と、糖類、上記形質転換体が代謝によりコリスミ酸を生成し得る化合物またはコリスミ酸およびそれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の原料化合物と、を含有する反応液中で反応させる工程。
（Ｂ）反応液の不純物を除去する工程。
（Ｃ）反応液中の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収する工程。
【0027】
〔（Ａ）形質転換体と、糖類、上記形質転換体が代謝によりコリスミ酸を生成し得る化合物またはコリスミ酸およびそれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の原料化合物と、を含有する反応液中で反応させる工程〕
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造方法としては、まず（Ａ）形質転換体と、糖類、上記形質転換体が代謝によりコリスミ酸を生成し得る化合物またはコリスミ酸およびそれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の原料化合物と、を含有する反応液中で反応させる工程を行う。
本工程にて用いる各化合物と、反応条件について以下に詳述する。
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造方法としては、まず（Ａ）形質転換体と、糖類、上記形質転換体が代謝によりコリスミ酸を生成し得る化合物またはコリスミ酸およびそれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の原料化合物と、を含有する反応液中で反応させる工程を行う。
本工程にて用いる各化合物と、反応条件について以下に詳述する。
【0028】
（形質転換体）
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造方法において、形質転換体としては、糖類から代謝により４－ヒドロキシ安息香酸を生成できる形質転換体であれば、いずれの形質転換体を用いることができる。このような形質転換体としては、例えば、特許第６３２７６５３号に記載のコリネ型細菌形質転換体ＨＢＡ－２（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８３８）または特許第６３２７６５４号に記載のコリネ型細菌形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）等が挙げられる。
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造方法において、形質転換体としては、糖類から代謝により４－ヒドロキシ安息香酸を生成できる形質転換体であれば、いずれの形質転換体を用いることができる。このような形質転換体としては、例えば、特許第６３２７６５３号に記載のコリネ型細菌形質転換体ＨＢＡ－２（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８３８）または特許第６３２７６５４号に記載のコリネ型細菌形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）等が挙げられる。
【0029】
反応に先立ち、形質転換体を好気条件下で培養させることが好ましい。培養温度および培養時間としては、形質転換体を培養することができ、かつ必要量以上の形質転換体を得ることができれば特に限定されない。培養温度としては、例えば２５℃以上３８℃以下である。培養時間としては、例えば１２時間以上４８時間以下である。
【0030】
（培養用培地）
反応に先立つ形質転換体の好気的培養に用いる培地は、炭素源、窒素源、無機塩類およびその他の栄養物質等を含有する天然培地または合成培地を用いることができる。
炭素源として、糖類（グルコース、フルクトース、マンノース、キシロース、アラビノース、ガラクトースのような単糖；スクロース、マルトース、ラクトース、セロビオース、キシロビオース、トレハロースのような二糖；澱粉のような多糖；糖蜜等）、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセリンのような糖アルコール；酢酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、グルコン酸のような有機酸；エタノール、プロパノールのようなアルコール；ノルマルパラフィンのような炭化水素等も用いることができる。
炭素源は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。炭素源の培地中の濃度は、使用する化合物によっても異なるが、例えば、０．１ｗ／ｖ％以上２０ｗ／ｖ％以下とすればよい。
反応に先立つ形質転換体の好気的培養に用いる培地は、炭素源、窒素源、無機塩類およびその他の栄養物質等を含有する天然培地または合成培地を用いることができる。
炭素源として、糖類（グルコース、フルクトース、マンノース、キシロース、アラビノース、ガラクトースのような単糖；スクロース、マルトース、ラクトース、セロビオース、キシロビオース、トレハロースのような二糖；澱粉のような多糖；糖蜜等）、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセリンのような糖アルコール；酢酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、グルコン酸のような有機酸；エタノール、プロパノールのようなアルコール；ノルマルパラフィンのような炭化水素等も用いることができる。
炭素源は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。炭素源の培地中の濃度は、使用する化合物によっても異なるが、例えば、０．１ｗ／ｖ％以上２０ｗ／ｖ％以下とすればよい。
【0031】
窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムのような無機又は有機アンモニウム化合物、尿素、アンモニア水、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等を使用できる。また、コーンスティープリカー、肉エキス、ペプトン、ＮＺ－アミン、蛋白質加水分解物、アミノ酸等の含窒素有機化合物等も使用できる。窒素源は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。窒素源の培地中の濃度は、使用する窒素化合物によっても異なるが、例えば、０．１ｗ／ｖ％以上１０ｗ／ｖ％以下とすればよい。
無機塩類としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、炭酸カルシウム等が挙げられる。無機塩類は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。無機塩類の培地中の濃度は、使用する無機塩類によっても異なるが、例えば、０．０１ｗ／ｖ％以上１ｗ／ｖ％以下とすればよい。
無機塩類としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、炭酸カルシウム等が挙げられる。無機塩類は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。無機塩類の培地中の濃度は、使用する無機塩類によっても異なるが、例えば、０．０１ｗ／ｖ％以上１ｗ／ｖ％以下とすればよい。
【0032】
栄養物質としては、肉エキス、ペプトン、ポリペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、コーンスティープリカー、脱脂粉乳、脱脂大豆塩酸加水分解物、動植物又は微生物菌体のエキスやそれらの分解物等が挙げられる。栄養物質の培地中の濃度は、使用する栄養物質によっても異なるが、例えば、０．１ｗ／ｖ％以上１０ｗ／ｖ％以下とすればよい。
さらに、必要に応じて、ビタミン類を添加することもできる。ビタミン類としては、ビオチン、チアミン（ビタミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が挙げられる。
培地のｐＨは６以上８以下が好ましい。
さらに、必要に応じて、ビタミン類を添加することもできる。ビタミン類としては、ビオチン、チアミン（ビタミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が挙げられる。
培地のｐＨは６以上８以下が好ましい。
【0033】
具体的な好ましい培地としては、Ａ培地〔Ｉｎｕｉ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ｄｕｒｉｎｇ ｌａｃｔａｔｅ ａｎｄ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓ ｕｎｄｅｒ ｏｘｙｇｅｎ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ７：１８２－１９６ （２００４）〕、ＢＴ培地〔Ｏｍｕｍａｓａｂａ， Ｃ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｗｉｔｈ ｏｐｐｏｓｉｔｅ， ＡＴＰ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ８：９１－１０３ （２００４）〕等が挙げられる。これらの培地において、糖類濃度を上記範囲にして用いればよい。
【0034】
（原料化合物）
原料化合物は形質転換体が細胞内に取り込める化合物であることが好ましく、植物に多く含まれる等、工業的に利用し易いものであることがより好ましい。
上記原料化合物のうち、糖類としては、形質転換体の代謝によりグルコースを生成し得る糖類が好ましく、グルコースがより好ましい。このような糖類にはグルコース単位を有するオリゴ糖および多糖類が含まれる。上記オリゴ糖および上記多糖類としては、フルクトース、マンノース、アラビノース、キシロース、ガラクトースなどの単糖類；セロビオース、ショ糖、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、キシロビオースなどの二糖類；デキストリン又は可溶性澱粉などの多糖類などが挙げられる。また、グルコースを用いることにより、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させることができる観点から好ましい。
また、上記原料化合物のうち、形質転換体が代謝によりコリスミ酸を生成し得る化合物としては、キナ酸、シキミ酸などが挙げられる。
また、例えばこれらの原料化合物を含む原料として、植物由来の原料を用いることができる。植物由来の原料としては、例えば、糖蜜や、わら（稲わら、大麦わら、小麦わら、ライ麦わら、オート麦わら等）、バガス、コーンストーバー等の非可食農産廃棄物や、スイッチグラス、ネピアグラス、ミスキャンサス等のエネルギー作物や、木くず、古紙などを糖化酵素などで糖化した、グルコースなどの複数の糖を含む糖化液を用いることもできる。
中でも、原料化合物としては、グルコース、コリスミ酸、キナ酸、シキミ酸が好ましく、これらを含む原料として、植物由来の原料を用いることが好ましい。
原料化合物は形質転換体が細胞内に取り込める化合物であることが好ましく、植物に多く含まれる等、工業的に利用し易いものであることがより好ましい。
上記原料化合物のうち、糖類としては、形質転換体の代謝によりグルコースを生成し得る糖類が好ましく、グルコースがより好ましい。このような糖類にはグルコース単位を有するオリゴ糖および多糖類が含まれる。上記オリゴ糖および上記多糖類としては、フルクトース、マンノース、アラビノース、キシロース、ガラクトースなどの単糖類；セロビオース、ショ糖、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、キシロビオースなどの二糖類；デキストリン又は可溶性澱粉などの多糖類などが挙げられる。また、グルコースを用いることにより、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させることができる観点から好ましい。
また、上記原料化合物のうち、形質転換体が代謝によりコリスミ酸を生成し得る化合物としては、キナ酸、シキミ酸などが挙げられる。
また、例えばこれらの原料化合物を含む原料として、植物由来の原料を用いることができる。植物由来の原料としては、例えば、糖蜜や、わら（稲わら、大麦わら、小麦わら、ライ麦わら、オート麦わら等）、バガス、コーンストーバー等の非可食農産廃棄物や、スイッチグラス、ネピアグラス、ミスキャンサス等のエネルギー作物や、木くず、古紙などを糖化酵素などで糖化した、グルコースなどの複数の糖を含む糖化液を用いることもできる。
中でも、原料化合物としては、グルコース、コリスミ酸、キナ酸、シキミ酸が好ましく、これらを含む原料として、植物由来の原料を用いることが好ましい。
【0035】
（反応液）
反応液としては、炭素源、窒素源、及び無機塩類等を含有する天然反応液または合成反応液を用いることができる。
炭素源としては、上記説明した原料化合物又はそれを含む糖蜜や糖化液などを用いればよい。また、炭素源として、糖類の他に、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセリンのような糖アルコール；酢酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、グルコン酸のような有機酸；エタノール、プロパノールのようなアルコール；ノルマルパラフィンのような炭化水素等も用いることができる。
炭素源は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。
反応液中の原料化合物の濃度は、１ｗ／ｖ％以上２０ｗ／ｖ％以下が好ましく、２ｗ／ｖ％以上１０ｗ／ｖ％以下がより好ましく、２ｗ／ｖ％以上５ｗ／ｖ％以下がさらに好ましい。
また、原料化合物を含む全炭素源の濃度は、２ｗ／ｖ％以上５ｗ／ｖ％以下とすればよい。
反応液としては、炭素源、窒素源、及び無機塩類等を含有する天然反応液または合成反応液を用いることができる。
炭素源としては、上記説明した原料化合物又はそれを含む糖蜜や糖化液などを用いればよい。また、炭素源として、糖類の他に、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセリンのような糖アルコール；酢酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、グルコン酸のような有機酸；エタノール、プロパノールのようなアルコール；ノルマルパラフィンのような炭化水素等も用いることができる。
炭素源は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。
反応液中の原料化合物の濃度は、１ｗ／ｖ％以上２０ｗ／ｖ％以下が好ましく、２ｗ／ｖ％以上１０ｗ／ｖ％以下がより好ましく、２ｗ／ｖ％以上５ｗ／ｖ％以下がさらに好ましい。
また、原料化合物を含む全炭素源の濃度は、２ｗ／ｖ％以上５ｗ／ｖ％以下とすればよい。
【0036】
窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムのような無機又は有機アンモニウム化合物、尿素、アンモニア水、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等を使用できる。また、コーンスティープリカー、肉エキス、ペプトン、ＮＺ－アミン、蛋白質加水分解物、アミノ酸等の含窒素有機化合物等も使用できる。窒素源は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。窒素源の反応液中の濃度は、使用する窒素化合物によっても異なるが、例えば、０．１ｗ／ｖ％以上１０ｗ／ｖ％以下とすればよい。
無機塩類としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、炭酸カルシウム等が挙げられる。無機塩類は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。無機塩類の反応液中の濃度は、使用する無機塩類によっても異なるが、例えば、０．０１ｗ／ｖ％以上１ｗ／ｖ％以下とすればよい。
無機塩類としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、炭酸カルシウム等が挙げられる。無機塩類は、１種を単独で、又は２種以上を混合して使用できる。無機塩類の反応液中の濃度は、使用する無機塩類によっても異なるが、例えば、０．０１ｗ／ｖ％以上１ｗ／ｖ％以下とすればよい。
【0037】
栄養物質としては、肉エキス、ペプトン、ポリペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、コーンスティープリカー、脱脂粉乳、脱脂大豆塩酸加水分解物、動植物又は微生物菌体のエキスやそれらの分解物等が挙げられる。栄養物質の培地中の濃度は、使用する栄養物質によっても異なるが、例えば、０．１ｗ／ｖ％以上１０ｗ／ｖ％以下とすればよい。
さらに、必要に応じて、ビタミン類を添加することもできる。ビタミン類としては、ビオチン、チアミン（ビタミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が挙げられる。
反応液のｐＨは６以上８以下が好ましい。
さらに、必要に応じて、ビタミン類を添加することもできる。ビタミン類としては、ビオチン、チアミン（ビタミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が挙げられる。
反応液のｐＨは６以上８以下が好ましい。
【0038】
具体的な好ましい反応液としては、前述したＡ培地およびＢＴ培地等が挙げられる。これらの反応液において、糖類濃度を上記範囲にして用いればよい。
【0039】
（反応条件）
反応温度、即ち形質転換体の生存温度は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率の観点から、２０℃以上が好ましく、２３℃以上がより好ましく、２５℃以上がさらに好ましい。また、上記生存温度は、同様の観点から、５０℃以下が好ましく、４８℃以下がより好ましく、４７℃以下がさらに好ましい。
反応時間は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率の観点から、７日間以下が好ましく、５日間以下がより好ましく、３日間以下がさらに好ましい。また、上記反応時間は、反応が十分に進行すれば特に限定されないが、例えば、１日間以上である。
培養は、バッチ式、流加式、連続式の何れでもよい。中でも、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率の観点から、バッチ式が好ましい。
反応は、好気的条件で行ってもよく、還元条件で行ってもよい。形質転換体自体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の生産能力は、好気的条件下の方が高い。しかし、好気的条件下では形質転換体が増殖するため、原料化合物が増殖のために消費され、その分、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率が低下する。
従って、好気的、かつ形質転換体が増殖しない条件下で反応を行うのが好ましい。本明細書において「増殖しない」ことには、実質的に増殖しないこと、又は殆ど増殖しないことが含まれる。例えば、微生物の増殖に必須の化合物であるビオチン、チアミンなどのビタミン類、窒素源などの１種以上を欠乏、或いは制限させた反応液を用いることにより、形質転換体の増殖を回避または抑制できる。
反応温度、即ち形質転換体の生存温度は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率の観点から、２０℃以上が好ましく、２３℃以上がより好ましく、２５℃以上がさらに好ましい。また、上記生存温度は、同様の観点から、５０℃以下が好ましく、４８℃以下がより好ましく、４７℃以下がさらに好ましい。
反応時間は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率の観点から、７日間以下が好ましく、５日間以下がより好ましく、３日間以下がさらに好ましい。また、上記反応時間は、反応が十分に進行すれば特に限定されないが、例えば、１日間以上である。
培養は、バッチ式、流加式、連続式の何れでもよい。中でも、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率の観点から、バッチ式が好ましい。
反応は、好気的条件で行ってもよく、還元条件で行ってもよい。形質転換体自体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の生産能力は、好気的条件下の方が高い。しかし、好気的条件下では形質転換体が増殖するため、原料化合物が増殖のために消費され、その分、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率が低下する。
従って、好気的、かつ形質転換体が増殖しない条件下で反応を行うのが好ましい。本明細書において「増殖しない」ことには、実質的に増殖しないこと、又は殆ど増殖しないことが含まれる。例えば、微生物の増殖に必須の化合物であるビオチン、チアミンなどのビタミン類、窒素源などの１種以上を欠乏、或いは制限させた反応液を用いることにより、形質転換体の増殖を回避または抑制できる。
【0040】
また、還元条件では、形質転換体は実質的に増殖しないため、原料化合物が増殖のために消費されない分、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率が高くなる。
還元条件は、反応液の酸化還元電位で規定される。反応液の酸化還元電位は、－５００ｍＶ以上－２００ｍＶ以下が好ましく、－５００ｍＶ以上－１５０ｍＶ以下がより好ましい。
反応液の還元状態は簡便にはレサズリン指示薬（還元状態であれば、青色から無色への脱色）で推定できるが、正確には酸化還元電位差計（例えば、ＢＲＯＡＤＬＥＹ ＪＡＭＥＳ社製、ＯＲＰ Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓ）を用いて測定できる。
還元条件は、反応液の酸化還元電位で規定される。反応液の酸化還元電位は、－５００ｍＶ以上－２００ｍＶ以下が好ましく、－５００ｍＶ以上－１５０ｍＶ以下がより好ましい。
反応液の還元状態は簡便にはレサズリン指示薬（還元状態であれば、青色から無色への脱色）で推定できるが、正確には酸化還元電位差計（例えば、ＢＲＯＡＤＬＥＹ ＪＡＭＥＳ社製、ＯＲＰ Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓ）を用いて測定できる。
【0041】
還元条件にある反応液の調整方法は、公知の方法を制限なく使用できる。例えば、反応液の液体媒体として、蒸留水などの代わりに反応液用水溶液を使用してもよく、反応液用水溶液の調整方法は、例えば硫酸還元微生物などの絶対嫌気性微生物用の培養液調整方法（Ｐｆｅｎｎｉｇ， Ｎ． ｅｔ ａｌ．， （１９８１）：Ｔｈｅ ｄｉｓｓｉｍｉｌａｔｏｒｙ ｓｕｌｆａｔｅ－ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ，Ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ，Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｈａｂｉｔａｔｓ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉａ，Ｅｄ．ｂｙ Ｓｔａｒｒ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．， ｐ９２６－９４０， Ｂｅｒｌｉｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ．）や「農芸化学実験書 第三巻、京都大学農学部 農芸化学教室編、１９９０年第２６刷、産業図書株式会社出版」などが参考となり、所望する還元条件下の水溶液を得ることができる。
具体的には、蒸留水などを加熱処理や減圧処理して溶解ガスを除去することにより、還元条件の反応液用水溶液を得ることができる。この場合、好ましくは１０ｍｍＨｇ以下、より好ましくは５ｍｍＨｇ以下、さらに好ましくは３ｍｍＨｇ以下の減圧下で、好ましくは１分以上６０分以下、より好ましくは５分以上４０分以下の条件で、蒸留水などを処理することにより、溶解ガス、特に溶解酸素を除去して還元条件下の反応液用水溶液を作成することができる。
具体的には、蒸留水などを加熱処理や減圧処理して溶解ガスを除去することにより、還元条件の反応液用水溶液を得ることができる。この場合、好ましくは１０ｍｍＨｇ以下、より好ましくは５ｍｍＨｇ以下、さらに好ましくは３ｍｍＨｇ以下の減圧下で、好ましくは１分以上６０分以下、より好ましくは５分以上４０分以下の条件で、蒸留水などを処理することにより、溶解ガス、特に溶解酸素を除去して還元条件下の反応液用水溶液を作成することができる。
【0042】
また、適当な還元剤（例えば、チオグリコール酸、アスコルビン酸、システィン塩酸塩、メルカプト酢酸、チオール酢酸、グルタチオン、硫化ソーダ等）を添加して還元条件の反応液用水溶液を調整することもできる。
これらの方法を適宜組み合わせることも有効な還元条件の反応液用水溶液の調整方法である。
これらの方法を適宜組み合わせることも有効な還元条件の反応液用水溶液の調整方法である。
【0043】
還元条件下で反応させる場合は、反応中も反応液を還元条件に維持することが好ましい。反応途中での還元条件を維持するために、反応系外からの酸素の混入を可能な限り防止することが望ましく、具体的には、反応系を窒素ガス等の不活性ガスや炭酸ガス等で封入する方法が挙げられる。酸素混入をより効果的に防止する方法としては、反応途中において本実施形態の第１の形質転換体内の代謝機能を効率よく機能させるために、反応系のｐＨ維持調整液の添加や各種栄養素溶解液を適宜添加する必要が生じる場合もあるが、このような場合には添加溶液から酸素を予め除去しておくことが有効である。
【0044】
〔（Ｂ）反応液の不純物を除去する工程〕
次に、（Ｂ）反応液の不純物を除去する工程を行う。上記のようにして培養することにより、反応液中に４－ヒドロキシ安息香酸組成物が生産される。反応液を回収することにより４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収できるが、反応液中には形質転換体、未反応の原料化合物および反応液そのものに含まれる成分といった４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性に影響する成分が含まれている。そのため、反応液からこれらの成分を除去することによって、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性をより向上させることができる。
次に、（Ｂ）反応液の不純物を除去する工程を行う。上記のようにして培養することにより、反応液中に４－ヒドロキシ安息香酸組成物が生産される。反応液を回収することにより４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収できるが、反応液中には形質転換体、未反応の原料化合物および反応液そのものに含まれる成分といった４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性に影響する成分が含まれている。そのため、反応液からこれらの成分を除去することによって、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性をより向上させることができる。
【0045】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を作製する際の反応液の不純物を除去する方法としては、形質転換体の分離と、化学成分の吸着の両方を行う。この両方を行うことにより、４－ヒドロキシ安息香酸組成物から不純物をより除去することができ、結果として４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性をより向上させることができる。
【0046】
まず、形質転換体の分離方法について説明する。
形質転換体の分離方法としては、公知の分離方法を用いることができるが、例えば、静置による上澄みの採取、膜ろ過、遠心分離などが挙げられる。これらの方法は、１種又は２種以上を適宜組み合わせて行うことができる。
形質転換体の分離方法としては、公知の分離方法を用いることができるが、例えば、静置による上澄みの採取、膜ろ過、遠心分離などが挙げられる。これらの方法は、１種又は２種以上を適宜組み合わせて行うことができる。
【0047】
膜ろ過による処理条件としては、一般的なろ過条件で処理することができる。膜孔径は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、０．０１μｍ以上が好ましく、０．０３μｍ以上がより好ましく、０．０５μｍ以上がさらに好ましく、０．０７μｍ以上がさらに好ましく、０．１０μｍ以上がさらに好ましく、０．１５μｍ以上がさらに好ましく、０．２０μｍ以上がさらに好ましい。また、同様の観点から、３μｍ以下が好ましく、２μｍ以下がより好ましく、１μｍ以下がさらに好ましい。なお、膜孔径の測定方法としては、水銀圧入法、バブルポイント試験、細菌ろ過法等を用いた一般的な測定方法が挙げられるが、バブルポイント試験で求めた値を用いることが好ましい。膜ろ過で使用する膜の材質としては、例えば、高分子膜、セラミック膜、ステンレス膜等が挙げることができる。
【0048】
遠心分離に用いる遠心分離機としては、分離板型、円筒型、デカンター型等の一般的な機器を使用することができる。遠心分離する際の温度の下限値は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、好ましくは５℃以上であり、より好ましくは１０℃以上であり、さらに好ましくは２０℃以上である。また、遠心分離する際の温度の上限値は、同様の観点から、好ましくは７０℃以下であり、より好ましくは６０℃以下であり、さらに好ましくは４０℃以下である。
【0049】
また、遠心分離する際の相対遠心力と時間は適宜設定可能であるが、相対遠心力の下限値は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性を向上させる観点から、好ましくは３０００ｇ以上であり、より好ましくは５０００ｇ以上であり、さらに好ましくは７０００ｇ以上であり、さらに好ましくは１００００ｇ以上であり、さらに好ましくは１５０００ｇ以上である。また、相対遠心力の上限値は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、好ましくは５００００ｇ以下であり、より好ましくは２５０００ｇ以下であり、さらに好ましくは２００００ｇ以下である。
同様に、時間の下限値は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性を向上させる観点から、好ましくは０．２分以上であり、より好ましくは０．５分以上であり、さらに好ましくは１分以上である。また、時間の上限値は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、好ましくは７５分以下、より好ましくは６０分以下、さらに好ましくは３０分以下である。
同様に、時間の下限値は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性を向上させる観点から、好ましくは０．２分以上であり、より好ましくは０．５分以上であり、さらに好ましくは１分以上である。また、時間の上限値は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、好ましくは７５分以下、より好ましくは６０分以下、さらに好ましくは３０分以下である。
【0050】
次に、化学成分の吸着方法について説明する。
化学成分の吸着方法としては、例えば、上記の方法によって形質転換体を除去した後の反応液に対して、４－ヒドロキシ安息香酸に活性を持たない吸着材を添加することが挙げられる。
上記吸着材としては、４－ヒドロキシ安息香酸に活性を持たず、かつ未反応の原料化合物および反応液そのものに含まれる成分を吸着できるものであれば特に限定されない。このような吸着材としては、例えば、天然物系吸着材（天然ゼオライト、銀ゼオライト、酸性白土等）、又は合成物系吸着材（合成ゼオライト、モレキュラーシーブ、細菌吸着ポリマー、ヒドロキシアパタイト、リン鉱石、チタン珪酸塩、シリカゲル、シリカアルミナゲル、多孔質ガラス等）等の無機系吸着材；粉末状活性炭、粒状活性炭、繊維状活性炭、ブロック状活性炭、押出成形活性炭、成形活性炭、合成物系粒状活性炭、合成物系繊維状活性炭等の活性炭；例えば、分子吸着樹脂、イオン交換樹脂、イオン交換繊維、キレート樹脂、キレート繊維等の有機系吸着材が挙げられる。
これらの中でも、環境適合性の観点から、活性炭を用いることが好ましい。
化学成分の吸着方法としては、例えば、上記の方法によって形質転換体を除去した後の反応液に対して、４－ヒドロキシ安息香酸に活性を持たない吸着材を添加することが挙げられる。
上記吸着材としては、４－ヒドロキシ安息香酸に活性を持たず、かつ未反応の原料化合物および反応液そのものに含まれる成分を吸着できるものであれば特に限定されない。このような吸着材としては、例えば、天然物系吸着材（天然ゼオライト、銀ゼオライト、酸性白土等）、又は合成物系吸着材（合成ゼオライト、モレキュラーシーブ、細菌吸着ポリマー、ヒドロキシアパタイト、リン鉱石、チタン珪酸塩、シリカゲル、シリカアルミナゲル、多孔質ガラス等）等の無機系吸着材；粉末状活性炭、粒状活性炭、繊維状活性炭、ブロック状活性炭、押出成形活性炭、成形活性炭、合成物系粒状活性炭、合成物系繊維状活性炭等の活性炭；例えば、分子吸着樹脂、イオン交換樹脂、イオン交換繊維、キレート樹脂、キレート繊維等の有機系吸着材が挙げられる。
これらの中でも、環境適合性の観点から、活性炭を用いることが好ましい。
【0051】
添加する吸着材の量としては、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の色調をより向上させる観点から、反応液１００ｇに対して、好ましくは０．１ｇ以上であり、より好ましくは０．２ｇ以上であり、さらに好ましくは０．３ｇ以上であり、さらに好ましくは０．４ｇ以上である。
また、添加する吸着材の量の上限値は特に限定されないが、後述する（Ｃ）反応液中の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収する工程の作業効率の観点から、反応液１００ｇに対して、好ましくは５．０ｇ以下であり、より好ましくは４．０ｇ以下であり、さらに好ましくは３．０ｇ以下であり、さらに好ましくは２．０ｇ以下であり、さらに好ましくは１．０ｇ以下であり、さらに好ましくは０．５ｇ以下である。
また、添加する吸着材の量の上限値は特に限定されないが、後述する（Ｃ）反応液中の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収する工程の作業効率の観点から、反応液１００ｇに対して、好ましくは５．０ｇ以下であり、より好ましくは４．０ｇ以下であり、さらに好ましくは３．０ｇ以下であり、さらに好ましくは２．０ｇ以下であり、さらに好ましくは１．０ｇ以下であり、さらに好ましくは０．５ｇ以下である。
【0052】
〔（Ｃ）反応液中の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収する工程〕
そして、（Ｃ）反応液中の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収する工程を行う。上記のように不純物を除去することにより比較的純度の高い４－ヒドロキシ安息香酸組成物を含む反応液とすることができるが、さらに、公知の方法で４－ヒドロキシ安息香酸組成物を反応液から分離することもできる。そのような公知の方法として、晶析法、膜分離法、有機溶媒抽出法、各種吸着法（イオン交換樹脂、合成吸着材などを使用）等が挙げられる。
そして、（Ｃ）反応液中の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を回収する工程を行う。上記のように不純物を除去することにより比較的純度の高い４－ヒドロキシ安息香酸組成物を含む反応液とすることができるが、さらに、公知の方法で４－ヒドロキシ安息香酸組成物を反応液から分離することもできる。そのような公知の方法として、晶析法、膜分離法、有機溶媒抽出法、各種吸着法（イオン交換樹脂、合成吸着材などを使用）等が挙げられる。
【0053】
また、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の回収後、必要に応じて、４－ヒドロキシ安息香酸組成物を洗浄する工程や精製する工程を設けるようにしてもよい。
【0054】
４－ヒドロキシ安息香酸組成物を洗浄する工程としては、公知の洗浄方法を用いることができる。公知の洗浄方法としては、例えば、超音波洗浄、撹拌洗浄、流通洗浄、浸漬洗浄等が挙げられる。これらの中でも、撹拌洗浄が好ましい。
洗浄溶媒としては、４－ヒドロキシ安息香酸組成物を溶解させず、不純物のみを溶解させる洗浄溶媒が好ましい。そのような洗浄溶媒としては、例えば、純水が好ましい。ここで、純水とは導電率が１ＭΩ・ｃｍ以上の水を指す。上記導電率を満たす水は純度が高く、含有される塩素や塩類等の不純物が非常に少ない。
洗浄溶媒としては、４－ヒドロキシ安息香酸組成物を溶解させず、不純物のみを溶解させる洗浄溶媒が好ましい。そのような洗浄溶媒としては、例えば、純水が好ましい。ここで、純水とは導電率が１ＭΩ・ｃｍ以上の水を指す。上記導電率を満たす水は純度が高く、含有される塩素や塩類等の不純物が非常に少ない。
【0055】
４－ヒドロキシ安息香酸組成物を洗浄する工程における洗浄溶媒の量は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性をより向上させる観点から、得られた４－ヒドロキシ安息香酸組成物の質量に対して７倍量以上が好ましく、８倍量以上がより好ましく、９倍量以上がさらに好ましく、１０倍量以上がさらに好ましい。
また、洗浄溶媒の量は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、５０倍量以下が好ましく、２５倍量以下がより好ましく、１５倍量以下がさらに好ましく、１２倍量以下がさらに好ましい。
また、洗浄溶媒の量は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、５０倍量以下が好ましく、２５倍量以下がより好ましく、１５倍量以下がさらに好ましく、１２倍量以下がさらに好ましい。
【0056】
４－ヒドロキシ安息香酸組成物を洗浄する工程における洗浄回数は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の重合性をより向上させる観点から、１回以上が好ましく、２回以上がより好ましく、３回以上がさらに好ましい。
また、洗浄回数は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、１０回以下が好ましく、７回以下がより好ましく、５回以下がさらに好ましく、４回以下がさらに好ましい。
また、洗浄回数は、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の製造効率を向上させる観点から、１０回以下が好ましく、７回以下がより好ましく、５回以下がさらに好ましく、４回以下がさらに好ましい。
【0057】
［用途］
本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物は、化石資源を原料とした従来の石油化学プロセスにより合成された４－ヒドロキシ安息香酸組成物と同様の用途に用いることができる。すなわち、本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物の用途としては、ポリエステル、ポリエステル樹脂、ポリエステル繊維、液晶ポリエステル、液晶ポリエステル樹脂、液晶ポリエステル繊維等のポリマー原料、防腐剤であるパラベンの合成原料、染料、顔料、接着性樹脂、可塑剤などが挙げられる。
これらのうち、ポリマー用途に用いることが好ましい。すなわち、本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物を用いたポリマーは、本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物由来の４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の構造を少なくとも含むポリマーである。
本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物は、化石資源を原料とした従来の石油化学プロセスにより合成された４－ヒドロキシ安息香酸組成物と同様の用途に用いることができる。すなわち、本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物の用途としては、ポリエステル、ポリエステル樹脂、ポリエステル繊維、液晶ポリエステル、液晶ポリエステル樹脂、液晶ポリエステル繊維等のポリマー原料、防腐剤であるパラベンの合成原料、染料、顔料、接着性樹脂、可塑剤などが挙げられる。
これらのうち、ポリマー用途に用いることが好ましい。すなわち、本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物を用いたポリマーは、本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物由来の４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の構造を少なくとも含むポリマーである。
【0058】
本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物は、上述のように環境適合性と重合性のバランスが向上したものである。そのため、環境適合性と重合性を高度に両立した、バイオマスプラスチック用のポリマー（バイオベースポリマー）に好ましく用いることができる。
【0059】
本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物を用いたポリマーを用いた製品の例としては、各種電源コード、電気機器、各種部品、建材、家具、釣り糸などの釣り具、漁網、ロープ、液晶ポリマー等が挙げられる。
【0060】
本実施形態のポリマーとしては、液晶ポリマーであることが好ましい。本実施形態のポリマーに含まれる４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の構造は、その分子形状が細長く、扁平で分子の長鎖に沿って剛性が高い分子鎖（この剛性が高い分子鎖は例えば「メソゲン骨格」と呼称されている）を有する。そして、本実施形態における４－ヒドロキシ安息香酸組成物は、上述のように環境適合性と重合性のバランスが向上したものである。すなわち、本実施形態のポリマーは、４－ヒドロキシ安息香酸組成物の環境適合性と重合性のバランスが向上したことに由来する、環境適合性、熱伝導性および機械的強度のバランスが向上した液晶ポリマーとして好適に用いることができる。
【0061】
ここで、液晶ポリマーとしては、液晶ポリマーを用いて得られる下流製品の特性を著しく損なわない範囲であれば、本実施形態のポリマーに加えて、必要な特性に応じて補強剤等の添加剤が含有されていてもよい。
ここで添加剤としては、例えばガラス繊維、シリカアルミナ繊維、アルミナ繊維、炭素繊維などの繊維状補強剤；ホウ酸アルミニウムウィスカー、チタン酸カリウムウィスカーなどの針状の補強剤；ガラスビーズ、タルク、マイカ、グラファイト、ウォラストナイト、ドロマイトなどの無機充填剤；フッ素樹脂、金属石鹸類などの離型改良剤；染料、顔料などの着色剤；酸化防止剤；熱安定剤；紫外線吸収剤；帯電防止剤；界面活性剤などが挙げられる。これらの添加剤は二種以上を併用してもよい。
ここで添加剤としては、例えばガラス繊維、シリカアルミナ繊維、アルミナ繊維、炭素繊維などの繊維状補強剤；ホウ酸アルミニウムウィスカー、チタン酸カリウムウィスカーなどの針状の補強剤；ガラスビーズ、タルク、マイカ、グラファイト、ウォラストナイト、ドロマイトなどの無機充填剤；フッ素樹脂、金属石鹸類などの離型改良剤；染料、顔料などの着色剤；酸化防止剤；熱安定剤；紫外線吸収剤；帯電防止剤；界面活性剤などが挙げられる。これらの添加剤は二種以上を併用してもよい。
【0062】
また、高級脂肪酸、高級脂肪酸エステル、高級脂肪酸金属塩、フルオロカーボン系界面活性剤等の外部滑剤効果を有する添加剤を用いることも可能である。更に、少量であれば、本実施形態のポリマー以外の熱可塑性樹脂（たとえば、ポリアミド、結晶性ポリエステル、ポリフェニレンスルフィド、ポリエーテルケトン、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル及びその変性物、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリエーテルイミド等）や熱硬化性樹脂（たとえば、フェノール樹脂、エポキシ樹脂等）を含有させてもよい。このような本実施形態のポリマー以外の熱可塑性樹脂や熱硬化性樹脂を使用する場合、本実施形態のポリマー自身の液晶性や成形性を損なわないようにして、その種類や添加量を選択することが必要である。
【0063】
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を用いたポリマーを用いた製品においては、所定の加工物（製品）の原料に用いられる４－ヒドロキシ安息香酸全体に対する、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の割合を、製造業者ごとに規定してもよい。
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の割合を、製造業者ごとに規定することにより、排出、廃棄された製品の実測バイオ化率を計測することで、かかる製品の回収義務が課せられる製造業者が特定可能となる。また、ある製造業者において、自社製品の製造ロットごとに、４－ヒドロキシ安息香酸全体に対する、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の割合を規定してもよく、こうすれば、製造ロットをトレースできるようになる。従来のトレーサビリティ付与手段（例えば、顔料などの混合）では、各種製品の強度が低下するおそれがあったところ、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物によれば、所望の重合性が得られるため、各種製品の強度が担保されつつ、製造業者を特定可能となる。
本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の割合を、製造業者ごとに規定することにより、排出、廃棄された製品の実測バイオ化率を計測することで、かかる製品の回収義務が課せられる製造業者が特定可能となる。また、ある製造業者において、自社製品の製造ロットごとに、４－ヒドロキシ安息香酸全体に対する、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物の割合を規定してもよく、こうすれば、製造ロットをトレースできるようになる。従来のトレーサビリティ付与手段（例えば、顔料などの混合）では、各種製品の強度が低下するおそれがあったところ、本実施形態の４－ヒドロキシ安息香酸組成物によれば、所望の重合性が得られるため、各種製品の強度が担保されつつ、製造業者を特定可能となる。
【0064】
以上、本発明の実施形態について述べたが、これらは本発明の例示であり、上記以外の様々な構成を採用することができる。また、本発明は上述の実施形態に限定されるものではなく、本発明の目的を達成できる範囲での変形、改良等は本発明に含まれる。
【0065】
具体的には、本実施形態において、バイオマス資源を原料とした化学物質として４－ヒドロキシ安息香酸を一例に挙げたが、本開示の技術思想は、フェノールなども含め、バイオマス資源を原料として生産される、様々な物質に適用可能である。
【0066】
また、本実施形態において、４－ヒドロキシ安息香酸に含有されるシキミ酸の濃度を規定した実施形態を一例に挙げたが、形質転換体が生産する様々な中間代謝物質、前述した「その他の成分」、「培地」などに含有される物質および特定の元素の含有量等について規定した発明等も、本開示の技術思想の範疇に含まれる。
なお、上記中間代謝物質としては、例えば、シキミ酸、デヒドロシキミ酸、キナ酸、プロトカテク酸、アミノ酸等が挙げられるが、これらに限定されない。また、上記特定の元素としては、例えば、窒素、リン、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、鉄、マンガン、亜鉛、コバルト等が挙げられるが、これらに限定されない。
なお、上記中間代謝物質としては、例えば、シキミ酸、デヒドロシキミ酸、キナ酸、プロトカテク酸、アミノ酸等が挙げられるが、これらに限定されない。また、上記特定の元素としては、例えば、窒素、リン、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、鉄、マンガン、亜鉛、コバルト等が挙げられるが、これらに限定されない。
【実施例0067】
本発明の実施態様を、実施例および比較例に基づき詳細に説明する。念のため述べておくと、本発明は実施例のみに限定されない。
【0068】
＜実施例、比較例＞
（実施例１）
カナマイシン５０μｇ／ｍｌを含むＡ液体培地［（ＮＨ２）２ＣＯ ２ｇ、（ＮＨ４）２ＳＯ４ ７ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ ０．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、０．０６％（ｗ／ｖ） ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ＋ ０．０４２％（ｗ／ｖ） ＭｎＳＯ４・２Ｈ２Ｏ １ｍｌ、０．０２％（ｗ／ｖ）ｂｉｏｔｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １ｍｌ、０．０１％（ｗ／ｖ） ｔｈｉａｍｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ２ｍｌ、ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ２ｇ、ｖｉｔａｍｉｎ ａｓｓａｙ ｃａｓａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ７ｇ、ｇｌｕｃｏｓｅ ４０ｇを蒸留水１Ｌに溶解したもの］１０ｍｌに、更に２質量％の割合で炭酸カルシウムの入った試験管に、特許第６３２７６５４号に記載のコリネ型細菌形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）を一白金耳植菌し、３３℃、２４時間、２００ｒｐｍの条件下にて好気的に振とう培養を行った。これにより、グルコースから合成された４－ヒドロキシ安息香酸を含む試験液を得た（４－ヒドロキシ安息香酸濃度：７．３質量％）。
上記試験液に対して孔径０．２２μｍのメンブレンフィルター（メルクミリポア社製、ステリトップ ０．２２μｍ×３３ｍｍ）を用いた真空ろ過を行うことで、上記試験液から上記ＨＢＡ－４７を分離した。次いで、上記試験液に粉末活性炭を添加し、活性炭処理を施した。なお、粉末活性炭は、試験液１００ｇに対して０．４ｇ使用した。次に、活性炭処理を施した試験液に硫酸２５％を添加して、ｐＨを８から３まで低下させることにより、溶質を析出させる晶析操作を行った。次に、析出した溶質をろ過分離し、固体の析出物を回収した。次に、得られた析出物を、上記析出物の質量に対して１０倍量の純水で３回、撹拌子を用いて２００ｒｐｍで撹拌洗浄した後、乾燥させ、固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
（実施例１）
カナマイシン５０μｇ／ｍｌを含むＡ液体培地［（ＮＨ２）２ＣＯ ２ｇ、（ＮＨ４）２ＳＯ４ ７ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ ０．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、０．０６％（ｗ／ｖ） ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ＋ ０．０４２％（ｗ／ｖ） ＭｎＳＯ４・２Ｈ２Ｏ １ｍｌ、０．０２％（ｗ／ｖ）ｂｉｏｔｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ １ｍｌ、０．０１％（ｗ／ｖ） ｔｈｉａｍｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ２ｍｌ、ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ２ｇ、ｖｉｔａｍｉｎ ａｓｓａｙ ｃａｓａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ７ｇ、ｇｌｕｃｏｓｅ ４０ｇを蒸留水１Ｌに溶解したもの］１０ｍｌに、更に２質量％の割合で炭酸カルシウムの入った試験管に、特許第６３２７６５４号に記載のコリネ型細菌形質転換体ＨＢＡ－４７（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）を一白金耳植菌し、３３℃、２４時間、２００ｒｐｍの条件下にて好気的に振とう培養を行った。これにより、グルコースから合成された４－ヒドロキシ安息香酸を含む試験液を得た（４－ヒドロキシ安息香酸濃度：７．３質量％）。
上記試験液に対して孔径０．２２μｍのメンブレンフィルター（メルクミリポア社製、ステリトップ ０．２２μｍ×３３ｍｍ）を用いた真空ろ過を行うことで、上記試験液から上記ＨＢＡ－４７を分離した。次いで、上記試験液に粉末活性炭を添加し、活性炭処理を施した。なお、粉末活性炭は、試験液１００ｇに対して０．４ｇ使用した。次に、活性炭処理を施した試験液に硫酸２５％を添加して、ｐＨを８から３まで低下させることにより、溶質を析出させる晶析操作を行った。次に、析出した溶質をろ過分離し、固体の析出物を回収した。次に、得られた析出物を、上記析出物の質量に対して１０倍量の純水で３回、撹拌子を用いて２００ｒｐｍで撹拌洗浄した後、乾燥させ、固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
【0069】
（実施例２）
得られた析出物を、上記析出物の質量に対して１０倍量の純水で撹拌洗浄する回数を２回に変更した以外は、実施例１に記載の方法と同様の方法にて固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
得られた析出物を、上記析出物の質量に対して１０倍量の純水で撹拌洗浄する回数を２回に変更した以外は、実施例１に記載の方法と同様の方法にて固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
【0070】
（実施例３）
得られた析出物を、上記析出物の質量に対して１０倍量の純水で撹拌洗浄する回数を１回に変更した以外は、実施例１に記載の方法と同様の方法にて固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
得られた析出物を、上記析出物の質量に対して１０倍量の純水で撹拌洗浄する回数を１回に変更した以外は、実施例１に記載の方法と同様の方法にて固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
【0071】
（比較例１）
得られた析出物の洗浄方法を５倍量の純水で１回撹拌洗浄する方法に変更した以外は、実施例１に記載の方法と同様の方法にて固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
得られた析出物の洗浄方法を５倍量の純水で１回撹拌洗浄する方法に変更した以外は、実施例１に記載の方法と同様の方法にて固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
【0072】
（比較例２）
得られた析出物の洗浄方法を次のように変更した以外は、実施例１に記載の方法と同様の方法にて固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
得られた析出物を１０倍量のメタノールに溶解させ、不溶分をろ過により除去した。その後、４０℃で１００ｈＰａ以下まで徐々に減圧させ、メタノールの液体成分がなくなるまでメタノールを気化させることにより、固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
得られた析出物の洗浄方法を次のように変更した以外は、実施例１に記載の方法と同様の方法にて固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
得られた析出物を１０倍量のメタノールに溶解させ、不溶分をろ過により除去した。その後、４０℃で１００ｈＰａ以下まで徐々に減圧させ、メタノールの液体成分がなくなるまでメタノールを気化させることにより、固体の４－ヒドロキシ安息香酸組成物を得た。
【0073】
（比較例３）
市販の４－ヒドロキシ安息香酸（東京化成工業社製、製品コード：Ｈ０２０７）を準備した。
市販の４－ヒドロキシ安息香酸（東京化成工業社製、製品コード：Ｈ０２０７）を準備した。
【0074】
（物性評価）
各実施例および各比較例で得られた４－ヒドロキシ安息香酸組成物の各物性を、以下の方法で評価した。
各実施例および各比較例で得られた４－ヒドロキシ安息香酸組成物の各物性を、以下の方法で評価した。
【0075】
（濃度分析）
各実施例および各比較例の４－ヒドロキシ安息香酸組成物中の４－ヒドロキシ安息香酸とシキミ酸濃度の定量は、ＵＶ検出器を備えた高速液体クロマトグラフ（株式会社日立ハイテクサイエンス製、Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ（登録商標））を用いて、以下の＜分析条件＞にて高速液体クロマトグラフィーにて行った。結果を表１に示す。
＜分析条件＞
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８－ＡＲ－ＩＩ（φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）ナカライテスク社製
移動相：水／メタノール／過塩素酸＝４／１／０．００７５（ｖｏｌ／ｖｏｌ／ｖｏｌ）イソクラティック溶出
流量：１ｍＬ／ｍｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出方法：フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器（２１０ｎｍ）
各実施例および各比較例の４－ヒドロキシ安息香酸組成物中の４－ヒドロキシ安息香酸とシキミ酸濃度の定量は、ＵＶ検出器を備えた高速液体クロマトグラフ（株式会社日立ハイテクサイエンス製、Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ（登録商標））を用いて、以下の＜分析条件＞にて高速液体クロマトグラフィーにて行った。結果を表１に示す。
＜分析条件＞
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８－ＡＲ－ＩＩ（φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）ナカライテスク社製
移動相：水／メタノール／過塩素酸＝４／１／０．００７５（ｖｏｌ／ｖｏｌ／ｖｏｌ）イソクラティック溶出
流量：１ｍＬ／ｍｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出方法：フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器（２１０ｎｍ）
【0076】
（実測バイオ化率）
各実施例および各比較例の４－ヒドロキシ安息香酸組成物中の４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）について、米国試験材料協会（ＡＳＴＭ）が定めるバイオベース濃度試験規格ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づき、全炭素原子中における放射性炭素１４Ｃの含有量を測定した。そして、その測定結果と、１９５０年時点の循環炭素中の放射性炭素１４Ｃの濃度とから、各実施例および各比較例の４－ヒドロキシ安息香酸組成物中の４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の１９５０年時点の循環炭素中の放射性炭素１４Ｃの濃度を１００％としたときの全炭素原子中における放射性炭素１４Ｃの濃度を実測バイオ化率として算出し、環境適合性の指標として評価した。算出結果を表１に示す。
各実施例および各比較例の４－ヒドロキシ安息香酸組成物中の４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）について、米国試験材料協会（ＡＳＴＭ）が定めるバイオベース濃度試験規格ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－２０に基づき、全炭素原子中における放射性炭素１４Ｃの含有量を測定した。そして、その測定結果と、１９５０年時点の循環炭素中の放射性炭素１４Ｃの濃度とから、各実施例および各比較例の４－ヒドロキシ安息香酸組成物中の４－ヒドロキシ安息香酸（Ａ）の１９５０年時点の循環炭素中の放射性炭素１４Ｃの濃度を１００％としたときの全炭素原子中における放射性炭素１４Ｃの濃度を実測バイオ化率として算出し、環境適合性の指標として評価した。算出結果を表１に示す。
【0077】
（重合性）
蒸留装置、撹拌機、窒素導入管を装備した１Ｌ重合器に各実施例および各比較例の４－ヒドロキシ安息香酸組成物２４１．７ｇ（４－ヒドロキシ安息香酸含有量：１．７５ｍｏｌ）、ビフェノール（東京化成工業社製、製品コード：Ｂ０４６４）９３．１ｇ（０．５ｍｏｌ）、テレフタル酸（東京化成工業社製、製品コード：Ｔ０１６６）８３．０ｇ（０．５ｍｏｌ）、無水酢酸（東京化成工業社製、製品コード：Ａ２０３６）３２６．４ｇ（３．２ｍｏｌ）を仕込んだ。１５０℃で３時間アセトキシ化反応を行った後、２４０℃に昇温し６時間、さらに３００℃まで昇温し、内容物が固化するまで重合を続けた。取り出した重合物（プレポリマー）を微粉砕後、窒素中、３００℃で固相重合させ、所定の攪拌トルクに達した時点で重縮合を完結させ、液晶ポリマーを得た。
得られた液晶ポリマーを、樹脂温度３４０℃、金型温度１５０℃、射出圧力１１０ＭＰａの条件で射出成形し、長さ８０ｍｍ、幅１０ｍｍ、厚さ４ｍｍの曲げ試験片を作製した。作製した曲げ試験片を用いてＡＳＴＭ Ｄ７９０に準拠し、曲げ強度の測定をおこなった。
得られた曲げ強度から重合性を以下のように評価した。結果を表１に示す。
Ａ：曲げ強度が１００ＭＰａ以上
Ｂ：曲げ強度が９０ＭＰａ以上１００ＭＰａ未満
Ｃ：曲げ強度が９０ＭＰａ未満
蒸留装置、撹拌機、窒素導入管を装備した１Ｌ重合器に各実施例および各比較例の４－ヒドロキシ安息香酸組成物２４１．７ｇ（４－ヒドロキシ安息香酸含有量：１．７５ｍｏｌ）、ビフェノール（東京化成工業社製、製品コード：Ｂ０４６４）９３．１ｇ（０．５ｍｏｌ）、テレフタル酸（東京化成工業社製、製品コード：Ｔ０１６６）８３．０ｇ（０．５ｍｏｌ）、無水酢酸（東京化成工業社製、製品コード：Ａ２０３６）３２６．４ｇ（３．２ｍｏｌ）を仕込んだ。１５０℃で３時間アセトキシ化反応を行った後、２４０℃に昇温し６時間、さらに３００℃まで昇温し、内容物が固化するまで重合を続けた。取り出した重合物（プレポリマー）を微粉砕後、窒素中、３００℃で固相重合させ、所定の攪拌トルクに達した時点で重縮合を完結させ、液晶ポリマーを得た。
得られた液晶ポリマーを、樹脂温度３４０℃、金型温度１５０℃、射出圧力１１０ＭＰａの条件で射出成形し、長さ８０ｍｍ、幅１０ｍｍ、厚さ４ｍｍの曲げ試験片を作製した。作製した曲げ試験片を用いてＡＳＴＭ Ｄ７９０に準拠し、曲げ強度の測定をおこなった。
得られた曲げ強度から重合性を以下のように評価した。結果を表１に示す。
Ａ：曲げ強度が１００ＭＰａ以上
Ｂ：曲げ強度が９０ＭＰａ以上１００ＭＰａ未満
Ｃ：曲げ強度が９０ＭＰａ未満
【0078】
【表1】
【0079】
表１に示したように、４－ヒドロキシ安息香酸組成物中に含まれるシキミ酸を所定の濃度以下にすることにより、環境適合性と重合性のバランスが向上した。
【0080】
コリネバクテリウム グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）ＨＢＡ－２は、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８（郵便番号２９２－０８１８）の独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに寄託した（国内寄託の受託日：２０１４年３月２７日、ブダペスト条約に基づく国際寄託の受託日：２０１５年２月２３日、受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８３８）。
【0081】
コリネバクテリウム グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）ＨＢＡ－４７は、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８（郵便番号２９２－０８１８）の独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに寄託した（ブダペスト条約に基づく国際寄託の受託日：２０１４年４月２５日、受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０１８４９）。
これらの株は、ブダペスト条約の下で国際寄託されており、３７ ＣＦＲ１．８０８に規定される条件の下で公に利用可能である。
これらの株は、ブダペスト条約の下で国際寄託されており、３７ ＣＦＲ１．８０８に規定される条件の下で公に利用可能である。