特開 2024-26911 標的抗原の測定方法並びにそれに用いる不溶性粒子及び標的抗原測定用キット

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024026911

(43)【公開日】2024-02-29

(54)【発明の名称】標的抗原の測定方法並びにそれに用いる不溶性粒子及び標的抗原測定用キット

(51)【国際特許分類】

   C07K 17/00 20060101AFI20240221BHJP

   G01N 33/531 20060101ALI20240221BHJP

   G01N 33/543 20060101ALI20240221BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20240221BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240221BHJP

【ＦＩ】

C07K17/00

G01N33/531 A ZNA

G01N33/543 581G

C07K16/00

C12N15/13

【審査請求】未請求

【請求項の数】10

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021003347

(22)【出願日】2021-01-13

(71)【出願人】

【識別番号】000003296

【氏名又は名称】デンカ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100185591

【弁理士】

【氏名又は名称】中塚 岳

(74)【代理人】

【識別番号】100126653

【弁理士】

【氏名又は名称】木元 克輔

(72)【発明者】

【氏名】万場 昌子

(72)【発明者】

【氏名】小笠原 大輔

(72)【発明者】

【氏名】山本 公隆

(72)【発明者】

【氏名】石川 晴登

【テーマコード（参考）】

4H045

【Ｆターム（参考）】

4H045AA11

4H045BA62

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA50

4H045FA74

4H045FA80

(57)【要約】      （修正有）

【課題】抗原抗体反応が生じたときの凝集能に優れた不溶性粒子を提供する。
【解決手段】ラテックス粒子等の粒状担体と、前記粒状担体に担持された、特定のアミノ酸配列を有するＦｃ領域を含むＩｇＧ等の抗体とを含有する不溶性粒子であって、前記抗体の重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである不溶性粒子、前記不溶性粒子を含む又は前記不溶性粒子を調製するための抗体及び粒状担体を含む標的抗原測定用キット、並びに前記不溶性粒子を用いる標的抗原の測定方法を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

粒状担体と、前記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体と、を含有する不溶性粒子であって、前記抗体の重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである、不溶性粒子。

【請求項2】

前記粒状担体はラテックス粒子である、請求項１に記載の不溶性粒子。

【請求項3】

前記抗体はＩｇＧである、請求項１又は２に記載の不溶性粒子。

【請求項4】

前記ＩｇＧのＦｃ領域は、配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、Ｃ末端アミノ酸がリジンである、請求項３に記載の不溶性粒子。

【請求項5】

前記ＩｇＧのＦｃ領域は、配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列からなる、請求項３に記載の不溶性粒子。

【請求項6】

請求項１～５のいずれか一項に記載の不溶性粒子を含む、又は請求項１～５のいずれか一項に記載の不溶性粒子を調製するための抗体及び粒状担体を含む、標的抗原測定用キット。

【請求項7】

被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するための、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するための、請求項６に記載のキット。

【請求項8】

請求項１～５のいずれか一項に記載の不溶性粒子を用いる、標的抗原の測定方法。

【請求項9】

請求項１～５のいずれか一項に記載の不溶性粒子と標的抗原を含有し得る被験試料を接触させる工程、並びに
前記抗体及び前記標的抗原の抗原抗体反応による前記不溶性粒子の凝集反応を測定する工程、
を含む、標的抗原の測定方法。

【請求項10】

被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するための、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するための、請求項８又は９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、標的抗原の測定方法並びにそれに用いる不溶性粒子及び標的抗原測定用キットに関する。

【背景技術】

【0002】

免疫反応を利用した標的抗原の測定方法として、ラテックスなどの粒状担体を利用する方法がある。標的抗原に特異的な抗体が結合された粒状担体は、標的抗原が存在すると、抗原抗体反応を生じる。そして、その特異性及び親和力により、標的抗原を橋渡しにして互いに結合し、凝集する。生じた凝集塊の有無及び凝集の程度により、標的抗原の有無及び存在量が測定される。

【0003】

特許文献１では、特定のアミノ酸配列を含み、親水化処理された樹脂表面の固相に対して特異的な吸着機能を発現させるペプチドが開示されており、かかるペプチドを介して固相に効率よく抗体を結合させる方法が提案されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特許第５５５３３３６号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

特許文献１の方法では、本来存在しないアミノ酸配列が抗体に付加されているため、非特異的な反応及び抗体の発現量の低下といった、好ましくない特性が抗体に付与される可能性がある。本発明の課題の一つは、かかる問題点が生じない、標的抗原の測定方法を提供することにあり、また、かかる測定方法に利用可能な不溶性粒子を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0006】

通常、抗体の重鎖のＣ末端リジンは、カルボキシペプチダーゼによる翻訳後修飾により除去されるため、一般的に使用される抗体の重鎖はＣ末端リジンが除去されている。本発明者らは、抗体の重鎖のＣ末端にリジンが存在することで、抗体の不溶性粒子への結合量が増加し、抗原抗体反応が生じたときの不溶性粒子の凝集能に優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0007】

本発明の一側面は、粒状担体と、上記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体と、を含有する不溶性粒子であり、上記抗体の重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである。

【0008】

上記不溶性粒子はラテックス粒子とすることができる。

【0009】

上記抗体はＩｇＧとすることができる。また、ＩｇＧのＦｃ領域は、配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、Ｃ末端アミノ酸がリジンであるポリペプチドであってよく、ＩｇＧのＦｃ領域は、配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。

【0010】

本発明の他の一側面は、上記不溶性粒子を含む、又は上記不溶性粒子を調製するための抗体及び粒状担体を含む、標的抗原測定用キットである。

【0011】

上記キットは、被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するための、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するためのキットとすることができる。

【0012】

本発明の他の一側面は、上記不溶性粒子を用いる標的抗原の測定方法である。

【0013】

上記測定方法は、上記不溶性粒子と標的抗原を含有し得る被験試料を接触させる工程、並びに上記抗体及び上記標的抗原の抗原抗体反応による上記不溶性粒子の凝集反応を測定する工程、を含むことができる。

【0014】

上記測定方法は、被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するための、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するための方法とすることができる。

【発明の効果】

【0015】

本発明により、抗原抗体反応が生じたときの凝集能に優れた不溶性粒子を提供することができる。凝集能に優れた不溶性粒子を使用することで、標的抗原の高感度な検出が期待できる。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】抗ＩｇＥ抗体感作ラテックスの凝集反応の結果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0017】

以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。

【0018】

一実施形態に係る不溶性粒子は、粒状担体と、上記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体と、を含有しており、上記抗体の重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである。重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである抗体は、粒状担体への結合能が高い。また、重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである抗体を含有する不溶性粒子は、抗原抗体反応が生じたときの凝集能に優れる。

【0019】

標的抗原は、例えば、ＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白質）、前立腺特異抗原、フェリチン、β－２マイクログロブリン、ミオグロビン、ヘモグロビン、アルブミン、クレアチニン等のタンパク質マーカー、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ等の免疫グロブリン、各種腫瘍マーカー、ＬＤＬ、ＨＤＬ、ＴＧ等のリポ蛋白、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、アストロウイルス、ＨＡＶ、ＨＢs、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＥＢＶ等のウイルス抗原、クラミジア・トラコマティス、溶連菌、百日咳菌、ヘリコバクター・ピロリ、レプトスピラ、トレポネーマ・パリダム、トキソプラズマ・ゴンディ、ボレリア、レジオネラ属菌、炭疽菌、ＭＲＳＡ等の細菌抗原、細菌等が産生する毒素、マイコプラズマ脂質抗原、ヒト絨毛製ゴナドトロピン等のペプチドホルモン、ステロイドホルモン等のステロイド、エピネフリンやモルヒネ等の生理活性アミン類、ビタミンＢ類等のビタミン類、プロスタグランジン類、テトラサイクリン等の抗生物質、農薬、環境ホルモン等が挙げられるがこれらに限定されるものではない。

【0020】

粒状担体は、ラテックス粒子、セラミック粒子、アルミナ粒子、シリカ－アルミナ粒子、カーボンブラック粒子等の粒子が挙げられる。これらの粒子の中ではラテックス粒子が好ましい。ラテックスの材質は、例えば、ポリスチレン、ジビニルベンゼン等が挙げられ、ポリスチレンであることが好ましい。粒状担体の平均粒径は０．１～５μｍとすることができる。なお、粒状担体の粒径は、動的光散乱法によって測定することができる。本明細書において「平均粒径」とは、動的光散乱法によって得られた体積基準の粒径の分布曲線において、小粒径からの積算値が全体の５０％に達した時の粒径（メディアン径）を意味する。

【0021】

抗体は、標的抗原に特異的に結合し得るものであれば特に制限されず、例えば、ＩｇＧとすることができる。ＩｇＧは２本の重鎖（Ｈ鎖）及び２本の軽鎖（Ｌ鎖）から構成される。重鎖はＮ末端から順に、可変領域（ＶＨ）、第一定常領域（ＣＨ１）、第二定常領域（ＣＨ２）及び第三定常領域（ＣＨ３）から構成されている。軽鎖はＮ末端から順に、可変領域（ＶＬ）及び定常領域（ＣＬ）から構成されている。ＣＨ２及びＣＨ３から構成される部分がＦｃ領域である。１本の重鎖と１本の軽鎖は、ＣＨ１に存在するシステイン残基及びＣＬに存在するシステイン残基のジスルフィド結合により結合している。また、重鎖同士は、ＣＨ１とＣＨ２の間に位置するヒンジ領域に存在するシステイン残基同士のジスルフィド結合により結合している。抗体は、重鎖が存在するＩｇＧの断片であってもよく、１本の重鎖及び１本の軽鎖から構成されるｒＩｇＧ（還元型ＩｇＧ）であってもよく、２本の重鎖から構成される断片であってもよく、１本の重鎖から構成される断片であってよい。２本の重鎖が存在する抗体において、少なくとも一方の重鎖のＣ末端がリジンであればよく、両方の重鎖のＣ末端がリジンであってもよい。

【0022】

抗体がＩｇＧである場合、そのＦｃ領域は、配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、Ｃ末端アミノ酸がリジンであるポリペプチドであることが好ましく、配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列からなるポリペプチドであることがより好ましい。配列番号１～１３のいずれか一つのアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、Ｃ末端アミノ酸がリジンであるポリペプチドは、エフェクター機能を有することが好ましい。Ｆｃ領域の有するエフェクター機能が維持されたポリペプチドは、不溶性粒子への結合効率も高くなる。

【0023】

ここで、配列番号１は、Protein Accession No. P01857 (human Ig gamma-1 C region)であり、配列番号２は、Protein Accession No. P01859 (human Ig gamma-2 C region)であり、配列番号３は、Protein Accession No. P01860 (human Ig gamma-3 C region)であり、配列番号４は、Protein Accession No. P01861 (human Ig gamma-4 C region)であり、配列番号５は、Protein Accession No. P01868 (mouse Ig gamma-1 C region)であり、配列番号６は、Protein Accession No. P01863 (mouse Ig gamma-2a C region)であり、配列番号７は、Protein Accession No. P01867 (mouse Ig gamma-2b C region)であり、配列番号８は、Protein Accession No. P03987 (mouse Ig gamma-3 C region)であり、配列番号９は、Protein Accession No. P20759 (rat Ig gamma-1 C region)であり、配列番号１０は、Protein Accession No. P20760 (rat Ig gamma-2a C region)であり、配列番号１１は、Protein Accession No. P20761 (rat Ig gamma-2b C region)であり、配列番号１２は、Protein Accession No. P20762 (rat Ig gamma-2c C region)であり、配列番号１３は、Protein Accession No. P01870 (rabbit Ig gamma C region)である。

【0024】

重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである抗体は、遺伝子組み換え植物により作製することができる。遺伝子組み換え植物により作製した抗体は、重鎖のＣ末端リジンが欠損し難いという特性がある。かかる抗体は、植物一過性発現系を用いることで作製することができ、例えば、特許第５０１５０１２号公報に記載の方法を利用することができる。かかる方法で作製した抗体はカルボキシペプチダーゼによる翻訳後修飾を受けにくいため、重鎖のＣ末端リジンが維持された抗体を得られやすい。また、重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである抗体は、カルボキシペプチダーゼを欠損させた哺乳動物細胞を発現宿主に用いた遺伝子組換え体としても得る事が可能である。その場合の哺乳動物細胞としては、ＣＨＯ（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｏｖａｒｙ）細胞やＨＥＫ２９３（Ｈｕｍａｎ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｋｉｄｎｅｙ ｃｅｌｌｓ ２９３）細胞等が挙げられるが、この限りではない。更に遺伝子組換え体として得る手法に関しても、自立複製能を欠いたプラスミドベクターやウイルスベクターを用いたｔｒａｎｓｉｅｎｔ発現系や、核移行性シグナルを付与し且つ自立複製能を有したｅｐｉｓｏｍａｌ ｖｅｃｔｏｒを用いたｓｅｍｉ－ｓｔａｂｌｅ発現系、また目的遺伝子を発現宿主のゲノムへ挿入したｓｔａｂｌｅ発現系等が挙げられ、特に限定されるものではない。

【0025】

粒状担体と重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである抗体の結合は、一般的な手法、例えば、物理吸着法及び化学結合法などを用いることができる。

【0026】

一実施形態の標的抗原の測定方法は、粒状担体と、上記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体とを含有し、上記抗体の重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである不溶性粒子を用いる。かかる測定方法は、被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するために、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するために行うことができる。

【0027】

一実施形態において、上記測定方法は、粒状担体と、上記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体とを含有し、上記抗体の重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである不溶性粒子と標的抗原を含有し得る被験試料を接触させる工程、並びに上記抗体及び上記標的抗原の抗原抗体反応による上記不溶性粒子の凝集反応を測定する工程、を含む。上記不溶性粒子は、調製済みのものを用いてもよく、測定に際して、粒状担体と重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである抗体とを結合させることにより調製してもよい。

【0028】

粒状担体と、上記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体とを含有し、上記抗体の重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである不溶性粒子を含む懸濁液と被検試料とを混合することで、上記不溶性粒子と標的抗原を含有し得る上記被験試料を接触させることができる。両者を接触させると、上記被検試料中に含まれる標的抗原と上記不溶性粒子に含まれる抗体との間の相互作用によって上記不溶性粒子が凝集し、懸濁液の吸光度が変化する。この吸光度の変化量（エンドポイント法）又は変化率（レート法）を測定する。測定は、比濁法又は比色法が好適に用いられる。例えば、セル外部より可視光から近赤外域の光、通常３００ｎｍ～１０００ｎｍ、好ましくは５００ｎｍ～９００ｎｍの光を照射し、吸光度変化又は散乱光の強度変化を検出することにより、上記不溶性粒子の凝集反応が測定される。

【0029】

凝集反応を行う時間は、１分～３０分とすることができ、好ましくは１分～１０分であるが、これらに限られない。凝集反応を行う温度は、３５℃～４０℃とすることができ、３６～３８℃とすることもできるが、これらに限られない。

【0030】

測定すべき標的抗原を種々の既知濃度で含む複数の標準試料を準備し、それらについて上記方法により吸光度の変化量又は変化率を測定する。標準試料中の測定すべき抗原の濃度を横軸、測定された吸光度の変化量又は変化率を縦軸にプロットして検量線を描く。未知の被検試料についても同じ方法により吸光度の変化量又は変化率を測定し、測定結果を上記検量線に当てはめることにより、被検試料中の標的抗原を定量的に評価することができる。また、あらかじめ吸光度の変化量又は変化率の閾値を設定しておき、閾値を超えた場合に被験試料中に標的抗原が存在すると定性的に評価することができる。

【0031】

被験試料は、標的抗原を含有し得るものであれば特に限定されないが、血液、血清、血漿、尿、便、唾液、組織液、髄液、ぬぐい液等の体液等又はその希釈物が挙げられ、血液、血清、血漿、尿、便、髄液又はこれらの希釈物が好ましい。

【0032】

一実施形態に係る標的抗原測定用キットは、粒状担体と、上記粒状担体に担持された、標的抗原に対する抗体とを含有し、上記抗体の重鎖のＣ末端アミノ酸がリジンである不溶性粒子を含む。標的抗原測定用キットは、被験試料中の標的抗原の有無を定性的に評価するため、又は被検試料中の標的抗原の濃度を定量的に評価するために用いることができ、より具体的には、上記標的抗原の測定方法に用いることができる。

【0033】

一実施形態において、標的抗原測定用キットは、上記不溶性粒子を調製するための抗体及び粒状担体を含む。本実施形態にかかる標的抗原測定用キットは、測定に際して抗体及び粒状担体を結合させて上記不溶性粒子を調製する。

【0034】

標的抗原測定用キットは、さらに、陽性対照又は検量線作成に用いるための標的抗原を含んでいてもよく、被験試料を希釈する緩衝液、不溶性粒子と被検試料とを混合するための緩衝液、抗体と粒状担体とを結合させるための緩衝液などを含んでいてもよい。

【実施例0035】

１．抗ＩｇＥ抗体の作製
重鎖の定常領域が配列番号５からなる抗体を以下の方法で作製した。

【0036】

１．１．重鎖のＣ末端リジンが欠損した抗ＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ０）の作製
抗ＩｇＥ抗体産生ハイブリドーマをマウスの腹腔内に投与し数日～数十日後に腹水を採取した。腹水をＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラムクロマトグラフィーにかけることで不純物を除去した。

【0037】

１．２．重鎖のＣ末端リジンが欠損していない抗ＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ６７）の作製
特許第５０１５０１２号公報に記載の植物一過性発現系で調製した。抗ＩｇＥ抗体の軽鎖はタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）ベクター（Ｉｃｏｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ社製）にクローニングし、各重鎖（ＣＨ３欠損体又はＣＨ２欠損体を含む）はジャガイモウイルスＸ（ＰＶＸ）ベクター（Ｉｃｏｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ社製）にクローニングした。これらのベクターをそれぞれ別々のアグロバクテリウムに導入して形質転換して培養した後、培養液の混合液をニコチアナベンサミアーナの葉にインフィルトレーションし、１週間ほどで収穫した。収穫した葉（感染葉）を凍結した。

【0038】

凍結した感染葉２００ｇを量りとり、カッターミキサーで粉砕した。粉砕物に抽出溶液（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ アスコルビン酸ナトリウム）５００ｍＬを添加し、感染葉を繰り返し粉砕した。遠心分離して上清を回収した。回収した液を硫安沈殿により濃縮した後、０．２２μｍフィルターで濾過した。濾過液をＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラムクロマトグラフィーにかけることで純物を除去した。

【0039】

２．抗ＩｇＥ抗体重鎖Ｃ末端リジンの分析
精製した抗ＩｇＥ抗体を還元アルキル化及び酵素消化（Ｔｒｐｓｉｎ／Ｌｙｓ－Ｃ）し、ＬＣ－ＭＳでタンパク質のアミノ酸配列を解析した。マウス腹水法で調製した抗ＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ０）の重鎖Ｃ末端のリジンは完全に欠損していた。一方で、植物一過性発現系で調製した抗ＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ６７）の重鎖Ｃ末端リジンは全体の３３％しか欠損が認められなかった。

【0040】

３．抗ＩｇＥ抗体のラテックス凝集試験
以下の手順に従い、得られた抗体のラテックスへの結合効率を評価した。

【0041】

（１）試薬の調製
抗ＩｇＥ抗体を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
ｉ）抗体をポリスチレンラテックス浮遊液１ｍＬに対し０．１ｍｇ担持させてなる感作粒子を、０．１％となるように緩衝液（グリシン、ｐＨ７．３）中で懸濁し、ラテックス浮遊液を調製した。
ｉｉ）緩衝液（グリシン、ｐＨ８．３）を準備した。

【0042】

（２）自動分析装置による測定
自動分析装置は日立社製７１８０型自動分析装置によりエンドポイント法で自動測定を行った。上記の通りに調製した試薬を用いて、各濃度の抗原（ＩｇＥ）の測定を行った。ＩｇＥ溶液３．５μＬに対し、上記（１）で調製した緩衝液１４０μＬを添加し、この混合液を３７℃で撹拌混合した。５分間放置後、ラテックス浮遊液７０μＬを添加し、更に３７℃で撹拌混合した。約５分間の凝集反応を吸光度変化量として測定した。

【0043】

調製条件（抗体とラテックスの量）を変化させたときの結果を表１に示す。

【0044】

【表1】

【0045】

表１に示した結果から明らかなように、抗体重鎖のＣ末端リジンが欠損していない抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ６７）は、Ｃ末端リジンが欠損している抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ０）に比べ、効率良くラテックスに結合することを確認した。

【0046】

同一条件で調製したＡｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ０及びＡｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ６７の感作ラテックス（それぞれ表１の調製条件１と調製条件２）で抗原との反応による凝集度を評価した結果を図１に示す。図１に示した結果から明らかなように、抗体重鎖のＣ末端リジンが欠損していない抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ６７）を担持するラテックスは、Ｃ末端リジンが欠損している抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＥ Ａｂ－Ｋ０）を担持するラテックスに比べ、凝集度が大きく、高感度な測定が可能であることを確認した。

【図1】

【配列表】

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