特開 2024-26876 線維芽細胞結合物質およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024026876

(43)【公開日】2024-02-28

(54)【発明の名称】線維芽細胞結合物質およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240220BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240220BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240220BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240220BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20240220BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240220BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240220BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240220BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 5/40 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 27/16 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/704 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 33/243 20190101ALI20240220BHJP

   A61K 47/55 20170101ALI20240220BHJP

   A61K 38/21 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240220BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/62 Z

C07K16/28

C07K19/00

C07K16/18

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P35/00

A61P31/00

A61P37/02

A61P43/00 105

A61P35/02

A61K45/00

A61P25/28

A61P25/00

A61P3/10

A61P13/12

A61P1/04

A61P17/00

A61P25/08

A61P1/16

A61P5/40

A61P5/14

A61P21/00

A61P27/16

A61P37/06

A61P7/06

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P21/04

A61P7/00

A61K31/704

A61K33/243

A61K47/55

A61K38/21

A61K39/395 N

A61K39/395 U

【審査請求】有

【請求項の数】103

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2024006557

(22)【出願日】2024-01-19

(62)【分割の表示】P 2020564042の分割

【原出願日】2019-02-05

(31)【優先権主張番号】62/626,453

(32)【優先日】2018-02-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】520292534

【氏名又は名称】オリオニス バイオサイエンシーズ，インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】518275408

【氏名又は名称】ブイアイビー ブイゼットダブリュー

(71)【出願人】

【識別番号】516003702

【氏名又は名称】ユニバーシテイト ヘント

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】クレイ，ニコライ

(72)【発明者】

【氏名】タヴェルニエ，ジャン

(72)【発明者】

【氏名】カウウェルス，アンジェ

(57)【要約】

【課題】線維芽細胞に関連する疾患を治療するための組成物および方法の提供。
【解決手段】Ｆ２線維芽細胞を標的とするターゲティング部分を含む線維芽細胞結合物質であって、Ｆ２線維芽細胞を含む疾患微小環境を直接的または間接的に変化させる、線維芽細胞結合物質、ならびに治療薬または診断薬としてのそれらの使用。
【選択図】図１４Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｆ２線維芽細胞を標的とするターゲティング部分を含む線維芽細胞結合物質であって、前記Ｆ２線維芽細胞を含む疾患微小環境を直接的または間接的に変化させる、線維芽細胞結合物質。

【請求項2】

前記Ｆ２線維芽細胞を直接的または間接的に極性化する、請求項１に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項3】

ＦＡＰマーカーを標的とする、請求項１または２に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項4】

線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的としかつ３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つのターゲティング部分を含み、
（ａ）ＣＤＲ１が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号９５のアミノ酸配列または配列番号８７～９４もしくは配列番号９６～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号８７～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲ２が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１１６～１２０もしくは配列番号１２２～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１１６～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１４５～１５１もしくは配列番号１５３～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１４５～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、
請求項３に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項5】

前記ターゲティング部分が、完全長抗体、単一ドメイン抗体、組換え重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である、請求項１～４のいずれか１項に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項6】

前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体である、請求項４に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項7】

前記ターゲティング部分が、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、またはラクダ化ＶＨＨを含む、請求項６に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項8】

前記ターゲティング部分が、配列番号５８、または配列番号２～４２、４６～５７、もしくは５９～８６のいずれか１つとの少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項9】

１種または複数のシグナル伝達物質をさらに含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項10】

前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、およびそれらの改変型の１種または複数から選択される、請求項９に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項11】

前記シグナル伝達物質が、配列番号１７６または１７７との少なくとも９５％の同一性を有しかつ配列番号１７６もしくは１７７を基準にして位置１４４～１５４でまたは配列番号１７６もしくは１７７を基準にして位置Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｌ２６、Ｆ２７、Ｌ３０、Ｌ３０、Ｋ３１、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｄ３５、Ｑ４０、Ｈ５７、Ｅ５８、Ｑ６１、Ｆ６４、Ｎ６５、Ｔ６９、Ｌ８０、Ｙ８５、Ｙ８９、Ｄ１１４、Ｌ１１７、Ｒ１２０、Ｒ１２５、Ｋ１３３、Ｋ１３４、Ｒ１４４、Ａ１４５、Ａ１４５、Ｍ１４８、Ｒ１４９、Ｓ１５２、Ｌ１５３、およびＮ１５６の１つもしくは複数で変異を有するアミノ酸配列を含む変異体インターフェロンアルファ２（IFN-α２）である、請求項１０に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項12】

前記変異体IFN-α２が、位置Ｒ１４９、Ｍ１４８、またはＬ１５３で１つまたは複数の変異を有する、請求項１１に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項13】

前記変異が、配列番号１７６または１７７を基準にしてＬ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａの１つまたは複数、場合によりＭ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、またはＬ１５３Ａである、請求項１２に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項14】

１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項15】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、腫瘍抗原を認識するまたは機能的に調節する、請求項１４に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項16】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、免疫細胞上の抗原を認識するまたは機能的に調節する、請求項１４に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項17】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、請求項１６に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項18】

細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に動員する、請求項１～１７のいずれかに記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項19】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＣＤ２０、ＸＣＲ１、およびＣｌｅｃ９Ａを認識するまたは機能的に調節する、請求項１４に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項20】

実質的にＦＡＰの活性を機能的に調節することなくＦＡＰを認識するまたは結合する、請求項１～１９のいずれかに記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項21】

線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的としかつ３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つのターゲティング部分を含む線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）結合物質であって、
（ａ）ＣＤＲ１が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号９５のアミノ酸配列または配列番号８７～９４もしくは配列番号９６～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号８７～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲ２が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１１６～１２０もしくは配列番号１２２～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１１６～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１４５～１５１もしくは配列番号１５３～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１４５～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、
線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）結合物質。

【請求項22】

前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体、組換え重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である、請求項２１に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項23】

前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体である、請求項２１に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項24】

前記ターゲティング部分が、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、またはラクダ化ＶＨＨを含む、請求項２３に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項25】

前記ターゲティング部分が、配列番号５８または配列番号２～４２、４６～５７、もしくは５９～８６のいずれか１つとの少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２１～２４のいずれか１項に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項26】

１種または複数のシグナル伝達物質を含む、請求項２１～２５のいずれか１項に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項27】

前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、およびそれらの改変型の１種または複数から選択される、請求項２６に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項28】

前記シグナル伝達物質が、配列番号１７６または１７７との少なくとも９５％の同一性を有しかつ配列番号１７６もしくは１７７を基準にして位置１４４～１５４でまたは配列番号１７６もしくは１７７を基準にして位置Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｌ２６、Ｆ２７、Ｌ３０、Ｌ３０、Ｋ３１、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｄ３５、Ｑ４０、Ｈ５７、Ｅ５８、Ｑ６１、Ｆ６４、Ｎ６５、Ｔ６９、Ｌ８０、Ｙ８５、Ｙ８９、Ｄ１１４、Ｌ１１７、Ｒ１２０、Ｒ１２５、Ｋ１３３、Ｋ１３４、Ｒ１４４、Ａ１４５、Ａ１４５、Ｍ１４８、Ｒ１４９、Ｓ１５２、Ｌ１５３、およびＮ１５６の１つもしくは複数で変異を有するアミノ酸配列を含む変異体インターフェロンアルファ２（IFN-α２）である、請求項２７に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項29】

前記変異体IFN-α２が、位置Ｒ１４９、Ｍ１４８、またはＬ１５３で１つまたは複数の変異を有する、請求項２８に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項30】

前記変異が、配列番号１７６または１７７を基準にしてＬ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａ、場合によりＭ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、またはＬ１５３Ａである、請求項２９に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項31】

１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含む、請求項２１～３０のいずれか１項に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項32】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、腫瘍抗原を認識するまたは機能的に調節する、請求項３１に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項33】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、免疫細胞上の抗原を認識するまたは機能的に調節する、請求項３２に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項34】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、請求項３３に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項35】

細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に動員する、請求項２１～３４のいずれか１項に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項36】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＣＤ２０、ＸＣＲ１、およびＣｌｅｃ９Ａを認識するまたは機能的に調節する、請求項３１に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項37】

実質的にＦＡＰの活性を機能的に調節することなくＦＡＰを認識するまたは結合する、請求項２１～３６のいずれかに記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項38】

少なくとも１つのターゲティング部分および１種のシグナル伝達物質、
を含むキメラタンパク質であって、
前記ターゲティング部分が、疾患関連の線維芽細胞を標的とし、かつ
前記キメラタンパク質が、前記疾患関連の線維芽細胞の機能および／または前記疾患関連の線維芽細胞を含む疾患微小環境を直接的または間接的に変化させる、
キメラタンパク質。

【請求項39】

前記疾患関連の線維芽細胞を直接的または間接的に極性化する、請求項３８に記載のキメラタンパク質。

【請求項40】

前記疾患関連の線維芽細胞が、癌、感染症、免疫異常、自己免疫疾患、線維性疾患、および心臓血管疾患から選択される疾患に関連する、請求項３８または３９に記載のキメラタンパク質。

【請求項41】

前記ターゲティング部分が、Ｆ２線維芽細胞を標的とする、請求項３８～４０のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。

【請求項42】

前記ターゲティング部分が、ＦＡＰ結合物質である、請求項３８～４１いずれか１項に記載のキメラタンパク質。

【請求項43】

前記ＦＡＰ結合物質が、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含み、
（ａ）ＣＤＲ１が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号９５のアミノ酸配列または配列番号８７～９４もしくは配列番号９６～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号８７～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲ２が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１１６～１２０もしくは配列番号１２２～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１１６～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１４５～１５１もしくは配列番号１５３～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１４５～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、
請求項４２に記載のキメラタンパク質。

【請求項44】

前記ターゲティング部分が、完全長抗体、単一ドメイン抗体、組換え重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である、請求項３８～４３のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。

【請求項45】

前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体である、請求項４４に記載のキメラタンパク質。

【請求項46】

前記ターゲティング部分が、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、またはラクダ化ＶＨＨを含む、請求項４５に記載のキメラタンパク質。

【請求項47】

前記ターゲティング部分が、配列番号５８または配列番号２～４２、４６～５７、もしくは５９～８６のいずれか１つとの少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３８～４６のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。

【請求項48】

前記ＦＡＰ結合物質が、１種または複数のシグナル伝達物質を含む、請求項３８～４７のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。

【請求項49】

前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、およびそれらの改変型の１種または複数から選択される、請求項４８に記載のキメラタンパク質。

【請求項50】

前記シグナル伝達物質が、配列番号１７６または１７７との少なくとも９５％の同一性を有しかつ配列番号１７６もしくは１７７を基準にして位置１４４～１５４でまたは配列番号１７６もしくは１７７を基準にして位置Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｌ２６、Ｆ２７、Ｌ３０、Ｌ３０、Ｋ３１、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｄ３５、Ｑ４０、Ｈ５７、Ｅ５８、Ｑ６１、Ｆ６４、Ｎ６５、Ｔ６９、Ｌ８０、Ｙ８５、Ｙ８９、Ｄ１１４、Ｌ１１７、Ｒ１２０、Ｒ１２５、Ｋ１３３、Ｋ１３４、Ｒ１４４、Ａ１４５、Ａ１４５、Ｍ１４８、Ｒ１４９、Ｓ１５２、Ｌ１５３、およびＮ１５６の１つもしくは複数で変異を有するアミノ酸配列を含む変異体インターフェロンアルファ２（IFN-α２）である、請求項４８に記載のキメラタンパク質。

【請求項51】

前記変異体IFN-α２が、位置Ｒ１４９、Ｍ１４８、またはＬ１５３で１つまたは複数の変異を有する、請求項５０に記載のキメラタンパク質。

【請求項52】

前記変異が、配列番号１７６または１７７を基準にしてＬ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａ、場合によりＭ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、またはＬ１５３Ａである、請求項５１に記載のキメラタンパク質。

【請求項53】

前記ＦＡＰ結合物質が、１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含む、請求項３８～５２のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。

【請求項54】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、腫瘍抗原を認識するまたは機能的に調節する、請求項５３に記載のキメラタンパク質。

【請求項55】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、免疫細胞上の抗原を認識するまたは機能的に調節する、請求項５３に記載のキメラタンパク質。

【請求項56】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、請求項５５に記載のキメラタンパク質。

【請求項57】

細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に動員する、請求項３８～５６のいずれかに記載のキメラタンパク質。

【請求項58】

前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＣＤ２０、ＸＣＲ１、およびＣｌｅｃ９Ａを認識するまたは機能的に調節する、請求項５３に記載のキメラタンパク質。

【請求項59】

実質的にＦＡＰの活性を機能的に調節することなくＦＡＰを認識するまたは結合する、請求項３８～５８のいずれかに記載のキメラタンパク質。

【請求項60】

（ａ）線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的としかつ配列番号５８または配列番号２～４２、４６～５７、もしくは５９～８６のいずれか１つと少なくとも９０％配列類似性を有するアミノ酸配列、あるいは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つのターゲティング部分であって、
（ｉ）ＣＤＲ１が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号９５のアミノ酸配列または配列番号８７～９４もしくは配列番号９６～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号８７～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＣＤＲ２が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１１６～１２０もしくは配列番号１２２～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列、または配列番号１１６～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み；および
（ｉｉｉ）ＣＤＲ３が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１４５～１５１もしくは配列番号１５３～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１４５～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、
少なくとも１つのターゲティング部分と；
（ｂ）配列番号１７６または１７７のアミノ酸配列を有する野生型IFN-α２に比較して改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有するヒトIFN-α２である、改変シグナル伝達物質、
を含み、
前記ターゲティング部分と前記改変シグナル伝達物質が、場合により１つまたは複数のリンカーで連結される、
キメラタンパク質。

【請求項61】

前記改変ヒトIFN-α２が、配列番号１７６または１７７中の位置Ｒ３３、Ｒ１２０、Ｒ１４４、Ａ１４５、Ｍ１４８、Ｒ１４９、およびＬ１５３で１つまたは複数の変異を含む、請求項６０に記載のキメラタンパク質。

【請求項62】

前記改変ヒトIFN-α２が、配列番号１７６または１７７においてＲ３３Ａ、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４４Ｘ_１ Ａ１４５Ｘ_２、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異を含み、Ｘ_１が、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、かつＸ_２が、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択される、請求項６０に記載のキメラタンパク質。

【請求項63】

前記改変ヒトIFN-α２が、Ｒ１４９Ａ変異を含む、請求項６０に記載のキメラタンパク質。

【請求項64】

（ａ）線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的としかつ配列番号５８または配列番号２～４２、４６～５７、もしくは５９～８６のいずれか１つと少なくとも９０％配列類似性を有するアミノ酸配列、あるいは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つのターゲティング部分であって、
（ｉ）ＣＤＲ１が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号９５のアミノ酸配列または配列番号８７～９４もしくは配列番号９６～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号８７～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＣＤＲ２が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１１６～１２０もしくは配列番号１２２～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１１６～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み；および
（ｉｉｉ）ＣＤＲ３が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１４５～１５１もしくは配列番号１５３～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１４５～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、
少なくとも１つのターゲティング部分と；
（ｂ）配列番号１７８のアミノ酸配列を有する野生型IFN-－βに比較して改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する改変ヒトIFN-βである、改変シグナル伝達物質、
を含み、
前記ターゲティング部分と前記改変シグナル伝達物質が、場合により１つまたは複数のリンカーで連結される、
キメラタンパク質。

【請求項65】

前記改変ヒトIFN-－βが、配列番号１７８の位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５で１つまたは複数の変異を含む、請求項６４に記載のキメラタンパク質。

【請求項66】

前記改変ヒトIFN-－βが、配列番号１７８のＷ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇから選択される１つまたは複数の変異を含む、請求項６５に記載のキメラタンパク質。

【請求項67】

請求項１～２０のいずれか１項に記載の線維芽細胞結合物質をコードする組換え核酸。

【請求項68】

請求項２１～３７のいずれか１項に記載のＦＡＰ結合物質をコードする組換え核酸。

【請求項69】

請求項３８～６６のいずれか１項に記載のキメラタンパク質をコードする組換え核酸。

【請求項70】

請求項６７、６８、または６９に記載の核酸を含む宿主細胞。

【請求項71】

前記線維芽細胞結合物質が、癌、感染症、免疫異常、線維性疾患、および自己免疫疾患の１つまたは複数を有する患者における使用に適する、請求項１～２０のいずれか１項に記載の線維芽細胞結合物質。

【請求項72】

前記ＦＡＰ結合物質が、癌、感染症、免疫異常、線維性疾患、および自己免疫疾患の１つまたは複数を有する患者における使用に適する、請求項２１～３７のいずれか１項に記載のＦＡＰ結合物質。

【請求項73】

前記キメラタンパク質が、癌、感染症、免疫異常、線維性疾患、および自己免疫疾患の１つまたは複数を有する患者における使用に適する、請求項３８～６６のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。

【請求項74】

癌を治療または予防するための方法であって、
（ａ）線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的としかつ配列番号５８または配列番号２～４２、４６～５７、もしくは５９～８６のいずれか１つと少なくとも９０％配列類似性を有するアミノ酸配列、あるいは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つのターゲティング部分であって、
（ｉ）ＣＤＲ１が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号９５のアミノ酸配列または配列番号８７～９４もしくは配列番号９６～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号８７～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＣＤＲ２が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１１６～１２０もしくは配列番号１２２～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１１６～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み；および
（ｉｉｉ）ＣＤＲ３が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１４５～１５１もしくは配列番号１５３～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１４５～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、
少なくとも１つのターゲティング部分と；
（ｂ）またはヒトIFN-α２またはヒトIFN-βである、シグナル伝達物質であって、かつ前記ターゲティング部分と前記改変シグナル伝達物質が、場合により１つまたは複数のリンカーで連結される、シグナル伝達物質、
を含むキメラタンパク質の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、方法。

【請求項75】

前記シグナル伝達物質が、改変される、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

前記改変シグナル伝達物質が、配列番号１７６もしくは１７７のアミノ酸配列を有する野生型IFN-α２に比較して改善された安全性を付与する１つもしくは複数の変異を有する改変ヒトIFN-α２であるか、または前記改変シグナル伝達物質が、配列番号１７８のアミノ酸配列を有する野生型IFN-－βに比較して改善された安全性を付与する１つもしくは複数の変異を有する改変ヒトIFN-－βである、請求項７４に記載の方法。

【請求項77】

前記改変ヒトIFN-βが、場合により配列番号１７８のＷ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇから選択される、配列番号１７８の位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５で１個または複数の変異を含む、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

前記改変ヒトIFN-α２が、配列番号１７６または１７７の位置Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｌ２６、Ｆ２７、Ｌ３０、Ｌ３０、Ｋ３１、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｄ３５、Ｑ４０、Ｈ５７、Ｅ５８、Ｑ６１、Ｆ６４、Ｎ６５、Ｔ６９、Ｌ８０、Ｙ８５、Ｙ８９、Ｄ１１４、Ｌ１１７、Ｒ１２０、Ｒ１２５、Ｋ１３３、Ｋ１３４、Ｒ１４４、Ａ１４５、Ａ１４５、Ｍ１４８、Ｒ１４９、Ｓ１５２、Ｌ１５３、およびＮ１５６で１つまたは複数の変異を含む、請求項７６に記載の方法。

【請求項79】

前記改変ヒトIFN-α２が、配列番号１７６または１７７中のＲ３３Ａ、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４４Ｘ_１ Ａ１４５Ｘ_２、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異を含み、Ｘ_１が、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、かつＸ_２が、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択される、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記改変ヒトIFN-α２が、Ｒ１４９Ａ変異を含む、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記癌が、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖の１種または複数から選択される、請求項７４～８０のいずれかに記載の方法。

【請求項82】

ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノルビシン、およびエピルビシンなどの、ＤＮＡ挿入剤、化学療法剤を投与することをさらに含む、請求項７４～８１のいずれかに記載の方法。

【請求項83】

前記キメラタンパク質が、免疫細胞を腫瘍または腫瘍微小環境に直接的または間接的に動員する、請求項７４～８２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項84】

自己免疫および／または神経変性疾患を治療または予防するための方法であって、
（ａ）線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的としかつ配列番号５８または配列番号２～４２、４６～５７、もしくは５９～８６のいずれか１つと少なくとも９０％配列類似性を有するアミノ酸配列、あるいは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む、少なくとも１つのターゲティング部分であって、
（ｉ）ＣＤＲ１が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号９５のアミノ酸配列または配列番号８７～９４もしくは配列番号９６～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号８７～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＣＤＲ２が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１１６～１２０もしくは配列番号１２２～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１１６～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み；および
（ｉｉｉ）ＣＤＲ３が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１４５～１５１もしくは配列番号１５３～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１４５～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、
少なくとも１つのターゲティング部分と；
（ｂ）またはヒトIFN-α２またはヒトIFN-βである、シグナル伝達物質であって、かつ前記ターゲティング部分と前記改変シグナル伝達物質が、場合により１つまたは複数のリンカーで連結される、シグナル伝達物質、
を含むキメラタンパク質の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、方法。

【請求項85】

前記シグナル伝達物質が、改変される、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記改変シグナル伝達物質が、配列番号１７６もしくは１７７のアミノ酸配列を有する野生型IFN-α２に比較して改善された安全性を付与する１つもしくは複数の変異を有する改変ヒトIFN-α２であるかまたは前記改変シグナル伝達物質が、配列番号１７８のアミノ酸配列を有する野生型IFN-－βに比較して改善された安全性を付与する１つもしくは複数の変異を有する改変ヒトIFN-－βである、請求項８５に記載の方法。

【請求項87】

前記改変ヒトIFN-－βが、配列番号１７８の位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５で１つまたは複数の変異を含む、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記改変ヒトIFN-βが、配列番号１７８のＷ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇから選択される１つまたは複数の変異を含む、請求項８７に記載の方法。

【請求項89】

前記改変ヒトIFN-α２が、配列番号１７６または１７７中の位置Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｌ２６、Ｆ２７、Ｌ３０、Ｌ３０、Ｋ３１、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｄ３５、Ｑ４０、Ｈ５７、Ｅ５８、Ｑ６１、Ｆ６４、Ｎ６５、Ｔ６９、Ｌ８０、Ｙ８５、Ｙ８９、Ｄ１１４、Ｌ１１７、Ｒ１２０、Ｒ１２５、Ｋ１３３、Ｋ１３４、Ｒ１４４、Ａ１４５、Ａ１４５、Ｍ１４８、Ｒ１４９、Ｓ１５２、Ｌ１５３、およびＮ１５６で１つまたは複数の変異を含む、請求項８６に記載の方法。

【請求項90】

前記改変ヒトIFN-α２が、配列番号１７６または１７７中のＲ３３Ａ、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４４Ｘ_１ Ａ１４５Ｘ_２、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異を含み、Ｘ_１が、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、かつＸ_２が、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択される、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

前記改変ヒトIFN-α２が、Ｒ１４９Ａ変異を含む、請求項９０に記載の方法。

【請求項92】

前記自己免疫疾患および／または神経変性疾患が、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、同種移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、およびグレーブス病から選択される、請求項８４に記載の方法。

【請求項93】

前記自己免疫疾患および／または神経変性疾患が、多発性硬化症である、請求項９２に記載の方法。

【請求項94】

前記キメラタンパク質が、前記患者において免疫抑制をもたらす、請求項８４～９３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項95】

線維性疾患を治療または予防するための方法であって、
（ａ）線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的としかつ配列番号５８または配列番号２～４２、４６～５７、もしくは５９～１７５のいずれか１つと少なくとも９０％配列類似性を有するアミノ酸配列、あるいは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つのターゲティング部分であって、
（ｉ）ＣＤＲ１が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号９５のアミノ酸配列または配列番号８７～９４もしくは配列番号９６～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号８７～１１５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）ＣＤＲ２が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１１６～１２０もしくは配列番号１２２～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１１６～１４４のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含み；および
（ｉｉｉ）ＣＤＲ３が、１～５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入を伴い配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１４５～１５１もしくは配列番号１５３～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列または配列番号１４５～１７５のいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、
少なくとも１つのターゲティング部分と；
（ｂ）またはヒトIFN-α２またはヒトIFN-βである、シグナル伝達物質であって、かつ前記ターゲティング部分と前記改変シグナル伝達物質が、場合により１つまたは複数のリンカーで連結される、シグナル伝達物質、
を含む、
キメラタンパク質の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、方法。

【請求項96】

前記シグナル伝達物質が、改変される、請求項９５に記載の方法。

【請求項97】

前記改変シグナル伝達物質が、配列番号１７６もしくは１７７のアミノ酸配列を有する野生型IFN-α２に比較して改善された安全性を付与する１つもしくは複数の変異を有する改変ヒトIFN-α２であるかまたは前記改変シグナル伝達物質が、配列番号１７８のアミノ酸配列を有する野生型IFN-－βに比較して改善された安全性を付与する１つもしくは複数の変異を有する改変ヒトIFN-－βである、請求項９６に記載の方法。

【請求項98】

前記改変ヒトIFN-－βが、配列番号１７８の位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１つまたは複数の変異を含む、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

前記改変ヒトIFN-βが、配列番号１７８のＷ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇから選択される１つまたは複数の変異を含む、請求項９８に記載の方法。

【請求項100】

前記改変ヒトIFN-α２が、配列番号１７６または１７７中の位置Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｌ２６、Ｆ２７、Ｌ３０、Ｌ３０、Ｋ３１、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｄ３５、Ｑ４０、Ｈ５７、Ｅ５８、Ｑ６１、Ｆ６４、Ｎ６５、Ｔ６９、Ｌ８０、Ｙ８５、Ｙ８９、Ｄ１１４、Ｌ１１７、Ｒ１２０、Ｒ１２５、Ｋ１３３、Ｋ１３４、Ｒ１４４、Ａ１４５、Ａ１４５、Ｍ１４８、Ｒ１４９、Ｓ１５２、Ｌ１５３、およびＮ１５６で１つまたは複数の変異を含む、請求項９７に記載の方法。

【請求項101】

前記改変ヒトIFN-α２が、配列番号１７６または１７７中のＲ３３Ａ、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４４Ｘ_１ Ａ１４５Ｘ_２、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異を含み、Ｘ_１が、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、かつＸ_２が、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択される、請求項１００に記載の方法。

【請求項102】

前記改変ヒトIFN-α２が、Ｒ１４９Ａ変異を含む、請求項１０１に記載の方法。

【請求項103】

前記繊維性疾患が、肝線維症、肺線維症、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、慢性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＳＨ）、Ｃ型肝炎感染、アルコール性肝疾患、肝障害、肝硬変、および骨髄異形成症候群から選択される、請求項９５～１０２のいずれかに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年２月５日出願の米国特許仮出願第６２／６２６，４５３号の利益および優先権を主張する。この内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

発明の分野
本発明の技術は、一部は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を結合する結合物質および治療薬および診断薬としてのそれらの使用に関する。

【0003】

電子申請したテキストファイルの説明
本明細書と共に電子申請された次記のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列リストのコンピュータ可読形式コピー（ファイル名：ＯＲＮ－０３５ＰＣ＿ＳＴ２５、作成日付：２０１９年１月２８日、ファイルサイズ：６３６ＫＢ）。

【背景技術】

【0004】

線維芽細胞は、他の細胞との動的相互作用に参加する。それらは、サイトカイン、脂質メディエーターおよび成長因子などの多種多様な免疫調節因子を発現する。その上、線維芽細胞は、数多くの表面および細胞内の受容体、ならびに外因性シグナルへの応答に必須の分子機構を提示する。線維芽細胞が炎症を開始し得るという事実を考慮すると、線維芽細胞は、「専門的な」免疫系の延長と見なすことができる。線維芽細胞は、数多くの正常なおよび病的な過程に参加する。異常な線維芽細胞に関連することが知られる例示的疾患としては、癌、心臓血管疾患、および自己免疫疾患が挙げられる。

【0005】

線維芽細胞は、健常な組織の構造および機能を調節し、急性炎症後の組織修復に一過的に参加し、癌を含む慢性炎症状態の際に異常な刺激の役割を担う。癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）は、腫瘍微小環境を調節し、腫瘍促進的または腫瘍阻害的な様式のいずれかで新生物細胞の挙動に影響を及ぼす。ＣＡＦは、重要な間質成分であり、主としてタンパク質分解酵素、成長因子およびサイトカインを放出することにより、腫瘍微小環境を調節すること、および腫瘍細胞の挙動に影響を及ぼすことにおいて、重要な役割を果たす。複数の試験は、間質の癌促進性および治療耐性が線維芽細胞の活性に起因し得ることを示している。

【0006】

したがって、異常な線維芽細胞に関連する疾患を治療するため、例えばＣＡＦ機能または線維性疾患を調節することにより癌を治療するための、改善された治療法の必要性が残されている。

【発明の概要】

【0007】

ある態様では、本発明の技術は、Ｆ２線維芽細胞を標的とする線維芽細胞結合物質に関する。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、Ｆ２線維芽細胞を含む疾患微小環境（例えば、Ｆ２線維芽細胞を含む腫瘍微小環境）を直接的または間接的に変化させる。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、Ｆ２線維芽細胞を直接的または間接的に極性化する。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、ＦＡＰマーカーを標的とする。いくつかの実施形態ではて、線維芽細胞結合物質は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）である。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、シグナル伝達物質、例えば、限定されないが、活性を弱めるように改変され得るインターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子をさらに含む。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、目的とする他の標的（例えば、抗原または受容体）に結合する追加のターゲティング部分を含む。別の実施形態では、目的とする他の標的（例えば、抗原または受容体）は、線維芽細胞上に存在する。いくつかの実施形態では、目的とする他の標的（例えば、抗原または受容体）は、癌間質中の線維芽細胞上に存在する。いくつかの実施形態では、本発明の線維芽細胞結合物質は、免疫細胞（例えば、樹状細胞）を、作用の部位（例えば、非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的または間接的に動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、腫瘍間質中の免疫細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ）により、または線維芽細胞により直接、抗原（例えば、抗原または受容体）の提示を促進する。

【0008】

別の態様では、本発明の技術は、ＦＡＰに特異的に結合する少なくとも１つのターゲティング部分を有するＦＡＰ結合物質を有する治療組成物に関する。いくつかの実施形態では、これらのＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰに結合するが、ＦＡＰを機能的に調節しない（例えば、部分的にまたは完全に中和しない）。したがって、いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、例えば、ＦＡＰ発現細胞にＦＡＰを介してシグナル伝達させつつそのＦＡＰ発現細胞を目的の部位に直接または間接的に動員するのに使用される（すなわち、ＦＡＰ結合物質の結合は、目的の部位でのＦＡＰシグナル伝達を低減せず排除しない）。反対に、いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰ発現細胞にＦＡＰを介するシグナル伝達をさせずに、そのＦＡＰ発現細胞を目的の部位に直接的または間接的に動員するのに使用される（すなわち、ＦＡＰ結合物質の結合は、目的の部位でのＦＡＰシグナル伝達を低減または排除する）。いくつかの実施形態では、ＦＡＰターゲティング部分は、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）である。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、シグナル伝達物質、例えば、限定されないが、活性を弱めるように改変され得るインターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、目的とする他の標的（例えば、抗原または受容体）に結合する追加のターゲティング部分を含む。別の実施形態では、目的とする他の標的（例えば、抗原または受容体）は、線維芽細胞上に存在する。いくつかの実施形態では、目的とする他の標的（例えば、抗原または受容体）は、癌間質中の線維芽細胞上に存在する。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、免疫細胞、（例えば、樹状細胞）を、作用の部位（例えば、非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、腫瘍間質中の免疫細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ）により、または線維芽細胞により直接、抗原（例えば、抗原または受容体）の提示を促進する。

【0009】

別の態様では、本発明のＦＡＰ結合物質は、癌、感染症、免疫異常、ならびに他の疾患および障害などの種々の疾患または障害の治療のための方法に有用である。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】図１は、Ｂ１６腫瘍を接種されたマウスにおける腫瘍成長に及ぼすＦＡＰ－ＡＦＮ（実施例２に記載）での処置の影響を示すグラフである。未処置マウス（対照）は、ＰＢＳで処置された。腫瘍成長曲線の右側の数は、示された日付に完全に腫瘍のなかったマウスの数を示す。

【図2】図２は、ＦＡＰ－ＡＦＮまたはＰＢＳで処置されたマウスの血液学的データを示すグラフである（好中球（ｎｅ）、リンパ球（ｌｙ）、および血小板（ｐｌｔ）は、Ｋ／μｌで；赤血球（ｒｂｃ）は、Ｍ／μｌで、平均血小板容積（ｍｐｖ）はｆＬで表されている）。試験されたパラメータは、好中球数（「ｎｅ」）、リンパ球数（「ｌｙ」）、赤血球数（「ｒｂｃ」）、血小板（「ｐｌｔ」）、および平均血小板容積（「ｍｐｖ」）である。

【図3A】図３Ａは、Ｂ１６－ｍＣＤ２０クローンを接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼす、ＦＡＰ－ＡＦＮ（実施例２に記載）のみ、ＦＡＰ－ＡＦＮとドキソルビシン（ＦＡＰ＋ｄｏｘ）、およびＦＡＰ－ＡＦＮと組換えマウスＴＮＦ（ＦＡＰ＋ＴＮＦ）での処置の影響を比較するグラフである。未処置マウス（対照）は、ＰＢＳで処置された。腫瘍成長曲線の右側の数は、示された日付に完全に腫瘍のなかったマウスの数を示す。

【図3B】図３Ｂは、Ｂ１６－ｍＣＤ２０クローンを接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼす、ＦＡＰ－ＡＦＮ（実施例２に記載）のみ、ＦＡＰ－ＡＦＮと抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｄＡｂ（ＦＡＰ＋ＰＤ－Ｌ１）、およびＦＡＰ－ＡＦＮと抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｄＡｂと抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ＋抗ＯＸ４０Ａｂ（ＦＡＰ＋ＰＤ－Ｌ１＋ＴｒｅｇＤ）での処置の影響を比較するグラフである。未処置マウス（対照）は、ＰＢＳで処置された。腫瘍成長曲線の右側の数は、示された日付に完全に腫瘍のなかったマウスの数を示す。

【図4】図４は、Ｂ１６－ｍＣＤ２０クローンを接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼす、ＦＡＰ－ＡＦＮ（実施例２に記載）のみ、およびＦＡＰ結合物質を有する二重特異性組成物（ＦＡＰ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒ）での処置の影響を比較するグラフである。未処置マウス（対照）は、ＰＢＳで処置された。腫瘍成長曲線の右側の数は、示された日付に完全に腫瘍のなかったマウスの数を示す。

【図5A-D】図５Ａ～Ｄは、Ｂ１６－ｍＣＤ２０クローンを接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼす、単一特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ：図５Ｂ）および二重特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１；図５ＣまたはｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ；図５Ｄ）での処置の影響を示すグラフである。未処置マウス（対照）は、ＰＢＳで処置された（図５Ａ）。

【図6A-D】図６Ａ～Ｄは、Ｂ１６－ｍＣＤ２０クローンを接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼす、ドキソルビシンと組み合わされた単一特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ Ｄｏｘ；図６Ｂ）およびドキソルビシンと組み合わされた二重特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ Ｄｏｘ；図６ＣまたはｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ Ｄｏｘ；図６Ｄ）での処置の影響を示すグラフである。未処置マウス（対照）は、ＰＢＳで処置された（図６Ａ）。腫瘍成長曲線の右側の数は、示された日付に完全に腫瘍のなかったマウスの数を示す。

【図7A-D】図７Ａ～Ｄは、Ｂ１６－ｍＣＤ２０クローンを接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼす、ＴＮＦと組み合わされた単一特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ ＴＮＦ；図７Ｂ）およびＴＮＦと組み合わされた二重特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ ＴＮＦ；図７ＣまたはｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ ＴＮＦ；図７Ｄ）での処置の影響を示すグラフである。未処置マウス（対照）は、ＰＢＳで処置された（図７Ａ）。腫瘍成長曲線の右側の数は、示された日付に完全に腫瘍のなかったマウスの数を示す。

【図8A-D】図８Ａ～Ｄは、Ｂ１６－ｍＣＤ２０クローンを接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼす、Ａｂｓと組み合わされた単一特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ Ａｂｓ；図８Ｂ）およびＡｂｓと組み合わされた二重特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ Ａｂｓ；図８ＣまたはｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ Ａｂｓ；図８Ｄ）での処置の影響を示すグラフである。未処置マウス（対照）は、ＰＢＳで処置された（図８Ａ）。腫瘍成長曲線の右側の数は、示された日付に完全に腫瘍のなかったマウスの数を示す。

【図9A-E】図９Ａ～Ｅは、単一特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ）のみ、もしくは少なくとも１種の追加の治療薬（すなわち、ドキソルビシン、ＴＮＦ、Ａｂｓ）と組み合わされた単一特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ）、または二重特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１またはｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ）のみ、もしくは少なくとも１種の追加の治療薬（すなわち、ドキソルビシン、ＴＮＦ、Ａｂｓ）と組み合わされた二重特異性組成物（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１またはｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ）で処置されたマウスからの血液学的データを示すグラフである（リンパ球（ＬＹ；図９Ａ）、単球（ＭＯ；図９Ｂ）、好中球（ＰＭＮ；図９Ｃ）および血小板（ＰＬＴ；図９Ｅ）は、Ｋ／μｌで、赤血球（ｒｂｃ；図９Ｄ）は、Ｍ／μｌで表されている）。図９Ａ～Ｅのそれぞれでは、ヒストグラムの順序は、凡例に列挙された物質を左から右に順に並べている（すなわち、図９Ａでは、左から右に向かって「ＰＢＳ」、「ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－Ｑ１２４Ａ」、「ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－Ｑ１２４Ａ＋ｄｏｘ」などである）。

【図10】図１０は、ヒトＦＡＰの組換えＨｉｓ_６タグ細胞外ドメインに特異的な４１種の異なるＶＨＨのヌクレオチド配列（配列番号８４４～８８４）を示す。

【図11】図１１は、ヒトＦＡＰの組換えＨｉｓ_６タグ細胞外ドメインに特異的な４１種の異なるヒトＶＨＨのアミノ酸配列（配列番号２～４２）を示す。ＶＨＨ中のＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ１、２および３）は、それに応じて標識される。例えば最上の配列２ＨＦＡ４４は、配列番号２であり、最下の配列２ＨＦＡ５０は、配列番号４２である。

【図12】図１２は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を利用して実行されたＦＡＰ ＶＨＨ結合分析を示す。ＦＡＰ ＶＨＨペリプラズム抽出物を、ヒトＦＡＰまたは空ベクター（ＭＯＣＫ）で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に適用した。結合を、蛍光標識された抗Ｈｉｓ Ａｂを用いてＦＡＣＳで測定し、ＦＡＰトランスフェクト細胞とＭＯＣＫトランスフェクト細胞との平均蛍光強度（ＭＦＩ）の差としてプロットした。

【図13A-B】図１３ＡおよびＢは、ＦＡＰ ＶＨＨ ＡＦＮの生物活性を示す。ＨＬ１１６またはＨＬ１６６－ｈＦＡＰ細胞を、系列希釈された野生型IFN-ａ２（左）またはＦＡＰ ＶＨＨ ＡＦＮ（右）で６時間刺激した。平均ルシフェラーゼ活性（±ＳＴＤＥＶ）をプロットする。

【図14A-B】図１４ＡおよびＢは、Ｂ１６ＢＬ６細胞株を接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼす、ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-のみ、またはドキソルビシンと組み合わされたＦＡＰ－ＷＴｍIFN-（図１４Ａ）、およびＦＡＰ－ＡＦＮのみ、またはドキソルビシンと組み合わされたＦＡＰ－ＡＦＮ（図１４Ｂ）の影響を示す。対照マウスは、ＰＢＳで処置された。平均腫瘍サイズ（＋ＳＥＭ）をプロットする。

【図15A-B】図１５ＡおよびＢは、Ｂ１６ＢＬ６細胞株を接種されたマウスの体重に及ぼす、ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-のみ、またはドキソルビシンと組み合わされたＦＡＰ－ＷＴｍIFN-（図１５Ａ）、およびＦＡＰ－ＡＦＮのみ、またはドキソルビシンと組み合わされたＦＡＰ－ＡＦＮ（図１５Ｂ）の影響を示す。対照マウスは、ＰＢＳで処置された。７日目の平均体重変化（＋ＳＥＭ）をプロットする。

【図16A-F】図１６Ａ～Ｆは、ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-のみ、またはドキソルビシンＡＦＮと組み合わされたＦＡＰ－ＷＴｍIFN-、およびＦＡＰ－ＡＦＮのみ、またはドキソルビシンと組み合わされたＦＡＰ－ＡＦＮで処置されたマウスからの血液学的データを示す：リンパ球（図１６Ａ）、単球（図１６Ｂ）、好中球（ＰＭＮ；図１６Ｃ）および血小板（図１６Ｅ）は、Ｋ／μｌで、赤血球（ＲＢＣ；図１６Ｄ）はＭ／μｌで、平均血小板容積（ｍｐｖ）は、ｆＬで（図１６Ｆ）表される。

【図17】図１７は、ＭＣ３８細胞株を接種されたマウスの腫瘍成長に及ぼすＦＡＰ－ＡＦＮのみ、またはドキソルビシンと組み合わされたＦＡＰ－ＡＦＮの影響を示す。対照マウスは、ＰＢＳで処置された。平均腫瘍サイズ（＋ＳＥＭ）をプロットする。

【図18】図１８は、ＭＣ３８細胞株を接種されたマウスの体重に及ぼすＦＡＰ－ＡＦＮのみ、またはドキソルビシンと組み合わされたＦＡＰ－ＡＦＮの影響を示す。対照マウスは、ＰＢＳで処置された。７日目の平均体重変化（＋ＳＥＭ）をプロットする。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本発明の技術は、一部は、線維芽細胞を認識し、かつそれに結合する物質（例えば、非限定的例であるが、ＶＨＨなどの抗体）の発見に基づいている。いくつかの実施形態では、本発明の線維芽細胞結合物質は、１つまたは複数のターゲティング部分および／または１種または複数のシグナル伝達物質を有するキメラまたは融合タンパク質の一部である。

【0012】

いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、Ｆ２線維芽細胞を標的とする。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、Ｆ２線維芽細胞を含む疾患微小環境（例えば、Ｆ２線維芽細胞を含む腫瘍微小環境）を直接的にまたは間接的に変化させる。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、Ｆ２線維芽細胞をＦ１線維芽細胞に直接的または間接的に極性化する。

【0013】

Ｆ２線維芽細胞（単数または複数）は、腫瘍形成促進性（ｐｒｏ－ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ）（または腫瘍促進性）癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）（別名、ＩＩ型ＣＡＦ）を指す。Ｆ１線維芽細胞（単数または複数）は、腫瘍抑制性ＣＡＦ（別名、Ｉ型ＣＡＦ）を指す。極性化は、細胞の表現型を変化させること、例えば腫瘍形成性Ｆ２線維芽細胞を腫瘍抑制性Ｆ１線維芽細胞に変化させることを指す。

【0014】

いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、ＦＡＰマーカーを標的とする。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、ＦＡＰターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質のＦＡＰターゲティング部分は、本明細書に開示の任意のＦＡＰターゲティング部分である。

【0015】

いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、配列番号２～４２または４６～８６のいずれか１つと少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、線維芽細胞結合物質は、配列番号５８と少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、１種または複数のシグナル伝達物質をさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子の１種または複数から選択され、これらのいずれかが任意に改変される。

【0017】

いくつかの実施形態では、１種または複数のシグナル伝達物質をさらに含む線維芽細胞結合物質は、Ｆ２線維芽細胞を含む疾患微小環境（例えば、Ｆ２線維芽細胞を含む腫瘍微小環境）を直接的または間接的に変化させる。いくつかの実施形態では、１種または複数のシグナル伝達物質をさらに含む線維芽細胞結合物質は、Ｆ２線維芽細胞をＦ１線維芽細胞に直接的または間接的に極性化する。

【0018】

いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、１つまたは複数の追加のターゲティング部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の追加のターゲティング部分は、腫瘍抗原を認識し、任意にそれを機能的に調節する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の追加のターゲティング部分は、免疫細胞上の抗原を認識し、任意にそれを機能的に調節する。

【0019】

いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される。

【0020】

いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞または腫瘍環境に動員する。

【0021】

いくつかの実施形態では、線維芽細胞結合物質は、実質的にＦＡＰの活性を機能的に調節することなく、ＦＡＰを認識し結合する。

【0022】

別の態様では、本発明の技術は、一部は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を認識し、それに結合する物質（例えば、非限定的例であるが、ＶＨＨなどの抗体）の発見に基づいている。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、１つまたは複数のターゲティング部分および／または１種または複数のシグナル伝達物質とのキメラまたは融合タンパク質の一部である。いくつかの実施形態では、これらのＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰに結合するが、ＦＡＰを機能的に調節しない。

【0023】

いくつかの実施形態では、これらのＦＡＰ結合物質は、免疫細胞を結合し治療作用の必要な部位（例えば、腫瘍または腫瘍微小環境）に直接的にまたは間接的に動員し得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、効果的な抗腫瘍免疫応答を誘発するための腫瘍抗原提示を強化する。

【0024】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、腫瘍抗原提示を調節する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、免疫応答を調節して自己免疫を回避するか低減させる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、患者において、Ｔｒｅｇの、ＣＤ８＋Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞に対する比率を高める。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、患者中の自己反応性Ｔ細胞の低減に関する。

【0025】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、ＦＡＰ結合物質を含む医薬組成物、および線維性疾患を含む種々の疾患の治療におけるそれらの使用を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、ＦＡＰ結合物質を含む医薬組成物、および癌、自己免疫疾患、および／または神経変性疾患を含む、種々の疾患の治療におけるそれらの使用を提供する。

【0026】

いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）を標的とするために用いられる。例えば種々の実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、例えば癌、例えば癌腫などの上皮由来の癌の治療において、腫瘍間質中の線維芽細胞を標的とする。ＣＡＦは、内皮細胞、脂肪細胞、炎症細胞および免疫細胞を含む腫瘍環境内に頻繁に見出される悪性上皮細胞、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および数多くの非癌性細胞の間で起こる動的および互恵的な相互作用を調節することにおける中核であるため、本発明のＦＡＰ結合物質は、重要な抗腫瘍療法（例えば、本明細書の他の箇所に記載される改変サイトカインおよび／または追加のターゲティング部分）を目的の部位に送達する方法を提供する。種々の実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、活性化線維芽細胞と、管形成に関与する内皮細胞（ＥＣ）と、腫瘍の成長に順応するように常にリモデリングされる細胞外マトリックス（ＥＣＭ）とで構成される間質微小環境を標的とする。したがって、例えば任意に追加のターゲティング部分を含む、サイトカインを有するキメラの状況では、本発明のＦＡＰ結合物質は抗腫瘍シグナルを、腫瘍発達に重要である間質微小環境に送達できる。種々の実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、癌関連線維芽細胞、ＭＳＣ、選択された癌細胞および内皮細胞などの、原発腫瘍または転移における腫瘍ニッチ形成に重要な細胞の膜を標的とするために用いられる。

【0027】

ＦＡＰ結合物質
線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）は、セリンプロテアーゼファミリーに属する１７０ｋＤａの黒色腫膜結合ゼラチナーゼである。ＦＡＰは、上皮癌の反応性間質線維芽細胞、創傷治癒の肉芽組織、ならびに骨および軟組織肉腫の悪性腫瘍細胞の中で選択的に発現される。ＦＡＰは、発達、組織修復、および上皮発癌の際の線維芽細胞増殖または上皮－間葉相互作用の制御に関与すると考えられる。

【0028】

いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰに特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰの機能的調節（例えば、部分的または完全な中和）なしに特異的にＦＡＰに結合できるタンパク質ベースの物質である。

【0029】

いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰ上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、ＦＡＰ上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、ＦＡＰ上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＦＡＰ上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。

【0030】

いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、ヒトＦＡＰの完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む任意の型のヒトＦＡＰに結合し得る。ある実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、モノマー型のＦＡＰに結合する。別の実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ダイマー型のＦＡＰに結合する。さらなる実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、グリコシル化型のＦＡＰに結合し、これはモノマーであってもダイマーであってもよい。

【0031】

ある実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、ヒトＦＡＰ上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰは、下記のアミノ酸配列を含む：
ＭＫＴＷＶＫＩＶＦＧＶＡＴＳＡＶＬＡＬＬＶＭＣＩＶＬＲＰＳＲＶＨＮＳＥＥＮＴＭＲＡＬＴＬＫＤＩＬＮＧＴＦＳＹＫＴＦＦＰＮＷＩＳＧＱＥＹＬＨＱＳＡＤＮＮＩＶＬＹＮＩＥＴＧＱＳＹＴＩＬＳＮＲＴＭＫＳＶＮＡＳＮＹＧＬＳＰＤＲＱＦＶＹＬＥＳＤＹＳＫＬＷＲＹＳＹＴＡＴＹＹＩＹＤＬＳＮＧＥＦＶＲＧＮＥＬＰＲＰＩＱＹＬＣＷＳＰＶＧＳＫＬＡＹＶＹＱＮＮＩＹＬＫＱＲＰＧＤＰＰＦＱＩＴＦＮＧＲＥＮＫIFN-ＧＩＰＤＷＶＹＥＥＥＭＬＰＴＫＹＡＬＷＷＳＰＮＧＫＦＬＡＹＡＥＦＮＤＫＤＩＰＶＩＡＹＳＹＹＧＤＥＱＹＰＲＴＩＮＩＰＹＰＫＡＧＡＫＮＰＶＶＲＩＦＩＩＤＴＴＹＰＡＹＶＧＰＱＥＶＰＶＰＡＭＩＡＳＳＤＹＹＦＳＷＬＴＷＶＴＤＥＲＶＣＬＱＷＬＫＲＶＱＮＶＳＶＬＳＩＣＤＦＲＥＤＷＱＴＷＤＣＰＫＴＱＥＨＩＥＥＳＲＴＧＷＡＧＧＦＦＶＳＲＰＶＦＳＹＤＡＩＳＹＹＫＩＦＳＤＫＤＧＹＫＨＩＨＹＩＫＤＴＶＥＮＡＩＱＩＴＳＧＫＷＥＡＩＮＩＦＲＶＴＱＤＳＬＦＹＳＳＮＥＦＥＥＹＰＧＲＲＮＩＹＲＩＳＩＧＳＹＰＰＳＫＫＣＶＴＣＨＬＲＫＥＲＣＱＹＹＴＡＳＦＳＤＹＡＫＹＹＡＬＶＣＹＧＰＧＩＰＩＳＴＬＨＤＧＲＴＤＱＥＩＫＩＬＥＥＮＫＥＬＥＮＡＬＫＮＩＱＬＰＫＥＥＩＫＫＬＥＶＤＥＩＴＬＷＹＫＭＩＬＰＰＱＦＤＲＳＫＫＹＰＬＬＩＱＶＹＧＧＰＣＳＱＳＶＲＳＶＦＡＶＮＷＩＳＹＬＡＳＫＥＧＭＶＩＡＬＶＤＧＲＧＴＡＦＱＧＤＫＬＬＹＡＶＹＲＫＬＧＶＹＥＶＥＤＱＩＴＡＶＲＫＦＩＥＭＧＦＩＤＥＫＲＩＡＩＷＧＷＳＹＧＧＹＶＳＳＬＡＬＡＳＧＴＧＬＦＫＣＧＩＡＶＡＰＶＳＳＷＥＹＹＡＳＶＹＴＥＲＦＭＧＬＰＴＫＤＤＮＬＥＨＹＫＮＳＴＶＭＡＲＡＥＹＦＲＮＶＤＹＬＬＩＨＧＴＡＤＤＮＶＨＦＱＮＳＡＱＩＡＫＡＬＶＮＡＱＶＤＦＱＡＭＷＹＳＤＱＮＨＧＬＳＧＬＳＴＮＨＬＹＴＨＭＴＨＦＬＫＱＣＦＳＬＳＤ（配列番号１）。

【0032】

いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、特異的結合ができるターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、抗体であるターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む完全長マルチマータンパク質である。それぞれの重鎖は、１つの可変領域（例えば、Ｖ_Ｈ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ_１、ＣＨ_２およびＣＨ_３）を含み、それぞれの軽鎖は、１つの可変領域（Ｖ_Ｌ）および１つの定常領域（Ｃ_Ｌ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）により挟まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる、３つの高頻度可変領域を含む。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。

【0033】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、特定の抗体誘導体または抗体フォーマットであるターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、次のターゲティング部分を含む：単一ドメイン抗体、組換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、または合成分子。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ ＭＡｂｓ．２０１１ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；３（３）：３１０－３１７、も参照されたい。

【0034】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＶＨＨなどの、単一ドメイン抗体であるターゲティング部分を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物から誘導されるか、またはＶＨＨは設計されたＶＨＨであってもよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（Ｖ_ＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。ＶＨＨは、ＮＡＮＯＢＯＤＹまたはＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳの商標で市販される。

【0035】

ある実施形態では、ＦＡＰ結合物質はＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。

【0036】

いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示的な完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0037】

限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ヒトＶＨＨ ＦＡＰ結合物質は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
２ＨＦＡ４４:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＦＤＳＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＳＤＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰＩＦＧＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２）;
２ＨＦＡ５２:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＲＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＴＦＤＳＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＤＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰＩＦＧＳＷＧＱＧＴＱ ＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３）；
２ＨＦＡ１１:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＦＤＳＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＤＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰIFN-ＳＷＧＱＧＴ ＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号４）；
２ＨＦＡ４:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＤＩＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＴＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＤＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＡＰＰＩＦＧＳＷＧＱＧＴＱ ＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号５）；
２ＨＦＡ４６:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＤＳＲＮＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＧＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＡＰＰIFN-ＳＷＧＱＧＴＱ ＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号６）；
２ＨＦＡ１０:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＶＡＥＳＩＤＶＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＧＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰＩＬＮＳＷＧＱＧＴ ＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７）;
２ＨＦＡ３８:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＲＶＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＦＤＳＲＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＳＧＳＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰIFN-ＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号８）；
２ＨＦＡ２０:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＲＬＦＳＡＮＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＴＩＬＳＳＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＡＰＰＰＥＧＹＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号９）；
２ＨＦＡ５:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＲＬＦＳＡＮＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＴＩＬＳＳＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＧＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＮＦＡＰＰＰＥＧＹＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１０）；
２ＨＦＡ１９:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１１）；
２ＨＦＡ２:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１２）；
２ＨＦＡ４１:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＲＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１３）；
２ＨＦＡ４２:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１４）；
２ＨＦＡ１２:
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＳＭＬＮＳＭＧＷＹＲＱＡＬＧＫＱＲＥＦＶＡＧＩＴＳＧＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＮＤＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＴＷＰＰＲＩＡＦＤＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１５）；
２ＨＦＡ２４：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＳＮＡＭＧＷＹＲＱＡＡＧＫＲＲＥＬＶＡＧＩＲＳＤＧＮＴＮＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＲＡＫＮＴＶＹＬＱＭＴＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＹＷＰＰＰＬＲＱＧＧＤＹＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１６）；
２ＨＦＡ６７：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＳＦＤＳＲＮＡＭＡＷＹＲＱＡＬＧＫＥＲＶＷＶＡＧＩＩＳＤＧＳＴＮＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＷＰＰＲＩＧＬＧＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１７）；
２ＨＦＡ２９：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＴＭＳＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＧＩＬＳＤＧＴＴＫＹＶＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＨＬＱＭＮＳＬＫＶＥＤＴＡＶＹＹＣＮＦＦＰＰＰＶＰＡＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１８）；
２ＨＦＡ５１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＩＳＳＭＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＧＬＧＳＧＶＳＴＴＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＲＷＰＰＰＹＤＹＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号１９）；
２ＨＦＡ６３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＴＩＬＳＳＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＳＩＳＴＤＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＳＴＶＦＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＦＨＰＰＶＶＲＤＷＧＤＴＹＷＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ ＱＧ（配列番号２０）；
２ＨＦＡ６２：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＲＳＩＦＳＩＧＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＦＩＴＶＤＨＮＴＹＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＴＥＮＤＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＲＡＰＰＳＴＤＧＤＲＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２１）；
２ＨＦＡ２６：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＴＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＮＧＧＳＡＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２２）；
２ＨＦＡ２５：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＮＧＧＳＡＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２３）；
２ＨＦＡ１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＩＡＳＧＲＴＦＧＴＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＳＡＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２４）；
２ＨＦＡ３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＩＡＳＧＲＴＦＧＴＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＴＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＨＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２５）；
２ＨＦＡ７：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＳＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＴＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２６）；
２ＨＦＡ３１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＳＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＰＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＴＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２７）；
２ＨＦＡ６：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＴＹＡＬＡＷＦＲＱＡＰＧＫＳＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＫＴＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２８）；
２ＨＦＡ５３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＡＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＬＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＴＧＧＡＡＹＴＲＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９）；
２ＨＦＡ９：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＡＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＡＧＧＳＴＬＹＡＤＮＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＬＳＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＨＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０）；
２ＨＦＡ７３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＡＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＡＧＧＳＴＬＹＡＤＮＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＬＳＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＨＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１）；
２ＨＦＡ５５：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＳＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＳＧＧＡＹＹＴＡＲＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３２）；
２ＨＦＡ７１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＳＴＬＹＡＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＳＧＧＡＹＹＴＡＲＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３３）；
２ＨＦＡ６０：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＰＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＳＧＳＡＹＹＴＴＲＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３４）；
２ＨＦＡ６５：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＮＩＤＳＩＡＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＳＶＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＳＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３５）；
２ＨＦＡ４９：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＧＩＳＳＧＧＩＴＮＹＡＨＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＩＤＫＮＴＶＦＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＳＧＧＡＹＹＴＳＲＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３６）；
２ＨＦＡ５７：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＸＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＤＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＩＡＧＩＳＷＧＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＬＳＧＶＳＲＳＤＲＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３７）；
２ＨＦＡ２３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＭＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＳＩＳＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＫＴＶＹＬＱＭＭＳＬＥＰＥＡＴＧＶＹＹＣＡＡＲＤＧＳＡＬＹＴＡＨＳＤＷＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３８）；
２ＨＦＡ３６：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＥＲＴＦＳＭＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＧＩＳＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＰＫＫＴＶＹＬＱＭＭＳＬＥＰＥＤＴＧＶＹＹＣＡＡＲＳＧＳＡＹＦＳＧＲＹＹＷＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３９）；
２ＨＦＡ１４：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＶＭＧＷＦＲＱＶＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＧＬＳＴＹＹＡＤＳＬＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＥＧＧＧＩＷＴＳＳＴＱＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号４０）；
２ＨＦＡ４３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＴＩＦＳＳＧＡＭＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＷＶＡＧＩＴＧＳＲＴＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＴＶＦＬＱＭＮＮＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＳＲＰＤＨＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号４１）；および
２ＨＦＡ５０：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＴＩＳＳＧＡＭＧＷＹＲＱＶＰＧＫＱＲＥＷＶＡＧＩＴＧＳＲＴＴＭＹＴＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＴＶＦＬＱＭＮＮＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＳＲＰＤＹＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号４２）。

【0038】

種々の例示的実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号４３）のない、上記に提供された配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0039】

種々の例示的実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号４４）のない、上記に提供された配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0040】

種々の例示的実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＡＡＡリンカー（すなわち、ＡＡＡ）のない、上記に提供された配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0041】

種々の例示的実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号４５）のない、上記に提供された配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0042】

限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ヒトＶＨＨ ＦＡＰ結合物質は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
２ＨＦＡ４４：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＦＤＳＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＳＤＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰＩＦＧＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号４６）；
２ＨＦＡ５２：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＲＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＴＦＤＳＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＤＧＲ－ＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰＩＦＧＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号４７）；
２ＨＦＡ１１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＦＤＳＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＤＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰIFN-ＳＷＧＱＧＴ ＱＶＴＶＳＳ（配列番号４８）；
２ＨＦＡ４：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＤＩＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＴＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＤＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＡＰＰＩＦＧＳＷＧＱＧＴＱ ＶＴＶＳＳ（配列番号４９）；
２ＨＦＡ４６：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＤＳＲＮＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＧＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＡＰＰIFN-ＳＷＧＱＧＴＱ ＶＴＶＳＳ（配列番号５０）；
２ＨＦＡ１０：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＶＡＥＳＩＤＶＲＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＴＧＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰＩＬＮＳＷＧＱＧＴ ＱＶＴＶＳＳ（配列番号５１）；
２ＨＦＡ３８：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＲＶＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＦＤＳＲＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＷＶＡＴＩＴＳＧＳＲＴＮＹＡＤＳＶＫＡＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＡＰＰIFN-ＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５２）；
２ＨＦＡ２０：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＲＬＦＳＡＮＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＴＩＬＳＳＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＡＰＰＰＥＧＹＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５３）；
２ＨＦＡ５：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＲＬＦＳＡＮＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡ ＴＩＬＳＳＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＧＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＮＦＡＰＰＰＥＧＹＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５４）；
２ＨＦＡ１９：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５５）；
２ＨＦＡ２：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５６）；
２ＨＦＡ４１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＲＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５７）；
２ＨＦＡ４２：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５８）；
２ＨＦＡ１２：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＳＭＬＮＳＭＧＷＹＲＱＡＬＧＫＱＲＥＦＶＡＧＩＴＳＧＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＮＤＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＴＷＰＰＲＩＡＦＤＳＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５９）；
２ＨＦＡ２４：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＳＮＡＭＧＷＹＲＱＡＡＧＫＲＲＥＬＶＡＧＩＲＳＤＧＮＴＮＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＲＡＫＮＴＶＹＬＱＭＴＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＹＷＰＰＰＬＲＱＧＧＤＹＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６０）；
２ＨＦＡ６７：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＳＦＤＳＲＮＡＭＡＷＹＲＱＡＬＧＫＥＲＶＷＶＡＧＩＩＳＤＧＳＴＮＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＷＰＰＲＩＧＬＧＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６１）；
２ＨＦＡ２９：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＴＭＳＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＧＩＬＳＤＧＴＴＫＹＶＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＨＬＱＭＮＳＬＫＶＥＤＴＡＶＹＹＣＮＦＦＰＰＰＶＰＡＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６２）；
２ＨＦＡ５１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＩＳＳＭＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＧＬＧＳＧＶＳＴＴＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＲＷＰＰＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６３）；
２ＨＦＡ６３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＴＩＬＳＳＮＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＳＩＳＴＤＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＳＴＶＦＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＦＨＰＰＶＶＲＤＷＧＤＴＹＷＧＴＱＶＴＶＳＳ ＱＧ（配列番号６４）；
２ＨＦＡ６２：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＲＳＩＦＳＩＧＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＲＲＥＬＶＡＦＩＴＶＤＨＮＴＹＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＴＥＮＤＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＲＡＰＰＳＴＤＧＤＲＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６５）；
２ＨＦＡ２６：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＴＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＮＧＧＳＡＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６６）；
２ＨＦＡ２５：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＮＧＧＳＡＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６７）；
２ＨＦＡ１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＩＡＳＧＲＴＦＧＴＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＳＡＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６８）；
２ＨＦＡ３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＩＡＳＧＲＴＦＧＴＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＴＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＨＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６９）；
２ＨＦＡ７：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＳＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＴＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７０）；
２ＨＦＡ３１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＳＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＰＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＴＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７１）；
２ＨＦＡ６：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＴＹＡＬＡＷＦＲＱＡＰＧＫＳＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＫＴＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７２）；
２ＨＦＡ５３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＡＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＬＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＴＧＧＡＡＹＴＲＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７３）；
２ＨＦＡ９：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＡＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＡＧＧＳＴＬＹＡＤＮＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＬＳＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＨＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７４）；
２ＨＦＡ７３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＡＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＡＧＧＳＴＬＹＡＤＮＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＬＳＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＨＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７５）；
２ＨＦＡ５５：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＳＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＳＧＧＡＹＹＴＡＲＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７６）；
２ＨＦＡ７１：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＳＴＬＹＡＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＳＧＧＡＹＹＴＡＲＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７７）；
２ＨＦＡ６０：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＥＡＥＧＳＰＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＳＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＳＧＳＡＹＹＴＴＲＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７８）；
２ＨＦＡ６５：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＮＩＤＳＩＡＳＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＳＶＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＴＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＳＲＩＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７９）；
２ＨＦＡ４９：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＥＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＧＩＳＳＧＧＩＴＮＹＡＨＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＩＤＫＮＴＶＦＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＳＧＧＡＹＹＴＳＲＶＤＷＰＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８０）；
２ＨＦＡ５７：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＸＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＤＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＩＡＧＩＳＷＧＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＬＳＧＶＳＲＳＤＲＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８１）；
２ＨＦＡ２３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＭＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＳＩＳＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＫＴＶＹＬＱＭＭＳＬＥＰＥＡＴＧＶＹＹＣＡＡＲＤＧＳＡＬＹＴＡＨＳＤＷＤＹＷ ＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８２）；
２ＨＦＡ３６：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＥＲＴＦＳＭＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＧＩＳＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＰＫＫＴＶＹＬＱＭＭＳＬＥＰＥＤＴＧＶＹＹＣＡＡＲＳＧＳＡＹＦＳＧＲＹＹＷＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８３）；
２ＨＦＡ１４：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＶＭＧＷＦＲＱＶＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＧＬＳＴＹＹＡＤＳＬＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＥＧＧＧＩＷＴＳＳＴＱＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８４）；
２ＨＦＡ４３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＴＩＦＳＳＧＡＭＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＷＶＡＧＩＴＧＳＲＴＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＴＶＦＬＱＭＮＮＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＳＲＰＤＨＷＧ ＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８５）；および
２ＨＦＡ５０：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＴＩＳＳＧＡＭＧＷＹＲＱＶＰＧＫＱＲＥＷＶＡＧＩＴＧＳＲＴＴＭＹＴＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＴＶＦＬＱＭＮＮＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＳＲＰＤＹＷＧＱＧ ＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８６）。

【0043】

限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ヒトＶＨＨ ＦＡＰ結合物質は、図１０の配列（すなわち、配列番号８４４～８８４）から選択されるヌクレオチド配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグおよび末端ヒスチジンタグ配列のない、図１０の配列のいずれか１つから選択されるヌクレオチド配列を含む。

【0044】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲと、３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲとを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるターゲティング部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。

【0045】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。

【0046】

いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰ結合物質は、下記から選択されるＣＤＲ１配列を含む：
ＧＧＦＤＳＲＮＡＭＧ（配列番号８７）；ＧＴＦＤＳＲＮＡＭＧ（配列番号８８）；ＧＳＦＤＳＲＮＡＭＧ（配列番号８９）；ＧＳＩＤＩＲＮＡＭＧ（配列番号９０）；ＧＳＩＤＳＲＮＴＭＧ（配列番号９１）；ＥＳＩＤＶＲＮＡＭＧ（配列番号９２）；ＧＳＦＤＳＲＮＳＭＧ（配列番号９３）；ＧＲＬＦＳＡＮＴＭＧ（配列番号９４）；ＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧ（配列番号９５）；ＧＳＩＳＭＬＮＳＭＧ（配列番号９６）；ＧＳＩＦＳＳＮＡＭＧ（配列番号９７）；ＧＳＦＤＳＲＮＡＭＡ（配列番号９８）；ＧＴＭＳＳＩＮＡＭＧ（配列番号９９）；ＧＩＩＳＳＭＮＡＭＧ（配列番号１００）；ＧＴＩＬＳＳＮＳＭＧ（配列番号１０１）；ＲＳＩＦＳＩＧＴＭＧ（配列番号１０２）；ＧＲＴＦＳＴＹＡＭＧ（配列番号１０３）；ＧＲＴＦＳＳＹＡＭＧ（配列番号１０４）；ＧＲＴＦＧＴＹＡＭＧ（配列番号１０５）；ＧＲＴＦＧＳＹＡＭＧ（配列番号１０６）；ＧＲＴＦＧＴＹＡＬＡ（配列番号１０７）；ＧＲＡＦＧＳＹＡＭＧ（配列番号１０８）；ＧＮＩＤＳＩＡＳＭＧ（配列番号１０９）；ＧＲＴＦＳＤＹＡＭＧ（配列番号１１０）；ＧＲＴＦＳＭＹＡＩＧ（配列番号１１１）；ＥＲＴＦＳＭＹＡＩＧ（配列番号１１２）；ＧＲＴＦＳＳＹＶＭＧ（配列番号１１３）；ＧＴＩＦＳＳＧＡＭＡＭＧ（配列番号１１４）；およびＧＴＩＳＳＧＡＭＧ（配列番号１１５）。

【0047】

いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰ結合物質は、下記から選択されるＣＤＲ２配列を含む：
ＴＩＴＳＤＧＲＴＮ（配列番号１１６）；ＴＩＴＴＤＧＲＴＮ（配列番号１１７）；ＴＩＴＴＧＧＲＴＮ（配列番号１１８）；ＴＩＴＳＧＳＲＴＮ（配列番号１１９）；ＴＩＬＳＳＧＳＴＮ（配列番号１２０）；ＧＩＴＳＤＧＴＴＹ（配列番号１２１）；ＧＩＴＳＧＧＲＴＮ（配列番号１２２）；ＧＩＲＳＤＧＮＴＮ（配列番号１２３）；ＧＩＩＳＤＧＳＴＮ（配列番号１２４）；ＧＩＬＳＤＧＴＴＫ（配列番号１２５）；ＧＬＧＳＧＶＳＴＴ（配列番号１２６）；ＳＩＳＴＤＧＳＴＮ（配列番号１２７）；ＦＩＴＶＤＨＮＴＹ（配列番号１２８）；ＡＩＳＮＧＧＳＡＹ（配列番号１２９）；ＡＩＳＳＧＧＳＡＹ（配列番号１３０）；ＡＩＳＴＧＧＳＴＹ（配列番号１３１）；ＡＩＳＳＧＧＴＴＹ（配列番号１３２）；ＡＩＳＳＧＧＳＴＹ（配列番号１３３）；ＡＩＳＡＧＧＳＴＬ（配列番号１３４）；ＡＩＳＳＧＧＳＴＬ（配列番号１３５）；ＡＩＳＳＧＧＩＴＹ（配列番号１３６）；ＡＩＳＶＧＧＳＴＹ（配列番号１３７）；ＧＩＳＳＧＧＩＴＮ（配列番号１３８）；ＧＩＳＷＧＧＳＳＴＹ（配列番号１３９）；ＳＩＳＳＧＧＳＴＮ（配列番号１４０）；ＧＩＳＳＧＧＳＴＮ（配列番号１４１）；ＡＩＴＳＧＬＳＴＹ（配列番号１４２）；ＧＩＴＧＳＲＴＴＴ（配列番号１４３）；およびＧＩＴＧＳＲＴＴＭ（配列番号１４４）。

【0048】

いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰ結合物質は、下記から選択されるＣＤＲ３配列を含む：
ＮＡＡＰＰＩＦＧＳ（配列番号１４５）；ＮＡＡＰＰIFN-Ｓ（配列番号１４６）；ＮＬＡＰＰＩＦＧＳ（配列番号１４７）；ＮＬＡＰＰIFN-Ｓ（配列番号１４８）；ＮＡＡＰＰＩＬＮＳ（配列番号１４９）；ＮＬＡＰＰＰＥＧＹ（配列番号１５０）；ＮＦＡＰＰＰＥＧＹ（配列番号１５１）；ＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳ（配列番号１５２）；ＮＴＷＰＰＲＩＡＦＤＳ（配列番号１５３）；ＮＹＷＰＰＰＬＲＱＧＧＤＹＡＹ（配列番号１５４）；ＮＡＷＰＰＲＩＧＬＧＳ（配列番号１５５）；ＮＦＦＰＰＰＶＰＡＳ（配列番号１５６）；ＮＲＷＰＰＰＹＤＹ（配列番号１５７）；ＮＦＨＰＰＶＶＲＤＷＧＤＴＹ（配列番号１５８）；ＮＲＡＰＰＳＴＤＧＤＲ（配列番号１５９）；ＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹ（配列番号１６０）；ＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＨＶＤＷＰＹ（配列番号１６１）；ＡＡＲＴＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹ（配列番号１６２）；ＡＡＫＴＧＳＡＹＹＴＮＲＩＤＷＰＹ（配列番号１６３）；ＡＡＲＴＧＧＡＡＹＴＲＲＩＤＷＰＹ（配列番号１６４）；ＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＮＨＩＤＷＰＹ（配列番号１６５）；ＡＡＲＳＧＧＡＹＹＴＡＲＶＤＷＰＹ（配列番号１６６）；ＡＡＲＳＧＳＡＹＹＴＴＲＶＤＷＰＹ（配列番号１６７）；ＡＡＲＲＧＳＡＹＹＴＳＲＩＤＷＰＹ（配列番号１６８）；ＡＡＲＳＧＧＡＹＹＴＳＲＶＤＷＰＹ（配列番号１６９）；ＡＡＲＬＳＧＶＳＲＳＤＲ－ＰＹＤＹ（配列番号１７０）；ＡＡＲＤＧＳＡＬＹＴＡＨＳＤＷＤＹ（配列番号１７１）；ＡＡＲＳＧＳＡＹＦＳＧＲＹＹＷＮＹ（配列番号１７２）；ＡＡＲＥＧＧＧＩＷＴＳＳＴＱＹＤＹ（配列番号１７３）；ＮＬＷＰＰＳＲＰＤＨ（配列番号１７４）；およびＮＬＷＰＰＳＲＰＤＹ（配列番号１７５）。

【0049】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、配列番号２～４２または４６～８６から選択される任意のアミノ酸配列との少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、配列番号２～４２または４６～８６から選択される任意のアミノ酸配列との約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％の同一性を有する。

【0050】

いくつかの実施形態では、例えばＦＡＰ結合物質は、配列番号８７～１７５から選択される任意のアミノ酸配列中に最大５個の置換、欠失または挿入を有する。例えばＦＡＰ結合物質は、例えば配列番号８７～１１５からの、ＣＤＲ１の選択された任意のアミノ酸配列中に最大５個の置換、欠失または挿入（例えば、合計１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または挿入）を含む。同様に、別の実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、例えば配列番号１１６～１４４からの、ＣＤＲ２の選択された任意のアミノ酸配列中に最大５個の置換、欠失または挿入（例えば、合計１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または挿入）を含む。同様に、別の実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、例えば配列番号１４５～１７５からの、ＣＤＲ３の選択された任意のアミノ酸配列中に最大５個の置換、欠失または挿入（例えば、合計１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または挿入）を含む。アミノ酸置換は、ペプチド配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基の、別の残基（単数または複数）での置換を指す。アミノ酸欠失は、ペプチド配列からの１つまたは複数のアミノ酸残基の除去を指す。アミノ酸挿入は、ペプチド配列への１つまたは複数のアミノ酸残基の付加を指す。

【0051】

種々の例示的実施形態では、ネズミＦＡＰ結合物質は、シブロツズマズ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）のアミノ酸配列との少なくとも９０％の同一性を有する。

【0052】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本明細書に記載の本発明の技術のＦＡＰ結合物質の任意の天然のまたは合成の類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。

【0053】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、本明細書で開示のＦＡＰ配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含むターゲティング部分を含む。例えば、ＦＡＰ結合物質は、本明細書で開示のＦＡＰ配列のいずれかに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のいずれか１つとの約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含むターゲティング部分を含み得る。

【0054】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに関して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに関して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。

【0055】

いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。

【0056】

「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0057】

本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのａ－ヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。

【0058】

本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）～（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。

【0059】

いくつかの実施形態では、置換は、非古典的アミノ酸も含む。例示的な非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。

【0060】

いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）の中にある。別の実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）の中にある。

【0061】

アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において、周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９ ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。

【0062】

いくつかの実施形態では、変異は、ＦＡＰに特異的に結合する本発明のＦＡＰ結合物質の能力を実質的に低下させない。いくつかの実施形態では、変異は、ＦＡＰに特異的に結合する本発明のＦＡＰ結合物質の能力を実質的に低下させず、かつＦＡＰを機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）こともない。

【0063】

いくつかの実施形態では、ヒトＦＡＰの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー型を含む）に対する本発明の技術のＦＡＰ結合物質の結合親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）により特徴付けられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ヒトＦＡＰの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に約１μＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫ_Ｄで結合するターゲティング部分を含む。

【0064】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、目的の抗原、すなわち、ＦＡＰを結合するが機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和）しないターゲティング部分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質のターゲティング部分は、単に抗原を標的とするが、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に阻害するまたは中和する）しない。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質のターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。

【0065】

顕著な機能調節のないこのような結合は、本発明のＦＡＰ結合物質がエフェクター抗原を介して必要な部位に活性免疫細胞を直接的にまたは間接的に動員するために用いられる方法を含む、本発明の技術のいくつかの実施形態で使用される。例えば、いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、腫瘍細胞にＦＡＰを介して直接的または間接的に樹状細胞を動員するために使用され得る（例えば、ＦＡＰ結合物質は、抗ＦＡＰ抗原認識ドメインを有するターゲティング部分および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。このような実施形態では、樹状細胞を直接的または間接的に動員するがＦＡＰ活性を機能的に調節または中和しないことが望ましい。これらの実施形態では、ＦＡＰシグナル伝達は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く作用の重要な部分である。

【0066】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、樹状細胞による抗原提示を強化する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、腫瘍細胞にＦＡＰを介して樹状細胞を直接または間接的に動員し、その後、そこで腫瘍抗原が取り込まれ、強力な体液性および細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導のために、樹状細胞上に提示される。

【0067】

他の実施形態では（例えば、癌、自己免疫または神経変性疾患の治療に関連して）、ＦＡＰ結合物質は、目的の抗原、すなわち、ＦＡＰを結合し中和するターゲティング部分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、例えば、免疫応答を低減させるために、ＦＡＰシグナル伝達または発現を阻害または低減し得る。

【0068】

本発明のＦＡＰ結合物質を含む治療薬
シグナル伝達物質とのキメラおよび融合体
いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、１種または複数のシグナル伝達物質とのキメラまたは融合タンパク質の一部である。したがって、本発明の技術は、例えば、ＦＡＰに対するターゲティング部分および１種または複数のシグナル伝達物質を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。

【0069】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対する低減された親和性または活性を有するように改変され、それによりキメラまたは融合タンパク質の活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にし、および／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は野生型の形態で拮抗性であり、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因して拮抗性であり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異も有する（例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）。

【0070】

したがって、いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の改変（例えば、変異）を有する改変された（変異した）型のシグナル伝達物質である。いくつかの実施形態では、変異は改変シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型形態のシグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変（例えば、変異）形態での同じシグナル伝達物質を比較して）、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性の１つまたは複数などの１つまたは複数の弱められた活性を有することを可能にする。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低下または除去する変異を含む。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低下または除去する変異とは異なる。結果として、いくつかの実施形態では、変異は、シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型シグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変（例えば、変異）形態での同じシグナル伝達物質を比較して）、向上した安全性、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。

【0071】

本明細書に記載のように、物質は、１個または複数の改変、例えば、変異により、向上した安全性を有し得る。いくつかの実施形態では、向上した安全性は、本キメラタンパク質がより低い毒性（例えば、全身性毒性および／または組織／器官関連毒性）；および／または低減されたまたは実質的に除去された副作用；および／または高められた耐容性、低減されたまたは実質的に除去された有害事象；および／または低減されたまたは実質的に除去された；および／または拡大された治療濃度域をもたらすことを意味する。

【0072】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対する結合親和性または活性を低減する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる活性は、受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、その受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、受容体に対する活性化作用を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された活性化シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または活性化シグナルが除去され得る。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる作用は、受容体に対するアンタゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の遮断または抑制）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、受容体をアンタゴナイズするまたは阻害し得る。これらの実施形態では、変異は、受容体に対するアンタゴナイズ活性を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された阻害シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または阻害シグナルが除去され得る。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因して拮抗性であり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように）かつ、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、１つまたは複数のその受容体に対するその結合親和性または活性を低減する、または１個または複数のその受容体に対し結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異も有する。

【0073】

いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１つまたは複数のターゲティング部分（例えば、ＦＡＰに対するターゲティング部分）との結合により回復可能である。他の実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、１つまたは複数のターゲティング部分の活性により実質的に回復可能でない。

【0074】

いくつかの実施形態では、本発明の技術のキメラタンパク質は、それらのシグナル伝達物質が受容体に対する結合親和性または活性を弱めるまたは除去する変異を有するという理由で、オフターゲット効果を低減させる。いくつかの実施形態では、副作用におけるこの低減は、例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて観察される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、標的細胞に対し活性である。理由は、ターゲティング部分（単数または複数）が、実質的な活性化に必要とされる欠損した／不十分な結合（例えば、限定されないが、および／または結合力）を補償するためである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、これにより望ましくない副作用を大きく低減する。

【0075】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１つの受容体（すなわち、治療受容体）に対する結合または親和性を弱めるまたは低減させる１個または複数の変異および第２の受容体に対する結合または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、これらの変異は、同じまたは異なる位置にあってよい（すなわち、同じ変異または複数の変異）。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）とは異なる。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）と同じである。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、治療受容体に対し結合および／または活性を弱めしたがってより制御された狙い通りの治療効果（例えば、野生型シグナル伝達物質に比較して）を可能にする変異および、別の受容体に対する結合および／または活性を実質的に低減または除去ししたがって副作用を低減する（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて）変異の両方を有する改変シグナル伝達物質を有する。

【0076】

いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分（ＦＡＰに対するターゲティング部分または本明細書に記載の任意のその他のターゲティング部分）を用いて実質的に回復可能ではない。いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分を用いて回復可能である。いくつかの実施形態では、第２の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、他の受容体により媒介される有害作用も防止し得る。あるいは、または加えて、他の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、治療作用部位から離れて治療キメラタンパク質を隔離するのを低減するまたは無くするので、治療効果を改善させる。例えば、いくつかの実施形態では、これは、他の受容体での損失を補償するための高用量の本発明のキメラタンパク質の必要性を無くする。このような用量を低減する能力は、さらに副作用の可能性を低くする。

【0077】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対し、シグナル伝達物質に、親和性、例えば、結合（例えば、Ｋ_Ｄ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能である）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、Ｋ_ｉおよび／または１０５０として測定可能である）を低減、実質的に低減、または除去させる１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、免疫調節薬の受容体に対する低減された親和性は、活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比較して、受容体に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０～５０倍低い、約５０～１００倍低い、約１００～１５０倍低い、約１５０～２００倍低い、または２００倍超低い。

【0078】

改変シグナル伝達物質が１つの受容体に対し結合を低減しかつ第２の受容体に対し結合を実質的に低減または除去する変異を有するいくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または除去より小さい。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的低減または除去よりも、約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％だけ小さい。いくつかの実施形態では、実質的な低減または除去は、減弱または低減よりも大きい結合親和性および／または活性の低減を指す。

【0079】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて、シグナル伝達物質の内在性活性を、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減する１個または複数の変異を含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、その受容体に対するターゲティング部分の結合親和性より低い、その受容体に対する低減された親和性を有するようにさせる１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、同じ細胞上のシグナル伝達物質／受容体とターゲティング部分／受容体との間に存在する。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、シグナル伝達物質、例えば、変異シグナル伝達物質が、局在化された狙い通りの効果を有し、かつ野生型シグナル伝達物質で観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。

【0081】

受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）またはＢｒｅｃｈｔら（１９９３）により記載のように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価し得る。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0082】

種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、改変型のサイトカイン、成長因子およびホルモンから選択される。このようなサイトカイン、成長因子、およびホルモンの実例としては、限定されないが、リンフォカイン、モノカイン、伝統的なポリペプチドホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体ホルモン（ＬＨ）；肝臓成長因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子－αおよび腫瘍壊死因子－β；ミュラー管阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管性内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えば、ＮＧＦ－α；血小板成長因子；トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ－αおよびＴＧＦ－β；インスリン様成長因子－Ｉおよび－ＩＩ；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロン－α、インターフェロン－βおよびインターフェロン－γ（ならびにインターフェロンＩ、ＩＩおよびＩＩＩ型）；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、マクロファージＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）；および顆粒球ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、１Ｌ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３およびＩＬ－１８；腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ－αおよびＴＮＦ－β；ならびに他のポリペプチド因子、例えば、ＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）が挙げられる。本明細書で使用される場合、サイトカイン、成長因子、およびホルモンは、天然源から得られる、または組換え細菌、真核細胞または哺乳動物細胞培養系から生成されるタンパク質、および天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。

【0083】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、限定されないが、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ－αおよびＴＧＦ－β、上皮成長因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子、例えばインスリン様成長因子－Ｉおよび－ＩＩ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ヘレグリン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）から選択される成長因子の改変型である。

【0084】

ある実施形態では、成長因子は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）の改変型である。例示的ＦＧＦとしては、限定されないが、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ネズミＦＧＦ１５、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、およびＦＧＦ２３が挙げられる。

【0085】

ある実施形態では、成長因子は、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）の改変型である。例示的なＴＧＦとしては、限定されないが、ＴＧＦ－αおよびＴＧＦ－β、ならびにそれらのサブタイプ、例えばＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３を含むＴＧＦ－βの種々のサブタイプなどが挙げられる。

【0086】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、限定されないが、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、アンドロゲン、エストロゲン、甲状腺刺激ホルモン、濾胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、プロラクチン、成長ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、抗利尿ホルモン、オキシトシン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、ソマトスタチン、ドーパミン、メラトニン、サイロキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アドレナリン、ノルアドレナリン、プロゲステロン、インスリン、グルカゴン、アミリン、カルシトリオール、カルシフェロール、心房性ナトリウム利尿ペプチド、ガストリン、セクレチン、コレシストキニン、ニューロペプチドＹ、グレリン、ＰＹＹ３－３６、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、レプチン、トロンボポエチン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、およびアンギオテンシノーゲンから選択されるホルモンの改変型である。

【0087】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、免疫調節薬、例えば、インターロイキン、インターフェロン、および腫瘍壊死因子の１種または複数である。

【0088】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターロイキンまたは改変インターロイキンであり、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－1４、ＩＬ－1５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＬ－３５、ＩＬ－３６またはそのフラグメント、バリアント、類似体、またはファミリーメンバーを含む。インターロイキンは、リンパ球、単球、およびマクロファージにより合成される多機能サイトカイン群である。既知の機能は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、およびリンパ球）の増殖の刺激、好中球およびＴリンパ球の遊走作用、および／またはインターフェロンの阻害を含む。インターロイキン活性は、当該技術分野において既知のアッセイを使用して測定できる（Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９８７，ｐｐ．２２１－２２５；ａｎｄ Ｏｒｅｎｃｏｌｅ ＆ Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １，１４－２０）。

【0089】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターフェロンまたはインターフェロンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ型などの改変型のインターフェロンである。インターフェロンの例としては、例えば、インターフェロン－α－１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、および２１、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、インターフェロンκ、インターフェロンε、インターフェロンτ、およびインターフェロンωが挙げられる。

【0090】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の改変型またはＴＮＦファミリーのタンパク質であり、限定されないが、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＬＴβ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、およびＴＲＡＩＬを含む。

【0091】

本明細書に記載の野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当該技術分野において、周知である。したがって、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質の既知の野生型アミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0092】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質のいずれかのアミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、６５％、または少なくとも約６６％、７０％、または少なくとも約７１％、７５％、または少なくとも約７６％、８０％、または少なくとも約８１％、８５％、または少なくとも約８６％、９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、本明細書の他の場所で記載のように、保存的置換および／または非保存的置換を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書の他の場所で記載のように、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。

【0094】

本明細書に記載のように、改変シグナル伝達物質は、１つまたは複数の受容体に対し親和性および／または活性に影響を与える変異を有する。いくつかの実施形態では、治療受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介される（例えば、アゴニズムまたはアンタゴニズム）受容体に対する低減された親和性および／または活性が存在する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介されない（例えば、結合の混乱状態の結果として）受容体に対する親和性および／または活性が実質的に低減または除去される変異を有する。改変シグナル伝達物質の受容体、例えば、本明細書に記載のサイトカイン、成長因子、およびホルモンの内の１つの受容体は当技術分野において既知である。

【0095】

受容体に対し低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）をもたらす変異の例は、国際公開第２０１３／１０７７９１号および国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号（例えば、インターフェロンに関して）、国際公開第２０１５／００７５４２号（例えば、インターロイキンに関して）、および国際公開第２０１５／００７９０３号（例えば、ＴＮＦに関して）で見出され、これらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。治療受容体に対する親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を低減する変異の例は、国際公開第２０１５／００７５２０号で見出され、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0096】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質のＩ型サイトカイン受容体、ＩＩ型サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーの受容体、ＴＧＦベータ受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体、および／またはチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体に対する親和性および／または活性を低減させる１個または複数の変異を含む。

【0097】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉ型サイトカイン受容体である。Ｉ型サイトカイン受容体は当技術分野において既知であり、限定されないが、ＩＬ２（ベータサブユニット）、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦに対する受容体、および同様に、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、プロラクチン、および成長ホルモンに対する受容体が挙げられる。例示Ｉ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、Ｇ－ＣＳＦ受容体、ＬＩＦ受容体、ＣＮＴＦ受容体、ＴＰＯ受容体、およびＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。

【0098】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＩＩ型サイトカイン受容体である。ＩＩ型サイトカイン受容体は、異種のサブユニットからなる多量体受容体であり、主にインターフェロンに対する受容体である。この受容体ファミリーとしては、限定されないが、インターフェロン－ａ、インターフェロン－βおよびインターフェロン－γ、ＩＬ１０、ＩＬ２２、および組織因子に対する受容体が挙げられる。例示ＩＩ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、IFN-ａ受容体（例えば、IFN-ＡＲ１およびIFN-ＡＲ２）、IFN-３受容体、IFN-ｙ受容体（例えば、IFN-ＧＲ１およびIFN-ＧＲ２）、およびＩＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。

【0099】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｇタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体は、７回膜貫通型構造を有し、シグナル伝達のためにＧタンパク質に結合されるＧタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体としては、限定されないが、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、およびＸＣケモカイン受容体（ＸＣＲ１）が挙げられる。例示的ケモカイン受容体としては、限定されないが、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲＳ、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲＳ、ＣＳＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１、およびＣＸ３ＣＲ１が挙げられる。

【0100】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＮＦＲファミリーメンバーである。腫瘍壊死因子受容体（ＴＦＮＲ）ファミリーメンバーは、細長い分子を作成するＣＸＸＣＸＸＣのコアモチーフを取り囲む３つのジスルフィド結合から形成されるシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を共有する。例示的腫瘍壊死因子受容体ファミリーとしては、下記が挙げられる：ＣＤＩ２０ａ（ＴＮＦＲＳＦＩＡ）、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦＩＢ）、リンホトキシンベータ受容体（ＬＴＢＲ、ＴＮＦＲＳＦ３）、ＣＤ１３４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＣＤ４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦＳ）、ＦＡＳ（ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ）、ＣＤ２７（ＣＤ２７、ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９）、ＴＮＦＲＳＦＩＯＡ（ＴＮＦＲＳＦＩＯＡ）、ＴＮＦＲＳＦＩＯＢ、（ＴＮＦＲＳＦＩＯＢ）、ＴＮＦＲＳＦＩＯＣ（ＴＮＦＲＳＦＩＯＣ）、ＴＮＦＲＳＦＩＯＤ（ＴＮＦＲＳＦＩＯＤ）、ＲＡＮＫ（ＴＮＦＲＳＦＩ ＩＡ）、破骨細胞分化抑制因子（ＴＮＦＲＳＦＩ ＩＢ）、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ、ＴＮＦＲＳＦ１６）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＴＮＦＲＳＦ２１）、およびＴＮＦＲＳＦ２５（ＴＮＦＲＳＦ２５）。ある実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）またはＴＮＦ－Ｒ１である。別の実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦＩＢ）またはＴＮＦ－Ｒ２である。

【0101】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＧＦベータ受容体である。ＴＧＦベータ受容体は、１回膜貫通型セリン／トレオニンキナーゼ受容体である。ＴＧＦベータ受容体としては、限定されないが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、およびＴＧＦＢＲ３が挙げられる。

【0102】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉｇスーパーファミリー受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体は、免疫グロブリンとの構造的相同性を共有する。Ｉｇスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、インターロイキン－１受容体、ＣＳＦ－１Ｒ、ＰＤＧＦＲ（例えば、ＰＤＧＦＲＡおよびＰＤＧＦＲＢ）、およびＳＣＦＲが挙げられる。

【0103】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、チロシンキナーゼスーパーファミリー受容体である。チロシンキナーゼチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体は、当該技術分野において周知である。２０のサブファミリーに分類される約５８個の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が存在する。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、ＦＧＦ受容体およびそれらの種々のアイソフォーム、例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、およびＦＧＦＲ５が挙げられる。

【0104】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インターフェロンαである。いくつかの実施形態では、改変IFN-α物質は、IFN-α／β受容体（IFN-ＡＲ）、すなわち、IFN-ＡＲ１および／またはIFN-ＡＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変IFN-α物質は、IFN-α／β受容体（IFN-ＡＲ）、すなわち、IFN-ＡＲ１および／またはIFN-ＡＲ２鎖に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変IFN-α物質は、ヒト改変IFN-α物質である。

【0105】

変異型のインターフェロンは、当業者に既知である。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号１７６のアミノ酸配列を有するアレル型IFN-α２ａである。

【0106】

限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸位置２３でIFN-α２ａと異なる配列番号１７７のアミノ酸配列を有するアレル型のIFN-α－２ｂである。

【0107】

いくつかの実施形態では、改変IFN-α２シグナル伝達物質は、ヒトIFN-α２変異体（IFN-α－２ａまたはIFN-α２ｂ）である。いくつかの実施形態では、ヒトIFN-α２変異体（IFN-α２ａまたはIFN-α２ｂ）は、位置１４４～１５４、例えば、アミノ酸位置１４８、１４９および／または１５３で、１個または複数のアミノ酸の変異が導入されている。いくつかの実施形態では、ヒトIFN-α２変異体は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＭ１４８Ａから選択される１個または複数の変異を含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、IFN-α２変異体は、IFN-ＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、IFN-α２変異体は、国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、およびＹ８９Ａから選択される１個または複数の変異を含むヒトIFN-α２変異体である。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0109】

いくつかの実施形態では、IFN-α２変異体は、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含むヒトIFN-α２変異体である。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0110】

いくつかの実施形態では、IFN-α２変異体は、国際公開第２０１５／００７５２０号および国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異を含むヒトIFN-α２変異体である。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、IFN-α２変異体は、野生型IFN-α２活性をアンタゴナイズする。いくつかの実施形態では、上記変異体IFN-α２は、IFN-ＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有するが、IFN-ＡＲ２に対する活性は保持される。

【0111】

いくつかの実施形態では、ヒトIFN-α２変異体は、（１）Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらはアンタゴニスト効果を作り出す）、および（２）Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらは、例えば、IFN-ＡＲ２に対する減弱化効果を可能とする）を含む。いくつかの実施形態では、ヒトIFN-α２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＬ１５３Ａを含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、ヒトIFN-α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示のように、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａから選択される１個または複数の変異を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトIFN-α２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ３０Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトIFN-α２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＲ３３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトIFN-α２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＭ１４８Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトIFN-α２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ１５３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトIFN-α２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、および／またはＹ８９Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトIFN-α２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａおよび／またはＤ１１４Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトIFN-α２変異体は、変異Ｒ１４４Ｘ_１、Ａ１４５Ｘ_２、およびＲ３３Ａを含み、ここでＸ_１は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、Ｘ_２は、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択される。

【0113】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンβである。このような実施形態では、改変インターフェロンβ物質は、IFN-α／β受容体（IFN-ＡＲ）、すなわち、IFN-ＡＲ１および／またはIFN-ＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変IFN-β物質は、IFN-α／β受容体（IFN-ＡＲ）、すなわち、IFN-ＡＲ１および／またはIFN-ＡＲ２鎖に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0114】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はIFN-βである。いくつかの実施形態では、IFN-βは、官能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはIFN-βのフラグメントを包含する。いくつかの実施形態では、IFN-βは、任意の種由来のIFN-βを包含する。ある実施形態では、キメラタンパク質は、改変型のマウスIFN-βを含む。ある実施形態では、キメラタンパク質は、改変型のヒトIFN-βを含む。ヒトIFN-βは、１６６個のアミノ酸残基を含む約２２ｋＤａの分子量を有するポリペプチドである。ヒトIFN-βのアミノ酸配列は、配列番号１７８として示される。

【0115】

いくつかの実施形態では、IFN-βは、ヒトIFN-βのグリコシル化型であるIFN-β－Ｉａである。いくつかの実施形態では、IFN-βは、Ｍｅｔ－１欠失およびＣｙｓ－１７のＳｅｒへの変異を有する非グリコシル化型のヒトIFN-βであるIFN-β－Ｉｂである。

【0116】

いくつかの実施形態では、改変IFN-βは、IFN-ＡＲのIFN-ＡＲ１サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、改変IFN-βは、IFN-ＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、IFN-ＡＲ１で低減された親和性および／または活性を有する改変IFN-βは、ヒトIFN-βであり、位置Ｆ６７、Ｒ７１、Ｌ８８、Ｙ９２、１９５、Ｎ９６、Ｋ１２３、およびＲ１２４に１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、Ｆ６７Ｇ、Ｆ６７Ｓ、Ｒ７１Ａ、Ｌ８８Ｇ、Ｌ８８Ｓ、Ｙ９２Ｇ、Ｙ９２Ｓ、１９５Ａ、Ｎ９６Ｇ、Ｋ１２３Ｇ、およびＲ１２４Ｇから選択される置換である。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｆ６７Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｋ１２３Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｆ６７ＧおよびＲ７１Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｌ８８ＧおよびＹ９２Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｙ９２Ｇ、１９５Ａ、およびＮ９６Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｋ１２３ＧおよびＲ１２４Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｆ６７Ｇ、Ｌ８８Ｇ、およびＹ９２Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｆ６７Ｓ、Ｌ８８Ｓ、およびＹ９２Ｓ変異を含む。

【0117】

いくつかの実施形態では、改変IFN-βは、IFN-ＡＲのIFN-ＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、改変IFN-βは、IFN-ＡＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、IFN-ＡＲ２で親和性および／または活性が低減された改変IFN-βは、ヒトIFN-βであり、位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇ、およびＹ１５５Ｇから選択される置換である。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｗ２２Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｌ３２Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｌ３２Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｒ３５Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｒ３５Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｖ１４８Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｒ１５２Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｒ１５２Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｙ１５５Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｗ２２ＧおよびＲ２７Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｌ３２ＡおよびＲ３５Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｌ１５１ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ヒトIFN-βは、Ｖ１４８ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、改変IFN-βは、１個または複数の次の変異を有する：Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。いくつかの実施形態では、改変IFN-βは、１個または複数の次の変異を有する：Ｃ１７５またはＭＡと組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。

【0119】

いくつかの実施形態では、改変IFN-βは、１個または複数の次の変異を有する：本明細書で記載の他のIFN-β変異と組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。

【0120】

ヒトIFN-βの結晶構造は既知であり、Ｋａｒｐｕｓａｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ，９４（２２）：１１８１３－１１８１８に記載されている。特に、ヒトIFN-βの構造は、５つのａ－ヘリックス（すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ）およびこれらのヘリックスを連結する４つのループ領域（すなわち、ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ）を含むことが示された。いくつかの実施形態では、改変IFN-βは、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅヘリックスおよび／またはＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ中に、IFN-ＡＲなどの治療受容体に対するその結合親和性または活性を低減させる１個または複数の変異を有する。例示的変異は、国際公開第２０００／０２３１１４号および米国特許出願公開第２０１５００１１７３２号に記載されている。これらの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、改変IFN-βは、アミノ酸位置１５、１６、１８、１９、２２、および／または２３にアラニン置換を含むヒトIFN-βである。例示的実施形態では、改変IFN-βは、アミノ酸位置２８～３０、３２、および３３にアラニン置換を含むヒトIFN-βである。例示的実施形態では、改変IFN-βは、アミノ酸位置３６、３７、３９、および４２にアラニン置換を含むヒトIFN-βである。例示的実施形態では、改変IFN-βは、アミノ酸位置６４および６７にアラニン置換を含み、位置６８にセリン置換を含むヒトIFN-βである。例示的実施形態では、改変IFN-βは、アミノ酸位置７１～７３にアラニン置換を含むヒトIFN-βである。例示的実施形態では、改変IFN-βは、アミノ酸位置９２、９６、９９、および１００にアラニン置換を含むヒトIFN-βである。例示的実施形態では、改変IFN-βは、アミノ酸位置１２８、１３０、１３１、および１３４にアラニン置換を含むヒトIFN-βである。例示的実施形態では、改変IFN-βは、アミノ酸位置１４９、１５３、１５６、および１５９にアラニン置換を含むヒトIFN-βである。いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＷ２２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0121】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＲ２７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0122】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＷ２２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ２７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0123】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＬ３２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0124】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＲ３５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0125】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＬ３２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ３５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0126】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0127】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＲ７１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0128】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ７１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0129】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0130】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0131】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0132】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0133】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８および１９５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0134】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＮ９６での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0135】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、および１９５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＮ９６での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0136】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＫ１２３での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0137】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＲ１２４での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0138】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＫ１２３での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１２４での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0139】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＬ１５１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0140】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0141】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＬ１５１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0142】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＶ１４８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびメチオニン（Ｍ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0143】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＶ１４８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0144】

いくつかの実施形態では、変異体IFN-βは、配列番号１７８およびＹ１５５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0145】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、（a）配列番号１７８のアミノ酸配列および位置Ｗ２２での変異を有し、変異は脂肪族疎水性残基である改変IFN-β；および（ｂ）１つまたは複数のターゲティング部分を含むキメラタンパク質に関し、上記ターゲティング部分は、目的の抗原または受容体（例えば、ＦＡＰ）に特異的に結合する認識ドメインを含み、改変IFN-βおよびターゲティング部分は、１個または複数のリンカーと任意に結合されてもよい。いくつかの実施形態では、位置Ｗ２２の変異は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、およびＶから選択される脂肪族疎水性残基である。いくつかの実施形態では、位置Ｗ２２での変異はＧである。

【0146】

追加の例示的IFN-β変異体は、国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号で提供される。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0147】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンγである。このような実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（IFN-ＧＲ）、すなわち、IFN-ＧＲ１および／またはIFN-ＧＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（IFN-ＧＲ）、すなわち、IFN-ＧＲ１および／またはIFN-ＧＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0148】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、コンセンサスインターフェロンである。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号１７９のアミノ酸を含む。

【0149】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号１７９を基準にして、位置３３および／または１４５～１５５、例えばアミノ酸位置１４５、１４６、１４９、１５０および／または１５４で、１個または複数のアミノ酸の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号１７９を基準にして、位置３３および／または１４５～１５５、例えばアミノ酸位置１４５、１４６、１４９、１５０および／または１５４で、１個または複数のアミノ酸の変異を有するように改変され、置換は、任意に疎水性であり、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンから選択される。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロン変異体は、配列番号１７９を基準にして、Ｒ３３Ａ、Ｒ１４５Ｘ_１、Ａ１４６Ｘ_２、Ｍ１４９Ａ、Ｒ１５０Ａ、およびＬ１５４Ａから選択される１個または複数の変異を含み、Ｘ_１は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、Ｘ_２は、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択される。

【0150】

ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号１７９を基準にして、アミノ酸位置１２１に変異（すなわち、Ｋ１２１）を有するように改変される。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号１７９を基準にして、Ｋ１２１Ｅ変異を含む。

【0151】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、同第５，５４１，２９３号、および同第８，４９６，９２１号で開示されるコンセンサスインターフェロンバリアントのいずれかを含む。これらの全文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例えば、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、および同第５，５４１，２９３号で開示のような、IFN-ＣＯＮ２またはIFN-ＣＯＮ３のアミノ酸配列を含み得る。

【0152】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）である。ＶＥＧＦは、生理学的であるが病的でもある血管新生において重要な役割を果たし、血管透過性を調節し、ＶＥＧＦ受容体を発現する細胞に対して成長因子として作用できる、強力な成長因子である。さらなる機能は、特に、マクロファージ系統および内皮細胞の細胞遊走の刺激を含む。少なくとも３個の受容体（ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２およびＶＥＧＦＲ３）に加えて、ＶＥＧＦ成長因子ファミリーのいくつかのメンバーが存在する。ＶＥＧＦファミリーのメンバーは、２種以上のＶＥＧＦＲタイプを結合し活性化できる。例えば、ＶＥＧＦ－Ａは、ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２を結合し、一方、ＶＥＧＦ－Ｃは、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３を結合できる。ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２活性化は、血管新生を調節し、ＶＥＧＦＲ３活性化は、リンパ脈管新生に関与する。大部分の血管新生促進シグナルは、ＶＥＧＦＲ２の活性化から生成される。ＶＥＧＦＲ１活性化は、血管新生の負の役割と関連する可能性があることが報告された。ＶＥＧＦＲ１シグナル伝達は、腫瘍の骨髄由来ＶＥＧＦＲ１陽性細胞を介したｉｎ ｖｉｖｏ進行にも重要である（骨中の転移前微小環境の形成の一因となる）ことも報告された。治療抗体に向けられた／治療抗体を中和するＶＥＧＦ－Ａをベースにしたいくつかの治療法が、主に、血管新生に依存する種々のヒト腫瘍の治療での使用のために開発されてきた。しかし、これらは、副作用がないわけではない。これは、これらが一般的な非細胞／組織特異的ＶＥＧＦＮＥＧＦＲ相互作用阻害剤として作用することを考慮すると驚くべきことではない。従って、特定の標的細胞（例えば、腫瘍血管系内皮細胞）に対するＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ）ＮＥＧＦＲ－２阻害を制限することが望ましいであろう。

【0153】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、またはＶＥＧＦ－ＥおよびＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１２１ｂ、ＶＥＧＦ_１４５、ＶＥＧＦ_１６５、ＶＥＧＦ_１６５ｂ、ＶＥＧＦ_１８９、およびＶＥＧＦ_２０６などの種々のＶＥＧＦ－Ａのアイソフォームを含むこれらのアイソフォームである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷治癒方法または虚血関連疾患の治療で使用される（理論に束縛されることを意図するものではないが、内皮細胞機能および血管新生に対するＶＥＧＦＲ２の効果により媒介されて）。いくつかの実施形態では、癌および炎症促進性活性と関連するＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）への結合が回避される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）は、デコイ受容体として機能し、そのため、この受容体に対する親和性を実質的に低減または除去し、治療薬の隔離を回避する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ－ＣまたはＶＥＧＦ－Ｄである。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する低減された親和性および／または活性を有する。あるいは、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0154】

血管新生促進治療法はまた、種々の疾患（例えば、虚血性心疾患、出血など）において重要であり、ＶＥＧＦベース治療薬を含む。ＶＥＧＦＲ２の活性化は血管新生促進性である（内皮細胞上で作用する）。ＶＥＧＦＲ１は、炎症細胞（例えば、マクロファージを含む）の遊走の刺激を生じ、血管過多透過性に関連する炎症をもたらし得る。ＶＥＧＦＲ１の活性化はまた、腫瘍微小環境形成に関連する骨髄を活性化できる。従って、ＶＥＧＦＲ２活性化に対し選択性があるＶＥＧＦベース治療薬は、この場合には望ましいであろう。さらに、例えば、内皮細胞を特異的に標的とする細胞が望ましいであろう。

【0155】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、拮抗的な）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。腫瘍内皮細胞マーカー（例えば、ＰＳＭＡなど）に結合するターゲティング部分を介して腫瘍血管系内皮細胞を標的にする場合、このような構築物は、このようなマーカー陽性細胞上で特異的にＶＥＧＦＲ２活性化を阻害するが、標的細胞へ向かう途上および標的細胞上では（活性が除去された場合）ＶＥＧＦＲ１を活性化せず、従って、例えば、炎症反応の誘導を無くする。これは、ＶＥＧＦ－Ａ中和療法に比べて、多くの腫瘍型に対するより選択的で安全な抗血管新生薬療法を提供することになろう。

【0156】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。血管内皮細胞への標的化により、いくつかの実施形態では、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ－１が関連する炎症反応誘導を生じることなく、血管新生を促進する。従って、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ－２ならびにＶＥＧＦＲ－１の全身性活性化に起因する副作用の実質的に低減されたリスクを有する、標的化血管新生促進効果を有するであろう。

【0157】

ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＶＥＧＦ１６５（野生型）である。

【0158】

別の例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＶＥＧＦ１６５ｂ（野生型）である。

【0159】

これらの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸１８３に変異を有する（例えば、１８３での置換変異、例えば、１８３Ｋ、１８３Ｒ、または１８３Ｈ）。理論に束縛されることを意図するものではないが、このような変異は、低減された受容体結合親和性を生じ得ると考えられている。例えば、米国特許第９，０７８，８６０号を参照されたい。この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0160】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦαである。ＴＮＦは、細胞増殖、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞機能および輸送、炎症、ならびに敗血性ショックの調節を含む、多くの多様な機能を有する多面的サイトカインである。それは、標的細胞：ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＴＮＦＲ２（ｐ７５）上の２つの別々の膜受容体に結合する。ＴＮＦＲ１は非常に広範な発現パターンを示すが、ＴＮＦＲ２はリンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、特定のニューロン、ミクログリア、心筋細胞および間葉系幹細胞の特定の集団上で選択的に発現される。受容体活性化に応答して、全く別々の生物学的経路が活性化されるが、若干の重なり合いも存在する。一般原則として、理論に束縛されることを望むものではないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導に関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化に関連する（例えば、ＮＦκＢ経路の活性化）。
ＴＮＦの投与は、全身的毒性であり、これは主にＴＮＦＲ１の関与のためである。しかし、ＴＮＦＲ２の活性化もまた、ＴＮＦＲ１と同様に、多様な作用に関連し、ＴＮＦ系治療薬の開発においては、ＴＮＦターゲティングおよび活性に対する制御が重要であることに留意されたい。

【0161】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＴＮＦＲ１はほとんどの組織で発現され、かつ細胞死シグナル伝達に関与するが、対照的に、ＴＮＦＲ２は細胞生存シグナルに関与する。したがって、癌の治療法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。これらの実施形態では、キメラタンパク質は、アポトーシスが望ましい細胞、例えば、腫瘍細胞または腫瘍血管内皮細胞を標的にし得る。例えば、神経変性障害の治療のためのニューロン新生における、細胞生存を促進する方法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。言い方を変えれば、本キメラタンパク質は、いくつかの実施形態では、死シグナルまたは生存シグナルのどちらかを優先できる改変ＴＮＦ－ａ物質を含む。

【0162】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦおよび／またはＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性をもたらす変異のみを有するキメラに比べて、より強力なアポトーシスの誘導因子である。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞死または腫瘍血管内皮細胞死の誘導に使用される（例えば、癌の治療において）。また、いくつかの実施形態では、これらのキメラは、例えば、ＴＮＦＲ２を介してＴｒｅｇ細胞の活性化を回避または低減し、したがってｉｎ ｖｉｖｏでＴＮＦＲ１介在性抗腫瘍活性をさらに支持する。

【0163】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、いくつかの細胞型での細胞生存のより強力な活性化因子であり、これは種々の疾患における具体的治療目的であり得、限定されないが、ニューロン新生の刺激を含む。さらに、このようなＴＮＦＲ２選択キメラはまた、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎など、および本明細書に記載の多くの他の疾患）の治療において有用である。いくつかの実施形態では、キメラは自己反応性Ｔ細胞を標的にする。いくつかの実施形態では、キメラは、Ｔ_ｒｅｇ細胞活性化および細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。

【0164】

いくつかの実施形態では、キメラは、例えば、ＴＮＦＲ２の活性化および／またはＴＮＦＲ１の回避により（例えば、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦにより）自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、ＮＦκＢ経路活性／シグナル伝達の変化により、変更されたアポトーシス／生存シグナルを有する。いくつかの実施形態では、キメラは、細胞死（アポトーシス）／生存シグナル特性の不均衡の根底にある、ＮＦκＢ経路での損傷または変更および、場合により特定の死誘導シグナルに対する変更された感受性（例えば、ＴＮＦＲ２活性化）を有する自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。

【0165】

いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２ベースキメラは、種々の自己免疫疾患、特に、心臓疾患、脱髄性および神経変性障害、および感染症を含む疾患に対する追加の治療用途を有する。

【0166】

ある実施形態では、野生型ＴＮＦαは、配列番号１８２のアミノ酸配列を有する。

【0167】

このような実施形態では、改変ＴＮＦα物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置２９、３１、３２、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１４５、１４６および１４７に変異を有し、これが、低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦαをもたらす。例えば、米国特許第７，９９３，６３６号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0168】

いくつかの実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、改変ヒトＴＮＦα部分は、アミノ酸位置Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、Ａ１４５、およびＥ１４６の内の１つまたは複数に変異を有する（ジェンバンク受入番号ＢＡＧ７０３０６、バージョンＢＡＧ７０３０６．１ ＧＩ：１９７６９２６８５、ヒトＴＮＦ配列に従ってナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、Ｌ２９Ｓ、Ｒ３２Ｇ、Ｒ３２Ｗ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｓ８６Ｔ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｙ８７Ｈ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、１９７Ａ、１９７Ｑ、１９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、Ｅ１４６Ｋ、およびＳ１４７Ｄから選択される置換変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、およびＹ８７Ｆ、およびＹ８７Ｈから選択される変異を有する。別の実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、１９７Ａ、１９７Ｑ、および１９７Ｓから選択される変異を有する。さらなる実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ１１５ＡおよびＹ１１５Ｇから選択される変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｅ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７ＨおよびＥ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７ＨおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２ＷおよびＳ８６Ｔ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２ＷおよびＥ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｌ２９ＳおよびＲ３２Ｗ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｄ１４３ＮおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｄ１４３ＮおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ａ１４５Ｔ、およびＳ１４７Ｄ変異を有する。

【0169】

いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、改変ＴＮＦα物質は、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、およびＹ８７Ｈから選択される１個または複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0170】

いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載のような受容体選択性をもたらす変異を有する。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ１選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ｒ３２、Ｓ８６、およびＥ１４６の内の１つまたは複数に対するものである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ８６Ｔ、およびＥ１４６Ｋの内の１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｒ３２Ｗ／Ｓ８６Ｔ、Ｒ３２Ｗ／Ｅ１４６ＫおよびＥ１４６Ｋの内の１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ２選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ａ１４５、Ｅ１４６、およびＳ１４７の内の１個または複数に対するものである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄの内の１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ／Ｓ１４７Ｄ、およびＡ１４５Ｔ／Ｅ１４６Ｄ／Ｓ１４７Ｄの内の１個または複数である。

【0171】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦβである。ＴＮＦβは、ＬＴβ（ＬＴα１β２）と、ホモトリマーまたはヘテロトリマーを形成する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）および／またはＬＴβＲに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0172】

ある実施形態では、野生型ＴＮＦβは、配列番号１８３のアミノ酸配列を有する。

【0173】

このような実施形態では、改変可溶性物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置１０６～１１３に変異を含み得、これが、ＴＮＦＲ２に対する低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦβをもたらす。ある実施形態では、改変可溶性物質は、アミノ酸位置１０６～１１３に１個または複数の置換変異を有する。いくつかの実施形態では、置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、およびＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変可溶性物質は、位置１０６～１１３に、約１～約３個のアミノ酸の挿入を有する。

【0174】

いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、単鎖トリマー型であり得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0175】

いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ１に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これもまた、場合により、ＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ２に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態の構築物は、例えば、細胞特異的な様式でＴＮＦ応答を抑制する方法において使用される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）は、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、単鎖トリマー型である。

【0176】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。

【0177】

ある実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬは、配列番号１８４のアミノ酸配列を有する。

【0178】

このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、アミノ酸位置Ｔ１２７～Ｒ１３２、Ｅ１４４～Ｒ１４９、Ｅ１５５～Ｈ１６１、Ｙ１８９～Ｙ２０９、Ｔ２１４～１２２０、Ｋ２２４～Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６～Ｌ２３９、Ｅ２４９～Ｋ２５１、Ｔ２６１～Ｈ２６４およびＨ２７０～Ｅ２７１に変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿００３８０１、バージョン１０ＮＰ＿００３８０１．１、ＧＩ：４５０７５９３、ヒト配列に基づいてナンバリング；上記参照）。

【0179】

いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１に対するその親和性および／または活性を実質的に低減する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＩＬ－Ｒ２に特異的に結合し得る。例示的変異は、アミノ酸位置Ｙ１８９、Ｒ１９１、Ｑ１９３、Ｈ２６４、１２６６、およびＤ２６７の内の１つまたは複数で変異を含む。例えば、変異は、Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、１２６６ＬおよびＤ２６７Ｑの内の１個または複数であり得る。ある実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、変異Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、１２６６ＬおよびＤ２６７Ｑを含む。

【0180】

いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２に対するその親和性および／または活性を実質的に低減する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＩＬ－Ｒ１に特異的に結合し得る。例示的変異には、アミノ酸位置Ｇ１３１、Ｒ１４９、Ｓ１５９、Ｎ１９９、Ｋ２０１、およびＳ２１５の内の１つまたは複数に変異を含む。例えば、変異は、Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９１、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、およびＳ２１５Ｄの内の１個または複数であり得る。ある実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、変異Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９１、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、およびＳ２１５Ｄを含む。さらなるＴＲＡＩＬ変異は、例えば、Ｔｒｅｂｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，５：ｅ１０３５に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0181】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＧＦαである。このような実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0182】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＧＦβである。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、これは、理論に束縛されることを意図するものではないが、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβは、ＴＧＦＢＲ２よりもＴＧＦＢＲ１またはＴＧＦＢＲ１よりもＴＧＦＢＲ２を選択する。同様に、理論に束縛されることを意図するものではないが、ＬＡＰは、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／または潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、このようなキメラは、カムラチ・エンゲルマン病、または不適切なＴＧＦβシグナル伝達に関連する他の疾患において使用される。

【0183】

いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３の内の１種または複数に対し、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３の内の１種または複数に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0184】

いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対して、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0185】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターロイキンである。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ－１である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ－１αまたはＩＬ－１βである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１Ｒ１および／またはＩＬ－１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１Ｒ１および／またはＩＬ－１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１Ｒ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、本改変ＩＬ－１物質は、ＩＬ－１Ｒ２に対する相互作用を回避し、したがって、治療薬に対するデコイおよび／またはシンクとしてのその機能を実質的に低減する。

【0186】

ある実施形態では、野生型ＩＬ－１βは、配列番号１８５のアミノ酸配列を有する。

【0187】

ＩＬ－１は、炎症促進性のサイトカインであり、重要な免疫系制御因子である。それは、ＣＤ４ Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の比率を高め、IFN-γおよびＩＬ４産生細胞の増殖を増大させる。ＩＬ－１はまた、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の強力な制御因子であり、抗原特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞増殖、分化、周辺部への移動および記憶を強化する。ＩＬ－１受容体は、ＩＬ－１Ｒ１およびＩＬ－１Ｒ２を含む。ＩＬ－１Ｒ１への結合およびＩＬ－１Ｒ１を介したシグナル伝達は、それによりＩＬ－１が多くのその生物学的（および病理学的）作用を媒介する機序を構成する。ＩＬ－１Ｒ２は、デコイ受容体として機能でき、それにより、ＩＬ－１Ｒ１を介した相互作用およびシグナル伝達のためのＩＬ－１の利用可能性を減らす。

【0188】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ１に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、回復可能なＩＬ－１／ＩＬ－１Ｒ１シグナル伝達ならびにＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果としての必要なＩＬ－１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を刺激して抗癌応答を開始することを含む、例えば、癌を治療する方法で使用される。

【0189】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、ＩＬ－１／ＩＬ－１Ｒ１シグナル伝達は回復可能でなく、また、ＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果として必要とされるＩＬ－１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を抑制することを含む、例えば、自己免疫疾患を治療する方法で使用される。

【0190】

このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５２～５４の欠失を有し、これは、Ｉ型ＩＬ－１Ｒに対して、低減された結合親和性および低減された生物活性を有する改変ヒトＩＬ－１βを産生する。例えば、国際公開第１９９４／０００４９１号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑから選択される１個または複数の置換変異（Ｘはアミノ酸の任意の変化、例えば、非保存的変化であり得る）を有し、これらは、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号および国際公開第２０１５／００７５３６号に記載のように、ＩＬ－１Ｒに対し低減された結合を示す（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０００５６７、バージョンＮＰ－０００５６７．１、ＧＩ：１０８３５１４５、ヒトＩＬ－１β配列に基づいてナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１ＳおよびＥ２２１Ｋから選択される１個または複数の変異を有し得る。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｑ１３１ＧおよびＱ１４８Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｑ１４８ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＱ１３１Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ａを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｎを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｒを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、変異Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、およびＱ１６４Ｅを含む。

【0191】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-２Ｒαおよび／またはＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-２Ｒαに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、改変ＩＬ２がＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対し拮抗的である場合、癌の治療に適切であり得る。例えば、本発明の構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８^＋ Ｔ細胞（抗腫瘍効果を与えることができる）の減弱化された活性化を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴ_ｒｅｇ（免疫抑制効果、腫瘍促進効果を与えることができる）を優先しない。さらに、いくつかの実施形態では、ＩＬ-２ＲαよりもＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対する選択性は、肺水腫などのＩＬ２副作用を回避させる。また、ＩＬ２ベースキメラは、例えば、改変ＩＬ２が、ＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対してアンタゴニスト（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）である場合、自己免疫疾患の治療に有用である。例えば、本発明の構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８^＋ Ｔ細胞の抑制の減弱化（したがって、免疫応答を抑制する）を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴ_ｒｅｇを優先しない。あるいは、いくつかの実施形態では、ＩＬ２を有するキメラは、Ｔ_ｒｅｇの活性化、したがって免疫抑制を優先し、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の活性化を優先しない。例えば、これらの構築物は、疾患または免疫抑制により恩恵を受けると思われる疾患、例えば、自己免疫障害の治療に使用される。

【0192】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＦＡＰ＋樹状細胞に向けられた本明細書に記載のターゲティング部分を有し、改変ＩＬ２物質は、ＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性および／またはＩＬ-２Ｒαに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、これらの構築物は、ＦＡＰ＋樹状細胞活性を標的とし、通常、Ｔ_ｒｅｇ細胞に対して不活性である（または実質的に低減された活性を有する）。いくつかの実施形態では、このような構築物は、野生型ＩＬ２に比べて、高められた免疫刺激効果を有し（理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことにより）、一方で、ＩＬ２に関連する全身毒性を除去または低減する。

【0193】

いくつかの実施形態では、野生型ＩＬ２は、配列番号１８６のアミノ酸配列を有する。

【0194】

このような実施形態では、改変ヒトＩＬ２物質は１個または複数の変異を、アミノ酸Ｌ７２の位置（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２５、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、またはＬ７２Ｋ）、Ｆ４２の位置（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、またはＦ４２Ｋ）およびＹ４５の位置（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５ＲまたはＹ４５Ｋ）で有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ２物質は、野性型ＩＬ２と比べて、高親和性ＩＬ２受容体に対して低減された親和性を有し、中間的親和性ＩＬ２受容体に対しては親和性をそのまま維持すると考えられる。例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１１２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0195】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、アミノ酸位置Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、およびＥ６２に１個または複数の変異を有する。例えば、改変ＩＬ２物質は、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、およびＥ６２Ａの内の１個または複数を含み得る。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｃ１２５で変異を含み得る。例えば、Ｃ１２５Ｓであってよい。このような実施形態では、改変ＩＬ２物質は、例えば、Ｃａｒｍｅｎａｔｅ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９０：６２３０－６２３８に記載されているように、ＩＬ-２Ｒαに対して実質的に低減された親和性および／または活性を有し得る。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、および／またはＥ６２に変異を有する改変ＩＬ２物質は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＮＫ細胞を含むが、Ｔｒｅｇ細胞を含まない、エフェクター細胞の増殖を誘導できる。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、および／またはＥ６２に変異を有する改変ＩＬ２物質は、野生型ＩＬ２物質よりも少ない毒性である。ＩＬ-２Ｒαに対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ２物質を含むキメラタンパク質は、例えば、腫瘍学において用途が見出され得る。他の実施形態では、改変ＩＬ２物質は、例えば、国際公開第２０１６／０２５３８５号に記載されているように、ＩＬ-２Ｒβに対して実質的に低減された親和性および／または活性を有し得る。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｔｒｅｇ細胞の増殖を誘導し得るが、ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＮＫ細胞などのエフェクター細胞の増殖を誘導し得ない。ＩＬ-２Ｒβに対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ２物質を含むキメラタンパク質は、例えば、自己免疫疾患の治療で用途が見出され得る。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、アミノ酸位置Ｎ８８、Ｄ２０、および／またはＡ１２６に１個または複数の変異を有し得る。例えば、改変ＩＬ２物質は、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８１、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２ＯＨ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆの内の１個または複数を含み得る。

【0196】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｄ１０９またはＣ１２５に変異を含み得る。例えば、変異は、Ｄ１０９ＣまたはＣ１２５Ｓであってよい。いくつかの実施形態では、Ｄ１０９またはＣ１２５に変異を有する改変ＩＬ２は、ＰＥＧ部分への結合のために利用され得る。

【0197】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ３である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対して実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。

【0198】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ４である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。１型ＩＬ４受容体は、共通のγ鎖を有するＩＬ４Ｒαサブユニットから構成され、ＩＬ４を特異的に結合する。２型ＩＬ４受容体は、ＩＬ－１３Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合したＩＬ４Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0199】

いくつかの実施形態では、野生型ＩＬ４は、配列番号１８７のアミノ酸配列を有する。

【0200】

このような実施形態では、改変ＩＬ４物質は、アミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）およびＳ１２５（Ｓ１２５Ａ）に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ４物質は、Ｉ型受容体により媒介される活性を維持するが、その他の受容体により媒介される生物活性を顕著に低減すると考えられる。例えば、米国特許第６，４３３，１５７号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0201】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ６である。ＩＬ６は、リガンド結合ＩＬ６Ｒ鎖（ＣＤ１２６）およびシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介して信号を伝達する。ＩＬ６はまた、可溶性型のＩＬ６Ｒ（ｓＩＬ６Ｒ）にも結合し得、これは、ＩＬ６Ｒの細胞外の部分である。ｓＩＬ６Ｒ／ＩＬ６複合体は、神経突起の成長およびニューロンの生存に関与し、したがって、再ミエリン化による神経再生に重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0202】

いくつかの実施形態では、野生型ＩＬ６は、配列番号１８８のアミノ酸配列を有する。

【0203】

このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５８、１６０、１６３、１７１または１７７に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ６物質は、ＩＬ６Ｒアルファに対し低減された結合親和性および低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第９７／１０３３８号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0204】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ－１０である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１０受容体１およびＩＬ－１０受容体２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１０受容体１およびＩＬ－１０受容体２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0205】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ－１１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１１Ｒαおよび／またはＩＬ－１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１１Ｒαおよび／またはＩＬ－１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0206】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ－１２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１２Ｒβ１および／またはＩＬ－１２Ｒβ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１２Ｒβ１および／またはＩＬ－１２Ｒβ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0207】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ－１３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）およびＩＬ－１３Ｒα１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）またはＩＬ－１３Ｒα１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0208】

いくつかの実施形態では、野生型ＩＬ－１３は、配列番号１８９のアミノ酸配列を有する。

【0209】

このような実施形態では、改変ＩＬ－１３物質は、アミノ酸１３、１６、１７、６６、６９、９９、１０２、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３および１１４に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ－１３物質は、低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第２００２／０１８４２２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0210】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ－１８である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１８Ｒαおよび／またはＩＬ－１８Ｒβに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１８Ｒαおよび／またはＩＬ－１８Ｒβに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要なＴＩＲドメインを欠くＩＬ－１８ＲαのアイソフォームであるＩＬ－１８Ｒα２型に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0211】

いくつかの実施形態では、野生型ＩＬ－１８は、配列番号１９０のアミノ酸配列を有する。

【0212】

このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変ＩＬ－１８物質は、Ｙ３７～Ｋ４４、Ｒ４９～Ｑ５４、Ｄ５９～Ｒ６３、Ｅ６７～Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７～Ａ９７、Ｎ２７～Ｋ１２９、Ｑ１３９～Ｍ１４９、Ｋ１６５～Ｋ１７１、Ｒ１８３およびＱ１９０～Ｎ１９１から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＡＡＶ３８６９７、バージョンＡＡＶ３８６９７．１、ＧＩ：５４６９６６５０、ヒトＩＬ－１８配列に基づいてナンバリング）。

【0213】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ３３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体１およびＩＬ－１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体およびＩＬ－１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0214】

いくつかの実施形態では、野生型ＩＬ３３は、配列番号１９１のアミノ酸配列を有する。

【0215】

このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変ＩＬ３３物質は、１１１３～Ｙ１２２、５１２７～Ｅ１３９、Ｅ１４４～Ｄ１５７、Ｙ１６３～Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０～Ｃ２２７およびＴ２６０～Ｅ２６９から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿２５４２７４、バージョン２５４２７４．１、ＧＩ：１５５５９２０９、ヒト配列に基づいてナンバリング）。

【0216】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は上皮増殖因子（ＥＧＦ）である。ＥＧＦは、強力な成長因子のファミリーである。メンバーは、ＥＧＦ、ＨＢ－ＥＧＦ、およびＴＧＦα、アンフィレギュリン、ニューレグリン、エピレギュリン、ベータセルリンなどの他のものを含む。ＥＧＦファミリー受容体は、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を含む。これらは、ホモダイマーおよび／またはヘテロダイマー受容体サブタイプとして機能し得る。異なるＥＧＦファミリーメンバーは、種々の受容体サブタイプに対して、他と異なる選択性を示す。例えば、ＥＧＦは、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４／ＥｒｂＢ２およびいくつかの他のヘテロダイマーサブタイプと結合する。ＨＢ－ＥＧＦは、類似のパターンを有するが、ＥｒｂＢ４／４と結合する。ＥＧＦ（ＥＧＦ様）増殖因子シグナル伝達の正または負方向への調節は、大きな治療上の観点から関心がもたれている。例えば、ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は、ＥＧＦＲシグナル伝達が主要な成長促進シグナルを構成する種々の癌の治療で関心がもたれている。あるいは、ＥＧＦＲシグナル伝達の刺激は、例えば、創傷治癒（急性および慢性）、口腔粘膜炎（限定されないが、放射線療法を含む種々の癌療法の主要な副作用）における治療上の観点から関心が持たれている。

【0217】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷の治療方法で使用される。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、およびＥｒｂＢ４の内の１種または複数に結合し、その受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、その受容体の活性が、弱められる様式でアンタゴナイズされる。このような実施形態は、例えば、癌の治療で使用される。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。ＥｒｂＢ１は、キナーゼ阻害剤の治療標的であるが－大抵の場合、副作用があり、その理由は、それらがあまり選択的でないためである（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブおよびイコチニブ）。いくつかの実施形態では、弱められた拮抗的ＥｒｂＢ１シグナル伝達は、ＥＧＦの受容体を標的とする他の物質より、オンターゲットであり、少ない副作用を有する。

【0218】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）および／またはＥｒｂＢ４またはそれが相互作用し得る他のサブタイプに対し実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ターゲティング部分を介した特異的標的化により、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１受容体活性化の細胞選択的抑制（アンタゴニズム、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）が達成されるであろう－阻害関連副作用に関連する可能性のある他の受容体サブタイプを関与させずに。従って、身体中の全ての細胞型のＥＧＦＲ活性を阻害するＥＧＦＲキナーゼ阻害剤と対照的に、このような構築物は、副作用の低減された細胞選択的（例えば、受容体の増幅、過剰発現などよる活性化ＥＧＦＲシグナル伝達を有する腫瘍細胞）抗ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）薬物作用を提供するであろう。

【0219】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ４および／またはそれが相互作用する他のサブタイプに対する低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性）を有する。ターゲティング部分を介した特定の標的細胞に対する標的化により、ＥｒｂＢ１シグナル伝達の選択的活性化が達成される（例えば、上皮細胞）。このような構築物は、いくつかの実施形態では、副作用が低減された創傷の治療（創傷治癒の促進）、特に慢性状態の治療および治療薬局所投与以外の適用（例えば、全身性創傷治癒）のために使用される。

【0220】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリンまたはインスリン類似体である。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。インスリン受容体に対する弱められた応答は、糖尿病、肥満症、代謝障害などの制御を可能にし、同時に、ＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体から離れた方向に向けることにより、癌促進性作用を回避する。

【0221】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン様増殖因子－Ｉまたはインスリン様増殖因子－ＩＩ（ＩＧＦ１またはＩＧＦ２）である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＧＦ１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に結合し、受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が、弱められる形式でアンタゴナイズされることを可能にする。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が、弱められる形式でアンタゴナイズされることを可能にする。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、したがって、インスリンシグナル伝達を妨げない。いくつかの実施形態では、これは、癌治療に適用される。いくつかの実施形態では、本物質は、ＩＲアイソフォームＡが癌治療に対し耐性を生じるのを防止し得る。

【0222】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥＰＯである。種々の実施形態では、改変ＥＰＯ物質は、本明細書に記載された野生型ＥＰＯまたは他のＥＰＯベースの物質に比較して、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）受容体および／またはエフリン受容体（ＥｐｈＲ）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯ物質は、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）受容体および／またはＥｐｈ受容体（ＥｐｈＲ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。例示的ＥＰＯ受容体としては、限定されないが、ＥＰＯＲホモダイマーまたはＥＰＯＲ／ＣＤ１３１ヘテロダイマーが挙げられる。ＥＰＯ受容体として挙げられるのはまた、ベータ共通受容体（βｃＲ）である。例示的Ｅｐｈ受容体としては、限定されないが、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、およびＥＰＨＢ６が挙げられる。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、ＥＰＯタンパク質に、１個または複数の異なるＥＰＯ受容体またはＥｐｈ受容体（例えば、非限定的例として、ＥＰＯＲ－ＥＰＨＢ４、ＥＰＯＲ－βｃＲ－ＥＰＯＲを含む、ヘテロダイマー、ヘテロトリマーなど）を含む受容体に対する親和性を低減させる１個または複数の変異を含む。提供されるのはまた、非限定的例として、ＮＥＰＯＲを含む欧州特許出願第２４９２３５５号の受容体である。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0223】

ヒトＥＰＯタンパク質の構造は、ヘリックスＡ，Ｂ、Ｃ、およびＤを含む４個のヘリックスバンドルを含むと予測される。種々の実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、生物活性に重要であるＥＰＯタンパク質の４つの領域、すなわち、１０～２０、４４～５１、９６～１０８、および１４２～１５６に位置する１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、残基１１～１５、４４～５１、１００～１０８、および１４７～１５１に位置する。これらの残基は、ヘリックスＡ（Ｖａｌ１１、Ａｒｇ１４、およびＴｙｒ１５）、ヘリックスＣ(Ｓｅｒ１００、Ａｒｇ１０３、Ｓｅｒ１０４、およびＬｅｕ１０８)、ヘリックスＤ(Ａｓｎ１４７、Ａｒｇ１５０、Ｇｌｙ１５１、およびＬｅｕ１５５)、およびＡ／Ｂコネクティングループ（ｃｏｎｎｅｃｔｉｎｇ ｌｏｏｐ）(残基４２～５１）に位置する。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、アミノ酸４１～５２と、アミノ酸１４７、１５０、１５１および１５５の間の残基の中に変基を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの残基の変異は、受容体結合とｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性の両方への実質的な影響を有すると考えられる。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、残基１１、１４、１５、１００、１０３、１０４、および１０８に変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの残基の変異は、受容体結合活性へのあまり大きくない影響と、ｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性へのかなり大きな影響とを有すると考えられる。例示的な置換としては、限定されないが、Ｖａｌ１１Ｓｅｒ、Ａｒｇ１４Ａｌａ、Ａｒｇ１４Ｇｌｎ、Ｔｙｒ１５ｌｌｅ、Ｐｒｏ４２Ａｓｎ、Ｔｈｒ４４ｌｌｅ、Ｌｙｓ４５Ａｓｐ、Ｖａｌ４６Ａｌａ、Ｔｙｒ５１Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１００Ｇｌｕ, Ｓｅｒ１００Ｔｈｒ、Ａｒｇ１０３Ａｌａ、Ｓｅｒ１０４ｌｌｅ、Ｓｅｒ１０４Ａｌａ、Ｌｅｕ１０８Ｌｙｓ、Ａｓｎ１４７Ｌｙｓ、Ａｒｇ１５０Ａｌａ、Ｇｌｙ１５１Ａｌａ、およびＬｅｕ１５５Ａｌａが挙げられる。

【0224】

いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、生物活性に影響を与え、結合に影響を与えない変異、例えばＥｌｉｏｔ， ｅｔ ａｌ. Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｓｉｔｅ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ Ｊａｎｕａｒｙ １５, １９９７; Ｂｌｏｏｄ: ８９(２）に列挙された変異を含む。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0225】

いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、受容体接触に関与するＥＰＯタンパク質の表面残基を含む１個または複数の変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの表面残基の変異は、タンパク質の折り畳みに影響を及ぼす可能性が低く、それによりいくつかの生物活性を保持すると考えられる。変異され得る例示的表面残基としては、限定されないが、残基１４７および１５０が挙げられる。例示的実施形態では、変異は、Ｎ１４７Ａ、Ｎ１４７Ｋ、Ｒ１５０ＡおよびＲ１５０Ｅの１個または複数を含む置換である。

【0226】

いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、残基Ｎ５９、Ｅ６２、Ｌ６７、およびＬ７０の１個または複数の変異と、ジスルフィド結合形成に影響を及ぼす１個または複数の変異とを含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの変異は、折り畳みに影響を及ぼし、かつ／または覆い隠された位置にあると予測され、このため間接的に生物活性に影響を及ぼすと考えられる。

【0227】

ある実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、受容体結合を有意に低減するＫ２０Ｅ置換を含む。Ｅｌｌｉｏｔｔ， ｅｔ ａｌ., (１９９７） Ｂｌｏｏｄ， ８９:４９３－５０２を参照されたい。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0228】

本発明のキメラＥＰＯタンパク質に組み込まれ得る追加のＥＰＯ変異は、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれるＥｌｌｉｏｔｔ， ｅｔ ａｌ．， （１９９７） Ｂｌｏｏｄ， ８９：４９３－５０２、および全内容が参照により本明細書に組み込まれるＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ., （２０１０） ＰＥＤＳ， ２３（４）: ２５１－２６０に開示される。

【0229】

一実施形態では、本キメラタンパク質は、本明細書に記載のいずれかの改変または変異シグナル伝達物質と共に、（ｉ）ＦＡＰに対するターゲティング部分および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられたターゲティング部分を有する。ある実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞上のＦＡＰに向けられたターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられた第２のターゲティング部分を有する。

【0230】

一実施形態では、本キメラタンパク質は、本明細書に記載のいずれかの改変または変異インターフェロンと共に、（ｉ）ＦＡＰに対するターゲティング部分および（ｉｉ）チェックポイント阻害剤マーカーに向けられたターゲティング部分を有する。ある実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞上のＦＡＰに対するターゲティング部分およびＰＤ－１に向けられた第２のターゲティング部分を有する。

【0231】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は毒素または毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素または毒性酵素は、植物および細菌から誘導される。毒素または毒性酵素の例としては、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素、炭疽病毒素、リシンおよびサポリンなどのリボソーム不活化タンパク質（ＲＩＰ）、モデシン、アブリン、ゲロニン、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。追加の毒素は、Ｍａｔｈｅｗ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １００（８）：１３５９－６５、に開示のものを含む。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、本発明の技術のキメラタンパク質は、細胞型特異的に細胞死を誘導するのに利用し得る。このような実施形態では、毒素は改変されて、例えば、変異導入されて、本明細書で他のシグナル伝達物質に関し記載のように、効果を弱めるために毒素の親和性および／または活性を低減させ得る。

【0232】

シグナル伝達物質との多重特異的キメラおよび融合体
いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、本明細書に記載の１種または複数のシグナル伝達物質および／または１つまたは複数の追加のターゲティング部分とのキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明の技術は、例えば、１種または複数のシグナル伝達物質およびＦＡＰに対するターゲティング部分および／または１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。

【0233】

いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、多重特異的であり、すなわち、ＦＡＰ結合物質は、２つ以上の標的、例えば、抗原、または受容体、またはエピトープを認識し結合する認識ドメインを有する２つ以上のターゲティング部分を含む。このような実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、同じ抗原上または異なる抗原上または異なる受容体上の２個以上のエピトープを認識し結合する認識ドメインを有する２つ以上のターゲティング部分を含み得る。いくつかの実施形態では、このような多重特異的ＦＡＰ結合物質は、向上した結合力および／または改善された選択性などの有利な性質を示す。ある実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、２つのターゲティング部分を含み、かつ二重特異性であり、すなわち、同じ抗原上または異なる抗原上の２個のエピトープに結合および認識する。

【0234】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、それぞれのターゲティング部分が本明細書に記載の抗体または抗体誘導体である２つ以上のターゲティング部分を含む。ある実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰに対する抗原認識ドメインを含む少なくとも１種のＶＨＨおよび腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを含む１種の抗体または抗体誘導体を含む。

【0235】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、異なる抗原または受容体を標的とする２つ以上のターゲティング部分を有し、１つのターゲティング部分は、その抗原または受容体に対し減弱化され得、例えば、ターゲティング部分はその抗原または受容体を低親和性または低結合力で結合する（例えば、その他のターゲティング部分がその抗原または受容体に対して有する親和性または結合力より低い親和性または結合力で結合することを含み、例えば、結合親和性の間の差異は、約１０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または３００倍、または５００倍、または１０００倍、または５０００倍であってよく；例えば、より低い親和性または結合力のターゲティング部分はその抗原または受容体に中～高ｎＭまたは低～中ｐＭの範囲のＫ_Ｄで結合し得るが、より高い親和性または結合力のターゲティング部分は、中～高ｐＭまたは低～中ｎＭの範囲のＫ_Ｄで結合し得る）。例えば、いくつかの実施形態では、本多重特異的ＦＡＰ結合物質は、無差別の抗原または受容体に向けられた減弱化ターゲティング部分を含み、これは目的の細胞への標的化を改善し（例えば、他のターゲティング部分を介して）かつ治療用の標的にされないものを含む、複数細胞型間にまたがる効果を防止し得る（例えば、これらの実施形態で与えられるものより高い親和性で無差別に抗原または受容体に結合することによる）。

【0236】

本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、当該技術分野において、既知の方法を使用して構築し得る。例えば、米国特許第９，０６７，９９１号、米国特許出願公開第２０１１０２６２３４８号および国際公開第２００４／０４１８６２号を参照されたい。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、２つ以上のターゲティング部分を含む本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、化学架橋により、例えば、アミノ酸残基を、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｌａｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４，１５１７－１５２４および欧州特許第２９４７０３号に記載のような有機誘導体化試薬を反応させることにより構築され得る。別の例示的実施形態では、２つ以上のターゲティング部分を含む多重特異的ＦＡＰ結合物質は、遺伝子融合、すなわち、個別のターゲティング部分のポリペプチドを含む単一ポリペプチドを構築することにより、構築される。例えば、ＦＡＰに対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨおよび腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体をコードする、単一ポリペプチド構築物を形成し得る。二価または多価性のＶＨＨポリペプチド構築物を産生する方法は、国際公開第９６／３４１０３号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。さらなる例示的実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、リンカーを用いることにより構築され得る。例えば、ＦＡＰに対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨのカルボキシ末端を、腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体のアミノ末端に連結され得る（または逆もまた同様）。使用し得る例示的リンカーは、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質の成分は、リンカーの使用なしに、相互に直接連結される。

【0237】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰおよび１個または複数の免疫細胞上に見出される１個または複数の抗原を認識し、それらに結合し、免疫細胞は巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、１個または複数の免疫細胞を効果的に、直接または間接的に動員する。

【0238】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰおよび腫瘍細胞上に見出される１個または複数の抗原を認識し、それらに結合する。これらの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に免疫細胞を直接的にまたは間接的に動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、免疫細胞、例えば、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる免疫細胞（例えば、ＣＴＬ）を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。

【0239】

いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、腫瘍の免疫攻撃に有利なように免疫細胞のバランスを変化させることができ、または免疫細胞のバランスを変化させることを含む方法において使用される。例えば、本発明のＦＡＰ結合物質は、臨床的に重要な部位の免疫細胞の比率を、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる細胞（例えば、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、好中球、Ｂ細胞、樹状細胞またはこれらのサブセット）に有利なように、および腫瘍を保護する細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）；腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、またはこれらのサブセット）に不利なように変化させることができる。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、エフェクターＴ細胞の制御性Ｔ細胞に対する比率を高めることができる。

【0240】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、腫瘍細胞を直接または間接的に動員する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞の動員は、腫瘍細胞を死滅させることができるおよび／または抑制できる１個または複数のエフェクター細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞）に対するものである。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、腫瘍およびＦＡＰ陽性免疫細胞（例えば、樹状細胞）上でそれらのそれぞれの抗原と相互作用する２つのターゲティング部分によって、Ｔ細胞を腫瘍細胞に直接または間接的に動員する。

【0241】

腫瘍細胞、または癌細胞は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害する、細胞または組織の無制御な増殖および／または細胞生存の異常な増大および／またはアポトーシスの抑制の異常な増大を指す。例えば、腫瘍細胞は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含む。腫瘍細胞の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびにその他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群と関連する異常血管増殖の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0242】

腫瘍細胞または癌細胞としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、および毛様細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））も挙げられるが、これらに限定されない。

【0243】

腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍ１１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－ＡＩ２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－０５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、ａ－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、ａ－カテニン、３－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅ１１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、Ｉｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶ－コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＭＳＡ、およびＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数のこれらの腫瘍抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0244】

いくつかの実施形態では、本多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰならびに腫瘍細胞上の抗原を認識し、それに結合する。いくつかの実施形態では、多重特異的ＦＡＰ結合物質は、直接的にまたは間接的に腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境にＣＴＬを動員する。

【0245】

いくつかの実施形態では、本多重特異的ＦＡＰ結合物質は、２個の異なる細胞（例えば、シナプスを作るために）または同じ細胞（例えば、より高濃度のシグナル伝達物質効果を得るために）を標的とするターゲティング部分を有する。

【0246】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、Ｔ細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｔ細胞を直接または間接的に動員する。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。エフェクターＴ細胞の例としては、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、CCR7+、CD62Lｈi,IL-7R/CD127＋）；ＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；ＣＤ８^＋ エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４^＋、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ－１５Ｒ^＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ－１５Ｒ^＋）；ＣＤ６２Ｌ^＋ エフェクターＴ細胞；早期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^＋ ＣＤ６２Ｌ^－）および後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^－ ＣＤ６２Ｌ^－）（それぞれ、ＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）を含むＣＤ８^＋ エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）；ＣＤ１２７（^＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／^－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（^－）ＣＤ２５（^－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８^＋ 幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（^＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３^＋、ＣＸＣＲ６^＋およびＣＣＲ５^＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－１２Ｒ^＋、IFN-γＲ＋、ＣＸＣＲ３^＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３^＋、ＣＣＲ４^＋およびＣＣＲ８^＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ４Ｒ^＋、ＩＬ３３Ｒ^＋、ＣＣＲ４^＋、ＩＬ－１７ＲＢ^＋、ＣＲＴＨ２^＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ２３Ｒ^＋、ＣＣＲ６^＋、ＩＬ－１Ｒ^＋）；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７^＋ エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ^＋ エフェクターＴ細胞；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７（^－）エフェクターＴ細胞；およびＩＬ２、ＩＬ４および／またはIFN-γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。

【0247】

目的とするＴ細胞抗原の例としては、例えば、下記が挙げられる（該当する場合には、細胞外ドメインも含む）：ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ-２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ-２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲＩ／ＩＬＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ－１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ－１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ－１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ－１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ－１３Ｒα１、ＩＬ－１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ルテグリン（ｌｕｔｅｇｒｉｎ） ａ４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンａＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤＩＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０ Ｌｉｇａｎｄ／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ-２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬ ＲＩ／ＴＮＦＲＳＦＩＯＡ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、IFN-γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、IFN-γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ－１Ｒ１およびＴＳＬＰＲ。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数のこれらの例示Ｔ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0248】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるＣＤ８に対するターゲティング部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。

【0249】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、少なくとも１つのＣＤ８のＣＤＲ１、ＣＤ８のＣＤＲ２、および／またはＣＤ８のＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＣＤ８に対するＶＨＨを含む。

【0250】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８のＣＤＲ１配列は、配列番号１９２または配列番号１９３から選択される。

【0251】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８のＣＤＲ２配列は、配列番号１９４または配列番号１９５から選択される。

【0252】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８のＣＤＲ３配列は、配列番号１９６または配列番号１９７または配列番号１９８から選択される。

【0253】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、次の配列Ｒ３ＨＣＤ２７（配列番号１９９）またはＲ３ＨＣＤ１２９（配列番号２００）またはＲ２ＨＣＤ２６（配列番号２０１）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0254】

種々の実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、後述のように少なくとも１つのＣＤ８のＣＤＲ１、ＣＤ８のＣＤＲ２、および／またはＣＤ８のＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。

【0255】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８のＣＤＲ１配列は、配列番号２０２～配列番号２７０または配列番号５２から選択される。

【0256】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８のＣＤＲ２配列は、配列番号２７１～配列番号３３９から選択される。

【0257】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８のＣＤＲ３配列は、配列番号３４０～配列番号４０８から選択される。

【0258】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、１ＣＤＡ７（配列番号４０９）または１ＣＤＡ１２（配列番号４１０）または１ＣＤＡ１４（配列番号４１１）または１ＣＤＡ１５（配列番号４１２）または１ＣＤＡ１７（配列番号４１３）または１ＣＤＡ１８（配列番号４１４）または１ＣＤＡ１９（配列番号４１５）または１ＣＤＡ２４（配列番号４１６）または１ＣＤＡ２６（配列番号４１７）または１ＣＤＡ２８（配列番号４１８）または１ＣＤＡ３７（配列番号４１９）または１ＣＤＡ４３（配列番号４２０）または１ＣＤＡ４５（配列番号４２１）または１ＣＤＡ４７（配列番号４２２）または１ＣＤＡ４８（配列番号４２３）または１ＣＤＡ５８（配列番号４２４）または１ＣＤＡ６５（配列番号４２５）または１ＣＤＡ６８（配列番号４２６）または１ＣＤＡ７３（配列番号４２７）または１ＣＤＡ７５（配列番号４２８）または１ＣＤＡ８６（配列番号４２９）または１ＣＤＡ８７（配列番号４３０）または１ＣＤＡ８８（配列番号４３１）または１ＣＤＡ８９（配列番号４３２）または１ＣＤＡ９２（配列番号４３３）または１ＣＤＡ９３（配列番号４３４）または２ＣＤＡ１（配列番号４３５）または２ＣＤＡ５（配列番号４３６）または２ＣＤＡ２２（配列番号４３７）または２ＣＤＡ２８（配列番号４３８）または２ＣＤＡ６２（配列番号４３９）または２ＣＤＡ６８（配列番号４４０）または２ＣＤＡ７３（配列番号４４１）または２ＣＤＡ７４（配列番号４４２）または２ＣＤＡ７５（配列番号４４３）または２ＣＤＡ７７（配列番号４４４）または２ＣＤＡ８１（配列番号４４５）または２ＣＤＡ８７（配列番号４４６）または２ＣＤＡ８８（配列番号４４７）または２ＣＤＡ８９（配列番号４４８）または２ＣＤＡ９１（配列番号４４９）または２ＣＤＡ９２（配列番号４５０）または２ＣＤＡ９３（配列番号４５１）または２ＣＤＡ９４（配列番号４５２）または２ＣＤＡ９５（配列番号４５３）または３ＣＤＡ３（配列番号４５４）または３ＣＤＡ８（配列番号４５５）または３ＣＤＡ１１（配列番号４５６）または３ＣＤＡ１８（配列番号４５７）または３ＣＤＡ１９（配列番号４５８）または３ＣＤＡ２１（配列番号４５９）または３ＣＤＡ２４（配列番号４６０）または３ＣＤＡ２８（配列番号４６１）または３ＣＤＡ２９（配列番号４６２）または３ＣＤＡ３１（配列番号４６３）または３ＣＤＡ３２（配列番号４６４）または３ＣＤＡ３３（配列番号４６５）または３ＣＤＡ３７（配列番号４６６）または３ＣＤＡ４０（配列番号４６７）または３ＣＤＡ４１（配列番号４６８）または３ＣＤＡ４８（配列番号４６９）または３ＣＤＡ５７（配列番号４７０）または３ＣＤＡ６５（配列番号４７１）または３ＣＤＡ７０（配列番号４７２）または３ＣＤＡ７３（配列番号４７３）または３ＣＤＡ８３（配列番号４７４）または３ＣＤＡ８６（配列番号４７５）または３ＣＤＡ８８（配列番号４７６）または３ＣＤＡ９０（配列番号４７７）から選択されるアミノ酸配列を含む。種々の例示的実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号４３）を含まない上記配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0259】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１４６２号に記載のアミノ酸配列を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１４６２号の表０．１、表０．２、表０．３、および／または図１Ａ～１２１に記載のアミノ酸配列を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ターゲティング部分は、以降で提供されるように、配列番号４７８または４７９のＨＣＤＲ１のＨＣＤＲ１および／または配列番号４７８または４７９のＨＣＤＲ１のＨＣＤＲ２および／または配列番号４７８または４７９のＨＣＤＲ１のＨＣＤＲ３および／または配列番号４８０のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ１および／または配列番号４８０のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ２および／または配列番号４８０のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ３を含む。

【0260】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本明細書に記載の本発明のＣＤ８に向けられたターゲティング部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。いくつかの実施形態では、ＣＤ８に向けられたターゲティング部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。

【0261】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、Ｂ細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的にＢ細胞を動員する。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、Ｂ細胞抗原としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０、およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示のＢ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0262】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ナチュラルキラー細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ナチュラルキラー細胞を、例えば治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）へ直接または間接的に動員する。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー細胞抗原としては、例えば、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、Ｋｉｄアルファ、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ－受容体様３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１ａ、Ｒａｅ－１ｐ、Ｒａｅ－１デルタ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄおよびＵＬＢＰ－３が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示のＮＫ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0263】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、マクロファージ／単球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、マクロファージ／単球を直接または間接的に、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に動員する。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、マクロファージ／単球抗原としては、例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通３鎖、インテグリンａ４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンａＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリン３２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリン３３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦＲａ、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、IFN-γＲＩ、ＴＬＲ４、IFN-ｇａｎｎｎａＲ２、ＴＲＥＭ－Ｉ、ＩＬ－ＩＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ ４、ＩＬ－１０Ｒａ、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ－１０Ｒｐ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通３鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンａ４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンａＭ／ＣＤＩＩ ｂ、ＣＣＲ８、インテグリンａＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリン３２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリン１３３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦＳ、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦ Ｒ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦ Ｒ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦＲａ、Ｓｉｇｌｅｃ－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－Ｉ、ＩＬ６Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲＩ／ＩＬ８ＲＡ、ＴＲＥＭ－３およびＴＲＥＭＬＩＴＴＬＴ－１が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示のマクロファージ／単球抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0264】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、樹状細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的に樹状細胞を動員する。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、樹状細胞（ＤＣ）抗原としては、例えば、ＦＡＰ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－ＰＩ／Ｃ０ＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ－１２／ＩＬ２３ｐ４０、４－Ａｍｉｎｏ－１、８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－ｏｘｏ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎ ａ４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンｐ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４ ＲＩ、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／シグレック－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬＩ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、ＣＬＥＣ－８、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＤＥＣ－２０５、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、Ｄｅｃｔｉｎ－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＤＥＣ２０５、およびバニロイドＲ１が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示のＤＣ抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0265】

いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のいずれか１つに、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）であるアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。

【0266】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、および好酸球から選択される免疫細胞上の標的（例えば、抗原、受容体）を特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、および好酸球を、例えば、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的に動員する。

【0267】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、巨核球および／または血小板関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、巨核球および／または血小板抗原としては、例えば、ＧＰ１１ｂ／１１１ａ、ＧＰ１ｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、およびＴＳＰが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示の巨核球および／または血小板抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0268】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、赤血球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、赤血球抗原としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質１１ｂ／１１１ａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコホリンＡ、グリコホリンＣ、ｃ－ｋｉｔ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ－Ｉ１）、およびＲｈ抗原が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示の赤血球抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0269】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、マスト細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、マスト細胞抗原としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、Ｆｃａ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡＩ、ＦＣＥＲＩＡ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢＩが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示のマスト細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0270】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、好塩基球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、好塩基球抗原としては、例えば、Ｆｃａ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、およびＣＤ１６４が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示の好塩基球抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0271】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、好中球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、好中球抗原としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ－１、ＣＲ３、およびｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、およびＣＤ１７７が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示の好中球抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0272】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、好酸球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、好酸球抗原としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４およびＣＤ６９が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示の好酸球抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0273】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、当業者に既知の任意の適切な抗原または受容体または細胞表面マーカーに特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原または細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、組織特異的マーカーとしては、限定ではないが、内皮細胞表面マーカー（例えば、ＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭＩ、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭＩ、ＶＷＦなど）；平滑筋細胞表面マーカー（例えば、ＡＣＴＡ２、ＭＹＨＩＯ、ＭＹＨＩ１、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤなど）；線維芽細胞（間質）細胞表面マーカー（例えば、ＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬＩＡＩ、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ－４など）；上皮細胞表面マーカー（例えば、ＣＤＩＤ、Ｋ６１ＲＳ２、ＫＲＴＩＯ、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣＩ、ＴＡＣＳＴＤＩなど）；新生血管マーカー（例えば、ＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ－ｖ ベータ－３（αｖ３３）、Ｅ－セレクチンなど）；および脂肪細胞表面マーカー（例えば、ＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、およびＲＥＴＮなど）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１個または複数の上記開示の抗原を結合するターゲティング部分を含む。

【0274】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、Ｔ細胞上に発現されるチェックポイントマーカーに特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイントマーカーは、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、０Ｘ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４ＯＬ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲから選択される１種または複数のチェックポイントマーカーである。

【0275】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、チェックポイントマーカーに特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイントマーカーは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬまたはＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、０Ｘ４０／０Ｘ４ＯＬ、ＣＤ２７、ＣＤ４ＯＬ、ＴＩＭ３／Ｇａ１９、およびＡ２ａＲから選択される１種または複数のチェックポイントマーカーである。

【0276】

限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、（ｉ）ＣＤ８；（ｉｉ）Ｔ細胞上に発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、０Ｘ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４ＯＬ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの内の１種または複数に向けられたターゲティング部分を含み、および／または（ｉｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの改変（例えば、変異体）シグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞に向けられる。

【0277】

いくつかの実施形態では、本多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－１に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。

【0278】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、少なくとも１つのＰＤ－１のＣＤＲ１、ＰＤ－１のＣＤＲ２、および／またはＰＤ－１のＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＰＤ１に対するＶＨＨを含む。

【0279】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１のＣＤＲ１配列は、配列番号４８１～配列番号４９４から選択される。

【0280】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１のＣＤＲ２配列は、配列番号４９５～配列番号５０８から選択される。

【0281】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１のＣＤＲ３配列は、配列番号５０９～配列番号５２１から選択される。

【0282】

種々の例示的実施形態では、ＰＤ１ターゲティング部分は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：２ＰＤ２３（配列番号５２２）；または２ＰＤ２６（配列番号５２３）；または２ＰＤ９０（配列番号５２４）；または２ＰＤ－１０６（配列番号５２５）；または２ＰＤ－１６（配列番号５２６）；または２ＰＤ７１（配列番号５２７）；または２ＰＤ－１５２（配列番号５２８）；または２ＰＤ－１２（配列番号５２９）；または３ＰＤ５５（配列番号５３０）；または３ＰＤ８２（配列番号５３１）；または２ＰＤ８（配列番号５３２）；または２ＰＤ２７（配列番号５３３）；または２ＰＤ８２（配列番号５３４）；または３ＰＤ３６（配列番号５３５）。

【0283】

種々の例示的実施形態では、ＰＤ－１ターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列を含まない（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号４３を含まない）上記配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0284】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体ペムブロリズマブ（別名ＭＫ－３４７５、キイトルーダ（登録商標））、またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ペムブロリズマブ、ならびにＨａｍｉｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９（２）：１３４－４４，ＵＳ ８，３５４，５０９、および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されるその他のヒト化抗ＰＤ－１抗体の内の１種または複数である。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのペムブロリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５３６）のアミノ酸配列を含む重鎖および／または（配列番号５３７）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0285】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体、ニボルバム（別名ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、オプジーボ（登録商標））、またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ニボルバム（クローン５Ｃ４）、ならびに米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されるＰＤ－１に特異的に結合するその他のヒトモノクローナル抗体の内の１種または複数である。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのニボルバムまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５３８）のアミノ酸配列を含む重鎖および／または（配列番号５３９）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0286】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体ピディリズマブ（別名ＣＴ－０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１）、またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ピディリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ－Ｉモノクローナル抗体は、ピディリズマブ、ならびに米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号および国際公開第２００９／１０１６１１号に開示される他のヒト化抗ＰＤ－Ｉモノクローナル抗体から選択される。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０に開示の下記の配列：（配列番号５４０）；（配列番号５４１）；（配列番号５４２）；および（配列番号５４３）から選択されるアミノ酸配列を含む１個もしくは複数の軽鎖可変領域、ならびに／または米国特許出願公開第２００８／００２５９８０に開示の下記の配列：（配列番号５４４）；（配列番号５４５）；（配列番号５４６）；（配列番号５４７）；および（配列番号５４８）から選択されるアミノ酸配列を含む１個の重鎖を含む。

【0287】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、（配列番号５４９）を含む軽鎖および（配列番号５５０）を含む重鎖を含む。

【0288】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＡＭＰ－５１４（別名ＭＥＤＩ－０６８０）を含む。

【0289】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ－Ｌ２－Ｆｃ融合タンパク質ＡＭＰ－２２４またはそのフラグメントを含み、これは国際公開第２０１０／０２７８２７号および同第２０１１／０６６３４２号に開示される。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、（配列番号５５１）および／または（配列番号５５２）を含むＢ７－ＤＣ融合タンパク質を含む。

【0290】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ペプチドＡＵＮＰ１２または米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号もしくは米国特許第８，９０７，０５３号に開示のいずれかの他のペプチドを含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、下記のＡＵＮＰ１２配列を含む：
ＳＮＴＳＥＳＦＫ（ＳＮＴＳＥＳＦ）ＦＲＶＴＱＬＡＰＫＡＱＩＫＥ－ＮＨ_２（配列番号５５３）

【化1】

（すなわち、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号の化合物８）

【0291】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示の抗ＰＤ－１抗体１Ｅ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ３またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５５４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号５５５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0292】

ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示の抗ＰＤ－１抗体１Ｅ８またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ８またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５５６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号５５７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0293】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示の抗ＰＤ－１抗体１Ｈ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｈ３またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５５８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号５５９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0294】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のＰＤ－１に向けられたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号に開示の下記の配列の内の１個または複数を含む：（配列番号５６０）；（配列番号５６１）；（配列番号５６２）；（配列番号５６３）；または（配列番号５６４）。

【0295】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示の抗ＰＤ－１抗体またはそのフラグメントのいずれか１種を含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の中の下記の配列：（配列番号５６５）；（配列番号５６６）；（配列番号５６７）；（配列番号５６８）；もしくは（配列番号５６９）から選択される１個または複数のアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の中の下記の配列：（配列番号５７０）；（配列番号５７１）；（配列番号５７２）；もしくは（配列番号５７３）から選択される１個または複数のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0296】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ Ｌｔｄ．）から選択されるＰＤ－１に向けられた１種または複数の抗体、またはその抗体フラグメントを含む。

【0297】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ１に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。

【0298】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ のＣＤＲ１、ＰＤ－Ｌ１のＣＤＲ２、および／またはＰＤ－Ｌ１のＣＤＲ３配列の少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨを含む。

【0299】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１のＣＤＲ１配列は、配列番号５７４～配列番号６０４から選択される。

【0300】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１のＣＤＲ２配列は、配列番号６０５～配列番号６３５から選択される。

【0301】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１のＣＤＲ３配列は、配列番号６３６～配列番号６６６から選択される。

【0302】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１ターゲティング部分は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：２ＬＩＧ２（配列番号６６７）または２ＬＩＧ３（配列番号６６８）または２ＬＩＧ１６（配列番号６６９）または２ＬＩＧ２２（配列番号６７０）または２ＬＩＧ２７（配列番号６７１）または２ＬＩＧ２９（配列番号６７２）または２ＬＩＧ３０（配列番号６７３）または２ＬＩＧ３４（配列番号６７４）または２ＬＩＧ３５（配列番号６７５）または２ＬＩＧ４８（配列番号６７６）または２ＬＩＧ６５（配列番号６７７）または２ＬＩＧ８５（配列番号６７８）または２ＬＩＧ８６（配列番号６７９）または２ＬＩＧ８９（配列番号６８０）または２ＬＩＧ９７（配列番号６８１）または２ＬＩＧ９９（配列番号６８２）または２ＬＩＧ１０９（配列番号６８３）または２ＬＩＧ１２７（配列番号６８４）または２ＬＩＧ１３９（配列番号６８５）または２ＬＩＧ１７６（配列番号６８６）または２ＬＩＧ１８９（配列番号６８７）または３ＬＩＧ３（配列番号６８８）または３ＬＩＧ７（配列番号６８９）または３ＬＩＧ８（配列番号６９０）または３ＬＩＧ９（配列番号６９１）または３ＬＩＧ１８（配列番号６９２）または３ＬＩＧ２０（配列番号６９３）または３ＬＩＧ２８（配列番号６９４）または３ＬＩＧ２９（配列番号６９５）または３ＬＩＧ３０（配列番号６９６）または３ＬＩＧ３３（配列番号６９７）。

【0303】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１ターゲティング部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号４３）を含まない上記配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0304】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＭＥＤ１４７３６（別名デュルバルマブ）、またはそのフラグメントを含む。ＭＥＤ１４７３６は、ＰＤ－Ｌ１に対し選択的であり、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１およびＣＤ８０受容体に対する結合を阻止する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤ１４７３６およびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤ１４７３６の配列は、国際公開第２０１６／０６２７２号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤ１４７３６またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号６９８）のアミノ酸配列を含む重鎖および／または（配列番号６９９）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0305】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤ１４７３６またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列：（配列番号８８５）を含む重鎖可変領域；および／またはアミノ酸配列；（配列番号８８６）を含む軽鎖可変領域を含む。

【0306】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブ（別名ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６）、またはそのフラグメントを含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号８８７）のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または（配列番号８８８）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0307】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アベルマブ（別名ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、またはそのフラグメントを含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアベルマブまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号８８９）のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または（配列番号８９０）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0308】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＢＭＳ－９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５）、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＢＭＳ－９３６５５９またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号８９１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号８９２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0309】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｇ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｇ１０またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号８９３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号８９４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0310】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ａ５、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ａ５またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号８９５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号８９６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0311】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体５Ｆ８、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための５Ｆ８またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号８９７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号８９８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0312】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ｈ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ｈ１０またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号８９９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号９００）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0313】

いくつかの実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｂ１２、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｂ１２またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号９０１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号９０２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0314】

いくつかの実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体７Ｈ１、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための７Ｈ１またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号９０３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号９０４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0315】

いくつかの実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１１Ｅ６、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１１Ｅ６またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号９０５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号９０６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0316】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体１２Ｂ７、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１２Ｂ７またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号９０７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号９０８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0317】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体１３Ｇ４、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１３Ｇ４またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号９０９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号９１０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0318】

いくつかの実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｅ１２またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ１２またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号９１１）アミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号９１２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0319】

いくつかの実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｆ４またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｆ４またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号９１３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号９１４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0320】

いくつかの実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２Ｇ１１またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２Ｇ１１またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７００）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７０１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0321】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｂ６、またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｂ６またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７０２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７０３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0322】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号および国際公開第２０１２／１４５４９３号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｄ１０、またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７０４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７０５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0323】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列：（配列番号７０６）；（配列番号７０７）；（配列番号７０８）；（配列番号７０９）；もしくは（配列番号７１０）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列：（配列番号７１１）；（配列番号７１２）；（配列番号７１３）；もしくは（配列番号７１４）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0324】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７１５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７１６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0325】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．９Ｄ１０またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．９Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７１７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７１８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0326】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７１９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７２０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0327】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．２０Ａ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．２０Ａ８またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７２１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７２２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0328】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１５Ｇ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１５Ｇ８またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７２３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７２４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0329】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１８Ｇ１またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１８Ｇ１またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７２５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７２６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0330】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示の抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７２７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７２８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0331】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のとおり、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９０ＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９０ＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７２９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７３０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0332】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１６／０６１１４２号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６１１４２号の下記の配列：（配列番号７３１）；（配列番号７３２）；（配列番号７３３）；（配列番号７３４）；（配列番号７３５）；（配列番号７３６）；（配列番号７３７）；（配列番号７３８）；もしくは（配列番号７３９）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または国際公開第２０１６／０６１１４２号の下記の配列：（配列番号７４０）；（配列番号７４１）；（配列番号７４２）；（配列番号７４３）；（配列番号７４４）；（配列番号７４５）；（配列番号７４６）；（配列番号７４７）；もしくは（配列番号７４８）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0333】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１６／０２２６３０号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０２２６３０号の下記の配列：（配列番号７４９）；（配列番号７５０）；（配列番号７５１）；（配列番号７５２）；（配列番号７５３）；（配列番号７５４）；（配列番号７５５）；（配列番号７５６）；（配列番号７５７）；（配列番号７５８）；（配列番号７５９）；（配列番号７６０）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む重鎖；ならびに／または国際公開第２０１６／０２２６３０号の下記の配列：（配列番号７６１）；（配列番号７６２）；（配列番号７６３）；（配列番号７６４）；（配列番号７６５）；（配列番号７６６）；（配列番号７６７）；（配列番号７６８）；（配列番号７６９）；（配列番号７７０）；（配列番号７７１）；および（配列番号７７２）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0334】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１５／１１２９００号の下記の配列：（配列番号７７３）；（配列番号７７４）；（配列番号７７５）；もしくは（配列番号７７６）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または国際公開第２０１５／１１２９００号の下記の配列：（配列番号７７７）；（配列番号７７８）；（配列番号７７９）；（配列番号７８０）；（配列番号７８１）；（配列番号７８２）；（配列番号７８３）；（配列番号７８４）；もしくは（配列番号７８５）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0335】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１０／０７７６３４号および米国特許第８，２１７，１４９号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ－Ｌ１またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７８６）のアミノ酸配列を含む重鎖領域；および／または（配列番号７８７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0336】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に開示のＣＮＣＭ受託番号ＣＮＣＭ １－４１２２、ＣＮＣＭ １－４０８０およびＣＮＣＭ １－４０８１により入手可能なハイブリドーマから得ることができるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0337】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のＰＤ－Ｌ１抗体に向けられたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の下記の配列：（配列番号７８８）；（配列番号７８９）；（配列番号７９０）；（配列番号７９１）；（配列番号７９２）；および（配列番号７９３）の１個または複数を含む。

【0338】

いくつかの実施形態では、本多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ２に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドに選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。

【0339】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のＰＤ－Ｌ２に向けられたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の下記の配列：（配列番号７９４）；（配列番号７９５）；（配列番号７９６）；（配列番号７９７）；（配列番号７９８）；（配列番号７９９）；および（配列番号８００）の１個または複数を含む。

【0340】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ２抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列：（配列番号８０１）；（配列番号８０２）；（配列番号８０３）；（配列番号８０４）；もしくは（配列番号８０５）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列：（配列番号８０６）；（配列番号８０７）；（配列番号８０８）；もしくは（配列番号８０９）から選択される１個もしくは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0341】

いくつかの実施形態では、本発明の技術のターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする配列を含み得る。

【0342】

いくつかの実施形態では、本発明の技術のターゲティング部分は、本明細書で開示のＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれの組み合わせを含み得る。

【0343】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号、米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／０２８３３０号、米国特許出願公開第２０１２／０１１４６４９号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，９０７，０６５号、国際公開第２０１６／０６２７２２号、国際公開第２００９／１０１６１１号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２００１／０１４５５６号、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号、国際公開第２００９／０８９１４９号、国際公開第２００７／００５８７号、国際公開第２０１６／０６１１４２号、国際公開第２０１６／０２２６３号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、および国際公開第２０１５／１１２９００号で開示されたＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を選択的に結合するまたは標的にする１種または複数の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチドまたは融合タンパク質である。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0344】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、例えば樹状細胞上の、ＸＣＲ１に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明の技術の多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＸＣＬ１の全てまたは一部を含む抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。

【0345】

いくつかの実施形態では、多重特異的ＦＡＰ結合物質は、非細胞構造の一部である標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、無傷の細胞または細胞構造の不可欠な構成要素ではない。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、細胞外の抗原または受容体である。いくつかの実施形態では、標的は、非タンパク質性の非細胞マーカーであり、これらは、限定されないが、例えば、壊死腫瘍細胞から放出されたＤＮＡ、などのＤＮＡまたはＲＮＡを含む、核酸またはコレステロールなどの細胞外沈着物を含む。

【0346】

いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、ストローマもしくは細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の非細胞成分またはそれと関連するマーカーの一部である。本明細書で使用される場合、ストローマは、組織または器官の連結および支持フレームワークを指す。ストローマは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および細胞外分子と共に線維芽細胞／筋線維芽細胞／膠細胞、上皮、脂肪、免疫、血管、平滑筋、および免疫細胞などの細胞の寄せ集めを含み得る。いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリックスおよび細胞外分子などのストローマの非細胞成分の一部である。本明細書で使用される場合、ＥＣＭは、全ての組織および器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定されないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、および多糖類を含む生化学的に別々の成分の多数の集まりからなる。これらのＥＣＭ成分は通常、隣接する細胞により産生され、エキソサイトーシスによりＥＣＭ中に分泌される。分泌されると、ＥＣＭ成分は多くの場合、集合して、巨大分子の複合体ネットワークを形成する。いくつかの実施形態では、本発明の技術のキメラタンパク質は、ＥＣＭの任意の成分上に位置する標的（例えば、抗原または受容体または非タンパク質分子）を認識するターゲティング部分を含む。ＥＣＭの成分の例としては、限定されないが、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖類、繊維および他のＥＣＭタンパク質またはＥＣＭ非タンパク質、例えば、多糖類および／または脂質、またはＥＣＭ関連分子（例えば、タンパク質または非タンパク質、例えば、多糖類、核酸および／または脂質）が挙げられる。

【0347】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化タンパク質である。塩基性プロテオグリカン単位は、１つまたは複数の共有結合グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖を有するコアタンパク質を含む。プロテオグリカンは、正電荷のナトリウムイオン（Ｎａ＋）を引き付ける正味負電荷を有し、これは、浸透を介して水を引き付け、ＥＣＭおよび常在性細胞を水和した状態に保持する。プロテオグリカンはまた、成長因子を捕捉し、ＥＣＭ内に貯蔵し得る。本発明の技術のキメラタンパク質により標的とされ得るプロテオグリカンの例としては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびケラタン硫酸が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、ターゲティング部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖類上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。

【0348】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭ繊維上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ繊維は、コラーゲン繊維およびエラスチン繊維を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、コラーゲンまたはコラーゲン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。コラーゲンは、ＥＣＭ中で最も豊富なタンパク質である。コラーゲンはＥＣＭ中に線維性タンパク質として存在し、常在性細胞に対し構造支持を与える。１つまたは複数の実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、線維性コラーゲン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＸＩ型）、ＦＡＣＩＴコラーゲン（ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、および／またはＶＩ、ＶＩＩ、またはＸＩＩＩ型コラーゲンを含む、ＥＣＭ内に存在する様々な種類のコラーゲンを認識し、これに結合する。エラスチン繊維は、組織に弾性を与え、組織が必要に応じ伸縮し、その後、元の状態に戻ることを可能にする。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、エラスチンまたはエラスチン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。

【0349】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、またはナイドジェン／エンタクチンを含む、１種または複数のＥＣＭタンパク質を認識する。

【0350】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンを認識し、これに結合する。テネイシン（ＴＮ）ファミリーの糖タンパク質は、少なくとも４種のメンバー：テネイシン－Ｃ、テネイシン－Ｒ、テネイシン－Ｘ、およびテネイシン－Ｗを含む。テネイシンタンパク質の一次構造は、同じ連続配列中に順序づけられたいくつかの共通のモチーフ：アミノ末端７個の反復、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様反復、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン反復、およびカルボキシル末端フィブリノーゲン様球状ドメインを含む。それぞれのタンパク質メンバーは、ＥＧＦ様およびフィブロネクチンＩＩＩ型反復の数および性質における典型的な変動に関連付けられる。アイソフォームバリアントもまた、特にテネイシン－Ｃに関連して存在する。２７種を超えるテネイシン－Ｃのスプライスバリアントおよび／またはアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシン－ＣＡ１を認識し、これに結合する。同様に、テネイシン－Ｒはまた、種々のスプライスバリアントおよびアイソフォームを有する。テネイシン－Ｒは通常、ダイマーまたはトリマーとして存在する。テネイシン－Ｘは、テネイシンファミリーの最大メンバーであり、トリマーとして存在することが知られている。テネイシン－Ｗは、トリマーとして存在する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンタンパク質上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマーおよび／またはトリマーおよび／またはヘキサマー型のテネイシンタンパク質を認識する。

【0351】

ある実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチンを認識し、これに結合する。フィブロネクチンは、細胞をＥＣＭ中のコラーゲン繊維と連結し、細胞がＥＣＭ中を移動することを可能にする糖タンパク質である。インテグリンに結合時には、フィブロネクチンは折り畳みをほどいて機能的ダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマー型のフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン上の１個または複数のエピトープを認識する。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）またはフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。ＥＤＡレベルの上昇は、乾癬、関節リウマチ、糖尿病、および癌を含む種々の疾患および障害に関連する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＡアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識し、キメラタンパク質を癌細胞を含む疾患細胞に向けるのに使用し得る。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＢアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、このようなターゲティング部分は、キメラタンパク質を腫瘍新生血管を含む腫瘍細胞に向けるのに使用し得る。

【0352】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリンを認識し、これに結合する。フィブリンは、ＥＣＭのマトリックスネットワーク中に見つかることが多い、もう１つのタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリノーゲンに対するプロテアーゼトロンビンの作用により形成され、これにより、フィブリンを重合させる。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーならびに重合型のフィブリンを認識する。

【0353】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニンを認識し、これに結合する。ラミニンは、基底膜の主要成分であり、細胞および器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である。ラミニンは、ａ鎖、３鎖、およびγ鎖を含むヘテロトリマータンパク質である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマーならびにトリマー型のラミニンを認識する。

【0354】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェンまたはエンタクチンを認識し、これらに結合する。ナイドジェン／エンタクチンは、高度に保存された硫酸化糖タンパク質ファミリーである。それらは基底膜の主要構造的成分をなし、ラミニンと、基底膜中のコラーゲンＩＶネットワークを連結するように機能する。このファミリーのメンバーは、ナイドジェン－１およびナイドジェン－２を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェン－１および／またはナイドジェン－２上のエピトープを認識する。

【0355】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。

【0356】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、トリマー、テトラマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、本明細書に記載の任意の型のタンパク質に結合し得る。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、グリコシル化および／またはリン酸化型などの、本明細書に記載の任意の翻訳後修飾型のタンパク質に結合し得る。

【0357】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、壊死細胞またはアポトーシス腫瘍細胞または他の疾患細胞から細胞外間隙中に脱落する。

【0358】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、アテローム斑と関連する１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。２つのタイプのアテローム斑が知られている。線維－脂質（線維－脂肪）斑（ｆｉｂｒｏ－ｌｉｐｉｄ（ｆｉｂｒｏ－ｆａｔｔｙ）ｐｌａｑｕｅ）は、動脈の内膜の下の脂質を取り込んだ（ｌｉｐｉｄ－ｌａｄｅｎ）細胞の蓄積を特徴とする。内皮の下には、アテローム性のプラークコアを覆う繊維状キャップが存在する。コアは、増大した組織コレステロールおよびコレステロールエステル含量を有する脂質を取り込んだ細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、ならびに壊死細胞片を含む。進行型プラークでは、プラークの中心コアは通常、細胞外のコレステロール沈着物（死細胞から放出）を含み、これは、空の針状間隙を有するコレステロール結晶の領域を形成する。プラークの周辺部には、より若い泡沫状細胞および毛細血管がある。繊維状プラークはまた、動脈壁内の内膜下にも局在し、壁の肥厚化および増殖、および時には、筋層の若干の萎縮を伴う内腔の飛び飛びに局在化した狭小化をもたらす。繊維状プラークは、コラーゲン繊維（エオシン好性）、カルシウムの沈殿物（ヘマトキシリン好性）および脂質を取り込んだ細胞を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、壊死細胞片、およびカルシウムまたは他の鉱物沈着物または沈殿物などのこれらのプラークの１種または複数の非細胞成分を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、壊死細胞片は、核酸、例えば、死細胞から放出される ＤＮＡまたはＲＮＡである。

【0359】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、神経変性疾患と関連する脳プラーク中で見つかる１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、アルツハイマー病の患者の脳中で見つかるアミロイド斑中に局在する１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。例えば、ターゲティング部分は、ペプチドアミロイドベータを認識し、これに結合する。ペプチドアミロイドベータは、アミロイド斑の主要な成分である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ハンチントン病の患者で見つかる脳プラーク中にある１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、レヴィー小体認知症および封入体筋炎などの他の神経変性疾患または筋骨格疾病と関連するプラークで見つかる１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。

【0360】

リンカーおよび官能基
いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、１つまたは複数の官能基、残基、または部分を含み得る。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の官能基、残基、または部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質またはターゲティング部分に結合されるか、または遺伝的に融合される。いくつかの実施形態では、このような官能基、残基または部分は、本発明の技術のＦＡＰ結合物質に１つまたは複数の望ましい特性または官能基を付与する。このような官能基およびそれらをＦＡＰ結合物質に導入する技術の例は、当技術分野において、既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８０）を参照されたい。

【0361】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、別の物質と複合化および／または融合されて、半減期を延長するか、または別の方法で薬力学的および薬物動態学的特性を改善し得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリンなどの１種または複数と融合または複合化され得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、抗体またはＦｃフラグメントなどの抗体フラグメントと融合または複合化され得る。例えば、キメラタンパク質は、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）ＧのＦｃドメインのＮ－末端またはＣ末端に融合され得る。いくつかの実施形態では、それぞれ個々のキメラタンパク質は、ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５－２３９に記載の１種または複数の物質に融合され、この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0362】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、好適な薬学的に許容可能なポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはその誘導体（例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）またはｍＰＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分の結合は、半減期を延長し、および／またはＦＡＰ結合タンパク質の免疫原性を低減する。例えば、抗体および抗体フラグメント（限定されないが、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む）に対し当該技術分野で用いられるペグ化などの任意の好適な形態のペグ化が通常用いられる；例えば、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４，５３１－５４５（２００２）；ＶｅｒｏｎｅｓｅおよびＨａｒｒｉｓによる、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５３－４５６（２００３），ＨａｒｒｉｓおよびＣｈｅｓｓによる、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．，２，（２００３）ならびに国際公開第００４／０６０９６５号を参照されたい。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。タンパク質のペグ化のための種々の試薬も、例えば、Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＵＳＡから市販されている。いくつかの実施形態では、特に、システイン残基を介した部位特異的なペグ化が使用される（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１６，１０，７６１－７７０（２００３）を参照されたい、この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、このために、ＰＥＧは、本発明の技術のＦＡＰ結合物質中の天然のシステイン残基に結合され得る。いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、ＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を適切に導入するように修飾されるか、またはＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列が、当該技術分野において、既知の技術を使用してＦＡＰ結合物質のアミノ末端および／またはカルボキシ末端に融合され得る。

【0363】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化は、翻訳時修飾および／または翻訳後修飾の一部として導入される。

【0364】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、１つまたは複数の検出可能なラベルまたはその他のシグナル生成基または部分を含む。好適なラベルおよびそれらの結合、使用および検出のための技術は、当技術分野において既知であり、限定されないが、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、ならびにフルオレサミンおよび蛍光金属、例えば、Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属）、リン光標識、化学発光ラベルまたは生物発光ラベル（例えば、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウム・エステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、オキサレートエステル、ジオキセタンまたはＧＦＰおよびその類似体）、放射性同位体、金属、金属キレートもしくは金属カチオンまたはｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはインサイツ診断および画像処理での使用に特に適しているその他の金属もしくは金属カチオン、ならびに発色団および酵素（例えば、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ－Ｖ－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコール脱水素酵素、アルファグリセロリン酸脱水素酵素、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－ＶＩ－リン酸脱水素酵素、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ）を含む。他の好適なラベルとしては、ＮＭＲまたはＥＳＲ分光法を用いて検出できる部分が挙げられる。このように標識した本発明の技術のＶＨＨおよびポリペプチドは、特定の標識の選択により、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはインサイツアッセイ（これ自体ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡおよびＥＩＡおよびその他の「サンドイッチ法」などとして知られるイムノアッセイ）ならびにｉｎ ｖｉｖｏ診断および画像処理の目的に使用し得る。

【0365】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ＦＡＰ結合物質に結合または遺伝的に融合されるタグを含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、単一タグまたは複数タグを含み得る。タグは例えば、ＦＡＰまたは腫瘍抗原などの目的のいずれか他の抗原へのＦＡＰ結合物質の結合を阻害または妨害しない、ペプチド、糖、またはＤＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、タグは、少なくとも約：３～５個のアミノ酸長、５～８個のアミノ酸長、８～１２個のアミノ酸長、１２～１５個のアミノ酸長、または１５～２０個のアミノ酸長である。タグの例は、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００５８９６２号に記載されている。いくつかの実施形態では、タグは、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）タグなどの親和性タグである。ある実施形態では、ＦＡＰ結合物質はＨｉｓタグを含む。

【0366】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、例えば、１種の金属または金属カチオンをキレートするためのキレート化基を含む。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、キレート化基は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である。

【0367】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ビオチン－（ストレプト）アビジン結合対などの、特異的結合対の片方の部分である官能基を含む。このような官能基を使って、本発明の技術のＦＡＰ結合物質を、結合対のもう一方の半分に結合される別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学化合物に、すなわち、結合対の形成を介して、連結し得る。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質をビオチンに複合化し、アビジンまたはストレプトアビジンに複合化された別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体に結合し得る。例えば、検出可能なシグナル生成物質がアビジンまたはストレプトアビジンに複合化される診断システムにおいて、このような結合ＦＡＰ結合物質を、例えば、レポーターとして用い得る。このような結合対を、例えば、医薬品目的に好適する担体を含む、担体へＦＡＰ結合物質を結合するのにも使用し得る。１つの非限定的例は、Ｃａｏ ａｎｄ Ｓｕｒｅｓｈ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，８，４，２５７（２０００）に記載されたリポソーム製剤である。このような結合対を、本発明の技術のＦＡＰ結合物質に治療活性薬剤を連結するのにも使用し得る。

【0368】

いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、必要に応じ、１個または複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、それぞれの結合領域および／またはターゲティング部分を連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、シグナル伝達物質およびターゲティング部分をそれぞれ連結する（または２つ以上のターゲティング部分の場合、シグナル伝達物質をターゲティング部分の１つに連結する）リンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に記載の種々の官能基、残基、または部分をＦＡＰ結合物質に連結するのに利用し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合領域および結合タンパク質の安定性、配向、結合、中和、および／または排出特性に影響を与えない、またはそれらを低下させない単一アミノ酸または複数のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、リンカーは、ペプチド、タンパク質、糖、または核酸から選択される。

【0369】

いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、ターゲティング部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、シグナル伝達物質内にリンカーを含む（例えば、単鎖ＴＮＦの場合には、トリマーを生じる２つのリンカーを含み得る）。

【0370】

本発明の技術は、種々のリンカー配列の使用を意図する。いくつかの実施形態では、リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質から誘導され得るか、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３－１６７；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に記載されている経験的リンカーである。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカー設計データベースおよびＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９ ａｎｄ Ｃｒａｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９－３１２に記載のものなどのコンピュータープログラムを用いて設計し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本発明のＦＡＰ結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。

【0371】

いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長未満である。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満である。いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長を超える。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長超である。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。

【0372】

いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、ターゲティング部分とシグナル伝達物質のそれらの受容体への効果的結合を可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、リンカー長さは、１つのターゲティング部分とシグナル伝達物質の同じ細胞上の受容体への効果的結合、ならびにその他のターゲティング部分の別の細胞への効果的結合を可能にする。細胞対の例は、本明細書の他の場所で提供される。

【0373】

いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、少なくとも、同じ細胞上の１つのターゲティング部分およびシグナル伝達物質の受容体への結合部位の間の最短距離に等しい。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、同じ細胞上の１つのターゲティング部分およびシグナル伝達物質の受容体への結合部位の間の最短距離の、少なくとも２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または２０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または、それを超える。

【0374】

いくつかの実施形態では、あるリンカーは２つのターゲティング部分を相互に連結し、このリンカーは短い長さを有し、また、あるリンカーはターゲティング部分とシグナル伝達物質を連結し、このリンカーは２つのターゲティング部分を連結するリンカーより長い。例えば、いくつかの実施形態では、２つのターゲティング部分を連結するリンカーと、ターゲティング部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーの間のアミノ酸長さの差異は、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。

【0375】

いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリン残基から実質的に構成される（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％のグリシンとセリン）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）_ｎであり、式中、ｎは、約１～約８、例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８（配列番号８１０～配列番号８１７）である。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８１８）である。いくつかの実施形態では、リンカーとしては、限定されないが、下記配列を有するリンカーが挙げられる：ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（配列番号８１０）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（ｎ＝１～４）（配列番号８１０～８１３）、（Ｇｌｙ）_８（配列番号８１９）、（Ｇｌｙ）_６（配列番号８２０）、（ＥＡＡＡＫ）_ｎ（ｎ＝１～３）（配列番号８２１～８２３）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_ｎＡ（ｎ＝２～５）（配列番号８２４～８２７）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号８２４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）_４Ａ（配列番号８２８）、ＰＡＰＡＰ（配列番号８２９）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号８３０）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号８３１）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号８３２）、および（ＸＰ）_ｎ、Ｘは、任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを示す。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＳである。

【0376】

いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳＥ（配列番号８３３）、ＧＳＥＳＧ（配列番号８３４）、ＧＳＥＧＳ（配列番号８３５）、ＧＥＧＧＳＧＥＧＳＳＧＥＧＳＳＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＳ（配列番号８３６）、および４アミノ酸間隔毎にランダムに配置されたＧ、Ｓ、およびＥのリンカーの内の１種または複数である。

【0377】

いくつかの実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。いくつかの実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。理論に束縛されることを望むものではないが、いくつかの実施形態では、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラス抗体で見つかるヒンジ部は、フレキシブルスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部が空間中で自由に動くことを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは、構造上多様であり、免疫グロブリンクラスおよびサブクラス中の配列および長さの両方で変動する。例えば、ヒンジ部の長さおよび可撓性は、ＩｇＧサブクラス内で変動する。ＩｇＧ１のヒンジ部は、アミノ酸２１６～２３１を包含し、それが自由にフレキシブルであるために、Ｆａｂフラグメントは、それらの対称軸の周りで回転でき、２つの重鎖間ジスルフィド架橋の最初の位置を中心とする球内で移動できる。ＩｇＧ２は、ＩｇＧ１より短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基と４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ部は、グリシン残基を欠き、比較的短く、また、追加の重鎖間ジスルフィド架橋により安定化された剛性ポリプロリン二重らせん体を含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可撓性を制限する。ＩｇＧ３は、６２個のアミノ酸を含む（２１個のプロリンと１１個のシステインを含む）その特有の延長されたヒンジ部（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により、他のサブクラスとは異なり、柔軟性を欠くポリプロリン二重らせん体を形成する。ＩｇＧ３では、Ｆａｂフラグメントは、Ｆｃフラグメントから比較的遠くに離れており、より大きな可撓性を分子に与える。ＩｇＧ３の伸びたヒンジは、他のサブクラスに比べて、そのより高分子量の原因でもある。ＩｇＧ４のヒンジ部は、ＩｇＧ１より短く、その可撓性は、ＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ部の可撓性は、次の順に低下すると報告されている：ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２。

【0378】

結晶学的調査によれば、免疫グロブリンヒンジ部は、機能的に次の３つの領域にさらに細分できる：上部ヒンジ部、コア部、および下部ヒンジ部。Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ部は、Ｃ_Ｈ１のカルボキシル末端～運動を制限するヒンジ中の最初の残基、通常は２つの重鎖間の鎖間ジスルフィド結合を形成する最初のシステイン残基のアミノ酸を含む。上部ヒンジ部の長さは、抗体のセグメントの可撓性と相関する。コアヒンジ部は重鎖間ジスルフィド架橋を含み、下部ヒンジ部はＣ_Ｈ２ドメインのアミノ末端に繋がり、かつＣ_Ｈ２中の残基を含む。野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ部は、配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓを含み、これは、ジスルフィド結合形成により二量体化されると、環状オクタペプチドを生成し、これが旋回軸として機能することにより、可撓性を付与すると考えられている。いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、任意の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）の１、または２、または３個の上部ヒンジ部、コア部および下部ヒンジ部を含む。ヒンジ部はまた、１つまたは複数のグリコシル化部位も含み得、これは、多くの構造上異なるタイプの炭水化物付着部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ部の１７アミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸内プロテアーゼに対するヒンジ部ポリペプチドの耐性を付与し、これは、分泌性免疫グロブリンにとって、有利な性質であると考えられる。いくつかの実施形態では、本発明の技術のリンカーは、１つまたは複数のグリコシル化部位を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインである。

【0379】

いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は抗体Ｆｃ領域に連結され、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３ドメインの片方または両方、および場合によりヒンジ部を含む。例えば、単一ヌクレオチド配列としてＦｃ領域に連結された本発明のＦＡＰ結合物質をコードするベクターを用いて、このようなポリペプチドを調製できる。

【0380】

いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧなどの合成リンカーである。

【0381】

いくつかの実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本発明のＦＡＰ結合物質の生物活性を改善するように機能する。別の例では、リンカーは、ＦＡＰ結合物質を特定の細胞型または部位に向けるように機能し得る。

【0382】

ＦＡＰ結合物質の改変と産生
いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＶＨＨであるターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、特定の生物源または特定の調製法に限定されない。例えば、ＶＨＨは通常、下記により得ることができる：（１）天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインを単離することにより；（２）天然のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現により；（３）天然のＶＨＨドメインの「ヒト化」により、またはこのようなヒト化ＶＨＨドメインをコードする核酸の発現により；（４）ヒト由来などの哺乳動物種由来などの任意の動物種由来の天然のＶＨドメインの「ラクダ化」、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（５）当該技術分野で記載の「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」により、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（６）当該技術分野において既知のタンパク質、ポリペプチドまたはその他のアミノ酸配列のための合成または半合成技術を用いることにより；（７）当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いてＶＨＨをコードする核酸を調製し、続けて、こうして得られた拡散を発現させることにより；および／または（８）前述の１つまたは複数の任意の組み合わせにより。

【0383】

ある実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ヒトＦＡＰに向けられた天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このようなＶＨＨ配列は通常、ラクダ科の動物種をＦＡＰ分子で適切に免疫する（すなわち、ＦＡＰに対する免疫応答および／またはＦＡＰに対する重鎖抗体を生じるように）ことにより、ラクダ科の動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ることにより、および任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＦＡＰに対するＶＨＨ配列を生成することにより、生成または得ることができる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰに対する天然のＶＨＨドメインは、ラクダ科の動物ＶＨＨ配列の未処理ライブラリーから、例えば、当技術分野で既知の１種または複数のスクリーニング技術を使って、ＦＡＰ、またはその少なくとも１つの部分、フラグメント、抗原決定基またはエピトープを用いてこのようなライブラリーをスクリーニングすることにより、得ることができる。このようなライブラリーおよび技術は、例えば、国際公開第９９／３７６８１号、国際公開第０１／９０１９０号、国際公開第０３／０２５０２０号、および国際公開第０３／０３５６９４号に記載されている。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、例えば、国際公開第００／４３５０７号に記載のランダム変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術により未処理ＶＨＨライブラリーから得られたＶＨＨライブラリーなどの未処理ＶＨＨライブラリー由来の改善された合成または半合成ライブラリーを使用し得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＦＡＰに対するＶＨＨ配列を得るための別の技術は、重鎖抗体を発現できる遺伝子導入哺乳動物を適切に免疫すること（すなわち、ＦＡＰに対する免疫応答および／またはＦＡＰに対する重鎖抗体を生じるように）、遺伝子導入哺乳動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ること、およびその後、任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発してＦＡＰに対するＶＨＨ配列を生成することを含む。例えば、このために、国際公開第０２／０８５９４５号および国際公開第０４／０４９７９４号（これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の重鎖抗体発現マウスおよびさらなる方法および技術を使用できる。

【0384】

ある実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、「ヒト化」されている、すなわち、天然のＶＨＨ配列（および特に、フレームワーク配列中の）のアミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ヒト由来の従来の４鎖抗体由来のＶＨドメイン中の対応する位置にある１個または複数のアミノ酸残基で置換することによる、ＶＨＨを含む。これは、当該技術分野において既知のヒト化技術を使用して実施できる。いくつかの実施形態では、可能なヒト化置換またはヒト化置換の組み合わせは、当該技術分野において既知の方法、例えば、ＶＨＨの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列との間の比較により決定し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化置換は、得られたヒト化ＶＨＨが有利な機能特性をなお保持するように選択される。通常、ヒト化の結果として、本発明の技術のＶＨＨは、より「ヒト様」になり得るが、対応する天然のＶＨＨドメインと比較して、低減された免疫原性などの好ましい特性を依然として保持している。いくつかの実施形態では、本発明の技術のヒト化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ、したがって、出発材料として天然のＶＨＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。

【0385】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、「ラクダ化」されている、すなわち、従来の４鎖抗体由来の天然のＶＨドメインのアミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ラクダ科の動物の重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置にある１個または複数のアミノ酸残基で置換することによる、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このような「ラクダ化」置換は、ＶＨ－ＶＬインターフェースを形成するおよび／または、そこに存在するアミノ酸位置に、および／またはいわゆるラクダ科の顕著な特徴残基（例えば、国際公開第９４／０４６７８号を参照されたい、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）の位置に挿入されるいくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨを生成するまたは設計するための出発材料または出発点として用いられるＶＨ配列は、哺乳動物由来のＶＨ配列、例えば、ＶＨ３配列などの、ヒトのＶＨ配列である。いくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ（すなわち、上記（１）～（８）で示したような）、したがって、出発材料として天然のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。

【0386】

いくつかの実施形態では、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ用意し、次に、当該技術分野において既知の方法で、ヌクレオチド配列中の１個または複数のコドンを新規ヌクレオチド配列がそれぞれ「ヒト化」または「ラクダ化」ＶＨＨをコードするような方法で変更することにより実施することができる。この核酸は、その後、本発明の技術の目的のＶＨＨを得るように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。あるいは、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列に基づいて、本発明の技術の目的のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれのアミノ酸配列を設計し、その後、当該技術分野において既知のペプチド合成技術を用いて新規に合成できる。また、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に基づいて、目的のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれをコードするヌクレオチド配列を設計し、次に当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いて新規に合成でき、その後、こうして得られた核酸を、本発明の技術の目的のＶＨＨが得られるように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。天然のＶＨ配列またはＶＨＨ配列から出発して、本発明の技術のＶＨＨおよび／またはそれをコードする核酸を得るその他の好適な方法および技術は、当技術分野において既知であり、例えば、１つまたは複数の天然のＶＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列および／またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、１つまたは複数の天然のＶＨＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、および／または１つまたは複数の合成または半合成配列を、本発明の技術のＶＨＨまたはそれをコードするヌクレオチド配列もしくは核酸を得るように、好適な方法で組み合わせることを含み得る。

【0387】

本発明の技術のＦＡＰ結合物質を産生するための方法は、本明細書に記載される。例えば、本発明の技術のＦＡＰ結合物質をコードするＤＮＡ配列は、当該技術分野において、既知の方法を使用して化学的に合成できる。合成ＤＮＡ配列を、例えば、発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列に連結して、目的のＦＡＰ結合物質をコードする遺伝子発現構築物を産生できる。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本発明の技術のＦＡＰ結合物質をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

【0388】

本発明の技術のＦＡＰ結合物質をコードする核酸は、発現ベクター中に組み込まれ（連結され）てよく、このベクターは、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術により宿主細胞中に導入できる。例えば、本発明の技術のＦＡＰ結合物質をコードする核酸は、レトロウイルス形質導入により宿主細胞中に導入できる。宿主細胞の例は、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ヒーラ細胞、仔ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎培養細胞（ＣＯＳ）、またはヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞は、宿主細胞が本発明の技術のＦＡＰ結合物質をコードする遺伝子を発現するのを可能にする条件下で増殖できる。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本発明の技術のＦＡＰ結合物質をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、このような発現ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。

【0389】

特定の発現および精製条件は、用いられる発現系に応じて変化する。例えば、遺伝子が大腸菌中で発現される場合、遺伝子は最初に、操作された遺伝子を細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、および原核生物シグナル配列の下流に配置することにより発現ベクター中に挿入される。別の例では、操作された遺伝子が真核生物宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞中で発現される場合、遺伝子は最初に、例えば、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、転写促進因子、および種々のイントロンを含む発現ベクター中に挿入される。遺伝子構築物は、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術を用いて宿主細胞中に導入できる。

【0390】

本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、タンパク質の発現を許容する条件下で、ＦＡＰ結合物質をコードする発現ベクターで形質導入された宿主細胞を増殖させることにより産生できる。発現後、タンパク質を収集し、例えば、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）などの親和性タグまたはクロマトグラフィーにより、当該技術分野において周知の技術を用いて精製できる。ある実施形態では、ＦＡＰ結合物質はＨｉｓタグを含む。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質はＨｉｓタグおよびＨｉｓタグの切断を可能にするタンパク分解部位を含む。

【0391】

したがって、いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本発明の技術のＦＡＰ結合物質をコードする核酸を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本発明の技術のＦＡＰ結合物質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。

【0392】

いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質またはＦＡＰを含むキメラタンパク質は、例えば、患者中でｉｎ ｖｉｖｏ発現され得る。例えば、いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質またはＦＡＰを含むキメラタンパク質は、本発明のＦＡＰ結合物質またはＦＡＰを含むキメラタンパク質をコードする核酸の形態で投与され得る。いくつかの実施形態では、核酸はＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質またはＦＡＰを含むキメラタンパク質は、修飾ｍＲＮＡ、すなわち、１種または複数の修飾ヌクレオチドを含むｍＲＮＡによりコードされる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、米国特許第８，２７８，０３６号で見出される１つまたは複数の修飾を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ψ、および２’－Ｏ－メチル－Ｕの内の１種または複数を含む。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本発明の１種または複数のキメラタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡの投与に関する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療法に関する。いくつかの実施形態では、核酸は、腫瘍溶解性ウイルス、例えば、アデノウイルス、レオウイルス、はしか、単純ヘルペス、ニューカッスル病ウイルスまたはワクシニアの形態である。

【0393】

薬学的に許容可能な塩および賦形剤
本明細書で記載のＦＡＰ結合物質（および／またはいずれか他の治療薬）は、無機酸もしくは有機酸と反応できる、充分に塩基性の官能基を有し、または無機塩基または有機塩基と反応できる、カルボキシル基を有して、薬学的に許容可能な塩を形成できる。薬学的に許容可能な酸付加塩は、当該技術分野でよく知られているように、薬学的に許容可能な酸から形成される。このような塩は、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２－１９（１９７７およびＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２、に挙げられた薬学的に許容可能な塩を含む。これらの文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0394】

薬学的に許容可能な塩としては、非限定的例であるが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、ホスフェート、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、ａ－ヒドロキシ酪酸塩、ブチン－１，４－ジカルボキシレート、ヘキシン－１，４－ジカルボキシレート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヒプル酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。

【0395】

「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および塩基を有する本発明の技術の組成物の塩を指す。適切な塩基としては、限定されないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換のモノ－、ジ－、またはトリ－アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル、Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ－、ビス－、またはトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、またはトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ－、ビス－、またはトリス－（２－０Ｈ－低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸などが挙げられる。

【0396】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。

【0397】

医薬組成物および製剤
いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本明細書で記載のＦＡＰ結合物質（および／またはいずれか他の治療薬）および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、本発明のＦＡＰ結合物質を含む医薬組成物に関する。別の実施形態では、本発明の技術は、本明細書に記載のいずれか他の治療薬を含む医薬組成物に関する。さらなる実施形態では、本発明の技術は、本発明のＦＡＰ結合物質と本明細書に記載のいずれか他の治療薬との組み合わせを含む医薬組成物に関する。本明細書で記載のいずれの医薬組成物も、薬学的に許容可能な担体またはビークルを含む組成物の成分として、対象に投与できる。このような組成物は必要に応じ、適切な投与用の形態を与えるように、適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を含み得る。

【0398】

いくつかの実施形態では、医薬賦形剤は、ピーナッツオイル、大豆油、ミネラルオイル、ゴマ油などの石油、動物、植物、または人工起源のものを含む、水および油などの液体であり得る。医薬賦形剤は、例えば、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってよい。さらに、助剤、安定化剤、増粘化剤、潤滑剤、および着色料を使用することができる。一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、対象に投与される場合、無菌である。本明細書で記載のいずれかの薬剤が静脈内に投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水および水性デキストロースならびにグリセリン溶液はまた、液体賦形剤として、特に注射可能溶液に用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げられる。本明細書で記載のいずれの薬剤も、必要に応じ、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでよい。適切な医薬賦形剤のそのほかの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）に記載されている。この文献は参照により本明細書に組み込まれる。

【0399】

本発明の技術は、種々の製剤中に記載医薬組成物（および／または追加の治療薬）を含む。本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の治療薬）も、液剤、懸濁剤、乳濁液、点滴剤、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、散剤、徐放製剤、坐剤、乳剤、エアロゾル、噴霧剤、懸濁剤、凍結乾燥散剤、凍結懸濁剤、乾燥散剤、または使用に適する他の任意の形態をとってよい。一実施形態では、組成物はカプセルの形態である。別の実施形態では、組成物は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、軟質ゲルカプセルの形態に処方される。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ゼラチンカプセルの形態に処方される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、液剤として処方される。

【0400】

いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）は、可溶化剤も含み得る。また、薬剤は当技術分野において既知の適切なビークルまたは送達装置を使って送達することができる。本明細書で概要を述べた併用療法剤は、単一の送達ビークルまたは送達担体で同時送達できる。

【0401】

本発明の技術の医薬組成物（および／または追加の薬剤）を含む製剤は単位剤形として好都合に提供でき、薬学の分野でよく知られたいずれかの方法により調製され得る。このような方法は通常、治療薬を担体と混合するステップを含み、担体は１種または複数の補助成分を構成する。通常、製剤は、治療薬と、液体担体、微粉化固相担体、または両方とを均一に、完全に混合すること、その後、必要に応じ、生成物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式または乾式造粒、散剤ブレンド、など、それに続く当該技術分野で既知の従来の方法を使って錠剤化すること）により調製される。

【0402】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載のいずれの医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、本明細書で記載の投与方法に適合された組成物として、ルーチン手順に従って処方される。

【0403】

いくつかの実施形態では、投与経路は、例えば、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、直腸内、吸入、または局所を含む。投与は局所的または全身性であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、経口により行われる。別の実施形態では、投与は非経口の注射による。投与方法は、開業医の自由裁量に任すことができ、１部には、病状の部位に依存する。大抵の場合、投与は本明細書で記載のいずれかの薬剤の血流中への放出をもたらす。

【0404】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＦＡＰ結合物質は、経口投与に適合された組成物として、常法に従って処方される。限定ではなく例として、いくつかの実施形態では、経口送達用の組成物は、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態である。いくつかの実施形態では、経口投与される組成物は、薬学的に口当たりの良い製剤を提供するために、１種または複数の薬剤、例えば、フルクトース、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料、ペパーミント、冬緑油またはチェリー油などの調味料、着色料および保存剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、タブレットまたは丸薬形態の場合、コートして消化管での崩壊および吸収を遅らせ、長期間にわたる持続作用を提供する。本明細書に記載のいずれかの浸透活性駆動ＦＡＰ結合物質を取り囲む選択的透過性膜も、経口投与組成物として好適である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルの周りの環境からの液体が駆動化合物により吸収され、この化合物は膨潤して開口部を介し薬剤または薬剤組成物を追い出す。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤の急上昇プロファイルとは対照的に、基本的に０次の送達プロファイルを提供することができる。いくつかの実施形態では、経口組成物は、例えばグリセロールモノステアレートまたはグリセロールステアレートなどの時間遅延物質を含む。いくつかの実施形態では、経口組成物は、標準的な賦形剤、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、および炭酸マグネシウムを含む。一実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。活性化合物に加えて、懸濁剤は、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天、トラガント、など、およびこれらの混合物などの沈殿防止剤を含んでよい。

【0405】

非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内注射および注入）に好適な剤形は、例えば、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、などを含む。それらは、無菌の固相組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造されてよく、これは、使用直前に、無菌の注入可能媒体中に溶解または懸濁され得る。それらは、例えば、当該技術分野において、既知の懸濁剤または分散剤を含み得る。非経口的投与に好適な製剤成分としては、注射用の水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、またはその他の合成溶媒などの無菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。

【0406】

静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌性水、クレモフォアＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、およびこれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。

【0407】

本明細書にて提供される組成物は、単独でまたは他の好適な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエーロゾル製剤（すなわち、「噴霧化」製剤）を作製することができる。エーロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容され得る加圧化噴射剤中に入れることができる。

【0408】

本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、当業者に既知の制御放出によりまたは徐放手段または送達装置により投与可能である。例としては、米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６号、および同第５，７３３，５５６号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの特許のそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このような剤形は、例えば、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、その他のポリマーマトリクス、ゲル、浸透膜、浸透系、多層被膜、微粒子、リポソーム、マイクロスフェア、またはこれらの組み合わせを用いて、１つまたは複数の有効成分の制御放出または徐放を可能にするために有用であり、様々な割合での所望の放出プロファイルを提供することができる。本明細書に記載されたものを含む当業者に既知の適切な制御放出または徐放製剤は、本明細書で記載の薬剤の有効成分と共に使用する上で容易に選択することができる。本発明の技術はこのように、限定されないが、制御放出または徐放に適合された錠剤、カプセル、ジェルカプセルおよびカプレットなどの経口投与に好適な単位剤形を提供する。

【0409】

有効成分の制御放出または徐放は、限定されないが、ｐＨ変化、温度変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用可能性、水の濃度または利用可能性、または他の生理学的条件または化合物を含む、種々の条件により刺激できる。

【0410】

別の実施形態では、徐放系を、治療される標的領域の近傍に配置でき、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３、中の概説で考察されている他の放出制御系を使用し得る。

【0411】

医薬製剤は好ましくは無菌である。無菌化は、例えば、無菌濾過膜で濾過することにより達成される。組成物が凍結乾燥される場合、凍結乾燥および再構成の前またはその後でフィルター滅菌を行うことができる。

【0412】

投与および投与量
本発明の技術により投与されるＦＡＰ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬の実際の用量は、特定の剤形および投与方法に応じて変わることは理解されよう。当業者なら、ＦＡＰ結合物質の作用を変える可能性のある多くの要因（例えば、体重、性別、食事、投与時期、投与経路、排出速度、対象の状態、薬剤の組み合わせ、遺伝的素因および反応感度）を考慮に入れることができる。投与は、最大耐量の範囲内で連続的にまたは１種または複数の別々の投与量で実施できる。与えられた一連の条件に対する最適投与速度は、従来の用量投与試験を使って、当業者により確認できる。

【0413】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬の好適な投与量は、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１ｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｇ／ｋｇ体重、約１０ｇ／ｋｇ体重（これらの間の全ての値および範囲を含む）である。

【0414】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬の個々の投与量は、例えば、単位剤形当たり約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５ｇ、約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１ｇ、約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約４０ｍｇの有効成分、約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または単位剤形当たり約５ｍｇ～約８０ｍｇを含む単位剤形で投与される。例えば、単位剤形は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）であってよい。

【0415】

一実施形態では、ＦＡＰ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬は、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または毎日約５ｍｇ～約８０ｍｇの量で投与される。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約７．５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）の１日量で投与される。

【0416】

本発明の技術の特定の実施形態では、ＦＡＰ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬を含む医薬組成物は、例えば、１日２回以上（例えば、毎日約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、または約１０回）、１日約１回、約１日おき、約３日おき、週約１回、２週毎に約１回、毎月約１回、２ヶ月毎に約１回、３ヶ月毎に約１回、６ヶ月毎に約１回、または毎年約１回投与されてよい。

【0417】

併用療法および追加の治療薬
いくつかの実施形態では、本発明の技術の医薬組成物は、１種または複数の追加の治療薬と共に同時投与される。いくつかの実施形態では、同時投与は、同時または順次であってよい。

【0418】

一実施形態では、追加の治療薬および本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、対象に同時に投与される。本明細書で使用される場合、用語「同時に」は、追加の治療薬およびＦＡＰ結合物質が約６０分程度、例えば約３０分程度、約２０分程度、約１０分程度、約５分程度、または約１分程度の時間間隔で投与されることを意味する。追加の治療薬およびＦＡＰ結合物質の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬およびＦＡＰ結合物質を含む製剤）のまたは別々の製剤（例えば、追加の治療薬を含む第１の製剤およびＦＡＰ結合物質を含む第２の製剤）の同時の投与により行うことができる。

【0419】

同時投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬およびＦＡＰ結合物質の薬理学的活性が時間経過と共に重なりあい、それにより組み合わされた治療効果が発揮されるような場合には、治療薬が同時に投与される必要はない。例えば、追加の治療薬およびＦＡＰ結合物質は、順次に投与できる。本明細書で使用される場合、用語の「順次に」は、追加の治療薬およびＦＡＰ結合物質が約６０分を超える時間間隔で投与されることを意味する。例えば、追加の治療薬とＦＡＰ結合物質との逐次投与の間の時間間隔を、約６０分を超えて、約２時間を超えて、約５時間を超えて、約１０時間を超えて、約１日を超えて、約２日を超えて、約３日を超えて、約１週間を超えて間隔を開ける、約２週間を超えて間隔を開ける、または約１ヶ月を越えて間隔を開けることができる。最適投与時間は、投与される追加の治療薬およびＦＡＰ結合物質の代謝、排泄速度、および／または薬力学的活性に依存するであろう。追加の治療薬またはＦＡＰ結合物質のいずれかを、最初に投与してよい。

【0420】

同時投与はまた、治療薬が同じ投与経路により対象に投与される必要はない。むしろ、それぞれの治療薬は、任意の適切な経路、例えば、非経口または経口（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）で投与できる。

【0421】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦＡＰ結合物質は、別の治療薬と同時投与されると、相乗的に作用する。本明細書で使用される場合、「相乗的に」は、少なくとも２種の物質の組み合わせにより生成され、他の方法によりその物質の個別の投与から生じる治療効果を超える、相加的より大きな治療効果を指す。例えばより低用量の１種または複数の物質を、疾患または障害を治療するのに用いて、高い治療効果および低い副作用をもたらしてもよい。このような実施形態では、ＦＡＰ結合物質および追加の治療薬は、治療薬が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。

【0422】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、追加の治療薬としての化学療法剤に関する。例えば、限定されないが、本発明のＦＡＰ結合物質と化学療法剤のこのような組み合わせは、本明細書の別の場所で記載のように、癌の治療で使用される。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ、ＣＹＴＯＸＡＮ（シクロホスファミド）、スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン、アジリジン、例えば、ベンゾドーパ，カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ、エチレンイミン、メチラメラミン例えば、アルトレタミン、トリエチルエネメラミン、トリエチレンネフォスフォラミド、トリエチレンチオフォスフォラミドおよび、トリメチロールメラミン、アセトゲニン（例えば、ブラタシン、ブラタチノン）、カントテシン（合成類似剤トポテカンを含む）、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙ ｓｔａｔｉｎ）、ＣＣ－１０６５（アドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）、クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８など）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似薬ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコディクチン、スポンギスタチン、ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロルエタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）、抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩＩとカリチアマイシンオメガＩＩ（Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照）、ダイネマイシン、ダイネマイシンＡを含む、ビスフォスフォネート、例えば、クロドロネート、エスペラマイシン、ならびに、ネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）（モルフォリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チュベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン、代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、葉酸の類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート、プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタン、葉酸補充液、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デメコルチ ン、ジアジクオン、エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）、エリプチニウムアセテート、エポチロン、エトグルシド、ガリウムニトレート、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（例えば、Ｔ２毒、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイディン）、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（アラ－Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、トキソイド（例えば、タキソール、パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、アブラキサン（登録商標）、クレモフォアフリー、アルブミン処理ナノ粒子形成パクリタキセル（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，１１１．）、タキソテールドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ））、クロランブシル、ジェムザール（ゲムシタビン）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキセート、白金類似体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンなど）、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ナベルビン（ビノレルビン）、ノバントロン、テニポシド、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、イリノテカン（キャンプトサー，ＣＰＴ－１１）（イリノテカンと５－ＦＵおよびロイコボリンの治療法を含む）、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ヂルルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイド、例えば、レチノイン酸、カペシタビン、コンブレタスタチン、ロイコボリン（ＬＶ）、オキサリプラチン、オキサリプラチン治療法（ＦＯＬＦＯＸ）を含む、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、ＰＫＣ－ａ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））および細胞増殖を抑制するＶＥＧＦ－Ａならびに上述のいずれかの薬剤の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体、が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、いくつかの実施形態では、治療の方法は、放射線の使用をさらに含む。さらに、いくつかの実施形態では、治療の方法は、光線力学的治療の使用をさらに含む。

【0423】

したがって、いくつかの実施形態では、本発明の技術は、ＦＡＰ結合物質および化学療法剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、化学療法剤を用いる治療を受けている患者に対するＦＡＰ結合物質の投与に関する。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＤＮＡ挿入剤、例えば、限定されないが、ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノルビシン、およびエピルビシンである。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ挿入剤は、ドキソルビシンである。

【0424】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ドキソルビシンと同時投与されると、相乗的に作用する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、腫瘍または癌の治療での使用において、ドキソルビシンと同時投与されると相乗的に作用する。例えば、ＦＡＰ結合物質とドキソルビシンとの同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質とドキソルビシンの組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質およびドキソルビシンは、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、変異IFN-αなどの変異インターフェロンを含む。いくつかの実施形態では、変異IFN-αは、配列番号６８８または配列番号６８９に対して、置換Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、１４８、１４９および１５３の位置に１個または複数の変異を含む。

【0425】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、１種または複数の免疫調節薬、例えば、限定されないが、免疫チェックポイントを調節する物質を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２の内の１種または複数を標的とする。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２の内の１種または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ニボルバム（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＯＣＨＥ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの内の１つまたは複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの内の１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３および抗４－１ＢＢ抗体としても知られる）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、固形腫瘍および／またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫および／または頭頸部癌および／または多発性骨髄腫の治療のために、ウレルマブと組み合わされる（必要に応じ、ニボルバム、リリルマブ、およびウレルマブの内の１種または複数と組み合わされる）。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの内の１種または複数を標的とする物質である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの内の１種または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）および／またはトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、黒色腫、前立腺癌、および肺癌の内の１種または複数の治療のために、イピリムマブと組み合わされる（必要に応じ、バビツキシマブと組み合わされる）。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０を標的とする。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、オファツムマブ（ＧＥＮＭＡＢ）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ）、ＡＭＥ－１３３ｖ（ＡＰＰＬＩＥＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＥＶＯＬＵＴＩＯＮ）、オクレリズマブ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＴＲＵ－０１５（ＴＲＵＢＩＯＮ／ＥＭＥＲＧＥＮＴ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ－１０６）などの抗体である。

【0426】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、ＦＡＰ結合物質およびチェックポイント阻害剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、チェックポイント阻害剤を用いる治療を受けている患者に対するＦＡＰ結合物質の投与に関する。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、およびＣＴＬＡ－４（本明細書に記載の抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＰＤ－Ｌ２、および抗ＣＴＬＡ－４物質のいずれかを含む）の内の１種または複数を標的とする物質である。いくつかの実施形態ではチェックポイント阻害剤は、ニボルバム（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＯＣＨＥ）、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）およびトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）内の１種または複数である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１に対する抗体である。

【0427】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と同時投与されると、相乗的に作用する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、腫瘍または癌の治療での使用において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と同時投与されると相乗的に作用する。例えば、ＦＡＰ結合物質と抗ＰＤ－Ｌ１抗体との同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質と抗ＰＤ－Ｌ１抗体の組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質および抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、変異IFN-αなどの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異IFN-αは、配列番号６８８または配列番号６８９に準拠して、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、位置１４８、１４９および１５３で１個または複数の変異を含む。

【0428】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、ＦＡＰ結合物質および免疫抑制剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明の技術は、免疫抑制剤を用いる治療を受けている患者に対するＦＡＰ結合物質の投与に関する。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ＴＮＦである。

【0429】

例示的実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＴＮＦと同時投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、腫瘍または癌の治療での使用において、ＴＮＦと同時投与されると相乗的に作用する。例えば、ＦＡＰ結合物質とＴＮＦとの同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質とＴＮＦの組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質およびＴＮＦは、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、変異IFN-αなどの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異IFN-αは、配列番号６８８または配列番号６８９に準拠して、置換Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、位置１４８、１４９および１５３で１個または複数の変異を含む。

【0430】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、腫瘍または癌の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、血液系腫瘍の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。ある実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、固形腫瘍の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例えば、ＦＡＰ結合物質とＣＡＲ Ｔ細胞との使用は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、ＣＡＲ Ｔ細胞分裂を誘導する。いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を誘導する。いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、ＣＡＲ Ｔ細胞増のアナジーを防止する。

【0431】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、抗原（例えば、腫瘍抗原）、例えば、限定されないが、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、５Ｔ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４７、ＣＳ１、ＣＤ１３８、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ、Ｌ１－ＣＡＭ、ＭＵＣ１６、ＲＯＲ－１、ＩＬ１３Ｒａ２、ｇｐ１００、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ヒトパピローマタイプ１６ Ｅ６（ＨＰＶ－１６ Ｅ６）、ＣＤ１７１、葉酸受容体アルファ（ＦＲａ）、ＧＤ２、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、および血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ならびに当該技術分野において周知のその他の腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ Ｔ細胞を含む。追加の腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍ１１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－ＡＩ２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－０５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、ａ－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、ａ－カテニン、３－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００、Ｐｍｅ１１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、Ｉｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶ－コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0432】

例示的ＣＡＲ Ｔ細胞療法としては、ＪＣＡＲ０１４（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１５（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１７（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１８（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２０（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２３（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２４（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＫＴＥ－Ｃ１９（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ）、ＢＰＸ－４０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ－５０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ－６０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ｂｂ２１２１（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ Ｂｉｏ）、ＣＤ－１９ Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ ｃｅｌｌｓ（眠れる森の美女細胞）（Ｚｉｏｐｈａｒｍ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＵＣＡＲＴ１９（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ１２３（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ３８（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴＣＳ１（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＯＸＢ－３０２（Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａ、ＭＢ－１０１（Ｍｕｓｔａｎｇ Ｂｉｏ）およびＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより開発されたＣＡＲ Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0433】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、国際公開第２０１３／１０７７９号、国際公開第２０１５／００７５３６号、国際公開第２０１５／００７５２０号、国際公開第２０１５／００７５４２号、および国際公開第２０１５／００７９０３号に記載の１種または複数のキメラ物質との併用療法に関する。これらの特許の全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0434】

限定されないが、感染症適用を含む、いくつかの実施形態では、本発明の技術は、追加の治療薬としての抗感染薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗ウイルス薬であり、これは、限定されないが、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォヴィル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、およびホスカルネットを含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は抗菌剤であり、これは、限定されないが、セファロスポリン系抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロール、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、およびセフトビプロール）；フルオロキノロン系抗生物質（シプロ、レヴァキン、フロキシン、テクイン、アベロックスおよびノルフロックス）；テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリン）；ペニシリン系抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、およびメチシリン）；モノバクタム系抗生物質（アズトレオナム）；およびカルバペネム系抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネム）を含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗マラリア薬（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アーテメータ／ルメファントリン、アトバクオン／プログアニルおよびスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、パモ酸ピランテル、およびアルベンダゾールを含む。

【0435】

限定されないが、自己免疫疾患適用を含むいくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイド性抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症剤である。ステロイド、特に副腎皮質ホルモン剤およびそれらの合成類似体は当該技術分野においてよく知られている。本発明の技術で有用な副腎皮質ステロイドの例としては、ヒドロキシルトリアムシノロン、α－メチルデキサメタゾン、β－メチルβ－メタゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、β－メタゾンベンゾエート、β－メタゾンジプロピオネート、β－メタゾンバレレート、クロベタゾールバレレート、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラソンジアセテート、ジフルコルトロンバレレート、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルメタゾンピバレート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）アセテート、フルランドレノロン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンブチレート、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾンジアセテート、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾンおよびその残りのエステル、クロロプレドニソン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオネートが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の技術で使用してよい（ＮＳＡＩＤＳ）としては、限定されないが、サリチル酸、アセチルサリチル酸、サリチル酸メチル、グリコールサリチレート、サリチルアミド、ベンジル－２，５－ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、スリンダク（ｆｕｌｉｎｄａｃ）、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、およびインドメタシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質（例えば、アザチオプリン、メトトレキセート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（バシリキシマブ、ダクリズマブ、およびムロモナブ）、抗イムノフィリン剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小分子生物学的製剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害薬であってよい。追加の抗炎症剤は、例えば、米国特許第４，５３７，７７６号に記載され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0436】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＦＡＰ結合物質は、修飾されている誘導体、すなわち、共有結合が組成物の活性を妨げないような組成物への任意のタイプの分子の共有結合により修飾されている誘導体を含む。例えば、限定するものではないが、誘導体は、特に、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたはその他のタンパク質への結合、などにより修飾されている組成物を含む。多くの化学修飾のいずれかを既知の技術、例えば、限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、などを使って行うことができる。

【0437】

さらに他の実施形態では、本明細書に記載のＦＡＰ結合物質は、例示的実施形態で、毒素、化学療法剤、放射性同位元素、およびアポトーシスまたは細胞死を引き起こす物質を含む細胞傷害薬をさらに含む。このような物質は、本明細書に記載の組成物に複合化され得る。

【0438】

本明細書で記載のＦＡＰ結合物質は従って翻訳後修飾されて、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば蛍光染料、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、および化学発光部分などの検出可能な部分、または、例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒、細胞傷害性薬、および放射性物質などの機能的部分を付加し得る。

【0439】

細胞傷害薬の例としては、メトトレキセート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン））；アントラサイクリン（ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含む）；抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む）；有糸分裂阻害薬（ａｎｔｉｍｙｔｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ）（例えば、ビンカアルカロイドビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。その他の細胞傷害薬としては、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン，１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害薬の混合物が挙げられる。

【0440】

さらなる細胞傷害薬としては、化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン、タキソール、イリノテカン、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｙｔａｂｉｎｅ）、ロイコボリン、ステロイド類、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモン拮抗薬、選択的アンドロゲン受容体調節薬、選択的エストロゲン受容体調節薬、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ－１アンタゴニスト、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１２またはＩＬ２）、ＩＬ－１２Ｒアンタゴニスト、毒素複合化モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス毒素などの植物および細菌由来の毒性酵素は、治療薬（例えば、抗体）と複合体形成して、細胞型特異的殺作用剤を生成し得る（Ｙｏｕｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４１９（１９８０））。

【0441】

他の細胞傷害薬としては、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇによる米国特許第６．６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが挙げられる。本発明の技術の実施形態はまた、放射性免疫複合体に関し、複合体形成剤を使用してまたは使用せずに、アルファまたはベータ粒子を放出する放射性核種がＦＡＰ結合物質に安定に結合される。このような放射性核種としては、例えば、リン－３２、スカンジウム－４７、銅－６７、ガリウム－６７、イットリウム－８８、イットリウム－９０、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、サマリウム－１５３、ルテチウム－１７７、レニウム－１８６またはレニウム－１８８などのβ放射体、およびアスタチン－２１１、鉛－２１２、ビスマス－２１２、ビスマス－２１３またはアクチニウム－２２５などのα放射体が挙げられる。

【0442】

検出可能な部分の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光材料のさらなる例としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。化学発光部分のさらなる例としては、ルミノールが挙げられるが、これに限定されない。生物発光材料のさらなる例としては、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられるが、これらに限定されない。放射性材料のさらなる例としては、ヨウ素－１２５、炭素－１４、硫黄－３５、トリチウムおよびリン－３２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0443】

治療方法
本明細書に記載の方法および組成物は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、線維性疾患、炎症性疾患または状態、貧血、自己免疫疾患、心臓血管疾患、創傷治癒、虚血関連疾患、神経変性疾患、代謝疾患、ならびに多くの他の疾患および障害を含む、種々の疾患および障害を治療する用途がある。

【0444】

さらに、本発明に物質のいずれかは、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、線維性疾患、および自己免疫疾患を含む、種々の疾患および障害の治療、または治療用の薬物の製造において使用し得る。

【0445】

いくつかの実施形態では、本発明は、慢性肉芽腫性疾患、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ運動失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、癌、心不全、自己免疫疾患、鎌状赤血球病、サラセミア、失血、輸血反応、糖尿病、ビタミンＢ１２欠乏、膠原血管病、シュワッハマン症候群、血小板減少性紫斑病、セリアック病、甲状腺機能低下症またはアジソン病などの内分泌腺不全状態、クローン病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチまたは若年性関節リウマチなどの自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、好酸球性筋膜炎または低免疫グロブリン血症または胸腺腫／胸腺癌などの免疫異常、移植片対宿主病、前白血病、非造血系症候群（Ｎｏｎｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（例えば、ダウン、デボウィッツ、セッケル）、フェルティー症候群、溶血性尿毒症症候群、骨髄異形成症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症、骨骨髄線維症、汎血球減少、赤芽球癆、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、マラリア、タンパク質不足、月経過多、全身性硬化症、肝硬変、低代謝状態、およびうっ血性心不全の内の１種もしくは複数の処置、またはそれを有する患者の処置に関する。

【0446】

いくつかの実施形態では、本発明は、慢性肉芽腫性疾患、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ運動失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、マイコバクテリア感染症、癌、強皮症、肝炎、Ｃ型肝炎、敗血症性ショック、および関節リウマチの内の１種または複数の処置、またはそれを有する患者の処置に関する。

【0447】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、癌の治療、または癌の患者に関する。本明細書で使用される場合、癌は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害し得る任意の制御されない細胞増殖を指し、原発性および転移性の腫瘍の両方を含む。元の位置から移動し重要な器官に播種される原発性腫瘍または癌は、罹患した器官の機能劣化により対象の死を最終的にもたらす場合がある。転移は、原発腫瘍部位のものとは異なる癌細胞または一群の癌細胞であり、原発腫瘍から身体の他の部位への癌細胞の播種から生ずる。転移は、最終的に対象の死をもたらす場合がある。例えば、癌は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含み得る。

【0448】

治療され得る癌の例としては、限定されないが、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性および毛様細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖、非分泌型、ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系の癌（例えば、脳（例えば、神経膠腫（星細胞腫、乏突起膠腫、および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫および神経腫）および骨髄の腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫）を含む）が挙げられる。

【0449】

治療され得る癌の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖が挙げられるが、これらに限定されない。

【0450】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、癌の治療のための改変シグナル伝達物質をさらに含むキメラの一部であるＦＡＰ結合物質を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の技術のＦＡＰ結合物質は、腫瘍を大きく低減および／または除去する。いくつかの実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、他の抗癌剤、例えば、化学療法剤、チェックポイント阻害剤、および免疫抑制剤と併せて対象に投与されると、腫瘍を大きく低減および／または除去する。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質と他の抗癌剤の組み合わせは、腫瘍サイズを相乗的に低減するおよび／または腫瘍細胞を除去する。

【0451】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、１つまたは複数のターゲティング部分および１種または複数の改変シグナル伝達物質を含むキメラの一部であるＦＡＰ結合物質を用いる癌併用療法に関する。したがって、本発明の技術は、例えば、ＦＡＰに対するターゲティング部分および１種または複数のシグナル伝達物質を含むキメラまたは融合タンパク質および抗癌剤と組み合わせたその使用を提供する。

【0452】

例えば、いくつかの実施形態では、本発明の技術は、限定されないが、本明細書に記載のＦＡＰ結合物質と、ヒトインターフェロンアルファ２を含むIFN-アルファなどの変異ヒトインターフェロンを含む改変シグナル伝達物質とのキメラを含む癌の併用療法剤に関する。

【0453】

他の実施形態では、本発明のＦＡＰ結合物質は、複数のターゲティング部分を含みしたがって二重特異性または三重特異性フォーマットで存在するキメラの一部である。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の技術は、ＦＡＰ結合物質と、本明細書に記載のチェックポイント阻害剤結合物質（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ２、または抗ＣＴＬＡ）、および限定されないが、ヒトインターフェロンアルファ２を含むIFN-アルファなどの変異ヒトインターフェロンを含む改変シグナル伝達物質、を含む癌のための併用療法剤に関する。

【0454】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、その１つまたは複数の受容体に対する低減された親和性または活性を有し、それにより、キメラタンパク質の活性（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）の減弱化を可能にし、および／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止するように改変される。いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１つまたは複数のターゲティング部分の結合により回復可能である。

【0455】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、微生物感染症および／または慢性感染症の治療、またはそれらの感染症を罹患している患者に関する。感染症の例としては、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バールウイルスまたはパルボウイルス感染症、Ｔ細胞白血病ウイルス感染症、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0456】

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、痛み、眼の炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症、炎症性喉頭疾患、結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症および他の塵肺症などの１種または複数の炎症性疾患または状態を治療するまたは予防するために使用される。

【0457】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、自己免疫疾患および／または神経変性疾患を治療する用途を有する。

【0458】

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の望ましくないＣＴＬ活性を特徴とする状態、および／または高レベルの細胞死を特徴とする状態を治療するまたは予防するために使用される。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の無制御または過敏性の免疫応答に関連する状態を治療するまたは予防するために使用される。

【0459】

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、ＭＳ、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、およびその他の自己免疫疾患などの１種または複数の自己免疫疾患および／または神経変性疾患または状態の治療または予防に使用される。

【0460】

いくつかの実施形態では、本発明の技術は、自己免疫疾患および／または神経変性疾患を治療するまたは予防するために用いられる。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患および／または神経変性疾患は、ＭＳ、アルツハイマー病（限定されないが、早期発症型アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、および家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）を含む）、パーキンソン病およびパーキンソニズム（限定されないが、特発性パーキンソン病、脳血管性パーキンソニズム、薬剤誘発性パーキンソニズム、レヴィー小体型痴呆、遺伝性パーキンソン病、若年性パーキンソン病を含む）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、限定されないが、突発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、西太平洋ＡＬＳ、若年性ＡＬＳ、平山病（Ｈｉｒａｍａｙａ ｄｉｓｅａｓｅ））から選択される。

【0461】

ある実施形態では、本発明は、ウイルス性肝炎、アルコール性肝炎、自己免疫性肝炎、アルコール性肝疾患、脂肪性肝疾患、脂肪肝、脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、薬物性肝疾患、肝硬変、線維症、肝不全、薬物性肝不全、メタボリックシンドローム、肝細胞癌、胆管細胞癌、原発性胆汁性肝硬変（原発性胆汁性胆管炎）、毛細胆管、ギルバート症候群、黄疸、および任意の他の肝毒性関連の適応症から選択される１種または複数の肝障害の治療または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、肝線維症の治療または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、場合により進行性線維症および肝線維症による、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、慢性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＳＨ）、Ｃ型肝炎感染、アルコール性肝疾患、肝障害の治療または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＳＨ）の治療または予防のための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、線維症を低減または予防する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、肝硬変を低減または予防するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、肝細胞癌を低減または予防する方法を提供する。

【0462】

いくつかの実施形態では、本発明は、場合により肝線維症、肺線維症、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、慢性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＳＨ）、Ｃ型肝炎感染、アルコール性肝疾患、肝障害、肝硬変、および骨髄異形成症候群から選択される線維性疾患を治療または予防する方法を提供する。

【0463】

種々の実施形態では、本発明は、限定されないが、冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）、脳血管疾患（ＣＶＤ）、大動脈弁狭窄症、末梢血管疾患、アテローム性硬化症、動脈硬化症、心筋梗塞（心発作）、脳血管疾患（卒中）、一過性虚血性発作（ＴＩＡ）、狭心症（安定および不安定）、心房細動、不整脈、弁（ｖａｖｕｌａｒ）疾患、および／またはうっ血性心不全を含む、心臓および脈管構造に影響を及ぼす疾患または状態などの心臓血管疾患の治療または予防のための方法を提供する。種々の実施形態では、本発明は、炎症を含む心臓血管疾患の治療または予防のための方法を提供する。

【0464】

種々の実施形態では、本発明は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、肺血管狭窄、炎症、アレルギー、呼吸困難、呼吸促迫症候群、嚢胞性線維症、肺高血圧症、肺血管狭窄、気腫、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、レフラー症候群、グッドパスチャー症候群、胸膜炎、間質性肺炎、肺浮腫、肺線維症、類肉腫症、呼吸器発疹ウイルス感染症に関連する合併症、および他の呼吸器疾患などの１種または複数の呼吸器疾患の治療または予防のための方法を提供する。

【0465】

いくつかの実施形態では、本発明の技術の方法は、ヒト対象の治療で有用である。いくつかの実施形態では、ヒトは小児科のヒトである。他の実施形態では、ヒトは成人のヒトである。他の実施形態では、ヒトは老人のヒトである。他の実施形態では、ヒトは患者と呼ばれることもある。いくつかの実施形態では、ヒトは女性である。いくつかの実施形態では、ヒトは男性である。

【0466】

特定の実施形態では、ヒトは、約１～約１８ヶ月、約１８～約３６ヶ月、約１～約５才、約５～約１０才、約１０～約１５才、約１５～約２０才、約２０～約２５才、約２５～約３０才、約３０～約３５才、約３５～約４０才、約４０～約４５才、約４５～約５０才、約５０～約５５才、約５５～約６０才、約６０～約６５才、約６５～約７０才、約７０～約７５才、約７５～約８０才、約８０～約８５才、約８５～約９０才、約９０～約９５才または約９５～約１００才の範囲の年齢である。いくつかの実施形態では、ヒトは３０才を超える年齢である。

【0467】

免疫調節
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、免疫調節ができ、または免疫調節の方法において使用される。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の治療方法は、本明細書に記載の免疫調節を含み得る。いくつかの実施形態では、免疫調節は、樹状細胞（ＤＣ）の場合、改変IFN-シグナル伝達を含むIFN-シグナル伝達を含む。

【0468】

いくつかの実施形態では、多重特異的ＦＡＰ結合物質が提供される。いくつかの実施形態では、本発明の技術のこのような多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＦＡＰおよび１個または複数の免疫細胞上に見出される１個または複数の抗原を認識し、それらに結合する。免疫細胞は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、キラーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、１個または複数の免疫細胞を効果的に、直接または間接的に動員する。

【0469】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、効果的に、直接または間接的に１個または複数の免疫細胞を動員し、免疫抑制効果を生じさせる。例えば、ＦＡＰ結合物質は直接的または間接的に免疫抑制性免疫細胞を動員する。いくつかの実施形態では、免疫抑制性免疫細胞は、制御性Ｔ細胞（または本明細書で使用される場合、免疫系を調節し、自己免疫疾患を抑制し、自己抗原に対する寛容を維持し、抗腫瘍免疫応答を妨害するＴ細胞の亜集団を指す、「Ｔｒｅｇ」）である。他の免疫抑制性免疫細胞としては、骨髄系サプレッサー細胞（または「ＭＳＣ」で、本明細書で使用される場合、それらの骨髄起源、未成熟状態、およびＴ細胞応答を強力に抑制する能力により規定される不均一細胞集団を指す）；腫瘍関連好中球（または「ＴＡＮ」で、本明細書で使用される場合、免疫応答を抑制することができる好中球サブセットを指す）；腫瘍関連マクロファージ（または「ＴＡＭ」で、本明細書で使用される場合、免疫応答を低減させ得るマクロファージのサブセットを指す）、Ｍ２マクロファージ、および／または腫瘍誘導マスト細胞（本明細書で使用される場合、骨髄由来の長寿命不均一細胞集団のサブセットを指す）が挙げられる。また、免疫抑制性免疫細胞は、Ｔｈ２細胞およびＴｈ１７細胞を含む。さらに、免疫抑制性免疫細胞としては、免疫細胞、例えば、１種または複数のチェックポイント阻害剤受容体を発現しているＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋ Ｔ細胞（例えば、無制御免疫応答を防止または抑制する免疫細胞上で発現されるＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ－３を含む、受容体）が挙げられる。Ｓｔａｇｇ，Ｊ．ｅｔ．ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｉｎ ｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｍｅｄ Ｏｎｃｏｌ．（２０１３）５（３）：１６９－１８１）を参照されたい。

【0470】

いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）増殖を刺激する。Ｔｒｅｇ細胞は、Ｆｏｘｐ３（Ｆｏｒｋｈｅａｄ ｂｏｘ ｐ３）転写因子の発現を特徴とする。大部分のＴｒｅｇ細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ２５＋であり、ヘルパーＴ細胞のサブセットと見なすことができるが、小さい集団はＣＤ８＋である場合もある。したがって、本発明の技術の方法により調節されるべき免疫応答は、Ｔｒｅｇ細胞の、場合により抗原に応答した、増殖誘導を含み得る。したがって、方法は、対象に抗原を含む組成物を投与することを含み得、この場合、抗原はＦＡＰに対する親和性を有する結合物質と組み合わせられる。抗原はＴｒｅｇ細胞の増殖を促進するアジュバントと共に投与されてよい。

【0471】

この方法が特異的抗原に応答してＴｒｅｇの増殖と分化を伴う限り、それは免疫応答を刺激する方法であると見なすことができる。しかし、Ｔｒｅｇが抗原に対し免疫系の他の細胞の応答を他の方法、例えば、それらの活性を阻害または抑制することで調節できることを考慮すれば、全体としての免疫系に対する効果は、その抗原に対する応答を調節（例えば、抑制または阻害）することであり得る。したがって、本発明の技術のこの態様の方法は、同様に、抗原に対する免疫応答を調節（例えば、阻害または抑制）する方法と呼ぶことができる。

【0472】

いくつかの実施形態では、方法は、その抗原に対する既存の免疫または進行中の免疫応答を有する対象の場合でも、特定の抗原に対する望ましくない免疫応答を治療的にまたは予防的に阻害または抑制する。これは、例えば、自己免疫疾患の治療で特に有用であり得る。

【0473】

特定の条件下では、ＦＡＰを発現する抗原提示細胞を抗原の標的にすることにより、特定の抗原に対して対象を寛容化することも可能である。したがって、本発明の技術は、対象の抗原に対する寛容を誘導する方法を提供し、この方法は、対象に抗原を含む組成物を投与することを含み、この場合、抗原はＦＡＰに対する親和性を有する結合物質と組み合わせられ、その抗原はアジュバントの非存在下で投与される。この状況において、寛容は通常、その抗原に応答できるはずの免疫細胞の枯渇を伴うか、またはこのような免疫細胞の抗原に対する応答性の持続的低減の誘導を伴う。

【0474】

それに対し対象が望ましくない免疫応答を示す、または生じる危険性のある抗原に対して、Ｔｒｅｇ応答を高めることは特に望ましいであろう。例えば、それは、それに対し自己免疫疾患で免疫応答が起こる自己抗原であり得る。特定の抗原が潜在的に病因に関して重要であると特定されている自己免疫疾患の例としては、多発性硬化症（ミエリン塩基性タンパク質）、インスリン依存性糖尿病（グルタミン酸デカルボキシラーゼ）、インスリン耐性糖尿病（インスリン受容体）、セリアック病（グリアジン）、水疱性類天疱瘡（コラーゲンＸＶＩＩ型）、自己免疫性貧血（Ｒｈタンパク質）、自己免疫性血小板減少症（ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ）、重症筋無力症（ｍｙａｅｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）（アセチルコリン受容体）、グレーブス病（甲状腺刺激ホルモン受容体）、グッドパスチャー病などの糸球体腎炎（アルファ３（ＩＶ）ＮＣ１コラーゲン）、および悪性貧血（内因子）が挙げられる。あるいは、標的抗原は、同様に宿主組織に損害をもたらす応答を刺激する外来性抗原であってもよい。例えば、急性リウマチ熱は、心筋細胞抗原と交差反応する連鎖球菌抗原に対する抗体応答により引き起こされる。したがって、これらの抗原、またはその特定のフラグメントまたはエピトープは、本発明の技術での使用のために好適な抗原であり得る。

【0475】

いくつかの実施形態では、本発明の物質、またはこれらの物質を用いる方法は、例えば、そのリガンドへのＦＡＰ結合を低減するかまたは抑制することにより、ＦＡＰシグナル伝達を破壊する（例えば、ＦＡＰの中和を介して）。いくつかの自己免疫疾患は、異常な高レベルの細胞死を特徴とし、これらの細胞と関連する自己抗原に対する免疫応答がこれらの状態の発症に寄与すると考えられる。したがって、ＦＡＰアンタゴニストを使用して、死細胞または瀕死細胞（例えば、免疫原性細胞死に曝されている細胞）中に曝露されたリガンドへのＦＡＰの結合を防ぎ、それにより、これらの抗原に対する免疫応答の刺激を抑制または防止し得る。

【0476】

いくつかの実施形態では、本発明の物質、またはこれらの物質を用いる方法は、自己反応性Ｔ細胞を低減または抑制する。いくつかの実施形態では、多重特異的ＦＡＰ結合物質は、キメラの場合には任意にインターフェロンシグナル伝達を介して、この免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、多重特異的ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２シグナル伝達および／または発現を刺激し、これは自己反応性Ｔ細胞を抑制し得る。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、キメラの場合にはインターフェロンシグナル伝達を介して、この免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、ＦＡＰ結合物質は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２シグナル伝達および／または発現を刺激し、これは自己反応性Ｔ細胞を抑制し得る。

【0477】

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、制御性Ｔ細胞対エフェクターＴ細胞の比率を、例えば、自己免疫疾患を治療するために、免疫抑制に有利なように調整することを含む。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１種または複数の細胞傷害性Ｔ細胞；エフェクターメモリーＴ細胞；セントラルメモリーＴ細胞；ＣＤ８＋ 幹細胞メモリーエフェクター細胞；ＴＨ１エフェクターＴ細胞；ＴＨ２エフェクターＴ細胞；ＴＨ９エフェクターＴ細胞；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞を低減および／または抑制する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５－制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ制御性Ｔ細胞、ＴＩＭ－３＋ＰＤ－１＋制御性Ｔ細胞、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）^＋制御性Ｔ細胞、ＣＴＬＡ－４／ＣＤ１５２＋制御性Ｔ細胞、ニューロピリン－１（Ｎｒｐ－１）±制御性Ｔ細胞、ＣＣＲ４＋ＣＣＲ８＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ６２Ｌ（Ｌ－セレクチン）^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＢｌｏｗ制御性Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ制御性Ｔ細胞、ＬＲＲＣ３２／ＧＡＲＰ＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ３９＋制御性Ｔ細胞、ＧＩＴＲ＋制御性Ｔ細胞、ＬＡＰ^＋制御性Ｔ細胞、１Ｂ１１＋制御性Ｔ細胞、ＢＴＬＡ＋制御性Ｔ細胞、１型制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）、Ｔヘルパー３型（Ｔｈ３）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞表現型の制御性細胞（ＮＫＴｒｅｇ）、ＣＤ８＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ２８－制御性Ｔ細胞および／またはＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＴＧＦ－３、ＴＮＦ－ａ、ガレクチン－１、IFN-γおよび／またはＭＣＰ１分泌制御性Ｔ細胞の内の１種または複数を増加させる、および／または刺激する。

【0478】

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、免疫刺激シグナルより免疫抑制シグナルを優先する。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、免疫活性化シグナルまたは共刺激シグナルを逆転または抑制することを可能にする。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、免疫抑制シグナルを提供することを可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の物質および方法は、免疫刺激シグナルの効果を低減する。免疫刺激シグナルは、限定されないが、４－１ＢＢ、ＯＸ－４０、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳリガンド；ＯＸ－４０リガンド、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド、ＣＤ７０、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＣＤ１３７リガンドおよびＴＬ１Ａの内の１種または複数である。さらにいくつかの実施形態では、本物質および方法は、免疫抑制シグナルの効果を高める。これらのシグナルは、限定されないが、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも呼ばれる）、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１およびＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３および／またはＣＥＡＣＡＭ－５）、および種々のＢ－７ファミリーリガンド（限定されないが、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－ＤＣ、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６およびＢ７－Ｈ７を含む）の内の１種または複数である。

【0479】

キット
本発明の技術はまた、本明細書に記載のいずれかのＦＡＰ結合物質の投与（追加の治療薬を含み、または含まずに）のためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載の少なくとも１種の本発明の医薬組成物を含む、材料または成分の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の少なくとも１種の医薬組成物を含む。

【0480】

キットを構成する成分の明確な性質は、その意図される目的に依存する。一実施形態では、キットは、ヒト対象用を治療する目的のために構成される。

【0481】

使用説明書をキット中に含めてもよい。使用説明書は、通常、癌の治療などの望まれる治療結果を達成するために、キットの成分を使用する際に採用すべき技術を説明する明確な表現を含む。必要に応じ、キットは、他の有用な成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペット操作または測定用ツール、包帯材料または当業者なら容易に気付くような他の有用な備品一式も含む。

【0482】

キットに組込まれる材料および成分は、それらの操作性および有用性を維持する任意の便利で適切な方法で保管され開業医に提供され得る。例えば、成分は、室温、冷蔵温度、または凍結温度で提供できる。成分は通常、適切な梱包材料に収容される。いくつかの実施形態では、梱包材料は、よく知られた方法、好ましくは、無菌の、混入物のない環境を与える方法で構築される。梱包材料は、内容物および／またはキットの目的および／またはその成分を表示する外部ラベルを有してよい。

【0483】

定義
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、１つ（１種）または１つ（１種）を超える、を意味し得る。

【0484】

さらに、参照数値表示に関連して使われる用語の「約」は、参照数値表示±参照数値表示の最大で１０％を意味する。例えば、用語の「約５０」は、４５～５５の範囲を含む。

【0485】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、所望の治療および／または予防効果を実現するのに充分な量、例えば疾患もしくは障害の、または疾患もしくは障害に関連する１つもしくは複数の兆候もしくは症状の予防または低減をもたらす量を指す。治療または予防適用の状況において、対象に投与される組成物の量は、疾患の程度、型、および重症度、ならびに一般的健康状態、年齢、性別、体重および薬物耐性などの個体の特徴に依存するであろう。当業者は、これらおよび他の因子に応じて適当な投与量を決定することができよう。組成物は、１種または複数の追加の治療化合物と組み合わせて投与することもできる。本明細書に記載の方法では、治療化合物は、疾患または障害の１つまたは複数の兆候または症状を有する対象に投与され得る。

【0486】

本明細書で使用される場合、物質または刺激の存在下で、このような調節の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、少なくとも最大約１００％（約１００％を含む）低減されるとき、何かが「減少され」ている。当業者により理解されるように、いくつかの実施形態では、活性は減少され、かついくつかの下流の出力値は減少されるが、他のものは増加し得る。

【0487】

逆に、物質または刺激の存在下で、このような物質または刺激の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、最大少なくとも約１００％（約１００％を含む）またはそれを超えて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加する場合、活性は「増加され」る。

【0488】

本明細書において、参照される場合、全ての組成物に関するパーセンテージは、特に指定がない限り、総組成物の重量による。本明細書で使用する場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語とその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、リスト中の項目の記載は、この技術の組成物および方法に有用である可能性を同様に有する他の類似項目の除外を意図するものではない。同様に、用語の「ｃａｎ」および「ｍａｙ」およびその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、ある実施形態が特定の要素または特徴を含むことが「できる（ｃａｎ）」または含んでも「よい（ｍａｙ）」という記載は、これらの要素または特徴を含まない本発明の技術のその他の実施形態を排除するものではない。

【0489】

ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ、またはｈａｖｉｎｇなどの用語の同義語としてのオープンエンド用語の「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を本明細書で使用して本発明の技術を記載および請求するが、本発明の技術、またはその実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの代替用語を使って、代わりに記載することができる。

【0490】

本明細書で使用される場合、用語の「好ましい」および「好ましくは」は、特定の状況下で、特定の利点をもたらす本技術の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の環境下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つまたは複数の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、また、本技術の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。

【0491】

本明細書で使用される場合、化合物の「治療有効量」または「薬理学的有効量」または「薬理学的有効用量」は、疾患または障害の生理的効果が最低でも改良される化合物レベルを指す。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。治療有効量は、１回または複数回の投与で与えられ得る。治療有効量を構成する化合物の量は、化合物、障害およびその重症度、ならびに治療される対象の一般的健康状態、年齢、性別体重および薬物耐性に応じて変動するであろうが、当業者により日常的に決定され得る。

【0492】

有効量、毒性、および治療効果は、例えば、細胞培養または実験動物によりＬＤ５０（集団の約５０％に対する致死用量）およびＥＤ５０（集団の約５０％での治療的有効量）を測定するための標準的薬学的手順により決定できる。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて変化し得る。毒性と治療効果との間の用量比率は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことができる。いくつかの実施形態では、大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療有効量は、最初は、例えば、細胞培養アッセイを含むｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイから推測することができる。また、用量は、細胞培養または適切な動物モデルで決定したＩＣ５０などの循環血漿中濃度を達成するように動物モデルで処方することができる。記載の組成物の血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。いずれかの特定の投与量の効果は、適切なバイオアッセイによりモニターすることができる。投与量は医師により決定されてよく、必要に応じて、観察された治療の効果に適合するように調節できる。

【0493】

特定の実施形態では、効果は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約９０％の定量可能な変化をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、またはさらに約９０％以上の定量化可能な変化をもたらすであろう。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。

【0494】

本明細書で使用される場合、「治療方法」は、本明細書に記載の疾患または障害の治療のための組成物および／または本明細書に記載の疾患または障害の治療のための薬剤の製造での使用および／または複数使用のための組成物に等しく適用可能である。

【0495】

実施例
実施例１．ヒトＦＡＰ結合物質の作製
ＶＨＨライブラリーを構築し、抗原特異的ＶＨＨの存在についてスクリーニングした。このために、末梢血リンパ球由来の総ＲＮＡを、オリゴ（ｄＴ）プライマーと共に第一鎖ｃＤＮＡ合成のテンプレートとして用いた。このｃＤＮＡを用いて、ＶＨＨをコードする配列をＰＣＲにより増幅し、ＰｓｔＩおよびＮｏｔＩで消化し、ファージミドベクターｐＭＥＣＳのＰｓｔＩおよびＮｏｔＩ部位にクローニングした。約１０^８個の独立した形質転換体のＶＨＨライブラリーを得た。形質転換体の約８７％は、正しい挿入サイズのベクターを含んだ。

【0496】

ライブラリーを、抗原（２００μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ウェル）がコートされた固相での３回の連続パニングラウンドに供した。抗原特異的ファージの濃縮を、抗原をコートしたウェルから溶出されたファージミド粒子の数をブロックのみを施されたウェル（陰性対照ウェル）から溶出されたファージミド粒子の数と比較することにより、各パニングラウンド後に評価した。これらの実験は、ファージ集団が、第１ラウンド、第２ラウンド、および第３ラウンドのパンニング後に、抗原特異的ファージについてそれぞれ約５倍、２×１０^２倍、および５×１０^２倍濃縮されたことを示唆した。第２ラウンドからの９５コロニーを無作為に選択し、ペリプラズム抽出物中の抗原特異的ＶＨＨの存在についてＥＬＩＳＡ（可溶性ＶＨＨを含む粗製ペリプラズム抽出物を使用するＥＬＩＳＡ）で分析した。これらの９５コロニー中、８４コロニーが、このアッセイで陽性と判定された。パンニングおよびＥＬＩＳＡスクリーニングに使用された抗原は、免疫化に使用されたものと同じであった。配列データに基づき、８４個のＥＬＩＳＡ陽性コロニーは、４１種の異なるＶＨＨを表した（表２）。４１種の異なるＶＨＨは、７種の異なるＣＤＲ３群に属する（表１の配列番号２～４２、および図１０～１１参照）。

【表1】

【0497】

大腸菌ＴＧ１は下記の表の通り、抗ヒトＦＡＰ－ＥＣＤ－Ｈｉｓ_６ ＶＨＨ配列を含む組換えファージミドｐＭＥＣＳを含む（－８０℃で貯蔵）。

【表2】

【0498】

表２は、ヒトＦＡＰ結合物質をコードする４１種の異なる抗ヒトＦＡＰ－ＥＣＤ－Ｈｉｓ_６ ＶＨＨ遺伝子を代表する４１種のクローンの記載を示す。ベクターｐＭＥＣＳは、アンピシリン耐性をコードする。

【0499】

ｐＭＥＣＳベクターにクローニングされたＶＨＨ遺伝子は、Ｎ－末端にＰｅｌＢシグナル配列、ならびにＣ－末端にＨＡタグおよびＨｉｓ_６タグを含む（ＰｅｌＢリーダ-ＶＨＨ－ＨＡ－Ｈｉｓ_６）。ＰｅｌＢリーダー配列は、ＶＨＨを大腸菌の細胞膜周辺腔に向け、ＨＡおよびＨｉｓ_６タグはＶＨＨの精製と検出（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、などで）に使用できる。

【0500】

ｐＭＥＣＳベクター中では、Ｈｉｓ_６タグに続けて、アンバー停止コドン（ＴＡＧ）およびこのアンバー停止コドンの後に、Ｍ１３ファージのｇｅｎｅＩＩＩが続く。サプレッサー大腸菌株（例えば、ＴＧ１）では、アンバー停止コドンがグルタミンとして読み取られ、したがって、ＶＨＨはファージのタンパク質ＩＩＩとの融合タンパク質として発現され、これは、パニングのために、ファージコート上のＶＨＨの提示を可能にする。（ＴＧ１サプレッサー株では、抑制の効率は１００％ではなく、したがって、抑制因子株中のＶＨＨの発現は、２種の異なるタイプのＶＨＨ分子、タンパク質ＩＩＩに融合されたものとタンパク質ＩＩＩのないもの、をもたらす）。非サプレッサー大腸菌株（例えば、ＷＫ６）では、アンバー停止コドンが停止コドンとして読み取られ、したがって、得られたＶＨＨはタンパク質ＩＩＩに融合されなかった。

【0501】

ｐＭＥＣＳベクターにクローニングされたＶＨＨを発現させ精製するために、目的のＶＨＨの遺伝子を含むｐＭＥＣＳを作製し、プラスミドで非サプレッサー株（例えば、ＷＫ６）中に形質転換した。このプラスミドを用いて、得られたクローンのＶＨＨの配列をＭＰ０５７プライマー（５’－ＴＴＡＴＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＣＧＴＡＴＧ－３’）（配列番号８３７）を用いて確認した。

【0502】

ｐＭＥＣＳからｐＨＥＮ６ｃベクターへのＶＨＨ遺伝子の再クローニング
プライマー配列（ＲはＡまたはＧを表す）
・プライマーＡ６Ｅ（５’ＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＲＧＧＡＧＧ ３’）（配列番号８３８）。
・プライマーＰＭＣＦ（５’ＣＴＡＧＴＧＣＧＧＣＣＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＣＧＧＴＧＡ ＣＣＴＧＧＧＴ３’）（配列番号８３９）。
・ユニバーサル逆方向プライマー（５’ＴＣＡＣＡＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣ ３’）（配列番号８４０）。
・ユニバーサル順方向プライマー（５’ＣＧＣＣＡＧＧＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣ３’）（配列番号８４１）。

【0503】

テンプレートとしてＶＨＨ遺伝子を含む大腸菌含有組換えｐＭＥＣＳを用い、プライマーＡ６ＥおよびＰＭＣＦを用いて、ＶＨＨ遺伝子をＰＣＲにより増幅した（約３０サイクルのＰＣＲを実施し、各サイクルは９４℃で３０秒、５５℃で３０秒、および７２℃で４５秒と、その後のＰＣＲの最後の７２℃で１０分間の伸長反応とからなった）。約４００ｂｐのフラグメントが増幅された（プライマーＡ６ＥおよびＰＭＣＦは、それぞれフレームワーク１およびフレームワーク４プライマーである）。

【0504】

ＰＣＲ産物を、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋ ＰＣＲ精製キットにより精製し、ＰｓｔＩ、ＢｓｔＥＩＩで、またはＥｃｏ９１Ｉで一晩消化した。

【0505】

ＰＣＲ産物を、下記のプロトコルを利用して連結した：
－ ｐＨＥＮ６ｃベクターをＰｓｔＩで３時間消化し、消化されたベクターを上述のように精製した後、ＢｓｔＥＩＩで２～３時間消化した。
－ 消化されたベクターを１％アガロースゲルで泳動した。ベクターバンドをゲルから切り出し、精製した（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋゲル抽出キットにより）。
－ ＰＣＲフラグメントとベクターを連結した。
－ エレクトロコンピテントＷＫ６細胞を連結反応物で形質転換した。
－ ＬＢ／寒天／アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）／グルコース（１～２％）プレートを用いて形質転換体を選択した。
－ 陽性クローンを、ユニバーサル逆方向およびユニバーサル順方向プライマーを用いてＰＣＲによりスクリーニングした。インサートが存在する場合には、約５５０ｂｐのフラグメントを増幅する。
－ クローンの同一性を確認するために、ユニバーサル逆方向プライマーを用いて、それぞれのＶＨＨ当たり、少なくとも２種のクローンを配列決定した。
－ ＥＬＩＳＡまたはいずれか他の適当なアッセイにより抗原結合能力を再試験した。

【0506】

上記プロトコルに続き、ＶＨＨ遺伝子を、Ｎ－末端にＰｅｌＢシグナル配列およびＣ－末端にＨｉｓ_６タグを含むｐＨＥＮ６ｃベクター中でクローニングした。ＰｅｌＢリーダー配列は、ＶＨＨを大腸菌の細胞膜周辺腔に向け、Ｈｉｓ_６タグはＶＨＨの精製と検出（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどで）に使用できる。

【0507】

ＶＨＨの発現および精製
１日目：
下記のプロトコルに従った：
－ １０～２０ｍｌのＬＢ＋アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）＋グルコース（１％）に、新たに形質転換したＷＫ６コロニーを接種した。
－ ３７℃で一晩、２００～２５０ｒｐｍで振とうしながらインキュベートした（これは前培養液である）。

【0508】

２日目：
１リットル当たりのＴＢ：２．３ｇのＫＨ_２ＰＯ_４、１６．４ｇのＫ_２ＨＰＯ_４・３Ｈ_２Ｏ、１２ｇのトリプトン（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、２４ｇの酵母（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、および４ｍｌの１００％グリセロール（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）。

【0509】

下記のプロトコルに従った：
－ １リットルのバッフル付振とうフラスコを、３３０ｍｌのＴＢで満たし、オートクレーブ処理した。
－ １ｍｌの前培養液を、１００μｇ／ｍｌのアンピシリン、２ｍＭのＭｇＣｌ_２および０．１％のグルコースを補充した３３０ｍｌのＴＢに加えた後、３７℃で振とう（２００～２５０ｒｐｍ）しながら、０．６～０．９のＯＤ_６００に達するまで増殖させる。
－ ＩＰＴＧ（１ｍＭの最終濃度）の添加によりＶＨＨ発現を誘導した。
－ ２８℃で振とうしながら一晩（約１６～１８時間）インキュベートした（一晩誘導後、ＯＤ_６００は理想的には２５～３０になるはずである）。

【0510】

３日目：
大腸菌の周辺質からのＶＨＨの抽出
溶液：
ＴＥＳ：０．２Ｍ トリスｐＨ８．０、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、および０．５Ｍショ糖。
ＴＥＳ／４：水で４倍希釈されたＴＥＳ。

【0511】

方法：
下記のプロトコルに従った：
－ 一晩の誘導培養液を８０００ｒｐｍで８分間遠心分離した。
－ １リットルの培養液からの細胞ペレットを、上下のピペッティングにより１２ｍｌのＴＥＳ中に再懸濁し、氷上で１時間振とうした。
－ 使用した各１２ｍｌのＴＥＳ当たり、１８ｍｌのＴＥＳ／４を加え、さらに氷上で追加の１時間（振とうしながら）インキュベートした。
－ ４℃、８０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。
－ 上清を新しいファルコンチューブに移した（上清は細胞膜周辺腔から抽出したタンパク質を含む）。

【0512】

ＩＭＡＣによる精製：
用いた溶液：
ＨＩＳ－ｓｅｌｅｃｔ（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ、および５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６。

【0513】

方法
下記のプロトコルに従った：
－ ＨｉＳ－ｓｅｌｅｃｔをＰＢＳで平衡化した。１リットルの培養液由来のペリプラズム抽出物当たり、１ｍｌのレジン（約２ｍｌのＨｉｓ－ｓｅｌｅｃｔ溶液）を５０ｍｌのファルコンチューブに加え、ＰＢＳも加えて最終容量を５０ｍｌにし、混合した。
－ ２０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上清を廃棄した。
－ 上述のように、レジンをＰＢＳで洗浄した。
－ 上述のように、レジンをＰＢＳで再度洗浄した。
－ ペリプラズム抽出物をレジンに加え、緩やかに振とうしながら室温で３０分～１時間インキュベートした（より長いインキュベーションは非特異的結合をもたらす場合がある）。
－ 試料を、底部にフィルターを備えたＰＤ－１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－０４３５－０１）に加えた。
－ ５０～１００ｍｌのＰＢＳで洗浄した（１ｍｌのレジン当たり、５０～１００ｍｌのＰＢＳ）。
－ ３回溶出し、各回に１ｍｌのレジン当たり、１ｍｌのＰＢＳ／０．５Ｍのイミダゾールを用いた（効率的溶出のために、ビーズを再懸濁し、カラムの底部を閉止して、４℃で一晩放置した）。
－ ＰＢＳに対し４℃で一晩透析して（カットオフ３５００ダルトン）、イミダゾールを除去した。効率的透析のために、透析緩衝液（ＰＢＳ）を２、３回交換した。

【0514】

タンパク質の量を、溶出試料のＯＤ_２８０測定により推定した。各クローンの吸光係数を、ＥｘＰＡＳｙプロテオミクスサーバーでの一次構造分析に基づいて、ｐｒｏｔＰａｒａｍツールにより測定した。ＶＨＨのさらなる精製は、追加の方法で達成できる。

【0515】

実施例２．癌を治療するためのＦＡＰ結合物質を有する融合タンパク質の使用
この実施例は、ＦＡＰターゲティング部分と変異サイトカインとを有し、サイトカインでの変異がサイトカインの活性低下をもたらす融合タンパク質が、腫瘍成長を低減し得ることを示す。この実施例は、ＦＡＰターゲティング部分が変異サイトカインの活性の回復をもたらすことを示す。

【0516】

ＦＡＰターゲティング部分を有する融合タンパク質の作製
ＦＡＰ（ｍＦＡＰ＿Ｒ３ＦＡＰ８５）に特異的なＮ－末端中和ＶＨＨ（単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）とも呼ばれる）に２０×ＧＧＳリンカーを介して連結されたＱ１２４Ｒでの変異を有するヒトIFN-α２であるＦＡＰ標的化ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（「ＦＡＰ－ＡＦＮ」）を、ｐＨｅｎ６ベクター中に構築した。

【0517】

ｍＦＡＰ＿Ｒ３ＦＡＰ８５：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＫＧＳＧＲＮＦＧＳＹＮＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＶＡＷＩＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＲＭＶＹＬＱＭＴＮＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＮＡＤＩＥ--ＲＲＰＬＦＧＳＷＧＰＧＴＱ ＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ (配列番号８４２）。

【0518】

ヒトIFN-α２におけるＱ１２４Ｒ変異は、その受容体へのヒトIFN-α２の親和性を低下させ、それによりその活性を低下させる（国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０５０７８７号参照）。Ｑ１２４Ｒ変異体は、ネズミモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏでアッセイされ得る弱化されたヒトIFN-アルファ２変異体の代表である。具体的にはＱ１２４Ｒは、マウスでの使用に適したヒトIFN-変異である（すなわちそれは、マウスで機能するヒト変異体IFN-である）。その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｎａｔ. Ｃｏｍｍ. ２０１４； ５：３０１６. ｄｏｉ： １０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ４０１６を参照されたい。

【0519】

ＨｉｓタグｐＨｅｎ６－ＦＡＰ－ＡＦＮ構築物の大規模生成を、大腸菌で実施した。細菌を、静止期になるまで培養し（ＯＤ６００が０．７～０．８）、その後、ＩＰＴＧ（ＢｉｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加えて、ＬａｃＺプロモーターを活性化した。細胞上清を、一晩培養した後に回収した。

【0520】

ペリプラズム画分中のタンパク質を、ショ糖溶液を用いて浸透圧ショックにより放出させ、コバルトイオンを加えたＨｉＴｒａｐセファロースレジンでの固定化金属イオンクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）により精製した。タンパク質の結合の後、カラムを０．５％ ＥＭＰＩＧＥＮ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、０．５％ ＣＨＡＰＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＰＢＳで洗浄した。イミダゾール（Ｍｅｒｃｋ）を溶出に使用し、ＰＤ－１０ゲル濾過カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて除去した。タンパク質濃度を、２８０ｎｍでの吸収を利用して決定し、純度をＳＤＳ－ＰＡＧＥを介して評価した。

【0521】

ＬＰＳレベルを、Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ（ＬＡＬ） ＱＣＬ－１０００（Ｌｏｎｚａ）を利用して定量した。ＬＰＳが、依然として存在する場合、エンドトキシン除去レジン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて除去した。全ての生成物の生物活性を、Ｇａｒｃｉｎ ｅｔ ａｌ., Ｎａｔ. Ｃｏｍｍｕｎ. （２０１４）に記載された通り、ＷＨＯ国際マウスIFN-ａ標準Ｇａ０２－９０１－５１１に対するマウスルシフェラーゼレポーター細胞株ＬＬ１７１を利用する機能的アッセイにより評価した。

【0522】

ＦＡＰ－ＡＦＮでの腫瘍の処置
マウスは、１２時間／１２時間の明暗周期での温度制御環境で、病原体フリーの条件にて保持され、飼料および水を随意に摂取した。８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｉｎｔ－Ｇｅｒｍａｉｎ ｓｕｒ ｌ'Ａｒｂｒｅｓｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）に、５×１０^６細胞のＢ１６－ｍＣＤ２０クローン（ｍＣＤ２０の発現カセットを含むプラスミドで安定にトランスフェクトされたＢ１６細胞）または親Ｂ１６細胞を、５０μｌ懸濁液中で、３０Ｇインスリンシリンジを用い、一時的に鎮静されたマウス（４％イソフルランを使用して）の剃毛した脇腹に接種した。Ｂ１６細胞は、ヒト皮膚癌のモデルとして典型的に用いられる、ネズミ黒色腫細胞株である。

【0523】

腫瘍処置を、腫瘍接種後７日目に開始して、腫瘍縁部でのｓ．ｃ．である、病変周辺的に（ｐ．ｌ．）実施した。マウス（ｎ＝５）は、７、８、９、１０、１２、１４、１５および１６日目にＦＡＰ－ＡＦＮ処置を受けた。対照マウスは、同日に１００μｌのＰＢＳを受けた（ｎ＝６）。ＦＡＰ－ＡＦＮを、処置当たり、３７μｇタンパク質（１．８ｍｇ／ｋｇ）に対応する５，０００ＩＵで与えた。最後の腫瘍処置後１日目に、血液を尾静脈からＥＤＴＡコートのＭｉｃｒｏｖｅｔｔｅチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）に採取し、Ｈｅｍａｖｅｔ ９５０ＦＳ（Ｄｒｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ、ＵＳＡ）全血計数装置で分析した。好中球（ｎｅ）、血小板（ｐｌｔ）、およびリンパ球（ｌｙ）をＫ／μｌで、赤血球（ｒｂｃ）をＭ／μｌで、平均血小板容積（ｍｐｖ）をｆＬで表す。図１は、腫瘍成長についての平均＋／－ｓ．ｅ．ｍ．を示し、図２は、血液学的データを示す。図１の腫瘍成長曲線の右側に、示された日付に完全に腫瘍のなかったマウスの数を示す（すなわち、５匹の処置マウス中１匹は、９日目に腫瘍がなかった）。

【0524】

図１は、ＦＡＰ－ＡＦＮで処置されたマウスが、未処置マウス（対照マウス）に比較して低減された腫瘍成長を有したことを示す。加えて、ＦＡＰ－ＡＦＮで処置された５匹のマウス中１匹は、９日目に腫瘍がなかった。

【0525】

図２は、ＦＡＰ－ＡＦＮ構築物が安全であったことを示している。具体的には、ＦＡＰ－ＡＦＮは、ＰＢＳと同等に血液学的パラメータを変化させた。野生型インターフェロンは、血液学的パラメータの変化に反映される、安全性の懸念があることが知られる。

【0526】

これらの結果は、ＦＡＰターゲティング部分と、受容体への親和性が低下した変異IFN-α２とを有する融合タンパク質が、腫瘍成長を低減し得ることを示す。加えて、データは、ＦＡＰターゲティング部分が受容体を活性化させる変異IFN-α２の能力を回復させることを示す。したがって、本明細書に開示のＦＡＰターゲティング部分と少なくとも１種の変異サイトカインとを有する融合タンパク質は、本明細書に開示の疾患および障害（例えば、癌）の治療に有用である。

【0527】

実施例３．ＦＡＰ－ＡＦＮとの併用療法
この実施例は、ＦＡＰターゲティング部分および変異サイトカインを有する融合タンパク質であって、サイトカインでの変異がサイトカインの活性低下をもたらす融合タンパク質と、少なくとも１種の追加の治療薬による併用療法が、腫瘍成長を低減し得ることを示す。

【0528】

方法
上記の実施例２に開示のＦＡＰ－ＡＦＮを、腫瘍成長を低減するための併用療法に用いた。実施例２に開示のマウスモデルを使用した。併用療法での処置では、マウス（実験群当たりｎ＝４）を、下記のいずれかで処置した：
１）ＰＢＳ（１００μｌ）（対照）
２）ＦＡＰ－ＡＦＮのみ（１．８ｍｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒ）；

３）ＦＡＰ－ＡＦＮ（１．８ｍｇ／ｋｇ）およびドキソルビシン（３ｍｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ＋ｄｏｘ）；
４）ＦＡＰ－ＡＦＮ（１．８ｍｇ／ｋｇ）および組換えマウスＴＮＦ（２８μｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ＋ＴＮＦ）；
５）ＦＡＰ－ＡＦＮ（１．８ｍｇ／ｋｇ）および抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｄＡｂ（５．５ｍｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ＋ＰＤ－Ｌ１）； または
６）ＦＡＰ－ＡＦＮ（１．８ｍｇ／ｋｇ）、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｄＡｂ（５．５ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ（４５０μｇ／ｋｇ）＋抗ＯＸ４０Ａｂ（１．８ｍｇ／ｋｇ）（抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ＋抗ＯＸ４０ Ａｂ、Ｔｒｅｇ枯渇（ＴｒｅｇＤ）と称する）（ＦＡＰ＋ＰＤ－Ｌ１＋ＴｒｅｇＤ）。

【0529】

処置を、腫瘍接種後６日目に開始した。

【0530】

これらの併用療法でのＦＡＰ－ＡＦＮ処置を、６、７、８、９、１０、１１、１３、１４および１５日目に与えた（ｐ．ｌ．注射を介した）。追加の治療薬を、２～３日おきに全３回／週（ｐ．ｌ．により）注射した。図３Ａおよび３Ｂは、腫瘍成長についての平均＋／－ｓ．ｅ．ｍ．を示す。腫瘍成長曲線の右側に、示された日付に完全に腫瘍がなかったマウスの数を示す。

【0531】

結果
図３Ａ～Ｂは、ＦＡＰ－ＡＦＮおよび少なくとも１種の他の治療薬（例えば、ＴＮＦ、ｄｏｘ、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ１＋ＴｒｅｇＤ）で処置されたマウスがＦＡＰ－ＡＦＮのみ（ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒ）および未処置マウス（対照）に比較して、増大された腫瘍成長低減を有したことを示す。加えて、ＦＡＰ＋ＴＮＦで処置された４匹のマウス中１匹は、９～１４日目に腫瘍がなく；ＦＡＰ＋ｄｏｘで処置された４匹のマウス中４匹は、１１日目に腫瘍がなく（２匹が９日目に腫瘍がなく、全４匹が１１日目に腫瘍がなかった）；ＦＡＰ＋ＰＤ－Ｌ１で処置された３匹のマウス中１匹は、１３～２０日目に腫瘍がなく；ＦＡＰ＋ＰＤ－Ｌ１＋ＴｒｅｇＤで処置された４匹のマウス中１匹は、１７日目に腫瘍がなかった。データは、ＦＡＰ－ＡＦＮのみで処置されたマウスが、未処置マウス（対照マウス）に比較してより大きな腫瘍成長低減を有したことも示す。

【0532】

これらの結果は、ＦＡＰターゲティング部分および変異サイトカインを有する融合タンパク質のみでの処置、または少なくとも１種の追加の治療薬を併用された処置が、腫瘍成長を低減し得ることを示す。加えてデータは、ＦＡＰ－ＡＦＮとの併用処置を受けたマウスがＦＡＰ－ＡＦＮのみで処置されたマウスに比較してより大きな腫瘍成長低減を有したことから、相乗効果があることを示す。したがって本明細書に開示のＦＡＰターゲティング部分と少なくとも１種の変異サイトカインとを有する融合タンパク質は、単独でまたは少なくとも１種の追加の治療薬との組み合わせで、本明細書に開示の疾患および障害（例えば、癌）の治療に有用である。

【0533】

実施例４．二重特異性ＦＡＰ－ＡＦＮでの処置
この実施例は、少なくとも１つのＦＡＰターゲティング部分と変異サイトカインとを有し、サイトカインでの変異がサイトカインの活性低下をもたらす二重特異性融合タンパク質が、腫瘍成長を低減し得ることを示す。

【0534】

方法
ＦＡＰターゲティング部分（実施例２に記載）と、ＰＤ－Ｌ１ターゲティング部分と、Ｑ１２４Ｒに変異を有するヒトIFN-α２とを有する二重特異性融合タンパク質（ＦＡＰ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒ）を、実施例２に開示のマウスモデルで使用した。マウス（実験群当たりｎ＝５）を、下記のいずれかで処置した：
１）ＰＢＳ（１００μｌ）（対照）
２）ＦＡＰ－ＡＦＮのみ（１．８ｍｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒ）；または
３）ＦＡＰ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒ（５５μｇ／注射）。

【0535】

ＦＡＰ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒを、５５μｇ／注射で与えて、単一特異性ＦＡＰ－ＡＦＮ中の１つのＶＨＨ（ｓｄＡｂ）の代わりに２つのＶＨＨ（ｓｄＡｂｓ）の存在に修正した。処置を、腫瘍接種後６日目に開始した。処置を、６、７、８、９、１０、１１、１３、１４および１５日目にｐ．ｌ．注射を介して与えた。図４は、腫瘍成長についての平均＋／－ｓ．ｅ．ｍ．を示す。図４では、腫瘍成長曲線の右側に、示された日付に完全に腫瘍がなかったマウスの数を示す。

【0536】

図４は、二重特異性ＦＡＰ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４ＲがＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒ処置マウスおよび未処置マウス（対照マウス）に比較してより大きな腫瘍成長低減を有したことを示す。加えて、ＦＡＰ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒで処置された５匹のマウス中１匹は、１３日目に腫瘍がなかった。データは、ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒで処置されたマウスが未処置マウス（対照マウス）に比較してより大きな腫瘍成長低減を有したことも示す。

【0537】

これらの結果は、少なくとも１つのＦＡＰターゲティング部分と少なくとも１種の変異サイトカインとを有する二重特異性融合タンパク質または単一特異性融合タンパク質が、腫瘍成長を低減し得ることを示す。結果は、二重特異性融合タンパク質が単一特異性融合タンパク質に比較してより強力な治療効果を有することも示す。したがって、本明細書に開示のＦＡＰターゲティング部分と少なくとも１種の変異サイトカインとを有する二重特異性および単一特異性融合タンパク質は、本明細書に開示の疾患および障害（例えば、癌）の治療に有用である。

【0538】

実施例５．二重特異性ＦＡＰ－ＡＦＮでの処置
この実施例は、大きな腫瘍で単一特異性ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－Ｑ１２４Ｒと比較した二重特異性ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒと比較した、二重特異性ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒの有効性を比較する。この実施例は、本明細書に開示の二重特異性組成物が、癌を治療するのに有用であることを示す。

【0539】

実施例２に開示のマウスモデルを使用した。マウス（実験群当たりｎ＝６）を下記のいずれかで処置した：
１） ＰＢＳ（１００μｌ）（対照）；
２） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－Ｑ１２４Ｒのみ（４０μｇ／注射）（ｎｎＣｌｅｃ）；
３） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒのみ（６０μｇ／注射）（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１）；
４） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒのみ（６０μｇ／注射）（ｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ）；
５） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－Ｑ１２４Ｒ（４０μｇ／注射）およびドキソルビシン（３ｍｇ／ｋｇ）（ｎｎＣｌｅｃ Ｄｏｘ）；
６） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒ（６０μｇ／注射）およびドキソルビシン（３ｍｇ／ｋｇ）（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ Ｄｏｘ）；
７） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒ（６０μｇ／注射）およびドキソルビシン（３ｍｇ／ｋｇ）（ｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ Ｄｏｘ）；
８） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－Ｑ１２４Ｒ（４０μｇ／注射）および組換えマウスＴＮＦ（２８μｇ／ｋｇ）（ｎｎＣｌｅｃ ＴＮＦ）；
９） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒ（６０μｇ／注射）および組換えマウスＴＮＦ（２８μｇ／ｋｇ）（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ ＴＮＦ）；
１０） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒ（６０μｇ／注射）および組換えマウスＴＮＦ（２８μｇ／ｋｇ）（ｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ ＴＮＦ）；
１１） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－Ｑ１２４Ｒ（４０μｇ／注射）および抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ（４５０μｇ／ｋｇ）＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（１．８ｍｇ／ｋｇ）（抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ＋抗ＯＸ４０ Ａｂ、Ｔｒｅｇ枯渇抗体と称する）（ｎｎＣｌｅｃ Ａｂｓ）；
１２） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＰＤ－Ｌ１－Ｑ１２４Ｒ（６０μｇ／注射）および抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ（４５０μｇ／ｋｇ）＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（１．８ｍｇ／ｋｇ）（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ Ａｂｓ）；または
１３） ｎｎＣｌｅｃ９Ａ－ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒ（６０μｇ／注射）および抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ（４５０μｇ／ｋｇ）＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（１．８ｍｇ／ｋｇ）（ｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ Ａｂｓ）。

【0540】

腫瘍を、処置開始前に３０ｍｍ^２より大きく成長させた。マウスを、腫瘍接種後１０～１６日目に、ＰＢＳ、ｎｎＣｌｅｃ、ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１、およびｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰをｐ．ｌ．により１日１回処置した。追加の治療薬（すなわち、ドキソルビシン、ＴＮＦ、またはＴｒｅｇ枯渇抗体）を受けた群（すなわち、群５～１２）は、追加の治療薬を２～３日おきに全３回／週、ｐ．ｌ．により受けた。最後の腫瘍処置後１日目に、血液を尾静脈からＥＤＴＡコートのＭｉｃｒｏｖｅｔｔｅチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）に採取し、Ｈｅｍａｖｅｔ ９５０ＦＳ（Ｄｒｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ、ＵＳＡ）全血計数装置で分析した。リンパ球、単球および好中球をＫ／μｌで、赤血球（ｒｂｃ）をＭ／μｌで、血小板をＫ／μｌで表す。

【0541】

図５Ａ～Ｄは、ｎｎＣｌｅｃ、ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１、およびｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰで処置されたマウスが、未処置マウス（対照マウス）に比較して低減された腫瘍成長を有したことを示す。データは、腫瘍成長がｎｎＣｌｅｃで処置されたマウスでは緩徐になったが、６匹のｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１処置マウス中３匹および６匹のｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ処置マウス中２匹で、腫瘍成長が停止した（すなわち、腫瘍増殖が静止した）ことも示す（図５Ｂ～Ｄ参照）。

【0542】

図６Ａ～Ｄは、ｎｎＣｌｅｃ＋Ｄｏｘ（ｎｎＣｌｅｃ Ｄｏｘ）、ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１＋Ｄｏｘ（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ Ｄｏｘ）、およびｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ＋Ｄｏｘ（ｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ Ｄｏｘ）で処置されたマウスが、未処置マウス（対照マウス）に比較して低減された腫瘍成長を有したことを示す。データは、二重特異性組成物で処置されたマウスが、腫瘍のないマウスをより多く生じたことも示す（表３参照）。

【表3】

【0543】

図５Ａ～Ｄおよび図６Ａ～Ｄの結果の比較は、併用処置を受けたマウスが、単一特異性または二重特異性融合タンパク質のみでの処置マウスと比較してより大きな腫瘍成長低減を有したことから、単一特異性または二重特異性融合タンパク質と少なくとも１種の追加の治療薬との組み合わせが、相乗効果を有することを示す（図５Ｂおよび６Ｂ、図５Ｃおよび６Ｃ、ならびに図５Ｄおよび６Ｄを比較）。

【0544】

図７Ａ～Ｄは、ｎｎＣｌｅｃ＋ＴＮＦ（ｎｎＣｌｅｃ ＴＮＦ）、ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１＋ＴＮＦ（ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ ＴＮＦ）、およびｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ＋ＴＮＦ（ｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ ＴＮＦ）で処置されたマウスが、未処置マウス（対照マウス）に比較して低減された腫瘍成長を有したことを示す。データは、二重特異性組成物で処置されたマウスが、腫瘍のないマウスをより多く生じたことも示す（表４参照）。

【表4】

【0545】

図８Ａ～Ｄは、ｎｎＣｌｅｃ Ａｂｓ、ｎｎＣｌｅｃ－ＰＤ－Ｌ１ Ａｂｓ、およびｎｎＣｌｅｃ－ＦＡＰ Ａｂｓで処置されたマウスが、未処置マウス（対照マウス）に比較して低減された腫瘍成長を有したことを示す。データは、二重特異性組成物で処置されたマウスが、腫瘍のないマウスおよび腫瘍増殖静止マウスをより多く生じたことも示す（表５参照）。

【表5】

【0546】

図９Ａ～Ｅは、リンパ球（ＬＹ）、単球（ＭＯ）、好中球（ＰＭＮ）、赤血球（ｒｂｃ）、および血小板（ＰＬＴ）の分析を示す。図９Ａ～Ｅは、試験構築物が安全であったことを示す。具体的には試験構築物は、ＰＢＳと同等に血液学的パラメータを変化させた。野生型インターフェロンは、血液学的パラメータの変化に反映される、安全性の懸念があることが知られる。

【0547】

これらの結果は、少なくとも１つのＦＡＰターゲティング部分と少なくとも１種の変異サイトカインとを有する二重特異性融合タンパク質または単一特異性融合タンパク質での処置が、腫瘍成長を低減し得ることを示す。結果は、併用処置を受けたマウスが二重特異性融合タンパク質または単一特異性融合タンパク質のみで処置されたマウスに比較してより大きな腫瘍成長低減を有したことから、二重特異性融合タンパク質と少なくとも１種の治療薬の組み合わせが相乗効果を有することも示す。さらにデータは、二重特異性融合タンパク質と少なくとも１種の追加の治療薬との併用処置が、腫瘍のないマウスのより高い発生率をもたらしたことを示す。したがって本明細書に開示のＦＡＰターゲティング部分と少なくとも１種の変異サイトカインとを有する二重特異性および単一特異性融合タンパク質は、本明細書に開示の疾患および障害（例えば、癌）の治療に有用である。

【0548】

実施例６．ヒトＦＡＰ ＶＨＨは細胞中の膜結合ＦＡＰに結合する
実施例１からのヒトＦＡＰ ＶＨＨの７種の異なるＣＤＲ３群を代表する３４のＶＨＨをコードする発現ベクター（ｐＭＥＣＳ）を、ＷＫ６細胞に形質転換した。ＶＨＨ（Ｃ末端Ｈｉｓタグを有する）を、ＩＰＴＧでの一夜刺激によりペリプラズム抽出物中で発現させた。これらの抽出物を、ＦＡＣＳ結合アッセイで１／５希釈にて適用した：ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を完全長ヒトＦＡＰプラスミド（ＰＭＥＴ７ ＦＬＡＧ－ｈｕＦＡＰ）または空ベクター（ＭＯＣＫ）で一過的にトランスフェクトした。トランスフェクションの２日後に、細胞を再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋０．５ｍＭ ＥＤＴＡ＋３％ＦＢＳ）中で１／５希釈ペリプラズム抽出物と共にインキュベートした。ＶＨＨ結合を、ＦＩＴＣ共役抗Ｈｉｓ Ａｂ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を用いて検出した。試料をＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ｘ装置（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で捕捉し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウエア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて分析した。データを、図１２に要約する。

【0549】

実施例７．ヒト特異的ＦＡＰ ＶＨＨ ＡｃＴａｋｉｎｅｓ
ＦＡＰ ＶＨＨの１種である２ＨＦＡ４２を、下記の通りｐＨＥＮ６Ｃ発現プラスミドのＡＦＮフォーマットにクローニングした：ＦＡＰ ＶＨＨ ２ＨＦＡ４２－（ＧＧＳ）_２０－ｈIFN-ａ２＿Ｒ１４９Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）_６ （下記の配列を参照）。ＷＫ６細胞でのＡＦＮ発現を、１ｍＭ ＩＰＴＧで一晩誘導し、細胞をペレット化して、ＴＥＳ（０．２Ｍトリス ｐＨ ８．０、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍスクロース）およびＴＥＳ／４緩衝液を用いてペリプラズム抽出物を調製した。タンパク質を、製造業者のガイドラインに従いＴＡＬＯＮ金属親和性レジンを用いて抽出物から精製し、イミダゾールを、ＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて試料から除去した。

【0550】

生物活性を、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターで安定にトランスフェクトされたIFN-応答性細胞株）およびそれに由来する、安定にトランスフェクトされたＨＬ１１６－ｈＦＡＰ細胞で測定した。細胞を一晩播種し、系列希釈のＦＡＰ ＶＨＨ ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を、ＥｎＳｉｇｈｔ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。図１３ＡおよびＢのデータは、ＡＦＮが、親細胞に比較してｈＦＡＰを発現する細胞でより活性であることを明確に示し、ｈＦＡＰへの特異的ターゲティングによりIFN-α２変異体のシグナル伝達を少なくとも一部、回復させ得ることを示す。注目すべきことに、親ＨＬ１１６とＨＬ１１６－ｈＦＡＰ細胞は、ＦＡＰ ＶＨＨ ＡＦＮについての１４０を超えるターゲティング指数（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｉｎｄｅｘ）に比較した約１のターゲティング指数からも示される通り、野生型の非ターゲティングIFN-ａ２と同等の感受性がある（図１３Ａおよび１３Ｂ；表６）。

【表6】

【0551】

ＦＡＰ ＶＨＨ ＡＦＮの構造を下記に示す：
ＦＡＰ ＶＨＨ ２ＨＦＡ４２－（ＧＧＳ）_２０－ ｈIFN-ａ２ Ｒ１４９Ａ－Ｈｉｓ_６

【0552】

ＦＡＰ ＶＨＨ ＡＦＮの配列を、下記に示す（ＦＡＰ ＶＨＨ ２ＨＦＡ４２の配列を太字で示し、（ＧＧＳ）_２０の配列を、斜体で示し、ｈIFN-ａ２＿Ｒ１４９Ａの配列を下線付きの文字で示す）：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＶＧＮＡＭＧＷＹＲＱＡＬＧＮＱＲＥＬＶＡＧＩＴＳＤＧＴＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＷＰＰＲＩＧＦＡＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＶＤＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＲＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＡＡＡＭＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱIFN-ＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＡＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥＬＥＨＨＨＨＨＨ (配列番号８４３）。

【0553】

実施例８．異なる腫瘍モデルにおける化学療法の存在または非存在下でのＦＡＰ－ＡＦＮの耐容性および有効性
マウスは、１２時間／１２時間の明暗周期での温度制御環境で、病原体フリーの条件にて保持され、飼料および水を随意に摂取した。８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｉｎｔ－Ｇｅｒｍａｉｎ ｓｕｒ ｌ'Ａｒｂｒｅｓｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）に、Ｂ１６ＢＬ６またはＭＣ３８またはＰａｎｃ０２細胞を、５０μｌ懸濁液中で３０Ｇインスリンシリンジを用い、一時的に鎮静されたマウス（４％イソフルランを使用して）の剃毛した脇腹に接種した。Ｂ１６ＢＬ６細胞は、ドキソルビシンへの耐性が上昇したヒト皮膚癌のモデルとして典型的に用いられる、ネズミ黒色腫細胞株である。ＭＣ３８細胞は、ネズミ結腸腺癌に由来し、ヒト結腸癌のモデルとして典型的に用いられる。Ｐａｎｃ０２細胞は、ネズミ膵管腺癌に由来し、ヒト膵臓癌のモデルとして典型的に用いられる。

【0554】

全ての腫瘍処置を、腫瘍接種後７日目に開始して、腫瘍縁部でのｓ．ｃ．である、病変周辺的に（ｐ．ｌ．）実施した。マウスは、７、８、９、１０、１２、１３、１４および１５日目にＦＡＰ－ＡＦＮまたはＦＡＰ－ＷＴｍIFN-処置を受けた。対照マウスは、同日にＰＢＳで処置された。ＦＡＰ－ＡＦＮまたはＦＡＰ－ＷＴｍIFN-を、約３７μｇタンパク質（１．８ｍｇ／ｋｇ）で与えた。ドキソルビシン処置を、３ｍｇ／ｋｇで週３回実施した。
１） ＰＢＳ（１００μｌ）（対照）、７～８ 匹；
２） ＦＡＰ－ＡＦＮのみ（１．８ｍｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ－Ｑ１２４Ｒ）、５匹；
３） ＦＡＰ－ＡＦＮ（１．８ｍｇ／ｋｇ）およびドキソルビシン（３ ｍｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ－ＡＦＮ ＋ ｄｏｘ）、５匹；
４） ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-（１．８ｍｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-）、５匹；
５） ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-（１．８ｍｇ／ｋｇ）およびドキソルビシン（３ｍｇ／ｋｇ）（ＦＡＰ－ＷＴｍIFN- ＋ ｄｏｘ）、５匹。

【0555】

実施例２に開示のＦＡＰ－ＡＦＮ融合タンパク質を使用し、ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-は、２０×ＧＧＳリンカーを介して連結され実施例２でＦＡＰ－ＡＦＮについて記載の通り生成された、Ｎ末端ＶＨＨ ｍＦＡＰ＿Ｒ３ＦＡＰ８とマウスIFN-α１１からなる類似のＨｉｓタグ融合体である。

【0556】

Ｂ１６ＢＬ６の実験では、最後の腫瘍処置後１日目に、血液を尾静脈からＥＤＴＡコートのＭｉｃｒｏｖｅｔｔｅチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）に採取し、Ｈｅｍａｖｅｔ ９５０ＦＳ（Ｄｒｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ、ＵＳＡ）全血計数装置で分析した。単球、好中球、血小板、およびリンパ球をＫ／μｌで、赤血球（ｒｂｃ）をＭ／μｌで、平均血小板容積（ｍｐｖ）をｆＬで表す。この分析を、対照群、またはＦＡＰ－ＡＦＮベースの処置の群では４匹で、ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-ベースの処置の場合には３匹で実施した。

【0557】

Ｂ１６Ｂ１６腫瘍モデル
図１４Ａ～Ｂは、ＦＡＰ－ＡＦＮまたはＦＡＰ－ＷＴｍIFN-のいずれかで処置されたマウスが、ＰＢＳに比較して強力な腫瘍成長低減を有したことを示す。ドキソルビシンとの組み合わせは、腫瘍成長低減を増強し、腫瘍縮小への移行をさらに示した。このモデルでドキソルビシンのみでの処置は、最良では腫瘍増殖の静止を導くが、腫瘍退縮はない（データは示さない）。注目すべきことに、１７日目に、ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-で処置された群でマウスの２０％が死亡し、かつＦＡＰ－ＷＴｍIFN-とドキソルビシンの組み合わせで処置されたマウスの群では８０％もが死亡したが、他の処置群のマウスはいずれも死亡しなかった。ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-処置の耐容性の欠如が、処置の初日の体重変化を示す図１５Ａ～Ｂでさらに示される。ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-で処置された群は両者とも、ＦＡＰ－ＡＦＮ処置群での体重増加に比較して、体重の劇的な減少を示す。加えて、血液学のデータもまた、ＦＡＰ－ＷＴｍIFN-ベースの処置に比較した、ＦＡＰ－ＡＦＮベースの処置の耐容性プロファイルの改善を裏づける（図１６Ａ～Ｆ）。

【0558】

ＭＣ３８腫瘍モデル
図１７は、ＦＡＰ－ＡＦＮで処置されたマウスがＰＢＳに比較して強力な腫瘍成長低減を有したことを示す。ドキソルビシンとの組み合わせは、腫瘍成長低減を増強し、腫瘍縮小への移行をさらに示した。ＦＡＰ－ＡＦＮ処置の耐容性が、体重変化により裏づけられる（図１８）。

【0559】

等価物
本発明の技術をその特定の実施形態と関連付けて説明してきたが、その実施形態はさらに修正が可能であり、本出願は、一般的に、本発明の技術の原理に従った本発明の技術の任意の変形、使用、または改変を包含することが意図され、本発明の技術が属する技術内の既知のまたは日常的な実施の範囲に入る、および上に示されるおよび以下の添付の請求項の範囲に入る本質的な特徴に該当し得る本開示からの乖離を含むものと理解されよう。

【0560】

当業者は、本明細書で具体的に記載された特定の実施形態に対する多数の等価物を、ルーチン実験のみを用いて認識し、確認できるであろう。このような等価物は、次の請求項の範囲内に包含されることが意図されている。

【0561】

参照による組み込み
本明細書で引用されている全ての特許および刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9-1】

【図9-2】

【図9-3】

【図9-4】

【図9-5】

【図10-1】

【図10-2】

【図10-3】

【図10-4】

【図11-1】

【図11-2】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図14A】

【図14B】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図16D】

【図16E】

【図16F】

【図17】

【図18】

【配列表】

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