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特開2024-3567膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024003567
(43)【公開日】2024-01-15
(54)【発明の名称】膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬
(51)【国際特許分類】
G01N 33/574 20060101AFI20240105BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20240105BHJP
C12Q 1/6851 20180101ALI20240105BHJP
【ＦＩ】
G01N33/574 A ZNA
G01N33/574 Z
G01N33/53 M
C12Q1/6851 Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022102786
(22)【出願日】2022-06-27
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．ＴＲＩＴＯＮ
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）令和３年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、次世代がん医療創生研究事業「標的細胞ホーミングペプチド創成技術による実効的なスキルス癌標的化ＰＤＣの開発」委託研究開発、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(71)【出願人】
【識別番号】304027279
【氏名又は名称】国立大学法人 新潟大学
(74)【代理人】
【識別番号】100165179
【弁理士】
【氏名又は名称】田▲崎▼ 聡
(74)【代理人】
【識別番号】100188558
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100175824
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100152272
【弁理士】
【氏名又は名称】川越 雄一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100181722
【弁理士】
【氏名又は名称】春田 洋孝
(72)【発明者】
【氏名】近藤 英作
【テーマコード（参考）】
4B063
【Ｆターム（参考）】
4B063QA01
4B063QA19
4B063QQ03
4B063QQ08
4B063QQ53
4B063QQ79
4B063QR08
4B063QR55
4B063QR62
4B063QS25
4B063QS33
4B063QS34
4B063QX02
(57)【要約】
【課題】新規の膵癌細胞膜表面発現分子をバイオマーカーとして用いた、膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法を提供する。
【解決手段】膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法は、被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出することを含み、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は前記核酸が検出された場合に、前記被験者が膵癌若しくは前立腺癌に罹患している、又は、罹患する可能性を有することを示す。
【選択図】なし
【解決手段】膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法は、被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出することを含み、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は前記核酸が検出された場合に、前記被験者が膵癌若しくは前立腺癌に罹患している、又は、罹患する可能性を有することを示す。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法であって、
被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出することを含み、
前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は前記核酸が検出された場合に、前記被験者が膵癌若しくは前立腺癌に罹患している、又は、罹患する可能性を有することを示す、方法。
被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出することを含み、
前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は前記核酸が検出された場合に、前記被験者が膵癌若しくは前立腺癌に罹患している、又は、罹患する可能性を有することを示す、方法。
【請求項2】
前記検出において、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質を用いて、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を検出する、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質が、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質、又は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を増幅するためのフォワードプライマー及びリバースプライマーを備える、膵癌又は前立腺癌の診断用試薬。
【請求項5】
前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質が、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体である、請求項４に記載の膵癌又は前立腺癌の診断用試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬に関する。
【背景技術】
【0002】
２０１８年９月に発表された国立がん研究センターの最新データでは、癌患者は毎年１００万人を超え、死亡者数は４０万人前後で推移しつつも増加傾向にあるとされている。癌罹患数予測では、２０１８年度膵癌患者は４万人（１位大腸癌１５万人、２位胃癌１２万人）であるが、膵癌死亡者予測数は３万５千人である。さらに、２０２０年３月の公開情報では全癌患者の１０年生存率が全体で５５％であるところ、膵癌では５年生存率５％と部位別で最低を記録しており、現行医療上の最難治癌となっている。膵癌の征圧は本邦のみならず全世界的にも癌医療における危急の最重要解決課題である。
【0003】
現行の原発性浸潤性膵管癌に対する治療には、外科手術と化学療法の２種類の方法がある。比較的早期であるステージ１及び２期の膵癌には摘出手術を行い、進行したステージ３及び４機の膵癌に対しては多剤併用（例えば、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ等）やＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ等による化学療法を行っている。
【0004】
一方、発明者は、これまで、独自に確立した改良型ｍＲＮＡ ｄｉｓｐｌａｙ技術により構築したランダムペプチド－ライブラリーから、標的とする細胞系に「選択的かつ高度にシフトした吸収」を発揮する生体低侵襲性オリゴペプチド（「ホーミングペプチド」と命名）を分離する技術を完成している。また、これを用いて、新規ヒト膵癌細胞ホーミングペプチドの獲得に成功している（例えば、特許文献１及び２等参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】国際公開第２０１７／０８６０９０号
【特許文献2】国際公開第２０１９／２１２０３１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
しかしながら、現在の治療方法では、予後改善の兆しがみえない。また、膵癌の治療が十分な奏功を得られない理由の一つに、早期発見が難しく、大多数の症例で発見時には進行期膵癌として手術適応外或いは癌の正確な浸潤範囲（浸潤領域）の同定が難しく、摘出後の再発が高頻度で起こること、さらに他臓器（肝や肺等）への転移巣を形成した症例となっていることが挙げられる。これは、膵癌の検査及び診断、さらには治療への応用において、膵癌患者症例に広く適用可能な汎用的、網羅的且つ実効的なバイオマーカーが発見されていないためである。
【0007】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、新規の膵癌細胞膜表面発現分子をバイオマーカーとして用いた、膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0008】
すなわち、本発明は、以下の態様を含む。
（１） 膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法であって、
被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出することを含み、
前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は前記核酸が検出された場合に、前記被験者が膵癌若しくは前立腺癌に罹患している、又は、罹患する可能性を有することを示す、方法。
（２） 前記検出において、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質を用いて、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を検出する、（１）に記載の方法。
（３） 前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質が、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体である、（２）に記載の方法。
（４） ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質、又は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を増幅するためのフォワードプライマー及びリバースプライマーを備える、膵癌又は前立腺癌の診断用試薬。
（５） 前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質が、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体である、（４）に記載の膵癌又は前立腺癌の診断用試薬。
（１） 膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法であって、
被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出することを含み、
前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は前記核酸が検出された場合に、前記被験者が膵癌若しくは前立腺癌に罹患している、又は、罹患する可能性を有することを示す、方法。
（２） 前記検出において、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質を用いて、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を検出する、（１）に記載の方法。
（３） 前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質が、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体である、（２）に記載の方法。
（４） ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質、又は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を増幅するためのフォワードプライマー及びリバースプライマーを備える、膵癌又は前立腺癌の診断用試薬。
（５） 前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質が、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体である、（４）に記載の膵癌又は前立腺癌の診断用試薬。
【発明の効果】
【0009】
上記態様の方法及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬は、膵癌又は前立腺癌の診断に有効である。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質のバリアント１の全長遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸配列とＳＬＣ４５Ａ４タンパク質のバリアント１のショート遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸配列を比較した図である。
【図2】実施例１における膵癌細胞ホーミングペプチドを用いた取り込み制御分子の同定法のプロトコルを示す図である。
【図3】実施例１における各候補分子の発現に用いたｐＥＦ１／Ｍｙｃ－Ｈｉｓベクターの概略構成図である。
【図4】実施例１における免疫沈降（ＩＰ）法の結果を示す図である。
【図5A】実施例２におけるヒト膵癌細胞での膵癌細胞ホーミングペプチドの取り込み試験の結果を示す画像（左：明視野像、右：蛍光像）である。
【図5B】実施例２におけるヒト膵癌細胞及びヒト前立腺癌細胞での膵癌細胞ホーミングペプチドの取り込み試験の結果を示す画像である。
【図6】実施例３におけるトランスフェクションしたＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（上段の画像）及びヒトＳＬＣ４５Ａ４の細胞内領域を特異的に認識するウサギポリクロナル抗体を用いた内因性ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（下段の画像）のヒト膵癌細胞での局在を示す蛍光免疫染色像である。
【図7】実施例４における膵癌患者由来の浸潤性膵管癌組織でのヒトＳＬＣ４５Ａ４の細胞内領域を特異的に認識するウサギポリクロナル抗体を用いた免疫組織化学染色像である。
【図8】実施例４におけるヒト正常組織でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の局在を示す免疫染色像である。
【図9A】実施例４における膵癌患者由来の膵癌組織及び正常膵臓組織でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の局在を示す免疫染色像である。
【図9B】実施例４における前立腺癌患者由来の前立腺癌でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の局在を示す免疫染色像である。
【図10】実施例５における膵癌患者由来の膵癌原発巣及び転移巣でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の局在を示す免疫染色像である。
【図11】実施例５における膵癌以外のその他の癌患者由来の各種癌組織でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の局在を示す免疫染色像である。
【図12】実施例６における膵癌患者由来の膵癌組織及び膵癌以外のその他の癌患者由来の各種癌組織でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の局在を示す蛍光免疫染色像である。
【図13】実施例７における膵癌患者由来の膵癌組織でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質及びトランスフェリン受容体（ＣＤ７１）の局在を示す蛍光免疫染色像である。
【図14】実施例７におけるヒト正常腎臓組織でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質及びトランスフェリン受容体（ＣＤ７１）の局在を示す蛍光免疫染色像である。
【図15】実施例８における膵癌患者由来の膵癌組織でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質及びＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎの局在を示す蛍光免疫染色像である。
【図16】実施例８における膵癌患者由来の膵癌組織でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質及びＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）の局在を示す蛍光免疫染色像である。
【図17】実施例９における膵癌モデルマウスの腫瘍組織でのＳＬＣ４５Ａ４の局在を示す蛍光免疫染色像である。
【図18】実施例１０におけるヒト膵癌細胞及びヒト前立腺癌細胞でのＳＬＣ２５Ａ５３遺伝子の発現量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0011】
以下、本発明の一実施形態に係る膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法、及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬について、詳細を説明する。
【0012】
なお、本明細書において、「膵癌」とは、膵臓から発生した腫瘍を意味し、膵臓癌とも言う。
膵臓は、膵液を産生する腺房、膵液を運ぶ膵管、及び内分泌腺であるランゲルハンス島等からなっており、癌はいずれの組織からも発生しうるが、それぞれ全く異なる性質を示す腫瘍となる。膵癌の種類としては、例えば、浸潤性膵管癌、膵内分泌腫瘍、膵管内乳頭粘液性腫瘍、粘液性嚢胞腫瘍、腺房細胞癌、漿液性嚢胞腺癌、転移性膵癌等が挙げられる。中でも、浸潤性膵管癌は膵臓にできる腫瘍性病変の８０％以上９０％以下程度を占めている。
膵臓は、膵液を産生する腺房、膵液を運ぶ膵管、及び内分泌腺であるランゲルハンス島等からなっており、癌はいずれの組織からも発生しうるが、それぞれ全く異なる性質を示す腫瘍となる。膵癌の種類としては、例えば、浸潤性膵管癌、膵内分泌腫瘍、膵管内乳頭粘液性腫瘍、粘液性嚢胞腫瘍、腺房細胞癌、漿液性嚢胞腺癌、転移性膵癌等が挙げられる。中でも、浸潤性膵管癌は膵臓にできる腫瘍性病変の８０％以上９０％以下程度を占めている。
【0013】
また、本明細書において、「前立腺癌」とは、前立腺から発生した腫瘍を意味する。
【0014】
本実施形態の膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法（以下、単に「本実施形態の方法」と称する場合がある）、及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬（以下、単に「本実施形態の試薬」と称する場合がある）の適用対象としては、ＳＬＣ４５Ａ４、又は、ＳＬＣ４５Ａ４及びＳＬＣ２５Ａ５３を発現する細胞を有する動物種であればよく、例えば、ヒト、サル、マーモセット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ウサギ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター等の哺乳動物が挙げられ、中でも、ヒトが好ましい。
【0015】
＜ＳＬＣ４５Ａ４及びＳＬＣ２５Ａ５３＞
ＳＬＣ４５Ａ４（Ｓｏｌｕｔｅ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｆａｍｉｌｙ ４５ Ｍｅｍｂｅｒ ４）は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン（１２回貫通）、細胞内ドメインを有する受容体－輸送体分子である。これまで、ＳＬＣ４５Ａ４は、酵母において輸送体（トランスポーター）として働き、塩や糖の取り込みに関連していると報告されているが（例えば、参考文献１：「Bartolke R et al., “Proton-associated sucrose transport of mammalian solute carrier family 45: an analysis in Saccharomyces cerevisiae.”, Biochem J., Vol. 464, Issue 2, pp. 193-201, 2014.」参照）、ヒト細胞における具体的な機能はほとんど報告されていない。
ＳＬＣ４５Ａ４（Ｓｏｌｕｔｅ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｆａｍｉｌｙ ４５ Ｍｅｍｂｅｒ ４）は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン（１２回貫通）、細胞内ドメインを有する受容体－輸送体分子である。これまで、ＳＬＣ４５Ａ４は、酵母において輸送体（トランスポーター）として働き、塩や糖の取り込みに関連していると報告されているが（例えば、参考文献１：「Bartolke R et al., “Proton-associated sucrose transport of mammalian solute carrier family 45: an analysis in Saccharomyces cerevisiae.”, Biochem J., Vol. 464, Issue 2, pp. 193-201, 2014.」参照）、ヒト細胞における具体的な機能はほとんど報告されていない。
【0016】
ＳＬＣ２５Ａ５３（Ｓｏｌｕｔｅ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｆａｍｉｌｙ ２５ Ｍｅｍｂｅｒ ５３）は、主にミトコンドリア内膜に局在するＳＬＣ２５ファミリーメンバーであり、約１００アミノ酸ドメインの３つのタンデムリピートを有し、該リピートには２つの膜貫通αヘリックスとシグネチャー配列モチーフを有すると推定されている。しかしながら、ＳＬＣ２５Ａ５３のヒト細胞における具体的な機能はほとんど報告されていない。
【0017】
これらのタンパク質について、ヒト組織、特に浸潤性膵管癌組織や前立腺癌組織、特にＧｌｅａｓｏｎ ｓｃｏｒｅ３以上の分化度の前立腺癌における腫瘍細胞上での発現の有無や強弱、細胞内局在についての具体的な報告は未だ存在しない。発明者は、後述する実施例に示すように、発明者が開発した膵癌細胞ホーミングペプチドの結合分子として、ＳＬＣ４５Ａ４及びＳＬＣ２５Ａ５３を同定した。また、発明者は、後述する実施例に示すように、膵癌患者由来の腫瘍組織において浸潤及び転移巣を含めてＳＬＣ４５Ａ４が非常に広範に膵癌細胞膜上に発現していることを今回初めて明らかにし、本発明を完成するに至った。また、発明者は、後述する実施例に示すように、前立腺癌患者由来の腫瘍組織においてＳＬＣ４５Ａ４が非常に広範に前立腺癌細胞膜上に発現していることを今回初めて明らかにし、本発明を完成するに至った。
【0018】
また、後述する実施例に示すように、ＳＬＣ４５Ａ４は、正常細胞や膵癌及び前立腺癌以外の癌細胞の細胞膜上や細胞内での発現は極めて低い。従って、ＳＬＣ４５Ａ４は、膵癌及び前立腺癌を特異的に検出するためのマーカーとして非常に有用である。
【0019】
［ＳＬＣ４５Ａ４］
ヒトＳＬＣ４５Ａ４のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＸＰ＿０１６８６９１３７．１、ＸＰ＿０１１５１５４８０．１、ＮＰ＿００１２７３５７７．１、ＸＰ＿０１１５１５４７３．１、ＸＰ＿０１１５１５４７６．１、ＸＰ＿０１１５１５４７９．１、ＸＰ＿０１１５１５４７１．１、ＸＰ＿０１１５１５４８１．１、ＮＰ＿００１０７３９００．１、ＸＰ＿０１１５１５４７４．１、ＸＰ＿０１６８６９１３９．１、ＸＰ＿０１１５１５４７２．１、ＮＰ＿００１２７３５７５．１、ＸＰ＿０１１５１５４７５．１、ＸＰ＿０１１５１５４７８．１、ＸＰ＿０１６８６９１３８．１に開示されている。ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１の全長遺伝子（ＳＬＣ４５Ａ４ ｖ１ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｇｅｎｅ）がコードするタンパク質のアミノ酸配列として具体的には、例えば、配列番号１で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１のショート遺伝子（ＳＬＣ４５Ａ４ ｓｈｏｒｔ）がコードするタンパク質のアミノ酸配列として具体的には、例えば、配列番号２で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
ヒトＳＬＣ４５Ａ４のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＸＰ＿０１６８６９１３７．１、ＸＰ＿０１１５１５４８０．１、ＮＰ＿００１２７３５７７．１、ＸＰ＿０１１５１５４７３．１、ＸＰ＿０１１５１５４７６．１、ＸＰ＿０１１５１５４７９．１、ＸＰ＿０１１５１５４７１．１、ＸＰ＿０１１５１５４８１．１、ＮＰ＿００１０７３９００．１、ＸＰ＿０１１５１５４７４．１、ＸＰ＿０１６８６９１３９．１、ＸＰ＿０１１５１５４７２．１、ＮＰ＿００１２７３５７５．１、ＸＰ＿０１１５１５４７５．１、ＸＰ＿０１１５１５４７８．１、ＸＰ＿０１６８６９１３８．１に開示されている。ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１の全長遺伝子（ＳＬＣ４５Ａ４ ｖ１ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｇｅｎｅ）がコードするタンパク質のアミノ酸配列として具体的には、例えば、配列番号１で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１のショート遺伝子（ＳＬＣ４５Ａ４ ｓｈｏｒｔ）がコードするタンパク質のアミノ酸配列として具体的には、例えば、配列番号２で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
【0020】
ヒトＳＬＣ４５Ａ４をコードする塩基配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＸＭ＿０１１５１７１７９．２、ＮＭ＿００１２８６６４６．２、ＸＭ＿０１１５１７１７６．２、ＸＭ＿０１１５１７１７３．２、ＸＭ＿０１７０１３６４９．１、ＸＭ＿０１１５１７１７０．２、ＸＭ＿０１１５１７１７１．２、ＸＭ＿０１７０１３６５０．２、ＸＭ＿０１７０１３６４８．１、ＸＭ＿０１１５１７１７２．２、ＸＭ＿０１１５１７１７７．２、ＮＭ＿００１０８０４３１．２、ＸＭ＿０１１５１７１７４．２、ＮＭ＿００１２８６６４８．１に開示されている。ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１の全長遺伝子の塩基配列として具体的には、例えば、配列番号３で表される塩基配列等が挙げられる。ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１のショート遺伝子の塩基配列として具体的には、例えば、配列番号４で表される塩基配列等が挙げられる。
【0021】
本明細書において、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質とは、全長タンパク質及びその断片の両方を含む。断片とは、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の任意の領域を含むポリペプチドであり、天然のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の機能を有していなくてもよい。断片の例として、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域を含む断片が挙げられる。
【0022】
例えば、ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１の全長遺伝子がコードするタンパク質の細胞外領域は、配列番号１で表されるアミノ酸配列において８３番目のアミノ酸から８６番目のアミノ酸までの領域（配列番号５：ＰＥＱＹ）、１４５番目のアミノ酸から１５３番目のアミノ酸までの領域（配列番号６：ＬＡＬＧＤＶＰＮＲ）、２１７番目のアミノ酸から２３０番目のアミノ酸までの領域（配列番号７：ＤＷＴＱＴＦＬＧＳＷＦＲＴＱＮ）、５３４番目のアミノ酸から５５９番目のアミノ酸までの領域（配列番号８：ＧＱＶＩＦＥＧＤＰＫＡＰＳＮＳＴＡＷＱＡＹＮＡＧＶＫ）、６１５番目のアミノ酸から６１７番目のアミノ酸までの領域（配列番号９：ＹＶＡ）、６８０番目のアミノ酸から６９３番目のアミノ酸までの領域（配列番号１０：ＳＡＬＧＧＶＶＤＡＶＧＴＶＲ）に相当する。
【0023】
或いは、膜貫通領域は配列番号１で表されるアミノ酸配列において６０番目から８２番目までの領域（配列番号１１：ＦＧＲＥＦＣＹＡＭＥＴＡＬＶＴＰＩＬＬＱＩＧＬ）、８７番目から１０９番目までの領域（配列番号１２：ＹＳＬＴＷＦＬＳＰＩＬＧＬＩＦＴＰＬＩＧＳＡＳ）、１２２番目から１４４番目までの領域（配列番号１３：ＦＩＬＡＬＣＶＧＶＬＦＧＶＡＬＦＬＮＧＳＡＩＧ）、１５４番目から１７３番目までの領域（配列番号１４：ＲＱＰＩＧＩＶＬＴＶＬＧＶＶＶＬＤＦＳＡＤＡＴ）、１９４番目から２１６番目までの領域（配列番号１５：ＭＡＬＮＩＨＡＦＳＡＧＬＧＧＡＩＧＹＶＬＧＧＬ）、２３１番目から２５３番目までの領域（配列番号１６：ＱＶＬＦＦＦＡＡＩＩＦＴＶＳＶＡＬＨＬＦＳＩＤ）、５１１番目から５３３番目までの領域（配列番号１７：ＬＣＬＣＨＬＬＴＷＦＳＶＩＡＥＡＶＦＹＴＤＦＭ）、５６０番目から５７９番目までの領域（配列番号１８：ＭＧＣＷＧＬＶＩＹＡＡＴＧＡＩＣＳＡＬＬ）、５９２番目から６１４番目までの領域（配列番号１９：ＶＩＹＶＬＧＴＬＧＦＳＶＧＴＡＶＭＡＭＦＰＮＶ）、６１８番目から６４０番目までの領域（配列番号２０：ＭＶＴＩＳＴＭＧＩＶＳＭＳＩＳＹＣＰＹＡＬＬＧ）、６６０番目から６７９番目までの領域（配列番号２１：ＦＧＩＤＣＡＩＬＳＣＱＶＹＩＳＱＩＬＶＡ）、及び６９４番目から７１６番目までの領域（配列番号２２：ＶＩＰＭＶＡＳＶＧＳＦＬＧＦＬＴＡＴＦＬＶＩＹ）が相当する。
【0024】
例えば、ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１のショート遺伝子がコードするタンパク質の細胞外領域は、配列番号２で表されるアミノ酸配列において２７番目のアミノ酸から２８番目のアミノ酸までの領域（配列番号２３：ＥＱ）、８７番目のアミノ酸から９７番目のアミノ酸までの領域（配列番号２４：ＧＬＡＬＧＤＶＰＮＲＱ）、１６０番目のアミノ酸から１７５番目のアミノ酸までの領域（配列番号２５：ＤＷＴＱＴＦＬＧＳＷＦＲＴＱＮＱ）、４８２番目のアミノ酸から５０２番目のアミノ酸までの領域（配列番号２６：ＥＧＤＰＫＡＰＳＮＳＴＡＷＱＡＹＮＡＧＶＫ）、５５６番目のアミノ酸（配列番号２７：Ｎ）、６３０番目のアミノ酸から６３７番目のアミノ酸までの領域（配列番号２８：ＤＡＶＧＴＶＲＶ）に相当する。
【0025】
或いは、膜貫通領域は配列番号２で表されるアミノ酸配列において６番目から２６番目までの領域（配列番号２９：ＥＦＣＹＡＭＥＴＡＬＶＴＰＩＬＬＱＩＧＬＰ）、２９番目から４９番目までの領域（配列番号３０：ＹＹＳＬＴＷＦＬＳＰＩＬＧＬＩＦＴＰＬＩＧ）、６７番目から８６番目までの領域（配列番号３１：ＬＡＬＣＶＧＶＬＦＧＶＡＬＦＬＮＧＳＡＩ）、９８番目から１１８番目までの領域（配列番号３２：ＰＩＧＩＶＬＴＶＬＧＶＶＶＬＤＦＳＡＤＡＴ）、１３９番目から１５９番目までの領域（配列番号３３：ＬＮＩＨＡＦＳＡＧＬＧＧＡＩＧＹＶＬＧＧＬ）、１７６番目から１９６番目までの領域（配列番号３４：ＶＬＦＦＦＡＡＩＩＦＴＶＳＶＡＬＨＬＦＳＩ）、４６１番目から４８１番目までの領域（配列番号３５：ＴＷＦＳＶＩＡＥＡＶＦＹＴＤＦＭＧＱＶＩＦ）、５０３番目から５２３番目までの領域（配列番号３６：ＭＧＣＷＧＬＶＩＹＡＡＴＧＡＩＣＳＡＬＬＱ）、５３５番目から５５５番目までの領域（配列番号３７：ＶＩＹＶＬＧＴＬＧＦＳＶＧＴＡＶＭＡＭＦＰ）、５５７番目から５７７番目までの領域（配列番号３８：ＶＹＶＡＭＶＴＩＳＴＭＧＩＶＳＭＳＩＳＹＣ）、６０９番目から６２９番目までの領域（配列番号３９：ＩＬＳＣＱＶＹＩＳＱＩＬＶＡＳＡＬＧＧＶＶ）、及び６３８番目から６５８番目までの領域（配列番号４０：ＩＰＭＶＡＳＶＧＳＦＬＧＦＬＴＡＴＦＬＶＩ）が相当する。
【0026】
ヒトＳＬＣ４５Ａ４のバリアント１の全長遺伝子及びショート遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸配列における細胞外領域及び膜貫通領域は、ＴＭＨＭＭ－２．０膜貫通ヘリックス予測プログラム:（https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?TMHMM-2.0）を用いて予測されたものである。
【0027】
図１は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質のバリアント１の全長遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸配列（配列番号１）とＳＬＣ４５Ａ４タンパク質のバリアント１のショート遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸配列（配列番号２）を比較した図である。図１に示すように、これらの膜タンパク質における細胞外領域は、ほぼ同一のアミノ酸配列からなっている。
【0028】
また、ヒトＳＬＣ４５Ａ４の他のバリアントのアミノ酸配列における細胞外領域及び膜貫通領域は、例えば、ＳＯＳＵＩ、ＴＭＨＭＭ（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｈｉｄｄｅｎ Ｍａｒｋｏｖ Ｍｏｄｅｌ）、ＫＤ５、ＫＤ９、ＡＬＯＭ２、ＨＭＭＴＯＰ、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ、ＰＨＤ、ＫＫＤ、ＴＭＡＰ、ＴＭＰｒｅｄ、ＭＥＭＳＡＴ、Ｔｏｐｐｒｅｄ、ＤＡＳ等の公知のバイオインフォマティクスツールを用いることで予測することができる。
【0029】
［ＳＬＣ２５Ａ５３］
ヒトＳＬＣ２５Ａ５３のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１０１２７７３．２、ＸＰ＿００５２６２１８６．１、ＸＰ＿０１１５２９２５５．１、ＸＰ＿０１１５２９２５４．１に開示されている。ヒトＳＬＣ４５Ａ４の全長遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸配列として具体的には、例えば、配列番号４１で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
ヒトＳＬＣ２５Ａ５３のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１０１２７７３．２、ＸＰ＿００５２６２１８６．１、ＸＰ＿０１１５２９２５５．１、ＸＰ＿０１１５２９２５４．１に開示されている。ヒトＳＬＣ４５Ａ４の全長遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸配列として具体的には、例えば、配列番号４１で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
【0030】
ヒトＳＬＣ２５Ａ５３をコードする塩基配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１０１２７５５．５、ＸＭ＿００５２６２１２９．６、ＸＭ＿０１１５３０９５３．４、ＸＭ＿０１１５３０９５２．４に開示されている。ヒトＳＬＣ４５Ａ４の全長遺伝子の塩基配列として具体的には、例えば、配列番号４２で表される塩基配列等が挙げられる。
【0031】
本明細書において、ヒトＳＬＣ２５Ａ５３タンパク質とは、全長タンパク質及びその断片の両方を含む。断片とは、ヒトＳＬＣ２５Ａ５３タンパク質の任意の領域を含むポリペプチドであり、天然のヒトＳＬＣ２５Ａ５３タンパク質の機能を有していなくてもよい。
【0032】
＜膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法＞
本実施形態の方法は、膵癌、好ましくは浸潤性膵管癌、又は前立腺癌の診断を補助する方法であり、被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出すること（以下、「検出工程」と称する場合がある）を含む。
本実施形態の方法は、膵癌、好ましくは浸潤性膵管癌、又は前立腺癌の診断を補助する方法であり、被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出すること（以下、「検出工程」と称する場合がある）を含む。
【0033】
本実施形態の方法において、前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は前記核酸が検出された場合、好ましくは前記ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の発現が腫瘍細胞膜上に検出された場合、又は、前記核酸、好ましくはＳＬＣ４５Ａ４のｍＲＮＡが有意な量で発現している場合に、前記被験者が膵癌若しくは前立腺癌に罹患している、又は、罹患する可能性を有することを示す。
【0034】
本実施形態の方法は、膵癌（好ましくは膵原発浸潤性膵管癌）又は前立腺癌の早期診断、確定診断、進展範囲の詳細な把握による精密診断に有効である。
【0035】
本実施形態の方法の工程について、以下に詳細を説明する。
【0036】
［検出工程］
検出工程では、被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出する。
検出工程では、被験者由来の試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を検出する。
【0037】
試料としては、被験者から採取されたものであればよく、膵臓組織及び前立腺組織に限定されず、その他の転移が疑われる組織（例えば、肝臓や肺等）から採取されたものも用いることができる。具体的には、例えば、外科的摘出組織又は生検採取組織の固定後の薄切切片、未固定新鮮組織の凍結薄切切片、さらに採取組織をほぐして得られる細胞塗抹標本及びその初代培養細胞により同様に得られる標本等が挙げられる。特に、被験者由来の新鮮生細胞又は生組織に直接ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質を接触させる場合には、その細胞膜上又は細胞内への該物質の結合の有無を検出することで、膵癌又は前立腺癌の迅速判定を行うことができる。この迅速判定は、膵癌又は前立腺癌の術中迅速病理診断ということもできる。当該迅速判定を行う場合には、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質としては、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体を用いることが好ましい。
【0038】
なお、本明細書において、「被験者」としては、検査に供される者、すなわち被験試料を提供する者を指す。被験者は、何らかの疾患を有する患者又は健常者のいずれであってもよい。好ましくは、膵癌又は前立腺癌の疑いのある者、膵癌又は前立腺癌の罹患経験のある者、膵癌患者又は前立腺癌患者等が挙げられる。
【0039】
検出工程において、試料中のＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を検出することが好ましい。ＳＬＣ４５Ａ４の細胞膜内領域を検出してもよく、細胞外領域を検出してもよいが、ＳＬＣ４５Ａ４の細胞外領域を検出することがより好ましい。
また、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の検出は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体を用いて行なわれることが好ましい。ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞膜内領域に含まれるエピトープに結合する抗体であってもよく、細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体であってもよいが、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体がより好ましい。
また、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の検出は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体を用いて行なわれることが好ましい。ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞膜内領域に含まれるエピトープに結合する抗体であってもよく、細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体であってもよいが、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体がより好ましい。
【0040】
本実施形態の方法において、検出には、定量的又は定性的な検出が含まれる。例えば、定性的な検出としては、次のような測定等が挙げられる。
１）単にＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該タンパク質をコードする核酸（好ましくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）、が（好ましくは、細胞膜上に）存在するか否かの測定；
２）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該タンパク質をコードする核酸（好ましくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）が一定の量以上（好ましくは、細胞膜上に）存在するか否かの測定；
３）（好ましくは、細胞膜上に存在する）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該タンパク質をコードする核酸（好ましくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）の量を対照と比較する測定；
１）単にＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該タンパク質をコードする核酸（好ましくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）、が（好ましくは、細胞膜上に）存在するか否かの測定；
２）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該タンパク質をコードする核酸（好ましくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）が一定の量以上（好ましくは、細胞膜上に）存在するか否かの測定；
３）（好ましくは、細胞膜上に存在する）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質又は該タンパク質をコードする核酸（好ましくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）の量を対照と比較する測定；
【0041】
なお、本実施形態の方法において、対照とは、比較の基準となる試料をいい、陰性コントロールや健常者の生体試料が含まれる。陰性コントロールは、健常者の生体試料を採取し、必要に応じて混合することによって得ることができる。対照のＳＬＣ４５Ａ４の発現レベルは、被験者の生体試料におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現レベルと平行して検出することができる。或いは、予め、多数の健常者の生体試料におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現レベルを検出し、健常者における標準的な発現レベルを統計学的に決定することができる。具体的には、たとえば、平均値±２×標準偏差（Ｓ．Ｄ．）、或いは平均値±３×標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を標準値として用いることもできる。統計学的に、平均値±２×標準偏差（Ｓ．Ｄ．）は８０％の、また平均値±３×標準偏差（Ｓ．Ｄ．）は９０％の健常者の値を含む。
【0042】
或いは、対照におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現レベルを、ＲＯＣ曲線を利用して設定することができる。ＲＯＣ曲線（ｒｅｃｅｉｖｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｕｒｖｅ；受信者操作特性曲線）は、縦軸に検出感度を、横軸に擬陽性率（すなわち“１－特異度”）を示すグラフである。本実施形態の方法において、試料中のＳＬＣ４５Ａ４の発現レベルを判定するための基準値を連続的に変化させたときの、感度と擬陽性率の変化をプロットすることによって、ＲＯＣ曲線を得ることができる。
【0043】
なお、ＲＯＣ曲線を得るための「基準値」は、統計学的な解析のために一時的に利用される数値である。ＲＯＣ曲線を得るための「基準値」は、一般的には、選択しうる全ての基準値をカバーできる範囲内で、連続的に変化させられる。例えば、解析される集団のＳＬＣ４５Ａ４の測定値の最小値と最大値の間で、基準値を変化させることができる。
【0044】
得られたＲＯＣ曲線に基づいて、所望の検出感度、並びに精度を期待できる標準値を選択することができる。ＲＯＣ曲線等によって統計学的に設定された標準値は、カットオフ値（ｃｕｔ－ｏｆｆ ｖａｌｕｅ）とも呼ばれる。カットオフ値に基づく膵癌又は前立腺癌の検出方法においては、検出されたＳＬＣ４５Ａ４の発現レベルが、カットオフ値と比較される。次いで、カットオフ値よりも検出されたＳＬＣ４５Ａ４の発現レベルが高いときに、被験者の膵癌又は前立腺癌が検出される。
【0045】
一方、定量的な検出としては、（好ましくは、細胞膜上に存在する）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の濃度の測定、（好ましくは、細胞膜上に存在する）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の量の測定、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸の量の測定等が挙げられる。
【0046】
検出工程において、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の検出方法としては、例えば、ウエスタンブロッティング法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、発光イムノアッセイ（ＬＩＡ）、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）法、ＣＬＥＩＡ（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏ Ａｓｓａｙ）法（化学発光酵素免疫測定法）、免疫沈降法（ＩＰ）、免疫比濁法（ＴＩＡ）、免疫組織学的染色法（ＩＨＣ）、酵素組織化学的染色、免疫拡散法（ＳＲＩＤ）等の免疫学的方法が挙げられる。
【0047】
これらの中でも、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の検出には、免疫組織学的染色法（ＩＨＣ）が、膵癌又は前立腺癌の診断方法として好ましい免疫学的アッセイ法の一つである。すなわち、ＳＬＣ４５Ａ４は、膵癌細胞又は前立腺癌細胞の細胞膜上において特異的に発現が増強している膜タンパク質であることから、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体（好ましくは、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体）によって、膵癌細胞若しくは膵癌組織、又は、前立腺癌細胞若しくは前立腺癌組織を検出することができる。
【0048】
ウエスタンブロッティング法は、例えば、試料からをアクリルアミドゲル電気泳動によりＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を分離し、これをメンブランに転写し、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を認識する抗体（一次抗体）と反応させ、目的タンパク質と結合していない一次抗体を洗浄等により除去した後、生成した目的タンパク質（ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）と一次抗体との免疫複合体を、標識した二次抗体を用いて検出する方法である。生成した免疫複合体と結合した標識二次抗体の標識量を測定することにより、存在するＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の量を測定できる。
【0049】
二次抗体の標識物質が酵素である場合には、酵素による基質の分解物の量を測定する方法や、標識物質が蛍光物質である場合には、蛍光強度を測定する方法等、標識物質の種類に応じた公知の方法を適宜選択して用いて検出することができる。より具体的には、例えば、通常の光学顕微鏡又は蛍光顕微鏡を用いる方法、共焦点レーザー顕微鏡を用いる方法、個細胞レベルに単離した検体でのＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体を用いたフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）法等が挙げられる。
【0050】
免疫組織学的染色法は、スライドガラス上に固定された組織切片や細胞等を、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を認識する抗体と反応させて免疫複合体を生成させ、目的タンパク質（ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）と結合していない一次抗体を洗浄等により除去した後、免疫複合体と結合した標識二次抗体により検出するものであり、組織や細胞における目的タンパク質（ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質）の発現部位を解析するのに有効である。
【0051】
検出工程において用いられるＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を認識する抗体の詳細については後述する。
【0052】
標識物質としては、例えば放射性同位元素、酵素、蛍光物質、ビオチン／アビジン等が挙げられる。これらの標識物質は市販の標識物質を使用することができる。
【0053】
放射性同位元素しては、例えば３２Ｐ、３３Ｐ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ等が挙げられる。
【0054】
酵素としては、例えばアルカリフォスファターゼ、ホースラディッシュパーオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、β－グルコシダーゼ等が挙げられる。酵素基質は、酵素がペルオキシダーゼの場合、３，３’－ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ（ＤＡＢ）、３，３’，５，５’－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ（ＴＭＢ）、ｏ－ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ（ＯＰＤ）等を用いることができ、アルカリフォスファターゼの場合、ｐ－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙ ｐｈｏｓｐｈａｓｅ（ＮＰＰ）等を用いることができる。
【0055】
蛍光物質としては、例えば公知の量子ドット、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、プロトポルフィリン、ポリフィリン類縁体（フォトフリン、レザフィリン等の光増感剤）、５－アミノレブリン酸（５－ＡＬＡ；代謝産物プロトポルフィリンＩＸ（ＰＰ ＩＸ））、近赤外蛍光色素（例えば、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒｏ、ローダミン等）、その他公知の蛍光色素（例えば、ＧＦＰ、ＦＩＴＣ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、ＴＡＭＲＡ等）等が挙げられる。
これらは市販のものを入手することができ、公知の方法によって標識される。
これらは市販のものを入手することができ、公知の方法によって標識される。
【0056】
免疫組織学的染色法において、組織を固定する場合には、公知の方法を適宜使用でき、例えばＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いることができる。被験者から採取された試料（凍結又は未凍結の臓器、組織又は細胞）をまずＰＦＡ液で固定する。ＰＦＡ液とはパラホルムアルデヒドの１ｖ／ｖ％以上６ｖ／ｖ％以下程度の濃度の水溶液にリン酸緩衝液等の緩衝液を加えた細胞固定溶液であり、好ましくは４ｖ／ｖ％ＰＦＡ固定液（４ｖ／ｖ％パラホルムアルデヒド／０．０１Ｍ ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ）（ｐＨ７．４））を用いる。ＰＦＡ固定液による固定は、目的とする臓器又は組織を１ｖ／ｖ％以上６ｖ／ｖ％以下、好ましくは４ｖ／ｖ％のパラホルムアルデヒドを含むＰＦＡ固定液に、０℃以上８℃以下、好ましくは約４℃の温度で、２時間以上４０時間以下、好ましくは６時間以上３０時間以下浸漬することにより行うことができる。次いで、固定した臓器又は組織をリン酸緩衝食塩水等で洗浄する。このとき、観察したい臓器又は組織の部分を切り出した後、洗浄してもよい。
【0057】
このようにして調製した臓器又は組織を次にＡＭｅＸ法でパラフィン包埋を行う。ＡＭｅＸ法は、冷アセトン固定、アセトンによる脱水、安息香酸メチルとキシレンによる透徹及びパラフィン包埋を一連の操作とする、パラフィン包埋法である。具体的には、－２５℃以上８℃以下、好ましくは－２０℃以上６℃以下のアセトンに２時間以上２４時間以下、好ましくは４時間以上１６時間以下浸漬し、次に組織を入れたアセトンを室温に戻す、或いは室温のアセトンに臓器又は組織を移した後、室温で０．５時間以上５時間以下、好ましくは１時間以上４時間以下脱水する。次に、安息香酸メチル中に室温で０．５時間以上３時間以下、好ましくは０．５時間以上２時間以下浸漬、キシレン中に室温で０．５時間以上３時間以下、好ましくは０．５時間以上２時間以下浸漬して透徹を行い、その後５５℃以上６５℃以下、好ましくは５８℃以上６２℃以下のパラフィンに１時間以上４時間以下、好ましくは１時間以上３時間以下浸透して包埋する。このようにしてＰＦＡ－ＡＭｅＸ法で得られた臓器又は組織のパラフィンブロックは使用時まで低温で保存する。
【0058】
使用時には、上記で得られたパラフィンブロックを、ミクロトーム等を用いて薄切切片を作製し、さらに薄切切片の脱パラフィン及び親水化を行う。脱パラフィン及び親水化は公知の方法により実施することができる。例えば、脱パラフィンはキシレン、トルエンにより実施し、また親水化はアルコール、アセトンにより実施することができる。
【0059】
組織染色（特殊染色）する場合には、通常のパラフィン包埋切片で可能な染色であれば、いずれの染色方法も使用することができる。具体的には、例えば、ＰＡＳ染色、ギムザ染色、トルイジンブルー染色等が挙げられる。
【0060】
酵素組織化学的染色としては、例えば、ＡＬＰ、ＡＣＰ、ＴＲＡＰ、エステラーゼ等の種々の染色が挙げられる。
【0061】
また、病理組織を染色するには、核染色として、ヘマトキシリン－エオジン（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－Ｅｏｓｉｎ）染色；膠原線維用として、ワン・ギーソン（Ｖａｎ Ｇｉｅｓｏｎ）染色、アザン（Ａｚａｎ）染色、マッソントリクローム（Ｍａｓｓｏｎ Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ）染色；弾性線維用として、ワイゲルト（Ｗｅｉｇｅｒｔ）染色、エラスチカワンギーソン（Ｅｌａｓｔｉｃａ Ｖａｎ Ｇｉｅｓｏｎ）染色；細網線維・基底膜用として、渡辺の鍍銀染色、ＰＡＭ染色（Ｐｅｒｉｏｄｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎ）等を用いることができる。
【0062】
ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸としては、ＤＮＡ、ＲＮＡが挙げられる。ＲＮＡとしては、マイクロＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、又はノンコーディングＲＮＡ等が挙げられる。例えば、ＳＬＣ４５Ａ４のｍＲＮＡを定法に従って抽出し、このｍＲＮＡを鋳型としたノーザンハイブリダイゼーション法、又はＲＴ－ＰＣＲ法を実施することによってＳＬＣ４５Ａ４遺伝子の転写レベルの測定を行うことができる。さらに、ＤＮＡアレイ技術を用いて、ＳＬＣ４５Ａ４の発現レベルを測定することも可能である。
【0063】
このような検出方法には、ＳＬＣ４５Ａ４の既知の塩基配列情報に基づいて作製したプローブやプライマー、又はそれらを組み合わせて用いることができる。プライマーの詳細については後述する。
【0064】
本実施形態の方法において、試料中に（好ましくは、細胞膜上に存在する）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質が検出された場合に、そのレベルを指標として膵癌（好ましくは、浸潤性膵管癌）又は前立腺癌が診断される。
【0065】
例えば、膵原発腺癌（特に、浸潤性膵管癌）に罹患していることを判定する基準としては、膵臓又は肝や肺等の転移巣から採取された組織又は細胞検体において、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体との接触によりＳＬＣ４５Ａ４タンパクの発現が細胞膜局在を示した場合に、膵原発腺癌（膵由来腺癌）と判定することができる。細胞膜局在の検出は、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体と他の膜局在分子（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＥｐＣＡＭ、Ｔｒａｎｆｅｒｒｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ等、広汎に上皮系細胞膜上に発現している受容体分子や接着分子等、細胞膜発現又は細胞膜外発現分子）との二重免疫組織化学染色や蛍光二重免疫染色法を実施し、両分子の発現パターンの一致を分析することにより細胞膜局在を確認することも可能である。
【0066】
或いは、例えば、健常者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量と比較して、被験者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量が有意に高い場合には、被験者が膵癌又は前立腺癌に罹患している可能性が高いと判定することができる。一方で、健常者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量と比較して、被験者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量が同程度又は有意に低い場合には、被験者が膵癌又は前立腺癌に罹患している可能性が低いと判定することができる。
【0067】
或いは、例えば、経時的に被験者の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を測定している場合に、前回の測定時の被験者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量と比較して、被験者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量が有意に高い場合に、被験者において膵癌又は前立腺癌が進行している可能性が高いと判定することができる。一方で、前回の測定時の被験者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量と比較して、被験者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量が同程度又は有意に低い場合には、被験者において膵癌又は前立腺癌が進行している可能性が低いと判定することができる。
【0068】
或いは、例えば、被験者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量が、予め設定された基準値超である場合に、被験者が膵癌又は前立腺癌に罹患している可能性があると判定することができる。一方で、被験者での（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量が、予め設定された基準値以下である場合には、被験者が膵癌又は前立腺癌に罹患していない可能性があると判定することができる。
【0069】
当該基準値は、例えば、膵癌患者群と非患者群の膵癌組織試料中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を測定し、両群を区別することができる閾値として実験的に求めることができる。
【0070】
或いは、例えば、前立腺癌患者群と非患者群の前立腺癌組織試料中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を測定し、両群を区別することができる閾値として実験的に求めることができる。
【0071】
本実施形態における膵癌組織試料中又は前立腺癌組織試料中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量の基準値の決定方法としては特に限定されず、例えば、一般的な統計学的手法を用いて決定することができる。
【0072】
基準値の決定方法として具体的には、例えば、一般的に行われている内視鏡検査やＰＥＴ検査等の方法によって膵癌患者であると診断されている患者について、採取された膵生検中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を測定する。複数の患者について測定した後に、その平均値又は中央値等からこれらの膵癌組織試料中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を算出し、これが含まれる数値を基準値とすることができる。
【0073】
或いは、例えば、一般的に行われている直腸内触診検査や画像検査（経直腸的超音波（エコー）検査、前立腺ＭＲＩ検査）等の方法によって前立腺癌患者であると診断されている患者について、採取された前立腺生検中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を測定する。複数の患者について測定した後に、その平均値又は中央値等からこれらの前立腺癌組織試料中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を算出し、これが含まれる数値を基準値とすることができる。
【0074】
また、複数の膵癌患者と複数の非膵癌患者に対して、それぞれ採取された膵生検中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を測定し、平均値又は中央値等から膵癌患者群及び非膵癌患者群の膵癌組織試料中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量とそのばらつきをそれぞれ算出した後、ばらつきも考慮して両数値が区別されるような閾値を求めて、これを基準値とすることができる。
【0075】
また、複数の前立腺癌患者と複数の非前立腺癌患者に対して、それぞれ採取された前立腺生検中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量を測定し、平均値又は中央値等から前立腺癌患者群及び非前立腺癌患者群の前立腺癌組織試料中の（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（又はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量とそのばらつきをそれぞれ算出した後、ばらつきも考慮して両数値が区別されるような閾値を求めて、これを基準値とすることができる。
【0076】
また、膵癌又は前立腺の進行度と、（好ましくは細胞膜上における）ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（若しくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸）の発現量とに相関がある場合には、膵癌又は前立腺の進行度に合わせた基準値を設定することで、被験者の膵癌又は前立腺の進行又は悪性の程度を判定することができる。
【0077】
本実施形態の方法は、例えば膵癌又は前立腺癌の診断、膵癌患者又は前立腺癌患者の選別、薬剤（医薬組成物）の有効性の予見や有効性の確認、治療のモニタリング、膵癌又は前立腺癌のイメージングに用いることができる。
【0078】
［他の実施形態］
他の実施形態において、生体内の膵癌組織又は前立腺癌組織をＳＬＣ４５Ａ４に特異的に結合する物質（好ましくは抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体、より好ましくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体）によって検出することもできる。すなわち、一実施形態において、本発明は、以下の工程を含む、膵癌又は前立腺癌の検出方法を提供する。
（１）放射性同位元素等の標識物質で標識された、ＳＬＣ４５Ａ４に特異的に結合する物質を被験者に投与する工程；
（２）該標識物質の集積を検出する工程。
他の実施形態において、生体内の膵癌組織又は前立腺癌組織をＳＬＣ４５Ａ４に特異的に結合する物質（好ましくは抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体、より好ましくはＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体）によって検出することもできる。すなわち、一実施形態において、本発明は、以下の工程を含む、膵癌又は前立腺癌の検出方法を提供する。
（１）放射性同位元素等の標識物質で標識された、ＳＬＣ４５Ａ４に特異的に結合する物質を被験者に投与する工程；
（２）該標識物質の集積を検出する工程。
【0079】
生体内に投与した特異的結合物質を追跡するために、特異的結合物質は、検出可能に標識することができる。例えば、蛍光物質や発光物質、或いは放射性同位元素で標識された特異的結合物質の生体における挙動を追跡することができる。蛍光物質や発光物質で標識された特異的結合物質は、内視鏡や腹腔鏡を利用して観察することができる。放射性同位元素は、その放射活性を追跡することによって、抗体の局在を画像化することができる。本実施形態の検出方法において、生体内における特異的結合物質（好ましくはＳＬＣ４５Ａ４に特異的に結合する物質）の局在（好ましくは細胞膜局在）は、膵癌細胞又は前立腺癌細胞の存在を表している。すなわち、本実施形態の検出方法を用いることで、膵癌又は前立腺癌の拡がり（浸潤範囲）を正確に把握することができる。膵癌は、後腹膜臓器であり、進行すると十二指腸、胃、腹膜、腹腔神経叢にまで沁み拡がることが知られている。しかしながら、従来では、実際にどこまで膵癌の浸潤が拡がっているのか正確に把握することができず、手術で完全に切除及び摘出することが極めて難しいことから、再発率が高いことが課題となっている。これに対して、本実施形態の検出方法によれば、例えば、外科医が、手術中に被験者の体内に標識物質で標識された、ＳＬＣ４５Ａ４に特異的に結合する物質を静脈注射、腫瘍血管への局所注入、腹腔内腫瘍への直接の散布等の方法で投与し、可視化する（術中イメージング）ことができる。或いは、例えば、肉眼で腫瘍の進展範囲を決める組織サンプリング等を行う際の判定方法としても活用することができる。
【0080】
生体内の癌を検出するために特異的結合物質を標識する放射性同位元素として、陽電子放出核種を利用することができる。例えば５５Ｃｏ、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、６８Ｇａ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、１２４Ｉ等の陽電子放出核種で抗体を標識することができる。これらの陽電子放出核種による抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体の標識には、公知の方法を利用することができる。
【0081】
陽電子放出核種で標識された特異的結合物質がヒトや動物に投与された後に、ＰＥＴ（ポジトロン断層撮影装置）により、その放射性核種が放射する放射線が体外から計測され、コンピュータートモグラフィーの手法で画像に変換される。ＰＥＴは、薬物の体内挙動などに関するデータを非侵襲的に得るための装置である。ＰＥＴによって、放射強度をシグナル強度として定量的に画像化することができる。上記のようにＰＥＴを使用することによって、患者から試料を採取することなく特定の癌で高発現する抗原分子が検出できる。特異的結合物質は、上記の核種の他に１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、４５Ｔｉ等の陽電子放出核種を用いた短寿命核種によって放射性標識することもできる。
【0082】
医療用サイクロトロンによる上記核種を用いた短寿命核種の生産、短寿命放射性標識化合物の製造技術等に関する研究開発が進められている。これらの技術により特異的結合物質が種々の放射性同位元素によって標識することができる。患者に投与された特異的結合物質は、各部位の病理組織に対する特異的結合物質の特異性に従って原発病巣及び転移病巣に集積する。特異的結合物質が陽電子放出核種で標識されていれば、その放射活性を検出することにより該原発病巣及び転移病巣の存在が放射活性の局在によって検出される。該診断用途に用いる場合には２５ｋｅＶ以上４０００ｋｅＶ以下のガンマ粒子又は陽電子放射量の活性値が適切に使用できる。また、適切な核種を選択して、さらに大量に投与すれば治療効果も期待できる。放射線による抗癌作用を得るためには、７０ｋｅＶ以上７００ｋｅＶ以下のガンマ粒子又は陽電子放射量値を与える核種を使用できる。
【0083】
＜膵癌又は前立腺癌の診断用試薬＞
本実施形態の試薬は、膵癌、好ましくは浸潤性膵管癌、又は前立腺癌の診断用試薬であって、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質、又は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を増幅するためのフォワードプライマー及びリバースプライマーを備える。
本実施形態の試薬は、膵癌、好ましくは浸潤性膵管癌、又は前立腺癌の診断用試薬であって、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質、又は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を増幅するためのフォワードプライマー及びリバースプライマーを備える。
【0084】
本実施形態の試薬によれば、膵癌細胞若しくは膵癌組織、又は、前立腺癌細胞若しくは前立腺癌組織を検出することができ、膵癌（好ましくは膵原発浸潤性膵管癌）又は前立腺癌の早期診断、確定診断、進展範囲の詳細な把握による精密診断に有効である。
【0085】
［特異的結合物質］
ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質としては、例えば、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体（抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体）、アプタマー等が挙げられる。中でも、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体が好ましい。固定された組織及び細胞試料に対して抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体を用いる場合には、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体としては、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞膜内領域に含まれるエピトープに結合する抗体であってもよく、細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体であってもよい。一方で、未固定の組織及び細胞試料に対して抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体を用いる場合には、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体としては、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体が好ましい。
ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質としては、例えば、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体（抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体）、アプタマー等が挙げられる。中でも、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体が好ましい。固定された組織及び細胞試料に対して抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体を用いる場合には、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体としては、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞膜内領域に含まれるエピトープに結合する抗体であってもよく、細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体であってもよい。一方で、未固定の組織及び細胞試料に対して抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体を用いる場合には、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体としては、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体が好ましい。
【0086】
本実施形態の試薬において、抗体は、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよく、さらに抗体の機能的断片であってもよい。中でも、特異性が高く、定量性が優れていることから、抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましい。
【0087】
本明細書中において、「特異的に結合」とは、抗体が標的タンパク質（抗原）にのみ結合することを意味し、例えば試験管内におけるアッセイ、好ましくは精製した野生型抗原を用いたプラズモン共鳴アッセイ（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ、ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ等）における抗体の抗原のエピトープへの結合等により定量することができる。結合の親和性は、ｋａ（抗体－抗原複合体からの抗体結合に関する速度定数）、ｋＤ（解離定数）、及びＫＤ（ｋＤ／ｋａ）によって規定することができる。抗体が抗原に特異的に結合している場合の結合親和性（ＫＤ）は、１０－８ｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、１０－１３ｍｏｌ／Ｌ以上１０－９ｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましい。
【0088】
本実施形態において、「ポリクローナル抗体」とは、異なるエピトープに対する異なる抗体を含む抗体調製物を意味する。すなわち、本実施形態の抗体がポリクローナル抗体である場合、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に対し、特異的に結合する異なる抗体を含み得る。
【0089】
また、「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体（抗体断片を含む）を意味する。
また、ポリクローナル抗体とは対照的に、モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を認識するものを意味する。
また、ポリクローナル抗体とは対照的に、モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を認識するものを意味する。
【0090】
本実施形態において、抗体の「機能的断片」とは、抗体の一部分（部分断片）であって、標的タンパク質を特異的に認識するものを意味する。具体的には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、可変領域断片（Ｆｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃ（Ｆｖ）２、ダイアボディー、多特異性抗体、及びこれらの重合体等が挙げられる。
【0091】
抗体は、市販のものであってもよく、作製したものであってもよい。
【0092】
抗体がポリクローナル抗体である場合、抗原（例えば、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質、若しくはその断片、又はこれらを発現する細胞等）で免疫動物を免疫し、その抗血清から、従来の手段（例えば、塩析、遠心分離、透析、カラムクロマトグラフィー等）によって、精製して取得することができる。
抗原として使用するＳＬＣ４５Ａ４タンパク質、又はその一部のアミノ酸配列を有するペプチド断片は、化学的に合成してもよく、ＳＬＣ４５Ａ４の既知の塩基配列情報にも基づいて既知の遺伝子工学的手段によって製造してもよい。
抗原として使用するＳＬＣ４５Ａ４タンパク質、又はその一部のアミノ酸配列を有するペプチド断片は、化学的に合成してもよく、ＳＬＣ４５Ａ４の既知の塩基配列情報にも基づいて既知の遺伝子工学的手段によって製造してもよい。
【0093】
また、抗体がモノクローナル抗体である場合は、ハイブリドーマ法や組換えＤＮＡ法によって作製することができる。
【0094】
ハイブリドーマ法としては、例えば、コーラー及びミルスタインの方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ， ２５６：４９５（１９７５）参照）等が挙げられる。この方法における細胞融合工程に使用される抗体産生細胞としては、例えば抗原（ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質、若しくはその断片、又はこれらを発現する細胞等）で免疫された動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、サル、ヤギ等）の脾臓細胞、リンパ節細胞、末梢血白血球等が挙げられる。また、免疫されていない動物から予め単離された上記の細胞又はリンパ球等に対して、抗原を培地中で作用させることによって得られた抗体産生細胞も使用することができる。ミエローマ細胞としては、公知の種々の細胞株を使用することができる。抗体産生細胞及びミエローマ細胞は、それらが融合可能であれば、異なる動物種起源のものでもよいが、同一の動物種起源のものであることが好ましい。ハイブリドーマを得る方法としては、例えば、抗原で免疫されたマウスから得られた脾臓細胞と、マウスミエローマ細胞との間の細胞融合により産生され、その後のスクリーニングにより、標的蛋白質に特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得る方法等が挙げられる。ハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体を得る方法としては、例えば標的蛋白質に対するモノクローナル抗体は、ハイブリドーマを培養することにより、また、ハイブリドーマを投与した哺乳動物の腹水から、取得する方法等が挙げられる。
【0095】
組換えＤＮＡ法としては、例えば上記抗体又は抗体の機能的断片をコードするＤＮＡをハイブリドーマやＢ細胞等からクローニングし、適当なベクターに組み込んで、これを宿主細胞（例えば哺乳類細胞株、大腸菌、酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞等）に導入し、本実施形態の抗体を組換え抗体として産生させる手法等が挙げられる（例えば、Ｐ．Ｊ．Ｄｅｌｖｅｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９７ ＷＩＬＥＹ、Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，２０００ ＯＸＦＯＲＤ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＰＲＥＳＳ、Ｖａｎｄａｍｍｅ Ａ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９２：７６７－７７５（１９９０）参照）。
【0096】
抗体をコードするＤＮＡの発現においては、重鎖又は軽鎖をコードするＤＮＡを別々に発現ベクターに組み込んで宿主細胞を形質転換してもよく、重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡを単一の発現ベクターに組み込んで宿主細胞を形質転換してもよい（例えば、国際特許出願第９４／１１５２３号参照）。本実施形態の抗体は、上記宿主細胞を培養し、宿主細胞内又は培養液から分離及び精製し、実質的に純粋で均一な形態で取得することができる。抗体の分離及び精製は、通常のポリペプチドの精製で使用されている方法を使用することができる。トランスジェニック動物作製技術を用いた方法では、例えば、抗体遺伝子が組み込まれたトランスジェニック動物（例えば、ウシ、ヤギ、ヒツジ、又はブタ等）を作製し、そのトランスジェニック動物のミルクから、抗体遺伝子に由来するモノクローナル抗体を大量に取得する方法等が挙げられる。
【0097】
抗体は、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合できるものであれば、アミノ酸配列変異体であってもかわない。
【0098】
アミノ酸配列変異体は、抗体鎖をコードするＤＮＡへの変異導入によって、又はペプチド合成によって作製することができる。抗体のアミノ酸配列が改変される部位は、改変される前の抗体と同等の活性を有する限り、抗体の重鎖又は軽鎖の定常領域であってもよく、また、可変領域（フレームワーク領域及びＣＤＲ）であってもよい。また、ＣＤＲのアミノ酸を改変して、抗原へのアフィニティーが高められた抗体をスクリーニングする手法等を用いてもよい（例えば、ＰＮＡＳ，１０２：８４６６－８４７１（２００５）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，２１：４８５－４９３（２００８）、国際公開第２００２／０５１８７０号、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８０：２４８８０－２４８８７（２００５）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，２１：３４５－３５１（２００８）参照）。
【0099】
改変されるアミノ酸数は、好ましくは、１０アミノ酸以内、より好ましくは５アミノ酸以内、最も好ましくは３アミノ酸以内（例えば、２アミノ酸以内、１アミノ酸）である。アミノ酸の改変は、好ましくは、保存的な置換である。
【0100】
本明細書中において「保存的な置換」とは、化学的に同様な側鎖を有する他のアミノ酸残基で置換することを意味する。化学的に同様なアミノ酸側鎖を有するアミノ酸残基のグループは、本発明の属する技術分野でよく知られている。例えば、酸性アミノ酸（アスパラギン酸及びグルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リシン・アルギニン・ヒスチジン）、中性アミノ酸においては、炭化水素鎖を持つアミノ酸（グリシン・アラニン・バリン・ロイシン・イソロイシン・プロリン）、ヒドロキシ基を持つアミノ酸（セリン・スレオニン）、硫黄を含むアミノ酸（システイン・メチオニン）、アミド基を持つアミノ酸（アスパラギン・グルタミン）、イミノ基を持つアミノ酸（プロリン）、芳香族基を持つアミノ酸（フェニルアラニン・チロシン・トリプトファン）等で分類することができる。アミノ酸配列変異体は、抗原への結合活性が対照抗体よりも高いことが好ましい。
【0101】
本実施形態において、抗体（上述の抗体の機能的断片、アミノ酸配列変異体等も含む）の抗原への結合活性は、例えば、ＥＬＩＳＡ法、ウエスタンブロッティング法、免疫沈降法、免疫染色法等により評価することができる。
【0102】
アプタマーとは、標的物質に対する特異的結合能を有する物質である。アプタマーとしては、核酸アプタマー、ペプチドアプタマー等が挙げられる。抗原に特異的結合能を有する核酸アプタマーは、例えば、ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（ＳＥＬＥＸ）法等により選別することができる。また、抗原に特異的結合能を有するペプチドアプタマーは、例えば酵母を用いたＴｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ法等により選別することができる。
【0103】
また、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に対する特異的結合物質として、特許文献１及び２等に記載のヒト膵癌細胞ホーミングペプチドを用いることもできる。後述する実施例に示すように、ヒト膵癌細胞ホーミングペプチドは、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質であるため、該ヒト膵癌細胞ホーミングペプチドの膵癌細胞又は前立腺癌細胞への吸収は、膵癌又は前立腺癌の診断の証拠になり得る。また、ヒト膵癌細胞ホーミングペプチドの吸収が起こることは、膵癌細胞膜上にＳＬＣ４５Ａ４タンパク質が表出している証拠になり得る。
【0104】
ヒト膵癌細胞ホーミングペプチドとして具体的には、以下の一般式（Ｉ）に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを用いることができる。
【0105】
一般式（Ｉ）： Ｘ１１－（Ｙ１１－Ｘ１２）ｎ１１
【0106】
（一般式（Ｉ）中、Ｘ１１は以下の（ａ）又は（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基である；
（ａ）配列番号４３～４５のいずれかに示されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４３～４５のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１又は２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された配列を含むアミノ酸配列；
Ｙ１１はアミノ酸数１以上１０以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーであって、前記アミノ酸残基は、それぞれ独立して、グリシン残基、プロリン残基、セリン残基、システイン残基又はリシン残基である；
Ｘ１２は、前記（ａ）若しくは前記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基、又は、それらのレトロインバーソ型ペプチド残基である。
ｎ１１は０以上９以下の整数である。）
（ａ）配列番号４３～４５のいずれかに示されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４３～４５のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１又は２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された配列を含むアミノ酸配列；
Ｙ１１はアミノ酸数１以上１０以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーであって、前記アミノ酸残基は、それぞれ独立して、グリシン残基、プロリン残基、セリン残基、システイン残基又はリシン残基である；
Ｘ１２は、前記（ａ）若しくは前記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基、又は、それらのレトロインバーソ型ペプチド残基である。
ｎ１１は０以上９以下の整数である。）
【0107】
上記（ａ）における配列番号４３、４４、又は４５に示されるアミノ酸配列は、下記のアミノ酸配列である。
ＲＸＰＴＴＷＨＫＰ （配列番号４３）
ＡＸＸＹＴＷＩＲＡ （配列番号４４）
ＲＸＷＲＱＣＲＷＲ （配列番号４５）
ＲＸＰＴＴＷＨＫＰ （配列番号４３）
ＡＸＸＹＴＷＩＲＡ （配列番号４４）
ＲＸＷＲＱＣＲＷＲ （配列番号４５）
【0108】
なお、配列番号４３におけるＸは、Ｒ（アルギニン残基）又はｍＲ（メチル化アルギニン残基）である。すなわち、配列番号４３に示されるアミノ酸配列は、下記のアミノ酸配列である。
ＲＲＰＴＴＷＨＫＰ （配列番号４６）
ＲｍＲＰＴＴＷＨＫＰ （配列番号４７）
ＲＲＰＴＴＷＨＫＰ （配列番号４６）
ＲｍＲＰＴＴＷＨＫＰ （配列番号４７）
【0109】
また、配列番号４４におけるＸは、Ｒ（アルギニン残基）又はｍＲ（メチル化アルギニン残基）である。すなわち、配列番号４４に示されるアミノ酸配列は、下記のアミノ酸配列である。
ＡＲＲＹＴＷＩＲＡ （配列番号４８）
ＡｍＲＲＹＴＷＩＲＡ （配列番号４９）
ＡＲｍＲＹＴＷＩＲＡ （配列番号５０）
ＡｍＲｍＲＹＴＷＩＲＡ （配列番号５１）
ＡＲＲＹＴＷＩＲＡ （配列番号４８）
ＡｍＲＲＹＴＷＩＲＡ （配列番号４９）
ＡＲｍＲＹＴＷＩＲＡ （配列番号５０）
ＡｍＲｍＲＹＴＷＩＲＡ （配列番号５１）
【0110】
また、配列番号４５におけるＸは、Ａ（アラニン残基）又はｍＡ（メチル化アラニン残基）である。すなわち、配列番号４５に示されるアミノ酸配列は、下記のアミノ酸配列である。
ＲＡＷＲＱＣＲＷＲ （配列番号５２）
ＲｍＡＷＲＱＣＲＷＲ （配列番号５３）
ＲＡＷＲＱＣＲＷＲ （配列番号５２）
ＲｍＡＷＲＱＣＲＷＲ （配列番号５３）
【0111】
一般式（Ｉ）中、Ｘ１１は、上記（ａ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基と機能的に同等なペプチド残基として、下記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基であってもよい。
（ｂ）配列番号４３～４５のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１又は２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された配列を含むアミノ酸配列
（ｂ）配列番号４３～４５のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１又は２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された配列を含むアミノ酸配列
【0112】
なお、本明細書中において、「置換」とは、化学的に同様な側鎖を有する他のアミノ酸残基で置換することを意味する。化学的に同様なアミノ酸側鎖を有するアミノ酸残基のグループは、本実施形態の製造方法で得られるポリペプチドの属する技術分野でよく知られている。例えば、酸性アミノ酸（アスパラギン酸及びグルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リシン、アルギニン及びヒスチジン）、中性アミノ酸においては、炭化水素鎖を持つアミノ酸（グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン及びプロリン）、ヒドロキシ基を持つアミノ酸（セリン及びトレオニン）、硫黄を含むアミノ酸（システイン及びメチオニン）、アミド基を持つアミノ酸（アスパラギン及びグルタミン）、イミノ基を持つアミノ酸（プロリン）、芳香族基を持つアミノ酸（フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン）等で分類することができる。一般的に起こり得るアミノ酸の置換としては、例えば、アラニン／セリン、バリン／イソロイシン、アスパラギン酸／グルタミン酸、トレオニン／セリン、アラニン／グリシン、アラニン／トレオニン、セリン／アスパラギン、アラニン／バリン、セリン／グリシン、チロシン／フェニルアラニン、アラニン／プロリン、リシン／アルギニン、アスパラギン酸／アスパラギン、ロイシン／イソロイシン、ロイシン／バリン、アラニン／グルタミン酸、アスパラギン酸／グリシン等が挙げられる。
【0113】
より具体的には、例えば、配列番号４３、４６又は４７に示されるアミノ酸配列において、Ｎ末端から１番目のアルギニンがグリシン、アラニン、リシン、セリン、トレオニン又はヒスチジン、Ｃ末端から２番目のリシンがグリシン、アラニン、アルギニン、ヒスチジン、セリン又はトレオニン、Ｃ末端から１番目のプロリンをグリシン、アラニン、セリン、トレオニン、バリン、ロイシン又はイソロイシン等への置換が想定される。
【0114】
上記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基として具体的には、例えば、配列番号５５又は配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド残基等が挙げられる。後述する実施例に示すように、配列番号４６で示されるアミノ酸配列において、「Ｒ－Ｐ－Ｔ－Ｔ－Ｗ－Ｈ」（配列番号５４）からなるアミノ酸残基が消化器系の癌細胞又は癌組織への高度の集積性に必須である。そのため、Ｘ１１が配列番号５３又は配列番号５４に示されるアミノ酸配列からなるペプチド残基であることで、消化器系の癌細胞又は癌組織への高度の集積性を発揮することができる。
ＲＰＴＴＷＨＫＰ（配列番号５５）
ＲＲＰＴＴＷＨ（配列番号５６）
ＲＰＴＴＷＨＫＰ（配列番号５５）
ＲＲＰＴＴＷＨ（配列番号５６）
【0115】
また、上記（ａ）又は上記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基は、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、又は、これらの組み合わせからなるものであってもよい。中でも、Ｘ１１はＬ－アミノ酸からなるペプチド残基であることが好ましい。
Ｌ－アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸であり、Ｄ－アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸残基のキラリティーが反転しているものである。また、消化器系の癌細胞又は癌組織への高度の集積性を高めるために、又は、他の物性を最適化するために上記（ａ）又は上記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基を構成するアミノ酸残基は、メチル化等の化学的修飾を受けていてもよい。
Ｌ－アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸であり、Ｄ－アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸残基のキラリティーが反転しているものである。また、消化器系の癌細胞又は癌組織への高度の集積性を高めるために、又は、他の物性を最適化するために上記（ａ）又は上記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基を構成するアミノ酸残基は、メチル化等の化学的修飾を受けていてもよい。
【0116】
［Ｘ１２］
一般式（Ｉ）中、Ｘ１２は、上記（ａ）もしくは上記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基、又は、それらのレトロインバーソ型ペプチド残基である。
本明細書において、「レトロインバーソ型ペプチド残基」とは、アミノ酸配列が逆転し、且つ、鏡像異性体アミノ酸残基によって置換されているペプチド残基を意味する。
一般式（Ｉ）中、Ｘ１２は、上記（ａ）もしくは上記（ｂ）のアミノ酸配列からなるペプチド残基、又は、それらのレトロインバーソ型ペプチド残基である。
本明細書において、「レトロインバーソ型ペプチド残基」とは、アミノ酸配列が逆転し、且つ、鏡像異性体アミノ酸残基によって置換されているペプチド残基を意味する。
【0117】
中でも、消化器系の癌細胞又は癌組織への高度の集積性をより高める観点から、Ｘ１２は、Ｘ１１と同一のアミノ酸配列からなるペプチド残基であることが好ましい。又は、生体内でのより優れた分解耐性を発揮する観点から、Ｘ１２は、Ｘ１１のレトロインバーソ型ペプチド残基であることが好ましい。
【0118】
［Ｙ１１］
一般式（Ｉ）中、Ｙ１１はアミノ酸数１以上１０以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーである。Ｙ１１を構成する前記アミノ酸残基は、それぞれ独立して、グリシン残基、プロリン残基、セリン残基、システイン残基又はリシン残基である。Ｙ１１におけるアミノ酸数は、１以上５以下であり、１以上３以下が好ましく、１がより好ましい。
中でも、Ｙ１１はアミノ酸数１以上１０以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーであって、前記アミノ酸残基はそれぞれ独立して、グリシン残基、システイン残基又はリシン残基であることが好ましく、アミノ酸数１のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーであって、前記アミノ酸残基はグリシン残基、システイン残基又はリシン残基であることがより好ましい。Ｙ１１を構成する前記アミノ酸残基がシステイン残基又はリシン残基である場合には、システイン残基のチオール基（－ＳＨ）又はリシン残基の側鎖を介して、後述する目的物質を共有結合により本実施形態のペプチドに結合させることができる。
一般式（Ｉ）中、Ｙ１１はアミノ酸数１以上１０以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーである。Ｙ１１を構成する前記アミノ酸残基は、それぞれ独立して、グリシン残基、プロリン残基、セリン残基、システイン残基又はリシン残基である。Ｙ１１におけるアミノ酸数は、１以上５以下であり、１以上３以下が好ましく、１がより好ましい。
中でも、Ｙ１１はアミノ酸数１以上１０以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーであって、前記アミノ酸残基はそれぞれ独立して、グリシン残基、システイン残基又はリシン残基であることが好ましく、アミノ酸数１のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーであって、前記アミノ酸残基はグリシン残基、システイン残基又はリシン残基であることがより好ましい。Ｙ１１を構成する前記アミノ酸残基がシステイン残基又はリシン残基である場合には、システイン残基のチオール基（－ＳＨ）又はリシン残基の側鎖を介して、後述する目的物質を共有結合により本実施形態のペプチドに結合させることができる。
【0119】
［ｎ１１］
一般式（Ｉ）中、ｎ１１は０以上９以下の整数であり、０以上８以下の整数が好ましく、０以上６以下の整数がより好ましく、０以上４以下の整数がさらに好ましく、０以上３以下の整数が特に好ましく、０以上２以下の整数が最も好ましい。
一般式（Ｉ）中、ｎ１１は０以上９以下の整数であり、０以上８以下の整数が好ましく、０以上６以下の整数がより好ましく、０以上４以下の整数がさらに好ましく、０以上３以下の整数が特に好ましく、０以上２以下の整数が最も好ましい。
【0120】
好ましいアミノ酸配列（Ｉ）として具体的には、例えば、配列番号４６、５７、又は５８で表されるアミノ酸配列等が挙げられるが、これに限定されない。
【0121】
これらの特異的結合物質は、標識物質が結合していてもよい。標識物質としては、上記「膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法」において例示されたものと同様のものが挙げられる。
【0122】
本実施形態の試薬に含まれるＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に特異的に結合する物質は１種類であってもよく、２種類以上であってもよい。
【0123】
中でも、本実施形態の試薬を用いて、ＳＬＣ４５Ａ４を検出する場合には、配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるＳＬＣ４５Ａ４タンパク質に結合する抗体が含まれることがより好ましく、配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体が含まれることが好ましい。ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞外領域としては、上述したとおりである。また、当該抗体としては、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞内領域を認識する市販のものであってもよい。市販の抗体としては、例えば、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製、抗原配列：ＮＶＳＥＥＡＫＥＥＱＫＧＬＳＳＰＬＡＧＥＧＲＡＧＧＮＳＥＫＰＴＶＬＫＬＴＲＫＥＧＬＱＧＰＶＥＴＥＲＬＱＶＬＴＳＶＲＳＲＨＩＧＷＣＲ（配列番号５９））等が挙げられる。なお、上記ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体が認識するヒトＳＬＣ４５Ａ４タンパク質のアミノ酸配列のうち、１番目から４８番目までのアミノ酸残基は、配列番号１で表されるアミノ酸配列における７１８番目から７６５番目までの領域と相同であり、該７１８番目から７６５番目までの領域は細胞内領域と予測されるため、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体はＳＬＣ４５Ａ４タンパク質の細胞内領域を認識する抗体であると推定される。
【0124】
［標識試薬］
本実施形態の試薬は、特異的結合物質に加えて、さらに、特異的結合物質に標識物質が結合したもの（例えば、抗体に標識物質が結合したもの）、又は特異的結合物質に対する抗体に標識物質が結合したもの（例えば、抗体に対する抗体に標識物質が結合したもの）を、標識試薬として備えていてもよい。
本実施形態の試薬は、特異的結合物質に加えて、さらに、特異的結合物質に標識物質が結合したもの（例えば、抗体に標識物質が結合したもの）、又は特異的結合物質に対する抗体に標識物質が結合したもの（例えば、抗体に対する抗体に標識物質が結合したもの）を、標識試薬として備えていてもよい。
【0125】
例えば、抗体に標識物質が結合したものを標識試薬として備える場合、サンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）法や抗原測定系による化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）等を用いて、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を検出及び定量することができる。
【0126】
また、例えば、抗体に対する抗体に標識物質が結合したものを標識試薬として備える場合、抗体測定系によるＥＬＩＳＡ法、間接蛍光抗体法、抗体測定系によるＣＬＥＩＡ法等を用いて、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を検出及び定量することができる。
【0127】
抗体に対する抗体は、抗体の由来動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、サル、ヤギ等）に対する抗体であることが好ましい。例えば、抗体の由来がマウスである場合、抗マウス抗体であることが好ましい。また、抗体に対する抗体に標識物質が結合したものには、免疫グロブリンのすべてのクラス及びサブクラスが含まれる。
【0128】
本実施形態の試薬は、必要に応じて、さらに反応停止液を備えていてもよい。反応停止液としては、例えば、硫酸、水酸化ナトリウム等が挙げられる。
【0129】
［プライマーセット］
以下、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を増幅するためのフォワードプライマー及びリバースプライマーを「プライマーセット」と称する場合がある。
以下、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を増幅するためのフォワードプライマー及びリバースプライマーを「プライマーセット」と称する場合がある。
【0130】
プライマーセットは、ＲＴ－ＰＣＲ法等により、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸の発現量（すなわち、ｍＲＮＡの発現量）を測定する場合に用いることができる。
【0131】
フォワードプライマーは、ＳＬＣ４５Ａ４をコードする核酸の３’末端領域の塩基配列に対して特異的な配列とすることができる。
リバースプライマーは、ＳＬＣ４５Ａ４をコードする核酸の５’末端領域の塩基配列に対して特異的な配列とすることができる。
フォワードプライマー及びリバースプライマーが上記配列を有することにより、リアルタイムＰＣＲ反応において、ＳＬＣ４５Ａ４をコードする核酸をより特異的に増幅することができる。
リバースプライマーは、ＳＬＣ４５Ａ４をコードする核酸の５’末端領域の塩基配列に対して特異的な配列とすることができる。
フォワードプライマー及びリバースプライマーが上記配列を有することにより、リアルタイムＰＣＲ反応において、ＳＬＣ４５Ａ４をコードする核酸をより特異的に増幅することができる。
【0132】
ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする核酸を増幅するためのフォワードプライマー及びリバースプライマーは、ＳＬＣ４５Ａ４の塩基配列情報を基に、当業者であれば適宜設計することができる。
【0133】
本実施形態の試薬は、上記プライマーセットに加えて、逆転写反応用のランダムプライマーを更に備えることができる。
【0134】
逆転写反応用のランダムプライマーとしては、例えば、ランダムな配列を有する６ｍｅｒ又は９ｍｅｒのデオキシリボヌクレオチドの混合物からなるもの等が挙げられ、前記デオキシリボヌクレオチドの５’末端がリン酸化されていることが好ましい。
【0135】
本実施形態の試薬は、さらに、標識されたオリゴヌクレオチドプローブを備えていてもよい。前記標識されたオリゴヌクレオチドプローブは、ＳＬＣ４５Ａ４をコードする核酸の塩基配列の少なくとも３塩基と相補的な塩基配列を含む。前記塩基配列を含むことにより、プローブは前記フォワードプライマー及びリバースプライマーによる増幅産物に特異的にハイブリダイゼーションすることができる。
【0136】
標識されたオリゴヌクレオチドプローブとしては、例えば、５’末端にクエンチャーが、３’末端に標識物質が結合しているものを用いることができる。５’末端にクエンチャー、３’末端に標識物質を備えることにより、リアルタイムＰＣＲ反応のＤＮＡポリメラーゼによる伸長反応の際に、ポリメラーゼの持つ５’－３’ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅ活性により、ＳＬＣ４５Ａ４をコードする核酸にハイブリダイズしたプローブが分解され、クエンチャーによる抑制が解除されて標識物質を検出することができる。
【0137】
プローブの３’末端に結合した標識物質としては、例えば、蛍光色素、蛍光ビーズ、量子ドット、ビオチン、抗体、抗原、エネルギー吸収性物質、ラジオアイソトープ、化学発光体、酵素等が挙げられる。
【0138】
蛍光色素としては、ＦＡＭ（カルボキシフルオレセイン）、ＪＯＥ（６－カルボキシ－４’,５’－ジクロロ２’,７’－ジメトキシフルオレセイン）、ＦＩＴＣ（フルオレセインイソチオシアネート）、ＴＥＴ（テトラクロロフルオレセイン）、ＨＥＸ（５'－ヘキサクロロ－フルオレセイン－ＣＥホスホロアミダイト）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ａｌｅｘａ５６８、Ａｌｅｘａ６４７等が挙げられる。
【0139】
プローブの３’末端に結合した標識物質が蛍光色素である場合、プローブの３’末端に結合した標識物質とプローブの５’末端に結合したクエンチャーとの組み合わせとしては、ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動；Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（Ｆｏｅｒｓｔｅｒ） Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｅｎｅｒｇｙ Ｔｒａｎｓｆｅｒ）が起こり得る標識物質の組合せであることが好ましい。具体的には、例えば、励起波長が４９０ｎｍ付近の蛍光色素（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミングリーン、Ａｌｅｘａ（登録商標）ｆｌｕｏｒ ４８８、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ等）と励起波長が５４０ｎｍ付近の蛍光色素（例えば、ＴＡＭＲＡ、テトラメチルローダミン、Ｃｙ３）、又は励起波長が５４０ｎｍ付近の蛍光色素と励起波長が６３０ｎｍ付近の蛍光色素（例えば、Ｃｙ５等）の組合せ等が挙げられる。
【0140】
本実施形態の試薬は、使用する核酸増幅方法によって異なるが、この他に、基質としてのヌクレオチド三リン酸、核酸合成酵素、増幅反応用緩衝液の１つ以上を含んでいてもよい。ヌクレオチド三リン酸は、核酸合成酵素に応じた基質（ｄＮＴＰ、ｒＮＴＰ等）である。核酸合成酵素は、使用する核酸増幅方法に応じた酵素であり、例えば、ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、逆転写酵素等が挙げられる。増幅反応用緩衝液としては、例えば、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ベロナール緩衝液、ホウ酸緩衝液、グッド緩衝液等が挙げられ、ｐＨは特に限定されない。
【0141】
［緩衝液］
本実施形態の試薬は、さらに、緩衝液を備えていてもよい。緩衝液としては、当該分野において公知のものから適宜選択でき、例えば、リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、クエン酸緩衝液、炭酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酢酸緩衝液等が挙げられる。緩衝液は、必要に応じて、ＮａＣｌ、界面活性剤(例えば、Ｔｗｅｅｎ ２０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００等)及び防腐剤（例えば、アジ化ナトリウム等）のうち少なくともいずれか一方を含んでいてもよい。緩衝液の具体例としては、リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）、ＰＢＳ－Ｔ（ＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ ２０）、トリス緩衝生理食塩水（Ｔｒｉｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ；ＴＢＳ）、又はＴＢＳ－Ｔ（ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ ２０）等が挙げられる。
本実施形態の試薬は、さらに、緩衝液を備えていてもよい。緩衝液としては、当該分野において公知のものから適宜選択でき、例えば、リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、クエン酸緩衝液、炭酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酢酸緩衝液等が挙げられる。緩衝液は、必要に応じて、ＮａＣｌ、界面活性剤(例えば、Ｔｗｅｅｎ ２０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００等)及び防腐剤（例えば、アジ化ナトリウム等）のうち少なくともいずれか一方を含んでいてもよい。緩衝液の具体例としては、リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）、ＰＢＳ－Ｔ（ＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ ２０）、トリス緩衝生理食塩水（Ｔｒｉｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ；ＴＢＳ）、又はＴＢＳ－Ｔ（ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ ２０）等が挙げられる。
【0142】
本実施形態の試薬において、特異的結合物質及びプライマーは、乾燥状態であってもよく、上述の緩衝液に溶解した上であってもよい。中でも、保存安定性から、乾燥状態であることが好ましい。
【実施例0143】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【0144】
［実施例１］
（膵癌細胞ホーミングペプチドの取り込み制御分子の同定）
膵癌細胞ホーミングペプチドとして、発明者が見出した特許文献１に記載のペプチドを用いた。具体的には、ビオチンが結合した、配列番号４６で表されるアミノ酸配列（ＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド（以下、単に「ビオチン化ペプチド」と称する場合がある）を用いた。膵癌細胞ホーミングペプチドを用いた取り込み制御分子の同定法のプロトコルを図２に示す。
（膵癌細胞ホーミングペプチドの取り込み制御分子の同定）
膵癌細胞ホーミングペプチドとして、発明者が見出した特許文献１に記載のペプチドを用いた。具体的には、ビオチンが結合した、配列番号４６で表されるアミノ酸配列（ＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド（以下、単に「ビオチン化ペプチド」と称する場合がある）を用いた。膵癌細胞ホーミングペプチドを用いた取り込み制御分子の同定法のプロトコルを図２に示す。
【0145】
まず、培地中濃度が１０μＭとなるようにビオチン化ペプチドをヒト膵管癌細胞（ＰＤＡＣ細胞）に添加し、１時間培養後、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｒ（ＢＳ３、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）による処理を行なった。次いで、処理後の細胞を回収し、膜タンパク質抽出キット（Ｔｒｉｄｅｎｔ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ、Ｇｅｎｅ Ｔｅｘ製）を用いて、膜タンパク質を含む画分を得た。次いで、膜タンパク質を含む画分についてアビジンビーズを用いて、膜タンパク質とビオチン化ペプチドとの複合体を精製し、溶出液を得た。次いで、溶出液をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、分離したバンドをＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析を行ない、複数種類の候補分子を得た。
【0146】
次いで、各候補分子をコードする遺伝子をｐＥＦ１／Ｍｙｃ－Ｈｉｓベクター（図３参照）のＥｃｏＲＩ－ＮｏｔＩサイトに挿入し、当該ベクターを用いて、各候補分子を膵癌細胞ホーミングペプチドの取り込みの低いネガコン細胞（ＮＣｌ－Ｈ２１１０細胞、非小細胞肺癌由来細胞株）にＭｙｃタグ結合コンストラクトとして発現させた。次いで、当該細胞を用いて、ビオチン化ペプチドとの結合性を免疫沈降（ＩＰ）法により再度検証した。免疫沈降（ＩＰ）法として具体的には、上述した方法と同様に、まず、培地中濃度が１０μＭとなるようにビオチン化ペプチドを添加して上記各候補分子を発現する細胞を１時間培養後、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｒによる処理を行なった。さらに、処理後の細胞から膜タンパク質を含む画分を回収し、アビジンビーズを用いて精製し、溶出液を得た。得られた溶出液をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、抗Ｍｙｃ抗体を用いてウエスタンブロッティング解析を行なった。結果を図４に示す。なお、図４において、「ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ－ＰＣＰＰ１１」とは、ビオチンが結合した、配列番号４６で表されるアミノ酸配列からなるペプチド（ビオチン化ペプチド）を示す。
【0147】
図４に示すように、膵癌細胞ホーミングペプチドの結合分子として、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質（図４中のφ）及びＳＬＣ２５Ａ５３（図４中のχ）を確認及び同定した。ｐＥＦ１／Ｍｙｃ－Ｈｉｓベクターに挿入した、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする遺伝子の塩基配列を配列番号２に、ＳＬＣ２５Ａ５３タンパク質をコードする遺伝子の塩基配列を配列番号４２に示す。なお、以下、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質を「Ｒｅｃｅｐｔｏｒ φ」、ＳＬＣ２５Ａ５３タンパク質を「Ｒｅｃｅｐｔｏｒ χ」、と称する場合がある。
【0148】
［実施例２］
（ＢｘＰＣ３細胞及びＰＣ３を用いた膵癌細胞ホーミングペプチドの取り込み制御分子の確認試験）
まず、予めＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムを用いて、ＳＬＣ４５Ａ４をノックアウトしたＢｘＰＣ３細胞（ヒト膵臓腺癌由来細胞）を作製した。また、コントロールとして、野生型のＢｘＰＣ３細胞も準備した。次いで、Ｎ末端に蛍光物質ＦＡＭ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）が結合した、アミノ酸配列の異なる３種類の膵癌細胞ホーミングペプチド（ｓｉｎｇｌｅ ＰＣＰＰ１１：配列番号４６で表されるアミノ酸配列（ＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド、ｔａｎｄｅｍ ＰＣＰＰ１１：配列番号５７で表されるアミノ酸配列（ＲＲＰＴＴＷＨＫＰＧＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド、ＮｍＬＬ：配列番号５８で表されるアミノ酸配列（ＲｍＲＰＴＴＷＨＫＰＧＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド）をそれぞれ培地中濃度が３μＭとなるように細胞に添加して、２時間培養した。次いで、培地中のペプチドを取り除くために、ペプチド不含の培地で３回洗浄した。次いで、倒立型蛍光顕微鏡で各細胞における各ペプチドの取り込みを視覚的に評価した。結果を図５Ａに示す。
（ＢｘＰＣ３細胞及びＰＣ３を用いた膵癌細胞ホーミングペプチドの取り込み制御分子の確認試験）
まず、予めＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムを用いて、ＳＬＣ４５Ａ４をノックアウトしたＢｘＰＣ３細胞（ヒト膵臓腺癌由来細胞）を作製した。また、コントロールとして、野生型のＢｘＰＣ３細胞も準備した。次いで、Ｎ末端に蛍光物質ＦＡＭ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）が結合した、アミノ酸配列の異なる３種類の膵癌細胞ホーミングペプチド（ｓｉｎｇｌｅ ＰＣＰＰ１１：配列番号４６で表されるアミノ酸配列（ＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド、ｔａｎｄｅｍ ＰＣＰＰ１１：配列番号５７で表されるアミノ酸配列（ＲＲＰＴＴＷＨＫＰＧＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド、ＮｍＬＬ：配列番号５８で表されるアミノ酸配列（ＲｍＲＰＴＴＷＨＫＰＧＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド）をそれぞれ培地中濃度が３μＭとなるように細胞に添加して、２時間培養した。次いで、培地中のペプチドを取り除くために、ペプチド不含の培地で３回洗浄した。次いで、倒立型蛍光顕微鏡で各細胞における各ペプチドの取り込みを視覚的に評価した。結果を図５Ａに示す。
【0149】
図５Ａに示すように、野生型のＢｘＰＣ３細胞では、各膵癌細胞ホーミングペプチドの取り込みによる蛍光が検出されたのに対して、ＳＬＣ４５Ａ４をノックアウトしたＢｘＰＣ３細胞では、ほとんど蛍光が検出されず、各膵癌細胞ホーミングペプチドが取り込まれなかったことが確かめられた。
よって、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質は、膵癌細胞ホーミングペプチドの細胞内への取り込みの制御に重要な役割を担っていることが確かめられた。
よって、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質は、膵癌細胞ホーミングペプチドの細胞内への取り込みの制御に重要な役割を担っていることが確かめられた。
【0150】
また、Ｎ末端に蛍光物質ＦＡＭが結合した、上記ホーミングペプチド（ｓｉｎｇｌｅ ＰＣＰＰ１１：配列番号４６で表されるアミノ酸配列（ＲＲＰＴＴＷＨＫＰ）からなるペプチド）を、培地中濃度が４μＭとなるように、ＰＣ３細胞（ヒト前立腺癌細胞）に添加して、３７℃、１２０分間ＣＯ２インキュベーター内で培養した。次いで、培地中のペプチドを取り除くために、ペプチド不含の培地で３回洗浄した。次いで、倒立型蛍光顕微鏡で各細胞における各ペプチドの取り込みを視覚的に評価した。結果を図５Ｂに示す。
【0151】
図５Ｂに示すように、ヒト前立腺癌細胞であるＰＣ３細胞においてもヒト膵臓腺癌由来細胞であるＢｘＰＣ３細胞とほぼ同程度のホーミングペプチドの取り込みによる傾向が検出された。
よって、ヒト前立腺癌細胞においても、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質がホーミングペプチドの細胞内への取り込みの制御に重要な役割を担っている可能性が示唆された。
よって、ヒト前立腺癌細胞においても、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質がホーミングペプチドの細胞内への取り込みの制御に重要な役割を担っている可能性が示唆された。
【0152】
［実施例３］
（ＳＬＣ４５Ａ４の細胞における局在）
ＢｘＰＣ３細胞に、実施例１で作製したＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする遺伝子（配列番号３で表される塩基配列からなるｃＤＮＡ）が挿入されたｐＥＦ１／Ｍｙｃ－Ｈｉｓベクターをトランスフェクションした。次いで、細胞を固定し、洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、マウス抗ヒトｃ－Ｍｙｃ抗体（×５００倍希釈、ＭＢＬ社製）を添加して室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ａｌｅｘａ５５５（赤色蛍光）標識抗マウスＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（励起波長：３５２ｎｍ、蛍光波長：４６１ｎｍ）を用いて核染色し、位相差／蛍光顕微鏡で観察した。結果を図６に示す。
（ＳＬＣ４５Ａ４の細胞における局在）
ＢｘＰＣ３細胞に、実施例１で作製したＳＬＣ４５Ａ４タンパク質をコードする遺伝子（配列番号３で表される塩基配列からなるｃＤＮＡ）が挿入されたｐＥＦ１／Ｍｙｃ－Ｈｉｓベクターをトランスフェクションした。次いで、細胞を固定し、洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、マウス抗ヒトｃ－Ｍｙｃ抗体（×５００倍希釈、ＭＢＬ社製）を添加して室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ａｌｅｘａ５５５（赤色蛍光）標識抗マウスＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（励起波長：３５２ｎｍ、蛍光波長：４６１ｎｍ）を用いて核染色し、位相差／蛍光顕微鏡で観察した。結果を図６に示す。
【0153】
また、野生型のＢｘＰＣ３細胞、ＡｓＰＣ１細胞（ヒト転移性膵臓腺癌由来細胞株）及びＰａｎｃ－１細胞（ヒト膵臓腺癌由来細胞株）を固定し、洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ａｌｅｘａ５５５（赤色蛍光）標識抗ウサギＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（励起波長：３５２ｎｍ、蛍光波長：４６１ｎｍ）を用いて核染色し、位相差／蛍光顕微鏡で観察した。結果を図６に示す。
【0154】
図６に示すように、ＳＬＣ４５Ａ４の塩基配列が挿入されたｐＥＦ１／Ｍｙｃ－ＨｉｓベクターをトランスフェクションしたＢｘＰＣ３細胞、並びに、内因性のＳＬＣ４５Ａ４を発現している野生型のＢｘＰＣ３細胞、ＡｓＰＣ１細胞及びＰａｎｃ－１細胞のいずれの細胞においても、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質は膵癌細胞の細胞膜上に局在していた。
【0155】
［実施例４］
（ヒト膵癌患者由来のヒト膵癌組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在１）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者（Ｃａｓｅ１～７の７検体）由来のヒト膵癌組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ＨＲＰ（西洋わさび由来ペルオキシダーゼ）標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ニチレイ製、ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ＤＡＢ（３，３’－ジアミノベンジジン四塩酸塩）基質溶液を滴下し、１分間程度発色反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。
（ヒト膵癌患者由来のヒト膵癌組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在１）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者（Ｃａｓｅ１～７の７検体）由来のヒト膵癌組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ＨＲＰ（西洋わさび由来ペルオキシダーゼ）標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ニチレイ製、ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ＤＡＢ（３，３’－ジアミノベンジジン四塩酸塩）基質溶液を滴下し、１分間程度発色反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。
【0156】
コントロールとして、膵管、膵腺房、膵ランゲルハンス島等の膵臓組織、肝臓、肺胞、胃粘膜上皮、腎糸球体及び精巣のヒト正常組織についても同様に免疫組織染色を行った。免疫組織染色後の各組織を位相差／蛍光顕微鏡で観察した結果を図７（膵癌患者のＣａｓｅ１～４の４検体の膵癌組織）、図８（各種正常組織）、図９Ａ（膵癌患者のＣａｓｅ５～７の３検体の膵癌組織及び正常な膵腺房及び膵管）、及び図９Ｂ（前立腺癌患者のＣａｓｅ１～４の４検体の前立腺癌組織）に示す。なお、図９Ａにおいて「Ｄ」は膵管を示し、「Ｌ」は膵ランゲルハンス島を示す。また、図９Ｂにおいて「ＧＳ」はＧｌｅａｓｏｎ ｓｃｏｒｅの略称であり、前立腺癌の悪性度を示す指標である。５段階に分けられており、グレードが高いほど（グレード５）悪性度が高くなる。最も多いグレードと２番目に多いグレードを足して悪性度を判定する。
【0157】
図７及び図９Ａに示すように、ＳＬＣ４５Ａ４は増殖及び浸潤する膵癌腺管に強い発現が、細胞膜パターンで認められた。また、図９Ｂに示すように、ＳＬＣ４５Ａ４は多様な分化度を示す前立腺癌患者の複数の症例において癌細胞膜と細胞質に確認された。
一方、図８に示すように、膵癌発生母地とされる正常な膵管、膵腺房、膵ランゲルハンス島等の正常膵臓組織、肝臓、肺胞、胃粘膜上皮、腎糸球体及び精巣では、ＳＬＣ４５Ａ４の発現は陰性、或いは、低い発現であった。また、低い発現である正常組織において、ＳＬＣ４５Ａ４の発現は核又は細胞質に局在しており、細胞膜上への有意な発現は認められなかった。
一方、図８に示すように、膵癌発生母地とされる正常な膵管、膵腺房、膵ランゲルハンス島等の正常膵臓組織、肝臓、肺胞、胃粘膜上皮、腎糸球体及び精巣では、ＳＬＣ４５Ａ４の発現は陰性、或いは、低い発現であった。また、低い発現である正常組織において、ＳＬＣ４５Ａ４の発現は核又は細胞質に局在しており、細胞膜上への有意な発現は認められなかった。
【0158】
［実施例５］
（ヒト膵癌患者由来の組織及びその他癌患者由来の組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在１）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来のヒト膵癌組織、肝転移巣及びリンパ節転移巣の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片について、実施例４と同様の方法を用いて、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体を用いて免疫組織染色を行った。また、コントロールとして、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌（ＧＣ）、胆のう癌（ＧＢＣ）、転移性胃癌（ＭＧＣ）、扁平上皮癌（ＳＣＣｓ）等のその他癌患者由来の各種ヒト癌組織についても同様に免疫染色を行った。免疫組織染色後の各組織を位相差／蛍光顕微鏡で観察した結果を図１０（ヒト膵癌組織、肝転移巣及びリンパ節転移巣）及び図１１（膵癌以外の癌患者由来の各種癌組織）に示す。なお、図１０において、「ｐｒｉｍａｒｙ ｓｉｔｅ」とは原発巣を示し、「ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａ．」とは肝転移巣を示し、「ＬＮ ｍｅｔａ．」とはリンパ節転移巣を示す。図１１において、「ｉｎｖａｓｉｖｅ ｆｒｏｎｔ」とは浸潤の最先端部を示し、「Ｌｕｎｇ ＳＣＣ」は肺扁平上皮癌組織を示し、「Ｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ＳＣＣ」は咽頭扁平上皮癌組織を示す。
（ヒト膵癌患者由来の組織及びその他癌患者由来の組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在１）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来のヒト膵癌組織、肝転移巣及びリンパ節転移巣の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片について、実施例４と同様の方法を用いて、抗ＳＬＣ４５Ａ４抗体を用いて免疫組織染色を行った。また、コントロールとして、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌（ＧＣ）、胆のう癌（ＧＢＣ）、転移性胃癌（ＭＧＣ）、扁平上皮癌（ＳＣＣｓ）等のその他癌患者由来の各種ヒト癌組織についても同様に免疫染色を行った。免疫組織染色後の各組織を位相差／蛍光顕微鏡で観察した結果を図１０（ヒト膵癌組織、肝転移巣及びリンパ節転移巣）及び図１１（膵癌以外の癌患者由来の各種癌組織）に示す。なお、図１０において、「ｐｒｉｍａｒｙ ｓｉｔｅ」とは原発巣を示し、「ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａ．」とは肝転移巣を示し、「ＬＮ ｍｅｔａ．」とはリンパ節転移巣を示す。図１１において、「ｉｎｖａｓｉｖｅ ｆｒｏｎｔ」とは浸潤の最先端部を示し、「Ｌｕｎｇ ＳＣＣ」は肺扁平上皮癌組織を示し、「Ｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ＳＣＣ」は咽頭扁平上皮癌組織を示す。
【0159】
図１０に示すように、ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来の組織において、ＳＬＣ４５Ａ４は原発巣だけでなく、肝転移巣及びリンパ節転移巣においても、強い発現が、細胞膜パターンで認められた。一方、図１１に示すように、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌（ＧＣ）、胆のう癌（ＧＢＣ）及び扁平上皮癌（ＳＣＣｓ）の組織では、ＳＬＣ４５Ａ４の発現は陰性、或いは、低い発現であった。また、また、低い発現であるその他の癌組織及び転移性胃癌（ＭＧＣ）組織におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現は、核又は細胞質に局在しており、細胞膜上への有意な発現は認められなかった。
【0160】
［実施例６］
（ヒト膵癌患者由来の組織及びその他癌患者由来の組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在２）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来のヒト膵癌組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ニチレイ製、ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。コントロールとして、結腸腺癌、胃腺癌、腎臓癌、肝臓癌等のその他癌患者由来の各種ヒト癌組織についても同様に免疫染色を行った。免疫組織染色後の各組織を位相差／蛍光顕微鏡で観察した結果を図１２（上段の画像：倍率４０倍、下段の画像：倍率８０倍）に示す。図１２において、「ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｄｅｎｏｃａ．」は膵臓腺癌組織を示し、「ｃｏｌｏｎ ａｄｅｎｏｃａ．」は結腸腺癌組織を示し、「ｇａｓｔｒｉｃ ａｄｅｎｏｃａ．」は胃腺癌組織を示し、「ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌｅｓ」は腎臓癌組織における尿細管を示し、「ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ」は肝癌組織における肝実質細胞を示す。
（ヒト膵癌患者由来の組織及びその他癌患者由来の組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在２）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来のヒト膵癌組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ニチレイ製、ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。コントロールとして、結腸腺癌、胃腺癌、腎臓癌、肝臓癌等のその他癌患者由来の各種ヒト癌組織についても同様に免疫染色を行った。免疫組織染色後の各組織を位相差／蛍光顕微鏡で観察した結果を図１２（上段の画像：倍率４０倍、下段の画像：倍率８０倍）に示す。図１２において、「ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｄｅｎｏｃａ．」は膵臓腺癌組織を示し、「ｃｏｌｏｎ ａｄｅｎｏｃａ．」は結腸腺癌組織を示し、「ｇａｓｔｒｉｃ ａｄｅｎｏｃａ．」は胃腺癌組織を示し、「ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌｅｓ」は腎臓癌組織における尿細管を示し、「ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ」は肝癌組織における肝実質細胞を示す。
【0161】
図１２に示すように、ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来の膵臓腺癌組織において、ＳＬＣ４５Ａ４は、強い発現が細胞膜パターンで認められた。一方、結腸腺癌、胃腺癌、腎臓癌、及び肝臓癌の組織では、ＳＬＣ４５Ａ４の発現は見られたが、膵臓腺癌組織での発現よりも低く、核又は細胞質に局在しており、細胞膜上への有意な発現は認められなかった。
【0162】
［実施例７］
（ヒト膵癌患者由来の組織及びその他癌患者由来の組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在３）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来のヒト膵癌組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、及び、マウス抗ＣＤ７１抗体（×２００倍希釈、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ａｌｅｘａ５５５（赤色蛍光）標識抗ウサギＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）、及び、Ａｌｅｘａ４８８（緑色蛍光）標識抗マウスＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。コントロールとして、ヒト正常腎臓組織についても同様に免疫染色を行った。免疫組織染色後の各組織を位相差／蛍光顕微鏡で観察した結果を図１３（ヒト膵癌組織）及び図１４（ヒト正常腎臓組織）に示す。
（ヒト膵癌患者由来の組織及びその他癌患者由来の組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在３）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来のヒト膵癌組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、及び、マウス抗ＣＤ７１抗体（×２００倍希釈、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ａｌｅｘａ５５５（赤色蛍光）標識抗ウサギＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）、及び、Ａｌｅｘａ４８８（緑色蛍光）標識抗マウスＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。コントロールとして、ヒト正常腎臓組織についても同様に免疫染色を行った。免疫組織染色後の各組織を位相差／蛍光顕微鏡で観察した結果を図１３（ヒト膵癌組織）及び図１４（ヒト正常腎臓組織）に示す。
【0163】
図１３に示すように、ヒト膵癌組織におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現はトランスフェリン受容体であるＣＤ７１の局在と一致しており、細胞膜上に局在していることが確かめられた。一方で、図１４に示すように、ヒト正常腎臓組織におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現はＣＤ７１の局在と一致しておらず、尿細管上皮の核及び細胞質に局在していることが確かめられた。すなわち、ヒト正常腎臓組織では、細胞膜上及び細胞膜外へのタンパク質の表出及び発現は見られなかった。
【0164】
［実施例８］
（ヒト膵癌患者由来のヒト膵癌組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在２）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来のヒト膵癌組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、及び、マウス抗Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体（×２００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ａｌｅｘａ５５５（赤色蛍光）標識抗ウサギＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）、及び、Ａｌｅｘａ４８８（緑色蛍光）標識抗マウスＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。
（ヒト膵癌患者由来のヒト膵癌組織における内因性ＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在２）
ヒト浸潤性膵管癌（ＰＤＡＣ）患者由来のヒト膵癌組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、及び、マウス抗Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体（×２００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ａｌｅｘａ５５５（赤色蛍光）標識抗ウサギＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）、及び、Ａｌｅｘａ４８８（緑色蛍光）標識抗マウスＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。
【0165】
また、マウス抗Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体（×２００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）の代わりに、マウス抗ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）抗体（×２００倍希釈、Ｍｙｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ製）を用いた以外は、上述した方法と同様の方法を用いて、免疫染色を行った。免疫組織染色後の各組織を位相差／蛍光顕微鏡で観察した結果を図１５（抗Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体使用）及び図１６（抗ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）抗体使用）に示す。
【0166】
図１５及び図１６に示すように、ヒト膵癌組織におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現は細胞膜マーカーであるＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ及びＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）の局在と一致しており、細胞膜上に局在していることが確かめられた。
【0167】
［実施例９］
（膵癌モデルマウスの腫瘍組織におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在）
スキルス膵癌モデルマウスは、参考文献２（Saito K et al., “Stromal mesenchymal stem cells facilitate pancreatic cancer progression by regulating specific secretory molecules through mutual cellular interaction.”, Journal of Cancer, Vol. 9, No. 16, p2916-2929, 2018.）に記載の方法に従い、作製した。具体的には、６週齢のＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ Ｉｎｃ、Ｊａｐａｎ）を無病原体条件下で飼育した。ＢｘＰＣ３細胞（１×１０５ｃｅｌｌｓ）とヒト間葉系幹細胞（ｈＭＳＣ）（１×１０５ｃｅｌｌｓ）との混合細胞をマウスの皮下に注射した。細胞注射から6週間飼育することで、ヒト膵癌患者組織を模倣する豊富な癌間質の発達した腫瘍を有するスキルス膵癌モデルマウスを得た。また、ＢｘＰＣ３細胞の代わりに、ＡｓＰＣ１細胞を用いた以外は同様の方法を用いて、ＡｓＰＣ１細胞を用いたスキルス膵癌モデルマウスも作製した。
（膵癌モデルマウスの腫瘍組織におけるＳＬＣ４５Ａ４の発現及び局在）
スキルス膵癌モデルマウスは、参考文献２（Saito K et al., “Stromal mesenchymal stem cells facilitate pancreatic cancer progression by regulating specific secretory molecules through mutual cellular interaction.”, Journal of Cancer, Vol. 9, No. 16, p2916-2929, 2018.）に記載の方法に従い、作製した。具体的には、６週齢のＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ Ｉｎｃ、Ｊａｐａｎ）を無病原体条件下で飼育した。ＢｘＰＣ３細胞（１×１０５ｃｅｌｌｓ）とヒト間葉系幹細胞（ｈＭＳＣ）（１×１０５ｃｅｌｌｓ）との混合細胞をマウスの皮下に注射した。細胞注射から6週間飼育することで、ヒト膵癌患者組織を模倣する豊富な癌間質の発達した腫瘍を有するスキルス膵癌モデルマウスを得た。また、ＢｘＰＣ３細胞の代わりに、ＡｓＰＣ１細胞を用いた以外は同様の方法を用いて、ＡｓＰＣ１細胞を用いたスキルス膵癌モデルマウスも作製した。
【0168】
次いで、得られた各スキルス膵癌モデルマウスから腫瘍組織を採取した。次いで、腫瘍組織の標本をＰＦＡ－ＡＭｅＸ－Ｐａｒａｆｆｉｎ法を用いて作製し、当該標本を薄切りして組織切片を得た。次いで、得られた組織切片を洗浄後、ブロッキングを行なった。次いで、洗浄後、ウサギ抗ヒトＳＬＣ４５Ａ４ポリクローナル抗体（Ｐｒｅｓｔｉｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、×５００倍希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、１次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、Ａｌｅｘａ５５５（赤色蛍光）標識抗ウサギＩｇＧ抗体（×３００倍希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製）を添加して、室温で１時間インキュベートして、２次抗体反応を行った。次いで、洗浄後、ヘマトキシリン溶液を滴下し、対比染色を行った。次いで、洗浄後、１００ｖ／ｖ％エタノールを用いて３分間ずつ２回洗浄し、キシレンを用いて３分間ずつ２回洗浄して脱水処理を行なった。次いで、封入剤を用いて封入を行った。コントロールとして、抗サイトケラチン（ＣＡＭ５．２）抗体及び抗ビメンチン抗体を用いて免疫組織染色を行った切片も準備した。結果を図１７に示す。
【0169】
図１７に示すように、ＢｘＰＣ３細胞を用いたスキルス膵癌モデルマウス及びＡｓＰＣ１細胞を用いたスキルス膵癌モデルマウスのいずれの腫瘍組織においても、ＳＬＣ４５Ａ４の強い発現が細胞膜パターンで認められた。
【0170】
以上のことから、ＳＬＣ４５Ａ４タンパク質は、膵癌細胞及び前立腺癌細胞を直接捕捉及び検知可能なバイオマーカーとして有用であることが明らかとなった。
【0171】
［実施例１０］
（ＳＬＣ２５Ａ５３の各種細胞における発現量の比較）
ＳＬＣ２５Ａ５３は細胞及び組織染色に使用可能な抗体が存在しないことから、各種細胞におけるＳＬＣ２５Ａ５３遺伝子の発現量をＲＴ－ＰＣＲ法により検討した。
（ＳＬＣ２５Ａ５３の各種細胞における発現量の比較）
ＳＬＣ２５Ａ５３は細胞及び組織染色に使用可能な抗体が存在しないことから、各種細胞におけるＳＬＣ２５Ａ５３遺伝子の発現量をＲＴ－ＰＣＲ法により検討した。
【0172】
まず、以下に示す各細胞においてｍＲＮＡを抽出後、逆転写酵素反応によりｃＤＮＡを合成した。
ＨｅＬａ細胞：子宮頸癌細胞株
ＢｘＰＣ３細胞、ＡｓＰＣ１細胞、ＰＫ８細胞、Ｐａｎｃ－１細胞：浸潤性膵管癌（膵癌）細胞株
ＬＮＣａｐ細胞：前立腺癌細胞株
ＨｅＬａ細胞：子宮頸癌細胞株
ＢｘＰＣ３細胞、ＡｓＰＣ１細胞、ＰＫ８細胞、Ｐａｎｃ－１細胞：浸潤性膵管癌（膵癌）細胞株
ＬＮＣａｐ細胞：前立腺癌細胞株
【0173】
得られたｃＤＮＡを鋳型として、以下に示すヒトＳＬＣ２５Ａ５３遺伝子に特異的なプライマーセットを用いたＰＣＲ法により、ヒトＳＬＣ２５Ａ５３遺伝子の発現を検出した。
Forward primer：5’-CTACCCTCCTCTTCTCTCCAAGA-3’（配列番号６０）
Reverse primer：5’-TAGGCAGGTGATTGTTCCATTGA-3’（配列番号６１）
Forward primer：5’-CTACCCTCCTCTTCTCTCCAAGA-3’（配列番号６０）
Reverse primer：5’-TAGGCAGGTGATTGTTCCATTGA-3’（配列番号６１）
【0174】
ＳＬＣ２５Ａ５３遺伝子及びβ－アクチン遺伝子の増幅条件をそれぞれ以下に示す。なお、鋳型ｃＤＮＡ量は、β－アクチン遺伝子の増幅量を指標に揃えて標準化した。結果を図１８に示す。
【0175】
（ＳＬＣ２５Ａ５３遺伝子の増幅条件）
［９８℃ ２秒間→６８℃ ５秒間→７２℃ ８秒間］×３０サイクル
［９８℃ ２秒間→６８℃ ５秒間→７２℃ ８秒間］×３０サイクル
【0176】
（β－アクチン遺伝子の増幅条件）
［９８℃ ２秒間→６８℃ ５秒間→７２℃ ８秒間］×２０サイクル
［９８℃ ２秒間→６８℃ ５秒間→７２℃ ８秒間］×２０サイクル
【0177】
図１８に示すように、膵癌細胞株及び前立腺癌細胞株において、ヒトＳＬＣ２５Ａ５３遺伝子の発現が確認された。
【産業上の利用可能性】
【0178】
本実施形態の方法及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬は、膵癌又は前立腺癌の診断に有効である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【配列表】