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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024029250
(43)【公開日】2024-03-05
(54)【発明の名称】フェリチン測定用標準物質およびフェリチン測定方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/543 20060101AFI20240227BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20240227BHJP
【ＦＩ】
G01N33/543 581L
G01N33/53 D
【審査請求】有
【請求項の数】7
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2024005672
(22)【出願日】2024-01-17
(62)【分割の表示】P 2019169148の分割
【原出願日】2019-09-18
(71)【出願人】
【識別番号】000120456
【氏名又は名称】栄研化学株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100108833
【弁理士】
【氏名又は名称】早川 裕司
(74)【代理人】
【識別番号】100162156
【弁理士】
【氏名又は名称】村雨 圭介
(74)【代理人】
【識別番号】100201606
【弁理士】
【氏名又は名称】田岡 洋
(72)【発明者】
【氏名】長竹 由佳
(72)【発明者】
【氏名】門脇 拓也
(57)【要約】
【課題】 検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させる方法を提供する。
【解決手段】 少なくとも２以上のロットのフェリチン測定用標準物質間における検体中のフェリチン測定結果の差を低減する方法であって、標準物質において、下記（１）または（２）を満たすフェリチンを用いる、方法：（１）標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である；（２）標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、標準物質間で８ポイント以下である。
【選択図】なし
【解決手段】 少なくとも２以上のロットのフェリチン測定用標準物質間における検体中のフェリチン測定結果の差を低減する方法であって、標準物質において、下記（１）または（２）を満たすフェリチンを用いる、方法：（１）標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である；（２）標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、標準物質間で８ポイント以下である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
フェリチンの免疫学的測定用標準物質および免疫学的測定試薬を用いて、異なる測定装置で検体中のフェリチンを測定するにあたり、前記異なる測定装置間での測定結果の差を低減する方法であって、
前記標準物質において、下記（１）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（１）前記フェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である。
前記標準物質において、下記（１）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（１）前記フェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である。
【請求項2】
前記免疫学的測定の方法が免疫凝集法である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記フェリチンモノマーの割合が９５％以上である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
少なくとも２以上のロットのフェリチンの免疫学的測定用標準物質を用いるフェリチンの免疫学的測定方法であって、
前記標準物質において、下記（１）または（２）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（１）前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である；または
（２）前記標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、前記標準物質間で８パーセントポイント以下である。
前記標準物質において、下記（１）または（２）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（１）前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である；または
（２）前記標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、前記標準物質間で８パーセントポイント以下である。
【請求項5】
前記（２）において、前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンダイマーの割合の差が、前記標準物質間で１０パーセントポイント以下である、請求項４に記載のフェリチンの免疫学的測定方法。
【請求項6】
前記免疫学的測定方法が免疫凝集法である請求項４または５に記載のフェリチンの免疫学的測定方法。
【請求項7】
前記（１）において、前記フェリチンモノマーの割合が９５％以上である、請求項４～６のいずれか一項に記載のフェリチンの免疫学的測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、フェリチン測定用標準物質およびその製造方法、ならびに上記標準物質を用いたフェリチンの測定方法に関するものである。また、さらに本発明は、フェリチン測定結果の差を低減する方法にも関する。
【背景技術】
【0002】
フェリチンは、２４個のポリペプチドサブユニットを含み分子量が約４８０ｋＤａの球状タンパク質複合体である。ポリペプチドサブユニットとしては、分子量の異なる２種類のＨ鎖（２１ｋＤａ）、Ｌ鎖（１９ｋＤａ）が知られている。フェリチン分子の内部は中空となっており、この空間に多数の鉄イオンを貯蔵することができる。フェリチン分子１個当たり４５００個の第三鉄イオン（Ｆｅ３＋）を貯蔵可能である。
【0003】
フェリチンは、ヒトにおいては肝臓、腎臓、脾臓、胎盤等の器官に存在するほか、血清中にも存在し、鉄輸送タンパク質として機能するものと考えられている。そして、鉄欠乏性障害の治療方法として、フェリチン－鉄複合体を患者に投与する方法が提案されている（例えば、特許文献１）。
【0004】
また、血清中のフェリチン濃度は、体内の鉄貯蔵量と密接に関係していることが分かっており、鉄欠乏性症等の臨床検査において重要な測定項目となっている（例えば、非特許文献１）。フェリチンの測定においては各種免疫学的測定方法が知られているが、近年はラテックス凝集法による免疫測定法が、他法に比べて簡便かつ迅速に測定が行える方法となっているため、広く使用されている。そして、ラテックス凝集法の検出感度を改良するために、反応液中にそれぞれ所定分子量を有するポリビニルピロリドン、プルランおよびポリエチレングリコールからなる群より選択される１種を含有させる方法（特許文献２）が、また、血清検体の鮮度の影響を抑えるために反応液中に第４級アンモニウム塩を含有させる方法（特許文献３）などが提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】特表２０１１－５１６４１９号公報
【特許文献2】特開平１０－１１５６１５号公報
【特許文献3】特開２０００－８８８４９号公報
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】臨床検査精度管理調査の定量検査評価法と試料に関する日臨技指針，医学検査，2008年，57：109-117
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
しかし、上記非特許文献１においては、測定項目としてのフェリチンが「分類３）基準測定操作法や標準物質が確立されていないうえ、施設間差も大きい項目」と分類されている。このように、フェリチンの免疫学的測定においては、測定施設が異なった場合などに、測定結果に差が生じてしまうことがあり、精度管理が重要な課題となっていた。
【0008】
上記特許文献２は、高感度かつ迅速、簡便なフェリチン定量方法として提案されており、上記特許文献３は、フェリチン検体の鮮度の影響が少ないフェリチン測定方法として提案されている。しかし、これらの方法においても、依然として精度管理の観点から充分なものとはいえなかった。
【0009】
そこで、本発明は、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明者らは上記問題を解決すべく研究を行った結果、フェリチンは、２４個のポリペプチドサブユニットを含み分子量約４８０ｋＤａであるフェリチンをモノマーとして称した場合、フェリチンモノマーが会合してフェリチンダイマー、フェリチンオリゴマー等を形成し、これらの間で免疫学的測定における反応性が異なること、標準物質におけるこれらの反応性の相違が、測定値の差の一因となっていることを知見した。
すなわち、検体中のフェリチンの測定において、免疫学的測定法のための標準物質（キャリブレータ）を調製するにあたり、標準物質は生体組織に由来するフェリチンを使用することが多いが、ロットの異なるフェリチンを用いるとフェリチンモノマー、ダイマー、オリゴマー等の割合が異なることがあるため、標準物質もこれらの構成割合が異なることがある。そして、フェリチンモノマー、ダイマー、オリゴマー等は、免疫学的測定における反応性が異なることから、フェリチンモノマー、ダイマー、オリゴマー等の構成割合が複数の標準物質のロット間で異なってしまうことが、検量線が変動する原因であり、ひいては検体の測定値が変わってしまう一因となっていることを知見した。
そして、標準物質において、フェリチンモノマー、ダイマー、オリゴマー等の割合が所定範囲にあるフェリチンを用いることにより、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
具体的には、本発明は以下のとおりである。
すなわち、検体中のフェリチンの測定において、免疫学的測定法のための標準物質（キャリブレータ）を調製するにあたり、標準物質は生体組織に由来するフェリチンを使用することが多いが、ロットの異なるフェリチンを用いるとフェリチンモノマー、ダイマー、オリゴマー等の割合が異なることがあるため、標準物質もこれらの構成割合が異なることがある。そして、フェリチンモノマー、ダイマー、オリゴマー等は、免疫学的測定における反応性が異なることから、フェリチンモノマー、ダイマー、オリゴマー等の構成割合が複数の標準物質のロット間で異なってしまうことが、検量線が変動する原因であり、ひいては検体の測定値が変わってしまう一因となっていることを知見した。
そして、標準物質において、フェリチンモノマー、ダイマー、オリゴマー等の割合が所定範囲にあるフェリチンを用いることにより、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
具体的には、本発明は以下のとおりである。
【0011】
〔１〕 少なくとも２以上のロットのフェリチン測定用標準物質間における検体中のフェリチン測定結果の差を低減する方法であって、
前記標準物質において、下記（１）または（２）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（１）前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である；
（２）前記標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、前記標準物質間で８ポイント以下である。
〔２〕 前記（２）において、前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンダイマーの割合の差が、前記標準物質間で１０ポイント以下である、〔１〕に記載の方法。
〔３〕 前記（１）または（２）において、標準物質として調製される前のフェリチンに対し、前記割合が調整される、〔１〕または〔２〕に記載の方法。
〔４〕 フェリチン測定用標準物質の製造方法であって、
前記標準物質において、下記（１）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（１）前記フェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である。
〔５〕 第１のロットのフェリチン測定用標準物質を参照して、第２のロットのフェリチン測定用標準物質を製造する方法であって、
前記第２の標準物質において、下記（２）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（２）前記標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、前記第１の標準物質と前記第２の標準物質との間で８ポイント以下である。
〔６〕 前記（２）において、前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンダイマーの割合の差が、前記第１の標準物質と前記第２の標準物質との間で１０ポイント以下である、〔５〕に記載のフェリチン測定用標準物質の製造方法。
〔７〕 前記（１）または（２）において、標準物質として調製される前のフェリチンに対し、前記割合が調整される、〔４〕～〔６〕に記載のフェリチン測定用標準物質の製造方法。
〔８〕 フェリチンを含有するフェリチン測定用標準物質であって、
前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上であることを特徴とするフェリチン測定用標準物質。
〔９〕 前記標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合が５％以下である、〔８〕に記載のフェリチン測定用標準物質。
〔１０〕 〔４〕～〔７〕に記載の方法で製造された標準物質、または〔８〕もしくは〔９〕に記載の標準物質を用いることを特徴とするフェリチンの測定方法。
前記標準物質において、下記（１）または（２）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（１）前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である；
（２）前記標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、前記標準物質間で８ポイント以下である。
〔２〕 前記（２）において、前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンダイマーの割合の差が、前記標準物質間で１０ポイント以下である、〔１〕に記載の方法。
〔３〕 前記（１）または（２）において、標準物質として調製される前のフェリチンに対し、前記割合が調整される、〔１〕または〔２〕に記載の方法。
〔４〕 フェリチン測定用標準物質の製造方法であって、
前記標準物質において、下記（１）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（１）前記フェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である。
〔５〕 第１のロットのフェリチン測定用標準物質を参照して、第２のロットのフェリチン測定用標準物質を製造する方法であって、
前記第２の標準物質において、下記（２）を満たすフェリチンを用いる、方法：
（２）前記標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、前記第１の標準物質と前記第２の標準物質との間で８ポイント以下である。
〔６〕 前記（２）において、前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンダイマーの割合の差が、前記第１の標準物質と前記第２の標準物質との間で１０ポイント以下である、〔５〕に記載のフェリチン測定用標準物質の製造方法。
〔７〕 前記（１）または（２）において、標準物質として調製される前のフェリチンに対し、前記割合が調整される、〔４〕～〔６〕に記載のフェリチン測定用標準物質の製造方法。
〔８〕 フェリチンを含有するフェリチン測定用標準物質であって、
前記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上であることを特徴とするフェリチン測定用標準物質。
〔９〕 前記標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合が５％以下である、〔８〕に記載のフェリチン測定用標準物質。
〔１０〕 〔４〕～〔７〕に記載の方法で製造された標準物質、または〔８〕もしくは〔９〕に記載の標準物質を用いることを特徴とするフェリチンの測定方法。
【発明の効果】
【0012】
本発明によれば、標準物質中のフェリチン反応性を安定化することができ、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。
【発明を実施するための形態】
【0013】
以下、本発明の実施形態について説明する。
本発明の一実施形態に係る方法は、少なくとも２以上のロットのフェリチン測定用標準物質間における検体中のフェリチン測定結果の差を低減する方法であって、当該標準物質において、標準物質中のフェリチンにおけるモノマー、ダイマー、オリゴマー等の割合が所定範囲にあるフェリチンを用いるものである。
本発明の一実施形態に係る方法は、少なくとも２以上のロットのフェリチン測定用標準物質間における検体中のフェリチン測定結果の差を低減する方法であって、当該標準物質において、標準物質中のフェリチンにおけるモノマー、ダイマー、オリゴマー等の割合が所定範囲にあるフェリチンを用いるものである。
【0014】
１．フェリチン
フェリチンは、２４個のポリペプチドサブユニットを含み約４８０ｋＤａとなる球状タンパク質複合体である。
本実施形態において用いるフェリチンは、肝臓、胎盤、脾臓等から精製して得ることができるほか、リコンビナントタンパク質なども利用することができる。ただし、入手容易性等の観点から、本実施形態で用いるフェリチンはＬ鎖のリコンビナントではなくてもよく、肝臓または胎盤由来であることが好ましく、肝臓由来であることが特に好ましい。
フェリチンは、２４個のポリペプチドサブユニットを含み約４８０ｋＤａとなる球状タンパク質複合体である。
本実施形態において用いるフェリチンは、肝臓、胎盤、脾臓等から精製して得ることができるほか、リコンビナントタンパク質なども利用することができる。ただし、入手容易性等の観点から、本実施形態で用いるフェリチンはＬ鎖のリコンビナントではなくてもよく、肝臓または胎盤由来であることが好ましく、肝臓由来であることが特に好ましい。
【0015】
本明細書においては、２４個のポリペプチドサブユニットを含み分子量約４８０ｋＤａであるフェリチン（タンパク質複合体）を、「フェリチンモノマー」と称する（単に「モノマー」ともいうこともある）。
また、上記モノマー２分子がさらに会合し形成された約９６０ｋＤａの複合体を、「フェリチンダイマー」と称する（単に「ダイマー」ということもある）。
さらに、上記モノマー３分子以上が会合して形成された巨大な複合体を、「トリマー以上のフェリチンオリゴマー」と称する（単に「フェリチンオリゴマー」あるいは「オリゴマー」ということもある）。
また、上記モノマー２分子がさらに会合し形成された約９６０ｋＤａの複合体を、「フェリチンダイマー」と称する（単に「ダイマー」ということもある）。
さらに、上記モノマー３分子以上が会合して形成された巨大な複合体を、「トリマー以上のフェリチンオリゴマー」と称する（単に「フェリチンオリゴマー」あるいは「オリゴマー」ということもある）。
【0016】
後述する実施例にて示すように、フェリチンは、モノマー、ダイマー、オリゴマーと多量体化するにつれて、免疫学的測定における反応性が低下する。そのため、標準物質においてこれらの構成割合が大きく変動してしまうと、同一の測定装置においても標準物質から作成される検量線が変動してしまい、検体中のフェリチン濃度の測定値も差が生じてしまう。
これに対し、標準物質に含まれるフェリチンにおいて、上記構成割合が大きく変動しないように調整することで、検量線が大きく変動することなく安定し、検体中のフェリチン濃度の測定値も安定化させることができる。
これに対し、標準物質に含まれるフェリチンにおいて、上記構成割合が大きく変動しないように調整することで、検量線が大きく変動することなく安定し、検体中のフェリチン濃度の測定値も安定化させることができる。
【0017】
なお、フェリチンにモノマー、ダイマー、オリゴマーが存在することは知られていたが、これらの間で免疫学的測定における反応性が異なることは全く知られておらず、本発明者らの新知見である。
また、後述する実施例にて示すとおり、同じフェリチン測定試薬を用いて異なる測定装置にて測定した場合に、モノマー、ダイマー、オリゴマーの間で免疫学的測定における反応性の相違が認められる。
また、後述する実施例にて示すとおり、同じフェリチン測定試薬を用いて異なる測定装置にて測定した場合に、モノマー、ダイマー、オリゴマーの間で免疫学的測定における反応性の相違が認められる。
【0018】
２．モノマー、ダイマーおよびオリゴマーの割合
本実施形態において、フェリチン中のモノマー、ダイマーおよびオリゴマーの各割合は、例えば吸光度換算により表すことができる。具体的には、フェリチンをゲルろ過クロマトグラフィー等により分画し、全フェリチンに対するモノマー、ダイマーおよびオリゴマーのタンパク量としての割合を吸光度換算により表すことができる。
モノマー、ダイマーおよびオリゴマーは、常法に従って分子量で分画することができ、ゲルろ過クロマトグラフィーの具体的な条件は、一例として後述する実施例に示す条件を例示することができる。
吸光度は、例えば波長２８０nmの吸光度により測定することができる。モノマー、ダイマーおよびオリゴマーのタンパク量としての割合は、当該波長で測定したゲルろ過クロマトグラフィーのピークの面積比などにより特定することができる。
本実施形態において、フェリチン中のモノマー、ダイマーおよびオリゴマーの各割合は、例えば吸光度換算により表すことができる。具体的には、フェリチンをゲルろ過クロマトグラフィー等により分画し、全フェリチンに対するモノマー、ダイマーおよびオリゴマーのタンパク量としての割合を吸光度換算により表すことができる。
モノマー、ダイマーおよびオリゴマーは、常法に従って分子量で分画することができ、ゲルろ過クロマトグラフィーの具体的な条件は、一例として後述する実施例に示す条件を例示することができる。
吸光度は、例えば波長２８０nmの吸光度により測定することができる。モノマー、ダイマーおよびオリゴマーのタンパク量としての割合は、当該波長で測定したゲルろ過クロマトグラフィーのピークの面積比などにより特定することができる。
【0019】
なお、フェリチンにおけるモノマー等の割合を決定すべき組成物がフェリチン以外の成分を含む等の理由により、各画分の吸光度をフェリチンの吸光度とみなせない場合には、例えば以下の（ａ）または（ｂ）の方法により、上記割合を決定することができる。
【0020】
（ａ）アフィニティ精製や結晶化等によりフェリチンを精製する。その後、前述と同様にゲルろ過クロマトグラフィー等により分画し、吸光度を測定することでタンパク量を求め、モノマー等の割合（タンパク量比）を決定する。
【0021】
（ｂ）一般的に入手可能なフェリチンをモノマー、ダイマーおよびオリゴマーに分画し、各画分について、吸光度を測定するとともに、特定のフェリチン測定試薬および測定装置の組み合わせにてシグナル強度を測定し、フェリチンモノマー等におけるシグナル強度と吸光度との関係式を特定する。その後、フェリチンにおけるモノマー等の割合を決定すべき組成物について、ゲルろ過クロマトグラフィー等により分画し、各画分について上記特定のフェリチン測定試薬および測定装置の組み合わせによりフェリチンのシグナル強度を測定する。各画分のシグナル強度と、上記関係式とから、各画分におけるシグナル強度を吸光度に換算し、モノマー、ダイマーおよびオリゴマーの割合を算出する。
【0022】
ここで、フェリチンの「吸光度」とは、フェリチン抗原単体を分光光度計にて測定したときの波長２８０nmの光の吸収強度をいう。
また、「シグナル強度」とは、免疫学的測定により検出されるシグナルの変化量をいう。上記シグナルは、免疫学的測定の方法によって、濁度、吸光、蛍光、発光、ＲＩ等が挙げられる。シグナル強度は、フェリチンの量に相関して増減するところ、なお、免疫学的測定における反応性がフェリチンモノマー、ダイマーおよびオリゴマーの間で異なることから、上記増減の程度はフェリチンモノマー、ダイマーおよびオリゴマーの間で異なるものとなる。
また、「シグナル強度」とは、免疫学的測定により検出されるシグナルの変化量をいう。上記シグナルは、免疫学的測定の方法によって、濁度、吸光、蛍光、発光、ＲＩ等が挙げられる。シグナル強度は、フェリチンの量に相関して増減するところ、なお、免疫学的測定における反応性がフェリチンモノマー、ダイマーおよびオリゴマーの間で異なることから、上記増減の程度はフェリチンモノマー、ダイマーおよびオリゴマーの間で異なるものとなる。
【0023】
３．検体中のフェリチン測定結果の差の低減方法
本実施形態においては、前述したとおり、標準物質に含まれるフェリチンにおいて、モノマー、ダイマーおよびオリゴマーの構成割合が大きく変動しないように調整することで、検量線が大きく変動することなく安定し、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。
ここで、フェリチンにおけるモノマー等の構成割合が大きく変動しないように調整する方法としては、具体的には、標準物質中のフェリチンとして、下記（１）を満たすフェリチンを用いる方法が挙げられる。
（１）標準物質中に含まれるフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である。
本実施形態においては、前述したとおり、標準物質に含まれるフェリチンにおいて、モノマー、ダイマーおよびオリゴマーの構成割合が大きく変動しないように調整することで、検量線が大きく変動することなく安定し、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。
ここで、フェリチンにおけるモノマー等の構成割合が大きく変動しないように調整する方法としては、具体的には、標準物質中のフェリチンとして、下記（１）を満たすフェリチンを用いる方法が挙げられる。
（１）標準物質中に含まれるフェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である。
【0024】
上記（１）のようにすることで、反応性の低いダイマーやオリゴマー等の割合の変動を抑制することができ、標準物質中のフェリチンの反応性を安定化させ、検量線が安定化し、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。すなわち、上記（１）を満たすフェリチンを用いることで、ロットの異なる標準物質間において、検体中のフェリチン測定結果の差を低減することができる。
上記（１）において、フェリチンモノマーの割合は、９５％以上とすることがさらに好ましく、９８％以上とすることが特に好ましい。
上記（１）において、フェリチンモノマーの割合は、９５％以上とすることがさらに好ましく、９８％以上とすることが特に好ましい。
【0025】
また、後述する実施例にて示すとおり、同じフェリチン測定試薬を用い異なる測定装置にて測定した場合、モノマー、ダイマー、オリゴマーの間で反応性の相違が認められる。このことに起因して、標準物質中のフェリチンがオリゴマー（あるいはダイマー）の割合が多いと、同一ロットの標準物質を用い、同一の検体を測定した場合でも、測定装置間で測定結果に差が生じてしまう場合がある。
これに対し、標準物質に用いるフェリチンにおいて、フェリチンモノマーの割合を高くする、例えば９０％以上、９５％以上、または９８％以上とすることで、ロットの異なる標準物質間で測定値差を低減できるだけでなく、同一ロットの標準物質を用い、異なる免疫学的測定装置間での測定値差を低減することもできる。
これに対し、標準物質に用いるフェリチンにおいて、フェリチンモノマーの割合を高くする、例えば９０％以上、９５％以上、または９８％以上とすることで、ロットの異なる標準物質間で測定値差を低減できるだけでなく、同一ロットの標準物質を用い、異なる免疫学的測定装置間での測定値差を低減することもできる。
【0026】
ここで、本明細書における「ロット」とは、同一の原料を用い、同一の条件のもとに製造された製品単位をいう。例えば、フェリチン等の原料として同一のものを用い、かつ製造された条件が同一であれば、同一ロットの標準物質ということができる。
ロットについては、標準物質だけでなく、フェリチンについても定義することができ、例えば、同一の原料を用い、同一の条件のもとに製造されたフェリチンであれば、同一ロットのフェリチンとなる。フェリチンのロットが同一であれば、フェリチンにおけるモノマー、ダイマー、オリゴマーの構成割合が同一とみなすことができる。
なお、少なくとも２以上の標準物質において、原料として用いたフェリチンのロットがそれぞれ異なる場合は、用いた原料が同一ではないため、標準物質のロットも異なるものとなる。また、少なくとも２以上の標準物質（またはフェリチン）において、製造された工程、場所、時期等が異なる場合には、製造された条件が同一ではないため、標準物質（またはフェリチン）のロットも異なるものとなる。
ロットについては、標準物質だけでなく、フェリチンについても定義することができ、例えば、同一の原料を用い、同一の条件のもとに製造されたフェリチンであれば、同一ロットのフェリチンとなる。フェリチンのロットが同一であれば、フェリチンにおけるモノマー、ダイマー、オリゴマーの構成割合が同一とみなすことができる。
なお、少なくとも２以上の標準物質において、原料として用いたフェリチンのロットがそれぞれ異なる場合は、用いた原料が同一ではないため、標準物質のロットも異なるものとなる。また、少なくとも２以上の標準物質（またはフェリチン）において、製造された工程、場所、時期等が異なる場合には、製造された条件が同一ではないため、標準物質（またはフェリチン）のロットも異なるものとなる。
【0027】
また、少なくとも２以上のロットの標準物質では、上記（１）の他に、標準物質中のフェリチンとして下記（２）を満たすフェリチンを用いてもよい。
（２）標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、標準物質間で８ポイント以下である。
なお、本明細書における「ポイント」はパーセントポイントである。
（２）標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、標準物質間で８ポイント以下である。
なお、本明細書における「ポイント」はパーセントポイントである。
【0028】
上記（２）のようにすることで、最も反応性の低いオリゴマーの割合の変動を抑制することができ、異なるロットの標準物質を用いた場合であっても、標準物質中のフェリチン反応性を安定化させ、検量線が安定化し、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。すなわち、上記（２）を満たすフェリチンを用いることにより、ロットの異なる、少なくとも２以上のロットのフェリチン測定用標準物質間において、検体中のフェリチン測定結果の差を低減することができる。
上記（２）において、標準物質中のフェリチンにおけるオリゴマーの割合の差は、標準物質間で５ポイント以下であることがさらに好ましく、３ポイント以下であることが特に好ましい。
上記（２）において、標準物質中のフェリチンにおけるオリゴマーの割合の差は、標準物質間で５ポイント以下であることがさらに好ましく、３ポイント以下であることが特に好ましい。
【0029】
また、標準物質を製造する場合、上記（１）または（２）のようなフェリチンを用いることで、任意のロットのフェリチンを用いて、それぞれ異なる、複数ロットの標準物質を製造したとしても、フェリチン測定結果の差が低減された標準物質を得ることができる。
【0030】
上記（１）または（２）においては、標準物質に用いるフェリチンが、さらに下記（３）を満たすことが好ましい。
（３）標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合が、５％以下である。
さらに、上記オリゴマーの割合は、４％以下であることがさらに好ましく、３％以下となることが特に好ましい。最も反応性の低いオリゴマーの割合を少なくすることで、標準物質中のフェリチン反応性をより一層安定化させることができ、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。
（３）標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合が、５％以下である。
さらに、上記オリゴマーの割合は、４％以下であることがさらに好ましく、３％以下となることが特に好ましい。最も反応性の低いオリゴマーの割合を少なくすることで、標準物質中のフェリチン反応性をより一層安定化させることができ、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。
【0031】
また、少なくとも２以上のロットの標準物質間においては、標準物質に用いるフェリチンが、上記（１）または（２）に加え、下記（４）を満たすことが好ましい。
（４）上記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンダイマーの割合の差が、標準物質間で１０ポイント以下である。
さらに、標準物質中のフェリチンにおけるダイマーの割合の差は、標準物質間で７ポイント以下となることがさらに好ましく、５ポイント以下となることが特に好ましい。
（４）上記標準物質中のフェリチンにおけるフェリチンダイマーの割合の差が、標準物質間で１０ポイント以下である。
さらに、標準物質中のフェリチンにおけるダイマーの割合の差は、標準物質間で７ポイント以下となることがさらに好ましく、５ポイント以下となることが特に好ましい。
【0032】
さらに、上記（２）においては、標準物質中のフェリチンとして、当該フェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、最も好ましくは９０％以上である、フェリチンを用いることが好ましい。
【0033】
ここで、フェリチンにおけるモノマー等の構成割合が大きく変動しないように調整する（例えば、上記（１）～（４）等）方法としては、例えば、フェリチンにおけるモノマー等の構成割合を確認する方法が挙げられる。この場合において、ロットの異なるフェリチンを用いる場合には、ロットごとに上記構成割合を確認することとなる。フェリチンにおけるモノマー等の構成割合を確認する方法は、上述したとおりであり、フェリチンをゲルろ過クロマトグラフィー等により分画し、構成割合を吸光度換算により表すことができる。
フェリチンにおけるモノマー等の構成割合が、所望の条件（例えば、上記（１）または（２）等）を満たす場合は、既に所望の構成割合に調整されているため、当該フェリチンをそのまま標準物質に用いればよい。一方、所望の条件を満たさない場合には、例えば、ゲルろ過クロマトグラフィー等により分画して得られた各画分を、適宜組み合わせることにより、所望の構成割合となるよう調整することができる。
本実施形態においては、標準物質として調製される前のフェリチンに対し、当該フェリチンにおけるモノマー等の構成割合が調整されることが好ましい。
フェリチンにおけるモノマー等の構成割合が、所望の条件（例えば、上記（１）または（２）等）を満たす場合は、既に所望の構成割合に調整されているため、当該フェリチンをそのまま標準物質に用いればよい。一方、所望の条件を満たさない場合には、例えば、ゲルろ過クロマトグラフィー等により分画して得られた各画分を、適宜組み合わせることにより、所望の構成割合となるよう調整することができる。
本実施形態においては、標準物質として調製される前のフェリチンに対し、当該フェリチンにおけるモノマー等の構成割合が調整されることが好ましい。
【0034】
４．標準物質
本発明の一実施形態に係るフェリチン測定用標準物質は、モノマー等の構成割合が上記のような範囲にあるフェリチンを含むものである。
本実施形態に係る標準物質は、上記フェリチンを含むほか、標準物質に許容されるその他の成分を含有してもよい。このような成分として、例えば、水；塩類；緩衝剤；安定化剤；血清などを適宜添加することができる。
本発明の一実施形態に係るフェリチン測定用標準物質は、モノマー等の構成割合が上記のような範囲にあるフェリチンを含むものである。
本実施形態に係る標準物質は、上記フェリチンを含むほか、標準物質に許容されるその他の成分を含有してもよい。このような成分として、例えば、水；塩類；緩衝剤；安定化剤；血清などを適宜添加することができる。
【0035】
塩類としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化リチウム、塩化セシウム、リン酸塩等を適宜用いることができ、１種を単独でまたは２種以上を併用して用いることができる。塩類の濃度は、例えば５～３０００ｍＭとすることができ、１００～２０００ｍＭとすることができる。
【0036】
緩衝剤としては、ＨＥＰＥＳ、ＰＩＰＥＳ等のグッド緩衝剤、リン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、グリシン緩衝剤、グリシルグリシン緩衝剤等が挙げられ、１種を単独でまたは２種以上を併用して用いることができる。緩衝剤の濃度は、例えば１～２００ｍＭとすることができ、５～５０ｍＭとすることができる。
【0037】
安定化剤は、フェリチンを安定化させるために用いられるものであり、具体的には、ウシ血清アルブミン、スキムミルク、ゼラチン等が挙げられ、１種を単独でまたは２種以上を併用して用いることができる。安定化剤の濃度は、例えば０．０１～２０質量％とすることができ、０．１～１０質量％とすることができる。
【0038】
さらに、標準物質を希釈するために、血清を用いてもよい。かかる血清は、脱脂血清であることが好ましく、フェリチンを含まない血清であることが好ましい。フェリチンを含んでいないことは、例えば、後述する免疫学的測定などにおいて確認することができる。具体的には、当該血清を複数回測定した結果がフェリチン不含有の対照試料と有意差が認められないことをもって、当該血清がフェリチンを含んでいないと判断することができる。
【0039】
さらに、本実施形態に係る標準物質は、本実施形態の効果を損なわない範囲において、その他の添加剤、例えば：アジ化ナトリウム等の防腐剤；安息香酸類、ソルビン酸類等の保存料；オルトフェニルフェノール類、ジフェニル、チアベンタゾール等の防かび剤などを適宜配合することができる。
【0040】
なお、標準物質のｐＨは、具体的にはｐＨ５～１０とすることができ、さらにはｐＨ６～８とすることができる。
【0041】
５．標準物質の製造方法
本発明の一実施形態に係るフェリチン測定用標準物質の製造方法は、モノマー等の構成割合が上記のような範囲にあるフェリチンを用いるほか、常法に従って製造することができる。例えば、フェリチンと、所望によりその他の成分とを混合することで、本実施形態に係る標準物質を製造することができる。
本発明の一実施形態に係るフェリチン測定用標準物質の製造方法は、モノマー等の構成割合が上記のような範囲にあるフェリチンを用いるほか、常法に従って製造することができる。例えば、フェリチンと、所望によりその他の成分とを混合することで、本実施形態に係る標準物質を製造することができる。
【0042】
より具体的には、標準物質を製造するにあたり、下記（１）を満たすフェリチンを用いる：
（１）前記フェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である。
（１）前記フェリチンにおけるフェリチンモノマーの割合が９０％以上である。
【0043】
また、ロットの異なる標準物質を製造する場合、すなわち、第１のロットの標準物質を参照して、異なるロット（第２のロット）の標準物質を製造する場合には、当該第２の標準物質において、下記（２）を満たすフェリチンを用いる：
（２）標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、第１の標準物質と第２の標準物質との間で８ポイント以下である。
ここで、第１のロットの標準物質を参照して、第２のロットの標準物質を製造する場合とは、互いに参照しつつ第１および第２のロットの標準物質を同時に製造してもよく、既に得られている標準物質（第１のロットの標準物質）を参照して、新たな標準物質（第２のロットの標準物質）を製造してもよい。
（２）標準物質中のフェリチンにおけるトリマー以上のフェリチンオリゴマーの割合の差が、第１の標準物質と第２の標準物質との間で８ポイント以下である。
ここで、第１のロットの標準物質を参照して、第２のロットの標準物質を製造する場合とは、互いに参照しつつ第１および第２のロットの標準物質を同時に製造してもよく、既に得られている標準物質（第１のロットの標準物質）を参照して、新たな標準物質（第２のロットの標準物質）を製造してもよい。
【0044】
フェリチンにおけるフェリチンモノマー等の構成割合のより好ましい条件や、標準物質に許容されるその他の成分は、前述したとおりであることが好ましい。
【0045】
６．フェリチンの測定方法
本発明の一実施形態に係るフェリチンの測定方法は、上記のようにして得られたフェリチン測定用標準物質を用いるものである。かかる標準物質を用いることにより、検量線が安定化され、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。
フェリチンの測定は、具体的には、まず、上記フェリチン測定用標準物質を用い、フェリチン測定試薬により、種々の既知濃度のフェリチン測定用標準物質のシグナル強度の測定を行い、検量線を作成する。次に、フェリチン測定試薬により検体のシグナル強度の測定を行い、先に作製した検量線に当てはめて濃度の算出を行う。
本発明の一実施形態に係るフェリチンの測定方法は、上記のようにして得られたフェリチン測定用標準物質を用いるものである。かかる標準物質を用いることにより、検量線が安定化され、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。
フェリチンの測定は、具体的には、まず、上記フェリチン測定用標準物質を用い、フェリチン測定試薬により、種々の既知濃度のフェリチン測定用標準物質のシグナル強度の測定を行い、検量線を作成する。次に、フェリチン測定試薬により検体のシグナル強度の測定を行い、先に作製した検量線に当てはめて濃度の算出を行う。
【0046】
本実施形態に係る測定方法は、フェリチンを免疫学的に測定する。すなわち、フェリチンを抗原として抗フェリチン抗体との特異的な抗原抗体反応を利用するものである。なお、抗フェリチン抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれを用いてもよく、また、組換え抗体を使用してもよく、さらにはＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ等の抗体断片を使用してもよい。
【0047】
免疫学的測定方法としては、例えば、ラテックス凝集法や金コロイド凝集法等の免疫凝集法、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法等）や化学発光測定法等のサンドイッチ法、放射性免疫測定法、イムノクロマトグラフ法等によることができ、特に限定されない。
測定方法としては、例えば、免疫反応液の吸光度や散乱光、発光、蛍光等を光学的手法により測定する方法、標識した放射性同位体の放射能を測定する方法などが挙げられる。光学的手法としては、例えば、汎用の光学的測定装置を用いてもよく、例えば、７１８０形日立自動分析装置（日立ハイテクノロジーズ社製）を用いて測定することができる。
測定方法としては、例えば、免疫反応液の吸光度や散乱光、発光、蛍光等を光学的手法により測定する方法、標識した放射性同位体の放射能を測定する方法などが挙げられる。光学的手法としては、例えば、汎用の光学的測定装置を用いてもよく、例えば、７１８０形日立自動分析装置（日立ハイテクノロジーズ社製）を用いて測定することができる。
【0048】
検体としては、全血、血清、血漿等などが挙げられる。検体はそのまま用いてもよいが、希釈等して測定用の試料としてもよい。
【0049】
以上述べた実施形態に係るフェリチン測定用標準物質によれば、標準物質中のフェリチン反応性を安定化することができ、検量線が安定化するため、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。
【0050】
以上説明した実施形態は、本発明の理解を容易にするために記載されたものであって、本発明を限定するために記載されたものではない。したがって、上記実施形態に開示された各要素は、本発明の技術的範囲に属する全ての設計変更や均等物・均等方法をも含む趣旨である。
【実施例0051】
以下、試験例等を示すことにより本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は下記の試験例等に何ら限定されるものではない。
【0052】
〔試験例１〕ロットの異なるフェリチンを用いたキャリブレータ（標準物質）による測定
フェリチン（ＢＢＩ社製，ヒト肝臓由来，ロット１およびロット２，ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる純度：９５％以上）を用い、フェリチン免疫学的測定用のキャリブレータ（標準物質）を調製した。キャリブレータは、フェリチンの２つのロット（それぞれロット１およびロット２）をそれぞれ用いた２種類（２ロット）を調製した。フェリチン濃度はメーカー表示値に基づき、脱脂血清により希釈して１０００ng/mLに調整し、さらに濃度２５、２５０、５００、７５０ng/mLのキャリブレータも調製した。
なお、希釈に用いた脱脂血清は、市販の脱脂血清を用い、抗フェリチン抗体を用いたアフィニティゲルによりフェリチンを除去したものである。除去後の脱脂血清がフェリチン不含有であることは、ＬＺテスト‘栄研’ＦＥＲを用いて確認した。
フェリチン（ＢＢＩ社製，ヒト肝臓由来，ロット１およびロット２，ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる純度：９５％以上）を用い、フェリチン免疫学的測定用のキャリブレータ（標準物質）を調製した。キャリブレータは、フェリチンの２つのロット（それぞれロット１およびロット２）をそれぞれ用いた２種類（２ロット）を調製した。フェリチン濃度はメーカー表示値に基づき、脱脂血清により希釈して１０００ng/mLに調整し、さらに濃度２５、２５０、５００、７５０ng/mLのキャリブレータも調製した。
なお、希釈に用いた脱脂血清は、市販の脱脂血清を用い、抗フェリチン抗体を用いたアフィニティゲルによりフェリチンを除去したものである。除去後の脱脂血清がフェリチン不含有であることは、ＬＺテスト‘栄研’ＦＥＲを用いて確認した。
【0053】
得られたキャリブレータを用いて検量線を作成し、ヒト検体（No.１～６）におけるフェリチン濃度を測定した。測定試薬としては、ラテックス凝集試薬（栄研化学社製，「ＬＺテスト‘栄研’ＦＥＲ」）を用い、測定装置としては７１８０形日立自動分析装置（日立ハイテクノロジーズ社製）を用いた。
また、得られた結果に基づき、ロット間の相違として、ロット１のキャリブレータで得られた測定値に対する、ロット２のキャリブレータで得られた測定値の比を算出した。
結果を表１に示す。
また、得られた結果に基づき、ロット間の相違として、ロット１のキャリブレータで得られた測定値に対する、ロット２のキャリブレータで得られた測定値の比を算出した。
結果を表１に示す。
【0054】
【表1】
【0055】
表１に示すように、異なるロットのフェリチンを用いた異なるロットのキャリブレータでは、シグナル強度が異なることでそれぞれ検量線が相違するため、測定結果に差が生じてしまうことが明らかとなった。キャリブレータにおけるその他の成分は同様に調製していることから、測定結果の差は、キャリブレータに用いたフェリチンのロットの相違に起因していると考えられた。
【0056】
〔試験例２〕ゲルろ過クロマトグラフィーによる分析
ロット１およびロット２のフェリチンについて、緩衝液（０．０５Ｍ リン酸緩衝液:ｐＨ７．０，塩化ナトリウム：０．３Ｍ）に溶解させ（フェリチン濃度：表示値換算で１０質量％）、以下の条件にてゲルろ過クロマトグラフィーによる分析を行った。なお、分子量マーカーとしてはＧｅｌ Ｆｉｌｔｒａｔｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ（ＢＩＯ ＲＡＤ社製）を用いた。
ロット１およびロット２のフェリチンについて、緩衝液（０．０５Ｍ リン酸緩衝液:ｐＨ７．０，塩化ナトリウム：０．３Ｍ）に溶解させ（フェリチン濃度：表示値換算で１０質量％）、以下の条件にてゲルろ過クロマトグラフィーによる分析を行った。なお、分子量マーカーとしてはＧｅｌ Ｆｉｌｔｒａｔｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ（ＢＩＯ ＲＡＤ社製）を用いた。
【0057】
＝ゲルろ過クロマトグラフィー条件＝
カラム：Ｙａｒｒａ ＳＥＣ３０００（島津ＧＬＣ社製）
移動相：０．０５Ｍ リン酸緩衝液，０．３Ｍ ＮａＣｌ，ｐＨ７．０
流量：０．５mL/min
検出：ＵＶ（２８０nm）
カラム：Ｙａｒｒａ ＳＥＣ３０００（島津ＧＬＣ社製）
移動相：０．０５Ｍ リン酸緩衝液，０．３Ｍ ＮａＣｌ，ｐＨ７．０
流量：０．５mL/min
検出：ＵＶ（２８０nm）
【0058】
ロット１および２のいずれも、３つのピークが認められ、これらはそれぞれフェリチンのモノマー（分子量約４８０ｋＤａ）、ダイマー（同約９６０ｋＤａ）、およびオリゴマー（同約１４００ｋＤａ以上）に対応するピークであると認められた。
ピーク面積の比から求められる構成割合は表２に示すとおりであり、２つのロット間で異なっていたことから、フェリチンにおけるモノマー等の構成比が測定結果の差の原因である可能性が考えられた。
ピーク面積の比から求められる構成割合は表２に示すとおりであり、２つのロット間で異なっていたことから、フェリチンにおけるモノマー等の構成比が測定結果の差の原因である可能性が考えられた。
【0059】
【表2】
【0060】
〔試験例３〕モノマー等を用いたキャリブレータによる測定
試験例２で分画したロット１のフェリチンについて、以下のようにしてフェリチンの吸光係数を決定した。
まず、フェリチンＷＨＯ国際標準（リコンビナント，３ｒｄ ＩＳ，９４／５７２）を基準として上記モノマー画分の濃度を決定し、当該モノマー画分の吸光度よりフェリチンの吸光係数を決定した。
ここで、フェリチン標準は上記ＷＨＯ国際標準に準拠すべきとされているが、ＷＨＯ国際標準はリコンビナントフェリチンタンパク質を血漿で希釈したものであり、フェリチン以外のタンパク質を多く含む。そのため、モノマーの濃度決定に当たっては、ラテックス凝集試薬（ＬＺテスト‘栄研’ＦＥＲ）および７１８０形日立自動分析装置（Ｈ７１８０）を用い、ＷＨＯ国際標準の表示値を基準として上記モノマー画分の濃度を決定した。このようにして得られたモノマー画分の濃度と、当該モノマー画分の吸光度より、フェリチンモノマーの吸光係数（波長：２８０nm）は、１mg/mLにおいて１１．２７と決定された。
試験例２で分画したロット１のフェリチンについて、以下のようにしてフェリチンの吸光係数を決定した。
まず、フェリチンＷＨＯ国際標準（リコンビナント，３ｒｄ ＩＳ，９４／５７２）を基準として上記モノマー画分の濃度を決定し、当該モノマー画分の吸光度よりフェリチンの吸光係数を決定した。
ここで、フェリチン標準は上記ＷＨＯ国際標準に準拠すべきとされているが、ＷＨＯ国際標準はリコンビナントフェリチンタンパク質を血漿で希釈したものであり、フェリチン以外のタンパク質を多く含む。そのため、モノマーの濃度決定に当たっては、ラテックス凝集試薬（ＬＺテスト‘栄研’ＦＥＲ）および７１８０形日立自動分析装置（Ｈ７１８０）を用い、ＷＨＯ国際標準の表示値を基準として上記モノマー画分の濃度を決定した。このようにして得られたモノマー画分の濃度と、当該モノマー画分の吸光度より、フェリチンモノマーの吸光係数（波長：２８０nm）は、１mg/mLにおいて１１．２７と決定された。
【0061】
決定されたモノマー画分の濃度（すなわちフェリチン吸光係数）に基づき、上記脱脂血清を用いてモノマー画分の濃度を１０００ng/mLに調整した。さらに、濃度２５、２５０、５００、７５０ng/mLに調整し、一連のキャリブレータを調製した。
また、上記フェリチン吸光係数に基づき、ダイマー、オリゴマーの各画分の濃度を１０００ng/mLに調整し、モノマー画分と同様にして一連のキャリブレータを調製した。
得られたキャリブレータを用い、試験例１と同様にして検量線を作成し、ヒト検体（No.１～６）におけるフェリチン濃度を測定した。ただし、測定値が１０００ng/mLを超えた結果については、検量線（０～１０００ng/mL）の範囲から外れたものとして対比不可とした。
結果を表３に示す。
また、上記フェリチン吸光係数に基づき、ダイマー、オリゴマーの各画分の濃度を１０００ng/mLに調整し、モノマー画分と同様にして一連のキャリブレータを調製した。
得られたキャリブレータを用い、試験例１と同様にして検量線を作成し、ヒト検体（No.１～６）におけるフェリチン濃度を測定した。ただし、測定値が１０００ng/mLを超えた結果については、検量線（０～１０００ng/mL）の範囲から外れたものとして対比不可とした。
結果を表３に示す。
【0062】
【表3】
【0063】
表３に示されるとおり、モノマー、ダイマー、オリゴマーと多量体化するにつれて、反応性が顕著に減少し、各キャリブレータから得られる検量線が低くなった。その結果、ダイマーやオリゴマーをキャリブレータとした場合、同じ検体であっても測定値が高く算出されてしまうことが明らかとなった。そのため、フェリチン標準は、フェリチンにおけるモノマー、ダイマー、オリゴマー等の構成比率が非常に重要であることが示された。また、モノマーの割合を高めることで、少量のフェリチンでも充分に高い反応性を得られ、生産性の向上に有用であるものと認められた。
【0064】
〔試験例４〕モノマー等の構成比率を調整したキャリブレータによる測定
モノマー、ダイマー、オリゴマーの各画分について、試験例３で決定された濃度に基づき、表４に示す種々の比率にて混合した。得られた混合フェリチンを、試験例３と同様に濃度２５、２５０、５００、７５０、１０００ng/mLに調整し、一連のキャリブレータを調製した。得られたキャリブレータを用い、試験例１と同様にして検量線を作成し、ヒト検体（No.１～６）におけるフェリチン濃度を測定した。ただし、測定値が１０００ng/mLを超えた結果については、検量線（０～１０００ng/mL）の範囲から外れたものとして対比不可とした。
結果を表４に示す。
モノマー、ダイマー、オリゴマーの各画分について、試験例３で決定された濃度に基づき、表４に示す種々の比率にて混合した。得られた混合フェリチンを、試験例３と同様に濃度２５、２５０、５００、７５０、１０００ng/mLに調整し、一連のキャリブレータを調製した。得られたキャリブレータを用い、試験例１と同様にして検量線を作成し、ヒト検体（No.１～６）におけるフェリチン濃度を測定した。ただし、測定値が１０００ng/mLを超えた結果については、検量線（０～１０００ng/mL）の範囲から外れたものとして対比不可とした。
結果を表４に示す。
【0065】
【表4】
【0066】
表４に示されるとおり、キャリブレータにおけるモノマー比率が低下するにつれ、同じ検体であっても測定値が高くなる傾向が確認された。
ロットの異なるフェリチンを標準物質に用いた場合に、同じ検体において測定値の差を小さくするためには、モノマーの割合を高める（例えば、９０％以上とする）ことが有用であると認められた。
また、モノマーの割合が高くないフェリチンを用いた場合であっても、次のロットにおいてフェリチン中の構成比率をなるべく一定に調整すること（例えば、反応性の低いオリゴマーの割合の差を８ポイント以下にする、さらにはダイマーの割合の差を１０ポイント以下にする、など）により、ロット間におけるフェリチン測定値の差を低減することができると認められた。
ロットの異なるフェリチンを標準物質に用いた場合に、同じ検体において測定値の差を小さくするためには、モノマーの割合を高める（例えば、９０％以上とする）ことが有用であると認められた。
また、モノマーの割合が高くないフェリチンを用いた場合であっても、次のロットにおいてフェリチン中の構成比率をなるべく一定に調整すること（例えば、反応性の低いオリゴマーの割合の差を８ポイント以下にする、さらにはダイマーの割合の差を１０ポイント以下にする、など）により、ロット間におけるフェリチン測定値の差を低減することができると認められた。
【0067】
〔試験例５〕異なる測定装置による測定
試験例３で調製したモノマー、ダイマー、オリゴマーの各キャリブレータを用い、測定装置をＴＢＡ－１２０ Ｐｅａｒｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ（キヤノンメディカルシステムズ社製）およびＪＣＡ－ＢＭ６０７０（日本電子社製）に変更して、ヒト検体（No.１～６）におけるフェリチン濃度を測定した。測定試薬としては、試験例３等と同様にラテックス凝集試薬（栄研化学社製，「ＬＺテスト‘栄研’ＦＥＲ」）を用いた。
得られた測定値から、測定装置間における測定値の差を評価した。ただし、測定値が１０００ng/mLを超えた結果については、検量線（０～１０００ng/mL）の範囲から外れたものとして対比不可とした。
結果を表５に示す。
試験例３で調製したモノマー、ダイマー、オリゴマーの各キャリブレータを用い、測定装置をＴＢＡ－１２０ Ｐｅａｒｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ（キヤノンメディカルシステムズ社製）およびＪＣＡ－ＢＭ６０７０（日本電子社製）に変更して、ヒト検体（No.１～６）におけるフェリチン濃度を測定した。測定試薬としては、試験例３等と同様にラテックス凝集試薬（栄研化学社製，「ＬＺテスト‘栄研’ＦＥＲ」）を用いた。
得られた測定値から、測定装置間における測定値の差を評価した。ただし、測定値が１０００ng/mLを超えた結果については、検量線（０～１０００ng/mL）の範囲から外れたものとして対比不可とした。
結果を表５に示す。
【0068】
【表5】
【0069】
表５に示すように、モノマー１００％のキャリブレータを用いた場合、測定装置が異なるものであっても、得られる測定値の差を小さく抑えられるとの結果が得られた。
ここで、同じ測定試薬を用い異なる測定装置で測定する場合、測定原理は同一であるものの、反応セルの材質・大きさ、試薬の添加順序や添加量、加温条件、撹拌条件、検出条件など、測定装置の間でかなりの相違が存在する。これらの相違により、測定装置間での結果の差（ひいては施設間での結果の差）が生じるものと考えられる。
表５の結果より、モノマー、ダイマー、オリゴマー等の反応性の差は、測定装置間での結果の差にも影響するものと認められた。そのため、フェリチン標準物質においてモノマーの割合を高くすることにより、測定装置間での結果の差（ひいては施設間での結果の差）が低減され、安定した測定値を得ることができると認められた。
ここで、同じ測定試薬を用い異なる測定装置で測定する場合、測定原理は同一であるものの、反応セルの材質・大きさ、試薬の添加順序や添加量、加温条件、撹拌条件、検出条件など、測定装置の間でかなりの相違が存在する。これらの相違により、測定装置間での結果の差（ひいては施設間での結果の差）が生じるものと考えられる。
表５の結果より、モノマー、ダイマー、オリゴマー等の反応性の差は、測定装置間での結果の差にも影響するものと認められた。そのため、フェリチン標準物質においてモノマーの割合を高くすることにより、測定装置間での結果の差（ひいては施設間での結果の差）が低減され、安定した測定値を得ることができると認められた。
【産業上の利用可能性】
【0070】
本発明によれば、検体中のフェリチン濃度の測定値を安定化させることができる。フェリチン測定においては精度安定化が長年の課題となっていたところ、本発明によればかかる課題解決の一助となるものである。