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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024020436
(43)【公開日】2024-02-14
(54)【発明の名称】ＨＥＲ２標的化剤
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20240206BHJP
C07K 16/30 20060101ALI20240206BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240206BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240206BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/30 ZNA
A61P35/00
A61K39/395 N
A61K39/395 T
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023195187
(22)【出願日】2023-11-16
(62)【分割の表示】P 2022565479の分割
【原出願日】2021-11-29
(31)【優先権主張番号】P 2020198044
(32)【優先日】2020-11-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2021110912
(32)【優先日】2021-07-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】000185983
【氏名又は名称】小野薬品工業株式会社
(71)【出願人】
【識別番号】504157024
【氏名又は名称】国立大学法人東北大学
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(72)【発明者】
【氏名】加藤 幸成
(72)【発明者】
【氏名】金子 美華
(72)【発明者】
【氏名】中山 大介
(72)【発明者】
【氏名】黒木 雅礼
(57)【要約】
【課題】がん細胞に発現するＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【解決手段】非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有する、単離された抗体または抗体の抗原結合性断片。
【選択図】なし
【解決手段】非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有する、単離された抗体または抗体の抗原結合性断片。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号：２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する、ＨＥＲ２に特異的に結合する単離された抗体、または、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、ダイアボディー、ｓｃＤｂ、タンデムｓｃＦｖ、ロイシンジッパー型、およびｓｃ（Ｆｖ）２（単鎖（Ｆｖ）２）からなる群から選択される、その抗原結合性断片。
配列番号：２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する、ＨＥＲ２に特異的に結合する単離された抗体、または、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、ダイアボディー、ｓｃＤｂ、タンデムｓｃＦｖ、ロイシンジッパー型、およびｓｃ（Ｆｖ）２（単鎖（Ｆｖ）２）からなる群から選択される、その抗原結合性断片。
【請求項2】
ｓｃＦｖである、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項3】
請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤を有効成分として含む、医薬組成物。
【請求項4】
がんを処置することに用いるための、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項5】
請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合性断片を有効成分として含む、がんの処置剤。
【請求項6】
請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＨＥＲ２標的化剤に関する。
【背景技術】
【0002】
ＨＥＲ２は、受容体型チロシンキナーゼであり、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）と類似した構造を有し、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ２、ＣＤ３４０、またはＮＥＵとも呼ばれる。ＨＥＲ２タンパク質は、正常細胞においても発現し、細胞の増殖および分化の調節に関与しているが、ＨＥＲ２遺伝子の増幅および／または変異により細胞の増殖の制御が不能になることにより細胞を悪性化させ、唾液腺がん、胃がん、乳がん、卵巣がんなどの多くのがんでＨＥＲ２が発現していることが知られている。トラスツズマブは、がん細胞の表面に発現するＨＥＲ２に特異的に結合する抗体医薬である。トラスツズマブは、がん細胞上のＨＥＲ２に結合することによってがん細胞の増殖を刺激する信号を抑制したり、免疫の働きを誘導してがん細胞を破壊することができる。
【0003】
がん細胞特異的にこのような細胞増殖抑制作用や細胞傷害作用をもたらすためには、がん細胞のみに特異的に結合する抗体が求められる。がん細胞に特異的な抗体を作製する技術としてＣａｓＭａｂ法が開発されている（非特許文献１～３）。ＣａｓＭａｂ法では、特異的な糖鎖プロファイルを有する神経膠芽腫細胞株のＬＮ２２９細胞に発現させた抗原タンパク質を免疫原として抗体を作製する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
【非特許文献1】Ｋａｔｏ ａｎｄ Ｋａｎｅｋｏ， ２０１４， Ｓｃｉ． Ｒｅｐ．， ４： ５９２４
【非特許文献2】Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．， ２０１７， Ｍｏｎｏｃｌｏｎ． Ａｎｔｉｂ． Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ３６（２）： ７２
【非特許文献3】Ｋａｎｅｋｏ ｅｔ ａｌ．， ２０２０， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｐ．， ２４： １００８２６
【発明の概要】
【0005】
本発明は、ＨＥＲ２に結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。本発明は、好ましくは、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。本発明は、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して結合親和性を有する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。本発明は、より好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合親和性を有し得る抗体またはその抗原結合性断片を提供する。本発明は、さらに好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体またはその抗原結合性断片を提供する。また、本発明は、前記ＨＥＲ２に結合する抗体またはその抗原結合性断片を用い、患者においてがんを処置する方法を提供する。さらに、本発明は、患者が前記ＨＥＲ２に結合する抗体またはその抗原結合性断片を当該患者から得られたがん試料と接触させることを含む方法であって、ＨＥＲ２陽性のがん細胞を検出する方法を提供する。さらにまた、本発明は、患者が前記ＨＥＲ２に結合する抗体またはその抗原結合性断片を用いたＨＥＲ２標的療法に応答性であるか否かを決定する方法を提供する。
【0006】
本発明者らは、がん細胞に発現するＨＥＲ２を特異的に認識する抗体を作出した。本発明者らはまた、正常細胞に発現するＨＥＲ２と、がん細胞に発現するＨＥＲ２とが抗体により区別できることを見出し、それらを区別できる抗体を作出した。本発明はこのような知見に基づく発明である。
【0007】
本発明によれば以下の態様が提供される。
［０］ がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して結合反応性を有する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
［１］ 非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
［２］ （ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、上記［０］または［１］に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［３］ （ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、例えば、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する、上記［０］、［１］または［２］に記載の抗体またはその抗原結合性断片｛上記において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部は配列番号：２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号６１３～６２２の領域であってもよい｝。
［４］ （ｉｉｉ）配列番号：１８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
（ｉｖ）配列番号：２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；または
上記（ｉｉｉ）または（ｉｖ）の一つ以上のＣＤＲにおいて少なくとも１個の置換、付加もしくは欠失を有する、上記［０］、および［１］～［３］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［５］ （ｖｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および、
配列番号：１５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する；
（ｖｉｉｉ）配列番号：１６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および、
配列番号：１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する；もしくは
上記（ｖｉｉ）または（ｖｉｉｉ）の各可変領域において少なくとも１個の置換、付加もしくは欠失を有する、上記［０］、および［１］～［４］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［６］ 神経膠芽腫細胞株のＬＮ２２９細胞により産生されるペプチドであって、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して結合する、上記［０］、および［１］～［５］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［７］ がん細胞が、乳がん細胞株のＳＫ－ＢＲ－３細胞であり、非がん細胞が、正常ヒト表皮角化細胞株のＨａＣａＴ細胞である、上記［０］、および［１］～［６］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［８］ 上記［０］、および［１］～［７］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を有するＨＥＲ２標的化剤を有効成分として含む、医薬組成物。
［９］ 細胞傷害剤がコンジュゲートされた上記［０］、および［１］～［７］のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
［１０］ 上記［９］に記載の抗体またはその抗原結合性断片を有効成分として含む、医薬組成物。
［１１］ がんを処置することに用いるための、上記［８］または［１０］に記載の医薬組成物。
［１２］ 上記［０］、および［１］～［７］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を有効成分として含む、がんの処置剤。
［１３］ 上記［２］～［６］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子。
［０］ がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して結合反応性を有する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
［１］ 非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
［２］ （ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、上記［０］または［１］に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［３］ （ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、例えば、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する、上記［０］、［１］または［２］に記載の抗体またはその抗原結合性断片｛上記において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部は配列番号：２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号６１３～６２２の領域であってもよい｝。
［４］ （ｉｉｉ）配列番号：１８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
（ｉｖ）配列番号：２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；または
上記（ｉｉｉ）または（ｉｖ）の一つ以上のＣＤＲにおいて少なくとも１個の置換、付加もしくは欠失を有する、上記［０］、および［１］～［３］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［５］ （ｖｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および、
配列番号：１５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する；
（ｖｉｉｉ）配列番号：１６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および、
配列番号：１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する；もしくは
上記（ｖｉｉ）または（ｖｉｉｉ）の各可変領域において少なくとも１個の置換、付加もしくは欠失を有する、上記［０］、および［１］～［４］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［６］ 神経膠芽腫細胞株のＬＮ２２９細胞により産生されるペプチドであって、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して結合する、上記［０］、および［１］～［５］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［７］ がん細胞が、乳がん細胞株のＳＫ－ＢＲ－３細胞であり、非がん細胞が、正常ヒト表皮角化細胞株のＨａＣａＴ細胞である、上記［０］、および［１］～［６］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［８］ 上記［０］、および［１］～［７］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を有するＨＥＲ２標的化剤を有効成分として含む、医薬組成物。
［９］ 細胞傷害剤がコンジュゲートされた上記［０］、および［１］～［７］のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
［１０］ 上記［９］に記載の抗体またはその抗原結合性断片を有効成分として含む、医薬組成物。
［１１］ がんを処置することに用いるための、上記［８］または［１０］に記載の医薬組成物。
［１２］ 上記［０］、および［１］～［７］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を有効成分として含む、がんの処置剤。
［１３］ 上記［２］～［６］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子。
【0008】
［１４］ （ｉｉｉ）配列番号：１８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
（ｉｖ）配列番号：２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；もしくは
上記（ｉｉｉ）または（ｉｖ）の一つ以上のＣＤＲにおいて少なくとも１個の置換、付加もしくは欠失を有する、ＨＥＲ２の細胞外ドメインのエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
［１５］ 非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体またはその抗原結合性断片。
配列番号：１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
（ｉｖ）配列番号：２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；もしくは
上記（ｉｉｉ）または（ｉｖ）の一つ以上のＣＤＲにおいて少なくとも１個の置換、付加もしくは欠失を有する、ＨＥＲ２の細胞外ドメインのエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
［１５］ 非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体またはその抗原結合性断片。
【0009】
［１６］抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１７］抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から下記（ｉ）～（ｉｉｉ）からなる群から選択される少なくとも１つを満たす抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する；および
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、例えば、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する；並びに
（ｉｉｉ）非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有する。
［１８］抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
下記（ｉ）～（ｉｉ）からなる群から選択される少なくとも１つを満たす抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する；および
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する。
［１９］得られた抗体または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定することをさらに含む、上記［１７］または［１８］に記載の方法。
［２０］抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、および（ｘｉｉ）のいずれかと少なくとも１つのＣＤＲにおいて、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上のアミノ酸の変異（例えば、１個～１０個、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個など）を有する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１７］抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から下記（ｉ）～（ｉｉｉ）からなる群から選択される少なくとも１つを満たす抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する；および
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、例えば、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する；並びに
（ｉｉｉ）非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有する。
［１８］抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
下記（ｉ）～（ｉｉ）からなる群から選択される少なくとも１つを満たす抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する；および
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する。
［１９］得られた抗体または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定することをさらに含む、上記［１７］または［１８］に記載の方法。
［２０］抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、および（ｘｉｉ）のいずれかと少なくとも１つのＣＤＲにおいて、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上のアミノ酸の変異（例えば、１個～１０個、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個など）を有する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体または抗体の抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
【0010】
［２０］選択または同定された抗体または抗体の抗原結合性断片を抗体産生細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）に産生させることを含む、上記［１６］～［１９］のいずれかに記載の方法。
［２１］上記［２０］の方法により得られた抗体。
［２２］抗体がモノクローナル抗体（例えば、単離されたモノクローナル抗体）である、上記［１６］～［２０］のいずれかに記載の方法。
［２３］上記［１］～［７］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を有するＨＥＲ２標的化剤を含む、医薬組成物。
［２４］上記［９］に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む、医薬組成物。
［２５］がんを処置することに用いるための、上記［２３］または［２４］に記載の医薬組成物。
［２１］上記［２０］の方法により得られた抗体。
［２２］抗体がモノクローナル抗体（例えば、単離されたモノクローナル抗体）である、上記［１６］～［２０］のいずれかに記載の方法。
［２３］上記［１］～［７］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を有するＨＥＲ２標的化剤を含む、医薬組成物。
［２４］上記［９］に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む、医薬組成物。
［２５］がんを処置することに用いるための、上記［２３］または［２４］に記載の医薬組成物。
【0011】
［１０１］（ｘｉ）配列番号：３７のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、上記［０］または［１］に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［１０２］（ｘｉｉ）上記［０］、［１］～［３］、および［１０１］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片であって、
配列番号：８１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：８４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：８７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：９０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：９３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：９６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：９９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１００に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１０２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１０５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１０８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１１１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１１４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１１７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１２０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１２３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１２６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１２９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１３２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１３５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１３８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１４１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１４７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１５０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１５３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１５６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１５９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１６２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１６５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１６８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１７１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１７７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１８０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１８９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１９２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１９５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１９８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２００に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：２０１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２０２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２０４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２０５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する、抗体またはその抗原結合性断片。
［１０３］（ｘｉｉｉ）
（ａ）配列番号：３９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｂ）配列番号：４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｃ）配列番号：４３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｄ）配列番号：４５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｅ）配列番号：４７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｆ）配列番号：４９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｇ）配列番号：５１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｈ）配列番号：５３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｉ）配列番号：５５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｊ）配列番号：５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｋ）配列番号：５９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｌ）配列番号：６１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｍ）配列番号：６３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｎ）配列番号：６５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｏ）配列番号：６７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｐ）配列番号：６９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｑ）配列番号：７１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｒ）配列番号：７３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｓ）配列番号：７５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｔ）配列番号：７７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｕ）配列番号：７９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：８０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；もしくは
（ｘｉｖ）上記（ｘｉｉｉ）（ａ）～（ｕ）のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片の可変領域の少なくとも１以上においてそれぞれ少なくとも１個の置換、付加もしくは欠失を有する、上記［０］、［１］～［３］、［１０１］および［１０２］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［１０４］抗体または抗体のその結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から下記（ｘｉ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１０５］抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から下記（ｘｉｉ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１０６］抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から下記（ｘｉｉｉ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１０７］抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から下記（ｘｉｖ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１０２］（ｘｉｉ）上記［０］、［１］～［３］、および［１０１］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片であって、
配列番号：８１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：８４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：８７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：９０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：９３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：９６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：９９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１００に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１０２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１０５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１０８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１１１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１１４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１１７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１２０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１２３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１２６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１２９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１３２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１３５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１３８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１４１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１４７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１５０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１５３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１５６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１５９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１６２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１６５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１６８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１７１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１７７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１８０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１８９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１９２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１９５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１９８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２００に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：２０１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２０２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２０４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２０５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する、抗体またはその抗原結合性断片。
［１０３］（ｘｉｉｉ）
（ａ）配列番号：３９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｂ）配列番号：４１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｃ）配列番号：４３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｄ）配列番号：４５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｅ）配列番号：４７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｆ）配列番号：４９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｇ）配列番号：５１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｈ）配列番号：５３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｉ）配列番号：５５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｊ）配列番号：５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｋ）配列番号：５９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｌ）配列番号：６１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｍ）配列番号：６３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｎ）配列番号：６５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｏ）配列番号：６７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｐ）配列番号：６９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｑ）配列番号：７１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｒ）配列番号：７３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｓ）配列番号：７５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｔ）配列番号：７７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｕ）配列番号：７９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：８０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；もしくは
（ｘｉｖ）上記（ｘｉｉｉ）（ａ）～（ｕ）のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片の可変領域の少なくとも１以上においてそれぞれ少なくとも１個の置換、付加もしくは欠失を有する、上記［０］、［１］～［３］、［１０１］および［１０２］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［１０４］抗体または抗体のその結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から下記（ｘｉ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１０５］抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から下記（ｘｉｉ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１０６］抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から下記（ｘｉｉｉ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
［１０７］抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から下記（ｘｉｖ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を製造、選択または同定することを含む、方法。
【0012】
［１１０］選択または同定された抗体またはその抗原結合性断片を抗体産生細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）に産生させることを含む、上記［１０１］～［１０３］のいずれかに記載の方法。
［１１１］上記［１０４］～［１０７］のいずれかの方法により得られた抗体。
［１１２］抗体がモノクローナル抗体（例えば、単離されたモノクローナル抗体）である、上記［１０４］～［１０７］のいずれかに記載の方法。
［１１３］上記［１０１］～［１０３］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を有するＨＥＲ２標的化剤を含む、医薬組成物。
［１１４］上記［１０１］～［１０３］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む、医薬組成物。
［１１５］がんを処置することに用いるための、上記［１１３］または［１１４］に記載の医薬組成物。
［１１１］上記［１０４］～［１０７］のいずれかの方法により得られた抗体。
［１１２］抗体がモノクローナル抗体（例えば、単離されたモノクローナル抗体）である、上記［１０４］～［１０７］のいずれかに記載の方法。
［１１３］上記［１０１］～［１０３］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を有するＨＥＲ２標的化剤を含む、医薬組成物。
［１１４］上記［１０１］～［１０３］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む、医薬組成物。
［１１５］がんを処置することに用いるための、上記［１１３］または［１１４］に記載の医薬組成物。
【0013】
［１２０］前記ＨＥＲ２が、ＬＮ２２９細胞上に発現したＨＥＲ２である、上記［１０４］～［１０７］のいずれかに記載の方法。
［１２１］ＨＥＲ２の断片が、配列番号：３１～３７に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６に記載のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドである、上記［１０４］～［１０７］のいずれかに記載の方法。
［１２１］ＨＥＲ２の断片が、配列番号：３１～３７に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６に記載のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドである、上記［１０４］～［１０７］のいずれかに記載の方法。
【0014】
本発明によれば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＥＲ２標的化剤として用いることができる。本発明によれば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、がん細胞の検出および／またはがんの処置に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【図2】図２は、本発明の抗体の一例（Ｈ ２Ｍａｂ－２１４およびＨ ２Ｍａｂ－２５０）が、乳がん細胞株（ＳＫ－ＢＲ－３細胞）上に発現するＨＥＲ２に結合する一方で、正常ヒト表皮角化細胞株（ＨａＣａＴ細胞）上に発現するＨＥＲ２には全く反応しないことを示す。
【図3】図３は、本発明の抗体の一例（Ｈ ２Ｍａｂ－２１４およびＨ ２Ｍａｂ－２５０）が、がん細胞のＨＥＲ２発現状況を調べる従来の診断薬によってＨＥＲ２陰性と診断されたがん細胞を染色することを示す免疫組織化学染色（ＩＨＣ）の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0016】
＜定義＞
本明細書では、「対象」とは、哺乳動物であり得、好ましくは、ヒトを対象とする「患者」である。より好ましくは、腫瘍またはがんに罹患している、またはそのリスクがある「がん患者」であり得る。
本明細書では、「対象」とは、哺乳動物であり得、好ましくは、ヒトを対象とする「患者」である。より好ましくは、腫瘍またはがんに罹患している、またはそのリスクがある「がん患者」であり得る。
【0017】
本明細書では、「抗体」とは、免疫グロブリンを意味し、ジスルフィド結合で安定化された２本の重鎖（Ｈ鎖）と２本の軽鎖（Ｌ鎖）が会合した構造をとるタンパク質をいう。重鎖は、重鎖可変領域ＶＨ、重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ１とＣＨ２の間に位置するヒンジ領域からなり、軽鎖は、軽鎖可変領域ＶＬと軽鎖定常領域ＣＬとからなる。この中で、ＶＨとＶＬからなる可変領域断片（Ｆｖ）が、抗原結合に直接関与し、抗体に多様性を与える領域である。また、ＶＬ、ＣＬ、ＶＨ、ＣＨ１からなる抗原結合領域をＦａｂ領域と呼び、ヒンジ領域、ＣＨ２、ＣＨ３からなる領域をＦｃ領域と呼ぶ。
可変領域のうち、直接抗原と接触する領域は特に変化が大きく、相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ：ＣＤＲ）と呼ばれる。ＣＤＲ以外の比較的変異の少ない部分をフレームワーク（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎ：ＦＲ）と呼ぶ。軽鎖と重鎖の可変領域には、それぞれ３つのＣＤＲが存在し、それぞれＮ末端側から順に、重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３と呼ばれる。抗体は、組換えタンパク質（組換え抗体）であってもよく、例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）などの動物細胞に産生させることができる。抗体の由来は、特に限定されないが例えば、非ヒト動物の抗体、非ヒト哺乳動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、およびヒト抗体が挙げられる。また、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、および完全ヒト型抗体であってもよい。抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよく、好ましくはモノクローナル抗体である。「キメラ抗体」とは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に異なる種の重鎖定常領域および軽鎖定常領域がそれぞれ連結した抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト由来の抗体に特徴的なアミノ酸配列で、ヒト抗体の対応する位置を置換した抗体を意味し、例えば、マウス又はラットを免疫して作製した抗体の重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を有し、重鎖及び軽鎖のそれぞれ４つのフレームワーク領域（ＦＲ）を含むその他のすべての領域がヒト抗体に由来するものが挙げられる。かかる抗体は、ＣＤＲ移植抗体と呼ばれる場合もある。「ヒト化抗体」は、ヒトキメラ抗体を含む場合もある。「ヒトキメラ抗体」は、非ヒト由来の抗体において、非ヒト由来の抗体の定常領域がヒトの抗体の定常領域に置換されている抗体である。ヒトキメラ抗体では、ＡＤＣＣ活性を高める観点では、例えば、定常領域に用いるヒトの抗体のサブタイプはＩｇＧ１とすることができる。「完全ヒト型抗体」とは、ＦＲおよびＣＤＲからなる可変領域ならびに定常領域の両方ともにヒト抗体に由来する抗体を意味する。また、抗体の細胞傷害性を増強する目的で抗体を抗体－薬物複合体の形態とすることもできる。また、抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体、または三重特異性抗体であってもよい。抗体は、単離された抗体、または精製された抗体であり得る。
可変領域のうち、直接抗原と接触する領域は特に変化が大きく、相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ：ＣＤＲ）と呼ばれる。ＣＤＲ以外の比較的変異の少ない部分をフレームワーク（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎ：ＦＲ）と呼ぶ。軽鎖と重鎖の可変領域には、それぞれ３つのＣＤＲが存在し、それぞれＮ末端側から順に、重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３と呼ばれる。抗体は、組換えタンパク質（組換え抗体）であってもよく、例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）などの動物細胞に産生させることができる。抗体の由来は、特に限定されないが例えば、非ヒト動物の抗体、非ヒト哺乳動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、およびヒト抗体が挙げられる。また、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、および完全ヒト型抗体であってもよい。抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよく、好ましくはモノクローナル抗体である。「キメラ抗体」とは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に異なる種の重鎖定常領域および軽鎖定常領域がそれぞれ連結した抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト由来の抗体に特徴的なアミノ酸配列で、ヒト抗体の対応する位置を置換した抗体を意味し、例えば、マウス又はラットを免疫して作製した抗体の重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を有し、重鎖及び軽鎖のそれぞれ４つのフレームワーク領域（ＦＲ）を含むその他のすべての領域がヒト抗体に由来するものが挙げられる。かかる抗体は、ＣＤＲ移植抗体と呼ばれる場合もある。「ヒト化抗体」は、ヒトキメラ抗体を含む場合もある。「ヒトキメラ抗体」は、非ヒト由来の抗体において、非ヒト由来の抗体の定常領域がヒトの抗体の定常領域に置換されている抗体である。ヒトキメラ抗体では、ＡＤＣＣ活性を高める観点では、例えば、定常領域に用いるヒトの抗体のサブタイプはＩｇＧ１とすることができる。「完全ヒト型抗体」とは、ＦＲおよびＣＤＲからなる可変領域ならびに定常領域の両方ともにヒト抗体に由来する抗体を意味する。また、抗体の細胞傷害性を増強する目的で抗体を抗体－薬物複合体の形態とすることもできる。また、抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体、または三重特異性抗体であってもよい。抗体は、単離された抗体、または精製された抗体であり得る。
【0018】
本明細書では、「抗原結合性断片」とは、抗原への結合性が維持された抗体の一部を意味する。抗原結合性断片は、本発明の抗体の重鎖可変領域若しくは軽鎖可変領域またはその両方を含みうる。抗原結合性断片は、キメラ化またはヒト化されていてもよい。抗原結合性断片としては、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２、Ｆｖが挙げられる。また、抗体結合性断片には、組換えにより生産された結合体または機能的等価物（例えば、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、ダイアボディー、ｓｃＤｂ、タンデムｓｃＦｖ、ロイシンジッパー型、ｓｃ（Ｆｖ） ２（単鎖（Ｆｖ） ２）等）の形態を有する、その他の抗体の一部）を含んでいてもよい。このような抗体の抗原結合性断片は、特に限定されないが例えば、抗体を酵素で処理して得ることができる。例えば、抗体をパパインで消化すると、Ｆａｂを得ることができる。あるいは、抗体をペプシンで消化すると、Ｆ（ａｂ’） ２を得ることができ、これをさらに還元するとＦａｂ’を得ることができる。本明細書ではこのような抗体の抗原結合性断片を用いることができる。ｓｃＦｖにおいては、ＶＬ及びＶＨが人工のポリペプチドリンカーで連結され、元の抗体と同じ抗原特異性が維持され得る。ＶＬ及びＶＨは、Ｎ末端側からＶＨ及びＶＬまたはＶＬ及びＶＨの順番で連結され得る。リンカーは、１０～２５アミノ酸程度の長さを有し、グリシンを豊富に含み、水溶性を高める目的でセリンやトレオニンなどのアミノ酸を含んでいてもよい。
【0019】
本明細書では、「結合速度定数」（ｋａ）および「解離速度定数」（ｋｄ）とは、２分子の結合解離反応における速度定数である。ｋａおよびｋｄは、当業者に周知の定数であり、適宜周知の技術、例えば、表面プラズモン共鳴法を用いて決定することができる。抗体の結合解離定数（Ｋ Ｄ）は、ｋｄ／ｋａで求められる。抗体は、標的分子に対して、例えば、１０ －７Ｍ以下、１０ －８Ｍ以下、１０ －９Ｍ以下、１０ －１０Ｍ以下、１０ －１１Ｍ以下、または１０ －１２Ｍ以下のＫ Ｄ値を有し得る。
【0020】
本明細書では、結合親和性が強い（または高い）とは、抗原に強く結合することを意味し、例えば、Ｋ Ｄ値が相対的に小さいことを意味する。結合親和性が弱い（または低い）とは、抗原に弱く結合することを意味し、結合親和性の高低は、例えば、結合相手が細胞である場合には、フローサイトメトリーにより細胞に結合した標識抗体の標識量の高低であり得る。
【0021】
本明細書では、ＨＥＲ２（またはその断片）に結合する抗体は、ＨＥＲ２（またはその断片）に特異的に結合する抗体であり得る。ここで特異的とは、他の分子（他の種類の分子、変異体、他の修飾を受けた分子、または修飾を受けていない分子）に結合する際の結合親和性よりも、規定された分子（例えば、ＨＥＲ２）に結合する際の結合親和性が強いことを意味する。特異的に結合する抗体は、例えば、ＨＥＲ２に対して１０ －７Ｍ以下、１０ －８Ｍ以下、１０ －９Ｍ以下、１０ －１０Ｍ以下、１０ －１１Ｍ以下、または１０ －１２Ｍ以下のＫ Ｄ値を有し得る。結合親和性の強度の観点では、ＨＥＲ２に対する結合親和性は、Ｋ Ｄ値において、２倍以上、３倍以上、４倍以上、５倍以上、６倍以上、７倍以上、８倍以上、９倍以上、１０倍以上、１００倍以上、１，０００倍以上、１０，０００倍以上、または１００，０００倍以上、下記で特定する変異体のいずれかに対する結合親和性よりも強いものであり得る。結合親和性の強弱は、統計学的に有意な差であり得る（例えば、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．００５、またはｐ＜０．０００１）。
【0022】
本明細書では、「抗体－薬物複合体」（ＡＤＣ）とは、抗体と薬物とが連結（コンジュゲート）した物質を意味する。ＡＤＣでは、抗体としてはモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが有利に用いられ得る。ＡＤＣでは、モノクローナル抗体と薬物とは適切なリンカーを介して連結させることができる。ＡＤＣは、細胞膜上の膜成分（例えば、受容体等の膜貫通タンパク質）に結合し、エンドサイトーシスやインターナライゼーションにより、細胞内に取り込まれ、抗体と切り離されて細胞内に放出される。細胞内で抗体と薬物との間に開裂性リンカーを導入しておくことで、細胞内、例えばエンドソーム内でリンカーを開裂させ薬物を抗体から乖離させて細胞質内に放出させることが可能である。薬物として、細胞傷害剤を用いると薬物が送達された細胞を死滅させることが可能である。細胞傷害剤としては、化学療法剤、放射性同位体、および毒素を用いることができる。
【0023】
本明細書では、「ＨＥＲ２標的化剤」とは、ＨＥＲ２またはその断片に対する結合分子（例えば、ＨＥＲ２もしくはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片もしくは当該抗原結合性断片を含む融合タンパク質）を含み、ＨＥＲ２をその標的として、その薬効を生じる薬剤を意味する。ＨＥＲ２標的化剤としては、例えば、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片またはこれらのいずれかを含む薬剤が挙げられる。薬剤は、ＡＤＣＣ活性を有する抗体自体であり得る。薬剤は、例えば、細胞傷害剤であり得る。薬剤はまた、細胞障害活性を有する細胞（例えば、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞等））であり得る。
【0024】
本明細書では、「核酸」とは、リボ核酸（ＲＮＡ）およびデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）などのヌクレオチドが連なった高分子を意味する。タンパク質は、ＤＮＡによりコードされ、ｍＲＮＡから翻訳される。タンパク質をコードするＤＮＡは、制御配列（例えば、プロモータ）と作動可能に連結させることができる。また、制御配列と作動可能に連結したタンパク質をコードするＤＮＡは、遺伝子発現ベクターに組込まれていてもよい。タンパク質をコードするＤＮＡは、ｍＲＮＡから逆転写により作製されたｃＤＮＡであってもよい。タンパク質をコードするｍＲＮＡは、５’末端にｍ７Ｇキャップを有していてよく、３’末端にポリ（Ａ）鎖を有していてよい。タンパク質をコードするｍＲＮＡにはリボソームが結合し、ｍＲＮＡからタンパク質が翻訳される。
【0025】
本明細書では、「がん」とは、細胞の制御不能な増殖を特徴とする疾患である。がん細胞には、局所的に広がるものと、血流またはリンパ系を通じて全身に広がるものとがある。がんの非限定的な例としては、例えば、固形腫瘍が挙げられる。がんの非限定的な例としては、例えば、造血器腫瘍が挙げられる。固形腫瘍としては、例えば、肺がん、膵臓がん、頭頸部がん、前立腺がん、膀胱がん、乳がん、食道がん、胃がん、大腸がん、子宮がん、卵巣がん、皮膚がん、甲状腺がん、胸腺がん、腎臓がん、精巣がん、陰茎がん、肝臓がん、胆道がん、脳腫瘍、骨軟部腫瘍、後腹膜腫瘍、血管・リンパ管肉腫、およびこれらの転移性のがん（例えば、転移性固形腫瘍）が挙げられる。また、造血器腫瘍としては、白血病、急性白血病、慢性白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無症候型およびハイグレード型）、多発性骨髄腫、ワルデンストローム・マクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、毛様細胞白血病および骨髄異形成が挙げられる。急性白血病としては、例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄急性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性の白血病および赤白血病が挙げられる。また、慢性白血病としては、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病および慢性リンパ性白血病が挙げられる。がんは特に、ＨＥＲ２陽性のがんであり得る。ＨＥＲ２陽性であるかは、当業者は周知の方法を用いて適宜決定することができる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片を用いてＨＥＲ２陽性か否かを決定してもよい。
【0026】
本明細書では、「処置」とは、予防的処置および治療的処置を含み、疾患を有する患者において、疾患の原因を軽減または除去すること、その進行を遅延または停止させること、その症状を軽減、緩和、改善または除去すること、および／または、その症状の悪化を抑制することを意味し、疾患が「がん」である場合には、がんの転移を抑制することも含む。
【0027】
本明細書では、「ＨＥＲ２」は、例えば、ヒトＨＥＲ２であり得る。ヒトＨＥＲ２は、例えば、Ｇｅｎｅｂａｎｋ受託番号：Ｘ０３３６３で登録される塩基配列（配列番号：１）によってコードされ得る。ヒトＨＥＲ２はまた、ＵｎｉｐｒｏｔＫＢ ＩＤ：Ｐ０４６２６で登録されるアミノ酸配列（配列番号：２）を有し得る。ヒトＨＥＲ２は、配列番号：２のアミノ酸配列において、アミノ酸番号１～２２のアミノ酸領域がシグナルペプチドであり、アミノ酸番号２３～６５２のアミノ酸領域が細胞外ドメイン（配列番号：３のアミノ酸配列を有し得る）であり、アミノ酸番号６５３～６７５のアミノ酸領域が膜貫通ドメインであり、アミノ酸番号６７６～１２５５のアミノ酸領域が細胞質ドメインである。ＨＥＲ２には、天然に見出されるＨＥＲ２の変種が含まれ得る。ＨＥＲ２は、標的であるので、その機能を低下または喪失していてもよいが、機能を保持または増強していてもよい。エピトープとして認識され得るＨＥＲ２としては、例えば、配列番号：２のアミノ酸配列のアミノ酸番号６１１～６１８のアミノ酸領域（ＭＰＩＷＫＦＰＤ：配列番号：３４）を有するものであり得る。また、エピトープとして認識され得るＨＥＲ２としては、例えば、配列番号：２のアミノ酸配列のアミノ酸番号６１２～６１８のアミノ酸領域（ＰＩＷＫＦＰＤ：配列番号：３５）を有するものであり得る。本明細書では、配列番号：２のアミノ酸配列のアミノ酸番号２３～６５２のアミノ酸領域（配列番号：３）からなるペプチドを「ＨＥＲ２ｅｃ」と呼ぶ。
【0028】
ＨＥＲ２は、免疫組織化学（ＩＨＣ）法または蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）法により、その発現または遺伝子増幅を検査することができる。
ＩＨＣ法では、２０１８ ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインに基づいて発現量をスコア化することができる（Ｗｏｌｆｆ ＡＣ， ｅｔ ａｌ： Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３６ （２０）， ２０１８： ２１０５－２１２２参照）。２０１８ ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインでは、ＨＥＲ２の発現量を
３＋：１０％を超える腫瘍細胞に強い完全な全周性の膜染色がみられる、
２＋：１０％を超える腫瘍細胞に弱～中等度の全周性の膜染色がみられる、
１＋：１０％を超える腫瘍細胞にかすかな／かろうじて認識できる不完全な膜染色がみられる、
０：染色像がみられない、または、１０％以下の腫瘍細胞に不完全なかすかな／かろうじて認識できる膜染色がみられる、
の４つの評点でスコア化することができる。
また、ＦＩＳＨでは、２００７ ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインに基づいて遺伝子増幅の程度を評価することができる。ＨＥＲ２遺伝子は、１７番染色体上に存在し、したがって、１７番染色体のセントロメアの数に対するＨＥＲ２遺伝子の比を測定することによって遺伝子増幅の程度を評価することができる。ＨＥＲ２の検査は、市販のキットを用いて実施することができる。
ＩＨＣ法では、２０１８ ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインに基づいて発現量をスコア化することができる（Ｗｏｌｆｆ ＡＣ， ｅｔ ａｌ： Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３６ （２０）， ２０１８： ２１０５－２１２２参照）。２０１８ ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインでは、ＨＥＲ２の発現量を
３＋：１０％を超える腫瘍細胞に強い完全な全周性の膜染色がみられる、
２＋：１０％を超える腫瘍細胞に弱～中等度の全周性の膜染色がみられる、
１＋：１０％を超える腫瘍細胞にかすかな／かろうじて認識できる不完全な膜染色がみられる、
０：染色像がみられない、または、１０％以下の腫瘍細胞に不完全なかすかな／かろうじて認識できる膜染色がみられる、
の４つの評点でスコア化することができる。
また、ＦＩＳＨでは、２００７ ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインに基づいて遺伝子増幅の程度を評価することができる。ＨＥＲ２遺伝子は、１７番染色体上に存在し、したがって、１７番染色体のセントロメアの数に対するＨＥＲ２遺伝子の比を測定することによって遺伝子増幅の程度を評価することができる。ＨＥＲ２の検査は、市販のキットを用いて実施することができる。
【0029】
本明細書では、「～に対応するアミノ酸配列」とは、アラインメントしたときに対応するアミノ酸配列であることを意味する。
【0030】
２つのアミノ酸配列のアラインメントは、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアルゴリズムを用いてデフォルトパラメータで２つまたは複数のアミノ酸配列のアラインメントを行うことができる。アラインメントアルゴリズムは、ｆａｓｔおよびｓｌｏｗ、このましくはｓｌｏｗを用いることができる。デフォルトパラメータは例えば、ＧＡＰ ＯＰＥＮ：１０、ＧＡＰ ＥＸＴＥＮＳＩＯＮ：０．１、ＫＴＵＰ：１、ＷＩＮＤＯＷ ＬＥＮＧＴＨ：５、ＴＯＰＤＩＡＧ：５、およびＰＡＩＲＧＡＰ：３からなる群から選択される１以上またはすべてのパラメータを満たすものとすることができる。これにより、対応するアミノ酸配列を特定することができる。また、これによりアミノ酸配列の同一性を決定することができる。
【0031】
本明細書では、「抗体がＨＥＲ２への結合に関して競合する」とは、抗体が、ＨＥＲ２上での結合部位（エピトープ）が重なり合い、ＨＥＲ２の結合部位を奪い合うなどの理由によって、両方の抗体が同時にＨＥＲ２に結合できないことを意味する。抗体がＨＥＲ２への結合に関して競合するか否かは、抗体の競合試験により決定することができる。
【0032】
本明細書では、「エピトープ」とは、抗体が結合する標的分子表面上の部位を意味する。
【0033】
＜本発明の抗体またはその抗原結合性断片＞
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。本発明の抗体またはその抗原結合性断片には、１～数個のアミノ酸の挿入、欠失、付加および置換からなる群から選択される変異を有する抗体またはその抗原結合性断片が含まれ得る。ある実施態様において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片における少なくとも１つのＣＤＲ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、またはそれ以上のＣＤＲと実質的に同一である、少なくとも１つのＣＤＲ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、またはそれ以上のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の実施態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片における、または本発明の抗体またはその抗原結合性断片に由来する、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲと実質的に同一である少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを有する抗体が含まれる。ある実施態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片における少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲと、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲが含まれる。ある実施態様において、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片における、または本発明の抗体またはその抗原結合性断片に由来する、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲにおいて、少なくとも１つの挿入、欠失、付加または置換が含まれる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片には、８０％以上、８５％以上、９０％以上、または９５％以上のアミノ酸配列の同一性を有し、抗体の抗原特異性を有する抗体またはその抗原結合性断片が含まれ得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片には、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のフレームワーク（ＦＲ）領域において１～数個のアミノ酸の挿入、欠失、付加および置換からなる群から選択される変異を有する抗体またはその抗原結合性断片が含まれ得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体であり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して結合親和性（または反応性）を有する。したがって、がん細胞への標的化に用いることができる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、より好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合親和性（または反応性）を有し得る。したがって、がん細胞への特異的な標的化に用いることができる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、さらに好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず（例えば、全く反応せず、または実質的な反応はなく）、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。したがって、がん細胞への標的化（特に特異的な標的化）に用いることができる。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。本発明の抗体またはその抗原結合性断片には、１～数個のアミノ酸の挿入、欠失、付加および置換からなる群から選択される変異を有する抗体またはその抗原結合性断片が含まれ得る。ある実施態様において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片における少なくとも１つのＣＤＲ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、またはそれ以上のＣＤＲと実質的に同一である、少なくとも１つのＣＤＲ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、またはそれ以上のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の実施態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片における、または本発明の抗体またはその抗原結合性断片に由来する、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲと実質的に同一である少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを有する抗体が含まれる。ある実施態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片における少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲと、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲが含まれる。ある実施態様において、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片における、または本発明の抗体またはその抗原結合性断片に由来する、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲにおいて、少なくとも１つの挿入、欠失、付加または置換が含まれる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片には、８０％以上、８５％以上、９０％以上、または９５％以上のアミノ酸配列の同一性を有し、抗体の抗原特異性を有する抗体またはその抗原結合性断片が含まれ得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片には、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のフレームワーク（ＦＲ）領域において１～数個のアミノ酸の挿入、欠失、付加および置換からなる群から選択される変異を有する抗体またはその抗原結合性断片が含まれ得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体であり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して結合親和性（または反応性）を有する。したがって、がん細胞への標的化に用いることができる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、より好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合親和性（または反応性）を有し得る。したがって、がん細胞への特異的な標的化に用いることができる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、さらに好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず（例えば、全く反応せず、または実質的な反応はなく）、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。したがって、がん細胞への標的化（特に特異的な標的化）に用いることができる。
【0034】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、医薬成分として用いる観点で、好ましくは、モノクローナル抗体であり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、医薬成分として用いる観点で、好ましくは、単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片である。本発明によれば、単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片と医薬上許容可能な添加剤とを含む医薬組成物が提供され得る。
【0035】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、すなわち
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片；または、
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、例えば、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいて、Ｗ６１４Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、Ｆ６１６Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、Ｗ６１４ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、またはＫ６１５ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体もしくはその抗原結合性断片｛上記において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部は配列番号：２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号６１３～６２２の領域であってもよい｝。ここで、Ｗ６１４Ａは、配列番号２に記載のＨＥＲ２のアミノ酸配列においてアミノ酸番号６１４のトリプトファン（Ｗ）に対応するアミノ酸残基がアラニン（Ａ）に置換されていることを意味し、Ｋ６１５Ａは、配列番号２に記載のＨＥＲ２のアミノ酸配列においてアミノ酸番号６１５のリジン（Ｋ）に対応するアミノ酸残基がアラニン（Ａ）に置換されていることを意味し、Ｆ６１６Ａは、配列番号２に記載のＨＥＲ２のアミノ酸配列においてアミノ酸番号６１６のフェニルアラニン（Ｆ）に対応するアミノ酸残基がアラニン（Ａ）に置換されていることを意味する。上記ペプチドは、合成ポリペプチドであり得る。上記ペプチドは、ある好ましい態様では糖鎖修飾を受けていない。
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片；または、
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、例えば、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいて、Ｗ６１４Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、Ｆ６１６Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、Ｗ６１４ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、またはＫ６１５ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体もしくはその抗原結合性断片｛上記において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部は配列番号：２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号６１３～６２２の領域であってもよい｝。ここで、Ｗ６１４Ａは、配列番号２に記載のＨＥＲ２のアミノ酸配列においてアミノ酸番号６１４のトリプトファン（Ｗ）に対応するアミノ酸残基がアラニン（Ａ）に置換されていることを意味し、Ｋ６１５Ａは、配列番号２に記載のＨＥＲ２のアミノ酸配列においてアミノ酸番号６１５のリジン（Ｋ）に対応するアミノ酸残基がアラニン（Ａ）に置換されていることを意味し、Ｆ６１６Ａは、配列番号２に記載のＨＥＲ２のアミノ酸配列においてアミノ酸番号６１６のフェニルアラニン（Ｆ）に対応するアミノ酸残基がアラニン（Ａ）に置換されていることを意味する。上記ペプチドは、合成ポリペプチドであり得る。上記ペプチドは、ある好ましい態様では糖鎖修飾を受けていない。
【0036】
ＨＥＲ２に対する結合反応性は、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって評価することもできる。ＥＬＩＳＡでは、例えば、抗体に連結させた酵素の存在または量を当該酵素に対する基質の反応物の量によって評価することができる。例えば、酵素としてセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を用い、基質として３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を用いると、ＴＭＢを酸化して３７０ｎｍと６５２ｎｍに最大吸収をもつ青色に発色する。硫酸を含む反応停止液をさらに接触させると４５０ｎｍに最大吸収をもつ黄色に発色する。例えば、６５２ｎｍの吸光を測定することにより、反応した抗体量を推定し、反応した抗体の量に基づいて抗体の抗原に対する反応性を評価することができる。そして、反応した抗体の量が多いほど、抗体の抗原に対する反応性が高いと評価できる。そして、結合反応性（反応した抗体量）において、１．５倍以上、２倍以上、３倍以上、４倍以上、５倍以上、６倍以上、７倍以上、８倍以上、９倍以上、１０倍以上、１００倍以上、１，０００倍以上、１０，０００倍以上、または１００，０００倍以上、上記変異体に対する結合反応性よりも強いものであり得る。結合反応性の強弱は、統計学的に有意な差であり得る（例えば、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．００５、またはｐ＜０．０００１）。
【0037】
以下、本発明の抗体またはその抗原結合性断片について詳述する。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片はいずれも、がん細胞（例えば、ＬＮ２２９細胞）上に発現したＨＥＲ２に結合する。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有することが好ましい。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ある態様では、がん細胞（例えば、ＬＮ２２９細胞）上に発現したＨＥＲ２に結合し、非がん細胞（例えば、正常細胞）上に発現したＨＥＲ２には有意な結合を示さないことがより好ましい。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片はいずれも、がん細胞（例えば、ＬＮ２２９細胞）上に発現したＨＥＲ２に結合する。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有することが好ましい。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ある態様では、がん細胞（例えば、ＬＮ２２９細胞）上に発現したＨＥＲ２に結合し、非がん細胞（例えば、正常細胞）上に発現したＨＥＲ２には有意な結合を示さないことがより好ましい。
【0038】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドは、配列番号：２のアミノ酸配列の部分ペプチドであり得る。配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドは、配列番号：２のアミノ酸配列の部分ペプチドであり、１０～２０アミノ酸長、１１～１９アミノ酸長、１２～１８アミノ酸長、１３～１７アミノ酸長、１４～１６アミノ酸長、または約１５アミノ酸長であり得る。配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドは、配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドであり得る。この領域は、がん細胞膜上に発現したＨＥＲ２において抗体がアクセス可能な立体配置を有すると考えられ、したがって、この領域を標的とする抗体は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性（または反応性）を持って結合し得る。ある好ましい態様では、この領域を標的とする抗体は、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。ペプチド自体が糖鎖修飾を有する必要は無く、ペプチドは、糖鎖修飾を有しなくてよい。
ここで、上記ペプチドは、特に限定されないが、好ましくは、合成ペプチドであり得る。
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドは、配列番号：２のアミノ酸配列の部分ペプチドであり得る。配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドは、配列番号：２のアミノ酸配列の部分ペプチドであり、１０～２０アミノ酸長、１１～１９アミノ酸長、１２～１８アミノ酸長、１３～１７アミノ酸長、１４～１６アミノ酸長、または約１５アミノ酸長であり得る。配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドは、配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドであり得る。この領域は、がん細胞膜上に発現したＨＥＲ２において抗体がアクセス可能な立体配置を有すると考えられ、したがって、この領域を標的とする抗体は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性（または反応性）を持って結合し得る。ある好ましい態様では、この領域を標的とする抗体は、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。ペプチド自体が糖鎖修飾を有する必要は無く、ペプチドは、糖鎖修飾を有しなくてよい。
ここで、上記ペプチドは、特に限定されないが、好ましくは、合成ペプチドであり得る。
【0039】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｉｉ） 配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る、または、
配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体またはＫ６１５ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る、もしくは
配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＫ６１５Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体ペプチド、もしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体ペプチド、もしくはＷ６１４ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体ペプチドに対するよりも、配列番号３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。この領域またはその周辺に結合する抗体は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性（または反応性）を持って結合し得る。上記において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部は配列番号：２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号６１３～６２２の領域であってもよい。
ここで、前記細胞外ドメインは、非がん細胞もしくはがん細胞に発現させたペプチドまたは合成ペプチドであってもよい。前記細胞外ドメインは、好ましくは、合成ペプチドであり得る。また、これらの抗体は、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドへの結合に関して相互に競合してもよい。また、これらの抗体は、がん細胞（例えば、ＬＮ２２９細胞）上に発現したＨＥＲ２への結合に関して相互に競合してもよい。
（ｉｉ） 配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る、または、
配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体またはＫ６１５ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る、もしくは
配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＫ６１５Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体ペプチド、もしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体ペプチド、もしくはＷ６１４ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体ペプチドに対するよりも、配列番号３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。この領域またはその周辺に結合する抗体は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性（または反応性）を持って結合し得る。上記において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部は配列番号：２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号６１３～６２２の領域であってもよい。
ここで、前記細胞外ドメインは、非がん細胞もしくはがん細胞に発現させたペプチドまたは合成ペプチドであってもよい。前記細胞外ドメインは、好ましくは、合成ペプチドであり得る。また、これらの抗体は、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドへの結合に関して相互に競合してもよい。また、これらの抗体は、がん細胞（例えば、ＬＮ２２９細胞）上に発現したＨＥＲ２への結合に関して相互に競合してもよい。
【0040】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｉｉｉ）配列番号：１８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｉｖ）配列番号：２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｖ）上記（ｉｉｉ）の抗体とＨＥＲ２との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片；または
（ｖｉ）上記（ｉｖ）の抗体とＨＥＲ２との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片はまた、上記（ｉｉｉ）または（ｉｖ）の少なくとも１つのＣＤＲにおいて、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個、例えば、２個、３個、４個、または５個）のアミノ酸の変異を有する本発明の抗体またはその抗原結合性断片であり得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性を持って結合し得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、非ヒト動物抗体またはその抗原結合性断片であり得る。非ヒト動物は、例えば、齧歯類、例えば、マウスであり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片はまた、好ましくは、キメラ抗体またはヒトキメラ抗体であり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、より好ましくは、ヒト化抗体またはヒト化抗体の抗原結合性断片であり得る。
（ｉｉｉ）配列番号：１８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｉｖ）配列番号：２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｖ）上記（ｉｉｉ）の抗体とＨＥＲ２との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片；または
（ｖｉ）上記（ｉｖ）の抗体とＨＥＲ２との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片はまた、上記（ｉｉｉ）または（ｉｖ）の少なくとも１つのＣＤＲにおいて、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個、例えば、２個、３個、４個、または５個）のアミノ酸の変異を有する本発明の抗体またはその抗原結合性断片であり得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性を持って結合し得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、非ヒト動物抗体またはその抗原結合性断片であり得る。非ヒト動物は、例えば、齧歯類、例えば、マウスであり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片はまた、好ましくは、キメラ抗体またはヒトキメラ抗体であり得る。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、より好ましくは、ヒト化抗体またはヒト化抗体の抗原結合性断片であり得る。
【0041】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｖｉｉ）配列番号：１４の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：１５の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｖｉｉｉ）配列番号：１６の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：１７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｉｘ）上記（ｖｉｉ）の抗体とＨＥＲ２｛例えば、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチド、またはＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２｝との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片；または
（ｘ）上記（ｖｉｉｉ）の抗体とＨＥＲ２｛例えば、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチド、またはＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２｝との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片はまた、上記（ｖｉｉ）または（ｖｉｉｉ）の各可変領域において少なくとも１つの置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個）のアミノ酸の変異を有する本発明の抗体またはその抗原結合性断片であり得る。ある態様において、各可変領域における置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個）のアミノ酸の変異はＣＤＲ以外の変異であり得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｘｉ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｘｉｉ）配列番号：８１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：８４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：８７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：９０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：９３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：９６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：９９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１００に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１０２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１０５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１０８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１１１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１１４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１１７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１２０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１２３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１２６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１２９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１３２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１３５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１３８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１４１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１４７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１５０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１５３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１５６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１５９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１６２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１６５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１６８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１７１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１７７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１８０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１８９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１９２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１９５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１９８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２００に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：２０１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２０２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２０４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２０５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する、抗体またはその抗原結合性断片であり得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号：３９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｂ）配列番号：４１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｃ）配列番号：４３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｄ）配列番号：４５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｅ）配列番号：４７の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｆ）配列番号：４９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｇ）配列番号：５１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｈ）配列番号：５３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｉ）配列番号：５５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｊ）配列番号：５７の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｋ）配列番号：５９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｌ）配列番号：６１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｍ）配列番号：６３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｎ）配列番号：６５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｏ）配列番号：６７の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｐ）配列番号：６９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｑ）配列番号：７１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｒ）配列番号：７３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｓ）配列番号：７５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｔ）配列番号：７７の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｕ）配列番号：７９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：８０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；または
（ｘｉｖ）上記（ｘｉｉ）（ａ）～（ｕ）の各抗体とＨＥＲ２｛例えば、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチド、またはＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２｝との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。
上記（ｘｉ）～（ｘｉｖ）の抗体もしくはその抗原結合性断片には、当業者であれば明らかな通り、後記する本発明の抗体またはその抗原結合性断片の説明等を適用し得る。
（ｖｉｉ）配列番号：１４の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：１５の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｖｉｉｉ）配列番号：１６の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：１７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｉｘ）上記（ｖｉｉ）の抗体とＨＥＲ２｛例えば、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチド、またはＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２｝との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片；または
（ｘ）上記（ｖｉｉｉ）の抗体とＨＥＲ２｛例えば、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチド、またはＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２｝との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片はまた、上記（ｖｉｉ）または（ｖｉｉｉ）の各可変領域において少なくとも１つの置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個）のアミノ酸の変異を有する本発明の抗体またはその抗原結合性断片であり得る。ある態様において、各可変領域における置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個）のアミノ酸の変異はＣＤＲ以外の変異であり得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｘｉ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含むペプチドに結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｘｉｉ）配列番号：８１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：８４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：８７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：８８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：８９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：９０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：９３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：９６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：９７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：９８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：９９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１００に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１０２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１０５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１０７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１０８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１０９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１１１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１１４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１１７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１１８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１１９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１２０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１２３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１２６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１２７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１２８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１２９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１３２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１３５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１３７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１３８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１３９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１４１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１４７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１４８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１４９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１５０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１５３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１５６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１５７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１５８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１５９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１６２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１６５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１６７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１６８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１６９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１７１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１７７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１７８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１７９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１８０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１８７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１８８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１８９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１９２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９３に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：１９５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：１９７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：１９８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：１９９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２００に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する；
配列番号：２０１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２０２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、ならびに
配列番号：２０４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号：２０５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、および
配列番号：２０６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する、抗体またはその抗原結合性断片であり得る。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号：３９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｂ）配列番号：４１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｃ）配列番号：４３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｄ）配列番号：４５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｅ）配列番号：４７の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：４８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｆ）配列番号：４９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｇ）配列番号：５１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｈ）配列番号：５３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｉ）配列番号：５５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｊ）配列番号：５７の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：５８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｋ）配列番号：５９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｌ）配列番号：６１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｍ）配列番号：６３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｎ）配列番号：６５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｏ）配列番号：６７の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：６８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｐ）配列番号：６９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｑ）配列番号：７１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｒ）配列番号：７３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｓ）配列番号：７５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｔ）配列番号：７７の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：７８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；
（ｕ）配列番号：７９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号：８０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体もしくはその抗原結合性断片；または
（ｘｉｖ）上記（ｘｉｉ）（ａ）～（ｕ）の各抗体とＨＥＲ２｛例えば、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチド、またはＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２｝との結合に関して競合する抗体もしくはその抗原結合性断片であり得る。
上記（ｘｉ）～（ｘｉｖ）の抗体もしくはその抗原結合性断片には、当業者であれば明らかな通り、後記する本発明の抗体またはその抗原結合性断片の説明等を適用し得る。
【0042】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合親和性（または反応性）を有する、単離されたモノクローナル抗体または抗体の抗原結合性断片であって、より好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る、単離されたモノクローナル抗体または抗体の抗原結合性断片であって、
上記（ｉ）～（ｘｉｖ）のいずれか１以上を満たす、抗体またはその抗原結合性断片であり得る。
この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｉ）または（ｉｉ）のいずれか１以上のプロファイルを有するものであってもよい。さらに、具体的には、上記（ｉ）のみ、上記（ｉｉ）のみ、または上記（ｉ）および（ｉｉ）のプロファイルを有するものであってもよい。
この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉ）を満たし得る。この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉｉ）を満たし得る。この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉ）および（ｉｉ）を満たし得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性（または反応性）を持って結合し得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。
上記（ｉ）～（ｘｉｖ）のいずれか１以上を満たす、抗体またはその抗原結合性断片であり得る。
この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｉ）または（ｉｉ）のいずれか１以上のプロファイルを有するものであってもよい。さらに、具体的には、上記（ｉ）のみ、上記（ｉｉ）のみ、または上記（ｉ）および（ｉｉ）のプロファイルを有するものであってもよい。
この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉ）を満たし得る。この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉｉ）を満たし得る。この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉ）および（ｉｉ）を満たし得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性（または反応性）を持って結合し得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。
【0043】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｉ）～（ｘｉｖ）のいずれか１以上を満たす、抗体またはその抗原結合性断片であり得る。
この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｉ）および（ｉｉ）のいずれか１以上のプロファイルを有するものであってもよい。さらに、具体的には、上記（ｉ）のみ、上記（ｉｉ）のみ、または上記（ｉ）および（ｉｉ）のプロファイルを有するものであってもよい。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性（または反応性）を持って結合し得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。
この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉ）を満たし得る。この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉｉ）を満たし得る。この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉ）および（ｉｉ）を満たし得る。
この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｉ）および（ｉｉ）のいずれか１以上のプロファイルを有するものであってもよい。さらに、具体的には、上記（ｉ）のみ、上記（ｉｉ）のみ、または上記（ｉ）および（ｉｉ）のプロファイルを有するものであってもよい。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性（または反応性）を持って結合し得る。これらの抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る。
この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉ）を満たし得る。この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉｉ）を満たし得る。この態様では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、および（ｘｉｖ）からなる群から選択される１以上と上記（ｉ）および（ｉｉ）を満たし得る。
【0044】
本発明の抗体は、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）活性および／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）活性を有し得る。ＡＤＣＣ活性とは、標的細胞の細胞表面抗原に本発明の抗体が結合した際、そのＦｃ部分にＦｃγ受容体保有細胞（エフェクター細胞）がＦｃγ受容体を介して結合し、標的細胞に障害を与える活性を意味する。
ＡＤＣＣ活性は、ＨＥＲ２を発現している標的細胞（がん細胞、例えば、ＬＮ２２９細胞やＳＫ－ＢＲ－３細胞）とエフェクター細胞と本発明の抗体を混合し、ＡＤＣＣの程度を測定することによって評価することができる。エフェクター細胞としては、例えば、マウス脾細胞、ヒト末梢血や骨髄から分離した単球核を利用することができる。標的細胞としては、例えばＨＥＲ２陽性乳がん細胞を用いることができる。標的細胞をあらかじめ ５１Ｃｒ等で標識し、これに本発明の抗体を加えてインキュベーションし、その後標的細胞に対して適切な比のエフェクター細胞（エフェクター細胞は活性化されていてもよい）を加えてインキュベーションを行う。インキュベーション後、上清を採取し、上清中の上記標識をカウントすることにより、測定することが可能である。ＣＤＣ活性とは、補体系による細胞障害活性を意味する。ＣＤＣ活性は、ＡＤＣＣ活性の試験において、エフェクター細胞に代えて補体を用いることにより測定することができる。
ＡＤＣＣ活性は、ＨＥＲ２を発現している標的細胞（がん細胞、例えば、ＬＮ２２９細胞やＳＫ－ＢＲ－３細胞）とエフェクター細胞と本発明の抗体を混合し、ＡＤＣＣの程度を測定することによって評価することができる。エフェクター細胞としては、例えば、マウス脾細胞、ヒト末梢血や骨髄から分離した単球核を利用することができる。標的細胞としては、例えばＨＥＲ２陽性乳がん細胞を用いることができる。標的細胞をあらかじめ ５１Ｃｒ等で標識し、これに本発明の抗体を加えてインキュベーションし、その後標的細胞に対して適切な比のエフェクター細胞（エフェクター細胞は活性化されていてもよい）を加えてインキュベーションを行う。インキュベーション後、上清を採取し、上清中の上記標識をカウントすることにより、測定することが可能である。ＣＤＣ活性とは、補体系による細胞障害活性を意味する。ＣＤＣ活性は、ＡＤＣＣ活性の試験において、エフェクター細胞に代えて補体を用いることにより測定することができる。
【0045】
本発明の抗体は、Ｆｃ領域に１以上のＮ－結合型糖鎖が結合し、該Ｎ－結合型糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない抗体であってもよい。例えばＩｇＧ抗体のＦｃ領域には、Ｎ－結合型糖鎖の結合部位が２ヶ所存在し、この部位に複合型糖鎖が結合している。Ｎ－結合型糖鎖とは、Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ配列のＡｓｎに結合する糖鎖をいい、共通した構造Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２－Ａｓｎを有する。非還元末端の２つのマンノース（Ｍａｎ）に結合する糖鎖の種類により、高マンノース型、混成型、及び複合型等に分類される。Ｎ－結合型糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）にはフコースが結合しうるが、このフコースが結合していない場合、結合している場合に比較してＡＤＣＣ活性が著しく上昇することが知られている。このことは例えば、国際公開第２００２／０３１１４０号パンフレットに記載されており、その開示は全体として参照により本明細書に組み込まれる。ＡＤＣＣ活性が著しく向上することにより、抗体を医薬として用いる場合に投与量を少なくすることができるので、副作用を軽減させることが可能であると共に、治療費も低減させることができる。ＡＤＣＣ活性を高めるためには、抗体の定常領域に用いるヒトの抗体のサブタイプをＩｇＧ１とすることができる。
【0046】
＜抗体－薬物複合体＞
本発明によれば、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと薬物との複合体（抗体－薬物複合体；ＡＤＣ）が提供される。本発明のＡＤＣでは、抗体またはその抗原結合フラグメントと薬物（例えば、細胞を傷害する特性を有する成分であり、例えば、細胞傷害剤である）とはリンカーを介して連結し得る。本発明のＡＤＣでは、細胞傷害剤としては、化学療法剤（例えば、市販の抗がん剤などの抗がん剤、例えば、アウリスタチン（アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦとそれらの誘導体）、メイタンシノイドＤＭ１およびＤＭ４とそれらの誘導体）、カンプトテシン（ＳＮ－３８、トポテカンおよびエキソテカンとそれらの誘導体）、ＤＮＡ副溝結合剤（エネジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシンとそれらの誘導体）、タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセルとそれらの誘導体）、ポリケチド（ディスコデルモライドとその誘導体）、アントラキノン系（ミトキサントロンとその誘導体）、ベンゾジアゼピン（ピロロベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、およびオキサゾリジノベンゾジアゼピンとそれらの誘導体）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビンとそれらの誘導体）、ドキソルビシン類（ドキソルビシン、モルホリノ－ドキソルビシン、およびシアノモルホリノ－ドキソルビシンとそれらの誘導体）、強心配糖体（ジギトキシンやその誘導体）、カレキアマイシン、エポチロン、クリプトフィシン、セマドチン、セマドチン、リゾキシン、ネトロプシン、コンブレタスタチン、エリュテロビン、エトポシド、Ｔ６７（チュラリク）、およびノコダゾール）、放射性同位体（例えば、 ３２Ｐ、 ６０Ｃ、 ９０Ｙ、 １１１Ｉｎ、 １３１Ｉ、 １２５Ｉ、 １５３Ｓｍ、 １８６Ｒｅ、 １８８Ｒｅ、および ２１２Ｂｉ）、および毒素（例えば、ジフテリアトキシンＡ、シュードモナスエンドトキシン、リシン、サポリン等）が挙げられ、本発明のＡＤＣにおける細胞傷害剤として用いることができる。細胞傷害剤はいずれも、がんの処置に用いられるものを用いることができる。
本発明によれば、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと薬物との複合体（抗体－薬物複合体；ＡＤＣ）が提供される。本発明のＡＤＣでは、抗体またはその抗原結合フラグメントと薬物（例えば、細胞を傷害する特性を有する成分であり、例えば、細胞傷害剤である）とはリンカーを介して連結し得る。本発明のＡＤＣでは、細胞傷害剤としては、化学療法剤（例えば、市販の抗がん剤などの抗がん剤、例えば、アウリスタチン（アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦとそれらの誘導体）、メイタンシノイドＤＭ１およびＤＭ４とそれらの誘導体）、カンプトテシン（ＳＮ－３８、トポテカンおよびエキソテカンとそれらの誘導体）、ＤＮＡ副溝結合剤（エネジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシンとそれらの誘導体）、タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセルとそれらの誘導体）、ポリケチド（ディスコデルモライドとその誘導体）、アントラキノン系（ミトキサントロンとその誘導体）、ベンゾジアゼピン（ピロロベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、およびオキサゾリジノベンゾジアゼピンとそれらの誘導体）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビンとそれらの誘導体）、ドキソルビシン類（ドキソルビシン、モルホリノ－ドキソルビシン、およびシアノモルホリノ－ドキソルビシンとそれらの誘導体）、強心配糖体（ジギトキシンやその誘導体）、カレキアマイシン、エポチロン、クリプトフィシン、セマドチン、セマドチン、リゾキシン、ネトロプシン、コンブレタスタチン、エリュテロビン、エトポシド、Ｔ６７（チュラリク）、およびノコダゾール）、放射性同位体（例えば、 ３２Ｐ、 ６０Ｃ、 ９０Ｙ、 １１１Ｉｎ、 １３１Ｉ、 １２５Ｉ、 １５３Ｓｍ、 １８６Ｒｅ、 １８８Ｒｅ、および ２１２Ｂｉ）、および毒素（例えば、ジフテリアトキシンＡ、シュードモナスエンドトキシン、リシン、サポリン等）が挙げられ、本発明のＡＤＣにおける細胞傷害剤として用いることができる。細胞傷害剤はいずれも、がんの処置に用いられるものを用いることができる。
【0047】
抗体は、がん細胞内にインターナライズする抗体であることが望ましいが、インターナライズしない抗体であっても用いることができる。がん周辺組織に抗がん剤を送達しさえすれば、バイスタンダー効果によってがんを殺傷することができるためである。
【0048】
本発明のある態様では、リンカーは非開裂性リンカーまたは開裂性リンカーであり得る。抗体とリンカーとの結合は、例えば抗体のスルフヒドリル基にマレイミド基を介して連結することができる。リンカーには必要に応じてポリエチレングリコールブロックが含まれていてもよい。
【0049】
例えば、開裂性リンカーとしては、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）およびフェニルアラニン－リジン（Ｐｈｅ－ｌｙｓ）リンカーなどのペプチドリンカーや、ｐＨ依存的に開裂するヒドラゾンリンカーが挙げられる。開裂性リンカーとしてはまた、カルバメート結合またはエステル結合を含むリンカーが挙げられ、これらは酵素的に細胞内で分解されうる。これらのリンカーは組み合わせて用いてもよい。
本発明のある態様では、マレイミド基－ＰＥＧ－Ｖａｌ－Ｃｉｔにより抗体と細胞傷害剤を連結することができる。本発明のある態様では、本願実施例で用いたリンカー（例えば、マレイミド基－ＰＥＧ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－細胞傷害剤）を用いることができる。
また、リンカーと細胞傷害剤との間には、スペーサーを介在させてもよい。
本発明のある態様では、マレイミド基－ＰＥＧ－Ｖａｌ－Ｃｉｔにより抗体と細胞傷害剤を連結することができる。本発明のある態様では、本願実施例で用いたリンカー（例えば、マレイミド基－ＰＥＧ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－細胞傷害剤）を用いることができる。
また、リンカーと細胞傷害剤との間には、スペーサーを介在させてもよい。
【0050】
＜本発明の抗体の製造方法＞
本発明の抗体は、（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれか１以上のアミノ酸配列を含むペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３１のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３２のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３３のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３４のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３５のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３６のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。またさらに、本発明の抗体は、配列番号：３７のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ペプチドは、合成ペプチドであり得る。
本発明の抗体は、（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれか１以上のアミノ酸配列を含むペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３１のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３２のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３３のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３４のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３５のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ある態様では、本発明の抗体は、配列番号：３６のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。またさらに、本発明の抗体は、配列番号：３７のアミノ酸配列からなるペプチドを免疫原として動物に投与することによって得られ得る。ペプチドは、合成ペプチドであり得る。
【0051】
本発明の抗体はまた、ＨＥＲ２ｅｃ等のＨＥＲ２の細胞外ドメイン部分を免疫原として動物に投与することによって得られ得る。本発明の抗体はまた、ファージディスプレイなどの当業者に周知の方法によっても得られ得る。ＨＥＲ２の細胞外ドメイン部分は、合成ペプチドであり得る。ＨＥＲ２の細胞外ドメイン部分は、細胞、例えば、非がん細胞またはがん細胞、例えば、がん細胞株（例えば、ＬＮ２２９細胞）に発現させたものであり得る。
【0052】
動物への免疫原の免疫は、当業者が周知の方法によって行うことができる。ＨＥＲ２またはその部分ペプチドに対する抗体が産生されたかどうかは、例えば、免疫した動物から得られる体液（例えば、血液、血漿、または血清）または免疫細胞（例えば、脾臓細胞）を用いて確認することができる。モノクローナル抗体は、当業者が、ハイブリドーマ法などの周知の方法により作製することができる。ハイブリドーマは、当業者に周知の方法により作製され得る。作製後、ハイブリドーマを限外希釈法により単一クローンにする。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ上清に分泌され得る。モノクローナル抗体が、所望の結合特性を有するものであるかは、当業者であれば、結合アッセイ（結合試験）によって確認することができる。
【0053】
例えば、抗体が、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性を持って結合するか否か、すなわち、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得るか否かは、当業者であれば容易に試験することができる。試験は、好ましくは、インビトロの試験であり得る。試験は、例えば、がん細胞としてがん細胞株、特にＨＥＲ２陽性のがん細胞株（例えば、ＳＫ－ＢＲ－３細胞）を用いることができる。試験はまた、例えば、非がん細胞として、非がん細胞株または正常細胞株、特にＨＥＲ２陽性の非がん細胞株または正常細胞株（例えば、ＨａＣａＴ細胞）を用いることができる。例えば、細胞を単一細胞化して、フローサイトメトリーにより、標識抗体との相互作用を分析することによって、がん細胞に対して非がん細胞に対するよりも強い結合親和性を持って結合するか否かを決定することができる。標識は、蛍光標識等の当業者に周知の標識を用いることができる。また、ＨＥＲ２発現するがん細胞に対する結合反応性（反応した抗体量）は、１．５倍以上、２倍以上、３倍以上、４倍以上、５倍以上、６倍以上、７倍以上、８倍以上、９倍以上、１０倍以上、１００倍以上、１，０００倍以上、１０，０００倍以上、または１００，０００倍以上、ＨＥＲ２を発現する正常細胞に対する結合反応性よりも強いものであり得る。結合反応性の強弱は、統計学的に有意な差であり得る（例えば、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．００５、またはｐ＜０．０００１）。がん細胞に対する結合反応性は、例えば、フローサイトメトリーを用いて評価できる。結合親和性や反応性をフローサイトメトリーにより決定する場合には、例えば、ピーク値を比較することができる。抗体が、非がん細胞（例えば、正常細胞）に対して有意な結合を示さないことは、抗体が非がん細胞株（例えば正常細胞株、特にＨＥＲ２陽性の非がん細胞株または正常細胞株（例えば、ＨａＣａＴ細胞））に対して有意な結合を示すか否かを試験することにより決定することができる。
【0054】
例えば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片が上記（ｉ）を満たすか否かは、ハイブリドーマ上清と配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドのそれぞれとが結合するかをアッセイによって試験することができる。例えば、ペプチドを常法により固相化し、これに対してハイブリドーマ上清中の抗体が結合するかをアッセイし、ハイブリドーマが産生する抗体を特異的に反応する標識２次抗体を用いて検出することができる。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて検出してもよい。同様に、本発明の抗体またはその抗原結合性断片が上記（ｉｉ）を満たすか否かは、ハイブリドーマ上清中の抗体と配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するペプチド（例えば、Ｗ６１４Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体；またはＫ６１５ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体；またはＫ６１５Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、もしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、もしくはＷ６１４ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体）とが結合するかをアッセイによって試験することと、ハイブリドーマ上清中の抗体と配列番号３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドとが結合するかをアッセイによって試験することによって決定することができる。例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いると結合解離定数（Ｋ Ｄ）を求めることができ、Ｋ Ｄの大きさを指標として上記（ｉｉ）を満たすか否かを簡単に決定することができる。したがって、本発明によれば、抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、抗体またはその抗原結合性断片群、例えば、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片群から上記（ｉ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供され得る。本発明によればまた、抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、抗体またはその抗原結合性断片群、例えば、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片群から上記（ｉｉ）を満たす抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供され得る。これらの方法は、これらの方法により選択または同定された抗体またはその抗原結合性断片群から非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片、すなわち、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得る抗体またはその抗原結合性断片をさらに選択または同定することを含んでいてもよい。なお、上記において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部が配列番号：２に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号６０３～６２２の領域である場合には、当該ペプチドにおいて上記点変異を有する変異体を用いて同様のアッセイによって抗体またはその抗原結合性断片を試験することができる。
【0055】
抗体がＨＥＲ２への結合に関して競合すること、および抗体が互いに類似した結合特性を有することは、競合アッセイにより検証することができる。ある抗体と抗原（例えば、ＨＥＲ２やその断片）との結合において競合する抗体は、当業者に周知の競合アッセイなどにより得ることができる。競合アッセイで、例えば、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも２０～５０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは６０％、より好ましくは７０％、より好ましくは８０％、とりわけ好ましくは９０％以上、所望の抗体の結合をブロックすることができるならば、同じ抗原に対する結合において競合する抗体とすることができる。競合する抗体は、交差ブロッキングアッセイ、フローサイトメトリー、蛍光エネルギー転移測定法（ＦＲＥＴ）や蛍光微量測定（ＦＭＡＴ（登録商標））、好ましくは、競合ＥＬＩＳＡアッセイにより確認することができる。交差ブロッキングアッセイでは、抗原を、例えばマイクロタイタープレート上にコーティングし、ここに候補となる競合抗体存在を添加してインキュベートし、抗原と候補抗体との結合を形成させる。その後、所望の抗体を標識した上でさらにウェルに添加してインキュベートし、洗浄して、所望の抗体の結合量を定量することにより、抗体が競合したか否かを判断することができる。競合する場合には、ウェル中に残存する標識量が少なくなるはずである。
【0056】
一般的に、競合アッセイにおいて、抗体Ａが抗体Ｂと抗原との結合を解離させるからといって、抗体Ｂが抗体Ａと抗原との結合を解離させるとは限らない。これは、抗体Ａが抗体Ｂよりも極めて強い結合を抗原に対して示す場合を考えれば容易に理解できる。結合特性の近い抗体を得るためには、抗体Ａが抗体Ｂと抗原との結合を解離させ、かつ、抗体Ｂが抗体Ａと抗原との結合を解離させることを確認すればよく、本明細書では、このような競合状態を「抗体Ａと抗体Ｂが抗原との結合において相互に競合する」という。
【0057】
したがって、本発明の抗体またはその抗原結合性断片が、上記（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、および（ｘ）のいずれかを満たすか否かは、それぞれ上記（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉｉ）、（ｖｉｉｉ）および（ｘｉｉｉ）のいずれかの抗体とＨＥＲ２またはその断片（エピトープを含むペプチド等）との結合に関して競合するかを確認することによって決定することができる。したがって、本発明によれば、抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片群から、上記（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉｉ）、（ｖｉｉｉ）および（ｘｉｉｉ）のいずれかの抗体とＨＥＲ２またはその断片（エピトープを含むペプチド等）との結合に関して競合する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。この方法は、これらの方法により選択または同定された抗体またはその抗原結合性断片群から非がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対するよりも、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して強い結合反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片をさらに選択または同定することを含んでいてもよい。ＨＥＲ２の断片としては、配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドを用い得る。ＨＥＲ２の断片としては、ＨＥＲ２ｅｃを用い得る。ＨＥＲ２としては、ＬＮ２２９細胞膜上に発現したＨＥＲ２を用い得る。本発明によれば、このようにして、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を取得することができる。
【0058】
このようにして、本発明の抗体の結合特性を有するモノクローナル抗体を選択して、得ることができる。得られたモノクローナル抗体のアミノ酸配列は、抗体を得てから決定することができる。例えば、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマからＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成して、免疫グロブリンをコードするｃＤＮＡの配列を決定することによって、得られたモノクローナル抗体をコードする遺伝子の塩基配列を決定することができる。塩基配列からは、モノクローナル抗体のアミノ酸配列を決定することができる。モノクローナル抗体のアミノ酸配列からは、重鎖ＣＤＲ１～３のアミノ酸配列および軽鎖ＣＤＲ１～３のアミノ酸配列を推定することができる。ＣＤＲの推定には、例えば、Ｋａｂａｔの番号付けシステム（Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．， （１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ． ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２））、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ａｌ－ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．， （１９９７） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２７３： ９２７－９４８）、Ａｈｏ、ＩＭＧＴ、ＣＣＧ等、またはこれら各手法の組み合わせにより行うことができる。また、番号付けシステムによっては推定されるＣＤＲ領域が変わりうることも周知の事実である。このようにして、重鎖ＣＤＲ１～３のアミノ酸配列および軽鎖ＣＤＲ１～３のアミノ酸配列を有する抗体を設計する、または作製することができる。
【0059】
抗体の抗原結合性断片は、当業者に周知の方法により作製することができる。例えば、Ｆａｂ断片は、抗体をパパインにより消化することにより作製することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’） ２は、抗体をペプシンにより消化することにより作製することができる。例えば、Ｆａｂ’は、Ｆ（ａｂ’） ２を還元剤で処理することにより作製することができる。例えば、ｓｃＦｖは、様々な方法で構築できる。例えば、重鎖可変領域のＣ末端を軽鎖可変領域のＮ末端に連結できる。通常、リンカー（例えば、（ＧＧＧＧＳ） ４、配列番号：３８）を重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間で配置する。しかし、鎖が連結され得る順序は、逆にすることができ、軽鎖可変領域のＣ末端を重鎖可変領域のＮ末端に連結できる。ｓｃＦｖの検出または精製を容易にするタグ（例えば、Ｍｙｃタグ、ＨｉｓタグまたはＦＬＡＧタグ）が含まれ得る。
【0060】
本発明によれば、抗体またはその抗原結合性断片の製造方法が提供される。本発明の製造方法は、ＨＥＲ２のペプチド（例えば、配列番号：３１～３７のアミノ酸配列のいずれかからなるペプチド、例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列からなるペプチド、例えば、配列番号：３１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、例えば、配列番号：３２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、例えば、配列番号：３３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、例えば、配列番号：３４に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、例えば、配列番号：３５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、例えば、配列番号：３６に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、例えば、配列番号３７に記載のアミノ酸配列からなるペプチド）またはがん細胞に発現させたＨＥＲ２（例えば、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン）を免疫原として動物に投与することを含み得る。本発明の製造方法はまた、得られた抗体が、がん細胞に発現するＨＥＲ２に対して、非がん細胞に発現するＨＥＲ２よりも強い反応性を示すことを試験（または確認）することを含み得る。本発明の製造方法はまた、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得ることを試験（または確認）することを含み得る。本発明の製造方法はまた、得られた抗体が、本発明の抗体である（本発明の抗体の結合特性を有する）ことを試験（または確認）することを含み得る。得られた抗体が、がん細胞に発現するＨＥＲ２に対して、非がん細胞に発現するＨＥＲ２よりも強い反応性を示すこと、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得ることおよび／または、本発明の抗体である（本発明の抗体の結合特性を有する）ことを確認したら、当該抗体を選択することができる。抗体は、抗体をコードする核酸を含む組換え抗体産生細胞（例えば、ＣＨＯ細胞など）を用いて産生させることができる。本発明の製造方法では、必要な場合には、産生された抗体を精製することができる。
【0061】
本発明によれば、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、ＨＥＲ２（例えば、ＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２、配列番号：３１～３７のアミノ酸配列のいずれかからなるペプチド、例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。ある態様では、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片群は、ＬＮ２２９細胞により産生されたＨＥＲ２ｅｃタンパク質に結合することができる。ある態様では、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片群は、配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）のいずれかからなるペプチドに結合することができる。
【0062】
本発明によれば、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、上記のいずれかの抗体または抗体の抗原結合性断片から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞株（例えば、ＬＮ２２９細胞）上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
例えば、本発明によれば、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、ＬＮ２２９細胞により産生されたＨＥＲ２ｅｃタンパク質に結合することができる抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
本発明によればまた、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）のいずれかからなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合することができる抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
本発明によればさらに、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
本発明によればさらにまた、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドに対して強い反応性を有する抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
本発明によればさらにまた、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＦ６１６Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、Ｗ６１４ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドに対して強い反応性を有する抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
例えば、本発明によれば、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、ＬＮ２２９細胞により産生されたＨＥＲ２ｅｃタンパク質に結合することができる抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
本発明によればまた、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）のいずれかからなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合することができる抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
本発明によればさらに、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
本発明によればさらにまた、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドに対して強い反応性を有する抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
本発明によればさらにまた、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＦ６１６Ａからなる点変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体、Ｗ６１４ＡとＦ６１６Ａの２つの点変異からなる変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドに対して強い反応性を有する抗体群またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
【0063】
また、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、および（ｘｉｉ）のいずれかと少なくとも１つのＣＤＲにおいて、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個）のアミノ酸の変異を有する抗体またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択することにより得られ得る。したがって、本発明によれば、抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、上記（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、および（ｘｉｉ）のいずれかと少なくとも１つのＣＤＲにおいて、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個）のアミノ酸の変異を有する抗体またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
【0064】
また、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、上記（ｖｉｉ）、（ｖｉｉｉ）、および（ｘｉｉｉ）のいずれかと少なくとも１つの可変領域において、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個）のアミノ酸の変異を有する抗体またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択することにより得られ得る。したがって、本発明によれば、抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、上記（ｖｉｉ）、（ｖｉｉｉ）、および（ｘｉｉｉ）のいずれかと少なくとも１つの可変領域において、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上（例えば、数個）のアミノ酸の変異を有する抗体またはその抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む方法が提供される。
【0065】
このようにして、本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することができる。本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定した後には、これらをコードする遺伝子を抗体産生細胞（例えば、ＣＨＯ細胞等）に導入して、抗体産生細胞からこれらの抗体または抗体の抗原結合性断片を回収することができる。本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片は、必要に応じてヒト化され得る。本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片は、単離され、例えば、プロテインＡまたはＧカラムを用いて単離され得る。さらには、単離された本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片は、薬学的に許容可能な賦形剤と混合され得る。あるいは、単離された本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片は、薬物（例えば、細胞傷害剤）とコンジュゲートされ得る。これにより、本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片は、ＨＥＲ２を発現するがん細胞に薬物を標的化することができるようになる。
【0066】
本発明によれば、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２（例えば、ＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２）またはその断片に結合することができる抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供され得る。
ＨＥＲ２（例えば、ＬＮ２２９細胞に発現したＨＥＲ２）またはその断片に結合することができる抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供され得る。
【0067】
本発明によればまた、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から上記（ｉ）または（ｉｉ）から選択される少なくとも１つを満たす抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される：
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する；または
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、もしくは
配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する。
本発明によればさらに、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
上記（ｉ）または（ｉｉ）から選択される少なくとも１つを満たす抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される：
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する；または
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、もしくは
配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する。
これらの態様において、本発明は、得られた抗体または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することをさらに含んでいてもよい。
ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から上記（ｉ）または（ｉｉ）から選択される少なくとも１つを満たす抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される：
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する；または
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、もしくは
配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する。
本発明によればさらに、抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
上記（ｉ）または（ｉｉ）から選択される少なくとも１つを満たす抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、ＨＥＲ２またはその断片に結合する抗体またはその抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される：
（ｉ）配列番号：３１～３７のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３１～３６のアミノ酸配列）からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドに結合する；または
（ｉｉ）配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、およびＦ６１６Ａからなる群から選択される１以上のアミノ酸変異を有するＨＥＲ２の細胞外ドメインの変異体に対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い結合親和性（または反応性）を有する、もしくは
配列番号：２に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインの一部（アミノ酸番号６０３～６２２の領域）からなるペプチドにおいてＷ６１４Ａからなる点変異を有するペプチド、またはＫ６１５ＡもしくはＦ６１６Ａからなる点変異を有するペプチドに対するよりも、配列番号：３に記載のＨＥＲ２の細胞外ドメインからなるペプチドに対して強い反応性を有する。
これらの態様において、本発明は、得られた抗体または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することをさらに含んでいてもよい。
【0068】
本発明によればまた、
抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
上記（ｉｉｉ）または（ｉｖ）のいずれかと少なくとも１つのＣＤＲにおいて、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上のアミノ酸の変異を有する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される。
抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
上記（ｉｉｉ）または（ｉｖ）のいずれかと少なくとも１つのＣＤＲにおいて、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上のアミノ酸の変異を有する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される。
【0069】
本発明によればまた、
抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
上記（ｖｉｉ）または（ｖｉｉｉ）のいずれかと少なくとも１つの可変領域において、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上のアミノ酸の変異を有する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される。
抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
上記（ｖｉｉ）または（ｖｉｉｉ）のいずれかと少なくとも１つの可変領域において、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上のアミノ酸の変異を有する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される。
【0070】
本発明によればまた、
抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
上記（ｘｉｉ）または（ｘｉｉｉ）のいずれかと少なくとも１つのＣＤＲまたは可変領域において、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上のアミノ酸の変異を有する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される。
抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法であって、
上記（ｘｉｉ）または（ｘｉｉｉ）のいずれかと少なくとも１つのＣＤＲまたは可変領域において、置換、付加、挿入、および欠失からなる群から選択される少なくとも１以上のアミノ酸の変異を有する抗体群または抗体の抗原結合性断片群から、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には有意には反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的な反応性を有する抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、方法が提供される。
【0071】
本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法は、ヒト化された抗体もしくは抗体の抗原結合性断片、またはヒト抗体もしくはヒト抗体の抗体結合性断片を選択または同定する方法であってもよい。本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定する方法は、単離および／または精製された抗体または抗体の抗原結合性断片選択または同定する方法であってもよい。
【0072】
本発明によれば、上記の本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片を選択または同定することを含む、抗体または抗体の抗原結合性断片の製造方法が提供される。この製造方法においては、抗体または抗体の抗原結合性断片は、これをコードする遺伝子を抗体産生細胞に導入して、抗体産生細胞から産生させることができる。抗体または抗体の抗原結合性断片は、ヒト化して、ヒト化抗体またはヒト化抗体の抗原結合性断片とすることもできる。抗体または抗体の抗原結合性は、単離および／または精製して、応用に用いることができる。例えば、抗体または抗体の抗原結合性断片は、薬学的に許容可能な賦形剤と混合して、製剤化し、医薬組成物としてもよい。
【0073】
＜本発明の医薬組成物＞
本発明によれば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物が提供される。本発明の医薬組成物は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片と薬学的に許容できる担体や添加物を含んでいてもよい。担体及び添加物の例としては、水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノール等薬学的に許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ぺクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、界面活性剤等が挙げられるがこれらに限定されない。
本発明によれば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物が提供される。本発明の医薬組成物は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片と薬学的に許容できる担体や添加物を含んでいてもよい。担体及び添加物の例としては、水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノール等薬学的に許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ぺクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、界面活性剤等が挙げられるがこれらに限定されない。
【0074】
本発明によれば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤（ＨＥＲ２標的化療法薬ともいう）を含む医薬組成物が提供され得る。本発明の医薬組成物は、がんを処置することに用いることができる。
【0075】
本発明によれば、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片を含む標的化剤、および当該標的化剤を含む、医薬組成物が提供される。例えば、本発明によれば、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片と薬物（例えば、細胞傷害剤）との抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を含む医薬組成物が提供される。本発明の医薬組成物は、がんを処置することに用いることができる。
【0076】
＜その他＞
本発明によれば、対象から得られたがん試料中でＨＥＲ２陽性のがん細胞を検出する方法であって、前記がん試料と本発明の抗体または抗体またはその抗原結合性断片とを接触させることを含む、方法が提供される。この方法では、生体試料中のＨＥＲ２と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片とが複合体を形成したときには、ＨＥＲ２陽性のがん細胞が検出されたと決定することができる。本発明によればまた、本発明の抗体または抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤によるＨＥＲ２標的化療法の有効性を決定する方法であって、対象から得られた生体試料と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片（好ましくは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片）とを接触させることと、生体試料中のＨＥＲ２と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片とが複合体を形成したときには、当該対象に対してはＨＥＲ２標的化療法が有効であると決定することとを含む、方法が提供され得る。本発明によればまた、本発明の抗体または抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤によるＨＥＲ２標的化療法の有効性を決定する方法であって、対象から得られた生体試料と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片（好ましくは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片）とを接触させ、生体試料中のＨＥＲ２と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片との複合体を形成させることと、当該複合体を検出することとを含み、当該複合体の検出は、当該対象に対してはＨＥＲ２標的化療法が有効であることを示す、方法が提供される。ここで、複合体形成は、生体試料が生検である場合には、生体試料が生検試料に結合したことに基づいて検出でき、生体試料が液体試料である場合には、ＥＬＩＳＡなどの当業者に周知の方法により決定することができる。この態様では、方法は、インビトロの方法であり得る。また、この態様では、方法は、産業上利用可能な方法である。この態様では、方法は、診断の工程を含まないことができる。本発明によれば、この方法において用いるための、本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を含む診断薬、または診断キットが提供され得る。本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片は標識され、これにより本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を検出してもよいし、または、本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を認識する標識二次抗体により、本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を検出してもよい。したがって、診断キットは、本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を認識する標識二次抗体をさらに含み得る。標識は、アルカリフォスファターゼや西洋ワサビペルオキシダーゼ等の酵素標識法において用いられる標識であり得、これらに対する発色基質を用いて標識の存在を検出することができる。したがって、診断キットは、発色基質をさらに含んでいてもよい。
本発明によれば、対象から得られたがん試料中でＨＥＲ２陽性のがん細胞を検出する方法であって、前記がん試料と本発明の抗体または抗体またはその抗原結合性断片とを接触させることを含む、方法が提供される。この方法では、生体試料中のＨＥＲ２と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片とが複合体を形成したときには、ＨＥＲ２陽性のがん細胞が検出されたと決定することができる。本発明によればまた、本発明の抗体または抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤によるＨＥＲ２標的化療法の有効性を決定する方法であって、対象から得られた生体試料と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片（好ましくは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片）とを接触させることと、生体試料中のＨＥＲ２と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片とが複合体を形成したときには、当該対象に対してはＨＥＲ２標的化療法が有効であると決定することとを含む、方法が提供され得る。本発明によればまた、本発明の抗体または抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤によるＨＥＲ２標的化療法の有効性を決定する方法であって、対象から得られた生体試料と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片（好ましくは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片）とを接触させ、生体試料中のＨＥＲ２と抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片との複合体を形成させることと、当該複合体を検出することとを含み、当該複合体の検出は、当該対象に対してはＨＥＲ２標的化療法が有効であることを示す、方法が提供される。ここで、複合体形成は、生体試料が生検である場合には、生体試料が生検試料に結合したことに基づいて検出でき、生体試料が液体試料である場合には、ＥＬＩＳＡなどの当業者に周知の方法により決定することができる。この態様では、方法は、インビトロの方法であり得る。また、この態様では、方法は、産業上利用可能な方法である。この態様では、方法は、診断の工程を含まないことができる。本発明によれば、この方法において用いるための、本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を含む診断薬、または診断キットが提供され得る。本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片は標識され、これにより本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を検出してもよいし、または、本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を認識する標識二次抗体により、本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を検出してもよい。したがって、診断キットは、本発明のＨＥＲ２抗体またはその抗原結合性断片を認識する標識二次抗体をさらに含み得る。標識は、アルカリフォスファターゼや西洋ワサビペルオキシダーゼ等の酵素標識法において用いられる標識であり得、これらに対する発色基質を用いて標識の存在を検出することができる。したがって、診断キットは、発色基質をさらに含んでいてもよい。
【0077】
本発明によれば、上記方法でＨＥＲ２標的化療法が有効であると決定された対象においてがんを処置することに用いるための、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤を含む医薬組成物が提供され得る。本発明によればまた、本発明の抗体または抗体またはその抗原結合性断片と反応性であるＨＥＲ２陽性腫瘍を有する対象においてがんを処置することに用いるための、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤を含む医薬組成物が提供され得る。本発明のＨＥＲ２標的化剤は、他の抗がん剤等と併用することができる。
【0078】
本発明によれば、対象においてがんを処置する方法であって、当該対象に本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤の治療上有効量を投与することを含む、方法が提供される。本発明によればまた、対象においてがんを処置する方法に用いるための当該対象に本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤が提供される。本発明によればさらに、対象においてがんを処置する方法に用いるための医薬の製造における当該対象に本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤の使用が提供される。これらの態様において、対象は、上記方法でＨＥＲ２標的化療法が有効であると決定された対象であり得る。対象はまた、本発明の抗体または抗体またはその抗原結合性断片と反応性であるＨＥＲ２陽性腫瘍を有する対象であり得る。治療上有効量は、医学的に有意な利益をもたらす医薬成分の量である。
【0079】
本発明によれば、ＨＥＲ２陽性のがんを有する対象において当該がん細胞に抗体またはその抗原結合性断片を結合させる方法であって、当該対象に本発明の抗体またはその抗原結合性断片の有効量を投与することを含む、方法が提供される。本発明によればまた、ＨＥＲ２陽性のがんを有する対象において当該がん細胞に抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤を結合させる方法であって、当該対象に本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むＨＥＲ２標的化剤の有効量を投与することを含む、方法が提供される。
【実施例0080】
以下に実施例を記載する。以下の実施例で用いる試薬類は、具体的には実施例中に記載した製品を使用したが、他メーカー（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、富士フィルム和光純薬株式会社、ナカライテスク株式会社、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＣＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＩＮＣ等）の同等品でも代用可能である。
【0081】
実施例１：ＣａｓＭａｂ 抗ＨＥＲ２抗体の産生
（１）細胞
ヒト膠芽腫細胞株ＬＮ２２９、ヒト乳がん細胞株ＳＫ－ＢＲ－３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）－Ｋ１、およびマウス骨髄腫細胞株Ｐ３Ｕ１はＡｍｅｒｉｃａｎ ｔｙｐｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。正常ヒト表皮角化細胞株ＨａＣａＴはコスモバイオから購入した。ＨＥＲ２としては、配列番号：２のアミノ酸配列を有するヒトＨＥＲ２を用いた。ＨＥＲ２ｅｃとしては、配列番号：３のアミノ酸配列を有するヒトＨＥＲ２の細胞外ドメイン（分泌型ＨＥＲ２）を用いた。ＣＨＯ－Ｋ１にＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を用いてＮ末にＰＡタグ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．， ９５， ２４０－２４７， ２０１４）、Ｃ末にＲＡＰタグ（Ｆｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎ． Ａｎｔｉｂ． Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． Ａｐｒ；３６（２）：６８－７１， ２０１７）、およびＭＡＰタグ（Ｆｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎ． Ａｎｔｉｂ． Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ３５（６）， ２９３－２９９． ２０１６）を付加したＨＥＲ２タンパク質の発現プラスミド（ｐＣＡＧ／ＰＡ－ＨＥＲ２－ＲＡＰ－ＭＡＰ；上記のＦｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６；図１Ａ参照）をトランスフェクションし、ＨＥＲ２発現細胞を抗ＰＡタグ抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．， ９５， ２４０－２４７， ２０１４）でソーティングした後に薬剤選択下で安定発現細胞株ＣＨＯ／ＨＥＲ２を樹立した。また、ＬＮ２２９にはＮｅｏｎ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を用いてＮ末にＰＡタグ、Ｃ末にＲＡＰタグ、およびＭＡＰタグを付加したＨＥＲ２タンパク質（ＰＡ－ＨＥＲ２－ＲＡＰ－ＭＡＰ）またはＮ末にＰＡタグ、Ｃ末にＲＡＰタグ、およびＭＡＰタグを付加したＨＥＲ２ｅｃ（ＰＡ－ＨＥＲ２ｅｃ－ＲＡＰ－ＭＡＰ；上記のＦｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６；図１Ｂ参照）の発現プラスミド（ｐＣＡＧ／ＰＡ－ＨＥＲ２－ＲＡＰ－ＭＡＰまたはｐＣＡＧ／ＰＡ－ＨＥＲ２ｅｃ－ＲＡＰ－ＭＡＰ）をそれぞれ導入した。ＰＡ－ＨＥＲ２－ＲＡＰ－ＭＡＰ発現細胞を抗ＰＡタグ抗体でソーティングした後に薬剤選択下で安定発現細胞株ＬＮ２２９／ＨＥＲ２を作製した。また、ＨＥＲ２ｅｃの高発現細胞株については、ＲＡＰタグに対する抗体（ＰＭａｂ－２）とＰＡタグに対する抗体（ＮＺ－１）のサンドイッチＥＬＩＳＡにより、培養上清のスクリーニングを行い、ＬＮ２２９／ＨＥＲ２ｅｃ（分泌型）を作製した。ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ／ＨＥＲ２およびＰ３Ｕ１は基礎培地としてＲＰＭＩ １６４０培地（ナカライテスク株式会社）を使用した。ＬＮ２２９、ＬＮ２２９／ＨＥＲ２ｅｃ、ＬＮ２２９／ＨＥＲ２、ＳＫ－ＢＲ－３およびＨａＣａＴは基礎培地としてダルベッコ改変イーグル培地（ナカライテスク株式会社）を用いた。培地には１０％ウシ胎子血清（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）、ペニシリン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）およびアンホテリシンＢ（０．２５ｍｇ／ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ ２下で培養した。
（１）細胞
ヒト膠芽腫細胞株ＬＮ２２９、ヒト乳がん細胞株ＳＫ－ＢＲ－３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）－Ｋ１、およびマウス骨髄腫細胞株Ｐ３Ｕ１はＡｍｅｒｉｃａｎ ｔｙｐｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。正常ヒト表皮角化細胞株ＨａＣａＴはコスモバイオから購入した。ＨＥＲ２としては、配列番号：２のアミノ酸配列を有するヒトＨＥＲ２を用いた。ＨＥＲ２ｅｃとしては、配列番号：３のアミノ酸配列を有するヒトＨＥＲ２の細胞外ドメイン（分泌型ＨＥＲ２）を用いた。ＣＨＯ－Ｋ１にＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を用いてＮ末にＰＡタグ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．， ９５， ２４０－２４７， ２０１４）、Ｃ末にＲＡＰタグ（Ｆｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎ． Ａｎｔｉｂ． Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． Ａｐｒ；３６（２）：６８－７１， ２０１７）、およびＭＡＰタグ（Ｆｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎ． Ａｎｔｉｂ． Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ３５（６）， ２９３－２９９． ２０１６）を付加したＨＥＲ２タンパク質の発現プラスミド（ｐＣＡＧ／ＰＡ－ＨＥＲ２－ＲＡＰ－ＭＡＰ；上記のＦｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６；図１Ａ参照）をトランスフェクションし、ＨＥＲ２発現細胞を抗ＰＡタグ抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．， ９５， ２４０－２４７， ２０１４）でソーティングした後に薬剤選択下で安定発現細胞株ＣＨＯ／ＨＥＲ２を樹立した。また、ＬＮ２２９にはＮｅｏｎ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を用いてＮ末にＰＡタグ、Ｃ末にＲＡＰタグ、およびＭＡＰタグを付加したＨＥＲ２タンパク質（ＰＡ－ＨＥＲ２－ＲＡＰ－ＭＡＰ）またはＮ末にＰＡタグ、Ｃ末にＲＡＰタグ、およびＭＡＰタグを付加したＨＥＲ２ｅｃ（ＰＡ－ＨＥＲ２ｅｃ－ＲＡＰ－ＭＡＰ；上記のＦｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６；図１Ｂ参照）の発現プラスミド（ｐＣＡＧ／ＰＡ－ＨＥＲ２－ＲＡＰ－ＭＡＰまたはｐＣＡＧ／ＰＡ－ＨＥＲ２ｅｃ－ＲＡＰ－ＭＡＰ）をそれぞれ導入した。ＰＡ－ＨＥＲ２－ＲＡＰ－ＭＡＰ発現細胞を抗ＰＡタグ抗体でソーティングした後に薬剤選択下で安定発現細胞株ＬＮ２２９／ＨＥＲ２を作製した。また、ＨＥＲ２ｅｃの高発現細胞株については、ＲＡＰタグに対する抗体（ＰＭａｂ－２）とＰＡタグに対する抗体（ＮＺ－１）のサンドイッチＥＬＩＳＡにより、培養上清のスクリーニングを行い、ＬＮ２２９／ＨＥＲ２ｅｃ（分泌型）を作製した。ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ／ＨＥＲ２およびＰ３Ｕ１は基礎培地としてＲＰＭＩ １６４０培地（ナカライテスク株式会社）を使用した。ＬＮ２２９、ＬＮ２２９／ＨＥＲ２ｅｃ、ＬＮ２２９／ＨＥＲ２、ＳＫ－ＢＲ－３およびＨａＣａＴは基礎培地としてダルベッコ改変イーグル培地（ナカライテスク株式会社）を用いた。培地には１０％ウシ胎子血清（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）、ペニシリン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）およびアンホテリシンＢ（０．２５ｍｇ／ｍＬ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ ２下で培養した。
【0082】
（２）モノクローナル抗体の作製
免疫動物として使用したＢＡＬＢ／ｃマウス（４週齢、メス）は、日本クレアから購入した。抗体はＣａｓＭａｂ法（Ｋａｔｏ ａｎｄ Ｋａｎｅｋｏ， Ｓｃｉ． Ｒｅｐ．， ４： ５９２４， ２０１４）を用いて作製した。ＬＮ２２９細胞により産生されたＨＥＲ２ｅｃタンパク質を抗ＭＡＰタグ抗体（上記のＦｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１６）でアフィニティ精製した。その後、ＢＡＬＢ／ｃマウスに１００μｇのＨＥＲ２ｅｃタンパク質をＩｍｊｅｃｔ ＴＭ Ａｌｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）と混合し、初回免疫を行なった。追加免疫（合計３回）として、ＬＮ２２９／ＨＥＲ２ｅｃから精製した１００μｇのＨＥＲ２ｅｃタンパク質を毎週腹腔内投与した。その後、脾臓摘出の２日前に最終免疫として１００μｇのＨＥＲ２ｅｃを投与した。摘出した脾臓から調製した脾細胞を、ＰＥＧ１５００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いてＰ３Ｕ１と細胞融合させた。細胞融合後はヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）添加ＲＰＭＩ １６４０で培養し、ＨＥＲ２ｅｃを用いて後記するＥＬＩＳＡ法で培養上清の１次スクリーニングを行った。１次スクリーニングで陽性となったハイブリドーマは限界希釈法によってクローニングを実施した。モノクローナル抗体の調製には無血清培地（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ－ＳＦＭ； Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）で培養したハイブリドーマ上清を用い、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＵＫ Ｌｔｄ）を使用して精製した。また次いで後記の通り、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、および免疫組織化学染色を実施した。結果として対照抗体のＨ ２Ｍａｂ－１１９抗体を含む約２５０個のクローンから、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、および免疫組織化学染色による絞り込みを経て、がん特異的なＨＥＲ２を認識すると考えられるがん特異的抗体のクローンが複数得られた。以下、２つのクローンについて、それぞれ、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４、およびＨ ２Ｍａｂ－２５０（以下、合わせて本発明の抗体と略記することがある。）と命名した。当該クローンから得られた抗体をそれぞれＨ ２Ｍａｂ－２１４抗体およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体と呼ぶ。
免疫動物として使用したＢＡＬＢ／ｃマウス（４週齢、メス）は、日本クレアから購入した。抗体はＣａｓＭａｂ法（Ｋａｔｏ ａｎｄ Ｋａｎｅｋｏ， Ｓｃｉ． Ｒｅｐ．， ４： ５９２４， ２０１４）を用いて作製した。ＬＮ２２９細胞により産生されたＨＥＲ２ｅｃタンパク質を抗ＭＡＰタグ抗体（上記のＦｕｊｉｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１６）でアフィニティ精製した。その後、ＢＡＬＢ／ｃマウスに１００μｇのＨＥＲ２ｅｃタンパク質をＩｍｊｅｃｔ ＴＭ Ａｌｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）と混合し、初回免疫を行なった。追加免疫（合計３回）として、ＬＮ２２９／ＨＥＲ２ｅｃから精製した１００μｇのＨＥＲ２ｅｃタンパク質を毎週腹腔内投与した。その後、脾臓摘出の２日前に最終免疫として１００μｇのＨＥＲ２ｅｃを投与した。摘出した脾臓から調製した脾細胞を、ＰＥＧ１５００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いてＰ３Ｕ１と細胞融合させた。細胞融合後はヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）添加ＲＰＭＩ １６４０で培養し、ＨＥＲ２ｅｃを用いて後記するＥＬＩＳＡ法で培養上清の１次スクリーニングを行った。１次スクリーニングで陽性となったハイブリドーマは限界希釈法によってクローニングを実施した。モノクローナル抗体の調製には無血清培地（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ－ＳＦＭ； Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）で培養したハイブリドーマ上清を用い、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＵＫ Ｌｔｄ）を使用して精製した。また次いで後記の通り、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、および免疫組織化学染色を実施した。結果として対照抗体のＨ ２Ｍａｂ－１１９抗体を含む約２５０個のクローンから、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、および免疫組織化学染色による絞り込みを経て、がん特異的なＨＥＲ２を認識すると考えられるがん特異的抗体のクローンが複数得られた。以下、２つのクローンについて、それぞれ、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４、およびＨ ２Ｍａｂ－２５０（以下、合わせて本発明の抗体と略記することがある。）と命名した。当該クローンから得られた抗体をそれぞれＨ ２Ｍａｂ－２１４抗体およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体と呼ぶ。
【0083】
（３）ＥＬＩＳＡ
ＨＥＲ２ｅｃ（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で希釈）を９６ｗｅｌｌプレートに、１μｇ／ｍｌの濃度で、３７℃で３０分、固相化した。１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０ ｉｎ ＰＢＳ（ＰＢＳＴ）を３７℃で３０分反応させ、ブロッキングを行った。その後、培養上清を、３７℃で３０分反応させた後、０．０５％ ＰＢＳＴを使用して３回の洗浄を行った。さらに、二次抗体（１／２０００希釈；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）を３７℃で３０分反応させ、０．０５％ＰＢＳＴを使用して３回の洗浄を行った。最後に１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）で発色させ、マイクロプレートリーダーのＯＤ６５５ｎｍで吸光度の測定を行った。
ＨＥＲ２ｅｃ（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で希釈）を９６ｗｅｌｌプレートに、１μｇ／ｍｌの濃度で、３７℃で３０分、固相化した。１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０ ｉｎ ＰＢＳ（ＰＢＳＴ）を３７℃で３０分反応させ、ブロッキングを行った。その後、培養上清を、３７℃で３０分反応させた後、０．０５％ ＰＢＳＴを使用して３回の洗浄を行った。さらに、二次抗体（１／２０００希釈；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）を３７℃で３０分反応させ、０．０５％ＰＢＳＴを使用して３回の洗浄を行った。最後に１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）で発色させ、マイクロプレートリーダーのＯＤ６５５ｎｍで吸光度の測定を行った。
【0084】
（４）フローサイトメトリー
０．２５％ トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ（ナカライテスク株式会社）を用いて各種接着細胞を回収し、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄後、４℃下、上記（２）で作製した抗体（１μｇ／ｍＬ）と反応させた。細胞を０．１％ ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄後、オレゴングリーン標識抗マウスＩｇＧ抗体（１０００倍希釈；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）と３０分反応させた。蛍光強度はＥＣ８００ ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｏｎｙ Ｃｏｒｐ．）で測定した。
０．２５％ トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ（ナカライテスク株式会社）を用いて各種接着細胞を回収し、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄後、４℃下、上記（２）で作製した抗体（１μｇ／ｍＬ）と反応させた。細胞を０．１％ ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄後、オレゴングリーン標識抗マウスＩｇＧ抗体（１０００倍希釈；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）と３０分反応させた。蛍光強度はＥＣ８００ ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｏｎｙ Ｃｏｒｐ．）で測定した。
【0085】
（５）ウェスタンブロット
２－メルカプトエタノールを含むＳＤＳサンプルバッファー（ナカライテスク株式会社）で調整した細胞可溶化液を５－２０％ポリアクリルアミドゲル（富士フィルム和光純薬株式会社）で電気泳動し、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）上に転写した。４％スキムミルク加ＰＢＳＴで、ポリフッ化ビニリデンＰＤＶＦ膜をブロッキング後、上記（２）で作製した抗体（５μｇ／ｍＬ）または抗ｂ－アクチン抗体（ｃｌｏｎｅ ＡＣ－１５；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．）と反応させた。その後、ペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ抗体（１０００希釈；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）と反応させた。検出には化学発光試薬 （ＩｍｍｕｎｏＳｔａｒ ＬＤ；富士フィルム和光純薬株式会社）を使用し、Ｓａｙａｃａ－Ｉｍａｇｅｒ（ＤＲＣ株式会社）でシグナルを検出した。
２－メルカプトエタノールを含むＳＤＳサンプルバッファー（ナカライテスク株式会社）で調整した細胞可溶化液を５－２０％ポリアクリルアミドゲル（富士フィルム和光純薬株式会社）で電気泳動し、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）上に転写した。４％スキムミルク加ＰＢＳＴで、ポリフッ化ビニリデンＰＤＶＦ膜をブロッキング後、上記（２）で作製した抗体（５μｇ／ｍＬ）または抗ｂ－アクチン抗体（ｃｌｏｎｅ ＡＣ－１５；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．）と反応させた。その後、ペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ抗体（１０００希釈；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）と反応させた。検出には化学発光試薬 （ＩｍｍｕｎｏＳｔａｒ ＬＤ；富士フィルム和光純薬株式会社）を使用し、Ｓａｙａｃａ－Ｉｍａｇｅｒ（ＤＲＣ株式会社）でシグナルを検出した。
【0086】
（６）免疫組織化学染色
ＢｉｏＣｈａｉｎ社から購入した乳がん組織（カタログ番号：Ｂ９０４１１１）とＢｉｏＣｈａｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｉｎｃ．から購入した正常乳腺組織（カタログ番号：Ｂ８０３０７７）を用いた。組織切片をキシレンで脱パラフィン、脱水しクエン酸緩衝液（ｐＨ ６．０；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）に浸漬して２０分間オートクレーブ処理を行った。次いで上記（２）で作製した抗体（１μｇ／ｍＬ）で室温下において１時間反応させ、その後Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＋ ｋｉｔ，ｍｏｕｓｅ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）で３０分処理した。３，３’－ジアミノベンジジン四塩酸塩で２分処理し発色させ、ヘマトキシリンで対比染色を行なった。染色強度は、上記した２０１８ ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインに基づいて０、１＋、２＋、および３＋で評価した。
ＢｉｏＣｈａｉｎ社から購入した乳がん組織（カタログ番号：Ｂ９０４１１１）とＢｉｏＣｈａｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｉｎｃ．から購入した正常乳腺組織（カタログ番号：Ｂ８０３０７７）を用いた。組織切片をキシレンで脱パラフィン、脱水しクエン酸緩衝液（ｐＨ ６．０；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）に浸漬して２０分間オートクレーブ処理を行った。次いで上記（２）で作製した抗体（１μｇ／ｍＬ）で室温下において１時間反応させ、その後Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＋ ｋｉｔ，ｍｏｕｓｅ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）で３０分処理した。３，３’－ジアミノベンジジン四塩酸塩で２分処理し発色させ、ヘマトキシリンで対比染色を行なった。染色強度は、上記した２０１８ ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインに基づいて０、１＋、２＋、および３＋で評価した。
【0087】
実施例２：ＣａｓＭａｂ 抗ＨＥＲ２抗体の配列決定
（１）Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体、およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のアミノ酸配列及び塩基配列の決定
Ｈ ２Ｍａｂ－２１４ハイブリドーマ細胞およびＨ ２Ｍａｂ－２５０ハイブリドーマ細胞１×１０ ６からＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用してトータルＲＮＡを抽出した。トータルＲＮＡ５μｇから、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＶ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を使用してｃＤＮＡ合成を行った。以下の実験にｃＤＮＡを鋳型として使用した。
重鎖（Ｈ鎖）の増幅に以下のプライマーを使用した。
ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２１４Ｈ（配列番号４）
ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２５０Ｈ（配列番号５）
ＩｎＦｒ．ＩｇＧ１ｔｅｒＮｏｔＩ（配列番号６）
（１）Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体、およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のアミノ酸配列及び塩基配列の決定
Ｈ ２Ｍａｂ－２１４ハイブリドーマ細胞およびＨ ２Ｍａｂ－２５０ハイブリドーマ細胞１×１０ ６からＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用してトータルＲＮＡを抽出した。トータルＲＮＡ５μｇから、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＶ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を使用してｃＤＮＡ合成を行った。以下の実験にｃＤＮＡを鋳型として使用した。
重鎖（Ｈ鎖）の増幅に以下のプライマーを使用した。
ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２１４Ｈ（配列番号４）
ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２５０Ｈ（配列番号５）
ＩｎＦｒ．ＩｇＧ１ｔｅｒＮｏｔＩ（配列番号６）
【0088】
ＰＣＲ反応にはＨｏｔＳｔａｒ ＨｉＦｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用した。温度条件は、最初に９５℃５分、次に９４℃１５秒、５０℃１分、７２℃１分を３５サイクル、最後に７２℃１０分とした。増幅したＰＣＲ産物はＦａｓｔＧｅｎｅ Ｇｅｌ／ＰＣＲ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（日本ジェネティクス株式会社）にて精製した。
【0089】
Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体Ｈ鎖のＰＣＲ産物は、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩにて３７℃で１時間処理しＦａｓｔＧｅｎｅ Ｇｅｌ／ＰＣＲ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（日本ジェネティクス株式会社）にて精製したｐＣＡＧ ｖｅｃｔｏｒにＩｎＦｕｓｉｏｎ－ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社）を用いてサブクローニングし、ベクタープライマーから塩基配列の確認を行った。
【0090】
Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体Ｈ鎖のＰＣＲ産物は、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩにて３７℃で１時間処理しＦａｓｔＧｅｎｅ Ｇｅｌ／ＰＣＲ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（日本ジェネティクス株式会社）にて精製したｐＣＡＧ ｖｅｃｔｏｒにＩｎＦｕｓｉｏｎ－ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社）を用いてサブクローニングし、ベクタープライマーから塩基配列の確認を行った。
【0091】
軽鎖（Ｌ鎖）の増幅に以下のプライマーを使用した。
ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２１４Ｌ（配列番号７）
ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２５０Ｌ（配列番号８）
ＩｎＦ．ｍＩｇＣＫｔｅｒＮｏｔＩ（配列番号９）
ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２１４Ｌ（配列番号７）
ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２５０Ｌ（配列番号８）
ＩｎＦ．ｍＩｇＣＫｔｅｒＮｏｔＩ（配列番号９）
【0092】
ＰＣＲ反応にはＨｏｔＳｔａｒ ＨｉＦｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用した。温度条件は、最初に９５℃５分、次に９４℃１５秒、５０℃１分、７２℃１分を３５サイクル、最後に７２℃１０分とした。増幅したＰＣＲ産物はＦａｓｔＧｅｎｅ Ｇｅｌ／ＰＣＲ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（日本ジェネティクス株式会社）にて精製した。
【0093】
Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体Ｌ鎖のＰＣＲ産物は、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩにて３７℃で１時間処理しＦａｓｔＧｅｎｅ Ｇｅｌ／ＰＣＲ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（日本ジェネティクス株式会社）にて精製したｐＣＡＧ ｖｅｃｔｏｒにＩｎＦｕｓｉｏｎ－ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社）を用いてサブクローニングし、ベクタープライマーから塩基配列の確認を行った。
【0094】
Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体Ｌ鎖のＰＣＲ産物は、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩにて３７℃で１時間処理しＦａｓｔＧｅｎｅ Ｇｅｌ／ＰＣＲ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（日本ジェネティクス株式会社）にて精製したｐＣＡＧ ｖｅｃｔｏｒにＩｎＦｕｓｉｏｎ－ＨＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社）を用いてサブクローニングし、ベクタープライマーから塩基配列の確認を行った。
その結果、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列は配列番号：１０に、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列は配列番号：１１に示すとおりであった。同様に、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列は配列番号：１２に、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列は配列番号：１３に示すとおりであった。
その結果、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列は配列番号：１０に、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列は配列番号：１１に示すとおりであった。同様に、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列は配列番号：１２に、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列は配列番号：１３に示すとおりであった。
【0095】
Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体の各塩基配列からアミノ酸配列を予測した。Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖アミノ酸配列は配列番号：１４に、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖アミノ酸配列は配列番号：１５に示すとおりであった。同様に、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体の各塩基配列からアミノ酸配列を予測した。Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖アミノ酸配列は配列番号：１６に、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖アミノ酸配列は配列番号：１７に示すとおりであった。
【0096】
（２）Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＣＤＲ（相補性決定領域）の決定
上記（１）で決定した塩基配列より以下のＵＲＬのホームページ（ａｂＹｓｉｓ； ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｂｙｓｉｓ．ｏｒｇ／ａｂｙｓｉｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）に提供されているイムノグロブリンの配列予測ソフト（Ｋａｂａｔナンバリング）にてＣＤＲの部位を特定した。
上記（１）で決定した塩基配列より以下のＵＲＬのホームページ（ａｂＹｓｉｓ； ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｂｙｓｉｓ．ｏｒｇ／ａｂｙｓｉｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）に提供されているイムノグロブリンの配列予測ソフト（Ｋａｂａｔナンバリング）にてＣＤＲの部位を特定した。
【0097】
その結果、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体の重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：１８～２０及び配列番号：２１～２３に示されるように特定された。同様に、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体の重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２４～２６及び配列番号：２７～２９に示されるように特定された。
【0098】
実施例３：ＣａｓＭａｂ 抗ＨＥＲ２抗体の評価
（１）フローサイトメトリー
正常ヒト表皮角化細胞株ＨａＣａＴ（コスモバイオ）、および乳がん細胞株ＳＫ－ＢＲ－３（ＡＴＣＣ）に対し、以下の方法でフローサイトメトリー解析を行った。
０．２５％トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ（ナカライテスク株式会社）を用いて各種接着細胞を回収し、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄後、４℃下で各種抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（対照抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－１１９抗体；Ｍｏｎｏｃｌｏｎ． Ａｎｔｉｂ． Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ｖｏｌ．３６（６）， ２８７－２９０， ２０１７参照）、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体、およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体、各培養上清）と反応させた。細胞を０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄後、オレゴングリーン標識抗マウスＩｇＧ抗体（１０００倍希釈；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）と３０分反応させた。蛍光強度はＥＣ８００ ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｏｎｙ Ｃｏｒｐ．）で測定した。
その結果、図２で示すように、対照抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－１１９抗体）は、がん細胞株であるＳＫ－ＢＲ－３に反応するだけでなく、正常細胞株であるＨａＣａＴに中程度の反応性を示した。一方、本発明の抗体は、がん細胞株であるＳＫ－ＢＲ－３には中程度の反応性を示したが、正常細胞株であるＨａＣａＴには全く反応しなかった。このことから、本発明の抗体は、がん特異性があることが示された。
（１）フローサイトメトリー
正常ヒト表皮角化細胞株ＨａＣａＴ（コスモバイオ）、および乳がん細胞株ＳＫ－ＢＲ－３（ＡＴＣＣ）に対し、以下の方法でフローサイトメトリー解析を行った。
０．２５％トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ（ナカライテスク株式会社）を用いて各種接着細胞を回収し、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄後、４℃下で各種抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（対照抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－１１９抗体；Ｍｏｎｏｃｌｏｎ． Ａｎｔｉｂ． Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ｖｏｌ．３６（６）， ２８７－２９０， ２０１７参照）、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体、およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体、各培養上清）と反応させた。細胞を０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄後、オレゴングリーン標識抗マウスＩｇＧ抗体（１０００倍希釈；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）と３０分反応させた。蛍光強度はＥＣ８００ ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｏｎｙ Ｃｏｒｐ．）で測定した。
その結果、図２で示すように、対照抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－１１９抗体）は、がん細胞株であるＳＫ－ＢＲ－３に反応するだけでなく、正常細胞株であるＨａＣａＴに中程度の反応性を示した。一方、本発明の抗体は、がん細胞株であるＳＫ－ＢＲ－３には中程度の反応性を示したが、正常細胞株であるＨａＣａＴには全く反応しなかった。このことから、本発明の抗体は、がん特異性があることが示された。
【0099】
（２）免疫組織化学染色
ＢｉｏＣｈａｉｎ社より入手したＨＥＲ２陰性乳がんの組織マイクロアレイ（カタログ番号：Ｂ９０４１１１）に対し、以下の方法で免疫組織化学染色を行った。
組織切片をキシレンで脱パラフィン、脱水しクエン酸緩衝液（ｐＨ ６．０； Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）に浸漬して２０分間オートクレーブ処理を行った。次いで本発明の抗体（１μｇ／ｍＬ）で室温下において１時間反応させ、その後Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＋ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）で３０分処理した。３，３’－ジアミノベンジジン四塩酸塩で２分処理し発色させ、ヘマトキシリンで対比染色を行なった。染色強度は、上述の通りに０、１＋、２＋、３＋で評価した。
その結果、下記図３に示すように、対照抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－１１９抗体）は、免疫組織化学染色法（ＩＨＣ）を用いてがん細胞のＨＥＲ２発現状況を調べる診断薬にてＨＥＲ２陰性と判定された乳がん（ＨＥＲ２陰性乳がん）組織に対し、陰性を示す一方、本発明の抗体は、ＨＥＲ２陰性乳がん組織に対し、１＋～３＋の陽性像を示すコアが存在した。このことから、本発明の抗体は、免疫組織染色において高い感度を示すことがわかった。
ＢｉｏＣｈａｉｎ社より入手したＨＥＲ２陰性乳がんの組織マイクロアレイ（カタログ番号：Ｂ９０４１１１）に対し、以下の方法で免疫組織化学染色を行った。
組織切片をキシレンで脱パラフィン、脱水しクエン酸緩衝液（ｐＨ ６．０； Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）に浸漬して２０分間オートクレーブ処理を行った。次いで本発明の抗体（１μｇ／ｍＬ）で室温下において１時間反応させ、その後Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＋ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）で３０分処理した。３，３’－ジアミノベンジジン四塩酸塩で２分処理し発色させ、ヘマトキシリンで対比染色を行なった。染色強度は、上述の通りに０、１＋、２＋、３＋で評価した。
その結果、下記図３に示すように、対照抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－１１９抗体）は、免疫組織化学染色法（ＩＨＣ）を用いてがん細胞のＨＥＲ２発現状況を調べる診断薬にてＨＥＲ２陰性と判定された乳がん（ＨＥＲ２陰性乳がん）組織に対し、陰性を示す一方、本発明の抗体は、ＨＥＲ２陰性乳がん組織に対し、１＋～３＋の陽性像を示すコアが存在した。このことから、本発明の抗体は、免疫組織染色において高い感度を示すことがわかった。
【0100】
実施例４：ＣａｓＭａｂ 抗ＨＥＲ２抗体のエピトープ解析（１）
本発明の抗体は常法により作製した欠失変異体（ＷＴ－ｄＮ２３（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号２２までの領域を欠失させた変異体）、ｄＮ２００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号１９９までの領域を欠失させた変異体）、ｄＮ３００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号２９９までの領域を欠失させた変異体）、ｄＮ４００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号３９９までの領域を欠失させた変異体）、ｄＮ５００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号４９９までの領域を欠失させた変異体）およびｄＮ６００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号５９９までの領域を欠失させた変異体））のすべてに反応したことから、ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のアミノ酸番号６００－６５２のアミノ酸配列（配列番号：３０）を認識しているものと予想された。一方、対照抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－１１９抗体）はＷＴ－ｄＮ２３には反応し、ｄＮ２００、ｄＮ３００、ｄＮ４００、ｄＮ５００およびｄＮ６００には反応しなかったことから、ヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号２３－１９９までのアミノ酸領域を認識しているものと予想された。なお、本実施例および以降の実施例におけるアミノ酸番号は、配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸の位置として示される。
本発明の抗体は常法により作製した欠失変異体（ＷＴ－ｄＮ２３（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号２２までの領域を欠失させた変異体）、ｄＮ２００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号１９９までの領域を欠失させた変異体）、ｄＮ３００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号２９９までの領域を欠失させた変異体）、ｄＮ４００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号３９９までの領域を欠失させた変異体）、ｄＮ５００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号４９９までの領域を欠失させた変異体）およびｄＮ６００（ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のＮ末からアミノ酸番号５９９までの領域を欠失させた変異体））のすべてに反応したことから、ヒトＨＥＲ２（配列番号：２）のアミノ酸番号６００－６５２のアミノ酸配列（配列番号：３０）を認識しているものと予想された。一方、対照抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－１１９抗体）はＷＴ－ｄＮ２３には反応し、ｄＮ２００、ｄＮ３００、ｄＮ４００、ｄＮ５００およびｄＮ６００には反応しなかったことから、ヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号２３－１９９までのアミノ酸領域を認識しているものと予想された。なお、本実施例および以降の実施例におけるアミノ酸番号は、配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸の位置として示される。
【0101】
次に、ＨＥＲ２ｅｃ（２３－６５２）と、ＨＥＲ２ｅｃのそれぞれ、２３－４２、３３－５２、４３－６２、５３－７２、６３－８２、７３－９２、８３－１０２、９３－１１２、１０３－１２２、１１３－１３２、１２３－１４２、１３３－１５２、１４３－１６２、１５３－１７２、１６３－１８２、１７３－１９２、１８３－２０２、１９３－２１２、２０３－２２２、２１３－２３２、２２３－２４２、２３３－２５２、２４３－２６２、２５３－２７２、２６３－２８２、２７３－２９２、２８３－３０２、２９３－３１２、３０３－３２２、３１３－３３２、３２３－３４２、３３３－３５２、３４３－３６２、３５３－３７２、３６３－３８２、３７３－３９２、３８３－４０２、３９３－４１２、４０３－４２２、４１３－４３２、４２３－４４２、４３３－４５２、４４３－４６２、４５３－４７２、４６３－４８２、４７３－４９２、４８３－５０２、４９３－５１２、５０３－５２２、５１３－５３２、５２３－５４２、５３３－５５２、５４３－５６２、５５３－５７２、５６３－５８２、５７３－５９２、５８３－６０２、５９３－６１２、６０３－６２２、６１３－６３２、６２３－６４２、６３３－６５２のアミノ酸領域からなる合成ペプチドに対する本発明の抗体の反応性をＥＬＩＳＡ法で確認した（ここで上記アミノ酸番号は、配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸番号を示す）。すなわち、各ペプチドを９６ウェルプレートに、１０μｇ／ｍｌの濃度で、３７℃で３０分、固相化した。１％ ＢＳＡ／０．０５％ ＰＢＳＴを３７℃で３０分反応させ、ブロッキングを行った。その後、１０μｇ／ｍｌの本発明の抗体を、３７℃で３０分反応させた後、０．０５％ＰＢＳＴを使用して３回の洗浄を行った。さらに、二次抗体（１／２０００希釈；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）を３７℃で３０分反応させ、０．０５％ＰＢＳＴを使用して３回の洗浄を行った。最後に１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）で１５分間発色させ、マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）のＯＤ６５５ｎｍで吸光度の測定を行った。
【0102】
その結果、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体は６０３～６２２ペプチドと６１３～６３２ペプチドに強く反応したことから、本発明の抗体のエピトープはヒトＨＥＲ２の６０３－６２２のアミノ酸領域（配列番号：３１）、ヒトＨＥＲ２の６１３～６３２のアミノ酸領域（配列番号：３２）、特に６１３～６２２のアミノ酸領域（配列番号：３３）であると考えられた。
【0103】
そこで、ＨＥＲ２ｅｃをポジティブコントロールとし、ヒトＨＥＲ２の６０３～６２２ペプチドの２０個のアミノ酸それぞれを１つずつアラニンに置換した２０種類の変異型ペプチドに対する本発明の抗体の反応性をＥＬＩＳＡ法で確認した。
【0104】
その結果、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体に関して、ヒトＨＥＲ２の６０３～６２２のアミノ酸においてＫ６１５とＦ６１６をそれぞれアラニンに置換したＫ６１５ＡペプチドとＦ６１６Ａペプチドに対する反応性が野生型ＨＥＲ２ペプチド（ヒトＨＥＲ２の６０３～６２２のアミノ酸）に対する反応性よりも弱かったことから、Ｋ６１５とＦ６１６の２つのアミノ酸およびその周辺がＨ ２Ｍａｂ－２１４抗体のエピトープであることがわかった。
また、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体に関して、ヒトＨＥＲ２のＷ６１４をアラニンに置換したＷ６１４Ａペプチド対する反応性が野生型ＨＥＲ２ペプチドに対する反応性よりも弱かったことから、Ｗ６１４のアミノ酸およびその周辺がＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のエピトープであることがわかった。
また、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体に関して、ヒトＨＥＲ２のＷ６１４をアラニンに置換したＷ６１４Ａペプチド対する反応性が野生型ＨＥＲ２ペプチドに対する反応性よりも弱かったことから、Ｗ６１４のアミノ酸およびその周辺がＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のエピトープであることがわかった。
【0105】
Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のエピトープについてさらに詳細に調べた。６１４－６１９、６１４－６２０、６１４－６２１、６１４－６２２、６１３－６１８、６１３－６１９、６１３－６２０、６１３－６２１、６１３－６２２、６１２－６１８、６１２－６１９、６１２－６２０、６１２－６２１、６１２－６２２、６１１－６１８、６１１－６１９、６１１－６２０、６１１－６２１、６１１－６２２、６１０－６１８、６１０－６１９、６１０－６２０、６１０－６２１、６１０－６２２、６０９－６１８、６０９－６１９、６０９－６２０、６０９－６２１、および６０９－６２２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸領域からなる合成ペプチド（各種ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｎｔ）に対する本発明の抗体の反応性をＥＬＩＳＡ法で確認した（ここで上記アミノ酸番号は、配列番号２のアミノ酸配列におけるアミノ酸番号を示す）。ＥＬＩＳＡは上記と同様に行った。一次抗体としては、本発明の抗体をそれぞれ５０μＬ／ウェルで用い、二次抗体としては、ウサギ抗マウスＩｇＧ／ＨＲＰ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．、１％ＢＳＡ／ＰＢＳ－Ｔ、１／２，０００希釈、５０μＬ／ウェル）を用いた。検出は、ＥＬＩＳＡ ＰＯＤ基質ＴＭＢキット（ナカライテスク株式会社）を用いた。ｉＭａｒｋ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを用いてＯＤ６５５ｎｍの吸光度を測定した。結果は、図４に示される通りであった。図４では、アミノ酸番号の前に「ｐ」が付されている。図４中、Ｐ．Ｃ．は陽性対照を示し、Ｎ．Ｃ．は陰性対照を示す。
【0106】
図４に示されるように、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体は、６１２～６１８のアミノ酸領域（配列番号：３５）からなるペプチドに対しては、強い反応性を示し、６１２～６１８のアミノ酸領域を含むより長いペプチドと同等の反応性を示した。また、図４に示されるように、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体は、６１１～６１８のアミノ酸領域（配列番号：３４）からなるペプチドに対しては、強い反応性を示し、６１１～６１８のアミノ酸領域を含むより長いペプチドと同等の反応性を示した。
【0107】
さらに、図４に示されるように、ＯＤ値が０．１を超えるものについて、反応性があると評価すると、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体およびＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のいずれも６１３～６１９のアミノ酸領域（配列番号：３６）からなるペプチドに対して反応性を示した。しかし、その反応性は、６１２～６１８のアミノ酸領域（配列番号：３５）からなるペプチドや、６１１～６１８のアミノ酸領域（配列番号：３４）からなるペプチドに対する反応性よりも弱いものであることから、本発明の抗体のＨＥＲ２の部分ペプチドへの反応性には、６１２番目のアミノ酸（および／または６１１番目のアミノ酸）の影響が強いことが明らかになった。
【0108】
実施例５：ＣａｓＭａｂ 抗ＨＥＲ２抗体のエピトープ解析（２）
（１）フローサイトメトリー
アラニン置換変異体を用いたフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）解析にて、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体またはＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のエピトープ解析を行った。目的の位置のアミノ酸をアラニンに置換したＨＥＲ２（配列番号：２のアミノ酸配列を有するヒトＨＥＲ２）遺伝子は、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）を使用して作製し、塩基配列の決定により変異導入の確認を行った。目的のアラニン置換変異の入ったＨＥＲ２遺伝子は、野生型ＨＥＲ２遺伝子と同様に、Ｎ末にＰＡタグ、Ｃ末にＲＡＰタグおよびＭＡＰタグを付加し、発現ベクターに組み込んだ（実施例１参照）。このプラスミドをＮｅｏｎ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を用いてＣＨＯ－Ｋ１細胞に遺伝子導入し、抗ＰＡ抗体によるセルソーティング（セルソーターＳＡ３８００、Ｓｏｎｙ Ｃｏｒｐ．）と、その後、ゼオシン（０．５ ｍｇ／ｍＬ、ＩｎＶｉｖｏｇｅｎ社）による薬剤選択により安定発現細胞株を樹立した。
（１）フローサイトメトリー
アラニン置換変異体を用いたフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）解析にて、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体またはＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のエピトープ解析を行った。目的の位置のアミノ酸をアラニンに置換したＨＥＲ２（配列番号：２のアミノ酸配列を有するヒトＨＥＲ２）遺伝子は、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）を使用して作製し、塩基配列の決定により変異導入の確認を行った。目的のアラニン置換変異の入ったＨＥＲ２遺伝子は、野生型ＨＥＲ２遺伝子と同様に、Ｎ末にＰＡタグ、Ｃ末にＲＡＰタグおよびＭＡＰタグを付加し、発現ベクターに組み込んだ（実施例１参照）。このプラスミドをＮｅｏｎ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を用いてＣＨＯ－Ｋ１細胞に遺伝子導入し、抗ＰＡ抗体によるセルソーティング（セルソーターＳＡ３８００、Ｓｏｎｙ Ｃｏｒｐ．）と、その後、ゼオシン（０．５ ｍｇ／ｍＬ、ＩｎＶｉｖｏｇｅｎ社）による薬剤選択により安定発現細胞株を樹立した。
【0109】
目的の位置のアミノ酸をアラニンに置換したＨＥＲ２遺伝子を強制的に安定発現したＣＨＯ－Ｋ１細胞を、０．２５％トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ溶液（ナカライテスク株式会社）を用いて、培養皿より回収し、０．１％ＢＳＡ（ナカライテスク株式会社）／ＰＢＳにて洗浄した。１次抗体（Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体またはＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体）を０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳにて１０ μｇ／ｍＬに調整し、回収した細胞に加え、混合、氷上で３０分間反応させた。その後、０．１％ ＢＳＡ／ＰＢＳにて洗浄した。引き続き、蛍光標識２次抗体（１／１０００希釈、ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を０．１％ ＢＳＡ／ＰＢＳにて調整し、氷上で３０分間、反応させた。再び０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳにて洗浄した。抗体の反応性をセルアナライザーＥＣ８００（Ｓｏｎｙ Ｃｏｒｐ．）にて検出した。
【0110】
図５に、ＰＡタグに対する抗体（ＮＺ－１）、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体、陽性対照抗体（トラスツズマブ）のフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ解析）の結果を示す。
【0111】
その結果、図５に示されるように、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４は、ＨＥＲ２－Ｋ６１５ＡおよびＨＥＲ２－Ｆ６１６Ａに対しては有意な結合を示さず、Ｈ ２Ｍａｂ－２５０は、ＨＥＲ２－Ｗ６１４Ａに対しては有意な結合を示さなかった。これに対して、ＮＺ－１抗体ではいずれのＨＥＲ２の点変異体も検出したことから、各点変異体の発現量は十分であったことが明らかである。このことから、当該エピトープ（Ｗ６１４、Ｋ６１５、Ｆ６１６）を認識する本発明の抗体は、非がん細胞上に発現するＨＥＲ２には全く反応せず、がん細胞上に発現するＨＥＲ２に対して特異的に反応し得ることが示唆された。また、図５に示されるように、トラスツズマブはいずれの点変異体に対しても有意な結合を示した。このことは、トラスツズマブは、本発明の抗体と同様に、ＨＥＲ２のドメインＩＶを認識する抗体であるにもかかわらず、当該ドメインＩＶのうち、本発明の抗体が認識するエピトープ（Ｗ６１４、Ｋ６１５、Ｆ６１６）を認識しないことを示唆する。したがって、トラスツズマブとは異なり、当該エピトープ（Ｗ６１４、Ｋ６１５、Ｆ６１６）を認識する特性が、がん細胞上のＨＥＲ２の特異的な認識に関与していることが明らかである。
【0112】
（２）Ｂｉａｃｏｒｅ測定
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００ （Ｃｙｔｉｖａ）を用いて、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体またはＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体と各種ペプチドとの相互作用解析を行った。ペプチドはヒトＨＥＲ２の６０３～６２２番目のアミノ酸配列（ｐ６０３－６２２）、ｐ６０３－６２２の１アミノ酸をアラニンに置換したもの（Ｇ６０３Ａ、Ｖ６０４Ａ、Ｋ６０５Ａ、Ｐ６０６Ａ、Ｄ６０７Ａ、Ｌ６０８Ａ、Ｓ６０９Ａ、Ｙ６１０Ａ、Ｍ６１１Ａ、Ｐ６１２Ａ、Ｉ６１３Ａ、Ｗ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、Ｆ６１６Ａ、Ｐ６１７Ａ、Ｄ６１８Ａ、Ｅ６１９Ａ、Ｅ６２０Ａ、Ｇ６２１Ａ）、ｐ６０３－６２２の１アミノ酸をグリシンに置換したもの（Ａ６２２Ｇ）、ｐ６０３－６２２のアミノ酸の一部分を欠損したＨＥＲ２の部分ペプチド（ｐ６１４－６１９、ｐ６１４－６２０、ｐ６１４－６２１、ｐ６１４－６２２、ｐ６１３－６１８、ｐ６１３－６１９、ｐ６１３－６２０、ｐ６１３－６２１、ｐ６１３－６２２、ｐ６１２－６１８、ｐ６１２－６１９、ｐ６１２－６２０、ｐ６１２－６２１、ｐ６１２－６２２、ｐ６１１－６１８、ｐ６１１－６１９、ｐ６１１－６２０、ｐ６１１－６２１、ｐ６１１－６２２、ｐ６１０－６１８、ｐ６１０－６１９、ｐ６１０－６２０、ｐ６１０－６２１、ｐ６１０－６２２、ｐ６０９－６１８、ｐ６０９－６１９、ｐ６０９－６２０、ｐ６０９－６２１、ｐ６０９－６２２）を用いた。上記ペプチドそれぞれをＨ ２Ｍａｂ－２１４抗体またＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体を酢酸バッファー（ｐＨ４．０）で希釈し、アミンカップリング法によってＣＭ５チップに固定化した。未反応のＮＨＳエステルはエタノールアミンによってブロッキングした。Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体またはＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体を固定化したＣＭ５チップに各種ペプチドを添加することで相互作用を測定した。ランニングバッファーは０．００５％ （ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ、または０．００５％ （ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ ２０および１．１９％ ＤＭＳＯを含むＰＢＳ、再生バッファーはグリシン－ＨＣｌ（ｐＨ１．５）を用いた。すべての測定は２５℃で行った。測定データはＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ （Ｃｙｔｉｖａ）の１：１ ｂｉｎｄｉｎｇモデルを用いて解析を行い、結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）および解離定数（Ｋ Ｄ）を求めた。ｋａまたはｋｄが決定できなかったものに関してはＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ （Ｃｙｔｉｖａ）の平衡値解析法を用いてＫＤを求めた。
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００ （Ｃｙｔｉｖａ）を用いて、Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体またはＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体と各種ペプチドとの相互作用解析を行った。ペプチドはヒトＨＥＲ２の６０３～６２２番目のアミノ酸配列（ｐ６０３－６２２）、ｐ６０３－６２２の１アミノ酸をアラニンに置換したもの（Ｇ６０３Ａ、Ｖ６０４Ａ、Ｋ６０５Ａ、Ｐ６０６Ａ、Ｄ６０７Ａ、Ｌ６０８Ａ、Ｓ６０９Ａ、Ｙ６１０Ａ、Ｍ６１１Ａ、Ｐ６１２Ａ、Ｉ６１３Ａ、Ｗ６１４Ａ、Ｋ６１５Ａ、Ｆ６１６Ａ、Ｐ６１７Ａ、Ｄ６１８Ａ、Ｅ６１９Ａ、Ｅ６２０Ａ、Ｇ６２１Ａ）、ｐ６０３－６２２の１アミノ酸をグリシンに置換したもの（Ａ６２２Ｇ）、ｐ６０３－６２２のアミノ酸の一部分を欠損したＨＥＲ２の部分ペプチド（ｐ６１４－６１９、ｐ６１４－６２０、ｐ６１４－６２１、ｐ６１４－６２２、ｐ６１３－６１８、ｐ６１３－６１９、ｐ６１３－６２０、ｐ６１３－６２１、ｐ６１３－６２２、ｐ６１２－６１８、ｐ６１２－６１９、ｐ６１２－６２０、ｐ６１２－６２１、ｐ６１２－６２２、ｐ６１１－６１８、ｐ６１１－６１９、ｐ６１１－６２０、ｐ６１１－６２１、ｐ６１１－６２２、ｐ６１０－６１８、ｐ６１０－６１９、ｐ６１０－６２０、ｐ６１０－６２１、ｐ６１０－６２２、ｐ６０９－６１８、ｐ６０９－６１９、ｐ６０９－６２０、ｐ６０９－６２１、ｐ６０９－６２２）を用いた。上記ペプチドそれぞれをＨ ２Ｍａｂ－２１４抗体またＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体を酢酸バッファー（ｐＨ４．０）で希釈し、アミンカップリング法によってＣＭ５チップに固定化した。未反応のＮＨＳエステルはエタノールアミンによってブロッキングした。Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体またはＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体を固定化したＣＭ５チップに各種ペプチドを添加することで相互作用を測定した。ランニングバッファーは０．００５％ （ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ、または０．００５％ （ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ ２０および１．１９％ ＤＭＳＯを含むＰＢＳ、再生バッファーはグリシン－ＨＣｌ（ｐＨ１．５）を用いた。すべての測定は２５℃で行った。測定データはＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ （Ｃｙｔｉｖａ）の１：１ ｂｉｎｄｉｎｇモデルを用いて解析を行い、結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）および解離定数（Ｋ Ｄ）を求めた。ｋａまたはｋｄが決定できなかったものに関してはＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ （Ｃｙｔｉｖａ）の平衡値解析法を用いてＫＤを求めた。
【0113】
結果を表１および表２にＨ ２Ｍａｂ－２１４抗体、表３および表４にＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体の、それぞれＢｉｏｃｏｒｅ測定による結合親和性を示す。なお、表２および４中のアミノ酸番号は、使用したアミノ酸領域を示す。
【0114】
【表1】
【0115】
【表2】
【0116】
【表3】
【0117】
【表4】
【0118】
実施例４および実施例５の結果から、各種アラニン置換変異体と各種ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｎｔにおける本発明の抗体の結合親和性が相関したことから、Ｋ６１５とＦ６１６の２つのアミノ酸およびその周辺（Ｉ６１３、Ｗ６１４）がＨ ２Ｍａｂ－２１４抗体のエピトープであることがわかった。
【0119】
また、Ｗ６１４のアミノ酸およびその周辺（Ｉ６１３、Ｋ６１５、Ｆ６１６、Ｐ６１７）がＨ ２Ｍａｂ－２５０抗体のエピトープであることがわかった。
【0120】
実施例６：更なる抗体群
本実施例では、更なる抗ＨＥＲ２抗体の取得を試みた。
マウス
６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを日本クレアから購入した。
本実施例では、更なる抗ＨＥＲ２抗体の取得を試みた。
マウス
６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを日本クレアから購入した。
【0121】
免疫原
免疫原として、ＨＥＲ２の６０４－６２２アミノ酸（１９アミノ酸）のＣ末にＣｙｓを加えた２０アミノ酸（ＨＥＲ２＿６０４－６２２Ｃ； ＮＨ２－ＶＫＰＤＬＳＹＭＰＩＷＫＦＰＤＥＥＧＡＣ－ ＣＯＯＨ；配列番号３７）を合成し（ユーロフィン）、常法によりＫＬＨを付加した。ペプチドの精製純度は９０％以上とした。
免疫原として、ＨＥＲ２の６０４－６２２アミノ酸（１９アミノ酸）のＣ末にＣｙｓを加えた２０アミノ酸（ＨＥＲ２＿６０４－６２２Ｃ； ＮＨ２－ＶＫＰＤＬＳＹＭＰＩＷＫＦＰＤＥＥＧＡＣ－ ＣＯＯＨ；配列番号３７）を合成し（ユーロフィン）、常法によりＫＬＨを付加した。ペプチドの精製純度は９０％以上とした。
【0122】
免疫法
ＨＥＲ２＿６０４－６２２Ｃを１００ μｇ／ｍｏｕｓｅ（１００ μｌ）とＩｍｊｅｃｔＡｌｕｍ （Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）１００ μｌを混ぜ、１回目の免疫を行なった。その後、２回目、３回目、４回目、５回目の免疫として、１００ μｇ／マウス（１００ μｌ）を毎週実施した（ＩｍｊｅｃｔＡｌｕｍなし）。５回目の免疫の２日後に、マウスから摘出した脾臓から脾細胞を常法により分離し、脾細胞：マウスミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）＝１０：１の割合で細胞融合を行なった。細胞融合については、常法によりＰＥＧ１５００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて行なった。
ＨＥＲ２＿６０４－６２２Ｃを１００ μｇ／ｍｏｕｓｅ（１００ μｌ）とＩｍｊｅｃｔＡｌｕｍ （Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）１００ μｌを混ぜ、１回目の免疫を行なった。その後、２回目、３回目、４回目、５回目の免疫として、１００ μｇ／マウス（１００ μｌ）を毎週実施した（ＩｍｊｅｃｔＡｌｕｍなし）。５回目の免疫の２日後に、マウスから摘出した脾臓から脾細胞を常法により分離し、脾細胞：マウスミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）＝１０：１の割合で細胞融合を行なった。細胞融合については、常法によりＰＥＧ１５００（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて行なった。
【0123】
ハイブリドーマの培養
ＨＡＴ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を入れた１０％ ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．） ｉｎ ＲＰＭＩ（ナカライテスク株式会社）を用い、９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにハイブリドーマを播種した。
ＨＡＴ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．）を入れた１０％ ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｉｎｃ．） ｉｎ ＲＰＭＩ（ナカライテスク株式会社）を用い、９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにハイブリドーマを播種した。
【0124】
スクリーニング
６日後、ＥＬＩＳＡによりスクリーニングを行なった。ＥＬＩＳＡは以下の通りに実施した。ＨＥＲ２ｐ６０４－６２２ＣはＤＭＳＯで１０ ｍｇ／ｍＬに溶解した後、ＰＢＳで希釈した（１ μｇ／ｍｌ）。ペプチドの固相化は、ＨＥＲ２ｐ６０４－６２２Ｃを５０ ｎｇ／ｗｅｌｌ （５０ μＬ／ｗｅｌｌ）をプレートに加え、３０分、３７℃でインキュベートした。ブロッキングは、１％ ＢＳＡ／ＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（０．０５％）を１００ μＬ／ｗｅｌｌで加え、３０分、３７℃でインキュベートした。ハイブリドーマの培養上清を５０ μｌずつ加え、３０分、３７℃でインキュベートした。２次抗体は、ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ／ＨＲＰ （Ａｇｉｌｅｎｔ， １％ ＢＳＡ／ＰＢＳ－０．０５％ Ｔｗｅｅｎで１／２０００希釈）を５０ μｌずつ加え、３０分、３７℃でインキュベートした。発色は、ＥＬＩＳＡ ＰＯＤ基質ＴＭＢキット（ナカライテスク株式会社）を５０ μｌずつ加え、１０分、室温でインキュベートした。測定は、１５分、ｉＭａｒｋＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ （ＯＤ ６５５ ｎｍ）で行なった。
６日後、ＥＬＩＳＡによりスクリーニングを行なった。ＥＬＩＳＡは以下の通りに実施した。ＨＥＲ２ｐ６０４－６２２ＣはＤＭＳＯで１０ ｍｇ／ｍＬに溶解した後、ＰＢＳで希釈した（１ μｇ／ｍｌ）。ペプチドの固相化は、ＨＥＲ２ｐ６０４－６２２Ｃを５０ ｎｇ／ｗｅｌｌ （５０ μＬ／ｗｅｌｌ）をプレートに加え、３０分、３７℃でインキュベートした。ブロッキングは、１％ ＢＳＡ／ＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（０．０５％）を１００ μＬ／ｗｅｌｌで加え、３０分、３７℃でインキュベートした。ハイブリドーマの培養上清を５０ μｌずつ加え、３０分、３７℃でインキュベートした。２次抗体は、ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ／ＨＲＰ （Ａｇｉｌｅｎｔ， １％ ＢＳＡ／ＰＢＳ－０．０５％ Ｔｗｅｅｎで１／２０００希釈）を５０ μｌずつ加え、３０分、３７℃でインキュベートした。発色は、ＥＬＩＳＡ ＰＯＤ基質ＴＭＢキット（ナカライテスク株式会社）を５０ μｌずつ加え、１０分、室温でインキュベートした。測定は、１５分、ｉＭａｒｋＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ （ＯＤ ６５５ ｎｍ）で行なった。
【0125】
シングルセルクローニング
陽性ｗｅｌｌについて、シングルセルクローニングを行なった。目視によりクローンを確認し、ＥＬＩＳＡにより陽性クローンを樹立した。クローン名をＨ ２Ｍａｂ－２７９～２９９と命名した。
陽性ｗｅｌｌについて、シングルセルクローニングを行なった。目視によりクローンを確認し、ＥＬＩＳＡにより陽性クローンを樹立した。クローン名をＨ ２Ｍａｂ－２７９～２９９と命名した。
【0126】
サブクラスの決定
常法によりサブクラスを決定した（Ｈ ２Ｍａｂ－２１４，２５０と同様）。
常法によりサブクラスを決定した（Ｈ ２Ｍａｂ－２１４，２５０と同様）。
【0127】
【表5】
【0128】
実施例１（１）の通りに、各抗体の精製を行なった。精製カラムには、Ａｂ－Ｃａｐｃｈｅｒ ＴＭ（プロテノバ）を使用した。精製した抗体をエピトープ解析、ＦＡＣＳ、および免疫組織化学染色に供した。ＦＡＣＳは、実施例１（４）に記載の通りに行い、免疫組織化学染色は、実施例１（６）に記載の通りに行った。エピトープ解析は、実施例４に記載の通り、ＥＬＩＳＡ法で行った。
【0129】
エピトープ解析では、アラニンスキャンによりアラニンに変化させたペプチドに対して試験した抗体が結合親和性を低下させるか消失させた場合に、当該アラニンに変化させたアミノ酸を抗体の推定エピトープと決定した。エピトープ解析の結果は、図６Ａ～６Ｅに示される通りであった。なお、図６Ａ～６Ｅでは、推定エピトープを下線で示した。図６Ａ～６Ｅに示されるように、上記抗体クローンの推定エピトープは、いずれもＷ６１４、Ｋ６１５、およびＦ６１６の領域に認められた。
【0130】
ＦＡＣＳ解析では、図中に示される生細胞と各抗体クローンとの結合性を試験した。中皮腫細胞株としてＭｅｔ５Ａ細胞を用い、ヒト表皮角化細胞株としてＨａＣａＴ細胞を用い、非腫瘍上皮細胞株としてＭＣＦ１０Ａ－ＩＩＩを用い、ヒト類表皮がん細胞株としてＡ４３１を用い、乳がん細胞株としてＳＫ－ＢＲ－３を用いた。結果は、図７Ａ～７Ｇに示される通りであった。図７Ａ～７Ｇに示されるように、配列番号：３７のアミノ酸を免疫原としたほとんどの細胞クローンで、正常細胞に対しては結合せず、陽性のがん細胞に対しては結合性を示した。
【0131】
免疫組織化学染色の結果は、図８Ａ～８Ｆに示される通りであった。図８Ａ～８Ｆに示されるように、配列番号：３７のアミノ酸を免疫原としたいずれの抗体クローンもがん組織には強く反応したが、正常組織に対して反応はほとんど認められなかった。
【0132】
抗体遺伝子クローニング
実施例２に記載されるように抗体遺伝子クローニング、重鎖可変領域および軽鎖可変領域の推定、およびＣＤＲ推定を実施した。リコンビナント抗体の活性はＦＡＣＳにより確認できた。
実施例２に記載されるように抗体遺伝子クローニング、重鎖可変領域および軽鎖可変領域の推定、およびＣＤＲ推定を実施した。リコンビナント抗体の活性はＦＡＣＳにより確認できた。
【0133】
配列番号：１４～１７および３９～８０のアミノ酸配列における重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸番号はそれぞれ以下表の通りである。推定されたＣＤＲの配列は、配列番号：８１～２０６にそれぞれ示されている。
【表6】
【0134】
配列番号１：ヒトｃ－ｅｒｂ－Ｂ－２（ＨＥＲ２）塩基配列（Ｇｅｎｅｂａｎｋ受託番号：Ｘ０３３６３）
配列番号２：ヒトｃ－ｅｒｂ－Ｂ－２（ＨＥＲ２）アミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＫＢ ＩＤ：Ｐ０４６２６）
配列番号３：ヒトｃ－ｅｒｂ－Ｂ－２（ＨＥＲ２）ｅｃ（細胞外ドメイン分泌型）アミノ酸配列（２３－６５２ａａ）
配列番号４：プライマー（ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２１４Ｈ）
配列番号５：プライマー（ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２５０Ｈ）
配列番号６：プライマー（ＩｎＦｒ．ＩｇＧ１ｔｅｒＮｏｔＩ）
配列番号７：プライマー（ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２１４Ｌ）
配列番号８：プライマー（ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２５０Ｌ）
配列番号９：プライマー（ＩｎＦ．ｍＩｇＣＫｔｅｒＮｏｔＩ）
配列番号１０：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１１：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１２：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１３：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１４：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号１５：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号１６：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号１７：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号１８：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２０：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２１：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２２：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２３：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２４：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２５：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２６：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２７：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２８：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２９：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号３０：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６００～６５２のアミノ酸配列
配列番号３１：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６０３～６２２のアミノ酸配列
配列番号３２：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１３～６３２のアミノ酸配列
配列番号３３：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１３～６２２のアミノ酸配列
配列番号３４：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１１～６１８のアミノ酸配列
配列番号３５：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１２～６１８のアミノ酸配列
配列番号３６：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１３～６１９のアミノ酸配列
配列番号３７：ＨＥＲ２ｐ６０４－６２２Ｃのアミノ酸配列
配列番号３８：ｓｃＦｖで用いられるリンカーの一例
配列番号３９：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４０：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号８０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号８１：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号８２：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号８３：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号８４：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号８５：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号８６：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号８７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号８８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号８９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号９０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号９２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号９３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号９５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号９６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号９８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号９９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１００：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１０２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１０３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１０５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１０６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１０８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１０９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１１０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１１２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１１３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１１５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１１６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１１８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１１９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１２０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１２２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１２３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１２５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１２６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１２８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１２９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１３０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１３２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１３３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１３５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１３６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１３８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１３９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１４０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１４２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１４３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１４５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１４６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１４８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１４９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１５０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１５１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１５２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１５３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１５４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１５５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１５６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１５７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１５８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１５９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１６０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１６１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１６２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１６３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１６４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１６５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１６６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１６７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１６８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１６９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１７０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１７１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１７２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１７３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１７４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１７５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１７６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１７７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１７８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１７９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１８０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１８１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１８２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１８３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１８４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１８５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１８６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１８７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１８８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１８９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１９１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１９２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１９４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１９５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１９７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１９８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２００：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２０１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２０２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２０３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２０４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２０５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２０６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
産業上の利用可能性
配列番号２：ヒトｃ－ｅｒｂ－Ｂ－２（ＨＥＲ２）アミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＫＢ ＩＤ：Ｐ０４６２６）
配列番号３：ヒトｃ－ｅｒｂ－Ｂ－２（ＨＥＲ２）ｅｃ（細胞外ドメイン分泌型）アミノ酸配列（２３－６５２ａａ）
配列番号４：プライマー（ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２１４Ｈ）
配列番号５：プライマー（ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２５０Ｈ）
配列番号６：プライマー（ＩｎＦｒ．ＩｇＧ１ｔｅｒＮｏｔＩ）
配列番号７：プライマー（ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２１４Ｌ）
配列番号８：プライマー（ＩｎＦ．ＨｉｎｄＩＩＩ－Ｈ２－２５０Ｌ）
配列番号９：プライマー（ＩｎＦ．ｍＩｇＣＫｔｅｒＮｏｔＩ）
配列番号１０：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１１：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１２：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１３：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１４：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号１５：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号１６：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号１７：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号１８：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２０：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２１：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２２：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２３：Ｈ ２Ｍａｂ－２１４抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２４：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２５：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２６：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２７：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２８：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２９：Ｈ ２Ｍａｂ－２５０抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号３０：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６００～６５２のアミノ酸配列
配列番号３１：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６０３～６２２のアミノ酸配列
配列番号３２：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１３～６３２のアミノ酸配列
配列番号３３：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１３～６２２のアミノ酸配列
配列番号３４：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１１～６１８のアミノ酸配列
配列番号３５：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１２～６１８のアミノ酸配列
配列番号３６：配列番号２のヒトＨＥＲ２のアミノ酸番号６１３～６１９のアミノ酸配列
配列番号３７：ＨＥＲ２ｐ６０４－６２２Ｃのアミノ酸配列
配列番号３８：ｓｃＦｖで用いられるリンカーの一例
配列番号３９：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４０：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号４８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号４９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号５８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号５９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号６８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号６９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号７８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号７９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＨ鎖アミノ酸配列
配列番号８０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＬ鎖アミノ酸配列
配列番号８１：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号８２：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号８３：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号８４：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号８５：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号８６：Ｈ ２Ｍａｂ－２７９抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号８７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号８８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号８９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号９０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号９２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８０抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号９３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号９５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号９６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号９７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号９８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８１抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号９９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１００：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１０２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１０３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８２抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１０５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１０６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１０８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１０９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１１０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８３抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１１２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１１３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１１５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１１６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８４抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１１８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１１９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１２０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１２２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８５抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１２３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１２５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１２６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１２７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１２８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８６抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１２９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１３０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１３２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１３３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８７抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１３５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１３６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１３７：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１３８：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１３９：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１４０：Ｈ ２Ｍａｂ－２８８抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４１：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１４２：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１４３：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４４：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１４５：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１４６：Ｈ ２Ｍａｂ－２８９抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１４７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１４８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１４９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１５０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１５１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１５２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９０抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１５３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１５４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１５５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１５６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１５７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１５８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９１抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１５９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１６０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１６１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１６２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１６３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１６４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９２抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１６５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１６６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１６７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１６８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１６９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１７０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９３抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１７１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１７２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１７３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１７４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１７５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１７６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９４抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１７７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１７８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１７９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１８０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１８１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１８２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９５抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１８３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１８４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１８５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１８６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１８７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１８８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９６抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１８９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９０：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１９１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１９２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１９４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９７抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１９５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１９７：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１９８：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号１９９：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２００：Ｈ ２Ｍａｂ－２９８抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２０１：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２０２：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２０３：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２０４：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２０５：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２０６：Ｈ ２Ｍａｂ－２９９抗体のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
産業上の利用可能性
【0135】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、がんの検出および／または処置に有用である。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図6E】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図7E】
【図7F】
【図7G】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図8E】
【図8F】
【配列表】