特開 2024-26159 アクチビン２型受容体結合タンパク質及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024026159

(43)【公開日】2024-02-28

(54)【発明の名称】アクチビン２型受容体結合タンパク質及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240220BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240220BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240220BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240220BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240220BHJP

   C12N 5/071 20100101ALI20240220BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 19/10 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240220BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N5/071

C12P21/08

A61K38/16

A61K45/00

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K39/395 C

A61K39/395 L

A61P21/00

A61P1/16

A61P11/00

A61P9/00

A61P27/02

A61P3/00

A61P3/04

A61P3/10

A61P29/00

A61P37/06

A61P9/04

A61P9/12

A61P19/00

A61P19/10

A61P25/00

A61P25/28

A61P17/02

A61P35/00

A61P43/00 121

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023198762

(22)【出願日】2023-11-24

(62)【分割の表示】P 2021194152の分割

【原出願日】2017-03-10

(31)【優先権主張番号】62/306,354

(32)【優先日】2016-03-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】517194542

【氏名又は名称】アクセレロン ファーマ インコーポレーテッド

(71)【出願人】

【識別番号】513010789

【氏名又は名称】アディマブ， エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】クマール，ラビンドラ

(72)【発明者】

【氏名】ベルク，ジョナサン

(72)【発明者】

【氏名】グリンバーグ，アシャ

(72)【発明者】

【氏名】サコ，ダイアン

(72)【発明者】

【氏名】カストングアイ，ロゼリン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】抗ＡｃｔＲＩＩＡ及び抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を作製するための組成物及び方法を提供する。
【解決手段】ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含む、抗ＡｃｔＲＩＩＡ及び抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を作製するための組成物及び方法を提供する。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩ活性を阻害または拮抗する。加えて、本開示は、筋肉消耗；線維症状態；炎症性、心血管、肺、筋骨格系、神経、眼、骨格系、自己免疫、または代謝性疾患または状態；創傷治癒；及びがん、及び他のＡｃｔＲＩＩ媒介疾患及び状態に関連する疾患及び状態を診断及び治療する組成物及び方法を提供する。
【選択図】図６

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲは、
（ａ）（ｉ）配列番号１６５のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１７２のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、アクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡｃｔＲＩＩＢ）と結合し；
（ｂ）（ｉ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号９のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）（ｉ）配列番号６３または７７のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）（ｉ）配列番号４５または５７のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号５０のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）（ｉ）配列番号１４４のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１５１のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）（ｉ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号９１のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びアクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡｃｔＲＩＩＡ）と結合し；及び
（ｇ）（ｉ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１３２のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
からなる群から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）対に存在する、単離されたアクチビン受容体ＩＩ型（ＡｃｔＲＩＩ）結合タンパク質。

【請求項2】

ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲセットは、
（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１６６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１６７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１６８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１７３のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１７４のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１７５のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１４５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１４７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１５２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または
（ｇ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
ＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する、単離されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項3】

（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１６６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１６７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１６８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１７３のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１７４のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１７５のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１４５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１４７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１５２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または
（ｇ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
ＣＤＲセットを含む、請求項２に記載の単離されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項4】

前記ＣＤＲセットが、
（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１６６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１６７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１６８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１７３のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１７４のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１７５のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｇ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｈ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｉ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号７８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号７９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｊ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｋ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号５９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｌ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１４５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１４７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１５２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｍ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｎ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号９９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１００のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｏ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１０６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１０７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｐ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１１４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１１５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｑ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または
（ｒ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
ＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する、請求項２に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項5】

（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１６６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１６７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１６８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１７３のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１７４のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１７５のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｇ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｈ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号７８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号７９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｉ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｊ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号５９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｋ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１４５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１４７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１５２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｌ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｍ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号９９のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１００のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｎ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１０６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１０７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｏ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１１４のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１１５のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｐ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２０のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２１のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または
（ｑ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；
（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；
（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；
（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び
（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；
かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
ＣＤＲセットを含む、請求項４に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項6】

（ａ）（ｉ）配列番号１６５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び
（ｉｉ）配列番号１７２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）（ｉ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び
（ｉｉ）配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）（ｉ）配列番号４５または５７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び
（ｉｉ）配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）（ｉ）配列番号６３または７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び
（ｉｉ）配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）（ｉ）配列番号１４４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び
（ｉｉ）配列番号１５１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）（ｉ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び
（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び
（ｇ）（ｉ）配列番号１２５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び
（ｉｉ）配列番号１３２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、 からなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項7】

前記ＶＨ及びＶＬ対が、
（ａ）配列番号１６５のＶＨ配列、及び配列番号１７２のＶＬ配列、前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列、前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）配列番号４５または５７のＶＨ配列、及び配列番号５０のＶＬ配列、前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）配列番号６３または７７のＶＨ配列、及び配列番号７０のＶＬ配列、前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）配列番号１４４のＶＨ配列、及び配列番号１５１のＶＬ配列、前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列、前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び
（ｇ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び配列番号１３２のＶＬ配列、前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
からなる群から選択される、請求項６に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項8】

前記ＶＨ及びＶＬ対が、
（ａ）配列番号１６５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）配列番号２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）配列番号１６に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）配列番号２２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）配列番号２８に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）配列番号３４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｇ）配列番号４０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｈ）配列番号４５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｉ）配列番号５７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｊ）配列番号６３に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｋ）配列番号７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ；かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｌ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号１５１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ；かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｍ）配列番号８４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｎ）配列番号９８に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｏ）配列番号１０５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｐ）配列番号１１２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｑ）配列番号１１９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び
（ｒ）配列番号１２５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号１３２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、かつ前記タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
からなる群から選択される、請求項７に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項9】

前記ＶＨ及びＶＬ対が、
（ａ）配列番号１６５のＶＨ配列、及び配列番号１７２のＶＬ配列；
（ｂ）配列番号２のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列；
（ｃ）配列番号１６のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列；
（ｄ）配列番号２２のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列；
（ｅ）配列番号２８のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列；
（ｆ）配列番号３４のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列；
（ｇ）配列番号４０のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列；
（ｈ）配列番号４５のＶＨ配列、及び配列番号５０のＶＬ配列；
（ｉ）配列番号５７のＶＨ配列、及び配列番号５０のＶＬ配列；
（ｊ）配列番号６３のＶＨ配列、及び配列番号７０のＶＬ配列；
（ｋ）配列番号７７のＶＨ配列、及び配列番号７０のＶＬ配列；
（ｌ）配列番号１４４のＶＨ配列、及び配列番号１５１のＶＬ配列；
（ｍ）配列番号８４のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列；
（ｎ）配列番号９８のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列；
（ｏ）配列番号１０５のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列；
（ｐ）配列番号１１２のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列；
（ｑ）配列番号１１９のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列；及び
（ｒ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び配列番号１３２のＶＬ配列
からなる群から選択される、請求項８に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項10】

（ａ）（ｉ）配列番号１６５からなる群から選択される参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１７２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）（ｉ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０からなる群から選択される参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）（ｉ）配列番号４５または５７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）（ｉ）配列番号６３または７７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）（ｉ）配列番号１４４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１５１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）（ｉ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９からなる群から選択される参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び
（ｇ）（ｉ）配列番号１２５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１３２の参照ＶＬから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
からなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項11】

（ａ）前記ＶＨ配列は、配列番号１６５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号１７２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｂ）前記ＶＨ配列は、配列番号２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）前記ＶＨ配列は、配列番号１６の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；前記ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）前記ＶＨ配列は、配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）前記ＶＨ配列は、配列番号２８の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）前記ＶＨ配列は、配列番号３４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｇ）前記ＶＨ配列は、配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｈ）前記ＶＨ配列は、配列番号４５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｉ）前記ＶＨ配列は、配列番号５７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｊ）前記ＶＨ配列は、配列番号６３の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｋ）前記ＶＨ配列は、配列番号７７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｌ）前記ＶＨ配列は、配列番号１４４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号１５１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｍ）前記ＶＨ配列は、配列番号８４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｎ）前記ＶＨ配列は、配列番号９８の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｏ）前記ＶＨ配列は、配列番号１０５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｐ）前記ＶＨ配列は、配列番号１１２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；
（ｑ）前記ＶＨ配列は、配列番号１１９の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または
（ｒ）前記ＶＨ配列は、配列番号１２５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及び前記ＶＬ配列は、配列番号１３２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；かつ前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
ＶＨ及びＶＬを含む、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項12】

（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）；
（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）；
（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）；及び
（ｄ）ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）
からなる群から選択されるポリペプチドに結合する、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と同じエピトープに結合する、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項14】

ＡｃｔＲＩＩとの結合に対して、請求項１～１３のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と競合する、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項15】

前記ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩ活性を拮抗する、請求項１～１４のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項16】

前記結合タンパク質が、
（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、またはＮｏｄａｌと競合すること；
（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞における１つ以上のＳｍａｄのリン酸化を減少させること；
（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させること；及び
（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合すること
からなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項17】

前記ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体である、請求項１～１６のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項18】

前記抗体が、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、またはＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片である、請求項１７に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項19】

前記ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子からなる群から選択される、請求項１８に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項20】

前記抗体が、
（ａ）ヒトＩｇＡ定常ドメイン；
（ｂ）ヒトＩｇＤ定常ドメイン；
（ｃ）ヒトＩｇＥ定常ドメイン；
（ｄ）ヒトＩｇＧ１定常ドメイン；
（ｅ）ヒトＩｇＧ２定常ドメイン；
（ｆ）ヒトＩｇＧ３定常ドメイン；
（ｇ）ヒトＩｇＧ４定常ドメイン；及び
（ｈ）ヒトＩｇＭ定常ドメイン
からなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、請求項１７～１９のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項21】

前記抗体が、
（ａ）ヒトＩｇカッパ定常ドメイン；及び
（ｂ）ヒトＩｇラムダ定常ドメイン
からなる群から選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、請求項１７～２０のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項22】

前記抗体が、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン及びヒトラムダ軽鎖定常ドメインをさらに含む、請求項１７～２１のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項23】

請求項１～２２のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする、単離された核酸分子または核酸分子セット。

【請求項24】

ｃＤＮＡである、請求項２３に記載の単離された核酸分子または核酸分子セット。

【請求項25】

請求項２２または２３に記載の核酸分子または核酸分子セットまたはその相補体の断片であるハイブリダイゼーションプローブ、ＰＣＲプライマー、または配列決定プライマーとして使用するのに十分な、単離ポリヌクレオチドまたはｃＤＮＡ分子。

【請求項26】

前記核酸分子が、制御配列に作動可能に連結される、請求項２２、２３、または２９に記載の核酸分子またはｃＤＮＡ分子。

【請求項27】

請求項２２、２４、または２５に記載の核酸分子を含む、ベクター。

【請求項28】

請求項２２、２４、または２５に記載の核酸分子、または請求項３１に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項29】

前記宿主細胞が、哺乳動物宿主細胞である、請求項２７に記載の宿主細胞。

【請求項30】

前記宿主細胞が、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項２８に記載の哺乳動物宿主細胞。

【請求項31】

前記ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を生成するのに適切な条件下で、請求項２７、２８、または２９に記載の宿主細胞を培養することを含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の作製方法。

【請求項32】

前記宿主細胞から分泌されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を単離することをさらに含む、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

請求項３０または３１の方法を用いて生成された、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質。

【請求項34】

請求項１～２０または２１のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、及び薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。

【請求項35】

医薬として使用される、請求項３３に記載の医薬組成物。

【請求項36】

ＡｃｔＲＩＩ発現または上昇したＡｃｔＲＩＩシグナル伝達と関連する疾患または状態を治療及び／または改善するための、請求項３４に記載の医薬組成物の使用。

【請求項37】

前記疾患または状態が、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、筋肉消耗、線維症状態（肝、肺、血管、または眼の線維症状態）、心筋線維症、特発性肺線維症、代謝性疾患、ＩＩ型糖尿病、肥満、炎症性疾患、自己免疫疾患、眼疾患、加齢黄斑変性症、心血管疾患、鬱血性心不全、高血圧、肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、骨粗鬆症、神経筋疾患、変性疾患、創傷治癒、及びがんからなる群から選択されるメンバーである、請求項３５に記載の使用。

【請求項38】

標識基またはエフェクター基をさらに含む、請求項３３に記載の医薬組成物。

【請求項39】

前記エフェクター基が、放射性同位体、放射性核種、毒素、治療剤、及び化学療法剤からなる群から選択される、請求項３７に記載の医薬組成物。

【請求項40】

請求項１～２０または２１のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、または請求項３３に記載の医薬組成物を含む組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、ＡｃｔＲＩＩ発現または上昇したＡｃｔＲＩＩ媒介シグナル伝達と関連する疾患または状態を治療及び／または改善する方法。

【請求項41】

前記疾患または状態が、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、筋肉消耗、線維症状態（肝、肺、血管、または眼の線維症状態）、心筋線維症、特発性肺線維症、代謝性疾患、ＩＩ型糖尿病、肥満、炎症性疾患、自己免疫疾患、眼疾患、加齢黄斑変性症、心血管疾患、鬱血性心不全、高血圧、肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、骨粗鬆症、神経筋疾患、変性疾患、創傷治癒、及びがんからなる群から選択されるメンバーである、請求項３９に記載の方法。

【請求項42】

前記ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質または医薬組成物が、単体または併用療法として投与される、請求項４０に記載の方法。

【請求項43】

請求項１～２１または３７のいずれか１項に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、または請求項３９、４２、または４３に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、対象におけるＡｃｔＲＩＩ活性の低下方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

電子的に提出された配列表の参照
本出願とともに出願された、ＡＳＣＩＩテキストファイル３１７４＿００３ＰＣ０１＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ（サイズ：１７７キロバイト；及び作成日：２０１７年３月１０日）によって電子提出された配列表の内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

トランスフォーミング増殖因子－β（ＴＧＦ－β）ファミリーは、脊椎動物及び無脊椎動物の両方において、非常に多くの細胞タイプに対して生物学的効果を発揮することが知られている種々の増殖因子を含む。ＴＧＦ－βファミリーのメンバーは、パターン形成及び組織明確化における胚発生の間に重要な機能を発揮し、種々の分化プロセス（脂肪生成、筋発生、軟骨形成、心臓発生、造血、神経発生、及び上皮細胞分化が挙げられる）に影響を及ぼし得る。ファミリーは、成長分化因子（ＧＤＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、アクチビン、及びインヒビンとして様々に記載されるタンパク質を含む。

【0003】

ＴＧＦ－βファミリーメンバーは、多段階プロセスを含む機序を介してシグナルを伝達する。多段階プロセスでは、ＴＧＦ－βファミリーメンバーは、細胞表面上に発現したＩＩ型セリン／スレオニンキナーゼ受容体と結合し、ＩＩ型受容体は、同種Ｉ型受容体と異種複合体を形成し、リン酸化を介してＩ型受容体を活性化し、活性化されたＩ型受容体は、Ｓｍａｄタンパク質をリン酸化して活性化し、活性化されたＳｍａｄタンパク質が細胞質から核にシグナルを伝達し、核ＳｍａｄオリゴマーがＤＮＡと結合し、転写因子と関連付けて、標的遺伝子の発現を調節する。

【0004】

２種の関連するＩＩ型ＴＧＦ－β受容体ファミリーメンバーである、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡは、アクチビンＡ及びアクチビンＢ、及び他のＴＧＦ－βファミリーメンバー（例えば、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、及びＮｏｄａｌ）のＩＩ型受容体として同定されている（Ｙａｍａｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３０：２１７－２２６（１９９５）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９８：９３０６－９３１１（２００１）；Ｙｅｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ７：９４９－９５７（２００１）；及びＯｈ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１６：２７４９－５４（２００２））。ＡＬＫ４及びＡＬＫ７は、それぞれ、アクチビンＡ及びアクチビンＢの主要なＩ型ＴＧＦ－β受容体ファミリーメンバー受容体である。

【0005】

ＴＧＦ－βリガンド及び受容体ファミリーのメンバーの発現及び活性の変化は、筋肉、骨、神経及び代謝性障害及び状態、並びにがんを含む種々の障害及び状態と関連していることが提唱されている。本開示の目的は、ＡｃｔＲＩＩ拮抗薬、及びＡｃｔＲＩＩ及び／またはＡｃｔＲＩＩリガンドと関連する疾患または状態の診断及び治療、防止、及び／または改善におけるＡｃｔＲＩＩ拮抗薬の使用を提供する。

【発明の概要】

【0006】

本開示は、アクチビン受容体ＩＩ型（ＡｃｔＲＩＩ）結合タンパク質、及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用方法を提供する。特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩが１つ以上の同種ＡｃｔＲＩＩリガンド及び／または１つ以上の同種ＡｃｔＲＩ受容体に結合することを阻害または遮断することができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩがＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）に結合することを阻害または遮断することができる。また、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ発現及び／または上昇したＡｃｔＲＩＩ媒介シグナル伝達と関連する疾患または状態の診断、または治療、防止、及び／または改善のためのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用方法を提供する。かかる疾患または状態としては、筋肉障害、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態；炎症性、自己免疫、心血管、肺、筋骨格系、骨格系、眼、神経、または代謝性疾患または状態；肥満；創傷治癒；及びがんが挙げられるが、これらに限定されない。

【0007】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する。さらなる態様では、提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８（ミオスタチン））の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＢ結合ＶＨ及びＶＬ対を有する抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体またはＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片である。

【0008】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する。さらなる態様では、提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８（ミオスタチン））の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ、及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合ＶＨ及びＶＬ対を有する抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＢ抗体、またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片である。

【0009】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する。さらなる態様では、提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８（ミオスタチン））の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＡ結合ＶＨ及びＶＬ対を有する抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体またはＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体断片である。

【0010】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、相補性決定領域（ＣＤＲ）セット：重鎖可変領域（ＶＨ）－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲは、表１に開示される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）対に存在する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対に存在するＣＤＲセットを含む：（ａ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し、（ｂ）配列番号６３または７７のＶＨ配列、及び配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）配列番号４５または５７のＶＨ配列、及び配列番号５０のＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びアクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡｃｔＲＩＩＡ）と結合し、（ｅ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び配列番号１３２のＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0011】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号１５１のアミノ酸配列を有するＶＬに存在するＣＤＲセットを含み、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0012】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＶＬに存在するＣＤＲセットを含み、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0013】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0014】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１４５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１４７のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１５２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有する。

【0015】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１６６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１６７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１６８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１７３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１７４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。

【0016】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、ＣＤＲセットを含む。

【0017】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１４５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１４７のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１５２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有する、ＣＤＲセットを含む。

【0018】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１６６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１６７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１６８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１７３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１７４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１７５のアミノ酸配列を有する、ＣＤＲセットを含む。

【0019】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、ＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＣＤＲセットを含む。ＣＤＲセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号３０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｆ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｇ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；及び（ｈ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｉ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｊ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｋ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｌ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号９９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１００のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｍ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１０６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｎ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１１４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１１５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｏ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｐ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0020】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＣＤＲセットを含み、ＣＤＲの参照セットは、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１４５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１４７のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１５２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有する。

【0021】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＣＤＲセットを含み、ＣＤＲの参照セットは、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１６６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１６７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１６８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１７３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１７４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１７５のアミノ酸配列を有する。

【0022】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、以下のものからなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む：（ａ）（ｉ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）配列番号４５または５７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）配列番号６３または７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び（ｅ）（ｉ）配列番号１２５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号１３２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0023】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１４４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号１５１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。

【0024】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１６５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。

【0025】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む：（ａ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）配列番号４５または５７のＶＨ配列、及び配列番号５０のＶＬ配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）配列番号６３または７７のＶＨ配列、及び配列番号７０のＶＬ配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び（ｅ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び配列番号１３２のＶＬ配列タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0026】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩとの結合に対して、本明細書に開示されるＶＨ及びＶＬ配列対を含む抗体と競合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と同じエピトープに結合する。

【0027】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）；及び（ｄ）ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）からなる群から選択されるポリペプチドに結合する。

【0028】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１４４のＶＨ配列及び配列番号１５１のＶＬ配列を含み；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0029】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ配列及び配列番号１７２のＶＬ配列を含み；タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0030】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、（ａ）配列番号２のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｂ）配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｃ）配列番号２２のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｄ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｅ）配列番号３４のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｆ）配列番号４０のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｇ）配列番号４５のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列；（ｈ）配列番号５７のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列；（ｉ）配列番号６３のＶＨ配列及び配列番号７０のＶＬ配列；（ｊ）配列番号７７のＶＨ配列及び配列番号７０のＶＬ配列；（ｋ）配列番号８４のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｌ）配列番号９８のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｍ）配列番号１０５のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｎ）配列番号１１２のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｏ）配列番号１１９のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；及び（ｐ）配列番号１２５のＶＨ配列及び配列番号１３２のＶＬ配列からなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１４４の配列を有するＶＨ及び配列番号１５１の配列を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５の配列を有するＶＨ及び配列番号１７２の配列を有するＶＬを含む。

【0031】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む：（ａ）（ｉ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０からなる群から選択される参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）配列番号４５または５７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）配列番号６３または７７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９からなる群から選択される参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｅ）（ｉ）配列番号１２５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号１３２の参照ＶＬから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0032】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１４４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び配列番号１５１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列を含み、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0033】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び配列番号１７２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列を含み、タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0034】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬ対を含み、（ａ）ＶＨ配列は、配列番号２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）ＶＨ配列は、配列番号１６の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）ＶＨ配列は、配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）ＶＨ配列は、配列番号２８の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｅ）ＶＨ配列は、配列番号３４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｆ）ＶＨ配列は、配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｇ）配列は、配列番号４５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｈ）ＶＨ配列は、配列番号５７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｉ）ＶＨ配列は、配列番号６３の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｊ）ＶＨ配列は、配列番号７７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｋ）配列は、配列番号８４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｌ）ＶＨ配列は、配列番号９８の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｍ）ＶＨ配列は、配列番号１０５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｎ）ＶＨ配列は、配列番号１１２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｏ）ＶＨ配列は、配列番号１１９の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｐ）ＶＨ配列は、配列番号１２５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号１３２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0035】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬ対を含み、ＶＨ配列は、配列番号１４４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し、及びＶＬ配列は、配列番号１５１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0036】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬ対を含み、ＶＨ配列は、配列番号１６５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し、及びＶＬ配列は、配列番号１７２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0037】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体である。さらなる態様では、抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片である。いくつかの態様では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、及び一本鎖抗体分子（例えば、ＢｉＴＥ）からなる群から選択される抗体断片である。

【0038】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする核酸及び核酸セットも提供される。核酸及び核酸セットを含有するベクター及びベクターセット、並びに核酸及びベクターで形質転換された宿主細胞をさらに提供する。いくつかの態様では、宿主細胞は、ハイブリドーマまたは哺乳動物宿主細胞、例えば、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を産生する哺乳動物宿主細胞及びハイブリドーマを含む宿主細胞も提供される。

【0039】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を作製する方法も提供される。いくつかの態様では、方法は、タンパク質を発現し、かつ、発現したＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を必要に応じて単離するための適切な条件下で、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を発現することができる宿主細胞を培養することを含む。本明細書に開示されるかまたはあるいは当該技術分野において公知の方法を用いて調製及び／または単離されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質も提供される。

【0040】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物をさらに提供する。いくつかの態様では、本開示は、上昇したＡｃｔＲＩＩ発現またはＡｃｔＲＩＩ媒介シグナル伝達と関連する対象における状態を治療及び／または改善する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、対象におけるＡｃｔＲＩＩ媒介シグナル伝達を減少させる。医薬の製造または調製における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体）の使用も提供される。いくつかの実施形態では、医薬は、上昇したＡｃｔＲＩＩ発現またはＡｃｔＲＩＩ媒介シグナル伝達と関連する対象における状態を治療及び／または改善するためである。さらなる実施形態では、本開示は、本明細書に記載される疾患または状態を治療するための医薬の製造における、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用を提供する。

【0041】

提供される方法を用いて、対象において治療及び／または改善され得る状態としては、筋肉障害、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態、例えば、心筋線維症、及び特発性肺線維症（ＩＰＦ））；代謝性疾患（例えば、インスリン抵抗性のＩＩ型糖尿病、高血糖、及び肥満）；炎症性疾患または状態、自己免疫疾患、心血管疾患（例えば、鬱血性心不全、及び高血圧）；眼疾患、例えば、加齢黄斑変性症；肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、例えば、骨粗鬆症；神経疾患；神経筋疾患、変性疾患、創傷治癒；体重減少；及びがん（例えば、癌腫、骨髄腫、骨誘導損失癌、下垂体癌、及び消化管癌）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0042】

いくつかの態様では、本開示の方法は、有効量のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、単独で投与される。他の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、併用療法として投与される。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、標準ケア治療／療法に対する併用療法として投与される。

【0043】

ＡｃｔＲＩＩ活性（例えば、リガンド結合及び／またはシグナル伝達）を遮断または減少させる方法も提供される。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞を接触させることを含む。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞を接触させることを含む。いくつかの態様では、方法は、インビボで行う。他の態様では、方法は、インビトロで行う。いくつかの態様では、遮断または減少させた、ＡｃｔＲＩＩ活性は、ＡｃｔＲＩのリン酸化である。さらなる態様では、リン酸化されたＡｃｔＲＩは、ＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７である。さらなる態様では、遮断または減少させたＡｃｔＲＩＩ活性は、Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化である。いくつかの態様では、本開示は、有効量のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象におけるＡｃｔＲＩＩ活性を遮断または減少させる方法を提供する。いくつかの態様では、有効量のＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象におけるＡｃｔＲＩＩＡ活性を減少させる方法を提供する。いくつかの態様では、有効量のＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象におけるＡｃｔＲＩＩＢ活性を減少させる方法を提供する。

【0044】

増加したＡｃｔＲＩＩ発現及び／またはＡｃｔＲＩＩシグナル伝達と関連する病理学的状態、またはＡｃｔＲＩＩリガンドの活性を減少または阻害することによって治療及び／または改善することができる病理学的状態におけるＡｃｔＲＩＩ活性を遮断または減少させる方法も提供される。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、ＡｃｔＲＩＩまたはＡｃｔＲＩＩリガンドの増加発現を有する対象に投与することを含む。いくつかの態様では、病理学的状態は、筋肉障害である。さらなる態様では、筋肉障害は、萎縮または筋ジストロフィーである。いくつかの態様では、病理学的状態は、肥満またはＩＩ型糖尿病などの代謝性状態である。いくつかの態様では、病理学的状態は、肺または肝臓の線維症状態である。さらなる態様では、病理学的状態は、がんである。さらなる態様では、がんは、骨髄線維症、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、下垂体癌、乳癌、消化管癌、または癌腫である。さらなる態様では、病理学的状態は、骨誘導損失癌（例えば、前立腺及び乳癌）である。いくつかの態様では、本開示は、がん治療誘発性骨量減少と関連する病理学的状態におけるＡｃｔＲＩＩ活性を遮断または減少させる方法を提供する。

【0045】

いくつかの態様では、本開示は、筋肉障害を治療及び／または改善する方法を提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）を、筋肉障害を有する対象に投与することを含む。筋肉障害の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。さらなる態様では、筋肉障害は、萎縮または筋ジストロフィーである。他の態様では、対象は、筋肉障害を発症するリスクがある。さらなる態様では、対象は、萎縮または筋ジストロフィーを発症するリスクがある。

【0046】

いくつかの態様では、本開示は、線維症状態を治療及び／または改善する方法を提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される医薬組成物における）を、線維症状態を有する対象に投与することを含む。他の態様では、対象は、線維症状態を発症するリスクがある。いくつかの態様では、線維症状態は、慢性である。線維症状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。

【0047】

いくつかの態様では、本開示は、対象における線維症を減少させる方法を提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体またはＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）を、線維症を有する対象に投与することを含む。いくつかの態様では、線維症は、肝または肺線維症である。線維症の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。

【0048】

別の態様では、本開示は、対象における線維症によって引き起こされた肝または肺機能の喪失を減少させる方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びそのＡｃｔＲＩＩ結合断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、対象における肝機能の喪失を減少させる。いくつかの態様では、方法は、対象における肺機能の喪失を減少させる。

【図面の簡単な説明】

【0049】

【図1-1】図１Ａ～１Ｎは、３７℃でのＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析によって決定される、ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＡ０１系列抗体の動力学的特徴付けを示す。単量体または二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢまたはｈＡｃｔＲＩＩＡをチップ上で捕捉した後、Ａ０１系列抗体の濃度に曝露した。図１Ａ～１Ｄは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図１Ａ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図１Ｂ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図１Ｃ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図１Ｄ）に結合する抗体Ａ０１（親）の特徴付けを示す。図１Ｅ及び１Ｆは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図１Ｅ）及びＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図１Ｆ）に結合する抗体Ｂ０１の特徴付けを示す。図１Ｇ～１Ｈは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図１Ｇ）及びＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図１Ｈ）に結合する抗体Ｃ０１を示す。図１Ｉ～１Ｊは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図１Ｉ）及びＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図１Ｊ）に結合する抗体Ｄ０１を示す。図１Ｋ～１Ｌは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図１Ｋ）及びＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図１Ｌ）に結合する抗体Ｅ０１を示す。図１Ｍ～１Ｎは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図１Ｍ）及びＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図１Ｎ）に結合する抗体Ｆ０１を示す。

【図1-2】図１－２は図１－１の続きである。

【図2】細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイにおけるＡ０１系列抗体の中和活性を示す。アクチビンＡ単独（２ｎｇ／ｍｌ）、及び５０ｎｇ／ｍｌのＡ０１系列抗体Ａ０１、Ｂ０１、Ｃ０１、Ｄ０１、Ｅ０１、及びＦ０１と併用したアクチビンＡによるアッセイ応答が含まれる。

【図3】図３Ａ～３Ｆは、３７℃でのＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析によって決定される、ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＧ０２系列抗体の動力学的特徴付けを示す。単量体または二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢまたはｈＡｃｔＲＩＩＡをチップ上で捕捉した後、Ｇ０１系列に曝露した。図３Ａ～３Ｄは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図３Ａ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図３Ｂ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図３Ｃ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図３Ｄ）に結合する抗体Ｇ０１の特徴付けを示す。図１Ｅ及び１Ｆは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図３Ｅ）及びＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図３Ｆ）に結合する抗体Ｈ０１の特徴付けを示す。

【図4】細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイにおけるＧ０１親及びＨ０１最適化抗体の中和活性を示す。アクチビンＡの不在下、アクチビンＡ単独（２ｎｇ／ｍｌ）、及び５０ｎｇ／ｍｌのＧ０１系列抗体Ｇ０１またはＨ０１と併用したアクチビンＡによるアッセイ応答が含まれる。

【図5-1】図５Ａ～５Ｐは、３７℃でのＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析によって決定される、ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＡ０２系列抗体の動力学的特徴付けを示す。単量体または二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢまたはｈＡｃｔＲＩＩＡをチップ上で捕捉した後、Ａ０２系列抗体に曝露した。図５Ａ～５Ｄは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図５Ａ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図５Ｂ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図５Ｃ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図５Ｄ）に結合する抗体Ａ０２（親）の特徴付けを示す。図５Ｅ～５Ｈは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図５Ｅ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図５Ｆ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図５Ｇ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図５Ｈ）に結合する抗体Ｂ０２の特徴付けを示す。図５Ｉ～５Ｌは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図５Ｉ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図５Ｊ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図５Ｋ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図５Ｌ）に結合する抗体Ｃ０２の特徴付けを示す。図５Ｍ～５Ｐは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図５Ｍ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図５Ｎ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図５Ｏ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図５Ｐ）に結合する抗体Ｄ０２の特徴付けを示す。図５Ｑ～５Ｔは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図５Ｑ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図５Ｒ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図５Ｓ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図５Ｔ）に結合する抗体Ｄ０３の特徴付けを示す。

【図5-2】図５－２は図５－１の続きである。

【図5-3】図５－３は図５－２の続きである。

【図6】図６Ａ～６Ｂは、細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイにおけるＡ０２系列抗体の中和活性を示す。アクチビンＡの不在下、アクチビンＡ単独（２ｎｇ／ｍｌ）、及び５０ｎｇ／ｍｌのＡ０２系列抗体と併用したアクチビンＡによるアッセイ応答が含まれる。図６Ａは、Ａ０２（親）、Ｂ０２、Ｃ０２、及びＤ０２の中和活性を示す。図６Ｂは、Ｄ０２及びＤ０３の中和活性を示す。

【図7】図７Ａ～７Ｆは、３７℃でのＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析によって決定される、ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＥ０２親及びＦ０２変異体抗体の動力学的特徴付けを示す。単量体または二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢまたはｈＡｃｔＲＩＩＡをチップ上で捕捉した後、Ｅ０２及びＦ０２に曝露した。図７Ａ～７Ｄは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図７Ａ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図７Ｂ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図７Ｃ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図７Ｄ）に結合するＥ０２親の特徴付けを示す。図７Ｅ及び７Ｆは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図７Ｅ）、及びＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図７Ｆ）に結合する抗体Ｆ０２の特徴付けを示す。

【図8】図８Ａ～８Ｄは、３７℃でのＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析によって決定される、ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合する抗体Ｇ０２の動力学的特徴付けを示す。単量体または二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢまたはｈＡｃｔＲＩＩＡをチップ上で捕捉した後、評価された抗ｈＡｃｔＲＩＩ抗体に曝露した。図８Ａ～８Ｄは、ＡｃｔＲＩＩＢモノマー（図８Ａ）、ＡｃｔＲＩＩＢダイマー（図８Ｂ）、ＡｃｔＲＩＩＡモノマー（図８Ｃ）、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマー（図８Ｄ）に結合する抗体Ｇ０２の特徴付けを示す。

【図9】細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイにおけるＡｃｔＲＩＩＢ結合Ｅ０２親及びＦ０２変異体抗体及びＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体Ｇ０２の中和活性を示す。アクチビンＡの不在下、アクチビンＡ単独（２ｎｇ／ｍｌ）、及び５０ｎｇ／ｍｌの抗体Ｅ０２、Ｆ０２、またはＧ０２と併用したアクチビンＡによるアッセイ応答が含まれる。

【発明を実施するための形態】

【0050】

本開示は、単離された組換えＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を提供する。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体である。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする核酸、核酸を含有するベクター及び宿主細胞、及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を作製し、使用する方法も提供される。提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、増加したＡｃｔＲＩＩ発現及び／またはシグナル伝達と関連する疾患及び状態を診断、治療、及び／または改善するのに使用する。かかる使用としては、筋肉障害、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮または筋肉消耗障害；線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態、例えば、心筋線維症、及び特発性肺線維症（ＩＰＦ））；代謝性疾患（例えば、ＩＩ型糖尿病及び肥満）；炎症性疾患または状態、自己免疫疾患、心血管疾患（例えば、鬱血性心不全、及び高血圧）；眼疾患、例えば、加齢黄斑変性症；肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、神経疾患、例えば、骨粗鬆症；創傷治癒；体重減少；及びがん（例えば、癌腫、骨髄腫、骨誘導損失癌、下垂体癌、及び消化管癌）を防止及び／または改善することが挙げられるが、これらに限定されない。

【0051】

定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本開示が関係する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣＰｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓが、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供する。本明細書に提供される見出しは、本明細書を全体として参照することによって有され得る種々の態様の限定ではない。従って、この直後に定義する用語は、本明細書を全体として参照することによってさらに十全に定義される。

【0052】

用語「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、それらの用語が使用される文脈上特に明確に指示されない限り複数の指示対象を含む。用語「ａ」（または「ａｎ」）、並びに用語「１つ以上」及び「少なくとも１つ」は、本明細書では交換可能に使用することができる。さらに、「及び／または」は、本明細書で使用される場合、２つ以上の指定される特徴または構成要素の各々の、他方を伴うまたは伴わない具体的な開示と解釈されるべきである。従って、用語「及び／または」は、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で用いられるとき、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、用語「及び／または」は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で用いられるとき、以下の態様の各々を包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。

【0053】

用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（～を含む）」は、１つ以上の特徴または構成要素の存在を容認することを含むという意味で一般に使用される。本明細書において態様が言語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ (～を含む)」を用いて記載される場合は常に、「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ(～からなる)」及び／または「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ(～から本質的になる)」の用語で記載される他の類似の態様も提供される。

【0054】

本明細書及び特許請求の範囲を通じた数値と関連して使用される用語「約」及び「おおよそ」は、当業者に馴染みがありかつ許容可能なある区間の正確度を示す。一般に、かかるある区間の正確度は、±１０％である。あるいは、かつ、特に生物系では、用語「約」及び「おおよそ」は、所与の値のある桁以内、好ましくは≦５倍、及びより好ましくは≦２倍の値を意味し得る。

【0055】

数値範囲は、その範囲を定義する数を含む。

【0056】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩ（すなわち、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）と特異的に結合し、好ましくは、ＡｃｔＲＩＩの細胞外ドメインに結合するタンパク質を指す。

【0057】

用語「ＡｃｔＲＩＩアクチビン受容体ＩＩ型」及び「ＡｃｔＲＩＩ」は、交換可能に使用され、その用語が使用される文脈上特に明確に指示されない限り、アクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡｃｔＲＩＩＡ）及び／またはアクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡｃｔＲＩＩＢ）を指す。

【0058】

用語「アクチビン受容体ＩＩＡ型」、「ＡｃｔＲＩＩＡ受容体」、及び「ＡｃｔＲＩＩＡ」は、本明細書では交換可能に使用され、ＡｃｔＲＩＩＡを指す（文献において、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩ、及びＥＣ ２．７．１１．３０とも呼ばれる）。ヒトＡｃｔＲＩＩＡの参照配列は、参照配列番号：ＮＰ＿００１６０７．１で提供される。提供されるＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１３８のアミノ酸配列に対応するＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメインに結合する。

【0059】

用語「アクチビン受容体ＩＩＢ型、「ＡｃｔＲＩＩＢ受容体」、及び「ＡｃｔＲＩＩＢ」は交換可能に使用され、ＡｃｔＲＩＩＢを指す（文献において、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＨＴＸ４、ＥｒｂＢ３受容体、及びＥＣ ２．７．１１．３０とも呼ばれる）。ヒトＡｃｔＲＩＩＢの参照配列は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１０９７で提供される。提供されるＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号１３９のアミノ酸配列に対応するＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインに結合する。

【0060】

用語「ｃｏｍｐｅｔｅ（競合する）」または「ｃｏｍｐｅｔｅｓ（競合する）」は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、中和抗体）の文脈において使用される場合、試験下の抗原結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体またはそのＡｃｔＲＩＩ結合断片）が、共通抗原（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインまたはその断片）への参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンド、または参照抗体）の特異的結合を防止または阻害するアッセイによって決定される抗原結合タンパク質間の競合を意味する。数多くのタイプの競合的結合アッセイを使用することができる。例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）（例えば、Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７－８２（１９９０）及びＭｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５（１９８８）を参照されたい）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２（１９９０）及びＫｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９（１９８６））、及びサンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９２：２４２－２５３（１９８３）を参照されたい）。典型的には、かかるアッセイは、これら非標識試験抗原結合タンパク質及び標識参照抗原結合タンパク質のうちのいずれかを担持する固体表面または細胞に結合した精製抗原の使用を伴う。

【0061】

競合阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定することができる。通常、試験抗原結合タンパク質は、過剰に存在する。（抗原結合タンパク質と競合する）競合アッセイによって同定される抗原結合タンパク質には、参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と同じエピトープに結合するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、並びに参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質によって結合したエピトープに対して立体障害が起こるほど十分に近接する隣接エピトープに結合するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が含まれる。通常、競合ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）結合タンパク質が過剰に存在する場合には、参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）の特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％阻害するであろう。場合によっては、競合抗原結合タンパク質は、参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の特異的結合を少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％阻害する。

【0062】

用語「エピトープ」は、ＡｃｔＲＩＩタンパク質の文脈で使用される場合、本開示のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗体）に結合することができるＡｃｔＲＩＩ（例えば、ヒトＡｃｔＲＩＩＡ、ヒトＡｃｔＲＩＩＢ、マウスＡｃｔＲＩＩＡまたはマウスＡｃｔＲＩＩＡ）タンパク質決定基を指す。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなり、通常、特定の三次元構造特性、並びに特定の電荷特性を有する。立体構造及び非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在下、後者ではなく前者との結合が失われることで区別される。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質によって結合したＡｃｔＲＩＩエピトープは、当該技術分野において公知の技術を用いて容易に決定することができる。

【0063】

本明細書に開示される抗ＡｃｔＲＩＩ結合抗体などの抗原結合タンパク質、及びそれらのＡｃｔＲＩＩ結合断片、変異体、または誘導体は、抗原、例えば、それらが認識するかまたはそれらに特異的に結合する標的ポリペプチドのエピトープ（複数可）または部分（複数可）の観点から説明または特定することができる。例えば、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の抗原結合ドメインと特異的に相互作用するＡｃｔＲＩＩの部分は、「エピトープ」である。「エピトープ」は、連続アミノ酸、またはタンパク質の三次折り畳みによって並置された非連続アミノ酸の両方から形成することができる。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露によっても保持され、一方、三次折り畳みによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒での処理によって失われる。エピトープ決定基は、化学的に活性な表面分子群、例えば、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニル基を含み得、特定の３次元構造特性及び／または特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、典型的には、固有の空間的立体配座において、少なくとも３、４、５、６、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５個のアミノ酸を含む。エピトープは、当該技術分野において公知の方法を用いて常法で決定することができる。

【0064】

用語「阻害する」、「遮断する」、「ｒｅｄｕｃｅ（減少させる）」、「ｄｅｃｒｅａｓｅ（減少させる）」、「抑制する」、「拮抗する」、及び「中和する」は、交換可能に使用され、活性の完全な遮断を含め、活性（例えば、ＡｃｔＲＩＩリガンド結合及びＡｃｔＲＩＩシグナル伝達）の任意の統計学的に有意な減少を指す。例えば、「阻害」または「抑制」は、対照と比較して、活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の減少を指し得る。

【0065】

いくつかの態様では、用語「減少させる」は、抗体またはそのＡｃｔＲＩＩ結合断片などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と接触させない場合の細胞におけるＳｍａｄリン酸化の程度と比較して、ＡｃｔＲＩＩ及びＩ型受容体を発現する細胞をアクチビンＡなどのＡｃｔＲＩＩリガンドと接触させることで誘発された１つ以上のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を統計的に有意に（例えば、０．０５以下のｐ値で）減少させる能力を指し得る。ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）を発現する細胞は、自然発生細胞または細胞株であり得、またはＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）をコードする核酸を宿主細胞に導入することによって組換え的に産生することができる。一態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、例えば、ＡｃｔＲＩＩ抗体またはそのＡｃｔＲＩＩ結合断片は、本明細書に記載されるまたは他の当該技術分野において公知の標準技術及び条件を用いて、例えば、ウエスタンブロッティングの後に、抗ホスホチロシン抗体でプローブすることで、またはＥＬＩＳＡによって決定される場合、１つ以上のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のＡｃｔＲＩＩリガンド媒介リン酸化を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％、または約１００％減少させる。

【0066】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、本明細書に記載されるまたは他の当該技術分野において公知の技術を用いて、例えば、ウエスタンブロッティングの後に、抗ホスホチロシン抗体でプローブすることで、またはＥＬＩＳＡ（例えば、Ｐ－Ｓｍａｄ ＥＬＩＳＡ）もしくはＳｍａｄ依存性レポーター遺伝子アッセイによって決定される場合、１つ以上のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）媒介リン酸化を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％、または約１００％減少させる。

【0067】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、本明細書に記載されるまたは他の当該技術分野において公知の標準技術及び条件を用いて、例えば、ウエスタンブロッティングの後に、抗ホスホチロシン抗体でプローブすることで、またはＥＬＩＳＡ（例えば、Ｐ－Ｓｍａｄ ＥＬＩＳＡ）もしくはＳｍａｄ依存性レポーター遺伝子アッセイによって決定される場合、１つ以上のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）媒介リン酸化を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％、または約１００％減少させる。

【0068】

用語「抗体」または「免疫グロブリン」は、本明細書では交換可能に使用され、全（完全長）抗体及びその抗原結合断片もしくは一本鎖を含む。典型的な抗体は、ジスルフィド結合によって相互に接続した少なくとも２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと省略する）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと省略する）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬを含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＷ）と呼ばれるより保存された領域が間に入った、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順番：ＦＷ１、ＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３、ＦＷ４で並んだ３つのＣＤＲと４つのＦＷとを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、種々の免疫系細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含めた宿主組織または因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介することができる。例示的な抗体としては、典型的な抗体、ｓｃＦｖ、及びそれらの組み合わせが挙げられ、ここで、例えば、ｓｃＦｖは、典型的な抗体の重鎖及び／または軽鎖のいずれかのＮまたはＣ末端に共有結合している（例えば、ペプチド結合もしくは化学リンカーを介して）か、あるいは、典型的な抗体の重鎖及び／または軽鎖中に挿入されている。

【0069】

用語「抗体」及び「免疫グロブリン」は、無傷なポリクローナル抗体、無傷なモノクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）誘導体及び突然変異体、二重特異性抗体などの多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、並びに抗体が所望の結合活性を呈示する限りにおいて抗原認識部位を含む他のあらゆる修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと称されるその重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、５つの主要な免疫グロブリンクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のいずれかのものであり得る。異なる免疫グロブリンクラスは、異なる周知のサブユニット構造及び三次元配置を有する。抗体は、裸であってもよく、または毒素、放射性同位体などの他の分子にコンジュゲートすることができる。用語「ＩｇＧ」は、認識された免疫グロブリンγ遺伝子によって実質的にコードされる抗体のクラスに属するポリペプチドを指す。ヒトでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。マウスでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、及びＩｇＧ３を含む。

【0070】

用語「ＡｃｔＲＩＩ抗体」、「ＡｃｔＲＩＩに結合する抗体」、または「抗ＡｃｔＲＩＩ抗体」は、抗体がＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡをそれぞれ標的化する治療剤または診断試薬として有用であるように、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）と十分な親和性で結合することができる抗体を指す。

【0071】

「特異的に結合する」とは、ＡｃｔＲＩＩタンパク質の文脈において使用する場合、抗体などの結合タンパク質が、結合タンパク質が無関係の対照タンパク質に結合するよりも大きな親和性で、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ、好ましくは、ヒトＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはヒトＡｃｔＲＩＩＢ、好ましくは、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメイン）に結合する能力を一般的に意味する。いくつかの態様では、対照タンパク質は、ニワトリ卵白リゾチームである。好ましくは、結合タンパク質は、対照タンパク質に対する親和性よりも少なくとも１００、５００、または１０００倍大きな親和性を有するＡｃｔＲＩＩに結合する。好ましくは、結合タンパク質は、当該技術分野において公知の結合アッセイによって計測するときの≦１×１０^－７Ｍまたは≦１×１０^－８のヒトＡｃｔＲＩＩに対する結合親和性を有する。いくつかの態様では、結合親和性は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（例えば、解析物としてＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）、及びリガンドとしてＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、またはその逆）を用いて測定される。

【0072】

いくつかの態様では、無関係の非ＡｃｔＲＩＩタンパク質に対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（解析物として組換えＡｃｔＲＩＩ及びリガンドとしてＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を使用するか、またはその逆）、結合平衡除外アッセイ（ＫＩＮＥＸＡ（登録商標））、または当該技術分野において公知の他の結合アッセイによって計測するときのＡｃｔＲＩＩに対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の結合の約１０％未満である。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦１０ｐＭ、≦１ｐＭ、または≦０．１ｐＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する完全長抗体またはＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片である。

【0073】

用語「抗原結合抗体断片」（例えば、「ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片」、「ＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体断片」、及び「ＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片」）は、無傷な抗体の抗原結合可変領域（例えば、ＣＤＲ３）の全てまたは部分を含有する断片を指す。抗体の抗原結合機能が完全長抗体の断片によって行われ得ることは公知である。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片、直鎖状抗体、一本鎖抗体、及び１本以上の抗体断片で形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、本開示は、抗体断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である、ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片を提供する。

【0074】

Ｆｃ領域は、最初の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含むポリペプチドを含む。従って、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、及びＩｇＥ及びＩｇＭの最後３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにこれらのドメインのＮ末端の可動性ヒンジを指す。ＩｇＡ及びＩｇＭについては、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧについては、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３、並びにＣγ１及びＣγ２との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシル末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むように定義される（ここで付番は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））に規定されるＥＵインデックスに従う）。Ｆｃとは、独立してこの領域を指し得るか、または全抗体、抗体断片、もしくはＦｃ融合タンパク質の文脈においてこの領域を指し得る。ＥＵインデックスによって付番するときの２７０、２７２、３１２、３１５、３５６、及び３５８位を含むがこれらに限定されない多くの異なるＦｃ位置に多型が観察されており、従って、提示される配列と先行技術の配列との間には少しの差異が存在し得る。

【0075】

「モノクローナル抗体」は、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均一な抗体集団を指す。これは、典型的には異なる抗原決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体と対照的である。用語「モノクローナル抗体」は、無傷及び完全長モノクローナル抗体の両方、並びに抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）突然変異体、及び抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物によることを含むがこれらに限定されない任意の数の方法で作製され得る。

【0076】

用語「キメラ抗体」は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の抗原結合特異性、親和性、及び／または能力を有する哺乳動物の１つの種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に対応し、一方、定常領域が、別の種（通常はヒト）に由来する抗体の配列と同種であり、その種における免疫応答の誘発が回避される。

【0077】

用語「ヒト化抗体」は、より少ない、好ましくは、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有するように遺伝子操作された非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンに由来する抗体を指す。典型的には、ヒト化抗体は、所望の抗原結合特異性、親和性、及び／または能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター）のＣＤＲの残基によってＣＤＲの残基が置き換えられているヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＷ）残基が、所望の抗原結合特異性、親和性、及び／または能力を有する非ヒト種由来の抗体の対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体は、抗体の特異性、親和性、及び／または能力を洗練して最適化するため、Ｆｖフレームワーク領域にあるか、及び／または置き換えられた非ヒト残基内にあるさらなる残基の置換によってさらに修飾することができる。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てを含有する少なくとも１つ、典型的には２つまたは３つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、一方、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれの少なくとも一部分も含み得る。ヒト化抗体の作成に用いられる方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号または同第５，６３９，６４１号に記載される。

【0078】

用語「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体、または当該技術分野において公知の任意の技術を用いて作製されるヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。用語「ヒト抗体」は、無傷（完全長）の抗体、その断片、及び／または少なくとも１つのヒト重鎖及び／または軽鎖ポリペプチドを含む抗体、例えば、マウス軽鎖及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体などを含む。

【0079】

「アンタゴニスト」、「遮断」、または「中和」結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡなどの、それが結合する抗原の活性を阻害または減少させるものである。いくつかの態様では、アンタゴニストＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、アクチビンＡなどのＡｃｔＲＩＩＡリガンドによって、ＡｃｔＲＩＩＡに結合することを減少または阻害する。いくつかの態様では、アンタゴニストＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、アクチビンＡなどのＡｃｔＲＩＩＢリガンドによって、ＡｃｔＲＩＩＢに結合することを減少または阻害する。ある特定の態様では、アンタゴニストＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩの活性を実質的または完全に阻害する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ活性は、１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％減少させる。ある特定の態様では、アンタゴニストＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体、例えば、完全長抗体またはＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体断片である。さらなる態様では、アンタゴニスト抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体は、ＡｃｔＲＩＩＡの活性を少なくとも１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、あるいは１００％阻害または減少させる。さらなる態様では、アンタゴニストＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、例えば、完全長抗体またはＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片である。さらなる態様では、アンタゴニスト抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、ＡｃｔＲＩＩＢの活性を少なくとも１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、あるいは１００％阻害または減少させる。

【0080】

「結合親和性」は、概して、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総和の強度を指す。特に指示がない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、概して、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含め、当該技術分野において公知の一般的な方法によって計測することができ、本開示の目的に使用することができる。

【0081】

「効力」は、所与の強度の効果を生成するのに必要な化合物の量で表現された化合物の薬理活性の尺度である。効力は、規定された生物学的効果を達成するのに必要な化合物の量を指し；必要な用量が少ないほど、薬物の効力はより高い。効力は、通常、特に指定されない限り、ｎＭ単位のＩＣ_５０値として表現される。ＩＣ_５０は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＡまたは抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）の阻害濃度中央値である。機能アッセイでは、ＩＣ_５０は、生物学的反応をその最大値の５０％低下させる濃度である。リガンド受容体結合試験では、ＩＣ_５０は、リガンド受容体結合を最大特異的結合レベルの５０％低下させる濃度である。ＩＣ_５０は、当該技術分野において公知の任意の数の手段によって計算することができる。参照抗ＡｃｔＲＩＩ抗体または他のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と比較したときの本明細書に提供される抗体または他の結合タンパク質の効力の改善倍数は、少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、または少なくとも１８０倍であり得る。

【0082】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、ある種の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌Ｉｇによってそれらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いてその標的細胞を細胞毒で死滅させることが可能になる細胞傷害の一形態を指す。標的細胞の表面に向かう特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞を「武装」し、かかる死滅に不可欠である。標的細胞の溶解は、細胞外であって、直接的な細胞間接触が必要であり、補体は関与しない。抗体に加えて、ＡｃｔＲＩＩ担持標的細胞に特異的に結合する能力を有するＦｃ領域を含む他のタンパク質、具体的にはＦｃ融合タンパク質は、細胞媒介性細胞傷害を達成可能であると考えられる。簡単にするため、Ｆｃ融合タンパク質の活性によって生じる細胞媒介性細胞傷害も本明細書ではＡＤＣＣ活性と呼ばれる。

【0083】

「単離されている」ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩ抗体（それらのＡｃｔＲＩＩ結合断片、変異体、及び誘導体を含む））、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、自然界に見られない形態であるタンパク質（例えば、抗体）、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物には、もはや自然界に見られる形態ではない程度にまで精製されているものが含まれる。いくつかの態様では、単離されたタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。単離されたタンパク質及び単離された核酸は、それらに天然に付随している物質、例えばその天然環境、またはかかる調製物がインビトロまたはインビボで実施される組換えＤＮＡ技術に基づく場合には、それらが調製される環境（例えば細胞培養）中で、それらとともに見出される他のポリペプチドまたは核酸を含まないかまたは実質的に含まない。タンパク質及び核酸は、希釈剤またはアジュバントとともに製剤化することができ、依然として実用的な目的のために単離されている－例えば、タンパク質は、イムノアッセイで使用するためのマイクロタイタープレートをコーティングするために使用されるならば、通常ゼラチンまたは他の担体と混合され、診断または治療で使用される場合、薬学的に許容可能な担体または希釈剤と混合される。

【0084】

用語「対象」、「個体」、「動物」、「患者」、及び「哺乳動物」は、その診断、予後、または治療が望まれる、任意の対象、特に哺乳動物の対象を指す。哺乳動物対象としては、これらに限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、家畜動物、農場動物、齧歯類などを含み、特定の治療のレシピエントとなるべきものである。

【0085】

用語「医薬組成物」は、活性成分の生物学的活性が有効となるのを可能にするような形態の調製物であって、その組成物を投与しようとする対象にとって許容できない毒性がある濃度で追加的な構成成分を含有しない調製物を指す。かかる組成物は、無菌であり得る。

【0086】

本明細書に開示されるポリペプチド、例えば、抗体を含む抗原結合タンパク質の「有効量」は、具体的に記載される目的の実行に十分な量である。「有効量」は、記載される目的に関して実験的に常法で決定することができる。用語「治療有効量」は、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）の疾患または状態を「治療」するのに有効な、ポリペプチド、例えば、抗体を含む抗原結合タンパク質、または他の薬物の量を指し、疾患または状態を有する対象にある程度の改善または利益をもたらす。従って、「治療上有効な」量は、ＡｃｔＲＩＩ媒介疾患または状態の臨床症状のうちの少なくとも１つのある程度の緩和、軽減、及び／または減少をもたらす量である。本開示の方法によって治療することができる疾患または状態と関連する臨床症状は周知である。さらに、ある程度の利益が対象に付与される限り、治療効果が完全または治癒的である必要はない。いくつかの実施形態では、用語「治療上有効」は、それを必要とする患者においてＡｃｔＲＩＩ活性を減少させることができる治療剤の量を指す。実際の投与量並びに投与率及び投与の時間的経過は、治療を受けているものの特性及び重症度に依る。治療の処方、例えば、投与量の決定などは、一般開業医及び他の医師の責任の範囲内である。抗体及びその抗原結合断片の適切な用量は、一般的に知られており；Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４７：６５９－６６４（１９９１）；Ｂａｇｓｈａｗｅ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔ，Ｉｍｍｕｎ．ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．４：９１５－９２２（１９９１）を参照されたい。

【0087】

「十分量」またはＡｃｔＲＩＩ媒介疾患または状態を有する患者において特定の結果を達成する「ために十分な量」は、必要に応じて（すなわち、治療有効量の投与による）治療効果である所望の効果をもたらすのに有効である治療剤（例えば、本明細書に開示される抗体を含む抗原結合タンパク質）の量を指す。いくつかの実施形態では、かかる特定の結果は、それを必要とする患者におけるＡｃｔＲＩＩ活性の減少である。

【0088】

用語「標識」は、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体などの部分に直接または間接的にコンジュゲートし、それにより「標識」部分を生じさせる検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体が検出可能であってもよく（例えば、放射性同位体標識または蛍光標識）、または酵素標識の場合、検出可能な基質化合物または組成物の化学的修飾を触媒することができる。

【0089】

「治療する」または「治療」または「治療すること」または「改善する」または「改善すること」などの用語は、（ａ）診断された病的状態または障害を治癒し、減速させ、その症状を和らげ、及び／またはその進行を止める治療手段、及び（ｂ）標的とする疾患または状態の発症を防止及び／または遅らせる防止または防御手段との両方を指す。従って、治療を必要としている対象には、疾患または状態を既に有する対象；疾患または状態を発症する危険性がある対象；及び疾患または状態を防止すべき対象が含まれる。ある特定の態様では、対象は、その対象が、例えば、疾患または状態と関連する症状の完全、部分、または一時的な改善または排除を示す場合、本明細書に提供される方法による「治療」に成功している。いくつかの態様では、本開示は、疾患または不使用による筋肉消耗などの筋肉障害を治療する方法を提供する。さらなる態様では、本開示は、筋肉障害、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態、例えば、心筋線維症、及び特発性肺線維症（ＩＰＦ））；代謝性疾患（例えば、ＩＩ型糖尿病及び肥満）；炎症性疾患または状態、自己免疫疾患、心血管疾患（例えば、鬱血性心不全、及び高血圧）；眼疾患、例えば、加齢黄斑変性症；肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、神経疾患、例えば、骨粗鬆症；創傷治癒；体重減少；及びがん（例えば、癌腫、骨髄腫、骨誘導損失癌、下垂体癌、及び消化管癌）から選択される疾患または状態を治療する方法を提供する。さらなる態様では、本開示は、上記の疾患または状態のうちの１つ以上の治療または改善のための医薬の製造において、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用を提供する。

【0090】

本明細書で使用される場合、「と併用して」または「併用療法」は、追加療法（例えば、第２、第３、第４など）が体内でまだ効果的であるような投与の任意の形態を指す（例えば、複数の化合物は、対象において同時に効果的であり、それらの化合物の相乗効果を含み得る）。有効性は、血液、血清、または血漿中における薬剤の測定可能な濃度に相関しない場合がある。例えば、異なる治療化合物は、同じ製剤または別個の製剤のいずれか、付随的または連続的のいずれか、及び異なるスケジュールで投与することができる。従って、かかる治療を受ける対象は、異なる療法の併用効果から恩恵を受けることができる。本開示の１つ以上のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、１つ以上の他の付加剤及び／または支持療法と同時に、前に、または引き続いて投与することができる。一般に、各々の治療剤は、該特定の薬剤について決定された用量及び／またはタイムスケジュールで投与される。レジメンで使用するための特定の組み合わせは、本開示の拮抗薬と治療との相溶性、及び／または所望の結果を考慮する。

【0091】

本開示の方法及び技術は一般的に、別途示されない限り、本開示全体を通して引用され説明される、種々の一般的かつより具体的な参考文献に記載されるような、公知の従来の方法に従って行われる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、及びＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照されたい；これらは全て参照により本明細書に組み入れられる。

【0092】

用語「がん」、「腫瘍」、「がん性」、及び「悪性」は、典型的には調節されない細胞成長によって特徴付けられる哺乳動物の生理的状態を指し、またはそれを記述する。がんの例としては、腺癌を含む癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、黒色腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかるがんのより特定の例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、消化管癌、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、膠芽細胞腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓の癌腫及び肝細胞癌などの肝臓癌、膀胱癌、乳癌（ホルモン媒介性乳癌を含む、例えば、Ｉｎｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ９４：１０５７－１０６５（２００６）を参照されたい）、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（多発性骨髄腫など）、唾液腺癌、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌、様々なタイプの頭頸部癌、並びに粘液性卵巣癌、及び胆管癌（肝臓）などの粘液起源のがんが挙げられる。特定の態様では、がんは、骨髄線維症、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、または下垂体癌である。別の態様では、がんは、乳癌、消化管癌、または癌腫（例えば、基底及び扁平上皮細胞癌）である。さらなる態様では、がんは、骨喪失誘導癌である。

【0093】

用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸」は、交換可能に使用され、単数形並びに複数形の核酸を包含することを意図し、単離された核酸分子または構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ある特定の態様では、ポリヌクレオチドは、従来のホスホジエステル結合または非従来の結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）中に見出されるようなアミド結合）を含む。用語「核酸」は、ポリヌクレオチド中に存在する任意の１つ以上の核酸セグメント、例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡ断片を指す。核酸またはポリヌクレオチドに適用する場合、用語「単離された」は、その天然環境から取り除かれた核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを指し、例えば、ベクターに含まれる抗原結合タンパク質をコードする組換えポリヌクレオチドは、本開示の目的のために単離されたと考えられる。単離ポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種宿主細胞内で維持されるか、または溶液中の他のポリヌクレオチドから（部分的または実質的に）精製される組換えポリヌクレオチドが含まれる。単離ＲＮＡ分子は、インビボまたはインビトロで本開示のポリヌクレオチドのＲＮＡ転写物を含む。本開示による単離ポリヌクレオチドまたは核酸は、合成産出されたかかる分子をさらに含む。加えて、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、または転写終了シグナルなどの調節因子を含み得る。

【0094】

用語「ベクター」は、宿主細胞に１つ以上の目的の遺伝子または配列を送達し、一部の態様では発現させる能力を有する構築物を意味する。ベクターの例としては、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に関連するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、及びある特定の真核細胞、例えば、プロデューサー細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0095】

用語「宿主細胞」は、組換え核酸を内部に持つかまたは内部に持つことができる細胞または細胞集団を指す。宿主細胞は、原核（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、または真核であり得る。宿主細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、またはＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅなどの酵母を含む真菌細胞であり得る。宿主細胞はまた、種々の動物細胞、例えば、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ－９）または哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｆ、ＣＨＯ、ＣＯＳ－７、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）、及びハイブリドーマ）のいずれかである。さらなる態様では、宿主細胞は、ＣＨＯ－Ｋ、ＣＨＯ－０、ＣＨＯ－Ｌｅｃ１０、ＣＨＯ－Ｌｅｃ１３、ＣＨＯ－Ｌｅｃ１、ＣＨＯ Ｐｒｏ^－５、及びＣＨＯ ｄｈｆｒ^－からなる群から選択されるＣＨＯ細胞である。特定の態様では、宿主細胞は、ハイブリドーマである。

【0096】

用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、本明細書では、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために交換可能に使用される。ポリマーは、線状または分枝状であってもよく、それは修飾アミノ酸を含んでもよく、かつ非アミノ酸によって分断されていてもよい。用語はまた、天然でまたは介入によって修飾されている；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作または修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションなど、アミノ酸ポリマーも包含する。また、この定義内には、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、並びに当該技術分野において公知の他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。いくつかの態様では、提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗体に基づいているため、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、一本鎖または会合鎖として存在し得ることが理解される。

【0097】

「組換え」ポリペプチド、タンパク質、または抗体は、組換えＤＮＡ技術によって産生されるポリペプチド、タンパク質、または抗体を指す。宿主細胞で発現する組換え産生ポリペプチド、タンパク質、及び抗体は、任意の好適な技術によって分離され、分画され、または部分的もしくは実質的に精製されている天然または組換えポリペプチドと同様に、本開示の目的のために単離されたと見なされる。

【0098】

また、本開示で含まれるのは、ポリペプチドの断片、変異体、または誘導体、及びそれらの任意の組み合わせである。用語「断片」は、ポリペプチド及びタンパク質を参照する場合、参照ポリペプチドまたはタンパク質の特性の少なくともいくつかを保持する任意のポリペプチドまたはタンパク質を含む。ポリペプチドの断片は、タンパク質分解断片、並びに欠失断片を含む。

【0099】

用語「変異体」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親抗体またはポリペプチド配列のものとは異なる抗体またはポリペプチド配列を指す。抗体またはポリペプチドの変異体は、断片、並びにアミノ酸置換、欠失、または挿入による変化したアミノ酸配列を有する抗体またはポリペプチドも含む。変異体は、自然に発生し得るか、または非自然的に生じている場合もある。非自然発生変異体を、当該技術分野で知られている突然変異誘発技術を使用して産生し得る。変異体ポリペプチドは、保存的もしくは非保存的アミノ酸置換、欠失、または付加を含み得る。

【0100】

用語「誘導体」は、抗体またはポリペプチドに適用する場合、天然の抗体またはポリペプチドには見られない追加の特性を示すように変化されている抗体またはポリペプチドを指す。「誘導体」抗体の一例は、第２ポリペプチドまたは別の分子（例えば、ＰＥＧ、発色団、または蛍光団などのポリマー）または原子（例えば、放射性同位体）との融合体またはコンジュゲートである。

【0101】

用語「アミノ酸置換」は、親配列に存在するアミノ酸残基を別のアミノ酸残基に置き換えることを指す。アミノ酸は、親配列において、例えば、化学的ペプチド合成を介して、または公知の組換え方法を介して置換することができる。従って、「Ｘ位での置換」または「Ｘ位での置換」と言うときは、Ｘ位に存在するアミノ酸を代替的なアミノ酸残基で置換することを指す。いくつかの実施形態では、置換パターンは、スキーマＡＸＹに従って記述することができ、ここで、Ａは、天然でＸ位に存在するアミノ酸に対応する一文字コードであり、Ｙは、置換するアミノ酸残基である。他の態様では、置換パターンは、スキーマＸＹに従って記述することができ、ここで、Ｙは、天然でＸ位に存在するアミノ酸を置換するアミノ酸残基に対応する一文字コードである。

【0102】

「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、以前に定義されており、塩基性側鎖（例えば、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）、酸性側鎖（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、非荷電極性側鎖（例えば、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ）、非極性側鎖（例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ）、β分枝側鎖（例えば、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ）、及び芳香族側鎖（例えば、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ）が含まれる。従って、ポリペプチドのアミノ酸が同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸に置き換えられる場合、この置換は保存的であると見なされる。別の態様では、一続きのアミノ酸残基を、側鎖ファミリーメンバーの順番及び／または組成が異なる構造的には同様の一続きによって保存的に置き換えることができる。

【0103】

非保存的置換は、（ａ）電気陽性側鎖を有する残基（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓ）が電気陰性残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）に代えて、またはそれによって置換されているか、（ｂ）親水性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＶａｌ）に代えて、またはそれによって置換されているか、（ｃ）ＣｙｓまたはＰｒｏが任意の他の残基に代えて、またはそれによって置換されているか、または（ｄ）嵩高い疎水性または芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、またはＴｒｐ）がより小さい側鎖を有するもの（例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ）または側鎖を有しないもの（例えば、Ｇｌｙ）に代えて、またはそれによって置換されているものを含む。

【0104】

他の置換は、容易に同定することができる。例えば、アミノ酸アラニンについて、置換は、Ｄ－Ａｌａ、Ｇｌｙ、β－Ａｌａ、Ｌ－Ｃｙｓ、及びＤ－Ｃｙｓのいずれか１つから選ぶことができる。リジンについて、置換は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ、ｈｏｍｏ－Ａｒｇ、Ｍｅｔ、Ｄ－Ｍｅｔ、オルニチン、またはＤ－オルニチンのいずれか１つであってもよい。概して、単離されたポリペプチドの特性の変化を引き起こすと予想し得る機能的に重要な領域の置換は、（ａ）極性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が疎水性残基（例えば、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＡｌａ）に代えて（またはそれによって）置換されるか；（ｂ）Ｃｙｓ残基が任意の他の残基に代えて（またはそれによって）置換されるか；（ｃ）電気陽性側鎖を有する残基（例えば、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓ）が電気陰性側鎖を有する残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）に代えて（またはそれによって）置換されるか；または（ｄ）嵩高い側鎖を有する残基（例えば、Ｐｈｅ）が、かかる側鎖を有しないもの（例えば、Ｇｌｙ）に代えて（またはそれによって）置換されるものである。前述の非保存的置換のうちの１つがタンパク質の機能特性を変化させ得る可能性はまた、タンパク質の機能的に重要な領域に対する置換の位置にも相関する：一部の非保存的置換は、生物学的特性に対する効果をほとんどまたは全く有しない。

【0105】

用語「アミノ酸挿入」は、親配列に存在する２つのアミノ酸残基の間に新規アミノ酸残基を導入することを指す。アミノ酸は、例えば、化学的ペプチド合成を介して、または当該技術分野において公知の組換え方法を介して親配列に挿入することができる。従って、語句「Ｘ位とＹ位との間への挿入」または「Ｋａｂａｔ Ｘ位とＹ位との間への挿入」（ここで、Ｘ及びＹは、アミノ酸位置に対応する）（例えば、２３９位と２４０位との間へのシステインアミノ酸残基挿入）は、Ｘ位とＹ位との間へのアミノ酸の挿入を指し、核酸配列における、Ｘ位及びＹ位のアミノ酸をコードするコドン間への、あるアミノ酸をコードするコドンの塩基配列への挿入も指す。

【0106】

２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の「パーセント配列同一性」または「パーセント同一性」という用語は、２つの配列の最適アラインメントのため導入しなければならない付加または欠失（すなわちギャップ）を考慮した、比較ウィンドウにわたって配列が共有される同一のマッチ位置の数を指す。マッチ位置は、標的配列と参照配列との両方で同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が提供される任意の位置である。ギャップはヌクレオチドまたはアミノ酸ではないため、標的配列に提供されるギャップはカウントしない。同様に、カウントするのは標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸であり、参照配列のヌクレオチドまたはアミノ酸ではないため、参照配列に提供されるギャップもカウントしない。配列同一性のパーセンテージは、両方の配列に同一のアミノ酸残基または核酸塩基が存在する位置の数を決定してマッチ位置の数を求め、そのマッチ位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除し、その結果に１００を乗じて配列同一性パーセンテージを求めることにより計算される。２つの配列間の配列の比較及びパーセント配列同一性の決定は、容易に利用可能なソフトウェアプログラムを用いて達成することができる。好適なソフトウェアプログラムは、様々な供給元から、タンパク質配列及びヌクレオチド配列の両方のアラインメントについて利用可能である。パーセント配列同一性を決定するための１つの好適なプログラムは、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴプログラムスイートの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰのいずれかのアルゴリズムを使用して２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列の比較に用いられ、一方、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列の比較に用いられる。他の好適なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳバイオインフォマティクスプログラムスイートの一部であって、かつ、欧州バイオインフォマティクス研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ：ＥＢＩ）、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａからも入手可能なニードル（Ｎｅｅｄｌｅ）、ストレッチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）、ウォーター（Ｗａｔｅｒ）、またはマッチャー（Ｍａｔｃｈｅｒ）である。

【0107】

ＣＤＲまたはＣＤＲセットを運ぶための構造は、一般には、ＣＤＲまたはＣＤＲセットが、再配列免疫グロブリン遺伝子によってコードされる自然発生ＶＨ及びＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲまたはＣＤＲセットに対応する場所に位置する抗体重鎖または軽鎖配列またはその実質的な部分であろう。免疫グロブリン可変ドメイン及びそれらのＣＤＲの構造及び場所は、プログラム、及びＣｈｏｔｈｉａ、Ｃｈｏｔｈｉａ＋などの公知の可変ドメイン残基ナンバリングシステムを用いて、当業者によって容易に決定することができ、Ｋａｂａｔは、全体として参照により本明細書に組み込まれるＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｕ．Ｓ．ＤＨＨＳ．１９８７、及びインターネット上で利用可能なツール（例えば、ａｔ ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｙｓｉｓ／ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｉｎｐｕｔ／ｋｅｙ＿ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ／ｋｅｙ＿ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ．ｈｔｍｌ；及びｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ））を参照することで常法で決定することができる。

【0108】

ＣＤＲは、フィブロネクチン、シトクロムＢ、アルブミン（例えば、ＡＬＢＵｄＡｂ（Ｄｏｍａｎｔｉｓ／ＧＳＫ）及びＡＬＢ－Ｋｕｎｉｔｚ（Ｄｙａｘ））、３または６アミノ酸の非構造化反復配列（例えば、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ（登録商標）技術及びＸＴＥＮ（登録商標）技術）、及びエラスチン様反復ドメインを含む配列（例えば、全体として参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願第６１／４４２，１０６号を参照されたい）などの他の足場によって運ぶこともできる。

【0109】

本明細書に実質的に記載されるＣＤＲアミノ酸配列は、ヒト可変ドメインまたはその実質的な部分におけるＣＤＲとして運ぶことができる。本明細書に実質的に記載されるＨＣＤＲ３配列は、本開示の実施形態を表し、これらの各々は、ヒト重鎖可変ドメインまたはその実質的な部分におけるＨＣＤＲ３として運ぶことができる。

【0110】

本開示で利用される可変ドメインは、任意の生殖系列または再配列ヒト可変ドメインから得ることができ、または公知のヒト可変ドメインのコンセンサス配列に基づく合成可変ドメインであってもよい。ＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲ３）は、組換えＤＮＡ技術を用いて、ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）が欠けている可変ドメインのレパートリーに導入することができる。

【0111】

例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（全体として参照により本明細書に組み込まれるＢｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２））は、可変ドメイン領域の５’末端に方向付けられる、またはそれに隣接するコンセンサスプライマーが、ＣＤＲ３が欠けているＶＨ可変ドメインのレパートリーを提供するために、ヒトＶＨ遺伝子の第３のフレームワーク領域へのコンセンサスプライマーと併せて使用される、抗体可変ドメインのレパートリーを産生する方法を提供する。Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．は、どのようにこのレパートリーが特定の抗体のＣＤＲ３と組み合わせられ得るかをさらに説明している。類似の技術を使用して、本開示のＣＤＲ３由来配列は、ＣＤＲ３が欠けているＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーとシャッフルされてもよく、シャッフルされた完全なＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合タンパク質を提供するように、同種ＶＬまたはＶＨドメインと組み合わせられてもよい。次いで、好適な抗原結合タンパク質が選択され得るように、レパートリーは、国際出願公開第ＷＯ９２／０１０４７号、またはＫａｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを含む、文献のその後の大部分のいずれかのファージ提示系などの、好適な宿主系で提示することができる。レパートリーは、１０^４個以上の個別のメンバー、例えば、１０^６～１０^８、または１０^１０個のメンバーからなってもよい。他の好適な寄主系には、酵母ディスプレイ、細菌ディスプレイ、Ｔ７ディスプレイ、及びリボゾームディスプレイが含まれる。リボソームディスプレイの概説については、これらの各々は全体として参照により本明細書に組み込まれるＬｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５１７－５２７（２００４）及び国際出願公開第ＷＯ９２／０１０４７号を参照されたい。類似のシャッフリングまたはコンビナトリアル技術もβ－ラクタマーゼ遺伝子に関連する技術について記載しているが、そのアプローチが抗体生成のために使用できることを観察しているＳｔｅｍｍｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ ３７０：３８９－３９１（１９９４）（全体として参照により本明細書に組み込まれる））によっても開示されている。

【0112】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体及び抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩへの参照分子の結合をある程度まで遮断する程度に、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質がＡｃｔＲＩＩに結合する場合、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、それぞれ、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）に結合するために、参照分子と「競合する」と言われる。タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩに結合するために競合することで、ＡｃｔＲＩＩに結合している１つのアンカーを干渉する、遮断する、または「交叉遮断する」能力は、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を含む、当該技術分野において公知の任意の標準競合的結合アッセイ、またはＳｃａｔｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０－６７２（１９４９））に記載の方法に従って決定することができる。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩへの参照分子の結合を、例えば、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると言われている。いくつかの態様によれば、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡへの参照分子の結合を、例えば、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害する。他の態様によれば、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢへの参照分子の結合を、例えば、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害する。

【0113】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質
ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合するタンパク質を提供する。

【0114】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＴＧＦ－β受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００、５００、または１０００倍以上である親和性でＡｃｔＲＩＩに結合する。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと結合し、かつ、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜１０ｐＭ、＜１ｐＭ、または＜０．１ｐＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、≦１μＭ～≧０．１ｐＭ、≦１００μＭ～≧０．１ｐＭ、または≦１００μＭ～≧１ｐＭの範囲内でヒトＡｃｔＲＩＩに対するＫ_Ｄを有する。

【0115】

いくつかの態様では、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）が、参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）によってＡｃｔＲＩＩタンパク質に結合することを競合／遮断する能力を決定するために使用される。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）機器（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００）は、製造業者の推奨に従って操作されるさらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ融合タンパク質は、予め結合された抗ｎｉＦｃ ＩｇＧによってＣＭ５ ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップ上で捕捉されて、ＡｃｔＲＩＩ被覆表面を生成する。典型的には、ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ（ダイマー）の２００～８００の共鳴ユニットは、チップに結合される（容易に測定可能な結合のレベルを与えるが、使用される試験試薬の濃度によって容易に飽和可能である量）。

【0116】

互いに競合／遮断する能力についてアッセイされるべき２種のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（Ａ^＊及びＢ^＊と示される）は、試験混合物を作るために適した緩衝液中で結合部位の１：１モル比で混合される。結合部位ベースで濃度を計算する場合、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の分子量は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の総分子量を、そのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質上のＡｃｔＲＩＩＡ結合部位の数で除算したものであると仮定される。試験混合物中の各ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の濃度（すなわち、Ａ^＊及びＢ^＊）は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップ上で捕捉されたＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ分子に対するそのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の結合部位を容易に飽和させるために十分高くなければならない。混合物中のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質のＡ^＊及びＢ^＊は、（結合ベースで）同じモル濃度において存在し、その濃度は、典型的には、（結合部位ベースで）１．００～１．５マイクロモル濃度の間である。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質Ａ^＊のみ、及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質Ｂ^＊のみを含む別個の溶液も調製される。これら溶液中のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質Ａ^＊及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質Ｂ^＊は、試験混合物と同じ緩衝液中及び同じ濃度で存在しなければならない。試験混合物は、ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ被覆ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップ上を通過させ、結合の総量が記録される。チップは、次いで、チップ結合ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃに損傷を与えずに結合したＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を除去するような方法において処理される。典型的には、これは、３０ｍＭ ＨＣｌで６０秒間チップを処理することによって行われる。次いで、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質Ａ^＊単独の溶液を、ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ被覆表面の上に通過させ、結合量を記録する。チップを再び処理して、チップに結合したＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃに損傷を与えることなく、上記結合した抗体を除去する。次いで、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質Ｂ^＊単独の溶液を、ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ被覆表面の上に通過させ、結合量を記録する。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質Ａ^＊及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質Ｂ^＊の混合物の最大の理論的結合を、次に計算する。これは、ＡｃｔＲＩＩ表面の上に単独で通過させた場合には、各ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の結合の合計である。混合物の実際に記録された結合が、この理論的最大値より低い場合、上記２種のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、互いに競合／遮断している。従って、一般に、ブロッキングＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、アッセイの間に、及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の存在下で、記録された結合が、組み合わせにおける２種のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の理論的最大結合のうちの８０％～０．１％の間（例えば、８０％～４％）、具体的には、理論的最大結合のうちの７５％～０．１％の間（例えば、７５％～４％）、及びより具体的には、理論的最大結合のうちの７０％～０．１％の間（例えば、７０％～４％）（直前で定義されるとおり）であるように、上記のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ブロッキングアッセイにおいてＡｃｔＲＩＩに結合するものである。

【0117】

上記のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイは、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体などの２種のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が、互いに競合／遮断して、ＡｃｔＲＩＩに結合するかどうかを決定するために使用される例示的なアッセイである。稀な場合には、特定のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗Ｆｃ ＩｇＧを介してＣＭ５ ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップと結合されたＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃに結合しなくてもよい（これは、ＡｃｔＲＩＩ上の関連する結合部位が、ＦｃへのＡｃｔＲＩＩ連結によってマスクされるかもしくは破壊される場合に起こり得る）。このような場合、ブロッキングは、ＡｃｔＲＩＩのタグ付きバージョン（例えば、Ｃ末端Ｈｉｓタグ付きＡｃｔＲＩＩ）を使用して決定され得る。この特定の形式において、抗Ｈｉｓ抗体は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップに結合され、次いで、Ｈｉｓタグ付きＡｃｔＲＩＩは、チップの表面の上に通過させられ、抗Ｈｉｓ抗体によって捕捉される。交叉ブロッキング解析は、本質的に、各チップ再生サイクル後に、新たなＨｉｓタグ付きＡｃｔＲＩＩが、抗Ｈｉｓ抗体で被覆された表面に戻って負荷されることを除いて、上記に記載されるとおりに行われる。さらに、当該技術分野において公知である、種々の他のタグ及びタグ結合タンパク質の組み合わせが、このようなブロッキング解析のために使用され得る（例えば、ＨＡタグと抗ＨＡ抗体；ＦＬＡＧタグと抗ＦＬＡＧ抗体；ビオチンタグとストレプトアビジン）。以下は、一般に、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩへの参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の結合を遮断するかまたは遮断することができるかを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイを記載する。

【0118】

いくつかの態様では、ＥＬＩＳＡは、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）が、ＡｃｔＲＩＩタンパク質に結合するために、参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体またはＡｃｔＲＩＩリガンド）と競合する能力を決定するために使用される。かかるアッセイの一般原理は、参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）が、ＥＬＩＳＡプレートのウェルに被覆されることである。過剰量の第２の潜在的に遮断する試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、溶液中に添加される（すなわち、ＥＬＩＳＡプレートに結合されない）。次いで、制限された量のＡｃｔＲＩＩ（あるいは、ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ）が、ウェルに添加される。被覆された参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質及び溶液中の試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、制限された数のＡｃｔＲＩＩ（または、ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ）分子の結合について競合する。プレートは、被覆された参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質によって結合されなかったＡｃｔＲＩＩを除去するため、試験の溶液相のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、及び試験の溶液相のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質とＡｃｔＲＩＩとの間で形成されたいかなる複合体をも除去するために洗浄される。次いで、結合したＡｃｔＲＩＩの量は、適切なＡｃｔＲＩＩ検出試薬を使用して測定される。被覆された参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質がＡｃｔＲＩＩに結合することを遮断することができる溶液中の試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩ分子の数の低下を引き起こすことができる。というのは、被覆された参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、被覆された参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が第２の溶液相の試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の非存在下で結合し得るＡｃｔＲＩＩ分子の数に比例して結合し得るからである。アッセイについてのバックグラウンドシグナルは、被覆された参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、溶液相の試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、ＡｃｔＲＩＩ緩衝液のみ（すなわち、ＡｃｔＲＩＩなし）、及びＡｃｔＲＩＩ検出試薬とともにウェル中で得られたシグナルとして定義される。アッセイについての陽性対照シグナルは、被覆された参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、溶液相の試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質緩衝液のみ（すなわち、溶液相の試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質なし）、ＡｃｔＲＩＩ、及びＡｃｔＲＩＩ検出試薬とともにウェル中で得られたシグナルとして定義される。ＥＬＩＳＡアッセイは、バックグラウンドシグナルの少なくとも３倍の陽性対照シグナルを有するような様式において行われる。方法論的アーティファクトについての対照として、交叉ブロッキングアッセイは、直前で記載される形式において行われ得るか、また、逆にされ得る（試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が被覆された抗体として、及び参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が溶液相の抗体として）。

【0119】

いくつかの態様では、レポーター遺伝子アッセイは、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）がＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ）を中和する能力を決定するために使用される。いくつかの態様では、レポーター遺伝子アッセイは、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）がＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ）活性を中和する能力を決定するために、組換えＡ２０４細胞を用いて行われる。このアッセイは、トランスフェクション効率を制御するために、（ＣＡＧＡ）１２モチーフを含有するｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２プラスミド（例えば、Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ １７：３０９１－３１００（１９９８）及び米国特許第８，７６５，３８５号を参照されたい、これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）、並びにＲｅｎｉＵａレポータープラスミド（ｐＲＬＣＭＶ）でトランスフェクトしたヒト横紋筋肉腫細胞株に基づいている。ＣＡＧＡ１２モチーフは、ＴＧＦ－β応答遺伝子（ＰＡＩ－１遺伝子）に存在するため、このベクターは、Ｓｍａｄ２及びＳｍａｄ３を介してシグナル伝達する因子に一般に有用である。このアッセイを用いて候補タンパク質のＡｃｔＲＩＩＢ結合活性の測定に関して、Ａ２０４細胞株は、ＡｃｔＲＩＩＢよりもＡｃｔＲＩＩＡを主に発現するため、ＡｃｔＲＩＩＢ中和能力の可能性について抗体を直接試験することはできない。代わりに、このアッセイは、試験ＡｃｔＲＩＩタンパク質結合候補が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの両方と高親和性で結合することができるリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ１１）によって内因性ＡｃｔＲＩＩＡの活性化における可溶性融合タンパク質ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃの阻害効果を中和する能力を検出するために設計される。従って、このアッセイでは、ＡｃｔＲＩＩＡのリガンド媒介活性化は、ＡｃｔＲＩＩＢ結合が中和されるとＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃの存在に関わらずに生じる。

【0120】

アッセイの最初の日に、Ａ２０４細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－８２）を、４８ウェルプレート中で、１０^５細胞／ウェルにおいて分配する。２日目に、１０μｇ ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２、１μｇ ｐＲＬＣＭＶ、３０μｌ Ｆｕｇｅｎｅ ６（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、及び９７０μｌ ＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する溶液を、３０分間にわたって予備インキュベートし、次いで、ＭｃＣｏｙの増殖培地に添加し、これを、室温において一晩のインキュベーションにわたってプレートした細胞（５００μｌ／ウェル）に適用する。３日目に、培地を除去し、細胞を、６時間にわたって３７℃において、後述されるように調製されたリガンドと阻害剤の混合物とともに、インキュベートする。

【0121】

一態様によれば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の中和能力は、試験タンパク質の段階希釈を４８ウェルプレートで作製することによって、２００μｌ容量のアッセイ緩衝液（ＭｃＣｏｙの培地＋０．１％のＢＳＡ）中で評価する。候補タンパク質がＡｃｔＲＩＩＢ活性を中和する能力を評価するアッセイでは、アッセイ緩衝液中に等しい容量のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ（２００μｇ／ｍｌ）を次いで添加する。試験溶液を３７℃で３０分間インキュベートした後、４００μｌのアクチビンＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）を全てのウェルに添加し、３５０μｌのこの混合物をＡ２０４細胞の４８ウェルプレートの各ウェルに添加する。各濃度の試験タンパク質を重複して試験する。候補タンパク質がＡｃｔＲＩＩＢ活性を中和する能力を評価するアッセイでは、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃの最終濃度は、５０ｎｇ／ｍｌである（これは、アクチビンＡの最終濃度が５ｎｇ／ｍｌである場合のアクチビンＡシグナル伝達の阻害剤に対するＩＣ_５０である）。試験溶液で６時間インキュベーション後、細胞を０．１％のＢＳＡを含有するリン酸緩衝生理食塩水ですすぎ、次いで、受動溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｅ１９４１）で溶解し、－７０℃で一晩貯蔵する。４日目及び最終日に、プレートを、室温へと穏やかに撹拌しながら加温する。細胞溶解物を、化学発光プレート（９６ウェル）に重複して移し、Ｄｕａｌ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｅ１９８０）の試薬でルミノメーターにおいて解析して、正規化したルシフェラーゼ活性を決定する。

【0122】

ＡｃｔＲＩＩＢシグナル伝達に依存する薬物動態パラメーターは、ＡｃｔＲＩＩＢを中和しかつ治療上の利益を提供し得るこれらの結合タンパク質を同定するために、ＡｃｔＲＩＩＢの結合タンパク質のインビボ試験のためのエンドポイントとして測定され得る。ＡｃｔＲＩＩＢ中和結合剤は、ビヒクル治療動物と比較して、このような薬物動態パラメーターにおいて統計的に有意な変化を引き起こし得るものとして定義される。このようなインビボ試験は、任意の適切な哺乳動物（例えば、マウス、ラット、またはサル）において行われ得る。

【0123】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＴＧＦ－β受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００、５００、または１０００倍以上である親和性でＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＴＧＦ－β受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００、５００、または１０００倍以上である親和性でＡｃｔＲＩＩＡに結合する。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと結合し、かつ、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜１０ｐＭ、＜１ｐＭ、または＜０．１ｐＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、≦１μＭ～≧０．１ｐＭ、≦１００μＭ～≧０．１ｐＭ、または≦１００μＭ～≧１ｐＭの範囲内でヒトＡｃｔＲＩＩＡに対するＫ_Ｄを有する。

【0124】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＴＧＦ－βファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００、５００、または１０００倍以上である親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＴＧＦ－β受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００、５００、または１０００倍以上である親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し、かつ、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜１０ｐＭ、＜１ｐＭ、または＜０．１ｐＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、≦１μＭ～≧０．１ｐＭ、≦１００μＭ～≧０．１ｐＭ、または≦１００μＭ～≧１ｐＭの範囲内でヒトＡｃｔＲＩＩＢに対するＫ_Ｄを有する。

【0125】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＴＧＦ－βファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００、５００、または１０００倍以上である親和性でＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＴＧＦ－β受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の親和性よりも少なくとも１００、５００、または１０００倍以上である親和性でＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに結合する。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し、かつ、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜１０ｐＭ、＜１ｐＭ、または＜０．１ｐＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、≦１μＭ～≧０．１ｐＭ、≦１００μＭ～≧０．１ｐＭ、または≦１００μＭ～≧１ｐＭの範囲内でヒトＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに対するＫ_Ｄを有する。

【0126】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体である。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、完全長抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体または完全長抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体である。さらなる態様では、抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、またはＡｃｔＲＩＩ結合抗体その断片である。さらなる態様では、抗体は、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する。

【0127】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片）は、生物種間のＡｃｔＲＩＩ分子に結合することができる。

【0128】

ヒトＡｃｔＲＩＩＡ（配列番号１３８）の成熟ＡｃｔＲＩＩＡ細胞外ドメインは、２つの保存されたアミノ酸置換（すなわち、Ｋ１９Ｒ及びＶ７２Ｉ）だけがマウスＡｃｔＲＩＩＡオルソログ（Ｒｅｆ．Ｐ２７０３８）のものと異なる。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ヒトＡｃｔＲＩＩＡ（ｈＡｃｔＲＩＩＡ）及びマウスＡｃｔＲＩＩＡ（ｍｕｒＡｃｔＲＩＩＡ）に結合することができる。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）またはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）によって決定される１０^－８Ｍ未満、１０^－９Ｍ未満、または１０^－１０Ｍ未満の解離定数またはＫ_ＤでＡｃｔＲＩＩＡ（例えば、ｈＡｃｔＲＩＩＡまたはｍｕｒＡｃｔＲＩＩＡ）に特異的に結合することができる抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体（例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩＡ抗体、及びそれらのＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体断片、及び変異体並びに誘導体）である。さらなる態様では、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体は、＜１ｎＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体は、１ｎＭの一桁内または１ｎＭの二桁内のＫ_ＤでＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、≦１μＭ～≧０．１ｐＭ，≦１００μＭ～≧０．１ｐＭ、または≦１００μＭ～≧１ｐＭの範囲内でヒトＡｃｔＲＩＩＡに対するＫ_Ｄを有する。

【0129】

ヒトＡｃｔＲＩＩＢ（配列番号１３９）の成熟細胞外ドメインは、１つのアミノ酸置換（すなわち、Ａ９５Ｐ）だけがマウスＡｃｔＲＩＩＢオルソログ（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ０３１４２３）の対応する配列と異なる。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）またはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）によって決定される１０^－８Ｍ未満、１０^－９Ｍ未満、または１０^－１０Ｍ未満の解離定数またはＫ_ＤでＡｃｔＲＩＩＢ（例えば、ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｍｕｒＡｃｔＲＩＩＢ）に特異的に結合する抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体（例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、及びそれらのＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片、及び変異体並びに誘導体）である。さらなる態様では、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）またはＫＩＮＥＸＡ(登録商標)解析によって決定される＜１ｎＭのＫ_ＤでＡｃｔＲＩＩＢに結合する。さらなる態様では、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、１ｎＭの一桁内または１ｎＭの二桁内のＫ_ＤでＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、≦１μＭ～≧０．１ｐＭ，≦１００μＭ～≧０．１ｐＭ、または≦１ｎＭ～≧１ｐＭの範囲内でヒトＡｃｔＲＩＩＢに対するＫ_Ｄを有する。

【0130】

いくつかの態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片である。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ抗体は、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、四重特異性抗体、三重特異性抗体、二重特異性抗体、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、またはｂｉｓ－ｓｃＦｖを含む。

【0131】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬを含む抗体である。いくつかの態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、重鎖定常領域またはその断片をさらに含む。いくつかの態様では、抗体は、（ａ）ヒトＩｇＡ定常領域またはその断片；（ｂ）ヒトＩｇＤ定常領域またはその断片；（ｃ）ヒトＩｇＥ定常ドメインまたはその断片；（ｄ）ヒトＩｇＧ１定常領域またはその断片；（ｅ）ヒトＩｇＧ２定常領域またはその断片；（ｆ）ヒトＩｇＧ３定常領域またはその断片；（ｇ）ヒトＩｇＧ４定常領域またはその断片；及び（ｈ）ヒトＩｇＭ定常領域またはその断片からなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常領域を含む。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、重鎖定常領域またはその断片、例えば、ヒトＩｇＧ定常領域またはその断片を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、エフェクター機能及び／または半減期が変化しているかまたは変化するように突然変異している重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。

【0132】

特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、エフェクター機能を減少させる突然変異を含有するＩｇＧ１重鎖定常領域を含む抗体である（例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１－２５７５（２００１）；Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０５：２０１６７－２０１７２（２００８）；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３４：２２０４－２２１０（２００７）；Ｂｏｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：４０３－４１１（１９９３）；Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３（１９９４）；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ。２００：１６－２６（２０００）；Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：５６３－５７１（１９９９）；Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９２：１１９８０－１１９８４（１９９５）；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５－１９３３（２０００）；ＷＯ９７／１１９７１、及びＷＯ０７／１０６５８５；米国出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号；ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９：１１８５－１１９２（２００７）；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－６９１（２００９）；及びＫｕｍａｇａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４７：１４８９－１４９７（２００７）（これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。

【0133】

いくつかの態様では、重鎖定常領域またはその断片は、野生型ＩｇＧ定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を含み、修飾ＩｇＧは、野生型ＩｇＧ定常ドメインを有するＩｇＧの半減期と比較してＡＤＣＣが減少している。ＡＤＣＣを減少させる提供される抗体に含まれるＦｃ配列エンジニアリング修飾の例としては、ＩｇＧ１－Ｋ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ２－Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ２－Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ；ＩｇＧ４－Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ；ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ；ＩｇＧ２－ＥＵ配列１１８－２６０；ＩｇＧ４－ＥＵ配列２６１－４４７；ＩｇＧ２－Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；及びＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓに対応する１つ以上の修飾が挙げられ、位置の付番は、Ｋａｂａｔと同様にＥＵインデックスに従う。

【0134】

ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＣ活性が減少しているかまたは減少するように突然変異している重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＣ活性を減少させる突然変異を含有するＩｇＧ１重鎖定常領域を含む抗体である（例えば、ＷＯ９７／１１９７１及びＷＯ０７／１０６５８５；米国出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号；ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９：１１８５－１１９２（２００７）；Ｈａｙｄｅｎ－Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ １５：２７３９－２７４６（２００９）；Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０３：４００５－４０１０（２００６）；Ｂｒｕｃｋｈｅｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ １１：５０９－５１７（２００９）；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－６９１（２００９）；及びＳａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０５：２０１６７－２０１７２（２００８）（これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。ＣＤＣを減少させる抗ＡｃｔＲＩＩ抗体に含まれるＦｃ配列エンジニアリング修飾の例としては、ＩｇＧ１－Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ；ＩｇＧ２ ＥＵ配列１１８－２６０；ＩｇＧ４－ＥＵ配列２６１－４４７；ＩｇＧ２－Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ；及びＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｐ２３０Ｓに対応する１つ以上の修飾が挙げられる。

【0135】

さらなる態様では、重鎖定常領域またはその断片は、野生型ＩｇＧ定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を含み、修飾ＩｇＧは、野生型ＩｇＧ定常ドメインを有するＩｇＧの半減期と比較して増加した半減期を有する。例えば、ＩｇＧ定常ドメインは、２５１～２５７位、２８５～２９０位、３０８～３１４位、３８５～３８９位、及び４２８～４３６位（アミノ酸位の付番は、Ｋａｂａｔに記載されるとおりのＥＵインデックスに従う）にアミノ酸残基の１つ以上のアミノ酸置換を含むことができる。ある特定の態様では、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、またはＴｈｒによるＫａｂａｔ２５２位のアミノ酸の置換；ＴｈｒによるＫａｂａｔ２５４位のアミノ酸の置換；Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、またはＴｈｒによるＫａｂａｔ２５６位のアミノ酸の置換；ＬｅｕによるＫａｂａｔ２５７位のアミノ酸の置換；ＰｒｏによるＫａｂａｔ３０９位のアミノ酸の置換；ＳｅｒによるＫａｂａｔ３１１位のアミノ酸の置換；Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、またはＳｅｒによるＫａｂａｔ４２８位のアミノ酸の置換；Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｉｓｏ、Ｐｒｏ、またはＧｌｎによるＫａｂａｔ４３３位のアミノ酸の置換；またはＴｒｐ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、またはＴｙｒによるＫａｂａｔ４３４位のアミノ酸の置換のうちの１つ以上を含み得る。より具体的には、ＩｇＧ定常ドメインは、ＴｙｒによるＫａｂａｔ２５２位のアミノ酸の置換、ＴｈｒによるＫａｂａｔ２５４位のアミノ酸の置換、及びＧｌｕによるＫａｂａｔ２５６位のアミノ酸の置換を含む、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインと比べてアミノ酸置換を含有し得る。

【0136】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、軽鎖免疫グロブリン定常領域を含む抗体である。さらなる態様では、抗体は、ヒトＩｇカッパ定常領域またはヒトＩｇラムダ定常領域を含む。

【0137】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲは、表１に開示されるＶＨ及びＶＬ対に存在する。さらなる実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲは、（ａ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し、（ｂ）配列番号６３または７７のＶＨ配列、及び配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）配列番号４５または５７のＶＨ配列、及び配列番号５０のＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと結合し、及び（ｅ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び配列番号１３２のＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、からなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対に存在する。

【0138】

さらなる実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲは、（ａ）配列番号１４４のＶＨ配列、及び配列番号１５１のＶＬ配列を有するＶＨ及びＶＬ対に存在し、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0139】

さらなる実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲは、（ａ）配列番号１６５のＶＨ配列、及び配列番号１７２のＶＬ配列を有するＶＨ及びＶＬ対に存在し、タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0140】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセット：（ａ）ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、及びＶＨ－ＣＤＲ３、または（ｂ）ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、本明細書に開示されるＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲセットは、表１に開示されるＶＨまたはＶＬ配列中のＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。

【0141】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、本明細書に開示されるＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲセットは、表１に開示されるＶＨまたはＶＬ配列中のＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。

【0142】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0143】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１４５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１４７のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１５２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0144】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１６６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１６７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１６８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１７３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１７４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１７５のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0145】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、ＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＣＤＲセットを含む。ＣＤＲセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｆ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｇ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；及び（ｈ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｉ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｊ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｋ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｌ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号９９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１００のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｍ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１０６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｎ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１１４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１１５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｏ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｐ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0146】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、及びＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；及び（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；及び（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；または（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；及び（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0147】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、及びＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｆ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｇ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｈ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８０のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｉ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；または（ｊ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0148】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）（ｉ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｉｉｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｉｉｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；または（ｃ）（ｉ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｉｉｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0149】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、及びＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；及びＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0150】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、及びＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号９９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１００のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０１のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１０６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０８のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１１４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１１５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２１のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0151】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｉｉｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0152】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、及びＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0153】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0154】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；または（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；または（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；または（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；または（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0155】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；または（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；または（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；または（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；または（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ－結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0156】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；（ｂ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；（ｃ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有し；（ｄ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｅ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；または（ｆ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0157】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、（ａ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；（ｂ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；（ｃ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有し；（ｄ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｅ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；または（ｆ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0158】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；（ｂ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；（ｃ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；（ｄ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；（ｅ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；または（ｆ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0159】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、（ａ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；（ｂ）ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；（ｃ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；（ｄ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；（ｅ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；または（ｆ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0160】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４または７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５または７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６または８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５、９９、１０６、または１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１２６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１３３のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１３４のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１３５のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0161】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲセットは、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１７のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号２４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｅ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号３６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｆ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号４１のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１１のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｇ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号６５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号６６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；及び（ｈ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号７８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号７９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８０のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｉ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｊ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号５９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｋ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号８５のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号８６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号８７のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｌ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号９９のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１００のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｍ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１０６のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１０７のアミノ酸配列を有し、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１０８のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｎ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１１４のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１１５のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｏ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１１３のアミノ酸配列を有し；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１２０のアミノ酸配列を有し；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１２１のアミノ酸配列を有し；（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；及び（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有し；タンパク質が、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0162】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示されるＶＨ－ＣＤＲ３またはＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、表１に開示されるＶＨ－ＣＤＲ３またはＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示されるＶＨ－ＣＤＲ３及びＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、表１に開示されるＶＨ－ＣＤＲ３及びＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。

【0163】

さらなる態様では、本開示は、配列番号５、４６、６６、または８０のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含むＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質を提供する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号４、１８、２４、３０、または３６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号３、１７、２３、２９、３５、または４１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号４または５９のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号３または５８のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0164】

さらなる態様では、本開示は、配列番号１２、５３、または７３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３を含むＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質を提供する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、及び配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0165】

さらなる態様では、本開示は、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含むＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質を提供する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号８７、１０１、１０８、１１５、または１２１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８６、１００、１０７、１１４、または１２０のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号８５、９９、１０６または１１３のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１０１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１０１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１０１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１２１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号１２０のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0166】

さらなる態様では、本開示は、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３を含むＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質を提供する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、及び配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0167】

さらなる態様では、本開示は、配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＶＨ－抗原結合ドメイン３（ＡＢＤ３）を含むＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質を提供する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＡＢＤ３、及び配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＶＨ－抗原結合ドメイン２（ＶＨ－ＡＢＤ２）を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＡＢＤ３、配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＡＢＤ２、及び配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＶＨ－抗原結合ドメイン１（ＶＨ－ＡＢＤ１）を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0168】

さらなる態様では、本開示は、配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含むＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質を提供する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0169】

さらなる態様では、本開示は、配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３を含むＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質を提供する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、及び配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３、配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0170】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示される参照ＶＨまたはＶＬと比較して、合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨまたはＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、表１に開示される参照ＶＨまたはＶＬと比較して、合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨまたはＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示される参照ＶＨ及びＶＬ対と比較して、合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ及びＶＬ対を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、表１に開示される参照ＶＨ及びＶＬ対と比較して、合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ及びＶＬ対を含む。

【0171】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む：（ａ）（ｉ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０からなる群から選択される参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）配列番号４５または５７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）配列番号６３または７７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９からなる群から選択される参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び（ｅ）（ｉ）配列番号１２５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号１３２の参照ＶＬから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0172】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、（ｉ）配列番号１４４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号１５１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する、を有するＶＨ及びＶＬ対を含む。

【0173】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、（ｉ）配列番号１６５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列、及び（ｉｉ）配列番号１７２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する、を有するＶＨ及びＶＬ対を含む。

【0174】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬ対を含み、ＶＨ配列は、配列番号２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）ＶＨ配列は、配列番号１６の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；ＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）ＶＨ配列は、配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）ＶＨ配列は、配列番号２８の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｅ）ＶＨ配列は、配列番号３４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｆ）ＶＨ配列は、配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｇ）配列は、配列番号４５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｈ）ＶＨ配列は、配列番号５７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号５０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｉ）ＶＨ配列は、配列番号６３の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｊ）ＶＨ配列は、配列番号７７の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号７０の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｋ）配列は、配列番号８４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｌ）ＶＨ配列は、配列番号９８の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｍ）ＶＨ配列は、配列番号１０５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｎ）ＶＨ配列は、配列番号１１２の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｏ）ＶＨ配列は、配列番号１１９の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号９１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；または（ｐ）ＶＨ配列は、配列番号１２５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号１３２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0175】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬ対を含み、ＶＨ配列は、配列番号１４４の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号１５１の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0176】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬ対を含み、ＶＨ配列は、配列番号１６５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し；及びＶＬ配列は、配列番号１７２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有し、タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0177】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示される参照ＶＨまたはＶＬに対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨまたはＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、表１に開示される参照ＶＨまたはＶＬに対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨまたはＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示される参照ＶＨ及びＶＬに対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ及びＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、表１に開示される参照ＶＨ及びＶＬに対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ及びＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0178】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、以下のものからなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む：（ａ）（ｉ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）（ｉ）配列番号４５または５７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）（ｉ）配列番号６３または７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）（ｉ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び（ｅ）（ｉ）配列番号１２５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号１３２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0179】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し、（ｉ）配列番号１４４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号１５１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する、から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0180】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し、配列番号１６５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号１７２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する、を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0181】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、（ａ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）配列番号４５または５７のＶＨ配列、及び配列番号５０のＶＬ配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）配列番号６３または７７のＶＨ配列、及び配列番号７０のＶＬ配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ配列、及び配列番号９１のＶＬ配列；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；及び（ｅ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び配列番号１３２のＶＬ配列タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む：（ａ）配列番号２のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｂ）配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｃ）配列番号２２のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｄ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｅ）配列番号３４のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｆ）配列番号４０のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｇ）配列番号４５のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列；（ｈ）配列番号５７のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列；（ｉ）配列番号６３のＶＨ配列及び配列番号７０のＶＬ配列；（ｊ）配列番号７７のＶＨ配列及び配列番号７０のＶＬ配列；（ｋ）配列番号８４のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｌ）配列番号９８のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｍ）配列番号１０５のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｎ）配列番号１１２のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｏ）配列番号１１９のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；及び（ｐ）配列番号１２５のＶＨ配列及び配列番号１３２のＶＬ配列からなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む。

【0182】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、配列番号１４４のＶＨ配列及び配列番号１５１のＶＬ配列を含み、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0183】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、配列番号１６５のＶＨ配列及び配列番号１７２のＶＬ配列を含み、タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0184】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む：（ａ）配列番号２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬタンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｂ）配列番号１６に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬタンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｃ）配列番号２２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｄ）配列番号２８に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｅ）配列番号３４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｆ）配列番号４０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｇ）配列番号４５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｈ）配列番号５７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｉ）配列番号６３に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｊ）配列番号７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；（ｋ）配列番号８４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ１、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｌ）配列番号９８に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｍ）配列番号１０５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ１、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｎ）配列番号１１２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ１、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；（ｏ）配列番号１１９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ１、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと結合し；及び（ｐ）配列番号１２５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号１３２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬ、タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0185】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１４４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号１５１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含み；タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0186】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含み；タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0187】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、（ａ）配列番号２のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｂ）配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｃ）配列番号２２のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｄ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列（ｅ）配列番号３４のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｆ）配列番号４０のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；（ｇ）配列番号４５のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列；（ｈ）配列番号５７のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列；（ｉ）配列番号６３のＶＨ配列及び配列番号７０のＶＬ配列；（ｊ）配列番号７７のＶＨ配列及び配列番号７０のＶＬ配列；（ｋ）配列番号８４のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｌ）配列番号９８のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｍ）配列番号１０５のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｎ）配列番号１１２のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列；（ｏ）配列番号１１９のＶＨ配列及び配列番号９１の配列；及び（ｐ）配列番号１２５のＶＨ配列及び配列番号１３２の配列からなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む。

【0188】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１４４のＶＨ配列及び配列番号１５１のＶＬ配列を含む。

【0189】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ配列及び配列番号１７２のＶＬ配列を含む。

【0190】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号２、１６、２２、２８、３４、４０、４５、５７、６３、または７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号２２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号２８に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号３４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号４０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号４５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号５７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号６３に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号９、５０、または７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号４５または５７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号４５または５７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号５０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号６３または７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し；及びＶＬは、配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号６３または７７に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号７０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0191】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１４４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１５１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１４４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し；及びＶＬは、配列番号１５１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号１５１のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0192】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１６５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１７２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１６５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し；及びＶＬは、配列番号１７２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＩＩＲＡ及びＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢの各々に結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0193】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号８４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号９８に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１０５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１１２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１１９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号８４に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号９８に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１０５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１１２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１１９に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号９１に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫＤで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0194】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１２５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１３２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１２５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し；及びＶＬは、配列番号１３２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫＤで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0195】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩとの結合に対して、本明細書に開示されるＶＨ及びＶＬ配列対を含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩとの結合に対して、表１に開示されるＶＨ及びＶＬ配列対を含む抗体と競合する。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と同じエピトープに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、表１に開示されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と同じエピトープに結合する。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が参照ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質とＡｃｔＲＩＩ上の同じエピトープとの結合に競合する及び／またはエピトープに結合する能力は、本明細書に開示されるまたはあるいは当該技術分野において公知の技術を用いて容易に決定することができる。

【0196】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号２、１６、２２、２８、３４、４０、４５、５７、６３、または７７のＶＨを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号９、５０、または７０のＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号２、１６、２２、２８、３４、４０、４５、５７、６３、または７７のＶＨ；及び配列番号９、５０、または７０のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１４４のＶＨを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１５１のＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、配列番号１４４のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合するが、ＡｃｔＲＩＩＡとは特異的に結合しない。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＡｃｔＲＩＩＢ及び配列番号１６５のＶＨを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＡｃｔＲＩＩＢ及び配列番号１７２のＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＡｃｔＲＩＩＢ及び配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する。

【0197】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）に結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）に結合するが、ＡｃＲＩＩＡと結合しない。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＶＫＫＧＣＷＬＤＤ（配列番号１５８）に結合するが、ＡｃＲＩＩＡと結合しない。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びアミノ酸残基ＶＫＫＧＣＷＬＤＤ（配列番号１５８）に結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びアミノ酸残基ＶＫＫＧＣＷＬＤＤ（配列番号１５８）に結合するが、ＡｃｔＲＩＩＡと結合しない。

【0198】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）；及び（ｄ）ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）からなる群から選択されるポリペプチドに結合する。

【0199】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ポリペプチドまたは以下のものからなる群から選択されるポリペプチドセットに結合する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びアミノ酸残基ＶＫＫＧＣＷＬＤＤ（配列番号１５８）；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）、アミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）、及びアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）；（ｄ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）；（ｅ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）、アミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）、及びアミノ酸残基ＶＫＫＧＣＷＬＤＤ（配列番号１５８）；（ｆ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）及びＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）；（ｇ）ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）、アミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）、及びアミノ酸残基ＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＴ（配列番号１６３）；（ｈ）ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）、アミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）、及びアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）、及びＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）、アミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）、及びアミノ酸残基ＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＴ（配列番号１６３）。

【0200】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号２、１６、２２、２８、３４、４０、４５、５７、６３、７７、または１４４のＶＨ、及び配列番号９、５０、７０、または１５１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号２、１６、２２、２８、３４、４０、４５、５７、６３、７７、または１４４のＶＨ、及び配列番号９、５０、７０、または１５１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ上の同じエピトープに結合する。

【0201】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）は、配列番号２のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号２のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号２のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0202】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号１６のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号１６のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0203】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号２２のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号２２のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号２２のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0204】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号２８のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号２８のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号２８のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0205】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号３４のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号３４のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号３４のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0206】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号４０のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号４０のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号４０のＶＨ及び配列番号９のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0207】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号４５のＶＨ及び配列番号５０のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号４５のＶＨ及び配列番号５０のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号４５のＶＨ及び配列番号５０のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0208】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号５７のＶＨ及び配列番号５０のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号５７のＶＨ及び配列番号５０のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号５７のＶＨ及び配列番号５０のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0209】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号６３のＶＨ及び配列番号７０のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号６３のＶＨ及び配列番号７０のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号６３のＶＨ及び配列番号７０のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0210】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号７７のＶＨ及び配列番号７０のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号７７のＶＨ及び配列番号７０のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号７７のＶＨ及び配列番号７０のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0211】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号１４４のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号１４４のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１４４のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0212】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。

【0213】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0214】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）との結合に対して、配列番号１４４のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む抗体と競合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＶＫＫＧＣＷＬＤＤ（配列番号１５８）に結合するために、配列番号１４４のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む抗体と競合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びアミノ酸残基ＶＫＫＧＣＷＬＤＤ（配列番号１５８）に結合するために、配列番号１４４のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合しない。

【0215】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ；及び配列番号９１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0216】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）に結合する。

【0217】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）に結合する。

【0218】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）に結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）に結合する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）に結合する。さらなる実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）、アミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）、及びアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）に結合する。

【0219】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）に結合する。

【0220】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）に結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）及びアミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）に結合する。

【0221】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＴ（配列番号１６３）に結合する。さらなる実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）、アミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）、及びアミノ酸残基ＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＴ（配列番号１６３）に結合する。

【0222】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）及びＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）に結合する。

【0223】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）及びＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）に結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）及びアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）、及びＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）及びアミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）に結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）、アミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）、及びＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）及びアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１）、アミノ酸残基ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２）、及びアミノ酸残基ＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＴ（配列番号１６３）に結合する。

【0224】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0225】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0226】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）との結合に対して、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）との結合に対して、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）及びアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）に結合するために、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。

【0227】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）との結合に対して、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体と競合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）との結合に対して、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）及びアミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）に結合するために、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体と競合する。

【0228】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）に結合するために、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。

【0229】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）に結合するために、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体と競合する。

【0230】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）、アミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）、及びアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）に結合するために、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。

【0231】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸残基ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号１５９）、アミノ酸残基ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７）、及びアミノ酸残基ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０）に結合するために、配列番号１６５のＶＨ及び配列番号１７２のＶＬを含む抗体と競合する。

【0232】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号９１のＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ；及び配列番号９１のＶＬを含む。

【0233】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１６５のＶＨを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１７２のＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、配列番号１６５のＶＨ；及び配列番号１７２のＶＬを含む。

【0234】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号８４のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0235】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号９８のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号９８のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号９８のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0236】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１０５のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号１０５のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１０５のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0237】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１１２のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号１１２のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１１２のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0238】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１１９のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号１１９のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１１９のＶＨ及び配列番号９１のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0239】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、配列番号１２５のＶＨ及び配列番号１３２のＶＬを含む。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、配列番号１２５のＶＨ及び配列番号１３２のＶＬを含む抗体と競合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、配列番号１２５のＶＨ及び配列番号１３２のＶＬを含む抗体とＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。

【0240】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、及びＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｂ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；または（ｃ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≦１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0241】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｂ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；または（ｃ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0242】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤＲセットは、ＣＤＲの参照セットと同一であるかまたはＣＤＲの参照セットから合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０未満のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＣＤＲの参照セットは、（ａ）ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３または５８のアミノ酸配列を有し；（ｂ）ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４または５９のアミノ酸配列を有し；（ｃ）ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号４６のアミノ酸配列を有し；（ｄ）ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号５１のアミノ酸配列を有し；（ｅ）ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を有し；または（ｆ）ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡまたはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0243】

さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＶＨ抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）セット：ＶＨ－ＡＢＤ１、ＶＨ－ＡＢＤ２、ＶＨ－ＡＢＤ３、ＶＬ－ＡＢＤ１、ＶＬ－ＡＢＤ２、及びＶＬ－ＡＢＤ３を含み、ＡＢＤセットは、（ａ）ＶＨ－ＡＢＤ１が、配列番号１４０のアミノ酸配列を有し；（ｂ）ＶＨ－ＡＢＤ２が、配列番号１４１のアミノ酸配列を有し；（ｃ）ＶＨ－ＡＢＤ３が、配列番号１４２のアミノ酸配列を有し；（ｄ）ＶＬ－ＡＢＤ１が、配列番号９２のアミノ酸配列を有し；（ｅ）ＶＬ－ＡＢＤ２が、配列番号９３のアミノ酸配列を有し；または（ｆ）ＶＬ－ＡＢＤ３が、配列番号９４のアミノ酸配列を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＶＨ及びＶＬを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0244】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ配列は、配列番号１２５の参照ＶＨ配列と同一であるかまたは配列番号１２５の参照ＶＨ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入を有する。ＶＬ配列は、配列番号１３２の参照ＶＬ配列と同一であるかまたは配列番号１３２の参照ＶＬ配列から合計で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５未満、または０、アミノ酸置換、付加、及び／または欠失を有する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。

【0245】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体である。いくつかの態様では、抗ＡｃｔＲＩＩは、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、マウス抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、多重特異性抗体、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆａｂ’断片、ｄｓＦｖ断片、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃ（Ｆｖ）_２断片である。

【0246】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）と特異的に結合し、ＡｃｔＲＩＩ－リガンド（例えば、ＧＤＦ８（ミオスタチン）及び／またはアクチビン）の活性を遮断する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する（例えば、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ８（ミオスタチン及び／またはアクチビン）の活性と関連する筋肉形成の阻害または脂肪形成の増加を減少させる）。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、筋肉障害または代謝性障害と関連する１つ以上の状態を治療または改善する。いくつかの態様では、筋肉障害は、疾患または不使用による筋肉消耗である。いくつかの態様では、代謝性障害は、糖尿病、肥満、高血糖、または骨量減少である。

【0247】

特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体または抗ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ抗体）は、ＧＤＦ８（ミオスタチン）またはＧＤＦ８媒介のＡｃｔＲＩＩＢ Ｓｍａｄシグナル伝達によってＡｃｔＲＩＩＢの結合を阻害または減少させる。別の態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、筋肉形成の阻害または脂肪形成の増加を減少させる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し、筋肉障害または代謝性障害と関連する１つ以上の状態を阻害または減少させる。いくつかの態様では、筋肉障害は、疾患または不使用による筋肉消耗である。いくつかの態様では、代謝性障害は、糖尿病、肥満、高血糖、または骨量減少であり、対象における筋肉量または筋力を増加させる。

【0248】

ある特定の態様では、本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及び抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体）によるＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）活性の遮断は、筋肉障害、例えば、筋肉消耗と関連する１つ以上の状態を阻害または減少させる。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩの遮断は、疾患または不使用による筋肉消耗と関連する１つ以上の状態を阻害または減少させる。特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体または抗ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ抗体）は、ＧＤＦ８によってＡｃｔＲＩＩＢとの結合を阻害または減少させる。別の態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、Ｓｍａｄ依存性経路によって筋肉分化の阻害を阻害または減少させる。

【0249】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、ＡｃｔＲＩＩＢリガンド媒介活性を遮断する。ＧＤＦ－８などのいくつかのＡｃｔＲＩＩＢリガンドは、骨格筋組織の負の調節因子であることが知られており、ミオスタチンシグナル伝達は、筋肉量につながることが知られている。ＡｃｔＲＩＩＢリガンド媒介シグナル伝達は、筋肉特異的酵素（例えば、クレアチンキナーゼ）の産生を調節し、筋芽細胞の増殖を刺激し、前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を調節することもできる。増加したミオスタチン活性は、筋肉消耗障害、不活性による筋力低下、及び代謝性障害、例えば、糖尿病、肥満、高血糖、及び骨量減少と関連している。増加したＡｃｔＲＩＩＢリガンド媒介活性は、脂肪／筋肉比の加齢による増加、及び加齢による筋委縮とも関連している。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、いくつかのＡｃｔＲＩＩＢリガンドの活性と関連する筋肉形成の阻害または脂肪形成の増加を減少させる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、筋肉障害または代謝性障害と関連する１つ以上の状態を治療または改善する。いくつかの態様では、筋肉障害は、疾患または不使用による筋肉消耗である。いくつかの態様では、代謝性障害は、糖尿病、肥満、高血糖、または骨量減少である。ＡｃｔＲＩＩＢリガンド媒介活性は、当該技術分野で認識された方法、例えば、本明細書に記載されるものを用いて決定することができる。

【0250】

ある特定の態様では、本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及び抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体）によるＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）活性の遮断は、線維症と関連する１つ以上の状態を減少させる。特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、線維性の病変のＡｃｔＲＩＩＢ媒介発症、体重減少または他の臨床症状の低下、及び／または線維症状態の発症と関連する生体分子（例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質発現）の発現変化を阻害または減少させる。特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、線維性の病変のＡｃｔＲＩＩＡ媒介発症、体重減少または他の臨床症状の低下、及び／または線維症状態の発症と関連する生体分子（例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質発現）の発現変化を阻害または減少させる。

【0251】

上述のとおり、ＡｃｔＲＩＩに結合するＶＨ及び／またはＶＬアミノ酸配列を含有するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにそれらの変異体及び誘導体）は、本明細書に示される配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し得る。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩに結合するＶＨ及び／またはＶＬアミノ酸配列（複数可）は、本明細書に示される配列と比べて８、７、６、５、４、３、２、１個のアミノ酸付加、置換（例えば、保存的置換）、または欠失を含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩに結合するＶＨ及び／またはＶＬアミノ酸配列は、本明細書に示される配列と比べて１、２、３、４、５個以上のアミノ酸付加、置換（例えば、保存的置換）、または欠失を含む。あるＶＨ領域またはＶＬ領域と特定のパーセント類似性を有するか、または１つ以上の置換、欠失及び／または挿入（例えば、保存的置換）を有するＶＨ及びＶＬ領域を含有する抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、本明細書に記載されるＶＨ及び／またはＶＬ領域をコードする核酸分子の突然変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ媒介性突然変異誘発）と、続くＡｃｔＲＩＩとの結合に関するコードされた改変抗体の試験、及び、必要に応じて、本明細書に記載される機能アッセイまたは保持機能を試験するため常法で改良し得る当該技術分野において公知のアッセイを用いた保持機能に関する試験によって得ることができる。

【0252】

抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体（例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにそれらの変異体及び誘導体）などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質のｈＡｃｔＲＩＩＢ、ｍｕｒＡｃｔＲＩＩＢに対する親和性またはアビディティは、当該技術分野において公知の任意の好適な方法、例えば、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または動態学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）またはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）解析）を用いて実験的に決定することができる。直接結合アッセイ並びに競合的結合アッセイフォーマットは、容易に用いることができる。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）；及び本明細書に記載される方法を参照されたい）。特定の抗体抗原相互作用についての計測される親和性は、異なる条件下（例えば、塩濃度、ｐＨ、温度）で計測された場合には変動し得る。従って、親和性及び他のＡｃｔＲＩＩ結合パラメーター（例えば、Ｋ_ＤまたはＫｄ、Ｋ_ｏｎ、Ｋ_ｏｆｆ）の計測は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質及びＡｃｔＲＩＩの標準溶液で行われ、測定は、本明細書に記載されるまたはあるいは当該技術分野において公知の標準化条件及び方法を用いて行われる。

【0253】

本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及び／または抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をさらに提供し、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、異種薬剤にコンジュゲートされている。ある特定の態様では、異種薬剤は、抗菌剤、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、脂質、生物学的反応修飾物質、医薬品、リンホカイン、異種抗体または抗体断片、検出可能標識、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ヘテロコンジュゲートＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質については、本明細書の他の部分でさらに詳細に考察する。

【0254】

ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体ではない。タンパク質標的に高親和性で結合する非抗体ポリペプチドを同定及び作製する種々の方法が当該技術分野において公知である。例えば、Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１８：２９５－３０４（２００７）；Ｈｏｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５：１４－２７（２００６）；Ｇｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：６５３－６５８（２００６）；Ｎｙｇｒｅｎ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６６８－２６７６（２００８）；及びＳｋｅｒｒａ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６７７－８３（２００８）（これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。いくつかの態様では、ファージディスプレイ技術を用いて、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を同定／作製することができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＶＡＳＰポリペプチド、トリ膵臓ポリペプチド（ａＰＰ）、テトラネクチン（ＣＴＬＤ３に基づく）、アフィリン（γＢ－クリスタリン／ユビキチンに基づく）、ノッチン、ＳＨ３ドメイン、ＰＤＺドメイン、テンダミスタット、トランスフェリン、アンキリンコンセンサス反復ドメイン（例えば、ＤＡＲＰｉｎｓ）、リポカリンタンパク質折畳み（例えば、アンチカリン及びデュオカリン）、タンパク質エピトープ模倣物（ＰＥＭ）、マキシボディ／アビマー、ドメイン抗体、フィブロネクチンドメイン（例えば、１０Ｆｎ３、例えば、米国出願公開第２００３／０１７０７５３号及び同第２００９０１５５２７５号（これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）、タンパク質Ａ（例えば、アフィボディ）のドメイン、及びチオレドキシンからなる群から選択されるタイプに基づくタンパク質足場を含む。

【0255】

いくつかの態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、本明細書に提供される抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体と競合するＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体、及びＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体断片）を提供する。いくつかの態様では、本開示は、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質とＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合するＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質を提供する。

【0256】

いくつかの態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、本明細書に提供される抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体と競合するＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、及びＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片）を提供する。いくつかの態様では、本開示は、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合するＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質を提供する。試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が、例えば、抗体を含む配列番号４０のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列、または配列番号１１９のＶＨ配列及び配列番号９１のＶＬ配列を含む抗体などの参照結合タンパク質の、ＡｃｔＲＩＩＢへの結合を阻害する能力は、試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が、参照抗体に結合するために、ＡｃｔＲＩＩＢと競合し得ることを実証している。かかるＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、非限定的な理論によれば、それが競合するＡｃｔＲＩＩＢ参照抗体とＡｃｔＲＩＩＢ上の同じまたは関連する（例えば、構造的に類似しているか、または空間的に近接した）エピトープに結合することができる。一態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、配列番号４０のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列を含む抗体とＡｃｔＲＩＩＢ上の同じエピトープに結合する。

【0257】

ＡｃｔＲＩＩ受容体、例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡは、ＡｃｔＲＩコレセプター（例えば、Ａｌｋ４及びＡｌｋ７）をリン酸化し、Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を介してシグナル伝達することが知られている。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及び抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体）は、その同種ＡｃｔＲＩ受容体のＡｃｔＲＩＩ媒介リン酸化を減少させることができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）は、ＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のＡｃｔＲＩＩＢ媒介リン酸化を減少させることができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体）は、ＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のＡｃｔＲＩＩＡ媒介リン酸化を減少させることができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩ２発現細胞におけるＡｃｔＲＩＩ媒介Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）リン酸化を阻害することができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）は、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＡｃｔＲＩＩＢ媒介Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）リン酸化を減少させることができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体）は、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＡｃｔＲＩＩＡ媒介Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）リン酸化を減少させることができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ受容体を発現する細胞は、ヒトである。

【0258】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、以下のものから選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、アクチビンＡと競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）またはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）によって決定される≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0259】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体）は、細胞ベースアッセイを用いて測定されたとおり、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞におけるＡｃｔＲＩ受容体（例えば、ＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７）のＡｃｔＲＩＩ媒介リン酸化、またはＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を抑制する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、細胞ベースアッセイを用いて測定されたとおり、５００ｐＭ未満、３５０ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、７５ｐＭ未満、６０ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＩＣ_５０でＡｃｔＲＩＩ媒介リン酸化を抑制する。

【0260】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の調製
いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ）の細胞外ドメインに結合する。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体及び／または抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体及び完全長抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体である。

【0261】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、公知の技術を用いて容易に調製することができる。モノクローナル抗ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ）抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７（１９７５）に記載されているようなハイブリドーマ法を含む当該技術分野において公知の技術を用いて調製することができる。ハイブリドーマ法を用いて、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物を、前述のように免疫化して、免疫化抗原に特異的に結合する抗体のリンパ球による産生を誘導する。リンパ球はインビトロでも免疫化され得る。免疫化後、リンパ球を単離し、好適な骨髄腫細胞株と融合してハイブリドーマ細胞を形成し、次いでこれは未融合リンパ球及び骨髄腫細胞から分離して選択され得る。ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡなどのＡｃｔＲＩＩに対して特異的に指向することが免疫沈降法、免疫ブロッティング法、またはインビトロ結合アッセイ法（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ））によって決定されたモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを、標準的な方法（例えば、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６を参照されたい）を用いたインビトロ培養または動物中の腹水腫瘍としてインビボで増やすことができる。次いで、上記ポリクローナル抗体について記載したように、培養培地または腹水液からモノクローナル抗体を精製することができる。

【0262】

提供されるモノクローナル抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように組換えＤＮＡ法を用いて作製することもできる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、成熟Ｂ細胞またはハイブリドーマ細胞から、例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを用いるＲＴ－ＰＣＲによって単離し、それらの配列を公知の手順を用いて決定する。次いで、重鎖及び軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドは、そうしなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、または骨髄腫細胞にトランスフェクトされた場合に、宿主細胞によってモノクローナル抗体が産生される好適な発現ベクターにクローニングする。組換え抗ＡｃｔＲＩＩモノクローナル抗体は、公知の技術を用いて、所望の種のＣＤＲを発現するファージディスプレイライブラリーから容易に単離することもできる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４（１９９０）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）を参照されたい）。

【0263】

抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、必要に応じて、ヒト化され、表面再構成され、及び遺伝子操作され、ＡｃｔＲＩＩ抗原（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ）に対する高親和性、及び他の好ましい生物学的特性を示すことができる。例えば、ヒト化（またはヒト）抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、一般に利用可能な三次元免疫グロブリンモデリング、及びフレームワーク（ＦＷ）残基、コンセンサス配列、及び生殖系列配列を選択する公知の手順を用いて、容易に設計して調製し、所望の抗体特性、例えば、ＡｃｔＲＩＩに対する増加した親和性をもたらすことができる。

【0264】

親和性成熟戦略及び鎖シャッフリング戦略は、当該技術分野において公知であり、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の高親和性の抗ＡｃｔＲＩＩ（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＡ及び／または抗ＡｃｔＲＩＩＢ）抗体、並びに誘導体及び変異体を作製するのに利用することができる。例えば、全体として参照により本明細書に組み込まれるＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）を参照されたい。本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の高親和性の抗ＡｃｔＲＩＩ（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＡ及び／または抗ＡｃｔＲＩＩＢ）抗体、並びに誘導体及び変異体を作製するさらなる戦略は、全可変ドメイン内に変異を生じさせるために、１つ以上の選択されたＶＨ及び／またはＶＬ遺伝子のランダム突然変異誘発を用いて、本開示のＣＤＲ由来配列を担う新規のＶＨまたはＶＬ領域を生成させる。エラープローンＰＣＲを使用するかかる技術は、Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８９：３５７６－３５８０（１９９２））に記載される。いくつかの実施形態では、１つまたは２つのアミノ酸置換をＶＨ ＣＤＲ及び／またはＶＬ ＣＤＲのセット内に作製する。さらなる戦略は、本明細書に開示される抗ＡｃｔＲＩＩ抗体をコードするＶＨまたはＶＬ遺伝子ＣＤＲ領域に定方向突然変異誘発を用いた。かかる技術の例は、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９１：３８０９－３８１３（１９９４））及びＳｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１－５６７（１９９６））に記載される。

【0265】

本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体のヒト化、表面再構成、または遺伝子操作は、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８））、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）、米国特許第５，６３９，６４１号、同第５，７２３，３２３号；同第５，９７６，８６２号；同第５，８２４，５１４号；同第５，８１７，４８３号；同第５，８１４，４７６号；同第５，７６３，１９２号；同第５，７２３，３２３号；同第５，７６６，８８６号；同第５，７１４，３５２号；同第６，２０４，０２３号；同第６，１８０，３７０号；同第５，６９３，７６２号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，２２５，５３９号；同第４，８１６，５６７号、同第７，５５７，１８９号；同第７，５３８，１９５号；及び同第７，３４２，１１０号；国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０号；同第ＰＣＴ／ＵＳ９６／１８９７８号；同第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０９６３０号；同第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５９３９号；同第ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３４号；同第ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１３３４号；同第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号；同第ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５号；国際出願公開第ＷＯ９０／１４４４３号；同第ＷＯ９０／１４４２４号；同第ＷＯ９０／１４４３０号；及び欧州特許公開第ＥＰ２２９２４６号に記載されるものを含むが、これらに限定されない任意の公知の方法を用いて行うことができ；これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。同様に、公知のアッセイは、望ましい特性を示すＡｃｔＲＩＩ抗体を容易に選択するために利用可能である（例えば、ＡｃｔＲＩＩに対する結合親和性を決定するためのアッセイ；本明細書に記載されるＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づくヒトＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質競合的結合アッセイなどの交叉ブロッキングアッセイ）。

【0266】

非ヒトまたはヒト抗体を遺伝子操作し、ヒト化し、または表面再構成するための方法も使用することができ、当該技術分野において公知である。ヒト化された、表面再構成された、または同様に遺伝子操作された抗体は、非ヒト（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、または他の哺乳動物を含むが、これに限定されない）である材料由来の１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「インポート」残基と呼ばれ、典型的には、公知のヒト配列の「インポート」可変、定常、または他のドメインから採られている残基によって置換される。このようなインポートされた配列は、当該技術分野において公知のように、免疫原性を低減するか、または、結合性、親和性、オン・レート、オフ・レート、アビディティ、特異性、半減期、もしくは任意の他の適切な特性を、低減するか、高めるか、もしくは改善するために使用することができる。好ましくは、非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部または全部は維持されるが、可変及び定常領域の非ヒト配列は、ヒトまたは他のアミノ酸で置換することができる。

【0267】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩＡまたは抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体をコードする核酸（複数可）は、別の抗体を生成するための組換えＤＮＡ技術を用いて複数の異なる様式でさらに修飾することができる。いくつかの態様では、例えば、マウスモノクローナル抗体の、軽鎖及び重鎖の定常ドメインをコードする核酸（複数可）は、（ａ）例えば、ヒト抗体のそのコード領域で置換されて、キメラ抗体を作製することができ、または（ｂ）核酸（複数可）をコードする非免疫グロブリンで置換されて、融合抗体を作製することができる。いくつかの態様では、定常領域が切り詰められるか除去されて、モノクローナル抗体の所望の抗体断片が作製される。可変領域コード配列の部位特異的または高密度突然変異誘発を用いて、モノクローナル抗体の特異性、親和性などを最適化することができる。

【0268】

抗ＡｃｔＲＩＩヒト抗体は、当該技術分野において公知の種々の技術を用いて直接調製することができる（例えば、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６－９５（１９９１）；及び米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい）。同様に、ヒト抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、インビトロで免疫化されたまたは免疫化された個体から単離された、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ）に対する抗体を産生する不死化ヒトＢリンパ球から容易に得ることができる。

【0269】

ヒト抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、例えば、Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：３０９－３１４（１９９６）、Ｓｈｅｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９５：６１５７－６１６２（１９９８）、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）、及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１）に記載されているようにヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択することもできる。抗体ファージライブラリーを生成し、スクリーニングする技術は、米国特許第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号；同第６，５９３，０８１号；同第６，３００，０６４号；同第６，６５３，０６８号；同第６，７０６，４８４号；及び同第７，２６４，９６３号；並びにＲｏｔｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７６（４）：１１８２－１２００（２００８）（これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）にも記載されている。

【0270】

ヒト抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、免疫化された時に内因的な免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体を産生することができるヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウス中で作製することもできる。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；及び同第５，６６１，０１６号に記載されている。

【0271】

ヒト抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、例えば、ＷＯ０１２／００９５６８；ＷＯ０９／０３６３７９；ＷＯ１０／１０５２５６；ＷＯ０３／０７４６７９、及び米国出願公開第ＵＳ２００２／０１７７１７０号（それらの各々の内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるような酵母ベースの抗体提示ライブラリーから選択及び／または単離することもできる。かかるライブラリーは、ヒトの免疫前レパートリーによってもたらされる多様性を反映するようにインシリコで設計される。

【0272】

あるいは、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、酵母ディスプレイ抗体ライブラリーから選択してもよい。例えば：Ｂｌａｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ３４２（２）：２１１－２１８（２００４）；Ｂｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（６）：５５３－５５７（１９９７）；Ｋｕｒｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３３（１）：１－９（２０１１）．Ｒｅｖｉｅｗ；Ｌａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１（１）：１０２－１５（２０１２）；Ｏｒｃｕｔｔ Ｋ．Ｄ．及びＷｉｔｔｒｕｐ Ｋ．Ｄ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｙｅａｓｔ ｄｉｓｐｌａｙ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｓ（２０１０），２０７－２３３；Ｒａｋｅｓｔｒａｗ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２４（６）：５２５－３０（２０１１）；及び米国特許第６，４２３，５３８号；同第６，６９６，２５１号；及び同第６，６９９，６５８号を参照されたい。

【0273】

抗原結合抗体断片を生産するための種々の技術が公知である。従来より、これらの断片は、無傷の抗体のタンパク質消化に由来する（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈ．２４：１０７－１１７（１９９３）；及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１（１９８５））を参照されたい）。ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片は、組換えにより作製される。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体断片は全て、Ｅ．ｃｏｌｉまたは他の宿主細胞中で発現させて分泌させることができるため、これらの断片の大量生産が可能である。かかるＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片は、前述の抗体ファージライブラリーからさらに単離することができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片は、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているように直鎖状抗体である。抗原結合抗体断片を生産するための他の技術は、当該技術分野において公知である。

【0274】

公知の技術は、ＡｃｔＲＩＩに結合する単鎖抗体の生産に容易に適用することができる（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい）。加えて、公知の方法を常法で適用して、Ｆａｂ発現ライブラリーを構築して（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１（１９８９）を参照されたい）、所望のＡｃｔＲＩＩ特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ効果的な同定を可能にすることができる。ＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片は、当該技術分野において公知の技術により生産することができ、かかる技術としては、限定されるものではないが、（ａ）抗体のペプシン消化により産生されたＦ（ａｂ’）_２断片；（ｂ）Ｆ（ａｂ’）_２断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成されたＦａｂ断片；（ｃ）パパイン及び還元剤で抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を処理することによって生成されたＦａｂ断片、及び（ｄ）Ｆｖ断片が含まれる。

【0275】

ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体及び／または抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）は、その血清半減期を増加させるために修飾することができる。これは、例えば、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の適切な領域の突然変異によりサルベージ受容体結合エピトープをＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質中に組み込むことによって、またはサルベージ受容体エピトープをペプチドタグ中に組み込んだ後、（例えば、ＤＮＡまたはペプチド合成により）ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質のいずれかの末端または中央に融合することによって達成することができる。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の血清半減期を増加させる他の方法、例えば、ＰＥＧなどの異種分子へのコンジュゲーションは、当該技術分野において公知である。

【0276】

ヘテロコンジュゲートＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、及びそれらのＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片、及び変異体、及び誘導体）も本開示の範囲内である。ヘテロコンジュゲートＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、共有結合的に連結された２つのタンパク質で構成される。ヘテロコンジュゲートＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、架橋剤を伴うものを含む、合成タンパク質化学において公知の方法を用いてインビトロで調製することができると考えられる。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いてまたはチオエーテル結合の形成によって構築することができる。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオラート及びメチル－４－メルカプトブチルイミダートが含まれる。

【0277】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗体とＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ）とを会合させる任意の種類の可変領域を含み得る。かかる可変領域は、ＡｃｔＲＩＩ抗原に対する体液性反応の開始及び免疫グロブリンの生成を誘導できる任意の哺乳動物を含み得る、またはこれに由来し得る。抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の可変領域は、例えば、ヒト、マウス、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル、マカクなど）、またはオオカミ起源であり得る。いくつかの態様では、修飾抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の可変及び定常領域の両方がヒトである。他の態様では、適合性抗体の可変領域（通常、非ヒト供給源に由来する）は、分子の結合特性を向上させるためまたは免疫原性を低減するために、遺伝子操作または特異的に適応され得る。この点に関して、本開示で有用な可変領域は、ヒト化され得、あるいは本明細書に記載されるまたはあるいは当該技術分野で知られる親和性成熟、突然変異誘発手順、鎖シャッフリング戦略、及び／または他の方法を用いて、インポートされたアミノ酸配列を含めることにより変更され得る。

【0278】

ある特定の態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の重鎖及び軽鎖の両方の可変ドメインは、１つ以上のＣＤＲの少なくとも一部の置換によって、及び／または部分的フレームワーク領域置換及び配列変化によって変更される。ＣＤＲはフレームワーク領域が由来する抗体と同じクラスまたはサブクラスの抗体に由来し得るが、ＣＤＲが、異なるクラスの抗体に由来すること、及びある特定の態様では、異なる種の抗体に由来し得ることも予期される。１つの可変ドメインの抗原結合能を別の可変ドメインに移すためにＣＤＲの全てをドナー可変領域の完全ＣＤＲで置換することが常に必要であるわけではない。むしろ、抗原結合部位の活性を維持するために必要な残基を移すことだけが必要である。免疫原性の低下した機能的抗体を常法で得ることは、当業者の能力の十分な範囲内である。例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、及び同第５，６９３，７６２号を参照されたい。

【0279】

可変領域への変更に関わらず、本開示の修飾抗ＡｃｔＲＩＩは、天然または無変化の定常領域を含むほぼ同じ免疫原性の抗体と比べた時にＡＤＣＣの減少または血清半減期の増加などの所望の生化学的特徴が付与されるように定常領域ドメインの１つ以上の少なくとも一部が欠失あるいは変化している抗体を含むことが当業者には理解される。いくつかの態様では、修飾抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の定常領域は、ヒト定常領域を含む。定常領域への修飾には、１つ以上のドメイン中における１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換が含まれ得る。本明細書に開示される修飾抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）のうちの１つ以上及び／または軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）への変更または修飾を含み得る。いくつかの態様では、修飾抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、定常領域を含み、１つ以上のドメインは、部分的にまたは全体的に欠失された定常領域が予期される。いくつかの態様では、修飾抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＣＨ２ドメイン全体が除去されたドメイン欠失構築物または変異体（ΔＣＨ２構築物）を含む。いくつかの態様では、取り除かれた定常領域ドメインは、存在しない定常領域によって通常は付与される分子的柔軟性の一部を提供する短いアミノ酸スペーサー（例えば、１０残基）で置換することができる。

【0280】

定常領域はいくつかのエフェクター機能を仲介することが一般的に知られている。例えば、抗体への補体のＣ１成分の結合は、補体系を活性化する。補体の活性化は、オプソニン作用及び病原細胞の溶解に重要である。補体の活性化はさらに、炎症反応を刺激し、自己免疫過敏症にも関与し得る。さらに、抗体は、Ｆｃ領域を介して、抗体Ｆｃ領域上のＦｃ受容体部位が細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合して、細胞に結合する。ＩｇＧ（ガンマ受容体）、ＩｇＥ（エータ受容体）、ＩｇＡ（アルファ受容体）、及びＩｇＭ（ミュー受容体）を含む、異なるクラスの抗体に特異的な複数のＦｃ受容体がある。細胞表面上のＦｃ受容体への抗体の結合は、抗体被覆粒子の貪食及び破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆標的細胞の溶解（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣと呼ばれる）、炎症性メディエーターの放出、胎盤移行、並びに免疫グロブリン生産の制御を含む、複数の重要かつ多様な生物学的反応を引き起こす。

【0281】

ある特定の態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、変化したエフェクター機能を有し、これが、投与された抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の生物学的プロファイルに影響を与える。例えば、（点突然変異または他の手段による）定常領域ドメインの欠失または不活化は、循環している修飾抗体のＦｃ受容体結合を低減し得る。他の場合には、定常領域修飾は、補体結合を緩和することで、血清半減期及びコンジュゲートされた細胞毒素との非特異的会合を低減し得る。定常領域のさらに他の修飾を用いて、抗原特異性または抗体柔軟性の増大により局在化の強化を可能にするジスルフィド結合またはオリゴ糖部分の除去が可能である。同様に、本開示による定常領域の修飾は、当業者に周知の生化学的または分子工学的技術を用いて容易に行うことができる。

【0282】

いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、１つ以上のエフェクター機能を有しないＡｃｔＲＩＩ抗体である。例えば、いくつかの態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性及び／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）活性を有しない。ある特定の態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、Ｆｃ受容体及び／または補体因子に結合しない。ある特定の態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、エフェクター機能を有しない。ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性、及びＦｃ受容体及び／または補体因子結合を減少または排除するＦｃ配列の遺伝子操作修飾の例は、本明細書に記載されており、あるいは、それを試験するためのアッセイ及び手順として当該技術分野で知られている。

【0283】

いくつかの態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＣＨ３ドメインがそれぞれの修飾抗体のヒンジ領域に直接融合するように遺伝子操作される。他の構築物では、ペプチドスペーサーは、ヒンジ領域と修飾ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインとの間に挿入される。例えば、ＣＨ２ドメインが欠失されており、かつ、残りのＣＨ３ドメイン（修飾または非修飾）が５～２０アミノ酸のスペーサーでヒンジ領域に結合している適合構築物が発現され得る。かかるスペーサーは、例えば、定常ドメインの調節エレメントが自由かつ接近可能であるようにするためまたはヒンジ領域の柔軟性を維持することを確実にするために付加され得る。アミノ酸スペーサーは、場合によっては、免疫原性であることを証明し、構築物に対する望まれない免疫応答を誘導することができる。従って、ある特定の態様では、構築物に付加される任意のスペーサーは、修飾抗ＡｃｔＲＩＩの所望の生化学的品質が維持されるように、比較的非免疫原性であり得るか、あるいは完全に取り除かれ得る。

【0284】

さらなる態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、定常領域における部分的欠失または数個もしくは１個のアミノ酸の置換によって修飾される。例えば、ＣＨ２ドメインの選択された領域中における１個のアミノ酸の突然変異は、Ｆｃ結合性を実質的に低下させるのに十分であり得る。同様に、エフェクター機能（例えば、補体Ｃ１Ｑ結合）を制御する１つ以上の定常領域ドメインは、完全にまたは部分的に欠失させることができる。かかる定常領域の部分的欠失は、対応する定常領域ドメインに関連する他の望ましい機能は損なわずに、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の選択された特徴（例えば、血清半減期）を向上させ得る。いくつかの態様では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の定常領域は、得られる構築物のプロファイルを高める１つ以上のアミノ酸の突然変異または置換を介して修飾される。この点に関して、修飾抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の立体配置及び免疫原性プロファイルを実質的に維持しながら、保存された結合部位により与えられる活性（例えば、Ｆｃ結合）を破壊することが可能であり得る。また、本開示は、エフェクター機能を低減もしくは増大する、または１つ以上の細胞毒素、標識、もしくは炭水化物部分に対する付着部位を提供するなどの所望の特性を高めるため、定常領域への１つ以上のアミノ酸の付加を含む、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を提供する。かかる態様では、選択された定常領域ドメインに由来する特異的配列を挿入または複製することが望ましいことがある。

【0285】

また、本開示は、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質に対する変異体（例えば、マウス、キメラ、ヒト化、及びヒトのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質）であるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を提供する。特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の変異体は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有する：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、アクチビンＡと競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞におけるＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。さらなる態様では、変異体は、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と比較して、保存的アミノ酸残基置換突然変異を含有する。

【0286】

提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の溶解度、生物学的半減期、バイオアベイラビリティを改善する、あるいはＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の安定性、製剤、及び／または治療特性を改善するための当該技術分野において公知の追加的な化学部分を含むように誘導体化することができる。かかる部分の完全に網羅されていない概要は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２０ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（２０００）に見出すことができる。

【0287】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする核酸及びそれらの発現
ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする核酸分子及び核酸分子の組み合わせも提供される。いくつかの態様では、核酸分子は、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片をコードする。さらなる態様では、本開示は、本明細書に提供される完全長抗ＡｃｔＲＩＩ抗体またはＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片の変異体または誘導体をコードする核酸分子を提供する。

【0288】

本明細書に開示される核酸分子は、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを含み；二本鎖または一本鎖であり得、一本鎖の場合、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。ある特定の態様では、核酸分子は、単離されている。さらなる態様では、核酸分子は、実質的に純粋である。いくつかの態様では、核酸は、ｃＤＮＡである、またはｃＤＮＡ由来である。いくつかの態様では、核酸は、組換え産生される。

【0289】

いくつかの態様では、核酸分子は、宿主細胞またはインビトロでのコード配列の発現を制御する制御配列に作動可能に連結されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質コード配列を含む。特定の態様では、コード配列は、ｃＤＮＡである。本開示は、宿主細胞またはインビトロでのコード配列の発現を制御する制御配列に作動可能に連結されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質コード配列を含む核酸分子を含有するベクターにも関する。

【0290】

いくつかの態様では、核酸分子は、異種ポリヌクレオチド配列に同じ読み枠で融合した成熟ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質のコード配列を含む。いくつかの態様では、異種ポリヌクレオチド配列は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする核酸分子（複数可）で形質転換された宿主細胞から発現したタンパク質の分泌を促進するリーダーペプチド配列をコードする。リーダー配列を含有するタンパク質は、プレタンパク質と呼ばれ、宿主細胞によってリーダー配列が切断されて成熟形態のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を形成することができる。かかるリーダーペプチド配列、及び宿主細胞における組換えタンパク質の分泌を促進するためのそれらの使用は、一般的に、当該技術分野において公知である。さらなる態様では、異種ポリヌクレオチド配列は、組換え発現されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の精製を促進し、かつ、組換え発現されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質のタンパク質の安定性及び／または治療または診断特性を付加するかまたは改善するように機能し得る追加的な５’アミノ酸残基をコードする。

【0291】

いくつかの態様では、本開示は、ハイブリダイゼーションプローブ、ＰＣＲプライマー、または配列決定プライマーとして使用するのに十分な、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードするｃＤＮＡ断片などの単離された核酸を提供する。

【0292】

いくつかの態様では、核酸分子は、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする：（ａ）ＡｃｔＲＩＩに結合するために、ＡｃｔＲＩＩリガンドと競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ及び同種ＡｃｔＲＩを発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞における１つ以上のＳｍａｄのリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩに結合する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩとの結合に対して、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ結合ＶＨ及びＶＬ対を有する抗体と競合する。さらなる態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体とＡｃｔＲＩＩの同じエピトープに結合する。

【0293】

いくつかの態様では、核酸分子は、ＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞における１つ以上のＳｍａｄのリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＡ結合ＶＨ及びＶＬ対を有する抗体と競合する。さらなる態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体とＡｃｔＲＩＩＡの同じエピトープに結合する。さらなる態様では、核酸分子は、ＡｃｔＲＩＩと特異的に結合し、かつ、ＶＨ及びＶＬを含むＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質をコードする。

【0294】

いくつかの態様では、核酸分子は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合するために、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞における１つ以上のＳｍａｄのリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢとの結合に対して、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＢ結合ＶＨ及びＶＬ対を有する抗体と競合する。さらなる態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体とＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。さらなる態様では、核酸分子は、ＡｃｔＲＩＩＢと特異的に結合し、かつ、ＶＨ及びＶＬを含むＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質をコードする。

【0295】

いくつかの態様では、核酸分子は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、以下のものからなる群から選択される少なくとも１つの特徴を有するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする：（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに結合するために、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８と競合する；（ｂ）ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ及び／またはＧＤＦ８）の存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化を減少させる；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢを発現する細胞における１つ以上のＳｍａｄのリン酸化を減少させる；及び（ｄ）≦１ｎＭ及び≧１ｐＭのＫ_Ｄで（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析によって決定される）、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、上記の特徴のうちの少なくとも２つまたは少なくとも３つを有する。いくつかの態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡとの結合に対して、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合ＶＨ及びＶＬ対を有する抗体と競合する。さらなる態様では、コードされたＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、本明細書に開示される抗体とＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢの同じエピトープに結合する。さらなる態様では、核酸分子は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡと特異的に結合し、かつ、ＶＨ及びＶＬを含むＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質をコードする。

【0296】

また、本開示は、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質をコードする核酸及び核酸セットを含有するベクター及びベクターセットを提供する。これらの核酸、核酸セット、ベクター、及びベクターセットで形質転換された宿主細胞も提供され、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を用いて作製する方法と同様である。

【0297】

いくつかの態様では、本開示は、核酸分子または核酸分子の組み合わせを含む宿主細胞、または上記で提供されるようなベクターを提供し、宿主細胞は、場合によっては、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片）を発現することができる。さらなる態様では、本開示は、核酸分子または核酸分子の組み合わせで形質転換された宿主細胞、または上記で提供されるようなベクターを提供し、宿主細胞は、場合によっては、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を発現することができる。かかる宿主細胞は、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を作製する方法で利用することができ、方法は、（ａ）宿主細胞を培養すること、及び（ｂ）宿主細胞から発現したＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を単離することを含む。

【0298】

また、本開示は、適切な条件下でＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を発現することができる宿主細胞（例えば、ハイブリドーマまたは形質転換された哺乳動物宿主細胞）を培養することを含むＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を作製する方法を提供し、必要に応じて、宿主細胞から分泌されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を単離する方法を提供する。本開示は、本開示の方法を用いて単離されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をさらに提供する。

【0299】

ある特定の態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、コードされたポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列に同じ読み枠で融合した成熟ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（複数可）（例えば、ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片）のコード配列（複数可）を含む。例えば、マーカー配列は、細菌宿主の場合にマーカーに融合した成熟ポリペプチドを精製するための、ｐＱＥ－９ベクターによって供給されるヘキサヒスチジンタグであり得、または、マーカー配列は、哺乳動物宿主（例えば、ＣＯＳ－７細胞）を使用する場合、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由来する赤血球凝集素（ＨＡ）タグであり得る。

【0300】

抗ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする核酸変異体も提供される。核酸変異体は、コード領域、非コード領域、またはその両方に変更を含み得る。いくつかの態様では、核酸変異体は、サイレント置換、付加、または欠失を生じるものの、コードされるポリペプチドの特性または活性は変えない変更を含む。いくつかの態様では、核酸変異体は、遺伝子コードの縮重に起因するサイレント置換によって作製される。核酸変異体は、種々の理由で、例えば、特定の宿主用にコドン発現を最適化するため（ヒトｍＲＮＡのコドンをＥ．ｃｏｌｉなどの細菌宿主が選好するものに変化させるため）作製され得る。本明細書に記載される核酸を含むベクター及び細胞も提供される。

【0301】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片）をコードする核酸配列は、オリゴヌクレオチド合成機を使用した化学合成によって構築される。かかるオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列、及び宿主細胞の好みに基づくコドン最適化に基づいて設計することができる。標準方法を常法で適用して、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド配列を合成することができる。

【0302】

アセンブル後（合成、部位特異的突然変異誘発または別の方法による）、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする核酸配列は、所望の宿主におけるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の発現に適切な制御配列に常法で作動可能に連結されることができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をコードする核酸配列は、発現ベクターに挿入され、所望の宿主におけるタンパク質の発現に適切な制御配列に作動可能に連結される。宿主におけるトランスフェクトした遺伝子の高い発現レベルを達成するために、その遺伝子を、選択された発現宿主で機能する転写及び翻訳発現制御配列に作動可能に連結するかまたは関連付けることができる。

【0303】

ある特定の態様では、組換え発現ベクターを使用して、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体、ＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片、またはＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体断片をコードするＤＮＡを増幅し、発現させる。組換え発現ベクターは、哺乳動物、微生物、ウイルス、または昆虫遺伝子に由来する好適な転写または翻訳調節エレメントに作動可能に連結された、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質のポリペプチド鎖をコードする合成またはｃＤＮＡ由来のＤＮＡ断片を有する複製可能なＤＮＡ構築物である。転写単位は、概して、以下に詳細に記載するとおり、（１）遺伝子発現において調節的役割を有する１つまたは複数の遺伝エレメント、例えば、転写プロモーターまたはエンハンサーと、（２）ｍＲＮＡに転写され、かつ、タンパク質に翻訳される構造またはコード配列と、（３）適切な転写及び翻訳開始及び終結配列との集合を含む。かかる調節エレメントは、転写を制御するためオペレーター配列を含み得る。一般に、複製起点によって付与される宿主における複製能、及び形質転換体の認識を促進する選択遺伝子が、さらに組み込まれ得る。ＤＮＡ領域は、それらが機能上互いに関係している場合、作動可能に連結している。例えば、シグナルペプチド（分泌リーダー）のＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与する前駆体として発現する場合、そのポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結している；プロモーターは、それが配列の転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結している；またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を可能にするような位置にある場合、コード配列に作動可能に連結している。酵母発現系での使用が意図される構造エレメントは、宿主細胞による翻訳タンパク質の細胞外分泌を可能にするリーダー配列を含む。あるいは、組換えタンパク質がリーダー配列または輸送配列なしに発現する場合、そのタンパク質は、Ｎ末端メチオニン残基を含み得る。この残基は、必要に応じて、後に発現した組換えタンパク質から切断されて、最終タンパク質を提供し得る。ある特定の態様では、本開示は、上述または本明細書の他の箇所に記載されるような核酸またはベクターを含む、必要に応じて、１つ以上の担体、希釈剤、賦形剤、または他の添加剤をさらに含む、組成物、例えば、医薬組成物を提供する。

【0304】

本明細書に開示される核酸分子またはｃＤＮＡ分子及び／またはベクターで形質転換された宿主細胞も提供される。また、本開示は、制御配列に作動可能に連結され、かつ、必要に応じて、ベクターに挿入された本開示の核酸分子または分子で形質転換された宿主細胞を提供する。いくつかの態様では、宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である。さらなる態様では、哺乳動物宿主細胞は、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。他の態様では、宿主細胞は、ハイブリドーマである。

【0305】

さらなる態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を生成するのに適切な条件下で、本明細書に開示される形質転換された宿主細胞またはハイブリドーマを培養することを含む、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）を作製する方法を提供する。本開示は、必要に応じて、宿主細胞から分泌されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を単離することを提供する。また、本開示は、必要に応じて、この方法を用いて生成されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、及びＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。

【0306】

発現制御配列及び発現ベクターの選択は、宿主の選択に依存することになる。幅広い種類の発現宿主／ベクターの組み合わせを用いることができる。真核生物宿主に有用な発現ベクターとしては、例えば、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス、及びサイトメガロウイルス由来の発現制御配列を含むベクターが挙げられる。細菌宿主に有用な発現ベクターとしては、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、及びそれらの誘導体を含めたＥ．ｃｏｌｉ由来のプラスミドなどの公知の細菌プラスミド、Ｍ１３及び繊維状一本鎖ＤＮＡファージなどのより広い宿主域のプラスミドが挙げられる。

【0307】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の発現に好適な宿主細胞には、適切なプロモーターの制御下にある原核生物、酵母、昆虫、または高等真核生物細胞が含まれる。原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたは桿菌が含まれる。高等真核生物細胞には、以下に記載するとおりの哺乳動物起源の樹立細胞株が含まれる。無細胞翻訳系も用いることができる。抗体産生を含めたタンパク質産生の方法に関するさらなる情報については、例えば、米国出願公開第２００８／０１８７９５４号、米国特許第６，４１３，７４６号、同第６，６６０，５０１号、及び国際出願公開第ＷＯ０４／００９８２３号（これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）で見出すことができる。

【0308】

種々の哺乳動物または昆虫細胞培養系も、組換えＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）の発現に有利に用いることができる。哺乳動物細胞における組換えＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の発現を実施することができ、なぜならかかるタンパク質は、概して正しく折り畳まれ、適切に修飾され、かつ、完全に機能性であるためである。好適な哺乳動物宿主細胞株の例としては、ＨＥＫ－２９３及びＨＥＫ－２９３Ｔ、Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｃｅｌｌ ２３：１７５，１９８１）によって記載されるサル腎細胞のＣＯＳ－７株、及び他の細胞株、例えば、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ、及びＢＨＫ細胞株が挙げられる。哺乳動物発現ベクターは、非転写エレメント、例えば、複製起点、発現させる遺伝子に連結した好適なプロモーター及びエンハンサー、及び他の５’または３’フランキング非転写配列、及び５’または３’非翻訳配列、例えば、必須リボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライス供与・受容部位、及び転写終結配列などを含み得る。昆虫細胞における異種タンパク質の産生用のバキュロウイルス系は、Ｌｕｃｋｏｗ ａｎｄ Ｓｕｍｍｅｒｓ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：４７（１９８８）によって概説されている。

【0309】

形質転換された宿主細胞またはハイブリドーマによって産生されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、任意の好適な方法によって精製することができる。かかる標準方法には、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、または任意の他の標準的なタンパク質精製技術によるものが含まれる。ヘキサヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザコート配列及びグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼなどの親和性タグをタンパク質に付加すると、適切な親和性カラムに通過させることによる容易な精製が可能となり得る。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質はまた、タンパク質分解、核磁気共鳴、及びＸ線結晶学などの技術を用いて物理的に特徴付けることもできる。

【0310】

例えば、組換えＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を培養培地中に分泌する系からの上清を、初めに市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外ろ過ユニットを使用して濃縮し得る。この濃縮ステップの後、濃縮物を好適な精製マトリックスに適用し得る。あるいは、陰イオン交換樹脂、例えば、ペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を有するマトリックスまたは基質を用いてもよい。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質精製において一般的に用いられる他のタイプであってもよい。あるいは、陽イオン交換ステップが用いられてもよい。好適な陽イオン交換体としては、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスが挙げられる。最後に、疎水性ＲＰ－ＨＰＬＣ媒体、例えば、ペンダントメチル基または他の脂肪族基を有するシリカゲルを用いる１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）ステップを用いて、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質をさらに精製することができる。均一な組換えＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を提供するため、前述の精製ステップの一部または全てを様々に組み合わせて常法で用いることもできる。

【0311】

細菌培養で産生された組換えＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）は、例えば、細胞ペレットからの初期抽出と、続く１つ以上の濃縮、塩析、水性イオン交換、またはサイズ排除クロマトグラフィーステップによって単離することができる。最終精製ステップには、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いることができる。組換えタンパク質の発現に用いられる微生物細胞は、凍結融解サイクル処理、音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含む、任意の好都合な方法によって破壊することができる。

【0312】

標的結合タンパク質、例えば、完全長抗体及び抗原結合抗体断片を精製するための当該技術分野において公知の方法としてはまた、例えば、米国出願公開第２００８／０３１２４２５号、同第２００８／０１７７０４８号、及び同第２００９／０１８７００５号（これらの各々は、本明細書によって全体として参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものも挙げられる。

【0313】

ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗体ではない。タンパク質標的に高親和性で結合する非抗体ポリペプチドを同定及び作製する種々の方法が知られている。例えば、Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：２９５－３０４（２００７），Ｈｏｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５：１４－２７（２００６），Ｇｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：６５３－６５８（２００６），Ｎｙｇｒｅｎ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６６８－２６７６（２００８）、及びＳｋｅｒｒａ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６７７－２６８３（２００８）（これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ある特定の実施形態では、ファージディスプレイ技術を用いてＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を同定／作製する。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、プロテインＡ、リポカリン、フィブロネクチンドメイン（例えば、ＩＩＩ型フィブロネクチン（Ｆｎ３））、アンキリンコンセンサス反復ドメイン、及びチオレドキシンからなる群から選択される種類のタンパク質足場を含む。

【0314】

使用方法及び医薬組成物
提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（抗体、免疫複合体、及びポリペプチドを含む）は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ抗体）で種々の疾患及び状態を診断する方法、及び治療及び／または改善する方法を含むが、これらに限定されない種々の用途に有用である。ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）シグナル伝達及び／または増加したＡｃｔＲＩＩ発現と関連する疾患または状態を有する対象を治療するためにＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）を使用するための方法を提供する。さらなる態様では、本開示は、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、及び薬学的に許容可能な担体を含有する医薬組成物を提供する。いくつかの態様では、本開示は、医薬として使用される、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、及び薬学的に許容可能な担体を含有する医薬組成物を提供する。また、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ、増加したＡｃｔＲＩＩ発現、及び／または増加したＡｃｔＲＩＩシグナル伝達と関連する疾患または状態を治療及び／または改善するための本明細書に開示される医薬組成物の使用を提供する。いくつかの態様では、本明細書に提供される医薬組成物を用いて治療される疾患または状態は、筋肉障害、例えば、疾患または不使用による筋肉消耗である。さらなる態様では、本明細書に提供される医薬組成物を用いて治療される疾患または状態は、線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態）；炎症性、心血管、肺、筋骨格系、神経、または代謝性疾患または状態；創傷治癒；またはがんである。

【0315】

いくつかの態様では、医薬組成物は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する完全長抗体、及びＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する完全長抗体）、及び薬学的に許容可能な担体を含み、標識基またはエフェクター基をさらに含む。「標識」は、スクリーニングでの検出を可能にするため付加される１つ以上のエレメント、同位体、または化学的化合物を指す。標識は、概して３つのクラスに分類される：（ａ）同位体標識（これは、放射性同位体または重同位体であり得る）、（ｂ）小分子標識（これには、蛍光色素及び比色定量色素、または他の標識方法を可能にするビオチンなどの分子が含まれ得る）、及び（ｃ）免疫標識（これは、抗体によって認識される融合パートナーとして組み込まれたエピトープであり得る）。「標識基」は、任意の検出可能標識を指す。いくつかの態様では、標識基は、潜在的な立体障害を低下させるためスペーサー（例えば、ペプチドスペーサー）を介してＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質にカップリングされる。標識は、化合物に任意の位置で組み込むことができ、タンパク質発現中にインビトロまたはインビボで組み込むことができる。タンパク質を標識するための様々な方法が当該技術分野において公知であり、提供される方法の実施に用いることができる。さらなる態様では、標識基は、同位体標識、磁気標識、酸化還元活性部分、光学色素、ビオチン化基、及び二次レポーターによって認識されるポリペプチドエピトープからなる群から選択される。いくつかの態様では、標識基は、緑色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、高感度ＧＦＰ、青色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＥＢＦＰ（高感度青色蛍光タンパク質）、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、ｍＫａｌａｍａ１、シアン蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＥＣＦＰ（高感度シアン蛍光タンパク質）、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ＣｙＰｅｔ）、黄色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ）などの蛍光タンパク質である。いくつかの態様では、ポリペプチド エピトープは、ビオチンシグナル伝達ペプチド、ヒスチジンペプチド（ｈｉｓ）、ヘマグルチニン（ＨＡ）、Ｆｌａｇ、金結合ペプチドから選択されるメンバーである。さらなる態様では、エフェクター基は、放射性同位体、放射性核種、毒素、治療薬、及び化学療法剤からなる群から選択される。

【0316】

本開示のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、インビトロ及びインビボでの診断的及び治療的有用性において応用される。例えば、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、種々の疾患または状態を治療、防止、または診断するために、例えば、インビトロまたはインビボで培養中の細胞、または対象における細胞に投与することができる。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ヒト抗体、マウス抗体、またはヒト化抗体である。

【0317】

ＡｃｔＲＩＩ活性を遮断する方法も提供される。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩをＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と接触させることを含む。場合によっては、方法は、インビボで行う。他の例では、方法は、インビトロで行う。いくつかの態様では、遮断されたＡｃｔＲＩＩ活性は、（ａ）ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）による結合；（ｂ）アクチビンＡの存在下で、ＡｃｔＲＩＩを発現する細胞における１つ以上のＳｍａｄのリン酸化；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩ、及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化から選択される。

【0318】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＡ活性を遮断する方法を提供する。さらなる態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩＡをＡｃｔＲＩＩＡ結合タンパク質と接触させることを含む。場合によっては、方法は、インビボで行う。他の例では、方法は、インビトロで行う。いくつかの態様では、遮断されたＡｃｔＲＩＩＡ活性は、（ａ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、またはＮｏｄａｌ）による結合；（ｂ）アクチビンＡの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞における１つ以上のＳｍａｄのリン酸化；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ、及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化から選択される。

【0319】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩＢ活性を遮断する方法を提供する。さらなる態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩＢをＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質と接触させることを含む。場合によっては、方法は、インビボで行う。他の例では、方法は、インビトロで行う。いくつかの態様では、遮断されたＡｃｔＲＩＩＢ活性は、（ａ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０）による結合；（ｂ）アクチビンＡの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡを発現する細胞における１つ以上のＳｍａｄのリン酸化；（ｃ）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下で、ＡｃｔＲＩＩＡ、及びＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７を発現する細胞におけるＡＬＫ４及び／またはＡＬＫ７のリン酸化から選択される。

【0320】

一態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する完全長抗体、及びＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する完全長抗体）を、ＡｃｔＲＩＩ発現及び／または上昇したＡｃｔＲＩＩシグナル伝達と関連する疾患または状態を有するかまたは疾患または状態を発症するリスクがある対象に投与することを含む、疾患または状態の治療、防止、及び／または改善を提供する。別の態様では、治療は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、対象から単離された組織または細胞に投与することを含み、対象は、ＡｃｔＲＩＩ発現またはＡｃｔＲＩＩシグナル伝達と関連する疾患または状態を有する、または疾患または状態を発症するリスクがある。ＡｃｔＲＩＩ発現またはＡｃｔＲＩＩシグナル伝達と関連する疾患または状態の治療のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。

【0321】

本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象におけるＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）媒介活性と関連する状態を治療及び／または改善する方法も提供される。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、単独で投与される。他の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、併用療法として投与される。有効量のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象におけるＡｃｔＲＩＩ活性を減少させる方法も提供される。

【0322】

また、本開示は、筋肉障害と関連する疾患または状態を治療及び／または改善する方法を提供する。いくつかの態様では、筋肉障害は、萎縮である。さらなる態様では、萎縮は、疾患または不使用に起因する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する抗体、ＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体、またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体）を含む医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、単独または併用療法として投与される。

【0323】

いくつかの態様によれば、本開示は、対象における骨格筋の形成を誘発する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及びＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、対象における筋肉量または筋力を増加させる。

【0324】

また、本開示は、対象における筋肉障害、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態、例えば、心筋線維症、及び特発性肺線維症（ＩＰＦ））；代謝性疾患（例えば、インスリン抵抗性のＩＩ型糖尿病、高血糖、及び肥満）；炎症性疾患または状態、自己免疫疾患、心血管疾患（例えば、鬱血性心不全、及び高血圧）；眼疾患、例えば、加齢黄斑変性症；肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、例えば、骨粗鬆症；神経疾患；創傷治癒；体重減少；及びがん（例えば、癌腫、骨髄腫、骨誘導損失癌、下垂体癌、及び消化管癌）と関連する疾患または状態を治療及び／または改善する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する抗体、ＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体、またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体）を含む医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。さらなる態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、単独または併用療法として投与される。ＡｃｔＲＩＩ発現またはＡｃｔＲＩＩシグナル伝達と関連する疾患または状態の使用、または疾患または状態を発症するリスクをさらに提供する。

【0325】

また、本開示は、対象におけるシグナル伝達などのＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）活性を減少させる方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する抗体、ＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体、またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体）の有効量、またはＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象（例えば、筋肉消耗；線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態）；炎症性、心血管、肺、筋骨格系（すなわち、骨及び／または筋肉）、神経、または代謝性疾患または状態；創傷治癒；またはがんと診断された対象）に投与することを含む。

【0326】

一態様では、本開示は、対象における筋肉障害を治療及び／または改善する方法を提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する抗体、ＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体、またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体）を、筋肉障害を有する対象に投与することを含む。他の態様では、対象は、筋肉障害を発症するリスクがある。いくつかの態様では、筋肉障害または状態は、筋萎縮である。さらなる態様では、筋萎縮は、グルココルチコイド治療、例えば、コルチゾール、デキサメタゾン、βメタゾン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、またはプレドニゾロンによる治療と関連する状態である。さらなる態様では、筋萎縮は、神経外傷、または退行性、代謝性、または炎症性ニューロパチー（例えば、ギラン・バレー症候群、末梢ニューロパチー、または環境毒素または薬物への曝露）の結果と関連する状態である。さらなる態様では、筋萎縮は、成人運動ニューロン疾患、乳児脊髄性筋萎縮、筋萎縮性側索硬化症、少年脊髄筋萎縮、多病巣性の神経ブロックによる自己免疫運動ニューロパチー、卒中または脊髄損傷による麻痺、心的外傷による骨格固定、長期床上安静、自発的な不活性、不随意な不活性、代謝性ストレスまたは栄養不足、がん、ＡＩＤＳ、断食、甲状腺障害、糖尿病、良性先天性低緊張症、中心コア病、熱傷、慢性閉塞性肺疾患、肝臓疾患（線維症、硬変などの例）、敗血症、鬱血性心不全、老化、宇宙旅行または無重力環境で費やした時間と関連する状態である。

【0327】

いくつかの態様では、治療及び／または改善した筋肉障害は、ミオパチーと関連する筋萎縮である。さらなる態様では、ミオパチーは、ミトコンドリアミオパチー；例えば、グリコーゲンまたは脂質蓄積症に起因する代謝性ミオパチー、先天性ミオパチー、例えば、ネマリンミオパチー、マルチ／ミニコアミオパチー及び筋細管（中心核）ミオパチー；ミオトニー；家族性周期性四肢麻痺；及び炎症性ミオパチーからなる群から選択される。さらなる態様では、ミオパチーは、筋ジストロフィー症候群、例えば、デュシェンヌ型、ベッカー型、筋強直性、顔面肩甲上腕、福山型、肢帯、肩甲上腕骨、エメリー・ドレフュス型、眼咽頭型、シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ）、先天性筋ジストロフィー、または遺伝性遠位型ミオパチーと関連する状態である。提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、封入体筋炎、ミオグロビン尿症、横紋筋融解症、骨化性筋炎、多発性筋炎、もしくは皮膚筋炎を治療するために使用され得る。加えて、提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、グルココルチコイド治療、筋肉減少症、長期床上安静、骨格固定、敗血症、もしくは鬱血性心不全から生じる筋萎縮を治療もしくは防止し得る。

【0328】

別の態様では、本開示は、筋ジストロフィーを治療及び／または改善する方法を提供する。用語「筋ジストロフィー」は、骨格筋（並びにときおり、心臓及び呼吸筋）が徐々に弱って、劣化することによって特徴付けられる退行性の筋疾患の群を指す。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質及び本明細書に提供される医薬組成物で治療及び／または改善することができる例示的な筋ジストロフィーとしては、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー（ＥＤＭＤ）、肢帯型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー（ＦＳＨもしくはＦＳＨＤ）（ランドゥジー・デジュリン型としても知られる）、筋強直性筋ジストロフィー（ＭＭＤ）（シュタイネルト病としても知られる）、眼球咽頭型筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）、遠位型筋ジストロフィー（ＤＤ）、先天性筋ジストロフィー（ＣＭＤ）、及び肩甲上腕型筋ジストロフィー（ＳＭＤ）が挙げられる。

【0329】

別の態様では、本開示は、線維症状態（例えば、線維症）を治療及び／または改善する方法を提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する抗体、ＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体、またはＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体）を、線維症状態を有する対象に投与することを含む。他の態様では、対象は、線維症状態を発症するリスクがある。さらなる態様では、線維症状態は、ＤＮである。いくつかの態様では、治療した線維症状態は、原発性の線維症である。一態様では、治療した線維症状態は、特発性である。いくつかの態様では、線維症状態は、慢性である。いくつかの態様では、治療した線維症状態は、全身性である。他の態様では、治療した線維性疾患または状態は、疾患（例えば、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、悪性またはがん性疾患、及び／または結合組織病）；毒素；障害（例えば、環境危害（例えば、アスベスト、炭塵、多環芳香族炭化水素類）、喫煙、創傷）；または治療（例えば、外科的切開、化学療法または放射線）と関連する（例えば、に二次的な）状態である。

【0330】

本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質で治療及び／または改善することができる線維症状態としては、線維症、肝損傷（例えば、アルコール、及びＢ型及びＣ型肝炎感染などのウイルス感染に起因する肝損傷）、肺線維症（例えば、嚢胞性線維症、喫煙に起因するＩＰＦまたは肺線維症、環境危害、及びブレオマイシンなどの化学療法薬）、放射線誘発線維症、注射線維症、血管線維症、アテローム性動脈硬化症、膵線維症、筋肉骨格線維症（例えば、筋肉線維症）、心臓線維症、皮膚線維症、強皮症、眼の線維症（例えば、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、及びドライアイ疾患）、進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、慢性移植片対宿主病、ペイロニー病、膀胱鏡検査後の尿道狭窄症、後腹膜線維症、縦隔線維症、進行性塊状線維症、増殖性線維症、新生物性線維症、デュピュイトラン病、狭窄、胸膜線維症、サルコイドーシス、脊髄損傷／線維症、及び骨髄線維症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0331】

対象における線維症を減少させる方法も提供される。いくつかの態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される医薬組成物における）を、線維症を有する対象に投与することを含む、対象における線維症を減少させる方法を提供する。かかる減少した線維症は、例えば、減少線維症に反映させることができ、例えば、線維性の病変の発症の減少、体重減少または他の臨床症状の低下、及び／または治療される線維症状態の発症と関連する生体分子（例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質発現）の発現変化を含む、線維症と関連する兆候または状態を減少させる。いくつかの態様では、線維症は、肝、筋肉、または肺の線維症である。線維症の治療のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。

【0332】

別の態様では、本開示は、細胞または組織における線維症を減少させる方法を提供する。方法は、線維性細胞または組織をＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、単剤として、または別の薬剤または治療法と併用して）と線維症を減少または阻害するのに十分な量で接触させることを含む。これらの方法は、インビトロまたはインビボで実施することができる。一態様では、方法は、インビボ、例えば、哺乳動物対象（例えば、動物モデル）において実施される。一態様では、対象は、ヒトである。いくつかの態様では、線維症を減少させることには、（ａ）組織線維症の形成または堆積を減少または阻害すること；（ｂ）線維性の病変のサイズ、細胞充実度（例えば、線維芽細胞または免疫細胞数）、組成物；または細胞内含有量を減少させること；（ｃ）線維性の病変のコラーゲンまたはヒドロキシプロリン含有量を減少させること；（ｄ）１つ以上の線維形成タンパク質の発現または活性を減少させること；及び／または（ｅ）炎症反応と関連する線維症を減少させることが含まれる。いくつかの態様では、線維症を減少させることには、（ａ）組織線維症の形成または堆積を減少または阻害すること；（ｂ）線維性の病変のサイズ、細胞充実度（例えば、線維芽細胞または免疫細胞数）、組成物；または細胞内含有量を減少させること；（ｃ）線維性の病変のコラーゲンまたはヒドロキシプロリン含有量を減少させること；（ｄ）１つ以上の線維形成タンパク質の発現または活性を減少させること；及び／または（ｅ）炎症と関連する線維症を減少させることが含まれる。

【0333】

いくつかの態様によれば、本開示は、対象における肝または肺機能の喪失を減少させる方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、対象における肝機能の喪失を減少させる。さらなる態様では、方法は、肝線維症を減少させることを通じて対象における肝機能の喪失を減少させる。いくつかの態様では、方法は、対象における肺機能の喪失を減少させる。いくつかの態様では、方法は、肺線維症を減少させることを通じて対象における肺機能の喪失を減少させる。いくつかの態様では、方法は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有するかまたは発症するリスクがある対象における肺機能の喪失及び／または肺線維症を減少させる。

【0334】

対象における線維症を減少させることによって、肝または肺機能を改善する方法をさらに提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質、例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）または本明細書に提供される医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、肝または肺機能の喪失を減少させること、または肝または肺機能を改善することには、（ａ）対応する臓器における組織線維症の形成または堆積を減少または阻害すること；（ｂ）対応する臓器における線維性の病変のサイズ、細胞充実度（例えば、線維芽細胞または免疫細胞数）、組成物；または細胞内含有量を減少させること；（ｃ）対応する臓器における線維性の病変のコラーゲンまたはヒドロキシプロリン含有量を減少させること；（ｄ）対応する臓器における１つ以上の線維形成タンパク質（例えば、フィブリノゲン及びコラーゲン）の発現または活性を減少させること；（ｄ）対応する臓器における発現細胞外マトリックス及び／またはＥＭＴを減少させること；及び／または（ｅ）対応する臓器における炎症反応と関連する線維症を減少させることが含まれる。

【0335】

人体は、心的外傷及び瘢痕によって損傷に応答する。過度の瘢痕化によって特徴付けられる障害の一種である線維症は、正常な創傷治癒反応が乱れた場合に起こる。線維症の間、創傷治癒反応は、コラーゲンの過剰な産生及び堆積を引き起こし続ける。別の態様では、本開示は、治療有効量のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する抗体またはＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体）を、それを必要とする対象に投与することを含む、線維症を治療する方法を提供する。

【0336】

いくつかの態様では、本開示は、肝または肺機能の喪失を減少させる、または肝または肺機能を改善する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、（ａ）対応する臓器における組織線維症の形成または堆積を減少または阻害すること；（ｂ）対応する臓器における線維性の病変のサイズ、細胞充実度（例えば、線維芽細胞または免疫細胞数）、組成物；または細胞内含有量を減少させること；（ｃ）対応する臓器における線維性の病変のコラーゲンまたはヒドロキシプロリン含有量を減少させること；（ｄ）対応する臓器における１つ以上の線維形成タンパク質（例えば、フィブリノゲン及びコラーゲン）の発現または活性を減少させること；（ｄ）対応する臓器における発現細胞外マトリックス及び／またはＥＭＴを減少させること；及び／または（ｅ）対応する臓器における炎症反応と関連する線維症を減少させることをもたらす。

【0337】

また、本開示は、肺の線維症状態を治療及び／または改善する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体、及びそれらの断片及び変異体及び誘導体）を、肺の線維症状態を有するかまたは発症するリスクがある対象に投与することを含む。いくつかの態様では、肺線維症は、特発性、薬理学的誘発性、放射線誘発性、慢性の閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または慢性喘息である。治療され得る肺の線維症状態には、通常間質性肺炎（ＵＩＰ）、間質性肺疾患、特発線維性肺胞炎（ＣＦＡ）、及び気管支拡張症からなる群の１つ以上のメンバーが含まれる。いくつかの態様では、治療した肺の線維症状態は、肺の炎症性障害、例えば、喘息、及び／または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）と関連する状態である。

【0338】

特定の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、肺線維症を有するかまたは発症するリスクがある対象に投与することを含む、肺線維症を治療及び／または改善する方法を提供する。肺線維症の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。

【0339】

いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、及び抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体、及び抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）で治療した肺の線維症状態は、急性呼吸窮迫症候群、慢性喘息、急性肺症候群、気管支肺異形成症、肺高血圧（例えば、特発性肺高血圧（ＩＰＨ））、ヒスチオサイトーシスＸ、塵肺、カプラン病、リウマチ様疾患、及び全身性硬化症からなる群から選択されるメンバーである。

【0340】

いくつかの態様では、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、及び抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体及び抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）で治療した肺の線維症状態は、自己免疫結合組織障害と関連する状態である。いくつかの態様では、自己免疫結合組織障害は、サルコイドーシス、関節リウマチ、強皮症及び全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）からなる群から選択される。さらなる態様では、肺の線維症状態は、疾患、毒素、障害、または治療と関連する状態である。従って、いくつかの態様では、肺の線維症状態は、毒素及び刺激物への曝露、例えば、吸入作業場所の危険（例えば、粉塵、アスベスト、シリカ、ボーキサイト、鉄、綿、タルク、及び炭塵）、毒素（例えば、アミオダロン、カルムスチン、クロラムフェニコール、ヘキサメトニウム）、タバコの煙、及び環境汚染物質からなる群の１つ以上のメンバーと関連する状態である。さらなる態様では、治療した肺の線維症状態は、感染性疾患と関連する状態である。特定の態様では、感染性疾患は、慢性感染症と関連する状態である。

【0341】

さらなる態様では、治療した肺の線維症状態は、治療と関連する状態である。特定の態様では、治療は、外科手術、放射線療法、及び薬物療法から選択される。さらなる態様では、薬物療法は、化学療法である。さらなる態様では、化学療法は、ブレオマイシン、メトトレキサート、アミオダロン、ブスルファン、ニトロソウレア、及びニトロフラントインからなる群から選択される化学療法剤の投与を伴う。

【0342】

肺高血圧または特発性肺線維症（ＩＰＦ）を治療及び／または改善する方法も提供される。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）を、肺高血圧またはＩＰＦを有するかまたは発症するリスクがある対象に投与することを含む。場合によっては、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質またはＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む医薬組成物は、肺高血圧を治療、防止、及び／または改善するために投与される。場合によっては、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質またはＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む医薬組成物は、ＩＰＦを治療、防止、及び／または改善するために投与される。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質またはＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む医薬組成物は、肺高血圧またはＩＰＦを有するかまたは発症するリスクがある対象に投与される。

【0343】

また、本開示は、肝臓の線維症状態を治療及び／または改善する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質またはＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む医薬組成物の有効量を、肝臓の線維症状態を有するかまたは発症するリスクがある対象に投与することを含む。肝臓の線維症状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を用いて治療され得る肝臓の線維症状態には、脂肪症（例えば、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、脂肪肝疾患、胆汁うっ滞性肝疾患（例えば、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ））、肝硬変、アルコール誘発性の肝線維症、感染誘発性の肝線維症、胆管損傷、胆管線維症、先天性肝線維症、自己免疫肝炎、及び胆管症からなる群の１つ以上のメンバーが含まれる。さらなる態様では、感染誘発性の肝線維症は、細菌誘発性またはウイルス誘発性である。

【0344】

さらなる態様では、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質で治療され得る肝臓の線維症状態は、ウイルス感染（例えば、肝炎（Ｃ型、Ｂ型、及びＤ型肝炎）と関連する肝線維症、自己免疫肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、進行性塊状線維症、アルコール依存症、及び毒素または刺激物への曝露（例えば、アルコール、医薬品、及び環境毒素）からなる群の１つ以上のメンバーである。

【0345】

また、本開示は、心臓線維症を治療及び／または改善する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質またはＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む医薬組成物の有効量を、心血管系の線維症状態を有するかまたは発症するリスクがある対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、心臓線維症は、心内膜心筋線維症または特発性心筋症である。いくつかの実施形態では、皮膚線維症は、強皮症、心的外傷後、手術皮膚の瘢痕、ケロイド、または皮膚のケロイド形成である。いくつかの実施形態では、眼の線維症は、緑内障、眼の硬化症、結膜の瘢痕化、角膜瘢痕、または翼状片である。いくつかの実施形態では、後腹膜線維症は、特発性、薬理学的誘発性、または放射線誘発性である。いくつかの実施形態では、嚢胞性線維症は、膵臓の嚢胞性線維症または肺の嚢胞性線維症である。いくつかの実施形態では、注射線維症は、筋肉内注射の合併症として起こる。心血管系の線維症状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。

【0346】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、眼疾患または状態を治療及び／または改善する方法も提供される。特定の態様では、眼疾患または状態は、緑内障である。いくつかの態様では、眼疾患は、網膜症である。さらなる態様では、眼疾患は、糖尿病性網膜症である。

【0347】

さらなる態様では、本開示は、眼の線維症状態（例えば、眼の線維症、眼科線維症、及び網膜機能不全と関連する線維症）を治療及び／または改善する方法を提供する。従って、場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、眼の線維症状態を有するかまたは発症するリスクがある対象に投与することを含む。心血管系の線維症状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。

【0348】

本明細書に提供される方法に従って治療され得る眼の線維症状態は、損傷、例えば、機械的創傷（例えば、アルカリ熱傷と関連する線維症）または種々の代謝性機能不全（例えば、炎症、虚血、及び変性疾患に対する応答を含む）に反応して起こり得る。いくつかの態様では、本開示は、眼の外科手術と関連する線維症を治療する方法を提供する。さらなる態様では、線維症は、眼の状態における術後の瘢痕と関連する状態である。さらなる態様では、術後の瘢痕は、網膜復位、白内障摘出、またはドレナージ術を伴う外科手術と関連する状態である。

【0349】

いくつかの態様では、本開示は、黄斑浮腫（例えば、糖尿病性黄斑浮腫）、ドライアイ疾患、レンズの線維症、角膜実質または内皮の線維症、角膜及び結膜における瘢痕、線維血管性瘢痕、網膜線維症、及び網膜神経膠症からなる群の１つ以上のメンバーと関連する眼の線維症状態を治療及び／または改善する方法を提供する。

【0350】

いくつかの態様では、本開示は、黄斑変性症と関連する眼の線維症状態を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、治療した線維症状態は、加齢黄斑変性症と関連する状態である。いくつかの実施形態では、治療した状態は、滲出型黄斑変性症と関連する状態である。他の実施形態では、治療した状態は、乾燥黄斑変性症と関連する状態である。

【0351】

いくつかの態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、炎症性疾患または状態を治療及び／または改善する方法を提供する。炎症性疾患または状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。いくつかの態様では、炎症性疾患または状態は、炎症性癌、線維症と関連する炎症、アテローム性動脈硬化症と関連する炎症、喘息、または自己免疫障害である。

【0352】

心血管疾患または状態を治療及び／または改善する方法をさらに提供する。心血管疾患または状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することによって、心血管疾患または状態を治療または改善することを含む。いくつかの態様では、心血管疾患または状態は、貧血、鬱血性心不全、心室機能不全、血管石灰化、肺高血圧、動脈再狭窄、または心筋線維症である。

【0353】

いくつかの態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、肺疾患または状態を治療及び／または改善する方法を提供する。肺疾患または状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。

【0354】

いくつかの態様では、本開示は、有効用量のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、筋肉骨格疾患または状態を治療及び／または改善する方法を提供する。筋肉骨格疾患または状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。有効用量のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）に投与することによって治療及び／または改善され得る例示的なＡｃｔＲＩＩＢ関連状態としては、神経筋疾患（例えば、筋ジストロフィー及び筋萎縮）、うっ血性閉塞性肺疾患または肺気腫（及び関連する筋肉消耗）、筋肉消耗症候群、サルコペニア、悪液質、脂肪組織障害（例えば、肥満）、２型糖尿病、及び骨変性疾患（例えば、骨粗鬆症）が挙げられる。これらの疾患または状態の各々の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用は、本明細書に提供される。

【0355】

有効用量のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）に投与することによって治療及び／または改善され得る他の例示的なＡｃｔＲＩＩ関連状態としては、筋変性及び神経筋疾患、及び骨粗鬆症が挙げられる。

【0356】

提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、他の神経筋疾患または筋肉成長を必要とする状態、例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）における筋肉量を増加させるための有効な手段を提供する。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質が有用であり得る他の神経筋疾患には、脊髄損傷または卒中による麻痺；心的外傷または退行性、代謝性、または炎症性ニューロパチーによる除神経；成人運動ニューロン疾患；多病巣性の神経ブロックによる自己免疫運動ニューロパチー；及び幼児または少年脊髄筋萎縮が含まれる。

【0357】

他の態様では、本開示は、骨及び／または軟骨形成を誘発する、骨量減少を防止する、骨石灰化を増加させる、または骨の脱灰を防止する方法を提供する。例えば、提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、対象（例えば、ヒト及び他の動物）における骨粗鬆症の治療、及び骨折及び軟骨欠損の治癒において使用する。いくつかの態様では、本開示は、対象における骨折または軟骨を治癒する方法を提供する。別の態様では、提供される方法及び組成物は、骨粗鬆症、副甲状腺機能亢進症、クッシング病、甲状腺中毒症、慢性下痢状態または吸収不良、または神経性無食欲症などの骨量減少を引き起こす状態を治療するために投与される。

【0358】

さらなる態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、神経障害または状態を治療する方法を提供する。神経障害または状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。いくつかの態様では、神経障害または状態は、神経細胞死と関連する。いくつかの態様では、神経障害または状態は、パーキンソン病、ＡＬＳ；脳萎縮、または痴呆である。

【0359】

さらなる態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、代謝性障害または状態を治療する方法を提供する。代謝性障害または状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。いくつかの態様では、代謝性障害または状態は、糖尿病と関連する状態である。いくつかの態様では、代謝性障害または状態は、肥満である。さらなる態様では、代謝性障害または状態は、肥大肥満である。いくつかの態様では、代謝性障害または状態は、がん悪液質または筋肉消耗である。

【0360】

他の態様では、本開示は、対象における体脂肪含量を調節する、それに関する状態を治療または防止する、特に、それに関する健康妥協状態の位置及び方法を提供する。

【0361】

本明細書に提供されるように、（対照）体重を調節することは、体重を減少または増加させること、体重増加率を減少または増加させること、または体重減少率を増加または減少させることを指し得、（例えば、あるいは体重を増加または減少させ得る外部または内部の影響に対する）体重を積極的に維持する、または著しく変化させないことも含む。一態様によれば、本開示は、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象（例えば、ヒト）に投与することによって、体重を調節する方法を提供する。一態様では、本開示は、対象における体重を減少させる、及び／または体重増加を減少させる、特に、肥満のリスクがあるかまたは罹患している患者における肥満を治療または改善する方法を提供する。別の態様では、本開示は、体重を増やすかまたは保つことができない対象（例えば、萎縮症候群を有する動物）を治療する方法及び化合物を提供する。かかる方法は、体重及び／または質量を増加させる、または体重及び／または質量損失を減少させる、または望ましくないくらい低い（例えば、不健康な）体重及び／または質量と関連するかまたは起因する状態を改善させるために有効である。提供されるＡｃｔＲＩＩＢ結合タンパク質は、ＩＩ型糖尿病及び代謝性症候群の発症を減速または防止する治療剤としてさらに使用され得る。

【0362】

特定の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、糖尿病及び／または糖尿病と関連する状態を有するかまたは発症するリスクがある対象に投与することを含む、糖尿病と関連する状態を治療及び／または改善する方法を提供する。糖尿病または糖尿病と関連する状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。一態様では、糖尿病と関連する状態は、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性血管障害、または糖尿病性細小血管症である。

【0363】

さらなる態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、創傷治癒を促進する方法を提供する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、創傷治癒と関連する瘢痕形成を減少させるために対象に投与される。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、肥厚性瘢痕またはケロイドを発症するリスクがある対象に投与される。

【0364】

ＡｃｔＲＩＩ発現及び／またはＡｃｔＲＩＩシグナル伝達と関連する病理学的状態におけるＡｃｔＲＩＩ活性を拮抗する方法をさらに提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩ抗体またはＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、病理学的状態は、筋肉骨格疾患または障害、例えば、筋萎縮である。いくつかの態様では、病理学的状態は、例えば、肺または肝臓の線維性疾患である。さらなる態様では、病理学的状態は、糖尿病である。いくつかの態様では、病理学的状態は、肥満（例えば、肥大肥満）である。さらなる態様では、病理学的状態は、肺高血圧または特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの態様では、病理学的状態は、眼疾患、例えば、糖尿病性網膜症である。いくつかの態様では、病理学的状態は、がん、例えば、癌腫（例えば、皮膚の基底及び扁平上皮細胞癌、頭頸部癌、及び腎細胞癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、大腸癌、または骨誘導損失癌である。

【0365】

ＡｃｔＲＩＩＢ発現及び／または増加したＡｃｔＲＩＩＢシグナル伝達と関連する病理学的状態におけるＡｃｔＲＩＩＢ活性を拮抗する方法も提供される。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、及びそれらのＡｃｔＲＩＩＢ結合抗体断片、及び変異体、及び誘導体）を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、病理学的状態は、筋肉骨格疾患または障害、例えば、筋萎縮である。いくつかの態様では、病理学的状態は、例えば、肺または肝臓の線維性疾患である。さらなる態様では、病理学的状態は、糖尿病である。いくつかの態様では、病理学的状態は、肥満（例えば、肥大肥満）である。さらなる態様では、病理学的状態は、肺高血圧または特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの態様では、病理学的状態は、眼疾患、例えば、糖尿病性網膜症である。いくつかの態様では、病理学的状態は、がん、例えば、癌腫（例えば、皮膚の基底及び扁平上皮細胞癌、及び頭頸部癌）、骨髄腫、腎細胞癌、大腸癌、または骨誘導損失癌である。

【0366】

ＡｃｔＲＩＩＡ発現及び／または増加したＡｃｔＲＩＩＡシグナル伝達と関連する病理学的状態におけるＡｃｔＲＩＩＡ活性を拮抗する方法をさらに提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体またはＡｃｔＲＩＩＡ結合抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、病理学的状態は、筋肉骨格疾患または障害、例えば、筋萎縮である。一態様では、病理学的状態は、線維性疾患である。いくつかの態様では、病理学的状態は、例えば、肺または肝臓の線維性疾患である。さらなる態様では、病理学的状態は、肺または肝臓の線維性疾患である。さらなる態様では、病理学的状態は、糖尿病である。いくつかの態様では、病理学的状態は、肥満（例えば、肥大肥満）である。さらなる態様では、病理学的状態は、肺高血圧または特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの態様では、病理学的状態は、眼疾患、例えば、糖尿病性網膜症である。いくつかの態様では、病理学的状態は、がん、例えば、癌腫（例えば、皮膚の基底及び扁平上皮細胞癌、頭頸部癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、大腸癌、または骨誘導損失癌である。

【0367】

ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ発現、及び／または増加したＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡシグナル伝達と関連する病理学的状態におけるＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ活性を拮抗する方法をさらに提供する。場合によっては、方法は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長抗ＡｃｔＲＩＩ抗体またはＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、病理学的状態は、筋肉骨格疾患または障害、例えば、筋萎縮である。一態様では、病理学的状態は、線維性疾患である。いくつかの態様では、病理学的状態は、例えば、肺または肝臓の線維性疾患である。さらなる態様では、病理学的状態は、肺または肝臓の線維性疾患である。さらなる態様では、病理学的状態は、糖尿病である。いくつかの態様では、病理学的状態は、肥満（例えば、肥大肥満）である。さらなる態様では、病理学的状態は、肺高血圧または特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの態様では、病理学的状態は、眼疾患、例えば、糖尿病性網膜症である。いくつかの態様では、病理学的状態は、がん、例えば、癌腫（例えば、皮膚の基底及び扁平上皮細胞癌、頭頸部癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、大腸癌、または骨誘導損失癌である。

【0368】

さらなる態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体またはそのＡｃｔＲＩＩ結合断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む、がんまたはがんと関連する状態またはその治療を治療及び／または改善する方法を提供する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体またはそのＡｃｔＲＩＩＢ結合断片である。がんまたはがんと関連する状態の治療または改善のための医薬の製造における本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用をさらに提供する。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体またはそのＡｃｔＲＩＩＡ結合断片である。いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ、またはそのＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ ＡｃｔＲＩＩＢ結合断片に結合する抗体である。いくつかの態様では、対象は、黒色腫、子宮癌、肺癌、卵巣癌、乳癌、大腸癌、膵癌、及び肉腫からなる群から選択される癌を有する。特定の態様では、対象は、癌腫（例えば、皮膚の基底及び扁平上皮細胞癌、及び頭頚部癌）、骨髄腫、大腸癌、または骨誘導損失癌を有する。

【0369】

いくつかの態様では、方法は、がん細胞、腫瘍関連間質細胞、またはＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡ）を発現する内皮細胞を、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合するＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を接触させることを含む。場合によっては、方法は、アクチビンＡをＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と接触させることを含む。さらなる態様では、腫瘍細胞は、骨髄線維症、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、下垂体癌からなる群から選択されるがん由来である。別の態様では、がんは、乳癌、消化管癌、または癌腫（例えば、基底及び扁平上皮細胞癌）である。さらなる態様では、がんは、骨喪失誘導癌である。いくつかの態様では、腫瘍細胞は、がん系由来である。

【0370】

本開示は、治療有効量のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、単独または１つ以上の追加療法（例えば、１つ以上のさらなる治療剤）と併用して、線維症状態を有するかまたは発症するリスクがある対象に投与することを含む方法を提供する。本開示は、ＡｃｔＲＩＩ媒介疾患及び／または状態（例えば、筋肉障害、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態、例えば、心筋線維症、及び特発性肺線維症（ＩＰＦ））；代謝性疾患（例えば、インスリン抵抗性のＩＩ型糖尿病、高血糖、及び肥満）；炎症性疾患または状態、自己免疫疾患、心血管疾患（例えば、鬱血性心不全、及び高血圧）；眼疾患、例えば、加齢黄斑変性症；肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、例えば、骨粗鬆症；神経疾患；創傷治癒；体重減少；及びがん（例えば、癌腫、骨髄腫、骨誘導損失癌、下垂体癌、及び消化管癌））の治療（例えば、防止）、及び／または改善に使用するための、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を単独または１つ以上の医薬の調製のための別の薬剤と併用して使用する組成物をさらに提供する。

【0371】

また、臨床試験手順の一環として血液または組織中のタンパク質レベル（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡレベル）を診断的にモニタリングして、例えば、所与の治療レジメンの有効性を判定するための、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用も提供される。例えば、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を検出可能な物質にカップリングすることにより、検出を促進することができる。検出可能な物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、及び放射性物質が挙げられる。好適な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ；好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが挙げられ；及び好適な放射性物質の例としては、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、または^３Ｈが挙げられる。

【0372】

医薬組成物及び投与方法
ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を調製して、それを必要としている対象に投与する方法は、当業者に公知であり、または当業者によって容易に決定される。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入によるものまたは局所であり得る。用語の非経口は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸、または腟内投与を含む。これらの投与形式の全てが、明らかに本開示の範囲内にあるものとして企図されるが、投与形式の別の例を挙げれば、注射用、詳細には、静脈内もしくは動脈内注射または点滴用の溶液であり得る。通常、好適な医薬組成物は、緩衝液（例えば、酢酸塩、リン酸塩、またはクエン酸塩緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、必要に応じて、安定剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含み得る。本明細書の教示と適合性のある他の方法では、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、線維症または腫瘍の臓器及び／または部位に直接送達し、それにより治療剤への罹患組織の曝露を増加させることができる。一態様では、投与は、例えば、吸入または鼻腔内投与によって気道に直接である。

【0373】

本明細書で考察するとおり、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、筋肉障害、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態、例えば、心筋線維症、及び特発性肺線維症（ＩＰＦ））；代謝性疾患（例えば、インスリン抵抗性のＩＩ型糖尿病、高血糖、及び肥満）；炎症性疾患または状態、自己免疫疾患、心血管疾患（例えば、鬱血性心不全、及び高血圧）；眼疾患、例えば、加齢黄斑変性症；肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、例えば、骨粗鬆症；神経疾患；創傷治癒；体重減少；及びがん（例えば、癌腫、骨髄腫、骨誘導損失癌、下垂体癌、及び消化管癌を含むが、これらに限定されない、ＡｃｔＲＩＩ媒介疾患及び状態のインビボ治療に薬学的に有効な量で投与することができる。この点で、本開示のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、投与が促進されかつ活性薬剤の安定性が増進するように製剤化され得ることは理解されるであろう。本開示による医薬組成物は、生理食塩水、非毒性緩衝液、保存剤などの薬学的に許容可能な非毒性の無菌担体を含み得る。本願の目的上、コンジュゲートしたまたはコンジュゲートしていないＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の薬学的に有効な量とは、ＡｃｔＲＩＩとの有効な結合を達成し、かつ利益を達成する、例えば、疾患または状態の症状を改善したり、または物質もしくは細胞を検出したりするのに十分な量を意味する。本明細書に開示される治療法における使用に好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．）１６ｔｈ ｅｄ．（１９８０）に記載されている。

【0374】

本明細書に提供されるある特定の医薬組成物は、例えば、カプセル、錠剤、水性懸濁液剤、または液剤を含む、許容可能な剤形で経口投与することができる。特定の医薬組成物はまた、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与することもできる。かかる組成物は、ベンジルアルコールまたは他の好適な保存剤、バイオアベイラビリティを増強する吸収促進剤、及び／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を用いて、生理食塩水中の溶液として調製することができる。

【0375】

単一の剤形を作製するため担体材料と組み合わせることのできるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／またはＡｃｔＲＩＩＡに特異的に結合する抗体）の量は、治療対象及び詳細な投与方法に応じて変わり得る。組成物は、単一用量、複数用量として、または決められた期間にわたって注入で投与することができる。投薬レジメンもまた、最適な所望の反応（例えば、治療的または予防的反応）がもたらされるように調整することができる。

【0376】

本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、前述の治療方法に従って、治療効果を生じさせるのに十分な量でヒトまたは他の対象に投与することができる。本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、公知の技術に従ってＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を従来の薬学的に許容可能な担体または希釈剤と組み合わせることによって調製される従来の剤形で、かかるヒトまたは他の動物に投与することができる。薬学的に許容可能な担体または希釈剤の形態及び特性は、それと組み合わせる活性成分の量、投与経路、及び他の周知の変動要因に左右され得る。１つ以上の異なるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含むカクテルも使用することができる。

【0377】

退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態；炎症性、自己免疫、心血管、肺、筋骨格系、骨格系、眼、神経、または代謝性疾患または状態；肥満；創傷治癒；及びがんなどのＡｃｔＲＩＩ媒介疾患または状態を治療するためのＡｃｔＲＩＩ結合組成物の治療有効用量は、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態、対象がヒトか、それとも動物か、投与される他の薬物療法、及び治療が予防的か、それとも治療的かを含めた多くの異なる要因に応じて変わる。通常、対象はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物もまた治療され得る。治療投薬量は、安全性及び有効性を最適化するため、当業者に公知の常法を用いて漸増することができる。

【0378】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の投与によって特定の疾患または状態の症状を改善するとは、永久的か、それとも一時的か、持続性か、それとも一過性かに関わらず、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の投与に帰することのできる、またはそれに関連付けることのできる何らかの軽減を指す。

【0379】

また、本開示は、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態；炎症性、自己免疫、心血管、肺、筋骨格系、骨格系、眼、神経、または代謝性疾患または状態；肥満；創傷治癒；及びがんを治療するための医薬の製造における抗ＡｃｔＲＩＩ抗体などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の使用を提供する。

【0380】

併用療法
いくつかの態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）は、１つ以上の他の療法と併用して投与される。かかる療法には、さらなる治療剤、並びに他の医学的介入が含まれる。本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質と併用して投与することのできる例示的な治療剤としては、抗ＳＤＩ繊維化剤、コルチコステロイド、抗炎症剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、利尿剤、抗糖尿病薬、免疫抑制剤、化学療法剤、代謝拮抗物質、及び免疫調節剤が挙げられるが、これらに限定されない。種々の態様では、ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、外科的切除／除去手順の前、中、後に対象に投与される。

【0381】

診断
また、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ媒介疾患及び状態（例えば、筋肉障害、例えば、退行性筋疾患、筋ジストロフィー、筋萎縮、または筋肉消耗障害；線維症状態（例えば、肝、肺、血管及び／または眼の線維症状態、例えば、心筋線維症、及び特発性肺線維症（ＩＰＦ））；代謝性疾患（例えば、インスリン抵抗性のＩＩ型糖尿病、高血糖、及び肥満）；炎症性疾患または状態、自己免疫疾患、心血管疾患（例えば、鬱血性心不全、及び高血圧）；眼疾患、例えば、加齢黄斑変性症；肺疾患、筋肉骨格疾患、骨格系疾患、例えば、骨粗鬆症；神経疾患；創傷治癒；体重減少；及びがん（例えば、癌腫、骨髄腫、骨誘導損失癌、下垂体癌、及び消化管癌））の診断において有用な診断方法を提供し、これには、個体からの組織または血清などの体液におけるＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）タンパク質の発現レベルの計測、及び計測した発現レベルと正常組織または体液における標準ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）発現レベルとの比較が関わり、それによって、標準と比較したＡｃｔＲＩＩ発現レベルの増加が、本明細書に提供されるとおりの完全長抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体及び抗原結合抗体断片など、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質によって治療可能な障害の指標となる。

【0382】

抗ＡｃｔＲＩＩ抗体（例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）など、本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質は、当業者に公知の古典的な免疫組織学的方法を用いた生物学的試料中のＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ）レベルのアッセイに使用することができる（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６－９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７－３０９６（１９８７）を参照されたい）。ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ）タンパク質発現の検出に有用な他の抗体ベースの方法としては、イムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、またはウエスタンブロッティングが挙げられる。

【0383】

「ＡｃｔＲＩＩタンパク質の発現レベルをアッセイする」とは、第１の生物学的試料中のＡｃｔＲＩＩタンパク質レベルを直接（例えば、絶対タンパク質レベルを決定または推定することによる）、あるいは相対的に（例えば、第２の生物学的試料中の疾患関連ポリペプチドレベルと比較することによる）、定性的または定量的に計測または推定することが意図される。第１の生物学的試料中のＡｃｔＲＩＩタンパク質発現レベルを計測または推定して標準ＡｃｔＲＩＩタンパク質レベルと比較することができ、この標準は、障害を有しない個体から得た第２の生物学的試料から取られるか、または障害を有しない個体集団の平均レベルによって決定される。当該技術分野では理解されるであろうとおり、一旦「標準」ＡｃｔＲＩＩタンパク質レベルが分かれば、それを比較用の標準として繰り返し使用することができる。

【0384】

「生物学的試料」とは、潜在的にＡｃｔＲＩＩを発現する個体、細胞株、組織培養物、または他の細胞供給源から得られる任意の生物学的試料が意図される。哺乳動物から組織生検及び体液を得る方法は、当該技術分野において公知である。

【0385】

ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含むキット
本開示は、好適な包装内にあるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体、例えば、完全長ＡｃｔＲＩＩ抗体及びＡｃｔＲＩＩ結合抗体断片、並びにその変異体及び誘導体）と、本明細書に記載される方法の実施に使用し得る文書とを含むキットをさらに提供する。文書には、以下の情報：使用説明書、臨床試験の考察、副作用一覧、科学文献、添付文書資料、臨床試験結果、及び／またはそれらの要約などのうちの任意のものが含まれ得る。文書は、組成物の活性及び／または利点を指示または確立し、及び／または用量決定、投与、副作用、薬物相互作用、または医療ケア提供者に有用な他の情報を記載し得る。かかる情報は、様々な試験、例えば、インビボモデルが関わる実験動物を使用した試験及び／またはヒト臨床試験に基づく試験の結果に基づき得る。キットは、別の療法（例えば、別の薬剤）及び／または他の療法（例えば、他の薬剤）に関する情報を提供する働きをする上記に記載されるものなどの文書をさらに含み得る。

【0386】

ある特定の態様では、キットは、１つ以上の容器に少なくとも１つの精製されたＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を含む。いくつかの態様では、キットは、全ての対照、アッセイの実施についての指図、並びに結果の解析及び発表に必要な任意のソフトウェアを含め、検出アッセイの実施に必要及び／または十分な全ての構成要素を含む。

【0387】

イムノアッセイ
ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体、及びＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体のＡｃｔＲＩＩ結合断片、並びにその変異体または誘導体）は、当該技術分野において公知の任意の方法によって免疫特異的結合に関してアッセイすることができる。使用することのできるイムノアッセイとしては、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル内拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイなどの技術を用いる競合及び非競合アッセイシステムが挙げられるが、これらに限定されない。かかるアッセイは常法であり、当該技術分野において公知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ）Ｖｏｌ．１（全体として参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。

【0388】

本明細書に提供されるＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体及びＡｃｔＲＩＩに特異的に結合する抗体のＡｃｔＲＩＩ結合断片、並びにその変異体または誘導体）は、免疫蛍光法、免疫電子顕微鏡法、または非免疫学的アッセイのように、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ）またはその保存された変異体もしくはペプチド断片のインサイチュー検出のため組織学的に用いることができる。インサイチュー検出は、当該技術分野において公知の方法に従って達成することができる。当業者は、ルーチンの実験を用いて各決定に有効かつ最適なアッセイ条件を決定することができるであろう。ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の結合特性の決定に好適な方法は、本明細書に記載されているかあるいは当該技術分野において公知である。かかる動態学的解析用に設計された機器及びソフトウェアは市販されている（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（登録商標）ソフトウェア、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）ソフトウェア、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）。

【0389】

特に指示されない限り、本開示の実施には、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来技術が用いられ、それらは当該技術分野の範囲内にある。

【0390】

以下の例は、限定としてではなく、例示として提供される。

【実施例0391】

具体的な実施形態についての前述の説明は、本開示の概略的な本質を十全に明らかにするものであるため、他の者は、当該技術分野の範囲内にある知識を適用することにより、過度の実験を行うことなく、本開示の概略的な概念から逸脱することなく、容易にかかる具体的な実施形態を改良し、及び／または様々な適用に適合させることができるであろう。従って、かかる適合及び改良は、本明細書に提供される教示及び指針に基づけば、本開示の実施形態の均等物の意味及び範囲内にあることが意図される。本明細書における表現法または用語法は、限定ではなく、説明を目的としていることが理解されるべきであり、本明細書の用語法または表現法は、当業者によって教示及び指針を踏まえて解釈されるべきである。

【0392】

本開示の広さ及び範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても制限されるものではなく、以下の特許請求の範囲及びそれらの均等物に従ってのみ定義されるものである。

【0393】

本出願に引用される全ての刊行物、特許、特許出願、及び／または他の文書は、個々の刊行物、特許、特許出願、及び／または他の文書が各々、あらゆる目的から参照によって組み込まれることを個々に示されたものとするのと同程度に、あらゆる目的から全体として参照によって組み込まれる。

【0394】

実施例１．ＡｃｔＲＩＩ結合抗体の選択、特徴付け、及び作製
マルチラウンド選択手順を用いて、高親和性でＡｃｔＲＩＩに結合し、ヒトＡｃｔＲＩＩの結合に対してアクチビンＡと競合するヒトＩｇＧ抗体を選択した。これを以下に詳述する。

【0395】

材料及び方法
Ｐｉｅｒｃｅ製のＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて、抗原（ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ、及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ）をビオチン化した。ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）_２カッパ－ＦＩＴＣ（ＬＣ－ＦＩＴＣ）、エクストラビジン－ＰＥ（ＥＡ－ＰＥ）及びストレプトアビジン－６３３（ＳＡ－６３３）は、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓｉｇｍａ、及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓからそれぞれ入手した。ストレプトアビジンマイクロビーズ及びＭＡＣＳ ＬＣ分離カラムは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから購入した。

【0396】

ナイーブ発見
以前に記載されているように８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリーが各々約１０^９個の多様性に増殖した（例えば、ＷＯ０９／０３６３７９；ＷＯ１０／１０５２５６；ＷＯ１２／００９５６８を参照されたい）。最初の２ラウンドの選択では、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣｓシステムを利用した磁気ビーズソーティング技術を、記載の通りに行った（例えば、Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２８６（１－２）：１４１－１５３（２００４）を参照されたい）。簡潔には、酵母細胞（約１０^１０個の細胞／ライブラリー）をＦＡＣＳ洗浄緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中、室温で１５分間、３ｍｌの１０ｎＭビオチン化単量体ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ抗原（ＡｃｔＲＩＩＢ－ＦｃまたはＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ）とインキュベートした。５０ｍｌの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを４０ｍｌの洗浄緩衝液に再懸濁し、ストレプトアビジンマイクロビーズ（５００μｌ）を酵母に加えて、４℃で１５分間インキュベートした。次に、酵母をペレット化し、５ｍｌの洗浄緩衝液に再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムの上にロードした。５ｍｌをロードした後、カラムを３ｍｌのＦＡＣＳ洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、カラムを磁場から除去し、酵母を５ｍｌの増殖培地で溶出した後、一晩増殖した。次ラウンドのソーティングは、フローサイトメトリーを使用して行った。おおよそ１×１０^８個の酵母をペレット化し、洗浄緩衝液で３回洗浄し、平衡状態下、ビオチン化単量体またはＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ融合抗原（１００から１ｎＭへ）濃度を下げながら室温でインキュベートした。次いで、酵母を２回洗浄し、ＬＣ－ＦＩＴＣ（１：１００に希釈）で染色し、ＳＡ－６３３（１：５００に希釈）またはＥＡ－ＰＥ（１：５０に希釈）の第２試薬のいずれかで４℃、１５分間染色した。氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍｌの洗浄緩衝液に再懸濁し、ストレーナーキャップ付ソートチューブに移した。ソーティングは、ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行い、ソートゲートを割り当てて、バックグラウンド対照に対する特定の結合剤を選択した。その後の選択ラウンドは、ＣＨＯ細胞由来の可溶性膜タンパク質を利用して非特異的試薬結合剤の数を減少させて（例えば、ＷＯ１４／１７９３６３及びＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２６（１０）：６６３－６７０（２０１３）を参照されたい）、かつ、ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ（それぞれ、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ抗原）を用いてＡｃｔＲＩＩ（ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＡ）への親和性が改善された結合剤を同定するために使用した。最終ラウンドのソーティング後、酵母を平板培地に置き、個別のコロニーを選択し、親和性成熟に対するクローンを特徴付けて、指定した。

【0397】

親和性成熟
ナイーブクローンの結合最適化は、３つの成熟戦略：軽鎖多様化；ＣＤＲＨ及びＣＤＲＨ２の多様化；及びシーケンシャルＶＨ及びＶＬ突然変異誘発の実行を利用して実施した。

【0398】

軽鎖多様化：重鎖プラスミドをナイーブ出力（上述）として抽出し、軽鎖ライブラリーに形質転換し、１×１０^６個の多様性を得た。１ラウンドのＭＡＣＳソーティングで上述のように選択を行い、２ラウンドのＦＡＣＳソーティングを行い、それぞれのラウンドで１０ｎＭまたは１ｎＭのビオチン化ＡｃｔＲＩＩ－Ｆｃ抗原（ＡｃｔＲＩＩＢ－ＦｃまたはＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ）を用いた。

【0399】

ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２選択：軽鎖多様化手順から選択されるクローン由来のＣＤＲＨ３を、１×１０^８個の多様性をもつＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２変異体で予め作製したライブラリーに組み換えて、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ抗原をそれぞれ用いる平行選択を行った。上述のように、異なる時間量に対し、ビオチン化抗原抗体酵母複合体を非ビオチン化抗原でインキュベートすることによって親和性圧力を適用し、最も高い親和性抗体を選択した。

【0400】

ＶＨｍｕｔ／ＶＫｍｕｔ選択：ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２選択手順から得られたクローンに、重鎖及び／または軽鎖のエラープローンＰＣＲに基づく突然変異誘発を介した追加のラウンドの親和性成熟を施した。選択は、一般的に上記のような抗原としてＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＡを用いるが、全ての選択ラウンドに対してＦＡＣＳソーティングの使用を加えて行った。抗原濃度を低下させて、冷却抗原競合時間を増やして、さらに圧力をかけて、最適な親和性を得た。

【0401】

抗体産生及び精製
さらなる特徴付けのために選択された抗体の十分量を産生するために、酵母クローンを飽和まで増殖させた後、撹拌しながら３０℃で４８時間誘発させた。誘発後、酵母細胞をペレット化し、上清を収穫して、精製した。ＩｇＧは、プロテインＡカラムを用いて精製し、酢酸、ｐＨ２．０で溶出した。Ｆａｂ断片は、パパイン消化によって生成し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。

【0402】

ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｋ_Ｄ測定
選択された抗体のＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、一般的に前述されるように行った（例えば、Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｂｓ、５（２）：２７０－２７８（２０１３）を参照されたい）。簡潔には、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、ＩｇＧをオンラインでＡＨＱセンサーにロードすることによって行った。センサーをオフラインでアッセイ緩衝液中にて３０分間平衡にした後、オンラインで６０秒間監視し、ベースラインを確立した。ＩｇＧをロードしたセンサーを１００ｎＭ抗原に５分間暴露した後、アッセイ緩衝液に５分間移して、オフ速度を測定した。速度論を、１：１結合モデルを用いて解析した。

【0403】

ＭＳＤ－ＳＥＴ Ｋ_Ｄ測定
選択された抗体の平衡親和性測定は、一般的に前述されるように行った（Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｂｓ ５（２）：２７０－２７８（２０１３））。簡潔には、溶液平衡力価測定（ＳＥＴ）は、ＰＢＳ＋０．１％のＩｇＧを含まないＢＳＡ（ＰＢＳＦ）中で行い、抗原（ＡｃｔＲＩＩＢモノマーまたはＡｃｔＲＩＩＡモノマー）を１０～１００ｐＭで一定に保持し、ＦａｂまたはｍＡｂｓの３～５倍段階希釈でインキュベートし、１０ｐＭ～１０ｎＭで開始した。抗体（ＰＢＳ中で２０ｎＭ）を標準結合ＭＳＤ－ＥＣＬプレート上に４℃で一晩または室温で３０分間被覆した。その後、プレートを７００ｒｐｍで振盪させながらＢＳＡによって３０分間ブロックした後、洗浄緩衝液（ＰＢＳＦ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。ＳＥＴ試料をプレートに塗布し、７００ｒｐｍで振盪させながら１５０秒間インキュベートした後、１回洗浄した。プレート上で捕捉した抗原を、プレート上で３分間のインキュベーションによって、ＰＢＳＦ中の２５０ｎｇ／ｍＬのスルホタグ標識ストレプトアビジンで検出した。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した後、界面活性剤を含む１×リードバッファＴを用いて、ＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００機器上で読み取った。遊離抗原のパーセントを滴定抗体の関数としてＰｒｉｓｍでプロットし、二次方程式にフィッティングして、ＫＤを抽出した。スループットを改善するため、ＳＥＴ試料調製を含むＭＳＤ－ＳＥＴ実験全体を通して液体処理ロボットを使用した。

【0404】

Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ３８４エピトープビニング／リガンドブロッキング
選択された抗体エピトープビニング／リガンドブロッキングは、標準サンドイッチ形式の交叉ブロッキングアッセイを用いて行った。対照抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサー上にロードし、センサー上の非占有Ｆｃ結合部位を無関係のヒトＩｇＧ１抗体でブロックした。次に、センサーを１００ｎＭの標的抗原、その後、第２の抗標的抗体またはリガンドに暴露した。ＦｏｒｔｅＢｉｏのデータ解析ソフトウェア７．０を用いてデータを処理した。抗原会合後の第２の抗体またはリガンドによるさらなる結合は、非占有エピトープ（非競合）を示す一方、結合なしは、エピトープブロッキング（競合またはリガンドブロッキング）を示す。

【0405】

サイズ排除クロマトグラフィー
ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰカラム（２２８５５）を、６分／ランのサイクル時間で０．４ｍＬ／分にて、酵母で産生されたｍＡｂの高速ＳＥＣ解析に使用した。２００ｍＭのリン酸ナトリウム及び２５０ｍＭの塩化ナトリウムを移動相として使用した。

【0406】

動的走査蛍光定量法
１０ｕＬの２０×Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅを２０ｕＬの０．２～１ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂまたはＦａｂ溶液に添加した。ＲＴ－ＰＣＲ機器（ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ９６ ＲＴ ＰＣＲ）を使用して、試料プレート温度を０．５℃の増分で４０℃～９５℃まで傾斜させ、各温度で２分平衡させた。生データの一次導関数の負を使用して、Ｔｍを抽出した。

【0407】

前述の解析に基づいて、好ましい特徴をもつ８つのナイーブＡｃｔＲＩＩ結合抗体の配列を確認し、上述の成熟戦略を用いた結合最適化のために選択した。

【0408】

実施例２．ＡｃｔＲＩＩ結合ナイーブ及び最適化抗体の特徴付け
前述の実施例に従って生成された例示的なナイーブ及び結合最適化ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を、配列、ＳＰＲ、及び細胞ベースのレポーターアッセイ解析によってさらに特徴付けた。

【0409】

実施例１に記載の方法に従って生成された例示的なナイーブ及び結合最適化ＡｃｔＲＩＩ結合抗体の配列を表１に提示する（例示的なＣＤＲ配列には、下線を引く）。

【0410】

【表1】

【0411】

ＳＰＲ（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）基づく解析）及び細胞ベースのレポーターアッセイを用いて、表１に記載のＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の結合をさらに詳しく特徴付けた。

【0412】

Ａ０１系列抗体
単量体及び二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＡ０１抗体系列（Ａ０１（ナイーブ親）、Ｂ０１、Ｃ０１、Ｄ０１、Ｅ０１及びＦ０１）の動力学的特徴付けは、３７℃での標準ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析を用いて行った。簡単に言えば、抗体を抗ｈＦｃＩｇＧ Ｂｉａｃｏｒｅチップ上で捕捉し、異なる濃度の二量体及び単量体ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＡを、捕捉された抗体及び対照表面の上に二重に注入した。運動速度定数を得るため、データを二重参照し、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、１：１相互作用モデルにフィッティングさせた。平衡結合定常Ｋ_Ｄは、結合速度定数比ｋ_ｄ／ｋ_ａによって決定された。

【0413】

Ａ０１系列抗体Ａ０１～Ｆ０１の結合パラメーター解析の結果を表２及び図１Ａ～１Ｎに提示する。

【0414】

【表2】

【0415】

最適化されたＡ０１系列抗体Ｂ０１、Ｃ０１、Ｄ０１、Ｅ０１、及びＦ０１の各々は、Ａ０１親抗体上のＡｃｔＲＩＩＢモノマー及びダイマー結合に対する平衡解離定数（ＫＤ）動態パラメーターの改善を示した。

【0416】

Ａ０１系列抗体Ａ０１、Ｂ０１、Ｃ０１、Ｄ０１、Ｅ０１、及びＦ０１のＡｃｔＲＩＩＢ中和能力は、２９３ＦＴ細胞のＣＲＩＳＰＥ－Ｃａｓ９修飾によって得られたＦ２．３５（ＩＩＡノックアウト）細胞における細胞ベースのアクチビンＡシグナル伝達アッセイで評価した。細胞を、Ｓｍａｄ２／３反応要素ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２を含有する実験ルシフェラーゼレポータープラスミド、及び対照ルシフェラーゼレポータープラスミドｐＲＬ－ＣＭＶと同時にトランスフェクトした。翌日、ｍＡｂの段階希釈を作製し、トランスフェクト細胞に添加し、３０分間インキュベートした後、アクチビンＡなどの活性化因子を添加し（最終濃度５ｎｇ／ｍｌ）、さらに６時間インキュベーションした。細胞をＰＢＳ中で１×で洗浄し、溶解し、製造者の指示に従ってデュアルルシフェラーゼレポーターアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて評価した。Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを用いて化学発光を測定した。実験レポーターのルシフェラーゼ活性は、対照レポーターから得られたルシフェラーゼ活性によって正規化した。抗ＡｃｔＲＩＩＡ中和活性を評価するため、Ａ２０４細胞を同じレポーター遺伝子でトランスフェクトした。Ａ２０４は、ＡｃｔＲＩＩＡ、及び低レベルの内因性ＡｃｔＲＩＩＢを発現する。トランスフェクト細胞を上記のように評価した。

【0417】

最適化されたＡ０１系列抗体Ｂ０１、Ｃ０１、Ｄ０１、Ｅ０１、及びＦ０１の各々は、Ａ０１親抗体と比較して、Ａ０１親抗体上のＡｃｔＲＩＩＢ媒介シグナル阻害の増加を示した。図２を参照されたい。

【0418】

Ｇ０１系列抗体
単量体及び二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＧ０１（ナイーブ親）及び最適化Ｈ０１抗体の動力学的特徴付けは、３７℃での標準ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析を用いて行った。

【0419】

Ｇ０１及びＨ０１抗体の結合パラメーター解析の結果を表３及び図３Ａ～３Ｆに提示する。

【0420】

【表3】

【0421】

Ｈ０２最適化抗体は、Ｇ０１親抗体上のＡｃｔＲＩＩＢモノマー及びダイマー結合に対する平衡解離定数（ＫＤ）動態パラメーターの改善を示した。

【0422】

親Ｇ０１及び最適化Ｈ０１抗体のＡｃｔＲＩＩＢ中和能力は、Ｆ２．３５（ＩＩＡノックアウト）細胞における細胞ベースのアクチビンＡシグナル伝達アッセイで評価した。Ｈ０１最適化抗体は、Ｇ０１親抗体と比較して、ＡｃｔＲＩＩＢ媒介シグナル阻害の増加を示した。図４を参照されたい。

【0423】

Ａ０２系列抗体
単量体及び二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＡ０２抗体系列（Ａ０１（ナイーブ親）、Ｂ０２、Ｃ０２、Ｄ０２、及びＤ０３）の動力学的特徴付けは、３７℃での標準ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析を用いて行った。

【0424】

Ａ０２系列抗体Ａ０２～Ｄ０２の結合パラメーター解析の結果を表４及び図５Ａ～５Ｔに提示する。

【0425】

【表4】

【0426】

最適化Ａ０２系列抗体Ｂ０２、Ｃ０２、Ｄ０２、及びＤ０３の各々は、Ａ０２親抗体上の結合ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡモノマー、及びＡｃｔＲＩＩＡダイマーに対する平衡解離定数（ＫＤ）の改善を示した。

【0427】

抗体Ａ０２、Ｂ０２、Ｃ０２、Ｄ０２、及びＤ０３のＡｃｔＲＩＩＢ中和能力は、Ｆ２．３５（ＩＩＡノックアウト）細胞における細胞ベースのアクチビンＡシグナル伝達アッセイで評価した。最適化抗体Ｂ０２、Ｃ０２、Ｄ０２、及びＤ０３の各々は、Ａ０２親抗体と比較して、ＡｃｔＲＩＩＢ媒介シグナル阻害の増加を示した。図６Ａ～６Ｂを参照されたい。

【0428】

Ｅ０２系列抗体
単量体及び二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＥ０２（ナイーブ親）及び最適化Ｆ０２抗体の動力学的特徴付けは、３７℃での標準ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析を用いて行った。

【0429】

Ｅ０２及びＦ０２抗体の結合パラメーター解析の結果を表５及び図７Ａ～７Ｆに提示する。

【0430】

【表5】

【0431】

Ｆ０２最適化抗体は、Ｅ０２親抗体上のＡｃｔＲＩＩＢモノマー及びダイマー結合に対する平衡解離定数（ＫＤ）動態パラメーターの改善を示した。

【0432】

Ｅ０２及びＦ０２抗体のＡｃｔＲＩＩＢ中和能力は、Ｆ２．３５（ＩＩＡノックアウト）細胞における細胞ベースのアクチビンＡシグナル伝達アッセイで評価した。図９は、アッセイにおけるＥ０２親抗体及びＦ０２変異体抗体の中和活性を示す。実証されているように、Ｆ０２抗体は、Ｅ０２と比較して、シグナル阻害の増加を示した。

【0433】

Ｇ０２抗体
単量体及び二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡに結合するＧ０２抗体の動力学的特徴付けは、３７℃での標準ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）に基づく解析を用いて行った。図８Ａ～８Ｄは、３７℃でのＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ベース解析によって決定される単量体及び二量体ｈＡｃｔＲＩＩＢ及びｈＡｃｔＲＩＩＡ（図８Ａ～８Ｄ、それぞれ）に結合するＧ０２抗体の動力学的特徴付けを示す。Ｇ０２抗体の結合パラメーター解析の結果を表６に提示する。

【0434】

【表6】

【0435】

実施例３．Ａ２０４細胞におけるレポーター遺伝子アッセイ
Ａ２０４細胞中のレポーター遺伝子アッセイを使用して、抗ＡｃｔＲＩＩ Ｆａｂ及び組換え抗体などのＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質がＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ）を中和する能力を決定することができる。このアッセイは、トランスフェクション効率を制御するため、ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２レポータープラスミド（Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ １７：３０９１－３１００（１９９８））、並びにＲｅｎｉＵａレポータープラスミド（ｐＲＬＣＭＶ）でトランスフェクトしたヒト横紋筋肉腫細胞株に基づくことができる。ＣＡＧＡ１２モチーフは、ＴＧＦ－β応答遺伝子（ＰＡＩ－１遺伝子）に存在するため、このベクターは、Ｓｍａｄ２及びＳｍａｄ３を介してシグナル伝達する因子に一般に有用である。Ａ２０４細胞株はＡｃｔＲＩＩＢよりもむしろＡｃｔＲＩＩＡを主に発現するので、潜在的なＡｃｔＲＩＩＢ中和能力について抗体を直接試験することはできない。代わりに、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡの両方に高親和性で結合することができるリガンド（例えば、アクチビンＡ、ＧＤＦ１１、またはミオスタチン）によって、内因性ＡｃｔＲＩＩＡの活性化における可溶性融合タンパク質ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃの阻害効果を試験物が中和する能力を検出するように、このアッセイを設計することができる。

【0436】

従って、このアッセイでは、ＡｃｔＲＩＩＡのリガンド媒介活性化は、抗ＡｃｔＲＩＩＢ Ｆａｂまたは抗体が中和されていれば、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃの存在に関わらず生じる。アッセイの最初の日に、Ａ２０４細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－８２）を、４８ウェルプレート中で、１０^５細胞／ウェルにおいて分配する。２日目に、１０μｇ ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２、１μｇ ｐＲＬＣＭＶ、３０μｌ Ｆｕｇｅｎｅ ６（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、及び９７０μｌ ＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する溶液を、３０分間にわたって予備インキュベートし、次いで、ＭｃＣｏｙの増殖培地に添加し、これを、室温において一晩のインキュベーションにわたってプレートした細胞（５００μｌ／ウェル）に適用する。３日目に、培地を除去し、細胞を、６時間にわたって３７℃において、後述されるように調製されたリガンドと阻害剤の混合物とともに、インキュベートする。

【0437】

試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質の中和能力を評価するため、試験物の段階希釈を、２００μｌ容量のアッセイ緩衝液（ＭｃＣｏｙの培地＋０．１％のＢＳＡ）中で４８ウェルプレートにて作製する。アッセイ緩衝液中に等しい容量のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ（２００μｇ／ｍｌ）を次いで添加する。試験溶液を３７℃で３０分間インキュベートした後、４００μｌのＧＤＦ１１（１０ｎｇ／ｍｌ）またはアクチビンＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）を全てのウェルに添加し、３５０μｌのこの混合物をＡ２０４細胞の４８ウェルプレートの各ウェルに添加する。各濃度の試験ＡｃｔＲＩＩ結合タンパク質を重複して試験する。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃの最終濃度は、５０ｎｇ／ｍｌである（これは、アクチビンＡの最終濃度が５ｎｇ／ｍｌである場合のアクチビンＡシグナル伝達の阻害剤に対するＩＣ_５０である）。試験溶液で６時間インキュベーション後、細胞を０．１％のＢＳＡを含有するリン酸緩衝生理食塩水ですすぎ、次いで、受動溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｅ１９４１）で溶解し、－７０℃で一晩貯蔵する。４日目及び最終日に、プレートを、室温へと穏やかに撹拌しながら加温する。細胞溶解物を、化学発光プレート（９６ウェル）に重複して移し、Ｄｕａｌ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｅ１９８０）の試薬でルミノメーターにおいて解析して、正規化したルシフェラーゼ活性を決定する。試験物と試験物が不在である対照との間のルシフェラーゼ活性の差は、試験物の存在から得られる細胞のシグナル伝達の差を反映する。

【0438】

実施例４．精密エピトープマッピング
抗体によって認識されたＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ ＥＣＤエピトープのマッピングは、特注のペプチドライブラリーを用いたＰｅｐｓｃａｎ Ｐｒｅｓｔｏ ＢＶによって行った。ヒトＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡのＥＣＤの配列は、コンビナトリアル・マトリックスの設計を用いて、直鎖の１５マーと環状の１５マーＣＬＩＰＳが重複するライブラリーに変換した。ＣＬＩＰＳ（足場へのペプチドの化学結合）技術は、定義された三次元構造（一重、二重、三重などのループ）にペプチドを構造的に修正し、複雑な結合部位の機能的模倣体を生成する。ペプチドは、固体支持体上で合成した。抗体の合成ペプチドの各々への結合は、ＥＬＩＳＡによって試験し、結合親和性を定量化した。正しい立体構造における不連続なエピトープの両方の部分を表すペプチド構築物は、特定の抗体と最も高い親和性で結合する。不完全なエピトープを提示しているペプチド構築物は、特定の抗体と低い親和性で結合する一方、正しいエピトープを含まない構築物は、全く結合しなかった。各ペプチドには、親和性に基づいてスコアを与えた。

【0439】

抗体Ｄ０４は、結合エピトープを配列番号１３８のアミノ酸残基９～２０（ＥＣＬＦＦＮＡＮＷＥＫＤ（配列番号１６２））、アミノ酸残基５８～６９（ＣＷＬＤＤＩＮＣＹＤＲＴ（配列番号１６３））及びアミノ酸残基８４～９３（ＣＣＥＧＮＭＣＮＥＫ（配列番号１６１））にマッピングした状態でＡｃＲＩＩＡ上の３つの配列ストレッチにわたって結合することが決定された。

【0440】

抗体Ｄ０４は、結合エピトープを配列番号１３８のアミノ酸９～１７（ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７））、アミノ酸５２～６３（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹＤＲ（配列番号１６０））、及びアミノ酸７９～８８（ＣＣＥＧＮＦＣＮＥＲ（配列番号５９））の結合部位にマッピングした状態でＡｃＲＩＩＢ上の３つの配列ストレッチにわたって結合することも決定された。

【0441】

抗体Ｉ０１は、結合エピトープを配列番号１３９のアミノ酸９～１７（ＮＡＮＷＥＬＥＲＴ（配列番号１５７））及びアミノ酸４９～６３（ＶＫＫＧＣＷＬＤＤ（配列番号１５８））にマッピングした状態でＡｃＲＩＩＢ上の２つの配列ストレッチにわたって結合することが決定された。

【0442】

SEQUENCE LISTING

<110> ACCELERON PHARMA, INC.
ADIMAB, LLC

<120> ACTIVIN TYPE 2 RECEPTOR BINDING PROTEINS AND USES THEREOF

<130> PA23-573

<150> US 62/306,354
<151> 2016-03-10

<160> 177

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 390
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 1
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt acgcatgggg ctggatccgc 120

cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300

tcaggaatag gatacagcta cgcctcatca catggctact actactacat ggacgtatgg 360

ggcaagggta caactgtcac cgtctcctca 390


<210> 2
<211> 130
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 2

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30


Ser Tyr Ala Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
100 105 110


Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125


Ser Ser
130


<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 3

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr
1 5


<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 4

Tyr Tyr Ser Gly Ser
1 5


<210> 5
<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 5

Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15


Tyr Met Asp Val
20


<210> 6
<211> 1380
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 6
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt acgcatgggg ctggatccgc 120

cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300

tcaggaatag gatacagcta cgcctcatca catggctact actactacat ggacgtatgg 360

ggcaagggta caactgtcac cgtctcctca gctagcacaa aaggaccaag cgtgtttcca 420

ctggcaccta gcagcaaatc caccagcggc ggaacagcag ccctcgggtg cctggtgaag 480

gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc tggaactccg gagccctgac atccggcgtg 540

cacaccttcc ccgctgtgct gcaatccagc ggactgtata gcctcagctc cgtcgtgaca 600

gtcccttcca gcagcctggg cacacagact tacatttgca acgtgaacca caaaccttcc 660

aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca 720

ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca 780

aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc 840

cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca 900

aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat agcacataca gggtggtgtc cgtcctgaca 960

gtgctccacc aggactggct caatggcaaa gagtataagt gcaaggtgag caacaaggcc 1020

ctgcctgcac caattgagaa aacaattagc aaggcaaagg ggcagccacg ggaaccccag 1080

gtgtataccc tgcccccaag ccgggatgaa ctgaccaaaa accaggtcag cctgacatgc 1140

ctggtgaaag ggttttaccc aagcgatatt gccgtcgagt gggagagcaa cggacagcca 1200

gaaaacaatt acaaaaccac cccacctgtg ctggactccg atgggagctt tttcctgtac 1260

agcaagctca cagtggacaa gtccagatgg caacagggca acgtgttttc ctgctccgtg 1320

atgcacgagg ccctccacaa ccactataca caaaagtccc tctccctcag cccaggaaag 1380


<210> 7
<211> 460
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 7

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30


Ser Tyr Ala Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
100 105 110


Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125


Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
130 135 140


Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
145 150 155 160


Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
165 170 175


Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
180 185 190


Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
195 200 205


Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
210 215 220


Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
225 230 235 240


Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
245 250 255


Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
260 265 270


Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
275 280 285


Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295 300


Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
305 310 315 320


Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
325 330 335


Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
340 345 350


Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
355 360 365


Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
370 375 380


Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
385 390 395 400


Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405 410 415


Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
420 425 430


Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
435 440 445


Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460


<210> 8
<211> 321
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 8
gaaatagtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttggc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tacttccact tccctctcac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321


<210> 9
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 9

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15


Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe His Phe Pro Leu
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105


<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 10

Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn Leu Ala
1 5 10


<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 11

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5


<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 12

Gln Gln Tyr Phe His Phe Pro Leu Thr
1 5


<210> 13
<211> 642
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 13
gaaatagtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttggc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tacttccact tccctctcac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa acgtacggtg gctgcacctt ccgtctttat ctttccacct 360

tccgatgagc agctgaagag cggaacagca agcgtggtgt gtctgctgaa caacttttat 420

ccccgggagg caaaggtgca gtggaaagtc gacaatgctc tccagtccgg caattcccaa 480

gagagcgtga cagagcaaga ttccaaggac tccacttaca gcctgtccag caccctcaca 540

ctgagcaagg ctgattacga gaaacacaaa gtgtacgctt gtgaagtcac ccaccaaggc 600

ctgagcagcc cagtcactaa gtcctttaac cggggcgaat gt 642


<210> 14
<211> 214
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 14

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15


Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe His Phe Pro Leu
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110


Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125


Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140


Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160


Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175


Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190


Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205


Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210


<210> 15
<211> 390
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 15
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60

acctgtactg tctctggtgg ctccatcggg agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120

cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt ggggggatct atggtagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300

tcaggaatag gatacagcta cgcctcatca catggctact actactacat ggacgtatgg 360

ggcaagggta caactgtcac cgtctcctca 390


<210> 16
<211> 130
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 16

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Gly Ser Gly
20 25 30


Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
100 105 110


Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125


Ser Ser
130


<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 17

Gly Gly Ser Ile Gly Ser Gly Gly Tyr
1 5


<210> 18
<211> 4
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 18

Tyr Gly Ser Gly
1


<210> 19
<211> 1380
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 19
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60

acctgtactg tctctggtgg ctccatcggg agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120

cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt ggggggatct atggtagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300

tcaggaatag gatacagcta cgcctcatca catggctact actactacat ggacgtatgg 360

ggcaagggta caactgtcac cgtctcctca gctagcacaa aaggaccaag cgtgtttcca 420

ctggcaccta gcagcaaatc caccagcggc ggaacagcag ccctcgggtg cctggtgaag 480

gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc tggaactccg gagccctgac atccggcgtg 540

cacaccttcc ccgctgtgct gcaatccagc ggactgtata gcctcagctc cgtcgtgaca 600

gtcccttcca gcagcctggg cacacagact tacatttgca acgtgaacca caaaccttcc 660

aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca 720

ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca 780

aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc 840

cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca 900

aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat agcacataca gggtggtgtc cgtcctgaca 960

gtgctccacc aggactggct caatggcaaa gagtataagt gcaaggtgag caacaaggcc 1020

ctgcctgcac caattgagaa aacaattagc aaggcaaagg ggcagccacg ggaaccccag 1080

gtgtataccc tgcccccaag ccgggatgaa ctgaccaaaa accaggtcag cctgacatgc 1140

ctggtgaaag ggttttaccc aagcgatatt gccgtcgagt gggagagcaa cggacagcca 1200

gaaaacaatt acaaaaccac cccacctgtg ctggactccg atgggagctt tttcctgtac 1260

agcaagctca cagtggacaa gtccagatgg caacagggca acgtgttttc ctgctccgtg 1320

atgcacgagg ccctccacaa ccactataca caaaagtccc tctccctcag cccaggaaag 1380


<210> 20
<211> 460
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 20

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Gly Ser Gly
20 25 30


Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
100 105 110


Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125


Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
130 135 140


Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
145 150 155 160


Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
165 170 175


Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
180 185 190


Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
195 200 205


Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
210 215 220


Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
225 230 235 240


Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
245 250 255


Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
260 265 270


Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
275 280 285


Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295 300


Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
305 310 315 320


Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
325 330 335


Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
340 345 350


Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
355 360 365


Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
370 375 380


Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
385 390 395 400


Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405 410 415


Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
420 425 430


Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
435 440 445


Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460


<210> 21
<211> 390
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 21
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60

acctgtactg tctctggtgg ctccatcaag agtggtgggt actactggag ctggatccgc 120

cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt ggggggatct atccgagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300

tcaggaatag gatacagcta cgcctcatca catggctact actactacat ggacgtatgg 360

ggcaagggta caactgtcac cgtctcctca 390


<210> 22
<211> 130
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 22

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Lys Ser Gly
20 25 30


Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
100 105 110


Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125


Ser Ser
130


<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 23

Gly Gly Ser Ile Lys Ser Gly Gly Tyr
1 5


<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 24

Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10


<210> 25
<211> 1380
<212> DNA
<213> Homo sapian

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<212> PRT
<213> Homo sapian

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Lys Ser Gly
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Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
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Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
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Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
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Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
130 135 140


Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
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Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
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Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
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Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
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Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
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Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
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Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
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Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
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Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
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Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
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Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<212> PRT
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<400> 28

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Leu Ser Gly
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Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
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Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Tyr Ser Gly Lys Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
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Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
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Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
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gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc tggaactccg gagccctgac atccggcgtg 540

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<213> Homo sapian

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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Glu Ser Gly
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Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
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<400> 33
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cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt ggggggatct attacagtgg gcggacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240

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<211> 130
<212> PRT
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<400> 34

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
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Gly Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
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Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
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<210> 35
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<400> 35

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Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr
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<400> 37
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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
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Gly Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
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Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
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Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
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Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
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Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
100 105 110


Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125


Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
130 135 140


Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
145 150 155 160


Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
165 170 175


Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
180 185 190


Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
195 200 205


Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
210 215 220


Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
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Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
260 265 270


Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
275 280 285


Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295 300


Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
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Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
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Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
340 345 350


Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
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Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
370 375 380


Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
385 390 395 400


Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
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Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
420 425 430


Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<210> 39
<211> 390
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 39
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60

acctgtactg tctctggtgg ctccatcgag agcggtggtt actactggag ctggatccgc 120

cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggggtatct atgggagtgg gagcacctac 180

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<210> 40
<211> 130
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 40

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Glu Ser Gly
20 25 30


Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
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Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
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Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
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<400> 41

Gly Gly Ser Ile Glu Ser Gly Gly Tyr
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<210> 42
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<212> DNA
<213> Homo sapian

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acctgtactg tctctggtgg ctccatcgag agcggtggtt actactggag ctggatccgc 120

cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggggtatct atgggagtgg gagcacctac 180

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tcaggaatag gatacagcta cgcctcatca catggctact actactacat ggacgtatgg 360

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aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca 720

ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca 780

aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc 840

cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca 900

aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat agcacataca gggtggtgtc cgtcctgaca 960

gtgctccacc aggactggct caatggcaaa gagtataagt gcaaggtgag caacaaggcc 1020

ctgcctgcac caattgagaa aacaattagc aaggcaaagg ggcagccacg ggaaccccag 1080

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ctggtgaaag ggttttaccc aagcgatatt gccgtcgagt gggagagcaa cggacagcca 1200

gaaaacaatt acaaaaccac cccacctgtg ctggactccg atgggagctt tttcctgtac 1260

agcaagctca cagtggacaa gtccagatgg caacagggca acgtgttttc ctgctccgtg 1320

atgcacgagg ccctccacaa ccactataca caaaagtccc tctccctcag cccaggaaag 1380


<210> 43
<211> 460
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 43

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Glu Ser Gly
20 25 30


Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Asp Ser Gly Ile Gly Tyr Ser Tyr Ala Ser Ser His Gly
100 105 110


Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
115 120 125


Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
130 135 140


Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
145 150 155 160


Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
165 170 175


Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
180 185 190


Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
195 200 205


Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
210 215 220


Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
225 230 235 240


Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
245 250 255


Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
260 265 270


Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
275 280 285


Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295 300


Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
305 310 315 320


Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
325 330 335


Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
340 345 350


Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
355 360 365


Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
370 375 380


Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
385 390 395 400


Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405 410 415


Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
420 425 430


Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
435 440 445


Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460


<210> 44
<211> 363
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 44
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt acgcatgggg ctggatccgc 120

cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagct 300

ggaaaatacc gatggcacgg aatggacgta tggggccagg gaacaactgt caccgtctcc 360

tca 363


<210> 45
<211> 121
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 45

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30


Ser Tyr Ala Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Ala Gly Lys Tyr Arg Trp His Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 46

Ala Gly Lys Tyr Arg Trp His Gly Met Asp Val
1 5 10


<210> 47
<211> 1353
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 47
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt acgcatgggg ctggatccgc 120

cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagct 300

ggaaaatacc gatggcacgg aatggacgta tggggccagg gaacaactgt caccgtctcc 360

tcagctagca caaaaggacc aagcgtgttt ccactggcac ctagcagcaa atccaccagc 420

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aatagcacat acagggtggt gtccgtcctg acagtgctcc accaggactg gctcaatggc 960

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gaactgacca aaaaccaggt cagcctgaca tgcctggtga aagggtttta cccaagcgat 1140

attgccgtcg agtgggagag caacggacag ccagaaaaca attacaaaac caccccacct 1200

gtgctggact ccgatgggag ctttttcctg tacagcaagc tcacagtgga caagtccaga 1260

tggcaacagg gcaacgtgtt ttcctgctcc gtgatgcacg aggccctcca caaccactat 1320

acacaaaagt ccctctccct cagcccagga aag 1353


<210> 48
<211> 451
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 48

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30


Ser Tyr Ala Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Ala Gly Lys Tyr Arg Trp His Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125


Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140


Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160


Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175


Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190


Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205


Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220


Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240


Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255


Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270


Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285


His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300


Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320


Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335


Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350


Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365


Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380


Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400


Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415


Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430


His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445


Pro Gly Lys
450


<210> 49
<211> 321
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 49
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

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gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcacccgacc tccctatcac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321


<210> 50
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 50

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Pro Asp Leu Pro Ile
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105


<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 51

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10


<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 52

Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5


<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 53

Gln Gln Ala Pro Asp Leu Pro Ile Thr
1 5


<210> 54
<211> 642
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 54
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

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aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcacccgacc tccctatcac ttttggcgga 300

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gagagcgtga cagagcaaga ttccaaggac tccacttaca gcctgtccag caccctcaca 540

ctgagcaagg ctgattacga gaaacacaaa gtgtacgctt gtgaagtcac ccaccaaggc 600

ctgagcagcc cagtcactaa gtcctttaac cggggcgaat gt 642


<210> 55
<211> 214
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 55

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Pro Asp Leu Pro Ile
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110


Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125


Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140


Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160


Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175


Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190


Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205


Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210


<210> 56
<211> 360
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 56
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggtgttt actggatgtg gatccggcag 120

cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatcgttc atagtgggca tacctactac 180

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ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc cagagctgga 300

aaataccgat ggcacggaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360


<210> 57
<211> 120
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 57

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30


Val Tyr Trp Met Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45


Ile Gly Ser Ile Val His Ser Gly His Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60


Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80


Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Ala Gly Lys Tyr Arg Trp His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 58
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 58

Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly Val
1 5


<210> 59
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 59

Val His Ser Gly His
1 5


<210> 60
<211> 1350
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 60
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggtgttt actggatgtg gatccggcag 120

cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatcgttc atagtgggca tacctactac 180

aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc cagagctgga 300

aaataccgat ggcacggaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360

gctagcacaa aaggaccaag cgtgtttcca ctggcaccta gcagcaaatc caccagcggc 420

ggaacagcag ccctcgggtg cctggtgaag gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc 480

tggaactccg gagccctgac atccggcgtg cacaccttcc ccgctgtgct gcaatccagc 540

ggactgtata gcctcagctc cgtcgtgaca gtcccttcca gcagcctggg cacacagact 600

tacatttgca acgtgaacca caaaccttcc aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc 660

aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga 720

ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc 780

gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat 900

agcacataca gggtggtgtc cgtcctgaca gtgctccacc aggactggct caatggcaaa 960

gagtataagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgcac caattgagaa aacaattagc 1020

aaggcaaagg ggcagccacg ggaaccccag gtgtataccc tgcccccaag ccgggatgaa 1080

ctgaccaaaa accaggtcag cctgacatgc ctggtgaaag ggttttaccc aagcgatatt 1140

gccgtcgagt gggagagcaa cggacagcca gaaaacaatt acaaaaccac cccacctgtg 1200

ctggactccg atgggagctt tttcctgtac agcaagctca cagtggacaa gtccagatgg 1260

caacagggca acgtgttttc ctgctccgtg atgcacgagg ccctccacaa ccactataca 1320

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<210> 61
<211> 450
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 61

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30


Val Tyr Trp Met Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45


Ile Gly Ser Ile Val His Ser Gly His Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60


Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80


Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Ala Gly Lys Tyr Arg Trp His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125


Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140


Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160


Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175


Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190


Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205


Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220


Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240


Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255


Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270


Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285


Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300


Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320


Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335


Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350


Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365


Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380


Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400


Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415


Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430


Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445


Gly Lys
450


<210> 62
<211> 363
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 62
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagga attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caaggaccct 300

ttgtctctac ttctaggcta ctttgactac tggggacagg gtgcattggt caccgtctcc 360

tca 363


<210> 63
<211> 121
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 63

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30


Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Lys Asp Pro Leu Ser Leu Leu Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 64
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 64

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5


<210> 65
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 65

Ser Gly Ser Gly Gly Ser
1 5


<210> 66
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 66

Asp Pro Leu Ser Leu Leu Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10


<210> 67
<211> 1353
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 67
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagga attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caaggaccct 300

ttgtctctac ttctaggcta ctttgactac tggggacagg gtgcattggt caccgtctcc 360

tcagctagca caaaaggacc aagcgtgttt ccactggcac ctagcagcaa atccaccagc 420

ggcggaacag cagccctcgg gtgcctggtg aaggattact tccctgagcc agtcacagtg 480

tcctggaact ccggagccct gacatccggc gtgcacacct tccccgctgt gctgcaatcc 540

agcggactgt atagcctcag ctccgtcgtg acagtccctt ccagcagcct gggcacacag 600

acttacattt gcaacgtgaa ccacaaacct tccaacacta aggtggacaa aaaggtggaa 660

cccaaatcct gtgataagac ccatacatgc ccaccttgtc ccgctcctga gctgctgggg 720

ggaccttccg tctttctgtt tcctccaaaa ccaaaagaca cactcatgat cagccggacc 780

cccgaagtca cctgtgtggt ggtggacgtc agccacgaag atccagaggt caagttcaat 840

tggtacgtgg atggagtgga agtccacaac gcaaaaacca aacctagaga agaacagtac 900

aatagcacat acagggtggt gtccgtcctg acagtgctcc accaggactg gctcaatggc 960

aaagagtata agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg caccaattga gaaaacaatt 1020

agcaaggcaa aggggcagcc acgggaaccc caggtgtata ccctgccccc aagccgggat 1080

gaactgacca aaaaccaggt cagcctgaca tgcctggtga aagggtttta cccaagcgat 1140

attgccgtcg agtgggagag caacggacag ccagaaaaca attacaaaac caccccacct 1200

gtgctggact ccgatgggag ctttttcctg tacagcaagc tcacagtgga caagtccaga 1260

tggcaacagg gcaacgtgtt ttcctgctcc gtgatgcacg aggccctcca caaccactat 1320

acacaaaagt ccctctccct cagcccagga aag 1353


<210> 68
<211> 451
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 68

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30


Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Lys Asp Pro Leu Ser Leu Leu Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125


Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140


Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160


Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175


Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190


Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205


Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220


Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240


Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255


Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270


Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285


His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300


Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320


Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335


Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350


Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365


Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380


Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400


Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415


Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430


His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445


Pro Gly Lys
450


<210> 69
<211> 321
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 69
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gatgattttg caacttatta ctgccagcag tacaatcgcc actctcctac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321


<210> 70
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 70

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg His Ser Pro
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105


<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 71

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10


<210> 72
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 72

Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5


<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 73

Gln Gln Tyr Asn Arg His Ser Pro Thr
1 5


<210> 74
<211> 642
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 74
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gatgattttg caacttatta ctgccagcag tacaatcgcc actctcctac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa acgtacggtg gctgcacctt ccgtctttat ctttccacct 360

tccgatgagc agctgaagag cggaacagca agcgtggtgt gtctgctgaa caacttttat 420

ccccgggagg caaaggtgca gtggaaagtc gacaatgctc tccagtccgg caattcccaa 480

gagagcgtga cagagcaaga ttccaaggac tccacttaca gcctgtccag caccctcaca 540

ctgagcaagg ctgattacga gaaacacaaa gtgtacgctt gtgaagtcac ccaccaaggc 600

ctgagcagcc cagtcactaa gtcctttaac cggggcgaat gt 642


<210> 75
<211> 214
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 75

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg His Ser Pro
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110


Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125


Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140


Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160


Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175


Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190


Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205


Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210


<210> 76
<211> 363
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 76
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc cgttatgcca tgtcgtgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggaa gtggtggtgc gacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caaggaccct 300

ttgtctctac ttctaggcta ctttgactac tggggacagg gtgcattggt caccgtctcc 360

tca 363


<210> 77
<211> 121
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 77

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30


Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Lys Asp Pro Leu Ser Leu Leu Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 78
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 78

Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
1 5


<210> 79
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 79

Ser Gly Ser Gly Gly Ala
1 5


<210> 80
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 80

Asp Pro Leu Ser Leu Leu Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10


<210> 81
<211> 1353
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 81
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc cgttatgcca tgtcgtgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggaa gtggtggtgc gacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caaggaccct 300

ttgtctctac ttctaggcta ctttgactac tggggacagg gtgcattggt caccgtctcc 360

tcagctagca caaaaggacc aagcgtgttt ccactggcac ctagcagcaa atccaccagc 420

ggcggaacag cagccctcgg gtgcctggtg aaggattact tccctgagcc agtcacagtg 480

tcctggaact ccggagccct gacatccggc gtgcacacct tccccgctgt gctgcaatcc 540

agcggactgt atagcctcag ctccgtcgtg acagtccctt ccagcagcct gggcacacag 600

acttacattt gcaacgtgaa ccacaaacct tccaacacta aggtggacaa aaaggtggaa 660

cccaaatcct gtgataagac ccatacatgc ccaccttgtc ccgctcctga gctgctgggg 720

ggaccttccg tctttctgtt tcctccaaaa ccaaaagaca cactcatgat cagccggacc 780

cccgaagtca cctgtgtggt ggtggacgtc agccacgaag atccagaggt caagttcaat 840

tggtacgtgg atggagtgga agtccacaac gcaaaaacca aacctagaga agaacagtac 900

aatagcacat acagggtggt gtccgtcctg acagtgctcc accaggactg gctcaatggc 960

aaagagtata agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg caccaattga gaaaacaatt 1020

agcaaggcaa aggggcagcc acgggaaccc caggtgtata ccctgccccc aagccgggat 1080

gaactgacca aaaaccaggt cagcctgaca tgcctggtga aagggtttta cccaagcgat 1140

attgccgtcg agtgggagag caacggacag ccagaaaaca attacaaaac caccccacct 1200

gtgctggact ccgatgggag ctttttcctg tacagcaagc tcacagtgga caagtccaga 1260

tggcaacagg gcaacgtgtt ttcctgctcc gtgatgcacg aggccctcca caaccactat 1320

acacaaaagt ccctctccct cagcccagga aag 1353


<210> 82
<211> 451
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 82

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30


Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Lys Asp Pro Leu Ser Leu Leu Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125


Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140


Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160


Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175


Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190


Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205


Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220


Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240


Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255


Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270


Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285


His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300


Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320


Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335


Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350


Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365


Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380


Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400


Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415


Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430


His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445


Pro Gly Lys
450


<210> 83
<211> 360
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 83
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagccctt acaatggtaa cacaaactat 180

gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240

atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

atgtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360


<210> 84
<211> 120
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 84

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Trp Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 85

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
1 5


<210> 86
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 86

Ser Pro Tyr Asn Gly Asn
1 5


<210> 87
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 87

Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val
1 5 10


<210> 88
<211> 1350
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 88
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagccctt acaatggtaa cacaaactat 180

gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240

atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

atgtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360

gctagcacaa aaggaccaag cgtgtttcca ctggcaccta gcagcaaatc caccagcggc 420

ggaacagcag ccctcgggtg cctggtgaag gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc 480

tggaactccg gagccctgac atccggcgtg cacaccttcc ccgctgtgct gcaatccagc 540

ggactgtata gcctcagctc cgtcgtgaca gtcccttcca gcagcctggg cacacagact 600

tacatttgca acgtgaacca caaaccttcc aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc 660

aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga 720

ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc 780

gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat 900

agcacataca gggtggtgtc cgtcctgaca gtgctccacc aggactggct caatggcaaa 960

gagtataagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgcac caattgagaa aacaattagc 1020

aaggcaaagg ggcagccacg ggaaccccag gtgtataccc tgcccccaag ccgggatgaa 1080

ctgaccaaaa accaggtcag cctgacatgc ctggtgaaag ggttttaccc aagcgatatt 1140

gccgtcgagt gggagagcaa cggacagcca gaaaacaatt acaaaaccac cccacctgtg 1200

ctggactccg atgggagctt tttcctgtac agcaagctca cagtggacaa gtccagatgg 1260

caacagggca acgtgttttc ctgctccgtg atgcacgagg ccctccacaa ccactataca 1320

caaaagtccc tctccctcag cccaggaaag 1350


<210> 89
<211> 450
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 89

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Trp Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125


Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140


Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160


Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175


Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190


Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205


Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220


Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240


Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255


Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270


Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285


Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300


Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320


Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335


Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350


Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365


Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380


Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400


Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415


Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430


Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445


Gly Lys
450


<210> 90
<211> 321
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 90
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc aggtggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcattctccc acccttggac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321


<210> 91
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 91

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Phe Ser His Pro Trp
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105


<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 92

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp Leu Ala
1 5 10


<210> 93
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 93

Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5


<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 94

Gln Gln Ala Phe Ser His Pro Trp Thr
1 5


<210> 95
<211> 642
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 95
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc aggtggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcattctccc acccttggac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa acgtacggtg gctgcacctt ccgtctttat ctttccacct 360

tccgatgagc agctgaagag cggaacagca agcgtggtgt gtctgctgaa caacttttat 420

ccccgggagg caaaggtgca gtggaaagtc gacaatgctc tccagtccgg caattcccaa 480

gagagcgtga cagagcaaga ttccaaggac tccacttaca gcctgtccag caccctcaca 540

ctgagcaagg ctgattacga gaaacacaaa gtgtacgctt gtgaagtcac ccaccaaggc 600

ctgagcagcc cagtcactaa gtcctttaac cggggcgaat gt 642


<210> 96
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 96

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Phe Ser His Pro Trp
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105


<210> 97
<211> 360
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 97
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

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cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaaccctg ctagtggttg gacaaactat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240

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<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 98

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly His
20 25 30


Lys Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Trp Ile Asn Pro Ala Ser Gly Trp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 99
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<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 99

Gly Tyr Thr Phe Thr Gly His Lys Met His
1 5 10


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<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 100

Asn Pro Ala Ser Gly Trp
1 5


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<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 101

Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val
1 5 10


<210> 102
<211> 1350
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 102
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggccataaga tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaaccctg ctagtggttg gacaaactat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagtatct 300

atgtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360

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ggaacagcag ccctcgggtg cctggtgaag gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc 480

tggaactccg gagccctgac atccggcgtg cacaccttcc ccgctgtgct gcaatccagc 540

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tacatttgca acgtgaacca caaaccttcc aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc 660

aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga 720

ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc 780

gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat 900

agcacataca gggtggtgtc cgtcctgaca gtgctccacc aggactggct caatggcaaa 960

gagtataagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgcac caattgagaa aacaattagc 1020

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ctgaccaaaa accaggtcag cctgacatgc ctggtgaaag ggttttaccc aagcgatatt 1140

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caaaagtccc tctccctcag cccaggaaag 1350


<210> 103
<211> 450
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 103

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly His
20 25 30


Lys Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Trp Ile Asn Pro Ala Ser Gly Trp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125


Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140


Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160


Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175


Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190


Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205


Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220


Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240


Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255


Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270


Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285


Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300


Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320


Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335


Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350


Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365


Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380


Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400


Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415


Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430


Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445


Gly Lys
450


<210> 104
<211> 360
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 104
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctacaata tggcgtgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaggccta gtgttggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

atgtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360


<210> 105
<211> 120
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 105

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Ile Ile Arg Pro Ser Val Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 106

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
1 5


<210> 107
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 107

Arg Pro Ser Val Gly Ser
1 5


<210> 108
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 108

Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val
1 5 10


<210> 109
<211> 1350
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 109
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctacaata tggcgtgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaggccta gtgttggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

atgtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360

gctagcacaa aaggaccaag cgtgtttcca ctggcaccta gcagcaaatc caccagcggc 420

ggaacagcag ccctcgggtg cctggtgaag gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc 480

tggaactccg gagccctgac atccggcgtg cacaccttcc ccgctgtgct gcaatccagc 540

ggactgtata gcctcagctc cgtcgtgaca gtcccttcca gcagcctggg cacacagact 600

tacatttgca acgtgaacca caaaccttcc aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc 660

aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga 720

ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc 780

gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat 900

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gagtataagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgcac caattgagaa aacaattagc 1020

aaggcaaagg ggcagccacg ggaaccccag gtgtataccc tgcccccaag ccgggatgaa 1080

ctgaccaaaa accaggtcag cctgacatgc ctggtgaaag ggttttaccc aagcgatatt 1140

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caacagggca acgtgttttc ctgctccgtg atgcacgagg ccctccacaa ccactataca 1320

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<210> 110
<211> 450
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 110

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Ile Ile Arg Pro Ser Val Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125


Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140


Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160


Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175


Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190


Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205


Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220


Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240


Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255


Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270


Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285


Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300


Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320


Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335


Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350


Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365


Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380


Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400


Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415


Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430


Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445


Gly Lys
450


<210> 111
<211> 360
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 111
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc tcgtaccgta tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggattt atcgtgccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

atgtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360


<210> 112
<211> 120
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 112

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Arg Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Phe Ile Val Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 113
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 113

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
1 5


<210> 114
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 114

Val Pro Ser Gly Gly Ser
1 5


<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 115

Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val
1 5 10


<210> 116
<211> 1350
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 116
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc tcgtaccgta tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggattt atcgtgccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

atgtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360

gctagcacaa aaggaccaag cgtgtttcca ctggcaccta gcagcaaatc caccagcggc 420

ggaacagcag ccctcgggtg cctggtgaag gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc 480

tggaactccg gagccctgac atccggcgtg cacaccttcc ccgctgtgct gcaatccagc 540

ggactgtata gcctcagctc cgtcgtgaca gtcccttcca gcagcctggg cacacagact 600

tacatttgca acgtgaacca caaaccttcc aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc 660

aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga 720

ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc 780

gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat 900

agcacataca gggtggtgtc cgtcctgaca gtgctccacc aggactggct caatggcaaa 960

gagtataagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgcac caattgagaa aacaattagc 1020

aaggcaaagg ggcagccacg ggaaccccag gtgtataccc tgcccccaag ccgggatgaa 1080

ctgaccaaaa accaggtcag cctgacatgc ctggtgaaag ggttttaccc aagcgatatt 1140

gccgtcgagt gggagagcaa cggacagcca gaaaacaatt acaaaaccac cccacctgtg 1200

ctggactccg atgggagctt tttcctgtac agcaagctca cagtggacaa gtccagatgg 1260

caacagggca acgtgttttc ctgctccgtg atgcacgagg ccctccacaa ccactataca 1320

caaaagtccc tctccctcag cccaggaaag 1350


<210> 117
<211> 450
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 117

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Arg Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Phe Ile Val Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Met Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125


Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140


Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160


Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175


Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190


Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205


Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220


Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240


Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255


Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270


Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285


Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300


Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320


Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335


Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350


Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365


Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380


Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400


Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415


Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430


Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445


Gly Lys
450


<210> 118
<211> 360
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 118
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc tcgtaccgta tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggattt atcgtgccta gtggtggtag cacaggctac 180

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atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

aggtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360


<210> 119
<211> 120
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 119

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Arg Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Phe Ile Val Pro Ser Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Arg Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 120
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 120

Val Pro Ser Gly Gly Ser
1 5


<210> 121
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 121

Val Ser Arg Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val
1 5 10


<210> 122
<211> 1350
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 122
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc tcgtaccgta tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggattt atcgtgccta gtggtggtag cacaggctac 180

gcacagaagt tccagggcag agttaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

aggtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360

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ggaacagcag ccctcgggtg cctggtgaag gattacttcc ctgagccagt cacagtgtcc 480

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tacatttgca acgtgaacca caaaccttcc aacactaagg tggacaaaaa ggtggaaccc 660

aaatcctgtg ataagaccca tacatgccca ccttgtcccg ctcctgagct gctgggggga 720

ccttccgtct ttctgtttcc tccaaaacca aaagacacac tcatgatcag ccggaccccc 780

gaagtcacct gtgtggtggt ggacgtcagc cacgaagatc cagaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggatg gagtggaagt ccacaacgca aaaaccaaac ctagagaaga acagtacaat 900

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<210> 123
<211> 450
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 123

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Arg Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Phe Ile Val Pro Ser Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Arg Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125


Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140


Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160


Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175


Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190


Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205


Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220


Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240


Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255


Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270


Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285


Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300


Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320


Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335


Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350


Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365


Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380


Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400


Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415


Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430


Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445


Gly Lys
450


<210> 124
<211> 366
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 124
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tcctca 366


<210> 125
<211> 122
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 125

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30


Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Gly Leu Gly Met Tyr Tyr His Val Pro Phe Asp Ile Trp
100 105 110


Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 126
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 126

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Ser Tyr
1 5


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<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 127

Tyr Tyr Ser Gly Ser
1 5


<210> 128
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 128

Gly Leu Gly Met Tyr Tyr His Val Pro Phe Asp Ile
1 5 10


<210> 129
<211> 1356
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 129
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60

acctgtactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtagct actactggag ctggatccgc 120

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gtgtcctgga actccggagc cctgacatcc ggcgtgcaca ccttccccgc tgtgctgcaa 540

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cagacttaca tttgcaacgt gaaccacaaa ccttccaaca ctaaggtgga caaaaaggtg 660

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gggggacctt ccgtctttct gtttcctcca aaaccaaaag acacactcat gatcagccgg 780

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aattggtacg tggatggagt ggaagtccac aacgcaaaaa ccaaacctag agaagaacag 900

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ggcaaagagt ataagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgc ctgcaccaat tgagaaaaca 1020

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<210> 130
<211> 452
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 130

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15


Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30


Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45


Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60


Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80


Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95


Cys Ala Arg Gly Leu Gly Met Tyr Tyr His Val Pro Phe Asp Ile Trp
100 105 110


Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125


Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140


Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160


Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175


Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190


Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205


His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220


Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240


Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255


Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270


His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285


Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300


Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320


Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335


Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350


Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365


Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380


Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400


Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415


Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430


Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445


Ser Pro Gly Lys
450


<210> 131
<211> 321
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 131
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

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ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180

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<210> 132
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 132

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15


Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
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Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe His Trp Pro Pro
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<210> 133
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 133

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10


<210> 134
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 134

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5


<210> 135
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 135

Gln Gln Tyr Phe His Trp Pro Pro Thr
1 5


<210> 136
<211> 642
<212> DNA
<213> Homo sapian

<400> 136
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

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aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tacttccact ggcctcctac ttttggcgga 300

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ccccgggagg caaaggtgca gtggaaagtc gacaatgctc tccagtccgg caattcccaa 480

gagagcgtga cagagcaaga ttccaaggac tccacttaca gcctgtccag caccctcaca 540

ctgagcaagg ctgattacga gaaacacaaa gtgtacgctt gtgaagtcac ccaccaaggc 600

ctgagcagcc cagtcactaa gtcctttaac cggggcgaat gt 642


<210> 137
<211> 214
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 137

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15


Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe His Trp Pro Pro
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110


Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125


Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140


Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160


Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175


Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190


Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205


Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210


<210> 138
<211> 118
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 138

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15


Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30


Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
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Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60


Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80


Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95


Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110


Lys Pro Pro Tyr Tyr Asn
115


<210> 139
<211> 106
<212> PRT
<213> Homo sapian

<400> 139

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg
1 5 10 15


Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg
20 25 30


Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu
35 40 45


Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln
50 55 60


Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys
65 70 75 80


Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly
85 90 95


Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro
100 105


<210> 140
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> human antigen binding domain of DO3 antibody

<400> 140

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Arg Met His
1 5


<210> 141
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> human antigen binding domain of DO3 antibody

<400> 141

Phe Ile Val Pro Ser Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15


Gly



<210> 142
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> human antigen binding domain of DO3 antibody

<400> 142

Ala Arg Val Ser Arg Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val
1 5 10


<210> 143
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VH sequence

<400> 143
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttggg agctatggca tgacttgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggaa gtggtggtgg gacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagggtcct 300

agaatagtgg gcatggatgt gtggggccag ggaacaactg tcaccgtctc ctca 354


<210> 144
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VH sequence

<400> 144

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr
20 25 30


Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Lys Gly Pro Arg Ile Val Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110


Thr Val Thr Val Ser
115


<210> 145
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR1 amino acid residues 31-35 of SEQ ID NO 144

<400> 145

Ser Tyr Gly Met Thr
1 5


<210> 146
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR2 amino acid residues 50-65 of SEQ ID NO 144

<400> 146

Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15


Gly



<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR3 amino acid residues 95-102 of SEQ ID NO 144

<400> 147

Gly Pro Arg Ile Val Gly Met Asp Val
1 5


<210> 148
<211> 1338
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> H sequence

<400> 148
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttggg agctatggca tgacttgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggaa gtggtggtgg gacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagggtcct 300

agaatagtgg gcatggatgt gtggggccag ggaacaactg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccaccctg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338


<210> 149
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> H sequence

<400> 149

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr
20 25 30


Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Lys Gly Pro Arg Ile Val Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110


Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125


Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140


Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160


Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175


Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190


Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205


Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220


Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240


Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255


Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270


Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285


Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300


Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320


Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335


Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350


Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365


Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380


Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400


Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415


Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430


His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445


<210> 150
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VL sequence

<400> 150
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gtattcagtt accctctcac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321


<210> 151
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VL sequence

<400> 151

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Phe Ser Tyr Pro Leu
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105


<210> 152
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR1 amino acid residues 24-34 of SEQ ID NO 151

<400> 152

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10


<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR2 amino acid residues 50-56 of SEQ ID NO 151

<400> 153

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5


<210> 154
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR3 amino acid residues 89-97 of SEQ ID NO 151

<400> 154

Gln Gln Val Phe Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5


<210> 155
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> L sequence

<400> 155
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gtattcagtt accctctcac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645


<210> 156
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> L sequence

<400> 156

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Phe Ser Tyr Pro Leu
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110


Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125


Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140


Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160


Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175


Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190


Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205


Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210


<210> 157
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Peptide sequence of human ActRIIB

<400> 157

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr
1 5


<210> 158
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Peptide sequence of human ActRIIB

<400> 158

Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp
1 5


<210> 159
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Peptide sequence of human ActRIIB

<400> 159

Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
1 5 10


<210> 160
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Peptide sequence of human ActRIIB

<400> 160

Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg
1 5 10


<210> 161
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Peptide sequence of human ActRIIA

<400> 161

Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys
1 5 10


<210> 162
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Peptide sequence of human ActRIIA

<400> 162

Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp
1 5 10


<210> 163
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Peptide sequence of human ActRIIA

<400> 163

Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr
1 5 10


<210> 164
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VH sequence

<400> 164
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc tcgtaccgta tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggattt atcgtgccta gtggtggtag cacaggctac 180

gcacagaagt tccagggcag agttaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

aggtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360


<210> 165
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VH sequence

<400> 165

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Arg Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Phe Ile Val Pro Ser Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Arg Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 166
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR1 amino acid residues 31-35 of SEQ ID NO 165

<400> 166

Ser Tyr Arg Met His
1 5


<210> 167
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR2 amino acid residues 50-66 of SEQ ID NO 165

<400> 167

Phe Ile Val Pro Ser Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15


Gly



<210> 168
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR3 amino acid residues 99-109 of SEQ ID NO 165

<400> 168

Val Ser Arg Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val
1 5 10


<210> 169
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> H sequence

<400> 169
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc tcgtaccgta tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggattt atcgtgccta gtggtggtag cacaggctac 180

gcacagaagt tccagggcag agttaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagagtatct 300

aggtacgccc cagagccaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360

gcttccacca agggcccatc cgtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420

agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 600

tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 660

aaatatggtc ccccatgccc accctgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 720

ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780

tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 840

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 900

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960

tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020

gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 1080

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200

gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 1260

aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 1320

ctctccctgt ctctgggtaa atga 1344


<210> 170
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> H sequence

<400> 170

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30


Arg Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Phe Ile Val Pro Ser Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Val Ser Arg Tyr Ala Pro Glu Pro Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110


Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125


Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140


Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160


Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175


Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190


Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205


Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220


Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240


Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255


Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270


Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285


Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300


Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320


Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335


Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350


Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365


Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380


Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400


Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415


Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430


His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445


<210> 171
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VL sequence

<400> 171
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc aggtggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcattctccc acccttggac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321


<210> 172
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VL sequence

<400> 172

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Phe Ser His Pro Trp
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105


<210> 173
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR1 amino acid residues 24-34 of SEQ ID NO 172

<400> 173

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp Leu Ala
1 5 10


<210> 174
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR2 amino acid residues 50-56 of SEQ ID NO 172

<400> 174

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5


<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CDR3 amino acid residues 89-97 of SEQ ID NO 172

<400> 175

Gln Gln Ala Phe Ser His Pro Trp Thr
1 5


<210> 176
<211> 727
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> L sequence

<400> 176
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc aggtggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcattctccc acccttggac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa acgtaagggg ctcacagtta attaattgag gtctggacat 360

atacatgggt gacaatgaca tccactttgc ctttctctcc acaggaactg tggctgcacc 420

atctgtcttc atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt 480

gtgcctgctg aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc 540

cctccaatcg ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta 600

cagcctcagc agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc 660

ctgcgaagtc acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga 720

gtgttag 727


<210> 177
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> L sequence

<400> 177

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30


Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Phe Ser His Pro Trp
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110


Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125


Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140


Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160


Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175


Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190


Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205


Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

【図1-1】

【図1-2】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図5-3】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

2024026159000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2023-12-22

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

ＣＤＲセット：ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲは、
（ａ）（ｉ）配列番号１６５のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１７２のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、アクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡｃｔＲＩＩＢ）と結合し；
（ｂ）（ｉ）配列番号２、１６、２２、２８、３４、または４０のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号９のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｃ）（ｉ）配列番号６３または７７のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｄ）（ｉ）配列番号４５または５７のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号５０のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｅ）（ｉ）配列番号１４４のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１５１のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢと結合し；
（ｆ）（ｉ）配列番号８４、９８、１０５、１１２、または１１９のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号９１のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＢ及びアクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡｃｔＲＩＩＡ）と結合し；及び
（ｇ）（ｉ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び
（ｉｉ）配列番号１３２のＶＬ配列、及び
前記タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合する、
からなる群から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）対に存在する、単離されたアクチビン受容体ＩＩ型（ＡｃｔＲＩＩ）結合タンパク質。