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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024019760
(43)【公開日】2024-02-14
(54)【発明の名称】皮脂中ビタミンＥ増加剤
(51)【国際特許分類】
A61K 36/86 20060101AFI20240206BHJP
A61K 36/84 20060101ALI20240206BHJP
A61K 36/73 20060101ALI20240206BHJP
A61P 17/16 20060101ALI20240206BHJP
A61K 8/9789 20170101ALI20240206BHJP
A61Q 17/04 20060101ALI20240206BHJP
A61P 3/02 20060101ALI20240206BHJP
A23L 33/105 20160101ALI20240206BHJP
A61K 8/67 20060101ALN20240206BHJP
A23L 2/52 20060101ALN20240206BHJP
A23L 2/38 20210101ALN20240206BHJP
A61K 125/00 20060101ALN20240206BHJP
A61K 133/00 20060101ALN20240206BHJP
A61K 127/00 20060101ALN20240206BHJP
【ＦＩ】
A61K36/86
A61K36/84
A61K36/73
A61P17/16
A61K8/9789
A61Q17/04
A61P3/02 109
A23L33/105
A61K8/67
A23L2/00 F
A23L2/38 C
A23L2/52
A61K125:00
A61K133:00
A61K127:00
【審査請求】未請求
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022122410
(22)【出願日】2022-08-01
(71)【出願人】
【識別番号】591230619
【氏名又は名称】株式会社ナリス化粧品
(72)【発明者】
【氏名】齊藤（奥田） 奈緒美
【テーマコード（参考）】
4B018
4B117
4C083
4C088
【Ｆターム（参考）】
4B018LB08
4B018LB10
4B018LE01
4B018LE05
4B018MD61
4B018ME14
4B018MF01
4B117LC04
4B117LG18
4B117LP01
4C083AA111
4C083AA112
4C083AA122
4C083AB242
4C083AB432
4C083AC012
4C083AC072
4C083AC102
4C083AC122
4C083AC152
4C083AC212
4C083AC352
4C083AC422
4C083AC432
4C083AC442
4C083AC522
4C083AC532
4C083AD332
4C083AD661
4C083AD662
4C083BB46
4C083CC04
4C083CC12
4C083CC19
4C083DD22
4C083DD23
4C083DD27
4C083EE07
4C083EE12
4C083EE13
4C083EE17
4C083FF01
4C088AB12
4C088AB23
4C088AB51
4C088AC01
4C088AC03
4C088AC04
4C088AC05
4C088AC11
4C088BA08
4C088BA09
4C088BA10
4C088MA28
4C088MA35
4C088MA52
4C088MA63
4C088NA14
4C088ZA89
4C088ZC29
(57)【要約】 （修正有）
【課題】皮脂分泌を大きく増減させることなく、皮脂腺から皮膚表面に供給されるビタミンＥ量自体を増加させる剤を提供することを課題とする。
【解決手段】スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物に高い皮脂中ビタミンＥ量増加効果を見出した。
【効果】皮脂腺細胞から分泌される皮脂分泌総量には大きく影響せずに、皮脂中ビタミンＥ量を増加させることができる。皮脂は常時皮膚上に分泌されていることから、皮脂膜中など皮膚表面上に存在するビタミンＥ量が持続的に増加し、ビタミンＥによる紫外線防御効果の向上が期待できる。さらには、紫外線による角層肥厚などを抑制することができるため、特に皮脂腺が存在する毛穴周囲に生じるざ瘡、脂漏性皮膚炎のほか、毛穴の開き、たるみなどの紫外線による各種皮膚症状の抑制が可能となる。
【選択図】図１
【解決手段】スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物に高い皮脂中ビタミンＥ量増加効果を見出した。
【効果】皮脂腺細胞から分泌される皮脂分泌総量には大きく影響せずに、皮脂中ビタミンＥ量を増加させることができる。皮脂は常時皮膚上に分泌されていることから、皮脂膜中など皮膚表面上に存在するビタミンＥ量が持続的に増加し、ビタミンＥによる紫外線防御効果の向上が期待できる。さらには、紫外線による角層肥厚などを抑制することができるため、特に皮脂腺が存在する毛穴周囲に生じるざ瘡、脂漏性皮膚炎のほか、毛穴の開き、たるみなどの紫外線による各種皮膚症状の抑制が可能となる。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する皮脂中ビタミンＥ増加剤。
【請求項2】
スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する皮脂腺細胞からのビタミンＥ分泌促進剤。
【請求項3】
スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する紫外線防御効果向上剤。
【請求項4】
請求項１乃至請求項３いずれか1項に記載の剤を含む、経口投与剤。
【請求項5】
請求項１乃至請求項３いずれか１項に記載の剤を含む、皮膚外用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物を含有する皮脂中のビタミンＥ増加剤、紫外線防御効果向上剤、またはこれらを含む経口投与剤および皮膚外用組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
皮膚の最表面には皮脂や汗の混合物である皮脂膜が存在し、生体からの水分の喪失や外部からの物理的・化学的刺激から皮膚をまもる働きを有する。皮脂膜の主成分である皮脂は、トリグリセリドや遊離脂肪酸、スクアレンなどの脂質を多く含む。皮脂は、毛穴に付属した皮脂腺で産生される。皮脂腺中には皮脂腺細胞が存在し、皮脂はこの皮脂腺細胞で生成され、さらに皮脂腺細胞が破裂することで分泌される（非特許文献１）。皮脂の分泌量には個人差・部位差があるものの、皮脂腺より０．１～２ｍｇ／ｃｍ２／ｍｉｎの量が常時分泌されていると考えられている（非特許文献１）。また皮脂腺が存在する毛穴では、紫外線による皮脂の変質や角層肥厚により、ざ瘡、脂漏性皮膚炎のほか、毛穴の開きやたるみといったトラブルが生じることが報告されている（非特許文献２、３、４）。
【0003】
また皮脂中には脂質のほか、ビタミンＥ（例えばα－トコフェロール）などの油溶性抗酸化物質が含まれることが報告されている（非特許文献５）。特にビタミンＥは、高い抗酸化作用やＵＶＢ吸収作用などを有しているが、一方で、構造的な不安定さから容易に酸化されて皮膚上から消失しやすいため、皮膚上に長時間安定に存在することは難しいと考えられている（非特許文献６）。
【0004】
従来、皮膚上で減少したビタミンＥを補う手段として、例えばビタミンＥや、酢酸トコフェリルなどのビタミンＥ誘導体を外用するといった手段がとられてきた。しかしながら、ビタミンＥの外用では構造的な不安定さを解消することができなく、効果は塗布直後の一時的なものに留まるといった課題があった。加えて、ビタミンＥ誘導体はそのままでは効果が弱く、皮膚に浸透した後にエステラーゼ等の酵素により加水分解を受けて初めてビタミンＥ様の効果を発揮できるため（非特許文献７）、効果の発現までに時間を要するほか、皮膚表面における効果の不十分さなどが課題であった。
【0005】
スイートバイオレットは、ニオイスミレとも呼ばれるスミレ科スミレ属の多年生の植物であり、甘い香気成分が香料として用いられてきた。皮膚に対しては、保湿作用（特許文献１）や脂質過酸化抑制作用（特許文献２）、メラニン産生抑制作用（特許文献３）等が知られているが、皮脂中ビタミンＥに対する作用については全く知られていなかった。
【0006】
バレリアンは、西洋カノコソウとも呼ばれるオミナエシ科カノコソウ属の多年生の植物であり、根茎は、緊張緩和・情緒不安定、神経過敏や不眠症に利用される。その他、皮膚に対してはシワ（特許文献４）や肌荒れ（特許文献５）等の効果が知られているが、皮脂中ビタミンＥに対する作用については全く知られていなかった。
【0007】
レディースマントルは、ハゴロモグサとも呼ばれる植物であり、月経不順や更年期障害に対して薬効を有する。そのほか、皮膚に対してはアレルギー性炎症予防効果（特許文献６）やしわ・肌荒れ予防効果（特許文献７）、ニキビ予防効果（特許文献８）等の効果が知られているが、皮脂中ビタミンＥに対する作用については全く知られていなかった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】化粧品技術者会，ライブラリー 化粧品用語集 皮脂［Ｓｅｂｕｍ， ｓｋｉｎ ｓｕｒｆａｃｅ ｌｉｐｉｄ］，ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｃｃｊ－ｉｆｓｃｃ．ｃｏｍ／ｌｉｂｒａｒｙ／ｇｌｏｓｓａｒｙ＿ｄｅｔａｉｌ／１３６４
【非特許文献2】Ｉｎｔ Ｊ Ｃｏｓｍｅｔ Ｓｃｉ． ２０１５ Ａｕｇ；３７（４）：３５７－６５
【非特許文献3】Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ． ２０００；２０１（２）：１４６－７．
【非特許文献4】Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．Ｊｐｎ．，５０（４）：３２１－３２８、２０１６
【非特許文献5】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１１３（６）：１００６－１０，１９９９
【非特許文献6】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１１０（５）：７５６－６１，１９９８
【非特許文献7】Ｏｒｅｇｏｎ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｖｉｔａｍｉｎ Ｅ ａｎｄ Ｓｋｉｎ Ｈｅａｌｔｈ，ｈｔｔｐｓ：／／ｌｐｉ．ｏｒｅｇｏｎｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／ｍｉｃ／ｈｅａｌｔｈ－ｄｉｓｅａｓｅ／ｓｋｉｎ－ｈｅａｌｔｈ／ｖｉｔａｍｉｎ－Ｅ
【特許文献】
【0009】
【特許文献1】特開２００２－０２０２２５号公報
【特許文献2】特開２００１－１２２７５７号公報
【特許文献3】特開２００１－０４８７７３号公報
【特許文献4】特開２００５－１９４２４６号公報
【特許文献5】特開２００７－１１９４３２号公報
【特許文献6】特開２００３－００２８１１号公報
【特許文献7】特開２００７－１８６４５７号公報
【特許文献8】特開２００５－００８５７２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
上記背景を鑑みると、皮脂中のビタミンＥ量自体を持続的に増加させることができれば、ビタミンＥ減少に伴う皮膚の紫外線防御能の低下、および紫外線の影響を受けて生じるざ瘡、脂漏性皮膚炎、毛穴の開きやたるみといった皮膚のトラブルを抑制することができると推測される。しかしながら過剰な皮脂分泌は脂質による皮膚トラブルを増加させる懸念があるため、分泌される脂質量には大きな影響を与えないことが肝要である。そこで本発明では、皮脂分泌を大きく増減させることなく、皮脂腺から皮膚表面に供給されるビタミンＥ量自体を増加させる剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0011】
上記課題を解決するべく鋭意検討を行った結果、スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物に高い皮脂中ビタミンＥ量増加効果を見出し、本願を完成するに至った。
【0012】
すなわち、本発明は以下の好適な態様を含む。
〔１〕スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する皮脂中ビタミンＥ増加剤。
〔２〕スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する皮脂腺細胞からのビタミンＥ分泌促進剤。
〔３〕スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する紫外線防御効果向上剤。
〔４〕請求項１乃至請求項４いずれか1項に記載の剤を含む、経口投与剤。
〔５〕請求項１乃至請求項４いずれか１項に記載の剤を含む、皮膚外用組成物。
〔１〕スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する皮脂中ビタミンＥ増加剤。
〔２〕スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する皮脂腺細胞からのビタミンＥ分泌促進剤。
〔３〕スイートバイオレット抽出物、バレリアン抽出物、レディースマントル抽出物から選択されるいずれか１種以上を含有する紫外線防御効果向上剤。
〔４〕請求項１乃至請求項４いずれか1項に記載の剤を含む、経口投与剤。
〔５〕請求項１乃至請求項４いずれか１項に記載の剤を含む、皮膚外用組成物。
【発明の効果】
【0013】
本願発明によれば、皮脂腺細胞から分泌される皮脂分泌総量には大きく影響せずに、皮脂中ビタミンＥ量を増加させることができる。皮脂は常時皮膚上に分泌されていることから、本願発明によって皮脂膜中など皮膚表面上に存在するビタミンＥ量が持続的に増加し、ビタミンＥによる紫外線防御効果の向上が期待できる。さらには、紫外線等による肌への悪影響を抑制することができるため、特に皮脂腺が存在する毛穴周囲に生じるざ瘡、脂漏性皮膚炎のほか、毛穴の開き、たるみなどの紫外線による各種皮膚症状の抑制が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】α－トコフェロール、パラアミノ安息香酸の紫外部吸収スペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0015】
以下、本発明について詳細に説明する。なお、本発明の範囲はここで説明する実施態様に限定されるものではなく、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で種々の変更をすることができる。
【0016】
本発明で使用するスイートバイオレット（Ｖｉｏｌａ ｏｄｏｒａｔａ）は、ニオイスミレとも呼ばれるスミレ科スミレ属の植物である。使用する部位は特に限定されず全草、果実、果皮、葉、花部、茎、種子、根等が挙げられる。
【0017】
本発明で使用するバレリアン（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．）は、西洋カノコソウとも呼ばれるオミナエシ科カノコソウ属の植物である。使用する部位は特に限定されず全草、果実、果皮、葉、花部、茎、種子、根等が挙げられる。
【0018】
本発明で使用するレディースマントルは、ハゴロモグサとも呼ばれるバラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）ハゴロモグサ属（Ａｌｃｈｅｍｉｌｌａ）の植物であり、例えばＡｌｃｈｅｍｉｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓやＡｌｃｈｅｍｉｌｌａ ｘａｎｔｈｏｃｈｌｏｒａなどが挙げられる。使用する部位は特に限定されず全草、果実、果皮、葉、花部、茎、種子、根等が挙げられる。
【0019】
ここで前記抽出物を得る方法としては公知の方法が利用できる。抽出物の調製は特に限定されないが、例えば上記植物を種々の適当な有機溶媒を用いて低温下から加温下で抽出される。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種又は２種以上を用いることが出来る。就中、水、エチルアルコール、１，３－ブチレングリコールの１種又は２種以上の混合溶媒が特に好適である。
【0020】
本発明に用いることのできる抽出物の抽出方法は特に限定されない。例えば上記植物の任意の部位をそのまま、又は予め裁断して小片状で抽出するほか、乾燥後粉砕して粉末状にしてから抽出することができる。更には例えば乾燥したものであれば重量比で１～１０００倍量、特に１０～１００倍量の溶媒を用い、常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃～４０℃で１時間以上、特に３～７日間行うのが好ましい。また、６０～１００℃で１時間、加熱抽出しても良い。また、０℃以下の抽出溶媒が凍結しない程度の温度で、１時間以上、特に１～７日間抽出を行なっても良い。
【0021】
上記の如く得られた抽出物は、抽出されたままの状態でも用いてもよいが、更に必要に応じて活性炭、活性白土、スチレン－ジビニルベンゼン系合成吸着剤（ＨＰ－２０：三菱化成社製）やオクタデシルシラン処理シリカ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ：富士シリシア化学製）等により精製することができ、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【0022】
本発明の各剤は、上記抽出物を少なくとも１種以上含有していればよく、本発明の効果を損なわない範囲で、その他成分を併用することができる。
【0023】
本発明におけるビタミンＥは生体内に存在するビタミンＥであれば特に限定されず、α－トコフェロール、β－トコフェロール、γ－トコフェロール、δ－トコフェロール等が例示される。中でも特に好ましくはα－トコフェロール、γ－トコフェロールである。
【0024】
本発明における「皮脂中ビタミンＥ増加剤」とは、後述する皮脂腺細胞からのビタミンＥ分泌促進効果により、分泌皮脂中のビタミンＥ量を増加させることができる剤を指す。なお本発明の皮脂中ビタミンＥ増加剤は、トリグリセリド、ワックスエステル、グリセリン、スクアレン等の脂肪酸を主成分とする皮脂の総量は大きく変化させることなく、皮脂中に存在するビタミンＥ量を増加させることができる。もっとも、これらの量的変化は厳密な意味ではなく、通常の実験のバラツキのレベルで皮脂の総量の変化や、ビタミンＥ以外のその他の皮脂中の成分の増加を完全に否定するものではない。
【0025】
本発明における「皮脂腺細胞からのビタミンＥ分泌促進剤」とは、皮脂腺細胞におけるビタミンＥの分泌促進効果および／又は皮脂腺細胞中ビタミンＥ増加促進効果を有する剤を指す。皮脂腺細胞は、その前駆細胞（皮脂腺未分化細胞）が分化・成熟するとともにトリグリセリド、ワックスエステル、グリセリン、スクアレン等の脂肪酸を主成分とする脂質を合成するが、ビタミンＥに関しては細胞内で合成できないため、主として食事由来のビタミンＥが血液によって皮膚に運ばれ、皮脂腺細胞中の脂質中に取り込まれ皮脂腺細胞内に蓄積されたのち、皮脂腺細胞の破裂に伴って脂質とともに皮脂として皮膚上に分泌される（非特許文献７）。そのため皮脂腺細胞中ビタミンＥ量の増加は、皮脂腺細胞におけるビタミンＥ分泌促進を誘導すると考えてよい。
【0026】
本発明の皮脂中ビタミンＥ増加剤および／又は皮脂腺細胞からのビタミンＥ分泌促進剤により、皮膚表面上および／又は皮脂膜中に存在するビタミンＥ量を増加させることができるため、ビタミンＥによる高い抗酸化作用やＵＶＢ吸収作用を皮膚の最表面で持続的に発揮させることができる。
【0027】
本発明の「紫外線防御効果向上剤」は、ビタミンＥを多く含む皮脂が皮脂線細胞から分泌されることで、皮膚上で増加したビタミンＥのＵＶＢ吸収作用により、皮膚内部への紫外線の透過を抑制することができる剤を指す。従って、本発明の剤を用いることで紫外線により生じる皮膚障害を軽減させることができるため、皮膚の紫外線防御機能を向上させるものである。なお、ビタミンＥは特にＵＶＢの波長領域（２８０～３２０ｎｍ）に吸収域を有するため、その他の紫外線防御剤（例えば紫外線吸収剤や紫外線散乱剤）と併用することで、より効率的にＵＶＢによる皮膚障害から皮膚をまもることができる。
【0028】
本発明の剤は、経口投与剤として使用することができ、ヒトや動物に摂取させることができる。なお本発明における経口投与剤とは、例えば、医薬品、医薬部外品とした用途で経口摂取する剤を含み、飲食品、加工食品、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、または特定保健用食品の用途で経口摂取されるものを含む。
【0029】
本発明の各剤を経口投与剤として使用する場合、その形態は制限されず、錠剤やカプセル、タブレット、顆粒、粉末等の固形状態のほか、水剤、ペースト状、ゲル状、クリーム状等の液体状態に成型にして用いることができる。また、前記の形態に加えて、例えばパン類、麺類、菓子類、乳製品、水産・畜産加工食品、油脂加工食品、各種飲料等の種類の製品として成型されるものが挙げられる。前記抽出物をこれらの経口投与剤として用いることにより、所望の皮脂中ビタミンＥ増加効果を付与することができる。
【0030】
本発明の各剤を経口投与剤として使用する場合の上記抽出物の配合量は、年齢や性別、病状等の個人差により変化するので明確に定義することはできないが、一般にヒトに投与又は摂取させる場合の１日の分量は体重１ｋｇあたり０．０１～１００ｍｇ、好ましくは０．１～５０ｍｇである。経口投与剤として使用する上記抽出物の乾燥重量がこの程度になるよう、１日１～３回に分けて投与又は摂取することができる。
【0031】
また本発明の剤は、医薬品、医薬部外品又は化粧料等の用途で皮膚外用組成物としても使用することができ、ヒトや動物に適用することができる。
【0032】
本発明の各剤を皮膚外用組成物として使用する場合、その形態は制限されず、例えば軟膏状、クリーム状、ゲル状、ペースト状、乳液状、スプレー状、水剤、貼付剤等の任意の形態に成型して用いることができる。皮膚外用組成物の種類としては、例えば、軟膏、クリーム剤、外用液剤、貼付剤、化粧水、乳液、ジェル、美容液、一般クリーム、日焼け止めクリーム、パック、マスク、洗顔料、化粧石鹸、ファンデーション、おしろい、浴用剤、ボディローション、ボディシャンプー、ヘアシャンプー、ヘアコンディショナー、頭皮用ローション、頭皮用クリーム、ヘアトニック、育毛剤等が挙げられる。
【0033】
本発明の各剤を皮膚外用組成物として使用する場合の上記抽出物の配合量は目的に応じ、乾燥重量に換算して組成物中０．０００１重量％～１００重量％を任意に使用することができる。好ましい配合量としては、０．０１重量％～１０重量％、更に好ましい配合量としては、０．０５重量％～５重量％である。
【0034】
本発明の各剤は、本発明の効果を損なわない範囲で、その他成分を併用することができる。その他成分としては、種々の賦形剤、結合剤、滑沢剤、安定剤、希釈剤、増量剤、増粘剤、等張化剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、着色料、防腐剤、添加物等を配合しても良く、これらの含有量は本発明の剤の剤形や求められる効果の程度や内容等に応じて適宜設定することができる。
【実施例0035】
以下、本発明の実施例について具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。また、特記しない限り配合量は質量％で示す。また、特記しない限りエタノールは試薬特級（９９．５％）を用いた。
【0036】
＜実施例１＞ビタミンＥ増加作用
以下の手順で、被験物質添加による皮脂腺細胞中のビタミンＥ量を測定した。
以下の手順で、被験物質添加による皮脂腺細胞中のビタミンＥ量を測定した。
【0037】
＜被験物質の調製＞
被験物質としては、表１に記載の植物を用いた（被験物質１～１１）。被験物質の調製方法としては、被験物質１は圧搾機にて植物原体から果汁を得、被験物質６又は１１は圧搾機にて植物原体からオイルを得た。被験物質１０では、乾燥植物原体に１０倍の重量の蒸留水を加えて６０℃、８時間加温し抽出した。その他の被験物質２～５、被験物質７～１０では、乾燥植物原体に１０倍の重量の５０％エタノールを加えて室温、１週間静置し抽出した。被験物質１～５、被験物質７～１０については抽出物の乾燥残分に対して、５０％エタノールを重量比で１：９９となるように加えて希釈したものを被験物質とし、被験物質６又は１１は圧搾オイルをそのまま被験物質とした。
被験物質としては、表１に記載の植物を用いた（被験物質１～１１）。被験物質の調製方法としては、被験物質１は圧搾機にて植物原体から果汁を得、被験物質６又は１１は圧搾機にて植物原体からオイルを得た。被験物質１０では、乾燥植物原体に１０倍の重量の蒸留水を加えて６０℃、８時間加温し抽出した。その他の被験物質２～５、被験物質７～１０では、乾燥植物原体に１０倍の重量の５０％エタノールを加えて室温、１週間静置し抽出した。被験物質１～５、被験物質７～１０については抽出物の乾燥残分に対して、５０％エタノールを重量比で１：９９となるように加えて希釈したものを被験物質とし、被験物質６又は１１は圧搾オイルをそのまま被験物質とした。
【0038】
【表1】
【0039】
＜被験物質中ビタミンＥ量の測定＞
被験物質１～１１をエタノール／メタノール混液（１：１（ｖ／ｖ））にて１０倍希釈し、フィルターろ過したものを測定サンプルとした。ＨＰＬＣにて、被験物質中のビタミンＥを測定した。
被験物質１～１１をエタノール／メタノール混液（１：１（ｖ／ｖ））にて１０倍希釈し、フィルターろ過したものを測定サンプルとした。ＨＰＬＣにて、被験物質中のビタミンＥを測定した。
【0040】
＜皮脂腺細胞中のビタミンＥ量の測定＞
ヒト皮脂腺細胞（ケーエーシー社）を、Ｓｅｂｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ＆ ｄｉｆｆｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ（Ｓｅｂ４Ｇｌｕ培地、ケーエーシー社）に懸濁し、２．３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように細胞懸濁液を調製し６ｗｅｌｌ－ｐｌａｔｅ（ＴｒｕｅＬｉｎｅ社）に２ｍＬずつ播種した。３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件で２４時間培養後に新しいＳｅｂ４Ｇｌｕ培地に交換し、細胞が９０－１００％コンフルエントになるまで３，４日に一度培地を交換しながら３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件で６日間培養した。培地を１％Ｆｒｏｚｅｎ Ｌｉｐｉｄ Ｄｒｏｐｌｅｔ Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ケーエーシー社）を含有したＳｅｂ４Ｇｌｕ培地に交換し、α－トコフェロール（富士フィルム和光純薬社）を１００μＭの濃度になるよう添加したのち、さらに被験物質を終濃度３０ｐｐｍになるよう添加した。３，４日に一度培地を交換しながら３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件でさらに９日間培養した。培養終了後、プレートの各ｗｅｌｌをＰＢＳ（－）で３回洗浄したのち、Ｔｒｉｐｌｅ（Ｇｉｂｃｏ社）にて皮脂腺細胞を剥離させ２００×ｇ、５分間遠心分離して上清を除去した。細胞沈査に再度ＰＢＳ（－）を添加し同様に遠心分離後、上清を除去して皮脂腺細胞を回収した。Ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ（１５０ ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ ８．０）、１％ ＮＰ－４０、１ｍｇ／ｍＬアプロチニン、１００μＭ ＰＭＳＦ、５０μＭ 没食子酸プロピル）を５００μL添加し混合後、超音波破砕処理を行い細胞破砕液を得た。うち一部はタンパク定量に供した。細胞破砕液にエタノール２．５ｍＬを混合して２３００×ｇ、４℃、１５分間遠心分離したのち、上清を回収し、ヘキサン（富士フィルム和光純薬社）７ｍＬを混合して静置後、上層を採取した。ヘキサンを留去したのち、５μＭ 没食子酸プロピル（富士フィルム和光純薬社）を含有したエタノール／メタノール混液（１：１（ｖ／ｖ））１５０μＭを加えたものを測定用サンプルとした。ＨＰＬＣにてビタミンＥを測定した。
ヒト皮脂腺細胞（ケーエーシー社）を、Ｓｅｂｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ＆ ｄｉｆｆｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ（Ｓｅｂ４Ｇｌｕ培地、ケーエーシー社）に懸濁し、２．３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように細胞懸濁液を調製し６ｗｅｌｌ－ｐｌａｔｅ（ＴｒｕｅＬｉｎｅ社）に２ｍＬずつ播種した。３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件で２４時間培養後に新しいＳｅｂ４Ｇｌｕ培地に交換し、細胞が９０－１００％コンフルエントになるまで３，４日に一度培地を交換しながら３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件で６日間培養した。培地を１％Ｆｒｏｚｅｎ Ｌｉｐｉｄ Ｄｒｏｐｌｅｔ Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ケーエーシー社）を含有したＳｅｂ４Ｇｌｕ培地に交換し、α－トコフェロール（富士フィルム和光純薬社）を１００μＭの濃度になるよう添加したのち、さらに被験物質を終濃度３０ｐｐｍになるよう添加した。３，４日に一度培地を交換しながら３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件でさらに９日間培養した。培養終了後、プレートの各ｗｅｌｌをＰＢＳ（－）で３回洗浄したのち、Ｔｒｉｐｌｅ（Ｇｉｂｃｏ社）にて皮脂腺細胞を剥離させ２００×ｇ、５分間遠心分離して上清を除去した。細胞沈査に再度ＰＢＳ（－）を添加し同様に遠心分離後、上清を除去して皮脂腺細胞を回収した。Ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ（１５０ ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ ８．０）、１％ ＮＰ－４０、１ｍｇ／ｍＬアプロチニン、１００μＭ ＰＭＳＦ、５０μＭ 没食子酸プロピル）を５００μL添加し混合後、超音波破砕処理を行い細胞破砕液を得た。うち一部はタンパク定量に供した。細胞破砕液にエタノール２．５ｍＬを混合して２３００×ｇ、４℃、１５分間遠心分離したのち、上清を回収し、ヘキサン（富士フィルム和光純薬社）７ｍＬを混合して静置後、上層を採取した。ヘキサンを留去したのち、５μＭ 没食子酸プロピル（富士フィルム和光純薬社）を含有したエタノール／メタノール混液（１：１（ｖ／ｖ））１５０μＭを加えたものを測定用サンプルとした。ＨＰＬＣにてビタミンＥを測定した。
【0041】
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
α－トコフェロールの検量線からサンプル中α－トコフェロール量を算出した。
分析カラム：Ｃｈｅｍｃｏｂｏｎｄ ５－ＯＤＳ－Ｗ（１５０×６ｍｍ）
ポンプ ： ＪＡＳＣＯ ＰＵ－２０８６ Ｐｌｕｓ
検出器 ： ＪＡＳＣＯ ＭＤ－２０１０ Ｐｌｕｓ
検出波長：２９５ｎｍ
移動相：エタノール／メタノール混液（１：３（ｖ／ｖ））
カラム温度：４０℃
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
α－トコフェロールの検量線からサンプル中α－トコフェロール量を算出した。
分析カラム：Ｃｈｅｍｃｏｂｏｎｄ ５－ＯＤＳ－Ｗ（１５０×６ｍｍ）
ポンプ ： ＪＡＳＣＯ ＰＵ－２０８６ Ｐｌｕｓ
検出器 ： ＪＡＳＣＯ ＭＤ－２０１０ Ｐｌｕｓ
検出波長：２９５ｎｍ
移動相：エタノール／メタノール混液（１：３（ｖ／ｖ））
カラム温度：４０℃
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
【0042】
得られた皮脂腺細胞中α－トコフェロール量から、次の式に従い、皮脂腺細胞中ビタミンＥ増加率（％）を算出した。得られた結果を表２に示す。なお、皮脂腺細胞中ビタミンＥ増加率は、概ね１２０％以上、好ましくは１５０％以上である場合、効果が得られたと判断できる。
【0043】
【数1】
【0044】
【表2】
【0045】
表２より、被験物質６以外の被験物質は、ほぼα－トコフェロ－ルを含有していなかった。また、ヒトの細胞ではビタミンＥを合成することができず、主として食事由来のビタミンＥが血液によって皮膚に運ばれ皮脂腺細胞中に取り込まれるため、本試験では予め皮脂腺細胞の培養培地にα－トコフェロールを添加している。被験物質５～１１を添加した皮脂腺細胞では、未添加（比較物質１）に対して皮脂腺細胞中のビタミンＥ量を１５０％以上に増加させた。従って、被験物質５、被験物質７～１１は皮脂腺細胞による培地中α－トコフェロールの取り込みを亢進させることで、皮脂腺細胞中のビタミンＥ量を増加させたと考えることができる。一方、被験物質６は、皮脂腺細胞による培地中または被験物質に含まれるα－トコフェロールの取り込みを亢進させることで、皮脂腺細胞中のビタミンＥ量を増加させたと考えることができる。
【0046】
＜実施例２＞脂質量の測定
以下の手順で、被験物質添加による皮脂腺細胞中の脂質量を測定した。
以下の手順で、被験物質添加による皮脂腺細胞中の脂質量を測定した。
【0047】
＜被験物質の調製＞
被験物質には、実施例１で皮脂腺細胞中のビタミンＥ量を１５０％以上に増加させた被験物質５～１１を用いた。
被験物質には、実施例１で皮脂腺細胞中のビタミンＥ量を１５０％以上に増加させた被験物質５～１１を用いた。
【0048】
＜皮脂腺細胞中の脂質量の測定＞
ヒト皮脂腺細胞（ケーエーシー社）を、Ｓｅｂ４Ｇｌｕ培地（ケーエーシー社）に懸濁し、２．３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように細胞懸濁液を調製し９６ｗｅｌｌ－ｐｌａｔｅ（ＴｒｕｅＬｉｎｅ社）に１００μＬずつ播種した。３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件で２４時間培養後に新しいＳｅｂ４Ｇｌｕ培地に交換し、細胞が９０－１００％コンフルエントになるまで３，４日に一度培地を交換しながら３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件で６日間培養した。培地を１％Ｆｒｏｚｅｎ Ｌｉｐｉｄ Ｄｒｏｐｌｅｔ Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ケーエーシー社）を含有したＳｅｂ４Ｇｌｕ培地に交換し、α－トコフェロール（富士フィルム和光純薬社）を１００μＭの濃度になるよう添加したのち、さらに被験物質を終濃度３０ｐｐｍになるよう添加した。３，４日に一度培地を交換しながら３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件でさらに９日間培養した。培養終了後、プレートの各ｗｅｌｌをＰＢＳ（－）で１回洗浄したのち、Ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ／Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社）を用いて、皮脂腺細胞内トリグリセリド量を算出した。また系中、測定溶液の一部をタンパク定量に供した。
ヒト皮脂腺細胞（ケーエーシー社）を、Ｓｅｂ４Ｇｌｕ培地（ケーエーシー社）に懸濁し、２．３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように細胞懸濁液を調製し９６ｗｅｌｌ－ｐｌａｔｅ（ＴｒｕｅＬｉｎｅ社）に１００μＬずつ播種した。３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件で２４時間培養後に新しいＳｅｂ４Ｇｌｕ培地に交換し、細胞が９０－１００％コンフルエントになるまで３，４日に一度培地を交換しながら３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件で６日間培養した。培地を１％Ｆｒｏｚｅｎ Ｌｉｐｉｄ Ｄｒｏｐｌｅｔ Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ケーエーシー社）を含有したＳｅｂ４Ｇｌｕ培地に交換し、α－トコフェロール（富士フィルム和光純薬社）を１００μＭの濃度になるよう添加したのち、さらに被験物質を終濃度３０ｐｐｍになるよう添加した。３，４日に一度培地を交換しながら３７℃、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿条件でさらに９日間培養した。培養終了後、プレートの各ｗｅｌｌをＰＢＳ（－）で１回洗浄したのち、Ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ／Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社）を用いて、皮脂腺細胞内トリグリセリド量を算出した。また系中、測定溶液の一部をタンパク定量に供した。
【0049】
得られた皮脂腺細胞中トリグリセリド量から、次の式に従い、皮脂腺細胞中トリグリセリド増加率（％）を算出した。得られた結果を表３に示す。なお、皮脂腺細胞中トリグリセリド増加率が１２０％以上である場合、皮脂腺細胞中の皮脂量を増加させる作用があると判断した。
【0050】
【数2】
【0051】
皮脂は皮脂腺細胞で産生され、さらに皮脂腺細胞が破裂することで分泌されるため、皮脂の分泌量は皮脂腺細胞で産生される皮脂量に相関することが知られている。皮脂の主成分は、トリグリセリドや遊離脂肪酸、スクアレンなどの脂質であるため、本試験では皮脂腺細胞での皮脂量の指標として皮脂中脂質のひとつである皮脂腺細胞中トリグリセリド量を測定した。表３より、被験物質６、７、１０、１１を添加した皮脂腺細胞では、未添加（比較物質１）に対して皮脂腺細胞中のトリグリセリド量を１４０％以上に増加させた。特に、被験物質６、１１は皮脂腺細胞中のトリグリセリド量を５５０％以上に増加させており、これらの被験物質は皮脂分泌量の増加作用がかなり高いと推測できる。一方、被験物質５（レディースマントル）、８（スイートバイオレット）、９（バレリアン）を添加した皮脂腺細胞では、未添加（比較物質１）に対する皮脂腺細胞中のトリグリセリド量が８９．９％～１１１．６％であり変化幅が小さいことから、これらの被験物質は皮脂分泌量へほぼ影響しないと考えられた。
【0052】
【表3】
【0053】
以上の結果より、被験物質５（レディースマントル）、被験物質８（スイートバイオレット）、被験物質９（バレリアン）には、皮脂腺細胞中のビタミンＥ増加作用を有する一方で皮脂分泌量にはほぼ影響しないことが示された。すなわち、上記３種の抽出物は、皮脂分泌量を増やすことなく優れた皮脂腺細胞からのビタミンＥ分泌促進効果ならびに皮脂中ビタミンＥ増加効果があると判断でき、皮膚上のビタミンＥ増加に伴い皮膚の紫外線防御効果向上、ならびに紫外線によるざ瘡、脂漏性皮膚炎、毛穴の開き、毛穴のたるみを抑制する効果が期待できる。
【0054】
＜実施例３＞
以下の手順で、ビタミンＥの紫外線吸収能を測定した。
＜紫外部吸収スペクトル測定＞
α－トコフェロール、パラアミノ安息香酸（ともに富士フィルム和光純薬社）をエタノールで５ｍＭに希釈し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ１０００ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｎａｎｏｄｒｏｐ社）にて２６０～４００ｎｍの吸収スペクトルを測定した。
以下の手順で、ビタミンＥの紫外線吸収能を測定した。
＜紫外部吸収スペクトル測定＞
α－トコフェロール、パラアミノ安息香酸（ともに富士フィルム和光純薬社）をエタノールで５ｍＭに希釈し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ１０００ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｎａｎｏｄｒｏｐ社）にて２６０～４００ｎｍの吸収スペクトルを測定した。
【0055】
図１に示すように、２８０～３２０ｎｍの波長域において、ビタミンＥ（α－トコフェロール）は２９０ｎｍ付近に極大吸収が存在しており、ＵＶＢを特徴的に吸収することがわかる。すなわち、皮膚上のビタミンＥ量を増加させることができれば、ビタミンＥのＵＶＢ吸収作用により紫外線による皮膚障害から皮膚をまもることができる。一方、紫外線吸収剤として知られるパラアミノ安息香酸は、３１０ｎｍ付近に極大吸収が存在しており、より長波長側のＵＶＢを吸収する特性があることが伺える。従って、ビタミンＥと紫外線吸収剤を併用することで、ＵＶＢ吸収能を向上させることができ、紫外線防御効果をより高めることができる。
【0056】
＜実施例４＞
以下、本発明における各剤の処方例を示す。なお、含有量は重量％である。製法は、常法による。なお、処方は代表例であり、これに限定されない。また、処方例中の抽出物の濃度は乾燥残分としての濃度である。これらにも、本願の効果が確認された。
以下、本発明における各剤の処方例を示す。なお、含有量は重量％である。製法は、常法による。なお、処方は代表例であり、これに限定されない。また、処方例中の抽出物の濃度は乾燥残分としての濃度である。これらにも、本願の効果が確認された。
【0057】
【0058】
【0059】
【0060】
【0061】
【図1】
