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▶ パラダイム バイオファーマシューティカルズ リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024178292
(43)【公開日】2024-12-24
(54)【発明の名称】ポリ硫酸化多糖を用いた疼痛の治療
(51)【国際特許分類】
A61K 31/737 20060101AFI20241217BHJP
A61K 31/727 20060101ALI20241217BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20241217BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20241217BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20241217BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241217BHJP
【ＦＩ】
A61K31/737
A61K31/727
A61P19/02
A61P19/08
A61P29/00
A61P43/00 111
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024161957
(22)【出願日】2024-09-19
(62)【分割の表示】P 2021519756の分割
【原出願日】2019-10-10
(31)【優先権主張番号】2018903820
(32)【優先日】2018-10-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(31)【優先権主張番号】2019900326
(32)【優先日】2019-02-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(31)【優先権主張番号】2019903556
(32)【優先日】2019-09-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(71)【出願人】
【識別番号】520040119
【氏名又は名称】パラダイム バイオファーマシューティカルズ リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100181168
【弁理士】
【氏名又は名称】丸山 智裕
(72)【発明者】
【氏名】レニー，ポール
(72)【発明者】
【氏名】クリシュナン，ラヴィ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】新規かつ改善された鎮痛剤を提供する。
【解決手段】本開示は、疼痛または疼痛状態を治療するためのポリ硫酸化多糖およびその組成物の医学的使用に関する。特に、その開示は、成熟神経成長因子（ＮＧＦ）またはその前駆体プロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介される疼痛または疼痛状態を治療するためのポリ硫酸化多糖およびその組成物の使用に関する。
【選択図】図２３
【解決手段】本開示は、疼痛または疼痛状態を治療するためのポリ硫酸化多糖およびその組成物の医学的使用に関する。特に、その開示は、成熟神経成長因子（ＮＧＦ）またはその前駆体プロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介される疼痛または疼痛状態を治療するためのポリ硫酸化多糖およびその組成物の使用に関する。
【選択図】図２３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）
活性を阻害または減少させる方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を前
記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
活性を阻害または減少させる方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を前
記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項2】
哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）
活性を阻害または減少させる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用。
活性を阻害または減少させる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用。
【請求項3】
哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）
活性を阻害または減少させるための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容
される塩の使用。
活性を阻害または減少させるための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容
される塩の使用。
【請求項4】
ＮＧＦまたはｐｒｏ－ＮＧＦ活性の前記阻害または減少が、前記哺乳動物における疼痛
を治療する、請求項１に記載の方法または請求項２もしくは請求項３に記載の使用。
を治療する、請求項１に記載の方法または請求項２もしくは請求項３に記載の使用。
【請求項5】
神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介され
る疼痛を治療する方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような
治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
る疼痛を治療する方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような
治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項6】
哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）
によって媒介される疼痛を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用
。
によって媒介される疼痛を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用
。
【請求項7】
哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）
によって媒介される疼痛を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはそ
の許容される塩の使用。
によって媒介される疼痛を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはそ
の許容される塩の使用。
【請求項8】
前記疼痛が筋骨格痛である、請求項１、４もしくは５のいずれか一項に記載の方法また
は請求項２、３、６もしくは７のいずれか一項に記載の使用。
は請求項２、３、６もしくは７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項9】
前記筋骨格痛が骨格痛である、請求項８に記載の方法または使用。
【請求項10】
前記骨格痛が非悪性骨格痛である、請求項９に記載の方法または使用。
【請求項11】
前記骨格痛が悪性骨格痛である、請求項１０に記載の方法または使用。
【請求項12】
前記骨格痛が、背痛；腰痛；骨痛および関節痛；骨痛；ならびに関節痛からなる群から
選択される、請求項９から１１のいずれか一項に記載の方法または使用。
選択される、請求項９から１１のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項13】
前記骨痛が非悪性骨痛である、請求項１２に記載の方法または使用。
【請求項14】
前記非悪性骨痛が、骨粗鬆症；関節リウマチ；および変形性関節症からなる群から選択
される状態と関連する疼痛から選択される、請求項１３に記載の方法または使用。
される状態と関連する疼痛から選択される、請求項１３に記載の方法または使用。
【請求項15】
前記骨痛が悪性骨痛である、請求項１２に記載の方法または使用。
【請求項16】
前記悪性骨痛が、原発性骨がんと関連する疼痛または続発性（転移性）骨がんと関連す
る疼痛である、請求項１５に記載の方法または使用。
る疼痛である、請求項１５に記載の方法または使用。
【請求項17】
前記疼痛が、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；および間質性膀胱炎か
らなる群から選択される状態と関連する、請求項１、４もしくは５のいずれか一項に記載
の方法または請求項２、３、６もしくは７のいずれか一項に記載の使用。
らなる群から選択される状態と関連する、請求項１、４もしくは５のいずれか一項に記載
の方法または請求項２、３、６もしくは７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項18】
前記疼痛が、腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移
性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄
腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新
生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、請求項１、
４もしくは５のいずれか一項に記載の方法または請求項２、３、６もしくは７のいずれか
一項に記載の使用。
性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄
腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新
生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、請求項１、
４もしくは５のいずれか一項に記載の方法または請求項２、３、６もしくは７のいずれか
一項に記載の使用。
【請求項19】
前記疼痛が、急性疼痛；慢性疼痛；全身痛および持続痛からなる群から選択される、請
求項１から１８のいずれか一項に記載の方法または使用。
求項１から１８のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項20】
前記疼痛が、侵害受容性疼痛状態；神経障害性疼痛状態；急性疼痛状態；慢性疼痛状態
；全身痛状態；持続痛状態；非悪性疼痛状態；悪性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状態
および持続痛状態からなる群から選択される、請求項１、４もしくは５のいずれか一項に
記載の方法または請求項２、３、６もしくは７のいずれか一項に記載の使用。
；全身痛状態；持続痛状態；非悪性疼痛状態；悪性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状態
および持続痛状態からなる群から選択される、請求項１、４もしくは５のいずれか一項に
記載の方法または請求項２、３、６もしくは７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項21】
前記ポリ硫酸化多糖が、高分子量ヘパリン、低分子量ヘパリン、ヘパラン硫酸、ポリ硫
酸ペントサン、ポリ硫酸コンドロイチン、ポリ硫酸キトサン、デルマタンポリ硫酸スロデ
キシド、硫酸デキストラン、ポリ硫酸化イヌリン、硫酸化ラクトビオン酸アミド、硫酸化
ビス－アルドン酸アミド、八硫酸スクロース、フコイダン－１、フコイダン－２、硫酸化
ベータ－シクロデキストリン、硫酸化ガンマ－シクロデキストリンおよび限定されないが
、六硫酸イノシトールを含む小さな硫酸化化合物からなる群から選択される、請求項１か
ら２０のいずれか一項に記載の方法または使用。
酸ペントサン、ポリ硫酸コンドロイチン、ポリ硫酸キトサン、デルマタンポリ硫酸スロデ
キシド、硫酸デキストラン、ポリ硫酸化イヌリン、硫酸化ラクトビオン酸アミド、硫酸化
ビス－アルドン酸アミド、八硫酸スクロース、フコイダン－１、フコイダン－２、硫酸化
ベータ－シクロデキストリン、硫酸化ガンマ－シクロデキストリンおよび限定されないが
、六硫酸イノシトールを含む小さな硫酸化化合物からなる群から選択される、請求項１か
ら２０のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項22】
前記ポリ硫酸化多糖が、高分子量ヘパリン、低分子量ヘパリン、ポリ硫酸ペントサン（
ＰＰＳ）、ポリ硫酸コンドロイチンおよびポリ硫酸キトサンからなる群から選択される、
請求項２１に記載の方法または使用。
ＰＰＳ）、ポリ硫酸コンドロイチンおよびポリ硫酸キトサンからなる群から選択される、
請求項２１に記載の方法または使用。
【請求項23】
前記ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）が、ポリ硫酸ペントサンのナトリウム塩（ＮａＰＰ
Ｓ）、ポリ硫酸ペントサンのマグネシウム塩（ＭｇＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサンのカル
シウム塩（ＣａＰＰＳ）、およびポリ硫酸ペントサンの亜鉛塩（ＺｎＰＰＳ）からなる群
から選択される、請求項２２に記載の方法または使用。
Ｓ）、ポリ硫酸ペントサンのマグネシウム塩（ＭｇＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサンのカル
シウム塩（ＣａＰＰＳ）、およびポリ硫酸ペントサンの亜鉛塩（ＺｎＰＰＳ）からなる群
から選択される、請求項２２に記載の方法または使用。
【請求項24】
前記ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）が、ポリ硫酸ペントサンナトリウム（ＮａＰＰＳ）
である、請求項２３に記載の方法または使用。
である、請求項２３に記載の方法または使用。
【請求項25】
前記阻害もしくは減少、または治療が、筋肉内（ＩＭ）もしくは皮下（ＳＣ）経路、心
室内経路、嚢内経路またはくも膜下腔経路による注射投与、静脈内（ＩＶ）投与、関節内
（ＩＡ）投与、関節周囲投与、局所的投与、坐剤を介した投与、または経口投与による、
請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法または使用。
室内経路、嚢内経路またはくも膜下腔経路による注射投与、静脈内（ＩＶ）投与、関節内
（ＩＡ）投与、関節周囲投与、局所的投与、坐剤を介した投与、または経口投与による、
請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項26】
前記阻害もしくは減少、または治療が、前記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、１用量あたり約１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で、前記哺乳動物に投
与することによる、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法または使用。
、１用量あたり約１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で、前記哺乳動物に投
与することによる、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項27】
前記哺乳動物への投与が、１日１回、週２回または週３回の治療レジメンでの投薬によ
る、請求項２５または請求項２６に記載の方法または使用。
る、請求項２５または請求項２６に記載の方法または使用。
【請求項28】
前記治療レジメンで投与されるポリ硫酸化多糖の合計用量が、約２００～４０００ｍｇ
である、請求項２７に記載の方法または使用。
である、請求項２７に記載の方法または使用。
【請求項29】
前記阻害もしくは減少、または治療が、前記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、固定用量として約１０ｎｇ～約１０００ｎｇの範囲の有効量で、前記哺乳動物に投与す
ることによる、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
、固定用量として約１０ｎｇ～約１０００ｎｇの範囲の有効量で、前記哺乳動物に投与す
ることによる、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記阻害もしくは減少、または治療が、前記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、固定用量として約１０μｇ～約１０００μｇの範囲の有効量で、前記哺乳動物に投与す
ることによる、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
、固定用量として約１０μｇ～約１０００μｇの範囲の有効量で、前記哺乳動物に投与す
ることによる、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記阻害もしくは減少、または治療が、心室内、嚢内またはくも膜下腔経路によって前
記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を投与することによる、請求項２９または請求
項３０に記載の方法。
記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を投与することによる、請求項２９または請求
項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記阻害もしくは減少、または治療が、前記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、固定用量として約１ｍｇ～約２５ｍｇの範囲の有効量で、前記哺乳動物に投与すること
による、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
、固定用量として約１ｍｇ～約２５ｍｇの範囲の有効量で、前記哺乳動物に投与すること
による、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、
（ｉ）哺乳動物の健康および／もしくは機能；
（ｉｉ）筋骨格の完全性および／もしくは機能；
（ｉｉｉ）骨格の完全性および／もしくは機能；または
（ｉｖ）関節もしくは骨の完全性および／もしくは機能
をさらに維持または改善する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法または使用
。
（ｉ）哺乳動物の健康および／もしくは機能；
（ｉｉ）筋骨格の完全性および／もしくは機能；
（ｉｉｉ）骨格の完全性および／もしくは機能；または
（ｉｖ）関節もしくは骨の完全性および／もしくは機能
をさらに維持または改善する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法または使用
。
【請求項34】
前記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、がんによって誘発される骨折を
予防し、前記哺乳動物は骨がんを患っている、請求項１から３３のいずれか一項に記載の
方法または使用。
予防し、前記哺乳動物は骨がんを患っている、請求項１から３３のいずれか一項に記載の
方法または使用。
【請求項35】
前記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、がんによって誘発される骨折ま
での時間を遅延させ、前記哺乳動物は骨がんを患っている、請求項３４に記載の方法また
は使用。
での時間を遅延させ、前記哺乳動物は骨がんを患っている、請求項３４に記載の方法また
は使用。
【請求項36】
前記ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、
（ｉ）骨量減少；
（ｉｉ）ミネラルの恒常性の異常調節；または
（ｉｉｉ）神経圧迫症候群
を予防または回復させる、請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法または使用。
（ｉ）骨量減少；
（ｉｉ）ミネラルの恒常性の異常調節；または
（ｉｉｉ）神経圧迫症候群
を予防または回復させる、請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、疼痛または疼痛状態の治療のためのポリ硫酸化多糖およびその組成物の医学
的使用に関する。特に、本開示は、成熟神経成長因子（ＮＧＦ）またはその前駆体プロ神
経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介される疼痛または疼痛状態の治療のためのポ
リ硫酸化多糖およびその組成物の使用に関する。
的使用に関する。特に、本開示は、成熟神経成長因子（ＮＧＦ）またはその前駆体プロ神
経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介される疼痛または疼痛状態の治療のためのポ
リ硫酸化多糖およびその組成物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
安全で効果的な鎮痛薬は、満たされていない医学的必要性を表し続けている。疼痛は疾
患の症状であり、それ自体で疾患である。骨疾患の例として、変形性関節症および骨粗鬆
症は、重大な身体障害、疼痛および生活の質の低下をもたらす。原発性および続発性（転
移性）骨がんは耐え難い骨痛を引き起こす。慢性疼痛は、５６００億米ドル～６３５０億
米ドルの推定年間コストで、およそ１億人のアメリカ人に影響を及ぼすと報告されている
。疼痛の公衆衛生および経済的負担は膨大である［１］。
患の症状であり、それ自体で疾患である。骨疾患の例として、変形性関節症および骨粗鬆
症は、重大な身体障害、疼痛および生活の質の低下をもたらす。原発性および続発性（転
移性）骨がんは耐え難い骨痛を引き起こす。慢性疼痛は、５６００億米ドル～６３５０億
米ドルの推定年間コストで、およそ１億人のアメリカ人に影響を及ぼすと報告されている
。疼痛の公衆衛生および経済的負担は膨大である［１］。
【0003】
疼痛の治療の中心は典型的に、オピオイドおよび非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ
）の投与を含む。臨床的状況の大半を占めているにもかかわらず、これらの薬剤は、限定
的な有効性であり、かなりの副作用プロファイルを有し、オピオイドの場合、依存または
病的状態に関する問題がある［２］。ＮＳＡＩＤは疾患を悪化させることが見出されてい
る。例えば、骨がん、骨粗鬆症および変形性関節症などの疾患に関して、ＮＳＡＩＤは骨
治癒および軟骨の代謝に対して悪影響を及ぼす（［３］～［６］）。長期または継続的な
療法を必要とする対象では、外傷性および特発性の両方の骨折のリスクが増大する。
）の投与を含む。臨床的状況の大半を占めているにもかかわらず、これらの薬剤は、限定
的な有効性であり、かなりの副作用プロファイルを有し、オピオイドの場合、依存または
病的状態に関する問題がある［２］。ＮＳＡＩＤは疾患を悪化させることが見出されてい
る。例えば、骨がん、骨粗鬆症および変形性関節症などの疾患に関して、ＮＳＡＩＤは骨
治癒および軟骨の代謝に対して悪影響を及ぼす（［３］～［６］）。長期または継続的な
療法を必要とする対象では、外傷性および特発性の両方の骨折のリスクが増大する。
【0004】
本文脈内で、ニューロトロフィン神経成長因子（ＮＧＦ）およびＮＧＦ前駆体ｐｒｏ－
ＮＧＦなどの関連分子標的は、悪性および非悪性疼痛［７］ならびに関節炎、変形性関節
症、骨粗鬆症、間質性膀胱炎、前立腺炎、膵炎、慢性頭痛、がん疼痛、非がん疼痛、背痛
および糖尿病性神経障害を含む、侵害受容性および神経障害性疼痛状態［１］の治療にお
いてＮＳＡＩＤおよびオピオイドの代替を提供する。ＮＧＦおよびｐｒｏ－ＮＧＦなどの
他の関連分子標的はまた、他の疼痛状態、例えば、線維筋痛［１Ａ］および子宮内膜症と
関連するものなどの炎症性疼痛［１Ｂ］の治療においても可能性を有する。さらに、ＮＧ
Ｆは、中枢性神経障害性疼痛の病態生理において役割を果たすことが見出されている。こ
れに関して、多発性硬化症を患っている患者の脳脊髄液中で高レベルのＮＧＦが観察され
ている［１Ｃ］。
ＮＧＦなどの関連分子標的は、悪性および非悪性疼痛［７］ならびに関節炎、変形性関節
症、骨粗鬆症、間質性膀胱炎、前立腺炎、膵炎、慢性頭痛、がん疼痛、非がん疼痛、背痛
および糖尿病性神経障害を含む、侵害受容性および神経障害性疼痛状態［１］の治療にお
いてＮＳＡＩＤおよびオピオイドの代替を提供する。ＮＧＦおよびｐｒｏ－ＮＧＦなどの
他の関連分子標的はまた、他の疼痛状態、例えば、線維筋痛［１Ａ］および子宮内膜症と
関連するものなどの炎症性疼痛［１Ｂ］の治療においても可能性を有する。さらに、ＮＧ
Ｆは、中枢性神経障害性疼痛の病態生理において役割を果たすことが見出されている。こ
れに関して、多発性硬化症を患っている患者の脳脊髄液中で高レベルのＮＧＦが観察され
ている［１Ｃ］。
【0005】
ＮＧＦを標的とする薬剤が疼痛状態を治療するために開発されている。これらの中で、
抗ＮＧＦ抗体が最も有望であることを示し、ＮＧＦ封鎖抗体（sequestering antibody）
が開発されている：タネズマブ（TANEZUMAB）（登録商標）（ＰｆｉｚｅｒおよびＥｌｉ
Ｌｉｌｌｙ）、ファシヌマブ（FASINUMAB）（登録商標）（ＴＥＶＡおよびＲｅｇｅｎ
ｅｒｏｎ）およびフルラヌマブ（FULRANUMAB）（登録商標）（ＪａｎｓｓｅｎおよびＡｍ
ｇｅｎ）。
抗ＮＧＦ抗体が最も有望であることを示し、ＮＧＦ封鎖抗体（sequestering antibody）
が開発されている：タネズマブ（TANEZUMAB）（登録商標）（ＰｆｉｚｅｒおよびＥｌｉ
Ｌｉｌｌｙ）、ファシヌマブ（FASINUMAB）（登録商標）（ＴＥＶＡおよびＲｅｇｅｎ
ｅｒｏｎ）およびフルラヌマブ（FULRANUMAB）（登録商標）（ＪａｎｓｓｅｎおよびＡｍ
ｇｅｎ）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
しかしながら、抗ＮＧＦ抗体が、関節破壊と関連し、関節置換術および神経毒性につな
がる場合があるいくつかの報告がある［１］。さらに、抗ＮＧＦ抗体の長期の有効性およ
び安全性プロファイルはまだ確立されていない。上記を考慮して、新規かつ改善された鎮
痛剤を提供するのに利用可能な医薬品のレパートリーを拡張する必要がある。
がる場合があるいくつかの報告がある［１］。さらに、抗ＮＧＦ抗体の長期の有効性およ
び安全性プロファイルはまだ確立されていない。上記を考慮して、新規かつ改善された鎮
痛剤を提供するのに利用可能な医薬品のレパートリーを拡張する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【0007】
ヘパリンおよびポリ硫酸ペントサン、ポリ硫酸キトサン、フカンなどのような構造的に
関連するポリ硫酸化多糖は、抗凝固剤として長年の間使用されており［８～１３］、安全
である。ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）は、血栓溶解剤として手術後におよび予防的に使
用されており［１３］、ＰＰＳは間質性膀胱炎に現在処方されている薬物ＥＬＭＩＲＯＮ
（登録商標）における活性剤である。骨粗鬆症［１５］および骨髄浮腫［１６］などの骨
関連病理におけるＰＰＳの使用が記載されているのと同様に、喘息、アレルギー性鼻炎お
よび／または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの炎症状態の治療におけるＰＰＳの潜在
的使用も記載されている［１４］。
関連するポリ硫酸化多糖は、抗凝固剤として長年の間使用されており［８～１３］、安全
である。ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）は、血栓溶解剤として手術後におよび予防的に使
用されており［１３］、ＰＰＳは間質性膀胱炎に現在処方されている薬物ＥＬＭＩＲＯＮ
（登録商標）における活性剤である。骨粗鬆症［１５］および骨髄浮腫［１６］などの骨
関連病理におけるＰＰＳの使用が記載されているのと同様に、喘息、アレルギー性鼻炎お
よび／または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの炎症状態の治療におけるＰＰＳの潜在
的使用も記載されている［１４］。
【0008】
本開示は、ＰＰＳがＮＧＦ活性を阻害または減少させるように作用し得るという驚くべ
き発見に部分的に基づく。このように、ＰＰＳは、ＮＧＦ封鎖剤として全て作用する、現
在の抗ＮＧＦ抗体、タネズマブ、ファシヌマブおよびフルラヌマブと異なる作用機構を介
して作用することが見出されている。さらに、驚くべきことに、ＰＰＳはｐｒｏ－ＮＧＦ
活性を阻害または減少させるように作用し得ることが見出されている。実験データにより
、例えば、ＰＰＳは、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルの両方においてＮＧＦの発現を阻
害または減少させることができ、ＰＰＳは、ｐｒｏ－ＮＧＦの発現を阻害または減少させ
ることができ、その結果、ＮＧＦおよびその活性のレベルに影響を及ぼすことが実証され
ている。さらに、実験データにより、ＰＰＳは、疼痛および疼痛関連状態のメディエータ
ーとしてＮＧＦ産生骨細胞をターゲティングすることによってその薬理作用を発揮するこ
とができることが実証されている。実験データは疼痛および疼痛関連状態を媒介すること
ができる細胞の例として骨細胞を使用しているが、本開示は、疼痛および疼痛関連状態の
メディエーターとしてＮＧＦまたはｐｒｏ－ＮＧＦを分泌する他の標的細胞の使用を企図
する。このような標的細胞の例は、免疫細胞ならびに原発性がん細胞および続発性がん細
胞を含むがん細胞である。
き発見に部分的に基づく。このように、ＰＰＳは、ＮＧＦ封鎖剤として全て作用する、現
在の抗ＮＧＦ抗体、タネズマブ、ファシヌマブおよびフルラヌマブと異なる作用機構を介
して作用することが見出されている。さらに、驚くべきことに、ＰＰＳはｐｒｏ－ＮＧＦ
活性を阻害または減少させるように作用し得ることが見出されている。実験データにより
、例えば、ＰＰＳは、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルの両方においてＮＧＦの発現を阻
害または減少させることができ、ＰＰＳは、ｐｒｏ－ＮＧＦの発現を阻害または減少させ
ることができ、その結果、ＮＧＦおよびその活性のレベルに影響を及ぼすことが実証され
ている。さらに、実験データにより、ＰＰＳは、疼痛および疼痛関連状態のメディエータ
ーとしてＮＧＦ産生骨細胞をターゲティングすることによってその薬理作用を発揮するこ
とができることが実証されている。実験データは疼痛および疼痛関連状態を媒介すること
ができる細胞の例として骨細胞を使用しているが、本開示は、疼痛および疼痛関連状態の
メディエーターとしてＮＧＦまたはｐｒｏ－ＮＧＦを分泌する他の標的細胞の使用を企図
する。このような標的細胞の例は、免疫細胞ならびに原発性がん細胞および続発性がん細
胞を含むがん細胞である。
【0009】
一態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少させ
る方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を哺乳動物に投与するステップ
を含む、方法が提供される。
る方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を哺乳動物に投与するステップ
を含む、方法が提供される。
【0010】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害
または減少させる方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を哺乳動物に投
与するステップを含む、方法が提供される。
または減少させる方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を哺乳動物に投
与するステップを含む、方法が提供される。
【0011】
別の態様によれば、神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛を治療する方法で
あって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような治療を必要とする哺乳動
物に投与するステップを含む、方法が提供される。
あって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような治療を必要とする哺乳動
物に投与するステップを含む、方法が提供される。
【0012】
別の態様によれば、プロ神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛を治療する方
法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような治療を必要とする哺
乳動物に投与するステップを含む、方法が提供される。
法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような治療を必要とする哺
乳動物に投与するステップを含む、方法が提供される。
【0013】
別の態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少さ
せるための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを含む組成
物が提供される。
せるための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを含む組成
物が提供される。
【0014】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害
または減少させるための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤
とを含む組成物が提供される。
または減少させるための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤
とを含む組成物が提供される。
【0015】
別の態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少さ
せる際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤
とを含む組成物が提供される。
せる際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤
とを含む組成物が提供される。
【0016】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害
または減少させる際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容
される賦形剤とを含む組成物が提供される。
または減少させる際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容
される賦形剤とを含む組成物が提供される。
【0017】
別の態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛
を治療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを含
む組成物が提供される。
を治療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを含
む組成物が提供される。
【0018】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒
介される疼痛を治療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される
賦形剤とを含む組成物が提供される。
介される疼痛を治療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される
賦形剤とを含む組成物が提供される。
【0019】
別の態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛
を治療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される
賦形剤とを含む組成物が提供される。
を治療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される
賦形剤とを含む組成物が提供される。
【0020】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒
介される疼痛を治療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と
、許容される賦形剤とを含む組成物が提供される。
介される疼痛を治療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と
、許容される賦形剤とを含む組成物が提供される。
【0021】
別の態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少さ
せる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供される。
せる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供される。
【0022】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減
少させる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供される。
少させる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供される。
【0023】
別の態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少さ
せるための、医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供
される。
せるための、医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供
される。
【0024】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害
または減少させるための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の
使用が提供される。
または減少させるための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の
使用が提供される。
【0025】
別の態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛
を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供される。
を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供される。
【0026】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒
介される疼痛を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供され
る。
介される疼痛を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が提供され
る。
【0027】
別の態様によれば、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛
を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が
提供される。
を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用が
提供される。
【0028】
別の態様によれば、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒
介される疼痛を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容され
る塩の使用が提供される。
介される疼痛を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容され
る塩の使用が提供される。
【0029】
定義
本明細書において他に定義しない限り、本出願に関連して使用される科学用語および専
門用語は、当業者に一般的に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈上別
段の要求がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものと
する。したがって、本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数
形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈上明らか
に別段の指示がない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「細胞（ａ ｃｅｌｌ）」に
対する言及は、複数の細胞の集団を含む。
本明細書において他に定義しない限り、本出願に関連して使用される科学用語および専
門用語は、当業者に一般的に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈上別
段の要求がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものと
する。したがって、本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数
形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈上明らか
に別段の指示がない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「細胞（ａ ｃｅｌｌ）」に
対する言及は、複数の細胞の集団を含む。
【0030】
本明細書で提供される定義に関して、別段の記載がないか、または文脈から暗黙的でな
い限り、定義された用語および語句は、提供された意味を含む。別段明記されていないか
、または文脈から明らかでない限り、以下の用語および語句は、関連分野の当業者によっ
て取得された用語または語句の意味を除外しない。本発明の範囲は、その特許請求の範囲
によってのみ限定されるため、定義は、特定の実施形態の記載を補助するために提供され
、特許請求の範囲に記載された発明を限定することを意図していない。
い限り、定義された用語および語句は、提供された意味を含む。別段明記されていないか
、または文脈から明らかでない限り、以下の用語および語句は、関連分野の当業者によっ
て取得された用語または語句の意味を除外しない。本発明の範囲は、その特許請求の範囲
によってのみ限定されるため、定義は、特定の実施形態の記載を補助するために提供され
、特許請求の範囲に記載された発明を限定することを意図していない。
【0031】
本明細書全体を通して、本発明の様々な態様および構成成分は、範囲形式で提示するこ
とができる。範囲形式は便宜上含まれ、本発明の範囲において柔軟性のない限定と解釈さ
れるべきではない。したがって、範囲の記載は、特に指示がない限り、可能な全ての部分
範囲に加えて、その範囲内の個々の数値を具体的に開示しているとみなされるべきである
。例えば、１～５のような範囲の記載は、１～２、１～３、１～４、２～３、２～４、２
～５、３～４などのような部分範囲に加えて、列挙した範囲内の個々の数および部分的な
数、例えば、１、２、３、４および５を具体的に開示しているとみなされるべきである。
これは、開示された範囲の幅に関わらず適用される。具体的な値を必要とする場合、これ
らは本明細書に示されるであろう。
とができる。範囲形式は便宜上含まれ、本発明の範囲において柔軟性のない限定と解釈さ
れるべきではない。したがって、範囲の記載は、特に指示がない限り、可能な全ての部分
範囲に加えて、その範囲内の個々の数値を具体的に開示しているとみなされるべきである
。例えば、１～５のような範囲の記載は、１～２、１～３、１～４、２～３、２～４、２
～５、３～４などのような部分範囲に加えて、列挙した範囲内の個々の数および部分的な
数、例えば、１、２、３、４および５を具体的に開示しているとみなされるべきである。
これは、開示された範囲の幅に関わらず適用される。具体的な値を必要とする場合、これ
らは本明細書に示されるであろう。
【0032】
「許容される賦形剤」という用語は、生理学的に適合し、本明細書に記載される化合物
またはその使用にとって有害でない、溶媒、希釈剤、分散媒、コーティング剤、抗菌剤お
よび抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などのような賦形剤または薬剤を含む。薬学的に
活性な物質の組成物を調製するための、このような担体および薬剤の使用は、当該分野で
周知である（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Editio
n; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005を参照のこと）。
またはその使用にとって有害でない、溶媒、希釈剤、分散媒、コーティング剤、抗菌剤お
よび抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などのような賦形剤または薬剤を含む。薬学的に
活性な物質の組成物を調製するための、このような担体および薬剤の使用は、当該分野で
周知である（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Editio
n; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005を参照のこと）。
【0033】
「許容される塩」という用語は、限定されないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リ
ン酸塩などのような無機酸塩；ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒
石酸塩などのような有機酸塩；メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエ
ンスルホン酸塩などのようなスルホン酸塩；アルギニン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタ
ミン酸塩などのようなアミノ酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩などのような
金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのようなアルカリ土類金属；およびトリエチ
ルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、
ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩などのような有機
アミン塩を含む。
ン酸塩などのような無機酸塩；ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒
石酸塩などのような有機酸塩；メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエ
ンスルホン酸塩などのようなスルホン酸塩；アルギニン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタ
ミン酸塩などのようなアミノ酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩などのような
金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのようなアルカリ土類金属；およびトリエチ
ルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、
ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩などのような有機
アミン塩を含む。
【0034】
塩基の塩には、限定されないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグ
ネシウム、亜鉛、アンモニウム、トリエチルアミンから形成される塩のようなアルキルア
ンモニウム、エタノールアミンで形成されるもののようなアルコキシアンモニウム、およ
びエチレンジアミン、コリンまたはアルギニン、リジンもしくはヒスチジンのようなアミ
ノ酸から形成される塩のような薬学的に許容されるカチオンで形成されるものが含まれる
。許容される塩の種類およびそれらの形成に関する一般的情報は、当業者に公知であり、
「Handbook of Pharmaceutical salts」 P.H.Stahl, C.G.Wermuth, 1st edition, 2002,
Wiley-VCHのような一般的教科書に記載されている通りである。
ネシウム、亜鉛、アンモニウム、トリエチルアミンから形成される塩のようなアルキルア
ンモニウム、エタノールアミンで形成されるもののようなアルコキシアンモニウム、およ
びエチレンジアミン、コリンまたはアルギニン、リジンもしくはヒスチジンのようなアミ
ノ酸から形成される塩のような薬学的に許容されるカチオンで形成されるものが含まれる
。許容される塩の種類およびそれらの形成に関する一般的情報は、当業者に公知であり、
「Handbook of Pharmaceutical salts」 P.H.Stahl, C.G.Wermuth, 1st edition, 2002,
Wiley-VCHのような一般的教科書に記載されている通りである。
【0035】
化合物「の投与」およびまたは「を投与すること」という用語は、本発明の化合物を、
治療を必要とする個体に提供することを意味すると理解されるべきである。
治療を必要とする個体に提供することを意味すると理解されるべきである。
【0036】
本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、特定の成分を特定の量で含む生
成物に加えて、特定の量の特定の成分の組合せから、直接的または間接的に得られるあら
ゆる生成物を包含することが意図される。
成物に加えて、特定の量の特定の成分の組合せから、直接的または間接的に得られるあら
ゆる生成物を包含することが意図される。
【0037】
本明細書全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語、または「含む（ｃ
ｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形は
、述べられた要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくはステップの群の包
含を意味するが、いかなる他の要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくは
ステップの群の除外を意味するものではないと理解されるであろう。
ｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形は
、述べられた要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくはステップの群の包
含を意味するが、いかなる他の要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくは
ステップの群の除外を意味するものではないと理解されるであろう。
【0038】
本開示は哺乳動物対象の治療に関する。「哺乳動物」対象の治療はまた、「患者」また
は「個体」の治療とも称されることがある。「哺乳動物」対象は、特定の症状もしくは治
療の必要性が示唆される症状の臨床徴候を呈しているか、状態について治療されるか、ま
たは治療される状態と診断されている。
は「個体」の治療とも称されることがある。「哺乳動物」対象は、特定の症状もしくは治
療の必要性が示唆される症状の臨床徴候を呈しているか、状態について治療されるか、ま
たは治療される状態と診断されている。
【0039】
本明細書で使用される場合、「悪性疼痛」とは、がんに関連する疼痛を指し：「非悪性
疼痛」とは、がんに関連しない疼痛を指す。
疼痛」とは、がんに関連しない疼痛を指す。
【0040】
したがって、別段特に指示されない限り、本発明は、ヒトおよび他の非ヒト哺乳動物に
適用可能であると理解されるべきである。ヒトは男性または女性であってもよい。他の非
ヒト哺乳動物は、霊長類、家畜および農場動物（farm animal）（例えば、ヒツジ、ウマ
、ウシ、ブタ）、ネコおよびイヌのような家庭内ペット、興行動物（performance animal
）（例えば、競走馬、ラクダ、グレーハウンド）、臨床検査動物（例えば、マウス、ウサ
ギ、ラット、モルモット）に加えて、通常、野生に存在するが、動物園、野生動物公園な
どにいるような哺乳動物であることから、治療を受けやすくなり得る哺乳動物であっても
よい。
適用可能であると理解されるべきである。ヒトは男性または女性であってもよい。他の非
ヒト哺乳動物は、霊長類、家畜および農場動物（farm animal）（例えば、ヒツジ、ウマ
、ウシ、ブタ）、ネコおよびイヌのような家庭内ペット、興行動物（performance animal
）（例えば、競走馬、ラクダ、グレーハウンド）、臨床検査動物（例えば、マウス、ウサ
ギ、ラット、モルモット）に加えて、通常、野生に存在するが、動物園、野生動物公園な
どにいるような哺乳動物であることから、治療を受けやすくなり得る哺乳動物であっても
よい。
【0041】
本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」または「治療」という用
語およびその変形は、ポリ硫酸化多糖もしくはその許容される塩、またはポリ硫酸化多糖
もしくはその許容される塩を含む組成物を投与しないことと比較して、臨床病理の過程中
に対象の自然な過程を変えることを意図された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果に
は、疾患の進行速度の低下、疾患状態の回復または緩和、および予後の寛解または改善が
含まれる。例えば、上記の治療転帰のうちの１つまたは複数が達成された場合、対象は、
首尾よく「治療される」。本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」
または「治療」という用語およびその変形は、臨床病理の過程の発生を避けることを意図
された臨床的介入を指すと理解されるであろう「予防すること」、「予防する」または「
予防」を包含する。
語およびその変形は、ポリ硫酸化多糖もしくはその許容される塩、またはポリ硫酸化多糖
もしくはその許容される塩を含む組成物を投与しないことと比較して、臨床病理の過程中
に対象の自然な過程を変えることを意図された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果に
は、疾患の進行速度の低下、疾患状態の回復または緩和、および予後の寛解または改善が
含まれる。例えば、上記の治療転帰のうちの１つまたは複数が達成された場合、対象は、
首尾よく「治療される」。本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」
または「治療」という用語およびその変形は、臨床病理の過程の発生を避けることを意図
された臨床的介入を指すと理解されるであろう「予防すること」、「予防する」または「
予防」を包含する。
【0042】
「有効量」は、特定の疾患（例えば、骨髄浮腫）の測定可能な改善を得るために必要と
される、少なくとも最小濃度または最小量を指す「治療的に有効な」量を包含する。本明
細書における有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体に望ま
しい反応を引き起こすためのＰＰＳの性能のような要因に従って変化することがある。有
効量は、治療的に有益な効果が、ＰＰＳのあらゆる毒性作用または有害作用を上回る量で
もある。「有効量」は、望ましい予防的結果を得るために必要とされる薬物の量または薬
物の投与速度を指す「予防的に有効な」量も包含する。
される、少なくとも最小濃度または最小量を指す「治療的に有効な」量を包含する。本明
細書における有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体に望ま
しい反応を引き起こすためのＰＰＳの性能のような要因に従って変化することがある。有
効量は、治療的に有益な効果が、ＰＰＳのあらゆる毒性作用または有害作用を上回る量で
もある。「有効量」は、望ましい予防的結果を得るために必要とされる薬物の量または薬
物の投与速度を指す「予防的に有効な」量も包含する。
【0043】
実施形態の説明
本開示は、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少させる方法
であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を哺乳動物に投与するステップを含む
、方法に関する。
本開示は、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少させる方法
であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を哺乳動物に投与するステップを含む
、方法に関する。
【0044】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害また
は減少させる方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を哺乳動物に投与す
るステップを含む、方法に関する。
は減少させる方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を哺乳動物に投与す
るステップを含む、方法に関する。
【0045】
上記の方法において、ＮＧＦ活性またはｐｒｏ－ＮＧＦ活性の阻害または減少は、好ま
しくは、哺乳動物における疼痛を治療する。
しくは、哺乳動物における疼痛を治療する。
【0046】
実験データにより、ＰＰＳがｍＲＮＡおよびタンパク質レベルの両方においてＮＧＦの
発現を阻害または減少させることができ、ＰＰＳがｐｒｏ－ＮＧＦの発現を阻害または減
少させることができ、その結果、ＮＧＦおよびその活性のレベルに影響を及ぼすことが示
される。さらに、実験データにより、ＰＰＳが、疼痛および疼痛関連状態のメディエータ
ーとしてＮＧＦ産生骨細胞をターゲティングすることによってその薬理作用を発揮するこ
とができることが実証される。実験データは疼痛および疼痛関連状態を媒介することがで
きる細胞の例として骨細胞を使用しているが、本開示は、疼痛および疼痛関連状態のメデ
ィエーターとしてＮＧＦまたはｐｒｏ－ＮＧＦを分泌する他の標的細胞の使用を企図する
。このような標的細胞の例は、免疫細胞ならびに原発性がん細胞および続発性がん細胞を
含むがん細胞である。
発現を阻害または減少させることができ、ＰＰＳがｐｒｏ－ＮＧＦの発現を阻害または減
少させることができ、その結果、ＮＧＦおよびその活性のレベルに影響を及ぼすことが示
される。さらに、実験データにより、ＰＰＳが、疼痛および疼痛関連状態のメディエータ
ーとしてＮＧＦ産生骨細胞をターゲティングすることによってその薬理作用を発揮するこ
とができることが実証される。実験データは疼痛および疼痛関連状態を媒介することがで
きる細胞の例として骨細胞を使用しているが、本開示は、疼痛および疼痛関連状態のメデ
ィエーターとしてＮＧＦまたはｐｒｏ－ＮＧＦを分泌する他の標的細胞の使用を企図する
。このような標的細胞の例は、免疫細胞ならびに原発性がん細胞および続発性がん細胞を
含むがん細胞である。
【0047】
したがって、本明細書に記載される方法、組成物または使用の例において、哺乳動物に
おける神経成長因子（ＮＧＦ）活性の阻害または減少は、ＮＧＦの発現を阻害または減少
させることによる。一例において、ＮＧＦの発現の阻害または減少は、ｍＲＮＡの転写を
阻害または減少させることによる。一例において、ＮＧＦの発現の阻害または減少は、ｍ
ＲＮＡのタンパク質への翻訳を阻害または減少させることによる。
おける神経成長因子（ＮＧＦ）活性の阻害または減少は、ＮＧＦの発現を阻害または減少
させることによる。一例において、ＮＧＦの発現の阻害または減少は、ｍＲＮＡの転写を
阻害または減少させることによる。一例において、ＮＧＦの発現の阻害または減少は、ｍ
ＲＮＡのタンパク質への翻訳を阻害または減少させることによる。
【0048】
したがって、本明細書に記載される方法、組成物または使用の例において、哺乳動物に
おけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性の阻害または減少は、ｐｒｏ－ＮＧＦの
発現を阻害または減少させることによる。一例において、ｐｒｏ－ＮＧＦの発現の阻害ま
たは減少は、ｍＲＮＡの転写を阻害または減少させることによる。一例において、ｐｒｏ
－ＮＧＦの発現の阻害または減少は、ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳を阻害または減少さ
せることによる。
おけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性の阻害または減少は、ｐｒｏ－ＮＧＦの
発現を阻害または減少させることによる。一例において、ｐｒｏ－ＮＧＦの発現の阻害ま
たは減少は、ｍＲＮＡの転写を阻害または減少させることによる。一例において、ｐｒｏ
－ＮＧＦの発現の阻害または減少は、ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳を阻害または減少さ
せることによる。
【0049】
本開示は、ｐｒｏ－ＮＧＦ活性の阻害および減少の結果としてＮＧＦ活性の阻害および
減少をさらに企図する。
減少をさらに企図する。
【0050】
本開示はまた、神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛を治療する方法であっ
て、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような治療を必要とする哺乳動物に
投与するステップを含む、方法に関する。
て、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような治療を必要とする哺乳動物に
投与するステップを含む、方法に関する。
【0051】
本開示はまた、プロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介される疼痛を治療す
る方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような治療を必要とす
る哺乳動物に投与するステップを含む、方法に関する。
る方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのような治療を必要とす
る哺乳動物に投与するステップを含む、方法に関する。
【0052】
上記の方法において、疼痛は非悪性疼痛または悪性疼痛である。
【0053】
上記の方法において、疼痛は好ましくは筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は非悪
性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は悪性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛
は骨格痛である。好ましくは、骨格痛は非悪性骨格痛である。好ましくは、骨格痛は悪性
骨格痛である。
性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は悪性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛
は骨格痛である。好ましくは、骨格痛は非悪性骨格痛である。好ましくは、骨格痛は悪性
骨格痛である。
【0054】
好ましくは、骨格痛は背痛である。好ましくは、背痛は腰痛である。好ましくは、骨格
痛は骨および／または関節痛である。好ましくは、骨格痛は関節痛である。好ましくは、
骨格痛は骨痛である。好ましくは、骨痛は非悪性骨痛である。好ましくは、非悪性骨痛は
骨粗鬆症と関連する疼痛である。
痛は骨および／または関節痛である。好ましくは、骨格痛は関節痛である。好ましくは、
骨格痛は骨痛である。好ましくは、骨痛は非悪性骨痛である。好ましくは、非悪性骨痛は
骨粗鬆症と関連する疼痛である。
【0055】
好ましくは、非悪性骨痛は関節炎状態と関連する疼痛である。好ましくは、関節炎状態
は関節リウマチまたは変形性関節症から選択される。好ましくは、関節炎状態は関節リウ
マチである。好ましくは、関節炎状態は変形性関節症である。好ましくは、変形性関節症
は、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる群から選択される接合
している関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症は股関節におけるものであ
る。好ましくは、変形性関節症は膝関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症
は脊椎におけるもの（脊椎症）である。好ましくは、骨痛は悪性骨痛である。好ましくは
、悪性骨痛は原発性骨がんと関連する疼痛である。好ましくは、悪性骨痛は続発性（転移
性）骨がんと関連する疼痛である。
は関節リウマチまたは変形性関節症から選択される。好ましくは、関節炎状態は関節リウ
マチである。好ましくは、関節炎状態は変形性関節症である。好ましくは、変形性関節症
は、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる群から選択される接合
している関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症は股関節におけるものであ
る。好ましくは、変形性関節症は膝関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症
は脊椎におけるもの（脊椎症）である。好ましくは、骨痛は悪性骨痛である。好ましくは
、悪性骨痛は原発性骨がんと関連する疼痛である。好ましくは、悪性骨痛は続発性（転移
性）骨がんと関連する疼痛である。
【0056】
好ましくは、疼痛は、急性疼痛；がん疼痛；慢性疼痛；全身痛；非がん疼痛および持続
痛からなる群から選択される。好ましくは、疼痛は、侵害受容性疼痛状態または神経障害
性疼痛状態である。好ましくは、疼痛は、急性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状態およ
び持続痛状態である。好ましくは、疼痛状態は、非悪性疼痛状態である。好ましくは、疼
痛状態は、悪性疼痛状態である。
痛からなる群から選択される。好ましくは、疼痛は、侵害受容性疼痛状態または神経障害
性疼痛状態である。好ましくは、疼痛は、急性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状態およ
び持続痛状態である。好ましくは、疼痛状態は、非悪性疼痛状態である。好ましくは、疼
痛状態は、悪性疼痛状態である。
【0057】
好ましくは、疼痛は、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；間質性膀胱炎
；骨粗鬆症；腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性
）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫
骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症；神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生
物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。
；骨粗鬆症；腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性
）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫
骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症；神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生
物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。
【0058】
好ましくは、疼痛は、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎および間質性膀
胱炎からなる群から選択される状態と関連する。
胱炎からなる群から選択される状態と関連する。
【0059】
好ましくは、疼痛は、腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発
性（転移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多
発性骨髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症；神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神
経痛；新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。
性（転移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多
発性骨髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症；神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神
経痛；新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。
【0060】
本開示はまた、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少させる
ためのポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを含む組成物に関
する。
ためのポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを含む組成物に関
する。
【0061】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害また
は減少させるための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを
含む組成物に関する。
は減少させるための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを
含む組成物に関する。
【0062】
本開示はまた、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少させる
際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを
含む組成物に関する。
際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを
含む組成物に関する。
【0063】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害また
は減少させる際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容され
る賦形剤とを含む組成物に関する。
は減少させる際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容され
る賦形剤とを含む組成物に関する。
【0064】
上記の組成物において、阻害または減少は哺乳動物における疼痛を治療する。
【0065】
本開示はまた、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛を治
療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを含む組
成物に関する。
療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形剤とを含む組
成物に関する。
【0066】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介さ
れる疼痛を治療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形
剤とを含む組成物に関する。
れる疼痛を治療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形
剤とを含む組成物に関する。
【0067】
本開示はまた、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛を治
療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形
剤とを含む組成物に関する。
療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許容される賦形
剤とを含む組成物に関する。
【0068】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介さ
れる疼痛を治療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許
容される賦形剤とを含む組成物に関する。
れる疼痛を治療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、許
容される賦形剤とを含む組成物に関する。
【0069】
上記の組成物において、疼痛は、非悪性疼痛または悪性疼痛である。
【0070】
上記の組成物において、疼痛は好ましくは筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は非
悪性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は悪性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格
痛は骨格痛である。好ましくは、骨格痛は非悪性骨格痛である。好ましくは、骨格痛は悪
性骨格痛である。
悪性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は悪性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格
痛は骨格痛である。好ましくは、骨格痛は非悪性骨格痛である。好ましくは、骨格痛は悪
性骨格痛である。
【0071】
好ましくは、骨格痛は背痛である。好ましくは、背痛は腰痛である。好ましくは、骨格
痛は骨および／または関節痛である。好ましくは、骨格痛は関節痛である。好ましくは、
骨格痛は骨痛である。好ましくは、骨痛は非悪性骨痛である。好ましくは、非悪性骨痛は
骨粗鬆症と関連する疼痛である。
痛は骨および／または関節痛である。好ましくは、骨格痛は関節痛である。好ましくは、
骨格痛は骨痛である。好ましくは、骨痛は非悪性骨痛である。好ましくは、非悪性骨痛は
骨粗鬆症と関連する疼痛である。
【0072】
好ましくは、非悪性骨痛は関節炎状態と関連する疼痛である。好ましくは、関節炎状態
は関節リウマチまたは変形性関節症から選択される。好ましくは、関節炎状態は関節リウ
マチである。好ましくは、関節炎状態は変形性関節症である。好ましくは、変形性関節症
は、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる群から選択される接合
している関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症は股関節におけるものであ
る。好ましくは、変形性関節症は膝関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症
は脊椎におけるもの（脊椎症）である。好ましくは、骨痛は悪性骨痛である。好ましくは
、悪性骨痛は原発性骨がんと関連する疼痛である。好ましくは、悪性骨痛は続発性（転移
性）骨がんと関連する疼痛である。
は関節リウマチまたは変形性関節症から選択される。好ましくは、関節炎状態は関節リウ
マチである。好ましくは、関節炎状態は変形性関節症である。好ましくは、変形性関節症
は、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる群から選択される接合
している関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症は股関節におけるものであ
る。好ましくは、変形性関節症は膝関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症
は脊椎におけるもの（脊椎症）である。好ましくは、骨痛は悪性骨痛である。好ましくは
、悪性骨痛は原発性骨がんと関連する疼痛である。好ましくは、悪性骨痛は続発性（転移
性）骨がんと関連する疼痛である。
【0073】
好ましくは、疼痛は、急性疼痛；がん疼痛；慢性疼痛；全身痛；非がん疼痛および持続
痛からなる群から選択される。好ましくは、疼痛は、侵害受容性疼痛状態または神経障害
性疼痛状態である。好ましくは、疼痛は、急性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状態およ
び持続痛状態である。好ましくは、疼痛状態は、非悪性疼痛状態である。好ましくは、疼
痛状態は、悪性疼痛状態である。
痛からなる群から選択される。好ましくは、疼痛は、侵害受容性疼痛状態または神経障害
性疼痛状態である。好ましくは、疼痛は、急性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状態およ
び持続痛状態である。好ましくは、疼痛状態は、非悪性疼痛状態である。好ましくは、疼
痛状態は、悪性疼痛状態である。
【0074】
好ましくは、疼痛は、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；間質性膀胱炎
；骨粗鬆症；腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性
）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫
骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症；神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生
物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。好ましくは、
骨折は大腿骨骨折である。大腿骨骨折は好ましくは大腿骨頸部骨折である。
；骨粗鬆症；腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性
）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫
骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症；神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生
物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。好ましくは、
骨折は大腿骨骨折である。大腿骨骨折は好ましくは大腿骨頸部骨折である。
【0075】
好ましくは、疼痛は、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎および間質性膀
胱炎からなる群から選択される状態と関連する。
胱炎からなる群から選択される状態と関連する。
【0076】
好ましくは、疼痛は、腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発
性（転移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多
発性骨髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症；神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神
経痛；新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。好
ましくは、骨折は大腿骨骨折である。大腿骨骨折は好ましくは大腿骨頸部骨折である。
性（転移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多
発性骨髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症；神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神
経痛；新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。好
ましくは、骨折は大腿骨骨折である。大腿骨骨折は好ましくは大腿骨頸部骨折である。
【0077】
本開示はまた、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少させる
際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
【0078】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害また
は減少させる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
は減少させる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
【0079】
本開示はまた、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）活性を阻害または減少させる
ための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
ための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
【0080】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）活性を阻害また
は減少させるための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用
に関する。
は減少させるための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用
に関する。
【0081】
上記の使用において、阻害または減少は哺乳動物における疼痛を治療する。
【0082】
本開示はまた、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛を治
療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
【0083】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介さ
れる疼痛を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
れる疼痛を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関する。
【0084】
本開示はまた、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）によって媒介される疼痛を治
療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関す
る。
療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用に関す
る。
【0085】
本開示はまた、哺乳動物におけるプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介さ
れる疼痛を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩
の使用に関する。
れる疼痛を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩
の使用に関する。
【0086】
上記の使用において、疼痛は、非悪性疼痛または悪性疼痛である。
【0087】
上記の使用において、疼痛は好ましくは筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は非悪
性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は悪性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛
は骨格痛である。好ましくは、骨格痛は非悪性骨格痛である。好ましくは、骨格痛は悪性
骨格痛である。
性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛は悪性筋骨格痛である。好ましくは、筋骨格痛
は骨格痛である。好ましくは、骨格痛は非悪性骨格痛である。好ましくは、骨格痛は悪性
骨格痛である。
【0088】
好ましくは、骨格痛は背痛である。好ましくは、背痛は腰痛である。好ましくは、骨格
痛は骨および／または関節痛である。好ましくは、骨格痛は関節痛である。好ましくは、
骨格痛は骨痛である。好ましくは、骨痛は非悪性骨痛である。好ましくは、非悪性骨痛は
骨粗鬆症と関連する疼痛である。
痛は骨および／または関節痛である。好ましくは、骨格痛は関節痛である。好ましくは、
骨格痛は骨痛である。好ましくは、骨痛は非悪性骨痛である。好ましくは、非悪性骨痛は
骨粗鬆症と関連する疼痛である。
【0089】
好ましくは、非悪性骨痛は関節炎状態と関連する疼痛である。好ましくは、関節炎状態
は関節リウマチまたは変形性関節症から選択される。好ましくは、関節炎状態は関節リウ
マチである。好ましくは、関節炎状態は変形性関節症である。好ましくは、変形性関節症
は、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる群から選択される接合
している関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症は股関節におけるものであ
る。好ましくは、変形性関節症は膝関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症
は脊椎におけるもの（脊椎症）である。好ましくは、骨痛は悪性骨痛である。好ましくは
、悪性骨痛は原発性骨がんと関連する疼痛である。好ましくは、悪性骨痛は続発性（転移
性）骨がんと関連する疼痛である。
は関節リウマチまたは変形性関節症から選択される。好ましくは、関節炎状態は関節リウ
マチである。好ましくは、関節炎状態は変形性関節症である。好ましくは、変形性関節症
は、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる群から選択される接合
している関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症は股関節におけるものであ
る。好ましくは、変形性関節症は膝関節におけるものである。好ましくは、変形性関節症
は脊椎におけるもの（脊椎症）である。好ましくは、骨痛は悪性骨痛である。好ましくは
、悪性骨痛は原発性骨がんと関連する疼痛である。好ましくは、悪性骨痛は続発性（転移
性）骨がんと関連する疼痛である。
【0090】
好ましくは、疼痛は、急性疼痛；がん疼痛；慢性疼痛；全身痛；非がん疼痛および持続
痛からなる群から選択される。好ましくは、疼痛は、侵害受容性疼痛状態または神経障害
性疼痛状態である。好ましくは、疼痛は、急性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状態およ
び持続痛状態である。好ましくは、疼痛状態は、非悪性疼痛状態である。好ましくは、疼
痛状態は、悪性疼痛状態である。
痛からなる群から選択される。好ましくは、疼痛は、侵害受容性疼痛状態または神経障害
性疼痛状態である。好ましくは、疼痛は、急性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状態およ
び持続痛状態である。好ましくは、疼痛状態は、非悪性疼痛状態である。好ましくは、疼
痛状態は、悪性疼痛状態である。
【0091】
好ましくは、疼痛は、関節炎、変形性関節症、関節リウマチ、間質性膀胱炎、腹痛；関
節痛；子宮内膜症、骨粗鬆症、前立腺炎、膵炎、慢性頭痛、原発性がん、続発性（転移性
）がん、背痛、骨損傷または骨折、糖尿病性神経障害、線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫
骨疾患、多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生
物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。好ましくは、
骨折は大腿骨骨折である。大腿骨骨折は好ましくは大腿骨頸部骨折である。
節痛；子宮内膜症、骨粗鬆症、前立腺炎、膵炎、慢性頭痛、原発性がん、続発性（転移性
）がん、背痛、骨損傷または骨折、糖尿病性神経障害、線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫
骨疾患、多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生
物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。好ましくは、
骨折は大腿骨骨折である。大腿骨骨折は好ましくは大腿骨頸部骨折である。
【0092】
好ましくは、疼痛は、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；および間質性
膀胱炎からなる群から選択される状態と関連する。
膀胱炎からなる群から選択される状態と関連する。
【0093】
好ましくは、疼痛は、腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発
性（転移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多
発性骨髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神
経痛；新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。好
ましくは、骨折は大腿骨骨折である。大腿骨骨折は好ましくは大腿骨頸部骨折である。
性（転移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多
発性骨髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神
経痛；新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する。好
ましくは、骨折は大腿骨骨折である。大腿骨骨折は好ましくは大腿骨頸部骨折である。
【0094】
本開示はまた、上述した方法、組成物および使用を企図し、ポリ硫酸化多糖は、好まし
くは、高分子量ヘパリン、低分子量ヘパリン、ヘパラン硫酸、ポリ硫酸ペントサン、ポリ
硫酸コンドロイチン、ポリ硫酸キトサン、デルマタンポリ硫酸スロデキシド、硫酸デキス
トラン、ポリ硫酸化イヌリン、硫酸化ラクトビオン酸アミド、硫酸化ビス－アルドン酸ア
ミド、八硫酸スクロース、フコイダン－１、フコイダン－２、硫酸化ベータ－シクロデキ
ストリン、硫酸化ガンマ－シクロデキストリンおよび限定されないが、六硫酸イノシトー
ルを含む小さな硫酸化化合物からなる群から選択される。
くは、高分子量ヘパリン、低分子量ヘパリン、ヘパラン硫酸、ポリ硫酸ペントサン、ポリ
硫酸コンドロイチン、ポリ硫酸キトサン、デルマタンポリ硫酸スロデキシド、硫酸デキス
トラン、ポリ硫酸化イヌリン、硫酸化ラクトビオン酸アミド、硫酸化ビス－アルドン酸ア
ミド、八硫酸スクロース、フコイダン－１、フコイダン－２、硫酸化ベータ－シクロデキ
ストリン、硫酸化ガンマ－シクロデキストリンおよび限定されないが、六硫酸イノシトー
ルを含む小さな硫酸化化合物からなる群から選択される。
【0095】
好ましくは、ポリ硫酸化多糖は、高分子量ヘパリン、低分子量ヘパリン、ポリ硫酸ペン
トサン（ＰＰＳ）、ポリ硫酸コンドロイチンおよびポリ硫酸キトサンからなる群から選択
される。
トサン（ＰＰＳ）、ポリ硫酸コンドロイチンおよびポリ硫酸キトサンからなる群から選択
される。
【0096】
ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）は、好ましくは、ポリ硫酸ペントサンのナトリウム塩（
ＮａＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサンのマグネシウム塩（ＭｇＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサ
ンのカルシウム塩（ＣａＰＰＳ）、およびポリ硫酸ペントサンの亜鉛塩（ＺｎＰＰＳ）か
らなる群から選択される。
ＮａＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサンのマグネシウム塩（ＭｇＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサ
ンのカルシウム塩（ＣａＰＰＳ）、およびポリ硫酸ペントサンの亜鉛塩（ＺｎＰＰＳ）か
らなる群から選択される。
【0097】
好ましくは、ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）は、ポリ硫酸ペントサンナトリウム（Ｎａ
ＰＰＳ）である。
ＰＰＳ）である。
【0098】
１つの好ましい実施形態では、ＮａＰＰＳは、Ｂｅｎｅ－ＰｈａｒｍａＣｈｅｍ Ｇｍ
ｂＨ ＆ Ｃｏ ＫＧ、Ｇｅｒｅｔｓｒｉｅｄ、ドイツによってＵＳ ＦＤＡおよびＥｕ
ｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ＥＭＥＡに提出された仕様書に従って製造される。
ｂＨ ＆ Ｃｏ ＫＧ、Ｇｅｒｅｔｓｒｉｅｄ、ドイツによってＵＳ ＦＤＡおよびＥｕ
ｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ＥＭＥＡに提出された仕様書に従って製造される。
【0099】
種々の経路による投与に適したＰＰＳおよびＰＰＳ組成物は、Remington: The Science
and Practice of Pharmacy, 21st Edition; Lippincott Williams & Wilkins: Philadel
phia, PA, 2005のような、この分野における標準的な教科書を参照することによって製剤
化され得ることは当業者によって認識されるであろう。これらの組成物には、注射、経口
（胃腸薬物吸収増量剤および増強剤を含有する錠剤およびカプセル剤を含む）、静脈内な
どによるものが含まれる。
and Practice of Pharmacy, 21st Edition; Lippincott Williams & Wilkins: Philadel
phia, PA, 2005のような、この分野における標準的な教科書を参照することによって製剤
化され得ることは当業者によって認識されるであろう。これらの組成物には、注射、経口
（胃腸薬物吸収増量剤および増強剤を含有する錠剤およびカプセル剤を含む）、静脈内な
どによるものが含まれる。
【0100】
好ましくは、阻害もしくは減少、または治療は、筋肉内（ＩＭ）もしくは皮下（ＳＣ）
経路、心室内経路、嚢内経路またはくも膜下腔経路による注射投与、静脈内（ＩＶ）投与
、関節内（ＩＡ）投与、関節周囲投与、局所的投与、坐剤を介した投与、または経口投与
による。
経路、心室内経路、嚢内経路またはくも膜下腔経路による注射投与、静脈内（ＩＶ）投与
、関節内（ＩＡ）投与、関節周囲投与、局所的投与、坐剤を介した投与、または経口投与
による。
【0101】
本開示は、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ
－ＮＧＦ）活性を阻害もしくは減少させること、またはポリ硫酸化多糖もしくはその許容
される塩を、固定用量として約１０ｎｇ～約１０００ｎｇの範囲の有効量で哺乳動物に投
与することによって、哺乳動物におけるＮＧＦもしくはｐｒｏ－ＮＧＦにより媒介される
疼痛を治療することを企図する。ある特定の実施形態では、有効量は、固定用量として約
５０ｎｇ～約９５０ｎｇ；約１００ｎｇ～約９００ｎｇ；約１５０ｎｇ～約８５０ｎｇ；
約２００ｎｇ～約８００ｎｇ；約２５０ｎｇ～約７５０ｎｇ；約３００ｎｇ～約７００ｎ
ｇ；約３５０ｎｇ～約６５０ｎｇ；約４００ｎｇ～約６００ｎｇ；約４５０ｎｇ～約５０
０ｎｇの範囲である。ある特定の実施形態では、有効量は、約１０ｎｇ、約５０ｎｇ、約
１００ｎｇ、約１５０ｎｇ、約２００ｎｇ、約２５０ｎｇ、約３００ｎｇ、約３５０ｎｇ
、約４００ｎｇ、約４５０ｎｇ、約５００ｎｇ、約５５０ｎｇ、約６００ｎｇ、約６５０
ｎｇ、約７００ｎｇ、約７５０ｎｇ、約８００ｎｇ、約８５０ｎｇ、約９００ｎｇ、約９
５０ｎｇまたは約１０００ｎｇの固定用量である。
－ＮＧＦ）活性を阻害もしくは減少させること、またはポリ硫酸化多糖もしくはその許容
される塩を、固定用量として約１０ｎｇ～約１０００ｎｇの範囲の有効量で哺乳動物に投
与することによって、哺乳動物におけるＮＧＦもしくはｐｒｏ－ＮＧＦにより媒介される
疼痛を治療することを企図する。ある特定の実施形態では、有効量は、固定用量として約
５０ｎｇ～約９５０ｎｇ；約１００ｎｇ～約９００ｎｇ；約１５０ｎｇ～約８５０ｎｇ；
約２００ｎｇ～約８００ｎｇ；約２５０ｎｇ～約７５０ｎｇ；約３００ｎｇ～約７００ｎ
ｇ；約３５０ｎｇ～約６５０ｎｇ；約４００ｎｇ～約６００ｎｇ；約４５０ｎｇ～約５０
０ｎｇの範囲である。ある特定の実施形態では、有効量は、約１０ｎｇ、約５０ｎｇ、約
１００ｎｇ、約１５０ｎｇ、約２００ｎｇ、約２５０ｎｇ、約３００ｎｇ、約３５０ｎｇ
、約４００ｎｇ、約４５０ｎｇ、約５００ｎｇ、約５５０ｎｇ、約６００ｎｇ、約６５０
ｎｇ、約７００ｎｇ、約７５０ｎｇ、約８００ｎｇ、約８５０ｎｇ、約９００ｎｇ、約９
５０ｎｇまたは約１０００ｎｇの固定用量である。
【0102】
上記の用量（すなわち、それらの用量は約１０ｎｇ～約１０００ｎｇの範囲である）に
関して、阻害もしくは減少、または治療は、好ましくは、心室内、嚢内またはくも膜下腔
経路によるポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の注射投与による。
関して、阻害もしくは減少、または治療は、好ましくは、心室内、嚢内またはくも膜下腔
経路によるポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の注射投与による。
【0103】
本開示は、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）もしくはプロ神経成長因子（ｐｒ
ｏ－ＮＧＦ）活性を阻害もしくは減少させること、またはポリ硫酸化多糖もしくはその許
容される塩を、固定用量として約１０μｇ～約１０００μｇの範囲の有効量で哺乳動物に
投与することによって哺乳動物におけるＮＧＦもしくはｐｒｏ－ＮＧＦにより媒介される
疼痛を治療することを企図する。ある特定の実施形態では、有効量は、固定用量として約
５０μｇ～約９５０μｇ；約１００μｇ～約９００μｇ；約１５０μｇ～約８５０μｇ；
約２００μｇ～約８００μｇ；約２５０μｇ～約７５０μｇ；約３００μｇ～約７００μ
ｇ；約３５０μｇ～約６５０μｇ；約４００μｇ～約６００μｇ；約４５０μｇ～約５０
０μｇである。ある特定の実施形態では、有効量は、約１０μｇ、約５０μｇ、約１００
μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４
００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ、約５５０μｇ、約６００μｇ、約６５０μｇ、
約７００μｇ、約７５０μｇ、約８００μｇ、約８５０μｇ、約９００μｇ、約９５０μ
ｇまたは約１０００μｇの固定用量である。
ｏ－ＮＧＦ）活性を阻害もしくは減少させること、またはポリ硫酸化多糖もしくはその許
容される塩を、固定用量として約１０μｇ～約１０００μｇの範囲の有効量で哺乳動物に
投与することによって哺乳動物におけるＮＧＦもしくはｐｒｏ－ＮＧＦにより媒介される
疼痛を治療することを企図する。ある特定の実施形態では、有効量は、固定用量として約
５０μｇ～約９５０μｇ；約１００μｇ～約９００μｇ；約１５０μｇ～約８５０μｇ；
約２００μｇ～約８００μｇ；約２５０μｇ～約７５０μｇ；約３００μｇ～約７００μ
ｇ；約３５０μｇ～約６５０μｇ；約４００μｇ～約６００μｇ；約４５０μｇ～約５０
０μｇである。ある特定の実施形態では、有効量は、約１０μｇ、約５０μｇ、約１００
μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４
００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ、約５５０μｇ、約６００μｇ、約６５０μｇ、
約７００μｇ、約７５０μｇ、約８００μｇ、約８５０μｇ、約９００μｇ、約９５０μ
ｇまたは約１０００μｇの固定用量である。
【0104】
上記の用量（すなわち、それらは約１０μｇ～約１０００μｇの範囲である）に関して
、阻害もしくは減少、または治療は、好ましくは、心室内、嚢内もしくはくも膜下腔経路
によるポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の注射投与による。
、阻害もしくは減少、または治療は、好ましくは、心室内、嚢内もしくはくも膜下腔経路
によるポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の注射投与による。
【0105】
好ましくは、阻害もしくは減少、または治療は、ポリ硫酸化多糖またはその許容される
塩を、１用量あたり約１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で哺乳動物に投与
することによる。
塩を、１用量あたり約１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で哺乳動物に投与
することによる。
【0106】
好ましくは、阻害もしくは減少、または治療は、ポリ硫酸化多糖またはその許容される
塩を、１用量あたり約２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で哺乳動物に投与することによる。
有効量は、好ましくは、１用量あたり約１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ対象である。ある特定
の実施形態では、有効量は、約１．０～１．５ｍｇ／ｋｇ；１．５～２．０ｍｇ／ｋｇ；
０．５ｍｇ／ｋｇ；１．０ｍｇ／ｋｇ；１．５ｍｇ／ｋｇ；または２．０ｍｇ／ｋｇであ
る。
塩を、１用量あたり約２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で哺乳動物に投与することによる。
有効量は、好ましくは、１用量あたり約１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ対象である。ある特定
の実施形態では、有効量は、約１．０～１．５ｍｇ／ｋｇ；１．５～２．０ｍｇ／ｋｇ；
０．５ｍｇ／ｋｇ；１．０ｍｇ／ｋｇ；１．５ｍｇ／ｋｇ；または２．０ｍｇ／ｋｇであ
る。
【0107】
本開示は、哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）もしくはプロ神経成長因子（ｐｒ
ｏ－ＮＧＦ）活性を阻害もしくは減少させること、またはポリ硫酸化多糖もしくはその許
容される塩を、固定用量として約１ｍｇ～約２５ｍｇの範囲の有効量で哺乳動物に投与す
ることによって、哺乳動物におけるＮＧＦもしくはｐｒｏ－ＮＧＦにより媒介される疼痛
を治療することを企図する。ある特定の実施形態では、有効量は、約２ｍｇから約２４ｍ
ｇの間；約３ｍｇから約２３ｍｇの間；約４ｍｇから約２２ｍｇの間；約５ｍｇから約２
１ｍｇの間；約６ｍｇから約２０ｍｇの間；約７ｍｇから約１９ｍｇの間；約８ｍｇから
約１８ｍｇの間；約９ｍｇから約１７ｍｇの間；約１０ｍｇから約１６ｍｇの間；約１１
ｍｇから約１５ｍｇの間；約１２ｍｇから約１４ｍｇの間の範囲の固定用量である。ある
特定の実施形態では、有効量は、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、
約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１
３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、
約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇまたは約２５ｍｇの固定
用量である。
ｏ－ＮＧＦ）活性を阻害もしくは減少させること、またはポリ硫酸化多糖もしくはその許
容される塩を、固定用量として約１ｍｇ～約２５ｍｇの範囲の有効量で哺乳動物に投与す
ることによって、哺乳動物におけるＮＧＦもしくはｐｒｏ－ＮＧＦにより媒介される疼痛
を治療することを企図する。ある特定の実施形態では、有効量は、約２ｍｇから約２４ｍ
ｇの間；約３ｍｇから約２３ｍｇの間；約４ｍｇから約２２ｍｇの間；約５ｍｇから約２
１ｍｇの間；約６ｍｇから約２０ｍｇの間；約７ｍｇから約１９ｍｇの間；約８ｍｇから
約１８ｍｇの間；約９ｍｇから約１７ｍｇの間；約１０ｍｇから約１６ｍｇの間；約１１
ｍｇから約１５ｍｇの間；約１２ｍｇから約１４ｍｇの間の範囲の固定用量である。ある
特定の実施形態では、有効量は、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、
約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１
３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、
約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇまたは約２５ｍｇの固定
用量である。
【0108】
ある特定の実施形態では、有効量は、約２５ｍｇから４０００ｍｇの間の固定用量であ
る。ある特定の実施形態では、有効量は、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ
、１２５ｍｇ、１５０ｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍ
ｇまたは３００ｍｇの固定用量である。ある特定の実施形態では、有効量は、約３５０ｍ
ｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７０
０ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ
、２０００ｍｇ、３０００ｍｇまたは４０００ｍｇの固定用量である。
る。ある特定の実施形態では、有効量は、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ
、１２５ｍｇ、１５０ｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍ
ｇまたは３００ｍｇの固定用量である。ある特定の実施形態では、有効量は、約３５０ｍ
ｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７０
０ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ
、２０００ｍｇ、３０００ｍｇまたは４０００ｍｇの固定用量である。
【0109】
好ましくは、投与は注射による。投与は、好ましくは、皮下（ＳＣ）注射による。好ま
しくは、ＳＣ注射はゆっくりとしたＳＣ注射である。投与は、好ましくは、筋肉内（ＩＭ
）注射による。
しくは、ＳＣ注射はゆっくりとしたＳＣ注射である。投与は、好ましくは、筋肉内（ＩＭ
）注射による。
【0110】
好ましくは、ヒトへの投与は、１日１回、週２回または週３回の治療レジメンでの投薬
による。ヒトへの投与は、好ましくは、週２回の治療レジメンでの投薬による。好ましく
は、ヒトへの投与は、最短で３日および最長で４日の投薬間隔で週２回の治療レジメンで
の投薬による。ヒトへの投与は、好ましくは、６週間の間、週２回の治療レジメンでの投
薬による。好ましくは、治療レジメンで投与されるポリ硫酸化多糖の総用量は約２００～
４０００ｍｇである。
による。ヒトへの投与は、好ましくは、週２回の治療レジメンでの投薬による。好ましく
は、ヒトへの投与は、最短で３日および最長で４日の投薬間隔で週２回の治療レジメンで
の投薬による。ヒトへの投与は、好ましくは、６週間の間、週２回の治療レジメンでの投
薬による。好ましくは、治療レジメンで投与されるポリ硫酸化多糖の総用量は約２００～
４０００ｍｇである。
【0111】
このように、投薬は、より重いまたはより軽い体重の個体に応じて調整される。治療レ
ジメンは、対象が経験する疼痛の重症度に応じて適合され得る。一部の場合、患者が高レ
ベルの疼痛を経験する場合、可能な限り速くＰＰＳの治療負荷に到達することが望ましい
。これは、例えば、疼痛が解消されるまで、１日あたり約１．０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以
上のＰＰＳの投与を必要とし得る。
ジメンは、対象が経験する疼痛の重症度に応じて適合され得る。一部の場合、患者が高レ
ベルの疼痛を経験する場合、可能な限り速くＰＰＳの治療負荷に到達することが望ましい
。これは、例えば、疼痛が解消されるまで、１日あたり約１．０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以
上のＰＰＳの投与を必要とし得る。
【0112】
投与が注射による場合、これは、通常、看護師／医師によって臨床的状況において実施
される。当業者は、成功的治療の鍵は、最適な治療用量を達成するために十分なＰＰＳを
対象に投与することであることを理解するであろう。ＰＰＳは結合組織において蓄積する
ことが知られているので、負荷は経時的に、例えば、４～５日にわたる１ｍｇ ＰＰＳ／
ｋｇの１日用量で達成され得る。重度の慢性症例に関して、対象は、１年につき１回より
多い治療過程、おそらく１年につき２回または３回の治療過程を必要とし得ることが考え
られる。
される。当業者は、成功的治療の鍵は、最適な治療用量を達成するために十分なＰＰＳを
対象に投与することであることを理解するであろう。ＰＰＳは結合組織において蓄積する
ことが知られているので、負荷は経時的に、例えば、４～５日にわたる１ｍｇ ＰＰＳ／
ｋｇの１日用量で達成され得る。重度の慢性症例に関して、対象は、１年につき１回より
多い治療過程、おそらく１年につき２回または３回の治療過程を必要とし得ることが考え
られる。
【0113】
安全性の観点から、より長期にわたって、投与頻度を減らした、より低い用量範囲（１
～２ｍｇ ＰＰＳ／ｋｇまたは約２５～５０ｍｇの固定用量）が好ましい。これは、ＰＰ
Ｓが既知の抗凝固剤であり、基礎ＡＰＴが、より高い用量（３ｍｇ超のＰＰＳ／ｋｇまた
は約１５０～２００ｍｇの固定用量）で上昇することがあり、いずれかの開放創の出血を
促す可能性があり得るためである。
～２ｍｇ ＰＰＳ／ｋｇまたは約２５～５０ｍｇの固定用量）が好ましい。これは、ＰＰ
Ｓが既知の抗凝固剤であり、基礎ＡＰＴが、より高い用量（３ｍｇ超のＰＰＳ／ｋｇまた
は約１５０～２００ｍｇの固定用量）で上昇することがあり、いずれかの開放創の出血を
促す可能性があり得るためである。
【0114】
注射による投与が好ましいが、ＰＰＳの経口または局所製剤が、初期のＩＭまたはＳＣ
ＰＰＳ治療のためのフォローアップ（維持用量）として使用されてもよい。これはまた
、経口投与にも適用可能である。ＩＶ点滴による投与に関して、１日あたり０．５～１ｍ
ｇ ＰＰＳ／ｋｇのより低い用量が好ましい。
ＰＰＳ治療のためのフォローアップ（維持用量）として使用されてもよい。これはまた
、経口投与にも適用可能である。ＩＶ点滴による投与に関して、１日あたり０．５～１ｍ
ｇ ＰＰＳ／ｋｇのより低い用量が好ましい。
【0115】
本開示はまた、ＮＧＦ封鎖剤などの、ポリ硫酸化多糖と他の治療剤との同時投与を企図
する。他の治療剤が本発明の化合物と組み合わせて利用される場合、それらは、例えば、
Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）に記されているか、また
はそうでなければ当業者によって決定される量で使用されてもよい。
する。他の治療剤が本発明の化合物と組み合わせて利用される場合、それらは、例えば、
Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）に記されているか、また
はそうでなければ当業者によって決定される量で使用されてもよい。
【0116】
任意の特定の患者についての特定の用量レベルおよび投薬頻度は、変化させてもよく、
利用される特定の化合物の活性、代謝安定性およびその化合物の作用の長さ、年齢、体重
、全体的な健康、性別、食事、投与の様式および時間、排泄率、薬物の組合せ、特定の状
態の重症度、ならびに療法を受ける宿主を含む、種々の要因に依存すると予想されること
は理解されるであろう。例えば、大きな動物はより多くの用量を必要とすることは理解さ
れるであろう。例示のために、ウマのような大きな動物は約４０００ｍｇの固定用量を必
要とし得る。
利用される特定の化合物の活性、代謝安定性およびその化合物の作用の長さ、年齢、体重
、全体的な健康、性別、食事、投与の様式および時間、排泄率、薬物の組合せ、特定の状
態の重症度、ならびに療法を受ける宿主を含む、種々の要因に依存すると予想されること
は理解されるであろう。例えば、大きな動物はより多くの用量を必要とすることは理解さ
れるであろう。例示のために、ウマのような大きな動物は約４０００ｍｇの固定用量を必
要とし得る。
【0117】
本開示の治療の適合性の決定は、患者が報告した転帰測定機器を使用して評価すること
ができる。患者が報告した疼痛および／または機能的転帰が使用されてもよい。これらに
は、疼痛についての数値評価スケール（Numerical Rating Scale）（ＮＲＳ）［１７］；
機能についてのリスホルム膝評価法（Lysholm Knee Score）［１８］；疼痛、症状、機能
および生活の質についての膝外傷および変形性関節症転帰スコア（Knee injury and Oste
oarthritis Outcome Score）（ＫＯＯＳ）［１９］；ならびに腰痛機能についてのオスウ
ェストリー障害指数（Oswestry Disability Index）（オスウェストリー腰痛障害質問票
（Oswestry Low Back Pain Disability Questionnaire）としても知られている）［２０
］が含まれる。
ができる。患者が報告した疼痛および／または機能的転帰が使用されてもよい。これらに
は、疼痛についての数値評価スケール（Numerical Rating Scale）（ＮＲＳ）［１７］；
機能についてのリスホルム膝評価法（Lysholm Knee Score）［１８］；疼痛、症状、機能
および生活の質についての膝外傷および変形性関節症転帰スコア（Knee injury and Oste
oarthritis Outcome Score）（ＫＯＯＳ）［１９］；ならびに腰痛機能についてのオスウ
ェストリー障害指数（Oswestry Disability Index）（オスウェストリー腰痛障害質問票
（Oswestry Low Back Pain Disability Questionnaire）としても知られている）［２０
］が含まれる。
【0118】
好ましくは、哺乳動物における疼痛は投与後に減少する。哺乳動物における疼痛は、好
ましくは、評価スケールによって決定される通り、減少する。好ましくは、評価スケール
は数値評価スケール（ＮＲＳ）である。
ましくは、評価スケールによって決定される通り、減少する。好ましくは、評価スケール
は数値評価スケール（ＮＲＳ）である。
【0119】
好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、哺乳動物の健康をさら
に維持または改善する。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は哺
乳動物の体重をさらに維持する。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の
投与は、筋骨格の完全性および／または機能をさらに維持または改善する。好ましくは、
ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、骨格の完全性および／または機能をさ
らに維持または改善する。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は
、関節または骨の完全性および／または機能をさらに維持または改善する。好ましくは、
ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、骨の完全性および／または機能をさら
に維持または改善する。
に維持または改善する。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は哺
乳動物の体重をさらに維持する。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の
投与は、筋骨格の完全性および／または機能をさらに維持または改善する。好ましくは、
ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、骨格の完全性および／または機能をさ
らに維持または改善する。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は
、関節または骨の完全性および／または機能をさらに維持または改善する。好ましくは、
ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、骨の完全性および／または機能をさら
に維持または改善する。
【0120】
好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、がんによって誘発され
る骨折を予防し、哺乳動物は骨がんを患っている。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはそ
の許容される塩の投与は、がんによって誘発される骨折までの時間を遅延させ、哺乳動物
は骨がんを患っている。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、
骨量減少を予防するか、または回復させる。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容
される塩の投与は、ミネラルの恒常性の異常調節を予防するか、または回復させる。好ま
しくは、ミネラルの恒常性はカルシウムおよび／またはリン酸塩の恒常性である。好まし
くは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、神経圧迫症候群を予防するか、
または回復させる。
る骨折を予防し、哺乳動物は骨がんを患っている。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはそ
の許容される塩の投与は、がんによって誘発される骨折までの時間を遅延させ、哺乳動物
は骨がんを患っている。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、
骨量減少を予防するか、または回復させる。好ましくは、ポリ硫酸化多糖またはその許容
される塩の投与は、ミネラルの恒常性の異常調節を予防するか、または回復させる。好ま
しくは、ミネラルの恒常性はカルシウムおよび／またはリン酸塩の恒常性である。好まし
くは、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与は、神経圧迫症候群を予防するか、
または回復させる。
【0121】
好ましくは、哺乳動物における機能は治療後に改善する。哺乳動物における機能は、好
ましくは、リスホルム膝評価法によって決定される通り、改善する。
ましくは、リスホルム膝評価法によって決定される通り、改善する。
【図面の簡単な説明】
【0122】
【図1】ＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦ ＥＬＩＳＡプレートレイアウトの例の図である。
【図2】分化ＫＯＡおよびＮＯＦ骨芽細胞／骨細胞様培養物の代表的なＡｌｉｚａｒｉｎ Ｒｅｄ染色の図である。
【図3】３人のドナー（ＫＯＡ１～３）：ＤＭＰ１からのＫＯＡ培養物における骨芽細胞／骨細胞分化マーカーの遺伝子発現の図である。Ａ）ＫＯＡ１－ＤＭＰ１：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＤＭＰ１：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；およびＣ）ＫＯＡ３－ＤＭＰ１ ｍＲＮＡ発現。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応（平均＋標準偏差（ＳＤ））である。
【図4】３人のドナー（ＫＯＡ１～３）：ＳＯＳＴからのＫＯＡ培養物における骨芽細胞／骨細胞分化マーカーの遺伝子発現の図である。Ａ）ＫＯＡ１－ＳＯＳＴ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＳＯＳＴ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；およびＣ）ＫＯＡ３－ＳＯＳＴ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応（平均＋標準偏差（ＳＤ））である。
【図5】３人のドナー（ＫＯＡ１～３）：ＯＣＮからのＫＯＡ培養物における骨芽細胞／骨細胞分化マーカーの遺伝子発現の図である。Ａ）ＫＯＡ１－ＯＣＮ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＯＣＮ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；およびＣ）ＫＯＡ３－ＯＣＮ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応（平均＋標準偏差（ＳＤ））である。
【図6】３人のドナー（ＫＯＡ１～３）：ＲＡＮＫＬからのＫＯＡ培養物における骨芽細胞／骨細胞分化マーカーの遺伝子発現の図である。Ａ）ＫＯＡ１－ＲＡＮＫＬ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＲＡＮＫＬ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；およびＣ）ＫＯＡ３－ＲＡＮＫＬ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応（平均＋標準偏差（ＳＤ））である。
【図7】３人のドナー（ＫＯＡ１～３）：ＯＰＧからのＫＯＡ培養物における骨芽細胞／骨細胞分化マーカーの遺伝子発現の図である。Ａ）ＫＯＡ１－ＯＰＧ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＯＰＧ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；およびＣ）ＫＯＡ３－ＯＰＧ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応（平均＋標準偏差（ＳＤ））である。
【図8】ヒト骨細胞によるＮＧＦ発現の図である。３人のドナーについてのＫＯＡ培養物の分化にわたる相対ＮＧＦ ｍＲＮＡ発現を分析した。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応（平均＋標準偏差（ＳＤ））である。Ａ）ＫＯＡ１－ＮＧＦ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＮＧＦ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；およびＣ）ＫＯＡ３－ＮＧＦ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。
【図9】アイソタイプ対照ＩｇＧ免疫染色（ｌｈｓ）Φと比較した、新たに採取されたヒト骨細胞（ｒｈｓ）によるＮＧＦタンパク質発現（赤色）を示す共焦点顕微鏡画像である。核（青色）はＤＡＰＩで染色される。
【図10】さらに７２時間未処理（ＵＴ）または１、５および５０μｇ／ｍＬのＰＰＳで同じ時間、前処理した、２８日の分化ＮＯＦ骨細胞様細胞の培養物における、ヒトＮＧＦ ＥＬＩＳＡによって決定した、ＮＧＦタンパク質の分泌レベルを示す図である。データは、３連の反応の平均＋ＳＤである。Ａ）－ＮＯＦ１；Ｂ）－ＮＯＦ２；Ｃ）－ＮＯＦ３；およびＤ）ＮＯＦ：全てのドナー。
【図11】さらに７２時間未処理（ＵＴ）または１、５および５０μｇ／ｍＬのＰＰＳで同じ時間、前処理した、２８日の分化ＫＯＡ骨細胞様細胞の培養物における、ヒトＮＧＦ ＥＬＩＳＡによって決定した、ＮＧＦタンパク質の分泌レベルの図である。データは、３連の反応の平均＋ＳＤである。Ａ）－ＫＯＡ１；Ｂ）－ＫＯＡ２；Ｃ）－ＫＯＡ３；およびＤ）ＫＯＡ：全てのドナー。
【図12】ｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せに反応してＮＯＦ骨細胞様培養物によって分泌されたＮＧＦの見かけのレベルの図である。データは、３連のウェルから収集した上清の平均＋ＳＤである。Ａ）－ＮＯＦ１；Ｂ）－ＮＯＦ２；Ｃ）－ＮＯＦ３；およびＤ）ＮＯＦ：全てのドナー。
【図13】ｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せに反応してＫＯＡ骨細胞様培養物によって分泌されたＮＧＦの見かけのレベルの図である。データは、３連のウェルから収集した上清の平均＋ＳＤである。Ａ）－ＫＯＡ１；Ｂ）－ＫＯＡ２；Ｃ）－ＫＯＡ３；およびＤ）ＫＯＡ：全てのドナー。
【図14】ｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せで処理したＮＯＦ骨細胞様細胞の培養物からのｐｒｏＮＧＦの分泌の図である。データは、３連のウェルから収集した上清の平均＋ＳＤである。未処理の対照（ＵＴ）に対する有意差は、＊（ｐ＜０．０５）によって示され；ｒｈＴＮＦで処理した培養物に対する有意差は、＃（ｐ＜０．０５）によって示される。Ａ）－ＮＯＦ１；Ｂ）－ＮＯＦ２；Ｃ）－ＮＯＦ３；およびＤ）ＮＯＦ：全てのドナー。
【図15】ｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せで処理したＮＯＦおよびＫＯＡ骨細胞様細胞の培養物からのｐｒｏＮＧＦの分泌の図である。データは、３連のウェルから収集した上清の平均＋ＳＤである。未処理の対照（ＵＴ）に対する有意差は、＊（ｐ＜０．０５）によって示され；ｒｈＴＮＦで処理した培養物に対する有意差は、＃（ｐ＜０．０５）によって示される。Ａ）－ＫＯＡ１；Ｂ）－ＫＯＡ２；Ｃ）－ＫＯＡ３；およびＤ）ＫＯＡ：全てのドナー。
【図16】ＫＯＡ骨細胞様培養物における遺伝子発現に対するｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せの効果の図である。ＮＧＦ ｍＲＮＡについてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを実施した。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応の平均＋ＳＤである。Ａ）ＫＯＡ１－ＮＧＦＲ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＮＧＦＲ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。
【図17】ＫＯＡ骨細胞様培養物における遺伝子発現に対するｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せの効果の図である。ＩＬ－６ ｍＲＮＡについてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを実施した。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応の平均＋ＳＤである。Ａ）ＫＯＡ１－ＩＬ６：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＩＬ６：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。
【図18】ＫＯＡ骨細胞様培養物における遺伝子発現に対するｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せの効果の図である。ＣＯＸ２ ｍＲＮＡについてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを実施した。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応の平均＋ＳＤである。Ａ）ＫＯＡ１－ＣＯＸ２：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ２－ＣＯＸ２：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。
【図19】ＫＯＡ１およびＫＯＡ２骨細胞様培養物におけるＮＧＦ受容体の遺伝子発現の図である。ＮＧＦＲ（Ｐ７５ＮＴＲ）およびＮＴＲＫＡ（ＴｒｋＡ）ｍＲＮＡについてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを実施した。データは、１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対する３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応の平均＋ＳＤである。多くの場合において、信頼できる融解曲線を伴う遺伝子発現は検出不可能であったか、またはＰＣＲ産物は３連の反応のうちの１つまたは２つのみに由来したことに留意されたい。Ａ）ＫＯＡ１－ＮＧＦＲ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｂ）ＫＯＡ１－ＮＴＲＫＡ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；Ｃ）ＫＯＡ２－ＮＧＦＲ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；およびＤ）ＫＯＡ２－ＮＴＲＫＡ：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。
【図20】ヒトＫＯＡ骨細胞様培養物における基礎およびＴＮＦαによって誘導されるＭＭＰ１３発現に対するＰＰＳ処理の効果の図である。１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対するＭＭＰ１３ ｍＲＮＡのリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ分析。データは、３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応の平均＋ＳＤである。Ａ）ＫＯＡ１－ＭＭＰ１３：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現；およびＢ）ＫＯＡ２－ＭＭＰ１３：１８Ｓ ｍＲＮＡ発現。
【図21】ヒトＫＯＡ骨細胞様培養物における基礎およびＴＮＦαによって誘導されるＭＭＰ１３発現に対するＰＰＳ処理の効果の図である。アイソタイプ対照一次抗体もしくはマウス抗ヒト抗ＭＭＰ１３抗体（上段）により染色した未処理のＫＯＡ２細胞、またはｒｈＴＮＦα単独もしくはｒｈＴＮＦα＋ＰＰＳ（５０μｇ／ｍＬ）により処理し、ＭＭＰ１３について染色した（緑色の染色）ＫＯＡ２細胞の免疫染色の共焦点顕微鏡画像化。全ての核はＤＡＰＩ（青色）で染色される。Ａ）アイソタイプＩｇＧ対照；Ｂ）未処理；抗ＭＭＰ１３；Ｃ）ｒｈＴＮＦ－α処理；抗ＭＭＰ１３；およびＤ）ｒｈＴＮＦα＋ＰＰＳ５０；抗ＭＭＰ１３。
【図22】単離されたヒト骨細胞におけるＮＧＦ発現の図である。連続ヒト小柱骨消化物の骨細胞富化画分を、未処理（Ａ）、ｒｈＴＮＦα（Ｂ）、ＰＰＳ（０．５μｇ／ｍＬ）（Ｃ）または両方の組合せ（Ｄ）による処理で２４時間培養し、次いでＮＧＦ免疫反応性について共焦点顕微鏡法によって調べた。対照細胞もまた、アイソタイプ適合陰性対照一次抗体（Ｅ）を使用して免疫染色した。画像は２人の個々のドナーから得られた代表的なデータである。各画像におけるスケールバーは１００μｍを表す。
【図23】骨細胞様培養物におけるＮＧＦ遺伝子発現に対するｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せの効果の図である。ヒト分化骨細胞様培養物を、未処理またはＰＰＳ（０．１または１．０μｇ／ｍＬ）により２４時間前処理し、次いでｒｈＴＮＦα（１ｎｇ／ｍＬ）を用いてまたは用いずにさらに４８時間前処理し、次いでＮＧＦ ｍＲＮＡについてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを実施した。データは、ハウスキーピング遺伝子ＡＣＴＢのｍＲＮＡ発現に対して正規化した３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応の平均＋ＳＤである。
【図24】ＴｒｋＡおよびＰ－７５についてのＫＯＡ由来骨細胞の免疫染色の図である。２８日目に、分化したヒト一次骨細胞様培養物を、（Ａ）ＴｒｋＡ、（Ｂ）Ｐ－７５について、材料および方法に記載されるように、免疫染色し、共焦点顕微鏡法によって調べたか、またはアイソタイプ対照モノクローナル抗体（Ｃ）により染色した。スケールバーは、各場合、５０μｍを表す。
【図25】ヒト分化ＫＯＡ骨芽細胞／骨細胞培養物がＮＧＦを発現する図である：３人のＫＯＡ患者由来の細胞を、材料および方法に記載されるように、最長で２８日間、骨形成促進条件下で培養した。遺伝子発現を、Ａ）ＤＭＰ１；Ｂ）ＳＯＳＴ；Ｃ）ＯＣＮ；Ｄ）ＮＧＦについて様々な時点においてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲによって測定した。データ（平均＋標準誤差（ＳＥＭ））を、２－（ΔＣＴ）法を使用して１８Ｓ ｒＲＮＡの発現に対して正規化し、３人のドナーの細胞からプールした時間経過の終わりに各遺伝子の発現に対して示す。各時点についての平均ΔＣＴを各ヒストグラムの上の丸括弧に示す。
【図26】単離されたヒト骨細胞およびＫＯＡ骨におけるＮＧＦ発現の図である。直接コンジュゲートしたα－ＮＧＦ ＭＡｂをＮＣＩ－Ｈ２６６細胞に対して試験し、直接コンジュゲートした陰性対照抗体、Ｘ－６３（上段）に対して比較した。ＫＯＡ骨消化物の画分ＩＶ～ＶＩを同様にＮＧＦについて染色し、染色を骨細胞マーカーＳＯＳＴ／スクレロスチン（中段）の発現に対して比較した。二重染色により、これらの細胞内のＮＧＦおよびＳＯＳＴの両方について細胞内染色が明らかになったが、共局在染色は明らかにならなかった。陰性対照ＩｇＧ１ ＭＡｂを使用して染色の特異性を確認した。最後に、材料および方法に記載されるように、ここでは、非コンジュゲートα－ＮＧＦ ＭＡｂを使用して、ＮＧＦ陽性が、脱灰されたＫＯＡ骨（下段）においてｉｎ ｓｉｔｕで骨細胞（白色の矢印）において明白になった。骨形態はデジタル干渉コントラスト（ＤＩＣ）によって明らかにされる。全ての場合、ＤＡＰＩ染色（青色）によって核を可視化した。スケールバーは５０μｍを表す。
【図27】ヒト骨細胞様細胞はｐｒｏＮＧＦを分泌する。ｐｒｏＮＧＦの分泌を、ｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せにより処理したＫＯＡ骨細胞様細胞の培養物から試験した。データは、３連のウェルから収集した上清の平均＋ＳＤである。未処理の対照（ＵＴ）に対する有意差は、＊（ｐ＜０．０５）によって示され；ｒｈＴＮＦにより処理した培養物に対する有意差は、＃（ｐ＜０．０５）によって示される。
【図28】骨細胞様培養物におけるＮＧＦ遺伝子発現に対するｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せの効果の図である。ヒト分化骨細胞様培養物を、未処理またはＰＰＳ（０．１または１．０μｇ／ｍＬ）により２４時間前処理し、次いでｒｈＴＮＦα（１ｎｇ／ｍＬ）を用いてまたは用いずにさらに４８時間前処理し、次いでＮＧＦ ｍＲＮＡについてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを実施した。データは、ハウスキーピング遺伝子ＡＣＴＢのｍＲＮＡ発現に対して正規化した３連のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応の平均＋ＳＤである。
【図29】ヒトＮＯＦ骨細胞様細胞はｐｒｏＮＧＦを分泌する。ｐｒｏＮＧＦの分泌を、ｒｈＴＮＦおよびＰＰＳの組合せにより処理したＮＯＦ骨細胞様細胞の培養物から試験した。データは、３連のウェルから収集した上清の平均＋ＳＤである。未処理の対照（ＵＴ）に対する有意差は、＊（ｐ＜０．０５）によって示され；ｒｈＴＮＦにより処理した培養物に対する有意差は、＃（ｐ＜０．０５）によって示される。
【発明を実施するための形態】
【0123】
実施形態例
１．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧ
Ｆ）活性を阻害または減少させる方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩
を哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
１．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧ
Ｆ）活性を阻害または減少させる方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩
を哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【0124】
２．ＮＧＦ活性の阻害または減少が、哺乳動物における疼痛を治療する、実施形態１に
記載の方法。
記載の方法。
【0125】
３．神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－ＮＧＦ）によって媒介
される疼痛を治療する方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのよ
うな治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
される疼痛を治療する方法であって、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を、そのよ
うな治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【0126】
４．疼痛が筋骨格痛である、実施形態１から３のいずれか一例に記載の方法。
【0127】
５．筋骨格痛が非悪性筋骨格痛である、実施形態４に記載の方法。
【0128】
６．筋骨格痛が悪性筋骨格痛である、実施形態４に記載の方法。
【0129】
７．筋骨格痛が骨格痛である、実施形態４に記載の方法。
【0130】
８．骨格痛が非悪性骨格痛である、実施形態７に記載の方法。
【0131】
９．骨格痛が悪性骨格痛である、実施形態８に記載の方法。
【0132】
１０．骨格痛が背痛である、実施形態７から９のいずれか一例に記載の方法。
【0133】
１１．背痛が腰痛である、実施形態１０に記載の方法。
【0134】
１２．骨格痛が骨および／または関節痛である、実施形態７に記載の方法。
【0135】
１３．骨格痛が関節痛である、実施形態１２に記載の方法。
【0136】
１４．骨格痛が骨痛である、実施形態１２に記載の方法。
【0137】
１５．骨痛が非悪性骨痛である、実施形態１４に記載の方法。
【0138】
１６．非悪性骨痛が骨粗鬆症と関連する疼痛である、実施形態１５に記載の方法。
【0139】
１７．非悪性骨痛が関節炎状態と関連する疼痛である、実施形態１５に記載の方法。
【0140】
１８．関節炎状態が、関節リウマチまたは変形性関節症から選択される、実施形態１７
に記載の方法。
に記載の方法。
【0141】
１９．関節炎状態が関節リウマチである、実施形態１８に記載の方法。
【0142】
２０．関節炎状態が変形性関節症である、実施形態１８に記載の方法。
【0143】
２１．変形性関節症が、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる
群から選択される接合している関節におけるものである、実施形態２０に記載の方法。
群から選択される接合している関節におけるものである、実施形態２０に記載の方法。
【0144】
２２．変形性関節症が股関節におけるものである、実施形態２１に記載の方法。
【0145】
２３．変形性関節症が膝関節におけるものである、実施形態２１に記載の方法。
【0146】
２４．変形性関節症が脊椎におけるもの（脊椎症）である、実施形態２１に記載の方法
。
。
【0147】
２５．骨痛が悪性骨痛である、実施形態１４に記載の方法。
【0148】
２６．悪性骨痛が、原発性骨がんと関連する疼痛である、実施形態２５に記載の方法。
【0149】
２７．悪性骨痛が、続発性（転移性）骨がんと関連する疼痛である、実施形態２５に記
載の方法。
載の方法。
【0150】
２８．疼痛が、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；間質性膀胱炎；腹痛
；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性）がん；背痛；骨
損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫骨疾患；多発性硬
化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生物；座骨神経痛；
および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態１から３のいずれか一
例に記載の方法。
；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性）がん；背痛；骨
損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫骨疾患；多発性硬
化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生物；座骨神経痛；
および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態１から３のいずれか一
例に記載の方法。
【0151】
２９．疼痛が、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；および間質性膀胱炎
からなる群から選択される状態と関連する、実施形態２８に記載の方法。
からなる群から選択される状態と関連する、実施形態２８に記載の方法。
【0152】
３０．疼痛が、腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転
移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨
髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；
新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態
２８に記載の方法。
移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨
髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；
新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態
２８に記載の方法。
【0153】
３１．疼痛が、急性疼痛；慢性疼痛；全身痛および持続痛からなる群から選択される、
実施形態１から３０のいずれか一例に記載の方法。
実施形態１から３０のいずれか一例に記載の方法。
【0154】
３２．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－Ｎ
ＧＦ）活性を阻害または減少させるための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、
許容される賦形剤とを含む組成物。
ＧＦ）活性を阻害または減少させるための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩と、
許容される賦形剤とを含む組成物。
【0155】
３３．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－Ｎ
ＧＦ）活性を阻害または減少させる際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容
される塩と、許容される賦形剤とを含む組成物。
ＧＦ）活性を阻害または減少させる際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容
される塩と、許容される賦形剤とを含む組成物。
【0156】
３４．阻害または減少が、哺乳動物における疼痛を治療する、実施形態３２または実施
形態３３に記載の組成物。
形態３３に記載の組成物。
【0157】
３５．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－Ｎ
ＧＦ）によって媒介される疼痛を治療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される
塩と、許容される賦形剤とを含む組成物。
ＧＦ）によって媒介される疼痛を治療するための、ポリ硫酸化多糖またはその許容される
塩と、許容される賦形剤とを含む組成物。
【0158】
３６．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－Ｎ
ＧＦ）によって媒介される疼痛を治療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはそ
の許容される塩と、許容される賦形剤とを含む組成物。
ＧＦ）によって媒介される疼痛を治療する際に使用するための、ポリ硫酸化多糖またはそ
の許容される塩と、許容される賦形剤とを含む組成物。
【0159】
３７．疼痛が筋骨格痛である、実施形態３２から３６のいずれか一例に記載の組成物。
【0160】
３８．筋骨格痛が非悪性筋骨格痛である、実施形態３７に記載の組成物。
【0161】
３９．筋骨格痛が悪性筋骨格痛である、実施形態３７に記載の組成物。
【0162】
４０．筋骨格痛が骨格痛である、実施形態３７に記載の組成物。
【0163】
４１．骨格痛が非悪性骨格痛である、実施形態４０に記載の組成物。
【0164】
４２．骨格痛が悪性骨格痛である、実施形態４０に記載の組成物。
【0165】
４３．骨格痛が背痛である、実施形態４０から４２のいずれか一例に記載の組成物。
【0166】
４４．背痛が腰痛である、実施形態４３に記載の組成物。
【0167】
４５．骨格痛が骨および／または関節痛である、実施形態４０に記載の組成物。
【0168】
４６．骨格痛が関節痛である、実施形態４５に記載の組成物。
【0169】
４７．骨格痛が骨痛である、実施形態４５に記載の組成物。
【0170】
４８．骨痛が非悪性骨痛である、実施形態４７に記載の組成物。
【0171】
４９．非悪性骨痛が骨粗鬆症と関連する疼痛である、実施形態４８に記載の組成物。
【0172】
５０．非悪性骨痛が関節炎状態と関連する疼痛である、実施形態４８に記載の組成物。
【0173】
５１．関節炎状態が、関節リウマチまたは変形性関節症から選択される、実施形態５０
に記載の組成物。
に記載の組成物。
【0174】
５２．関節炎状態が関節リウマチである、実施形態５１に記載の組成物。
【0175】
５３．関節炎状態が変形性関節症である、実施形態５１に記載の組成物。
【0176】
５４．変形性関節症が、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる
群から選択される接合している関節におけるものである、実施形態５３に記載の組成物。
群から選択される接合している関節におけるものである、実施形態５３に記載の組成物。
【0177】
５５．変形性関節症が股関節におけるものである、実施形態５４に記載の組成物。
【0178】
５６．変形性関節症が膝関節におけるものである、実施形態５４に記載の組成物。
【0179】
５７．変形性関節症が脊椎におけるもの（脊椎症）である、実施形態５４に記載の組成
物。
物。
【0180】
５８．骨痛が悪性骨痛である、実施形態４７に記載の組成物。
【0181】
５９．悪性骨痛が、原発性骨がんと関連する疼痛である、実施形態５８に記載の組成物
。
。
【0182】
６０．悪性骨痛が、続発性（転移性）骨がんと関連する疼痛である、実施形態５８に記
載の組成物。
載の組成物。
【0183】
６１．疼痛が、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；間質性膀胱炎；腹痛
；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性）がん；背痛；骨
損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫骨疾患；多発性硬
化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生物；座骨神経痛；
および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態３２から３６のいずれ
か一例に記載の組成物。
；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性）がん；背痛；骨
損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫骨疾患；多発性硬
化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生物；座骨神経痛；
および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態３２から３６のいずれ
か一例に記載の組成物。
【0184】
６２．疼痛が、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；および間質性膀胱炎
からなる群から選択される状態と関連する、実施形態６１に記載の組成物。
からなる群から選択される状態と関連する、実施形態６１に記載の組成物。
【0185】
６３．疼痛が、腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転
移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨
髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；
新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態
６１に記載の組成物。
移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨
髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；
新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態
６１に記載の組成物。
【0186】
６４．疼痛が、急性疼痛；慢性疼痛；全身痛および持続痛からなる群から選択される、
実施形態３２から６３のいずれか一例に記載の組成物。
実施形態３２から６３のいずれか一例に記載の組成物。
【0187】
６５．疼痛が、侵害受容性疼痛状態；神経障害性疼痛状態；急性疼痛状態；慢性疼痛状
態；全身痛状態；持続痛状態；非悪性疼痛状態；悪性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状
態および持続痛状態からなる群から選択される、実施形態３２から３６のいずれか一例に
記載の組成物。
態；全身痛状態；持続痛状態；非悪性疼痛状態；悪性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状
態および持続痛状態からなる群から選択される、実施形態３２から３６のいずれか一例に
記載の組成物。
【0188】
６６．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－Ｎ
ＧＦ）活性を阻害または減少させる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用
。
ＧＦ）活性を阻害または減少させる際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の使用
。
【0189】
６７．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－Ｎ
ＧＦ）活性を阻害または減少させるための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはそ
の許容される塩の使用。
ＧＦ）活性を阻害または減少させるための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖またはそ
の許容される塩の使用。
【0190】
６８．阻害または減少が、哺乳動物における疼痛を治療する、実施形態６６または実施
形態６７に記載の使用。
形態６７に記載の使用。
【0191】
６９．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－Ｎ
ＧＦ）によって媒介される疼痛を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩
の使用。
ＧＦ）によって媒介される疼痛を治療する際の、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩
の使用。
【0192】
７０．哺乳動物における神経成長因子（ＮＧＦ）またはプロ神経成長因子（ｐｒｏ－Ｎ
ＧＦ）によって媒介される疼痛を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖ま
たはその許容される塩の使用。
ＧＦ）によって媒介される疼痛を治療するための医薬の製造における、ポリ硫酸化多糖ま
たはその許容される塩の使用。
【0193】
７１．疼痛が筋骨格痛である、実施形態６６から７０のいずれか一例に記載の使用。
【0194】
７２．筋骨格痛が非悪性筋骨格痛である、実施形態７１に記載の使用。
【0195】
７３．筋骨格痛が悪性筋骨格痛である、実施形態７１に記載の使用。
【0196】
７４．筋骨格痛が骨格痛である、実施形態７１に記載の使用。
【0197】
７５．骨格痛が非悪性骨格痛である、実施形態７４に記載の使用。
【0198】
７６．骨格痛が悪性骨格痛である、実施形態７４に記載の使用。
【0199】
７７．骨格痛が背痛である、実施形態７４から７６のいずれか一例に記載の使用。
【0200】
７８．背痛が腰痛である、実施形態７７に記載の使用。
【0201】
７９．骨格痛が骨および／または関節痛である、実施形態７４に記載の使用。
【0202】
８０．骨格痛が関節痛である、実施形態７９に記載の使用。
【0203】
８１．骨格痛が骨痛である、実施形態７９に記載の使用。
【0204】
８２．骨痛が非悪性骨痛である、実施形態８１に記載の使用。
【0205】
８３．非悪性骨痛が骨粗鬆症と関連する疼痛である、実施形態８２に記載の使用。
【0206】
８４．非悪性骨痛が関節炎状態と関連する疼痛である、実施形態８２に記載の使用。
【0207】
８５．関節炎状態が、関節リウマチまたは変形性関節症から選択される、実施形態８４
に記載の使用。
に記載の使用。
【0208】
８６．関節炎状態が関節リウマチである、実施形態８５に記載の使用。
【0209】
８７．関節炎状態が変形性関節症である、実施形態８５に記載の使用。
【0210】
８８．変形性関節症が、足関節、股関節、膝関節、肩関節、脊椎および手関節からなる
群から選択される接合している関節におけるものである、実施形態８７に記載の使用。
群から選択される接合している関節におけるものである、実施形態８７に記載の使用。
【0211】
８９．変形性関節症が股関節におけるものである、実施形態８８に記載の使用。
【0212】
９０．変形性関節症が膝関節におけるものである、実施形態８８に記載の使用。
【0213】
９１．変形性関節症が脊椎におけるもの（脊椎症）である、実施形態８８に記載の使用
。
。
【0214】
９２．骨痛が悪性骨痛である、実施形態８１に記載の使用。
【0215】
９３．悪性骨痛が、原発性骨がんと関連する疼痛である、実施形態９２に記載の使用。
【0216】
９４．悪性骨痛が、続発性（転移性）骨がんと関連する疼痛である、実施形態９２に記
載の使用。
載の使用。
【0217】
９５．疼痛が、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；間質性膀胱炎；腹痛
；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性）がん；背痛；骨
損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫骨疾患；多発性硬
化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生物；座骨神経痛；
および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態６６から７０のいずれ
か一例に記載の使用。
；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転移性）がん；背痛；骨
損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨髄腫骨疾患；多発性硬
化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；新生物；座骨神経痛；
および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態６６から７０のいずれ
か一例に記載の使用。
【0218】
９６．疼痛が、関節炎；変形性関節症；関節リウマチ；前立腺炎；および間質性膀胱炎
からなる群から選択される状態と関連する、実施形態９５に記載の使用。
からなる群から選択される状態と関連する、実施形態９５に記載の使用。
【0219】
９７．疼痛が、腹痛；関節痛；子宮内膜症；膵炎；慢性頭痛；原発性がん；続発性（転
移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨
髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；
新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態
９５に記載の使用。
移性）がん；背痛；骨損傷または骨折；糖尿病性神経障害；線維筋痛；片頭痛；多発性骨
髄腫骨疾患；多発性硬化症；骨粗鬆症、神経痛；ヘルペス性神経痛；ヘルペス後神経痛；
新生物；座骨神経痛；および内臓痛からなる群から選択される状態と関連する、実施形態
９５に記載の使用。
【0220】
９８．疼痛が、急性疼痛；慢性疼痛；全身痛および持続痛からなる群から選択される、
実施形態６６から９７のいずれか一例に記載の使用。
実施形態６６から９７のいずれか一例に記載の使用。
【0221】
９９．疼痛が、侵害受容性疼痛状態；神経障害性疼痛状態；急性疼痛状態；慢性疼痛状
態；全身痛状態；持続痛状態；非悪性疼痛状態；悪性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状
態および持続痛状態からなる群から選択される、実施形態６６から７０のいずれか一例に
記載の使用。
態；全身痛状態；持続痛状態；非悪性疼痛状態；悪性疼痛状態；慢性疼痛状態；全身痛状
態および持続痛状態からなる群から選択される、実施形態６６から７０のいずれか一例に
記載の使用。
【0222】
１００．ポリ硫酸化多糖が、高分子量ヘパリン、低分子量ヘパリン、ヘパラン硫酸、ポ
リ硫酸ペントサン、ポリ硫酸コンドロイチン、ポリ硫酸キトサン、デルマタンポリ硫酸ス
ロデキシド、硫酸デキストラン、ポリ硫酸化イヌリン、硫酸化ラクトビオン酸アミド、硫
酸化ビス－アルドン酸アミド、八硫酸スクロース、フコイダン－１、フコイダン－２、硫
酸化ベータ－シクロデキストリン、硫酸化ガンマ－シクロデキストリンおよび限定されな
いが、六硫酸イノシトールを含む小さな硫酸化化合物からなる群から選択される、実施形
態１から９９のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
リ硫酸ペントサン、ポリ硫酸コンドロイチン、ポリ硫酸キトサン、デルマタンポリ硫酸ス
ロデキシド、硫酸デキストラン、ポリ硫酸化イヌリン、硫酸化ラクトビオン酸アミド、硫
酸化ビス－アルドン酸アミド、八硫酸スクロース、フコイダン－１、フコイダン－２、硫
酸化ベータ－シクロデキストリン、硫酸化ガンマ－シクロデキストリンおよび限定されな
いが、六硫酸イノシトールを含む小さな硫酸化化合物からなる群から選択される、実施形
態１から９９のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0223】
１０１．ポリ硫酸化多糖が、高分子量ヘパリン、低分子量ヘパリン、ポリ硫酸ペントサ
ン（ＰＰＳ）、ポリ硫酸コンドロイチンおよびポリ硫酸キトサンからなる群から選択され
る、実施形態１００に記載の方法、組成物または使用。
ン（ＰＰＳ）、ポリ硫酸コンドロイチンおよびポリ硫酸キトサンからなる群から選択され
る、実施形態１００に記載の方法、組成物または使用。
【0224】
１０２．ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）が、ポリ硫酸ペントサンのナトリウム塩（Ｎａ
ＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサンのマグネシウム塩（ＭｇＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサンの
カルシウム塩（ＣａＰＰＳ）、およびポリ硫酸ペントサンの亜鉛塩（ＺｎＰＰＳ）からな
る群から選択される、実施形態１０１に記載の方法、組成物または使用。
ＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサンのマグネシウム塩（ＭｇＰＰＳ）、ポリ硫酸ペントサンの
カルシウム塩（ＣａＰＰＳ）、およびポリ硫酸ペントサンの亜鉛塩（ＺｎＰＰＳ）からな
る群から選択される、実施形態１０１に記載の方法、組成物または使用。
【0225】
１０３．ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）が、ポリ硫酸ペントサンナトリウム（ＮａＰＰ
Ｓ）である、実施形態１０２に記載の方法、組成物または使用。
Ｓ）である、実施形態１０２に記載の方法、組成物または使用。
【0226】
１０４．阻害もしくは減少、または治療が、心室内経路、嚢内経路またはくも膜下腔経
路を介する投与、筋肉内（ＩＭ）もしくは皮下（ＳＣ）経路による注射投与、静脈内（Ｉ
Ｖ）投与、関節内（ＩＡ）投与、関節周囲投与、局所的投与、坐剤を介した投与、または
経口投与による、実施形態１から１０３のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用
。
路を介する投与、筋肉内（ＩＭ）もしくは皮下（ＳＣ）経路による注射投与、静脈内（Ｉ
Ｖ）投与、関節内（ＩＡ）投与、関節周囲投与、局所的投与、坐剤を介した投与、または
経口投与による、実施形態１から１０３のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用
。
【0227】
１０５．阻害もしくは減少、または治療が、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、１用量あたり約１～２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で、哺乳動物に投与することによる
、実施形態１から１０４のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
、１用量あたり約１～２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で、哺乳動物に投与することによる
、実施形態１から１０４のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0228】
１０６．阻害もしくは減少、または治療が、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、１用量あたり約２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で、哺乳動物に投与することによる、実
施形態１から１０５のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
、１用量あたり約２ｍｇ／ｋｇ哺乳動物の有効量で、哺乳動物に投与することによる、実
施形態１から１０５のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0229】
１０７．投与が注射による、実施形態１０４から１０６のいずれか一例に記載の方法、
組成物または使用。
組成物または使用。
【0230】
１０８．投与が皮下（ＳＣ）注射による、実施形態１０７に記載の方法、組成物または
使用。
使用。
【0231】
１０９．ＳＣ注射が、ゆっくりとしたＳＣ注射である、実施形態１０８に記載の方法、
組成物または使用。
組成物または使用。
【0232】
１１０．ヒトへの投与が、１日１回、週２回または週３回の治療レジメンでの投薬によ
る、実施形態１０４から１０９のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
る、実施形態１０４から１０９のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0233】
１１１．ヒトへの投与が、週２回の治療レジメンでの投薬による、実施形態１１０に記
載の方法、組成物または使用。
載の方法、組成物または使用。
【0234】
１１２．ヒトへの投与が、最短で３日および最長で４日の投薬間隔で週２回の治療レジ
メンでの投薬による、実施形態１１１に記載の方法、組成物または使用。
メンでの投薬による、実施形態１１１に記載の方法、組成物または使用。
【0235】
１１３．ヒトへの投与が、６週間の間、週２回の治療レジメンでの投薬による、実施形
態１１１または実施形態１１２に記載の方法、組成物または使用。
態１１１または実施形態１１２に記載の方法、組成物または使用。
【0236】
１１４．治療レジメンで投与されるポリ硫酸化多糖の総用量が約２００～４０００ｍｇ
である、実施形態１１３に記載の方法、組成物または使用。
である、実施形態１１３に記載の方法、組成物または使用。
【0237】
１１５．阻害もしくは減少、または治療が、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、固定用量として約１０ｎｇ～約１０００ｎｇの範囲の有効量で、哺乳動物に投与するこ
とによる、実施形態１から１１３のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
、固定用量として約１０ｎｇ～約１０００ｎｇの範囲の有効量で、哺乳動物に投与するこ
とによる、実施形態１から１１３のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0238】
１１６．阻害もしくは減少、または治療が、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、固定用量として約１０μｇ～約１０００μｇの範囲の有効量で、哺乳動物に投与するこ
とによる、実施形態１から１１３に記載の方法、組成物または使用。
、固定用量として約１０μｇ～約１０００μｇの範囲の有効量で、哺乳動物に投与するこ
とによる、実施形態１から１１３に記載の方法、組成物または使用。
【0239】
１１７．阻害もしくは減少、または治療が、心室内、嚢内またはくも膜下腔経路によっ
てポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を投与することによる、実施形態１１５または
実施形態１１６に記載の方法、組成物または使用。
てポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を投与することによる、実施形態１１５または
実施形態１１６に記載の方法、組成物または使用。
【0240】
１１８．阻害もしくは減少、または治療が、ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩を
、固定用量として約１ｍｇ～約２５ｍｇの範囲の有効量で、哺乳動物に投与することによ
る、実施形態１０４から１１３のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
、固定用量として約１ｍｇ～約２５ｍｇの範囲の有効量で、哺乳動物に投与することによ
る、実施形態１０４から１１３のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0241】
１１９．哺乳動物における疼痛が投与後に減少する、実施形態１から１１８のいずれか
一例に記載の方法、組成物または使用。
一例に記載の方法、組成物または使用。
【0242】
１２０．哺乳動物における疼痛が、評価スケールによって決定される通り、減少する、
実施形態１１９に記載の方法、組成物または使用。
実施形態１１９に記載の方法、組成物または使用。
【0243】
１２１．評価スケールが数値評価スケール（ＮＲＳ）である、実施形態１２０に記載の
方法、組成物または使用。
方法、組成物または使用。
【0244】
１２２．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、哺乳動物の健康をさらに維
持または改善する、実施形態１から１２１のいずれか一例に記載の方法、組成物または使
用。
持または改善する、実施形態１から１２１のいずれか一例に記載の方法、組成物または使
用。
【0245】
１２３．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、哺乳動物の体重をさらに維
持する、実施形態１から１２２のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
持する、実施形態１から１２２のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0246】
１２４．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、筋骨格の完全性および／ま
たは機能をさらに維持または改善する、実施形態１から１２３の一例に記載の方法、組成
物または使用。
たは機能をさらに維持または改善する、実施形態１から１２３の一例に記載の方法、組成
物または使用。
【0247】
１２５．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、骨格の完全性および／また
は機能をさらに維持または改善する、実施形態１２４に記載の方法、組成物または使用。
は機能をさらに維持または改善する、実施形態１２４に記載の方法、組成物または使用。
【0248】
１２６．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、関節または骨の完全性およ
び／または機能をさらに維持または改善する、実施形態１２５に記載の方法、組成物また
は使用。
び／または機能をさらに維持または改善する、実施形態１２５に記載の方法、組成物また
は使用。
【0249】
１２７．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、骨の完全性および／または
機能をさらに維持または改善する、実施形態１２６に記載の方法、組成物または使用。
機能をさらに維持または改善する、実施形態１２６に記載の方法、組成物または使用。
【0250】
１２８．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、がんによって誘発される骨
折を予防し、哺乳動物が骨がんを患っている、実施形態１から１２７のいずれか一例に記
載の方法、組成物または使用。
折を予防し、哺乳動物が骨がんを患っている、実施形態１から１２７のいずれか一例に記
載の方法、組成物または使用。
【0251】
１２９．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、がんによって誘発される骨
折までの時間を遅延させ、哺乳動物が骨がんを患っている、実施形態１２８に記載の方法
、組成物または使用。
折までの時間を遅延させ、哺乳動物が骨がんを患っている、実施形態１２８に記載の方法
、組成物または使用。
【0252】
１３０．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、骨量減少を予防または回復
させる、実施形態１から１２７のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
させる、実施形態１から１２７のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0253】
１３１．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、ミネラルの恒常性の異常調
節を予防または回復させる、実施形態１から１３０のいずれか一例に記載の方法、組成物
または使用。
節を予防または回復させる、実施形態１から１３０のいずれか一例に記載の方法、組成物
または使用。
【0254】
１３２．ミネラルの恒常性が、カルシウムおよび／またはリン酸塩の恒常性である、実
施形態１３１に記載の方法、組成物または使用。
施形態１３１に記載の方法、組成物または使用。
【0255】
１３３．ポリ硫酸化多糖またはその許容される塩の投与が、神経圧迫症候群を予防また
は回復させる、実施形態１から１３２のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
は回復させる、実施形態１から１３２のいずれか一例に記載の方法、組成物または使用。
【0256】
１３４．哺乳動物における機能が、投与後に改善する、実施形態１から１３３のいずれ
か一例に記載の方法、組成物または使用。
か一例に記載の方法、組成物または使用。
【0257】
１３５．哺乳動物における機能が、本明細書に記載されるリスホルム膝評価法によって
決定される通り、改善する、実施形態１３４に記載の方法、組成物または使用。
決定される通り、改善する、実施形態１３４に記載の方法、組成物または使用。
【実施例0258】
研究実施例１：炎症性メディエーターに対するヒト骨細胞反応に対するポリ硫酸ペント
サンナトリウム（ＮａＰＰＳ）の効果
ＰＰＳが疼痛メディエーターに対する効果を発揮する可能性を調べるための予備研究を
記載する。この研究はまた、ＰＰＳが骨細胞を介して疼痛メディエーターに対する効果を
発揮する可能性にも注目している。
サンナトリウム（ＮａＰＰＳ）の効果
ＰＰＳが疼痛メディエーターに対する効果を発揮する可能性を調べるための予備研究を
記載する。この研究はまた、ＰＰＳが骨細胞を介して疼痛メディエーターに対する効果を
発揮する可能性にも注目している。
【0259】
研究への導入
変形性膝関節症（ＫＯＡ）は、一般的で痛みを伴う状態であり、痛みを制御するために
鎮痛剤の処方によって主に管理されている。ＫＯＡの病因は完全には解明されていないが
、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）およびインターロイキン１－ベータ（ＩＬ－１β）
を含む、炎症誘発性メディエーターの発現の増加と関連することが知られている［２１］
。これらは、マトリクスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ）ファミリーメンバー－１３（ＭＭ
Ｐ－１３）などの、軟骨分解酵素の局所的な産生を刺激すると考えられる。最終的に、人
工膝関節全置換術（ＴＫＡ）を実施して罹患関節を人工膝関節全置換物（prosthetic tot
al knee replacement）と置換する。患者が報告した疼痛はＴＫＡについての主要な指標
である［２２］。
変形性膝関節症（ＫＯＡ）は、一般的で痛みを伴う状態であり、痛みを制御するために
鎮痛剤の処方によって主に管理されている。ＫＯＡの病因は完全には解明されていないが
、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）およびインターロイキン１－ベータ（ＩＬ－１β）
を含む、炎症誘発性メディエーターの発現の増加と関連することが知られている［２１］
。これらは、マトリクスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ）ファミリーメンバー－１３（ＭＭ
Ｐ－１３）などの、軟骨分解酵素の局所的な産生を刺激すると考えられる。最終的に、人
工膝関節全置換術（ＴＫＡ）を実施して罹患関節を人工膝関節全置換物（prosthetic tot
al knee replacement）と置換する。患者が報告した疼痛はＴＫＡについての主要な指標
である［２２］。
【0260】
骨は、脊髄の後根神経節のみに由来する骨感覚ニューロンを有する、神経支配を受ける
組織である［２３］。分泌された神経向性タンパク質ベータ－神経成長因子（ＮＧＦ）は
、ＫＯＡを含む、多くの慢性状態における疼痛の主な原因因子である［２４～２６］。さ
らに、ＮＧＦ発現は、変形性関節症の実験マウスモデルにおいてＴＮＦαおよびＩＬ－１
βの両方によって誘導されることが知られている［２７］。ＮＧＦは、ニューロンによっ
て発現される少なくとも２つの受容体、トロポミオシン受容体キナーゼＡ（ＴｒｋＡ）お
よび汎ニューロトロピン（pan-neurotropin）受容体ｐ７５／ＮＴＲに結合し、それは、
ニューロンがまた、共受容体であるソルチリンを発現するかどうかに依存して、ニューロ
ンの成長を促進するか、またはニューロンのアポトーシスを引き起こす、多様な生物学的
効果を有することができる［２８］。ＮＧＦを標的とする中和抗体治療薬であるタネズマ
ブ（登録商標）は、ＫＯＡと関連する疼痛の治療において有望な結果をもたらし［２１、
２４～２６］、ＮＧＦがこの状態についての鍵となるリードアウトおよび疼痛のメディエ
ーターの両方であることと一致する。ＮＧＦは最初にプロタンパク質形態（ｐｒｏＮＧＦ
）として翻訳され、それは、ヒューリンまたはヒューリン様プロタンパク質転換酵素の作
用によって成熟形態に翻訳後プロセシングされる（タンパク質分解的に切断される）［２
８］。現在、市販の酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用した可溶性ＮＧＦレベ
ルの正確な検出はｐｒｏＮＧＦのリードアウトへの影響に起因して問題がある；存在する
場合、ｐｒｏＮＧＦは、効果の大きさおよび方向（増加または減少）の両方に関して、予
測できない様式で多くの市販のＥＬＩＳＡキットのリードアウトを妨げる［２９］。した
がって、定量的評価をｐｒｏＮＧＦのレベルまで延ばすことが必要である。
組織である［２３］。分泌された神経向性タンパク質ベータ－神経成長因子（ＮＧＦ）は
、ＫＯＡを含む、多くの慢性状態における疼痛の主な原因因子である［２４～２６］。さ
らに、ＮＧＦ発現は、変形性関節症の実験マウスモデルにおいてＴＮＦαおよびＩＬ－１
βの両方によって誘導されることが知られている［２７］。ＮＧＦは、ニューロンによっ
て発現される少なくとも２つの受容体、トロポミオシン受容体キナーゼＡ（ＴｒｋＡ）お
よび汎ニューロトロピン（pan-neurotropin）受容体ｐ７５／ＮＴＲに結合し、それは、
ニューロンがまた、共受容体であるソルチリンを発現するかどうかに依存して、ニューロ
ンの成長を促進するか、またはニューロンのアポトーシスを引き起こす、多様な生物学的
効果を有することができる［２８］。ＮＧＦを標的とする中和抗体治療薬であるタネズマ
ブ（登録商標）は、ＫＯＡと関連する疼痛の治療において有望な結果をもたらし［２１、
２４～２６］、ＮＧＦがこの状態についての鍵となるリードアウトおよび疼痛のメディエ
ーターの両方であることと一致する。ＮＧＦは最初にプロタンパク質形態（ｐｒｏＮＧＦ
）として翻訳され、それは、ヒューリンまたはヒューリン様プロタンパク質転換酵素の作
用によって成熟形態に翻訳後プロセシングされる（タンパク質分解的に切断される）［２
８］。現在、市販の酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用した可溶性ＮＧＦレベ
ルの正確な検出はｐｒｏＮＧＦのリードアウトへの影響に起因して問題がある；存在する
場合、ｐｒｏＮＧＦは、効果の大きさおよび方向（増加または減少）の両方に関して、予
測できない様式で多くの市販のＥＬＩＳＡキットのリードアウトを妨げる［２９］。した
がって、定量的評価をｐｒｏＮＧＦのレベルまで延ばすことが必要である。
【0261】
ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）ナトリウムは、間質性膀胱炎および膀胱痛症候群の治療
のためにＦＤＡによって承認された薬物であり、優れた安全性プロファイルを有する［３
０］。現在、ＫＯＡについての治療としてその有効性について試験されており、有望な結
果が得られている［３１］。ＰＰＳの作用様式は、多元的であるように見え、間質性膀胱
炎におけるその効果の場合にはグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）層の補充、ならびに細胞
内シグナル伝達、特に軟骨細胞における核因子カッパ－Ｂ（ＮＦκＢ）［３２］、および
ＩＬ－１β－ｉＮＯＳ［３３］経路に対する効果を含む。重要なことに、ＫＯＡは、関節
全体の疾患であり、軟骨下骨、ならびに滑膜および軟骨に対する変化を伴う［２１］。疾
患進行および関連する疼痛に対する各組織の寄与は完全には解明されていない。進行した
ＫＯＡでは、軟骨のほぼ完全な分解があり、残っている健康な軟骨細胞は少ない。このこ
とは、疼痛のメディエーターは、かなりの程度まで、下層の軟骨下骨に由来し得ることを
示唆している。硬い骨組織における最も多い細胞型は骨細胞であり、これらの細胞は、多
くの局所および全身の生理学的過程における鍵となる制御細胞型としてますます認識され
るようになってきている［３４、３５］。変形性関節症と関連する状態では、骨細胞は、
インプラント由来の摩耗粒子に対する炎症性、溶骨性反応に関与し［３６］、人工関節周
囲感染の状態では細菌に対する強い炎症誘発性反応も引き起こす［３７］。
のためにＦＤＡによって承認された薬物であり、優れた安全性プロファイルを有する［３
０］。現在、ＫＯＡについての治療としてその有効性について試験されており、有望な結
果が得られている［３１］。ＰＰＳの作用様式は、多元的であるように見え、間質性膀胱
炎におけるその効果の場合にはグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）層の補充、ならびに細胞
内シグナル伝達、特に軟骨細胞における核因子カッパ－Ｂ（ＮＦκＢ）［３２］、および
ＩＬ－１β－ｉＮＯＳ［３３］経路に対する効果を含む。重要なことに、ＫＯＡは、関節
全体の疾患であり、軟骨下骨、ならびに滑膜および軟骨に対する変化を伴う［２１］。疾
患進行および関連する疼痛に対する各組織の寄与は完全には解明されていない。進行した
ＫＯＡでは、軟骨のほぼ完全な分解があり、残っている健康な軟骨細胞は少ない。このこ
とは、疼痛のメディエーターは、かなりの程度まで、下層の軟骨下骨に由来し得ることを
示唆している。硬い骨組織における最も多い細胞型は骨細胞であり、これらの細胞は、多
くの局所および全身の生理学的過程における鍵となる制御細胞型としてますます認識され
るようになってきている［３４、３５］。変形性関節症と関連する状態では、骨細胞は、
インプラント由来の摩耗粒子に対する炎症性、溶骨性反応に関与し［３６］、人工関節周
囲感染の状態では細菌に対する強い炎症誘発性反応も引き起こす［３７］。
【0262】
仮説の研究
本発明者らは、骨細胞が、ＫＯＡでの軟骨下骨の炎症環境においてＮＧＦを産生するこ
とができ、ＰＰＳはこの産生を阻害することによって作用し得るという仮説を立てた。
本発明者らは、骨細胞が、ＫＯＡでの軟骨下骨の炎症環境においてＮＧＦを産生するこ
とができ、ＰＰＳはこの産生を阻害することによって作用し得るという仮説を立てた。
【0263】
この仮説を検証するために、本発明者らは、進行したＫＯＡを患っており、ＴＫＡを受
けている患者の近位脛骨から分化した、ヒト初代骨細胞様培養物の反応に対するＰＰＳの
効果を調べた。組換えＴＮＦαによる処理を炎症誘発性刺激として使用し、ＮＧＦを含む
多くの遺伝子の相対発現に対する効果を調べた。ＮＧＦおよびｐｒｏＮＧＦタンパク質レ
ベルもまた、それぞれのＥＬＩＳＡによって測定した。
けている患者の近位脛骨から分化した、ヒト初代骨細胞様培養物の反応に対するＰＰＳの
効果を調べた。組換えＴＮＦαによる処理を炎症誘発性刺激として使用し、ＮＧＦを含む
多くの遺伝子の相対発現に対する効果を調べた。ＮＧＦおよびｐｒｏＮＧＦタンパク質レ
ベルもまた、それぞれのＥＬＩＳＡによって測定した。
【0264】
本発明者らは、ヒト骨細胞がＮＧＦを産生することができることを初めて示し、それら
が局所的な疼痛反応の原因となる可能性があることを示唆する。本発明者らはまた、ＰＰ
Ｓが、ＮＧＦ ｍＲＮＡ転写および骨細胞によるｐｒｏＮＧＦ分泌を抑制し、これらのプ
ロセスに対するＴＮＦαの刺激作用を逆転させることも示す。まとめると、本発明者らの
発見は、疼痛反応における骨細胞についてのこれまで知られていなかった役割およびＰＰ
Ｓを摂取しているＫＯＡ患者において有益な疼痛についての機構を示唆している。
が局所的な疼痛反応の原因となる可能性があることを示唆する。本発明者らはまた、ＰＰ
Ｓが、ＮＧＦ ｍＲＮＡ転写および骨細胞によるｐｒｏＮＧＦ分泌を抑制し、これらのプ
ロセスに対するＴＮＦαの刺激作用を逆転させることも示す。まとめると、本発明者らの
発見は、疼痛反応における骨細胞についてのこれまで知られていなかった役割およびＰＰ
Ｓを摂取しているＫＯＡ患者において有益な疼痛についての機構を示唆している。
【0265】
材料および方法
倫理的声明
ヒト患者由来の材料を用いた全ての研究は、Ｒｏｙａｌ Ａｄｅｌａｉｄｅ Ｈｏｓｐ
ｉｔａｌのＨｕｍａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによる既
存の倫理委員会の承認によって認められた（承認番号１３０１１４）。全てのドナー材料
は患者の書面によるインフォームドコンセントと共に得た。
倫理的声明
ヒト患者由来の材料を用いた全ての研究は、Ｒｏｙａｌ Ａｄｅｌａｉｄｅ Ｈｏｓｐ
ｉｔａｌのＨｕｍａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによる既
存の倫理委員会の承認によって認められた（承認番号１３０１１４）。全てのドナー材料
は患者の書面によるインフォームドコンセントと共に得た。
【0266】
研究設計
ドナーおよび細胞
この研究からの発見の臨床的関連性を最大化するために、ＰＰＳの効果を、人工膝関節
全置換術（ＴＫＡ）の手術を受けた進行した膝関節ＯＡを有する３人の患者（ＫＯＡ：群
１）の近位脛骨の軟骨下骨から単離された細胞から、２８日の期間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで
の分化によって誘導された骨細胞様培養物［３６、３８～４２］において試験した。比較
群として、大腿骨頸部骨折について人工股関節全置換術（ＴＨＡ）を受けた３人の患者（
ＮＯＦ：群２）の近位大腿骨から単離された細胞を、同様に分化させ、試験した。全ての
ドナーの性別は女性であり、群は年齢を一致させ、ＫＯＡの平均年齢は７７．０±８．５
歳であり、ＮＯＦ群の平均年齢は７７．７±５．５歳であった（ｐ＝０．９１）。
ドナーおよび細胞
この研究からの発見の臨床的関連性を最大化するために、ＰＰＳの効果を、人工膝関節
全置換術（ＴＫＡ）の手術を受けた進行した膝関節ＯＡを有する３人の患者（ＫＯＡ：群
１）の近位脛骨の軟骨下骨から単離された細胞から、２８日の期間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで
の分化によって誘導された骨細胞様培養物［３６、３８～４２］において試験した。比較
群として、大腿骨頸部骨折について人工股関節全置換術（ＴＨＡ）を受けた３人の患者（
ＮＯＦ：群２）の近位大腿骨から単離された細胞を、同様に分化させ、試験した。全ての
ドナーの性別は女性であり、群は年齢を一致させ、ＫＯＡの平均年齢は７７．０±８．５
歳であり、ＮＯＦ群の平均年齢は７７．７±５．５歳であった（ｐ＝０．９１）。
【0267】
各ドナーからの凍結保存細胞（全て継代０または１）を解凍し、Ｔ７５ｃｍ２組織培養
フラスコ内で１０日間培養した。コンフルエントになったら、コラゲナーゼ／ディスパー
ゼ消化によって細胞を除去し、遠心分離によって洗浄し、計数し、５×１０５細胞／ｍＬ
に調整した。次いで細胞を、１×１０５および２×１０４細胞／ウェルでそれぞれ、１２
ウェル組織培養トレイまたは８ウェルチャンバスライドのいずれかに播種した。２４時間
後、培地を、αＭＥＭ、５％ｖ／ｖウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１．８ｍＭリン酸二水素カ
リウム（ＫＨ２ＰＯ４）、１００μＭアスコルビン酸－２－リン酸（Ａｓ２Ｐ）、１０ｍ
Ｍ ＨＥＰＥＳ、１０－８Ｍデキサメタゾンおよび０．２ｍＭ Ｌ－グルタミンからなる
骨形成分化培地と置き換えた。分化プロセスの間、試料を、全ＲＮＡ調製および遺伝子発
現分析のためにＴｒｉｚｏｌ試薬中に３日、１４日および２８日に収集した（以下を参照
のこと）。チャンバスライドに播種した培養物を、以前に記載されているように［４１］
、Ａｌｉｚａｒｉｎ Ｒｅｄ染色技術を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで石灰化について試験
した。
フラスコ内で１０日間培養した。コンフルエントになったら、コラゲナーゼ／ディスパー
ゼ消化によって細胞を除去し、遠心分離によって洗浄し、計数し、５×１０５細胞／ｍＬ
に調整した。次いで細胞を、１×１０５および２×１０４細胞／ウェルでそれぞれ、１２
ウェル組織培養トレイまたは８ウェルチャンバスライドのいずれかに播種した。２４時間
後、培地を、αＭＥＭ、５％ｖ／ｖウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１．８ｍＭリン酸二水素カ
リウム（ＫＨ２ＰＯ４）、１００μＭアスコルビン酸－２－リン酸（Ａｓ２Ｐ）、１０ｍ
Ｍ ＨＥＰＥＳ、１０－８Ｍデキサメタゾンおよび０．２ｍＭ Ｌ－グルタミンからなる
骨形成分化培地と置き換えた。分化プロセスの間、試料を、全ＲＮＡ調製および遺伝子発
現分析のためにＴｒｉｚｏｌ試薬中に３日、１４日および２８日に収集した（以下を参照
のこと）。チャンバスライドに播種した培養物を、以前に記載されているように［４１］
、Ａｌｉｚａｒｉｎ Ｒｅｄ染色技術を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで石灰化について試験
した。
【0268】
ＰＰＳおよびＴＮＦα治療
ＰＰＳは、ｂｅｎｅ ｐｈａｒｍａＣｈｅｍ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ．ＫＧ、Ｇｅｒｅｔ
ｓｔｒｉｅｄ、ドイツによって製造された。これをストック溶液として１．０ｍｇ／ｍＬ
で滅菌ＰＢＳに溶解した。分化した細胞を、未処理にしたか、または培養培地中で７２時
間、１、５または５０μｇ／ｍＬの最終濃度のＰＰＳにより前処理した。試験用量のＰＰ
Ｓは、以前の研究において公開された有効かつ最大活性レベルに基づいた［４３］。次い
で、培地を、組換えヒト（ｒｈ）ＴＮＦα（１ｎｇ／ｍＬ）を添加した、または添加して
いない同じ濃度のＰＰＳと置き換え、次いでさらに４８時間培養した。下記に記載される
ように、培養上清を収集し、全ＲＮＡおよびｃＤＮＡを調製した。これにより、６人のド
ナーから８つの条件（未処理、ＴＮＦ、ＰＰＳ１、ＰＰＳ５、ＰＰＳ５０、ＴＮＦ＋ＰＰ
Ｓ１、ＴＮＦ＋ＰＰＳ５、ＴＮＦ＋ＰＰＳ５０）が得られた。
ＰＰＳは、ｂｅｎｅ ｐｈａｒｍａＣｈｅｍ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ．ＫＧ、Ｇｅｒｅｔ
ｓｔｒｉｅｄ、ドイツによって製造された。これをストック溶液として１．０ｍｇ／ｍＬ
で滅菌ＰＢＳに溶解した。分化した細胞を、未処理にしたか、または培養培地中で７２時
間、１、５または５０μｇ／ｍＬの最終濃度のＰＰＳにより前処理した。試験用量のＰＰ
Ｓは、以前の研究において公開された有効かつ最大活性レベルに基づいた［４３］。次い
で、培地を、組換えヒト（ｒｈ）ＴＮＦα（１ｎｇ／ｍＬ）を添加した、または添加して
いない同じ濃度のＰＰＳと置き換え、次いでさらに４８時間培養した。下記に記載される
ように、培養上清を収集し、全ＲＮＡおよびｃＤＮＡを調製した。これにより、６人のド
ナーから８つの条件（未処理、ＴＮＦ、ＰＰＳ１、ＰＰＳ５、ＰＰＳ５０、ＴＮＦ＋ＰＰ
Ｓ１、ＴＮＦ＋ＰＰＳ５、ＴＮＦ＋ＰＰＳ５０）が得られた。
【0269】
全ＲＮＡ産生およびリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ分析
アッセイ可能なｃＤＮＡの生成におけるＰＰＳ干渉の証拠に起因して、残留ＰＰＳを除
去しようとして、ＲＮＡ沈殿物を、通常の単一洗浄ステップの代わりに７５％エタノール
中で３回洗浄したことを除いて、製造業者の説明書に従って、Ｔｒｉｚｏｌ溶解物から全
ＲＮＡを調製した。ＲＮＡ調製物を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ微量体積分光光度計（Ｔｈｅｒｍ
ｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して収率および純度について試験した。各試料からのＲＮＡ１
マイクログラムを、製造業者の説明書に従って、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩキ
ット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して逆転写した。ハウスキーピング遺伝子（
１８Ｓ、ＡＣＴＢ）発現に対して、神経成長因子（ＮＧＦ）、その受容体ＮＴＲＫ１（Ｔ
ＲＫＡ）およびＮＧＦＲ（Ｐ７５ＮＴＲ）、ＭＭＰ１３、シクロオキシゲナーゼ－２（Ｃ
ＯＸ－２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）ＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＯＣＮ、ＤＭＰ１
ならびにＳＯＳＴを含む遺伝子についてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを実施した。これらの
各々についてのオリゴヌクレオチドプライマー配列を表１に示す。
アッセイ可能なｃＤＮＡの生成におけるＰＰＳ干渉の証拠に起因して、残留ＰＰＳを除
去しようとして、ＲＮＡ沈殿物を、通常の単一洗浄ステップの代わりに７５％エタノール
中で３回洗浄したことを除いて、製造業者の説明書に従って、Ｔｒｉｚｏｌ溶解物から全
ＲＮＡを調製した。ＲＮＡ調製物を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ微量体積分光光度計（Ｔｈｅｒｍ
ｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して収率および純度について試験した。各試料からのＲＮＡ１
マイクログラムを、製造業者の説明書に従って、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩキ
ット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して逆転写した。ハウスキーピング遺伝子（
１８Ｓ、ＡＣＴＢ）発現に対して、神経成長因子（ＮＧＦ）、その受容体ＮＴＲＫ１（Ｔ
ＲＫＡ）およびＮＧＦＲ（Ｐ７５ＮＴＲ）、ＭＭＰ１３、シクロオキシゲナーゼ－２（Ｃ
ＯＸ－２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）ＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＯＣＮ、ＤＭＰ１
ならびにＳＯＳＴを含む遺伝子についてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを実施した。これらの
各々についてのオリゴヌクレオチドプライマー配列を表１に示す。
【0270】
【表1】
【0271】
ＥＬＩＳＡ分析
使用するまで凍結保存（－８０℃）した培養上清を４℃で解凍するとすぐに、製造業者
の説明書に従って、ヒトＮＧＦ（カタログ番号：ＥＨＮＧＦ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅ
ｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）またはｐｒｏＮＧＦ（カタログ番号：ＢＥＫ－２２２６－２
Ｐ；Ｂｉｏｓｅｎｓｉｓ）タンパク質レベルについてＥＬＩＳＡによってアッセイした。
全体的なプレートレイアウトの概略を図１に示す。
使用するまで凍結保存（－８０℃）した培養上清を４℃で解凍するとすぐに、製造業者
の説明書に従って、ヒトＮＧＦ（カタログ番号：ＥＨＮＧＦ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅ
ｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）またはｐｒｏＮＧＦ（カタログ番号：ＢＥＫ－２２２６－２
Ｐ；Ｂｉｏｓｅｎｓｉｓ）タンパク質レベルについてＥＬＩＳＡによってアッセイした。
全体的なプレートレイアウトの概略を図１に示す。
【0272】
免疫染色
８ウェルチャンバスライドに播種し、２８日間分化させたか、または骨から新たに消化
した細胞を、未処理にしたか、またはｒｈＴＮＦα（１ｎｇ／ｍＬ）、ＰＰＳ（５０μｇ
／ｍＬ；「ＰＰＳ５０」）もしくはＰＰＳ５０＋ｒｈＴＮＦαにより処理した。分化後、
培地を除去し、全てのウェルをＰＢＳ（ｐＨ７．４、Ｇｉｂｃｏ）で合計３回リンスした
。次いで細胞を、室温で１時間、１００μＬのＨｉｓｔｏｃｈｏｉｃｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａ
ｌｄｒｉｃｈ）組織固定剤で固定した。固定後、ウェルを蒸留Ｈ２Ｏで２回リンスし、染
色するまで４℃で保存した。細胞を、湿潤チャンバ内で室温にて２０分間、５０μＬのブ
ロッキングバッファー（１×ＰＢＳ中の５％ｖ／ｖ正常ウサギ血清）によりブロックした
。次いで細胞を洗浄バッファー（ＰＢＳ中の０．１％ｖ／ｖ正常ウサギ血清）で３回リン
スした。細胞を、マウスモノクローナルＩｇＧ１抗ヒトＮＧＦ（２５６２３；Ｔｈｅｒｍ
ｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、抗ヒトＮＧＦＲ（２Ｆ１Ｃ２；Ｔｈｅｒｍ
ｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、または抗ヒトＴｒｋＡ（６Ｂ２；Ｔｈｅｒ
ｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、または抗ヒトＳＯＳＴ（ＭＡｂ ２２０
９０２．１１；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）一次
抗体およびそれらのそれぞれのＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＭＡｂ １Ｂ５）のいずれか
で染色した。一次抗体およびＩｇＧ対照を１：５０から１：４００の間で希釈した。細胞
を、４℃で４０分間、一次抗体とインキュベートした。非コンジュゲートＭＡｂに関して
、次いでチャンバスライドを洗浄バッファーで３回リンスし、核ＤＡＰＩ染色（１：２０
００希釈；ジアミジノ－２－フェニルインドール；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）も含有
する５０μＬのウサギα－マウスＡｌｅｘａ－ｆｌｕｏｒ二次抗体（１：２０００希釈）
をウェルに添加した。室温での１時間のインキュベーション後、二次抗体を除去し、ウェ
ルを洗浄バッファーで３回洗浄した。最後に、ＦｌｕｏｒｏＢｒｉｔｅ ＤＭＥＭ（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各ウェルに添加して、共焦点顕微鏡法（ＦＶ３００
０共焦点顕微鏡、Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ；Ａｄｅｌａｉｄｅ Ｍｉｃ
ｒｏｓｃｏｐｙ）を使用して画像化した。
８ウェルチャンバスライドに播種し、２８日間分化させたか、または骨から新たに消化
した細胞を、未処理にしたか、またはｒｈＴＮＦα（１ｎｇ／ｍＬ）、ＰＰＳ（５０μｇ
／ｍＬ；「ＰＰＳ５０」）もしくはＰＰＳ５０＋ｒｈＴＮＦαにより処理した。分化後、
培地を除去し、全てのウェルをＰＢＳ（ｐＨ７．４、Ｇｉｂｃｏ）で合計３回リンスした
。次いで細胞を、室温で１時間、１００μＬのＨｉｓｔｏｃｈｏｉｃｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａ
ｌｄｒｉｃｈ）組織固定剤で固定した。固定後、ウェルを蒸留Ｈ２Ｏで２回リンスし、染
色するまで４℃で保存した。細胞を、湿潤チャンバ内で室温にて２０分間、５０μＬのブ
ロッキングバッファー（１×ＰＢＳ中の５％ｖ／ｖ正常ウサギ血清）によりブロックした
。次いで細胞を洗浄バッファー（ＰＢＳ中の０．１％ｖ／ｖ正常ウサギ血清）で３回リン
スした。細胞を、マウスモノクローナルＩｇＧ１抗ヒトＮＧＦ（２５６２３；Ｔｈｅｒｍ
ｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、抗ヒトＮＧＦＲ（２Ｆ１Ｃ２；Ｔｈｅｒｍ
ｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、または抗ヒトＴｒｋＡ（６Ｂ２；Ｔｈｅｒ
ｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、または抗ヒトＳＯＳＴ（ＭＡｂ ２２０
９０２．１１；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）一次
抗体およびそれらのそれぞれのＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＭＡｂ １Ｂ５）のいずれか
で染色した。一次抗体およびＩｇＧ対照を１：５０から１：４００の間で希釈した。細胞
を、４℃で４０分間、一次抗体とインキュベートした。非コンジュゲートＭＡｂに関して
、次いでチャンバスライドを洗浄バッファーで３回リンスし、核ＤＡＰＩ染色（１：２０
００希釈；ジアミジノ－２－フェニルインドール；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）も含有
する５０μＬのウサギα－マウスＡｌｅｘａ－ｆｌｕｏｒ二次抗体（１：２０００希釈）
をウェルに添加した。室温での１時間のインキュベーション後、二次抗体を除去し、ウェ
ルを洗浄バッファーで３回洗浄した。最後に、ＦｌｕｏｒｏＢｒｉｔｅ ＤＭＥＭ（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各ウェルに添加して、共焦点顕微鏡法（ＦＶ３００
０共焦点顕微鏡、Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ；Ａｄｅｌａｉｄｅ Ｍｉｃ
ｒｏｓｃｏｐｙ）を使用して画像化した。
【0273】
二重標識化目的のために、抗ＮＧＦをフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ；
Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）に直接コン
ジュゲートした。このために、最初にＭＡｂ２５６２３を、４℃で一晩、炭酸塩／重炭酸
塩バッファー（１Ｌ；ｐＨ９．６）に対して透析した。ＦＩＴＣを無水ＤＭＳＯ中で１ｍ
ｇ／ｍＬに溶解した。１５μＬのＦＩＴＣ溶液を１００μｇの抗ＮＧＦに添加し、チュー
ブを室温で２時間、回転子上で混合した。Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５カラム（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）でのサイズ排除ク
ロマトグラフィーを使用して非結合ＦＩＴＣを除去した。ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｏｎｅ分光
光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して２８０ｎｍお
よび４９２ｎｍでの０．５ｍＬ画分の吸光度を決定し、式：濃度（ｍｇ／ｍＬ）＝Ａ２８
０－（Ａ４９２×０．３５）／１．４によってＦＩＴＣコンジュゲート抗体の濃度を決定
した。凝集体を除去するために、抗体溶液を、使用前に１６，４００ＲＣＦで１５分間遠
心分離した。免疫染色のための陽性対照として、Ｈａｒｍｏｎｉｚｏｍｅデータベース［
Ｒｏｕｉｌｌａｒｄ ＡＤ、Ｇｕｎｄｅｒｓｅｎ ＧＷ、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ ＮＦ、Ｗ
ａｎｇ Ｚ、Ｍｏｎｔｅｉｒｏ ＣＤ、ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ ＭＧ、Ｍａ’ａｙａｎ Ａ
］を使用して、小細胞肺癌細胞株ＮＣＩ－Ｈ２６６（ＡＴＣＣ、Ｍａｓａｓｓａｓ、ＶＡ
、ＵＳＡ）がＮＧＦを発現すると同定した。これらのアッセイのために、ＦＩＴＣコンジ
ュゲートＸ－６３ ＭＡｂ（Ｂｉｏｓｅｎｓｉｓ、Ｔｈｅｂａｒｔｏｎ、ＳＡ、オースト
ラリア）を陰性対照として使用した；直接コンジュゲートを４０分間インキュベートし、
吸引し、ウェルを上記のように３回洗浄した。
Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）に直接コン
ジュゲートした。このために、最初にＭＡｂ２５６２３を、４℃で一晩、炭酸塩／重炭酸
塩バッファー（１Ｌ；ｐＨ９．６）に対して透析した。ＦＩＴＣを無水ＤＭＳＯ中で１ｍ
ｇ／ｍＬに溶解した。１５μＬのＦＩＴＣ溶液を１００μｇの抗ＮＧＦに添加し、チュー
ブを室温で２時間、回転子上で混合した。Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５カラム（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）でのサイズ排除ク
ロマトグラフィーを使用して非結合ＦＩＴＣを除去した。ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｏｎｅ分光
光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して２８０ｎｍお
よび４９２ｎｍでの０．５ｍＬ画分の吸光度を決定し、式：濃度（ｍｇ／ｍＬ）＝Ａ２８
０－（Ａ４９２×０．３５）／１．４によってＦＩＴＣコンジュゲート抗体の濃度を決定
した。凝集体を除去するために、抗体溶液を、使用前に１６，４００ＲＣＦで１５分間遠
心分離した。免疫染色のための陽性対照として、Ｈａｒｍｏｎｉｚｏｍｅデータベース［
Ｒｏｕｉｌｌａｒｄ ＡＤ、Ｇｕｎｄｅｒｓｅｎ ＧＷ、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ ＮＦ、Ｗ
ａｎｇ Ｚ、Ｍｏｎｔｅｉｒｏ ＣＤ、ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ ＭＧ、Ｍａ’ａｙａｎ Ａ
］を使用して、小細胞肺癌細胞株ＮＣＩ－Ｈ２６６（ＡＴＣＣ、Ｍａｓａｓｓａｓ、ＶＡ
、ＵＳＡ）がＮＧＦを発現すると同定した。これらのアッセイのために、ＦＩＴＣコンジ
ュゲートＸ－６３ ＭＡｂ（Ｂｉｏｓｅｎｓｉｓ、Ｔｈｅｂａｒｔｏｎ、ＳＡ、オースト
ラリア）を陰性対照として使用した；直接コンジュゲートを４０分間インキュベートし、
吸引し、ウェルを上記のように３回洗浄した。
【0274】
記載されているように、ＫＯＡ患者から単離した骨を固定し、脱灰し、包埋し、切片化
した［３７］。最初に骨切片（５μｍ）を６０℃で１５分間加熱して、過剰のパラフィン
を溶融させ、次いで脱ろうした。抗原回収のために、次いでスライドを蒸留水中の１０％
ギ酸中で１０分間インキュベートし、ＰＢＳ中でリンスし、次いで上記のように免疫染色
した。
した［３７］。最初に骨切片（５μｍ）を６０℃で１５分間加熱して、過剰のパラフィン
を溶融させ、次いで脱ろうした。抗原回収のために、次いでスライドを蒸留水中の１０％
ギ酸中で１０分間インキュベートし、ＰＢＳ中でリンスし、次いで上記のように免疫染色
した。
【0275】
新たな骨からのヒト初代骨細胞単離
いくつかの実験に関して、新たに得たヒト患者の骨を、免疫染色の目的のために、記載
されているように［４６］、初代骨細胞の供給源として使用した。
いくつかの実験に関して、新たに得たヒト患者の骨を、免疫染色の目的のために、記載
されているように［４６］、初代骨細胞の供給源として使用した。
【0276】
データおよび統計分析：
ＥＬＩＳＡデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ
Ｐｒｉｓｍ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、ＵＳＡ）に入力し、Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋの多
重比較事後検定を用いて二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析した。ｐ＜０．０
５についての値を統計的に有意とみなした。
ＥＬＩＳＡデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ
Ｐｒｉｓｍ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、ＵＳＡ）に入力し、Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋの多
重比較事後検定を用いて二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析した。ｐ＜０．０
５についての値を統計的に有意とみなした。
【0277】
結果および考察
培養骨細胞によるＮＧＦ発現
変形性膝関節症（ＫＯＡ）についてのＴＫＡまたは大腿骨頸部骨折（ＮＯＦ）について
のＴＨＡを受けている患者の軟骨下骨から単離したヒト初代骨芽細胞を、２８日の期間、
分化条件下で培養した［３５～４０、４７］。全体として、ＮＯＦ培養物は、Ａｌｉｚａ
ｒｉｎ Ｒｅｄ染色によってアッセイされるように、ＫＯＡドナーよりも有意に大きな程
度まで石灰化され、以前の公開していない観察と一致した（図２）。この理由は、本発明
者らが近位大腿骨から単離した細胞について以前に報告したように［４１］、採取した部
位（ＮＯＦでは近位大腿骨およびＫＯＡでは軟骨下近位脛骨）に関連し得るか、またはよ
り可能性が高いのは、変形性関節症を有する患者由来の骨芽細胞を分化させる際の明らか
な異常調節石灰化に関連し得るためである。全てのドナーの細胞は、１４日目までに前骨
細胞／骨細胞の強い特徴を示し、２つの症例では３日目までに、ＤＭＰ１、ＳＯＳＴおよ
びＯＣＮについてかなりのｍＲＮＡを発現した。２／３の症例では、２８日目までにＤＭ
Ｐ１、ＳＯＳＴおよびＯＣＮのｍＲＮＡ発現が１４日目のレベルから低下し、細胞小器官
の消失と関連する成熟骨細胞様の表現型の獲得および全体的な代謝レベルの減少と一致し
た［３５、４８］。全てのドナーの培養物はまた、破骨細胞形成関連遺伝子であるＲＡＮ
ＫＬおよびＯＰＧをコードするｍＲＮＡを発現し（図３～図７）、骨細胞様の表現型とも
一致した［３５］。ＮＧＦ ｍＲＮＡの発現は、試験した全てのドナーの細胞からのこれ
らの培養物において比較的豊富であり、上記の分化マーカーの発現を反映しており、１４
日目にピークに達し、２８日目までに低下した（図８のＫＯＡ２）。さらに、全てのドナ
ーの細胞は、上清中に検出されたかなりの全長ＮＧＦタンパク質を分泌した：ＫＯＡ１１
１．９±４８．８ｐｇ／ｍｌ；ＮＯＦ８５．０±６０．３ｐｇ／ｍｌ。
培養骨細胞によるＮＧＦ発現
変形性膝関節症（ＫＯＡ）についてのＴＫＡまたは大腿骨頸部骨折（ＮＯＦ）について
のＴＨＡを受けている患者の軟骨下骨から単離したヒト初代骨芽細胞を、２８日の期間、
分化条件下で培養した［３５～４０、４７］。全体として、ＮＯＦ培養物は、Ａｌｉｚａ
ｒｉｎ Ｒｅｄ染色によってアッセイされるように、ＫＯＡドナーよりも有意に大きな程
度まで石灰化され、以前の公開していない観察と一致した（図２）。この理由は、本発明
者らが近位大腿骨から単離した細胞について以前に報告したように［４１］、採取した部
位（ＮＯＦでは近位大腿骨およびＫＯＡでは軟骨下近位脛骨）に関連し得るか、またはよ
り可能性が高いのは、変形性関節症を有する患者由来の骨芽細胞を分化させる際の明らか
な異常調節石灰化に関連し得るためである。全てのドナーの細胞は、１４日目までに前骨
細胞／骨細胞の強い特徴を示し、２つの症例では３日目までに、ＤＭＰ１、ＳＯＳＴおよ
びＯＣＮについてかなりのｍＲＮＡを発現した。２／３の症例では、２８日目までにＤＭ
Ｐ１、ＳＯＳＴおよびＯＣＮのｍＲＮＡ発現が１４日目のレベルから低下し、細胞小器官
の消失と関連する成熟骨細胞様の表現型の獲得および全体的な代謝レベルの減少と一致し
た［３５、４８］。全てのドナーの培養物はまた、破骨細胞形成関連遺伝子であるＲＡＮ
ＫＬおよびＯＰＧをコードするｍＲＮＡを発現し（図３～図７）、骨細胞様の表現型とも
一致した［３５］。ＮＧＦ ｍＲＮＡの発現は、試験した全てのドナーの細胞からのこれ
らの培養物において比較的豊富であり、上記の分化マーカーの発現を反映しており、１４
日目にピークに達し、２８日目までに低下した（図８のＫＯＡ２）。さらに、全てのドナ
ーの細胞は、上清中に検出されたかなりの全長ＮＧＦタンパク質を分泌した：ＫＯＡ１１
１．９±４８．８ｐｇ／ｍｌ；ＮＯＦ８５．０±６０．３ｐｇ／ｍｌ。
【0278】
さらなる研究において、全てのＫＯＡドナーの細胞は、３日目までに前骨細胞／骨細胞
の強い特徴を示し、ＤＭＰ１、ＳＯＳＴおよびＯＣＮについてかなりのｍＲＮＡを発現し
た（図２５Ａ～Ｃ）。ＤＭＰ１およびＳＯＳＴ ｍＲＮＡは、デルタサイクル閾値（ΔＣ
Ｔ）の値に基づいて全体的に同様のレベルまで発現したが、ＯＣＮ ｍＲＮＡはより豊富
に発現した。ＤＭＰ１およびＯＣＮの発現は１４日目までに増加し、次いで２８日目まで
に低下し、細胞小器官の消失と関連する成熟骨細胞様の表現型の獲得および全体的な代謝
レベルの減少と一致した［３５、４８］。ＮＧＦ ｍＲＮＡの発現は、試験した全てのド
ナーの細胞からのＯＣＮの発現と同様に、これらの培養物において比較的豊富であり、上
記の分化マーカーの発現を反映しており、１４日目にピークに達し、２８日目までに低下
した（図１Ｄ）。さらに、全てのＫＯＡドナーの細胞は、上清中に検出されたかなりの全
長ＮＧＦタンパク質を分泌した（１１１．９±４８．８ｐｇ／ｍｌ）。
の強い特徴を示し、ＤＭＰ１、ＳＯＳＴおよびＯＣＮについてかなりのｍＲＮＡを発現し
た（図２５Ａ～Ｃ）。ＤＭＰ１およびＳＯＳＴ ｍＲＮＡは、デルタサイクル閾値（ΔＣ
Ｔ）の値に基づいて全体的に同様のレベルまで発現したが、ＯＣＮ ｍＲＮＡはより豊富
に発現した。ＤＭＰ１およびＯＣＮの発現は１４日目までに増加し、次いで２８日目まで
に低下し、細胞小器官の消失と関連する成熟骨細胞様の表現型の獲得および全体的な代謝
レベルの減少と一致した［３５、４８］。ＮＧＦ ｍＲＮＡの発現は、試験した全てのド
ナーの細胞からのＯＣＮの発現と同様に、これらの培養物において比較的豊富であり、上
記の分化マーカーの発現を反映しており、１４日目にピークに達し、２８日目までに低下
した（図１Ｄ）。さらに、全てのＫＯＡドナーの細胞は、上清中に検出されたかなりの全
長ＮＧＦタンパク質を分泌した（１１１．９±４８．８ｐｇ／ｍｌ）。
【0279】
重要なことに、全ての３人のドナーの細胞はＮＧＦをコードする豊富なｍＲＮＡを発現
し（図８）、ヒト骨細胞がＮＧＦタンパク質の供給源であり、変形性膝関節症における疼
痛反応の原因となり得る可能性があることと一致した。これをさらに試験するために、本
発明者らの公開されたプロトコル［４６］に従って、さらなるドナーの骨から骨細胞を消
化した。免疫染色により、細胞質ＮＧＦタンパク質について強い陽性が明らかになった（
図９）。これはＮＧＦの骨細胞発現の最初の報告であると考えられる。
し（図８）、ヒト骨細胞がＮＧＦタンパク質の供給源であり、変形性膝関節症における疼
痛反応の原因となり得る可能性があることと一致した。これをさらに試験するために、本
発明者らの公開されたプロトコル［４６］に従って、さらなるドナーの骨から骨細胞を消
化した。免疫染色により、細胞質ＮＧＦタンパク質について強い陽性が明らかになった（
図９）。これはＮＧＦの骨細胞発現の最初の報告であると考えられる。
【0280】
ＮＧＦの分泌に対するＰＰＳ前処理の効果
ＫＯＡまたはＮＯＦ骨芽細胞に由来するヒト骨細胞様培養物を、未処理（対照）にした
か、または異なる濃度のＰＰＳ（１、５または５０μｇ／ｍＬ）により７２時間、前処理
した。上清をＥＬＩＳＡによって成熟ＮＧＦタンパク質分泌について試験した。試験した
全てのドナーの細胞は検出可能な分泌ＮＧＦを発現した。興味深いことに、分泌レベルは
ＰＰＳ処理に反応して増加した（図１０および図１１）。
ＫＯＡまたはＮＯＦ骨芽細胞に由来するヒト骨細胞様培養物を、未処理（対照）にした
か、または異なる濃度のＰＰＳ（１、５または５０μｇ／ｍＬ）により７２時間、前処理
した。上清をＥＬＩＳＡによって成熟ＮＧＦタンパク質分泌について試験した。試験した
全てのドナーの細胞は検出可能な分泌ＮＧＦを発現した。興味深いことに、分泌レベルは
ＰＰＳ処理に反応して増加した（図１０および図１１）。
【0281】
ＴＮＦにより誘導されるＮＧＦおよびｐｒｏＮＧＦ分泌に対するＰＰＳの効果
ＮＧＦ発現に対するＰＰＳの効果をさらに調べるために、３人のＫＯＡおよび３人のＮ
ＯＦドナーの骨芽細胞に由来する骨細胞様培養物を、異なる濃度のＰＰＳによる前処理の
３日後、前処理濃度のＰＰＳの不在下または存在下でｒｈＴＮＦαにより処理した。上清
を、処理の４８時間後に収集し、材料および方法に記載されるように、ＥＬＩＳＡ分析に
供した。Ｍａｌｅｒｂａおよびその同僚らによる研究［２９］により、実験試料中の成熟
ＮＧＦと一緒に、ＮＧＦ、ｐｒｏＮＧＦの未成熟プロタンパク質形態の存在が、ＮＧＦに
ついての多くの市販のＥＬＩＳＡにおいて誤った読み取りを与え、これらの効果は予測で
きない大きさおよび方向であったことが実証された。したがって、この研究では、材料お
よび方法に記載されるように、処理した上清中のｐｒｏＮＧＦレベルも測定した。
ＮＧＦ発現に対するＰＰＳの効果をさらに調べるために、３人のＫＯＡおよび３人のＮ
ＯＦドナーの骨芽細胞に由来する骨細胞様培養物を、異なる濃度のＰＰＳによる前処理の
３日後、前処理濃度のＰＰＳの不在下または存在下でｒｈＴＮＦαにより処理した。上清
を、処理の４８時間後に収集し、材料および方法に記載されるように、ＥＬＩＳＡ分析に
供した。Ｍａｌｅｒｂａおよびその同僚らによる研究［２９］により、実験試料中の成熟
ＮＧＦと一緒に、ＮＧＦ、ｐｒｏＮＧＦの未成熟プロタンパク質形態の存在が、ＮＧＦに
ついての多くの市販のＥＬＩＳＡにおいて誤った読み取りを与え、これらの効果は予測で
きない大きさおよび方向であったことが実証された。したがって、この研究では、材料お
よび方法に記載されるように、処理した上清中のｐｒｏＮＧＦレベルも測定した。
【0282】
成熟タンパク質について観察されたように、基礎ｐｒｏＮＧＦは、全てのドナー細胞培
養上清中で検出可能であった（図１４および図１５および図２７）。ＫＯＡ細胞培養物お
よびＮＯＦ細胞培養物の両方を含む、組換えヒトＴＮＦα処理はｐｒｏＮＧＦのレベルを
有意に増加させ、変形性関節症の状況においてこの炎症誘発性刺激に反応するＮＧＦ発現
の誘導と一致した［２７、４９］。ＰＰＳは、アッセイした全てのドナーの細胞において
、および試験したＰＰＳ濃度の全てにおいて基礎ｐｒｏＮＧＦ分泌を強力に抑制した。治
療の観点から重要なことに、ＰＰＳはまた、再び試験した全ての濃度において、ＫＯＡ培
養物およびＮＯＦ培養物の両方ならびに図２７においてｐｒｏＮＧＦ分泌に対するｒｈＴ
ＮＦの効果を強力に逆転させた（図１４および図１５）。
養上清中で検出可能であった（図１４および図１５および図２７）。ＫＯＡ細胞培養物お
よびＮＯＦ細胞培養物の両方を含む、組換えヒトＴＮＦα処理はｐｒｏＮＧＦのレベルを
有意に増加させ、変形性関節症の状況においてこの炎症誘発性刺激に反応するＮＧＦ発現
の誘導と一致した［２７、４９］。ＰＰＳは、アッセイした全てのドナーの細胞において
、および試験したＰＰＳ濃度の全てにおいて基礎ｐｒｏＮＧＦ分泌を強力に抑制した。治
療の観点から重要なことに、ＰＰＳはまた、再び試験した全ての濃度において、ＫＯＡ培
養物およびＮＯＦ培養物の両方ならびに図２７においてｐｒｏＮＧＦ分泌に対するｒｈＴ
ＮＦの効果を強力に逆転させた（図１４および図１５）。
【0283】
選択したＰＰＳの濃度は以前に報告されたものに基づいた［４３］。１９８６年のＤａ
ｗｅｓらによる研究は、ＰＰＳを皮下注射したボランティアにおいておよそ１～３μｇ／
ｍｌのＰＰＳの血漿濃度を報告し、本明細書で使用される有効用量が臨床的関連性を有す
ることを支持した。しかしながら、本発明者らのアッセイにおける用量反応の欠如は、研
究の限界と考えることができる。ＮＯＦ細胞について著しく類似した発見が得られており
（図２９）、ＮＧＦ発現およびＰＰＳによるその調節が、骨格部位と病理との間の骨細胞
の共通の特徴である可能性があることが示唆された。
ｗｅｓらによる研究は、ＰＰＳを皮下注射したボランティアにおいておよそ１～３μｇ／
ｍｌのＰＰＳの血漿濃度を報告し、本明細書で使用される有効用量が臨床的関連性を有す
ることを支持した。しかしながら、本発明者らのアッセイにおける用量反応の欠如は、研
究の限界と考えることができる。ＮＯＦ細胞について著しく類似した発見が得られており
（図２９）、ＮＧＦ発現およびＰＰＳによるその調節が、骨格部位と病理との間の骨細胞
の共通の特徴である可能性があることが示唆された。
【0284】
ＴＮＦにより誘導される遺伝子発現に対するＰＰＳの効果
ＰＰＳによる骨細胞様培養物の３日の前処理およびさらなる４８時間の処理時間の後、
リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを使用して遺伝子発現を分析する目的のために全ＲＮＡを単離
した。２６０ｎｍ／２８０ｎｍでの吸光度の比が一般に１．９から２．０の間であること
を示すＮａｎｏｄｒｏｐマイクロ分光光度法によって判断されるように、全ての培養物か
ら単離されたＲＮＡの質は高いように見えたが、１つまたは２つの試料を除いて、５また
は５０μｇ／ｍＬのＰＰＳに曝露されたあらゆる試料から相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生
成することは一貫して不可能であった。これは、アッセイ可能なハウスキーピング遺伝子
（１８Ｓ、ＢＡＣＴ）発現をもたらすが、ＰＰＳの一般的な存在下ではハウスキーピング
遺伝子発現が非常に減少しているか、または欠如している６人全てのドナーからの全ての
未処理およびＴＮＦ処理試料によって証明された。これは、ＲＮＡペレットの反復洗浄に
よって潜在的に汚染しているＰＰＳを除去する試みが増加したにもかかわらずであった。
本発明者らは、沈殿したＲＮＡのＰＰＳ汚染が、共沈を生じるＲＮＡとの五炭糖様構造類
似性におそらく起因して、ＲＮＡのｃＤＮＡへの逆転写を阻害すると結論付けた。様々な
逆転写酵素のＰＰＳによるこのような阻害活性はこれまでに立証されている［３０～３２
］。しかしながら、逆転写の前のＲＮＡペレットの反復洗浄後、上記のように、未処理、
ＴＮＦα処理、ＰＰＳ（１μｇ／ｍＬ）およびＴＮＦα＋ＰＰＳ（１μｇ／ｍＬ）処理培
養物からの３人のＫＯＡドナーの培養物のうちの２つからｃＤＮＡを産生し、これらをリ
アルタイムＲＴ－ＰＣＲによって分析した。結果を図１６～図１８に示す。
ＰＰＳによる骨細胞様培養物の３日の前処理およびさらなる４８時間の処理時間の後、
リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを使用して遺伝子発現を分析する目的のために全ＲＮＡを単離
した。２６０ｎｍ／２８０ｎｍでの吸光度の比が一般に１．９から２．０の間であること
を示すＮａｎｏｄｒｏｐマイクロ分光光度法によって判断されるように、全ての培養物か
ら単離されたＲＮＡの質は高いように見えたが、１つまたは２つの試料を除いて、５また
は５０μｇ／ｍＬのＰＰＳに曝露されたあらゆる試料から相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生
成することは一貫して不可能であった。これは、アッセイ可能なハウスキーピング遺伝子
（１８Ｓ、ＢＡＣＴ）発現をもたらすが、ＰＰＳの一般的な存在下ではハウスキーピング
遺伝子発現が非常に減少しているか、または欠如している６人全てのドナーからの全ての
未処理およびＴＮＦ処理試料によって証明された。これは、ＲＮＡペレットの反復洗浄に
よって潜在的に汚染しているＰＰＳを除去する試みが増加したにもかかわらずであった。
本発明者らは、沈殿したＲＮＡのＰＰＳ汚染が、共沈を生じるＲＮＡとの五炭糖様構造類
似性におそらく起因して、ＲＮＡのｃＤＮＡへの逆転写を阻害すると結論付けた。様々な
逆転写酵素のＰＰＳによるこのような阻害活性はこれまでに立証されている［３０～３２
］。しかしながら、逆転写の前のＲＮＡペレットの反復洗浄後、上記のように、未処理、
ＴＮＦα処理、ＰＰＳ（１μｇ／ｍＬ）およびＴＮＦα＋ＰＰＳ（１μｇ／ｍＬ）処理培
養物からの３人のＫＯＡドナーの培養物のうちの２つからｃＤＮＡを産生し、これらをリ
アルタイムＲＴ－ＰＣＲによって分析した。結果を図１６～図１８に示す。
【0285】
最も興味深いのは、ＮＧＦ ｍＲＮＡ発現に対するＰＰＳの効果であった。ヒト骨細胞
様培養物は測定可能なＮＧＦ ｍＲＮＡを発現した（図１６）。ＴＮＦαの存在下では、
１人のドナー（ＫＯＡ１）の発現レベルは変化しなかったが、第２のドナー（ＫＯＡ２）
ではそれは減少した。ＴＮＦα曝露後４８時間は比較的後期の時点であることに留意すべ
きである。なぜなら、多くの遺伝子が曝露から数分から数時間以内に刺激され、その後一
般的に減少すると予想されるからであり；理想的には、ｒｈＴＮＦα処理細胞の時間経過
を調べることが興味深いであろう。重要なことに、ＰＰＳ単独またはｒｈＴＮＦαとの組
合せで、ＮＧＦ ｍＲＮＡレベルは強力に抑制された（図１６）。
様培養物は測定可能なＮＧＦ ｍＲＮＡを発現した（図１６）。ＴＮＦαの存在下では、
１人のドナー（ＫＯＡ１）の発現レベルは変化しなかったが、第２のドナー（ＫＯＡ２）
ではそれは減少した。ＴＮＦα曝露後４８時間は比較的後期の時点であることに留意すべ
きである。なぜなら、多くの遺伝子が曝露から数分から数時間以内に刺激され、その後一
般的に減少すると予想されるからであり；理想的には、ｒｈＴＮＦα処理細胞の時間経過
を調べることが興味深いであろう。重要なことに、ＰＰＳ単独またはｒｈＴＮＦαとの組
合せで、ＮＧＦ ｍＲＮＡレベルは強力に抑制された（図１６）。
【0286】
ＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦ発現に対するＰＰＳの効果が転写レベルであるかどうかをさらに
調べるために、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを使用してＮＧＦ ｍＲＮＡ発現をプローブす
るさらなる研究を行った（図２８）。ＴＮＦαへの曝露により、ＮＧＦ ｍＲＮＡレベル
の相対発現が増加した。しかしながら、１ｍｇ／ｍＬでのＰＰＳはＴＮＦαの存在下でＮ
ＧＦ発現を有意に減少させ、示唆する。
調べるために、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを使用してＮＧＦ ｍＲＮＡ発現をプローブす
るさらなる研究を行った（図２８）。ＴＮＦαへの曝露により、ＮＧＦ ｍＲＮＡレベル
の相対発現が増加した。しかしながら、１ｍｇ／ｍＬでのＰＰＳはＴＮＦαの存在下でＮ
ＧＦ発現を有意に減少させ、示唆する。
【0287】
この発見はタンパク質発現データと一致し、ＰＰＳが、疼痛のメディエーターの発現に
対するＫＯＡにおける炎症誘発性メディエーターの効果を逆転させるという仮説を支持す
る。ＮＧＦについての既知の受容体のうちの２つの骨細胞による発現もまた、免疫組織化
学と同様にＲＴ－ＰＣＲによって調べた。高親和性受容体トロポミオシン受容体キナーゼ
Ａ（ＴｒｋＡ）の発現は、ＫＯＡ１またはＫＯＡ２のいずれにおいてもＲＴ－ＰＣＲによ
って検出できず（図１９）、免疫染色／共焦点顕微鏡法によるシグナルの完全な欠如と一
致した（図２４）。ヒト骨細胞によるＴｒｋＡの発現の欠如は、ニューロンのみがマウス
骨においてこのタンパク質の検出可能なレベルを発現したと報告したＣａｓｔａｎｅｄａ
－Ｃｏｒｒａｌらの発見と一致する［５３］。しかしながら、非常に低いレベルのＮＧＦ
受容体Ｐ７５ＮＴＲ ｍＲＮＡが検出されたが、試験した試料にわたって散発的な検出が
存在した；ＴＲＫＡに関しては（図１９）、この分子についての検出可能な免疫染色は観
察されなかった（図２４）。これらの観察は、骨細胞によるＮＧＦ発現が骨においてパラ
クリン様式で作用し、最も可能性の高い標的細胞は骨感覚ニューロンであるという概念を
支持する。
対するＫＯＡにおける炎症誘発性メディエーターの効果を逆転させるという仮説を支持す
る。ＮＧＦについての既知の受容体のうちの２つの骨細胞による発現もまた、免疫組織化
学と同様にＲＴ－ＰＣＲによって調べた。高親和性受容体トロポミオシン受容体キナーゼ
Ａ（ＴｒｋＡ）の発現は、ＫＯＡ１またはＫＯＡ２のいずれにおいてもＲＴ－ＰＣＲによ
って検出できず（図１９）、免疫染色／共焦点顕微鏡法によるシグナルの完全な欠如と一
致した（図２４）。ヒト骨細胞によるＴｒｋＡの発現の欠如は、ニューロンのみがマウス
骨においてこのタンパク質の検出可能なレベルを発現したと報告したＣａｓｔａｎｅｄａ
－Ｃｏｒｒａｌらの発見と一致する［５３］。しかしながら、非常に低いレベルのＮＧＦ
受容体Ｐ７５ＮＴＲ ｍＲＮＡが検出されたが、試験した試料にわたって散発的な検出が
存在した；ＴＲＫＡに関しては（図１９）、この分子についての検出可能な免疫染色は観
察されなかった（図２４）。これらの観察は、骨細胞によるＮＧＦ発現が骨においてパラ
クリン様式で作用し、最も可能性の高い標的細胞は骨感覚ニューロンであるという概念を
支持する。
【0288】
興味深いことに、ＰＰＳはまた、ＩＬ－６ ｍＲＮＡ発現に対するｒｈＴＮＦαの効果
も阻害した（図１７）；ＩＬ－６の転写および分泌は、ＴＮＦにより誘導されるＮＦκＢ
シグナル伝達の鍵となるリードアウトである［５４］。さらに、ｒｈＴＮＦαはＣＯＸ２
ｍＲＮＡ発現を誘導した（図１８）。ＣＯＸ２は、骨破壊に関与する重要な炎症誘発性
メディエーターである、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）発現を担う酵素であり、い
くつかの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に対する標的であり、ＯＡ関連疼痛の緩
和に効力があると主張されている［５５］。ＰＰＳ単独およびｒｈＴＮＦαとの組合せは
、ＣＯＸ２ ｍＲＮＡ発現を完全に阻害した。
も阻害した（図１７）；ＩＬ－６の転写および分泌は、ＴＮＦにより誘導されるＮＦκＢ
シグナル伝達の鍵となるリードアウトである［５４］。さらに、ｒｈＴＮＦαはＣＯＸ２
ｍＲＮＡ発現を誘導した（図１８）。ＣＯＸ２は、骨破壊に関与する重要な炎症誘発性
メディエーターである、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）発現を担う酵素であり、い
くつかの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に対する標的であり、ＯＡ関連疼痛の緩
和に効力があると主張されている［５５］。ＰＰＳ単独およびｒｈＴＮＦαとの組合せは
、ＣＯＸ２ ｍＲＮＡ発現を完全に阻害した。
【0289】
これらの発見は、ＰＰＳがＴＮＦαの複数の下流の炎症誘発効果を阻害することを示唆
しており、ＰＰＳが、ＴＮＦα／ＴＮＦ受容体シグナル伝達によって引き起こされる細胞
内シグナル伝達経路の転写阻害剤として作用するという以前の報告と一致する［３２］。
しており、ＰＰＳが、ＴＮＦα／ＴＮＦ受容体シグナル伝達によって引き起こされる細胞
内シグナル伝達経路の転写阻害剤として作用するという以前の報告と一致する［３２］。
【0290】
ＫＯＡと関連する軟骨破壊の機構に関して、骨質の調節において骨細胞によって産生さ
れる重要な酵素であるＭＭＰ１３［５６］、およびＯＡにおける軟骨破壊と関連するＭＭ
Ｐ１３［５７］の発現を試験することも興味深かった。ＰＰＳはＩＬ－１βに反応するＭ
ＭＰ１３発現の阻害剤として関与しているが、明確には実証されていない［３３］。本研
究では、ｒｈＴＮＦαはＫＯＡドナー骨細胞様培養物においてＭＭＰ１３ ｍＲＮＡ発現
を誘導し、その作用はＰＰＳ処理により強力に阻害された（図２０）。これは、免疫染色
によってタンパク質レベルで確認された（図２１）。これは、ＰＰＳが、軟骨下骨の骨細
胞におけるその効果によって、ＫＯＡにおける軟骨破壊を保護するという概念を支持する
予備的な機構データを提供する。
れる重要な酵素であるＭＭＰ１３［５６］、およびＯＡにおける軟骨破壊と関連するＭＭ
Ｐ１３［５７］の発現を試験することも興味深かった。ＰＰＳはＩＬ－１βに反応するＭ
ＭＰ１３発現の阻害剤として関与しているが、明確には実証されていない［３３］。本研
究では、ｒｈＴＮＦαはＫＯＡドナー骨細胞様培養物においてＭＭＰ１３ ｍＲＮＡ発現
を誘導し、その作用はＰＰＳ処理により強力に阻害された（図２０）。これは、免疫染色
によってタンパク質レベルで確認された（図２１）。これは、ＰＰＳが、軟骨下骨の骨細
胞におけるその効果によって、ＫＯＡにおける軟骨破壊を保護するという概念を支持する
予備的な機構データを提供する。
【0291】
結論
この研究は、ＰＰＳがＮＧＦまたはｐｒｏ－ＮＧＦ活性を阻害または減少させる際に使
用され得ることを示す。さらに、この研究は、変形性膝関節症を有する患者における軟骨
下骨から単離したヒト初代骨細胞に対するＰＰＳの効果を初めて示す。これはまた、必ず
しも排他的ではないが、ＫＯＡを含む病的状態における疼痛反応に骨細胞が関与している
、この細胞型によるＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦの産生および分泌の最初の実証である。ＰＰＳ
は、基礎およびＴＮＦαにより誘導されるレベルのｐｒｏＮＧＦ分泌ならびにＴＮＦαに
より誘導されるＮＧＦ ｍＲＮＡ発現を阻害した。ＰＰＳはまた、ＴＮＦαにより誘導さ
れるレベルのコラゲナーゼＭＭＰ－１３を阻害した。まとめると、これは、ＰＰＳが、変
形性膝関節症と関連する疼痛を回復させるために、軟骨下骨におけるＮＧＦおよび可能性
がある場合、他の疼痛メディエーターの放出を抑制するために複数のレベルで作用し得る
という証拠を提供する。
この研究は、ＰＰＳがＮＧＦまたはｐｒｏ－ＮＧＦ活性を阻害または減少させる際に使
用され得ることを示す。さらに、この研究は、変形性膝関節症を有する患者における軟骨
下骨から単離したヒト初代骨細胞に対するＰＰＳの効果を初めて示す。これはまた、必ず
しも排他的ではないが、ＫＯＡを含む病的状態における疼痛反応に骨細胞が関与している
、この細胞型によるＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦの産生および分泌の最初の実証である。ＰＰＳ
は、基礎およびＴＮＦαにより誘導されるレベルのｐｒｏＮＧＦ分泌ならびにＴＮＦαに
より誘導されるＮＧＦ ｍＲＮＡ発現を阻害した。ＰＰＳはまた、ＴＮＦαにより誘導さ
れるレベルのコラゲナーゼＭＭＰ－１３を阻害した。まとめると、これは、ＰＰＳが、変
形性膝関節症と関連する疼痛を回復させるために、軟骨下骨におけるＮＧＦおよび可能性
がある場合、他の疼痛メディエーターの放出を抑制するために複数のレベルで作用し得る
という証拠を提供する。
【0292】
研究実施例２：ヒト骨細胞様培養物におけるＮＧＦ遺伝子発現に対するｒｈＴＮＦおよび
ＰＰＳの組合せの効果
ＰＰＳが転写レベルでＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦ発現に対する効果を発揮する可能性を調べ
るための追跡研究について記載する。
ＰＰＳの組合せの効果
ＰＰＳが転写レベルでＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦ発現に対する効果を発揮する可能性を調べ
るための追跡研究について記載する。
【0293】
材料および方法
この研究についての方法論は、以下を加えて、実施例１についてのものと同じである。
この研究についての方法論は、以下を加えて、実施例１についてのものと同じである。
【0294】
ヒト骨細胞の単離
いくつかの実験では、公開されているプロトコル［４６］に従って、骨細胞をヒトの骨
試料から直接単離した。簡潔に述べると、ＴＫＡから得た骨を滅菌ＰＢＳ中で激しくリン
スし、次いで遠心分離およびＰＢＳ中での洗浄によって放出された細胞の回収に介入しな
がら、コラゲナーゼ／ディスパーゼ／ＥＤＴＡの６回の連続消化に供した。骨細胞富化画
分［４６］に対応する、消化物４～６から得た細胞をプールし、遠心分離によってさらに
２回洗浄し、ＰＢＳ中に再懸濁し、次いで８ウェルのガラス底付きチャンバスライドに播
種した。細胞を７２時間回復させた後、それらを免疫染色したか、またはＰＰＳにより前
処理し、次いで、示したように、ＰＰＳおよびｒｈＴＮＦαの組合せにより処理した。
いくつかの実験では、公開されているプロトコル［４６］に従って、骨細胞をヒトの骨
試料から直接単離した。簡潔に述べると、ＴＫＡから得た骨を滅菌ＰＢＳ中で激しくリン
スし、次いで遠心分離およびＰＢＳ中での洗浄によって放出された細胞の回収に介入しな
がら、コラゲナーゼ／ディスパーゼ／ＥＤＴＡの６回の連続消化に供した。骨細胞富化画
分［４６］に対応する、消化物４～６から得た細胞をプールし、遠心分離によってさらに
２回洗浄し、ＰＢＳ中に再懸濁し、次いで８ウェルのガラス底付きチャンバスライドに播
種した。細胞を７２時間回復させた後、それらを免疫染色したか、またはＰＰＳにより前
処理し、次いで、示したように、ＰＰＳおよびｒｈＴＮＦαの組合せにより処理した。
【0295】
結果および考察
新たに単離されたヒト骨細胞によるＮＧＦ発現
ＮＧＦ発現をまた、ヒトＫＯＡ骨から直接消化した細胞において試験した。図２２に示
すように、連続骨消化物の「骨細胞富化」画分［４６］における多数の細胞は、ＮＧＦ発
現について明るく染色された。これは、ヒト骨細胞によるＮＧＦ発現に関する本発明者ら
の知見に対する最初の報告である。ＮＧＦ発現を、ＴＮＦ－αへの曝露によりこれらの細
胞において定性的にアップレギュレートし、ＰＰＳとの共インキュベーションによりダウ
ンレギュレートした。
新たに単離されたヒト骨細胞によるＮＧＦ発現
ＮＧＦ発現をまた、ヒトＫＯＡ骨から直接消化した細胞において試験した。図２２に示
すように、連続骨消化物の「骨細胞富化」画分［４６］における多数の細胞は、ＮＧＦ発
現について明るく染色された。これは、ヒト骨細胞によるＮＧＦ発現に関する本発明者ら
の知見に対する最初の報告である。ＮＧＦ発現を、ＴＮＦ－αへの曝露によりこれらの細
胞において定性的にアップレギュレートし、ＰＰＳとの共インキュベーションによりダウ
ンレギュレートした。
【0296】
ＴＮＦαにより誘導されるＮＧＦ ｍＲＮＡ発現に対するＰＰＳの効果
ＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦ発現に対するＰＰＳの効果が転写レベルであるかどうかを調べる
ために、本発明者らはまた、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを使用してＮＧＦ ｍＲＮＡ発現
を調べた（図２３）。ＴＮＦαへの曝露はＮＧＦ ｍＲＮＡの相対発現を増加させた。０
．１および１μｇ／ｍＬの両方のＰＰＳは、基礎ＮＧＦ ｍＲＮＡレベルに対して明らか
な効果を有さなかった。しかしながら、１μｇ／ｍＬのＰＰＳはＴＮＦαの存在下でＮＧ
Ｆ発現を有意に減少させ、骨細胞に対するＰＰＳの効果の少なくとも一部が転写レベルで
あることが示唆された。これは、ＰＰＳが、ＴＮＦα／ＴＮＦ受容体シグナル伝達によっ
て引き起こされる細胞内シグナル伝達経路の転写阻害剤として作用するという以前の報告
と一致する［３２］。これは、ＰＰＳが、疼痛のメディエーターの発現に対するＫＯＡに
おける炎症誘発性メディエーターの効果を逆転させるという仮説を支持する。
ＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦ発現に対するＰＰＳの効果が転写レベルであるかどうかを調べる
ために、本発明者らはまた、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを使用してＮＧＦ ｍＲＮＡ発現
を調べた（図２３）。ＴＮＦαへの曝露はＮＧＦ ｍＲＮＡの相対発現を増加させた。０
．１および１μｇ／ｍＬの両方のＰＰＳは、基礎ＮＧＦ ｍＲＮＡレベルに対して明らか
な効果を有さなかった。しかしながら、１μｇ／ｍＬのＰＰＳはＴＮＦαの存在下でＮＧ
Ｆ発現を有意に減少させ、骨細胞に対するＰＰＳの効果の少なくとも一部が転写レベルで
あることが示唆された。これは、ＰＰＳが、ＴＮＦα／ＴＮＦ受容体シグナル伝達によっ
て引き起こされる細胞内シグナル伝達経路の転写阻害剤として作用するという以前の報告
と一致する［３２］。これは、ＰＰＳが、疼痛のメディエーターの発現に対するＫＯＡに
おける炎症誘発性メディエーターの効果を逆転させるという仮説を支持する。
【0297】
実施例２についての結論
この研究は、進行したＫＯＡを患っており、ＴＫＡを受けている患者の近位脛骨から分
化した、ヒト初代骨細胞様培養物の反応に対するＰＰＳの効果を示す。組換えＴＮＦαに
よる処理を炎症誘発性刺激として使用し、ＮＧＦ ｍＲＮＡの相対発現に対する効果を調
べた。ＰｒｏＮＧＦタンパク質レベルも決定した。
この研究は、進行したＫＯＡを患っており、ＴＫＡを受けている患者の近位脛骨から分
化した、ヒト初代骨細胞様培養物の反応に対するＰＰＳの効果を示す。組換えＴＮＦαに
よる処理を炎症誘発性刺激として使用し、ＮＧＦ ｍＲＮＡの相対発現に対する効果を調
べた。ＰｒｏＮＧＦタンパク質レベルも決定した。
【0298】
本発明者らは、ヒト骨細胞がＮＧＦを産生することができることを再度示し、それらが
局所的な疼痛反応の原因となる可能性があることを示唆する。本発明者らはまた、ＰＰＳ
が、ＮＧＦ ｍＲＮＡ転写および骨細胞によるｐｒｏＮＧＦ分泌を抑制し、これらのプロ
セスに対するＴＮＦαの刺激作用を逆転させることも示す。まとめると、本発明者らの発
見は、疼痛反応における骨細胞についてのこれまで知られていなかった役割およびＰＰＳ
を摂取しているＫＯＡ患者において有用な疼痛についての機構を示唆している。
局所的な疼痛反応の原因となる可能性があることを示唆する。本発明者らはまた、ＰＰＳ
が、ＮＧＦ ｍＲＮＡ転写および骨細胞によるｐｒｏＮＧＦ分泌を抑制し、これらのプロ
セスに対するＴＮＦαの刺激作用を逆転させることも示す。まとめると、本発明者らの発
見は、疼痛反応における骨細胞についてのこれまで知られていなかった役割およびＰＰＳ
を摂取しているＫＯＡ患者において有用な疼痛についての機構を示唆している。
【0299】
研究実施例３：新たに単離されたヒト骨細胞による、およびヒト骨におけるＮＧＦ発現。
この研究は研究実施例２から続き、ＮＧＦ発現を特徴付けるさらなる研究を提示する。
この研究は研究実施例２から続き、ＮＧＦ発現を特徴付けるさらなる研究を提示する。
【0300】
材料および方法
この研究についての方法論は実施例２についてのものと同じである。
この研究についての方法論は実施例２についてのものと同じである。
【0301】
結果および考察
ＮＧＦタンパク質発現を調べるために、本発明者らは、ＮＣＩ－Ｈ２６６細胞に直接コ
ンジュゲートした抗ＮＧＦ抗体の染色を最適化した（図２６、上段）。また、ＮＧＦ発現
を、ヒトＫＯＡ骨からの連続消化によって得た細胞において試験した。この方法を使用し
て得られた画分ＩＶ～ＶＩは、成熟骨細胞が豊富であることが以前に公開されている［４
６］。図２６（中段）に示すように、骨細胞富化画分における多数の細胞は、ＮＧＦ発現
について明るく染色され、骨細胞マーカーＳＯＳＴ／スクレロスチンについて同時染色さ
れた。さらに、ＮＧＦの骨細胞発現はヒトＫＯＡ軟骨下骨の染色切片において明らかであ
った（図２６の下段）。上記の分化培養物における観察と合わせて、これは、ヒト骨細胞
によるＮＧＦ発現に関する本発明者らの知見に対する最初の報告である。マウス骨におけ
るＮＧＦ発現を同定するための蛍光レポーター系を使用した以前の研究では、尺骨の機械
的負荷に反応するＮＧＦの骨芽細胞発現は報告されているが、骨細胞発現は報告されてい
ない［２３］。使用したレポーター系は、低レベルのＮＧＦを検出する感度を欠いていた
可能性があるか、または観察された差は、種間、相対年齢、骨格部位、刺激（炎症誘発性
ではなく機械的）、ならびに骨細胞発現に対する変形性関節症の影響に起因する可能性が
ある。
ＮＧＦタンパク質発現を調べるために、本発明者らは、ＮＣＩ－Ｈ２６６細胞に直接コ
ンジュゲートした抗ＮＧＦ抗体の染色を最適化した（図２６、上段）。また、ＮＧＦ発現
を、ヒトＫＯＡ骨からの連続消化によって得た細胞において試験した。この方法を使用し
て得られた画分ＩＶ～ＶＩは、成熟骨細胞が豊富であることが以前に公開されている［４
６］。図２６（中段）に示すように、骨細胞富化画分における多数の細胞は、ＮＧＦ発現
について明るく染色され、骨細胞マーカーＳＯＳＴ／スクレロスチンについて同時染色さ
れた。さらに、ＮＧＦの骨細胞発現はヒトＫＯＡ軟骨下骨の染色切片において明らかであ
った（図２６の下段）。上記の分化培養物における観察と合わせて、これは、ヒト骨細胞
によるＮＧＦ発現に関する本発明者らの知見に対する最初の報告である。マウス骨におけ
るＮＧＦ発現を同定するための蛍光レポーター系を使用した以前の研究では、尺骨の機械
的負荷に反応するＮＧＦの骨芽細胞発現は報告されているが、骨細胞発現は報告されてい
ない［２３］。使用したレポーター系は、低レベルのＮＧＦを検出する感度を欠いていた
可能性があるか、または観察された差は、種間、相対年齢、骨格部位、刺激（炎症誘発性
ではなく機械的）、ならびに骨細胞発現に対する変形性関節症の影響に起因する可能性が
ある。
【0302】
研究実施例２において上述したように、新たに単離されたＫＯＡ骨細胞様細胞における
ＮＧＦタンパク質発現の調節を調べる試みにおいて、それらを、ｒｈＴＮＦ－α、ＰＰＳ
またはこれらの組合せのいずれかにより処理した。全ての場合においてＮＧＦ免疫染色を
検出したが、ｒｈＴＮＦ－αのみおよびＰＰＳのみに曝露した細胞は、定性的に対象より
多いＮＧＦ発現を有し、ｒｈＴＮＦ－αおよびＰＰＳの組合せにより処理した細胞は定性
的に少ない染色を示した（図２２）。
ＮＧＦタンパク質発現の調節を調べる試みにおいて、それらを、ｒｈＴＮＦ－α、ＰＰＳ
またはこれらの組合せのいずれかにより処理した。全ての場合においてＮＧＦ免疫染色を
検出したが、ｒｈＴＮＦ－αのみおよびＰＰＳのみに曝露した細胞は、定性的に対象より
多いＮＧＦ発現を有し、ｒｈＴＮＦ－αおよびＰＰＳの組合せにより処理した細胞は定性
的に少ない染色を示した（図２２）。
【0303】
個々の患者の骨からの骨細胞の予測できない収率に起因して、処理の定量的評価のため
にウェル間で同一および十分な数の得られる接着性生存細胞を達成することは技術的に困
難である。さらに、ＮＧＦは分泌タンパク質であるので、細胞内レベルを解明することは
困難である。したがって、骨細胞様細胞の分化培養物の上清へのＮＧＦ分泌の定量的調節
を研究した。
にウェル間で同一および十分な数の得られる接着性生存細胞を達成することは技術的に困
難である。さらに、ＮＧＦは分泌タンパク質であるので、細胞内レベルを解明することは
困難である。したがって、骨細胞様細胞の分化培養物の上清へのＮＧＦ分泌の定量的調節
を研究した。
【0304】
結論として、ＰＰＳはＮＧＦまたはｐｒｏ－ＮＧＦ活性を阻害または減少させる際に使
用され得ることが、本明細書において実証される。さらに、変形性膝関節症を有する患者
における軟骨下骨から単離されたヒト初代骨細胞に対するＰＰＳの効果が本明細書で初め
て実証される。また、必ずしも排他的ではないが、ＫＯＡを含む病的状態における疼痛反
応に骨細胞が関与している、この細胞型によるＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦの産生および分泌の
最初の実証であることが本明細書に開示される。ＰＰＳは、基礎およびＴＮＦαにより誘
導されるレベルのｐｒｏＮＧＦ分泌ならびにＴＮＦαにより誘導されるＮＧＦ ｍＲＮＡ
発現を阻害した。ＰＰＳはまた、コラゲナーゼＭＭＰ－１３のＴＮＦαにより誘導される
レベルを阻害した。まとめると、これは、ＰＰＳが、変形性膝関節症と関連する疼痛を回
復させるために、軟骨下骨におけるＮＧＦおよび可能性がある場合、他の疼痛メディエー
ターの放出を抑制するために複数のレベルで作用し得るという証拠を提供する。
用され得ることが、本明細書において実証される。さらに、変形性膝関節症を有する患者
における軟骨下骨から単離されたヒト初代骨細胞に対するＰＰＳの効果が本明細書で初め
て実証される。また、必ずしも排他的ではないが、ＫＯＡを含む病的状態における疼痛反
応に骨細胞が関与している、この細胞型によるＮＧＦ／ｐｒｏＮＧＦの産生および分泌の
最初の実証であることが本明細書に開示される。ＰＰＳは、基礎およびＴＮＦαにより誘
導されるレベルのｐｒｏＮＧＦ分泌ならびにＴＮＦαにより誘導されるＮＧＦ ｍＲＮＡ
発現を阻害した。ＰＰＳはまた、コラゲナーゼＭＭＰ－１３のＴＮＦαにより誘導される
レベルを阻害した。まとめると、これは、ＰＰＳが、変形性膝関節症と関連する疼痛を回
復させるために、軟骨下骨におけるＮＧＦおよび可能性がある場合、他の疼痛メディエー
ターの放出を抑制するために複数のレベルで作用し得るという証拠を提供する。
【0305】
多数の変形および／または修飾が、本開示の広範な全体的範囲から逸脱せずに、上記の
実施形態に対してなされ得ることは当業者によって理解されるであろう。したがって、本
実施形態は、全ての点において例示的であり、限定的ではないと考えられるべきである。
実施形態に対してなされ得ることは当業者によって理解されるであろう。したがって、本
実施形態は、全ての点において例示的であり、限定的ではないと考えられるべきである。
【0306】
参考文献
【0307】
【表2-1】
【0308】
【表2-2】
【0309】
【表2-3】
【0310】
【表2-4】
【0311】
【表2-5】
【0312】
【表2-6】
【0313】
【表2-7】
【0314】
【表2-8】
【0315】
【表2-9】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【手続補正書】
【提出日】2024-10-18
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
本願明細書に記載された発明。