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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024041167
(43)【公開日】2024-03-27
(54)【発明の名称】プロトンポンプ機能促進剤
(51)【国際特許分類】
A61K 8/9789 20170101AFI20240319BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20240319BHJP
A61K 36/232 20060101ALI20240319BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240319BHJP
A61P 17/16 20060101ALI20240319BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240319BHJP
A23L 33/105 20160101ALI20240319BHJP
A23L 2/52 20060101ALN20240319BHJP
A23L 2/60 20060101ALN20240319BHJP
【ＦＩ】
A61K8/9789
A61Q19/00 ZNA
A61K36/232
A61P17/00
A61P17/16
A61P43/00 111
A23L33/105
A23L2/00 F
A23L2/52
A23L2/60
【審査請求】未請求
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022145824
(22)【出願日】2022-09-14
(71)【出願人】
【識別番号】592262543
【氏名又は名称】日本メナード化粧品株式会社
(72)【発明者】
【氏名】村上 祐子
(72)【発明者】
【氏名】岡田 大輝
(72)【発明者】
【氏名】山羽 宏行
【テーマコード（参考）】
4B018
4B117
4C083
4C088
【Ｆターム（参考）】
4B018LB01
4B018LB08
4B018LE01
4B018MD61
4B018ME14
4B018MF01
4B117LC04
4B117LG18
4B117LK06
4B117LK08
4B117LL01
4B117LL02
4B117LP01
4C083AA082
4C083AA111
4C083AA112
4C083AA122
4C083AB032
4C083AB232
4C083AB242
4C083AB312
4C083AB352
4C083AB432
4C083AB442
4C083AC022
4C083AC072
4C083AC102
4C083AC122
4C083AC182
4C083AC242
4C083AC302
4C083AC422
4C083AC432
4C083AC482
4C083AC542
4C083AC842
4C083AD092
4C083AD112
4C083AD272
4C083AD352
4C083AD512
4C083BB51
4C083CC02
4C083CC04
4C083CC05
4C083CC07
4C083CC12
4C083CC25
4C083DD23
4C083DD41
4C083EE12
4C083FF01
4C088AB41
4C088AC11
4C088BA09
4C088BA10
4C088CA05
4C088CA06
4C088NA14
4C088ZA89
4C088ZC41
(57)【要約】 （修正有）
【課題】皮膚のｐＨを調整し、皮膚のバリア機能を改善する植物由来成分を見出し、これを有効成分とする、作用点が明確であり、且つ、優れた皮膚ｐＨ調整剤及び皮膚バリア機能改善剤を提供する。
【解決手段】水からなる前処理剤で抽出したトウキの抽出残渣から、水（前処理剤より高い温度）、低級アルコール及び液状多価アルコールからなる群より選ばれる１種又は２種以上の抽出剤で抽出して得られたトウキの抽出物は、優れたプロトンポンプ機能促進作用、皮膚ｐＨ調整作用、皮膚バリア機能改善作用を有し、安定性にも優れていた。本発明の抽出物は、プロトンポンプ機能を促進する作用を介して、皮膚のｐＨを弱酸性に維持することによる皮膚のバリア機能の改善を目的とする化粧品、医薬品、医薬部外品及び食品への応用が期待される。
【選択図】なし
【解決手段】水からなる前処理剤で抽出したトウキの抽出残渣から、水（前処理剤より高い温度）、低級アルコール及び液状多価アルコールからなる群より選ばれる１種又は２種以上の抽出剤で抽出して得られたトウキの抽出物は、優れたプロトンポンプ機能促進作用、皮膚ｐＨ調整作用、皮膚バリア機能改善作用を有し、安定性にも優れていた。本発明の抽出物は、プロトンポンプ機能を促進する作用を介して、皮膚のｐＨを弱酸性に維持することによる皮膚のバリア機能の改善を目的とする化粧品、医薬品、医薬部外品及び食品への応用が期待される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
水からなる前処理剤で抽出したトウキの抽出残渣から、水、低級アルコール及び液状多価アルコールからなる群より選ばれる１種又は２種以上の抽出剤で抽出し、前記抽出剤が水の場合は前記前処理剤より高い温度であることを特徴とするトウキの抽出物を含有するプロトンポンプ機能促進剤。
【請求項2】
抽出剤がエタノール濃度５０％のエタノール水溶液であることを特徴とする請求項１記載の機能促進剤。
【請求項3】
プロトンポンプがナトリウム／水素イオン交換輸送体である請求項１～２いずれか記載の機能促進剤。
【請求項4】
請求項１記載の剤を含む、皮膚ｐＨ調整剤。
【請求項5】
請求項１記載の剤を含む、皮膚バリア機能改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、皮膚におけるプロトンポンプの機能を促進する皮膚ｐＨ調整剤及び皮膚バリア機能改善剤に関するものである。
【背景技術】
【0002】
表皮の最も重要な機能の一つに、ケラチノサイトの分裂とその後の分化により、常に新しい角質細胞をつくり出すことで、外界の種々の刺激から皮膚を防御するバリア機能が挙げられる。様々な内的及び外的要因によるバリア機能の低下は、経表皮水分蒸散量を増加させ、かさつき、落屑、掻痒感、炎症等を引き起こす。これらは、更にバリア機能を低下させる。
【0003】
バリア機能の一つに皮膚の弱酸性化が挙げられ、これは透過障壁の恒常性や角質層の耐久性に働く（非特許文献１）。また、細胞外脂質二重膜の脂質間結合や（非特許文献２）、セラミド産生酵素であるβ－グルコセレブロシダーゼ（β－ｇｌｕｃｏｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄａｓｅ）、酸性スフィンゴミエリナーゼ（ａｃｉｄｉｃ ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ）の活性にも関与する（非特許文献３）。
【0004】
一方、皮膚のｐＨ上昇は、バリア機能回復の遅延や角質層セリンプロテアーゼの活性化を引き起こす（非特許文献４及び５）。中性からアルカリ性に至適ｐＨを有するセリンプロテアーゼは、角質細胞の剥離・脱落に関わるタンパク質分解酵素であり、コルネオデスモソームを分解して皮膚の剥離を誘発する。
【0005】
皮膚のｐＨ低下、即ち、弱酸性化には、汗や皮脂に含まれる成分の影響が考えられていたが、近年、ケラチノサイトに存在するプロトンポンプが重要な役割を果たしており、プロトンポンプの一種であるナトリウム／水素イオン交換輸送体（Ｎａ＋／Ｈ＋ ｅｘｃｈａｎｇｅｒ：ＮＨＥ）の機能低下が皮膚のｐＨ上昇につながることが明らかにされてきた（非特許文献６及び７）。
【0006】
皮膚のバリア機能を改善する手段としては、保湿性の高い物質、例えば、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等を含有した組成物を塗布することが主流であったが、これらは一時的に角質層表面に水分を補うものであることから、十分な効果を有するものではなかった。また、皮膚を弱酸性に保つために酸性化粧水が開発されているが、これらの効果は一時的であり、効果の持続性に問題があった。
【0007】
これまでに、皮膚ｐＨ調整剤として鎮痒外用剤（特許文献１）、皮膚バリア機能改善剤として皮膚バリア機能増強剤（特許文献２）等が知られているが、より安全で、効果の高い製剤が求められている。
【0008】
トウキ（学名：Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｃｕｔｉｌｏｂａ）は、セリ科シシウド属に属する多年草である。これまでトウキの根部の抽出物が、浄血、鎮静、強壮効果があり、主に婦人薬として用いられていることが知られている（非特許文献８）。近年、トウキの研究が進められ、トウキの皮膚バリア機能増強剤についてはすでに公知であるが（特許文献２）、より効果の高いトウキの製造が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0009】
【特許文献1】平２－１６４８２３
【特許文献2】特開２０１５－１０５２６９
【非特許文献】
【0010】
【非特許文献1】Ｓｃｈｍｉｄ－Ｗｅｎｄｔｎｅｒ ＭＨ ｅｔ ａｌ，Ｓｋｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９，２９６－３０２（２００６）
【非特許文献2】Ｇｉｂｂｓ Ｓ ｅｔ ａｌ，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２８９，５８５－５９５（１９９７）
【非特許文献3】Ｈａｃｈｅｍ ＪＰ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１３０，５００－５１０（２０１０）
【非特許文献4】Ｍａｕｒｏ Ｔ ｅｔ ａｌ，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２９０，２１５－２２２（１９９８）
【非特許文献5】Ｈａｃｈｅｍ ＪＰ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１２５，５１０－５２０（２００５）
【非特許文献6】Ｂｅｈｎｅ ＭＪ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，４７３９９－４７４０６（２００２）
【非特許文献7】Ｃｈｏｉ ＥＨ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１２７，２８４７－２８５６（２００７）
【非特許文献8】薬用植物大辞典、廣川書店、２３６（１９８３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0011】
本発明が解決する課題は、皮膚のｐＨを調整し、皮膚のバリア機能を改善する植物由来成分を見出し、これを有効成分とする、作用点が明確であり、且つ、優れた皮膚ｐＨ調整剤及び皮膚バリア機能改善剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明者らは、上記課題の解決に向け鋭意検討を行った結果、水からなる前処理剤で抽出したトウキの抽出残渣から、水（前処理剤より高い温度）、低級アルコール及び液状多価アルコールからなる群より選ばれる１種又は２種以上の抽出剤で抽出して得られたトウキの抽出物に、優れたプロトンポンプ機能促進作用を有することを見出した。更に、本発明者らは、その抽出物を含有する組成物に、優れた皮膚ｐＨ調整効果及び皮膚バリア機能改善効果を見出し、本発明を完成するに至った。
【0013】
即ち、本発明は、水からなる前処理剤で抽出したトウキの抽出残渣から、水（前処理剤より高い温度）、低級アルコール及び液状多価アルコールからなる群より選ばれる１種又は２種以上の抽出剤で抽出して得られたトウキの抽出物を含有することを特徴とするプロトンポンプ機能促進剤、皮膚ｐＨ調整剤、皮膚バリア機能改善剤に関する。
【0014】
本発明は、以下の発明を包含する。
（１）水からなる前処理剤で抽出したトウキの抽出残渣から、水、低級アルコール及び液状多価アルコールからなる群より選ばれる１種又は２種以上の抽出剤で抽出し、前記抽出剤が水の場合は前記前処理剤より高い温度であることを特徴とするトウキの抽出物を含有するプロトンポンプ機能促進剤。
（２）抽出剤がエタノール濃度５０％のエタノール水溶液であることを特徴とする（１）記載の機能促進剤。
（３）プロトンポンプがナトリウム／水素イオン交換輸送体である（１）～（２）いずれか記載の機能促進剤。
（４）（１）記載の剤を含む、皮膚ｐＨ調整剤。
（５）（１）記載の剤を含む、皮膚バリア機能改善剤。
（１）水からなる前処理剤で抽出したトウキの抽出残渣から、水、低級アルコール及び液状多価アルコールからなる群より選ばれる１種又は２種以上の抽出剤で抽出し、前記抽出剤が水の場合は前記前処理剤より高い温度であることを特徴とするトウキの抽出物を含有するプロトンポンプ機能促進剤。
（２）抽出剤がエタノール濃度５０％のエタノール水溶液であることを特徴とする（１）記載の機能促進剤。
（３）プロトンポンプがナトリウム／水素イオン交換輸送体である（１）～（２）いずれか記載の機能促進剤。
（４）（１）記載の剤を含む、皮膚ｐＨ調整剤。
（５）（１）記載の剤を含む、皮膚バリア機能改善剤。
【発明の効果】
【0015】
本発明のトウキの抽出物は、プロトンポンプ機能促進効果に優れていた。この抽出物を含有することを特徴とするプロトンポンプ機能促進剤は、皮膚のｐＨを弱酸性に維持することにより、皮膚のバリア機能改善効果に優れていた。
【発明を実施するための形態】
【0016】
本発明におけるプロトンポンプは、哺乳類細胞の膜に存在し、細胞内の水素イオン（Ｈ＋）を細胞外に能動輸送するタンパク質である。
【0017】
本発明におけるプロトンポンプ機能促進は、ケラチノサイトにおけるプロトンポンプ遺伝子の発現及びそのタンパク質合成の促進をいうが、それに続く細胞内から細胞外への水素イオン（Ｈ＋）輸送の促進をも包含する。
【0018】
本発明におけるナトリウム／水素イオン交換輸送体は、細胞内の水素イオン（Ｈ＋）と細胞外のナトリウムイオン（Ｎａ＋）を１：１で交換輸送する交換輸送体タンパク質であり、細胞内のイオン濃度や浸透圧の調整に重要な役割を果たしている。
【0019】
本発明における皮膚ｐＨ調整は、皮膚表面のｐＨを４．０～６．５、好ましくは４．５～６．０の弱酸性に維持することをいう。
【0020】
本発明における皮膚バリア機能は、ケラチノサイトの分裂とその後の分化により常に新しい角質細胞をつくり出すことで、角質層の内側の水分蒸散を防いだり、外界の種々の刺激から皮膚を守ったりすることをいう。
【0021】
ケラチノサイトにおいて、プロトンポンプの一種であるＮＨＥが正常に機能すると、細胞内にナトリウムイオン（Ｎａ＋）が取り込まれると共に細胞外に水素イオン（Ｈ＋）が輸送される。この細胞外に輸送された水素イオン（Ｈ＋）が皮膚ｐＨの弱酸性化に寄与する（非特許文献６及び７）。従って、本発明のトウキの抽出物は、プロトンポンプ機能を促進する作用を介して、皮膚のｐＨを弱酸性に維持することにより、皮膚のバリア機能改善に有用である。
【0022】
本発明に用いるトウキ（別名：ニホントウキ、ヤマトトウキ、オオブカトウキ、イワテトウキ、ミヤマトウキ、イブキトウキ）（学名：Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｃｕｔｉｌｏｂａ）やホッカイトウキ（学名：Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｃｕｔｉｌｏｂａ Ｋｉｔａｇａｗａ ｖａｒ．ｓｕｇｉｙａｍａｅ Ｈｉｋｉｎｏ）はセリ科シシウド属に属する日本原産の多年草である。また、カラトウキ（学名：Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）は主に中国で栽培されている。本発明に用いるトウキは、好ましくはトウキ又はホッカイトウキが良く、最も好ましくはトウキが良い。
【0023】
本発明に用いるトウキは、花、果実、種子、葉、茎、根等の植物体の一部又は植物体全体（全草）、或いは、それらの混合物を用いることができるが、特に根が好ましい。また、植物体をそのまま使用しても良く、乾燥、粉砕、細切等の処理を行っても良い。尚、Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｃｕｔｉｌｏｂａ又はＡｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓを基原植物として市販された生薬「当帰（トウキ）」又は「唐当帰（カラトウキ）」を用いることもできる。
【0024】
［前処理剤での抽出］
前処理剤としては、水を用いることが好ましい。また、上記前処理剤に酸やアルカリを添加して、ｐＨ調整した前処理剤を使用することもできる。前処理剤の使用量については、特に限定はなく、例えば、トウキ（乾燥重量）に対し、５倍以上であれば良い。好ましくは２０倍以上が良く、特に好ましくは６０倍以上が良い。前処理剤での抽出温度や抽出時間は抽出時の圧力等により適宜選択できるが、抽出温度は好ましくは４０℃以下である液体の水が良く、より好ましくは２℃以上２０℃以下が良く、最も好ましくは５℃以上１０℃以下が良い。前処理剤での抽出に用いるトウキは根のままでも良く、粉砕、細切等の処理を行っても良い。粉砕や細切を行う場合には１～２０ｍｍが良く、２～１５ｍｍがより好ましく、３～１０ｍｍが最も好ましい。
前処理剤としては、水を用いることが好ましい。また、上記前処理剤に酸やアルカリを添加して、ｐＨ調整した前処理剤を使用することもできる。前処理剤の使用量については、特に限定はなく、例えば、トウキ（乾燥重量）に対し、５倍以上であれば良い。好ましくは２０倍以上が良く、特に好ましくは６０倍以上が良い。前処理剤での抽出温度や抽出時間は抽出時の圧力等により適宜選択できるが、抽出温度は好ましくは４０℃以下である液体の水が良く、より好ましくは２℃以上２０℃以下が良く、最も好ましくは５℃以上１０℃以下が良い。前処理剤での抽出に用いるトウキは根のままでも良く、粉砕、細切等の処理を行っても良い。粉砕や細切を行う場合には１～２０ｍｍが良く、２～１５ｍｍがより好ましく、３～１０ｍｍが最も好ましい。
【0025】
［抽出剤での抽出］
抽出剤としては、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール等）及び液状多価アルコール類（１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）からなる群より選ばれる１種又は２種以上を用いる。好ましくは水又は含水エタノールが良く、エタノール濃度５０％のエタノール水溶液がより好ましい。また、上記抽出剤に酸やアルカリを添加して、ｐＨ調整した抽出剤を使用することもできる。抽出剤の使用量については、特に限定はなく、例えば、トウキ（乾燥重量）に対し、５倍以上、好ましくは１０倍以上であれば良いが、抽出後に濃縮を行ったり、単離したりする場合の操作の便宜上１００倍以下であることが好ましい。また、抽出温度や抽出時間は、用いる抽出剤の種類や抽出時の圧力等により適宜選択できる。但し、水を用いる場合は、前処理剤より高い温度であることが必要である。中でも、前処理剤より６０℃以上高いことが好ましく、７５℃以上高いことがより好ましく、９０℃以上高いことが最も好ましい。
抽出剤としては、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール等）及び液状多価アルコール類（１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）からなる群より選ばれる１種又は２種以上を用いる。好ましくは水又は含水エタノールが良く、エタノール濃度５０％のエタノール水溶液がより好ましい。また、上記抽出剤に酸やアルカリを添加して、ｐＨ調整した抽出剤を使用することもできる。抽出剤の使用量については、特に限定はなく、例えば、トウキ（乾燥重量）に対し、５倍以上、好ましくは１０倍以上であれば良いが、抽出後に濃縮を行ったり、単離したりする場合の操作の便宜上１００倍以下であることが好ましい。また、抽出温度や抽出時間は、用いる抽出剤の種類や抽出時の圧力等により適宜選択できる。但し、水を用いる場合は、前処理剤より高い温度であることが必要である。中でも、前処理剤より６０℃以上高いことが好ましく、７５℃以上高いことがより好ましく、９０℃以上高いことが最も好ましい。
【0026】
尚、前処理剤での抽出残渣は、乾燥してから抽出剤で抽出しても良いし、乾燥せずにそのまま抽出剤で抽出しても良い。抽出剤による抽出方法は特に限定されず、例えば、撹拌抽出又はカラム抽出する方法等により行うことができる。本発明に用いるトウキは、天然由来の植物であり、トウキから抽出される成分は、多様な構造の化合物が多数同時に存在する混合物である。従って、含有する成分の構造又は特性を全て明らかにすることは困難であり、抽出物として扱うことが好ましい。
【0027】
上記抽出剤による抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良いが、必要に応じて、本発明の効果を奏する範囲で、濃縮（減圧濃縮、膜濃縮等による濃縮）、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭、エタノール沈殿等の処理を行ってから用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【0028】
また、上記抽出剤による抽出物は、抽出物の効果を損なわない範囲で、化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分が含有されていても良い。
【0029】
本発明は、化粧品、医薬部外品、医薬品、食品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、錠菓、チョコレート、ガム、飴、飲料、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤、坐剤、注射用溶液等が挙げられる。
【0030】
外用の場合、本発明に用いる上記抽出物の含有量は、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１～１０重量％がより好ましい。更に、０．０１～５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を超えると、効果の増強は認められにくく不経済である。
【0031】
内用の場合、摂取量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なる。通常、成人１人あたりの１日の摂取量としては、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ～５ｇがより好ましい。更に、２０ｍｇ～２ｇが最も好ましい。
【0032】
次に、本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。製造例と処方例に示す％とは重量％を示す。
【実施例0033】
［トウキの抽出物の製造例］
本発明のトウキの抽出物を、製造例１～１０の通り、製造した。従来のトウキの抽出物を、比較製造例１～３の通り、製造した。抽出材料にはトウキ（学名：Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｃｕｔｉｌｏｂａ）の根部の粉砕品（大きさ１～１５ｍｍ）を用いた。
本発明のトウキの抽出物を、製造例１～１０の通り、製造した。従来のトウキの抽出物を、比較製造例１～３の通り、製造した。抽出材料にはトウキ（学名：Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｃｕｔｉｌｏｂａ）の根部の粉砕品（大きさ１～１５ｍｍ）を用いた。
【0034】
（製造例１）前処理を施したトウキの熱水抽出物１の調製
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、５℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の水（抽出剤）を加え、９５℃で２時間抽出した。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの熱水抽出物を０．２ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、５℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の水（抽出剤）を加え、９５℃で２時間抽出した。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの熱水抽出物を０．２ｇ得た。
【0035】
（製造例２）前処理を施したトウキの熱水抽出物２の調製
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、２０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の水（抽出剤）を加え、９５℃で２時間抽出した。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの熱水抽出物を０．２ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、２０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の水（抽出剤）を加え、９５℃で２時間抽出した。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの熱水抽出物を０．２ｇ得た。
【0036】
（製造例３）前処理を施したトウキの熱水抽出物３の調製
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、４０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の水（抽出剤）を加え、９５℃で２時間抽出した。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの熱水抽出物を０．１ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、４０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の水（抽出剤）を加え、９５℃で２時間抽出した。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの熱水抽出物を０．１ｇ得た。
【0037】
（比較製造例１）従来のトウキの熱水抽出物の調製
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し１０倍量の水を加え、９５℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの熱水抽出物を２．８ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し１０倍量の水を加え、９５℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの熱水抽出物を２．８ｇ得た。
【0038】
（製造例４）前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物１の調製
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、５℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の５０％エタノール水溶液（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの５０％エタノール抽出物を０．３ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、５℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の５０％エタノール水溶液（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの５０％エタノール抽出物を０．３ｇ得た。
【0039】
（製造例５）前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物２の調製
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、２０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の５０％エタノール水溶液（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの５０％エタノール抽出物を０．２ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、２０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の５０％エタノール水溶液（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの５０％エタノール抽出物を０．２ｇ得た。
【0040】
（製造例６）前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物３の調製
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、４０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の５０％エタノール水溶液（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの５０％エタノール抽出物を０．２ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、４０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量の５０％エタノール水溶液（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの５０％エタノール抽出物を０．２ｇ得た。
【0041】
（比較製造例２）従来のトウキの５０％エタノール抽出物の調製
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し１０倍量の５０％エタノール水溶液に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの５０％エタノール抽出物を３．３ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１０ｇに対し１０倍量の５０％エタノール水溶液に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキの５０％エタノール抽出物を３．３ｇ得た。
【0042】
（製造例７）前処理を施したトウキのエタノール抽出物１の調製
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、５℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量のエタノール（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を０．５ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、５℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量のエタノール（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を０．５ｇ得た。
【0043】
（製造例８）前処理を施したトウキのエタノール抽出物２の調製
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、２０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量のエタノール（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を０．５ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、２０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量のエタノール（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を０．５ｇ得た。
【0044】
（製造例９）前処理を施したトウキのエタノール抽出物３の調製
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、４０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量のエタノール（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を０．５ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、４０℃で２４時間抽出した（２０時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量のエタノール（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を０．５ｇ得た。
【0045】
（製造例１０）前処理を施したトウキのエタノール抽出物４の調製
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、９５℃で３時間抽出した（３時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量のエタノール（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を０．４ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し６０倍量の水（前処理剤）を加え、９５℃で３時間抽出した（３時間以内で抽出液の固形分濃度上昇が停止し、これ以上抽出されなくなった）。得られた抽出液を濾過した後、その残渣を乾燥し、得られた乾燥残渣に対し１０倍量のエタノール（抽出剤）に２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。抽出剤から得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を０．４ｇ得た。
【0046】
（比較製造例３）従来のトウキのエタノール抽出物の調製
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し１０倍量のエタノールに２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を１．７ｇ得た。
トウキの根部の乾燥物１００ｇに対し１０倍量のエタノールに２０℃で７日間浸漬し、抽出を行った。得られた抽出液を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトウキのエタノール抽出物を１．７ｇ得た。
【実施例0047】
（処方例１）化粧水
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物１（製造例４） ０．１
２．１，３－ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～６及び１１と、成分１及び７～１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物１（製造例４） ０．１
２．１，３－ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～６及び１１と、成分１及び７～１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【0048】
（処方例２）クリーム
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの熱水抽出物２（製造例２） １．０
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１２．１，３－ブチレングリコール ８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１～１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの熱水抽出物２（製造例２） １．０
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１２．１，３－ブチレングリコール ８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１～１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【0049】
（処方例３）乳液
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物１（製造例４） ０．０１
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１０～１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物１（製造例４） ０．０１
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１０～１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【0050】
（処方例４）ゲル剤
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの熱水抽出物３（製造例３） １．０
２．エタノール ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
５．香料 適量
６．１，３－ブチレングリコール ５．０
７．グリセリン ５．０
８．キサンタンガム ０．１
９．カルボキシビニルポリマー ０．２
１０．水酸化カリウム ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～５と、成分１及び６～１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの熱水抽出物３（製造例３） １．０
２．エタノール ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
５．香料 適量
６．１，３－ブチレングリコール ５．０
７．グリセリン ５．０
８．キサンタンガム ０．１
９．カルボキシビニルポリマー ０．２
１０．水酸化カリウム ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～５と、成分１及び６～１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【0051】
（処方例５）パック
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物２（製造例５） １．０
２．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物３（製造例６） ４．０
３．ポリビニルアルコール １２．０
４．エタノール ５．０
５．１，３－ブチレングリコール ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．） ０．５
８．クエン酸 ０．１
９．クエン酸ナトリウム ０．３
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～１１を均一に溶解して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物２（製造例５） １．０
２．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物３（製造例６） ４．０
３．ポリビニルアルコール １２．０
４．エタノール ５．０
５．１，３－ブチレングリコール ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．） ０．５
８．クエン酸 ０．１
９．クエン酸ナトリウム ０．３
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～１１を均一に溶解して製品とする。
【0052】
（処方例６）ファンデーション
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの熱水抽出物１（製造例１） １．０
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．） １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１０．ベントナイト ０．５
１１．プロピレングリコール ４．０
１２．トリエタノールアミン １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．二酸化チタン ８．０
１５．タルク ４．０
１６．ベンガラ １．０
１７．黄酸化鉄 ２．０
１８．香料 適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０～１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４～１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの熱水抽出物１（製造例１） １．０
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．） １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１０．ベントナイト ０．５
１１．プロピレングリコール ４．０
１２．トリエタノールアミン １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．二酸化チタン ８．０
１５．タルク ４．０
１６．ベンガラ １．０
１７．黄酸化鉄 ２．０
１８．香料 適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０～１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４～１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【0053】
（処方例７）浴用剤
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキのエタノール抽出物１（製造例７） １．０
２．炭酸水素ナトリウム ５０．０
３．黄色２０２号（１） 適量
４．香料 適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１～５を均一に混合して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキのエタノール抽出物１（製造例７） １．０
２．炭酸水素ナトリウム ５０．０
３．黄色２０２号（１） 適量
４．香料 適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１～５を均一に混合して製品とする。
【0054】
（処方例８）軟膏
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの熱水抽出物２（製造例２） ４．０
２．前処理を施したトウキの熱水抽出物３（製造例３） １．０
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン １０．０
５．流動パラフィン ５．０
６．セタノール ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
８．プロピレングリコール １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３～６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７～９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの熱水抽出物２（製造例２） ４．０
２．前処理を施したトウキの熱水抽出物３（製造例３） １．０
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン １０．０
５．流動パラフィン ５．０
６．セタノール ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
８．プロピレングリコール １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３～６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７～９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【0055】
（処方例９）散剤
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキのエタノール抽出物２（製造例８） １．０
２．乾燥コーンスターチ ３９．０
３．微結晶セルロース ６０．０
［製造方法］成分１～３を混合して製品とする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキのエタノール抽出物２（製造例８） １．０
２．乾燥コーンスターチ ３９．０
３．微結晶セルロース ６０．０
［製造方法］成分１～３を混合して製品とする。
【0056】
（処方例１０）錠剤
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキのエタノール抽出物３（製造例９） ５．０
２．乾燥コーンスターチ ２５．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム ２０．０
４．微結晶セルロース ４０．０
５．ポリビニルピロリドン ７．０
６．タルク ３．０
［製造方法］成分１～４を混合し、続いて、成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成型する。成型した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキのエタノール抽出物３（製造例９） ５．０
２．乾燥コーンスターチ ２５．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム ２０．０
４．微結晶セルロース ４０．０
５．ポリビニルピロリドン ７．０
６．タルク ３．０
［製造方法］成分１～４を混合し、続いて、成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成型する。成型した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【0057】
（処方例１１）錠菓
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキのエタノール抽出物４（製造例１０） ２．０
２．乾燥コーンスターチ ４９．８
３．エリスリトール ４０．０
４．クエン酸 ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル ３．０
６．香料 ０．１
７．精製水 ０．１
［製造方法］成分１～４及び７を混合し、顆粒成型する。成型した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキのエタノール抽出物４（製造例１０） ２．０
２．乾燥コーンスターチ ４９．８
３．エリスリトール ４０．０
４．クエン酸 ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル ３．０
６．香料 ０．１
７．精製水 ０．１
［製造方法］成分１～４及び７を混合し、顆粒成型する。成型した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【0058】
（処方例１２）飲料
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物１（製造例４） ０．０５
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．香料 ０．１
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～３を少量の水に溶解する。続いて、成分４及び５を加えて混合する。
処方 含有量（％）
１．前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物１（製造例４） ０．０５
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．香料 ０．１
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～３を少量の水に溶解する。続いて、成分４及び５を加えて混合する。
【0059】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【実施例0060】
（実験例１）ケラチノサイトにおけるプロトンポンプ機能促進効果
ケラチノサイト由来ＨａＣａＴ細胞を６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり５×１０４個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４日間培養した。次に、Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｏｄｅｃｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ（ＳＤＳ、最終濃度１０μｇ／ｍｌ）及び試料（最終濃度１及び１０μｇ／ｍｌ）を添加したＤＭＥＭ培養液にて２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏ Ｐｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（Ｎａｎｏｄｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法には、Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ＲＮＡ－ｔｏ－ｃＤＮＡ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳＹＢＲ Ｓｅｌｅｃｔ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。即ち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＮＨＥ１ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ－アクチンｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＮＨＥ１発現率は、コントロール（ＳＤＳ及び試料未添加）群のＮＨＥ１ｍＲＮＡの発現量に対するＳＤＳ（ＳＤＳ添加）群又は試料添加（ＳＤＳ及び試料添加）群のＮＨＥ１ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
ケラチノサイト由来ＨａＣａＴ細胞を６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり５×１０４個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４日間培養した。次に、Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｏｄｅｃｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ（ＳＤＳ、最終濃度１０μｇ／ｍｌ）及び試料（最終濃度１及び１０μｇ／ｍｌ）を添加したＤＭＥＭ培養液にて２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏ Ｐｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（Ｎａｎｏｄｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法には、Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ＲＮＡ－ｔｏ－ｃＤＮＡ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳＹＢＲ Ｓｅｌｅｃｔ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。即ち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＮＨＥ１ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ－アクチンｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＮＨＥ１発現率は、コントロール（ＳＤＳ及び試料未添加）群のＮＨＥ１ｍＲＮＡの発現量に対するＳＤＳ（ＳＤＳ添加）群又は試料添加（ＳＤＳ及び試料添加）群のＮＨＥ１ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【0061】
ＮＨＥ１用のプライマーセット
ＧＣＣＣＴＧＴＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＴＣ（配列番号１）
ＣＡＣＡＴＧＧＡＡＡＣＣＴＡＴＣＴＴＣＡＴＧＡＧ（配列番号２）
β－アクチン用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）
ＧＣＣＣＴＧＴＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＴＣ（配列番号１）
ＣＡＣＡＴＧＧＡＡＡＣＣＴＡＴＣＴＴＣＡＴＧＡＧ（配列番号２）
β－アクチン用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）
【0062】
これらの実験結果を表１に示した。その結果、ＳＤＳ処理によりＮＨＥ１ｍＲＮＡ発現量が減少したが、前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物（製造例４）はそれを回復させた。また、比較品の従来のトウキの５０％エタノール抽出物（比較製造例２）よりも、前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物（製造例４）の方が、顕著に高い効果が認められた。尚、他の製造方法で得られた、前処理を施したトウキの５０％エタノール抽出物（製造例５及び６）にも同等の効果が認められた。更に、異なる抽出方法である、前処理を施したトウキの熱水抽出物（製造例１～３）及び比較品の従来のトウキの熱水抽出物（比較製造例１）、前処理を施したトウキのエタノール抽出物（製造例７～１０）及び比較品の従来のトウキのエタノール抽出物（比較製造例３）についても同様の実験を行った結果、比較品の従来のトウキの抽出物よりも、前処理を施したトウキの抽出物の方が、顕著に高い効果が認められた。従って、従来のトウキの抽出物と比較して、前処理を施したトウキの抽出物はプロトンポンプ機能を促進する作用に優れており、皮膚のｐＨを弱酸性に維持することにより、皮膚のバリア機能改善に有用であることが示唆された。
【0063】
【表1】
