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特開2024-32630ラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024032630
(43)【公開日】2024-03-12
(54)【発明の名称】ラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法
(51)【国際特許分類】
B09C 1/10 20060101AFI20240305BHJP
A62D 3/02 20070101ALI20240305BHJP
A62D 101/22 20070101ALN20240305BHJP
【ＦＩ】
B09C1/10
A62D3/02
A62D101:22
【審査請求】有
【請求項の数】3
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022146844
(22)【出願日】2022-09-15
(11)【特許番号】
(45)【特許公報発行日】2023-03-14
(31)【優先権主張番号】202211040852.4
(32)【優先日】2022-08-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(71)【出願人】
【識別番号】521088468
【氏名又は名称】生態環境部南京環境科学研究所
(74)【代理人】
【識別番号】100216471
【弁理士】
【氏名又は名称】瀬戸 麻希
(72)【発明者】
【氏名】応蓉蓉
(72)【発明者】
【氏名】張亜
(72)【発明者】
【氏名】夏氷
(72)【発明者】
【氏名】芦園園
(72)【発明者】
【氏名】馮艶紅
(72)【発明者】
【氏名】張暁雨
(72)【発明者】
【氏名】胡哲偉
(72)【発明者】
【氏名】趙彩衣
(72)【発明者】
【氏名】季文兵
(72)【発明者】
【氏名】尹愛経
(72)【発明者】
【氏名】陳紅楓
(72)【発明者】
【氏名】張斌
【テーマコード（参考）】
4D004
【Ｆターム（参考）】
4D004AA41
4D004AB07
4D004AC07
4D004CA15
4D004CA18
4D004CC07
4D004CC20
4D004DA03
4D004DA09
4D004DA10
4D004DA20
(57)【要約】 （修正有）
【課題】高効率であり、グリーンで環境に優しく、低コスト、簡単なプロセス、操作しやすい利点を有する、ダイオキシン汚染土壌を修復する方法を提供する。
【解決手段】緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製するステップと、ミミズ種を取得するステップと、汚染土壌を前処理するステップと、ラムノリピッドと脱イオン水を混合してラムノリピッド溶液を調製し土壌に投入するステップと、土壌に分水路と補助飼養基穴を設け補助飼養基穴に有機肥料を投入するステップと、ミミズ種を投入して土壌を処理及び修復するステップとを含む、ラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法を提供する。
【選択図】図１
【解決手段】緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製するステップと、ミミズ種を取得するステップと、汚染土壌を前処理するステップと、ラムノリピッドと脱イオン水を混合してラムノリピッド溶液を調製し土壌に投入するステップと、土壌に分水路と補助飼養基穴を設け補助飼養基穴に有機肥料を投入するステップと、ミミズ種を投入して土壌を処理及び修復するステップとを含む、ラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法を提供する。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ステップＳ１、
緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製して用意し、ラムノリピッドを調製
するステップと、
ステップＳ２、
ミミズ種を取得するステップと、
ステップＳ３、
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが３０～５０ｃｍであり、土壌を前処理するステップと、
ステップＳ４、
ステップＳ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合して濃度３００～１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド
溶液を調製した後、Ｓ３で形成された処理層に２～３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド
溶液を施用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
ステップＳ４-２、土壌再処理
ステップＳ４-１処理後の処理層に、３～５ｍ間隔で深さ２０～３０ｃｍ、頂部幅１０～
１５ｃｍ、底部幅５～８ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路（１）を設け、前記分水
路（１）に８～１０ｍ間隔で内径３０～５０ｃｍ、深さ３０～５０ｃｍの補助飼養基穴（
２）を設け、前記補助飼養基穴（２）に補助飼養基穴（２）の容積の４０～６０％を占め
る有機肥料を投入し、
ステップＳ４-３、ミミズ種の投入
３０～８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
ステップＳ４-４、土壌の処理修復
前記分水路（１）によって汚染土壌の含水率を４０～５０％に保持し、この含水量を保持
した条件下で継続的に１２日修復した後、自然条件下で２１～３０日修復する、土壌を修
復処理するステップと、
を含むことを特徴とするラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌
を修復する方法。
緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製して用意し、ラムノリピッドを調製
するステップと、
ステップＳ２、
ミミズ種を取得するステップと、
ステップＳ３、
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが３０～５０ｃｍであり、土壌を前処理するステップと、
ステップＳ４、
ステップＳ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合して濃度３００～１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド
溶液を調製した後、Ｓ３で形成された処理層に２～３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド
溶液を施用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
ステップＳ４-２、土壌再処理
ステップＳ４-１処理後の処理層に、３～５ｍ間隔で深さ２０～３０ｃｍ、頂部幅１０～
１５ｃｍ、底部幅５～８ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路（１）を設け、前記分水
路（１）に８～１０ｍ間隔で内径３０～５０ｃｍ、深さ３０～５０ｃｍの補助飼養基穴（
２）を設け、前記補助飼養基穴（２）に補助飼養基穴（２）の容積の４０～６０％を占め
る有機肥料を投入し、
ステップＳ４-３、ミミズ種の投入
３０～８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
ステップＳ４-４、土壌の処理修復
前記分水路（１）によって汚染土壌の含水率を４０～５０％に保持し、この含水量を保持
した条件下で継続的に１２日修復した後、自然条件下で２１～３０日修復する、土壌を修
復処理するステップと、
を含むことを特徴とするラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌
を修復する方法。
【請求項2】
前記ステップＳ１では、前記ラムノリピッドを発酵および調製する方法は、
ステップＳ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３５～３７℃、振動回転数２３０～
２５０ｒ／ｍｉｎの条件下で４～７日発酵培養して、発酵液を得ること、
ステップＳ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７０００～７５００ｒ／ｍｉｎの条件下で２０～２５ｍｉｎ遠心分離処理して菌
体を除去して上澄み液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出することを含む、こと
を特徴とする請求項１に記載の方法。
ステップＳ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３５～３７℃、振動回転数２３０～
２５０ｒ／ｍｉｎの条件下で４～７日発酵培養して、発酵液を得ること、
ステップＳ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７０００～７５００ｒ／ｍｉｎの条件下で２０～２５ｍｉｎ遠心分離処理して菌
体を除去して上澄み液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出することを含む、こと
を特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ステップＳ１-１１では、前記第１液体発酵培地の成分には、グリセロール４０～５
０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１．
０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ
４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍ
ｌが含まれ、ｐＨ＝６．５～７．０である、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１．
０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ
４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍ
ｌが含まれ、ｐＨ＝６．５～７．０である、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記ステップＳ１-１２では、前記抽出法としては、濃度９８％の硫酸を用いて上澄み液
のｐＨを１～１．５に調節し、４～８℃の条件下で１０～１２ｈ静置した後、体積比２：
１のクロロホルム-メタノール混合液で等量の上澄み液を抽出し、静置・層別した後下層
を取り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出し、静置・層別した後下
層を取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピッドを得る、ことを特徴
とする請求項２に記載の方法。
のｐＨを１～１．５に調節し、４～８℃の条件下で１０～１２ｈ静置した後、体積比２：
１のクロロホルム-メタノール混合液で等量の上澄み液を抽出し、静置・層別した後下層
を取り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出し、静置・層別した後下
層を取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピッドを得る、ことを特徴
とする請求項２に記載の方法。
【請求項5】
前記有機肥料は、質量％で４０～５０％の家畜糞便、１５～２５％ストロー、５～１０％
おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られるものである、ことを特徴とす
る請求項１に記載の方法。
おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られるものである、ことを特徴とす
る請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記発酵の方法としては、前記割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した後家
畜糞便と混合して混合マトリクスを得て、混合マトリクスに発酵剤を加えて混合マトリク
スの含水量が４０～５０％になるまで水を添加し、１～３日堆積発酵した後反転させ、プ
ラスチックフィルムで覆って２１～３０日継続的に発酵し、継続的に発酵する過程中３～
５日ごとに反転させる、ことを特徴とする請求項５に記載の方法。
畜糞便と混合して混合マトリクスを得て、混合マトリクスに発酵剤を加えて混合マトリク
スの含水量が４０～５０％になるまで水を添加し、１～３日堆積発酵した後反転させ、プ
ラスチックフィルムで覆って２１～３０日継続的に発酵し、継続的に発酵する過程中３～
５日ごとに反転させる、ことを特徴とする請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、汚染土壌修復の技術分野に関し、具体的には、ラムノリピッドとミミズを組み
合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法に関する。
合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ダイオキシンは、環境中に広く存在する残留性有機汚染物であり、塩素を含む多くの化学
プロセスから無意識に副産物として発生するものである。ダイオキシン類の天然の貯蔵庫
として、土壌は乾湿の大気沈着、有機塩素系農薬の散布、下水汚泥の農業利用、廃棄物沈
着など、さまざまな経路で土壌環境に入り込む。
プロセスから無意識に副産物として発生するものである。ダイオキシン類の天然の貯蔵庫
として、土壌は乾湿の大気沈着、有機塩素系農薬の散布、下水汚泥の農業利用、廃棄物沈
着など、さまざまな経路で土壌環境に入り込む。
【0003】
土壌中のダイオキシン類は極めて安定で、自然環境下では非常にゆっくりと分解され、難
分解性である。土壌中のダイオキシン類を処理する既存技術としては、光分解、化学分解
、物理分解、バイオレメディエーションが一般的である。しかし、バイオレメディエーシ
ョンは、消費量が少なく、高効率で環境に優しいことから、近年広く注目されている土壌
浄化手段である。より効率的な分解株の単離と分解条件の探索により、バイオレメディエ
ーションは土壌ダイオキシン汚染の処理に重要な役割を果たすと思われている。
分解性である。土壌中のダイオキシン類を処理する既存技術としては、光分解、化学分解
、物理分解、バイオレメディエーションが一般的である。しかし、バイオレメディエーシ
ョンは、消費量が少なく、高効率で環境に優しいことから、近年広く注目されている土壌
浄化手段である。より効率的な分解株の単離と分解条件の探索により、バイオレメディエ
ーションは土壌ダイオキシン汚染の処理に重要な役割を果たすと思われている。
【発明の概要】
【0004】
ラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法は、
Ｓ１、ラムノリピッドを調製するステップと、
緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製して用意し、
Ｓ２、ミミズ種を取得するステップと、
Ｓ３、土壌を前処理するステップと、
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて処理層を形成し、ここで
、ほぐし深さが３０～５０ｃｍであり、
Ｓ４、土壌を修復処理するステップと、
Ｓ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合して濃度３００～１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド
溶液を調製した後、Ｓ３で形成された処理層に２～３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド
溶液を施用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
Ｓ４-２、土壌再処理
Ｓ４-１処理後の処理層に、３～５ｍ間隔で深さ２０～３０ｃｍ、頂部幅１０～１５ｃｍ
、底部幅５～８ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路（１）を設け、前記分水路（１）
に８～１０ｍ間隔で内径３０～５０ｃｍ、深さ３０～５０ｃｍの補助飼養基穴（２）を設
け、前記補助飼養基穴（２）に補助飼養基穴（２）の容積の４０～６０％を占める有機肥
料を投入し、
Ｓ４-３、ミミズ種の投入
３０～８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
Ｓ４-４、土壌の処理修復
前記分水路（１）によって汚染土壌の含水率を４０～５０％に保持し、この含水量を保持
した条件下で継続的に１２日修復した後、自然条件下で２１～３０日修復する、を含む。
説明すると、分水路の設置により、土壌修復処理の前期に汚染土壌の含水量を保持し、補
助飼養基穴を設けて有機肥料を投入することにより、分水路の補水過程に伴い土壌への有
機肥料の浸透を促進することができる。
本発明の一側面として、前記ステップＳ１では、前記ラムノリピッドを発酵および調製す
る方法は、
Ｓ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３５～３７℃、振動回転数２３０～
２５０ｒ／ｍｉｎの条件下で４～７日発酵培養して、発酵液を得ること、
Ｓ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７０００～７５００ｒ／ｍｉｎの条件下で２０～２５ｍｉｎ遠心分離処理して菌
体を除去して上澄み液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出することを含む。
本発明の一側面として、前記ステップＳ１-１１では、前記第１液体発酵培地の成分には
、グリセロール４０～５０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ
／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ
１．０ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ
、脱イオン水１０００ｍｌが含まれ、ｐＨ＝６．５～７．０である。
本発明の一側面として、前記ステップＳ１-１２では、前記抽出法としては、濃度９８％
の硫酸を用いて上澄み液のｐＨを１～１．５に調節し、４～８℃の条件下で１０～１２ｈ
静置した後、体積比２：１のクロロホルム-メタノール混合液で等量の上澄み液を抽出し
、静置・層別した後下層を取り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出
し、静置・層別した後下層を取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピ
ッドを得る。
本発明の別の側面として、前記ステップＳ１では、前記ラムノリピッドを発酵および調製
する方法は、
Ｓ１-２１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第２液体発酵培地に投入して温度２８～３２℃、振動回転数２８０～
３００ｒ／ｍｉｎの条件下で８～１０日発酵培養して、発酵液を得ること、
Ｓ１-２２、ラムノリピッド抽出
発酵液を５０００～５５００ｒ／ｍｉｎの条件下で２５～３０ｍｉｎ遠心分離処理して菌
体を除去して上澄み液を取り、次に膜分離法でラムノリピッドを抽出することを含む。
ここで、前記ステップＳ１-２１では、前記第２液体発酵培地の成分には、大豆油１００
～１２０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ
４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ、Ｆ
ｅＳＯ４０．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４０．３ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍｌが含まれ、ｐ
Ｈ＝６．０～６．５である。
ここで、前記ステップＳ１-２２では、前記膜分離法としては、二重蒸留水を用いて発酵
液を５～２０倍希釈した後、分画分子量１００００の濾過膜を用いて２５℃、０．５Ｍｐ
ａ、２００～３００Ｌ／ｈの条件下で限外濾過処理し、次に分画分子量３００の濾過膜を
用いて限外濾過液を２５℃、１．０Ｍｐａ条件下でナノ濾過処理し、溶媒を蒸発させてラ
ムノリピッドを得る。
本発明の一側面として、前記有機肥料は、照質量％で４０～５０％の家畜糞便、１５～２
５％ストロー、５～１０％おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られるも
のである。
説明すると、家畜糞便は、具体的に、豚、牛、羊、鶏、鴨などの１つまたは複数の飼養家
畜の糞便であり、ストローは具体的に、小麦、トウモロコシ、米、大豆などの１つまたは
複数の成熟作物のストローであり、おがくず、落ち葉は特に限定されなく、家畜糞便、ス
トロー、おがくず、落ち葉は地域に応じて現地調達して輸送コストを低減する。
本発明の一側面として、前記発酵方法としては、前記割合でストロー、落ち葉、おがくず
を混合し粉砕した後家畜糞便と混合して、混合マトリクスを得、混合マトリクスに発酵剤
を加え混合マトリクスの含水量が４０～５０％になるまで水を添加し、１～３日堆積発酵
した後反転させ、プラスチックフィルムで覆って２１～３０日継続的に発酵し、ここで、
継続的に発酵する過程中３～５日ごとに反転させる。
説明すると、ミミズの生命活動は、土壌中の汚染物の移動および変質を直接的または間接
的に影響を与え、この発酵方法で調製された有機肥料は、ミミズの活動を効果的に促進し
、その生命活動をより活発させることができ、ここで、発酵剤は市販されている有機肥料
発酵剤であり、具体的な使用量は実際の製品のガイド基準に準じて使用する。
Ｓ１、ラムノリピッドを調製するステップと、
緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製して用意し、
Ｓ２、ミミズ種を取得するステップと、
Ｓ３、土壌を前処理するステップと、
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて処理層を形成し、ここで
、ほぐし深さが３０～５０ｃｍであり、
Ｓ４、土壌を修復処理するステップと、
Ｓ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合して濃度３００～１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド
溶液を調製した後、Ｓ３で形成された処理層に２～３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド
溶液を施用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
Ｓ４-２、土壌再処理
Ｓ４-１処理後の処理層に、３～５ｍ間隔で深さ２０～３０ｃｍ、頂部幅１０～１５ｃｍ
、底部幅５～８ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路（１）を設け、前記分水路（１）
に８～１０ｍ間隔で内径３０～５０ｃｍ、深さ３０～５０ｃｍの補助飼養基穴（２）を設
け、前記補助飼養基穴（２）に補助飼養基穴（２）の容積の４０～６０％を占める有機肥
料を投入し、
Ｓ４-３、ミミズ種の投入
３０～８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
Ｓ４-４、土壌の処理修復
前記分水路（１）によって汚染土壌の含水率を４０～５０％に保持し、この含水量を保持
した条件下で継続的に１２日修復した後、自然条件下で２１～３０日修復する、を含む。
説明すると、分水路の設置により、土壌修復処理の前期に汚染土壌の含水量を保持し、補
助飼養基穴を設けて有機肥料を投入することにより、分水路の補水過程に伴い土壌への有
機肥料の浸透を促進することができる。
本発明の一側面として、前記ステップＳ１では、前記ラムノリピッドを発酵および調製す
る方法は、
Ｓ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３５～３７℃、振動回転数２３０～
２５０ｒ／ｍｉｎの条件下で４～７日発酵培養して、発酵液を得ること、
Ｓ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７０００～７５００ｒ／ｍｉｎの条件下で２０～２５ｍｉｎ遠心分離処理して菌
体を除去して上澄み液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出することを含む。
本発明の一側面として、前記ステップＳ１-１１では、前記第１液体発酵培地の成分には
、グリセロール４０～５０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ
／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ
１．０ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ
、脱イオン水１０００ｍｌが含まれ、ｐＨ＝６．５～７．０である。
本発明の一側面として、前記ステップＳ１-１２では、前記抽出法としては、濃度９８％
の硫酸を用いて上澄み液のｐＨを１～１．５に調節し、４～８℃の条件下で１０～１２ｈ
静置した後、体積比２：１のクロロホルム-メタノール混合液で等量の上澄み液を抽出し
、静置・層別した後下層を取り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出
し、静置・層別した後下層を取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピ
ッドを得る。
本発明の別の側面として、前記ステップＳ１では、前記ラムノリピッドを発酵および調製
する方法は、
Ｓ１-２１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第２液体発酵培地に投入して温度２８～３２℃、振動回転数２８０～
３００ｒ／ｍｉｎの条件下で８～１０日発酵培養して、発酵液を得ること、
Ｓ１-２２、ラムノリピッド抽出
発酵液を５０００～５５００ｒ／ｍｉｎの条件下で２５～３０ｍｉｎ遠心分離処理して菌
体を除去して上澄み液を取り、次に膜分離法でラムノリピッドを抽出することを含む。
ここで、前記ステップＳ１-２１では、前記第２液体発酵培地の成分には、大豆油１００
～１２０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ
４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ、Ｆ
ｅＳＯ４０．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４０．３ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍｌが含まれ、ｐ
Ｈ＝６．０～６．５である。
ここで、前記ステップＳ１-２２では、前記膜分離法としては、二重蒸留水を用いて発酵
液を５～２０倍希釈した後、分画分子量１００００の濾過膜を用いて２５℃、０．５Ｍｐ
ａ、２００～３００Ｌ／ｈの条件下で限外濾過処理し、次に分画分子量３００の濾過膜を
用いて限外濾過液を２５℃、１．０Ｍｐａ条件下でナノ濾過処理し、溶媒を蒸発させてラ
ムノリピッドを得る。
本発明の一側面として、前記有機肥料は、照質量％で４０～５０％の家畜糞便、１５～２
５％ストロー、５～１０％おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られるも
のである。
説明すると、家畜糞便は、具体的に、豚、牛、羊、鶏、鴨などの１つまたは複数の飼養家
畜の糞便であり、ストローは具体的に、小麦、トウモロコシ、米、大豆などの１つまたは
複数の成熟作物のストローであり、おがくず、落ち葉は特に限定されなく、家畜糞便、ス
トロー、おがくず、落ち葉は地域に応じて現地調達して輸送コストを低減する。
本発明の一側面として、前記発酵方法としては、前記割合でストロー、落ち葉、おがくず
を混合し粉砕した後家畜糞便と混合して、混合マトリクスを得、混合マトリクスに発酵剤
を加え混合マトリクスの含水量が４０～５０％になるまで水を添加し、１～３日堆積発酵
した後反転させ、プラスチックフィルムで覆って２１～３０日継続的に発酵し、ここで、
継続的に発酵する過程中３～５日ごとに反転させる。
説明すると、ミミズの生命活動は、土壌中の汚染物の移動および変質を直接的または間接
的に影響を与え、この発酵方法で調製された有機肥料は、ミミズの活動を効果的に促進し
、その生命活動をより活発させることができ、ここで、発酵剤は市販されている有機肥料
発酵剤であり、具体的な使用量は実際の製品のガイド基準に準じて使用する。
【0005】
従来技術と比較すると、本発明は以下の有益な効果を有する。本発明はプロセス全体が合
理的であり、ラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復し、土
壌中の微生物の代謝経路を効果的に変更でき、生物活性剤としてのラムノリピッドの添加
により、ダイオキシンなどの汚染物の生物学的利用度を向上させ、微生物の応答を刺激し
、ミミズの活動によって生成された酵素や優勢菌は汚染物を効果的に分解し、高効率、グ
リーンで環境に優しく、低コストなどの利点を有し、添加した有機肥料はミミズの成長に
栄養を与え、ミミズの活動を促進し、本発明のプロセスは、簡単なプロセス、操作しやす
い利点を有し、幅広い普及に適している。
理的であり、ラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復し、土
壌中の微生物の代謝経路を効果的に変更でき、生物活性剤としてのラムノリピッドの添加
により、ダイオキシンなどの汚染物の生物学的利用度を向上させ、微生物の応答を刺激し
、ミミズの活動によって生成された酵素や優勢菌は汚染物を効果的に分解し、高効率、グ
リーンで環境に優しく、低コストなどの利点を有し、添加した有機肥料はミミズの成長に
栄養を与え、ミミズの活動を促進し、本発明のプロセスは、簡単なプロセス、操作しやす
い利点を有し、幅広い普及に適している。
【図面の簡単な説明】
【0006】
【図1】本発明のプロセスのフローチャートである。
【図2】本発明の処理層内の分水路と補助飼養基穴の局所的な構造の概略図である。
【図3】本発明の処理層内の分水路と補助飼養基穴の局所上面図である。
【図4】本発明の処理層内の分水路と補助飼養基穴の局所断面図である。
【0007】
[符号の説明]
１ 分水路
２ 補助飼養基穴
１ 分水路
２ 補助飼養基穴
【発明を実施するための形態】
【0008】
実施例１
図１に示すラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法
は以下のステップを含む。
Ｓ１、ラムノリピッドの調製
Ｓ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３５℃、振動回転数２３０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で４日発酵培養して、発酵液を得、ここで、第１液体発酵培地の成分には、グ
リセロール４０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ
２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／
Ｌ、ＦｅＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ、脱イオン
水１０００ｍｌが含まれ、ｐＨ＝６．５であり、
Ｓ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７０００ｒ／ｍｉｎの条件下で２０ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出し、ここで、抽出法として、濃度９８％の
硫酸で上澄み液のｐＨを１に調節し、４℃条件下で１０ｈ静置し、体積比２：１のクロロ
ホルム-メタノール混合液を用いて等量の上澄み液を抽出し、静置・層別した後下層を取
り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出し、静置・層別した後下層を
取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピッドを得、
Ｓ２、ミミズ種の取得
病気や傷がなく、はっきりとしたリング形状を持ち、体重３．０±０．５ｇの成熟したウ
イリアムズリングワームを得、
Ｓ３、土壌前処理
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて、処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが３０ｃｍであり、
Ｓ４、土壌修復処理
Ｓ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合し調製して濃度３００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド溶液
を得た後、Ｓ３で形成された処理層を２Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド溶液を施用し
、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
Ｓ４-２、土壌再処理
図２、３、４に示すように、Ｓ４-１処理後の処理層内で３ｍ間隔で深さ２０ｃｍ、頂部
幅１０ｃｍ、底部幅５ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路１を設け、分水路１に８ｍ
間隔で内径３０ｃｍ、深さ３０ｃｍの補助飼養基穴２を設け、補助飼養基穴２に補助飼養
基穴２の容積４０％の有機肥料を投入し、有機肥料は、質量％で４０％の家畜糞便、１５
％ストロー、５％おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られたものであり
、ここで、発酵方法として、割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した後家畜
糞便と混合して、混合マトリクスを得、混合マトリクスに発酵剤を加えて、混合マトリク
スの含水量が４０％になるまで水を添加し、１日堆積発酵した後反転させ、プラスチック
フィルムで覆って２１日継続的に発酵し、ここで、継続的に発酵する過程中３日ごとに反
転させ、発酵剤は市販されている有機肥料発酵剤であり、具体的な使用量は実際の製品の
ガイド基準に準じて使用することができ、
Ｓ４-３、ミミズ種の投入
３０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
Ｓ４-４、土壌の処理修復
分水路１で汚染土壌の含水率を４０％に保持し、この含水量を保持した条件下で１２日継
続的に修復した後、自然条件下で２１日修復する。
図１に示すラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法
は以下のステップを含む。
Ｓ１、ラムノリピッドの調製
Ｓ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３５℃、振動回転数２３０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で４日発酵培養して、発酵液を得、ここで、第１液体発酵培地の成分には、グ
リセロール４０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ
２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／
Ｌ、ＦｅＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ、脱イオン
水１０００ｍｌが含まれ、ｐＨ＝６．５であり、
Ｓ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７０００ｒ／ｍｉｎの条件下で２０ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出し、ここで、抽出法として、濃度９８％の
硫酸で上澄み液のｐＨを１に調節し、４℃条件下で１０ｈ静置し、体積比２：１のクロロ
ホルム-メタノール混合液を用いて等量の上澄み液を抽出し、静置・層別した後下層を取
り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出し、静置・層別した後下層を
取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピッドを得、
Ｓ２、ミミズ種の取得
病気や傷がなく、はっきりとしたリング形状を持ち、体重３．０±０．５ｇの成熟したウ
イリアムズリングワームを得、
Ｓ３、土壌前処理
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて、処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが３０ｃｍであり、
Ｓ４、土壌修復処理
Ｓ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合し調製して濃度３００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド溶液
を得た後、Ｓ３で形成された処理層を２Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド溶液を施用し
、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
Ｓ４-２、土壌再処理
図２、３、４に示すように、Ｓ４-１処理後の処理層内で３ｍ間隔で深さ２０ｃｍ、頂部
幅１０ｃｍ、底部幅５ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路１を設け、分水路１に８ｍ
間隔で内径３０ｃｍ、深さ３０ｃｍの補助飼養基穴２を設け、補助飼養基穴２に補助飼養
基穴２の容積４０％の有機肥料を投入し、有機肥料は、質量％で４０％の家畜糞便、１５
％ストロー、５％おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られたものであり
、ここで、発酵方法として、割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した後家畜
糞便と混合して、混合マトリクスを得、混合マトリクスに発酵剤を加えて、混合マトリク
スの含水量が４０％になるまで水を添加し、１日堆積発酵した後反転させ、プラスチック
フィルムで覆って２１日継続的に発酵し、ここで、継続的に発酵する過程中３日ごとに反
転させ、発酵剤は市販されている有機肥料発酵剤であり、具体的な使用量は実際の製品の
ガイド基準に準じて使用することができ、
Ｓ４-３、ミミズ種の投入
３０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
Ｓ４-４、土壌の処理修復
分水路１で汚染土壌の含水率を４０％に保持し、この含水量を保持した条件下で１２日継
続的に修復した後、自然条件下で２１日修復する。
【0009】
実施例２
図１に示すラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法
は以下のステップを含む。
Ｓ１、ラムノリピッドの調製
Ｓ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３６℃、振動回転数２４０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で４～７日発酵培養して、発酵液を得、ここで、第１液体発酵培地の成分には
、グリセロール４５ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、
ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０
ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ、脱イ
オン水１０００ｍｌが含まれ、ｐＨ＝６．８であり、
Ｓ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７３００ｒ／ｍｉｎの条件下で２２ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出し、ここで、抽出法として、濃度９８％の
硫酸を用いて上澄み液のｐＨを１．３に調節し、５℃条件下で１１ｈ静置した後、体積比
２：１のクロロホルム-メタノール混合液で等量の上澄み液を抽出し、静置・層別した後
下層を取り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出し、静置・層別した
後下層を取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピッドを得、
Ｓ２、ミミズ種取得
病気や傷がなく、はっきりとしたリング形状を持ち、体重３．０±０．５ｇの成熟したウ
イリアムズリングワームを得、
Ｓ３、土壌前処理
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて、処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが４０ｃｍであり、
Ｓ４、土壌修復処理
Ｓ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合し調製して濃度５００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド溶液
を得た後、Ｓ３で形成された処理層を２．５Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド溶液を施
用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
Ｓ４-２、土壌再処理
図２、３、４に示すように、Ｓ４-１処理後の処理層内で４．５ｍ間隔で深さ２５ｃｍ、
頂部幅１２ｃｍ、底部幅６ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路１を設け、分水路１に
９ｍ間隔で内径４０ｃｍ、深さ４０ｃｍの補助飼養基穴２を設け、補助飼養基穴２に補助
飼養基穴２の容積５０％の有機肥料を投入し、有機肥料は質量％で４５％の家畜糞便、２
０％ストロー、８％おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られたものであ
り、ここで、発酵方法として、割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した後家
畜糞便と混合して、混合マトリクスを得、混合マトリクスに発酵剤を加え混合マトリクス
の含水量が４５％になるまで水を添加し、２日堆積発酵した後反転させ、プラスチックフ
ィルムで覆って２８日継続的に発酵し、ここで、継続的に発酵する過程中４日間隔で反転
させ、発酵剤は市販されている有機肥料発酵剤であり、具体的な使用量は実際の製品のガ
イド基準に準じて使用することができ、
Ｓ４-３、ミミズ種の投入
６０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
Ｓ４-４、土壌の処理修復
分水路１によって汚染土壌の含水率を４５％に保持し、この含水量を保持した条件下で１
２日継続的に修復した後、自然条件下で２８日修復する。
図１に示すラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法
は以下のステップを含む。
Ｓ１、ラムノリピッドの調製
Ｓ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３６℃、振動回転数２４０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で４～７日発酵培養して、発酵液を得、ここで、第１液体発酵培地の成分には
、グリセロール４５ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、
ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０
ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ、脱イ
オン水１０００ｍｌが含まれ、ｐＨ＝６．８であり、
Ｓ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７３００ｒ／ｍｉｎの条件下で２２ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出し、ここで、抽出法として、濃度９８％の
硫酸を用いて上澄み液のｐＨを１．３に調節し、５℃条件下で１１ｈ静置した後、体積比
２：１のクロロホルム-メタノール混合液で等量の上澄み液を抽出し、静置・層別した後
下層を取り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出し、静置・層別した
後下層を取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピッドを得、
Ｓ２、ミミズ種取得
病気や傷がなく、はっきりとしたリング形状を持ち、体重３．０±０．５ｇの成熟したウ
イリアムズリングワームを得、
Ｓ３、土壌前処理
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて、処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが４０ｃｍであり、
Ｓ４、土壌修復処理
Ｓ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合し調製して濃度５００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド溶液
を得た後、Ｓ３で形成された処理層を２．５Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド溶液を施
用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
Ｓ４-２、土壌再処理
図２、３、４に示すように、Ｓ４-１処理後の処理層内で４．５ｍ間隔で深さ２５ｃｍ、
頂部幅１２ｃｍ、底部幅６ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路１を設け、分水路１に
９ｍ間隔で内径４０ｃｍ、深さ４０ｃｍの補助飼養基穴２を設け、補助飼養基穴２に補助
飼養基穴２の容積５０％の有機肥料を投入し、有機肥料は質量％で４５％の家畜糞便、２
０％ストロー、８％おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られたものであ
り、ここで、発酵方法として、割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した後家
畜糞便と混合して、混合マトリクスを得、混合マトリクスに発酵剤を加え混合マトリクス
の含水量が４５％になるまで水を添加し、２日堆積発酵した後反転させ、プラスチックフ
ィルムで覆って２８日継続的に発酵し、ここで、継続的に発酵する過程中４日間隔で反転
させ、発酵剤は市販されている有機肥料発酵剤であり、具体的な使用量は実際の製品のガ
イド基準に準じて使用することができ、
Ｓ４-３、ミミズ種の投入
６０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
Ｓ４-４、土壌の処理修復
分水路１によって汚染土壌の含水率を４５％に保持し、この含水量を保持した条件下で１
２日継続的に修復した後、自然条件下で２８日修復する。
【0010】
実施例３
図１に示すラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法
は以下のステップを含む。
Ｓ１、ラムノリピッドの調製
Ｓ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３７℃、振動回転数２５０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で７日発酵培養して、発酵液を得、ここで、第１液体発酵培地の成分には、グ
リセロール５０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ
２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／
Ｌ、ＦｅＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ、脱イオン
水１０００ｍｌが含まれ、ｐＨ＝７．０であり、
Ｓ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７５００ｒ／ｍｉｎの条件下で２５ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出し、ここで、抽出法として、濃度９８％の
硫酸を用いて上澄み液のｐＨを１．５に調節し、８℃条件下で１２ｈ静置した後、体積比
２：１のクロロホルム-メタノール混合液で等量の上澄み液を抽出し、静置・層別した後
下層を取り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出し、静置・層別した
後下層を取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピッドを得、
Ｓ２、ミミズ種取得
病気や傷がなく、はっきりとしたリング形状を持ち、体重３．０±０．５ｇの成熟したウ
イリアムズリングワームを得、
Ｓ３、土壌前処理
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて、処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが５０ｃｍであり、
Ｓ４、土壌修復処理
Ｓ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合し調製して濃度１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド溶
液を得た後、Ｓ３で形成された処理層を３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド溶液を施用
し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
Ｓ４-２、土壌再処理
図２、３、４に示すように、Ｓ４-１処理後の処理層内に５ｍ間隔で深さ３０ｃｍ、頂部
幅１５ｃｍ、底部幅８ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路１を設け、分水路１に８～
１０ｍ間隔で内径５０ｃｍ、深さ５０ｃｍの補助飼養基穴２を設け、補助飼養基穴２に補
助飼養基穴２の容積６０％の有機肥料を投入し、有機肥料は質量％で５０％の家畜糞便、
２５％ストロー、１０％おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られたもの
であり、ここで、発酵方法として、割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した
後家畜糞便と混合し、混合マトリクスを得、混合マトリクスに発酵剤を加え混合マトリク
スの含水量が５０％になるまで水を添加し、３日堆積発酵した後反転させ、プラスチック
フィルムで覆って３０日継続的に発酵し、ここで、継続的に発酵する過程中５日ごとに反
転させ、発酵剤は市販されている有機肥料発酵剤であり、具体的な使用量は実際の製品の
ガイド基準に準じて使用することができ、
Ｓ４-３、ミミズ種の投入
８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
Ｓ４-４、土壌の処理修復
分水路１によって汚染土壌の含水率を５０％に保持し、この含水量を保持した条件下で１
２日継続的に修復した後、自然条件下で３０日修復する。
図１に示すラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌を修復する方法
は以下のステップを含む。
Ｓ１、ラムノリピッドの調製
Ｓ１-１１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第１液体発酵培地に投入して温度３７℃、振動回転数２５０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で７日発酵培養して、発酵液を得、ここで、第１液体発酵培地の成分には、グ
リセロール５０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ
２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／
Ｌ、ＦｅＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．３ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２Ｏ０．１ｇ／Ｌ、脱イオン
水１０００ｍｌが含まれ、ｐＨ＝７．０であり、
Ｓ１-１２、ラムノリピッド抽出
発酵液を７５００ｒ／ｍｉｎの条件下で２５ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に抽出法でラムノリピッドを抽出し、ここで、抽出法として、濃度９８％の
硫酸を用いて上澄み液のｐＨを１．５に調節し、８℃条件下で１２ｈ静置した後、体積比
２：１のクロロホルム-メタノール混合液で等量の上澄み液を抽出し、静置・層別した後
下層を取り、次に中層をクロロホルム-メタノール混合液で二次抽出し、静置・層別した
後下層を取り、２回の抽出液を合わせて溶媒を蒸発させてラムノリピッドを得、
Ｓ２、ミミズ種取得
病気や傷がなく、はっきりとしたリング形状を持ち、体重３．０±０．５ｇの成熟したウ
イリアムズリングワームを得、
Ｓ３、土壌前処理
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて、処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが５０ｃｍであり、
Ｓ４、土壌修復処理
Ｓ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合し調製して濃度１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド溶
液を得た後、Ｓ３で形成された処理層を３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド溶液を施用
し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
Ｓ４-２、土壌再処理
図２、３、４に示すように、Ｓ４-１処理後の処理層内に５ｍ間隔で深さ３０ｃｍ、頂部
幅１５ｃｍ、底部幅８ｃｍの縦断面二等辺三角形構造の分水路１を設け、分水路１に８～
１０ｍ間隔で内径５０ｃｍ、深さ５０ｃｍの補助飼養基穴２を設け、補助飼養基穴２に補
助飼養基穴２の容積６０％の有機肥料を投入し、有機肥料は質量％で５０％の家畜糞便、
２５％ストロー、１０％おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られたもの
であり、ここで、発酵方法として、割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した
後家畜糞便と混合し、混合マトリクスを得、混合マトリクスに発酵剤を加え混合マトリク
スの含水量が５０％になるまで水を添加し、３日堆積発酵した後反転させ、プラスチック
フィルムで覆って３０日継続的に発酵し、ここで、継続的に発酵する過程中５日ごとに反
転させ、発酵剤は市販されている有機肥料発酵剤であり、具体的な使用量は実際の製品の
ガイド基準に準じて使用することができ、
Ｓ４-３、ミミズ種の投入
８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
Ｓ４-４、土壌の処理修復
分水路１によって汚染土壌の含水率を５０％に保持し、この含水量を保持した条件下で１
２日継続的に修復した後、自然条件下で３０日修復する。
【0011】
実施例４
実施例１と以下の点で異なり、
ステップＳ１では、ラムノリピッドを発酵および調製する方法は以下のステップを含む。
Ｓ１-２１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第２液体発酵培地に投入して温度２８℃、振動回転数２８０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で８日発酵培養させ、発酵液を得、ここで、第２液体発酵培地の成分には、大
豆油１００ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２Ｐ
Ｏ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ、
ＦｅＳＯ４０．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４０．３ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍｌが含まれ、
ｐＨ＝６．０であり、
Ｓ１-２２、ラムノリピッド抽出
発酵液を５０００ｒ／ｍｉｎの条件下で２５ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に膜分離法でラムノリピッドを抽出し、ここで、膜分離法として、二重蒸留
水を用いて発酵液を５倍希釈した後、分画分子量１００００の濾過膜を用いて２５℃、０
．５Ｍｐａ、２００Ｌ／ｈの条件下で限外濾過処理した後、分画分子量３００の濾過膜を
用いて限外濾過液を２５℃、１．０Ｍｐａ条件下でナノ濾過処理し、溶媒を蒸発させてラ
ムノリピッドを得る。
実施例１と以下の点で異なり、
ステップＳ１では、ラムノリピッドを発酵および調製する方法は以下のステップを含む。
Ｓ１-２１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第２液体発酵培地に投入して温度２８℃、振動回転数２８０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で８日発酵培養させ、発酵液を得、ここで、第２液体発酵培地の成分には、大
豆油１００ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２Ｐ
Ｏ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ、
ＦｅＳＯ４０．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４０．３ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍｌが含まれ、
ｐＨ＝６．０であり、
Ｓ１-２２、ラムノリピッド抽出
発酵液を５０００ｒ／ｍｉｎの条件下で２５ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に膜分離法でラムノリピッドを抽出し、ここで、膜分離法として、二重蒸留
水を用いて発酵液を５倍希釈した後、分画分子量１００００の濾過膜を用いて２５℃、０
．５Ｍｐａ、２００Ｌ／ｈの条件下で限外濾過処理した後、分画分子量３００の濾過膜を
用いて限外濾過液を２５℃、１．０Ｍｐａ条件下でナノ濾過処理し、溶媒を蒸発させてラ
ムノリピッドを得る。
【0012】
実施例５
実施例２とは以下の点で異なり、
ステップＳ１では、ラムノリピッドを発酵および調製する方法は以下のステップを含む。
Ｓ１-２１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第２液体発酵培地に投入して温度３０℃、振動回転数２９０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で９日発酵培養し、発酵液を得、ここで、第２液体発酵培地の成分には、大豆
油１１０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ
４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ、Ｆ
ｅＳＯ４０．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４０．３ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍｌが含まれ、ｐ
Ｈ＝６．３であり、
Ｓ１-２２、ラムノリピッド抽出
発酵液を５２００ｒ／ｍｉｎの条件下で２８ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に膜分離法でラムノリピッドを抽出し、ここで、膜分離法として、二重蒸留
水を用いて発酵液を１５倍希釈した後、分画分子量１００００の濾過膜を用いて２５℃、
０．５Ｍｐａ、２５０Ｌ／ｈの条件下で限外濾過処理した後、分画分子量３００の濾過膜
で限外濾過液を２５℃、１．０Ｍｐａ条件下でナノ濾過処理し、溶媒を蒸発させてラムノ
リピッドを得る。
実施例６
実施例３とは以下の点で異なり、
ステップＳ１では、ラムノリピッドを発酵および調製する方法は以下のステップを含む。
Ｓ１-２１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第２液体発酵培地に投入して温度３２℃、振動回転数２８０～３００
ｒ／ｍｉｎの条件下で１０日発酵培養し、発酵液を得、ここで、第２液体発酵培地の成分
には、大豆油１２０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、
ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０
ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ４０．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４０．３ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍｌが
含まれ、ｐＨ＝６．５であり、
Ｓ１-２２、ラムノリピッド抽出
発酵液を５５００ｒ／ｍｉｎの条件下で３０ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に膜分離法でラムノリピッドを抽出し、ここで、膜分離法として、二重蒸留
水を用いて発酵液を２０倍希釈した後、分画分子量１００００の濾過膜を用いて２５℃、
０．５Ｍｐａ、３００Ｌ／ｈの条件下で限外濾過処理した後、分画分子量３００の濾過膜
を用いて限外濾過液を２５℃、１．０Ｍｐａ条件下でナノ濾過処理し、溶媒を蒸発させて
ラムノリピッドを得る。
実施例２とは以下の点で異なり、
ステップＳ１では、ラムノリピッドを発酵および調製する方法は以下のステップを含む。
Ｓ１-２１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第２液体発酵培地に投入して温度３０℃、振動回転数２９０ｒ／ｍｉ
ｎの条件下で９日発酵培養し、発酵液を得、ここで、第２液体発酵培地の成分には、大豆
油１１０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ
４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ、Ｆ
ｅＳＯ４０．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４０．３ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍｌが含まれ、ｐ
Ｈ＝６．３であり、
Ｓ１-２２、ラムノリピッド抽出
発酵液を５２００ｒ／ｍｉｎの条件下で２８ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に膜分離法でラムノリピッドを抽出し、ここで、膜分離法として、二重蒸留
水を用いて発酵液を１５倍希釈した後、分画分子量１００００の濾過膜を用いて２５℃、
０．５Ｍｐａ、２５０Ｌ／ｈの条件下で限外濾過処理した後、分画分子量３００の濾過膜
で限外濾過液を２５℃、１．０Ｍｐａ条件下でナノ濾過処理し、溶媒を蒸発させてラムノ
リピッドを得る。
実施例６
実施例３とは以下の点で異なり、
ステップＳ１では、ラムノリピッドを発酵および調製する方法は以下のステップを含む。
Ｓ１-２１、発酵培養
活性化後の緑膿菌を第２液体発酵培地に投入して温度３２℃、振動回転数２８０～３００
ｒ／ｍｉｎの条件下で１０日発酵培養し、発酵液を得、ここで、第２液体発酵培地の成分
には、大豆油１２０ｇ／Ｌ、イーストペースト０．２ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３６．５ｇ／Ｌ、
ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ０．５ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ・１２Ｈ２Ｏ１．０
ｇ／Ｌ、ＦｅＳＯ４０．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４０．３ｇ／Ｌ、脱イオン水１０００ｍｌが
含まれ、ｐＨ＝６．５であり、
Ｓ１-２２、ラムノリピッド抽出
発酵液を５５００ｒ／ｍｉｎの条件下で３０ｍｉｎ遠心分離処理して菌体を除去し上澄み
液を取り、次に膜分離法でラムノリピッドを抽出し、ここで、膜分離法として、二重蒸留
水を用いて発酵液を２０倍希釈した後、分画分子量１００００の濾過膜を用いて２５℃、
０．５Ｍｐａ、３００Ｌ／ｈの条件下で限外濾過処理した後、分画分子量３００の濾過膜
を用いて限外濾過液を２５℃、１．０Ｍｐａ条件下でナノ濾過処理し、溶媒を蒸発させて
ラムノリピッドを得る。
【0013】
実験例
上海のあるバイオテクノロジー有限公司から番号ＡＴＣＣ１５４４２の緑膿菌の株を購入
し、実施例１のステップＳ１で調製されたラムノリピッドを調製し、脱イオン水と混合し
て濃度３００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド溶液を調製し、
江蘇淮安市のあるミミズ養殖公司からミミズを購入し、実施例１のステップＳ２によって
ミミズ種を入手し、
原始土壌を安徽省合肥市のある廃ガス製鉄所から採集し：５点サンプリング法により５～
２０ｃｍ深さの位置で採集し、乾燥後２ｍｍの篩にかけて原始土壌を得、ＨＲＧＣ／ＨＲ
ＭＳ超微量分析法により原始土壌中のダイオキシン濃度４．６１ｎｇ／ｋｇを検出し、
有機肥料は、４０％の牛糞、１５％の麦わら、５％おがくずおよび残部の松葉を発酵およ
び調製して得られたものであり、ここで、発酵剤は飼料承認番号／登録証番号豫飼添（２
０１５）２３３５の市販されている発酵剤であり、
５組の処理実験が設定され：
第１実験組、５０００ｇ原始土壌、
第２実験組、５０００ｇ原始土壌＋５本ミミズ種、
第３実験組、５０００ｇ原始土壌＋１０ｍｌラムノリピッド溶液、
第４実験組、５０００ｇ原始土壌＋５本ミミズ種＋３ｍｌラムノリピッド溶液、
第５実験組、５０００ｇ原始土壌＋５本ミミズ種＋３ｍｌラムノリピッド溶液＋２ｇ有機
肥料、
各組の実験は、汚染土壌の含水率を４０％保持した条件下で１２日継続的に修復した後、
自然条件下で２１日修復し、３日ごとに５ｇの土壌サンプルを採集して生物量分析を行っ
て表１に示す結果を得、
表１：５組の処理実験の２１日間土壌サンプルの生物量分析結果
上海のあるバイオテクノロジー有限公司から番号ＡＴＣＣ１５４４２の緑膿菌の株を購入
し、実施例１のステップＳ１で調製されたラムノリピッドを調製し、脱イオン水と混合し
て濃度３００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド溶液を調製し、
江蘇淮安市のあるミミズ養殖公司からミミズを購入し、実施例１のステップＳ２によって
ミミズ種を入手し、
原始土壌を安徽省合肥市のある廃ガス製鉄所から採集し：５点サンプリング法により５～
２０ｃｍ深さの位置で採集し、乾燥後２ｍｍの篩にかけて原始土壌を得、ＨＲＧＣ／ＨＲ
ＭＳ超微量分析法により原始土壌中のダイオキシン濃度４．６１ｎｇ／ｋｇを検出し、
有機肥料は、４０％の牛糞、１５％の麦わら、５％おがくずおよび残部の松葉を発酵およ
び調製して得られたものであり、ここで、発酵剤は飼料承認番号／登録証番号豫飼添（２
０１５）２３３５の市販されている発酵剤であり、
５組の処理実験が設定され：
第１実験組、５０００ｇ原始土壌、
第２実験組、５０００ｇ原始土壌＋５本ミミズ種、
第３実験組、５０００ｇ原始土壌＋１０ｍｌラムノリピッド溶液、
第４実験組、５０００ｇ原始土壌＋５本ミミズ種＋３ｍｌラムノリピッド溶液、
第５実験組、５０００ｇ原始土壌＋５本ミミズ種＋３ｍｌラムノリピッド溶液＋２ｇ有機
肥料、
各組の実験は、汚染土壌の含水率を４０％保持した条件下で１２日継続的に修復した後、
自然条件下で２１日修復し、３日ごとに５ｇの土壌サンプルを採集して生物量分析を行っ
て表１に示す結果を得、
表１：５組の処理実験の２１日間土壌サンプルの生物量分析結果
【0014】
結論：第１実験組の２１日間土壌サンプルの生物量分析結果から分かるように、最初の１
２日間で土壌の最大保水能力の４０％を保持したことにより土壌中のダイオキシンを希釈
して土壌サンプル中のダイオキシン濃度が原始土壌中のダイオキシン濃度よりもわずか低
く、
第１実験組、第２実験組、第３実験組、第４実験組、第５実験組から分かるように、第４
実験組と第５実験組は土壌中のダイオキシンに対して比較的に効果的な分解効果を発揮し
、ここで、第５実験組の分解率は９０．６％であり、ＷＨＯの土壌中ダイオキシンの管理
標準０．６０ｎｇ／ｋｇを満たし、
第１実験組、第２実験組、第３実験組から分かるように、ラムノリピッドとミミズの２つ
の要因により、ミミズはダイオキシンの分解に比較的大きい影響を与え、
第２実験組、第４実験組、第５実験組から分かるように、ラムノリピッド溶液は、ミミズ
による土壌中のダイオキシンの分解効率を効果的に促進でき、
第４実験組、第５実験組から分かるように、有機肥料の添加により、ダイオキシンの分解
効果を促進し、これは、有機肥料がミミズの活動を効果的に促進することからであると思
われている。
２日間で土壌の最大保水能力の４０％を保持したことにより土壌中のダイオキシンを希釈
して土壌サンプル中のダイオキシン濃度が原始土壌中のダイオキシン濃度よりもわずか低
く、
第１実験組、第２実験組、第３実験組、第４実験組、第５実験組から分かるように、第４
実験組と第５実験組は土壌中のダイオキシンに対して比較的に効果的な分解効果を発揮し
、ここで、第５実験組の分解率は９０．６％であり、ＷＨＯの土壌中ダイオキシンの管理
標準０．６０ｎｇ／ｋｇを満たし、
第１実験組、第２実験組、第３実験組から分かるように、ラムノリピッドとミミズの２つ
の要因により、ミミズはダイオキシンの分解に比較的大きい影響を与え、
第２実験組、第４実験組、第５実験組から分かるように、ラムノリピッド溶液は、ミミズ
による土壌中のダイオキシンの分解効率を効果的に促進でき、
第４実験組、第５実験組から分かるように、有機肥料の添加により、ダイオキシンの分解
効果を促進し、これは、有機肥料がミミズの活動を効果的に促進することからであると思
われている。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【手続補正書】
【提出日】2022-11-14
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ステップＳ１、
緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製して用意し、ラムノリピッドを調製
するステップと、
ステップＳ２、
ミミズ種を取得するステップと、
ステップＳ３、
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが３０～５０ｃｍである、土壌を前処理するステップと、
ステップＳ４、
ステップＳ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合して濃度３００～１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド
溶液を調製した後、Ｓ３で形成された処理層に２～３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド
溶液を施用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
ステップＳ４-２、土壌再処理
ステップＳ４-１処理後の処理層に、３～５ｍ間隔で深さ２０～３０ｃｍの分水路（１）
を設け、前記分水路（１）に８～１０ｍ間隔で内径３０～５０ｃｍ、深さ３０～５０ｃｍ
の補助飼養基穴（２）を設け、前記補助飼養基穴（２）に補助飼養基穴（２）の容積の４
０～６０％を占める有機肥料を投入し、
ステップＳ４-３、ミミズ種の投入
３０～８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
ステップＳ４-４、土壌の処理修復
前記分水路（１）によって汚染土壌の含水率を４０～５０％に保持し、この含水量を保持
した条件下で継続的に１２日修復した後、自然条件下で２１～３０日修復する、土壌を修
復処理するステップと、
を含むことを特徴とするラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌
を修復する方法。
緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製して用意し、ラムノリピッドを調製
するステップと、
ステップＳ２、
ミミズ種を取得するステップと、
ステップＳ３、
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが３０～５０ｃｍである、土壌を前処理するステップと、
ステップＳ４、
ステップＳ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合して濃度３００～１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド
溶液を調製した後、Ｓ３で形成された処理層に２～３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド
溶液を施用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
ステップＳ４-２、土壌再処理
ステップＳ４-１処理後の処理層に、３～５ｍ間隔で深さ２０～３０ｃｍの分水路（１）
を設け、前記分水路（１）に８～１０ｍ間隔で内径３０～５０ｃｍ、深さ３０～５０ｃｍ
の補助飼養基穴（２）を設け、前記補助飼養基穴（２）に補助飼養基穴（２）の容積の４
０～６０％を占める有機肥料を投入し、
ステップＳ４-３、ミミズ種の投入
３０～８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
ステップＳ４-４、土壌の処理修復
前記分水路（１）によって汚染土壌の含水率を４０～５０％に保持し、この含水量を保持
した条件下で継続的に１２日修復した後、自然条件下で２１～３０日修復する、土壌を修
復処理するステップと、
を含むことを特徴とするラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌
を修復する方法。
【請求項2】
前記有機肥料は、質量％で４０～５０％の家畜糞便、１５～２５％ストロー、５～１０％
おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られるものである、ことを特徴とす
る請求項１に記載の方法。
おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られるものである、ことを特徴とす
る請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記発酵の方法としては、前記割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した後家
畜糞便と混合して混合マトリクスを得て、混合マトリクスに発酵剤を加えて混合マトリク
スの含水量が４０～５０％になるまで水を添加し、１～３日堆積発酵した後反転させ、プ
ラスチックフィルムで覆って２１～３０日継続的に発酵し、継続的に発酵する過程中３～
５日ごとに反転させる、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
畜糞便と混合して混合マトリクスを得て、混合マトリクスに発酵剤を加えて混合マトリク
スの含水量が４０～５０％になるまで水を添加し、１～３日堆積発酵した後反転させ、プ
ラスチックフィルムで覆って２１～３０日継続的に発酵し、継続的に発酵する過程中３～
５日ごとに反転させる、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【手続補正書】
【提出日】2022-12-20
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ステップＳ１、
緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製して用意し、ラムノリピッドを調製
するステップと、
ステップＳ２、
ミミズ種を取得するステップと、
ステップＳ３、
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが３０～５０ｃｍである、土壌を前処理するステップと、
ステップＳ４、
ステップＳ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合して濃度３００～１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド
溶液を調製した後、Ｓ３で形成された処理層に２～３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド
溶液を施用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
ステップＳ４-２、土壌再処理
ステップＳ４-１処理後の処理層に、３～５ｍ間隔で深さ２０～３０ｃｍ、頂部幅１０～
１５ｃｍ、底部幅５～８ｃｍの縦断面等脚台形構造の分水路（１）を設け、前記分水路（
１）に８～１０ｍ間隔で内径３０～５０ｃｍ、深さ３０～５０ｃｍの補助飼養基穴（２）
を設け、前記補助飼養基穴（２）に補助飼養基穴（２）の容積の４０～６０％を占める有
機肥料を投入し、
ステップＳ４-３、ミミズ種の投入
３０～８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
ステップＳ４-４、土壌の処理修復
前記分水路（１）によって汚染土壌の含水率を４０～５０％に保持し、この含水量を保持
した条件下で継続的に１２日修復した後、自然条件下で２１～３０日修復する、土壌を修
復処理するステップと、
を含むことを特徴とするラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌
を修復する方法。
緑膿菌を利用してラムノリピッドを発酵および調製して用意し、ラムノリピッドを調製
するステップと、
ステップＳ２、
ミミズ種を取得するステップと、
ステップＳ３、
修復する汚染土壌をほぐし、雑物を除去した後表面をかき混ぜて処理層を形成し、ここ
で、ほぐし深さが３０～５０ｃｍである、土壌を前処理するステップと、
ステップＳ４、
ステップＳ４-１、ラムノリピッド溶液の投入
ラムノリピッドと脱イオン水を混合して濃度３００～１０００ｍｇ／Ｌのラムノリピッド
溶液を調製した後、Ｓ３で形成された処理層に２～３Ｌ／ｍ２の施用量でラムノリピッド
溶液を施用し、再び土壌をほぐしてラムノリピッド溶液と土壌を均一に混合し、
ステップＳ４-２、土壌再処理
ステップＳ４-１処理後の処理層に、３～５ｍ間隔で深さ２０～３０ｃｍ、頂部幅１０～
１５ｃｍ、底部幅５～８ｃｍの縦断面等脚台形構造の分水路（１）を設け、前記分水路（
１）に８～１０ｍ間隔で内径３０～５０ｃｍ、深さ３０～５０ｃｍの補助飼養基穴（２）
を設け、前記補助飼養基穴（２）に補助飼養基穴（２）の容積の４０～６０％を占める有
機肥料を投入し、
ステップＳ４-３、ミミズ種の投入
３０～８０本／ｍ２の投入密度でミミズ種を汚染土壌に投入し、
ステップＳ４-４、土壌の処理修復
前記分水路（１）によって汚染土壌の含水率を４０～５０％に保持し、この含水量を保持
した条件下で継続的に１２日修復した後、自然条件下で２１～３０日修復する、土壌を修
復処理するステップと、
を含むことを特徴とするラムノリピッドとミミズを組み合わせてダイオキシン汚染土壌
を修復する方法。
【請求項2】
前記有機肥料は、質量％で４０～５０％の家畜糞便、１５～２５％ストロー、５～１０％
おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られるものである、ことを特徴とす
る請求項１に記載の方法。
おがくずおよび残部の落ち葉を発酵および調製して得られるものである、ことを特徴とす
る請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記発酵の方法としては、前記割合でストロー、落ち葉、おがくずを混合し粉砕した後家
畜糞便と混合して混合マトリクスを得て、混合マトリクスに発酵剤を加えて混合マトリク
スの含水量が４０～５０％になるまで水を添加し、１～３日堆積発酵した後反転させ、プ
ラスチックフィルムで覆って２１～３０日継続的に発酵し、継続的に発酵する過程中３～
５日ごとに反転させる、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
畜糞便と混合して混合マトリクスを得て、混合マトリクスに発酵剤を加えて混合マトリク
スの含水量が４０～５０％になるまで水を添加し、１～３日堆積発酵した後反転させ、プ
ラスチックフィルムで覆って２１～３０日継続的に発酵し、継続的に発酵する過程中３～
５日ごとに反転させる、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。