特開 2024-41747 新規な免疫活性インターロイキン２アナログ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024041747

(43)【公開日】2024-03-27

(54)【発明の名称】新規な免疫活性インターロイキン２アナログ

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/26 20060101AFI20240319BHJP

   C07K 14/55 20060101ALI20240319BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240319BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240319BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240319BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240319BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240319BHJP

【ＦＩ】

C12N15/26

C07K14/55 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

【審査請求】未請求

【請求項の数】21

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023202447

(22)【出願日】2023-11-30

(62)【分割の表示】P 2022559531の分割

【原出願日】2021-03-31

(31)【優先権主張番号】10-2020-0039476

(32)【優先日】2020-03-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】515022445

【氏名又は名称】ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100123766

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 七重

(72)【発明者】

【氏名】オ ウ リム

(72)【発明者】

【氏名】キム サン ユン

(72)【発明者】

【氏名】ホ ヨン ホ

(72)【発明者】

【氏名】キム ジン ヨン

(72)【発明者】

【氏名】パク チョ ロン

(72)【発明者】

【氏名】パク ジュン ソプ

(72)【発明者】

【氏名】リュ ヒュン ス

(57)【要約】      （修正有）

【課題】毒性及び副作用を減少させると共に服用量を減少させることのできるインターロイキン２アナログを提供する。
【解決手段】インターロイキン２α受容体結合力が変化し、インターロイキン２β受容体結合力が増大したインターロイキン２アナログを提供する。また、前記インターロイキン２アナログをコードする、分離された核酸、前記核酸を含む組換え発現ベクター、及び前記ベクターを含む形質転換体を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アルデスロイキン（aldesleukin）に比べてインターロイキン２β受容体結合力が増大したインターロイキン２アナログ（analog）であって、前記インターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目、１２番目、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３２番目、３５番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、４８番目、４９番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、７６番目、８０番目、８１番目、８２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目、９５番目、９６番目、１２５番目、１２６番目及び１３３番目の位置に相当するアミノ酸の少なくとも１つが変異した配列を含む、インターロイキン２アナログ。

【請求項2】

前記インターロイキン２アナログは、インターロイキン２α受容体に対する結合力がアルデスロイキンとは異なることを特徴とする、請求項１に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項3】

前記１３３番目の位置に相当するアミノ酸に少なくとも１つのアミノ酸が付加されたものである、請求項１に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項4】

前記インターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたものである、請求項１に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項5】

前記インターロイキン２アナログは、１個～１０個のアミノ酸置換をさらに含む、請求項４に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項6】

前記インターロイキン２アナログは、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目及び９６番目の少なくとも１つのアミノ酸が他のアミノ酸にさらに置換されたものである、請求項５に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項7】

前記インターロイキン２アナログは、１８番目、１９番目、２２番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、６１番目、６８番目、７４番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、８８番目、９１番目、９２番目、９４番目及び９６番目の少なくとも１つのアミノ酸が他のアミノ酸にさらに置換されたものである、請求項６に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項8】

前記インターロイキン２アナログは、次のアナログのいずれかである、請求項１に記載のインターロイキン２アナログ。
（ａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４３番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４９番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び７６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び８７番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び８０番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１９番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１２番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び６１番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８９番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び９１番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び９４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び１２６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６１番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、２０番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８８番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４５番目、８０番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６９番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６９番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、１９番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４３番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ

【請求項9】

前記アミノ酸置換は、次のアミノ酸置換からなる群から選択されるいずれかである、請求項８に記載のインターロイキン２アナログ。
（ａ）１２番目のアミノ酸のバリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｂ）１８番目のアミノ酸のアルギニンへの置換
（ｃ）１９番目のアミノ酸のチロシン、バリン、フェニルアラニン、アルギニンへの置換
（ｄ）２０番目のアミノ酸のバリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｅ）２２番目のアミノ酸のグルタミン酸への置換
（ｆ）３２番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｇ）３５番目のアミノ酸のシステイン又はグルタミン酸への置換
（ｈ）３８番目のアミノ酸のアラニン又はアスパラギン酸への置換
（ｉ）４２番目のアミノ酸のリシン、アラニン又はトリプトファンへの置換
（ｊ）４３番目のアミノ酸のシステイン、グルタミン酸又はグルタミンへの置換
（ｋ）４５番目のアミノ酸のアラニンへの置換
（ｌ）４８番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｍ）４９番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｎ）６１番目のアミノ酸のグルタミン、アルギニン又はアスパラギン酸への置換
（ｏ）６８番目のアミノ酸のアスパラギン酸又はグルタミンへの置換
（ｐ）６９番目のアミノ酸のグリシンへの置換
（ｑ）７４番目のアミノ酸のヒスチジン又はアラニンへの置換
（ｒ）７６番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｓ）８０番目のアミノ酸のフェニルアラニン、チロシン、バリン、アスパラギン酸又はトリプトファンへの置換
（ｔ）８１番目のアミノ酸のアスパラギン酸、グルタミン酸又はアスパラギンへの置換
（ｕ）８２番目のアミノ酸のグリシン又はバリンへの置換
（ｖ）８４番目のアミノ酸のグルタミン酸、バリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｗ）８５番目のアミノ酸のバリン、アラニン、グリシン、トリプトファン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、グルタミン酸又はフェニルアラニンへの置換
（ｘ）８６番目のアミノ酸のバリン、アラニン、グリシン又はロイシンへの置換
（ｙ）８７番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｚ）８８番目のアミノ酸のグルタミン、バリン又はフェニルアラニンへの置換
（ａａ）８９番目のアミノ酸のフェニルアラニンへの置換
（ａｂ）９１番目のアミノ酸のトレオニン、フェニルアラニン又はグルタミン酸への置換
（ａｃ）９２番目のアミノ酸のフェニルアラニン、ロイシン、チロシン又はトリプトファンへの置換
（ａｄ）９５番目のアミノ酸のアスパラギン酸への置換
（ａｅ）９６番目のアミノ酸のフェニルアラニン、バリン又はイソロイシンへの置換
（ａｆ）１２６番目のアミノ酸のトレオニンへの置換

【請求項10】

請求項１～９のいずれか一項に記載のインターロイキン２アナログをコードする、分離された核酸。

【請求項11】

請求項１０に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。

【請求項12】

請求項１１に記載の組換え発現ベクターを含む、ヒトを除く形質転換体。

【請求項13】

配列番号３～１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含む、インターロイキン２アナログ。

【請求項14】

下記一般式１で表されるアミノ酸配列を含む、インターロイキン２アナログ。
［一般式１］
Ｘ１－Ｐ－Ｔ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｔ－Ｋ－Ｋ－Ｔ－Ｑ－Ｌ－Ｑ－Ｌ－Ｅ－Ｈ－Ｌ－Ｘ１８－Ｘ１９－Ｄ－Ｌ－Ｘ２２－Ｍ－Ｉ－Ｌ－Ｎ－Ｇ－Ｉ－Ｎ－Ｎ－Ｙ－Ｋ－Ｎ－Ｐ－Ｋ－Ｌ－Ｔ－Ｘ３８－Ｍ－Ｌ－Ｔ－Ｘ４２－Ｘ４３－Ｆ－Ｘ４５－Ｍ－Ｐ－Ｋ－Ｋ－Ａ－Ｔ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｈ－Ｌ－Ｑ－Ｃ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６１－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｐ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６８－Ｖ－Ｌ－Ｎ－Ｌ－Ａ－Ｘ７４－Ｓ－Ｋ－Ｎ－Ｆ－Ｈ－Ｘ８０－Ｘ８１－Ｐ－Ｒ－Ｘ８４－Ｘ８５－Ｘ８６－Ｓ－Ｎ－Ｉ－Ｎ－Ｘ９１－Ｘ９２－Ｖ－Ｘ９４－Ｅ－Ｘ９６－Ｋ－Ｇ－Ｓ－Ｅ－Ｔ－Ｔ－Ｆ－Ｍ－Ｃ－Ｅ－Ｙ－Ａ－Ｄ－Ｅ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｉ－Ｖ－Ｅ－Ｆ－Ｌ－Ｎ－Ｒ－Ｗ－Ｉ－Ｔ－Ｆ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｉ－Ｉ－Ｓ－Ｔ－Ｌ－Ｔ（一般式１，配列番号２１２）
前記一般式１において、
Ｘ１は欠失しており、
Ｘ１８はロイシン（Ｌ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ１９はロイシン（Ｌ）又はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ２２はグルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ３８はアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ４２はアラニン（Ａ）、フェニルアラニン（Ｆ）、リシン（Ｋ）又はトリプトファン（Ｗ）であり、
Ｘ４３はグルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ４５はアラニン（Ａ）又はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ６８はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ７４はヒスチジン（Ｈ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ８０はフェニルアラニン（Ｆ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）又はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ８１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ８４はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ８５はアラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）又はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ８６はアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ９１はトレオニン（Ｔ）又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ９２はフェニルアラニン（Ｆ）、イソロイシン（Ｉ）又はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ９４はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）であり、
Ｘ９６はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）である。

【請求項15】

前記インターロイキン２アナログは、配列番号１０、１３、１４、１５、１６、１７、２０、２１、２２、３２、３５、３６、４２、５３、５４、５６、５８、５９、６０、６２、７１、７２、７４、７５、７６、７７、７８、８５、８７、８９、９１、９２、９３、９４、９５、９８、９９、１００、１０１、１０３、１０４、１０５及び１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含む、請求項１４に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項16】

前記一般式１において、
Ｘ４３はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ４５はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ６８はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ７４はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ８０はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）であり、
Ｘ８５はロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）又はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ８６はイソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ９２はフェニルアラニン（Ｆ）又はイソロイシン（Ｉ）である、請求項１４に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項17】

前記インターロイキン２アナログは、配列番号１０、１３、１４、１６、１７、２０、２１、２２、３２、３５、３６、４２、５３、５４、８７、８９、９１、９２、９３、９４、９８、９９、１００、１０１、１０３、１０４及び１０５のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含む、請求項１６に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項18】

前記インターロイキン２アナログは、Ｃ末端に少なくとも１つのアミノ酸をさらに含む、請求項１４に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項19】

下記一般式２で表されるアミノ酸配列を含む、インターロイキン２アナログ。
［一般式２］
Ｘ１－Ｐ－Ｔ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｔ－Ｋ－Ｋ－Ｔ－Ｑ－Ｌ－Ｑ－Ｌ－Ｅ－Ｈ－Ｌ－Ｘ１８－Ｌ－Ｄ－Ｌ－Ｘ２２－Ｍ－Ｉ－Ｌ－Ｎ－Ｇ－Ｉ－Ｎ－Ｎ－Ｙ－Ｋ－Ｎ－Ｐ－Ｋ－Ｌ－Ｔ－Ｘ３８－Ｍ－Ｌ－Ｔ－Ｘ４２－Ｋ－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｐ－Ｋ－Ｋ－Ａ－Ｔ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｈ－Ｌ－Ｑ－Ｃ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６１－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｐ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６８－Ｖ－Ｌ－Ｎ－Ｌ－Ａ－Ｑ－Ｓ－Ｋ－Ｎ－Ｆ－Ｈ－Ｆ－Ｘ８１－Ｐ－Ｒ－Ｄ－Ｘ８５－Ｘ８６－Ｓ－Ｎ－Ｉ－Ｎ－Ｖ－Ｆ－Ｖ－Ｌ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｇ－Ｓ－Ｅ－Ｔ－Ｔ－Ｆ－Ｍ－Ｃ－Ｅ－Ｙ－Ａ－Ｄ－Ｅ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｉ－Ｖ－Ｅ－Ｆ－Ｌ－Ｎ－Ｒ－Ｗ－Ｉ－Ｔ－Ｆ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｉ－Ｉ－Ｓ－Ｔ－Ｌ－Ｔ（一般式２，配列番号２１３）
Ｘ１は欠失しており、
Ｘ１８はロイシン（Ｌ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ２２はグルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ３８はアラニン（Ａ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ４２はフェニルアラニン（Ｆ）又はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ６８はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ８１はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ８５はロイシン（Ｌ）又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ８６はイソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）である。

【請求項20】

前記インターロイキン２アナログは、配列番号２２、４２、５３、８７、１０５及び１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含む、請求項１９に記載のインターロイキン２アナログ。

【請求項21】

前記インターロイキン２アナログは、Ｃ末端に少なくとも１つのアミノ酸をさらに含む、請求項１９に記載のインターロイキン２アナログ。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規なインターロイキン２アナログに関する。

【背景技術】

【0002】

インターロイキン２（Interleukin 2）は、計１３３個のアミノ酸残基から構成される分子量約１５ｋＤａの重要な免疫刺激剤であり、Ｔ細胞、Ｂ細胞をはじめとする免疫系の様々な細胞を活性化する。インターロイキン２の免疫刺激剤としての高い効能は、癌、エイズをはじめとする様々な免疫関連疾患の治療に有用である（特許文献１）。現在、インターロイキン２（Proleukin（登録商標））は、転移性腎細胞癌及び転移性黒色腫の治療用としてＦＤＡから承認された医薬である。しかし、高服用量のインターロイキン２療法には深刻な毒性が関連するので、適用できる患者が制限され、実際に適当な少数の患者に対してのみこの治療療法が行われている。インターロイキン２に関連する毒性には、高熱、吐気、嘔吐、血管漏出（vascular leak）、重い低血圧、肺浮腫及び肝損傷を引き起こす血管漏出症候群（Vascular leak syndrome）が含まれる。

【0003】

インターロイキン２受容体には、３種のサブユニット受容体がある。そのサブユニットは、α鎖（ＩＬ－２Ｒα，ＣＤ２５）、β鎖（ＩＬ－２Ｒβ又はＣＤ１２２）及びγ鎖（ＩＬ－２Ｒγ又はＣＤ１３２）で形成されており、インターロイキン２が受容体サブユニットの様々な組み合わせに結合することにより、様々な機能を発揮することができる。単一のインターロイキン２α受容体は、低親和性インターロイキン２受容体であり、シグナル伝達には関与しない。インターロイキン２β及びγ受容体の複合体は、中程度の親和性でインターロイキン２に結合する。インターロイキン２α、β及びγ受容体の複合体は、高い親和性でインターロイキン２に結合する。インターロイキン２β及びγ受容体の複合体は、多重シグナル伝達経路のキナーゼ活性化による効果的なシグナル変換に必要である。特に、インターロイキン２β及びγ受容体の複合体は、ＣＤ８＋細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞において著しい。また、高い親和性を有するインターロイキン２α、β及びγ受容体の複合体は、通常見られるＣＤ４⁺Ｔ調節細胞（Treg）のみならず、最近では、活性化したＴ細胞においても見られる。インターロイキン２β受容体は、ＣＤ８⁺Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞（NK cell）に分布して体内の免疫反応に関与するので、免疫活性化のためにβ受容体に対する活性向上により治療剤を開発する研究が行われている。

【0004】

一方、インターロイキン２には様々な免疫関連疾患の治療剤としての可能性があるにもかかわらず、毒性及び副作用を減少させると共に服用量を減少させることのできる薬剤が十分に存在しない状態であるので、新規かつ向上した薬剤に関する研究がさらに求められている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】韓国公開特許第１０－２０１７－００７００９１号公報

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453

【非特許文献2】Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277

【非特許文献3】Pearson et al (1988)[Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85]: 2444

【非特許文献4】Devereux, J., et al, Nucleic Acids Research 12: 387 (1984)

【非特許文献5】Atschul, [S.] [F.,] [ET AL, J MOLEC BIOL 215]: 403 (1990)

【非特許文献6】Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop, [ED.,] Academic Press, San Diego,1994

【非特許文献7】[CARILLO ETA/.](1988) SIAM J Applied Math 48: 1073

【非特許文献8】Smith and Waterman, Adv. Appl. Math (1981) 2:482

【非特許文献9】Needleman et al. (1970), J Mol Biol.48: 443

【非特許文献10】Schwartz and Dayhoff, eds., Atlas Of Protein Sequence And Structure, National Biomedical Research Foundation, pp. 353-358 (1979)

【非特許文献11】Gribskov et al(1986) Nucl. Acids Res. 14: 6745

【非特許文献12】J. Sambrook et al.,Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory press, Cold Spring Harbor, New York, 1989

【非特許文献13】F.M. Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York,9.50-9.51, 11.7-11.8

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は、インターロイキン２アナログを提供することを目的とする。

【0008】

また、本発明は、前記インターロイキン２アナログをコードする、分離された核酸、前記核酸を含む組換え発現ベクター、及び前記ベクターを含む形質転換体を提供することを目的とする。

【0009】

さらに、本発明は、前記インターロイキン２アナログを製造する方法を提供することを目的とする。

【0010】

さらに、本発明は、天然インターロイキン２において少なくとも１つのアミノ酸を変異させるステップを含む、インターロイキン２β受容体結合力を増大させる方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明の一態様は、新規なインターロイキン２アナログ（interleukin ２ analog又はIL-2 analog）である。前記インターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２又はインターロイキン２アナログであるアルデスロイキン（aldesleukin）に比べて、インターロイキン２β受容体結合力が増大したインターロイキン２アナログであってもよく、前記インターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において少なくとも１つのアミノ酸が変異した配列を含むものであってもよい。

【0012】

他の具体例として、前記インターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目、１２番目、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３２番目、３５番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、４８番目、４９番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、７６番目、８０番目、８１番目、８２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目、９５番目、９６番目、１２５番目、１２６番目及び１３３番目の位置に相当するアミノ酸の少なくとも１つが変異した配列を含むことを特徴とする。

【0013】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２又はアルデスロイキンに比べて、インターロイキン２α受容体結合力が変化し、インターロイキン２β受容体結合力が増大したことを特徴とする。

【0014】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、前記１３３番目の位置に相当するアミノ酸に少なくとも１つのアミノ酸が付加されたことを特徴とする。

【0015】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換された配列を含むことを特徴とする。

【0016】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、１個～１０個のアミノ酸置換をさらに含むことを特徴とする。

【0017】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目及び９６番目の位置に相当するアミノ酸の少なくとも１つのアミノ酸が他のアミノ酸にさらに置換されたことを特徴とする。

【0018】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１８番目、１９番目、２２番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、６１番目、６８番目、７４番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、８８番目、９１番目、９２番目、９４番目及び９６番目の位置に相当するアミノ酸の少なくとも１つのアミノ酸が他のアミノ酸にさらに置換されたことを特徴とする。

【0019】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、次のアナログのいずれかであることを特徴とする。
（ａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４３番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４９番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び７６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び８７番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び８０番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１９番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１２番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び６１番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８９番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び９１番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び９４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び１２６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６１番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、２０番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８８番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４５番目、８０番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６９番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６９番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、１９番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４３番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ

【0020】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、次のアミノ酸置換からなる群から選択される少なくとも１つを含むことを特徴とする。
（ａ）１２番目のアミノ酸のバリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｂ）１８番目のアミノ酸のアルギニンへの置換
（ｃ）１９番目のアミノ酸のチロシン、バリン、フェニルアラニン、アルギニンへの置換
（ｄ）２０番目のアミノ酸のバリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｅ）２２番目のアミノ酸のグルタミン酸への置換
（ｆ）３２番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｇ）３５番目のアミノ酸のシステイン又はグルタミン酸への置換
（ｈ）３８番目のアミノ酸のアラニン又はアスパラギン酸への置換
（ｉ）４２番目のアミノ酸のリシン、アラニン又はトリプトファンへの置換
（ｊ）４３番目のアミノ酸のシステイン、グルタミン酸又はグルタミンへの置換
（ｋ）４５番目のアミノ酸のアラニンへの置換
（ｌ）４８番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｍ）４９番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｎ）６１番目のアミノ酸のグルタミン、アルギニン又はアスパラギン酸への置換
（ｏ）６８番目のアミノ酸のアスパラギン酸又はグルタミンへの置換
（ｐ）６９番目のアミノ酸のグリシンへの置換
（ｑ）７４番目のアミノ酸のヒスチジン又はアラニンへの置換
（ｒ）７６番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｓ）８０番目のアミノ酸のフェニルアラニン、チロシン、バリン、アスパラギン酸又はトリプトファンへの置換
（ｔ）８１番目のアミノ酸のアスパラギン酸、グルタミン酸又はアスパラギンへの置換
（ｕ）８２番目のアミノ酸のグリシン又はバリンへの置換
（ｖ）８４番目のアミノ酸のグルタミン酸、バリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｗ）８５番目のアミノ酸のバリン、アラニン、グリシン、トリプトファン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、グルタミン酸又はフェニルアラニンへの置換
（ｘ）８６番目のアミノ酸のバリン、アラニン、グリシン又はロイシンへの置換
（ｙ）８７番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｚ）８８番目のアミノ酸のグルタミン、バリン又はフェニルアラニンへの置換
（ａａ）８９番目のアミノ酸のフェニルアラニンへの置換
（ａｂ）９１番目のアミノ酸のトレオニン、フェニルアラニン又はグルタミン酸への置換
（ａｃ）９２番目のアミノ酸のフェニルアラニン、ロイシン、チロシン又はトリプトファンへの置換
（ａｄ）９５番目のアミノ酸のアスパラギン酸への置換
（ａｅ）９６番目のアミノ酸のフェニルアラニン、バリン又はイソロイシンへの置換
（ａｆ）１２６番目のアミノ酸のトレオニンへの置換

【0021】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、配列番号３～１０６からなる群から選択されることを特徴とする。

【0022】

本発明の他の態様は、前記インターロイキン２アナログをコードする、分離された核酸、前記核酸を含む組換え発現ベクター、前記ベクターを含む形質転換体である。

【0023】

本発明のさらに他の態様は、前記インターロイキン２アナログを製造する方法である。

【0024】

本発明のさらに他の態様は、天然インターロイキン２において少なくとも１つのアミノ酸を変異させるステップを含む、インターロイキン２β受容体結合力を増大させる方法であり、前記変異は、天然インターロイキン２において、１番目、１２番目、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３２番目、３５番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、４８番目、４９番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、７６番目、８０番目、８１番目、８２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目、９５番目、９６番目、１２５番目、１２６番目及び１３３番目の位置に相当するアミノ酸からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸が変異したものであってもよい。

【0025】

本発明のさらに他の態様は、配列番号３～１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むインターロイキン２アナログである。

【0026】

本発明のさらに他の態様は、一般式１で表されるアミノ酸配列を含むインターロイキン２アナログである。

【0027】

［一般式１］
Ｘ１－Ｐ－Ｔ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｔ－Ｋ－Ｋ－Ｔ－Ｑ－Ｌ－Ｑ－Ｌ－Ｅ－Ｈ－Ｌ－Ｘ１８－Ｘ１９－Ｄ－Ｌ－Ｘ２２－Ｍ－Ｉ－Ｌ－Ｎ－Ｇ－Ｉ－Ｎ－Ｎ－Ｙ－Ｋ－Ｎ－Ｐ－Ｋ－Ｌ－Ｔ－Ｘ３８－Ｍ－Ｌ－Ｔ－Ｘ４２－Ｘ４３－Ｆ－Ｘ４５－Ｍ－Ｐ－Ｋ－Ｋ－Ａ－Ｔ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｈ－Ｌ－Ｑ－Ｃ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６１－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｐ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６８－Ｖ－Ｌ－Ｎ－Ｌ－Ａ－Ｘ７４－Ｓ－Ｋ－Ｎ－Ｆ－Ｈ－Ｘ８０－Ｘ８１－Ｐ－Ｒ－Ｘ８４－Ｘ８５－Ｘ８６－Ｓ－Ｎ－Ｉ－Ｎ－Ｘ９１－Ｘ９２－Ｖ－Ｘ９４－Ｅ－Ｘ９６－Ｋ－Ｇ－Ｓ－Ｅ－Ｔ－Ｔ－Ｆ－Ｍ－Ｃ－Ｅ－Ｙ－Ａ－Ｄ－Ｅ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｉ－Ｖ－Ｅ－Ｆ－Ｌ－Ｎ－Ｒ－Ｗ－Ｉ－Ｔ－Ｆ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｉ－Ｉ－Ｓ－Ｔ－Ｌ－Ｔ（一般式１，配列番号２１２）

【0028】

一般式１において、Ｘ１は欠失しており、Ｘ１８はロイシン（Ｌ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ１９はロイシン（Ｌ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ２２はグルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ３８はアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ４２はアラニン（Ａ）、フェニルアラニン（Ｆ）、リシン（Ｋ）又はトリプトファン（Ｗ）であり、Ｘ４３はグルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ４５はアラニン（Ａ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ６８はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ７４はヒスチジン（Ｈ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ８０はフェニルアラニン（Ｆ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ８１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ８４はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ８５はアラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ８６はアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）であり、Ｘ９１はトレオニン（Ｔ）又はバリン（Ｖ）であり、Ｘ９２はフェニルアラニン（Ｆ）、イソロイシン（Ｉ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ９４はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）であり、Ｘ９６はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）である。

【0029】

一具体例として、前記インターロイキン２アナログは、配列番号１０、１３、１４、１５、１６、１７、２０、２１、２２、３２、３５、３６、４２、５３、５４、５６、５８、５９、６０、６２、７１、７２、７４、７５、７６、７７、７８、８５、８７、８９、９１、９２、９３、９４、９５、９８、９９、１００、１０１、１０３、１０４、１０５及び１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むことを特徴とする。

【0030】

他の具体例として、一般式１において、Ｘ４３はリシン（Ｋ）であり、Ｘ４５はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ６８はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ７４はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ８０はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）であり、Ｘ８５はロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ８６はイソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）であり、Ｘ９２はフェニルアラニン（Ｆ）又はイソロイシン（Ｉ）であることを特徴とする。

【0031】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、配列番号１０、１３、１４、１６、１７、２０、２１、２２、３２、３５、３６、４２、５３、５４、８７、８９、９１、９２、９３、９４、９８、９９、１００、１０１、１０３、１０４及び１０５のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むことを特徴とする。

【0032】

前述した具体例のいずれかによるインターロイキン２アナログは、Ｃ末端に少なくとも１つのアミノ酸をさらに含むことを特徴とする。

【0033】

本発明のさらに他の態様は、一般式２で表されるアミノ酸配列を含むインターロイキン２アナログである。

【0034】

［一般式２］
Ｘ１－Ｐ－Ｔ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｔ－Ｋ－Ｋ－Ｔ－Ｑ－Ｌ－Ｑ－Ｌ－Ｅ－Ｈ－Ｌ－Ｘ１８－Ｌ－Ｄ－Ｌ－Ｘ２２－Ｍ－Ｉ－Ｌ－Ｎ－Ｇ－Ｉ－Ｎ－Ｎ－Ｙ－Ｋ－Ｎ－Ｐ－Ｋ－Ｌ－Ｔ－Ｘ３８－Ｍ－Ｌ－Ｔ－Ｘ４２－Ｋ－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｐ－Ｋ－Ｋ－Ａ－Ｔ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｈ－Ｌ－Ｑ－Ｃ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６１－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｐ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６８－Ｖ－Ｌ－Ｎ－Ｌ－Ａ－Ｑ－Ｓ－Ｋ－Ｎ－Ｆ－Ｈ－Ｆ－Ｘ８１－Ｐ－Ｒ－Ｄ－Ｘ８５－Ｘ８６－Ｓ－Ｎ－Ｉ－Ｎ－Ｖ－Ｆ－Ｖ－Ｌ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｇ－Ｓ－Ｅ－Ｔ－Ｔ－Ｆ－Ｍ－Ｃ－Ｅ－Ｙ－Ａ－Ｄ－Ｅ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｉ－Ｖ－Ｅ－Ｆ－Ｌ－Ｎ－Ｒ－Ｗ－Ｉ－Ｔ－Ｆ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｉ－Ｉ－Ｓ－Ｔ－Ｌ－Ｔ（一般式２，配列番号２１３）

【0035】

一般式２において、Ｘ１は欠失しており、Ｘ１８はロイシン（Ｌ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ２２はグルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ３８はアラニン（Ａ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ４２はフェニルアラニン（Ｆ）又はリシン（Ｋ）であり、Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ６８はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ８１はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ８５はロイシン（Ｌ）又はバリン（Ｖ）であり、Ｘ８６はイソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）である。

【0036】

一具体例として、前記インターロイキン２アナログは、配列番号２２、４２、５３、８７、１０５及び１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むことを特徴とする。

【0037】

他の具体例として、前記インターロイキン２アナログは、Ｃ末端に少なくとも１つのアミノ酸をさらに含むことを特徴とする。

【発明の効果】

【0038】

本発明によるインターロイキン２アナログは、生体インターロイキン２β受容体結合力が増大したアナログであり、様々な用途に用いられる。

【図面の簡単な説明】

【0039】

【図1】インターロイキン２アナログのインターロイキン２α受容体結合力を確認した結果を示す図である。（Ａ）はインターロイキン２アナログ#８６であり、（Ｂ）はインターロイキン２アナログ#１０４であり、（Ｃ）はインターロイキン２アナログ#１０５である。

【図2】インターロイキン２アナログのインターロイキン２β受容体の結合力を確認した結果を示す図である。（Ａ）はインターロイキン２アナログ#８６であり、（Ｂ）はインターロイキン２アナログ#１０４であり、（Ｃ）はインターロイキン２アナログ#１０５である。

【発明を実施するための形態】

【0040】

以下、本発明を実施するための形態について説明する。なお、本願で開示される各説明及び実施形態はそれぞれ他の説明及び実施形態にも適用される。すなわち、本願で開示される様々な要素のあらゆる組み合わせが本発明に含まれる。また、以下の具体的な記述に本発明が限定されるものではない。

【0041】

本明細書全体を通して、アミノ酸に対する通常の１文字及び３文字コードが用いられる。また、本明細書において略語で言及したアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ命名法に従って記載したものである。
アラニン Ａ
アルギニン Ｒ
アスパラギン Ｎ
アスパラギン酸 Ｄ
システイン Ｃ
グルタミン酸 Ｅ
グルタミン Ｑ
グリシン Ｇ
ヒスチジン Ｈ
イソロイシン Ｉ
ロイシン Ｌ
リシン Ｋ
メチオニン Ｍ
フェニルアラニン Ｆ
プロリン Ｐ
セリン Ｓ
トレオニン Ｔ
トリプトファン Ｗ
チロシン Ｙ
バリン Ｖ

【0042】

本発明の一態様は、インターロイキン２アナログを提供する。本発明のインターロイキン２アナログは、インターロイキン２受容体に対する結合力が変更されたこと、特にインターロイキン２β受容体結合力が増大したことを特徴とする。具体的には、本発明のインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２又は公知のアルデスロイキンに比べて、インターロイキン２β受容体に対する結合力が増大したものであってもよく、より具体的には、インターロイキン２α受容体に対する結合力も変化（増加又は減少）したものであってもよい。

【0043】

本発明における「インターロイキン２（interleukin 2, IL-2）」とは、生体内免疫システムにおいてシグナルを伝達するサイトカインの一種である免疫調節剤を意味する。インターロイキン２は、一般に約１５ｋＤａの重要な免疫刺激剤として知られている。

【0044】

本発明における「インターロイキン２アナログ」とは、天然配列において少なくとも１つのアミノ酸が変異したものを意味し、特に本発明においては、天然のものに比べてインターロイキン２受容体に対する結合力が減少又は増加した、天然インターロイキン２のアミノ酸が変異したインターロイキン２アナログであってもよい。具体的には、本発明のインターロイキン２アナログは、非自然発生（non-naturally occurring）のものであってもよい。

【0045】

前記天然インターロイキン２は、ヒトインターロイキン２であってもよく、その配列は公知のデータベースなどから得られる。具体的には、配列番号１のアミノ酸配列であるが、これに限定されるものではない。

【0046】

本発明における、天然インターロイキン２が配列番号１のアミノ酸配列であるとは、配列番号１と同じ配列だけでなく、配列番号１と相同性８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列も本発明の天然インターロイキン２の範疇に含まれることを意味し、アミノ酸の変異位置は、配列番号１を基準に、相同性８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列をアラインメント（align）したときに、配列番号１のアミノ酸配列に相当する位置が変異したことを意味する。

【0047】

本発明における、天然配列において少なくとも１つのアミノ酸が変異したものとは、天然インターロイキン２において少なくとも１つのアミノ酸に置換（substitution）、付加（addition）、欠失（deletion）、修飾（modification）及びそれらの組み合わせからなる群から選択される改変が行われたものを意味する。

【0048】

具体的には、本発明のインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目、１２番目、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３２番目、３５番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、４８番目、４９番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、７６番目、８０番目、８１番目、８２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目、９５番目、９６番目、１２５番目、１２６番目及び１３３番目の位置に相当するアミノ酸の少なくとも１つが変異した配列を含むものであってもよい。具体的には、本発明のインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換され、さらに１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個又はそれ以上のアミノ酸置換を含むものであってもよい。１２５番目のアミノ酸であるシステインがセリンに置換されるが、これに限定されるものではなく、さらなる置換が起こるアミノ酸は、１２番目、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３２番目、３５番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、４８番目、４９番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、７６番目、８０番目、８１番目、８２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目、９５番目、９６番目、１２６番目及び１３３番目の位置に相当するアミノ酸であるが、これらに限定されるものではない。

【0049】

また、前記変異位置以外に、当該技術分野で公知のペプチドの安定性及び半減期延長のために行う程度のアミノ酸残基の置換、付加、欠失、修飾などを含むインターロイキン２アナログも本発明に含まれる。

【0050】

本発明における「アルデスロイキン（aldesleukin）」又は「インターロイキン２アナログ（aldesleukin）」とは、市販されているインターロイキン２アナログであるａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ（商標名：Proleukin（登録商標））を意味し、具体的には、配列番号２のアミノ酸配列を有するものを意味する。本発明においては、「インターロイキン２アナログ１」と混用される。本発明によるインターロイキンアナログは、前記インターロイキン２アナログ１に比べて、変化したインターロイキン２α受容体結合力及び／又は増大したインターロイキン２β受容体結合力を有するものであってもよい。

【0051】

インターロイキン２α受容体は、インターロイキン２のシグナル伝達システムには関与しないことが知られているが、他のインターロイキン２受容体（β又はγ）とインターロイキン２の結合力を１０倍～１００倍増加させ、ＣＤ４⁺調節Ｔ細胞などに発現する。

【0052】

インターロイキン２β受容体は、ＣＤ８⁺Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞（NK cell）に主に分布しており、免疫反応とマクロファージ作用を活性化することを主な機能とするので、インターロイキン２β受容体の活性化により腫瘍アポトーシス及び身体の免疫反応の活性化が期待される。

【0053】

よって、本発明のインターロイキン２β受容体に対する結合力が増加したインターロイキン２アナログは、腫瘍抑制及び死滅などの治療効果を増大させ、副作用を減少させる効果を奏する。

【0054】

本発明における前記インターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換された配列を含むものであってもよく、１～１０個のアミノ酸変異をさらに含むものであってもよい。例えば、１２５番目のアミノ酸がセリンに置換され、１２番目、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３２番目、３５番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、４８番目、４９番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、７６番目、８０番目、８１番目、８２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目、９５番目、９６番目及び１２６番目の少なくとも１つのアミノ酸が他のアミノ酸にさらに置換され、かつ／又は１３３番目のアミノ酸に少なくとも１つのアミノ酸が付加された配列を含むが、これらに限定されるものではなく、天然インターロイキン２及び／又はアルデスロイキンに比べて、インターロイキン２α受容体結合力が変化し、インターロイキン２β受容体結合力が増加したインターロイキン２アナログであればいかなるものでもよい。

【0055】

一例として、前記インターロイキン２アナログは、前記１３３番目の位置に相当するアミノ酸に少なくとも１つのアミノ酸が付加されたものであるが、これに限定されるものではない。本発明の目的上、前述したように付加されるアミノ酸は、天然インターロイキン２又はアルデスロイキンに比べて、インターロイキン２α受容体結合力が変化し、インターロイキン２β受容体結合力が増大するものであれば、その種類や長さが制限されるものでなく、天然アミノ酸以外にも、非天然アミノ酸、化学的改変を含むアミノ酸が付加されてもよい。

【0056】

他の例として、前記インターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換され、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸のうち１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又はそれ以上のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたものであるが、これらに限定されるものではない。

【0057】

さらに他の例として、前記インターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換され、１８番目、１９番目、２２番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、６１番目、６８番目、７４番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、８８番目、９１番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸のうち１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又はそれ以上のアミノ酸が他のアミノ酸にさらに置換されたものであるが、これらに限定されるものではない。

【0058】

さらに他の例として、前記インターロイキン２アナログは、次のアナログからなる群から選択されるいずれかであってもよい。
（ａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び３８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４３番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び４９番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び７６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目及び８７番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び８０番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１９番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１２番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び６１番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８８番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び８９番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び９１番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び９４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目及び１２６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目及び８４番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６１番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、２０番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８８番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４５番目、８０番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６９番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ａｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、６９番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、１９番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、１８番目、２２番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、４３番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ
（ｂｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸が欠失され、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたインターロイキン２アナログ

【0059】

ここで、前記インターロイキン２アナログが含むアミノ酸置換は、次のアミノ酸置換からなる群から選択される少なくとも１つであってもよい。
（ａ）１２番目のアミノ酸のバリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｂ）１８番目のアミノ酸のアルギニンへの置換
（ｃ）１９番目のアミノ酸のチロシン、バリン、フェニルアラニン、アルギニンへの置換
（ｄ）２０番目のアミノ酸のバリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｅ）２２番目のアミノ酸のグルタミン酸への置換
（ｆ）３２番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｇ）３５番目のアミノ酸のシステイン又はグルタミン酸への置換
（ｈ）３８番目のアミノ酸のアラニン又はアスパラギン酸への置換
（ｉ）４２番目のアミノ酸のリシン、アラニン又はトリプトファンへの置換
（ｊ）４３番目のアミノ酸のシステイン、グルタミン酸又はグルタミンへの置換
（ｋ）４５番目のアミノ酸のアラニンへの置換
（ｌ）４８番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｍ）４９番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｎ）６１番目のアミノ酸のグルタミン、アルギニン又はアスパラギン酸への置換
（ｏ）６８番目のアミノ酸のアスパラギン酸又はグルタミンへの置換
（ｐ）６９番目のアミノ酸のグリシンへの置換
（ｑ）７４番目のアミノ酸のヒスチジン又はアラニンへの置換
（ｒ）７６番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｓ）８０番目のアミノ酸のフェニルアラニン、チロシン、バリン、アスパラギン酸又はトリプトファンへの置換
（ｔ）８１番目のアミノ酸のアスパラギン酸、グルタミン酸又はアスパラギンへの置換
（ｕ）８２番目のアミノ酸のグリシン又はバリンへの置換
（ｖ）８４番目のアミノ酸のグルタミン酸、バリン又はフェニルアラニンへの置換
（ｗ）８５番目のアミノ酸のバリン、アラニン、グリシン、トリプトファン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、グルタミン酸又はフェニルアラニンへの置換
（ｘ）８６番目のアミノ酸のバリン、アラニン、グリシン又はロイシンへの置換
（ｙ）８７番目のアミノ酸のシステインへの置換
（ｚ）８８番目のアミノ酸のグルタミン、バリン又はフェニルアラニンへの置換
（ａａ）８９番目のアミノ酸のフェニルアラニンへの置換
（ａｂ）９１番目のアミノ酸のトレオニン、フェニルアラニン又はグルタミン酸への置換
（ａｃ）９２番目のアミノ酸のフェニルアラニン、ロイシン、チロシン又はトリプトファンへの置換
（ａｄ）９５番目のアミノ酸のアスパラギン酸への置換
（ａｅ）９６番目のアミノ酸のフェニルアラニン、バリン又はイソロイシンへの置換
（ａｆ）１２６番目のアミノ酸のトレオニンへの置換

【0060】

本明細書における「相当する（corresponding to）」とは、ペプチドにおいて列挙される位置のアミノ酸残基であるか、又はペプチドにおいて列挙される残基に類似、同一もしくは相当するアミノ酸残基を意味する。相当する位置のアミノ酸を確認することは、特定配列を参照する配列の特定アミノ酸を決定することになる。

【0061】

例えば、任意のアミノ酸配列を配列番号１とアラインメント（align）すると、それに基づいて、前記アミノ酸配列の各アミノ酸残基は、配列番号１のアミノ酸残基に相当するアミノ酸残基の数、位置を参照してナンバリングすることができる。

【0062】

このようなアラインメントには、例えばＮｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（非特許文献１）、ＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラム（EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, 非特許文献２）などを用いることができるが、これらに限定されるものではなく、当該技術分野で公知の配列アラインメントプログラム、ペアワイズ配列（pairwise sequence）比較アルゴリズムなどを適宜用いることができる。

【0063】

本発明において、ペプチド中のアミノ酸の特定位置で表現されていても、参照配列において相当する位置を意味することもある。

【0064】

さらに他の例として、前記インターロイキン２アナログは、配列番号３～１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むものであるか、前記アミノ酸配列から必須に構成されるものであるか、前記アミノ酸配列からなるものであるが、これらに限定されるものではない。

【0065】

また、本明細書において「特定配列番号からなるインターロイキン２アナログ」と記載されていても、当該配列番号のアミノ酸配列からなるインターロイキン２アナログと同一又は相当する活性を有するものであれば、当該配列番号のアミノ酸配列の前後の無意味な配列付加、自然発生する突然変異、又はその非表現突然変異（silent mutation）を除外するものではなく、このような配列付加又は突然変異を有するものも本願に含まれることは言うまでもない。

【0066】

本発明のインターロイキン２アナログは、配列番号３～１０６のアミノ酸配列と４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の相同性又は同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよいが、これらに限定されるものではない。

【0067】

本発明における「相同性（homology）」又は「同一性（identity）」とは、２つの与えられたアミノ酸配列又は塩基配列が互いに関連する程度を意味し、百分率で表すことができる。

【0068】

保存されている（conserved）ポリヌクレオチド又はポリペプチドの配列相同性又は同一性は標準的な配列アルゴリズムにより決定され、用いられるプログラムにより確立されたデフォルトギャップペナルティが共に用いられてもよい。実質的には、相同性を有するか（homologous）又は同じ（identical）配列は、中程度又は高いストリンジェントな条件（stringent conditions）下において、一般に配列全体又は一部分とハイブリダイズすることができる。ハイブリダイゼーションには、ポリヌクレオチドにおいて一般のコドン又はコドン縮退を考慮したコドンを有するポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションも含まれることは言うまでもない。

【0069】

相同性及び同一性は、しばしば互換的に用いられる。

【0070】

任意の２つの塩基配列又はペプチド配列が相同性、類似性又は同一性を有するか否かは、例えば非特許文献３のようなデフォルトパラメーターと「ＦＡＳＴＡ」プログラムなどの公知のコンピュータアルゴリズムを用いて決定することができる。あるいは、ＥＭＢＯＳＳパッケージのニードルマンプログラム（EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, 非特許文献２）（バージョン５．０．０又はそれ以降のバージョン）で行われるように、ニードルマン＝ウンシュ（Needleman-Wunsch）アルゴリズム（非特許文献１）を用いて決定することができる（ＧＣＧプログラムパッケージ（非特許文献４）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（非特許文献５、６及び７）を含む）。例えば、国立生物工学情報センターのＢＬＡＳＴ又はＣｌｕｓｔａｌ Ｗを用いて相同性、類似性又は同一性を決定することができる。

【0071】

塩基配列又はペプチドの相同性、類似性又は同一性は、例えば非特許文献８に開示されているように、非特許文献９などのＧＡＰコンピュータプログラムを用いて、配列情報を比較することにより決定することができる。要約すると、ＧＡＰプログラムは、２つの配列のうち短いものにおける記号の総数で、類似する配列記号（すなわち、ヌクレオチド又はアミノ酸）の数を割った値と定義している。ＧＡＰプログラムのためのデフォルトパラメーターは、（１）一進法比較マトリックス（同一性は１、非同一性は０の値をとる）及び非特許文献１０に開示されているように、非特許文献１１の加重比較マトリックス（又はＥＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩ ＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックス）と、（２）各ギャップに３．０のペナルティ、及び各ギャップの各記号に追加の０．１０ペナルティ（又はギャップオープンペナルティ１０、ギャップ延長ペナルティ０．５）と、（３）末端ギャップに無ペナルティとを含むことができる。よって、本発明における「相同性」又は「同一性」は、配列間の関連性（relevance）を示すものである。

【0072】

以上の内容は、本発明の他の具体例又は他の態様にも適用されるが、これらに限定されるものではない。

【0073】

本発明のインターロイキン２アナログは、インターロイキン２のα及び／又はβ受容体との結合力を弱化又は増加させることによりｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を変化させる、新たなインターロイキン２の代替剤として用いられる。特に、β受容体に対する結合力を増加させるだけでなく、α受容体に対する結合力を変化（増加又は減少）させるので、２つの受容体に対する活性により、効果的な治療剤として用いられる。

【0074】

本発明における、インターロイキン２のアナログの製造のためのこのような改変には、Ｌ型もしくはＤ型アミノ酸及び／又は非天然アミノ酸を用いた改変、並びに／あるいは天然配列の修飾、例えば測鎖官能基の改変、分子内の共有結合、一例として測鎖間の環形成、メチル化、アシル化、ユビキチン化、リン酸化、アミノヘキサン化、ビオチン化などの修飾による改変が全て含まれる。

【0075】

また、天然インターロイキン２のＮ及び／又はＣ末端に少なくとも１つのアミノ酸が付加されたものが全て含まれる。

【0076】

前述したように置換されるか、付加されるアミノ酸としては、ヒトタンパク質において通常観察される２０種のアミノ酸だけでなく、異常又は非天然アミノ酸を用いることができる。異常アミノ酸の市販元には、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣｈｅｍＰｅｐ、Ｇｅｎｚｙｍｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが含まれる。これらのアミノ酸が含まれるペプチドと定型的なペプチド配列は、民間のペプチド合成会社、例えば米国のＡｍｅｒｉｃａｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐａｎｙやＢａｃｈｅｍ、又は韓国のＡｎｙｇｅｎにおいて合成及び購入することができる。

【0077】

アミノ酸誘導体も同じ方式で入手することができ、一例として４－イミダゾ酢酸（4-imidazoacetic acid）などが挙げられる。

【0078】

また、本発明によるインターロイキン２アナログは、生体内のタンパク質切断酵素から保護して安定性を向上させるために、そのＮ末端及び／又はＣ末端などが化学的に修飾された形態、有機基により保護された形態、又はペプチド末端などにアミノ酸が付加されて改変された形態であってもよい。

【0079】

特に、化学的に合成したペプチドの場合、Ｎ及びＣ末端が電荷を帯びているので、その電荷を除去するために、Ｎ末端のアセチル化（acetylation）及び／又はＣ末端のアミド化（amidation）を行うが、特にこれらに限定されるものではない。

【0080】

また、本発明によるインターロイキン２アナログはペプチドの形態であるので、ペプチド自体、その塩（例えば、前記ペプチドの薬学的に許容される塩）又はその溶媒和物の形態が全て含まれる。さらに、ペプチドは、薬学的に許容されるものであれば、いかなる形態であってもよい。

【0081】

前記塩の種類は、特に限定されるものではない。もっとも、個体、例えば哺乳類に安全かつ効果的な形態であることが好ましいが、特にこれらに限定されるものではない。

【0082】

前記「薬学的に許容される」とは、医薬学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激、アレルギー反応などを誘発することなく所望の用途に効果的に使用できる物質を意味する。

【0083】

本発明における「薬学的に許容される塩」には、薬学的に許容される無機酸、有機酸又は塩基から誘導された塩が含まれる。好適な酸の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－Ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられる。好適な塩基から誘導された塩には、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、アンモニウムなどが含まれる。

【0084】

また、本発明における「溶媒和物」とは、本発明によるペプチド又はその塩が溶媒分子と複合体を形成したものを意味する。

【0085】

本発明において、天然インターロイキン２受容体に対するいずれかのインターロイキン２アナログの結合力は、受容体に対する親和性を測定する方法により公知の様々な技術を用いて測定することができる。例えば、ＳＰＲ（surface Plasmon resonance）を用いることができるが、これに限定されるものではない。

【0086】

具体的には、本発明のインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２又はアルデスロイキンに比べて、減少又は増加したインターロイキン２α受容体結合力を有してもよい。

【0087】

より具体的には、本発明のインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２又はアルデスロイキンのインターロイキン２α受容体結合力と比較して、約０．００１倍以上、約０．００５倍以上、約０．０１倍以上、約０．０５倍以上、約０．１倍以上、約０．３倍以上、約０．５倍以上、約０．７倍以上、約０．９倍以上、約１．１倍以上、約１．３倍以上、約１．５倍以上、約１．７倍以上のインターロイキン２α受容体結合力を有するものであるが、その数値は限定されるものではなく、結合力が天然インターロイキン２又はアルデスロイキンに比べて変更されたものであれば本発明に含まれる。

【0088】

あるいは、アルデスロイキンのインターロイキン２α受容体結合力（１００％）を基準に、本発明のインターロイキン２アナログは、完全に結合力を喪失したものであるか、約１％以上、約５％以上、約７％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約５０％以上、約７０％以上、約９０％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上の結合力を有するものであるが、その数値は限定されるものではなく、結合力が天然インターロイキン２又はアルデスロイキンに比べて変更されたものであれば本発明に含まれる。

【0089】

また、具体的には、本発明のインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２又はアルデスロイキンのインターロイキン２β受容体結合力と比較して、約０．１倍以上、約０．３倍以上、約０．５倍以上、約０．７倍以上、約１．０倍以上、約１０倍以上、約２０倍以上、約３０倍以上、約４０倍以上、約５０倍以上、約６０倍以上、約７０倍以上、約８０倍以上、約９０倍以上、約１００倍以上のインターロイキン２β受容体結合力を有するものであるが、その数値は限定されるものではなく、結合力が天然インターロイキン２又はアルデスロイキンに比べて変更されたか、増加したものであれば本発明に含まれる。

【0090】

あるいは、アルデスロイキンのインターロイキン２β受容体結合力（１００％）を基準に、本発明のインターロイキン２アナログは、約５％以上、約９％以上、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約５０％以上、約１００％以上、約２００％以上、約５００％以上、約７００％以上、約１０００％以上、約１５００％以上、約３０００％以上、約５０００％以上、約７０００％以上、約１００００％以上、約１２０００％以上、約１５０００％以上、約２００００％以上、約２５０００％以上の結合力を有するものであるが、その数値は限定されるものではなく、結合力がアルデスロイキンに比べて増加したものであれば本発明に含まれる。

【0091】

本発明における「約」とは、±０．５、±０．４、±０．３、±０．２、±０．１などが全て含まれる範囲であり、約という用語の後に続く数値と同等又は同程度の範囲の数値が全て含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0092】

本発明のインターロイキン２アナログは、天然インターロイキン２又はアルデスロイキンに比べて、インターロイキン２α受容体に対する結合力が変更され、インターロイキン２β受容体に対する結合力が増加したことを特徴とする。

【0093】

本発明の具体的な実施形態においては、本発明のインターロイキン２アナログを製造するために、天然インターロイキン２（配列番号１）に基づいて、変異を導入したインターロイキン２アナログを製造した。本発明で製造したインターロイキン２アナログは、配列番号３～１０６のいずれかのアミノ酸配列を含むものであってもよく、配列番号１０８～２１１のいずれかの塩基配列でコードされるものであってもよい。

【0094】

本発明の他の態様は、前記インターロイキン２アナログをコードする核酸（ポリヌクレオチド）、前記核酸を含む組換え発現ベクター、及び前記核酸又は組換え発現ベクターを含む形質転換体を提供する。

【0095】

本発明のインターロイキン２アナログをコードする核酸は、配列番号１の天然インターロイキン２をコードする塩基配列において、特定位置のアミノ酸に変異（アミノ酸の欠失、置換及び／又は付加）を導入できるように改変されたものであってもよく、具体的には、配列番号３～１０６のいずれかのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むものであってもよい。例えば、本発明の核酸は、配列番号１０８～２１１のいずれかの塩基配列を有するものであってもよく、含むものであってもよい。

【0096】

本発明の塩基配列は、コドンの縮退（degeneracy）により、又は本発明の核酸を発現させようとする生物において好まれるコドンを考慮して、本発明のインターロイキン２アナログのアミノ酸配列が変化しない範囲でコード領域に様々な改変を行うことができる。具体的には、本発明の核酸は、配列番号１０８～２１１のいずれかの配列と相同性もしくは同一性が７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上及び９８％以上、１００％未満の塩基配列を有するものであるか、含むものであるか、又は配列番号１０８～２１１の配列のいずれかの配列と相同性もしくは同一性が７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上及び９８％以上、１００％未満の塩基配列からなるものであるか、必須に構成されるものであるが、これらに限定されるものではない。

【0097】

また、本発明の核酸は、公知の遺伝子配列から製造されるプローブ、例えば本発明の核酸配列の全部又は一部に対する相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列であればいかなるものでもよい。前記「ストリンジェントな条件（stringent condition）」とは、ポリヌクレオチド間の特異的ハイブリダイゼーションを可能にする条件を意味する。このような条件は、文献（非特許文献１２、１３参照）に具体的に記載されている。

【0098】

ハイブリダイゼーションは、たとえハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに応じて塩基間のミスマッチ（mismatch）が可能であっても、２つの核酸が相補的配列を有することが求められる。「相補的」とは、互いにハイブリダイゼーションが可能なヌクレオチド塩基間の関係を表すために用いられるものである。例えば、ＤＮＡにおいて、アデノシンはチミンに相補的であり、シトシンはグアニンに相補的である。よって、本発明の核酸には、実質的に類似する核酸配列だけでなく、全配列に相補的な単離された核酸断片が含まれてもよい。

【0099】

前記ポリヌクレオチドをハイブリダイズする適切なストリンジェンシーはポリヌクレオチドの長さ及び相補性の程度に依存し、変数は当該技術分野で公知である（例えば、非特許文献１２）。

【0100】

相同性又は同一性については前述した通りである。

【0101】

本発明による組換えベクターは、典型的にクローニングのためのベクター又は発現のためのベクターとして構築されてもよく、原核細胞又は真核細胞を宿主細胞として用いるためのベクターとして構築されるてもよい。

【0102】

本発明における「ベクター」とは、好適な宿主細胞において標的タンパク質を発現する組換えベクターであり、核酸挿入物が発現するように作動可能に連結された必須の調節因子を含む核酸構築物（construct）を意味する。本発明によれば、インターロイキン２アナログをコードする核酸を含む組換えベクターを作製することができ、前記組換えベクターを宿主細胞に形質転換（transformation）又はトランスフェクション（transfection）することにより、本発明のインターロイキン２アナログが得られる。

【0103】

本発明における「形質転換（transformation）」とは、ＤＮＡを宿主細胞内に導入してＤＮＡが染色体の因子として又は染色体統合完成により複製可能になることであり、外部のＤＮＡを細胞内に導入して人為的に遺伝的な変化を起こす現象を意味する。

【0104】

本発明に適した宿主は、本発明の核酸を発現させるものであれば特に限定されるものではない。本発明に用いられる宿主の特定例としては、大腸菌（E. coli）などのエシェリキア（Escherichia）属細菌、バチルス・サブティリス（Bacillus subtilis）などのバチルス（Bacillus）属細菌、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）などのシュードモナス（Pseudomonas）属細菌、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）などの酵母、スポドプテラ・フルギペルダ（Sf9）などの昆虫細胞、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＢＳＣなどの動物細胞が挙げられる。

【0105】

本発明のさらに他の態様は、少なくとも１つのアミノ酸変異を含むインターロイキン２アナログを製造する方法を提供する。

【0106】

具体的には、前記方法は、天然インターロイキン２において、１番目、１２番目、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３２番目、３５番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、４８番目、４９番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、７６番目、８０番目、８１番目、８２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目、９５番目、９６番目、１２５番目、１２６番目及び１３３番目の位置に相当するアミノ酸からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸に変異を導入するステップを含むものであってもよい。

【0107】

より具体的には、（ａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び３２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び３５番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び３８番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び４２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び４３番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び４８番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び４９番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び７６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び８７番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目及び８０番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目及び８４番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１９番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１２番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び６１番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び８４番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び８８番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び８９番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び９１番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び９４番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び１２６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目及び８４番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、６１番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、２０番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８８番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４５番目、８０番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、６９番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ａｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、６９番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、１９番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、２２番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、２２番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、２２番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、８０番目、８
１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、４３番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるか、（ｂｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換したものであるが、これらに限定されるものではない。

【0108】

インターロイキン２アナログ及び変異については前述した通りである。

【0109】

本発明のインターロイキン２アナログの製造方法の他の例として、前記インターロイキン２アナログを製造する方法は、ａ）前記インターロイキン２アナログをコードする核酸を含む形質転換体を培養してインターロイキン２アナログを発現させるステップと、ｂ）発現したインターロイキン２アナログを分離及び精製するステップとを含むものであってもよいが、インターロイキン２アナログを製造できるものであればいかなる方法であってもよく、当該技術分野で公知の方法であってもよい。

【0110】

本発明において、前記インターロイキン２アナログをコードする核酸は、配列番号１０８～２１１のいずれかの塩基配列を含むものであるか、前記塩基配列から（必須に）構成されるものであるが、これらに限定されるものではない。

【0111】

本発明において、形質転換体の培養に用いられる培地は、好適な方法で宿主細胞培養の要件を満たさなければならない。宿主細胞の成長のために培地中に含まれる炭素源は、作製される形質転換体の種類に応じて当業者の判断により適宜選択され、培養の時期及び量を調節するために好適な培養条件が採用される。

【0112】

用いることのできる糖源としては、グルコース、スクロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デンプン、セルロースなどの糖及び炭水化物、大豆油、ヒマワリ油、ヒマシ油、ココナッツ油などの油脂、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸などの脂肪酸、グリセリン、エタノールなどのアルコール、酢酸などの有機酸が挙げられる。これらの物質は、単独で用いることもでき、混合物として用いることもできる。

【0113】

用いることのできる窒素源としては、ペプトン、酵母抽出物、肉汁、麦芽抽出物、トウモロコシ浸漬液、黄粉及び尿素、又は無機化合物、例えば硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、炭酸アンモニウム及び硝酸アンモニウムが挙げられる。窒素源も、単独で用いることもでき、混合物として用いることもできる。

【0114】

用いることのできるリン源としては、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、又はそれらに相当するナトリウム含有塩が挙げられる。また、培養培地は、成長に必要な硫酸マグネシウム、硫酸鉄などの金属塩を含有してもよい。

【0115】

最後に、上記物質以外に、アミノ酸、ビタミンなどの必須成長物質が用いられてもよい。また、培養培地に好適な前駆体が用いられてもよい。前述した原料は、培養過程において培養物に好適な方法でバッチ毎に又は連続して添加されてもよい。水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニアなどの塩基性化合物、又はリン酸、硫酸などの酸性化合物を好適な方法で用いて培養物のｐＨを調整してもよい。また、脂肪酸ポリグリコールエステルなどの消泡剤を用いて気泡生成を抑制してもよい。好気状態を維持するために、培養物中に酸素又は酸素含有気体（例えば、空気）を注入してもよい。

【0116】

本発明による形質転換体の培養は、通常２０℃～４５℃、具体的には２５℃～４０℃の温度で行われる。また、培養は、所望のインターロイキン２アナログの最大の生成量が得られるまで続けるが、これらの目的上、通常１０～１６０時間続ける。

【0117】

前述したように、宿主細胞に応じて適切な培養条件を整えると、本発明による形質転換体によりインターロイキン２アナログが生産され、ベクターの構成及び宿主細胞の特徴に応じて、生産されるインターロイキン２アナログは宿主細胞の細胞質内、細胞周辺腔（periplasmic space）又は細胞外に分泌される。

【0118】

宿主細胞の内外で発現したタンパク質は、通常の方法で精製することができる。精製方法の例としては、塩析（例えば、硫酸アンモニウム沈殿、リン酸ナトリウム沈殿など）、溶媒沈殿（例えば、アセトン、エタノールなどを用いたタンパク質分画沈殿など）、透析、ゲル濾過、イオン交換、逆相カラムクロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー、限外濾過などの技法を単独で又は組み合わせて用いることができる。

【0119】

本発明の具体例として、インターロイキン２アナログを製造する方法は、（ａ）前記インターロイキン２アナログを発現させるステップと、（ｂ）発現したインターロイキン２アナログを分離するステップとを含むものであってもよい。

【0120】

本発明の具体例として、形質転換体から封入体の形態で発現したインターロイキン２アナログを分離及び精製するために、次のステップをさらに含んでもよい。
ｂ－１）前記ａ）ステップの培養液から形質転換体を獲得して破砕するステップ
ｂ－２）破砕した細胞溶解物から発現したインターロイキン２アナログを回収してリフォールディングするステップ
ｂ－３）リフォールディングしたインターロイキン２アナログをサイズ排除クロマトグラフィーで精製するステップ

【0121】

本発明のさらに他の態様は、前記インターロイキン２アナログをペプチド合成法により製造する方法を提供する。このようなペプチド合成は、本発明のインターロイキン２アナログ配列が提供されているので、公知のペプチド合成法を用いることにより制限なく製造することができる。

【0122】

インターロイキン２アナログ及び変異については前述した通りである。

【0123】

本発明のさらに他の態様は、天然インターロイキン２において少なくとも１つのアミノ酸を変異させるステップを含む、インターロイキン２β受容体結合力を増大させる方法である。

【0124】

本発明によるインターロイキン２β受容体結合力を増大させる方法は、天然インターロイキン２又はアルデスロイキンに比べて、インターロイキン２β受容体に対する結合力を増加させると共に、インターロイキン２α受容体に対する結合力を変化させるものであってもよい。

【0125】

具体的には、前記方法は、天然インターロイキン２において、１番目、１２番目、１８番目、１９番目、２０番目、２２番目、３２番目、３５番目、３８番目、４２番目、４３番目、４５番目、４８番目、４９番目、６１番目、６８番目、６９番目、７４番目、７６番目、８０番目、８１番目、８２番目、８４番目、８５番目、８６番目、８７番目、８８番目、８９番目、９１番目、９２番目、９４番目、９５番目、９６番目、１２５番目、１２６番目及び１３３番目の位置に相当するアミノ酸の少なくとも１つのアミノ酸に変異を導入するステップを含むものであってもよい。

【0126】

より具体的には、前記方法は、（ａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び３２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び３５番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び３８番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び４２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び４３番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び４８番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び４９番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び７６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目及び８７番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目及び８０番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目及び８４番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１９番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１２番目、３８番目及び４２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び６１番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び８４番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び８８番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び８９番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び９１番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び９４番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目及び１２６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目及び８４番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、６１番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、２０番目、３８番目、４２番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８１番目、８８番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｏ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８４番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｐ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４５番目、８０番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｑ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｒ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｓ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｔ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、６９番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｕ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｖ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｗ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｘ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、７４番目、８０番目、８１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｙ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ａｚ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、６９番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂａ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、８０番目、８１番目、８４番目、８５番目、８６番目、９１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｂ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目、９４番目及び９６番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｃ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、１９番目、２２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｄ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、２２番目、３８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｅ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、２２番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｆ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、１８番目、２２番目、６８番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｇ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｈ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、４５番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｉ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９
１番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｊ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｋ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｌ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、４３番目、６１番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、（ｂｍ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３８番目、４２番目、８０番目、８１番目、８５番目、８６番目、９１番目、９２番目及び９５番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップ、又は（ｂｎ）天然インターロイキン２において、１番目のアミノ酸を欠失させ、１２５番目、３５番目、３８番目、４２番目、７４番目、８０番目、８１番目、８２番目、８５番目、８６番目及び９２番目のアミノ酸を他のアミノ酸に置換するステップを含むものであるが、これらに限定されるものではない。

【0127】

インターロイキン２アナログ及び変異については前述した通りである。

【0128】

本発明のさらに他の態様は、配列番号３～１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むインターロイキン２アナログを提供する。

【0129】

インターロイキン２アナログ、変異及び配列番号で表されるアナログの定義については前述した通りである。

【0130】

具体的には、前記インターロイキン２アナログは、配列番号３～１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むものであるか、前記配列から必須に構成されるものであるか、前記配列からなるものであるが、これらに限定されるものではない。

【0131】

本発明のさらに他の態様は、一般式１で表されるアミノ酸配列を含むインターロイキン２アナログを提供する。

【0132】

［一般式１］
Ｘ１－Ｐ－Ｔ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｔ－Ｋ－Ｋ－Ｔ－Ｑ－Ｌ－Ｑ－Ｌ－Ｅ－Ｈ－Ｌ－Ｘ１８－Ｘ１９－Ｄ－Ｌ－Ｘ２２－Ｍ－Ｉ－Ｌ－Ｎ－Ｇ－Ｉ－Ｎ－Ｎ－Ｙ－Ｋ－Ｎ－Ｐ－Ｋ－Ｌ－Ｔ－Ｘ３８－Ｍ－Ｌ－Ｔ－Ｘ４２－Ｘ４３－Ｆ－Ｘ４５－Ｍ－Ｐ－Ｋ－Ｋ－Ａ－Ｔ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｈ－Ｌ－Ｑ－Ｃ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６１－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｐ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６８－Ｖ－Ｌ－Ｎ－Ｌ－Ａ－Ｘ７４－Ｓ－Ｋ－Ｎ－Ｆ－Ｈ－Ｘ８０－Ｘ８１－Ｐ－Ｒ－Ｘ８４－Ｘ８５－Ｘ８６－Ｓ－Ｎ－Ｉ－Ｎ－Ｘ９１－Ｘ９２－Ｖ－Ｘ９４－Ｅ－Ｘ９６－Ｋ－Ｇ－Ｓ－Ｅ－Ｔ－Ｔ－Ｆ－Ｍ－Ｃ－Ｅ－Ｙ－Ａ－Ｄ－Ｅ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｉ－Ｖ－Ｅ－Ｆ－Ｌ－Ｎ－Ｒ－Ｗ－Ｉ－Ｔ－Ｆ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｉ－Ｉ－Ｓ－Ｔ－Ｌ－Ｔ（一般式１，配列番号２１２）

【0133】

一般式１において、Ｘ１は欠失しており、Ｘ１８はロイシン（Ｌ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ１９はロイシン（Ｌ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ２２はグルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ３８はアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ４２はアラニン（Ａ）、フェニルアラニン（Ｆ）、リシン（Ｋ）又はトリプトファン（Ｗ）であり、Ｘ４３はグルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ４５はアラニン（Ａ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ６８はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ７４はヒスチジン（Ｈ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ８０はフェニルアラニン（Ｆ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ８１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ８４はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ８５はアラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ８６はアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、イソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）であり、Ｘ９１はトレオニン（Ｔ）又はバリン（Ｖ）であり、Ｘ９２はフェニルアラニン（Ｆ）、イソロイシン（Ｉ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ９４はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）であり、Ｘ９６はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）である。

【0134】

また、一般式１においてＸ１３３に相当するトレオニン（Ｔ）に少なくとも１つのアミノ酸が付加されてもよいが、これに限定されるものではない。

【0135】

具体的には、前記インターロイキン２アナログは、配列番号１０、１３、１４、１５、１６、１７、２０、２１、２２、３２、３５、３６、４２、５３、５４、５６、５８、５９、６０、６２、７１、７２、７４、７５、７６、７７、７８、８５、８７、８９、９１、９２、９３、９４、９５、９８、９９、１００、１０１、１０３、１０４、１０５及び１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むものであるか、前記配列から必須に構成されるものであるか、前記配列からなるものであるが、これらに限定されるものではない。

【0136】

このようなインターロイキン２アナログは、アルデスロイキン又は天然インターロイキン２より増加したβ受容体結合力を有するが、これらに限定されるものではない。

【0137】

他の例として、本発明のインターロイキン２アナログは、一般式１において、Ｘ４３はリシン（Ｋ）であり、Ｘ４５はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ６８はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ７４はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ８０はフェニルアラニン（Ｆ）又はロイシン（Ｌ）であり、Ｘ８５はロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）又はチロシン（Ｙ）であり、Ｘ８６はイソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）であり、Ｘ９２はフェニルアラニン（Ｆ）又はイソロイシン（Ｉ）であるが、これらに限定されるものではない。

【0138】

具体的には、前記インターロイキン２アナログは、配列番号１０、１３、１４、１６、１７、２０、２１、２２、３２、３５、３６、４２、５３、５４、８７、８９、９１、９２、９３、９４、９８、９９、１００、１０１、１０３、１０４及び１０５のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むことを特徴とする。

【0139】

本発明のインターロイキン２アナログは、Ｃ末端に少なくとも１つのアミノ酸をさらに含むが、これに限定されるものではない。

【0140】

本発明のさらに他の態様は、一般式２で表されるアミノ酸配列を含むインターロイキン２アナログを提供する。

【0141】

［一般式２］
Ｘ１－Ｐ－Ｔ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｔ－Ｋ－Ｋ－Ｔ－Ｑ－Ｌ－Ｑ－Ｌ－Ｅ－Ｈ－Ｌ－Ｘ１８－Ｌ－Ｄ－Ｌ－Ｘ２２－Ｍ－Ｉ－Ｌ－Ｎ－Ｇ－Ｉ－Ｎ－Ｎ－Ｙ－Ｋ－Ｎ－Ｐ－Ｋ－Ｌ－Ｔ－Ｘ３８－Ｍ－Ｌ－Ｔ－Ｘ４２－Ｋ－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｐ－Ｋ－Ｋ－Ａ－Ｔ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｈ－Ｌ－Ｑ－Ｃ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６１－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｐ－Ｌ－Ｅ－Ｘ６８－Ｖ－Ｌ－Ｎ－Ｌ－Ａ－Ｑ－Ｓ－Ｋ－Ｎ－Ｆ－Ｈ－Ｆ－Ｘ８１－Ｐ－Ｒ－Ｄ－Ｘ８５－Ｘ８６－Ｓ－Ｎ－Ｉ－Ｎ－Ｖ－Ｆ－Ｖ－Ｌ－Ｅ－Ｌ－Ｋ－Ｇ－Ｓ－Ｅ－Ｔ－Ｔ－Ｆ－Ｍ－Ｃ－Ｅ－Ｙ－Ａ－Ｄ－Ｅ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｉ－Ｖ－Ｅ－Ｆ－Ｌ－Ｎ－Ｒ－Ｗ－Ｉ－Ｔ－Ｆ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｉ－Ｉ－Ｓ－Ｔ－Ｌ－Ｔ（一般式２，配列番号２１３）

【0142】

一般式２において、Ｘ１は欠失しており、Ｘ１８はロイシン（Ｌ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ２２はグルタミン酸（Ｅ）又はグルタミン（Ｑ）であり、Ｘ３８はアラニン（Ａ）又はアルギニン（Ｒ）であり、Ｘ４２はフェニルアラニン（Ｆ）又はリシン（Ｋ）であり、Ｘ６１はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ６８はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ８１はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、Ｘ８５はロイシン（Ｌ）又はバリン（Ｖ）であり、Ｘ８６はイソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）である。

【0143】

具体的には、前記インターロイキン２アナログは、配列番号２２、４２、５３、８７、１０５及び１０６のアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれかの配列を含むものであるが、これらに限定されるものではない。

【0144】

また、一般式２においてＸ１３３に相当するトレオニン（Ｔ）に少なくとも１つのアミノ酸が付加されるか、インターロイキン２アナログのＣ末端に少なくとも１つのアミノ酸をさらに含むが、これらに限定されるものではない。

【0145】

なお、本願明細書において、特に断らない限り、「含む」、「有する」、「含有する」などの表現は、明示した整数（integer）又は整数の集合を含むことを意味するが、他の整数又は整数の集合を排除するものではないと解されるべきである。

【0146】

以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例はあくまで本発明を例示するものにすぎず、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。

【実施例0147】

天然インターロイキン２及びインターロイキン２アナログ発現ベクターの作製
１３３個のアミノ酸をコードする天然インターロイキン２発現ベクターを作製するために、報告されているインターロイキン２配列（ＮＭ＿０００５８６．３；配列番号１）に基づいて合成したインターロイキン２をｐＥＴ－２２ｂベクター（Novagen）にクローニングした。また、前記インターロイキン２を鋳型とし、インターロイキン２のアミノ酸を改変させた新規なインターロイキン２アナログを作製した。インターロイキン２アナログを増幅させるためのＰＣＲ条件は、９５℃で３０秒間、５５℃で６０秒間、６５℃で６．５分間とし、この過程を１６サイクル行った。所望の部位のアミノ酸が正常に改変されたかを判断するために、上記条件で得られた突然変異（mutagenesis）産物に対して配列分析を行い、各インターロイキン２アナログの目的とする変異位置に、天然のものを基準として次の表１に示す変異があることが確認された。このようにして得られた発現ベクターをｐＥＴ２２ｂ－インターロイキン２アナログ１～１０５と命名した。

【0148】

表１に各アミノ酸の改変配列及びアナログ名を示す。これらのインターロイキン２アナログを作製するために、順方向（Ｆ）及び逆方向（Ｒ）プライマーを合成し、その後ＰＣＲを行って各アナログ遺伝子を増幅した。

【0149】

表１において、アナログ１はアルデスロイキンであり、プライマー#１～#２０４は本明細書の配列番号２１４～４１７にそれぞれ相当する。

【0150】

【表1】

【0151】

ｄｅｓＡとは、インターロイキン２の１番目のアミノ酸であるアラニンを欠失させたことを意味する。

【0152】

表２にインターロイキン２アナログの全長タンパク質配列を示す。表２内の太字は変異位置を示す。

【0153】

【表2】

【実施例0154】

インターロイキン２アナログの発現
実施例１で作製した発現ベクターを用いて、Ｔ７プロモーター制御下で組換えインターロイキン２アナログを発現させた。各組換えインターロイキン２アナログ発現ベクターに発現大腸菌菌株、Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ＤＥ３（E. coli B F-dcm ompT hsdS(rB-mB-) gal λ(DE3); ノバジェン）を形質転換した。形質転換方法は、ノバジェン社が推薦する方法を用いた。各組換え発現ベクターが形質転換された各単一コロニーを得て、アンピシリン（５０μｇ／ｍｌ）を含む２×ルリア（Luria Broth）培地に接種し、３７℃で１５時間培養した。組換え菌株の培養液と３０％グリセリンとを含む２×ＬＢ培地を１：１（ｖ／ｖ）の比で混合して各１ｍＬずつｃｒｙｏチューブに分注し、－１５０℃で保管した。これを組換えタンパク質の作製のための細胞ストック（cell stock）として用いた。

【0155】

組換えインターロイキン２アナログの発現のために、各細胞ストック１バイアル（vial）を溶解して５００ｍｌの２×ＬＢに接種し、３７℃で１４～１６時間振盪培養した。６００ｎｍでの吸光度値が４．０以上になったら培養を終了し、これを種培養液として用いた。５Ｌ発酵槽（Bioflo-320, NBS, 米国）を用いて、種培養液を１．６Ｌの発酵培地に接種して初期発酵を始めた。培養条件は、温度３７℃、空気量２．０Ｌ／ｍｉｎ（１ｖｖｍ）、攪拌速度６５０ｒｐｍとし、３０％アンモニア水を用いてｐＨ６．７０に維持した。発酵は、培養液中の栄養素が枯渇したら追加培地（feeding solution）を添加することにより、流加培養を行った。菌株の成長は吸光度により観測し、吸光度値が７０以上になったら最終濃度５００μＭのＩＰＴＧを導入した。培養はＩＰＴＧ導入後約２３～２５時間まで続け、培養終了後に、遠心分離器を用いて組換え菌株を得て、使用するまで－８０℃で保管した。