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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024001864
(43)【公開日】2024-01-10
(54)【発明の名称】うつ病バイオマーカー
(51)【国際特許分類】
G01N 33/68 20060101AFI20231227BHJP
G01N 33/50 20060101ALI20231227BHJP
C12Q 1/04 20060101ALI20231227BHJP
C12Q 1/68 20180101ALI20231227BHJP
C12M 1/00 20060101ALI20231227BHJP
C12M 1/34 20060101ALI20231227BHJP
C12Q 1/6869 20180101ALI20231227BHJP
C12N 15/11 20060101ALI20231227BHJP
【ＦＩ】
G01N33/68
G01N33/50 D
C12Q1/04
C12Q1/68
C12M1/00 A
C12M1/34 Z
C12Q1/6869 Z
C12N15/11 Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】14
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023098086
(22)【出願日】2023-06-14
(31)【優先権主張番号】P 2022100474
(32)【優先日】2022-06-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）令和２年度、国立研究開発法人科学技術振興機構、研究成果展開事業 研究成果最適展開支援プログラム（Ａ－ＳＴＥＰ）トライアウト、研究課題「ストレスに起因する過剰な攻撃性を低下させる機能性食品の開発」に関する研究題目「ストレスに起因する過剰な攻撃性を低下させる機能性食品の開発」委託研究、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(71)【出願人】
【識別番号】504203572
【氏名又は名称】国立大学法人茨城大学
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】豊田 淳
(72)【発明者】
【氏名】谷島 優平
【テーマコード（参考）】
2G045
4B029
4B063
【Ｆターム（参考）】
2G045AA25
2G045CA26
2G045DA02
2G045DA31
2G045DA36
4B029AA07
4B029BB02
4B029CC01
4B029FA03
4B029GA03
4B029GA08
4B029GB06
4B029GB10
4B063QA13
4B063QA18
4B063QA19
4B063QQ03
4B063QQ28
4B063QQ42
4B063QQ62
4B063QR08
4B063QR32
4B063QR42
4B063QR62
4B063QR66
4B063QR72
4B063QS03
4B063QS25
4B063QS34
4B063QS36
4B063QX02
(57)【要約】
【課題】
本発明は生体試料中の新たなうつ病のバイオマーカーを提供することを課題とする。
【解決手段】
うつ病を有する対象の生体試料、特に糞便試料、血漿試料、肝臓試料において、特定の代謝産物がコントロール対象の当該試料と比較して増加又は減少していることを見出し、また、特に糞便試料において特定の細菌がコントロール対象の当該試料と比較して増加又は減少していることを見出し、本発明に想到した。
【選択図】図２
本発明は生体試料中の新たなうつ病のバイオマーカーを提供することを課題とする。
【解決手段】
うつ病を有する対象の生体試料、特に糞便試料、血漿試料、肝臓試料において、特定の代謝産物がコントロール対象の当該試料と比較して増加又は減少していることを見出し、また、特に糞便試料において特定の細菌がコントロール対象の当該試料と比較して増加又は減少していることを見出し、本発明に想到した。
【選択図】図２
【特許請求の範囲】
【請求項1】
被検対象から採取された生体試料中における、
表１に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物、並びに／又は
Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の、
うつ病の診断のためのバイオマーカーとしての使用。
表１に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物、並びに／又は
Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の、
うつ病の診断のためのバイオマーカーとしての使用。
【表1-1】
【表1-2】
【請求項2】
前記生体試料が、糞便であり、
前記代謝物が、表２に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、請求項１に記載の使用。
前記代謝物が、表２に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、請求項１に記載の使用。
【表2】
【請求項3】
前記生体試料が、血漿であり、
前記代謝物が、表３に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、請求項１に記載の使用。
前記代謝物が、表３に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、請求項１に記載の使用。
【表3】
【請求項4】
前記生体試料が、肝臓であり、
前記代謝物が、表４に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、請求項１に記載の使用。
前記代謝物が、表４に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、請求項１に記載の使用。
【表4】
【請求項5】
ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のための請求項１に記載の使用であって、
前記生体試料が糞便であり、並びに
前記代謝物が、表５に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物であり、並びに／又は
前記細菌が、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌である、前記使用。
前記生体試料が糞便であり、並びに
前記代謝物が、表５に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物であり、並びに／又は
前記細菌が、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌である、前記使用。
【表5】
【請求項6】
ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のための請求項１に記載の使用であって、
前記生体試料が血漿であり、及び
前記代謝物が、表６に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、前記使用。
前記生体試料が血漿であり、及び
前記代謝物が、表６に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、前記使用。
【表6】
【請求項7】
被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、請求項１～４のいずれか一項において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、コントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記コントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又は発症リスクを有すると判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法。
前記被検対象から採取された生体試料における、請求項１～４のいずれか一項において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、コントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記コントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又は発症リスクを有すると判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法。
【請求項8】
被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、請求項５又は６において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法。
前記被検対象から採取された生体試料における、請求項５又は６において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法。
【請求項9】
被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラム：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における請求項１～４のいずれか一項に
おいて定義されるバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又は発症リスクを有するとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラム：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における請求項１～４のいずれか一項に
おいて定義されるバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又は発症リスクを有するとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
【請求項10】
被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラム：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における請求項５又は６において定義されるバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとうつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラム：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における請求項５又は６において定義されるバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとうつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
【請求項11】
被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キット。
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キット。
【請求項12】
被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キット。
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キット。
【請求項13】
うつ病の治療薬をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
治療薬の候補物質を投与されたうつ病を有する対象から採取された生体試料における請
求項１～４のいずれか一項において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合又はうつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法。
治療薬の候補物質を投与されたうつ病を有する対象から採取された生体試料における請
求項１～４のいずれか一項において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合又はうつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法。
【請求項14】
うつ病を有する対象におけるストレスに対する耐性の向上剤をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
向上剤の候補物質を投与されたうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象から採取された生体試料における請求項５又は６において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２未満となった場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法。
向上剤の候補物質を投与されたうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象から採取された生体試料における請求項５又は６において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２未満となった場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、生体試料中における新たなうつ病のバイオマーカーや、このバイオマーカーを用いたうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法、うつ病を判定するためのプログラム、うつ病を判定するための検査キット、並びにうつ病の治療薬のスクリーニング及び評価方法に関する。
【背景技術】
【0002】
健康的な日常生活を送るためには、健康な肉体と健康な精神の両方を維持する必要がある。しかし、昨今、ストレス増加などの要因によりメンタルヘルスの低下や、うつ病患者の増加などの社会問題となっている。
【0003】
これまでに、生体試料として血液や脳脊髄液、尿、唾液等を用いたうつ病の重症度を示すバイオマーカー候補のメタボローム解析による探索（特許文献１）や、うつ病のバイオマーカー候補となるマイクロＲＮＡの探索（特許文献２）、うつ病の診断のための血液中バイオマーカーの候補の探索（特許文献３）が行われており、うつ病のバイオマーカーとして、トリプトファンまたはその分解物が候補となることなどが開示されている（特許文献４）。しかしながら、依然として網羅的解析によるうつ病の早期診断技術に資するバイオマーカーを同定することが求められていた。また、これまでのところ生体試料として糞便や肝臓などを用いたうつ病のバイオマーカーに関する報告は無かった。
【0004】
また、本発明者等は、社会的敗北ストレスモデルマウス（うつ病モデルマウス）の腸管上皮細胞において、ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ２（Ｆｕｔ２）遺伝子がダウンレギュレーションされることを報告している（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】再表2017/082103号公報
【特許文献2】再表2016/117582号公報
【特許文献3】再表2011/019072号公報
【特許文献4】特表2008-537111号公報
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Scientific Reports, 2018;8:13199
【非特許文献2】Biomedical chromatography, 2012;26(5):548-558
【非特許文献3】Journal of proteome research, 2017;16(5):1857-1867
【非特許文献4】PLOS ONE, 2014;9(11):e113259
【非特許文献5】Behav Brain Res., 2014;270:339-48
【非特許文献6】J Vis Exp., 2015;105:52973
【非特許文献7】Cell, 2007;131(2):391-404
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明は、生体試料中における新たなうつ病のバイオマーカーを提供すること、このバイオマーカーを用いたうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法、うつ病を判定するためのプログラム、うつ病を判定するための検査キット、並びにうつ病の治療薬のスクリーニング及び評価方法を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、うつ病を有する対象の生体試料、特に糞便試料においてや特定の細菌がコントロール対象の当該試料と比較して増加又は減少していることを見出し、また、特に糞便試料、血漿試料、肝臓試料において、特定の代謝産物がコントロール対象の当該試料と比較して増加又は減少していることを見出し、また、本発明に想到した。
【0009】
すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］被検対象から採取された生体試料中における、
表１に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物、並びに／又は
Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の、
うつ病の診断のためのバイオマーカーとしての使用。
［２］前記生体試料が、糞便であり、
前記代謝物が、表２に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、［１］に記載の使用。
［３］前記生体試料が、血漿であり、
前記代謝物が、表３に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、［１］に記載の使用。
［４］前記生体試料が、肝臓であり、
前記代謝物が、表４に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、［１］に記載の使用。
［５］ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のための［１］に記載の使用であって、
前記生体試料が糞便であり、並びに
前記代謝物が、表５に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物であり、並びに／又は
前記細菌が、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌である、前記使用。
［６］ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のための［１］に記載の使用であって、
前記生体試料が血漿であり、及び
前記代謝物が、表６に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、前記使用。
［７］被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、［１］～［４］のいずれかにおいて定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、コントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記コントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又はうつ病の発症リスクを有すると判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法。
［８］被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、［５］又は［６］において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法。
［９］被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラム：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における［１］～［４］のいずれかにおいて定義されるバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどう
かを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又はうつ病の発症リスクを有するとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
［１０］被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラム：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における［５］又は［６］において定義されるバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとうつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
［１１］被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キット。
［１２］被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キット。
［１３］うつ病の治療薬をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
治療薬の候補物質を投与されたうつ病を有する対象から採取された生体試料における［１］～［４］のいずれかにおいて定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合又はうつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法。
［１４］うつ病を有する対象におけるストレスに対する耐性の向上剤をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
向上剤の候補物質を投与されたうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象から採取された生体試料における［５］又は［６］において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２未満となった場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法。
［１］被検対象から採取された生体試料中における、
表１に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物、並びに／又は
Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の、
うつ病の診断のためのバイオマーカーとしての使用。
【表1-1】
【表1-2】
［２］前記生体試料が、糞便であり、
前記代謝物が、表２に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、［１］に記載の使用。
【表2】
［３］前記生体試料が、血漿であり、
前記代謝物が、表３に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、［１］に記載の使用。
【表3】
［４］前記生体試料が、肝臓であり、
前記代謝物が、表４に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、［１］に記載の使用。
【表4】
［５］ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のための［１］に記載の使用であって、
前記生体試料が糞便であり、並びに
前記代謝物が、表５に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物であり、並びに／又は
前記細菌が、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌である、前記使用。
【表5】
［６］ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のための［１］に記載の使用であって、
前記生体試料が血漿であり、及び
前記代謝物が、表６に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物である、前記使用。
【表6】
［７］被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、［１］～［４］のいずれかにおいて定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、コントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記コントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又はうつ病の発症リスクを有すると判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法。
［８］被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、［５］又は［６］において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法。
［９］被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラム：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における［１］～［４］のいずれかにおいて定義されるバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどう
かを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又はうつ病の発症リスクを有するとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
［１０］被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラム：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における［５］又は［６］において定義されるバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとうつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
［１１］被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キット。
［１２］被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キット。
［１３］うつ病の治療薬をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
治療薬の候補物質を投与されたうつ病を有する対象から採取された生体試料における［１］～［４］のいずれかにおいて定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合又はうつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法。
［１４］うつ病を有する対象におけるストレスに対する耐性の向上剤をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
向上剤の候補物質を投与されたうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象から採取された生体試料における［５］又は［６］において定義されるバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２未満となった場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法。
【発明の効果】
【0010】
本発明により、生体試料中の細菌や代謝物がうつ病のバイオマーカーとして使用できることを見出し、さらにこのバイオマーカーを用いたうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法、うつ病を判定するためのプログラム、うつ病を判定するための検査キット、並びにうつ病の治療薬のスクリーニング及び評価方法を提供することを可能とした。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】社会的敗北ストレスマウスにおける社会行動スコアを示す図である。
【図2】糞便中代謝物及び血漿中代謝物に対してそれぞれＯｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｐａｒｔｉａｌ ｌｅａｓｔ ｓｑｕａｒｅｓ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ（ＯＰＬＳ－ＤＡ）を行った結果を示す図である。
【図3】社会的敗北ストレスマウスにおける肝臓における（Ａ）Ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ及び（Ｂ）Ｓｐｅｒｍｉｎｅの相対量を示す図である。データはｍｅａｎ±ＳＤ（標準偏差）で示す（ｎ＝６－７）。
【発明を実施するための形態】
【0012】
＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞
本発明の一実施態様は、
被検対象から採取された生体試料中における、
表１に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物、並びに／又は
Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の、
うつ病の診断のためのバイオマーカーとしての使用である。
本発明の一実施態様は、
被検対象から採取された生体試料中における、
表１に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物、並びに／又は
Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の、
うつ病の診断のためのバイオマーカーとしての使用である。
【0013】
本発明のバイオマーカーは生体試料中に含まれるものである。生体試料としては、例えば糞便、血漿、血清、血液、肝臓、唾液などを挙げることができる。非侵襲的又は低侵襲的であるという観点からは、生体試料は糞便又は血漿であることが好ましい。
【0014】
生体試料は、当業者に既知の方法により被検対象から採取することができる。
【0015】
細菌叢解析を行う場合、当業者に既知の方法により、糞便からＤＮＡを単離することができる。例えば、市販の試薬やキット（例えば、ＱｕｉｃｋＧｅｎｅ－８１０ ｓｙｓｔｅｍ、ＱｕｉｃｋＧｅｎｅ ＤＮＡ ｔｉｓｓｕｅ ＫＩＴ、倉敷紡績株式会社、大阪、日本）をキットに添付されているプロトコルに従って行うことができる。
代謝物の解析を行う場合、当業者に既知の方法により、生体試料から低分子代謝物を抽出することができる。例えば、肝臓及び血漿試料からの低分子代謝物の抽出は非特許文献２～３に記載される方法に基づき行うことができ、糞便からの低分子代謝物の抽出は非特許文献４に記載される方法に基づき行うことができる。特に限定されないが、糞便から低分子代謝物を抽出するとき、例えば２～１０倍等の任意の倍率で糞便を希釈し、その希釈した糞便を遠心分離し、その遠心上清を用いて抽出を行ってもよい。
生体試料から回収したＤＮＡや低分子代謝物は、任意で凍結保存してもよく、随時調製してもよい。
代謝物の解析を行う場合、当業者に既知の方法により、生体試料から低分子代謝物を抽出することができる。例えば、肝臓及び血漿試料からの低分子代謝物の抽出は非特許文献２～３に記載される方法に基づき行うことができ、糞便からの低分子代謝物の抽出は非特許文献４に記載される方法に基づき行うことができる。特に限定されないが、糞便から低分子代謝物を抽出するとき、例えば２～１０倍等の任意の倍率で糞便を希釈し、その希釈した糞便を遠心分離し、その遠心上清を用いて抽出を行ってもよい。
生体試料から回収したＤＮＡや低分子代謝物は、任意で凍結保存してもよく、随時調製してもよい。
【0016】
各バイオマーカーの測定方法は、そのバイオマーカーを測定できる限り特に限定されない。バイオマーカーが代謝物であるとき、バイオマーカーの測定は、例えば、生体試料が血漿や肝臓であれば、ガスクロマトグラフィー－タンデム質量分析（ＧＣ／ＭＳ／ＭＳ）によって行ってもよく、生体試料が糞便であれば、ＧＣＭＳ－ＱＰ２０１０ Ｕｌｔｒａ（島津製作所）によって行ってもよい。また、バイオマーカーが細菌であるとき、バイオマーカーの測定は、例えば、次世代シーケンス解析により行ってもよく、マイクロアレイ法により行ってもよく、定量ＰＣＲ法により行ってもよい。いずれの測定方法も当業者に既知の方法により行うことができる。
【0017】
バイオマーカーが代謝物であるとき、バイオマーカーとして有用な代謝物は、表１に記載されるものである。これらの代謝物は、うつ病を有する対象から採取した生体試料と、うつ病を有しない対象から採取した生体試料との間で、有意に存在比が異なる代謝物であるため、うつ病のバイオマーカーとして好ましく利用できる。
【0018】
生体試料が糞便の場合は、表２に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物をうつ病のバイオマーカーとしてより好ましく利用でき、生体試料が血漿の場合は、表３に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物をうつ病のバイ
オマーカーとしてより好ましく利用でき、さらに、生体試料が肝臓の場合は、表４に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物をうつ病のバイオマーカーとしてより好ましく利用できる。これらの代謝物はそれぞれ、うつ病を有する対象から採取した生体試料と、うつ病を有しない対象から採取した生体試料との間で、有意に存在比が異なる代謝物である。
さらに、後述のＶＩＰスコアの測定結果に鑑み、糞便中及び血漿中のいずれにおいてもＶＩＰスコアが高い３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ及び２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄは、うつ病のバイオマーカーとして特に有用である。
オマーカーとしてより好ましく利用でき、さらに、生体試料が肝臓の場合は、表４に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物をうつ病のバイオマーカーとしてより好ましく利用できる。これらの代謝物はそれぞれ、うつ病を有する対象から採取した生体試料と、うつ病を有しない対象から採取した生体試料との間で、有意に存在比が異なる代謝物である。
さらに、後述のＶＩＰスコアの測定結果に鑑み、糞便中及び血漿中のいずれにおいてもＶＩＰスコアが高い３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ及び２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄは、うつ病のバイオマーカーとして特に有用である。
【0019】
また、バイオマーカーが細菌であるとき、バイオマーカーとして有用な細菌は、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌である。これらの細菌は、うつ病を有する対象から採取した生体試料と、うつ病を有しない対象から採取した生体試料との間で、有意に存在比が異なる細菌であるため、うつ病のバイオマーカーとして好ましく利用できる。
これらの細菌の中でも、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌は、うつ病を有しない対象から採取した生体試料において存在が確認できなかった細菌であるためうつ病に関与するバイオマーカーとして特に好ましく利用できる。
なお、本明細書において、属名が記載されている細菌に関しては、細菌の種や株に関しては特に限定されず、また科名が記載されている細菌に関しては、細菌の属、種や株に関しては特に限定されない。
これらの細菌の中でも、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌は、うつ病を有しない対象から採取した生体試料において存在が確認できなかった細菌であるためうつ病に関与するバイオマーカーとして特に好ましく利用できる。
なお、本明細書において、属名が記載されている細菌に関しては、細菌の種や株に関しては特に限定されず、また科名が記載されている細菌に関しては、細菌の属、種や株に関しては特に限定されない。
【0020】
被検対象は、うつ病を発症し得る対象であり、本発明のバイオマーカーをうつ病の診断に使用できる限り特に限定されず、典型的にはヒトであるが、イヌやネコなどの愛玩動物、ウシ、ウマ、ブタなどの家畜動物、マウス、ラットなどの実験動物など、どのような哺乳動物であってもよい。
【0021】
本発明におけるいずれの代謝産物もＰｕｂＣｈｅｍやＨＭＤＢ（Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ Ｄａｔａｂａｓｅ）等のデータベースに開示されている。
【0022】
本発明において、「うつ病」は、例えば大うつ病性障害（ｍａｊｏｒ ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）等が挙げられる。大うつ病性障害は、気分障害（ｍｏｏｄ ａｎｄ ａｎｘｉｅｔｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の一種であり、抑うつ行動や不安行動、意欲行動の低下などにより特徴付けられる。双極性障害や統合失調症などとは区別される。
【0023】
うつ病の診断は、現状を診断するものであってもよく、またうつ病の発症リスクを事前に予測するための診断であってよく、すなわち予測診断又は事前診断であってもよい。
具体的には、うつ病の診断は、被検対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と、コントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量とを比較し、被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記コントロール対象由来のバイオマ
ーカーの量と比較して有意差がある場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又はうつ病を発症するリスクがあると判定、評価及び／又は予測することができるものであってもよい。被検対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量が有意に増加するか、それとも有意に減少するかは、測定するバイオマーカーに依存する。
または、当業者に既知の方法である、Ｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｐａｃｋａｇｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．６．２（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）とＭｅｔａｂｏＡｎａｌｙｓｔ ５．０を用いた解析によりＶＩＰ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）スコアを算出し、特に限定されないが、ＶＩＰスコアが１．２以上、１．５以上、若しくは２．０以上である場合、ＶＩＰスコアが上位２０以内、１５位以内、若しくは１０位以内である場合、又はＶＩＰスコアが上位２０％以内、上位１５％以内、若しくは上位１０％以内である場合に、被検対象がうつ病を有する及び／又はうつ病が重症である及び／又はうつ病を発症するリスクがあると判定、評価及び／又は予測することができるものであってもよい。
ただし、本発明において、うつ病の診断、判定、評価及び／又は予測について、最終的な判断行為は含まれず、医師が診断等するための材料を提供するまでを指す。
具体的には、うつ病の診断は、被検対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と、コントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量とを比較し、被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記コントロール対象由来のバイオマ
ーカーの量と比較して有意差がある場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又はうつ病を発症するリスクがあると判定、評価及び／又は予測することができるものであってもよい。被検対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量が有意に増加するか、それとも有意に減少するかは、測定するバイオマーカーに依存する。
または、当業者に既知の方法である、Ｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｐａｃｋａｇｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．６．２（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）とＭｅｔａｂｏＡｎａｌｙｓｔ ５．０を用いた解析によりＶＩＰ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）スコアを算出し、特に限定されないが、ＶＩＰスコアが１．２以上、１．５以上、若しくは２．０以上である場合、ＶＩＰスコアが上位２０以内、１５位以内、若しくは１０位以内である場合、又はＶＩＰスコアが上位２０％以内、上位１５％以内、若しくは上位１０％以内である場合に、被検対象がうつ病を有する及び／又はうつ病が重症である及び／又はうつ病を発症するリスクがあると判定、評価及び／又は予測することができるものであってもよい。
ただし、本発明において、うつ病の診断、判定、評価及び／又は予測について、最終的な判断行為は含まれず、医師が診断等するための材料を提供するまでを指す。
【0024】
また、例えば、特定のバイオマーカーに関して有意差があった場合にうつ病が重症であると判断してもよく、有意差が生じたバイオマーカーの個数に応じて重症であると判断してもよい。
コントロール対象とは、例えば、うつ病を有しない対象のことである。
コントロール対象とは、例えば、うつ病を有しない対象のことである。
【0025】
有意差検定は、当業者に既知の検定を使用することができ、例えば、Ｔｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法によって行うことができる。有意差があるとは、特に限定されないが、例えば、ｐ値が０．０５未満としてもよく、ｐ値が０．０１未満としてもよく、ｐ値が０．００１未満としてもよい。なお、ｐ値が０．１未満の場合は、傾向有りと判断することが可能である。
また、任意でｑ値によって閾値を設定してもよく、特に限定されないが、例えばｑ値が０．５未満としてもよく、０．４未満としてもよく、０．３未満としてもよく、０．２未満としてもよく、０．１未満としてもよい。
また、任意でｑ値によって閾値を設定してもよく、特に限定されないが、例えばｑ値が０．５未満としてもよく、０．４未満としてもよく、０．３未満としてもよく、０．２未満としてもよく、０．１未満としてもよい。
【0026】
うつ病の診断は、バイオマーカー１種の測定結果のみに基づくものであってもうつ病を有すると判断することができるが、複数のバイオマーカーの測定結果を組み合わせることによって、うつ病のより正確な判定、評価及び／又は予測を行うことができる。複数のバイオマーカーとは、２種以上、３種以上、４種以上、５種以上、６種以上、７種以上、８種以上、９種以上、１０種以上、１５種以上、２０種以上、２５種以上、３０種以上、３５種以上、４０種以上であってもよく、また、例えば、１００種以下、５０種以下、４０種以下、３０種以下、２０種以下であってもよい。下限と上限は任意に組み合わせることが出来るが、例えば、１種以上かつ１００種以下、２種以上かつ５０種以下、３種以上かつ４０種以下、５種以上かつ３０種以下、１０種以上かつ２０種以下としてもよい。複数のバイオマーカーを用いるときは、複数のバイオマーカーの測定結果に基づきリスクスコアを算出して、そのリスクスコアによって診断を行ってもよい。
例えば、特に限定されないが、複数のバイオマーカーが代謝物の組み合わせを含むとき、３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ及び２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄから成る群から選択される代謝物を少なくとも１つ以上含むことが好ましい。
また、例えば、特に限定されないが、複数のバイオマーカーが細菌の組み合わせを含むとき、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌から成る群から選択される細菌を少なくとも１つ以上含むことが好ましい。
例えば、特に限定されないが、複数のバイオマーカーが代謝物の組み合わせを含むとき、３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ及び２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄから成る群から選択される代謝物を少なくとも１つ以上含むことが好ましい。
また、例えば、特に限定されないが、複数のバイオマーカーが細菌の組み合わせを含むとき、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌から成る群から選択される細菌を少なくとも１つ以上含むことが好ましい。
【0027】
また、うつ病の診断は、予め被検対象と同じ種である健常な哺乳動物(例えば健常人)の生体試料中のこれらのバイオマーカーの値を基準値として設定しておけば、被検対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量がその基準値を超えた又は下回った場合に、うつ病であると診断することもできる。
【0028】
さらに、本実施形態のバイオマーカーは、ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとして使用してもよい。
【0029】
生体試料が糞便の場合、例えば、ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとしては、表５に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物、並びに／又はＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌を挙げることができる。
また、生体試料が血漿の場合、例えば、ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとしては、表６に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物を挙げることができる。
また、生体試料が血漿の場合、例えば、ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとしては、表６に記載される代謝物からなる群から選択される１つ以上の代謝物を挙げることができる。
【0030】
表５又は表６に記載される代謝物は、後述のＶＩＰスコアの測定結果より、ＶＩＰスコア高い代謝物であることが示された代謝物である。
さらに、後述のＶＩＰスコアの測定結果に鑑み、糞便中及び血漿中のいずれにおいてもＶＩＰスコアが高い３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ及び２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄは、ストレス感受性に関するバイオマーカーとして特に有用である。
また、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌はいずれも、後述の細菌叢解析の結果ストレス感受性に関与することが示された細菌である。
さらに、後述のＶＩＰスコアの測定結果に鑑み、糞便中及び血漿中のいずれにおいてもＶＩＰスコアが高い３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ及び２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄは、ストレス感受性に関するバイオマーカーとして特に有用である。
また、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌はいずれも、後述の細菌叢解析の結果ストレス感受性に関与することが示された細菌である。
【0031】
ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測は、被検対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と、ストレス耐性を有するコントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量とを比較し、被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記ストレス耐性を有するコントロール対象由来のバイオマーカーの量と比較して有意差がある場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測することができるものであってもよい。被検対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量が有意に増加するか、それとも有意に減少するかは、測定するバイオマーカーに依存する。
または、当業者に既知の方法によりＶＩＰ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ
ｏｆ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）スコアを算出し、特に限定されないが、ＶＩＰスコアが１．２以上、１．５以上、若しくは２．０以上である場合、ＶＩＰスコアが上位２０以内、１５位以内、若しくは１０位以内である場合、又はＶＩＰスコアが上位２０％以内、上位１５％以内、若しくは上位１０％以内である場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測することができるものであってもよい。
ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測におけるコントロール対象とは、例えば、うつ病を有し且つストレス耐性を有する対象のことである。
または、当業者に既知の方法によりＶＩＰ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ
ｏｆ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）スコアを算出し、特に限定されないが、ＶＩＰスコアが１．２以上、１．５以上、若しくは２．０以上である場合、ＶＩＰスコアが上位２０以内、１５位以内、若しくは１０位以内である場合、又はＶＩＰスコアが上位２０％以内、上位１５％以内、若しくは上位１０％以内である場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測することができるものであってもよい。
ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測におけるコントロール対象とは、例えば、うつ病を有し且つストレス耐性を有する対象のことである。
【0032】
有意差検定は、当業者に既知の検定を使用することができ、例えば、Ｔｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法によって行うことができる。有意差があるとは、特に限定されないが、例えば、ｐ値が０．０５未満としてもよく、ｐ値が０．０１未満としてもよく、ｐ値が０．００１未満としてもよい。なお、ｐ値が０．１未満の場合は、傾向有りと判断することが可能である。
また、任意でｑ値によって閾値を設定してもよく、特に限定されないが、例えばｑ値が
０．５未満としてもよく、０．４未満としてもよく、０．３未満としてもよく、０．２未満としてもよく、０．１未満としてもよい。
また、任意でｑ値によって閾値を設定してもよく、特に限定されないが、例えばｑ値が
０．５未満としてもよく、０．４未満としてもよく、０．３未満としてもよく、０．２未満としてもよく、０．１未満としてもよい。
【0033】
ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測は、バイオマーカー１種の測定結果のみに基づくものであってもうつ病を有すると判断することができるが、複数のバイオマーカーの測定結果を組み合わせることによって、ストレス感受性のより正確な判定、評価及び／又は予測を行うことができる。複数のバイオマーカーとは、２種以上、３種以上、４種以上、５種以上、６種以上、７種以上、８種以上、９種以上、１０種以上、１５種以上、２０種以上、２５種以上、３０種以上、３５種以上、４０種以上であってもよく、また、例えば、１００種以下、５０種以下、４０種以下、３０種以下、２０種以下であってもよい。下限と上限は任意に組み合わせることが出来るが、例えば、１種以上かつ１００種以下、２種以上かつ５０種以下、３種以上かつ４０種以下、５種以上かつ３０種以下、１０種以上かつ２０種以下としてもよい。複数のバイオマーカーを用いるときは、複数のバイオマーカーの測定結果に基づきリスクスコアを算出して、そのリスクスコアによって診断を行ってもよい。
例えば、特に限定されないが、複数のバイオマーカーが代謝物の組み合わせを含むとき、３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ及び２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄから成る群から選択される代謝物を少なくとも１つ以上含むことが好ましい。
また、例えば、特に限定されないが、複数のバイオマーカーが細菌の組み合わせを含むとき、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌から成る群から選択される細菌を少なくとも１つ以上含むことが好ましい。
例えば、特に限定されないが、複数のバイオマーカーが代謝物の組み合わせを含むとき、３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ及び２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄから成る群から選択される代謝物を少なくとも１つ以上含むことが好ましい。
また、例えば、特に限定されないが、複数のバイオマーカーが細菌の組み合わせを含むとき、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌から成る群から選択される細菌を少なくとも１つ以上含むことが好ましい。
【0034】
また、ストレス感受性の判定、評価及び／又は予測は、予め被検対象と同じ種であるうつ病を有し且つストレス耐性を有する哺乳動物の生体試料中のこれらのバイオマーカーの値を基準値として設定しておけば、被検対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量がその基準値を超えた又は下回った場合に、ストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測することもできる。
【0035】
＜うつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法、並びにストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するための方法＞
本発明の他の実施態様は、被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項に記載するいずれかのバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、コントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記コントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又は発症リスクを有すると判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法である。
本発明の他の実施態様は、被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項に記載するいずれかのバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、コントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記コントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又は発症リスクを有すると判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法である。
【0036】
また、本実施形態は、被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するための方法であって、
前記被検対象から採取された生体試料における、上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項においてストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとして記載するいずれかのバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法であってもよい。
前記被検対象から採取された生体試料における、上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項においてストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとして記載するいずれかのバイオマーカーの量を測定する工程、
前記被検対象由来のバイオマーカーの量を、うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象から採取された生体試料中におけるバイオマーカーの量と比較する工程、及び
前記被検対象由来のバイオマーカーの量が、前記うつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来のバイオマーカーの量よりと比較して有意差がある場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いと判定、評価及び／又は予測される工程
を含む、方法であってもよい。
【0037】
うつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するための方法、並びにストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するための方法における各記載は、上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項の記載を援用することができる。
【0038】
＜うつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのプログラム、並びにストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのプログラム＞
本発明の他の実施態様は、被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラムである：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項に記載するいずれかのバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又は発症リスクを有するとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
本発明の他の実施態様は、被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラムである：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項に記載するいずれかのバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象がうつ病を有する、うつ病が重症である及び／又は発症リスクを有するとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
【0039】
また、本実施形態は、被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのプログラムであって、
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラムであってもよい：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項においてストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとして記載するいずれかのバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとうつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
以下の手順（１）及び（２）を情報処理装置に実行させるためのプログラムであってもよい：
（１）前記被検対象から採取された生体試料における上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項においてストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとして記載するいずれかのバイオマーカーの量の入力された測定データ、及びコントロール対象から採取された生体試料におけるバイオマーカーの量の入力された測定データに基づき、被検対象由来の測定データとうつ病を有し且つストレス耐性を有するコントロール対象由来の測定データとの間で有意差があるかどうかを算出する手順、
（２）前記算出した結果、両者の測定データの間で有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合に、被検対象はストレス感受性が高いとの判定、評価及び／又は予測を表示する手順。
【0040】
本実施形態のプログラムは、さらに、測定データを入力する手順を含んでもよい。
【0041】
本実施形態のプログラムの情報処理装置への実装方法は、当業者に既知の方法により行うことができる。例えば、上述のプログラムを記録した情報処理装置読み取り可能な記録媒体を介して、情報処理装置に実装することができる。本実施形態において、情報処理装置とは、典型的にはコンピュータである。
【0042】
うつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのプログラム、並びにストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのプログラムにおける各記載は、上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項の記載を援用することができる。
【0043】
＜うつ病の病状、重症度及び／又は予測を判定、評価及び／又は予測するためのキット、並びにストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのキット＞
本発明の他の実施態様は、被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キットである。
本発明の他の実施態様は、被検対象におけるうつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌、Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４－７科に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目に属する細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する細菌、Ｇｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ科に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｄｏｒｅａ属に属する細菌、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科に属する細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する細菌、及びＭｏｌｌｉｃｕｔｅｓ綱ＲＦ３９目に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キットである。
【0044】
また、本実施形態は、被検対象がうつ病を有する対象であるとき、前記被検対象におけるストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのキットであって、
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キットであってもよい。
前記被検対象から採取された糞便試料における、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌及びＣｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌からなる群から選択される１つ以上の細菌の量を測定するための試薬を含み、
前記試薬が、少なくとも１つの前記細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブ及び／又は核酸プライマー
を含む、キットであってもよい。
【0045】
細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プローブとしては、例えば、当該ＲＮＡのヌクレオチド配列の一部又は全部に相補的な１０塩基以上（例えば、１０～２４塩基、好ましくは１５～２４塩基）の連続したヌクレオチド配列を含み、当該ＲＮＡにハイブリダイズすることが可能なポリヌクレオチドを挙げることができる。そのような核酸プローブは、本明細書に記載されたＲＮＡの情報等に基づいて、既知の方法により適宜設計することができ、または市販の核酸プローブを用いることもできる。
細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プライマーは、ＲＮＡのヌクレオチド配列の一部又は全部の領域を特異的に増幅し得るように設計されたものである限り、いかなる配列を有するものであってもよい。
細菌のＲＮＡを特異的に検出する核酸プライマーは、ＲＮＡのヌクレオチド配列の一部又は全部の領域を特異的に増幅し得るように設計されたものである限り、いかなる配列を有するものであってもよい。
【0046】
核酸プローブ及び／又は核酸プライマーは、任意の標識剤、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質、ビオチン等で標識されていてもよい。
【0047】
本実施形態のキットは、さらに、ＲＮＡの測定法に依存して、ＲＮＡを抽出する試薬、内部標準試薬、定量ＰＣＲ用試薬、マイクロアレイ用メンブレンなどを適宜含むものであってもよい。
【0048】
うつ病の病状、重症度及び／又は発症リスクを判定、評価及び／又は予測するためのキット、並びにストレス感受性を判定、評価及び／又は予測するためのキットにおける各記載は、上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項の記載を援用することができる。
【0049】
＜うつ病の治療薬をスクリーニングする方法及び／又は評価方法、並びにストレスに対する耐性の向上剤をスクリーニングする方法及び／又は評価方法＞
本発明の他の実施態様は、うつ病の治療薬をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
治療薬の候補物質を投与されたうつ病を有する対象から採取された生体試料における上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項に記載するいずれかのバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合又はうつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法である。
本発明の他の実施態様は、うつ病の治療薬をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
治療薬の候補物質を投与されたうつ病を有する対象から採取された生体試料における上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項に記載するいずれかのバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合又はうつ病を有する対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有する対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２以上の場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法である。
【0050】
具体的な手順は、例えば、以下に記載する通りである。
うつ病を有する対象を２群に分け、１つの群は治療薬の候補物質を投与する群とし、他方の群は治療薬の候補物質を投与しない群とする。治療薬の候補物質を投与した群の対象由来の生体試料と治療薬の候補物質を投与しない群由来の生体試料を採取し、それぞれの群間において上述のうつ病に関するバイオマーカーの量を比較する。比較した結果、治療薬の候補物質を投与した群の測定値が、治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があり、またうつ病を有しない健常群の測定値と比較して有意差が無い場合、用いた治療薬の候補物質を、うつ病の治療薬の候補として選択することができる。
また、うつ病を有する対象において、治療薬の候補物質を投与した前と後のそれぞれにおいて生体試料を採取し、治療薬の候補物質を投与した後の生体試料における上述のうつ病に関するバイオマーカーの量が、治療薬の候補物質を投与する前の生体試料における当該バイオマーカーの量と比較する。比較した結果、治療薬の候補物質を投与した後の生体試料中の当該バイオマーカーの量が、治療薬の候補物質を投与する前の生体試料中の当該バイオマーカーの量と比較して有意差があり、またうつ病を有しない健常群の測定値と比較して有意差が無い場合、用いた治療薬の候補物質を、うつ病の治療薬の候補として選択することができる。
対象への投与は、経口、静注、塗布などの投与形態を用いることができるが、飼料中又は、給水中に被検物質を添加しておくことが好ましい。
うつ病を有する対象を２群に分け、１つの群は治療薬の候補物質を投与する群とし、他方の群は治療薬の候補物質を投与しない群とする。治療薬の候補物質を投与した群の対象由来の生体試料と治療薬の候補物質を投与しない群由来の生体試料を採取し、それぞれの群間において上述のうつ病に関するバイオマーカーの量を比較する。比較した結果、治療薬の候補物質を投与した群の測定値が、治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有する対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があり、またうつ病を有しない健常群の測定値と比較して有意差が無い場合、用いた治療薬の候補物質を、うつ病の治療薬の候補として選択することができる。
また、うつ病を有する対象において、治療薬の候補物質を投与した前と後のそれぞれにおいて生体試料を採取し、治療薬の候補物質を投与した後の生体試料における上述のうつ病に関するバイオマーカーの量が、治療薬の候補物質を投与する前の生体試料における当該バイオマーカーの量と比較する。比較した結果、治療薬の候補物質を投与した後の生体試料中の当該バイオマーカーの量が、治療薬の候補物質を投与する前の生体試料中の当該バイオマーカーの量と比較して有意差があり、またうつ病を有しない健常群の測定値と比較して有意差が無い場合、用いた治療薬の候補物質を、うつ病の治療薬の候補として選択することができる。
対象への投与は、経口、静注、塗布などの投与形態を用いることができるが、飼料中又は、給水中に被検物質を添加しておくことが好ましい。
【0051】
また、本実施形態は、うつ病を有する対象におけるストレスに対する耐性の向上剤をスクリーニングする方法及び／又は評価方法であって、
向上剤の候補物質を投与されたうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象から採取された生体試料における上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項においてストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとして記載するいずれかのバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２未満となった場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法であってもよい。
向上剤の候補物質を投与されたうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象から採取された生体試料における上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項においてストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーとして記載するいずれかのバイオマーカーの量を測定する工程、
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較する、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量を、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較する工程、及び
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、前記治療薬の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、又はうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記候補物質を投与された後における前記バイオマーカーの量が、このうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記治療薬の候補物質を投与される前における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があった場合、若しくはＶＩＰスコアを指標としてＶＩＰスコアが１．２未満となった場合、前記候補物質がうつ病の治療薬として有効であると評価される工程
を含む、スクリーニングする方法及び／又は評価方法であってもよい。
【0052】
具体的な手順は、例えば、以下に記載する通りである。
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象を２群に分け、１つの群はストレスに対する耐性の向上剤の候補物質を投与する群とし、他方の群は該向上剤の候補物質を投与しない群とする。該向上剤の候補物質を投与した群の対象由来の生体試料と該向上剤の候補物質を投与しない群由来の生体試料を採取し、それぞれの群間において上述のストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーの量を比較する。比較した結果、該向上剤の候補物質を投与した群の測定値が、該向上剤の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があり、またうつ病を有し且つストレス耐性が高い群の測定値と比較して有意差が無い場合、用いた該向上剤の候補物質を、ストレスに対する耐性の向上剤の候補として選択することができる。
また、うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象において、ストレスに対する耐性の向上剤の候補物質を投与した前と後のそれぞれにおいて生体試料を採取し、該向上剤の候補物質を投与した後の生体試料における上述のうつ病に関するバイオマーカーの量が、該向上剤の候補物質を投与する前の生体試料における当該バイオマーカーの量と比較する。比較した結果、該向上剤の候補物質を投与した後の生体試料中の当該バイオマーカーの量が、該向上剤の候補物質を投与する前の生体試料中の当該バイオマーカーの量と比較して有意差があり、またうつ病を有し且つストレス感受性が高い群の測定値と比較して有意差が無い場合、用いた該向上剤の候補物質を、ストレスに対する耐性の向上剤の候補として選択することができる。
対象への投与は、経口、静注、塗布などの投与形態を用いることができるが、飼料中又は、給水中に被検物質を添加しておくことが好ましい。
うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象を２群に分け、１つの群はストレスに対する耐性の向上剤の候補物質を投与する群とし、他方の群は該向上剤の候補物質を投与しない群とする。該向上剤の候補物質を投与した群の対象由来の生体試料と該向上剤の候補物質を投与しない群由来の生体試料を採取し、それぞれの群間において上述のストレス感受性の判定、評価及び／又は予測のためのバイオマーカーの量を比較する。比較した結果、該向上剤の候補物質を投与した群の測定値が、該向上剤の候補物質を投与されていないうつ病を有し且つストレス感受性が高い対象における前記バイオマーカーの量と比較して有意差があり、またうつ病を有し且つストレス耐性が高い群の測定値と比較して有意差が無い場合、用いた該向上剤の候補物質を、ストレスに対する耐性の向上剤の候補として選択することができる。
また、うつ病を有し且つストレス感受性が高い対象において、ストレスに対する耐性の向上剤の候補物質を投与した前と後のそれぞれにおいて生体試料を採取し、該向上剤の候補物質を投与した後の生体試料における上述のうつ病に関するバイオマーカーの量が、該向上剤の候補物質を投与する前の生体試料における当該バイオマーカーの量と比較する。比較した結果、該向上剤の候補物質を投与した後の生体試料中の当該バイオマーカーの量が、該向上剤の候補物質を投与する前の生体試料中の当該バイオマーカーの量と比較して有意差があり、またうつ病を有し且つストレス感受性が高い群の測定値と比較して有意差が無い場合、用いた該向上剤の候補物質を、ストレスに対する耐性の向上剤の候補として選択することができる。
対象への投与は、経口、静注、塗布などの投与形態を用いることができるが、飼料中又は、給水中に被検物質を添加しておくことが好ましい。
【0053】
うつ病の治療薬をスクリーニングする方法及び／又は評価方法、並びにストレスに対する耐性の向上剤をスクリーニングする方法及び／又は評価方法における各記載は、上述の＜うつ病の診断のためのバイオマーカー＞の項の記載を援用することができる。
【実施例0054】
以下に実施例を用いて本発明を説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【0055】
＜実施例１：社会的敗北ストレスモデルマウス（うつ病モデルマウス）の作製＞
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ系統（Ｂ６）のマウス（７週齢、雄性、日本クレア株式会社）を、２
３±２℃、湿度５０－６０％、明期１２時間、暗期１２時間の明暗サイクル下（７：００点灯、１９：００消灯）で１週間飼育した（馴化飼育）。Ｂ６マウスの飼料としては、ＡＩＮ－９３Ｇ（オリエンタル酵母工業）を用い、実験の全期間を通して自由摂餌とした。馴化終了後、既報（非特許文献５、６）に従い、ＩＣＲ系統（ＩＣＲ）のマウス（リタイア、雄性、日本クレア株式会社）による１０日間（Ｄａｙ１～Ｄａｙ１０）の社会的敗北ストレスをＢ６マウスに負荷し、社会的敗北ストレスモデルマウスを得た。このようにして得た社会的敗北ストレスモデルマウスは、世界中で使用されている代表的なうつ病の動物モデルである。また、上記のように社会的敗北ストレスモデルマウスを作製した場合において、社会的敗北ストレスに対して脆弱であるマウス（以下、脆弱性マウスとも言う）と、社会的敗北ストレスに対する耐性を有するマウス（以下、耐性マウスとも言う）が出現することが知られている。社会的敗北ストレスに脆弱であるか、または社会的敗北ストレスに耐性を有するかは、当業者に既知の方法により社会行動スコアを測定することに判断できる（非特許文献７）。すなわち、社会行動スコア（ターゲットマウス不在率）は、箱内に設けられたケージ内に他のマウス（以下、ターゲットマウスともいう）を入れ、そのターゲットマウスの存在時又は不在時のそれぞれにおいて、スコア測定対象マウスがそのケージ周辺に滞在する時間をそれぞれ測定し、次の式を用いて算出することができる。
社会行動スコア＝（ターゲットマウス存在時の行動時間／ターゲットマウス不在時の行動時間）×１００
社会行動スコアが１００以上であるとき、耐性マウスと評価することができ、社会行動スコアが１００未満であるとき、脆弱性マウスと評価することができる。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ系統（Ｂ６）のマウス（７週齢、雄性、日本クレア株式会社）を、２
３±２℃、湿度５０－６０％、明期１２時間、暗期１２時間の明暗サイクル下（７：００点灯、１９：００消灯）で１週間飼育した（馴化飼育）。Ｂ６マウスの飼料としては、ＡＩＮ－９３Ｇ（オリエンタル酵母工業）を用い、実験の全期間を通して自由摂餌とした。馴化終了後、既報（非特許文献５、６）に従い、ＩＣＲ系統（ＩＣＲ）のマウス（リタイア、雄性、日本クレア株式会社）による１０日間（Ｄａｙ１～Ｄａｙ１０）の社会的敗北ストレスをＢ６マウスに負荷し、社会的敗北ストレスモデルマウスを得た。このようにして得た社会的敗北ストレスモデルマウスは、世界中で使用されている代表的なうつ病の動物モデルである。また、上記のように社会的敗北ストレスモデルマウスを作製した場合において、社会的敗北ストレスに対して脆弱であるマウス（以下、脆弱性マウスとも言う）と、社会的敗北ストレスに対する耐性を有するマウス（以下、耐性マウスとも言う）が出現することが知られている。社会的敗北ストレスに脆弱であるか、または社会的敗北ストレスに耐性を有するかは、当業者に既知の方法により社会行動スコアを測定することに判断できる（非特許文献７）。すなわち、社会行動スコア（ターゲットマウス不在率）は、箱内に設けられたケージ内に他のマウス（以下、ターゲットマウスともいう）を入れ、そのターゲットマウスの存在時又は不在時のそれぞれにおいて、スコア測定対象マウスがそのケージ周辺に滞在する時間をそれぞれ測定し、次の式を用いて算出することができる。
社会行動スコア＝（ターゲットマウス存在時の行動時間／ターゲットマウス不在時の行動時間）×１００
社会行動スコアが１００以上であるとき、耐性マウスと評価することができ、社会行動スコアが１００未満であるとき、脆弱性マウスと評価することができる。
【0056】
本発明者は、上記方法により社会的敗北ストレスマウスを作製した。社会的敗北ストレスを１０日間負荷した翌日に、そのマウスにおける社会行動スコアを測定した結果を図１に示す。社会的敗北ストレスを与えられていないコントロールマウス群（ｎ＝７、図中においてｃｏｎｔｒｏｌと示す）と比較して、脆弱性マウス群（ｎ＝６、図中においてＳｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅと示す）は社会行動スコアが大きく低下することが示された。一方で、耐性マウス群（ｎ＝７、図中においてＲｅｓｉｌｉｅｎｔと示す）は、脆弱性マウス群と比較して社会行動スコアが大きく上昇することが示された。なお、コントロールマウス群と耐性マウス群の社会行動スコアは同程度であることが示された。データはｍｅａｎ±ＳＥＭ（標準誤差）で示す。
【0057】
＜実施例２：社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた糞便の細菌叢解析＞
社会的敗北ストレスを１０日間負荷した翌日（Ｄａｙ１１）に各種マウスの糞便を採取した。採取した糞便は解析まで－８０℃で保存した。
その糞便を用いた細菌叢の網羅的解析は、次世代シーケンサーを用いて行った。糞便から市販のキット（ＱｕｉｃｋＧｅｎｅ－８１０ ｓｙｓｔｅｍ、ＱｕｉｃｋＧｅｎｅ ＤＮＡ ｔｉｓｓｕｅ ＫＩＴ、倉敷紡績株式会社、大阪、日本）を用いて、メーカーの説明書に従ってＤＮＡを単離した。ＤＮＡを単離した後、当業者に既知の方法により、２段階のｔａｉｌｅｄポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行い、１６Ｓ ｒＤＮＡライブラリを構築した。ＰＣＲ領域は１６Ｓ ｒＤＮＡのＶ３領域とＶ４領域であった。ＭｉＳｅｑを用いた配列解析は、当業者に既知の方法により実施した。配列解析後、得られたデータは、ＱＩＭＥを用いて解析し、門レベルから属レベルまでの操作的分類単位（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｕｎｉｔ；ＯＴＵ）を分類した。
社会的敗北ストレスを１０日間負荷した翌日（Ｄａｙ１１）に各種マウスの糞便を採取した。採取した糞便は解析まで－８０℃で保存した。
その糞便を用いた細菌叢の網羅的解析は、次世代シーケンサーを用いて行った。糞便から市販のキット（ＱｕｉｃｋＧｅｎｅ－８１０ ｓｙｓｔｅｍ、ＱｕｉｃｋＧｅｎｅ ＤＮＡ ｔｉｓｓｕｅ ＫＩＴ、倉敷紡績株式会社、大阪、日本）を用いて、メーカーの説明書に従ってＤＮＡを単離した。ＤＮＡを単離した後、当業者に既知の方法により、２段階のｔａｉｌｅｄポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行い、１６Ｓ ｒＤＮＡライブラリを構築した。ＰＣＲ領域は１６Ｓ ｒＤＮＡのＶ３領域とＶ４領域であった。ＭｉＳｅｑを用いた配列解析は、当業者に既知の方法により実施した。配列解析後、得られたデータは、ＱＩＭＥを用いて解析し、門レベルから属レベルまでの操作的分類単位（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｕｎｉｔ；ＯＴＵ）を分類した。
【0058】
社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた糞便の細菌叢解析の結果を、表７に示す。
【0059】
【表7】
【0060】
データはｍｅａｎ±ＳＥＭ（標準誤差）で示す（ｎ＝６－７）。統計解析はＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法にて行った。それぞれｐ値は次の通りである：Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：＊p＜０．０５、Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ：†ｐ＜０．０５、Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：§ｐ＜０．０５。
表中において、Ｇｅｎｕｓ ｌｅｖｅｌの欄は、門（p：ｐｈｙｌｕｍ）、綱（ｃ：ｃｌａｓｓ）、目（ｏ：ｏｒｄｅｒ）、科（ｆ：ｆａｍｉｌｙ）、属（ｇ：ｇｅｎｕｓ）を示し、当該欄にこれらの分類が記載されていないものは属を示す。
表中において、Ｇｅｎｕｓ ｌｅｖｅｌの欄は、門（p：ｐｈｙｌｕｍ）、綱（ｃ：ｃｌａｓｓ）、目（ｏ：ｏｒｄｅｒ）、科（ｆ：ｆａｍｉｌｙ）、属（ｇ：ｇｅｎｕｓ）を示し、当該欄にこれらの分類が記載されていないものは属を示す。
【0061】
細菌叢解析の結果、１７３のＯＴＵが同定された。それらのうちの１８種類の細菌が、属レベルにおいて、コントロールマウス群と比較して、脆弱性マウス群及び／又は耐性マウス群では存在比が異なることが示された（表７）。すなわち、コントロールマウス群とは異なる存在比を示すこれらの１８種類の細菌は、うつ病に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。また、特にＧｅｍｅｌｌａ属に属する細菌、Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚｉａ属に属する細菌、Ａｎａｅｒｏｐｌａｓｍａ属に属する細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ科に属する細菌及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌は、コントロールマウス群においては存在が確認されず、社会的敗北ストレスモデルマウスのみに存在が確認でき、うつ病に関与するバイオマーカーとして特に有用であることが示唆された。
さらに、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌では、脆弱性マウス群と耐性マウス群とを比較した場合においても細菌の存在比が異なることが示された（表７）。すなわち、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌では、脆弱性マウス群は、耐性マウス群と比較して有意に存在比が増加することが示された。また、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌では脆弱性マウス群は、耐性マウス群と比較して有意に存在比が低下することが示された。すなわち、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓは、ストレス感受性に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
さらに、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌では、脆弱性マウス群と耐性マウス群とを比較した場合においても細菌の存在比が異なることが示された（表７）。すなわち、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌では、脆弱性マウス群は、耐性マウス群と比較して有意に存在比が増加することが示された。また、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ属に属する細菌では脆弱性マウス群は、耐性マウス群と比較して有意に存在比が低下することが示された。すなわち、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ及びＡｌｉｓｔｉｐｅｓは、ストレス感受性に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
【0062】
＜実施例３：社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた糞便、血漿、肝臓の代謝物（メタボローム）解析＞
社会的敗北ストレスを１０日間負荷した翌日（Ｄａｙ１１）に各種マウスの糞便を採取した。さらにその翌日（Ｄａｙ１２）、３時間絶食させた後にマウスの血漿及び肝臓を採取した。血漿は、イソフルラン麻酔下で腹部大静脈採血により血液を採取し、遠心分離（１０分、１，２００×ｇ、４℃）の後、上清を回収することで得た。肝臓は、マウスの断頭による安楽死後、採取した。これらの試料は、解析まで－８０℃で保存した。
社会的敗北ストレスを１０日間負荷した翌日（Ｄａｙ１１）に各種マウスの糞便を採取した。さらにその翌日（Ｄａｙ１２）、３時間絶食させた後にマウスの血漿及び肝臓を採取した。血漿は、イソフルラン麻酔下で腹部大静脈採血により血液を採取し、遠心分離（１０分、１，２００×ｇ、４℃）の後、上清を回収することで得た。肝臓は、マウスの断頭による安楽死後、採取した。これらの試料は、解析まで－８０℃で保存した。
【0063】
血漿及び肝臓試料からの低分子代謝物の抽出は既報を参考にして行った（非特許文献２～３）。具体的にはマルガリン酸とテトラコサンの混合物（０．５ｍｇ／ｍＬ）１０μＬと内部標準としてトロピン酸（１ｍｇ／ｍＬ）１０μＬ、トリメチルシリル化のためにＮ，Ｏ－ｂｉｓ（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ）ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔａｍｉｄｅ＋１％ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｃｈｌｏｒｏｓｉｌａｎｅを１００μＬずつ添加した。
糞便試料からの低分子代謝物の抽出は既報を参考にして行った。具体的には、糞便試料に５倍量のＭｉｌｌｉ－Ｑ水を加えた後、遠心分離を行った。遠心分離後、上清から低分子量代謝物の抽出を既知の方法により行った（非特許文献４)。
糞便試料からの低分子代謝物の抽出は既報を参考にして行った。具体的には、糞便試料に５倍量のＭｉｌｌｉ－Ｑ水を加えた後、遠心分離を行った。遠心分離後、上清から低分子量代謝物の抽出を既知の方法により行った（非特許文献４)。
【0064】
血漿および肝臓試料に対しては、ＧＣＭＳ－ＴＱ８０４０ ＮＸ（島津製作所、京都、日本）を用いてガスクロマトグラフィー－タンデム質量分析（ＧＣ／ＭＳ／ＭＳ）を実施した。マルチプルリアクションモニタリングを行い、データ処理はＧＣＭＳソリューション（島津製作所）及びＳｍａｒｔ Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ Ｄａｔａｂａｓｅ（島津製作所）にて行った。定性分析では、内部標準物質（マルガリン酸）に対する各代謝物の面
積で代謝物量を算出した。
糞便試料に対しては、ＧＣＭＳ－ＱＰ２０１０ Ｕｌｔｒａ（島津製作所）を用いてガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ／ＭＳ）を実施した。選択イオンモニタリングを行い、ＭＳ－ＤＩＡＬ（理化学研究所、東京、日本）を用いて半自動的にデータ処理を行った。定性分析では、内部標準物質（２－イソプロピルマレイン酸）に対する各代謝物の面積で代謝物量を算出した。
積で代謝物量を算出した。
糞便試料に対しては、ＧＣＭＳ－ＱＰ２０１０ Ｕｌｔｒａ（島津製作所）を用いてガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ／ＭＳ）を実施した。選択イオンモニタリングを行い、ＭＳ－ＤＩＡＬ（理化学研究所、東京、日本）を用いて半自動的にデータ処理を行った。定性分析では、内部標準物質（２－イソプロピルマレイン酸）に対する各代謝物の面積で代謝物量を算出した。
【0065】
社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた糞便の代謝物解析の結果を、表８に示す。
【0066】
【表8】
【0067】
データはｍｅａｎ±ＳＥＭ（標準誤差）で示す（ｎ＝６－７）。統計解析はＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法にて行った。それぞれｐ値は次の通りである：Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：＊p＜０．０５、Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ：†ｐ＜０．０５、Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：§ｐ＜０．０５。
【0068】
糞便におけるＧＣ－ＭＳによる代謝物解析の結果、９９種類の代謝物が検出された。ｑ値の閾値をｑ＜０．１としたとき、それらのうちの１９種類の代謝物が、コントロールマウス群と比較して、脆弱性マウス群及び／又は耐性マウス群では存在比が異なることが示された（表８）。すなわち、コントロールマウス群とは異なる存在比を示すこれらの１９種類の代謝物は、うつ病に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
さらに、２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ、３－Ｍｅｔｈｙｌ－２－ｏｘｏｖａｌｅｒｉｃ ａｃｉｄ、Ｆｕｃｏｓｅ及びＮ－Ａｃｅｔｙｌｍａｎｎｏｓａｍｉｎｅでは、脆弱性マウス群と耐性マウス群とを比較した場合においても代謝物の存在比が異なることが示された（表８）。すなわち、これらの４種類の代謝物では、脆弱性マウス群
は、耐性マウス群と比較して有意に存在比が増加することが示された。すなわち、これらの４種類の代謝物は、ストレス感受性に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
さらに、２－Ｋｅｔｏｉｓｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ、３－Ｍｅｔｈｙｌ－２－ｏｘｏｖａｌｅｒｉｃ ａｃｉｄ、Ｆｕｃｏｓｅ及びＮ－Ａｃｅｔｙｌｍａｎｎｏｓａｍｉｎｅでは、脆弱性マウス群と耐性マウス群とを比較した場合においても代謝物の存在比が異なることが示された（表８）。すなわち、これらの４種類の代謝物では、脆弱性マウス群
は、耐性マウス群と比較して有意に存在比が増加することが示された。すなわち、これらの４種類の代謝物は、ストレス感受性に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
【0069】
次に、社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた血漿の代謝物解析の結果を、表９に示す。
【0070】
【表9】
【0071】
データはｍｅａｎ±ＳＥＭ（標準誤差）で示す（ｎ＝６－７）。統計解析はＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法にて行った。それぞれｐ値は次の通りである：Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：＊p＜０．０５、Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ：†ｐ＜０．０５。
【0072】
血漿におけるＧＣ－ＭＳ／ＭＳによる代謝物解析の結果、２７５種類の代謝物が検出された。ｑ値の閾値をｑ＜０．１としたとき、それらのうちの４８種類の代謝物が、コントロールマウス群と比較して、脆弱性マウス群及び／又は耐性マウス群では存在比が異なることが示された（表９）。すなわち、コントロールマウス群とは異なる存在比を示すこれらの４８種類の代謝物は、うつ病に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
【0073】
次に、社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた肝臓の代謝物解析の結果を、表１０に示す。
【0074】
【表10】
【0075】
データはｍｅａｎ±ＳＥＭ（標準誤差）で示す（ｎ＝６－７）。統計解析はＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法にて行った。それぞれｐ値は次の通りである：Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：＊p＜０．０５、Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ：†ｐ＜０．０５。
【0076】
肝臓におけるＧＣ－ＭＳ／ＭＳによる代謝物解析の結果、２９４種類の代謝物が検出された。ｑ値の閾値をｑ＜０．１としたとき、それらのうちの３０種類の代謝物が、コントロールマウス群と比較して、脆弱性マウス群及び／又は耐性マウス群では存在比が異なることが示された（表１０）。すなわち、コントロールマウス群とは異なる存在比を示すこれらの３０種類の代謝物は、うつ病に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
【0077】
＜実施例４：糞便中代謝物及び血漿中代謝物におけるＶＩＰスコア＞
社会的敗北ストレスを受けたマウスのストレス感受性の差に関連する糞便中及び血漿中における代謝物を同定するために、各代謝物データに対してそれぞれ、当業者に既知の方法により、多変量解析であるＯｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｐａｒｔｉａｌ ｌｅａｓｔ ｓｑｕａｒｅｓ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ（ＯＰＬＳ－ＤＡ）を行い（図２）、ストレス感受性に関連する代謝物を選択した。なお、図２中、四角形で表されるマーカーは耐性マウス群を示し、三角形で表されるマーカーは脆弱性マウス群を示す。
ｐ＜０．０５であるとき、統計的に有意であることを示す。ｑ＜０．１であるとき、差は統計的に有意であることを示す。データはｍｅａｎ±ＳＥＭ（標準誤差）で示す。すべてのデータは、Ｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｐａｃｋａｇｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．６．２（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）とＭｅｔａｂｏＡｎａｌｙｓｔ ５．０を用いて解析した。この解析によりＶＩＰ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）スコアを算出した。本明細書において、ＶＩＰスコアとは、うつ病の判別への寄与の大きさを示すスコアである。そのＶＩＰスコアに基づいて、各群を区別するために最も重要な上位２０種類の代謝物を選択し、うつ病のバイオマーカーとして同定した（表１１）。また、上記実施例３の記載等に鑑み、ＶＩＰスコアが上位に来る代謝物は、うつ病の判別に寄与するのみならず、ストレス感受性を評価にも寄与し得るものであることが示唆された。
社会的敗北ストレスを受けたマウスのストレス感受性の差に関連する糞便中及び血漿中における代謝物を同定するために、各代謝物データに対してそれぞれ、当業者に既知の方法により、多変量解析であるＯｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｐａｒｔｉａｌ ｌｅａｓｔ ｓｑｕａｒｅｓ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ（ＯＰＬＳ－ＤＡ）を行い（図２）、ストレス感受性に関連する代謝物を選択した。なお、図２中、四角形で表されるマーカーは耐性マウス群を示し、三角形で表されるマーカーは脆弱性マウス群を示す。
ｐ＜０．０５であるとき、統計的に有意であることを示す。ｑ＜０．１であるとき、差は統計的に有意であることを示す。データはｍｅａｎ±ＳＥＭ（標準誤差）で示す。すべてのデータは、Ｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｐａｃｋａｇｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．６．２（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）とＭｅｔａｂｏＡｎａｌｙｓｔ ５．０を用いて解析した。この解析によりＶＩＰ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）スコアを算出した。本明細書において、ＶＩＰスコアとは、うつ病の判別への寄与の大きさを示すスコアである。そのＶＩＰスコアに基づいて、各群を区別するために最も重要な上位２０種類の代謝物を選択し、うつ病のバイオマーカーとして同定した（表１１）。また、上記実施例３の記載等に鑑み、ＶＩＰスコアが上位に来る代謝物は、うつ病の判別に寄与するのみならず、ストレス感受性を評価にも寄与し得るものであることが示唆された。
【0078】
【表11】
【0079】
＜実施例５：社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた肝臓の代謝物（メタボローム）解析＞
実施例３に記載する方法と同様の方法により、社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた肝臓の代謝物解析を行った。その結果、肝臓代謝物の１つであるＳｐｅｒｍｉｄｉｎｅをマーカーとしたとき、Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：ｐ＝０．０７３９であった。この結果から、脆弱性マウス群と耐性マウス群とを比較した場合において、肝臓におけるＳｐｅｒｍｉｄｉｎｅの存在量が異なる傾向があることが示された（図３Ａ）。また、肝臓代謝物の１つであるＳｐｅｒｍｉｎｅをマーカーとしたとき、Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：ｐ＝０．０６２０であり、Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：０．０４５９であった。これらの結果から、脆弱性マウス群と耐性マウス群とを比較した場合において、肝臓におけるＳｐｅｒｍｉｎｅの存在量が異なる傾向があることが示され、またコントロールマウス群と脆弱性マウス群とを比較した場合において、肝臓におけるＳｐｅｒｍｉｎｅの存在量が有意に異なることが示された（図３Ｂ）。
すなわち、ＳｐｅｒｍｉｄｉｎｅとＳｐｅｒｍｉｎｅは、うつ病に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
実施例３に記載する方法と同様の方法により、社会的敗北ストレスモデルマウスを用いた肝臓の代謝物解析を行った。その結果、肝臓代謝物の１つであるＳｐｅｒｍｉｄｉｎｅをマーカーとしたとき、Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：ｐ＝０．０７３９であった。この結果から、脆弱性マウス群と耐性マウス群とを比較した場合において、肝臓におけるＳｐｅｒｍｉｄｉｎｅの存在量が異なる傾向があることが示された（図３Ａ）。また、肝臓代謝物の１つであるＳｐｅｒｍｉｎｅをマーカーとしたとき、Ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：ｐ＝０．０６２０であり、Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ：０．０４５９であった。これらの結果から、脆弱性マウス群と耐性マウス群とを比較した場合において、肝臓におけるＳｐｅｒｍｉｎｅの存在量が異なる傾向があることが示され、またコントロールマウス群と脆弱性マウス群とを比較した場合において、肝臓におけるＳｐｅｒｍｉｎｅの存在量が有意に異なることが示された（図３Ｂ）。
すなわち、ＳｐｅｒｍｉｄｉｎｅとＳｐｅｒｍｉｎｅは、うつ病に関与するバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
【図1】
【図2】
【図3】
