知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024025666
(43)【公開日】2024-02-26
(54)【発明の名称】植物組成物含有スエヒロタケ培地およびその調製方法と使用
(51)【国際特許分類】
C12N 1/14 20060101AFI20240216BHJP
A61K 8/9728 20170101ALI20240216BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20240216BHJP
A61Q 19/08 20060101ALI20240216BHJP
【ＦＩ】
C12N1/14 H
C12N1/14 G
A61K8/9728
A61Q19/00
A61Q19/08
【審査請求】有
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023108544
(22)【出願日】2023-06-30
(31)【優先権主張番号】202210966791.8
(32)【優先日】2022-08-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(71)【出願人】
【識別番号】520317240
【氏名又は名称】広東丸美生物技術股▲フン▼有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】孫 懐慶
(72)【発明者】
【氏名】▲トウ▼ 永飛
(72)【発明者】
【氏名】郭 朝万
(72)【発明者】
【氏名】王 暁華
(72)【発明者】
【氏名】裴 運林
(72)【発明者】
【氏名】▲ジョウ▼ 艶峰
(72)【発明者】
【氏名】江 川霞
【テーマコード（参考）】
4B065
4C083
【Ｆターム（参考）】
4B065AA71X
4B065AC14
4B065BB03
4B065BB11
4B065BB12
4B065BB15
4B065BB18
4B065BB26
4B065BB29
4B065BC03
4B065BC09
4B065BC26
4B065CA02
4B065CA50
4C083AA031
4C083AA032
4C083AA111
4C083AA112
4C083CC02
4C083EE12
4C083FF01
(57)【要約】
【課題】本発明は、植物組成物含有スエヒロタケ培地、およびその調製方法と使用を提供する。
【解決手段】前記植物組成物含有スエヒロタケ培地は植物組成物と基本培地とを含み、そのうち、前記植物組成物はニンジンとイチゴを含む。本発明は、改良された基本培地にニンジンおよびイチゴを添加しており、スエヒロタケ発酵過程において、ニンジンとイチゴが互いに協働して相乗効果を達成することで、発酵過程でスエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量を向上させるだけでなく、最終に得られたスエヒロタケ発酵生成物の耐酸化能力および保湿能力を著しく向上させる。
【選択図】なし
【解決手段】前記植物組成物含有スエヒロタケ培地は植物組成物と基本培地とを含み、そのうち、前記植物組成物はニンジンとイチゴを含む。本発明は、改良された基本培地にニンジンおよびイチゴを添加しており、スエヒロタケ発酵過程において、ニンジンとイチゴが互いに協働して相乗効果を達成することで、発酵過程でスエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量を向上させるだけでなく、最終に得られたスエヒロタケ発酵生成物の耐酸化能力および保湿能力を著しく向上させる。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
植物組成物と基本培地とを含む植物組成物含有スエヒロタケ培地であって、
前記植物組成物は、ニンジンとイチゴを含む、
ことを特徴とする植物組成物含有スエヒロタケ培地。
前記植物組成物は、ニンジンとイチゴを含む、
ことを特徴とする植物組成物含有スエヒロタケ培地。
【請求項2】
前記植物組成物含有スエヒロタケ培地におけるニンジンの濃度が０．１～１０ｇ／Ｌであり、３～４ｇ／Ｌであることが好ましく、
好ましくは、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地におけるイチゴの濃度が０．１～１０ｇ／Ｌであり、０．１～３ｇ／Ｌであることが好ましい、
ことを特徴とする請求項１に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地。
好ましくは、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地におけるイチゴの濃度が０．１～１０ｇ／Ｌであり、０．１～３ｇ／Ｌであることが好ましい、
ことを特徴とする請求項１に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地。
【請求項3】
前記基本培地は、質量％で、グルコース５～１０％、リン酸二水素カリウム０．０５～０．２％、硫酸マグネシウム０．０１～０．０２％、トリプトン０．１～１％、酵母抽出物０．１～０．５％、水８５～９０％を含み、
好ましくは、前記基本培地は、さらに栄養添加剤を含み、
好ましくは、前記栄養添加剤は、前記基本培地の総質量の０．０１～０．２％を占め、
好ましくは、前記栄養添加剤は、グルタミン酸、グルタチオン、ニコチンアミド、γ－ポリグルタミン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムまたはマンニトールのいずれか１種または少なくとも２種の組合せを含み、グルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せであることが好ましく、
好ましくは、前記グルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの質量比が（５～９）：（１～５）：（０．１～１）である、
ことを特徴とする請求項１または２に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地。
好ましくは、前記基本培地は、さらに栄養添加剤を含み、
好ましくは、前記栄養添加剤は、前記基本培地の総質量の０．０１～０．２％を占め、
好ましくは、前記栄養添加剤は、グルタミン酸、グルタチオン、ニコチンアミド、γ－ポリグルタミン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムまたはマンニトールのいずれか１種または少なくとも２種の組合せを含み、グルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せであることが好ましく、
好ましくは、前記グルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの質量比が（５～９）：（１～５）：（０．１～１）である、
ことを特徴とする請求項１または２に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地。
【請求項4】
請求項１～３のいずれか一項に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法であって、
まず、ニンジンおよびイチゴを凍結乾燥処理した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、ニンジン粉末およびイチゴ粉末を得、基本培地における各成分を溶解させて培地混合液を得るステップ（ａ）と、
ニンジン粉末、イチゴ粉末および培地混合液を混合撹拌して、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得るステップ（ｂ）と、を含む、
ことを特徴とする植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法。
まず、ニンジンおよびイチゴを凍結乾燥処理した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、ニンジン粉末およびイチゴ粉末を得、基本培地における各成分を溶解させて培地混合液を得るステップ（ａ）と、
ニンジン粉末、イチゴ粉末および培地混合液を混合撹拌して、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得るステップ（ｂ）と、を含む、
ことを特徴とする植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法。
【請求項5】
ステップ（ａ）において、前記凍結乾燥処理の処理温度が－３０～－２０℃であり、前記凍結乾燥処理の時間が１０～１５ｈであり、
好ましくは、ステップ（ａ）において、前記ニンジン粉末およびイチゴ粉末の粒径が各々独立して１００～５００メッシュであり、
好ましくは、ステップ（ａ）において、前記溶解のステップは、グルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、トリプトン、酵母抽出物および水を混合した後、まず、３～５℃／ｍｉｎの昇温速度、３００～５００ｒｐｍの回転数で３０～３５℃に昇温し、そして、２～３℃／ｍｉｎの昇温速度、１００～３００ｒｐｍの回転数で３５～４０℃に昇温し、最後、３５～４０℃で１～３ｍｉｎ維持して、
好ましくは、ステップ（ｂ）において、前記混合撹拌の回転数が５００～１０００ｒｐｍであり、前記混合撹拌の時間が５～２０ｍｉｎである、
ことを特徴とする請求項４に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法。
好ましくは、ステップ（ａ）において、前記ニンジン粉末およびイチゴ粉末の粒径が各々独立して１００～５００メッシュであり、
好ましくは、ステップ（ａ）において、前記溶解のステップは、グルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、トリプトン、酵母抽出物および水を混合した後、まず、３～５℃／ｍｉｎの昇温速度、３００～５００ｒｐｍの回転数で３０～３５℃に昇温し、そして、２～３℃／ｍｉｎの昇温速度、１００～３００ｒｐｍの回転数で３５～４０℃に昇温し、最後、３５～４０℃で１～３ｍｉｎ維持して、
好ましくは、ステップ（ｂ）において、前記混合撹拌の回転数が５００～１０００ｒｐｍであり、前記混合撹拌の時間が５～２０ｍｉｎである、
ことを特徴とする請求項４に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法。
【請求項6】
請求項１～３のいずれか一項に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地の、スエヒロタケ発酵における使用。
【請求項7】
活性化されたスエヒロタケを、請求項１～３のいずれか一項に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地に接種し、発酵培養した後、スエヒロタケ発酵生成物を得るステップを含む、
ことを特徴とするスエヒロタケ発酵方法。
ことを特徴とするスエヒロタケ発酵方法。
【請求項8】
前記発酵培養は、撹拌下で行い、発酵培養の回転数が１５０～２００ｒｐｍであり、発酵培養の温度が２５～３０℃であり、発酵培養の時間が６０～８０ｈであり、
好ましくは、前記活性化されたスエヒロタケは、斜面培地でスエヒロタケ菌種を活性化させ、菌糸が斜面全体に成長したまで、２５～３０℃の条件下で５～７日間培養し、斜面の菌種を液体培地に移して、３～４日間拡大培養して、活性化されたスエヒロタケシード液を得るというステップによって活性化されたものであり、
好ましくは、前記斜面培地は、ＰＤＡ斜面培地であり、
好ましくは、前記液体培地は、質量％で、グルコース１～５％、リン酸二水素カリウム０．０５～０．２％、硫酸マグネシウム０．０１～０．０２％、酵母エキス粉末０．１～０．２％、残量の水からなり、
好ましくは、前記活性化されたスエヒロタケの、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地における接種量が１～５ｖｏｌ％である、
ことを特徴とする請求項７に記載のスエヒロタケ発酵方法。
好ましくは、前記活性化されたスエヒロタケは、斜面培地でスエヒロタケ菌種を活性化させ、菌糸が斜面全体に成長したまで、２５～３０℃の条件下で５～７日間培養し、斜面の菌種を液体培地に移して、３～４日間拡大培養して、活性化されたスエヒロタケシード液を得るというステップによって活性化されたものであり、
好ましくは、前記斜面培地は、ＰＤＡ斜面培地であり、
好ましくは、前記液体培地は、質量％で、グルコース１～５％、リン酸二水素カリウム０．０５～０．２％、硫酸マグネシウム０．０１～０．０２％、酵母エキス粉末０．１～０．２％、残量の水からなり、
好ましくは、前記活性化されたスエヒロタケの、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地における接種量が１～５ｖｏｌ％である、
ことを特徴とする請求項７に記載のスエヒロタケ発酵方法。
【請求項9】
請求項７または８に記載のスエヒロタケの発酵方法により調製されたスエヒロタケ発酵生成物であって、
好ましくは、前記スエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量が５～１５ｍｇ／ｍＬである、
ことを特徴とするスエヒロタケ発酵生成物。
好ましくは、前記スエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量が５～１５ｍｇ／ｍＬである、
ことを特徴とするスエヒロタケ発酵生成物。
【請求項10】
請求項９に記載のスエヒロタケ発酵生成物の、化粧品の調製における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、微生物発酵の技術分野に属し、具体的には、植物組成物含有スエヒロタケ培地およびその調製方法と使用に関する。
【背景技術】
【0002】
スエヒロタケ（学名：Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ ｃｏｍｍｕｎｅ Ｆｒ．）とは、スエヒロタケ科、スエヒロタケ属の真菌である。スエヒロタケは、子実体が小さく、覆瓦状に散在または集合性、扇形または腎臓形、無柄または短柄であり、蓋の表面にはビロードが密生しており、白色から薄灰色であり、蓋の縁が内側に巻き、縞模様があり、裂開が複数あり、菌のしわが狭く、しわの縁に沿って縦方向に裂開して外側に巻き戻る。
【0003】
シゾフィランは、スエヒロタケの発酵による水溶性多糖であり、腫瘍の抑制、抗菌および抗炎症、抗放射線、体の免疫力の向上などの様々な生理的活性を有する。現在、シゾフィランの生産方法は、単一の食用菌液体発酵方式を採用することが多く、発酵後の生成物を後処理し、最終にシゾフィランを得る。しかしながら、発酵によるシゾフィランは、再溶解しにくく、生物吸収などの特性に不利であるため、その使用が極めて大きく制限されてしまう。
【0004】
ＣＮ１１２６９１１２５Ａでは、医薬品組成物、およびその調製方法、スキンケア製品が開示されている。医薬品組成物の調製方法は、基本培地でスエヒロタケを培養し、前記基本培地に甘草を添加し、継続して培養し、そして発酵生成物を収集することを含む。スエヒロタケの培養過程で、適当なタイミングで甘草を添加してスエヒロタケを培養することにより、発酵生成物の耐酸化性能、およびエラスターゼの抑制や、チロシナーゼの抑制のレベルを向上させることができ、該医薬品組成物の使用を拡張することができるが、該スエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量は向上の余地があり、耐酸化や抗老化能力が向上の余地がある。
【0005】
ＣＮ１１３３３７５４５Ａでは、スエヒロタケ発酵生成物およびその調製方法、スキンケア製品、スエヒロタケ培地が開示されている。スエヒロタケ発酵生成物の調製方法は、葛根を含有するスエヒロタケ培地でスエヒロタケを培養した後、発酵生成物を収集することを含む。培地に葛根粉末を添加してスエヒロタケを培養し、発酵生成物を収集する。
【0006】
したがって、スエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量をさらに向上させることができる培地およびその調製方法の開発が急務である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
従来技術の不足に対して、本発明は、植物組成物含有スエヒロタケ培地、およびその調製方法と使用を提供することを目的とする。本発明は、改良された基本培地にニンジンおよびイチゴが添加されており、両者が互いに協働して相乗効果を達成することで、発酵過程においてスエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量を向上させる。
【課題を解決するための手段】
【0008】
その目的を達成するために、本発明は、以下の技術案を採用する。
【0009】
第１態様として、本発明は、植物組成物と基本培地とを含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
【0010】
そのうち、前記植物組成物は、ニンジンとイチゴを含む。
【0011】
本発明では、改良された基本培地にニンジンおよびイチゴを添加しており、スエヒロタケ発酵過程において、ニンジンとイチゴが互いに協働して相乗効果を達成することで、発酵過程中にスエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量を向上させるだけでなく、最終に得られたスエヒロタケ発酵生成物の耐酸化能力および保湿能力を著しく向上させる。
【0012】
好ましくは、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地におけるニンジンの濃度は、０．１～１０ｇ／Ｌであり、たとえば０．１ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、２ｇ／Ｌ、３ｇ／Ｌ、４ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、６ｇ／Ｌ、７ｇ／Ｌ、８ｇ／Ｌ、９ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌなどであってもよく、３～４ｇ／Ｌであることが好ましい。
【0013】
好ましくは、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地におけるイチゴの濃度は、０．１～１０ｇ／Ｌであり、たとえば０．１ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、２ｇ／Ｌ、３ｇ／Ｌ、４ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、６ｇ／Ｌ、７ｇ／Ｌ、８ｇ／Ｌ、９ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌなどであってもよく、０．１～３ｇ／Ｌであることが好ましい。
【0014】
好ましくは、前記基本培地は、質量％で、グルコース５～１０％、リン酸二水素カリウム０．０５～０．２％、硫酸マグネシウム０．０１～０．０２％、トリプトン０．１～１％、酵母抽出物０．１～０．５％、水８５～９５％を含む。
【0015】
前記基本培地の総質量を１００％として、グルコースの含有量は、５～１０％であり、たとえば５％、６％、７％、８％、９％、１０％などであってもよい。
【0016】
前記基本培地の総質量を１００％として、リン酸二水素カリウムの含有量は、０．０５～０．２％であり、たとえば０．０５％、０．０６％、０．０８％、０．１％、０．１２％、０．１４％、０．１６％、０．１８％、０．２％などであってもよい。
【0017】
前記基本培地の総質量を１００％として、トリプトンの含有量は、０．１～１％であり、たとえば０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％などであってもよい。
【0018】
前記基本培地の総質量を１００％として、酵母抽出物の含有量は、０．１～０．５％であり、たとえば０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％などであってもよい。
【0019】
前記基本培地の総質量を１００％として、水の含有量は、８５～９０％であり、たとえば８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％などであってもよい。
【0020】
好ましくは、前記基本培地は、さらに栄養添加剤を含む。
【0021】
好ましくは、前記栄養添加剤は、前記基本培地の総質量の０．０１～０．２％を占め、たとえば０．０１％、０．０２％、０．０４％、０．０６％、０．０８％、０．１％、０．１２％、０．１４％、０．１６％、０．１８％、０．２％などであってもよい。
【0022】
本発明では、基本培地の滅菌条件として、前記滅菌の温度は１２０℃以上であり、たとえば１２０℃、１２１℃、１２２℃などであってもよく、滅菌の時間は２０～３０ｍｉｎであり、たとえば２０ｍｉｎ、２２ｍｉｎ、２４ｍｉｎ、２６ｍｉｎ、２８ｍｉｎ、３０
ｍｉｎなどであってもよい。
ｍｉｎなどであってもよい。
【0023】
好ましくは、前記栄養添加剤は、グルタミン酸、グルタチオン、ニコチンアミド、γ－ポリグルタミン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムまたはマンニトールのいずれか１種または少なくとも２種の組合せを含み、グルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せであることが好ましい。
【0024】
好ましくは、前記グルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの質量比は、（５～９）：（１～５）：（０．１～１）である。
【0025】
そのうち、「５～９」とは、たとえば、５、６、７、８、９などであってもよい。
【0026】
そのうち、「１～５」とは、たとえば、１、２、３、４、５などであってもよい。
【0027】
そのうち、「０．１～１」とは、たとえば、０．１、０．２、０．４、０．６、０．８、１などであってもよい。
【0028】
第２態様として、本発明は、植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法であって、
まず、ニンジンおよびイチゴを凍結乾燥処理した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、ニンジン粉末およびイチゴ粉末を得、基本培地における各成分を溶解させて培地混合液を得るステップ（ａ）と、
ニンジン粉末、イチゴ粉末および培地混合液を混合撹拌して、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得るステップ（ｂ）とを含む、第１態様に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法を提供する。
まず、ニンジンおよびイチゴを凍結乾燥処理した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、ニンジン粉末およびイチゴ粉末を得、基本培地における各成分を溶解させて培地混合液を得るステップ（ａ）と、
ニンジン粉末、イチゴ粉末および培地混合液を混合撹拌して、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得るステップ（ｂ）とを含む、第１態様に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法を提供する。
【0029】
好ましくは、ステップ（ａ）において、前記凍結乾燥処理の温度は、－３０～－２０℃であり、たとえば－３０℃、－２８℃、－２５℃、－２２℃、－２０℃などであってもよく、前記凍結乾燥処理の時間は、１０～１５ｈであり、たとえば１０ｈ、１１ｈ、１２ｈ、１３ｈ、１４ｈ、１５ｈなどであってもよい。
【0030】
好ましくは、ステップ（ａ）において、前記ニンジン粉末およびイチゴ粉末の粒径は、各々独立して１００～５００メッシュであり、たとえば１００メッシュ、２００メッシュ、３００メッシュ、４００メッシュ、５００メッシュなどであってもよい。
【0031】
好ましくは、ステップ（ａ）において、前記溶解のステップは、グルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、トリプトン、酵母抽出物および水を混合した後、まず、３～５℃／ｍｉｎ（たとえば、３℃／ｍｉｎ、３．５℃／ｍｉｎ、４℃／ｍｉｎ、４．５℃／ｍｉｎ、５℃／ｍｉｎなどであってもよい）の昇温速度、３００～５００ｒｐｍ（たとえば、３００ｒｐｍ、３５０ｒｐｍ、４００ｒｐｍ、４５０ｒｐｍ、５００ｒｐｍなどであってもよい）の回転数で３０～３５℃（たとえば、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃などであってもよい）に昇温し、そして、２～３℃／ｍｉｎ（たとえば、２℃／ｍｉｎ、２．２℃／ｍｉｎ、２．４℃／ｍｉｎ、２．６℃／ｍｉｎ、２．８℃／ｍｉｎ、３℃／ｍｉｎなどであってもよい）の昇温速度、１００～３００ｒｐｍ（たとえば、１００ｒｐｍ、１５０ｒｐｍ、２００ｒｐｍ、２５０ｒｐｍ、３００ｒｐｍなどであってもよい）の回転数で３５～４０℃（たとえば、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃、４０℃などであってもよい）に昇温し、最後、３５～４０℃（たとえば、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃、４０℃などであってもよい）で１～３ｍｉｎ（たとえば、１ｍｉｎ、１．５ｍｉｎ、２ｍｉｎ、２．５ｍｉｎ、３ｍｉｎなどであってもよい）維持する。
【0032】
好ましくは、ステップ（ｂ）において、前記混合撹拌の回転数は、５００～１０００ｒｐｍであり、たとえば５００ｒｐｍ、６００ｒｐｍ、７００ｒｐｍ、８００ｒｐｍ、９００ｒｐｍ、１０００ｒｐｍなどであってもよく、前記混合撹拌の時間は、５～２０ｍｉｎであり、たとえば５ｍｉｎ、６ｍｉｎ、８ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、１２ｍｉｎ、１４ｍｉｎ、１６ｍｉｎ、１８ｍｉｎ、２０ｍｉｎなどであってもよい。
【0033】
第３態様として、本発明は、第１態様に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地の、スエヒロタケ発酵における使用を提供する。
【0034】
第４態様として、本発明は、活性化されたスエヒロタケを、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地に接種し、発酵培養した後、スエヒロタケ発酵生成物を得るステップを含むスエヒロタケ発酵方法を提供する。
【0035】
好ましくは、前記発酵培養は、撹拌下で行い、発酵培養の回転数が１５０～２００ｒｐｍであり、たとえば１５０ｒｐｍ、１６０ｒｐｍ、１７０ｒｐｍ、１８０ｒｐｍ、２００ｒｐｍなどであってもよく、発酵培養の温度が２５～３０℃であり、たとえば２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃などであってもよく、発酵培養の時間が６０～８０ｈである。
【0036】
好ましくは、前記活性化されたスエヒロタケは、
斜面培地でスエヒロタケ菌種を活性化させ、菌糸が斜面全体に成長したまで、２５～３０℃（たとえば２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃などであってもよい）の条件下で５～７日間（たとえば、５日間、６日間、７日間などであってもよい）培養し、斜面の菌種を液体培地にに移して、３～４日間（たとえば、３日間、３．５日間、４日間などであってもよい）拡大培養し、活性化されたスエヒロタケシード液を得るというステップによって活性化されたものである。
斜面培地でスエヒロタケ菌種を活性化させ、菌糸が斜面全体に成長したまで、２５～３０℃（たとえば２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃などであってもよい）の条件下で５～７日間（たとえば、５日間、６日間、７日間などであってもよい）培養し、斜面の菌種を液体培地にに移して、３～４日間（たとえば、３日間、３．５日間、４日間などであってもよい）拡大培養し、活性化されたスエヒロタケシード液を得るというステップによって活性化されたものである。
【0037】
好ましくは、前記斜面培地は、ＰＤＡ斜面培地である。
【0038】
好ましくは、前記液体培地は、質量％で、グルコース１～５％、リン酸二水素カリウム０．０５～０．２％、硫酸マグネシウム０．０１～０．０２％、酵母エキス粉末０．１～０．２％、残量の水からなる。
【0039】
前記液体培地の総質量を１００％として、前記グルコースの含有量は、１～５％であり、たとえば１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％などであってもよい。
【0040】
前記液体培地の総質量を１００％として、前記リン酸二水素カリウムの含有量は、０．０５～０．２％であり、たとえば０．０５％、０．０６％、０．０８％、０．１％、０．１２％、０．１４％、０．１６％、０．１８％、０．２％などであってもよい。
【0041】
前記液体培地の総質量を１００％として、前記硫酸マグネシウムの含有量は、０．０１～０．０２％であり、たとえば０．０１％、０．０１２％、０．０１４％、０．０１６％、０．０１８％、０．０２％などであってもよい。
【0042】
前記液体培地の総質量を１００％として、酵母エキス粉末の含有量は、０．１～０．２％であり、たとえば０．１％、０．１２％、０．１４％、０．１６％、０．１８％、０．２％などであってもよい。
【0043】
好ましくは、前記活性化されたスエヒロタケの、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地
における接種量は、１～５ｖｏｌ％であり、たとえば１ｖｏｌ％、１．５ｖｏｌ％、２ｖｏｌ％、２．５ｖｏｌ％、３ｖｏｌ％、３．５ｖｏｌ％、４ｖｏｌ％、４．５ｖｏｌ％、５ｖｏｌ％などであってもよい。
における接種量は、１～５ｖｏｌ％であり、たとえば１ｖｏｌ％、１．５ｖｏｌ％、２ｖｏｌ％、２．５ｖｏｌ％、３ｖｏｌ％、３．５ｖｏｌ％、４ｖｏｌ％、４．５ｖｏｌ％、５ｖｏｌ％などであってもよい。
【0044】
第５態様として、本発明は、前記のスエヒロタケ発酵方法により調製されたスエヒロタケ発酵生成物を提供する。
【0045】
好ましくは、前記スエヒロタケ発酵生成物ではシゾフィランの含有量は、５～１５ｍｇ／ｍＬであり、たとえば５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬであってもよい。
【0046】
第６態様として、本発明は、スエヒロタケ発酵生成物の、化粧品の調製における使用を提供する。
【発明の効果】
【0047】
従来技術に対して、本発明は、以下の有益な効果を有する。
【0048】
（１）本発明は、改良された基本培地にニンジンおよびイチゴを添加しており、スエヒロタケ発酵過程において、ニンジンとイチゴが互いに協働して相乗効果を達成することで、発酵過程中にスエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量を向上させるだけでなく（シゾフィランの含有量が４．１４ｍｇ／ｍＬ以上であり）、最終に得られたスエヒロタケ発酵生成物の耐酸化能力および保湿能力を著しく向上させる。
【0049】
（２）本発明により調製されたスエヒロタケ発酵生成物は、スーパーオキシドアニオンラジカルに対する消去率が３９．８６％以上であり、ヒドロキシルラジカルに対する消去率が３７．９０％以上であり、ＤＰＰＨラジカルに対する抑制率が７４．９８％以上である。本発明の調製されたスエヒロタケ発酵生成物を用いて試験した１４日目の皮膚含水量が３５．８２％以上であり、２８日目の皮膚含水量が４３．０８％以上であり、１４日目の皮膚の水分損失が２７．２０ｇ／（ｍ２ｈ）以下であり、２８日目皮膚の水分損失が２２．５９ｇ／（ｍ２ｈ）以下である。本発明に係るスエヒロタケ発酵生成物は、エラスターゼに対する抑制率が５３．７３％以上であり、コラゲナーゼに対する抑制率が２７．３８％以上である。
【発明を実施するための形態】
【0050】
以下、具体的な実施形態によって、さらに本発明の技術案を説明する。当業者であれば、かかる実施例が本発明を理解するためのものに過ぎず、本発明を具体に制限するものと見なすべきではないということを理解すべきである。
【0051】
［調製例１］
本調製例は、ニンジン、イチゴおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
本調製例は、ニンジン、イチゴおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
【0052】
そのうち、ニンジンの濃度は３ｇ／Ｌであり、イチゴの濃度は２ｇ／Ｌである。
【0053】
そのうち、前記基本培地は、質量％で、グルコース６％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０１％、トリプトン０．４％、酵母抽出物０．２％、栄養添加剤０．０５％、残量の水からなる。そのうち、前記栄養添加剤は、質量比６：４：０．２のグルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せである。
【0054】
前記植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法は、以下のステップを含む。
【0055】
（ａ）まず、ニンジンおよびイチゴを－８０℃で１５ｈ凍結乾燥した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、２００メッシュのニンジン粉末および２００メッシュのイチゴ粉末を得、それと同時に、上記割合でグルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、トリプトン、酵母抽出物および水を混合した後、まず、４℃／ｍｉｎの昇温速度、４００ｒｐｍの回転数で３２℃に昇温し、そして２．５℃／ｍｉｎの昇温速度、２００ｒｐｍの回転数で３７℃に昇温し、最後、３７℃で２ｍｉｎ維持して、培地混合液を得た。
【0056】
（ｂ）ニンジン粉末、イチゴ粉末および培地混合液を混合し、６００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ撹拌し、滅菌して用意した。
【0057】
（ｃ）無菌条件で、栄養添加剤を植物組成物含有スエヒロタケ培地に添加し、０．２２μｍの濾過膜を通過して用意し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得た。
【0058】
［調製例２］
本調製例は、ニンジン、イチゴおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
本調製例は、ニンジン、イチゴおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
【0059】
そのうち、ニンジンの濃度は４ｇ／Ｌであり、イチゴの濃度は１ｇ／Ｌである。
【0060】
そのうち、前記基本培地は、質量％で、グルコース５％、リン酸二水素カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０２％、トリプトン０．６％、酵母抽出物０．２％、栄養添加剤０．０４％、残量の水からなる。そのうち、前記栄養添加剤は、質量比８：２：０．１のグルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せである。
【0061】
前記植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法は、以下のステップを含む。
【0062】
（ａ）まず、ニンジンおよびイチゴを－８０℃で１０ｈ凍結乾燥した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、３００メッシュのニンジン粉末および３００メッシュのイチゴ粉末を得、それと同時に、上記割合でグルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、トリプトン、酵母抽出物および水を混合した後、まず、３℃／ｍｉｎの昇温速度、３００ｒｐｍの回転数で３０℃に昇温し、そして２℃／ｍｉｎの昇温速度、１００ｒｐｍの回転数で３５℃に昇温し、最後、３５℃で１ｍｉｎ維持して、培地混合液を得た。
【0063】
（ｂ）ニンジン粉末、イチゴ粉末および培地混合液を混合し、６００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ撹拌し、滅菌して用意した。
【0064】
（ｃ）無菌条件で、栄養添加剤を植物組成物含有スエヒロタケ培地に添加し、０．２２μｍの濾過膜を通過して用意し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得た。
【0065】
［調製例３］
本調製例は、ニンジン、イチゴおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
本調製例は、ニンジン、イチゴおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
【0066】
そのうち、ニンジンの濃度は３．５ｇ／Ｌであり、イチゴの濃度は１．５ｇ／Ｌである。
【0067】
そのうち、前記基本培地は、質量％で、グルコース８％、リン酸二水素カリウム０．０５％、硫酸マグネシウム０．０２％、トリプトン０．６％、酵母抽出物０．２％、栄養添
加剤０．０６％、残量の水からなる。そのうち、前記栄養添加剤は、質量比５：５：０．５のグルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せである。
加剤０．０６％、残量の水からなる。そのうち、前記栄養添加剤は、質量比５：５：０．５のグルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せである。
【0068】
前記植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法は、以下のステップを含む。
【0069】
（ａ）まず、ニンジンおよびイチゴを－８０℃で１２ｈ凍結乾燥した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、２００メッシュのニンジン粉末および２００メッシュのイチゴ粉末を得、それと同時に、上記割合でグルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、トリプトン、酵母抽出物および水を混合した後、まず、３℃／ｍｉｎの昇温速度、３００ｒｐｍの回転数で３０℃に昇温し、そして２℃／ｍｉｎの昇温速度、１００ｒｐｍの回転数で３５℃に昇温し、最後、３５℃で１ｍｉｎ維持して、培地混合液を得た。
【0070】
（ｂ）ニンジン粉末、イチゴ粉末および培地混合液を混合し、６００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ撹拌し、滅菌して用意した。
【0071】
（ｃ）無菌条件で、栄養添加剤を植物組成物含有スエヒロタケ培地に添加し、０．２２μｍの濾過膜を通過して用意し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得た。
【0072】
［調製例４］
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地には、ニンジンの濃度が２ｇ／Ｌであり、イチゴの濃度が３ｇ／Ｌである点だけで調製例１と異なる。
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地には、ニンジンの濃度が２ｇ／Ｌであり、イチゴの濃度が３ｇ／Ｌである点だけで調製例１と異なる。
【0073】
［調製例５］
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地には、前記ニンジンの濃度が５ｇ／Ｌであり、イチゴの濃度が０．０５ｇ／Ｌである点だけで調製例１と異なる。
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地には、前記ニンジンの濃度が５ｇ／Ｌであり、イチゴの濃度が０．０５ｇ／Ｌである点だけで調製例１と異なる。
【0074】
［調製例６］
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比６：４のグルタミン酸とグルタチオンとの組合せである点だけで調製例１と異なる。
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比６：４のグルタミン酸とグルタチオンとの組合せである点だけで調製例１と異なる。
【0075】
［調製例７］
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比４：０．１のグルタチオンとニコチンアミドとの組合せである点だけで調製例１と異なる。
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比４：０．１のグルタチオンとニコチンアミドとの組合せである点だけで調製例１と異なる。
【0076】
［調製例８］
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比６：０．１のグルタミン酸とニコチンアミドとの組合せである点だけで調製例１と異なる。
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比６：０．１のグルタミン酸とニコチンアミドとの組合せである点だけで調製例１と異なる。
【0077】
［調製例９］
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比６：４：０．１のグルタミン酸、グルタチオンおよびγ－ポリグルタミン酸ナトリウムの組合せである点だけで調製例１と異なる。
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比６：４：０．１のグルタミン酸、グルタチオンおよびγ－ポリグルタミン酸ナトリウムの組合せである点だけで調製例１と異なる。
【0078】
［調製例１０］
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比６：４：０．１のグルタチオン、マンニトールおよびγ－ポリグルタミン酸ナトリウムの組合せである点だけで調製例１と異なる。
本調製例は、植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供し、前記栄養添加剤が質量比６：４：０．１のグルタチオン、マンニトールおよびγ－ポリグルタミン酸ナトリウムの組合せである点だけで調製例１と異なる。
【0079】
［比較調製例１］
本調製例は、葛根と基本培地を含む葛根含有スエヒロタケ培地を提供する。葛根の濃度は１ｇ／Ｌであり、前記基本培地は、質量％で、グルコース６％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０１５％、酵母エキス粉末０．５％、酵母エキス０．１５％、残量の水を含む。
本調製例は、葛根と基本培地を含む葛根含有スエヒロタケ培地を提供する。葛根の濃度は１ｇ／Ｌであり、前記基本培地は、質量％で、グルコース６％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０１５％、酵母エキス粉末０．５％、酵母エキス０．１５％、残量の水を含む。
【0080】
前記葛根含有スエヒロタケ培地の調製方法は、以下のステップを含む。
【0081】
（ａ）葛根を粉砕して篩にかけて、粒径２００メッシュの葛根粉末を得、グルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、酵母エキス粉末、酵母エキスおよび水を混合した後、まず、４℃／ｍｉｎの昇温速度、４００ｒｐｍの回転数で３２℃に昇温し、そして２．５℃／ｍｉｎの昇温速度、２００ｒｐｍの回転数で３７℃に昇温し、最後、３７℃で２ｍｉｎ維持して、培地混合液を得た。
【0082】
（ｂ）葛根粉末と培地混合液を混合し、６００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ撹拌し、前記葛根含有スエヒロタケ培地を得た。
【0083】
［比較調製例２］
本調製例は、甘草および基本培地を含む甘草含有スエヒロタケ培地を提供する。甘草の濃度は１ｇ／Ｌであり、前記基本培地は、質量％で、グルコース６％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０１５％、酵母エキス粉末０．５％、酵母エキス０．１５％、残量の水を含む。
本調製例は、甘草および基本培地を含む甘草含有スエヒロタケ培地を提供する。甘草の濃度は１ｇ／Ｌであり、前記基本培地は、質量％で、グルコース６％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０１５％、酵母エキス粉末０．５％、酵母エキス０．１５％、残量の水を含む。
【0084】
前記甘草含有スエヒロタケ培地の調製方法は、以下のステップを含む。
【0085】
（ａ）甘草を粉砕して篩にかけて、粒径２００メッシュの葛根粉末を得、グルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、酵母エキス粉末、酵母エキスおよび水を混合した後、まず４℃／ｍｉｎの昇温速度、４００ｒｐｍの回転数で３２℃に昇温し、そして、２．５℃／ｍｉｎの昇温速度、２００ｒｐｍの回転数で３７℃に昇温し、最後、３７℃で２ｍｉｎ維持して、培地混合液を得た。
【0086】
（ｂ）甘草粉末と培地混合液を混合し、６００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ撹拌し、前記甘草含有スエヒロタケ培地を得た。
【0087】
［比較調製例３］
本比較調製例は、ニンジンおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
本比較調製例は、ニンジンおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
【0088】
そのうち、ニンジンの濃度は５ｇ／Ｌである。
【0089】
そのうち、前記基本培地は、質量％で、グルコース６％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０１％、トリプトン０．４％、酵母抽出物０．２％、栄養添加剤０．０５％、残量の水からなる。そのうち、前記栄養添加剤は、質量比６：４：０．２のグルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せである。
【0090】
前記植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法は、以下のステップを含む。
【0091】
（ａ）まず、ニンジンを－８０℃で１５ｈ凍結乾燥した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、２００メッシュのニンジン粉末を得、それと同時に、上記割合でグルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、トリプトン、酵母抽出物および水を混合した後、ま
ず４℃／ｍｉｎの昇温速度、４００ｒｐｍの回転数で３２℃に昇温し、そして２．５℃／ｍｉｎの昇温速度、２００ｒｐｍの回転数で３７℃に昇温し、最後、３７℃で２ｍｉｎ維持して、培地混合液を得た。
ず４℃／ｍｉｎの昇温速度、４００ｒｐｍの回転数で３２℃に昇温し、そして２．５℃／ｍｉｎの昇温速度、２００ｒｐｍの回転数で３７℃に昇温し、最後、３７℃で２ｍｉｎ維持して、培地混合液を得た。
【0092】
（ｂ）ニンジン粉末と培地混合液を混合し、６００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ撹拌し、滅菌して用意した。
【0093】
（ｃ）無菌条件で、栄養添加剤を植物組成物含有スエヒロタケ培地に添加し、０．２２μｍの濾過膜を通過して用意し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得た。
【0094】
［比較調製例４］
本比較調製例は、イチゴおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
本比較調製例は、イチゴおよび基本培地を含む植物組成物含有スエヒロタケ培地を提供する。
【0095】
そのうち、イチゴの濃度は５ｇ／Ｌである。
【0096】
そのうち、前記基本培地は、質量％で、グルコース６％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０１％、トリプトン０．４％、酵母抽出物０．２％、栄養添加剤０．０５％、残量の水からなる。そのうち、前記栄養添加剤は、質量比６：４：０．２のグルタミン酸、グルタチオンおよびニコチンアミドの組合せである。
【0097】
前記植物組成物含有スエヒロタケ培地の調製方法は、以下のステップを含む。
【0098】
（ａ）まず、イチゴを－８０℃で１５ｈ凍結乾燥した後、それぞれ粉砕して篩にかけて、２００メッシュのイチゴ粉末を得、それと同時に、上記割合でグルコース、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、トリプトン、酵母抽出物および水を混合した後、まず４℃／ｍｉｎの昇温速度、４００ｒｐｍの回転数で３２℃に昇温し、そして２．５℃／ｍｉｎの昇温速度、２００ｒｐｍの回転数で３７℃に昇温し、最後、３７℃で２ｍｉｎ維持して、培地混合液を得た。
【0099】
（ｂ）イチゴ粉末と培地混合液を混合し、６００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ撹拌し、滅菌して用意した。
【0100】
（ｃ）無菌条件で、栄養添加剤を植物組成物含有スエヒロタケ培地に添加し、０．２２μｍの濾過膜を通過して用意し、前記植物組成物含有スエヒロタケ培地を得た。
【0101】
［実施例１］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供する。具体的には、前記調製方法は以下のステップを含む。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供する。具体的には、前記調製方法は以下のステップを含む。
【0102】
（１）ＰＤＡ斜面培地でスエヒロタケ菌種を活性化させ、菌糸が斜面全体に成長したまで、２７℃、１６０ｒｐｍの条件下で６日間培養し、斜面の菌種を液体培地に移して（前記液体培地は、質量％で、グルコース３％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０１％、酵母エキス０．１％、残量の水からなる）、３日間拡大培養し、活性化されたスエヒロタケシード液を得た。
【0103】
（２）活性化されたスエヒロタケシード液を、２ｖｏｌ％の接種量で、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に接種し、培養した後（前記培養は撹拌下で行い、培養の回転数が１６０ｒｐｍであり、培養の温度が２７℃であり、培養の時間が７２ｈであり）、スエヒロタケ発酵生成物を収集した。
【0104】
［実施例２］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例２に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例２に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0105】
［実施例３］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例３に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例３に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0106】
［実施例４］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例４に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例４に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0107】
［実施例５］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例５に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例５に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0108】
［実施例６］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例６に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例６に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0109】
［実施例７］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例７に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例７に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0110】
［実施例８］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例８に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例８に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0111】
［実施例９］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例９に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例９に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0112】
［実施例１０］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例１０に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を調製例１０に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0113】
［比較例１］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を比較調製例１に係る培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を比較調製例１に係る培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0114】
［比較例２］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を比較調製例２に係る培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を比較調製例２に係る培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0115】
［比較例３］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を比較調製例３に係る培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を比較調製例３に係る培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0116】
［比較例４］
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を比較調製例４に係る培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
本実施例は、スエヒロタケ発酵生成物の調製方法を提供し、調製例１に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地を比較調製例４に係る培地に置き換える点だけで実施例１と異なる。
【0117】
［試験例１］
シゾフィランの含有量の測定
試験サンプル：実施例１～１０に係るスエヒロタケ発酵生成物、および比較例１～４に係るスエヒロタケ発酵生成物。
シゾフィランの含有量の測定
試験サンプル：実施例１～１０に係るスエヒロタケ発酵生成物、および比較例１～４に係るスエヒロタケ発酵生成物。
【0118】
試験原理：シゾフィランの含有量は、発酵生成物の重要な判断指標とすることもできる。計算方法は、シゾフィランの含有量＝総糖の含有量－還元糖の含有量である。
【0119】
試験方法：
Ｉ．硫酸－フェノール法により発酵生成物の総糖の含有量を測定した。多糖は、濃硫酸の作用下で、まず単糖に加水分解され、さらに迅速に脱水してフルフラール誘導体を生成し、フェノールと反応してオレンジ色の溶液を生成し、４９０ｎｍに極大吸収を有する。グルコースを標準品として、発酵生成物の総糖の含有量を測定した。具体的な操作ステップは以下の通りである。
Ｉ．硫酸－フェノール法により発酵生成物の総糖の含有量を測定した。多糖は、濃硫酸の作用下で、まず単糖に加水分解され、さらに迅速に脱水してフルフラール誘導体を生成し、フェノールと反応してオレンジ色の溶液を生成し、４９０ｎｍに極大吸収を有する。グルコースを標準品として、発酵生成物の総糖の含有量を測定した。具体的な操作ステップは以下の通りである。
【0120】
（１）１０．０ｍＬの栓付試験管に、一定の倍数に希釈した試験液を１．０ｍＬ添加した。
【0121】
（２）５％のフェノール溶液を１．０ｍＬ添加してから、迅速に液面に垂直のように５．０ｍＬの濃硫酸を添加し、１０ｍｉｎ静置した。ボルテックス振とう機を用いて反応液を十分に混合させた後、栓付試験管を３０℃水浴に置き、２０ｍｉｎ反応した。
【0122】
（３）対応する試薬によりブランクゼロ点の調整を行い、４９０ｎｍにおいて吸光度を測定した。
【0123】
計算式：総糖の含有量（ｍｇ／ｍＬ）＝吸光度に対応するグルコースの濃度×希釈倍数Ｎ。
【0124】
ＩＩ．ＤＮＳ法により、発酵生成物還元糖の含有量を測定した。還元糖は、アルカリ性条件下で糖酸および他の生成物に酸化されることができるが、酸化剤である３，５－ジニトロサリチル酸は、赤褐色の３－アミノ－５－ニトロサリチル酸に還元された。一定の範囲内、還元糖の量と赤褐色物質の色の濃淡とは比例関係にあり、分光光度計により５５０ｎｍにおいてその吸光度を測定した。グルコースを標準品として、発酵生成物の還元糖の含有量を測定した。具体的な操作ステップは、以下の通りである。
【0125】
（１）１０ｍＬの栓付試験管に、一定の倍数に希釈した試験液を１．０ｍＬ添加した。
【0126】
（２）ＤＮＳ溶液を３．０ｍＬ添加し、沸騰水浴で５ｍｉｎの後、顕色し、冷却した後、水で２５．０ｍＬまでメスアップし、十分に振り混ぜた。
【0127】
（３）対応する試薬によりブランクゼロ点の調整を行い、５５０ｎｍにおいて吸光度を測定した。
【0128】
計算式：還元糖の含有量（ｍｇ／ｍＬ）＝吸光度に対応するグルコースの濃度×希釈倍数Ｎ。
【0129】
具体的な試験結果を表１に示す。
【0130】
【表1】
【0131】
表１の試験結果から分かるように、本発明により調製されたスエヒロタケ発酵生成物は、総糖の含有量が５～１０ｍｇ／ｍＬであり、還元糖の含有量が０．５７～０．８３ｍｇ／ｍＬ以上であり、シゾフィランの含有量が４．１４ｍｇ／ｍＬ以上である。これにより、本発明は、改良された基本培地にニンジンおよびイチゴを添加することで、スエヒロタケ発酵生成物におけるシゾフィランの含有量を向上させることができることが判明した。
【0132】
［試験例２］
耐酸化能力試験
試験サンプル：実施例１～１０に係るスエヒロタケ発酵生成物、および比較例１～４に係るスエヒロタケ発酵生成物。
耐酸化能力試験
試験サンプル：実施例１～１０に係るスエヒロタケ発酵生成物、および比較例１～４に係るスエヒロタケ発酵生成物。
【0133】
試験方法：
１、スーパーオキシドアニオンラジカルに対する消去能力についての評価
０．０５ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ＝８．２のＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を４．５ｍＬ取り、２５℃の水浴釜で２０ｍｉｎ予熱した。さらに、１ｍＬの試料および０．４ｍＬの２５ｍｍｏｌ／Ｌのピロガロール溶液を添加し、均一に混合した後、２５℃の水浴で５ｍｉｎ反応させ、８ｍｏｌ／ＬのＨＣｌを１．０ｍＬ添加して反応を終止させた。Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩
衝液を参照として、２９９ｎｍにおいて吸光度値を測定した。ブランクについては、１ｍＬの試料の溶媒でサンプルを代替した。
１、スーパーオキシドアニオンラジカルに対する消去能力についての評価
０．０５ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ＝８．２のＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を４．５ｍＬ取り、２５℃の水浴釜で２０ｍｉｎ予熱した。さらに、１ｍＬの試料および０．４ｍＬの２５ｍｍｏｌ／Ｌのピロガロール溶液を添加し、均一に混合した後、２５℃の水浴で５ｍｉｎ反応させ、８ｍｏｌ／ＬのＨＣｌを１．０ｍＬ添加して反応を終止させた。Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩
衝液を参照として、２９９ｎｍにおいて吸光度値を測定した。ブランクについては、１ｍＬの試料の溶媒でサンプルを代替した。
【0134】
スーパーオキシドアニオンラジカル消去率（％）＝［１－（Ａ２／Ａ１）］×１００％
（式中、Ａ１は、ブランクの吸光度値であり、Ａ２は、サンプルの吸光度値である。）
（式中、Ａ１は、ブランクの吸光度値であり、Ａ２は、サンプルの吸光度値である。）
【0135】
２、ヒドロキシルラジカルに対する消去能力についての評価
２５ｍＬのキュベットに、順次に２ｍｍｏｌ／ＬのＦｅＳＯ４を３ｍＬ、１ｍｍｏｌ／ＬのＨ２Ｏ２を３ｍＬ添加し、均一に振り混ぜ、次に、６ｍｍｏｌ／Ｌのサリチル酸を３ｍＬ添加し、均一に振り混ぜ、３７℃の水浴で１５ｍｉｎ加熱した後に取り出して、その吸光度を測定した。それぞれ、一定濃度の試験液を添加し、均一に振り混ぜ、続いて、水浴で１５ｍｉｎ加熱して、取り出してその吸光度を測定した。下記式は、試験液のヒドロキシルラジカル（・ＯＨ）に対する消去率である。
２５ｍＬのキュベットに、順次に２ｍｍｏｌ／ＬのＦｅＳＯ４を３ｍＬ、１ｍｍｏｌ／ＬのＨ２Ｏ２を３ｍＬ添加し、均一に振り混ぜ、次に、６ｍｍｏｌ／Ｌのサリチル酸を３ｍＬ添加し、均一に振り混ぜ、３７℃の水浴で１５ｍｉｎ加熱した後に取り出して、その吸光度を測定した。それぞれ、一定濃度の試験液を添加し、均一に振り混ぜ、続いて、水浴で１５ｍｉｎ加熱して、取り出してその吸光度を測定した。下記式は、試験液のヒドロキシルラジカル（・ＯＨ）に対する消去率である。
【0136】
ヒドロキシルラジカル消去率（％）＝［Ａ１－Ａ２－（Ａ１－Ａ３）］／Ａ１×１００％
（式中、Ａ１は薬品を添加しない前の反応系の吸光度値であり、Ａ２はサンプルによる・ＯＨ消去後の反応系の吸光度値であり、Ａ３はブランクによる・ＯＨ消去後の反応系の吸光度値である。）
（式中、Ａ１は薬品を添加しない前の反応系の吸光度値であり、Ａ２はサンプルによる・ＯＨ消去後の反応系の吸光度値であり、Ａ３はブランクによる・ＯＨ消去後の反応系の吸光度値である。）
【0137】
３、ＤＰＰＨラジカルに対する消去能力についての評価
試験は、Ｌａｒｒａｕｒｉ ＪＡに規定する方法を参照して、２０ｍｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨ溶液を調製した。被験サンプル溶液：超純水で実施例１～１０に係るシゾフィラン組成物および比較例１～５に係る組成物を希釈し、質量濃度０．１％の溶液を得た。試験管へ被験サンプル溶液２．０ｍＬおよび２０ｍｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨ溶液２．０ｍＬを取り、均一に混合した後、３０ｍｉｎ反応させ、５１７ｎｍにおいて吸光度値を測定した。無水エタノールをブランクとし、吸光度値からＤＰＰＨ抑制率を算出した。
試験は、Ｌａｒｒａｕｒｉ ＪＡに規定する方法を参照して、２０ｍｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨ溶液を調製した。被験サンプル溶液：超純水で実施例１～１０に係るシゾフィラン組成物および比較例１～５に係る組成物を希釈し、質量濃度０．１％の溶液を得た。試験管へ被験サンプル溶液２．０ｍＬおよび２０ｍｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨ溶液２．０ｍＬを取り、均一に混合した後、３０ｍｉｎ反応させ、５１７ｎｍにおいて吸光度値を測定した。無水エタノールをブランクとし、吸光度値からＤＰＰＨ抑制率を算出した。
【0138】
ＤＰＰＨラジカル抑制率（％）＝［１－（Ａ１－Ａ２）／Ａ３］×１００％
（ただし、Ａ１は２．０ｍＬのＤＰＰＨ溶液と２．０ｍＬの被験サンプル溶液の吸光度であり、Ａ２は２．０ｍＬの被験サンプル溶液と２．０ｍＬの無水エタノールの吸光度であり、Ａ３は２．０ｍＬのＤＰＰＨ溶液と２．０ｍＬの無水エタノールの吸光度であり、３回平行試験して平均値を取った。）
（ただし、Ａ１は２．０ｍＬのＤＰＰＨ溶液と２．０ｍＬの被験サンプル溶液の吸光度であり、Ａ２は２．０ｍＬの被験サンプル溶液と２．０ｍＬの無水エタノールの吸光度であり、Ａ３は２．０ｍＬのＤＰＰＨ溶液と２．０ｍＬの無水エタノールの吸光度であり、３回平行試験して平均値を取った。）
【0139】
具体的な試験結果を表２に示す。
【0140】
【表2】
【0141】
表２の試験データから分かるように、本発明により調製されたスエヒロタケ発酵生成物は、良好な耐酸化、およびＤＰＰＨラジカルを消去する能力を有し、スーパーオキシドアニオンラジカルに対する消去率が３９．８６％以上であり、ヒドロキシルラジカルに対する消去率が３７．９０％以上であり、ＤＰＰＨラジカルに対する抑制率が７４．９８％以上である。本発明に係る植物組成物含有スエヒロタケ培地はスエヒロタケの発酵を促進できること、得られたスエヒロタケ発酵生成物はさらに、ＤＰＰＨラジカル、ヒドロキシルラジカルおよびスーパーオキシドアニオンラジカルに対して消去作用し、皮膚組織の耐酸化能力を補強させ、皮膚組織のラジカルの含有量を低下させることができることが判明した。
【0142】
［試験例３］
保湿性能試験
試験サンプル：実施例１～１０に係るスエヒロタケ発酵生成物、および比較例１～２に係るスエヒロタケ発酵生成物。
保湿性能試験
試験サンプル：実施例１～１０に係るスエヒロタケ発酵生成物、および比較例１～２に係るスエヒロタケ発酵生成物。
【0143】
試験方法：
乾燥肌の人群れを選択し、年齢が２０～４５歳であり、ランダムに１４群に分け、１群当たり１０人である。被験前１５日間、被験部位は、いずれかの製品（化粧品、外用薬剤、内服健康製品）も使用不可である。試験前に、被験者には、顔面を洗浄し、洗浄後の２ｈに気候制御室（２２±１℃、相対湿度５０％）に入り、リラックスしたまま２０ｍｉｎ以上静かに座ったことを求めた。
乾燥肌の人群れを選択し、年齢が２０～４５歳であり、ランダムに１４群に分け、１群当たり１０人である。被験前１５日間、被験部位は、いずれかの製品（化粧品、外用薬剤、内服健康製品）も使用不可である。試験前に、被験者には、顔面を洗浄し、洗浄後の２ｈに気候制御室（２２±１℃、相対湿度５０％）に入り、リラックスしたまま２０ｍｉｎ以上静かに座ったことを求めた。
【0144】
試験中、ランダムテーブルに従って半分の顔の試験を行った。ボランティアの左右鼻唇溝の部分を選択して皮膚含水量（％）および水分損失（ＴＥＷＬ）（［ｇ／（ｍ２ｈ）］）試験を行い、３つの値の平均値を、左右鼻唇溝の含水量データ（ｄ０）および鼻唇溝の皮膚の水分損失（ＴＥＷＬ）のデータ（ｄ０）とする。試験終了後、ボランティアが要求に従って使用する必要があり、２８日間連続使用し、試験者には試験の１４日目（ｄ１４）および２８日目（ｄ２８）に再訪問することを求めた。試験結果を表３に示す。
【0145】
【表3】
【0146】
表３の試験結果から分かるように、本発明の実施例１～１０で調製したスエヒロタケ発酵生成物は、比較例１～４のスエヒロタケ発酵生成物に比較して、皮膚に対する良好な保湿効果を有し、皮膚角質層の含水量を明らかに向上させ、皮膚の外への水分損失を減少させることができる。具体的には、試験の１４日目の皮膚含水量が３５．８２％以上であり、２８日目の皮膚含水量が４３．０８％以上であり、１４日目の皮膚の水分損失が２７．２０ｇ／（ｍ２ｈ）以下であり、２８日目の皮膚の水分損失が２２．５９ｇ／（ｍ２ｈ）以下であると体現した。
【0147】
［試験例４］
抗老化能力試験
試験サンプル：実施例１～１０に係るスエヒロタケ発酵生成物、および比較例１～４に係るスエヒロタケ発酵生成物。
抗老化能力試験
試験サンプル：実施例１～１０に係るスエヒロタケ発酵生成物、および比較例１～４に係るスエヒロタケ発酵生成物。
【0148】
試験方法：
（１）エラスターゼ抑制率
５０μＬのサンプル、１００μＬの０．９Ｕ／ｍＬのエラスターゼおよび１００μＬのＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を、２５℃で２０ｍｉｎインキュベートした。その後、５０μＬのＭＡＡＰＶＮ溶液を添加して反応を開始させた。サンプルブランクについては、ＭＡＡＰＶＮを代替して５０μＬのＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を添加した。２５℃で６０ｍｉｎインキュベートした後、４１０ｎｍにおいて吸光度値を測定した。
（１）エラスターゼ抑制率
５０μＬのサンプル、１００μＬの０．９Ｕ／ｍＬのエラスターゼおよび１００μＬのＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を、２５℃で２０ｍｉｎインキュベートした。その後、５０μＬのＭＡＡＰＶＮ溶液を添加して反応を開始させた。サンプルブランクについては、ＭＡＡＰＶＮを代替して５０μＬのＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を添加した。２５℃で６０ｍｉｎインキュベートした後、４１０ｎｍにおいて吸光度値を測定した。
【0149】
【数1】
（式中、Ａ１はサンプルを添加し、ＭＡＡＰＶＮを添加したものであり、Ａ２はサンプルを添加し、ＭＡＡＰＶＮを添加しなかったものであり、Ｂ１はサンプルを添加せず、ＭＡＡＰＶＮを添加したものであり、Ｂ２はサンプルを添加せず、ＭＡＡＰＶＮを添加しなかったものであり、Ｔ’は対応するサンプルのエラスターゼに対する抑制率（％）である。）
【0150】
（２）コラゲナーゼに対する抑制活性
２ｍＬの試験管には、試験群として、それぞれ２５μＬのコラゲナーゼ（１ｍｇ／ｍＬ）、５０ｍＭのＴＥＳ緩衝液およびサンプル（２ｍｇ／ｍＬ）を添加し、ブランクとして、７５μＬのＴＥＳ緩衝液を含み、陰性対照群として、２５μＬのプロテイナーゼおよび５０μＬのＴＥＳ緩衝液を含み、陽性対照群として、それぞれ２５μＬのプロテイナーゼ、ＴＥＳ緩衝液およびＥＤＴＡ（１ｍｇ／ｍＬ）を含み、溶媒対照群Ｔとして、それぞれ、２５μＬのプロテイナーゼ、ＴＥＳ緩衝液およびサンプルを溶解させる溶媒を含んだ。３７℃のインキュベーターで２０ｍｉｎ培養した後、それぞれ１００μＬのＦＡＬＧＰＡを添加し、３７℃で継続して１ｈ培養した。そして、各試験管に１００μＬの２００ｍＭのクエン酸塩緩衝液および１００μＬのニンヒドリン溶液を添加した。すべての試験管を１００℃の水浴釜で水浴を５ｍｉｎ行い、室温まで冷却させた後、それぞれ２００μＬの５０％のイソプロパノール溶液を添加した。均一に混合した後、試験管における溶液をそれぞれ２００μＬ取って９６ウェルプレートへ転移し、多機能蛍光マイクロプレートリーダーを用いて５４０ｎｍにおいて吸光度Ａを測定した。３回繰り返した。計算してエラスターゼ抑制率を得た。
２ｍＬの試験管には、試験群として、それぞれ２５μＬのコラゲナーゼ（１ｍｇ／ｍＬ）、５０ｍＭのＴＥＳ緩衝液およびサンプル（２ｍｇ／ｍＬ）を添加し、ブランクとして、７５μＬのＴＥＳ緩衝液を含み、陰性対照群として、２５μＬのプロテイナーゼおよび５０μＬのＴＥＳ緩衝液を含み、陽性対照群として、それぞれ２５μＬのプロテイナーゼ、ＴＥＳ緩衝液およびＥＤＴＡ（１ｍｇ／ｍＬ）を含み、溶媒対照群Ｔとして、それぞれ、２５μＬのプロテイナーゼ、ＴＥＳ緩衝液およびサンプルを溶解させる溶媒を含んだ。３７℃のインキュベーターで２０ｍｉｎ培養した後、それぞれ１００μＬのＦＡＬＧＰＡを添加し、３７℃で継続して１ｈ培養した。そして、各試験管に１００μＬの２００ｍＭのクエン酸塩緩衝液および１００μＬのニンヒドリン溶液を添加した。すべての試験管を１００℃の水浴釜で水浴を５ｍｉｎ行い、室温まで冷却させた後、それぞれ２００μＬの５０％のイソプロパノール溶液を添加した。均一に混合した後、試験管における溶液をそれぞれ２００μＬ取って９６ウェルプレートへ転移し、多機能蛍光マイクロプレートリーダーを用いて５４０ｎｍにおいて吸光度Ａを測定した。３回繰り返した。計算してエラスターゼ抑制率を得た。
【0151】
コラゲナーゼ抑制率（％）＝（Ａｃ－Ａｔ／Ａｃ）×１００％
【0152】
ここで、Ａｃは溶媒対照群の吸光度値であり、Ａｔは陽性対照群または試験群の吸光度値である。試験結果は平均値を取った。
【0153】
具体的な試験結果を表４に示す。
【0154】
【表4】
【0155】
表４の試験結果から分かるように、本発明に係るスエヒロタケ発酵生成物は、エラスターゼに対する抑制率が５３．７３％以上であり、コラゲナーゼに対する抑制率が２７．３８％以上であることから、本発明に記載の植物組成物含有スエヒロタケ培地はスエヒロタケの発酵を促進できること、得られたスエヒロタケ発酵生成物は活性化されて皮膚自身のコラーゲンの合成を促進し、セラミドの合成を刺激することができ、エラスターゼ抑制率およびコラゲナーゼ抑制率を効果的に向上させることができることが判明した。
【0156】
本発明は上記実施例によって本発明の植物組成物含有スエヒロタケ培地、およびその調製方法と使用を説明したが、本発明は上記実施例に限られるものではなく、即ち、本発明は上記実施例によって実施しなければならないものではないと出願人は声明する。当業者は、本発明に対する如何なる改良、本発明の製品の各原料への等価置換及び補助成分の追加、具体的な実施形態の選択等はいずれも本発明の保護範囲及び開示範囲に入ることを明らかにすべきである。