特開 2024-37966 単鎖キメラポリペプチドおよびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024037966

(43)【公開日】2024-03-19

(54)【発明の名称】単鎖キメラポリペプチドおよびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240312BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240312BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240312BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240312BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20240312BHJP

   C07K 14/55 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 15/26 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 38/36 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 19/10 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 27/12 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 31/16 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240312BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C12N15/12 ZNA

C07K19/00

C07K14/47

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/02 C

C07K14/55

C12N15/26

A61K38/36

A61K39/395 L

A61K39/395 N

A61P1/04

A61P1/16

A61P1/18

A61P3/10

A61P9/00

A61P9/10

A61P9/10 101

A61P9/12

A61P11/00

A61P13/02

A61P13/08

A61P13/12

A61P15/00

A61P17/00

A61P17/02

A61P17/14

A61P19/02

A61P19/08

A61P19/10

A61P21/00

A61P25/00

A61P25/14

A61P25/16

A61P25/28

A61P27/02

A61P27/12

A61P31/00

A61P31/12

A61P31/14

A61P31/16

A61P31/18

A61P31/20

A61P31/22

A61P35/00

A61P35/02

A61P37/06

A61P43/00 105

【審査請求】有

【請求項の数】31

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023214081

(22)【出願日】2023-12-19

(62)【分割の表示】P 2021535497の分割

【原出願日】2019-08-29

(31)【優先権主張番号】62/725,038

(32)【優先日】2018-08-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/746,832

(32)【優先日】2018-10-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/749,506

(32)【優先日】2018-10-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/816,683

(32)【優先日】2019-03-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/817,241

(32)【優先日】2019-03-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/817,244

(32)【優先日】2019-03-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/881,039

(32)【優先日】2019-07-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】521087117

【氏名又は名称】エイチシーダブリュー バイオロジックス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】ウォン ヒン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】哺乳動物における血液凝固を刺激しない、単鎖キメラポリペプチドを用いた、免疫細胞を刺激する方法および治療を提供する。
【解決手段】（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、および（ｉｉｉ）第２の標的結合ドメインを含み、哺乳動物において血液凝固を刺激しない、単鎖キメラポリペプチドであって、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインが、ＩＬ－２受容体に結合する、単鎖キメラポリペプチドを提供する。
【選択図】図９

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、および
（ｉｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、単鎖キメラポリペプチド。

【請求項2】

前記第１の標的結合ドメインと前記可溶性組織因子ドメインが、互いに直接隣接している、請求項１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項3】

前記第１の標的結合ドメインと前記可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、請求項１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項4】

前記可溶性組織因子ドメインと前記第２の標的結合ドメインが、互いに直接隣接している、請求項１～３のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項5】

前記可溶性組織因子ドメインと前記第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項6】

前記第１の標的結合ドメインおよび前記第２の標的結合ドメインが、同じ抗原に特異的に結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項7】

前記第１の標的結合ドメインおよび前記第２の標的結合ドメインが、同じエピトープに特異的に結合する、請求項６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項8】

前記第１の標的結合ドメインおよび前記第２の標的結合ドメインが、同じアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項9】

前記第１の標的結合ドメインおよび前記第２の標的結合ドメインが、異なる抗原に特異的に結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項10】

前記第１の標的結合ドメインおよび前記第２の標的結合ドメインの一方または両方が、抗原結合ドメインである、請求項１～９のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項11】

前記第１の標的結合ドメインおよび前記第２の標的結合ドメインの一方または両方が、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＰＤＬ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＣＤ２６ａ、ＣＤ３６、ＵＬＢＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ２００、ＩＧＦ－１Ｒ、ＭＵＣ４ＡＣ、ＭＵＣ５ＡＣ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ７Ｈ３、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＵＬ１６結合タンパク質、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ４、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１５５、ＰＤＧＦＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ１リガンド、ＮＫｐ４６リガンド、ＮＫｐ４４リガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＫｐ３０リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－１受容体、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－３受容体、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－８受容体、ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１２受容体、ＩＬ－１５受容体、ＩＬ－１７受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＰＤＧＦ－ＤＤ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ１６結合タンパク質受容体、ＣＤ１５５受容体、ＣＤ１２２受容体、およびＣＤ２８受容体からなる群から選択される標的に結合する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項12】

前記第１の標的結合ドメインおよび前記第２の標的結合ドメインの一方または両方が、可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項13】

前記可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質が、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－Ｄ、ＳＣＦ、ＦＬＴ３Ｌ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＰ１６結合タンパク質からなる群から選択される、請求項１２に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項14】

前記第１の標的結合ドメインおよび前記第２の標的結合ドメインの一方または両方が、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項15】

前記可溶性インターロイキン受容体、前記可溶性サイトカイン受容体、または前記可溶性細胞表面受容体が、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩ、可溶性ＮＫＧ２Ｄ、可溶性ＮＫｐ３０、可溶性ＮＫｐ４４、可溶性ＮＫｐ４６、可溶性ＤＮＡＭ－１、ｓｃＭＨＣＩ、ｓｃＭＨＣＩＩ、ｓｃＴＣＲ、可溶性ＣＤ１５５、または可溶性ＣＤ２８である、請求項１４に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項16】

前記可溶性組織因子ドメインが、可溶性ヒト組織因子ドメインである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項17】

前記可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項18】

そのＮ末端および／またはＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインをさらに含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項19】

請求項１～１８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、組成物。

【請求項20】

医薬組成物である、請求項１９に記載の組成物。

【請求項21】

少なくとも１用量の請求項１９または２０に記載の組成物を含む、キット。

【請求項22】

免疫細胞を刺激する方法であって、
免疫細胞を、有効量の、請求項１～１８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは請求項１９もしくは２０に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【請求項23】

免疫細胞の増殖を誘導するかまたは増加させる方法であって、
免疫細胞を、有効量の、請求項１～１８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは請求項１９もしくは２０に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【請求項24】

免疫細胞のメモリーまたはメモリー様免疫細胞への分化を誘導する方法であって、
免疫細胞を、有効量の、請求項１～１８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは請求項１９もしくは２０に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【請求項25】

前記免疫細胞をインビトロで接触させる、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記免疫細胞をインビボで接触させる、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記免疫細胞が、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記免疫細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている、請求項２２～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、請求項２２～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

がん細胞、感染細胞、または老化細胞の死滅を必要とする対象におけるがん細胞、感染細胞、または老化細胞を死滅させる方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項１～１８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは請求項１９もしくは２０に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項31】

治療を必要とする対象を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項１～１８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは請求項１９もしくは２０に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項32】

前記対象が、がん、加齢関連疾患もしくは状態、または感染性疾患を有すると特定または診断されている、請求項３０または３１に記載の方法。

【請求項33】

前記がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃（ｇａｓｔｉｃ）食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記加齢関連疾患もしくは状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎（ｐａｎｃｅａｔｉｔｉｓ）における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。

【請求項35】

前記感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、請求項３２に記載の方法。

【請求項36】

請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする、核酸。

【請求項37】

請求項３６に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項38】

請求項３６に記載の核酸または請求項３７に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項39】

単鎖キメラポリペプチドを産生する方法であって、
前記単鎖キメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で、請求項３８に記載の細胞を培養培地中で培養することと、
前記単鎖キメラポリペプチドを前記細胞および／または前記培養培地から回収することと
を含む、方法。

【請求項40】

請求項３９に記載の方法によって産生された、単鎖キメラポリペプチド。

【請求項41】

前記ヒト可溶性組織因子ドメインが、血液凝固を開始させない、請求項１６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項42】

前記可溶性組織因子ドメインが、野生型可溶性ヒト組織因子由来の配列を含むか、またはそれからなる、請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、各々参照により全体が本明細書に組み込まれる、２０１８年８月３０日に出願された米国特許出願第６２／７２５，０３８号、２０１９年３月１２日に出願された米国特許出願第６２／８１７，２４４号、２０１８年１０月１７日に出願された米国特許出願第６２／７４６，８３２号、２０１８年１０月２３日に出願された米国特許出願第６２／７４９，５０６号、２０１９年３月１２日に出願された米国特許出願第６２／８１７，２４１号、２０１９年３月１１日に出願された米国特許出願第６２／８１６，６８３号、および２０１９年７月３１日に出願された米国特許出願第６２／８８１，０３９号に対する優先権を主張する。

【0002】

技術分野
本開示は、バイオテクノロジーの分野、より具体的には、抗原結合分子に関する。

【背景技術】

【0003】

約４６ｋＤａの分子量を有する２６３アミノ酸内在性膜糖タンパク質であり、かつ外因性血液凝固経路の誘因タンパク質である組織因子（ＴＦ）は、インビボでの凝固の主要な開始因子である。通常、循環血液と接触していない組織因子は、循環凝固セリンプロテアーゼ因子への曝露時に凝固カスケードを開始させる。血管損傷は、組織因子を発現する内皮下細胞を曝露し、既存の血漿因子ＶＩＩａ（ＦＶＩＩａ）とのカルシウム依存性高親和性複合体の形成をもたらす。セリンプロテアーゼＦＶＩＩａの組織因子への結合は、ＦＸからＦＸａおよびＦＩＸからＦＩＸａへの迅速な切断を促進する。次いで、結果として生じたＦＸａおよび活性膜表面のタンパク質分解活性は、少量のプロトロンビンを非効率的にトロンビンに変換する。ＦＸａによって生成されたトロンビンは、血小板活性化を開始させ、微量のプロ補因子である第Ｖ因子（ＦＶ）および第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）を活性化して、活性補因子である第Ｖａ因子（ＦＶａ）および第ＶＩＩＩａ因子（ＦＶＩＩＩａ）になる。ＦＩＸａは、血小板表面上でＦＶＩＩＩａと複合体を形成して、内因性テナーゼ複合体を形成し、これにより、ＦＸａが迅速に生成される。ＦＸａは、ＦＶａと複合体を形成して、活性化された血小板表面上にプロトロンビナーゼ複合体を形成し、これにより、プロトロンビンがトロンビンに迅速に切断される。

【0004】

組織因子－ＦＶＩＩａ複合体に加えて、最近の研究では、組織因子－ＦＶＩＩａ－ＦＸａ複合体がＦＶＩＩＩを活性化することができ、これにより、開始段階で追加のレベルのＦＶＩＩＩａが提供されることが示された。外因性経路が限られた量のトロンビンの活性化により凝固を開始させる際に最も重要である一方で、内因性経路は、初期シグナルの劇的な増幅により凝固を維持する。

【0005】

細胞表面上に発現する組織因子の多くは「暗号化」されており、凝固に完全に関与するには「暗号解読」されなければならない。細胞表面組織因子の「暗号解読」のメカニズムは、現時点では依然として不明であるが、アニオン性リン脂質の曝露がこのプロセスで主要な役割を果たしている。健常な細胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）等のアニオン性リン脂質を原形質膜の内側の小葉に能動的に隔離する。細胞損傷、活性化、または細胞質Ｃａ^２＋レベルの増加後、この二層非対称性が失われ、外側の小葉でＰＳ曝露が増加し、これにより、細胞表面組織因子－ＦＶＩＩａ複合体の比活性が増加する。ＰＳ曝露は、組織因子－ＦＶＩＩａ複合体によるＦＩＸおよびＦＸの活性化の見かけのＫｍを低下させることが知られているが、追加のメカニズムには、組織因子または組織因子－ＦＶＩＩａの立体配座再配置、およびその後の基質結合部位の曝露が含まれ得る。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、可溶性組織因子が抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチドの足場として使用され得るという発見に基づく。この発見に基づき、（ｉ）第１の標的結合ドメイン、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、および（ｉｉｉ）第２の標的結合ドメインを含む単鎖キメラポリペプチドが本明細書に提供される。また、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む組成物、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸、および本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸のうちのいずれかを含む細胞も本明細書に提供される。また、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかの使用を含む、免疫細胞を刺激する方法および治療を必要とする対象を治療する方法も本明細書に提供される。また、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを産生する方法も本明細書に提供される。単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかの追加の使用が本明細書に記載されている。

【0007】

したがって、
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、および
（ｉｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含む、単鎖キメラポリペプチドが本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインは、互いに直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインは、互いに直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは、互いに直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインは、互いに直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第２の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、同じ抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、異なる抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方は、抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、各々、抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖまたは単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方は、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＰＤＬ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＣＤ２６ａ、ＣＤ３６、ＵＬＢＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ２００、ＩＧＦ－１Ｒ、ＭＵＣ４ＡＣ、ＭＵＣ５ＡＣ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ７Ｈ３、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＵＬ１６結合タンパク質、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ４、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１５５、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ－１リガンド、ＮＫｐ４６リガンド、ＮＫｐ４４リガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＫｐ３０リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－１受容体、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－３受容体、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－８受容体、ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１２受容体、ＩＬ－１５受容体、ＩＬ－１７受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＰＤＧＦ－ＤＤ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ１６結合タンパク質受容体、ＣＤ１５５受容体、ＣＤ１２２受容体、およびＣＤ２８受容体からなる群から選択される標的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方は、可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質は、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＳＣＦ、ＦＬＴ３Ｌ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＰ１６結合タンパク質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方は、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体である。いくつかの実施形態では、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体は、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩ、可溶性ＮＫＧ２Ｄ、可溶性ＮＫｐ３０、可溶性ＮＫｐ４４、可溶性ＮＫｐ４６、可溶性ＤＮＡＭ－１、ｓｃＭＨＣＩ、ｓｃＭＨＣＩＩ、ｓｃＴＣＲ、可溶性ＣＤ１５５、または可溶性ＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性ヒト組織因子ドメインである。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９と少なくとも８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９と少なくとも９０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９と少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインの単鎖キメラポリペプチドは、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２０位に対応するアミノ酸の位置にリジン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２２位に対応するアミノ酸の位置にイソロイシン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸４５位に対応するアミノ酸の位置にトリプトファン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸５８位に対応するアミノ酸の位置にアスパラギン酸、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸９４位に対応するアミノ酸の位置にチロシン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１３５位に対応するアミノ酸の位置にアルギニン、および成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１４０位に対応するアミノ酸の位置にフェニルアラニンのうちの１つ以上を含まない。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２０位に対応するアミノ酸の位置にリジン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２２位に対応するアミノ酸の位置にイソロイシン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸４５位に対応するアミノ酸の位置にトリプトファン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸５８位に対応するアミノ酸の位置にアスパラギン酸、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸９４位に対応するアミノ酸の位置にチロシン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１３５位に対応するアミノ酸の位置にアルギニン、および成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１４０位に対応するアミノ酸の位置にフェニルアラニンのうちのいずれも含まない。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、第ＶＩＩａ因子に結合することができない。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、不活性第Ｘ因子を第Ｘａ因子に変換しない。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、哺乳動物における血液凝固を刺激しない。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、そのＮ末端および／またはＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、そのＮ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の標的結合ドメインは、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、少なくとも１つの追加の標的結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、そのＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの１つは、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、少なくとも１つの追加の標的結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、そのＮ末端およびＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つは、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、Ｎ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つは、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、Ｃ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上は、同じ抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上は、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上は、同じアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインは、各々、同じ抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインは、各々、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインは、各々、同じアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインは、異なる抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の標的結合ドメインのうちの１つ以上は、抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインは、各々、抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖまたは単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の標的結合ドメインのうちの１つ以上は、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＰＤＬ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＣＤ２６ａ、ＣＤ３６、ＵＬＢＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ２００、ＩＧＦ－１Ｒ、ＭＵＣ４ＡＣ、ＭＵＣ５ＡＣ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、Ｈ
ＥＲ３、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ７Ｈ３、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＵＬ１６結合タンパク質、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ４、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１５５、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ－１リガンド、ＮＫｐ４６リガンド、ＮＫｐ４４リガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＫｐ３０リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－１受容体、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－３受容体、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－８受容体、ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１２受容体、ＩＬ－１５受容体、ＩＬ－１７受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＰＤＧＦ－Ｄ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ１６結合タンパク質受容体、ＣＤ１５５受容体、ＣＤ１２２受容体、およびＣＤ２８受容体からなる群から選択される標的に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの１つ以上は、可溶性インターロイキンまたはサイトカインタンパク質である。いくつかの実施形態では、可溶性インターロイキンまたはサイトカインタンパク質は、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＳＣＦ、ＦＬＴ３Ｌ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＰ１６結合タンパク質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの１つ以上は、可溶性インターロイキンまたはサイトカイン受容体である。いくつかの実施形態では、可溶性受容体は、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩ、可溶性ＮＫＧ２Ｄ、可溶性ＮＫｐ３０、可溶性ＮＫｐ４４、可溶性ＮＫｐ４６、可溶性ＤＮＡＭ－１、ｓｃＭＨＣＩ、ｓｃＭＨＣＩＩ、ｓｃＴＣＲ、可溶性ＣＤ１５５、可溶性ＣＤ１２２、可溶性ＣＤ３、または可溶性ＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、そのＮ末端にシグナル配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、単鎖キメラポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置付けられたペプチドタグをさらに含む。

【0008】

また、上述の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む組成物も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、少なくとも１用量のキット内の組成物を含む。

【0009】

また、免疫細胞を刺激する方法も本明細書に提供され、この方法は、免疫細胞を、有効量の上述の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞をインビトロで接触させることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞を対象から得ることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞をインビボで接触させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、メモリーＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている。いくつかの実施形態では、この方法は、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、加齢関連疾患または状態は、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、がんを有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、感染性疾患を有すると診断または特定することを含む。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である。

【0010】

また、免疫細胞の増殖を誘導するかまたは増加させる方法も本明細書に提供され、この方法は、免疫細胞を、有効量の本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞をインビトロで接触させることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞を対象から得ることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞をインビボで接触させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、メモリーＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている。いくつかの実施形態では、この方法は、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、加齢関連疾患または状態は、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、がんを有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、感染性疾患を有すると診断または特定することを含む。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である。

【0011】

また、免疫細胞のメモリーまたはメモリー様免疫細胞への分化を誘導する方法も本明細書に提供され、この方法は、免疫細胞を、有効量の上述の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞をインビトロで接触させることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞を対象から得ることを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞をインビボで接触させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように免疫細胞を遺伝子改変することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、加齢関連疾患または状態は、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、がんを有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、感染性疾患を有すると診断または特定することを含む。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である。

【0012】

また、がん細胞、感染細胞、または老化細胞の死滅を必要とする対象におけるがん細胞、感染細胞、または老化細胞を死滅させる方法も本明細書に提供され、この方法は、対象に、治療有効量の上述の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、がんを有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、対象を、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断する方法。いくつかの実施形態では、加齢関連疾患または状態は、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される。

【0013】

また、治療を必要とする対象を治療する方法も本明細書に提供され、この方法は、対象に、治療有効量の上述の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、がんを有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断することを含む。いくつかの実施形態では、加齢関連疾患または状態は、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この方法は、対象を、感染性疾患を有すると診断または特定することを含む。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である。

【0014】

また、上述の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸も本明細書に提供される。いくつかの実施形態は、上述の核酸を含むベクターを含む。いくつかの実施形態では、ベクターは発現ベクターである。いくつかの実施形態は、上述の核酸またはベクターを含む細胞を含む。

【0015】

また、単鎖キメラポリペプチドを産生する方法も本明細書に提供され、この方法は、単鎖キメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で、細胞を培養培地中で培養することと、単鎖キメラポリペプチドを細胞および／または培養培地から回収することと、を含む。いくつかの実施形態は、上述の方法によって産生された単鎖キメラポリペプチドを含む。本明細書に提供される単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ヒト可溶性組織因子ドメインは、血液凝固を開始させない。本明細書に提供される単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性野生型ヒト組織因子を含むか、またはそれからなる。

【0016】

いくつかの実施形態では、変異体可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９６と少なくとも９０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９６と少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９６と１００％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９７と少なくとも８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９７と少なくとも９０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９７と少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ヒト組織因子ドメインは、配列番号９７と１００％同一である配列を含む。

【0017】

本明細書で使用される場合、「キメラ」という用語は、元来２つの異なる源（例えば、同じ種または異なる種由来の、例えば、２つの異なる天然に存在するタンパク質）に由来するアミノ酸配列（例えば、ドメイン）を含むポリペプチドを指す。例えば、キメラポリペプチドは、少なくとも２つの異なる天然に存在するヒトタンパク質由来のドメインを含み得る。いくつかの例では、キメラポリペプチドは、合成配列であるドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）および天然に存在するタンパク質（例えば、天然に存在するヒトタンパク質）に由来するドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、合成配列である少なくとも２つの異なるドメイン（例えば、２つの異なるｓｃＦｖ）を含み得る。

【0018】

「抗原結合ドメイン」とは、１つ以上の異なる抗原（複数可）に特異的に結合することができる１つ以上のタンパク質ドメイン（複数可）（例えば、単一のポリペプチド由来のアミノ酸から形成されるか、または２つ以上のポリペプチド（例えば、同じまたは異なるポリペプチド）由来のアミノ酸から形成される）である。いくつかの例では、抗原結合ドメインは、天然に存在する抗体と同様の特異性および親和性で抗原またはエピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体またはその断片であり得る。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、代替足場を含み得る。抗原結合ドメインの非限定的な例が本明細書に記載されている。抗原結合ドメインの追加の例は、当該技術分野で既知である。

【0019】

「可溶性組織因子ドメイン」とは、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを欠く野生型哺乳動物組織因子タンパク質（例えば、野生型ヒト組織因子タンパク質）のセグメントと少なくとも７０％の同一性（例えば、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９９％の同一性、または１００％の同一性）を有するポリペプチドを指す。可溶性組織因子ドメインの非限定的な例が本明細書に記載されている。

【0020】

「可溶性インターロイキンタンパク質」という用語は、成熟分泌インターロイキンタンパク質またはその生物学的に活性な断片を指すために本明細書で使用される。いくつかの例では、可溶性インターロイキンタンパク質は、野生型成熟分泌哺乳動物インターロイキンタンパク質（例えば、野生型ヒトインターロイキンタンパク質）と少なくとも７０％同一、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一であり、かつその生物学的活性を保持する配列を含み得る。可溶性インターロイキンタンパク質の非限定的な例が本明細書に記載されている。

【0021】

「可溶性サイトカインタンパク質」という用語は、成熟分泌サイトカインタンパク質またはその生物学的に活性な断片を指すために本明細書で使用される。いくつかの例では、可溶性サイトカインタンパク質は、野生型成熟分泌哺乳動物インターロイキンタンパク質（例えば、野生型ヒトインターロイキンタンパク質）と少なくとも７０％同一、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一であり、かつその生物学的活性を保持する配列を含み得る。可溶性サイトカインタンパク質の非限定的な例が本明細書に記載されている。

【0022】

「可溶性インターロイキン受容体」という用語は、本明細書で最も広い意味で使用され、（例えば、生理学的条件下で、例えば、室温のリン酸緩衝生理食塩水中で）その天然リガンドのうちの１つ以上に結合することができる膜貫通ドメイン（および任意に、細胞内ドメイン）を欠くポリペプチドを指す。例えば、可溶性インターロイキン受容体は、野生型インターロイキン受容体の細胞外ドメインと少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）であり、かつその天然リガンドのうちの１つ以上に特異的に結合する能力を保持するが、その膜貫通ドメインを欠く（および任意に、その細胞内ドメインをさらに欠く）配列を含み得る。可溶性インターロイキン受容体の非限定的な例が本明細書に記載されている。

【0023】

「可溶性サイトカイン受容体」という用語は、本明細書で最も広い意味で使用され、（例えば、生理学的条件下で、例えば、室温のリン酸緩衝生理食塩水中で）その天然リガンドのうちの１つ以上に結合することができる膜貫通ドメイン（および任意に、細胞内ドメイン）を欠くポリペプチドを指す。例えば、可溶性サイトカイン受容体は、野生型サイトカイン受容体の細胞外ドメインと少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）であり、かつその天然リガンドのうちの１つ以上に特異的に結合する能力を保持するが、その膜貫通ドメインを欠く（および任意に、その細胞内ドメインをさらに欠く）配列を含み得る。可溶性サイトカイン受容体の非限定的な例が本明細書に記載されている。

【0024】

「抗体」という用語は、本明細書でその最も広い意味で使用され、抗原またはエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含むある特定のタイプの免疫グロブリン分子を含む。抗体には、具体的には、例えば、インタクトな抗体（例えば、インタクトな免疫グロブリン）、抗体断片、および多重特異性抗体が含まれる。抗原結合ドメインの一例は、ＶＨ－ＶＬ二量体によって形成された抗原結合ドメインである。抗体の追加の例が本明細書に記載されている。抗体の追加の例は、当該技術分野で既知である。

【0025】

「親和性」は、抗原結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原またはエピトープ）との間の非共有相互作用の合計の強さを指す。特に明記しない限り、本明細書で使用される場合、「親和性」は、固有の結合親和性を指し、これは、抗原結合ドメインのメンバーと抗原またはエピトープとの間の１：１の相互作用を反映する。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）によって表され得る。解離平衡定数に寄与する動力学的要素は、以下でより詳細に記載される。親和性は、本明細書に記載の方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））または生体層干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））を使用して決定され得る。抗原結合ドメインおよびその対応する抗原またはエピトープに対する親和性を決定するための追加の方法は、当該技術分野で既知である。

【0026】

本明細書で使用される場合、「単鎖ポリペプチド」は、単一のタンパク質鎖を指す。

【0027】

「親和性ドメイン対」という用語は、１×１０^－７Ｍ未満（例えば、１×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、または１×１０^－１１Ｍ未満）のＫ_Ｄで互いに特異的に結合する２つの異なるタンパク質ドメイン（複数可）である。いくつかの例では、一対の親和性ドメインは、一対の天然に存在するタンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、一対の親和性ドメインは、一対の合成タンパク質であり得る。親和性ドメイン対の非限定的な例が本明細書に記載されている。

【0028】

「エピトープ」という用語は、抗原結合ドメインに特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは、例えば、表面接触可能アミノ酸残基および／または糖側鎖からなり得、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有し得る。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合が失われる可能性があるが、後者への結合が失われる可能性がないという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。抗原結合ドメインが結合するエピトープを特定するための方法は、当該技術分野で既知である。

【0029】

「免疫エフェクター細胞」は、哺乳動物の病原性細胞（例えば、がん細胞）の細胞分裂停止または細胞死を直接的または間接的に認識および／または引き起こすことができる哺乳動物の免疫系の細胞を指す。免疫エフェクター細胞の非限定的な例には、マクロファージ、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球およびＴヘルパー細胞）、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、および好酸球が挙げられる。免疫エフェクター細胞の追加の例は、当該技術分野で既知である。

【0030】

「治療」という用語は、障害の少なくとも１つの症状を改善することを意味する。いくつかの例では、治療される障害はがんであり、がんの少なくとも１つの症状を改善することは、異常な増殖、遺伝子発現、シグナル伝達、翻訳、および／または因子の分泌を減少させることを含む。一般に、治療方法は、治療を必要とする対象、またはそのような治療を必要とすると決定された対象に、障害の少なくとも１つの症状を軽減する治療有効量の組成物を投与することを含む。

【0031】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。方法および材料は、本発明で使用するために本明細書に記載されており、当該技術分野で既知の他の好適な方法および材料も使用され得る。材料、方法、および実施例は、単なる例証であり、限定することを意図するものではない。本明細書に記載の全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、および他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。矛盾が生じた場合、定義を含む本明細書が優先されるものとする。

【0032】

本発明の他の特徴および利点は、以下の発明を実施するための形態および図から、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1】例示的なαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドの概略図である。

【図2】抗組織因子抗体アフィニティーカラムからの例示的なαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドの溶出を示すクロマトグラフである。

【図3】例示的なαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドを装填したＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬゲル濾過カラムの溶出を示すクロマトグラフである。

【図4】抗組織因子抗体アフィニティーカラムを使用して精製した例示的なαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドのドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル（４～１２％ＮｕＰａｇｅビス－トリスゲル）である。

【図5】実施例１に記載の方法を使用して実施した例示的なαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドのＥＬＩＳＡ定量を示すグラフである。精製した組織因子を対照として使用した。

【図6】例示的なαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドが、２人のドナー由来の血液から単離されたＣＤ４^＋ Ｔ－細胞においてＣＤ２５発現を刺激する能力を示すグラフである。実験を、実施例２に記載のとおり実施した。

【図7】例示的なαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドが、２人のドナー由来の血液から単離されたＣＤ８^＋ Ｔ－細胞においてＣＤ２５発現を刺激する能力を示すグラフである。実験を、実施例２に記載のとおり実施した。

【図8】例示的なαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドが、２人のドナー由来の血液から単離されたＣＤ４^＋ Ｔ－細胞においてＣＤ６９発現を刺激する能力を示すグラフである。実験を、実施例２に記載のとおり実施した。

【図9】例示的なＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２単鎖キメラポリペプチドの概略図である。

【図10】３２Ｄβ細胞増殖アッセイを使用した組換えＩＬ－２と比較したＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２のＩＬ－２活性を示す。

【図11】ＣＴＬＬ－２細胞増殖アッセイを使用した組換えＩＬ－２と比較したＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２のＩＬ－２活性を示す。

【図12】標準固形飼料または高脂肪食餌を与え、ＰＢＳ対照（未処理）またはＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２で処理したＡｐｏＥ^－／－マウスにおける空腹時血糖値を示す。

【図13】標準固形飼料または高脂肪食餌を与え、ＰＢＳ対照（未処理）またはＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２で処理したＡｐｏＥ^－／－マウス由来の血液リンパ球におけるＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋Ｔ制御性細胞の比率を示す。

【図14】抗ＴＦ抗体樹脂への結合および該樹脂からの溶出後のＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２タンパク質含有細胞培養上清のクロマトグラフィープロファイルを示す線グラフである。

【図15】ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の分析的ＳＥＣプロファイルを示す。

【図16A】図１６Ａおよび１６Ｂは、脱グリコシル化前後のＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。図１６Ａは、脱グリコシル化前のＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。

【図16B】図１６Ｂは、脱グリコシル化後のＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。

【図17A】図１７Ａおよび１７Ｂは、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を使用したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける免疫刺激の結果を示す。図１７Ａは、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２での処理後の脾臓重量を示す。

【図17B】図１７Ｂは、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２処理後の免疫細胞タイプのパーセンテージを示す。

【図18】ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２で処理したマウスにおけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ２５発現のアップレギュレーションを示す。

【図19】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の薬物動態を示す。

【図20A】図２０Ａおよび２０Ｂは、ＡｐｏＥ^－／－マウスにおける高脂肪誘導性アテローム硬化性プラークの形成の減弱におけるＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の効果を示す。図２０Ａは、標準固形飼料または高脂肪食餌を与え、ＰＢＳ対照またはＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２のいずれかで処理したＡｐｏＥ^－／－マウス由来のアテローム硬化性プラークの代表的な図を示す。

【図20B】図２０Ｂは、各群のアテローム硬化性プラークの定量分析の結果を示す。

【図21】対照処理マウスと比較したＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２処理マウスにおける空腹時血糖値を示す。

【図22】ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２で処理したマウスおよび対照処理マウス由来の血液リンパ球におけるＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋Ｔｒｅｇのパーセンテージを示す。

【図23】例示的なＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５単鎖キメラポリペプチドの概略図である。

【図24】３２Ｄβ細胞増殖アッセイにおける組換えＩＬ－１５と比較したＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５のＩＬ－１５活性を示す。

【図25】抗ＴＦ抗体樹脂への結合および該樹脂からの溶出後のＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５タンパク質含有細胞培養上清のクロマトグラフィープロファイルを示す線グラフである。

【図26A】図２６Ａおよび２６Ｂは、脱グリコシル化前後のＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。図２６Ａは、脱グリコシル化前のＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。

【図26B】図２６Ｂは、脱グリコシル化後のＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。

【図27】図２７Ａ～２７Ｃは、２ｔ２での処理後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける免疫刺激を示す一組のグラフである。

【図28】図２８Ａ～２８Ｃは、西洋食餌を与え、かつ２ｔ２で処理したＡｐｏＥ^－／－マウスにおけるＴｒｅｇ細胞、ＮＫ細胞、およびＣＤ８^＋Ｔ細胞のインビボ刺激を示す一組のグラフである。

【図29】図２９Ａおよび２９Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける２ｔ２による脾細胞増殖の誘導を示す一組のグラフである。

【図30】図３０Ａおよび３０Ｂは、西洋食餌を与え、かつ２ｔ２で処理したＡｐｏＥ^－／－マウスにおけるＮＫ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖のインビボ誘導を示す一組のグラフである。

【図31】図３１Ａ～３１Ｃは、２ｔ２によるＡｐｏＥ^－／－マウスにおける西洋食餌誘導性高血糖症の改善を示す一組のグラフである。

【図32】２ｔ２での処理時のＣＤ４４メモリーＴ細胞のアップレギュレーションを示す。

【図33】単鎖または多鎖キメラポリペプチドでの処理後の第Ｘ因子（ＦＸ）活性化のグラフを示す。

【図34】図３４Ａ～３４Ｃは、２ｔ２もしくはＩＬ２処理に応答したＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＴ_ｒｅｇ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^－Ｔ_ｃｏｎ細胞、またはＣＤ８^＋Ｔ_ｃｏｎ細胞におけるヒト血液リンパ球ｐＳｔａｔ５ａ応答を示す。図３４Ａは、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＴ_ｒｅｇ細胞におけるｐＳＴＡＴ５応答を示す。図３４Ｂは、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^－Ｔ_ｃｏｎ細胞におけるｐＳＴＡＴ５応答を示す。図３４Ｃは、ＣＤ８^＋Ｔ_ｃｏｎ細胞におけるｐＳＴＡＴ５応答を示す。

【発明を実施するための形態】

【0034】

詳細な説明
（ｉ）第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の標的結合ドメインのうちのいずれか）、（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）、および（ｉｉｉ）第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の標的結合ドメインのうちのいずれか）を含む単鎖キメラポリペプチドが本明細書に提供される。

【0035】

また、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む組成物、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸、および本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸のうちのいずれかを含む細胞も本明細書に提供される。また、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかの使用を含む、免疫細胞を刺激する方法および治療を必要とする対象を治療する方法も本明細書に提供される。また、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを産生する方法も本明細書に提供される。

【0036】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの例では、単鎖キメラポリペプチドは、約５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約５０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約５０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３００アミノ酸、約５０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約９００アミノ酸、約１００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約８００アミノ酸、約１００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約７００アミノ酸、約１００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約６００アミノ酸、約１００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約５００アミノ酸、約１００アミノ酸～約４８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４００アミノ酸、約１００アミノ酸～約３８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約２００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約９００アミノ酸、約２００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約８００アミノ酸、約２００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約７００アミノ酸、約２００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約６００アミノ酸、約２００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４００アミノ酸、約２００アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３２０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３００アミノ酸、約３００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約９００アミノ酸、約３００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約８００アミノ酸、約３００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約７００アミノ酸、約３００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約６００アミノ酸、約３００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４００アミノ酸、約３００アミノ酸～約３８０アミノ酸、約３００アミノ酸～約３６０アミノ酸、約３００アミノ酸～約３４０アミノ酸、約３００アミノ酸～約３２０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約３２０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約３２０アミノ酸～約３４０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３４０アミノ
酸～約９５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約４００アミノ酸、約３４０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約３４０アミノ酸～約３６０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３６０アミノ酸～約４００アミノ酸、約３６０アミノ酸～約３８０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４２０アミノ酸、約３８０アミノ酸～約４００アミノ酸、約４００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約９００アミノ酸、約４００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約８００アミノ酸、約４００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約７００アミノ酸、約４００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約６００アミノ酸、約４００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約４８０アミノ酸、約４００アミノ酸～約４６０アミノ酸、約４００アミノ酸～約４４０アミノ酸、約４００アミノ酸～約４２０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約４２０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約４２０アミノ酸～約４４０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約５００アミノ酸、約４４０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約４４０アミノ酸～約４６０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４６０アミノ酸～約５００アミノ酸、約４６０アミノ酸～約４８０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約５００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約５００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約９００アミノ酸、約５００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約８００アミノ酸、約５００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約７００アミノ酸、約５００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約６００アミノ酸、約５００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約６００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約６００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約６００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約６００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約６００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約９００アミノ酸、約６００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約８００アミノ酸、約６００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約７００アミノ酸、約６００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約７００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約７００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約７００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約７００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約７００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７００アミノ酸～約９００アミノ酸、約７００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７００アミノ酸～約８００アミノ酸、約７００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約８００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約８００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約８００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約８００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約８００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８００アミノ酸～約９００アミノ酸、約８００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約８５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約９００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約９００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約９００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約９００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約９００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約９００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約９５０アミノ酸～約３０００アミノ酸、約９５０アミノ酸～約２５００アミノ酸、約９５０アミノ酸～約２０００アミノ酸、約９５０アミノ酸～約１５００アミノ酸、約９５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１０００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約１０００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約１０００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約１０００アミノ酸～約１５００アミノ酸、約１５００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約１５００アミノ酸～約２５００アミノ酸、約１５００アミノ酸～約２０００アミノ酸、約２０００アミノ酸～約３０００アミノ酸、約２０００アミノ酸～約２５００アミノ酸、または約２５００アミノ酸～約３０００アミノ酸の全長を有し得る。本明細書に提供される例示的な単鎖キメラポリペプチドの図は、図１に示されている。

【0037】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）および可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）は、互いに直接隣接している。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）と可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）および第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）は、互いに直接隣接している。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）と第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。

【0038】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）および第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）は、互いに直接隣接している。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）と第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）および可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）は、互いに直接隣接している。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）と可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。

【0039】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ（配列番号１）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0040】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、ＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＣＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＣＴＣＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＴＣＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＣＧＣＴＣＡＴＴＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＡＴＧＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＴＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＣＡＡＴＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＣＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＴＴＡＣＴＣＧＴＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＡＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＴＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＴＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＡＴＣＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＴＧＡＴＴＴＡＡＣＣＧＡＣＧＡＡＡＴＣＧＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＣＧＧＧＴＣＴＴＴＴＣＣＴＡＣＣＣＣＧＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＧＧＣＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＣＴＣＴＡＣＧＡＧＡＡＴＴＣＣＣＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＣＣＣＴＴＡＴＴＴＡＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＴＡＡＣＡＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＡＡＡＧＡＣＣＧＣＴＡＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＣＧＴＧＡＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧＴＡＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＡＧＡＴＴＣＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＣＣＴＡＴＧＴＧＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＡＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＡＡＡＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＡＡＡＧＧＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＣＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＣＧＡＧＣＧＧＧＴＣＡＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＧ（配列番号２）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる。

【0041】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ（配列番号３）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0042】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＴＴＣＡＧＣＴＣＣＧＣＣＴＡＴＴＣＣ ＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＣＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＣＴＣＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＴＣＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＣＧＣＴＣＡＴＴＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＡＴＧＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＴＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＣＡＡＴＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＣＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＴＴＡＣＴＣＧＴＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＡＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＴＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＴＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＡＴＣＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＴＧＡＴＴＴＡＡＣＣＧＡＣＧＡＡＡＴＣＧＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＣＧＧＧＴＣＴＴＴＴＣＣＴＡＣＣＣＣＧＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＧＧＣＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＣＴＣＴＡＣＧＡＧＡＡＴＴＣＣＣＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＣＣＣＴＴＡＴＴＴＡＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＴＡＡＣＡＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＡＡＡＧＡＣＣＧＣＴＡＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＣＧＴＧＡＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧＴＡＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＡＧＡＴＴＣＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＣＣＴＡＴＧＴＧＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＡＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＡＡＡＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＡＡＡＧＧＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＣＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＣＧＡＧＣＧＧＧＴＣＡＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＧ（配列番号４）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる。

【0043】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、ＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号５）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0044】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＧＧＴＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＴＡＣＧＴＣＡＴＣＣＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＴＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＴＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＴＡＡＣＧＡＡＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＴＴＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＴＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＴＴＡＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧＡＴＧＧＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＡＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＴＡＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＴＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣＧＴＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＡＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＣＡＡＧＣＧＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＣＴＡＣＡＡＴＣＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＣＣＧＴＴＡＡＴＣＡＡＧＴＴＴＡＴＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＴＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＧＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＴＣＡＡＡＧＡＣＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＣＡＴＡＴＴＴＡＧＣＴＡＧＧＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＡＣＣＣＣＧＣＴＧＧＡＡＡＣＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＣＣＣＣＴＡＴＣＴＧＧＡＡＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＡＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＧＡＡＧＡＴＧＡＧＡＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＴＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＣＴＴＣＧＧＣＡＡＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＴＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＣＧＡＡＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＡＧＴＧＡＡＣＣＧＧＡＡＧＴＣＣＡＣＣＧＡＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＴＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＴＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＡＴＧＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＴＣＣＧＴＧＡＧＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＴＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＴＡＡＴＣＧＴＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＴＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＡＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＡＣＴＣＧＣＴＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＴＣＡＣＣＣＧＧＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＣＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＴＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＴＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＧＧＴＡＣＴＡＣＧＡＣＧＡＴＣＡＴＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＡＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣ（配列番号６）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる。

【0045】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号７）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0046】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、ＡＴＧＡＡＡＴＧＧＧＴＣＡＣＣＴＴＣＡＴＣＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＴＴＴＴＡＴＴＴＡＧＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＧＧＴＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＴＡＣＧＴＣＡＴＣＣＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＴＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＴＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＴＡＡＣＧＡＡＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＴＴＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＴＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＴＴＡＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧＡＴＧＧＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＡＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＴＡＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＴＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣＧＴＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＡＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＣＡＡＧＣＧＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＣＴＡＣＡＡＴＣＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＣＣＧＴＴＡＡＴＣＡＡＧＴＴＴＡＴＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＴＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＧＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＴＣＡＡＡＧＡＣＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＣＡＴＡＴＴＴＡＧＣＴＡＧＧＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＡＣＣＣＣＧＣＴＧＧＡＡＡＣＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＣＣＣＣＴＡＴＣＴＧＧＡＡＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＡＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＧＡＡＧＡＴＧＡＧＡＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＴＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＣＴＴＣＧＧＣＡＡＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＴＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＣＧＡＡＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＡＧＴＧＡＡＣＣＧＧＡＡＧＴＣＣＡＣＣＧＡＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＴＴＴＣＧＴＧＡＧＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＴＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＡＴＧＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＴＣＣＧＴＧＡＧＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＴＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＴＡＡＴＣＧＴＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＴＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＡＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＡＣＴＣＧＣＴＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＴＣＡＣＣＣＧＧＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＣＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＴＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＴＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＧＧＴＡＣＴＡＣＧＡＣＧＡＴＣＡＴＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＡＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣ（配列番号８）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる。

【0047】

これらのキメラポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、および方法の非限定的な態様は、以下に記載されており、限定されることなく任意の組み合わせで使用され得る。これらのキメラポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、および方法の追加の態様は、当該技術分野で既知である。

【0048】

組織因子
ヒト組織因子は、以下の３つのドメイン：（１）２１９アミノ酸Ｎ末端細胞外ドメイン（残基１～２１９）、（２）２２アミノ酸膜貫通ドメイン（残基２２０～２４２）、および（３）２１アミノ酸細胞質Ｃ末端尾部（残基２４２～２６３）（（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子番号：Ｐ１３７２６）を含有する２６３アミノ酸膜貫通タンパク質である。細胞質尾部は、Ｓｅｒ２５３およびＳｅｒ２５８に２つのリン酸化部位を含有し、Ｃｙｓ２４５に１つのＳ－パルミトイル化部位を含有する。細胞質ドメインの欠失または変異が組織因子凝固活性に影響を及ぼすことは見出されなかった。組織因子は、Ｃｙｓ２４５のタンパク質の細胞内ドメイン内に１つのＳ－パルミトイル化部位を有する。Ｃｙｓ２４５は、細胞内ドメインのアミノ酸末端に位置し、膜表面の近くにある。組織因子膜貫通ドメインは、単一膜貫通α－ヘリックスで構成されている。

【0049】

２つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインで構成されている組織因子の細胞外ドメインは、６アミノ酸リンカーを介して膜貫通ドメインに連結されている。このリンカーは、組織因子細胞外ドメインをその膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインから分離するために立体配座可動性を提供する。各組織因子フィブロネクチンＩＩＩ型モジュールは、２つの重複βシートで構成されており、上部のシートドメインは３つの逆平行βストランドを含有し、下部のシートは４つのβストランドを含有する。βストランドは、ストランドβＡとβＢの間、βＣとβＤの間、およびβＥとβＦの間のβループによって連結されており、これらの全ての立体配座が２つのモジュール内で保存されている。βストランドを連結する３つの短いα－ヘリックスセグメントが存在する。組織因子の特有の特徴は、フィブロネクチンスーパーファミリーの共通要素ではない、ストランドβ１０とストランドβ１１の間の１７アミノ酸β－ヘアピンである。また、Ｎ末端ドメインは、β６Ｆとβ７Ｇの間に１２アミノ酸ループも含有し、これは、Ｃ末端ドメインには存在せず、組織因子に特有のものである。そのようなフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン構造は、免疫グロブリン様タンパク質ファミリー折り畳みの特徴であり、多種多様な細胞外タンパク質間で保存されている。

【0050】

チモーゲンＦＶＩＩは、それが組織に結合して活性組織因子－ＦＶＩＩａ複合体を形成すると、タンパク質限定分解によってＦＶＩＩａに迅速に変換される。およそ０．１ｎＭ（血漿ＦＶＩＩの１％）の濃度で酵素として循環するＦＶＩＩａも、組織因子に直接結合することができる。組織因子－ＦＶＩＩａ複合体上の組織因子とＦＶＩＩａの間のアロステリック相互作用は、ＦＶＩＩａの酵素活性を大幅に増加させ、小さい発色性ペプチジル基質の加水分解速度をおよそ２０～１００倍増加させ、天然高分子基質ＦＩＸおよびＦＸの活性化速度をほぼ１００万倍増加させる。組織因子への結合時のＦＶＩＩａの活性部位のアロステリック活性化と協調して、リン脂質二重層上での組織因子－ＦＶＩＩａ複合体の形成（すなわち、膜表面上のホスファチジル－Ｌ－セリンの曝露時）は、Ｃａ^２＋依存的様式で、ＦＩＸまたはＦＸの活性化速度をさらに１，０００倍増加させる。遊離ＦＶＩＩａと比較した組織因子－ＦＶＩＩａ－リン脂質複合体によるＦＸ活性化のおよそ１００万倍の全体的な増加は、凝固カスケードの臨界調節点である。

【0051】

ＦＶＩＩは、約５０ｋＤａの単鎖ポリペプチドであり、４０６アミノ酸残基からなり、Ｎ末端γ－カルボキシグルタミン酸リッチ（ＧＬＡ）ドメイン、２つの上皮成長因子様ドメイン（ＥＧＦ１およびＥＦＧ２）、およびＣ末端セリンプロテアーゼドメインを有する。ＦＶＩＩは、ＥＧＦ２とプロテアーゼドメインとの間の短いリンカー領域におけるＩｌｅ－^１５４－Ａｒｇ^１５２結合の特異的タンパク質分解切断によってＦＶＩＩａに活性化される。この切断により、軽鎖および重鎖がＣｙｓ^１３５およびＣｙｓ^２６２の単一ジスルフィド結合によって一緒に保持されるようになる。ＦＶＩＩａは、そのＮ末端ＧＬＡドメインを介してＣａ^２＋依存的様式でリン脂質膜に結合する。ＧＬＡドメインのすぐＣ末端側に、芳香族スタックおよび２つのＥＧＦドメインが存在する。芳香族スタックは、ＧＬＡドメインを、単一のＣａ^２＋イオンに結合するＥＧＦ１ドメインに連結する。このＣａ^２＋結合部位の占有により、ＦＶＩＩａアミド分解活性および組織因子会合が増加する。触媒トライアドは、Ｈｉｓ^１９３、Ａｓｐ^２４２、およびＳｅｒ^３４４からなり、ＦＶＩＩａプロテアーゼドメイン内での単一のＣａ^２＋イオンの結合は、その触媒活性に不可欠である。ＦＶＩＩのＦＶＩＩａへのタンパク質分解活性は、Ｉｌｅ^１５３で新たに形成されたアミノ末端を解放して、折り返し、活性化ポケットに挿入されて、Ａｓｐ^３４３のカルボン酸塩と塩橋を形成して、オキシアニオンホールを生成する。この塩橋の形成は、ＦＶＩＩａ活性に不可欠である。しかしながら、オキシアニオンホールの形成は、タンパク質分解活性化時に遊離ＦＶＩＩａでは生じない。結果として、ＦＶＩＩａは、血漿プロテアーゼ阻害剤によってほとんど認識されないチモーゲン様状態で循環し、それがおよそ９０分の半減期で循環することを可能にする。

【0052】

膜表面上でのＦＶＩＩａ活性部位の組織因子媒介性位置付けは、同族基質に対するＦＶＩＩａに重要である。遊離ＦＶＩＩａは、その活性部位が膜表面上約８０Åに位置付けられた膜に結合すると、安定した拡張構造をとる。ＦＶＩＩａが組織因子に結合すると、ＦＶａ活性部位は、膜に約６Å近づいて再び位置付けられる。この調節は、ＦＶＩＩａ触媒トライアドの標的基質切断部位との適切な整列を助け得る。ＧＬＡドメインレスＦＶＩＩａを使用して、活性部位が依然として膜上から同様の距離で位置付けられたことが示されており、組織因子がＦＶＩＩａ－膜相互作用の不在下でさえもＦＶＩＩａ活性部位位置付けを完全に支援することができることを実証する。追加のデータは、組織因子細胞外ドメインが何らかの方法で膜表面に繋留されている限り、組織因子が完全なＦＶＩＩａタンパク質分解活性を支援することを示した。しかしながら、ＦＶＩＩａの活性部位を膜表面上８０Åを超えて上昇させることにより、組織因子－ＦＶＩＩａ複合体がＦＸを活性化する能力が大幅に低下したが、組織因子－ＦＶＩＩａアミド分解活性は低下しなかった。

【0053】

アラニンスキャニング変異誘発は、ＦＶＩＩａとの相互作用のための組織因子細胞外ドメインにおける特定のアミノ酸側鎖の役割を評価するために使用されている（Ｇｉｂｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３（４７）：１４００３－１４０１０，１９９４、Ｓｃｈｕｌｌｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６９（３０）：１９３９９－１９４０３，１９９４）。アラニン置換は、アラニン置換がＦＶＩＩａ結合に対して５～１０倍低い親和性を引き起こす限定された数の残基位置を特定した。これらの残基側鎖の大半が、高分子リガンド相互作用と調和して、結晶構造における溶媒に十分に曝露されることが見出された。ＦＶＩＩａリガンド結合部位は、２つのモジュール間の境界の広範な領域にわたって位置する。Ｃ－モジュールにおいて、突出したＢ－Ｃループ上に位置する残基Ａｒｇ^１３５およびＰｈｅ^１４０は、ＦＶＩＩａとの独立した接触を提供する。Ｌｅｕ^１３３は、指様の構造の基部に位置し、２つのモジュール間の隙間にパッキングされている。これにより、Ｌｙｓ^２０、Ｔｈｒ^６０、Ａｓｐ^５８、およびＩｌｅ^２２からなる重要な結合残基の主要なクラスターに連続性が提供される。Ｔｈｒ^６０は、部分的にのみ溶媒に曝露されており、リガンドと有意に接触するのではなく、局所的な構造的役割を果たし得る。結合部位は、Ｇｌｕ^２４およびＧｌｎ^１１０、ならびに潜在的により遠位の残基Ｖａｌ^２０７を含むモジュール間角度の凹面側に伸びている。結合領域は、Ａｓｐ^５８から、Ｌｙｓ^４８、Ｌｙｓ^４６、Ｇｌｎ^３７、Ａｓｐ^４４、およびＴｒｐ^４５によって形成された凸面領域に伸びている。Ｔｒｐ^４５およびＡｓｐ^４４は、ＦＶＩＩａと独立して相互作用せず、Ｔｒｐ^４５位での変異効果が、隣接するＡｓｐ^４４およびＧｌｎ^３７側鎖の局所的パッキングのためのこの側鎖の構造的重要性を反映し得ることを示す。相互作用領域は、Ｎ－モジュール内に疎水性クラスターの一部を形成する２つの表面曝露芳香族残基Ｐｈｅ^７６およびＴｙｒ^７８をさらに含む。

【0054】

組織因子－ＦＶＩＩａの既知の生理学的基質は、ＦＶＩＩ、ＦＩＸ、およびＦＸ、ならびにある特定のプロテイナーゼ活性化受容体である。変異分析により、変異すると、小さいペプチジル基質に対する完全なＦＶＩＩａアミド分解活性を支援するが、高分子基質（すなわち、ＦＶＩＩ、ＦＩＸ、およびＦＸ）の活性化を支援する能力を欠くいくつかの残基が特定されている（Ｒｕｆ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６７（３１）：２２２０６－２２２１０，１９９２、Ｒｕｆ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６７（９）：６３７５－６３８１，１９９２、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１（３６）：２１７５２－２１７５７，１９９６、Ｋｉｒｃｈｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３９（２５）：７３８０－７３８７，２０００）。残基１５９～１６５の組織因子ループ領域、およびこの可動性ループ内のまたはそれに隣接する残基が、組織因子－ＦＶＩＩａ複合体のタンパク質分解活性に不可欠であることが示されている。これは、ＦＶＩＩａ活性部位からかなり遠位である組織因子の提案された基質結合エキソサイト領域を定義する。グリシン残基を、わずかによりかさばったアラニン残基で置換することによって、組織因子－ＦＶＩＩａのタンパク質分解活性は有意に損なわれる。これは、グリシンによってもたらされる可動性が、組織因子高分子基質認識のための残基１５９～１６５のループに不可欠であることを示唆する。

【0055】

また、残基Ｌｙｓ^１６５およびＬｙｓ^１６６が、基質認識および結合に重要であることも実証されている。これらの残基のいずれかをアラニンに変異させることにより、組織因子補因子機能が有意に低下する。Ｌｙｓ^１６５とＬｙｓ^１６６は互いに外方に向いており、Ｌｙｓ^１６５は、大半の組織因子－ＦＶＩＩａ構造内でＦＶＩＩａの方を指し、Ｌｙｓ^１６６は、結晶構造内の基質結合エキソサイト領域を指している。ＦＶＩＩａのＬｙｓ^１６５とＧｌａ^３５との間の推定塩橋形成は、組織因子のＦＶＩＩａのＧＬＡドメインとの相互作用が基質認識を調節するという概念を支持するであろう。これらの結果は、組織因子外部ドメインのＣ末端部分が、ＦＩＸおよびＦＸのＧＬＡドメイン、隣接する可能性のあるＥＧＦ１ドメインと直接相互作用し、ＦＶＩＩａ ＧＬＡドメインの存在がこれらの相互作用を直接または間接的のいずれかで調節し得ることを示唆する。

【0056】

可溶性組織因子ドメイン
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチド、組成物、または方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、シグナル配列、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを欠く野生型組織因子ポリペプチドであり得る。いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、組織因子変異体であり得、野生型組織因子ポリペプチドが、シグナル配列、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを欠き、選択されたアミノ酸でさらに改変されている。いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性ヒト組織因子ドメインであり得る。いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性マウス組織因子ドメインであり得る。いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性ラット組織因子ドメインであり得る。可溶性ヒト組織因子ドメイン、可溶性マウス組織因子ドメイン、可溶性ラット組織因子ドメイン、および変異体可溶性組織因子ドメインの非限定的な例が以下に示される。

例示的な可溶性ヒト組織因子ドメイン（配列番号９）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ

可溶性ヒト組織因子ドメインをコードする例示的な核酸（配列番号１０）
ＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧ

例示的な可溶性マウス組織因子ドメイン（配列番号１１）
ａｇｉｐｅｋａｆｎｌｔｗｉｓｔｄｆｋｔｉｌｅｗｑｐｋｐｔｎｙｔｙｔｖｑｉｓｄｒｓｒｎｗｋｎｋｃｆｓｔｔｄｔｅｃｄｌｔｄｅｉｖｋｄｖｔｗａｙｅａｋｖｌｓｖｐｒｒｎｓｖｈｇｄｇｄｑｌｖｉｈｇｅｅｐｐｆｔｎａｐ ｋｆｌｐｙｒｄｔｎｌｇｑｐｖｉｑｑｆｅｑｄｇｒｋｌｎｖｖｖｋｄｓｌｔｌｖｒｋｎｇｔｆｌｔｌｒｑｖｆｇｋｄｌｇｙｉｉｔｙｒｋｇｓｓｔｇｋｋｔｎｉｔｎｔｎｅｆｓｉｄｖｅｅｇｖｓｙｃｆｆｖｑａｍｉｆｓｒｋｔｎｑｎｓｐｇｓｓｔｖｃｔｅｑｗｋｓｆｌｇｅ

例示的な可溶性ラット組織因子ドメイン（配列番号１２）
Ａｇｔｐｐｇｋａｆｎｌｔｗｉｓｔｄｆｋｔｉｌｅｗｑｐｋｐｔｎｙｔｙｔｖｑｉｓｄｒｓｒｎｗｋｙｋｃｔｇｔｔｄｔｅｃｄｌｔｄｅｉｖｋｄｖｎｗｔｙｅａｒｖｌｓｖｐｗｒｎｓｔｈｇｋｅｔｌｆｇｔｈｇｅｅｐｐｆｔｎａｒｋｆｌｐｙｒｄｔｋｉｇｑｐｖｉｑｋｙｅｑｇｇｔｋｌｋｖｔｖｋｄｓｆｔｌｖｒｋｎｇｔｆｌｔｌｒｑｖｆｇｎｄｌｇｙｉｌｔｙｒｋｄｓｓｔｇｒｋｔｎｔｔｈｔｎｅｆｌｉｄｖｅｋｇｖｓｙｃｆｆａｑａｖｉｆｓｒｋｔｎｈｋｓｐｅｓｉｔｋｃｔｅｑｗｋｓｖｌｇｅ

例示的な変異体可溶性ヒト組織因子ドメイン（配列番号９６）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＡＴＡＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＡＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＡＲＮＮＴＡＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ

例示的な変異体可溶性ヒト組織因子ドメイン（配列番号９７）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＡＴＡＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＡＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＡＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＡＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＡＲＮＮＴＡＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ

【0057】

いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、配列番号９、１１、１２、９６、または９７と少なくとも７０％同一、少なくとも７２％同一、少なくとも７４％同一、少なくとも７６％同一、少なくとも７８％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一である配列を含み得る。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、１～２０個のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸）がそのＮ末端から除去された、および／または１～２０個のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸）がそのＣ末端から除去された、配列番号９、１１、１２、９６、または９７の配列を含み得る。

【0058】

当該技術分野で理解され得るように、当業者であれば、異なる哺乳動物種間で保存されているアミノ酸の変異がタンパク質の活性および／または構造的安定性を低下させる可能性が高い一方で、異なる哺乳動物種間で保存されていないアミノ酸の変異がタンパク質の活性および／または構造的安定性を低下させる可能性が低いことを理解するであろう。

【0059】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、第ＶＩＩａ因子に結合することができない。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、不活性第Ｘ因子を第Ｘａ因子に変換しない。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、哺乳動物における血液凝固を刺激しない。

【0060】

いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性ヒト組織因子ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性マウス組織因子ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性ラット組織因子ドメインであり得る。

【0061】

いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２０位に対応するアミノ酸の位置にリジン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２２位に対応するアミノ酸の位置にイソロイシン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸４５位に対応するアミノ酸の位置にトリプトファン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸５８位に対応するアミノ酸の位置にアスパラギン酸、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸９４位に対応するアミノ酸の位置にチロシン、成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１３５位に対応するアミノ酸の位置にアルギニン、および成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１４０位に対応するアミノ酸の位置にフェニルアラニンのうちの１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、または７つ）を含まない。いくつかの実施形態では、変異体可溶性組織因子は、配列番号９６または配列番号９７のアミノ酸配列を有する。

【0062】

いくつかの例では、可溶性組織因子ドメインは、配列番号１０と少なくとも７０％同一、少なくとも７２％同一、少なくとも７４％同一、少なくとも７６％同一、少なくとも７８％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一である配列を含む核酸によってコードされ得る。

【0063】

いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、約２０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約２０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約２０アミノ酸～約２００アミノ酸、約２０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１００アミノ酸、約２０アミノ酸～約９５アミノ酸、約２０アミノ酸～約９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約８５アミノ酸、約２０アミノ酸～約８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約７５アミノ酸、約２０アミノ酸～約７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約３０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約３０アミノ酸～約２００アミノ酸、約３０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１００アミノ酸、約３０アミノ酸～約９５アミノ酸、約３０アミノ酸～約９０アミノ酸、約３０アミノ酸～約８５アミノ酸、約３０アミノ酸～約８０アミノ酸、約３０アミノ酸～約７５アミノ酸、約３０アミノ酸～約７０アミノ酸、約３０アミノ酸～約６０アミノ酸、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約４０アミノ酸、約４０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約４０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約４０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約４０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約４０アミノ酸～約２００アミノ酸、約４０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約４０アミノ酸～約１００アミノ酸、約４０アミノ酸～約９５アミノ酸、約４０アミノ酸～約９０アミノ酸、約４０アミノ酸～約８５アミノ酸、約４０アミノ酸～約８０アミノ酸、約４０アミノ酸～約７５アミノ酸、約４０アミノ酸～約７０アミノ酸、約４０アミノ酸～約６０アミノ酸、約４０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約５０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、約５０アミノ酸～約９５アミノ酸、約５０アミノ酸～約９０アミノ酸、約５０アミノ酸～約８５アミノ酸、約５０アミノ酸～約８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７５アミノ酸、約５０アミノ酸～約７０アミノ酸、約５０アミノ酸～約６０アミノ酸、約６０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約６０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約６０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約６０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約６０アミノ酸～約２００アミノ酸、約６０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１００アミノ酸、約６０アミノ酸～約９５アミノ酸、約６０アミノ酸～約９０アミノ酸、約６０アミノ酸～約８５アミノ酸、約６０アミノ酸～約８０アミノ酸、約６０アミノ酸～約７５アミノ酸、約６０アミノ酸～約７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約７０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約７０アミノ酸～約２００アミノ酸、約７０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１００アミノ酸、約７０アミノ酸～約９５アミノ酸、約７０アミノ酸～約９０アミノ酸、約７０アミノ酸～約８５アミノ酸、約７０アミノ酸～約８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約８０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約８０アミノ酸～約２００アミノ酸、約８０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１００アミノ酸、約８０アミノ酸～約９５アミノ酸、約８０アミノ酸～約９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約９０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約９０アミノ酸～約２００アミノ酸、約９０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１００アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１００アミノ酸～約２００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１１５ア
ミノ酸～約１８０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１４０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１４０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１４５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１４５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１４５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１４５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１４５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１４５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１５５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１５５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１５５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１５５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１５５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１５５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１５５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１５５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１５５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１５５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１５５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１５５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１５５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１６０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１６０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１６０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１６０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１６０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１６０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１６０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１６０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１６０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１６０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１６０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１６０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１６５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１６５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１６５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１６５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１６５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１６５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１６５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１６５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１６５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１６５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１６５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１７０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１７０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１７０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１７０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１７０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１７０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１７０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１７０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１７０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１７０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１７５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１７５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１７５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１７５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１７５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１７５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１７５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１７５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１７５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１８０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１８０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１８０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１８０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１８０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１８０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１８０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１８０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１８５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１８５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１８５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１８５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１８５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１８５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１８５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２０５アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２１５アミノ酸、約２００アミノ酸～約２１０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２０５アミノ酸、約２０５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２０５アミノ酸～約２１５アミノ酸、約２０５アミノ酸～約２１０アミノ酸、約２１０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２１０アミノ酸～約２１５アミノ酸、または約２１５アミノ酸～約２２０アミノ酸の全長を有し得る。

【0064】

いくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、可溶性野生型ヒト組織因子（またはそれからの任意の配列）を含むか、またはそれからなり得る。

【0065】

リンカー配列
いくつかの実施形態では、リンカー配列は、可動性リンカー配列であり得る。使用され得るリンカー配列の非限定的な例は、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．１０，ｐｐ．３２５－３３０，２０１４、Ｐｒｉｙａｎｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．，２０１３ Ｆｅｂ；２２（２）：１５３－１６７に記載されている。いくつかの例では、リンカー配列は、合成リンカー配列である。

【0066】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のリンカー配列（複数可）（例えば、同じまたは異なるリンカー配列、例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）を含み得る。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のリンカー配列（複数可）（例えば、同じまたは異なるリンカー配列、例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）を含み得る。

【0067】

いくつかの実施形態では、リンカー配列は、１アミノ酸～約１００アミノ酸、１アミノ酸～約９０アミノ酸、１アミノ酸～約８０アミノ酸、１アミノ酸～約７０アミノ酸、１アミノ酸～約６０アミノ酸、１アミノ酸～約５０アミノ酸、１アミノ酸～約４５アミノ酸、１アミノ酸～約４０アミノ酸、１アミノ酸～約３５アミノ酸、１アミノ酸～約３０アミノ酸、１アミノ酸～約２５アミノ酸、１アミノ酸～約２４アミノ酸、１アミノ酸～約２２アミノ酸、１アミノ酸～約２０アミノ酸、１アミノ酸～約１８アミノ酸、１アミノ酸～約１６アミノ酸、１アミノ酸～約１４アミノ酸、１アミノ酸～約１２アミノ酸、１アミノ酸～約１０アミノ酸、１アミノ酸～約８アミノ酸、１アミノ酸～約６アミノ酸、１アミノ酸～約４アミノ酸、約２アミノ酸～約１００アミノ酸、約２アミノ酸～約９０アミノ酸、約２アミノ酸～約８０アミノ酸、約２アミノ酸～約７０アミノ酸、約２アミノ酸～約６０アミノ酸、約２アミノ酸～約５０アミノ酸、約２アミノ酸～約４５アミノ酸、約２アミノ酸～約４０アミノ酸、約２アミノ酸～約３５アミノ酸、約２アミノ酸～約３０アミノ酸、約２アミノ酸～約２５アミノ酸、約２アミノ酸～約２４アミノ酸、約２アミノ酸～約２２アミノ酸、約２アミノ酸～約２０アミノ酸、約２アミノ酸～約１８アミノ酸、約２アミノ酸～約１６アミノ酸、約２アミノ酸～約１４アミノ酸、約２アミノ酸～約１２アミノ酸、約２アミノ酸～約１０アミノ酸、約２アミノ酸～約８アミノ酸、約２アミノ酸～約６アミノ酸、約２アミノ酸～約４アミノ酸、約４アミノ酸～約１００アミノ酸、約４アミノ酸～約９０アミノ酸、約４アミノ酸～約８０アミノ酸、約４アミノ酸～約７０アミノ酸、約４アミノ酸～約６０アミノ酸、約４アミノ酸～約５０アミノ酸、約４アミノ酸～約４５アミノ酸、約４アミノ酸～約４０アミノ酸、約４アミノ酸～約３５アミノ酸、約４アミノ酸～約３０アミノ酸、約４アミノ酸～約２５アミノ酸、約４アミノ酸～約２４アミノ酸、約４アミノ酸～約２２アミノ酸、約４アミノ酸～約２０アミノ酸、約４アミノ酸～約１８アミノ酸、約４アミノ酸～約１６アミノ酸、約４アミノ酸～約１４アミノ酸、約４アミノ酸～約１２アミノ酸、約４アミノ酸～約１０アミノ酸、約４アミノ酸～約８アミノ酸、約４アミノ酸～約６アミノ酸、約６アミノ酸～約１００アミノ酸、約６アミノ酸～約９０アミノ酸、約６アミノ酸～約８０アミノ酸、約６アミノ酸～約７０アミノ酸、約６アミノ酸～約６０アミノ酸、約６アミノ酸～約５０アミノ酸、約６アミノ酸～約４５アミノ酸、約６アミノ酸～約４０アミノ酸、約６アミノ酸～約３５アミノ酸、約６アミノ酸～約３０アミノ酸、約６アミノ酸～約２５アミノ酸、約６アミノ酸～約２４アミノ酸、約６アミノ酸～約２２アミノ酸、約６アミノ酸～約２０アミノ酸、約６アミノ酸～約１８アミノ酸、約６アミノ酸～約１６アミノ酸、約６アミノ酸～約１４アミノ酸、約６アミノ酸～約１２アミノ酸、約６アミノ酸～約１０アミノ酸、約６アミノ酸～約８アミノ酸、約８アミノ酸～約１００アミノ酸、約８アミノ酸～約９０アミノ酸、約８アミノ酸～約８０アミノ酸、約８アミノ酸～約７０アミノ酸、約８アミノ酸～約６０アミノ酸、約８アミノ酸～約５０アミノ酸、約８アミノ酸～約４５アミノ酸、約８アミノ酸～約４０アミノ酸、約８アミノ酸～約３５アミノ酸、約８アミノ酸～約３０アミノ酸、約８アミノ酸～約２５アミノ酸、約８アミノ酸～約２４アミノ酸、約８アミノ酸～約２２アミノ酸、約８アミノ酸～約２０アミノ酸、約８アミノ酸～約１８アミノ酸、約８アミノ酸～約１６アミノ酸、約８アミノ酸～約１４アミノ酸、約８アミノ酸～約１２アミノ酸、約８アミノ酸～約１０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１０アミノ酸～約９０アミノ酸、約１０アミノ酸～約８０アミノ酸、約１０アミノ酸～約７０アミノ酸、約１０アミノ酸～約６０アミノ酸、約１０アミノ酸～約５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約４５アミノ酸、約１０アミノ酸～約４０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３５アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２４アミノ酸、約１０アミノ酸～約２２アミノ酸、約１０アミノ酸～約２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１８アミノ酸、約１０アミノ酸～約１６アミノ酸、約１０アミノ酸～約１４アミノ酸、約１０アミノ酸～約１２アミノ酸、約１２アミノ酸～約１００アミノ酸、約１２アミノ酸～約９０アミノ酸、約１２アミノ酸～約８０アミノ酸、約１２アミノ酸～約７０アミノ酸、約１２アミノ酸～約６０アミノ酸、約１２アミノ酸～約５０アミノ酸、約１２アミノ酸～約４５アミノ酸、約１２アミノ酸～約４０アミノ酸、約１２アミノ酸～約３５アミノ酸、約１２アミノ酸～約３０アミノ酸、約１２アミノ酸～約２５アミノ酸、約１２アミノ酸～約２４アミノ酸、約１２アミノ酸～約２２アミノ酸、約１２アミノ酸～約２０アミノ酸、約１２アミノ酸～約１８アミノ酸、約１２アミノ酸～約１６アミノ酸、約１２アミノ酸～約１４アミノ酸、約１４アミノ酸～約１００アミノ酸、約１４アミノ酸～約９０アミノ酸、約１４アミノ酸～約８０アミノ酸、約１４アミノ酸～約７０アミノ酸、約１４アミノ酸～約６０アミノ酸、約１４アミノ酸～約５０アミノ酸、約１４アミノ酸～約４５アミノ酸、約１４アミノ酸～約４０アミノ酸、約１４アミノ酸～約３５アミノ酸、約１４アミノ酸～約３０アミノ酸、約１４アミノ酸～約２５アミノ酸、約１４アミノ酸～約２４アミノ酸、約１４アミノ酸～約２２アミノ酸、約１４アミノ酸～約２０アミノ酸、約１４アミノ酸～約１８アミノ酸、約１４アミノ酸～約１６アミノ酸、約１６アミノ酸～約１００アミノ酸、約１６アミノ酸～約９０アミノ酸、約１６アミノ酸～約８０アミノ酸、約１６アミノ酸～約７０アミノ酸、約１６アミノ酸～約６０アミノ酸、約１６アミノ酸～約５０アミノ酸、約１６アミノ酸～約４５アミノ酸、約１６アミノ酸～約４０アミノ酸、約１６アミノ酸～約３５アミノ酸、約１６アミノ酸～約３０アミノ酸、約１６アミノ酸～約２５アミノ酸、約１６アミノ酸～約２４アミノ酸、約１６アミノ酸～約２２アミノ酸、約１６アミノ酸～約２０アミノ酸、約１６アミノ酸～約１８アミノ酸、約１８アミノ酸～約１００アミノ酸、約１８アミノ酸～約９０アミノ酸、約１８アミノ酸～約８０アミノ酸、約１８アミノ酸～約７０アミノ酸、約１８アミノ酸～約６０アミノ酸、約１８アミノ酸～約５０アミノ酸、約１８アミノ酸～約４５アミノ酸、約１８アミノ酸～約４０アミノ酸、約１８アミノ酸～約３５アミノ酸、約１８アミノ酸～約３０アミノ酸、約１８アミノ酸～約２５アミノ酸、約１８アミノ酸～約２４アミノ酸、約１８アミノ酸～約２２アミノ酸、約１８アミノ酸～約２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１００アミノ酸、約２０アミノ酸～約９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約４５アミノ酸、約２０アミノ酸～約４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約３５アミノ酸、約２０アミノ酸～約３０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２５アミノ酸、約２０アミノ酸～約２４アミノ酸、約２０アミノ酸～約２２アミノ酸、約２２アミノ酸～約１００アミノ酸、約２２アミノ酸～約９０アミノ酸、約２２アミノ酸～約８０アミノ酸、約２２アミノ酸～約７０アミノ酸、約２２アミノ酸～約６０アミノ酸、約２２アミノ酸～約５０アミノ酸、約２２アミノ酸～約４５アミノ酸、約２２アミノ酸～約４０アミノ酸、約２２アミノ酸～約３５アミノ酸、約２２アミノ酸～約３０アミノ酸、約２２アミノ酸～約２５アミノ酸、約２２アミノ酸～約２４アミノ酸、約２５アミノ酸～約１００アミノ酸、約２５アミノ酸～約９０アミノ酸、約２５アミノ酸～約８０アミノ酸、約２５アミノ酸～約７０アミノ酸、約２５アミノ酸～約６０アミノ酸、約２５アミノ酸～約５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約４５アミノ酸、約２５アミノ酸～約４０アミノ酸、約２５アミノ酸～約３５アミノ酸、約２５アミノ酸～約３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１００アミノ酸、約３０アミノ酸～約９０アミノ酸、約３０アミノ酸～約８０アミノ酸、約３０アミノ酸～約７０アミノ酸、約３０アミノ酸～約６０アミノ酸、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約４５アミノ酸、約３０アミノ酸～約４０アミノ酸、約３０アミノ酸～約３５アミノ酸、約３５アミノ酸～約１００アミノ酸、約３５アミノ酸～約９０アミノ酸、約３５アミノ酸～約８０アミノ酸、約３５アミノ酸～約７０アミノ酸、約３５アミノ酸～約６０アミノ酸、約３５アミノ酸～約５０アミノ酸、約３５アミノ酸～約４５アミノ酸、約３５アミノ酸～約４０アミノ酸、約４０アミノ酸～約１００アミノ酸、約４０アミノ酸～約９０アミノ酸、約４０アミノ酸～約８０アミノ酸、約４０アミノ酸～約７０アミノ酸、約４０アミノ酸～約６０アミノ酸、約４０アミノ酸～約５０アミノ酸、約４０アミノ酸～約４５アミノ酸、約４５アミノ酸～約１００アミノ酸、約４５アミノ酸～約９０アミノ酸、約４５アミノ酸～約８０アミノ酸、約４５アミノ酸～約７０アミノ酸、約４５アミノ酸～約６０アミノ酸、約４５アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、約５０アミノ酸～約９０アミノ酸、約５０アミノ酸～約８０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７０アミノ酸、約５０アミノ酸～約６０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１００アミノ酸、約６０アミノ酸～約９０アミノ酸、約６０アミノ酸～約８０アミノ酸、約６０アミノ酸～約７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１００アミノ酸、約７０アミノ酸～約９０アミノ酸、約７０アミノ酸～約８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１００アミノ酸、約８０アミノ酸～約９０アミノ酸、または約９０アミノ酸～約１００アミノ酸の全長を有し得る。

【0068】

いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン（ＧｌｙまたはＧ）残基に富む。いくつかの実施形態では、リンカーは、セリン（ＳｅｒまたはＳ）残基に富む。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン残基およびセリン残基に富む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のグリシン－セリン残基対（ＧＳ）、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のＧＳ対を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ＧＧＧＳ）配列、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のＧＧＧＳ配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ＧＧＧＧＳ）配列、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のＧＧＧＧＳ配列を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（ＧＧＳＧ）配列、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のＧＧＳＧ配列を有する。

【0069】

いくつかの実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）を含むか、またはそれからなり得る。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴ（配列番号１４）を含むか、またはそれからなる核酸によってコードされ得る。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１５）を含むか、またはそれからなり得る。

【0070】

標的結合ドメイン
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および／または追加の１つ以上の標的結合ドメインは、抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な抗原結合ドメインのうちのいずれか）、可溶性インターロイキンまたはサイトカインタンパク質（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性インターロイキンタンパク質または可溶性サイトカインタンパク質のうちのいずれか）、および可溶性インターロイキンまたはサイトカイン受容体（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性インターロイキン受容体または可溶性サイトカイン受容体のうちのいずれか）であり得る。

【0071】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な第１の標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な第２の標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの１つ以上は各々独立して、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２８、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３α、ＣＤ３β、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、およびＣＤ３γのうちの１つ以上）、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＰＤＬ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＣＤ２６ａ、ＣＤ３６、ＵＬＢＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ２００、ＩＧＦ－１Ｒ、ＭＵＣ４ＡＣ、ＭＵＣ５ＡＣ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ７Ｈ３、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＵＬ１６結合タンパク質（例えば、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ４、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１５５、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ１リガンド、ＮＫｐ４６リガンド、ＮＫｐ４４リガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＫｐ３０リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－１受容体、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－３受容体、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－８受容体、ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１２受容体、ＩＬ－１５受容体、ＩＬ－１７受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＰＤＧＦ－ＤＤ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ１６結合タンパク質受容体、ＣＤ１５５受容体、ＣＤ１２２受容体、およびＣＤ２８受容体の群から選択される標的に特異的に結合し、それからなる群から選択される標的に特異的に結合することができる。

【0072】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および／または１つ以上の追加の標的結合ドメインは、各々独立して、約５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５アミノ酸～約９００アミノ酸、約５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５アミノ酸～約８００アミノ酸、約５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５アミノ酸～約７００アミノ酸、約５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５アミノ酸～約６００アミノ酸、約５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５アミノ酸～約５００アミノ酸、約５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約５アミノ酸～約４００アミノ酸、約５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約５アミノ酸～約３００アミノ酸、約５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約５アミノ酸～約２００アミノ酸、約５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約５アミノ酸～約１００アミノ酸、約５アミノ酸～約９５アミノ酸、約５アミノ酸～約９０アミノ酸、約５アミノ酸～約８５アミノ酸、約５アミノ酸～約８０アミノ酸、約５アミノ酸～約７５アミノ酸、約５アミノ酸～約７０アミノ酸、約５アミノ酸～約６５アミノ酸、約５アミノ酸～約６０アミノ酸、約５アミノ酸～約５５アミノ酸、約５アミノ酸～約５０アミノ酸、約５アミノ酸～約４５アミノ酸、約５アミノ酸～約４０アミノ酸、約５アミノ酸～約３５アミノ酸、約５アミノ酸～約３０アミノ酸、約５アミノ酸～約２５アミノ酸、約５アミノ酸～約２０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約５アミノ酸～約１０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約１０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１０アミノ酸～約９５アミノ酸、約１０アミノ酸～約９０アミノ酸、約１０アミノ酸～約８５アミノ酸、約１０アミノ酸～約８０アミノ酸、約１０アミノ酸～約７５アミノ酸、約１０アミノ酸～約７０アミノ酸、約１０アミノ酸～約６５アミノ酸、約１０アミノ酸～約６０アミノ酸、約１０アミノ酸～約５５アミノ酸、約１０アミノ酸～約５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約４５アミノ酸、約１０アミノ酸～約４０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３５アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約９００アミノ酸、約１５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約８００アミノ酸、約１５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約７００アミノ酸、約１５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約６００アミノ酸、約１５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約５００アミノ酸、約１５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約４００アミノ酸、約１５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約３００アミノ酸、約１５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約１５アミノ酸～約１００アミノ酸、約１５アミノ酸～約９５アミノ酸、約１５アミノ酸～約９０アミノ酸、約１５アミノ酸～約８５アミノ酸、約１５アミノ酸～約８０アミノ酸、約１５アミノ酸～約７５アミノ酸、約１５アミノ酸～約７０アミノ酸、約１５アミノ酸～約６５アミノ酸、約１５アミノ酸～約６０アミノ酸、約１５アミノ酸～約５５アミノ酸、約１５アミノ酸～約５０アミノ酸、約１５アミノ酸～約４５アミノ酸、約１５アミノ酸～約４０アミノ酸、約１５アミノ酸～約３５アミノ酸、約１５アミノ酸～約３０アミノ酸、約１５アミノ酸～約２５アミノ酸、約１５アミノ酸～約２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２００アミノ酸、約２０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約２０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約２０アミノ酸～約１００アミノ酸、約２０アミノ酸～約９５アミノ酸、約２０アミノ酸～約９０アミノ酸、約２０アミノ酸～約８５アミノ酸、約２０アミノ酸～約８０アミノ酸、約２０アミノ酸～約７５アミノ酸、約２０アミノ酸～約７０アミノ酸、約２０アミノ酸～約６５アミノ酸、約２０アミノ酸～約６０アミノ酸、約２０アミノ酸～約５５アミノ酸、約２０アミノ酸～約５０アミノ酸、約２０アミノ酸～約４５アミノ酸、約２０アミノ酸～約４０アミノ酸、約２０アミノ酸～約３５アミノ酸、約２０アミノ酸～約３０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約９００アミノ酸、約２５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約８００アミノ酸、約２５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約７００アミノ酸、約２５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約６００アミノ酸、約２５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約５００アミノ酸、約２５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約４００アミノ酸、約２５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約３００アミノ酸、約２５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２５アミノ酸～約２００アミノ酸、約２５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約２５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約２５アミノ酸～約１００アミノ酸、約２５アミノ酸～約９５アミノ酸、約２５アミノ酸～約９０アミノ酸、約２５アミノ酸～約８５アミノ酸、約２５アミノ酸～約８０アミノ酸、約２５アミノ酸～約７５アミノ酸、約２５アミノ酸～約７０アミノ酸、約２５アミノ酸～約６５アミノ酸、約２５アミノ酸～約６０アミノ酸、約２５アミノ酸～約５５アミノ酸、約２５アミノ酸～約５０アミノ酸、約２５アミノ酸～約４５アミノ酸、約２５アミノ酸～約４０アミノ酸、約２５アミノ酸～約３５アミノ酸、約２５アミノ酸～約３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約４００アミノ酸、約３０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約３０アミノ酸～約３００アミノ酸、約３０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約３０アミノ酸～約２００アミノ酸、約３０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約３０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約３０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約３０アミ
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ミノ酸、約６０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約６０アミノ酸～約２００アミノ酸、約６０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１７５アミノ
酸、約６０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約６０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約６０アミノ酸～約１００アミノ酸、約６０アミノ酸～約９５アミノ酸、約６０アミノ酸～約９０アミノ酸、約６０アミノ酸～約８５アミノ酸、約６０アミノ酸～約８０アミノ酸、約６０アミノ酸～約７５アミノ酸、約６０アミノ酸～約７０アミノ酸、約６０アミノ酸～約６５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６５アミノ酸～約９００アミノ酸、約６５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６５アミノ酸～約８００アミノ酸、約６５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６５アミノ酸～約７００アミノ酸、約６５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約６５アミノ酸～約６００アミノ酸、約６５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約６５アミノ酸～約５００アミノ酸、約６５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約６５アミノ酸～約４００アミノ酸、約６５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約６５アミノ酸～約３００アミノ酸、約６５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約６５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約６５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約６５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約６５アミノ酸～約２００アミノ酸、約６５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約６５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約６５アミノ酸～約１００アミノ酸、約６５アミノ酸～約９５アミノ酸、約６５アミノ酸～約９０アミノ酸、約６５アミノ酸～約８５アミノ酸、約６５アミノ酸～約８０アミノ酸、約６５アミノ酸～約７５アミノ酸、約６５アミノ酸～約７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約９００アミノ酸、約７０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約８００アミノ酸、約７０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約７００アミノ酸、約７０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約６００アミノ酸、約７０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約５００アミノ酸、約７０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約４００アミノ酸、約７０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約３００アミノ酸、約７０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約７０アミノ酸～約２００アミノ酸、約７０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約７０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約７０アミノ酸～約１００アミノ酸、約７０アミノ酸～約９５アミノ酸、約７０アミノ酸～約９０アミノ酸、約７０アミノ酸～約８５アミノ酸、約７０アミノ酸～約８０アミノ酸、約７０アミノ酸～約７５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７５アミノ酸～約９００アミノ酸、約７５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７５アミノ酸～約８００アミノ酸、約７５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約７５アミノ酸～約７００アミノ酸、約７５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約７５アミノ酸～約６００アミノ酸、約７５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約７５アミノ酸～約５００アミノ酸、約７５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約７５アミノ酸～約４００アミノ酸、約７５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約７５アミノ酸～約３００アミノ酸、約７５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約７５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約７５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約７５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約７５アミノ酸～約２００アミノ酸、約７５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約７５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約７５アミノ酸～約１００アミノ酸、約７５アミノ酸～約９５アミノ酸、約７５アミノ酸～約９０アミノ酸、約７５アミノ酸～約８５アミノ酸、約７５アミノ酸～約８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約８０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約４００アミノ酸、約８０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約３００アミノ酸、約８０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約８０アミノ酸～約２００アミノ酸、約８０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約８０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約８０アミノ酸～約１００アミノ酸、約８０アミノ酸～約９５アミノ酸、約８０アミノ酸～約９０アミノ酸、約８０アミノ酸～約８５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８５アミノ酸～約９００アミノ酸、約８５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約８５アミノ酸～約８００アミノ酸、約８５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約８５アミノ酸～約７００アミノ酸、約８５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約８５アミノ酸～約６００アミノ酸、約８５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約８５アミノ酸～約５００アミノ酸、約８５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約８５アミノ酸～約４００アミノ酸、約８５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約８５アミノ酸～約３００アミノ酸、約８５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約８５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約８５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約８５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約８５アミノ酸～約２００アミノ酸、約８５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約８５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約８５アミノ酸～約１００アミノ酸、約８５アミノ酸～約９５アミノ酸、約８５アミノ酸～約９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約９０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約９００アミノ酸、約９０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約８００アミノ酸、約９０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約７００アミノ酸、約９０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約６００アミノ酸、約９０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約５００アミノ酸、約９０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約４００アミノ酸、約９０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約３００アミノ酸、約９０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約９０アミノ酸～約２００アミノ酸、約９０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１１０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１０５アミノ酸、約９０アミノ酸～約１００アミノ酸、約９０アミノ酸～約９５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約９５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約９５アミノ酸～約９００アミノ酸、約９５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約９５アミノ酸～約８００アミノ酸、約９５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約９５アミノ酸～約７００アミノ酸、約９５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約９５アミノ酸～約６００アミノ酸、約９５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約９５アミノ酸～約５００アミノ酸、約９５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約９５アミノ酸～約４００アミノ酸、約９５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約９５アミノ酸～約３００アミノ酸、約９５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約９５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約９５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約９５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約９５アミノ
酸～約２００アミノ酸、約９５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約９５アミノ酸～約１０５アミノ酸、約９５アミノ酸～約１００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約９００アミノ酸、約１００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約８００アミノ酸、約１００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約７００アミノ酸、約１００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約６００アミノ酸、約１００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約５００アミノ酸、約１００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４００アミノ酸、約１００アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１００アミノ酸～約１０５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約９００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約８００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約７００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約６００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約５００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約４００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約３００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１１５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約９００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約８００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約７００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約６００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約５００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約４００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約３００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１１５アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１２５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約９００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約８００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約７００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約６００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約５００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約４００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約３００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約２００アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１２５アミノ酸～約１３０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１９０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１８５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１７５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１６５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１６０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１５５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１４５アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１３０アミノ酸～約１３５アミノ酸、約１３５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１３５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約９００アミノ酸、約１３５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約８００アミノ酸、約１３５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約７００アミノ酸、約１３５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約６００アミノ酸、約１３５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約５００アミノ酸、約１３５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１３５アミノ酸～約
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約１９０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約９００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約８００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１９０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１９０アミノ酸～約１９５アミノ酸、約１９５アミノ酸～約１０００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約９５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約９００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約８５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約８００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約７５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約７００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約６００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約５００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約４００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約３００アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２８０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２６０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２４０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２２０アミノ酸、約１９５アミノ酸～約２００アミノ酸、約２００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約９００アミノ酸、約２００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約８００アミノ酸、約２００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約７００アミノ酸、約２００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約６００アミノ酸、約２００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４００アミノ酸、約２００アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２００アミノ酸～約２２０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２２０アミノ酸～約２４０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２４０アミノ酸～約２６０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２６０アミノ酸～約３００アミノ酸、約２６０アミノ酸～約２８０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約９００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約８００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２８０アミノ酸～約３００アミノ酸、約３００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約９００アミノ酸、約３００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約８００アミノ酸、約３００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約７００アミノ酸、約３００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約６００アミノ酸、約３００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４００アミノ酸、約３００アミノ酸～約３５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約４００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約９００アミノ酸、約４００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約８００アミノ酸、約４００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約７００アミノ酸、約４００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約６００アミノ酸、約４００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約９００アミノ酸、約５００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約８００アミノ酸、約５００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約７００アミノ酸、約５００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約６００アミノ酸、約５００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約６００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約９００アミノ酸、約６００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約８００アミノ酸、約６００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６００アミノ酸～約７００アミノ酸、約６００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約７００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７００アミノ酸～約９００アミノ酸、約７００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７００アミノ酸～約８００アミノ酸、約７００アミノ酸～約７５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約７５０アミノ酸～約８５０アミノ酸、約７５０アミノ酸～約８００アミノ酸、約８００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８００アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８００アミノ酸～約９００アミノ酸、約８００アミノ酸～約８５０アミノ酸、約８５０アミノ酸～約１０００アミノ酸、約８５０アミノ酸～約９５０アミノ酸、約８５０アミノ酸～約９００アミノ酸、約９００アミノ酸～約１０００アミノ酸、約９００アミノ酸～約９５０アミノ酸、または約９５０アミノ酸～約１０００アミノ酸のアミノ酸総数を有し得る。

【0073】

本明細書に記載の標的結合ドメインのうちのいずれも、１×１０^－７Ｍ未満、１×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１１Ｍ未満、１×１０^－１２Ｍ未満、または１×１０^－１３Ｍ未満の解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）でその標的に結合することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗原結合タンパク質構築物は、約１×１０^－３Ｍ～約１×１０^－５Ｍ、約１×１０^－４Ｍ～約１×１０^－６Ｍ、約１×１０^－５Ｍ～約１×１０^－７Ｍ、約１×１０^－６Ｍ～約１×１０^－８Ｍ、約１×１０^－７Ｍ～約１×１０^－９Ｍ、約１×１０^－８Ｍ～約１×１０^－１０Ｍ、または約１×１０^－９Ｍ～約１×１０^－１１Ｍ（その上限および下限も含む）のＫ_Ｄで特定の抗原に結合することができる。

【0074】

本明細書に記載の標的結合ドメインのうちのいずれも、約１ｐＭ～約３０ｎＭ（例えば、約１ｐＭ～約２５ｎＭ、約１ｐＭ～約２０ｎＭ、約１ｐＭ～約１５ｎＭ、約１ｐＭ～約１０ｎＭ、約１ｐＭ～約５ｎＭ、約１ｐＭ～約２ｎＭ、約１ｐＭ～約１ｎＭ、約１ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１ｐＭ～約９００ｐＭ、約１ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１ｐＭ～約８００ｐＭ、約１ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１ｐＭ～約７００ｐＭ、約１ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１ｐＭ～約６００ｐＭ、約１ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１ｐＭ～約５００ｐＭ、約１ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１ｐＭ～約４００ｐＭ、約１ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１ｐＭ～約３００ｐＭ、約１ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１ｐＭ～約２００ｐＭ、約１ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１ｐＭ～約１００ｐＭ、約１ｐＭ～約９０ｐＭ、約１ｐＭ～約８０ｐＭ、約１ｐＭ～約７０ｐＭ、約１ｐＭ～約６０ｐＭ、約１ｐＭ～約５０ｐＭ、約１ｐＭ～約４０ｐＭ、約１ｐＭ～約３０ｐＭ、約１ｐＭ～約２０ｐＭ、約１ｐＭ～約１０ｐＭ、約１ｐＭ～約５ｐＭ、約１ｐＭ～約４ｐＭ、約１ｐＭ～約３ｐＭ、約１ｐＭ～約２ｐＭ、約２ｐＭ～約３０ｎＭ、約２ｐＭ～約２５ｎＭ、約２ｐＭ～約２０ｎＭ、約２ｐＭ～約１５ｎＭ、約２ｐＭ～約１０ｎＭ、約２ｐＭ～約５ｎＭ、約２ｐＭ～約２ｎＭ、約２ｐＭ～約１ｎＭ、約２ｐＭ～約９５０ｐＭ、約２ｐＭ～約９００ｐＭ、約２ｐＭ～約８５０ｐＭ、約２ｐＭ～約８００ｐＭ、約２ｐＭ～約７５０ｐＭ、約２ｐＭ～約７００ｐＭ、約２ｐＭ～約６５０ｐＭ、約２ｐＭ～約６００ｐＭ、約２ｐＭ～約５５０ｐＭ、約２ｐＭ～約５００ｐＭ、約２ｐＭ～約４５０ｐＭ、約２ｐＭ～約４００ｐＭ、約２ｐＭ～約３５０ｐＭ、約２ｐＭ～約３００ｐＭ、約２ｐＭ～約２５０ｐＭ、約２ｐＭ～約２００ｐＭ、約２ｐＭ～約１５０ｐＭ、約２ｐＭ～約１００ｐＭ、約２ｐＭ～約９０ｐＭ、約２ｐＭ～約８０ｐＭ、約２ｐＭ～約７０ｐＭ、約２ｐＭ～約６０ｐＭ、約２ｐＭ～約５０ｐＭ、約２ｐＭ～約４０ｐＭ、約２ｐＭ～約３０ｐＭ、約２ｐＭ～約２０ｐＭ、約２ｐＭ～約１０ｐＭ、約２ｐＭ～約５ｐＭ、約２ｐＭ～約４ｐＭ、約２ｐＭ～約３ｐＭ、約５ｐＭ～約３０ｎＭ、約５ｐＭ～約２５ｎＭ、約５ｐＭ～約２０ｎＭ、約５ｐＭ～約１５ｎＭ、約５ｐＭ～約１０ｎＭ、約５ｐＭ～約５ｎＭ、約５ｐＭ～約２ｎＭ、約５ｐＭ～約１ｎＭ、約５ｐＭ～約９５０ｐＭ、約５ｐＭ～約９００ｐＭ、約５ｐＭ～約８５０ｐＭ、約５ｐＭ～約８００ｐＭ、約５ｐＭ～約７５０ｐＭ、約５ｐＭ～約７００ｐＭ、約５ｐＭ～約６５０ｐＭ、約５ｐＭ～約６００ｐＭ、約５ｐＭ～約５５０ｐＭ、約５ｐＭ～約５００ｐＭ、約５ｐＭ～約４５０ｐＭ、約５ｐＭ～約４００ｐＭ、約５ｐＭ～約３５０ｐＭ、約５ｐＭ～約３００ｐＭ、約５ｐＭ～約２５０ｐＭ、約５ｐＭ～約２００ｐＭ、約５ｐＭ～約１５０ｐＭ、約５ｐＭ～約１００ｐＭ、約５ｐＭ～約９０ｐＭ、約５ｐＭ～約８０ｐＭ、約５ｐＭ～約７０ｐＭ、約５ｐＭ～約６０ｐＭ、約５ｐＭ～約５０ｐＭ、約５ｐＭ～約４０ｐＭ、約５ｐＭ～約３０ｐＭ、約５ｐＭ～約２０ｐＭ、約５ｐＭ～約１０ｐＭ、約１０ｐＭ～約３０ｎＭ、約１０ｐＭ～約２５ｎＭ、約１０ｐＭ～約２０ｎＭ、約１０ｐＭ～約１５ｎＭ、約１０ｐＭ～約１０ｎＭ、約１０ｐＭ～約５ｎＭ、約１０ｐＭ～約２ｎＭ、約１０ｐＭ～約１ｎＭ、約１０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約８００ｐＭ、約１０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約７００ｐＭ、約１０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約６００ｐＭ、約１０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約２００ｐＭ、約１０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約１００ｐＭ、約１０ｐＭ～約９０ｐＭ、約１０ｐＭ～約８０ｐＭ、約１０ｐＭ～約７０ｐＭ、約１０ｐＭ～約６０ｐＭ、約１０ｐＭ～約５０ｐＭ、約１０ｐＭ～約４０ｐＭ、約１０ｐＭ～約３０ｐＭ、約１０ｐＭ～約２０ｐＭ、約１５ｐＭ～約３０ｎＭ、約１５ｐＭ～約２５ｎＭ、約１５ｐＭ～約２０ｎＭ、約１５ｐＭ～約１５ｎＭ、約１５ｐＭ～約１０ｎＭ、約１５ｐＭ～約５ｎＭ、約１５ｐＭ～約２ｎＭ、約１５ｐＭ～約１ｎＭ、約１５ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約９００ｐＭ、約１５ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約８００ｐＭ、約１５ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約７００ｐＭ、約１５ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約６００ｐＭ、約１５ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約５００ｐＭ、約１５ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約４００ｐＭ、約１５ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約３００ｐＭ、約１５ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約２００ｐＭ、約１５ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約１００ｐＭ、約１５ｐＭ～約９０ｐＭ、約１５ｐＭ～約８０ｐＭ、約１５ｐＭ～約７０ｐＭ、約１５ｐＭ～約６０ｐＭ、約１５ｐＭ～約５０ｐＭ、約１５ｐＭ～約４０ｐＭ、約１５ｐＭ～約３０ｐＭ、約１５ｐＭ～約２０ｐＭ、約２０ｐＭ～約３０ｎＭ、約２０ｐＭ～約２５ｎＭ、約２０ｐＭ～約２０ｎＭ、約２０ｐＭ～約１５ｎＭ、約２０ｐＭ～約１０ｎＭ、約２０ｐＭ～約５ｎＭ、約２０ｐＭ～約２ｎＭ、約２０ｐＭ～約１ｎＭ、約２０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約９００ｐＭ、約２０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約８００ｐＭ、約２０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約７００ｐＭ、約２０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約６００ｐＭ、約２０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約５００ｐＭ、約２０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約４００ｐＭ、約２０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約３００ｐＭ、約２０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約２０ｐＭ、約２００ｐＭ～約１５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約１００ｐＭ、約２０ｐＭ～約９０ｐＭ、約２０ｐＭ～約８０ｐＭ、約２０ｐＭ～約７０ｐＭ、約２０ｐＭ～約６０ｐＭ、約２０ｐＭ～約５０ｐＭ、約２０ｐＭ～約４０ｐＭ、約２０ｐＭ～約３０ｐＭ、約３０ｐＭ～約３０ｎＭ、約３０ｐＭ～約２５ｎＭ、約３０ｐＭ～約３０ｎＭ、約３０ｐＭ～約１５ｎＭ、約３０ｐＭ～約１０ｎＭ、約３０ｐＭ～約５ｎＭ、約３０ｐＭ～約２ｎＭ、約３０ｐＭ～約１ｎＭ、約３０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約９００ｐＭ、約３０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約８００ｐＭ、約３０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約７００ｐＭ、約３０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約６００ｐＭ、約３０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約５００ｐＭ、約３０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約４００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約３０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約１００ｐＭ、約３０ｐＭ～約９０ｐＭ、約３０ｐＭ～約８０ｐＭ、約３０ｐＭ～約７０ｐＭ、約３０ｐＭ～約６０ｐＭ、約３０ｐＭ～約５０ｐＭ、約３０ｐＭ～約４０ｐＭ、約４０ｐＭ～約３０ｎＭ、約４０ｐＭ～約２５ｎＭ、約４０ｐＭ～約３０ｎＭ、約４０ｐＭ～約１５ｎＭ、約４０ｐＭ～約１０ｎＭ、約４０ｐＭ～約５ｎＭ、約４０ｐＭ～約２ｎＭ、約４０ｐＭ～約１ｎＭ、約４０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約９００ｐＭ、約４０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約８００ｐＭ、約４０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約７００ｐＭ、約４０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約６００ｐＭ、約４０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約５００ｐＭ、約４０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約４００ｐＭ、約４０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約３００ｐＭ、約４０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約２００ｐＭ、約４０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約４０ｐＭ～約１００ｐＭ、約４０ｐＭ～約９０ｐＭ、約４０ｐＭ～約８０ｐＭ、約４０ｐＭ～約７０ｐＭ、約４０ｐＭ～約６０ｐＭ、約４０ｐＭ～約５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約３０ｎＭ、約５０ｐＭ～約２５ｎＭ、約５０ｐＭ～約３０ｎＭ、約５０ｐＭ～約１５ｎＭ、約５０ｐＭ～約１０ｎＭ、約５０ｐＭ～約５ｎＭ、約５０ｐＭ～約２ｎＭ、約５０ｐＭ～約１ｎＭ、約５０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約９００ｐＭ、約５０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約５０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約７００ｐＭ、約５０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約５０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約５０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約２００ｐＭ、約５０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約１００ｐＭ、約５０ｐＭ～約９０ｐＭ、約５０ｐＭ～約８０ｐＭ、約５０ｐＭ～約７０ｐＭ、約５０ｐＭ～約６０ｐＭ、約６０ｐＭ～約３０ｎＭ、約６０ｐＭ～約２５ｎＭ、約６０ｐＭ～約３０ｎＭ、約６０ｐＭ～約１５ｎＭ、約６０ｐＭ～約１０ｎＭ、約６０ｐＭ～約５ｎＭ、約６０ｐＭ～約２ｎＭ、約６０ｐＭ～約１ｎＭ、約６０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約９００ｐＭ、約６０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約８００ｐＭ、約６０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約７００ｐＭ、約６０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約６００ｐＭ、約６０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約５００ｐＭ、約６０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約４００ｐＭ、約６０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約３００ｐＭ、約６０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約２００ｐＭ、約６０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約６０ｐＭ～約１００ｐＭ、約６０ｐＭ～約９０ｐＭ、約６０ｐＭ～約８０ｐＭ、約６０ｐＭ～約７０ｐＭ、約７０ｐＭ～約３０ｎＭ、約７０ｐＭ～約２５ｎＭ、約７０ｐＭ～約３０ｎＭ、約７０ｐＭ～約１５ｎＭ、約７０ｐＭ～約１０ｎＭ、約７０ｐＭ～約５ｎＭ、約７０ｐＭ～約２ｎＭ、約７０ｐＭ～約１ｎＭ、約７０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約９００ｐＭ、約７０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約８００ｐＭ、約７０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約７００ｐＭ、約７０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約６００ｐＭ、約７０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約５００ｐＭ、約７０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約４００ｐＭ、約７０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約３００ｐＭ、約７０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約２００ｐＭ、約７０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約７０ｐＭ～約１００ｐＭ、約７０ｐＭ～約９０ｐＭ、約７０ｐＭ～約８０ｐＭ、約８０ｐＭ～約３０ｎＭ、約８０ｐＭ～約２５ｎＭ、約８０ｐＭ～約３０ｎＭ、約８０ｐＭ～約１５ｎＭ、約８０ｐＭ～約１０ｎＭ、約８０ｐＭ～約５ｎＭ、約８０ｐＭ～約２ｎＭ、約８０ｐＭ～約１ｎＭ、約８０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約９００ｐＭ、約８０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約８００ｐＭ、約８０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約７００ｐＭ、約８０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約６００ｐＭ、約８０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約５００ｐＭ、約８０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約４００ｐＭ、約８０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約３００ｐＭ、約８０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約２００ｐＭ、約８０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約８０ｐＭ～約１００ｐＭ、約８０ｐＭ～約９０ｐＭ、約９０ｐＭ～約３０ｎＭ、約９０ｐＭ～約２５ｎＭ、約９０ｐＭ～約３０ｎＭ、約９０ｐＭ～約１５ｎＭ、約９０ｐＭ～約１０ｎＭ、約９０ｐＭ～約５ｎＭ、約９０ｐＭ～約２ｎＭ、約９０ｐＭ～約１ｎＭ、約９０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約９００ｐＭ、約９０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約８００ｐＭ、約９０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約７００ｐＭ、約９０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約６００ｐＭ、約９０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約５００ｐＭ、約９０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約４００ｐＭ、約９０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約３００ｐＭ、約９０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約２００ｐＭ、約９０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約９０ｐＭ～約１００ｐＭ、約１００ｐＭ～約３０ｎＭ、約１００ｐＭ～約２５
ｎＭ、約１００ｐＭ～約３０ｎＭ、約１００ｐＭ～約１５ｎＭ、約１００ｐＭ～約１０ｎＭ、約１００ｐＭ～約５ｎＭ、約１００ｐＭ～約２ｎＭ、約１００ｐＭ～約１ｎＭ、約１００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約９００ｐＭ、約１００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約８００ｐＭ、約１００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約７００ｐＭ、約１００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約６００ｐＭ、約１００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約５００ｐＭ、約１００ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約４００ｐＭ、約１００ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約３００ｐＭ、約１００ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約２００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３０ｎＭ、約１５０ｐＭ～約２５ｎＭ、約１５０ｐＭ～約３０ｎＭ、約１５０ｐＭ～約１５ｎＭ、約１５０ｐＭ～約１０ｎＭ、約１５０ｐＭ～約５ｎＭ、約１５０ｐＭ～約２ｎＭ、約１５０ｐＭ～約１ｎＭ、約１５０ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約８５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約７５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約７００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約６５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約５５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２００ｐＭ、約２００ｐＭ～約３０ｎＭ、約２００ｐＭ～約２５ｎＭ、約２００ｐＭ～約３０ｎＭ、約２００ｐＭ～約１５ｎＭ、約２００ｐＭ～約１０ｎＭ、約２００ｐＭ～約５ｎＭ、約２００ｐＭ～約２ｎＭ、約２００ｐＭ～約１ｎＭ、約２００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約９００ｐＭ、約２００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約８００ｐＭ、約２００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約７００ｐＭ、約２００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約６００ｐＭ、約２００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約５００ｐＭ、約２００ｐＭ～約４５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約４００ｐＭ、約２００ｐＭ～約３５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約３００ｐＭ、約２００ｐＭ～約２５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約３０ｎＭ、約３００ｐＭ～約２５ｎＭ、約３００ｐＭ～約３０ｎＭ、約３００ｐＭ～約１５ｎＭ、約３００ｐＭ～約１０ｎＭ、約３００ｐＭ～約５ｎＭ、約３００ｐＭ～約２ｎＭ、約３００ｐＭ～約１ｎＭ、約３００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約９００ｐＭ、約３００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約８００ｐＭ、約３００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約７００ｐＭ、約３００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約６００ｐＭ、約３００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約５００ｐＭ、約３００ｐＭ～約４５０ｐＭ、約３００ｐＭ～約４００ｐＭ、約３００ｐＭ～約３５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約３０ｎＭ、約４００ｐＭ～約２５ｎＭ、約４００ｐＭ～約３０ｎＭ、約４００ｐＭ～約１５ｎＭ、約４００ｐＭ～約１０ｎＭ、約４００ｐＭ～約５ｎＭ、約４００ｐＭ～約２ｎＭ、約４００ｐＭ～約１ｎＭ、約４００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約９００ｐＭ、約４００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約８００ｐＭ、約４００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約７００ｐＭ、約４００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約６００ｐＭ、約４００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約４００ｐＭ～約５００ｐＭ、約５００ｐＭ～約３０ｎＭ、約５００ｐＭ～約２５ｎＭ、約５００ｐＭ～約３０ｎＭ、約５００ｐＭ～約１５ｎＭ、約５００ｐＭ～約１０ｎＭ、約５００ｐＭ～約５ｎＭ、約５００ｐＭ～約２ｎＭ、約５００ｐＭ～約１ｎＭ、約５００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約５００ｐＭ～約９００ｐＭ、約５００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約５００ｐＭ～約８００ｐＭ、約５００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約５００ｐＭ～約７００ｐＭ、約５００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約５００ｐＭ～約６００ｐＭ、約５００ｐＭ～約５５０ｐＭ、約６００ｐＭ～約３０ｎＭ、約６００ｐＭ～約２５ｎＭ、約６００ｐＭ～約３０ｎＭ、約６００ｐＭ～約１５ｎＭ、約６００ｐＭ～約１０ｎＭ、約６００ｐＭ～約５ｎＭ、約６００ｐＭ～約２ｎＭ、約６００ｐＭ～約１ｎＭ、約６００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約６００ｐＭ～約９００ｐＭ、約６００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約６００ｐＭ～約８００ｐＭ、約６００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約６００ｐＭ～約７００ｐＭ、約６００ｐＭ～約６５０ｐＭ、約７００ｐＭ～約３０ｎＭ、約７００ｐＭ～約２５ｎＭ、約７００ｐＭ～約３０ｎＭ、約７００ｐＭ～約１５ｎＭ、約７００ｐＭ～約１０ｎＭ、約７００ｐＭ～約５ｎＭ、約７００ｐＭ～約２ｎＭ、約７００ｐＭ～約１ｎＭ、約７００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約７００ｐＭ～約９００ｐＭ、約７００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約７００ｐＭ～約８００ｐＭ、約７００ｐＭ～約７５０ｐＭ、約８００ｐＭ～約３０ｎＭ、約８００ｐＭ～約２５ｎＭ、約８００ｐＭ～約３０ｎＭ、約８００ｐＭ～約１５ｎＭ、約８００ｐＭ～約１０ｎＭ、約８００ｐＭ～約５ｎＭ、約８００ｐＭ～約２ｎＭ、約８００ｐＭ～約１ｎＭ、約８００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約８００ｐＭ～約９００ｐＭ、約８００ｐＭ～約８５０ｐＭ、約９００ｐＭ～約３０ｎＭ、約９００ｐＭ～約２５ｎＭ、約９００ｐＭ～約３０ｎＭ、約９００ｐＭ～約１５ｎＭ、約９００ｐＭ～約１０ｎＭ、約９００ｐＭ～約５ｎＭ、約９００ｐＭ～約２ｎＭ、約９００ｐＭ～約１ｎＭ、約９００ｐＭ～約９５０ｐＭ、約１ｎＭ～約３０ｎＭ、約１ｎＭ～約２５ｎＭ、約１ｎＭ～約２０ｎＭ、約１ｎＭ～約１５ｎＭ、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約１ｎＭ～約５ｎＭ、約２ｎＭ～約３０ｎＭ、約２ｎＭ～約２５ｎＭ、約２ｎＭ～約２０ｎＭ、約２ｎＭ～約１５ｎＭ、約２ｎＭ～約１０ｎＭ、約２ｎＭ～約５ｎＭ、約４ｎＭ～約３０ｎＭ、約４ｎＭ～約２５ｎＭ、約４ｎＭ～約２０ｎＭ、約４ｎＭ～約１５ｎＭ、約４ｎＭ～約１０ｎＭ、約４ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約３０ｎＭ、約５ｎＭ～約２５ｎＭ、約５ｎＭ～約２０ｎＭ、約５ｎＭ～約１５ｎＭ、約５ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～約３０ｎＭ、約１０ｎＭ～約２５ｎＭ、約１０ｎＭ～約２０ｎＭ、約１０ｎＭ～約１５ｎＭ、約１５ｎＭ～約３０ｎＭ、約１５ｎＭ～約２５ｎＭ、約１５ｎＭ～約２０ｎＭ、約２０ｎＭ～約３０ｎＭ、および約２０ｎＭ～約２５ｎＭ）のＫ_Ｄでその標的に結合することができる。

【0075】

本明細書に記載の標的結合ドメインのうちのいずれも、約１ｎＭ～約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ～約９ｎＭ、約１ｎＭ～約８ｎＭ、約１ｎＭ～約７ｎＭ、約１ｎＭ～約６ｎＭ、約１ｎＭ～約５ｎＭ、約１ｎＭ～約４ｎＭ、約１ｎＭ～約３ｎＭ、約１ｎＭ～約２ｎＭ、約２ｎＭ～約１０ｎＭ、約２ｎＭ～約９ｎＭ、約２ｎＭ～約８ｎＭ、約２ｎＭ～約７ｎＭ、約２ｎＭ～約６ｎＭ、約２ｎＭ～約５ｎＭ、約２ｎＭ～約４ｎＭ、約２ｎＭ～約３ｎＭ、約３ｎＭ～約１０ｎＭ、約３ｎＭ～約９ｎＭ、約３ｎＭ～約８ｎＭ、約３ｎＭ～約７ｎＭ、約３ｎＭ～約６ｎＭ、約３ｎＭ～約５ｎＭ、約３ｎＭ～約４ｎＭ、約４ｎＭ～約１０ｎＭ、約４ｎＭ～約９ｎＭ、約４ｎＭ～約８ｎＭ、約４ｎＭ～約７ｎＭ、約４ｎＭ～約６ｎＭ、約４ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約１０ｎＭ、約５ｎＭ～約９ｎＭ、約５ｎＭ～約８ｎＭ、約５ｎＭ～約７ｎＭ、約５ｎＭ～約６ｎＭ、約６ｎＭ～約１０ｎＭ、約６ｎＭ～約９ｎＭ、約６ｎＭ～約８ｎＭ、約６ｎＭ～約７ｎＭ、約７ｎＭ～約１０ｎＭ、約７ｎＭ～約９ｎＭ、約７ｎＭ～約８ｎＭ、約８ｎＭ～約１０ｎＭ、約８ｎＭ～約９ｎＭ、および約９ｎＭ～約１０ｎＭ）のＫ_Ｄでその標的に結合することができる。

【0076】

当該技術分野で既知の様々な異なる方法を使用して、本明細書に記載の抗原結合タンパク質構築物のうちのいずれのＫ_Ｄ値も決定することができる（例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、フィルター結合アッセイ、表面プラズモン共鳴、および生体分子結合反応速度アッセイ等）。

【0077】

抗原結合ドメイン
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、同じ抗原に特異的に結合する。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、同じエピトープに特異的に結合する。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。

【0078】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、異なる抗原に特異的に結合する。

【0079】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方は、抗原結合ドメインである。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、各々、抗原結合ドメインである。

【0080】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖもしくは単一ドメイン抗体（例えば、Ｖ_ＨＨまたはＶ_ＮＡＲドメイン）を含むか、またはそれらである。

【0081】

いくつかの例では、抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗原結合ドメインのうちのいずれか）は、ＣＤ１６ａ（例えば、米国特許第９，０３５，０２６号に記載のものを参照）、ＣＤ２８（例えば、米国特許第７，７２３，４８２号に記載のものを参照）、ＣＤ３（例えば、米国特許第９，２２６，９６２号に記載のものを参照）、ＣＤ３３（例えば、米国特許第８，７５９，４９４号に記載のものを参照）、ＣＤ２０（例えば、ＷＯ２０１４／０２６０５４に記載のものを参照）、ＣＤ１９（例えば、米国特許第９，７０１，７５８号に記載のものを参照）、ＣＤ２２（例えば、ＷＯ２００３／１０４４２５に記載のものを参照）、ＣＤ１２３（例えば、ＷＯ２０１４／１３０６３５に記載のものを参照）、ＩＬ－１Ｒ（例えば、米国特許第８，７４１，６０４号に記載のものを参照）、ＩＬ－１（例えば、ＷＯ２０１４／０９５８０８に記載のものを参照）、ＶＥＧＦ（例えば、米国特許第９，０９０，６８４号に記載のものを参照）、ＩＬ－６Ｒ（例えば、米国特許第７，４８２，４３６号に記載のものを参照）、ＩＬ－４（例えば、米国特許出願公開第２０１２／０１７１１９７号に記載のものを参照）、ＩＬ－１０（例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３４０４１３号に記載のものを参照）、ＰＤＬ－１（例えば、Ｄｒｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ．Ｐｕｒｉｆ．９４：６０－６６，２０１４に記載のものを参照）、ＴＩＧＩＴ（例えば、米国特許出願公開第２０１７／０１９８０４２号に記載のものを参照）、ＰＤ－１（例えば、米国特許第７，４８８，８０２号に記載のものを参照）、ＴＩＭ３（例えば、米国特許第８，５５２，１５６号に記載のものを参照）、ＣＴＬＡ４（例えば、ＷＯ２０１２／１２０１２５に記載のものを参照）、ＭＩＣＡ（例えば、ＷＯ２０１６／１５４５８５に記載のものを参照）、ＭＩＣＢ（例えば、米国特許第８，７５３，６４０号に記載のものを参照）、ＩＬ－６（例えば、Ｇｅｊｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ １１（４）：１２１－１２９，２００２に記載のものを参照）、ＩＬ－８（例えば、米国特許第６，１１７，９８０号に記載のものを参照）、ＴＮＦα（例えば、Ｇｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．６２（３）：３７７－３８５，２０１５に記載のものを参照）、ＣＤ２６ａ（例えば、ＷＯ２０１７／１８９５２６に記載のものを参照）、ＣＤ３６（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２９号に記載のものを参照）、ＵＬＢＰ２（例えば、米国特許第９，２７３，１３６号に記載のものを参照）、ＣＤ３０（例えば、Ｈｏｍａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４８（５）：４９７－５０１，１９９８に記載のものを参照）、ＣＤ２００（例えば、米国特許第９，０８５，６２３号に記載のものを参照）、ＩＧＦ－１Ｒ（例えば、米国特許出願公開第２０１７／００５１０６３号に記載のものを参照）、ＭＵＣ４ＡＣ（例えば、ＷＯ２０１２／１７０４７０に記載のものを参照）、ＭＵＣ５ＡＣ（例えば、米国特許第９，２３８，０８４号に記載のものを参照）、Ｔｒｏｐ－２（例えば、ＷＯ２０１３／０６８９４６に記載のものを参照）、ＣＭＥＴ（例えば、Ｅｄｗａｒｄｒａｊａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．１０６（３）：３６７－３７５，２０１０に記載のものを参照）、ＥＧＦＲ（例えば、Ａｋｂａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．１２７：８－１５，２０１６に記載のものを参照）、ＨＥＲ１（例えば、米国特許出願公開第２０１３／０２７４４４６号に記載のものを参照）、ＨＥＲ２（例えば、Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３７（７）：１３４７－１３５４，２０１５に記載のものを参照）、ＨＥＲ３（例えば、米国特許第９，５０５，８４３号に記載のものを参照）、ＰＳＭＡ（例えば、Ｐａｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．８９（２）：１３６－１４５，２０１３に記載のものを参照）、ＣＥＡ（例えば、ＷＯ１９９５／０１５３４１に記載のものを参照）、Ｂ７Ｈ３（例えば、米国特許第９，３７１，３９５号に記載のものを参照）、ＥＰＣＡＭ（例えば、ＷＯ２０１４／１５９５３１に記載のものを参照）、ＢＣＭＡ（例えば、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２６（６）：１４４７－１４５６，２０１８に記載のものを参照）、Ｐ－ｃａｄｈｅｒｉｎ（例えば、米国特許第７，４５２，５３７号に記載のものを参照）、ＣＥＡＣＡＭ５（例えば、米国特許第９，６１７，３４５号に記載のものを参照）、ＵＬ１６結合タンパク質（例えば、ＷＯ２０１７／０８３６１２に記載のものを参照）、ＨＬＡ－ＤＲ（例えば、Ｐｉｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ．１４（２）：１２３－１３０，１９９７を参照）、ＤＬＬ４（例えば、ＷＯ２０１４／００７５１３に記載のものを参照）、ＴＹＲＯ３（例えば、ＷＯ２０１６／１６６３４８に記載のものを参照）、ＡＸＬ（例えば、ＷＯ２０１２／１７５６９２に記載のものを参照）、ＭＥＲ（例えば、ＷＯ２０１６／１０６２２１に記載のものを参照）、ＣＤ１２２（例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３６７６６４号に記載のものを参照）、ＣＤ１５５（例えば、ＷＯ２０１７／１４９５３８に記載のものを参照）、またはＰＤＧＦＤＤ（例えば、米国特許第９，４４１，０３４号に記載のものを参照）のうちのいずれか１つに特異的に結合することができる。

【0082】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかに存在する抗原結合ドメインは、各々独立して、ＶＨＨドメイン、ＶＮＡＲドメイン、およびｓｃＦｖからなる群から選択される。

【0083】

いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および／または１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つ以上は、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖであり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１６）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む重鎖可変ドメイン、および／またはＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲ（配列番号１７）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む軽鎖可変ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（例えば、本明細書に記載のｓｃＦｖのうちのいずれか）は、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、ＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＡＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＡＣＴＣＧＣＴＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＴＣＡＣＣＣＧＧＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＣＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＴＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＴＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＧＧＴＡＣＴＡＣＧＡＣＧＡＴＣＡＴＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＡＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣ（配列番号１８）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる重鎖可変ドメイン、および／またはＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＴＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＡＴＧＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＴＣＣＧＴＧＡＧＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＴＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＴＡＡＴＣＧＴ（配列番号１９）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる軽鎖可変ドメインを含み得る。

【0084】

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２０）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、配列番号２０に存在する６つのＣＤＲを含み得る。

【0085】

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、ＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＴＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＡＴＧＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＴＣＣＧＴＧＡＧＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＴＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＴＡＡＴＣＧＴＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＴＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＡＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＡＣＴＣＧＣＴＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＴＣＡＣＣＣＧＧＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＣＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＴＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＴＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＧＧＴＡＣＴＡＣＧＡＣＧＡＴＣＡＴＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＡＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣ（配列番号２１）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である核酸配列によってコードされる配列を含み得る。

【0086】

いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および／または１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つ以上は、抗ＣＤ２８ ｓｃＦｖであり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ ｓｃＦｖは、ＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ（配列番号２２）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む重鎖可変ドメイン、および／またはＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２３）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む軽鎖可変ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ ｓｃＦｖは、ＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＡＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＴＡＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＴＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣＧＴＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＡＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＣＡＡＧＣＧＧ（配列番号２４）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる重鎖可変ドメイン、および／またはＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＧＧＴＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＴＡＣＧＴＣＡＴＣＣＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＴＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＴＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＴＡＡＣＧＡＡＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＴＴＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＴＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＴＴＡＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧＡＴＧＧＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＣＣ（配列番号２５）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる軽鎖可変ドメインを含み得る。

【0087】

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ ｓｃＦｖは、ＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ（配列番号２６）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ ｓｃＦｖは、配列番号２６に存在する６つのＣＤＲを含み得る。

【0088】

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ ｓｃＦｖは、ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＧＧＴＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＴＡＣＧＴＣＡＴＣＣＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＴＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＴＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＴＡＡＣＧＡＡＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＴＴＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＴＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＴＴＡＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧＡＴＧＧＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＡＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＴＡＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＴＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣＧＴＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＡＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＣＡＡＧＣＧＧ（配列番号２７）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である核酸配列によってコードされる配列を含み得る。

【0089】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗原結合ドメインのうちのいずれかは、ＢｉＴｅ、（ｓｃＦｖ）_２、ナノボディ、ナノボディ－ＨＳＡ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ－ＣＨ３、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、ＨＳＡｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ－ＨＡＳ、またはタンデム－ｓｃＦｖである。単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかで使用され得る抗原結合ドメインの追加の例は、当該技術分野で既知である。

【0090】

ＶＨＨドメインは、ラクダ科動物に見られ得る単一単量体可変抗体ドメインである。Ｖ_ＮＡＲドメインは、軟骨魚に見られ得る単一単量体可変抗体ドメインである。ＶＨＨドメインおよびＶ_ＮＡＲドメインの非限定的な態様は、例えば、Ｃｒｏｍｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１５：２５４３－２５５７，２０１６、Ｄｅ Ｇｅｎｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１８７－１９８，２００６、Ｄｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：２６３－２７０，２０１４、Ｋｉｊａｎｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ１０：１６１－１７４，２０１５、Ｋｏｖａｌｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．１４：１５２７－１５３９，２０１４、Ｋｒａｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．３８：２１－２８，２０１６、Ｍｕｊｉｃ－Ｄｅｌｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３５：２４７－２５５，２０１４、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７－３０２，２００１、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０－２３５，２００１、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８２：７７５－７９７，２０１３、Ｒａｈｂａｒｉｚａｄｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．４０：２９９－３３８，２０１１、Ｖａｎ Ａｕｄｅｎｈｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ８：４０－４８，２０１６、Ｖａｎ Ｂｏｃｋｓｔａｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ １０：１２１２－１２２４，２００９、Ｖｉｎｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９１１：１５－２６，２０１２、およびＷｅｓｏｌｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８：１５７－１７４，２００９に記載されている。

【0091】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチド内の抗原結合ドメインの各々は、両方がＶＨＨドメインであるか、または少なくとも１つの抗原結合ドメインがＶＨＨドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチド内の抗原結合ドメインの各々は、両方がＶＮＡＲドメインであるか、または少なくとも１つの抗原結合ドメインがＶＮＡＲドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチド内の抗原結合ドメインの各々は、両方がｓｃＦｖドメインであるか、または少なくとも１つの抗原結合ドメインがｓｃＦｖドメインである。ＤＡＲＴは、例えば、Ｇａｒｂｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １３：７９９－８０１，２０１４に記載されている。

【0092】

本明細書に記載の抗原結合ドメインのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、タンパク質、炭水化物、脂質、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される抗原に結合することができる。

【0093】

抗原結合ドメインの追加の例および態様は、当該技術分野で既知である。

【0094】

可溶性インターロイキンまたはサイトカインタンパク質
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方は、可溶性インターロイキンタンパク質、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、可溶性インターロイキンまたは可溶性サイトカインタンパク質は、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＳＣＦ、およびＦＬＴ３Ｌの群から選択される。可溶性ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＳＣＦ、およびＦＬＴ３Ｌの非限定的な例を以下に提供する。

ヒト可溶性ＩＬ－２（配列番号２８）
ａｐｔｓｓｓｔｋｋｔ ｑｌｑｌｅｈｌｌｌｄ ｌｑｍｉｌｎｇｉｎｎ ｙｋｎｐｋｌｔｒｍｌ ｔｆｋｆｙｍｐｋｋａ ｔｅｌｋｈｌｑｃｌｅ ｅｅｌｋｐｌｅｅｖｌ ｎｌａｑｓｋｎｆｈｌ ｒｐｒｄｌｉｓｎｉｎ ｖｉｖｌｅｌｋｇｓｅ ｔｔｆｍｃｅｙａｄｅ ｔａｔｉｖｅｆｌｎｒ ｗｉｔｆｃｑｓｉｉｓ ｔｌｔ

ヒト可溶性ＩＬ－３（配列番号２９）
ａｐｍｔｑｔｔｐｌｋｔ ｓｗｖｎｃｓｎｍｉｄ ｅｉｉｔｈｌｋｑｐｐ ｌｐｌｌｄｆｎｎｌｎ ｇｅｄｑｄｉｌｍｅｎ ｎｌｒｒｐｎｌｅａｆ ｎｒａｖｋｓｌｑｎａ ｓａｉｅｓｉｌｋｎｌ ｌｐｃｌｐｌａｔａａ ｐｔｒｈｐｉｈｉｋｄ ｇｄｗｎｅｆｒｒｋｌ ｔｆｙｌｋｔｌｅｎａ ｑａｑｑｔｔｌｓｌａ ｉｆ

ヒト可溶性ＩＬ－７（配列番号３０）
ｄｃｄｉｅｇｋｄｇｋｑｙｅｓｖ ｌｍｖｓｉｄｑｌｌｄ ｓｍｋｅｉｇｓｎｃｌ ｎｎｅｆｎｆｆｋｒｈ ｉｃｄａｎｋｅｇｍｆ ｌｆｒａａｒｋｌｒｑ ｆｌｋｍｎｓｔｇｄｆ ｄｌｈｌｌｋｖｓｅｇ ｔｔｉｌｌｎｃｔｇｑ ｖｋｇｒｋｐａａｌｇ ｅａｑｐｔｋｓｌｅｅ ｎｋｓｌｋｅｑｋｋｌ ｎｄｌｃｆｌｋｒｌｌ ｑｅｉｋｔｃｗｎｋｉ ｌｍｇｔｋｅｈ

ヒト可溶性ＩＬ－８（配列番号３１）
ｅｇａｖｌｐｒｓａｋ ｅｌｒｃｑｃｉｋｔｙ ｓｋｐｆｈｐｋｆｉｋ ｅｌｒｖｉｅｓｇｐｈ ｃａｎｔｅｉｉｖｋｌ ｓｄｇｒｅｌｃｌｄｐ ｋｅｎｗｖｑｒｖｖｅ ｋｆｌｋｒａｅｎｓ

ヒト可溶性ＩＬ－１０（配列番号３２）
ｓｐｇｑｇｔｑｓｅｎｓｃ ｔｈｆｐｇｎｌｐｎｍ ｌｒｄｌｒｄａｆｓｒ ｖｋｔｆｆｑｍｋｄｑ ｌｄｎｌｌｌｋｅｓｌ ｌｅｄｆｋｇｙｌｇｃ ｑａｌｓｅｍｉｑｆｙ ｌｅｅｖｍｐｑａｅｎ ｑｄｐｄｉｋａｈｖｎ ｓｌｇｅｎｌｋｔｌｒ ｌｒｌｒｒｃｈｒｆｌ ｐｃｅｎｋｓｋａｖｅ ｑｖｋｎａｆｎｋｌｑ ｅｋｇｉｙｋａｍｓｅ ｆｄｉｆｉｎｙｉｅａ ｙｍｔｍｋｉｒｎ

ヒト可溶性ＩＬ－１２β（ｐ４０）（配列番号３３）
ＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳ

ヒト可溶性ＩＬ－１２β（ｐ４０）をコードする核酸（配列番号３４）
ＡＴＴＴＧＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＡＡＧＧＡＣＧＴＣＴＡＣＧＴＧＧＴＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡＴＣＣＣＧＡＴＧＣＴＣＣＣＧＧＣＧＡＡＡＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＣＡＣＴＴＧＴＧＡＣＡＣＣＣＣＣＧＡＡＧＡＡＧＡＣＧＧＣＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＣＣＣＴＣＧＡＴＣＡＧＡＧＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＡＧＡＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＡＡＧＴＴＡＡＧＧＡＧＴＴＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＧＧＣＣＡＡＴＡＣＡＣＡＴＧＣＣＡＣＡＡＧＧＧＡＧＧＣＧＡＧＧＴＧＣＴＣＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＴＡＴＴＡＴＴＡＴＴＡＣＡＣＡＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＣＧＧＡＡＴＣＴＧＧＴＣＣＡＣＣＧＡＣＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＡＧＡＡＧＧＡＧＣＣＣＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＡＡＧＧＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＡＣＡＧＣＧＧＴＣＧＴＴＴＣＡＣＴＴＧＴＴＧＧＴＧＧＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＣＣＧＡＴＴＴＡＡＣＣＴＴＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＧＧＧＧＡＡＧＣＴＣＣＧＡＣＣＣＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＴＣＡＧＣＧＣＴＧＡＧＡＧＧＧＴＴＣＧＴＧＧＣＧＡＴＡＡＣＡＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＴＡＧＣＧＣＴＴＧＴＣＣＣＧＣＴＧＣＣＧＡＡＧＡＡＴＣＴＴＴＡＣＣＣＡＴＴＧＡＧＧＴＧＡＴＧＧＴＧＧＡＣＧＣＣＧＴＧＣＡＣＡＡＡＣＴＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＴＡＡＧＣＣＣＧＡＴＣＣＴＣＣＴＡＡＧＡＡＴＴＴＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＴＣＴＣＡＡＡＡＡＴＡＧＣＣＧＧＣＡＡＧＴＴＧＡＧＧＴＣＴＣＴＴＧＧＧＡＡＴＡＴＣＣＣＧＡＣＡＣＴＴＧＧＡＧＣＡＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＴＴＧＴＧＴＧＣＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＴＡＡＡＡＧＣＡＡＧＣＧＧＧＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＣＣＧＡＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＧＴＣＡＴＣＴＧＴＣＧＧＡＡＧＡＡＣＧＣＣＴＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＧＧＧＣＴＣＡＡＧＡＴＣＧＴＴＡＴＴＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＣＧＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＣＧＴＧＣＣＴＴＧＴＴＣＣ

ヒト可溶性ＩＬ－１２α（ｐ３５）（配列番号３５）
ＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ

ヒト可溶性ＩＬ－１２α（ｐ３５）をコードする核酸（配列番号３６）
ＣＧＴＡＡＣＣＴＣＣＣＣＧＴＧＧＣＴＡＣＣＣＣＣＧＡＴＣＣＣＧＧＡＡＴＧＴＴＣＣＣＴＴＧＴＴＴＡＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＡＧＡＡＴＴＴＡＣＴＧＡＧＧＧＣＣＧＴＧＡＧＣＡＡＣＡＴＧＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＣＴＡＧＧＣＡＧＡＣＴＴＴＡＧＡＡＴＴＴＴＡＣＣＣＴＴＧＣＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＧＣＴＴＧＴＴＴＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＧＡＧＴＣＴＴＧＴＣＴＣＡＡＣＴＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＴＣＡＣＡＡＡＴＧＧＣＴＣＴＴＧＴＴＴＡＧＣＴＴＣＣＣＧＧＡＡＧＡＣＣＴＣＣＴＴＴＡＴＧＡＴＧＧＣＴＴＴＡＴＧＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＡＴＣＴＡＣＧＡＧＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＴＧＴＡＣＣＡＡＧＴＧＧＡＧＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＴＧＡＡＣＧＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＡＡＡＣＧＧＣＡＧＡＴＣＴＴＴＴＴＡＧＡＣＣＡＧＡＡＣＡＴＧＣＴＧＧＣＴＧＴＧＡＴＴＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＡＡＧＣＴＴＴＡＡＡＣＴＴＣＡＡＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＧＴＣＣＣＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＣＣＣＴＣＧＡＧＧＡＧＣＣＣＧＡＴＴＴＴＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＴＣＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＴＴＴＴＡＣＴＣＣＡＣＧＣＣＴＴＴＡＧＧＡＴＣＣＧＧＧＣＣＧＴＧＡＣＣＡＴＴＧＡＣＣＧＧＧＴＣＡＴＧＡＧＣＴＡＴＴＴＡＡＡＣＧＣＣＡＧＣ

例示的なヒト可溶性ＩＬ－１２（配列番号３７）
ＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ

例示的なヒト可溶性ＩＬ－１２をコードする核酸（配列番号３８）
ＡＴＴＴＧＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＡＡＧＧＡＣＧＴＣＴＡＣＧＴＧＧＴＣＧＡＡＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡＴＣＣＣＧＡＴＧＣＴＣＣＣＧＧＣＧＡＡＡＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＣＡＣＴＴＧＴＧＡＣＡＣＣＣＣＣＧＡＡＧＡＡＧＡＣＧＧＣＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＣＣＣＴＣＧＡＴＣＡＧＡＧＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＡＧＡＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＡＡＧＴＴＡＡＧＧＡＧＴＴＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＧＧＣＣＡＡＴＡＣＡＣＡＴＧＣＣＡＣＡＡＧＧＧＡＧＧＣＧＡＧＧＴＧＣＴＣＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＴＡＴＴＡＴＴＡＴＴＡＣＡＣＡＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＣＧＧＡＡＴＣＴＧＧＴＣＣＡＣＣＧＡＣＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＡＧＡＡＧＧＡＧＣＣＣＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＡＡＧＧＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＡＣＡＧＣＧＧＴＣＧＴＴＴＣＡＣＴＴＧＴＴＧＧＴＧＧＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＣＣＧＡＴＴＴＡＡＣＣＴＴＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＧＧＧＧＡＡＧＣＴＣＣＧＡＣＣＣＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＧＡＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＴＣＡＧＣＧＣＴＧＡＧＡＧＧＧＴＴＣＧＴＧＧＣＧＡＴＡＡＣＡＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＴＡＧＣＧＣＴＴＧＴＣＣＣＧＣＴＧＣＣＧＡＡＧＡＡＴＣＴＴＴＡＣＣＣＡＴＴＧＡＧＧＴＧＡＴＧＧＴＧＧＡＣＧＣＣＧＴＧＣＡＣＡＡＡＣＴＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＴＡＡＧＣＣＣＧＡＴＣＣＴＣＣＴＡＡＧＡＡＴＴＴＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＴＣＴＣＡＡＡＡＡＴＡＧＣＣＧＧＣＡＡＧＴＴＧＡＧＧＴＣＴＣＴＴＧＧＧＡＡＴＡＴＣＣＣＧＡＣＡＣＴＴＧＧＡＧＣＡＣＡＣＣＣＣＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＴＴＧＴＧＴＧＣＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＴＡＡＡＡＧＣＡＡＧＣＧＧＧＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＣＣＧＡＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＧＴＣＡＴＣＴＧＴＣＧＧＡＡＧＡＡＣＧＣＣＴＣＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＧＧＧＣＴＣＡＡＧＡＴＣＧＴＴＡＴＴＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＣＧＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＣＧＴＧＣＣＴＴＧＴＴＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴＣＧＴＡＡＣＣＴＣＣＣＣＧＴＧＧＣＴＡＣＣＣＣＣＧＡＴＣＣＣＧＧＡＡＴＧＴＴＣＣＣＴＴＧＴＴＴＡＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＡＧＡＡＴＴＴＡＣＴＧＡＧＧＧＣＣＧＴＧＡＧＣＡＡＣＡＴＧＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＣＴＡＧＧＣＡＧＡＣＴＴＴＡＧＡＡＴＴＴＴＡＣＣＣＴＴＧＣＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＧＣＴＴＧＴＴＴＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＧＡＧＴＣＴＴＧＴＣＴＣＡＡＣＴＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＴＣＡＣＡＡＡＴＧＧＣＴＣＴＴＧＴＴＴＡＧＣＴＴＣＣＣＧＧＡＡＧＡＣＣＴＣＣＴＴＴＡＴＧＡＴＧＧＣＴＴＴＡＴＧＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＡＴＣＴＡＣＧＡＧＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＴＧＴＡＣＣＡＡＧＴＧＧＡＧＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＴＧＡＡＣＧＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＡＡＡＣＧＧＣＡＧＡＴＣＴＴＴＴＴＡＧＡＣＣＡＧＡＡＣＡＴＧＣＴＧＧＣＴＧＴＧＡＴＴＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＡＡＧＣＴＴＴＡＡＡＣＴＴＣＡＡＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＧＴＣＣＣＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＣＣＣＴＣＧＡＧＧＡＧＣＣＣＧＡＴＴＴＴＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＴＣＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＴＴＴＴＡＣＴＣＣＡＣＧＣＣＴＴＴＡＧＧＡＴＣＣＧＧＧＣＣＧＴＧＡＣＣＡＴＴＧＡＣＣＧＧＧＴＣＡＴＧＡＧＣＴＡＴＴＴＡＡＡＣＧＣＣＡＧＣ

ヒト可溶性ＩＬ－１５（配列番号３９）
Ｎｗｖｎｖｉｓｄｌｋｋｉ ｅｄｌｉｑｓｍｈｉｄ ａｔｌｙｔｅｓｄｖｈ ｐｓｃｋｖｔａｍｋｃ ｆｌｌｅｌｑｖｉｓｌ ｅｓｇｄａｓｉｈｄｔ ｖｅｎｌｉｉｌａｎｎ ｓｌｓｓｎｇｎｖｔｅ ｓｇｃｋｅｃｅｅｌｅ ｅｋｎｉｋｅｆｌｑｓ ｆｖｈｉｖｑｍｆｉｎ ｔｓ

ヒト可溶性ＩＬ－１７（配列番号４０）
ｇｉｔｉｐｒｎ ｐｇｃｐｎｓｅｄｋｎ ｆｐｒｔｖｍｖｎｌｎ ｉｈｎｒｎｔｎｔｎｐ ｋｒｓｓｄｙｙｎｒｓ ｔｓｐｗｎｌｈｒｎｅ ｄｐｅｒｙｐｓｖｉｗ ｅａｋｃｒｈｌｇｃｉ ｎａｄｇｎｖｄｙｈｍ ｎｓｖｐｉｑｑｅｉｌ ｖｌｒｒｅｐｐｈｃｐ ｎｓｆｒｌｅｋｉｌｖ ｓｖｇｃｔｃｖｔｐｉ ｖｈｈｖａ

ヒト可溶性ＩＬ－１８（配列番号４１）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ

ヒト可溶性ＩＬ－１８をコードする核酸（配列番号４２）
ＴＡＣＴＴＣＧＧＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＧＣＧＴＧＡＴＣＣＧＧＡＡＴＴＴＡＡＡＣＧＡＣＣＡＡＧＴＴＣＴＧＴＴＴＡＴＣＧＡＴＣＡＡＧＧＴＡＡＣＣＧＧＣＣＴＣＴＧＴＴＣＧＡＧＧＡＣＡＴＧＡＣＣＧＡＣＴＣＣＧＡＴＴＧＣＣＧＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＣＣＣＧＧＡＣＣＡＴＣＴＴＣＡＴＴＡＴＣＴＣＣＡＴＧＴＡＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣＣＣＧＧＧＧＣＡＴＧＧＣＴＧＴＧＡＣＡＡＴＴＡＧＣＧＴＧＡＡＧＴＧＴＧＡＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＣＴＴＴＡＴＣＴＴＧＴＧＡＧＡＡＣＡＡＧＡＴＣＡＴＣＴＣＣＴＴＴＡＡＧＧＡＡＡＴＧＡＡＣＣＣＣＣＣＣＧＡＴＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＣＡＧＣＧＧＴＣＣＧＴＧＣＣＣＧＧＴＣＡＣＧＡＴＡＡＣＡＡＧＡＴＧＣＡＧＴＴＣＧＡＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＧＡＧＧＧＣＴＡＣＴＴＴＴＴＡＧＣＴＴＧＴＧＡＡＡＡＧＧＡＧＡＧＧＧＡＴＴＴＡＴＴＣＡＡＧＣＴＧＡＴＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＴＣＧＴＴＣＣＡＴＣＡＴＧＴＴＣＡＣＣＧＴＣＣＡＡＡＡＣＧＡＧＧＡＴ

ヒト可溶性ＩＬ－２１（配列番号４３）
ＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ

ヒト可溶性ＩＬ－２１をコードする核酸（配列番号４４）
ＣＡＧＧＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＴＧＡＴＣＣＧＧＡＴＧＡＧＧＣＡＧＣＴＣＡＴＣＧＡＣＡＴＣＧＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＧＴＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＧＴＧＣＣＣＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＣＴＧＣＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＡＣＣＡＡＣＴＧＣＧＡＧＴＧＧＴＣＣＧＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＣＡＡＣＧＡＧＣＧＧＡＴＣＡＴＣＡＡＣＧＴＧＡＧＣＡＴＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＣＣＴＣＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＧＧＣＡＧＡＡＧＣＡＣＡＧＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＣＣＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＡＧＡＧＧＴＴＣＡＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＡＴＧＡＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＧＧＡＣＣＣＡＣＧＧＣＴＣＣＧＡＧＧＡＣＴＣＣ

ヒト可溶性ＰＤＧＦ－ＤＤ（配列番号４５）
ｒｄｔｓａｔｐｑｓａｓｉ ｋａｌｒｎａｎｌｒｒ ｄｅｓｎｈｌｔｄｌｙ ｒｒｄｅｔｉｑｖｋｇ ｎｇｙｖｑｓｐｒｆｐ ｎｓｙｐｒｎｌｌｌｔ ｗｒｌｈｓｑｅｎｔｒ ｉｑｌｖｆｄｎｑｆｇ ｌｅｅａｅｎｄｉｃｒ ｙｄｆｖｅｖｅｄｉｓ ｅｔｓｔｉｉｒｇｒｗ ｃｇｈｋｅｖｐｐｒｉ ｋｓｒｔｎｑｉｋｉｔ ｆｋｓｄｄｙｆｖａｋ ｐｇｆｋｉｙｙｓｌｌ ｅｄｆｑｐａａａｓｅ ｔｎｗｅｓｖｔｓｓｉ ｓｇｖｓｙｎｓｐｓｖ ｔｄｐｔｌｉａｄａｌ ｄｋｋｉａｅｆｄｔｖ ｅｄｌｌｋｙｆｎｐｅ ｓｗｑｅｄｌｅｎｍｙ ｌｄｔｐｒｙｒｇｒｓ ｙｈｄｒｋｓｋｖｄｌ ｄｒｌｎｄｄａｋｒｙ ｓｃｔｐｒｎｙｓｖｎ ｉｒｅｅｌｋｌａｎｖ ｖｆｆｐｒｃｌｌｖｑ ｒｃｇｇｎｃｇｃｇｔ ｖｎｗｒｓｃｔｃｎｓ ｇｋｔｖｋｋｙｈｅｖ ｌｑｆｅｐｇｈｉｋｒ ｒｇｒａｋｔｍａｌｖ ｄｉｑｌｄｈｈｅｒｃ ｄｃｉｃｓｓｒｐｐｒ

ヒト可溶性ＳＣＦ（配列番号４６）
ｅｇｉｃｒｎｒｖｔｎｎｖｋｄｖ ｔｋｌｖａｎｌｐｋｄ ｙｍｉｔｌｋｙｖｐｇ ｍｄｖｌｐｓｈｃｗｉ ｓｅｍｖｖｑｌｓｄｓ ｌｔｄｌｌｄｋｆｓｎ ｉｓｅｇｌｓｎｙｓｉ ｉｄｋｌｖｎｉｖｄｄ ｌｖｅｃｖｋｅｎｓｓ ｋｄｌｋｋｓｆｋｓｐ ｅｐｒｌｆｔｐｅｅｆ ｆｒｉｆｎｒｓｉｄａ ｆｋｄｆｖｖａｓｅｔ ｓｄｃｖｖｓｓｔｌｓ ｐｅｋｄｓｒｖｓｖｔ ｋｐｆｍｌｐｐｖａａ ｓｓｌｒｎｄｓｓｓｓ ｎｒｋａｋｎｐｐｇｄ ｓｓｌｈｗａａｍａｌ ｐａｌｆｓｌｉｉｇｆ ａｆｇａｌｙｗｋｋｒ ｑｐｓｌｔｒａｖｅｎ ｉｑｉｎｅｅｄｎｅｉ ｓｍｌｑｅｋｅｒｅｆ ｑｅｖ

ヒト可溶性ＦＬＴ３Ｌ（配列番号４７）
ｔｑｄｃｓｆｑｈｓｐｉｓｓｄ ｆａｖｋｉｒｅｌｓｄ ｙｌｌｑｄｙｐｖｔｖ ａｓｎｌｑｄｅｅｌｃ ｇｇｌｗｒｌｖｌａｑ ｒｗｍｅｒｌｋｔｖａ ｇｓｋｍｑｇｌｌｅｒ ｖｎｔｅｉｈｆｖｔｋ ｃａｆｑｐｐｐｓｃｌ ｒｆｖｑｔｎｉｓｒｌ ｌｑｅｔｓｅｑｌｖａ ｌｋｐｗｉｔｒｑｎｆ ｓｒｃｌｅｌｑｃｑｐ ｄｓｓｔｌｐｐｐｗｓ ｐｒｐｌｅａｔａｐｔ ａｐｑｐｐｌｌｌｌｌ ｌｌｐｖｇｌｌｌｌａ ａａｗｃｌｈｗｑｒｔ ｒｒｒｔｐｒｐｇｅｑ ｖｐｐｖｐｓｐｑｄｌ ｌｌｖｅｈ

【0095】

例示的な可溶性細胞表面タンパク質には、可溶性ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＰ１６結合タンパク質（例えば、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、またはＵＬＢＰ６）が挙げられる。可溶性ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６の例示的な配列を以下に列挙する。

ヒト可溶性ＭＩＣＡ（配列番号４８）
ｅｐｈｓｌｒｙ ｎｌｔｖｌｓｗｄｇｓ ｖｑｓｇｆｌｔｅｖｈ ｌｄｇｑｐｆｌｒｃｄ ｒｑｋｃｒａｋｐｑｇ ｑｗａｅｄｖｌｇｎｋ ｔｗｄｒｅｔｒｄｌｔ ｇｎｇｋｄｌｒｍｔｌ ａｈｉｋｄｑｋｅｇｌ ｈｓｌｑｅｉｒｖｃｅ ｉｈｅｄｎｓｔｒｓｓ ｑｈｆｙｙｄｇｅｌｆ ｌｓｑｎｌｅｔｋｅｗ ｔｍｐｑｓｓｒａｑｔ ｌａｍｎｖｒｎｆｌｋ ｅｄａｍｋｔｋｔｈｙ ｈａｍｈａｄｃｌｑｅ ｌｒｒｙｌｋｓｇｖｖ ｌｒｒｔｖｐｐｍｖｎ ｖｔｒｓｅａｓｅｇｎ ｉｔｖｔｃｒａｓｇｆ ｙｐｗｎｉｔｌｓｗｒ ｑｄｇｖｓｌｓｈｄｔ ｑｑｗｇｄｖｌｐｄｇ ｎｇｔｙｑｔｗｖａｔ ｒｉｃｑｇｅｅｑｒｆ ｔｃｙｍｅｈｓｇｎｈ ｓｔｈｐｖｐｓｇｋｖ ｌｖｌｑｓｈｗｑｔｆ ｈｖｓａｖａａａａｉ ｆｖｉｉｉｆｙｖｒｃ ｃｋｋｋｔｓａａｅｇ ｐｅｌｖｓｌｑｖｌｄ ｑｈｐｖｇｔｓｄｈｒ ｄａｔｑｌｇｆｑｐｌ ｍｓｄｌｇｓｔｇｓｔ ｅｇａ

ヒト可溶性ＭＩＣＢ（配列番号４９）
ａｅｐｈｓｌｒｙ ｎｌｍｖｌｓｑｄｅｓ ｖｑｓｇｆｌａｅｇｈ ｌｄｇｑｐｆｌｒｙｄ ｒｑｋｒｒａｋｐｑｇ ｑｗａｅｄｖｌｇａｋ ｔｗｄｔｅｔｅｄｌｔ ｅｎｇｑｄｌｒｒｔｌ ｔｈｉｋｄｑｋｇｇｌ ｈｓｌｑｅｉｒｖｃｅ ｉｈｅｄｓｓｔｒｇｓ ｒｈｆｙｙｄｇｅｌｆ ｌｓｑｎｌｅｔｑｅｓ ｔｖｐｑｓｓｒａｑｔ ｌａｍｎｖｔｎｆｗｋ ｅｄａｍｋｔｋｔｈｙ ｒａｍｑａｄｃｌｑｋ ｌｑｒｙｌｋｓｇｖａ ｉｒｒｔｖｐｐｍｖｎ ｖｔｃｓｅｖｓｅｇｎ ｉｔｖｔｃｒａｓｓｆ ｙｐｒｎｉｔｌｔｗｒ ｑｄｇｖｓｌｓｈｎｔ ｑｑｗｇｄｖｌｐｄｇ ｎｇｔｙｑｔｗｖａｔ ｒｉｒｑｇｅｅｑｒｆ ｔｃｙｍｅｈｓｇｎｈ ｇｔｈｐｖｐｓｇｋｖ ｌｖｌｑｓｑｒｔｄｆ ｐｙｖｓａａｍｐｃｆ ｖｉｉｉｉｌｃｖｐｃ ｃｋｋｋｔｓａａｅｇ ｐｅｌｖｓｌｑｖｌｄ ｑｈｐｖｇｔｇｄｈｒ ｄａａｑｌｇｆｑｐｌ ｍｓａｔｇｓｔｇｓｔ ｅｇａ

ヒト可溶性ＵＬＢＰ１（配列番号５０）
ｗｖｄｔｈｃｌｃｙｄｆｉｉｔ ｐｋｓｒｐｅｐｑｗｃ ｅｖｑｇｌｖｄｅｒｐ ｆｌｈｙｄｃｖｎｈｋ ａｋａｆａｓｌｇｋｋ ｖｎｖｔｋｔｗｅｅｑ ｔｅｔｌｒｄｖｖｄｆ ｌｋｇｑｌｌｄｉｑｖ ｅｎｌｉｐｉｅｐｌｔ ｌｑａｒｍｓｃｅｈｅ ａｈｇｈｇｒｇｓｗｑ ｆｌｆｎｇｑｋｆｌｌ ｆｄｓｎｎｒｋｗｔａ ｌｈｐｇａｋｋｍｔｅ ｋｗｅｋｎｒｄｖｔｍ ｆｆｑｋｉｓｌｇｄｃ ｋｍｗｌｅｅｆｌｍｙ ｗｅｑｍｌｄｐｔｋｐ ｐｓｌａｐｇ

ヒト可溶性ＵＬＢＰ２（配列番号５１）
ｇｒａｄｐｈｓｌｃｙｄｉｔｖｉ ｐｋｆｒｐｇｐｒｗｃ ａｖｑｇｑｖｄｅｋｔ ｆｌｈｙｄｃｇｎｋｔ ｖｔｐｖｓｐｌｇｋｋ ｌｎｖｔｔａｗｋａｑ ｎｐｖｌｒｅｖｖｄｉ ｌｔｅｑｌｒｄｉｑｌ ｅｎｙｔｐｋｅｐｌｔ ｌｑａｒｍｓｃｅｑｋ ａｅｇｈｓｓｇｓｗｑ ｆｓｆｄｇｑｉｆｌｌ ｆｄｓｅｋｒｍｗｔｔ ｖｈｐｇａｒｋｍｋｅ ｋｗｅｎｄｋｖｖａｍ ｓｆｈｙｆｓｍｇｄｃ ｉｇｗｌｅｄｆｌｍｇ ｍｄｓｔｌｅｐｓａｇ ａｐｌａｍｓ

ヒト可溶性ＵＬＢＰ３（配列番号５２）
ｄａｈｓｌｗｙｎｆｔｉ ｉｈｌｐｒｈｇｑｑｗ ｃｅｖｑｓｑｖｄｑｋ ｎｆｌｓｙｄｃｇｓｄ ｋｖｌｓｍｇｈｌｅｅ ｑｌｙａｔｄａｗｇｋ ｑｌｅｍｌｒｅｖｇｑ ｒｌｒｌｅｌａｄｔｅ ｌｅｄｆｔｐｓｇｐｌ ｔｌｑｖｒｍｓｃｅｃ ｅａｄｇｙｉｒｇｓｗ ｑｆｓｆｄｇｒｋｆｌ ｌｆｄｓｎｎｒｋｗｔ ｖｖｈａｇａｒｒｍｋ ｅｋｗｅｋｄｓｇｌｔ ｔｆｆｋｍｖｓｍｒｄ ｃｋｓｗｌｒｄｆｌｍ ｈｒｋｋｒｌｅｐｔａ ｐｐｔｍａｐｇ

ヒト可溶性ＵＬＢＰ４（配列番号５３）
ｈｓｌｃｆｎｆｔｉｋ ｓｌｓｒｐｇｑｐｗｃ ｅａｑｖｆｌｎｋｎｌ ｆｌｑｙｎｓｄｎｎｍ ｖｋｐｌｇｌｌｇｋｋ ｖｙａｔｓｔｗｇｅｌ ｔｑｔｌｇｅｖｇｒｄ ｌｒｍｌｌｃｄｉｋｐ ｑｉｋｔｓｄｐｓｔｌ ｑｖｅｍｆｃｑｒｅａ ｅｒｃｔｇａｓｗｑｆ ａｔｎｇｅｋｓｌｌｆ ｄａｍｎｍｔｗｔｖｉ ｎｈｅａｓｋｉｋｅｔ ｗｋｋｄｒｇｌｅｋｙ ｆｒｋｌｓｋｇｄｃｄ ｈｗｌｒｅｆｌｇｈｗ ｅａｍｐｅｐｔｖｓｐ ｖｎａｓｄｉｈｗｓｓ ｓｓｌｐｄｒｗｉｉｌ ｇａｆｉｌｌｖｌｍｇ ｉｖｌｉｃｖｗｗｑｎ ｇｅｗｑａｇｌｗｐｌ ｒｔｓ

ヒト可溶性ＵＬＢＰ５（配列番号５４）
ｇｌａｄｐ ｈｓｌｃｙｄｉｔｖｉ ｐｋｆｒｐｇｐｒｗｃ ａｖｑｇｑｖｄｅｋｔ ｆｌｈｙｄｃｇｓｋｔ ｖｔｐｖｓｐｌｇｋｋ ｌｎｖｔｔａｗｋａｑ ｎｐｖｌｒｅｖｖｄｉ ｌｔｅｑｌｌｄｉｑｌ ｅｎｙｉｐｋｅｐｌｔ ｌｑａｒｍｓｃｅｑｋ ａｅｇｈｇｓｇｓｗｑ ｌｓｆｄｇｑｉｆｌｌ ｆｄｓｅｎｒｍｗｔｔ ｖｈｐｇａｒｋｍｋｅ ｋｗｅｎｄｋｄｍｔｍ ｓｆｈｙｉｓｍｇｄｃ ｔｇｗｌｅｄｆｌｍｇ ｍｄｓｔｌｅｐｓａｇ ａｐｐｔｍｓｓｇ

ヒト可溶性ＵＬＢＰ６（配列番号５５）
ｒｒｄｄｐ ｈｓｌｃｙｄｉｔｖｉ ｐｋｆｒｐｇｐｒｗｃ ａｖｑｇｑｖｄｅｋｔ ｆｌｈｙｄｃｇｎｋｔ ｖｔｐｖｓｐｌｇｋｋ ｌｎｖｔｍａｗｋａｑ ｎｐｖｌｒｅｖｖｄｉ ｌｔｅｑｌｌｄｉｑｌ ｅｎｙｔｐｋｅｐｌｔ ｌｑａｒｍｓｃｅｑｋ ａｅｇｈｓｓｇｓｗｑ ｆｓｉｄｇｑｔｆｌｌ ｆｄｓｅｋｒｍｗｔｔ ｖｈｐｇａｒｋｍｋｅ ｋｗｅｎｄｋｄｖａｍ ｓｆｈｙｉｓｍｇｄｃ ｉｇｗｌｅｄｆｌｍｇ ｍｄｓｔｌｅｐｓａｇ ａｐｌａｍｓｓｇ

【0096】

いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１２タンパク質は、配列番号３３と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である第１の配列、および配列番号３５と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である第２の配列を含み得る。いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１２は、第１の配列と第２の配列との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含み得る。

【0097】

いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１２タンパク質は、配列番号３４と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である第１の配列をコードする第１の核酸、および配列番号３６と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である第２の配列をコードする第２の核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１２タンパク質をコードする核酸は、第１の核酸と第２の核酸との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。

【0098】

いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１２タンパク質は、配列番号３７と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１２タンパク質は、配列番号３８と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる。

【0099】

いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１８タンパク質は、配列番号４１と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－１８タンパク質は、配列番号４２と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる。

【0100】

いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－２１タンパク質は、配列番号４３と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ－２１タンパク質は、配列番号４４と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる。

【0101】

可溶性インターロイキンタンパク質および可溶性サイトカインタンパク質の追加の例は、当該技術分野で既知である。

【0102】

可溶性受容体
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方は、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体である。いくつかの実施形態では、可溶性受容体は、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）（例えば、Ｙｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９４（９）：１１４０－１１５１， ２０１６に記載のものを参照）、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩ（例えば、Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｃｅｎｔａ ５７：３２０，２０１７に記載のものを参照）、または可溶性ＮＫＧ２Ｄ（例えば、Ｃｏｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １４（２）：１２３－１３３，２００１、Ｃｏｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．９，Ａｒｔｉｃｌｅ １１５０，Ｍａｙ ２９，２０１８；ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１８．０１１５０を参照）である。いくつかの実施形態では、可溶性細胞表面受容体は、可溶性ＮＫｐ３０（例えば、Ｃｏｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．９，Ａｒｔｉｃｌｅ １１５０，Ｍａｙ ２９，２０１８；ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１８．０１１５０を参照）、可溶性ＮＫｐ４４（例えば、Ｃｏｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．９，Ａｒｔｉｃｌｅ １１５０，Ｍａｙ ２９，２０１８；ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１８．０１１５０に記載のものを参照）、可溶性ＮＫｐ４６（例えば、Ｍａｎｄｅｌｂｏｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４０９：１０５５－１０６０，２００１、Ｃｏｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．９，Ａｒｔｉｃｌｅ １１５０，Ｍａｙ ２９，２０１８；ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１８．０１１５０を参照）、可溶性ＤＮＡＭ１（例えば、Ｃｏｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．９，Ａｒｔｉｃｌｅ １１５０，Ｍａｙ ２９，２０１８；ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１８．０１１５０に記載のものを参照）、ｓｃＭＨＣＩ（例えば、Ｗａｓｈｂｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６（３）：ｅ１８４３９，２０１１に記載のものを参照）、ｓｃＭＨＣＩＩ（例えば、Ｂｉｓｈｗａｊｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（１）：２５－３３，１９９６に記載のものを参照）、ｓｃＴＣＲ（例えば、Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５６（６３７２）：７９３－７９６，１９９２に記載のものを参照）、可溶性ＣＤ１５５（例えば、Ｔａｈａｒａ－Ｈａｎａｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６（４）：５３３－５３８，２００４に記載のものを参照）、または可溶性ＣＤ２８（例えば、Ｈｅｂｂａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：３８８－３９２，２００４を参照）である。

【0103】

いくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦβＲＩＩ受容体は、ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ（配列番号５６）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である第１の配列、およびＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ（配列番号５６）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である第２の配列を含み得る。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦβＲＩＩ受容体は、第１の配列と第２の配列との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含み得る。

【0104】

いくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦβＲＩＩ受容体は、ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴ（配列番号５７）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である第１の配列をコードする第１の核酸配列、およびＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴ（配列番号５７）と少なくとも７０％同一、（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である第２の配列をコードする第２の核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦβＲＩＩ受容体をコードする核酸は、第１の核酸と第２の核酸との間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。

【0105】

いくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦβＲＩＩ受容体は、ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤ（配列番号６０）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦβＲＩＩ受容体は、ＡＴＣＣＣＣＣＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＣＧＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＣＧＴＧＴＧＴＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＧＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＧＴＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＡＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＡＴＡＡＴＧＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＧＡＣＣＧＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＧＴＧＡＧＧＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＣＣＡＣＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＴＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣ（配列番号６１）と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む核酸によってコードされる。

【0106】

可溶性インターロイキン受容体および可溶性サイトカイン受容体の追加の例は、当該技術分野で既知である。

【0107】

追加の抗原結合ドメイン
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態は、そのＮおよび／またはＣ末端に１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）をさらに含み得る。

【0108】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、Ｎ末端に１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）を含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドのＮ末端の１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つは、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、または可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）に直接隣接し得る。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、単鎖キメラポリペプチドのＮ末端の少なくとも１つの追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つと、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、または可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）との間に、リンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。

【0109】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、そのＣ末端に１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）を含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドのＣ末端の１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つは、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、または可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）に直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、単鎖キメラポリペプチドのＣ末端の少なくとも１つの追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つと、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、または可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）との間に、リンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。

【0110】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、そのＮ末端およびそのＣ末端に１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）を含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドのＮ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つは、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、または可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）に直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、Ｎ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つと、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、または可溶性組織因子ドメイン（例えば、例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）との間に、リンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つは、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、または可溶性組織因子ドメイン（例えば、例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）に直接隣接している。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、Ｃ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つと、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、または可溶性組織因子ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれか）との間に、リンカー配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なリンカー配列のうちのいずれか）をさらに含む。

【0111】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの２つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、または１０）は、同じ抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの２つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、または１０）は、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの２つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、または１０）は、同じアミノ酸配列を含む。

【0112】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）は、各々、同じ抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）は、各々、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の標的結合ドメインは、各々、同じアミノ酸配列を含む。

【0113】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）は、異なる抗原に特異的に結合する。

【0114】

単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の標的結合ドメインのうちの１つ以上は、抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）である。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインは、各々、抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）である。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖまたは単一ドメイン抗体を含み得る。

【0115】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）は、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＰＤＬ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＣＤ２６ａ、ＣＤ３６、ＵＬＢＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ２００、ＩＧＦ－１Ｒ、ＭＵＣ４ＡＣ、ＭＵＣ５ＡＣ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ７Ｈ３、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＵＬ１６結合タンパク質、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ４、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１５５、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ１リガンド、ＮＫｐ４６リガンド、ＮＫｐ４４リガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＫｐ３０リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－１受容体、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－３受容体、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－８受容体、ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１２受容体、ＩＬ－１５受容体、ＩＬ－１７受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＰＤＧＦ－ＤＤ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ１６結合タンパク質受容体、ＣＤ１５５受容体、ＣＤ１２２受容体、およびＣＤ２８受容体からなる群から選択される標的に特異的に結合する。

【0116】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つ以上は、可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質である。可溶性インターロイキンタンパク質および可溶性サイトカインタンパク質の非限定的な例には、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＳＣＦ、およびＦＬＴ３Ｌが挙げられる。可溶性細胞表面タンパク質の非限定的な例には、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＰ１６結合タンパク質が挙げられる。

【0117】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、第２の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）、および１つ以上の追加の標的結合ドメイン（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な標的結合ドメインのうちのいずれか）のうちの１つ以上は、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体である。可溶性インターロイキン受容体および可溶性サイトカイン受容体の非限定的な例には、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）および可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩが挙げられる。可溶性細胞表面受容体の非限定的な例には、可溶性ＮＫＧ２Ｄ、可溶性ＮＫ３０、可溶性ＮＫｐ４４、可溶性ＮＫｐ４６、可溶性ＤＮＡＭ１、ｓｃＭＨＣＩ、ｓｃＭＨＣＩＩ、ｓｃＴＣＲ、可溶性ＣＤ１５５、可溶性ＣＤ１２２、可溶性ＣＤ３、および可溶性ＣＤ２８が挙げられる。

【0118】

シグナル配列
いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、そのＮ末端にシグナル配列を含む。当業者に理解されるように、シグナル配列は、タンパク質を分泌経路に指向するいくつかの内因的に産生されたタンパク質のＮ末端に存在するアミノ酸配列である（例えば、タンパク質は、ある特定の細胞内オルガネラに存在するか、細胞膜に存在するか、または細胞から分泌されるように指示される）。シグナル配列は不均一であり、それらの一次アミノ酸配列が大きく異なる。しかしながら、シグナル配列は、典型的には、１６～３０アミノ酸長であり、親水性の通常は正に帯電したＮ末端領域、中央の疎水性ドメイン、およびシグナルペプチダーゼの切断部位を含有するＣ末端領域を含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、アミノ酸配列ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ（配列番号６２）を有するシグナル配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、核酸配列ＡＴＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＴＡＴＴＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＧＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ（配列番号６３）、ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＣＡＣＡＴＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＡＧＣ（配列番号６４）、またはＡＴＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＴＡＴＴＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＧＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ（配列番号６５）によってコードされるシグナル配列を含む。

【0120】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、アミノ酸配列ＭＫＣＬＬＹＬＡＦＬＦＬＧＶＮＣ（配列番号６６）を有するシグナル配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、アミノ酸配列ＭＧＱＩＶＴＭＦＥＡＬＰＨＩＩＤＥＶＩＮＩＶＩＩＶＬＩＩＩＴＳＩＫＡＶＹＮＦＡＴＣＧＩＬＡＬＶＳＦＬＦＬＡＧＲＳＣＧ（配列番号６７）を有するシグナル配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、アミノ酸配列ＭＰＮＨＱＳＧＳＰＴＧＳＳＤＬＬＬＳＧＫＫＱＲＰＨＬＡＬＲＲＫＲＲＲＥＭＲＫＩＮＲＫＶＲＲＭＮＬＡＰＩＫＥＫＴＡＷＱＨＬＱＡＬＩＳＥＡＥＥＶＬＫＴＳＱＴＰＱＮＳＬＴＬＦＬＡＬＬＳＶＬＧＰＰＶＴＧ（配列番号６８）を有するシグナル配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、アミノ酸配列ＭＤＳＫＧＳＳＱＫＧＳＲＬＬＬＬＬＶＶＳＮＬＬＬＣＱＧＶＶＳ（配列番号６９）を有するシグナル配列を含む。当業者であれば、単鎖キメラポリペプチドにおいて使用するための他の適切なシグナル配列を認識しているであろう。

【0121】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、約１０～１００アミノ酸長であるシグナル配列を含む。例えば、シグナル配列は、約１０～１００アミノ酸長、約１５～１００アミノ酸長、約２０～１００アミノ酸長、約２５～１００アミノ酸長、約３０～１００アミノ酸長、約３５～１００アミノ酸長、約４０～１００アミノ酸長、約４５～１００アミノ酸長、約５０～１００アミノ酸長、約５５～１００アミノ酸長、約６０～１００アミノ酸長、約６５～１００アミノ酸長、約７０～１００アミノ酸長、約７５～１００アミノ酸長、約８０～１００アミノ酸長、約８５～１００アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約９５～１００アミノ酸長、約１０～９５アミノ酸長、約１０～９０アミノ酸長、約１０～８５アミノ酸長、約１０～８０アミノ酸長、約１０～７５アミノ酸長、約１０～７０アミノ酸長、約１０～６５アミノ酸長、約１０～６０アミノ酸長、約１０～５５アミノ酸長、約１０～５０アミノ酸長、約１０～４５アミノ酸長、約１０～４０アミノ酸長、約１０～３５アミノ酸長、約１０～３０アミノ酸長、約１０～２５アミノ酸長、約１０～２０アミノ酸長、約１０～１５アミノ酸長、約２０～３０アミノ酸長、約３０～４０アミノ酸長、約４０～５０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、約６０～７０アミノ酸長、約７０～８０アミノ酸長、約８０～９０アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約２０～９０アミノ酸長、約３０～８０アミノ酸長、約４０～７０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、またはそれらの間の任意の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、シグナル配列は、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００アミノ酸長である。

【0122】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるシグナル配列のうちのいずれかは、シグナル配列の機能が損なわれないままである限り、そのＮ末端および／またはＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸（例えば、１、２、３、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のアミノ酸）を含み得る。例えば、アミノ酸配列ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ（配列番号６２）を有するシグナル配列は、単鎖キメラポリペプチドを分泌経路に指向する能力を依然として保持しながら、Ｎ末端またはＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸を含み得る。

【0123】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、単鎖キメラポリペプチドを細胞外空間に指向するシグナル配列を含む。そのような実施形態は、単離および／または精製が比較的容易な単鎖キメラポリペプチドの産生において有用である。

【0124】

ペプチドタグ
いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、（例えば、単鎖キメラポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に）ペプチドタグを含む。いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、２つ以上のペプチドタグを含む。

【0125】

単鎖キメラポリペプチドに含まれ得る例示的なペプチドタグには、ＡｖｉＴａｇ（ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ、配列番号７０）、カルモジュリンタグ（ＫＲＲＷＫＫＮＦＩＡＶＳＡＡＮＲＦＫＫＩＳＳＳＧＡＬ、配列番号７１）、ポリグルタミン酸タグ（ＥＥＥＥＥＥ、配列番号７２）、Ｅタグ（ＧＡＰＶＰＹＰＤＰＬＥＰＲ、配列番号７３）、ＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ、配列番号７４）、ＨＡタグ、血球凝集素由来のペプチド（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ、配列番号７５）、ｈｉｓタグ（ＨＨＨＨＨ（配列番号７６）、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号７７）、ＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号７８）、ＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号７９）、ＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号８０）、またはＨＨＨＨＨＨＨＨＨＨ（配列番号８１）、ｍｙｃタグ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ、配列番号８２）、ＮＥタグ（ＴＫＥＮＰＲＳＮＱＥＥＳＹＤＤＮＥＳ、配列番号８３）、Ｓタグ（ＫＥＴＡＡＡＫＦＥＲＱＨＭＤＳ、配列番号８４）、ＳＢＰタグ（ＭＤＥＫＴＴＧＷＲＧＧＨＶＶＥＧＬＡＧＥＬＥＱＬＲＡＲＬＥＨＨＰＱＧＱＲＥＰ、配列番号８５）、Ｓｏｆｔａｇ １（ＳＬＡＥＬＬＮＡＧＬＧＧＳ、配列番号８６）、Ｓｏｆｔａｇ ３（ＴＱＤＰＳＲＶＧ、配列番号８７）、Ｓｐｏｔタグ（ＰＤＲＶＲＡＶＳＨＷＳＳ、配列番号８８）、Ｓｔｒｅｐタグ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ、配列番号８９）、ＴＣタグ（ＣＣＰＧＣＣ、配列番号９０）、Ｔｙタグ（ＥＶＨＴＮＱＤＰＬＤ、配列番号９１）、Ｖ５タグ（ＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴ、配列番号９２）、ＶＳＶタグ（ＹＴＤＩＥＭＮＲＬＧＫ、配列番号９３）、およびＸｐｒｅｓｓタグ（ＤＬＹＤＤＤＤＫ、配列番号９４）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組織因子タンパク質は、ペプチドタグである。

【0126】

単鎖キメラポリペプチドに含まれ得るペプチドタグは、単鎖キメラポリペプチドに関連する様々な用途のうちのいずれかに使用され得る。例えば、ペプチドタグは、単鎖キメラポリペプチドの精製に使用され得る。１つの非限定的な例として、単鎖キメラポリペプチドはｍｙｃタグを含み得、ｍｙｃタグ（複数可）を認識する抗体を使用して精製され得る。ｍｙｃタグを認識する抗体の１つの非限定的な例は、非営利Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｂａｎｋから入手可能な９Ｅ１０である。別の非限定的な例として、単鎖キメラポリペプチドは、ヒスチジンタグを含み得、ニッケルまたはコバルトキレートを使用して精製され得る。当業者であれば、それらのタグに結合する単鎖キメラポリペプチドの精製に使用するための他の好適なタグおよび薬剤を認識しているであろう。いくつかの実施形態では、ペプチドタグは、精製後に単鎖キメラポリペプチドから除去される。いくつかの実施形態では、ペプチドタグは、精製後に単鎖キメラポリペプチドから除去されない。

【0127】

単鎖キメラポリペプチドに含まれ得るペプチドタグは、例えば、単鎖キメラポリペプチドの免疫沈殿、単鎖キメラポリペプチドの撮像（例えば、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、および／または免疫細胞化学による）、および／または単鎖キメラポリペプチドの可溶化に使用され得る。

【0128】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、約１０～１００アミノ酸長であるペプチドタグを含む。例えば、ペプチドタグは、約１０～１００アミノ酸長、約１５～１００アミノ酸長、約２０～１００アミノ酸長、約２５～１００アミノ酸長、約３０～１００アミノ酸長、約３５～１００アミノ酸長、約４０～１００アミノ酸長、約４５～１００アミノ酸長、約５０～１００アミノ酸長、約５５～１００アミノ酸長、約６０～１００アミノ酸長、約６５～１００アミノ酸長、約７０～１００アミノ酸長、約７５～１００アミノ酸長、約８０～１００アミノ酸長、約８５～１００アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約９５～１００アミノ酸長、約１０～９５アミノ酸長、約１０～９０アミノ酸長、約１０～８５アミノ酸長、約１０～８０アミノ酸長、約１０～７５アミノ酸長、約１０～７０アミノ酸長、約１０～６５アミノ酸長、約１０～６０アミノ酸長、約１０～５５アミノ酸長、約１０～５０アミノ酸長、約１０～４５アミノ酸長、約１０～４０アミノ酸長、約１０～３５アミノ酸長、約１０～３０アミノ酸長、約１０～２５アミノ酸長、約１０～２０アミノ酸長、約１０～１５アミノ酸長、約２０～３０アミノ酸長、約３０～４０アミノ酸長、約４０～５０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、約６０～７０アミノ酸長、約７０～８０アミノ酸長、約８０～９０アミノ酸長、約９０～１００アミノ酸長、約２０～９０アミノ酸長、約３０～８０アミノ酸長、約４０～７０アミノ酸長、約５０～６０アミノ酸長、またはそれらの間の任意の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドタグは、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００アミノ酸長である。

【0129】

単鎖キメラポリペプチドに含まれるペプチドタグは、任意の好適な長さのものであり得る。例えば、ペプチドタグは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のアミノ酸長であり得る。単鎖キメラポリペプチドが２つ以上のペプチドタグを含む実施形態では、２つ以上のペプチドタグは、同じ長さまたは異なる長さのものであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるペプチドタグのうちのいずれかは、ペプチドタグの機能が損なわれないままである限り、Ｎ末端および／またはＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸（例えば、１、２、３、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のアミノ酸）を含み得る。例えば、アミノ酸配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号８２）を有するｍｙｃタグは、抗体（例えば、９Ｅ１０）によって結合される能力を依然として保持しながら、（例えば、ペプチドタグのＮ末端および／またはＣ末端に）１つ以上の追加のアミノ酸を含み得る。

【0130】

単鎖キメラポリペプチドの例示的な実施形態－タイプＡ
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび／または第２の標的結合ドメインは、独立して、ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）またはＣＤ２８（例えば、ヒトＣＤ２８）に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインはＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）に特異的に結合し、第２の標的結合ドメインはＣＤ２８（例えば、ヒトＣＤ２８）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインはＣＤ２８（例えば、ヒトＣＤ２８）に特異的に結合し、第２の標的結合ドメインはＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３）に特異的に結合する。

【0131】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインは、互いに直接隣接している。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載の例示的なリンカーのうちのいずれか）をさらに含む。

【0132】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインは、互いに直接隣接している。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載の例示的なリンカーのうちのいずれか）をさらに含む。

【0133】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方は、抗原結合ドメインである。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、各々、抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の例示的な抗原結合ドメインのうちのいずれか）である。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖまたは単一ドメイン抗体を含む。

【0134】

ＣＤ３に特異的に結合するｓｃＦｖの非限定的な例には、
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２０）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列が含まれ得る。

【0135】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３に特異的に結合するｓｃＦｖは、
ＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＣＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＣＴＣＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＴＣＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＣＧＣＴＣＡＴＴＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＡＴＧＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＴＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＣＡＡＴＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＣＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＴＴＡＣＴＣＧＴＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＡＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣ（配列番号９９）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされ得る。

【0136】

ＣＤ２８に特異的に結合するｓｃＦｖの非限定的な例には、
ＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ（配列番号２６）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列が含まれ得る。

【0137】

いくつかの実施形態では、ＣＤ２８に特異的に結合するｓｃＦｖは、
ＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＣＣＴＡＴＧＴＧＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＡＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＡＡＡＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＡＡＡＧＧＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＣＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＣＧＡＧＣＧＧＧＴＣＡＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＧ（配列番号１０１）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされ得る。

【0138】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび／または第２の標的結合ドメインは、可溶性受容体（例えば、可溶性ＣＤ２８受容体または可溶性ＣＤ３受容体）である。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれかであり得る。

【0139】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ（配列番号１）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0140】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＣＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＣＴＣＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＴＣＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＣＧＣＴＣＡＴＴＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＡＴＧＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＴＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＣＡＡＴＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＣＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＴＴＡＣＴＣＧＴＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＡＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＴＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＴＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＡＴＣＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＴＧＡＴＴＴＡＡＣＣＧＡＣＧＡＡＡＴＣＧＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＣＧＧＧＴＣＴＴＴＴＣＣＴＡＣＣＣＣＧＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＧＧＣＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＣＴＣＴＡＣＧＡＧＡＡＴＴＣＣＣＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＣＣＣＴＴＡＴＴＴＡＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＴＡＡＣＡＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＡＡＡＧＡＣＣＧＣＴＡＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＣＧＴＧＡＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧＴＡＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＡＧＡＴＴＣＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＣＣＴＡＴＧＴＧＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＡＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＡＡＡＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＡＡＡＧＧＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＣＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＣＧＡＧＣＧＧＧＴＣＡＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＧ（配列番号２）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされる。

【0141】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ（配列番号３）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0142】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＴＴＣＡＧＣＴＣＣＧＣＣＴＡＴＴＣＣＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＣＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＣＴＣＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＴＣＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＣＧＣＴＣＡＴＴＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＡＴＧＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＴＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＣＡＡＴＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＣＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＴＴＡＣＴＣＧＴＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＡＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＴＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＴＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＡＴＣＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＴＧＡＴＴＴＡＡＣＣＧＡＣＧＡＡＡＴＣＧＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＣＧＧＧＴＣＴＴＴＴＣＣＴＡＣＣＣＣＧＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＧＧＣＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＣＴＣＴＡＣＧＡＧＡＡＴＴＣＣＣＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＣＣＣＴＴＡＴＴＴＡＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＴＡＡＣＡＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＡＡＡＧＡＣＣＧＣＴＡＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＣＧＴＧＡＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧＴＡＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＡＧＡＴＴＣＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＣＣＴＡＴＧＴＧＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＡＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＡＡＡＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＡＡＡＧＧＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＣＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＣＧＡＧＣＧＧＧＴＣＡＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＧ（配列番号４）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされる。

【0143】

単鎖キメラポリペプチドの例示的な実施形態－タイプＢ
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび／または第２の標的結合ドメインは、独立して、ＩＬ－２受容体（例えば、ヒトＩＬ－２受容体）に特異的に結合することができる。

【0144】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインは、互いに直接隣接している。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載の例示的なリンカーのうちのいずれか）をさらに含む。

【0145】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインは、互いに直接隣接している。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載の例示的なリンカーのうちのいずれか）をさらに含む。

【0146】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、可溶性ヒトＩＬ－２タンパク質である。ＩＬ－２受容体に特異的に結合するＩＬ－２タンパク質の非限定的な例には、
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２８）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列が含まれ得る。

【0147】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－２受容体に特異的に結合するＩＬ－２タンパク質は、
ＧＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＴＧＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＡＡＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＡＴＣＣＣＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡＧＧＡＴＧＣＴＣＡＣＡＴＴＴＡＡＧＴＴＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＡＧＡＡＣＴＧＡＡＡＣＡＴＣＴＴＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＡＧＴＧＣＴＡＡＡＴＴＴＡＧＣＴＣＡＡＡＧＣＡＡＡＡＡＣＴＴＴＣＡＣＴＴＡＡＧＡＣＣＣＡＧＧＧＡＣＴＴＡＡＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＡＣＧＴＡＡＴＡＧＴＴＣＴＧＧＡＡＣＴＡＡＡＧＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＴＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＧＡＣＡＧＣＡＡＣＣＡＴＴＧＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＴＡＣＣＴＴＴＴＧＴＣＡＡＡＧＣＡＴＣＡＴＣＴＣＡＡＣＡＣＴＡＡＣＴ（配列番号１０６）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされ得る。

【0148】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－２受容体に特異的に結合するＩＬ－２タンパク質は、
ＧＣＣＣＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＡＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＴＣＧＴＡＴＧＣＴＧＡＣＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＴＧＴＴＴＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＣＣＴＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＣＴＧＡＡＴＴＴＡＧＣＣＣＡＧＴＣＣＡＡＧＡＡＴＴＴＣＣＡＴＴＴＡＡＧＧＣＣＣＣＧＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＣＡＡＣＧＴＧＡＴＣＧＴＴＴＴＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＴＣＡＴＧＴＧＣＧＡＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＡＴＣＧＴＴＧＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣ（配列番号１０７）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされ得る。

【0149】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれかであり得る。

【0150】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１０８）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0151】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＧＣＣＣＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＡＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＴＣＧＴＡＴＧＣＴＧＡＣＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＴＧＴＴＴＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＣＣＴＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＣＴＧＡＡＴＴＴＡＧＣＣＣＡＧＴＣＣＡＡＧＡＡＴＴＴＣＣＡＴＴＴＡＡＧＧＣＣＣＣＧＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＣＡＡＣＧＴＧＡＴＣＧＴＴＴＴＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＴＣＡＴＧＴＧＣＧＡＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＡＴＣＧＴＴＧＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＴＧＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＡＡＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＡＴＣＣＣＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡＧＧＡＴＧＣＴＣＡＣＡＴＴＴＡＡＧＴＴＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＡＧＡＡＣＴＧＡＡＡＣＡＴＣＴＴＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＡＧＴＧＣＴＡＡＡＴＴＴＡＧＣＴＣＡＡＡＧＣＡＡＡＡＡＣＴＴＴＣＡＣＴＴＡＡＧＡＣＣＣＡＧＧＧＡＣＴＴＡＡＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＡＣＧＴＡＡＴＡＧＴＴＣＴＧＧＡＡＣＴＡＡＡＧＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＴＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＧＡＣＡＧＣＡＡＣＣＡＴＴＧＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＴＡＣＣＴＴＴＴＧＴＣＡＡＡＧＣＡＴＣＡＴＣＴＣＡＡＣＡＣＴＡＡＣＴ（配列番号１０９）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされる。

【0152】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１１０）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0153】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣＧＣＣＣＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＡＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＴＣＧＴＡＴＧＣＴＧＡＣＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＴＧＴＴＴＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＣＣＴＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＣＴＧＡＡＴＴＴＡＧＣＣＣＡＧＴＣＣＡＡＧＡＡＴＴＴＣＣＡＴＴＴＡＡＧＧＣＣＣＣＧＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＣＡＡＣＧＴＧＡＴＣＧＴＴＴＴＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＴＣＡＴＧＴＧＣＧＡＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＡＴＣＧＴＴＧＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＴＧＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＡＡＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＡＴＣＣＣＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡＧＧＡＴＧＣＴＣＡＣＡＴＴＴＡＡＧＴＴＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＡＧＡＡＣＴＧＡＡＡＣＡＴＣＴＴＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＡＧＴＧＣＴＡＡＡＴＴＴＡＧＣＴＣＡＡＡＧＣＡＡＡＡＡＣＴＴＴＣＡＣＴＴＡＡＧＡＣＣＣＡＧＧＧＡＣＴＴＡＡＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＡＣＧＴＡＡＴＡＧＴＴＣＴＧＧＡＡＣＴＡＡＡＧＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＴＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＧＡＣＡＧＣＡＡＣＣＡＴＴＧＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＴＡＣＣＴＴＴＴＧＴＣＡＡＡＧＣＡＴＣＡＴＣＴＣＡＡＣＡＣＴＡＡＣＴ（配列番号１１１）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされる。

【0154】

単鎖キメラポリペプチドの例示的な実施形態－タイプＣ
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび／または第２の標的結合ドメインは、独立して、ＩＬ－１５受容体（例えば、ヒトＩＬ－１５受容体）に特異的に結合することができる。

【0155】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインは、互いに直接隣接している。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載の例示的なリンカーのうちのいずれか）をさらに含む。

【0156】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインは、互いに直接隣接している。これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列（例えば、本明細書に記載の例示的なリンカーのうちのいずれか）をさらに含む。

【0157】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインは、可溶性ヒトＩＬ－１５タンパク質である。ＩＬ－１５受容体に特異的に結合するＩＬ－１５タンパク質の非限定的な例には、
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号３９）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列が含まれ得る。

【0158】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５受容体に特異的に結合するＩＬ－１５タンパク質は、
ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＣＴＧＴＡＣＡＣＴＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＴＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＴＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＣＡＡＣＴＣＴＴＴＡＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＡＧＣ（配列番号１１２）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされ得る。

【0159】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５受容体に特異的に結合するＩＬ－１５タンパク質は、
ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣ（配列番号１１３）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされ得る。

【0160】

これらの単鎖キメラポリペプチドのいくつかの実施形態では、可溶性組織因子ドメインは、本明細書に記載の例示的な可溶性組織因子ドメインのうちのいずれかであり得る。

【0161】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１１４）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0162】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＣＴＧＴＡＣＡＣＴＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＴＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＴＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＣＡＡＣＴＣＴＴＴＡＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＡＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣ（配列番号１１５）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされる。

【0163】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１１６）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含み得る。

【0164】

いくつかの実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＣＴＧＴＡＣＡＣＴＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＴＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＴＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＣＡＡＣＴＣＴＴＴＡＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＡＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣ（配列番号１１７）と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％同一、少なくとも８４％同一、少なくとも８６％同一、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列によってコードされる。

【0165】

組成物／キット
本明細書に記載のいずれかの単鎖キメラポリペプチドのうちの少なくとも１つ、細胞のうちのいずれか、または核酸のうちのいずれかを含む組成物（例えば、医薬組成物）も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、免疫細胞のうちのいずれか（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか、例えば、本明細書に記載の方法のうちのいずれかを使用して産生された免疫細胞のうちのいずれか）を含む。

【0166】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、異なる投与経路（例えば、静脈内、皮下）用に製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）を含み得る。

【0167】

医薬組成物の単回または複数回投与は、例えば、対象によって必要とされ、かつ許容される投与量および頻度に応じて、それを必要とする対象に与えられ得る。製剤は、状態、疾患、または症状を効果的に治療、予防、または改善するのに十分な量の活性薬剤を提供すべきである。

【0168】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチド、組成物、核酸、または細胞（例えば、免疫細胞）のうちのいずれかを含むキットも本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のうちのいずれかを実施するための指示を含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、少なくとも１用量の本明細書に記載の医薬組成物のうちのいずれかを含み得る。

【0169】

核酸／ベクター
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸も本明細書に提供される。本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする核酸のうちのいずれかを含むベクターも本明細書に提供される。

【0170】

本明細書に記載のベクターのうちのいずれかは、発現ベクターであり得る。例えば、発現ベクターは、単鎖キメラポリペプチドをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含み得る。

【0171】

ベクターの非限定的な例には、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、およびウイルスベクター（例えば、任意のアデノウイルスベクター（例えば、ｐＳＶまたはｐＣＭＶベクター）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、およびレトロウイルスベクター）、ならびに任意のＧａｔｅｗａｙ（登録商標）ベクターが挙げられる。ベクターは、例えば、発現のための十分なシス作用エレメントを含み得、発現のための他の要素は、宿主哺乳動物細胞によって、またはインビトロ発現系において供給され得る。当業者であれば、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかの作製に好適なベクターおよび哺乳動物細胞を選択することができるであろう。

【0172】

細胞
本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする本明細書に記載の核酸のうちのいずれかを含む細胞（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な細胞のうちのいずれか）も本明細書に提供される。

【0173】

本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする本明細書に記載のベクターのうちのいずれかを含む細胞（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な細胞のうちのいずれか）も本明細書に提供される。

【0174】

本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、細胞は、真核細胞であり得る。本明細書で使用される場合、「真核細胞」という用語は、別個の膜結合核を有する細胞を指す。そのような細胞には、例えば、哺乳動物（例えば、齧歯類、非ヒト霊長類、またはヒト）細胞、昆虫細胞、真菌細胞、または植物細胞が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、真核細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ等の酵母細胞である。いくつかの実施形態では、真核細胞は、哺乳動物細胞、鳥類細胞、植物細胞、または昆虫細胞等の高等真核生物である。哺乳動物細胞の非限定的な例には、チャイニーズハムスター卵巣細胞およびヒト胎児腎臓細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）が挙げられる。

【0175】

核酸および発現ベクターを細胞（例えば、真核細胞）に導入する方法は、当該技術分野で既知である。核酸を細胞に導入するために使用され得る方法の非限定的な例には、リポフェクション、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リン酸カルシウムトランスフェクション、デンドリマーベースのトランスフェクション、カチオン性ポリマートランスフェクション、細胞圧搾、ソノポレーション、光学トランスフェクション、インパレフェクション、流体力学的送達、マグネトフェクション、ウイルス形質導入（例えば、アデノウイルスおよびレンチウイルス形質導入）、およびナノ粒子トランスフェクションが挙げられる。

【0176】

単鎖キメラポリペプチドを産生する方法
また、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを産生する方法も本明細書に提供され、この方法は、単鎖キメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で本明細書に記載の細胞のうちのいずれかを培養培地中で培養することと、単鎖キメラポリペプチドを細胞および／または培養培地から回収することと、を含む。

【0177】

培養培地または細胞（例えば、真核生物細胞）からの単鎖キメラポリペプチドの回収は、当該技術分野で周知の技法（例えば、硫酸アンモニウム沈殿、ポリエチレングリコール沈殿、イオン交換クロマトグラフィー（アニオンまたはカチオン）、疎水性相互作用に基づくクロマトグラフィー、金属アフィニティークロマトグラフィー、リガンドアフィニティークロマトグラフィー、およびサイズ排除クロマトグラフィー）を使用して実施され得る。

【0178】

細胞を培養する方法は、当該技術分野で周知である。細胞は、増殖、分化、および成長を好む条件下で、インビトロで維持され得る。簡潔には、細胞は、細胞（例えば、任意の細胞）を、細胞の生存および成長を支持するために必要な成長因子および栄養補助剤を含む細胞培養培地と接触させることによって培養され得る。

【0179】

また、本明細書に記載の方法のいずれかによって産生された単鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのいずれか）も本明細書に提供される。

【0180】

免疫細胞を刺激する方法
また、免疫細胞（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な免疫細胞のうちのいずれか）を刺激する方法も本明細書に提供され、この方法は、免疫細胞を、有効量の本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかと接触させることを含む。いくつかの例では、免疫細胞は、インビトロで（例えば、免疫細胞の刺激をもたらすのに十分な条件下で、好適な液体培地中で）接触する。

【0181】

いくつかの例では、免疫細胞は、対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）から以前に得られている。これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む。

【0182】

いくつかの例では、免疫細胞は、インビボで接触する。そのような実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）に、対象における免疫細胞の刺激をもたらすのに十分な量で投与される。

【0183】

本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの例では、免疫細胞は、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、メモリーＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、もしくはナチュラルキラー細胞、またはそれらの組み合わせであり得る。

【0184】

いくつかの例では、免疫細胞は、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている。いくつかの例では、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）は、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）を発現するように以前に遺伝子改変されている。

【0185】

これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの後に、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含み得る。これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの後に、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）に、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）をコードする核酸を導入することをさらに含み得る。

【0186】

これらの方法のいくつかの実施形態は、治療有効量の免疫細胞を、それを必要とする対象（例えば、本明細書に記載の例示的な対象のうちのいずれか）に投与することをさらに含み得る。

【0187】

いくつかの例では、対象は、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断された対象であり得る。加齢関連疾患または障害の非限定的な例には、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害が挙げられる。

【0188】

いくつかの例では、対象は、がんを有すると特定または診断されている対象であり得る。がんの非限定的な例には、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんが挙げられる。

【0189】

いくつかの例では、対象は、感染性疾患を有すると診断または特定されている対象であり得る。感染性疾患の非限定的な例には、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、またはインフルエンザウイルスによる感染が挙げられる。

【0190】

免疫細胞の活性化は、当該技術分野で既知の方法を使用して決定され得る。例えば、免疫細胞の活性化は、免疫細胞の活性化時に分泌されるサイトカインおよびケモカインのレベルを検出することによって決定され得る。免疫細胞の活性化時に分泌またはアップレギュレートされるサイトカイン、ケモカイン、および調節分子の非限定的な例には、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２２、ＩＬ－３３、ロイコトリエンＢ４、ＣＣＬ５、ＴＮＦα、グランザイム、パーフォリン、ＴＧＦβ、ＳＴＡＴ３、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＳＴＡＴ６、およびＧＡＴＡ３が挙げられる。これらのサイトカインおよびケモカイン、または調節分子の検出は、イムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ）または定量的ＰＣＲを使用して実施され得る。例えば、免疫細胞の活性化は、（例えば、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれとも接触していない対照における１つ以上のサイトカインおよびケモカインのレベルと比較して、）本明細書に記載のサイトカインまたはケモカインまたは調節分子のうちのいずれかのうちの１つ以上（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２２、ＩＬ－３３、ロイコトリエンＢ４、ＣＣＬ５、ＴＮＦα、グランザイム、パーフォリン、ＴＧＦβ、ＳＴＡＴ３、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＳＴＡＴ６、およびＧＡＴＡ３のうちのいずれかのうちの１つ以上）の約１％～約８００％（例えば、約１％～約７５０％、約１％～約７００％、約１％～約６５０％、約１％～約６００％、約１％～約５５０％、約１％～約５００％、約１％～約４５０％、約１％～約４００％、約１％～約３５０％、約１％～約３００％、約１％～約２８０％、約１％～約２６０％、約１％～約２４０％、約１％～約２２０％、約１％～約２００％、約１％～約１８０％、約１％～約１６０％、約１％～約１４０％、約１％～約１２０％、約１％～約１００％、約１％～約９０％、約１％～約８０％、約１％～約７０％、約１％～約６０％、約１％～約５０％、約１％～約４５％、約１％～約４０％、約１％～約３５％、約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約１％～約５％、約５％～約８００％、約５％～約７５０％、約５％～約７００％、約５％～約６５０％、約５％～約６００％、約５％～約５５０％、約５％～約５００％、約５％～約４５０％、約５％～約４００％、約５％～約３５０％、約５％～約３００％、約５％～約２８０％、約５％～約２６０％、約５％～約２４０％、約５％～約２２０％、約５％～約２００％、約５％～約１８０％、約５％～約１６０％、約５％～約１４０％、約５％～約１２０％、約５％～約１００％、約５％～約９０％、約５％～約８０％、約５％～約７０％、約５％～約６０％、約５％～約５０％、約５％～約４５％、約５％～約４０％、約５％～約３５％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％、約５％～約１０％、約１０％～約８００％、約１０％～約７５０％、約１０％～約７００％、約１０％～約６５０％、約１０％～約６００％、約１０％～約５５０％、約１０％～約５００％、約１０％～約４５０％、約１０％～約４００％、約１０％～約３５０％、約１０％～約３００％、約１０％～約２８０％、約１０％～約２６０％、約１０％～約２４０％、約１０％～約２２０％、約１０％～約２００％、約１０％～約１８０％、約１０％～約１６０％、約１０％～約１４０％、約１０％～約１２０％、約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４５％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％、約１０％～約１５％、約１５％～約８００％、約１５％～約７５０％、約１５％～約７００％、約１５％～約６５０％、約１５％～約６００％、約１５％～約５５０％、約１５％～約５００％、約１５％～約４５０％、約１５％～約４００％、約１５％～約３５０％、約１５％～約３００％、約１５％～約２８０％、約１５％～約２６０％、約１５％～約２４０％、約１５％～約２２０％、約１５％～約２００％、約１５％～約１８０％、約１５％～約１６０％、約１５％～約１４０％、約１５％～約１２０％、約１５％～約１００％、約１５％～約９０％、約１５％～約８０％、約１５％～約７０％、約１５％～約６０％、約１５％～約５０％、約１５％～約４５％、約１５％～約４０％、約１５％～約３５％、約１５％～約３０％、約１５％～約２５％、約１５％～約２０％、約２０％～約８００％、約２０％～約７５０％、約２０％～約７００％、約２０％～約６５０％、約２０％～約６００％、約２０％～約５５０％、約２０％～約５００％、約２０％～約４５０％、約２０％～約４００％、約２０％～約３５０％、約２０％～約３００％、約２０％～約２８０％、約２０％～約２６０％、約２０％～約２４０％、約２０％～約２２０％、約２０％～約２００％、約２０％～約１８０％、約２０％～約１６０％、約２０％～約１４０％、約２０％～約１２０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約７０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４５％、約２０％～約４０％、約２０％～約３５％、約２０％～約３０％、約２０％～約２５％、約２５％～約８００％、約２５％～約７５０％、約２５％～約７００％、約２５％～約６５０％、約２５％～約６００％、約２５％～約５５０％、約２５％～約５００％、約２５％～約４５０％、約２５％～約４００％、約２５％～約３５０％、約２５％～約３００％、約２５％～約２８０％、約２５％～約２６０％、約２５％～約２４０％、約２５％～約２２０％、約２５％～約２００％、約２５％～約１８０％、約２５％～約１６０％、約２５％～約１４０％、約２５％～約１２０％、約２５％～約１００％、約２５％～約９０％、約２５％～約８０％、約２５％～約７０％、約２５％～約６０％、約２５％～約５０％、約２５％～約４５％、約２５％～約４０％、約２５％～約３５％、約３５％～約８００％、約３５％～約７５０％、約３５％～約７００％、約３５％～約６５０％、約３５％～約６００％、約３５％～約５５０％、約３５％～約５００％、約３５％～約４５０％、約３５％～約４００％、約３５％～約３５０％、約３５％～約３００％、約３５％～約２８０％、約３５％～約２６０％、約３５％～約２４０％、約３５％～約２２０％、約３５％～約２００％、約３５％～約１８０％、約３５％～約１６０％、約３５％～約１４０％、約３５％～約１２０％、約３５％～約１００％、約３５％～約９０％、約３５％～約８０％、約３５％～約７０％、約３５％～約６０％、約３５％～約５０％、約３５％～約４５％、約３５％～約４０％、約４０％～約８００％、約４０％～約７５０％、約４０％～約７００％、約４０％～約６５０％、約４０％～約６００％、約４０％～約５５０％、約４０％～約５００％、約４０％～約４５０％、約４０％～約４００％、約４０％～約３５０％、約４０％～約３００％、約４０％～約２８０％、約４０％～約２６０％、約４０％～約２４０％、約４０％～約２２０％、約４０％～約２００％、約４０％～約１８０％、約４０％～約１６０％、約４０％～約１４０％、約４０％～約１２０％、約４０％～約１００％、約４０％～約９０％、約４０％～約８０％、約４０％～約７０％、約４０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約４５％、約４５％～約８００％、約４５％～約７５０％、約４５％～約７００％、約４５％～約６５０％、約４５％～約６００％、約４５％～約５５０％、約４５％～約５００％、約４５％～約４５０％、約４５％～約４００％、約４５％～約３５０％、約４５％～約３００％、約４５％～約２８０％、約４５％～約２６０％、約４５％～約２４０％、約４５％～約２２０％、約４５％～約２００％、約４５％～約１８０％、約４５％～約１６０％、約４５％～約１４０％、約４５％～約１２０％、約４５％～約１００％、約４５％～約９０％、約４５％～約８０％、約４５％～約７０％、約４５％～約６０％、約４５％～約５０％、約５０％～約８００％、約５０％～約７５０％、約５０％～約７００％、約５０％～約６５０％、約５０％～約６００％、約５０％～約５５０％、約５０％～約５００％、約５０％～約４５０％、約５０％～約４００％、約５０％～約３５０％、約５０％～約３００％、約５０％～約２８０％、約５０％～約２６０％、約５０％～約２４０％、約５０％～約２２０％、約５０％～約２００％、約５０％～約１８０％、約５０％～約１６０％、約５０％～約１４０％、約５０％～約１２０％、約５０％～約１００％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約５０％～約６０％、約６０％～約８００％、約６０％～約７５０％、約６０％～約７００％、約６０％～約６５０％、約６０％～約６００％、約６０％～約５５０％、約６０％～約５００％、約６０％～約４５０％、約６０％～約４００％、約６０％～約３５０％、約６０％～約３００％、約６０％～約２８０％、約６０％～約２６０％、約６０％～約２４０％、約６０％～約２２０％、約６０％～約２００％、約６０％～約１８０％、約６０％～約１６０％、約６０％～約１４０％、約６０％～約１２０％、約６０％～約１００％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８００％、約７０％～約７５０％、約７０％～約７００％、約７０％～約６５０％、約７０％～約６００％、約７０％～約５５０％、約７０％～約５００％、約７０％～約４５０％、約７０％～約４００％、約７０％～約３５０％、約７０％～約３００％、約７０％～約２８０％、約７０％～約２６０％、約７０％～約２４０％、約７０％～約２２０％、約７０％～約２００％、約７０％～約１８０％、約７０％～約１６０％、約７０％～約１４０％、約７０％～約１２０％、約７０％～約１００％、約７０％～約９０％、約７０％～約８０％、約８０％～約８００％、約８０％～約７５０％、約８０％～約７００％、約８０％～約６５０％、約８０％～約６００％、約８０％～約５５０％、約８０％～約５００％、約８０％～約４５０％、約８０％～約４００％、約８０％～約３５０％、約８０％～約３００％、約８０％～約２８０％、約８０％～約２６０％、約８０％～約２４０％、約８０％～約２２０％、約８０％～約２００％、約８０％～約１８０％、約８０％～約１６０％、約８０％～約１４０％、約８０％～約１２０％、約８０％～約１００％、約８０％～約９０％、約９０％～約８００％、約９０％～約７５０％、約９０％～約７００％、約９０％～約６５０％、約９０％～約６００％、約９０％～約５５０％、約９０％～約５００％、約９０％～約４５０％、約９０％～約４００％、約９０％～約３５０％、約９０％～約３００％、約９０％～約２８０％、約９０％～約２６０％、約９０％～約２４０％、約９０％～約２２０％、約９０％～約２００％、約９０％～約１８０％、約９０％～約１６０％、約９０％～約１４０％、約９０％～約１２０％、約９０％～約１００％、約１００％～約８００％、約１００％～約７５０％、約１００％～約７００％、約１００％～約６５０％、約１００％～約６００％、約１００％～約５５０％、約１００％～約５００％、約１００％～約４５０％、約１００％～約４００％、約１００％～約３５０％、約１００％～約３００％、約１００％～約２８０％、約１００％～約２６０％、約１００％～約２４０％、約１００％～約２２０％、約１００％～約２００％、約１００％～約１８０％、約１００％～約１６０％、約１００％～約１４０％、約１００％～約１２０％、約１２０％～約８００％、約１２０％～約７５０％、約１２０％～約７００
％、約１２０％～約６５０％、約１２０％～約６００％、約１２０％～約５５０％、約１２０％～約５００％、約１２０％～約４５０％、約１２０％～約４００％、約１２０％～約３５０％、約１２０％～約３００％、約１２０％～約２８０％、約１２０％～約２６０％、約１２０％～約２４０％、約１２０％～約２２０％、約１２０％～約２００％、約１２０％～約１８０％、約１２０％～約１６０％、約１２０％～約１４０％、約１４０％～約８００％、約１４０％～約７５０％、約１４０％～約７００％、約１４０％～約６５０％、約１４０％～約６００％、約１４０％～約５５０％、約１４０％～約５００％、約１４０％～約４５０％、約１４０％～約４００％、約１４０％～約３５０％、約１４０％～約３００％、約１４０％～約２８０％、約１４０％～約２６０％、約１４０％～約２４０％、約１４０％～約２２０％、約１４０％～約２００％、約１４０％～約１８０％、約１４０％～約１６０％、約１６０％～約８００％、約１６０％～約７５０％、約１６０％～約７００％、約１６０％～約６５０％、約１６０％～約６００％、約１６０％～約５５０％、約１６０％～約５００％、約１６０％～約４５０％、約１６０％～約４００％、約１６０％～約３５０％、約１６０％～約３００％、約１６０％～約２８０％、約１６０％～約２６０％、約１６０％～約２４０％、約１６０％～約２２０％、約１６０％～約２００％、約１６０％～約１８０％、約１８０％～約８００％、約１８０％～約７５０％、約１８０％～約７００％、約１８０％～約６５０％、約１８０％～約６００％、約１８０％～約５５０％、約１８０％～約５００％、約１８０％～約４５０％、約１８０％～約４００％、約１８０％～約３５０％、約１８０％～約３００％、約１８０％～約２８０％、約１８０％～約２６０％、約１８０％～約２４０％、約１８０％～約２２０％、約１８０％～約２００％、約２００％～約８００％、約２００％～約７５０％、約２００％～約７００％、約２００％～約６５０％、約２００％～約６００％、約２００％～約５５０％、約２００％～約５００％、約２００％～約４５０％、約２００％～約４００％、約２００％～約３５０％、約２００％～約３００％、約２００％～約２８０％、約２００％～約２６０％、約２００％～約２４０％、約２００％～約２２０％、約２２０％～約８００％、約２２０％～約７５０％、約２２０％～約７００％、約２２０％～約６５０％、約２２０％～約６００％、約２２０％～約５５０％、約２２０％～約５００％、約２２０％～約４５０％、約２２０％～約４００％、約２２０％～約３５０％、約２２０％～約３００％、約２２０％～約２８０％、約２２０％～約２６０％、約２２０％～約２４０％、約２４０％～約８００％、約２４０％～約７５０％、約２４０％～約７００％、約２４０％～約６５０％、約２４０％～約６００％、約２４０％～約５５０％、約２４０％～約５００％、約２４０％～約４５０％、約２４０％～約４００％、約２４０％～約３５０％、約２４０％～約３００％、約２４０％～約２８０％、約２４０％～約２６０％、約２６０％～約８００％、約２６０％～約７５０％、約２６０％～約７００％、約２６０％～約６５０％、約２６０％～約６００％、約２６０％～約５５０％、約２６０％～約５００％、約２６０％～約４５０％、約２６０％～約４００％、約２６０％～約３５０％、約２６０％～約３００％、約２６０％～約２８０％、約２８０％～約８００％、約２８０％～約７５０％、約２８０％～約７００％、約２８０％～約６５０％、約２８０％～約６００％、約２８０％～約５５０％、約２８０％～約５００％、約２８０％～約４５０％、約２８０％～約４００％、約２８０％～約３５０％、約２８０％～約３００％、約３００％～約８００％、約３００％～約７５０％、約３００％～約７００％、約３００％～約６５０％、約３００％～約６００％、約３００％～約５５０％、約３００％～約５００％、約３００％～約４５０％、約３００％～約４００％、約３００％～約３５０％、約３５０％～約８００％、約３５０％～約７５０％、約３５０％～約７００％、約３５０％～約６５０％、約３５０％～約６００％、約３５０％～約５５０％、約３５０％～約５００％、約３５０％～約４５０％、約３５０％～約４００％、約４００％～約８００％、約４００％～約７５０％、約４００％～約７００％、約４００％～約６５０％、約４００％～約６００％、約４００％～約５５０％、約４００％～約５００％、約４００％～約４５０％、約４５０％～約８００％、約４５０％～約７５０％、約４５０％～約７００％、約４５０％～約６５０％、約４５０％～約６００％、約４５０％～約５５０％、約４５０％～約５００％、約５００％～約８００％、約５００％～約７５０％、約５００％～約７００％、約５００％～約６５０％、約５００％～約６００％、約５００％～約５５０％、約５５０％～約８００％、約５５０％～約７５０％、約５５０％～約７００％、約５５０％～約６５０％、約５５０％～約６００％、約６００％～約８００％、約６００％～約７５０％、約６００％～約７００％、約６００％～約６５０％、約６５０％～約８００％、約６５０％～約７５０％、約６５０％～約７００％、約７００％～約８００％、約７００％～約７５０％、または約７５０％～約８００％）の増加をもたらし得る。

【0191】

免疫細胞の増殖を誘導するかまたは増加させる方法
また、免疫細胞（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な免疫細胞のうちのいずれか）の増殖を誘導するかまたは増加させる方法も本明細書に提供され、この方法は、免疫細胞を、有効量の本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかと接触させることを含む。いくつかの例では、免疫細胞は、インビトロで（例えば、免疫細胞の刺激をもたらすのに十分な条件下で、好適な液体培地中で）接触する。

【0192】

いくつかの例では、免疫細胞は、対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）から以前に得られている。これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む。

【0193】

いくつかの例では、免疫細胞は、インビボで接触する。そのような実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）に、対象における免疫細胞の刺激をもたらすのに十分な量で投与される。

【0194】

本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの例では、免疫細胞は、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、メモリーＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、もしくはナチュラルキラー細胞、またはそれらの組み合わせであり得る。

【0195】

いくつかの例では、免疫細胞は、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている。いくつかの例では、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）は、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）を発現するように以前に遺伝子改変されている。

【0196】

これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの後に、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含み得る。これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの後に、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）に、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）をコードする核酸を導入することをさらに含み得る。

【0197】

これらの方法のいくつかの実施形態は、治療有効量の免疫細胞を、それを必要とする対象（例えば、本明細書に記載の例示的な対象のうちのいずれか）に投与することをさらに含み得る。

【0198】

いくつかの例では、対象は、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断された対象であり得る。加齢関連疾患または障害の非限定的な例には、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害が挙げられる。

【0199】

いくつかの例では、対象は、がんを有すると特定または診断されている対象であり得る。がんの非限定的な例には、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんが挙げられる。

【0200】

いくつかの例では、対象は、感染性疾患を有すると診断または特定されている対象であり得る。感染性疾患の非限定的な例には、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、またはインフルエンザウイルスによる感染が挙げられる。

【0201】

免疫細胞の増殖の検出は、当該技術分野で既知の方法、例えば、サイトメトリー（例えば、蛍光支援フローサイトメトリー）、顕微鏡法、および免疫蛍光顕微鏡法を使用して、例えば、単鎖キメラポリペプチドと接触していない試料中の免疫細胞の濃度の増加率を、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかと接触した同様の試料中の免疫細胞の濃度の増加率と比較することによって実施され得る。

【0202】

他の例では、免疫細胞の増殖は、（例えば、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれとも接触していない対照における１つ以上のサイトカインおよびケモカインのレベルと比較して、）増殖性免疫細胞によって分泌される１つ以上のサイトカインもしくはケモカインまたは調節分子（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２２、ＩＬ－３３、ロイコトリエンＢ４、ＣＣＬ５、ＴＮＦα、グランザイム、パーフォリン、ＴＧＦβ、ＳＴＡＴ３、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＳＴＡＴ６、およびＧＡＴＡ３のうちの１つ以上）のレベルの増加を検出することによって間接的に検出され得る。

【0203】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法は、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれとも接触していない同様の対照試料中の免疫細胞の濃度の増加率と比較して、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかと接触した試料中の免疫細胞の濃度の増加率の増加（例えば、約１％～約８００％の増加、または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）をもたらし得る。

【0204】

免疫細胞の分化を誘導する方法
また、免疫細胞（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な免疫細胞のうちのいずれか）のメモリーまたはメモリー様免疫細胞への分化を誘導する方法も本明細書に提供され、この方法は、免疫細胞を、有効量の本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかと接触させることを含む。いくつかの例では、免疫細胞は、インビトロで（例えば、免疫細胞の刺激をもたらすのに十分な条件下で、好適な液体培地中で）接触する。

【0205】

いくつかの例では、免疫細胞は、対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）から以前に得られている。これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む。

【0206】

いくつかの例では、免疫細胞は、インビボで接触する。そのような実施形態では、単鎖キメラポリペプチドは、対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）に、対象における免疫細胞の刺激をもたらすのに十分な量で投与される。

【0207】

本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの例では、免疫細胞は、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、もしくはナチュラルキラー細胞、またはそれらの組み合わせであり得る。

【0208】

いくつかの例では、免疫細胞は、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている。いくつかの例では、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）は、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）を発現するように以前に遺伝子改変されている。

【0209】

これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの後に、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含み得る。これらの方法のいくつかの実施形態は、接触させるステップの後に、免疫細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞のうちのいずれか）に、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）をコードする核酸を導入することをさらに含み得る。

【0210】

これらの方法のいくつかの実施形態は、治療有効量の免疫細胞を、それを必要とする対象（例えば、本明細書に記載の例示的な対象のうちのいずれか）に投与することをさらに含み得る。

【0211】

いくつかの例では、対象は、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断された対象であり得る。加齢関連疾患または障害の非限定的な例には、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害が挙げられる。

【0212】

いくつかの例では、対象は、がんを有すると特定または診断されている対象であり得る。がんの非限定的な例には、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんが挙げられる。

【0213】

いくつかの例では、対象は、感染性疾患を有すると診断または特定されている対象であり得る。感染性疾患の非限定的な例には、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、またはインフルエンザウイルスによる感染が挙げられる。

【0214】

いくつかの例では、免疫細胞は、ＮＫ細胞であり、メモリーＮＫ細胞の検出は、例えば、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ６２Ｌ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－３３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５、Ｚｂｔｂ３２、ＤＮＡＭ－１、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０、ＮＫｐ４６、ＢＩＭ、Ｎｏｘａ、ＳＯＣＳ１、ＢＮＩＰ３、ＢＮＩＰ３Ｌ、ＩＦＮ－γ、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＲＡＩＬ、ＣＤ４９、Ｌｙ４９Ｄ、ＣＤ４９ｂ、およびＬｙ７９Ｈのうちの１つ以上の増加したレベルの検出を含み得る。メモリーＮＫ細胞およびそれを検出する方法の説明は、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４３：６３４－６４５，２０１５に記載されている。

【0215】

いくつかの例では、免疫細胞は、Ｔ細胞であり、メモリーＴ細胞の検出は、例えば、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＡ、インテグリンαｅβ７、ＣＤ４３、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＬ－７Ｒα、ＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、およびＬＦＡ－１のうちの１つ以上の発現レベルの検出を含み得る。いくつかの例では、免疫細胞は、Ｂ細胞であり、メモリーＢ細胞の検出は、例えば、ＣＤ２７の発現レベルの検出を含み得る。メモリーまたはメモリー様免疫細胞の他のタイプおよびマーカーは、当該技術分野で既知である。

【0216】

治療の方法
また、治療を必要とする対象（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な対象のうちのいずれか）を治療する方法も本明細書に提供され、この方法は、対象に、治療有効量の本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかを投与することを含む。

【0217】

これらの方法のいくつかの実施形態では、対象は、がんを有すると特定または診断されている。がんの非限定的な例には、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんが挙げられる。いくつかの実施形態では、これらの方法は、（例えば、治療前の対象におけるがんの１つ以上の症状の数、重症度、または頻度と比較して、）対象におけるがんの１つ以上の症状の数、重症度、または頻度の減少をもたらし得る。いくつかの実施形態では、これらの方法は、（例えば、治療前または治療開始時の１つ以上の固形腫瘍の体積と比較して、）対象における１つ以上の固形腫瘍の体積の減少（例えば、約１％減少～約９９％減少、約１％減少～約９５％減少、約１％減少～約９０％減少、約１％減少～約８５％減少、約１％減少～約８０％減少、約１％減少～約７５％減少、約１％減少～約７０％減少、約１％減少～約６５％減少、約１％減少～約６０％減少、約１％減少～約５５％減少、約１％減少～約５０％減少、約１％減少～約４５％減少、約１％減少～約４０％減少、約１％減少～約３５％減少、約１％減少～約３０％減少、約１％減少～約２５％減少、約１％減少～約２０％減少、約１％減少～約１５％減少、約１％減少～約１０％減少、約１％減少～約５％減少、約５％減少～約９９％減少、約５％減少～約９５％減少、約５％減少～約９０％減少、約５％減少～約８５％減少、約５％減少～約８０％減少、約５％減少～約７５％減少、約５％減少～約７０％減少、約５％減少～約６５％減少、約５％減少～約６０％減少、約５％減少～約５５％減少、約５％減少～約５０％減少、約５％減少～約４５％減少、約５％減少～約４０％減少、約５％減少～約３５％減少、約５％減少～約３０％減少、約５％減少～約２５％減少、約５％減少～約２０％減少、約５％減少～約１５％減少、約５％減少～約１０％減少、約１０％減少～約９９％減少、約１０％減少～約９５％減少、約１０％減少～約９０％減少、約１０％減少～約８５％減少、約１０％減少～約８０％減少、約１０％減少～約７５％減少、約１０％減少～約７０％減少、約１０％減少～約６５％減少、約１０％減少～約６０％減少、約１０％減少～約５５％減少、約１０％減少～約５０％減少、約１０％減少～約４５％減少、約１０％減少～約４０％減少、約１０％減少～約３５％減少、約１０％減少～約３０％減少、約１０％減少～約２５％減少、約１０％減少～約２０％減少、約１０％減少～約１５％減少、約１５％減少～約９９％減少、約１５％減少～約９５％減少、約１５％減少～約９０％減少、約１５％減少～約８５％減少、約１５％減少～約８０％減少、約１５％減少～約７５％減少、約１５％減少～約７０％減少、約１５％減少～約６５％減少、約１５％減少～約６０％減少、約１５％減少～約５５％減少、約１５％減少～約５０％減少、約１５％減少～約４５％減少、約１５％減少～約４０％減少、約１５％減少～約３５％減少、約１５％減少～約３０％減少、約１５％減少～約２５％減少、約１５％減少～約２０％減少、約２０％減少～約９９％減少、約２０％減少～約９５％減少、約２０％減少～約９０％減少、約２０％減少～約８５％減少、約２０％減少～約８０％減少、約２０％減少～約７５％減少、約２０％減少～約７０％減少、約２０％減少～約６５％減少、約２０％減少～約６０％減少、約２０％減少～約５５％減少、約２０％減少～約５０％減少、約２０％減少～約４５％減少、約２０％減少～約４０％減少、約２０％減少～約３５％減少、約２０％減少～約３０％減少、約２０％減少～約２５％減少、約２５％減少～約９９％減少、約２５％減少～約９５％減少、約２５％減少～約９０％減少、約２５％減少～約８５％減少、約２５％減少～約８０％減少、約２５％減少～約７５％減少、約２５％減少～約７０％減少、約２５％減少～約６５％減少、約２５％減少～約６０％減少、約２５％減少～約５５％減少、約２５％減少～約５０％減少、約２５％減少～約４５％減少、約２５％減少～約４０％減少、約２５％減少～約３５％減少、約２５％減少～約３０％減少、約３０％減少～約９９％減少、約３０％減少～約９５％減少、約３０％減少～約９０％減少、約３０％減少～約８５％減少、約３０％減少～約８０％減少、約３０％減少～約７５％減少、約３０％減少～約７０％減少、約３０％減少～約６５％減少、約３０％減少～約６０％減少、約３０％減少～約５５％減少、約３０％減少～約５０％減少、約３０％減少～約４５％減少、約３０％減少～約４０％減少、約３０％減少～約３５％減少、約３５％減少～約９９％減少、約３５％減少～約９５％減少、約３５％減少～約９０％減少、約３５％減少～約８５％減少、約３５％減少～約８０％減少、約３５％減少～約７５％減少、約３５％減少～約７０％減少、約３５％減少～約６５％減少、約３５％減少～約６０％減少、約３５％減少～約５５％減少、約３５％減少～約５０％減少、約３５％減少～約４５％減少、約３５％減少～約４０％減少、約４０％減少～約９９％減少、約４０％減少～約９５％減少、約４０％減少～約９０％減少、約４０％減少～約８５％減少、約４０％減少～約８０％減少、約４０％減少～約７５％減少、約４０％減少～約７０％減少、約４０％減少～約６５％減少、約４０％減少～約６０％減少、約４０％減少～約５５％減少、約４０％減少～約５０％減少、約４０％減少～約４５％減少、約４５％減少～約９９％減少、約４５％減少～約９５％減少、約４５％減少～約９０％減少、約４５％減少～約８５％減少、約４５％減少～約８０％減少、約４５％減少～約７５％減少、約４５％減少～約７０％減少、約４５％減少～約６５％減少、約４５％減少～約６０％減少、約４５％減少～約５５％減少、約４５％減少～約５０％減少、約５０％減少～約９９％減少、約５０％減少～約９５％減少、約５０％減少～約９０％減少、約５０％減少～約８５％減少、約５０％減少～約８０％減少、約５０％減少～約７５％減少、約５０％減少～約７０％減少、約５０％減少～約６５％減少、約５０％減少～約６０％減少、約５０％減少～約５５％減少、約５５％減少～約９９％減少、約５５％減少～約９５％減少、約５５％減少～約９０％減少、約５５％減少～約８５％減少、約５５％減少～約８０％減少、約５５％減少～約７５％減少、約５５％減少～約７０％減少、約５５％減少～約６５％減少、約５５％減少～約６０％減少、約６０％減少～約９９％減少、約６０％減少～約９５％減少、約６０％減少～約９０％減少、約６０％減少～約８５％減少、約６０％減少～約８０％減少、約６０％減少～約７５％減少、約６０％減少～約７０％減少、約６０％減少～約６５％減少、約６５％減少～約９９％減少、約６５％減少～約９５％減少、約６５％減少～約９０％減少、約６５％減少～約８５％減少、約６５％減少～約８０％減少、約６５％減少～約７５％減少、約６５％減少～約７０％減少、約７０％減少～約９９％減少、約７０％減少～約９５％減少、約７０％減少～約９０％減少、約７０％減少～約８５％減少、約７０％減少～約８０％減少、約７０％減少～約７５％減少、約７５％減少～約９９％減少、約７５％減少～約９５％減少、約７５％減少～約９０％減少、約７５％減少～約８５％減少、約７５％減少～約８０％減少、約８０％減少～約９９％減少、約８０％減少～約９５％減少、約８０％減少～約９０％減少、約８０％減少～約８５％減少、約８５％減少～約９９％減少、約８５％減少～約９５％減少、約８５％減少～約９０％減少、約９０％減少～約９９％減少、約９０％減少～約９５％減少、または約９５％減少～約９９％減少）をもたらし得る。いくつかの実施形態では、これらの方法は、（例えば、治療前の対象または異なる治療が施された同様の対象もしくは対象集団における転移または１つ以上の追加の転移を発症するリスクと比較して、）対象における転移または１つ以上の追加の転移を発症するリスクを減少（例えば、約１％減少～約９９％減少、または本明細書に記載のこの範囲の部分範囲のうちのいずれか）させ得る。

【0218】

これらの方法のいくつかの例では、対象は、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている。加齢関連疾患および状態の非限定的な例には、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害が挙げられる。いくつかの例では、これらの方法は、（例えば、治療前の対象における加齢関連疾患または状態の１つ以上の症状の数、重症度、または頻度と比較して、）対象における加齢関連疾患または状態の１つ以上の症状の数、重症度、または頻度の減少をもたらし得る。いくつかの例では、これらの方法は、例えば、治療前の対象における老化細胞の数と比較して、対象における老化細胞の数の減少（例えば、対象における加齢関連疾患または障害に関与しているおよび／または関係付けられている１つ以上の特定の組織中の老化細胞の数の減少）（例えば、約１％減少～約９９％減少、約１％減少～約９５％減少、約１％減少～約９０％減少、約１％減少～約８５％減少、約１％減少～約８０％減少、約１％減少～約７５％減少、約１％～約７０％減少、約１％減少～約６５％減少、約１％減少～約６０％減少、約１％減少～約５５％減少、約１％減少～約５０％減少、約１％減少～約４５％減少、約１％減少～約４０％減少、約１％減少～約３５％減少、約１％減少～約３０％減少、約１％減少～約２５％減少、約１％減少～約２０％減少、約１％減少～約１５％減少、約１％減少～約１０％減少、約１％減少～約５％減少、約５％減少～約９９％減少、約５％減少～約９５％減少、約５％減少～約９０％減少、約５％減少～約８５％減少、約５％減少～約８０％減少、約５％減少～約７５％減少、約５％～約７０％減少、約５％減少～約６５％減少、約５％減少～約６０％減少、約５％減少～約５５％減少、約５％減少～約５０％減少、約５％減少～約４５％減少、約５％減少～約４０％減少、約５％減少～約３５％減少、約５％減少～約３０％減少、約５％減少～約２５％減少、約５％減少～約２０％減少、約５％減少～約１５％減少、約５％減少～約１０％減少、約１０％減少～約９９％減少、約１０％減少～約９５％減少、約１０％減少～約９０％減少、約１０％減少～約８５％減少、約１０％減少～約８０％減少、約１０％減少～約７５％減少、約１０％～約７０％減少、約１０％減少～約６５％減少、約１０％減少～約６０％減少、約１０％減少～約５５％減少、約１０％減少～約５０％減少、約１０％減少～約４５％減少、約１０％減少～約４０％減少、約１０％減少～約３５％減少、約１０％減少～約３０％減少、約１０％減少～約２５％減少、約１０％減少～約２０％減少、約１０％減少～約１５％減少、約１５％減少～約９９％減少、約１５％減少～約９５％減少、約１５％減少～約９０％減少、約１５％減少～約８５％減少、約１５％減少～約８０％減少、約１５％減少～約７５％減少、約１５％～約７０％減少、約１５％減少～約６５％減少、約１５％減少～約６０％減少、約１５％減少～約５５％減少、約１５％減少～約５０％減少、約１５％減少～約４５％減少、約１５％減少～約４０％減少、約１５％減少～約３５％減少、約１５％減少～約３０％減少、約１５％減少～約２５％減少、約１５％減少～約２０％減少、約２０％減少～約９９％減少、約２０％減少～約９５％減少、約２０％減少～約９０％減少、約２０％減少～約８５％減少、約２０％減少～約８０％減少、約２０％減少～約７５％減少、約２０％～約７０％減少、約２０％減少～約６５％減少、約２０％減少～約６０％減少、約２０％減少～約５５％減少、約２０％減少～約５０％減少、約２０％減少～約４５％減少、約２０％減少～約４０％減少、約２０％減少～約３５％減少、約２０％減少～約３０％減少、約２０％減少～約２５％減少、約２５％減少～約９９％減少、約２５％減少～約９５％減少、約２５％減少～約９０％減少、約２５％減少～約８５％減少、約２５％減少～約８０％減少、約２５％減少～約７５％減少、約２５％～約７０％減少、約２５％減少～約６５％減少、約２５％減少～約６０％減少、約２５％減少～約５５％減少、約２５％減少～約５０％減少、約２５％減少～約４５％減少、約２５％減少～約４０％減少、約２５％減少～約３５％減少、約２５％減少～約３０％減少、約３０％減少～約９９％減少、約３０％減少～約９５％減少、約３０％減少～約９０％減少、約３０％減少～約８５％減少、約３０％減少～約８０％減少、約３０％減少～約７５％減少、約３０％～約７０％減少、約３０％減少～約６５％減少、約３０％減少～約６０％減少、約３０％減少～約５５％減少、約３０％減少～約５０％減少、約３０％減少～約４５％減少、約３０％減少～約４０％減少、約３０％減少～約３５％減少、約３５％減少～約９９％減少、約３５％減少～約９５％減少、約３５％減少～約９０％減少、約３５％減少～約８５％減少、約３５％減少～約８０％減少、約３５％減少～約７５％減少、約３５％～約７０％減少、約３５％減少～約６５％減少、約３５％減少～約６０％減少、約３５％減少～約５５％減少、約３５％減少～約５０％減少、約３５％減少～約４５％減少、約３５％減少～約４０％減少、約４０％減少～約９９％減少、約４０％減少～約９５％減少、約４０％減少～約９０％減少、約４０％減少～約８５％減少、約４０％減少～約８０％減少、約４０％減少～約７５％減少、約４０％～約７０％減少、約４０％減少～約６５％減少、約４０％減少～約６０％減少、約４０％減少～約５５％減少、約４０％減少～約５０％減少、約４０％減少～約４５％減少、約４５％減少～約９９％減少、約４５％減少～約９５％減少、約４５％減少～約９０％減少、約４５％減少～約８５％減少、約４５％減少～約８０％減少、約４５％減少～約７５％減少、約４５％～約７０％減少、約４５％減少～約６５％減少、約４５％減少～約６０％減少、約４５％減少～約５５％減少、約４５％減少～約５０％減少、約５０％減少～約９９％減少、約５０％減少～約９５％減少、約５０％減少～約９０％減少、約５０％減少～約８５％減少、約５０％減少～約８０％減少、約５０％減少～約７５％減少、約５０％～約７０％減少、約５０％減少～約６５％減少、約５０％減少～約６０％減少、約５０％減少～約５５％減少、約５５％減少～約９９％減少、約５５％減少～約９５％減少、約５５％減少～約９０％減少、約５５％減少～約８５％減少、約５５％減少～約８０％減少、約５５％減少～約７５％減少、約５５％～約７０％減少、約５５％減少～約６５％減少、約５５％減少～約６０％減少、約６０％減少～約９９％減少、約６０％減少～約９５％減少、約６０％減少～約９０％減少、約６０％減少～約８５％減少、約６０％減少～約８０％減少、約６０％減少～約７５％減少、約６０％～約７０％減少、約６０％減少～約６５％減少、約６５％減少～約９９％減少、約６５％減少～約９５％減少、約６５％減少～約９０％減少、約６５％減少～約８５％減少、約６５％減少～約８０％減少、約６５％減少～約７５％減少、約６５％～約７０％減少、約７０％減少～約９９％減少、約７０％減少～約９５％減少、約７０％減少～約９０％減少、約７０％減少～約８５％減少、約７０％減少～約８０％減少、約７０％減少～約７５％減少、約７５％減少～約９９％減少、約７５％減少～約９５％減少、約７５％減少～約９０％減少、約７５％減少～約８５％減少、約７５％減少～約８０％減少、約８０％減少～約９９％減少、約８０％減少～約９５％減少、約８０％減少～約９０％減少、約８０％減少～約８５％減少、約８５％減少～約９９％減少、約８５％減少～約９５％減少、約８５％減少～約９０％減少、約９０％減少～約９９％減少、約９０％減少～約９５％減少、または約９５％減少～約９９％減少）をもたらし得る。

【0219】

これらの方法のいくつかの例では、対象は、感染症疾患を有すると診断または特定されている。感染性疾患の非限定的な例には、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染が挙げられる。いくつかの実施形態では、これらの方法は、（例えば、治療前の対象における感染力価と比較して、）対象における感染力価（例えば、ウイルス力価）の減少をもたらし得る。いくつかの実施形態では、これらの方法は、（例えば、治療前の対象における感染性疾患の１つ以上の症状の数、重症度、または頻度と比較して、）対象における感染性疾患（例えば、ウイルス感染）の１つ以上の症状の数、重症度、または頻度の減少をもたらし得る。

【0220】

「対象」という用語は、任意の哺乳動物を指す。いくつかの実施形態では、対象または「治療を必要とする対象」は、イヌ科動物（例えば、イヌ）、ネコ科動物（例えば、ネコ）、ウマ科動物（例えば、ウマ）、ヒツジ、ウシ、ブタ、ヤギ、霊長類、例えば、サル（ｓｉｍｉａｎ）（例えば、サル（ｍｏｎｋｅｙ）（例えば、マーモセット、ヒヒ）、もしくは類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、またはテナガザル）、もしくはヒト、または齧歯類（例えば、マウス、テンジクネズミ、ハムスター、またはラット）であり得る。いくつかの実施形態では、対象または「治療を必要とする対象」は、非ヒト哺乳動物であり得、特にヒトにおける治療効果を実証するためのモデルとして従来的に使用されている哺乳動物（例えば、マウス、ウサギ、ブタ、イヌ、または霊長類動物）が用いられ得る。

【0221】

がん細胞、感染細胞、または老化細胞を死滅させる方法
また、がん細胞（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なタイプのがんのうちのいずれか）、感染細胞（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的なウイルスのうちのいずれかによる感染）、または老化細胞（例えば、老化がん細胞、老化線維芽細胞、または老化内皮細胞）の死滅を必要とする対象（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の例示的な対象のうちのいずれか）においてそれらを死滅させる方法も本明細書に提供され、この方法は、対象に、治療有効量の本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかを投与することを含む。

【0222】

これらの方法のいくつかの実施形態では、対象は、がんを有すると特定または診断されている。がんの非限定的な例には、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんが挙げられる。

【0223】

これらの方法のいくつかの例では、対象は、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている。加齢関連疾患および状態の非限定的な例には、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害が挙げられる。

【0224】

これらの方法のいくつかの例では、対象は、感染症疾患を有すると診断または特定されている。感染性疾患の非限定的な例には、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染が挙げられる。

【0225】

老化細胞
老化は、表現型の変化、アポトーシスへの耐性、および損傷を感知するシグナル伝達経路の活性化を伴う不可逆的な成長停止の一形態である。細胞老化は、増殖する能力を失った培養ヒト線維芽細胞で最初に説明され、約５０回の集団倍加（ヘイフリック限界と称される）後に永久停止に達した。老化は、酸化的ストレスおよび遺伝毒性ストレス、ＤＮＡ損傷、テロメア摩滅、発がん性活性化、ミトコンドリア機能障害、または化学療法剤を含む、広範囲の内因性および外因性傷害によって誘導され得るストレス応答とみなされる。

【0226】

老化細胞は、代謝的に活性を維持し、それらの分泌表現型を介して組織の止血、疾患、および加齢に影響を及ぼし得る。老化は、生理学的プロセスとみなされており、創傷治癒、組織の恒常性、再生、および線維症の調節を促進する上で重要である。例えば、老化細胞の一過性の誘導は、治癒中に観察され、創傷の消散に寄与する。恐らく、老化の最も重要な役割の１つは、腫瘍抑制におけるその役割である。しかしながら、老化細胞の蓄積は、加齢および加齢関連疾患および状態も促進する。老化の表現型は、慢性炎症応答も誘因し、その結果、慢性炎症状態を増強して、腫瘍の成長を促進する可能性がある。老化と加齢との間の関連性は、当初、老化細胞が加齢組織に蓄積するという観察に基づいていた。トランスジェニックモデルの使用により、多くの加齢関連病状において老化細胞を体系的に検出することが可能となっている。老化細胞を選択的に排除するための戦略は、老化細胞が実際に加齢および関連病状において因果的役割を果たし得ることを実証している。

【0227】

老化細胞は、形態、クロマチン構成、遺伝子発現、および代謝の変化を含む重要かつ特有の特性を呈する。細胞老化に関連するいくつかの生化学的および機能的特性、例えば、（ｉ）サイクリン依存性キナーゼの阻害剤であるｐ１６およびｐ２１の発現の増加、（ｉｉ）リソソーム活性のマーカーである老化関連β－ガラクトシダーゼの存在、（ｉｉｉ）老化関連ヘテロクロマチン病巣の出現およびラミンＢ１レベルのダウンレギュレーション、（ｉｖ）抗アポトーシスＢＣＬファミリータンパク質の発現の増加によって引き起こされるアポトーシスに対する耐性、および（ｖ）ＣＤ２６（ＤＰＰ４）、ＣＤ３６（スカベンジャー受容体）、フォークヘッドボックス４（ＦＯＸＯ４）、および分泌担体膜タンパク質４（ＳＣＡＭＰ４）のアップレギュレーションが存在する。老化細胞は、炎症特性、いわゆる老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）も発現する。ＳＡＳＰを介して、老化細胞は、細胞自律的様式で作動して老化を強化し（オートクリン効果）、微小環境と通信してそれを改変する（パラクリン効果）、広範囲の炎症性サイトカイン（ＩＬ－６、ＩＬ－８）、成長因子（ＴＧＦ－β）、ケモカイン（ＣＣＬ－２）、およびマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９）を産生する。ＳＡＳＰ因子は、老化細胞の免疫介在性クリアランスである老化監視を誘因することによって腫瘍抑制に寄与することができる。しかしながら、慢性炎症も腫瘍形成の既知の要因であり、累積証拠は、慢性ＳＡＳＰががんおよび加齢関連疾患を後押しする可能性もあることを示す。

【0228】

老化細胞の分泌プロファイルは、状況依存的である。例えば、ヒト線維芽細胞における様々なミトコンドリア機能障害によって誘導されるミトコンドリア機能障害関連老化（ＭｉＤＡＳ）は、ＩＬ－１依存性炎症性因子が不足したＳＡＳＰの出現をもたらした。ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ比の減少は、ｐ５３の活性化によりＭｉＤＡＳを誘導したＡＭＰＫシグナル伝達を活性化した。結果として、ｐ５３は、炎症促進性ＳＡＳＰの重要な誘導因子であるＮＦ－κＢシグナル伝達を阻害した。対照的に、ヒト細胞における持続的なＤＮＡ損傷によって引き起こされた細胞老化は、炎症性ＳＡＳＰを誘導し、これは、運動失調－毛細血管拡張症変異（ＡＴＭ）キナーゼの活性化に依存したが、ｐ５３の活性化には依存しなかった。具体的には、ＩＬ－６およびＩＬ－８の発現レベルおよび分泌レベルが増加した。異所性発現ｐ１６ＩＮＫ４ａおよびｐ２１ＣＩＰ１によって引き起こされる細胞老化が、炎症性ＳＡＳＰなしでヒト線維芽細胞における老化表現型を誘導することも実証されており、成長停止自体はＳＡＳＰを刺激しなかったことを示している。

【0229】

老化の最も明確な特徴の１つは、安定した成長停止である。これは、２つの重要な経路であるｐ１６／Ｒｂおよびｐ５３／ｐ２１によって達成され、これらはいずれも腫瘍抑制の中心である。ＤＮＡ損傷は、（１）クロマチンにおけるγＨ２Ａｘ（ヒストンコーディング遺伝子）および５３ＢＰ１（ＤＮＡ損傷応答に関与）の高沈着（これは最終的にｐ５３活性化をもたらすキナーゼカスケードの活性化につながる）、および（２）ｐ１６ＩＮＫ４ａおよびＡＲＦ（いずれもＣＤＫＮ２Ａによってコードされる）ならびにＰ１５ＩＮＫ４ｂ（ＣＤＫＮ２Ｂによってコードされる）の活性化（ｐ５３はサイクリン依存性キナーゼ阻害剤（ｐ２１）の転写を誘導し、ｐ１６ＩＮＫ４ａおよびｐ１５ＩＮＫ４ｂの両方とともに、細胞周期進行のために遺伝子を遮断する（ＣＤＫ４およびＣＤＫ６））をもたらす。これは、最終的に網膜芽細胞腫タンパク質（Ｒｂ）の低リン酸化およびＧ１期での細胞周期停止につながる。

【0230】

老化細胞を選択的に死滅させることにより、正常な加齢との関連でマウスの健康スパンが有意に改善され、加齢関連疾患またはがん療法の結果が改善されることが示されている（Ｏｖａｄｙａ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１２８（４）：１２４７－１２５４，２０１８）。自然界では、老化細胞は、通常、自然免疫細胞によって除去される。老化の誘導は、損傷／変化した細胞の潜在的な増殖および形質転換を阻止するのみならず、主にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（ＩＬ－１５およびＣＣＬ２等）およびマクロファージ（ＣＦＳ－１およびＣＣＬ２等）の化学誘引物質として機能するＳＡＳＰ因子の産生により組織修復も支持する。これらの自然免疫細胞は、ストレスを受けた細胞を排除するための免疫監視メカニズムを媒介する。老化細胞は、通常、ストレス誘導性リガンドのファミリーに属するＮＫ細胞活性化受容体ＮＫＧ２ＤおよびＤＮＡＭ１リガンドをアップレギュレートし、これは、感染性疾患および悪性腫瘍に対する最前線の免疫防御の重要な要素である。受容体が活性化されると、ＮＫ細胞は、それらの細胞溶解機構を介して老化細胞の死を特異的に誘導することができる。老化細胞の免疫監視におけるＮＫ細胞の役割は、肝線維症（Ｓａｇｉｖ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３２（１５）：１９７１－１９７７，２０１３）、肝細胞がん（Ｉａｎｎｅｌｌｏ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２１０（１０）：２０５７－２０６９，２０１３）、多発性骨髄腫（Ｓｏｒｉａｎｉ，Ｂｌｏｏｄ １１３（１５）：３５０３－３５１１，２００９）、およびメバロン酸経路の機能傷害によってストレスを受けた神経膠腫細胞（Ｃｉａｇｌｉａ，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １４２（１）：１７６－１９０，２０１８）において指摘されている。子宮内膜細胞は、急性細胞老化を受け、脱落膜細胞に分化しない。分化した脱落膜細胞は、ＩＬ－１５を分泌し、それにより子宮ＮＫ細胞を動員して、未分化老化細胞を標的として排除し、ひいては子宮内膜の再構築および若返りを助ける（Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，Ｅｌｉｆｅ ６：ｅ３１２７４，２０１７）。同様のメカニズムを用いて、肝線維症の間、ｐ５３を発現する老化肝衛星細胞は、常在性Ｋｕｐｆｅｒマクロファージおよび新たに浸潤したマクロファージの極性を、老化細胞除去活性を呈する炎症促進性Ｍ１表現型に向かって歪めた。Ｆ４／８０＋マクロファージが、分娩後の子宮機能を維持するためにマウス子宮老化細胞のクリアランスに重要な役割を果たすことが示されている。

【0231】

老化細胞は、主に、ＮＫＧ２Ｄ（ＮＫ細胞で発現）、ケモカイン、および他のＳＡＳＰ因子に対するリガンドをアップレギュレートすることによってＮＫ細胞を動員する。肝線維症のインビボモデルは、活性化されたＮＫ細胞による老化細胞の効果的なクリアランスを示している（Ｋｒｉｚｈａｎｏｖｓｋｙ，Ｃｅｌｌ １３４（４）：６５７－６６７，２００８）。研究は、肝線維症（Ｋｒｉｚｈａｎｏｖｓｋｙ，Ｃｅｌｌ １３４（４）：６５７－６６７，２００８）、変形性関節症（Ｘｕ，Ｊ Ｇｅｒｏｎｔｏｌ Ａ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ Ｍｅｄ Ｓｃｉ ７２（６）：７８０－７８５，２０１７）、およびパーキンソン病（Ｃｈｉｎｔａ，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ ２２（４）：９３０－９４０，２０１８）を含む老化を研究するための様々なモデルを説明している。老化細胞を研究するための動物モデルは、Ｋｒｉｚｈａｎｏｖｓｋｙ，Ｃｅｌｌ １３４（４）：６５７－６６７，２００８、Ｂａｋｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ４７９（７３７２）：２３２－２３６，２０１１、Ｆａｒｒ，Ｎａｔ Ｍｅｄ ２３（９）：１０７２－１０７９，２０１７、Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５９２（１２）：２０８３－２０９７，２０１８、Ｘｕ，Ｎａｔ Ｍｅｄ ２４（８）：１２４６－１２５６，２０１８）で説明されている。

【0232】

追加の治療剤
本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態は、治療有効量の１つ以上の追加の治療剤を対象（例えば、本明細書に記載の対象のうちのいずれか）に投与することをさらに含み得る。１つ以上の追加の治療剤は、単鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれか）または免疫細胞と実質的に同時に対象に投与され得る（例えば、単一製剤としてまたは２つ以上の製剤として対象に投与され得る）。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の治療剤は、単鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれか）または免疫細胞を投与する前に、対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の治療剤は、単鎖キメラポリペプチド（例えば、本明細書に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれか）または免疫細胞を投与した後に、対象に投与され得る。

【0233】

追加の治療剤の非限定的な例には、抗がん剤、活性化受容体アゴニスト、免疫チェックポイント阻害剤、ＨＬＡ特異的阻害受容体を遮断するための薬剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ）３阻害剤、および抗体が挙げられる。

【0234】

抗がん薬の非限定的な例には、代謝拮抗薬（例えば、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、カペシタビン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、メトトレキサート、６－チオグアニン、クラドリビン、ネララビン、ペントスタチン、またはペメトレキセド）、植物アルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、カンプトセシン、９－メトキシカンプトセシン、コロナリジン、タキソール、ナウクレアオラル（ｎａｕｃｌｅａｏｒａｌ）、ジプレニル化インドールアルカロイド、モンタミン、シシュキニイン、プロトベルベリン、ベルベリン、サンギナリン、ケレリトリン、ケリドニン、リリオデニン、クリボリン、β－カルボリン、アントフィン、チロホリン、クリプトレピン、ネオクリプトレピン、コリノリン、サンパンギン、カルバゾール、クリナミン、モンタニン、エリプチシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、テニポシド、イリノテカン、トポテカン、またはアクリドンアルカロイド）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ラクタシスチン、ジスルフィラム、エピガロカテキン－３－ガレート、マリゾミブ（サリノスポラミドＡ）、オプロゾミブ（ＯＮＸ－０９１２）、デランゾミブ（ＣＥＰ－１８７７０）、エポキソミシン、ＭＧ１３２、ベータ－ヒドロキシベータ－メチルブチラート、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、またはイキサゾミブ）、抗腫瘍抗生物質（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、アクチノマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、またはブレオマイシン）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えば、ボリノスタット、パノビノスタット、ギビノスタット、アベキシノスタット、デプシペプチド、エンチノスタット、フェニルブチラート、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ダシノスタット、モセチノスタット、プラシノスタット、ニコチンアミド、カンビノール、テノビン１、テノビン６、シルチノール、リコリノスタット、テフィノスタット、ケベトリン、キシノスタット、レスミノスタット、タセジナリン、チダミド、またはセリシスタット）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、アキシチニブ、ダサチニブ、エンコラフィニブ、エルロチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、およびスニチニブ）、および化学療法剤（例えば、オールトランスレチノイン酸、アザシチジン、アザチオプリン、ドキシフルリジン、エポチロン、ヒドロキシウレア、イマチニブ、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ベムラフェニブ、およびレナリドミド）が挙げられる。化学療法剤の追加の例には、アルキル化剤、例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、イホスファミド、チオテパ、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、アルトレタミン、プロカルバジン、ダカルバジン、テモゾロミド、カルムスチン、ルムスチン、ストレプトゾシン、カルボプラチン、シスプラチン、およびオキサリプラチンが挙げられる。

【0235】

活性化受容体アゴニストの非限定的な例には、抗ＣＤ１６抗体（例えば、抗ＣＤ１６／ＣＤ３０二重特異性モノクローナル抗体（ＢｉＭＡｂ））およびＦｃベースの融合タンパク質を含む、ＮＫ細胞の細胞傷害性を活性化および増強する活性化受容体のための任意のアゴニストが挙げられる。チェックポイント阻害剤の非限定的な例には、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ＭＥＤＩ０６８０）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、ＢＣＤ－１３５、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＣＢＴ－５０２、ＣＫ－３０１、ＣＳ１００１、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＭＤＸ－１１０５、ＭＳＢ２３１１、ＳＨＲ－１３１６、抗ＰＤ－Ｌ１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体ＫＮ０４６、抗ＰＤ－Ｌ１／ＴＧＦβＲＩＩ融合タンパク質Ｍ７８２４、抗ＰＤ－Ｌ１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体ＬＹ３４１５２４４、アテゾリズマブ、またはアベルマブ）、抗ＴＩＭ３抗体（例えば、ＴＳＲ－０２２、Ｓｙｍ０２３、またはＭＢＧ４５３）、および抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、ＡＧＥＮ１８８４、ＭＫ－１３０８、または抗ＣＴＬＡ－４／ＯＸ４０二重特異性抗体ＡＴＯＲ－１０１５）が挙げられる。ＨＬＡ特異的阻害受容体を遮断するための薬剤の非限定的な例には、モナリズマブ（例えば、抗ＨＬＡ－Ｅ ＮＫＧ２Ａ阻害受容体モノクローナル抗体）が挙げられる。ＧＳＫ３阻害剤の非限定的な例には、チデグルシブまたはＣＨＩＲ９９０２１が挙げられる。追加の治療剤として使用され得る抗体の非限定的な例には、抗ＣＤ２６抗体（例えば、ＹＳ１１０）、抗ＣＤ３６抗体、およびＮＫ細胞上のＦｃ受容体（例えば、ＣＤ１６）に結合して活性化することができる任意の他の抗体または抗体構築物が挙げられる。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、インスリンまたはメトホルミンであり得る。

【実施例0236】

本発明は、以下の実施例にさらに記載されており、これらは、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定しない。

【0237】

実施例１．例示的な単鎖キメラポリペプチドの産生
抗ＣＤ３ ｓｃＦｖである第１の標的結合ドメイン、可溶性ヒト組織因子ドメイン、および抗ＣＤ２８ ｓｃＦｖである第２の標的結合ドメインを含む、例示的な単鎖キメラポリペプチド（αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ）を生成した（図１）。この単鎖キメラポリペプチドの核酸およびアミノ酸配列を以下に示す。

例示的な単鎖キメラポリペプチド（αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ）をコードする核酸（配列番号４）
（シグナルペプチド）
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＴＴＣＡＧＣＴＣＣＧＣＣＴＡＴＴＣＣ
（αＣＤ３軽鎖可変領域）
ＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＣＣＧＣＣＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＣＴＣＣＧＣＴＴＣＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＴＣＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＣＧＣＴＣＡＴＴＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＡＴＧＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＴＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＡＡＴＣＡＡＴＣＧＴ
（リンカー）
ＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣ
（αＣＤ３重鎖可変領域）
ＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＣＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＴＴＡＣＴＣＧＴＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＧＧＴＡＴＴＡＣＧＡＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣ
（ヒト組織因子２１９型）
ＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＴＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＴＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＡＴＣＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＴＧＡＴＴＴＡＡＣＣＧＡＣＧＡＡＡＴＣＧＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＣＧＧＧＴＣＴＴＴＴＣＣＴＡＣＣＣＣＧＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＧＧＣＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＣＴＣＴＡＣＧＡＧＡＡＴＴＣＣＣＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＣＣＣＴＴＡＴＴＴＡＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＴＡＡＣＡＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＡＡＡＧＡＣＣＧＣＴＡＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＣＧＴＧＡＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧＴＡＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＡＧＡＴＴＣＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧ
（αＣＤ２８軽鎖可変領域）
ＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＣＧＴＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＣＣＴＡＴＧＴＧＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＡＣＧＡＣＴＡＴＡＣＣＡＡＡＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＡＡＡＧＧＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＣＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＴＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ
（リンカー）
ＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＴＣＣ
（αＣＤ２８軽鎖可変領域）
ＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＣＧＡＧＣＧＧＧＴＣＡＣＡＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＧ

例示的な単鎖キメラポリペプチド（αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ）（配列番号３）
（シグナルペプチド）
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（αＣＤ３軽鎖可変領域）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲ
（リンカー）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
（αＣＤ３重鎖可変領域）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
（ヒト組織因子２１９）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ
（αＣＤ２８軽鎖可変領域）
ＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳ
（リンカー）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
（αＣＤ２８重鎖可変領域）
ＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ

【0238】

抗ＣＤ２８ ｓｃＦｖである第１の標的結合ドメイン、可溶性ヒト組織因子ドメイン、および抗ＣＤ３ ｓｃＦｖである第２の標的結合ドメインを含む、第２の例示的な単鎖キメラポリペプチド（αＣＤ２８ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ３ｓｃＦｖ）を生成した（図２）。この単鎖キメラポリペプチドの核酸およびアミノ酸配列を以下に示す。

例示的な単鎖キメラポリペプチド（αＣＤ２８ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ３ｓｃＦｖ）をコードする核酸（配列番号８）
（シグナルペプチド）
ＡＴＧＡＡＡＴＧＧＧＴＣＡＣＣＴＴＣＡＴＣＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＴＴＴＴＡＴＴＴＡＧＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＡＧＣ
（αＣＤ２８軽鎖可変領域）
ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＣＣＣＧＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＧＧＴＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＴＡＣＧＴＣＡＴＣＣＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＴＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＴＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＴＡＡＣＧＡＡＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＴＴＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＡＣＴＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＣＧＣＴＴＴＡＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＧＧＧＧＣＧＡＴＧＧＣＡＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＡＣＴＡＣＴＴＴＡＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＣＣ
（リンカー）
ＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＧＣ
（αＣＤ２８重鎖可変領域）
ＧＡＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＣＡＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＴＴＴＡＧＧＡＧＡＡＣＧＴＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＴＡＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＴＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＡＴＴＴＡＧＣＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＣＣＴＣＧＴＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＡＴＴＡＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＣＡＧＴＡＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＣＡＡＧＣＧＧ
（ヒト組織因子２１９型）
ＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＣＴＡＣＡＡＴＣＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＣＣＧＴＴＡＡＴＣＡＡＧＴＴＴＡＴＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＴＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＧＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＴＣＡＡＡＧＡＣＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＣＡＴＡＴＴＴＡＧＣＴＡＧＧＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＡＣＣＣＣＧＣＴＧＧＡＡＡＣＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＴＣＣＣＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＣＣＣＣＴＡＴＣＴＧＧＡＡＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＡＡＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＧＡＡＧＡＴＧＡＧＡＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＴＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＣＴＴＣＧＧＣＡＡＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＴＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＡＣＧＡＡＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＡＧＴＧＡＡＣＣＧＧＡＡＧＴＣＣＡＣＣＧＡＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＴＴＴＣＧＴＧＡＧ
（αＣＤ３軽鎖可変領域）
ＣＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＣＴＡＴＴＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＧＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＴＡＴＧＡＣＡＴＧＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＴＣＣＧＴＧＡＧＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＴＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＡＴＴＡＡＴＣＧＴ
（リンカー）
ＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＴＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＣ
（αＣＤ３重鎖可変領域）
ＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＡＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＡＣＴＣＧＣＴＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＴＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＴＣＡＣＣＣＧＧＴＡＣＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＣＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＧＧＣＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＴＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＴＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＧＧＴＡＣＴＡＣＧＡＣＧＡＴＣＡＴＴＡＣＴＧＣＣＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＴＴＡＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣ

例示的な単鎖キメラポリペプチド（αＣＤ２８ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ３ｓｃＦｖ）（配列番号７）
（シグナルペプチド）
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（αＣＤ２８軽鎖可変領域）
ＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＩＱＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＮＰＹＮＤＹＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＦＳＳＬＴＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＷＧＤＧＮＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳ
（リンカー）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
（αＣＤ２８重鎖可変領域）
ＤＩＥＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＬＧＥＲＶＴＭＴＣＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＦＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＬＣＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＨＱＹＨＲＳＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫＲ
（ヒト組織因子２１９）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ
（αＣＤ３軽鎖可変領域）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲ
（リンカー）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
（αＣＤ３重鎖可変領域）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ

【0239】

αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖをコードする核酸を、以前に記載されたように（Ｈｕｇｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １６：４５７－７２，２００５）改変レトロウイルス発現ベクターにクローニングした。αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖをコードする発現ベクターを、ＣＨＯ－Ｋ１細胞にトランスフェクトした。ＣＨＯ－Ｋ１細胞での発現ベクターの発現により、可溶性αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチド（３ｔ２８と称する）の分泌が可能になり、これを抗ＴＦ抗体アフィニティーおよび他のクロマトグラフィー法によって精製することができる。

【0240】

抗組織因子抗体アフィニティーカラムを使用して、αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドを精製した。抗組織因子抗体アフィニティーカラムを、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステムに接続した。流速４ｍＬ／分を、溶出ステップを除く全てのステップで使用し、溶出ステップの流速は２ｍＬ／分であった。

【0241】

αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドを含む細胞培養収集物を１Ｍトリス塩基でｐＨ７．４に調整し、５カラム体積のＰＢＳで平衡化した抗ＴＦ抗体アフィニティーカラム（上記）に装填した。試料を装填した後、カラムを５カラム体積のＰＢＳで洗浄し、続いて６カラム体積の０．１Ｍ酢酸、ｐＨ２．９で溶出した。Ａ２８０溶出ピークを収集し、次いで１Ｍトリス塩基を添加することによってｐＨ７．５～８．０に中和した。次いで、中和した試料を、分子量カットオフ３０ｋＤａでＡｍｉｃｏｎ遠心フィルターを使用してＰＢＳに緩衝液交換した。図２のデータは、抗組織因子抗体アフィニティーカラムが、ヒト可溶性組織因子ドメインを含有するαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドに結合できることを示す。緩衝液交換したタンパク質試料を、さらなる生化学的分析および生物学的活性試験のために２～８℃で保管した。

【0242】

各溶出後、抗組織因子抗体アフィニティーカラムを、６カラム体積の０．１Ｍグリシン、ｐＨ２．５を使用してストリッピングした。次いで、カラムを、１０カラム体積のＰＢＳ、０．０５％ＮａＮ_３を使用して中和し、２～８℃で保管した。

【0243】

分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を、ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）に接続されたＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬゲル濾過カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）を使用して、αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドにおいて実施した。カラムを、２カラム体積のＰＢＳで平衡化した。流速０．８ｍＬ／分を使用した。２００μＬのαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチド（１ｍｇ／ｍＬ）を、キャピラリーループを使用してカラムに注入した。単鎖キメラポリペプチドの注入後、１．２５カラム体積のＰＢＳをカラムに流し込んだ。ＳＥＣクロマトグラフを図３に示す。データは、αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドの単量体形態および二量体形態、または他の異なる形態を表す可能性が高い３つのタンパク質ピークが存在することを示す。

【0244】

αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドの純度およびタンパク質分子量を決定するために、抗組織因子抗体アフィニティーカラムからの精製αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖタンパク質試料を、還元条件下で標準ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル（４～１２％ＮｕＰａｇｅビス－トリスゲル）電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法によって分析した。ゲルをＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅで約３０分間染色し、精製水で一晩脱色した。図４は、抗組織因子抗体アフィニティーカラムを使用して精製したαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドのＳＤＳゲルを示す。結果は、精製αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドが、還元ＳＤＳゲルにおいて予想された分子量（７２ｋＤａ）を有することを示す。

【0245】

実施例２．αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドの機能的特性評価
ＥＬＩＳＡベースの方法により、αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドの形成を確認した。αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドを、捕捉用の１つの抗ＴＦモノクローナル抗体と、検出用の異なる抗ＴＦモノクローナル抗体とを用いて、ＥＬＩＳＡを使用して検出した（図５）。同様の濃度の精製組織因子タンパク質を、対照として使用した。

【0246】

さらなるインビトロ実験を実施して、αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドがヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を活性化できるかどうかを決定した。新鮮なヒト白血球を血液バンクから入手し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を密度勾配Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）を使用して単離した。細胞をカウントし、０．２ｍＬの完全培地（ＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ペニシリン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補充）中の９６ウェル平底プレートに０．２×１０^６／ｍＬで再懸濁した。細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で３日間、０．０１ｎＭ～１０００ｎＭのαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドで刺激した。７２時間後、細胞を収集し、ＣＤ４－４８８、ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５、ＣＤ２５－ＢＶ４２１、ＣＤ６９－ＡＰＣＦｉｒｅ７５０、ＣＤ６２Ｌ－ＰＥ Ｃｙ７、およびＣＤ４４－ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に３０分間表面染色した。表面染色後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（１Ｘ ＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、０．５％ＢＳＡ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）および０．００１％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含む）中で洗浄した（１５００ＲＰＭ、室温で５分間）。２回洗浄した後、細胞を３００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、フローサイトメトリー（Ｃｅｌｅｓｔａ－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって分析した。図６および７のデータは、αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドが、ＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞の両方を刺激することができることを示す。

【0247】

さらなる実験を実施し、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）を使用して血液から分離されたＰＢＭＣをカウントし、０．２ｍＬの完全培地（ＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ペニシリン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補充）中の９６ウェル平底プレートに０．２×１０^６／ｍＬで再懸濁した。次いで、細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で３日間、０．０１ｎＭ～１０００ｎＭのαＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドで刺激した。７２時間後、細胞を収集し、ＣＤ４－４８８、ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５、ＣＤ２５－ＢＶ４２１、ＣＤ６９－ＡＰＣＦｉｒｅ７５０、ＣＤ６２Ｌ－ＰＥ Ｃｙ７、およびＣＤ４４－ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に３０分間表面染色した。表面染色後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（１Ｘ ＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、０．５％ＢＳＡ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）および０．００１％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含む）中で洗浄した（１５００ＲＰＭ、室温で５分間）。２回洗浄した後、細胞を３００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、フローサイトメトリー（Ｃｅｌｅｓｔａ－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって分析した。データは、αＣＤ３ｓｃＦｖ／ＴＦ／αＣＤ２８ｓｃＦｖ単鎖キメラポリペプチドが、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の活性化を刺激することができたことを再び示す（図８）。

【0248】

実施例３．例示的な単鎖キメラポリペプチドＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の産生および特性評価
ＩＬ－２受容体に結合する第１の標的結合ドメイン、可溶性ヒト組織因子ドメイン、およびＩＬ－２受容体に結合する第２の標的結合ドメインを含む、例示的な単鎖キメラポリペプチド（ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２）を生成した（図９）。この単鎖キメラポリペプチドの核酸およびアミノ酸配列を以下に示す。

例示的な単鎖キメラポリペプチド（ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２）をコードする核酸（配列番号１１１）
（シグナルペプチド）
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ
（第１のＩＬ－２断片）
ＧＣＣＣＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＡＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＴＣＧＴＡＴＧＣＴＧＡＣＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＴＴＴＡＣＡＧＴＧＴＴＴＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＣＣＴＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＣＴＧＡＡＴＴＴＡＧＣＣＣＡＧＴＣＣＡＡＧＡＡＴＴＴＣＣＡＴＴＴＡＡＧＧＣＣＣＣＧＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＣＡＡＣＧＴＧＡＴＣＧＴＴＴＴＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＴＣＡＴＧＴＧＣＧＡＧＴＡＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＡＴＣＧＴＴＧＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡＣＴＴＴＡＡＣＣ
（ヒト組織因子２１９型）
ＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧ
（第２のＩＬ－２断片）
ＧＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＴＴＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＴＧＧＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＡＡＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＡＴＣＣＣＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡＧＧＡＴＧＣＴＣＡＣＡＴＴＴＡＡＧＴＴＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＣＡＧＡＡＣＴＧＡＡＡＣＡＴＣＴＴＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＡＧＴＧＣＴＡＡＡＴＴＴＡＧＣＴＣＡＡＡＧＣＡＡＡＡＡＣＴＴＴＣＡＣＴＴＡＡＧＡＣＣＣＡＧＧＧＡＣＴＴＡＡＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＣＡＡＣＧＴＡＡＴＡＧＴＴＣＴＧＧＡＡＣＴＡＡＡＧＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＴＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＧＡＣＡＧＣＡＡＣＣＡＴＴＧＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＴＡＣＣＴＴＴＴＧＴＣＡＡＡＧＣＡＴＣＡＴＣＴＣＡＡＣＡＣＴＡＡＣＴ

例示的な単鎖キメラポリペプチド（ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２）（配列番号１１０）
（シグナルペプチド）
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（ヒトＩＬ－２）
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ
（ヒト組織因子２１９）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ
（ヒトＩＬ－２）
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ

【0249】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２をコードする核酸を、以前に記載されたように（Ｈｕｇｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １６：４５７－７２，２００５）改変レトロウイルス発現ベクターにクローニングした。ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２をコードする発現ベクターを、ＣＨＯ－Ｋ１細胞にトランスフェクトした。ＣＨＯ－Ｋ１細胞での発現ベクターの発現により、可溶性ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２単鎖キメラポリペプチド（２ｔ２と称する）の分泌が可能になり、これを抗ＴＦ抗体アフィニティーおよび他のクロマトグラフィー法によって精製することができる。

【0250】

ＩＬ－２およびＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２は、ＩＬ－２Ｒβおよび共通γ鎖含有３２Ｄβ細胞の増殖を同様の様式で促進した
ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２のＩＬ－２活性を評価するために、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を、ＩＬ－２Ｒβおよび共通γ鎖を発現する３２Ｄβ細胞の増殖を促進するための組換えＩＬ－２と比較した。ＩＬ－２依存性３２Ｄβ細胞を、ＩＭＤＭ－１０％ＦＢＳで５回洗浄し、２×１０^４細胞／ウェルでウェルに播種した。ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２またはＩＬ－２の段階希釈液を細胞に添加した（図１０）。細胞をＣＯ_２インキュベーター内で、３７℃で３日間インキュベートした。３日目に１０μＬのＷＳＴ１を各ウェルに添加し、ＣＯ_２インキュベーター内で、３７℃でさらに３時間インキュベートすることによって、細胞増殖を検出した。吸光度を４５０ｎｍで測定することにより、生成されたホルマザン色素の量を分析した。図１０に示すように、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２およびＩＬ－２は、３２Ｄβ細胞を同様の様式で活性化した。ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２とＩＬ－２のＥＣ_５０は、それぞれ、１５８．１ｐＭと１４０ｐＭであった。

【0251】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２は、ＩＬ－２と比較して、ＣＴＬＬ－２細胞増殖を含有するＩＬ－２Ｒαβγを促進する能力の改善を示した
ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２のＩＬ－２活性を評価するために、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、および共通γ鎖を発現するＣＴＬＬ－２細胞の増殖を促進するための組換えＩＬ－２と比較した。ＩＬ－２依存性ＣＴＬＬ－２細胞を、ＩＭＤＭ－１０％ＦＢＳで５回洗浄し、２×１０^４細胞／ウェルでウェルに播種した。ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２またはＩＬ－２の段階希釈液を細胞に添加した（図１１）。細胞をＣＯ_２インキュベーター内で、３７℃で３日間インキュベートした。３日目に１０μＬのＷＳＴ１を各ウェルに添加し、ＣＯ_２インキュベーター内で、３７℃でさらに３時間インキュベートすることによって、細胞増殖を検出した。吸光度を４５０ｎｍで測定することにより、生成されたホルマザン色素の量を分析した。図３に示すように、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２は、ＩＬ－２よりも４～５倍強力にＣＴＬＬ－２細胞の増殖を促進した。ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２のＥＣ_５０は１２３．２ｐＭであり、ＩＬ－２は５４８．２ｐＭであった。

【0252】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２は、ＡｐｏＥ^－／－マウスにおける高脂肪誘導性高血糖の増加を抑制した
６週齢の雌ＡｐｏＥ^－／－マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）に、標準固形飼料食餌、または２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、および１５％デンプンを含有する高脂肪食餌（ＴＤ８８１３７、Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を与え、標準状態に維持した。７週目に、高脂肪食餌を与えたマウスを、対照群と処理群にランダムに割り当てた。次いで、マウスに、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２（処理群）またはＰＢＳ（固形飼料食餌群および対照群）のいずれかを、３ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射によって与えた。投与の３日後、マウスを一晩絶食させ、血液試料を後眼窩静脈叢穿刺によって収集した。一晩絶食させた空腹時血糖値を、ＯｎｅＴｏｕｃｈ Ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒを使用して測定した。図１２に示すように、結果は、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２注射が、ＡｐｏＥ^－／－マウスの血糖値の上昇を効果的に抑制することを示した。

【0253】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２は、血液リンパ球におけるＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞の比率を有意にアップレギュレートする
６週齢の雌ＡｐｏＥ^－／－マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）に、標準固形飼料食餌、または２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、および１５％デンプンを含有する高脂肪食餌（ＴＤ８８１３７、Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を与え、標準状態に維持した。７週目に、高脂肪食餌を与えたマウスを、対照群と処理群にランダムに割り当てた。次いで、マウスに、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２（処理群）またはＰＢＳ（固形飼料食餌群および対照群）のいずれかを、３ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射によって与えた。投与の３日後、一晩絶食させた空腹時血液試料を、後眼窩静脈叢穿刺によって収集し、ＡＣＫ溶解緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とともに３７℃で５分間インキュベートした。次いで、試料を、ＦＡＣＳ緩衝液（１Ｘ ＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、０．５％ＢＳＡ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）および０．００１％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含む）中で再懸濁し、ＦＩＴＣ－抗ＣＤ４およびＡＰＣ－抗ＣＤ２５抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で３０分間表面染色した。表面染色した試料をさらに固定し、Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍ緩衝液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）でプレメタライズし、ＰＥ－抗Ｆｏｘｐ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で細胞内染色した。染色後、細胞をＦＡＣ緩衝液で２回洗浄した後、１５００ＲＰＭで、室温で５分間遠心分離した。細胞を、フローサイトメトリー（Ｃｅｌｅｓｔａ－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって分析した。図１３に示すように、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２処理は、未処理群（固形飼料食餌群で０．４％±０．１６、および高脂肪食餌群で０．４６％±０．０９）と比較して、血中リンパ球におけるＴｒｅｇ集団を有意に増加させた（３．５％±０．３２）。

【0254】

抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムからのＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の精製溶出クロマトグラフ
細胞培養物から収集したＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を、５カラム体積のＰＢＳで平衡化した抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムに装填した。試料を装填した後、カラムを５カラム体積のＰＢＳで洗浄し、続いて６カラム体積の０．１Ｍ酢酸、ｐＨ２．９で溶出した。Ａ２８０溶出ピークを収集し、次いで１Ｍトリス塩基でｐＨ７．５～８．０に中和した。次いで、中和した試料を、分子量カットオフ３０ｋＤａでＡｍｉｃｏｎ遠心フィルターを使用してＰＢＳに緩衝液交換した。図１４に示すように、抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムは、融合ドメインとしてＴＦを含有するＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２に結合した。緩衝液交換したタンパク質試料を、さらなる生化学的分析および生物学的活性試験のために２～８℃で保管した。各溶出後、抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムを、６カラム体積の０．１Ｍグリシン、ｐＨ２．５を使用してストリッピングした。次いで、カラムを、保管のために５カラム体積のＰＢＳおよび７カラム体積の２０％エタノールを使用して中和した。抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムを、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステムに接続した。流速は、溶出ステップを除く全てのステップで４ｍＬ／分であり、溶出ステップの流速は２ｍＬ／分であった。

【0255】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析
分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用してＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を分析するために、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬゲル濾過カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）をＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）に接続した。カラムを、２カラム体積のＰＢＳで平衡化した。流速は０．７ｍＬ／分であった。ＰＢＳ中のＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を含有する試料を、キャピラリーループを使用してＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラムに注入し、ＳＥＣによって分析した。試料のＳＥＣクロマトグラフを図１５に示す。ＳＥＣの結果は、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の２つのタンパク質ピークを示した。

【0256】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
タンパク質の純度および分子量を決定するために、抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムで精製したＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２タンパク質試料を、還元条件下でドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル（４～１２％ＮｕＰａｇｅビス－トリスゲル）電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法によって分析した。電気泳動後、ゲルをＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅで約３０分間染色し、続いて精製水中で一晩脱色した。

【0257】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２タンパク質がＣＨＯ細胞において翻訳後にグリコシル化を受けることを検証するために、脱グリコシル化実験を、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ製のＰｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ Ｍｉｘ ＩＩキットを製造業者の指示に従って使用して実行した。図１６Ａおよび１６Ｂは、非脱グリコシル化状態（赤色の縁内のレーン１）および脱グリコシル化状態（黄色の縁内のレーン２）の試料の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。結果は、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２タンパク質がＣＨＯ細胞で発現されるとグリコシル化されることを示す。脱グリコシル化後、精製した試料は、還元ＳＤＳゲル中で予想された分子量（５６ｋＤａ）となった。レーンＭに、１０μＬのＳｅｅＢｌｕｅ Ｐｌｕｓ２ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄを装填した。

【0258】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２のインビボ特性評価
ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を様々な用量でＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射して、インビボでのＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の免疫刺激活性を決定した。マウスを、対照溶液（ＰＢＳ）、または０．１、０．４、２、および１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２で皮下処理した。処理したマウスを、処理の３日後に安楽死させた。マウスの脾臓を収集し、処理の３日後に秤量した。単一脾細胞懸濁液を調製し、調製した脾細胞を、（蛍光色素結合抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、および抗ＮＫ１．１抗体で）ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞に染色し、フローサイトメトリーによって分析した。結果は、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２が、脾臓重量に基づいて、特に０．１～１０ｍｇ／ｋｇで脾臓細胞の増殖に効果的であったことを示した（図１７Ａ）。ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージは、対照処理マウスと比較して、２および１０ｍｇ／ｋｇでより高かった（図１７Ｂ）。ＮＫ細胞のパーセンテージは、対照処理マウスと比較して、試験した全ての用量でより高かった（図１７Ｂ）。

【0259】

ＩＬ－２が免疫細胞によるＣＤ２５発現をアップレギュレートすることは既知である。したがって、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２処理マウスにおけるＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞のＣＤ２５発現にアクセスした。上の段落に記載したように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２で皮下処理した。脾細胞を、蛍光色素結合抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＣＤ２５、および抗ＮＫ１．１モノクローナル抗体で染色した。脾細胞サブセットのＣＤ２５発現（ＭＦＩ）を、フローサイトメトリーによって分析した。図１８に示すように、試験した用量と時点（３日目）で、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２はＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＣＤ２５発現を有意にアップレギュレートしたが、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞ではアップレギュレートしなかった。

【0260】

また、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の薬物動態も調査した。ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を、１ｍｇ／ｋｇで、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射した。図１９に示すように、マウスの血液を様々な時点で尾静脈から排出し、血清を調製した。ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２濃度を、ＥＬＩＳＡで決定した（捕捉：抗組織因子抗体；検出：ビオチン化抗ヒトＩＬ－２抗体、続いてＳＡ－ＨＲＰおよびＡＢＴＳ基質）。ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２の半減期は、ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ２．０（Ｓｕｍｍｉｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）で計算して１．８３時間であった。

【0261】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２によるＡｐｏＥ^－／－マウスにおける高脂肪誘導性アテローム硬化性プラークの形成の減弱
６週齢の雌ＡｐｏＥ^－／－マウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に、標準固形飼料食餌または高脂肪食餌（２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、および１５％デンプン）（ＴＤ８８１３７、Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を与え、標準状態に維持した。７週目に、高脂肪食餌（ＨＦＤ）を与えたマウスを、対照群と処理群にランダムに割り当てた。次いで、マウスに、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２（処理群）またはＰＢＳ（固形飼料食餌群および対照群）のいずれかを、毎週３ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間皮下投与した。１２週目に、全てのマウスをイソフルランで安楽死させた。大動脈を収集し、縦方向に開き、正面法を使用してＳｕｄａｎ ＩＶ溶液（０．５％）で染色した。次いで、総大動脈面積に対するプラーク面積（図２０Ａに示す赤色）のパーセンテージを、Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェアで定量化した。図２０Ａは、各群からのアテローム硬化性プラークの代表的な図を示す。図２０Ｂは、各群のアテローム硬化性プラークの定量分析の結果を示す。対照群（ＨＦ食餌）のプラーク面積のパーセンテージは、処理群（ＨＦＤ＋ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２）よりもはるかに高く、１０．２８％対４．６８％であった。

【0262】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２は、２型糖尿病の進行を抑制する
雄ＢＫＳ．Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７^ｍ＋／＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／Ｊ（ｄｂ／ｄｂ）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）マウスに、標準固形飼料食餌および飲用水を自由に与えた。６週齢で、マウスを、対照群と処理群にランダムに割り当てた。処理群に、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を隔週３ｍｇ／ｋｇで皮下注射によって与えたが、対照群には、ビヒクル（ＰＢＳ）のみを与えた。一晩絶食した空腹時血糖値を、ＯｎｅＴｏｕｃｈ Ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒを使用して毎週測定した。結果は、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２が、ＢＫＳ．Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７^ｍ＋／＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／Ｊマウスの血糖値の上昇を効果的に抑制したことを示した。

【0263】

ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２は、最初の注射の後、血液リンパ球におけるＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋Ｔ制御性細胞の比率を有意にアップレギュレートする
雄ＢＫＳ．Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７^ｍ＋／＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／Ｊ（ｄｂ／ｄｂ）（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）マウスに、標準固形飼料食餌および飲用水を自由に与えた。６週齢で、マウスを、対照群と処理群にランダムに割り当てた。処理群に、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２を隔週３ｍｇ／ｋｇで皮下注射によって与えたが、対照群には、ビヒクル（ＰＢＳ）のみを与えた。最初の薬物注射の４日後、一晩絶食させた空腹時血液試料を収集し、ＡＣＫ溶解緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とともに３７℃で５分間インキュベートした。次いで、試料を、ＦＡＣＳ緩衝液（１Ｘ ＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、０．５％ＢＳＡ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）および０．００１％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含む）中で再懸濁し、ＦＩＴＣ－抗ＣＤ４およびＡＰＣ－抗ＣＤ２５抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で３０分間表面染色した。表面染色した試料をさらに固定し、Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍ緩衝液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）でプレメタライズし、ＰＥ－抗Ｆｏｘｐ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で細胞内染色した。染色後、細胞をＦＡＣ緩衝液で２回洗浄し、フローサイトメトリー（Ｃｅｌｅｓｔａ－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって分析した。血液リンパ球におけるＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋Ｔｒｅｇのパーセンテージを測定した。図２２に示すように、結果は、ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２が血液リンパ球のＴｒｅｇの比率を有意にアップレギュレートしたことを示した。＊ｐ＜０．０５

【0264】

実施例４．例示的な単鎖キメラポリペプチドＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５の産生および特性評価
ＩＬ－１５受容体に結合する第１の標的結合ドメイン、可溶性ヒト組織因子ドメイン、およびＩＬ－１５受容体に結合する第２の標的結合ドメインを含む、第２の例示的な単鎖キメラポリペプチド（ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５またはＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５）を生成した（図２３）。この単鎖キメラポリペプチドの核酸およびアミノ酸配列を以下に示す。

例示的な単鎖キメラポリペプチド（ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５）をコードする核酸（配列番号１１７）
（シグナルペプチド）
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣ
（第１のＩＬ－１５断片）
ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＣＴＧＴＡＣＡＣＴＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＴＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＴＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＣＡＡＣＴＣＴＴＴＡＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＡＧＣ
（ヒト組織因子２１９型）
ＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＡＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＡＴＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＡＴＣＴＣＡＣＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＡＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＧＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＧＣＧＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＡＣＴＧＴＴＴＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＴＡＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧ
（第２のＩＬ－１５断片）
ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣ
例示的な単鎖キメラポリペプチド（ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５）（配列番号１１６）
（シグナルペプチド）
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（ヒトＩＬ－１５）
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ
（ヒト組織因子２１９）
ＳＧＴＴＮＴＶＡＡＹＮＬＴＷＫＳＴＮＦＫＴＩＬＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴＶＱＩＳＴＫＳＧＤＷＫＳＫＣＦＹＴＴＤＴＥＣＤＬＴＤＥＩＶＫＤＶＫＱＴＹＬＡＲＶＦＳＹＰＡＧＮＶＥＳＴＧＳＡＧＥＰＬＹＥＮＳＰＥＦＴＰＹＬＥＴＮＬＧＱＰＴＩＱＳＦＥＱＶＧＴＫＶＮＶＴＶＥＤＥＲＴＬＶＲＲＮＮＴＦＬＳＬＲＤＶＦＧＫＤＬＩＹＴＬＹＹＷＫＳＳＳＳＧＫＫＴＡＫＴＮＴＮＥＦＬＩＤＶＤＫＧＥＮＹＣＦＳＶＱＡＶＩＰＳＲＴＶＮＲＫＳＴＤＳＰＶＥＣＭＧＱＥＫＧＥＦＲＥ
（ヒトＩＬ－１５）
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ

【0265】

ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５をコードする核酸を、以前に記載されたように（Ｈｕｇｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １６：４５７－７２，２００５）改変レトロウイルス発現ベクターにクローニングした。ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５をコードする発現ベクターを、ＣＨＯ－Ｋ１細胞にトランスフェクトした。ＣＨＯ－Ｋ１細胞での発現ベクターの発現により、可溶性ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５単鎖キメラポリペプチド（１５ｔ１５と称する）の分泌が可能になり、これを抗ＴＦ抗体アフィニティーおよび他のクロマトグラフィー法によって精製することができる。

【0266】

ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５は、ＩＬ－２Ｒβおよび共通γ鎖含有３２Ｄβ細胞の増殖を促進する
ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５のＩＬ－１５活性を、ＩＬ２Ｒβおよび共通γ鎖発現３２Ｄβ細胞における組換えＩＬ－１５と比較した。ＩＬ－１５依存性３２Ｄβ細胞を、ＩＭＤＭ－１０％ＦＢＳで５回洗浄し、ウェルに２×１０^４細胞／ウェルで播種した。ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５またはＩＬ－１５の段階希釈液を細胞に添加した（図２４）。細胞をＣＯ_２インキュベーター内で、３７℃で３日間インキュベートした。３日目に１０μＬのＷＳＴ１を各ウェルに添加し、ＣＯ_２インキュベーター内で、３７℃でさらに３時間インキュベートすることによって、細胞増殖を検出した。吸光度を４５０ｎｍで測定することにより、生成されたホルマザン色素の量を分析した。図２４に示すように、ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５と比較して３２Ｄβ細胞の増殖を効率的に促進しなかった。ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５およびＩＬ－１５のＥＣ_５０は、それぞれ、１６１．４ｐＭおよび１．６ｐＭであった。

【0267】

抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムからのＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５の精製溶出クロマトグラフ
細胞培養物から収集したＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５を、５カラム体積のＰＢＳで平衡化した抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムに装填した。試料を装填した後、カラムを５カラム体積のＰＢＳで洗浄し、続いて６カラム体積の０．１Ｍ酢酸、ｐＨ２．９で溶出した。Ａ２８０溶出ピークを収集し、次いで１Ｍトリス塩基でｐＨ７．５～８．０に中和した。次いで、中和した試料を、分子量カットオフ３０ｋＤａでＡｍｉｃｏｎ遠心フィルターを使用してＰＢＳに緩衝液交換した。図２５に示すように、抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムは、融合ドメインとしてＴＦを含有するＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５に結合した。緩衝液交換したタンパク質試料を、さらなる生化学的分析および生物学的活性試験のために２～８℃で保管した。各溶出後、抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムを、６カラム体積の０．１Ｍグリシン、ｐＨ２．５を使用してストリッピングした。次いで、カラムを、保管のために５カラム体積のＰＢＳおよび７カラム体積の２０％エタノールを使用して中和した。抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムを、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステムに接続した。流速は、溶出ステップを除く全てのステップで４ｍＬ／分であり、溶出ステップの流速は２ｍＬ／分であった。

【0268】

ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
タンパク質の純度および分子量を決定するために、抗ＴＦ抗体アフィニティーカラムで精製したＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５（１５ｔ１５）タンパク質試料を、還元条件下でドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル（４～１２％ＮｕＰａｇｅビス－トリスゲル）電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法によって分析した。電気泳動後、ゲルをＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅで約３０分間染色し、続いて精製水中で一晩脱色した。

【0269】

ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５タンパク質がＣＨＯ細胞において翻訳後にグリコシル化を受けることを検証するために、脱グリコシル化実験を、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ製のＰｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ Ｍｉｘ ＩＩキットおよび製造業者の指示を使用して実行した。図２６Ａおよび２６Ｂは、非脱グリコシル化状態（赤色の縁内のレーン１）および脱グリコシル化状態（黄色の縁内のレーン２）の試料の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。結果は、ＩＬ－１５／ＴＦ／ＩＬ－１５タンパク質がＣＨＯ細胞で発現されるとグリコシル化されることを示した。脱グリコシル化後、精製した試料は、還元ＳＤＳゲル中で予想された分子量（５０ｋＤａ）となった。レーンＭに、１０μＬのＳｅｅＢｌｕｅ Ｐｌｕｓ２ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄを装填した。

【0270】

実施例５：ＩＬ－２／ＴＦ／ＩＬ－２（２ｔ２）によるインビボでのＮＫ細胞の刺激
一連の実験を実施して、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける免疫刺激に対する２ｔ２構築物の効果を決定した。これらの実験では、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、対照溶液（ＰＢＳ）、または０．１、０．４、２、および１０ｍｇ／ｋｇの２ｔ２で皮下処理した。処理したマウスを、処理の３日後に安楽死させた。脾臓重量を測定し、単一脾細胞懸濁液を調製した。脾細胞懸濁液を、結合抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、および抗ＮＫ１．１（ＮＫ）抗体で染色した。ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞のパーセンテージ、ならびにリンパ球サブセットにおけるＣＤ２５発現を、フローサイトメトリーによって分析した。図２７Ａは、２ｔ２が、脾臓重量に基づいて、特に０．１～１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで脾細胞の増殖に効果的であったことを示す。処理後、ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージは、対照処理マウスと比較して、２および１０ｍｇ／ｋｇで２ｔ２処理マウスのほうが高かった（図２７Ｂ）。ＮＫ細胞のパーセンテージもまた、対照処理マウスと比較して、試験した全ての用量の２ｔ２で２ｔ２処理マウスのほうが高かった（図２７Ｂ）。さらに、２ｔ２はＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＣＤ２５発現を有意にアップレギュレートしたが、０．４～１０ｍｇ／ｋｇでの処理後のＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞ではアップレギュレートしなかった（図２７Ｃ）。

【0271】

一連の実験を実施して、西洋食餌を与えたＡｐｏＥ^－／－マウスにおける免疫刺激に対する２ｔ２構築物の効果を決定した。これらの実験では、６週齢の雌Ｂ６．１２９Ｐ２－ＡｐｏＥ^{ｔｍ１Ｕｎｃ}／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に、２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、および１５％デンプンを含有する西洋食餌（ＴＤ８８１３７、Ｅｎｖｉｇｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を与えた。西洋食餌の８週間後、マウスに２ｔ２を３ｍｇ／ｋｇで皮下注射した。処理の３日後、マウスを１６時間絶食させ、次いで血液試料を後眼窩静脈叢穿刺によって収集した。血液を１０μＬの０．５Ｍ ＥＤＴＡと混合し、２０μＬの血液をリンパ球サブセット分析のために採取した。赤血球を、ＡＣＫ（０．１５Ｍ ＮＨ_４Ｃｌ、１．０ｍＭ ＫＨＣＯ_３、０．１ｍＭ Ｎａ_２ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で溶解し、リンパ球を、ＦＡＣＳ染色緩衝液（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）中、抗マウスＣＤ８ａおよび抗マウスＮＫ１．１抗体で、４℃で３０分間染色した。細胞を１回洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａを用いて分析した。Ｔｒｅｇ染色の場合、ＡＣＫで処理した血液リンパ球を、ＦＡＣＳ染色緩衝液中、抗マウスＣＤ４および抗マウスＣＤ２５抗体で、４℃で３０分間染色した。細胞を１回洗浄し、固定／透過処理希釈標準溶液中に再懸濁し、室温で６０分間インキュベートした。細胞を１回洗浄し、透過処理緩衝液中に再懸濁した。試料を３００～４００×ｇで、室温で５分間遠心分離し、次いで上清を廃棄した。細胞ペレットを残留体積中に再懸濁し、体積を１×透過処理緩衝液で約１００μＬに調整した。抗Ｆｏｘｐ３抗体を細胞に添加し、細胞を室温で３０分間インキュベートした。透過処理緩衝液（２００μＬ）を細胞に添加し、細胞を３００～４００×ｇで、室温で５分間遠心分離した。細胞を、フローサイトメトリー染色緩衝液中に再懸濁し、フローサイトメーター上で分析した。図２８Ｂ～２８Ｃは、２ｔ２での処理により、西洋食餌を与えたＡｐｏＥ^－／－マウスにおけるＮＫ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージが増加したことを示す。図２８Ａは、２ｔ２での処理により、Ｔｒｅｇ細胞のパーセンテージも増加したことを示す。

【0272】

実施例６：インビボでの免疫細胞の増殖の誘導
一連の実験を実施して、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける免疫細胞刺激に対する２ｔ２構築物の効果を決定した。これらの実験では、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、対照溶液（ＰＢＳ）、または０．１、０．４、２、および１０ｍｇ／ｋｇの２ｔ２で皮下処理した。処理したマウスを、処理の３日後に安楽死させた。脾臓重量を測定し、単一脾細胞懸濁液を調製した。脾細胞懸濁液を、結合抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、および抗ＮＫ１．１（ＮＫ）抗体で染色した。ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞のパーセンテージを、フローサイトメトリーによって分析した。図２９Ａは、２ｔ２処理が、脾臓重量に基づいて、特に０．１～１０ｍｇ／ｋｇで脾細胞の増殖に効果的であったことを示す。ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージは、対照処理マウスと比較して、２および１０ｍｇ／ｋｇでより高かった（図２９Ｂ）。ＮＫ細胞のパーセンテージは、対照処理マウスと比較して、試験した全ての用量の２ｔ２でより高かった（図２９Ｂ）。これらの結果は、２ｔ２処理が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の増殖を誘導することができたことを実証する。

【0273】

一連の実験を実施して、西洋食餌を与えたＡｐｏＥ^－／－マウスにおける免疫刺激に対する２ｔ２構築物の効果を決定した。これらの実験では、６週齢の雌Ｂ６．１２９Ｐ２－ＡｐｏＥ^{ｔｍ１Ｕｎｃ}／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に、２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、および１５％デンプンを含有する西洋食餌（ＴＤ８８１３７、Ｅｎｖｉｇｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を与えた。西洋食餌の８週間後、マウスに２ｔ２を３ｍｇ／ｋｇで皮下注射した。処理の３日後、マウスを１６時間絶食させ、次いで血液試料を後眼窩静脈叢穿刺によって収集した。血液を１０μＬの０．５Ｍ ＥＤＴＡと混合し、２０μＬの血液をリンパ球サブセット分析のために採取した。赤血球を、ＡＣＫ（０．１５Ｍ ＮＨ_４Ｃｌ、１．０ｍＭ ＫＨＣＯ_３、０．１ｍＭ Ｎａ_２ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で溶解し、リンパ球を、ＦＡＣＳ染色緩衝液（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）中、抗マウスＣＤ８ａおよび抗マウスＮＫ１．１抗体で、４℃で３０分間染色した。細胞を１回洗浄し、Ｆｉｘａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号４２０８０１）中に室温で２０分間再懸濁した。細胞を３５０×ｇで５分間遠心分離し、固定した細胞をＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号４２１００２）中に再懸濁し、次いで３５０×ｇで５分間遠心分離した。次いで、細胞を、抗Ｋｉ６７抗体で、室温で２０分間染色した。細胞をＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで２回洗浄し、３５０×ｇで５分間遠心分離した。次いで、細胞を、ＦＡＣＳ染色緩衝液中に再懸濁した。リンパ球サブセットを、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａを用いて分析した。図３０Ａおよび図３０Ｂは、２ｔ２でのＡｐｏＥ^－／－マウスの処理もまた、ＮＫ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖（Ｋｉ６７陽性染色）を誘導したことを示す。

【0274】

実施例７：糖尿病の治療
一連の実験を実施して、２ｔ２によるＡｐｏＥ^－／－マウスにおける西洋食餌誘導性高血糖の改善を調査した。これらの実験では、６週齢の雌Ｂ６．１２９Ｐ２－ＡｐｏＥ^{ｔｍ１Ｕｎｃ}／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に、２１％脂肪、０．１５％コレステロール、３４．１％スクロース、１９．５％カゼイン、および１５％デンプンを含有する西洋食餌（ＴＤ８８１３７、Ｅｎｖｉｇｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を与えた。西洋食餌の８週間後、マウスに２ｔ２を３ｍｇ／ｋｇで皮下注射した。処理の３日後、マウスを１６時間絶食させ、次いで血液試料を後眼窩静脈叢穿刺によって収集した。血糖値を、一滴の新鮮な血液を使用して血糖値計（ＯｎｅＴｏｕｃｈ ＵｌｔｒａＭｉｎｉ）およびＧｅｎＵｌｔｉｍａｔｅｄ試験条片で検出した。図３１Ａに示すように、２ｔ２処理は、西洋食餌によって誘導された高血糖を有意に低下させた（ｐ＜０．０４）。血漿インスリンレベルおよびレジスチンレベルを、Ｅｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のＭｏｕｓｅ Ｒａｔ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ａｒｒａｙを用いて分析した。ＨＯＭＡ－ＩＲを、以下の式：恒常性モデル評価－インスリン抵抗性＝グルコース（ｍｇ／ｄＬ）×インスリン（ｍＵ／ｍＬ）／４０５を使用して計算した。図３１Ｂに示すように、２ｔ２処理は、未処理群と比較してインスリン抵抗性を低下させた。２ｔ２（ｐ＜０．０２）は、図３１Ｃに示すように、未処理群と比較してレジスチンレベルを有意に低下させ、これは、２ｔ２によって誘導されたインスリン抵抗性の低下（図３１Ｂ）に関連している可能性がある。

【0275】

実施例８．ＣＤ４４メモリーＴ細胞のアップレギュレーション
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、２ｔ２で皮下処理した。処理したマウスを安楽死させ、単一脾細胞懸濁液を、処理の４日後（ＴＧＦＲｔ１５－ＴＧＦＲ）または３日後（２ｔ２）に調製した。調製した脾細胞を、蛍光色素結合抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、および抗ＣＤ４４抗体で染色し、ＣＤ４^＋Ｔ細胞またはＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ４４^高Ｔ細胞のパーセンテージを、フローサイトメトリーによって分析した。結果は、２ｔ２がＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞でのメモリーマーカーＣＤ４４の発現をアップレギュレートしたことを示す（図３２）。これらの所見は、２ｔ２が、マウスＴ細胞のメモリーＴ細胞への分化を誘導することができたことを示す。

【0276】

実施例９．単鎖または多鎖キメラポリペプチドでの処理後の組織因子凝固アッセイ
一連の実験を実施して、単鎖または多鎖キメラポリペプチドでの処理後の血液凝固を評価した。血液凝固カスケード経路を開始させるために、組織因子（ＴＦ）を第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）に結合して、ＴＦ／ＦＶＩＩａ複合体を形成する。次いで、ＴＦ／ＦＶＩＩａ複合体を第Ｘ因子（ＦＸ）に結合し、ＦＸをＦＸａに変換する。

【0277】

血液凝固を測定するためのアッセイは、第Ｘ因子（ＦＸ）の活性化の測定を含む。簡潔には、ＴＦ／ＶＩＩａは、カルシウムおよびリン脂質の存在下で、血液凝固第Ｘ因子（ＦＸ）を第Ｘａ因子（ＦＸａ）に活性化する。ＴＦの膜貫通ドメインを含有するＴＦ_２４３は、ＦＸをＦＸａに活性化する際に、膜貫通ドメインを含有しないＴＦ_２１９よりもはるかに高い活性を有する。ＦＸのＴＦ／ＶＩＩａ依存性活性化を、ＦＸａ特異的発色性基質Ｓ－２７６５（Ｄｉａｐｈａｒｍａ，Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＯＨ）を使用してＦＸａ活性を測定することによって決定する。Ｓ－２７６５の色の変化を分光光度法で監視することができ、これは、ＦＸａのタンパク質分解活性に比例する。

【0278】

これらの実験では、多鎖キメラポリペプチド（１８ｔ１５－１２ｓ、マウス（ｍ）２１ｔ１５、２１ｔ１５－ＴＧＦＲ、および２１ｔ１５－７ｓ）によるＦＸ活性化を、陽性対照（Ｉｎｎｏｖｉｎ）またはＴＦ_２１９と比較した。ＴＦ_２１９（またはＴＦ_２１９含有多鎖キメラポリペプチド）／ＦＶＩＩａ複合体を、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートの丸底ウェル中に５０μＬの体積中等モル濃度（各０．１ｎＭ）で混合し、その後、１０μＬの１８０ｎＭ ＦＸを添加した。３７℃で１５分間インキュベートしている間にＦＸをＦＸａに変換し、その後、８μＬの０．５Ｍ ＥＤＴＡ（カルシウムをキレート化し、ひいてはＴＦ／ＶＩＩａによるＦＸ活性化を終了させる）を各ウェルに添加して、ＦＸ活性化を停止した。次に、１０μＬの３．２ｍＭ Ｓ－２７６５基質を、反応混合物に添加した。直ちにプレート吸光度を４０５ｎｍで測定し、０時点での吸光度として記録した。次いで、プレートを、３７℃で１０～２０分間インキュベートした。色の変化を、インキュベートした後に吸光度を４０５ｎｍで読み取ることによって監視した。発色性基質Ｓ－２７６５を使用してＦＸａ活性によって測定されたＦＸ活性化の結果を、図３３に示す。この実験では、脂質化組換えヒトＴＦ_２４３を含有する市販のプロトロンビン試薬であるＩｎｎｏｖｉｎを、ＦＸ活性化の陽性対照として使用した。Ｉｎｎｏｖｉｎを精製水で再構成して、約１０ｎＭのＴＦ_２４３にした。次に、０．１ｎＭのＴＦ／ＶＩＩａ複合体を、等体積の０．２ｎＭのＦＶＩＩａを０．２ｎＭのＩｎｎｏｖｉｎと混合することによって作製した。Ｉｎｎｏｖｉｎが非常に強力なＦＸ活性化活性を実証した一方で、ＴＦ_２１９およびＴＦ_２１９含有多鎖キメラポリペプチドは非常に低いＦＸ活性化活性を有し、ＴＦ_２１９がインビボで天然基質ＦＸを活性化するためにＴＦ／ＦＶＩＩａ複合体では活性でないことを確認した。

【0279】

実施例１０：２ｔ２によるＴｒｅｇ細胞の誘導
ヒースのドナー（ドナー１６３）の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ１７１４４００３）によって５ｍＬの全血バフィーコートから単離した。次いで、ＰＢＭＣをＡＣＫで溶解して、赤血球を除去した。細胞をＩＭＤＭ－１０％ＦＢＳで洗浄し、カウントした。１．８×１０^６個の細胞（１００μＬ／チューブ）をフローチューブに播種し、５０μＬの下行性２ｔ２またはＩＬ２（１５０００、１５００、１５０、１５、１．５、０．１５、または０ｐＭ）および５０μＬのプレ染色抗体（抗ＣＤ８－ＢＶ６０５および抗ＣＤ１２７－ＡＦ６４７）でインキュベートした。細胞を、水浴中３７℃で３０分間インキュベートした。２００μＬの予熱したＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ（カタログ番号５５７８７０、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、水浴中３７℃で１０分間添加して、刺激を停止した。細胞（４．５×１０^５個の細胞／１００μＬ）をＶ字型９６ウェルプレートに移し、遠心沈殿した後、１００μＬの－２０℃の予冷ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩ（カタログ番号ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で、氷上で３０分間透過処理した。次いで、細胞を、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回徹底的に洗浄し、蛍光抗体のパネル（抗ＣＤ２５－ＰＥ、ＣＤ４－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、ＣＤ５６－ＢＶ４２１、ＣＤ４５ＲＡ－ＰＥ－Ｃｙ７、およびｐＳＴＡＴ５ａ－ＡＦ４８８）で染色して、異なるリンパ球亜集団を区別し、ｐＳＴＡＴ５ａの状態を評価した。細胞を遠心沈殿し、ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａ分析のために２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。図Ｃ１Ａに播種したように、６ｐＭの２ｔ２はＣＤ４^＋ＣＤ２５^ｈｉＴ_ｒｅｇ細胞においてＳｔａｔ５ａのリン酸化を誘導するのに十分であったが、４３．１１ｐＭのＩＬ－２がリンパ球の同じ集団においてＳｔａｔ５ａのリン酸化を誘導するために必要であった。対照的に、２ｔ２は、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^－Ｔ_ｃｏｎ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ_ｃｏｎ細胞においてＳｔａｔ５ａのリン酸化を誘導する際に、ＩＬ２と比較して活性が低かった（図３４Ｂ）か、または等しく活性であった（図３４Ｃ）。これらの結果は、２ｔ２が、ヒトＰＢＭＣにおけるＴ_ｒｅｇの活性化において、ＩＬ２と比較して優れていることと、２ｔ２が、ヒト血液リンパ球ｐＳｔａｔ５ａ応答において、ＩＬ－２と比較してＴ_ｒｅｇの選択性を高めることを実証することとを示唆する。

【0280】

他の実施形態
本発明がその発明を実施するための形態と併せて記載されているが、前述の記述は、例証することを意図するものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定することを意図するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、および改変は、下記の特許請求の範囲内にある。

【0281】

Ａ．例示的な実施形態
実施形態Ａ１．
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、および
（ｉｉｉ）第２の標的結合ドメインを含む、単鎖キメラポリペプチド。

【0282】

実施形態Ａ２．第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインが、互いに直接隣接している、実施形態Ａ１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0283】

実施形態Ａ３．単鎖キメラポリペプチドが、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、実施形態Ａ１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0284】

実施形態Ａ４．可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインが、互いに直接隣接している、実施形態Ａ１～Ａ３のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0285】

実施形態Ａ５．単鎖キメラポリペプチドが、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ３のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0286】

実施形態Ａ６．第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインが、互いに直接隣接している、実施形態Ａ１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0287】

実施形態Ａ７．単鎖キメラポリペプチドが、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、実施形態Ａ１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0288】

実施形態Ａ８．第２の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインが、互いに直接隣接している、実施形態Ａ６またはＡ７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0289】

実施形態Ａ９．単鎖キメラポリペプチドが、第２の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、実施形態Ａ６またはＡ７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0290】

実施形態Ａ１０．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、同じ抗原に特異的に結合する、実施形態Ａ１～Ａ９のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0291】

実施形態Ａ１１．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、同じエピトープに特異的に結合する、実施形態Ａ１０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0292】

実施形態Ａ１２．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、同じアミノ酸配列を含む、実施形態Ａ１１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0293】

実施形態Ａ１３．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、異なる抗原に特異的に結合する、実施形態Ａ１～Ａ９のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0294】

実施形態Ａ１４．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方が、抗原結合ドメインである、実施形態Ａ１～Ａ１３のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0295】

実施形態Ａ１５．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、各々、抗原結合ドメインである、実施形態Ａ１４に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0296】

実施形態Ａ１６．抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖまたは単一ドメイン抗体を含む、実施形態Ａ１３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0297】

実施形態Ａ１７．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方が、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＰＤＬ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＣＤ２６ａ、ＣＤ３６、ＵＬＢＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ２００、ＩＧＦ－１Ｒ、ＭＵＣ４ＡＣ、ＭＵＣ５ＡＣ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ７Ｈ３、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＵＬ１６結合タンパク質、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ４、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１５５、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ－１リガンド、ＮＫｐ４６リガンド、ＮＫｐ４４リガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＫｐ３０リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－１受容体、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－３受容体、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－８受容体、ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１２受容体、ＩＬ－１５受容体、ＩＬ－１７受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＰＤＧＦ－ＤＤ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ１６結合タンパク質受容体、ＣＤ１５５受容体、ＣＤ１２２受容体、およびＣＤ２８受容体からなる群から選択される標的に結合する、実施形態Ａ１～Ａ１６のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0298】

実施形態Ａ１８．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方が、可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質である、実施形態Ａ１～Ａ１６のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0299】

実施形態Ａ１９．可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質が、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＳＣＦ、ＦＬＴ３Ｌ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＰ１６結合タンパク質からなる群から選択される、実施形態Ａ１８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0300】

実施形態Ａ２０．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの一方または両方が、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体である、実施形態Ａ１～Ａ１６のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0301】

実施形態Ａ２１．可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体が、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩ、可溶性ＮＫＧ２Ｄ、可溶性ＮＫ３０、可溶性ＮＫｐ４４、可溶性ＮＫｐ４６、可溶性ＤＮＡＭ１、ｓｃＭＨＣＩ、ｓｃＭＨＣＩＩ、ｓｃＴＣＲ、可溶性ＣＤ１５５、または可溶性ＣＤ２８である、実施形態Ａ２０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0302】

実施形態Ａ２２．可溶性組織因子ドメインが、可溶性ヒト組織因子ドメインである、実施形態Ａ１～Ａ２１のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0303】

実施形態Ａ２３．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態Ａ２２に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0304】

実施形態Ａ２４．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも９０％同一である配列を含む、実施形態Ａ２３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0305】

実施形態Ａ２５．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも９５％同一である配列を含む、実施形態Ａ２４に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0306】

実施形態Ａ２６．可溶性ヒト組織因子ドメインが、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２０位に対応するアミノ酸の位置にリジン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２２位に対応するアミノ酸の位置にイソロイシン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸４５位に対応するアミノ酸の位置にトリプトファン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸５８位に対応するアミノ酸の位置にアスパラギン酸、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸９４位に対応するアミノ酸の位置にチロシン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１３５位に対応するアミノ酸の位置にアルギニン、および
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１４０位に対応するアミノ酸の位置にフェニルアラニンのうちの１つ以上を含まない、実施形態Ａ２２～Ａ２５のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0307】

実施形態Ａ２７．可溶性ヒト組織因子ドメインが、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２０位に対応するアミノ酸の位置にリジン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２２位に対応するアミノ酸の位置にイソロイシン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸４５位に対応するアミノ酸の位置にトリプトファン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸５８位に対応するアミノ酸の位置にアスパラギン酸、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸９４位に対応するアミノ酸の位置にチロシン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１３５位に対応するアミノ酸の位置にアルギニン、および
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１４０位に対応するアミノ酸の位置にフェニルアラニンのうちのいずれも含まない、実施形態Ａ２６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0308】

実施形態Ａ２８．可溶性組織因子ドメインが、第ＶＩＩａ因子に結合することができない、実施形態Ａ１～Ａ２７のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0309】

実施形態Ａ２９．可溶性組織因子ドメインが、不活性第Ｘ因子を第Ｘａ因子に変換しない、実施形態Ａ１～Ａ２８のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0310】

実施形態Ａ３０．単鎖キメラポリペプチドが、哺乳動物における凝固を血液刺激しない、実施形態Ａ１～Ａ２９のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0311】

実施形態Ａ３１．単鎖キメラポリペプチドが、そのＮ末端および／またはＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ３０のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0312】

実施形態Ａ３２．単鎖キメラポリペプチドが、そのＮ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む、実施形態Ａ３１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0313】

実施形態Ａ３３．１つ以上の追加の標的結合ドメインが、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している、実施形態Ａ３２に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0314】

実施形態Ａ３４．単鎖キメラポリペプチドが、少なくとも１つの追加の標的結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む、実施形態Ａ３３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0315】

実施形態Ａ３５．単鎖キメラポリペプチドが、そのＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む、実施形態Ａ３１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0316】

実施形態Ａ３６．１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの１つが、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している、実施形態Ａ３５に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0317】

実施形態Ａ３７．単鎖キメラポリペプチドが、少なくとも１つの追加の標的結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む、実施形態Ａ３５に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0318】

実施形態Ａ３８．単鎖キメラポリペプチドが、そのＮ末端およびＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む、実施形態Ａ３１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0319】

実施形態Ａ３９．Ｎ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つが、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している、実施形態Ａ３８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0320】

実施形態Ａ４０．単鎖キメラポリペプチドが、Ｎ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む、実施形態Ａ３８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0321】

実施形態Ａ４１．Ｃ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つが、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している、実施形態Ａ３８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0322】

実施形態Ａ４２．単鎖キメラポリペプチドが、Ｃ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む、実施形態Ａ３８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0323】

実施形態Ａ４３．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上が、同じ抗原に特異的に結合する、実施形態Ａ３１～Ａ４２のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0324】

実施形態Ａ４４．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上が、同じエピトープに特異的に結合する、実施形態Ａ４３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0325】

実施形態Ａ４５．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの２つ以上が、同じアミノ酸配列を含む、実施形態Ａ４４に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0326】

実施形態Ａ４６．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインが、各々、同じ抗原に特異的に結合する、実施形態Ａ４３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0327】

実施形態Ａ４７．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインが、各々、同じエピトープに特異的に結合する、実施形態Ａ４６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0328】

実施形態Ａ４８．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインが、各々、同じアミノ酸配列を含む、実施形態Ａ４７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0329】

実施形態Ａ４９．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインが、異なる抗原に特異的に結合する、実施形態Ａ３１～Ａ４２のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0330】

実施形態Ａ５０．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の標的結合ドメインのうちの１つ以上が、抗原結合ドメインである、実施形態Ａ３１～Ａ４９のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0331】

実施形態Ａ５１．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインが、各々、抗原結合ドメインである、実施形態Ａ５０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0332】

実施形態Ａ５２．抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖまたは単一ドメイン抗体を含む、実施形態Ａ５１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0333】

実施形態Ａ５３．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の標的結合ドメインのうちの１つ以上が、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＰＤＬ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＣＤ２６ａ、ＣＤ３６、ＵＬＢＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ２００、ＩＧＦ－１Ｒ、ＭＵＣ４ＡＣ、ＭＵＣ５ＡＣ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ７Ｈ３、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＵＬ１６結合タンパク質、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ４、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１５５、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ－１リガンド、ＮＫｐ４６リガンド、ＮＫｐ４４リガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＫｐ３０リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－１受容体、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－３受容体、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－８受容体、ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１２受容体、ＩＬ－１５受容体、ＩＬ－１７受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＰＤＧＦ－ＤＤ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ１６結合タンパク質受容体、ＣＤ１５５受容体、ＣＤ１２２受容体、およびＣＤ２８受容体からなる群から選択される標的に特異的に結合する、実施形態Ａ３１～Ａ５２のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0334】

実施形態Ａ５４．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の標的結合ドメインのうちの１つ以上が、可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質である、実施形態Ａ３１～Ａ５２のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0335】

実施形態Ａ５５．可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質が、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＳＣＦ、ＦＬＴ３Ｌ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＰ１６結合タンパク質からなる群から選択される、実施形態Ａ５４に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0336】

実施形態Ａ５６．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の標的結合ドメインのうちの１つ以上が、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体である、実施形態Ａ３１～Ａ５２のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0337】

実施形態Ａ５７．可溶性受容体が、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩ、可溶性ＮＫＧ２Ｄ、可溶性ＮＫ３０、可溶性ＮＫｐ４４、可溶性ＮＫｐ４６、可溶性ＤＮＡＭ１、ｓｃＭＨＣＩ、ｓｃＭＨＣＩＩ、ｓｃＴＣＲ、可溶性ＣＤ１５５、可溶性ＣＤ１２２、可溶性ＣＤ３、または可溶性ＣＤ２８である、実施形態Ａ５６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0338】

実施形態Ａ５８．単鎖キメラポリペプチドが、そのＮ末端にシグナル配列をさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ５７のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0339】

実施形態Ａ５９．単鎖キメラポリペプチドが、単鎖キメラポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置付けられたペプチドタグをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ５８のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0340】

実施形態Ａ６０．実施形態Ａ１～Ａ５９に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、組成物。

【0341】

実施形態Ａ６１．組成物が、医薬組成物である、実施形態Ａ６０に記載の組成物。

【0342】

実施形態Ａ６２．少なくとも１用量の実施形態Ａ６０またはＡ６１に記載の組成物を含む、キット。

【0343】

実施形態Ａ６３．免疫細胞を刺激する方法であって、
免疫細胞を、有効量の実施形態Ａ１～Ａ５９に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ａ６０もしくはＡ６１に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【0344】

実施形態Ａ６４．免疫細胞をインビトロで接触させる、実施形態Ａ６３に記載の方法。

【0345】

実施形態Ａ６５．免疫細胞が、以前に対象から得られたものである、実施形態Ａ６４に記載の方法。

【0346】

実施形態Ａ６６．方法が、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む、実施形態Ａ６５に記載の方法。

【0347】

実施形態Ａ６７．免疫細胞をインビボで接触させる、実施形態Ａ６３に記載の方法。

【0348】

実施形態Ａ６８．免疫細胞が、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、メモリーＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される、実施形態Ａ６３～Ａ６７のいずれか１つに記載の方法。

【0349】

実施形態Ａ６９．免疫細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている、実施形態Ａ６３～Ａ６８のいずれか１つに記載の方法。

【0350】

実施形態Ａ７０．方法が、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む、実施形態Ａ６３～Ａ６８のいずれか１つに記載の方法。

【0351】

実施形態Ａ７１．方法が、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、実施形態Ａ６３～Ａ７０のいずれか１つに記載の方法。

【0352】

実施形態Ａ７２．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ａ７１に記載の方法。

【0353】

実施形態Ａ７３．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎（ｐａｎｃｅａｔｉｔｉｓ）における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ａ７２に記載の方法。

【0354】

実施形態Ａ７４．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ａ７１に記載の方法。

【0355】

実施形態Ａ７５．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃（ｇａｓｔｉｃ）食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ａ７４に記載の方法。

【0356】

実施形態Ａ７６．対象が、感染性疾患を有すると診断または特定されている、実施形態Ａ７１に記載の方法。

【0357】

実施形態Ａ７７．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、実施形態Ａ７６に記載の方法。

【0358】

実施形態Ａ７８．免疫細胞の増殖を誘導するかまたは増加させる方法であって、
免疫細胞を、有効量の実施形態Ａ１～Ａ５９に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ａ６０もしくはＡ６１に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【0359】

実施形態Ａ７９．免疫細胞をインビトロで接触させる、実施形態Ａ８８に記載の方法。

【0360】

実施形態Ａ８０．免疫細胞が、以前に対象から得られたものである、実施形態Ａ７９に記載の方法。

【0361】

実施形態Ａ８１．方法が、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む、実施形態Ａ８０に記載の方法。

【0362】

実施形態Ａ８２．免疫細胞をインビボで接触させる、実施形態Ａ７８に記載の方法。

【0363】

実施形態Ａ８３．免疫細胞が、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、メモリーＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される、実施形態Ａ７８～Ａ８２のいずれか１つに記載の方法。

【0364】

実施形態Ａ８４．免疫細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている、実施形態Ａ７８～Ａ８３のいずれか１つに記載の方法。

【0365】

実施形態Ａ８５．方法が、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む、実施形態Ａ７８～Ａ８３のいずれか１つに記載の方法。

【0366】

実施形態Ａ８６．方法が、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、実施形態Ａ７８～Ａ８５のいずれか１つに記載の方法。

【0367】

実施形態Ａ８７．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ａ８６に記載の方法。

【0368】

実施形態Ａ８８．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎（ｐａｎｃｅａｔｉｔｉｓ）における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ａ８７に記載の方法。

【0369】

実施形態Ａ８９．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ａ８６に記載の方法。

【0370】

実施形態Ａ９０．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃（ｇａｓｔｉｃ）食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ａ８９に記載の方法。

【0371】

実施形態Ａ９１．対象が、感染性疾患を有すると診断または特定されている、実施形態Ａ８６に記載の方法。

【0372】

実施形態Ａ９２．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、実施形態Ａ８６に記載の方法。

【0373】

実施形態Ａ９３．免疫細胞のメモリーまたはメモリー様免疫細胞への分化を誘導する方法であって、
免疫細胞を、有効量の実施形態Ａ１～Ａ５９に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ａ６０もしくはＡ６１に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【0374】

実施形態Ａ９４．免疫細胞をインビトロで接触させる、実施形態Ａ９３に記載の方法。

【0375】

実施形態Ａ９５．免疫細胞が、以前に対象から得られたものである、実施形態Ａ９４に記載の方法。

【0376】

実施形態Ａ９６．方法が、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む、実施形態Ａ９５に記載の方法。

【0377】

実施形態Ａ９７．免疫細胞をインビボで接触させる、実施形態Ａ９３に記載の方法。

【0378】

実施形態Ａ９８．免疫細胞が、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される、実施形態Ａ９３～Ａ９７のいずれか１つに記載の方法。

【0379】

実施形態Ａ９９．免疫細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている、実施形態Ａ９３～Ａ９８のいずれか１つに記載の方法。

【0380】

実施形態Ａ１００．方法が、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む、実施形態Ａ９３～Ａ９８のいずれか１つに記載の方法。

【0381】

実施形態Ａ１０１．方法が、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、実施形態Ａ９３～Ａ１００のいずれか１つに記載の方法。

【0382】

実施形態Ａ１０２．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ａ１０１に記載の方法。

【0383】

実施形態Ａ１０３．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎（ｐａｎｃｅａｔｉｔｉｓ）における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ａ１０２に記載の方法。

【0384】

実施形態Ａ１０４．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ａ１０１に記載の方法。

【0385】

実施形態Ａ１０５．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃（ｇａｓｔｉｃ）食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ａ１０４に記載の方法。

【0386】

実施形態Ａ１０６．対象が、感染性疾患を有すると診断または特定されている、実施形態Ａ１０１に記載の方法。

【0387】

実施形態Ａ１０７．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、実施形態Ａ１０６に記載の方法。

【0388】

実施形態Ａ１０８．がん細胞、感染細胞、または老化細胞の死滅を必要とする対象におけるがん細胞、感染細胞、または老化細胞を死滅させる方法であって、対象に、治療有効量の実施形態Ａ１～Ａ５９に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ａ６０もしくはＡ６１に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【0389】

実施形態Ａ１０９．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ａ１０８に記載の方法。

【0390】

実施形態Ａ１１０．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃（ｇａｓｔｉｃ）食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ａ１０９に記載の方法。

【0391】

実施形態Ａ１１１．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ａ１０８に記載の方法。

【0392】

実施形態Ａ１１２．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎（ｐａｎｃｅａｔｉｔｉｓ）における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ａ１１１に記載の方法。

【0393】

実施形態Ａ１１３．治療を必要とする対象を治療する方法であって、対象に、治療有効量の実施形態Ａ１～Ａ５９に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ａ６０もしくはＡ６１に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【0394】

実施形態Ａ１１４．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ａ１１３に記載の方法。

【0395】

実施形態Ａ１１５．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃（ｇａｓｔｉｃ）食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ａ１１４に記載の方法。

【0396】

実施形態Ａ１１６．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ａ１１３に記載の方法。

【0397】

実施形態Ａ１１７．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎（ｐａｎｃｅａｔｉｔｉｓ）における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ａ１１６に記載の方法。

【0398】

実施形態Ａ１１８．対象が、感染性疾患を有すると診断または特定されている、実施形態Ａ１１３に記載の方法。

【0399】

実施形態Ａ１１９．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、実施形態Ａ１１８に記載の方法。

【0400】

実施形態Ａ１２０．実施形態Ａ１～Ａ５９のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする、核酸。

【0401】

実施形態Ａ１２１．実施形態Ａ１２０に記載の核酸を含む、ベクター。

【0402】

実施形態Ａ１２２．ベクターが、発現ベクターである、実施形態Ａ１２１に記載のベクター。

【0403】

実施形態Ａ１２３．実施形態Ａ１２０に記載の核酸または実施形態Ａ１２１もしくはＡ１２２に記載のベクターを含む、細胞。

【0404】

実施形態Ａ１２４．単鎖キメラポリペプチドを産生する方法であって、
単鎖キメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で、実施形態Ａ１２３に記載の細胞を培養培地中で培養することと、
単鎖キメラポリペプチドを細胞および／または培養培地から回収することと、を含む、方法。

【0405】

実施形態Ａ１２５．実施形態Ａ１２４に記載の方法によって産生された、単鎖キメラポリペプチド。

【0406】

実施形態Ａ１２６．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態Ａ２６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0407】

実施形態Ａ１２７．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９６と少なくとも９０％同一である配列を含む、実施形態Ａ１２６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0408】

実施形態Ａ１２８．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９６と少なくとも９５％同一である配列を含む、実施形態Ａ１２７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0409】

実施形態Ａ１２９．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９６と１００％同一である配列を含む、実施形態Ａ１２８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0410】

実施形態Ａ１３０．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態Ａ２６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0411】

実施形態Ａ１３１．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と少なくとも９０％同一である配列を含む、実施形態Ａ１３０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0412】

実施形態Ａ１３２．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と少なくとも９５％同一である配列を含む、実施形態Ａ１３１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0413】

実施形態Ａ１３３．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と１００％同一である配列を含む、実施形態Ａ１３２に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0414】

Ｂ．例示的な実施形態
実施形態Ｂ１．単鎖キメラポリペプチドであって、
（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、および
（ｉｉｉ）第２の標的結合ドメインを含み、
第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、各々、ＩＬ－２受容体に特異的に結合するか、または
第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、各々、ＩＬ－１５受容体に特異的に結合する、単鎖キメラポリペプチド。

【0415】

実施形態Ｂ２．第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインが、互いに直接隣接している、実施形態Ｂ１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0416】

実施形態Ｂ３．単鎖キメラポリペプチドが、第１の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、実施形態Ｂ１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0417】

実施形態Ｂ４．可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインが、互いに直接隣接している、実施形態Ｂ１～Ｂ３のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0418】

実施形態Ｂ５．単鎖キメラポリペプチドが、可溶性組織因子ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、実施形態Ｂ１～Ｂ３のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0419】

実施形態Ｂ６．第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインが、互いに直接隣接している、実施形態Ｂ１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0420】

実施形態Ｂ７．単鎖キメラポリペプチドが、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、実施形態Ｂ１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0421】

実施形態Ｂ８．第２の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインが、互いに直接隣接している、実施形態Ｂ６またはＢ７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0422】

実施形態Ｂ９．単鎖キメラポリペプチドが、第２の標的結合ドメインと可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、実施形態Ｂ６またはＢ７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0423】

実施形態Ｂ１０．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインの両方が、可溶性インターロイキンタンパク質である、実施形態Ｂ１～Ｂ９のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0424】

実施形態Ｂ１１．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、可溶性ＩＬ－２タンパク質である、実施形態Ｂ１０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0425】

実施形態Ｂ１２．可溶性ＩＬ－２タンパク質が、可溶性ヒトＩＬ－２タンパク質である、実施形態Ｂ１１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0426】

実施形態Ｂ１３．可溶性ヒトＩＬ－２タンパク質が、配列番号２８を含む、実施形態Ｂ１２に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0427】

実施形態Ｂ１４．第１の標的結合ドメインおよび第２の標的結合ドメインが、可溶性ＩＬ－１５タンパク質である、実施形態Ｂ１０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0428】

実施形態Ｂ１５．可溶性ＩＬ－１５タンパク質が、可溶性ヒトＩＬ－１５タンパク質である、実施形態Ｂ１４に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0429】

実施形態Ｂ１６．可溶性ヒトＩＬ－１５タンパク質が、配列番号３９を含む、実施形態Ｂ１５に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0430】

実施形態Ｂ１７．可溶性組織因子ドメインが、可溶性ヒト組織因子ドメインである、実施形態Ｂ１～Ｂ１６のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0431】

実施形態Ｂ１８．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0432】

実施形態Ｂ１９．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも９０％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0433】

実施形態Ｂ２０．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも９５％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１９に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0434】

実施形態Ｂ２１．可溶性ヒト組織因子ドメインが、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２０位に対応するアミノ酸の位置にリジン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２２位に対応するアミノ酸の位置にイソロイシン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸４５位に対応するアミノ酸の位置にトリプトファン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸５８位に対応するアミノ酸の位置にアスパラギン酸、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸９４位に対応するアミノ酸の位置にチロシン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１３５位に対応するアミノ酸の位置にアルギニン、および
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１４０位に対応するアミノ酸の位置にフェニルアラニンのうちの１つ以上を含まない、実施形態Ｂ１７～Ｂ２０のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0435】

実施形態Ｂ２２．可溶性ヒト組織因子ドメインが、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２０位に対応するアミノ酸の位置にリジン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸２２位に対応するアミノ酸の位置にイソロイシン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸４５位に対応するアミノ酸の位置にトリプトファン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸５８位に対応するアミノ酸の位置にアスパラギン酸、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸９４位に対応するアミノ酸の位置にチロシン、
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１３５位に対応するアミノ酸の位置にアルギニン、および
成熟野生型ヒト組織因子タンパク質のアミノ酸１４０位に対応するアミノ酸の位置にフェニルアラニンのうちのいずれも含まない、実施形態Ｂ２１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0436】

実施形態Ｂ２３．可溶性組織因子ドメインが、第ＶＩＩａ因子に結合することができない、実施形態Ｂ１～Ｂ２２のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0437】

実施形態Ｂ２４．可溶性組織因子ドメインが、不活性第Ｘ因子を第Ｘａ因子に変換しない、実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0438】

実施形態Ｂ２５．単鎖キメラポリペプチドが、哺乳動物における凝固を血液刺激しない、実施形態Ｂ１～Ｂ２４のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0439】

実施形態Ｂ２６．単鎖キメラポリペプチドが、そのＮ末端および／またはＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインをさらに含む、実施形態Ｂ１～Ｂ２５のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0440】

実施形態Ｂ２７．単鎖キメラポリペプチドが、そのＮ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む、実施形態Ｂ２６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0441】

実施形態Ｂ２８．１つ以上の追加の標的結合ドメインが、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している、実施形態Ｂ２７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0442】

実施形態Ｂ２９．単鎖キメラポリペプチドが、少なくとも１つの追加の標的結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む、実施形態Ｂ２８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0443】

実施形態Ｂ３０．単鎖キメラポリペプチドが、そのＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む、実施形態Ｂ２６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0444】

実施形態Ｂ３１．１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの１つが、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している、実施形態Ｂ３０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0445】

実施形態Ｂ３２．単鎖キメラポリペプチドが、少なくとも１つの追加の標的結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む、実施形態Ｂ３０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0446】

実施形態Ｂ３３．単鎖キメラポリペプチドが、そのＮ末端およびＣ末端に１つ以上の追加の標的結合ドメインを含む、実施形態Ｂ２６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0447】

実施形態Ｂ３４．Ｎ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つが、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している、実施形態Ｂ３３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0448】

実施形態Ｂ３５．単鎖キメラポリペプチドが、Ｎ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む、実施形態Ｂ３３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0449】

実施形態Ｂ３６．Ｃ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つが、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインに直接隣接している、実施形態Ｂ３３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0450】

実施形態Ｂ３７．単鎖キメラポリペプチドが、Ｃ末端の１つ以上の追加の抗原結合ドメインのうちの１つと、第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、または可溶性組織因子ドメインとの間に、リンカー配列をさらに含む、実施形態Ｂ３３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0451】

実施形態Ｂ３８．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインの各々が、ＩＬ－２受容体またはＩＬ－１５受容体に特異的に結合する、実施形態Ｂ２６～Ｂ３７のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0452】

実施形態Ｂ３９．第１の標的結合ドメイン、第２の標的結合ドメイン、および１つ以上の追加の標的結合ドメインのうちの各々が、同じアミノ酸配列を含む、実施形態Ｂ３８に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0453】

実施形態Ｂ４０．１つ以上の追加の標的結合ドメインが、抗原結合ドメインである、実施形態Ｂ２６～Ｂ３７のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0454】

実施形態Ｂ４１．抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖまたは単一ドメイン抗体を含む、実施形態Ｂ４０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0455】

実施形態Ｂ４２．１つ以上の追加の標的結合ドメインが、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－１、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＰＤＬ－１、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＣＤ２６ａ、ＣＤ３６、ＵＬＢＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ２００、ＩＧＦ－１Ｒ、ＭＵＣ４ＡＣ、ＭＵＣ５ＡＣ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ７Ｈ３、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＵＬ１６結合タンパク質、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ４、ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１５５、ＰＤＧＦ－ＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ－１リガンド、ＮＫｐ４６リガンド、ＮＫｐ４４リガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＫｐ３０リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－１受容体、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－３受容体、ＩＬ－７受容体、ＩＬ－８受容体、ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１２受容体、ＩＬ－１５受容体、ＩＬ－１７受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＰＤＧＦ－ＤＤ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ１６結合タンパク質受容体、ＣＤ１５５受容体、ＣＤ１２２受容体、およびＣＤ２８受容体からなる群から選択される標的に特異的に結合する、実施形態Ｂ２６～Ｂ３７、Ｂ４０、およびＢ４１のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0456】

実施形態Ｂ４３．１つ以上の追加の標的結合ドメインが、可溶性インターロイキンまたはサイトカインタンパク質である、実施形態Ｂ６～Ｂ３７、Ｂ４０、およびＢ４１のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0457】

実施形態Ｂ４４．可溶性インターロイキンまたはサイトカインタンパク質が、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＰＤＧＦ－ＤＤ、およびＳＣＦからなる群から選択される、実施形態Ｂ４３に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0458】

実施形態Ｂ４５．１つ以上の追加の標的結合ドメインが、可溶性インターロイキンまたはサイトカイン受容体である、実施形態Ｂ６～Ｂ３７、Ｂ４０、およびＢ４１のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0459】

実施形態Ｂ４６．可溶性受容体が、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）および可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩである、実施形態Ｂ４５に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0460】

実施形態Ｂ４７．単鎖キメラポリペプチドが、そのＮ末端にシグナル配列をさらに含む、実施形態Ｂ１～Ｂ４６のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0461】

実施形態Ｂ４８．単鎖キメラポリペプチドが、単鎖キメラポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置付けられたペプチドタグをさらに含む、実施形態Ｂ１～Ｂ４７のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0462】

実施形態Ｂ４９．実施形態Ｂ１～Ｂ４８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、組成物。

【0463】

実施形態Ｂ５０．組成物が、医薬組成物である、実施形態Ｂ４９に記載の組成物。

【0464】

実施形態Ｂ５１．少なくとも１用量の実施形態Ｂ４９またはＢ５０に記載の組成物を含む、キット。

【0465】

実施形態Ｂ５２．免疫細胞を刺激する方法であって、
免疫細胞を、有効量の実施形態Ｂ１～Ｂ４８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ｂ４９もしくはＢ５０に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【0466】

実施形態Ｂ５３．免疫細胞をインビトロで接触させる、実施形態Ｂ５２に記載の方法。

【0467】

実施形態Ｂ５４．免疫細胞が、以前に対象から得られたものである、実施形態Ｂ５３に記載の方法。

【0468】

実施形態Ｂ５５．方法が、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む、実施形態Ｂ５４に記載の方法。

【0469】

実施形態Ｂ５６．免疫細胞をインビボで接触させる、実施形態Ｂ５２に記載の方法。

【0470】

実施形態Ｂ５７．免疫細胞が、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、メモリーＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される、実施形態Ｂ５２～Ｂ５６のいずれか１つに記載の方法。

【0471】

実施形態Ｂ５８．免疫細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている、実施形態Ｂ５２～Ｂ５７のいずれか１つに記載の方法。

【0472】

実施形態Ｂ５９．方法が、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む、実施形態Ｂ５２～Ｂ５７のいずれか１つに記載の方法。

【0473】

実施形態Ｂ６０．方法が、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、実施形態Ｂ５２～Ｂ５９のいずれか１つに記載の方法。

【0474】

実施形態Ｂ６１．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ６０に記載の方法。

【0475】

実施形態Ｂ６２．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ｂ６１に記載の方法。

【0476】

実施形態Ｂ６３．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ６０に記載の方法。

【0477】

実施形態Ｂ６４．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ｂ６３に記載の方法。

【0478】

実施形態Ｂ６５．対象が、感染性疾患を有すると診断または特定されている、実施形態Ｂ６０に記載の方法。

【0479】

実施形態Ｂ６６．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、実施形態Ｂ６５に記載の方法。

【0480】

実施形態Ｂ６７．免疫細胞の増殖を誘導するかまたは増加させる方法であって、
免疫細胞を、有効量の実施形態Ｂ１～Ｂ４８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ｂ４９もしくはＢ５０に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【0481】

実施形態Ｂ６８．免疫細胞をインビトロで接触させる、実施形態Ｂ６７に記載の方法。

【0482】

実施形態Ｂ６９．免疫細胞が、以前に対象から得られたものである、実施形態Ｂ６８に記載の方法。

【0483】

実施形態Ｂ７０．方法が、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む、実施形態Ｂ６０に記載の方法。

【0484】

実施形態Ｂ７１．免疫細胞をインビボで接触させる、実施形態Ｂ６７に記載の方法。

【0485】

実施形態Ｂ７２．免疫細胞が、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、メモリーＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される、実施形態Ｂ６７～Ｂ７１のいずれか１つに記載の方法。

【0486】

実施形態Ｂ７３．免疫細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている、実施形態Ｂ６７～Ｂ７２のいずれか１つに記載の方法。

【0487】

実施形態Ｂ７４．方法が、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む、実施形態Ｂ６７～Ｂ７２のいずれか１つに記載の方法。

【0488】

実施形態Ｂ７５．方法が、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、実施形態Ｂ６７～Ｂ７４のいずれか１つに記載の方法。

【0489】

実施形態Ｂ７６．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ７５に記載の方法。

【0490】

実施形態Ｂ７７．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ｂ７６に記載の方法。

【0491】

実施形態Ｂ７８．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ７５に記載の方法。

【0492】

実施形態Ｂ７９．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ｂ７８に記載の方法。

【0493】

実施形態Ｂ８０．対象が、感染性疾患を有すると診断または特定されている、実施形態Ｂ７５に記載の方法。

【0494】

実施形態Ｂ８１．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、実施形態Ｂ７５に記載の方法。

【0495】

実施形態Ｂ８２．免疫細胞のメモリーまたはメモリー様免疫細胞への分化を誘導する方法であって、
免疫細胞を、有効量の実施形態Ｂ１～Ｂ４８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ｂ４９もしくはＢ５０に記載の組成物と接触させることを含む、方法。

【0496】

実施形態Ｂ８３．免疫細胞をインビトロで接触させる、実施形態Ｂ８２に記載の方法。

【0497】

実施形態Ｂ８４．免疫細胞が、以前に対象から得られたものである、実施形態Ｂ８３に記載の方法。

【0498】

実施形態Ｂ８５．方法が、接触させるステップの前に、免疫細胞を対象から得ることをさらに含む、実施形態Ｂ８４に記載の方法。

【0499】

実施形態Ｂ８６．免疫細胞をインビボで接触させる、実施形態Ｂ８２に記載の方法。

【0500】

実施形態Ｂ８７．免疫細胞が、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ３細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される、実施形態Ｂ８２～Ｂ８６のいずれか１つに記載の方法。

【0501】

実施形態Ｂ８８．免疫細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている、実施形態Ｂ８２～Ｂ８７のいずれか１つに記載の方法。

【0502】

実施形態Ｂ８９．方法が、接触させるステップの後に、免疫細胞に、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体をコードする核酸を導入することをさらに含む、実施形態Ｂ８２～Ｂ８７のいずれか１つに記載の方法。

【0503】

実施形態Ｂ９０．方法が、免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、実施形態Ｂ８２～Ｂ８９のいずれか１つに記載の方法。

【0504】

実施形態Ｂ９１．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ９０に記載の方法。

【0505】

実施形態Ｂ９２．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ｂ９１に記載の方法。

【0506】

実施形態Ｂ９３．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ９０に記載の方法。

【0507】

実施形態Ｂ９４．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ｂ９３に記載の方法。

【0508】

実施形態Ｂ９５．対象が、感染性疾患を有すると診断または特定されている、実施形態Ｂ９０に記載の方法。

【0509】

実施形態Ｂ９６．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、実施形態Ｂ９５に記載の方法。

【0510】

実施形態Ｂ９７．がん細胞、感染細胞、または老化細胞の死滅を必要とする対象におけるがん細胞、感染細胞、または老化細胞を死滅させる方法であって、対象に、治療有効量の実施形態Ｂ１～Ｂ４８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ｂ４９もしくはＢ５０に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【0511】

実施形態Ｂ９８．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ９７に記載の方法。

【0512】

実施形態Ｂ９９．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ｂ９８に記載の方法。

【0513】

実施形態Ｂ１００．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ９７に記載の方法。

【0514】

実施形態Ｂ１０１．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ｂ１００に記載の方法。

【0515】

実施形態Ｂ１０２．治療を必要とする対象を治療する方法であって、対象に、治療有効量の実施形態Ｂ１～Ｂ４８に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは実施形態Ｂ４９もしくはＢ５０に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【0516】

実施形態Ｂ１０３．対象が、がんを有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ１０２に記載の方法。

【0517】

実施形態Ｂ１０４．がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、実施形態Ｂ１０３に記載の方法。

【0518】

実施形態Ｂ１０５．対象が、加齢関連疾患または状態を有すると特定または診断されている、実施形態Ｂ１０２に記載の方法。

【0519】

実施形態Ｂ１０６．加齢関連疾患または状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、２型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、実施形態Ｂ１０５に記載の方法。

【0520】

実施形態Ｂ１０７．対象が、感染性疾患を有すると診断または特定されている、実施形態Ｂ１０２に記載の方法。

【0521】

実施形態Ｂ１０８．感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、実施形態Ｂ１０７に記載の方法。

【0522】

実施形態Ｂ１０９．実施形態Ｂ１～Ｂ４８のいずれか１つに記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする、核酸。

【0523】

実施形態Ｂ１１０．実施形態Ｂ１０９の核酸を含む、ベクター。

【0524】

実施形態Ｂ１１１．ベクターが、発現ベクターである、実施形態Ｂ１１０に記載のベクター。

【0525】

実施形態Ｂ１１２．実施形態Ｂ１０９に記載の核酸または実施形態Ｂ１１０もしくはＢ１１１に記載のベクターを含む、細胞。

【0526】

実施形態Ｂ１１３．単鎖キメラポリペプチドを産生する方法であって、
単鎖キメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で、実施形態Ｂ１１２に記載の細胞を培養培地中で培養することと、
単鎖キメラポリペプチドを細胞および／または培養培地から回収することと、を含む、方法。

【0527】

実施形態Ｂ１１４．実施形態Ｂ１１３に記載の方法によって産生された、単鎖キメラポリペプチド。

【0528】

実施形態Ｂ１１５．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態Ｂ２１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0529】

実施形態Ｂ１１６．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９６と少なくとも９０％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１１５に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0530】

実施形態Ｂ１１７．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９６と少なくとも９５％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１１６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0531】

実施形態Ｂ１１８．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９６と１００％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１１７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0532】

実施形態Ｂ１１９．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態Ｂ２１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0533】

実施形態Ｂ１２０．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と少なくとも９０％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１１９に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0534】

実施形態Ｂ１２１．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と少なくとも９５％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１２０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【0535】

実施形態Ｂ１２２．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と１００％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１２１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図18】

【図19】

【図20A】

【図20B】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26A】

【図26B】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【手続補正書】

【提出日】2024-01-16

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

（ｉ）第１の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、および
（ｉｉｉ）第２の標的結合ドメイン
を含み、哺乳動物において血液凝固を刺激しない、単鎖キメラポリペプチドであって、前記第１の標的結合ドメインと前記第２の標的結合ドメインが、ＩＬ－２受容体に結合する、単鎖キメラポリペプチド。

【請求項2】

前記第１の標的結合ドメインと前記第２の標的結合ドメインのうち一方または両方が、ヒトＩＬ－２である、請求項１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項3】

前記第１の標的結合ドメインと前記第２の標的結合ドメインが、ヒトＩＬ－２である、請求項２に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項4】

前記可溶性組織因子ドメインが、凝固活性を持たない可溶性ヒト組織因子ドメインである、請求項１～３のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項5】

前記可溶性組織因子ドメインが、野生型可溶性ヒト組織因子由来の配列を含むか、またはそれからなる、請求項１～４のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項6】

前記第１の標的結合ドメインと前記可溶性組織因子ドメインが、互いに直接隣接している、請求項１～５のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項7】

前記第１の標的結合ドメインと前記可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項8】

前記可溶性組織因子ドメインと前記第２の標的結合ドメインが、互いに直接隣接している、請求項１～７のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項9】

前記可溶性組織因子ドメインと前記第２の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項10】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号２８と少なくとも８０％同一である配列を含み、
前記可溶性組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも８０％同一である配列を含み、かつ、
前記第２の標的結合ドメインが、配列番号２８と少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１～９のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項11】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号２８と少なくとも９０％同一である配列を含み、
前記可溶性組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも９０％同一である配列を含み、かつ、
前記第２の標的結合ドメインが、配列番号２８と少なくとも９０％同一である配列を含む、
請求項１０に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項12】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号２８と少なくとも９５％同一である配列を含み、
前記可溶性組織因子ドメインが、配列番号９と少なくとも９５％同一である配列を含み、かつ、
前記第２の標的結合ドメインが、配列番号２８と少なくとも９５％同一である配列を含む、
請求項１１に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項13】

前記第１の標的結合ドメインが、配列番号２８を含み、
前記可溶性組織因子ドメインが、配列番号９を含み、かつ、
前記第２の標的結合ドメインが、配列番号２８を含む、
請求項１２に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項14】

配列番号１０８と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項15】

配列番号１０８と少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項１４に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項16】

配列番号１０８と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１５に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項17】

配列番号１０８を含む、請求項１６に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項18】

配列番号１１０を含む、請求項１７に記載の単鎖キメラポリペプチド。

【請求項19】

請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、組成物。

【請求項20】

医薬組成物である、請求項１９に記載の組成物。

【請求項21】

請求項１９または２０に記載の組成物を含むキット。

【請求項22】

有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、免疫細胞を刺激するための医薬組成物。

【請求項23】

有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、免疫細胞の増殖を誘導するかまたは増加させるための医薬組成物。

【請求項24】

有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、免疫細胞のメモリー免疫細胞またはメモリー様免疫細胞への分化を誘導するための医薬組成物。

【請求項25】

がん細胞、感染細胞、または老化細胞の死滅を必要とする対象におけるがん細胞、感染細胞、または老化細胞を死滅させるための医薬組成物であって、有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、医薬組成物。

【請求項26】

治療を必要とする対象を治療するための医薬組成物であって、有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、医薬組成物。

【請求項27】

対象におけるアテローム性動脈硬化症を治療するための医薬組成物であって、有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、医薬組成物。

【請求項28】

請求項１～１８のいずれか一項に記載の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする、核酸。

【請求項29】

請求項２８に記載の核酸を含むベクター。

【請求項30】

請求項２８に記載の核酸を含む細胞。

【請求項31】

単鎖キメラポリペプチドを産生する方法であって、
請求項３０に記載の細胞を、単鎖キメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で、培養培地中で培養する工程、および
前記単鎖キメラポリペプチドを前記細胞および／または前記培養培地から回収する工程
を含む、方法。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0032】

[本発明1001]
（ｉ）第1の標的結合ドメイン、
（ｉｉ）可溶性組織因子ドメイン、および
（ｉｉｉ）第2の標的結合ドメイン
を含む、単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1002]
前記第1の標的結合ドメインと前記可溶性組織因子ドメインが、互いに直接隣接している、本発明1001の単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1003]
前記第1の標的結合ドメインと前記可溶性組織因子ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、本発明1001の単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1004]
前記可溶性組織因子ドメインと前記第2の標的結合ドメインが、互いに直接隣接している、本発明1001～1003のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1005]
前記可溶性組織因子ドメインと前記第2の標的結合ドメインとの間にリンカー配列をさらに含む、本発明1001～1003のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1006]
前記第1の標的結合ドメインおよび前記第2の標的結合ドメインが、同じ抗原に特異的に結合する、本発明1001～1005のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1007]
前記第1の標的結合ドメインおよび前記第2の標的結合ドメインが、同じエピトープに特異的に結合する、本発明1006の単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1008]
前記第1の標的結合ドメインおよび前記第2の標的結合ドメインが、同じアミノ酸配列を含む、本発明1007の単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1009]
前記第1の標的結合ドメインおよび前記第2の標的結合ドメインが、異なる抗原に特異的に結合する、本発明1001～1005のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1010]
前記第1の標的結合ドメインおよび前記第2の標的結合ドメインの一方または両方が、抗原結合ドメインである、本発明1001～1009のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1011]
前記第1の標的結合ドメインおよび前記第2の標的結合ドメインの一方または両方が、ＣＤ16ａ、ＣＤ28、ＣＤ3、ＣＤ33、ＣＤ20、ＣＤ19、ＣＤ22、ＣＤ123、ＩＬ－1Ｒ、ＩＬ－1、ＶＥＧＦ、ＩＬ－6Ｒ、ＩＬ－4、ＩＬ－10、ＰＤＬ－1、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－1、ＴＩＭ3、ＣＴＬＡ4、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＩＬ－6、ＩＬ－8、ＴＮＦα、ＣＤ26ａ、ＣＤ36、ＵＬＢＰ2、ＣＤ30、ＣＤ200、ＩＧＦ－1Ｒ、ＭＵＣ4ＡＣ、ＭＵＣ5ＡＣ、Ｔｒｏｐ－2、ＣＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ1、ＨＥＲ2、ＨＥＲ3、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、Ｂ7Ｈ3、ＥＰＣＡＭ、ＢＣＭＡ、Ｐ－カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ5、ＵＬ16結合タンパク質、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＬＬ4、ＴＹＲＯ3、ＡＸＬ、ＭＥＲ、ＣＤ122、ＣＤ155、ＰＤＧＦＤＤ、ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）リガンド、ＴＧＦ－βＲＩＩＩリガンド、ＤＮＡＭ1リガンド、ＮＫｐ46リガンド、ＮＫｐ44リガンド、ＮＫＧ2Ｄリガンド、ＮＫｐ30リガンド、ｓｃＭＨＣＩリガンド、ｓｃＭＨＣＩＩリガンド、ｓｃＴＣＲリガンド、ＩＬ－1受容体、ＩＬ－2受容体、ＩＬ－3受容体、ＩＬ－7受容体、ＩＬ－8受容体、ＩＬ－10受容体、ＩＬ－12受容体、ＩＬ－15受容体、ＩＬ－17受容体、ＩＬ－18受容体、ＩＬ－21受容体、ＰＤＧＦ－ＤＤ受容体、幹細胞因子（ＳＣＦ）受容体、幹細胞様チロシンキナーゼ3リガンド（ＦＬＴ3Ｌ）受容体、ＭＩＣＡ受容体、ＭＩＣＢ受容体、ＵＬＰ16結合タンパク質受容体、ＣＤ155受容体、ＣＤ122受容体、およびＣＤ28受容体からなる群から選択される標的に結合する、本発明1001～1010のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1012]
前記第1の標的結合ドメインおよび前記第2の標的結合ドメインの一方または両方が、可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質である、本発明1001～1010のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1013]
前記可溶性インターロイキン、可溶性サイトカインタンパク質、または可溶性細胞表面タンパク質が、ＩＬ－1、ＩＬ－2、ＩＬ－3、ＩＬ－7、ＩＬ－8、ＩＬ－10、ＩＬ－12、ＩＬ－15、ＩＬ－17、ＩＬ－18、ＩＬ－21、ＰＤＧＦ－Ｄ、ＳＣＦ、ＦＬＴ3Ｌ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＰ16結合タンパク質からなる群から選択される、本発明1012の単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1014]
前記第1の標的結合ドメインおよび前記第2の標的結合ドメインの一方または両方が、可溶性インターロイキン受容体、可溶性サイトカイン受容体、または可溶性細胞表面受容体である、本発明1001～1010のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1015]
前記可溶性インターロイキン受容体、前記可溶性サイトカイン受容体、または前記可溶性細胞表面受容体が、可溶性ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴＧＦ－βＲＩＩ）、可溶性ＴＧＦ－βＲＩＩＩ、可溶性ＮＫＧ2Ｄ、可溶性ＮＫｐ30、可溶性ＮＫｐ44、可溶性ＮＫｐ46、可溶性ＤＮＡＭ－1、ｓｃＭＨＣＩ、ｓｃＭＨＣＩＩ、ｓｃＴＣＲ、可溶性ＣＤ155、または可溶性ＣＤ28である、本発明1014の単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1016]
前記可溶性組織因子ドメインが、可溶性ヒト組織因子ドメインである、本発明1001～1015のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1017]
前記可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号9と少なくとも80％同一である配列を含む、本発明1016の単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1018]
そのＮ末端および／またはＣ末端に1つ以上の追加の標的結合ドメインをさらに含む、本発明1001～1017のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1019]
本発明1001～1018の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかを含む、組成物。
[本発明1020]
医薬組成物である、本発明1019の組成物。
[本発明1021]
少なくとも1用量の本発明1019または1020の組成物を含む、キット。
[本発明1022]
免疫細胞を刺激する方法であって、
免疫細胞を、有効量の、本発明1001～1018の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本発明1019もしくは1020の組成物と接触させることを含む、方法。
[本発明1023]
免疫細胞の増殖を誘導するかまたは増加させる方法であって、
免疫細胞を、有効量の、本発明1001～1018の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本発明1019もしくは1020の組成物と接触させることを含む、方法。
[本発明1024]
免疫細胞のメモリーまたはメモリー様免疫細胞への分化を誘導する方法であって、
免疫細胞を、有効量の、本発明1001～1018の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本発明1019もしくは1020の組成物と接触させることを含む、方法。
[本発明1025]
前記免疫細胞をインビトロで接触させる、本発明1022～1024のいずれかの方法。
[本発明1026]
前記免疫細胞をインビボで接触させる、本発明1022～1024のいずれかの方法。
[本発明1027]
前記免疫細胞が、未熟胸腺細胞、末梢血リンパ球、ナイーブＴ細胞、多能性Ｔｈ細胞前駆体、リンパ前駆細胞、Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｈ17細胞、Ｔｈ22細胞、Ｔｈ9細胞、Ｔｈ2細胞、Ｔｈ1細胞、Ｔｈ3細胞、γδ Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、ＣＤ8＋Ｔ細胞、ＣＤ4＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好酸球、およびナチュラルキラー細胞からなる群から選択される、本発明1022～1026のいずれかの方法。
[本発明1028]
前記免疫細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴ細胞受容体を発現するように以前に遺伝子改変されている、本発明1022～1027のいずれかの方法。
[本発明1029]
前記免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、本発明1022～1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
がん細胞、感染細胞、または老化細胞の死滅を必要とする対象におけるがん細胞、感染細胞、または老化細胞を死滅させる方法であって、前記対象に、治療有効量の、本発明1001～1018の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本発明1019もしくは1020の組成物を投与することを含む、方法。
[本発明1031]
治療を必要とする対象を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の、本発明1001～1018の単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかまたは本発明1019もしくは1020の組成物を投与することを含む、方法。
[本発明1032]
前記対象が、がん、加齢関連疾患もしくは状態、または感染性疾患を有すると特定または診断されている、本発明1030または1031の方法。
[本発明1033]
前記がんが、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、胃がん、尿路上皮がん、肺がん、腎細胞がん、胃（ｇａｓｔｉｃ）食道がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、扁平上皮頭頸部がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肝臓がん、および肝細胞がんからなる群から選択される、本発明1032の方法。
[本発明1034]
前記加齢関連疾患もしくは状態が、アルツハイマー病、動脈瘤、嚢胞性線維症、膵炎（ｐａｎｃｅａｔｉｔｉｓ）における線維症、緑内障、高血圧症、特発性肺線維症、炎症性腸疾患、椎間板変性、黄斑変性、骨関節炎、2型真性糖尿病、脂肪萎縮、リポジストロフィー、アテローム性動脈硬化症、白内障、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、腎移植不全、肝線維症、骨量喪失、心筋梗塞、サルコペニア、創傷治癒、脱毛症、心筋細胞肥大、骨関節炎、パーキンソン病、加齢に伴う肺組織弾性の低下、黄斑変性、悪液質、糸球体硬化症、肝硬変、ＮＡＦＬＤ、骨粗しょう症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、多発性硬化症、および腎機能障害からなる群から選択される、本発明1032の方法。
[本発明1035]
前記感染性疾患が、ヒト免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ロタウイルス、天然痘、単純ヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、ならびにインフルエンザウイルスによる感染である、本発明1032の方法。
[本発明1036]
本発明1001～1018のいずれかの単鎖キメラポリペプチドのうちのいずれかをコードする、核酸。
[本発明1037]
本発明1036の核酸を含む、ベクター。
[本発明1038]
本発明1036の核酸または本発明1037のベクターを含む、細胞。
[本発明1039]
単鎖キメラポリペプチドを産生する方法であって、
前記単鎖キメラポリペプチドの産生をもたらすのに十分な条件下で、本発明1038の細胞を培養培地中で培養することと、
前記単鎖キメラポリペプチドを前記細胞および／または前記培養培地から回収することと
を含む、方法。
[本発明1040]
本発明1039の方法によって産生された、単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1041]
前記ヒト可溶性組織因子ドメインが、血液凝固を開始させない、本発明1016の単鎖キメラポリペプチド。
[本発明1042]
前記可溶性組織因子ドメインが、野生型可溶性ヒト組織因子由来の配列を含むか、またはそれからなる、本発明1001～1018のいずれかの単鎖キメラポリペプチド。
本発明の他の特徴および利点は、以下の発明を実施するための形態および図から、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０５３５

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0535】

実施形態Ｂ１２２．可溶性ヒト組織因子ドメインが、配列番号９７と１００％同一である配列を含む、実施形態Ｂ１２１に記載の単鎖キメラポリペプチド。
配列情報
SEQUENCE LISTING
<110> HCW BIOLOGICS, INC.
<120> SINGLE-CHAIN CHIMERIC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
<150> US 62/881,039
<151> 2019-07-31
<150> US 62/817,244
<151> 2019-03-12
<150> US 62/817,241
<151> 2019-03-12
<150> US 62/816,683
<151> 2019-03-11
<150> US 62/749,506
<151> 2018-10-23
<150> US 62/746,832
<151> 2018-10-17
<150> US 62/725,038
<151> 2018-08-30
<160> 117
<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 696
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
alphaCD3scFv/TF/alphaCD28scFv sequence"
<400> 1
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln
115 120 125
Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys
130 135 140
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys
145 150 155 160
Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser
165 170 175
Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu
180 185 190
Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu
195 200 205
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp
210 215 220
His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys
245 250 255
Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn
260 265 270
Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser
275 280 285
Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile
290 295 300
Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro
305 310 315 320
Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu
325 330 335
Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro
340 345 350
Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val
355 360 365
Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu
370 375 380
Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys
385 390 395 400
Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe
405 410 415
Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala
420 425 430
Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val
435 440 445
Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Val Gln Leu Gln
450 455 460
Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser
465 470 475 480
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Ile Gln Trp Val
485 490 495
Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Asn Pro
500 505 510
Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr
515 520 525
Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met Glu Phe Ser Ser
530 535 540
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Asp
545 550 555 560
Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly
565 570 575
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu
580 585 590
Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val
595 600 605
Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Phe His
610 615 620
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Cys Ile Tyr Ser
625 630 635 640
Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly
645 650 655
Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala
660 665 670
Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Thr Phe Gly Gly
675 680 685
Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg
690 695

<210> 2
<211> 2088
<212> DNA
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Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
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Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn
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Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser
660 665 670
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
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Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp
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Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
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Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val
50 55 60
Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala
65 70 75 80
Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn
85 90 95
Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr
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Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu
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Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg
130 135 140
Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser
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Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu
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Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val
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Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu
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Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu
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Thr Val Gln Ile Ser Asp Arg Ser Arg Asn Trp Lys Asn Lys Cys Phe
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Ser Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp
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Val Val Val Lys Asp Ser Leu Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr Phe
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Tyr Arg Lys Gly Ser Ser Thr Gly Lys Lys Thr Asn Ile Thr Asn Thr
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Lys Val Thr Val Lys Asp Ser Phe Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr
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Phe Leu Thr Leu Arg Gln Val Phe Gly Asn Asp Leu Gly Tyr Ile Leu
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Thr Tyr Arg Lys Asp Ser Ser Thr Gly Arg Lys Thr Asn Thr Thr His
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Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Glu Lys Gly Val Ser Tyr Cys Phe
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
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Anti-CD3 scFv heavy chain variable domain sequence"
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Anti-CD3 scFv light chain variable domain sequence"
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Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
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Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
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Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
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Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly Gly Ser
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln
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Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys
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Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys
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Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser
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Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu
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Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu
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Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp
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His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser
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Ser

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Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Cys
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Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Thr
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Ser Ser

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cctcgtttta gcggctccgg cagcacctct tactctttaa ccattagctc tatggaggcc 240
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Ile Gln Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
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Ser Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
50 55 60
Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met
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Glu Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
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Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu
130 135 140
Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser
145 150 155 160
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Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
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Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
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tcctatttcc actggtacca gcagaaaccc ggctcctccc ctaaactgtg tatctactcc 540
acaagcaatt tagctagcgg cgtgcctcct cgttttagcg gctccggcag cacctcttac 600
tctttaacca ttagctctat ggaggccgaa gatgccgcca catacttttg ccatcagtac 660
caccggtccc ctacctttgg cggaggcaca aagctggaga ccaagcgg 708

<210> 28
<211> 133
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
<223> /note="Human Soluble IL-2"
<400> 28
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130

<210> 29
<211> 133
<212> PRT
<213> Homo sapiens
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<221> source
<223> /note="Human Soluble IL-3"
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Ala Pro Met Thr Gln Thr Thr Pro Leu Lys Thr Ser Trp Val Asn Cys
1 5 10 15
Ser Asn Met Ile Asp Glu Ile Ile Thr His Leu Lys Gln Pro Pro Leu
20 25 30
Pro Leu Leu Asp Phe Asn Asn Leu Asn Gly Glu Asp Gln Asp Ile Leu
35 40 45
Met Glu Asn Asn Leu Arg Arg Pro Asn Leu Glu Ala Phe Asn Arg Ala
50 55 60
Val Lys Ser Leu Gln Asn Ala Ser Ala Ile Glu Ser Ile Leu Lys Asn
65 70 75 80
Leu Leu Pro Cys Leu Pro Leu Ala Thr Ala Ala Pro Thr Arg His Pro
85 90 95
Ile His Ile Lys Asp Gly Asp Trp Asn Glu Phe Arg Arg Lys Leu Thr
100 105 110
Phe Tyr Leu Lys Thr Leu Glu Asn Ala Gln Ala Gln Gln Thr Thr Leu
115 120 125
Ser Leu Ala Ile Phe
130

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<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
<223> /note="Human Soluble IL-7"
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Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu
1 5 10 15
Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser
20 25 30
Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp
35 40 45
Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg
50 55 60
Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu
65 70 75 80
Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val
85 90 95
Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser
100 105 110
Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu
115 120 125
Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys
130 135 140
Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
145 150

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<213> Homo sapiens
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<400> 31
Glu Gly Ala Val Leu Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys
1 5 10 15
Ile Lys Thr Tyr Ser Lys Pro Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu
20 25 30
Arg Val Ile Glu Ser Gly Pro His Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val
35 40 45
Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu Leu Cys Leu Asp Pro Lys Glu Asn Trp
50 55 60
Val Gln Arg Val Val Glu Lys Phe Leu Lys Arg Ala Glu Asn Ser
65 70 75

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<213> Homo sapiens
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Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro
1 5 10 15
Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
20 25 30
Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu
35 40 45
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu
85 90 95
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
100 105 110
Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe
115 120 125
Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp
130 135 140
Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn
145 150 155 160

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<213> Homo sapiens
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Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr
1 5 10 15
Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu
20 25 30
Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly
35 40 45
Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly
50 55 60
Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu
65 70 75 80
Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys
85 90 95
Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys
100 105 110
Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr
115 120 125
Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln
130 135 140
Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly
145 150 155 160
Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala
165 170 175
Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala
180 185 190
Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg
195 200 205
Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu
210 215 220
Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp
225 230 235 240
Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln
245 250 255
Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr
260 265 270
Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala
275 280 285
Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro
290 295 300
Cys Ser
305

<210> 34
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<400> 34
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ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120
gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180
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ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300
cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360
tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420
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gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600
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agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780
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aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900
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<210> 35
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<213> Homo sapiens
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Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu
1 5 10 15
His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys
20 25 30
Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp
35 40 45
His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu
50 55 60
Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr
65 70 75 80
Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe
85 90 95
Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr
100 105 110
Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys
115 120 125
Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu
130 135 140
Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser
145 150 155 160
Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu
165 170 175
Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser
180 185 190
Tyr Leu Asn Ala Ser
195

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<213> Homo sapiens
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<400> 36
cgtaacctcc ccgtggctac ccccgatccc ggaatgttcc cttgtttaca ccacagccag 60
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gaggcttgtt tacctctgga gctgacaaag aacgagtctt gtctcaactc tcgtgaaacc 240
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<211> 518
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<213> Homo sapiens
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<223> /note="Human Soluble IL-12"
<400> 37
Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr
1 5 10 15
Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu
20 25 30
Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly
35 40 45
Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly
50 55 60
Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu
65 70 75 80
Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys
85 90 95
Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys
100 105 110
Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr
115 120 125
Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln
130 135 140
Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly
145 150 155 160
Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala
165 170 175
Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala
180 185 190
Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg
195 200 205
Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu
210 215 220
Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp
225 230 235 240
Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln
245 250 255
Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr
260 265 270
Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala
275 280 285
Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro
290 295 300
Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
305 310 315 320
Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys
325 330 335
Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln
340 345 350
Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile
355 360 365
Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys
370 375 380
Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu
385 390 395 400
Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser
405 410 415
Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met
420 425 430
Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro
435 440 445
Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu
450 455 460
Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser
465 470 475 480
Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile
485 490 495
Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met
500 505 510
Ser Tyr Leu Asn Ala Ser
515

<210> 38
<211> 1554
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
<223> /note="Human Soluble IL-12"
<400> 38
atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60
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ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300
cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360
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gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540
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tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660
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agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780
cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840
aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900
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accagcttca tcacaaatgg ctcttgttta gcttcccgga agacctcctt tatgatggct 1260
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gtgattgatg agctgatgca agctttaaac ttcaactccg agaccgtccc tcagaagtcc 1440
tccctcgagg agcccgattt ttacaagaca aagatcaaac tgtgcatttt actccacgcc 1500
tttaggatcc gggccgtgac cattgaccgg gtcatgagct atttaaacgc cagc 1554

<210> 39
<211> 114
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
<223> /note="Human Soluble IL-15"
<400> 39
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser

<210> 40
<211> 132
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
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<223> /note="Human Soluble IL-17"
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Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys
1 5 10 15
Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn Leu Asn Ile His Asn Arg Asn
20 25 30
Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr
35 40 45
Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser
50 55 60
Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp
65 70 75 80
Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile
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Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu
100 105 110
Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Ile Val
115 120 125
His His Val Ala
130

<210> 41
<211> 157
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
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<223> /note="Human Soluble IL-18"
<400> 41
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
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Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
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Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155

<210> 42
<211> 471
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
<223> /note="Human Soluble IL-18"
<400> 42
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atctccttta aggaaatgaa cccccccgat aacatcaagg acaccaagtc cgatatcatc 300
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gagggctact ttttagcttg tgaaaaggag agggatttat tcaagctgat cctcaagaag 420
gaggacgagc tgggcgatcg ttccatcatg ttcaccgtcc aaaacgagga t 471

<210> 43
<211> 133
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
<223> /note="Human Soluble IL-21"
<400> 43
Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile
1 5 10 15
Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu
20 25 30
Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser
35 40 45
Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His
115 120 125
Gly Ser Glu Asp Ser
130

<210> 44
<211> 399
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
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<400> 44
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<210> 45
<211> 352
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
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000

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tacaatacca gcaaccccga c 861

<210> 62
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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Signal sequence"
<400> 62
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<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Signal sequence"
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<213> Artificial Sequence
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<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
Signal sequence"
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atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctcc 54

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Signal sequence"
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Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Leu Gly Val Asn Cys
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Signal sequence"
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Met Gly Gln Ile Val Thr Met Phe Glu Ala Leu Pro His Ile Ile Asp
1 5 10 15
Glu Val Ile Asn Ile Val Ile Ile Val Leu Ile Ile Ile Thr Ser Ile
20 25 30
Lys Ala Val Tyr Asn Phe Ala Thr Cys Gly Ile Leu Ala Leu Val Ser
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Phe Leu Phe Leu Ala Gly Arg Ser Cys Gly
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Signal sequence"
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Met Pro Asn His Gln Ser Gly Ser Pro Thr Gly Ser Ser Asp Leu Leu
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Leu Ser Gly Lys Lys Gln Arg Pro His Leu Ala Leu Arg Arg Lys Arg
20 25 30
Arg Arg Glu Met Arg Lys Ile Asn Arg Lys Val Arg Arg Met Asn Leu
35 40 45
Ala Pro Ile Lys Glu Lys Thr Ala Trp Gln His Leu Gln Ala Leu Ile
50 55 60
Ser Glu Ala Glu Glu Val Leu Lys Thr Ser Gln Thr Pro Gln Asn Ser
65 70 75 80
Leu Thr Leu Phe Leu Ala Leu Leu Ser Val Leu Gly Pro Pro Val Thr
85 90 95
Gly

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Signal sequence"
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Met Asp Ser Lys Gly Ser Ser Gln Lys Gly Ser Arg Leu Leu Leu Leu
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Leu Val Val Ser Asn Leu Leu Leu Cys Gln Gly Val Val Ser
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Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
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Calmodulin-tag sequence"
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Lys Arg Arg Trp Lys Lys Asn Phe Ile Ala Val Ser Ala Ala Asn Arg
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Phe Lys Lys Ile Ser Ser Ser Gly Ala Leu
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E-tag sequence"
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Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu Glu Pro Arg
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His-tag sequence"
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His His His His His His
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His-tag sequence"
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His-tag sequence"
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Glu Ser

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S-tag sequence"
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Met Asp Glu Lys Thr Thr Gly Trp Arg Gly Gly His Val Val Glu Gly
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Gln Gly Gln Arg Glu Pro
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Ser Leu Ala Glu Leu Leu Asn Ala Gly Leu Gly Gly Ser
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Softag 3 sequence"
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Spot-tag sequence"
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Ty tag sequence"
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Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr
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Xpress tag sequence"
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Asp Leu Tyr Asp Asp Asp Asp Lys
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Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln
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Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys
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Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val
50 55 60
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65 70 75 80
Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn
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Asp Glu Arg Thr Leu Val Ala Arg Asn Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg
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Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser
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Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu
165 170 175
Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val
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Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu
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Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu
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<213> Homo sapiens
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Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln
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Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Ala Lys Ser Lys
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Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala
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Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Ala Glu Asn
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Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu
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Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser
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Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu
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Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val
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Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu
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Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu
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<400> 98
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accagcccca aaaggtggat ctacgacacc agcaagctgg cctccggagt gcccgctcat 180
ttccggggct ctggatccgg caccagctac tctttaacca tttccggcat ggaagctgaa 240
gacgctgcca cctactattg ccagcaatgg agcagcaacc ccttcacatt cggatctggc 300
accaagctcg aaatcaatcg tggaggaggt ggcagcggcg gcggtggatc cggcggagga 360
ggaagccaag ttcaactcca gcagagcggc gctgaactgg cccggcccgg cgcctccgtc 420
aagatgagct gcaaggcttc cggctataca tttactcgtt acacaatgca ttgggtcaag 480
cagaggcccg gtcaaggttt agagtggatc ggatatatca acccttcccg gggctacacc 540
aactataacc aaaagttcaa ggataaagcc actttaacca ctgacaagag ctcctccacc 600
gcctacatgc agctgtcctc tttaaccagc gaggactccg ctgtttacta ctgcgctagg 660
tattacgacg accactactg tttagactat tggggacaag gtaccacttt aaccgtcagc 720
agc 723

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Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val
20 25 30
Ile Gln Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
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Ser Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
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Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met
65 70 75 80
Glu Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Trp Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu
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Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser
145 150 155 160
Ser Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu
165 170 175
Cys Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe
180 185 190
Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
195 200 205
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
210 215 220
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg
225 230 235

<210> 101
<211> 708
<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<400> 101
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tgtaaggcca gcggatacac cttcacctcc tatgtgatcc agtgggtcaa acagaagccc 120
ggacaaggtc tcgagtggat cggcagcatc aacccttaca acgactatac caaatacaac 180
gagaagttta agggaaaggc tactttaacc tccgacaaaa gctccatcac agcctacatg 240
gagttcagct ctttaacatc cgaggacagc gctctgtact attgcgcccg gtggggcgac 300
ggcaattact ggggacgggg cacaacactg accgtgagca gcggaggcgg aggctccggc 360
ggaggcggat ctggcggtgg cggctccgac atcgagatga cccagtcccc cgctatcatg 420
tccgcctctt taggcgagcg ggtcacaatg acttgtacag cctcctccag cgtctcctcc 480
tcctacttcc attggtacca acagaaaccc ggaagctccc ctaaactgtg catctacagc 540
accagcaatc tcgccagcgg cgtgccccct aggttttccg gaagcggaag caccagctac 600
tctttaacca tctcctccat ggaggctgag gatgccgcca cctacttttg tcaccagtac 660
caccggtccc ccaccttcgg aggcggcacc aaactggaga caaagagg 708

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<400> 103
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<400> 105
000

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<211> 399
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<400> 106
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ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc ccaaactcac caggatgctc 120
acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa 180
gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta 240
agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 300
acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga 360
tggattacct tttgtcaaag catcatctca acactaact 399

<210> 107
<211> 399
<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<223> /note="IL-2"
<400> 107
gcccccacct cctcctccac caagaagacc cagctgcagc tggagcattt actgctggat 60
ttacagatga ttttaaacgg catcaacaac tacaagaacc ccaagctgac tcgtatgctg 120
accttcaagt tctacatgcc caagaaggcc accgagctga agcatttaca gtgtttagag 180
gaggagctga agcccctcga ggaggtgctg aatttagccc agtccaagaa tttccattta 240
aggccccggg atttaatcag caacatcaac gtgatcgttt tagagctgaa gggctccgag 300
accaccttca tgtgcgagta cgccgacgag accgccacca tcgtggagtt tttaaatcgt 360
tggatcacct tctgccagtc catcatctcc actttaacc 399

<210> 108
<211> 485
<212> PRT
<213> Homo sapiens
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<400> 108
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
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Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
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Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn
130 135 140
Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro
145 150 155 160
Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly
165 170 175
Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu
180 185 190
Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val
195 200 205
Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu
210 215 220
Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn
225 230 235 240
Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val
245 250 255
Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr
260 265 270
Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu
275 280 285
Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn
290 295 300
Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe
305 310 315 320
Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr
325 330 335
Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu
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Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
355 360 365
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
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420 425 430
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
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450 455 460
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Ile Ser Thr Leu Thr
485

<210> 109
<211> 1455
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
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<400> 109
gcccccacct cctcctccac caagaagacc cagctgcagc tggagcattt actgctggat 60
ttacagatga ttttaaacgg catcaacaac tacaagaacc ccaagctgac tcgtatgctg 120
accttcaagt tctacatgcc caagaaggcc accgagctga agcatttaca gtgtttagag 180
gaggagctga agcccctcga ggaggtgctg aatttagccc agtccaagaa tttccattta 240
aggccccggg atttaatcag caacatcaac gtgatcgttt tagagctgaa gggctccgag 300
accaccttca tgtgcgagta cgccgacgag accgccacca tcgtggagtt tttaaatcgt 360
tggatcacct tctgccagtc catcatctcc actttaacca gcggcacaac caacacagtc 420
gctgcctata acctcacttg gaagagcacc aacttcaaaa ccatcctcga atgggaaccc 480
aaacccgtta accaagttta caccgtgcag atcagcacca agtccggcga ctggaagtcc 540
aaatgtttct ataccaccga caccgagtgc gatctcaccg atgagatcgt gaaagatgtg 600
aaacagacct acctcgcccg ggtgtttagc taccccgccg gcaatgtgga gagcactggt 660
tccgctggcg agcctttata cgagaacagc cccgaattta ccccttacct cgagaccaat 720
ttaggacagc ccaccatcca aagctttgag caagttggca caaaggtgaa tgtgacagtg 780
gaggacgagc ggactttagt gcggcggaac aacacctttc tcagcctccg ggatgtgttc 840
ggcaaagatt taatctacac actgtattac tggaagtcct cttcctccgg caagaagaca 900
gctaaaacca acacaaacga gtttttaatc gacgtggata aaggcgaaaa ctactgtttc 960
agcgtgcaag ctgtgatccc ctcccggacc gtgaatagga aaagcaccga tagccccgtt 1020
gagtgcatgg gccaagaaaa gggcgagttc cgggaggcac ctacttcaag ttctacaaag 1080
aaaacacagc tacaactgga gcatttactg ctggatttac agatgatttt gaatggaatt 1140
aataattaca agaatcccaa actcaccagg atgctcacat ttaagtttta catgcccaag 1200
aaggccacag aactgaaaca tcttcagtgt ctagaagaag aactcaaacc tctggaggaa 1260
gtgctaaatt tagctcaaag caaaaacttt cacttaagac ccagggactt aatcagcaat 1320
atcaacgtaa tagttctgga actaaaggga tctgaaacaa cattcatgtg tgaatatgct 1380
gatgagacag caaccattgt agaatttctg aacagatgga ttaccttttg tcaaagcatc 1440
atctcaacac taact 1455

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<211> 503
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
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<400> 110
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu
20 25 30
Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn
35 40 45
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
50 55 60
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
65 70 75 80
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe
85 90 95
His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu
100 105 110
Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu
115 120 125
Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln
130 135 140
Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala
145 150 155 160
Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp
165 170 175
Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys
180 185 190
Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys
195 200 205
Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala
210 215 220
Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala
225 230 235 240
Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu
245 250 255
Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr
260 265 270
Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn
275 280 285
Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr
290 295 300
Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys
305 310 315 320
Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr
325 330 335
Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys
340 345 350
Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe
355 360 365
Arg Glu Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu
370 375 380
Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
405 410 415
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
420 425 430
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe
435 440 445
His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu
450 455 460
Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu
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Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln
485 490 495
Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
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acactaact 1509

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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
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Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
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Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
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Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
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Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
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Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
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Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
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Thr Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp
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130 135 140
Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys
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Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu
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Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr
180 185 190
Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr
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210 215 220
Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr
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Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser
245 250 255
Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp
260 265 270
Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu
275 280 285
Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln
290 295 300
Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro
305 310 315 320
Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val
325 330 335
Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met
340 345 350
His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys
355 360 365
Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser
370 375 380
Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile
385 390 395 400
Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser
405 410 415
Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe
420 425 430
Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser
435 440 445

<210> 115
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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caagttatct ctttagagag cggagacgct agcatccacg acaccgtgga gaatttaatc 1200
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cagatgttca tcaatacctc c 1341

<210> 116
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
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<400> 116
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp
20 25 30
Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp
35 40 45
Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu
50 55 60
Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr
65 70 75 80
Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys
100 105 110
Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe
115 120 125
Ile Asn Thr Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu
130 135 140
Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys
145 150 155 160
Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp
165 170 175
Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr
180 185 190
Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe
195 200 205
Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro
210 215 220
Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu
225 230 235 240
Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn
245 250 255
Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe
260 265 270
Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr
275 280 285
Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr
290 295 300
Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser
305 310 315 320
Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp
325 330 335
Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn
340 345 350
Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln
355 360 365
Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro
370 375 380
Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val
385 390 395 400
Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn
405 410 415
Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr
420 425 430
Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys
435 440 445
Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr
450 455 460
Ser
465

<210> 117
<211> 1395
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> source
<223> /note="IL-15/TF/IL-15 with signal sequence"
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atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccaactgg 60
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tgtttctata ccaccgacac cgagtgcgat ctcaccgatg agatcgtgaa agatgtgaaa 600
cagacctacc tcgcccgggt gtttagctac cccgccggca atgtggagag cactggttcc 660
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ggacagccca ccatccaaag ctttgagcaa gttggcacaa aggtgaatgt gacagtggag 780
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tgcatgggcc aagaaaaggg cgagttccgg gagaactggg tgaacgtcat cagcgattta 1080
aagaagatcg aagatttaat tcagtccatg catatcgacg ccactttata cacagaatcc 1140
gacgtgcacc cctcttgtaa ggtgaccgcc atgaaatgtt ttttactgga gctgcaagtt 1200
atctctttag agagcggaga cgctagcatc cacgacaccg tggagaattt aatcatttta 1260
gccaataact ctttatccag caacggcaac gtgacagagt ccggctgcaa ggagtgcgaa 1320
gagctggagg agaagaacat caaggagttt ctgcaatcct ttgtgcacat tgtccagatg 1380
ttcatcaata cctcc 1395

【手続補正4】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2024037966000001.xml

【外国語明細書】