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▶ リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024178339
(43)【公開日】2024-12-24
(54)【発明の名称】ＰＤ－１に対するヒト抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 14/705 20060101AFI20241217BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241217BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241217BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241217BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241217BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241217BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241217BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20241217BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20241217BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241217BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20241217BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20241217BHJP
A61P 31/20 20060101ALI20241217BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20241217BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20241217BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20241217BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20241217BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20241217BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20241217BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20241217BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20241217BHJP
A61P 1/14 20060101ALI20241217BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20241217BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20241217BHJP
A61P 7/04 20060101ALI20241217BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20241217BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20241217BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20241217BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20241217BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20241217BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20241217BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241217BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20241217BHJP
【ＦＩ】
C07K14/705 ZNA
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K48/00
A61P35/00
A61P31/18
A61P31/14
A61P31/20
A61P1/16
A61P17/14
A61P25/00
A61P37/02
A61P37/06
A61P7/06
A61P29/00
A61P1/04
A61P1/14
A61P1/18
A61P3/10
A61P7/04
A61P17/00
A61P17/04
A61P17/06
A61P19/02
A61P21/04
A61P29/00 101
A61P37/04
A61K39/395 N
A61K39/395 U
A61K45/00
C07K14/705
【審査請求】有
【請求項の数】30
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2024164717
(22)【出願日】2024-09-24
(62)【分割の表示】P 2022123661の分割
【原出願日】2015-01-23
(31)【優先権主張番号】62/014,181
(32)【優先日】2014-06-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】61/930,576
(32)【優先日】2014-01-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】597160510
【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100216105
【弁理士】
【氏名又は名称】守安 智
(72)【発明者】
【氏名】ニコラス・ジェイ・パパドポーロス
(72)【発明者】
【氏名】アンドリュー・ジェイ・マーフィー
(72)【発明者】
【氏名】ギャヴィン・サーストン
(72)【発明者】
【氏名】エラ・イオッフェ
(72)【発明者】
【氏名】エレナ・ブローヴァ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】Ｔ細胞共阻害分子プログラム細胞死１（ＰＤ－１）タンパク質に結合する抗体、およびその使用方法を提供する。
【解決手段】本発明の種々の実施形態において、抗体は、ＰＤ－１に結合する、完全ヒト抗体である。ある種の実施形態において、本発明は、ＰＤ－１に結合する第１の結合特異性、および自己免疫組織抗原、別のＴ細胞共阻害分子、Ｆｃ受容体、またはＴ細胞受容体に結合する第２の結合特異性を含む多特異性抗原結合分子を提供する。ある実施形態において、本発明の抗体は、ＰＤ－１活性の阻害または中和に有用であり、従って、がんもしくは慢性ウイルス感染症のような疾患または障害を処置する手段を提供する。他の実施形態において、抗体は、ＰＤ－１活性の増強または刺激に有用であり、従って、例えば、自己免疫疾患もしくは障害を処置する手段を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明の種々の実施形態において、抗体は、ＰＤ－１に結合する、完全ヒト抗体である。ある種の実施形態において、本発明は、ＰＤ－１に結合する第１の結合特異性、および自己免疫組織抗原、別のＴ細胞共阻害分子、Ｆｃ受容体、またはＴ細胞受容体に結合する第２の結合特異性を含む多特異性抗原結合分子を提供する。ある実施形態において、本発明の抗体は、ＰＤ－１活性の阻害または中和に有用であり、従って、がんもしくは慢性ウイルス感染症のような疾患または障害を処置する手段を提供する。他の実施形態において、抗体は、ＰＤ－１活性の増強または刺激に有用であり、従って、例えば、自己免疫疾患もしくは障害を処置する手段を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトプログラム細胞死１（ＰＤ－１）タンパク質への結合について、表１において挙げられるＨＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）；および表１に挙げられるＬＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む参照抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって：
（ａ）２５℃における競合サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される３ｎＭ未満のＩＣ５０でＰＤ－Ｌ１へのヒトＰＤ－１タンパク質結合を遮断する特性；
（ｂ）３７℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される約５０ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で単量体ヒトＰＤ－１に結合する特性；
（ｃ）２５℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて約１２ｎＭ未満のＫＤで単量体ヒトＰＤ－１に結合する特性；
（ｄ）２５℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて約８．５ｎＭ未満のＫＤで単量体カニクイザルＰＤ－１に結合する特性；
（ｅ）２５℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される約６．３分より長い解離半減期（ｔ１／２）で単量体ヒトＰＤ－１に結合する特性；および
（ｆ）３７℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される約０．９分より長い解離半減期（ｔ１／２）で単量体ヒトＰＤ－１に結合する特性
のうちの１つまたはそれ以上を有する、前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
（ａ）２５℃における競合サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定される３ｎＭ未満のＩＣ５０でＰＤ－Ｌ１へのヒトＰＤ－１タンパク質結合を遮断する特性；
（ｂ）３７℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される約５０ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で単量体ヒトＰＤ－１に結合する特性；
（ｃ）２５℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて約１２ｎＭ未満のＫＤで単量体ヒトＰＤ－１に結合する特性；
（ｄ）２５℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて約８．５ｎＭ未満のＫＤで単量体カニクイザルＰＤ－１に結合する特性；
（ｅ）２５℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される約６．３分より長い解離半減期（ｔ１／２）で単量体ヒトＰＤ－１に結合する特性；および
（ｆ）３７℃における表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される約０．９分より長い解離半減期（ｔ１／２）で単量体ヒトＰＤ－１に結合する特性
のうちの１つまたはそれ以上を有する、前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項2】
参照抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項3】
参照抗体は、配列番号１３０／１３８、１６２／１７０、２３４／２０２、および３１４／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項4】
ヒトＰＤ－１に特異的に結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、表１において挙げられるＨＣＶＲ配列のいずれか１つに含有される３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）；ならびに表１において挙げられるＬＣＶＲ配列のいずれか１つに含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、前記単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項5】
表１において挙げられるＨＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、請求項４に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項6】
表１において挙げられるＬＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項４または５に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項7】
（ａ）表１において挙げられるＨＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ；および（ｂ）表１において挙げられるＬＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項４～６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項8】
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４
８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２０、２２８、２３６、２４４、２５２、２６０、２６８、２７６、２８４、２９２、３００、３０８、および３１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２２２、２３０、２３８、２４６、２５４、２６２、２７０、２７８、２８６、２９４、３０２、３１０、および３１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２２４、２３２、２４０、２４８、２５６、２６４、２７２、２８０、２８８、２９６、３０４、３１２、および３２０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、および２０４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、および２０６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、および２０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２０、２２８、２３６、２４４、２５２、２６０、２６８、２７６、２８４、２９２、３００、３０８、および３１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２２２、２３０、２３８、２４６、２５４、２６２、２７０、２７８、２８６、２９４、３０２、３１０、および３１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２２４、２３２、２４０、２４８、２５６、２６４、２７２、２８０、２８８、２９６、３０４、３１２、および３２０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、および２０４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、および２０６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、および２０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項9】
ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を遮断する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１８、３４、５０、６６、８２、１１４、１３０、１６２、１７８、１９４、２１０、２１８、２２６、２３４、２４２、２５８、２６６、２７４、２８２、２９０、２９８、３０６、および３１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ；ならびに配列番号２６、４２、５８、７４、９０、１２２、１３８、１７０、１８６、および２０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項10】
配列番号１３０／１３８、１６２／１７０、２３４／２０２、および３１４／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項９に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項11】
ヒトＰＤ－１に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、２５℃における競合サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイにより測定される、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を増強する、前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項12】
抗体は、配列番号２、９８、および２５０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ；ならびに配列番号１０、１０６、および２０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む、請求項１１に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項13】
抗体は、配列番号２／１０、９８／１０６、および２５０／２０２からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項１２に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項14】
抗体は多特異性抗原結合分子である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項15】
請求項１～１４のいずれか１項に記載の、ＰＤ－１に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、および薬学的に許容し得る担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項16】
請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項17】
請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項18】
請求項１６または１７に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項19】
請求項１８に記載のベクターを発現する細胞。
【請求項20】
ＰＤ－１に特異的に結合する第１の抗原結合特異性、およびＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２の細胞外ドメイン、またはそのフラグメントを含む第２の抗原結合特異性を含む多特異性抗原結合分子またはその抗原結合フラグメント。
【請求項21】
ＰＤ－１に特異的に結合する第１の抗原結合特異性、およびＴ細胞共阻害分子に特異的に結合する第２の抗原結合特異性を含む多特異性抗原結合分子またはその抗原結合フラグメント。
【請求項22】
第１の抗原結合特異性は、表１において挙げられるＨＣＶＲ配列のいずれか１つに含有される３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）；ならびに表１において挙げられるＬＣＶＲ配列のいずれか１つに含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項２０または２１に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項23】
第１の抗原結合特異性は、表１において挙げられるＨＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ；および表１において挙げられるＬＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項２０～２２のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項24】
第１の抗原結合特異性は、配列番号１３０／１３８、１６２／１７０、２３４／２０２、および３１４／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項２３に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項25】
第２の抗原結合特異性は、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＣＤ２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＴＩＧＩＴ、ＩＣＯＳ、およびＣＤ１６０からなる群より選択されるＴ細胞共阻害分子に特異的に結合する、請求項２１に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項26】
腎細胞癌、結腸直腸がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、大腸がん、非小細胞肺がん、およびメラノーマからなる群より選択されるがんの処置において使用するための、請求項２０～２５のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項27】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）からなる群より選択されるウイルスにより
引き起こされる慢性ウイルス感染症の処置において使用するための、請求項２０～２５のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
引き起こされる慢性ウイルス感染症の処置において使用するための、請求項２０～２５のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項28】
ＰＤ－１に特異的に結合する第１の抗原結合特異性、ならびに自己免疫組織特異的抗原、Ｔ細胞受容体、およびＦｃ受容体からなる群より選択される抗原に特異的に結合する第２の抗原結合特異性を含む多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項29】
第１の抗原結合特異性は、表１において挙げられるＨＣＶＲ配列のいずれか１つに含有される３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）；ならびに表１において挙げられるＬＣＶＲ配列のいずれか１つに含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項２８に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項30】
第１の抗原結合特異性は、表１において挙げられるＨＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ；および表１において挙げられるＬＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項２８または２９に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項31】
第１の抗原結合特異性は、配列番号１３０／１３８、１６２／１７０、２３４／２０２、および３１４／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項３０に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項32】
第１の抗原結合特異性は、ＰＤ－Ｌ１および／もしくはＰＤ－Ｌ２の細胞外ドメイン、またはそのフラグメントを含む、請求項２８に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項33】
第２の抗原結合特異性は、自己免疫組織特異的抗原に特異的に結合する、請求項２８～３２のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項34】
自己免疫組織特異的抗原は、円形脱毛症、自己免疫性肝炎、セリアック病、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、白斑、自己免疫性膵炎、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性血小板減少性紫斑病、クローン病、Ｉ型糖尿病、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、乾癬性関節炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、脈管炎、またはウェゲナー肉芽腫症に関連する、請求項３３に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項35】
第２の抗原結合特異性は、Ｔ細胞受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃγ受容体、またはＣＤ１９のうちの１つに特異的に結合する、請求項２８～３２のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項36】
円形脱毛症、自己免疫性肝炎、セリアック病、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、白斑、自己免疫性膵炎、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性血小板減少性紫斑病、クローン病、Ｉ型糖尿病、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、乾癬性関節炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、脈管炎、およびウェゲナー肉芽腫症からなる群より選択される自己免疫疾患または障害の処置において使用するための、請求項２８～３５のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメント。
【請求項37】
対象において免疫応答を増強する方法であって、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント；または請求項２０～２５のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む前記方法。
【請求項38】
対象においてＴ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞を阻害する方法であって、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合フラグメント；または請求項２０～２５のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む前記方法。
【請求項39】
対象においてＴ細胞活性化を増強する方法であって、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント；または請求項２０～２５のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む前記方法。
【請求項40】
対象は、脳がん、腎細胞癌、卵巣がん、前立腺がん、大腸がん、非小細胞肺がん、頭部および頸部の扁平上皮癌、結腸直腸がん、およびメラノーマからなる群より選択される疾患または障害を有する、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項41】
対象は、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ＨＰＶ、ＬＣＭＶ、およびＳＩＶからなる群より選択されるウイルスにより引き起こされる慢性ウイルス感染症を有する、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項42】
腫瘍または腫瘍細胞の成長を阻害する方法であって、腫瘍または腫瘍細胞を、治療上有効量の請求項１～１３または２０～２５のいずれか１項に記載の抗体と接触させることを含む前記方法。
【請求項43】
対象においてＴ細胞活性化を阻害する方法であって、治療上有効量の、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント；または請求項２８～３５のいずれか１項に記載の多特異性抗原結合分子またはそのフラグメントを投与することを含む前記方法。
【請求項44】
対象は、円形脱毛症、自己免疫性肝炎、セリアック病、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、白斑、自己免疫性膵炎、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性血小板減少性紫斑病、クローン病、Ｉ型糖尿病、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、乾癬性関節炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、脈管炎、およびウェゲナー肉芽腫症からなる群より選択される自己免疫疾患または障害を有する、請求項４３に記載の方法。
【請求項45】
抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または該抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物は、第２の治療剤と併用して対象に投与される、請求項３７～４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項46】
第２の治療剤は、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、異なるＴ細胞共阻害分子に対する抗体、腫瘍特異的抗原に対する抗体、自己免疫組織抗原に対する抗体、ウイルス性に感染した細胞抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体、酸化防止剤のような栄養補助剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、化学療法剤、細胞毒性剤、抗ウイルス薬、放射線、および疾患または障害に関連する少なくとも１つの症状の改善に有用である任意の他の療法からなる
群より選択される、請求項４５に記載の方法。
群より選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項47】
抗体またはその抗原結合フラグメントは、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内投与される、請求項３７～４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項48】
抗体または抗原結合フラグメントは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～体重１ｋｇ当たり約６０ｍｇの用量で投与される、請求項３７～４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項49】
ヒトＰＤ－１への結合について、重鎖および軽鎖を含む参照抗体またはその抗原結合フラグメントと競合し、ここで、該重鎖は、配列番号３３０、３３２、３３４、および３３６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項50】
ヒトＰＤ－１への結合について、重鎖および軽鎖を含む参照抗体またはその抗原結合フラグメントと競合し、ここで、該軽鎖は、配列番号３３１、３３３、３３５、および３３７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項51】
ヒトＰＤ－１への結合について、配列番号３３０／３３１、３３２／３３３、３３４／３３５、および３３６／３３７からなる群より選択される重鎖／軽鎖アミノ酸配列対を含む参照抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、請求項１に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項52】
請求項４９～５１のいずれか１項に記載のＰＤ－１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、および薬学的に許容し得る担体または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項53】
請求項４９～５１のいずれか１項に記載の抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項54】
請求項４９～５１のいずれか１項に記載の抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項55】
請求項５３または５４に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項56】
請求項５５に記載のベクターを発現する細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、免疫調節受容体プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合するヒト抗体およびヒト抗体の抗原結合フラグメントならびにその抗体を用いる治療および診断方法に関する。
【背景技術】
【0002】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）（ＣＤ２７９とも呼ばれる）は、活性化されたＴ細胞およびＢ細胞、ナチュラルキラー細胞、ならびに単球上で発現される２８８個のアミノ酸のタンパク質受容体である。ＰＤ－１は、Ｔ細胞共阻害受容体のＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球抗原）／ＩＣＯＳ（誘導性共刺激分子）ファミリーのメンバーである（非特許文献１）。ＰＤ－１の主要な機能は、免疫応答を減弱させることである（非特許文献２）。ＰＤ－１は、２つのリガンド、ＰＤ－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）およびＰＤ－Ｌ２を有する。ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４、Ｂ７Ｈ１）は、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞、マクロファージ系列細胞、抹消組織、ならびに腫瘍細胞、ウイルス性に感染した細胞、および自己免疫組織細胞のようなリンパ組織上および非リンパ組織上の両方で広く発現する。ＰＤ－Ｌ２（ＣＤ２７３、Ｂ７－ＤＣ）は発現がＰＤ－Ｌ１よりも制限されており、活性化された樹状細胞およびマクロファージ上で発現される（非特許文献３）。ＰＤ－Ｌ１は、メラノーマ、グリオーマ、非小細胞肺がん、頭部および頸部の扁平上皮癌、白血病、膵臓がん、腎細胞癌、ならびに肝細胞癌を含む、大抵のヒトがんにおいて発現され、ほぼ全てのがんタイプにおいて誘導性である（非特許文献４）。ＰＤ－１がそのリガンドに結合すると、がん、ウイルス感染症、および自己免疫疾患のような疾患において、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン分泌が低減され、体液性および細胞性免疫応答が損なわれる。免疫抑制を逆転させるためのＰＤ－１結合の遮断は、自己免疫、ウイルスおよび腫瘍免疫療法において研究されている（非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７）。
【0003】
Ｔ細胞共刺激および共阻害分子（共シグナル伝達分子とまとめて命名される）は、Ｔ細胞活性化、サブセット分化、エフェクター機能および生存の制御において重大な役割を果たす（非特許文献１）。Ｔ細胞受容体による抗原提示細胞上の同族ペプチド－ＭＨＣ複合体の認識後、共シグナル伝達受容体は、免疫シナプスにおいてＴ細胞受容体と共存し、ここで、ＴＣＲシグナル伝達と協力して、Ｔ細胞活性化および機能を促進するか、または阻害する（非特許文献８）。最終免疫応答は、共刺激シグナルと共阻害シグナルの間のバランス（「免疫チェックポイント」）により制御される（非特許文献９）。ＰＤ－１は、抹消Ｔ細胞寛容の仲介および自己免疫の回避において１つのかかる「免疫チェックポイント」として機能する。ＰＤ－１は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に結合し、Ｔ細胞活性化を阻害する。Ｔ細胞活性化を阻害するＰＤ１の能力は、免疫応答を逃れるために慢性ウイルス感染症および腫瘍により利用される。慢性ウイルス感染症において、ＰＤ－１はウイルス特異的Ｔ細胞上で高度に発現され、これらのＴ細胞は「疲弊」し、エフェクター機能および増殖能が喪失する（非特許文献１０）。ＰＤ－Ｌ１は広範囲の腫瘍上で発現され、動物モデルにおける研究は、腫瘍上のＰＤ－Ｌ１が、Ｔ細胞活性化および腫瘍細胞の溶解を阻害し、腫瘍特異的Ｔ細胞の死の増大を導くことを示した。ＰＤ－１：ＰＤ－Ｌ１システムはまた、誘導されたＴ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞発生において、およびＴｒｅｇ機能の維持において重要な役割を果たす（非特許文献１１）。
【0004】
ＰＤ－１は、自己免疫、腫瘍免疫、および感染免疫において重要な役割を果たすので、免疫療法の理想的な標的である。モノクローナル抗体を含む、アンタゴニストでのＰＤ－１の遮断は、がんおよび慢性ウイルス感染症の処置において研究されている（非特許文献１２）。
【0005】
ＰＤ－１に対するモノクローナル抗体は、当該技術分野で公知であり、例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５において、ならびに特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１および特許文献１２において記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】米国特許第８００８４４９号
【特許文献2】米国特許第８１６８７５７号
【特許文献3】米国特許出願公開第２０１１０００８３６９号
【特許文献4】米国特許出願公開第２０１３００１７１９９号
【特許文献5】米国特許出願公開第２０１３００２２５９５号
【特許文献6】ＷＯ２００６１２１１６８
【特許文献7】ＷＯ２００９１１５４３３５
【特許文献8】ＷＯ２０１２１４５４９３
【特許文献9】ＷＯ２０１３０１４６６８
【特許文献10】ＷＯ２００９１０１６１１
【特許文献11】ＥＰ２２６２８３７
【特許文献12】ＥＰ２５０４０２８
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｃｈｅｎら２０１３年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：２２７～２４２頁
【非特許文献2】Ｒｉｌｅｙ２００９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９：１１４～１２５頁
【非特許文献3】Ｄｏｎｇら１９９９年、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．
【非特許文献4】ＺｏｕおよびＣｈｅｎ２００８年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：４６７～７７頁
【非特許文献5】Ｒｉｂａｓ２０１２年、ＮＥＪＭ３６６：２５１７～２５１９頁
【非特許文献6】Ｗａｔａｎａｂｅら２０１２年、Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２巻、論文ＩＤ：２６９７５６
【非特許文献7】Ｗａｎｇら２０１３年、Ｊ．Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐ．２０：２７～３９頁
【非特許文献8】Ｆｌｉｅｓら２０１１年、Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．８４：４０９～４２１頁
【非特許文献9】Ｐａｒｄｏｌｌ２０１２年、Ｎａｔｕｒｅ１２：２５２～２６４頁
【非特許文献10】Ｆｒｅｅｍａｎ２００８年、ＰＮＡＳ１０５：１０２７５～１０２７６頁
【非特許文献11】Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら２０１０年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２３６：２１９～２４２頁
【非特許文献12】Ｓｈｅｒｉｄａｎ２０１２年、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３０：７２９～７３０頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明は、ＰＤ－１に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。本発明の抗体は、とりわけ、ＰＤ－１を発現するＴ細胞を標的化するのに、およびＰＤ－１活性を調節するのに有用である。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、ＰＤ－１活性を阻害もしくは中和するのに、および／または例えば、Ｔ細胞により仲介される殺傷が
有益であるか、もしくは望ましい状況下で、Ｔ細胞活性化を刺激するのに有用である。代わりの実施形態において、抗体は、ＰＤ－１結合および／または活性を増強し、Ｔ細胞活性化を阻害するために用いられる。本発明の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合部分は、例えば、免疫応答を調節するため、および／または腫瘍細胞、自己免疫組織細胞、もしくはウイルス性に感染した細胞のような特定の細胞タイプに抗体を標的化するための多特異性抗原結合分子の部分として含まれる。抗体は、がん、ウイルス感染症、および自己免疫疾患のような疾患または障害の処置において有用である。
有益であるか、もしくは望ましい状況下で、Ｔ細胞活性化を刺激するのに有用である。代わりの実施形態において、抗体は、ＰＤ－１結合および／または活性を増強し、Ｔ細胞活性化を阻害するために用いられる。本発明の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合部分は、例えば、免疫応答を調節するため、および／または腫瘍細胞、自己免疫組織細胞、もしくはウイルス性に感染した細胞のような特定の細胞タイプに抗体を標的化するための多特異性抗原結合分子の部分として含まれる。抗体は、がん、ウイルス感染症、および自己免疫疾患のような疾患または障害の処置において有用である。
【0009】
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）であるか、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、もしくはｓｃＦｖフラグメント）のみを含み、機能性に影響するように、例えば、残りのエフェクター機能を除去するように修飾される（Ｒｅｄｄｙら、２０００年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５～１９３３頁）。ある種の実施形態において、抗体は二重特異性である。
【0010】
第１の態様において、本発明は、ＰＤ－１に特異的に結合する、単離された組み換えモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、抗体は完全にヒトである。本発明の典型的な抗ＰＤ－１抗体を、本明細書における表１～３に挙げる。表１に、典型的な抗ＰＤ－１抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別名を記載する。表２に、典型的な抗ＰＤ－１抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の核酸配列識別名を記載する。表３に、典型的な抗ＰＤ－１抗体の重鎖および軽鎖配列のアミノ酸配列識別名を記載する。
【0011】
本発明は、表１に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【0012】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0013】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかと対形成される表１に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含む、ＨＣＶＲとＬＣＶＲアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。ある種の実施形態によると、本発明は、表１に挙げられる典型的な抗ＰＤ－１抗体のいずれかに含有されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２０２、２１８／２０２、２２６／２０２、２３４／２０２、２４２／２０２、２５０／２０２、２５８／２０２、２６６／２０２、２７４／２０２、２８２／２０２、２９０／２０２、２９８／１８６、３０６／１８６、および３１４／１８６からなる群より選択される。ある種の実施形態において、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号１３０／１３８（例えば、Ｈ２Ｍ７７９５Ｎ）、１６２／１７０（例えば、Ｈ２Ｍ７７９８Ｎ）、２３４／２０２（例えば、Ｈ４ｘＨ９０４８Ｐ）、または３１４／１８６（例えば、Ｈ４ｘＨ９００８Ｐ）の１つから選択される。
【0014】
本発明はまた、表１に挙げられるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0015】
本発明はまた、表１に挙げられるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0016】
本発明はまた、表１に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0017】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0018】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0019】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0020】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかと対形成される表１に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含む、ＨＣＤＲ３とＬＣＤＲ３アミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。ある種の実施形態によると、本発明は、表１に挙げられる典型的な抗ＰＤ－１抗体のいずれかに含有されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は、配列番号１３６／１４４（例えば、Ｈ２Ｍ７７９５Ｎ）、１６８／１７６（例えば、Ｈ２Ｍ７７９８Ｎ）、２４０／２０８（例えば、Ｈ４ｘＨ９０４８Ｐ）、および３２０／１９２（例えば、Ｈ４ｘＨ９００８Ｐ）からなる群より選択される。
【0021】
本発明は、表３に挙げられるＨＣアミノ酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【0022】
本発明はまた、表３に挙げられるＬＣアミノ酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
【0023】
本発明はまた、表３に挙げられるＬＣアミノ酸配列のいずれかと対形成される表３に挙げられるＨＣアミノ酸配列のいずれかを含む、ＨＣとＬＣアミノ酸配列対（ＨＣ／ＬＣ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。ある種の実施形態によると、本発明は、表３に挙げられる典型的な抗ＰＤ－１抗体のいずれかに含有されるＨＣ／ＬＣアミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、ＨＣ／ＬＣアミノ酸配列対は、配列番号３３０／３３１、３３２／３３３、３３４／３３５、および３３６／３３７からなる群より選択される。
【0024】
本発明はまた、表１に挙げられる典型的な抗ＰＤ－１抗体のいずれかに含有される６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。ある種の実施形態において、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、配列番号１３２－１３４－１３６－１４０－１４２－１４４（例えば、Ｈ２Ｍ７７９５Ｎ）；１６４－１６６－１６８－１７２－１７４－１７６（例えば、Ｈ２Ｍ７７９８Ｎ）；２３６－２３８－２４０－２０４－２０６－２０８（例えば、Ｈ４ｘＨ９０４８Ｐ）；および３１６－３１８－３２０－１８８－１９０－１９２（例えば、Ｈ４ｘＨ９００８Ｐ）からなる群より選択される。
【0025】
関連する実施形態において、本発明は、表１に挙げられる典型的な抗ＰＤ－１抗体のいずれかにより定義される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有される６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。例えば、本発明は、配列番号１３０／１３８（例えば、Ｈ２Ｍ７７９５Ｎ）；１６２／１７０（例えば、Ｈ２Ｍ７７９８Ｎ）；２３４／２０２（例えば、Ｈ４ｘＨ９０４８Ｐ）；および３１４／１８６（例えば、Ｈ４ｘＨ９００８Ｐ）からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットを含む抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定する方法および技術は、当該技術分野において周知であり、これを用いて、本明細書において開示される特定されたＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定することができる。ＣＤＲの境界を同定するために用いられる典型的な慣例は、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義を含む。一般的な用語において、Ｋａｂａｔ定義は配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造上のループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａのアプローチの間で妥協したものである。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７～９４８頁（１９９７年）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：９２６８～９２７２（１９８９年）を参照。公的データベースも、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７～９４８頁（１９９７年）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：９２６８～９２７２（１９８９年）を参照。公的データベースも、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
【0026】
本発明は、修飾されたグリコシル化パターンを有する抗ＰＤ－１抗体を含む。ある実施形態において、不所望なグリコシル化部位を取り除くための修飾が有用であるか、またはフコース部分を欠く抗体は、オリゴ糖鎖上に提示して、例えば、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）機能が増大される（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２年）ＪＢＣ２７７：２６７３３頁を参照）。他の適用において、ガラクトシル化という修飾は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を修飾するために成される。
【0027】
本発明はまた、ＰＤ－１への特異的結合について、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲの
ＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗体ならびにその抗原結合フラグメントも提供し、ここで、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲそれぞれは、表１に挙げられるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
ＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗体ならびにその抗原結合フラグメントも提供し、ここで、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲそれぞれは、表１に挙げられるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
【0028】
本発明はまた、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２へのＰＤ－１結合を遮断する単離された抗体およびその抗原結合フラグメントも提供する。ある実施形態において、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を遮断する抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＰＤ－Ｌ１と同一のＰＤ－１上のエピトープに結合するか、もしくはＰＤ－Ｌ１と異なるＰＤ－１上のエピトープに結合する。
【0029】
代わりの実施形態において、本発明は、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を刺激する抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、本発明は、ＰＤ－１に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を増強する。ある実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２、９８、および２５０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ、ならびに配列番号１０、１０６、および２０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む。ある実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２／１０（例えば、Ｈ１Ｍ７７８９Ｎ）、９８／１０６（例えば、Ｈ２Ｍ７７９１Ｎ）、および２５０／２０２（例えば、Ｈ４Ｈ９０６８Ｐ２）からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
【0030】
本発明はまた、ヒトまたは他の種由来のＰＤ－１に特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントも提供する。ある種の実施形態において、抗体は、ヒトＰＤ－１に、および／またはカニクイザルＰＤ－１に結合する。
【0031】
本発明はまた、ＰＤ－１への結合について、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗体またはその抗原結合フラグメントと交差競合する抗体ならびにその抗原結合フラグメントも提供し、ここで、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲそれぞれは、表１に挙げられるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
【0032】
１つの実施形態において、本発明は、次の特徴のうちの１つまたはそれ以上を有する、単離された抗体または抗原結合フラグメントを提供する：（ａ）ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２へのＰＤ－１の結合を遮断する；（ｂ）ヒトＰＤ－１および／またはカニクイザルＰＤ－１に特異的に結合する；（ｃ）ＰＤ－１により誘導されるＴ細胞下方制御を遮断し、Ｔ細胞シグナル伝達をレスキューする；（ｄ）腫瘍成長を抑制し、大腸がんを有する対象において生存を増大させる；（ｅ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を阻害する；ならびに（ｆ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２および／またはインターフェロン－ガンマ分泌を増大する。
【0033】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、アゴニスト方法においてＰＤ－１に特異的に結合する、すなわち、ＰＤ－１結合および／もしくは活性を増強するか、または刺激し；他の実施形態において、抗体は、アンタゴニスト方法においてＰＤ－１に特異的に結合する、すなわち、ＰＤ－１をそのリガンドへの結合から遮断する。
【0034】
ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、ＰＤ－１への第１の結合特異性、および第２の標的エピトープについての第２の結合特異性を含む、二重特異性である。第２の標的エピトープは、ＰＤ－１上または異なるタンパク質上の別のエピトープである。ある種の実施形態において、標的エピトープは、異なるＴ細胞、Ｂ細胞、腫瘍細胞、自己免疫組織細胞、またはウイルス性に感染した細胞を含む異なる細胞
上にある。
上にある。
【0035】
第２の態様において、本発明は、抗ＰＤ－１抗体またはその部分をコードする核酸分子を提供する。例えば、本発明は、表１に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＶＲ核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0036】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＬＣＶＲ核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0037】
本発明はまた、表１に挙げられるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＤＲ１核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0038】
本発明はまた、表１に挙げられるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＤＲ２核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0039】
本発明はまた、表１に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＤＲ３核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0040】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＬＣＤＲ１核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0041】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＬＣＤＲ２核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0042】
本発明はまた、表１に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し；ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＬＣＤＲ３核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【0043】
本発明はまた、ＨＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、ここで、ＨＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３）を含み、ここで、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、表１に挙げられる典型的な抗ＰＤ－１抗体のいずれかにより定義される通りである。
【0044】
本発明はまた、ＬＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、ここで、ＬＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含み、ここで、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、表１に挙げられる典型的な抗ＰＤ－１抗体のいずれかにより定義される通りである。
【0045】
本発明はまた、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ両方をコードする核酸分子も提供し、ここで、ＨＣＶＲは、表１に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、ここで、ＬＣＶＲは、表１に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む。ある種の実施形態において、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＶＲ核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列、および表２に挙げられるＬＣＶＲ核酸配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。本発明のこの態様によるある種の実施形態において、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ここで、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはいずれも、表１に挙げられる同一の抗ＰＤ－１抗体に由来する。
【0046】
本発明は、表３に挙げられる重鎖アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供する。本発明はまた、表３に挙げられる軽鎖アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。
【0047】
本発明はまた、重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）両方をコードする核酸分子も提供し、ここで、ＨＣは、表３に挙げられるＨＣアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、ここで、ＬＣは、表３に挙げられるＬＣアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む。
【0048】
関連する態様において、本発明は、抗ＰＤ－１抗体の重鎖または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現する能力を有する組み換え発現ベクターを提供する。例えば、本発明は、上述の核酸分子、すなわち、表１に記載のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組み換え発現ベクターを含む。本発明はまた、抗ＰＤ－１抗体の重鎖または軽鎖を含むポリペプチドを発現する能力がある組み換え発現ベクターも提供する。例えば、本発明は、上述の核酸分子、すなわち、表３に記載の重鎖または軽鎖配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組み換え発現ベクターを含む。かかるベクターが導入される宿主細胞、ならびに抗体もしくは抗体フラグメントの産生が可能となる条件下で宿主細胞を培養すること、ならびに産生される抗体および抗体フラグメントを回収することにより、抗体またはその部分を産生する方法もまた、本発明の範囲に含まれる。
【0049】
第３の態様において、本発明は、ＰＤ－１に特異的に結合する第１の抗原結合特異性、ならびに腫瘍細胞特異的細胞、自己免疫組織特異的抗原、感染した細胞特異的抗原、Ｔ細胞共阻害分子、Ｔ細胞受容体、Ｆｃ受容体、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－１からなる群より選択される抗原に特異的に結合する第２の抗原結合特異性を含む多特異性抗原結合分子、およびその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、第１の抗原結合特異性は、表１におけるＨＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲに
由来する３つのＣＤＲ、および表１におけるＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲに由来する３つのＣＤＲを含む。１つの実施形態において、第１の抗原結合特異性は、ＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインを含む。第２の抗原結合特異性は、ＰＤ－１と同一の細胞上、または同一の組織タイプもしくは異なる組織タイプの異なる細胞上の抗原を標的とする。例えば、多特異性抗原結合分子はＴ細胞に結合し、ここで、第１の抗原結合特異性は、ＰＤ－１に特異的に結合し、第２の抗原結合特異性は、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体に結合する。あるいは、別の実施形態において、第１の抗原結合特異性は、Ｔ細胞上のＰＤ－１に特異的に結合し、第２の抗原結合特異性は、Ｂ細胞、またはマクロファージ、または抗原提示細胞上の抗原／受容体に標的化される。ある種の実施形態において、第２の抗原結合特異性は、自己免疫組織に関連する（associated with）抗原に対するもの
である。１つの実施形態において、第１の抗原結合特異性は、ＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインを含み、第２の抗原結合特異性は、ＰＤ－１上の別のエピトープに結合する。ある種の実施形態において、第１の抗原結合特異性は、より低い親和性で、例えば、１０－７Ｍより大きい、１０－６Ｍより大きい、１０－５Ｍより大きい、または１０－４Ｍより大きいＫＤでＰＤ－１に結合する。
由来する３つのＣＤＲ、および表１におけるＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲに由来する３つのＣＤＲを含む。１つの実施形態において、第１の抗原結合特異性は、ＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインを含む。第２の抗原結合特異性は、ＰＤ－１と同一の細胞上、または同一の組織タイプもしくは異なる組織タイプの異なる細胞上の抗原を標的とする。例えば、多特異性抗原結合分子はＴ細胞に結合し、ここで、第１の抗原結合特異性は、ＰＤ－１に特異的に結合し、第２の抗原結合特異性は、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体に結合する。あるいは、別の実施形態において、第１の抗原結合特異性は、Ｔ細胞上のＰＤ－１に特異的に結合し、第２の抗原結合特異性は、Ｂ細胞、またはマクロファージ、または抗原提示細胞上の抗原／受容体に標的化される。ある種の実施形態において、第２の抗原結合特異性は、自己免疫組織に関連する（associated with）抗原に対するもの
である。１つの実施形態において、第１の抗原結合特異性は、ＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインを含み、第２の抗原結合特異性は、ＰＤ－１上の別のエピトープに結合する。ある種の実施形態において、第１の抗原結合特異性は、より低い親和性で、例えば、１０－７Ｍより大きい、１０－６Ｍより大きい、１０－５Ｍより大きい、または１０－４Ｍより大きいＫＤでＰＤ－１に結合する。
【0050】
第４の態様において、本発明は、ＰＤ－１に特異的に結合する組み換えヒト抗体またはそのフラグメント、および薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物を提供する。関連する態様において、本発明は、抗ＰＤ－１抗体および第２の治療剤の併用である、組成物を特徴付ける。１つの実施形態において、第２の治療剤は、抗ＰＤ－１抗体と有利に併用される任意の剤である。抗ＰＤ－１抗体と有利に併用される典型的な剤は、ＰＤ－１に結合し、および／もしくはＰＤ－１シグナル伝達を調節する他の剤（他の抗体またはその抗原結合フラグメントなどを含む）、ならびに／またはＰＤ－１を直接的に結合しないが、それにもかかわらず、免疫細胞活性化を調節する剤を含むが、これらに限定されない。本発明の抗ＰＤ－１抗体を含む、さらなる併用療法および同時製剤は、本明細書において他の場所で開示される。
【0051】
第５の態様において、本発明は、治療上有効量の本発明の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントを、それを必要とする対象に投与することを含む、対象において免疫応答を調節する方法を提供する。ある種の実施形態において、本発明は、対象に、有効量の、ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を遮断する本発明の抗体またはそのフラグメントを投与することを含む、対象において免疫応答を増強する方法を提供する。１つの実施形態において、本発明は、対象においてＴ細胞刺激を刺激するか、または増強する方法を提供する。１つの実施形態において、本発明は、治療上有効量の本発明の遮断抗体またはその抗原結合フラグメントを、それを必要とする対象に投与することを含む、対象においてＴ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞を阻害する方法を提供する。ある種の実施形態において、それを必要とする対象は、がんもしくはウイルス感染症のような疾患または障害に罹患する。代わりの実施形態において、本発明は、治療上有効量の本発明の活性化抗体もしくはそのフラグメントを、それを必要とする対象に投与することを含む、対象においてＴ細胞活性化を阻害するか、または抑制する方法を提供する。１つの実施形態において、対象は、自己免疫疾患または障害に罹患する。
【0052】
第６の態様において、本発明は、本発明の抗ＰＤ－１抗体もしくは抗体の抗原結合部分を用いた、対象においてがん、自己免疫疾患、もしくはウイルス感染症のような疾患または障害を処置する治療方法を提供し、ここで、治療方法は、治療上有効量の本発明の抗体もしくは抗体のフラグメントを含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。処置される障害は、ＰＤ－１活性もしくはシグナル伝達の刺激もしくは阻害により、好転されるか、改善されるか、阻害されるか、もしくは予防される任意の疾患または状態である。ある種の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、第２の治療剤との併用でそれを必要とする対象に投与される。第２の治療剤は、別の
Ｔ細胞共阻害分子に対する抗体、腫瘍細胞抗原に対する抗体、Ｔ細胞受容体に対する抗体、Ｆｃ受容体に対する抗体、ウイルス性に感染した細胞上のエピトープに対する抗体、自己免疫組織抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体、細胞毒性剤、抗がん薬、抗ウイルス薬、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド）、化学療法剤、放射線療法、免疫抑制剤、および当該技術分野において公知の任意の他の薬物または療法からなる群より選択される。ある種の実施形態において、第２の治療剤は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントに関連する何らかの副作用が生じるようなら、かかる潜在的副作用に対抗するか、または低減するのを助ける剤である。
Ｔ細胞共阻害分子に対する抗体、腫瘍細胞抗原に対する抗体、Ｔ細胞受容体に対する抗体、Ｆｃ受容体に対する抗体、ウイルス性に感染した細胞上のエピトープに対する抗体、自己免疫組織抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体、細胞毒性剤、抗がん薬、抗ウイルス薬、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド）、化学療法剤、放射線療法、免疫抑制剤、および当該技術分野において公知の任意の他の薬物または療法からなる群より選択される。ある種の実施形態において、第２の治療剤は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメントに関連する何らかの副作用が生じるようなら、かかる潜在的副作用に対抗するか、または低減するのを助ける剤である。
【0053】
ある種の実施形態において、本発明は、腫瘍成長を抑制する方法を提供する。ある種の実施形態において、本発明は、がん患者の生存を増強する方法を提供する。がんの例は、脳がん（例えば、多形神経膠芽腫）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、頭部および頸部の扁平上皮癌、腎細胞癌、メラノーマ、多発性骨髄腫、前立腺がん、ならびに大腸がんを含む原発性ならびに／または再発性がんを含むが、これらに限定されない。方法は、治療上有効量の本発明の抗ＰＤ－１抗体を含む医薬組成物を、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト、ベバシズマブ）、アンジオポエチン２（Ａｎｇ２）阻害剤（例えば、ネスバクマブのような抗Ａｎｇ２抗体）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）阻害剤、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）阻害剤（例えば、イピリムマブ）、化学療法剤、および放射線療法からなる群より選択される第２の治療剤との併用で投与することを含む。がんの処置において用いるための本発明の抗ＰＤ－１抗体との併用で用いられるさらなる療法／治療剤のさらなる例は、本明細書において他の場所で記載される。
【0054】
抗体またはそのフラグメントは、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内投与される。抗体またはそのフラグメントは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇの用量で投与される。
【0055】
本発明はまた、ＰＤ－１結合および／もしくはシグナル伝達の遮断もしくは増強から恩恵を受ける疾患もしくは障害を処置するための医薬の製造における本発明の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントの使用も含む。
【0056】
他の実施形態は、次の詳細な説明の記載から明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【0057】
【図1-1】本明細書における実施例８において記載されるルシフェラーゼベースのＰＤ－１バイオアッセイの模式図である。パネルＡ：不活性なジャーカット細胞；パネルＢ：ジャーカット細胞は、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体を通じたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）クラスター形成により活性化される；パネルＣ：ＰＤ－１活性化は、活性化ジャーカット細胞において応答を減弱する；パネルＤ：遮断ＰＤ－１は、活性化ジャーカット細胞において応答をレスキューする。
【図2】０日において結腸－２６腫瘍細胞を移植され、３、６、１０、１３、および１９日における注射により、示した分子の組み合わせで処置されたマウスについての腫瘍成長および生存結果を説明する図である（「早期処置腫瘍モデル」）。グラフは、移植後種々の時間点において、異なる実験群についての腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。Ｘ軸に沿った上向きの矢印は、処置注射のタイミングを示す。本明細書において他の場所で記載される通り、「ｍＩｇＧ２ａ」はＩｇＧ２アイソタイプ対照であり；「Ｆｃ」はヒトＦｃ対照であり；「ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ」はアフリベルセプトであり；「抗ＰＤ－１」は、抗マウスＰＤ－１クローンＲＰＭＩ－１４であり；「抗ＰＤ－Ｌ１」は抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体である。
【図3】０日において結腸－２６腫瘍細胞を移植され、３、６、１０、１３、および１９日における注射により、示した分子の組み合わせで処置されたマウスについての腫瘍成長および生存結果を説明する図である（「早期処置腫瘍モデル」）。グラフは、移植の２８日後において、それぞれの実験群における個々のマウス腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。本明細書において他の場所で記載される通り、「ｍＩｇＧ２ａ」はＩｇＧ２アイソタイプ対照であり；「Ｆｃ」はヒトＦｃ対照であり；「ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ」はアフリベルセプトであり；「抗ＰＤ－１」は抗マウスＰＤ－１クローンＲＰＭＩ－１４であり；「抗ＰＤ－Ｌ１」は抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体である。
【発明を実施するための形態】
【0058】
本方法が記載される前に、本発明は、記載される特定の方法および実験条件に制限されず、方法および条件自体が変動することは理解されるべきである。本明細書において用いられる専門用語は、特定の実施形態を記載する目的のためのみであることも理解されるべきであり、本発明の範囲は、添付の請求項によってのみ制限されるので、制限であることは意図されない。
【0059】
別段定義されない限り、本明細書において用いられる全ての技術および科学用語は、本発明が属する当業者により一般的に理解されるのと同一の意味を有する。本明細書において記載されるものと類似または均等な任意の方法および材料は、本発明の実施または試験において用いられるが、好ましい方法および材料がここで記載される。本明細書において述べられる全ての刊行物は、全体として参照によって本明細書に組み入れられる。
【0060】
用語「ＰＤ－１」は、ＣＤ２７９としても公知の、プログラム細胞死１タンパク質、Ｔ細胞共阻害分子を指す。全長ＰＤ－１のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋにおいて受託番号ＮＰ＿００５００９．２として提供され、本明細書において配列番号３２７としても言及される。用語「ＰＤ－１」はまた、配列番号３２１、３２２、３２３、または３２４のアミノ酸配列を有するＰＤ－１のタンパク質変異体も含む。用語「ＰＤ－１」は、組み換えＰＤ－１またはそのフラグメントを含む。用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトＦｃ、もしくはＲＯＲ１のようなシグナル配列に結合したＰＤ－１またはそのフラグメントも包含する。例えば、用語は、Ｃ９３Ｓ変更を有する全長ＰＤ－１のアミノ酸残基２５～１７０に結合した、Ｃ末端におけるマウスＦｃ（ｍＩｇＧ２ａ）もしくはヒトＦｃ（ｈＩｇＧ１）を含む、配列番号３２３または３２４により例示される配列を含む。配列番号３２１により例示されるタンパク質変異体は、全長ＰＤ－１のアミノ酸残基２５～１７０に結合した、Ｃ末端におけるヒスチジンタグを含む。非ヒト種由来であると特定されない限り、用語「ＰＤ－１」はヒトＰＤ－１を意味する。
【0061】
ＰＤ－１は、Ｔ細胞共阻害分子のＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４／ＩＣＯＳファミリーのメンバーである。ＰＤ－１は、ＩｇＶ様の細胞外Ｎ末端ドメイン、膜貫通型ドメイン、ならびに免疫受容体チロシンベースの阻害性（ＩＴＩＭ）モチーフ、および免疫受容体チロシンベースのスイッチ（ＩＴＳＭ）モチーフを含有する細胞内ドメインを有する２８８個のアミノ酸のタンパク質である（Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙら２００９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．）。ＰＤ－１受容体は、２つのリガンド、ＰＤ－リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）およびＰＤ－Ｌ２を有する。
【0062】
用語「ＰＤ－Ｌ１」は、ＣＤ２７４およびＢ７Ｈ１としても公知の、ＰＤ－１受容体のリガンドを指す。全長ＰＤ－Ｌ１のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋにおいて受託番号ＮＰ＿０５４８６２．１として提供され、本明細書において配列番号３２８としても言及される。用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトＦｃ、もしくはＲＯＲ１のようなシグナル配列に結合したＰＤ－Ｌ１またはそのフラグメントも包含する。例えば、用語は、全長ＰＤ－Ｌ１のアミノ酸残基１９～２３９に結合した、Ｃ末端におけるマ
ウスＦｃ（ｍＩｇＧ２ａ）もしくはヒトＦｃ（ｈＩｇＧ１）を含む、配列番号３２５または３２６により例示される配列を含む。ＰＤ－Ｌ１は、細胞外ＩｇＶ様ドメイン、膜貫通型ドメイン、およびおよそ３０個のアミノ酸の高度に保存された細胞内ドメインを有する２９０個のアミノ酸のタンパク質である。ＰＤ－Ｌ１は、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、およびＢ細胞）のような多くの細胞上、ならびに造血細胞および非造血細胞（例えば、血管内皮細胞、膵島、および免疫特権の部位）上で構成的に発現される。ＰＤ－Ｌ１はまた、広範囲の腫瘍、ウイルス性に感染した細胞、および自己免疫組織上でも発現され、免疫抑制環境の成分である（Ｒｉｂａｓ２０１２年、ＮＥＪＭ３６６：２５１７～２５１９頁）。
ウスＦｃ（ｍＩｇＧ２ａ）もしくはヒトＦｃ（ｈＩｇＧ１）を含む、配列番号３２５または３２６により例示される配列を含む。ＰＤ－Ｌ１は、細胞外ＩｇＶ様ドメイン、膜貫通型ドメイン、およびおよそ３０個のアミノ酸の高度に保存された細胞内ドメインを有する２９０個のアミノ酸のタンパク質である。ＰＤ－Ｌ１は、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、およびＢ細胞）のような多くの細胞上、ならびに造血細胞および非造血細胞（例えば、血管内皮細胞、膵島、および免疫特権の部位）上で構成的に発現される。ＰＤ－Ｌ１はまた、広範囲の腫瘍、ウイルス性に感染した細胞、および自己免疫組織上でも発現され、免疫抑制環境の成分である（Ｒｉｂａｓ２０１２年、ＮＥＪＭ３６６：２５１７～２５１９頁）。
【0063】
本明細書において用いられる用語「Ｔ細胞共阻害分子」は、Ｔ細胞活性化もしくは抑制を介して免疫応答を調節するリガンドおよび／または受容体を指す。Ｔ細胞共シグナル伝達分子としても公知の、用語「Ｔ細胞共阻害分子」は、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ－３、ＣＤ２２３としても公知）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチン３（ＴＩＭ３）、免疫グロブリンおよびＩＴＩＭ（ＴＩＧＩＴ；ＶＳＩＧ９としても公知）を有するＴ細胞免疫受容体、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１；ＣＤ３０５としても公知）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８としても公知）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制分子（ＶＩＳＴＡ）、ならびにＣＤ１６０を含むが、これらに限定されない。
【0064】
本明細書において用いられる用語「Ｆｃ受容体」は、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好塩基球、好中球、および肥満細胞を含む免疫細胞上で見られる表面受容体タンパク質を指し、抗体のＦｃ領域に対する結合特異性を有する。用語「Ｆｃ受容体」は、Ｆｃγ受容体［例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、およびＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）］、Ｆｃα受容体（例えば、ＦｃαＲＩまたはＣＤ８９）、ならびにＦｃε受容体［例えば、ＦｃεＲＩ、およびＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）］を含むが、これらに限定されない。
【0065】
本明細書において用いられる用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、ジスルフィド結合により相互結合された２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合フラグメントを指すことが意図される。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）、ならびに重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む）を含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）、および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存される領域が散在した相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、高頻度可変性の領域にさらに細分される。それぞれのＶＨならびにＶＬは、次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端まで配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。本発明のある種の実施形態において、抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であるか、または天然または人工的に修飾される。アミノ酸連続配列は、２つまたはそれ以上のＣＤＲの隣り合った解析に基づき定義される。
【0066】
１つもしくはそれ以上のＣＤＲ残基の置換、または１つもしくはそれ以上のＣＤＲの除外も可能である。１つまたは２つのＣＤＲを省いても結合する抗体が、科学文献において記載されている。Ｐａｄｌａｎら（１９９５年ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３～１３９頁）は、公開された結晶構造に基づき、抗体とその抗原の間の接触領域を解析し、ＣＤＲ残基の約５分の１～３分の１のみが抗原と実際に接触すると結論付けた。Ｐａｄｌａｎはまた
、１つまたは２つのＣＤＲが、抗原と接触したアミノ酸を有していない、多くの抗体を見出した（Ｖａｊｄｏｓら２００２年Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ３２０：４１５～４２８頁も参照）。
、１つまたは２つのＣＤＲが、抗原と接触したアミノ酸を有していない、多くの抗体を見出した（Ｖａｊｄｏｓら２００２年Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ３２０：４１５～４２８頁も参照）。
【0067】
抗原と接触しないＣＤＲ残基は、従前の研究（例えば、ＣＤＲＨ２における残基Ｈ６０～Ｈ６５はしばしば必要とされない）において、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔＣＤＲの領域から、分子モデリングにより、および／または実験的に同定される。ＣＤＲまたはその残基が除外されるなら、それは、別のヒト抗体配列または共通のかかる配列における対応する位置を占めるアミノ酸で通常置換される。置換するためのＣＤＲおよびアミノ酸内の置換のための位置はまた、実験的に選択される。実験的置換は、保存的または非保存的置換である。
【0068】
本明細書において開示される完全ヒト抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域における１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠損を含む。かかる変異は、本明細書において開示されるアミノ酸配列を、例えば、公開抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することにより、容易に確かめられる。本発明は、本明細書において開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合フラグメントを含み、ここで、１つもしくはそれ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１個またはそれ以上のアミノ酸は、抗体が由来する生殖系列配列の対応する残基に、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基に、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に変異される（かかる配列変更は、本明細書において「生殖系列変異」としてまとめて言及される）。当業者は、本明細書において開示される重鎖および軽鎖可変領域配列から出発して、１つもしくはそれ以上の個々の生殖系列変異またはその組み合わせを含む、多数の抗体および抗原結合フラグメントを容易に作り出す。ある種の実施形態において、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークならびに／またはＣＤＲ残基の全てを変異させて、抗体が由来する元の生殖系列配列において見出される残基に戻す。他の実施形態において、ある種の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内、もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内で見出される変異した残基、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内で見出される変異した残基のみを変異させて、元の本来の生殖系列配列に戻す。他の実施形態において、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の１つまたはそれ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が元々由来する生殖系列配列と異なる、生殖系列配列）の対応する残基に変異される。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の２つもしくはそれ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含有し、例えば、ここで、ある種の個々の残基は、特定の生殖系列配列の対応する残基に変異され、一方、元の生殖系列配列と異なるある種の他の残基は、維持されるか、もしくは異なる生殖系列配列の対応する残基に変異される。一旦得られると、１つまたはそれ以上の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合フラグメントは、結合特異性の好転、結合親和性の増大、アンタゴニストもしくはアゴニスト生物学的特性の好転または増強（場合によっては）、免疫原性の低減などのような１つまたはそれ以上の所望の特性について容易に試験される。この一般的な方法において得られる抗体および抗原結合フラグメントは、本発明に包含される。
【0069】
本発明はまた、１つもしくはそれ以上の保存的置換を有する、本明細書において開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む完全ヒト抗ＰＤ－１モノクローナル抗体も含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書において開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／もしくはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに関連する１０もしくはそれ以下、８つもしくはそれ以下、６つもしくはそれ以下、４つもしくはそれ以下などの保存的アミノ酸置換を有する、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ならびに／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＤ－１抗体を含む。
【0070】
本明細書において用いられる用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のヒトｍＡｂは、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでの無作為もしくは部位特異的変異誘発、またはインビボでの体細胞変異により導入される変異）を含む。しかしながら、本明細書において用いられる用語「ヒト抗体」は、別の哺乳類種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトＦＲ配列に移植されている、ｍＡｂを含むことは意図されない。用語は、非ヒト哺乳類において、または非ヒト哺乳類の細胞において組み換え的に産生される抗体を含む。用語は、ヒト対象から単離された、またはヒト対象において生じた抗体を含むことは意図されない。
【0071】
本明細書において用いられる用語「組換え体」は、例えば、ＤＮＡスプライシングおよび遺伝子導入発現を含む、組み換えＤＮＡ技術として当該技術分野において公知の技術もしくは方法により、作製されるか、発現されるか、単離されるか、もしくは得られる、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。用語は、非ヒト哺乳類（遺伝子導入非ヒト哺乳類、例えば、遺伝子導入マウスを含む）、もしくは細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）発現系において発現されるか、または組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体を指す。
【0072】
本明細書において用いられる用語「多特異性抗原結合分子」は、二重特異性、三重特異性、または多特異性抗原結合分子、およびその抗原結合フラグメントを指す。多特異性抗原結合分子は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であるか、または１つより多くの標的ポリペプチドのエピトープに特異的な抗原結合ドメインを含有する。多特異性抗原結合分子は、単一の多機能ポリペプチドであるか、または互いに共有結合または非共有結合する、２つもしくはそれ以上のポリペプチドの多量体複合体である。用語「多特異性抗原結合分子」は、別の機能分子、例えば、別のペプチドもしくはタンパク質に結合されるか、または共発現される、本発明の抗体を含む。例えば、抗体またはそのフラグメントは、第２の結合特異性を有する二重特異性もしくは多特異性抗原結合分子を作り出すためのタンパク質もしくはそのフラグメントのような、１つまたはそれ以上の他の分子実体に、（例えば、化学的架橋結合、遺伝子融合、非共有結合的会合、もしくはその他により）機能的に結合される。本発明によると、用語「多特異性抗原結合分子」はまた、二重特異性、三重特異性、または多特異性抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、別の抗体またはその抗原結合フラグメントに機能的に結合されて、第２の結合特異性を有する二重特異性抗体が作り出される。本発明の二重特異性および多特異性抗体は、本明細書において他の場所で記載される。
【0073】
用語「特異的に結合する」、または「に特異的に結合する」などは、抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、生理的条件下で比較的安定である抗原との複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０－８Ｍまたはそれ以下の平衡解離定数により特徴付けられる（例えば、ＫＤが小さいほど、より強固な結合を示す）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定する方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。本明細書において記載される通り、抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により同定され、ＰＤ－１に特異的に結合する。さらに、ＰＤ－１における１つのドメイン、および１つもしくはそれ以上のさらなる抗原に結合する多特異性抗体、またはＰＤ－１の２つの異なる領域に結合する二重特異性抗体は、それにもかかわらず、本明細書において用いられる「特異的に結合する」抗体とみなされる。
【0074】
用語「高い親和性」抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）ま
たは溶液親和性ＥＬＩＳＡにより測定される、少なくとも１０－７Ｍ；好ましくは、１０－８Ｍ；より好ましくは、１０－９Ｍ、なおより好ましくは、１０－１０Ｍ、なおより好ましくは、１０－１１ＭのＫＤとして表される、ＰＤ－１に対する結合親和性を有するそのｍＡｂを指す。
たは溶液親和性ＥＬＩＳＡにより測定される、少なくとも１０－７Ｍ；好ましくは、１０－８Ｍ；より好ましくは、１０－９Ｍ、なおより好ましくは、１０－１０Ｍ、なおより好ましくは、１０－１１ＭのＫＤとして表される、ＰＤ－１に対する結合親和性を有するそのｍＡｂを指す。
【0075】
用語「スローオフレート」、「Ｋｏｆｆ」、または「ｋｄ」は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により決定される、１×１０－３ｓ－１もしくはそれ以下、好ましくは、１×１０－４ｓ－１もしくはそれ以下の速度定数でＰＤ－１から解離する抗体を意味する。
【0076】
本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、任意の天然に生じる、酵素的に得られる、合成された、または遺伝子操作された、抗原に特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合フラグメント」、または「抗体フラグメント」は、ＰＤ－１に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上のフラグメントを指す。
【0077】
特定の実施形態において、本発明の抗体または抗体フラグメントは、リガンド、もしくは抗生物質、第２の抗ＰＤ－１抗体、もしくは腫瘍特異的抗原、自己免疫組織抗原、ウイルス性に感染した細胞抗原、Ｆｃ受容体、Ｔ細胞受容体、もしくはＴ細胞共阻害分子、もしくは免疫毒素のような別の抗原に対する抗体のような治療部分（「免疫複合体」）、もしくはがん、自己免疫疾患、もしくは慢性ウイルス感染症を含む疾患もしくは状態を処置するのに有用な任意の他の治療部分のような部分に結合される。
【0078】
本明細書において用いられる「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）が実質的にない抗体（例えば、ＰＤ－１に特異的に結合する、単離された抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ－１以外の抗原に特異的に結合するＡｂが実質的にない）を指すことが意図される。
【0079】
本明細書において用いられる「遮断抗体」もしくは「中和抗体」（または「ＰＤ－１活性を中和する抗体」もしくは「アンタゴニスト抗体」）は、ＰＤ－１への結合が、ＰＤ－１の少なくとも１つの生物学的活性の阻害をもたらす抗体を指すことが意図される。例えば、本発明の抗体は、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を防ぐか、または遮断する。
【0080】
本明細書において用いられる「活性化抗体」もしくは「増強抗体」（または「アゴニスト抗体」）は、ＰＤ－１への結合が、ＰＤ－１の少なくとも１つの生物学的活性の増大または刺激をもたらす抗体を指すことが意図される。例えば、本発明の抗体は、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を増大する。
【0081】
本明細書において用いられる用語「表面プラズモン共鳴」は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を用いた、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出による、リアルタイムの生体分子相互作用の解析を可能にする光学現象を指す。
【0082】
本明細書において用いられる用語「ＫＤ」は、特定の抗体と抗原の相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。
【0083】
用語「エピトープ」は、パラトープとしても公知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する、抗原決定因子を指す。単一の抗原は、１つより多くのエピ
トープを有する。従って、異なる抗体は、抗原上の異なる範囲に結合し、異なる生物学的作用を有する。用語「エピトープ」はまた、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。それはまた、抗体により結合される抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的として定義される。機能的エピトープは、一般に構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に関与するその残基を有する。エピトープはまた立体構造でもあり、すなわち、非直線状のアミノ酸を含む。ある種の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、リン酸基、またはスルホニル基のような分子の化学的に活性な表面基である決定因子を含み、ある種の実施形態において、特異的な３次元の構造的特徴、および／または特異的な変更特徴を有する。
トープを有する。従って、異なる抗体は、抗原上の異なる範囲に結合し、異なる生物学的作用を有する。用語「エピトープ」はまた、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。それはまた、抗体により結合される抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的として定義される。機能的エピトープは、一般に構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に関与するその残基を有する。エピトープはまた立体構造でもあり、すなわち、非直線状のアミノ酸を含む。ある種の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、リン酸基、またはスルホニル基のような分子の化学的に活性な表面基である決定因子を含み、ある種の実施形態において、特異的な３次元の構造的特徴、および／または特異的な変更特徴を有する。
【0084】
核酸もしくはそのフラグメントに言及している場合、用語「実質的な同一性」または「実質的に同一の」は、適切なヌクレオチド挿入または欠損を伴うかたちで別の核酸（もしくはその相補鎖）と最適に整列されると、以下で考察される通り、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧＡＰのような、配列同一性の任意の周知のアルゴリズムにより測定される、少なくとも約９０％、より好ましくは、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のヌクレオチド塩基のヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対する実質的な同一性を有する核酸分子は、ある種の例において、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同一または実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。
【0085】
ポリペプチドに適用される場合、用語「実質的な類似性」または「実質的に類似の」は、２つのペプチド配列が、例えば、デフォルトギャップウェイトを用いたプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴにより、最適に整列されると、少なくとも９０％の配列同一性、なおより好ましくは、少なくとも９５％、９８％、または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、残基位置は、同一でなく、保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換されているものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つまたはそれ以上のアミノ酸配列が、保存的置換により互いに異なる場合において、類似性の割合または程度は、置換の保存的性質を補正するよう上方調節される。この調節を成す手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７～３３１頁を参照（参照によって本明細書に組み入れられる）。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例は、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリン、およびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギン、およびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸塩、およびグルタミン酸塩、ならびに７）硫黄含有側鎖：システイン、およびメチオニンを含む。好ましい保存的アミノ酸置換基は：バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸塩－アスパラギン酸塩、およびアスパラギン－グルタミンである。あるいは、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔら（１９９２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１４４３～４５頁（参照によって本明細書に組み入れられる）において開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「中程度の保存的」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負でない値を有する任意の変化である。
【0086】
ポリペプチドについての配列類似性は、配列解析ソフトウェアを用いて典型的に測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む、様々な置換、欠損、および他の修飾に割り当てられる類似性の測定を用いて、類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、生物の異なる種由来の相同な諸ポリペプチドの間、または野
生型タンパク質とその変異タンパク質の間のような、密接に関連するポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定するためのデフォルトパラメーターで用いられるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴのようなプログラムを含む。例えば、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１を参照。ポリペプチド配列はまた、デフォルトまたは推奨パラメーターを用いたＦＡＳＴＡ；ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１におけるプログラムを用いても比較される。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２、およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリーと検索配列の間の最適オーバーラップの領域の整列化およびパーセント配列同一性をもたらす（上記、Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年））。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する上での別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメーターを用いた、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴ、特に、ＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０頁、および（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２頁を参照（それぞれが、参照によって本明細書に組み入れられる）。
生型タンパク質とその変異タンパク質の間のような、密接に関連するポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定するためのデフォルトパラメーターで用いられるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴのようなプログラムを含む。例えば、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１を参照。ポリペプチド配列はまた、デフォルトまたは推奨パラメーターを用いたＦＡＳＴＡ；ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１におけるプログラムを用いても比較される。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２、およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリーと検索配列の間の最適オーバーラップの領域の整列化およびパーセント配列同一性をもたらす（上記、Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年））。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する上での別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメーターを用いた、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴ、特に、ＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０頁、および（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２頁を参照（それぞれが、参照によって本明細書に組み入れられる）。
【0087】
語句「治療上有効量」によって、投与されるものに所望の作用を作り出す量が意味される。抽出量は、処置の目的に依存し、公知の技術（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９年）Ｔｈｅ Ａｒｔ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照）を用いて当業者により解明可能だろう。
【0088】
本明細書において用いられる用語「対象」は、慢性ウイルス感染症、がん、または自己免疫疾患のような疾患または障害の改善、予防、および／または処置の必要な動物、好ましくは、哺乳類を指す。
【0089】
本明細書において用いられる「抗がん薬」は、細胞毒素、ならびに代謝拮抗物質、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質、有糸分裂阻害剤、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、バイオ医薬品（biologic）（例えば、抗体、およびインターフェロン）、ならびに放射性剤を含むが、これらに限定されない、がんを処置するのに有用な任意の剤を意味する。本明細書において用いられる「細胞毒素または細胞毒性剤」はまた、化学療法剤も指し、細胞に有害である任意の剤も意味する。例は、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、テモゾラミド、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、シスプラチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンビラスチン、コイチシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにその類似体または相同体を含む。
【0090】
本明細書において用いられる用語「抗ウイルス薬」は、宿主対象においてウイルス感染症を処置、予防、もしくは改善するために用いられる任意の薬物または療法を指す。用語「抗ウイルス薬」は、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンツ、コビシスタット、テノホビル、リルピビリン、鎮痛剤、およびコルチコステロイドを含むが、これらに限定されない。本発明の文脈において、ウイルス感染症は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）を含むが、これらに限定されないウイルスにより引き起こされる長期または慢性感染症を含む。
【0091】
本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、ＰＤ－１に特異的に結合し、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１との相互作用を調節する。抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１に高い親和性または低
い親和性で結合してもよい。ある種の実施形態において、本発明の抗体は遮断抗体であり、ここで、抗体は、ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断する。ある実施形態において、本発明の遮断抗体は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断し、および／またはＴ細胞活性化を刺激するか、もしくは増強する。ある実施形態において、遮断抗体は、免疫応答を刺激もしくは増強するのに、および／またはがん、もしくは慢性ウイルス感染症に罹患している対象を処置するのに有用である。抗体は、それを必要とする対象に投与されると、対象において、ＨＩＶ、ＬＣＭＶ、またはＨＢＶのようなウイルスによる慢性感染症を低減する。それらを用いて、対象において腫瘍細胞の成長が阻害される。それらは、単独で、またはがん、もしくはウイルス感染症を処置するための当該技術分野において公知の他の治療部分もしくは様式を用いた補助療法として用いられる。
い親和性で結合してもよい。ある種の実施形態において、本発明の抗体は遮断抗体であり、ここで、抗体は、ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断する。ある実施形態において、本発明の遮断抗体は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断し、および／またはＴ細胞活性化を刺激するか、もしくは増強する。ある実施形態において、遮断抗体は、免疫応答を刺激もしくは増強するのに、および／またはがん、もしくは慢性ウイルス感染症に罹患している対象を処置するのに有用である。抗体は、それを必要とする対象に投与されると、対象において、ＨＩＶ、ＬＣＭＶ、またはＨＢＶのようなウイルスによる慢性感染症を低減する。それらを用いて、対象において腫瘍細胞の成長が阻害される。それらは、単独で、またはがん、もしくはウイルス感染症を処置するための当該技術分野において公知の他の治療部分もしくは様式を用いた補助療法として用いられる。
【0092】
他の実施形態において、本発明の抗体は活性化抗体であり、ここで、抗体は、ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の相互作用を増強する。ある実施形態において、活性化抗体は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を増強し、および／またはＴ細胞活性化を阻害するか、もしくは抑制する。本発明の活性化抗体は、対象における免疫応答を阻害するのに、および／または自己免疫疾患を処置するのに有用である。
【0093】
ある種の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は多特異性抗原結合分子であり、ここで、それらは、ＰＤ－１に対する第１の結合特異性、ならびに別のＴ細胞共阻害分子、自己免疫組織抗原、Ｔ細胞受容体、Ｆｃ受容体、Ｔ細胞受容体、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－１の異なるエピトープからなる群より選択される抗原に対する第２の結合特異性を含む。
【0094】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は、全長ＰＤ－１［ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９．２（配列番号３２７）を参照］のような一次免疫原、またはＰＤ－１の組み換え形態もしくは修飾されたヒトＰＤ－１フラグメント（配列番号３２１、３２３、もしくは３２４）、または修飾されたカニクイザルＰＤ－１フラグメント（配列番号３２２）で免疫され、続いて、二次免疫原、またはＰＤ－１の免疫原として活性なフラグメントで免疫されたマウスから得られる。
【0095】
免疫原は、ＰＤ－１の生物学的に活性および／もしくは免疫原性フラグメント、またはその活性フラグメントをコードするＤＮＡである。フラグメントは、ＰＤ－１のＮ末端またはＣ末端のドメインに由来する。本発明のある種の実施形態において、免疫原は、Ｃ９３Ｓ変更を有する配列番号３２７のアミノ酸残基２５～１７０の範囲にあるＰＤ－１のフラグメントである。
【0096】
ペプチドは、タグ付けのため、もしくはＫＬＨのような担体分子への結合の目的のためのある種の残基の付加または置換を含むよう修飾される。例えば、免疫のためのＫＬＨへの結合のためのペプチドを調製するために、例えば、ペプチドのＮ末端もしくはＣ末端いずれかにシステインが付加されるか、またはリンカー配列が付加される。
【0097】
全長ヒトＰＤ－１の全長アミノ酸配列は、配列番号３２７として示される。
【0098】
ある種の実施形態において、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体は、上で示された領域のフラグメント、または本明細書において記載される領域のＮもしくはＣ末端いずれか、もしくは両方から約５～約２０個のアミノ酸残基だけ、指定された領域を越えて伸びているペプチドを用いて調製される。ある種の実施形態において、上で示された領域またはそのフラグメントの任意の組み合わせは、ＰＤ－１特異的抗体の調製において用いられる。ある種の実施形態において、ＰＤ－１の上で示された領域、またはそのフラグメントの任意の１つまたはそれ以上は、単一特異性、二重特異性、または多特異性抗体を調製するため用いられる。
【0099】
本発明のある種の抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１に結合し、インビトロまたはインビボアッセイにより決定される、ＰＤ－１の活性を中和する。ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１の活性を中和する本発明の抗体の能力は、本明細書において記載される、結合アッセイ、もしくは活性アッセイを含む、当業者に公知の任意の標準的方法を用いて測定される。
【0100】
結合活性を測定するための非限定的な典型的インビトロアッセイは、本明細書における実施例において説明される。実施例３において、ヒトＰＤ－１およびカニクイザルＰＤ－１についてのヒト抗ＰＤ－１抗体の結合親和性ならびに運動定数は、表面プラズモン共鳴において決定され、測定は、Ｂｉａｃｏｒｅ４０００またはＴ２００装置にて行われた。実施例４および５において、遮断アッセイを用いて、インビトロでＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１－結合能を遮断する抗ＰＤ－１抗体の能力が決定された。実施例６において、遮断アッセイを用いて、抗ＰＤ－１抗体間の交差競合が決定された。実施例７は、抗体のＰＤ－１を過剰発現する細胞への結合を記載する。実施例８において、ルシフェラーゼアッセイを用いて、Ｔ細胞におけるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達と拮抗する抗ＰＤ－１抗体の能力が決定された。
【0101】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は、インビトロで、およびがんを有する対象、もしくはＬＣＭＶのようなウイルスに感染した対象においてＴ細胞活性化を増強するか、または刺激することができる。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、対象において免疫応答を増強し、腫瘍成長を阻害するために、第２のＴ細胞共阻害分子に対する抗体のような第２の治療剤と併用して用いられる。
【0102】
ＰＤ－１に特異的な抗体は、さらなる標識もしくは部分を含有しないか、またはそれらは、Ｎ末端またはＣ末端標識もしくは部分を含有する。１つの実施形態において、標識または部分はビオチンである。結合アッセイにおいて、（もしあれば）標識の位置は、ペプチドが結合される表面に関連してペプチドの方向が決定される。例えば、表面がアビジンでコートされるなら、Ｎ末端のビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面の遠位であるように、方向付けられる。１つの実施形態において、標識は、放射性核種、蛍光色素、またはＭＲＩで検出可能な標識である。ある種の実施形態において、かかる標識された抗体は、画像化アッセイを含む診断アッセイにおいて用いられる。
【0103】
抗体の抗原結合フラグメント
別段具体的に示されない限り、本明細書において用いられる用語「抗体」は、２つの免疫グロブリン重鎖、および２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにその抗原結合フラグメントを包含することは理解されるだろう。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、任意の天然に生じる、酵素的に得られる、合成された、または遺伝子操作された、抗原に特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドもしくは糖タンパク質を含む。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合フラグメント」、または「抗体フラグメント」は、ＰＤ－１に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上のフラグメントを指す。抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、ＣＤＲを含有するフラグメント、または単離されたＣＤＲを含む。ある種の実施形態において、用語「抗原結合フラグメント」は、多特異性抗原結合分子のポリペプチドフラグメントを指す。かかる実施形態において、用語「抗原結合フラグメント」は、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合するＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインを含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、タンパク質消化、または抗体可変および（場合により）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組み換え遺伝子操作技術のような任意の適切な標準的技術を用いて、完全抗体分子から得ることができる。かかるＤＮＡは公知であり、および／または例えば、市販の供
給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ－抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、もしくは合成される。ＤＮＡは、配列決定され、化学的に、または分子生物学技術を用いることにより操作されて、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインが適切な配置に配置されるか、またはコドンが導入されるか、システイン残基が作製されるか、アミノ酸が修飾されるか、付加されるか、もしくは欠損される。
別段具体的に示されない限り、本明細書において用いられる用語「抗体」は、２つの免疫グロブリン重鎖、および２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにその抗原結合フラグメントを包含することは理解されるだろう。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、任意の天然に生じる、酵素的に得られる、合成された、または遺伝子操作された、抗原に特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドもしくは糖タンパク質を含む。本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合フラグメント」、または「抗体フラグメント」は、ＰＤ－１に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上のフラグメントを指す。抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、ＣＤＲを含有するフラグメント、または単離されたＣＤＲを含む。ある種の実施形態において、用語「抗原結合フラグメント」は、多特異性抗原結合分子のポリペプチドフラグメントを指す。かかる実施形態において、用語「抗原結合フラグメント」は、例えば、ＰＤ－１に特異的に結合するＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインを含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、タンパク質消化、または抗体可変および（場合により）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組み換え遺伝子操作技術のような任意の適切な標準的技術を用いて、完全抗体分子から得ることができる。かかるＤＮＡは公知であり、および／または例えば、市販の供
給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ－抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、もしくは合成される。ＤＮＡは、配列決定され、化学的に、または分子生物学技術を用いることにより操作されて、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインが適切な配置に配置されるか、またはコドンが導入されるか、システイン残基が作製されるか、アミノ酸が修飾されるか、付加されるか、もしくは欠損される。
【0104】
抗原結合フラグメントの非限定的な例は：（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補決定領域（ＣＤＲ））、または限定されたＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを含む。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメインが欠損した抗体、キメラ抗体、ＣＤＲが移植された抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ミニボディ、ナノボディ（例えば、１価のナノボディ、２価のナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインのような他の操作された分子もまた、本明細書において用いられる、表現「抗原結合フラグメント」に包含される。
【0105】
抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの可変ドメインを典型的に含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成であり、少なくとも１つのＣＤＲを一般的に含み、１つもしくはそれ以上のフレームワーク配列に隣接されるか、もしくはインフレームである。ＶＬドメインと繋がったＶＨドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶＨおよびＶＬドメインは、任意の適切な配置で相対的に位置する。例えば、可変領域は、二量体であり、ＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬ、またはＶＬ－ＶＬ二量体を含有する。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有する。
【0106】
ある種の実施形態において、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含有する。本発明の抗体の抗原結合フラグメント内で見出される可変および定常ドメインの非限定的な典型的配置は：（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬを含む。上で挙げられる典型的な配置のいずれかを含む、可変および定常ドメインの任意の配置において、可変ならびに定常ドメインは、互いに直接的に結合されるか、または完全もしくは部分的ヒンジもしくはリンカー領域により結合されるか、のいずれかである。ヒンジ領域は、少なくとも２個（例えば、５個、１０個、１５個、２０個、４０個、６０個もしくはそれ以上）のアミノ酸からなり、単一のポリペプチド分子における隣接する可変および／または定常ドメイン間の可動性または半可動性の結合をもたらす。さらに、本発明の抗体の抗原結合フラグメントは、（例えば、ジスルフィド結合による）互いにおよび／もしくは１つもしくはそれ以上の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインと非共有結合的に会合した、上で挙げられた可変ならびに定常ドメイン配置のいずれかのホモ－二量体またはヘテロ－二量体（もしくは他の多量体）を含む。
【0107】
全抗体分子と同様に、抗原結合フラグメントは、単特異性または多特異性（例えば、二重特異性）である。抗体の多特異性抗原結合フラグメントは、少なくとも２つの異なる可変ドメインを典型的には含み、ここで、それぞれの可変ドメインは、別々の抗原、または同一抗原上の異なるエピトープに特異的に結合する能力がある。本明細書において開示さ
れる典型的な二重特異性抗体フォーマットを含む、任意の多特異性抗体フォーマットは、当該技術分野において利用可能な慣例的技術を用いて、本発明の抗体の抗原結合フラグメントの文脈において使用するために適合される。
れる典型的な二重特異性抗体フォーマットを含む、任意の多特異性抗体フォーマットは、当該技術分野において利用可能な慣例的技術を用いて、本発明の抗体の抗原結合フラグメントの文脈において使用するために適合される。
【0108】
ヒト抗体の調製
遺伝子導入マウスにおいてヒト抗体を作製する方法は、当該分野で公知である。任意のかかる公知の方法を、本発明の文脈において用いて、ＰＤ－１に特異的に結合するヒト抗体が作られる。
遺伝子導入マウスにおいてヒト抗体を作製する方法は、当該分野で公知である。任意のかかる公知の方法を、本発明の文脈において用いて、ＰＤ－１に特異的に結合するヒト抗体が作られる。
【0109】
次のいずれか１つを含む免疫原を用いて、ＰＤ－１に対する抗体を作製する。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、全長の天然ＰＤ－１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９．２を参照）（配列番号３２７）、または組み換えＰＤ－１ペプチドで免疫されたマウスから得られる。あるいは、ＰＤ－１またはそのフラグメントは、標準的生化学技術を用いて作り出され、修飾され（配列番号３２１～３２４）、免疫原として用いられる。
【0110】
ある種の実施形態において、免疫原は、ＰＤ－１のＮ末端またはＣ末端由来のペプチドである。１つの実施形態において、免疫原は、ＰＤ－１の細胞外ドメインまたはＩｇＶ様ドメインである。本発明のある種の実施形態において、免疫原は、Ｃ９３Ｓ変更を有する配列番号３２７のおよそアミノ酸残基２５～１７０の範囲にあるＰＤ－１のフラグメントである。
【0111】
ある実施形態において、免疫原は、エシェリキア・コリ（E.coli）において、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような任意の他の真核生物もしくは哺乳類細胞において発現された組み換えＰＤ－１ペプチドである。
【0112】
ある種の実施形態において、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体は、上で示された領域のフラグメント、または本明細書において記載される領域のＮもしくはＣ末端いずれか、もしくは両方から約５～約２０個のアミノ酸残基だけ、指定された領域を越えて伸びているペプチドを用いて、調製される。ある種の実施形態において、上で示された領域、またはそのフラグメントの任意の組み合わせは、ＰＤ－１特異的抗体の調製において用いられる。
【0113】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標））、またはモノクローナル抗体を作製する任意の他の公知の方法を用いて、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＰＤ－１に対する高親和性キメラ抗体が、まず単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが、抗原刺激に応答して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域部位に作動可能に結合したヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有する遺伝子導入マウスの作製に関与する。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、ヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に結合される。次に、ＤＮＡは、完全ヒト抗体を発現する能力がある細胞において発現される。
【0114】
生物学的等価物
本発明の抗ＰＤ－１抗体および抗体フラグメントは、記載される抗体のものと異なるが、ＰＤ－１に結合する能力を保持する、アミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。かかる変異体抗体および抗体フラグメントは、親配列と比較された場合、アミノ酸の１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、記載される抗体のものと実質的に等価物である生物学的活性を示す。同様に、本発明のＤＮＡ配列をコードする抗体は、開示さ
れる配列と比較された場合、ヌクレオチドの１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗体または抗体フラグメントに実質的な生物学的等価物である抗体または抗体フラグメントをコードする配列を含む。
本発明の抗ＰＤ－１抗体および抗体フラグメントは、記載される抗体のものと異なるが、ＰＤ－１に結合する能力を保持する、アミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。かかる変異体抗体および抗体フラグメントは、親配列と比較された場合、アミノ酸の１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、記載される抗体のものと実質的に等価物である生物学的活性を示す。同様に、本発明のＤＮＡ配列をコードする抗体は、開示さ
れる配列と比較された場合、ヌクレオチドの１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗体または抗体フラグメントに実質的な生物学的等価物である抗体または抗体フラグメントをコードする配列を含む。
【0115】
２つの抗原結合タンパク質、または抗体は、例えば、吸収の速度および程度が、類似の実験条件下で同一のモル用量、単回用量もしくは複数回用量いずれかで投与される場合、有意な相違を示さない医薬等価物もしくは医薬代替物であるなら、生物学的等価物とみなされる。ある抗体は、その吸収の程度において等価物であるが、その吸収の速度において等価物でないなら、等価物または医薬代替物とみなされ、かかる吸収の速度における相違が意図的であり、標識において反映され、例えば、慢性的使用の際の有効な身体薬物濃度の到達に必須ではなく、研究される特定の薬物製品にとって医薬的に有意でないとみなされるので、生物学的等価物であると依然みなされる。
【0116】
１つの実施形態において、２つの抗原結合タンパク質の安全性、純度、または有効性において臨床上有意義な相違はないなら、２つの抗原結合タンパク質は生物学的等価物である。
【0117】
１つの実施形態において、２つの抗原結合タンパク質は、患者が、切り替えることなく継続される療法と比較して、免疫原性における臨床上有意な変化、もしくは損なわれた効能を含む副作用のリスクの増大を予期せずに、参照産物と生物学的産物の間で１回またはそれ以上切り替えられるなら、生物学的等価物である。
【0118】
１つの実施形態において、２つの抗原結合タンパク質は、それら両方が、使用の条件もしくは複数の条件についての作用の通常のメカニズムまたは複数のメカニズムにより、かかるメカニズムが公知である限り、作用するなら、生物学的等価物である。
【0119】
生物学的等価物は、インビボおよび／またはインビトロの方法により実証される。生物学的等価物の測定は、例えば、（ａ）抗体もしくはその代謝産物の濃度が、血液、血漿、血清、もしくは他の生物学的体液において時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボ試験；（ｂ）ヒトインビボバイオアベイラビリティデータと相関し、それを十分に予測するインビトロ試験；（ｃ）抗体（もしくはその標的）の適切な急性薬理作用が、時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボ試験；および（ｄ）抗体の安全性、効能（efficacy）、もしくはバイオアベイラビリティもしくは生物学的均等性を確立する、十分に制御された臨床試験、を含む。
【0120】
本発明の抗体の生物学的等価物は、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を成すこと、または生物学的活性のため必要とされない末端もしくは内部残基もしくは配列を欠損させることにより、構築される。例えば、生物学的活性に必須でないシステイン残基は、欠損されるか、または他のアミノ酸で置換されて、再生の際に不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成が防止される。他の文脈において、生物学的等価物抗体は、アミノ酸変更を含む抗体変異体を含み、抗体のグリコシル化特徴、例えば、グリコシル化を除去するか、または取り除く変異を修飾する。
【0121】
Ｆｃ変異体を含む抗ＰＤ－１抗体
本発明のある種の実施形態によると、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強するか、もしくは損なう１つまたはそれ以上の変異を含むＦｃドメインを含む抗ＰＤ－１抗体が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域における変異を含む抗ＰＤ－１抗体を含み、ここで、変異は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲にあるエンドソームにおいて）、ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増大させる。かかる変異は、動物に投与
される場合、抗体の血清半減期の増大をもたらす。かかるＦｃ修飾の非限定的な例は、例えば、２５０位（例えば、ＥもしくはＱ）；２５０位および４２８位（例えば、ＬもしくはＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／Ｗ、もしくはＴ）、２５４位（例えば、Ｓ、もしくはＴ）、ならびに２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／Ｄ、もしくはＴ）における修飾；または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／Ｑ、もしくはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、もしくはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、もしくはＮ４３４Ｙ］）における修飾；または２５０位および／もしくは４２８位における修飾；または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における修飾を含む。１つの実施形態において、修飾は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）、ならびに４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）修飾；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、ならびに３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）修飾；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）、ならびに４３４（例えば、４３４Ｙ）修飾；２５２、２５４、ならびに２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）修飾；２５０Ｑ、ならびに４２８Ｌ修飾（例えば、Ｔ２５０Ｑ、およびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７、ならびに／または３０８修飾（例えば、３０８Ｆ、もしくは３０８Ｐ）を含む。なお別の実施形態において、修飾は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）、および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）修飾を含む。
本発明のある種の実施形態によると、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強するか、もしくは損なう１つまたはそれ以上の変異を含むＦｃドメインを含む抗ＰＤ－１抗体が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域における変異を含む抗ＰＤ－１抗体を含み、ここで、変異は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲にあるエンドソームにおいて）、ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増大させる。かかる変異は、動物に投与
される場合、抗体の血清半減期の増大をもたらす。かかるＦｃ修飾の非限定的な例は、例えば、２５０位（例えば、ＥもしくはＱ）；２５０位および４２８位（例えば、ＬもしくはＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／Ｗ、もしくはＴ）、２５４位（例えば、Ｓ、もしくはＴ）、ならびに２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／Ｄ、もしくはＴ）における修飾；または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／Ｑ、もしくはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、もしくはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、もしくはＮ４３４Ｙ］）における修飾；または２５０位および／もしくは４２８位における修飾；または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における修飾を含む。１つの実施形態において、修飾は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）、ならびに４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）修飾；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、ならびに３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）修飾；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）、ならびに４３４（例えば、４３４Ｙ）修飾；２５２、２５４、ならびに２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）修飾；２５０Ｑ、ならびに４２８Ｌ修飾（例えば、Ｔ２５０Ｑ、およびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７、ならびに／または３０８修飾（例えば、３０８Ｆ、もしくは３０８Ｐ）を含む。なお別の実施形態において、修飾は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）、および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）修飾を含む。
【0122】
例えば、本発明は、２５０Ｑ、ならびに２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０Ｑ、およびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ、ならびに２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌ、ならびに４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８Ｌ、およびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉ、ならびに３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７Ｉ、およびＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉ、ならびに４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７Ｉ、およびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖ、ならびに４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６Ｖ、およびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａ、ならびに４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋ、ならびに４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３Ｋ、およびＮ４３４Ｆ）：からなる群より選択される変異の１つまたはそれ以上の対または群を含むＦｃドメインを含む抗ＰＤ－１抗体を含む。１つの実施形態において、本発明は、二量体安定化を促進するためのＩｇＧ４のヒンジ領域におけるＳ１０８Ｐ変異を含むＦｃドメインを含む抗ＰＤ－１抗体を含む。前述のＦｃドメイン変異と、本明細書において開示される抗体可変ドメイン内の他の変異の全ての可能な組み合わせは、本発明の範囲内と考えられる。
【0123】
本発明はまた、キメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含む抗ＰＤ－１抗体も含み、ここで、キメラＣＨ領域は、１つより多い免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域に由来するセグメントを含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、もしくはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ３ドメインの一部または全てと組み合わされた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、もしくはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ２ドメインの一部または全てを含むキメラＣＨ領域を含む。ある種の実施形態によると、本発明の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣＨ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部のヒンジ」配列（ＥＵナンバリングによる２２８位～２３６位のアミノ酸残基）と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部のヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵナンバリングによる２１６位～２２７位のアミノ酸残基）を含む。ある種の実施形態によると、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１、またはヒトＩｇＧ４上部のヒンジに由来するアミノ酸残基、およびヒトＩｇＧ２下部のヒンジに由来するアミノ酸残基を含む。本明細書において記載されるキメラＣＨ領域を含む抗体は、ある種の実施形態において、抗体の治療または薬物動態特性に有害に作用することなく、修飾されたＦｃエフェクター機能を提示する。（例えば、２０１４年１月３１日付けで出願されたＵＳＳＮ．１４／１７０，１６６（全体として参照によって本明細書に組み入れられる）を参照。）
【0124】
抗体の生物学的特徴
一般に、本発明の抗体は、ＰＤ－１に結合することにより機能する。本発明は、可溶性単量体または二量体ＰＤ－１分子を高親和性で結合する抗ＰＤ－１抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマットを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、（例えば、２５℃において、または３７℃において）約５０ｎＭ未満のＫＤで単量体ＰＤ－１に結合する抗体および抗体の抗原結合フラグメントを含む。ある種の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマット、もしくは実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、もしくは約１ｎＭ未満のＫＤで単量体ＰＤ－１に結合する。
一般に、本発明の抗体は、ＰＤ－１に結合することにより機能する。本発明は、可溶性単量体または二量体ＰＤ－１分子を高親和性で結合する抗ＰＤ－１抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマットを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、（例えば、２５℃において、または３７℃において）約５０ｎＭ未満のＫＤで単量体ＰＤ－１に結合する抗体および抗体の抗原結合フラグメントを含む。ある種の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマット、もしくは実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、もしくは約１ｎＭ未満のＫＤで単量体ＰＤ－１に結合する。
【0125】
本発明はまた、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマットを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、（例えば、２５℃において、または３７℃において）約４００ｐＭ未満のＫＤで二量体ＰＤ－１に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。ある種の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマット、もしくは実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、約３００ｐＭ未満、約２５０ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、もしくは約５０ｐＭ未満のＫＤで二量体ＰＤ－１に結合する。
【0126】
本発明はまた、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマットを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、（例えば、２５℃において、または３７℃において）約３５ｎＭ未満のＫＤでカニクイザル（マカク・ファシクラリス（Macaca fascicularis））ＰＤ－１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含
む。ある種の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマット、もしくは実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、もしくは約５ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する。
む。ある種の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマット、もしくは実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴により測定される、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、もしくは約５ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する。
【0127】
本発明はまた、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマット、または実質的に類似のアッセイを用いて、２５℃もしくは３７℃における表面プラズモン共鳴により測定される、約１．１分より長い解離半減期（ｔ１／２）でＰＤ－１に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書における実施例３において定義されるアッセイフォーマット（例えば、ｍＡｂ捕捉または抗原捕捉フォーマット）、または実質的に類似のアッセイを用いて、２５℃または３７℃における表面プラズモン共鳴により測定される、約５分より長い、約１０分より長い、約３０分より長い、約５０分より長い、約６０分より長い、約７０分より長い、約８０分より長い、約９０分より長い、約１００分より長い、約２００分より長い、約３００分より長い、約４００分より長い、約５００分より長い、約６００分より長い、約７００分より長い、約８００分より長い、約９００分より長い、約１０００分より長い、または約１２００分より長いｔ１／２でＰＤ－１に結合する。
【0128】
本発明はまた、例えば、実施例４において示されるＥＬＩＳＡベースのイムノアッセイアッセイ、または実質的に類似のアッセイを用いて決定される約３ｎＭ未満のＩＣ５０でＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を遮断する抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。本発明はまた、ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を増強する抗体およびそ
の抗原結合フラグメントも含む。
の抗原結合フラグメントも含む。
【0129】
ある実施形態において、本発明の抗体は、ＰＤ－１の細胞外ドメイン、またはドメインのフラグメントに結合する。ある実施形態において、本発明の抗体は、１つより多くのドメインに結合する（交差反応性抗体）。ある種の実施形態において、本発明の抗体は、ＰＤ－１のアミノ酸残基２１～１７１（配列番号３２７）を含む細胞外ドメインに位置するエピトープに結合する。１つの実施形態において、抗体は、配列番号３２１～３２４のアミノ酸残基１～１４６からなる群より選択される１個またはそれ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。
【0130】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は、アミノ酸配列が配列番号３２７において示される、全長タンパク質の任意の他の領域もしくはフラグメントに結合することにより、ＰＤ－１に関連するＰＤ－Ｌ１－結合活性を遮断または阻害することにより機能する。ある種の実施形態において、抗体は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の間の相互作用を減弱させるか、または調節する。
【0131】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は二重特異性抗体である。本発明の二重特異性抗体は、あるドメインにおけるあるエピトープに結合し、ＰＤ－１の異なるドメインにおける第２のエピトープにも結合する。ある種の実施形態において、本発明の二重特異性抗体は、同一ドメインにおける２つの異なるエピトープに結合する。１つの実施形態において、多特異性抗原結合分子は、ＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む第１の結合特異性、およびＰＤ－１の別のエピトープに対する第２の結合特異性を含む。
【0132】
１つの実施形態において、本発明は、ＰＤ－１に結合する、単離された完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体またはそのフラグメントは、次の特徴のうちの１つもしくはそれ以上を示す：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２１８、２２６、２３４、２４２、２５０、２５８、２６６、２７４、２８２、２９０、２９８、３０６、および３１４からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含む；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、および２０２からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含む；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２２４、２３２、２４０、２４８、２５６、２６４、２７２、２８０、２８８、２９６、３０４、３１２、および３２０からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、および２０８からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２０、２２８、２３６、２４４、２５２、２６０、２６８、２７６、２８４、２９２、３００、３０８、および３１６からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号６
、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２２２、２３０、２３８、２４６、２５４、２６２、２７０、２７８、２８６、２９４、３０２、３１０、および３１８からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、および２０４からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、および２０６からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）ＰＤ－１に対する第１の結合特異性、ならびにＰＤ－１、腫瘍特異的抗原、自己免疫組織特異的抗原、ウイルス性に感染した細胞抗原、異なるＴ細胞共阻害分子、Ｔ細胞受容体、およびＦｃ受容体からなる群より選択される抗原に対する第２の結合特異性を含む多特異性抗原結合分子である；（ｖｉ）ヒトＰＤ－１に約２８ｐＭ～約１．５μＭのＫＤで結合する；（ｖｉｉ）カニクイザルＰＤ－１に約３ｎＭ～約７．５μＭのＫＤで結合する；（ｖｉｉｉ）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を、約３．３ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断するか、もしくは増強する；（ｉｘ）ＰＤ－１により誘導されるＴ細胞下方制御を遮断し、および／もしくはＴ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて、Ｔ細胞シグナル伝達をレスキューする；（ｘ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖および活性を刺激する；（ｘｉ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２および／もしくはＩＦＮγ産生を誘導する；ならびに（ｘｉｉ）がんを有する対象において、腫瘍成長を抑制し、生存を増大させる。
、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２２２、２３０、２３８、２４６、２５４、２６２、２７０、２７８、２８６、２９４、３０２、３１０、および３１８からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、および２０４からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、および２０６からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）ＰＤ－１に対する第１の結合特異性、ならびにＰＤ－１、腫瘍特異的抗原、自己免疫組織特異的抗原、ウイルス性に感染した細胞抗原、異なるＴ細胞共阻害分子、Ｔ細胞受容体、およびＦｃ受容体からなる群より選択される抗原に対する第２の結合特異性を含む多特異性抗原結合分子である；（ｖｉ）ヒトＰＤ－１に約２８ｐＭ～約１．５μＭのＫＤで結合する；（ｖｉｉ）カニクイザルＰＤ－１に約３ｎＭ～約７．５μＭのＫＤで結合する；（ｖｉｉｉ）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を、約３．３ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断するか、もしくは増強する；（ｉｘ）ＰＤ－１により誘導されるＴ細胞下方制御を遮断し、および／もしくはＴ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて、Ｔ細胞シグナル伝達をレスキューする；（ｘ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖および活性を刺激する；（ｘｉ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２および／もしくはＩＦＮγ産生を誘導する；ならびに（ｘｉｉ）がんを有する対象において、腫瘍成長を抑制し、生存を増大させる。
【0133】
１つの実施形態において、本発明は、ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－１結合を遮断する、単離された完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体またはそのフラグメントは、次の特徴のうちの１つもしくはそれ以上を示す：（ｉ）配列番号１３０、１６２、２３４、および３１４からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含む；（ｉｉ）配列番号１３８、１７０、１８６、および２０２からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含む；（ｉｉｉ）配列番号１３６、１６８、２４０、および３２０からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列番号１４４、１７６、１９２、および２０８からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む；（ｉｖ）配列番号１３２、１６４、２３６、および３１６からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号１３４、１６６、２３８、および３１８からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１４０、１７２、１８８、および２０４からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１４２、１７４、１９０、および２０６からなる群よ
り選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）ＰＤ－１に対する第１の結合特異性、ならびにＰＤ－１の異なるエピトープ、腫瘍特異的抗原、自己免疫組織特異的抗原、ウイルス性に感染した細胞抗原、異なるＴ細胞共阻害分子、Ｔ細胞受容体、およびＦｃ受容体からなる群より選択される抗原に対する第２の結合特異性を含む多特異性抗原結合分子である；（ｖｉ）ヒトＰＤ－１に１０－９Ｍ以下のＫＤで結合する；（ｖｉｉ）カニクイザルＰＤ－１に１０－８Ｍ以下のＫＤで結合する；（ｖｉｉｉ）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を１０－１０Ｍ以下のＩＣ５０で遮断する；（ｉｘ）ＰＤ－１により誘導されるＴ細胞下方制御を遮断し、および／もしくはＴ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイにおいてＴ細胞シグナル伝達をレスキューする；（ｘ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖および活性を刺激する；（ｘｉ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２および／もしくはＩＦＮγ産生を誘導する；ならびに（ｘｉｉ）がんを有する対象において、腫瘍成長を抑制し、生存を増大させる。
り選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）ＰＤ－１に対する第１の結合特異性、ならびにＰＤ－１の異なるエピトープ、腫瘍特異的抗原、自己免疫組織特異的抗原、ウイルス性に感染した細胞抗原、異なるＴ細胞共阻害分子、Ｔ細胞受容体、およびＦｃ受容体からなる群より選択される抗原に対する第２の結合特異性を含む多特異性抗原結合分子である；（ｖｉ）ヒトＰＤ－１に１０－９Ｍ以下のＫＤで結合する；（ｖｉｉ）カニクイザルＰＤ－１に１０－８Ｍ以下のＫＤで結合する；（ｖｉｉｉ）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を１０－１０Ｍ以下のＩＣ５０で遮断する；（ｉｘ）ＰＤ－１により誘導されるＴ細胞下方制御を遮断し、および／もしくはＴ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイにおいてＴ細胞シグナル伝達をレスキューする；（ｘ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖および活性を刺激する；（ｘｉ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２および／もしくはＩＦＮγ産生を誘導する；ならびに（ｘｉｉ）がんを有する対象において、腫瘍成長を抑制し、生存を増大させる。
【0134】
本発明の抗体は、前述の生物学的特徴の１つもしくはそれ以上、または任意のその組み合わせを有する。本発明の抗体の他の生物学的特徴は、本明細書における実施例を含む本開示の説明から当業者に明白であろう。
【0135】
種選択性および種交差反応性
本発明のある種の実施形態によると、抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１に結合するが、他の種由来のＰＤ－１に結合しない。あるいは、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、ある種の実施形態において、ヒトＰＤ－１、および１つまたはそれ以上の非ヒト種由来のＰＤ－１に結合する。例えば、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１に結合し、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザル、もしくはチンパンジーＰＤ－１のうちの１つもしくはそれ以上に結合するか、または結合しない。ある種の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、ヒトおよびカニクイザルＰＤ－１に、同一の親和性で、または異なる親和性で結合するが、ラットおよびマウスＰＤ－１に結合しない。
本発明のある種の実施形態によると、抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１に結合するが、他の種由来のＰＤ－１に結合しない。あるいは、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、ある種の実施形態において、ヒトＰＤ－１、および１つまたはそれ以上の非ヒト種由来のＰＤ－１に結合する。例えば、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１に結合し、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザル、もしくはチンパンジーＰＤ－１のうちの１つもしくはそれ以上に結合するか、または結合しない。ある種の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、ヒトおよびカニクイザルＰＤ－１に、同一の親和性で、または異なる親和性で結合するが、ラットおよびマウスＰＤ－１に結合しない。
【0136】
エピトープマッピングおよび関連技術
本発明は、例えば、細胞外（ＩｇＶ様）ドメイン、膜貫通型ドメイン、ならびに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）および免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含有する細胞内ドメインを含むＰＤ－１分子の１つまたはそれ以上のドメイン内で見出される１個またはそれ以上のアミノ酸と相互作用する、抗ＰＤ－１抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、ＰＤ－１分子の前述のドメインのいずれかに位置する、３個またはそれ以上（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個もしくはそれ以上）のアミノ酸の単一の連続配列からなる（例えば、ドメインにおける直線エピトープ）。あるいは、エピトープは、ＰＤ－１分子の前述のドメインのいずれかまたは両方に位置する、多数の非連続アミノ酸（もしくはアミノ酸配列）からなる（例えば、立体構造エピトープ）。
本発明は、例えば、細胞外（ＩｇＶ様）ドメイン、膜貫通型ドメイン、ならびに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）および免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含有する細胞内ドメインを含むＰＤ－１分子の１つまたはそれ以上のドメイン内で見出される１個またはそれ以上のアミノ酸と相互作用する、抗ＰＤ－１抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、ＰＤ－１分子の前述のドメインのいずれかに位置する、３個またはそれ以上（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個もしくはそれ以上）のアミノ酸の単一の連続配列からなる（例えば、ドメインにおける直線エピトープ）。あるいは、エピトープは、ＰＤ－１分子の前述のドメインのいずれかまたは両方に位置する、多数の非連続アミノ酸（もしくはアミノ酸配列）からなる（例えば、立体構造エピトープ）。
【0137】
当業者に公知の種々の技術を用いて、抗体が、ポリペプチドもしくはタンパク質内の「１個またはそれ以上のアミノ酸と相互作用するかどうかが決定される。典型的な技術は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）において記載されるもののような、慣例的交差－遮断アッセイを含む。他の方法は、アラニンスキャンニング変異解析、ペプチドブロット解析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２４８：４４３～６３頁）、ペプチド切断解析結晶研究
、およびＮＭＲ解析を含む。加えて、抗原のエピトープ切除、エピトープ抽出、および化学修飾のような方法が利用される（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７～４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために用いられる別の方法は、質量分析により検出される水素／ジュウテリウム交換である。一般的な用語において、水素／ジュウテリウム交換方法は、目的のタンパク質をジュウテリウム標識すること、続いて、抗体をジュウテリウムで標識されたタンパク質に結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体は水に移され、抗体複合体により保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、接触面の一部でないアミノ酸内の交換可能なプロトンより遅い速度でジュウテリウムから水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体接触面の部分を形成するアミノ酸は、ジュウテリウムを保持し、それ故、接触面に含まれないアミノ酸と比較して、比較的大きな質量を提示する。抗体の解離後、標的タンパク質は、タンパク質分解酵素切断および質量分析の対象とされ、それにより、抗体が相互作用する特異的アミノ酸に対応するジュウテリウムで標識された残基が明らかにされる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６７：２５２～２５９頁；ＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ～２６５Ａ頁を参照。
、およびＮＭＲ解析を含む。加えて、抗原のエピトープ切除、エピトープ抽出、および化学修飾のような方法が利用される（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７～４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために用いられる別の方法は、質量分析により検出される水素／ジュウテリウム交換である。一般的な用語において、水素／ジュウテリウム交換方法は、目的のタンパク質をジュウテリウム標識すること、続いて、抗体をジュウテリウムで標識されたタンパク質に結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体は水に移され、抗体複合体により保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、接触面の一部でないアミノ酸内の交換可能なプロトンより遅い速度でジュウテリウムから水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体接触面の部分を形成するアミノ酸は、ジュウテリウムを保持し、それ故、接触面に含まれないアミノ酸と比較して、比較的大きな質量を提示する。抗体の解離後、標的タンパク質は、タンパク質分解酵素切断および質量分析の対象とされ、それにより、抗体が相互作用する特異的アミノ酸に対応するジュウテリウムで標識された残基が明らかにされる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６７：２５２～２５９頁；ＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ～２６５Ａ頁を参照。
【0138】
用語「エピトープ」は、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、タンパク質の３次フォールディングにより並べて置かれた連続アミノ酸または不連続アミノ酸両方から形成される。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、変性溶媒への曝露の際に典型的に保持され、他方、３次フォールディングにより形成されるエピトープは、変性溶媒での処理の際に典型的に失われる。エピトープは、固有の空間立体構造において少なくとも３個、より通常には、少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を典型的に含む。
【0139】
抗原構造ベースの抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）としても公知の修飾補助プロファイリング（ＭＡＰ）は、化学的または酵素的に修飾された抗原表面へのそれぞれの抗体の結合プロファイルの類似性により、同一の抗原に対して向けられた多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分類する方法である（ＵＳ２００４／０１０１９２０、参照によって全体として本明細書に組み入れられる）。それぞれのカテゴリーは、別のカテゴリーにより表されるエピトープと明らかに異なるか、または部分的に重複するいずれかの固有のエピトープを反映する。この技術は、特徴が、遺伝子学的に明確な抗体に焦点を当てられるように、遺伝子学的に一致する抗体の迅速な選別を可能にする。ハイブリドーマスクリーニングに適用される場合、ＭＡＰは、所望の特徴を有するｍＡｂを産生する稀なハイブリドーマクローンの同定を促進する。ＭＡＰを用いて、本発明の抗体は異なるエピトープに結合する抗体の群に分類される。
【0140】
ある種の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３２７において例示される天然の形態か、もしくは配列番号３２１～３２４において例示される組換え産生されているかのいずれかのＰＤ－１において例示される領域の任意の１つまたはそれ以上の内のエピトープ、またはそのフラグメントに結合する。ある実施形態において、本発明の抗体は、ＰＤ－１のアミノ酸残基２１～１７１からなる群より選択される１個またはそれ以上のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。ある実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３２２により例示される、カニクイザルＰＤ－１のアミノ酸残基１～１４６からなる群より選択される１個またはそれ以上のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。
【0141】
ある種の実施形態において、表１に示される、本発明の抗体は、配列番号３２７のおよそ２１位～およそ１３６の範囲にあるアミノ酸残基；または配列番号３２７のおよそ１３６位～およそ１７１位の範囲にあるアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１
個のアミノ酸配列と相互作用する。これらの領域は、配列番号３２１～３２４において部分的に例示される。
個のアミノ酸配列と相互作用する。これらの領域は、配列番号３２１～３２４において部分的に例示される。
【0142】
本発明は、本明細書における表１において記載される特異的な典型的な抗体、もしくは表１において記載される典型的な抗体のいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体のいずれかと、同一のエピトープ、またはエプトープの部分に結合する、抗ＰＤ－１抗体を含む。同様に、本発明はまた、ＰＤ－１もしくはＰＤ－１フラグメントへの結合について、本明細書における表１において記載される特異的な典型的な抗体、または表１において記載される典型的な抗体のいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体のいずれかと競合する、抗ＰＤ－１抗体も含む。例えば、本発明は、ＰＤ－１への結合について、本明細書における実施例６において定義される１つまたはそれ以上の抗体と交差競合する抗ＰＤ－１抗体（例えば、Ｈ２ａＭ７７８８Ｎ、Ｈ４ｘＨ８９９２Ｐ、Ｈ４ｘＨ８９９９Ｐ、Ｈ１Ｍ７７９９Ｎ、Ｈ２ａＭ７７８０Ｎ、Ｈ１Ｍ７８００Ｎ、Ｈ２ａＭ７７９４Ｎ、Ｈ２ａＭ７７９８Ｎ、Ｈ４ｘＨ９１４５Ｐ２、Ｈ４Ｈ９０５７Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９１２０Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９１２８Ｐ２、Ｈ４Ｈ９０１９Ｐ、Ｈ４ｘＨ９１１９Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９１３５Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９０３４Ｐ、Ｈ２ａＭ７７９０Ｎ、Ｈ４ｘＨ９０３５Ｐ、Ｈ４ｘＨ９０３７Ｐ、Ｈ４ｘＨ９０４５Ｐ、およびＨ２ａＭ７７９５Ｎ）を含む。
【0143】
当該技術分野において公知の慣例的方法を用いることにより、抗体が、参照抗ＰＤ－１抗体と同一のエピトープに結合するか、または結合について参照抗ＰＤ－１抗体と競合するかどうかを容易に決定することができる。例えば、試験抗体が、本発明の参照抗ＰＤ－１抗体と同一のエピトープに結合するかを決定するために、参照抗体を飽和条件下でＰＤ－１タンパク質またはペプチドに結合させることを可能にする。次に、ＰＤ－１分子に結合する試験抗体の能力が評価される。試験抗体は、参照抗ＰＤ－１抗体との飽和結合後にＰＤ－１に結合することができるなら、試験抗体は、参照抗ＰＤ－１抗体より異なるエピトープに結合すると結論付けられる。他方、試験抗体は、参照抗ＰＤ－１抗体との飽和結合後にＰＤ－１タンパク質に結合することができないなら、次に、試験抗体は、本発明の参照抗ＰＤ－１抗体により結合されるエピトープと同一のエピトープに結合する。
【0144】
抗体が、結合について参照抗ＰＤ－１抗体と競合するかを決定するために、上で記載された結合方法論は、２つの方針で行われる。第１の方針において、参照抗体を、飽和条件下でＰＤ－１タンパク質に結合させることを可能にし、続いて、試験抗体のＰＤ－１分子への結合が評価される。第２の方針において、試験抗体を、飽和条件下でＰＤ－１分子に結合させることを可能にし、続いて、参照抗体のＰＤ－１分子への結合が評価される。両方の方針において、第１の（飽和）抗体のみが、ＰＤ－１分子に結合する能力があるなら、次に、試験抗体と参照抗体は、ＰＤ－１への結合について競合すると結論付けられる。当業者により理解される通り、結合について参照抗体と競合する抗体は、参照抗体と一致するエピトープに必ずしも結合しないが、重複または隣接するエピトープに結合することにより、参照抗体の結合を立体的に遮断する。
【0145】
２つの抗体は、それぞれが、他方の抗原への結合を競合的に阻害（遮断）するなら、同一または重複するエピトープに結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰の一方の抗体が、他方の結合を、競合的結合アッセイにおいて測定される、少なくとも５０％だが、好ましくは、７５％、９０％、もしくは９９％でさえ阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０年５０：１４９５～１５０２頁を参照）。あるいは、一方の抗体の結合を低減するか、もしくは除去する抗原における本質的に全てのアミノ酸変異が、他方の結合を低減するか、または除去するなら、２つの抗体は同一のエピトープを有する。一方の抗体の結合を低減するか、もしくは除去する、いくつかのアミノ酸変異が、他方の結合を低減するか、または除去するなら、２つの抗体は重複するエピトープを有する。
【0146】
次に、さらなる慣習的実験（例えば、ペプチド変異、および結合解析）を行い、試験抗体の結合の観察された欠如が、事実上、参照抗体と同一のエピトープへの結合に起因するかどうか、または立体的遮断（もしくは別の現象）が、観察された結合の欠如に関与するかが確認される。この選別の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当該技術分野において利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを用いて行われる。
【0147】
免疫複合体
本発明は、細胞毒素、またはがんを処置するための化学療法剤のような、治療部分に結合したヒト抗ＰＤ－１モノクローナル抗体（「免疫複合体」）を包含する。本明細書において用いられる用語「免疫複合体」は、細胞毒素、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチドもしくはタンパク質、もしくは治療剤に化学的または生物学的に結合される抗体を指す。抗体は、その標的に結合することができる限り、分子に沿った任意の位置において、細胞毒素、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチド、または治療剤に結合される。免疫複合体の例は、抗体薬物複合体、および抗体と毒素の融合タンパク質を含む。１つの実施形態において、剤は、ＰＤ－１に対する第２の異なる抗体である。ある種の実施形態において、抗体は、腫瘍細胞、またはウイルス性に感染した細胞に特異的な剤に結合される。抗ＰＤ－１抗体に結合される治療部分のタイプは、処置されるべき条件、および達成されるべき所望の治療効果を考慮する。免疫複合体を形成させるのに適切な剤の例は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照。
本発明は、細胞毒素、またはがんを処置するための化学療法剤のような、治療部分に結合したヒト抗ＰＤ－１モノクローナル抗体（「免疫複合体」）を包含する。本明細書において用いられる用語「免疫複合体」は、細胞毒素、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチドもしくはタンパク質、もしくは治療剤に化学的または生物学的に結合される抗体を指す。抗体は、その標的に結合することができる限り、分子に沿った任意の位置において、細胞毒素、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチド、または治療剤に結合される。免疫複合体の例は、抗体薬物複合体、および抗体と毒素の融合タンパク質を含む。１つの実施形態において、剤は、ＰＤ－１に対する第２の異なる抗体である。ある種の実施形態において、抗体は、腫瘍細胞、またはウイルス性に感染した細胞に特異的な剤に結合される。抗ＰＤ－１抗体に結合される治療部分のタイプは、処置されるべき条件、および達成されるべき所望の治療効果を考慮する。免疫複合体を形成させるのに適切な剤の例は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照。
【0148】
多特異性抗体
本発明の抗体は、単特異性、二重特異性、または多特異性である。多特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であるか、または１つより多くの標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有する。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０～６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８～２４４頁を参照。
本発明の抗体は、単特異性、二重特異性、または多特異性である。多特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であるか、または１つより多くの標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有する。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０～６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８～２４４頁を参照。
【0149】
１つの態様において、本発明は、多特異性抗原結合分子、またはその抗原結合フラグメントを含み、ここで、免疫グロブリンの１つの特異性は、ＰＤ－１の細胞外ドメイン、またはそのフラグメントに特異的であり、免疫グロブリンの他の特異性は、ＰＤ－１の細胞外ドメイン、もしくは第２の治療標的の外側の結合に特異的であるか、または治療部分に結合される。ある種の実施形態において、第１の抗原結合特異性は、ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２、またはそのフラグメントを含む。本発明のある種の実施形態において、免疫グロブリンの一方の特異性は、ＰＤ－１のアミノ酸残基２１～１７１（配列番号３２７）、またはそのフラグメントを含むエピトープに特異的であり、免疫グロブリンの他の特異性は、第２の標的抗原に特異的である。第２の標的抗原は、ＰＤ－１と同一の細胞上、または異なる細胞上にある。１つの実施形態において、第２の標的細胞は、Ｂ細胞、抗原提示細胞、単球、マクロファージ、または樹状細胞のようなＴ細胞以外の免疫細胞上にある。ある実施形態において、第２の標的抗原は、腫瘍細胞上、または自己免疫組織細胞上、またはウイルス性に感染した細胞上に存在する。
【0150】
別の態様において、本発明は、ＰＤ－１に結合する第１の抗原結合特異性、およびＴ細胞受容体、Ｂ細胞受容体、またはＦｃ受容体に結合する第２の抗原結合特異性を含む多特異性抗原結合分子またはその抗原結合フラグメントを提供する。関連する態様において、本発明は、ＰＤ－１に結合する第１の抗原結合特異性、ならびにＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、およびＣＤ１６０のような異なるＴ細胞共阻害分子に結合する第２の抗原結合
特異性を含む多特異性抗原結合分子またはその抗原結合フラグメントを提供する。
特異性を含む多特異性抗原結合分子またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【0151】
別の態様において、本発明は、ＰＤ－１に結合する第１の抗原結合特異性、および自己免疫組織特異的抗原に結合する第２の抗原結合特異性を含む多特異性抗原結合分子またはその抗原結合フラグメントを提供する。ある種の実施形態において、抗体は、活性化またはアゴニスト抗体である。
【0152】
本発明の多特異性抗原結合分子のいずれか、またはその変異体は、当業者に公知であろう、標準的分子生物学的技術（例えば、組み換えＤＮＡ、およびタンパク質発現技術）を用いて構築される。
【0153】
ある実施形態において、ＰＤ－１特異的抗体は、ＰＤ－１の別個のドメインに結合する可変領域が、単一の結合分子内に二重－ドメイン特異性を付与するよう一緒に結合される、二重特異性フォーマット（「二重特異性」）で作製する。適切には、設計された二重特異性は、特異性および結合活性両方の増大を通じて、全体的なＰＤ－１阻害性効能を増強する。個々のドメイン（例えば、Ｎ末端のドメインのセグメント）についての特異性を有する、または１つのドメイン内の異なる領域に結合する可変領域は、それぞれの領域が、別個のエピトープ、または１つのドメイン内の異なる領域に同時に結合することを可能にする、構造スキャフォールド上で対形成される。二重特異性についての１つの例において、１つのドメインについての特異性を有する結合剤由来の重鎖可変領域（ＶＨ）を、第２のドメインについての特異性を有する、一連の結合剤由来の軽鎖可変領域（ＶＬ）と再度組み合わせて、そのＶＨについての元の特異性を壊すことなく、元のＶＨと対形成させる、非同族ＶＬパートナーが同定される。この方法において、単一のＶＬセグメント（例えば、ＶＬ１）は、２つの異なるＶＨドメイン（例えば、ＶＨ１、およびＶＨ２）と組み合わされて、２つの結合「アーム」（ＶＨ１－ＶＬ１、およびＶＨ２－ＶＬ１）を含む二重特異性を生じる。単一のＶＬセグメントの使用は、システムの複雑さを低減し、これにより、単純化し、二重特異性を生じるために用いられるクローニング、発現、および精製方法における効率を増大させる（例えば、ＵＳＳＮ１３／０２２７５９、およびＵＳ２０１０／０３３１５２７を参照）。
【0154】
あるいは、１つより多くのドメイン、および非限定的に、例えば、第２の異なる抗ＰＤ－１抗体のような第２の標的に結合する抗体は、本明細書において記載される技術、または当業者に公知の他の技術を用いて、二重特異性フォーマットで調製される。別個の領域に結合する抗体可変領域を、例えば、ＰＤ－１の細胞外ドメイン上の関連部位に結合する可変領域と一緒に結合させて、単一の結合分子内の二重－抗原特異性が確かにされる。適切には、この性質の設計された二重特異性は、二重機能を果たす。細胞外ドメインについての特異性を有する可変領域は、細胞外ドメインの外側についての特異性を有する可変領域と組み合わされ、それぞれの可変領域が、別の抗原に結合することを可能にする、構造スキャフォールド上で対形成される。
【0155】
本発明の文脈において用いられる典型的な二重特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメイン、および第２のＩｇ ＣＨ３ドメインの使用を含み、ここで、第１および第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、少なくとも１個のアミノ酸により互いに異なり、ここで、少なくとも１個のアミノ酸相違が、アミノ酸相違を欠く二重特異性抗体と比較して、タンパク質Ａへの二重特異性抗体の結合を低減する。１つの実施形態において、第１のＩｇ ＣＨ３ドメインは、タンパク質Ａに結合し、第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエキソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによりＨ４３５Ｒ）のようなタンパク質Ａ結合を低減するか、または消失させる、変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによりＹ４３６Ｆ）をさらに含む。第２のＣＨ３内で見出されるさらなる修飾は：ＩｇＧ１抗体の場合において、Ｄ
１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵにより、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合において、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵにより、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合において、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵにより、Ｑ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）を含む。上で記載された二重特異性抗体フォーマットにおけるバリエーションは、本発明の範囲内であると考えられる。
１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵにより、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合において、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵにより、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合において、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、ならびにＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵにより、Ｑ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）を含む。上で記載された二重特異性抗体フォーマットにおけるバリエーションは、本発明の範囲内であると考えられる。
【0156】
本発明の文脈において用いられる他の典型的な二重特異性フォーマットは、限定されることなく、例えば、ｓｃＦｖ－ベースもしくは二重特異性抗体二重特異性フォーマット、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、クアドローマ、ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ、共通軽鎖（例えば、ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ｂｏｄｙ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、ならびにＭａｂ２二重特異性フォーマットを含む（例えば、前述のフォーマットの説明のため、Ｋｌｅｉｎら、２０１２年、ｍＡｂｓ４：６、１～１１頁、およびそこで引用される参考文献を参照）。二重特異性抗体はまた、ペプチド／核酸結合を用いても構築され、例えば、ここで、直交性化学反応性（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）を有する非天然のアミノ酸を用いて、部位特異的抗体－オリゴヌクレオチド結合を生じ、次に、規定された組成、原子価、および幾何学を有する多量体複合体に自己アセンブルする（例えば、Ｋａｚａｎｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：２０１２年１２月４日］を参照）。
【0157】
治療投与および製剤
本発明は、本発明の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む治療組成物を提供する。治療組成物は、本発明に従い、輸送、デリバリー、寛容の好転などをもたらすよう製剤に取り込まれる、適切な担体、賦形剤、および他の剤と共に投与される。多数の適切な製剤は、全ての医薬化学者に公知の処方書：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡにおいて見出される。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ジェル、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオンまたは陰イオン）含有ベシクル（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標））、ＤＮＡ結合体、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ジェル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ
ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ５２：２３８～３１１頁も参照。
本発明は、本発明の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む治療組成物を提供する。治療組成物は、本発明に従い、輸送、デリバリー、寛容の好転などをもたらすよう製剤に取り込まれる、適切な担体、賦形剤、および他の剤と共に投与される。多数の適切な製剤は、全ての医薬化学者に公知の処方書：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡにおいて見出される。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ジェル、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオンまたは陰イオン）含有ベシクル（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標））、ＤＮＡ結合体、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ジェル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ
ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ５２：２３８～３１１頁も参照。
【0158】
抗体の用量は、投与されるべき対象の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路などに依存して変動する。本発明の抗体が、成人患者において疾患もしくは障害を処置するために、またはかかる疾患の予防のため用いられる場合、本発明の抗体を、通常、体重１ｋｇ当たり約０．１～約６０ｍｇ、より好ましくは、体重１ｋｇ当たり約５～約６０、約１０～約５０、または約２０～約５０ｍｇの単回用量で投与することが有利である。状態の重症度に依存して、処置の頻度および持続時間は調節される。ある種の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも約０．１ｍｇ～約８００ｍｇ、約１～約５００ｍｇ、約５～約３００ｍｇ、または約１０～約２００ｍｇ、～約１００ｍｇ、もしくは～約５０ｍｇの開始用量として投与される。ある種の実施形態において、開始用量に続き、開始用量のものとおよそ同一であるか、またはそれ未満である量
における第２または多数の続く用量の抗体またはその抗原結合フラグメントが投与され、ここで、続く用量は、少なくとも１日～３日；少なくとも１週；少なくとも２週；少なくとも３週；少なくとも４週；少なくとも５週；少なくとも６週；少なくとも７週；少なくとも８週；少なくとも９週；少なくとも１０週；少なくとも１２週；または少なくとも１４週により隔てられる。
における第２または多数の続く用量の抗体またはその抗原結合フラグメントが投与され、ここで、続く用量は、少なくとも１日～３日；少なくとも１週；少なくとも２週；少なくとも３週；少なくとも４週；少なくとも５週；少なくとも６週；少なくとも７週；少なくとも８週；少なくとも９週；少なくとも１０週；少なくとも１２週；または少なくとも１４週により隔てられる。
【0159】
種々のデリバリーシステムが公知であり、これを用いて、本発明の医薬組成物、例えば、リポソームにおけるカプセル封入、微粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現する能力がある組み換え細胞、受容体により仲介されるエンドサイトーシスが投与される（例えば、Ｗｕら（１９８７年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９～４４３２頁を参照）。導入の方法は、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路を含むが、これらに限定されない。組成物は、任意の好都合な経路により、例えば、注入もしくはボーラス注射により、上皮もしくは皮膚粘膜裏層（例えば、経口粘膜、直腸、および腸粘膜など）を通じた吸収により、投与され、他の生物学的に活性な剤と一緒に投与される。投与は全身または局所である。医薬組成物はまた、ベシクル、特に、リポソームにおいてもデリバリーされる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７～１５３３頁を参照）。
【0160】
本発明の抗体をデリバリーするためのナノ粒子の使用も本明細書において考えられる。抗体結合ナノ粒子は、治療上および診断上の適用両方のため用いられる。抗体結合ナノ粒子、ならびに調製および使用方法は、Ａｒｒｕｅｂｏ，Ｍ．ら、２００９年（Ｊ． Ｎａｎｏｍａｔ．における「Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」２００９巻、論文番号４３９３８９、２４頁、ｄｏｉ：１０．１１５５／２００９／４３９３８９）（参照によって本明細書において組み入れられる）により詳細に記載される。ナノ粒子が開発され、腫瘍細胞、または自己免疫組織細胞、またはウイルス性に感染した細胞を標的化するための医薬組成物において含有される抗体に結合される。薬物デリバリー用ナノ粒子はまた、例えば、ＵＳ８２５７７４０、またはＵＳ８２４６９９５（それぞれ、参照によって、全体として本明細書に組み入れられる）においても記載される。
【0161】
ある種の状況において、医薬組成物は、制御放出システムにおいてデリバリーされる。１つの実施形態において、ポンプが用いられる。別の実施形態において、ポリマー材料が用いられる。なお別の実施形態において、制御放出システムは、組成物の標的の近くに置かれ、従って、少量の全身性用量のみが必要とされる。
【0162】
注射可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内、頭蓋内、腹腔内および筋内注射用形態、点滴注入用形態などを含む。これらの注射可能な調製物は、公的に公知の方法により調製される。例えば、注射可能な調製物は、例えば、注射のため通常用いられる無菌の水性媒体もしくは油性媒体において、上で記載された抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化することにより、調製される。注射用水性媒体として、例えば、生理的食塩水、グルコースを含有する等調溶液、および他の補助剤などが存在し、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などのような適切な溶解剤と併用で用いられる。油性媒体として、例えば、ゴマ油、大豆油などが利用され、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような溶解剤と併用して用いられる。従って、調製される注射は、適切なアンプルに好ましく充填される。
【0163】
本発明の医薬組成物は、標準的な針およびシリンジで皮下または静脈内にデリバリーされる。加えて、皮下デリバリーに関して、ペンデリバリー装置は、本発明の医薬組成物の
デリバリーにおいて容易に適用される。かかるペンデリバリー装置は、再利用可能であるか、または使い捨てである。再利用可能なペンデリバリー装置は、医薬組成物を含有する置換可能なカートリッジを一般に利用する。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与されると、カートリッジは空になり、空のカートリッジは容易に廃棄され、医薬組成物を含有する新しいカートリッジで置き換えられる。次に、ペンデリバリー装置は再利用される。使い捨てのペンデリバリー装置において、置き換え可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てのペンデリバリー装置は、装置内のリザーバーにおいて保持される医薬組成物で予め充填される。リザーバーは、医薬組成物が空になると、全体の装置は廃棄される。
デリバリーにおいて容易に適用される。かかるペンデリバリー装置は、再利用可能であるか、または使い捨てである。再利用可能なペンデリバリー装置は、医薬組成物を含有する置換可能なカートリッジを一般に利用する。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与されると、カートリッジは空になり、空のカートリッジは容易に廃棄され、医薬組成物を含有する新しいカートリッジで置き換えられる。次に、ペンデリバリー装置は再利用される。使い捨てのペンデリバリー装置において、置き換え可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てのペンデリバリー装置は、装置内のリザーバーにおいて保持される医薬組成物で予め充填される。リザーバーは、医薬組成物が空になると、全体の装置は廃棄される。
【0164】
多数の再利用可能なペン、および自動注射デリバリー装置は、本発明の医薬組成物の皮下デリバリーにおいて適用される。例は、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）（２、３例のみを挙げる）を含むが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下デリバリーにおいて適用される、使い捨てのペンデリバリー装置の例は、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、ならびにＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）（２、３例のみを挙げる）を含むが、確かにこれらに限定されない。
【0165】
有利には、上で記載された経口または非経口使用用医薬組成物は、有効成分の用量に適合するよう適した単位用量における投薬形態に調製される。単位用量におけるかかる投薬形態は、例えば、錠剤、ピル、カプセル剤、注射（アンプル剤）、坐剤などを含む。含有される抗体の量は、一般に、単位用量において；特に、注射の形態において１つの投薬形態当たり約５～約５００ｍｇ、他の投薬形態のため約５～約１００ｍｇ、および約１０～約２５０ｍｇの抗体が含有されることが好ましい。
【0166】
抗体の治療上の使用
本発明の抗体は、とりわけ、ＰＤ－１発現、シグナル伝達、もしくは活性に関連するか、もしくはそれにより仲介される、もしくはＰＤ－１とＰＤ－１リガンド（例えば、ＰＤ－Ｌ１、もしくはＰＤ－Ｌ２）との間の相互作用を遮断すること、もしくはそうでなければＰＤ－１活性および／もしくはシグナル伝達を阻害することにより処置可能な、任意の疾患または障害の処置、予防、および／または改善に有用である。例えば、本発明は、処置を必要とする患者に、本明細書において記載される抗ＰＤ－１抗体（もしくは抗ＰＤ－１抗体を含む医薬組成物）を投与することによる、がん（腫瘍成長阻害）、慢性ウイルス感染症、および／または自己免疫疾患を処置する方法を提供する。本発明の抗体は、がん、自己免疫疾患、もしくはウイルス感染症のような疾患、もしくは障害、もしくは状態の
処置、予防、および／もしくは改善するのに、ならびに／またはかかる疾患、障害、もしくは状態に関連する少なくとも１つの症状を改善するのに有用である。本明細書において記載される処置の方法の文脈において、抗ＰＤ－１抗体は、単独療法として（すなわち、唯一の治療剤として）、または１つもしくはそれ以上のさらなる治療剤（その例は、本明細書において他の場所で記載される）との併用で投与される。
本発明の抗体は、とりわけ、ＰＤ－１発現、シグナル伝達、もしくは活性に関連するか、もしくはそれにより仲介される、もしくはＰＤ－１とＰＤ－１リガンド（例えば、ＰＤ－Ｌ１、もしくはＰＤ－Ｌ２）との間の相互作用を遮断すること、もしくはそうでなければＰＤ－１活性および／もしくはシグナル伝達を阻害することにより処置可能な、任意の疾患または障害の処置、予防、および／または改善に有用である。例えば、本発明は、処置を必要とする患者に、本明細書において記載される抗ＰＤ－１抗体（もしくは抗ＰＤ－１抗体を含む医薬組成物）を投与することによる、がん（腫瘍成長阻害）、慢性ウイルス感染症、および／または自己免疫疾患を処置する方法を提供する。本発明の抗体は、がん、自己免疫疾患、もしくはウイルス感染症のような疾患、もしくは障害、もしくは状態の
処置、予防、および／もしくは改善するのに、ならびに／またはかかる疾患、障害、もしくは状態に関連する少なくとも１つの症状を改善するのに有用である。本明細書において記載される処置の方法の文脈において、抗ＰＤ－１抗体は、単独療法として（すなわち、唯一の治療剤として）、または１つもしくはそれ以上のさらなる治療剤（その例は、本明細書において他の場所で記載される）との併用で投与される。
【0167】
本発明のある実施形態において、本明細書において記載される抗体は、腎細胞癌、結腸直腸がん、非小細胞肺がん、脳がん（例えば、多形神経膠芽腫）、頭部および頸部の扁平上皮癌、胃がん、前立腺がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、多発性骨髄腫、ならびにメラノーマを含むが、これらに限定されない、原発性または再発性がんに罹患している対象を処置するのに有用である。
【0168】
抗体を用いて、がんの早期ステージまたは末期ステージの症状が処置される。１つの実施形態において、本発明の抗体またはそのフラグメントを用いて、転移性がんが処置さる。抗体は、固形腫瘍および血液がん両方の腫瘍成長の低減、または阻害、または収縮において有用である。ある種の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントでの処置は、対象において腫瘍の５０％より多くの退縮、６０％より多くの退縮、７０％より多くの退縮、８０％より多くの退縮、または９０％より多くの退縮を導く。ある種の実施形態において、抗体を用いて、腫瘍の再発が予防される。ある種の実施形態において、抗体は、がんを有する対象における全体的生存の延長において有用である。ある実施形態において、抗体は、がんに罹患している患者における長期生存を維持しながら、化学療法または放射線療法に起因する毒性の低減において有用である。
【0169】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は、慢性ウイルス感染症に罹患している対象を処置するのに有用である。ある実施形態において、本発明の抗体は、宿主におけるウイルスタイターの低減、および／または消耗されたＴ細胞のレスキューにおいて有用である。ある種の実施形態において、本発明の抗体またはそのフラグメントを用いて、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）による慢性ウイルス感染症が処置される。ある実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、治療用量で、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、もしくはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、もしくは肝炎Ｂ／Ｃウイルス（ＨＢＶ／ＨＣＶ）による感染症を有する患者に投与される。関連する実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて、カニクイザルのようなサル対象においてサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）による感染症が処置される。
【0170】
ある種の実施形態において、本発明の遮断抗体は、がんまたはウイルス感染症に罹患している対象に、治療上有効量で投与される。
【0171】
ある種の実施形態において、本発明の抗体は、円形脱毛症、自己免疫性肝炎、セリアック病、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、白斑、自己免疫性膵炎、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性血小板減少性紫斑病、クローン病、Ｉ型糖尿病、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、乾癬性関節炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、脈管炎、およびウェゲナー肉芽腫症を含むが、これらに限定されない、自己免疫疾患の処置に有用である。ある種の実施形態において、本発明の活性化抗体を用いて、自己免疫疾患に罹患している対象が処置される。
【0172】
本発明の１つまたはそれ以上の抗体を投与して、疾患または障害の症状または状態のうちの１つまたはそれ以上の重症度が、軽減されるか、または予防されるか、または低減される。
【0173】
本発明の１つまたはそれ以上の抗体を、がん、自己免疫疾患、および慢性ウイルス感染症のような疾患もしくは障害を発症するリスクのある患者に予防的に用いることも本明細書において考えられる。
【0174】
本発明のさらなる実施形態において、本抗体は、がん、自己免疫疾患、またはウイルス感染症に罹患している患者を処置するための医薬組成物の調製のため用いられる。本発明の別の実施形態において、本抗体は、がん、自己免疫疾患、もしくはウイルス感染症を処置するのに有用な、当業者に公知の任意の他の剤を用いた補助療法、または任意の他の療法として用いられる。
【0175】
併用療法および製剤
併用療法は、本発明の抗ＰＤ－１抗体、および本発明の抗体、または本発明の抗体の生物学的に活性なフラグメントと有利に組み合わされる、任意のさらなる治療剤を含む。
併用療法は、本発明の抗ＰＤ－１抗体、および本発明の抗体、または本発明の抗体の生物学的に活性なフラグメントと有利に組み合わされる、任意のさらなる治療剤を含む。
【0176】
本発明の抗体は、例えば、腎細胞癌、結腸直腸がん、多形神経膠芽腫、頭部および頸部の扁平上皮癌、非小細胞肺がん、大腸がん、卵巣がん、腺癌、前立腺がん、グリオーマ、ならびにメラノーマを含むがんを処置するために用いられる、１つまたはそれ以上の抗がん薬または療法と相乗的に併用される。本明細書において、腫瘍成長を阻害し、および／またはがん患者の生存を増強するために、免疫刺激および／または免疫支持療法と併用して本発明の抗ＰＤ－１抗体を用いることも考えられる。免疫刺激療法は、抑制された免疫細胞上で「ブレーキを放出すること」、または免疫応答を活性化するための「アクセルを踏むこと」いずれかにより、免疫細胞活性を増強するための直接的な免疫刺激療法を含む。例は、他のチェックポイント受容体、ワクチン接種、およびアジュバントを標的化することを含む。免疫抑制様式は、免疫原性の細胞死、炎症を促進することにより、腫瘍の抗原性を増大させるか、または抗腫瘍免疫応答を促進する他の直接的効果を有する。例は、放射線、化学療法、抗拮抗剤、および手術を含む。
【0177】
種々の実施形態において、本発明の１つまたはそれ以上の抗体は、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体、ＰＤ－１に対する２次抗体（例えば、ニボルマブ）、ＬＡＧ－３阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、別のＴ細胞共阻害分子もしくはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０、もしくはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、アフリベルセプトのような「ＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ」、もしくはＵＳ７，０８７，４１１に記載の他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質、もしくは抗ＶＥＧＦ抗体、もしくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、もしくはラニビズマブ）、もしくはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、もしくはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、共刺激性受容体のアゴニスト（例えば、グルココルチコイドにより誘導されるＴＮＦＲにより放出されるタンパク質のアゴニスト）、腫瘍特異的抗原（例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、メラノーマ関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９）に対する抗体、ワクチン（例えば、バチルス・カルメッテ・グエリン、がんワクチン）、抗原提示を増大するためのアジュバント（例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）、二重特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒素、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボ
プラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５のようなサイトカイン、抗体と薬物結合体（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド、および非ステロイド系抗炎症薬）、抗オキシダントのような栄養補助剤、または任意のがんを処置するための対症ケアと併用して用いられる。ある種の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、抗腫瘍応答を増強するための、樹状細胞ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍細胞ワクチンなどを含む、がんワクチンと併用して用いられる。本発明の抗ＰＤ－１抗体と併用して用いられる、がんワクチンの例は、メラノーマおよび膀胱がんのためのＭＡＧＥ３ワクチン、乳がんのためのＭＵＣ１ワクチン、脳がん（多形神経膠芽腫を含む）のためのＥＧＦＲｖ３（例えば、Ｒｉｎｄｏｐｅｐｉｍｕｔ）、またはＡＬＶＡＣ－ＣＥＡ（ＣＥＡ＋がんのため）を含む。
プラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５のようなサイトカイン、抗体と薬物結合体（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド、および非ステロイド系抗炎症薬）、抗オキシダントのような栄養補助剤、または任意のがんを処置するための対症ケアと併用して用いられる。ある種の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、抗腫瘍応答を増強するための、樹状細胞ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍細胞ワクチンなどを含む、がんワクチンと併用して用いられる。本発明の抗ＰＤ－１抗体と併用して用いられる、がんワクチンの例は、メラノーマおよび膀胱がんのためのＭＡＧＥ３ワクチン、乳がんのためのＭＵＣ１ワクチン、脳がん（多形神経膠芽腫を含む）のためのＥＧＦＲｖ３（例えば、Ｒｉｎｄｏｐｅｐｉｍｕｔ）、またはＡＬＶＡＣ－ＣＥＡ（ＣＥＡ＋がんのため）を含む。
【0178】
ある種の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、耐久性のある抗腫瘍応答を生じ、および／またはがんを有する患者の生存を増強する方法において放射線療法と併用して投与される。ある実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、がん患者への放射線療法の投与に先立ち、同時に、または後に、投与される。例えば、放射線療法は、腫瘍病変への１回またはそれ以上の投薬において投与され、続いて、本発明の抗ＰＤ－１抗体の１回またはそれ以上の投薬において投与される。ある実施形態において、放射線療法は、患者の腫瘍の局所免疫原性を増強する（放射線を補助する）ため、および／または腫瘍細胞を殺傷するため（切除照射）、腫瘍病変に局所的に投与され、続いて、本発明の抗ＰＤ－１抗体が全身的に投与される。例えば、頭蓋内照射は、本発明の抗ＰＤ－１抗体の全身性投与と併用して、脳がん（例えば、多形神経膠芽腫）を有する患者に投与される。ある種の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、放射線療法、および化学療法剤（例えば、テモゾロミド）またはＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト）と併用して投与される。
【0179】
ある種の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、ＬＣＭＶ、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶにより引き起こされる慢性ウイルス感染症を処置するための１つまたはそれ以上の抗ウイルス薬と併用して投与される。抗ウイルス薬の例は、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンツ、コビシスタット、テノホビル、リルピビリン、およびコルチコステロイドを含むが、これらに限定されない。ある実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、慢性ウイルス感染症を処置するためのＬＡＧ３阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、または別のＴ細胞共阻害分子の任意のアンタゴニストと併用して投与される。
【0180】
ある種の実施形態において、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、自己免疫疾患の処置のため、免疫細胞上のＦｃ受容体に対する抗体と組み合わされる。１つの実施形態において、本発明の抗体またはそのフラグメントは、自己免疫組織に特異的な抗原に標的化された抗体または抗原結合タンパク質と併用して投与される。ある種の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｆｃα（例えば、ＣＤ８９）、Ｆｃγ（例えば、ＣＤ６４、ＣＤ３２、ＣＤ１６ａ、およびＣＤ１６ｂ）、ＣＤ１９などを含むが、これらに限定されない、Ｔ細胞受容体もしくはＢ細胞受容体に標的化された抗体または抗原結合タンパク質と併用して投与される。本発明の抗体またはそのフラグメントは、円形脱毛症、自己免疫性肝炎、セリアック病、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、白斑、自己免疫性膵炎、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性血小板減少性紫斑病、クローン病、Ｉ型糖尿病、好
酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、乾癬性関節炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、脈管炎、およびウェゲナー肉芽腫症を含むが、これらに限定されない、自己免疫疾患もしくは障害を処置するための、当該技術分野において公知の任意の薬物または治療（例えば、コルチコステロイド、および他の免疫抑制剤）と併用して用いられる。
酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、乾癬性関節炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、脈管炎、およびウェゲナー肉芽腫症を含むが、これらに限定されない、自己免疫疾患もしくは障害を処置するための、当該技術分野において公知の任意の薬物または治療（例えば、コルチコステロイド、および他の免疫抑制剤）と併用して用いられる。
【0181】
さらなる治療上有効な剤／成分は、本発明の抗ＰＤ－１抗体投与に先立ち、併用して、または後に投与される。本開示の目的のため、かかる投与治療計画は、第２の治療上活性な成分「と併用した」抗ＰＤ－１抗体の投与とみなされる。
【0182】
さらなる治療上有効な成分は、本発明の抗ＰＤ－１抗体の投与に先立ち、対象に投与される。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、または１分未満前に投与されるなら、第１の成分は、第２の成分「に先立ち」投与されるとみなされる。他の実施形態において、さらなる治療上有効な成分は、本発明の抗ＰＤ－１抗体の投与後、対象に投与される。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与されるなら、第１の成分は、第２の成分「の後に」投与されるとみなされる。なお他の実施形態において、さらなる治療上有効な成分は、本発明の抗ＰＤ－１抗体の投与と同時に対象に投与される。本発明の目的上、「同時」投与は、例えば、単回投薬形態（例えば、共製剤化された）、または互いに約３０分もしくはそれ以下の内に対象に投与される別の投薬形態における対象への抗ＰＤ－１抗体、およびさらなる治療上活性な成分の投与を含む。別の投薬形態で投与されるなら、それぞれの投薬形態は、同一の経路を介して投与される（例えば、抗ＰＤ－１抗体、およびさらなる治療上活性な成分両方が、静脈内、皮下などで投与される）；あるいは、それぞれの投薬形態は、異なる経路を介して投与される（例えば、抗ＰＤ－１抗体は静脈内投与され、さらなる治療上活性な成分は皮下投与される）。任意の現象において、単回投薬形態、同一の経路による別の投薬形態、または異なる経路による別の投薬形態において成分を投与することは、本開示の目的のため、全て「併用投与」とみなされる。本開示の目的のため、さらなる治療上活性な成分の投与「に先立つ」、「同時」、または「の後の」（それらの用語は、本明細書において上で定義された通り）抗ＰＤ－１抗体の投与は、さらなる治療上活性な成分「と併用した」抗ＰＤ－１抗体の投与とみなされる。
【0183】
本発明は、医薬組成物を含み、ここで、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、様々な投薬併用を用いて、本明細書において他の場所で記載される通り、さらなる治療上活性な成分の１つまたはそれ以上と共製剤化される。
【0184】
本発明の抗ＰＤ－１抗体が、抗ＰＤ－１抗体およびＶＥＧＦ アンタゴニストを含む共製剤の投与を含む、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトのようなＶＥＧＦ ｔｒａｐ）と併用して投与される典型的な実施形態において、個々の成分が対象に投与され、および／または様々な投薬併用を用いて共製剤化される。例えば、抗ＰＤ－１抗体は、０．０１ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．５ｍｇ、２．０ｍｇ、２．５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．５ｍｇ、４．０ｍｇ、４．５ｍｇ、５．０ｍｇ、６．０ｍｇ、７．０ｍｇ、８．０ｍｇ、９．０ｍｇ、および１０．０ｍｇからなる群より選択される量で、対象に投与され、ならびに／または共製剤において含有され；ならびにＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトのようなＶＥＧＦ ｔｒａｐ）は、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．
３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２．０ｍｇ、２．１ｍｇ、２．２ｍｇ、２．３ｍｇ、２．４ｍｇ、２．５ｍｇ、２．６ｍｇ、２．７ｍｇ、２．８ｍｇ、２．９ｍｇ、および３．０ｍｇからなる群より選択される量で、対象に投与され、ならびに／または共製剤において含有される。併用／共製剤は、例えば、１週間に２回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、１月毎に１回、２月毎に１回、３カ月毎に１回、４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回などを含む、本明細書において他の場所で開示される投与治療計画のいずれかに従い、対象に投与される。
３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２．０ｍｇ、２．１ｍｇ、２．２ｍｇ、２．３ｍｇ、２．４ｍｇ、２．５ｍｇ、２．６ｍｇ、２．７ｍｇ、２．８ｍｇ、２．９ｍｇ、および３．０ｍｇからなる群より選択される量で、対象に投与され、ならびに／または共製剤において含有される。併用／共製剤は、例えば、１週間に２回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、１月毎に１回、２月毎に１回、３カ月毎に１回、４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回などを含む、本明細書において他の場所で開示される投与治療計画のいずれかに従い、対象に投与される。
【0185】
投与治療計画
本発明のある種の実施形態によると、複数回用量の抗ＰＤ－１抗体（または抗ＰＤ－１抗体、および本明細書において言及される、さらなる治療上活性な剤のいずれかの併用を含む医薬組成物）は、定義される時間経過に渡り、対象に投与される。本発明のこの態様による方法は、対象に、複数回用量の本発明の抗ＰＤ－１抗体を連続して投与することを含む。本明細書において用いられる「連続して投与すること」は、それぞれの用量の抗ＰＤ－１抗体が、対象に、時間における異なる点において、例えば、予め決定された間隔（例えば、時間、日、週、または月）により隔てられた異なる日において投与されることを意味する。本発明は、患者に、単回開始用量の抗ＰＤ－１抗体、続いて、１つまたはそれ以上の２次用量の抗ＰＤ－１抗体、場合により、続いて、１つまたはそれ以上の３次用量の抗ＰＤ－１抗体を連続して投与することを含む方法を含む。抗ＰＤ－１抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの間の用量において投与される。
本発明のある種の実施形態によると、複数回用量の抗ＰＤ－１抗体（または抗ＰＤ－１抗体、および本明細書において言及される、さらなる治療上活性な剤のいずれかの併用を含む医薬組成物）は、定義される時間経過に渡り、対象に投与される。本発明のこの態様による方法は、対象に、複数回用量の本発明の抗ＰＤ－１抗体を連続して投与することを含む。本明細書において用いられる「連続して投与すること」は、それぞれの用量の抗ＰＤ－１抗体が、対象に、時間における異なる点において、例えば、予め決定された間隔（例えば、時間、日、週、または月）により隔てられた異なる日において投与されることを意味する。本発明は、患者に、単回開始用量の抗ＰＤ－１抗体、続いて、１つまたはそれ以上の２次用量の抗ＰＤ－１抗体、場合により、続いて、１つまたはそれ以上の３次用量の抗ＰＤ－１抗体を連続して投与することを含む方法を含む。抗ＰＤ－１抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの間の用量において投与される。
【0186】
用語「開始用量」、「２次用量」、および「３次用量」は、本発明の抗ＰＤ－１抗体の投与の時間的な並びを指す。従って、「開始用量」は、処置計画の開始時に投与される用量であり（「ベースライン用量」としても言及される）；「２次用量」は、開始用量の後に投与される用量であり；「３次用量」は、２次用量後に投与される用量である。開始、２次、および３次用量は、全て、同一量の抗ＰＤ－１抗体を含有するが、一般に、投与の頻度の点で互いに異なる。しかしながら、ある種の実施形態において、開始、２次、および／または３次用量において含有される抗ＰＤ－１抗体の量は、処置の経過中、互いに異なる（例えば、必要に応じて、上方もしくは下方調節される）。ある種の実施形態において、２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、もしくは５回）の用量は、処置治療計画の開始時に、「添加用量」として投与され、続いて、あまり頻繁でない基盤で投与される続く用量（例えば、「維持用量」）が投与される。
【0187】
本発明のある種の典型的な実施形態において、それぞれの２次および／または３次用量は、直前の先行する用量の後、１～２６（例えば、１、１１／２、２、２１／２、３、３１／２、４、４１／２、５、５１／２、６、６１／２、７、７１／２、８、８１／２、９、９１／２、１０、１０１／２、１１、１１１／２、１２、１２１／２、１３、１３１／２、１４、１４１／２、１５、１５１／２、１６、１６１／２、１７、１７１／２、１８、１８１／２、１９、１９１／２、２０、２０１／２、２１、２１１／２、２２、２２１／２、２３、２３１／２、２４、２４１／２、２５、２５１／２、２６、２６１／２、またはそれ以上）週で投与される。本明細書において用いられる語句「直前の先行する用量」は、複数回投与の並びにおいて、中断のない用量の並びで、まさに次の用量の投与に先立ち患者に投与される、抗ＰＤ－１抗体の用量を意味する。
【0188】
本発明のこの態様による方法は、患者に、任意の数の２次および／または３次用量の抗ＰＤ－１抗体を投与することを含む。例えば、ある種の実施形態において、単回２次用量のみが患者に投与される。他の実施形態において、２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回、もしくはそれ以上）の２次用量が患者に投与される。同様に、
ある種の実施形態において、単回の３次用量のみが患者に投与される。他の実施形態において、２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回、もしくはそれ以上）の３次用量が患者に投与される。
ある種の実施形態において、単回の３次用量のみが患者に投与される。他の実施形態において、２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回、もしくはそれ以上）の３次用量が患者に投与される。
【0189】
複数回の２次用量を含む実施形態において、それぞれの２次用量は、他の２次用量と同一の頻度で投与される。例えば、それぞれの２次用量は、直前の先行する用量の１～２週間または１～２カ月後に投与される。同様に、複数回の３次用量を含む実施形態において、それぞれの３次用量は、他の３次用量と同一の頻度で投与される。例えば、それぞれの３次用量は、直前の先行する用量の２～１２週間後に投与される。本発明のある種の実施形態において、２次および／または３次用量が患者に投与される頻度は、処置治療計画の経過に渡り変動する。投与の頻度もまた、医師による処置の経過中、臨床検査に従い個々の患者のニーズに依存して調節される。
【0190】
本発明は、投与治療計画を含み、ここで、２～６回の添加用量は、患者に、第１の頻度（例えば、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、１カ月に１回、２カ月に１回など）で投与され、続いて、２回またはそれ以上の維持用量が、あまり頻繁でない基盤で患者に投与される。例えば、本発明のこの態様によると、添加用量が、例えば、１カ月に１回（例えば、１カ月に１回投与される、２、３、４回、またはそれ以上の添加用量）の頻度で投与されるなら、次に、維持用量が、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、１０週間毎に１回、１２週間毎に１回などで患者に投与される。
【0191】
抗体の診断上の使用
本発明の抗ＰＤ－１抗体を用いて、例えば、診断の目的のため、試料中のＰＤ－１が検出され、および／または測定される。ある実施形態は、がん、自己免疫疾患、もしくは慢性ウイルス感染症のような疾患もしくは障害を検出するためのアッセイにおいて、１つまたはそれ以上の本発明の抗体の使用を考慮する。ＰＤ－１についての典型的な診断アッセイは、例えば、患者から得た試料を、本発明の抗ＰＤ－１抗体と接触させることを含み、ここで、抗ＰＤ－１抗体は、検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識されるか、または患者試料からＰＤ－１を選択的に単離するための捕捉リガンドとして用いられる。あるいは、未標識の抗ＰＤ－１抗体は、検出可能に標識されたそれ自体である２次抗体と組み合わせた診断適用において用いられる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉのようなラジオアイソトープ；フルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミンのような蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼのような酵素である。試料中のＰＤ－１を検出または測定するために用いられる特異的な典型的アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む。
本発明の抗ＰＤ－１抗体を用いて、例えば、診断の目的のため、試料中のＰＤ－１が検出され、および／または測定される。ある実施形態は、がん、自己免疫疾患、もしくは慢性ウイルス感染症のような疾患もしくは障害を検出するためのアッセイにおいて、１つまたはそれ以上の本発明の抗体の使用を考慮する。ＰＤ－１についての典型的な診断アッセイは、例えば、患者から得た試料を、本発明の抗ＰＤ－１抗体と接触させることを含み、ここで、抗ＰＤ－１抗体は、検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識されるか、または患者試料からＰＤ－１を選択的に単離するための捕捉リガンドとして用いられる。あるいは、未標識の抗ＰＤ－１抗体は、検出可能に標識されたそれ自体である２次抗体と組み合わせた診断適用において用いられる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉのようなラジオアイソトープ；フルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミンのような蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼのような酵素である。試料中のＰＤ－１を検出または測定するために用いられる特異的な典型的アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む。
【0192】
本発明によるＰＤ－１診断アッセイにおいて用いられる試料は、患者から得ることができる任意の組織または体液試料を含み、正常もしくは病理条件下で、ＰＤ－１タンパク質、またはそのフラグメントいずれかの検出可能な量を含有する。一般に、健常患者（例えば、がんもしくは自己免疫疾患に苦しまない患者）から得られる特定の試料中のＰＤ－１のレベルは、ベースライン、または標準的ＰＤ－１レベルをまず確立するために測定される。次に、このＰＤ－１のベースラインレベルは、がん関連状態、またはかかる状態に関連する症状を有することが疑われる個人から得られる試料において測定されるＰＤ－１のレベルに対して比較される。
【0193】
ＰＤ－１に特異的な抗体は、さらなる標識もしくは部分を含まず、またはそれらは、Ｎ末端もしくはＣ末端の標識もしくは部分を含有する。１つの実施形態において、標識また
は部分はビオチンである。結合アッセイにおいて、（もしあれば）標識の位置は、ペプチドが結合される表面に関連してペプチドの向きを決定する。例えば、表面がアビジンでコートされるなら、Ｎ末端のビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面の遠位であるように、方向付けられる。
は部分はビオチンである。結合アッセイにおいて、（もしあれば）標識の位置は、ペプチドが結合される表面に関連してペプチドの向きを決定する。例えば、表面がアビジンでコートされるなら、Ｎ末端のビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面の遠位であるように、方向付けられる。
【0194】
本発明の態様は、患者におけるがんまたは自己免疫障害の予測的診断のためのマーカーとしての、開示される抗体の使用に関する。本発明の抗体は、患者においてがんの予後を評価するため、および生存を予測するための診断アッセイにおいて用いられる。
【実施例0195】
以下の実施例は、当業者に本発明の方法および組成物の作り方、ならびに用い方の完全な開示または記載を提供するために記述するものであり、本発明者らが彼らの発明とみなすものの範囲を制限することは意図されない。用いた数字（例えば、量、温度など）に関する正確さを保証するよう試みられたが、実験上の誤差および自差がある程度あることは考慮されるべきである。別段示されなければ、部分は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏におけるものであり、室温は約２５℃であり、圧力は雰囲気においてであるか、または雰囲気に近い。
【実施例0196】
ＰＤ－１に対するヒト抗体の生成
Ｃ９３Ｓ変更を有するＧｅｎＢａｎｋ受託ＮＰ＿００５００９．２（配列番号３２７）のおよそアミノ酸２５～１７０の範囲にあるＰＤ－１のフラグメントを用いて、ＰＤ－１に対するヒト抗体を作製した。免疫応答を刺激するためのアジュバントと共に、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパー軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、免疫原を直接的に投与した。ＰＤ－１特異的イムノアッセイにより、抗体免疫応答をモニターした。所望の免疫応答を達成したら、脾細胞を回収し、マウスミエローマ細胞と融合させて生存能を保持し、ハイブリドーマ細胞株を形成させた。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、選択して、ＰＤ－１特異的抗体を産生する細胞株を同定した。この技術、および上で記載した免疫原を用いて、いくつかの抗ＰＤ－１キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを有する抗体）を得て；この方法で作製した典型的な抗体を、Ｈ１Ｍ７７８９Ｎ、Ｈ１Ｍ７７９９Ｎ、Ｈ１Ｍ７８００Ｎ、Ｈ２Ｍ７７８０Ｎ、Ｈ２Ｍ７７８８Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９０Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９１Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９４Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９５Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９６Ｎ、およびＨ２Ｍ７７９８Ｎと命名した。
Ｃ９３Ｓ変更を有するＧｅｎＢａｎｋ受託ＮＰ＿００５００９．２（配列番号３２７）のおよそアミノ酸２５～１７０の範囲にあるＰＤ－１のフラグメントを用いて、ＰＤ－１に対するヒト抗体を作製した。免疫応答を刺激するためのアジュバントと共に、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパー軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、免疫原を直接的に投与した。ＰＤ－１特異的イムノアッセイにより、抗体免疫応答をモニターした。所望の免疫応答を達成したら、脾細胞を回収し、マウスミエローマ細胞と融合させて生存能を保持し、ハイブリドーマ細胞株を形成させた。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、選択して、ＰＤ－１特異的抗体を産生する細胞株を同定した。この技術、および上で記載した免疫原を用いて、いくつかの抗ＰＤ－１キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを有する抗体）を得て；この方法で作製した典型的な抗体を、Ｈ１Ｍ７７８９Ｎ、Ｈ１Ｍ７７９９Ｎ、Ｈ１Ｍ７８００Ｎ、Ｈ２Ｍ７７８０Ｎ、Ｈ２Ｍ７７８８Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９０Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９１Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９４Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９５Ｎ、Ｈ２Ｍ７７９６Ｎ、およびＨ２Ｍ７７９８Ｎと命名した。
【0197】
Ｕ．Ｓ．２００７／０２８０９４５Ａ１（参照によって、全体として本明細書に具体的に組み入れる）において記載される通り、ミエローマ細胞に融合させることなく、抗原陽性Ｂ細胞から抗ＰＤ－１抗体も直接的に単離した。この方法を用いて、いくつかの完全ヒト抗ＰＤ－１抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを有する抗体）を得て；この方法で作製した典型的な抗体を、次の：Ｈ４Ｈ９０１９Ｐ、Ｈ４ｘＨ９０３４Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９０３５Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９０３７Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９０４５Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９０４８Ｐ２、Ｈ４Ｈ９０５７Ｐ２、Ｈ４Ｈ９０６８Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９１１９Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９１２０Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９１２８Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９１３５Ｐ２、Ｈ４ｘＨ９１４５Ｐ２、Ｈ４ｘＨ８９９２Ｐ、Ｈ４ｘＨ８９９９Ｐ、およびＨ４ｘＨ９００８Ｐと命名した。
【0198】
この実施例の方法に従い作製した典型的な抗体の生物学的特性を、以下で説明する実施例において詳細に記載する。
【実施例0199】
重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸およびヌクレオチド配列
表１には、選択した本発明の抗ＰＤ－１抗体の重鎖および軽鎖可変領域、ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別名を記載する。対応する核酸配列識別名を表２に記載する。
表１には、選択した本発明の抗ＰＤ－１抗体の重鎖および軽鎖可変領域、ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別名を記載する。対応する核酸配列識別名を表２に記載する。
【0200】
【表1】
【0201】
【表2】
【0202】
抗体は、本明細書において典型的には次の命名法によって言及する：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ４ｘＨ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」など）、続いて、数字で表した識別名（例えば、表１において示す「７７８９」、「７７９９」など）、続いて「Ｐ」、「Ｐ２」、「Ｎ」、または「Ｂ」接尾辞。従って、この命名法により、本明細書において、例えば、「Ｈ１Ｈ７７８９Ｎ」、「Ｈ１Ｍ７７９９Ｎ」、「Ｈ２Ｍ７７８０Ｎ」などとして抗体を指す。本明細書において用いた抗体名称上のＨ４ｘＨ、Ｈ１Ｍ、Ｈ２Ｍ、およびＨ２ａＭ接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。例えば、「Ｈ４ｘＨ」抗体は、ＵＳ２０１００３３１５２７において開示される２つまたはそれ以上のアミノ酸変更を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有し、「Ｈ１Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有し、「Ｈ２Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ２ Ｆｃ（ａもしくはｂのアイソタイプ）を有する（全ての可変
領域は、抗体名称において最初の「Ｈ」により示す通り、完全ヒトである）。当業者が理解する通り、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体を、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体を、ヒトＩｇＧ４を有する抗体などに変換することができる）が、いずれの場合も、表１において示した数字で表した識別名により示した可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同一のままであり、抗原の結合特性はＦｃドメインの性質に関わらず、一致または実質的に類似であると予測した。
領域は、抗体名称において最初の「Ｈ」により示す通り、完全ヒトである）。当業者が理解する通り、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体を、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体を、ヒトＩｇＧ４を有する抗体などに変換することができる）が、いずれの場合も、表１において示した数字で表した識別名により示した可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同一のままであり、抗原の結合特性はＦｃドメインの性質に関わらず、一致または実質的に類似であると予測した。
【0203】
ある種の実施形態において、選択したマウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体を、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有する抗体に変換した。１つの実施形態において、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、二量体安定化を促進するためのヒンジ領域におけるセリンからプロリンへの変異（Ｓ１０８Ｐ）を含む。表３に、選択したヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有する抗ＰＤ－１抗体の重鎖および軽鎖配列のアミノ酸配列識別名を記載する。
【0204】
【表3】
【0205】
表３におけるそれぞれの重鎖配列は、可変領域（ＶＨまたはＨＣＶＲ；ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む）、ならびに定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含む）を含んでいた。表３におけるそれぞれの軽鎖配列は、可変領域（ＶＬまたはＬＣＶＲ；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む）、ならびに定常領域（ＣＬ）を含んでいた。配列番号３３０は、アミノ酸１～１１７を含むＨＣＶＲ、およびアミノ酸１１８～４４４を含む定常領域を含んでいた。配列番号３３１は、アミノ酸１～１０７を含むＬＣＶＲ、およびアミノ酸１０８～２１４を含む定常領域を含んでいた。配列番号３３２は、アミノ酸１～１２２を含むＨＣＶＲ、およびアミノ酸１２３～４４９を含む定常領域を含んでいた。配列番号３３３は、アミノ酸１～１０７を含むＬＣＶＲ、およびアミノ酸１０８～２１４を含む定常領域を含んでいた。配列番号３３４は、アミノ酸１～１１９を含むＨＣＶＲ、およびアミノ酸１２０～４４６を含む定常領域を含んでいた。配列番号３３５は、アミノ酸１～１０８を含むＬＣＶＲ、およびアミノ酸１０９～２１５を含む定常領域を含んでいた。配列番号３３６は、アミノ酸１～１２１を含むＨＣＶＲ、およびアミノ酸１２２～４４８を含む定常領域を含んでいた。配列番号３３７は、アミノ酸１～１０８を含むＬＣＶＲ、およびアミノ酸１０９～２１５を含む定常領域を含んでいた。