特開 2024-28890 メディトープ対応Ｔ細胞

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024028890

(43)【公開日】2024-03-05

(54)【発明の名称】メディトープ対応Ｔ細胞

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20240227BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240227BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20240227BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240227BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240227BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240227BHJP

   A61K 35/17 20150101ALN20240227BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12

C12N5/10 ZNA

C07K16/18

C07K19/00

C07K16/00

C12N15/63 Z

A61K39/395 T

A61P35/00

A61P35/02

A61K35/17

【審査請求】有

【請求項の数】7

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023206682

(22)【出願日】2023-12-07

(62)【分割の表示】P 2020536020の分割

【原出願日】2018-12-31

(31)【優先権主張番号】62/680,442

(32)【優先日】2018-06-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/611,924

(32)【優先日】2017-12-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】598004424

【氏名又は名称】シティ・オブ・ホープ

【氏名又は名称原語表記】Ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ウィリアムズ，ジョン・シー

(72)【発明者】

【氏名】ブラウン，クリスティーン

(72)【発明者】

【氏名】ジェンキンズ，カート

(72)【発明者】

【氏名】クオ，イー－チウ

(72)【発明者】

【氏名】クオ，チュン－フー

(57)【要約】      （修正有）

【課題】治療用抗体のオフターゲット効果を低減する組成物を提供する。
【解決手段】がんを処置する方法において使用するための組成物であって、組換えタンパク質をコードする単離核酸を含む発現ベクターを含むＴリンパ球を含み、組換えタンパク質は、（ｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；及び（ｉｉｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している膜貫通ドメインを含み、組換えタンパク質は、連続的な単鎖ポリペプチドであり、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、メディトープであり、方法は、がんの処置を必要とする対象に、有効量のＴリンパ球及び非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインに結合することが可能な抗原結合性ドメインを投与するステップを含み、抗原結合性ドメインががん抗原結合性ドメインである、組成物である。
【選択図】図３５

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；
（ｉｉ）細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；及び
（ｉｉｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している膜貫通ドメイン
を含む組換えタンパク質。

【請求項2】

細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の組換えタンパク質。

【請求項3】

膜貫通ドメインが、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン又はＣＤ３ゼータ膜貫通ドメインである、請求項１に記載の組換えタンパク質。

【請求項4】

膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインである、請求項３に記載の組換えタンパク質。

【請求項5】

非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを膜貫通ドメインに接続しているスペーサー領域をさらに含む、請求項４に記載の組換えタンパク質。

【請求項6】

スペーサー領域が、重鎖定常３（ＣＨ３）ドメインである、請求項５に記載の組換えタンパク質。

【請求項7】

非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインをスペーサー領域に接続しているペプチドリンカーをさらに含む、請求項６に記載の組換えタンパク質。

【請求項8】

膜貫通ドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している細胞内共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項７に記載の組換えタンパク質。

【請求項9】

細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン又はＯＸ－４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、請求項８に記載の組換えタンパク質。

【請求項10】

細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、請求項９に記載の組換えタンパク質。

【請求項11】

細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、請求項１０に記載の組換えタンパク質。

【請求項12】

細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのＣ末端に結合している検出用ドメインをさらに含む、請求項１１に記載の組換えタンパク質。

【請求項13】

検出用ドメインが、切断型ＣＤ１９タンパク質である、請求項１２に記載の組換えタンパク質。

【請求項14】

細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを検出用ドメインに接続している自己切断性ペプチジル配列をさらに含む、請求項１３に記載の組換えタンパク質。

【請求項15】

自己切断性ペプチジルリンカー配列が、Ｔ２Ａ配列又は２Ａ配列である、請求項１４に記載の組換えタンパク質。

【請求項16】

組換えタンパク質が、細胞の一部を形成する、請求項１に記載の組換えタンパク質。

【請求項17】

組換えタンパク質が、Ｔ細胞の一部を形成する、請求項１に記載の組換えタンパク質。

【請求項18】

膜貫通ドメインが、Ｔ細胞の細胞膜の一部を形成する、請求項１７に記載の組換えタンパク質。

【請求項19】

非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、抗原結合性ドメインに結合している、請求項１に記載の組換えタンパク質。

【請求項20】

抗原結合性ドメインが、Ｆａｂ、ＩｇＧ又は二特異性抗体である、請求項１９に記載の組換えタンパク質。

【請求項21】

抗原結合性ドメインが、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、請求項２０に記載の組換えタンパク質。

【請求項22】

抗原結合性ドメインが、がん抗原に結合することが可能である、請求項１９に記載の組換えタンパク質。

【請求項23】

抗原結合性ドメインが、がん抗原に、非共有結合によって結合することが可能である、請求項１９に記載の組換えタンパク質。

【請求項24】

がん抗原が、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９又はＣＤ２０である、請求項２２に記載の組換えタンパク質。

【請求項25】

がん抗原が、細胞の一部を形成する、請求項２２に記載の組換えタンパク質。

【請求項26】

細胞が、がん細胞である、請求項２５に記載の組換えタンパク質。

【請求項27】

がんが、卵巣がん、腎細胞癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、神経芽細胞腫、黒色腫、髄芽腫、肺がん、骨肉腫、神経膠芽腫又は神経膠腫である、請求項２６に記載の組換えタンパク質。

【請求項28】

請求項１に記載の組換えタンパク質をコードする単離核酸。

【請求項29】

請求項２８に記載の核酸を含む発現ベクター。

【請求項30】

レンチウイルス又はオンコレトロウイルスである、請求項２９に記載の発現ベクター。

【請求項31】

請求項２９に記載の発現ベクターを含むＴリンパ球。

【請求項32】

請求項１に記載の組換えタンパク質を含むＴリンパ球。

【請求項33】

請求項１に記載の組換えタンパク質を含み、膜貫通ドメインがＴリンパ球の細胞膜内にある、Ｔリンパ球。

【請求項34】

Ｔリンパ球が、自家Ｔリンパ球である、請求項３１に記載のＴリンパ球。

【請求項35】

Ｔリンパ球が、異種Ｔリンパ球である、請求項３１に記載のＴリンパ球。

【請求項36】

非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、抗原結合性ドメインに結合している、請求項３１に記載のＴリンパ球。

【請求項37】

抗原結合性ドメインが、Ｆａｂ、ＩｇＧ又は二特異性抗体である、請求項３６に記載のＴリンパ球。

【請求項38】

抗原結合性ドメインが、がん抗原に結合している、請求項３６に記載のＴリンパ球。

【請求項39】

がん抗原が、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９又はＣＤ２０である、請求項３８に記載のＴリンパ球。

【請求項40】

抗原結合性ドメインが、がん抗原結合性ドメインである、請求項３６に記載のＴリンパ球。

【請求項41】

抗原結合性ドメインが、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、請求項３６に記載のＴリンパ球。

【請求項42】

がんを処置する方法であって、がんの処置を必要とする対象に、有効量の、請求項３１に記載のＴリンパ球及び非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインに結合することが可能な抗原結合性ドメインを投与するステップを含み、抗原結合性ドメインががん抗原結合性ドメインである、方法。

【請求項43】

Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインが、同時に又は逐次的に投与される、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

Ｔリンパ球が第１の時点で投与され、抗原結合性ドメインが第２の時点で投与され、第１の時点が第２の時点に先行する、請求項４２に記載の方法。

【請求項45】

抗原結合性ドメインが第１の時点で投与され、Ｔリンパ球が第２の時点で投与され、第１の時点が第２の時点に先行する、請求項４２に記載の方法。

【請求項46】

（ｉ）投与する前に、インビトロで非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを抗原結合性ドメインに結合させ、これによりＴリンパ球－組換えタンパク質複合体を形成するステップ；及び
（ｉｉ）Ｔリンパ球－組換えタンパク質複合体を対象に投与し、これにより対象におけるがんを処置するステップ
を含む、請求項４２に記載の方法。

【請求項47】

がんが、卵巣がん、腎細胞癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、神経芽細胞腫、黒色腫、髄芽腫、肺がん、骨肉腫、神経膠芽腫又は神経膠腫である、請求項４２に記載の方法。

【請求項48】

抗原結合性ドメインが、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、請求項４２に記載の方法。

【請求項49】

組換えタンパク質が第１の組換えタンパク質であり、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインであり、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが第１の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインであり、膜貫通ドメインが第１の膜貫通ドメインであり、スペーサー領域が第１のスペーサー領域であり、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが第１の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の組換えタンパク質。

【請求項50】

第１の組換えタンパク質が、第２の組換えタンパク質に非共有結合によって結合しており、第２の組換えタンパク質が、
（ｉ）第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；
（ｉｉ）第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；
（ｉｉｉ）第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している第２の膜貫通ドメイン；及び
（ｉｖ）第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを第２の膜貫通ドメインに接続しており、第１のスペーサー領域が非共有結合によって結合している、第２のスペーサー領域
を含む、請求項４９に記載の組換えタンパク質。

【請求項51】

第１のスペーサー領域及び第２のスペーサー領域が、第１の重鎖定常３（ＣＨ３）ドメイン及び第２の重鎖定常３（ＣＨ３）ドメインである、請求項５０に記載の組換えタンパク質。

【請求項52】

第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及び第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、化学的に異なる、請求項４９に記載の組換えタンパク質。

【請求項53】

第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及び第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、化学的に同じである、請求項４９に記載の組換えタンパク質。

【請求項54】

第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、第１の抗原結合性ドメインに非共有結合によって結合している、請求項４９に記載の組換えタンパク質。

【請求項55】

第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、第２の抗原結合性ドメインに非共有結合によって結合している、請求項５０に記載の組換えタンパク質。

【請求項56】

第１の抗原結合性ドメイン及び第２の抗原結合性ドメインが、化学的に異なる、又は化学的に同じである、請求項５４に記載の組換えタンパク質。

【請求項57】

第１の抗原結合性ドメイン及び第２の抗原結合性ドメインが、独立に、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、請求項５４に記載の組換えタンパク質。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照により全体において、全ての目的のために本明細書に組み込まれる、２０１７年１２月２９日に出願された、米国仮出願第６２／６１１，９２４号、２０１８年６月４日に出願された、米国仮出願第６２／６８０，４４２号に対する優先権を主張する。

【0002】

ＡＳＣＩＩファイルとして提出された、「配列表」、表又はコンピュータプログラム一覧の付表の参照
０４８４４０－６２１００１ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５というファイルに書き込まれ、２０１８年１２月３１日に、２９，６７２バイト、マシンフォーマットをＩＢＭ－ＰＣとし、ＭＳ Ｗｉｎｄｏｗｓオペレーションシステムにより創出された配列表が、参照により本明細書に組み込まれる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

（発明の要旨）
一態様において、第１の組換えタンパク質が提供される。第１の組換えタンパク質は、（ｉ）第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）第１の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；及び（ｉｉｉ）第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを第１の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している第１の膜貫通ドメインを含む。複数の実施形態において、第１の組換えタンパク質は、第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを第１の膜貫通ドメインに接続している第１のスペーサー領域を含む。複数の実施形態において、第１のスペーサー領域は、第１のＣＨ３領域である。

【0004】

一態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される第１の組換えタンパク質をコードする単離核酸が提供される。

【0005】

一態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される核酸を含む発現ベクターが提供される。複数の実施形態において、ベクターは、レンチウイルス又はオンコレトロウイルスである。

【0006】

一態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される発現ベクターを含むＴリンパ球が提供される。

【0007】

一態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される第１の組換えタンパク質を含むＴリンパ球が提供される。

【0008】

一態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される第１の組換えタンパク質を含むＴリンパ球であって、膜貫通ドメインがＴリンパ球の細胞膜内にある、Ｔリンパ球が提供される。

【0009】

一態様において、がんを処置する方法が提供される。方法は、がんの処置を必要とする対象に、有効量の、その実施形態を含む本明細書において提供されるＴリンパ球を投与するステップを含み、第１の抗原結合性ドメイン及び第２の抗原結合性ドメインは、独立に、抗がん抗原結合性ドメインである。

【0010】

ある態様において、組換えタンパク質が提供される。組換えタンパク質は、（ｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；及び（ｉｉｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している膜貫通ドメインを含む。

【0011】

ある態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質をコードする単離核酸が提供される。

【0012】

ある態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される核酸を含む発現ベクターが提供される。

【0013】

ある態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される発現ベクターを含むＴリンパ球が提供される。

【0014】

ある態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質を含むＴリンパ球が提供される。

【0015】

ある態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質を含むＴリンパ球であって、膜貫通ドメインがＴリンパ球の細胞膜内にある、Ｔリンパ球が提供される。

【0016】

ある態様において、がんを処置する方法が提供される。方法は、がんの処置を必要とする対象に、有効量の、その実施形態を含む本明細書において提供されるＴリンパ球及び非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインに結合することが可能な抗原結合性ドメインを投与するステップを含み、抗原結合性ドメインは、がん抗原結合性ドメインである。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1A】キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞が、抗原特異的単鎖可変Ｆａｂ（例えば、ｍＡｂの重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン）を、ＣＤ３ゼータ鎖と融合させることにより、典型的に創出されることを示す図である。このように、各ＣＡＲ Ｔ細胞は、標的特異性を変化させる、新たな遺伝子の創出を要求する。

【図1B】この制約を取り除くために、本出願者らがメディトープ技術を使用して、抗体断片上において、操作Ｔ細胞に「スナップ」したことを示す図である。具体的に、本出願者らは、ｓｃＦｖｃを、ＱＦＤメディトープにより置きかえた。

【図1C】単一抗原特異的ＣＡＲ Ｔ細胞のための現行の技術及びメディトープ技術をどのように使用して、ユニバーサルＣＡＲを創出しうるのかについての描画による明示である。

【図2A】ＣＨＯ－Ｓ細胞に、ベクターなし（モック）、親ＣＡＲ（１）、メディトープ－ＣＨ３（３）又はメディトープ－ＣＤ２８（２）をトランスフェクトして、蛍光色素であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７とコンジュゲートしているメディトープ対応Ｉ８３ＥトラスツズマブＩｇＧ（６４７－Ｉ８３Ｅ ＩｇＧ）、蛍光色素であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７とコンジュゲートしているメディトープ対応Ｉ８３ＥトラスツズマブＦａｂ（６４７－Ｉ８３Ｅ Ｆａｂ）及び蛍光色素であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７とコンジュゲートしている非メディトープ対応イピリムマブＩｇＧ（６４７－Ｉｐｉ ＩｇＧ）の結合について調べたことを示す図である。生存トランスフェクト細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋ゲーティングを使用して同定した（図３Ａを参照されたい）。細胞を、ＡＰＣシグナルの平均値蛍光強度（ＭＦＩ）について解析した。

【図2B】ベクターなし（モック）、親ＣＡＲ（１）又はメディトープ－ＣＤ２８（２）をトランスフェクトされた細胞が、６４７－Ｉ８３Ｅ ＩｇＧ、６４７－Ｉ８３Ｅ Ｆａｂ又は６４７－Ｉｐｉ ＩｇＧにより染色したところ、ＭＦＩのシフトを示さなかったことを示す図である。

【図2C】メディトープ－ＣＨ３（３）をトランスフェクトされた細胞が、６４７－Ｉ８３Ｅ ＩｇＧ又は６４７－Ｉ８３Ｅ Ｆａｂにより染色したところ、ＭＦＩの著明なシフトを示したが、６４７－Ｉｐｉ ＩｇＧにより染色したところ、最小限のシフトを示すに過ぎなかったことを示す図である。

【図3A】フローサイトメトリー解析のためのゲーティング戦略を示す図である。ＦＳＣ／ＳＳＣ（左パネル）、ＰＩ染色（生存細胞を指し示す；中パネル）及びＣＤ１９発現（トランスフェクションマーカー；右パネル）により、細胞にゲートをかけた。

【図3B】フローサイトメトリー解析のためのゲーティング戦略を示す図である。ゲートをかけた細胞についてのさらなる解析により、それぞれ、抗体及びＨｅｒ２の結合を指し示す、６４７シグナル（左パネル）及びＶｉｏＢｌｕｅシグナル（右パネル）を測定した。

【図4A】メディトープ対応のＩｇＧ及びＦａｂが、メディトープ－ＣＨ３ ＣＡＲに結合することを示す図である。生存トランスフェクト細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋ゲーティングを使用して同定した。細胞を、ＡＰＣシグナルの平均値蛍光強度（ＭＦＩ）について解析した。染料を伴わない細胞を使用して、ＡＰＣ^＋細胞についてゲートをかけた。非メディトープ対応６４７－Ｉｐｉ ＩｇＧにより染色された細胞は、ＡＰＣ ＭＦＩの最小限のシフトを示した。メディトープ対応の６４７－Ｉ８３Ｅ ＩｇＧ及び６４７－Ｉ８３Ｅ Ｆａｂにより染色された細胞は、ＡＰＣ ＭＦＩの著明なシフトを示したことから、６４７コンジュゲートタンパク質の、メディトープ－ＣＨ３発現細胞への結合を裏付けた。

【図4B】メディトープ対応のＩｇＧ及びＦａｂが、メディトープ－ＣＨ３ ＣＡＲに結合することを示す図である。この傾向は、メディトープ－ＣＤ２８構築物において見られなかった。

【図4C】メディトープ対応のＩｇＧ及びＦａｂが、メディトープ－ＣＨ３ ＣＡＲに結合することを示す図である。６４７－ＩｇＧ又は６４７－Ｆａｂについて陽性である、ＣＤ１９^＋細胞の生存百分率（ゲートをかけた細胞：ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋→ＡＰＣ^＋；親集団のＡＰＣ^＋細胞の頻度）である。

【図5A】メディトープ－ＣＨ３発現細胞が、メディトープ対応抗体に結合し、その後、メディトープ対応抗体が、抗原に結合しうることを示す図である。ＡＰＣ^＋（ゲートをかけた細胞：ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋→ＡＰＣ^＋）である、メディトープ－ＣＨ３ ＣＡＲ細胞上における、Ｈｅｒ２平均値蛍光強度（ＭＦＩ）についてのヒストグラムである。

【図5B】メディトープ－ＣＨ３発現細胞が、メディトープ対応抗体に結合し、その後、メディトープ対応抗体が、抗原に結合することを示す図である。Ｈｅｒ２について陽性である、ＣＤ１９^＋６４７^＋細胞の生存百分率（上記と同じゲーティング戦略による、祖父母集団のＨｅｒ２^＋細胞頻度）である。

【図6A】６４７^＋Ｈｅｒ２^＋二重陽性細胞の同定を示す図である。生存トランスフェクト細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋ゲーティングを使用して同定した（図３Ａを参照されたい）。次いで、細胞を、６４７レベル（ｘ軸）及びＨｅｒ２レベル（ＶｉｏＢｌｕｅ）について解析した。多くの６４７^－細胞が、ｙ軸上にあることが注目される。メディトープ対応６４７－Ｉ８３Ｅ Ｆａｂにより染色された細胞についての解析である。

【図6B】６４７^＋Ｈｅｒ２^＋二重陽性細胞の同定を示す図である。生存トランスフェクト細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋を使用して同定した（図３Ａを参照されたい）。次いで、細胞を、６４７レベル（ｘ軸）及びＨｅｒ２レベル（ＶｉｏＢｌｕｅ）について解析した。多くの６４７^－細胞が、ｙ軸上にあることが注目される。メディトープ対応６４７－Ｉ８３Ｅ ＩｇＧにより染色された細胞についての解析である。

【図6C】６４７^＋Ｈｅｒ２^＋二重陽性細胞の同定を示す図である。生存トランスフェクト細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋を使用して同定した（図３Ａを参照されたい）。次いで、細胞を、６４７レベル（ｘ軸）及びＨｅｒ２レベル（ＶｉｏＢｌｕｅ）について解析した。多くの６４７^－細胞が、ｙ軸上にあることが注目される。非メディトープ対応６４７－Ｉｐｉ ＩｇＧにより染色された細胞についての解析である。

【図7】Ｈｅｒ２^＋細胞の同定を示す図である。生存トランスフェクト細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋ゲーティングを使用して同定した。ＰａｃＢｌｕｅ－Ｈｅｒ２を伴わない試料による解析を使用して、次のゲートをかけて、Ｈｅｒ２^＋細胞を同定した。次いで、細胞を、Ｈｅｒ２（ＶｉｏＢｌｕｅ）レベルについて解析した。

【図8】メディトープ対応のセツキシマブＦａｂ及びトラスツズマブＦａｂが、メディトープ－ＣＨ３ ＣＡＲに結合することを示す図である。（図８Ａ）６４７－Ｆａｂについて陽性である、ＣＤ１９^＋細胞の生存百分率（ゲートをかけた細胞：ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋→ＡＰＣ^＋；親集団のＡＰＣ^＋細胞の頻度）である。（図８Ｂ）メディトープ－ＣＨ３をトランスフェクトされた生存細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋ゲーティングを使用して同定した。細胞を、ＡＰＣシグナルの平均値蛍光強度（ＭＦＩ）について解析した。染料を伴わない細胞を使用して、ＡＰＣ^＋細胞についてゲートをかけた。非メディトープ対応６４７－Ｉｐｉ Ｆａｂにより染色された細胞は、ＡＰＣ ＭＦＩの最小限のシフトを示した。メディトープ対応の６４７－Ｉ８３Ｅセツキシマブ（ｃｅｔｕｘ）Ｆａｂ及び６４７－Ｉ８３Ｅトラスツズマブ（ｔｒａｓ）Ｆａｂにより染色された細胞は、ＡＰＣ ＭＦＩの著明なシフトを示したことから、６４７コンジュゲートタンパク質の、メディトープ－ＣＨ３発現細胞への結合を裏付けた。

【図9A】６４７^＋Ｈｅｒ２^＋二重陽性細胞の同定を示す図である。生存トランスフェクト細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋ゲーティングを使用して同定した。次いで、細胞を、６４７レベル（ｘ軸）及びＨｅｒ２レベル（Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ）について解析した。メディトープ対応６４７－Ｉ８３Ｅセツキシマブ（ｃｅｔｕｘ）Ｆａｂにより染色された細胞についての解析である。

【図9B】６４７^＋Ｈｅｒ２^＋二重陽性細胞の同定を示す図である。生存トランスフェクト細胞を、ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋を使用して同定した。次いで、細胞を、６４７レベル（ｘ軸）及びＨｅｒ２レベル（Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ）について解析した。メディトープ対応６４７－Ｉ８３Ｅトラスツズマブ（ｔｒａｓ）Ｆａｂにより染色された細胞についての解析である。

【図10】異なる濃度のメディトープ対応Ｈｅｒ２を使用する、卵巣がん細胞株における腫瘍殺滅アッセイを示す図である。

【図11】異なる濃度のメディトープ対応Ｈｅｒ２を使用する、乳がん細胞株における腫瘍殺滅アッセイを示す図である。

【図12】ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞を示す図である。

【図13】切替え型Ｆａｂ ＣＡＲ－Ｔ細胞を示す図である。

【図14】メディトープ－ＣＡＲを、Ｊｕｒｋａｔ細胞に形質導入し、切断型ＣＤ１９を、マーカーとして共発現させたことを示す図である。形質導入の後、ＣＤ１９が陽性である細胞を分取し、後続の実験のために拡大した。

【図15】メディトープ－ＣＡＲを発現させるＪｕｒｋａｔ細胞を、メディトープ部位を伴う、又はこれを伴わないトラスツズマブと共にインキュベートし、次いで、二次抗カッパ－６４７（Ａｂｃａｍ＃２０２８３２）又は二次抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ－４８８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ＃Ｈ１０１２０）により染色したことを示す図である。結果は、細胞を、フローサイトメトリーにより解析した後において、ｍｅｍＡｂトラスツズマブだけが、メディトープ－ＣＡＲを発現させるＪｕｒｋａｔ細胞に結合しうることを示した。

【図16】左：がん細胞、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃメディトープ－ＣＡＲ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブを、白色壁面の９６ウェルプレート内において共インキュベートしたことを示す図である。図中の最高濃度は、１５ｎＭであり、４倍の希釈系列をこれに後続させた。６時間にわたるインキュベーションの後、ルシフェラーゼ基質を、各ウェルに添加し、プレートリーダーを使用して、発光を速やかに測定した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブの存在下において、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化は、１５ｎＭにおけるフック効果状況にもかかわらず、用量依存的に増大した。各細胞株についてのＥＣ５０は、０．３５ｎＭ（ＳＫＯＶ３）、０．８３ｎＭ（ＳＫＢＲ３）、０．４２ｎＭ（ＭＣＦ７）、０．２７ｎＭ（ＯＶＣＡＲ３）及び０．２６ｎＭ（ＢＴ４７４）である。Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化レベルは、ＢＴ４７４細胞株を除き、がん細胞上のＨＥＲ２の発現と正に関連する。ＢＴ４７４は、高ＨＥＲ２発現を示すが、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、他の高ＨＥＲ２発現細胞（ＳＫＯＶ３及びＳＫＢＲ３）と同じレベルまで活性化させない。右：細胞５×１０^５個を、ＰＢＳ中に１％のＦＢＳ中に１００ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブにより、３０分間にわたり処置した。３回にわたる洗浄の後、細胞を、二次抗カッパ－６４７抗体により、３０分間にわたり標識した。細胞のフルオロフォア強度は、ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメーターにより解析した。赤色のピークは、二次抗カッパ－６４７抗体単独により処置された細胞である。緑色のピークは、ｍｅｍＡｂトラスツズマブ及び二次抗カッパ－６４７抗体により処置された細胞である。フローサイトメトリーを使用して、二次抗体単独により染色された細胞と、ｍｅｍＡｂトラスツズマブ及び二次抗体により染色された細胞とを比較することにより、ＨＥＲ２発現レベルを解析した。中央値蛍光強度（ＭＦＩ）は、ＭＣＦ７細胞について、３３８及び９８５；ＳＫＢＲ３細胞について、３３０及び３４４０５；ＢＴ４７４細胞について、３９２及び３１７２０；ＳＫＯＶ３細胞について、３７０及び４３１９１；ＯＶＣＡＲ３細胞について、３０７及び１４３６である。ＨＥＲ２発現を伴う細胞は、高度から低度に、ＳＫＯＶ３、ＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４、ＯＶＣＡＲ３及びＭＣＦ７である。

【図17】左：がん細胞、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ細胞及びセツキシマブを、白色壁面の９６ウェルプレート内において共インキュベートしたことを示す図である。図中の最高濃度は、６０ｎＭであり、４倍の希釈系列をこれに後続させた。６時間にわたるインキュベーションの後、ルシフェラーゼ基質を、各ウェルに添加し、プレートリーダーを使用して、発光を速やかに測定した。各細胞株についてのＥＣ５０は、０．１４ｎＭ（ＳＫＯＶ３）、０．１２ｎＭ（ＳＫＢＲ３）、０．１２ｎＭ（ＭＣＦ７）、０．１１ｎＭ（ＯＶＣＡＲ３）及び１．１ｎＭ（ＢＴ４７４）である。右：細胞５×１０^５個を、ＰＢＳ中に１％のＦＢＳ中に１００ｎＭのセツキシマブにより、３０分間にわたり処置した。３回にわたる洗浄の後、細胞を、二次抗カッパ－６４７抗体により、３０分間にわたり標識した。細胞のフルオロフォア強度は、ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメーターにより解析した。赤色のピークは、二次抗カッパ－６４７抗体単独により処置された細胞である。緑色のピークは、セツキシマブ及び二次抗カッパ－６４７抗体により処置された細胞である。中央値蛍光強度は、ＥＧＦＲ発現を伴う細胞が、高度から低度に、ＯＶＣＡＲ３（４８１９）、ＳＫＯＶ３（４４７９）、ＳＫＢＲ３（２８６５）、ＢＴ４７４（６５１）及びＭＣＦ７（４８０）であることを示した。

【図18】ｍｅｍＡｂトラスツズマブとあらかじめ混合し、洗浄した、Ｊｕｒｋａｔ細胞又はがん細胞を示す図である。Ｊｕｒｋａｔ細胞又はがん細胞を、ｍｅｍＡｂトラスツズマブとあらかじめ結合させた後に洗浄する。がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種した。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃメディトープ－ＣＡＲ細胞（６０ｕｌ当たり１×１０^５個）を、各ウェルに添加した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、持続的に存在させる、又はＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞若しくはがん細胞にあらかじめ結合させ、洗浄する（グラフ内のバーは、左から右に、処置なし；持続的に存在させたハーセプチン（４ｎＭ）；持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ細胞；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、がん細胞を表す。）。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、５０ｕｌのルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して、速やかに測定した。

【図19】ｍｅｍＡｂをあらかじめ結合させたＴ細胞（左）及びｍｅｍＡｂをあらかじめ結合させたがん細胞（右）を示す図である。

【図20】ハーセプチンが、Ｉ８３Ｅに媒介されたＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃの活性化を遮断することを示す図である。ｍｅｍＡｂトラスツズマブ及びハーセプチンを持続的に存在させた。がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種した。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅ－ＣＡＲ細胞（６０ｕｌ当たり１×１０^５個）を、各ウェルに添加した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、持続的に存在させた、又はＪｕｒｋａｔ細胞又はがん細胞にあらかじめ結合させ、洗浄した（グラフ内のバーは、左から右に、持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）；持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）及びハーセプチン（４０ｎＭ）；持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）及びハーセプチン（４００ｎＭ）を表す）。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、５０ｕｌのルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーにより、速やかに読み取った。４ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブの連続的な存在下において、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞は、ｍｅｍＡｂトラスツズマブによる、がん細胞への結合に起因して活性化された。ハーセプチンは、本発明者らのｍｅｍＡｂトラスツズマブと同じエピトープを有し、ＨＥＲ２上の同じ結合性部位について競合しうるため、インキュベーション時における、ハーセプチンの持続的存在は、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を遮断しうる。ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）の１００倍濃度のハーセプチン（４００ｎＭ）が、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を、ほぼ完全に遮断することから、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化が、ハーセプチンにより認識される、同じＨＥＲ２エピトープに結合する、ｍｅｍＡｂトラスツズマブにより引き起こされることが裏付けられた。

【図21】ハーセプチンが、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ｍｅｍＡｂトラスツズマブとあらかじめ結合させ、洗浄した後における、ｍｅｍＡｂに媒介されたＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃの活性化を遮断することを示す図である。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、まず、Ｊｕｒｋａｔ細胞にあらかじめ結合させ、洗浄する。ハーセプチンを持続的に存在させた。がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種した。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅ－ＣＡＲ細胞（６０ｕｌ当たり１×１０^５個）を、各ウェルに添加した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、持続的に存在させた、又はＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞にあらかじめ結合させ、洗浄した（グラフ内のバーは、左から右に、持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞＋持続的に存在させたハーセプチン（４０ｎＭ）；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞＋持続的に存在させたハーセプチン（４００ｎＭ）を表す）。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、５０ｕｌのルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して、速やかに測定した。Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞を、ｍｅｍＡｂトラスツズマブとあらかじめ結合させ、洗浄することは、発光活性を、高ＨＥＲ２発現細胞（ＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４及びＳＫＯＶ３）と共に共インキュベートした場合に、ｍｅｍＡｂを持続的に存在させた細胞と比較して、著明に減殺したが、低ＨＥＲ２発現細胞（ＭＣＦ７及びＯＶＣＡＲ３）と共に共インキュベートした場合に、それほど減殺しなかった。インキュベーション時における、ハーセプチンの持続的存在は、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を遮断しうる。各Ｊｕｒｋａｔ細胞上のｍｅｄｉ－ＣＡＲ又は各がん細胞上の標的分子の数は、各Ｔ細胞内において、どのくらい大きな活性化が示されるのか、又はどのくらい多くのＴ細胞が活性化されるのかを決定しうる。

【図22】ハーセプチンが、がん細胞を、ｍｅｍＡｂとあらかじめ混合し、洗浄した後における、ｍｅｍＡｂトラスツズマブに媒介されたＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃの活性化を、ほとんど遮断しなかったことを示す図である。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、まず、がん細胞にあらかじめ結合させ、洗浄する。ハーセプチンを持続的に存在させた。がん細胞を、ｍｅｍＡｂトラスツズマブとあらかじめ結合させ、洗浄することは、発光活性を、ｍｅｍＡｂを持続的に存在させた細胞と比較して、劇的に減殺しなかった。インキュベーション時における、ハーセプチンの持続的存在は、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化に対する遮断効果を、全く及ぼさなかった、又はある程度及ぼした。このデータは、ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、がん細胞上のＨＥＲ２に結合させたところ、それは、メディトープ結合性部位を伴わないトラスツズマブにほとんど競合されないことを裏付けた。がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種した。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅ－ＣＡＲ細胞（１×１０^５）を、各ウェルに添加した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、持続的に存在させた、又はがん細胞にあらかじめ結合させ、洗浄した（グラフ内のバーは、左から右に、持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、がん細胞；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、がん細胞＋持続的に存在させたハーセプチン（４０ｎＭ）；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、がん細胞＋持続的に存在させたハーセプチン（４００ｎＭ）を表す）。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、５０ｕｌのルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して、速やかに測定した。

【図23】Ｔ細胞が、ｍｅｍＡｂとあらかじめ混合し、洗浄したがん細胞を、死滅させることを示す図である。生存率（％）＝［Ｌｕｃ_{（ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ＋ ａｎｔｉｂｏｄｙ）} － Ｌｕｃ_{（Ｔ ｃｅｌｌｓ ＋ ａｎｔｉｂｏｄｙ）}］／［Ｌｕｃ_{（ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ＋ Ｔｍｏｃｋ ｃｅｌｌｓ）} － Ｌｕｃ_{（Ｔｍｏｃｋ ｃｅｌｌｓ）}］である。０．１ｎＭ又は０．５ｎＭのｍｅｍ抗体の持続的存在下において、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞との共インキュベーションを伴うがん細胞の生存率は、モックＴ細胞共インキュベーションとの共インキュベーションを伴うがん細胞と比較して減少した。乳がん細胞において、０．１及び０．５ｎＭとしたときに、細胞生存率は、用量依存的に低下したが、卵巣がん細胞は、これらの２つの濃度においても、同様の生存率を示す。抗体とあらかじめ結合させ、洗い流したがん細胞は、持続的な抗体処置を伴うがん細胞と比較して、５～１８％の、生存率の逆戻しにもかかわらず、ヒトＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞により、やはり死滅させることができる。腫瘍殺滅アッセイのために、がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）及びヒトＴ細胞（１００ｕｌ当たり６，２５０個）を、抗体の存在下又は非存在下において、９６ウェル丸底プレート内に播種した。７２時間にわたるインキュベーションの後、細胞を、２５０×ｇにおいて、５分間にわたり遠心分離し、各ウェル内、１００ｕｌずつの培地を除去した。細胞生存率について調べるために、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒキットからの試薬１００ｕｌを、各ウェル内に添加した。２分間にわたるインキュベーションの後、１００ｕｌの混合物を、白色壁面の９６ウェルプレートに移し、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して測定した。

【図24】ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞が、がん細胞を、ｍｅｍＡｂトラスツズマブを低用量として、効果的に死滅させることを示す図である。がん細胞を、モックＴ細胞又はＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞と共に、ｍｅｍＡｂトラスツズマブの存在下において、３日間にわたりインキュベートした。このデータは、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞が、ｍｅｍＡｂトラスツズマブを介して、がん細胞に結合するので、ＨＥＲ２陽性がん細胞を、効果的に死滅させたことを示した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブ及びＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞と共に、共インキュベートされたがん細胞のＩＣ５０は、０．３３ｎＭ（ＢＴ４７４）、０．１１ｎＭ（ＳＫＢＲ３）、０．０６９ｎＭ（ＭＣＦ７）、０．０４６ｎＭ（ＳＫＯＶ３）及び０．０２７ｎＭ（ＯＶＣＡＲ３）である。殺滅効果は、がん細胞上のＨＥＲ２発現レベルと関連しなかった。腫瘍殺滅アッセイのために、がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）及びヒトＴ細胞（１００ｕｌ当たり６，２５０個）を、抗体の存在下又は非存在下において、９６ウェル丸底プレート内に播種した。７２時間にわたるインキュベーションの後、細胞を、２５０×ｇにおいて、５分間にわたり遠心分離し、各ウェル内、１００ｕｌずつの培地を除去した。細胞生存率について調べるために、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒキットからの試薬１００ｕｌを、各ウェル内に添加した。２分間にわたるインキュベーションの後、１００ｕｌの混合物を、白色壁面の９６ウェルプレートに移し、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して測定した。

【図25】メディトープ－ＣＡＲ Ｔ細胞（その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質を発現させるＴ細胞）の、ｓｃＦｖ ＣＡＲ Ｔ細胞及びＦａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と比較した腫瘍殺滅を示す図である。

【図26】卵巣がんにおける腫瘍殺滅アッセイ（ＦＡＣＳ）を示す図である。フローサイトメトリーを使用して、どれほど多くのがん細胞が、それらを、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に共インキュベートした後において、やはり生存しているのかについて、陽性対照としての、ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ又はＨＥＲ２Ｆａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と共にインキュベートされたがん細胞と比較して解析した。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に共インキュベートしたところ、３日間にわたるインキュベーションの後、生存がん細胞は、劇的に減少した。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞の殺滅効果は、ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ Ｔ細胞又はＨＥＲ２Ｆａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と同様であった、又はこれらよりなお良好であった。

【図27】乳がんにおける腫瘍殺滅アッセイ（ＦＡＣＳ）を示す図である。フローサイトメトリーを使用して、どれほど多くのがん細胞が、それらを、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に共インキュベートした後において、やはり生存しているのかについて、陽性対照としての、ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ又はＨＥＲ２Ｆａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と共にインキュベートされたがん細胞と比較して解析した。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に共インキュベートしたところ、３日間にわたるインキュベーションの後、生存がん細胞は、劇的に減少した。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞の殺滅効果は、ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ Ｔ細胞又はＨＥＲ２Ｆａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と同様であった、又はこれらよりなお良好であった。

【図28】Ｔ細胞内の、ＣＤ１０７ａ及びＩＦＮ－ｇの発現についてのヒストグラムを示す図である。フローサイトメトリーは、ヒトＴ細胞のうちの約４０％が、メディトープ－ＣＡＲの形質導入に成功したことを示した。がん細胞を、あらかじめ混合し、洗浄したｍｅｍＡｂトラスツズマブと併せて、又はｍｅｍＡｂトラスツズマブの持続的存在下においてインキュベートしたところ、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞は、ＣＤ１０７ａ及びＩＦＮγの発現を増大させた。ＣＤ１０７ａ及びＩＦＮγの発現について解析するために、がん細胞（５×１０^４／１００ｕｌ）を、９６ウェル丸底プレート内に播種し、ヒトＴモック細胞又はＦａｂＲａｃｋ細胞（１００ｕｌ当たり５×１０^４個）を、がん細胞が存在する各ウェルに添加した。エフェクターの、標的に対する比は、１：１である。ＣＤ１０７ａ－ＦＩＴＣ（ＢＤ＃５５５８００）抗体及び輸送体阻害剤であるＧｏｌｇｉｓｔｏｐ（ＢＤ＃５５４７２４）を、インキュベーション時に、各ウェルに添加した。５時間にわたるインキュベーションの後、細胞を、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃Ｌ３４９６５）により、暗所内、４℃において、３０分間にわたり染色した。２回にわたり洗浄した後、細胞を、ＣＤ４－ＰｅｒＣＰ（ＢＤ＃３４７３２４）、ＣＤ８－ＡＰＣＣｙ７（ＢＤ＃３４８７９３）及びＣＤ１９－ＰＥＣｙ７（ＢＤ＃５５７８３５）により、暗所内、４℃において、３０分間にわたり染色した。２回にわたり洗浄した後、細胞を、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ５５４７１４）により固定及び透過化するのに続き、細胞内ＩＦＮを、ＩＦＮ－ＡＰＣ（ＢＤ＃５５４７０２）により、暗所内、室温において、３０分間にわたり染色した。２回にわたり洗浄した後、細胞を、１００ｕｌの最終容量において再懸濁させ、４０ｕｌの試料を、フローサイトメーターにより解析した。

【図29】ＣＤ１０７ａ及びＩＦＮ－γを示す図である。

【図30】Ｉ８３Ｅトラスツズマブが、標的細胞を伴わないＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞を活性化させえないことを示す図である。試験に利用可能な活性化マーカー：上方調節：ＣＤ６９（生存時間が短い）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ４４、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１５４；下方調節：ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７（ＣＤ１９７）（ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＫＬＲＧ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２７、ＣＤ２８）である。０．５ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に、５時間にわたりインキュベートしたところ、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞は、ＣＤ１０７ａ及びＩＦＮγの発現の増大を示さなかった。

【図31】４つの構築物を作出したことを示す図である。上の２つの概略図は、形質転換細胞についてのマーカーとして使用される、切断型ＣＤ１９遺伝子を含む。これらの２つは、共刺激シグナルである、Ｃ２８又は４１ＢＢにより異なる。下の２つの概略図は、ＣＤ１９リードアウトマーカーを除き、同じである。

【図32】分取の前及び後における、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ細胞内の切断型ＣＤ１９（ＣＤ１９ｔ）の発現についてのヒストグラムである。細胞を、ＣＤ１９－ＰＥ－Ｃｙ７により染色し、ＣＤ１９ｔ陽性細胞を、ＢＤ Ａｒｉａ ＳＯＲＰフローサイトメーターにより分取した。切断型ＣＤ１９マーカーを使用する細胞分取により単離された、形質転換細胞の均質集団である。

【図33A】今後の課題を示す図である。メディトープ対応ＩｇＧは、４つの変異体（ＣＤ１９ｔ及びＣＤ２８共刺激シグナル又は４１ＢＢ共刺激シグナルを伴う、又はこれを伴わない）のうちの１つだけに結合する。

【図33B】今後の課題を示す図である。非形質転換Ｊｕｒｋａｔ細胞は、ＩｇＧに結合しない。

【図33C】今後の課題を示す図である。同様に、親抗体（例えば、非メディトープ対応）は、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞に結合しない。言い換えれば、異なるｍｅｍＡｂを、異なるＦａｂｒａｃｋ変異体と組み合わせることができる。

【図34】乳がん細胞株（ＭＣＦ７、ＳＫＢＲ３及びＢＴ４７４）又は卵巣がん細胞株（ＳＫＯＶ３及びＯＶＣＡＲ３）が、ｍｅｍＡｂの、ＨＥＲ２又はＥＧＦＲへの結合を示した図である。ｍｅｍＡｂ結合を伴う、又はこれを伴わない細胞の中央値蛍光強度（ＭＦＩ）を、それぞれのグラフの下に示す。Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ及びＣＤ２０の抗原密度を、Ｆａｂｒａｃｋが、抗原特異性を切り替える能力及び効能について調べるのに、その後、広範にわたり使用する、解析用サイトメトリーを使用して、一連の細胞株にわたり、独立に定量した。

【図35】乳がん細胞又は卵巣がん細胞（２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種したことを示す図である。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、多様な用量のｍｅｍＡｂ（抗ＨＥＲ２又は抗ＥＧＦＲ）を伴う、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ Ｆａｂｒａｃｋ細胞（ＣＤ２８形、１×１０^５個）を、各ウェルに添加した。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、ルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して、速やかに測定した。「ＥＣ５０」は、全ての細胞について１ｎＭ未満であるが、プラトーは、大きく異なる。増大は、ＢＴ４７４細胞の場合を除き、抗原発現と相関する。この例外は、さらなる研究（Ｈｅｒ３又は他の分子による干渉か）を要求する。右パネルにおいて、ＥＧＦＲについても、同様の傾向が観察される。セツキシマブを使用すると、ＭＦＩは、ＢＴ４７４について、６５１；ＭＣＦ７について、４８０；ＯＶＣＡＲ３について、４８１９；ＳＫＢＲ３について、２８６５であり、ＳＫＯＶ３について、４４７９である。ＢＴ４７４は、ＭＣＦ７より、わずかに多くのＥＧＦＲを発現させるが、プラトー内の傾向は、抗原密度に従う傾向がある。ＢＴ４７４細胞株の特性の一部は、ウェブサイト：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ３２３６３２９／において見出すことができる。

【図36】ＣＤ１９を発現させるがん細胞（５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種し、多様な用量のＣＤ１９ ｍｅｍＡｂを伴う、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ Ｆａｂｒａｃｋ細胞（４１ＢＢ形又はＣＤ２８形、１×１０^５個）と共培養したことを示す図である。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、ルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して、速やかに測定した。左パネルは、異なるＣＤ１９発現細胞をターゲティングしうることを示す。プラトーは、抗原密度と共に変動する。ＲａｊｉについてのＭＦＩは、２１５６６であり；ＤａｕｄｉについてのＭＦＩは、１２２６３であり；Ｓｕｐ－Ｂ１５についてのＭＦＩは、１２６１７である。右パネルは、ＣＤ２８活性化シグナルが、４１ＢＢより強いことを指し示す。

【図37】ｍｅｍＡｂ及び標的細胞の存在下における、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を示す図である。異なる用量のｍｅｍＡｂトラスツズマブのＩｇＧ又はＦａｂを、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞及び標的細胞を含有するウェル内に、６時間にわたり存在させる。インキュベーションの終了時に、ルシフェラーゼ基質を、各ウェルに添加し、発光は、プレートリーダーにより、速やかに読み取った。乳がん細胞又は卵巣がん細胞（２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種した。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、多様な用量のｍｅｍＡｂトラスツズマブ又は非ｍｅｍＡｂペルツズマブを伴う、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ Ｆａｂｒａｃｋ細胞（ＣＤ２８形、１×１０^５個）を、各ウェルに添加した。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、ルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して、速やかに測定した。本発明者らのＦＡＣＳデータに基づき、ＭＣＦ７は、最低量のＨｅｒ２を発現させる（ＭＦＩ＝９８５）。ＯｖＣＡＲ３は、わずかに高量（ＭＦＩ＝１４３５）を発現させる。ＳＫＢＲ３（ＭＦＩ＝３４４０５）及びＳＫＯＶ３（ＭＦＩ＝４３１９１）は、ＭＣＦ７及びＯｖＣＡＲ３より、はるかに高量を発現させる。これもまたＨｅｒ２に結合するペルツズマブは、メディトープに対応せず、Ｆｃを含有する。ペルツズマブが結合しないという事実は、メディトープ対応Ｆａｂ／Ｍａｂが要求されること（予測された通り）を指し示す。フック効果は、ＩｇＧフォーマットを使用する、全ての細胞株において活性である。この効果は、抗原密度が「低度」である細胞について、早期に始まる（「当てはめ」のピークは、ＭＣＦ７及びＯｖＣＡＲ３について、１０ｎＭ未満であり、ＳＫＢＲ３及びＳＫＯＶ３について、１０ｎＭを超える）。この知見は、細胞由来の抗原が、低濃度において飽和されることと符合する。価数は、大きな影響を及ぼす（例えば、フック効果は、ＩｇＧ｛二価｝を使用すると、Ｆａｂ｛一価｝を使用する場合と比較して、低濃度において始まる）。興味深いことに、「プラトー」は、Ｆａｂを使用する場合に、はるかに高値となる。差違が見られるという事実は、効果を最適化するように、ｍｅｍＡｂの特性を微調整しうることを指し示す。この事実はまた、フック効果を、安全性機構として使用しうることも示唆する。注：図８及び図９において、フック効果は、明白ではなかった。これは、部分的に、これらの研究において使用された、低濃度範囲に起因する（抗体濃度は、１０ｎＭに達したに過ぎないが、本明細書において、１ｕＭに達している）。「フック効果」についての情報は、ウェブサイト：ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｈｏｏｋ＿ｅｆｆｅｃｔにおいて見出すことができる。

【図38】ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、標的細胞にあらかじめ結合させた、又はｍｅｍＡｂトラスツズマブを、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞にあらかじめ結合させた、４ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブの存在下において、がん細胞と共培養した、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を示す図である。がん細胞又はＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞を、１００ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブとあらかじめ結合させた後に洗い流した。４ｎＭのハーセプチン処置を伴う、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化レベルは、処置なしと同様である。方法：がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種した。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃメディトープ－ＣＡＲ細胞（６０ｕｌ当たり１×１０^５個）を、各ウェルに添加した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、持続的に存在させる、又はＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞又はがん細胞にあらかじめ結合させ、洗浄する。グラフ内のバーは、左から右に、持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）、ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄したＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ細胞、ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄したがん細胞、持続的に存在させたハーセプチン（４ｎＭ）及び処置なしを表す。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、５０ｕｌのルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して、速やかに測定した。全ての場合に、４ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブの、「メディトープＣＡＲ」であるＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃと混合した腫瘍細胞への添加は、最大のシグナルをもたらした。他の２つの試料を、プレインキュベートし、洗浄し、次いで、第３の構成要素に添加した。１つの場合に、ｍｅｍＡＢトラスツズマブを、腫瘍細胞に添加し、洗浄し、次いで、「メディトープＣＡＲ」であるＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃに曝露した。他の場合に、ｍｅｍＡＢトラスツズマブを、「メディトープＣＡＲ」であるＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃに添加し、洗浄し、次いで、腫瘍細胞に添加した。抗原発現が高度である細胞について、腫瘍細胞の前処置は、高度の活性化をもたらした。抗原発現が低度である細胞（ＭＣＦ７及びＯＶＣＡＲ３）について、「メディトープＣＡＲ」細胞であるＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ細胞のプレインキュベーションは、高レベルの活性化をもたらした。細胞「を洗浄した」後におけるｍｅｍＡｂの濃度は、わからないが、確実に、４ｎＭ未満であることに注意することが重要である。この異なる処理は、４ｎＭの処置における高シグナルを説明する可能性が高い。

【図39】ハーセプチンが、がん細胞及び４ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に、共インキュベートされた、ＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を遮断したことを示す図である。処置の全持続時間において、ハーセプチン及びｍｅｍＡｂトラスツズマブを持続的に存在させた。方法：がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種した。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅ－ＣＡＲ細胞（６０ｕｌ当たり１×１０^５個）を、各ウェルに添加した。グラフ内のバーは、左から右に、持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）、ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）及び持続的に存在させたハーセプチン（４０ｎＭ）並びにｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）及び持続的に存在させたハーセプチン（４００ｎＭ）を表す。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、５０ｕｌのルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーにより、速やかに読み取った。結果：４ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブの持続的存在下において、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅｄｉ－ＣＡＲ細胞は、ｍｅｍＡｂトラスツズマブによる、がん細胞への結合に起因して活性化された。ハーセプチンは、本発明者らのｍｅｍＡｂトラスツズマブと同じエピトープを有し、ＨＥＲ２上の同じ結合性部位について競合しうるため、インキュベーション時における、ハーセプチンの持続的存在は、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を遮断しうる。ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）の１００倍濃度のハーセプチン（４００ｎＭ）が、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を、ほぼ完全に遮断することから、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化が、ハーセプチンにより認識される、同じＨＥＲ２エピトープに結合する、ｍｅｍＡｂトラスツズマブにより引き起こされることが裏付けられた。ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞の活性化は、メディトープの相互作用を要求することから、提起された作用機構についてのさらなる証拠がもたらされる。

【図40】がん細胞にあらかじめ結合させたハーセプチンが、がん細胞及び４ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブと共インキュベートされたＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を遮断したことを示す図である。がん細胞を、４０ｎＭ又は４００ｎＭのハーセプチンとあらかじめ結合させた後に洗い流した。ハーセプチンと、ｍｅｍＡｂトラスツズマブとの唯一の差違は、後者が、メディトープに対応していることである。細胞を、ハーセプチンにより前処置することにより、抗原へのアクセスが遮断される。ハーセプチンにより処置された細胞を、ｍｅｍＡｂトラスツズマブ／Ｆａｂｒａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ処置の前に洗浄することは、結合しなかったハーセプチンを除去する。しかし、結合したハーセプチンは、時間経過にわたり、細胞から解離する。したがって、活性化の低減は、この実験におけるほど劇的ではない（図４１と比較して）。

【図41】ハーセプチンが、ｍｅｍＡｂとあらかじめ結合させたがん細胞と共培養したＦａｂＲａｃｋ Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を、ほとんど遮断しないことを示す図である。がん細胞を、１００ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブとあらかじめ結合させた後に洗い流した。がん細胞を、ｍｅｍＡｂトラスツズマブとあらかじめ結合させ、洗浄することは、発光活性を、劇的に減殺しなかった。インキュベーション時における、ハーセプチンの持続的存在は、Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化に対して、小さな遮断効果を及ぼした。このデータは、ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、がん細胞上のＨＥＲ２に結合させたところ、結合が、臨床トラスツズマブにより、ほとんど遮断されないことを裏付けた。方法：がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種した。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ ｍｅ－ＣＡＲ細胞（１×１０^５）を、各ウェルに添加した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、持続的に存在させた、又はがん細胞にあらかじめ結合させ、洗浄した（グラフ内のバーは、左から右に、持続的に存在させたｍｅｍＡｂトラスツズマブ（４ｎＭ）；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、がん細胞；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、がん細胞＋持続的に存在させたハーセプチン（４０ｎＭ）；ｍｅｍＡｂトラスツズマブ（１００ｎＭ）とあらかじめ結合させた後に洗浄した、がん細胞＋持続的に存在させたハーセプチン（４００ｎＭ）を表す）。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、５０ｕｌのルシフェラーゼ基質（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ＃ｒｅｐ－ｑｌｃ２）を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して、速やかに測定した。ｍｅｍＡｂトラスツズマブを、細胞に結合させると、それは、ハーセプチンが、細胞由来の抗原に結合することを遮断する。

【図42】ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞の活性化マーカー及びサイトカインの発現を示す図である。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞を、卵巣がん細胞である、ＳＫＯＶ３及びＯＶＣＡＲ３又は乳がん細胞である、ＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４及びＭＣＦ７と共に、０．５ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブの存在下において、５時間にわたり共培養した。エフェクター細胞の、標的細胞に対する比は、１：１である。ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ及びＨＥＲ２ Ｆａｂ ＣＡＲを、陽性対照として使用した。５時間にわたるインキュベーションの後、活性化マーカーを、フローサイトメトリーにより解析した：多数の対照を、これらの実験において使用した。ここで使用されたｓｃＦｖ ＣＡＲ及びＦａｂ ＣＡＲのＣＤＲループは、Ｆａｂｒａｃｋのために使用されたｍｅｍＡｂと同じである。モックとは、非形質転換Ｔ細胞である。サイトメトリーを使用して、Ｔ細胞活性化についてのマーカーである、ＣＤ６９及びＣＤ２５のレベルを測定した。腫瘍細胞の非存在下において、変異体の活性化は、観察されなかった。抗原保有腫瘍細胞の存在下においてもまた、Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞（ｍｅｍＡｂを伴わない）、モック又はモック及びＩ８３ＥｍｅｍＡｂトラスツズマブについて、活性化は、ほとんど～全く観察されなかった。最後に、ＦａｂｒａｃｋＴ細胞＋Ｉ８３Ｅ ｍｅｍＡｂトラスツズマブ及びｓｃＦＶＣＡＲ Ｔ細胞について、Ｔ細胞活性化の著明な増大が観察された。Ｆａｂ－ＣＡＲ Ｔ細胞もまた、活性化されたが、大きなばらつきを顕示した。

【図43】ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞を、卵巣がん細胞である、ＳＫＯＶ３及びＯＶＣＡＲ３又は乳がん細胞である、ＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４及びＭＣＦ７と共に、０．５ｎＭのｍｅｍＡｂトラスツズマブの存在下において、５時間にわたり共培養したことを示す図である。エフェクター細胞の、標的細胞に対する比は、１：１である。ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲを、陽性対照として使用した。５時間にわたるインキュベーションの後、脱顆粒マーカーである、ＣＤ１０７ａ及びＩＦＮγを、フローサイトメトリーにより解析した：Ｆａｂ Ｔ細胞は、従来のＣＡＲ Ｔ細胞と同様に挙動する。

【図44】がん細胞を、モックＴ細胞又はＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞と共に、多様な用量のｍｅｍＡｂトラスツズマブの存在下において、３日間にわたりインキュベートしたことを示す図である。エフェクター細胞の、標的細胞に対する比は、１：４である。インキュベーションの終了時に、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒキットの指示書に基づき、細胞生存率を測定した。結果：がん細胞を、モックＴ細胞又はＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞と共に、ｍｅｍＡｂトラスツズマブの存在下において、３日間にわたりインキュベートした。このデータは、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞が、ｍｅｍＡｂトラスツズマブを介して、がん細胞に結合するので、ＨＥＲ２陽性がん細胞を、効果的に死滅させたことを示す。ｍｅｍＡｂトラスツズマブ及びＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞と共に、共インキュベートされたがん細胞のＩＣ５０は、０．３３ｎＭ（ＢＴ４７４）、０．１１ｎＭ（ＳＫＢＲ３）、０．０６９ｎＭ（ＭＣＦ７）、０．０４６ｎＭ（ＳＫＯＶ３）及び０．０２７ｎＭ（ＯＶＣＡＲ３）である。殺滅効果は、がん細胞上のＨＥＲ２発現レベルと関連しなかった。方法：腫瘍殺滅アッセイのために、がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）及びヒトＴ細胞（１００ｕｌ当たり６，２５０個）を、抗体の存在下又は非存在下において、９６ウェル丸底プレート内に播種した。７２時間にわたるインキュベーションの後、細胞を、２５０×ｇにおいて、５分間にわたり遠心分離し、各ウェル内、１００ｕｌずつの培地を除去した。細胞生存率について調べるために、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒキットからの試薬１００ｕｌを、各ウェル内に添加した。２分間にわたるインキュベーションの後、１００ｕｌの混合物を、白色壁面の９６ウェルプレートに移し、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して測定した。

【図45】ｍｅｍＡｂトラスツズマブ及びＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞と共に、共インキュベートされたがん細胞のＩＣ５０が、０．３３ｎＭ（ＢＴ４７４）、０．１１ｎＭ（ＳＫＢＲ３）、０．０６９ｎＭ（ＭＣＦ７）、０．０４６ｎＭ（ＳＫＯＶ３）及び０．０２７ｎＭ（ＯＶＣＡＲ３）であることを示す図である。

【図46】結果を示す図である：０．１ｎＭ又は０．５ｎＭのｍｅｍＡｂ抗体の持続的存在下において、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞との共インキュベーションを伴うがん細胞（中央バー）の生存率は、モックＴ細胞共インキュベーションとの共インキュベーションを伴うがん細胞（左バー）と比較して減少した。乳がん細胞において、０．１及び０．５ｎＭとしたときに、細胞生存率は、用量依存的に低下したが、卵巣がん細胞は、これらの２つの濃度においても、同様の生存率を示す。抗体とあらかじめ結合させ、洗い流したがん細胞（右バー）は、持続的な抗体処置を伴うがん細胞と比較して、５～１８％の、生存率の逆戻しにもかかわらず、ヒトＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞により、やはり死滅させることができる。方法：腫瘍殺滅アッセイのために、がん細胞（１００ｕｌ当たり２．５×１０^４個）及びヒトＴ細胞（１００ｕｌ当たり６，２５０個）を、ｍｅｍＡｂ抗体の存在下又は非存在下において、９６ウェル丸底プレート内に播種した。７２時間にわたるインキュベーションの後、細胞を、２５０×ｇにおいて、５分間にわたり遠心分離し、各ウェル内、１００ｕｌずつの培地を除去した。細胞生存率について調べるために、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒキットからの試薬１００ｕｌを、各ウェル内に添加した。２分間にわたるインキュベーションの後、１００ｕｌの混合物を、白色壁面の９６ウェルプレートに移し、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して測定した。

【図47】フローサイトメトリーを使用して、ＤＡＰＩ染色の後におけるがん細胞の生存について解析したことを示す図である。ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ及びＨＥＲ２ Ｆａｂ ＣＡＲを、陽性対照として使用した。結果：フローサイトメトリーを使用して、どれほど多くのがん細胞が、それらを、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に共インキュベートした後において、やはり生存しているのかについて、陽性対照としての、ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ又はＨＥＲ２Ｆａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と共にインキュベートされたがん細胞と比較して解析した。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に共インキュベートしたところ、３日間にわたるインキュベーションの後、生存がん細胞は、劇的に減少した。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞の殺滅効果は、ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ Ｔ細胞又はＨＥＲ２Ｆａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と同様であった、又はこれらよりなお良好であった。細胞生存率を読み取るための代替法を使用しても、同様の結果がもたらされる。

【図48】フローサイトメトリーを使用して、ＤＡＰＩ染色の後におけるがん細胞の生存について解析したことを示す図である。ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ及びＨＥＲ２ Ｆａｂ ＣＡＲを、陽性対照として使用した。結果：フローサイトメトリーを使用して、どれほど多くのがん細胞が、それらを、ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に共インキュベートした後において、やはり生存しているのかについて、陽性対照としての、ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ又はＨＥＲ２Ｆａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と共にインキュベートされたがん細胞と比較して解析した。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂトラスツズマブと共に共インキュベートしたところ、３日間にわたるインキュベーションの後、生存がん細胞は、劇的に減少した。ＦａｂＲａｃｋ Ｔ細胞の殺滅効果は、ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ Ｔ細胞又はＨＥＲ２Ｆａｂ ＣＡＲ Ｔ細胞と同様であった、又はこれらよりなお良好であった。

【図49】標的細胞及び異なる濃度のｍｅｍＡｂトラスツズマブを伴う共培養物中の、Ｔ細胞数の倍数変化を示す図である。エフェクター細胞の、標的細胞に対する比は、インキュベーション時において、１：４である。これらの実験は、ｍｅｍＡｂの存在に応じた細胞増殖をもたらす、Ｔ細胞の活性化を指し示す。

【図50】乳がん細胞（２．５×１０^４個）を、白色壁面の９６ウェルプレート内に播種したことを示す図である。一晩にわたる細胞接着の後、プレート内の培地を除去し、多様な用量の２Ｎ１ ｍｅｍＡｂを伴う、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ Ｆａｂｒａｃｋ細胞（４１ＢＢ形、１×１０^５個）を、各ウェルに添加した。細胞を、３７℃において、６時間にわたりインキュベートした後に、ルシフェラーゼ基質を、各ウェルに追加した。発光は、Ｂｉｏｔｅｋ’ｓ Ｓｙｎｅｒｇｙ ４ ｍｕｌｔｉ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎマイクロプレートリーダーにより、速やかに読み取った。

【発明を実施するための形態】

【0018】

定義
本明細書において、本発明の多様な実施形態及び態様を示し、これらについて記載してきたが、このような実施形態が、例だけを目的として提示されていることは、当業者に明らかである。今や、本発明から逸脱しない限りにおいて、当業者は、多数の変動、変化及び代用に想到する。本明細書において記載される、本発明の実施形態に対する、多様な代替物が、本発明の実施において利用されうることを理解されたい。

【0019】

本明細書において使用される節の見出しは、構成だけを目的とするものであり、記載される対象物を限定するものとは見なさないものとする。限定せずに述べると、特許、特許出願、論文、書籍、マニュアル及び論考を含む、本出願において引用された、全ての文献又は文献の部分は、任意の目的のために、参照によりそれらの全体において明示的に組み込まれる。

【0020】

本明細書において使用される略号は、化学技術分野及び生物技術分野内における、それらの従来の意味を有する。本明細書において明示された化学構造及び化学式は、化学技術分野において公知の化学価についての標準的な規則に従い構築される。

【0021】

置換基が、それらの従来の化学式により指定され、左から右に書かれる場合、それらは、構造を、右から左に書くことから生じる、化学的に同一な置換基を、等しく包含する、例えば、－ＣＨ_２Ｏ－は、－ＯＣＨ_２－と等価である。

【0022】

「アルキル」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、それ自体、又は別の置換基の部分として、完全飽和の場合もあり、一価不飽和の場合もあり、多価不飽和の場合もある、直鎖型（すなわち、非分枝型）若しくは分枝型の非環状炭素鎖（又は炭素）又はこれらの組合せを意味し、表記された炭素原子数（すなわち、Ｃ_１～Ｃ_１０とは、１～１０個の炭素を意味する）を有する、二価基及び多価基を含みうる。飽和炭化水素基の例は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、（シクロヘキシル）メチルなどの基、例えば、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチルの相同体及び異性体などを含むがこれらに限定されない。不飽和アルキル基とは、１つ以上の二重結合又は三重結合を有するアルキル基である。不飽和アルキル基の例は、ビニル、２－プロペニル、クロチル、２－イソペンテニル、２－（ブタジエニル）、２，４－ペンタジエニル、３－（１，４－ペンタジエニル）、エチニル、１－プロピニル及び３－プロピニル、３－ブチニル並びに上級の相同体及び異性体を含むがこれらに限定されない。アルコキシとは、酸素リンカー（－Ｏ－）を介して、分子の残余部分に接合しているアルキルである。アルキル部分は、アルケニル部分でありうる。アルキル部分は、アルキニル部分でありうる。アルキル部分は、完全飽和アルキル部分でありうる。

【0023】

「アルキレン」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、それ自体、又は別の置換基の部分として、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－により例示されるがこれらに限定されないアルキルに由来する二価基を意味する。典型的に、アルキル（又はアルキレン）基は、１～２４個の炭素原子を有するが、本発明において、１０個以下の炭素原子を有する基が好ましい。「低級アルキル」又は「低級アルキレン」とは、一般に、８個以下の炭素原子を有する、短鎖アルキル基又は短鎖アルキレン基である。「アルケニレン」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、それ自体、又は別の置換基の部分として、アルケンに由来する二価基を意味する。

【0024】

「ヘテロアルキル」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、それ自体、又は別の用語と組み合わせて、少なくとも１個の炭素原子及び少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ又はＳ）を含み、窒素原子及び硫黄原子が、任意選択的に、酸化される場合があり、窒素によるヘテロ原子が、任意選択的に、四級化されうる、安定的な非環状の直鎖型鎖若しくは分枝型鎖又はこれらの組合せを意味する。ヘテロ原子（複数可）であるＯ、Ｎ、Ｐ、Ｓ及びＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置又はアルキル基が分子の残余部分に接合している位置に配置されうる。例は、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＮＨ－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－Ｓ－ＣＨ_２－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＣＨ_２、－Ｓ（Ｏ）－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ（Ｏ）_２－ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｏ－ＣＨ_３、－Ｓｉ（ＣＨ_３）_３、－ＣＨ_２－ＣＨ＝Ｎ－ＯＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_３、－Ｏ－ＣＨ_３、－Ｏ－ＣＨ－_２－ＣＨ_３及び－ＣＮを含むがこれらに限定されない。例えば、－ＣＨ_２－ＮＨ－ＯＣＨ_３及び－ＣＨ_２－Ｏ－Ｓｉ（ＣＨ_３）_３など、最大で、２又は３個のヘテロ原子が連続しうる。ヘテロアルキル部分は、１個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロアルキル部分は、２個の、任意選択的に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロアルキル部分は、３個の、任意選択的に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロアルキル部分は、４個の、任意選択的に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロアルキル部分は、５個の、任意選択的に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロアルキル部分は、最大で８個の、任意選択的に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。

【0025】

同様に、「ヘテロアルキレン」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、それ自体、又は別の置換基の部分として、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｓ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－及び－ＣＨ_２－Ｓ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＮＨ－ＣＨ_２－により例示されるがこれらに限定されない、ヘテロアルキルに由来する二価基を意味する。ヘテロアルキレン基について、ヘテロ原子はまた、鎖末端の一方又は両方も占有しうる（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。なおさらに、アルキレン連結基及びヘテロアルキレン連結基について、連結基の配向性は、連結基の式が書かれた方向により含意されない。例えば、式－Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’－は、－Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’－及び－Ｒ’Ｃ（Ｏ）_２－の両方を表す。上記において記載した通り、本明細書において使用されるヘテロアルキル基は、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＯＲ’、－ＳＲ’及び／又は－ＳＯ_２Ｒ’など、ヘテロ原子を介して分子の残余部分に接合している基を含む。「ヘテロアルキル」が列挙されるのに続き、－ＮＲ’Ｒ’’など、具体的なヘテロアルキル基の列挙がなされる場合、ヘテロアルキル及び－ＮＲ’Ｒ’’という用語は、冗長でも、互いに排他的でもないことが理解される。そうではなくて、具体的なヘテロアルキル基は、明確さを付け加えるために列挙される。したがって、本明細書において、「ヘテロアルキル」という用語は、－ＮＲ’Ｒ’’など、具体的なヘテロアルキル基を除外するものとして解釈されるべきではない。

【0026】

「シクロアルキル」及び「ヘテロシクロアルキル」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、それら自体、又は他の用語と組み合わせて、それぞれ、「アルキル」及び「ヘテロアルキル」の、非芳香族環状形を意味するが、この場合、１つ以上の環を構成する炭素は、水素以外の原子との結合に参与する、全ての炭素結合価に起因して、必ずしも、水素に結合させる必要がない。加えて、ヘテロシクロアルキルについて、ヘテロ原子は、複素環が分子の残余部分に接合している位置を占有しうる。シクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、１－シクロヘキセニル、３－シクロヘキセニル、シクロヘプチル、３－ヒドロキシ－シクロブタ－３－エニル－１，２－ジオン、１Ｈ－１，２，４－トリアゾイル－５（４Ｈ）－オン、４Ｈ－１，２，４－トリアゾイルなどを含むがこれらに限定されない。ヘテロシクロアルキルの例は、１－（１，２，５，６－テトラヒドロピリジル）、１－ピペリジニル、２－ピペリジニル、３－ピペリジニル、４－モルホリニル、３－モルホリニル、テトラヒドロフラン－２－イル、テトラヒドロフラン－３－イル、テトラヒドロチエン－２－イル、テトラヒドロチエン－３－イル、１－ピペラジニル、２－ピペラジニルなどを含むがこれらに限定されない。「シクロアルキレン」及び「ヘテロシクロアルキレン」は、単独において、又は別の置換基の部分として、それぞれ、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキルに由来する二価基を意味する。ヘテロシクロアルキル部分は、１個の環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロシクロアルキル部分は、２個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロシクロアルキル部分は、３個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロシクロアルキル部分は、４個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロシクロアルキル部分は、５個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。ヘテロシクロアルキル部分は、最大で８個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ又はＰ）を含みうる。

【0027】

「ハロ」又は「ハロゲン」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、それら自体、又は別の置換基の部分として、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。加えて、「ハロアルキル」などの用語は、一価ハロアルキル及び多価ハロアルキルを含むことが意図される。例えば、「ハロ（Ｃ_１～Ｃ_４）アルキル」という用語は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、４－クロロブチル、３－ブロモプロピルなどを含むがこれらに限定されない。

【0028】

「アシル」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、－Ｃ（Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のシクロアルキル、置換若しくは非置換のヘテロアルキル、置換若しくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換のアリール又は置換若しくは非置換のヘテロアリールである］を意味する。

【0029】

「アリール」という用語は、そうでないことが言明されない限りにおいて、単一の環の場合もあり、互いに縮合した（すなわち、縮合環アリール）、又は共有結合によって連結された複数の環（好ましくは、１～３つの環）の場合もある、多価不飽和芳香族の炭化水素置換基を意味する。縮合環アリールとは、互いに縮合した複数の環を指し、この場合、縮合環のうちの少なくとも１つはアリール環である。「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、Ｏ又はＳなど、少なくとも１個のヘテロ原子を含有するアリール基（又は環）を指し、この場合、窒素原子及び硫黄原子が任意選択的に酸化され、窒素原子（複数可）が任意選択的に四級化されている。したがって、「ヘテロアリール」という用語は、縮合環ヘテロアリール基（すなわち、縮合環のうちの少なくとも１つが、ヘテロ芳香族環である、互いに縮合した複数の環）を含む。５，６－縮合環ヘテロアリーレンとは、一方の環が５員を有し、他方の環が６員を有する、互いに縮合した２つの環を指し、この場合、少なくとも１つの環は、ヘテロアリール環である。同様に、６，６－縮合環ヘテロアリーレンとは、一方の環が６員を有し、他方の環が６員を有する、互いに縮合した２つの環を指し、この場合、少なくとも１つの環は、ヘテロアリール環である。さらに、６，５－縮合環ヘテロアリーレンとは、一方の環が６員を有し、他方の環が５員を有する、互いに縮合した２つの環を指し、この場合、少なくとも１つの環は、ヘテロアリール環である。ヘテロアリール基は、炭素原子又はヘテロ原子を介して、分子の残余部分に接合していてもよい。アリール基及びヘテロアリール基の非限定例は、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、４－ビフェニル、１－ピロリル、２－ピロリル、３－ピロリル、３－ピラゾイル、２－イミダゾイル、４－イミダゾイル、ピラジニル、２－オキサゾリル、４－オキサゾリル、２－フェニル－４－オキサゾリル、５－オキサゾリル、３－イソキサゾリル、４－イソキサゾリル、５－イソキサゾリル、２－チアゾリル、４－チアゾリル、５－チアゾリル、２－フリル、３－フリル、２－チエニル、３－チエニル、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、２－ピリミジル、４－ピリミジル、５－ベンゾチアゾリル、プリニル、２－ベンズイミダゾイル、５－インドリル、１－イソキノリル、５－イソキノリル、２－キノキサリニル、５－キノキサリニル、３－キノリル及び６－キノリルを含む。上記において言及されたアリール環系及びヘテロアリール環系の各々の置換基は、下記される、許容可能な置換基の群から選択される。「アリーレン」及び「ヘテロアリーレン」とは、単独において、又は別の置換基の部分として、それぞれ、アリール及びヘテロアリールに由来する二価ラジカルを意味する。アリール基及びヘテロアリール基の非限定例は、ピリジニル、ピリミジニル、チオフェニル、チエニル、フラニル、インドリル、ベンゾキサジアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキサニル、チアナフタニル、ピロロピリジニル、インダゾリル、キノリニル、キノキサリニル、ピリドピラジニル、キナゾリノニル、ベンゾイソキサゾリル、イミダゾピリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチオフェニル、フェニル、ナフチル、ビフェニル、ピロリル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピラジニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、フリルチエニル、ピリジル、ピリミジル、ベンゾチアゾリル、プリニル、ベンズイミダゾイル、イソキノリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピロリル、ジアゾリル、トリアゾイル、テトラゾリル、ベンゾチアジアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾロピリミジニル、ピロロピリミジニル、ベンゾトリアゾイル、ベンゾキサゾリル又はキノリルを含む。上記の例は、置換ヘテロアリールの場合もあり、非置換ヘテロアリールの場合もあり、上記の各ヘテロアリールの例の二価基は、ヘテロアリーレンの非限定例である。ヘテロアリール部分は、１個の環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ又はＳ）を含みうる。ヘテロアリール部分は、２個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ又はＳ）を含みうる。ヘテロアリール部分は、３個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ又はＳ）を含みうる。ヘテロアリール部分は、４個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ又はＳ）を含みうる。ヘテロアリール部分は、５個の、任意選択的に異なる環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ又はＳ）を含みうる。アリール部分は、単一の環を有しうる。アリール部分は、２つの、任意選択的に異なる環を有しうる。アリール部分は、３つの、任意選択的に異なる環を有しうる。アリール部分は、４つの、任意選択的に異なる環を有しうる。ヘテロアリール部分は、１つの環を有しうる。ヘテロアリール部分は、２つの、任意選択的に異なる環を有しうる。ヘテロアリール部分は、３つの、任意選択的に異なる環を有しうる。ヘテロアリール部分は、４つの、任意選択的に異なる環を有しうる。ヘテロアリール部分は、５つの、任意選択的に異なる環を有しうる。

【0030】

縮合環である、ヘテロシクロアルキル－アリールは、ヘテロシクロアルキルと縮合したアリールである。縮合環である、ヘテロシクロアルキル－ヘテロアリールは、ヘテロシクロアルキルと縮合したヘテロアリールである。縮合環である、ヘテロシクロアルキル－シクロアルキルは、シクロアルキルと縮合したヘテロシクロアルキルである。縮合環である、ヘテロシクロアルキル－ヘテロシクロアルキルは、別のヘテロシクロアルキルと縮合したヘテロシクロアルキルである。縮合環である、ヘテロシクロアルキル－アリール、縮合環である、ヘテロシクロアルキル－ヘテロアリール、縮合環である、ヘテロシクロアルキル－シクロアルキル又は縮合環である、ヘテロシクロアルキル－ヘテロシクロアルキルは、各々、独立に、非置換の場合もあり、本明細書において記載される置換基のうちの１つ以上により置換される場合もある。

【0031】

本明細書において使用される、「オキソ」という用語は、炭素原子に二重結合している酸素を意味する。

【0032】

本明細書において使用される、「アルキルスルホニル」という用語は、式－Ｓ（Ｏ_２）－Ｒ’［式中、Ｒ’は、上記において規定された置換又は非置換のアルキル基である］を有する部分を意味する。Ｒ’は、指定された数の炭素（例えば、「Ｃ_１～Ｃ_４アルキルスルホニル」）を有しうる。

【0033】

上記の用語（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」及び「ヘテロアリール」）の各々は、表示の基の置換形態及び非置換形態の両方を含む。各種の基に好ましい置換基は、下記に提示される。

【0034】

アルキル基及びヘテロアルキル基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル及びヘテロシクロアルケニルと称されることが多い基を含む）の置換基は、ゼロ～（２ｍ’＋１）［式中、ｍ’は、このような基内の炭素原子の総数である］の範囲の数の、－ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ－ＯＲ’、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＳＲ’、－ハロゲン、－ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＣＯ_２Ｒ’、－ＣＯＮＲ’Ｒ’’、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＮＲ’－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ）（’Ｒ’’－ＮＲＳＯ_２Ｒ’）、－ＣＮ及び－ＮＯ_２から選択されるがこれらに限定されない、様々な基のうちの１つ以上でありうる。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、各々、好ましくは、独立に、水素、置換若しくは非置換のヘテロアルキル、置換若しくは非置換のシクロアルキル、置換若しくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換のアリール（例えば、１つ～３つのハロゲンによるアリール置換）、置換若しくは非置換のアルキル、アルコキシ基若しくはチオアルコキシ基又はアリールアルキル基を指す。本発明の化合物が、例えば、１つを超えるＲ基を含む場合、Ｒ基の各々は、各Ｒ’基、Ｒ’’基、Ｒ’’’基及びＲ’’’’基のうちの１つを超える基が存在する場合に、これらの基が選択されるのと同様に、独立に選択される。Ｒ’及びＲ’’が、同じ窒素原子に接合している場合、それらは、４員環、５員環、６員環又は７員環を形成するように、窒素原子と組み合わせられうる。例えば、－ＮＲ’Ｒ’’は、１－ピロリジニル及び４－モルホリニルを含むがこれらに限定されない。置換基についての上記の議論から、当業者は、「アルキル」という用語が、ハロアルキル（例えば、－ＣＦ_３及び－ＣＨ_２ＣＦ_３）及びアシル（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３、－Ｃ（Ｏ）ＣＦ_３、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＯＣＨ_３など）など、水素基以外の基に結合している炭素原子を含む基を含むことが意図されることを理解する。

【0035】

アルキル基について記載される置換基と同様に、アリール基及びヘテロアリール基の置換基は、多様であり、ゼロ～芳香族環系上の開放結合価の総数の範囲の数の、例えば、－ＯＲ’、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＳＲ’、－ハロゲン、－ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＣＯ_２Ｒ’、－ＣＯＮＲ’Ｒ’’、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＮＲ’－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、ＮＲＣ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ’）（Ｒ’’、－ＮＲＳＯ_２Ｒ’）、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｒ’、－Ｎ_３、－ＣＨ（Ｐｈ）_２、フルオロ（Ｃ_１～Ｃ_４）アルコキシ及びフルオロ（Ｃ_１～Ｃ_４）アルキルから選択され；Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、好ましくは、独立に、水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール及び置換又は非置換のヘテロアリールから選択される。本発明の化合物が、例えば、１つを超えるＲ基を含む場合、Ｒ基の各々は、各Ｒ’基、Ｒ’’基、Ｒ’’’基及びＲ’’’’基のうちの１つを超える基が存在する場合に、これらの基が選択されるのと同様に、独立に選択される。

【0036】

部分が、Ｒ置換基により置換されている場合、基は、「Ｒ置換された」と称されうる。部分が、Ｒ置換されている場合、部分は、少なくとも１つのＲ置換基により置換されており、各Ｒ置換基は、任意選択的に、異なる。例えば、本明細書における部分が、Ｒ^１Ａによる置換又は非置換のアルキルである場合、複数のＲ^１Ａ置換基は、アルキル部分に接合している場合があり、この場合、各Ｒ^１Ａ置換基は、任意選択的に、異なる。Ｒ置換部分が、複数のＲ置換基により置換されている場合、本明細書において、Ｒ置換基の各々は、Ｒ’、Ｒ’’など、プライム記号（’）を使用して差別化されうる。例えば、部分が、Ｒ^３Ａによる置換又は非置換のアルキルであり、部分が、複数のＲ^３Ａ置換基により置換されている場合、複数のＲ^３Ａ置換基は、Ｒ^３Ａ’、Ｒ^３Ａ’’、Ｒ^３Ａ’’’などとして差別化されうる。一部の実施形態において、複数のＲ置換基は、３つのＲ置換基である。一部の実施形態において、複数のＲ置換基は、２つのＲ置換基である。

【0037】

アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基を形成するように、２つ以上の置換基が、任意選択的に接続されうる。このような、いわゆる環形成置換基は、必ずしもではないが、典型的に、環状塩基構造に接合されていることが見出される。一実施形態において、環形成置換基は、塩基構造の隣接する員に接合している。例えば、環状塩基構造の隣接する員に接合している２つの環形成置換基は、縮合環構造を創出する。別の実施形態において、環形成置換基は、塩基構造の単一の員に接合している。例えば、環状塩基構造の単一の員に接合している２つの環形成置換基は、スピロ環構造を創出する。さらに別の実施形態において、環形成置換基は、塩基構造の隣接しない員に接合している。

【0038】

アリール環又はヘテロアリール環の、隣接する原子上の置換基のうちの２つは、任意選択的に、式－Ｔ－Ｃ（Ｏ）－（ＣＲＲ’）_ｑ－Ｕ－［式中、Ｔ及びＵは、独立に－ＮＲ－、－Ｏ－、－ＣＲＲ’－又は単結合であり、ｑは、０～３の整数である］の環を形成しうる。代替的に、アリール環又はヘテロアリール環の、隣接する原子上の置換基のうちの２つは、任意選択的に、式－Ａ－（ＣＨ_２）_ｒ－Ｂ－［式中、Ａ及びＢは、独立に、－ＣＲＲ’－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’－又は単結合であり、ｒは、１～４の整数である］の置換基により置きかえられうる。このように形成された、新たな環の単結合のうちの１つは、任意選択的に、二重結合により置きかえられうる。代替的に、アリール環又はヘテロアリール環の、隣接する原子上の置換基のうちの２つは、任意選択的に、式－（ＣＲＲ’）_ｓ－Ｘ’－（Ｃ’’Ｒ’’Ｒ’’’）_ｄ－［式中、変数であるｓ及びｄは、独立に、０～３の整数であり、Ｘ’は、－Ｏ－、－ＮＲ’－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－又は－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’－である］の置換基により置きかえられうる。置換基である、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’及びＲ’’’は、好ましくは、独立に、水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール及び置換又は非置換のヘテロアリールから選択される。

【0039】

本明細書において使用される、「ヘテロ原子」又は「環のヘテロ原子」という用語は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）及びケイ素（Ｓｉ）を含むことが意図される。

【0040】

本明細書において使用される、「置換基」とは、以下の部分：
（Ａ）オキソ、ハロゲン、－ＣＦ_３、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_２Ｃｌ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）－ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＨＦ_２、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール並びに
（Ｂ）アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールであって、
（ｉ）オキソ、ハロゲン、－ＣＦ_３、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_２Ｃｌ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）－ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＨＦ_２、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール並びに
（ｉｉ）アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールであって、
（ａ）オキソ、ハロゲン、－ＣＦ_３、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_２Ｃｌ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）－ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＨＦ_２、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール及び
（ｂ）アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールであって、オキソ、ハロゲン、－ＣＦ_３、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_２Ｃｌ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）－ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＨＦ_２、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリールから選択された、少なくとも１つの置換基により置換された、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール
から選択された、少なくとも１つの置換基により置換された、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール
から選択された、少なくとも１つの置換基により置換された、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール
から選択された基を意味する。

【0041】

本明細書において使用される、「サイズ限定置換基」又は「サイズ限定置換基」とは、「置換基」について、上記された置換基の全てから選択された基を意味し、この場合、各置換又は非置換のアルキルは、置換又は非置換のＣ_１～Ｃ_２０アルキルであり、各置換又は非置換のヘテロアルキルは、置換又は非置換の２～２０員ヘテロアルキルであり、各置換又は非置換のシクロアルキルは、置換又は非置換のＣ_３～Ｃ_８シクロアルキルであり、各置換又は非置換のヘテロシクロアルキルは、置換又は非置換の３～８員ヘテロシクロアルキルであり、各置換又は非置換のアリールは、置換又は非置換のＣ_６～Ｃ_１０アリールであり、各置換又は非置換のヘテロアリールは、置換又は非置換の５～１０員ヘテロアリールである。

【0042】

本明細書において使用される、「低級置換基」又は「低級置換基」とは、「置換基」について、上記された置換基の全てから選択された基を意味し、この場合、各置換又は非置換のアルキルは、置換又は非置換のＣ_１～Ｃ_８アルキルであり、各置換又は非置換のヘテロアルキルは、置換又は非置換の２～８員ヘテロアルキルであり、各置換又は非置換のシクロアルキルは、置換又は非置換のＣ_３～Ｃ_７シクロアルキルであり、各置換又は非置換のヘテロシクロアルキルは、置換又は非置換の３～７員ヘテロシクロアルキルであり、各置換又は非置換のアリールは、置換又は非置換のＣ_６～Ｃ_１０アリールであり、各置換又は非置換のヘテロアリールは、置換又は非置換の５～９員ヘテロアリールである。

【0043】

一部の実施形態において、本明細書の化合物内に記載される各置換基は、少なくとも１つの置換基により置換されている。より具体的に、一部の実施形態において、本明細書の化合物内に記載される、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン及び／又は置換ヘテロアリーレンの各々は、少なくとも１つの置換基により置換されている。他の実施形態において、これらの基のうちの、少なくとも１つ又は全ては、少なくとも１つのサイズ限定置換基により置換されている。他の実施形態において、これらの基のうちの、少なくとも１つ又は全ては、少なくとも１つの低級置換基により置換されている。

【0044】

本明細書の化合物についての、他の実施形態において、各置換又は非置換のアルキルは、置換又は非置換のＣ_１～Ｃ_２０アルキルであることが可能であり、各置換若しくは非置換のヘテロアルキルは、置換若しくは非置換の２～２０員ヘテロアルキルであり、各置換若しくは非置換のシクロアルキルは、置換若しくは非置換のＣ_３～Ｃ_８シクロアルキルであり、各置換若しくは非置換のヘテロシクロアルキルは、置換若しくは非置換の３～８員ヘテロシクロアルキルであり、各置換若しくは非置換のアリールは、置換若しくは非置換のＣ_６～Ｃ_１０アリールであり、かつ／又は各置換若しくは非置換のヘテロアリールは、置換若しくは非置換の５～１０員ヘテロアリールである。本明細書の化合物についての、一部の実施形態において、各置換若しくは非置換のアルキレンは、置換若しくは非置換のＣ_１～Ｃ_２０アルキレンであり、各置換若しくは非置換のヘテロアルキレンは、置換若しくは非置換の２～２０員ヘテロアルキレンであり、各置換若しくは非置換のシクロアルキレンは、置換若しくは非置換のＣ_３～Ｃ_８シクロアルキレンであり、各置換若しくは非置換のヘテロシクロアルキレンは、置換若しくは非置換の３～８員ヘテロシクロアルキレンであり、各置換若しくは非置換のアリーレンは、置換若しくは非置換のＣ_６～Ｃ_１０アリーレンであり、かつ／又は各置換若しくは非置換のヘテロアリーレンは、置換若しくは非置換の５～１０員ヘテロアリーレンである。

【0045】

一部の実施形態において、各置換若しくは非置換のアルキルは、置換若しくは非置換のＣ_１～Ｃ_８アルキルであり、各置換若しくは非置換のヘテロアルキルは、置換若しくは非置換の２～８員ヘテロアルキルであり、各置換若しくは非置換のシクロアルキルは、置換若しくは非置換のＣ_３～Ｃ_７シクロアルキルであり、各置換若しくは非置換のヘテロシクロアルキルは、置換若しくは非置換の３～７員ヘテロシクロアルキルであり、各置換若しくは非置換のアリールは、置換若しくは非置換のＣ_６～Ｃ_１０アリールであり、かつ／又は各置換若しくは非置換のヘテロアリールは、置換若しくは非置換の５～９員ヘテロアリールである。一部の実施形態において、各置換若しくは非置換のアルキレンは、置換若しくは非置換のＣ_１～Ｃ_８アルキレンであり、各置換若しくは非置換のヘテロアルキレンは、置換若しくは非置換の２～８員ヘテロアルキレンであり、各置換若しくは非置換のシクロアルキレンは、置換若しくは非置換のＣ_３～Ｃ_７シクロアルキレンであり、各置換若しくは非置換のヘテロシクロアルキレンは、置換若しくは非置換の３～７員ヘテロシクロアルキレンであり、各置換若しくは非置換のアリーレンは、置換若しくは非置換のＣ_６～Ｃ_１０アリーレンであり、かつ／又は各置換若しくは非置換のヘテロアリーレンは、置換若しくは非置換の５～９員ヘテロアリーレンである。一部の実施形態において、化合物は、下記の実施例節、図又は表において明示された化学種である。

【0046】

本明細書において使用される、「コンジュゲート」という用語は、原子又は分子の間の会合を指す。会合は、直接的な会合の場合もあり、間接的な会合の場合もある。例えば、核酸とタンパク質とのコンジュゲートは、例えば、共有結合による、直接的コンジュゲートの場合もあり、例えば、非共有結合（例えば、静電相互作用（例えば、イオン結合、水素結合、ハロゲン結合）、ファンデルワールス相互作用（例えば、双極子間相互作用、双極子－誘起双極子間相互作用、ロンドン分散力）、環スタッキング（パイ効果）、疎水性相互作用など）による、間接的コンジュゲートの場合もある。複数の実施形態において、コンジュゲートは、求核置換（例えば、アミン及びアルコールの、ハロゲン化アシル、活性エステルとの反応）、求電子置換（例えば、エナミン反応）並びに炭素間及び炭素－ヘテロ原子間の多重結合への付加（例えば、マイケル反応、ディールス－アルダー付加）を含むがこれらに限定されない、コンジュゲート化学反応を使用して形成される。これらの有用な反応及び他の有用な反応は、例えば、Ｍａｒｃｈ、「ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＯＲＧＡＮＩＣ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ」、３版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８５；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「ＢＩＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥ ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、１９９６及びＦｅｅｎｅｙら、「ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ」、「Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｅｒｉｅｓ」、１９８巻、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．、１９８２において論じられている。複数の実施形態において、微粒子は、微粒子の成分と、固体支持体の成分との、非共有結合化学反応を介して、固体支持体に非共有結合によって接合している。他の実施形態において、微粒子は、１つ以上の反応性部分、例えば、本明細書において記載される、共有結合反応性部分（例えば、アミン反応性部分）を含む。他の実施形態において、微粒子は、１つ以上の反応性部分、例えば、本明細書において記載される、共有結合反応性部分（例えば、アミン反応性部分）を伴うリンカーを含む。

【0047】

本明細書におけるコンジュゲート化学反応（当技術分野において公知の「クリック化学反応」を含む）において使用される、有用な反応性部分又は官能基は、例えば、
（ａ）Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ－ヒドロキシベンズトリアゾールエステル、ハロゲン酸、アシルイミダゾール、チオエステル、ｐ－ニトロフェニルエステル、アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族エステルを含むがこれらに限定されない、カルボキシル基及びこれらの多様な誘導体；
（ｂ）エステル、エーテル、アルデヒドなどに転換されうるヒドロキシル基；
（ｃ）ハロゲン化物が、その後、例えば、アミン、カルボン酸アニオン、チオールアニオン、カルバニオン又はアルコキシドイオンなどの求核基により置きかえられ、これにより、新たな基の、ハロゲン原子部位における、共有結合による接合をもたらす、ハロアルキル基；
（ｄ）例えば、マレイミド基など、ディールス－アルダー反応に参与することが可能な、ジエノフィル基；
（ｅ）後続の誘導体化が、例えば、イミン、ヒドラゾン、セミカルバゾン若しくはオキシムなどのカルボニル誘導体の形成を介して、又はグリニャール付加若しくはアルキルリチウム付加などの機構を介して可能となるような、アルデヒド基又はケトン基；
（ｆ）例えば、スルホンアミドを形成する、後続のアミンとの反応のための、ハロゲン化スルホニル基；
（ｇ）ジスルフィドに転換される場合もあり、ハロゲン化アシルと反応する場合もあり、金などの金属に結合している場合もある、チオール基；
（ｈ）例えば、アシル化、アルキル化、又は酸化されうる、アミン基又はスルフヒドリル基；
（ｉ）例えば、シクロ付加、アシル化、マイケル付加などを経る、アルケン；
（ｊ）例えば、アミン化合物及びヒドロキシル化合物と反応しうる、エポキシド；
（ｋ）核酸合成において有用な、ホスホルアミダイト及び他の標準的な官能基；
（ｌ）金属酸化ケイ素結合；
（ｍ）例えば、リン酸ジエステル結合を形成する、反応性リン基（例えば、ホスフィン）への金属結合並びに
（ｎ）スルホン、例えば、ビニルスルホンを含む。

【0048】

当技術分野において、コンジュゲート（「クリック」）化学反応を使用して、低分子モジュラーユニットを接続することによる、組成物の化学合成が周知であり、例えば、それらの全てが、それらの全体において、かつ、全ての目的のために、参照により本明細書に組み込まれた、Ｈ．Ｃ．Ｋｏｌｂ、Ｍ．Ｇ．Ｆｉｎｎ及びＫ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ（（２００１）、「Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｄｉｖｅｒｓｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ａ Ｆｅｗ Ｇｏｏｄ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ」、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ、４０（１１）：２００４～２０２１）；Ｒ．Ａ．Ｅｖａｎｓ（（２００７）、「Ｔｈｅ Ｒｉｓｅ ｏｆ Ａｚｉｄｅ－Ａｌｋｙｎｅ １，３－Ｄｉｐｏｌａｒ ‘Ｃｌｉｃｋ’ Ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、６０（６）：３８４～３９５；Ｗ．Ｃ．Ｇｕｉｄａら、Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．、３頁、１９９６；Ｓｐｉｔｅｒｉ，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ及びＭｏｓｅｓ，Ｊｏｈｎ Ｅ．（（２０１０）、「Ｃｏｐｐｅｒ－Ｃａｔａｌｙｚｅｄ Ａｚｉｄｅ－Ａｌｋｙｎｅ Ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎ：Ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ １，４，５－Ｔｒｉｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ １，２，３－Ｔｒｉａｚｏｌｅｓ」、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ、４９（１）：３１～３３）；Ｈｏｙｌｅ，Ｃｈａｒｌｅｓ Ｅ．及びＢｏｗｍａｎ，Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ｎ．（（２０１０）、「Ｔｈｉｏｌ－Ｅｎｅ Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ、４９（９）：１５４０～１５７３）；Ｂｌａｃｋｍａｎ，Ｍｅｌｉｓｓａ Ｌ．及びＲｏｙｚｅｎ，Ｍａｋｓｉｍ及びＦｏｘ，Ｊｏｓｅｐｈ Ｍ．（（２００８）、「Ｔｅｔｒａｚｉｎｅ Ｌｉｇａｔｉｏｎ：Ｆａｓｔ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｉｎｖｅｒｓｅ－Ｅｌｅｃｔｒｏｎ－Ｄｅｍａｎｄ Ｄｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒ Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１３０（４１）：１３５１８～１３５１９）；Ｄｅｖａｒａｊ，Ｎｅａｌ Ｋ．及びＷｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｒａｌｐｈ及びＨｉｌｄｅｒｂｒａｎｄ，Ｓｃｏｔｔ Ａ．（（２００８）、「Ｔｅｔｒａｚｉｎｅ Ｂａｓｅｄ Ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎｓ：Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｌａｂｅｌｉｎｇ」、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９（１２）：２２９７～２２９９）；Ｓｔｏｅｃｋｍａｎｎ，Ｈｅｎｎｉｎｇ；Ｎｅｖｅｓ，Ａｎｄｒｅ；Ｓｔａｉｒｓ，Ｓｈａｕｎ；Ｂｒｉｎｄｌｅ，Ｋｅｖｉｎ；Ｌｅｅｐｅｒ，Ｆｉｎｉａｎ（（２０１１）、「Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ ｉｓｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｂａｓｅｄ ｃｌｉｃｋ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）において記載されている。

【0049】

本明細書において記載されるタンパク質又は核酸の化学的安定性に参与又は干渉しないように、反応性官能基が選び出されうる。例として述べると、核酸は、ビニルスルホン又は他の反応性部分（例えば、マレイミド）を含みうる。任意選択的に、核酸は、式－Ｓ－Ｓ－Ｒを有する反応性部分を含みうる。Ｒは、例えば、保護基でありうる。任意選択的に、Ｒは、ヘキサノールである。本明細書において使用される、「ヘキサノール」という用語は、式Ｃ_６Ｈ_１３ＯＨを伴う化合物を含み、１－ヘキサノール、２－ヘキサノール、３－ヘキサノール、２－メチル－１－ペンタノール、３－メチル－１－ペンタノール、４－メチル－１－ペンタノール、２－メチル－２－ペンタノール、３－メチル－２－ペンタノール、４－メチル－２－ペンタノール、２－メチル－３－ペンタノール、３－メチル－３－ペンタノール、２，２－ジメチル－１－ブタノール、２，３－ジメチル－１－ブタノール、３，３－ジメチル－１－ブタノール、２，３－ジメチル－２－ブタノール、３，３－ジメチル－２－ブタノール及び２－エチル－１－ブタノールを含む。任意選択的に、Ｒは、１－ヘキサノールである。

【0050】

本明細書において使用される、「約」という用語は、当業者が、指定された値と同様であると妥当に考える、指定された値を含む値の範囲を意味する。複数の実施形態において、「約」という用語は、当技術分野において、一般に許容可能な測定値を使用する、標準偏差以内を意味する。複数の実施形態において、「約」とは、指定された値から、±１０％まで拡がる範囲を意味する。複数の実施形態において、「約」とは、指定された値を意味する。

【0051】

本明細書において使用される、「ある（ａ）」又は「ある（ａｎ）」という用語は、１つ以上を意味する。加えて、本明細書において使用される、「ａ［ｎ］により置換された」という語句は、指定された基が、名指された置換基のいずれか又は全てのうちの１つ以上により置換されうることを意味する。例えば、アルキル基又はヘテロアリール基などの基が、「非置換のＣ_１～Ｃ_２０アルキル又は非置換の２～２０員ヘテロアルキルにより置換されている」場合、基は、１つ以上の非置換Ｃ_１～Ｃ_２０アルキル及び／又は１つ以上の非置換２～２０員ヘテロアルキルを含有しうる。さらに、部分が、Ｒ置換基により置換されている場合、基は、「Ｒ置換された」と称されうる。部分が、Ｒ置換されている場合、部分は、少なくとも１つのＲ置換基により置換されており、各Ｒ置換基は、任意選択的に、異なる。

【0052】

そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、当業者により一般に理解された意味と同じ意味を有する。例えば、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、「ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ」、２版、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ １９９４）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ １９８９）を参照されたい。本発明の実施において、本明細書において記載されるものと類似する、又は同等な、任意の方法、デバイス及び材料が使用されうる。以下の定義は、本明細書において頻繁に使用される、ある特定の用語の理解を容易とするために提示されるものであり、本開示の範囲を限定することが意図されるものではない。

【0053】

「生物学的試料」又は「試料」とは、対象又は患者から得られた材料又はこれらに由来する材料を指す。生物学的試料は、生検試料及び剖検試料など、組織の切片及び組織学的な目的のために採取された凍結切片を含む。このような試料は、血液及び血液画分又は血液生成物（例えば、血清、血漿、血小板、赤血球など）などの体液、痰、組織、培養細胞（例えば、初代培養物、外植片及び形質転換細胞）、糞便、尿、滑液、関節組織、滑膜組織、滑膜細胞、線維芽細胞様滑膜細胞、マクロファージ様滑膜細胞、免疫細胞、造血細胞、線維芽細胞、マクロファージ、Ｔ細胞などを含む。生物学的試料は、典型的に、霊長動物、例えば、チンパンジー又はヒト；ウシ；イヌ；ネコ；齧歯類、例えば、モルモット、ラット、マウス；ウサギなどの哺乳動物又は鳥類；爬虫類若しくは魚類などの真核生物から得られる。

【0054】

本明細書において使用される、「細胞」とは、そのゲノムのＤＮＡを保存又は複製するのに十分な、代謝機能又は他の機能を果たす細胞を指す。細胞は、例えば、インタクトの膜の存在、特定の色素による染色、後代をもたらす能力又は、配偶子の場合には生存子孫細胞をもたらすように第２の配偶子と配偶する能力を含む、当技術分野において周知の方法により同定されうる。細胞は、原核細胞及び真核細胞を含みうる。原核細胞は、細菌を含むがこれらに限定されない。真核細胞は、酵母細胞及び植物及び動物に由来する細胞、例えば、哺乳動物細胞、昆虫（例えば、スポドプテラ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）属）細胞及びヒト細胞を含むがこれらに限定されない。細胞は、天然において非接着性である、又は例えば、トリプシン処理により、表面に接着しないように処理されている場合に有用でありうる。

【0055】

本明細書において、「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すように、互換的に使用され、この場合、ポリマーは、任意選択的に、アミノ酸からならない部分とコンジュゲートしていてもよい。用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然のアミノ酸の、人工的な化学的模倣体であるアミノ酸ポリマーのほか、天然のアミノ酸ポリマー及び非天然のアミノ酸ポリマーにも適用される。「融合タンパク質」とは、単一の部分として組換え発現された、２つ以上の個別のタンパク質配列をコードするキメラタンパク質を指す。

【0056】

「ペプチジル」及び「ペプチジル部分」という用語は、分子の残余部分（例えば、本明細書において提供される組換えタンパク質又は本明細書において提供される組換えタンパク質のペプチドドメイン形成部分）に接合しているペプチドを指す。ペプチジル部分は、ペプチジル部分を、組換えタンパク質の残余部分（例えば、膜貫通ドメイン、スペーサー領域又はペプチジルリンカー）に接合させるのに用いられる化学リンカーにより置換されうる。ペプチジル部分はまた、さらなる化学的部分（例えば、さらなるＲ置換基）によっても置換されうる。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、ペプチジル部分を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、ペプチジル部分である。本明細書において使用される「メディトープ」という用語は、本明細書において記載されるペプチドドメイン内に含まれたペプチジル部分を指す。したがって、複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、メディトープである。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、メディトープを含む。

【0057】

ペプチジル部分（例えば、メディトープ）は、直鎖状ペプチド部分の場合もあり、環状ペプチド部分の場合もある。例えば、インビボにおける安定性に対処し、後続のコンジュゲーション化学反応のための化学選択的制御を可能とするように、ペプチド部分の結晶化のための、多様な方法が使用されうる。一部の実施形態において、結晶化戦略は、頭－尾（頭尾）ラクタム結晶化（非環状ペプチドの末端残基の間の）及び／又は他の残基の間のラクタム連結を含む、ラクタム結晶化戦略である。ラクタムの形成はまた、グリシン、β－Ａｌａ及び／又は７－アミノヘプタン酸などの残基を、非環状ペプチド結晶前駆体に組み込んで、異なるラクタム環のサイズ及び接続方式をもたらすことによっても影響を受ける。「クリック」化学反応及びオレフィンメタセシスなど、さらなる結晶化戦略もまた使用されうる。当技術分野において、このようなペプチド及びペプチド模倣体の結晶化の方法が周知である。複数の実施形態において、ペプチジル部分（例えば、メディトープ）は、直鎖状ペプチジル部分（例えば、直鎖状メディトープ）である。複数の実施形態において、ペプチジル部分（例えば、メディトープ）は、環状ペプチジル部分（例えば、環状メディトープ）である。

【0058】

「標識」、「検出用ドメイン」又は「検出用部分」とは、分光的手段、光化学的手段、生化学的手段、免疫化学的手段、化学的又は他の物理的手段により検出可能な組成物である。例えば、有用な標識は、^３２Ｐ、蛍光色素、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡにおいて、一般に使用される）、ビオチン、ジゴキシゲニン若しくはハプテン及びタンパク質又は、例えば、放射性標識を、標的ペプチドと特異的に反応性である、ペプチド又は抗体に組み込むことにより、検出可能とされうる、他の実体を含む。抗体を標識とコンジュゲートさせるための、当技術分野において公知の任意の適切な方法であって、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｑｕｅｎｉｑｕｅｓ」、１９９６、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏにおいて記載された方法を使用する方法が利用されうる。

【0059】

「標識タンパク質又は標識ポリペプチド」とは、標識タンパク質又は標識ポリペプチドの存在が、標識タンパク質又は標識ポリペプチドに結合している標識の存在を検出することにより検出されうるように、リンカー若しくは化学結合を介して、共有結合によって、又はイオン性結合、ファンデルワールス結合、静電結合若しくは水素結合を介して、非共有結合によって、標識に結合しているタンパク質又はポリペプチドである。代替的に、高アフィニティー相互作用を使用する方法であって、結合パートナーの対のうちの一方が、他方、例えば、ビオチン、ストレプトアビジンに結合する方法も、同じ結果を達成しうる。

【0060】

「アミノ酸」という用語は、天然のアミノ酸及び合成アミノ酸のほか、天然のアミノ酸と同様に機能する、アミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然のアミノ酸は、遺伝子コードによりコードされたアミノ酸のほか、その後において修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体とは、天然のアミノ酸と同じ、基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基及びＲ基に結合しているα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このような類似体は、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）又は修飾ペプチド骨格を有するが、天然のアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣体とは、アミノ酸の一般的化学構造と異なる構造を有するが、天然のアミノ酸と同様に機能する化合物を指す。

【0061】

本明細書において、アミノ酸は、それらの一般に公知であり、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨されている、３文字記号又は１文字記号により言及されうる。ヌクレオチドも同様に、それらの一般に許容された１文字コードにより言及されうる。

【0062】

アミノ酸又はヌクレオチド塩基の「位置」は、参照配列内の各アミノ酸（又はヌクレオチド塩基）を、Ｎ末端（又は５’末端）と比べた、その位置に基づき、順次同定する番号により表示される。一般に、最適のアライメントを決定する場合に考慮されうる、欠失、挿入、切断、融合などに起因して、単純に、Ｎ末端から数えることにより決定された、被験配列内のアミノ酸残基番号は、必ずしも、参照配列内の、その対応する位置の番号と同じにならない。例えば、変異体が、アライメントされた参照配列と比べて、欠失を有する場合、変異体内に、欠失部位における、参照配列内の位置に対応するアミノ酸は存在しない。アライメントされた参照配列内に、挿入が存在する場合、この挿入は、参照配列内の、番号付けされたアミノ酸位置に対応しない。切断又は融合の場合、参照配列内又はアライメントされた配列内に、対応する配列内のいかなるアミノ酸にも対応しないアミノ酸の連なりが存在しうる。

【0063】

所与のアミノ酸配列又はポリヌクレオチド配列の番号付けの文脈において使用される場合における、「～に照らして番号付けされた」又は「～に対応する」という用語は、所与のアミノ酸配列又はポリヌクレオチド配列が、参照配列と比較された場合における、指定された参照配列の残基の番号付けを指す。タンパク質内のアミノ酸残基は、それが、タンパク質内の、所与の残基と同じ、本質的な構造位置を占有する場合に、所与の残基「に対応する」。例えば、選択された抗体（又はＦａｂドメイン）内の、選択された残基は、選択された残基が、Ｋａｂａｔによる４０位における軽鎖トレオニンと、同じ本質的な、空間関係又は他の構造関係を占有する場合に、Ｋａｂａｔによる４０位における軽鎖トレオニンに対応する。一部の実施形態において、選択されたタンパク質が、抗体（又はＦａｂドメイン）の軽鎖との最大の相同性についてアライメントされる場合、アライメントされる、選択されたタンパク質内の、トレオニン４０とアライメントする位置は、トレオニン４０に対応する。例えば、選択されたタンパク質の構造が、Ｋａｂａｔによる４０位における、軽鎖トレオニン及び比較される全体構造との最大の対応についてアライメントされる場合、一次配列アライメントの代わりに、三次元構造アライメントもまた使用されうる。この場合、構造モデル内のトレオニン４０と同じ本質的位置を占有するアミノ酸は、トレオニン４０残基に対応するものとされる。

【0064】

「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸配列及び核酸配列のいずれにも適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体とは、同一なアミノ酸配列若しくは本質的に同一なアミノ酸配列をコードする核酸を指す、又は、核酸が、アミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一な配列を指す。遺伝子コードの縮重のために、多数の、機能的に同一な核酸配列が、任意の所与のアミノ酸残基をコードする。例えば、コドンである、ＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵは、全て、アミノ酸であるアラニンをコードする。したがって、アラニンが、コドンにより指定される、いずれの位置においても、コドンは、コードされたポリペプチドを変更せずに、記載された、対応するコドンのうちのいずれかに変更されうる。このような核酸変異は、保存的な修飾変異の一種である、「サイレント変異」である。本明細書における、ポリペプチドをコードする、あらゆる核酸配列はまた、核酸の、あらゆる可能なサイレント変異についても記載する。当業者は、核酸内の各コドン（通常は、メチオニンだけのコドンであるＡＵＧ及び通常は、トリプトファンだけのコドンであるＴＧＧを除く）が、機能的に同一な分子をもたらすように修飾されうることを認識する。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の、各サイレント変異は、発現産物に関して、記載された各配列内に含意されているが、プローブ配列に関しては含意されていない。

【0065】

アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされた配列内の、単一のアミノ酸又は小さな百分率のアミノ酸を変更する、付加する、又は欠失させる、核酸配列、ペプチド配列、ポリペプチド配列又はタンパク質配列への個々の置換、欠失又は付加は、変更が、アミノ酸の化学的に類似するアミノ酸による置換をもたらす場合に、「保存的に修飾された変異体」であることを認識する。機能的に類似するアミノ酸をもたらす保存的置換の表は、当技術分野において周知である。このような保存的に修飾された変異体は、加えて、本発明の多形変異体、種間相同体及び対立遺伝子でもあり、これらを除外しない。

【0066】

以下の８つの群は、各々、互いに対する保存的置換であるアミノ酸：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、「Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」（１９８４）を参照されたい）を含有する。

【0067】

「核酸」とは、一本鎖形態又は二本鎖形態にある、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド及びこれらのポリマー並びにこれらの相補体を指す。「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドの直鎖状配列を指す。「ヌクレオチド」という用語は、典型的に、単一のポリヌクレオチド単位、すなわち、単量体を指す。ヌクレオチドは、リボヌクレオチドの場合もあり、デオキシリボヌクレオチドの場合もあり、これらの修飾形の場合もある。本明細書において想定されたポリヌクレオチドの例は、一本鎖及び二本鎖のＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖のＲＮＡ（ｓｉＲＮＡを含む）並びに一本鎖及び二本鎖のＤＮＡ及びＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子を含む。本明細書において使用される核酸はまた、天然の核酸と同じ、基本的化学構造を有する核酸も指す。このような類似体は、修飾糖及び／又は修飾環の置換基を有するが、天然の核酸と同じ、基本的化学構造を保持する。核酸模倣体とは、核酸の一般的化学構造と異なる構造を有するが、天然の核酸と同様に機能する化合物を指す。このような類似体の例は、限定せずに述べると、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド及びペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。

【0068】

「配列同一性の百分率」は、２つの、最適にアライメントされた配列を、比較域にわたり比較することにより決定されるが、この場合、比較域内の、ポリヌクレオチド配列又はポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適のアライメントのために、参照配列（付加又は欠失を含まない）と比較して、付加又は欠失（すなわち、ギャップ）を含みうる。百分率は、マッチさせた位置の数をもたらすように、同一な核酸塩基又はアミノ酸残基が、両方の配列内において生じる位置の数を決定し、マッチさせた位置の数を、比較域内の位置の総数により除し、結果に１００を乗じて、配列同一性の百分率をもたらすことにより計算される。

【0069】

２つ以上の核酸配列又はポリペプチド配列の文脈における「同一」又は「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の配列若しくは部分配列が同じである、又は以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して、若しくは手作業のアライメント及び目視により測定された比較域若しくは指定領域にわたり、最大の対応について比較され、アライメントされた場合に、２つ以上の配列若しくは部分配列の、指定された百分率のアミノ酸残基又はヌクレオチドが同じである（すなわち、例えば、本発明の全ポリペプチド配列又は本発明のポリペプチドの個々のドメインの、指定された領域にわたる、６０％の同一性、任意選択的に、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有する）ことを指す。したがって、このような配列は「実質的に同一」であるものとされる。この定義はまた、被験配列の相補体も指す。任意選択的に、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチドの長さの領域にわたり、又はより好ましくは、１００～５００若しくは１０００ヌクレオチド以上の長さの領域にわたり存在する。本発明は、配列番号１～３５のうちのいずれかと、実質的に同一であるポリペプチドを含む。

【0070】

配列比較のために、１つの配列が、それに照らして被験配列が比較される参照配列として働くことが典型的である。配列比較アルゴリズムを使用する場合、被験配列及び基準配列が、コンピュータに入力され、必要な場合は、部分配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムのパラメータが指定される。デフォルトのプログラムパラメータが使用される場合もあり、代替的なパラメータが指定される場合もある。次いで、配列比較アルゴリズムが、プログラムパラメータに基づき、被験配列について、参照配列と比べた配列同一性パーセントを計算する。

【0071】

本明細書において使用される「比較域」は、２つの配列が、最適にアライメントされた後で、配列が、同じ数の連続的な位置を有する参照配列と比較されうる、例えば、全長配列又は２０～６００、約５０～約２００若しくは約１００～約１５０アミノ酸若しくはヌクレオチドからなる群から選択された、連続的な位置の数のうちのいずれか１つを有するセグメントに対する言及を含む。当技術分野において、比較のための配列アライメント法が周知である。比較のための最適の配列アライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ（１９７０）、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．、２：４８２ｃによる局所相同性アルゴリズムにより行うこともでき、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（１９７０）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８：４４３による相同性アライメントアルゴリズムにより行うこともでき、Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎ（１９８８）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：２４４４による類似性検索法により行うこともでき、これらアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）により行うこともでき、手作業のアライメント及び目視（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（１９９５、増補版）を参照されたい）により行うこともできる。

【0072】

配列同一性パーセント及び配列類似性パーセントを決定するのに適するアルゴリズムの例は、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９７７）、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２及びＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０において記載されている、ＢＬＡＳＴアルゴリズム及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）により公表されている。このアルゴリズムは、データベース配列内の同じ長さのワードによりアライメントされた場合に、ある正の値の閾値スコアＴにマッチする、又はこれを満たす、クエリー配列内の短いワード長Ｗを同定することにより、高スコア配列対（ＨＳＰ）をまず同定することを伴う。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）と称される。これらの初期の隣接ワードヒットが、これらを含有するより長いＨＳＰを見出す検索を開始するためのシードとして働く。累積アライメントスコアが増大しうる限りにおいて、ワードヒットは、各配列に沿っていずれの方向にも拡張される。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（マッチする残基の対についてのリウォードスコア；常に＞０）及びＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティースコア；常に＜０）を使用して計算される。アミノ酸配列について、累積スコアを計算するのに、スコアリングマトリックスが使用される。累積アライメントスコアが、達成されたその最大値から数量Ｘだけ低下する場合；１つ以上の負スコア残基のアライメントの累積のために、累積スコアが、ゼロ以下に低下する場合又はいずれかの配列の末端に達する場合、各方向へのワードヒットの拡張が停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータであるＷ、Ｔ、及びＸは、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４をデフォルトとして使用し、両方の鎖の比較を行う。アミノ酸配列のためのＢＬＡＳＴＰプログラムは、３のワード長、及び１０の期待値（Ｅ）及び５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ及びＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：１０９１５を参照されたい）アライメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４をデフォルトとして使用し、両方の鎖の比較を行う。

【0073】

ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列の間の類似性についての統計学的解析（例えば、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：５８７３～５７８７を参照されたい）も実施する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、２つのヌクレオチド配列間又はアミノ酸配列間のマッチが偶然に生じる確率の指標をもたらす、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、被験核酸を参照核酸に照らして比較したときの最小合計確率が約０．２未満であり、より好ましくは、約０．０１未満であり、最も好ましくは、約０．００１未満であれば、核酸は参照配列と類似すると考えられる。

【0074】

２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることの指標は、下記される通り、第１の核酸によりコードされたポリペプチドが、第２の核酸によりコードされたポリペプチドに対して惹起された抗体と免疫学的に交差反応性であることである。したがって、例えば、２つのペプチドが保存的置換だけにより異なる場合、ポリペプチドは、典型的に、第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一であることの別の指標は、下記される通り、２つの分子又はそれらの相補体が、厳密な条件下において、互いとハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であることのさらに別の指標は、配列を増幅するのに、同じプライマーを使用されうることである。

【0075】

遺伝子に言及して、本明細書において使用される、「発現」又は「発現される」という語は、この遺伝子の転写産物及び／又は翻訳産物を意味する。ＤＮＡ分子の、細胞内の発現レベルは、細胞内に存在する対応するｍＲＮＡの量又は細胞により産生された、このＤＮＡによりコードされたタンパク質の量に基づき決定されうる。非コード核酸分子（例えば、ｓｉＲＮＡ）の発現レベルは、当技術分野において周知の、標準的なＰＣＲ法又はノーザンブロット法により検出されうる。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、１８．１～１８．８８を参照されたい。

【0076】

トランスフェクトされた遺伝子の発現は、細胞内において一過性に生じる場合もあり、安定的に生じる場合もある。「一過性発現」時に、トランスフェクトされた遺伝子は、細胞分裂時に娘細胞に転移されない。その発現は、トランスフェクト細胞に制限されるので、遺伝子の発現は、時間経過と共に失われる。これに対し、トランスフェクトされた遺伝子の安定的発現は、遺伝子が、選択の利点をトランスフェクト細胞に付与する別の遺伝子と共に共トランスフェクトされる場合に生じうる。このような選択の利点は、細胞に提供される、ある特定の毒素に対して抵抗性でありうる。トランスフェクトされた遺伝子の発現は、宿主ゲノムへのトランスポゾン媒介型挿入によりさらに達せられうる。トランスポゾン媒介型挿入時に、遺伝子は、宿主ゲノムへの挿入並びに後続の切出しを可能とする、２つのトランスポゾンリンカー配列の間に、予測可能な形において配置される。トランスフェクトされた遺伝子の安定的な発現は、細胞に、感染の後、細胞ゲノムの部分を形成し（細胞ゲノムに組み込まれ）、その結果として、遺伝子の安定的発現をもたらす、レンチウイルスベクターを感染させることによりさらに達せられうる。

【0077】

「プラスミド」、「ベクター」又は「発現ベクター」という用語は、遺伝子の発現に必要な遺伝子及び／又は調節エレメントをコードする核酸分子を指す。遺伝子の、プラスミドからの発現は、シスにおいて生じる場合もあり、トランスにおいて生じる場合もある。遺伝子が、シスにおいて発現される場合、遺伝子及び調節エレメントは、同じプラスミドによりコードされる。トランスにおける発現とは、遺伝子と、調節エレメントとが、個別のプラスミドによりコードされる場合を指す。

【0078】

「トランスフェクション」、「形質導入」、「トランスフェクトする」又は「形質導入する」という用語は、互換的に使用される場合があり、核酸分子又はタンパク質を、細胞に導入する過程として規定される。核酸は、非ウイルスベースの方法又はウイルスベースの方法を使用して、細胞に導入される。核酸分子は、完全なタンパク質をコードする遺伝子配列の場合もあり、この機能的部分をコードする遺伝子配列の場合もある。トランスフェクションの非ウイルス法は、核酸分子を、細胞に導入する送達系として、ウイルスＤＮＡ又はウイルス粒子を使用しない、任意の適切なトランスフェクション法を含む。例示的な非ウイルストランスフェクション法は、リン酸カルシウムトランスフェクション、リポソームトランスフェクション、ヌクレオフェクション、ソノポレーション、熱ショックを介するトランスフェクション、マグネトフェクション及び電気穿孔を含む。一部の実施形態において、核酸分子は、当技術分野において周知の標準的な手順に従う電気穿孔を使用して、細胞に導入される。ウイルスベースのトランスフェクション法のために、本明細書において記載される方法において、任意の有用ウイルスベクターが使用されうる。ウイルスベクターの例は、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター及びアデノ随伴ウイルスベクターを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態において、核酸分子は、当技術分野において周知の標準的な手順に従うレトロウイルスベクターを使用して、細胞に導入される。「トランスフェクション」又は「形質導入」という用語はまた、タンパク質を、外部環境から、細胞に導入することも指す。典型的に、タンパク質の形質導入又はトランスフェクションは、細胞膜を横断ことが可能なペプチド又はタンパク質の、目的のタンパク質への接合に依拠する。例えば、Ｆｏｒｄら（２００１）、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、８：１～４及びＰｒｏｃｈｉａｎｔｚ（２００７）Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、４：１１９～２０を参照されたい。

【0079】

「抗体」とは、抗原に特異的に結合し、これを認識する、免疫グロブリン遺伝子又はこの断片に由来するフレームワーク領域を含むポリペプチドを指す。認知された免疫グロブリン遺伝子は、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン及びミューの定常領域遺伝子のほか、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。軽鎖は、カッパ鎖又はラムダ鎖として分類される。重鎖は、ガンマ鎖、ミュー鎖、アルファ鎖、デルタ鎖又はイプシロン鎖として分類され、これらが、それぞれ、免疫グロブリンのクラスである、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥを規定する。典型的に、抗体の抗原結合性領域は、結合の特異性及びアフィニティーの決定において、著明な役割を果たす。一部の実施形態において、抗体又は抗体の断片は、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ラクダなどを含む、異なる生物に由来しうる。本発明の抗体は、所望の抗体の機能（例えば、グリコシル化、発現、抗原の認識、エフェクター機能、抗原への結合、特異性など）を改善又はモジュレートするように、１つ以上のアミノ酸位置において修飾された、又は突然変異した抗体を含みうる。

【0080】

抗体とは、複雑な内部構造を伴う、大型の複合体分子（分子量を約１５０，０００Ｄａとする、又は約１３２０アミノ酸である）である。天然の抗体分子は、各対が、１つの軽鎖及び１つの重鎖を有する、２つの同一なポリペプチド鎖の対を含有する。各軽鎖及び各重鎖は、２つの領域：標的抗原への結合に関与する、可変（「Ｖ」）領域及び免疫系の他の構成要素と相互作用する、定常（「Ｃ」）領域からなる。軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、三次元空間内において、一体となって、抗原（例えば、細胞の表面上における受容体）に結合する、可変領域を形成する。各軽鎖可変領域内又は重鎖可変領域内に、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と呼ばれた、３つの短いセグメント（平均して、１０アミノ酸の長さである）が存在する。６つのＣＤＲ抗体可変ドメイン（軽鎖に由来する３つ及び重鎖に由来する３つ）は、三次元空間内において、一体に折りたたまれて、標的抗原（エピトープ）にドッキングする、実際の抗体側の結合性部位（パラトープ）を形成する。ＣＤＲの位置及び長さは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．ら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８３、１９８７により、正確に規定されている。ＣＤＲ内に含有されない可変領域の部分は、フレームワーク（「ＦＲ」）と呼ばれ、これは、ＣＤＲのための環境を形成する。

【0081】

本明細書において提供される「抗体変異体」とは、抗原に結合することが可能であり、抗体又はこれらの断片の、１つ以上の構造ドメイン（例えば、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン）を含むポリペプチドを指す。抗体変異体の非限定例は、単一ドメイン抗体又はナノボディー、単一特異性Ｆａｂ_２、二特異性Ｆａｂ_２、三特異性Ｆａｂ_３、一価ＩｇＧ、ｓｃＦｖ、二特異性ダイアボディー、三特異性トリアボディー、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ミニボディー、ＩｇＮＡＲ、Ｖ－ＮＡＲ、ｈｃＩｇＧ、ＶｈＨ又はペプチボディーを含む。本明細書において提供される「ペプチボディー」とは、抗体のＦｃドメインに接合している（共有結合リンカー又は非共有結合リンカーを介して）ペプチド部分を指す。当技術分野において公知の抗体変異体の、さらなる非限定例は、軟骨魚又はラクダ科動物により産生された抗体を含む。ラクダ科動物に由来する抗体及びこの可変領域並びにそれらの産生、単離及び使用のための方法についての一般的記載は、参照によりそれらの全体において全ての目的のために本明細書に組み込まれた参考文献である、ＷＯ９７／４９８０５及びＷＯ９７／４９８０５において見出されうる。同様に、軟骨魚に由来する抗体及びこの可変領域並びにそれらの産生、単離及び使用のための方法は、参照によりそれらの全体において全ての目的のために本明細書に組み込まれた、ＷＯ２００５／１１８６２９において見出されうる。

【0082】

本明細書において提供される「ＣＤＲ Ｌ１」、「ＣＤＲ Ｌ２」及び「ＣＤＲ Ｌ３」という用語は、抗体の可変軽（Ｌ）鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３を指す。複数の実施形態において、本明細書において提供される可変軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３を含む。同様に、本明細書において提供される「ＣＤＲ Ｈ１」、「ＣＤＲ Ｈ２」及び「ＣＤＲ Ｈ３」という用語は、抗体の可変重（Ｈ）鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３を指す。複数の実施形態において、本明細書において提供される可変重鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３を含む。

【0083】

本明細書において提供される「ＦＲ Ｌ１」、「ＦＲ Ｌ２」、「ＦＲ Ｌ３」及び「ＦＲ Ｌ４」という用語は、当技術分野における、それらの一般的な意味に従い使用され、抗体の可変軽（Ｌ）鎖の、フレームワーク領域（ＦＲ）１、２、３及び４を指す。複数の実施形態において、本明細書において提供される可変軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＦＲ Ｌ１、ＦＲ Ｌ２、ＦＲ Ｌ３及びＦＲ Ｌ４を含む。同様に、本明細書において提供される「ＦＲ Ｈ１」、「ＦＲ Ｈ２」、「ＦＲ Ｈ３」及び「ＦＲ Ｈ４」という用語は、当技術分野におけるそれらの一般的な意味に従い使用され、抗体の可変重（Ｈ）鎖のフレームワーク領域（ＦＲ）１、２、３及び４を指す。複数の実施形態において、本明細書において提供される可変重鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＦＲ Ｈ１、ＦＲ Ｈ２、ＦＲ Ｈ３及びＦＲ Ｈ４を含む。

【0084】

「抗体」という用語は、当技術分野において一般に公知である、その意味に従い使用される。抗体は、例えば、インタクトの免疫グロブリンとして、又は多様なペプチダーゼを伴う消化によりもたらされた、多数の十分に特徴付けられた断片として存在する。したがって、例えば、ペプシンは、それ自体、ジスルフィド結合により、ＶＨ－ＣＨ_１に接続された軽鎖である、Ｆａｂの二量体であるＦ（ａｂ）’_２をもたらすように、ヒンジ領域内のジスルフィド連結の下方の抗体を消化する。Ｆ（ａｂ）’_２は、マイルドな条件下において、ヒンジ領域内のジスルフィド連結を切断し、これにより、Ｆ（ａｂ）’_２二量体を、Ｆａｂ’単量体に転換するように、還元されうる。Ｆａｂ’単量体は、本質的に、ヒンジ領域の一部を伴うＦａｂである（「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｐａｕｌ編、３版、１９９３）を参照されたい）。インタクト抗体の消化との関係において、多様な抗体断片が規定されるが、当業者は、このような断片が、化学的に、又は組換えＤＮＡ法を使用することにより、デノボにおいて合成されうることを察知する。したがって、本明細書において使用される抗体という用語はまた、全抗体の修飾により作製された抗体断片又は組換えＤＮＡ法を使用して、デノボにおいて合成された抗体断片（例えば、単鎖Ｆｖ）又はファージディスプレイライブラリーを使用して同定された抗体断片も含む（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２～５５４（１９９０）を参照されたい）。

【0085】

例示的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位は、四量体を含む。各四量体は、各対が、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤ）及び１つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤ）を有する、２つの同一なポリペプチド鎖の対から構成される。各鎖のＮ末端は、主に、抗原認識の一因となる、約１００～１１０以上のアミノ酸の可変領域を規定する。可変軽鎖（ＶＬ）又は軽鎖可変領域及び可変重鎖（ＶＨ）又は重鎖可変領域という用語は、それぞれ、これらの軽鎖領域及び重鎖領域を指す。本明細書において言及された、可変軽鎖（ＶＬ）及び軽鎖可変領域という用語は、互換的に使用されうる。本明細書において言及された、可変重鎖（ＶＨ）及び重鎖可変領域という用語は、互換的に使用されうる。Ｆｃ（すなわち、Ｆｃ（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ）領域）とは、免疫グロブリンの「ベース」又は「テール」であり、典型的に、抗体のクラスに応じて、２つ又は３つの定常ドメインに寄与する、２つの重鎖から構成される。特異的タンパク質に結合することにより、Ｆｃ領域は、各抗体が、所与の抗原に対する、適切な免疫応答を発生させることを確保する。Ｆｃ領域はまた、Ｆｃ受容体など、多様な細胞受容体及び補体タンパク質など、他の免疫分子にも結合する。

【0086】

本明細書において提供される「抗原」という用語は、本明細書において提供される抗体結合性ドメインに結合することが可能な分子を指す。本明細書において提供される「抗原結合性ドメイン」とは、抗原（エピトープ）に結合する、抗体の領域である。上記において記載した通り、抗原結合性ドメインは一般に、重鎖及び軽鎖の各々の、１つの定常ドメイン及び１つの可変ドメイン（それぞれ、ＣＨ、ＣＬ、ＶＨ及びＶＬ）から構成される。パラトープ又は抗原結合性部位は、抗原結合性ドメインのＮ末端上に形成される。抗原結合性ドメインのうちの、２つの可変ドメインは、典型的に、抗原上のエピトープに結合する。

【0087】

抗体は、例えば、インタクトの免疫グロブリンとして、又は多様なペプチダーゼを伴う消化によりもたらされた、多数の十分に特徴付けられた断片として存在する。したがって、例えば、ペプシンは、それ自体、ジスルフィド結合により、ＶＨ－ＣＨ１に接続された軽鎖である、Ｆａｂの二量体であるＦ（ａｂ）’_２をもたらすように、ヒンジ領域内のジスルフィド連結の下方の抗体を消化する。Ｆ（ａｂ）’２は、マイルドな条件下において、ヒンジ領域内のジスルフィド連結を切断し、これにより、Ｆ（ａｂ）’２二量体を、Ｆａｂ’単量体に転換するように、還元されうる。Ｆａｂ’単量体は、本質的に、ヒンジ領域の一部を伴う抗原結合性部分である（「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｐａｕｌ編、３版、１９９３）を参照されたい）。インタクト抗体の消化との関係において、多様な抗体断片が規定されるが、当業者は、このような断片が、化学的に、又は組換えＤＮＡ法を使用することにより、デノボにおいて合成されうることを察知する。したがって、本明細書において使用される抗体という用語はまた、全抗体の修飾により作製された抗体断片又は組換えＤＮＡ法を使用して、デノボにおいて合成された抗体断片（例えば、単鎖Ｆｖ）又はファージディスプレイライブラリーを使用して同定された抗体断片も含む（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２～５５４（１９９０）を参照されたい）。

【0088】

単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、典型的に、１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドにより接続された、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）可変領域と、軽鎖（ＶＬ）可変領域との融合タンパク質である。リンカーは、通例、可撓性のために、グリシンに富む場合があるほか、可溶性のために、セリン又はトレオニンに富む場合がある。リンカーは、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に接続する場合もあり、この逆の場合もある。

【0089】

ｍＡｂのエピトープとは、ｍＡｂが結合する、その抗原の領域である。２つの抗体は、各々が、他の抗体の抗原への結合を競合的に阻害する（遮断する）場合、同じエピトープ又は重複エピトープに結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍又は１００倍過剰量の、一方の抗体は、他方の抗体の結合を、競合的結合アッセイにおいて測定される通り、少なくとも３０％であるが、好ましくは、５０％、７５％、９０％又はなお９９％阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５０：１４９５、１９９０を参照されたい）。代替的に、抗原内の、一方の抗体の結合を低減する、又はこれを消失させる、本質的に全てのアミノ酸突然変異が、他方の抗体の結合も低減する、又はこれを消失させる場合、２つの抗体は、同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を低減する、又はこれを消失させる、一部のアミノ酸突然変異が、他方の抗体の結合も低減する、又はこれを消失させる場合、２つの抗体は、重複エピトープを有する。

【0090】

本発明の適切な抗体、例えば、組換え抗体、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体の調製及び本発明に従う使用のために、当技術分野において公知の多くの技法が使用されうる（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５～４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ、４：７２（１９８３）；Ｃｏｌｅら、７７～９６頁、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｃｏｌｉｇａｎ、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（１９９１）；Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（１９８８）；並びにＧｏｄｉｎｇ、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ」（２版、１９８６）を参照されたい）。目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は、細胞からクローニングされる場合がある、例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子は、ハイブリドーマからクローニングされる場合があり、組換えモノクローナル抗体を作製するのに使用されうる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーもまた、ハイブリドーマ又は形質細胞から作られうる。重鎖遺伝子産物と、軽鎖遺伝子産物とのランダムな組合せは、異なる抗原特異性を伴う、大規模な抗体プールを作り出す（例えば、Ｋｕｂｙ、「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（３版、１９９７）を参照されたい）。単鎖抗体又は組換え抗体を作製するための技法（米国特許第４，９４６，７７８号、米国特許第４，８１６，５６７号）は、抗体を、本発明のポリペプチドに作製するのに適合されうる。また、トランスジェニックマウス又は他の哺乳動物など、他の生物も、ヒト化抗体又はヒト抗体を発現させるのに使用されうる（例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９～７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６～８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８１２～１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８４５～５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８２６（１９９６）；並びにＬｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３：６５～９３（１９９５）を参照されたい）。代替的に、ファージディスプレイ技術は、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーのＦａｂ断片を同定するのに使用されうる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２～５５４（１９９０）；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９～７８３（１９９２）を参照されたい）。抗体はまた、二特異性、すなわち、２つの異なる抗原を認識することが可能ともされうる（例えば、ＷＯ９３／０８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１０：３６５５～３６５９（１９９１）及びＳｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１：２１０（１９８６）を参照されたい）。抗体はまた、ヘテロコンジュゲート、例えば、２つの共有結合によって接続された抗体又は免疫毒素でもありうる。（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３及びＥＰ０３０８９）を参照されたい。

【0091】

当技術分野において、非ヒト抗体をヒト化又は霊長動物化するための方法が周知である（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；同第５，５３０，１０１号；同第５，８５９，２０５号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，７７７，０８５号；同第６，１８０，３７０号；同第６，２１０，６７１号及び同第６，３２９，５１１号；ＷＯ８７／０２６７１；欧州特許出願第０１７３４９４号；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２；及びＶｅｒｈｏｙｅｎら（１９８８）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４）。ヒト化抗体については、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）、Ｎａｔｕｒｅ、３４９：２９３において、さらに記載されている。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から、それに導入された、１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的に、移入可変ドメインから取り出された、移入残基と称されることが多い。ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者による方法（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、８１：６８５１～６８５５（１９８４）、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２～５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３～３２７（１９８８）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ及びＯｉ、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４４：６５～９２（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４～１５３６（１９８８）並びにＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２：５９３～５９６（１９９２）、Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．、２８：４８９～４９８（１９９１）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．、３１（３）：１６９～２１７（１９９４）を参照されたい）に従い、齧歯動物のＣＤＲ又はＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列により置換することにより、本質的に実施されうる。したがって、このようなヒト化抗体は、実質的に、インタクトに満たないヒト可変ドメインが、非ヒト種に由来する、対応する配列により置換された、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際は、ヒト化抗体は、典型的に、一部のＣＤＲ残基及び、おそらく、一部のＦＲ残基が、齧歯動物抗体内の類似する部位に由来する残基により置換されている、ヒト抗体である。例えば、ヒト化免疫グロブリンフレームワーク領域をコードする、第１の配列及び所望の免疫グロブリン相補性決定領域をコードする、第２の配列セットを含むポリヌクレオチドは、合成により作製される場合もあり、適切なｃＤＮＡセグメント及びゲノムＤＮＡセグメントを組み合わせることにより作製される場合もある。ヒト定常領域ＤＮＡ配列は、周知の手順に従い、様々なヒト細胞から単離されうる。

【0092】

「キメラ抗体」とは、（ａ）抗原結合性部位（可変領域）が、クラス、エフェクター機能及び／若しくは種が異なる、又はクラス、エフェクター機能、及び／若しくは種が変更された定常領域、又はキメラ抗体に新たな特性を付与する、全く異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるように、定常領域もしくその一部が、変更された、置きかえられた、もしく交換された抗体分子又は（ｂ）可変領域もしくその一部が、抗原特異性が異なる、若しくは抗原特異性が変更された可変領域により変更された、置きかえられた、もしくこれと交換された抗体分子である。本発明の好ましい抗体及び本発明に従う使用に好ましい抗体は、ヒト化モノクローナル抗体及び／又はキメラモノクローナル抗体を含む。

【0093】

本明細書において提供される「治療用抗体」とは、がん、自己免疫疾患、移植片拒絶、心血管疾患又は本明細書において記載される疾患若しくは状態など、他の疾患若しくは状態を処置するのに使用される、任意の抗体又はこの機能的断片を指す。治療用抗体の非限定例は、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、ＲｅｏＰｒｏ（アブシキシマブ）、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（バシリキシマブ）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（インフリキシマブ）；Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（ムロモナブ－ＣＤ３）；Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｂｅｘｘａｒ（トシツモマブ）、Ｈｕｍｉｒａ（アダリムマブ）、Ｃａｍｐａｔｈ（アレムツズマブ）、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（バシリキシマブ）、Ａｖａｓｔｉｎ（ベバシズマブ）、Ｃｉｍｚｉａ（セルトリズマブペゴル）、Ｚｅｎａｐａｘ（ダクリズマブ）、Ｓｏｌｉｒｉｓ（エクリズマブ）、Ｒａｐｔｉｖａ（エファリズマブ）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（ゲムツズマブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（イブリツモマブチウキセタン）、Ｔｙｓａｂｒｉ（ナタリズマブ）、Ｘｏｌａｉｒ（オマリズマブ）、Ｓｙｎａｇｉｓ（パリビズマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（ラニビズマブ）及びＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）を含むがこれらに限定されない、マウス抗体、マウス化キメラ抗体若しくはヒト化キメラ抗体又はヒト抗体を含む。

【0094】

治療剤を抗体とコンジュゲートさせるための技法が周知である（例えば、Ａｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、２４３～５６頁（Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」（２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、６２３～５３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５～５０６頁（１９８５）並びにＴｈｏｒｐｅら、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９～５８（１９８２）を参照されたい）。本明細書において使用される、「抗体－薬物コンジュゲート」又は「ＡＤＣ」という用語は、抗体とコンジュゲートしている、又は他の形において共有結合によって結合している治療剤を指す。本明細書において言及された、「治療剤」とは、がんなどの疾患の処置又は防止において有用な組成物である。

【0095】

タンパク質又はペプチドに言及する場合における、抗体「に特異的に（又は選択的に）結合する」又は抗体「と特異的に（又は選択的に）免疫反応性の」という語句は、タンパク質の、しばしば、タンパク質及び他の生物学的薬剤の不均質集団内の存在を決定する結合反応を指す。したがって、指定された免疫アッセイ条件下において、指定された抗体は、特定のタンパク質に、バックグラウンドの、少なくとも２倍、より典型的に、バックグラウンドの１０～１００倍を超えて結合する。このような条件下における、抗体への特異的な結合は、典型的に、特定のタンパク質に対するその特異性について選択された抗体を要求する。例えば、ポリクローナル抗体は、選択された抗原と、特異的に免疫反応性であるが、他のタンパク質と特異的に免疫反応性でない抗体のサブセットだけを得るように選択されうる。この選択は、他の分子と交差反応する抗体を除外することにより達成されうる。様々な免疫アッセイフォーマットは、特定のタンパク質と、特異的に免疫反応性である抗体を選択するのに使用されうる。例えば、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイは、タンパク質と、特異的に免疫反応性である抗体を選択するのに、日常的に使用されている（特異的免疫反応性を決定するのに使用されうる、免疫アッセイのフォーマット及び条件の記載について、例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、「Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（１９９８）を参照されたい）。

【0096】

「リガンド」とは、受容体に結合することが可能な薬剤、例えば、ポリペプチド又は他の分子を指す。

【0097】

例えば、細胞、核酸、タンパク質又はベクターに言及して使用される場合における、「組換え」という用語は、細胞、核酸、タンパク質又はベクターが、実験室法により改変されている、又は実験室法の結果であることを指し示す。したがって、例えば、組換えタンパク質は、実験室法により作製されたタンパク質を含む。組換えタンパク質は、タンパク質の天然（非組換え）形態内に見出されないアミノ酸残基を含む場合もあり、修飾された、例えば、標識されたアミノ酸残基を含む場合もある。

【0098】

核酸の部分に言及して使用される場合の、「異種」という用語は、核酸が、天然において、互いと同じ関係にあることが見出されない、２つ以上の部分配列を含むことを指し示す。例えば、新たな機能的核酸、例えば、１つの供給源に由来するプロモーター及び別の供給源に由来するコード領域を作るように配置された、非類縁遺伝子に由来する、２つ以上の配列を有する核酸は、典型的に、組換えにより作製される。同様に、異種タンパク質は、タンパク質が、天然において、互いと同じ関係にあることが見出されない、２つ以上の部分配列を含むこと（例えば、融合タンパク質）を指し示す。

【0099】

核酸又はタンパク質に適用された場合における、「単離」という用語は、核酸又はタンパク質が、天然状態において、それが会合する、他の細胞成分を、本質的に含まないことを表す。「単離」は、例えば、均質状態にあり、乾燥溶体の場合もあり、水溶液の場合もある。純度及び均質性は、典型的に、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学法を使用して決定される。調製物中に存在する主要種であるタンパク質は、実質的に精製されている。

【0100】

「～を接触させること」とは、その明白な通常の意味に従い使用され、少なくとも２つの顕著に異なる分子種（例えば、生体分子又は細胞を含む化合物）を、反応する、相互作用する、又は物理的に接触するのに十分に近接させる過程を指す。しかし、得られる反応生成物は、添加された試薬の間の反応から直接生成される場合もあり、反応混合物中において生成されうる、添加された試薬のうちの１つ以上に由来する中間体から生成される場合もあることを察知されたい。

【0101】

「～を接触させること」という用語は、２つの分子種を、反応させる、相互作用させる、又は物理的に接触させることを含むことが可能であり、この場合、２つの分子種は、例えば、本明細書において記載される組換えタンパク質及び抗原結合性ドメインでありうる。複数の実施形態において、接触させることは、例えば、本明細書において記載される組換えタンパク質を、抗原結合性ドメインと相互作用させることを含む。

【0102】

「対照」試料又は「対照」値とは、被験試料との比較のための参照、通例既知である参照として用いられた試料を指す。例えば、被験試料は、例えば、被験化合物の存在下にある被験条件から採取され、既知の条件、例えば、被験化合物の非存在下（陰性対照）又は既知の化合物の存在下（陽性対照）にある試料と比較されうる。対照はまた、多数の試験又は結果から集めた平均値も表しうる。当業者は、対照が、任意の数のパラメータについての評価のためにデザインされうることを認識する。例えば、対照は、治療利益を、薬理学的データ（例えば、半減期）又は治療測定値（例えば、副作用の比較）に基づき比較するために案出されうる。当業者は、どの対照が、所与の状況において価値があり、対照値との比較に基づき、データを解析することが可能な対照であるのかを理解する。対照はまた、データの有意性を決定するためにも価値がある。例えば、所与のパラメータについての値が、対照において、広範に変動している場合、被験試料中の変動は、有意であると考えられない。

【0103】

「患者」又は「それを必要とする対象」とは、本明細書において提供される組成物又は医薬組成物の投与により処置されうる疾患又は状態を患っている、又はこれらへの素因がある生物を指す。非限定例は、ヒト、他の哺乳動物、ウシ科動物、ラット、マウス、イヌ、サル、ヤギ、ヒツジ、ウシ、シカ及び他の非哺乳動物を含む。一部の実施形態において、患者は、ヒトである。

【0104】

「疾患」又は「状態」という用語は、本明細書において提供される化合物、医薬組成物又は方法により処置されることが可能な、患者又は対象の現況又は健康状態を指す。複数の実施形態において、疾患は、がん（例えば、肺がん、卵巣がん、骨肉腫、膀胱がん、子宮頸がん、肝臓がん、腎臓がん、皮膚がん（例えば、メルケル細胞癌）、精巣がん、白血病、リンパ腫、頭頸部がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、黒色腫、乳がん、神経芽細胞腫）である。

【0105】

「～を処置すること」又は「処置」という用語は、損傷、疾患、病理又は状態の処置又は改善の任意の成功の徴候であって、症状の軽減；寛解；消失又は損傷、病理若しくは状態を、患者にとってより忍容可能とすること；変性又は減退の速度の緩徐化；最終的な変性点を、それほど消耗性ではなくすること；患者の身体的福利又は精神的福利を改善することなど、任意の客観的パラメータ又は主観的パラメータを含む徴候を指す。症状の処置又は改善は、全身検診、神経精神科検診及び／又は精神科査定の結果を含む、客観的パラメータ又は主観的パラメータに基づきうる。「～を処置すること」という用語及びその活用形は、損傷、病理、状態又は疾患の防止を含む。複数の実施形態において、「～を処置すること」とは、がんの処置を指す。

【0106】

「有効量」とは、化合物が、化合物の非存在と比べて、言明された目的を達成する（例えば、そのためにそれが投与される効果を達成する、疾患を処置する、酵素活性を低減する、酵素活性を増大させる、シグナル伝達経路を低減する、又は疾患若しくは状態の１つ以上の症状を低減する）のに十分な量である。「有効量」の例は、疾患の１つ以上の症状の処置、防止又は軽減に寄与するのに十分な量であって、「治療有効量」ともまた称されうる量である。１つ以上の症状（及びこの語句の文法的同等物）の「低減」とは、症状（複数可）の重症度若しくは頻度の減弱又は症状（複数可）の消失を意味する。正確な量は、処置の目的に依存し、公知の技法を使用して、当業者により確認可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ」（１～３巻、１９９２）；Ｌｌｏｙｄ、「Ｔｈｅ Ａｒｔ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ」（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ、「Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ」（１９９９）；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ「Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、２０版、２００３、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓを参照されたい）。

【0107】

本明細書において使用される、「Ｈｅｒ２タンパク質」又は「Ｈｅｒ２」という用語は、ＣＤ３４０（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ３４０）、がん原遺伝子である、Ｎｅｕ、Ｅｒｂｂ２（齧歯動物）若しくはＥＲＢＢ２（ヒト）としてもまた公知の受容体チロシン－タンパク質キナーゼであるｅｒｂＢ－２又はＨｅｒ２の活性（例えば、Ｈｅｒ２と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。一部の態様において、変異体又は相同体は、天然のＨｅｒ２タンパク質と比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態において、Ｈｅｒ２タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号：Ｐ０４６２６によって識別されるタンパク質又はこれとの実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体と実質的に同一である。

【0108】

本明細書において使用される、「ＥＧＦＲタンパク質」又は「ＥＧＦＲ」という用語は、ヒトにおいて、ＥｒｂＢ－１又はＨＥＲ１としてもまた公知の、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）又はＥＧＦＲの活性（例えば、ＥＧＦＲと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。一部の態様において、変異体又は相同体は、天然のＥＧＦＲタンパク質と比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態において、ＥＧＦＲタンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号：Ｐ００５３３によって識別されるタンパク質又はこれとの実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体と実質的に同一である。

【0109】

本明細書において使用される、「ＣＤ１９タンパク質」又は「ＣＤ１９」という用語は、ＣＤ１９分子（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １９）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２及びＣＶＩＤ３としてもまた公知の、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９又はＣＤ１９の活性（例えば、ＣＤ１９と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。一部の態様において、変異体又は相同体は、天然のＣＤ１９タンパク質と比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態において、ＣＤ１９タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号：Ｐ１５３９１によって識別されるタンパク質又はこれとの実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体と実質的に同一である。

【0110】

本明細書において使用される、「ＣＤ２０タンパク質」又は「ＣＤ２０」という用語は、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０若しくはＣＤ２０（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ２０）又はＣＤ２０の活性（例えば、ＣＤ２０と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。一部の態様において、変異体又は相同体は、天然のＣＤ２０タンパク質と比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態において、ＣＤ２０タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号：Ｐ１１８３６によって識別されるタンパク質又はこれとの実質的な同一性を有する変異体若しくは相同体と実質的に同一である。

【0111】

組換えタンパク質組成物
本明細書において、とりわけ、Ｔ細胞により発現され、抗原結合性ドメイン（例えば、抗体、変異体又はこれらの断片）に結合し、これによりＴ細胞を抗原結合性ドメインにより結合している抗原を発現させる細胞（例えば、腫瘍細胞）にターゲティングすることが可能な組換えタンパク質が提示される。Ｔ細胞により発現された組換えタンパク質の抗原結合性ドメインへの結合及び抗原結合性ドメインの標的細胞により発現された抗原への結合を介して、Ｔ細胞は、活性化され、細胞傷害性となり、これにより標的細胞（例えば、がん細胞）を消失させる。本明細書において提供される組換えタンパク質は、とりわけ、養子免疫療法に、機能性を迅速に付加することを可能とし、とりわけ、多種多様な治療目的及び診断目的に有用である。例えば、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質は、エフェクターＴ細胞（例えば、自家Ｔ細胞）及び治療用抗体をそれらの作用部位に方向付け、これにより、オフターゲット効果を減殺する手段として使用されうる。本明細書において提供される組成物は、個別のＣＡＲ Ｔ細胞を創出及び最適化せずに、標的特異性を、迅速かつ効率的に変更することを可能とする。

【0112】

本明細書において提供される組換えタンパク質は、例えば、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン及び非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している膜貫通ドメインを含む、連続的な単鎖ポリペプチドである。本明細書において提供される組換えタンパク質は、それらの全てが、前記連続的な単鎖ポリペプチドの部分を形成するさらなるエレメント、例えば、スペーサー領域、ペプチドリンカー、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインを含みうる。本明細書において提供される連続的な単鎖ポリペプチドとは、互いに共有結合によって接合しており、これにより連続的なポリペプチド鎖を形成するエレメントを含むポリペプチド鎖を指す。

【0113】

したがって、一態様において、組換えタンパク質が提供される。組換えタンパク質は、（ｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；及び（ｉｉｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している膜貫通ドメインを含む。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである。

【0114】

本明細書において提供される「非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン」とは、抗体、抗体変異体又はこれらの断片の非ＣＤＲ結合性部位に結合することが可能な、ペプチド又はペプチドを含むペプチドドメインを指す。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、ペプチドである。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、ペプチドを含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、非ＣＤＲ結合性部位に結合する。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、ペプチジル部分である。複数の実施形態において、ペプチジル部分は、参照によりその全体において全ての目的のために本明細書に組み込まれた、米国出願公開第ＵＳ２０１２０３０１４００Ａ１号において記載された部分である。

【0115】

複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、式：
Ｘ０－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｘ１２（Ｉ）
のペプチド部分を含む。式（Ｉ）において、Ｘ０は、Ｓｅｒ又はヌルである。Ｘ１は、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、β－アラニン、ジアミノプロピオン酸、β－アジドアラニン又はヌルである。Ｘ２は、Ｇｌｎ又はヌルである。Ｘ３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、β，β’－ジフェニル－Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、２－ブロモ－Ｌ－フェニルアラニン、３－ブロモ－Ｌ－フェニルアラニン、４－ブロモ－Ｌ－フェニルアラニン、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、修飾Ｐｈｅ、水和性のカルボニル含有残基又はボロン酸含有残基である。Ｘ４は、Ａｓｐ又はＡｓｎである。Ｘ５は、Ｌｅｕ、β，β’－ジフェニル－Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、フェニルアラニン、トリプトファン又はチロシンの非天然類似体、水和性のカルボニル含有残基又はボロン酸含有残基である。Ｘ６は、Ｃｙｓ又はＳｅｒである。Ｘ７は、Ｃｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒである。Ｘ８は、保護Ａｒｇ、Ａｒｇ又はＡｌａである。Ｘ９は、Ｃｙｓ、Ａｒｇ又はＡｌａである。Ｘ１０は、Ｌｅｕ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、β，β’－ジフェニル－Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ；フェニルアラニン、トリプトファン又はチロシンの非天然類似体、水和性のカルボニル含有残基又はボロン酸含有残基である。Ｘ１１は、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ又はＡｒｇである。Ｘ１２は、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、７－アミノヘプタン酸、β－アラニン、ジアミノプロピオン酸、プロパルギルグリシン、イソアスパラギン酸又はヌルである。Ｘ１とＸ１２とは、任意選択的に、互いに接続されて、環状ペプチジル部分を形成する。

【0116】

複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、式：
Ｘ０－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｘ１２（Ｉ）
のペプチド部分を含む。式（Ｉ）において、Ｘ０は、Ｓｅｒ又はヌルである。Ｘ１は、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、β－アラニン又はヌルである。Ｘ２は、Ｇｌｎ又はヌルである。Ｘ３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ａｓｎ又はＧｌｎである。Ｘ４は、Ａｓｐ又はＡｓｎである。Ｘ５は、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、トリプトファン又はチロシンである。Ｘ６は、Ｃｙｓ又はＳｅｒである。Ｘ７は、Ｃｙｓ、Ｔｈｒ又はＳｅｒである。Ｘ８は、Ａｒｇ又はＡｌａである。Ｘ９は、Ｃｙｓ、Ａｒｇ又はＡｌａである。Ｘ１０は、Ｌｅｕ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、トリプトファン又はチロシンである。Ｘ１１は、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ又はＡｒｇである。Ｘ１２は、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ又はヌルである。Ｘ１とＸ１２とは、任意選択的に、互いに接続されて、環状ペプチジル部分を形成する。

【0117】

複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、配列番号３２の配列を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、配列番号３２の配列を有する。複数の実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３７の配列を有するシグナル伝達ペプチドをさらに含む。複数の実施形態において、シグナル伝達ペプチドは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインのＮ末端に結合している。

【0118】

本明細書において提供される「非ＣＤＲ結合性部位」という用語は、抗原結合性ドメイン（例えば、抗体のＦａｂドメイン、抗体変異体又はこれらの断片）の結合性部位であって、抗体の重鎖のＣＤＲ残基及び軽鎖のＣＤＲ残基を含まない結合性部位を指す。「非ＣＤＲペプチド結合性部位」とは、本明細書において提供される組換えタンパク質の、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインに、非共有結合によって結合することが可能である、抗原結合性ドメインの領域である。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、フレームワーク領域のアミノ酸残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、重鎖又は軽鎖のＦＲ残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、重鎖及び軽鎖のＦＲ残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、Ｋａｂａｔによる８３位に対応する位置における残基、Ｋａｂａｔによる３０位に対応する位置における残基又はＫａｂａｔによる５２位に対応する位置における残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、Ｋａｂａｔによる４０位に対応する位置における残基、Ｋａｂａｔによる４１位に対応する位置における残基、Ｋａｂａｔによる３０位に対応する位置における残基、Ｋａｂａｔによる５２位に対応する位置における残基、Ｋａｂａｔによる８３位に対応する位置における残基又はＫａｂａｔによる８５位に対応する位置における残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、Ｋａｂａｔによる４０位に対応する位置における残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、Ｋａｂａｔによる４１位に対応する位置における残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、Ｋａｂａｔによる３０位に対応する位置における残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、Ｋａｂａｔによる５２位に対応する位置における残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、Ｋａｂａｔによる８３位に対応する位置における残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、Ｋａｂａｔによる８５位に対応する位置における残基を含む。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位を形成する残基は、参照によりその全体において全ての目的のために本明細書に組み込まれた、米国出願公開第ＵＳ２０１２０３０１４００Ａ１号において記載された残基である。

【0119】

本明細書において提供される非ＣＤＲ結合性部位はまた、「メディトープ結合性部位」とも称されうる。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを介して、非ＣＤＲ結合性部位に結合する組換えタンパク質は、抗原結合性ドメインの、エピトープへの結合に影響を与えない（例えば、これに測定可能な影響を与えない）。言い換えれば、複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位の占有は、抗原への結合に影響を及ぼさない。複数の実施形態において、非ＣＤＲ結合性部位は、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン（例えば、メディトープ）と非共有結合によって相互作用する。非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン（例えば、メディトープ）と相互作用することが可能なアミノ酸残基は、抗体の部分、Ｆａｂ、抗体の変異体又はこれらの任意の断片を形成しうる。非ＣＤＲ結合性部位は、任意の適切な抗体、変異体又はこれらの断片に操作され、これにより、非ＣＤＲ結合性部位を伴う抗原結合性ドメインを形成しうる。本明細書において、非ＣＤＲ結合性部位を含む抗原結合性ドメインはまた、「メディトープ対応抗体」、「メディトープ対応ドメイン」又は「メディトープ対応抗体領域」とも称される。

【0120】

本明細書において提供される「抗原結合性ドメイン」とは、抗原（エピトープ）に結合する、抗体、変異体又はこれらの断片の領域である。本明細書において記載される通り、抗原結合性ドメインは一般に、重鎖及び軽鎖の各々の、１つの定常ドメイン及び１つの可変ドメイン（それぞれ、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１）から構成される。パラトープ又は抗原結合性部位は、抗原結合性ドメインのＮ末端上に形成される。抗原結合性ドメインのうちの、２つの可変ドメインは、典型的に、抗原上のエピトープに結合する。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、抗体の一部を形成する。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、治療用抗体の一部を形成する。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、Ｆａｂの一部を形成する。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、Ｆａｂである。

【0121】

複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、重鎖定常領域（ＣＨ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。複数の実施形態において、重鎖定常領域（ＣＨ）は、抗体の重鎖の定常領域又はこの断片である。複数の実施形態において、軽鎖定常領域（ＣＬ）は、抗体の軽鎖の定常領域又はこの断片である。複数の実施形態において、重鎖定常領域（ＣＨ）は、Ｆａｂの定常領域である。複数の実施形態において、軽鎖定常領域（ＣＬ）は、Ｆａｂの軽鎖の定常領域である。複数の実施形態において、重鎖定常領域（ＣＨ）は、Ｆ（ａｂ）’２二量体の定常領域である。複数の実施形態において、軽鎖定常領域（ＣＬ）は、Ｆ（ａｂ）’２二量体の軽鎖の定常領域である。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、Ｆｃドメインを含む。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、ヒト化抗原結合性ドメインである。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、ヒト化マウス抗原結合性ドメインである。

【0122】

複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、ヒト化リツキシマブメディトープ対応ドメインである。

【0123】

複数の実施形態において、その実施形態を含む本明細書において提供される抗原結合性ドメインは、抗原結合性について、例えば、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、アルツモマブペンテテート、アナツモマブ、アナツモマブマフェナトクス、アルシツモマブ、アチリズマブ、バシリキシマブ、ベクツモマブ、エクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、カルトリズマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エタラシズマブ、エルツマキソマブ、ファノレソマブ、Ｆｂｔａ０５、フォントリズマブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、メポリズマブ、ムロモナブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナタリズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、オレゴボマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、サツモマブ、スレソマブ、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、Ｔｒｂｓ０７、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ及び／若しくはブロダルマブ並びに／又はアンルキンズマブ、バピネウズマブ、ダロツズマブ、デムシズマブ、ガニツマブ、イノツズマブ、マブリリムマブ、モキセツモマブパスドトクス、リロツムマブ、シファリムマブ、タネズマブ、トラロキヌマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、ハイブリドーマ１０Ｂ５により作製された抗体（Ｅｄｅｌｓｏｎ及びＵｎａｎｕｅ、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００年８月、１２（４）：４２５～３１を参照されたい。）、Ｂ６Ｈ１２．２（ａｂｃａｍ）又は他の抗ＣＤ４７抗体（Ｃｈａｏら、Ｃｅｌｌ、１４２、６９９～７１３、２０１０年９月３日を参照されたい）など、任意の市販される抗体を含む、１つ以上の公知の抗体の、重鎖ＣＤＲ１、２及び／若しくは３並びに／又は軽鎖ＣＤＲ１、２及び／若しくは３を含む、１つ、これを超える、又は全てのＣＤＲ（又はＣＤＲに対する、少なくとも、又は約７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８若しくは９９％の同一性を含むＣＤＲ）と同じ抗原又はエピトープと競合する、これらに特異的に結合する、かつ／又はこれらを含有する。

【0124】

複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、ＣＡ－１２５、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体、ＴＮＦアルファ、ＣＤ５２、ＴＡＧ－７２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、インターロイキン６受容体（ＩＬ－６Ｒ）、ＩＬ－２、インターロイキン２受容体ａ鎖（ＣＤ２５）、ＣＤ２２、Ｂ細胞活性化因子、インターロイキン５受容体（ＣＤ１２５）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ａ、ＣＤ３０、ＩＬ－１ベータ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ３、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、ＭＵＣ１、ヒトインターロイキン２受容体、Ｔａｃ、ＲＡＮＫリガンド、補体タンパク質、例えば、Ｃ５、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ１１ａ、例えば、ヒトＣＤ１１ａ、インテグリン、例えば、アルファ－ｖベータ－３インテグリン、ビトロネクチン受容体アルファｖベータ３インテグリン、ＨＥＲ２、ｎｅｕ、ＣＤ３、ＣＤ１５、ＣＤ２０（小型ループ及び／又は大型ループ）、インターフェロンガンマ、ＣＤ３３、ＣＡ－ＩＸ、ＴＮＦアルファ、ＣＴＬＡ－４、癌胎児性抗原、ＩＬ－５、ＣＤ３イプシロン、ＣＡＭ、アルファ－４－インテグリン、ＩｇＥ、例えば、ＩｇＥ Ｆｃ領域、ＲＳＶ抗原、例えば、ＲＳＶ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）のＦタンパク質、ＴＡＧ－７２、ＮＣＡ－９０（顆粒球抗原）、ＩＬ－６、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１７、ＣＴＡＡ１６．８８、ＩＬ１３、インターロイキン１ベータ、ベータ－アミロイド、ＩＧＦ－１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体のアルファサブユニット、肝細胞成長因子、ＩＦＮアルファ、神経成長因子、ＩＬ－１３、ＣＤ３２６、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１、別称：ＣＤ２７４、Ｂ７－Ｈ１）、ＣＤ４７及びＣＤ１３７からなる群から選択された抗原に特異的に結合する。

【0125】

複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、抗ＣＤ１９タンパク質、抗ＣＤ２０タンパク質、抗ＣＤ２２タンパク質、抗ＣＤ３０タンパク質、抗ＣＤ３３タンパク質、抗ＣＤ４４ｖ６／７／８タンパク質、抗ＣＤ１２３タンパク質、抗ＣＥＡタンパク質、抗ＥＧＰ－２タンパク質、抗ＥＧＰ－４０タンパク質、抗ｅｒｂ－Ｂ２タンパク質、抗ｅｒｂ－Ｂ２，３，４タンパク質、抗ＦＢＰタンパク質、抗胎児型アセチルコリン受容体タンパク質、抗ＧＤ２タンパク質、抗ＧＤ３タンパク質、抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕタンパク質、抗ＩＬ－１３Ｒ－ａ２タンパク質、抗ＫＤＲタンパク質、抗ｋ－軽鎖タンパク質、抗ＬｅＹタンパク質、抗Ｌ１細胞接着分子タンパク質、抗ＭＡＧＥ－Ａ１タンパク質、抗メソテリンタンパク質、抗マウスＣＭＶ感染細胞タンパク質、抗ＭＵＣ２タンパク質、抗ＮＫＧＤ２タンパク質、抗、癌胎児性抗原タンパク質、抗ＰＣＳＡタンパク質、抗ＰＳＭＡタンパク質、抗ＴＡＡ（ｍＡｂ ＩｇＥによりターゲティングされた）タンパク質、抗ＥＧＦＲタンパク質、抗ＴＡＧ－７２タンパク質又は抗ＶＥＧＦ－７２タンパク質である。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、セツキシマブではない。

【0126】

非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインへの、非共有結合による結合に加えて、抗原結合性ドメインは、治療用部分又はイメージング部分若しくは検出用部分を含むように修飾（例えば、遺伝子修飾又は化学修飾）されうる。したがって、複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、治療用部分又は検出用部分を含む。

【0127】

本明細書において提供される「治療用部分」という用語は、その明白な通常の意味に従い使用され、それを必要とする対象に施されると、治療利益（例えば、処置される基礎障害の防止、根絶、改善）をもたらす一価化合物を指す。本明細書において提供される治療用部分は、限定せずに述べると、ペプチド、タンパク質、核酸、核酸類似体、低分子、抗体、ナノボディー、酵素、プロドラッグ、リシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシンＤ、ジフテリア毒素、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン及びグルココルチコイドを含むがこれらに限定されない細胞傷害剤（例えば、毒素）を含みうる。複数の実施形態において、治療用部分は、本明細書において記載される、抗がん剤又は化学療法剤である。複数の実施形態において、治療用部分は、核酸部分、ペプチド部分又は低分子薬物部分である。複数の実施形態において、治療用部分は、核酸部分である。複数の実施形態において、治療用部分は、抗体部分である。複数の実施形態において、治療用部分は、ペプチド部分である。複数の実施形態において、治療用部分は、低分子薬物部分である。複数の実施形態において、治療用部分は、ヌクレアーゼである。複数の実施形態において、治療用部分は、免疫刺激剤である。複数の実施形態において、治療用部分は、毒素である。複数の実施形態において、治療用部分は、ヌクレアーゼである。複数の実施形態において、治療用部分は、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）である。複数の実施形態において、治療用部分は、非天然アミノ酸を含む。複数の実施形態において、治療用部分は、ｓｉＲＮＡを含む。複数の実施形態において、治療用部分は、ｓｉＲＮＡである。複数の実施形態において、治療用部分は、アンチセンス核酸を含む。複数の実施形態において、治療用部分は、アンチセンス核酸である。

【0128】

本明細書において提供される「イメージング部分又は検出用部分」は、分光的手段、光化学的手段、生体化学的手段、免疫化学的手段、化学的手段又は他の物理的手段により検出可能な一価化合物である。複数の実施形態において、イメージング部分は、ペプチド化合物に共有結合によって接合している。例示的なイメージング部分は、限定せずに述べると、^３２Ｐ、放射性核種、ポジトロン放射性同位体、蛍光色素、フルオロフォア、抗体、生体発光分子、化学発光分子、光反応性分子、金属、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡにおいて、一般に使用される）、磁気造影剤、量子ドット、ナノ粒子、ビオチン、ジゴキシゲニン、ハプテン及びタンパク質又は、例えば、放射性標識を、標的ペプチドと特異的に反応性である、ペプチド又は抗体に組み込むことにより検出可能とされうる他の実体である。抗体を部分とコンジュゲートさせるための、当技術分野において公知の任意の方法であって、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｑｕｅｎｉｑｕｅｓ」、１９９６、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏにおいて記載された方法を使用する方法が利用されうる。例示的なフルオロフォアは、フルオレセイン、ローダミン、ＧＦＰ、クマリン、ＦＩＴＣ、ＡＬＥＸＡ ｆｌｕｏｒ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、ＢＯＤＩＰＹ及びシアニン色素を含む。例示的な放射性核種は、フッ素１８、ガリウム６８及び銅６４を含む。例示的な磁気造影剤は、ガドリニウム、酸化鉄及び鉄－白金合金及びマンガンを含む。複数の実施形態において、イメージング部分は、生体発光分子である。複数の実施形態において、イメージング部分は、光反応性分子である。複数の実施形態において、イメージング部分は、金属である。複数の実施形態において、イメージング部分は、ナノ粒子である。

【0129】

本明細書において提供される組換えタンパク質は、それらの全てが、１つの連続的な単鎖ポリペプチドの部分を形成する、複数のドメイン（例えば、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、スペーサー領域、細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン）を含む。

【0130】

本明細書において提供される「細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン」とは、抗原の、その実施形態を含む本明細書において提供される抗体領域への結合に応答して、一次シグナル伝達をもたらすことが可能なアミノ酸配列を含む。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのシグナル伝達は、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを発現させるＴ細胞の活性化をもたらす。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのシグナル伝達は、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを発現させるＴ細胞の増殖（細胞分裂）をもたらす。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのシグナル伝達は、前記Ｔ細胞による、当技術分野において、活性化Ｔ細胞（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＤ６９）に特徴的であることが公知であるタンパク質の発現をもたらす。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３複合体のゼータ鎖のシグナル伝達ドメインを含む。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである。

【0131】

複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、配列番号３４の配列を含む。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、配列番号３４の配列である。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、配列番号１１の配列を含む。複数の実施形態において、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、配列番号１１の配列である。

【0132】

本明細書において提供される組換えタンパク質について、膜貫通ドメインは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインと細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとの間にある。言い換えれば、膜貫通ドメインは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインのＣ末端に直接的に又は間接的に（例えば、スペーサーを介して）接続しており、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのＮ末端に直接的に又は間接的に（例えば、共刺激シグナル伝達ドメインを介して）接続している。

【0133】

本明細書において提供される「膜貫通ドメイン」とは、生体膜のポリペプチド形成部分を指す。本明細書において提供される膜貫通ドメインは、膜の一方の側から膜の他方の側に、生体膜（例えば、細胞膜）にわたることが可能である。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、細胞膜の細胞内側から細胞外側にわたる。膜貫通ドメインは、その実施形態を含む本明細書において提供されるタンパク質を生体膜（例えば、Ｔ細胞の細胞膜）内にアンカリングする非極性の疎水性残基を含みうる。その実施形態を含む本明細書において提供されるタンパク質をアンカリングすることが可能な任意の膜貫通ドメインが想定される。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｌ－セレクチンである。本明細書において提供される「Ｌ－セレクチン」という用語は、ＣＤ６２Ｌとしてもまた公知のＬ－セレクチンタンパク質又はＬ－セレクチン活性（例えば、Ｌ－セレクチンと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。複数の実施形態において、変異体又は相同体は、天然のＬ－セレクチンポリペプチドと比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態において、Ｌ－セレクチンは、ＮＣＢＩ配列参照番号ＧＩ：２６２２０６３１５によって識別されるタンパク質、その相同体又は機能的断片である。膜貫通ドメインの非限定例は、ＣＤ８α、ＣＤ４又はＣＤ３ゼータの膜貫通ドメインを含む。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン又はＣＤ３ゼータ膜貫通ドメインである。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。

【0134】

本明細書において提供される「ＣＤ２８膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン、又はＣＤ２８の膜貫通ドメイン活性（例えば、ＣＤ２８膜貫通ドメインと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。一部の態様において、変異体又は相同体は、天然のＣＤ２８膜貫通ドメインポリペプチドと比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。複数の実施形態において、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１８又は配列番号２によって識別されるタンパク質、その変異体、相同体又は機能的断片である。複数の実施形態において、ＣＤ２８は、ＮＣＢＩ配列参照番号ＧＩ：３４０５４５５０６によって識別されるタンパク質、その相同体又は機能的断片である。

【0135】

複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１８によって識別されるタンパク質ドメイン、その相同体又は機能的断片である。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１８によって識別されるタンパク質ドメイン、その相同体又は機能的断片を含む。

【0136】

同様に、本明細書において提供される「ＣＤ８α膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ８αの膜貫通ドメイン又はＣＤ８αの膜貫通ドメイン活性（例えば、ＣＤ８α膜貫通ドメインと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。一部の態様において、変異体又は相同体は、天然のＣＤ８α膜貫通ドメインポリペプチドと比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。

【0137】

本明細書において提供される「ＣＤ４膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ４の膜貫通ドメイン又はＣＤ４の膜貫通ドメイン活性（例えば、ＣＤ４膜貫通ドメインと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。一部の態様において、変異体又は相同体は、天然のＣＤ４膜貫通ドメインポリペプチドと比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。

【0138】

本明細書において提供される「ＣＤ３ゼータ膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ３ゼータの膜貫通ドメイン又はＣＤ３ゼータの膜貫通ドメイン活性（例えば、ＣＤ３ゼータ膜貫通ドメインと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％以内の活性）を維持するその変異体若しくは相同体の組換え形態又は天然形態のうちのいずれかを含む。一部の態様において、変異体又は相同体は、天然のＣＤ３ゼータ膜貫通ドメインポリペプチドと比較して、全配列又は配列の部分（例えば、５０、１００、１５０又は２００連続アミノ酸の部分）にわたり、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。

【0139】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを膜貫通ドメインに接続しているスペーサー領域を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、膜貫通ドメインと非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインとの間にある。言い換えれば、スペーサー領域は、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインのＣ末端に直接的に又は間接的に（例えば、ペプチドリンカーを介して）接続しており、膜貫通ドメインのＮ末端に直接的に又は間接的に（例えば、別のペプチドリンカーを介して）接続している。こうして、本明細書において提供される組換えタンパク質は、第１のペプチドリンカー及び第２のペプチドリンカーを含むことが可能であり、第１のペプチドリンカーは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインのＣ末端をスペーサー領域のＮ末端に接続しており、第２のペプチドリンカーは、スペーサー領域のＣ末端を膜貫通ドメインのＮ末端に接続している。

【0140】

本明細書において提供される「スペーサー領域」は、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを、膜貫通ドメインと接続するポリペプチドである。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインの、抗原結合性ドメイン（例えば、Ｆａｂ）に対する結合アフィニティーは、スペーサー領域の非存在と比較して増大している。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインと抗原結合性ドメイン（例えば、Ｆａｂ）との間の立体障害は、スペーサー領域の存在下において減殺される。

【0141】

複数の実施形態において、スペーサー領域は、Ｆｃ領域を含む。本明細書において提供される組成物及び方法のために想定されたスペーサー領域の例は、限定せずに述べると、免疫グロブリン分子又はこれらの断片（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）及びＦｃ受容体への結合に影響を及ぼす突然変異を含む、免疫グロブリン分子又はこれらの断片（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ４）の断片であり、この場合、前記断片は、ＣＨ２ドメインの欠失を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ４）の断片であり、この場合、前記断片は、ＣＨ３領域を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、ＣＨ３領域である。複数の実施形態において、スペーサー領域は、ＣＨ３領域を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、ＣＨ２領域である。複数の実施形態において、スペーサー領域は、ＣＨ２領域を含む。スペーサー領域は、ペプチドリンカーでありうる。複数の実施形態において、スペーサー領域は、セリン－グリシンリンカーである。複数の実施形態において、スペーサー領域は、配列ＧＧＳＧを有する。複数の実施形態において、スペーサー領域は、配列ＧＧＳＧを含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、配列ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２４）を有する。複数の実施形態において、スペーサー領域は、配列ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２４）を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、少なくとも４アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、スペーサー領域は、約４アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、スペーサー領域は、４～２５０アミノ酸の間の長さである。スペーサー領域は、本明細書において提供されるタンパク質のインビボにおける（例えば、血漿中）半減期を延長することが可能な残基を含みうる。複数の実施形態において、スペーサー領域は、１０アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、スペーサー領域は、２２９アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、スペーサー領域は、ＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号３１）である。複数の実施形態において、スペーサー領域は、配列ＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号３１）を含む。スペーサー領域は、「ＰＡＳ化」されうる。「ＰＡＳ化された」又は「ＰＡＳ化」という用語は、その一般的な意味において使用され、それらのプロリン、アラニン及びセリンの高含量に起因して、高度に可溶性の生物学的ポリマーを形成するアミノ酸配列を指す。したがって、複数の実施形態において、スペーサー領域は、組み合わされた約２００のプロリン残基、アラニン残基及びセリン残基を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、組み合わされた、約１０～約２００の、プロリン残基、アラニン残基及びセリン残基を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、親水性残基を含む。複数の実施形態において、組換えタンパク質は、スペーサー領域を含まない。

【0142】

複数の実施形態において、スペーサー領域は、配列番号３３の配列を含む。複数の実施形態において、スペーサー領域は、配列番号３３の配列を有する。

【0143】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインをスペーサー領域に接続しているペプチドリンカーを含む。複数の実施形態において、ペプチドリンカーは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインとスペーサー領域との間にある。言い換えれば、ペプチドリンカーは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインのＣ末端に直接的に又は間接的に（例えば、ペプチドリンカーを介して）接続しており、スペーサー領域のＮ末端に直接的に又は間接的に（例えば、別のペプチドリンカーを介して）接続している。本明細書において提供されるペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～５０アミノ酸の長さでありうる。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～４５アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～４０アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～３５アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～３０アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～２５アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～２０アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～１５アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５～１０アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー又は第２のペプチドリンカー）は、１８アミノ酸の長さである。複数の実施形態において、ペプチドリンカーは、配列番号２５の配列を有する。複数の実施形態において、ペプチドリンカーは、配列番号２５の配列を含む。複数の実施形態において、ペプチドリンカーは、配列ＳＡＰＡＳＳＡＳＡＰＳＡＡＳＡＰＡＧ（配列番号２６）である。

【0144】

複数の実施形態において、ペプチドリンカーは、第１のペプチドリンカーであり、組換えタンパク質は、第２のペプチドリンカーを含み、第２のペプチドリンカーは、スペーサー領域を膜貫通ドメインと接続する。したがって、複数の実施形態において、第２のペプチドリンカーは、スペーサー領域と膜貫通ドメインとの間にある。言い換えれば、第１のペプチドリンカーは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインのＣ末端に接続しており、スペーサー領域のＮ末端に接続しており；第２のペプチドリンカーは、スペーサー領域のＣ末端に接続し、膜貫通ドメインのＮ末端に接続している。

【0145】

複数の実施形態において、本明細書において提供される組換えタンパク質は、膜貫通ドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している細胞内共刺激シグナル伝達ドメインを含む。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインと細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとの間にある。言い換えれば、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインのＣ末端に直接的に又は間接的に（例えば、ペプチドリンカーを介して）接続しており、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのＮ末端に直接的に又は間接的に（例えば、別のペプチドリンカーを介して）接続している。

【0146】

本明細書において提供される「細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン」とは、抗原の、その実施形態を含む本明細書において提供される抗体領域への結合に応答して、共刺激シグナル伝達をもたらすことが可能なアミノ酸配列を含む。複数の実施形態において、共刺激シグナル伝達ドメインのシグナル伝達は、サイトカインの産生及びサイトカインを発現させるＴ細胞の増殖をもたらす。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン又はＯＸ－４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメインを含む。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインを含む。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＯＸ－４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン又はこれらの任意の組合せである。

【0147】

配列及び受託番号を含む、例示的な細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、表２に列挙される。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６によって識別されるタンパク質を含む。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６である。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１３である。複数の実施形態において、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１４である。

【0148】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのＣ末端に結合している検出用ドメインを含む。複数の実施形態において、検出用ドメインは、切断型ＣＤ１９（ＣＤ１９ｔ）ドメインである。「ＣＤ１９ｔ」という用語は、細胞内シグナル伝達能を欠く、切断型ＣＤ１９タンパク質を指す。本明細書において使用される、切断型ＣＤ１９は、本明細書において提供される組換えタンパク質を含むＴ細胞を同定する検出用ドメインとして機能する、不活性分子である。複数の実施形態において、検出用ドメインは、配列番号２２の配列を含む。複数の実施形態において、検出用ドメインは、配列番号２２の配列である。

【0149】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを検出用ドメインに接続している自己切断性ペプチジル配列を含む。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルリンカー配列は、Ｔ２Ａ配列又は２Ａ配列である。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジル配列は、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインと検出用ドメインとの間にある。言い換えれば、自己切断性ペプチジル配列は、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのＣ末端に直接的に又は間接的に（例えば、ペプチドリンカーを介して）接続しており、検出用ドメインのＮ末端に直接的に又は間接的に（例えば、別のペプチドリンカーを介して）接続している。

【0150】

複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルリンカーは、配列ＰＶＫＱＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２７）を有する。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルリンカーは、Ａ型ウマ鼻炎ウイルスの配列を有する。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルリンカーは、配列ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２８）を有する。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルは、１型ブタテッショウウイルスの配列を有する。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルは、配列ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２９）を有する。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルリンカーは、トセア・アシグナ（Ｔｏｓｅａ ａｓｉｇｎａ）ウイルスの配列を有する。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルリンカーは、配列ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号３０）を有する。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルリンカーは、配列番号２１の配列を有する。複数の実施形態において、自己切断性ペプチジルリンカーは、配列番号２１の配列である。

【0151】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、細胞の一部を形成する。複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｔ細胞の一部を形成する。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞の細胞膜の一部を形成する。

【0152】

上記において記載した通り、本明細書において提供される組換えタンパク質は、抗原結合性ドメインに結合しうる。その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質のエレメント（例えば、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン）が、互いに共有結合によって結合し、これにより、連続的な単鎖ポリペプチドを形成するのに対し、組換えタンパク質は、抗原結合性ドメインに非共有結合によって結合する。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、抗原結合性ドメインに結合している。複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、抗原結合性ドメインに非共有結合によって結合している。

【0153】

上記において記載した通り、抗原結合性ドメインは、Ｆａｂ、ＩｇＧ又は二特異性抗体でありうる。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、がん抗原に結合することが可能である。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、がん抗原に結合することが可能である。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、がん抗原に非共有結合によって結合することが可能である。複数の実施形態において、がん抗原は、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９又はＣＤ２０である。複数の実施形態において、がん抗原は、細胞の一部を形成する。複数の実施形態において、がん抗原は、細胞の表面上において発現される。複数の実施形態において、細胞は、がん細胞である。複数の実施形態において、がんは、卵巣がん、腎細胞癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、神経芽細胞腫、黒色腫、髄芽腫、肺がん、骨肉腫、神経膠芽腫又は神経膠腫である。

【0154】

本明細書において提供される組成物は、複数（すなわち、１つを超える、少なくとも２つ）の、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質を含みうる。組成物が、１つを超える、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質を含む場合、組換えタンパク質は、本明細書において、第１、第２、第３、第４などの組換えタンパク質と称される。したがって、前記第１、第２、第３、第４などの組換えタンパク質の部分を形成するエレメントは、本明細書において、それぞれ、第１、第２、第３若しくは第４の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、第１、第２、第３若しくは第４の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、第１、第２、第３若しくは第４の膜貫通ドメイン、第１、第２、第３若しくは第４のスペーサー領域又は第１、第２、第３若しくは第４の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインと称される。組成物が、複数の、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質を含む場合、組換えタンパク質は、異なる場合もあり、同じ場合もある。言い換えれば、組換えタンパク質は、同じドメイン又は異なるドメイン（例えば、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、スペーサー領域、細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン）を含む場合もあり、同じ抗原結合性ドメイン又は異なる抗原結合性ドメインに結合することが可能な場合もある。

【0155】

本明細書において提供される組成物が、複数の、本明細書において提供される組換えタンパク質を含む場合、組換えタンパク質は、それらのそれぞれのスペーサー領域の非共有結合による結合を介して、互いと二量体化しうる。例えば、第１の組換えタンパク質は、第２の組換えタンパク質の第２のＣＨ３ドメインに非共有結合によって結合する第１のＣＨ３ドメインを含みうる。したがって、複数の実施形態において、組換えタンパク質は、第１の組換えタンパク質であり、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインであり、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、第１の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインであり、膜貫通ドメインは、第１の膜貫通ドメインであり、スペーサー領域は、第１のスペーサー領域であり、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、第１の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである。

【0156】

複数の実施形態において、第１の組換えタンパク質は、第２の組換えタンパク質に非共有結合によって結合しており、第２の組換えタンパク質は、（ｉ）第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；（ｉｉｉ）第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している第２の膜貫通ドメイン；及び（ｉｖ）第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを第２の膜貫通ドメインに接続しており、第１のスペーサー領域が非共有結合によって結合している、第２のスペーサー領域を含む。複数の実施形態において、第１のスペーサー領域及び第２のスペーサー領域は、第１の重鎖定常３（ＣＨ３）ドメイン及び第２の重鎖定常３（ＣＨ３）ドメインである。

【0157】

複数の実施形態において、第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及び第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、化学的に異なる。複数の実施形態において、第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及び第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、化学的に同じである。

【0158】

複数の実施形態において、第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、第１の抗原結合性ドメインに非共有結合によって結合している。複数の実施形態において、第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、第２の抗原結合性ドメインに非共有結合によって結合している。複数の実施形態において、第１の抗原結合性ドメイン及び第２の抗原結合性ドメインは、化学的に異なる、又は化学的に同じである。複数の実施形態において、第１の抗原結合性ドメイン及び第２の抗原結合性ドメインは、独立に、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである。

【0159】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、配列番号３３のスペーサー領域、配列番号１８のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１３のＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、配列番号３４のＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、配列番号２１の自己切断性ペプチジルリンカー配列及び配列番号２２の検出用ドメインを含む。

【0160】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、配列番号３３のスペーサー領域、配列番号１８のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１４の４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、配列番号３４のＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、配列番号２１の自己切断性ペプチジルリンカー配列及び配列番号２２の検出用ドメインを含む。

【0161】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、配列番号３３のスペーサー領域、配列番号１８のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１３のＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン及び配列番号３４のＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。

【0162】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、配列番号３３のスペーサー領域、配列番号１８のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１４の４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン及び配列番号３４のＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。

【0163】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、配列番号２５のペプチドリンカー、配列番号３３のスペーサー領域、配列番号１８のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１３のＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、配列番号３４のＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、配列番号２１の自己切断性ペプチジルリンカー配列及び配列番号２２の検出用ドメインを含む。

【0164】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、配列番号２５のペプチドリンカー、配列番号３３のスペーサー領域、配列番号１８のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１４の４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、配列番号３４のＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、配列番号２１の自己切断性ペプチジルリンカー配列及び配列番号２２の検出用ドメインを含む。

【0165】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３７のシグナルペプチドを含む。複数の実施形態において、シグナルペプチドは、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインのＮ末端に結合している。

【0166】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、配列番号２５のペプチドリンカー、配列番号３３のスペーサー領域、配列番号１８のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１３のＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン及び配列番号３４のＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。

【0167】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、配列番号２５のペプチドリンカー、配列番号３３のスペーサー領域、配列番号１８のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１４の４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン及び配列番号３４のＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。

【0168】

一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３５の配列を含む。一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３５の配列である。一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３６の配列を含む。一実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３６の配列である。

【0169】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、スペーサー領域、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、自己切断性ペプチジルリンカー配列及び検出用ドメインを含む。

【0170】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、スペーサー領域、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、自己切断性ペプチジルリンカー配列及び検出用ドメインを含む。

【0171】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、スペーサー領域、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。

【0172】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、スペーサー領域、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。

【0173】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、ペプチドリンカー、スペーサー領域、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、自己切断性ペプチジルリンカー配列及び検出用ドメインを含む。

【0174】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、ペプチドリンカー、スペーサー領域、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン、自己切断性ペプチジルリンカー配列及び検出用ドメインを含む。

【0175】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、ペプチドリンカー、スペーサー領域、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。

【0176】

複数の実施形態において、組換えタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン、ペプチドリンカー、スペーサー領域、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。

【0177】

核酸組成物
本明細書において、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質をコードする核酸が提示される。したがって、一態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質をコードする核酸が提示される。別の態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される核酸を含む発現ベクターが提示される。複数の実施形態において、発現ベクターは、レンチウイルス又はオンコレトロウイルスである。複数の実施形態において、発現ベクターは、レンチウイルスである。複数の実施形態において、発現ベクターは、オンコレトロウイルスである。

【0178】

細胞組成物
本明細書において提供される組換えタンパク質及び核酸は、細胞の一部を形成しうる（すなわち、細胞に含まれ、かつ／又は発現される）。したがって、ある態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される発現ベクターを含むＴリンパ球が提供される。

【0179】

別の態様において、その実施形態を含む本明細書において提供される組換えタンパク質を含むＴリンパ球が提供される。本明細書において提供される組換えタンパク質の一部は、それが発現される細胞の細胞膜の一部を形成しうる。膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞の、膜の一方の側から膜の他方の側に、細胞膜にわたることが可能である。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、細胞膜の細胞内側から細胞外側にわたる。したがって、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及びスペーサー領域が、細胞膜の細胞外側に配置されるのに対し、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、細胞の細胞内側に配置される。複数の実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔリンパ球の細胞膜内にある。複数の実施形態において、Ｔリンパ球は、自家Ｔリンパ球である。複数の実施形態において、Ｔリンパ球は、異種Ｔリンパ球である。

【0180】

したがって、複数の実施形態において、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、抗原結合性ドメインに結合している。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、Ｆａｂ、ＩｇＧ又は二特異性抗体である。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、がん抗原に結合している。

【0181】

抗原結合性ドメインは、第１のＦａｂドメイン及び第２のＦａｂドメインを含む抗体であることが可能であり、組換えタンパク質は、第１のＦａｂドメインの非ＣＤＲ結合性部位に結合することが可能であり、第２のＦａｂドメインは、がん抗原に結合しうる。複数の実施形態において、組換えタンパク質は、第１のＦａｂドメインの非ＣＤＲ結合性部位に結合し、第１のＦａｂドメインは、がん抗原に結合する。複数の実施形態において、組換えタンパク質は、第１のＦａｂドメインの非ＣＤＲ結合性部位に結合し、第１のＦａｂドメインは、第１のがん抗原に結合し、第２のＦａｂドメインは、第２のがん抗原に結合する。複数の実施形態において、第１の組換えタンパク質は、第１のＦａｂドメインの非ＣＤＲ結合性部位に結合し、第２の組換えタンパク質は、第２のＦａｂドメインの非ＣＤＲ結合性部位に結合する。さらなる実施形態において、第１のＦａｂドメインは、第１のがん抗原に結合し、第２のＦａｂドメインは、第２のがん抗原に結合する。

【0182】

複数の実施形態において、がん抗原は、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９又はＣＤ２０である。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、がん抗原結合性ドメインである。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである。

【0183】

処置法
その実施形態を含む本明細書において提供される組成物は、とりわけ、がんなどの疾患に効果的な処置をもたらすのに有用である。したがって、ある態様において、がんを処置する方法が提供される。方法は、それを必要とする対象に、有効量の、その実施形態を含む本明細書において提供されるＴリンパ球及び有効量の、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインに結合することが可能な抗原結合性ドメインを投与するステップを含み、抗原結合性ドメインは、がん抗原結合性ドメインである。

【0184】

複数の実施形態において、Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインは、同時に又は逐次的に投与される。複数の実施形態において、Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインは、同時に投与される。

【0185】

Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインは、共時的に（例えば、混合物として）、個別であるが同時に（例えば、個別の静脈ラインを介して）又は逐次的に（例えば、１つの薬剤が、まず投与されるのに続き、第２の薬剤の投与がなされる）、組み合わせて投与されうる。したがって、「組合せ」という用語は、Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインの、共時的投与、同時的投与又は逐次的投与を指すのに使用される。Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインが、逐次的に投与される実施形態において、Ｔリンパ球は第１の時点で投与され、抗原結合性ドメインは第２の時点で投与され、第１の時点は第２の時点に先行する。処置のコースは、対象の特定の特徴及び選択された処置種類に応じる、個体ベースにおいて、最も良く決定される。本明細書において開示された処置などの処置は、毎日、１日２回、隔週、毎月又は、治療的に有効である、任意の適用可能なベースにおいて、対象に投与されうる。処置は、単独において、又は本明細書において開示された、又は当技術分野において公知である、他の任意の処置と組み合わせて投与されうる。さらなる処置は、第１の処置と同時に投与される場合もあり、異なる時点で投与される場合もあり、全く異なる治療スケジュール（例えば、第１の処置は、毎日の処置でありうるのに対し、さらなる処置は、毎週の処置である）により投与される場合もある。したがって、複数の実施形態において、Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインは、同時に又は逐次的に投与される。

【0186】

複数の実施形態において、Ｔリンパ球は第１の時点で投与され、抗原結合性ドメインは第２の時点で投与され、第１の時点は第２の時点に先行する。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約１２０、９０、６０、５０、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１０、１１、９、８、７、６、５、４、３、２又は１日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約１２０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約９０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約６０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約５０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約４０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約３０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約２０日未満以内である。

【0187】

複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは第１の時点で投与され、Ｔリンパ球は第２の時点で投与され、第１の時点は第２の時点に先行する。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約１２０、９０、６０、５０、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１０、１１、９、８、７、６、５、４、３、２又は１日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約１２０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約９０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約６０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約５０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約４０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約３０日未満以内である。複数の実施形態において、第２の時点は、第１の時点から約２０日未満以内である。

【0188】

複数の実施形態において、Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインは、投与する前に混合される。複数の実施形態において、方法は、（ｉ）投与する前に、インビトロで非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを抗原結合性ドメインに結合させ、これによりＴリンパ球－組換えタンパク質複合体を形成するステップ；及び（ｉｉ）Ｔリンパ球－組換えタンパク質複合体を対象に投与し、これにより対象におけるがんを処置するステップを含む。

【0189】

複数の実施形態において、Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインは、逐次的に投与される。複数の実施形態において、Ｔリンパ球は第１の時点で投与され、前記抗原結合性ドメインは第２の時点で投与され、第１の時点は第２の時点に先行する。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは第１の時点で投与され、前記Ｔリンパ球は第２の時点で投与され、第１の時点は第２の時点に先行する。

【0190】

複数の実施形態において、がんは、卵巣がん、腎細胞癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、神経芽細胞腫、黒色腫、髄芽腫、肺がん、骨肉腫、神経膠芽腫又は神経膠腫である。複数の実施形態において、抗原結合性ドメインは、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである。

【0191】

本明細書において使用される、「がん」という用語は、哺乳動物において見出された、がん、新生物又は悪性腫瘍の全ての種類であって、白血病、リンパ腫、黒色腫、神経内分泌腫瘍、癌腫及び肉腫を含む、全ての種類を指す。本明細書において提供される化合物、医薬組成物又は方法により処置されうる、例示的ながんは、リンパ腫、肉腫、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍、子宮頸がん、結腸がん、食道がん、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がん、頭頸部がん、腎臓がん、骨髄腫、甲状腺がん、白血病、前立腺がん、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん、ＥＲ陽性乳がん、ＥＲ陰性乳がん、化学療法耐性乳がん、ハーセプチン耐性乳がん、ＨＥＲ２陽性乳がん、ドキソルビシン耐性乳がん、タモキシフェン耐性乳がん、卵管癌、小葉癌、原発性乳がん、転移性乳がん）、卵巣がん、膵臓がん、肝臓がん（例えば、肝細胞癌）、肺がん（例えば、非小細胞肺癌、扁平上皮肺癌、腺癌、大細胞肺癌、小細胞肺癌、カルチノイド、肉腫）、多形性神経膠芽腫、神経膠腫、黒色腫、前立腺がん、去勢抵抗性前立腺がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫、卵巣がん、肺がん、扁平上皮がん（例えば、頭部、頸部又は食道）、結腸直腸がん、白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫又は多発性骨髄腫を含む。さらなる例は、甲状腺がん、内分泌系がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、頭頸部がん、食道がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、黒色腫、中皮腫、卵巣がん、肉腫、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん、子宮がん又は髄芽腫、ホジキン疾患、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、多形性神経膠芽腫、卵巣がん、横紋筋肉腫、原発性血小板減少症、原発性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、がん、悪性膵島細胞腫、悪性カルチノイド、膀胱がん、前悪性皮膚病変、精巣がん、リンパ腫、甲状腺がん、神経芽細胞腫、食道がん、尿生殖路がん、悪性高カルシウム血症、子宮内膜がん、副腎皮質がん、膵内分泌腺又は膵外分泌腺の新生物、甲状腺髄様がん、甲状腺髄様癌、黒色腫、結腸直腸がん、甲状腺乳頭がん、肝細胞癌、乳首のパジェット病、葉状腫瘍、小葉癌、乳管癌、膵星細胞がん、肝星細胞がん又は前立腺がんを含む。

【0192】

「白血病」という用語は、広く、造血器の進行性の悪性疾患を指し、一般に、血液中及び骨髄中の、白血球及びそれらの前駆体の、異常な増殖及び発生により特徴付けられる。白血病は、一般に、（１）疾患の持続時間及び特徴（急性又は慢性）；（２）関与する細胞の種類；骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ））、リンパ性（ｌｙｍｐｈｏｉｄ（ｌｙｍｐｈｏｇｅｎｏｕｓ））又は単球；並びに（３）血中の異常細胞の数の増大又は非増大（白血性又は非白血性（亜白血性）に基づき、臨床的に分類される。本明細書において提供される化合物、医薬組成物又は方法により処置されうる、例示的な白血病は、例えば、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血性白血病、白血性白血病、好塩基球性白血病、芽球性白血病、ウシ白血病、慢性骨髄球性白血病、皮膚白血病、胎児性白血病、好酸球性白血病、グロス白血病、有毛細胞白血病、血芽球性白血病、血球母細胞性白血病、組織球性白血病、幹細胞性白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性（ｌｙｍｐｈａｔｉｃ）白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ性（ｌｙｍｐｈｏｇｅｎｏｕｓ）白血病、リンパ性（ｌｙｍｐｈｏｉｄ）白血病、リンパ肉腫細胞性白血病、マスト細胞性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ型白血病、形質細胞（ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌ）性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性（ｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃ）白血病、前骨髄球性白血病、リーダー細胞性白血病、シリング白血病、幹細胞性白血病、亜白血性白血病又は未分化細胞性白血病を含む。

【0193】

「肉腫」という用語は、一般に、胎児性結合組織様物質から構成された腫瘍を指し、一般に、小線維状物質中又は均質物質中に埋め込まれた、緊密に詰まった細胞から構成される。本明細書において提供される化合物、医薬組成物又は方法により処置されうる肉腫は、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバーネシー肉腫、脂肪肉腫（ａｄｉｐｏｓｅ ｓａｒｃｏｍａ、ｌｉｐｏｓａｒｃｏｍａ）、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維肉腫、ブドウ状肉腫、緑色腫、絨毛癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫、傍骨性肉腫、網状赤血球肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫又は毛細管拡張性肉腫を含む。

【0194】

「黒色腫」という用語は、皮膚及び他の器官の色素細胞性系から生じる腫瘍を意味するように理解される。本明細書において提供される化合物、医薬組成物又は方法により処置されうる黒色腫は、例えば、末端性黒子性黒色腫、無色素性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング－パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、結節型黒色腫、爪下黒色腫又は表在拡大型黒色腫を含む。

【0195】

「癌腫」という用語は、周囲組織に浸潤し、転移をもたらす傾向がある、上皮細胞から構成された、悪性の新たな増殖を指す。本明細書において提供される化合物、医薬組成物又は方法により処置されうる、例示的な癌腫は、例えば、甲状腺髄様癌、家族性甲状腺髄様癌、腺房癌、腺房細胞癌、腺嚢癌、腺様嚢胞癌、腺腫内癌、副腎皮質癌、肺胞上皮癌、肺胞上皮細胞癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底細胞癌、基底細胞型扁平上皮がん、細気管支肺胞上皮癌、細気管支癌、気管支原性癌、脳状癌、胆管細胞癌、絨毛癌、膠様癌腫、面皰癌、子宮体がん、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱上皮癌、円柱上皮細胞癌、腺管癌、乳管癌、緻密癌、胎児性癌、脳様癌、類表皮癌、腺様上皮癌、外向発育癌、潰瘍性癌、線維性癌、ゼラチン状癌、膠様癌、巨細胞癌（ｇｉａｎｔ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、肝様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌腫、ガラス状癌、腎明細胞癌、小児型胎児性癌、上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ）、表皮内癌、上皮内癌（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クロムペッヘル癌、クルチスキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪性癌、小葉癌、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｄｕｌｌａｒｅ、ｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、色素性癌、軟性癌、粘液性癌（ｍｕｃｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｕｃｉｐａｒｕｍ）、粘液細胞癌、粘膜表皮癌、粘膜癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｕｃｏｓｕｓ、ｍｕｃｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液腫状癌、鼻咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌腫、粥状癌腫、腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫性癌、シュナイダー癌、硬性癌、陰嚢癌、印環細胞癌腫、単純癌、小細胞癌、ナス状癌、球状細胞癌腫、紡錘細胞癌腫、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮がん、紐様癌、血管拡張性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃｕｍ、ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔｏｄｅｓ）、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、管状癌、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣状癌又は絨毛癌腫を含む。

【0196】

本明細書において使用される、「転移」、「転移性」及び「転移性がん」という用語は、互換的に使用される場合があり、増殖性疾患又は増殖性障害、例えば、がんの、１つの器官若しくは別の隣接しない器官又は身体部分からの拡散を指す。由来部位、例えば、乳腺において生じるがんは、原発性腫瘍、例えば、原発性乳がんと称される。原発性腫瘍又は由来部位における一部のがん細胞は、局所領域内の、周囲の正常組織を透過し、これらに浸潤する能力並びに／又はリンパ系若しくは血管系の内壁透過し、リンパ系及び血管系を介して、体内の他の部位及び組織に循環する能力を獲得する。原発性腫瘍のがん細胞から形成された、臨床的に検出可能な二次腫瘍は、転移性腫瘍又は続発性腫瘍と称される。がん細胞が転移する場合、転移性腫瘍及びその細胞は、元の腫瘍の細胞と同様であると推測される。したがって、肺がんが、乳腺に転移する場合、乳腺部位における続発性腫瘍は、異常な肺細胞からなり、異常な乳腺細胞からならない。乳腺内の続発性腫瘍は、転移性肺がんと称される。したがって、転移性がんという語句は、対象が、原発性腫瘍を有する、又はこれを有したことがあり、かつ、１つ以上の続発性腫瘍を有する疾患を指す。非転移性がんという語句又は転移性でないがんを伴う対象とは、対象が、原発性腫瘍を有するが、１つ以上の続発性腫瘍を有さない疾患を指す。例えば、転移性肺がんは、原発性肺腫瘍を伴う、又はこの履歴を伴い、１つ以上の続発性腫瘍を、第２の場所又は複数の場所、例えば、乳腺内に伴う対象における疾患を指す。

【0197】

「抗がん剤」は、その明白な通常の意味に従い使用され、抗新生物特性又は細胞の成長又は増殖を阻害する能力を有する組成物（例えば、化合物、薬物、アンタゴニスト、阻害剤、モジュレーター）を指す。複数の実施形態において、抗がん剤は、化学療法剤である。複数の実施形態において、抗がん剤は、がんを処置する方法において有用性を有すると、本明細書において同定された薬剤である。複数の実施形態において、抗がん剤は、がんの処置について、ＦＤＡ又は米国以外の国の同様の規制機関により承認された薬剤である。

【0198】

疾患（例えば、がん（例えば、前立腺がん、腎臓がん、転移性がん、黒色腫、去勢抵抗性前立腺がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫、卵巣がん、肺がん、扁平上皮がん（例えば、頭部、頸部又は食道）、結腸直腸がん、白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫又は多発性骨髄腫））と関連した物質又は物質の活性若しくは機能の文脈における、「関連した」又は「～と関連した」という用語は、疾患（例えば、肺がん、卵巣がん、骨肉腫、膀胱がん、子宮頸がん、肝臓がん、腎臓がん、皮膚がん（例えば、メルケル細胞癌）、精巣がん、白血病、リンパ腫、頭頸部がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、黒色腫、乳がん、神経芽細胞腫）が、物質又は物質の活性若しくは機能により、（全体的に、又は部分的に）引き起こされる、又は疾患の症状が、（全体的に、又は部分的に）引き起こされることを意味する。

【0199】

「化学療法の」又は「化学療法剤」は、その明白な通常の意味に従い使用され、抗新生物特性又は細胞の成長又は増殖を阻害する能力を有する、化学的組成物又は化合物を指す。

【0200】

本明細書において使用される「異常」という用語は、正常と異なることを指す。酵素活性について記載するのに使用される場合において、異常とは、正常対照又は正常な非罹患対照試料の平均を超える、又はこれ未満の活性を指す。異常な活性とは、疾患をもたらす量の活性を指す場合があり、この場合、異常な活性を、正常量又は非疾患関連量に戻すこと（例えば、本明細書において記載される方法を使用することにより）は、疾患又は１つ以上の疾患症状の軽減をもたらす。

【実施例0201】

ＣＡＲ Ｔ細胞は、液性腫瘍を処置するのに、目覚ましい成功を裏付けており、充実性腫瘍及び他の疾患を処置するために、急速に拡張されつつある。現行の手法は、単一の抗原をターゲティングするＣＡＲ Ｔ細胞を創出することである。指定された抗原を発現させる腫瘍細胞を消失されるのに効果的であるが、抗原を発現させない腫瘍細胞は、免れ、増殖することが可能であり、より侵襲性となることが多い。したがって、これらの細胞をターゲティングするために、異なる腫瘍をターゲティングするｓｃＦｖを発現させる、全く新たなＣＡＲ Ｔ細胞が創出される必要がある。本明細書において、本出願者らは、メディトープ技術を使用して、この問題に取り組む。具体的に、本出願者らは、腫瘍ターゲティングｓｃＦｖを、超高アフィニティーメディトープ（非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン）により置きかえる。その後、抗原特異的なメディトープ対応Ｆａｂ又はｍＡｂ（抗原結合性ドメイン）を使用して、腫瘍特異性が追加される。

【0202】

本出願者らは、メディトープ相互作用を使用して、ユニバーサルＣＡＲ Ｔ細胞を創出した。具体的に、本出願者らは、抗原ターゲティング領域を、メディトープ（非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン）により置きかえ、メディトープ対応Ｆａｂ／ｍＡｂを付加し、Ｆａｂに特異的な抗原に結合させうることを裏付けた。本明細書における利点は、本出願者らが、メディトープ－ゼータ鎖Ｔ細胞を作り、疾患に特異的なメディトープ対応Ｆａｂと交換しうること又は複数の抗原を対象とすることである。

【0203】

ＣＡＲ Ｔ細胞の分野は、迅速に発展しつつあり、臨床結果が入手可能となるにつれ、ＣＡＲ Ｔ細胞の特異性を変更する必要が裏付けられている。本出願者らは、ユニバーサルＣＡＲ Ｔ細胞プラットフォームを提示するが、この場合、本出願者らは、ＣＡＲ Ｔ細胞内のｓｃＦｖを、メディトープ（例えば、非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン）により置きかえ、メディトープ対応ｍＡｂ／Ｆａｂ（抗原結合性ドメイン）を使用して、抗原特異性を付加する。このプラットフォーム技術は、本出願者らが、個々のＣＡＲ Ｔ細胞を創出し、最適化せずに、標的特異性を、迅速かつ効率的に変更することを可能とする。本出願者らは、２つの異なるメディトープ対応ｍＡｂを使用するＦＡＣＳを介して、概念実証を示す。本出願者らは、リンカーのデザイン及びドッキングを最適化することができ、メディトープ－ＣＡＲの抗原特異性を、インサイチューにおいて変更することにより、動物モデルにおける効能を裏付ける。

【0204】

メディトープを発現させる、単一のＴ細胞を、腫瘍内の、異なる抗原／エピトープをターゲティングする、Ｆａｂ／Ｍａｂと混合及びマッチさせ、がんの複数の形態に適用されうる、優れた生成物を、潜在的に作製することができる。Ｆａｂ／ｍＡｂは、一般に、ｓｃＦｖより安定であり、一般に、抗原に対して、ｓｃＦｖより高度なアフィニティーを有し、抗原上の異なるエピトープに結合するＦａｂのパネルは、たやすく作製され、迅速な最適化を可能とする（例えば、分野内の目下の問題は、受容体エピトープと腫瘍膜との間のどのくらいの距離が効能に影響を及ぼすのかという問題である）。

【0205】

本出願者らは、メディトープを、レンチウイルス内にパッケージングして、ＦａｂＲａｃｋ（本明細書において提供される組換えタンパク質）を作製し、インビトロ及びインビボにおける腫瘍の根絶を特徴付けることができる。本出願者らは、インサイチューにおいて、特異性を変更し、特徴付けることができる。本出願者らは、リンカー（例えば、リムーバーであるＣＨ３ドメイン）を変更して、一価ＦａｂＲａｃｋを創出し、作製し、特異性を特徴付け、変更することができる。

【0206】

従来のＣＡＲ及びメディトープＣＡＲ：基本概念：ｓｃＦｖ変異体は、診療所において使用される。「最も単純な」ＦａｂＲａｃｋは、メディトープ対応のＩｇＧ又はＦａｂ断片に結合している。これは、ＩｇＧ又はＦａｂに限定されず、二特異性ＩｇＧ又はバイオニクス又は単一アームのｆａｂも作りうることが注目される。基本的に、メディトープに対応しているＦａｂに、いかなるものも融合させることができる。

【0207】

Ｆａｂｒａｃｋ－Ｔ細胞は、メディトープ対応ＩｇＧに媒介され、腫瘍細胞に結合していてもよい。生産的な相互作用をもたらしうる、複数の組合せ／相互作用が存在する。一方のＦａｂアームがＦａｂｒａｃｋ Ｔ細胞に結合し、他方のアームが腫瘍細胞に結合する。同じＦａｂアームがＦＡＢｒａｃｋ Ｔ細胞及び腫瘍抗原に結合する。両方のＦａｂアームが腫瘍に結合し、一方又は他方のＦａｂアームがＦａｂｒａｃｋ Ｔ細胞に結合する。両方のＦａｂアームが、Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞及び腫瘍に結合するなどである。

【0208】

メディトープＣＡＲ構築物は、レンチウイルスベクター内にパッキングされうる。細胞外ドメインは、メディトープ（非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン）、リンカー（ペプチドリンカー）及びＩｇＧのＣＨ３ドメイン（スペーサー領域）を含み、これに続き、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＣＤ２８ｔｍ）、ＣＤ２８共刺激ドメイン（ＣＤ２８）及びＣＤ３ζ細胞溶解性ドメイン（本明細書においてまた、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとも称される）（ＣＤ３ζ）を含む。ＣＤ３ζとＣＤ１９ｔとは、Ｔ２Ａ配列により隔てる。ｍｅｍＡｂ（メディトープ対応モノクローナル抗体）を、標的細胞及びＮＦＡＴ応答性ルシフェラーゼを保有するＦａｂＲａｃｋ発現Ｊｕｒｋａｔ細胞に結合させる。これは、Ｔ細胞に移る前に、概念を試すための、簡単なリードアウトである。

【0209】

ｍｅｍＡｂ（メディトープ対応モノクローナル抗体；抗原結合性ドメイン）を、ＦａｂＲａｃｋ細胞（本明細書において提供される組換えタンパク質を発現させるＴ細胞）に、あらかじめ結合させることもでき、ｍｅｍＡｂ（抗原結合性ドメイン）を、標的細胞（例えば、がん細胞）にあらかじめ結合させることもできる。標的細胞上の抗原発現のレベルは、Ｔ細胞の活性化に影響を及ぼす。Ｔ細胞の活性化は、ｍｅｍＡｂをあらかじめ結合させたＴ細胞と、ｍｅｍＡｂをあらかじめ結合させたがん細胞であって、がん細胞上における抗原の発現が低度であるがん細胞とについて同等である。最高のＴ細胞活性化は、がん細胞を、ｍｅｍＡｂとあらかじめ結合させ、かつ、がんにおける抗原発現が高度である場合に達成することができる。同様に、がんにおける抗原発現レベルが高度である場合に、Ｔ細胞を、ｍｅｍＡｂ（メディトープ対応モノクローナル抗体、抗原結合性ドメイン）にあらかじめ結合させていれば、Ｔ細胞の活性化は、高度である。図１９を参照されたい。

【0210】

材料及び方法
クローニング：親抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ＿ＩｇＧ４ｏｐ（ＨＬ－ＣＨ３）＿ＣＤ２８ｇｇ＿ｏｐ－Ｚｅｔａ＿ｏｐ－Ｔ２Ａ－ＣＤ１９ｔ＿ｅｐＨＩＶ７ベクターは、Ｃ．Ｂｒｏｗｎ博士より恵与された。ＧＭ－ＣＳＦｒ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌ＿ｍｅｄｉｔｏｐｅ＿ＰＡＳｌｉｎｋｅｒ１７遺伝子カセットは、ＤＮＡ２．０により合成し、ＮｈｅＩ及びＳｂｆＩの制限部位を使用して、ＩｇＧ４ｏｐ（ＨＬ－ＣＨ３）ドメイン（それぞれ、メディトープ－ＣＨ３及びメディトープ－ＣＤ２８）を伴う、又はこれを伴わないＣＡＲベクターに挿入した。クローニングされたプラスミドは、ＭａｘｉＰｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製した。

【0211】

フルオロフォアによる、可溶性タンパク質の標識付け：製造元のプロトコールに従うアミンコンジュゲーションを使用して、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、可溶性タンパク質に接合させた。略述すると、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ ＮＨＳ Ｅｓｔｅｒ色素を、トラスツズマブＩ８３Ｅ ＩｇＧ及びトラスツズマブＩ８３Ｅ Ｆａｂ並びにイピリムマブＩｇＧとコンジュゲートさせた。標識度（ＤＯＬ）は、Ａ_２８０及びＡ_ｍａｘを使用して、分子１つ当たり色素１≦ＤＯＬ≦３の間であると計算した。Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ ＮＨＳ Ｅｓｔｅｒ色素を、ｓＨｅｒ２とコンジュゲートさせた。サイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によりにより、タンパク質の相互作用を特徴付けてから、結合活性について評価するＦＡＣＳアッセイを行った。

【0212】

トランスフェクション：０日目に、継代９代目のＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に、ベクターなし（モック）又は親ＣＡＲベクター、メディトープ－ＣＨ３ベクター又はメディトープ－ＣＤ２８ベクターをトランスフェクトした。細胞に、製造元のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ＭＡＸトランスフェクションキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してトランスフェクトした。

【0213】

フローサイトメトリー：５日目に、細胞を採取し、カウントした。細胞３×１０^６個を、５ｍＬのＦＡＣＳチューブ（ＶＷＲ）に添加し、ＦＡＣＳ染色液（Ｈａｎｋｓ’Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ中に２％のＦＣＳ、０．５％のＮａＮ_３；Ｂａｔｃｈ＃０５０９２０１６）により、１ｍＬ当たりの細胞１×１０^６個に適量化させた。細胞０．１×１０^６個を、Ｖ字底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ）の各ウェルに、条件１つ当たりのウェル３つずつとして添加した。細胞を、１００μＬの染色液により、２回にわたり洗浄し、４℃、３００ｇにおいて、３分間にわたりスピンし、上清をデカントした。細胞を、光から保護した、１００μＬの一次染色液（１：１００に希釈されたＰＥ－Ｃｙ７－ＣＤ－１９及び１００ｎＭの６４７－ＩｇＧ、１００ｎＭの６４７－Ｉｐｉ又は２００ｎＭの６４７－Ｆａｂ）中、４℃において、３０分間にわたり再懸濁させた。細胞を、１００μＬの染色液により、２回にわたり洗浄し、光から保護した二次染色液（２００ｎＭのＰａｃＢｌｕｅ－Ｈｅｒ２）中、４℃において、３０分間にわたり再懸濁させた。細胞を、１００μＬの染色液により、２回にわたり洗浄し、１５０μＬのＰＩ溶液（染色液中、１：１００に希釈したＰＩ）中に再懸濁させた。細胞試料は、試料１例当たり４０μＬを使用する、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ測定器（＃２、Ｗｅｓｔ ｓｉｄｅ ｏｆ Ｂｒｏｗｎ ｌａｂ）を使用して解析した。電圧は、以下：ＦＳＣ＝３５８Ｖ、ＳＳＣ＝５２０Ｖの通りであった。解析チャネルは、ＰＥ（ＰＩ）、ＰＥ－Ｃｙ７（ＣＤ１９）、ＡＰＣ（６４７）及びＶｉｏＢｌｕｅ（Ｈｅｒ２）であった。ゲーティング戦略は、
ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＥ－→ＰＥ－Ｃｙ７^＋→ＡＰＣ^＋→ＶｉｏＢｌｕｅ^＋
ＦＳＣ／ＳＳＣ→ＰＩ^－→ＣＤ１９^＋→６４７^＋→Ｈｅｒ２^＋
であった。

【0214】

動物の割付け：各群は、４匹ずつのマウスを有する。

【0215】

１．腫瘍だけ：ＯＶＣＡＲ３－ｌｕｃでも、ＳＫＯＶ３－ｌｕｃでもよい。

【0216】

２．ＨＥＲ－２ ＣＡＲ Ｔ細胞を伴う腫瘍：Ｆａｂ ＣＡＲでも、ｓｃＦｖ ＣＡＲ Ｔ細胞でもよい。各マウスにつき陽性細胞１×１０^７個とする。

【0217】

３．モックＴ細胞を伴う腫瘍：各マウスにつきモックＴ細胞１×１０^７個とする。

【0218】

４．メディトープ－ＣＡＲ Ｔ細胞を伴う腫瘍：各マウスにつき陽性ＣＡＲ Ｔ細胞１×１０^７個とする。

【0219】

５．あらかじめ混合したモックＴ細胞＋ＨＥＲ２抗体を伴う腫瘍：各マウスにつきモックＴ細胞１×１０^７個とする。Ｔ細胞注射の１日前に、４ｍｇ／ｋｇのＨＥＲ２抗体を、腹腔内に施す。Ｔ細胞を、１００ｎＭの抗体と、あらかじめ混合し、洗浄する。抗体は、４ｍｇ／ｋｇを、毎週２回ずつ、２週間にわたり、腹腔内に施す。

【0220】

６．あらかじめ混合したメディトープ－ＣＡＲ Ｔ細胞＋ＨＥＲ２抗体を伴う腫瘍：各マウスにつきＣＡＲ Ｔ細胞１×１０^７個とする。Ｔ細胞注射の１日前に、４ｍｇ／ｋｇのＨＥＲ２抗体を、腹腔内に施す。Ｔ細胞を、１００ｎＭの抗体と、あらかじめ混合し、洗浄する。抗体は、４ｍｇ／ｋｇを、毎週２回ずつ、２週間にわたり、腹腔内に施す。

【0221】

７．あらかじめ混合していないメディトープ－ＣＡＲ Ｔ細胞＋ＨＥＲ２抗体を伴う腫瘍：各マウスにつきＣＡＲ Ｔ細胞１×１０^７個とする。Ｔ細胞注射の１日前に、４ｍｇ／ｋｇのＨＥＲ２抗体を、腹腔内に施す。Ｔ細胞を、抗体と、あらかじめ混合しない。抗体は、４ｍｇ／ｋｇを、毎週２回ずつ、２週間にわたり、腹腔内に施す。

【0222】

【表1】

【0223】

Ｆａｂｒａｃｋについての動物データ
方法（ＯＶＣＡＲ３）
ＯＶＣＡＲ３－ｇｆｐ－ｌｕｃ細胞５００万個を、１日目に、マウスに、腹腔内（ｉｐ）注射した。Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞（群６及び７）により処置されたマウスにおいて、マウスに、４ｍｇ／ｋｇのｍｅｍＡｂトラスツズマブを、３日ごとに施し（合計５回の投与）、初回のＡｂ投与は、８日目に施した。ヒトＴ細胞１０００万個を、９日目に、マウスにｉｐ注射した。群６において、Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞を、ｍｅｍＡｂと、あらかじめ混合し、洗浄した。１５０μｌのルシフェリン（２８．５７ｍｇ／ｍｌ）を、マウスにｉｐ注射した後、マウスの腫瘍負荷を、発光により測定した（群１：腫瘍だけ；群２：モックＴ細胞；群３：Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞だけ；群４：モックＴ細胞＋Ａｂ；群５：ＨＥＲ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ；群６：Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞（あらかじめ混合した）＋Ａｂ；群７：Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞＋Ａｂ）。

【0224】

結果（ＯＶＣＡＲ３）
マウスは、Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂを施された場合（群６及び７）、Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞を、ｍｅｍＡｂとあらかじめ混合したのか、しなかったのかに関わらず、腫瘍サイズの実質的な減少を示す。しかし、腫瘍は、１４日目ごろに再発した。腫瘍の再発は、マウス腹水中のＨＥＲ２＋腫瘍細胞を示すフローサイトメトリー結果に基づく、ＨＥＲ２抗原の喪失と符合しなかった。腫瘍の再発は、マウスの血液中及び腹水中に、ごく少数のＦａｂｒａｃｋ Ｔ細胞しか残存していないことからの、Ｔ細胞の非存続に起因しうる。腫瘍根絶に最適化するための投与スケジュールを策定中である。

【0225】

方法（ＭＣＦ７）
ＭＣＦ７－ｇｆｐ－ｌｕｃ細胞５００万個を、１日目に、マウスに、腹腔内（ｉｐ）注射した。Ｆａｂｒａｃｋ群において、マウスに、４ｍｇ／ｋｇのｍｅｍＡｂトラスツズマブを、約４日ごとに施し、初回のＡｂ投与を、Ｔ細胞と併せてｉｐ注射した。ヒトＴ細胞２００万個の初回投与を、８日目に、マウスにｉｐ注射した。Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞２００万個を、約６日ごとに、さらに施した。１５０μｌのルシフェリン（２８．５７ｍｇ／ｍｌ）を、マウスにｉｐ注射した後、マウスの腫瘍負荷を、発光により測定した。

【0226】

結果（ＭＣＦ７）
腫瘍サイズの減少は、Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞及びｍｅｍＡｂを施されたマウスにおいて、１１日目及び１４日目に見られた。しかし、１６日目に、腫瘍の再発が見られた。２２日目におけるマウス血液の解析は、Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞が存在し、ｍｅｍＡｂが、Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞に結合していることを示した。４５日目におけるマウス腹水の解析は、腫瘍細胞の抗原逃避を示さなかった。腫瘍の再発は、その投与が、腫瘍上及びＴ細胞上のＡｂ結合性部位を飽和させうる、Ａｂに由来するフック効果に起因しうる。Ｆａｂｒａｃｋ Ｔ細胞の用量は、ＯＶＣＡＲ３研究における１０００万個と比較して、ＭＣＦ７異種移植研究において、２００万個であるので、Ａｂへの結合のためのＦａｂｒａｃｋ Ｔ細胞は少数であった。加えて、ＭＣＦ７及びＯＶＣＡＲ３は、ＨＥＲ２の発現が低度であるので、それらのＨＥＲ２は、Ａｂにより、容易に飽和される。腫瘍根絶に最適化するための投与スケジュールを策定中である。

【0227】

表

【0228】

【表2】

【0229】

【表3】

【0230】

Ｐ実施形態
実施形態Ｐ１．（ｉ）第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）第１の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；及び（ｉｉｉ）前記第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを、前記第１の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している第１の膜貫通ドメインを含む、第１の組換えタンパク質。

【0231】

実施形態Ｐ２．前記第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを前記第１の膜貫通ドメインに接続している第１のスペーサー領域をさらに含む、実施形態Ｐ１に記載の第１の組換えタンパク質。

【0232】

実施形態Ｐ３．前記第１のスペーサー領域が、第１のＣＨ３領域である、実施形態Ｐ２に記載の第１の組換えタンパク質。

【0233】

実施形態Ｐ４．前記第１の組換えタンパク質が、第２の組換えタンパク質に非共有結合によって結合しており、前記第２の組換えタンパク質が、（ｉ）第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；（ｉｉｉ）前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを前記第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している第２の膜貫通ドメイン；及び（ｉｖ）前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを前記第２の膜貫通ドメインに接続しており、第２のＣＨ３領域を含み、前記第１のＣＨ３領域が、前記第２のＣＨ３領域に結合している第２のスペーサー領域を含む、実施形態Ｐ３に記載の第１の組換えタンパク質。

【0234】

実施形態Ｐ５．前記第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及び前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、化学的に異なる、実施形態Ｐ１～Ｐ５のいずれか一項に記載の第１の組換えタンパク質。

【0235】

実施形態Ｐ６．前記第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及び前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、化学的に同じである、実施形態Ｐ１～Ｐ５のいずれか一項に記載の第１の組換えタンパク質。

【0236】

実施形態Ｐ７．前記第１の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン及び前記第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、独立に、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである、実施形態Ｐ１～Ｐ６のいずれか一項に記載の第１の組換えタンパク質。

【0237】

実施形態Ｐ８．前記第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、第１の抗原結合性ドメインに、非共有結合によって結合している、実施形態Ｐ１～Ｐ７のいずれか一項に記載の第１の組換えタンパク質。

【0238】

実施形態Ｐ９．前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、第２の抗原結合性ドメインに、非共有結合によって結合している、実施形態Ｐ１～Ｐ８のいずれか一項に記載の第１の組換えタンパク質。

【0239】

実施形態Ｐ１０．実施形態１～３のいずれか一項に記載の第１の組換えタンパク質をコードする単離核酸。

【0240】

実施形態Ｐ１１．実施形態Ｐ１０に記載の核酸を含む発現ベクター。

【0241】

実施形態Ｐ１２．前記ウイルスが、レンチウイルス又はオンコレトロウイルスである、実施形態Ｐ１１に記載の発現ベクター。

【0242】

実施形態Ｐ１３．実施形態Ｐ１１～Ｐ１２のいずれか一項に記載の発現ベクターを含むＴリンパ球。

【0243】

実施形態Ｐ１４．実施形態Ｐ１～Ｐ９のいずれか一項に記載の第１の組換えタンパク質を含むＴリンパ球。

【0244】

実施形態Ｐ１５．実施形態Ｐ１～Ｐ９のいずれか一項に記載の第１の組換えタンパク質を含み、前記膜貫通ドメインが、前記Ｔリンパ球の細胞膜内にある、Ｔリンパ球。

【0245】

実施形態Ｐ１６．がんを処置する方法であって、がんの処置を必要とする対象に、有効量の、実施形態Ｐ１５のＴリンパ球を投与するステップを含み、前記第１の抗原結合性ドメイン及び前記第２の抗原結合性ドメインが独立に抗がん抗原結合性ドメインである、方法。

【0246】

実施形態
実施形態１．（ｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；及び（ｉｉｉ）前記非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを前記細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している膜貫通ドメインを含む組換えタンパク質。

【0247】

実施形態２．前記細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインである、実施形態１に記載の組換えタンパク質。

【0248】

実施形態３．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン又はＣＤ３ゼータ膜貫通ドメインである、実施形態１又は２に記載の組換えタンパク質。

【0249】

実施形態４．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインである、実施形態１～３のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0250】

実施形態５．前記非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを前記膜貫通ドメインに接続しているスペーサー領域をさらに含む、実施形態１～４のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0251】

実施形態６．前記スペーサー領域が、重鎖定常３（ＣＨ３）ドメインである、実施形態５に記載の組換えタンパク質。

【0252】

実施形態７．前記非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを前記スペーサー領域に接続しているペプチドリンカーをさらに含む、実施形態１～６のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0253】

実施形態８．前記膜貫通ドメインを前記細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している細胞内共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、実施形態１～７のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0254】

実施形態９．前記細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン又はＯＸ－４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、実施形態８に記載の組換えタンパク質。

【0255】

実施形態１０．前記細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、実施形態８又は９に記載の組換えタンパク質。

【0256】

実施形態１１．前記細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、実施形態８～１０のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0257】

実施形態１２．前記細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインのＣ末端に結合している検出用ドメインをさらに含む、実施形態１～１１のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0258】

実施形態１３．前記検出用ドメインが、切断型ＣＤ１９タンパク質である、実施形態１２に記載の組換えタンパク質。

【0259】

実施形態１４．前記細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを前記検出用ドメインに接続している自己切断性ペプチジル配列をさらに含む、実施形態１～１３のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0260】

実施形態１５．前記自己切断性ペプチジルリンカー配列が、Ｔ２Ａ配列又は２Ａ配列である、実施形態１４に記載の組換えタンパク質。

【0261】

実施形態１６．前記組換えタンパク質が、細胞の一部を形成する、実施形態１～１５のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0262】

実施形態１７．前記組換えタンパク質が、Ｔ細胞の一部を形成する、実施形態１～１６のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0263】

実施形態１８．前記非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、抗原結合性ドメインに結合している、実施形態１～１７のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0264】

実施形態１９．前記抗原結合性ドメインが、Ｆａｂ、ＩｇＧ又は二特異性抗体である、実施形態１８に記載の組換えタンパク質。

【0265】

実施形態２０．前記抗原結合性ドメインが、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、実施形態１８～１９のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0266】

実施形態２１．前記抗原結合性ドメインが、がん抗原に結合することが可能である、実施形態１８～２０のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0267】

実施形態２２．前記抗原結合性ドメインが、がん抗原に結合することが可能である、実施形態１８～２１のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0268】

実施形態２３．前記がん抗原が、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９又はＣＤ２０である、実施形態２１又は２２に記載の組換えタンパク質。

【0269】

実施形態２４．前記がん抗原が、細胞の一部を形成する、実施形態２１又は２２に記載の組換えタンパク質。

【0270】

実施形態２５．前記細胞が、がん細胞である、実施形態２４に記載の組換えタンパク質。

【0271】

実施形態２６．前記がんが、卵巣がん、腎細胞癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、神経芽細胞腫、黒色腫、髄芽腫、肺がん、骨肉腫、神経膠芽腫又は神経膠腫である、実施形態２５に記載の組換えタンパク質。

【0272】

実施形態２７．実施形態１～２６のいずれか一項に記載の組換えタンパク質をコードする単離核酸。

【0273】

実施形態２８．実施形態２７に記載の核酸を含む発現ベクター。

【0274】

実施形態２９．前記ウイルスが、レンチウイルス又はオンコレトロウイルスである、実施形態２８に記載の発現ベクター。

【0275】

実施形態３０．実施形態２８～２９のいずれか一項に記載の発現ベクターを含むＴリンパ球。

【0276】

実施形態３１．実施形態１～２６のいずれか一項に記載の組換えタンパク質を含むＴリンパ球。

【0277】

実施形態３２．実施形態１～２６のいずれか一項に記載の組換えタンパク質を含むＴリンパ球であって、前記膜貫通ドメインが前記Ｔリンパ球の細胞膜内にある、Ｔリンパ球。

【0278】

実施形態３３．前記Ｔリンパ球が、自家Ｔリンパ球である、実施形態３０～３２のいずれか一項に記載のＴリンパ球。

【0279】

実施形態３４．前記Ｔリンパ球が、異種Ｔリンパ球である、実施形態３０～３２のいずれか一項に記載のＴリンパ球。

【0280】

実施形態３５．前記非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、抗原結合性ドメインに結合している、実施形態３０～３４のいずれか一項に記載のＴリンパ球。

【0281】

実施形態３６．前記抗原結合性ドメインが、Ｆａｂ、ＩｇＧ又は二特異性抗体である、実施形態３５に記載のＴリンパ球。

【0282】

実施形態３７．前記抗原結合性ドメインが、がん抗原に結合している、実施形態３５又は３６に記載のＴリンパ球。

【0283】

実施形態３８．前記がん抗原が、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９又はＣＤ２０である、実施形態３７に記載のＴリンパ球。

【0284】

実施形態３９．前記抗原結合性ドメインが、がん抗原結合性ドメインである、実施形態３５～３８のいずれか一項に記載のＴリンパ球。

【0285】

実施形態４０．前記抗原結合性ドメインが、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、実施形態３５～３９のいずれか一項に記載のＴリンパ球。

【0286】

実施形態４１．がんを処置する方法であって、がんの処置を必要とする対象に、有効量の、実施形態３０～３４のいずれか一項に記載のＴリンパ球及び前記非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインに結合することが可能な抗原結合性ドメインを投与するステップを含み、前記抗原結合性ドメインががん抗原結合性ドメインである、方法。

【0287】

実施形態４２．前記Ｔリンパ球及び前記抗原結合性ドメインが、同時に又は逐次的に投与される、実施形態４１に記載の方法。

【0288】

実施形態４３．前記Ｔリンパ球が第１の時点で投与され、前記抗原結合性ドメインが第２の時点で投与され、第１の時点が第２の時点に先行する、実施形態４１又は４２に記載の方法。

【0289】

実施形態４４．前記抗原結合性ドメインが第１の時点で投与され、前記Ｔリンパ球が第２の時点で投与され、第１の時点が第２の時点に先行する、実施形態４１又は４２に記載の方法。

【0290】

実施形態４５．（ｉ）前記投与する前に、インビトロで前記非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを前記抗原結合性ドメインに結合させ、これによりＴリンパ球－組換えタンパク質複合体を形成するステップ；及び（ｉｉ）前記Ｔリンパ球－組換えタンパク質複合体を前記対象に投与し、これにより前記対象におけるがんを処置するステップを含む、実施形態４１に記載の方法。

【0291】

実施形態４６．前記がんが、卵巣がん、腎細胞癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、神経芽細胞腫、黒色腫、髄芽腫、肺がん、骨肉腫、神経膠芽腫又は神経膠腫である、実施形態４１～４５のいずれか一項に記載の方法。

【0292】

実施形態４７．前記抗原結合性ドメインが、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、実施形態４１～４６のいずれか一項に記載の方法。

【0293】

実施形態４８．前記組換えタンパク質が第１の組換えタンパク質であり、前記非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインであり、前記細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインが第１の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインであり、前記膜貫通ドメインが第１の膜貫通ドメインであり、前記スペーサー領域が第１のスペーサー領域であり、前記細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが第１の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインである、実施形態１～２６のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0294】

実施形態４９．前記第１の組換えタンパク質が、第２の組換えタンパク質に非共有結合によって結合しており、前記第２の組換えタンパク質が、（ｉ）第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；（ｉｉ）第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；（ｉｉｉ）前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを、前記第２の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している第２の膜貫通ドメイン；及び（ｉｖ）前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを前記第２の膜貫通ドメインに接続しており、前記第１のスペーサー領域が非共有結合によって結合している、前記第２のスペーサー領域を含む、実施形態４８に記載の組換えタンパク質。

【0295】

実施形態５０．前記第１のスペーサー領域及び前記第２のスペーサー領域が、第１の重鎖定常３（ＣＨ３）ドメイン及び第２の重鎖定常３（ＣＨ３）ドメインである、実施形態４９に記載の組換えタンパク質。

【0296】

実施形態５１．前記第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及び前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、化学的に異なる、実施形態４８～５０のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0297】

実施形態５２．前記第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン及び前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、化学的に同じである、実施形態４８～５０のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0298】

実施形態５３．前記第１の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、第１の抗原結合性ドメインに、非共有結合によって結合している、実施形態４８～５２のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0299】

実施形態５４．前記第２の非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインが、第２の抗原結合性ドメインに、非共有結合によって結合している、実施形態４９～５３のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0300】

実施形態５５．前記第１の抗原結合性ドメイン及び前記第２の抗原結合性ドメインが、化学的に異なる、又は化学的に同じである、実施形態５３又は５４に記載の組換えタンパク質。

【0301】

実施形態５６．前記第１の抗原結合性ドメイン及び前記第２の抗原結合性ドメインが、独立に、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、実施形態５３～５５のいずれか一項に記載の組換えタンパク質。

【0302】

非公式の配列表
ＣＤ３ｚ；ＧＩ：６２３０４１（配列番号１）
ＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬ

【0303】

ＣＤ２８；ＧＩ：３４０５４５５０６（配列番号２）
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ

【0304】

ＣＤ４；ＧＩ：１７９１４３（配列番号３）
ＭＡＬＩＶＬＧＧＶＡＧＬＬＬＦＩＧＬＧＩＦＦ

【0305】

ＣＤ８；ＧＩ：２２５００７５３４（配列番号４）
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ

【0306】

ＣＤ８；ＧＩ：２２５００７５３４（配列番号５）
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹ

【0307】

ＣＤ８；ＧＩ：２２５００７５３４（配列番号６）
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ

【0308】

４１ＢＢ；ＧＩ：３１５２５９０９９（配列番号７）
ＩＩＳＦＦＬＡＬＴＳＴＡＬＬＦＬＬＦＦ ＬＴＬＲＦＳＶＶ

【0309】

ＯＸ４０；ＧＩ：３１５３６０６３７（配列番号８）
ＶＡＡＩＬＧＬＧＬＶＬＧＬＬＧＰＬＡＩＬＬ

【0310】

ＩＣＯＳ；ＧＩ：２５１８２３９５１（配列番号９）
ＦＷＬＰＩＧＣＡＡＦＶＶＶＣＩＬＧＣＩＬＩ

【0311】

ＣＤ６２Ｌ；ＧＩ：２６２２０６３１４（配列番号１０）
ＰＬＦＩＰＶＡＶＭＶＴＡＦＳＧＬＡＦＩＩＷＬＡ

【0312】

ＣＤ３ζ；ＧＩ：６２３０４１；配列番号１１：

【0313】

【化1】

【0314】

ＣＤ２８；ＧＩ：３４０５４５５０６；配列番号１２：
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ

【0315】

ＣＤ２８ｇｇ^＊；ＧＩ：３４０５４５５０６；配列番号１３：
ＲＳＫＲＳＲＧＧＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（ｒｅｆ）

【0316】

４１ＢＢ；ＧＩ：３１５２５９０９９；配列番号１４：
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ

【0317】

ＯＸ４０；ＧＩ：３１５３６０６３７；配列番号１５：
ＡＬＹＬＬＲＲＤＱＲＬＰＰＤＡＨＫＰＰＧＧＧＳＦＲＴＰＩＱＥＥＱＡＤＡＨＳＴＬＡＫＩ

【0318】

ＩＣＯＳ；ＧＩ：２５１８２３９５１；配列番号１６：
ＣＷＬＴＫＫＫＹＳＳＳＶＨＤＰＮＧＥＹＭＦＭＲＡＶＮＴＡＫＫＳＲＬＴＤＶＴＬ

【0319】

スペーサー（ＩｇＧ４－ＣＨ３を含む）；配列番号１７：

【0320】

【化2】

【0321】

ＣＤ２８膜貫通；配列番号１８：
ＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ

【0322】

ＣＤ２８ｃｙｔｏ（ＬＬｍＧＧ）；配列番号１９：
ＲＳＫＲＳＲＧＧＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ

【0323】

細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ゼータ）：配列番号２０：

【0324】

【化3】

【0325】

自己切断性ペプチジルリンカー（Ｔ２Ａ）：配列番号２１：
ＬＥＧＧＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＴＲ

【0326】

マーカーペプチド（ＣＤ１９ｔ）：配列番号２２：

【0327】

【化4】

【0328】

自己切断性ペプチジルリンカー（２Ａ）：配列番号２３：
ＧＧＳＴＳＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ

【0329】

スペーサー領域：配列番号２４
ＧＳＧＳＧＳＧＳ

【0330】

ペプチドリンカー：配列番号２５
ＳＡＰＡＳＳＡＳＡＰＳＡＡＳＡＰＡＧ

【0331】

配列番号２６
ＳＡＰＡＳＳＡＳＡＰＳＡＡＳＡＰＡＧ

【0332】

自己切断性ペプチジルリンカー：配列番号２７
ＰＶＫＱＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ

【0333】

自己切断性ペプチジルリンカー：配列番号２８
ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ

【0334】

自己切断性ペプチジルリンカー：配列番号２９
ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ

【0335】

自己切断性ペプチジルリンカー：配列番号３０
ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＳＮＰＧＰ

【0336】

スペーサー領域：配列番号３１
ＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ

【0337】

配列番号３２：メディトープ（非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン）
ＣＱＦＤＬＳＴＲＲＬＱＣ

【0338】

配列番号３３：ＣＨ３（スペーサー領域）

【0339】

【化5】

【0340】

配列番号３４：ＣＤ３ゼータ鎖（細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン）

【0341】

【化6】

【0342】

配列番号３５：全４－１ＢＢ Ｆａｂｒａｃｋ配列

【0343】

【化7】

【0344】

配列番号３６：全ＣＤ２８ Ｆａｂｒａｃｋ配列

【0345】

【化8】

【0346】

配列番号３７：シグナルペプチド
ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰ

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33A】

【図33B】

【図33C】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】

【図46】

【図47】

【図48】

【図49】

【図50】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2023-12-26

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

がんを処置する方法において使用するための組成物であって、組換えタンパク質をコードする単離核酸を含む発現ベクターを含むＴリンパ球を含み、
当該組換えタンパク質は、
（ｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメイン；
（ｉｉ）細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン；及び
（ｉｉｉ）非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに接続している膜貫通ドメインを含み、
当該組換えタンパク質は、連続的な単鎖ポリペプチドであり、
当該非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインは、メディトープであり、
当該方法は、がんの処置を必要とする対象に、有効量の当該Ｔリンパ球及び非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインに結合することが可能な抗原結合性ドメインを投与するステップを含み、抗原結合性ドメインががん抗原結合性ドメインである、組成物。

【請求項2】

Ｔリンパ球及び抗原結合性ドメインが、同時に又は逐次的に投与される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

Ｔリンパ球が第１の時点で投与され、抗原結合性ドメインが第２の時点で投与され、第１の時点が第２の時点に先行する、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

抗原結合性ドメインが第１の時点で投与され、Ｔリンパ球が第２の時点で投与され、第１の時点が第２の時点に先行する、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

当該方法が、
（ｉ）投与する前に、インビトロで非ＣＤＲ Ｆａｂ結合性ペプチドドメインを抗原結合性ドメインに結合させ、これによりＴリンパ球－組換えタンパク質複合体を形成するステップ；及び
（ｉｉ）Ｔリンパ球－組換えタンパク質複合体を対象に投与し、これにより対象におけるがんを処置するステップ
を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

がんが、卵巣がん、腎細胞癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、神経芽細胞腫、黒色腫、髄芽腫、肺がん、骨肉腫、神経膠芽腫又は神経膠腫である、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

抗原結合性ドメインが、セツキシマブメディトープ対応ドメイン、トラスツズマブメディトープ対応ドメイン、ペルツズマブメディトープ対応ドメイン、Ｍ５Ａメディトープ対応ドメイン又はリツキシマブメディトープ対応ドメインである、請求項１に記載の組成物。

【外国語明細書】