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特開2024-19677癌及び免疫学的障害を治療するためのＢＣＭＡ抗生物質及びその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024019677
(43)【公開日】2024-02-09
(54)【発明の名称】癌及び免疫学的障害を治療するためのＢＣＭＡ抗生物質及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/46 20060101AFI20240202BHJP
C07K 16/30 20060101ALI20240202BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240202BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240202BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240202BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240202BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240202BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20240202BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20240202BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240202BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240202BHJP
A61P 31/06 20060101ALI20240202BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240202BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240202BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240202BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240202BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240202BHJP
A61K 31/5517 20060101ALI20240202BHJP
C12N 15/62 20060101ALN20240202BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240202BHJP
【ＦＩ】
C07K16/46
C07K16/30
A61K39/395 N
A61K39/395 L
A61P1/16
A61P3/10
A61P11/06
A61P11/00
A61P7/00
A61P17/06
A61P17/00
A61P29/00 101
A61P31/06
A61P35/00
A61P35/02
A61P37/06
A61P37/08
A61K47/68
A61K31/5517
C12N15/62 Z ZNA
C12N15/13
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023216464
(22)【出願日】2023-12-22
(62)【分割の表示】P 2022030779の分割
【原出願日】2017-02-16
(31)【優先権主張番号】62/296,594
(32)【優先日】2016-02-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/396,084
(32)【優先日】2016-09-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】505314468
【氏名又は名称】シージェン インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(72)【発明者】
【氏名】ジャンゴ サスマン
(72)【発明者】
【氏名】マウリーン ライアン
(72)【発明者】
【氏名】ローリ ウェステンドルフ
(72)【発明者】
【氏名】マイケル フェルドハウス
(57)【要約】
【課題】ＢＣＭＡに特異的に結合するヒト化抗体を提供すること。
【解決手段】本抗体は、種々の癌及び免疫障害の治療及び診断、ならびにＢＣＭＡの検出に有用である。本発明は、ＡＴＣＣ ＰＴＣ－６９３７として寄託される抗体のヒト化形態またはキメラ形態である、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体を提供する。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。
【選択図】なし
【解決手段】本抗体は、種々の癌及び免疫障害の治療及び診断、ならびにＢＣＭＡの検出に有用である。本発明は、ＡＴＣＣ ＰＴＣ－６９３７として寄託される抗体のヒト化形態またはキメラ形態である、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体を提供する。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年２月１７日出願の米国仮出願第ＵＳ６２／２９６，５９４号、及び２０１６年９月１６日出願の米国仮出願第６２／３９６，０８４号の利益を主張し、これらの両方は、あらゆる目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１６年２月１７日出願の米国仮出願第ＵＳ６２／２９６，５９４号、及び２０１６年９月１６日出願の米国仮出願第６２／３９６，０８４号の利益を主張し、これらの両方は、あらゆる目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表の参照
本出願に開示される配列は、本明細書と共に出願された配列表に含まれる。
本出願に開示される配列は、本明細書と共に出願された配列表に含まれる。
【背景技術】
【0003】
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＢＣＭＡの発現は、それが主に胚中心の濾胞間領域で、ならびに分化した形質細胞及び形質芽細胞上に発現されるＢ細胞系列に限られる。ＢＣＭＡは、増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）及びＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ；ＢｌｙＳ、ＴＡＬＬ－１、及びＴＨＡＮＫとしても知られる）の２つの異なるリガンドに結合する。ＢＣＭＡのリガンドは、膜貫通活性化因子及びカルシウム修飾因子及びシクロフィリンリガンド相互作用物質（ＴＡＣＩ）、ならびにＢＡＦＦ受容体（ＢＡＦＦ－Ｒ；ＢＲ３とも呼ばれる）の２つのさらなるＴＮＦ受容体に結合する。ＴＡＣＩは、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦに結合し、一方でＢＡＦＦ－Ｒは、ＢＡＦＦに対して制限されてはいるが高い親和性結合を示す。まとめると、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦ－Ｒ、及びそれらの対応するリガンドは、液性免疫、Ｂ細胞発達、及び恒常性の異なる側面を調節する。
【0004】
ＢＣＭＡは、ナイーブ細胞及びメモリーＢ細胞上では実質的に不在である（Ｎｏｖａｋ
ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３，６８９－９４（２００４））が、それが正常な形質細胞及び形質芽細胞の生存を促進することによって液性免疫を支持し得る血漿細胞分化中に選択的に誘導される（Ｏ’Ｃｏｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９９， ９１－９８（２００４））。ＢＣＭＡは、原発性多発性骨髄腫（ＭＭ）試料において発現されると報告された。ＢＣＭＡは、ホジキン病の患者からのリード－ステルンベルグ細胞（ＣＤ３０＋）上でも検出された。ノックダウン実験に基づいて、そのＢＣＭＡがホジキン病細胞系の増殖及び生存の両方に寄与したと報告された（Ｃｈｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９，７２９－３９（２００７））。
ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３，６８９－９４（２００４））が、それが正常な形質細胞及び形質芽細胞の生存を促進することによって液性免疫を支持し得る血漿細胞分化中に選択的に誘導される（Ｏ’Ｃｏｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９９， ９１－９８（２００４））。ＢＣＭＡは、原発性多発性骨髄腫（ＭＭ）試料において発現されると報告された。ＢＣＭＡは、ホジキン病の患者からのリード－ステルンベルグ細胞（ＣＤ３０＋）上でも検出された。ノックダウン実験に基づいて、そのＢＣＭＡがホジキン病細胞系の増殖及び生存の両方に寄与したと報告された（Ｃｈｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９，７２９－３９（２００７））。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Ｎｏｖａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３，６８９－９４（２００４）
【非特許文献2】Ｏ’Ｃｏｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９９， ９１－９８（２００４）
【非特許文献3】Ｃｈｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９，７２９－３９（２００７）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、ＡＴＣＣ ＰＴＣ－６９３７として寄託される抗体のヒト化形態またはキメラ形態である、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体を提供する。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）とを含むが、但し、位置Ｈ５８が、ＮまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６０が、ＡまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６１が、ＱまたはＥにより占められ得、位置Ｈ６２が、ＫまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６４が、ＱまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６５が、ＧまたはＴにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ５３が、ＳまたはＲにより占められ得ることを条件とする。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）とを含む。任意選択で、位置Ｈ５８、Ｈ６０、Ｈ６１、Ｈ６２、Ｈ６４、及びＨ６５は、それぞれ、Ｎ、Ａ、Ｑ、Ｋ、Ｑ、及びＧにより占められ、Ｌ２４及びＬ５３は、それぞれ、Ｒ及びＳにより占められる。任意選択で、位置Ｈ２０、Ｈ４８、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８８、Ｈ９１、及びＨ９３は、それぞれ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｖ、Ａ、Ｆ、及びＴにより占められ、位置Ｌ４６、Ｌ４８、及びＬ８７は、それぞれ、Ｖ、Ｖ、及びＦにより占められる。任意選択で、成熟重鎖可変は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の配列を有し、成熟軽鎖可変領域は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の配列を有する。
【0007】
本発明は、ＶＨ（配列番号２３）配列及びＶＫ（配列番号３３）配列を有するラットＳＧ１６．４５抗体のヒト化形態、キメラ形態、またはベニヤ形態である、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体をさらに提供する。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖成熟可変領域と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。任意選択で、本は、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）とを含むが、但し、位置Ｈ５０が、ＡまたはＳにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ２６が、ＳまたはＴにより占められ得ることを条件とする。任意選択で、本抗体は、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）とを含む。任意選択で、位置Ｈ３０、Ｈ９３、及びＨ９４は、それぞれ、Ｎ、Ｔ、及びＳにより占められる。任意選択で、成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の配列を有し、成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の配列を有するか、または成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ１（配列番号２７）の配列を有し、成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ１（配列番号３５）の配列を有するか、または成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ１（配列番号２７）の配列を有し、成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ３（配列番号３７）の配列を有する。
【0008】
上記の抗体のいずれかにおいて、成熟重鎖可変領域は重鎖定常領域に融合し得、成熟軽鎖可変領域は軽鎖定常領域に融合し得る。任意選択で、重鎖定常領域は、天然のヒト定常領域の突然変異形態であり、この突然変異形態のＦｃγ受容体への結合は、天然のヒト定常領域と比較して減少している。任意選択で、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域である。任意選択で、重鎖定常領域は、配列番号５を含むアミノ酸配列を有し、軽鎖定常領域は、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する。任意選択で、重鎖定常領域は、配列番号７（Ｓ２３９Ｃ）を含むアミノ酸配列を有し、軽鎖定常領域は、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する。任意選択で、本抗体は、裸抗体である。任意選択で、本抗体は、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬と複合体化される。任意選択で、本抗体は、細胞傷害性薬と複合体化される。任意選択で、細胞傷害性薬は、酵素で切断可能なリンカーを介してと複合体化される。任意選択で、細胞傷害性薬は、ＤＮＡ小溝結合剤であり、例えば、細胞傷害性薬は、下式
を有する。
任意選択で、細胞傷害性薬は、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである。
【化1】
を有する。
任意選択で、細胞傷害性薬は、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである。
【0009】
本発明は、上述の抗体のいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物をさらに提供する。
【0010】
一実施形態では、本発明は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、前記ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）とを含む抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の配列を有する成熟重鎖可変と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の配列を有する成熟軽鎖可変領域とを有する抗体を提供する。別の実施形態では、成熟重鎖可変領域は重鎖定常領域に融合し、成熟軽鎖可変領域は軽鎖定常領域に融合している。本抗体は、例えば、ＩｇＧ１抗体であり得る。別の実施形態では、本抗体は、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を欠く。本抗体は、例えば薬学的に許容される担体を添加して、薬学的組成物に製剤化され得る。
【0011】
さらなる実施形態では、薬学的組成物は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の配列を有する成熟重鎖可変と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の配列を有する成熟軽鎖可変領域とを有する複数の抗体を有する。これらの抗体の可変領域は、好ましくは、適切な重鎖及び軽鎖定常領域に融合している。別の実施形態では、本抗体は、ＩｇＧ１抗体である。さらなる実施形態では、複数の抗体は、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する約５％未満の抗体を有する。さらなる実施形態では、複数の抗体は、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する約１０％未満の抗体を有する。さらなる実施形態では、複数の抗体は、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する約２％の抗体を含む。さらなる実施形態では、複数の抗体は、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する２％の抗体を含む。
【0012】
本発明は、上述の抗体の有効なレジメンを患者に施すことを含む、ＢＣＭＡを発現する癌を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法をさらに提供する。任意選択で、癌は血液癌である。任意選択で、血液癌は、骨髄腫、白血病、またはリンパ腫である。任意選択で、血液癌は、多発性骨髄腫である。任意選択で、血液癌は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）またはホジキンリンパ腫である。任意選択で、血液癌は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖症候群（ＭＰＳ）、ワンデンストレームマクログロブリン血症、またはバーキットリンパ腫である。
【0013】
本発明は、上述の抗体のいずれかの有効なレジメンを患者に施すことを含む、ＢＣＭＡを発現する免疫細胞によって媒介される免疫障害を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法をさらに提供する。任意選択で、障害は、Ｂ細胞媒介障害である。任意選択で、免疫障害は、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｉ型糖尿病、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核、及び移植片対宿主病である。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ＡＴＣＣ ＰＴＣ－６９３７として寄託される抗体のヒト化形態、キメラ形態、またはベニヤ形態である、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体。
（項目２）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目１に記載の抗体。
（項目３）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目２に記載の抗体。
（項目４）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）と、を含むが、但し、位置Ｈ５８が、ＮまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６０が、ＡまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６１が、ＱまたはＥにより占められ得、位置Ｈ６２が、ＫまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６４が、ＱまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６５が、ＧまたはＴにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ５３が、ＳまたはＲにより占められ得ることを条件とする、項目１～３のいずれかに記載の抗体。
（項目５）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）と、を含む、項目１～４のいずれかに記載の抗体。
（項目６）
位置Ｈ２０、Ｈ４８、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８８、Ｈ９１、及びＨ９３が、それぞれ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｖ、Ａ、Ｆ、及びＴにより占められ、位置Ｌ４６、Ｌ４８、及びＬ８７が、それぞれ、Ｖ、Ｖ、及びＦにより占められる、項目１～５のいずれかに記載の抗体。
（項目７）
前記成熟重鎖可変が、前記ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、前記ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の配列を有する、項目１に記載の抗体。
（項目８）
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、項目１～７のいずれかに記載の抗体。
（項目９）
前記重鎖定常領域が、天然のヒト定常領域の突然変異形態であり、前記突然変異形態のＦｃγ受容体への結合が、前記天然のヒト定常領域と比較して減少している、項目６に記載の抗体。
（項目１０）
前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域である、項目８または９に記載の抗体。
（項目１１）
前記重鎖定常領域が、配列番号５を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する、項目８に記載の抗体。
（項目１２）
前記重鎖定常領域が、配列番号７（Ｓ２３９Ｃ）を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する、項目８に記載の抗体。
（項目１３）
裸抗体である、項目１～１２のいずれかに記載の抗体。
（項目１４）
前記抗体が、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬と複合体化される、項目１～１２のいずれかに記載の抗体。
（項目１５）
前記抗体が、細胞傷害性薬と複合体化される、項目１４に記載の抗体。
（項目１６）
前記細胞傷害性薬が、酵素で切断可能なリンカーを介して前記抗体と複合体化される、項目１５に記載の抗体。
（項目１７）
前記細胞傷害性薬が、ＤＮＡ小溝結合剤である、項目１５または１６に記載の抗体。
（項目１８）
前記細胞傷害性薬が、下式
を有する、項目１７に記載の抗体。
（項目１９）
前記細胞傷害性薬が、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである、項目１５または１６に記載の抗体。
（項目２０）
項目１～１９のいずれかに記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
（項目２１）
ＢＣＭＡを発現する癌を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法であって、項目１～２０のいずれかに記載の抗体の有効なレジメンを前記患者に施すことを含む、方法。
（項目２２）
前記癌が血液癌である、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
前記血液癌が、骨髄腫、白血病、またはリンパ腫である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記血液癌が、多発性骨髄腫である、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記血液癌が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）またはホジキンリンパ腫である、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
前記血液癌が、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖症候群（ＭＰＳ）、ワンデンストレームマクログロブリン血症、またはバーキットリンパ腫である、項目２２に記載の方法。
（項目２７）
ＢＣＭＡを発現する免疫細胞によって媒介される免疫障害を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法であって、項目１～２６のいずれかに記載のヒト化抗体の有効なレジメンを前記患者に施すことを含む、方法。
（項目２８）
Ｂ細胞媒介障害である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記免疫障害が、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｉ型糖尿病、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核、及び移植片対宿主病である、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
配列番号２３の成熟重鎖可変領域及び配列番号３３の成熟軽鎖可変領域を有するラットＳＧ１６．４５抗体のヒト化形態、キメラ形態、またはベニヤ形態である、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体。
（項目３１）
ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目３０に記載の抗体。
（項目３２）
ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目３１に記載の抗体。
（項目３３）
ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）と、を含むが、但し、位置Ｈ５０が、ＡまたはＳにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ２６が、ＳまたはＴにより占められ得ることを条件とする、項目３０～３２のいずれかに記載の抗体。
（項目３４）
ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）と、を含む、項目３０～３３のいずれかに記載の抗体。（項目３５）
位置Ｈ３０、Ｈ９３、及びＨ９４が、それぞれ、Ｎ、Ｔ、及びＳにより占められる、項目３０～３４のいずれか１項に記載の抗体。
（項目３６）
前記成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の配列を有するか、または前記成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ１（配列番号２７）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ１（配列番号３５）の配列を有するか、または前記成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ１（配列番号２７）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ３（配列番号３７）の配列を有する、項目３０に記載の抗体。
（項目３７）
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、項目３０～３６のいずれか１項に記載の抗体。
（項目３８）
前記重鎖定常領域が、天然のヒト定常領域の突然変異形態であり、前記突然変異形態のＦｃγ受容体への結合が、前記天然のヒト定常領域と比較して減少している、項目３７に記載の抗体。
（項目３９）
前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域である、項目３７または３８に記載の抗体。
（項目４０）
前記重鎖定常領域が、配列番号５を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する、項目３７に記載の抗体。
（項目４１）
前記重鎖定常領域が、配列番号７（Ｓ２３９Ｃ）を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する、項目３７に記載の抗体。
（項目４２）
裸抗体である、項目３０～４１のいずれか１項に記載の抗体。
（項目４３）
前記抗体が、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬と複合体化される、項目３０～４１のいずれか１項に記載の抗体。
（項目４４）
前記抗体が、細胞傷害性薬と複合体化される、項目４３に記載の抗体。
（項目４５）
前記細胞傷害性薬が、酵素で切断可能なリンカーを介して前記抗体と複合体化される、項目４４に記載の抗体。
（項目４６）
前記細胞傷害性薬が、ＤＮＡ小溝結合剤である、項目４３または４４に記載の抗体。
（項目４７）
前記細胞傷害性薬が、下式
を有する、項目４６に記載の抗体。
（項目４８）
前記細胞傷害性薬が、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである、項目４４または４５に記載の抗体。
（項目４９）
重鎖定常領域のＥＵ位置２９７のａｓｎ残基のＮ－グルコシド連結糖鎖の５％未満が、フコースまたはその類似体を含み、これらの中で前記抗体を発現する細胞が前記抗体のフコシル化を低減するように培養される、項目１～４８のいずれかに記載の抗体。
（項目５０）
項目３０～４８のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
（項目５１）
ＢＣＭＡを発現する癌を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法であって、項目３０～４９のいずれか１項に記載のヒト化抗体の有効なレジメンを前記患者に施すことを含む、方法。
（項目５２）
前記癌が血液癌である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記血液癌が、骨髄腫、白血病、またはリンパ腫である、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記血液癌が、多発性骨髄腫である、項目５２に記載の方法。
（項目５５）
前記血液癌が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）またはホジキンリンパ腫である、項目５２に記載の方法。
（項目５６）
前記血液癌が、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖症候群（ＭＰＳ）、ワンデンストレームマクログロブリン血症、またはバーキットリンパ腫である、項目５２に記載の方法。
（項目５７）
ＢＣＭＡを発現する免疫細胞によって媒介される免疫障害を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法であって、項目１～５６のいずれかに記載の抗体の有効なレジメンを前記患者に施すことを含む、方法。
（項目５８）
Ｂ細胞媒介障害である、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
前記免疫障害が、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｉ型糖尿病、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核、及び移植片対宿主病である、項目５６に記載の方法。
（項目６０）
ヒトＢＣＭＡタンパク質に特異的に結合するヒト化抗体であって、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、ヒト化抗体。
（項目６１）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目６０に記載の抗体。
（項目６２）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）と、を含むが、但し、位置Ｈ５８が、ＮまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６０が、ＡまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６１が、ＱまたはＥにより占められ得、位置Ｈ６２が、ＫまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６４が、ＱまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６５が、ＧまたはＴにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ５３が、ＳまたはＲにより占められ得ることを条件とする、項目６０に記載の抗体。
（項目６３）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）と、を含む、項目６０に記載の抗体。
（項目６４）
位置Ｈ２０、Ｈ４８、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８８、Ｈ９１、及びＨ９３が、それぞれ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｖ、Ａ、Ｆ、及びＴにより占められ、位置Ｌ４６、Ｌ４８、及びＬ８７が、それぞれ、Ｖ、Ｖ、及びＦにより占められる、項目６０に記載の抗体。
（項目６５）
前記成熟重鎖可変が、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の配列を有する、項目６０に記載の抗体。
（項目６６）
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、項目６０に記載の抗体。
（項目６７）
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、項目６５に記載の抗体。
（項目６８）
項目６７に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
（項目６９）
前記抗体の約１０％未満が、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する、項目６８の薬学的組成物。
（項目７０）
前記抗体の約５％未満が、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する、項目６８の薬学的組成物。
（項目７１）
前記抗体の約２％が、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する、項目６９の薬学的組成物。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ＡＴＣＣ ＰＴＣ－６９３７として寄託される抗体のヒト化形態、キメラ形態、またはベニヤ形態である、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体。
（項目２）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目１に記載の抗体。
（項目３）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目２に記載の抗体。
（項目４）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）と、を含むが、但し、位置Ｈ５８が、ＮまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６０が、ＡまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６１が、ＱまたはＥにより占められ得、位置Ｈ６２が、ＫまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６４が、ＱまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６５が、ＧまたはＴにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ５３が、ＳまたはＲにより占められ得ることを条件とする、項目１～３のいずれかに記載の抗体。
（項目５）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）と、を含む、項目１～４のいずれかに記載の抗体。
（項目６）
位置Ｈ２０、Ｈ４８、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８８、Ｈ９１、及びＨ９３が、それぞれ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｖ、Ａ、Ｆ、及びＴにより占められ、位置Ｌ４６、Ｌ４８、及びＬ８７が、それぞれ、Ｖ、Ｖ、及びＦにより占められる、項目１～５のいずれかに記載の抗体。
（項目７）
前記成熟重鎖可変が、前記ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、前記ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の配列を有する、項目１に記載の抗体。
（項目８）
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、項目１～７のいずれかに記載の抗体。
（項目９）
前記重鎖定常領域が、天然のヒト定常領域の突然変異形態であり、前記突然変異形態のＦｃγ受容体への結合が、前記天然のヒト定常領域と比較して減少している、項目６に記載の抗体。
（項目１０）
前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域である、項目８または９に記載の抗体。
（項目１１）
前記重鎖定常領域が、配列番号５を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する、項目８に記載の抗体。
（項目１２）
前記重鎖定常領域が、配列番号７（Ｓ２３９Ｃ）を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する、項目８に記載の抗体。
（項目１３）
裸抗体である、項目１～１２のいずれかに記載の抗体。
（項目１４）
前記抗体が、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬と複合体化される、項目１～１２のいずれかに記載の抗体。
（項目１５）
前記抗体が、細胞傷害性薬と複合体化される、項目１４に記載の抗体。
（項目１６）
前記細胞傷害性薬が、酵素で切断可能なリンカーを介して前記抗体と複合体化される、項目１５に記載の抗体。
（項目１７）
前記細胞傷害性薬が、ＤＮＡ小溝結合剤である、項目１５または１６に記載の抗体。
（項目１８）
前記細胞傷害性薬が、下式
【化1】
を有する、項目１７に記載の抗体。
（項目１９）
前記細胞傷害性薬が、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである、項目１５または１６に記載の抗体。
（項目２０）
項目１～１９のいずれかに記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
（項目２１）
ＢＣＭＡを発現する癌を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法であって、項目１～２０のいずれかに記載の抗体の有効なレジメンを前記患者に施すことを含む、方法。
（項目２２）
前記癌が血液癌である、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
前記血液癌が、骨髄腫、白血病、またはリンパ腫である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記血液癌が、多発性骨髄腫である、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記血液癌が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）またはホジキンリンパ腫である、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
前記血液癌が、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖症候群（ＭＰＳ）、ワンデンストレームマクログロブリン血症、またはバーキットリンパ腫である、項目２２に記載の方法。
（項目２７）
ＢＣＭＡを発現する免疫細胞によって媒介される免疫障害を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法であって、項目１～２６のいずれかに記載のヒト化抗体の有効なレジメンを前記患者に施すことを含む、方法。
（項目２８）
Ｂ細胞媒介障害である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記免疫障害が、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｉ型糖尿病、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核、及び移植片対宿主病である、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
配列番号２３の成熟重鎖可変領域及び配列番号３３の成熟軽鎖可変領域を有するラットＳＧ１６．４５抗体のヒト化形態、キメラ形態、またはベニヤ形態である、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体。
（項目３１）
ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目３０に記載の抗体。
（項目３２）
ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目３１に記載の抗体。
（項目３３）
ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）と、を含むが、但し、位置Ｈ５０が、ＡまたはＳにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ２６が、ＳまたはＴにより占められ得ることを条件とする、項目３０～３２のいずれかに記載の抗体。
（項目３４）
ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）と、を含む、項目３０～３３のいずれかに記載の抗体。（項目３５）
位置Ｈ３０、Ｈ９３、及びＨ９４が、それぞれ、Ｎ、Ｔ、及びＳにより占められる、項目３０～３４のいずれか１項に記載の抗体。
（項目３６）
前記成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の配列を有するか、または前記成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ１（配列番号２７）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ１（配列番号３５）の配列を有するか、または前記成熟重鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ１（配列番号２７）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ３（配列番号３７）の配列を有する、項目３０に記載の抗体。
（項目３７）
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、項目３０～３６のいずれか１項に記載の抗体。
（項目３８）
前記重鎖定常領域が、天然のヒト定常領域の突然変異形態であり、前記突然変異形態のＦｃγ受容体への結合が、前記天然のヒト定常領域と比較して減少している、項目３７に記載の抗体。
（項目３９）
前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域である、項目３７または３８に記載の抗体。
（項目４０）
前記重鎖定常領域が、配列番号５を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する、項目３７に記載の抗体。
（項目４１）
前記重鎖定常領域が、配列番号７（Ｓ２３９Ｃ）を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号３を含むアミノ酸配列を有する、項目３７に記載の抗体。
（項目４２）
裸抗体である、項目３０～４１のいずれか１項に記載の抗体。
（項目４３）
前記抗体が、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬と複合体化される、項目３０～４１のいずれか１項に記載の抗体。
（項目４４）
前記抗体が、細胞傷害性薬と複合体化される、項目４３に記載の抗体。
（項目４５）
前記細胞傷害性薬が、酵素で切断可能なリンカーを介して前記抗体と複合体化される、項目４４に記載の抗体。
（項目４６）
前記細胞傷害性薬が、ＤＮＡ小溝結合剤である、項目４３または４４に記載の抗体。
（項目４７）
前記細胞傷害性薬が、下式
【化2】
を有する、項目４６に記載の抗体。
（項目４８）
前記細胞傷害性薬が、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである、項目４４または４５に記載の抗体。
（項目４９）
重鎖定常領域のＥＵ位置２９７のａｓｎ残基のＮ－グルコシド連結糖鎖の５％未満が、フコースまたはその類似体を含み、これらの中で前記抗体を発現する細胞が前記抗体のフコシル化を低減するように培養される、項目１～４８のいずれかに記載の抗体。
（項目５０）
項目３０～４８のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
（項目５１）
ＢＣＭＡを発現する癌を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法であって、項目３０～４９のいずれか１項に記載のヒト化抗体の有効なレジメンを前記患者に施すことを含む、方法。
（項目５２）
前記癌が血液癌である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記血液癌が、骨髄腫、白血病、またはリンパ腫である、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記血液癌が、多発性骨髄腫である、項目５２に記載の方法。
（項目５５）
前記血液癌が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）またはホジキンリンパ腫である、項目５２に記載の方法。
（項目５６）
前記血液癌が、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖症候群（ＭＰＳ）、ワンデンストレームマクログロブリン血症、またはバーキットリンパ腫である、項目５２に記載の方法。
（項目５７）
ＢＣＭＡを発現する免疫細胞によって媒介される免疫障害を有するか、またはそれを有するリスクにある患者の治療方法であって、項目１～５６のいずれかに記載の抗体の有効なレジメンを前記患者に施すことを含む、方法。
（項目５８）
Ｂ細胞媒介障害である、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
前記免疫障害が、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｉ型糖尿病、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核、及び移植片対宿主病である、項目５６に記載の方法。
（項目６０）
ヒトＢＣＭＡタンパク質に特異的に結合するヒト化抗体であって、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、ヒト化抗体。
（項目６１）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、項目６０に記載の抗体。
（項目６２）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）と、を含むが、但し、位置Ｈ５８が、ＮまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６０が、ＡまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６１が、ＱまたはＥにより占められ得、位置Ｈ６２が、ＫまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６４が、ＱまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６５が、ＧまたはＴにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ５３が、ＳまたはＲにより占められ得ることを条件とする、項目６０に記載の抗体。
（項目６３）
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）と、を含む、項目６０に記載の抗体。
（項目６４）
位置Ｈ２０、Ｈ４８、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８８、Ｈ９１、及びＨ９３が、それぞれ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｖ、Ａ、Ｆ、及びＴにより占められ、位置Ｌ４６、Ｌ４８、及びＬ８７が、それぞれ、Ｖ、Ｖ、及びＦにより占められる、項目６０に記載の抗体。
（項目６５）
前記成熟重鎖可変が、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の配列を有する、項目６０に記載の抗体。
（項目６６）
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、項目６０に記載の抗体。
（項目６７）
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、項目６５に記載の抗体。
（項目６８）
項目６７に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
（項目６９）
前記抗体の約１０％未満が、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する、項目６８の薬学的組成物。
（項目７０）
前記抗体の約５％未満が、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する、項目６８の薬学的組成物。
（項目７１）
前記抗体の約２％が、フコースまたはフコース類似体によるコアフコシル化を有する、項目６９の薬学的組成物。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1A】ＢＣＭＡの構造を示す。
【図1B】ＢＣＭＡの細胞外ドメインのＢＡＦＦとの構造的相互作用を示す。
【図2】抗体選択手順を示す。
【図3】クローニングされていないハイブリドーマウェルの細胞結合データ及びリガンド遮断活性を示す。
【図4】抗ＢＣＭＡ抗体の遮断活性／阻害パーセントを示す。
【図5】抗ＢＣＭＡ抗体で滴定されたＡＰＲＩＬ遮断の阻害を示す。
【図6】抗ＢＣＭＡ抗体を使用したＢＡＦＦ遮断の滴定を示す。
【図7】ヒトＶＨアクセプター配列ＨＶ１～２／ＨＪ３を有するｈＳＧ１６．１７重鎖変異型の整合を示す。これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号３９～４１）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号４２及び４３）を有するラットＳＧ１６．１７ ｖＨ（配列番号８）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号４４及び４５）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号４６及び「ＡＲ」）を有するＨｕ ＨＶ１～２／ＨＪ３（配列番号９）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号５０～５２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号５３及び５４）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＨ１（配列番号１１）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号５５～５７）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号５８及び５９）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＨ２（配列番号１２）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号６３及び６４）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＨ３（配列番号１３）、ならびにＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６５～６７）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号６８及び６９）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＨ４（配列番号１４）を示す。
【図8】ヒトＶＨアクセプター配列ＨＶ１～４６／ＨＪ３を有するｈＳＧ１６．１７重鎖変異型の整合を示す。これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号３９～４１）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号４２及び４３）を有するラットＳＧ１６．１７ ｖＨ（配列番号８）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号４７及び４８）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号４９及び「ＡＲ」）を有するＨｕ ＨＶ１～４６／ＨＪ３（配列番号１０）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号７０～７２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号７３及び７４）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＨ５（配列番号１５）、ならびにＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号７５～７７）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号７８及び７９）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＨ６（配列番号１６）の配列を示す。
【図9】ｈＳＧ１６．１７重鎖変異型の整合を示す。これは、ＳＧ１６．１７ ｖＨ１～６（配列番号１１～１６）の配列を示す。
【図10】ヒトＶＫアクセプター配列ＫＶ１～１２／ＫＪ５を有するｈＳＧ１６．１７軽鎖変異型の整合を示す。これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号８０～８２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号８３、「ＴＴＳ」及び配列番号８４）を有するラットＳＧ１６．１７ ｖＫ（配列番号１７）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号８５～８７）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号８８、「ＡＡＳ」、及び配列番号８９）を有するＨｕ ＫＶ１－１２／ＫＪ５（配列番号１８）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号９３、「ＴＴＳ」及び配列番号９４）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＫ２（配列番号１９）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９５～９７）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号９８、「ＴＴＳ」、及び配列番号９９）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＫ３（配列番号２０）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１００～１０２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１０３、「ＴＴＳ」、及び配列番号１０４）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＫ４（配列番号２１）、ならびにＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１０５～１０７）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１０８、「ＴＴＳ」、及び配列番号１０９）を有するｈＳＧ１６．１７ ｖＫ５（配列番号２２）の配列を示す。
【図11】ｈＳＧ１６．１７軽鎖変異型の整合を示す。これは、ｈＳＧ１６．１７ ｖＫ２、ｖＫ３、ｖＫ４、ｖＫ５（配列番号１９～２２）の配列を示す。
【図12】キメラＳＧ１６．１７のヒトＦｃＲＩＩＩａへの結合を示す競合結合アッセイを示す。
【図13】キメラＳＧ１６．１７がＦｃγＲＩＩＩＡを通してシグナル伝達を誘導することを示す。
【図14】ヒトＨＶアクセプター配列ＨＶ３～２３／ＨＪ３を有するｈＳＧ１６．４５重鎖変異型の整合を示す。これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１１０～１１２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１１３～１１５）を有するラットＳＧ１６．４５ ｖＨ（配列番号２３）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１１６及び１１７）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１１８及び１１９、ならびに「ＡＫ」）を有するＨｕ ＨＶ３－２３／ＨＪ３（配列番号２４）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１２８～１３０）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１３１～１３３）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＨ１（配列番号２７）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１３４～１３６）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１３７～１３９）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＨ２（配列番号２８）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１４０～１４２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１４３～１４５）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＨ３（配列番号２９）、ならびにＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１４６～１４８）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１４９～１５１）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＨ４（配列番号３０）の配列を示す。
【図15】ヒトＨＶアクセプター配列ＨＶ３～７４／ＨＪ３を有するｈＳＧ１６．４５重鎖変異型の整合を示す。これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１１０～１１２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１１３～１１５）を有するラットＳＧ１６．４５ ｖＨ（配列番号２３）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１２０及び１２１）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１２２及び１２３、ならびに「ＡＲ」）を有するＨｕ ＨＶ３～７４／ＨＪ３（配列番号２５）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１５５～１５７）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＨ５（配列番号３１）の配列を示す。
【図16】ヒトＨＶアクセプター配列ＨＶ３～９／ＨＪ３を有するｈＳＧ１６．４５重鎖変異型の整合を示す。これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１１０～１１２）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１１３～１１５）を有するラットＳＧ１６．４５ ｖＨ（配列番号２３）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１２４及び１２５）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１２６及び１２７、ならびに「ＡＲ」）を有するＨｕ ＨＶ３～９／ＨＪ３（配列番号２６）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５８～１６０）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（配列番号１６１～１６３）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＨ６（配列番号３２）の配列を示す。
【図17】ｈＳＧ１６．４５重鎖変異型の整合を示す。これは、ｈＳＧ１６．４５ ｖＨ１～６（配列番号２７～３２）の配列を示す。
【図18】ヒトＫＶアクセプター配列ＫＶ３～２０／ＫＪ２を有するｈＳＧ１６．４５軽鎖変異型の整合を示す。これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１６４～１６６）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１６７、「ＳＴＳ」、及び配列番号１６８）を有するラットＳＧ１６．４５ ｖＫ（配列番号３３）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１６９～１７１）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１７２、「ＳＴＳ」、及び配列番号１７３）を有するＨｕ ＫＶ３～２０／ＫＪ２（配列番号３４）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７４～１７６）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１７７、「ＳＴＳ」、及び配列番号１７８）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＫ１（配列番号３５）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１８２、「ＳＴＳ」、及び配列番号１８３）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＫ２（配列番号３６）、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１８４～１８６）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１８７、「ＳＴＳ」、及び配列番号１８８）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＫ３（配列番号３７）、ならびにＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１８９～１９１）及びＩＭＧＴ ＣＤＲ（それぞれ、配列番号１９２、「ＳＴＳ」、及び配列番号１９３）を有するｈＳＧ１６．４５ ｖＫ５（配列番号３８）の配列を示す。
【図19】ｈＳＧ１６．４５軽鎖変異型の整合を示す。これは、ｈＳＧ１６．４５ ｖＫ１、ｖＫ２、ｖＫ３、ｖＫ５（配列番号３５～３８）の配列を示す。
【図20】ＳＣＩＤマウスのＭＭ１Ｓ播種性腫瘍モデルにおける複数回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示す。
【図21】ＮＳＧマウスのＥＪＭ播種性腫瘍モデルにおける単回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示す。
【図22】ＮＳＧマウスのＮＣＩ－Ｈ９２９－ルシフェラーゼ播種性腫瘍モデルにおける複数回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示す。
【図23】ＮＳＧマウスのＮＣＩ－Ｈ９２９－ルシフェラーゼ播種性腫瘍モデルにおける単回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示す。
【図24】ＳＣＩＤマウスのＭＯＬＰ－８－ルシフェラーゼ播種性腫瘍モデルにおける単回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を提供する。
【図25】ＭＭ１Ｒ標的細胞上のＳＧ１６．１７ ＳＥＡ抗体のＡＤＣＣ活性を提供する。
【発明を実施するための形態】
【0015】
定義
「単離された」抗体は、特定され、その天然環境の構成成分から分離及び／もしくは回収された抗体、ならにび／または組換え産生される抗体を指す。「精製された抗体」は、典型的には、その産生または精製から生じる妨害タンパク質及び他の汚染物の少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋である抗体であるが、そのモノクローナル抗体がその使用を容易にすることを意図した過剰の薬学的に許容される担体（複数可）または他のビヒクルと組み合わされる可能性を除外しない。妨害タンパク質及び他の汚染物は、例えば、抗体が単離されるか、または組換え産生される細胞の細胞構成成分を含み得る。モノクローナル抗体は、産生または精製からの妨害タンパク質及び汚染物から少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５、または９９％ｗ／ｗ純粋である場合がある。ラット抗体、キメラ抗体、ベニヤ抗体、及びヒト化抗体を含む本明細書に記載される抗体は、単離された形態及び／または精製された形態で提供され得る。
「単離された」抗体は、特定され、その天然環境の構成成分から分離及び／もしくは回収された抗体、ならにび／または組換え産生される抗体を指す。「精製された抗体」は、典型的には、その産生または精製から生じる妨害タンパク質及び他の汚染物の少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋である抗体であるが、そのモノクローナル抗体がその使用を容易にすることを意図した過剰の薬学的に許容される担体（複数可）または他のビヒクルと組み合わされる可能性を除外しない。妨害タンパク質及び他の汚染物は、例えば、抗体が単離されるか、または組換え産生される細胞の細胞構成成分を含み得る。モノクローナル抗体は、産生または精製からの妨害タンパク質及び汚染物から少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５、または９９％ｗ／ｗ純粋である場合がある。ラット抗体、キメラ抗体、ベニヤ抗体、及びヒト化抗体を含む本明細書に記載される抗体は、単離された形態及び／または精製された形態で提供され得る。
【0016】
「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体、即ち、集団を含む個々の抗体が微量で存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除き同一である集団から得られた抗体を指す。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られたときの抗体の性質を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されないものとする。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５により記載されたハイブリドーマ法により作製され得るか、または組換えＤＮＡ法により（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照されたい）作製され得る。「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７に記載される技法を使用して、ファージ抗体ライブラリからも単離され得るか、または他の方法により作製され得る。本明細書に記載される抗体は、モノクローナル抗体である。
ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７に記載される技法を使用して、ファージ抗体ライブラリからも単離され得るか、または他の方法により作製され得る。本明細書に記載される抗体は、モノクローナル抗体である。
【0017】
モノクローナル抗体の、その標的抗原への特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０ Ｍ－１の親和性を意味する。特異的結合は、検出可能に規模が高く、少なくとも１つの無関係の標的に生じる非特異的結合から区別可能である。特異的結合は、特定の官能基間の結合の形成または特定の空間的適合（例えば、ロック・アンド・キータイプ）の結果であり得るが、非特異的結合は通常、ファンデルワールス力の結果である。
【0018】
基本的な抗体構造単位は、サブユニットの四量体である。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖の対を含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含む。切断可能なシグナルペプチドに連結されたこの可変領域が最初に発現される。シグナルペプチドを有しない可変領域は、時折、成熟可変領域と称される。よって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを有しない軽鎖可領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を画定する。
【0019】
軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはエプシロンに分類され、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定義する。軽鎖及び重鎖内で、可変及び定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により結合され、重鎖も約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。（一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９，Ｃｈ．７を参照されたい、全ての目的に関してその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【0020】
各軽鎖／重鎖対の成熟可変領域は、抗体結合部位を形成する。よって、無傷抗体は２つの結合部位を有する。二重機能性または二重特異性抗体の場合を除き、２つの結合部位は同じである。鎖は全て、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域により結合された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を呈する。各対の２本の鎖からのＣＤＲは、フレームワーク領域により整合され、特定のエピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖の両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）もしくはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４２：８７８－８８３（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９）の定義、Ｋａｂａｔ ａｎｄ 及びＣｈｏｔｈｉａの混合、またはＩＭＧＴ、ＡｂＭ、もしくはＣｏｎｔａｃｔ、または他のＣＤＲの従来の定義に従う。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応する残基が同じ番号を割り当てられる、広く使用されている番付規則（Ｋａｂａｔ番付）も提供する。別途文脈から明らかでない限り、Ｋａｂａｔ番付は、可変領域のアミノ酸の位置を指定するために使用される。別途文脈から明らかでない限り、ＥＵ番付は、定常領域のアミノ酸の位置を指定するために使用される。
【0021】
「抗体」という用語は、無傷抗体及びその抗原結合断片を含む。典型的には、抗体断片は、それらが別個の重鎖、軽鎖 Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、ダイアボディ、Ｄａｂｓ、ナノボディ、及びＦｖを含む標的への特異的結合について得られた無傷抗体と競合する。断片は、組換えＤＮＡ技術により、または無傷免疫グロブリンの酵素もしくは化学分離により産生され得る。「抗体」という用語は、二重特異性抗体または同様のものであるダイアボディ（ホモ二量体Ｆｖ断片）またはミニボディ（ＶＬ－ＶＨ－ＣＨ３）も含む。二重特異性または二重機能性抗体は、２つの異なる重／軽鎖対、及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５－３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７－５３（１９９２）を参照されたい）。
【0022】
「抗体」という用語は、単独の抗体（「裸抗体」）または細胞傷害性薬もしくは細胞増殖抑制薬と複合体化された抗体を含む。
【0023】
キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウス）の軽鎖及び重鎖の成熟可変領域がヒト軽鎖及び重鎖定常領域と組み合わされる抗体である。かかる抗体は、実質的にまたは完全にマウス抗体の結合特異性を保持し、約３分の２がヒト配列である。
【0024】
ベニヤ抗体は、一部の及び通常全てのＣＤＲ、ならびに非ヒト抗体の一部の非ヒト可変領域フレームワーク残基を保持するが、Ｂ細胞またはＴ細胞エピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基、例えば、曝露された残基（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９，１９９１）をヒト抗体配列の対応する位置からの残基で代置するヒト化抗体の種類である。結果は、ＣＤＲが完全にまたは実質的に非ヒト抗体からであり、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが置換によってよりヒトのようになる抗体である。
【0025】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接するアミノ酸、または１つ以上のタンパク質の３次折り畳みが並置される隣接しないアミノ酸から形成され得る。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露で保持され、一方で３次折り畳みによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒による処理で失われる。エピトープは、典型的には、少なくとも３個、さらに通常は少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を、固有の空間的構造で含む。エピトープの空間的構造を決定するための方法としては、例えば、Ｘ線結晶学及び２次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい。
【0026】
同じであるかまたは重複しているエピトープを認識する抗体は、一方の抗体が標的抗原への他方の抗体の結合と競合する能力を示す単純な免疫アッセイにおいて特定することができる。抗体のエピトープも、接触残基を特定するためのその抗原に結合した抗体のＸ線結晶学によって定義することができる。代替的に、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する抗原における全てのアミノ酸突然変異が他方の結合を低減または排除する場合に、同じエピトープを有する。２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除するいくつかのアミノ酸突然変異が他方の結合を低減かまたは排除する場合に、重複しているエピトープを有する。
【0027】
抗体間の競合は、試験されている抗体が参照抗体の共通抗原への特異的結合を阻害するアッセイによって決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照されたい）。試験抗体は、競合結合アッセイにおいて測定されるとき、過剰な試験抗体（例えば、少なくとも２×、５×、１０×、２０×、または１００×）が参照抗体の結合を少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％、または９９％阻害する場合に、参照抗体と競合する。競合アッセイによって特定された抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が生じるように参照抗体によって結合されるエピトープに十分近位にある隣接するエピトープに結合する抗体を含む。ヒトＢＣＭＡタンパク質への結合に関してｈ２Ｈ１２抗体と競合する抗体は、本開示に含まれる。
Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照されたい）。試験抗体は、競合結合アッセイにおいて測定されるとき、過剰な試験抗体（例えば、少なくとも２×、５×、１０×、２０×、または１００×）が参照抗体の結合を少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％、または９９％阻害する場合に、参照抗体と競合する。競合アッセイによって特定された抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が生じるように参照抗体によって結合されるエピトープに十分近位にある隣接するエピトープに結合する抗体を含む。ヒトＢＣＭＡタンパク質への結合に関してｈ２Ｈ１２抗体と競合する抗体は、本開示に含まれる。
【0028】
「患者」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳類対象を含む。
【0029】
アミノ酸置換を保存または非保存に分類する目的に関して、アミノ酸は、以下のようにグループ分けされる：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を伴う。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のメンバーと交換することに相当する。
【0030】
配列同一性パーセントは、Ｋａｂａｔ番付規則により最大限に整合された抗体配列により決定される。整合後、対象抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の成熟可変領域全体）が参照抗体の同じ領域と比較される場合、対象と参照抗体領域との間の配列同一性パーセントは、対象及び参照抗体領域の両方において同じアミノ酸により占められる位置の数を、２つの領域の整合された位置の総数で除し（ギャップは数えられない）、１００を乗じてパーセントに変換する。
【0031】
１つ以上の列記される要素を「含む」組成物または方法は、具体的に列記されない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、抗体のみを含むか、または他の成分との組み合わせであり得る。
【0032】
値の範囲の表示は、範囲内または範囲を定義する全ての整数を含む。
【0033】
抗体エフェクター機能は、ＩｇのＦｃドメイン（複数可）が寄与する機能を指す。かかる機能は、例えば、抗体依存性細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用、または補体依存性細胞傷害性であり得る。かかる機能は、例えば、食作用もしくは溶解活性を有する免疫細胞上でのＦｃエフェクタードメイン（複数可）のＦｃ受容体への結合によって、またはＦｃエフェクタードメイン（複数可）の補体系の構成成分への結合によって引き起こされ得る。典型的には、Ｆｃ結合細胞または補体構成成分が媒介する作用（複数可）により、ＢＣＭＡ標的細胞の阻害及び／または欠乏がもたらされる。抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）発現細胞を動員し、それらを抗体でコーティングされた標的細胞と並置し得る。ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ６４）を含む、ＩｇＧに対する表面ＦｃＲを発現している細胞は、ＩｇＧでコーティングされた細胞を破壊するためのエフェクター細胞として作用し得る。かかるエフェクター細胞としては、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及び好酸球が挙げられる。ＩｇＧによってＦｃγＲが会合することで、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）が活性化される。ＡＤＣＣは、膜孔形成タンパク質及びプロテアーゼの分泌を通してＣＤ１６＋エフェクター細胞によって媒介され、一方で食作用は、ＣＤ３２＋及びＣＤ６４＋エフェクター細胞によって媒介される（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｐａｕｌ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｎ．Ｙ．，１９９７，Ｃｈａｐｔｅｒｓ ３，１７
ａｎｄ ３０、Ｕｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９：１６５９－６９、Ａｋｅｗａｎｌｏｐ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：４０６１－６５、Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ． ５３：１９９－２０７を参照されたい）。ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰに加えて、細胞に結合した抗体のＦｃ領域も、補体古典的経路を活性化して、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発することができる。補体系のＣ１ｑは抗体のＦｃ領域に結合し、この結合は、それらが抗原と複合体化されるときに生じる。Ｃ１ｑが細胞に結合した抗体に結合することで、Ｃ４及びＣ２のタンパク質分解活性化に関与する事象のカスケードが始動し、Ｃ３転換酵素を生成し得る。Ｃ３転換酵素によってＣ３がＣ３ｂに切断されることにより、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９を含む末端補体構成成分の活性化が可能となる。まとめて、これらのタンパク質は、抗体でコーティングされた細胞上に膜攻撃複合体孔を形成する。これらの孔が、細胞膜の統合性を分断して、標的細胞を殺滅する（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ ２を参照されたい）。
ａｎｄ ３０、Ｕｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９：１６５９－６９、Ａｋｅｗａｎｌｏｐ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：４０６１－６５、Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ． ５３：１９９－２０７を参照されたい）。ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰに加えて、細胞に結合した抗体のＦｃ領域も、補体古典的経路を活性化して、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発することができる。補体系のＣ１ｑは抗体のＦｃ領域に結合し、この結合は、それらが抗原と複合体化されるときに生じる。Ｃ１ｑが細胞に結合した抗体に結合することで、Ｃ４及びＣ２のタンパク質分解活性化に関与する事象のカスケードが始動し、Ｃ３転換酵素を生成し得る。Ｃ３転換酵素によってＣ３がＣ３ｂに切断されることにより、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９を含む末端補体構成成分の活性化が可能となる。まとめて、これらのタンパク質は、抗体でコーティングされた細胞上に膜攻撃複合体孔を形成する。これらの孔が、細胞膜の統合性を分断して、標的細胞を殺滅する（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ ２を参照されたい）。
【0034】
「抗体依存性細胞傷害性」またはＡＤＣＣという用語は、抗体でコーティングされた標的細胞と溶解活性を保有する免疫細胞（エフェクター細胞とも称される）との相互作用に依存する細胞死を誘導するための機序である。かかるエフェクター細胞としては、ナチュラルキラー細胞、単球／マクロファージ、及び好中球が挙げられる。エフェクター細胞は、標的細胞に結合したＩｇのＦｃエフェクタードメイン（複数可）に、それらの抗原結合部位を介して結合する。抗体でコーティングされた標的細胞の死滅は、エフェクター細胞活性の結果として生じる。
【0035】
「抗体依存性細胞食作用」またはＡＤＣＰという用語は、抗体でコーティングされた細胞が、ＩｇのＦｃエフェクタードメイン（複数可）に結合する食作用免疫細胞（例えば、マクロファージ、好中球、及び樹状細胞）によって全てまたは部分的のいずれかで内在化されるプロセスを指す。
【0036】
「補体依存性細胞傷害性」またはＣＤＣという用語は、標的に結合した抗体のＦｃエフェクタードメイン（複数可）が一連の酵素反応を活性化して標的細胞膜における孔の形成をもたらす、細胞死を誘導するための機序を指す。典型的には、抗原－抗体複合体、例えば、抗体でコーティングされた標的細胞上のものが、補体構成成分Ｃ１ｑに結合してそれを活性化し、今度はこのＣ１ｑが標的細胞死につながる補体カスケードを活性化する。補体の活性化により、白血球上の補体受容体（例えば、ＣＲ３）の結合によってＡＤＣＣを促進する、標的細胞表面上の補体構成成分の堆積も生じ得る。
【0037】
「細胞傷害性作用」は、標的細胞の枯渇、排除、及び／または殺滅を指す。「細胞傷害性薬」は、細胞に対して細胞傷害作用を有する薬剤を指す。
【0038】
細胞傷害性薬は、抗体と複合体化されるか、または抗体と組み合わせて投与され得る。
【0039】
「細胞増殖抑制作用」は、細胞増殖の阻害を指す。「細胞増殖抑制薬」は、細胞に対して細胞増殖抑制作用を有することで、細胞の特定のサブセットの成長及び／または拡大を阻害する薬剤を指す。細胞増殖抑制薬は、抗体と複合体化されるか、または抗体と組み合わせて投与され得る。
【0040】
「薬学的に許容される」という用語は、米国の連邦もしくは州政府の規制機関により承認されたもしくは承認可能である、または動物、より具体的にはヒトにおいて使用するための米国薬局方もしくは他の一般的に認識されている薬局方に列記されていることを意味する。「薬学的に相溶性の成分」という用語は、抗ＢＣＭＡ抗体と共に対象に投与される薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。
【0041】
「薬学的に許容される塩」という語句は、抗ＢＣＭＡ－１抗体もしくはその複合体、または抗ＢＣＭＡ－１抗体と投与される薬剤の薬学的に許容される有機塩もしくは無機塩を指す。例示的な塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩（ｓａｃｃｈａｒａｔｅ）、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐトルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（即ち、１，１’メチレンビス－（２ヒドロキシ３ナフトエート））が含まれる。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンなどの別の分子の包含を伴ってもよい。対イオンは、親化合物上の電荷を安定させる任意の有機または無機の部分であり得る。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造内に２つ以上の荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合は、複数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有し得る。
【0042】
別途文脈から明らかでない限り、「約」という用語は、機能特性に対して顕著な作用を有しないごくわずかな変動（例えば、誤差または実験的測定の限度内）を包含する。
詳細な説明
詳細な説明
【0043】
Ｉ．概要
本発明は、ＢＣＭＡに特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。本抗体は、種々の癌及び免疫学的障害の治療及び診断、ならびにＢＣＭＡの検出に有用である。
本発明は、ＢＣＭＡに特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。本抗体は、種々の癌及び免疫学的障害の治療及び診断、ならびにＢＣＭＡの検出に有用である。
【0044】
ＩＩ．標的分子
別途記載のない限り、ＢＣＭＡはヒトＢＣＭＡを意味する。例示的なヒト核酸及びアミノ酸配列は、配列番号１及び２により提供される。別途文脈から明らかでない限り、ＢＭＣＡに対する参照は、タンパク質の少なくとも細胞外ドメイン（配列番号２のおよそ１～５４の残基）、そして場合により、完全タンパク質を意味する。同様に、別途文脈から明らかでない限り、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬ、ならびにＢＣＭＡ以外のそれらの受容体に対する参照は、例えば、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔデータベースに提供される、野生型ヒト配列を指す。
別途記載のない限り、ＢＣＭＡはヒトＢＣＭＡを意味する。例示的なヒト核酸及びアミノ酸配列は、配列番号１及び２により提供される。別途文脈から明らかでない限り、ＢＭＣＡに対する参照は、タンパク質の少なくとも細胞外ドメイン（配列番号２のおよそ１～５４の残基）、そして場合により、完全タンパク質を意味する。同様に、別途文脈から明らかでない限り、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬ、ならびにＢＣＭＡ以外のそれらの受容体に対する参照は、例えば、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔデータベースに提供される、野生型ヒト配列を指す。
【0045】
ＩＩＩ．本発明の抗体
結合特異性及び機能特性
ＳＧ１６．１７抗体は、実施例に記載されるように、ヒトＢＣＭＡに特異的に結合するラットモノクローナル抗体である。ＡＴＣＣ寄託は、ブダペスト条約により２００５年８月１５日になされた。ＡＴＣＣは、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．２０１１０－２２０９，ＵＳＡに位置する。ＡＴＣＣ寄託は、受入番号ＰＴＡ－６９３７が割り当てられた。ＳＧ１６．１７抗体は、ＢＣＭＡのそのリガンドであるＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦの両方への結合を阻害する。ＳＧ１６．１７抗体は、ヒトＩｇＧ１に連結されるときにＡＤＣＣを誘発し、Ｆｃγ受容体に結合し、それを通してシグナル伝達を誘発する。ＳＧ１６．１７抗体は、抗体薬物複合体に組み込まれ、ＢＣＭＡを発現する細胞の内部に連結された薬物を送達することもできる。ＳＧ１６．４５抗体は、ヒトＢＣＭＡに特異的に結合し、そのリガンドへのその結合を阻害し、ＢＣＭＡを発現する細胞の内部に連結された薬物を送達することができる別のラットモノクローナル抗体である。
結合特異性及び機能特性
ＳＧ１６．１７抗体は、実施例に記載されるように、ヒトＢＣＭＡに特異的に結合するラットモノクローナル抗体である。ＡＴＣＣ寄託は、ブダペスト条約により２００５年８月１５日になされた。ＡＴＣＣは、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．２０１１０－２２０９，ＵＳＡに位置する。ＡＴＣＣ寄託は、受入番号ＰＴＡ－６９３７が割り当てられた。ＳＧ１６．１７抗体は、ＢＣＭＡのそのリガンドであるＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦの両方への結合を阻害する。ＳＧ１６．１７抗体は、ヒトＩｇＧ１に連結されるときにＡＤＣＣを誘発し、Ｆｃγ受容体に結合し、それを通してシグナル伝達を誘発する。ＳＧ１６．１７抗体は、抗体薬物複合体に組み込まれ、ＢＣＭＡを発現する細胞の内部に連結された薬物を送達することもできる。ＳＧ１６．４５抗体は、ヒトＢＣＭＡに特異的に結合し、そのリガンドへのその結合を阻害し、ＢＣＭＡを発現する細胞の内部に連結された薬物を送達することができる別のラットモノクローナル抗体である。
【0046】
本発明は、ＳＧ１６．１７抗体（ｈＳＧ１６．１７、ｃＳＧ１６．１７、またはｖＳＧ１６．１７と表示される）及びＳＧ１６．４５（類似して表示される）のヒト化形態、キメラ形態、及びベニヤ形態を提供する。かかる抗体は、典型的には、上述のＳＧ１６．１７またはＳＧ１６．４５の一部または全ての特性を保持する。任意の所与の特性に関して、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体は、実験誤差内と同程度のまたは少なからずラットＳＧ１６．１７またはＳＧ１６．４５の特性を呈し得る。ラットＳＧ１６．１７抗体のヒト化形態、キメラ形態、及びベニヤ形態の親和性（即ち、Ｋａ）は、ラットＳＧ１６．１７抗体の親和性よりも大きいか、またはヒトＢＣＭＡのラットＳＧ１６．１７抗体の親和性の５倍もしくは２倍以内（即ち、それより大きい、またはそれより小さい）であり得る。好ましいヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７抗体は、同じエピトープに結合し、かつ／またはヒトＢＣＭＡへの結合に関してラットＳＧ１６．１７抗体と競合する。ラットＳＧ１６．４５抗体のヒト化形態、キメラ形態、及びベニヤ形態の親和性（即ち、Ｋａ）は、ラットＳＧ１６．４５抗体の親和性よりも大きいか、またはヒトＢＣＭＡのラットＳＧ１６．４５抗体の親和性の５倍もしくは２倍以内（即ち、それより大きい、またはそれより小さい）であり得る。好ましいヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．４５抗体は、同じエピトープに結合し、かつ／またはヒトＢＣＭＡへの結合に関してラットＳＧ１６．４５抗体と競合する。
【0047】
好ましいヒト化抗体、キメラ抗体、及びベニヤ抗体は、動物モデルまたは臨床試験においてインビトロで示されるように、癌（例えば、細胞の成長、転移、及び／または生物に対する致死性）またはＢ細胞媒介免疫障害を阻害する。
【0048】
Ｂ．抗体
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列にグラフトされる遺伝子操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ，ＵＳ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９、Ｗｉｎｔｅｒ，ＵＳ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ，ＵＳ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ，ＵＳ５，８５９，２０５、ならびにＦｏｏｔｅ，ＵＳ６，８８１，５５７を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、かかる配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列であり得る。ＳＧ１６．１７のヒト化に関して、重鎖の好ましいアクセプター配列は、生殖系列ＶＨエクソンＶＨ１～２であり、Ｊエクソン（ＪＨ）に関しては、エクソンＪＨ－３である。軽鎖に関して、好ましいアクセプター配列は、エクソンＶＬ１～１２及びＪエクソンＪＫ５である。ＳＧ１６．４５のヒト化に関して、好ましい重鎖アクセプター配列はＨＶ３～２３／ＨＪ３（配列番号２４）であり、好ましい軽鎖アクセプター配列はＫＶ３～２０／ＫＪ２（配列番号３４）である。
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列にグラフトされる遺伝子操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ，ＵＳ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９、Ｗｉｎｔｅｒ，ＵＳ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ，ＵＳ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ，ＵＳ５，８５９，２０５、ならびにＦｏｏｔｅ，ＵＳ６，８８１，５５７を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、かかる配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列であり得る。ＳＧ１６．１７のヒト化に関して、重鎖の好ましいアクセプター配列は、生殖系列ＶＨエクソンＶＨ１～２であり、Ｊエクソン（ＪＨ）に関しては、エクソンＪＨ－３である。軽鎖に関して、好ましいアクセプター配列は、エクソンＶＬ１～１２及びＪエクソンＪＫ５である。ＳＧ１６．４５のヒト化に関して、好ましい重鎖アクセプター配列はＨＶ３～２３／ＨＪ３（配列番号２４）であり、好ましい軽鎖アクセプター配列はＫＶ３～２０／ＫＪ２（配列番号３４）である。
【0049】
よって、ヒト化抗体は、完全にまたは実質的に非ヒトドナー抗体ならびに可変領域フレームワーク配列及び定常領域から、存在する場合、完全にまたは実質的にヒト抗体配列からの少なくとも４つのＣＤＲを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体重鎖ならびに重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域から、存在する場合、実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの少なくとも２つ、及び通常３つ全てのＣＤＲを有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体軽鎖ならびに軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域から、存在する場合、実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの少なくとも２つ、及び通常３つ全てのＣＤＲを有する。ナノボディ及びｄＡｂ以外、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖及びヒト化軽鎖を含む。ヒト化抗体またはヒト抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔにより定義されるように）の少なくとも６０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一であるとき、実質的に非ヒト抗体において対応するＣＤＲからであるか、またはそれに実質的に同一である。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、Ｋａｂａｔにより定義される対応する残基の少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％が同一であるとき、それぞれ、実質的にヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域からである。
【0050】
ヒト化抗体は、マウス抗体からの６つ全てのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔにより定義されるが、代替的に、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ複合、ＡｂＭもしくはＣｏｎｔａｃｔ、または他の従来の定義により定義されるように）を組み込むことが多いが、それらは、マウス抗体からの全てより少ないＣＤＲ（例えば、少なくとも４つまたは５つ）とでも作製され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２、Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５－４２８，２００２、Ｉｗａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９－１０９１，１９９９、Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２－１４４１，２０００）。
【0051】
ヒト可変領域フレームワーク残基からのある特定のアミノ酸は、ＣＤＲ構造及び／または抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づく置換に関して選択され得る。かかる可能な影響の研究は、モデル化、特定の位置でのアミノ酸の特徴の検査、または特定のアミノ酸の置換もしくは突然変異誘発の作用の経験的観察によるものである。
【0052】
例えば、アミノ酸がマウス可変領域フレームワーク残基と選択されたヒト可変領域フレームワーク残基との間で異なるとき、ヒトフレームワークアミノ酸は、マウス抗体からの同等のフレームワークアミノ酸によって置換され得るが、これは、アミノ酸が、
（１）直接的に抗原に非共有結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接する、
（３）さもなければＣＤＲ領域と相互作用する（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å以内である）、または
（４）重鎖と軽鎖との間の相互作用を媒介するときに合理的に判断される。
（１）直接的に抗原に非共有結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接する、
（３）さもなければＣＤＲ領域と相互作用する（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å以内である）、または
（４）重鎖と軽鎖との間の相互作用を媒介するときに合理的に判断される。
【0053】
本発明は、６つの例示されるヒト化重鎖成熟可変領域（ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ１～６）（配列番号１１～１６）及び４つの例示されるヒト化軽鎖成熟可変領域（ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２－５）（配列１９～２２）を含むラットＳＧ１６．１７抗体のヒト化形態を提供する。重鎖及び軽鎖は、任意の順列で組み合わされてもよく、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ１、ＶＨ３、またはＶＨ５のいずれかを含む順列が好ましい。結合親和性、ヒト生殖系列に対する配列同一性パーセント、発現、及び単量体含量のパーセントの最良の組み合わせを有する順列は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３ ＶＫ２であった。この抗体は、実験誤差内のラットＳＧ１６．１７と類似する親和性、重鎖及び軽鎖可変領域の両方においてヒト生殖系列と８５％超の配列同一性（よって、新しいＩＮＮガイドラインの「ヒト化」表示を満たす）、ＣＨＯ細胞において高発現、及び高単量体比率を示す。大半の他のヒト化抗体と比較して、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３ ＶＫ２は、ヒトアクセプター残基が対応するラット残基（１３）に交換される多数の可変領域フレームワーク突然変異を有するが、全体的に抗体がＩＮＮガイドラインのヒト化として分類されるのにヒト生殖系列配列に対して十分な配列同一性を有するように、Ｋａｂａｔ ＣＤＲにおけるラット残基がヒトアクセプター配列において対応する残基に交換される多数の「順方向」ＣＤＲ突然変異も有するという点で珍しい。大半の以前のヒト化抗体は、完全にドナー抗体からのＫａｂａｔ ＣＤＲを有した。
【0054】
本発明は、重鎖可変領域がｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）と少なくとも９０％の同一性を示し、軽鎖可変領域がｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）と少なくとも９０％の同一性を示す抗体を提供する。一部の抗体は、ＨＶ３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性、及びＶＫ２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を示す。一部のかかる抗体は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）とを含む。一部のかかる抗体は、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３（配列番号１３）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号６０～６２）と、ｈＳＧ１６．１７ ＶＫ２（配列番号１９）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号９０～９２）とを含むが、但し、位置Ｈ５８が、ＮまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６０が、ＡまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６１が、ＱまたはＥにより占められ得、位置Ｈ６２が、ＫまたはＮにより占められ得、位置Ｈ６４が、ＱまたはＫにより占められ得、位置Ｈ６５が、ＧまたはＴにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ５３が、ＳまたはＲにより占められ得ることを条件とする。好ましくは、位置Ｈ５８、Ｈ６０、Ｈ６１、Ｈ６２、Ｈ６４、及びＨ６５は、それぞれ、Ｎ、Ａ、Ｑ、Ｋ、Ｑ、及びＧにより占められ、Ｌ２４及びＬ５３は、それぞれ、Ｒ及びＳにより占められる。 これらの列記される残基は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の位置を占めるヒトアクセプター配列からのアミノ酸を表す。一部の抗体は、ヒトＫａｂａｔ ＣＤＲにおいて、ヒトアクセプター配列からの対応する残基で代置された、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、または８つのラット残基を有する。一部の抗体において、位置Ｈ５８、Ｈ６０、Ｈ６１、Ｈ６２、Ｈ６４、及びＨ６５は、それぞれ、Ｎ、Ａ、Ｑ、Ｋ、Ｑ、及びＧにより占められ、Ｌ２４及びＬ５３は、それぞれ、Ｒ及びＳにより占められる。一部の抗体は、可変領域ヒトアクセプター配列残基の対応するラット残基での代置を表す、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４の復帰突然変異を含む。
【0055】
一部の抗体において、位置Ｈ２０、Ｈ４８、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８８、Ｈ９１、及びＨ９３のうちの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１が、それぞれ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｖ、Ａ、Ｆ、及びＴにより占められる。一部の抗体において、位置Ｌ４６、Ｌ４８、及びＬ８７のうちの少なくとも１、２、または３つが、それぞれ、Ｖ、Ｖ、及びＦにより占められる。一部の抗体において、位置Ｈ２０、Ｈ４８、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ７６、Ｈ８０、Ｈ８８、Ｈ９１、及びＨ９３の各々は、それぞれ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｖ、Ａ、Ｆ、及びＴにより占められ、Ｌ４６、Ｌ４８、及びＬ８７の各々は、それぞれ、Ｖ、Ｖ、及びＦにより占められる。
【0056】
ヒト化抗体は例示されるｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３ ＶＫ２ヒト化抗体からの任意の変形を示す限りにおいて、かかる追加の変形に関する１つの可能性は、可変領域フレームワークにおける追加の復帰突然変異である。他の例示されるヒト化重鎖または軽鎖成熟可変領域における復帰突然変異された位置のいずれかまたは全ては、Ｒにより示されるＨ８、Ａにより占められるＨ６７、及びＡにより占められるＨ７８、Ｓにより占められるＬ４０、Ｍにより占められるＬ７８、Ｄにより占められるＬ８５（即ち、１、２、３、４、５、または６つ全て）から、または重鎖における、Ｎにより占められるＨ３８、Ｒにより占められるＨ４０、Ｋにより占められるＨ７３、Ｓにより占められるＨ８２Ａ、及びＴにより占められるＨ８３の５つ全て、ならびに軽鎖における、Ｋにより占められるＬ３及びＩにより占められるＬ２０のうちの１つもしくは両方からも作製することができる。しかしながら、かかる追加の復帰突然変異は、それらが一般的に親和性を改善せず、より多くのマウス残基を導入することによって免疫原性のリスクが増加し得ることから、好ましくない。
【0057】
可能性のある別の変形は、マウス抗体のＣＤＲにおけるより多くのまたはより少ない残基を、ヒトＣＤＲ配列からの、典型的には、例示されるヒト化抗体の設計に使用されるヒトアクセプター配列のＣＤＲからの対応する残基で置換することである。一部の抗体においては、ＣＤＲの一部のみ、つまり、ＳＤＲと呼ばれる、結合に必要なＣＤＲ残基のサブセットが、ヒト化抗体における結合を保持するために必要とされる。抗原と接触しておらず、ＳＤＲ中にないＣＤＲ残基は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７）などの他の定義に従うＣＤＲの外にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域に基づき、分子モデリングにより、及び／もしくは経験的に、またはＧｏｎｚａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１： ８６３（２００４）に記載されるように特定することができる。１つ以上のドナーＣＤＲ残基が存在しない、またはドナーＣＤＲ全体が省かれる位置にあるかかるヒト化抗体では、その位置を占めているアミノ酸は、アクセプター抗体配列中の対応する位置（Ｋａｂａｔ番付による）を占めているアミノ酸であり得る。ＣＤＲにおけるドナーアミノ酸に対するアクセプターのかかる置換をいくつ含めるかは、競合する検討事項のバランスを反映する。かかる置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させること、ひいては可能性のある免疫原性を減少させることに有利である可能性がある。しかしながら、置換により親和性の変化も生じ得、著しい親和性の低減は回避することが好ましい。ＣＤＲ内での置換のための位置及び置換するアミノ酸も経験的に選択することができる。
【0058】
好ましくはないが、他のアミノ酸置換を、例えば、ＣＤＲと接触していないフレームワーク残基、またはさらには一部のＣＤＲに接触している可能性のあるＣＤＲ内の残基アミノ酸中で行うことができる。変異型ヒト化配列中で行われた代置は、代置されたｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３ ＶＫ２アミノに関して保存的であることが多い。好ましくは、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３ ＶＫ２に対する代置（保存的であるか否かにかかわらない）は、ヒト化ｍＡｂの結合親和性または効力、つまり、ヒトＢＣＭＡに結合し、癌細胞の成長を阻害するその能力に実質的な作用がない。
【0059】
変異型は、典型的には、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３ ＶＫ２の重鎖及び軽鎖成熟可変領域配列とは、少数（例えば、典型的には、軽鎖または重鎖成熟可変領域のいずれか、またはこれらの両方において、１、２、３、５、または１０以下）の代置、欠失、または挿入で異なる。
【0060】
ヒト化重鎖及び軽鎖の他の好ましい組み合わせは、ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ１ ＶＫ２、ＶＨ１ ＶＫ３、ＶＨ１ ＶＫ４、ＶＨ１ ＶＫ４、ＶＨ３ ＶＫ２、ＶＨ３ ＶＫ３、ＶＨ３ ＶＫ４、及びＶＨ３ ＶＫ５、ならびにＶＨ５ ＶＫ２、ＶＨ５ ＶＫ３、ＶＨ５ ＶＫ４、ＶＨ５ ＶＫ５のいずれか、ならびに重鎖及び軽鎖可変領域がこれらの抗体のいずれかの重鎖及び軽鎖可変領域と少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９％の同一性を示すヒト化抗体を含む。
【0061】
本発明は、６つの例示されるヒト化重鎖成熟可変領域（ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ１～６）（配列番号２７～３２）及び４つの例示されるヒト化軽鎖成熟可変領域（ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ１、２、３、及び５）（配列３５～３８）を含むラットＳＧ１６．４５抗体のヒト化形態を提供する。重鎖及び軽鎖は、任意の順列で組み合わされてもよく、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５ ＶＫ２、ＶＨ１ ＶＫ１、及びＶＨ１ ＶＫ５の順列が好ましい。ｈＳＧ１６．４５ ＨＶ５ ＶＫ２は、重鎖及び軽鎖可変領域の両方においてヒト生殖系列と８５％超の配列同一性（よって、新しいＩＮＮガイドラインの「ヒト化」表示を満たす）、ＣＨＯ細胞において高発現、高単量体比率、ならびにラットまたはキメラＳＧ１６．４５よりもわずかに少ないにもかかわらず適切な結合を示す。ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５
ＶＫ２は、全体的に抗体がＩＮＮガイドラインのヒト化として分類されるのにヒト生殖系列配列に対して十分な配列同一性を有するように、Ｋａｂａｔ ＣＤＲにおけるラット残基が、ヒトアクセプター配列において対応する残基に交換される、３つの可変領域復帰突然変異（全て重鎖において）及び３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ順方向突然変異を有する。
ＶＫ２は、全体的に抗体がＩＮＮガイドラインのヒト化として分類されるのにヒト生殖系列配列に対して十分な配列同一性を有するように、Ｋａｂａｔ ＣＤＲにおけるラット残基が、ヒトアクセプター配列において対応する残基に交換される、３つの可変領域復帰突然変異（全て重鎖において）及び３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ順方向突然変異を有する。
【0062】
本発明は、重鎖可変領域がｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）と少なくとも９０％の同一性を示し、軽鎖可変領域がｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２と少なくとも９０％の同一性を示す抗体を提供する。一部の抗体は、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性、及びＶＫ２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を示す。一部のかかる抗体は、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）とを含む。一部のかかる抗体は、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５（配列番号３１）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１５２～１５４）と、ｈＳＧ１６．４５ ＶＫ２（配列番号３６）の３つのＫａｂａｔ ＣＤＲ（配列番号１７９～１８１）とを含むが、但し、位置Ｈ５０が、ＡまたはＳにより占められ得、位置Ｌ２４が、ＲまたはＬにより占められ得、位置Ｌ２６が、ＳまたはＴにより占められ得ることを条件とする。好ましくは、位置Ｈ５０はＡにより占められ、位置Ｌ２４及びＬ２６はＲ及びＳにより占められる。これらの列記される残基は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の位置を占めるヒトアクセプター配列からのアミノ酸を表す。一部の抗体は、ヒトＫａｂａｔ ＣＤＲにおいて、ヒトアクセプター配列からの対応する残基で代置された、少なくとも１、２、または３つのラット残基を有する。一部の抗体において、位置Ｈ５０、Ｌ２４、及びＬ２６は、それぞれ、Ａ、Ｒ、及びＳにより占められる。一部の抗体は、可変領域ヒトアクセプター配列残基の対応するラット残基での代置を表す、少なくとも１、２、または３つの復帰突然変異を含む。
【0063】
一部の抗体において、位置Ｈ３０、Ｈ９３、及びＨ９４のうちの少なくとも１、２、または３つが、それぞれ、Ｎ、Ｔ、及びＳにより占められる。一部の抗体において、位置Ｈ３０、Ｈ９３、及びＨ９４の各々は、それぞれ、Ｎ、Ｔ、及びＳにより占められる。
【0064】
ヒト化抗体は例示されるｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５ ＶＫ２ヒト化抗体からの任意の変形を示す限りにおいて、かかる追加の変形に関する１つの可能性は、可変領域フレームワークにおける追加の復帰突然変異である。他の例示されるヒト化重鎖または軽鎖成熟可変領域における復帰突然変異された位置のいずれかまたは全ては、それぞれ、Ｉ、Ｉ、Ｎ、及びＶにより占められるＨ３７、Ｈ４８、Ｈ７６、Ｈ１０７（即ち、１、２、３、または４つ）から、ならびに／またはそれぞれ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、Ｖ、Ｙ、及びＭにより占められるＬ１４、Ｌ１９、Ｌ２１、Ｌ３８、Ｌ５８、Ｌ７１、及びＬ７８のうちの１、２、３、４、５、６、または７つからも作製することができる。しかしながら、かかる追加の復帰突然変異は、それらが一般的に親和性を改善せず、より多くのマウス残基を導入することによって免疫原性のリスクが増加し得ることから、好ましくない。
【0065】
可能性のある別の変形は、マウス抗体のＣＤＲにおけるより多くのまたはより少ない残基を、ヒトＣＤＲ配列からの、典型的には、例示されるヒト化抗体の設計に使用されるヒトアクセプター配列のＣＤＲからの対応する残基で置換することである。一部の抗体においては、ＣＤＲの一部のみ、つまり、ＳＤＲと呼ばれる、結合に必要なＣＤＲ残基のサブセットが、ヒト化抗体における結合を保持するために必要とされる。抗原と接触しておらず、ＳＤＲ中にないＣＤＲ残基は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７）などの他の定義に従うＣＤＲの外にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域に基づき、分子モデリングにより、及び／もしくは経験的に、またはＧｏｎｚａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１： ８６３（２００４）に記載されるように特定することができる。１つ以上のドナーＣＤＲ残基が存在しない、またはドナーＣＤＲ全体が省かれる位置にあるかかるヒト化抗体では、その位置を占めているアミノ酸は、アクセプター抗体配列中の対応する位置（Ｋａｂａｔ番付による）を占めているアミノ酸であり得る。ＣＤＲにおけるドナーアミノ酸に対するアクセプターのかかる置換をいくつ含めるかは、競合する検討事項のバランスを反映する。かかる置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させること、ひいては可能性のある免疫原性を減少させることに有利である可能性がある。しかしながら、置換により親和性の変化も生じ得、著しい親和性の低減は回避することが好ましい。ＣＤＲ内での置換のための位置及び置換するアミノ酸も経験的に選択することができる。
【0066】
好ましくはないが、他のアミノ酸置換を、例えば、ＣＤＲと接触していないフレームワーク残基、またはさらには一部のＣＤＲに接触している可能性のあるＣＤＲ内の残基アミノ酸中で行うことができる。変異型ヒト化配列中で行われた代置は、代置されたｈＳＧ１６．４５ ＶＨ３ ＶＫ２に関して保存的であることが多い。好ましくは、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５ ＶＫ２に対する代置（保存的であるか否かにかかわらない）は、ヒト化ｍＡｂの結合親和性または効力、つまり、ヒトＢＣＭＡに結合し、癌細胞の成長を阻害するその能力に実質的な作用がない。
【0067】
変異型は、典型的には、ＳＧ１６．４５ ＶＨ５ ＶＫ２の重鎖及び軽鎖成熟可変領域配列とは、少数（例えば、典型的には、軽鎖または重鎖成熟可変領域のいずれか、またはこれらの両方において、１、２、３、５、または１０以下）の代置、欠失、または挿入で異なる。
【0068】
ヒト化重鎖及び軽鎖の他の好ましい組み合わせは、ｈＳＧ１６．４５ ＶＨ１ ＶＫ４及びＶＨ１ ＶＫ５のいずれか、ならびに重鎖及び軽鎖可変領域がこれらの抗体のいずれかの重鎖及び軽鎖可変領域と少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９％の同一性を示すヒト化抗体を含む。
【0069】
Ｃ．定常領域の選択
ヒト化抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部に連結され得る。定常領域の選択は、一部、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用、及び／または補体依存性細胞傷害性が所望されるかどうかに依存する。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１及びＩｇＧ３は強い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２は弱い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトＩｇＧ４は補体依存性細胞傷害性を欠く。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも強い細胞媒介エフェクター機能も誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。抗体は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む四量体として、別個の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖとして、または重鎖及び軽鎖可変ドメインがスペーサーを通して連結される単鎖抗体として発現され得る。
ヒト化抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部に連結され得る。定常領域の選択は、一部、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用、及び／または補体依存性細胞傷害性が所望されるかどうかに依存する。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１及びＩｇＧ３は強い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２は弱い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトＩｇＧ４は補体依存性細胞傷害性を欠く。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも強い細胞媒介エフェクター機能も誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。抗体は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む四量体として、別個の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖとして、または重鎖及び軽鎖可変ドメインがスペーサーを通して連結される単鎖抗体として発現され得る。
【0070】
ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ多様性及びイソアロタイプ多様性を示す、つまり、定常領域は１つ以上の多型位置で異なる個体において異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つ以上の他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点でアロタイプとは異なる。例示される野生型ヒトカッパ及びＩｇＧ１定常領域配列（後者はＣ末端リジンを伴うか、または伴わない）は、配列番号３～５に提供される。
【0071】
重鎖のＣ末端リジンなどの軽鎖及び／もしくは重鎖のアミノまたはカルボキシ末端の１個またはいくつかのアミノ酸は、ある比率で、もしくは分子の全てを欠損するか、または誘導体化され得る。置換は、補体媒介細胞傷害性もしくはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低減または増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏら、米国特許第５，８３４，５９７号；及びＬａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：４００５，２００６を参照されたい）、あるいはヒトにおける半減期を延長するために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照されたい）定常領域において行われ得る。
ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照されたい）定常領域において行われ得る。
【0072】
例示的な置換としては、アミノ酸位置２３４、２３５、２３７、２３９、２６７、２９８、２９９、３２６、３３０、または３３２で導入される天然のアミノ酸のシステイン残基へのアミノ酸置換、好ましくは、ヒトＩｇＧ１アイソタイプにおけるＳ２３９Ｃ突然変異が挙げられる（番付はＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）に従う、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１０／０１５８９０９を参照されたい）。Ｃ末端リジンを伴う、または伴わない、Ｓ２３９Ｃを有する重鎖定常領域の配列は、配列番号６及び７により提供される。追加のシステイン残基の存在により、鎖間ジスルフィド結合形成が可能となる。かかる鎖間ジスルフィド結合形成により立体障害が生じることで、Ｆｃ領域－ＦｃγＲ結合相互作用の親和性が低減し得る。ＩｇＧ定常領域のＦｃ領域で導入されるかまたはそれに近接するシステイン残基（複数可）も、治療薬との複合体化（即ち、薬物のマレイミド誘導体などのチオール特異的試薬を使用した細胞傷害性薬物の結合）のための部位として機能し得る。治療薬の存在により立体障害が生じることで、Ｆｃ領域－ＦｃγＲ結合相互作用の親和性がさらに低減し得る。位置２３４、２３５、２３６、及び／または２３７のうちのいずれかにおける他の置換により、Ｆｃγ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に対する親和性が低減する（例えば、ＵＳ６，６２４，８２１、ＵＳ５，６２４，８２１を参照されたい）。突然変異の好ましい組み合わせは、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、及びＩ３３２Ｅであり、これは、ＦｃγＲＩＩＩＡのＦｃドメインの親和性を増加させ、したがって、ＡＤＣＣを増加させる。
【0073】
抗体のインビボ半減期も、そのエフェクター機能に影響し得る。抗体の半減期を増加または減少させて、その治療活性を修飾することができる。ＦｃＲｎは、β２－ミクログロブリンと非共有的に会合するＭＨＣクラスＩ抗原と構造的に類似している受容体である。ＦｃＲｎは、ＩｇＧの異化及び組織を横断するそれらのトランスサイトーシスを調節する（Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，２０００，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９－７６６、Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２５：９７－１１３）。ＩｇＧ－ＦｃＲｎ相互作用は、ｐＨ６．０（細胞内ベシクルのｐＨ）で起きるが、ｐＨ７．４（血液のｐＨ）では起きない。この相互作用により、ＩｇＧを循環に戻して再利用することが可能となる（Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，２０００，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９－７６６、Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２５：９７－１１３）。 ＦｃＲｎ結合に関与するヒトＩｇＧ１上の領域はマッピングされている（Ｓｈｉｅｌｄｓ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４）。ヒトＩｇＧ１の位置Ｐｒｏ２３８、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｎ３１１、Ａｓｐ３１２、Ｇｌｕ３８０、Ｇｌｕ３８２、またはＡｓｎ４３４におけるアラニン置換により、ＦｃＲｎ結合が強化される（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４）。 これらの置換を含むＩｇＧ１分子はより長い血清半減期を有する。したがって、これらの修飾されたＩｇＧ１分子は、それらのエフェクター機能を実行することができるため、未修飾のＩｇＧ１と比較してより長期間にわたってそれらの治療効果を発揮し得る。ＦｃＲｎへの結合を増加させるための他の例示的な置換には、位置２５０のＧｌｎ及び／または位置４２８のＬｅｕが挙げられる。ＥＵ番付を定常領域中の全ての位置に使用する。
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４）。ヒトＩｇＧ１の位置Ｐｒｏ２３８、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｎ３１１、Ａｓｐ３１２、Ｇｌｕ３８０、Ｇｌｕ３８２、またはＡｓｎ４３４におけるアラニン置換により、ＦｃＲｎ結合が強化される（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４）。 これらの置換を含むＩｇＧ１分子はより長い血清半減期を有する。したがって、これらの修飾されたＩｇＧ１分子は、それらのエフェクター機能を実行することができるため、未修飾のＩｇＧ１と比較してより長期間にわたってそれらの治療効果を発揮し得る。ＦｃＲｎへの結合を増加させるための他の例示的な置換には、位置２５０のＧｌｎ及び／または位置４２８のＬｅｕが挙げられる。ＥＵ番付を定常領域中の全ての位置に使用する。
【0074】
保存されたＡｓｎ２９７に共有結合されたオリゴ糖は、ＩｇＧのＦｃ領域がＦｃγＲに結合する能力に関与する（Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：４９６３－６９、Ｗｒｉｇｈｔ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：２６－３１）。ＩｇＧ上のこの糖型を操作することで、ＩｇＧ媒介性ＡＤＣＣを顕著に改善することができる。この糖型にＮ－アセチルグルコサミンの二分修飾を加えること（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６－１８０、Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８－９４）、またはこの糖型からフコースを除去すること（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：６５９１－６０４、Ｎｉｗａ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．６４：２１２７－３３） が、ＩｇＧ ＦｃとＦｃγＲとの間の結合を改善することでＩｇ媒介性ＡＤＣＣ活性を強化する、ＩｇＧ Ｆｃ操作の２つの例である。
Ｒｅｓ．６４：２１２７－３３） が、ＩｇＧ ＦｃとＦｃγＲとの間の結合を改善することでＩｇ媒介性ＡＤＣＣ活性を強化する、ＩｇＧ Ｆｃ操作の２つの例である。
【0075】
ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の溶媒曝露アミノ酸の全身置換により、ＦｃγＲ結合親和性が改変されたＩｇＧ変異型が生成された（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４）。親ＩｇＧ１と比較すると、Ｔｈｒ２５６／Ｓｅｒ２９８、Ｓｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３、Ｓｅｒ２９８／Ｌｙｓ３３４、またはＳｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３／Ｌｙｓ３３４におけるＡｌａへの置換に関与するこれらの変異型のサブセットは、ＦｃγＲへの結合親和性とＡＤＣＣ活性との両方の増加を示す（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６０４；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－４９）。
【0076】
抗体の補体結合活性（Ｃ１ｑ結合とＣＤＣ活性との両方）は、Ｌｙｓ３２６及びＧｌｕ３３３における置換によって改善することができる（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１－２５７５）。ヒトＩｇＧ２骨格における同じ置換は、Ｃ１ｑに不良に結合し補体活性化活性が大幅に不足している抗体アイソタイプを、Ｃ１ｑへの結合とＣＤＣの媒介との両方を行うことができるものへと変換し得る（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１－７５）。いくつかの他の方法も、抗体の補体結合活性を改善するために適用されている。例えば、ＩｇＭの１８アミノ酸カルボキシル末端尾片をＩｇＧのカルボキシル末端にグラフトすることで、それらのＣＤＣ活性が非常に強化される。これは、通常はＣＤＣ活性が検出可能でないＩｇＧ４であっても観察される（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：２２２６－３６）。また、ＩｇＧ１重鎖のカルボキシ末端の近くに位置するＳｅｒ４４４をＣｙｓで置換することにより、ＣＤＣ活性が単量体ＩｇＧ１の２００倍の増加したＩｇＧ１の尾－尾二量体化が誘導された（Ｓｈｏｐｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８－２２）。加えて、Ｃ１ｑへの特異性を有する二重特異性ダイアボディの構築によってもＣＤＣ活性が付与される（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６２９－３１）。
【0077】
補体活性は、重鎖のアミノ酸残基３１８、３２０、及び３２２のうちの少なくとも１つをＡｌａなどの異なる側鎖を有する残基に突然変異させることによって低減させることができる。３つの残基のうちのいずれか１つの代わりに、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、もしくはＶａｌなどの他のアルキル置換非イオン性残基、またはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、及びＰｒｏなどの芳香族非極性残基も、Ｃ１ｑ結合を低減または無効にする。Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、及びＭｅｔを残基３１８ではなく残基３２０及び３２２で使用して、Ｃ１ｑ結合活性を低減または無効にすることができる。３１８（Ｇｌｕ）残基を極性残基によって代置することで、Ｃ１ｑ結合活性を無効にせずに修飾し得る。残基２９７（Ａｓｎ）をＡｌａで代置することにより、溶解活性が除去されるが、Ｃ１ｑに対する親和性はわずかに低減される（約３倍弱化する）だけである。この改変により、グリコシル化部位が破壊され、補体活性化に必要とされる炭水化物の存在が破壊される。この部位における任意の他の置換でも、グリコシル化は破壊される。以下の突然変異及びそれらの任意の組み合わせもＣ１ｑ結合を低減する：Ｄ２７０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びＰ３１１Ｓ（ＷＯ０６／０３６２９１を参照されたい）。
【0078】
ヒト定常領域への言及は、天然アロタイプにおける多型位置を占めている残基の任意の天然アロタイプまたは任意の順列を有する定常領域を含む。また、上記のものなどの突然変異が天然ヒト定常領域に対して最大１、２、５、または１０個存在して、Ｆｃγ受容体結合を低減させるか、またはＦｃＲｎへの結合を増加させてもよい。
【0079】
Ｄ．組換え抗体の発現
ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体は、典型的には、組換え発現により産生される。組換えポリヌクレオチド構築物は典型的には、自然に会合した、または異種プロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に動作可能に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクターにおける真核プロモーター系である。ベクターが適切な宿主内に組み込まれたら、宿主は高レベルのヌクレオチド配列の発現、ならびに交差反応抗体の回収及び精製に適した条件下で維持される。
ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体は、典型的には、組換え発現により産生される。組換えポリヌクレオチド構築物は典型的には、自然に会合した、または異種プロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に動作可能に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクターにおける真核プロモーター系である。ベクターが適切な宿主内に組み込まれたら、宿主は高レベルのヌクレオチド配列の発現、ならびに交差反応抗体の回収及び精製に適した条件下で維持される。
【0080】
哺乳類細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現するための好ましい宿主である。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ
Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。無傷異種タンパク質をスクリーニングすることが可能ないくつかの好適な宿主細胞系が当該技術分野において開発されており、ＣＨＯ細胞系（例えば、ＤＧ４４）、種々のＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、及び非抗体産生骨髄腫（Ｓｐ２／０及びＮＳ０を含む）を含む。好ましくは、細胞は非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサー（Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９，（１９８６））などの発現制御配列、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位などの必要なプロセシング情報部位、ならびに転写終結配列を含み得る。好ましい発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。
Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。無傷異種タンパク質をスクリーニングすることが可能ないくつかの好適な宿主細胞系が当該技術分野において開発されており、ＣＨＯ細胞系（例えば、ＤＧ４４）、種々のＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、及び非抗体産生骨髄腫（Ｓｐ２／０及びＮＳ０を含む）を含む。好ましくは、細胞は非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサー（Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９，（１９８６））などの発現制御配列、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位などの必要なプロセシング情報部位、ならびに転写終結配列を含み得る。好ましい発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。
【0081】
発現されたら、抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む、当該技術分野の標準的な手順に従い精製され得る（一般的に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照されたい）。
【0082】
Ｅ．グルコシル化変異型
抗体は、 それらの定常領域の保存位置でグリコシル化され得る（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｕｎｄ，（１９９７）Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１－１２８、Ｗｒｉｇｈｔ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，（１９９７）ＴｉｂＴＥＣＨ １５：２６－３２）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３２：１３１１－１３１８、Ｗｉｔｔｗｅ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｄ，（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５－４１８０）、ならびに糖タンパク質の構造及び提示される３次元表面に影響を及ぼし得る糖タンパク質の部分間の分子内相互作用（上記のＨｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｕｎｄ、Ｗｙｓｓ ａｎｄ
Ｗａｇｎｅｒ，（１９９６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９－４１６）に影響を及ぼす。オリゴ糖は、特定の認識構造に基づいてある特定の分子に対する所与の糖タンパク質を標的とするようにも機能し得る。例えば、非ガラクトシル化（ａｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｅｄ）ＩｇＧにおいて、オリゴ糖部分がＣＨ２間の空間外に反転し、末端Ｎ－アセチルグルコサミン残基が利用可能になり、マンノース結合タンパク質に結合することが報告された。（Ｍａｌｈｏｔｒａ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１：２３７－２４３）。グリコペプチダーゼによりチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において産生されたＣＡＭＰＡＴＨ－１Ｈ（ヒトリンパ球のＣＤｗ５２抗原を認識する組換えヒト化マウスモノクローナルＩｇＧ１抗体）からオリゴ糖を除去することにより、補体媒介溶解（ＣＭＣＬ）において完全な低減がもたらされた（Ｂｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１－１３１８）が、ノイラミニダーゼを使用するシアル酸残基の選択的除去は、ＤＭＣＬの喪失をもたらさなかった。抗体のグリコシル化も抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすことが報告された。特に、二分ＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼである、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン調節された発現を伴うＣＨＯ細胞が、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告された（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｍａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０）。
抗体は、 それらの定常領域の保存位置でグリコシル化され得る（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｕｎｄ，（１９９７）Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１－１２８、Ｗｒｉｇｈｔ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，（１９９７）ＴｉｂＴＥＣＨ １５：２６－３２）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３２：１３１１－１３１８、Ｗｉｔｔｗｅ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｄ，（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５－４１８０）、ならびに糖タンパク質の構造及び提示される３次元表面に影響を及ぼし得る糖タンパク質の部分間の分子内相互作用（上記のＨｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｕｎｄ、Ｗｙｓｓ ａｎｄ
Ｗａｇｎｅｒ，（１９９６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９－４１６）に影響を及ぼす。オリゴ糖は、特定の認識構造に基づいてある特定の分子に対する所与の糖タンパク質を標的とするようにも機能し得る。例えば、非ガラクトシル化（ａｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｅｄ）ＩｇＧにおいて、オリゴ糖部分がＣＨ２間の空間外に反転し、末端Ｎ－アセチルグルコサミン残基が利用可能になり、マンノース結合タンパク質に結合することが報告された。（Ｍａｌｈｏｔｒａ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１：２３７－２４３）。グリコペプチダーゼによりチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において産生されたＣＡＭＰＡＴＨ－１Ｈ（ヒトリンパ球のＣＤｗ５２抗原を認識する組換えヒト化マウスモノクローナルＩｇＧ１抗体）からオリゴ糖を除去することにより、補体媒介溶解（ＣＭＣＬ）において完全な低減がもたらされた（Ｂｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１－１３１８）が、ノイラミニダーゼを使用するシアル酸残基の選択的除去は、ＤＭＣＬの喪失をもたらさなかった。抗体のグリコシル化も抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすことが報告された。特に、二分ＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼである、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン調節された発現を伴うＣＨＯ細胞が、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告された（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｍａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０）。
【0083】
抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎ連結またはＯ連結のいずれかである。Ｎ連結は、炭水化物部分のアスパラギン残基の側鎖への結合を指す。トリペプチド配列のアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－スレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合のための認識配列である。よって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のうちのいずれかの存在は、可能なグリコシル化部位を創出する。Ｏ連結グリコシル化は、糖Ｎ－アセイルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの結合を指すが、５－ヒドロキシプリンまたは５－ヒドロキシリジンも使用することができる。
【0084】
抗体のグリコシル化変異型は、抗体のグリコシル化パターンが改変される変異型である。改変とは、抗体に見出される１つ以上の炭水化物部分を削除し、１つ以上の炭水化物部分を抗体に付加し、グリコシル化の組成（グリコシル化パターン）、グリコシル化の程度などを変更することを意味する。
【0085】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、（Ｎ連結グリコシル化部位のための）上述のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含有するようにアミノ酸配列を改変することにより達成することができる。改変は、（Ｏ連結グリコシル化部位のための）１つ以上のセリンまたはスレオニン残基の元の抗体の配列への付加によって、またはそれによる置換によっても行うことができる。同様に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然のグリコシル化部位内でのアミノ酸改変により達成することができる。
【0086】
アミノ酸配列は、通常、基底の核酸配列を改変することにより改変される。これらの方法は、天然源からの単離（天然に生じるアミノ酸配列変異型の場合）、またはオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、及び抗体の前に調製された変異型または非変異型形態のカセット突然変異誘発による調製を含む。
【0087】
抗体のグリコシル化（グリコシル化パターンを含む）も、アミノ酸配列または基底のヌクレオチド配列を改変することなく改変することができる。グリコシル化は、抗体を発現させるために使用する宿主細胞に大きく依存する。可能な治療薬としての組換え糖タンパク質、例えば、抗体の発現に使用される細胞型が天然の細胞であることは稀であり、抗体のグリコシル化パターンの顕著な変動が予想され得る。例えば、Ｈｓｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２－９０７０を参照のこと。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え産生中のグリコシル化に影響を及ぼす要因としては、成長モード、培地配合物、培養密度、酸素負荷、ｐＨ、精製スキームなどが挙げられる。オリゴ糖の産生に関与するある特定の酵素の導入または過剰発現を含む、特定の宿主生物において達成されるグリコシル化パターンを改変するための種々の方法が提案されている（米国特許第５０４７３３５号、同第５５１０２６１号、同第５２７８２９９号）。グリコシル化、またはある特定の種類のグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ Ｈ）を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去され得る。加えて、組換え宿主細胞は遺伝子操作されてもよく、例えば、ある特定の種類の多糖をプロセシングする際に欠損させることができる。これら及び類似する技法が当該技術分野で周知である。
【0088】
抗体のグリコシル化構造は、炭水化物分析の従来の技法によって容易に分析することができ、これらの技法としては、レクチンクロマトグラフィー、ＮＭＲ、質量分析、ＨＰＬＣ、ＧＰＣ、単糖組成分析、連続酵素消化、及び高ｐＨアニオン交換クロマトグラフィーを使用して、荷電に基づいてオリゴ糖を分離するＨＰＡＥＣ－ＰＡＤが挙げられる。分析を目的としたオリゴ糖の放出方法も既知であり、限定されないが、酵素処理（一般にペプチド－Ｎ－グリコシダーゼＦ／エンド－β－ガラクトシダーゼを使用して行われる）、厳しいアルカリ性環境を使用して、主にＯ連結構造を放出する排除、及び無水ヒドラジンを使用して、Ｎ連結オリゴ糖とＯ連結オリゴ糖との両方を放出する化学的方法が含まれる。
【0089】
抗体のグリコシル化の修飾の好ましい形態は、低減されたコアフコシル化である。「コアフコシル化」は、Ｎ連結グリカンの還元末端におけるフコース（「フコシル化」）のＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）への付加を指す。
【0090】
「Ｎ－グリコシド連結複合型糖鎖」は、典型的には、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号に従う）に結合される。本明細書で使用される場合、Ｎ－グリコシド連結複合型糖鎖は、主に以下の構造：
を有する二分岐複合型糖鎖を有し、式中、±は、糖分子が存在するか、または不在であってもよいことを示し、数字は、糖分子間の連結の位置を示す。上記の構造において、アスパラギンに結合する糖鎖末端は、還元末端（右記）と呼ばれ、反対側は、非還元末端と呼ばれる。フコースは通常、典型的にはα１，６結合（ＧｌｃＮＡｃの６位がフコースの１位に連結される）により還元末端のＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）に結合される。「Ｇａｌ」はガラクトースを指し、「Ｍａｎ」はマンノースを指す。
【化2】
を有する二分岐複合型糖鎖を有し、式中、±は、糖分子が存在するか、または不在であってもよいことを示し、数字は、糖分子間の連結の位置を示す。上記の構造において、アスパラギンに結合する糖鎖末端は、還元末端（右記）と呼ばれ、反対側は、非還元末端と呼ばれる。フコースは通常、典型的にはα１，６結合（ＧｌｃＮＡｃの６位がフコースの１位に連結される）により還元末端のＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）に結合される。「Ｇａｌ」はガラクトースを指し、「Ｍａｎ」はマンノースを指す。
【0091】
「Ｎ－グリコシド連結複合型糖鎖」は、１）コア構造の非還元末端側がガラクトースＮ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の１つ以上の分岐を有し、ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が任意選択で、シアル酸、二分Ｎ－アセチルグルコサミンなどを有する複合型、または２）コア構造の非還元末端側が高マンノースＮ－グリコシド連結糖鎖及びＮ－グリコシド連結複合型糖鎖の両分岐を有するハイブリッド型を含む。
【0092】
一部の実施形態では、「Ｎ－グリコシド連結複合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側がガラクトースＮ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の０、１つ以上の分岐を有し、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が任意選択で、シアル酸、二分Ｎ－アセチルグルコサミンなどの構造をさらにを有する複合型を含む。
【0093】
本方法によると、典型的には、少量のフコースのみがヒト化、キメラ、もしくはベニヤＳＧ１６．１７またはＳＧ１６．４５抗体のＮ－グリコシド連結複合型糖鎖（複数可）に組み込まれる。例えば、種々の実施形態では、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満の抗体の分子が、フコースによるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、約２％の抗体の分子がフコースによるコアフコシル化を有する。
【0094】
ある特定の実施形態では、少量のフコース類似体のみ（またはフコース類似体の代謝物または産物）が、Ｎ－グリコシド連結複合型糖鎖（複数可）に組み込まれる。例えば、種々の実施形態では、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満のヒト化、キメラ、もしくはベニヤＳＧ１６．１７またはＳＧ１６．４５抗体が、フコース類似体、またはフコース類似体の代謝物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、約２％のヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７抗体が、フコース類似体、またはフコース類似体の代謝物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。
【0095】
抗体産生細胞をフコース類似体と共にインキュベートすることによる非フコシル化抗体の作製方法は、例えば、ＷＯ２００９／１３５１８１に記載される。簡潔に、ヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７抗体を発現するように操作された細胞が、フコース類似体、またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物の存在下でインキュベートされる。細胞内代謝物は、例えば、ＧＤＰ修飾された類似体、または完全にもしくは部分的に脱エステル化された類似体であり得る。産物は、例えば、完全にもしくは部分的に脱エステル化された類似体であり得る。一部の実施形態では、フコース類似体は、フコースサルベージ経路において酵素（複数可）を阻害し得る。例えば、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコキナーゼまたはＧＤＰ－フコース－ピロホスホリラーゼの活性を阻害し得る。一部の実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコシルトランスフェラーゼ（好ましくは、１，６－フコシルトランスフェラーゼ、例えば、ＦＵＴ８タンパク質）を阻害する。一部の実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコースの新規合成経路において酵素の活性を阻害する。例えば、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、ＧＤＰ－マンノース４，６－デヒドラターゼまたは／またはＧＤＰ－フコースシンセターゼの活性を阻害し得る。一部の実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコース輸送体（例えば、ＧＤＰ－フコース輸送体）を阻害し得る。
【0096】
一実施形態では、フコース類似体は、２－フルロフコースである。成長培地中でのフコース類似体、及び他のフコース類似体の使用方法は、例えば、ＷＯ／２００９／１３５１８１（参照により本明細書に組み込まれる）に開示される。
【0097】
細胞系を操作してコアフコシル化を低減させる多の方法は、遺伝子ノックアウト、遺伝子ノックイン、及びＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を含んだ。遺伝子ノックアウトにおいて、ＦＵＴ８をコードする遺伝子（アルファ１，６－フコシルトランスフェラーゼ酵素）が不活性化される。ＦＵＴ８は、ＧＤＰ－フコースからのフコシル残基を、Ｎ－グリカンのＡｓｎ連結（Ｎ連結）ＧｌｃＮａｃの位置６への移動を触媒する。ＦＵＴ８は、Ａｓｎ２９７でのフコースのＮ－連結二分岐炭水化物への付加に関与する唯一の酵素であると報告される。遺伝子ノックインは、ＧＮＴＩＩＩまたはゴルジアルファマンノシダーゼＩＩなどの酵素をコードする遺伝子を付加する。細胞におけるかかる酵素のレベルの増加は、フコシル化経路からモノクローナル抗体を転用し（コアフコシル化の減少につながる）、二分Ｎ－アセチルグルコサミンの量を増加させる。ＲＮＡｉも、典型的には、ＦＵＴ８遺伝子発現を標的とし、ｍＲＮＡ転写レベルの減少をもたらすか、または遺伝子発現を完全にノックアウトする。これらの方法のいずれも、非フコシル化抗体、例えば、ヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７抗体を産生することができるであろう細胞系を生成するために使用され得る。
【0098】
抗体上のフコシル化の量を決定するための多くの方法が利用可能である。方法は、例えば、ＰＬＲＰ－Ｓクロマトグラフィーを介するＬＣ－ＭＳ及びエレクトロスプレーイオン化四重極ＴＯＦ ＭＳを含む。
【0099】
ＩＶ．核酸
本発明は、上述のヒト化重鎖及び軽鎖のうちのいずれかをコードする核酸をさらに提供する。典型的には、核酸は、成熟重鎖及び軽鎖に融合したシグナルペプチドもコードする。核酸上のコード配列は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナルなど、コード配列の発現を確実にするために、調節配列と動作可能な連結にあり得る。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は単離された形態で生じるか、または１つ以上のベクターにクローニングされ得る。核酸は、例えば、固体状態の合成または重複オリゴヌクレオチドのＰＣＲにより合成され得る。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、例えば発現ベクター内で１つの隣接する核酸として結合され得るか、または例えば、各々がそれ自体の発現ベクター内にクローニングされる、別個であり得る。
本発明は、上述のヒト化重鎖及び軽鎖のうちのいずれかをコードする核酸をさらに提供する。典型的には、核酸は、成熟重鎖及び軽鎖に融合したシグナルペプチドもコードする。核酸上のコード配列は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナルなど、コード配列の発現を確実にするために、調節配列と動作可能な連結にあり得る。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は単離された形態で生じるか、または１つ以上のベクターにクローニングされ得る。核酸は、例えば、固体状態の合成または重複オリゴヌクレオチドのＰＣＲにより合成され得る。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、例えば発現ベクター内で１つの隣接する核酸として結合され得るか、または例えば、各々がそれ自体の発現ベクター内にクローニングされる、別個であり得る。
【0100】
Ｖ．抗体－薬物複合体
抗ＭＣＭＡ抗体は、細胞傷害部分と複合体化されて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成し得る。抗体との複合体化に特に好適な部分は、細胞傷害性薬（例えば、化学療法薬）、プロドラッグ変換酵素、放射性同位体もしくは化合物、または毒素（治療薬または薬物と総称されるこれらの部分）である。例えば、抗ＢＣＭＡ抗体は、化学療法薬などの細胞傷害性薬、または毒素（例えば、細胞増殖抑制もしくは殺細胞薬、例えば、アブリン、リシンＡ、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、またはジフテリア毒素）と複合体化され得る。細胞傷害性薬の有用なクラスの例は、例えば、ＤＮＡ小溝結合、ＤＮＡアルキル化剤、及びチューブリン阻害剤を含む。例示的な細胞傷害性薬としては、例えば、アウリスタチン、カンプトテシン、デュオカルマイシン、エトポシド、マイタンシン及びマイタンシノイド（例えば、ＤＭ１及びＤＭ４）、タキサン、ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン）、及びビンカアルカロイドが挙げられる。治療薬をタンパク質、及び特に抗体と複合体化するための技法は周知である。（例えば、Ａｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０ １４：１－９、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．，２００８，１４（３）：１５４－１６９を参照されたい。）
抗ＭＣＭＡ抗体は、細胞傷害部分と複合体化されて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成し得る。抗体との複合体化に特に好適な部分は、細胞傷害性薬（例えば、化学療法薬）、プロドラッグ変換酵素、放射性同位体もしくは化合物、または毒素（治療薬または薬物と総称されるこれらの部分）である。例えば、抗ＢＣＭＡ抗体は、化学療法薬などの細胞傷害性薬、または毒素（例えば、細胞増殖抑制もしくは殺細胞薬、例えば、アブリン、リシンＡ、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、またはジフテリア毒素）と複合体化され得る。細胞傷害性薬の有用なクラスの例は、例えば、ＤＮＡ小溝結合、ＤＮＡアルキル化剤、及びチューブリン阻害剤を含む。例示的な細胞傷害性薬としては、例えば、アウリスタチン、カンプトテシン、デュオカルマイシン、エトポシド、マイタンシン及びマイタンシノイド（例えば、ＤＭ１及びＤＭ４）、タキサン、ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン）、及びビンカアルカロイドが挙げられる。治療薬をタンパク質、及び特に抗体と複合体化するための技法は周知である。（例えば、Ａｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０ １４：１－９、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．，２００８，１４（３）：１５４－１６９を参照されたい。）
【0101】
治療薬（例えば細胞傷害性薬）は、抗体から切り離されない限り（例えば、加水分解により、抗体分解により、または切断試薬により）、その活性を低減する様式で抗体と複合体化され得る。かかる治療薬は、リンカーを介して抗体に結合され得る。リンカーと複合体化された治療薬も本明細書において薬物リンカーと称される。リンカーの性質は大きく異なり得る。リンカーを構成する構成成分は、一部、複合体が送達される部位の状態により決定され得る、それらの特徴に基づいて選択される。
【0102】
治療薬は、複合体が、抗ＢＣＭＡ発現癌細胞によって内在化されるときに抗体から切断されるように（例えば、エンドソーム環境において、または例えば、ｐＨ感受性もしくはプロテアーゼ感受性により、リソソーム環境において、またはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａｒ）環境において）、抗ＢＣＭＡ発現癌細胞の細胞内環境における切断に感受性であるが、細胞外環境に実質的に感受性ではない切断可能なリンカーによって抗体に結合され得る。治療薬はまた、切断不可能なリンカーによって抗体に結合され得る。
【0103】
示されるように、リンカーは、切断可能な単位を含み得る。一部のかかる実施形態では、切断可能な単位の構造及び／または配列は、標的部位（例えば、標的細胞）に存在する酵素の作用により切断されるように選択される。他の実施形態では、ｐＨ（例えば、酸不安定または塩基不安定）、温度の変化により、または照射（例えば、感光性）時に切断可能である切断可能な単位も使用することができる。
【0104】
一部の実施形態では、切断可能な単位は、１個のアミノ酸またはアミノ酸の隣接する配列を含み得る。アミノ酸配列は、酵素の標的基質であり得る。
【0105】
一部の態様では、切断可能な単位は、ペプチジル単位であり、少なくとも２個のアミノ酸の長さである。切断試薬は、カテプシンＢ及びＤ、ならびにプラスミンを含み得る（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３を参照されたい）。抗ＢＣＭＡ発現細胞に存在する酵素により切断可能である切断可能なリンカー、即ち、酵素で切断可能なリンカーが最も典型的である。したがって、リンカーは、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含む、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素により切断され得る。例えば、癌性組織において高度に発現されるチオール依存性プロテアーゼカテプシンＢにより切断可能であるリンカー（例えば、Ｐｈｅ－ＬｅｕもしくはＶａｌ－ＣｉｔペプチドまたはＶａｌ－Ａｌａペプチドを含むリンカー）を使用することができる。
【0106】
一部の実施形態では、リンカーは、切断可能な単位（例えば、ペプチジル単位）を含み、切断可能な単位は、治療薬と直接複合体化される。他の実施形態では、切断可能な単位は、追加の機能性単位、例えば、自己犠牲スペーサー単位または非自己犠牲スペーサー単位を介して治療薬と複合体化される。非自己犠牲スペーサー単位は、スペーサー単位の一部または全てが抗体薬物複合体からの切断可能な単位（例えば、アミノ酸）の切断後に薬物単位に結合されたままであるものである。薬物を解放するために、非依存性加水分解反応が標的細胞内で生じて、薬物からスペーサー単位を切断する。
【0107】
自己犠牲スペーサー単位によって、別個の加水分解ステップのための薬物を必要とせずに、薬物を放出する。一実施形態では、リンカーは切断可能な単位及び自己犠牲基を含み、切断可能な単位は酵素の作用により切断可能であり、切断可能な単位の切断後、自己犠牲基（複数可）は治療薬を放出する。一部の実施形態では、リンカーの切断可能な単位は、一端で治療薬と直接または間接的に複合体化され、もう一端で抗体と直接または間接的に複合体化される。一部のかかる実施形態では、切断可能な単位は、一端で治療薬と直接または間接的に（自己犠牲または非自己犠牲スペーサー単位を介して）複合体化され、もう一端でストレッチャー単位を介して抗体と複合体化される。ストレッチャー単位は、抗体を薬物及び／または薬物リンカーの残部に連結する。一実施形態では、抗体と薬物もしくは薬物リンカーの残部との間の結合は、マレイミド基を介して、例えば、マレイミドカプロイルリンカーを介してである。一部の実施形態では、抗体は、ジスルフィドを介して薬物に連結され、例えば、ジスルフィド連結されたマイタンシノイドはＳＰＤＢ－ＤＭ４及びＳＰＰ－ＤＭ１と複合体化する。
【0108】
抗体とリンカーとの間の結合は、いくつかの異なる経路を介して、例えば、チオエーテル結合を通して、ジスルフィド結合を通して、アミド結合を通して、またはエステル結合を通してでもよい。一実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体とリンカーとの間の結合は、抗体のシステイン残基のチオール基とリンカーのマレイミド基との間に形成される。一部の実施形態では、抗体の鎖間結合は、リンカーの官能基との反応前に遊離チオール基に変換される。一部の実施形態では、システイン残基は、抗体の重鎖または軽鎖内に導入され、リンカーと反応させられる。抗体の重鎖または軽鎖における置換によるシステイン挿入の位置としては、公開米国出願第２００７－００９２９４０号及び国際特許公開第ＷＯ２００８０７０５９３号（これらの各々は、その全体が参照により、及び全ての目的に関して、本明細書に組み込まれる）に記載されるものが挙げられる。
【0109】
一部の実施形態では、抗体－薬物複合体は、次式Ｉ：
Ｌ－（ＬＵ－Ｄ）ｐ （Ｉ）
を有し、式中、Ｌは抗ＢＣＭＡ抗体であり、ＬＵはリンカー単位であり、Ｄは薬物単位（即ち、治療薬）である。添字ｐは１～２０の範囲である。かかる複合体は、リンカーを介して少なくとも１つの薬物に共有結合された抗ＢＣＭＡ抗体を含む。リンカー単位は、一端で抗体に結合され、もう一端で薬物に結合される。
Ｌ－（ＬＵ－Ｄ）ｐ （Ｉ）
を有し、式中、Ｌは抗ＢＣＭＡ抗体であり、ＬＵはリンカー単位であり、Ｄは薬物単位（即ち、治療薬）である。添字ｐは１～２０の範囲である。かかる複合体は、リンカーを介して少なくとも１つの薬物に共有結合された抗ＢＣＭＡ抗体を含む。リンカー単位は、一端で抗体に結合され、もう一端で薬物に結合される。
【0110】
薬物負荷は、抗体当たりの薬物分子の数であるｐにより表される。薬物負荷は、抗体当たり１～２０の薬物単位（Ｄ）の範囲であり得る。一部の態様では、添字ｐは、１～２０の範囲（即ち、１～２０の整数及び非整数値の両方）である。一部の態様では、添字ｐは、１～２０の整数であり、単一抗体上の薬物－リンカーの数を表す。他の態様では、ｐは、抗体当たりの薬物－リンカー分子の平均数、例えば、反応混合物または組成物（例えば、薬学的組成物）中の抗体当たりの薬物－リンカーの平均数を表し、整数または非整数値であり得る。したがって、一部の態様では、組成物（例えば、薬学的組成物）に関して、ｐは、組成物中の抗体－薬物複合体の平均薬物負荷を表し、ｐは１～２０の範囲である。
【0111】
一部の実施形態では、ｐは、抗体当たり約１～約８の薬物である。一部の実施形態では、ｐは１である。一部の実施形態では、ｐは２である。一部の実施形態では、ｐは、抗体当たり約２～約８の薬物である。一部の実施形態では、ｐは、抗体当たり約２～約６、２～約５、または２～約４の薬物である。一部の実施形態では、ｐは、抗体当たり約２、約４、約６、または約８の薬物である。
【0112】
複合体化反応からの調製物における抗体単位当たりの薬物の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＨＩＣ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特徴付けされ得る。ｐに関する複合体の量的分布も決定され得る。
【0113】
例示的な抗体－薬物複合体は、アウリスタチン系抗体－薬物複合体、即ち、薬物構成成分がアウリスタチン薬物である複合体を含む。アウリスタチンは、チューブリンに結合し、微小管の動態ならびに核及び細胞分裂に干渉することが示されており、抗癌活性を有する。典型的には、アウリスタチン系抗体－薬物複合体は、アウリスタチン薬物と抗ＢＣＭＡ抗体との間にリンカーを含む。アウリスタチンは、リンカーへの複合体化に好適な任意の位置で、抗ＢＣＭＡ抗体に連結され得る。リンカーは、例えば、切断可能なリンカー（例えば、ペプチジルリンカー）または切断不可能なリンカー（例えば、抗体の分解により放出されるリンカー）であり得る。アウリスタチンは、アウリスタチンＥまたはその誘導体であり得る。アウリスタチンは、例えば、アウリスタチンＥとケト酸との間で形成されたエステルであり得る。例えば、アウリスタチンＥをパラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応させて、それぞれ、ＡＥＢ及びＡＥＶＢを産生することができる。他の典型的なアウリスタチンとしては、ＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）及びＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）が挙げられる。例示的なアウリスタチンの合成及び構造は、米国公開第７，６５９，２４１号、第７，４９８，２９８号、第２００９－０１１１７５６号、第２００９－００１８０８６号、及び第７，９６８，６８７号に記載されており、それらの各々は、その全体が参照により、及び全ての目的に関して、本明細書に組み込まれる。
【0114】
例示的なアウリスタチン系抗体－薬物複合体には、以下に示されるｖｃＭＭＡＥ、ｖｃＭＭＡＦ、及びｍｃＭＭＡＦ抗体－薬物複合体が含まれ、式中、Ａｂは、本明細書に記載される抗体であり、ｖａｌ－ｃｉｔは、バリン－シトルリンジペプチド：
、またはその薬学的に許容される塩を表す。薬物負荷は、抗体当たりの薬物－リンカー分子の数であるｐにより表される。文脈により、ｐは、抗体当たりの薬物－リンカー分子の平均数を表し、平均薬物負荷とも称され得る。変数ｐは、１～２０の範囲であり、好ましくは１～８である。一部の好ましい実施形態では、ｐが平均薬物負荷を表す場合、ｐは約２～約５の範囲である。一部の実施形態では、ｐは、約２、約３、約４、または約５である。一部の態様では、抗体は、システイン残基の硫黄原子を介してリンカーと複合体化される。一部の態様では、システイン残基は、抗体内に操作されるシステイン残基である。他の態様では、システイン残基は、鎖間ジスルフィドシステイン残基である。
【化3】
、またはその薬学的に許容される塩を表す。薬物負荷は、抗体当たりの薬物－リンカー分子の数であるｐにより表される。文脈により、ｐは、抗体当たりの薬物－リンカー分子の平均数を表し、平均薬物負荷とも称され得る。変数ｐは、１～２０の範囲であり、好ましくは１～８である。一部の好ましい実施形態では、ｐが平均薬物負荷を表す場合、ｐは約２～約５の範囲である。一部の実施形態では、ｐは、約２、約３、約４、または約５である。一部の態様では、抗体は、システイン残基の硫黄原子を介してリンカーと複合体化される。一部の態様では、システイン残基は、抗体内に操作されるシステイン残基である。他の態様では、システイン残基は、鎖間ジスルフィドシステイン残基である。
【0115】
例示的な抗体－薬物複合体は、ＰＢＤ系抗体－薬物複合体、即ち、薬物構成成分がＰＢＤ薬物である抗体－薬物複合体を含む。
【0116】
ＰＢＤは、以下の一般式のものである：
【化4】
【0117】
それらは、置換基の数、種類、及び位置、それらの芳香族Ａ環及びピロロＣ環の両方、ならびにＣ環の飽和度が異なる。Ｂ環において、アルキル化ＤＮＡに関与する求電子中心であるＮ１０－Ｃ１１位置にイミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ－ＣＨ（ＯＨ））、またはカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ－ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかが存在する。全ての既知の天然産物は、キラルＣ１１ａ位置に（Ｓ）立体配置を有し、これは、Ｃ環からＡ環方向に見たときに右撚りの天然産物を提供する。これは、それらにＢ形態ＤＮＡの小溝を有する等螺旋性に適切な３次元形状を与え、結合部位でのぴったりとした適合をもたらす。ＰＢＤが小溝で付加体を形成する能力は、それらがＤＮＡプロセシングと干渉し、それ故に、抗腫瘍薬としてのそれらの使用を可能にする。
【0118】
これらの分子の生物学的活性は、可動性アルキレンリンカーを介してそれらのＣ８／Ｃ’－ヒドロキシル官能基を通して一緒に２つのＰＢＤ単位を結合することによって増強され得る。ＰＢＤ二量体は、それらの生物学的活性に主に関与すると考えられる回文構造の５’－Ｐｕ－ＧＡＴＣ－Ｐｙ－３’鎖間架橋結合などの配列選択的ＤＮＡ損傷を形成すると考えられる。
【0119】
一部の実施形態では、ＰＢＤ系抗体－薬物複合体は、抗ＢＣＭＡ抗体に連結されたＰＢＤ二量体を含む。ＰＢＤ二量体を形成する単量体は、同じまたは異なる、即ち、対称または非対称であり得る。ＰＢＤ二量体は、リンカーとの複合体化に好適な任意の位置で、抗ＢＣＭＡ抗体に連結され得る。例えば、一部の実施形態では、ＰＢＤ二量体は、化合物を抗ＢＣＭＡ抗体に連結するためのアンカーを提供するＣ２位置に置換基を有する。代替えの実施形態では、ＰＢＤ二量体のＮ１０位置は、化合物を抗ＢＣＭＡ抗体に連結するためのアンカーを提供する。
【0120】
典型的には、ＰＢＤ系抗体－薬物複合体は、ＰＢＤ薬物と抗ＢＣＭＡ抗体との間にリンカーを含む。リンカーは、切断可能な単位（例えば、酵素の標的基質であるアミノ酸またはアミノ酸の隣接する配列）、または切断不可能なリンカー（例えば、抗体の分解により放出されたリンカー）をさらに含み得る。リンカーは、抗体への連結のためのマレイミド基、例えば、マレイミドカプロイルをさらに含み得る。一部の実施形態では、リンカーは、例えば、ｐ－アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）単位など、自己犠牲基をさらに含む。
【0121】
複合体として使用するための例示的なＰＢＤは、国際出願第ＷＯ２０１１／１３０６１３号に記載され、以下の通り（波線はリンカーへの結合の部位を示す）：
であるか、またはその薬学的に許容される塩である。例示的なリンカーは以下の通りであり、波線は薬物への結合の部位を示し、抗体はマレイミド基を介して連結される。
。
【化5】
であるか、またはその薬学的に許容される塩である。例示的なリンカーは以下の通りであり、波線は薬物への結合の部位を示し、抗体はマレイミド基を介して連結される。
【化6】
。
【0122】
例示的なＰＢＤ系抗体－薬物複合体は、下に示される通り（式中、Ａｂは、本明細書に記載される抗体である）：
であるか、またはその薬学的に許容される塩である。薬物負荷は、抗体当たりの薬物－リンカー分子の数であるｐにより表される。文脈により、ｐは、抗体当たりの薬物－リンカー分子の平均数を表し、平均薬物負荷とも称され得る。変数ｐは、１～２０の範囲であり、好ましくは１～８である。一部の好ましい実施形態では、ｐが平均薬物負荷を表す場合、ｐは約２～約５の範囲である。一部の実施形態では、ｐは、約２、約３、約４、または約５である。一部の態様では、抗体は、抗体内に操作されるシステイン残基の硫黄原子を介して薬物リンカーと複合体化される。一部の態様では、システイン残基は、ＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ
Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）により決定されるように、位置２３９（ＩｇＧ１）で抗体内に操作される。
【化7】
であるか、またはその薬学的に許容される塩である。薬物負荷は、抗体当たりの薬物－リンカー分子の数であるｐにより表される。文脈により、ｐは、抗体当たりの薬物－リンカー分子の平均数を表し、平均薬物負荷とも称され得る。変数ｐは、１～２０の範囲であり、好ましくは１～８である。一部の好ましい実施形態では、ｐが平均薬物負荷を表す場合、ｐは約２～約５の範囲である。一部の実施形態では、ｐは、約２、約３、約４、または約５である。一部の態様では、抗体は、抗体内に操作されるシステイン残基の硫黄原子を介して薬物リンカーと複合体化される。一部の態様では、システイン残基は、ＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ
Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）により決定されるように、位置２３９（ＩｇＧ１）で抗体内に操作される。
【0123】
ＶＩ．免疫学的障害またはＢＣＭＡ発現癌の動物モデル
抗ＢＣＭＡ抗体または誘導体は、免疫学的障害またはＢＣＭＡ発現癌の動物モデルにおいて試験されるか、または検証され得る。糖尿病、狼瘡、全身性硬化症、シェーグレン症候群、実験的自己免疫性脳脊髄炎（多発性硬化症）、甲状腺炎、重症筋無力症、関節炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患を含む全身及び臓器特異的自己免疫疾患の動物モデルの例が、Ｂｉｇａｚｚｉ“Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ：Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ａｎｄ Ｉｎｄｕｃｅｄ，”ｉｎ Ｔｈｅ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ
Ｄｉｓｅａｓｅｓ（Ｒｏｓｅ ａｎｄ Ｍａｃｋａｙ ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９８）、及び“Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ，” ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９７）により記載されている。
抗ＢＣＭＡ抗体または誘導体は、免疫学的障害またはＢＣＭＡ発現癌の動物モデルにおいて試験されるか、または検証され得る。糖尿病、狼瘡、全身性硬化症、シェーグレン症候群、実験的自己免疫性脳脊髄炎（多発性硬化症）、甲状腺炎、重症筋無力症、関節炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患を含む全身及び臓器特異的自己免疫疾患の動物モデルの例が、Ｂｉｇａｚｚｉ“Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ：Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ａｎｄ Ｉｎｄｕｃｅｄ，”ｉｎ Ｔｈｅ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ
Ｄｉｓｅａｓｅｓ（Ｒｏｓｅ ａｎｄ Ｍａｃｋａｙ ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９８）、及び“Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ，” ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９７）により記載されている。
【0124】
アレルギー状態、例えば、喘息及び皮膚炎もゲッ歯類においてモデル化され得る。気道過敏性は、卵白アルブミン（Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：５７９２－８００）またはＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ卵抗原（Ｔｅｓｃｉｕｂａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１９９６－２００３）により、マウスにおいて誘導することができる。マウスのＮｃ／Ｎｇａ株は、血清ＩｇＥにおいて顕著な増加を示し、自発的にアトピー性皮膚炎のような病変を発達させる（Ｖｅｓｔｅｒｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ ６：２０９－１０、Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９：４６１－６６、Ｓａｓｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６：２３９－４７）。
【0125】
免疫応答性ドナーリンパ球の致死的な放射線照射された組織不適合宿主への注射は、マウスにおいてＧＶＨＤを誘導するための古典的なアプローチである。代替的に、親Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスモデルは、急性及び慢性ＧＶＨＤの両方を誘導するための系を提供する。このモデルにおいて、Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスは、Ｃ５７ＢＬ／６及びＤＢＡ／２マウスの親株間での交差からのＦ１子孫である。ＤＢＡ／２リンパ球様細胞の放射線照射されていないＢ６Ｄ２Ｆ１マウスへの移入は慢性ＧＶＨＤを引き起こし、一方でＣ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／１０、またはＢ１０．Ｄ２リンパ球様細胞の移入は急性ＧＶＨＤを引き起こす（Ｓｌａｙｂａｃｋ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌ．２６：９３１－９３８、Ｋａｔａｏｋａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０３：３１０－３１８）。
【0126】
加えて、ヒト造血幹細胞及び成熟末梢血リンパ球様細胞の両方がＳＣＩＤマウスにグラフトされ得、これらのヒトリンパ－造血細胞は、ＳＣＩＤマウスにおいて機能的なままである（ＭｃＣｕｎｅ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：１６３２－１６３９、Ｋａｍｅｌ－Ｒｅｉｄ ａｎｄ Ｄｉｃｋ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１７０６－１７０９、Ｍｏｓｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３５：２５６－２５９）。これは、ヒトリンパ球様細胞に対する可能な治療薬の直接的な試験のための小動物モデル系を提供した。（例えば、Ｔｏｕｒｎｏｙ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：６９８２－６９９１を参照されたい）。
【0127】
さらに、ＢＣＭＡ発現ヒト腫瘍細胞を適切な免疫不全ゲッ歯類株、例えば、無胸腺ヌードマウスまたはＳＣＩＤマウスに移植することにより、抗ＢＣＭＡ抗体または誘導体のインビボ効果を検査する小動物モデルが創出され得る。ＢＣＭＡ発現ヒトリンパ腫細胞系の例としては、例えば、Ｄａｕｄｉ（Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｌｏｏｄ
８３：１３２９－３６、Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １５：４８１－８５、ｄｅ Ｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．６１：７６５４－５９）、Ｒａｍｏｓ（Ｍａ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １６：６０－６、Ｐｒｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｂｌｏｏｄ ９８：２５３５－４３）、ＨＳ－Ｓｕｌｔａｎ（Ｃａｔｔａｎ ａｎｄ Ｍａｕｎｇ，１９９６，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３８：５４８－５２、Ｃａｔｔａｎ ａｎｄ Ｄｏｕｇｌａｓ，１９９４，Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．１８：５１３－２２）、Ｒａｊｉ（Ｏｃｈａｋｏｖｓｋａｙａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７：１５０５－１０、Ｂｒｅｉｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９：２９４４－４９）、及びＣＡ４６（Ｋｒｅｉｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８１：１４８－５５）が挙げられる。ＢＣＭＡ発現ホジキンリンパ腫系の非限定的な例としては、Ｌ５４０ｃｙ（Ｂａｒｔｈ
ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｌｏｏｄ ９５：３９０９－１４、Ｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：３７３６－４２）である。ＢＣＭＡ発現ヒト腎細胞癌腫細胞系の非限定的な例としては、７８６－Ｏ（Ａｎａｎｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９：２２１０－１６、Ｄａｔｔａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：１７６８－７５）、ＡＣＨＮ（Ｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｕｒｏｌ．１６６：２４９１－９４、Ｍｉｙａｋｅ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｕｒｏｌ．１６７：２２０３－０８）、Ｃａｋｉ－１（Ｐｒｅｗｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４：２９５７－６６、Ｓｈｉ ａｎｄ Ｓｉｅｍａｎｎ，２００２，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８７：１１９－２６）、及びＣａｋｉ－２（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ ３：３６０－６７）が挙げられる。ＢＣＭＡ発現鼻咽頭癌腫細胞系の非限定的な例としては、Ｃ１５及びＣ１７（Ｂｕｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４２：５９９－６０６、Ｂｅｒｎｈｅｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅｔ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．６６：１１－５）が挙げられる。ＢＣＭＡ発現神経膠腫細胞系の非限定的な例としては、Ｕ３７３（Ｐａｌｍａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８２：４８０－７）及びＵ８７ＭＧ（Ｊｏｈｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ９８：３９８－４０８）が挙げられる。。これらの腫瘍細胞系は、皮下注射による固形腫瘍として、または静脈内注射による播種性腫瘍としてのいずれかで免疫不全ゲッ歯類宿主において確立することができる。宿主内で確立されたら、これらの腫瘍モデルは、インビボ腫瘍成長の調節に対する、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ抗体または誘導体の治療効果を評価するために適用され得る。
８３：１３２９－３６、Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １５：４８１－８５、ｄｅ Ｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．６１：７６５４－５９）、Ｒａｍｏｓ（Ｍａ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １６：６０－６、Ｐｒｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｂｌｏｏｄ ９８：２５３５－４３）、ＨＳ－Ｓｕｌｔａｎ（Ｃａｔｔａｎ ａｎｄ Ｍａｕｎｇ，１９９６，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３８：５４８－５２、Ｃａｔｔａｎ ａｎｄ Ｄｏｕｇｌａｓ，１９９４，Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．１８：５１３－２２）、Ｒａｊｉ（Ｏｃｈａｋｏｖｓｋａｙａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７：１５０５－１０、Ｂｒｅｉｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９：２９４４－４９）、及びＣＡ４６（Ｋｒｅｉｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８１：１４８－５５）が挙げられる。ＢＣＭＡ発現ホジキンリンパ腫系の非限定的な例としては、Ｌ５４０ｃｙ（Ｂａｒｔｈ
ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｌｏｏｄ ９５：３９０９－１４、Ｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：３７３６－４２）である。ＢＣＭＡ発現ヒト腎細胞癌腫細胞系の非限定的な例としては、７８６－Ｏ（Ａｎａｎｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９：２２１０－１６、Ｄａｔｔａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：１７６８－７５）、ＡＣＨＮ（Ｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｕｒｏｌ．１６６：２４９１－９４、Ｍｉｙａｋｅ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｕｒｏｌ．１６７：２２０３－０８）、Ｃａｋｉ－１（Ｐｒｅｗｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４：２９５７－６６、Ｓｈｉ ａｎｄ Ｓｉｅｍａｎｎ，２００２，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８７：１１９－２６）、及びＣａｋｉ－２（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ ３：３６０－６７）が挙げられる。ＢＣＭＡ発現鼻咽頭癌腫細胞系の非限定的な例としては、Ｃ１５及びＣ１７（Ｂｕｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４２：５９９－６０６、Ｂｅｒｎｈｅｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅｔ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．６６：１１－５）が挙げられる。ＢＣＭＡ発現神経膠腫細胞系の非限定的な例としては、Ｕ３７３（Ｐａｌｍａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８２：４８０－７）及びＵ８７ＭＧ（Ｊｏｈｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ９８：３９８－４０８）が挙げられる。。これらの腫瘍細胞系は、皮下注射による固形腫瘍として、または静脈内注射による播種性腫瘍としてのいずれかで免疫不全ゲッ歯類宿主において確立することができる。宿主内で確立されたら、これらの腫瘍モデルは、インビボ腫瘍成長の調節に対する、本明細書に記載される抗ＢＣＭＡ抗体または誘導体の治療効果を評価するために適用され得る。
【0128】
ＶＩＩ．治療の適用
本発明の抗ＢＣＭＡ抗体は、癌を治療するために使用され得る。いくつかのかかる癌は、タンパク質レベル（例えば、例示される抗体のうちの１つを使用する免疫アッセイによって）またはｍＲＮＡレベルのいずれかで測定された検出可能なレベルのＢＣＭＡを示す。一部のかかる癌は、同じ種類、好ましくは同じ患者からの非癌性組織と比較して上昇したレベルのＢＣＭＡを示す。治療に適した癌細胞上のＢＣＭＡの例示的なレベルは、細胞当たり５０００～１５００００個のＢＣＭＡ分子であるが、より高いレベルまたはより低いレベルも治療され得る。任意選択で、癌におけるＢＣＭＡのレベルは、治療を行う前に測定される。
本発明の抗ＢＣＭＡ抗体は、癌を治療するために使用され得る。いくつかのかかる癌は、タンパク質レベル（例えば、例示される抗体のうちの１つを使用する免疫アッセイによって）またはｍＲＮＡレベルのいずれかで測定された検出可能なレベルのＢＣＭＡを示す。一部のかかる癌は、同じ種類、好ましくは同じ患者からの非癌性組織と比較して上昇したレベルのＢＣＭＡを示す。治療に適した癌細胞上のＢＣＭＡの例示的なレベルは、細胞当たり５０００～１５００００個のＢＣＭＡ分子であるが、より高いレベルまたはより低いレベルも治療され得る。任意選択で、癌におけるＢＣＭＡのレベルは、治療を行う前に測定される。
【0129】
本発明の抗体で治療可能な癌は、固形腫瘍及び血液癌、例えば、白血病及びリンパ腫を含む。抗体は、Ｂ細胞の癌に特に適している。抗体で治療可能な癌の例としては、成人及び小児急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄腫白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、及び二次性白血病；非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びホジキン病；骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖症候群（ＭＰＳ）
多発性骨髄腫、ワンデンストレームマクログロブリン血症、またはバーキットリンパ腫、悪性形質細胞新生物、ＢＣＭＡ＋高悪性度リンパ腫、ケーラー病、及び骨髄腫症；形質細胞性白血病；形質細胞腫；Ｂ細胞前リンパ球性白血病；有毛細胞白血病；濾胞性リンパ腫（濾胞性非ホジキンリンパ腫型を含む）；バーキットリンパ腫（流行性バーキットリンパ腫；孤発性バーキットリンパ腫）：辺縁帯リンパ腫（粘膜関連リンパ組織：ＭＡＬＴ １ ＭＡＬＴｏｍａ；単球様Ｂ細胞リンパ腫；絨毛リンパ球を有する脾リンパ腫）；マントル細胞リンパ腫；大細胞型リンパ腫（びまん性大細胞型リンパ腫；びまん性混合細胞型リンパ腫；免疫芽球性リンパ腫；原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫；血管中心性リンパ腫肺Ｂ細胞）：小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）；前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫；骨髄性白血病（顆粒球性、骨髄性、急性骨髄白血病；慢性骨髄白血病；亜急性骨髄白血病；骨髄肉腫；緑色腫；顆粒球性肉腫；急性前骨髄球性白血病；急性骨髄単球性白血病）；ワンデンストレームマクログロブリン血症、または他のＢ細胞白血病もしくはリンパ腫が挙げられる。
多発性骨髄腫、ワンデンストレームマクログロブリン血症、またはバーキットリンパ腫、悪性形質細胞新生物、ＢＣＭＡ＋高悪性度リンパ腫、ケーラー病、及び骨髄腫症；形質細胞性白血病；形質細胞腫；Ｂ細胞前リンパ球性白血病；有毛細胞白血病；濾胞性リンパ腫（濾胞性非ホジキンリンパ腫型を含む）；バーキットリンパ腫（流行性バーキットリンパ腫；孤発性バーキットリンパ腫）：辺縁帯リンパ腫（粘膜関連リンパ組織：ＭＡＬＴ １ ＭＡＬＴｏｍａ；単球様Ｂ細胞リンパ腫；絨毛リンパ球を有する脾リンパ腫）；マントル細胞リンパ腫；大細胞型リンパ腫（びまん性大細胞型リンパ腫；びまん性混合細胞型リンパ腫；免疫芽球性リンパ腫；原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫；血管中心性リンパ腫肺Ｂ細胞）：小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）；前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫；骨髄性白血病（顆粒球性、骨髄性、急性骨髄白血病；慢性骨髄白血病；亜急性骨髄白血病；骨髄肉腫；緑色腫；顆粒球性肉腫；急性前骨髄球性白血病；急性骨髄単球性白血病）；ワンデンストレームマクログロブリン血症、または他のＢ細胞白血病もしくはリンパ腫が挙げられる。
【0130】
本発明の抗体は、ＢＣＭＡを発現する免疫細胞により媒介される免疫障害、特にＢ細胞媒介障害にも有用である。かかる疾患の例としては、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｉ型糖尿病、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核、及び移植片対宿主病 免疫媒介血小板減少症、溶血性貧血、水疱性類天疱瘡、重症筋無力症、グレーブス病、アジソン病、落葉状天疱瘡、乾癬、乾癬性関節炎、及び強直性脊椎炎が挙げられる。
【0131】
抗ＢＣＭＡ抗体は、単独でまたはその薬物複合体として、有効なレジメン、つまり、癌の少なくとも１つの徴候または症状の発症を遅延する、その重症度を低減する、そのさらなる悪化を阻害する、及び／またはそれを寛解する投薬量、投与経路、及び投与頻度で投与される。患者が既に癌に罹患している場合、レジメンは、治療上有効なレジメンと称され得る。患者が一般集団と比較して癌のリスクが高いが、症状がまだ見られない場合、レジメンは、予防状有効なレジメンと称され得る。場合によっては、治療または予防効果は、個々の患者において、同じ患者の歴史的対照または過去の経験と比較して観察され得る。他の場合では、治療または予防効果は、治療を受けた患者集団の前臨床または臨床試験において、治療を受けていない患者の対照集団と比較して示され得る。
【0132】
モノクローナル抗体の例示的な投薬量は、患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、より典型的には、１ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１２ｍｇ／ｋｇ、もしくは１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ１、または２ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ～１２ｍｇ／ｋｇ、もしくは２ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ～１２ｍｇ／ｋｇ、もしくは３ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇである。その活性モノクローナル抗体薬物複合体、例えば、アウリスタチンの例示的な投薬量は、対象の体重の１ｍｇ／ｋｇ～７．５ｍｇ／ｋｇ、もしくは２ｍｇ／ｋｇ～７．５ｍｇ／ｋｇ、もしくは３ｍｇ／ｋｇ～７．５ｍｇ／ｋｇ、または０．１～２０、もしくは０．５～５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０ｍｇ／ｋｇ）、または規定用量として１０～１５００もしくは２００～１５００ｍｇである。その高度に活性なモノクローナル抗体薬物複合体、例えば、ＰＢＤの例示的な投薬量は、対象の体重の１．０μｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ、または１．０μｇ／ｋｇ～５００．０μｇ／ｋｇである。一部の方法において、患者は、その後、隔週、３週間ごと、または４週間ごとに抗体またはＡＤＣを投与される。投薬量は、他の要因の中でも、投与頻度、患者の状態、及びもしあれば、前治療に対する応答、治療が予防的もしくは治療的であるか、ならびに障害が急性もしくは慢性であるかによる。
【0133】
投与は、非経口、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、くも膜下、腹腔内、局所、鼻腔内、または筋肉内であり得る。投与は、腫瘍に直接局所化させることもできる。静脈内投与または皮下投与による体循環への投与が好ましい。静脈内投与は、例えば、３０～９０分などの期間にわたる注入により、または単一ボーラス注射によるものであり得る。
【0134】
投与頻度は、要因の中でも、循環中の抗体または抗体－薬物複合体の半減期、患者の状態、及び投与経路による。頻度は、患者の状態または治療される癌の進行の変化に応じて、毎日、毎週、毎月、３ヶ月ごと、または不規則な間隔であり得る。静脈内投与の例示的な頻度は、継続的な治療過程にわたって週に２回～３ヶ月ごとであるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。静脈内投与の他の例示的な頻度は、継続的な治療過程にわたって毎週もしくは毎月の間であるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。皮下投与に関して、例示的な投薬頻度は、毎日～毎月であるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。
【0135】
投与される投薬回数は、癌または自己免疫疾患の性質（例えば、急性症状を示しているか慢性症状を示しているか）及び障害の治療に対する応答による。急性障害、または慢性障害の増悪には、１～１０回の投薬が十分である場合が多い。任意選択で分割形態での単回ボーラス投薬が、急性障害、または慢性障害の急性増悪に十分である場合もある。治療は、急性障害または急性増悪の再発に対して繰り返され得る。慢性障害に関して、抗体は、少なくとも１、５、もしくは１０年間、または患者の生涯にわたって、一定間隔で、例えば、毎週、隔週、毎月、３ヶ月ごと、６ヶ月ごとに投与され得る。
【0136】
非経口投与用の薬学的組成物は、好ましくは、無菌かつ実質的に等張性であり、ＧＭＰ状態下で製造される。薬学的組成物は、単位剤形で（即ち、単一投与用の投薬量）提供され得る。薬学的組成物は、１つ以上の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、または助剤を使用して製剤化され得る。製剤は、選択される投与経路による。注射に関して、抗体は、水性溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、もしくは生理食塩水などの生理学的に適合性の緩衝液、または酢酸緩衝液（注射部位の不快感を低減するため）に製剤化され得る。溶液は、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤などの製剤用作用物質を含有し得る。代替的に、本抗体は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、減菌発熱物質不含水で構築するために、凍結乾燥形態であり得る。液体製剤中の抗体の濃度は、例えば、１．０ｍｇ／ｍｌなど．０１～１０ｍｇ／ｍｌであり得る。
【0137】
本発明の抗体を用いた治療は、化学療法、放射線、幹細胞治療、外科手術 治療される障害に対して有効な他の治療と組み合わせることができる。ＢＣＭＡに対する抗体と共に投与することができる他の薬剤の有用なクラスとしては、例えば、癌性細胞上で発現される他の受容体に対する抗体、抗チューブリン薬（例えば、アウリスタチン）、ＤＮＡ小溝結合剤（例えば、ＰＢＤ）、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、モノ（白金）、ビス（白金）、ならびに三核白金錯体及びカルボプラチンなどの白金錯体）、アントラサイクリン、抗生物質、抗葉酸剤、代謝拮抗薬、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ化ピリミジン、イオノフォア、レキシトロプシン、ニトロソウレア、プラチノール、予備形成化合物、プリン代謝拮抗薬、ピューロマイシン、放射線増感剤、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドなどが挙げられる。癌に関して前述の同じ追加治療が免疫媒介障害にも使用され得る。免疫媒介障害の追加の薬剤としては、マスト細胞の脱顆粒阻害剤、抗ヒスタミン、コルチコステロイド、ＮＳＡＩＤ、アザチオプリン、シクロホスファミド、ロイケラン、及びシクロスポリンなどの免疫抑制剤、ならびにＴｙｓａｂｒｉ（登録商標）またはＨｕｍｉｒａ（登録商標）などの抗炎症薬が挙げられる。
【0138】
上述の他の薬剤もしくはレジメンのうちのいずれかを単独でまたは抗体薬物複合体として任意選択で組み合わせた、抗ＢＣＭＡ抗体を用いた治療により、癌に罹患する患者の無増悪生存期間中央値または全生存期間は、特に再発性または難治性である場合に、同じ治療（例えば、化学療法）であるが抗ＢＣＭＡ抗体を含まないものと比較して、少なくとも３０％または４０％だが、好ましくは５０％、６０％～７０％、またはさらには１００％以上増加し得る。加えてまたは代替的に、抗ＢＣＭＡ抗体を単独で、または抗体－薬物複合体として含む治療（例えば、標準的な化学療法）により、腫瘍を有する患者の完全奏効率、部分奏効率、または客観的奏効率（完全＋部分）は、同じ治療（例えば、化学療法）であるが抗ＢＣＭＡ抗体を含まないものと比較して、少なくとも３０％または４０％だが、好ましくは５０％、６０％～７０％、またはさらには１００％増加し得る。
【0139】
典型的には、臨床試験（例えば、第ＩＩ相、第ＩＩ／ＩＩＩ相、または第ＩＩＩ相試験）では、標準的療法に加えて抗ＢＣＭＡ抗体を用いて治療した患者の無増悪生存率及び／または奏効率中央値を、標準的な療法のみ（またはそれにプラセボを加えたもの）を受けた患者の対照群と比較した場合の前述した増加は、統計的に有意であり、例えば、ｐ＝０．０５もしくは０．０１、またはさらには０．００１レベルであった。完全奏効率及び部分奏効率は、癌臨床試験で一般に使用される客観的基準、例えば、国立がん研究所及び／または食品医薬品局が記載しているかまたは認めているものによって決定される。
【0140】
ＶＩＩＩ．他の用途
本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ抗体は、臨床診断もしくは治療または研究との関連において、ＢＣＭＡの検出に使用され得る。癌におけるＢＣＭＡの発現は、その癌が本発明の抗体による治療に適していることを示す。本抗体は、ＢＣＭＡを保有する細胞及び種々の刺激に対するそれらの応答の検出に関する実験研究のための研究用試薬としても販売され得る。かかる使用においては、モノクローナル抗体は、蛍光分子、スピン標識分子、酵素、またはラジオアイソタイプによって標識され得、ＢＣＭＡのアッセイを行うために必要な試薬全てを含むキットの形態で提供され得る。本抗体を使用して、ＢＣＭＡタンパク質を、例えば親和性クロマトグラフィーによって精製することもできる。
本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ抗体は、臨床診断もしくは治療または研究との関連において、ＢＣＭＡの検出に使用され得る。癌におけるＢＣＭＡの発現は、その癌が本発明の抗体による治療に適していることを示す。本抗体は、ＢＣＭＡを保有する細胞及び種々の刺激に対するそれらの応答の検出に関する実験研究のための研究用試薬としても販売され得る。かかる使用においては、モノクローナル抗体は、蛍光分子、スピン標識分子、酵素、またはラジオアイソタイプによって標識され得、ＢＣＭＡのアッセイを行うために必要な試薬全てを含むキットの形態で提供され得る。本抗体を使用して、ＢＣＭＡタンパク質を、例えば親和性クロマトグラフィーによって精製することもできる。
【0141】
本発明の任意の特徴、ステップ、要素、実施形態、または態様は、具体的に別途記載のない限り、任意のその他と組み合わせて使用され得る。本発明は、明確性及び理解の目的に関して、図示及び例によりある程度詳細に記載されてきたが、ある特定の変更及び修正が付属の特許請求の範囲の範囲内で実践され得ることは明らかであろう。
【実施例0142】
実施例１：抗体の開発
組換えＢＣＭＡ細胞外ドメイン（ＢＣＭＡ ＥＣＤ）の調製
ヒト（アミノ酸１～５１）及びマウスＢＣＭＡ（アミノ酸１～４６）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をクローニングし、ＧＳＴ融合タンパク質（ｐＧＥＸ４Ｔ１；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）として発現させた。ＢＣＭＡ融合タンパク質をグルタチオン－セファロースで捕捉し、トロンビンによるプロテアーゼ消化によりＢＣＭＡ ＥＣＤを放出することにより、精製したＢＣＭＡ ＥＣＤ を得た。その後、ベンズアミジンセファロースによりトロンビンを除去した。
組換えＢＣＭＡ細胞外ドメイン（ＢＣＭＡ ＥＣＤ）の調製
ヒト（アミノ酸１～５１）及びマウスＢＣＭＡ（アミノ酸１～４６）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をクローニングし、ＧＳＴ融合タンパク質（ｐＧＥＸ４Ｔ１；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）として発現させた。ＢＣＭＡ融合タンパク質をグルタチオン－セファロースで捕捉し、トロンビンによるプロテアーゼ消化によりＢＣＭＡ ＥＣＤを放出することにより、精製したＢＣＭＡ ＥＣＤ を得た。その後、ベンズアミジンセファロースによりトロンビンを除去した。
【0143】
悪性Ｂ細胞系上のＢＣＭＡ発現の特定
ＢＣＭＡ用の市販の抗体であるＶｉｃｋｙ－１（Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、多発性骨髄腫細胞系に対して定量的フローサイトメトリーを行った。結果は、ＢＣＭＡが試験した骨髄腫系の中で広く見られることを示す。ＮＣＩ Ｈ９２９は、ＢＣＭＡに関して陽性細胞表面染色を示したが、ＢＲ３またはＴＡＣＩのいずれかの発現を欠いた。ＮＣＩ Ｈ９２９はＢＣＭＡを発現したが、ＢＲ３またはＴＡＣＩを発現しなかったため、ＢＣＭＡハイブリドーマの細胞に基づくスクリーニングに使用された。
ＢＣＭＡ用の市販の抗体であるＶｉｃｋｙ－１（Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、多発性骨髄腫細胞系に対して定量的フローサイトメトリーを行った。結果は、ＢＣＭＡが試験した骨髄腫系の中で広く見られることを示す。ＮＣＩ Ｈ９２９は、ＢＣＭＡに関して陽性細胞表面染色を示したが、ＢＲ３またはＴＡＣＩのいずれかの発現を欠いた。ＮＣＩ Ｈ９２９はＢＣＭＡを発現したが、ＢＲ３またはＴＡＣＩを発現しなかったため、ＢＣＭＡハイブリドーマの細胞に基づくスクリーニングに使用された。
【0144】
トランスフェクトされたＢＣＭＡ細胞系の開発
ＨＥＫ ２９３細胞を完全長ＢＣＭＡクローンまたは空のベクターのいずれかでトランスフェクトすることにより、安定した細胞系を開発した。フローサイトメトリーにより、トランスフェクトされたＢＣＭＡ（２９３： ＢＣＭＡ）の表面上でのＢＣＭＡの陽性発現を確認したが、ベクター空対照プラスミド（２９３：ベクター）では確認されなかった。その後、これらの細胞系をツールとして使用して、クローニングしたＢＣＭＡ抗体の特異性を確認した。
ＨＥＫ ２９３細胞を完全長ＢＣＭＡクローンまたは空のベクターのいずれかでトランスフェクトすることにより、安定した細胞系を開発した。フローサイトメトリーにより、トランスフェクトされたＢＣＭＡ（２９３： ＢＣＭＡ）の表面上でのＢＣＭＡの陽性発現を確認したが、ベクター空対照プラスミド（２９３：ベクター）では確認されなかった。その後、これらの細胞系をツールとして使用して、クローニングしたＢＣＭＡ抗体の特異性を確認した。
【0145】
実施例２：クローニングされていないハイブリドーマウェルの免疫化及びスクリーニング抗血清の免疫化及びスクリーニング
我々の免疫化戦略は、リガンド結合ドメインの内部及び外部のエピトープが抗体（図１Ａ及び１Ｂ）の標的にされ得るように、ＢＣＭＡ ＥＣＤのアミノ酸１～５０を使用した
ＫＬＨ複合体化ＢＣＭＡ ＥＣＤは、市販の供給源（Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から生成された。最大免疫応答がＥＬＩＳＡによって検出されるまで、Ｔｉｔｅｒｍａｘアジュバントを使用してＫＬＨ複合体化ＢＣＭＡ でラットを免疫化した。免疫化したラットの血清も、プレートに基づくアッセイにおいてＡＰＲＩＬ結合の遮断能力に関してスクリーニングされた。抗血清が顕著なヒトＢＣＭＡ抗体の力価を有し、強固な遮断活性を示したため、ラット２～３が融合のために選択された。
我々の免疫化戦略は、リガンド結合ドメインの内部及び外部のエピトープが抗体（図１Ａ及び１Ｂ）の標的にされ得るように、ＢＣＭＡ ＥＣＤのアミノ酸１～５０を使用した
ＫＬＨ複合体化ＢＣＭＡ ＥＣＤは、市販の供給源（Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から生成された。最大免疫応答がＥＬＩＳＡによって検出されるまで、Ｔｉｔｅｒｍａｘアジュバントを使用してＫＬＨ複合体化ＢＣＭＡ でラットを免疫化した。免疫化したラットの血清も、プレートに基づくアッセイにおいてＡＰＲＩＬ結合の遮断能力に関してスクリーニングされた。抗血清が顕著なヒトＢＣＭＡ抗体の力価を有し、強固な遮断活性を示したため、ラット２～３が融合のために選択された。
【0146】
記載されるように、ラット２～３からの脾臓細胞を採取し、Ｘ－６３．Ａｇ８．６５３．３．１２．１１マウス骨髄腫細胞に融合し、（Ｇｏｄｉｎｇ，１９８９）選択した。得られたハイブリドーマからの培養上清を、精製したｈＢＣＭＡ－ＧＳＴを使用してＥＬＩＳＡによりスクリーニングした（図２のフローチャートを参照されたい）。８０の陽性ウェルが特定され、拡大のために選択された。８０の陽性ウェルのうち６０が、拡大後、ＥＬＩＳＡによりＯＤ＞０．５を示し続けた。次いで、これらの６０のクローニングされていないハイブリドーマウェルは、細胞に基づく結合、リガンド遮断活性、及びマウスＢＣＭＡに対する交差反応性に関する二次アッセイにおいてスクリーニングされた。これにより、１２の有力なＢＣＭＡハイブリドーマウェルの特定に至った。これらの１２の有力なウェルからの細胞結合データ及びリガンド遮断活性を図３に要約する。ハイブリドーマウェル１７は、市販のモノクローナルＶｉｃｋｙ－１（Ａｌｅｘｉｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）に優先する細胞結合及びリガンド遮断活性を示した。８つのウェル（図３において赤色の星印で示される）は、ＢＣＭＡ陽性細胞を結合するか、またはリガンド結合を遮断するそれらの能力に基づいてクローニングに使用された。
【0147】
実施例３：クローンハイブリドーマの特徴付け
細胞結合及びリガンド遮断活性。
ハイブリドーマウェル１１、１７、２０、２９、４０、４５、及び７０は、２回の限定希釈クローニングを受けた。これ以降、抗体は、表１に示される形式上のクローンＩＤにより表示される。２９３：ベクター対照細胞ではなく、抗体の２９３：ＢＣＭＡ対照細胞への抗体の特異的結合は、抗体がＢＣＭＡに結合することを確認する。
細胞結合及びリガンド遮断活性。
ハイブリドーマウェル１１、１７、２０、２９、４０、４５、及び７０は、２回の限定希釈クローニングを受けた。これ以降、抗体は、表１に示される形式上のクローンＩＤにより表示される。２９３：ベクター対照細胞ではなく、抗体の２９３：ＢＣＭＡ対照細胞への抗体の特異的結合は、抗体がＢＣＭＡに結合することを確認する。
【表1】
【0148】
新しいＢＣＭＡ抗体のリガンド遮断活性を、クローニングされていないマスターウェルからの上清、クローニングされたウェルからの上清、及びクローニングされたウェルからの精製した抗体を使用して比較した（図４）。市販の抗体を陽性対照として使用した。ＳＧ－１６．１７は、クローニングされたハイブリドーマウェルからの培養上清を使用して、ＡＰＲＩＬ結合の顕著な遮断をもたらした。ＡＰＲＩＬ結合のＳＧ１６．１７遮断の滴定は、精製したＳＧ１６．１７及び市販の抗体を使用して、別個の実験において行われた（図５）。精製したＳＧ１６．１７は、市販の抗体と比較したとき、類似する濃度にわたって改善された遮断活性を示した。ＳＧ－１６．４５は、Ａｐｒｉｌ結合の用量依存性阻害を示したが、ＳＧ－１６．１７ほど強くなかった。残りのＢＣＭＡ抗体（ＳＧ－１６．１１、ＳＧ１６．２０、ＳＧ１６．２９、ＳＧ１６．４０、及びＳＧ１６．７０）のリガンド遮断活性は、より軽度であった。ある特定の遮断ＢＣＭＡ抗体は、ＳＧ－１６．１７で観察されたように、ＡＰＲＩＬ結合の＞７５％阻害を示す。ＳＧ－１６．１１、ＳＧ－１６．２０、ＳＧ－１６．２９、ＳＧ－１６．４０、及びＳＧ－１６．７０を含むより「軽度」な遮断抗体は、ＡＰＲＩＬ結合に関して約３０％の阻害を示した（図４）。
【0149】
ＢＡＦＦが固定化されたＢＣＭＡを結合する能力も、精製したＢＣＭＡ抗体の存在下、または不在下で分析された。ＢＣＭＡ抗体ＳＧ１６．１７、ＳＧ１６．４０、ＳＧ１６．２０、及びＳＧ１７．７０による前処理は全て、ＢＣＭＡへのＢＡＦＦ結合の滴定可能な阻害をもたらした。相対的な阻害は、抗体処理の不在下で、ＢＡＦＦの固定化されたＢＣＭＡへの結合により決定された（図６、星印）。まとめると、図５及び６のデータは、ＢＣＭＡ抗体がＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦのＢＣＭＡへのリガンド結合を遮断し、それにより、Ｂ細胞生存シグナルと干渉することができることを示す。
【0150】
実施例４：ＡＤＣＣ及びＡＤＣとしての細胞傷害性に関するＳＧ１６．１７及びＳＧ１６．４５抗体の試験
ラットＶＨ及びＶＬドメインをそれぞれ野生型ヒトＩｇＧ１重鎖及びκ軽鎖定常ドメインに融合することにより、ＳＧ１６．１７抗体をラット－ヒトキメラＩｇＧに変換した。ｃＳＧ１６．１７野生型と表示されるキメラ抗体は、親抗体ＳＧ１６．１７と比較したとき、類似する抗原結合特性を示した。次に、我々は、ＡＤＣＣを強化することが知られるＦｃ突然変異Ｓ２３９Ｄ：Ａ３３０Ｌ：Ｉ３３２Ｅを導入してｃＳＧ１６．１７突然変異形態を生成した。ｃＳＧ１６．１７野生型と同様に、Ｆｃ三重突然変異形態の生成により、ｃＳＧ１６．１７突然変異形態の抗原結合特性は改変されなかった。精製した天然のキラー細胞を用いたＡＤＣＣアッセイにおけるｃＳＧ１６．１７野生型及びｃＳＧ１６．１７突然変異形態の評価は、ＪＪＮ３細胞及びＵ２６６細胞の用量依存性溶解をもたらし、一方で顕著な溶解は、非結合ヒトＩｇＧ対照では観察されなかった。ｃＳＧ１６．１７野生型抗体は、ＪＪＮ３細胞上で限定されたＡＤＣＣ活性を示し、これは、ｃＳＧ１６．１７突然変異形態により、効力が約１００倍、そして効果が＞２倍（最大溶解）増加した。同様に、Ｕ２６６細胞に関して、ｃＳＧ１６．１７突然変異形態のＡＤＣＣ活性は、親キメラ抗体と比較して、効力が約１００倍、そして効果が２倍強化された。ＪＪＮ３細胞及びＵ２６６細胞の両方の最大溶解に必要とされるｃＳＧ１６．１７突然変異形態の濃度は、約１００ｐｍｏｌ／Ｌであった。対照的に、ＪＪＮ３細胞及びＵ２６６細胞上でのｃＳＧ１６．１７の解離定数（ＫＤ）は、それぞれ、１５及び１０ｎｍｏｌ／Ｌと推定された。よって、ｃＳＧ１６．１７突然変異形態による最大溶解は、飽和結合に達するのに必要とされる濃度よりも非常に低い濃度で達成された。
ラットＶＨ及びＶＬドメインをそれぞれ野生型ヒトＩｇＧ１重鎖及びκ軽鎖定常ドメインに融合することにより、ＳＧ１６．１７抗体をラット－ヒトキメラＩｇＧに変換した。ｃＳＧ１６．１７野生型と表示されるキメラ抗体は、親抗体ＳＧ１６．１７と比較したとき、類似する抗原結合特性を示した。次に、我々は、ＡＤＣＣを強化することが知られるＦｃ突然変異Ｓ２３９Ｄ：Ａ３３０Ｌ：Ｉ３３２Ｅを導入してｃＳＧ１６．１７突然変異形態を生成した。ｃＳＧ１６．１７野生型と同様に、Ｆｃ三重突然変異形態の生成により、ｃＳＧ１６．１７突然変異形態の抗原結合特性は改変されなかった。精製した天然のキラー細胞を用いたＡＤＣＣアッセイにおけるｃＳＧ１６．１７野生型及びｃＳＧ１６．１７突然変異形態の評価は、ＪＪＮ３細胞及びＵ２６６細胞の用量依存性溶解をもたらし、一方で顕著な溶解は、非結合ヒトＩｇＧ対照では観察されなかった。ｃＳＧ１６．１７野生型抗体は、ＪＪＮ３細胞上で限定されたＡＤＣＣ活性を示し、これは、ｃＳＧ１６．１７突然変異形態により、効力が約１００倍、そして効果が＞２倍（最大溶解）増加した。同様に、Ｕ２６６細胞に関して、ｃＳＧ１６．１７突然変異形態のＡＤＣＣ活性は、親キメラ抗体と比較して、効力が約１００倍、そして効果が２倍強化された。ＪＪＮ３細胞及びＵ２６６細胞の両方の最大溶解に必要とされるｃＳＧ１６．１７突然変異形態の濃度は、約１００ｐｍｏｌ／Ｌであった。対照的に、ＪＪＮ３細胞及びＵ２６６細胞上でのｃＳＧ１６．１７の解離定数（ＫＤ）は、それぞれ、１５及び１０ｎｍｏｌ／Ｌと推定された。よって、ｃＳＧ１６．１７突然変異形態による最大溶解は、飽和結合に達するのに必要とされる濃度よりも非常に低い濃度で達成された。
【0151】
我々は、抗体当たり８つの薬物の化学量論によりｖｃＭＭＡＦを使用して、ＳＧ１６．１７及びＳＧ１６．４５がＡＤＣとして細胞傷害性を誘導する能力を評価した。ＳＧ１６．１７またはＳＧ１６．４５－ｖｃＭＭＡＦ８は、Ｈ９２９細胞に対して強く細胞傷害性であった。非結合対照ＡＤＣまたは非複合体化抗体を使用した細胞生存率の低下は観察されなかった。我々は、ＪＪＮ３細胞系及びＵ２６６細胞系を含む他のＭＭ細胞系にわたるＳＧ１６．１７ ＡＤＣの効力も検査した。ＳＧ１６．１７－ｖｃＭＭＡＦ８は、３つ全てのＭＭ細胞系にわたって一定かつ高い効力（ＩＣ５０値≦１３０ｐｍｏｌ／Ｌ）を示し、一方でＳＧ１６．４５－ｖｃＭＭＡＦ８は、より大きい変動性及びより小さい全体的な効力を示した。
【0152】
実施例５：ＦｃγＲＩＩＩａへの結合及びＦｃγＲＩＩＩａを通したシグナル伝達に関するＳＧ１６．１７抗体の試験
結合アッセイに関して、ＣＨＯ細胞をＦｃγＲＩＩＩａ（ｈＣＤ１６）でトランスフェクトし、標識されたｈ００抗体の結合を、野生型 ＩｇＧ１及びＩｇＧ１ Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ遺伝子型を有するキメラＳＧ１６．１７、ならびに種々のＩｇＧ１対照抗体との競合で測定した。図１２は、キメラＳＧ１６．１７が２つの対照抗体のリツキシマブ及びｃＯＫＴ９よりも強く競合したことを示す。ＳＧ１６．１７の突然変異形態は、野生型ＩｇＧ１形態よりも強く競合した。シグナル伝達アッセイは、ＢＣＭＡを発現するＵ２６６標的細胞、ＦｃγＲＩＩＩａを発現し、ＮＦＡＴ応答要素からルシフェラーゼレポーターを発現するように操作されたＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、及びＢｉｏ－Ｇｌｏインジケーターを使用する。ｃＳＧ１６．１７ Ｇ１ ＷＴ及びＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅの両方は、ＦｃγＲＩＩＩａシグナル伝達を誘発し、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ形態からのシグナル伝達がより強かった（図１３）。
実施例６：ＳＧ１６．１７のヒト化
結合アッセイに関して、ＣＨＯ細胞をＦｃγＲＩＩＩａ（ｈＣＤ１６）でトランスフェクトし、標識されたｈ００抗体の結合を、野生型 ＩｇＧ１及びＩｇＧ１ Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ遺伝子型を有するキメラＳＧ１６．１７、ならびに種々のＩｇＧ１対照抗体との競合で測定した。図１２は、キメラＳＧ１６．１７が２つの対照抗体のリツキシマブ及びｃＯＫＴ９よりも強く競合したことを示す。ＳＧ１６．１７の突然変異形態は、野生型ＩｇＧ１形態よりも強く競合した。シグナル伝達アッセイは、ＢＣＭＡを発現するＵ２６６標的細胞、ＦｃγＲＩＩＩａを発現し、ＮＦＡＴ応答要素からルシフェラーゼレポーターを発現するように操作されたＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、及びＢｉｏ－Ｇｌｏインジケーターを使用する。ｃＳＧ１６．１７ Ｇ１ ＷＴ及びＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅの両方は、ＦｃγＲＩＩＩａシグナル伝達を誘発し、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ形態からのシグナル伝達がより強かった（図１３）。
実施例６：ＳＧ１６．１７のヒト化
【表2】
【表3】
【表4】
【表5】
【0153】
ＳＧ１６．１７を発現するラットハイブリドーマのラット重鎖及び軽鎖可変領域を配列決定した。ＨＶ１～２／ＨＪ３（配列番号９）またはＨＶ１～４６／ＨＪ３（配列番号１０）を重鎖のヒトアクセプター配列として使用し、ＫＶ１－１２／ＫＪ５（配列番号１８）を軽鎖のヒトアクセプター配列として使用した。
【0154】
ラットドナー配列とヒトアクセプター配列との間で異なる位置は、Ｈ８、Ｈ２０、Ｈ４８、Ｈ６７、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７６、Ｈ７８、Ｈ８０、Ｈ８８、Ｈ９１、Ｈ９３、Ｌ４０、Ｌ４６、Ｌ４８、Ｌ７８、Ｌ８５、及びＬ８７を含んだ。これらの残基の異なる順列は、異なるヒト化重鎖及び軽鎖配列の復帰突然変異として含まれた。Ｋａｂａｔ ＣＤＲにおけるいくつかのラット残基もヒトアクセプター配列の対応する残基との代置に関して試験された。これらの残基位置は、Ｈ３４、Ｈ５０、Ｈ５８、Ｈ６０、Ｈ６１、Ｈ６２、Ｈ６４、及びＨ６５、ならびにＬ２４及びＬ５３であった。６つのヒト化重鎖変異型及び４つのヒト化軽鎖変異型を設計し、発現させた。表２及び３は、各ヒト化変異型鎖におけるヒトアクセプター配列、復帰突然変異（ドナーフレームワーク残基）、及びＣＤＲ置換（アクセプターＣＤＲ残基）を示す。表４及び５は、ヒト化変異型鎖の各々における復帰突然変異と考えられる位置の各々を占めるアミノ酸を示す。これらの表は、最も近いヒト生殖系列配列と同一の残基のパーセントも示す。最近のＩＮＮガイドラインによると、重鎖及び軽鎖の両方においてヒト生殖系列配列と少なくとも８５％の同一性を有する抗体のみがヒト化と称され得る。図７～９は、ラット可変領域及びヒトアクセプター配列を有するヒト化重鎖可変領域の整合を示す。図１０及び１１は、ラット可変領域及びヒトアクセプター配列を有するヒト化軽鎖可変領域の整合を示す。可変軽鎖のＣ末端アルギニン（Ｒ）は、代替的に、軽鎖定常領域のＮ末端アルギニンと見なされ得る。
【0155】
６つのヒト化重鎖及び４つのヒト化軽鎖は、細胞当たり５０，０００個のＢＣＭＡの分子を発現するＮＣＩ－Ｈ９２９細胞上に発現されるＢＣＭＡへの結合に関して、２４全ての可能な順列において試験された。結果を下の表６に示す。簡潔に、全てのヒト化軽鎖は、良好な結合を示した。ヒト化重鎖のうち、変異型ＶＨ１、ＶＨ３、及びＶＨ５の全ては、キメラまたはラットのいずれかのＳＧ１６．１７抗体と比較して、改善された結合を示した。
【表6】
【0156】
ＮＣＩ－Ｈ９２９アッセイで最良に機能するヒト化抗体（即ち、ＶＨ１、ＶＨ３、またはＶＨ５重鎖を含有するものは、濃度点の全範囲でのＵ２６６細胞への結合に関してさらに試験された。このアッセイにおいて、ＶＨ１重鎖を含有するヒト化抗体（どのヒト化軽鎖変異型が含まれたかにかかわらない）は、ラットまたはキメラＳＧ１６．１７と比較して強化された結合を示した。ＶＨ３またはＶＨ５重鎖を含有するヒト化抗体（どのヒト化軽鎖変異型が含まれたかにかかわらない）は、ラットまたはキメラＳＧ１６．１７結合と実験誤差内の同じ結合を示した。ＶＨ２またはＶＨ６可変領域を含有するヒト化抗体は、どのヒト化軽鎖変異型が含まれたかにかかわらず、ラットまたはキメラＳＧ１６．１７と比較して低減した結合を示した。
【0157】
ＮＣＩ－Ｈ９２９アッセイで最良に機能するヒト化抗体は、下の表７に示されるように、タンパク質発現レベル、単量体レベル、及びヒト生殖系との配列同一性パーセントに関しても比較された。
【表7】
【0158】
ＶＨ３ ＶＫ２ヒト化抗体は、それがヒトＢＣＭＡに関してラット及びマウスＳＧ１６．１７抗体と同じ結合親和性（実験誤差内）、重鎖及び軽鎖両方の可変領域におけるヒト生殖系列配列と８５％超、良好な発現、及び高単量体パーセントを有することに基づいて有力なヒト化抗体として選択された。
実施例７：ＳＧ１６．４５のヒト化
実施例７：ＳＧ１６．４５のヒト化
【表8】
【表9】
【表10】
【表11】
【0159】
ＳＧ１６．４５を発現するラットハイブリドーマのラット重鎖及び軽鎖可変領域を配列決定した。ＨＶ３～２３／ＨＪ３（配列番号２４）を重鎖のヒトアクセプター配列として使用し、ＫＶ３～２０／ＫＪ２（配列番号３４）を軽鎖のヒトアクセプター配列として使用した。
【0160】
ラットドナーとヒトアクセプター配列との間で異なる可変領域フレームワーク位置には、Ｈ３０、Ｈ３７、Ｈ４８、Ｈ６７、Ｈ９３、Ｈ９４、及びＨ１０７、ならびに位置Ｌ１４、Ｌ１９、Ｌ２１、Ｌ３８、Ｌ５８、Ｌ７１、及びＬ７８が含まれた。これらの残基の異なる順列は、異なるヒト化重鎖及び軽鎖配列の復帰突然変異として含まれた。Ｋａｂａｔ ＣＤＲにおけるいくつかのラット残基もヒトアクセプター配列の対応する残基との代置に関して試験された。これらの残基の位置は、Ｈ５０、Ｈ６０、Ｌ２４、及びＬ２６であった。６つのヒト化重鎖変異型及び４つのヒト化軽鎖変異型を設計し、発現させた。表８及び９は、各ヒト化変異型鎖におけるヒトアクセプター配列、復帰突然変異（ドナーフレームワーク残基）、及びＣＤＲ置換（アクセプターＣＤＲ残基）を示す。表１０及び１１は、ヒト化変異型鎖の各々における復帰突然変異と考えられる位置の各々を占めるアミノ酸を示す。これらの表は、最も近いヒト生殖系列配列と同一の残基のパーセントも示す。最近のＩＮＮガイドラインによると、重鎖及び軽鎖の両方においてヒト生殖系列配列と少なくとも８５％同一の抗体のみがヒト化と称され得る。図１４～１７は、ラット可変領域及びヒトアクセプター配列を有するヒト化重鎖可変領域の整合を示す。図１８及び１９は、軽鎖可変領域の整合を示す。可変軽鎖のＣ末端アルギニン（Ｒ）は、代替的に、軽鎖定常領域のＮ末端アルギニンと見なされ得る。
【0161】
６つのヒト化重鎖及び４つのヒト化軽鎖は、細胞当たり５０，０００個のＢＣＭＡの分子を発現するＮＣＩ－Ｈ９２９細胞上に発現されるＢＣＭＡへの結合に関して、２４全ての可能な順列において試験された。結果を下の表１２に示す。
【表12】
【0162】
ＮＣＩ－Ｈ９２９アッセイで最良に機能するヒト化抗体は、濃度点の全範囲でのＵ２６６細胞への結合、ならびに発現及び単量体含量、ならびにヒト生殖系列に対する配列同一性に関してさらに比較された（表１３）。
【表13】
【0163】
ＶＨ５ ＶＫ２、ＶＨ１ ＶＫ１、及びＶＨ１ ＶＫ３は、ヒトに対する結合親和性、重鎖及び軽鎖両方の可変領域におけるヒト生殖系列配列に対する配列同一性、良好な発現、及び高パーセントの単量体ＶＨ１ ＶＫ１に基づいて全体的に最良の抗体であり、ＶＨ１ ＶＫ３は、多少高い結合（実験誤差内のラットまたはキメラと同じ）を有するが、ヒト生殖系列に対する配列同一性は低い。
【0164】
実施例８：フコシル化が低減されたｈＳＧ１６．１７またはｈＳＧ１６．４５抗体の合成
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３ ＶＫ２またはｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５ ＶＫ２抗体は、ＣＨＯ細胞において発現された。フコシル化阻害剤である２－フルオロフコースは、非フコシル化抗体をもたらした抗体の産生中の細胞培養培地に含まれた。例えば、Ｏｋｅｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１１０：５４０４－５５４０９（２０１３）を参照されたい。細胞成長のための基礎培地は、フコース不含であり、２－フルオロフコースが培地に添加されて、タンパク質のフコシル化を阻害した。同上。フコースの抗体への組み込みは、ＰＬＲＰ－Ｓクロマトグラフィーを介したＬＣ－ＭＳ及びエレクトロスプレーイオン化四重極ＴＯＦ ＭＳにより測定された。同上。
ｈＳＧ１６．１７ ＶＨ３ ＶＫ２またはｈＳＧ１６．４５ ＶＨ５ ＶＫ２抗体は、ＣＨＯ細胞において発現された。フコシル化阻害剤である２－フルオロフコースは、非フコシル化抗体をもたらした抗体の産生中の細胞培養培地に含まれた。例えば、Ｏｋｅｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１１０：５４０４－５５４０９（２０１３）を参照されたい。細胞成長のための基礎培地は、フコース不含であり、２－フルオロフコースが培地に添加されて、タンパク質のフコシル化を阻害した。同上。フコースの抗体への組み込みは、ＰＬＲＰ－Ｓクロマトグラフィーを介したＬＣ－ＭＳ及びエレクトロスプレーイオン化四重極ＴＯＦ ＭＳにより測定された。同上。
【0165】
実施例９：ＳＣＩＤまたはＮＳＧマウスにおけるｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性
図２０Ａ～Ｃは、ＳＣＩＤマウスのＭＭ１Ｓ播種性腫瘍モデルにおける複数回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示した。動物にＭＭ１Ｓ細胞をＩＶで移植し、投薬は移植９日後に開始された。動物の生存は、経時的に追跡された。１群当たりＮ＝８匹の動物。ＢＣＭＡコピー＃＝７，０００、ＣＤ３８コピー＃＝１４，０００。Ａ）ｉｐで毎週１ｍｇ／ｋｇを５週間、Ｂ）ｉｐで毎週３ｍｇ／ｋｇを５週間、Ｃ）ｉｐで毎週１０ｍｇ／ｋｇを５週間。ＳＣＩＤ動物は、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰを媒介するために、エフェクター細胞を有した。この図のデータは、ｈＳＧ１６．１７ ＳＥＡがダラツムバム（ＣＤ３８標的Ａｂと比較して生存を改善することを示す。非結合ｈ００対照は活性を示さなかった。
図２０Ａ～Ｃは、ＳＣＩＤマウスのＭＭ１Ｓ播種性腫瘍モデルにおける複数回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示した。動物にＭＭ１Ｓ細胞をＩＶで移植し、投薬は移植９日後に開始された。動物の生存は、経時的に追跡された。１群当たりＮ＝８匹の動物。ＢＣＭＡコピー＃＝７，０００、ＣＤ３８コピー＃＝１４，０００。Ａ）ｉｐで毎週１ｍｇ／ｋｇを５週間、Ｂ）ｉｐで毎週３ｍｇ／ｋｇを５週間、Ｃ）ｉｐで毎週１０ｍｇ／ｋｇを５週間。ＳＣＩＤ動物は、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰを媒介するために、エフェクター細胞を有した。この図のデータは、ｈＳＧ１６．１７ ＳＥＡがダラツムバム（ＣＤ３８標的Ａｂと比較して生存を改善することを示す。非結合ｈ００対照は活性を示さなかった。
【0166】
図２１Ａ～Ｃは、ＮＳＧマウスのＥＪＭ播種性腫瘍モデルにおける単回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示した。ＮＳＧ動物は、ＮＫ細胞を有せず、最小限の活性マクロファージ動物にＩＶでＥＪＭ細胞を移植し、移植５日後にｉｐで単一用量の抗体が与えられた。動物の生存は、経時的に追跡された。１群当たりＮ＝８匹の動物。ＢＣＭＡコピー＃＝４５，０００。ＣＤ３８コピー＃＝４７，０００。ＣＳ１コピー＃＝１４，０００。Ａ）１ｍｇ／ｋｇ用量、Ｂ）３ｍｇ／ｋｇ用量、Ｃ）１０ｍｇ／ｋｇ用量。この図のデータは、ｈＳＧ１６．１７ ＳＥＡがダラツムバム（ＣＤ３８標的Ａｂ）及びエロツズマブ（ＣＳ１標的Ａｂ）と等しい、またはそれより大きい程度で生存を増加させることを示す。ＷＴ ＳＧ１６．１７も生存の増加を誘導することができる。非結合ｈ００対照は最大用量で活性を示さなかった。これらの動物においてエフェクター細胞は最小限しかないため、ＷＴ及びＳＥＡ ｈＳＧ１６．１７抗体の活性は、ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦ増殖シグナルの遮断による可能性が高い。
【0167】
図２２は、ＮＳＧマウスのＮＣＩ－Ｈ９２９－ルシフェラーゼ播種性腫瘍モデルにおける複数回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示した。ＮＳＧ動物にＮＣＩ－Ｈ９２９ルシフェラーゼ細胞を移植した。抗体の投薬は、生物発光が骨髄で観察された、移植２１日後に開始された。合計５用量を、ｉｐで毎週投薬した。１群当たりＮ＝５匹の動物。ＢＣＭＡコピー＃＝２５，０００。ＣＤ３８コピー＃＝４５，０００。ＣＳ１コピー＃＝３，０００。平均発光は、未処置及びナイーブ動物と比較して、経時的にプロットされる。ｈＳＧ１６．１７ ＳＥＡは、ダラツムバム（ＣＤ３８標的Ａｂ）及びエロツズマブ（ＣＳ１標的Ａｂ）と比較して非常に良好な活性を示した。ｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡ １０ｍｇ／ｋｇ 群で観察された発光の増加が１匹の動物によりもたらされた。
【0168】
図２３Ａ及び２３Ｂは、ＮＳＧマウスのＮＣＩ－Ｈ９２９－ルシフェラーゼ播種性腫瘍モデルにおける単回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示した。ＮＳＧ動物にＮＣＩ－Ｈ９２９ルシフェラーゼ細胞を移植した。抗体の投薬は、生物発光が骨髄で観察された、注射２１日後に開始された。ＩＰで１回投薬。１群当たりＮ＝５匹の動物。Ａ）３ｍｇ／ｋｇ ＷＴ対ＳＥＡ抗体。Ｂ）ｈＳＧ１６．１７ ＳＥＡの投薬範囲。この図のデータは、ｈＳＧ１６．１７ ＳＥＡが０．３ｍｇ／ｋｇの単一用量で活性であり得、ｈＳＧ１６．１７ＳＥＡがそのＷＴ（フコシル化）対応物よりも活性であり得ることを示す。
【0169】
図２３Ａ及び２３Ｂは、ＮＳＧマウスのＮＣＩ－Ｈ９２９－ルシフェラーゼ播種性腫瘍モデルにおける単回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性を示した。ＮＳＧ動物にＮＣＩ－Ｈ９２９ルシフェラーゼ細胞を移植した。抗体の投薬は、生物発光が骨髄で観察された、注射２１日後に開始された。ＩＰで１回投薬。１群当たりＮ＝５匹の動物。Ａ）３ｍｇ／ｋｇ ＷＴ対ＳＥＡ抗体。Ｂ）ｈＳＧ１６．１７ ＳＥＡの投薬範囲。この図のデータは、ｈＳＧ１６．１７ ＳＥＡが０．３ｍｇ／ｋｇの単一用量で活性であり得、ｈＳＧ１６．１７ＳＥＡがそのＷＴ（フコシル化）対応物よりも活性であり得ることを示す。発光に対する作用は、動物生存の延長（データ示さず）を意味する。
【0170】
図２４ ＳＣＩＤマウスのＭＯＬＰ－８－ルシフェラーゼ播種性腫瘍モデルにおける単回投与されたｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡのインビボ活性。ＳＣＩＤ動物にＭＯＬＰ－８ルシフェラーゼ細胞をＩＶにより移植した。抗体の投薬は、生物発光が骨髄で観察された、注射１３日後に開始された。ＩＰで１回投薬。１群当たりＮ＝５匹の動物。ＢＣＭＡコピー＃＝２，０００。発光は、経時的にプロットされる。これらのデータは、２０００のＢＣＭＡコピーのみでも、ｈＳＧ１６．１７－ＳＥＡが顕著な抗腫瘍活性を示すことを示す。ＦｃγＲＩＩまたはＦｃγＲＩＩＩに結合しない脱グリコシル化ＳＥＡ ＢＣＭＡ抗体は、ｈ００ ＳＥＡ非結合対照と類似する活性を示さなかった。これは、このモデルにおけるＦｃ媒介活性の重要性を明らかにする。
【0171】
図２５ ＳＧ１６．１７ ＳＥＡ抗体は、インビトロでのＷＴ抗体と比較して、ＭＭ１Ｒ標的細胞上の改善されたＡＤＣＣ活性を示す。ＮＫ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐヒトＮＫ細胞濃縮キットを使用して、負選択を介してＰＢＭＣから単離し、得られたＣＤ１６＋細胞を定量化した。多発性骨髄腫ＭＭ１Ｒ ＡＤＣＣ標的細胞をクロム－５１で１時間標識した。アッセイプレートに抗体の希釈系列、続いて標的細胞（Ｔ）及びＮＫエフェクター細胞（Ｅ）を１３：１のＥ：Ｔ比で添加した。溶解は、３７℃で４時間後の合計及び自発的放出対照に基づいて計算された。これらのデータは、ＷＴ抗体ならびに臨床抗体のダラツムバム及びエロツズマブに対して、非フコシル化ＳＥＡ ＳＧ１６．１７抗体のＡＤＣＣ活性における顕著な改善を示す。
【0172】
本発明は、理解の明確性の目的に関して詳細に記載されてきたが、ある特定の修正が付属の特許請求の範囲の範囲内で実践され得る。本明細書に引用される受入番号、ウェブサイトなどを含む全ての刊行物及び特許文献は、各々が個々に示される場合と同じ程度に、全ての目的において、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。異なるバージョンの配列、ウェブサイト、または他の参照文献が異なる時点で存在し得る範囲で、有効出願日の参照文献に関連するバージョンを意味する。有効出願日とは、問題の受入番号が開示される最も早い優先日を意味する。別途文脈から明らかでない限り、本発明の任意の要素、実施形態、ステップ、特徴、または態様は、任意のその他と組み合わせて行うことができる。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【配列表】
【外国語明細書】