▶ ヌシード ニュートリショナル ユーエス インク．の特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024023267
(43)【公開日】2024-02-21
(54)【発明の名称】ＤＨＡが豊富な多価不飽和脂肪酸組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/202 20060101AFI20240214BHJP
A61K 31/232 20060101ALI20240214BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240214BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240214BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20240214BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240214BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240214BHJP
A61K 36/31 20060101ALI20240214BHJP
A61K 31/23 20060101ALI20240214BHJP
A61K 31/231 20060101ALI20240214BHJP
A23D 9/013 20060101ALI20240214BHJP
C11B 3/12 20060101ALI20240214BHJP
A23L 33/115 20160101ALN20240214BHJP
【ＦＩ】
A61K31/202
A61K31/232
A61P3/10
A61P9/00
A61P9/12
A61P35/00
A61P37/02
A61K36/31
A61K31/23
A61K31/231
A23D9/013
C11B3/12
A23L33/115
【審査請求】有
【請求項の数】19
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023191793
(22)【出願日】2023-11-09
(62)【分割の表示】P 2020560368の分割
【原出願日】2018-12-20
(31)【優先権主張番号】18169368.0
(32)【優先日】2018-04-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】18179081.7
(32)【優先日】2018-06-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(71)【出願人】
【識別番号】521535227
【氏名又は名称】ヌシード ニュートリショナル ユーエス インク．
【氏名又は名称原語表記】ＮＵＳＥＥＤ ＮＵＴＲＩＴＩＯＮＡＬ ＵＳ ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】110000774
【氏名又は名称】弁理士法人 もえぎ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】リトラー，スチュアート
(57)【要約】 （修正有）
【課題】安定性の改善されたＤＨＡ、ＡＬＡ、およびオレイン酸を特定の比率で含む植物ベースの脂質組成物、ならびにその製造プロセスを提供する。
【解決手段】アブラナ属植物などの単一の供給源から入手し得る脂肪酸エステル混合物をエステル交換によりエチルエステルとし、１４５℃から１６０℃の温度範囲で分子蒸留するステップを含む、プロセスとする。
【選択図】図１
【解決手段】アブラナ属植物などの単一の供給源から入手し得る脂肪酸エステル混合物をエステル交換によりエチルエステルとし、１４５℃から１６０℃の温度範囲で分子蒸留するステップを含む、プロセスとする。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）組成物の総脂肪酸含有量の１５重量％～３５重量％の量のドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）と、
（ｉｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の最大５重量％の量のエイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）と、
（ｉｉｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の１０重量％～２０重量％の量のα－リノレン酸（１８：３ｎ－３）と、
（ｉｖ）前記組成物の総脂肪酸含有量の２０重量％～４０重量％の量のオレイン酸（１８：１ｎ－９）と、
（ｖ）前記組成物の総脂肪酸含有量の最大１．５重量％の量のパルミチン酸（１６：０）と、を含み、
成分（ｉ）～（ｖ）が、各々独立して脂肪酸エステルの形態で提供される植物ベースの脂質組成物を生成するためのプロセスであって、
脂肪酸エチルエステルの混合物を提供することと、その混合物を第１の分子蒸留ステップに供し、第１の残留物を得ることと、を含む、プロセス。
（ｉｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の最大５重量％の量のエイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）と、
（ｉｉｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の１０重量％～２０重量％の量のα－リノレン酸（１８：３ｎ－３）と、
（ｉｖ）前記組成物の総脂肪酸含有量の２０重量％～４０重量％の量のオレイン酸（１８：１ｎ－９）と、
（ｖ）前記組成物の総脂肪酸含有量の最大１．５重量％の量のパルミチン酸（１６：０）と、を含み、
成分（ｉ）～（ｖ）が、各々独立して脂肪酸エステルの形態で提供される植物ベースの脂質組成物を生成するためのプロセスであって、
脂肪酸エチルエステルの混合物を提供することと、その混合物を第１の分子蒸留ステップに供し、第１の残留物を得ることと、を含む、プロセス。
【請求項2】
前記第１の分子蒸留ステップで使用される温度が１４５℃から１６０℃の範囲である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項3】
前記第１の残留物が第２の分子蒸留ステップに供される、請求項１又は２に記載のプロセス。
【請求項4】
前記第２の分子蒸留ステップで使用される温度が１４５℃から１６０℃の範囲である、請求項３に記載のプロセス。
【請求項5】
それぞれの蒸留ステップが、少なくとも蒸留物の重量が前記残留物の重量と同じになるまで実施される、請求項１～４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項6】
前記蒸留物が、成分（ｉ）～（ｖ）が独立してトリグリセリドの一部又はジグリセリドの一部として提供されるように、さらにエステル変換される、請求項１～５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項7】
前記脂質組成物が、その組成物の総脂肪酸含有量の２０重量％～３５重量％の量のドコサヘキサエン酸を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項8】
前記脂質組成物が、その組成物の総脂肪酸含有量の最大３重量％の量のエイコサペンタエン酸を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項9】
前記脂質組成物が、その組成物の総脂肪酸含有量の１２重量％～２０重量％の量のα－リノレン酸を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項10】
前記脂質組成物が、その組成物の総脂肪酸含有量の２０重量％～３５重量％の量のオレイン酸を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項11】
前記脂質組成物が、その組成物の総脂肪酸含有量の最大１．０重量％の量のパルミチン酸を含む、請求項１０に記載のプロセス。
【請求項12】
前記第１の分子蒸留ステップで使用される脂肪酸エチルエステルの混合物が単一の供給源に由来する、請求項１～１１のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項13】
前記第１の分子蒸留ステップで使用される脂肪酸エチルエステルの混合物が植物に由来する、請求項１～１２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項14】
前記植物が油糧種子である、請求項１３に記載のプロセス。
【請求項15】
前記植物が、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｐ．、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ、Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｓｐ．、Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、Ｚｅａ ｍａｙｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ、Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｓｐ．、Ｅｌａｅｓｉｓ ｇｕｉｎｅｅｎｉｓ、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ、Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ、Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ、Ｏｒｙｚａ ｇｌａｂｅｒｒｉｍａ、Ｃａｍｅｌｉｎａ ｓａｔｉｖａ、及びＣｒａｍｂｅ ａｂｙｓｓｉｎｉｃａからなる群から選択される、請求項１３又は１４に記載のプロセス。
【請求項16】
前記植物が、アブラナ属の植物又はＢｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ又はＢｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａである、請求項１５に記載のプロセス。
【請求項17】
前記植物が、長鎖多価不飽和脂肪酸を生成する能力を向上させるために遺伝子改変されている、請求項１３に記載のプロセス。
【請求項18】
抗酸化剤、安定剤、および界面活性剤からなる群から選択される１つ以上の追加成分を加えることをさらに含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項19】
請求項１～１８のいずれか一項に記載のプロセスにより得られる脂質組成物を含む錠剤、カプセル、カプセル化ゲル、摂取可能な液体もしくは粉末、または局所軟膏もしくはクリーム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本明細書に開示される実施形態は、ドコサヘキサエン酸を強化した新規な脂質組成物に関する。本組成物は、多くの健康上の利点を有する多価不飽和脂肪酸の混合物を含む。本組成物は、栄養上の利益を提供し、単一の供給源から入手可能であり、拡張性と持続性の両方を兼ね備えている。また、酸化に対する安定性も向上している。
【背景技術】
【0002】
オメガ－３長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ－ＰＵＦＡｓ）は、人間と動物の健康にとって重要な化合物として広く認識されている。これらの脂肪酸は、食事供給源から、または程度はより低いが、リノール酸（ＬＡ、１８：２ω－６）またはα－リノレン酸（ＡＬＡ、１８：３ω－３）の脂肪酸の変換によって得られる可能性があり、これらは全て人間の食事の必須脂肪酸と見なされている。
【0003】
栄養学的観点から、最も重要なオメガ－３脂肪酸は、おそらくα－リノレン酸、エイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」、２０：５ｎ－３）、およびドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」、２２：６ｎ－３）である。ＤＨＡはＬＣ－ＰＵＦＡであり、脳と眼の発達に重要である。オメガ－３ＰＵＦＡの摂取は、冠動脈疾患の予防にも役立つ可能性がある。医学的研究は、これらの脂肪酸が心血管機能および免疫機能の改善、または癌、糖尿病、および高血圧の減少などの有益な健康面を有することを明確に示している。臨床結果は、週に５．５ｇのオメガ－３ＰＵＦＡの食事摂取が、一次心停止のリスクの５０％減少に関連している可能性があることを証明した。その結果、オメガ－３ＰＵＦＡを含有する油は、製薬および栄養の目的で高い需要がある。
【0004】
一般に、脂肪酸の酸化安定性は、炭素－炭素二重結合の数、または不飽和度が増加するにつれて著しく低下する。残念ながら、ＡＬＡ、ＥＰＡ、およびＤＨＡは全て多価不飽和脂肪であり、容易に酸化する傾向がある。ＥＰＡ（５つの炭素－炭素二重結合を持つ）は、ＡＬＡよりも有意に酸化されやすく、ＤＨＡ（６つの炭素－炭素二重結合を持つ）は、ＥＰＡよりもさらに酸化されやすい。結果として、オメガ－３含有量を増やすと、多くの製品の貯蔵寿命が短くなる傾向がある。これらの問題は、有意な量のＥＰＡまたはＤＨＡを含む油で特に深刻になる。
【0005】
ＵＳ２０１５／２２３４８３は、酸化安定性が改善されたキャノーラ油ベースのブレンドを開示している。安定性は、１つ以上の添加剤の添加によって達成される。
【0006】
ＵＳ２０１１／００２７４４３は、改善されたフレーバープロファイルを有するオレイン酸、リノール酸、アルファリノレン酸およびＬＣ－ＰＵＦＡの特定のブレンドを含有する油脂組成物を開示している。ＵＳ２００４／２０９９５３は、ＬＣ－ＰＵＦＡの主にモノグリセリドおよびジグリセリドを含有する栄養製品を開示している。ＵＳ５，１３０，０６１は、原油からＤＨＡを抽出するためのエステル交換および蒸留プロセスの使用を記載している。ＵＳ９，０４０，７３０は、組成物中の望ましくないステロールの量を減らすために、ＰＵＦＡを含有する脂質混合物の純化を記載している。これらのいずれの場合も、特定のブレンドが得られる原料として魚油または微生物油が使用される。
【0007】
国際特許出願第ＷＯ２０１３／１８５１８４号は、多価不飽和脂肪酸のエチルエステルを生成するためのプロセスを開示している。
【0008】
国際特許出願第ＷＯ２０１５／０８９５８７号および米国特許出願第ＵＳ２０１５／０１６６９２８号は、オメガ－３およびオメガ－６脂肪酸の混合物を含む植物脂質組成物を開示している。遺伝子組み換えキャノーラは、ＷＯ２０１７／２１８９６９およびＷＯ２０１７／２１９００６に記載されている。
【0009】
本明細書で明らかに先に公表された文献のリストまたは議論は、その文献が最新技術の一部であるか、または共通の一般知識であることを認めるものと必ずしも解釈されるべきではない。
【発明の概要】
【0010】
本発明の第１の態様によれば、
（ｉ）組成物の総脂肪酸含有量の約１５重量％～約３５重量％の量のドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）と、
（ｉｉ）組成物の総脂肪酸含有量の最大約５重量％の量のエイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）と、
（ｉｉｉ）組成物の総脂肪酸含有量の約１０重量％～約２０重量％の量のα－リノレン酸（１８：３ｎ－３）と、
（ｉｖ）組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約４０重量％の量のオレイン酸（１８：１ｎ－９）と、
（ｖ）組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．５重量％の量のパルミチン酸と、を含む、植物ベースの脂質組成物が提供され、
成分（ｉ）～（ｖ）は、各々独立して、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステル、または脂肪酸エステルの塩の形態で提供される。
（ｉ）組成物の総脂肪酸含有量の約１５重量％～約３５重量％の量のドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）と、
（ｉｉ）組成物の総脂肪酸含有量の最大約５重量％の量のエイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）と、
（ｉｉｉ）組成物の総脂肪酸含有量の約１０重量％～約２０重量％の量のα－リノレン酸（１８：３ｎ－３）と、
（ｉｖ）組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約４０重量％の量のオレイン酸（１８：１ｎ－９）と、
（ｖ）組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．５重量％の量のパルミチン酸と、を含む、植物ベースの脂質組成物が提供され、
成分（ｉ）～（ｖ）は、各々独立して、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステル、または脂肪酸エステルの塩の形態で提供される。
【0011】
該脂質組成物は、本明細書では「本発明の組成物」と呼ばれる。
【0012】
本発明は、遊離脂肪酸、塩、エステルまたはエステルの塩のいずれかの形態で、高レベルのドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびα－リノレン酸（ＡＬＡ）を同時に含有する脂質組成物に関する。これらの組成物は、植物源などの持続可能な供給源から入手可能であることが見出されている。それらはまた、貯蔵中の酸化による分解の減少によって証明される改善された貯蔵安定性プロファイルを有することも見出された。特に、ＤＨＡは、人間と動物の健康にとって重要な化合物として認識されている。これらの組成物は、飼料、栄養補助食品、化粧品、および他の化学組成物に使用することができる。それらはまた、中間体および医薬品有効成分として有用である可能性もある。
【0013】
本発明の組成物中の脂肪酸レベルは、当業者に知られている常法を使用して決定することができる。そのような方法は、例えば、実施例に開示される方法に従って、参照標準と組み合わせたガスクロマトグラフィー（ＧＣ）を含む。特定の方法では、ＧＣ分析の前に脂肪酸がメチルエステルまたはエチルエステルに変換される。このような技術は、実施例で説明される。クロマトグラムのピーク位置を使用して各特定の脂肪酸を同定し、各ピーク下の面積を積分して量を決定することができる。本明細書で使用される場合、反対に述べられない限り、試料中の特定の脂肪酸のパーセンテージは、その脂肪酸のクロマトグラムの曲線下面積を、クロマトグラムの脂肪酸の総面積のパーセンテージとして計算することによって決定される。これは本質的に重量パーセント（ｗ／ｗ）に対応する。脂肪酸の同一性はＧＣ－ＭＳにより確認できる。
【0014】
この文脈でのドコサヘキサエン酸および「ＤＨＡ」への言及は、特に明記しない限り、ドコサヘキサエン酸のω３型、すなわち脂肪酸のメチル末端から３番目の炭素－炭素結合に不飽和（炭素－炭素二重結合）を有するドコサヘキサエン酸についての言及である。同義で使用できる省略形には、「２２：６ｎ－３」および「２２：６ω－３」が含まれる。
【0015】
より一般的には、「多価不飽和脂肪酸」および「ＰＵＦＡ」という用語は、少なくとも２つの炭素－炭素二重結合を含む脂肪酸を指す。「長鎖多価不飽和脂肪酸」および「ＬＣ－ＰＵＦＡ」という用語は、その炭素鎖に少なくとも２０個の炭素原子および少なくとも２個の炭素－炭素二重結合を含む脂肪酸を指し、従って、ＶＬＣ－ＰＵＦＡを含む。本明細書で使用される場合、「非常に長鎖の多価不飽和脂肪酸」および「ＶＬＣ－ＰＵＦＡ」という用語は、その炭素鎖に少なくとも２２個の炭素原子および少なくとも３個の炭素－炭素二重結合を含む脂肪酸を指す。通常、脂肪酸の炭素鎖の炭素原子数は、分岐していない炭素鎖を指す。炭素鎖が分岐している場合、炭素原子の数は側基の炭素原子を除外する。
【0016】
長鎖ポリ不飽和脂肪酸は、ω３（「オメガ－３」）脂肪酸、すなわち、脂肪酸のメチル末端から３番目の炭素－炭素結合に不飽和（炭素－炭素二重結合）を有する脂肪酸であり得る。あるいは、それらは、ω６（「オメガ－６」）脂肪酸、すなわち、脂肪酸のメチル末端から６番目の炭素－炭素結合に不飽和（炭素－炭素二重結合）を有する脂肪酸であり得る。他の不飽和パターンが存在する可能性がある一方で、ω６および特にω３の型は、本発明の文脈において特に関連性がある。
【0017】
本発明の組成物は、ＤＨＡおよびα－リノレン酸（ＡＬＡ、１８：３ｎ－３）を含む少なくとも２つの異なる多価不飽和脂肪酸を含む。一実施形態では、ＤＨＡまたはＡＬＡのいずれかが、組成物中に存在する最も豊富な脂肪酸である（組成物の総脂肪酸含有量に対する重量で）。別の実施形態では、ＤＨＡおよびＡＬＡは、組成物中に存在する２つの最も豊富な脂肪酸である。
【0018】
本発明の組成物中の成分（ｉ）～（ｖ）は各々、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステルまたは脂肪酸エステルの塩の形態で存在し得る。
【0019】
本明細書で使用される場合、「脂肪酸」という用語は、多くの場合、飽和または不飽和のいずれかの長い脂肪族テールを有するカルボン酸（または有機酸）を指す。典型的には、脂肪酸は、少なくとも８個の炭素原子の長さ、より具体的には少なくとも１２個の炭素の長さの炭素－炭素結合鎖を有する。ほとんどの天然脂肪酸は、生合成に２つの炭素原子を持つアセテートが含まれるため、偶数の炭素原子を有する。脂肪酸は、本明細書で「遊離脂肪酸」と呼ばれる遊離状態（非エステル化）、またはアルキルエステル、トリグリセリドの一部、ジアシルグリセリドの一部、モノアシルグリセリドの一部、アシル－ＣｏＡ（チオエステル）結合もしくは他の結合形態、またはそれらの混合物などのエステル化形態であり得る。脂肪酸は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトールまたはジホスファチジルグリセロールの形態などのリン脂質としてエステル化することができるが、好ましくは、アルキルエステルとして、特に、エチルエステルとしてエステル化する。誤解を避けるために、特に明記しない限り、「脂肪酸」という用語は、遊離脂肪酸、脂肪酸エステル、およびこれらのいずれかの塩を包含する。特に明記しない限り、特定の脂肪酸に関連する定量値は、それが存在する形態（例えば、遊離酸またはエステル）に関係なく、存在するその脂肪酸の量（重量に基づいて計算される）を指す。
【0020】
組成物中の各脂肪酸はまた、脂肪酸の塩、例えばアルカリ塩またはアルカリ土類塩の形態でも提供され得る。言及され得る特定の塩には、リチウム塩およびカルシウム塩が含まれる。そのような塩は、潜在的な追加の薬効を有する、または加工性の改善を提供する。同様に、脂肪酸エステルは、脂肪酸エステルの塩の形態で提供され得る。遊離脂肪酸、塩、エステル、またはエステルの塩の形態の脂肪酸の任意の組み合わせが、本発明の組成物中に存在し得る。これは、例として、ＤＨＡが主にエチルエステルとして存在し、ＡＬＡが主にメチルエステルのカルシウム塩として存在し、オレイン酸が主に遊離脂肪酸として存在する可能性があることを意味する。
【0021】
「飽和脂肪酸」には、鎖に沿って任意の二重結合または他の官能基は含まれない。「飽和」という用語は、全ての炭素（カルボン酸［－ＣＯＯＨ］基を除く）ができるだけ多くの水素を含有するという点で、水素を指す。言い換えると、オメガ（ω）末端は３つの水素原子（ＣＨ３－）に結合し、鎖内の各炭素は２つの水素原子（－ＣＨ２－）に結合している。「総脂肪酸」という用語は、全ての形態の脂肪酸を含み、飽和または不飽和、遊離酸、エステルおよび／または塩である。
【0022】
化合物の量、重量、時間、温度などの測定可能な値を指す場合に本明細書で使用される「約」という用語は、明記された量の２０％、１０％、５％、１％、０．５％、またはさらに０．１％の変動を指す。
【0023】
言及され得る本発明の組成物は、高濃度のオメガ－３脂肪酸を含有するものを含み、それらの多くは、人間の健康にとって特に重要であると考えられているいわゆる「必須脂肪」である。オメガ－３脂肪酸は、ＨＤＬコレステロールレベルに有益な効果を有し得、若者の脳の発達をサポートし、メンタルヘルスに役立つことが示されている。これらの脂肪酸は一般に、抗炎症性を有するエイコサノイドの前駆体であると考えられている。言及され得る本発明の特定の組成物は、脂質組成物中のオメガ－３多価不飽和脂肪酸の総量が、組成物の総脂肪酸含有量の少なくとも約３０重量％、例えば少なくとも約３５重量％であるものを含む。特定の実施形態において、脂質組成物中のオメガ－３多価不飽和脂肪酸の総量は、組成物の総脂肪酸含有量の少なくとも約４０重量％である。
【0024】
オメガ－６脂肪酸も人間の健康にとって重要であると考えられている。特に、特定のオメガ６脂肪酸は健康に必要な「必須脂肪」であるが、身体はそれらを合成することができない。ただし、オメガ－６脂肪は、より炎症誘発性のあるエイコサノイドの前駆体であることが示されたため、これらのエイコサノイドが過剰に生成されると、炎症および炎症性疾患を増加させる可能性がある。したがって、脂質組成物中のそのような脂肪酸の量を最小限に抑えることが望ましい場合がある。食事中のオメガ－６脂肪酸とオメガ－３脂肪酸の比率は４：１以下であるべきだと一般的に認められている。しかしながら、通常の洋風の食事では、典型的に、オメガ－６脂肪酸の割合が高くなる。本発明の脂質組成物は、有利には、比較的少量のオメガ－６脂肪酸を含有し、同時に、比較的大量のより有益なオメガ－３脂肪酸を含有する。一実施形態では、組成物中のオメガ－６多価不飽和脂肪酸の総量は、組成物の総脂肪酸含有量のせいぜい約８重量％である。別の実施形態において、組成物中のオメガ－３多価不飽和脂肪酸の総重量とオメガ－６多価不飽和脂肪酸の総重量との比は、少なくとも約６：１である。さらなる実施形態において、組成物中のオメガ－３多価不飽和脂肪酸の総重量とオメガ－６多価不飽和脂肪酸の総重量との比は、少なくとも約８：１である。
【0025】
オメガ－９脂肪酸は、体が生成できる一価不飽和脂肪である。他の種類の脂肪の代わりに、オメガ－９脂肪酸が豊富な食品を摂取すると、糖尿病患者に血漿トリグリセリドおよび「悪い」超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）コレステロールの減少を含む多くの有益な健康効果を及ぼす可能性があり、炎症を軽減し、インスリン感受性を改善する。一実施形態において、脂質組成物中のオメガ－３およびオメガ－９の多価不飽和脂肪酸の総量は、組成物の総脂肪酸含有量の少なくとも約５０重量％であり、例えば少なくとも約６０重量％または少なくとも約７０重量％である。さらなる実施形態において、組成物中のオメガ－３およびオメガ－９の多価不飽和脂肪酸の総重量とオメガ－６多価不飽和脂肪酸の総重量との比は、少なくとも約５：１、例えば少なくとも約１０：１である。
【0026】
長鎖多価不飽和脂肪酸を含有する脂質組成物は、典型的には、海洋源（例えば、魚、甲殻類）、藻類源、または植物源（例えば、亜麻またはエキウム）から得られる。出発有機物は、そこに含有される油（一般に「原」油と呼ばれる）を抽出するために最初に加工される。例えば、植物種子の場合、種子は粉砕され、油を放出し、油は次に濾過および／またはデカンテーションによって固形物から分離される。原油は、有用性を発揮するには低過ぎるレベルの多価不飽和脂肪酸（例えば、栄養製品）を含有することが多いため、濃縮が必要である。原油に１つ以上の必須成分が不足している場合、複数の供給源から（例えば、魚および藻類から）、原油または濃縮油を共にブレンドし、所望の組成物を得ることが一般的に多い。あるいは、濃縮は、所望の脂肪酸成分のレベルを最大化しながら、原油を加工し、不要な成分（例えば、製品の色、臭いもしくは安定性に悪影響を及ぼす成分、または不要な脂肪酸）を除去することによって達成され得る。
【0027】
本発明の組成物は、単一の供給源から有利に入手可能である。単一の供給源の使用は、原油の効率的かつ経済的な加工および本発明の脂質組成物の製造を容易にする。「単一の供給源から入手可能である」（または「単一の供給源から得られる」）という句は、脂質組成が単一の分類学的クラスの１つ以上の生物から入手可能であることを意味する。特定の実施形態では、脂質組成物は、異なる分類学的クラスにわたる複数の生物に由来しない。例えば、脂質組成物は、魚と藻類の組み合わせ、または魚と植物の組み合わせから得られた油のブレンドであってはならない。代わりに、本発明の脂質組成物（またはエステル交換および蒸留などの濃縮技術によって組成物を得ることができる「原」油）は、単一の生物集団、例えば、単一の植物源または草木源から入手可能である。誤解を避けるために、「単一の供給源から入手可能である」という句は、脂質組成物または「原」油の供給源としての同じ種の複数の生物の使用、すなわち複数の魚、藻類資源、植物、または同じ種のものである植物種子の使用を除外するものではない。該複数の生物は、好ましくは、全て同じ種のものであるか、または同じ育種系統に由来するか、または同じ植物種のものであるか、または同じ生産資源またはバッチのものである。
【0028】
本発明の特定の脂質組成物において、ＤＨＡは、組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％（例えば、約２２重量％～約３３重量％）の量で存在する。
【0029】
本発明の脂質組成物は、存在するＥＰＡの量と比較して高レベルのＤＨＡを含有することが有利に見出された。したがって、一実施形態では、脂質組成物中のドコサヘキサエン酸とエイコサペンタエン酸との重量比は、少なくとも約２０：１である。さらなる実施形態において、脂質組成物中のドコサヘキサエン酸とエイコサペンタエン酸との重量比は、約２５：１超であり得、例えば、約３０：１より大きく、最も具体的には、約３５：１より大きくてもよい。
【0030】
好ましくは、組成物中のＥＰＡ量は比較的少ない可能性がある。本発明の組成物は、組成物の総脂肪酸含有量の最大約５重量％のＥＰＡを含有する。特定の実施形態では、組成物は、組成物の総脂肪酸含有量の最大約３重量％、より具体的には最大約１重量％のＥＰＡを含有する。
【0031】
本発明の組成物は、組成物の総脂肪酸含有量の約１０重量％～約２０重量％の量のα－リノレン酸（ＡＬＡ）を含有する。ＡＬＡは、人間または動物の適切な健康にとって重要な必須脂肪である。特定の実施形態では、組成物は、組成物の総脂肪酸含有量の約１２重量％～約２０重量％、より具体的には約１２重量％～約１８重量％の量のＡＬＡを含有する。
【0032】
オレイン酸は、本発明の組成物の成分であり、組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約４０重量％の量で存在する。オレイン酸は、人間の食事でよく見られる一価不飽和脂肪である。一価不飽和脂肪の消費は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールの減少、およびおそらく高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロールの増加と関連している。一実施形態では、オレイン酸は、組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％の量で存在する。さらなる実施形態において、オレイン酸は、組成物の総脂肪酸含有量の約２２重量％～約３３重量％の量で存在する。
【0033】
本発明の組成物は、組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．５重量％のパルミチン酸（１６：０）を含有する。特定の実施形態では、組成物は、組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．０重量％、より具体的には最大約０．７重量％のパルミチン酸を含有する。
【0034】
本発明の組成物はまた、組成物の総脂肪酸含有量の少なくとも約０．５重量％のエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ、２０：４ｎ－３）も含有する。特定の実施形態では、組成物は、組成物の総脂肪酸含有量の少なくとも約１．０重量％、より具体的には少なくとも約１．５重量％のＥＴＡを含有する。
【0035】
本発明の所与の態様、特徴、または実施形態についての選好および選択肢は、特に文脈に示されない限り、本発明の全ての他の態様、特徴、および実施形態についての任意のおよび全ての選好および選択肢と組み合わせて開示されているとみなされるべきである。例えば、前の節で示された特定量のＤＨＡ、ＥＰＡ、ＡＬＡ、オレイン酸およびパルミチン酸は、全ての組み合わせで開示されている。
【0036】
したがって、言及され得る特定の脂質組成物は、
（ｉ）組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％の量のドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）と、
（ｉｉ）組成物の総脂肪酸含有量の最大約３重量％の量のエイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）と、
（ｉｉｉ）組成物の総脂肪酸含有量の約１２重量％～約２０重量％の量のα－リノレン酸（１８：３ｎ－３）と、
（ｉｖ）組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％の量のオレイン酸（１８：１ｎ－９）と、
（ｖ）組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．０重量％の量のパルミチン酸と、を含むものであり、
成分（ｉ）～（ｖ）は、各々独立して、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステル、または脂肪酸エステルの塩の形態で提供される。
（ｉ）組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％の量のドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）と、
（ｉｉ）組成物の総脂肪酸含有量の最大約３重量％の量のエイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）と、
（ｉｉｉ）組成物の総脂肪酸含有量の約１２重量％～約２０重量％の量のα－リノレン酸（１８：３ｎ－３）と、
（ｉｖ）組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％の量のオレイン酸（１８：１ｎ－９）と、
（ｖ）組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．０重量％の量のパルミチン酸と、を含むものであり、
成分（ｉ）～（ｖ）は、各々独立して、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステル、または脂肪酸エステルの塩の形態で提供される。
【0037】
本発明の組成物において、成分（ｉ）～（ｖ）の各々は、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステルまたは脂肪酸エステルの塩の形態で独立して存在し得る脂肪酸である。特定の実施形態において、これらの成分は、各々同じ形態をとり、例えば、それらは全て脂肪酸の形態、全て脂肪酸塩の形態、全て脂肪酸エステルの形態、または全て脂肪酸エステルの塩の形態であり得る。成分が、脂肪酸塩、エステルまたはエステルの塩の形態である場合、成分は、同じ塩、エステルまたはエステルの塩の形態であり得る。例えば、成分（ｉ）～（ｖ）の各々は、脂肪酸のエチルエステルの形態で提供され得る。
【0038】
特定の実施形態において、成分（ｉ）～（ｖ）は、脂肪酸エステルの塩の形態で、または最も具体的には、脂肪酸エステルの形態で提供される。好適な脂肪酸エステルの形態は当業者に知られている。例えば、栄養学的に許容されるおよび／または薬学的に許容される脂肪酸エステルの形態には、脂肪酸のエチルエステル、メチルエステル、リン脂質、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドが含まれる。脂質組成物の目的の用途に応じて、異なるエステル形態が必要となる場合がある。例えば、トリグリセリドは、人間の消費、特に乳児の消費を目的とした食品での使用に特に適しており、一つには熱処理（そのような食品に必要な場合がある）に対するこれらのエステル形態の味および安定性によるものである。エチルエステルは、これらのエステル形態が効率的かつ容易に製造でき、トリグリセリド形態への変換が必要でないため、栄養補助食品での使用に特に適している。したがって、さらなる実施形態において、成分（ｉ）～（ｖ）は、各々独立して、脂肪酸エチルエステルの形態で、またはトリグリセリドの一部として提供される。
【0039】
トリグリセリドは、グリセロールおよび３つの脂肪酸に由来するエステルである。本発明は、脂肪酸のブレンドに関するため、そのようなトリグリセリド中の脂肪酸成分は、対応する比率で混合することができる。すなわち、異なるトリグリセリド分子の混合物が組成物中に存在し得るが、組成物中の全体的な脂肪酸プロファイルは、特許請求の範囲で定義される通りである。
【0040】
あるいは、脂肪酸成分は、「遊離」脂肪酸の形態、すなわち、脂肪酸の－ＣＯＯＨ形態で存在し得る。しかしながら、本発明の特定の組成物では、組成物は、不快な（しばしば「石鹸のような」）味を伴い、エステル化形態の脂肪酸よりも安定性が低いため、この形態の脂肪酸を比較的低レベルで含有する。遊離脂肪酸は、典型的には、アルカリまたは物理的精製によって、例えば本明細書の他の場所で論じられているプロセスに従って、油および脂質組成物から除去される。したがって、一実施形態において、脂質組成物中の総遊離脂肪酸含有量は、組成物の総脂肪酸含有量の５重量％未満（例えば、３重量％未満、特に、２重量％未満）である。
【0041】
本発明の脂質組成物中の脂肪酸は、典型的には、線状（すなわち、分岐していない）鎖脂肪酸（ＤＨＡ、ＡＬＡなど）である。言及され得る本発明の組成物は、組成物が分岐鎖脂肪酸および分岐鎖脂肪酸エステルを本質的に含まないように、非常に低レベルの分岐鎖脂肪酸およびそれらのエステルを含有するものを含む。「低レベル」という用語は、組成物が、組成物の全脂肪酸の最大約０．１重量％の量で分岐鎖脂肪酸および脂肪酸エステルを含有することを意味する。
【0042】
本発明の脂質組成物はまた、原料に由来し、抽出および濃縮プロセス中に完全に除去されない他の成分（例えば、脂肪酸以外）も含有し得る。これらの他の成分の正確な同一性は、原料によって大きく異なる。そのような他の成分の例には、遊離ステロールとして、またはステロールエステル（β－シトステロール、β－シトスタノール、Δ５－アベナステロール、カンペステロール、Δ５－スチグマステロール、Δ７－スチグマステロールおよびΔ７－アベナステロール、コレステロール、ブラシカステロール、カリナステロール、カンペステロール、カンペスタノールおよびエブリコールなど）としてのいずれかで存在する植物ステロール（すなわち、植物ステロールおよび植物スタノール）が含まれる。他の例には、トコフェロールおよびトコトリエノールなどの抗酸化剤が含まれる。したがって、言及され得る本発明の特定の脂質組成物は、検出可能な量の１つ以上のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）を含有するものを含む。そのようなステロールは、脂質組成物の少なくとも約０．０１重量％、しかし典型的には約１重量％以下で存在し得る。
【0043】
本発明の組成物は、植物源（「野菜」源）から有利に入手可能である。「野菜ベース」という用語は、本発明の組成物中に存在する脂質の少なくとも７０重量％が野菜源から得られることを意味する。野菜源には、植物源、特に、穀物などの作物が含まれる。少なくとも１つの実施形態において、脂質は、アブラナ属、例えばＢｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓまたはＢｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａなどの種子油作物から得られる。しかしながら、誤解を避けるため、組成物がそのような供給源からのみ得られることは必須ではなく、すなわち、本発明の組成物中の脂質の割合（例えば最大３０重量％）が他の供給源から得られ、海洋（例えば、魚または甲殻類）油、藻類油およびそれらの組み合わせを含む。一例では、存在する脂質の少なくとも８０重量％、例えば少なくとも９０重量％が植物源から得られる。本発明の特定の組成物において、本質的に全て（すなわち、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または約１００％）の脂質が植物源から得られる。
【0044】
一実施形態では、本発明の組成物（および以下の本明細書に定義される飼料および医薬組成物）は、動物（例えば、海洋動物）起源のものではない。すなわち、そのような実施形態では、脂質組成物は、魚および甲殻類などの動物に由来するいかなる成分も含有しない。動物から成分が得られない脂質組成物は、脂質含有量、および標準的な精製および／または濃縮手順に従って達成できる安定性プロファイルの点で有利であると考えられている。
【0045】
脂質または脂肪酸源として植物を使用することには、多くの利点がある。例えば、海洋の油源には、植物材料には見られない比較的高レベルの汚染物質（水銀、ＰＣＢおよび魚のアレルゲン（例えば、パルブアルブミン）など）が含有されていることが知られている。歴史的な乱獲は、魚および甲殻類（オキアミなど）の資源も枯渇させ、もはや持続可能ではない。したがって、本発明は、比較的低レベルの望ましくない汚染物質を含有する、持続可能な供給源の多価不飽和脂肪酸油組成物を提供する。
【0046】
特定の実施形態では、本発明の組成物は植物に由来する。油が得られる植物は、典型的には、コプラ、綿実、亜麻、パーム核、ピーナッツ、菜種、大豆、およびヒマワリの種などの油糧種子作物である。したがって、植物からのみ得られる組成物は、「植物性」油または「植物性脂質組成物」と呼ばれることがある。本発明の脂質組成物を得ることができる好適な植物は、当業者に知られており、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｐ．、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ、Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｓｐ．、Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、Ｚｅａ ｍａｙｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ、Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｓｐ．、Ｅｌａｅｓｉｓ ｇｕｉｎｅｅｎｉｓ、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ、Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ、Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ、Ｏｒｙｚａ ｇｌａｂｅｒｒｉｍａ、Ｃａｍｅｌｉｎａ ｓａｔｉｖａ、またはＣｒａｍｂｅ ａｂｙｓｓｉｎｉｃａを含む。この点で言及され得る特定の植物源は、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｐ．である。
【0047】
好適な供給源（海洋、藻類、および植物の供給源を含む）は、天然に存在し得るか、または長鎖多価不飽和脂肪酸を生成する能力を向上させるために遺伝子改変され得る。この目的のために遺伝子改変された、すなわち組換え植物細胞に由来する植物源の例は、当業者に知られており、国際特許出願第ＰＣＴ／ＡＵ２０１３／０００６３９号（ＷＯ２０１３／１８５１８４として公開）、同第ＰＣＴ／ＡＵ２０１４／０５０４３３号（ＷＯ２０１５／０８９５８７として公開）、および同第ＰＣＴ／ＡＵ２０１５／０５０３４０号（ＷＯ２０１５／１９６２５０として公開）に開示されている。遺伝子改変キャノーラは、ＷＯ２０１７／２１８９６９およびＷＯ２０１７／２１９００６に記載されている。本明細書に記載の全ての刊行物における開示は、その全体が参照により組み込まれる。
【0048】
本発明の脂質組成物は、天然に存在する供給源（例えば、動物、藻類、および／または植物）から直接得ることができる。しかしながら、典型的には、天然に存在する供給源から得られた油を濃縮するためにそれらを加工する必要がある。好適な濃縮プロセスは、実施例に例示されている。
【0049】
本発明の脂質組成物の好適な供給源、またはそれらの組成物を生成するためにブレンドまたは濃縮され得る「原」油には、海洋種、藻類および植物が含まれる。海洋供給源から油を得るためのプロセスは、当技術分野で周知である。
【0050】
上で論じたように、特定の汚染物質のレベルが低く、持続可能性が優れているため、植物源（油糧種子源など）が特に適している。Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｐ．などの植物（例えば、キャノーラ）は、油を得るために加工され得る種子を生成する。
【0051】
油／脂質の抽出
当技術分野で日常的に実施されている技術を使用して、植物および種子によって生成された油を抽出、加工、および分析することができる。典型的には、植物の種子は調理され、圧搾され、油が抽出され、原油を生成する。その油は、次に、脱ガム、精製、漂白、および／または脱臭することができる。脱ガム、精製、漂白、および脱臭の組み合わせは、ＤＨＡが豊富な脂質混合物を調製するために特に効果的であることが見出されている。したがって、一実施形態では、脂質組成物は、脱ガム、精製、漂白、および／または脱臭された種子油から得られる。しかしながら、このように油を加工する必要はなく、これらの方法を用いずに、適切な純化および濃縮が達成され得る。
当技術分野で日常的に実施されている技術を使用して、植物および種子によって生成された油を抽出、加工、および分析することができる。典型的には、植物の種子は調理され、圧搾され、油が抽出され、原油を生成する。その油は、次に、脱ガム、精製、漂白、および／または脱臭することができる。脱ガム、精製、漂白、および脱臭の組み合わせは、ＤＨＡが豊富な脂質混合物を調製するために特に効果的であることが見出されている。したがって、一実施形態では、脂質組成物は、脱ガム、精製、漂白、および／または脱臭された種子油から得られる。しかしながら、このように油を加工する必要はなく、これらの方法を用いずに、適切な純化および濃縮が達成され得る。
【0052】
一般に、種子を粉砕するための技術は当技術分野で知られている。例えば、油糧種子は、それらに水を噴霧し、含水率を例えば８．５％に上げることによってテンパリングされ、０．２３ｍｍ～０．２７ｍｍのギャップ設定を有する滑らかなローラーを使用してフレーク化することができる。種子の種類に応じて、粉砕前に水を加えない場合がある。抽出は、押し出しプロセスを使用して達成することもできる。押し出しプロセスは、フレーキングの代わりに使用される場合と使用されない場合があり、スクリュープレスの前または後のいずれかでアドオンプロセスとして使用される場合がある。
【0053】
一実施形態では、種子油の大部分は、スクリュープレスを使用して粉砕することによって放出される。次に、スクリュープレスから排出された固形物を、ヒート・トレース・カラムを使用して、溶媒、例えばヘキサンで抽出し、その後、抽出した油から溶媒を除去する。あるいは、プレス操作によって生成された原油を、スロット付きワイヤー排液トップを備えた沈殿タンクに通過させ、プレス操作中に該油で発現した固形物を除去することができる。この清澄油は、プレートおよびフレームフィルターを通過し、任意の残存する微細な固体粒子を取り除くことができる。必要に応じて、抽出プロセスで回収された油を清澄油と組み合わせて、混合原油を生成することができる。原油から溶剤が一度除去されると、圧搾部分と抽出部分とが組み合わされ、通常の石油加工手順に供された。
【0054】
精製および純化
本明細書で使用される場合、本発明の脂質または油に関連して使用される場合の「純化された」という用語は、典型的には、抽出された脂質または油が脂質／油成分の純度を高めるために１つ以上の加工ステップに供されたことを意味する。例えば、純化ステップは、抽出された油の脱ガム、脱臭、脱色または乾燥のうちの１つ以上を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される場合、「純化された」という用語は、総脂肪酸含有量のパーセンテージとしてＤＨＡ含有量を増加させるために、エステル交換プロセス、または本発明の脂質または油の脂肪酸組成を変更する別のプロセスを含まない。言い換えると、純化された脂質または油の脂肪酸組成は、未純化の脂質または油の脂肪酸組成と本質的に同じである。
本明細書で使用される場合、本発明の脂質または油に関連して使用される場合の「純化された」という用語は、典型的には、抽出された脂質または油が脂質／油成分の純度を高めるために１つ以上の加工ステップに供されたことを意味する。例えば、純化ステップは、抽出された油の脱ガム、脱臭、脱色または乾燥のうちの１つ以上を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される場合、「純化された」という用語は、総脂肪酸含有量のパーセンテージとしてＤＨＡ含有量を増加させるために、エステル交換プロセス、または本発明の脂質または油の脂肪酸組成を変更する別のプロセスを含まない。言い換えると、純化された脂質または油の脂肪酸組成は、未純化の脂質または油の脂肪酸組成と本質的に同じである。
【0055】
植物油は、以下のプロセスの１つ以上を使用して、特に、脱ガム、アルカリ精製、漂白および脱臭の組み合わせを使用して、植物源から一度抽出されると、精製（純化）され得る。好適な方法は、当業者に知られている（例えば、ＷＯ２０１３／１８５１８４に開示されているもの）。
【0056】
脱ガムは油の精製の初期段階であり、その主な目的は油からほとんどのリン脂質を除去することである。典型的には、リン酸を含有する約２％の水を原油に７０～８０℃で添加すると、微量の金属および色素を伴うほとんどのリン脂質が分離する。除去される不溶性物質は、主にリン脂質とトリアシルグリセロールの混合物である。脱ガムは、粗種子油に濃リン酸を添加し、水和不可能なリン脂質を水和可能な形態に変換し、存在する希少金属をキレート化することによって実施できる。ガムは遠心分離によって種子油から分離される。
【0057】
アルカリ精製は、原油を処理するための精製プロセスの１つであり、中和とも呼ばれる場合がある。通常、脱ガムに続き、漂白に先行する。脱ガムに続いて、種子油は、全ての遊離脂肪酸およびリン酸を滴定するのに十分な量のアルカリ溶液を添加し、こうして形成された石鹸を除去することによって処理することができる。好適なアルカリ性材料には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム、および水酸化アンモニウムが含まれる。アルカリ精製は典型的に、室温で行われ、遊離脂肪酸画分を除去する。石鹸は、遠心分離または石鹸の溶媒への抽出によって除去され、中和された油は水で洗浄される。必要に応じて、油中の任意の過剰なアルカリを塩酸または硫酸などの好適な酸で中和することができる。
【0058】
漂白は、漂白土（０．２～２．０％）の存在下かつ酸素の非存在下で、窒素または蒸気または真空中で操作することにより、油を９０～１２０℃で１０～３０分間加熱する精製プロセスである。漂白は、不要な色素（カロテノイド、クロロフィルなど）を除去するように設計されており、このプロセスでは、酸化生成物、微量金属、硫黄化合物、および微量の石鹸も除去される。
【0059】
脱臭は、高温（例えば、約１８０℃）および低圧（０．１～１ｍｍのＨｇ）での油脂の処理である。これは典型的に、約０．１ｍｌ／分／１００ｍｌの種子油の速度で種子油に蒸気を導入することによって達成される。散布の約３０分後、種子油を真空下で冷却させる。この処理により、種子油の色が改善され、任意の残留する遊離脂肪酸、モノアシルグリセロール、および酸化生成物を含む揮発性物質または臭気化合物の大部分が除去される。
【0060】
脱蝋は、周囲温度以下での結晶化によって油脂を固体（ステアリン）と液体（オレイン）の画分に分離するために、油の商業生成で時々使用されるプロセスである。もともと綿実油に適用され、固形物を含まない製品を生成していた。これは典型的に、油の飽和脂肪酸含有量を減らすために使用される。
【0061】
エステル交換
原油は通常、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）の形態で目的の脂肪酸を含有する。エステル交換とは、ＴＡＧ内およびＴＡＧ間で脂肪酸を交換するために、または脂肪酸を別のアルコールに転移しエステル（エチルエステルやメチルエステルなど）を形成するために使用できるプロセスである。本発明の実施形態において、エステル交換は、典型的には触媒として強酸または強塩基を含む化学的手段を使用して達成される。ナトリウムエトキシド（エタノール中）は、エステル交換によって脂肪酸エチルエステルを形成するために使用される強塩基の例である。このプロセスは、周囲温度または高温（例えば、約８０℃まで）で実施することができる。
原油は通常、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）の形態で目的の脂肪酸を含有する。エステル交換とは、ＴＡＧ内およびＴＡＧ間で脂肪酸を交換するために、または脂肪酸を別のアルコールに転移しエステル（エチルエステルやメチルエステルなど）を形成するために使用できるプロセスである。本発明の実施形態において、エステル交換は、典型的には触媒として強酸または強塩基を含む化学的手段を使用して達成される。ナトリウムエトキシド（エタノール中）は、エステル交換によって脂肪酸エチルエステルを形成するために使用される強塩基の例である。このプロセスは、周囲温度または高温（例えば、約８０℃まで）で実施することができる。
【0062】
蒸留
分子蒸留は、飽和脂肪酸などの揮発性の高い成分を原油から大量に除去するための効果的な方法である。蒸留は、典型的には、減圧下、例えば約１ｍｂａｒ未満で実施される。次に、温度および時間は、数時間（例えば、１～１０）の蒸留時間の後に、蒸留物と残留物との間で約５０：５０の分割を達成するように選択され得る。本発明の脂質組成物の生成に使用される典型的な蒸留温度は、１２０℃～１８０℃の範囲、特に、１４５℃～１６０℃である。
分子蒸留は、飽和脂肪酸などの揮発性の高い成分を原油から大量に除去するための効果的な方法である。蒸留は、典型的には、減圧下、例えば約１ｍｂａｒ未満で実施される。次に、温度および時間は、数時間（例えば、１～１０）の蒸留時間の後に、蒸留物と残留物との間で約５０：５０の分割を達成するように選択され得る。本発明の脂質組成物の生成に使用される典型的な蒸留温度は、１２０℃～１８０℃の範囲、特に、１４５℃～１６０℃である。
【0063】
複数の蒸留を実施することができ、各蒸留は、蒸留物と残留物との間で約５０：５０の分割が達成された場合に完了したと見なされる。連続蒸留を使用すると、全体の収率が低下するが、２回の蒸留で最適な結果が得られる場合がある。
【0064】
したがって、本発明の第２の態様に従って、本発明の脂質組成物を生成するためのプロセスが提供され、このプロセスは、脂肪酸エチルエステルの混合物を提供することと、その混合物を第１の分子蒸留ステップに供して第１の残留物を得ることと、第１の残留物を第２の分子蒸留ステップに供することと、を含む。本発明はまた、そのような蒸留プロセスによって得られる脂質組成物に関する。好適な蒸留条件には、本明細書に記載されているものが含まれる。例えば、第１および第２の分子蒸留ステップで使用できる特定の蒸留温度は、１４５℃～１６０℃など、１２０℃～１８０℃の範囲である。温度および時間は、典型的には約１時間～約１０時間の蒸留時間の後に、蒸留物と残留物との間で約５０：５０の分割を達成するように選択される。驚くべきことに、植物ベースのエステル交換油の蒸留は、分離プロセスの効率を損なうことなく、他の起源のエステル交換油（特に、有意な量（例えば、３０重量％超）の海洋起源の油を含むもの）と同じまたはわずかに低い（例えば、３℃低い）温度で達成できることが見出された。すなわち、蒸留時間を増やす必要はないが、合理的な時間枠で同じ程度の分離（例えば、重量による５０：５０の分離）を維持しながら、実際には減らすことができる。
【0065】
一実施形態では、原油は、第１の蒸留ステップで４時間～８時間、例えば４時間～６時間加熱される。同じまたは別の実施形態において、原油は、第２の蒸留ステップにおいて、０．５～４時間、例えば、１～２時間加熱される。
【0066】
本発明の第２の態様の実施形態において、脂肪酸エチルエステルの混合物は、例えば、前述のプロセスのいずれか１つに従って、植物性ベースの脂質油のエステル交換によって得られる。植物ベースの脂質油は、本明細書に開示される、または当技術分野で知られている、任意の植物、特に、油糧種子から得ることができる。
【0067】
その他の濃縮方法
本発明の脂質組成物は、医薬品有効成分（ＡＰＩ）として、またはさらなる濃縮によってそこから得ることができるＡＰＩの前駆体（または「中間体」）として、有用である。このような組成物は、ＤＨＡおよび／またはＡＬＡなどの有益なＰＵＦＡのレベルでさらに濃縮される。
本発明の脂質組成物は、医薬品有効成分（ＡＰＩ）として、またはさらなる濃縮によってそこから得ることができるＡＰＩの前駆体（または「中間体」）として、有用である。このような組成物は、ＤＨＡおよび／またはＡＬＡなどの有益なＰＵＦＡのレベルでさらに濃縮される。
【0068】
油中の多価不飽和脂肪酸の濃度は、例えば、凍結結晶化、尿素を使用した錯体形成、超臨界流体抽出および銀イオン錯体形成など、当技術分野で知られている様々な方法によって増加させることができる。尿素との錯体形成は、油中の飽和および一価不飽和脂肪酸のレベルを下げるための簡単で効率的な方法である。最初に、油のＴＡＧは、多くの場合脂肪酸エステルの形態で、それらの構成脂肪酸に分割される。次に、これらの遊離脂肪酸または脂肪酸エステルは、通常、処理によって脂肪酸組成が変化しないため、錯体形成のために尿素のエタノール溶液と混合することができる。飽和および一価不飽和脂肪酸は、尿素と容易に錯体形成し、冷却すると結晶化し、その後、ろ過によって除去することができる。これにより、非尿素錯化画分は長鎖多価不飽和脂肪酸で強化される。
【0069】
製品
本発明の脂質組成物は、バルク油である。すなわち、脂質組成物は、脂質の一部または全部が得られた原料（例えば、植物の種子）から分離されている。
本発明の脂質組成物は、バルク油である。すなわち、脂質組成物は、脂質の一部または全部が得られた原料（例えば、植物の種子）から分離されている。
【0070】
本発明の脂質組成物は、飼料として使用することができる。すなわち、本発明の組成物は、経口的に利用可能な形態で提供され得る。本発明の目的のために、「飼料」は、体内に取り込まれた場合に、組織に栄養を与える、または組織を構築する、またはエネルギーを供給するのに役立ち、ならびに／または適切な栄養状態または代謝機能を維持、回復、またはサポートする、ヒトまたは動物が消費するための任意の食品または調製物を含む。飼料には、例えば、乳児用調製粉乳などの乳児および／または幼児向けの栄養組成物が含まれる。飼料の場合、さらに不快な味を最小限に抑え、安定性を最大にするために、脂肪酸をトリグリセリドの形態で提供することができる。
【0071】
飼料は、任意選択で好適な担体と共に本発明の脂質組成物を含む。「担体」という用語は、その最も広い意味で使用され、栄養価を有する場合も有しない場合もある任意の成分を包含する。当業者が理解するように、担体は、飼料を消費する生物に有害な影響を及ぼさないように、飼料での使用に好適である（または十分に低濃度で使用されている）必要がある。
【0072】
飼料組成物は、固体または液体の形態であり得る。追加的に、該組成物は、当技術分野で周知であるように、特定の用途に望ましい量の食用主要栄養素、タンパク質、炭水化物、ビタミン、および／またはミネラルを含み得る。これらの成分の量は、組成物が正常な個体での使用を意図するか、または代謝障害などに苦しむ個体などの特別なニーズを有する個体での使用を意図するかによって異なる。
【0073】
栄養価のある好適な担体の例には、食用脂肪（例えば、ココナッツ油、ボラージ油、真菌油、黒潮油、大豆油、およびモノグリセリドおよびジグリセリド）、炭水化物（例えば、ブドウ糖、食用乳糖、および加水分解デンプン）およびタンパク質（例えば、大豆タンパク質、電気透析ホエイ、電気透析スキムミルク、ミルクホエイ、またはこれらのタンパク質の加水分解物）などの主要栄養素が含まれる。
【0074】
本明細書に開示される飼料に添加され得るビタミンおよびミネラルには、例えば、カルシウム、リン、カリウム、ナトリウム、塩化物、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、セレン、ヨウ素、ならびにビタミンＡ、Ｅ、Ｄ、ＣおよびＢ複合体が含まれる。
【0075】
本発明の脂質組成物は、医薬組成物に使用することができる。そのような医薬組成物は、任意選択で、当業者に知られている１つ以上の医薬的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と共に、本発明の脂質組成物を含む。好適な賦形剤、希釈剤または担体には、リン酸緩衝生理食塩水、水、エタノール、ポリオール、湿潤剤、または水／油乳濁液などの乳濁液が含まれる。組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、油または粉末を含む、液体または固体のいずれかの形態であり得る。例えば、組成物は、錠剤、カプセル、カプセル化ゲル、摂取可能な液体（油または溶液を含む）もしくは粉末、または局所軟膏もしくはクリームの形態であり得る。医薬組成物はまた、静脈内製剤としても提供され得る。
【0076】
飼料および医薬組成物に好適な特定の形態には、液体含有カプセルおよびカプセル化ゲルが含まれる。
【0077】
本発明の脂質組成物は、使用前に他の脂質または脂質混合物（特に、植物ベースの脂肪酸エステルおよび脂肪酸エステル混合物）と混合することができる。本発明の脂質組成物は、抗酸化剤（例えば、トコフェロール（アルファ－トコフェロールまたはガンマ－トコフェロールなど）またはトコトリエノール）、安定剤、および界面活性剤からなる群から選択される１つ以上の追加成分と共に提供され得る。アルファ－トコフェロールおよびガンマ－トコフェロールはいずれも、キャノーラ油を含む様々な植物種子油に天然に存在する成分である。
【0078】
例えば、糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことも望ましい場合がある。そのような不活性希釈剤に加えて、組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤および芳香剤などのアジュバントを含むこともできる。本発明の脂質組成物に加えて、懸濁液は、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタヒドロキシアルミニウム、ベントナイト、寒天、およびトラガカントまたはこれらの物質の混合物などの懸濁剤を含み得る。
【0079】
錠剤およびカプセルなどの固形剤形は、当技術分野で周知の技術を使用して調製することができる。例えば、本明細書に開示される方法に従って生成された脂肪酸は、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンなどの結合剤、ジャガイモデンプンまたはアルギン酸などの崩壊剤、およびステアリン酸またはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤と組み合わせて、ラクトース、スクロース、およびコーンスターチなどの従来の錠剤ベースで錠剤化することができる。カプセルは、これらの賦形剤を、関連する脂質組成物および任意選択で１つ以上の抗酸化剤とともにゼラチンカプセルに組み込むことによって調製することができる。
【0080】
本発明の医薬組成物の可能な投与経路には、例えば、経腸（例えば、経口および直腸）および非経口が含まれる。例えば、液体調製物は、経口または経直腸で投与され得る。追加的に、均質な混合物を水に完全に分散させ、無菌条件下で生理学的に許容される希釈剤、防腐剤、緩衝剤、または噴射剤と混合し、スプレーまたは吸入剤を形成することができる。
【0081】
本発明の脂質組成物は医薬品として示される。本発明のさらなる態様によれば、医薬品として使用するための、上記の医薬組成物のいずれかを含む本発明の組成物が提供される。
【0082】
本発明の脂質組成物は、典型的には長鎖多価不飽和脂肪酸に関連する多くの利点を提供し得る。例えば、本発明の脂質組成物、および上記の医薬組成物は、当業者に周知の試験を用いて決定され得るように、心血管疾患の治療もしくは予防、心血管疾患患者の死に対する防御、全体的な血清コレステロールレベルの低下、高血圧の低下、ＨＤＬ：ＬＤＬ比の増加、トリグリセリドの低下、またはアポリポタンパク質Ｂレベルの低下において使用され得る。したがって、本発明の脂質組成物を使用して、上記に列挙される疾患および状態を治療（または予防）する方法も開示される。
【0083】
本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、および「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、講じる方策がない場合に発生するであろうものと比較して、本明細書に記載の疾患もしくは障害の進行を逆転、緩和、阻害すること、または本明細書に記載されるような障害もしくは疾患の発生率もしくは発症を遅延、排除もしくは低減することを指す。本明細書で使用される場合、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」および「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」という用語は、所与の状態を獲得もしくは発症するリスクの低減、または病気ではない対象における再発もしくは該状態の低減もしくは阻害を指す。
【0084】
特定の脂肪酸の典型的な投与量は、０．１ｍｇ～２０ｇであり、１日１回～５回（１日最大１００ｇ）摂取され、特に、１日約１０ｍｇ～約１、２、５、または１０ｇ（１回または複数回の用量で摂取）の範囲である。当技術分野で知られているように、最低約３００ｍｇ／日の脂肪酸、特に、ＬＣ－ＰＵＦＡが望ましい。しかしながら、任意の量の脂肪酸が対象にとって有益であることが理解されよう。
【0085】
医薬組成物として使用される場合、患者に投与される脂質組成物の投与量は、当技術分野の通常の技術の１つによって決定され、例えば、患者の体重、患者の年齢、患者の全体的な健康、患者の過去の病歴、患者の免疫状態などの様々な要因に依存する。
【0086】
本発明の組成物は、容易に入手可能な組成物であり、該組成物は、改善された安定性プロファイルを有し、オメガ－３、オメガ－６および／またはオメガ－９脂肪酸の相対的比率が人間の健康に特に有益である脂肪酸の混合物を含み得る。安定性は、当業者に知られている様々な方法を使用して評価することができる。このような方法には、ランシマット法、プロパナール形成の評価（特に、オメガ－３脂肪酸に適している）、ヘキサナール形成の評価（特に、オメガ－６脂肪酸に適している）、「過酸化物価」法（例えば、ＡＯＣＳ公式法Ｃｄ８－５３を使用）および「ｐ－アニシジン値」法（例えば、ＡＯＣＳ公式法Ｃｄ１８－９０を使用）が含まれる。本発明の組成物は、参照ブレンド（主要なＬＣ－ＰＵＦＡに関して同様の組成を有するが、有意な量の動物（魚）由来の脂質を含む参照ブレンド）と比較して向上された安定性プロファイルを示さない出発混合物から得られることが実施例に示される。
【0087】
本発明の組成物は、先行技術で知られている脂質組成物よりも、より効果的であり、より毒性が低く、より長く作用し、より効力があり、より副作用が少なく、より吸収されやすく、および／またはより優れた薬物動態プロフィール（例えば、より高い経口バイオアベイラビリティおよび／またはより低いクリアランス）を有し、および／または他の有用な薬理学的、物理的、または化学的特性を有し得るという利点も有し得る。
【0088】
本発明を以下の実施例により説明する。
【図面の簡単な説明】
【0089】
【図1】キャノーラ油および参照油（エステル交換および蒸留後）のプロパナール放出データを示し、本明細書に記載のキャノーラ油の安定性が改善されていることを証明する。
【図2】キャノーラ油および参照油（ＲＢＤ精製、エステル交換、および蒸留後）のプロパナール放出データを示し、本明細書に記載のキャノーラ油の安定性が改善していることを証明する。
【0090】
一般的な方法
ＧＣ試料調製およびＧＣパラメータ
ニート脂肪酸エチルエステルを５０：５０クロロホルム：メタノールおよび０．０１％ＢＨＴで０．２５％（ｖ／ｖ）に希釈した。エチルエステル溶液をクロロホルム：メタノールで２．５ｍｇ／ｍＬに希釈した。
ＧＣ試料調製およびＧＣパラメータ
ニート脂肪酸エチルエステルを５０：５０クロロホルム：メタノールおよび０．０１％ＢＨＴで０．２５％（ｖ／ｖ）に希釈した。エチルエステル溶液をクロロホルム：メタノールで２．５ｍｇ／ｍＬに希釈した。
【0091】
管理チェックは、キャノーラ油、マグロ油、および３ｘキャノーラ－ＤＨＡ油の脂肪酸メチルエステルとして調製した。これらを試料のバッチごとに分析し、ＧＣのパフォーマンスをチェックし、ＧＣシステムのアクティビティによるＤＨＡの劣化を監視した。
【0092】
メチルエステルは以下のように調製した。
ニートオイルを５０：５０クロロホルム：メタノールと０．０１％ＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシトルエン）で０．３３％（ｖ／ｖ）に希釈した。５０μＬの０．０５Ｎ Ｍｅｔｈ－Ｐｒｅｐ ＩＩ溶液（０．２Ｎ ｍ－トリフルオロメチルフェニルトリメチルアンモニウムヒドロキシドのメタノール溶液）を添加し、溶液をボルテックスし、４０℃で３０分間インキュベートした。最終溶液は、０．２５％（ｖ／ｖ）の油に相当した。
ニートオイルを５０：５０クロロホルム：メタノールと０．０１％ＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシトルエン）で０．３３％（ｖ／ｖ）に希釈した。５０μＬの０．０５Ｎ Ｍｅｔｈ－Ｐｒｅｐ ＩＩ溶液（０．２Ｎ ｍ－トリフルオロメチルフェニルトリメチルアンモニウムヒドロキシドのメタノール溶液）を添加し、溶液をボルテックスし、４０℃で３０分間インキュベートした。最終溶液は、０．２５％（ｖ／ｖ）の油に相当した。
【0093】
エチルエステル（試料）およびメチルエステル（チェック）は、水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）および下記パラメータを使用した分割噴射を用いて、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ－２０１０ Ｐｌｕｓで調べた。
カラム：３０ｍのＢＰＸ－７０、内径０．３２ｍｍ、膜厚０．２５ｐｍ。注入量：０．５μＬ
カラム：３０ｍのＢＰＸ－７０、内径０．３２ｍｍ、膜厚０．２５ｐｍ。注入量：０．５μＬ
【0094】
結果は、正規化された面積として計算した（すなわち、脂肪酸のピーク後の面積％が同定され、非脂肪酸のピークが全てのピークの面積の合計から除外される）。
【0095】
エチルエステルピークの同一性は、脂肪酸エチルエステルのクロマトグラムを脂肪酸メチルエステルのクロマトグラムと比較することによって決定された。相対的な溶出順序はほぼ同一であったが、エチルエステルは、脂肪酸メチルエステルと比較して、グループとして後で溶出した。脂肪酸メチルエステルの溶出順序は、参照標準およびＧＣ－ＭＳを使用して以前に同定された。
【実施例0096】
実施例１－種子からのＤＨＡキャノーラ油の抽出
米国特許公開第ＵＳ２０１８／００１６５９０Ａ１号に開示されている品種のキャノーラは夏作物として栽培された。種子を収穫した後、粉砕前は室温で保存した。
米国特許公開第ＵＳ２０１８／００１６５９０Ａ１号に開示されている品種のキャノーラは夏作物として栽培された。種子を収穫した後、粉砕前は室温で保存した。
【0097】
Ｋｅｒｎ Ｋｒａｆｔ ＫＫ８０スクリュープレスを使用して、２７２ｋｇの種子を粉砕してＤＨＡ油を生成した。エクスペラー・カラー・ヒーターの温度は、サーモスタットの最大設定温度に設定された。初期周囲温度およびチョーク温度は２０℃であり、チョーク距離は７３．９２ｍｍに設定した。全ての種子が粉砕されるまで、エクスペラーを停止することなく、油および粗挽き粉を継続的に収集しながら種子を供給した。
【0098】
オーガーの回転速度、粗挽き粉および排出油の温度は、プレスの間中、監視された。６７．５ｋｇ／時間のスループット率である破砕の時間は、２７０ｋｇで４時間であった。８７．２ｋｇの原油の収率（３２％）が得られた。微粉を除去するために濾過した後、収率は７７．２ｋｇ（２８％）であった。
【0099】
実施例２－参照ブレンド油
純粋な魚油には、低レベルのＡＬＡ脂肪酸、ならびに有意に高レベルのＥＰＡおよびＤＨＡが含有される。参照油ブレンド（本明細書では「粗トリグリセリド参照ブレンド油」または同様のものと呼ぶ）は、実施例１で得られた濾過されたＤＨＡキャノーラ油と組成が可能な限り類似するように設計された。これは、（ａ）ＤＨＡの総レベルをＤＨＡキャノーラ油のレベルと一致させ、（ｂ）ＤＨＡ／（ＡＬＡ＋ＥＰＡ）の比率を一致させることによって行われた。これは、ＤＨＡ（マグロ）が豊富な魚油、ＡＬＡ（亜麻仁油）が豊富な油、および標準的なキャノーラ油をブレンドすることによって達成された。得られた参照ブレンド油も、ＤＨＡキャノーラ油と同様の総オメガ－３含有量を有する。
純粋な魚油には、低レベルのＡＬＡ脂肪酸、ならびに有意に高レベルのＥＰＡおよびＤＨＡが含有される。参照油ブレンド（本明細書では「粗トリグリセリド参照ブレンド油」または同様のものと呼ぶ）は、実施例１で得られた濾過されたＤＨＡキャノーラ油と組成が可能な限り類似するように設計された。これは、（ａ）ＤＨＡの総レベルをＤＨＡキャノーラ油のレベルと一致させ、（ｂ）ＤＨＡ／（ＡＬＡ＋ＥＰＡ）の比率を一致させることによって行われた。これは、ＤＨＡ（マグロ）が豊富な魚油、ＡＬＡ（亜麻仁油）が豊富な油、および標準的なキャノーラ油をブレンドすることによって達成された。得られた参照ブレンド油も、ＤＨＡキャノーラ油と同様の総オメガ－３含有量を有する。
【0100】
実施例３－粗ＤＨＡキャノーラ油および参照ブレンドの脂肪酸組成
ろ過した原油および参照ブレンド油の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
ろ過した原油および参照ブレンド油の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
【表1】
【0101】
実施例４－油の安定性評価
ランシマット安定性研究は、それぞれ実施例１および実施例２に記載されている粗ＤＨＡキャノーラ油および参照ブレンドを使用して実施された。この方法では、Ｍｅｔｒｏｈｍ７４３ Ｒａｎｃｉｍａｔの標準手順を９０℃で使用して、約２．５ｇの試験材料を試験することを伴った。
ランシマット安定性研究は、それぞれ実施例１および実施例２に記載されている粗ＤＨＡキャノーラ油および参照ブレンドを使用して実施された。この方法では、Ｍｅｔｒｏｈｍ７４３ Ｒａｎｃｉｍａｔの標準手順を９０℃で使用して、約２．５ｇの試験材料を試験することを伴った。
【0102】
以下の表に、９０℃でこれらの油から得られた結果をまとめる。実験は２回実施した。
【表2】
【0103】
ＤＨＡキャノーラ油は、参照油よりも一貫して劣った安定性を示した。
【0104】
実施例５－粗キャノーラ－ＤＨＡ油の化学的エステル交換
機械的攪拌機を備えた乾燥した窒素フラッシュＢｕｃｈｉ ＣＲ１０１化学反応器に、無水エタノール（１２．５Ｌ）および実施例１で得られた粗トリグリセリドキャノーラ油（「ＤＨＡキャノーラ油」）（５．００ｋｇ）を加え、混合物を撹拌した。
機械的攪拌機を備えた乾燥した窒素フラッシュＢｕｃｈｉ ＣＲ１０１化学反応器に、無水エタノール（１２．５Ｌ）および実施例１で得られた粗トリグリセリドキャノーラ油（「ＤＨＡキャノーラ油」）（５．００ｋｇ）を加え、混合物を撹拌した。
【0105】
上記の混合物にナトリウムエトキシド（１５０ｇ）を加え、これをさらに無水エタノール（２．５Ｌ）で反応器にすすぎ、撹拌を周囲温度で１６時間続けた。混合物から採取された試料の記録された１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、反応が完了したことを示した。
【0106】
エステル交換手順は、５．２２ｋｇの粗キャノーラ－ＤＨＡ油で実施された。得られた粗反応混合物に、４０～６０℃の沸点の石油スピリット（ペットスピリット、１０Ｌ）および水（１０Ｌ）を加え、完全に混合しながら、混合物を１０％塩酸（合計８７０ｍＬが必要、Ｍｅｒｃｋ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｓｔｒｉｐｓ、ｐＨ ０－１４）でｐＨ７に慎重に酸性化した。
【0107】
得られた混合物を反応器内に放置した後、２つの相が形成された。石油スピリット層を除去し、水層をさらに石油スピリットで抽出した（３ｘ５Ｌ）。組み合わせた石油スピリット層を反応器に戻し、真空中で少量（約１０Ｌ）まで蒸発させた。得られた濃縮溶液を反応器から排出し、無水硫酸マグネシウム（約１ｋｇ）で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、黄色の油（５．１３ｋｇ）を得た。
【0108】
実施例６－参照原油ブレンド油の化学的エステル交換
機械的攪拌機を備えた乾燥した窒素フラッシュＢｕｃｈｉ ＣＲ１０１化学反応器に、無水エタノール（１２．５Ｌ）および実施例２に従って得られた粗トリグリセリド参照ブレンド油（５．００ｋｇ）を加え、混合物を撹拌した。
機械的攪拌機を備えた乾燥した窒素フラッシュＢｕｃｈｉ ＣＲ１０１化学反応器に、無水エタノール（１２．５Ｌ）および実施例２に従って得られた粗トリグリセリド参照ブレンド油（５．００ｋｇ）を加え、混合物を撹拌した。
【0109】
上記の混合物にナトリウムエトキシド（１５０ｇ）を加え、これをさらに無水エタノール（２．５Ｌ）で反応器にすすぎ、撹拌を周囲温度で１６時間続けた。試料の記録された１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ほとんどまたは全く反応が起きたことを示さなかった。さらにナトリウムエトキシド（５７ｇ）を混合物に加え、撹拌を続けた。
【0110】
さらに５時間後、試料の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、反応が７５％完了したことを示した。さらにナトリウムエトキシド（６０ｍＬの２１％エタノール溶液）を混合物に加え、撹拌を３日間続け、その後、反応が完了した。
【0111】
参照の粗ブレンドの化学的エステル交換からの実施例生成物の分離
エステル交換手順は、５．１７ｋｇの参照の粗ブレンド油で実施した。得られた粗反応混合物に、石油スピリット（１５Ｌ）および水（３．３Ｌ）を加え、完全に混合しながら、混合物を１０％塩酸（合計９１０ｍＬが必要）でｐＨ７に慎重に酸性化した。
エステル交換手順は、５．１７ｋｇの参照の粗ブレンド油で実施した。得られた粗反応混合物に、石油スピリット（１５Ｌ）および水（３．３Ｌ）を加え、完全に混合しながら、混合物を１０％塩酸（合計９１０ｍＬが必要）でｐＨ７に慎重に酸性化した。
【0112】
得られた混合物を反応器内に放置した後、２つの相が形成された。石油スピリット層を除去し、水層をさらに石油スピリット（２ｘ７．５Ｌ）で抽出した。組み合わせた石油スピリット層を反応器に戻し、真空中で少量（約１０Ｌ）まで蒸発させた。得られた濃縮溶液を反応器から排出し、無水硫酸マグネシウム（約１ｋｇ）で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、黄色の油（５．３９ｋｇ）を得た。
【0113】
実施例７－エステル交換油の脂肪酸組成分析
実施例５および実施例６で得られたエステル交換生成物の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
実施例５および実施例６で得られたエステル交換生成物の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
【表3】
【0114】
実施例８－エステル交換されたキャノーラ油の蒸留
真空蒸留により脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）混合物のより揮発性の高い成分を除去するための標準的手順
粗キャノーラ－ＤＨＡ（実施例５で得られた）からの粗脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を、以下の条件下で蒸留に供した。蒸留による分離は、蒸留物および残留物を収集する２ｘ１０００ｍｌの収集フラスコを備え、真空下にあるＰｏｐｅ２インチ（５０ｍｍ）薄膜蒸留器にトランスエステル化原油を通過させることによって達成された。それぞれの脂肪酸組成を分析した。
真空蒸留により脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）混合物のより揮発性の高い成分を除去するための標準的手順
粗キャノーラ－ＤＨＡ（実施例５で得られた）からの粗脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を、以下の条件下で蒸留に供した。蒸留による分離は、蒸留物および残留物を収集する２ｘ１０００ｍｌの収集フラスコを備え、真空下にあるＰｏｐｅ２インチ（５０ｍｍ）薄膜蒸留器にトランスエステル化原油を通過させることによって達成された。それぞれの脂肪酸組成を分析した。
【0115】
真空はＥｄｗａｒｄｓ３ロータリーポンプによって供給され、真空はｅｂｒｏ真空計ＶＭ２０００によって測定された。
【0116】
油は、Ｃｏｌｅ－Ｐａｌｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙのｅａｓｙ－ｌｏａｄ ＩＩ蠕動ポンプによって４ｍＬ／分で蒸留器に供給され、蒸留器モーターは３２５ｒｐｍに設定され、水凝縮器を使用して蒸留物を凝縮した。いずれかのレシーバーフラスコが一杯になるまで供給を続けた。
【0117】
粗キャノーラＤＨＡ ＦＡＥＥは、ヒーターバンドが１４７℃に初期設定されたこれらの条件下で蒸留した。目的は、蒸留物：残留物の５０：５０分割を得ることであった。実験の最初の３０～４５分間に、ヒーターバンドの温度を１５４℃に上げ、蒸留された油の割合を増やした後、蒸留器を平衡化した。３０分後、ヒーターバンドの温度を３０分かけて１４９℃まで調整した。残りの蒸留は１４９℃で行った。蒸留の合計時間は３５０分であった。ヒーターバンドの温度を１４９℃に設定した標準条件下での蒸留により、上記の蒸留からの残留物の一部を、より揮発性の高い成分の除去に再び供した。蒸留の合計時間は９５分であった。
【表4】
【0118】
実施例９－エステル交換された参照の粗ブレンド由来のＦＡＥＥの蒸留
参照の粗ブレンド（実施例６で得られた）からの粗脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を、前の実施例に示したのと同じ条件下で蒸留に供した。
参照の粗ブレンド（実施例６で得られた）からの粗脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を、前の実施例に示したのと同じ条件下で蒸留に供した。
【0119】
参照の粗ブレンドＦＡＥＥは、ヒーターバンドが１５２℃に初期設定されたこれらの標準条件下で蒸留した。目的は、蒸留物：残留物の５０：５０分割を得ることであった。２０分後、ヒーターバンドの温度を１５４℃に設定し、蒸留物の流れを増加させた。さらに１時間後、ヒーターバンドの温度を１５３℃に調整し、次の１時間で１５２℃に調整した。蒸留の最後の１時間、ヒーターバンドの温度を１５３℃に設定した。蒸留の合計時間は３８０分であった。上記の蒸留からの残留物を、標準的な条件下での蒸留により、より揮発性の高い成分の除去に再び供した。目的は、蒸留物：残留物の５０：５０分割を得ることであった。蒸留は主にヒーターバンドを１５０～１５１℃に設定して実施した。蒸留の合計時間は１９５分であった。
【表5】
【0120】
実施例１０－蒸留油の脂肪酸組成分析
実施例８および実施例９で得られた２回蒸留生成物の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
実施例８および実施例９で得られた２回蒸留生成物の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
【表6】
【0121】
実施例１１－油の安定性評価
ヘッドスペースＧＣ－ＭＳ安定性試験
特定の条件下で放出されるプロパナールの量を評価するために、上記の濃縮製品に対してヘッドスペース分析を実行した。プロパナール放出のレベルの増加は、試験材料の安定性の低下を示している。
ヘッドスペースＧＣ－ＭＳ安定性試験
特定の条件下で放出されるプロパナールの量を評価するために、上記の濃縮製品に対してヘッドスペース分析を実行した。プロパナール放出のレベルの増加は、試験材料の安定性の低下を示している。
【0122】
ＳＰＭＥ（固相マイクロ抽出）法
６５μｍ ＰＤＭＳ／ＤＶＢ ＳｔａｂｌｅＦｌｅｘファイバー（Ｓｕｐｅｌｃｏファイバーキット５７２８４－ｕ）を選択した。
Ｔｒｉｐｌｕｓ ＲＳＨコンディショニングステーションで２５０℃で使用する前に、ファイバーを１０分間コンディショニングした。
抽出前に試料を４０℃で１分間インキュベートした。
Ｈｅａｄｓｐａｃｅバイアルから１分間抽出した。
広範囲の揮発性成分を捕捉できる優れた一般的な方法であることが期待される。
６５μｍ ＰＤＭＳ／ＤＶＢ ＳｔａｂｌｅＦｌｅｘファイバー（Ｓｕｐｅｌｃｏファイバーキット５７２８４－ｕ）を選択した。
Ｔｒｉｐｌｕｓ ＲＳＨコンディショニングステーションで２５０℃で使用する前に、ファイバーを１０分間コンディショニングした。
抽出前に試料を４０℃で１分間インキュベートした。
Ｈｅａｄｓｐａｃｅバイアルから１分間抽出した。
広範囲の揮発性成分を捕捉できる優れた一般的な方法であることが期待される。
【0123】
ＧＣ法
Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＴＲＡＣＥ１３１０ ＧＣ
Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＴＲ－ＤＩＯＸＩＮ ５ＭＳカラム、内径０．２５ｍｍ、３０ｍフィルム０．１μｍ
分割噴射２５０℃分割８３、１．２ｍｌ Ｈｅ／分
ＧＣランプ：４０℃１分から５℃／分で１００、次に５０℃／分で３００℃
Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＴＲＡＣＥ１３１０ ＧＣ
Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＴＲ－ＤＩＯＸＩＮ ５ＭＳカラム、内径０．２５ｍｍ、３０ｍフィルム０．１μｍ
分割噴射２５０℃分割８３、１．２ｍｌ Ｈｅ／分
ＧＣランプ：４０℃１分から５℃／分で１００、次に５０℃／分で３００℃
【0124】
ヘッドスペース分析に優れた相乗効果を示す一般的なＭＳ固有のカラムを使用した。カラムの性能を維持するために最大に上昇する前に、揮発性物質の分離を最大化するために、遅い初期温度の上昇が採用された。注入口の極低温冷却の必要性を回避し、カラムの分離能を向上させるために、分割噴射を採用した。
【0125】
標準の分離は、ピークのオーバーラップによって妨げられたが、それでも定量に対応できた。３つの標準の較正結果（０．１、０．０１、および０．０１％）、分子イオンｍ／ｚ５６をプロパナールの検出に使用した。ｍ／ｚ５８のベースピークは、ヘキサナールの検出に使用される。
【0126】
ＭＳ法
Ｔｈｅｒｍｏ ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＤＦＳ高分解能ＧＣ－ＭＳ
低分解能（１０００）、フルスキャン３５－３５０Ｄａ、０．５秒／スキャン
標準：－プロパナールおよびヘキサナールの標準希釈液は、供給されたＤＨＡキャノーラエチルエステルに作製された。次に、これらの標準混合物を５４０μｌの容量で２０ｍｌのヘッドスペースバイアルに添加した。
Ｔｈｅｒｍｏ ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＤＦＳ高分解能ＧＣ－ＭＳ
低分解能（１０００）、フルスキャン３５－３５０Ｄａ、０．５秒／スキャン
標準：－プロパナールおよびヘキサナールの標準希釈液は、供給されたＤＨＡキャノーラエチルエステルに作製された。次に、これらの標準混合物を５４０μｌの容量で２０ｍｌのヘッドスペースバイアルに添加した。
【0127】
フルスキャンが採用され、特定分子ではなく、全ての開発製品のモニタリングが可能になった。
【0128】
ヘッドスペースの安定性の結果：
以下の表に、実施例８で得られた２回蒸留されたキャノーラ油および実施例９で得られた２回蒸留された参照油からＴ＝０～４日で得られた結果をまとめる。試験試料は、この期間中、ライトボックス上および蛍光管照明下で周囲温度で保持された。ｍ／ｚ５８分子イオンを分析し、質量クロマトグラムは室温で１．３７分でプロパナールの出現を明確に示す。下の表でプロパナールの展開を定量化し、データを図１に示す。ＤＨＡキャノーラ油は実質的に少量のプロパナールを放出し、参照と比較してキャノーラ油の安定性が改善されていることを証明する。
以下の表に、実施例８で得られた２回蒸留されたキャノーラ油および実施例９で得られた２回蒸留された参照油からＴ＝０～４日で得られた結果をまとめる。試験試料は、この期間中、ライトボックス上および蛍光管照明下で周囲温度で保持された。ｍ／ｚ５８分子イオンを分析し、質量クロマトグラムは室温で１．３７分でプロパナールの出現を明確に示す。下の表でプロパナールの展開を定量化し、データを図１に示す。ＤＨＡキャノーラ油は実質的に少量のプロパナールを放出し、参照と比較してキャノーラ油の安定性が改善されていることを証明する。
【表7】
【0129】
ＤＨＡキャノーラ油は、参照油と比較して酸化に対して優れた安定性を示す。
【0130】
実施例１２－ＤＨＡキャノーラ油の精製
実施例１で得られたキャノーラ油の一部は、さらなる濃縮を受ける前に精製された。精製プロセスには、脱ガム、アルカリ精製、漂白、および脱臭が含まれた。
実施例１で得られたキャノーラ油の一部は、さらなる濃縮を受ける前に精製された。精製プロセスには、脱ガム、アルカリ精製、漂白、および脱臭が含まれた。
【0131】
酸脱ガム
脱ガムとは、油から非水和性および水和性のリン脂質を除去することである。実施例１で得られた乾燥原油を５３±２℃に加熱し、０．２％の５０％クエン酸溶液を加えた。約３０分間混合した後、２．０％の加熱（５３±２℃）軟水を加え、約３０分間混合した。保持中に油を６７±３℃に加熱し、次に遠心分離した。
脱ガムとは、油から非水和性および水和性のリン脂質を除去することである。実施例１で得られた乾燥原油を５３±２℃に加熱し、０．２％の５０％クエン酸溶液を加えた。約３０分間混合した後、２．０％の加熱（５３±２℃）軟水を加え、約３０分間混合した。保持中に油を６７±３℃に加熱し、次に遠心分離した。
【0132】
酸前処理／精製
精製とは、腐食剤で鹸化して水溶性にした後の遊離脂肪酸の除去、およびそれに続く遠心分離による除去である。ホスファチドの水和を継続するために、酸前処理ステップが使用された。脱ガム油を６５±５℃に加熱し、０．１％の８５％リン酸を添加し、合計３０分間混合した。酸の添加および保持時間の後、２０ Ｂｅ’（Ｂａｕｍｅ；１４．４％、ｗ／ｗ）水酸化ナトリウムを添加し、遊離脂肪酸と０．０５％（ｗ／ｗ）過剰を中和した。次に、腐食剤および油をさらに１５分間混合した。１５分間保持しながら油を６２±２℃に加熱した後、油を遠心分離した。
精製とは、腐食剤で鹸化して水溶性にした後の遊離脂肪酸の除去、およびそれに続く遠心分離による除去である。ホスファチドの水和を継続するために、酸前処理ステップが使用された。脱ガム油を６５±５℃に加熱し、０．１％の８５％リン酸を添加し、合計３０分間混合した。酸の添加および保持時間の後、２０ Ｂｅ’（Ｂａｕｍｅ；１４．４％、ｗ／ｗ）水酸化ナトリウムを添加し、遊離脂肪酸と０．０５％（ｗ／ｗ）過剰を中和した。次に、腐食剤および油をさらに１５分間混合した。１５分間保持しながら油を６２±２℃に加熱した後、油を遠心分離した。
【0133】
Ｔｒｉｓｙｌシリカ処理
石鹸をさらに除去するために、漂白に適合するレベルまでＴｒｉｓｙｌシリカ処理を実施した。Ｔｒｉｓｙｌ前処理は、漂白ステップと組み合わされた。精製油を６８±５℃に加熱し、０．３％のＴｒｉｓｙｌ３００で処理した。油／Ｔｒｉｓｙｌを約１５分間混合した後、漂白を続けた。
石鹸をさらに除去するために、漂白に適合するレベルまでＴｒｉｓｙｌシリカ処理を実施した。Ｔｒｉｓｙｌ前処理は、漂白ステップと組み合わされた。精製油を６８±５℃に加熱し、０．３％のＴｒｉｓｙｌ３００で処理した。油／Ｔｒｉｓｙｌを約１５分間混合した後、漂白を続けた。
【0134】
漂白
精製油は、過酸化物、リン脂質、カラーボディー、および微量の石鹸を除去するために吸着粘土で処理された。ホスファチドの水和を継続するために、酸前処理ステップが使用された。Ｔｒｉｓｙｌ前処理油を０．２％（ｗ／ｗ）の５０％クエン酸溶液と混合した。１５分間混合した後、２％（ｗ／ｗ）のＴｏｎｓｉｌ Ｓｕｐｒｅｍｅ１２６ＦＦ漂白粘土を添加した。次に、混合物を真空下で９０±２℃に加熱し、約３０分間保持した。油を６０±２℃に冷却し、窒素で真空破壊し、１．０ｋｇの濾過助剤を加えて濾過した。圧力容器：５００ＬのＣｈｅｒｒｙ－Ｂｕｒｒｅｌｌ圧力容器、蒸気または冷却水ジャケット、混合用のインペラーおよびバッフルを備えた全て３１６ステンレス構造、製造シリアル番号Ｅ－２２７－９４。フィルタープレス：２４´´Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ Ｓｐｅｒｒｙ Ｆｉｌｔｅｒ Ｐｒｅｓｓ、容量４．８ｃｕのｆｔフィルター、紙および布の支持材を使用した。
精製油は、過酸化物、リン脂質、カラーボディー、および微量の石鹸を除去するために吸着粘土で処理された。ホスファチドの水和を継続するために、酸前処理ステップが使用された。Ｔｒｉｓｙｌ前処理油を０．２％（ｗ／ｗ）の５０％クエン酸溶液と混合した。１５分間混合した後、２％（ｗ／ｗ）のＴｏｎｓｉｌ Ｓｕｐｒｅｍｅ１２６ＦＦ漂白粘土を添加した。次に、混合物を真空下で９０±２℃に加熱し、約３０分間保持した。油を６０±２℃に冷却し、窒素で真空破壊し、１．０ｋｇの濾過助剤を加えて濾過した。圧力容器：５００ＬのＣｈｅｒｒｙ－Ｂｕｒｒｅｌｌ圧力容器、蒸気または冷却水ジャケット、混合用のインペラーおよびバッフルを備えた全て３１６ステンレス構造、製造シリアル番号Ｅ－２２７－９４。フィルタープレス：２４´´Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ Ｓｐｅｒｒｙ Ｆｉｌｔｅｒ Ｐｒｅｓｓ、容量４．８ｃｕのｆｔフィルター、紙および布の支持材を使用した。
【0135】
脱臭
漂白された油は、高温および低圧で蒸気を用いて散布され、臭気成分、フレーバー成分、および追加の遊離脂肪酸が除去された。高温での熱漂白によっても色が落ちる。漂白油の半分を１８０±２℃で６０分間、１％スパージ蒸気で脱臭し、脂肪酸組成（ＦＡＣ）を監視した。脱臭容器（ＯＤ４）：４００Ｌ Ｃｏｐｐｅｒｓｍｉｔｈｉｎｇ真空定格容器、蒸気または冷却水ジャケット、全て３１６ステンレス構造。１８０℃で６０分間保持すると、ＤＨＡレベルのわずかな低下が観察された。次に、１８０℃で３０分間保持して別の試験を実行した。製品は窒素下で２０ＬのプラスチックＨＤＰＥペール缶に梱包され、４℃のクーラーに保管された。
漂白された油は、高温および低圧で蒸気を用いて散布され、臭気成分、フレーバー成分、および追加の遊離脂肪酸が除去された。高温での熱漂白によっても色が落ちる。漂白油の半分を１８０±２℃で６０分間、１％スパージ蒸気で脱臭し、脂肪酸組成（ＦＡＣ）を監視した。脱臭容器（ＯＤ４）：４００Ｌ Ｃｏｐｐｅｒｓｍｉｔｈｉｎｇ真空定格容器、蒸気または冷却水ジャケット、全て３１６ステンレス構造。１８０℃で６０分間保持すると、ＤＨＡレベルのわずかな低下が観察された。次に、１８０℃で３０分間保持して別の試験を実行した。製品は窒素下で２０ＬのプラスチックＨＤＰＥペール缶に梱包され、４℃のクーラーに保管された。
【0136】
実施例１３－オリジナルの参照ブレンド油の精製
実施例２に記載されている参照ブレンドの一部は、さらに濃縮される前に精製された。精製プロセスでは、前の実施例に示したのと同じ条件下で、参照ブレンドを精製した。
実施例２に記載されている参照ブレンドの一部は、さらに濃縮される前に精製された。精製プロセスでは、前の実施例に示したのと同じ条件下で、参照ブレンドを精製した。
【0137】
実施例１４－ＲＢＤ ＤＨＡキャノーラ油およびＲＢＤ参照ブレンドの脂肪酸組成
（実施例１２の）ＲＢＤ ＤＨＡキャノーラ油および（実施例１３の）ＲＢＤ参照ブレンド油の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
（実施例１２の）ＲＢＤ ＤＨＡキャノーラ油および（実施例１３の）ＲＢＤ参照ブレンド油の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
【表8】
【0138】
実施例（および添付の図）に関連する「ＲＢＤ」への言及は、問題の製品が、実施例１２（キャノーラ油の場合）および実施例１３（参照ブレンドの場合）のいずれかの「精製」製品から直接的または間接的に得られたことを意味する。
【0139】
実施例１５－ＲＢＤキャノーラ－ＤＨＡ油の化学的エステル交換
機械的攪拌機を備えた乾燥した窒素フラッシュＢｕｃｈｉ ＣＲ１０１化学反応器に、無水エタノール（１２．５Ｌ）および実施例１２で得られた精製（「ＲＢＤ」）トリグリセリドキャノーラ－ＤＨＡ油（５．００ｋｇ）を加え、混合物を撹拌した。
機械的攪拌機を備えた乾燥した窒素フラッシュＢｕｃｈｉ ＣＲ１０１化学反応器に、無水エタノール（１２．５Ｌ）および実施例１２で得られた精製（「ＲＢＤ」）トリグリセリドキャノーラ－ＤＨＡ油（５．００ｋｇ）を加え、混合物を撹拌した。
【0140】
上記の混合物にナトリウムエトキシド（１５０ｇ）を加え、これをさらに無水エタノール（２．５Ｌ）で反応器にすすぎ、撹拌を周囲温度で１６時間続けた。混合物から採取された試料の記録された１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、反応が完了したことを示した。
【0141】
エステル交換手順は、約５ｋｇのＲＢＤキャノーラ－ＤＨＡ油で実施された。得られた粗反応混合物に、４０～６０℃の沸点の石油スピリット（ペットスピリット、１０Ｌ）および水（１０Ｌ）を加え、完全に混合しながら、混合物を１０％塩酸（合計８７０ｍＬが必要、Ｍｅｒｃｋ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｓｔｒｉｐｓ、ｐＨ０～１４）でｐＨ７に慎重に酸性化した。
【0142】
得られた混合物を反応器内に放置した後、２つの相が形成された。石油スピリット層を除去し、水層をさらに石油スピリットで抽出した（３ｘ５Ｌ）。組み合わせた石油スピリット層を反応器に戻し、真空中で少量（約１０Ｌ）まで蒸発させた。得られた濃縮溶液を反応器から排出し、無水硫酸マグネシウム（約１ｋｇ）で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、薄い淡黄色の油（収率：９９％）を得た。
【0143】
実施例１６－ＲＢＤ参照ブレンド油の化学的エステル交換
機械的攪拌機を備えた乾燥した窒素フラッシュＢｕｃｈｉ ＣＲ１０１化学反応器に、無水エタノール（１２．５Ｌ）および実施例１３に従って得られたＲＢＤトリグリセリド参照ブレンド油（約５ｋｇ）を加え、混合物を撹拌した。
機械的攪拌機を備えた乾燥した窒素フラッシュＢｕｃｈｉ ＣＲ１０１化学反応器に、無水エタノール（１２．５Ｌ）および実施例１３に従って得られたＲＢＤトリグリセリド参照ブレンド油（約５ｋｇ）を加え、混合物を撹拌した。
【0144】
上記の混合物にナトリウムエトキシド（１５０ｇ）を加え、これをさらに無水エタノール（２．５Ｌ）で反応器にすすぎ、撹拌を周囲温度で１６時間続けた。試料の記録された１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ほとんどまたは全く反応が起きたことを示さなかった。さらにナトリウムエトキシド（５７ｇ）を混合物に加え、撹拌を続けた。
【0145】
さらに５時間後、試料の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、反応が７５％完了したことを示した。さらにナトリウムエトキシド（６０ｍＬの２１％エタノール溶液）を混合物に加え、撹拌を３日間続け、その後、反応が完了した。
【0146】
ＲＢＤ参照ブレンドの化学的エステル交換からの実施例生成物の分離
エステル交換手順は、約５ｋｇのＲＢＤ参照ブレンド油で実施された。得られた粗反応混合物に、石油スピリット（１５Ｌ）および水（３．３Ｌ）を加え、完全に混合しながら、混合物を１０％塩酸（合計９１０ｍＬが必要）でｐＨ７に慎重に酸性化した。
エステル交換手順は、約５ｋｇのＲＢＤ参照ブレンド油で実施された。得られた粗反応混合物に、石油スピリット（１５Ｌ）および水（３．３Ｌ）を加え、完全に混合しながら、混合物を１０％塩酸（合計９１０ｍＬが必要）でｐＨ７に慎重に酸性化した。
【0147】
得られた混合物を反応器内に放置した後、２つの相が形成された。石油スピリット層を除去し、水層をさらに石油スピリット（２ｘ７．５Ｌ）で抽出した。組み合わせた石油スピリット層を反応器に戻し、真空中で少量（約１０Ｌ）まで蒸発させた。得られた濃縮溶液を反応器から排出し、無水硫酸マグネシウム（約１ｋｇ）で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、薄い淡黄色の油（収率：９９％）を得た。
【0148】
実施例１７－エステル交換されたＲＢＤキャノーラ油の蒸留
真空蒸留により脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）混合物のより揮発性の高い成分を除去するための標準的手順
ＲＢＤキャノーラ－ＤＨＡ（実施例１５で得られた）からの脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を、以下の条件下で蒸留に供した。蒸留による分離は、蒸留物および残留物を収集する２ｘ１０００ｍｌの収集フラスコを備え、真空下にあるＰｏｐｅ２インチ（５０ｍｍ）薄膜蒸留器にトランスエステル化油を通過させることによって達成された。各々の脂肪酸組成を分析した。
真空蒸留により脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）混合物のより揮発性の高い成分を除去するための標準的手順
ＲＢＤキャノーラ－ＤＨＡ（実施例１５で得られた）からの脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を、以下の条件下で蒸留に供した。蒸留による分離は、蒸留物および残留物を収集する２ｘ１０００ｍｌの収集フラスコを備え、真空下にあるＰｏｐｅ２インチ（５０ｍｍ）薄膜蒸留器にトランスエステル化油を通過させることによって達成された。各々の脂肪酸組成を分析した。
【0149】
真空はＥｄｗａｒｄｓ３ロータリーポンプによって供給され、真空はｅｂｒｏ真空計ＶＭ２０００によって測定された。
【0150】
油は、Ｃｏｌｅ－Ｐａｌｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙのｅａｓｙ－ｌｏａｄ ＩＩ蠕動ポンプによって４ｍＬ／分で蒸留器に供給され、蒸留器モーターは３２５ｒｐｍに設定され、水凝縮器を使用して蒸留物を凝縮した。いずれかのレシーバーフラスコが一杯になるまで供給を続けた。
【0151】
ＲＢＤキャノーラ－ＤＨＡ ＦＡＥＥは、ヒーターバンドが１５２℃に初期設定されたこれらの条件下で蒸留され、蒸留物：残留物の５０：５０分割を得た。ヒーターバンドの温度を１５２℃に設定した標準条件下での蒸留により、この蒸留からの残留物の一部を、より揮発性の高い成分の除去に再び供した。蒸留の合計時間は約９０分であった。
【表9】
【0152】
実施例１８－エステル交換されたＲＢＤ参照ブレンド由来のＦＡＥＥの蒸留
ＲＢＤ参照ブレンド（実施例１６で得られた）からの脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を、前の実施例に示したのと同じ条件下で蒸留に供した。
ＲＢＤ参照ブレンド（実施例１６で得られた）からの脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を、前の実施例に示したのと同じ条件下で蒸留に供した。
【0153】
ＲＢＤ参照ブレンドＦＡＥＥは、ヒーターバンドが１５２℃に初期設定されたこれらの標準条件下で蒸留され、蒸留物：残留物の５０：５０分割を得た。この蒸留からの残留物を、標準的な条件下での蒸留により、より揮発性の高い成分の除去に再び供した。目的は、蒸留物：残留物の５０：５０分割を得ることであった。蒸留は主にヒーターバンドを１５２℃に設定して実施した。蒸留の合計時間は約２００分であった。
【表10】
【0154】
実施例１９－濃縮ＲＢＤ油の脂肪酸組成分析
実施例１７および実施例１８で得られた生成物の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
実施例１７および実施例１８で得られた生成物の脂肪酸組成を分析した。結果を以下に示す。
【表11】
【0155】
実施例２０－油の安定性評価
ヘッドスペース分析は、実施例１１に記載された方法に従って、実施例１７および実施例１８に記載された濃縮生成物について実行された。
ヘッドスペース分析は、実施例１１に記載された方法に従って、実施例１７および実施例１８に記載された濃縮生成物について実行された。
【0156】
以下の表に、実施例１７で得られたＲＢＤキャノーラ油および実施例１８で得られたＲＢＤ参照油からＴ＝０～３日で得られた結果をまとめる。試験試料は、この期間中、ライトボックス上および蛍光管照明下で周囲温度で保持された。ｍ／ｚ５８分子イオンを分析し、質量クロマトグラムは室温で１．３７分でプロパナールの出現を明確に示す。下の表でプロパナールの展開を定量化し、データを図２に示す。ＤＨＡキャノーラ油は実質的に少量のプロパナールを放出し、参照と比較してキャノーラ油の安定性が改善されていることを証明する。
【表12】
【0157】
ＤＨＡキャノーラ油は、参照油と比較して酸化に対して優れた安定性を示した。
【0158】
［項目１］
植物ベースの脂質組成物であって、
（ｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の約１５重量％～約３５重量％の量のドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）と、
（ｉｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の最大約５重量％の量のエイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）と、
（ｉｉｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の約１０重量％～約２０重量％の量のα－リノレン酸（１８：３ｎ－３）と、
（ｉｖ）前記組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約４０重量％の量のオレイン酸（１８：１ｎ－９）と、
（ｖ）前記組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．５重量％の量のパルミチン酸と、を含み、
成分（ｉ）～（ｖ）が、各々独立して、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステル、または脂肪酸エステルの塩の形態で提供される、脂質組成物。
［項目２］
ドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）が、前記組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％（特に、約２２重量％～約３３重量％）の量で存在する、請求項１に記載の脂質組成物。
［項目３］
前記エイコサペンタエン酸が、前記組成物の総脂肪酸含有量の最大約３重量％（特に、最大約１重量％）の量で存在する、請求項１または請求項２に記載の脂質組成物。
［項目４］
前記α－リノレン酸が、前記組成物の総脂肪酸含有量の約１２重量％～約２０重量％（特に、約１２重量％～約１８重量％）の量で存在する、請求項１～３のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目５］
前記オレイン酸が、前記組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％（特に、約２２重量％～約３３重量％）の量で存在する、請求項１～４のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目６］
前記パルミチン酸（１６：０）が、前記組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．０重量％（特に、最大約０．７重量％）の量で存在する、請求項５に記載の脂質組成物。
［項目７］
成分（ｉ）～（ｖ）が、各々独立して、脂肪酸エステルまたは脂肪酸エステルの塩の形態で提供される、請求項１～６のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目８］
成分（ｉ）～（ｖ）が、各々独立して、脂肪酸エチルエステルまたはトリグリセリドの一部の形態で提供される、請求項７に記載の脂質組成物。
［項目９］
前記脂質組成物が、単一の供給源に由来する、請求項１～８のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１０］
前記脂質組成物が、植物に由来する、請求項１～９のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１１］
前記植物が、油糧種子、特に、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｐ．、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ、Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｓｐ．、Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、Ｚｅａ ｍａｙｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ、Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｓｐ．、Ｅｌａｅｓｉｓ ｇｕｉｎｅｅｎｉｓ、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ、Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ、Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ、Ｏｒｙｚａ ｇｌａｂｅｒｒｉｍａ、Ｃａｍｅｌｉｎａ ｓａｔｉｖａ、またはＣｒａｍｂｅ ａｂｙｓｓｉｎｉｃａである、請求項１０に記載の脂質組成物。
［項目１２］
前記組成物が、錠剤、カプセル、カプセル化ゲル、摂取可能な液体もしくは粉末、または局所軟膏もしくはクリームの形態で提供される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１３］
抗酸化剤、安定剤、および界面活性剤からなる群から選択される１つ以上の追加成分をさらに含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１４］
心血管疾患の治療もしくは予防、心血管疾患患者の死亡に対する防御、全体的な血清コレステロールレベルの低下、高血圧の低下、ＨＤＬ：ＬＤＬ比の増加、トリグリセリドの低下、またはアポリポタンパク質Ｂレベルの低下に使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１５］
請求項１～１１のいずれか一項に記載の脂質組成物を生成するためのプロセスであって、脂肪酸エチルエステルの混合物を提供することと、その混合物を第１の分子蒸留ステップに供して第１の残留物を得ることと、前記第１の残留物を第２の分子蒸留ステップに供することと、を含む、プロセス。
植物ベースの脂質組成物であって、
（ｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の約１５重量％～約３５重量％の量のドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）と、
（ｉｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の最大約５重量％の量のエイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）と、
（ｉｉｉ）前記組成物の総脂肪酸含有量の約１０重量％～約２０重量％の量のα－リノレン酸（１８：３ｎ－３）と、
（ｉｖ）前記組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約４０重量％の量のオレイン酸（１８：１ｎ－９）と、
（ｖ）前記組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．５重量％の量のパルミチン酸と、を含み、
成分（ｉ）～（ｖ）が、各々独立して、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステル、または脂肪酸エステルの塩の形態で提供される、脂質組成物。
［項目２］
ドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ－３）が、前記組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％（特に、約２２重量％～約３３重量％）の量で存在する、請求項１に記載の脂質組成物。
［項目３］
前記エイコサペンタエン酸が、前記組成物の総脂肪酸含有量の最大約３重量％（特に、最大約１重量％）の量で存在する、請求項１または請求項２に記載の脂質組成物。
［項目４］
前記α－リノレン酸が、前記組成物の総脂肪酸含有量の約１２重量％～約２０重量％（特に、約１２重量％～約１８重量％）の量で存在する、請求項１～３のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目５］
前記オレイン酸が、前記組成物の総脂肪酸含有量の約２０重量％～約３５重量％（特に、約２２重量％～約３３重量％）の量で存在する、請求項１～４のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目６］
前記パルミチン酸（１６：０）が、前記組成物の総脂肪酸含有量の最大約１．０重量％（特に、最大約０．７重量％）の量で存在する、請求項５に記載の脂質組成物。
［項目７］
成分（ｉ）～（ｖ）が、各々独立して、脂肪酸エステルまたは脂肪酸エステルの塩の形態で提供される、請求項１～６のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目８］
成分（ｉ）～（ｖ）が、各々独立して、脂肪酸エチルエステルまたはトリグリセリドの一部の形態で提供される、請求項７に記載の脂質組成物。
［項目９］
前記脂質組成物が、単一の供給源に由来する、請求項１～８のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１０］
前記脂質組成物が、植物に由来する、請求項１～９のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１１］
前記植物が、油糧種子、特に、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｐ．、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ、Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｓｐ．、Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、Ｚｅａ ｍａｙｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ、Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｓｐ．、Ｅｌａｅｓｉｓ ｇｕｉｎｅｅｎｉｓ、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ、Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ、Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ、Ｏｒｙｚａ ｇｌａｂｅｒｒｉｍａ、Ｃａｍｅｌｉｎａ ｓａｔｉｖａ、またはＣｒａｍｂｅ ａｂｙｓｓｉｎｉｃａである、請求項１０に記載の脂質組成物。
［項目１２］
前記組成物が、錠剤、カプセル、カプセル化ゲル、摂取可能な液体もしくは粉末、または局所軟膏もしくはクリームの形態で提供される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１３］
抗酸化剤、安定剤、および界面活性剤からなる群から選択される１つ以上の追加成分をさらに含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１４］
心血管疾患の治療もしくは予防、心血管疾患患者の死亡に対する防御、全体的な血清コレステロールレベルの低下、高血圧の低下、ＨＤＬ：ＬＤＬ比の増加、トリグリセリドの低下、またはアポリポタンパク質Ｂレベルの低下に使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の脂質組成物。
［項目１５］
請求項１～１１のいずれか一項に記載の脂質組成物を生成するためのプロセスであって、脂肪酸エチルエステルの混合物を提供することと、その混合物を第１の分子蒸留ステップに供して第１の残留物を得ることと、前記第１の残留物を第２の分子蒸留ステップに供することと、を含む、プロセス。
【図1】
【図2】
