【図1】 様々なサイトカイン受容体の構造、それらのサイトカインを産生する細胞型、およびそれらのサイトカイン受容体を発現する細胞型を要約している模式図。

【図2】 本発明の二重キメラ受容体システムの模式図。第１のＣＲは、サイトカイン受容体エンドドメイン（共通ガンマ鎖）および細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ゼータ）を含むエンドドメインを有する。第２のＣＲは、サイトカイン受容体エンドドメイン（ＩＬ２受容体ベータ鎖）および細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン（ＣＤ２８共刺激ドメインとＯＸ４０共刺激ドメインの両方を含む）を含むエンドドメインを有する。それらの２つのキメラ受容体の抗原結合エキソドメイン（ｅｘｏｄｏｍａｉｎｓ）は、同じリガンド上の異なるエピトープに結合する。これらのＣＲが、リガンドに結合すると、各分子上のサイトカインエンドドメインは、接近して、それらは会合し得、サイトカイン様の細胞活性化をもたらし得る。細胞活性化は、シグナル１およびシグナル２を細胞に提供するＴ細胞活性化エンドドメインを介しても生じる。注意：１本の鎖だけが示されているが、このシステムにおけるＣＲは、ホモ二量体である。

【図3】 本発明の代替的二重ＣＲシステムの模式図。このシステムでは、第１および第２のＣＲは、エンドドメインなどに関して図２に示されているものと類似の構造を有する。相違点は、２つのキメラ受容体の抗原結合エキソドメインが、リガンド上の同じエピトープに結合する点である。それらは、同一の抗原結合部分を含み得る。密接なシナプスが存在する場合、２つのキメラ受容体による独立した抗原結合は、エンドドメインを、サイトカインエンドドメインが会合するのに十分近くにして、活性化をもたらし得る。注意：１本の鎖だけが示されているが、このシステムにおけるＣＲは、ホモ二量体である。

【図4】 本発明のＣＲ：ＺＡＰ７０システムの模式図。このシステムでは、単一のＣＲが、同族抗原を認識し、そのエンドドメインは、Ｔ細胞シグナル伝達エンドドメイン（少なくともＣＤ３－ゼータエンドドメインを含み得る）だけでなく、サイトカイン受容体エンドドメイン（例えば、共通ガンマ鎖またはＩＬ２受容体ベータ鎖のいずれかに由来）も含む。この受容体は、ＺＡＰ７０ ＳＨ２ドメインと、相補的な（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）サイトカイン受容体エンドドメインとの融合物と共発現される（例えば、ＣＲが、共通ガンマ鎖を含む場合、ＺＡＰ７０ ＳＨ２ドメインは、ＩＬ２受容体ベータ鎖に融合され得る）。抗原の認識の際、ＣＲ ＣＤ３－ゼータエンドドメインＩＴＡＭは、リン酸化され、ＺＡＰ７０融合タンパク質をリクルートする。ここで、そのサイトカイン受容体の２つのエンドドメインは、近くなり、サイトカインシグナルが伝達される。

【図5】 個々の構成要素を示している図２に図示されているような二重ＣＲシステムに対するアミノ酸配列。この構築物では、両ＣＡＲが、ＣＤ２２を認識する。第１のＣＲは、ＬＴ２２に基づくバインダー、およびＩＬ２受容体ベータ鎖を含むエンドドメインを含み；第２のＣＲは、ＲＦＢ４に基づくバインダー、ならびにＩＬ２受容体ガンマ鎖およびＣＤ３ゼータエンドドメインを含むエンドドメインを含む。

【図6】 実施例３に記載されている増殖／生存アッセイにおいて試験されたキメラ受容体システムを図示している模式図。一方のキメラ受容体は、Ｒ１１ ｓｃＦｖを含むのに対して、他方は、Ｒ１２ ｓｃＦｖを含む。Ｒ１１およびＲ１２は、同じ抗原：ＲＯＲ１上の別個のエピトープに結合する。

【図7】 リガンドでコーティングされたビーズと共培養されたときの、形質導入された細胞の増加倍率を示しているグラフ。Ｒ１１－ｉｌ２ｂ－ｚ－２Ａ－Ｒ１２－ｉｌ２ｇ－ｚは、サイトカイン受容体エンドドメインとＣＤ３ゼータエンドドメインの両方を含む、図６に図示されている第４世代ＣＡＲシステムをコードする構築物であり；Ｒ１１－ｚ－２Ａ－Ｒ１２－ｚは、サイトカイン受容体エンドドメインを欠く等価なキメラ受容体システムをコードする構築物である。

【図8】 ＲＯＲ１でコーティングされたビーズと共培養した後の３および６日後の、形質導入された細胞の数を示しているグラフ。

【図9】 実施例４に記載されている死滅アッセイにおいて試験されたキメラ受容体システムを図示している模式図。一方のキメラ受容体は、Ｒ１１ ｓｃＦｖを含むのに対して、他方は、Ｒ１２ ｓｃＦｖを含む。Ｒ１１およびＲ１２は、同じ抗原：ＲＯＲ１上の別個のエピトープに結合する。

【図10】 １０：１のＥ：Ｔ比で４８時間インキュベーションした後の標的細胞の細胞死滅を示しているグラフ。Ｒ１１－ＩＬ２Ｂ－Ｚ－２Ａ－Ｒ１２－ＩＬ２Ｇ－ｚは、サイトカイン受容体エンドドメインとＣＤ３ゼータエンドドメインの両方を含む、図９に図示されている第４世代ＣＡＲシステムをコードする構築物であり；Ｒ１１－ＩＬ２Ｂ－２Ａ－Ｒ１２－ＩＬ２Ｇは、ＣＤ３ゼータエンドドメインを欠く等価なキメラ受容体システムをコードする構築物である。

【図11】 １０：１のＥ：Ｔ比で４８時間インキュベーションした後の細胞のＩＦＮγ分泌を示しているグラフ。Ｒ１１－ＩＬ２ＲＢ－Ｚ＋Ｒ１２－ＩＬ２ＲＧ－ｚは、サイトカイン受容体エンドドメインとＣＤ３ゼータエンドドメインの両方を含む、図９に図示されている第４世代ＣＡＲシステムを発現する細胞を表し；Ｒ１１－ＩＬ２ＲＢ＋Ｒ１２－ＩＬ２ＲＧは、ＣＤ３ゼータエンドドメインを欠く等価なキメラ受容体システムを発現する細胞を表す。

【図12】 実施例６に記載されている増殖／生存アッセイにおいて試験されたキメラ受容体システムを図示している模式図。両方のキメラ受容体が、Ｒ１２ ｓｃＦｖを含むので、それらは、同じ抗原：ＲＯＲ１上の同じエピトープに結合する。相同組換えを防ぐために、第１のＲ１２ ｓｃＦｖのＤＮＡ配列をゆらぎにした（ｗｏｂｂｌｅｄ）。

【図13】 リガンドでコーティングされたビーズと共培養されたときの、形質導入された細胞の増加倍率を示しているグラフ。Ｒ１２ｗ－ｉｌ２ｂ－ｚ－２Ａ－Ｒ１２－ｉｌ２ｇ－ｚは、サイトカイン受容体エンドドメインとＣＤ３ゼータエンドドメインの両方を含む、図１２に図示されている第４世代ＣＡＲシステムをコードする構築物であり；Ｒ１２ｗ－ｚ－２Ａ－Ｒ１２－ｚは、サイトカイン受容体エンドドメインを欠く等価なキメラ受容体システムをコードする構築物である。

【図14】 ＲＯＲ１でコーティングされたビーズと共培養された後の３および６日後の、形質導入された細胞の数を示しているグラフ。