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▶ グアンジョウ アンハオ ファーマスーティカルズ テクノロジー カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024045042
(43)【公開日】2024-04-02
(54)【発明の名称】スチルベン系化合物の抗腫瘍薬物の調製における使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/192 20060101AFI20240326BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240326BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240326BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20240326BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20240326BHJP
A61P 27/12 20060101ALI20240326BHJP
A61K 9/06 20060101ALI20240326BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240326BHJP
A61K 9/127 20060101ALI20240326BHJP
A61K 9/51 20060101ALI20240326BHJP
A61K 9/16 20060101ALI20240326BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20240326BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240326BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240326BHJP
A61K 35/26 20150101ALI20240326BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240326BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20240326BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240326BHJP
【ＦＩ】
A61K31/192
A61P35/00
A61P27/02
A61P35/04
A61P27/06
A61P27/12
A61K9/06
A61K9/08
A61K9/127
A61K9/51
A61K9/16
A61K9/10
A61K45/00
A61P43/00 121
A61K35/26
A61P37/02
A61K38/17
A61P1/16
【審査請求】有
【請求項の数】24
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023149271
(22)【出願日】2023-09-14
(31)【優先権主張番号】202211155404.9
(32)【優先日】2022-09-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(71)【出願人】
【識別番号】523351999
【氏名又は名称】グアンジョウ アンハオ ファーマスーティカルズ テクノロジー カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001427
【氏名又は名称】弁理士法人前田特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ヨン ジーチュエン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C087
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C076AA06
4C076AA09
4C076AA12
4C076AA16
4C076AA19
4C076AA22
4C076AA31
4C076AA65
4C076BB24
4C076CC10
4C076CC27
4C076FF12
4C076FF16
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA19
4C084BA44
4C084CA18
4C084MA02
4C084MA17
4C084MA22
4C084MA23
4C084MA24
4C084MA28
4C084MA41
4C084MA58
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA331
4C084ZA332
4C084ZA751
4C084ZA752
4C084ZB072
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC751
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB43
4C087MA02
4C087MA17
4C087MA22
4C087MA23
4C087MA24
4C087MA28
4C087MA41
4C087MA58
4C087NA05
4C087NA14
4C087ZA33
4C087ZA75
4C087ZB26
4C087ZC75
4C206AA01
4C206AA02
4C206DA23
4C206MA01
4C206MA02
4C206MA04
4C206MA37
4C206MA42
4C206MA43
4C206MA44
4C206MA48
4C206MA61
4C206MA78
4C206NA05
4C206NA14
4C206ZA33
4C206ZA75
4C206ZB26
4C206ZC75
(57)【要約】 （修正有）
【課題】スチルベン系化合物の抗腫瘍薬物の調製における使用を提供する。
【解決手段】式Ｉに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、抗腫瘍薬物および／または眼疾患を予防および／または治療するための薬物の調製における使用である。
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムまたは有機アミンから選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）
【選択図】なし
【解決手段】式Ｉに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、抗腫瘍薬物および／または眼疾患を予防および／または治療するための薬物の調製における使用である。
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムまたは有機アミンから選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、抗腫瘍薬物および／または眼疾患を予防および／または治療するための薬物の調製における使用：
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムまたは有機アミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）。
【請求項2】
前記有機アミンはアミノ酸、ペプチド、ｔ－ブチルアミンまたはｎ－ブチルアミンであり、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、フッ素、塩素または臭素から選択され、
好ましくは、
前記有機アミンはメグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジン、ｔ－ブチルアミンから選択され、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、フッ素、塩素または臭素から選択され、
好ましくは、
前記有機アミンはメグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジン、ｔ－ブチルアミンから選択され、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項3】
前記化合物は式ＩＩに示す化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の使用：
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
【請求項4】
前記化合物は式ＩＩＩに示す化合物であることを特徴とする、請求項３に記載の使用：
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
【請求項5】
前記化合物は式ＩＶに示す化合物であることを特徴とする、請求項４に記載の使用：
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
【請求項6】
前記抗腫瘍薬物は、固形腫瘍内にＣＤ８＋Ｔリンパ球を多く集めおよび／または腫瘍血管の内壁を破壊する効果を有する薬物であり、
好ましくは、前記薬物が、固形腫瘍の中心部位の腫瘍細胞の壊死を引き起こす薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
好ましくは、前記薬物が、固形腫瘍の中心部位の腫瘍細胞の壊死を引き起こす薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項7】
前記抗腫瘍薬物が腫瘍の転移を抑制する薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項8】
前記抗腫瘍薬物が腫瘍の転移を抑制する薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであり、
好ましくは、前記腫瘍の転移を抑制する薬物が、メラノーマの転移を抑制する薬物であることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
【請求項9】
前記抗腫瘍薬物が、肺癌、肝癌、胃癌、卵巣癌、前立腺癌または腎細胞癌を予防および／または治療するための薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項10】
前記抗腫瘍薬物が、肺癌、肝癌、胃癌または卵巣癌を予防および／または治療するための薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであることを特徴とする、請求項９に記載の使用。
【請求項11】
前記抗腫瘍薬物が、前立腺癌または腎細胞癌を予防および／または治療するための薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖｂに示すとおりであることを特徴とする、請求項９に記載の使用。
【請求項12】
前記眼疾患を予防および／または治療するための薬物が、眼表面の血管の成長を抑制する薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項13】
前記眼疾患が、網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項14】
前記眼疾患が糖尿病眼疾患であり、
好ましくは、前記糖尿病眼疾患が、糖尿病と関係する網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
好ましくは、前記糖尿病眼疾患が、糖尿病と関係する網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項15】
前記化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであることを特徴とする、請求項１２～１４のいずれか１つに記載の使用。
【請求項16】
腫瘍を治療するための薬物製剤であって、該薬物製剤は、請求項１～１１のいずれか１つに記載の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料または補助性成分を添加して調製された薬物製剤であり、
好ましくは、前記薬物製剤が注射製剤、経口製剤または外用製剤であることを特徴とする、薬物製剤。
好ましくは、前記薬物製剤が注射製剤、経口製剤または外用製剤であることを特徴とする、薬物製剤。
【請求項17】
眼疾患を予防および／または治療するための薬物製剤であって、該薬物製剤は、請求項１～５、１５のいずれか１つに記載の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料または補助性成分を添加して調製された薬物製剤であり、
好ましくは、前記薬物製剤が眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形が点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤が水溶液、懸濁剤、乳剤であることを特徴とする、薬物製剤。
好ましくは、前記薬物製剤が眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形が点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤が水溶液、懸濁剤、乳剤であることを特徴とする、薬物製剤。
【請求項18】
請求項１～１１のいずれか１つに記載の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、腫瘍免疫治療薬物との併用による、抗腫瘍併用薬物の調製における使用であって、
好ましくは、前記腫瘍免疫治療薬物がＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＣＡＲＴ細胞であることを特徴とする、使用。
好ましくは、前記腫瘍免疫治療薬物がＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＣＡＲＴ細胞であることを特徴とする、使用。
【請求項19】
式Ｖｃに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、ＰＤ－Ｌ１との併用による、肺癌を予防および／または治療するための併用薬物の調製における使用であることを特徴とする、請求項１８に記載の使用。
【請求項20】
式Ｖａに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、Ｔ細胞との併用による、肝癌を予防および／または治療するための併用薬物の調製における使用であることを特徴とする、請求項１８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、薬物の分野に関し、具体的にはスチルベン系化合物の抗腫瘍薬物の調製における使用に関する。
【背景技術】
【0002】
ＣＤ８＋Ｔリンパ球は、腫瘍細胞を死滅させ、腫瘍の拡散を遮断することができる細胞傷害性Ｔリンパ球である。薬物を使用した後に、固形腫瘍組織におけるＣＤ８＋Ｔリンパ球の細胞濃度を著しく向上させ、ＣＤ８＋Ｔリンパ球を固形腫瘍組織内に多く集めることができれば、薬物の抗癌作用を実現することができる。
【0003】
また、悪性腫瘍内部の血液供給と悪性腫瘍周辺の血管はいずれも非常に豊富であるが、もし薬物が腫瘍血管内皮細胞に作用して、活発な腫瘍血管に炎症応答を発生させ且つ膨張させて血管を塞ぎ、血液の腫瘍内での流れを遮断することができれば、腫瘍細胞の「栄養を断った」後に徐々に飢餓状態にして死滅させることができ、抗腫瘍の効果が実現できる。
【0004】
発明者のこれまでの研究により、スチレン酸誘導体は、腫瘍血管に対して特異的な標的作用を一定程度有するため腫瘍の成長を抑制することができるが、腫瘍細胞、特に固形腫瘍組織の縁の部分の腫瘍細胞を死滅させることはできず、それにより腫瘍組織が縁の部分を通じて急速に増殖するため、腫瘍の治療効果は芳しくない、ということが見出された。
【0005】
ＣＤ８＋Ｔリンパ球を固形腫瘍組織に多く集めるだけでなく、腫瘍内の血液の流れを阻止することも可能な薬物を提供できれば、抗腫瘍への応用において大いに期待されるものとなる。
【発明の概要】
【0006】
本発明の目的は、スチルベン系化合物の、抗腫瘍薬物の調製における使用を提供することである。
【0007】
本発明は、式Ｉに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、抗腫瘍薬物および／または眼疾患を予防および／または治療するための薬物の調製における使用を提供する。
ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムまたは有機アミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される。
【0008】
さらに、前記有機アミンはアミノ酸、ペプチド、ｔ－ブチルアミンまたはｎ－ブチルアミンであり、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、フッ素、塩素または臭素から選択され、
好ましくは、
前記有機アミンはメグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジン、ｔ－ブチルアミンから選択され、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、フッ素、塩素または臭素から選択され、
好ましくは、
前記有機アミンはメグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジン、ｔ－ブチルアミンから選択され、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
【0009】
さらに、前記化合物は式ＩＩに示す化合物であり、
ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
【0010】
さらに、前記化合物は式ＩＩＩに示す化合物であり、
ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
【0011】
さらに、前記化合物は式ＩＶに示す化合物であり、
ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
【0012】
さらに、前記抗腫瘍薬物は、固形腫瘍内にＣＤ８＋Ｔリンパ球を多く集めおよび／または腫瘍血管の内壁を破壊する効果を有する薬物であり、
好ましくは、前記薬物は、固形腫瘍の中心部位の腫瘍細胞の壊死を引き起こす薬物である。
好ましくは、前記薬物は、固形腫瘍の中心部位の腫瘍細胞の壊死を引き起こす薬物である。
【0013】
さらに、前記抗腫瘍薬物は腫瘍の転移を抑制する薬物である。
【0014】
さらに、前記抗腫瘍薬物が腫瘍の転移を抑制する薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであり、
好ましくは、前記腫瘍の転移を抑制する薬物は、メラノーマの転移を抑制する薬物である。
【0015】
さらに、前記抗腫瘍薬物は、肺癌、肝癌、胃癌、卵巣癌、前立腺癌または腎細胞癌を予防および／または治療するための薬物である。
【0016】
さらに、前記抗腫瘍薬物が、肺癌、肝癌、胃癌または卵巣癌を予防および／または治療するための薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖａに示すとおりである。
【0017】
さらに、前記抗腫瘍薬物が、前立腺癌または腎細胞癌を予防および／または治療するための薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖｂに示すとおりである。
【0018】
さらに、前記眼疾患を予防および／または治療するための薬物は、眼表面の血管の成長を抑制する薬物である。
【0019】
さらに、前記眼疾患は、網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離である。
【0020】
さらに、前記眼疾患は糖尿病眼疾患であり、
好ましくは、前記糖尿病眼疾患は、糖尿病と関係する網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離である。
好ましくは、前記糖尿病眼疾患は、糖尿病と関係する網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離である。
【0021】
さらに、前記薬物が、眼疾患を予防および／または治療するための薬物である場合、前記化合物の構造は式Ｖａに示すとおりである。
【0022】
本発明は、腫瘍を治療するための薬物製剤をさらに提供し、該薬物製剤は、前述の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料または補助性成分を添加して調製された薬物製剤であり、
好ましくは、前記薬物製剤は注射製剤、経口製剤または外用製剤である。
好ましくは、前記薬物製剤は注射製剤、経口製剤または外用製剤である。
【0023】
本発明は、眼疾患を治療するための薬物製剤をさらに提供し、該薬物製剤は、前述の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料または補助性成分を添加して調製された薬物製剤であり、
好ましくは、前記薬物製剤は眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形は点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤は水溶液、懸濁剤、乳剤である。
好ましくは、前記薬物製剤は眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形は点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤は水溶液、懸濁剤、乳剤である。
【0024】
本発明は、前述の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、腫瘍免疫治療薬物との併用による、抗腫瘍併用薬物の調製における使用をさらに提供し、
好ましくは、前記腫瘍免疫治療薬物はＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＣＡＲＴ細胞である。
好ましくは、前記腫瘍免疫治療薬物はＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＣＡＲＴ細胞である。
【0025】
さらに、式Ｖｃに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、ＰＤ－Ｌ１との併用による、肺癌を予防および／または治療するための併用薬物の調製における使用である。
【0026】
さらに、式Ｖａに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、Ｔ細胞との併用による、肝癌を予防および／または治療するための併用薬物の調製における使用である。
【0027】
本発明の発明者がこれまで研究してきたスチレン酸誘導体は、腫瘍血管に対して特異的な標的作用を一定程度有するものの、腫瘍血管を破壊し、腫瘍の成長を抑制できるだけで、腫瘍細胞、特に固形腫瘍組織の縁の部分の腫瘍細胞を死滅させることはできず、それにより腫瘍組織が縁の部分から急速に増殖してしまった。過去の作業を踏まえて、発明者は、構造最適化およびインビボスクリーニングにより、本発明の一連の化合物が、固形腫瘍内にＣＤ８＋Ｔリンパ球を多く集め且つ新生血管の内皮細胞の接着タンパク質を破壊するという二重の効果を有し、抗腫瘍薬物の調製に用いることができることを、研究の結果見出した。
【0028】
式（Ｉ）の構造のスチルベン系化合物を有効活性成分とし、薬物において許容可能な相応の薬用補助材料または担体などの補助添加成分と組み合わせ、且つ相応の通常の製薬方法によって加工処理した後、経口、注射または外用型などの相応の形式の血管標的剤薬物として調製することができる。例えば、経口薬物製剤において許容される崩壊剤、賦形剤、潤滑剤、結合剤、充填剤等の常用の補助添加成分と混合した後、相応の通常のプロセス方法で処理し、錠剤、丸剤、顆粒剤、カプセル剤または適切な形態の徐放剤、放出制御剤等の固体製剤の形態の経口薬物として調製することができる。注射薬物製剤において使用が許可されている適切な溶剤および添加剤を配合し、且つ相応のプロセス操作で処理した後、相応の水性注射剤または粉末注射剤等の筋肉または静脈形式の注射製剤薬物として調製することができる。常用の溶剤、安定剤またはポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、植物油、ワセリン、ラノリン等の親油性基質および／または水溶性基質と混合し、相応の外用薬物製剤の処理に従って、点眼液または膏剤、膏薬、ゲル剤、軟膏剤、リニメント剤、塗布剤などとして調製することができる。これらの注射液、無菌粉末注射剤、無菌凍結乾燥粉末注射剤等の注射製剤、錠剤、カプセル、各種徐放性製剤等の経口製剤、および点眼液、軟膏等の外用製剤形式の薬物等は、それぞれ抗固形腫瘍薬物の治療に用いることができる。
【0029】
本発明はスチルベン系化合物の抗腫瘍薬物の調製における使用を提供し、本発明の研究により、一部のスチルベン系化合物は固形腫瘍内にＣＤ８＋Ｔリンパ球を多く集め且つ腫瘍血管の内壁を標的破壊するという二重の効果を有し、抗原ＣＤ８＋キラーＴリンパ球によって腫瘍細胞を消滅させると同時に、腫瘍組織への血液供給を遮断し、固形腫瘍内部の急速な壊死を引き起こし、腫瘍に対する殺傷力を大幅に向上させ、さらに腫瘍転移に対して抑制効果を有することが見出された。本発明のスチルベン系化合物は、抗腫瘍薬物の調製に用いることができ、また、腫瘍免疫治療薬物と併用して相乗的な抗腫瘍効果を発揮することもできる。これらのスチルベン系化合物は、構造が異なると化合物の抗腫瘍効果も異なるため、様々な抗腫瘍薬物の調製に用いることができる。また、本発明のスチルベン系化合物は、眼表面の血管の成長を抑制することができるため、様々な眼部疾患を治療するための薬物の調製に用いることができる。本発明のスチルベン系化合物の応用には将来性がある。
【0030】
当然ながら、本発明の上記内容に基づき、当分野の一般的な技術的知識や慣用的手段に照らし、本発明の上記基本的な技術的思想を逸脱しないという前提において、他の様々な形態の修正、置換または変更を行うことができる。
【0031】
以下、実施例という形の具体的な実施形態によって、本発明の上記内容を更に詳細に説明する。但し、これをもって、本発明の上記主題の範囲が以下の実施例に限定されると理解してはならない。本発明の上記内容に基づいて実現される技術は、いずれも本発明の範囲に属する。
【図面の簡単な説明】
【0032】
【発明を実施するための形態】
【0033】
本発明の「発明を実施するための形態」において使用される材料、機器はすべて従来の製品であり、市販の製品を購入したものである。
【0034】
本発明のスチルベン系化合物の構造は式（Ｉ）に示すとおりであり、
式中、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、またはアミノ酸、ｔ－ブチルアミン、ｎ－ブチルアミン、ペプチドを含む有機アミンから選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ水素、アルキル基、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、アミノ基、フッ素、塩素または臭素から選択される。
【0035】
本発明の具体的な化合物を表１に示す。
表１ 本発明の化合物の具体的な構造
表１ 本発明の化合物の具体的な構造
【0036】
実施例１ 本発明の化合物１の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、２．０２ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の２，３－ジヒドロキシ－４－メトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物１）２．１７ｇを得た（収率５７．７％）。1H NMR (400 MHz, DMSO) 3.672(d 9H 3’,4’,5’-OCH3),3.821(d 3H 4’’-OCH3),5.265(s 1H 2’’-OH),5.318(s 1H 3’’-OH),6.273(s 1H 2’-H),6.348(d 1H 6’-H),6.386(d 1H 5’’-H),7.415(s 1H 3-H);10.982(s 1H CO-OH);13C NMR (100 MHz, DMSO) δ 57.692 ,57.826 ,62.837 ,109.313 ,112.713 ,118.627 ,125.392 ,129.883 ,137.423 ,138.153 ,138.232 ,138.772 ,146.391 ,149.167 ,154.482,178.277計１６グループの炭素。
【0037】
実施例２ 本発明の化合物２の調製
調製方法：１０ｍｌの三つ口フラスコに１．８２ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（２，３－ジヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸（化合物１）、０．９９ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のメグルミンを加え、さらに１５ｍｌのエタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、水浴で加熱して６０℃まで昇温し、溶解して透明になったら、室温まで冷却し、固体を析出させた後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物２）２．２１ｇを得た（収率８０．０％）。1H NMR (400 MHz, DMSO) 2.791(d,3H a-CH3),3.187(d,2H a-CH2),3.297(d,1H a-CH),3.365(d,1H a-CH),3.382(d,1H a-CH),3.516(d,2H a-CH2),3.683(d,4H a-OH),3.698(d,1H a-OH),3.713(d 9H 3’,4’,5’-OCH3),3.796(d 3H 4’’-OCH3),5.159(s 1H 2’’-OH),5.435(s 1H 3’’-OH),6.368(s 1H 2’-H),6.521(d 1H 6’-H),6.472(d 1H 5’’-H),7.477(s 1H 3-H);13C NMR (100 MHz, DMSO) δ34.286,51.217, 57.692 ,57.826 ,62.837 ,63.295,68.786,71.198,73.136,73.982,109.313 ,112.713 ,118.627 ,125.392 ,129.883 ,137.423 ,138.153 ,138.232 ,138.772 ,146.391 ,149.167 ,154.482,178.277計２３グループの炭素。
【0038】
実施例３ 本発明の化合物３の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、１．９９ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の３，５－ジメトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．２５ｇを得た（収率６０．１％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（３，５－ジメトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0039】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．８１ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（３，５－ジメトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、１０ｍｌの無水エタノール、０．５ｍｌの４０％水酸化ナトリウム溶液を加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、撹拌し、固体が析出した後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物３）１．６２ｇを得た（収率８４．４％）。1H NMR (400 MHz, DMSO) 3.727(d 9H 3’,4’,5’-OCH3),3.869(d 6H 3’’,5’’-OCH3), 6.174(d 1H 4’’-H),6.273(s 1H 2’-H),6.348(d 1H 6’-H),6.386(d 1H 5’’-H),6.723(d 2H 2’’,5’’-H)),7.329(s 1H 3-H);13C NMR (100 MHz, DMSO) δ55.823,57.314 ,62.729 ,108.476 ,113.626 ,117.196 ,126.181 ,128.347 ,136.973 ,137.826 ,137.951 ,137.865 ,147.127 ,148.331 ,154.672,171.323計１６グループの炭素。
【0040】
実施例４ 本発明の化合物４の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、１．８５ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の３－フルオロ－４－メトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液（１＋５）を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．１５ｇを得た（収率５９．３％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0041】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．７５ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、１０ｍｌの無水エタノール、０．４１ｇのピラジンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、撹拌し、固体が析出した後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物４）１．７６ｇを得た（収率８２．２％）。1H NMR (400 MHz, DMSO)δ3.612(d 9H 3’,4’,5’-OCH3),3.824(d 3H 4’’-OCH3),6.287(s 2H 2’,6’-H),6.413(s 1H 2’’-H),6.578(d 1H 6’’-H),6.612(d 1H 5’’-H), 9.583(s 2H C-H),9.689(s 2H C-H), 9.823(s 1H 3-H);13C NMR (100 MHz, DMSO) δ 56.276 ,57.327 ,63.196 ,108.893,113.746,117.845 ,125.637 ,130.762 ,138.524 ,138.267 ,139.241 ,139.482 ,142.158,146.783,148.298 ,152.930,174.128計１７グループの炭素。
【0042】
実施例５ 本発明の化合物５の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、２．２４ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の３－クロロ－５－ヒドロキシ－４－メトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．１３ｇを得た（収率５３．９％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（３－クロロ－５－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0043】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．７５ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（３－クロロ－５－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、０．４５ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のアラニン、１０ｍｌの無水エタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、撹拌し、固体が析出した後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物５）１．４２ｇを得た（収率６０．６％）。[M+H] +:443.16。1H-NMR(CDCl3,δ(ppm)):9.972(2H),9.712(2H),7.326(1H),6.887(1H),6.865(1H),6.853(1H),3.812(3H),3.924(9H),6.615(2H)。
【0044】
実施例６ 本発明の化合物６の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、１．８３ｇ（０．０１２ｍｏｌ）のイソバニリンを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液１２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１０ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．５６ｇを得た（収率７１．０％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0045】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．７４ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、０．３７ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のｎ－ブチルアミン、１０ｍｌの無水エタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、撹拌し、固体が析出した後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物６）１．６８ｇを得た（収率８０．１％）。1H NMR (400 MHz, DMSO)δ0.832(d,3H a-CH3),1.329(d 2H b-CH3),1.546(d 2H c-CH2),2.914(d 2H,d-CH3),3.593(d 9H 3’,4’,5’-OCH3),3.749(d 3H 4’’-OCH3),6.375(s 2H 2’-H),6.386(s 1H 2’’-H),6.462(d 1H 6’’-H),6.499(d 1H 5’’-H),7.346(s 1H 3-H);13C NMR (100 MHz, DMSO) δ 15.103 ,21.343 ,31.101 ,41.526 ,57.788 ,58.186 ,63.341 ,109.224 ,113.626 ,118.900 ,125.518 ,130.918 ,137.718 ,137.812 ,138.175 ,139.291 ,146.588 ,149.858 ,154.930,178.099計２０グループの炭素。
【0046】
実施例７ 本発明の化合物７の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、１．８３ｇ（０．０１２ｍｏｌ）のバニリンを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．７４ｇを得た（収率７６．０％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（４－ヒドロキシ－３－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0047】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．７４ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（４－ヒドロキシ－３－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、０．７４ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のリジンを加え、さらに１５ｍｌのエタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、水浴で加熱して６０℃まで昇温し、溶解して透明になったら、室温まで冷却し、固体を析出させた後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物７）１．７５ｇを得た（収率７１．４％）。[M+H] +:507.23。1H-NMR(CDCl3,δ(ppm)):1.187(2H),1.742(2H),2.116(2H),3.281(2H),3.373(1H),5.095(2H),7.386(1H),3.659(3H),5.287(1H),7.137(1H),7.349(1H),3.876(9H),6.517(2H)。
【0048】
実施例８ 本発明の化合物８の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、１．８３ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の５－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．４５ｇを得た（収率６４．７％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（５－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0049】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．７４ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（５－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、０．３７ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のｔ－ブチルアミン、１０ｍｌの無水エタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、撹拌し、固体が析出した後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物８）１．５２ｇを得た（収率６９．６％）。[M+H] +:452.20。1H-NMR(CDCl3,δ(ppm)):1.287(9H),3.635(3H),3.831(9H),6.228(2H),7.267(1H),7.338(1H),7.643(1H)。
【0050】
実施例９ 本発明の化合物９の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、１．８３ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の２－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液１２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１０ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．５６ｇを得た（収率６７．６％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（２－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0051】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．７４ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（２－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、０．３７ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のｎ－ブチルアミン、１０ｍｌの無水エタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、撹拌し、固体が析出した後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、１．７８ｇの類白色の結晶性固体（化合物９）を得た（収率８１．５％）。[M+H] +:452.20。1H-NMR(CDCl3,δ(ppm)):0.912(3H),1.276(2H),2.314(2H),3.251(2H),3.586(3H),3.773(9H),6.643(2H),7.084(1H),7.237(1H),7.539(1H)。
【0052】
実施例１０ 本発明の化合物１０の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、１．９９ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の４－フルオロ－３，５－ジメトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．４７ｇを得た（収率６２．９％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（３，５－ジメトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0053】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．８１ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（３，５－ジメトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、１０ｍｌの無水エタノール、０．７ｍｌの４０％水酸化カリウム溶液を加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、撹拌し、固体が析出した後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物１０）１．４５ｇを得た（収率６９．６％）。[M+H] +:432.08。1H-NMR(CDCl3,δ(ppm)):3.541(3H),3.682(3H),3.773(9H),6.327(2H),6.495(1H),6.676(1H),7.329(1H)。
【0054】
実施例１１ 本発明の化合物１１の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、２．０２ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の３，５－ジヒドロキシ－４－メトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．１４ｇを得た（収率５６．８％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（３，５－ジヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0055】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．８２ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（３，５－ジヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、０．３７ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のｎ－ブチルアミン、１０ｍｌの無水エタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、撹拌し、固体が析出した後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物１１）１．５６ｇを得た（収率７１．７％）。[M+H] +:450.21。1H-NMR(CDCl3,δ(ppm)):0.821(3H),1.327(2H),2.172(2H),3.319(2H),3.591(3H),3.836(9H),5.243(2H),6.385(2H),7.326(2H),7.613(1H)。
【0056】
実施例１２ 本発明の化合物１２の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、２．１９ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の３－ヒドロキシ－２，４－ジメトキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．３８ｇを得た（収率６１．０％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（３－ヒドロキシ－２，４－ジメトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0057】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．８９ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（３－ヒドロキシ－２，４－ジメトキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、０．７４ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のリジンを加え、さらに１５ｍｌのエタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、水浴で加熱して６０℃まで昇温し、溶解して透明になったら、室温まで冷却し、固体を析出させた後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物１２）１．８５ｇを得た（収率７５．５％）。[M+H] +:537.24。1H-NMR(CDCl3,δ(ppm)):1.183(2H),1.649(2H),2.173(2H),3.286(2H),3.513(1H),3.597(3H),3.876(9H),5.237(2H),5.459(1H),6.525(2H),7.193(1H),7.315(1H),7.613(1H)。
【0058】
実施例１３ 本発明の化合物１３の調製
調製方法：５０ｍｌの三つ口フラスコに２．２６ｇ（０．０１０ｍｏｌ）の３，４，５－トリメトキシフェニル酢酸、１．９９ｇ（０．０１２ｍｏｌ）の４－エトキシ－３－ヒドロキシベンズアルデヒドを加え、さらに３．２ｍｌの無水酢酸および１．６ｍｌのトリエチルアミンを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、還流冷却管を取り付け、窒素ガスを導入して保護し、油浴で加熱して１５０℃まで昇温し、５時間保温して反応させ、８０℃まで冷却し、還流冷却管を滴下漏斗に交換し、８ｍｌの塩酸溶液を滴下し、８０℃を維持して１時間反応させ、室温まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム溶液２ｍｌを滴下し、１時間反応を継続させ、次に１．８ｍｌの濃塩酸を滴下し、固体が析出した後に１時間撹拌し反応を継続させ、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体２．０２ｇを得た（収率５３．９％）。類白色の結晶性固体は、（Ｅ）－３－（４－エトキシ－３－ヒドロキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸である。
【0059】
１０ｍｌの三つ口フラスコに１．８１ｇ（４．８４ｍｍｏｌ）の（Ｅ）－３－（４－エトキシ－３－ヒドロキシフェニル）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アクリル酸、０．７４ｇ（５．０８ｍｍｏｌ）のリジンを加え、さらに１５ｍｌのエタノールを加え、振とうして均一にし、磁気撹拌子を入れ、水浴で加熱して６０℃まで昇温し、溶解して透明になったら、室温まで冷却し、固体を析出させた後、１時間撹拌を継続し、濾過し、濾過ケーキを氷冷した無水エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、類白色の結晶性固体（化合物１３）２．０５ｇを得た（収率８１．４％）。[M+H] +:521.25。1H-NMR(CDCl3,δ(ppm)):1.187(2H),1.341(3H),1.843(2H),2.117(2H),3.415(2H),3.523(1H),3.786(9H),4.217(2H),5.302(2H),5.476(1H),6.558(2H),7.181(1H),7.328(1H),7.613(1H)。
【0060】
実施例１４ 本発明の化合物を用いた０．９％塩化ナトリウム注射液の調製
０．９％塩化ナトリウム静脈内注射液を調製した。
０．９％塩化ナトリウム静脈内注射液を調製した。
【0061】
処方一：
【0062】
処方二：
【0063】
処方三：
【0064】
上記処方において、化合物の安定性を向上させるため、注射液を調製する際に、一般的な方法に従って、薬物でよく用いられる安定剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤をそれぞれ加えてもよい。安定剤は、例えば、シクロデキストリン包接化合物、界面活性剤（アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤）等であり、抗酸化剤は、例えば、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、システイン等であり、ｐＨ調整剤は、クエン酸、フマル酸、グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ガラクツロン酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、塩酸、酢酸等である。
【0065】
実施例１５ 本発明の化合物を用いた無菌粉末注射剤の調製
処方一：
処方一：
【0066】
処方二：
【0067】
処方三：
【0068】
実施例１６ 本発明の化合物を用いた５％ブドウ糖注射液の調製
５％ブドウ糖の静脈注射用注射液を調製した。
５％ブドウ糖の静脈注射用注射液を調製した。
【0069】
処方一：
【0070】
処方二：
【0071】
処方三：
【0072】
実施例１７ 本発明の化合物を用いた錠剤の調製
処方：
処方：
【0073】
錠剤を調製する際、充填剤として、例えばデンプン、デキストリン、粉砂糖、アルファ化デンプン、ラクトース、グルコース、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素カルシウム等を選択することができ、結合剤として、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン、デンプンスラリー、デキストリンスラリー、シロップ、ゼラチンスラリー、アルギン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ピーチガム、アラビアガム等を選択することができ、崩壊剤として、例えばクロスカルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスポビドン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クエン酸、酒石酸、酸無水物、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム等を選択することができる。
【0074】
実施例１８ 本発明の化合物を用いたカプセル剤の調製
処方：
処方：
【0075】
カプセルを調製する際、充填剤として、例えばデンプン、デキストリン、粉砂糖、アルファ化デンプン、ラクトース、グルコース、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素カルシウム等を選択することができ、結合剤として、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン、デンプンスラリー、デキストリンスラリー、シロップ、ゼラチンスラリー、アルギン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ピーチガム、アラビアガム等を選択することができる。
【0076】
以下の具体的な試験例により、本発明の有益な効果を実証する。
【0077】
試験例１．本発明の化合物による、マウスＬｅｗｉｓ非小細胞肺癌モデルにおける抗原ＣＤ８＋キラーＴリンパ球の集中に関する研究
ＬＬＣ（マウス肺癌細胞）は、マウスＬｅｗｉｓ肺癌細胞である。
ＬＬＣ細胞肺癌マウスのモデリング方法は以下のとおりである。
ＬＬＣ（マウス肺癌細胞）は、マウスＬｅｗｉｓ肺癌細胞である。
ＬＬＣ細胞肺癌マウスのモデリング方法は以下のとおりである。
【0078】
ＬＬＣ細胞を、１０％ウシ胎児血清および１００μ／ｍｌのペニシリン－ストレプトマイシン溶液を含む汎用培地で培養し、３７℃、５％ＣＯ２の細胞培養インキュベーター内で通常培養した。対数期まで成長したＬＬＣ細胞を、０．２５％トリプシン（ＥＤＴＡを含む）で消化して細胞懸濁液にし、１０００ｒｐｍ／ｍｉｎで３ｍｉｎ遠心分離し、上清を廃棄して細胞の沈殿を収集し、無血清且つペニシリン－ストレプトマイシン溶液を含まない培地で再懸濁し、細胞計数と同様の条件で再び遠心分離して体積を調整し、細胞濃度が１×１０７／μｌの細胞懸濁液となるよう調製した。各マウスの右脇腹に２００μｌの細胞懸濁液を注射して腫瘍細胞の接種を完了した。腫瘍を約１０日間増殖させた後、体積が１００ｍｍ３前後に達したところで、投与を開始した。
【0079】
薬物の調製：本発明の化合物１～１３を注射用水を用いて調製し、注射液とした。
【0080】
実験方法：腹腔内注射の方式で、モデル化に成功したＬＬＣ細胞肺癌マウスに、本発明の化合物を含む注射液を、４００ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射して治療を行い、投与を行わない陰性群（モデル化マウスに等体積の注射用水のみを腹腔内注射したもの）と、投与を行う実験群（モデル化マウスに本発明の化合物で調製した注射液を腹腔内注射したもの）とを設けた。腹腔内注射の方法は、毎日１回、決まった時間に投与し、投与前に体重を量り、投与容量を１０ｍｌ／ｋｇとし、連続１０日間投与を行って、治療を受けた１０日目にマウスを死なせて皮下腫瘍を剥離した。陰性群と投与群の腫瘍組織における抗原ＣＤ８＋キラーＴリンパ球の比率を、フローサイトメトリーによって測定した。
【0081】
腫瘍組織におけるＣＤ８＋腫瘍浸潤リンパ球をフローサイトメーターによって測定した。具体的なステップは以下のとおりである。
【0082】
マウスを死なせ、眼科用ハサミでマウスの腹部表皮を切開し、皮下腫瘍を十分に露出させ、鉗子と眼科用ハサミを用いてマウスの右側腹部の皮下腫瘍組織を徐々に剥離した。ＰＢＳで腫瘍組織を洗浄した後、眼科用ハサミで剥離した腫瘍組織を１ｍｍ前後に細かく切断し、切断した腫瘍組織を、１００μｇ／ｍｌのヒアルロニダーゼを含有する３ｍｌのＰＢＳ緩衝溶液に入れた。消化液が入った遠心管を水浴鍋に入れ、３７℃で２０ｍｉｎ水浴を行い、５ｍｉｎおきにピペットで吹きかけ振とうして、腫瘍組織を十分に消化させた。完全に消化しきれていない腫瘍組織を含む消化液を、７０μｍのステンレスセルストレーナーで濾過し、残留した未消化の腫瘍組織を２０ｍｌシリンジのプランジャーを用いて７０μｍのセルストレーナー上で粉砕し、粉砕しながら１ｍｌのＰＢＳで５回洗浄した。セルストレーナーを通過した細胞懸濁液を１５ｍｌの遠心管に移し、４０００ｒｐｍで３ｍｉｎ遠心分離した後、細胞の沈殿を収集するとともに、２ｍｌの赤血球溶解バッファーを加え、１０ｍｉｎ静置した後に、再度４０００ｒｐｍで３ｍｉｎ遠心分離した。ＰＢＳで洗浄した後、２～３ｍｌのＰＢＳを加えて細胞を再懸濁させた。
【0083】
適量の細胞をフロー分析のサンプルとし、細胞懸濁液について計数を行うとともに、細胞濃度を５×１０６／ｍｌに調整し、ピペットガンで細胞懸濁液を１００μｌ吸引してフローサイトメトリーチューブに加えた。各フローサイトメトリーチューブにそれぞれＦＦＩＴＣ ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ ＣＤ３、ＰＥ－Ｃｙ５ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ８、ＰＥ／Ｃｙａｎｉｎｅ７ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ４５を加え、そのうち前の二者を同時に１本のフローサイトメトリーチューブに加え、蛍光抗体を加えた後に、フローサイトメトリーチューブを改めて氷上に放置し、光を避けて２０ｍｉｎインキュベートした。さらにフローサイトメトリーチューブに２ｍｌの滅菌ＰＢＳを加え、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離し、上清を廃棄した。０．５ｍｌの滅菌ＰＢＳを加えて細胞を再懸濁させ、細胞の総量は１×１０６を選択し、フローサイトメーターで測定して、ＢＤ－ＦＡＣＳＤｉＶａで結果を分析した。
【0084】
ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋およびＣＤ８＋細胞における、ＣＤ８＋抗原を含有する細胞傷害性Ｔリンパ球の比率を比較した。
【0085】
腫瘍免疫組織化学の顕微画像を、ＩｍａｇｅＪのＩＨＣ Ｐｒｏｆｉｌｅｒプラグインによって処理し、染色された画像についてカラーデコンボリューションを行い、青色の陰性領域と茶色の陽性領域を分離させ、染色された領域の総面積に対する陽性領域のパーセンテージを得た。
【0086】
薬物の、腫瘍組織におけるＣＤ８＋キラーＴリンパ球の分布に対する影響および腫瘍細胞殺傷効果を、免疫組織化学によって測定した。具体的な操作手順は以下のとおりである。
【0087】
治療を受けて１０日後にマウスを死なせ、眼科用ハサミでマウスの腹部表皮を切開し、腫瘍を切除し、固定のためにホルマリンに入れた。固定が完了した後にパラフィン包埋を行い、連続した３μｍの切片を２枚切り出し、スライドガラスに乗せて乾燥させた（６０℃、１ｈ）。それぞれ一次抗体を加えた後に４℃で一晩放置し、二次抗体を滴下した。ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）を用いて発色させ、ヘマトキシリンで再染色し、脱水し、透明化した後に封入した。
【0088】
２０倍に拡大して得たスライドガラス全体の画像について、ＩｍａｇｅＪ内で切片の染色画像を処理し、青色の陰性領域と茶色の陽性領域を分け、切片の総面積に対する陽性部分のパーセンテージを算出した。
【0089】
研究結果を表２に示す。
表２ 本発明の化合物が、ＣＤ８＋の腫瘍組織内への集中に及ぼす影響および分布面積比率の結果
表２ 本発明の化合物が、ＣＤ８＋の腫瘍組織内への集中に及ぼす影響および分布面積比率の結果
【0090】
実験結果の説明：本発明の化合物は、抗原ＣＤ８＋キラーＴリンパ球を腫瘍組織に多く集め且つ腫瘍血管の内壁を標的破壊するという二重の効果を有する。抗原ＣＤ８＋キラーＴリンパ球の腫瘍組織における集中比率および分布面積を大幅に向上させることができ、抗原ＣＤ８＋キラーＴリンパ球によって腫瘍細胞を消滅させると同時に、腫瘍組織への血液供給を遮断し、固形腫瘍の内部を急速に壊死させることができた。
【0091】
試験例２．本発明の化合物が、非融合状態のヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の接着タンパク質に及ぼす影響
融合状態のＨＵＶＥＣｓ：対数増殖期にあるＨＵＶＥＣｓ細胞を取り、８×１０４個／ｍｌ、１００μｌ／ウェルとして、９６ウェル培養プレートに接種し（即ち８０００個／ウェル）、細胞を１０％ウシ胎児血清を含有する培養液で増殖させ、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で培養し、２４ｈ後に試験化合物を加えた。試験サンプルをＰＢＳ（－）で希釈した後に各ウェルに加え（１０μＬ／ウェル）、同一濃度で３ウェル設定した。インキュベーターに入れて２４時間培養した後、各ウェルそれぞれに１０μｌのＣＣＫ－８溶液を加え、気泡が発生しないように注意した。インキュベーター内で２．５時間前後培養を続けた後、吸光度の測定が可能となった。ＭＫ－２全自動マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの波長でＯＤ値とＩＣ５０値を測定した。
融合状態のＨＵＶＥＣｓ：対数増殖期にあるＨＵＶＥＣｓ細胞を取り、８×１０４個／ｍｌ、１００μｌ／ウェルとして、９６ウェル培養プレートに接種し（即ち８０００個／ウェル）、細胞を１０％ウシ胎児血清を含有する培養液で増殖させ、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で培養し、２４ｈ後に試験化合物を加えた。試験サンプルをＰＢＳ（－）で希釈した後に各ウェルに加え（１０μＬ／ウェル）、同一濃度で３ウェル設定した。インキュベーターに入れて２４時間培養した後、各ウェルそれぞれに１０μｌのＣＣＫ－８溶液を加え、気泡が発生しないように注意した。インキュベーター内で２．５時間前後培養を続けた後、吸光度の測定が可能となった。ＭＫ－２全自動マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの波長でＯＤ値とＩＣ５０値を測定した。
【0092】
非融合状態のＨＵＶＥＣｓ：対数増殖期にあるＨＵＶＥＣｓ細胞を取り、２×１０４個／ｍｌ、１００μｌ／ウェルとして、９６ウェル培養プレートに接種し（即ち２０００個／ウェル）、細胞を１０％ウシ胎児血清を含有する培養液で増殖させ、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で培養し、２４ｈ後に試験化合物を加えた。試験サンプルをＰＢＳ（－）で希釈した後に各ウェルに加え（１０μＬ／ウェル）、同一濃度で３ウェル設定した。インキュベーターに入れて２４時間培養した後、気泡が発生しないように各ウェルそれぞれに１０μｌのＣＣＫ－８溶液を加えた。インキュベーター内で２．５時間前後培養を続けた後、吸光度の測定が可能となった。ＭＫ－２全自動マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの波長でＯＤ値とＩＣ５０値を測定した。
【0093】
非融合状態のヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を用いて新生腫瘍血管を模倣し、融合状態のＨＵＶＥＣが正常血管を模倣するように実験モデルを調製した。１０μＭの同用量の化合物で２種類の異なる状態のヒト臍帯静脈内皮細胞を処理し、融合細胞の状態を模倣して、プロテオームのサンプルを調製し、ペプチド断片を調製した後、ＴＭＴで標識して、定量プロテオミクスによる研究を行った。ＴＭＴ標識の効率は９９．４％を超え、１％ＦＤＲの厳格なスコアで、合計４９３４個のタンパク質由来の２８３７２本のペプチド断片を同定し、そのうち定量可能なタンパク質は４９０９個であり、品質は信頼できるものであった。非融合状態および融合状態の薬物処理群をそれぞれの対照群と比較し、対照群を基準として、１．５倍を超える差異または０．６７倍未満の差異を有意差異タンパク質スコア基準とした。
【0094】
非融合細胞群と融合細胞群のサンプルそれぞれの総細胞タンパク質を抽出し、タンパク質サンプルから２μｇを取って質量測定を行い、定量プロテオミクスの実験を行い、グレースケール定量を用いてタンパク質濃度測定を完了した。具体的なフローチャートを図１に示す。
【0095】
得られたデータの分析：ＵｎｉＰｒｏｔからヒトタンパク質データベース（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｎａｍｅ： Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ，９６０６）をダウンロードした。ＭａｘＱｕａｎｔ（ｖ １．５．５．１）検索エンジンを用いてデータベースを検索した。ＴＭＴ定量プロテオミクスの実験により、合計４９３４個のタンパク質（４９０９個の定量タンパク質）と、２８３７２本のペプチド断片を同定でき、標識効率は９９％を上回り、全酵素切断比率は８６．３％であった。
【0096】
本発明の化合物の、非融合状態のヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）に対するプロテオミクスの試験結果を表３に示す。
表３ 本発明の化合物がタンパク質に及ぼす影響
表３ 本発明の化合物がタンパク質に及ぼす影響
【0097】
差異タンパク質に対してＧＯエンリッチメント解析を行ったところ、非融合群の差異発現タンパク質は主に細胞間接着の制御に関与していた。これは、上記化合物が非融合状態のヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の接着機能を狙って破壊し、内皮細胞を血管基底から脱離させ、それにより非融合血管の炎症反応を引き起こし、さらに血管を遮断することを示している。
【0098】
試験例３．ヌードマウスにおけるヒト肺癌Ａ５４９移植腫瘍に対する化合物の治療効果
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト肺癌Ａ５４９モデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量４００ｍｇ／ｋｇを経口により１４日間投与し、ヒト肺癌Ａ５４９に対する腫瘍抑制率を測定した。
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト肺癌Ａ５４９モデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量４００ｍｇ／ｋｇを経口により１４日間投与し、ヒト肺癌Ａ５４９に対する腫瘍抑制率を測定した。
【0099】
調製：投与前に、化合物を蒸留水で所望の濃度に調製した。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
【0100】
試験方法：
良好に増殖した肺癌Ａ５４９腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
良好に増殖した肺癌Ａ５４９腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
【0101】
接種の１４日後に腫瘍の塊の平均体積が約１００ｍｍ３であることを確認し、腫瘍の大きさによって動物を改めてグループ分けし、腫瘍が大きすぎる動物および小さすぎる動物を排除して、各グループの腫瘍の平均体積をほぼ一致させ、投与を開始した。投与群には、１４日間連続で経口により毎日１回投与し、１回あたりの投与体積を０．５ｍｌ／体重２０ｇとし、対照群には、同体積の生理食塩水を投与した。接種１４日目から毎週２回デジタル電子ノギスで腫瘍の長径ａ（ｍｍ）およびそれと直交する腫瘍の短径ｂ（ｍｍ）を測定した。腫瘍体積の計算式はＴＶ＝ａｂ２／２、相対腫瘍体積の計算式はＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖｏであり、Ｖｏはケージ分け時（即ちｄ１）において測定した腫瘍体積であり、Ｖｔは毎回の測定時の腫瘍体積である。
【0102】
以下の式に従って、結果を判定した。
【0103】
試験結果を表４に示す。
表４ 肺癌Ａ５４９腫瘍塊に対する化合物の腫瘍抑制効果
対照群との比較： ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。その他の化合物と化合物６との比較：＃Ｐ＜０．０５、＃＃Ｐ＜０．０１．
表４ 肺癌Ａ５４９腫瘍塊に対する化合物の腫瘍抑制効果
【0104】
上記試験結果の説明：本発明の一部の化合物は、肺癌に対して有意な抑制効果を有し、特に化合物６は肺癌を抑制する効果が最も優れており、肺癌を治療するための薬物の調製に用いることができる。
【0105】
試験例４．ヌードマウスにおけるヒト肝癌ＱＧＹ７７０３移植腫瘍に対する化合物の治療効果
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト肝癌ＱＧＹ７７０３モデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量１００ｍｇ／ｋｇを静脈注射により１４日間投与し、ヒト肝癌ＱＧＹ７７０３に対する腫瘍抑制率を測定した。
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト肝癌ＱＧＹ７７０３モデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量１００ｍｇ／ｋｇを静脈注射により１４日間投与し、ヒト肝癌ＱＧＹ７７０３に対する腫瘍抑制率を測定した。
【0106】
調製：投与前に、化合物を滅菌生理食塩水で所望の濃度に調製した。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
【0107】
試験方法：
良好に増殖したヒト肝癌ＱＧＹ７７０３腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
良好に増殖したヒト肝癌ＱＧＹ７７０３腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
【0108】
接種の１４日後に腫瘍の塊の平均体積が約１００ｍｍ３であることを確認し、腫瘍の大きさによって動物を改めてグループ分けし、腫瘍が大きすぎる動物および小さすぎる動物を排除して、各グループの腫瘍の平均体積をほぼ一致させ、投与を開始した。投与群には、１４日間連続で静脈注射により毎日１回投与し、１回あたりの投与体積を０．１ｍｌ／体重２０ｇとし、対照群には、同体積の滅菌生理食塩水を投与した。接種１４日目から毎週２回デジタル電子ノギスで腫瘍の長径ａ（ｍｍ）およびそれと直交する腫瘍の短径ｂ（ｍｍ）を測定した。腫瘍体積の計算式はＴＶ＝ａｂ２／２、相対腫瘍体積の計算式はＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖｏであり、Ｖｏはケージ分け時（即ちｄ１）において測定した腫瘍体積であり、Ｖｔは毎回の測定時の腫瘍体積である。
【0109】
以下の式に従って、結果を判定した。
【0110】
試験結果を表５に示す。
表５ 化合物の肝癌ＱＧＹ７７０３腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
対照群との比較： ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。その他の化合物と化合物６との比較：＃Ｐ＜０．０５、＃＃Ｐ＜０．０１．
表５ 化合物の肝癌ＱＧＹ７７０３腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
【0111】
上記試験結果の説明：本発明の一部の化合物は、肝癌に対して有意な抑制効果を有し、特に化合物６は肝癌を抑制する効果が最も優れており、肝癌を治療するための薬物の調製に用いることができる。
【0112】
試験例５．ヌードマウスにおけるヒト胃癌ＭＧＣ８０３移植腫瘍に対する化合物の治療効果
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト胃癌ＭＧＣ８０３モデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射により１４日間投与し、ヒト胃癌ＭＧＣ８０３に対する腫瘍抑制率を測定した。
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト胃癌ＭＧＣ８０３モデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射により１４日間投与し、ヒト胃癌ＭＧＣ８０３に対する腫瘍抑制率を測定した。
【0113】
調製：投与前に、化合物を滅菌生理食塩水で所望の濃度に調製した。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
【0114】
試験方法：
良好に増殖したヒト胃癌ＭＧＣ８０３腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
良好に増殖したヒト胃癌ＭＧＣ８０３腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
【0115】
接種の１４日後に腫瘍の塊の平均体積が約１００ｍｍ３であることを確認し、腫瘍の大きさによって動物を改めてグループ分けし、腫瘍が大きすぎる動物および小さすぎる動物を排除して、各グループの腫瘍の平均体積をほぼ一致させ、投与を開始した。投与は、１４日間連続で腹腔内注射により毎日１回行い、１回あたりの投与体積を０．２ｍｌ／体重２０ｇとした。接種１４日目から毎週２回デジタル電子ノギスで腫瘍の長径ａ（ｍｍ）およびそれと直交する腫瘍の短径ｂ（ｍｍ）を測定した。腫瘍体積の計算式はＴＶ＝ａｂ２／２、相対腫瘍体積の計算式はＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖｏであり、Ｖｏはケージ分け時（即ちｄ１）において測定した腫瘍体積であり、Ｖｔは毎回の測定時の腫瘍体積である。
【0116】
以下の式に従って、結果を判定した。
【0117】
試験結果を表６に示す。
表６ 化合物の胃癌ＭＧＣ８０３腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
対照群との比較： ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。その他の化合物と化合物６との比較：＃Ｐ＜０．０５、＃＃Ｐ＜０．０１．
表６ 化合物の胃癌ＭＧＣ８０３腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
【0118】
上記試験結果の説明：本発明の一部の化合物は、胃癌に対して有意な抑制効果を有し、特に化合物６は胃癌を抑制する効果が最も優れており、胃癌を治療するための薬物の調製に用いることができる。
【0119】
試験例６．ヌードマウスにおけるヒト卵巣癌Ａ２７８０移植腫瘍に対する化合物の治療効果
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト卵巣癌Ａ２７８０モデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射により１４日間投与し、ヒト卵巣癌Ａ２７８０に対する腫瘍抑制率を測定した。
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト卵巣癌Ａ２７８０モデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射により１４日間投与し、ヒト卵巣癌Ａ２７８０に対する腫瘍抑制率を測定した。
【0120】
調製：投与前に、化合物を滅菌生理食塩水で所望の濃度に調製した。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
【0121】
試験方法：
良好に増殖した卵巣癌Ａ２７８０腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
良好に増殖した卵巣癌Ａ２７８０腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
【0122】
接種の１４日後に腫瘍の塊の平均体積が約１００ｍｍ３であることを確認し、腫瘍の大きさによって動物を改めてグループ分けし、腫瘍が大きすぎる動物および小さすぎる動物を排除して、各グループの腫瘍の平均体積をほぼ一致させ、投与を開始した。投与群には、１４日間連続で腹腔内注射により毎日１回投与し、１回あたりの投与体積を０．２ｍｌ／体重２０ｇとし、対照群には、同体積の滅菌生理食塩水を投与した。接種１４日目から毎週２回デジタル電子ノギスで腫瘍の長径ａ（ｍｍ）およびそれと直交する腫瘍の短径ｂ（ｍｍ）を測定した。腫瘍体積の計算式はＴＶ＝ａｂ２／２、相対腫瘍体積の計算式はＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖｏであり、Ｖｏはケージ分け時（即ちｄ１）において測定した腫瘍体積であり、Ｖｔは毎回の測定時の腫瘍体積である。
【0123】
以下の式に従って、結果を判定した。
【0124】
試験結果を表７に示す。
表７ 化合物の卵巣癌Ａ２７８０腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
対照群との比較： ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。その他の化合物と化合物６との比較：＃Ｐ＜０．０５、＃＃Ｐ＜０．０１．
表７ 化合物の卵巣癌Ａ２７８０腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
【0125】
上記試験結果の説明：本発明の一部の化合物は、卵巣癌に対して有意な抑制効果を有し、特に化合物６は卵巣癌を抑制する効果が最も優れており、卵巣癌を治療するための薬物の調製に用いることができる。
【0126】
試験例７．ヌードマウスにおけるヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰ移植腫瘍に対する化合物の治療効果
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰモデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射により１４日間投与し、ヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰに対する腫瘍抑制率を測定した。
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰモデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射により１４日間投与し、ヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰに対する腫瘍抑制率を測定した。
【0127】
調製：投与前に、化合物を滅菌生理食塩水で所望の濃度に調製した。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の動物数：＞１２匹。
【0128】
試験方法：
良好に増殖したヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰ腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
良好に増殖したヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰ腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
【0129】
接種の１４日後に腫瘍の塊の平均体積が約１００ｍｍ３であることを確認し、腫瘍の大きさによって動物を改めてグループ分けし、腫瘍が大きすぎる動物および小さすぎる動物を排除して、各グループの腫瘍の平均体積をほぼ一致させ、投与を開始した。投与群には、１４日間連続で腹腔内注射により毎日１回投与し、１回あたりの投与体積を０．２ｍｌ／体重２０ｇとし、対照群には、同体積の滅菌生理食塩水を投与した。接種１４日目から毎週２回デジタル電子ノギスで腫瘍の長径ａ（ｍｍ）およびそれと直交する腫瘍の短径ｂ（ｍｍ）を測定した。腫瘍体積の計算式はＴＶ＝ａｂ２／２、相対腫瘍体積の計算式はＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖｏであり、Ｖｏはケージ分け時（即ちｄ１）において測定した腫瘍体積であり、Ｖｔは毎回の測定時の腫瘍体積である。
【0130】
以下の式に従って、結果を判定した。
【0131】
試験結果を以下の表８に示す。
表８ 化合物の前立腺細胞ＬＮＣａＰ腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
対照群との比較： ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。その他の化合物と化合物４との比較：＃Ｐ＜０．０５、＃＃Ｐ＜０．０１．
表８ 化合物の前立腺細胞ＬＮＣａＰ腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
【0132】
上記試験結果の説明：本発明の一部の化合物は、前立腺癌に対して有意な抑制効果を有し、特に化合物４は前立腺癌を抑制する効果が最も優れており、前立腺癌を治療するための薬物の調製に用いることができる。
【0133】
試験例８．ヌードマウスにおけるヒト腎細胞癌ＡＧＨＮ移植腫瘍に対する化合物の治療効果
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト腎細胞癌ＡＧＨＮモデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射により１４日間投与し、ヒト腎細胞癌ＡＧＨＮに対する腫瘍抑制率を測定した。
本試験は、ヌードマウスに移植されたヒト腎細胞癌ＡＧＨＮモデルを用いて試験サンプルの抗腫瘍効果を研究したものであり、用量２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射により１４日間投与し、ヒト腎細胞癌ＡＧＨＮに対する腫瘍抑制率を測定した。
【0134】
調製：投与前に、化合物を滅菌生理食塩水で所望の濃度に調製した。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群の動物数：＞１２匹。
動物の系統：ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス（ＳＰＦグレード）、体重：１９～２１ｇ、性別： 雄。
投与群の各グループの動物数：８匹、対照群の動物数：＞１２匹。
【0135】
試験方法：
良好に増殖したヒト腎細胞癌ＡＧＨＮ腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
良好に増殖したヒト腎細胞癌ＡＧＨＮ腫瘍の塊を取り、無菌条件下で３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各マウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種して、以下の９グループを設定し、投与群は各グループ８匹、対照群は１２匹より多い数とした。
【0136】
接種の１４日後に腫瘍の塊の平均体積が約１００ｍｍ３であることを確認し、腫瘍の大きさによって動物を改めてグループ分けし、腫瘍が大きすぎる動物および小さすぎる動物を排除して、各グループの腫瘍の平均体積をほぼ一致させ、投与を開始した。投与群には、１４日間連続で腹腔内注射により毎日１回投与し、１回あたりの投与体積を０．２ｍｌ／体重２０ｇとし、対照群には、同体積の滅菌生理食塩水を投与した。接種１４日目から毎週２回デジタル電子ノギスで腫瘍の長径ａ（ｍｍ）およびそれと直交する腫瘍の短径ｂ（ｍｍ）を測定した。腫瘍体積の計算式はＴＶ＝ａｂ２／２、相対腫瘍体積の計算式はＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖｏであり、Ｖｏはケージ分け時（即ちｄ１）において測定した腫瘍体積であり、Ｖｔは毎回の測定時の腫瘍体積である。
【0137】
以下の式に従って、結果を判定した。
【0138】
試験結果を表９に示す。
表９ 化合物の腎細胞癌ＡＧＨＮ腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
対照群との比較： ＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。その他の化合物と化合物４との比較：＃Ｐ＜０．０５、＃＃Ｐ＜０．０１．
表９ 化合物の腎細胞癌ＡＧＨＮ腫瘍塊に対する腫瘍抑制効果
【0139】
上記試験結果の説明：本発明の一部の化合物は、腎細胞癌に対して有意な抑制効果を有し、特に化合物４は腎細胞癌を抑制する効果が最も優れており、腎細胞癌を治療するための薬物の調製に用いることができる。
【0140】
試験例９．化合物６によるインビボの腫瘍の壊死
１．試験方法：
良好に増殖した固形腫瘍（ヒト肺癌９５Ｄおよびヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４）を取り、無菌条件下で２～３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各ヌードマウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種した。接種の１４日後に、投与量４００ｍｇ／ｋｇ、投与体積０．５ｍｌ／体重２０ｇで経口投与し（化合物６）、薬物は滅菌生理食塩水を用いて調製した。投与後の異なる時点（４ｈ、２４ｈ）で、ヌードマウスマウスを死なせ、解剖して腫瘍組織を取り出し、１０％ホルマリンで固定し、病理切片を作製し、ＨＥ染色し、写真を撮り、腫瘍内部の壊死状況と、細胞の増殖状況を観察した。
１．試験方法：
良好に増殖した固形腫瘍（ヒト肺癌９５Ｄおよびヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４）を取り、無菌条件下で２～３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各ヌードマウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種した。接種の１４日後に、投与量４００ｍｇ／ｋｇ、投与体積０．５ｍｌ／体重２０ｇで経口投与し（化合物６）、薬物は滅菌生理食塩水を用いて調製した。投与後の異なる時点（４ｈ、２４ｈ）で、ヌードマウスマウスを死なせ、解剖して腫瘍組織を取り出し、１０％ホルマリンで固定し、病理切片を作製し、ＨＥ染色し、写真を撮り、腫瘍内部の壊死状況と、細胞の増殖状況を観察した。
【0141】
２．試験結果：
ＨＥ染色を図２および図３に示す。４００ｍｇ／ｋｇの化合物６を経口投与した４時間後に、腫瘍組織の内部の壊死が現れ始め、２４時間で腫瘍内部の広範囲な壊死（明るい色の領域）を引き起こした。これは、本発明の化合物６が効果的に腫瘍の壊死を引き起こし、抗腫瘍の目的を達成できることを示している。
ＨＥ染色を図２および図３に示す。４００ｍｇ／ｋｇの化合物６を経口投与した４時間後に、腫瘍組織の内部の壊死が現れ始め、２４時間で腫瘍内部の広範囲な壊死（明るい色の領域）を引き起こした。これは、本発明の化合物６が効果的に腫瘍の壊死を引き起こし、抗腫瘍の目的を達成できることを示している。
【0142】
試験例１０．化合物６によるインビボの腫瘍内部血管の壊死
１．試験方法：
良好に増殖した固形腫瘍（ヒト肺癌９５Ｄおよびヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４）を取り、無菌条件下で２～３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各ヌードマウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種した。接種の１４日後に、投与量４００ｍｇ／ｋｇ、投与体積０．５ｍｌ／体重２０ｇで経口投与し（化合物６）、薬物は滅菌生理食塩水を用いて調製した。投与後の異なる時点（４ｈ、２４ｈ）で、ヌードマウスマウスを死なせ、解剖して腫瘍組織を取り出し、１０％ホルマリンで固定し、病理切片を作製し、ＰＣＮＡ免疫組織化学染色を行い、写真を撮り、腫瘍内部の腫瘍血管の壊死状況を観察した。
１．試験方法：
良好に増殖した固形腫瘍（ヒト肺癌９５Ｄおよびヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４）を取り、無菌条件下で２～３ｍｍ大の均一な塊を切り出し、トロカールで各ヌードマウスの右腋窩の皮下に１つずつ接種した。接種の１４日後に、投与量４００ｍｇ／ｋｇ、投与体積０．５ｍｌ／体重２０ｇで経口投与し（化合物６）、薬物は滅菌生理食塩水を用いて調製した。投与後の異なる時点（４ｈ、２４ｈ）で、ヌードマウスマウスを死なせ、解剖して腫瘍組織を取り出し、１０％ホルマリンで固定し、病理切片を作製し、ＰＣＮＡ免疫組織化学染色を行い、写真を撮り、腫瘍内部の腫瘍血管の壊死状況を観察した。
【0143】
２．試験結果：
ＰＣＮＡ免疫組織化学（図４および図５）は、４００ｍｇ／ｋｇの化合物６を経口投与した４時間後、腫瘍組織内における血管内皮細胞の増殖は一部のみであり、投与の２４ｈ後に、腫瘍内の広範囲の血流遮断および腫瘍組織を壊死させることができた、ということを示している。腫瘍組織においてＰＣＮＡの発現が低下したことは、インビボでの腫瘍血管破壊効果が良好であったことを表している。
ＰＣＮＡ免疫組織化学（図４および図５）は、４００ｍｇ／ｋｇの化合物６を経口投与した４時間後、腫瘍組織内における血管内皮細胞の増殖は一部のみであり、投与の２４ｈ後に、腫瘍内の広範囲の血流遮断および腫瘍組織を壊死させることができた、ということを示している。腫瘍組織においてＰＣＮＡの発現が低下したことは、インビボでの腫瘍血管破壊効果が良好であったことを表している。
【0144】
試験例１１．ヌードマウスにおけるヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物３とレンバチニブの併用による抑制効果
試験方法：ヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４のヌードマウス移植腫瘍は、ヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４細胞株をヌードマウスの腋窩皮下に接種して作成した。細胞接種量は１×１０６であり、接種して移植腫瘍を形成した後に、さらにヌードマウスの体内で３世代継代した後に使用した。増殖がピーク期にある腫瘍組織を約１．５ｍｍ３切り出し、無菌条件下でホモジナイズした後に、１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、０．１ｍｌをヌードマウスの右側腋窩皮下に接種した。ヌードマウスに移植した腫瘍の直径をノギスで測定し、腫瘍が１００ｍｍ３に成長したところで、マウスを無作為に群分けし、各群６匹とした。腫瘍径を測定する方法を用いて、試験物の抗腫瘍効果を動的に観察した。化合物３は、４００ｍｇ／ｋｇで、経口により、毎日１回、３週間投与し、レンバチニブは、１０ｍｇ／ｋｇで、経口により、毎日１回、２週間投与した。腫瘍径の測定回数は、３日に１回測定とした。陰性対照群には、同量の生理食塩水溶液を経口投与した。併用投与の効果は、金氏の公式に基づいてＱ値を計算した。
試験方法：ヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４のヌードマウス移植腫瘍は、ヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４細胞株をヌードマウスの腋窩皮下に接種して作成した。細胞接種量は１×１０６であり、接種して移植腫瘍を形成した後に、さらにヌードマウスの体内で３世代継代した後に使用した。増殖がピーク期にある腫瘍組織を約１．５ｍｍ３切り出し、無菌条件下でホモジナイズした後に、１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、０．１ｍｌをヌードマウスの右側腋窩皮下に接種した。ヌードマウスに移植した腫瘍の直径をノギスで測定し、腫瘍が１００ｍｍ３に成長したところで、マウスを無作為に群分けし、各群６匹とした。腫瘍径を測定する方法を用いて、試験物の抗腫瘍効果を動的に観察した。化合物３は、４００ｍｇ／ｋｇで、経口により、毎日１回、３週間投与し、レンバチニブは、１０ｍｇ／ｋｇで、経口により、毎日１回、２週間投与した。腫瘍径の測定回数は、３日に１回測定とした。陰性対照群には、同量の生理食塩水溶液を経口投与した。併用投与の効果は、金氏の公式に基づいてＱ値を計算した。
【0145】
Ｑ ＝ Ｅａ＋ｂ ／ （Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
【0146】
試験結果を表１０に示す。
表１０ ヌードマウスにおけるヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物３とレンバチニブの併用による抑制効果
ブランク対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５
表１０ ヌードマウスにおけるヒト肝癌Ｂｅｌ７４０４異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物３とレンバチニブの併用による抑制効果
【0147】
試験の結論：
化合物３をレンバチニブと組み合わせたＱ値は０．９７０であり、有意な抗腫瘍の相加効果があったが、相乗的な抗腫瘍効果はなかった。動物の体重に有意な低下はなく、レンバチニブを併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
化合物３をレンバチニブと組み合わせたＱ値は０．９７０であり、有意な抗腫瘍の相加効果があったが、相乗的な抗腫瘍効果はなかった。動物の体重に有意な低下はなく、レンバチニブを併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
【0148】
試験例１２．ヌードマウスにおけるヒト胃癌ＳＧＣ７９０１異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物６とパクリタキセルの併用による抑制効果
試験方法：ヒト胃癌ＳＧＣ７９０１のヌードマウス移植腫瘍は、ヒト胃癌ＳＧＣ７９０１細胞株をヌードマウスの腋窩皮下に接種して作成した。細胞接種量は１×１０６であり、接種して移植腫瘍を形成した後に、さらにヌードマウスの体内で３世代継代した後に使用した。増殖がピーク期にある腫瘍組織を約１．５ｍｍ３切り出し、無菌条件下でホモジナイズした後に、１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、０．１ｍｌをヌードマウスの右側腋窩皮下に接種した。ヌードマウスに移植した腫瘍の直径をノギスで測定し、腫瘍が１００ｍｍ３に成長したところで、マウスを無作為に群分けし、各群６匹とした。腫瘍径を測定する方法を用いて、試験物の抗腫瘍効果を動的に観察した。化合物６は、２００ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与し、パクリタキセルは、１０ｍｇ／ｋｇで、静脈注射により、１日おきに１回、３週間投与した。腫瘍径の測定回数は、３日に１回測定とした。投与体積は０．１ｍｌ／２０ｇとした。陰性対照群には、同量の生理食塩水溶液を静脈注射により投与した。併用投与の効果は、金氏の公式に基づいてＱ値を計算した。
試験方法：ヒト胃癌ＳＧＣ７９０１のヌードマウス移植腫瘍は、ヒト胃癌ＳＧＣ７９０１細胞株をヌードマウスの腋窩皮下に接種して作成した。細胞接種量は１×１０６であり、接種して移植腫瘍を形成した後に、さらにヌードマウスの体内で３世代継代した後に使用した。増殖がピーク期にある腫瘍組織を約１．５ｍｍ３切り出し、無菌条件下でホモジナイズした後に、１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、０．１ｍｌをヌードマウスの右側腋窩皮下に接種した。ヌードマウスに移植した腫瘍の直径をノギスで測定し、腫瘍が１００ｍｍ３に成長したところで、マウスを無作為に群分けし、各群６匹とした。腫瘍径を測定する方法を用いて、試験物の抗腫瘍効果を動的に観察した。化合物６は、２００ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与し、パクリタキセルは、１０ｍｇ／ｋｇで、静脈注射により、１日おきに１回、３週間投与した。腫瘍径の測定回数は、３日に１回測定とした。投与体積は０．１ｍｌ／２０ｇとした。陰性対照群には、同量の生理食塩水溶液を静脈注射により投与した。併用投与の効果は、金氏の公式に基づいてＱ値を計算した。
【0149】
Ｑ ＝ Ｅａ＋ｂ ／ （Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
【0150】
試験結果を表１１に示す。
表１１ ヌードマウスにおけるヒト胃癌ＳＧＣ７９０１異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物６とパクリタキセルの併用による抑制効果
ブランク対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５
表１１ ヌードマウスにおけるヒト胃癌ＳＧＣ７９０１異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物６とパクリタキセルの併用による抑制効果
【0151】
試験の結論：
化合物６をパクリタキセルと組み合わせたＱ値は０．９２７であり、有意な抗腫瘍の相加効果があったが、相乗的な抗腫瘍効果はなかった。動物の体重に有意な低下はなく、パクリタキセルを併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
化合物６をパクリタキセルと組み合わせたＱ値は０．９２７であり、有意な抗腫瘍の相加効果があったが、相乗的な抗腫瘍効果はなかった。動物の体重に有意な低下はなく、パクリタキセルを併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
【0152】
試験例１３．ヌードマウスにおけるヒト肺癌Ａ５４９異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物８とカルボプラチンの併用による抑制効果
試験方法：ヒト肺癌Ａ５４９のヌードマウス移植腫瘍は、ヒト肺癌Ａ５４９細胞株をヌードマウスの腋窩皮下に接種して作成した。細胞接種量は１×１０６であり、接種して移植腫瘍を形成した後に、さらにヌードマウスの体内で３世代継代した後に使用した。増殖がピーク期にある腫瘍組織を約１．５ｍｍ３切り出し、無菌条件下でホモジナイズした後に、１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、０．１ｍｌをヌードマウスの右側腋窩皮下に接種した。ヌードマウスに移植した腫瘍の直径をノギスで測定し、腫瘍が１００ｍｍ３に成長したところで、マウスを無作為に群分けし、各群６匹とした。腫瘍径を測定する方法を用いて、試験物の抗腫瘍効果を動的に観察した。化合物８は、２００ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与し、カルボプラチンは、１０ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与した。腫瘍径の測定回数は、３日に１回測定とした。投与体積は０．１ｍｌ／２０ｇとした。陰性対照群には、同量の生理食塩水溶液を静脈注射により投与した。併用投与の効果は、金氏の公式に基づいてＱ値を計算した。
試験方法：ヒト肺癌Ａ５４９のヌードマウス移植腫瘍は、ヒト肺癌Ａ５４９細胞株をヌードマウスの腋窩皮下に接種して作成した。細胞接種量は１×１０６であり、接種して移植腫瘍を形成した後に、さらにヌードマウスの体内で３世代継代した後に使用した。増殖がピーク期にある腫瘍組織を約１．５ｍｍ３切り出し、無菌条件下でホモジナイズした後に、１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、０．１ｍｌをヌードマウスの右側腋窩皮下に接種した。ヌードマウスに移植した腫瘍の直径をノギスで測定し、腫瘍が１００ｍｍ３に成長したところで、マウスを無作為に群分けし、各群６匹とした。腫瘍径を測定する方法を用いて、試験物の抗腫瘍効果を動的に観察した。化合物８は、２００ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与し、カルボプラチンは、１０ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与した。腫瘍径の測定回数は、３日に１回測定とした。投与体積は０．１ｍｌ／２０ｇとした。陰性対照群には、同量の生理食塩水溶液を静脈注射により投与した。併用投与の効果は、金氏の公式に基づいてＱ値を計算した。
【0153】
Ｑ ＝ Ｅａ＋ｂ ／ （Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
【0154】
試験結果を表１２に示す。
表１２ ヌードマウスにおけるヒト肺癌Ａ５４９異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物８とカルボプラチンの併用による抑制効果
ブランク対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５
表１２ ヌードマウスにおけるヒト肺癌Ａ５４９異種移植腫瘍の増殖に対する、化合物８とカルボプラチンの併用による抑制効果
【0155】
試験の結論：
化合物８をカルボプラチンと組み合わせたＱ値は０．９４１であり、有意な抗腫瘍の相加効果があったが、相乗的な抗腫瘍効果はなかった。動物の体重に有意な低下はなく、カルボプラチンを併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
化合物８をカルボプラチンと組み合わせたＱ値は０．９４１であり、有意な抗腫瘍の相加効果があったが、相乗的な抗腫瘍効果はなかった。動物の体重に有意な低下はなく、カルボプラチンを併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
【0156】
試験例１４．マウスにおけるＬｅｗｉｓ非小細胞肺癌モデルに対する、化合物１１とＰＤ－Ｌ１の併用による腫瘍抑制効果
試験方法：Ｃ５７ＢＬ／６マウスの移植腫瘍は、Ｌｅｗｉｓ非小細胞肺癌株をＣ５７ＢＬ／６マウスの腋窩皮下に接種して作成した。細胞接種量は１×１０６であり、接種して移植腫瘍を形成した後に、さらにＣ５７ＢＬ／６マウスの体内で３世代継代した後に使用した。増殖がピーク期にある腫瘍組織を約１．５ｍｍ３切り出し、無菌条件下でホモジナイズした後に、１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、０．１ｍｌをＣ５７ＢＬ／６マウスの右側腋窩皮下に接種した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに移植した腫瘍の直径をノギスで測定し、腫瘍が１００ｍｍ３に成長したところで、マウスを無作為に群分けし、各群６匹とした。腫瘍径を測定する方法を用いて、試験物の抗腫瘍効果を動的に観察した。化合物１１は、２００ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与し、ＰＤ－Ｌ１は、１０ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与した。腫瘍径の測定回数は、３日に１回測定とした。投与体積は０．１ｍｌ／２０ｇとした。陰性対照群には、同量の生理食塩水溶液を静脈注射により投与した。
試験方法：Ｃ５７ＢＬ／６マウスの移植腫瘍は、Ｌｅｗｉｓ非小細胞肺癌株をＣ５７ＢＬ／６マウスの腋窩皮下に接種して作成した。細胞接種量は１×１０６であり、接種して移植腫瘍を形成した後に、さらにＣ５７ＢＬ／６マウスの体内で３世代継代した後に使用した。増殖がピーク期にある腫瘍組織を約１．５ｍｍ３切り出し、無菌条件下でホモジナイズした後に、１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、０．１ｍｌをＣ５７ＢＬ／６マウスの右側腋窩皮下に接種した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに移植した腫瘍の直径をノギスで測定し、腫瘍が１００ｍｍ３に成長したところで、マウスを無作為に群分けし、各群６匹とした。腫瘍径を測定する方法を用いて、試験物の抗腫瘍効果を動的に観察した。化合物１１は、２００ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与し、ＰＤ－Ｌ１は、１０ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射により、１日おきに１回、３週間投与した。腫瘍径の測定回数は、３日に１回測定とした。投与体積は０．１ｍｌ／２０ｇとした。陰性対照群には、同量の生理食塩水溶液を静脈注射により投与した。
【0157】
併用投与の効果は、金氏の公式に基づいてＱ値を計算した。
【0158】
Ｑ ＝ Ｅａ＋ｂ ／ （Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
【0159】
試験結果を表１３に示す。
表１３ マウスにおけるＬｅｗｉｓ非小細胞肺癌モデルに対する、化合物１１とＰＤ－Ｌ１の併用による腫瘍抑制効果
ブランク対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５
表１３ マウスにおけるＬｅｗｉｓ非小細胞肺癌モデルに対する、化合物１１とＰＤ－Ｌ１の併用による腫瘍抑制効果
【0160】
試験の結論：
化合物１１をＰＤ－Ｌ１と組合わせたＱ値は１．１６であり、これは、化合物１１とＰＤ－Ｌ１を併用した場合に有意な相乗的抗肺癌効果があることを示している。動物の体重に有意な低下はなく、薬物を併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
化合物１１をＰＤ－Ｌ１と組合わせたＱ値は１．１６であり、これは、化合物１１とＰＤ－Ｌ１を併用した場合に有意な相乗的抗肺癌効果があることを示している。動物の体重に有意な低下はなく、薬物を併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
【0161】
試験例１５．ＮＯＧマウスにおけるヒト肝癌ＱＧＹ７７０３モデル内での、化合物６とＴ細胞の併用による腫瘍抑制効果
試験方法：ＱＧＹ７７０３腫瘍細胞をＰＢＳで２回洗浄し、次にＰＢＳ：Ｍａｔｒｉｇｅｌ（体積比１：１で混合）で再懸濁させ、細胞濃度を２．５×１０６個／ｍｌに調整し、実験動物の右側腋窩の皮下に、マウス１匹あたり２００μｌ、すなわちマウス１匹あたり５×１０５個の細胞を接種した。腫瘍が５０ｍｍ３前後に成長したところで、群分けし、投与を行った。
試験方法：ＱＧＹ７７０３腫瘍細胞をＰＢＳで２回洗浄し、次にＰＢＳ：Ｍａｔｒｉｇｅｌ（体積比１：１で混合）で再懸濁させ、細胞濃度を２．５×１０６個／ｍｌに調整し、実験動物の右側腋窩の皮下に、マウス１匹あたり２００μｌ、すなわちマウス１匹あたり５×１０５個の細胞を接種した。腫瘍が５０ｍｍ３前後に成長したところで、群分けし、投与を行った。
【0162】
Ｔ細胞の培養および収穫：ドナーのＰＢＭＣを、Ｔ細胞培養の標準操作規程に従ってインビトロで活性化させ増殖させた。対数増殖期の細胞を収穫し、中用量（２×１０７個／ｍｌ）の要件に応じて溶媒に懸濁して使用に備えた。
【0163】
腫瘍が適切な大きさに成長したところで、Ｔ細胞の注射および化合物６の投与を行い、この時間をＤ０として記録した。化合物６の投与方式は腹腔内注射であり、用量は２００ｍｇ／ｋｇとした。Ｄ０日に投与を開始し、毎日、１４日間投与を続けた。Ｔ細胞の投与方式は皮下投与とし、投与部位と腫瘍細胞接種部位とは同じであり、Ｄ０において３回に分けて注射して投与した。注射スケジュールを以下の表１４に示す。Ｔ細胞の各回の投与は、化合物６の投与の約４時間後に行った。
【0164】
３日毎にマウスの一般症状、マウスの体重、腫瘍体積および腫瘍重量を記録した。腫瘍の状態に基づいて、追加のＥＡＬ注射を行うかどうかを決定した。
表１４ 投与計画
表１４ 投与計画
【0165】
併用投与の効果は、金氏の公式に基づいてＱ値を計算した。
Ｑ ＝ Ｅａ＋ｂ ／ （Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
Ｑ ＝ Ｅａ＋ｂ ／ （Ｅａ＋Ｅｂ－Ｅａ×Ｅｂ）
Ｅａ＋ｂは、併用投与の腫瘍抑制率であり、ＥａとＥｂはそれぞれ薬剤Ａと薬剤Ｂの腫瘍抑制率である。Ｑ値が０．８５～１．１５の場合は相加的（＋）とし、＞１．１５の場合は増強的（＋＋）とした。
【0166】
試験結果を表１５に示す。
表１５ ＮＯＧマウスにおけるヒト肝癌ＱＧＹ７７０３モデル内での、化合物６とＴ細胞の併用による腫瘍抑制効果
ブランク対照群と比較して、＊Ｐ＜０．０５
表１５ ＮＯＧマウスにおけるヒト肝癌ＱＧＹ７７０３モデル内での、化合物６とＴ細胞の併用による腫瘍抑制効果
【0167】
試験の結論：
化合物６をＴ細胞と組合わせたＱ値は１．２０であり、これは、化合物６とＴ細胞を併用した場合に有意な相乗的抗肝癌効果があることを示している。動物の体重に有意な低下はなく、Ｔ細胞を併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
化合物６をＴ細胞と組合わせたＱ値は１．２０であり、これは、化合物６とＴ細胞を併用した場合に有意な相乗的抗肝癌効果があることを示している。動物の体重に有意な低下はなく、Ｔ細胞を併用しても、有意な毒性の相加反応は見られなかった。
【0168】
試験例１４および１５は、本発明のスチルベン系化合物が、腫瘍免疫治療薬物との併用により相乗的な抗腫瘍効果を発揮することができる、ということを示している。
【0169】
試験例１６．化合物６の腫瘍転移に対する抑制効果
無菌条件下で、対数増殖期のＢ１６マウスメラノーマ培養細胞を取り、２．８×１０５／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈にマウス１匹あたり０．２ｍｌを接種し、翌日に、表１６に示す投与方式により投与を行い、３週間後に各動物を死なせ、各群の肺を取り出し、各群のマウスの肺に転移したコロニー数を計測し、各群の腫瘍の平均コロニー数に基づき、式に従って腫瘍抑制率を計算した：腫瘍抑制率％＝［（対照群平均コロニー数－投与群平均コロニー数）／対照群平均コロニー数］×１００％。結果を表１６に示す。
無菌条件下で、対数増殖期のＢ１６マウスメラノーマ培養細胞を取り、２．８×１０５／ｍｌの細胞懸濁液に調製し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈にマウス１匹あたり０．２ｍｌを接種し、翌日に、表１６に示す投与方式により投与を行い、３週間後に各動物を死なせ、各群の肺を取り出し、各群のマウスの肺に転移したコロニー数を計測し、各群の腫瘍の平均コロニー数に基づき、式に従って腫瘍抑制率を計算した：腫瘍抑制率％＝［（対照群平均コロニー数－投与群平均コロニー数）／対照群平均コロニー数］×１００％。結果を表１６に示す。
【0170】
表１６ Ｂ１６マウスメラノーマ肺転移モデルに対する化合物６の抗転移効果
＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ陰性対照。
【0171】
この結果は、化合物６がＢ１６マウスにおけるメラノーマの転移に対して抑制効果を有し、且つ用量依存の関係を示し、その経路は癌関連血栓の動きの抑制に関連する可能性がある、ということを示している。
【0172】
試験例１７．化合物６のラット眼表面新生血管抑制に関する研究
ＳＤラット４匹、雌雄を問わず、単眼でモデル化し、合計４眼とし、ブランク対照（無処理群）１眼、モデル群１眼、投与群１と投与群２をそれぞれ１眼とした。
ＳＤラット４匹、雌雄を問わず、単眼でモデル化し、合計４眼とし、ブランク対照（無処理群）１眼、モデル群１眼、投与群１と投与群２をそれぞれ１眼とした。
【0173】
ペントバルビタールナトリウム（２５～３０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射）で麻酔し、同時に両眼に２滴のオキシブプロカイン塩酸塩点眼液を滴下して眼表面の麻酔を行い、ピペットガンで３０μＬのＮａＯＨ（１ｍｏｌ／Ｌ）溶液を取って、直径が約３ｍｍの乾燥した濾紙に１０秒乗せ、湿潤した円形濾紙をモデル化した眼の角膜中心（角膜強膜の縁を覆う）に軽く貼り付け、適切な時間密着を維持して、濾紙を除去し、次に生理食塩水を用いて、針を用いて１分間洗浄した。術後にオフロキサシン眼軟膏を塗布して感染を防止した（３回／日、５日間継続）。
【0174】
モデル化して１、３、５、７、１０日目（Ｄ１、Ｄ３、Ｄ５、Ｄ７、Ｄ１０）に、細隙灯で前眼部の結膜充血状況、角膜浮腫および角膜新生血管の成長状況を観察した。
【0175】
５日目（Ｄ５）に血管新生が現れ、これを試験薬の投与１日目（ｄ１）とし、１日３回点眼し、１０日間連続投与し（ｄ１０）、ｄ１０日の投与が終了した後に、細隙灯で前眼部の結膜充血状況、角膜浮腫および角膜新生血管の成長状況を観察した。試験を終了し、ラットを安楽死させた。
【0176】
ブランク対照（未処理群）：いかなる処理もせず、モデル化もせず、投与も行わなかった。
【0177】
モデル群：３０μＬのＮａＯＨ（１ｍｏｌ／Ｌ）で湿潤させた円形濾紙（直径約３ｍｍ）を角膜に軽く貼り付けてモデル化し、モデル化した後に抗感染処理を行ったが、投与は行わなかった。
【0178】
投与群１：モデル化した後に投与を行い、投与は化合物６を生理食塩水に溶解させて濃度を１０ｍｇ／ｍＬにし、投与時５０μＬ／眼とし、下眼の結膜嚢に、３回／日、１０日間連続で点眼した。
【0179】
投与群２：モデル化した後に投与を行い、投与は化合物６を生理食塩水に溶解させて濃度を２５ｍｇ／ｍＬにし、投与時５０μＬ／眼とし、下眼の結膜嚢に、３回／日、１０日間連続で点眼した。
【0180】
結果を図６に示す：投与群の眼表面新生血管はいずれもモデル群よりも減少し、そのうち高用量群の血管増殖面積は有意に減少した。化合物６は、眼表面の新生血管の成長に対して抑制効果を有するとともに、用量反応関係を有する。
【0181】
以上のように、本発明はスチルベン系化合物の抗腫瘍薬物の調製における使用を提供し、本発明の研究により、一部のスチルベン系化合物は、固形腫瘍内にＣＤ８＋Ｔリンパ球を多く集め且つ腫瘍血管の内壁を標的破壊するという二重の効果を有し、抗原ＣＤ８＋キラーＴリンパ球によって腫瘍細胞を消滅させると同時に、腫瘍組織への血液供給を遮断し、固形腫瘍内部の急速な壊死を引き起こし、腫瘍に対する殺傷力を大幅に向上させ、さらに腫瘍転移に対して抑制効果を有することが見出された。本発明のスチルベン系化合物は、抗腫瘍薬物の調製に用いることができ、また、腫瘍免疫治療薬物と併用して相乗的な抗腫瘍効果を発揮することもできる。これらのスチルベン系化合物は、構造が異なると化合物の抗腫瘍効果も異なるため、様々な抗腫瘍薬物の調製に用いることができる。また、本発明のスチルベン系化合物は、眼表面の血管の成長を抑制することができるため、様々な眼部疾患を治療するための薬物の調製に用いることができる。本発明のスチルベン系化合物の応用には将来性がある。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【手続補正書】
【提出日】2023-12-05
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、抗腫瘍薬物および／または眼疾患を予防および／または治療するための薬物の調製における使用：
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムまたは有機アミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）。
【請求項2】
前記有機アミンはアミノ酸、ペプチド、ｔ－ブチルアミンまたはｎ－ブチルアミンであり、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、フッ素、塩素または臭素から選択され、
好ましくは、
前記有機アミンはメグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジン、ｔ－ブチルアミンから選択され、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、フッ素、塩素または臭素から選択され、
好ましくは、
前記有機アミンはメグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジン、ｔ－ブチルアミンから選択され、
および／または、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項3】
前記化合物は式ＩＩに示す化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の使用：
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
【請求項4】
前記化合物は式ＩＩＩに示す化合物であることを特徴とする、請求項３に記載の使用：
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
【請求項5】
前記化合物は式ＩＶに示す化合物であることを特徴とする、請求項４に記載の使用：
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、メグルミン、ピラジン、アラニン、ｎ－ブチルアミン、リジンまたはｔ－ブチルアミンから選択され、
Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して水素、メトキシ基、エトキシ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素または臭素から選択される）。
【請求項6】
前記抗腫瘍薬物は、固形腫瘍内にＣＤ８＋Ｔリンパ球を多く集めおよび／または腫瘍血管の内壁を破壊する効果を有する薬物であり、
好ましくは、前記薬物が、固形腫瘍の中心部位の腫瘍細胞の壊死を引き起こす薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
好ましくは、前記薬物が、固形腫瘍の中心部位の腫瘍細胞の壊死を引き起こす薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項7】
前記抗腫瘍薬物が腫瘍の転移を抑制する薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項8】
前記抗腫瘍薬物が腫瘍の転移を抑制する薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであり、
好ましくは、前記腫瘍の転移を抑制する薬物が、メラノーマの転移を抑制する薬物であることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
【請求項9】
前記抗腫瘍薬物が、肺癌、肝癌、胃癌、卵巣癌、前立腺癌または腎細胞癌を予防および／または治療するための薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項10】
前記抗腫瘍薬物が、肺癌、肝癌、胃癌または卵巣癌を予防および／または治療するための薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであることを特徴とする、請求項９に記載の使用。
【請求項11】
前記抗腫瘍薬物が、前立腺癌または腎細胞癌を予防および／または治療するための薬物である場合、式Ｉに示す化合物の構造は式Ｖｂに示すとおりであることを特徴とする、請求項９に記載の使用。
【請求項12】
前記眼疾患を予防および／または治療するための薬物が、眼表面の血管の成長を抑制する薬物であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項13】
前記眼疾患が、網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項14】
前記眼疾患が糖尿病眼疾患であり、
好ましくは、前記糖尿病眼疾患が、糖尿病と関係する網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
好ましくは、前記糖尿病眼疾患が、糖尿病と関係する網膜症、眼底血管腫、眼底出血、涙嚢炎、緑内障、白内障、硝子体混濁、視神経萎縮、黄斑変性および／または網膜剥離であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１つに記載の使用。
【請求項15】
前記化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであることを特徴とする、請求項１２に記載の使用。
【請求項16】
前記化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項17】
前記化合物の構造は式Ｖａに示すとおりであることを特徴とする、請求項１４に記載の使用。
【請求項18】
腫瘍を治療するための薬物製剤であって、該薬物製剤は、式Ｉに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料または補助性成分を添加して調製された薬物製剤であり、
好ましくは、前記薬物製剤が注射製剤、経口製剤または外用製剤であることを特徴とする、薬物製剤
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムまたは有機アミンから選択され、
Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ はそれぞれ独立して水素、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル基、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）。
好ましくは、前記薬物製剤が注射製剤、経口製剤または外用製剤であることを特徴とする、薬物製剤
Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ はそれぞれ独立して水素、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル基、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）。
【請求項19】
眼疾患を予防および／または治療するための薬物製剤であって、該薬物製剤は、請求項１～５、１５のいずれか１つに記載の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料または補助性成分を添加して調製された薬物製剤であり、
好ましくは、前記薬物製剤が眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形が点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤が水溶液、懸濁剤、乳剤であることを特徴とする、薬物製剤。
好ましくは、前記薬物製剤が眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形が点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤が水溶液、懸濁剤、乳剤であることを特徴とする、薬物製剤。
【請求項20】
眼疾患を予防および／または治療するための薬物製剤であって、該薬物製剤は、請求項１～５、１６のいずれか１つに記載の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料または補助性成分を添加して調製された薬物製剤であり、
好ましくは、前記薬物製剤が眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形が点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤が水溶液、懸濁剤、乳剤であることを特徴とする、薬物製剤。
好ましくは、前記薬物製剤が眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形が点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤が水溶液、懸濁剤、乳剤であることを特徴とする、薬物製剤。
【請求項21】
眼疾患を予防および／または治療するための薬物製剤であって、該薬物製剤は、請求項１～５、１７のいずれか１つに記載の化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容可能な補助材料または補助性成分を添加して調製された薬物製剤であり、
好ましくは、前記薬物製剤が眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形が点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤が水溶液、懸濁剤、乳剤であることを特徴とする、薬物製剤。
好ましくは、前記薬物製剤が眼部を通じて投与する製剤であり、
より好ましくは、前記製剤の剤形が点眼剤、眼軟膏、眼用ゲル、ナノ製剤、マイクロスフェア製剤、リポソーム製剤であり、
さらに好ましくは、前記点眼剤が水溶液、懸濁剤、乳剤であることを特徴とする、薬物製剤。
【請求項22】
式Ｉに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、腫瘍免疫治療薬物との併用による、抗腫瘍併用薬物の調製における使用であって、
好ましくは、前記腫瘍免疫治療薬物がＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＣＡＲＴ細胞であることを特徴とする、使用
（ただし、Ｍは水素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムまたは有機アミンから選択され、
Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ はそれぞれ独立して水素、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル基、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）。
好ましくは、前記腫瘍免疫治療薬物がＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＣＡＲＴ細胞であることを特徴とする、使用
Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ はそれぞれ独立して水素、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル基、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、ハロゲンから選択される）。
【請求項23】
式Ｖｃに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、ＰＤ－Ｌ１との併用による、肺癌を予防および／または治療するための併用薬物の調製における使用であることを特徴とする、請求項２２に記載の使用。
【請求項24】
式Ｖａに示す化合物、またはその塩、またはその立体異性体、またはその溶媒和物の、Ｔ細胞との併用による、肝癌を予防および／または治療するための併用薬物の調製における使用であることを特徴とする、請求項２２に記載の使用。
【外国語明細書】