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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024178792
(43)【公開日】2024-12-25
(54)【発明の名称】自己反応性Ｔ細胞の検出方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/06 20060101AFI20241218BHJP
C12Q 1/04 20060101ALI20241218BHJP
【ＦＩ】
C12N15/06
C12Q1/04
【審査請求】未請求
【請求項の数】8
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023097210
(22)【出願日】2023-06-13
(71)【出願人】
【識別番号】599055382
【氏名又は名称】学校法人東邦大学
(74)【代理人】
【識別番号】100165179
【弁理士】
【氏名又は名称】田▲崎▼ 聡
(74)【代理人】
【識別番号】100175824
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100152272
【弁理士】
【氏名又は名称】川越 雄一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100181722
【弁理士】
【氏名又は名称】春田 洋孝
(72)【発明者】
【氏名】田中 ゆり子
(72)【発明者】
【氏名】近藤 元就
【テーマコード（参考）】
4B063
【Ｆターム（参考）】
4B063QA01
4B063QA18
4B063QQ02
4B063QQ08
4B063QQ52
4B063QR08
4B063QR32
4B063QR62
4B063QS25
4B063QS36
(57)【要約】
【課題】自己免疫疾患の障害臓器内で活性化される自己反応性Ｔ細胞の検出方法を提供する。
【解決手段】組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞と腫瘍細胞とを融合してＴ細胞ハイブリドーマを作製するＴ細胞ハイブリドーマ作製工程、作製した前記Ｔ細胞ハイブリドーマを免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器に移入するＴ細胞ハイブリドーマ移入工程、前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収するＴ細胞ハイブリドーマ回収工程、及び回収した前記Ｔ細胞ハイブリドーマのインターロイキン２遺伝子発現量を定量するＴ細胞ハイブリドーマ検出工程を含む、自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【選択図】なし
【解決手段】組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞と腫瘍細胞とを融合してＴ細胞ハイブリドーマを作製するＴ細胞ハイブリドーマ作製工程、作製した前記Ｔ細胞ハイブリドーマを免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器に移入するＴ細胞ハイブリドーマ移入工程、前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収するＴ細胞ハイブリドーマ回収工程、及び回収した前記Ｔ細胞ハイブリドーマのインターロイキン２遺伝子発現量を定量するＴ細胞ハイブリドーマ検出工程を含む、自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞と腫瘍細胞とを融合してＴ細胞ハイブリドーマを作製するＴ細胞ハイブリドーマ作製工程、
作製した前記Ｔ細胞ハイブリドーマを免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器に移入するＴ細胞ハイブリドーマ移入工程、
前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収するＴ細胞ハイブリドーマ回収工程、及び
回収した前記Ｔ細胞ハイブリドーマのインターロイキン２遺伝子発現量を定量するＴ細胞ハイブリドーマ検出工程
を含む、自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
作製した前記Ｔ細胞ハイブリドーマを免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器に移入するＴ細胞ハイブリドーマ移入工程、
前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収するＴ細胞ハイブリドーマ回収工程、及び
回収した前記Ｔ細胞ハイブリドーマのインターロイキン２遺伝子発現量を定量するＴ細胞ハイブリドーマ検出工程
を含む、自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【請求項2】
前記免疫不全非ヒト哺乳動物がＲａｇ１遺伝子及びＲａｇ２遺伝子の一方又は両方をホモ欠損する非ヒト哺乳動物である、請求項１に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【請求項3】
前記組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞が頸部リンパ節Ｔ細胞である、請求項１又は２に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【請求項4】
前記組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患がシェーグレン症候群である、請求項１又は２に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【請求項5】
前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器が外分泌腺組織である、請求項１又は２に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【請求項6】
前記免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器がオルガノイドである、請求項１又は２に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【請求項7】
前記免疫不全非ヒト哺乳動物が免疫不全異種間キメラ哺乳動物である、請求項１又は２に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
【請求項8】
請求項１又は２に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法によって検出された、自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、自己反応性Ｔ細胞の検出方法に関する。
【背景技術】
【0002】
シェーグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，略称：ＳＳ）は、外分泌腺に慢性的に炎症が起こりドライアイやドライマウスなどの機能障害を呈し、全身性エリテマトーデス（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｌｕｐｕｓ Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，略称：ＳＬＥ）などの全身性自己免疫疾患や悪性リンパ腫を続発することもある、難治性自己免疫疾患である。我が国では約１０万人のＳＳ患者が存在するが、ＳＳ特異的な治療法は確立されていない。
【0003】
ＳＳの病態形成にはＴ細胞が中心的な役割を果たしていることがよく知られている。非特許文献１には、Ｔ細胞の分化に必要な遺伝子発現を調節する転写制御因子であるＳＡＴＢ１（Ｓｐｅｃｉａｌ ＡＴ－ｒｉｃｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－１）を血球系細胞特異的に欠損するマウス（血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウス、ＳＡＴＢ１コンディショナルノックアウトマウス）では、生後早期（４週齢）からシェーグレン症候群用病態を呈すること、血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウスにおける唾液の減少には、頸部リンパ節に集積するＴ細胞が重要であることが開示されている。
【0004】
特許文献１には、自己免疫疾患のひとつである多発性硬化症（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，略称：ＭＳ）は、自己反応性Ｔ細胞が引き金となる疾患であることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】特開２０１８－０８８８８７号公報
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Tanaka, Y.，外７名、“SATB1 Conditional Knockout Results in Sjogren’s Syndrome in Mice”、The Journal of Immunology、2017年、第199巻、第12号、ｐ．4016-4022
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
病原性を持つＴ細胞（病原性Ｔ細胞）（「自己反応性Ｔ細胞」ともいう。）は、どのような自己抗原と反応するＴ細胞なのかは不明である。一般に１つのＴ細胞が発現するＴ細胞受容体は１種類の抗原ペプチドしか認識しないため、血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウスの頸部リンパ節には、自己抗原と反応する自己反応性Ｔ細胞及び反応しないＴ細胞が含まれ得る。そのため、血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウスの頸部リンパ節のＴ細胞から、自己反応性Ｔ細胞を検出する手段が求められている。
【0008】
本発明は、上記事情に鑑みて成されたものであり、自己免疫疾患の障害臓器内で活性化される自己反応性Ｔ細胞の検出方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねたところ、シェーグレン症候群モデルマウス由来のリンパ節Ｔ細胞と自律増殖能を持つ胸腺腫細胞株を細胞融合させて樹立したＴ細胞ハイブリドーマを免疫不全マウスの唾液腺に直接注入し、数日後、唾液腺から回収したＴ細胞ハイブリドーマにおけるインターロイキン２遺伝子の発現亢進を調べたところ、唾液腺組織に反応して活性化する自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマを検出できることを知得し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は以下の態様を含む。
すなわち、本発明は以下の態様を含む。
【0010】
［１］組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞と腫瘍細胞とを融合してＴ細胞ハイブリドーマを作製するＴ細胞ハイブリドーマ作製工程、
作製した前記Ｔ細胞ハイブリドーマを免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器に移入するＴ細胞ハイブリドーマ移入工程、
前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収するＴ細胞ハイブリドーマ回収工程、及び
回収した前記Ｔ細胞ハイブリドーマのインターロイキン２遺伝子発現量を定量するＴ細胞ハイブリドーマ検出工程
を含む、自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［２］前記免疫不全非ヒト哺乳動物がＲａｇ１遺伝子及びＲａｇ２遺伝子の一方又は両方をホモ欠損する非ヒト哺乳動物である、［１］に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［３］前記組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞が頸部リンパ節Ｔ細胞である、［１］又は［２］に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［４］前記組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患がシェーグレン症候群である、［１］～［３］のいずれかに記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［５］前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器が外分泌腺組織である、［１］～［４］のいずれかに記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［６］前記免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器がオルガノイドである、［１］～［５］のいずれかに記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［７］前記免疫不全非ヒト哺乳動物が免疫不全異種間キメラ哺乳動物である、［１］～［６］のいずれかに記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［８］［１］～［７］のいずれかの自己反応性Ｔ細胞の検出方法によって検出された、自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマ。
作製した前記Ｔ細胞ハイブリドーマを免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器に移入するＴ細胞ハイブリドーマ移入工程、
前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収するＴ細胞ハイブリドーマ回収工程、及び
回収した前記Ｔ細胞ハイブリドーマのインターロイキン２遺伝子発現量を定量するＴ細胞ハイブリドーマ検出工程
を含む、自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［２］前記免疫不全非ヒト哺乳動物がＲａｇ１遺伝子及びＲａｇ２遺伝子の一方又は両方をホモ欠損する非ヒト哺乳動物である、［１］に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［３］前記組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞が頸部リンパ節Ｔ細胞である、［１］又は［２］に記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［４］前記組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患がシェーグレン症候群である、［１］～［３］のいずれかに記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［５］前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器が外分泌腺組織である、［１］～［４］のいずれかに記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［６］前記免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器がオルガノイドである、［１］～［５］のいずれかに記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［７］前記免疫不全非ヒト哺乳動物が免疫不全異種間キメラ哺乳動物である、［１］～［６］のいずれかに記載の自己反応性Ｔ細胞の検出方法。
［８］［１］～［７］のいずれかの自己反応性Ｔ細胞の検出方法によって検出された、自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマ。
【発明の効果】
【0011】
本発明によれば、自己免疫疾患の障害臓器内で活性化される自己反応性Ｔ細胞の検出方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【発明を実施するための形態】
【0013】
ＲＡＧ２ノックアウトマウス（Ｒａｇ２－／－マウス）は、Ｒａｇ２（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｇｅｎｅ ２）を欠くため、Ｔ細胞及びＢ細胞の受容体の再構成ができず、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びＮＫＴ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ Ｔ）細胞を完全に欠く免疫不全マウスである。
【0014】
以下では本発明の実施形態を詳細に説明するが、本発明は後述する実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない限り種々の変形が可能である。
【0015】
［自己反応性Ｔ細胞の検出方法］
図２に説明する本実施形態に係る自己反応性Ｔ細胞の検出方法は、Ｔ細胞ハイブリドーマ１０４をＲａｇ２－／－マウス１０６の唾液腺１０１に注入し、数日後（図２では６日後）、唾液腺１０１を摘出してＴ細胞ハイブリドーマ１０４を分離し、Ｒａｇ２－／－マウス１０６の唾液腺１０１中で活性化したＴ細胞ハイブリドーマを検出するものである。
図２に説明する本実施形態に係る自己反応性Ｔ細胞の検出方法は、Ｔ細胞ハイブリドーマ１０４をＲａｇ２－／－マウス１０６の唾液腺１０１に注入し、数日後（図２では６日後）、唾液腺１０１を摘出してＴ細胞ハイブリドーマ１０４を分離し、Ｒａｇ２－／－マウス１０６の唾液腺１０１中で活性化したＴ細胞ハイブリドーマを検出するものである。
【0016】
本発明の自己反応性Ｔ細胞の検出方法の一実施形態は、Ｔ細胞ハイブリドーマ作製工程、Ｔ細胞ハイブリドーマ移入工程、Ｔ細胞ハイブリドーマ回収工程、及びＴ細胞ハイブリドーマ検出工程を含む。
【0017】
＜Ｔ細胞ハイブリドーマ作製工程＞
Ｔ細胞ハイブリドーマ作製工程は、組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞と腫瘍細胞とを融合してＴ細胞ハイブリドーマを作製する工程である。
Ｔ細胞ハイブリドーマ作製工程は、組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物に由来するＴ細胞と腫瘍細胞とを融合してＴ細胞ハイブリドーマを作製する工程である。
【0018】
前記組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患は、特に限定されないが、例として、シェーグレン症候群、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、アジソン病、多発性筋炎、全身性強皮症、糸球体腎炎、バセドウ病、関節リウマチ、橋本甲状腺炎、１型糖尿病、及び血管炎が挙げられる。前記組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患としては、これらの中でも、シェーグレン症候群、多発性硬化症、及び全身性エリテマトーデスが好ましく、シェーグレン症候群がより好ましい。
【0019】
前記組織・細胞障害が生じる組織又は細胞は、特に限定されないが、シェーグレン症候群においては、例えば唾液腺及び涙腺等の外分泌腺が挙げられ、多発性硬化症においては、例えば中枢神経系が挙げられ、全身性エリテマトーデスにおいては、例えば皮膚、関節、血管、及び腎臓が挙げられ、１型糖尿病においては、例えば膵臓β細胞が挙げられ、関節リウマチにおいては、例えば関節が挙げられる。
【0020】
前記哺乳動物は、特に限定されないが、例えばヒト又は非ヒト哺乳動物が挙げられる。前記非ヒト哺乳動物は、特に限定されないが、メガネザル、オナガザル、テナガザル、クモザル、オマキザル、サキ、キツネザル、コビトキツネザル、インドリ、イタチキツネザル、アイアイ、ガラゴ、ロリス、チンパンジー、ゴリラ、及びオランウータン等のヒト以外の霊長類、マウス、ラット、及びモルモット等の齧歯類、イヌ、ネコ、クマ、アライグマ、イタチ、及びアシカ等の食肉目動物、ウマ、バク、及びサイ等の奇蹄目動物、ラクダ、イノシシ、シカ、ウシ、キリン、カバ、シロナガスクジラ、マッコウクジラ、及びイルカ等の鯨偶蹄目動物、並びにウサギ及びナキウサギ等のウサギ目動物が例示される。
【0021】
前記Ｔ細胞は、特に限定されないが、リンパ節Ｔ細胞が好ましい。組織・細胞障害を生じる組織近傍のリンパ節には、組織・細胞障害を誘導する病原性T細胞が多く存在しているからである。
【0022】
前記Ｔ細胞は、そのまま腫瘍細胞と融合してハイブリドーマを作製してもよいが、免疫不全非ヒト哺乳動物の臓器又は組織に移入して濃縮した後、腫瘍細胞と融合してハイブリドーマを作製してもよい。
【0023】
前記腫瘍細胞は、特に限定されないが、Ｔ細胞との融合の容易さから、胸腺腫細胞が好ましい。
【0024】
Ｔ細胞と腫瘍細胞とを融合する方法は、特に限定されず、従来公知の方法、例えばポリエチレングリコールを使うポリエチレングリコール法（ＰＥＧ法）や電流を使った電気融合法を採用することができる。融合前の細胞が２倍体である場合、融合直後のハイブリドーマは４倍体となるが、培養しているうちに安定化され、融合前の２種類の細胞の性質を持った１つの細胞になる。
【0025】
作製したＴ細胞ハイブリドーマがＴ細胞としての性質を有していることは、例えばＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞受容体β（ＴＣＲβ）の発現によって確認できる。より具体的には、例えばＴＣＲβ陽性かつＣＤ４及びＣＤ８の少なくとも一方が陽性であることを確認することが好ましい。
【0026】
図３を参照しながらＴ細胞ハイブリドーマ作製工程の一例を説明する。この例では、組織・細胞障害を伴う自己免疫疾患を発症している哺乳動物として、血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウスを、Ｔ細胞としてリンパ節Ｔ細胞を、腫瘍細胞として胸腺腫細胞を用いる。
血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウス１０７から頸部リンパ節１０８を採取し、頸部リンパ節１０８からリンパ節Ｔ細胞を分離する。頸部リンパ節Ｔ細胞＋胸腺腫細胞１０９をＰＥＧ法で融合してＴ細胞ハイブリドーマ１０４を得る。
血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウス１０７から頸部リンパ節１０８を採取し、頸部リンパ節１０８からリンパ節Ｔ細胞を分離する。頸部リンパ節Ｔ細胞＋胸腺腫細胞１０９をＰＥＧ法で融合してＴ細胞ハイブリドーマ１０４を得る。
【0027】
＜Ｔ細胞ハイブリドーマ移入工程＞
前記Ｔ細胞ハイブリドーマ移入工程は、作製した前記Ｔ細胞ハイブリドーマを免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器に移入する工程である。
前記Ｔ細胞ハイブリドーマ移入工程は、作製した前記Ｔ細胞ハイブリドーマを免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器に移入する工程である。
【0028】
免疫不全非ヒト哺乳動物は、特に限定されないが、Ｒａｇ１遺伝子及びＲａｇ２遺伝子の一方又は両方がホモ欠損する非ヒト動物が好ましい。ここで、前記非ヒト哺乳動物は、特に限定されないが、メガネザル、オナガザル、テナガザル、クモザル、オマキザル、サキ、キツネザル、コビトキツネザル、インドリ、イタチキツネザル、アイアイ、ガラゴ、ロリス、チンパンジー、ゴリラ、及びオランウータン等のヒト以外の霊長類、マウス、ラット、及びモルモット等の齧歯類、イヌ、ネコ、クマ、アライグマ、イタチ、及びアシカ等の食肉目動物、ウマ、バク、及びサイ等の奇蹄目動物、ラクダ、イノシシ、シカ、ウシ、キリン、カバ、シロナガスクジラ、マッコウクジラ、及びイルカ等の鯨偶蹄目動物、並びにウサギ及びナキウサギ等のウサギ目動物が例示される。
前記免疫不全非ヒト哺乳動物は、また、免疫不全異種間キメラ哺乳動物であってもよい。
前記免疫不全非ヒト哺乳動物は、また、免疫不全異種間キメラ哺乳動物であってもよい。
【0029】
前記免疫不全非ヒト哺乳動物の前記自己免疫疾患により障害を受ける組織・臓器は、例えば組織又は臓器のオルガノイドであってもよい。
【0030】
＜Ｔ細胞ハイブリドーマ回収工程＞
Ｔ細胞ハイブリドーマ回収工程は、前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収する工程である。
前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収する方法は特に限定されないが、例えば前記組織又は前記臓器を酵素処理によって前記組織又は前記臓器の細胞をばらばらにした後、Ｔ細胞ハイブリドーマを密度遠心勾配、フローサイトメトリー等の手段によって回収する方法が挙げられる。
Ｔ細胞ハイブリドーマ回収工程は、前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収する工程である。
前記組織・臓器からＴ細胞ハイブリドーマを回収する方法は特に限定されないが、例えば前記組織又は前記臓器を酵素処理によって前記組織又は前記臓器の細胞をばらばらにした後、Ｔ細胞ハイブリドーマを密度遠心勾配、フローサイトメトリー等の手段によって回収する方法が挙げられる。
【0031】
＜Ｔ細胞ハイブリドーマ検出工程＞
Ｔ細胞ハイブリドーマ検出工程は、回収した前記Ｔ細胞ハイブリドーマのインターロイキン２（ＩＬ－２）遺伝子発現量を定量して、ＩＬ－２遺伝子発現量が有意に高水準であるＴ細胞ハイブリドーマを自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマとして検出する工程である。
Ｔ細胞ハイブリドーマ検出工程は、回収した前記Ｔ細胞ハイブリドーマのインターロイキン２（ＩＬ－２）遺伝子発現量を定量して、ＩＬ－２遺伝子発現量が有意に高水準であるＴ細胞ハイブリドーマを自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマとして検出する工程である。
【0032】
Ｔ細胞ハイブリドーマのＩＬ－２遺伝子発現量は、例えば定量的逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ｑＰＣＲ，ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ）によって定量することが好ましい。対照としては、組織又は臓器に注入していない未刺激のＴ細胞ハイブリドーマを用いることが好ましい。さらに、汎用刺激、例えばＰｈｏｒｂｏｌ １２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３－ａｃｅｔａｔｅ（ＰＭＡ）とＩｏｎｏｍｙｃｉｎによって刺激したＴ細胞ハイブリドーマを参照用に用いることも好ましい。
【0033】
［自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマ］
本発明の別の実施形態は、上述した自己反応性Ｔ細胞の検出方法によって検出された自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマである。
本発明の別の実施形態は、上述した自己反応性Ｔ細胞の検出方法によって検出された自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマである。
【0034】
［作用効果］
図１に示す従来の自己反応性Ｔ細胞の検出方法は、唾液腺１０１から唾液腺抽出液１０２を調製して抗原提示細胞１０３と接触させ、抗原提示細胞１０３の存在下でＴ細胞ハイブリドーマ１０４を培養し、活性化したＴ細胞ハイブリドーマを検出するものであった。
従来の自己反応性Ｔ細胞の検出方法は二次元の状態で病原性Ｔ細胞の反応性を判定していたが、本実施形態の自己反応性Ｔ細胞の検出方法は生体内において臓器の形状を保った三次元状態で病原性Ｔ細胞の反応性を調べることができる。
図１に示す従来の自己反応性Ｔ細胞の検出方法は、唾液腺１０１から唾液腺抽出液１０２を調製して抗原提示細胞１０３と接触させ、抗原提示細胞１０３の存在下でＴ細胞ハイブリドーマ１０４を培養し、活性化したＴ細胞ハイブリドーマを検出するものであった。
従来の自己反応性Ｔ細胞の検出方法は二次元の状態で病原性Ｔ細胞の反応性を判定していたが、本実施形態の自己反応性Ｔ細胞の検出方法は生体内において臓器の形状を保った三次元状態で病原性Ｔ細胞の反応性を調べることができる。
【実施例0035】
以下では実施例によって本発明をより具体的に説明する。ただし、本発明は後述する実験例に限定されるものではない。
【0036】
［作製例１］血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウス（ＳＡＴＢ１ ｃＫＯマウス）の作製
参考文献１（Tanaka et al., 2016）に記載の方法によりＳＡＴＢ１ｆｌ／ｆｌ Ｖａｖ－Ｃｒｅ＋マウスを作製し、これをＳＡＴＢ１ ｃＫＯマウスとして用いた。
参考文献１（Tanaka et al., 2016）に記載の方法によりＳＡＴＢ１ｆｌ／ｆｌ Ｖａｖ－Ｃｒｅ＋マウスを作製し、これをＳＡＴＢ１ ｃＫＯマウスとして用いた。
【0037】
［実験例１］自己反応性Ｔ細胞の検出
１．病原性Ｔ細胞ハイブリドーマの作製
（１）Ｔ細胞の準備
ａ）血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウスの頸部リンパ節を採取し、採取した頸部リンパ節から単離した頸部リンパ節Ｔ細胞をＴｈｙ１．２抗体（Ｔ細胞表面抗原を認識する抗体）で標識して、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ Ｆｕｓｉｏｎセルソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分離した。
ｂ）分離した頸部リンパ節Ｔ細胞をＲａｇ２－／－マウスに静脈注射で移入し、唾液腺炎を発症させた。
ｃ）ｂのＲａｇ２－／－マウスの頸部リンパ節を採取し、丸ごとすりつぶしたリンパ節細胞を細胞融合に用いるＴ細胞（頸部リンパ節Ｔ細胞）とした。病原性Ｔ細胞を濃縮する目的で、再度Ｒａｇ２－／－マウスに移入した。
１．病原性Ｔ細胞ハイブリドーマの作製
（１）Ｔ細胞の準備
ａ）血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウスの頸部リンパ節を採取し、採取した頸部リンパ節から単離した頸部リンパ節Ｔ細胞をＴｈｙ１．２抗体（Ｔ細胞表面抗原を認識する抗体）で標識して、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ Ｆｕｓｉｏｎセルソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分離した。
ｂ）分離した頸部リンパ節Ｔ細胞をＲａｇ２－／－マウスに静脈注射で移入し、唾液腺炎を発症させた。
ｃ）ｂのＲａｇ２－／－マウスの頸部リンパ節を採取し、丸ごとすりつぶしたリンパ節細胞を細胞融合に用いるＴ細胞（頸部リンパ節Ｔ細胞）とした。病原性Ｔ細胞を濃縮する目的で、再度Ｒａｇ２－／－マウスに移入した。
【0038】
２．Ｔ細胞ハイブリドーマの作製
（１）１日目の実験操作
ａ）上記の頸部リンパ節Ｔ細胞（１×１０７個）とマウスリンパ腫ＢＷ５１４７細胞（１×１０７個）のそれぞれをＦＡＬＣＯＮ ５０ｍＬ遠心分離用コニカルチューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，＃３５２０９８；以下、単に「ＦＡＬＣＯＮチューブ」ともいう。）に移した。
ｂ）それぞれのＦＡＬＣＯＮチューブを、室温下、１，５００ｒｐｍで５分間遠心した。
ｃ）遠心後、それぞれのＦＡＬＣＯＮチューブ内の上清を捨てた。
ｄ）上清を捨てた後、それぞれのＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ－）を５ｍＬ加え、混合した。
ｅ）細胞数を計測した。
ｆ）同数のマウスリンパ腫ＢＷ５１４７細胞及び頸部リンパ節Ｔ細胞を１つのＦＡＬＣＯＮチューブに入れた。
ｇ）ＦＡＬＣＯＮチューブを、室温下、１，５００ｒｐｍで５分間遠心した。
ｈ）遠心後、ＦＡＬＣＯＮチューブ内の上清を捨てた。
ｉ）５０％ｗ／ｖ ＰＥＧ（５０％ｗ／ｖポリエチレングリコール６，０００（Ｈａｍｐｔｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，＃ＨＲ２－５３３））１ｍＬを加え、３７℃のウォーターバスで１分間インキュベートした。
ｊ）さらに１分間、１ｍＬピペット（ガラス製）でかき混ぜた。
ｋ）上記ＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ－）２ｍＬを加え、１０ｍＬピペットで２分間混合した。
ｌ）上記ＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ－）７ｍＬを加え、１０ｍＬピペットで２分間混合した。
ｍ）上記ＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ－）３０ｍＬを加え、１０ｍＬピペットで混合した（トータル４０ｍＬ）。
ｎ）上記ＦＡＬＣＯＮチューブを、室温下、１，５００ｒｐｍで５分間遠心した。
ｏ）細胞数が１×１０６個／ｍＬになるように、上記ＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＣＳ含有）を加えた。
ｐ）細胞分散液を、９６ウェルマイクロプレート（丸底，コーニング，＃３７９９）に１００μＬ／ウェルとなるように播いた。
ｑ）ＣＯ２インキュベータを用いて、５％ＣＯ２濃度、３７℃、２４時間インキュベートした。
（１）１日目の実験操作
ａ）上記の頸部リンパ節Ｔ細胞（１×１０７個）とマウスリンパ腫ＢＷ５１４７細胞（１×１０７個）のそれぞれをＦＡＬＣＯＮ ５０ｍＬ遠心分離用コニカルチューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，＃３５２０９８；以下、単に「ＦＡＬＣＯＮチューブ」ともいう。）に移した。
ｂ）それぞれのＦＡＬＣＯＮチューブを、室温下、１，５００ｒｐｍで５分間遠心した。
ｃ）遠心後、それぞれのＦＡＬＣＯＮチューブ内の上清を捨てた。
ｄ）上清を捨てた後、それぞれのＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ－）を５ｍＬ加え、混合した。
ｅ）細胞数を計測した。
ｆ）同数のマウスリンパ腫ＢＷ５１４７細胞及び頸部リンパ節Ｔ細胞を１つのＦＡＬＣＯＮチューブに入れた。
ｇ）ＦＡＬＣＯＮチューブを、室温下、１，５００ｒｐｍで５分間遠心した。
ｈ）遠心後、ＦＡＬＣＯＮチューブ内の上清を捨てた。
ｉ）５０％ｗ／ｖ ＰＥＧ（５０％ｗ／ｖポリエチレングリコール６，０００（Ｈａｍｐｔｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，＃ＨＲ２－５３３））１ｍＬを加え、３７℃のウォーターバスで１分間インキュベートした。
ｊ）さらに１分間、１ｍＬピペット（ガラス製）でかき混ぜた。
ｋ）上記ＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ－）２ｍＬを加え、１０ｍＬピペットで２分間混合した。
ｌ）上記ＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ－）７ｍＬを加え、１０ｍＬピペットで２分間混合した。
ｍ）上記ＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳ－）３０ｍＬを加え、１０ｍＬピペットで混合した（トータル４０ｍＬ）。
ｎ）上記ＦＡＬＣＯＮチューブを、室温下、１，５００ｒｐｍで５分間遠心した。
ｏ）細胞数が１×１０６個／ｍＬになるように、上記ＦＡＬＣＯＮチューブにＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＣＳ含有）を加えた。
ｐ）細胞分散液を、９６ウェルマイクロプレート（丸底，コーニング，＃３７９９）に１００μＬ／ウェルとなるように播いた。
ｑ）ＣＯ２インキュベータを用いて、５％ＣＯ２濃度、３７℃、２４時間インキュベートした。
【0039】
（２）２日目以降の実験操作
ａ）５０×ＨＡＴサプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，＃２１０６００１７）２ｍＬとＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＣＳ含有）４８ｍＬとを混合して２×ＨＡＴ培地を調製した。
ｂ）インキュベート後の９６ウェルマイクロプレートに上記２×ＨＡＴ培地を１００μＬ／ウェルで加えた。
ｃ）ＣＯ２インキュベータを用いて、５％ＣＯ２濃度、３７℃でインキュベートした。
ｄ）インキュベート中、３日に１回、ウェルあたり培地２００μＬから１００μＬを除去し、新鮮な２×ＨＡＴ培地を１００μＬ加えた。これを１週間継続した。
ｅ）１００×ＨＴサプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，＃１１０６７０３０）１ｍＬとＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＣＳ含有）４９ｍＬとを混合して２×ＨＴ培地を調製した。
ｆ）９６ウェルマイクロプレートの培地を２×ＨＡＴ培地から２×ＨＴ培地に置換した。
ａ）５０×ＨＡＴサプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，＃２１０６００１７）２ｍＬとＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＣＳ含有）４８ｍＬとを混合して２×ＨＡＴ培地を調製した。
ｂ）インキュベート後の９６ウェルマイクロプレートに上記２×ＨＡＴ培地を１００μＬ／ウェルで加えた。
ｃ）ＣＯ２インキュベータを用いて、５％ＣＯ２濃度、３７℃でインキュベートした。
ｄ）インキュベート中、３日に１回、ウェルあたり培地２００μＬから１００μＬを除去し、新鮮な２×ＨＡＴ培地を１００μＬ加えた。これを１週間継続した。
ｅ）１００×ＨＴサプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，＃１１０６７０３０）１ｍＬとＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＣＳ含有）４９ｍＬとを混合して２×ＨＴ培地を調製した。
ｆ）９６ウェルマイクロプレートの培地を２×ＨＡＴ培地から２×ＨＴ培地に置換した。
【0040】
３．Ｔ細胞ハイブリドーマのスクリーニング
ａ）作製したＴ細胞ハイブリドーマの一部を採取し、ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞受容体β（ＴＣＲβ）の発現をフローサイトメトリーでチェックした。
ｃ）ＴＣＲβ陽性かつＣＤ４及びＣＤ８の少なくとも一方が陽性であるＴ細胞ハイブリドーマ、すなわち以下のいずれかに当てはまるＴ細胞ハイブリドーマを選別した。
ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋
ＴＣＲβ＋ＣＤ８＋
ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋ＣＤ８＋
ｄ）選別されたＴ細胞ハイブリドーマは、クローニングを行い、モノクローナルな細胞として保存した。
ａ）作製したＴ細胞ハイブリドーマの一部を採取し、ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞受容体β（ＴＣＲβ）の発現をフローサイトメトリーでチェックした。
ｃ）ＴＣＲβ陽性かつＣＤ４及びＣＤ８の少なくとも一方が陽性であるＴ細胞ハイブリドーマ、すなわち以下のいずれかに当てはまるＴ細胞ハイブリドーマを選別した。
ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋
ＴＣＲβ＋ＣＤ８＋
ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋ＣＤ８＋
ｄ）選別されたＴ細胞ハイブリドーマは、クローニングを行い、モノクローナルな細胞として保存した。
【0041】
４．Ｔ細胞ハイブリドーマの自己抗原反応性の解析
（１）Ｔ細胞ハイブリドーマの活性化
ａ）選別及び保存したＴ細胞ハイブリドーマをＲａｇ２－／－マウスの左右の唾液線に注射器を用いて直接投与した。具体的には次のとおりである。Ｒａｇ２－／－マウスに麻酔をかけた後、仰向けに寝かせ、局所をポビドンヨード液で消毒し、喉部正中をはさみで切開して、左右の唾液腺（顎下腺）の位置を確認した。Ｔ細胞ハイブリドーマのＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４）分散液（８×１０５個／２０μＬ）を３０Ｇの針を付けた注射器で左右それぞれの唾液腺内に注入し、切開創を縫合した。
ｂ）Ｔ細胞ハイブリドーマを唾液腺に注入してから６日後にマウスを取殺し、唾液腺を取り出した。
ｃ）取り出した唾液腺を酵素処理して組織細胞をばらばらにした後、Ｐｅｒｃｏｌｌ ＩＩ ＰＬＵＳ（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ）を用いて密度勾配遠心法により唾液腺組織内のリンパ球分画を分離した。この画分に注入したＴ細胞ハイブリドーマが含まれている。
（１）Ｔ細胞ハイブリドーマの活性化
ａ）選別及び保存したＴ細胞ハイブリドーマをＲａｇ２－／－マウスの左右の唾液線に注射器を用いて直接投与した。具体的には次のとおりである。Ｒａｇ２－／－マウスに麻酔をかけた後、仰向けに寝かせ、局所をポビドンヨード液で消毒し、喉部正中をはさみで切開して、左右の唾液腺（顎下腺）の位置を確認した。Ｔ細胞ハイブリドーマのＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４）分散液（８×１０５個／２０μＬ）を３０Ｇの針を付けた注射器で左右それぞれの唾液腺内に注入し、切開創を縫合した。
ｂ）Ｔ細胞ハイブリドーマを唾液腺に注入してから６日後にマウスを取殺し、唾液腺を取り出した。
ｃ）取り出した唾液腺を酵素処理して組織細胞をばらばらにした後、Ｐｅｒｃｏｌｌ ＩＩ ＰＬＵＳ（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ）を用いて密度勾配遠心法により唾液腺組織内のリンパ球分画を分離した。この画分に注入したＴ細胞ハイブリドーマが含まれている。
【0042】
（２）Ｔ細胞ハイブリドーマのＩＬ－２遺伝子発現解析
ａ）単離したＴ細胞ハイブリドーマから全ＲＮＡを抽出し、定量的逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ｑＰＣＲ，ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ）によってインターロイキン２（ＩＬ－２）の発現をｍＲＮＡレベルで解析した。
ｄ）比較のため、無刺激のＴ細胞ハイブリドーマ及び汎用刺激（４８ｗｅｌｌ ｆｌａｔ ｂｏｔｔｏｍ ｐｌａｔｅ（ＦＡＬＣＯＮ，＃３５３０７８）中でＴ細胞ハイブリドーマをＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌ １２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３－ａｃｅｔａｔｅ，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ｐ１５８５）１０ｎｇ／ｍｌとＩｏｎｏｍｙｓｉｎ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ｉ９６５７）１μＭで３７°Ｃ、４時間刺激）を与えたＴ細胞ハイブリドーマについても、ＲＴ－ｑＰＣＲによるＩＬ－２発現解析を行った。
装置：ＡＢＩ ７５００ ｆａｓｔ ｓｙｓｔｅｍ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
使用プライマー ＩＬ－２：ＴａｑＭａｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙ ｐｒｉｍｅｒ Ｍｍ００４３４２５６＿ｍ１ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、内在性コントロール ＨＰＲＴ ：ＴａｑＭａｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙ ｐｒｉｍｅｒ Ｍｍ００４４６９６８＿ｍ１ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
反応条件：ＴａｑＭａｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔを使用
ａ）単離したＴ細胞ハイブリドーマから全ＲＮＡを抽出し、定量的逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ｑＰＣＲ，ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ）によってインターロイキン２（ＩＬ－２）の発現をｍＲＮＡレベルで解析した。
ｄ）比較のため、無刺激のＴ細胞ハイブリドーマ及び汎用刺激（４８ｗｅｌｌ ｆｌａｔ ｂｏｔｔｏｍ ｐｌａｔｅ（ＦＡＬＣＯＮ，＃３５３０７８）中でＴ細胞ハイブリドーマをＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌ １２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３－ａｃｅｔａｔｅ，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ｐ１５８５）１０ｎｇ／ｍｌとＩｏｎｏｍｙｓｉｎ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ＃Ｉ９６５７）１μＭで３７°Ｃ、４時間刺激）を与えたＴ細胞ハイブリドーマについても、ＲＴ－ｑＰＣＲによるＩＬ－２発現解析を行った。
装置：ＡＢＩ ７５００ ｆａｓｔ ｓｙｓｔｅｍ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
使用プライマー ＩＬ－２：ＴａｑＭａｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙ ｐｒｉｍｅｒ Ｍｍ００４３４２５６＿ｍ１ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、内在性コントロール ＨＰＲＴ ：ＴａｑＭａｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙ ｐｒｉｍｅｒ Ｍｍ００４４６９６８＿ｍ１ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
反応条件：ＴａｑＭａｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔを使用
【0043】
５．結果
図４に、無刺激Ｔ細胞ハイブリドーマ、唾液線移入Ｔ細胞ハイブリドーマ、及び汎用刺激Ｔ細胞ハイブリドーマのＩＬ－２ ｍＲＮＡ量（ＩＬ－２遺伝子発現量）を示す。
図４示す結果は、血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウスのリンパ節Ｔ細胞に由来するＴ細胞ハイブリドーマがＲａｇ２－／－マウスの唾液腺中の自己抗原に反応して活性化されたことを示唆する。
図４に、無刺激Ｔ細胞ハイブリドーマ、唾液線移入Ｔ細胞ハイブリドーマ、及び汎用刺激Ｔ細胞ハイブリドーマのＩＬ－２ ｍＲＮＡ量（ＩＬ－２遺伝子発現量）を示す。
図４示す結果は、血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウスのリンパ節Ｔ細胞に由来するＴ細胞ハイブリドーマがＲａｇ２－／－マウスの唾液腺中の自己抗原に反応して活性化されたことを示唆する。
【0044】
［参考文献一覧］
参考文献１：Kondo, M., Y. Tanaka, T. Kuwabara, T. Naito, T. Kohwi-Shigematsu, and A. Watanabe. 2016. SATB1 plays a critical role in establishment of immune tolerance. J. Immunol. 196: 563-572.
参考文献１：Kondo, M., Y. Tanaka, T. Kuwabara, T. Naito, T. Kohwi-Shigematsu, and A. Watanabe. 2016. SATB1 plays a critical role in establishment of immune tolerance. J. Immunol. 196: 563-572.
【0045】
［登録商標］
“ＦＡＬＣＯＮ”及び“ファルコン”はコーニング インコーポレイテッドの日本国における登録商標である（商標登録第１４５８３３１号、商標登録第１４５８３３２号）。
“ＥＡＳＹＳＥＰ”はステムセル テクノロジーズ カナダ インコーポレイテッドの日本国における登録商標である（商標登録第５５４０２９６号）。
“ＧＩＢＣＯ”はライフ テクノロジーズ コーポレーションの日本国における登録商標である（商標登録第４８９１３７２号）。
“ＦＡＣＳＡｒｉａ”はベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニーの日本国における登録商標である（商標登録第４７０３６５２号）。
“ＦＡＬＣＯＮ”及び“ファルコン”はコーニング インコーポレイテッドの日本国における登録商標である（商標登録第１４５８３３１号、商標登録第１４５８３３２号）。
“ＥＡＳＹＳＥＰ”はステムセル テクノロジーズ カナダ インコーポレイテッドの日本国における登録商標である（商標登録第５５４０２９６号）。
“ＧＩＢＣＯ”はライフ テクノロジーズ コーポレーションの日本国における登録商標である（商標登録第４８９１３７２号）。
“ＦＡＣＳＡｒｉａ”はベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニーの日本国における登録商標である（商標登録第４７０３６５２号）。
【産業上の利用可能性】
【0046】
自己免疫疾患の障害臓器内で活性化されるＴ細胞を同定する本発明の方法は、自己免疫疾患の新たな診断や治療法の開発につながる可能性が高い技術である。より具体的には、本発明の方法によって検出された自己反応性Ｔ細胞ハイブリドーマを、自己免疫疾患の治療方法、治療薬、又は診断方法を開発するために利用することができる。
【符号の説明】
【0047】
１０１…唾液腺
１０２…唾液腺抽出液
１０３…抗原提示細胞
１０４…Ｔ細胞ハイブリドーマ
１０５…シャーレ
１０６…Ｒａｇ２－／－マウス
１０７…血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウス
１０８…頸部リンパ節
１０９…頸部リンパ節Ｔ細胞＋胸腺腫細胞
１０２…唾液腺抽出液
１０３…抗原提示細胞
１０４…Ｔ細胞ハイブリドーマ
１０５…シャーレ
１０６…Ｒａｇ２－／－マウス
１０７…血球系細胞特異的ＳＡＴＢ１欠損マウス
１０８…頸部リンパ節
１０９…頸部リンパ節Ｔ細胞＋胸腺腫細胞
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】